Immunoconjugates and pharmaceutical uses thereof

Abstract

Disclosed is an immunoconjugate of the bispecific antibody and small molecule medicine. Also disclosed are uses of the immunoconjugate and pharmaceutical compositions comprising the same in the preparation of drugs for treating cancers.

Description

IMMUNOCONJUGATES AND PHARMACEUTICAL USES THEREOFFIELD OF THE INVENTION

[0001] The present invention relates to an immunoconjugate of with improved ability to target cancers, which contain a bispecific antibody targeting EGFR and c-MET, and a therapeutic motiety belong to the camptothecin group of drugs. The present invention further relates to use of the immunoconjugates in the manufacture of a drugs for treating cancers.BACKGROUND

[0002] Epidermal growth factor receptor (EGFR) and hepatocyte growth factor receptor (HGFR or c-MET) have been found to be overexpressed in many tumors. For example, EGFR is overexpressed in non-small cell lung cancers (NSCLC) , head and neck squamous cell cancers. c-MET receptor is overexpressed in NSCLC and several other solid tumor types. Recently, EGFR and c-MET have been found to be co-expressed in many solid tumors, including head and neck squamous cell carcinoma, NSCLC, colorectal carcinoma, gastric cancers, renal cell carcinoma, and pancreatic ductal adenocarcinoma, etc.

[0003] For patients with aberrant activation of EGFR, tyrosine kinase inhibitors (TKIs) targeting EGFR are the standard of care. However, many patients will acquire resistance to TKIs. Among the mechanisms, increased c-MET pathway activation is frequently found in patients with EGFR TKI resistance. Moreover, treatment strategies targeting both receptors using a combination of single-agent EGFR and MET inhibitors do not cover the wide range of resistance mechanisms. Therefore, novel approaches that simultaneously engage both EGFR and c-MET through a bispecific antibody, is a proved to be an efficacious approach to overcome resistance and achieve greater efficacy in a sub-group of NSCLC patients.

[0004] One way of improving the therapeutic effect of antibody is antibody-drug conjugates (ADCs) . ADC belongs to a type of new anticancer drug, that antibody is coupled with cytotoxin through chemical coupling. The antibody-drug coupling technology connects the small molecule drug and biological protein together, which may have the advantages of both remarkably increasing the potency of drugs and reducing the side effects.

[0005] Given the prevalent challenges of general off-target toxicity and clinical resistance faced by traditional ADCs, the following criteria should guide target selection: (1) The conventional guiding principle involves identifying antigens characterized by good internalization, relatively low expression on normal tissues, and high expression on tumors. (2) Acknowledging the heterogeneity of solid tumors, it becomes imperative to ascertain the expression levels of targets in various tumor subtypes and sites, facilitating the optimal implementation of tailored drug delivery rather than relying on a singular “magic bullet” approach. (3) Owing to the unique dual targeting characteristics of BsADCs, a comprehensive consideration of the deep-level effects of antigen combinations is essential. This encompasses factors include internalization, recycling, rates of turnover, lysosomal degradation, and obligate mechanisms. The thoughtful integration of these considerations is indispensable for effective BsADC design, ensuring a nuanced understanding of the dynamic interplay between antigens and their cellular processes (Acta Pharm Sin B. 2024 May; 14 (5) : 1965-1986) .

[0006] The BsADC is still in the early stages of development, and early clinical trials encounter substantial challenges. The meticulous choice of BsAb, linker and cytotoxic payload is crucial for attaining the desired therapeutic outcomes in ADCs. Take BsAb for instance, whether it has good internalization or not and whether it can be developed into BsADC or not are unexpected and face many uncertainties, and the linker and cytotoxic payload also make significant difference on the therapeutic outcomes in ADCs.

[0007] Since EGFR and c-Met receptors are highly co-expressed and overexpressed in many types of tumor cells, an ADC target both EGFR and c-MET simultaneously (an EGFRxc-MET bispecific ADC) may possess the advantages in improved therapeutic efficacy benefiting a broader range of patient population, regardless of whether the aberrant EGFR and c-MET activation are the driven factor of tumorigenesis. There is an urgent need to develop bispecific antibody-drug conjugates (bispecific ADCs) targeting EGFR×c-MET that possess good internalization and strong antitumor effects.SUMMARY OF THE INVENTION

[0008] The technical problem to be solved by the present invention is to develop an immunoconjugate, which contain a bispecific antibody targeting EGFR and c-Met, and a therapeutic drug, showing good internalization and very strong antitumor effects in cancers. The antitumor effects may be contributed by improved binding affinities of the antibodies, increased internalizations for robust endocytosis, higher DARs.

[0009] Specifically, the present invention encompasses the following aspects:

[0010] The present disclosure relates to an immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, the immunoconjugate is as shown in general formula (A) : Ab- (L2-L1-D) y (A)

[0011] wherein:

[0012] D is a cytotoxic drug; L1 and L2 are linking units; y is a number of 1 to 20, preferably 2 to10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8; Ab is an antibody or antibody fragment thereof, comprising: the first antigen-binding domain that binds EGFR and a second antigen-binding domain that binds c-Met.

[0013] In some embodiments of the present disclosure, the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain variable (VH) region comprising the following CDRs:

[0014] HCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1,

[0015] HCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2,

[0016] HCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, or a variant thereof in which one or two or three amino acids in one or more of HCDR1, HCDR2, or HCDR3 are substituted with another amino acid; and a light chain variable (VL) region comprising the following CDRs:

[0017] LCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4,

[0018] LCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5,

[0019] LCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, or a variant thereof in which one or two or three amino acids in one or more of LCDR1, LCDR2, or LCDR3 are substituted with another amino acid.

[0020] In some embodiments of the present disclosure, the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain variable (VH) region comprising the following CDRs:

[0021] HCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1,

[0022] HCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2,

[0023] HCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3; and a light chain variable (VL) region comprising the following CDRs:

[0024] LCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4,

[0025] LCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5,

[0026] LCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.

[0027] In some embodiments of the present disclosure, the second antigen-binding domain comprises: a VH region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, or having at least at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13; and a VL region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.

[0028] In some embodiments of the present disclosure, the second antigen-binding domain comprises: a VH region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13; and a VL region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.

[0029] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain variable (VH) region comprising the following CDRs:

[0030] HCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7,

[0031] HCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8,

[0032] HCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, or a variant thereof in which one or two or three amino acids in one or more of HCDR1, HCDR2, or HCDR3 are substituted with another amino acid; and a light chain variable (VL) region comprising the following CDRs:

[0033] LCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10,

[0034] LCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11,

[0035] LCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or a variant thereof in which one or two or three amino acids in one or more of LCDR1, LCDR2, or LCDR3 are substituted with another amino acid.

[0036] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain variable (VH) region comprising the following CDRs:

[0037] HCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7,

[0038] HCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8,

[0039] HCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9; and a light chain variable (VL) region comprising the following CDRs:

[0040] LCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10,

[0041] LCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11,

[0042] LCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.

[0043] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain comprises: a VH region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15; and a VL region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16.

[0044] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain comprises: a VH region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15; and a VL region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 16.

[0045] In some embodiments of the present disclosure, the antibody fragment is selected from the group consisting of Fab, Fab', F (ab') 2, variable fragment (Fv) , single chain variable fragment (scFv) , diabodies, triabodies, scFv-Fc, disulfide stabilized Fv (dsFv) and CDR-containing peptides.

[0046] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain and / or the second antigen-binding domain further comprises human antibody constant regions;

[0047] preferably, the heavy chain constant region of the human antibody constant regions is selected from constant regions of human IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 and conservative variants thereof, and the light chain constant region of the human antibody constant regions is selected from κ and λ chain constant regions of human antibody and conservative variants thereof;

[0048] more preferably, the heavy chain constant region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 or 26, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 or 26; and the light chain constant region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 27, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27;

[0049] more preferably, the heavy chain constant region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 or 26; and the light chain constant region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 27.

[0050] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain and the second antigen-binding domain form a heterodimer, the first antigen-binding domain and / or the second antigen-binding domain further comprises the CH1 and CL region, and the CH1 of the second antigen-binding domain comprises one or more substitutions selected from L145Q, K147E, S181E, and the CL of the second antigen-binding domain comprises one or more substitutions selected from T129R, T178R, T180Q; and / or the CH1 of the first antigen-binding domain comprises one or more substitutions selected from L128R, K147R, and the CL of the first antigen-binding domain comprises one or more substitutions selected from Q124E, V133Q, T178E, wherein the numbering of the constant region is as per the EU index;

[0051] preferably the amino acid substitutions of the CH1 of the second antigen-binding domain comprises L145Q, K147E, S181E, and the amino acid substitutions of the CL of the second antigen-binding domain comprises T129R, T178R, T180Q; and / or the amino acid substitutions of the CH1 of the first antigen-binding domain comprises L128R, K147R, and the amino acid substitutions of the CL of the first antigen-binding domain comprises Q124E, V133Q, T178E, wherein the numbering of the constant region is as per the EU index;

[0052] more preferably, the first antigen-binding domain comprises a human antibody heavy chain constant region of SEQ ID NO: 19 and a human light chain constant region of SEQ ID NO: 20; and / or the second antigen-binding domain comprises a human antibody heavy chain constant region of SEQ ID NO: 17 and a human light chain constant region of SEQ ID NO: 18.

[0053] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 23 or 30, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23 or 30; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 24 or 31, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24 or 31; and / or,

[0054] the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 or 28, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 or 28; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 or 29, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 or 29;

[0055] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 23, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 24, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24; and / or,

[0056] the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22.

[0057] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 30, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 31, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 31; and / or,

[0058] the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 28, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 29, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29.

[0059] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 23; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 24; and the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 22.

[0060] In some embodiments of the present disclosure, the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 30; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 31; and the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 28; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 29.

[0061] In some embodiments of the present disclosure, the cytotoxic drug is selected from the group consisting of toxin, chemotherapeutic, antibiotic, radioisotope and nucleolytic enzyme.

[0062] There are numerous cytotoxic drugs being used in developing ADCs, in some embodiments of the present disclosure, the cytotoxic drug is selected from the group consisting of tubulin inhibitors or topoisomerase inhibitors; preferably auristatin analogues, maytansine derivatives, eribulin and derivatives thereof, pyrrolobenzodiazepines, or camptothecin derivatives; more preferably SN-38, MMAE, MMAF, MMAD, eribulin or exatecan, and derivatives thereof.

[0063] In some embodiments of the present disclosure, the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof, has one of the following structures:

[0064] wherein:

[0065] L1 and L2 are linking units; y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8; Ab is the antibody or antibody fragment thereof mentioned above.

[0066] In some embodiments of the present disclosure, the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof, is as shown in general formula (D) :

[0067] wherein:

[0068] the carbon atoms marked with p1*and p2*each is asymmetric center, and the asymmetric center is S configured, R configured or racemic; each of R3, and R4 is, independently, hydrogen, halogen, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted alkoxyl, or hydroxyl; or R3, and R4 together with the atoms to which they are attached to, form unsubstituted or substituted cycloalkyl, unsubstituted or substituted heterocyclyl, unsubstituted or substituted aryl, or unsubstituted or substituted heteroaryl; R5 is hydrogen, deuterium, C1-6 alkyl, deuterated alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;

[0069] L1 and L2 are linking units; y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8; Ab is the antibody or antibody fragment thereof mentioned above.

[0070] In some embodiments of the present disclosure, the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof, has one of the following structures:

[0071] wherein:

[0072] L1 and L2 are linking units; y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8; Ab is the antibody or antibody fragment thereof mentioned above.

[0073] In some embodiments of the present disclosure, the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof, is as shown in general formula (B) :

[0074] wherein:

[0075] L1 and L2 are linking units; y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 4 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8; Ab is the antibody or antibody fragment thereof mentioned above.

[0076] In some embodiments of the present disclosure, the -L2-is selected from -La-Lb-, and the -L1-is selected from -Lc-Ld-Le-,

[0077] wherein, the -La-is a covalently linked unit, the -Lb-is an extension unit, the -Lc-is a bond, or a polar hydrophilic group unit, wherein the polar hydrophilic group comprises a sugar residue and its derivatives, a polyethylene glycol residue and its derivatives, a polysarcosine residue and its derivatives, or a combination thereof, the -Ld-is selected from a peptide residue consisting of 2-8 amino acids, the -Le-is a bond, or a self-cleaving fragment.

[0078] In some embodiments of the present disclosure, the -La-is selected from:

[0079] the -Lb-is selected from:

[0080] - (CH2) s2-C (=O) -, -CH2-C (=O) -NH- (CH2) s1-C (=O) -, - (CH2CH2O) s2- (CH2) s1-C (=O) -,

[0081] the s1 and s2 are each independently an integer selected from 0-8;

[0082] the -Lc-is a bond,  wherein, s3 is selected from an integer of 2-12; Preferably, s3 is selected from 6, 7, 8, 9, 10, 11 or 12;

[0083] the -Ld-is selected from a peptide residue consisting of 2-8 amino acids selected from the group consisting of phenylalanine, isoleucine, leucine, tryptophan, valine, methionine, tyrosine, alanine, threonine, histidine, serine, glutamine, arginine, lysine, asparagine, glutamic acid, proline, citrulline, aspartic acid and glycine; Preferably the -Ld-is selected from:

[0084] the -Le-is a bond,  or -NH-CH2-O- (CRaRb) s4-CR1R2-C (O) -; wherein, Ra and Rb are identical or different and are each independently selected from the group consisting of hydrogen atom, deuterium atom, halogen, alkyl, haloalkyl, deuterated alkyl, alkoxy, hydroxy, amino; s4 is an integer selected from 0-4, Preferably, s4 is 0 or 1; R1 is selected from hydrogen, C1-6 haloalkyl or C3-8 cycloalkyl; R2 is selected from hydrogen, C1-6 haloalkyl or C3-8 cycloalkyl; or, R1 and R2 together with the carbon atom to which they are attached form a C3-8 cycloalkyl; Preferably, R1 is selected from hydrogen, C1-3 haloalkyl or C3-6 cycloalkyl; R2 is selected from hydrogen, C1-3 haloalkyl or C3-6 cycloalkyl; or, R1 and R2 together with the carbon atom to which they are attached form a C3-6 cycloalkyl.

[0085] In some embodiments of the present disclosure, the –L2-L1-has one of the following structures:

[0086] In some embodiments of the| present disclosure, the –L2-L1-has one of the following structures:

[0087] In some embodiments of the present disclosure, the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof, is as the following structure:

[0088] wherein:

[0089] y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8; Ab is the antibody or antibody fragment thereof mentioned above.

[0090] In some embodiments of the present disclosure, the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof, is as shown in general formula (C) :

[0091] wherein:

[0092] R1 is selected from hydrogen, C1-6 haloalkyl or C3-8 cycloalkyl; R2 is selected from hydrogen, C1-6 haloalkyl or C3-8 cycloalkyl; or, R1 and R2 together with the carbon atom to which they are attached form a C3-8 cycloalkyl.

[0093] In some embodiments of the present disclosure, R1 is selected from hydrogen, C1-3 haloalkyl or C3-6 cycloalkyl; R2 is selected from hydrogen, C1-3 haloalkyl or C3-6 cycloalkyl; or, R1 and R2 together with the carbon atom to which they are attached form a C3-6 cycloalkyl.

[0094] In some embodiments of the present disclosure, L2 is as shown in general formula (I) :

[0095] wherein:

[0096] s1 and s2 are each independently an integer selected from 0-8, Preferably, s1 and s2 are independently selected from 1, 2, 3, 4, 5 or 6; or, s1 is an integer from 1 to 8, s2 is 0, Preferably, s1 is selected from 4, 5, 6, 7 or 8, and s2 is 0; or, s2 is selected from an integer from 2 to 8, s1 is 2, Preferably, s2 is selected from 2, 3, 4, 5 or 6, and s1 is 2.

[0097] In some embodiments of the present disclosure, the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof, is as the following structure:

[0098] wherein:

[0099] y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 4 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8; Ab is the antibody or antibody fragment thereof mentioned above.

[0100] In some embodiments of the present disclosure, the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof, is selected from the group consisting of the following compounds:

[0101] wherein:

[0102] y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8.

[0103] In another aspect, the present disclosure provides a pharmaceutical composition, comprising the immunoconjugate the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or the pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof mentioned above, and one or more pharmaceutically acceptable excipient (s) , diluent (s) or carrier (s) .

[0104] In another aspect, the present disclosure provides use of the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or the pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof mentioned above, or the pharmaceutical composition mentioned above, in the manufacture of a medicament for treating or preventing a disease related to human EGFR and / or c-MET.

[0105] In some embodiments of the present disclosure, it is for the manufacture of a medicament for treating or preventing a cancer with EGFR and / or c-MET expression; preferably the cancer is epithelial cell cancer, lung cancer, ovarian cancer, breast cancer, colorectal cancer, squamous cell carcinoma of head and neck (SCCHN or SQHN) , anal cancer, prostate cancer, kidney cancer, bladder cancer, pharynx cancer, cancer of the nose, pancreatic cancer, skin cancer, oral cancer, cancer of the tongue, esophageal cancer, vaginal cancer, cervical cancer, cancer of the spleen, testicular cancer, gastric cancer, or glioblastoma; more preferably, lung cancer is Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) , lung adenocarcinoma or small cell lung cancer.

[0106] The obtained immunoconjugates have a series of excellent characteristics: i) Specifically bind to EGFR and c-MET. ii) Good internalization in EGFR high-expression cancer cells. iii) in vitro and in vivo activity in a wide range of cancer cells with various EGFR and c-MET expression levels. Specifically the in vitro efficacy of the bispecific antibody in this application after conjugation with cytotoxic drug is superior to that of the cytotoxic drug alone. Meanwhile, it was found that in some tumor cells, the killing effect of other bispecific antibodies conjugated with the same cytotoxic drug in the prior art is weaker than that of the cytotoxic drug. In terms of in vivo efficacy, the ADC of the present application significantly outperforms the control ADC and also surpasses the combination group of antibody and toxin.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0107] Figure 1. In vitro cell binding of EGFRxc-MET bispecific antibodies to SNU-1 (A) and SW620 (B) cells.

[0108] Figure 2. (A) Activation of SRE reporter HEK293 cell line by HGF, EGF and bispecific antibodies. (B) Bispecific antibodies block HGF activating SRE reported cells.  Bispecific antibodies block EGF activating SRE reported cells.

[0109] Figure 3. In vitro cytotoxicity dose-response curves of EGFRxc-MET bispecific ADCs in cancer cells.

[0110] Figure 4. Tumor growth curves of mice treated with Vehicle and ADCs in NCI-H1975 CDX model.

[0111] Figure 5. Tumor growth curves of mice treated with Vehicle and ADCs in NCI-H1975 CDX model.

[0112] Figure 6. Tumor growth curves of mice treated with Vehicle and ADCs in NCI-H1975 CDX model.

[0113] Figure 7. Tumor growth curves of mice treated with Vehicle and ADCs in NCI-H441 CDX model.

[0114] Figure 8. Tumor growth curves of mice treated with Vehicle and ADCs in SNU-1 CDX model.

[0115] Figure 9. Tumor growth curves of mice treated with Vehicle and ADCs in HCT-116 CDX model.

[0116] Figure 10. Tumor growth curves of mice treated with Vehicle and ADCs in Detroit562 CDX model.DETAILED DESCRIPTION

[0117] The present invention is based on the development of an immnoconjugate comprising bispecific antibody which can specifically bind to EGFR and c-Met, and a therapeutic drug including, for example, an exatecan or exatecan derivative.

[0118] The titles used in the present section are for convenience of specification only, and do not limit the present invention. Unless otherwise defined herein, the scientific and technical terms used herein have the same meaning as commonly understood by those skilled in the art. Further, unless the context specifically requires, the singular includes the plural, and the plural includes the singular. The abbreviation of the amino acid residue is the standard three-letter and / or one-letter code used in the art, which represents one of the 20 common L-amino acids.

[0119] DEFINITIONS

[0120] The term "antibody" or "antibodies" is meant in a broad sense and includes immunoglobulin molecules including monoclonal antibodies including murine, human, humanized and chimeric monoclonal antibodies, full-length antibodies, antigen binding fragments, multispecific antibodies, such as bispecific, trispecific, tetraspecific etc., dimeric, tetrameric or multimeric antibodies, single chain antibodies, domain antibodies and any other modified configuration of the immunoglobulin molecule that comprises an antigen binding site of the required specificity.

[0121] The term "antibody fragment" as long as they display binding to the relevant target molecule (s) . Examples of antibody fragments include Fv, scFv, Fab, scFab, F (ab’ ) 2, Fab2, diabodies, triabodies, scFv-Fc, minibodies and single domain antibodies (e.g. VhH) , etc. ) .

[0122] "Antibody" or "antibody fragment" according to the present disclosure comprise one or more antigen-binding domains. An "antigen-binding domain" describes the part of a molecule that binds to all or part of the target antigen. Where an antigen is large, an antibody may only bind to a particular part of the antigen, which part is termed an epitope. An antibody antigen-binding site may be provided by one or more antibody variable domains. An antibody antigen-binding site preferably comprises a variable light (VL) region and variable heavy (VH) region. The VH and VL region of an antigen-binding domain together constitute the Fv region.

[0123] An antigen-binding domain generally comprises six complementarity-determining regions (CDRs) ; three in the VH region: HCDR1 , HCDR2 and HCDR3, and three in the VL region: LCDR1 , LCDR2, and LCDR3. The six CDRs together define the paratope of the antigen-binding domain, which is the part of the antigen-binding domain which binds to the target antigen.

[0124] The VH region and VL region comprise framework regions (FRs) either side of each CDR, which provide a scaffold for the CDRs. From N-terminus to C-terminus, VH regions comprise the following structure: N term- [HFR1] - [HCDR1] - [HFR2] - [HCDR2] - [HFR3] - [HCDR3] - [HFR4] -C term; and VL regions comprise the following structure: N term- [LFR1] - [LCDR1] - [LFR2] - [LCDR2] - [LFR3] - [LCDR3] - [LFR4] -C term.

[0125] The term "antigen-binding fragment" of an antibody, as used herein, refers to one or more fragments of an antibody that retain the ability to specifically bind to an antigen (e.g., HER3) . It has been shown that the antigen-binding function of an antibody can be performed by fragments of a full-length antibody. Examples of binding fragments encompassed within the term "antigen-binding fragment "of an antibody include (i) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL and CHI domains; (ii) a F (ab') 2 fragment, a bivalent fragment comprising two Fab fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region; (iii) a Fd fragment consisting of the VH and CHI domains; (iv) a Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody, (v) a dAb fragment (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546) , which consists of a VH domain; (vi) an isolated complementarity determining region (CDR) , and (vii) a combination of two or more isolated CDRs which may optionally be joined by a synthetic linker. Furthermore, although the two domains of the Fv fragment, VL and VH, are coded for by separate genes, they can be joined, using recombinant methods, by a synthetic linker that enables them to be made as a single protein chain in which the VL and VH regions pair to form monovalent molecules (known as single chain Fv (scFv) ; see e.g., Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci.  85 : 5879-5883) . Such single chain antibodies are also intended to be encompassed within the term "antigen-binding portion" of an antibody.

[0126] The term "human antibody" , as used herein, is intended to include antibodies having variable and constant regions derived from human germline immunoglobulin sequences. The human antibodies of the invention may include amino acid residues not encoded by human germline immunoglobulin sequences (e.g., mutations introduced by random or site-specific mutagenesis in vitro or by somatic mutation in vivo) . However, the term "human antibody" , as used herein, is not intended to include antibodies in which CDR sequences derived from the germline of another mammalian species, such as a mouse, have been grafted onto human framework sequences.

[0127] The term "recombinant human antibody" , as used herein, includes all human antibodies that are prepared, expressed, created or isolated by recombinant means, such as (a) antibodies isolated from an animal (e.g., a mouse) that is transgenic or trans chromosomal for human immunoglobulin genes or a hybridoma prepared therefrom (described further in Section I, below) , (b) antibodies isolated from a host cell transformed to express the antibody, e.g., from a transfectoma, (c) antibodies isolated from a recombinant, combinatorial human antibody library, and (d) antibodies prepared, expressed, created or isolated by any other means that involve splicing of human immunoglobulin gene sequences to other DNA sequences. Such recombinant human antibodies have variable and constant regions derived from human germline immunoglobulin sequences. In certain embodiments, however, such recombinant human antibodies can be subjected to in vitro mutagenesis (or, when an animal transgenic for human Ig sequences is used, in vivo somatic mutagenesis) and thus the amino acid sequences of the VH and VL regions of the recombinant antibodies are sequences that, while derived from and related to human germline VH and VL sequences, may not naturally exist within the human antibody germline repertoire in vivo.

[0128] The term "CDR" refers to one of the six hypervariable regions within the variable domain of an antibody that primarily contributes to antigen binding. One of the most commonly used definitions for the six CDRs is provided by Kabat E. A. et al. (1991) Sequences of proteins of immunological interest. NIH Publication 91-3242. As used herein, the Kabat definition of CDR only applies to CDR1, CDR2 and CDR3 of the light chain variable domain (LCDR1, LCDR2, LCDR3 or L1, L2, L3) , as well as CDR1, CDR2 and CDR3 of heavy chain variable domain (HCDR1, HCDR2, HCDR3 or H1, H2, H3) .

[0129] Methods and techniques for identifying CDRs within HCVR and LCVR amino acid sequences are well known in the art and can be used to identify CDRs within the specified HCVR and / or LCVR amino acid sequences disclosed herein. Exemplary conventions that can be used to identify the boundaries of CDRs including, e.g., Chothia based on the three-dimensional structure of antibodies and the topology of the CDR loops (Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883) , Kabat based on antibody sequence variability (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th edition, US Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987) ) , AbM (University of Bath) , Contact (University College London) , International ImMunoGeneTics database (IMGT) (imgt. cines. fr / on the World Wide Web) , and North CDR definition based on the affinity propagation clustering using a large number of crystal structures. Those skilled in the art can easily identify the CDRs defined by each numbering system.

[0130] A useful comparison of CDR numbering is as below:

[0131] Note 1: some of these definitions (particularly for Chothia loops) vary depending on the individual publication examined; Note2: any of the numbering schemes can be used for these CDR defintions, except the contact definition uses the Chothia or Martin (enhanced Chothia) definition; Note 3: the end of the Chothia HCDR1 loop when numbered using the Kabat numbering convention varies between H32 and H34 depending on the length of the loop. This is because the Kabat numbering scheme places the insertions at H35A and H35B.

[0132] "Bispecific" refers to an antibody that specifically binds two distinct antigens or two distinct epitopes within the same antigen. The bispecific antibody may have cross-reactivity to other related antigens, for example to the same antigen from other species (homologs) , such as human or monkey, for example Macaca cynomolgus (cynomolgus, cyno) or Pan troglodytes, or may bind an epitope that is shared between two or more distinct antigens.

[0133] The term "nucleic acid molecule" as used herein refers to a DNA molecule and a RNA molecule. The nucleic acid molecule may be single stranded or double stranded but is preferably a double stranded DNA. A nucleic acid is “effectively linked” when it is placed into functional relationship with another nucleic acid sequence. For example, if a promoter or enhancer affects transcription of a coding sequence, the promoter or enhancer is effectively linked to the coding sequence.

[0134] The preparation method of the nucleic acid is a conventional preparation method in the art. Preferably, it comprises the following steps: obtaining the nucleic acid molecule encoding the above-mentioned protein by gene cloning technology, or obtaining the nucleic acid molecule encoding the above-mentioned protein by the method of artificial full-length sequence synthesis.

[0135] Those skilled in the art know that the base sequence encoding the amino acid sequence of the protein can be replaced, deleted, changed, inserted or added appropriately to provide a polynucleotide homolog. The homolog of the polynucleotide of the present invention can be prepared by replacing, deleting or adding one or more bases of the gene encoding the protein sequence within the scope of maintaining the activity of the antibody.

[0136] The term "ligand" is a macromolecular compound able to recognize and bind to the target cell-associated antigens or receptors. The role of the ligand is to deliver the drug to the target cell population bound to the ligand. The ligand includes, but is not limited to, proteinaceous hormones, lectins, growth factors, antibodies and other molecules capable of binding to cells. In an embodiment of the present invention, the ligand is expressed as Ab. A connecting bond can be formed between a hetero atom in the ligand and the connecting unit.

[0137] The term "linking unit" as used herein means the part which links the antibody with the drug in the antibody-drug conjugate (i.e. ADC) , which could be cleavable or uncleavable. The cleavable linker (i.e., breakable linker or biodegradable linker) may be broken in or on the target cells, and thereby releasing the drug. In some embodiments, the linking unit or linker of the present invention has very good stability and greatly decreases the release of the drug during the process of delivering to the target (e.g., in blood) , thereby reducing the side effect and toxicity. In some particular embodiments, the linking unit or linker of the present invention is selected from cleavable linker, such as the linker based on disulfide (which is selectively broken in the tumor cells at a higher thiol concentration) , peptide linker (which is cleaved by the enzyme in the tumor cells) , and hydrazone linker.

[0138] The term "cytotoxic drug" means a chemical molecule capable of strongly destructing normal growth in tumor cells. In principle, cytotoxic drugs can kill tumor cells in high enough concentrations, but due to the lack of specificity, when killing tumor cells, it also leads to apoptosis in normal cells, leading to serious side effects. In an embodiment of the present invention, the cytotoxic drug is represented as "Compound C" , In an embodiment of the present invention, the cytotoxic drug is represented as "Compound D" , and non-limiting examples include tubulin inhibitors, DNA alkylating agents, tyrosine kinase inhibitors, topoisomerase inhibitors, and DNA synthesis inhibitors, preferably topoisomerase inhibitors.

[0139] The term "immunoconjugate" means that an antibody component or other targeting moiety conjugated to a therapeutic agent. In some particular embodiments, the "immunoconjugate" is preferably an antibody-drug conjugate (ADC) , which means that an antibody or antibody fragment is linked to a cytotoxic drug with biological activity through a linking unit. As used herein, the terms "conjugate" and "immunoconjugate" are used interchangeably.

[0140] The term "Drug to Antibody Ratio (DAR) " means the average number of cytotoxic drugs loaded on each ligand, and can also be represented as ratio of drug amount and antibody amount. It could be integer or non-integer. The range of drug loading for each ligand (Ab) can be 1-20 cytotoxic drugs (Compound C or Compound D) . In the embodiment of the present invention, the Drug to Antibody Ratio is represented as y, y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 4, 2 to 6, 4 to 6, 4 to 8, 6 to 8, further preferably a number of 4 to 8 or 6 to 8, and most preferably 4, 5, 6, 7 or 8. The average number of drugs in each ADC molecule after the coupling reaction can be identified by conventional methods, such as UV / visible spectroscopy, mass spectrometry, ELISA test, and HPLC characteristic identification.

[0141] The term "halogen" refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.

[0142] The term "alkyl" refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group, which is a straight or branched chain group comprising 1 to 20 carbon atoms, preferably an alkyl having 1 to 12 carbon atoms, more preferably an alkyl having 1 to 10 carbon atoms, and most preferably an alkyl having 1 to 6 carbon atoms (having 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms) . Non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1, 1-dimethylpropyl, 1, 2-dimethylpropyl, 2, 2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1, 1, 2-trimethylpropyl, 1, 1-dimethylbutyl, 1, 2-dimethylbutyl, 2, 2-dimethylbutyl, 1, 3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2, 3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhexyl, 5-methylhexyl, 2, 3-dimethylpentyl, 2, 4-dimethylpentyl, 2, 2-dimethylpentyl, 3, 3-dimethylpentyl, 2-ethylpentyl, 3-ethylpentyl, n-octyl, 2, 3-dimethylhexyl, 2, 4-dimethylhexyl, 2, 5-dimethylhexyl, 2, 2-dimethylhexyl, 3, 3-dimethylhexyl, 4, 4-dimethylhexyl, 2-ethylhexyl, 3-ethylhexyl, 4-ethylhexyl, 2-methyl-2-ethylpentyl, 2-methyl-3-ethylpentyl, n-nonyl, 2-methyl-2-ethylhexyl, 2-methyl-3-ethylhexyl, 2, 2-diethylpentyl, n-decyl, 3, 3-diethylhexyl, 2, 2-diethylhexyl, and various branched isomers thereof. More preferably, the alkyl group is a lower alkyl having 1 to 6 carbon atoms, and non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1, 1-dimethylpropyl, 1, 2-dimethylpropyl, 2, 2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1, 1, 2-trimethylpropyl, 1, 1-dimethylbutyl, 1, 2-dimethylbutyl, 2, 2-dimethylbutyl, 1, 3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2, 3-dimethylbutyl and the like. The alkyl can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) can be substituted at any available connection point. The substituent group (s) is preferably one or more groups independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, thiol, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocyclylthio and oxo.

[0143] The term "alkoxy" refers to -O- (alkyl) and -O- (unsubstituted cycloalkyl) , wherein alkyl or cycloalkyl is as defined above. Non-limiting examples of alkoxy groups include: methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, cyclopropoxy, cyclobutoxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy. Alkoxy may be optionally substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituents are preferably one or more of the following groups independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkoxy thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio.

[0144] The term "haloalkyl" refers to an alkyl group substituted by one or more halogen (s) , wherein the alkyl is as defined above.

[0145] The term "cycloalkyl" refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic hydrocarbon substituent group having 3 to 20 carbon atoms, preferably 3 to 12 carbon atoms, more preferably 3 to 10 carbon atoms, and most preferably 3 to 8 carbon atoms (having 3, 4, 5, 6, 7 or 8 carbon atoms) . Non-limiting examples of monocyclic cycloalkyl include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cycloheptatrienyl, cyclooctyl and the like. Polycyclic cycloalkyl includes a cycloalkyl having a spiro ring, fused ring or bridged ring.

[0146] The term "heterocyclyl" refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic cyclic hydrocarbon substituent containing from 3 to 20 ring atoms, one or more of which is selected from nitrogen, oxygen or S (O) heteroatoms of u (where u is an integer from 0 to 2) , excluding ring moieties of -OO-, -OS-or -SS-, the remaining ring atoms being carbon. In one embodiment, it contains 3 to 12 ring atoms, of which 1 to 4 are heteroatoms; more preferably, the cycloalkyl ring contains 3 to 10 ring atoms. Non-limiting examples of monocyclic heterocyclyl groups include pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, homopiperazinyl, and the like. Polycyclic heterocyclyls include spiro, fused and bridged heterocyclyls. The heterocyclyl ring can be fused to an aryl, heteroaryl or cycloalkyl ring, wherein the ring attached to the parent structure is a heterocyclyl. Heterocyclyl may be optionally substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituents are preferably one or more of the following groups independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkane thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio, oxo.

[0147] The term "aryl" refers to a 6-to 14-membered all-carbon monocyclic or fused polycyclic (that is, rings that share adjacent pairs of carbon atoms) groups, preferably 6 to 10 membered, with a conjugated electron system, such as benzene and naphthyl, in one embodiment, phenyl. The aryl ring may be fused to a heteroaryl, heterocyclyl or cycloalkyl ring, wherein the ring linked to the parent structure is an aryl ring. Aryl may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituents are preferably one or more of the following groups independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycloalkanethio base.

[0148] The term "heteroaryl" refers to a heteroaromatic system comprising 1 to 4 heteroatoms, 5 to 14 ring atoms, wherein the heteroatoms are selected from oxygen, sulfur and nitrogen. Heteroaryl is preferably 5 to 10-membered, more preferably 5-or 6-membered, such as furyl, thienyl, pyridyl, pyrrolyl, N-alkylpyrrolyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, imidazolyl, tetra azolyl, etc. The heteroaryl ring may be fused to an aryl, heterocyclyl or cycloalkyl ring, wherein the ring linked to the parent structure is a heteroaryl ring. Heteroaryl groups may be optionally substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituents are preferably one or more of the following groups independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkane thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio.

[0149] The term "transfectoma" , as used herein, includes recombinant eukaryotic host cell expressing the antibody, such as CHO cells, NS / 0 cells, HEK293 cells, plant cells, or fungi, including yeast cells.

[0150] The sequence of the DNA molecule for the antibody or a fragment thereof according to the present invention can be obtained by conventional techniques, for example, methods such as PCR amplification or genomic library screening. In addition, the sequences encoding light chain and heavy chain can be fused together, to form a single-chain antibody.

[0151] Once a relevant sequence is obtained, the relevant sequence can be obtained in bulk using a recombination method. This is usually carried out by cloning the sequence into a vector, transforming a cell with the vector, and then separating the relevant sequence from the proliferated host cell by conventional methods.

[0152] In addition, a relevant sequence can be synthesized artificially, especially when the fragment is short in length. Usually, several small fragments are synthesized first, and then are linked together to obtain a fragment with a long sequence.

[0153] At present, it is possible to obtain a DNA sequence encoding the antibody of the present invention (or fragments thereof, or derivatives thereof) completely by chemical synthesis. The DNA sequence can then be introduced into a variety of existing DNA molecules (or, for example, vectors) and cells known in the art. In addition, mutations can also be introduced into the protein sequences of the present invention by chemical synthesis.

[0154] In general, under conditions suitable for expression of the antibody according to the present invention, the host cell obtained is cultured. Then, the antibody of the present invention is purified by using conventional immunoglobulin purification steps, for example, the conventional separation and purification means well known to those skilled in the art, such as protein A-Sepharose, hydroxyapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, molecular sieve chromatography or affinity chromatography.

[0155] The monoclonal antibody obtained can be identified by conventional means. For example, the binding specificity of a monoclonal antibody can be determined by immunoprecipitation or an in vitro binding assay (such as radioimmunoassay (RIA) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ) . The binding affinity of a monoclonal antibody can be determined by, for example, the Scatchard analysis (Munson et al., Anal. Biochem., 107: 220 (1980) ) .

[0156] The antibody according to the present invention can be expressed in a cell or on the cell membrane, or is secreted extracellularly. If necessary, the recombinant protein can be separated and purified by various separation methods according to its physical, chemical, and other properties. These methods are well known to those skilled in the art. The examples of these methods comprise, but are not limited to, conventional renaturation treatment, treatment by protein precipitant (such as salt precipitation) , centrifugation, cell lysis by osmosis, ultrasonic treatment, supercentrifugation, molecular sieve chromatography (gel chromatography) , adsorption chromatography, ion exchange chromatography, high performance liquid chromatography (HPLC) , and any other liquid chromatography, and the combination thereof.

[0157] The term "variant" of a polypeptide such as for example, an antigen-binding fragment, a protein or an antibody is a polypeptide in which one or more amino acid residues are inserted, deleted, added and / or substituted, as compared to another polypeptide sequence, and includes a fusion polypeptide. In addition, a protein variant includes one modified by protein enzyme cutting, phosphorylation or other posttranslational modification, but maintaining biological activity of the antibody disclosed herein, for example, binding to HER3 and specificity. The variant may be about 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, or 80%identical to the sequence of the antibody or its antigen-binding fragment disclosed herein. The percent identity (%) or homology may be calculated with reference to the following description.

[0158] In one embodiment, the percent homology or identity may be calculated as 100 x [ (identical position)  / min (TGA, TGB) ] , and in the formula, TGA, TGB are the sum of the number of residues of sequences A and B compared and the internal gap position (Russell et al., J. Mol Biol., 244: 332-350 (1994) .

[0159] In the present invention, the antibody of the present invention also includes a conservative variant thereof, which means that, compared to the amino acid sequence of the antibody of the present invention, there are up to 10, preferably up to 8 and more preferably up to 5, most preferably up to 3 amino acids are replaced by amino acids with similar or similar properties to form a polypeptide. These conservative variant polypeptides are preferably produced by amino acid substitution according to Table A.

[0160] Table A

[0161] The term "KD" (M) , as used herein, is intended to refer to the dissociation equilibrium constant of a particular antibody-antigen interaction. “KD” refers to the dissociation constant, which is obtained from the ratio of Kd to Ka (i.e., Kd / Ka) and is expressed as a molar concentration (M) . KD values for antibodies can be determined using methods in the art in view of the present disclosure. For example, the KD of an antibody can be determined by using surface plasmon resonance, such as by using a biosensor system, e.g., a system, or by using bio-layer interferometry technology, such as an Octet RED96 system.

[0162] The term "affinity" is the strength of interaction between an antibody or its antigen-binding fragment and an antigen, and it is determined by properties of the antigen such as size, shape and / or charge of antigen, and CDR sequences of the antibody or antigen-binding fragment. The methods for determining the affinity are known in the art, and the followings can be referred.

[0163] The antibody or its antigen-binding fragment is called "specifically binding" to its target such as an antigen, when a dissociation constant (KD) is < l06 M. The antibody specifically binds to a target with "high affinity " , when KD is < l09 M.

[0164] “Antibody internalization” , the antibody molecules and immunoconjugates described herein may be characterized by their ability to mediate efficient internalization. This is particularly useful for immunoconjugates, as it ensures the conjugate is internalized into the cell and delivered to lysosomes, where the antibody molecule is subsequently degraded and drug released into the cell, where it exerts its cellular effects, e.g. cytotoxicity.

[0165] The term "Pharmaceutical composition" , as used herein, is intended to refer to a mixture containing one or more of the compounds or a physiological / pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof described herein with other chemical components, such as physiological  / pharmaceutically acceptable carriers and excipients. The purpose of the pharmaceutical composition is to promote the administration to the organism, which is beneficial to the absorption of the active ingredient and exerts the biological activity.

[0166] "Administration" and "treatment" , when applied to an animal, human, experimental subject, cell, tissue, organ, or biological fluid, refer to contact with an exogenous pharmaceutical, therapeutic, diagnostic reagent, or composition with the animal, human, subject, cell, tissue, organ, or biological fluid. “Administration” and “treatment” can refer, e.g., to therapeutic, pharmacokinetic, diagnostic, research, and experimental methods. Treatment of a cell encompasses contacting the cell with a reagent, as well as contacting a fluid with a reagent, wherein the fluid is in contact with the cell. "Administration" and "treatment" also mean in vitro and ex vivo treatments, e.g., of a cell, by a reagent, diagnostic, binding composition or by another cell. “Treatment, ” when applied to a human, veterinary, or research subject, refers to therapeutic treatment, prophylactic or preventative measures, research and diagnostic applications.

[0167] "Therapeutically effective amount" refers to an amount effective, at doses and for periods of time necessary, to achieve a desired therapeutic result. A therapeutically effective amount may vary depending on factors such as the disease state, age, sex, and weight of the individual, and the ability of a therapeutic or a combination of therapeutics to elicit a desired response in the individual. Exemplary indicators of an effective therapeutic or combination of therapeutics that include, for example, improved well-being of the patient.

[0168] An antibody or antigen-binding fragment, immunoconjugate or pharmaceutical composition as described herein may be used in a method of treatment of the human or animal body. Related aspects of the disclosure provide;

[0169] (i) an antibody or antigen-binding fragment, or immunoconjugate, or pharmaceutical composition described herein for use as a medicament,

[0170] (ii) an antibody or antigen-binding fragment, or immunoconjugate, or pharmaceutical composition described herein for use in a method of treatment of a disease or disorder,

[0171] (iii) an antibody or antigen-binding fragment, or immunoconjugate, or pharmaceutical composition described herein in the manufacture of a medicament for use in the treatment of a disease or disorder; and,

[0172] (iv) a method of treating a disease or disorder in an individual, wherein the method comprises administering to the individual a therapeutically effective amount of an antibody or antigen-binding fragment, or immunoconjugate, or pharmaceutical composition as described herein.

[0173] The "individual" includes any human or nonhuman animal. "Nonhuman animal" includes all vertebrates, e.g., mammals and non-mammals, such as nonhuman primates, sheep, dogs, cats, horses, cows, chickens, amphibians, reptiles, etc. The terms "individual" and "subject" are used interchangeably herein.

[0174] EXAMPLE

[0175] The invention is further illustrated by the following specific examples. It is to be understood that these examples are for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the invention. The experimental methods without detailed conditions in the following examples are generally in accordance with the conditions described in the conventional conditions such as Sambrook. J et al. "Guide to Molecular Cloning Laboratory" (translated by Huang Peitang et al., Beijing: Science Press, 2002) , or in accordance with the conditions recommended by the manufacturer (for example, product manuals) . Percentages and parts are by weight unless otherwise stated. The experimental materials and reagents used in the following examples are commercially available unless otherwise specified.

[0176] The room temperature described in the examples is a conventional room temperature in the art, and is generally 10-30℃.

[0177] EXAMPLE 1: Preparation of the bispecific antibody

[0178] The bispecific antibody EGFRxc-MET-136 Afu (denoted as BsAb-1) is prepared according to the method of Example 6 disclosed in the patent of WO2023 / 186092. Patent recited herein is hereby incorporated by reference in its entirety. The amino acid sequence of CDRs, heavy chain variable region, light chain variable region, constant regions, heavy chain and light chain of the bispecific antibody are showed in Table 1. The amino acid residues of the CDRs in VH / VL are numbered and annotated according to the Kabat &Wu definition system.

[0179] Table 1. sequences of the bispecific antibody

[0180] EXAMPLE 2 Cell binding of the bispecific antibody

[0181] The binding of EGFRxc-MET bispecific antibody to the cell surface EGFR was determined by FACS analysis using EGFR expressing and c-Met non-expressing cancer cells SNU-1. The binding of EGFRxc-MET bispecific antibody to the cell surface c-Met was determined by FACS analysis using c-Met expressing and EGFR non-expressing cancer cells SW620. SNU-1 and SW620 cells were maintained in RPMI-1640 medium supplemented with 10%FBS, 1%penicillin and streptomycin. All cell lines were cultured at 37℃ with 5%CO2 in humidified atmosphere.

[0182] To determine the binding of EGFRxc-MET bispecific antibody to cell surface EGFR and c-Met, cells were first harvested and resuspended in cell staining buffer (BioLegend) at 2×106 cells / mL. Then, the cells were treated with human Fc receptor blocking reagent (BioLegend) on the ice for 10 min. The resulting cell suspension was aliquoted into 50 μL aliquots. 50 μL of BsAbs at various concentrations were mixed with the cell aliquots, the final concentration of hIgG1 mAbs in the mixture ranged from 4 pM to 200 nM. The cells were incubated on the ice for 1 hour and then washed with cell staining buffer twice. 50 μL of secondary antibody (PE conjugated goat anti-human Fc, eBioscienceTM, 1: 400 dilution) was added to each sample to resuspend the cells. The cells were incubated on the ice for another 30 min. Cells were subsequently washed twice with cell staining buffer and resuspended in 4%PFA to fix the cells. The samples were analyzed using iQue3 to measure the median fluorescence intensity using corresponding channels. An EGFRxcMET bispecific antibody from WO2023083846 was used as reference (named as Ref 1 in the invention) . Isotype control mAb1 is our -in-house version of antibodies obtained from reference (McLellan, et al. Nat Struct Mol Biol., 2010 17: 248-250) .

[0183] The result was disclosed in Figure 1 and Table 2. As a result, it was confirmed that the EGFRxc-MET bispecific antibody binds to the EGFR and c-Met as originally expressed in cancer cells.

[0184] Table 2. KD values of EGFRxc-MET bispecific antibodies

[0185] EXAMPLE 3 EGFRxc-MET BsAb in SRE-HEK293 reporter cell line

[0186] SRE reporter-HEK293 cells (BPS Bioscience) were used to assess the impact of EGFRxc-MET bispecific antibodies on EGFR and c-Met signaling pathways.

[0187] To evaluate the direct impact of EGFRxc-MET bispecific antibodies on the EGFR and c-Met signaling pathway. 2×105 SRE-HEK293 cells were plated in 96-well white plate and incubated overnight. Then, bispecific antibodies, recombinant human HGF, and recombinant human EGF were added to the cells, respectively. An EGFRxc-MET bispecific antibody from WO2014081954 was used as reference (named as Ref 2 in the invention) . Isotype control mAb2 was our in-house version of an antibody obtained from reference (Zwick, et al. J Virol., 2003, 77 (10) : 5863-5876) . After 4 hours incubation, One-Glo luciferase assay reagents (Promega) were added to each well. The luminescence was then measured by a plate reader. As shown in Figure 2, recombinant human HGF and recombinant EGF can activate the SRE-HEK293 cells, while BsAb-1 and Ref 2 didn’ t activate the SRE-HEK293 cells.

[0188] To evaluate if the EGFRxc-MET bispecific antibodies can block the HGF or EGF mediated activation, bispecific antibodies were first incubated with SRE-HEK293 cells in 96-well plates. After 1 hour incubation, HGF and EGF were added to the culture with final concentration at 185 pM and 750 pM, respectively. One-Glo luciferase assay reagents (Promega) were added to each well 4 hours later. The luminescence was then measured by a plate reader. As shown in Figure 2B and 2C, BsAb-1 can block the HGF or EGF mediated activation in the SRE reporter cells efficiently.

[0189] EXAMPLE 4 Generation of immunoconjugate that comprising the EGFRxc-MET bispecific antibodies

[0190] Purification of the Bispecific Antibody

[0191] Referring to the preparation procedures of the bispecific antibody described in Example 1, the bispecific antibody is purified for drug conjugation.

[0192] Preparation of Intermediates as Drugs

[0193] The following intermediate compound was used for generation of immunoconjugates for anti-EGFRxc-MET bispecific antibody, compound C was prepared by a method disclosed in PCT Patent Application. (See WO2020063673, filed Sept 25, 2019) , Compound D was prepared by a method disclosed in PCT Patent Application. (See WO2022161385, filed Jan 26, 2022) .

[0194] Both compound C and compound D rely on processes inside the cell to release the toxin (compound 2-A) . the compound 2-A is a potent DNA topoisomerase I inhibitor disclosed in WO2021190480, and the compound 2-A was prepared by a method disclosed in PCT Patent Application. (See WO2021190480, filed Mar 23, 2021) .

[0195] Conjugation of the Bispecific Antibody with Drug Molecule

[0196] The bispecific antibody BsAb-1 (5 mg / mL in PBS, pH 7.4) was treated with sufficient molar equivalence of (tris (2-carboxylethyl) phosphine (TCEP, 10 mM) at 37 ℃ for 1 hour. Isotype control mAb1 and mAb2 are the negative control, Ref 1 and Ref 2 are the positive control. Ref1 antibody was also conjugated with payload SG3932 as described in patent WO2023083846.

[0197] Sufficient molar equivalence of drug linker, for example, Compound C or Compound D, in DMSO, was added to the reduced antibody in PBS. After an hour incubation, the reaction mixture was then purified using size-exclusion chromatography (SEC) to separate ADC and free, unconjugated drug linker. The bispecific antibody conjugated with Compound C has the general formula (ADC-A) , The bispecific antibody conjugated with Compound D has the general formula (ADC-B) .

[0198] The drug-to-antibody ratio (DAR) of ADC was determined using a TOF LC / MS system (Agilent) and the average DAR values were summarized in Table 3. The average DAR values of BsAb-1 conjugated with compound C were approximately 4 and 6. The average DAR values of BsAb-1 conjugated with compound D were approximately 4, 6 and 8. The synthesis steps of anti-EGFRxc-MET bispecific antibody conjugated with compound C or compound D with other DAR values can refer to the above.

[0199] Table 3: Conjugation of the bispecific antibody and linker / payload moiety

[0200] EXAMPLE 5: Determination of the internalization rate of bsAb and ADCs

[0201] BsAb and ADCs were labeled using pHrodoTM iFL dye. The pHrodoTM iFL dye hardly fluoresces at neutral pH. When the BsAb or ADC is endocytosed, the dye is internalized at the same time. The fluorescence signal will gradually intensify as the pH decreases. The endocytic activity of the BsAb or ADC was evaluated according to how the fluorescence signal intensified.

[0202] Briefly, HCC827, MDA-MB-468 cells with a density of 2×106 cells / mL were seeded in 96 well conical (V) bottom plate at 50 μL per well, with 100,000 cells per well. Dilute BsAb and ADC in complete cell culture medium to 40 nM or 80 nM, dilute the pHrodoTM iFL dye in complete cell culture medium to 120 nM or 240 nM, then mix the ADC and the pHrodoTM iFL dye dilutions at a molar ratio of 1: 3 and a volume ratio of 1: 1, and incubate at room temperature for 10 minutes. Take 50 μL per well of the ADC labeled with pHrodoTM iFL dye to the 96 well conical (V) bottom plate. Gently mix and incubate in a 37℃ incubator. The final concentration of the ADC is 10 nM, and the final concentration of the pHrodoTM iFL dye is 30 nM.

[0203] At 0.5 h, 2 h, and 4 h, remove the cells from the 37℃ incubator and the samples are loaded into a flow cytometer. The data is analyzed using Flowjo analysis software. By comparing the MFI of cell pore with pHrodoTM iFL dye added separately at each time point, the proportion of MFI change of different cells was obtained. The datas are summarized in Table 4. The endocytosis of ADC-12 was slightly higher than that of BsAb-1 and significantly higher than that of ADC-13 at all time points.

[0204] Table 4: The change ratio of mean fluorescence signal (MFI) at different time points

[0205] EXAMPLE 6: Inhibitory Effect of the ADCs on Growth of Tumor Cells

[0206] Inhibitory effect of the ADCs on tumor cells growth were examined using in vitro cell killing assay. Different tumor cells were collected in log phase growth and distributed into 96-well plates at 2000 cells / well. After overnight incubation, the ADCs were added to each well. The final concentrations of the ADCs in the wells were ranging from 0.003 nM to 200 nM. After 4 to 7 days of incubation, the cell viability in each well was determined by Cell Titer Glo 2.0 Assay (Promega) . IC50 values were generated in GraphPad Prism using a sigmoidal dose-response non-linear regression fit. The data from these experiments are summarized in Table 5. Figure 3 showed representative killing curves for all ADCs tested against the indicated cell lines. The tested BsAb-1 ADCs showed good in vitro toxicity on tumor cells.

[0207] Table 5: Evaluation of the cytotoxicity of antibody-drug conjugates on tumor cells (IC50, nM)

[0208] NA: IC50 not measurable, -: not tested.

[0209] The inhibitory effect of ADCs on the growth of tumor cells was detected by CellTiter-Glo luminescence assay kit. Different tumor cells were collected in log phase growth and distributed into 96-well plates with different densities. After overnight growth, the tested ADCs with a maximum final concentration of 100 or 300 or 1000 or 2000 nM, diluted 3 or 4 times, and 9 concentration gradients were added. BsAb-1 and Compound 2-A are as the references. After adding the tested ADCs and drug, the cells were cultured at 37℃ and 5%CO2 for 6 days, and then CellTiter-Glo reagent was added and oscillated on an oscillator to induce cell lysis and release ATP. The 96-well plates was further left at room temperature to avoid light and the chemiluminescence signal value was measured with an enzymoleter. Finally, IC50 values were generated in GraphPad Prism using a sigmoidal dose-response non-linear regression fit.

[0210] The data from these experiments are summarized in Table 6. The tested ADCs and Compound 2-A can significantly inhibit tumor cells from different tissue sources expressing EGFR / cMet antigen, and the efficacy of ADC-12 is superior to that of reference ADC and cytotoxic drug.

[0211] Table 6: Evaluation of the cytotoxicity of ADCs on tumor cells (IC50, nM)

[0212] EXAMPLE 7: Tumor-Inhibitory Experiment of ADCs Towards NCI-H1975 cell line Nude Mouse Subcutaneous Transplantation Tumor Model

[0213] 1. NCI-H1975 cell line-derived xenograft (CDX) model

[0214] NCI-H1975 cells were engrafted subcutaneously into Balb / C nude mice. When the tumor volume reaches approximately 150-200 mm3, the engrafted mice were randomized into four groups (5 mice per group) . The groups were treated with vehicle control, ADC-08, ADC-09, respectively. The mice were treated with ADCs (3 mg / kg) intravenously QW×3. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0215] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0216] Tumor growth in mice treated with the ADCs showed a statistically significant difference from mice in the control group, causing regression of tumors.

[0217] The results of the study are shown in Table 7 and Figure 4. Tumor growth in mice treated with ADC-08, ADC-09 showed a statistically significant difference from mice treated with vehicle, with TGI value at Day 16 of 103.2%, 104.0%respectively.

[0218] Table 7. Efficacy of ADCs in NCI-H1975 tumor-bearing mice

[0219] In another experiment, NCI-H1975 tumor-bearing mice were randomized into 7 groups (5 mice per group) . The groups were treated with vehicle control, ADC-11, ADC-01, ADC-02, at 2 dose levels, respectively. Tumor growth in mice treated with the ADCs showed a statistically significant difference from mice in the control group, causing regression of tumors. ADC-01 and ADC-02 significantly delayed tumor growth compared to ADC-11. ADC-02 is slightly more efficacious than ADC-01. The results of the study are shown in Table 8 and Figure 5.

[0220] Table 8. Efficacy of ADCs in NCI-H1975 tumor-bearing mice

[0221] In another experiment, NCI-H1975 tumor-bearing mice were randomized into 12 groups (5 mice per group) . The groups were treated with vehicle control, BsAb-1 ADCs, Ref 1 ADCs, and BsAb-1, respectively. ADC-01 and ADC-02 significantly delayed tumor growth compared to ADC-03, ADC-04, and BsAb-1. The results of the study are shown in Table 9 and Figure 6.

[0222] Table 9. Efficacy of ADCs in NCI-H1975 tumor-bearing mice

[0223] 2. NCI-H1975 (EGFR C797S) cell line-derived xenograft (CDX) model

[0224] NCI-H1975 (EGFR C797S) cells were engrafted subcutaneously into NOD / SCID mice. When the tumor volume reaches approximately 150-200 mm3, the engrafted mice were randomized into four groups (5 mice per group) . The groups were treated with vehicle control, ADC-08 respectively. The mice were treated with ADCs (3 mg / kg) intravenously QW×2. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0225] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0226] The results of the study are shown in Table 10. Tumor growth in mice treated with ADC-08 showed a statistically significant difference from mice treated with vehicle, with TGI value at Day 28 of 108.55%.

[0227] Table 10. Efficacy of ADCs in NCI-H1975 (EGFR C797S) tumor-bearing mice

[0228] 3. NCI-H441 cell line-derived xenograft (CDX) model

[0229] NCI-H441 cells were engrafted subcutaneously into BALB / c mice. When the tumor volume reaches approximately 100-200 mm3, the engrafted mice were randomized into four groups (6 mice per group) . The groups were treated with BsAb-1 and Compound 2-A, ADC-12, ADC-13 respectively. The mice were treated with ADCs (1, 3, 6 mg / kg) and BsAb-1+Compound 2-A (mAb+drug_6+0.086 mg / kg) intravenously single dose. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0230] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0231] The results of the study are shown in Table 11 and Figure 7. ADC-12 significantly delayed tumor growth compared to ADC-13, and BsAb-1 with Compound 2-A.

[0232] Table 11. Efficacy of ADCs in NCI-H441 tumor-bearing mice

[0233] 4. SNU-1 cell line-derived xenograft (CDX) model

[0234] SNU-1 cells were engrafted subcutaneously into BALB / c mice. When the tumor volume reaches approximately 150-200 mm3, the engrafted mice were randomized into four groups (7 mice per group) . The groups were treated with BsAb-1 and Compound 2-A, ADC-12, ADC-13 respectively. The mice were treated with ADCs (1, 3, 9 mg / kg) and BsAb-1+Compound 2-A (mAb+drug_9+0.128 mg / kg) intravenously single dose. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0235] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0236] The results of the study are shown in Table 12 and Figure 8. ADC-12 significantly delayed tumor growth compared to ADC-13, and BsAb-1 with Compound 2-A.

[0237] Table 12. Efficacy of ADCs in SNU-1 tumor-bearing mice

[0238] 5. HCT-116 cell line-derived xenograft (CDX) model

[0239] HCT-116 cells were engrafted subcutaneously into BALB / c mice. When the tumor volume reaches approximately 100-200 mm3, the engrafted mice were randomized into four groups (7 mice per group) . The groups were treated with BsAb-1 and Compound 2-A, ADC-12, ADC-13 respectively. The mice were treated with ADCs (1, 3, 8 mg / kg) and BsAb-1+Compound 2-A (mAb+drug_8+0.114 mg / kg) intravenously single dose. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0240] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0241] The results of the study are shown in Table 13 and Figure 9. ADC-12 significantly delayed tumor growth compared to ADC-13, and BsAb-1 with Compound 2-A.

[0242] Table 13. Efficacy of ADCs in HCT-116 tumor-bearing mice

[0243] 6. Detroit562 cell line-derived xenograft (CDX) model

[0244] Detroit562 cells were engrafted subcutaneously into BALB / c mice. When the tumor volume reaches approximately 100-200 mm3, the engrafted mice were randomized into four groups (6 mice per group) . The groups were treated with BsAb-1 and Compound 2-A, ADC-12, ADC-13 respectively. The mice were treated with ADCs (0.3, 1, 3 mg / kg) and BsAb-1+Compound 2-A (mAb+drug_3+0.043 mg / kg) intravenously single dose. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0245] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0246] The results of the study are shown in Table 14 and Figure 10. ADC-12 significantly delayed tumor growth compared to ADC-13, and BsAb-1 with Compound 2-A.

[0247] Table 14. Efficacy of ADCs in Detroit562 tumor-bearing mice

Claims

1.An immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, the immunoconjugate is as shown in general formula (A) , Ab- (L2-L1-D) y (A) ,wherein:D is a cytotoxic drug;L1 and L2 are linking units;y is a number of 1 to 20, preferably 2 to 10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;Ab is an antibody or antibody fragment thereof, comprising: the first antigen-binding domain that binds EGFR and a second antigen-binding domain that binds c-Met;wherein, the second antigen-binding domain comprises:a heavy chain variable (VH) region comprising the following CDRs:HCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1,HCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2,HCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, or a variant thereof in which one or two or three amino acids in one or more of HCDR1, HCDR2, or HCDR3 are substituted with another amino acid; anda light chain variable (VL) region comprising the following CDRs:LCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4,LCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5,LCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, or a variant thereof in which one or two or three amino acids in one or more of LCDR1, LCDR2, or LCDR3 are substituted with another amino acid;preferably, the second antigen-binding domain comprises:a heavy chain variable (VH) region comprising the following CDRs:HCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1,HCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2,HCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3; anda light chain variable (VL) region comprising the following CDRs:LCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4,LCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5,LCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.2.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 1, whereinthe second antigen-binding domain comprises: a VH region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, or having at least at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13; and a VL region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14;preferably, the second antigen-binding domain comprises: a VH region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13; and a VL region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.3.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 1 or 2, whereinthe first antigen-binding domain comprises:a heavy chain variable (VH) region comprising the following CDRs:HCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7,HCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8,HCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, or a variant thereof in which one or two or three amino acids in one or more of HCDR1, HCDR2, or HCDR3 are substituted with another amino acid; anda light chain variable (VL) region comprising the following CDRs:LCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10,LCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11,LCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or a variant thereof in which one or two or three amino acids in one or more of LCDR1, LCDR2, or LCDR3 are substituted with another amino acid;preferably,the first antigen-binding domain comprises:a heavy chain variable (VH) region comprising the following CDRs:HCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7,HCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8,HCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9; anda light chain variable (VL) region comprising the following CDRs:LCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10,LCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11,LCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.4.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 3, whereinthe first antigen-binding domain comprises: a VH region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15; and a VL region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16;preferably, the first antigen-binding domain comprises: a VH region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15; and a VL region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 16.5.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 4, whereinthe antibody fragment is selected from the group consisting of Fab, Fab', F (ab') 2, variable fragment (Fv) , single chain variable fragment (scFv) , diabodies, triabodies, scFv-Fc, disulfide stabilized Fv (dsFv) and CDR-containing peptides.6.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 5, wherein the first antigen-binding domain and / or the second antigen-binding domain further comprises human antibody constant regions;preferably, the heavy chain constant region of the human antibody constant regions is selected from constant regions of human IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 and conservative variants thereof, and the light chain constant region of the human antibody constant regions is selected from κ and λ chain constant regions of human antibody and conservative variants thereof;more preferably, the heavy chain constant region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 or 26, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 or 26; and the light chain constant region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 27, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27;more preferably, the heavy chain constant region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 or 26; and the light chain constant region comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 27.7.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 6, wherein the first antigen-binding domain and the second antigen-binding domain form a heterodimer, the first antigen-binding domain and / or the second antigen-binding domain further comprises the CH1 and CL region, and the CH1 of the second antigen-binding domain comprises one or more substitutions selected from L145Q, K147E, S181E, and the CL of the second antigen-binding domain comprises one or more substitutions selected from T129R, T178R, T180Q; and / or the CH1 of the first antigen-binding domain comprises one or more substitutions selected from L128R, K147R, and the CL of the first antigen-binding domain comprises one or more substitutions selected from Q124E, V133Q, T178E, wherein the numbering of the constant region is as per the EU index;preferably the amino acid substitutions of the CH1 of the second antigen-binding domain comprises L145Q, K147E, S181E, and the amino acid substitutions of the CL of the second antigen-binding domain comprises T129R, T178R, T180Q; and / or the amino acid substitutions of the CH1 of the first antigen-binding domain comprises L128R, K147R, and the amino acid substitutions of the CL of the first antigen-binding domain comprises Q124E, V133Q, T178E, wherein the numbering of the constant region is as per the EU index;more preferably, the first antigen-binding domain comprises a human antibody heavy chain constant region of SEQ ID NO: 19 and a human light chain constant region of SEQ ID NO: 20; and / or the second antigen-binding domain comprises a human antibody heavy chain constant region of SEQ ID NO: 17 and a human light chain constant region of SEQ ID NO: 18.8.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 7, wherein the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 23 or 30, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23 or 30; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 24 or 31, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24 or 31; and / or,the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 or 28, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 or 28; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 or 29, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 or 29;preferably, the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 23, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 24, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24; and / or,the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22;or, the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 30, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 31, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 31; and / or,the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 28, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 29, or having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29;more preferably,the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 23; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 24; and the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 22; or,the first antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 30; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 31; and the second antigen-binding domain comprises: a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 28; and a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 29.9.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 8, wherein the cytotoxic drug is selected from the group consisting of toxin, chemotherapeutic, antibiotic, radioisotope and nucleolytic enzyme.10.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 9, wherein the cytotoxic drug is selected from the group consisting of DNA damaging agents, tubulin inhibitors, or topoisomerase inhibitors; preferably auristatin analogues, maytansine derivatives, eribulin and derivatives thereof, pyrrolobenzodiazepines, or camptothecin derivatives; more preferably SN-38, MMAE, MMAF, MMAD, eribulin or exatecan, and derivatives thereof.11.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 10, wherein the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof has one of the following structures: wherein:L1 and L2 are linking units;y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8;Ab is the antibody or antibody fragment thereof according to any one of claims 1 to 8.12.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 10, wherein the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof is as shown in general formula (D) : wherein:the carbon atoms marked with p1*and p2*each is asymmetric center, and the asymmetric center is S configured, R configured or racemic;each of R3, and R4 is, independently, hydrogen, halogen, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted alkoxyl, or hydroxyl; or R3, and R4 together with the atoms to which they are attached to, form unsubstituted or substituted cycloalkyl, unsubstituted or substituted heterocyclyl, unsubstituted or substituted aryl, or unsubstituted or substituted heteroaryl;R5 is hydrogen, deuterium, C1-6 alkyl, deuterated alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted aryl or heteroaryl;L1 and L2 are linking units;y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;Ab is the antibody or antibody fragment thereof according to any one of claims 1 to 8.13.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 12, wherein the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof has one of the following structures: wherein:L1 and L2 are linking units;y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;Ab is the antibody or antibody fragment thereof according to any one of claims 1 to 8.14.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 12, wherein the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof is as shown in general formula (B) : wherein:L1 and L2 are linking units;y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 4 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8;Ab is the antibody or antibody fragment thereof according to any one of claims 1 to 8.15.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 11 to 14, whereinthe -L2-is selected from -La-Lb-, and the -L1-is selected from -Lc-Ld-Le-, wherein,the -La-is a covalently linked unit,the -Lb-is an extension unit,the -Lc-is a bond, or a polar hydrophilic group unit, wherein the polar hydrophilic group comprises a sugar residue and its derivatives, a polyethylene glycol residue and its derivatives, a polysarcosine residue and its derivatives, or a combination thereof,the -Ld-is selected from a peptide residue consisting of 2-8 amino acids,the -Le-is a bond, or a self-cleaving fragment.16.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 15, wherein the -La-is selected from: the -Lb-is selected from:- (CH2) s2-C (=O) -, -CH2-C (=O) -NH- (CH2) s1-C (=O) -, - (CH2CH2O) s2- (CH2) s1-C (=O) -,the s1 and s2 are each independently an integer selected from 0-8;the -Lc-is a bond, wherein, s3 is selected from an integer of 2-12; Preferably, s3 is selected from 6, 7, 8, 9, 10, 11 or 12;the -Ld-is selected from a peptide residue consisting of 2-8 amino acids selected from the group consisting of phenylalanine, isoleucine, leucine, tryptophan, valine, methionine, tyrosine, alanine, threonine, histidine, serine, glutamine, arginine, lysine, asparagine, glutamic acid, proline, citrulline, aspartic acid and glycine; Preferably the -Ld-is selected from:the -Le-is a bond, or -NH-CH2-O- (CRaRb) s4-CR1R2-C (O) -; wherein, Ra and Rb are identical or different and are each independently selected from the group consisting of hydrogen atom, deuterium atom, halogen, alkyl, haloalkyl, deuterated alkyl, alkoxy, hydroxy, amino;s4 is an integer selected from 0-4, Preferably, s4 is 0 or 1;R1 is selected from hydrogen, C1-6 haloalkyl or C3-8 cycloalkyl; R2 is selected from hydrogen, C1-6 haloalkyl or C3-8 cycloalkyl; or, R1 and R2 together with the carbon atom to which they are attached form a C3-8 cycloalkyl;Preferably, R1 is selected from hydrogen, C1-3 haloalkyl or C3-6 cycloalkyl; R2 is selected from hydrogen, C1-3 haloalkyl or C3-6 cycloalkyl; or, R1 and R2 together with the carbon atom to which they are attached form a C3-6 cycloalkyl.17.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 16, wherein the –L2-L1-has one of the following structures: 18.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 11 to 14, wherein the –L2-L1-has one of the following structures: 19.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 17 or 18, wherein the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof is as the following structure: wherein:y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8;Ab is the antibody or antibody fragment thereof according to any one of claims 1 to 8.20.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 14, wherein the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof is as shown in general formula (C) : wherein:R1 is selected from hydrogen, C1-6 haloalkyl or C3-8 cycloalkyl;R2 is selected from hydrogen, C1-6 haloalkyl or C3-8 cycloalkyl;or, R1 and R2 together with the carbon atom to which they are attached form a C3-8 cycloalkyl;preferably,R1 is selected from hydrogen, C1-3 haloalkyl or C3-6 cycloalkyl;R2 is selected from hydrogen, C1-3 haloalkyl or C3-6 cycloalkyl;or, R1 and R2 together with the carbon atom to which they are attached form a C3-6 cycloalkyl.21.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 20, wherein L2 is as shown in general formula (I) : wherein:s1 and s2 are each independently an integer selected from 0-8, Preferably, s1 and s2 are independently selected from 1, 2, 3, 4, 5 or 6;or, s1 is an integer from 1 to 8, s2 is 0, Preferably, s1 is selected from 4, 5, 6, 7 or 8, and s2 is 0;or, s2 is selected from an integer from 2 to 8, s1 is 2, Preferably, s2 is selected from 2, 3, 4, 5 or 6, and s1 is 2.22.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 20 or 21, wherein the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof is as the following structure: wherein:y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 4 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8;Ab is the antibody or antibody fragment thereof according to any one of claims 1 to 8.23.The immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 22, wherein the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof is selected from the group consisting of the following compounds: wherein:y is a number selected from 1 to 10, preferably a number selected from 2 to 8, more preferably a number of 2 to 6 or 4 to 8, further preferably a number of 6 to 8, and most preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8.24.A pharmaceutical composition, comprising the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or the pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 23, and one or more pharmaceutically acceptable excipient (s) , diluent (s) or carrier (s) .25.Use of the immunoconjugate or a tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, or diastereomer thereof, or the pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 23, or the pharmaceutical composition thereof according to claim 24, in the manufacture of a medicament for treating or preventing a disease related to human EGFR and / or c-MET.26.The use according to claim 25, characterized in that it is for the manufacture of a medicament for treating or preventing a cancer with EGFR and / or c-MET expression; preferably the cancer is epithelial cell cancer, lung cancer, ovarian cancer, breast cancer, colorectal cancer, squamous cell carcinoma of head and neck (SCCHN or SQHN) , anal cancer, prostate cancer, kidney cancer, bladder cancer, pharynx cancer, cancer of the nose, pancreatic cancer, skin cancer, oral cancer, cancer of the tongue, esophageal cancer, vaginal cancer, cervical cancer, cancer of the spleen, testicular cancer, gastric cancer, or glioblastoma; more preferably, lung cancer is Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) , lung adenocarcinoma or small cell lung cancer.

Images