Anti-TL1a antibodies, multispecific antibodies comprising the same and uses thereof

Abstract

Provided are anti-TL1A antibodies or antigen-binding fragments thereof, multispecific antibodies comprising the same and uses thereof.

Description

ANTI-TL1A ANTIBODIES, MULTISPECIFIC ANTIBODIES COMPRISING THE SAME AND USES THEREOFTechnical Field

[0001] The present disclosure relates to the field of molecular biology and immunology and particularly to anti-TL1A antibodies or antigen-binding fragments thereof, multispecific antibodies comprising the same and uses thereof.Background

[0002] Tumor necrosis factor-like cytokine 1A (TL1A) belongs to the TNF family of cytokines and is expressed across a diverse range of cell types, including dendritic cells, macrophages, B cells, T cells, and endothelial cells. It exists either on the cell surface or is secreted into the extracellular environment as a soluble cytokine. Intriguingly, both the membrane-bound and soluble forms of TL1A exhibit functional activity. Functionally, TL1A exerts its effects by interacting with Death Receptor 3 (DR3) . This interaction enables TL1A to activate multiple types of target immune cells, such as T cells, NK cells, NKT cells, and Treg cells, thereby playing a crucial role in modulating immune responses.

[0003] Notably, while TL1A is the sole identified ligand for DR3, TL1A also has the ability to interact with tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B (also known as “Decoy Receptor 3” or “DcR3” ) , a decoy receptor. DcR3 is a soluble protein that competitively inhibits the binding of TL1A to DR3. Moreover, DcR3 has a broader function as a decoy receptor, as it can also sequester Fas-L and LIGHT, further highlighting its importance in regulating immune-related signaling pathways.

[0004] Inflammatory bowel disease (IBD) , which encompasses Crohn's disease and ulcerative colitis (UC) , represents an intestinal disorder that incites inflammatory states within the gastrointestinal tract. On a global scale, approximately 1.86 million individuals have been diagnosed with UC, while around 1.3 million have been diagnosed with Crohn's disease (CD) . In an effort to induce remission in patients afflicted with IBD, a variety of therapeutic interventions have been employed. These encompass tumor necrosis factor antagonists such as infliximab, adalimumab, and golimumab, the interleukin-12 / 23 inhibitor ustekinumab, and the integrin receptor antagonist vedolizumab. Notwithstanding, a substantial proportion of patients exhibit non-responsiveness or a waning of the response to these treatments. Consequently, the development of novel therapeutic modalities for IBD persists as an exigent unmet clinical necessity.

[0005] The TL1A / DR3 signaling pathway has been found to be involved in multiple biological systems that are closely associated with human diseases. A multitude of genome-wide association studies have established links between several polymorphisms of the TL1A gene and ulcerative colitis (UC) as well as Crohn's disease (CD) in patient populations of Japanese, European, and Asian ethnic origins. Furthermore, inflamed tissues in human patients with inflammatory bowel disease (IBD) exhibit elevated levels of TL1A and DR3 expression. Multiple independent research laboratories have provided evidence demonstrating that antibody-mediated blockade of TL1A can prevent or mitigate pre-existing gut inflammation in a variety of murine models of IBD. Beyond the context of IBD, the inhibition of this signaling pathway has the potential to confer therapeutic benefits in several immune-mediated conditions. These include experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) , which serves as a model for multiple sclerosis, as well as asthma and arthritis.

[0006] From the above, it's clear that TL1A is crucial in biological processes linked to important human diseases. So, compounds that can block TL1A activity are very useful. These compounds can be used in many ways, like for treating, preventing, diagnosing, and predicting diseases. Their use can greatly improve how we manage and understand diseases related to TL1A, and help patients get better healthcare.Summary

[0007] In one aspect, provided is an anti-TL1A antibody or an antigen-binding fragment thereof, wherein the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain variable domain, wherein the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, 77, 69, 70, 71, 72, 73, 74 or 75.

[0008] In another aspect, provided is an anti-TL1A antibody or an antigen-binding fragment thereof, wherein the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain variable domain, wherein the heavy chain variable domain comprises CDRs 1-3 having (1) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 24 and 36, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 24 and 36, respectively; (2) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 25 and 36, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 25 and 36, respectively; (3) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 35, respectively; (4) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 19 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 19 and 35, respectively; (5) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 20 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 20 and 35, respectively; (6) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 21 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 21 and 35, respectively; (7) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 22 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 22 and 35, respectively; (8) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 23 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 23 and 35, respectively; or (9) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 36, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 36, respectively.

[0009] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises: (A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, 77, 69, 70, 71, 72, 73, 74 or 75; or (B) an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, 77, 69, 70, 71, 72, 73, 74 or 75.

[0010] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of the present disclosure (1) binds to human TL1A and non-human primate TL1A; and / or (2) blocks interaction between TL1A and DR3; and / or (3) does not block interaction between TL1A and DcR3.

[0011] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of the present disclosure is a single domain antibody or a heavy-chain-only antibody and optionally a fully human antibody.

[0012] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of the present disclosure further comprises an Fc region, and optionally the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to reduce the effector function and / or enhance the FcRn binding.

[0013] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of the present disclosure comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93, 94, 86, 87, 88, 89, 90, 91 or 92 or an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93, 94, 86, 87, 88, 89, 90, 91 or 92.

[0014] In another aspect, provided is a multispecific antibody, wherein the multispecific antibody comprises a first antigen-binding moiety binding to TL1A, wherein the first antigen-binding moiety comprises the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of the present disclosure, and a second antigen-binding moiety binding to interleukin-23 p19 subunit (IL-23p19) .

[0015] In some embodiments, the second antigen-binding moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein the VH comprises the HCDRs 1-3 of a VH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, and the VL comprises LCDRs 1-3 of a VL having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78. In some embodiments, the VH comprises HCDRs 1-3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 14 and 31, respectively; and the VL comprises LCDRs 1-3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 42, 50 and 58, respectively. In some embodiments, the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65 or an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65. In some embodiments, the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78 or an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78.

[0016] In some embodiments, the second antigen-binding moiety is a dsFv, an scFv, an scdsFv, a di-scFv, an Fab, an Fab’, an scFab or an F (ab’) 2.

[0017] In some embodiments, the multispecific antibody of the present disclosure further comprises an Fc region, and optionally the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to reduce the effector function and / or enhance the FcRn binding. In some embodiments, the Fc region comprises a human IgG1 Fc region and amino acid substitutions L234A, L235A, G237A, M252Y, S254T and T256E.

[0018] In some embodiments, the second antigen-binding moiety comprises a VH and a VL, wherein the multispecific antibody comprises: a first polypeptide comprising the VH, a CH1 domain, the heavy chain variable domain and the Fc region; and a second polypeptide comprising the VL and a light chain constant region.

[0019] In some embodiments, the multispecific antibody of the present disclosure comprises a first polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102 or 103, and a second polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95.

[0020] In a further aspect, provided is a nucleic acid encoding the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, or the multispecific antibody of the present disclosure.

[0021] In yet another aspect, provided is a vector comprising the nucleic acid of the present disclosure.

[0022] Further provided is a host cell comprising the nucleic acid or the vector of the present disclosure.

[0023] In another aspect, provided is a pharmaceutical composition comprising the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody, the nucleic acid or the vector of the present disclosure, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.

[0024] In yet another aspect, provided is a method of treating an inflammatory disease, autoimmune disease or condition in a subject, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody, the nucleic acid, the vector, or the pharmaceutical composition of the present disclosure.

[0025] Further provided is use of the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody, the nucleic acid, the vector, or the pharmaceutical composition of the present disclosure in the manufacture of a medicament for treating an inflammatory disease, autoimmune disease or condition in a subject.

[0026] Also provided is the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody, the nucleic acid, the vector, or the pharmaceutical composition of the present disclosure for use in the treatment of an inflammatory disease, autoimmune disease or condition in a subject.

[0027] In some embodiments, the inflammatory disease, autoimmune disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory bowel disease (such as Crohn's disease and ulcerative colitis) , atopic dermatitis, asthma, psoriasis, psoriasis vulgaris, arthritis (such as reactive arthritis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis) , gastrointestinal disease associated with cystic fibrosis, interstitial lung disease, irritable bowel syndrome, small and large intestinal fibrostenosis, systemic sclerosis, multiple sclerosis,  syndrome, Primary biliary cirrhosis, Systemic lupus erythematosus, sarcoidosis, Type 1 diabetes mellitus, insulin dependent diabetes mellitus (IDDM) , autoimmune thyroiditis, ankylosing spondylitis, scleroderma, polymyositis, dermatomyositis, vasculitis, Wegener's granulomatosis, Myasthenia gravis, Hashimoto's thyroiditis, Graves' disease, chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy, and Guillain-Barre syndrome.Brief Description of the Drawings

[0028] Figure 1A illustrates the binding activity of anti-TL1A HCAb PR014047 to human TL1A.

[0029] Figure 1B illustrates the binding activity of anti-TL1A HCAb PR014047 to cyno TL1A.

[0030] Figure 2 illustrates the binding activity of anti-TL1A HCAb PR014047 to CHOK1-hTL1A cells.

[0031] Figure 3 illustrates the activity of anti-TL1A HCAb PR014047 in blocking DR3 / TL1A interaction as determined by ELISA.

[0032] Figure 4 illustrates the activity of anti-TL1A HCAb PR014047 in inhibiting the activation of NFκB.

[0033] Figure 5 illustrates the activity of anti-TL1A HCAb PR014047 in inhibiting the production of IFNγ in human PBMCs.

[0034] Figure 6A illustrates the binding activities of single amino acid mutated PR014047 variants to human TL1A.

[0035] Figure 6B illustrates the binding activities of single amino acid mutated PR014047 variants to cyno TL1A.

[0036] Figure 7A illustrates the binding activities of single amino acid mutated PR014047 variants (PR014624, PR014625, PR014626 and PR014627) to CHOK1-hTL1A cells.

[0037] Figure 7B illustrates the binding activities of single amino acid mutated PR014047 variants (PR014628 and PR014629) to CHOK1-hTL1A cells.

[0038] Figure 8A illustrates the activities of single-point mutation variants of PR014047 (PR014624, PR014625, PR014626 and PR014627) in blocking DR3 / TL1A interaction as determined by ELISA.

[0039] Figure 8B illustrates the activities of single-point mutation variants of PR014047 (PR014628 and PR014629) in blocking DR3 / TL1A interaction as determined by ELISA.

[0040] Figure 9A illustrates the activities of single-point mutation variants of PR014047 (PR014624 and PR014625) in inhibiting the activation of NFκB.

[0041] Figure 9B illustrates the activities of single-point mutation variants of PR014047 (PR014626, PR014627, PR014628 and PR014629) in inhibiting the activation of NFκB.

[0042] Figure 10 illustrates the activities of multi-point mutation variants of PR014047 (PR014685 and PR014686) in blocking DR3 / TL1A interaction as determined by ELISA.

[0043] Figure 11 illustrates the activities of multi-point mutation variants of PR014047 (PR014685 and PR014686) in inhibiting the activation of NFκB.

[0044] Figure 12 illustrates a schematic diagram of the structure of TL1A x IL-23p19 BsAbs.

[0045] Figure 13 illustrates the binding activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs to human, cyno, mouse and rat TL1As.

[0046] Figure 14 illustrates the binding activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs to CHOK1-hTL1A cells.

[0047] Figure 15 illustrates the activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs in blocking DR3 / TL1A interaction as determined by ELISA.

[0048] Figure 16 illustrates the activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs in inhibiting the activation of NFκB.

[0049] Figure 17 illustrates the binding activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs to human IL-23.

[0050] Figure 18 illustrates the activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs in blocking hIL-23 / hIL-23 receptor interaction as determined by ELISA.

[0051] Figure 19 illustrates the activity of TL1A x IL-23p19 BsAb PR014897 in inhibiting the production of IFNγ in human PBMCs.

[0052] Figure 20 illustrates the activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs in inhibiting the production of mouse IL-17 in mouse spenocytes.

[0053] Figure 21 illustrates the selectivity of TL1A x IL-23p19 BsAbs in blocking DR3 / TL1A or DcR3 / TL1A interactions as determined by ELISA.

[0054] Figure 22A illustrates the formation of large immune complexes at 1: 1 ratio as determined by SEC-MALS.

[0055] Figure 22B illustrates the formation of large immune complexes at higher antigen to antibody ratio as determined by SEC-MALS.

[0056] Figures 23 to 27 illustrate the results of efficacy evaluation of PR014897 in a TNBS-induced colitis model in B-hTL1A-hIL23A-hIL12B mice. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p <0.001, ****p < 0.0001, versus the Vehicle group, ANOVA.

[0057] Figure 23 illustrates the colitis severity, as evaluated by body weight loss (A) and DAI score (B) .

[0058] Figure 24 illustrates the efficacy of PR014897 in reducing colitis severity, as evaluated by colon density (A) , colon length (B) and colon weight (C) .

[0059] Figure 25 illustrates histopathological analysis of colonic lesions using H&E staining and pathological scoring.

[0060] Figure 26 illustrates histopathological evaluation of colonic fibrosis using Masson’s Trichrome staining and pathological scoring.

[0061] Figure 27 illustrates TNF-α, IL-1β, IL-6, IFN-γ and IL-17A levels in the intestinal mucosal tissues.Detailed DescriptionDefinitions

[0062] The aforementioned features and advantages of the invention as well as additional features and advantages thereof will be more clearly understood hereafter as a result of a detailed description of the following embodiments when taken in conjunction with the drawings.

[0063] The embodiments described herein with reference to drawings are explanatory, illustrative, and used to generally understand the present invention. The embodiments shall not be construed to limit the scope of the present invention. The same or similar elements and the elements having same or similar functions are denoted by like reference numerals throughout the descriptions.

[0064] Unless indicated or defined otherwise, all terms used have their usual meaning in the art, which will be clear to the skilled person. Reference is for example made to the standard handbooks, such as Leuenberger, H. G. W, Nagel, B. and Klbl, H. eds., “A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations) ” , Helvetica Chimica Acta (1995) , CH-4010 Basel, Switzerland; Sambrook et al, “Molecular Cloning: A Laboratory Manual” (2nd Ed.) , Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) ; F. Ausubel et al, eds., “Current protocols in molecular biology” , Green Publishing and Wiley InterScience, New York (1987) ; Roitt et al., “Immunology (6th Ed. ) , Mosby / Elsevier, Edinburgh (2001) ; and Janeway et al., “Immunobiology” (6th Ed. ) , Garland Science Publishing / Churchill Livingstone, New York (2005) , as well as the general background art cited above.

[0065] As used herein, singular forms “a” , “an” and “the” include plural referents unless the context clearly indicates otherwise. Thus, for example, reference to “an antibody” includes a plurality of antibodies and reference to “an antibody” in some embodiments includes multiple antibodies, and so forth.

[0066] Unless indicated or defined otherwise, the term “comprise” , and variations thereof such as “comprises” and “comprising” , should be understood to imply the inclusion of a stated elements or step or group of elements or steps but not the exclusion of any other element or step or group of elements or steps. The term “comprising” encompasses “including” as well as “consisting” e.g., a composition “comprising” X may consist exclusively of X or may include something additional e.g., X + Y.

[0067] The term “about” in relation to a numerical value x is optional and means, for example, x±10%or x±5%.

[0068] As used herein, the term “sequence identity” refers to the extent to which two sequences (amino acid) have the same residue at the same positions in an alignment. For example, “an amino acid sequence is X%identical to SEQ ID NO: Y” refers to %identity of the amino acid sequence to SEQ ID NO: Y and is elaborated as X%of residues in the amino acid sequence are identical to the residues of sequence disclosed in SEQ ID NO: Y. Generally, computer programs are employed for such calculations. Exemplary programs that compare and align pairs of sequences, include ALIGN (Myers and Miller, 1988) , FASTA (Pearson and Lipman, 1988; Pearson, 1990) and gapped BLAST (Altschul et al., 1997) , BLASTP, BLASTN, or GCG (Devereux et al., 1984) .

[0069] Also, in determining the degree of sequence identity between two amino acid sequences, the skilled person may take into account so-called “conservative” amino acid substitutions, which can generally be described as amino acid substitutions in which an amino acid residue is replaced with another amino acid residue of similar chemical structure and which has little or essentially no influence on the function, activity or other biological properties of the polypeptide. Such conservative amino acid substitutions are well known in the art, for example from WO 04 / 037999, GB-A-2 357 768, WO 98 / 49185, WO 00 / 46383 and WO 01 / 09300; and (preferred) types and / or combinations of such substitutions may be selected on the basis of the pertinent teachings from WO 04 / 037999 as well as WO 98 / 49185 and from the further references cited therein.

[0070] Such conservative substitutions preferably are substitutions in which one amino acid within the following groups (a) - (e) is substituted by another amino acid residue within the same group: (a) small aliphatic, nonpolar or slightly polar residues: Ala, Ser, Thr, Pro and Gly; (b) polar, negatively charged residues and their (uncharged) amides: Asp, Asn, Glu and Gln; (c) polar, positively charged residues: His, Arg and Lys; (d) large aliphatic, nonpolar residues: Met, Leu, He, Val and Cys; and (e) aromatic residues: Phe, Tyr and Trp.

[0071] Particularly preferred conservative substitutions are as follows: Ala into Gly or into Ser; Arg into Lys; Asn into Gln or into His; Asp into Glu; Cys into Ser; Gln into Asn; Glu into Asp; Gly into Ala or into Pro; His into Asn or into Gln; Ile into Leu or into Val; Leu into Ile or into Val; Lys into Arg, into Gln or into Glu; Met into Leu, into Tyr or into Ile; Phe into Met, into Leu or into Tyr; Ser into Thr; Thr into Ser; Trp into Tyr; Tyr into Trp; and / or Phe into Val, into Ile or into Leu.

[0072] Any amino acid substitutions applied to the polypeptides described herein may also be based on the analysis of the frequencies of amino acid variations between homologous proteins of different species developed by Schulz et al., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, 1978, on the analyses of structure forming potentials developed by Chou and Fasman, Biochemistry 13: 211, 1974 and Adv. Enzymol., 47: 45-149, 1978, and on the analysis of hydrophobicity patterns in proteins developed by Eisenberg et al., Proc. Nat. Acad Sci. USA 81: 140-144, 1984; Kyte &Doolittle, J Mol. Biol. 157: 105-132, 198 1, and Goldman et al., Ann. Rev. Biophys. Chem. 15: 321-353, 1986, all incorporated herein in their entirety by reference.

[0073] As used herein, the term “antigen (Ag) ” is any substance which could trigger immune response in the body, especially the production of antibodies. As used herein, this term refers to any substance comprising epitope (s) (i.e., antigenic determinant (s) ) to which an antibody specifically binds. An antigen can be a polypeptide, lipid, carbohydrate, polynucleotide, etc. In a specific embodiment, the antigen refers to TL1A proteins or fragments thereof comprising the epitope to which the antibody or antigen-binding fragment of the present disclosure binds. The TL1A proteins or fragments thereof may be of any species, such as human, murine and rabbit or the like.

[0074] As used herein, the term “antibody (Ab) ” is an immunoglobulin (Ig) molecule or fragment thereof that specifically binds to the epitope of an antigen through at least one antigen-binding site (i.e., the paratope) . Antibodies may be derived from different species, including but not limited to mouse, rat, rabbit, guinea pig and human.

[0075] As used herein, the definition of “antibody” encompasses conventional antibodies, single domain antibodies, heavy-chain-only antibodies, recombinant antibodies, multispecific antibodies (e.g., bispecific antibodies) , monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, fully human antibodies, non-human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies, intrabodies, diabodies, anti-idiotypic antibodies, and antigen-binding fragments. Antibodies provided herein include members of any immunoglobulin type (e.g., IgG, IgM, IgD, IgE, IgA and IgY) , any class (e.g. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 and IgA2) or subclass (e.g., IgG2a and IgG2b) .

[0076] As used herein, the term “heavy-chain-only antibody” or “heavy-chain antibody” or “HCAb” refers to an antibody consisting only of two heavy chains and lacking the two light chains usually found in conventional antibodies. In contrast to a conventional antibody, an HCAb only require the heavy chain variable domain (also referred to as “VHH” ) for antigen binding. That is, the antigen-binding site of an HCAb is primarily determined by the three CDRs of the VHH. Typically, the heavy chains of HCAbs lack the CH1 domain usually found in the heavy chains of conventional antibodies. HCAbs can be obtained by hybridoma technology, or phage libraries or eukaryotic cell libraries displaying or secreting HCAbs. HCAbs can also be obtained from transgenic animals, for example transgenic mice capable of producing fully human HCAbs (see e.g., WO2007 / 096779) .

[0077] As used herein, the term “single-domain antibody” or “nanobody” refers to an antibody only consists of a single variable domain. The single variable domain may be a heavy chain single variable domain or a light chain single variable domain.

[0078] A “conventional” or “full-length” antibody typically consists of four polypeptides: two heavy chains (HC) and two light chains (LC) . Each light chain, from the amino-terminus to the carboxyl-terminus, comprises a light chain variable region (VL) and a light chain constant region (CL) . Each heavy chain, from the amino-terminus to the carboxyl-terminus, comprises a heavy chain variable region (VH) and one or more heavy chain constant regions (CH) , which could include CH1, CH2, CH3 and CH4.

[0079] The term “monoclonal antibody” as used herein refers to a preparation of antibody molecules of single molecular composition. A monoclonal antibody displays a single binding specificity and affinity. In one embodiment, the monoclonal antibodies are produced by a hybridoma which includes a B cell obtained from a non-human animal, e.g., mouse, fused to an immortalized cell.

[0080] The term “recombinant antibody” , as used herein, includes all antibodies that are prepared, expressed, created or isolated by recombinant means, such as (a) antibodies isolated from an animal (e.g., a mouse) that is transgenic or transchromosomal with respect to the immunoglobulin genes or a hybridoma prepared therefrom, (b) antibodies isolated from a host cell transformed to express the antibody, e.g., from a transfectoma, (c) antibodies isolated from a recombinant, combinatorial antibody library, and (d) antibodies prepared, expressed, created or isolated by any other means that involve splicing of immunoglobulin gene sequences to other DNA sequences.

[0081] The term “human antibody” , as used herein, is intended to include antibodies having variable and constant regions derived from human germline immunoglobulin sequences. Human antibodies may include amino acid residues not encoded by human germline immunoglobulin sequences (e.g., mutations introduced by random or site-specific mutagenesis in vitro or by somatic mutation in vivo) . The definition of a human antibody specifically excludes a humanized antibody comprising non-human antigen-binding residues.

[0082] The term “chimeric antibody” refers to those antibodies wherein one portion of each of the amino acid sequences of heavy and light chains is homologous to corresponding sequences in antibodies derived from a particular species or belonging to a particular class, while the remaining segment of the chain is homologous to corresponding sequences in another.

[0083] As used herein, a “humanized antibody” is an antibody derived from a non-human antibody whose sequence has been modified to increase the sequence similarity to human immunoglobulin molecules.

[0084] As used herein, the term “fully human antibody” refers to an antibody that comprises human immunoglobulin protein sequences only. A fully human antibody may contain murine carbohydrate chains if produced in a mouse, in a mouse cell, or in a hybridoma derived from a mouse cell.

[0085] As used herein, the term “antigen-binding moiety” refers to an amino acid sequence comprising an antigen-binding site and is capable of binding to an epitope. The definition of antigen-binding moiety falls within the definition of an antibody or antigen-binding fragment. An antigen-binding moiety may comprise one or more (e.g., 1, 2, 3, or 4) antigen-binding domains / site. In some embodiments, the antigen-binding moiety comprises one antigen-binding domains / sites. In some other embodiments, the antigen-binding moiety comprises two antigen-binding domains / sites.

[0086] As used herein, an “antigen-binding fragment” of an antibody refers to any portion of a full-length antibody that contains at least a portion of the variable domains (e.g. one or more CDRs) of the antibody and specifically binds to the same cognate antigen as the full-length antibody. Examples of antigen-binding fragments include, but are not limited to, Fv, scFv, dsFv, scdsFv, diabody, single variable domain (e.g., VHH) , Fd, di-scFv, Fab, Fab’, scFab, F (ab’) 2, tandem scFv, tandem VHH, and other fragments. An antigen-binding fragment generally contains at least or about 50 amino acids and typically at least or about 200 amino acids.

[0087] A single-chain variable fragment (scFv) is a fusion protein of the variable regions of the heavy (VH) and light chains (VL) of immunoglobulins, connected with a peptide linker. The peptide linker can either connect the N-terminus of the VH with the C-terminus of the VL, or vice versa.

[0088] The Fv or the scFv can be further stabilized by introducing an interchain disulfide bond between the VL and the VH to generate a disulfide-stabilized variable fragment (dsFv) or a single-chain disulfide-stabilized variable fragment (scdsFv, with a peptide linker and an interchain disulfide bond) , respectively.

[0089] Two single-chain variable fragments may be linked by a peptide linker to generate a covalently linked divalent single chain (referred to as an “sc (Fv) 2” ) . A “diabody” is a noncovalent dimer of scFv.

[0090] The term “di-scFv” refers to a fusion protein comprising two light chain variable region (VL) and two heavy chain variable region (VH) , wherein the two VL and the two VH are contiguously linked optionally via polypeptide linkers, and capable of being expressed as a single chain polypeptide. The two VL and two VH are fused optionally by peptide linkers to form a bivalent molecule, such as in the order of VL1-linker-VH1-linker-VL2-linker-VH2 or VL1-linker-VH1-linker-VH2-linker-VL2 or VL1-linker-VL2-linker-VH2-linker-VH1 or VL1-linker-VH2-linker-VL2-linker-VH1, to form two antigen-binding domains.

[0091] An Fab fragment essentially comprises a light chain and one variable and one constant region of the heavy chain (i.e., the VH-CH1, also known as the fragment difficult (Fd) ) , wherein the VL and VH form the antigen-binding site (also known as the fragment variable region, Fv) , and the CL and CH1 are covalently linked by a disulfide bond.

[0092] A single-chain Fab (scFab) fragment may be generated by connecting the light chain and the Fd fragment with a peptide linker.

[0093] An F (ab’) 2 fragment essentially contains two Fab fragments joined at the hinge region through disulfide bonds. An Fab’ fragment is one half of a F (ab’) 2 fragment, formed by the reduction of the disulfide bonds at the hinge region of the F (ab’) 2 fragment.

[0094] As used herein, the term “Fc region” refers to a C-terminal region of an immunoglobulin heavy chain that contains at least a portion of the heavy chain constant region. Preferably, an Fc region comprises at least a CH3 domain, for example, a CH3 domain, a CH2 domain and a CH3 domain or preferably, a hinge region, a CH2 domain and a CH3 domain. This term encompasses native and variant Fc regions. Unless otherwise specified, numbering of amino acid residues in the Fc region or constant region is according to the EU numbering system (EU index) , as described in Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991.

[0095] In some embodiments, an antibody or antigen-binding fragment as described herein comprises an Fc region. In some embodiments, the Fc region comprises a CH3 domain. In some embodiments, the Fc region comprises a CH2 domain and a CH3 domain. In some embodiments, the Fc region comprises at least a portion of a hinge region, a CH2 domain and a CH3 domain. In some embodiments, for example, wherein the Fc region is fused to the C-terminus of the heavy chain variable domain binding to TL1A of the present disclosure, the Fc region lacks a CH1 domain. The Fc region may be a monomeric Fc region, i.e., a soluble monomeric Fc region (see e.g., Wang C et al., Engineered Soluble Monomeric IgG1 Fc with Significantly Decreased Non-Specific Binding. Front Immunol. 2017 Nov 13; 8: 1545) , or a dimeric Fc region, which comprises two identical (homodimer) or different (heterodimer) Fc region subunits.

[0096] The Fc region may be used may be derived from any immunoglobulin subtype or subclass, for example, IgG, IgM, IgA, IgD and IgE. Preferably, the Fc region is derived from human IgG, e.g., human IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4. In some embodiments, the Fc region is a human IgG1 Fc region. In some embodiments, a human IgG1 Fc region may extend from Glu216, or Cys220, or Asp221, or Cys226, or Pro230, to the carboxyl-terminus of the heavy chain, while the C-terminal lysine (Lys447) of the heavy chain may or may not be present.

[0097] The Fc regions of antibodies may be modified to obtain antibodies having desirable properties. For example, one or more cysteines may be introduced into or removed from the hinge region (e.g., by site-directed mutagenesis) to promote or weaken dimerization. For example, hinge region, CH2 and / or CH3 may be modified to prolong or decrease the half-life, promote the cellular internalization or tissue penetration, increase or decrease the binding to FcγRIIB (see e.g., WO2008150494A1) , increase or decrease Fc effector functions, including but not limited to antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) , antibody dependent cell-mediated phagocytosis and complement-dependent cytotoxicity (CDC) (see e.g., Caron, P. C., et al., J. Exp. Med. 176: 1191-1195 (1992) ; and Shopes B. J. Immunol. 148 2918-2922 (1992) ) .

[0098] The term “hinge region” generally refers to a portion between the CH1 and CH2 domains of a conventional antibody, a portion between the VHH and CH2 domains of a heavy chain antibody or a functional equivalent thereof (e.g., the hinge region in a T cell receptor (TCR) ) . The hinge region may be an intact hinge region or a portion thereof.

[0099] The variable region (or “variable domain” ) allows specific antigen recognition and binding. Each variable domain has three hypervariable “complementarity-determining regions (CDRs) ” and four relatively conserved “framework regions (FWRs) ” , arranged from the amino-terminus (N-terminus) to the carboxyl-terminus (C-terminus) in the following order: FWR1, CDR1, FWR2, CDR2, FWR3, CDR3, FWR4. One of skill in the art knows and can identify the CDRs and FWRs using methodology of the art, for example, the Kabat or Chothia numbering schemes (see e.g., Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, and Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917) .

[0100] Each CDR forms a CDR loop and contributes to the antigen-binding specificity and affinity. The framework residues form a scaffold and maintain the overall structure of the antigen-binding domain (e.g., Fv or VHH) . The combinations of CDR loops (e.g., three CDRs from each of VL and VH, or the three CDRs from VHH) , with the help of the FWRs, form a three-dimensional structure, which defines the paratope or the antigen-binding site of the antibody. According to the locations in the VL or VH (or VHH) , the CDR is designated as the heavy chain variable region CDR (HCDR or VH CDR) , like HCDR1 (or VH CDR1) , HCDR2 (or VH CDR2) , HCDR3 (or VH CDR3) ; or the light chain variable region CDR (LCDR or VL CDR) , like LCDR1 (or VL CDR1) , LCDR2 (or VL CDR2) , LCDR3 (or VL CDR3) .

[0101] In a given amino acid sequence of an immunoglobulin variable region, the precise amino acid sequence boundary of each CDR may be determined by using any one of many well-known antibody numbering schemes or a combination thereof, wherein the numbering schemes include, for example, Chothia based on the three-dimensional structures of antibodies and the topology of CDR loops (Chothia et al., (1989) Nature 342: 877-883, Al-Lazikani et al., “Standard Conformations for the Canonical Structures of Immunoglobulins” , Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997) ) , Kabat based on the antibody sequence variability (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, version 4, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987) ) , AbM (University of Bath) , Contact (University College London) , the International ImMunoGeneTics database (IMGT) (World-Wide-Web imgt. cines. fr / ) , and the North CDR definition based on affinity propagation clustering using a large number of crystal structures. In the anti-TL1A antibody or antigen-binding fragment of the present disclosure, the amino acid sequences of the CDR regions are defined using the Chothia numbering scheme, and it is not meant that the present disclosure only protects an antibody molecule represented by the CDR regions defined by the Chothia numbering scheme. It shall be noted that the boundaries of CDRs of a variable region in the same antibody obtained based on different numbering scheme may be different, that is, the CDR sequences of the variable region in the same antibody defined under different numbering schemes may be different. Once a variable region (e.g., a VH or VL) is given, those skilled in the art would understand that CDRs within the variable region can be defined by different numbering systems or combinations thereof. The CDR sequences defined under these different numbering schemes and the antibody molecules characterized thereby are also intended to be protected by the present disclosure.

[0102] Those skilled in the art would be able to determine the positions of the CDRs, FWRs, VHH, VH, CH1, hinge region, CH2, CH3, VL and CL in an antibody, for example with the help of an algorithm or a software (see e.g., William R. Strohl, Lila M. Strohl, (2012) , Antibody structure–function relationships, In Woodhead Publishing Series in Biomedicine, Therapeutic Antibody Engineering, Woodhead Publishing, pp. 37-56) .

[0103] The term “multispecific antibody” is used in the broadest sense and specifically covers an antibody that is capable of specifically binding to two or more different epitopes. The two or more different epitopes may be present on the same biological molecule or on two or more different biological molecules. A multispecific antibody may be a multivalent (e.g., bivalent, trivalent, tetravalent, pentavalent or more) antibody. A multispecific antibody may be a bispecific, trispecific or tetraspecific antibody, which can specifically bind to 2, 3 or 4 different epitopes. In some embodiments, the multispecific antibody is a bispecific antibody (BsAb) . In some embodiments, the multispecific antibody binds to TL1A and IL-23p19 (also referred to as “TL1A x IL-23p19 BsAb” herein) .

[0104] Multispecific antibodies include, but are not limited to, full length antibodies, antibody fragments such as Fab, Fv, dsFv, scFv, diabodies, single-chain diabodies, bispecific diabodies and triabodies, antibody fragments that have been linked covalently or non-covalently. A multispecific antibody may be a non-IgG like antibody or an IgG-like antibody. An IgG-like multispecific antibody may be symmetric or asymmetric. Methods for constructing multispecific antibodies using antibodies or antigen-binding fragments of interest are well known to those skilled in the art (see e.g., WO93 / 08829; Suresh et al., (1986) Methods in Enzymology, 121: 210; and Traunecker et al., (1991) EMBO, 10: 3655-3659) . Multispecific antibodies may be generated and isolated using various methods known in the art. For example, a multispecific antibody may be expressed and isolated from a suitable host or generated by conjugating different portions of the multispecific antibody by chemical or enzymatic methods.

[0105] As used herein, a “bispecific antibody (BsAb) ” is a multispecific antibody that is capable of specifically binding to two different epitopes. The two different epitopes may be present on the same biological molecule or on two different biological molecules.

[0106] As used herein, the term “binding” or “specifically binding” refers to a non-random binding reaction between two molecules, such as between an antibody and its target antigen. The binding specificity of an antibody can be determined based on affinity and / or avidity. The affinity, represented by the equilibrium constant for the dissociation of an antigen

[0107] Avidity is the measure of the strength of binding between an antibody and the pertinent antigen. Avidity is related to both the affinity between an antigenic determinant (epitope) and its antigen binding site on the antibody and the number of pertinent binding sites present on the antibody. Typically, an antibody will bind with a dissociation constant (KD) of 10-5 to 10-12 M or less, and preferably 10-7 to 10-12 M or less and more preferably 10-8 to 10-12 M, and / or with a binding affinity of at least 10-7 M, preferably at least 10-8 M, more preferably at least 10-9 M, such as at least 10-12 M. Any KD value greater than 10-4 M is generally considered to indicate non-specific binding. Specifically, the binding of an antibody to an antigen or antigenic determinant can be determined in any suitable manner known per se, including, for example, Scatchard analysis and / or competitive binding assays, such as radioimmunoassays (RIA) , enzyme immunoassays (EIA) , bio-layer interferometry (BLI) assay and sandwich competition assays, and the different variants thereof known per se in the art.

[0108] Various methods known in the art may be used to measure the affinity. Such methods may include, but are not limited to, Bio-Layer Interferometry (BLI, e.g., using the Octet Fortebio system) , radioimmunoassay (RIA) , Surface Plasmon Resonance (SPR) , enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) , flow cytometry (also referred to as “FACS” ) and other kinetic interaction assays known in the art (see, e.g., Paul, W. E., Fundamental Immunology, 2nd ed., Raven Press, New York, pages 332-336 (1989) ; see also U.S. Pat. No. US7,229,619) . Instrumentation and methods for real time detection and monitoring of binding rates are known and are commercially available (e.g., BiaCore 2000, Biacore AB, Upsala, Sweden) .

[0109] Typically, the antibody affinity may be measured and reported by the equilibrium dissociation constant KD. KD can be calculated from kinetic analysis using the following equation: KD= Kd / Ka wherein Kd and Ka are the dissociation and association rate constants between the antigen and the antibody, respectively.

[0110] The KD and affinity are inversely related, that is, the smaller the KD value, the greater the affinity. The typical KD value for an antibody or antigen-binding fragment is in the range of μM (10-5 M) to nM (10-7 to 10-9 M) or pM (10-12 M) . In some embodiments, the KD values described herein are measured using Bio-Layer Interferometry as demonstrated in the Examples of the present disclosure.

[0111] As used herein, the term “half maximal effective concentration” or “EC50” refers to the concentration of an agent (e.g., antibody) at which it induces a response halfway between the baseline and maximum after some specified exposure time. EC50 can be used as a surrogate measurement for the affinity of an antibody for its target.

[0112] The term “epitope” refers to a site on an antigen to which an antibody binds. An epitope can be formed from contiguous amino acids or noncontiguous amino acids juxtaposed by tertiary folding of one or more proteins. Epitopes formed from contiguous amino acids (also known as linear epitopes) are typically retained on exposure to denaturing solvents whereas epitopes formed by tertiary folding (also known as conformational epitopes) are typically lost on treatment with denaturing solvents. An epitope typically includes at least 3, and more usually, at least 5 or 8-10 amino acids in a unique spatial conformation. The epitope defines the smallest binding site of an antibody and therefore is the specific target of the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0113] The definition of “antibody” or “antigen-binding fragment” encompasses any variant derived from any antibody or antigen-binding fragment as described herein, such as amino acid sequence variants, glycosylation variants, and covalently modified variants. The definition of antigen-binding protein falls within the definition of an antibody or antigen-binding fragment.

[0114] An “amino acid sequence variant” may comprise one or more amino acid modifications (including substitutions, insertions and / or deletions) compared to an exemplary antibody as described herein, provided that the amino acid sequence variant preserves the desired antigen-binding activity. For example, an amino acid sequence variant may be obtained by substituting one or more amino acid residues with corresponding conservative residues without affecting the biological activity of the protein. Suitable conservative substitutions of amino acids are known to those of skill in this art. Those of skill in this art recognize that, in general, single amino acid substitutions in non-essential regions of a polypeptide (for example, in the framework regions of an antibody) do not substantially alter its biological activity (see, e.g., Watson et al., Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, The Benjamin / Cummings Pub. Co., p. 224) .

[0115] Amino acid sequence variants also include “Fc variants” of any antibody or antigen-binding fragment as described herein. Such Fc variants may comprise one or more modifications in the Fc region, such that one or more properties of the Fc region may be changed. For example, modifications may be introduced into the Fc region to increase or reduce the effector function (including but not limited to ADCC, CDC and ADCP) , increase the half-life (for example, enhanced FcRn binding) or increase the stability (for example, introduction or removal of cysteines that may be involved in disulfide-bond formation) of an antibody.

[0116] In some embodiments, for example, which relate to treatment of an inflammatory disease or condition, reduced effector function of the anti-TL1A antibody or the multispecific antibody of the present disclosure may be desirable. One or more modifications for reducing the effector function may include but not limited to one or more amino acid substitutions at a position in the Fc region selected from: 297 (e.g., N297A, N297Q or N297G) , 234 (IgG1: L234A; IgG4: F234A; IgG2: V234A) , 235 (e.g., L235E, L235A) , 237 (G237A) .

[0117] One or more amino acid substitutions for enhancing the FcRn binding may include but not limited to one or more one or more amino acid substitutions at a position in the Fc region selected from: 252 (e.g., M252Y) , 254 (e.g., S254T) , 256 (e.g., T256E) , 428 (e.g., M428L) , 434 (e.g., N434S and N434A) and 436 (e.g., Y436I) . In some embodiments, the Fc region comprises amino acid substitutions M252Y, S254T and T256E. In some embodiments, the Fc region comprises amino acid substitutions N434A and Y436I.

[0118] In some embodiments, the Fc region comprises an amino acid substitution of C220S. In some embodiments, the Fc region comprises amino acid substitutions of L234A, L235A and G237A. In some embodiments, the Fc region is a human IgG1 Fc region comprising one or more amino acid substitutions selected from: C220S, L234A, L235A and G237A. In some embodiments, the human IgG1 Fc region comprises an amino acid substitution of C220S. In some embodiments, the human IgG1 Fc region comprises amino acid substitutions L234A, L235A and G237A. In some embodiments, the human IgG1 Fc region comprises amino acid substitutions C220S, L234A, L235A and G237A.

[0119] As used herein, “glycosylation” refers to a post-translational modification of a protein leading to the addition of carbohydrate or glycan moieties to the protein backbone (e.g., serine-or threonine-linked glycosylation for O-linked glycans and asparagine-linked glycosylation for N-linked glycans) . Those of skill in the art are able to generate glycosylation variants of a therapeutic antibody to achieve desired therapeutic efficacies using techniques known in the art.

[0120] Also contemplated are covalently modified variants of any antibody or antigen-binding fragment as described herein. As used herein, “covalently modified variants” of an antibody or antigen-binding fragment can be generated by introducing natural or unnatural amino acids, compounds, or peptide linkers through covalently linkage. For example, an additional polypeptide may be linked to an antibody or antigen-binding fragment as described herein to confer a desirable property or reduce an undesirable property, for example increasing the half-life, solubility or uptake (e.g., facilitating the transport through the phospholipid membrane or organelles) ; and / or lowering the immunogenicity, toxicity or side effects. Other polypeptides may be, for example, polypeptides that can be used for directing the expression and secretion of an antibody or antigen-binding fragment from a host cell, or facilitating the detection and / or isolation of an antibody or antigen-binding fragment. Examples of such polypeptides may include but are not limited to signaling peptides (leader sequences) , affinity tags (e.g., polyhistidine tags (His6) or glutathione S-transferase (GST) tags) , polypeptides containing protease cleavage sites and reporter tags (e.g., fluorescent proteins) . Other additional polypeptides may be biologically active polypeptides, for example, a polypeptide or protein having a therapeutic activity, binding activity or enzymatic activity.

[0121] As used herein, the term “tumor necrosis factor-like cytokine 1A” or “TL1A” refers to any native TL1A from any vertebrate source, including mammals such as primates (e.g., human and cynomolgus) and rodents (e.g., mice and rats) . This term encompasses “full-length” TL1A as well as a fragment of TL1A, such as soluble TL1A and membrane-bound TL1A. The term also encompasses naturally occurring variants of TL1A, e.g., splice variants or allelic variants. In some embodiments, the TL1A is human TL1A ( “hTL1A” or “huTL1A” ) , for example, a human full length TL1A comprising the amino acid sequence as set forth in GenBank accession No.: NP_005109.2.

[0122] The term “interleukin-23 p19 subunit” or “IL-23p19” as used herein, refers to interleukin-23 subunit alpha. In some embodiments, the IL-23p19 is a human IL-23p19. A human IL-23p19 may comprise the amino acid sequence as set forth in Uniprot accession No.: Q9NPF7.

[0123] As used herein, an “inflammatory disease or condition” refers to pathological states resulting in inflammation. As used herein, an “autoimmune disease or condition” refers to a condition characterized by a specific humoral or cellular mediated immune response against constituents of the body's own tissues, which may be referred to as self-antigens or autoantigens. In some embodiments, the inflammatory disease, autoimmune disease or condition is mediated, at least in part, by TL1A signaling.

[0124] Examples of inflammatory diseases, autoimmune disease or conditions may include, but are not limited to: inflammatory bowel disease (such as Crohn's disease and ulcerative colitis) , atopic dermatitis, asthma, psoriasis, psoriasis vulgaris, arthritis (such as reactive arthritis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis) , gastrointestinal disease associated with cystic fibrosis, interstitial lung disease, irritable bowel syndrome, small and large intestinal fibrostenosis, systemic sclerosis, multiple sclerosis,  syndrome, Primary biliary cirrhosis, Systemic lupus erythematosus, sarcoidosis, autoimmune thyroiditis, ankylosing spondylitis, scleroderma, polymyositis, dermatomyositis, vasculitis, Wegener's granulomatosis, Myasthenia gravis, Hashimoto's thyroiditis, Graves' disease, chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy, and Guillain-Barre syndrome.

[0125] As used herein, the term “polypeptide” refers to two or more amino acids covalently joined. The terms “polypeptide” and “protein” are used interchangeably herein.

[0126] As used herein, the term “first polypeptide (chain) ” and similar terms like “second polypeptide (chain) ” are used for the purpose of distinguishing only, but not intended to constrain the polypeptides (chains) in any manner. If desired, an antibody or antigen-binding fragment may comprise two or more first / second / third / fourth polypeptides (chains) which may be identical or different. When used in different embodiments, these terms may refer to identical or different polypeptides (chains) .

[0127] As used herein, a “nucleic acid” or a “polynucleotide” refers to a polymer of at least two nucleotides or nucleotide derivatives joined together by phosphodiester bonds, including deoxyribonucleic acid (DNA) and ribonucleic acid (RNA) . Exogenous nucleic acids can be introduced into a host cell in the form of vectors. Therapeutic nucleic acids can be introduced into a subject with a purpose of treating a disease.

[0128] A “host cell” may be any prokaryotic or eukaryotic cell that contains exogenous polynucleotides.

[0129] As used herein, the term “expression” refers to the production of RNA polynucleotides from transcription or polypeptides from translation. The expression level of a polypeptide in a biological sample can be examined using any method known in art. Such methods include, but are not limited to, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) , western blot, flow cytometry, immunofluorescence imaging and immunohistochemistry using antibodies that specifically bind to the polypeptide to be examined.

[0130] As used herein, a “vector” is a vehicle used to transfer exogenous nucleic acids into a host cell, where the exogenous nucleic acids are amplified or expressed. As used herein, the definition of “vector” encompasses plasmids, linearized plasmids, viral vectors, cosmids, phage vectors, phagemids, artificial chromosomes (e.g., yeast artificial chromosomes and mammalian artificial chromosomes) , etc. A vector could be expressible and / or replicable inside a host cell, meaning that the vector is able to express RNA polynucleotides or polypeptides and / or to produce multiple copies of the vector in the host cell. To be “expressible” or “replicable” , a vector could comprise nucleic acid sequences or elements operably linked to a promoter.

[0131] As used herein, “operably linked” with reference to nucleic acid sequences or elements means that these nucleic acid sequences are functionally related to each other. For example, a promoter can be operably linked to a nucleic acid sequence encoding a polypeptide, whereby the promoter regulates or mediates the transcription of the nucleic acid. Those skilled in the art could select and use appropriate vectors for a particular purpose.

[0132] As used herein, “treating” a disease or disorder refers to curing the disease or disorder, or arresting, alleviating, ameliorating or eliminating the symptoms of the disease or disorder. Hence treatment encompasses prophylaxis, therapy and / or cure. “Prophylaxis” refers to prevention of a potential disease and / or a prevention of worsening of symptoms or progression of a disease.

[0133] As used herein, a “therapeutically effective amount” refers to the quantity of an agent, compound, or composition containing one or more active agents that is at least sufficient to produce a therapeutic effect following administration to a subject. Hence, it is the quantity necessary for preventing, curing, ameliorating, arresting or partially arresting a symptom of a disease or disorder.

[0134] The term “pharmaceutically acceptable” means that the carrier or adjuvant is compatible with the other ingredients of the composition and not substantially deleterious to the recipient thereof and / or that such carrier or adjuvant is approved or approvable for inclusion in a pharmaceutical composition for parenteral administration to humans.

[0135] As used herein, the term “subject” refers to an animal (e.g., a mammal) , including, but not limited to, humans, non-human primates, canines, felines, rabbits, rodents, and the like. In some embodiments, the subject is a human.

[0136] The antibody identity numbers or identifies (e.g., PR014047, PR014624, PR014625, PR014626, PR014627, PR014628, PR014629, PR014685, PR014686, PR014897, PR014898 or the like) are used herein for the purpose of distinguishing or designating different antibodies or products only, but do not intend to restrict the features of the antibody or product of the present disclosure thereto. Similarly, the use of identity numbers or identifies in the Examples is merely for convenience and brevity. The features of the antibody or product of the present disclosure are defined by those described in the appended claims.Anti-TL1A antibodies or antigen-binding fragments thereof

[0137] In one aspect, provided is an anti-TL1A antibody or an antigen-binding fragment thereof.

[0138] In some embodiment, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment binds to human TL1A and non-human primate (e.g., cynomolgus monkey) TL1A. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment blocks interaction between TL1A and DR3. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment does not block interaction between TL1A and DcR3. The term “not blocking” includes not inhibiting / decreasing binding of TL1A to DcR3.

[0139] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain variable domain. In some embodiments, the heavy chain variable domain is a heavy chain single variable domain.

[0140] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment is a single domain antibody. In some particular embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment is a heavy-chain-only antibody.

[0141] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment is a fully human antibody. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment is a fully human single domain antibody. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment is a fully human heavy-chain-only antibody.

[0142] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 35, respectively. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 35, respectively.

[0143] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 19 and 35, respectively. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 19 and 35, respectively.

[0144] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 20 and 35, respectively. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 20 and 35, respectively.

[0145] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 21 and 35, respectively. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 21 and 35, respectively.

[0146] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 22 and 35, respectively. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 22 and 35, respectively.

[0147] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 74. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 23 and 35, respectively. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 23 and 35, respectively.

[0148] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 36, respectively. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 36, respectively.

[0149] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 24 and 36, respectively. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 24 and 36, respectively.

[0150] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 25 and 36, respectively. In some embodiments, the CDRs 1-3 comprise amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 25 and 36, respectively.

[0151] In some embodiments, the heavy chain variable domain further comprises a framework region 1 (FWR1) , an FWR2, an FWR3 and an FWR4. The framework regions may be derived from an immunoglobulin of any species. In some preferable embodiments, the framework regions are derived from a human immunoglobulin.

[0152] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises an amino acid sequence that is at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76 or 77.

[0153] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises an amino acid sequence having amino acid addition, deletion and / or substitution of one or more (for example, 1-10, e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acids in comparison with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76 or 77, wherein the amino acid addition, deletion and / or substitution do / does not occur in a CDR region.

[0154] In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 74. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77.

[0155] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of the present disclosure further comprises an Fc region.

[0156] In some embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to reduce the effector function. In some other embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to enhance the effector function. In some embodiments, the effector function comprises at least one selected from ADCC, CDC and ADCP.

[0157] In some embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to enhance the FcRn binding.

[0158] In some embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to reduce the effector function and enhance the FcRn binding. In some embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to enhance the effector function and enhance the FcRn binding.

[0159] In some embodiments, the Fc region is a monomeric Fc region. In some embodiments, the Fc region is a homodimeric Fc region. In some embodiments, the Fc region is a heterodimeric Fc region.

[0160] In some embodiments, the Fc region is directly fused to the C-terminus of the heavy chain variable domain. In some embodiments, the Fc region is fused to the N-terminus of the heavy chain variable domain, optionally via a peptide linker.

[0161] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain which comprises a heavy chain variable domain as described herein fused to a monomeric Fc region.

[0162] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises two heavy chains, wherein each heavy chain comprises a heavy chain variable domain as described herein fused to an Fc region subunit. In some embodiments, the two heavy chains are identical. In some embodiments, the two heavy chains are different.

[0163] In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 88. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 89. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 92. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93. In some embodiments, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment comprises a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 94.Multispecific antibodies

[0164] In yet another aspect, provided is a multispecific antibody, comprising a first antigen-binding moiety binding to TL1A, wherein the first antigen-binding moiety comprises the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment (especially the heavy chain variable domain binding to TL1A) as described herein, and a second antigen-binding moiety binding to interleukin-23 p19 subunit (IL-23p19) .

[0165] The first antigen-binding moiety may be an antibody or antigen-binding fragment in any format, including but not limited to a single variable domain and a heavy-chain antibody. In some embodiments, the first antigen-binding moiety comprises the heavy chain variable domain that binds to TL1A as described herein.

[0166] The second antigen-binding moiety may be an antibody or an antigen-binding fragment in any format. In some embodiments, the second antigen-binding moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) which bind to IL-23p19. In some embodiments, the second antigen-binding moiety comprises or is a dsFv, an scFv, an scdsFv, a di-scFv, an Fab, an Fab’, an scFab or an F (ab’) 2. In some embodiments, the antigen-binding moiety comprises or is an Fab. In some embodiments, the antigen-binding moiety comprises or is an F (ab’) 2.

[0167] In some embodiments, the first antigen-binding moiety and the second antigen-binding moiety may be optionally linked through a linker (e.g., a peptide linker) .

[0168] In some embodiments, the multispecific antibody further comprises an Fc region.

[0169] In some embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to reduce the effector function. In some other embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to enhance the effector function. In some embodiments, the effector function comprises at least one selected from ADCC, CDC and ADCP.

[0170] In some embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to enhance the FcRn binding.

[0171] In some embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to reduce the effector function and enhance the FcRn binding. In some embodiments, the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to enhance the effector function and enhance the FcRn binding.

[0172] In some embodiments, the second antigen-binding moiety comprises a VH and a VL. In some embodiments, the second antigen-binding moiety comprises an Fab. In some embodiments, the multispecific antibody comprises an Fab-VHH fragment. In some embodiments, the multispecific antibody has an Fab-VHH-Fc format. In some embodiments, the multispecific antibody comprises two polypeptide chains, each of which has an Fab-VHH-Fc format. In some embodiments, the multispecific antibody comprises a first polypeptide comprising the VH, a CH1 domain, the heavy chain variable domain binding to TL1A as described herein and an Fc region, and a second polypeptide comprising the VL and a light chain constant region. In some preferable embodiments, the multispecific antibody may have a configuration as shown in Figure 12.

[0173] In some embodiments, the second antigen-binding moiety comprises a VH and a VL, wherein the VH comprises the HCDRs 1-3 of a VH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, and the VL comprises the LCDRs 1-3 of a VL having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78. In some preferable embodiments, the VH comprises HCDRs 1-3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 14 and 31, respectively; and the VL comprises LCDRs 1-3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 42, 50 and 58, respectively.

[0174] In some particular embodiments, the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65. In some particular embodiments, the VH comprises an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65. In some embodiments, the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78. In some embodiments, the VL comprises an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78. In some particular embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 65; and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78.

[0175] In some embodiments, the multispecific antibody binding to TL1A and IL-23p19 comprises a first polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102. In some embodiments, the multispecific antibody binding to TL1A and IL-23p19 comprises a first polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103.

[0176] In some embodiments, the multispecific antibody binding to TL1A and IL-23p19 comprises a second polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95.

[0177] In some embodiments, the multispecific antibody binding to TL1A and IL-23p19 comprises a first polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102, and a second polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95. In some embodiments, the multispecific antibody binding to TL1A and IL-23p19 comprises a first polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103, and a second polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95.

[0178] In a particular aspect, the multispecific antibody binding to TL1A and IL-23p19 is Antibody PR014897 as described herein. In some embodiments, Antibody PR014897 comprises a first antigen-binding moiety having a heavy chain variable domain. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, for example, CDRs 1-3 comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 24 and 36, respectively. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76. In some embodiments, Antibody PR014897 comprises a first polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102, and a second polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95.

[0179] In a particular aspect, the multispecific antibody binding to TL1A and IL-23p19 is Antibody PR014898 as described herein. In some embodiments, Antibody PR014898 comprises a first antigen-binding moiety having a heavy chain variable domain. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, for example, CDRs 1-3 comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 8, 25 and 36, respectively. In some embodiments, the heavy chain variable domain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77. In some embodiments, Antibody PR014898 comprises a first polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103, and a second polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95.Nucleic acids, vectors and host cells

[0180] In another aspect, provided is a nucleic acid encoding the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, or the multispecific antibody of the present disclosure. In some embodiments, the nucleic acid of the present disclosure is an isolated nucleic acid.

[0181] In yet another aspect, provided is a vector comprising the nucleic acid of the present disclosure. In some embodiments, the vector is an expression vector, such as a plasmid for expression in bacteria, yeast or mammalian cells, or a phage vector and a phagemid vector for phage display. The expression vector may further comprise additional polynucleotide sequences, such as regulatory sequences and antibiotic resistance genes.

[0182] Any vector may be suitable for the present disclosure. In some embodiments, the vector is a viral vector. In some embodiments, the vector is a retroviral vector, a DNA vector, a murine leukemia virus vector, an SFG vector, a plasmid, a RNA vector, an adenoviral vector, a baculoviral vector, an Epstein Barr viral vector, a papovaviral vector, a vaccinia viral vector, a herpes simplex viral vector, an adenovirus associated vector (AAV) , a lentiviral vector, or any combination thereof. Suitable exemplary vectors include e.g., pGAR, pBABE-puro, pBABE-neo largeTcDNA, pBABE-hygro-hTERT, pMKO. 1 GFP, MSCV-IRES-GFP, pMSCV PIG (Puro IRES GFP empty plasmid) , pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE, MSCV IRES Luciferase, pMIG, MDH1-PGK-GFP_2.0, TtRMPVIR, pMSCV-IRES-mCherry FP, pRetroX GFP T2A Cre, pRXTN, pLncEXP, and pLXIN-Luc.

[0183] A recombinant expression vector may be any suitable recombinant expression vector. Suitable vectors comprise those designed for propagation and expansion or for expression or both, such as plasmids and viruses. For example, a vector may be selected from the pUC series (Fermentas Life Sciences, Glen Burnie, Md. ) , the pBluescript series (Stratagene, LaJolla, Calif. ) , the pET series (Novagen, Madison, Wis. ) , the pGEX series (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden) , and the pEX series (Clontech, Palo Alto, Calif. ) . Bacteriophage vectors, such as λGT10, λGT11, λZapII (Stratagene) , λEMBL4, and λNM1149, also may be used. Examples of plant expression vectors useful in the context of the disclosure comprise pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 and pBIN19 (Clontech) . Examples of animal expression vectors useful in the context of the disclosure comprise pcDNA, pEUK-Cl, pMAM, and pMAMneo (Clontech) .

[0184] Recombinant expression vectors may be prepared using standard recombinant DNA techniques described in, for example, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N. Y. 2001; and Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley &Sons, NY, 1994. Constructs of expression vectors, which are circular or linear, may be prepared to contain a replication system functional in a prokaryotic or eukaryotic host cell. Replication systems may be derived, e.g., from ColEl, 2μ plasmid, λ, SV40, bovine papilloma virus, and the like.

[0185] The nucleic acid of the present disclosure may be present in one or more vectors.

[0186] The nucleic acid of the present disclosure may be obtained by using various methods known in the art. For example, the nucleic acid of the present disclosure may be isolated from a phage display library, a yeast display library, an immunized animal (e.g., a transgenic mouse, or a camelid) , an immortalized cell (e.g., a mouse B-cell hybridoma, an EBV-immortalized B cell) or chemically synthesized. The nucleic acid of the present disclosure may be codon-optimized for optimal expression in a host cell.

[0187] In some embodiments, the nucleic acid of the present disclosure is prepared as a recombinant nucleic acid comprising additional nucleic acid sequences, such as regulatory elements and nucleic acid sequences encoding desired peptides or proteins. Recombinant nucleic acids can be prepared using molecular cloning techniques well known in the art, for example, chemical synthesis, site-directed mutagenesis and polymerase chain reaction (PCR) techniques (see Sambrook, J., E. F. Fritsch, and T. Maniatis. (1989) . Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y. ) . Regulatory elements suitable for use in the present disclosure may include, but are not limited to, enhancers, insulators, internal ribosome entry sites (IRES) . Examples of peptides or proteins that may facilitate the detection or isolation of the expressed antibody or antigen-binding fragment, include, but are not limited to, affinity tags (e.g., a biotin tag, a polyhistidine-tag (His6) or a Glutathione S-Transferase (GSH) tag) , enzyme-cleavable peptides, and reporter proteins (e.g., fluorescent proteins) . In some embodiments, nucleic acids of the present disclosure and the regulatory elements and / or nucleic acid sequences encoding desired peptides or proteins can be operably linked to a promoter. Depending on the type of host cells and purification strategies to be used, those of skill in the art are able to select suitable expression vectors, promoters, regulatory elements, and peptides or proteins.

[0188] In another aspect, provided is a host cell comprising the nucleic acid or the vector of the present disclosure.

[0189] A host cell herein can be used to produce the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment or the multispecific antibody of the present disclosure. Examples of host cells for producing recombinant antibodies may include but are not limited to: mammalian cells, for example, HEK293 cells, Chinese Hamster Ovary (CHO) cells, COS cells, myeloma cells, baby hamster kidney (BHK) , Hela and Vero cells; insect cells, for example, sf9, sf21 and Tn5; plant cells, for example plants belonging to the genus Nicotiana (e.g. Nicotiana tabacum) ; yeast cells, for example, those belonging to the genus Saccharomyces (e.g. Saccharomyces cerevisiae) ; and bacterial cells, for example Escherichia coli or Bacillus subtilis, etc.

[0190] The nucleic acid or vector may be introduced into a suitable host cell using well know methods in the art. Such methods may include but are not limited to, liposome transfection, electroporation, viral transduction and calcium phosphate transfection.

[0191] In some embodiments, a single vector comprising the nucleic acids encoding both heavy and light chains could be used. In a particular embodiment, two vectors are used, wherein one vector encodes the light chain and the other encodes the heavy chain of said antibody. In some embodiments, the expression vector (s) could further contain one or more selective marker genes, for example, a neomycin or puromycin resistance gene. In some embodiments, chaperon plasmids may be introduced into the same host cell together with the expression vectors described above, for example, in bacteria, to assist the solubilisation and / or folding of the antibodies. Isolation and purification of antibodies may be performed using well-known techniques in the art, for example, using a Protein A affinity column.

[0192] Also provided is a method of producing the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment or the multispecific antibody of the present disclosure, comprising: culturing the host cell of the present disclosure under suitable conditions to allow the expression of the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment or the multispecific antibody, and optionally isolating the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment or the multispecific antibody from the host cell or the culture medium.Pharmaceutical compositions

[0193] Also provided is a pharmaceutical composition comprising the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody (e.g., the TL1A x IL-23p19 BsAb) , the nucleic acid or the vector of the present disclosure.

[0194] The pharmaceutical composition provided herein can be in various dosage forms, e.g., in solid, semi-solid, liquid, powder, aqueous, or lyophilized forms. Depending on different dosage forms, the pharmaceutical composition could further comprise pharmaceutically acceptable excipients (see, generally, Alfonso R. Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition. Baltimore, MD: Lippincott Williams &Wilkins) .

[0195] Excipients can be used in solid dosage forms in the preparation of pharmaceutical compositions include, but are not limited to: diluents (e.g., lactose, microcrystalline cellulose and dextrose) , binders and adhesives (e.g., acacia, gelatin, starch paste and carboxymethyl cellulose) , lubricants (e.g., polyethylene glycol, calcium stearate and steric acid) , disintegrants (e.g., starches, cellulose and cross linker polymers) , preservatives, vehicles, glidants (e.g., corn starch) , sweeteners (e.g., mannitol and saccharin) , coating materials (e.g., povidone, ethyl cellulose and synthetic polymers) , and plasticizers (e.g., castor oil, diacetylated monoglycerides, and polyethylene glycol) . Excipients can be used in semi-solid dosage forms in the preparation of pharmaceutical compositions include, but are not limited to: structure forming excipients (e.g., cetostearyl alcohol and mineral oils) , preservatives (e.g., benzyl alcohol, propylparaben and sodium benzoate) , antioxidants (e.g., butyl hydroxyl toluene and butyl hydroxyl anisole) , solubilizers (e.g., lanolin and cholesterol) , gelling agents (e.g., carboxyl methyl cellulose, hydroxyl propyl cellulose and xanthan gum) , and emollients (e.g., glycerin, mineral oil, petrolatum and isopropyl palmitate) . Excipients can be used in liquid dosage forms in the preparation of pharmaceutical compositions include, but are not limited to: solvents (e.g., water, alcohol, acetic acid and syrups) , buffers (e.g., phosphate buffers and acetate buffers) , antimicrobial preservatives (e.g., benzyl alcohol, butylparaben, phenol and thiomersal) , antioxidants (e.g., ascorbic acid, sodium bisulfate, thiourea and butyl hydroxy toluene) , chelating agents (e.g., disodium EDTA, dihydroxy ethyl glycine and citric acid) , and emulsifying agents (e.g., sodium lauryl sulfate, cetrimide and macrogol esters) .

[0196] The pharmaceutical composition provided herein can be administered into a subject by any method known in the art, for example, by systemic or local administration. Routes of administration include, but are not limited to, parenteral (e.g., intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, or intracavity) , topical, epidural, or mucosal (e.g. intranasal or oral) . The exact dosage to be administered will depend on various factors, such as the therapeutic objectives, the route of administration, and the condition of the subject, for example, the patient’s health, body weight, sex, diet, etc. Accordingly, it will be necessary for the therapist to titer the dosage of the pharmaceutical composition and modify the route of administration as required to obtain the optimal therapeutic effect. Generally, the dosage ranges for the administration of the pharmaceutical composition provided herein are those large enough to produce desired effects.

[0197] In a preferred embodiment, the pharmaceutical composition of the present disclosure could be prepared from the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, or the multispecific antibody of the present disclosure and administered into a human subject in a therapeutically effective amount. A therapeutic dose of the antibodies could be, for example, between preferably 0.1-25 mg / kg body weight per single therapeutic dose and most preferably between 0.1-10 mg / kg body weight for single therapeutic dose. In a particular embodiment, the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, or the multispecific antibody of the present disclosure can be formulated in accordance with conventional practice for administration by any suitable route and could generally be in a liquid form (e.g., a solution of the antibody in a sterile physiologically acceptable buffer) for administration by, for example, an intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, or intramuscular route.Kits

[0198] Also provided is a kit comprising the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody, the nucleic acid or vector, or the pharmaceutical composition of the present disclosure, and optionally instructions for use thereof.

[0199] The kit may further comprise a suitable container. In some embodiments, the kit further comprises a device for administration. Typically, a kit may further comprise a label, which indicates the intended use and / or method of use of the contents in the container. The term “label” includes any written or documented material provided on or with the kit or otherwise provided with the kit.Uses and methods for treatment

[0200] In one aspect, provided is a method of treating an inflammatory disease, autoimmune disease or condition in a subject, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody (e.g., the TL1A x IL-23p19 BsAb) , the nucleic acid, the vector, or the pharmaceutical composition of the present disclosure.

[0201] Also provided is use of the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody, the nucleic acid, the vector, or the pharmaceutical composition of the present disclosure in the manufacture of a medicament for treating an inflammatory disease, autoimmune disease or condition in a subject.

[0202] Further provided is the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody, the nucleic acid, the vector, or the pharmaceutical composition of the present disclosure for use in the treatment of an inflammatory disease or condition in a subject.

[0203] In some embodiments, the inflammatory disease, autoimmune disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory bowel disease (such as Crohn's disease and ulcerative colitis) , atopic dermatitis, asthma, psoriasis, psoriasis vulgaris, arthritis (such as reactive arthritis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis) , gastrointestinal disease associated with cystic fibrosis, interstitial lung disease, irritable bowel syndrome, small and large intestinal fibrostenosis, systemic sclerosis, multiple sclerosis,  syndrome, Primary biliary cirrhosis, Systemic lupus erythematosus, sarcoidosis, Type 1 diabetes mellitus, insulin dependent diabetes mellitus (IDDM) , autoimmune thyroiditis, ankylosing spondylitis, scleroderma, polymyositis, dermatomyositis, vasculitis, Wegener's granulomatosis, Myasthenia gravis, Hashimoto's thyroiditis, Graves' disease, chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy, and Guillain-Barre syndrome.

[0204] Although the present disclosure has been described with reference to particular embodiments, it is to be understood that these embodiments are merely illustrative of the application and principles of the present disclosure. Modifications can be made without departing from the spirit and scope of the present disclosure.Beneficial Effects

[0205] The beneficial effects of the anti-TL1A antibodies or the antigen-binding fragments, or the multispecific antibodies of the present disclosure may include at least one of the following: (1) the anti-TL1A antibodies or the antigen-binding fragments, or the multispecific antibodies of the present disclosure bind to human TL1A and non-human primate TL1A; (2) the anti-TL1A antibodies or the antigen-binding fragments, or the multispecific antibodies of the present disclosure block interaction between TL1A and DR3; and (3) the anti-TL1A antibodies or the antigen-binding fragments, or the multispecific antibodies of the present disclosure do not block interaction between TL1A and DcR3.

[0206] Further, binding of the anti-TL1A antibodies or the antigen-binding fragments of the present disclosure to TL1A requires only a single variable domain which has a low molecular weight favorable for production and synthesis. In addition, the anti-TL1A antibodies or the antigen-binding fragments of the present disclosure can be fully human antibodies. Therapeutic antibodies produced in non-human systems could be possibly immunogenic and elicit undesirable and sometimes fatal immune reactions, for example, a murine antibody often induces a human anti-mouse antibody response (HAMA) . In addition, immunogenicity can also alter the pharmacokinetics of a therapeutic antibody by impacting clearance, thereby affecting the in vivo efficacy.

[0207] Furthermore, although bivalent antibodies that bind trivalent antigens can form large immune complexes, the multispecific antibodies of the present disclosure form very few large immune complexes with purified trimeric TL1A, comparing with reference antibodies, indicating a lower immunogenicity of the multispecific antibodies of the present disclosure.EXAMPLES

[0208] The present disclosure is further described below with reference to specific examples. It is to be understood that the examples are not intended to limit the scope of the disclosure. The specific experimental methods which were not mentioned in the following examples were carried out according to conventional experimental method. Unless otherwise specified, instruments described could be obtained commercially, and reagents and materials could be obtained commercially or prepared according to methods known in the art. Example 1: Generation of anti-TL1A HCAbs Example 1.1: Preparation of immunogens

[0209] TL1A expressing HEK293T and CHOK1 cell lines were generated by transduction with a lentiviral construct containing the sequence for the full length TL1A protein (NP_005109.2) and maintained in selective media (media supplemented with 1 ug / ml puromycin for HEK293T cells, and 6 ug / ml puromycin for CHOK1 cells) . After multiple passages, the cells were tested for cell surface expression of TLlA by flow cytometry. 1E5 cells per well were plated into 96-well v-shape bottom plates (Corning) and incubated with a reference anti-TL1A antibody (PR012826) on ice for 30 minutes. Samples were washed then incubated with a fluorescent secondary antibody (AF488-conjugated AffiniPure Goat Anti -Human IgG, Fcγ Fragment Specific, Jackson) for a further 30 minutes on ice. Samples were then washed and resuspended and data was acquired on a flow cytometer. A recombinant TL1A protein (PR012893) having a point mutation C66S and lacking the leading 57 amino acids was expressed in E. coli. Human (PR012898, aa72-251) and cyno (PR012900, aa72-251) TL1A proteins with a His tag were expressed and purified from in Expi293F (Biointron) . The sequences information of recombinant proteins is listed in Table 1.

[0210] Table 1. SEQ ID NOs for the amino acid sequences of recombinant proteins used in this application Example 1.2: Animal Immunization

[0211] Advances in transgenic technology allows the breeding of genetically engineered mice that carry the human immunoglobulin repertoire and in which their endogenous murine immunoglobulin repertoires are deleted. The antibody produced by this transgenic mouse has a fully human sequence, so no further humanization is required, greatly improving the efficiency of therapeutic antibody development. Harbour HCAb transgenic mice (see WO2007 / 096779 for detailed description) is a transgenic mouse carrying the human heavy-chain only immunoglobulin repertoire, and the antibodies produced thereby have complete human antibody heavy chain variable domains and mouse constant domains. Mice were immunized with multiple rounds of immunization using both the recombinant protein and the TL1A expressing cell line, with primary immunization with TL1A expressing cell line (HEK293T-hTL1A) and boost with recombinant TL1A protein (PR012893) . The antigen protein was mixed with an immunoadjuvant to form an immunogen reagent, and the immunogen reagent was then injected subcutaneously in the inguinal region or injected intraperitoneally. In each round of immunization, each mouse received a total injection dose of 100 microliters. In the first round of immunization, each mouse was immunized with injection of 1E7 HEK293T-hTL1A cells. In each subsequent round of booster immunization, each mouse was immunized with an immunogen reagent prepared by mixing 25 micrograms of the antigen protein with Sigma Adjuvant System adjuvant (Sigma, #S6322) . The interval between two rounds of booster immunization was at least two weeks, typically with 4 to 5 rounds of booster immunization. The immunization time was on day 0, 14, 28, 42, 56, 70, 84, and 96; and starting from day 21, and the antibody titer in the sera of mice was measured every two weeks. Three days before the isolation of splenic B cells in HCAb mice, the final booster immunization was performed at a dose of 50 micrograms of the human TL1A protein (PR012893) per mouse. Example 1.3: Screening of anti-TL1A antibodies by single B-cell screening

[0212] When the detected titer of the TL1A-specific antibody in the mouse serum reached a certain level, the Optofluidic system was used for single B cell screening. The system uses optical-electric positioning (OEPTM) technology to move individual cells, and allow simultaneous biological function tests, experimental analysis, positive clone selection and other operations under cell culture conditions. The Beacon platform can perform these tasks in a massively parallel, automated manner on thousands of cells.

[0213] In this example, a plasma cell discovery workflow was used. In each experiment, up to 14,000 individual plasma cells were screened for secretion of human TL1A (PR012898) -, cyno TL1A (PR012900) -, and CHOK1-hTL1A-specific antibodies. Then, plasma cells that secreted antigen-specific antibodies were transferred to 96-well plates for subsequent single B cell sequencing to identify the heavy chain of the antibody produced by a single B cell.

[0214] The example used a single B cell sequencing method to obtain the sequences of heavy chain of the antibody from a single plasma cell. General procedures include extraction and purification of the total RNA from single plasma cell lysate, reverse transcription synthesis of cDNA, amplification and purification of cDNA, amplification of the DNA sequences encoding heavy chain of an antibody, cloning and transfection, and sanger sequencing. Uniqueness and cluster analysis on the obtained sequences was performed, and then DNA sequences encoding the heavy chain of the antibody were synthesized. Example 2: Antibody Production and Purification

[0215] The recombinant plasmids encoding target antibodies were transiently transfected into HEK293-6E cells (National Research Council) using PEI (Polyscience, 24885) . After transfection, the cells were incubated at 37℃ with 5%CO2 and shaking at 120 rpm. The cell culture supernatants containing target antibodies were harvested 6-7 days post transfection by centrifugation and filtration. Monoclonal antibodies were purified using Protein A magnetic beads (AmMag Protein A Magnetic Beads, Genscript, L00695) . The purity of the antibodies was tested by SEC-HPLC (Agilent 1260 Infinity II HPLC with Welch Xtimate SEC-300 Colum, 1X PBS pH 7.4 as mobile phase) and SDS-PAGE (SurePAGE, Bis-Tris, 10X 8, 4-12%, 12 wells, Genscript, M00653) . Recombinant antibodies were successfully expressed and purified for further characterization. The amino acid sequences of one identified anti-TL1A HCAb PR014047 are shown in Table 2A. Three reference antibodies PR012826, PR012905 and PR012906 were produced as listed in Table 2B.

[0216] Table 2A. Amino acid sequences of anti-TL1A HCAb PR014047

[0217] Table 2B. SEQ ID NOs for the amino acid sequences of anti-TL1A reference antibodies Example 3: Binding to human and cyno TL1As

[0218] In order to assess the binding activities of the antibodies to human and cyno TL1As, an ELISA binding assay was performed. High-binding plates (9018, Corning) were coated with 1 μg / ml of human or cyno TL1A in PBS and left to stand overnight at 4 ℃. Subsequently, the plates were washed three times with PBST (0.02%Tween) and blocked with PBS / 5%milk for 1 hour at room temperature. Thereafter, a serial dilution of antibodies with PBS (starting dilution from 100 nM with a dilution factor of 10) was incubated with the plate for 1 hour at room temperature. After washes of three times with PBST, an HRP-conjugated anti-human Fc antibody (Jackson Lab) in blocking buffer was added and incubated for 1 hour. Following another three-cycle wash, 100 μl of KPL SureBlue TMB substrate (Seracare) was utilized to initiate the reaction. Once a distinct yellow color had developed, the reaction was terminated by adding 100 μl of ELISA buffer (Solarbio) . The absorbance of the plate was measured at 450 nm using a SpectraMax HB164 (Molecular Devices) . Reference antibody PR012826 was simultaneously characterized. The results are presented in Table 3 and Figure 1. The results demonstrated that PR014047 exhibited comparable binding activity to human and cyno TL1A proteins with the reference antibody PR012826.

[0219] Table 3. Binding activities of anti-TL1A antibodies to human and cyno TL1A proteins measured by ELISA Example 4: Activity of binding to membrane-bound TL1A

[0220] TL1A, similar to the majority of TNF superfamily members, exists in a cell surface form. This cell surface form undergoes cleavage to produce soluble TL1A. Moreover, analogous to other members of the family, the membrane-bound form of TL1A has been demonstrated to possess biological functions. Consequently, for the purpose of neutralizing the activity of TL1A, it would be beneficial to have antibodies that exhibit strong binding affinity to both the membrane-bound and soluble forms of TL1A.

[0221] This example aims to investigate the in vitro binding activity of human anti-TL1A HCAb to human TL1A expressed on the cell surface. Briefly, CHOK1-hTL1A cells were digested and collected, and subsequently resuspended in PBS containing 2%BSA. The cell density was adjusted to 1E6 cells / mL. The cells were seeded at a volume of 100 μL per well in a 96-well V-bottom plate (Corning, 3894) . Following this, test antibodies and reference antibodies were serially diluted and added at 100 μL per well. The cells were then incubated in the dark at 4 ℃ for 1 hour. Thereafter, the cells in each well were washed twice with 100 μL of PBS containing 2%BSA. Subsequently, the cells were centrifuged at 500 × g at 4 ℃ for 5 minutes, and the supernatant was discarded. A volume of 100 μL of a fluorescent secondary antibody (AF488-conjugated AffiniPure Goat Anti -Human IgG, Fcγ Fragment Specific, Jackson) was added to each well. The plate was then incubated in the dark at 4 ℃ for 1 hour. Next, the cells in each well were washed twice again with 100 μL of PBS containing 2%BSA. After centrifugation at 500 × g at 4 ℃ for 5 minutes, the supernatant was discarded. Finally, the cells in each well were resuspended in 200 μL of PBS, and the fluorescence signal values were measured using a BD CantoII flow cytometer. The results of the binding of the antibodies to CHOK1-hTL1A cells are presented in Table 4 and Figure 2. The anti-TL1A HCAb PR014047 exhibit comparable binding activity to human TL1A expressed on the surface of the CHOK1 cell line compared to the reference antibody PR012826.

[0222] Table 4. Binding activities of anti-TL1A antibodies to CHOK1-hTL1A cells measured by FACS Example 5: Activity of blocking the interaction of TL1A and DR3

[0223] This example aims to investigate the activity of human anti-TL1A HCAb in blocking the interaction between DR3 and human TL1A in vitro. To assess the blocking activity, a competition sandwich ELISA binding assay was performed. High-binding plates (9018, Corning) were coated with 2 μg / ml of human DR3 with a His tag (Acro) in PBS and incubated overnight at 4 ℃. Subsequently, the plates were washed three times with PBST (0.02%Tween) and blocked with PBS / 5%milk for 1 hour at room temperature.

[0224] Serial dilutions of antibodies (starting from 200 nM in PBS with a dilution factor of 10) and biotinylated human TL1A (Acro, 1 μg / ml) were mixed at a 1: 1 ratio (100 μl + 100 μl) and incubated for 1 hour at room temperature. This mixture was then added to the blocked plates.

[0225] After one-hour incubation, the plates were washed three times with PBST. HRP-conjugated Streptavidin (Biorad) in blocking buffer was added and incubated for 1 hour. Following another three-cycle wash, 100 μl of KPL SureBlue TMB substrate (Seracare) was employed to initiate the reaction. Once a distinct yellow color had developed, the reaction was terminated by adding 100 μl of ELISA buffer (Solarbio) . The absorbance of the plates was measured at 450 nm using a SpectraMax HB164 (Molecular Devices) . The reference antibody PR012826 was also characterized concurrently. As a positive control, biotinylated TL1A without any antibody preincubation was used. The blocking effect was calculated as the reduction from the maximal signal divided by the maximal response window. The results are presented in Table 5 and Figure 3. The results demonstrated that the anti-TL1A HCAb PR014047 exhibited stronger blocking activity compared with the reference antibody PR012826.

[0226] Table 5. Activities of blocking DR3 / TL1A interaction of anti-TL1A antibodies Example 6: Activity of inhibiting the activation of NFκB signaling

[0227] An NFκB-luc reporter TF-1 cell line (Genomeditech) was utilized to evaluate the activities of anti-TL1A antibodies in inhibiting the activation of NFκB signaling. Briefly, one day prior to the experiment, TF-1 cells were seeded at a density of 3E5 cells / ml and cultured overnight at 37 ℃ in RPMI 1640 medium supplemented with 10%fetal bovine serum (FBS) , 2 ng / ml GM-CSF, and 3 μg / ml blasticidin. Serial dilutions of antibodies, each with a volume of 25 μl, were incubated with 25 μl of human TL1A (16 nM) in a black-walled 96-well cell culture plate at 4 ℃ overnight. On the subsequent day, the plate was pre-warmed at 37 ℃ for 30 minutes before the addition of 50 μl of a cell suspension containing 5E4 TF-1 cells. After 5 hours of culturing at 37 ℃, 100 μl of GM One-step substrate (Genomeditech) was added to the plate. Three to five minutes after thorough mixing, the luminescence signal was measured using an EnVision Luminometer (PerkinElmer) . Reference antibody PR012826 were characterized concurrently. As for maximal signal, TL1A treatment without any antibody preincubation was used. The inhibitory effect was calculated as the reduction from the maximal signal divided by the maximal response window. The results are presented in Table 6 and Figure 4. The results demonstrated that the anti-TL1A HCAb PR014047 exhibited stronger inhibitory activity compared with the reference antibody PR012826.

[0228] Table 6. Activities of inhibiting the activation of NFκB in TF-1 cells Example 7: Inhibiting the activation of human PBMCs

[0229] To determine the activities of anti-TL1A antibodies to inhibit hTL1A-induced stimulation of human PBMCs, an in vitro assay was developed in which hTL1A-induced release of IFNγ was measured in the presence of antibodies. Serial dilutions of antibodies in RPMI1640+10%FBS cell culture medium (start dilution from 400 nM with a dilution factor of 3) , each with a volume of 50 μl, were incubated with 50 μl of human TL1A (16 nM) in a black-walled 96-well cell culture plate at 4 ℃ overnight. The next day, 5E4 human PBMCs (MILECELL Bio) were diluted in 100 uL RPMI1640+10%FBS cell culture medium containing IL-12 (Peprotech, 1ng / mL) and IL-18 (Peprotech, 10ng / mL) and added to the wells. After incubation at 37 ℃ for 72 hours, the supernatants were harvested, and IFNγ levels were determined by ELISA. Reference antibodies PR012826 and PR012905 were characterized concurrently. The results are presented in Table 7 and Figure 5. The results demonstrated that the anti-TL1A antibodies PR014047 exhibited stronger inhibitory activity compared with the reference antibodies PR012826 and PR012905.

[0230] Table 7. Activities of inhibiting IFNγ in PBMC

[0231] Example 8: Removal of predicted PTM risks

[0232] Amino acid analysis of the amino acid sequences of PR014047 revealed several amino acid residues that are prone to undergoing post-translational modifications (PTMs) . Particular attention was devoted to the amino acid residues located within the complementarity-determining regions (CDRs) of the antibody. Over an extended period, alterations to these amino acid residues have the potential to modify the binding profile of the antibody. Within CDR2, the amino acid pair N52S53 was identified as a potential site for deamidation, and the pair D54G55 was recognized as a potential site for aspartate isomerization. In CDR3, the amino acid sequence N100G101T102 was pinpointed as a potential site for both deamidation and N-linked glycosylation. Example 8.1: Single amino acid substitutions of PR014047

[0233] To reduce the potential impact of these predicted issues, variants of single amino acid substitutions of PR014047 were produced. The resulting PR014047 variants were produced as listed in Table 8.

[0234] Table 8A. SEQ ID NOs for the amino acid sequences of PR014047 variants

[0235] Table 8B. Amino acid sequences of PR014047 variants Example 8.1.1: Activity of binding to human and cyno TL1As

[0236] The abilities of PR014047 variants binding to human and cyno TL1As were assessed as described above (Example 3) . The results are presented in Table 9 and Figure 6. The results demonstrated that anti-TL1A HCAbs PR014047 and all its variants, and the reference antibody PR012826 exhibited comparable activities of binding to human and cyno TL1As.

[0237] Table 9. Binding activities of PR014047 variants to human and cyno TL1A proteins Example 8.1.2: Activity of binding to membrane-bound TL1A

[0238] The abilities of PR014047 variants binding to membrane-bound TL1A was assessed as described above (Example 4) . The results are presented in Table 10 and Figure 7. The results demonstrated that anti-TL1A HCAbs PR014047 and all its variants, and the reference antibody PR012826 exhibited comparable EC50 values as derived from the curves of their binding to CHOK1-hTL1A cells.

[0239] Table 10. Binding activities of PR014047 variants to CHOK1-hTL1A cells measured by FACS Example 8.1.3: Activity of blocking the interaction of TL1A and DR3

[0240] The abilities of PR014047 variants in blocking the interaction of TL1A and DR3 were assessed as described above (Example 5) . The results are presented in Table 11 and Figure 8. The results demonstrated that all the variants of PR014047 maintained the blocking activity comparable to that of PR014047.

[0241] Table 11. Activities of PR014047 variants in blocking DR3 / TL1A interaction Example 8.1.4: Activity of inhibiting the activation of NFκB signaling

[0242] The abilities of PR014047 variants in inhibiting the activation of NFκB signaling was assessed as described above (Example 6) . The results are presented in Table 12 and Figure 9. The results demonstrated that all the variants of PR014047 exhibited inhibitory activity comparable to that of PR014047, and the inhibitory activities of these variants were better than that of the reference antibody PR012826.

[0243] Table 12. Activities of inhibiting the activation of NFκB in TF-1 cells Example 8.2: Multiple amino acid substitutions of PR014047

[0244] A single amino acid substitution can merely eliminate a portion of the PTM risks. To mitigate the majority of the key potential impacts of PTMs in PR014047, multiple-amino-acid-substitution variants of PR014047 were generated. These substitutions of the resulting PR014047 variants include PR014685 (S53A_D54E_N100Q) and PR014686 (S53A_G55A_N100Q) . These substitutions of the resulting PR014047 variants were produced as listed in Table 13.

[0245] Table 13A. SEQ ID NOs for the amino acid sequences of PR014047 variants

[0246] Table 13B. Amino acid sequences of PR014047 variants Example 8.2.1: Activity of blocking the interaction of TL1A and DR3

[0247] The abilities of PR014685 and PR014686 in blocking the interaction of TL1A and DR3 were assessed as described above (Example 5) . The results are presented in Table 14 and Figure 10. The results demonstrated that PR014685 and PR014686 exhibited comparable blocking activity with PR014047, better than the reference antibody PR012826.

[0248] Table 14. Activities of PR014047 variants in blocking DR3 / TL1A interaction Example 8.2.2: Activity of inhibiting the activation of NFκB signaling

[0249] The abilities of PR014685 and PR014686 in inhibiting the activation of NFκB signaling were assessed as described above (Example 6) . The results are presented in Table 15 and Figure 11. The results demonstrated that PR014685 and PR014686 exhibited comparable inhibitory activity with PR014047, better than the reference antibody PR012826.

[0250] Table 15. Activities of inhibiting the activation of NFκB in TF-1 cells Example 9: Generation and characterization of TL1AxIL-23p19 bispecific antibodies

[0251] Human interleukin-23 (IL-23) is a heterocomplex composed of the IL-23p19 and IL-12p40 subunits. In order to generate a TL1A×IL-23p19 bispecific antibody (BsAb) , the amino acid sequences of the heavy-chain and light-chain variable regions (VH and VL) of the anti-IL-23p19 human monoclonal antibody Guselkumab (PR001595) were obtained. These sequences were sourced from the work of Jacqueline Benson, et al., as disclosed in U.S. Pat. No. 7,491,391 B2. Two TL1A×IL-23p19 bispecific antibodies (BsAbs) (PR014897 and PR014898) were constructed, utilizing the anti-TL1A VH sequences of PR014685 and PR014686, along with the anti-IL-23p19 VH and VL sequences of PR001595. The format is depicted in Figure 12. To enhance the half-life of the antibodies, mutations M252Y, S254T, and T256E (collectively referred to as “YTE” ) were incorporated into the Fc region. Additionally, in order to abolish Fc effector functions, triple mutations L234A, L235A, G237A (denoted as “AAA” ) were introduced to CH2 of both heavy chains. Both bi-specific molecules and the reference IL-23p19 mAb (PR001595) were produced and purified as listed in Table 16.

[0252] Table 16A. SEQ ID NOs for the amino acid sequences of PR014047 variants

[0253] Table 16B. Amino acid sequences of TL1A×IL-23p19 BsAbs Example 9.1: Activity of binding to human, cyno, rat and mouse TL1As

[0254] The binding capabilities of TL1A×IL-23p19 BsAbs to human, cynomolgus, rat, and mouse TL1As were evaluated as described previously (Example 3) . Additionally, the activities of reference TL1A monoclonal antibodies PR012826, PR012905 and PR012906 were also investigated. The results are presented in Table 17 and Figure 13. The findings indicated that PR014897 and PR014898 exhibited comparable human and cyno TL1A binding activities with reference antibody PR012826 but does not bind to rat or mouse TL1A.

[0255] Table 17. Binding activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs and reference TL1A mAbs to human and cyno TL1A proteins Example 9.2: Activity of binding to membrane-bound TL1A

[0256] The abilities of TL1A×IL-23p19 BsAbs binding to membrane-bound TL1A were assessed as described above (Example 4) . The results are presented in Table 18 and Figure 14. The results demonstrated that PR014897 and PR014898 exhibited a little weaker binding activities than the reference antibody PR012826.

[0257] Table 18. Binding activities of TL1A×IL-23p19 BsAbs and reference TL1A mAbs to CHOK1-hTL1A cells Example 9.3: Activity of blocking the interaction of TL1A and DR3

[0258] The abilities of TL1A×IL-23p19 BsAbs to block the interaction between DR3 and TL1A were evaluated as described above (Example 5) . The results are presented in the Table 19 and Figure 15. The findings revealed that PR014897 and PR014898 exhibited stronger blocking activities than the reference antibody PR012826.

[0259] Table 19. Activities of TL1AxIL-23p19 BsAbs and reference TL1A mAbs in blocking DR3 / TL1A interaction Example 9.4: Activity of inhibiting the activation of NFκB signaling

[0260] The abilities of TL1A×IL-23p19 BsAbs to inhibit activation of NFκB signaling were evaluated as described above (Example 6) . The results are presented in the Table 20 and Figure 16. The findings revealed that PR014897 and PR014898 exhibited stronger inhibitory activities than the reference antibody PR012826, but comparable to PR012906.

[0261] Table 20. Activities of TL1AxIL-23p19 BsAbs and reference TL1A mAbs in inhibiting activation of NFκB Example 9.5: Activity of binding to human IL-23

[0262] The binding capabilities of TL1A×IL-23p19 BsAbs to human IL-23 heterocomplex were evaluated by ELISA. In order to assess the binding activities of the antibodies to human IL-23 heterocomplex, an ELISA binding assay was performed. High-binding plates (9018, Corning) were coated with 1 μg / ml of human IL-23 in PBS and left to stand overnight at 4 ℃. Subsequently, the plates were washed three times with PBST (0.02%Tween) and blocked with PBS / 5%milk for 1 hour at room temperature. Thereafter, a serial dilution of antibodies with PBS (starting dilution from 100 nM with a dilution factor of 10) was incubated with the plate for 1 hour at room temperature. After washes of three times with PBST, an HRP-conjugated anti-human Fc antibody (Jackson Lab) in blocking buffer was added and incubated for 1 hour. Following another three-cycle wash, 100 μl of KPL SureBlue TMB substrate (Seracare) was utilized to initiate the reaction. Once a distinct yellow color had developed, the reaction was terminated by adding 100 μl of ELISA buffer (Solarbio) . The absorbance of the plate was measured at 450 nm using a SpectraMax HB164 (Molecular Devices) . Reference antibody PR001595 was simultaneously characterized. The results are presented in Table 21 and Figure 17. The results demonstrated that PR014897 and PR014898 exhibited good binding activities to human IL-23, which are comparable to that of the reference antibody.

[0263] Table 21. Binding activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs and the reference IL-23p19 mAb to human IL-23 Example 9.6: Activity of blocking the interaction of hIL-23 and hIL-23 receptor

[0264] The activities of TL1A×IL-23p19 BsAbs to block the interaction in between human IL-23 and human IL-23 receptor were evaluated by ELISA. High-binding plates (9018, Corning) were coated with 1 μg / ml of human IL-23 receptor (Acro) in PBS and incubated overnight at 4 ℃. Subsequently, the plates were washed three times with PBST (0.02%Tween) and blocked with PBS / 5%milk for 1 hour at room temperature. Serial dilutions of antibodies (starting from 200 nM in PBS with a dilution factor of 10) and biotinylated human IL-23 (Acro, 1 μg / ml) were mixed at a 1: 1 ratio (100 μl + 100 μl) and incubated for 1 hour at room temperature. This mixture was then added to the blocked plates. After a 1-hour incubation, the plates were washed three times with PBST. HRP-conjugated Streptavidin (Biorad) in blocking buffer was added and incubated for 1 hour. Following another three-cycle wash, 100 μl of KPL SureBlue TMB substrate (Seracare) was employed to initiate the reaction. Once a distinct yellow color had developed, the reaction was terminated by adding 100 μl of ELISA buffer (Solarbio) . The absorbance of the plates was measured at 450 nm using a SpectraMax HB164 (Molecular Devices) . The reference antibody PR001595 was also characterized concurrently. The results are presented in Table 22 and Figure 18. The results demonstrated that PR014897 and PR014898 exhibited comparable blocking activities compared with the reference IL-23p19 antibody PR001595.

[0265] Table 22. Activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs and reference IL-23p19 mAb in blocking human IL-23 / human IL-23 receptor interaction Example 9.7: Inhibiting the activation of human PBMCs

[0266] The activities of TL1A × IL-23p19 BsAbs to inhibit hTL1A-induced stimulation of human PBMCs was evaluated as described above (Example 7) . The inhibitory effect was represented as the reduction from maximal signal divided by maximal response window. The results are presented in Table 23 and Figure 19. The results demonstrated that the PR014897 exhibited stronger inhibitory activity compared with the reference antibody PR012826, comparable with PR012906.

[0267] Table 23. Activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs and reference TL1A mAbs in inhibiting IFNγ in PBMC Example 9.8: Inhibiting the activation of mouse spleenocytes

[0268] Freshly isolated mouse splenocytes were incubated with human IL-23 that had been preincubated with titrated TL1A x IL-23p19 BsAbs PR014897 and PR014898, or the reference IL-23p19 monoclonal antibody PR001595. As a positive control, human IL-23 without any antibody preincubation was used. After 72 hours of culture, cell supernatants were collected and analyzed by ELISA with a mouse IL-17 ELISA kit (Acro) . The inhibitory effect was calculated as the reduction from the maximal signal divided by the maximal response window. The results are presented in Table 24 and Figure 20. PR014897 and PR014898 were found to inhibit human IL-23-induced IL-17 production at a level similar to that of the reference IL-23 antibody PR001595.

[0269] Table 24. Activities of TL1A x IL-23p19 BsAbs and reference IL-23p19 mAbs in inhibiting mouse IL-17 in mouse splenocytes Example 10: Binding affinity to human TL1A by BLI

[0270] The binding affinity and kinetic constants of the TL1AxIL-23p19 BsAb PR014897 and the reference TL1A monoclonal antibodies (mAbs) PR012826, PR012905, and PR012906 to human TL1A (Acro) were determined via surface plasmon resonance at 25 ℃. The measurements were carried out using a Biacore 8K instrument. His-tagged human TL1A (Acro) was diluted to 0.5 μg / mL with the running buffer (1×HEPES: 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.005%Tween-20, pH 7.4) and then captured onto an anti-His sensor surface (Cytiva, Series S Sensor Chip CM5) . Subsequently, the captured biosensors were immersed in wells containing six different concentrations of antibodies to detect the association signals, followed by dissociation steps in other wells.

[0271] The association phase was set to last for 90 seconds, and the dissociation phase was set to 210 seconds. The sensorgrams were recorded, and the background signals from the reference channel were subtracted. The kinetic association (Ka) and dissociation (Kd) rate constants were determined by fitting the data to a 1: 1 binding model. The equilibrium dissociation constant (KD) was calculated as the ratio of Kd to Ka. The affinity constants of PR012826, PR012905, PR012906, and PR014897 for human TL1A were 1.73 pM, 0.477 nM, 0.132 nM, and 0.419 nM, respectively. The results are presented in Table 25.

[0272] Table 25. Summary of affinity assay between TL1AxIL-23p19 BsAbs and reference TL1A mAbs and Human TL1A protein Example 11: Binding activity to human FcRn

[0273] To enhance the half-life of the antibodies, the mutations M252Y, S254T, and T256E (collectively referred to as “YTE” ) were incorporated into the Fc region for better binding to FcRn. The binding affinity and kinetic constants of the TL1A x IL-23p19 BsAb PR014897 to human FcRn (Acro) were determined via surface plasmon resonance at 25 ℃. The measurements were carried out using a Biacore 8K instrument. PR014897 was diluted to 0.5 μg / mL with the immobilization buffer (10 mM Sodium Acetate, pH4.5) and then immobilized onto a CM4 sensor surface (Cytiva, Series S Sensor Chip CM4) . For detecting the binding affinity under pH 7.4, human FcRn was diluted with the running buffer A (1×HEPES: 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.005%Tween-20, pH7.4) to corresponding concentration (15.625-4000 nM) . For detecting binding affinity under pH 6.0, human FcRn was diluted with the running buffer (1×PBS, 0.05%Tween-20, pH6.0) to corresponding concentration (0.977-250 nM) . Subsequently, the captured biosensors were immersed in wells containing FcRn to detect the association signals, followed by dissociation steps in other wells. The association and dissociation processes were all handling in the running buffer A or B. The association phase was set to last for 90 seconds, and the dissociation phase was set to 210 seconds. The sensorgrams were recorded, and the background signals from the reference channel were subtracted. The affinity constants of PR014897 for FcRn were 7.09 μM (pH 7.4) and 0.117 μM (pH 6.0) . The results are presented in Table 26 and Table 27.

[0274] Table 26. Summary of affinity assay between PR014897 and Human FcRn protein (pH7.4)

[0275] Table 27. Summary of affinity assay between PR014897 and Human FcRn protein (pH6.0) Example 12: Binding activity to human Fcγ receptors

[0276] In order to abolish Fc effector functions, triple mutations L234A, L235A and G237A (denoted as “AAA” ) were introduced to CH2 of both heavy chains. The binding affinity and kinetic constants of the TL1A x IL-23p19 BsAb PR014897 and His-tagged Fcγ receptors: Human CD64, Human CD32b / c, Human CD32a (R167) , Human CD32a (H167) , Human CD16a (F176) , Human CD16a (V176) , Human CD16b (NA1) and Human CD16b (NA2) (all from Acro) were determined via surface plasmon resonance at 25 ℃. The measurements were carried out using a Biacore 8K instrument. His-tagged human Fcγ receptors were diluted to 0.2 μg / mL with the running buffer (1×HEPES: 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.005%Tween-20, pH 7.4) and then captured onto an anti-His sensor surface (Cytiva, Series S Sensor Chip CM5) . Subsequently, the captured biosensors were immersed in wells containing different concentrations of antibodies (9.766-20000 nM) to detect the association signals, followed by dissociation steps in other wells.

[0277] The association phase was set to last for 90 seconds, and the dissociation phase was set to 210 seconds. The sensorgrams were recorded, and the background signals from the reference channel were subtracted. The results are presented in Table 28. The results demonstrated PR014897 does not bind to all Fcγ receptors tested.

[0278] Table 28. Summary of affinity assay between PR014897 and Human FcγR proteins Example 13: Epitope binning by competition assay

[0279] To determine if PR014897 binds to human TL1A on different or approximate binding epitopes with reference TL1A mAbs PR012826, PR012905 and PR012906, the ForteBio  RED96e platform was used to perform epitope competition experiments on the antibodies. Biotinylated human TL1A protein (Acro) was captured onto SA biosensors (ForteBio, #18-5020) to reach loading level of 0.3-0.4 nm. The in-tandem competition assay format was applied, and it contains two association steps. Firstly, the antigen-loaded biosensors bind to each antibody (a.k.a, First antibody, 1st Ab) with a saturating concentration of 200 nM for 180 seconds to reach equilibrium and then secondly bind to the competing antibodies (a.k.a, Second antibody, 2nd Ab) of 200 nM for 180 seconds. The second binding signals were recorded as the 100%signal of each antibody when the first antibodies were replaced by kinetics buffer. All the binding data were analyzed using ForteBio Data Analysis 11.0 software. The inhibition rate is calculated by the following formula:

[0280] Inhibition rate (%) = (A-B)  / A *100

[0281] A: 100%signal of each antibody;

[0282] B: the signals of second antibody binding steps.

[0283] Because the binding affinities of the reference TL1A mAbs are stronger than or comparable to that of PR014897, as demonstrated in Example 10, it is more crucial to focus on the value of using the reference TL1A mAbs as the first antibody and PR014897 as the second antibody. As shown in Table 29, an inhibition greater than 90%is detected only when PR012906 is used as the first antibody. This result indicates that PR014897 potentially share the same binding epitopes on human TL1A with the reference antibody PR012906, but not with PR012826 or PR012905. However, the results in Example 14 indicate that the binding epitopes of PR014897 and PR012906 are still different.

[0284] Table 29. The inhibition rates of antibodies in the epitope competition assay Example 14: Receptor selectivity

[0285] TL1A binds to both its cognate signaling receptor, DR3, and the decoy receptor, DcR3. Notably, DcR3 serves as a decoy receptor for other members of the TNF family, including FasL and LIGHT. It has been reported (WO 2013 / 044298) that the TL1A antibody C03V (PR014906) inhibits the binding between TL1A and DR3 to a significantly greater degree than the binding between TL1A and DcR3. Given that PR014897 potentially shares the same epitopes with TL1A monoclonal antibody C03V, the selectivity of PR014897 for DR3 or DcR3 was evaluated using a competition ELISA assay as described previously (Example 5) . Similar to the procedure for DR3, a solution of 2 μg / ml of DcR3 (Acro) in PBS was coated onto the plates overnight at 4 ℃. Concurrently, the reference antibodies PR012826, PR012905, and PR012906 were also characterized. The results are presented in Table 30 and Figure 21. Besides blocking the DR3 / TL1A interaction for all four tested antibodies, PR014897 was found to be the only one that did not block the interaction between DcR3 and TL1A. This result indicates that the binding epitopes of PR014897 and PR012906 may be partially overlapping, but still different.

[0286] Table 30. The selectivity of TL1A x IL-23p19 BsAbs and reference TL1A monoclonal antibodies (mAbs) in blocking the DR3 / TL1A or DcR3 / TL1A interaction. Example 15: Large immune complex formation

[0287] Immune complexes of drug and target were created by incubating human TL1A with reference antibodies (PR012826 and PR012905) or bispecific antibodies (PR014897 and PR014898) in different molar ratios at 4℃ for approximately 16 hours. Size exclusion chromatography with inline multi-angle light scattering (SEC-MALS) as used to characterize the samples.

[0288] The SEC-MALS system was set up by connecting MALS (Wyatt Technologies) and dRI (Wyatt Technologies) detectors after the UV detector of the Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) system with a SEC column (Acquity UPLC Protein SEC Guard Column or Acquity UPLC BEH450 SEC column from Waters, Milford, MA) . 100 μL filtered or centrifuged protein sample was injected for detection. Data were collected using MALS software (Wyatt Technologies) and FPLC software. Data analysis was performed using MALS software.

[0289] The reference TL1A antibodies PR012826 and PR012905, along with bispecific antibodies PR014897 and PR014898, were incubated with human TL1A at a 1: 1 molar ratio and then the incubated samples were subjected to characterization by SEC-MALS. The corresponding data are presented in Figure 22A. When compared to the antibodies alone, the incubated samples exhibited formation of larger immune complexes, with molecular weights exceeding 2000 kD. Notably, the percentage and size of large immune complexes formed by the bispecific antibodies were lower and smaller, respectively, than that of those formed by the reference antibodies.

[0290] Subsequently, PR014897 and the reference antibody PR012905 were incubated with human TL1A at molar ratios of 1: 1, 1: 3, and 1: 10 and then the incubated samples were subjected to characterization by SEC-MALS. The data for this experiment are shown in Figure 22B. As the ratio of TL1A increased, both molecules showed a decrease in the percentage and size of large immune complexes. However, the percentage and size of large immune complexes formed by PR014897 were consistently lower and smaller than that of those formed by PR012905. Example 16: Efficacy evaluation of PR014897 in a mouse model of TNBS-induced colitis

[0291] This study investigated the pharmacological effects of PR014897 in a mouse model of Trinitro-benzene-sulfonic acid (TNBS) induced colitis. Example 16.1: Methods Example 16.1.1: Testing Article Formulation Preparation

[0292] The formulations were prepared freshly before dosing. The stocks stored at -80℃were dissolved on ice for subsequent manipulation. The preparations were conducted under aseptic conditions in a super clean bench and on ice, using low-bind consumables.

[0293] For dosage at 17.7 mg / kg, 0.221 mL of the PR014897 stock solution was diluted to 1.77 mg / mL formulation with 1.179 mL Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS, Corning, 21-031-CVR) .

[0294] The details of dosage, dosing volume and concentration of the stock solution are presented in Table 31.

[0295] Table 31. Dosage, dosing volume and concentration Note: DPBS was prepared for the vehicle and sham groups. Example 16.1.2: Animals

[0296] Experimental B-hTL1A-hIL23A-hIL12B mice (BM3018, Biocytogen Jiangsu Gene Biotechnology Co., LTD, female, B202412020093) were bred in specific pathogen free IVC cages in a temperature controlled (20±2℃) room with 12-hour light and 12-hour dark cycle. All animals had free access to a standard certified commercial laboratory diet. Maximum allowable concentrations of contaminants in the diet were controlled and routinely analyzed by the manufacturers. Autoclaved municipal tap water, suitable for human consumption, was available to the animals ad libitum. Example 16.1.3: Grouping and systemic dosing

[0297] 18 female B-hTL1A-hIL23A-hIL12B mice (around 18-21 grams) , were assigned into 3 groups (6 mice in each group) . Mice were respectively intraperitoneal injected with PR014897 (17.7 mg / kg, Q2D) at Day -1, Day 1 and Day 3, whereas in the sham and vehicle groups, mice were respectively intraperitoneal injected with DPBS at Day -1, Day 1 and Day 3. The treatment scheme is presented in Table 32.

[0298] Table 32. Grouping for TNBS induced IBD Model for in-life study Example 16.1.4: Induction of colitis

[0299] Mice in the Sham group were given a solution of 50%ethanol (0.1 mL) via intracolonic injection at Day 0, whereas mice in the two TNBS colitis model groups were given a solution of 1.5%TNBS (0.1 mL) via intracolonic injection at Day 0. Intracolonic injection was performed by inserting a gavage needle about 3.5 cm into the colon via the anus. Mice were anesthetized with 15 mL / kg of avertin (1.25%) , and maintained in the head-down position for 2 min after intracolonic administration. These mice were euthanized on Day 5 (7th day of the experiment) . Samples were immediately harvested at the experimental endpoint. Example 16.1.5: Fecal occult blood (FOB) test

[0300] If there was no blood visible with naked eyes, the FOB test was performed with a fecal occult blood test strip (the improved pyramidon method) . The FOB score (0-2) was interpreted as follows: 0, no color appeared after 2 min; 1, a dimmed color during 1-2 min; 2, a deeper color during 1-2 min. Example 16.1.6: Evaluation of the severity of colitis

[0301] Body weight and DAI scores were daily recorded to assess the severity of colitis. DAI score was the sum of the body weight loss score, stool consistency score and rectal bleeding score. A blinded scoring system was employed to assess the severity of colitis. DAI scoring standards were followed, as shown in Table 33.

[0302] Table 33. DAI scoring system Example 16.1.7: Sample collection

[0303] At the experimental endpoint, the mice were euthanized with carbon dioxide. Whole blood was collected from the heart, and then centrifuged at 2500 × g for 15 min at 4 ℃ to obtain serum. The serum was immediately frozen and stored at -80 ℃ until analysis. The colons (without mesentery / adipose tissue) were harvested and placed on ruled paper for photography. After photographing, the length and weight of the colons were measured, and the internal content were removed with cold DPBS. The colons (anus to cecum) were divided lengthwise; one half was Swiss-rolled and fixed with PFA for subsequent pathological examination using H&E and Masson’s Trichrome staining, and the intestinal mucosal tissues isolated from the other half was immediately frozen and stored at -80 ℃ until further analysis for inflammatory cytokines. Example 16.1.8: Measurement of inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6, IFN-γ and IL-17A)

[0304] The intestinal mucosal tissue samples were processed and analyzed for inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6, IFN-γ and IL-17A) as follows.

[0305] Sample preparation:

[0306] 1) An appropriate amount of DPBS (containing Protease Inhibitor Cocktail) was added to each sample, which was then homogenized with magnetic beads at 50 Hz for 5 min at 4℃. The sample was then placed on ice and vortexed for 10 min, centrifuged at 12000 rpm for 10 min at 4℃. The supernatant was collected (if turbid, centrifugation was repeated) for analysis.

[0307] 2) A 96-well plate was pre-treated by washing each well twice with 250 μL of washing buffer, followed by blotting the plate on absorbent paper to remove residual buffer.

[0308] 3) The supernatants were diluted 1: 1 with assay diluent in another 96-well plate before being transferred to the pre-treated 96-well plate.

[0309] IL-1β, IL-6, IFN-γ and IL-17A measurement:

[0310] IL-1β, IL-6, IFN-γ and IL-17A levels were measured using BDTM Cytometric Bead Array (CBA) Mouse Enhanced Sensitivity Master Buffer kit (BDB562248) and BDTM CBA Mouse IL-1β, IL-6, IFN-γ, and IL-17A Enhanced Sensitivity Flex Sets (BD, 562278, 562236, 562233 and 562261) . The detailed experimental procedure was as follows:

[0311] 1) Each diluted supernatant was added to the pre-treated 96-well plate at 50 μL / well in triplicate.

[0312] 2) Top standards of IL-1β, IL-6, IFN-γ and IL-17A were prepared at dilutions of 1: 3, 1: 9, 1: 27, 1: 81, 1: 243, 1: 729, 1: 2187, and 1: 6561.50 μL of each standard was pipetted into the top standard wells.

[0313] 3) The capture bead mix was prepared by mixing 60 μL IL-6 beads, 60 μL IFN-γ beads, 60 μL IL-1β beads, 60 μL IL-17A beads, and 960 μL capture bead diluent.

[0314] 4) The mixed capture beads were vortexed for at least 30 seconds, and then 20 μL of the mixed capture beads to each well. Then the plate was incubated at room temperature for 2 h.

[0315] 5) PE Detection Reagent (Part A) was prepared by mixing 60 μL IL-6 PE Detection Reagent A, 60 μL IL-1β PE Detection Reagent A, 60 μL IL-17A PE Detection Reagent A, 60 μL IFN-γ PE Detection Reagent A, and 960 μL detection reagent diluent A.

[0316] 6) 20 μL of the mixed PE Detection Reagent was added to each well. The plate was mixed for 5 min at 200 × g on a digital shaker and then incubated at room temperature for 2 h.

[0317] 7) Enhanced Sensitivity Detection Reagent (Part B) was prepared as follows: reconstitute each of two vials of the lyophilized Enhanced Sensitivity Detection Reagent (Part B) with 0.55 mL of Detection Reagent Diluent B and incubate for 15 min at room temperature, protected from light; gently mix by pipetting up and down; to prepare a 1: 10 dilution, transfer 0.5 mL of the reconstituted reagent into a 15-mL conical polypropylene tube containing 4.5 mL of Detection Reagent Diluent B, and gently vortex.

[0318] 8) 100 μL of the diluted Enhanced Sensitivity Detection Reagent (Part B) was added to each well.

[0319] 9) The plate was incubated for 1 h at room temperature.

[0320] 10) Subsequently, the plate was washed once as follows: add 150 μL of wash buffer to each well, centrifuge the plate at 400 × g for 5 min and aspirate the supernatant.

[0321] 11) Finally, 150 μL of wash buffer was added to each well. The plate was mixed on a digital shaker for 5 min at 500 rpm to resuspend the beads before sample acquisition on a flow cytometer. The data were analyzed with FCAP Assay V3.

[0322] TNF-α measurement:

[0323] TNF-α measurement was performed using BDTM Cytometric Bead Array (CBA) Mouse Enhanced Sensitivity Master Buffer kit (BDB562248) and BDTM CBA Mouse TNF Flex Set (BD, 558299) . The detailed experimental procedure was as follows:

[0324] 1) Each diluted supernatant was added to the pre-treated 96-well plate at 50 μL / well in triplicate.

[0325] 2) Top standards of TNF-α were prepared at dilutions of 1: 4, 1: 8, 1: 16, 1: 32, 1: 64, 1: 128, and 1: 256.50 μL of each standard was pipetted into the top standard wells.

[0326] 3) . The capture bead mix was prepared by mixing 60 μL TNF-α beads, and 2940 μL capture bead diluent.

[0327] 4) 50 μL of the mixed capture beads was added to each well. Then the plate was incubated at room temperature for 1 h.

[0328] 5) PE Detection Reagent (Part A) was prepared by mixing TNF-α PE Detection Reagent A, and 2940 μL detection reagent diluent A.

[0329] 6) 50 μL of the mixed PE Detection Reagent was added to each well. The plate was mixed for 5 min at 200 × g on a digital shaker and then incubated the plate at room temperature for 1 h.

[0330] 7) Subsequently, the plate was washed twice, each time as follows: add 150 μL of wash buffer to each well, centrifuge the plate 400 × g for 5 min, and aspirate the supernatant.

[0331] 8) Finally, 150 μL of wash buffer was added to each well. The plate was mixed on a digital shaker for 5 min at 500 rpm to resuspend the beads before sample acquisition on a flow cytometer. The data were analyzed with FCAP Assay V3. Example 16.1.9: Data analysis

[0332] All the data were analyzed and plotted using GraphPad Prism 10.1.2 software (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA) . The data were expressed as mean ±standard error of the mean (SEM) . Statistical comparisons were done with two-way analysis of variance (ANOVA) for body weight change and DAI score. Other parameters, such as colon index, pathological score, and inflammatory cytokines were analyzed by one-way ANOVA. Dunnett’s test was used for multiple comparisons. p< 0.05 was considered statistically significant. Example 16.2: Results Example 16.2.1: PR014897 promotes the recovery of TNBS-induced colitis

[0333] At the experimental endpoint, the efficacy of PR014897 in promoting recovery from TNBS-induced colitis was evaluated by comparing body weight changes and DAI scores. The results are presented in Figure 23.

[0334] As shown in Figure 23A-B, compared to the Sham group, the Vehicle group exhibited significantly increased body weight loss and DAI score from Day 1 to Day 5. From Day 3 to Day 5, compared to the Vehicle group, the PR014897 group exhibited significantly less TNBS-induced body weight loss and a faster recovery rate, as evidenced by lower Disease Activity Index (DAI) scores, less diarrhea, and less bleeding. Example 16.2.2: PR014897 maintains colon density

[0335] TNBS administration in mice primarily leads to increased colon weight and density, which are indicators of acute colitis severity. At the experimental endpoint, the colon samples were analyzed for colon weight, length and density. The results are presented in Figure 24.

[0336] As shown in Figure 24A-C, compared to the Sham group, the Vehicle group exhibited significantly increased colon weight and decreased colon length, ultimately resulting in increased colon swelling. In contrast, mice in the PR014897 group exhibited a significantly lower average colon density than those in the Vehicle group, consistent with the observed body weight changes and DAI scores. Furthermore, the average colon length of mice in the PR014897 group was longer than that in the Vehicle group. Additionally, the average colon weight of mice in the PR014897 group was significantly lower than that in the Vehicle group. Example 16.2.3: PR014897 improves colonic lesion

[0337] At the experimental endpoint, the colon samples were Swiss-rolled and subjected to H&E staining and pathological scoring. The results are presented in Figure 25.

[0338] As shown in Figure 25, significant colonic lesions were observed in the Vehicle group as a result of TNBS treatment. Compared to the Vehicle group, the colons of mice in the PR014897 group exhibited better-preserved crypt structure, less inflammatory cell infiltration, less muscle thickening and fewer crypt abscesses. Example 16.2.4: PR014897 inhibits colonic fibrosis

[0339] At the experimental endpoint, the colon samples were subjected to Masson’s Trichrome staining and pathological scoring to assess colonic fibrosis. The results are presented in Figure 26.

[0340] As shown in Figure 26, mice in the Vehicle group exhibited significant colonic fibrosis as a result of TNBS treatment. In contrast, colonic fibrosis was significantly inhibited in the PR014897 group. Example 16.2.5: PR014897 suppresses inflammatory cytokine production in intestinal mucosal tissue

[0341] At the experimental endpoint, the levels of inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6, IFN-γ and IL-17A) in the intestinal mucosal tissues were measured via flow cytometry. The results are presented in Figure 27.

[0342] As shown in Figure 27, increased inflammatory cytokine levels were observed in the intestinal mucosal tissues of the Vehicle group as a result of TNBS treatment. Compared to the Vehicle group, the PR014897 group exhibited significantly reduced IL-1β and IL-6 levels, as well as decreased IL-17A, TNF-α and IFN-γ levels. Example 16.3: Conclusions

[0343] In-life experiment results show that TNBS administration in B-hTL1A-hIL23A-hIL12B mice induced clinical manifestations of acute colitis, such as decreased body weight and increased DAI score, as well as markedly increased colon weight and decreased colon length, which ultimately resulted in increased colon swelling. In this TNBS-induced acute colitis model, PR014897 exhibited significant efficacy in alleviating body weight loss, diarrhea, and bleeding. In addition, PR014897 significantly inhibited colon swelling, preserved crypt structure, reduced inflammatory cell infiltration, attenuated muscle thickening, and decreased crypt abscesses. It also effectively inhibited colonic fibrosis, and significantly decreased IL-1βand IL-6 levels in the intestinal mucosal tissues of the acute colitis mice.

[0344] In conclusion, PR014897 effectively alleviates symptoms in a mouse model of TNBS-induced acute colitis, underscoring its promise as a therapeutic agent for inflammatory bowel disease (IBD) .

[0345] It is to be understood that the foregoing description of the embodiments is intended to be purely illustrative of the principles of the disclosure, rather than exhaustive thereof, and that changes and variations will be apparent to those skilled in the art, and that the present disclosure is not intended to be limited other than expressly set forth in the following claims.

Claims

1.An anti-TL1A antibody or an antigen-binding fragment thereof, comprising a heavy chain variable domain, wherein the heavy chain variable domain comprises the CDRs 1-3 of a heavy chain variable domain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, 77, 69, 70, 71, 72, 73, 74 or 75.2.An anti-TL1A antibody or an antigen-binding fragment thereof, comprising a heavy chain variable domain, wherein the heavy chain variable domain comprises CDRs 1-3 having(1) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 24 and 36, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 24 and 36, respectively;(2) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 25 and 36, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 25 and 36, respectively;(3) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 35, respectively;(4) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 19 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 19 and 35, respectively;(5) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 20 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 20 and 35, respectively;(6) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 21 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 21 and 35, respectively;(7) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 22 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 22 and 35, respectively;(8) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 23 and 35, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 23 and 35, respectively; or(9) the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 36, respectively; or amino acid sequences differing by one or two amino acid residues from the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8, 18 and 36, respectively.3.The anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of claim 1 or 2, wherein the heavy chain variable domain comprises:(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, 77, 69, 70, 71, 72, 73, 74 or 75; or(B) an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, 77, 69, 70, 71, 72, 73, 74 or 75.4.The anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-3, which(1) binds to human TL1A and non-human primate TL1A; and / or(2) blocks interaction between TL1A and DR3; and / or(3) does not block interaction between TL1A and DcR3.5.The anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-4, which is a single domain antibody or a heavy-chain-only antibody and optionally a fully human antibody.6.The anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-5, further comprising an Fc region, and optionally the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to reduce the effector function and / or enhance the FcRn binding.7.The anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-6, comprising a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93, 94, 86, 87, 88, 89, 90, 91 or 92 or an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93, 94, 86, 87, 88, 89, 90, 91 or 92.8.A multispecific antibody, comprising a first antigen-binding moiety binding to TL1A, wherein the first antigen-binding moiety comprises the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-7, and a second antigen-binding moiety binding to interleukin-23 p19 subunit (IL-23p19) .9.The multispecific antibody of claim 8, wherein the second antigen-binding moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein the VH comprises the HCDRs 1-3 of a VH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, and the VL comprises LCDRs 1-3 of a VL having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78.10.The multispecific antibody of claim 9, wherein the VH comprises HCDRs 1-3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 14 and 31, respectively; and the VL comprises LCDRs 1-3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 42, 50 and 58, respectively.11.The multispecific antibody of claim 9 or 10, wherein the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65 or an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65.12.The multispecific antibody of any one of claims 9-11, wherein the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78 or an amino acid sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78.13.The multispecific antibody of any one of claims 9-12, wherein the second antigen-binding moiety is a dsFv, an scFv, an scdsFv, a di-scFv, an Fab, an Fab’, an scFab or an F (ab’) 2.14.The multispecific antibody of any one of claims 8-13, further comprising an Fc region, and optionally the Fc region comprises one or more amino acid substitutions to reduce the effector function and / or enhance the FcRn binding.15.The multispecific antibody of claim 14, wherein the Fc region comprises a human IgG1 Fc region and amino acid substitutions L234A, L235A, G237A, M252Y, S254T and T256E.16.The multispecific antibody of claim 14 or 15, wherein the second antigen-binding moiety comprises a VH and a VL, wherein the multispecific antibody comprises:a first polypeptide comprising the VH, a CH1 domain, the heavy chain variable domain and the Fc region; anda second polypeptide comprising the VL and a light chain constant region.17.The multispecific antibody of claim 9, comprising a first polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102 or 103, and a second polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95.18.A nucleic acid encoding the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-7, or the multispecific antibody of any one of claims 8-17.19.A vector comprising the nucleic acid of claim 18.20.A host cell, comprising the nucleic acid of claim 18 or the vector of claim 19.21.A pharmaceutical composition comprising the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-7, the multispecific antibody of any one of claims 8-17, the nucleic acid of claim 18 or the vector of claim 19, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.22.A method of treating an inflammatory disease, autoimmune disease or condition in a subject, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-7, the multispecific antibody of any one of claims 8-17, the nucleic acid of claim 18, the vector of claim 19, or the pharmaceutical composition of claim 21.23.Use of the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-7, the multispecific antibody of any one of claims 8-17, the nucleic acid of claim 18, the vector of claim 19, or the pharmaceutical composition of claim 21 in the manufacture of a medicament for treating an inflammatory disease, autoimmune disease or condition in a subject.24.The anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment of any one of claims 1-7, the multispecific antibody of any one of claims 8-17, the nucleic acid of claim 18, the vector of claim 19, or the pharmaceutical composition of claim 21 for use in the treatment of an inflammatory disease, autoimmune disease or condition in a subject.25.The method of claim 22, the use of claim 23, or the anti-TL1A antibody or the antigen-binding fragment, the multispecific antibody, the nucleic acid, the vector, or the pharmaceutical composition for use of claim 24, wherein the inflammatory disease, autoimmune disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory bowel disease (such as Crohn's disease and ulcerative colitis) , atopic dermatitis, asthma, psoriasis, psoriasis vulgaris, arthritis (such as reactive arthritis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis) , gastrointestinal disease associated with cystic fibrosis, interstitial lung disease, irritable bowel syndrome, small and large intestinal fibrostenosis, systemic sclerosis, multiple sclerosis,  syndrome, Primary biliary cirrhosis, Systemic lupus erythematosus, sarcoidosis, Type 1 diabetes mellitus, insulin dependent diabetes mellitus (IDDM) , autoimmune thyroiditis, ankylosing spondylitis, scleroderma, polymyositis, dermatomyositis, vasculitis, Wegener's granulomatosis, Myasthenia gravis, Hashimoto's thyroiditis, Graves' disease, chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy, and Guillain-Barre syndrome.

Images