一种大片段DNA组装方法及其应用
By utilizing homologous recombination and alternating plasmid-vector transformation in Bacillus subtilis, we achieved efficient assembly of the Saccharomyces cerevisiae chromosome and nitrophenol degradation pathway, solving the problems of large DNA fragment assembly and nitrophenol mineralization, and improving assembly efficiency and biodegradation effect.
CN118389561BActive Publication Date: 2026-07-17NANKAI UNIV
Patent Information
- Authority / Receiving Office
- CN · China
- Patent Type
- Patents(China)
- Current Assignee / Owner
- NANKAI UNIV
- Filing Date
- 2024-05-23
- Publication Date
- 2026-07-17
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Abstract
本发明属于基因工程技术领域，公开了一种大片段DNA组装方法及其应用。本发明将大片段DNA通过PCR方式转变为小片段DNA，然后将小片段DNA交替整合到含有两种不同抗性基因(氯霉素抗性基因、四环素抗性基因)的pBR322质粒上，接着再将这些新构建的质粒依次转化到底盘细胞中，实现大片段DNA的组装。本发明大片段DNA组装方法可方便、高效地对酿酒酵母染色体进行组装，为人工设计合成酿酒酵母长染色体提供了基础。同时，采用本发明组装方法能够在枯草芽孢杆菌体内组装一条完整的PNP降解途径，并成功构建了高效PNP矿化工程菌，该方法构建的工程菌具有与野生菌株相似的生长趋势，外源基因能够稳定表达，实现PNP矿化功效，为农业环境的修复提供一种可行方案。
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