A cryoprotectant removal apparatus and method

Abstract

A cryoprotectant removal apparatus for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product or cryopreserved cell culture, comprises a housing, a filter disposed in the housing, the filter separating the housing into a first chamber and a second chamber. In use, the apparatus is configured to remove or partially remove a cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product by a tangential flow filtering process. In another example form the cryoprotectant removal apparatus comprises a housing, a semipermeable membrane that extends across the housing, separates the housing into a first chamber and a second chamber. The second chamber comprises a larger volume than the first chamber. In use, a cryopreserved cell therapy product may be placed or introduced into the first chamber and a buffer solution may be placed or introduced into the second chamber, and the difference of volume between the chambers causes diffusion of cryoprotectant across the semipermeable membrane.

Description

A CRYOPROTECTANT REMOVAL APPARATUS AND METHODTECHNICAL FIELD

[0001] The present invention relates to a cryoprotectant removal apparatus and a cryoprotectant removal method for removing cryoprotectants from a cryopreserved cell therapy product.BACKGROUND

[0002] Cell therapy is an emerging treatment for medical conditions without satisfactory regimens. In some circumstances, cell therapy products are provided in the form of fresh cells suspension which will be shipped to the site of application. However, the viability of these cell therapy products is highly sensitive to various conditions such as temperature, pH, oxygen and carbon dioxide levels, nutrient availability, and metabolic waste levels. Consequently, the shelf-life of freshly made cell therapy products is very short (e.g., ranging from 30 min to 24 hours depending on cell type) when compared to other forms of pharmaceutical products. This short shelf life presents significant challenges for ensuring their quality during global supply chain distribution.

[0003] Cryopreservation is commonly used to extend the storage life of viable cells. Cryoprotectants, such as dimethyl sulfoxide (DMSO) , are added to prevent intracellular ice formation during freezing and improve cell recovery and viability upon thawing. However, higher concentrations of cryoprotectants can be toxic, raising safety concerns when co-administering post-thawed cell therapy products. Despite this, cryopreservation offers advantages in terms of storage, shipment, and distribution of cell therapy products, leading to ongoing efforts to optimize freezing and thawing conditions using various instruments.

[0004] In most cases, cryopreserved cell therapy products are delivered to the treatment site, thawed, and administered without washing or removing cryoprotectants. This is mainly due to limitations in equipment, sterile consumables, and trained personnel. However, to ensure safety and minimize potential risks associated with residual cryoprotectants,

[0005] Currently, cryoprotectants are typically removed through centrifugation and washing, followed by resuspension in an injectable or infusion excipient. However, this process presents challenges in clinical and hospital settings, particularly regarding the risk of contamination. Traditional methods, such as manual washing and centrifugation, have been commonly used for cryoprotectant removal but come with several limitations. However, the major hurdle of using manual washing and centrifugation in clinic setting or operation theatre where cell injection performed is the requirement of extra facilities such as biological safety cabinet, sterile consumables such as sterile tubes and pipet tips for liquid transfer, and most importantly trained personnel able to perform aseptic technique. All these will result in extra cost and manpower, thus making cryoprotectant removal not user friendly and infeasible.

[0006] Manual washing is a labor-intensive process that requires significant hands-on time, especially when dealing with large volumes of cell therapy products. It can result in longer processing times, delaying the availability of the final product for patient administration. Each washing step involves transferring the cell pellet to a new tube, which increases the risk of cell loss and damage. The repeated centrifugation steps can subject cells to mechanical stress, potentially impacting cell viability and therapeutic efficacy. Manual washing involves multiple transfers between tubes, increasing the risk of contamination and compromising the sterility of the cell therapy product. Centrifugation involves multiple cycles of pelleting and resuspension, making it a time-consuming process. It requires skilled personnel to perform the steps accurately and consistently. Centrifugation alone may not efficiently remove all cryoprotectants, especially low molecular weight cryoprotectants that can remain in the cell pellet or adhere to cell surfaces. This can result in residual cryoprotectants, posing potential risks during patient administration.SUMMARY OF THE INVENTION

[0007] The present disclosure relates to a cryoprotectant removal apparatus and a cryoprotectant removal method for removing cryoprotectants from a cryopreserved cell therapy product. The present invention may, in one example, relate to or include a sterile, single use apparatus for cryoprotectant removal that comprises a semi-permeable membrane and an optimized volumetric ratio between at least two chambers to facilitate cryoprotectant removal via diffusion and dilution, either with or without tangential flow.

[0008] According to a first aspect there is provided a cryoprotectant removal apparatus for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising:

[0009] a housing,

[0010] a filter disposed in the housing, wherein the filter extends across the housing, the filter separating the housing into a first chamber and a second chamber,

[0011] an inlet formed in the housing,

[0012] in use, the cryopreserved cell therapy product is introduced into the first chamber, and the apparatus is configured to remove or partially remove a cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product by a tangential flow filtering process.

[0013] In one example, the cell therapy product may be a cell therapy suspension e.g., a fluid that includes viable cells. The tangential flow filtering causes cryoprotectant to pass through the filter and out of the cell therapy product. This is advantageous because the use of the apparatus results in a cell therapy product that has a concentration of cryoprotectant that is less than a threshold.

[0014] The tangential flow filtering based cryoprotectant removal apparatus provides a gentler and improved process as compared to the commonly used process of centrifugation. The apparatus is advantageous because it allows selective removal of cryoprotectants based on their size while retaining the cell therapy product. The apparatus utilizes tangential flow filtration to selectively remove cryoprotectants from the cell therapy product suspension while retaining the viability and quality of the cells.

[0015] The apparatus results in a more thorough and consistent removal of cryoprotectants, while reducing the risk of residual cryoprotectants and enhances the safety of the cell therapy product. Additionally, the apparatus is advantageous because the apparatus can be used in clinical and hospital settings where cryopreserved cell therapy products are thawed and prepared for administration.

[0016] In one example the inlet is oriented tangentially to the filter such that the cryopreserved cell product is introduced from the inlet is introduced parallel to a longitudinal axis of the filter.

[0017] In one example the first chamber is located above the second chamber and the filter is positioned between the first chamber and second chamber.

[0018] In one example, the filter may extend horizontally across the housing. Optionally the filter may be rectangular in shape. Alternatively, the filter may be in any polygon shape. In a further alternative form, the filter may be circular or elliptical or any other arcuate shape.

[0019] In one example the filter is a cell impermeable membrane, wherein the cell impermeable membrane comprises pores that allow passage of cryoprotectants while preventing the passage of cells. In one example, the filter may be semi permeable membrane.

[0020] In one example the membrane has a pore size of less than 100kDa.

[0021] In one example the pores are sized based on the size or molecular weight of the cryoprotectant such that the cryoprotectant molecules can pass through the membrane from the first chamber into the second chamber.

[0022] In one example the pore size may be selected to allow passage of the cryoprotectant through the filter as part of the tangential flow filtration.

[0023] In one example the cryoprotectant is a dimethyl sulfoxide (DMSO) , and wherein the pores are sized to allow passage of DMSO through the membrane while preventing passage of cells.

[0024] In one example the apparatus incorporates carefully selected membranes and optimized operating conditions to maximize retention of desired cells and reduce any potential damage or loss during the filtration process.

[0025] In one example in use, the cryopreserved cell therapy product is introduced into the first chamber parallel to the filter, and the cryoprotectant molecules pass through the filter into the second chamber while the retentate remains in the first chamber.

[0026] In one example, the apparatus comprising an outlet that is in fluid communication with the first chamber, in use the retentate is extracted from the first chamber via the outlet and recirculated through the apparatus.

[0027] In one example in use, the retentate is recirculated through the apparatus a plurality of times to substantially reduce the concentration of a cryoprotectant or completely remove a cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product.

[0028] Optionally, the inlet may comprise a valve moveable between a closed position and an open position. The valve allows a user to control the flow of the cell therapy product across the filter. In one example, the valve may be controlled to adjust the flow rate of the cell therapy product suspension passing through the apparatus.

[0029] In one example in use, a cryoprotectant free excipient is introduced into the second chamber, the cryoprotectant free excipient flows through the second chamber parallel to the filter and parallel to the flow of the cryopreserved cell therapy product through the first chamber, and wherein the cryoprotectant molecules are collected in the cryoprotectant free excipient as they move out of from the first chamber into the second chamber through the filter.

[0030] In one example, the apparatus comprising:

[0031] a first inlet,

[0032] a second inlet,

[0033] a first outlet,

[0034] a second outlet,

[0035] the first inlet and first outlet are fluidly coupled to the first chamber, a first flow path defined from the first inlet through the first chamber to the first outlet,

[0036] the second inlet and second outlet are fluidly coupled to the second chamber, a second flow path defined from the second inlet through the second chamber to the second outlet,

[0037] wherein the first flow path and second flow path extend tangential to the filter and both the first and second flow paths extend parallel to each other, and;

[0038] in use, the cell therapy product passes through the first flow path, the cryoprotectant free excipient passes through the second flow path and; the cryoprotectant from the cell therapy product passes into the second flow path due to tangential flow filtering.

[0039] In one example, the apparatus comprises a feed reservoir, the feed reservoir is positioned upstream of the inlet and is fluidly coupled to the inlet,

[0040] in use, the cryopreserved cell therapy product is introduced into the feed reservoir prior to being introduced into the first chamber and wherein the retentate is recirculated from the first chamber and collected in the feed reservoir prior to introducing the retentate into the first chamber.

[0041] In one example the apparatus is a sterile, single use apparatus.

[0042] In one example the apparatus is configured to form an aseptic connection to a packaging of the cryopreserved cell therapy product.

[0043] In one example, the apparatus may be attached to the cell therapy product by high temperature welding (i.e., aseptic welding) .

[0044] The apparatus may be welded to the primary package of the cryopreserved cell therapy product to form an aseptic connection.

[0045] The aseptic connection is advantageous because it reduces or prevents infection by pathogens of the cell therapy product.

[0046] Optionally, one or both of the first inlet and second inlet may comprise a valve that can be used to control the flow of the cell therapy product or control the flow of the cryoprotectant free excipient.

[0047] According to a further aspect, there is provided a cryoprotectant removal method for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising:

[0048] introducing the cryopreserved cell therapy product tangential to a filter such that the cryopreserved cell therapy product moves or flows tangential to a filter,

[0049] applying a pressure to the cryopreserved cell therapy product as it moves tangential to the filter,

[0050] wherein a cryoprotectant from the cell therapy product moves through the filter and out of the cell therapy product as the cell therapy product moves tangential to the filter under the applied pressure, and;

[0051] collecting the filtered cell therapy product, wherein the filtered cell therapy product comprises a cryoprotectant concentration that is below a threshold or comprises no cryoprotectant.

[0052] In one example the applied pressure drives cryoprotectant molecules to pass through the filter.

[0053] In one example, the method comprises:

[0054] introducing a cryoprotectant free excipient tangential to the filter,

[0055] wherein the cryopreserved cell therapy product is introduced into a first chamber and the cryoprotectant free excipient is introduced into a second chamber wherein the filter separates the first chamber and second chamber, and;

[0056] wherein the cryoprotectant moves through the filter into the cryoprotectant free excipient and out of the cell therapy product as the cell therapy product moves tangential to the filter under the applied pressure, and;

[0057] recirculating the collected filtered cell therapy product and reintroducing the collected cell therapy product

[0058] In one example the filter comprises a porous membrane comprising a plurality of pores, wherein the membrane is cell impermeable and cryoprotectant permeable, and wherein the membrane has a pore size of less than 100kDa.

[0059] In one example, the method may be repeated multiple times by recirculating the collected filtered cell therapy product until the concentration of cryoprotectant in the cell therapy product is less than a threshold or the concentration of the cryoprotectant is zero.

[0060] The method may be implemented using the cryoprotectant removal apparatus as described above.

[0061] According to a further aspect, there is provided a cryoprotectant removal apparatus for removing a cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising:

[0062] a housing,

[0063] an inlet to the housing,

[0064] a filter disposed in the housing and extending across the housing,

[0065] the inlet is arranged to introduce the cell therapy product parallel to a longitudinal axis of the filter (i.e., tangential to the filter) ,

[0066] the filter is shaped and structured to allow passage of cryoprotectant molecules through the filter while preventing passage of cells,

[0067] where in use an applied pressure drives cryoprotectant molecules to pass through the filter while retaining the remaining solution.

[0068] According to a further aspect, there is provided a cryoprotectant removal apparatus for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising:

[0069] a housing,

[0070] a semi permeable membrane disposed in the housing, wherein the semi permeable membrane extends across the housing, the semi permeable membrane separating the housing into a first chamber and a second chamber,

[0071] the second chamber comprises a larger volume than the first chamber,

[0072] the first chamber comprises a cryopreserved cell therapy product and the second chamber comprising a buffer solution,

[0073] in use, the difference of volume between the second chamber and first chamber causing removal of cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product due to diffusion across the semi permeable membrane.

[0074] In one example, volumetric ratio of the volume of the first chamber and the volume of the second chamber is greater than 1: 1, and the second chamber comprises a larger volume than the first chamber.

[0075] In one example, the volumetric ratio of the volume of the first chamber and the volume of the second chamber is between 1: 2 to 1: 7.

[0076] In one example, the volumetric ratio of the volume of the first chamber and the volume of the second chamber is 1: 2.5.

[0077] In one example, the volumetric ration of the volume of the first chamber and the volume of the second chamber is 1: 7.

[0078] In one example, the height of the second chamber is greater than the height of the first chamber.

[0079] In one example, the semi permeable membrane comprises a pore size between 1 to 100 micrometers.

[0080] In one example, the cryoprotectant apparatus is configured to be agitated or shaken in use to improve diffusion of the cryoprotectant from the first chamber to the second chamber.

[0081] In one example, in use, the apparatus is configured to reduce a concentration of cryoprotectant in the cell therapy product from 10%to 2%within 10 minutes.

[0082] In one example, the apparatus comprising an inlet formed in the first chamber, and wherein the inlet is configured to form an aseptic connection to a packaging of the cryopreserved cell therapy product.

[0083] In one example, the semi permeable membrane comprising a surface area of 50 mm2 to 800 mm2.

[0084] In one example, the semi permeable membrane comprises a cryoprotectant permeable membrane, and wherein the membrane has a pore size of less than 100kDa.

[0085] In one example, in use, the larger volume of the second chamber facilitates the removal of cryoprotectant from the first chamber into the second chamber via diffusion across the semi-permeable membrane by maintaining a concentration gradient.

[0086] In one example, a cryoprotectant removal apparatus as described herein may be a sterile, single use device.

[0087] According to a further aspect, there is provided a cryoprotectant removal method for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising the steps of:

[0088] introducing the cryopreserved cell therapy product into a first chamber of a cryoprotectant removal apparatus,

[0089] introducing a buffer solution into a second chamber of the cryoprotectant removal apparatus,

[0090] wherein the cryoprotectant apparatus comprises a semi permeable membrane positioned between the first chamber and second chamber, the semi permeable membrane separating the first chamber and second chamber,

[0091] wherein the second chamber comprises a volume larger than the first chamber, and;

[0092] wherein the cryoprotectant diffuses from the first chamber into the second chamber across the semi permeable membrane, wherein the larger volume of the second chamber facilitates diffusion of cryoprotectant across the semi permeable membrane. The method leaves a filtered cryopreserved cell therapy product in the first chamber.

[0093] In one example, the method may comprise the step of providing a cryoprotectant removal apparatus. In one example, the cryoprotectant removal apparatus may be an apparatus as described according to any aspect described herein.

[0094] In one example, the larger volume of the second chamber dilutes the cryoprotectant entering the second chamber to maintain a concentration gradient that facilitates further diffusion.

[0095] In one comprising the step of agitating the apparatus or allowing the apparatus to stand for a predetermined period of time after the cryopreserved cell therapy product is introduced into the first chamber.

[0096] The term “comprising” (and its grammatical variations) as used herein are used in the inclusive sense of “having” or “including” and not in the sense of “consisting only of” .

[0097] It is to be understood that, if any prior art information is referred to herein, such reference does not constitute an admission that the information forms a part of the common general knowledge in the art.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0098] Embodiments of the present invention will now be described, by way of example, with reference to the accompanying drawings in which:

[0099] Figure 1 illustrates an example embodiment of a cryoprotectant removal apparatus.

[0100] Figure 2 illustrates an example of a further embodiment of a cryoprotectant removal apparatus.

[0101] Figure 3 illustrates another example of a further embodiment of a cryoprotectant removal apparatus.

[0102] Figure 4 illustrates a cryoprotectant removal method for removing or filtering cryoprotectant out of a cryopreserved cell therapy product.

[0103] Figure 5 and Figure 6 illustrate further example embodiments of a cryoprotectant removal apparatus that comprise a larger volume second chamber.

[0104] Figure 7 illustrates a further example method of removing a cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product or cell culture.

[0105] Figure 8 illustrates test results comparing the performance of the cryoprotectant removal apparatus embodiment show in Figure 5 as compared to control apparatus.

[0106] Figure 9 illustrates test results comparing the performance of the cryoprotectant removal apparatus embodiment show in Figure 6 as compared to control apparatus.

[0107] Figure 10 illustrates a graph showing the comparison of using a cryoprotectant removal apparatus as compared to an untreated cell therapy product, the graph illustrates the comparison of cryoprotectant concentrations after 10 mins.

[0108] Figure 11 illustrates two plots of a freezing medium viability study. Figure 11 illustrates a plot of cell viability post thaw and cell viability pre freeze. The results indicate viability of the cryoprotectant removal process using a removal apparatus.

[0109] DETAILED DESCRIPTION OF EXAMPLE EMBODIMENTS

[0110] Cell therapy is an emerging treatment for medical conditions without satisfactory regimens. In some circumstances, cell therapy products are provided in the form of fresh cells suspension which will be shipped to the site of application. The present invention relates to a cryoprotectant removal apparatus that provides a practical solution for the removal of cryoprotectants from cryopreserved cell therapy products at the site of application. The apparatus aims to overcome the challenges associated with the short shelf-life of freshly made cell therapy products and the potential risks associated with residual cryoprotectants.

[0111] The present disclosure relates to a cryoprotectant removal apparatus and a cryoprotectant removal method for removing cryoprotectants from a cryopreserved cell therapy product. The cryoprotectant removal apparatus may separate cryoprotectants out from the cryopreserved cells based on a tangential flow filtering process or based on diffusion across a semi permeable membrane.

[0112] Referring to Figure 1, an embodiment of the present invention is illustrated. This embodiment is arranged to provide a cryoprotectant removal apparatus 100 for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising: a housing 102, a filter 104 disposed in the housing 102, wherein the filter 104 extends across the housing, the filter 104 separating the housing 102 into a first chamber 110 and a second chamber 112, an inlet 106 formed in the housing 102, and; in use, the cryopreserved cell therapy product is introduced into the first chamber 110 and the apparatus is configured to remove or partially remove a cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product by a tangential flow filtering process. The apparatus 100 comprises an outlet 108. The outlet 108 is fluidly coupled to at least the first chamber 110.

[0113] The cell therapy product may be a cell therapy suspension e.g., a fluid that includes viable cells. The tangential flow filtering process causes cryoprotectant to pass through the filter and out of the cell therapy product. This is advantageous because the use of the apparatus results in a cell therapy product that has a concentration of cryoprotectant that is less than a threshold.

[0114] Referring to Figure 1, the inlet 106 is oriented tangentially to the filter 104 i.e., parallel to filter 104. As shown in Figure 1, the inlet 106 may be oriented parallel or tangentially relative to a longitudinal axis of the filter 104. The apparatus 100 may comprise a valve 120 that is fluidly coupled to the inlet 106. The valve 120 and inlet 106 are fluidly coupled to a package of a cryopreserved cell therapy product 10. The inlet 106 may be a pipe as shown in Figure 1.

[0115] The valve 120 is moveable between a closed position and an open position. The valve 120 can be actuated by a user. The valve 120 allows a user to control the flow of the cell therapy product across the filter. The valve 120 can be controlled to adjust the flow rate of the cell therapy product suspension passing through the apparatus.

[0116] The apparatus 100 may be attached to the cell therapy product 10 by high temperature welding (i.e., aseptic welding) . The apparatus may be welded to the primary package of the cryopreserved cell therapy product 10 to form an aseptic connection. The aseptic connection is advantageous because it reduces or prevents infection by pathogens of the cell therapy product. The inlet 106 forms an aseptic connection with the package of the cryopreserved cell therapy product 10. The inlet 106 may be connected by high temperature welding.

[0117] The apparatus comprises a feed reservoir 116. The feed reservoir 116 is positioned upstream of the inlet 106 and is fluidly coupled to the inlet 106. Optionally, the reservoir 116 may form an aseptic connection with the inlet 106.

[0118] As shown in Figure 1, the first chamber 110 is located above the second chamber 112. The filter 104 is positioned between the first chamber 110 and second chamber 112. The filter 104 extends horizontally across the housing 102. The filter 104 may be rectangular in shape. Alternatively, the filter may be any polygon shape. In a further alternative form, the filter may be circular or elliptical or any other arcuate shape.

[0119] The filter 104 is a cell impermeable membrane. The filter 104 (i.e., the cell impermeable membrane) may be a porous membrane. The cell impermeable membrane 104 comprises pores that allow passage of cryoprotectants while preventing the passage of cells. In one example the membrane 104 has a pore size of less than 100kDa. The pores of the membrane 104 are sized based on the size or molecular weight of the cryoprotectant such that the cryoprotectant molecules can pass through the membrane from the first chamber into the second chamber.

[0120] In one example the pore size may be selected to allow passage of the cryoprotectant through the filter as part of the tangential flow filtration. The cryoprotectant is a dimethyl sulfoxide (DMSO) . The filter 104 (i.e., cell permeable membrane) has pores that are sized to allow passage of DMSO through the membrane while preventing passage of cells.

[0121] In other examples, other cryoprotectant substances may be used. The membrane pore size may be selected to allow passage of a different cryoprotectant.

[0122] The apparatus 100 incorporates a carefully selected membrane. The apparatus is optimized to maximize retention of desired cells and reduce any potential damage or loss during the filtration process.

[0123] In use, the cryopreserved cell therapy product is introduced into the first chamber 110 parallel to the filter 104 (i.e., tangential to the filter) . A pressure is applied at the inlet or applied to the cell therapy product. The applied pressure causes the cell therapy product to move tangentially across the filter 104. The cryoprotectant molecules (filtrate) pass through the filter 104 (i.e., membrane) into the second chamber 112 while the retentate remains in the first chamber 110. The filtrate i.e., the cryoprotectant molecules are collected in the second chamber 112. This process is the tangential flow filtration that causes movement of the cryoprotectant molecules through the filter 104.

[0124] In one example, the apparatus comprising an outlet that is in fluid communication with the first chamber, in use the retentate (i.e., filtered cell therapy product) may be collected in the outlet 108 for subsequent immediate injection, infusion or implantation.

[0125] Optionally, the retentate may be recirculated from the outlet 108 back to a feed reservoir 116. The recirculated retentate may be pumped back through the first chamber 110 for additional tangential flow filtration. The apparatus 100 may include a recirculation line 118 that fluidly couples the outlet 108 to the reservoir 116. The recirculation line 118 may be a sealed pipe or a hose.

[0126] The apparatus 100 employs tangential flow filtration to dilute cryoprotectant in the thawed cell therapy product. The retentate can be recirculated through the apparatus 100 a plurality of times to substantially reduce the concentration of a cryoprotectant or completely remove a cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product. The retentate (i.e., the filtered cell therapy product) may be recirculated multiple times until all the cryoprotectant is removed or until the concentration of the cryoprotectant in the retentate is less than a threshold.

[0127] Figure 2 and Figure 3 illustrate a second embodiment of a cryoprotectant removal apparatus 200 for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product. Referring to Figures 2 and 3, the apparatus 200 comprises a housing 202. The housing 202 comprises a filter 204 that extends across the housing 202. The filter 204 divides the housing 202 into a first chamber 210 and a second chamber 212.

[0128] The filter 204 may extend horizontally across the housing 202. The first chamber 210 is located above the second chamber 212. The first chamber 210 may be physically separated from the second chamber 212 by the filter 204. The filter 204 may be cell impermeable membrane.

[0129] In one example the filter 204 (i.e. membrane) has a pore size of less than 100kDa. The pores of the membrane 204 are sized based on the size or molecular weight of the cryoprotectant, such that the cryoprotectant molecules can pass through the membrane from the first chamber into the second chamber.

[0130] In one example the pore size may be selected to allow passage of the cryoprotectant through the filter as part of the tangential flow filtration. For example, the filter 204 (i.e., cell permeable membrane) comprises pores that are sized to allow passage of DMSO through the membrane while preventing passage of cells.

[0131] The apparatus 200 comprises a first inlet 206 and a first outlet 208. The first inlet 206 and the first outlet 208 are fluidly coupled to the first chamber 210. A first flow path 230 is defined from the first inlet 206 through the first chamber 210 and to the first outlet 2008. The apparatus 200 further comprises a second inlet 220 and a second outlet 222. The second inlet 220 and the second outlet 222 are fluidly coupled to the second chamber 212. A second flow path 232 is defined from the second inlet 220 through the second chamber 212 and to the second outlet 222.

[0132] The first flow path 230 and second flow path 232 extend tangential to the filter 204 and both the first and second flow paths 230, 232 extend parallel to each other, as shown in Figure 2. The flow paths 230 and 232 are indicated by the dotted arrows. In use, the cell therapy product passes through the first flow path 230, and a cryoprotectant free excipient (i.e., a buffer) passes through the second flow path 232. The cell therapy product and the buffer may be passed through the apparatus 100 at the same flow rate or same speed.

[0133] Alternatively, the buffer may be provided at a flow rate that is greater than the flow rate of the cell therapy product. the cryoprotectant from the cell therapy product passes into the second flow path due to tangential flow filtering.

[0134] The cryoprotectant may be DMSO and buffer may be a DMSO free excipient. The apparatus 200 is configured to use a tangential flow filtration process, as shown in Figure 3. The cell therapy product suspension comprising DMSO flows across the membrane 204 (i.e., parallel to the membrane) through the first chamber 210 as shown in Figure 3. The buffer flows through the second chamber 212 as shown in Figure 3. The cell therapy product suspension comprises DMSO flowing through the first flow path 230 and the buffer flowing through the second flow path 232.

[0135] Applied pressure to the cell therapy product causes DMSO molecules in the cell therapy product pass through the filter 204 into the second chamber 212. The remainder of the cell product, i.e., the retentate remains in the first chamber 210, as shown in Figure 3. The mixture of the buffer and cryoprotectant (e.g., DMSO) flows out of the second chamber 212 via the second outlet 222, as shown in Figure 3. Figure 3 illustrates the direction of flow of the cryopreserved cell therapy product suspension and the buffer.

[0136] The retentate may be recirculated back to the feed reservoir 216 via a recirculation line 218, as shown in Figure 2. The recirculation line may be a pipe or tube or channel that fluidly couples the first chamber 210 to the reservoir 216.

[0137] The recirculated retentate may be pumped back through the first chamber for additional tangential flow filtration to remove additional cryoprotectants. By repeating the parallel flow of the or increasing the contact duration to the filter 204, the concentration of DMSO (cryoprotectant) in the cell therapy product suspension can be reduced to a safe level or eliminated. The recirculation may be repeated until all DMSO is totally removed or until the DMSO concentration is less than a threshold.

[0138] Alternatively, the retentate may be collected in the outlet 206 for subsequent immediate injection, infusion or implantation. The retentate may be removed from the outlet once either the cryoprotectant (e.g., DMSO) concentration is less than a threshold or all the cryoprotectant is removed from the cell therapy product.

[0139] Referring to Figure 2, the first inlet 206 may comprise a first valve 250. The second inlet 220 may comprise a second valve 252. The valves 250, 252 can be used to control the flow of the cell therapy product or control the flow of the cryoprotectant free excipient. The valves 250, 252 may be actuatable by a user. The first inlet 206 may be configured to form an aseptic connection to the primary packaging of the cryopreserved cell therapy product 10. The first inlet 206 may attached to the cell therapy product 10 by heat welding. The cell therapy product suspension may flow through the first flow path 230. The second inlet 220 may be coupled to a buffer reservoir 12. The buffer reservoir 12 may hold an amount of the buffer such that it can be pumped through or flow through the second flow path 232.

[0140] The apparatus 100, 200 may be a sterile, single use apparatus. The apparatus 100, 200 may be a disposable apparatus that may be disposed after single use. The apparatus 100 or 200 can be used in clinical and hospital settings where cryopreserved cell therapy products are thawed and prepared for administration. The apparatus 100, 200 can be connected to the primary packaging of the cell therapy product through aseptic welding and the cryoprotectants can be removed by applying the tangential flow filtration process. The apparatus 100, 200 utilizes tangential flow filtration to selectively remove cryoprotectants from the cell therapy product suspension while retaining the viability and quality of the cells.

[0141] The apparatus 100, 200 leverages pressure-driven flow across a filtration membrane, to selectively separate cryoprotectant from a cell therapy product based on size or molecular weight. The apparatus 100, 200 incorporates a filter (i.e., a membrane) that is selected based on the size or molecular weight of the cryoprotectant. For example, the membrane 104, 204 may be selected based on the molecule size or molecular weight of DMSO. The selected filter 104, 204 may be optimized for operating conditions to maximize retention of desired cells and minimize any potential damage or loss during the filtration process.

[0142] The present invention relates to a cryoprotectant removal method for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product. One example of a cryoprotectant removal method comprising: applying a tangential flow filtering process to the cryopreserved cell therapy product to remove or partially remove cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product, and; collecting a filtered cell therapy product or recirculating the filtered cell therapy product and repeatedly applying the tangential flow filtering process until the concentration of the cryoprotectant in the cell therapy product is below a threshold. The method may be applied by a user by utilizing the cryoprotectant removal apparatus as described herein.

[0143] Figure 4 illustrates an example of a cryoprotectant removal method 300 for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product. Step 302 comprises introducing the cryopreserved cell therapy product tangential to a filter such that the cryopreserved cell therapy product moves or flows tangential to a filter. Step 304 comprises introducing a cryoprotectant free excipient tangential to the filter. The cryopreserved cell therapy product is introduced into a first chamber and the cryoprotectant free excipient is introduced into a second chamber.

[0144] Step 306 comprises applying a pressure to the cryopreserved cell therapy product as it moves tangential to the filter. The pressure may cause the cell therapy product to move through the first chamber and cause the excipient to move through the second chamber.

[0145] A tangential flow filtering process causes the cryoprotectant to move out of the cell therapy product as the cell therapy product moves tangentially across the filter (i.e., parallel to the filter) . The cryoprotectant moves through the filter into the cryoprotectant free excipient and out of the cell therapy product as the cell therapy product moves tangential to the filter under the applied pressure. The applied pressure drives cryoprotectant molecules to pass through the filter.

[0146] Step 308 comprises collecting the filtered cell therapy product. The filtered cell therapy product comprises a cryoprotectant concentration that is below a threshold or comprises no cryoprotectant.

[0147] Step 310 comprises recirculating the collected filtered cell therapy product and reintroducing the collected cell therapy product into the cryoprotectant removal apparatus. Step 310 may optionally be performed before step 308. Once the filtered cell therapy product is collected it may be used in various applications.

[0148] The method 300 may be repeated multiple times by recirculating the collected filtered cell therapy product until the concentration of cryoprotectant in the cell therapy product is less than a threshold or the concentration of the cryoprotectant is zero. The method 300 may be implemented using the cryoprotectant removal apparatus 100 or 200 as described above.

[0149] The tangential flow filtering based cryoprotectant removal apparatus provides a gentler and improved process as compared to the commonly used process of centrifugation. The apparatus is advantageous because it allows selective removal of cryoprotectants based on their size while retaining the cell therapy product. The apparatus utilizes tangential flow filtration to selectively remove cryoprotectants from the cell therapy product suspension while retaining the viability and quality of the cells.

[0150] The apparatus 100, 200 results in a more thorough and consistent removal of cryoprotectants, while reducing the risk of residual cryoprotectants and enhances the safety of the cell therapy product. Additionally, the apparatus is advantageous because the apparatus can be used in clinical and hospital settings where cryopreserved cell therapy products are thawed and prepared for administration.

[0151] The tangential flow filtering based apparatus 100, 200 apparatus eliminates the need for repeated pelleting and resuspension steps as used in traditional cryoprotectant removal methods. The tangential flow filtering process reduces cell damage and loss. The automation and standardization of the cryoprotectant removal process further enhances efficiency and reduces variability between operators and batches.

[0152] Prior art devices often required extensive cleaning and sterilization between uses, limiting their practicality and efficiency. In contrast, the apparatus 100, 200 is designed for single-use and is a disposable unit, eliminating the need for cleaning and sterilization. The aseptic connection to the primary packaging of the cell therapy product through high-temperature welding ensures a sterile environment. This reduces the risk of contamination and thereby improving patient safety.

[0153] The method 300 is advantageous because it allows customization of the filtered cell therapy product. The method 300 can be repeated or extended, ensuring precise control over the cryoprotectant concentration in the cell therapy product. This feature enables tailoring the cryoprotectant removal to meet the specific needs of different cell therapy products, ensuring optimal product quality.

[0154] Prior art devices often required modifications to the primary packaging or specialized containers, which could be costly and time-consuming. The apparatus 100, 200 is designed to be compatible with existing cell therapy product packaging. The apparatus 100, 200 can be easily connected by aseptic welding. The aseptic connection interface allows for seamless integration with standard primary packaging, facilitating easy adoption and integration into current workflows without the need for significant modifications or investments.

[0155] Preserving cell viability and maintaining the quality of the cell therapy product are crucial for its therapeutic efficacy. The apparatus 100, 200 employs a tangential flow filtration process, minimizing mechanical stress on cells while efficiently removing cryoprotectants. This ensures the preservation of cell viability and therapeutic quality, enhancing the overall efficacy of the cell therapy treatment.

[0156] Previous cryoprotectant removal devices may have suffered from limited efficiency, resulting in longer processing times and delays in product availability. The apparatus 100, 200 and method 300 provide an automated and efficient cryoprotectant removal process. The use of the apparatus 100, 200 to perform method 300 reduces processing time compared to manual washing or centrifugation. The elimination of labour-intensive steps and the standardized nature of the apparatus 100, 200 results in time savings, enabling faster delivery of cell therapy products to patients in need.

[0157] Figure 5 and Figure 6 illustrate further additional embodiments of a cryoprotectant removal apparatus. Each embodiment of a cryoprotectant removal apparatus as shown in Figure 5 and Figure 6, comprises a housing, a first chamber and second chamber formed in the housing and a filter or semi permeable membrane separating the first chamber and second chamber. The second chamber may comprise a larger volume than the first chamber. The semi permeable membrane causes diffusion of cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product from the first chamber to the second chamber.

[0158] The difference in volume between the second chamber and first chamber causes diffusion of the cryoprotectant across the semi permeable membrane. The volume difference between the two chambers causes cryoprotectant to pass through the semi permeable membrane and out of the cell therapy product. This is advantageous because the use of the apparatus results in a cell therapy product that has a concentration of cryoprotectant that is less than a threshold. The pores in the semi permeable membrane may be selected to allow diffusion of cryoprotectant across the membrane from one chamber to the other.

[0159] Figure 5 illustrates an example embodiment of a cryoprotectant removal apparatus 400 for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product. The apparatus 400 comprises a housing 402 and a semi permeable membrane 404 disposed in the housing 402. The semi permeable membrane 404 extends across the housing 402. The membrane 404 may extend laterally across the housing 402. The semi permeable membrane 404 separating the housing into a first chamber 410 and a second chamber 412. As shown in Figure 5, the second chamber 412 comprises a larger volume than the first chamber 410. The first chamber 410 may comprise an inlet (not shown) and the second chamber may comprise an outlet (not shown) . The inlet and outlet may extend parallel to each other. In one example, configuration the inlet may be arranged such that there is tangential flow of the cell product across the semi permeable membrane 404.

[0160] In use, the cryopreserved cell therapy product may be introduced or placed inside the first chamber 410 and a buffer solution may be placed inside or introduced into second chamber 412. In use, the difference of volume between the second chamber 412 and first chamber 410 causes removal of cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product due to diffusion across the semi permeable membrane. The cryoprotectant material can diffuse through the semi permeable membrane 404 from the first chamber 410 into the second chamber 412.

[0161] In one example, the volumetric ratio of the volume of the first chamber 410 and the volume of the second chamber 412 is greater than 1: 1. The second chamber 412 comprises a larger volume than the first chamber. In the illustrated example embodiment of Figure 5, the volumetric ratio of the volume of the first chamber 410 and the volume of the second chamber 412 is 1: 7.

[0162] As shown in Figure 5, the first chamber 410 may have a length of 10mm, a width of 5mm and a height of 4mm. The second chamber 412 may have a length of 10mm, width of 5mm and a height of 28mm. In one example, the ratio of the first chamber height to the second chamber height may be greater than 1: 1. In the illustrated example in Figure 5 the ratio of first chamber height to second chamber height is 1: 7. Preferably, the length of width of two chambers may be similar or identical. The semi permeable membrane 404 may comprise a length of 10mm and a width of 5mm. The height may be very small e.g., less than 1mm.

[0163] In one example, the semi permeable membrane 404 comprises a pore size between 1 to 100 micrometers. In a further example, the membrane 404 may have a pore size of less than 100kDa The semi permeable membrane comprising a surface area of 50 mm2 to 800 mm2. In the illustrated example, the semi permeable membrane 404 comprises a surface area of 50 mm2.

[0164] In use, the cryoprotectant apparatus 400 is configured to be agitated or shaken in use to improve diffusion of the cryoprotectant from the first chamber to the second chamber.

[0165] Figure 6 illustrates a further example embodiment of a cryoprotectant removal apparatus 500 for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product. The apparatus 500 comprises a housing 502 and a semi permeable membrane 504 disposed in the housing 502. The semi permeable membrane 504 extends across the housing 502 e.g., laterally across. The semi permeable membrane 504 separating the housing into a first chamber 510 and a second chamber 512. As shown in Figure 6, the second chamber 512 comprises a larger volume than the first chamber 510. The first chamber 510 may comprise an inlet (not shown) and the second chamber may comprise an outlet (not shown) .

[0166] In use, the cryopreserved cell therapy product may be introduced or placed inside the first chamber 510 and a buffer solution may be placed inside or introduced into second chamber 512. In use, the difference of volume between the second chamber 512 and first chamber 510 causes removal of cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product due to diffusion across the semi permeable membrane. The cryoprotectant material can diffuse through the semi permeable membrane 504 from the first chamber 510 into the second chamber 512. A filtered cryopreserved cell product remains in the first chamber.

[0167] The apparatus 500, shown in Figure 6, may be substantially similar in construction and operation as the cryoprotectant removal apparatus 400 described in relation to Figure 5. In one example, the ratio of the volume of the first chamber 510 and the volume of the second chamber 512 is greater than 1: 1. The ratio of the first chamber volume to the second chamber volume for apparatus 500, shown in Figure 6, may be 1: 2.5. In the illustrated example of Figure 6, the second chamber may have a volume that is 2.5 times larger than the first chamber.

[0168] In one example the cryoprotectant may be DMSO. The apparatus 400 and apparatus 500 may be configured to filter out DMSO from a cryopreserved cell therapy product. The use of apparatus 400 or 500 leaves a filtered cell culture or filtered cell product in the first chamber as the DMSO diffuses out. The filtered cell therapy product may have a concentration of a cryoprotectant e.g., DMSO that is below an acceptable threshold. In one example, the apparatus 400 or 500 may cause all DMSO to pass across the membrane.

[0169] As shown in Figure 6, the first chamber 510 may have a length of 40mm, a width of 20mm and a height of 2mm. The second chamber 512 may have a length of 40mm, width of 20mm and a height of 5mm. In one example, the ratio of the first chamber height to the second chamber height may be greater than 1: 1. In the illustrated example in Figure 5 the ratio of first chamber height to second chamber height is 1: 2.5. Preferably, the length of width of two chambers may be similar or identical. The semi permeable membrane 504 may comprise a length of 40mm and a width of 20mm. The height may be very small e.g., less than 1mm. The surface area of the semi permeable membrane 504 may be 800mm2.

[0170] The cryoprotectant apparatus 400, 500 may have a ratio of the first chamber volume to the second chamber volume of greater than 1: 1. The ration may be between 1: 2 to 1: 7. The height of the second chamber is greater than the height of the first chamber. Both embodiments of the removal apparatus (400, 500) comprise a stacked arrangement where the first chamber is located above the second chamber. The semi permeable membrane area of the removal apparatus 500 is larger than that of the membrane in the apparatus 400.

[0171] In one example, the semi permeable membrane 504 comprises a pore size between 1 to 100 micrometers. In one example, the semi permeable membrane 504 comprising a surface area of 50 mm2 to 800 mm2. In one example, the semi permeable membrane comprises a cryoprotectant permeable membrane 504, and wherein the membrane 504 has a pore size of less than 100kDa.

[0172] Figure 7 illustrates an example method 600 of removing a cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product. The method comprises multiple steps. Step 602 comprises introducing the cryopreserved cell therapy product into a first chamber of a cryoprotectant removal apparatus. Step 604 comprises introducing a buffer solution into a second chamber of the cryoprotectant removal apparatus. Step 606 comprises agitating the apparatus or allowing the apparatus to stand for a predetermined period of time after the cryopreserved cell therapy product is introduced into the first chamber.

[0173] In use, the cryoprotectant diffuses from the first chamber into the second chamber across the semi permeable membrane, wherein the larger volume of the second chamber facilitates diffusion of cryoprotectant across the semi permeable membrane. Step 608 comprises collecting and removing the filtered cryopreserved cell therapy product from the first chamber. Optionally, the method may comprise removing the buffer solution.

[0174] The method 600 may be performed by the cryoprotectant removal apparatus 400 or 500. The larger volume of the second chamber dilutes the cryoprotectant entering the second chamber to maintain a concentration gradient that facilitates further diffusion. Step 606 may be performed for a set period of time that is sufficient to allow the cryoprotectant e.g., DMSO to diffuse such that the concentration in the first chamber is below an acceptable level or threshold.

[0175] In use, the cryoprotectant apparatus 400 or 500 may be configured to be agitated or shaken in use to improve diffusion of the cryoprotectant from the first chamber to the second chamber. In use, the apparatus 400 and 500 may be adapted to reduce a concentration of cryoprotectant in the cell therapy product from 10%to 2%within 10 minutes. In use, the larger volume of the second chamber in apparatus 400 or 500 facilitates the removal of cryoprotectant from the first chamber into the second chamber via diffusion across the semi-permeable membrane by maintaining a concentration gradient. The concentration gradient causes diffusion of the cryoprotectant across the membrane. This is advantageous because the use of the apparatus 400, 500 results in a cell therapy product that has a concentration of cryoprotectant that is less than a threshold.

[0176] The cryoprotectant removal apparatus 100, 200, 400 or 500 as described herein may be a sterile, single use device.

[0177] The diffusion filtering based cryoprotectant removal apparatus 400, 500 provides a gentler and improved process as compared to the commonly used process of centrifugation. The apparatus is advantageous because it allows selective removal of cryoprotectants based on their size and a concentration difference, while retaining the cell therapy product. The apparatus utilizes diffusion across the semi permeable membrane to selectively remove cryoprotectants from the cell therapy product suspension while retaining the viability and quality of the cells.

[0178] Figures 8 and 9 illustrate results of experiments peformed comparing the performance of the cryoprotectant removal apparatus 400 and 500 against a control removal apparatus. The control removal apparatus had a housing, first chamber and second chamber defined by a semi permable membrane. In the control removal apparatus the volume of the first chamber was equal to the volume of the second chamber. The results were derived from 3 separate experiments.

[0179] For the experiment DMSO-containing or dye-containing cell culture medium was added to the first chamber, while fresh cell culture medium is added to the second chamber. After shaking for a few minutes, the cell culture medium from the top compartment is retrieved to analyze the change of dye concentration or DMSO concentration.

[0180] In the first experiment, the dye-containing cell culture medium was added in the top compartment (i.e., first chamber) and analyzed the change of dye concentration by recording optical density after 1.5, 5, and 10 min.

[0181] Graph 702 labelled 1A shows the performance of a control removal apparatus. Graph 704 labelled 1B shows the performance of the removal apparatus 400. Graph 706 labelled 2A illustrates the performance of a control removal apparatus. Graph 708 labelled 2B illustrates the performance of the removal apparatus 500. The control removal apparatus 2A comprises a larger semi permeable surface area similar to that of the membrane 504.

[0182] The results showed that the removal apparatus with a larger volume ratio (or height ratio) , apparatus 400 and 500, as per graph 704 and 708 respectively (1B and 2B) , the drop of dye concentration was more significant. The dye concentration drops more significantly from a starting state indicating that there is increased diffusion of dye into the second chamber. This indicates that more cryoprotectant diffuses across the semi permeable membrane due to the larger volume of the second chamber. The results also suggested that removal apparatus having a larger membrane area, reached equilibrium (final dye concentration) faster than the removal apparatus with a smaller membrane area. This is shown by the time to equilibrium for 2A (706) and 2B (708) being faster than 1A (702) and 1B (704) .

[0183] Apparatus 400 (1B) was then used to test the efficiency of DMSO removal, using a commercial spectrometer for DMSO quantification. The DMSO concentrations were measured before and after shaking for 10 min. The results are indicated in graph 710 shown in Figure 10. The graph 710 indicates the final concentration of cryoprotectant (e.g., DMSO) in the filtered cell therapy product after 10mins of using the apparatus 400, as compared to a non-treated cell therapy product. The results as shown in graph 712, which shows the performance of apparatus 400, the DMSO concentration (i.e., cryoprotectant concentration) was reduced from ～10%to ～2%after 10 min. This will make the cell culture medium more friendly for cell survival. This illustrates the improved performance of the cryoprotectant removal apparatus as described herein. Figure 10 illustrates the improved performance of removal apparatus 400.

[0184] To validate the feasibility of the removal process using a removal apparatus, a study was conducted to assess the changes in cell viability when cells are resuspended in different freezing medium and stored under room temperature for different time periods. This helps understand whether there is any impact to cells when they are not frozen or processed immediately upon thawing in DMSO-containing freezing media. The study assesses the changes in cell viability when cells are resuspended in different freezing medium and stored under room temperature for different time periods to understand whether there is any impact to cells when they are not frozen or processed immediately upon thawing in DMSO-containing freezing media.

[0185] The study involved using Human adipose derived MSCs are stored in two different freezing media: Formula A: 90%FBS +10%DMSO and Formula B: 70%IMDM + 20%FBS + 10%DMSO.

[0186] Thawed cells were placed at room temperature for 2.5min, 5min, 10min and 20min. At each timepoint, cell viability is counted using trypan blue and hemocytometer. Cells about to be frozen were resuspended in freezing medium and placed at room temperature for 2.5min, 5min, 10min and 20min. At each timepoint, cell viability was counted using trypan blue and hemocytometer. Figure 11 illustrates the two plots of the experimental results. The first plot 802 indicates cell viability post thaw across 20 mins for forumla A and formula B. Plot 804 illustrates cell viability pre freeze across 20 mins for fomula A and forumla B.

[0187] For the post-thaw analysis, thawed cells were placed at room temperature for 2.5min, 5min, 10min and 20min. At each timepoint, cell viability was counted using trypan blue and hemocytometer. For the pre-freeze analysis, cells about to be frozen were resuspended in freezing medium and placed at room temperature for 2.5min, 5min, 10min and 20min. At each timepoint, cell viability was counted using trypan blue and hemocytometer.

[0188] The cell viability of cells in post-thaw and pre-freeze conditions across four timepoints for both groups did not have any significant decrease despite storing at room temperature for different periods of time. Formula A shows higher viability in both conditions and at different timepoints; while formula B has a lower viability and larger variability across different repeats in both conditions, ranging from 60-90%cell viability at different timepoints. These results suggest cells stored in either formula A or B has no significant impact on cell viability, but the general trend suggests formula A to be the more stable option. The results also indicate that the removal process yields cell cultures having viable cells.

[0189] The apparatus 100, 200, 400 and 500, as described herein provide significant advancements over existing methods for cryoprotectant removal in cell therapy products. By addressing the limitations of manual washing and centrifugation, the apparatus 100, 200, 400, 500 offers a sterile, efficient, and standardized solution for cryoprotectant removal. Its compatibility with existing packaging, customization options, preservation of cell viability, and time-saving benefits make it a valuable tool for cell therapy manufacturers, clinical research organizations, hospitals, and medical facilities involved in cell therapy treatments. The cryoprotectant removal apparatus 100, 200 provides enhanced quality, safety, and therapeutic efficacy of cryopreserved cell therapy products. This benefits patients and advancing the field of cell therapy.

[0190] The apparatus 100, 200, 400, 500 can be used in clinical and hospital settings where cryopreserved cell therapy products are thawed and prepared for administration. The apparatus 100, 200 can be used by cell therapy manufacturers, clinical research organizations, hospitals, and medical facilities involved in cell therapy treatments. These entities would benefit from a user-friendly and sterile device for cryoprotectant removal, ensuring the quality and safety of cell therapy products. The demand for cryopreserved cell-based treatments is increasing due to their advantages in long-term storage and transportation. The apparatus 100, 200 provides an improved output of a cell therapy product with a cryoprotectant removed from the product or provides a product with a customised concentration of cryoprotectant. The apparatus 100, 200 can address the need for efficient DMSO removal. The apparatus 100, 200 can be used globally, as the demand for cryopreserved cell-based therapies transcends geographical boundaries. By providing a reliable and efficient solution for cryoprotectants removal, the apparatus 100, 200 meets the needs of healthcare providers and contributes to the expansion of the field of regenerative medicine and immunotherapy worldwide.

[0191] The apparatus 400 and 500 as described use a diffusion filtering mechanism. The apparatus 400 and 500 are advantageous because they passively cause filtering of cryoprotectants via diffusion. Each apparatus 400, 500 comprises a second chamber that has a larger volume that the first chamber. This difference in volume further improves the diffusion across the membrane thereby resulting more cryoprotectant e.g., DMSO being filtered out of the cell therapy product via diffusion.

[0192] It will be appreciated by persons skilled in the art that numerous variations and / or modifications may be made to the invention as shown in the specific embodiments without departing from the spirit or scope of the invention as broadly described. The present embodiments are, therefore, to be considered in all respects as illustrative and not restrictive.

[0193] Any reference to prior art contained herein is not to be taken as an admission that the information is common general knowledge, unless otherwise indicated.

[0194] Also, it is noted that the embodiments may be described as a process that is depicted as a flowchart, a flow diagram, a structure diagram, or a block diagram. Although a flowchart may describe the operations as a sequential process, many of the operations can be performed in parallel or concurrently. In addition, the order of the operations may be rearranged. A process is terminated when its operations are completed.

[0195] One or more of the components and functions illustrated in the figures may be rearranged and / or combined into a single component or embodied in several components without departing from the scope of the invention. Additional elements or components may also be added without departing from the scope of the invention.

Claims

1.A cryoprotectant removal apparatus for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising:a housing,a filter disposed in the housing, wherein the filter extends across the housing, the filter separating the housing into a first chamber and a second chamber,an inlet formed in the housing; and,in use, the cryopreserved cell therapy product is introduced into the first chamber, and the apparatus is configured to remove or partially remove a cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product by a tangential flow filtering process.2.The apparatus of claim 1, wherein the inlet is oriented tangentially to the filter such that the cryopreserved cell product is introduced parallel to a longitudinal axis of the filter.3.The apparatus of claim 2, wherein the first chamber is located above the second chamber, and the filter is positioned between the first chamber and second chamber.4.The apparatus of claim 3, wherein the filter is a cell impermeable membrane, wherein the cell impermeable membrane comprises pores that allow passage of cryoprotectants while preventing the passage of cells.5.The apparatus of claim 4, wherein the membrane has a pore size of less than 100kDa.6.The apparatus of claim 4, wherein the pores are sized based on the size or molecular weight of the cryoprotectant such that the cryoprotectant molecules can pass through the membrane from the first chamber into the second chamber.7.The apparatus of claim 6, wherein the cryoprotectant is a dimethyl sulfoxide (DMSO) , and wherein the pores are sized to allow passage of DMSO through the membrane while preventing passage of cells.8.The apparatus of claim 4, where in use, the cryopreserved cell therapy product is introduced into the first chamber parallel to the filter, and the cryoprotectant molecules pass through the filter into the second chamber while the retentate remains in the first chamber.9.The apparatus of claim 8, comprising an outlet that is in fluid communication with the first chamber, in use the retentate is extracted from the first chamber through the outlet and recirculated through the apparatus, and; where in use, the retentate is recirculated through the apparatus a plurality of times to substantially reduce the concentration of a cryoprotectant or completely remove a cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product.10.The apparatus of claim 9, where in use, a cryoprotectant free excipient is introduced into the second chamber, the cryoprotectant free excipient flows through the second chamber parallel to the filter and parallel to the flow of the cryopreserved cell therapy product through the first chamber, and wherein the cryoprotectant molecules are collected in the cryoprotectant free excipient as they move out of from the first chamber into the second chamber through the filter.11.The apparatus of claim 10, comprising:a first inlet,a second inlet,a first outlet,a second outlet,the first inlet and first outlet are fluidly coupled to the first chamber, a first flow path defined from the first inlet through the first chamber to the first outlet,the second inlet and second outlet are fluidly coupled to the second chamber, a second flow path defined from the second inlet through the second chamber to the second outlet,a feed reservoir, the feed reservoir is positioned upstream of the inlet and is fluidly coupled to the inlet,wherein the first flow path and second flow path extend tangentially to the filter and both the first and second flow paths extend parallel to each other, and;in use, the cell therapy product passes through the first flow path, the cryoprotectant free excipient passes through the second flow path and; the cryoprotectant from the cell therapy product passes into the second flow path due to tangential flow filtering, and;in use, the cryopreserved cell therapy product is introduced into the feed reservoir prior to being introduced into the first chamber and wherein the retentate is recirculated from the first chamber and collected in the feed reservoir prior to introducing the retentate into the first chamber.12.A cryoprotectant removal method for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising:introducing the cryopreserved cell therapy product tangential to a filter such that the cryopreserved cell therapy product moves or flows tangential to a filter,applying a pressure to the cryopreserved cell therapy product as it moves tangentially to the filter,wherein a cryoprotectant from the cell therapy product moves through the filter and out of the cell therapy product as the cell therapy product moves tangential to the filter under the applied pressure,collecting the filtered cell therapy product, wherein the filtered cell therapy product comprises a cryoprotectant concentration that is below a threshold or comprises no cryoprotectant.13.The method of claim 12, comprising:introducing a cryoprotectant free excipient tangential to the filter,wherein the cryopreserved cell therapy product is introduced into a first chamber and the cryoprotectant free excipient is introduced into a second chamber wherein the filter separates the first chamber and second chamber, and;wherein the cryoprotectant moves through the filter into the cryoprotectant free excipient and out of the cell therapy product as the cell therapy product moves tangential to the filter under the applied pressure, and;recirculating the collected filtered cell therapy product and reintroducing the collected cell therapy product.14.The method of claim 13, wherein the filter comprises a porous membrane comprising a plurality of pores, wherein the membrane is cell impermeable and cryoprotectant permeable, and wherein the membrane has a pore size of less than 100kDa.15.A cryoprotectant removal apparatus for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising:a housing,a semi permeable membrane disposed in the housing, wherein the semi permeable membrane extends across the housing, the semi permeable membrane separating the housing into a first chamber and a second chamber,the second chamber comprises a larger volume than the first chamber,in use, a cryopreserved cell therapy product be placed or introduced into the first chamber and a buffer solution be placed or introduced into the second chamber,in use, the difference of volume between the second chamber and first chamber causing removal of cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product due to diffusion across the semi permeable membrane.16.The cryoprotectant removal apparatus of claim 15, wherein volumetric ratio of the volume of the first chamber and the volume of the second chamber is greater than 1: 1, and the second chamber comprises a larger volume than the first chamber.17.The cryoprotectant removal apparatus of claim 16, wherein the volumetric ratio of the volume of the first chamber and the volume of the second chamber is between 1: 2 to 1: 7.18.The cryoprotectant removal apparatus of claim 17, wherein the volumetric ratio of the volume of the first chamber and the volume of the second chamber is 1: 2.5.19.The cryoprotectant removal apparatus of claim 17, wherein the volumetric ratio of the volume of the first chamber and the volume of the second chamber is 1: 7.20.The cryoprotectant removal apparatus of 15, wherein the height of the second chamber is greater than the height of the first chamber.21.The cryoprotectant removal apparatus of claim 17, wherein the semi permeable membrane comprises a pore size between 1 to 100 micrometers.22.The cryoprotectant removal apparatus of claim 21, wherein the cryoprotectant apparatus is configured to be agitated or shaken in use to improve diffusion of the cryoprotectant from the first chamber to the second chamber.23.The cryoprotectant removal apparatus of claim 17, in use, the apparatus is configured to reduce a concentration of cryoprotectant in the cell therapy product from 10%to 2%within 10 minutes.24.The cryoprotectant removal apparatus of claim 17 or claim 1, comprising an inlet formed in the first chamber, and wherein the inlet is configured to form an aseptic connection to a packaging of the cryopreserved cell therapy product.25.The cryoprotectant removal apparatus of claim 15, wherein the larger volume of the second chamber facilitates removal of cryoprotectant from the cryopreserved cell therapy product in the first chamber via diffusion across the semi permeable membrane by maintaining a concentration gradient.26.The cryoprotectant removal apparatus of claim 15, wherein the semi permeable membrane comprising a surface area of 50 mm2 to 800 mm2.27.The cryoprotectant removal apparatus of claim 15, wherein the semi permeable membrane comprises a cryoprotectant permeable membrane, and wherein the membrane has a pore size of less than 100kDa.28.The cryoprotectant removal apparatus of claim 15 or claim 1 is a sterile, single use device.29.A cryoprotectant removal method for removing cryoprotectant from a cryopreserved cell therapy product comprising the steps of:introducing the cryopreserved cell therapy product into a first chamber of a cryoprotectant removal apparatus,introducing a buffer solution into a second chamber of the cryoprotectant removal apparatus,wherein the cryoprotectant apparatus comprises a semi permeable membrane positioned between the first chamber and second chamber, the semi permeable membrane separating the first chamber and second chamber,wherein the second chamber comprises a volume larger than the first chamber, and;wherein the cryoprotectant diffuses from the first chamber into the second chamber across the semi permeable membrane leaving a filtered cryopreserved cell therapy product in the first chamber, wherein the larger volume of the second chamber facilitates diffusion of cryoprotectant across the semi permeable membrane.30.The cryoprotectant removal method of claim 29, wherein the larger volume of the second chamber dilutes the cryoprotectant entering the second chamber to maintain a concentration gradient that facilitates further diffusion, and the method comprises collecting or removing a filtered cryopreserved cell therapy product from the first chamber.31.The cryoprotectant removal method of claim 29, comprising the step of agitating the apparatus or allowing the apparatus to stand for a predetermined period of time after the cryopreserved cell therapy product is introduced into the first chamber.32.The cryoprotectant removal method of claim 29, wherein the cryoprotectant removal apparatus is an apparatus of claim 1 or claim 15.

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