TNF superfamily member immunocytokine and uses thereof

Abstract

Disclosure relates to antibody-cytokine fusion proteins, in particular, TNF superfamily member fusion proteins (immunocytokines) and uses thereof. The fusion proteins exhibit anti-tumor activity.

Description

Abstract This disclosure relates to antibody-cytokine fusion proteins, particularly fusion proteins of TNF superfamily members (immune cytokines), and their uses. The fusion proteins exhibit antitumor activity.

Claims

1.A fusion protein, comprising:a first cytokine fragment linked to the C-terminal of a first CH2-CH3 fragment, comprising a first cytokine molecule, or a first cytokine molecule and a third cytokine molecule that are tandem linked, anda second cytokine fragment linked to the C-terminal of a second CH2-CH3 fragment, comprising a second cytokine molecule, or a second cytokine molecule and a fourth cytokine molecule that are tandem linked,the first CH2-CH3 fragment and the second CH2-CH3 fragment form a dimer, totally three cytokine molecules are linked to the dimer.2.The fusion protein according to claim 1, wherein the first cytokine fragment comprises the first cytokine molecule, and the second cytokine fragment comprises the second cytokine molecule and the fourth cytokine molecule that are tandem linked, orthe first cytokine fragment comprises the first cytokine molecule and a third cytokine molecule that are tandem linked, and the second cytokine fragment comprises the second cytokine molecule.3.The fusion protein according to claim 1 or 2, wherein the first cytokine molecule, the second cytokine molecule, the third cytokine molecule and the fourth cytokine molecule independently are selected from the group consisting of tumor necrosis factor, interleukin, lymphokine, interferon, colony stimulating factor, chemokine and growth factor.4.The fusion protein according to any one of claims 1-3, wherein the first cytokine molecule, the second cytokine molecule, the third cytokine molecule and the fourth cytokine molecule independently are LIGHT, lymphotoxin α, lymphotoxin β, or 4-1BBL.5.The fusion protein according to any one of claims 1-4, wherein the first cytokine molecule, the second cytokine molecule, the third cytokine molecule and the fourth cytokine molecule independently are wild type LIGHT (preferably human LIGHT) , truncated LIGHT or mutein thereof; optionally, wild type LIGHT, truncated LIGHT or mutein thereof comprises amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 25, 26, 58, 59, 68-78, 126-141, 158, 177, 178 and 180;the first cytokine molecule, the second cytokine molecule, the third cytokine molecule and the fourth cytokine molecule independently are wild type 4-1BBL (preferably human 4-1BBL) , truncated 4-1BBL or mutein thereof; optionally, wild type 4-1BBL, truncated 4-1BBL or mutein thereof comprises amino acid sequence of SEQ ID NO: 179;the first cytokine molecule, the second cytokine molecule, the third cytokine molecule and the fourth cytokine molecule independently are wild, truncated lymphotoxin α or lymphotoxin β, or mutein thereof; optionally, the wild, truncated lymphotoxin α or lymphotoxin β, or mutein thereof comprises amino acid sequence of SEQ ID NO: 181, 182.6.The fusion protein according to any one of claims 1-5, wherein the first cytokine molecule, the second cytokine molecule, the third cytokine molecule and the fourth cytokine molecule independently are truncated LIGHT, optionally, the truncated LIGHT includes an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 68 or SEQ ID NO: 78.7.The fusion protein according to any one of claims 1-6, wherein the first cytokine molecule, the second cytokine molecule, the third cytokine molecule and the fourth cytokine molecule independently are LIGHT mutein; optionally, the LIGHT mutein includes an amino acid sequence set forth in one of SEQ ID NOs: 25-26, 58-59, 69-77, 126-141, 158, 177, 178 and 180.8.The fusion protein according to any one of claims 1-7, wherein the dimer is an Fc domain, which is modified to improve the correct assembly of the fusion protein.9.The fusion protein according to claim 8, wherein the Fc domain is derived from IgG, which includes IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4, optionally the Fc domain is derived from human IgG1 or IgG4 Fc domain.10.The fusion protein according to any one of claims 1-9, wherein the first CH2-CH3 fragment and the second CH2-CH3 fragment comprise one or more modifications selected from the group consisting of knobs-into-holes, electrostatic steering of CH3 (such as DDKK) , DuoBody, SEEDbodies, cFAE, XmAb, Azymetric, and optionally, the modifications comprise knobs-into-holes, and / or DDKK.11.The fusion protein according to any one of claims 1-10, wherein the first CH2-CH3 fragment and the second CH2-CH3 fragment form a human IgG1 Fc domain with mutation N297A.12.The fusion protein according to any one of claims 1-11, wherein the first CH2-CH3 fragment or the second CH2-CH3 fragment further comprises one or more mutations selected from the group consisting of Y349C, T366S, L368A, and Y407V; and the other one comprises mutations S354C and / or T366W.13.The fusion protein according to any one of claims 1-12, wherein the first cytokine fragment links to the C-terminal of the first CH2-CH3 fragment directly or via a linker; and / orthe second cytokine fragment link to the C-terminal of the second CH2-CH3 fragment directly or via a linker.14.The fusion protein according to any one of claims 1-13, wherein the C terminal of the CH3 domain in the first CH2-CH3 fragment is fused to the N terminal of the first cytokine fragment directly or via a first linker A; and / or the C terminal of the CH3 domain in the second CH2-CH3 fragment is fused to the N-terminal of the second cytokine fragment directly or via a first linker B.15.The fusion protein according to any one of claims 1-14, wherein the first cytokine molecule is fused to the third cytokine molecule directly or via a second linker A; and / orthe second cytokine molecule is fused to the fourth cytokine molecule directly or via a second linker B.16.The fusion protein according to any one of claims 1-15, wherein the C terminal of the first cytokine molecule is fused to the N terminal of the third cytokine molecule directly or via a second linker A; and / or the C terminal of the second cytokine is fused to the N terminal of the fourth cytokine directly or via a second linker B.17.The fusion protein according to any one of claims 1-16, wherein the first linker A, the first linker B, the second linker A, and the second linker B independently are absent or are selected from the group consisting of VH-CH1 linker (SEQ ID NO: 82) , VL-CL linker (SEQ ID NO: 83) , CH2-CH3 linker (SEQ ID NO: 81) , IgM tail linker (SEQ ID NO: 84) , GGGGSGGGGSGGGGSGGGGT (SEQ ID NO: 89) , G, and (GGGGS) n, wherein n=1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10.optionally, the first linker A and the first linker B independently are absent or are selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 84 and 89, G, and (GGGGS) n, wherein n=1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10.18.The fusion protein according to any one of claims 1-17, wherein the first linker A and the first linker B independently are absent or comprise the amino acid sequence as set forth in any one of SEQ ID NOs: 81-90.19.The fusion protein according to any one of claims 1-18, wherein the first linker A and the first linker B are the same or different.20.The fusion protein according to any one of claims 1-19, wherein the second linker A and the second linker B independently are absent or are G, GGGGSGGGGSGGGGSGGGGT, or (GGGGS) n, wherein n=1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10.21.The fusion protein according to any one of claims 1-20, wherein the second linker A and the second linker B independently of each other are absent or comprise the amino acid G or the amino acid sequence as set forth in any one of SEQ ID NOs: 85-89.22.The fusion protein according to any one of claims 1-21, comprising a first antigen-binding fragment and a second antigen-binding fragment, which are connected to the N-terminal of the first CH2-CH3 fragment and the second CH2-CH3 fragment, respectively.23.The fusion protein according to claim 22, wherein the first antigen-binding fragment and the second antigen-binding fragment independently are selected from the group consisting of a diabody, a Fab, a Fab’, a F (ab’) 2, an Fv fragment, a disulfide stabilized Fv fragment (dsFv) , a (dsFv) 2, a bispecific dsFv (dsFv-dsFv’) , a disulfide stabilized diabody (ds diabody) , a single-chain Fv (scFv) , an scFv dimer (bivalent diabody) , a multispecific antibody formed from a portion of an antibody including one or more CDRs, a camelized single domain antibody, a nanobody, a domain antibody, a bivalent domain antibody, or any other antibody fragment.24.The fusion protein according to claim 22 or 23, wherein the first antigen-binding fragment is an scFv or a Fab that specifically binds to a first antigen; and the second antigen-binding fragment is a Fab that specifically binds to a second antigen.25.The fusion protein according to any one of claims 22-24, comprisinga first heavy chain, from N terminal to C terminal, including the operably linked first antigen-binding fragment, the first CH2-CH3 fragment, and the first cytokine fragment;a second heavy chain, from the N terminal to the C terminal, including the operably linked second antigen-binding fragment, the second CH2-CH3 fragment, and the second cytokine fragment.26.The fusion protein according to any one of claims 22-25, further comprisinga first light chain, which pairs with the first antigen-binding fragment to form a heterodimer; and / ora second light, which pairs with the second antigen-binding fragment to form a heterodimer.27.The fusion protein according to any one of claims 22-26, wherein the first antigen and the second antigen independently of each other are selected from the group consisting of FAP, HER2, PDL-1, PD-1, EGFR, VEGFR, VEGF, CCR8, OX-40, 41BB, Angiopoietin-2, IL-4Rα, BCMA, Blys, BTNO2, C5, CD122, CD13, CD133, CD137, CD138, CD16a, CD19, CD20, CD22, CD27, CD28, CD3, CD30, CD33, CD38, CD40, CD47, CD-8, CEA, CGPR / CGRPR, CSPGs, CTLA4, CTLA-4, DLL-4, EpCAM, factor IXa, factor X, GITR, GP130, Her3, HSG, ICOS, IGF1, IGF1 / 2, IGF-1R, IGF2, IGFR, IL-1, IL-12, IL-12p40, IL-13, IL-17A, IL-1β, IL-23, IL-5, IL-6, IL-6R, Lag-3, LAG3 , MAG, Met, NgR, NogoA, OMGp, OX40, PDGFR, PSMA, RGMA, RGMB, SARS-CoV-2, Te38, TIM-3, TNF, TNFα, TROP-2, and TWEAK.28.The fusion protein according to any one of claims 22-27, wherein the first antigen and the second antigen independently of each other are selected from the group consisting of FAP, HER2, PDL-1, and EGFR.29.The fusion protein according to any one of claims 22-28, wherein both the first antigen and the second antigen are FAP, HER2, EGFR, or PDL-1, or the first antigen is HER2 and the second antigen is FAP.30.The fusion protein according to any one of claims 1-29, wherein the fusion protein is monovalent or bivalent, monospecific or bispecific.31.The fusion protein according to any one of claims 1-30, wherein the first cytokine molecule, the second cytokine molecule, and the third cytokine molecule have the same amino acid sequence; orthe first cytokine molecule, the second cytokine molecule, and the fourth cytokine molecule have the same amino acid sequence.32.The fusion protein according to any one of claims 26-31, wherein the first light chain and the second light chain independently comprise an amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, 29, 91 or 94.33.The fusion protein according to any one of claims 22-32, wherein the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 23, 28, 31, 32, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 52, 53, 55, 57, 61, 63, 65, 67, 93, 96, 98, 99, 100, 102, 104, 107, 109, 111, 113, 114, 117, 119, 121, 123, 125, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 157, 155, 160, 162, 164, 166, 167, 169, 171, 173 or 175.34.The fusion protein according to any one of claims 22-33, wherein the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 2, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 24, 27, 30, 33, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 92, 95, 97, 101, 103, 105, 106, 108, 110, 112, 115, 116, 118, 120, 122, 124, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 159, 161, 163, 165, 168, 170, 172, 174 or 176.35.The fusion protein according to any one of claims 22-34, wherein the fusion protein is select from the following:(1) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 3, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 2;(2) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 4, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 2;(3) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 6, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 5;(4) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 8, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 7;(5) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 10, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 9;(6) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 11, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 11;(7) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 14, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 13;(8) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 16, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 15;(9) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 18, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 17;(10) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 20, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 19;(11) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 22, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 21;(12) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 23, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 24;(13) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 27, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 28;(14) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 29, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 30, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 31;(15) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 32, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 33;(16) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 34, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 35;(17) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 37, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 36;(18) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 39, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 38;(19) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 41, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 40;(20) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 29, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 42, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 43; or(21) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 45, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 44;(22) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 47, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 46;(23) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 49, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 48;(24) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 51, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 50;(25) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 52, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 2;(26) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 53, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 2;(27) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 55, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 54;(28) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 57, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 56;(29) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 61, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 60;(30) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 63, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 62;(31) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 65, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 64;(32) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 67, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 66;(33) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 91, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 92, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 93;(34) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 94, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 95, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 96;(35) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 98, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 97;(36) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 99, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 97;(37) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 100, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 101;(38) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 102, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 103;(39) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 104, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 105;(40) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 107, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 106;(41) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 109, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 108;(42) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 111, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 110;(43) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 113, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 112;(44) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 114, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 115;(45) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 117, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 116;(46) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 119, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 118;(47) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 121, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 120;(48) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 123, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 122;(49) the second light chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 124, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 4;(50) the second light chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 2, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 125;(51) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 143, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 142;(52) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 145, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 144;(53) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 147, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 146;(54) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 149, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 148;(55) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 151, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 150;(56) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 153, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 152;(57) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 155, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 154;(58) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 157, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 156;(59) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 160, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 159;(60) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 162, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 161;(61) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 164, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 163;(62) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 166, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 165;(63) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 168, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 167;(64) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 170, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 169;(65) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 172, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 171;(66) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 174, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 173;(67) both of the first light chain and the second light chain comprise the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 1, the first heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 176, and the second heavy chain comprises the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 175.36.An isolated polynucleotide encoding the first heavy chain, the first light chain, the second heavy chain or the second light chain of the fusion protein according to any one of claims 1-35.37.A set of isolated polynucleotides, comprising the polynucleotide encoding the first heavy chain, the polynucleotide encoding first light chain, the polynucleotide encoding second  heavy chain and the polynucleotide encoding second light chain of the fusion protein according to any one of claims 1-35.38.An isolated vector comprising the isolated polynucleotide according to claim 36 or 37.39.A host cell comprising the isolated polynucleotide according to claim 36, the set of isolated polynucleotides according to claim 37 or the isolated vector according to claim 38.40.A pharmaceutical composition comprising the fusion protein according to any one of claims 1-35, the isolated polynucleotide according to claim 36, the set of isolated polynucleotides according to claim 37, the isolated vector according to claim 38 or the host cell according to claim 39, and a pharmaceutically acceptable carrier.41.A kit, comprising the fusion protein according to any one of claims 1-35, the isolated polynucleotide according to claim 36, the set of isolated polynucleotides according to claim 37, the isolated vector according to claim 38, the host cell according to claim 39 or the pharmaceutical composition according to claim 40.42.Use of the fusion protein according to any one of claims 1-35, the isolated polynucleotide according to claim 36, the set of isolated polynucleotides according to claim 37, the isolated vector according to claim 38, the host cell according to claim 39, the pharmaceutical composition according to claim 40 or the kit according to claim 41 in the manufacture of a drug for preventing or treating a disease, or in the manufacture of a kit for diagnosing a disease.43.The use according to claim 42, wherein the disease comprises tumor, optionally solid tumor.44.A method of diagnosing, preventing or treating a disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject a therapeutically effective amount of the fusion protein according to any one of claims 1-36, the isolated polynucleotide according to claim 36, the set of isolated polynucleotides according to claim 37, the isolated vector according to claim 38, the host cell according to claim 39, the pharmaceutical composition according to claim 40 or the kit of claim 41.45.The method according to claim 44, wherein the disease comprises tumor, optionally solid tumor.46.A method for production of the fusion protein according to any one of claims 1-35, comprising introducing a first expression vector encoding the first heavy chain, a second expression vector encoding the first light chain, a third expression vector encoding the second heavy chain and / or a fourth expression vector encoding the second light chain together into one host cell, or into separate host cells, and expressing the first, second, third and fourth expression vectors under a proper condition.47.The method according to claim 46, wherein the host cells are eukaryotic cells.48.The method according to claim 46 or 47, wherein the host cells are mammalian cells.

Images