Alpha beta t cell compositions and methods of use

Abstract

The present disclosure provides genetically modified iPSC-derived αβT cells and their precursors. A double genomic disruption in the suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene and the cytokine-inducible sh2-containing protein (CISH) gene are provided, as is a triple genomic disruption in genes for SOCS1, CISH, and Bcl-2 interacting mediator of cell death (BIM), as is a quadruple genomic disruption in genes for SOCS1, CISH, BIM, and cell surface death receptor (FAS), as is a quintuple genomic disruption in genes for SOCS1, CISH, BIM, β-2-Microglobulin (B2M), and class II transactivator (CIITA), as is a sextuple genomic disruption in genes for SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS. Also provided is genetically modified iPSC-derived αβT cells and their precursors with improved proliferation and tumor killing activity. Also provided are genetically modified iPSC-derived αβT cells and their precursors further comprising anti-CD19 CAR. The present disclosure further provides methods making and using such cells, as well as gene editing systems.

Description

ALPHA BETA T CELL COMPOSITIONS AND METHODS OF USECROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS

[0001] This application claims priority to and the benefit of PCT Application PCT / CN2025 / 089599 filed on April 17, 2025 and PCT Application No. PCT / CN2026 / 082246 filed on March 9, 2026, the contents of which are hereby incorporated herein by reference in their entirety.FIELD OF THE DISCLOSURE AND BACKGROUND

[0002] This disclosure relates to genetically modified αβT cells and their precursors. An alpha-beta T cell (αβT-cell) is a type of T cell that has a T-cell receptor (TCR) composed of a αglycoprotein chain and a β glycoprotein chain on the surface of the cell and is activated in a major histocompatibility complex-dependent manner. αβT-cells can be genetically modified to tailor the αβT-cell for specific roles in diagnostic and therapeutic settings.

[0003] Human BIM gene (Gene ID: 10018) , also called BCL2L11, or “Bcl-2 Interacting Mediator of cell death” is transcribed as three splice variants: BIMEL, BIML, and BIMS. BIM is a member of BH3 (Bcl-2 homology 3) -only proteins, which can directly activate the proapoptotic effector proteins BAX and BAK. On the other hand, BIM also can indirectly activate BAX and BAK by binding to antiapoptotic BCL-2 family members (BCL-2, BCL-xL, MCL-1 and A1) .

[0004] Cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH)  /  (CIS1) (Gene ID: 1154, NM_013324.7, NP_037456.5) is a member of the suppressor of cytokine signaling (SOCS) protein family. The SOCS family members are negative regulators of cytokine signal transduction that inhibit the JAK / STAT pathway. Each SOCS family member contains a central SH2 domain and a conserved carboxy-terminal motif designated as the SOCS box. These proteins are important regulators of cytokine signaling, proliferation, differentiation, and immune responses.

[0005] The SOCS family consists of at least eight members including the originally identified CIS1, as well as SOCS1, SOCS2, SOCS3, SOCS4, SOCS5, SOCS6, and SOCS7. SOCS1 (Suppressor of cytokine signaling 1) also known as JAB (Janus kinase binding protein) , SSI-1 (Stat-induced Stat inhibitor-1) , Gene ID: 8651, NM_003745.2, NP_003736.1, and TIP3 (Tec-interacting protein 3) , is a cytokine-regulated SOCS family member that directly inhibits JAK family members through interaction within their kinase activation loop. In addition to inhibiting JAK / STAT signaling, SOCS1 can also negatively regulate Toll-like receptors that contribute to innate immunity.

[0006] Human FAS cell surface death receptor protein (Gene ID: 355, NM_000043.6, NP_000034.1) , also known as “FAS” or “CD95, ” is one of five tumor necrosis factor (TNF) superfamily death receptors. Human FAS can induce caspase-dependent apoptosis following engagement with its extracellular ligand (FAS ligand (FASL) ) . The FASL-FAS signaling-induced apoptotic pathway plays an important role in immune regulation, development of cancer, and progression of cancer. In addition, FASL-FAS signaling also has a role in the auto-regulatory circuit for CAR-engineered lymphocyte persistence.

[0007] β-2-Microglobulin (Gene ID: 567, NM_004048, NP_004039) , also known as “β2M” or “B2M” , is a component of the human leukocyte antigen (HLA) class I molecules found on the surface of nearly all nucleated cells. The B2M gene, which encodes β2M, is located on chromosome 15 (15q21.1) and consists of 4 exons. It encodes a 12 kDa protein. β2M associates non-covalently with the HLA class I heavy chain, enabling proper folding and stabilization of HLA class I. β2M-free HLA class I molecules are eventually degraded by proteasomes in the cytosol. Genetic ablation of the β2M gene eliminates surface HLA class I expression, reducing CD8+ T cell-mediated allogeneic responses.

[0008] The Class II transactivator gene (Gene ID: 4261, NM_001286402.1, NP_001273331.1) , encodes the Class II transactivator protein, which is also called “CIITA” . The CIITA gene is located on chromosome 16 (16p13.13) and has 19 exons. It encodes a 130 kDa protein. CIITA serves as a master regulator of HLA class II expression by recruiting and facilitating the assembly of DNA-binding proteins including the regulatory factor X (RFX) complex, cAMP response element-binding protein (CREB) , and nuclear factor Y (NF-Y) . Together, this complex enables HLA class II expression. Genetic ablation of the CIITA gene eliminates surface HLA class II expression, reducing CD4+ T cell-mediated allogeneic responses.

[0009] Allogeneic immune recognition and rejection remain obstacles in cellular transplantation and cell therapy development. A major cause of transplant rejection is HLA mismatch. To suppress these HLA mismatch-mediated responses, genetic ablation of HLA in iPSC-derived αβ T cells can be conducted.

[0010] Interferon-gamma receptor (IFNGR) is a cytokine receptor of interferon gamma (IFN-γ) . IFNGR comprises a heterodimer of interferon-gamma receptor 1 (IFNGR1) and interferon-gamma receptor 2 (IFNGR2) . IFN-γ can signal IFNGR-expressing cells, enabling the immunomodulatory effects of IFN-γ, including augmenting antigen presentation through both the MHC class I and class II pathways. CD132, also called “the common γ chain (γc) of interleukin-2 receptor” or “IL2RG, ” is a cytokine receptor subunit that is common to the cytokine receptor complexes of at least IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, and IL-21. Interleukin-2 receptor beta subunit, also known as “CD122” or “IL2RB, ” is a cytokine receptor subunit of the cytokine receptor complex of IL-2 (IL2R) . IL2R is a protein complex found on the surface of cells, including T cells, NK cells and other immune cells. IL-2 mediated IL2R signaling promotes the differentiation of T cells into effector T cells and memory T cells. IL-2 mediated IL2R signaling enables downstream signaling pathways through the Janus kinase (JAK)  / signal transducer and activator of transcription (STAT) pathway, e.g., STAT1, STAT5. Modulating these signaling pathways may, for example, be useful in treating diseases such as cancer by helping to promote killing of tumor cells by immune cells.

[0011] There remains an unmet need for therapeutic αβT-cells. Such modified cells would be useful in a variety of diagnostic and therapeutic settings, such as in the treatment of human disease and disorders.SUMMARY

[0012] The present inventors have herein demonstrated that genomic disruptions in 1) an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene; and 2) an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene, and optionally 3) an endogenous Bcl-2 Interacting Mediator of cell death (BIM) gene, and optionally 4) an endogenous FAS cell surface death receptor (FAS) gene, and optionally, 5) an endogenous β-2-Microglobulin (B2M) gene, and optionally 6) an endogenous class II transactivator (CIITA) gene in αβT (e.g., iPSC-derived αβT) cells confer enhanced cytotoxicity (including enhanced secretion of effector enzymes, e.g., Granzyme A and Granzyme B) and persistence, synergistic effect in enhancing cytokine release (e.g., IFN-γ) and / or increased survival in the αβT cells. The modified cells can be used for a variety of therapeutic and diagnostic purposes.

[0013] In some embodiments, the present disclosure provides a modified αβT cell (e.g., from primary αβT cell or differentiated from modified iPSC) , comprising a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein and a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein, which shows synergistic effects in enhancing cytokine (e.g., IFN-γ) release and better effects in promoting αβT persistence and / or enhanced αβT cytotoxicity (including enhanced secretion of effector enzymes, e.g., Granzyme A and Granzyme B) , compared with an unmodified control.

[0014] In some embodiments, the present disclosure provides a modified αβT (e.g., from primary αβT cell or differentiated from modified iPSC) , comprising a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell, showing better survival ability of αβT, compared with an unmodified control.

[0015] In some embodiments, the present disclosure provides a modified αβT (e.g., from primary αβT cell or differentiated from modified iPSC) , comprising (1) a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein, (2) a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein, and (3) a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell, showing synergistic effect in enhancing cytokine (e.g., IFN-γ) releasing, enhanced αβT persistence, enhanced αβT cytotoxicity and better survival ability of αβT cells, compared with an unmodified control.

[0016] In some embodiments, the present disclosure provides a modified αβT cell (e.g., from primary αβT cell or differentiated from modified iPSC) , comprising (1) a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein and a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein, and / or (2) a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of the BIMS splice variant is retained in the modified cell, optionally further comprising (a) a genomic disruption in an endogenous FAS cell surface death receptor (FAS) gene, optionally further comprising (b) a genomic disruption in an endogenous β-2-Microglobulin (B2M) gene, optionally further comprising (c) a genomic disruption in an endogenous Class II transactivator (CIITA) gene, optionally further comprising (d) one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, and optional further comprising (e) an exogenous polynucleotide ending a suicide switch, showing any one or more of the following features:(1) enhanced αβT persistence and / or enhanced αβT cytotoxicity (including enhanced secretion of effector enzymes, e.g., Granzyme A and Granzyme B) ;(2) enhanced survival ability of αβT;(3) enhanced durable killing (e.g., around 18 rounds of killing in one embodiment) ;(4) synergistic effect in enhancing cytokine (e.g., IFN-γ) release;(5) improved cell expansion;(6) reduced CRS-related cytokine release; and(7) allowing inducible cell death as a safety mechanism.

[0017] The present disclosure also provides a modified iPSC or an intermediate cell differentiated from iPSC having 1) a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1 and a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of CISH, and / or (2) a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of the BIMS splice variant is retained in the modified cell, optionally further comprising (a) a genomic disruption in an endogenous FAS cell surface death receptor (FAS) gene, optionally further comprising (b) a genomic disruption in an endogenous β-2-Microglobulin (B2M) gene, optionally further comprising (c) a genomic disruption in an endogenous Class II transactivator (CIITA) gene, and / or optionally further comprising (d) one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, which can be used for differentiation into the modified αβT cells.

[0018] In some aspects, the genomic modifications herein (e.g., a genomic disruption in SOCS1, a genomic disruption in CISH, a genomic disruption in BIM, a genomic disruption in FAS, and / or introduction of a signal converter) contribute to effector enhancement of αβ T cell, thereby providing a functionally augmented αβ T cell platform. In some aspects, the modified αβT cells are further combined with an exogenous recognition module, such as a chimeric antigen receptor, to enable antigen-specific target cell recognition and killing.

[0019] The above-mentioned modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC can serve as a platform cell for introduction of an antigen receptor, such as chimeric antigen receptor (CAR) or T cell receptor (TCR) .

[0020] The above-mentioned modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC can further comprise one or more exogenous polynucleotides encoding a TCR, e.g., a TCR specifically binding to KRAS G12V.

[0021] The above-mentioned modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC can further comprise an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) .

[0022] The above-mentioned modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC can further comprise an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19 and / or an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20.

[0023] The CAR incorporated in the modified αβT cell described herein functions to recognize tumor-associated antigens (TAAs) expressed on the surface of cancer cells.

[0024] In some embodiments, the present disclosure provides a modified αβT cell (e.g., from primary αβT cell or differentiated from modified iPSC) , comprising (a) an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) (e.g., anti-CD19 CAR and / or an anti-CD20 CAR) or a TCR; in combination with (b) any one or more of:(1) a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein and a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein; (2) a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of the BIMS splice variant is retained in the modified cell; (3) a genomic disruption in an endogenous FAS cell surface death receptor (FAS) gene; (4) a genomic disruption in an endogenous β-2-Microglobulin (B2M) gene; (5) a genomic disruption in an endogenous Class II transactivator (CIITA) gene; and (6) one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter,showing any one or more of the following features:(1) enhanced αβT persistence and / or enhanced αβT cytotoxicity (including enhanced secretion of effector enzymes, e.g., Granzyme A and Granzyme B) ;(2) enhanced survival ability of αβT;(3) enhanced durable killing (e.g., around 18 rounds of killing in one embodiment) ;(4) synergistic effect in enhancing cytokine (e.g., IFN-γ) release; and(5) improved cell expansion; and(6) reduced CRS-related cytokine release.

[0025] The present disclosure encompasses, inter alia, the following embodiments, among others disclosed herein.1. A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein and a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein.2. The modified cell of embodiment 1, wherein the genomic disruption in the endogenous SOCS1 gene is in exon 2 of the SOCS1 gene; optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.3. The modified cell of embodiment 1 or embodiment 2, wherein the genomic disruption in the endogenous CISH gene is in exon 3 or exon 4 of the CISH gene; optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.4. The modified cell of any one of embodiments 1-3, wherein the genomic disruption in the endogenous SOCS1 gene is within a target sequence in SOCS1 that comprises SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 23 and / or the genomic disruption in the endogenous CISH gene is within a target sequence in CISH that comprises SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 24.5. The modified cell of any one of embodiments 1-4, wherein the genomic disruption within SOCS1 and / or CISH is made by administering guide RNAs to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.6. The modified cell of embodiment 5, wherein the guide RNAs comprise the guide sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 5, 11, 3, 4, and 12, or comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 29, 37, 27, 28, and 38.7. The modified cell of embodiment 5 or embodiment 6, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 11, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 37; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 5, or comprise the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 29.8. The modified cell of embodiment 5 or embodiment 6, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 12, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 38; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 3 and 4, or comprise the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 27 and 28.9. The modified cell of any one of embodiments 1-8, further comprising a genomic disruption in an endogenous Bcl-2 Interacting Mediator of cell death (BIM) gene.10. The modified cell of embodiment 9, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is in exon 2C of the BIM gene.11. The modified cell of embodiment 9 or embodiment 10, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell.12. The modified cell of any one of embodiments 9-11, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is an inactivating nucleic acid mutation in an exon 2C of an endogenous BIM gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.13. The modified cell of any one of embodiments 9-12, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is within a target sequence in BIM that comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22.14. The modified cell of any one of embodiments 9-13, wherein the genomic disruption within BIM is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.15. The modified cell of embodiment 14, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 9, and 10, or comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, 35, and 36.16. The modified cell of embodiment 14 or embodiment 15, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 10, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, and 9, or comprises the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, and 35.17. The modified cell of any one of embodiments 1-16, further comprising a genomic disruption in an endogenous FAS cell surface death receptor (FAS) gene that suppresses or eliminates expression of a functional FAS protein.18. The modified cell of embodiment 17, wherein the genomic disruption in the FAS gene is in exon 1 of the FAS gene.19. The modified cell of embodiment 17 or embodiment 18, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 1 of an endogenous FAS gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.20. The modified cell of any one of embodiments 17-19, wherein the genomic disruption is within a target sequence in FAS that comprises SEQ ID NO: 62.21. The modified cell of any one of embodiments 17-20, wherein the genomic disruption within FAS is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.22. The modified cell of embodiment 21, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 61, or comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 60.23. The modified cell of any one of embodiments 1-22, further comprising a genomic disruption in an endogenous β-2-Microglobulin (B2M) gene that suppresses or eliminates expression of a functional B2M protein.24. The modified cell of embodiment 23, wherein the genomic disruption in the B2M gene is in exon 2 of the B2M gene.25. The modified cell of embodiment 23 or embodiment 24, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2 of an endogenous B2M gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.26. The modified cell of any one of embodiments 23-25, wherein the genomic disruption is within a target sequence in B2M that comprises SEQ ID NO: 56.27. The modified cell of any one of embodiments 23-26, wherein the genomic disruption within B2M is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.28. The modified cell of embodiment 27, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 55, or comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 54.29. The modified cell of any one of embodiments 1-28, further comprising a genomic disruption in an endogenous Class II transactivator (CIITA) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CIITA protein.30. The modified cell of embodiment 29, wherein the genomic disruption in the CIITA gene is in exon 3 of the CIITA gene.31. The modified cell of embodiment 29 or embodiment 30, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 3 of an endogenous CIITA gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.32. The modified cell of any one of embodiments 29-31, wherein the genomic disruption is within a target sequence in CIITA that comprises SEQ ID NO: 59.33. The modified cell of any one of embodiments 29-32, wherein the genomic disruption within CIITA is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.34. The modified cell of embodiment 33, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 58, or comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 57.35. The modified cell of any one of embodiments 1-34, further comprising a genomic disruption in an endogenous T-cell receptor alpha constant region (TRAC) gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRAC protein and / or a genomic disruption in an endogenous TRBC1 / 2 gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRBC1 / 2 protein.36. The modified cell of any one of embodiments 1-35, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.37. The modified cell of any one of embodiments 1-36, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, wherein the signal converter comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) .38. The modified cell of embodiment 37, wherein the amino acid sequence of ECD of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 63, and the amino acid sequence of ECD of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 64.39. The modified cell of embodiment 37 or embodiment 38, wherein the amino acid sequence of intracellular domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 69, and the amino acid sequence of intracellular domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 70.40. The modified cell of any one of embodiments 37-39, wherein the first fusion protein subunit further comprises a transmembrane domain between the ECD and the intracellular domain thereof, and the second fusion protein subunit further comprises a transmembrane domain between the ECD and the intracellular domain thereof.41. The modified cell of embodiment 40, wherein the transmembrane domain of the first fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit gamma, and the transmembrane domain of the second fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit beta.42. The modified cell of embodiment 41, wherein the amino acid sequence of transmembrane domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 67, and the amino acid sequence of transmembrane domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 68.43. The modified cell of any one of embodiments 37-42, wherein the first fusion protein subunit further comprises a membrane-proximal region between the ECD and the intracellular domain thereof, and the second fusion protein subunit further comprises a membrane-proximal region between the ECD and the intracellular domain thereof.44. The modified cell of embodiment 43, wherein the membrane-proximal region of the first fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit gamma, and the membrane-proximal region of the second fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit beta.45. The modified cell of embodiment 44, wherein the amino acid sequence of membrane-proximal region of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 65, and the amino acid sequence of membrane-proximal region of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 66.46. The modified cell of any one of embodiment 37-45, wherein a first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus.47. The modified cell of any one of embodiments 37-46, wherein a second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus.48. The modified cell of any one of embodiments 37-47, the first fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72; optionally the first exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 75, and the second exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 76.49. The modified cell of any one of embodiments 37-48, wherein the amino acid sequence of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 71, and the amino acid sequence of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 72.50. The modified cell of any one of embodiments 1-49, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a B2M-HLA-E fusion protein (B2M-HLA-E) comprising at least a portion of B2M fused with at least a portion of HLA-E.51. The modified cell of embodiment 50, wherein the exogenous polynucleotide encoding the B2M-HLA-E is inserted into a B2M locus.52. The modified cell of embodiment 50 or embodiment 51, wherein the B2M-HLA-E comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81.53. The modified cell of any one of embodiments 1-52, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a TCR, or further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding TCRαβ.54. The modified cell of embodiment 53, wherein the one or more exogenous polynucleotides encoding the TCRαβ are inserted into a TRAC locus.55. The modified cell of embodiment 53 or embodiment 54, wherein the TCRαβ specifically binds KRAS G12V.56. The modified cell of embodiment 55, wherein the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80; or the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and a βchain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.57. The modified cell of any one of embodiments 1-56, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a chimeric antigen receptor (CAR) , or further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19, or further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20.58. The modified cell of any one of embodiments 1-56, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19, and further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20.59. The modified cell of embodiment 57 or embodiment 58, wherein the exogenous polynucleotide encoding the CAR which specifically binds human CD19 is inserted into an AAVS1 locus.60. The modified cell of any one of embodiments 57-59, wherein the CAR which specifically binds human CD19 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 or SEQ ID NO: 94. 61. The modified cell of any one of embodiments 1-60, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a suicide switch, which comprises a herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) polypeptide or a functional variant thereof capable of inducing cell death upon administration of Ganciclovir (GCV) .62. The modified cell of embodiments 61, wherein the suicide switch comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85.63. The modified cell of embodiments 61 or embodiment 62, wherein the suicide switch is inserted into a Rogi2 locus, or wherein the suicide switch is inserted into a FAS locus.64. The modified cell of any one of embodiments 1-63, wherein the iPSC is derived from a primary T cell (T-iPSC) .65. The modified cell of any one of embodiments 1-64, wherein the iPSC is derived from a primary αβT cell (αβT-iPSC) .66. The modified cell of any one of embodiments 1-65, wherein the αβT cell is an iPSC-derived αβT (iαβT) cell.67. The modified cell of any one of embodiments 1-66, wherein the αβT cell is a αβT cell derived from a T-iPSC (T-iαβT) .68. The modified cell of any one of embodiments 1-67, wherein the αβT cell is a αβT cell differentiated from a αβT-iPSC (αβT-iαβT) .69. The modified cell of any one of embodiments 1-68, wherein the intermediate cell differentiated from the iPSC is a αβT-iHSC, a αβT-iCLP, and / or an immature T-iαβT cell.70. A population of cells comprising the modified cell of any one of embodiments 1-69.71. The population of cells of embodiment 70, frozen in storage at about -196 degrees Celsius.72. A method of generating a modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC comprising contacting the cell with guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease, wherein the contacting results in a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein and a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein.73. The method of embodiment 72, wherein the iPSC is derived from a primary T cell (T-iPSC) .74. The method of embodiment 72 or embodiment 73, wherein the iPSC is derived from a primary αβT cell (αβT-iPSC) .75. The method of any one of embodiments 72-74, wherein the αβT cell is an iPSC-derived αβT (iαβT) cell.76. The method of any one of embodiments 72-75, wherein the αβT cell is a αβT cell derived from a T-iPSC (T-iαβT) .77. The method of any one of embodiments 72-76, wherein the αβT cell is a αβT cell differentiated from a αβT-iPSC (αβT-iαβT) .78. The method of any one of embodiments 72-77, wherein the intermediate cell differentiated from the iPSC is a αβT-iHSC, a αβT-iCLP, and / or an immature T-iαβT cell.79. The method of any one of embodiments 72-78, wherein the genomic disruption is in exon 2 of the SOCS1 gene; optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.80. The method of any one of embodiments 72-79, wherein the genomic disruption is in exon 3 or exon 4 of the CISH gene; optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.81. The method of any one of embodiments 72-80, wherein the genomic disruption is within a target sequence in SOCS1 that comprises SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 23 and / or the genomic disruption is within a target sequence in CISH that comprises SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 24.82. The method of any one of embodiments 72-81, wherein the genomic disruption within SOCS1 and / or CISH is made by administering guide RNAs to said cell, and optionally wherein a Cas endonuclease or a nucleic acid encoding the Cas endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.83. The method of embodiment 82, wherein the guide RNAs comprise the guide sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 5, 11, 3, 4, and 12, or comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 29, 37, 27, 28, and 38.84. The method of embodiment 82 or embodiment 83, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 11, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 37; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 5, or comprise the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 29.85. The method of embodiment 82 or embodiment 83, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 12, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 38; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 3 and 4, or comprise the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 27 and 28.86. The method of any one of embodiments 72-85, further comprising inhibiting expression of an endogenous BIM gene by causing a genomic disruption in an endogenous BIM gene.87. The method of embodiment 86, wherein the genomic disruption in the BIM gene is in exon 2C of the BIM gene.88. The method of embodiment 86 or embodiment 87, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the cell.89. The method of any one of embodiments 86-88, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in an exon 2C of an endogenous BIM gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.90. The method of any one of embodiments 86-89, wherein the genomic disruption is within a target sequence in BIM that comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22.91. The method of any one of embodiments 86-90, wherein the genomic disruption within BIM is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.92. The method of embodiment 91, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 9, and 10, or comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, 35, and 36.93. The method of embodiment 91 or embodiment 92, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 10, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, and 9, or comprises the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, and 35.94. The method of any one of embodiments 72-93, further comprising inhibiting expression of an endogenous FAS gene by causing a genomic disruption in an endogenous FAS gene that suppresses or eliminates expression of a functional FAS protein.95. The method of embodiment 94, wherein the genomic disruption in the FAS gene is in exon 1 of the FAS gene.96. The method of embodiment 94 or embodiment 95, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 1 of an endogenous FAS gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.97. The method of any one of embodiments 94-96, wherein the genomic disruption is within a target sequence in FAS that comprises SEQ ID NO: 62.98. The method of any one of embodiments 94-97, wherein the genomic disruption within FAS is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.99. The method of embodiment 98, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 61, or comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 60.100. The method of any one of embodiments 72-99, further comprising inhibiting expression of an endogenous B2M gene by causing a genomic disruption in an endogenous B2M gene that suppresses or eliminates expression of a functional B2M protein.101. The method of embodiment 100, wherein the genomic disruption in the B2M gene is in exon 2 of the B2M gene.102. The method of embodiment 100 or embodiment 101, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2 of an endogenous B2M gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.103. The method of any one of embodiments 100-102, wherein the genomic disruption is within a target sequence in B2M that comprises SEQ ID NO: 56.104. The method of any one of embodiments 100-103, wherein the genomic disruption within B2M is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.105. The method of embodiment 104, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 55, or comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 54.106. The method of any one of embodiments 72-105, further comprising inhibiting expression of an endogenous CIITA gene by causing a genomic disruption in an endogenous CIITA gene that suppresses or eliminates expression of a functional CIITA protein.107. The method of embodiment 106, wherein the genomic disruption in the CIITA gene is in exon 3 of the CIITA gene.108. The method of embodiment 106 or embodiment 107, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 3 of an endogenous CIITA gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.109. The method of any one of embodiments 106-108, wherein the genomic disruption is within a target sequence in CIITA that comprises SEQ ID NO: 59.110. The method of any one of embodiments 106-109, wherein the genomic disruption within CIITA is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.111. The method of embodiment 110, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 58, or comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 57.112. The method of any one of embodiments 72-111, further comprising inhibiting expression of an endogenous TRAC gene by causing a genomic disruption in an endogenous TRAC gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRAC protein and / or inhibiting expression of an endogenous TRBC1 / 2 gene by causing a genomic disruption in an endogenous TRBC1 / 2 gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRBC1 / 2 protein.113. The method of any one of embodiments 72-112, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.114. The method of any one of embodiments 72-113, further comprising introducing one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter into the cell, wherein the signal converter comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) .115. The method of embodiment 114, wherein a first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus.116. The method of embodiment 114 or 115, wherein a second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus. 117. The method of any one of embodiments 114-116, the first fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72; optionally the first exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 75, and the second exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 76.118. The method of any one of embodiments 72-117, further comprising introducing an exogenous polynucleotide encoding a B2M-HLA-E fusion protein (B2M-HLA-E) comprising at least a portion of B2M fused with at least of a portion of HLA-E into the cell.119. The method of embodiment 118, wherein the exogenous polynucleotide encoding the B2M-HLA-E is inserted into a B2M locus.120. The method of any one of embodiments 118-119, wherein the B2M-HLA-E comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81.121. The method of any one of embodiments 72-120, further comprising introducing one or more exogenous polynucleotides encoding TCRαβ into the cell.122. The method of embodiment 121, wherein the one or more exogenous polynucleotides encoding the TCRαβ are inserted into a TRAC locus.123. The method of embodiment 121 or embodiment 122, wherein the one or more exogenous polynucleotides encode the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V.124. The method of embodiment 123, wherein the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80; or the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and a βchain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.125. The method of any one of embodiments 72-124, further comprising introducing an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19 or further comprising introducing an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20.126. The method of any one of embodiments 72-124, further comprising introducing an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19, and further comprising introducing an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20.127. The method of embodiment 125 or embodiment 126, wherein the exogenous polynucleotide encoding the CAR which specifically binds human CD19 is inserted into an AAVS1 locus.128. The method of any one of embodiments 125-127, wherein the CAR which specifically binds human CD19 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 or SEQ ID NO: 94.129. The method of any one of embodiments 72-128, further comprising introducing an exogenous polynucleotide encoding a suicide switch, which comprises a herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) polypeptide or a functional variant thereof capable of inducing cell death upon administration of Ganciclovir (GCV) .130. The method of embodiments 129, wherein the suicide switch comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85.131. The method of embodiments 129 or embodiment 130, wherein the suicide switch is inserted into a Rogi2 locus, or wherein the suicide switch is inserted into a FAS locus.132. A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control, and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell.133. The modified cell of embodiment 132, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in the exon 2C, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.134. The modified cell of embodiment 132 or embodiment 133, wherein the genomic disruption is within a target sequence in BIM that comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 20, 21, and 22.135. The modified cell of any one of embodiments 132-134, wherein the genomic disruption within BIM is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.136. The modified cell of embodiment 135, wherein the guide RNA comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 26, 34, 35 and 36, or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one or more of SEQ ID Nos: 2, 8, 9 and 10.137. The modified cell of embodiment 135 or embodiment 136, wherein the guide RNA comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36 or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 10, and the endonuclease is a MAD7 endonuclease.138. The modified cell of embodiment 135 or embodiment 136, wherein the guide RNA comprises the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 34, and 35, or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one of SEQ ID Nos: 2, 8, and 9, and the endonuclease is a Cas9 endonuclease.139. A method of inhibiting expression of an endogenous BIM gene in a iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising contacting the cell with a guide RNA and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease, wherein the contacting results in a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the cell.140. The method of embodiment 139, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in the exon 2C, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution, and optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.141. The method of embodiment 139 or embodiment 140, wherein the genomic disruption is within a target sequence in BIM that comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 20, 21, and 22.142. The method of any one of embodiments 139-141, wherein the guide RNA comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 26, 34, 35 and 36, or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one or more of SEQ ID Nos: 2, 8, 9 and 10.143. The method of any one of embodiments 139-142, wherein (1) the guide RNA comprises the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 2, 8, and 9, or comprises the sgRNA sequence of any one of SEQ ID Nos: 26, 34, and 35, and the endonuclease is a Cas9 endonuclease; or (2) the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 10, or comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36, and the endonuclease is a MAD7 endonuclease.144. The method of any one of embodiments 139-143, wherein the αβT cell is a αβT cell differentiated from a αβT-iPSC (αβT-iαβT) .145. The method of any one of embodiments 139-143, wherein the cell is generated from the method of any one of embodiments 72-131.146. A modified cell generated from the method of any one of embodiments 72-131 and embodiments 139-145.147. A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, wherein the signal converter comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) .148. The modified cell of embodiment 147, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding TCRαβ, optionally wherein the one or more exogenous polynucleotides encoding the TCRαβ is inserted into a TRAC locus, optionally wherein the TCRαβ specifically binds KRAS G12V, optionally wherein the TCRαβ comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, or the TCRαβ comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.149. The modified cell of embodiment 147 or embodiment 148, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19 and / or an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20, optionally wherein the exogenous polynucleotide encoding the CAR which specifically binds human CD19 is inserted into an AAVS1 locus, optionally wherein the CAR which specifically binds human CD19 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 or SEQ ID NO: 94.150. The modified cell of any one of embodiments 147-149, wherein the amino acid sequence of ECD of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 63, and the amino acid sequence of ECD of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 64.151. The modified cell of any one of embodiments 147-150, wherein the amino acid sequence of intracellular domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 69, and the amino acid sequence of intracellular domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 70.152. The modified cell of any one of embodiments 147-151, wherein the first fusion protein subunit further comprises a transmembrane domain between the ECD and the intracellular domain thereof, and the second fusion protein subunit further comprises a transmembrane domain between the ECD and the intracellular domain thereof.153. The modified cell of embodiment 152, wherein the transmembrane domain of the first fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit gamma, and the transmembrane domain of the second fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit beta.154. The modified cell of embodiment 153, wherein the amino acid sequence of transmembrane domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 67, and the amino acid sequence of transmembrane domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 68.155. The modified cell of any one of embodiments 147-154, wherein the first fusion protein subunit further comprises a membrane-proximal region between the ECD and the intracellular domain thereof, and the second fusion protein subunit further comprises a membrane-proximal region between the ECD and the intracellular domain thereof.156. The modified cell of embodiment 155, wherein the membrane-proximal region of the first fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit gamma, and the membrane-proximal region of the second fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit beta.157. The modified cell of embodiment 156, wherein the amino acid sequence of membrane-proximal region of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 65, and the amino acid sequence of membrane-proximal region of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 66.158. The modified cell of any one of embodiment 147-157, wherein a first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus.159. The modified cell of any one of embodiments 147-158, wherein a second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus.160. The modified cell of any one of embodiments 147-159, the first fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72; optionally the first exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 75, and the second exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 76.161. The modified cell of any one of embodiments 147-160, wherein the amino acid sequence of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 71, and the amino acid sequence of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 72.162. The modified cell or method of any one of the preceding embodiments, wherein the cell is a human cell.163. The modified cell or method of any one of the preceding embodiments, wherein the cell is in vivo, in vitro, ex vivo, or in a human subject.164. A gene editing system comprising one or more guide RNA and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease, wherein the one or more guide RNAs comprise one or more single guide RNA (sgRNA) or CRISPR RNA (crRNA) that comprises:a. a guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24;b. a guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22;c. a first guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 17 and 23; and a second guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 15, 16, and 24;d. a first guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 17 and 23; a second guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 15, 16, and 24; and a third guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22;e. a first guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 17 and 23; a second guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 15, 16, and 24; a third guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22; a fourth guide sequence that binds to a target sequence comprising SEQ ID NO: 56; and, a fifth guide sequence that binds to a target sequence comprising SEQ ID NO: 59;f. a first guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 17 and 23; a second guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 15, 16, and 24; a third guide sequence that binds to a target sequence comprising any one of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22; a sixth guide sequence that binds to a target sequence comprising SEQ ID NO: 62; a fourth guide sequence that binds to a target sequence comprising SEQ ID NO: 56; and a fifth guide sequence that binds to a target sequence comprising SEQ ID NO: 59;g. a guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 5 and 11;h. a sgRNA or crRNA sequence that comprises SEQ ID NO: 29 and 37;i. a guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 3, 4, and 12;j. a sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 27, 28, and 38;k. a guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 9, 10;l. a sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, 35, and 36;m. a first guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 5 and 11, and a second guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 3, 4, and 12;n. a first sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 29 and 37, and a second sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 27, 28, and 38;o. a first guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 5 and 11; a second guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 3, 4, and 12; and a third guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 9, and 10;p. a first sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 29 and 37; a second sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 27, 28, and 38; and a third sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, 35, and 36;q. a first guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 5, and 11; a second guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 3, 4, and 12; a third guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 9, and 10; a fourth guide sequence that comprises SEQ ID NO: 55; and, a fifth guide sequence that comprises SEQ ID NO: 58;r. a first sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 29 and 37; a second sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 27, 28, and 38; a third sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, 35, and 36; a fourth sgRNA sequence that comprises SEQ ID NO: 54; and, a fifth sgRNA sequence that comprises SEQ ID NO: 57;s. a first guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 5, and 11; a second guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 3, 4, and 12; a third guide sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 9, and 10; a sixth guide sequence that comprises SEQ ID NO: 61; a fourth guide sequence that comprises SEQ ID NO: 55; and, a fifth guide sequence that comprises SEQ ID NO: 58; ort. a first sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 29 and 37; a second sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 27, 28, and 38; a third sgRNA or crRNA sequence that comprises any one of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, 35, and 36; a sixth sgRNA sequence that comprises SEQ ID NO: 60; a fourth sgRNA sequence comprises SEQ ID NO: 54; and, a fifth sgRNA sequence that comprises SEQ ID NO: 57.165. The gene editing system of embodiment 164, wherein the endonuclease is a Cas endonuclease.166. The gene editing system of embodiment 165, wherein the Cas endonuclease is a MAD7 endonuclease.167. The gene editing system of embodiment 166, wherein:a. the target sequence comprises SEQ ID NO: 22; and / orb. the crRNA comprises a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 10.168. The gene editing system of embodiment 166, wherein:a. the target sequence comprises SEQ ID NO: 23; and / orb. the crRNA comprises a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 11.169. The gene editing system of embodiment 166, wherein:a. the target sequence comprises SEQ ID NO: 24; and / orb. the crRNA comprises a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 12.170. The gene editing system of embodiment 165, wherein the Cas endonuclease is a Cas9 endonuclease.171. The gene editing system of embodiment 170, wherein:a. the target sequence comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, and 21; and / orb. the sgRNA comprises a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, and 9.172. The gene editing system of embodiment 170, wherein:a. the target sequence comprises SEQ ID NO: 17; and / orb. the sgRNA comprises a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 5.173. The gene editing system of embodiment 170, wherein:a. the target sequence comprises SEQ ID NOs: 15 or 16; and / orb. the sgRNA comprises a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NOs: 3 or 4.174. The gene editing system of embodiment 170, wherein:a. the target sequence comprises SEQ ID NO: 62; and / orb. the sgRNA comprises a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 61.175. The gene editing system of embodiment 170, wherein:a. the target sequence comprises SEQ ID NO: 56; and / orb. the sgRNA comprises a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 55.176. The gene editing system of embodiment 170, wherein:a. the target sequence comprises SEQ ID NO: 59; and / orb. the sgRNA comprises a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 58.177. A guide RNA comprising SEQ ID NO: 5 (SOCS1) , SEQ ID NO: 29 (SOCS1) , SEQ ID NO: 11 (SOCS1) , SEQ ID NO: 37 (SOCS1) , SEQ ID NO: 27 (CISH) , SEQ ID NO: 28 (CISH) , SEQ ID NO: 12 (CISH) , SEQ ID NO: 38 (CISH) , SEQ ID NO: 6 (BIM) , SEQ ID NO: 32 (BIM) , SEQ ID NO: 7 (BIM) , SEQ ID NO: 33 (BIM) , SEQ ID NO: 8 (BIM) , SEQ ID NO: 34 (BIM) , SEQ ID NO: 9 (BIM) , SEQ ID NO: 35 (BIM) , SEQ ID NO: 10 (BIM) , or SEQ ID NO: 36 (BIM) .178. A guide RNA comprising a CRISPR RNA (crRNA) sequence, wherein the crRNA sequence comprises a 2'-O-Methyl modification at each of the first three positions on the 5’ end and at each of the fourth to last, third to last, and second to last positions of the crRNA sequence on the 3’ end, and a phosphorothioate linkage between each base in the first three positions on the 5’ end and a phosphorothioate linkage between each base of the last three positions of the crRNA sequence at the 3’ end.179. The guide RNA of embodiment 178, wherein the guide RNA functions with a MAD7 endonuclease.180. The guide RNA of any one of embodiments 178-179, wherein the crRNA is about 56 bases long.181. The guide RNA of any one of embodiments 178-180, wherein the crRNA sequence comprises a 2'-O-Methyl modification at each of positions 1, 2, 3, 53, 54, and 55 of the crRNA sequence on the 3’ end.182. The guide RNA of any one of embodiments 178-181, wherein the crRNA comprises SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, or SEQ ID NO: 38, including its modifications.183. The guide RNA of any one of embodiments 178-182, wherein the last base of the crRNA is modified, but not with 2'-O-Methyl modification.184. The guide RNA of any one of embodiments 178-183, wherein the modification on the last base of the crRNA is a pseudoknot.185. The guide RNA of any one of embodiments 178-184, wherein the modification on the last base of the crRNA is a modification that facilitates use with MAD7.186. A gene editing system comprising one or more guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease, wherein the one or more guide RNAs comprise one or more guide sequences that binds to a target sequence in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein upon administering the gene editing system to a cell, the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the cell relative to that in an unmodified control, and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained, optionally the targe sequence comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 20, 21, and 22.187. The gene editing system of embodiment 186, wherein (1) the endonuclease is a MAD7 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36 or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 10; or (2) the endonuclease is a Cas9 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 34, and 35, or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one of SEQ ID NOs: 2, 8, and 9.188. A gene editing system comprising one or more guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease, wherein the one or more guide RNAs comprise one or more guide sequences which binds to a target sequence in CISH gene that comprises SEQ ID NO: 24; wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 38 or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 12.189. A gene editing system comprising one or more guide RNA and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease, wherein (1) the one or more guide RNAs comprise one or more guide sequences which binds to a target sequence in SOCS1 gene that comprises SEQ ID NO: 23; wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 37 or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 11; or (2) the one or more guide RNAs comprise one or more guide sequences which binds to a target sequence in SOCS1 gene that comprises SEQ ID NO: 17, the endonuclease is a Cas9 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 29, or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 5.190. A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, generated by any of the following:i) contacting the cell with the gene editing system of any one of embodiments 164-176 and 186-189, wherein the contacting results in a genomic disruption in a target sequence that binds to the single guide RNA(sgRNA) of the gene editing system; orii) contacting the cell with the guide RNA of any one of embodiments 177-185 and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease,wherein the contacting results in a genomic disruption in a target sequence that binds to the guide RNA of embodiment 177; and wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.191. A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising a genomic disruption in a target sequence of an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein, wherein the target sequence comprises SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 23.192. The modified cell of embodiment 191, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.193. The modified cell of embodiment 191 or embodiment 192, wherein the genomic disruption within SOCS1 is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell; optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.194. The modified cell of embodiment 193, wherein the guide RNA comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 29 and 37, or comprises the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 5 or 11.195. The modified cell of embodiment 193 or embodiment 194, wherein the guide RNA comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 37 or comprises the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 11, and the endonuclease is a MAD7 endonuclease.196. The modified cell of embodiment 193 or embodiment 194, wherein the guide RNA comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 29 or comprises the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 5, and the endonuclease is a Cas9 endonuclease.197. A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising a genomic disruption in a target sequence of an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, wherein the target sequence comprises SEQ ID NO: 24.198. The modified cell of embodiment 197, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.199. The modified cell of embodiment 197 or embodiment 198, wherein the genomic disruption within CISH is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell; optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.200. The modified cell of embodiment 199, wherein the guide RNA comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 38 or comprises the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 12.201. The modified cell of embodiment 199 or embodiment 200, wherein the guide RNA comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 38 or comprises the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 12, and the endonuclease is a MAD7 endonuclease.202. The modified cell of any one of embodiments 191-201, wherein the iPSC is derived from a primary T cell (T-iPSC) .203. The modified cell of any one of embodiments 191-202, wherein the iPSC is derived from a primary αβT cell (αβT-iPSC) .204. The modified cell of any one of embodiments 191-203, wherein the αβT cell is an iPSC-derived αβT (iαβT) cell.205. The modified cell of any one of embodiments 191-204, wherein the αβT cell is a αβT cell differentiated from a T-iPSC (T-iαβT) .206. The modified cell of any one of embodiments 191-205, wherein the αβT cell is an αβT cell differentiated from a αβT-iPSC (αβT-iαβT) .207. The modified cell of any one of embodiments 191-206, wherein the intermediate cell differentiated from the iPSC is a αβT-iHSC, a αβT-iCLP, and / or an immature T-iαβT cell.208. The modified cell of any one of embodiments 191-207, wherein the cell is a human cell.209. The modified cell any one of embodiments 191-208, wherein the cell is in vivo, in vitro, ex vivo, or in a human subject.210. A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising 1) an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19 and / or an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20, 2) a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein, and 3) a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein.211. The modified cell of embodiment 210, further comprising a genomic disruption in an endogenous Bcl-2 Interacting Mediator of cell death (BIM) gene.212. The modified cell of embodiment 211, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is in exon 2C of the BIM gene.213. The modified cell of embodiment 212, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell.214. The modified cell of any one of embodiments 211-213, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2C of the endogenous BIM gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.215. The modified cell of any one of embodiments 211-214, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is within a target sequence in BIM that comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22.216. The modified cell of any one of embodiments 211-215, wherein the genomic disruption within BIM is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.217. The modified cell of embodiment 216, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 9, and 10, or comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, 35, and 36.218. The modified cell of embodiment 216 or embodiment 217, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 10, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, and 9, or comprises the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, and 35.219. A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising 1) an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19 and / or an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20, 2) a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein, 3) a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein, and 4) a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell.220. The modified cell of embodiment 219, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is an inactivating nucleic acid mutation in the exon 2C of the BIM gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.221. The modified cell of embodiment 219 or embodiment 220, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is within a target sequence in BIM that comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 20, 21, and 22.222. The modified cell of any one of embodiments 219-221, wherein the genomic disruption within BIM is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.223. The modified cell of embodiment 222, wherein the guide RNA comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 34, 35, and 36, or comprises the guide sequence of any one of SEQ ID Nos: 2, 8, 9 and 10.224. The modified cell of embodiment 222 or embodiment 223, wherein the guide RNA comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36 or comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 10, and the endonuclease is a MAD7 endonuclease.225. The modified cell of embodiment 222 or embodiment 223, wherein the guide RNA comprises the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 34, and 35, or comprises the guide sequence of any one of SEQ ID Nos: 2, 8, and 9, and the endonuclease is a Cas9 endonuclease.226. The modified cell of any one of embodiments 210-225, wherein the exogenous polynucleotide encoding the CAR which specifically binds human CD19 is inserted into an AAVS1 locus.227. The modified cell of any one of embodiments 210-226, wherein the CAR which specifically binds human CD19 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 or SEQ ID NO: 94.228. The modified cell of any one of embodiments 210-227, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding TCRαβ.229. The modified cell of embodiment 228, wherein the one or more exogenous polynucleotides encoding the TCRαβ is inserted into a TRAC locus.230. The modified cell of any one of embodiments 228-229, wherein the TCRαβ specifically binds KRAS G12V; and optionally wherein the TCRαβ comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80; or optionally wherein the TCRαβ comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.231. The modified cell of any one of embodiments 210-230, wherein the genomic disruption in the endogenous SOCS1 gene is in exon 2 of the SOCS1 gene; optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.232. The modified cell of any one of embodiments 210-231, wherein the genomic disruption in the endogenous CISH gene is in exon 3 or exon 4 of the CISH gene; optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.233. The modified cell of any one of embodiments 210-232, wherein the genomic disruption in the endogenous SOCS1 gene is within a target sequence in SOCS1 that comprises SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 23 and / or the genomic disruption in the endogenous CISH gene is within a target sequence in CISH that comprises SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 24.234. The modified cell of any one of embodiments 210-233, wherein the genomic disruption within SOCS1 and / or CISH is made by administering guide RNAs to said cell, , and wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease.235. The modified cell of embodiment 234, wherein the guide RNAs comprise the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 29, 37, 27, 28, and 38, or comprises the guide sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 5, 11, 3, 4, and 12.236. The modified cell of embodiment 234 or embodiment 235, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 11, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 37; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 5, or comprise the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 29.237. The modified cell of embodiment 234 or embodiment 235, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 12, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 38; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 3 and 4, or comprise the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 27 and 28.238. The modified cell of any one of embodiments 210-237, further comprising a genomic disruption in an endogenous FAS cell surface death receptor (FAS) gene that suppresses or eliminates expression of a functional FAS protein.239. The modified cell of embodiment 238, wherein the genomic disruption in the FAS gene is in exon 1 of the FAS gene.240. The modified cell of embodiment 238 or embodiment 239, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 1 of an endogenous FAS gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.241. The modified cell of any one of embodiments 238-240, wherein the genomic disruption is within a target sequence in FAS that comprises SEQ ID NO: 62.242. The modified cell of any one of embodiments 238-241, wherein the genomic disruption within FAS is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.243. The modified cell of embodiment 242, wherein the guide RNA comprises SEQ ID NO: 60 or comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 61.244. The modified cell of any one of embodiments 210-243, further comprising a genomic disruption in an endogenous β-2-Microglobulin (B2M) gene that suppresses or eliminates expression of a functional B2M protein.245. The modified cell of embodiment 244, wherein the genomic disruption in the B2M gene is in exon 2 of the B2M gene.246. The modified cell of embodiment 244 or embodiment 245, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2 of an endogenous B2M gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.247. The modified cell of any one of embodiments 244-246, wherein the genomic disruption is within a target sequence in B2M that comprises SEQ ID NO: 56.248. The modified cell of any one of embodiments 244-247, wherein the genomic disruption within B2M is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.249. The modified cell of embodiment 248, wherein the guide RNA comprises SEQ ID NO: 54 or comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 55.250. The modified cell of any one of embodiments 210-249, further comprising a genomic disruption in an endogenous Class II transactivator (CIITA) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CIITA protein.251. The modified cell of embodiment 250, wherein the genomic disruption in the CIITA gene is in exon 3 of the CIITA gene.252. The modified cell of embodiment 250 or embodiment 251, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 3 of an endogenous CIITA gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.253. The modified cell of any one of embodiments 250-252, wherein the genomic disruption is within a target sequence in CIITA that comprises SEQ ID NO: 59.254. The modified cell of any one of embodiments 250-253, wherein the genomic disruption within CIITA is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.255. The modified cell of embodiment 254, wherein the guide RNA comprises SEQ ID NO: 57 or comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 58.256. The modified cell of any one of embodiments 210-255, further comprising a genomic disruption in an endogenous T-cell receptor alpha constant region (TRAC) gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRAC protein and / or a genomic disruption in an endogenous TRBC1 / 2 gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRBC1 / 2 protein.257. The modified cell of any one of embodiments 210-256, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.258. The modified cell of any one of embodiments 210-257, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, wherein the signal converter comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) .259. The modified cell of embodiment 258, wherein a first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus.260. The modified cell of embodiment 258 or embodiment 259, wherein a second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus.261. The modified cell of any one of embodiments 258-260, the first fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72; optionally the first exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 75, and the second exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 76.262. The modified cell of any one of embodiments 258-261, wherein the amino acid sequence of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 71, and the amino acid sequence of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 72.263. The modified cell of any one of embodiments 210-262, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a B2M-HLA-E fusion protein (B2M-HLA-E) comprising at least a portion of B2M fused with at least a portion of HLA-E.264. The modified cell of embodiment 263, wherein the exogenous polynucleotide encoding the B2M-HLA-E is inserted into a B2M locus.265. The modified cell of embodiment 263 or embodiment 264, wherein the B2M-HLA-E comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81.266. The modified cell of any one of embodiments 210-265, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a suicide switch, which comprises a herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) polypeptide or a functional variant thereof capable of inducing cell death upon administration of Ganciclovir (GCV) .267. The modified cell of embodiments 266, wherein the suicide switch comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85.268. The modified cell of embodiments 266 or embodiment 267, wherein the suicide switch is inserted into a Rogi2 locus, or wherein the suicide switch is inserted into a FAS locus.269. The modified cell of any one of embodiments 210-268, wherein the iPSC is derived from a primary T cell (T-iPSC) .270. The modified cell of any one of embodiments 210-269, wherein the iPSC is derived from a primary αβT cell (αβT-iPSC) .271. The modified cell of any one of embodiments 210-270, wherein the αβT cell is an iPSC-derived αβT (iαβT) cell.272. The modified cell of any one of embodiments 210-271, wherein the αβT cell is a αβT cell derived from a T-iPSC (T-iαβT) .273. The modified cell of any one of embodiments 210-272, wherein the αβT cell is a αβT cell differentiated from a αβT-iPSC (αβT-iαβT) .274. The modified cell of any one of embodiments 210-273, wherein the intermediate cell differentiated from the iPSC is a αβT-iHSC, a αβT-iCLP, and / or an immature T-iαβT cell.275. A pharmaceutical composition comprising the modified αβT cell of any one of embodiments 210-274 and a pharmaceutically acceptable carrier.276. A method of killing B cells which are CD19 positive and / or CD20 positive and have abnormal B cell function, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the modified αβT cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275.277. The method of embodiment 276, wherein the B cells are the CD19 positive B cells in B‐cell Acute Lymphoblastic Leukemia (B-ALL) patients.278. A method of treating B-ALL, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the modified αβT cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275.279. The modified αβT cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275 for use in therapy.280. The modified αβT cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275 for use in treatment of B-ALL.281. Use of the modified cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275 in the manufacturing of a medicament for treatment of B-ALL.282. A method of killing cancer cells which are KRAS G12V positive, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the modified αβT cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275.283. A method of treating colorectal cancer with KRAS G12V, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the modified αβT cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275.284. The modified αβT cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275 for use in therapy.285. The modified αβT cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275 for use in treatment of colorectal cancer with KRAS G12V.286. Use of the modified cell of any one of embodiments 210-274 or the pharmaceutical composition of embodiment 275 in the manufacturing of a medicament for treatment of colorectal cancer with KRAS G12V.287. A method of generating the modified αβT cell of any one of embodiments 210-274, comprising (i) generating the modified iPSC cell of any one of embodiments 210-274, optionally, according to the method of any one of embodiments 72-131, and (ii) differentiating the modified iPSC cell into the modified αβT cell.288. A method of generating the modified αβT cell of any one of embodiments 1-69, comprising (i) generating the modified iPSC cell of any one of embodiments 1-69, optionally, according to the method of any one of embodiments 72-131, and (ii) differentiating the modified iPSC cell into the modified αβT cell.289. The method of any one of embodiments 72-131 and embodiments 139-145, further comprising differentiating the modified iPSC generated from the method of any one of embodiments 72-131 and embodiments 139-145, into the modified αβT cell.

[0026] Also, the present disclosure encompasses, inter alia, the following embodiments, among others disclosed herein.

[0027] Embodiment 301: A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control, and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell.

[0028] Embodiment 302: The modified cell of embodiment 301, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in the exon 2C, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.

[0029] Embodiment 303: The modified cell of embodiment 301 or embodiment 302, wherein the genomic disruption is within a target sequence in BIM that comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 20, 21, and 22.

[0030] Embodiment 304: The modified cell of any one of embodiments 301-303, wherein the genomic disruption within BIM is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.

[0031] Embodiment 305: The modified cell of embodiment 304, wherein the guide RNA comprises any one of SEQ ID NOs: 26, 34, 35 and 36, or a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one of SEQ ID Nos: 2, 8, 9 and 10.

[0032] Embodiment 306: The modified cell of embodiment 304 or embodiment 305, wherein the guide RNA comprises SEQ ID NO: 36 or a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 10, and the endonuclease is a MAD7 endonuclease.

[0033] Embodiment 307: The modified cell of embodiment 304 or embodiment 305, wherein the guide RNA comprises any one of SEQ ID NOs: 26, 34, and 35, or a guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one of SEQ ID Nos: 2, 8, and 9, and the endonuclease is a Cas9 endonuclease.

[0034] Embodiment 308: The modified cell of any one of embodiments 301-307, comprising a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein and / or a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein.

[0035] Embodiment 309: The modified cell of embodiment 308, wherein the genomic disruption is in exon 2 of the SOCS1 gene; optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.

[0036] Embodiment 310: The modified cell of embodiment 308 or embodiment 309, wherein the genomic disruption is in exon 3 or exon 4 of the CISH gene; optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.

[0037] Embodiment 311: The modified cell of any one of embodiments 308-310, wherein the genomic disruption is within a target sequence in SOCS1 that comprises SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 23 and / or the genomic disruption is within a target sequence in CISH that comprises SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 24.

[0038] Embodiment 312: The modified cell of any one of embodiments 308-311, wherein the genomic disruption within SOCS1 and CISH is made by administering guide RNAs to said cell, optionally wherein the guide RNAs are single-guide RNAs (sgRNAs) or crRNAs, and wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.

[0039] Embodiment 313: The modified cell of embodiment 312, wherein the guide RNAs comprise the guide sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 5, 11, 3, 4, and 12, or comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 29, 37, 27, 28, and 38.

[0040] Embodiment 314: The modified cell of any one of embodiments 301-313, further comprising a genomic disruption in an endogenous FAS cell surface death receptor (FAS) gene that suppresses or eliminates expression of a functional FAS protein.

[0041] Embodiment 315: The modified cell of embodiment 314, wherein the genomic disruption in the FAS gene is in exon 1 of the FAS gene.

[0042] Embodiment 316: The modified cell of embodiment 314 or embodiment 315, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 1 of an endogenous FAS gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.

[0043] Embodiment 317: The modified cell of any one of embodiments 314-316, wherein the genomic disruption is within a target sequence in FAS that comprises SEQ ID NO: 62.

[0044] Embodiment 318: The modified cell of any one of embodiments 314-317, wherein the genomic disruption within FAS is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.

[0045] Embodiment 319: The modified cell of embodiment 318, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 61, or comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 60.

[0046] Embodiment 320: The modified cell of any one of embodiments 301-319, further comprising a genomic disruption in an endogenous β-2-Microglobulin (B2M) gene that suppresses or eliminates expression of a functional B2M protein.

[0047] Embodiment 321: The modified cell of embodiment 320, wherein the genomic disruption in the B2M gene is in exon 2 of the B2M gene.

[0048] Embodiment 322: The modified cell of embodiment 320 or embodiment 321, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2 of an endogenous B2M gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.

[0049] Embodiment 323: The modified cell of any one of embodiments 320-322, wherein the genomic disruption is within a target sequence in B2M that comprises SEQ ID NO: 56.

[0050] Embodiment 324: The modified cell of any one of embodiments 320-323, wherein the genomic disruption within B2M is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.

[0051] Embodiment 325: The modified cell of embodiment 324, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 55, or comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 54.

[0052] Embodiment 326: The modified cell of any one of embodiments 301-325, further comprising a genomic disruption in an endogenous Class II transactivator (CIITA) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CIITA protein.

[0053] Embodiment 327: The modified cell of embodiment 326, wherein the genomic disruption in the CIITA gene is in exon 3 of the CIITA gene.

[0054] Embodiment 328: The modified cell of embodiment 326 or embodiment 327, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 3 of an endogenous CIITA gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.

[0055] Embodiment 329: The modified cell of any one of embodiments 326-328, wherein the genomic disruption is within a target sequence in CIITA that comprises SEQ ID NO: 59.

[0056] Embodiment 330: The modified cell of any one of embodiments 326-329, wherein the genomic disruption within CIITA is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell.

[0057] Embodiment 331: The modified cell of embodiment 330, wherein the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 58, or comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 57.

[0058] Embodiment 332: The modified cell of any one of embodiments 301-331, further comprising a genomic disruption in an endogenous T-cell receptor alpha constant region (TRAC) gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRAC protein and / or a genomic disruption in an endogenous TRBC1 / 2 gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRBC1 / 2 protein.

[0059] Embodiment 333: The modified cell of any one of embodiments 301-332, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.

[0060] Embodiment 334: The modified cell of any one of embodiments 301-333, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, wherein the signal converter comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) .

[0061] Embodiment 335: The modified cell of embodiment 334, wherein the amino acid sequence of ECD of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 63, and the amino acid sequence of ECD of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 64.

[0062] Embodiment 336: The modified cell of embodiment 334 or embodiment 335, wherein the amino acid sequence of intracellular domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 69, and the amino acid sequence of intracellular domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 70.

[0063] Embodiment 337: The modified cell of any one of embodiments 334-336, wherein the first fusion protein subunit further comprises a transmembrane domain between the ECD and the intracellular domain thereof, and the second fusion protein subunit further comprises a transmembrane domain between the ECD and the intracellular domain thereof.

[0064] Embodiment 338: The modified cell of embodiment 337, wherein the transmembrane domain of the first fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit gamma, and the transmembrane domain of the second fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit beta.

[0065] Embodiment 339: The modified cell of embodiment 338, wherein the amino acid sequence of transmembrane domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 67, and the amino acid sequence of transmembrane domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 68.

[0066] Embodiment 340: The modified cell of any one of embodiments 334-339, wherein the first fusion protein subunit further comprises a membrane-proximal region between the ECD and the intracellular domain thereof, and the second fusion protein subunit further comprises a membrane-proximal region between the ECD and the intracellular domain thereof.

[0067] Embodiment 341: The modified cell of embodiment 340, wherein the membrane-proximal region of the first fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit gamma, and the membrane-proximal region of the second fusion protein subunit is of the interleukin-2 receptor subunit beta.

[0068] Embodiment 342: The modified cell of embodiment 341, wherein the amino acid sequence of membrane-proximal region of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 65, and the amino acid sequence of membrane-proximal region of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 66.

[0069] Embodiment 343: The modified cell of any one of embodiment 334-342, wherein a first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus.

[0070] Embodiment 344: The modified cell of any one of embodiments 334-343, wherein a second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus.

[0071] Embodiment 345: The modified cell of any one of embodiments 334-344, the first fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72; optionally the first exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 75, and the second exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 76.

[0072] Embodiment 346: The modified cell of any one of embodiments 334-345, wherein the amino acid sequence of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 71, and the amino acid sequence of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 72.

[0073] Embodiment 347: The modified cell of any one of embodiments 301-346, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a B2M-HLA-E fusion protein (B2M-HLA-E) comprising at least a portion of B2M fused with at least of a portion of HLA-E.

[0074] Embodiment 348: The modified cell of embodiment 347, wherein the exogenous polynucleotide encoding the B2M-HLA-E is inserted into a B2M locus.

[0075] Embodiment 349: The modified cell of embodiment 347 or embodiment 348, wherein the B2M-HLA-E comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81.

[0076] Embodiment 350: The modified cell of any one of embodiments 301-349, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding TCRαβ.

[0077] Embodiment 351: The modified cell of embodiment 350, wherein the one or more exogenous polynucleotides encoding the TCRαβ are inserted into a TRAC locus.

[0078] Embodiment 352: The modified cell of embodiment 350 or embodiment 351, wherein the one or more exogenous polynucleotides encode the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V.

[0079] Embodiment 353: The modified cell of embodiment 352, wherein the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80; or the TCRαβwhich specifically binds KRAS G12V comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.

[0080] Embodiment 354: The modified cell of any one of embodiment 301-353, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19 or further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20.

[0081] Embodiment 355: The modified cell of any one of embodiments 301-353, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19, and further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20.

[0082] Embodiment 356: The modified cell of embodiment 354 or embodiment 355, wherein the exogenous polynucleotide encoding the CAR which specifically binds human CD19 is inserted into an AAVS1 locus.

[0083] Embodiment 356: The modified cell of any one of embodiments 354-356, wherein the CAR which specifically binds human CD19 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 or SEQ ID NO: 94.

[0084] Embodiment 357: The modified cell of any one of embodiments 301-356, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a suicide switch, which comprises a herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) polypeptide or a functional variant thereof capable of inducing cell death upon administration of Ganciclovir (GCV) .

[0085] Embodiment 358: The modified cell of embodiments 357, wherein the suicide switch comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85.

[0086] Embodiment 359: The modified cell of embodiments 357 or embodiment 358, wherein the suicide switch is inserted into a Rogi2 locus, or wherein the suicide switch is inserted into a FAS locus.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0087] Figure 1 shows the knockout efficiency of candidate genes (CISH, SOCS1, BIM and FAS) in KRAS G12V TCR T-iαβT (iPSC-derived αβT) cells examined by Western blotting.

[0088] Figure 2 shows the better effects of CISH- / -SOCS1- / -double knockout (DKO) and BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -triple knockout (TKO) KRAS G12V TCR T-iαβT cells in enhanced cytotoxicity and / or persistence against HLA-A11-SW620 cells compared with single KO. Figure 2 shows the serial killing ability of CISH- / -single knockout (SKO) , SOCS1- / -SKO, CISH- / -SOCS1- / -DKO, and BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -TKO KRAS G12V TCR T-iαβT against HLA-A11-SW620 cells at a 4: 1 effector: target (E: T) ratio in the presence of IL-2 (0.1 ng / mL) monitored by the  SX5 live-cell analysis system.

[0089] Figure 3 shows the enhanced IFN-γ secretion in CISH- / -SOCS1- / -double knockout (DKO) and BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -triple knockout (TKO) KRAS G12V TCR T-iαβT cells post the 1st round of serial killing against HLA-A11 SW620 cells compared with control and single gene knockout KRAS G12V TCR T-iαβT cells. The concentration of IFN-γ in the culture supernatants post co-culturing with SW620 cells was quantified using the  IFN-γ (Human) Immunoassay Kit.

[0090] Figure 4 shows prolonged survival of KRAS G12V TCR T-iαβT cells with a BIMEL and BIML deficiency (knockout by BIM sgRNA#5 (SEQ ID NO: 26) ) or of BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -TKO KRAS G12V TCR T-iαβT cells, in which the BIM- / -modification has a BIMEL and BIML deficiency, post IL-2 deprivation for 2-8 days, in which the experimental IL-2 levels were 0 ng / mL and 0.1 ng / mL.

[0091] Figures 5A-5C show that the BIM short splice variant (BIMS) is necessary for T-iαβT cell survival post IL-15 deprivation. Figure 5A is the schematic representation of BIM gene structure, and there are three main splice variants expressed in T-iαβT cells. Figure 5B shows a knockout of BIM splice variants with different BIM sgRNAs (BIM#5 (SEQ ID NO: 26) , #9 (SEQ ID NO: 32) , #19 (SEQ ID NO: 33) or #25 (SEQ ID NO: 35) ) , as demonstrated by Western blotting. Figure 5C shows knockout of BIMEL and BIML splice variants with BIM sgRNA#5 (SEQ ID NO: 26) and #25 (SEQ ID NO: 35) (retaining BIMS) exhibited prolonged survival when T-iαβT cells were cultured at 0, 0.05 and 0.3 ng / mL IL-15 concentration condition.

[0092] Figures 6A-6C show the editing efficiency of CISH crRNA (CRISPR RNA) using CRISPR / MAD7-mediated gene editing. Figure 6A shows the insertion-deletion (indel) percentages (ICEd) of the control and CISH crRNA samples calculated by ICE analysis. Data presented as mean ± SD. Figure 6B shows a representative screenshot of the Sanger sequencing chromatogram demonstrating the indel formation after CRISPR / MAD7-mediated gene editing at the CISH locus. The shaded area indicates the targeting site after indel formation by CISH crRNA. Figure 6C shows the summary chart of single clone selection and analysis for CISH edited cells.

[0093] Figures 7A-7D show the editing efficiency of SOCS1 crRNA using CRISPR / MAD7-mediated gene editing. Figure 7A shows the indel percentages (ICEd) of the control and SOCS1 crRNA samples calculated by ICE analysis. Data are presented as mean ± SD. Figure 7C shows a representative screenshot of the Sanger sequencing result demonstrating the indel formation after CRISPR / MAD7-mediated gene editing at the SOCS1 locus. The shaded area indicates the targeting site after indel formation by SOCS1 crRNA. Figure 7D shows the summary chart of single clone selection and analysis for SOCS1 edited cells. Figure 7B shows the western blot analysis of SOCS1 protein depletion in two SOCS1 homozygous knockout clones (#13 and #36) .

[0094] Figures 8A-8D show the editing efficiency of BIM crRNA using CRISPR / MAD7-mediated gene editing. Figure 8A shows the indel percentages (ICEd) of the control and BIM crRNA samples calculated by ICE analysis. Data are presented as mean ± SD. Figure 8C shows a representative screenshot of the Sanger sequencing result demonstrating the indel formation after CRISPR / MAD7-mediated gene editing at the BIM locus. The shaded area indicates the targeting site after indel formation by BIM crRNA. Figure 8D shows the summary chart of single clone selection and analysis for BIM edited cells. Figure 8B shows the western blot analysis of BIM protein depletion in one heterozygous (#21) and one homozygous (#39) knockout clone. The BIM designed crRNA was intended to deplete BIMEL and BIML splice forms but to retain BIMS.

[0095] Figure 9 shows the prolonged survival of FAS-deficient (knockout of the FAS gene by FAS sgRNA#1) KRAS G12V TCR T-iαβT cells in the presence of the FAS ligand (FASL; an inducer of cell apoptosis) and human recombinant IL-2 (0.1 ng / mL) , compared with control (nucleofection by Scramble sgRNA#2) KRAS G12V TCR T-iαβT cells.

[0096] Figure 10 shows the enhanced durable cytotoxicity of FAS-deficient KRAS G12V TCR T-iαβT cells against FASL-overexpressed and FAS-deficient HLA-A11 SW620 cells (GFP-HLA-A11-SW620-FASL) at a 4: 1 E: T ratio in the presence of IL-2 (1 ng / mL) monitored by the  SX5 live-cell analysis system.

[0097] Figure 11 shows the prolonged survival of FAS-deficient TKO (BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -) KRAS G12V TCR T-iαβT cells in the presence of the FAS ligand and human recombinant IL-2 (0.1 ng / mL) , compared with BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -TKO KRAS G12V TCR T-iαβT cells.

[0098] Figure 12 shows the enhanced durable cytotoxicity of FAS-deficient TKO (BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -) KRAS G12V TCR T-iαβT cells against FASL-overexpressed and FAS-deficient HLA-A11 SW620 cells at a 4: 1 E: T ratio in the presence of IL-2 (0.1 ng / mL) , compared with BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -TKO KRAS G12V TCR T-iαβT cells monitored by the  SX5 live-cell analysis system.

[0099] Figure 13 shows the increased IFN-γ secretion in FAS-deficient TKO (BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -) KRAS G12V TCR T-iαβT cells post the 1st round of serial killing against FASL-overexpressed and FAS-deficient HLA-A11 SW620 cells compared with BIM- / -CISH- / -SOCS1- / -TKO KRAS G12V TCR T-iαβT cells. The concentration of IFN-γ in the culture supernatants post co-culturing with SW620 cells was quantified using the  IFN-γ (Human) Immunoassay Kit.

[0100] Figure 14 illustrates the extracellular domains (ECD) of an interferon gamma (IFN-γ) receptor fused to the intracellular domains (ICD) of a distinct cytokine receptor, with a transmembrane domain positioned in between.

[0101] Figures 15A-15B illustrate that the IFNγR-IL2 / IL15R signal converter is capable of inducing phosphorylation of STAT1 and STAT5 in mature iαβT 4KO (CISH- / - / SOCS1- / - / BIM- / - / FAS- / -) KRAS G12V TCR cells. Figure 15A shows that the percentage of cells with IFNγR-IL2 / IL15R signal converter in mature iαβT 4KO KRAS G12V TCR cells was approximately 35.9%. Figure 15B shows that, upon IFN-γ stimulation, phosphorylation of STAT1 and STAT5 was markedly increased in mature iαβT 4KO KRAS G12V TCR cells with IFNγR-IL2 / IL15R signal converter.

[0102] Figure 16 illustrates enhanced expansion of mature iαβT 4KO (CISH- / - / SOCS1- / - / BIM- / - / FAS- / -) KRAS G12V TCR cells expressing the IFNγR-IL2 / IL15R signal converter under repeated tumor antigen stimulation.

[0103] Figure 17 demonstrates the enhanced serial tumor cell killing capacity of mature iαβT 4KO (CISH- / - / SOCS1- / - / BIM- / - / FAS- / -) KRAS G12V TCR cells expressing the IFNγR-IL2 / IL15R signal converter against GFP-HLA-A11-SW620 tumor cells.

[0104] Figure 18A-18B demonstrate the decrease in cell viability by GCV treatment of dellta-HSV-tk-A168H knock-in iPSC (Figure 18A) and iPSC-derived iαβT cells (Figure 18B) .

[0105] Figure 19A shows that the percentage of cells expressing IFNγR-IL2 / IL15R signal converter was approximately 19.1%. Figure 19B shows that the percentage of cells expressing CD19 CAR was approximately 98%.

[0106] Figure 20 illustrates cell expansion of 4KO iαβT cells expressing CD19 CAR and IFNγR-IL2 / IL15R under repeated Nalm-6-iRFP713 tumor cell stimulation.

[0107] Figure 21 demonstrates the single run tumor cell killing capacity of mature CD19 CAR 4KO (CISH- / - / SOCS1- / - / BIM- / - / FAS- / -) KRAS G12V TCR iαβT cells expressing the IFNγR-IL2 / IL15R signal converter against Nalm-6-iRFP713 tumor cells at indicated E: T ratios.

[0108] Figure 22A demonstrates the superior persistent killing of 4KO iαβT cells expressing CD19 CAR and IFNγR-IL2 / IL15R against Nalm-6-iRFP713 tumor cells at a 4: 1 E: T ratio, compared with that of primary αβT expressing CD19 CAR. Figure 22B shows the cytokine secretion profile of 4KO iαβT cells expressing CD19 CAR and IFNγR-IL2 / IL15R or primary αβT expressing CD19 CAR against Nalm-6-iRFP713 tumor cells.DETAILED DESCRIPTIONI. DEFINITIONS

[0109] Unless stated otherwise, the following terms and phrases have the meanings described below. The definitions are not meant to be limiting in nature and serve to provide a clearer understanding of certain aspects of the present disclosure.

[0110] Unless specifically defined elsewhere in this document, all other technical and scientific terms used herein have the meaning commonly understood by one of ordinary skill in the art.

[0111] As used herein, including the appended claims, the singular forms of words such as “a, ” “an, ” and “the, ” include their corresponding plural references unless the context clearly dictates otherwise.

[0112] The term “or” is used to mean, and is used interchangeably with, the term “and / or” unless the context clearly dictates otherwise.

[0113] Induced pluripotent stem cell (iPSC) : As used herein, the terms “induced pluripotent stem cell” or “iPSC” refer to an induced stem cell that is generated from a somatic cell (e.g., a fibroblast or a T cell) using induced pluripotent reprogramming factors, e.g., Yamanaka factors: Oct3 / 4, Sox2, Klf4 and c-Myc (see Takahashi K, Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 2006 Aug 25; 126 (4) : 663-76. Further, see Takahashi K, Tanabe K, Ohnuki M, Narita M, Ichisaka T, Tomoda K, Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors. Cell. 2007 Nov 30; 131 (5) : 861-72) .

[0114] T-iPSC: As used herein, the terms “T-iPSC” , “T cell-derived iPSC” , “T derived iPSC” , “iPSC derived from T, ” “iPSC derived from a T cell” and the like refer to an iPSC that is generated from a T cell using induced pluripotent reprogramming factors, wherein the T cell could be a primary T cell or a αβT cell.

[0115] αβT-iPSC: As used herein, the terms “αβT-iPSC, ” “αβT derived iPSC” , “iPSC derived from αβT” and the like refer to an iPSC that is generated from a αβ (alpha / beta) T cell (αβT cell) using induced pluripotent reprogramming factors.

[0116] αβT cell: As used herein, a “αβT cell, ” “αβT, ” “alpha / betaT, ” and the like refers to a type of T cell that has a T-cell receptor (TCR) composed of a α glycoprotein chain and a βglycoprotein chain on the surface of the cell, regardless of how the αβT cell is generated / obtained. The αβT cell can be a primary αβT cell or an αβT cell differentiated from iPSC (iαβT) .

[0117] iαβT: The terms “iPSC-derived αβT cell, ” “iPSC-αβT, ” “iαβT, ” and the like, as used herein, refers to an αβT cell differentiated from an iPSC.

[0118] T-iαβT: The terms “T-iαβT, ” “T-iabT, ” “T derived iαβT” , and the like, as used herein, refers to a αβT cell differentiated from an iPSC derived from a T cell (T-iPSC) .

[0119] αβT-iαβT: The terms “αβT-iαβT” , “αβT-iPSC derived αβT” and the like, as used herein, refers to an αβT differentiated from an iPSC derived from an αβ T cell (αβT-iPSC) .

[0120] “An intermediate cell differentiated from an iPSC” and the like, as used herein, refers to a cell differentiated from an iPSC that possesses the ability to be differentiated into an αβT cell. The intermediate cell differentiated from the iPSC includes but is not limited to an αβT-iHSC, an αβT-iCLP, and / or an immature T-iαβT cell.

[0121] iPSC-derived Hematopoietic stem cell (iHSC) : As used herein, the terms “iPSC-derived hematopoietic stem cell” , or “iHSC” refer to a hematopoietic stem cell generated from an iPSC.

[0122] αβT-iPSC Hematopoietic stem cell (αβT-iHSC) : As used herein, the terms “αβT-iPSC hematopoietic stem cell” or “αβT-iHSC” refer to a hematopoietic stem cell generated from a αβT-iPSC.

[0123] iPSC-derived Common lymphoid progenitor (iCLP cell) : As used herein, the terms “iPSC-derived common lymphoid progenitor, ” “iCLP cell, ” or “iCLP” refer to a common lymphoid progenitor cell that is differentiated from an iHSC, in which the iHSC is generated from an iPSC.

[0124] αβT-iPSC Common lymphoid precursor (αβT-iCLP) : As used herein, the terms “αβT-iPSC common lymphoid precursor, ” “αβT-iCLP cell, ” or “αβT-iCLP” refer to a common lymphoid precursor cell that is differentiated from a T-iHSC, in which the T-iHSC is generated from a αβT-iPSC.

[0125] iPSC-derived immature T cell (immature iT cell) : As used herein, the terms “iPSC-derived immature T cell” or “immature iT cell” refer to an immature T cell differentiated from an iCLP cell, in which the iCLP cell is differentiated from an iHSC, in which the iHSC is generated from an iPSC.

[0126] αβ-TiPSC immature alpha / beta T cell (immature T-iαβT cell) : As used herein, the terms “αβT-iPSC immature alpha / beta T cell” or “immature T-iαβT cell” refer to an immature αβT cell differentiated from a T-iCLP, in which the T-iCLP is differentiated from a T-iHSC, in which the T-iHSC is generated from a αβT-iPSC.

[0127] Genomic Disruption: As used herein, the term “genomic disruption” refers to any genetic alteration (e.g., substitution, deletion, and / or insertion) in the sequence of a gene or epigenetic modification (e.g., DNA methylation, histone modification) without changes to the sequence of the gene. The genomic disruption can result in a change of the transcription of a gene, translation of mRNA, and / or function of a protein. A genomic disruption can include alterations to a coding sequence, a non-coding sequence (e.g., promoter, enhancer, insulator, operon, or silencer) , or a combination thereof.

[0128] Splice Variant: As used herein, the term “splice variant” refers to mature mRNA and its encoded protein produced by alternatively splicing a gene, e.g., the BIM gene, in which exons of pre-mRNA are reconnected in at least two distinct forms during the process of RNA splicing. The BIM gene is transcribed as three splice variants: BIMEL, which contains coding exons E1, E2A, E2B, E2C, E4 and E5; BIML, which contains coding exons E1, E2A, E2C, E4 and E5; and BIMs, which contains coding exons E1, E2A, E4 and E5.

[0129] Identity: As used herein, the term “identity” in the context of sequence comparisons refers to the number of exact matches between two different sequences in a sequence alignment. Sequence alignment techniques and software include Basic Local Alignment Search Tool (BLAST, which includes e.g., BLASTP for protein sequences and BLASTN for nucleic acid sequences) , ClustalOmega, MUSCLE, and MAFFT.

[0130] Bcl-2 Interacting Mediator of cell death (BIM) : As used herein, the terms “Bcl-2 Interacting Mediator of cell death, ” “BIM, ” “Human BIM gene, ” “Gene ID: 10018, ” or “BCL2L11” refer to a member of the BH3 (Bcl-2 homology 3) -only proteins, which can directly activate the proapoptotic effector proteins BAX and BAK. BIM can also indirectly activate BAX and BAK by binding to antiapoptotic BCL-2 family members (BCL-2, BCL-xL, MCL-1 and A1) . BIM is transcribed as three splice variants, BIMEL (NM_138621.5; NP_619527.1, containing coding exons E1, E2A, E2B, E2C, E4 and E5) , BIML (NM_006538.5; NP_006529.1, containing coding exons E1, E2A, E2C, E4 and E5) and BIMs (NM_001204106.1; NP_001191035.1, containing coding exons E1, E2A, E4 and E5) .

[0131] Cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) : As used herein, the terms “CISH, ” “Cytokine-inducible SH2-containing protein, ” “CIS1, ” “Gene ID: 1154, ” “NM_013324.7, ” or “NP_037456.5” refer to a member of the suppressor of cytokine signaling (SOCS) protein family. The SOCS family members are negative regulators of cytokine signal transduction that inhibit the JAK / STAT pathway. Each SOCS family member contains a central SH2 domain and a conserved carboxy-terminal motif designated as the SOCS box. These proteins are important regulators of cytokine signaling, proliferation, differentiation, and immune responses.

[0132] Suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) : As used herein, the terms “Suppressor of cytokine signaling 1, ” “SOCS1, ” “Gene ID: 8651, ” “NM_003745.2, ” “NP_003736.1” “Janus kinase binding protein, ” “JAB, ” “Stat-induced Stat inhibitor-1, ” “SSI-1, ” “Tec-interacting protein 3, ” or “TIP3” refer to a cytokine-regulated SOCS family member that directly inhibits JAK family members through interaction within its kinase activation loop. In addition to inhibiting JAK / STAT signaling, SOCS1 can also negatively regulate Toll-like receptors that contribute to innate immunity.

[0133] FAS cell surface death receptor: As used herein, the terms “FAS cell surface death receptor, ” “FAS, ” “Gene ID: 355, ” “NM_000043.6, ” and “NP_000034.1” refer to a tumor necrosis factor (TNF) superfamily death receptor that induce caspase-dependent apoptosis following engagement with its extracellular ligand (FAS ligand (FASL) ) .

[0134] β-2-Microglobulin: As used herein, the terms “β-2-Microglobulin, ” “Beta-2-Microglobulin, ” “B2M, ” “Gene ID: 567, ” “NM_004048, ” and “NP_004039” refer to a component of the human leukocyte antigen (HLA) class I molecules found on the surface of nearly all nucleated cells. In addition, β2M associates non-covalently with the HLA class I heavy chain, enabling proper folding and stabilization of HLA class I.

[0135] Class II transactivator: As used herein, the terms “Class II transactivator, ” “CIITA, ” “Gene ID: 4261, ” “NM_001286402.1, ” and “NP_001273331.1” refer to a master regulator of HLA class II expression by recruiting and facilitating the assembly of DNA-binding proteins, including the regulatory factor X (RFX) complex, cAMP response element-binding protein (CREB) , and nuclear factor Y (NF-Y) .

[0136] Clustered Regularly Interspace Short Palindromic Repeats (CRISPR) : As used herein, the terms “Clustered Regularly Interspace Short Palindromic Repeats” or “CRISPR” refer to a gene editing system that utilizes a guide sequence and a nuclease to modify a cell’s genome at a specific location. The nuclease cuts the cell’s genome at the specific location targeted by the guide sequence, allowing a target sequence to be removed, a sequence to be added, or a combination thereof.

[0137] Programmable Addition Via Site-Specific Target Elements (PASTE) : As used herein, the terms “Programmable Addition Via Site-Specific Target Elements” or “PASTE” refer to a gene editing system that utilizes a guide sequence and a CRISPR-Cas9 nickase fused to a reverse transcriptase and a serine integrase to modify a cell’s genome at a specific location. The nickase cuts one strand of double stranded DNA of the cell’s genome at the specific location targeted by the guide sequence, allowing a target sequence to be removed, a sequence to be added using the serine integrase, or a combination thereof.

[0138] Prime Editing: As used herein, the term “Prime editing” refers to a gene editing system that utilizes a guide sequence and a catalytically impaired Cas nickase (e.g., Cas9 nickase or Cas12 nickase) fused to a reverse transcriptase to modify a cell’s genome at a specific location. The nickase cuts one strand of double stranded DNA of the cell’s genome at the specific location targeted by the guide sequence, allowing a target sequence to be removed, a sequence to be added using the reverse transcriptase, or a combination thereof.

[0139] Base Editing: As used herein, the term “Base editing” refers to a gene editing system that utilizes a guide sequence and a base editor, which is a Cas nickase (e.g., Cas9 nickase or Cas12 nickase) and a nucleoside deaminase, including e.g., a cytosine deaminase or an adenine deaminase, to modify a cell’s genome at a specific location. The nickase cuts one strand of double stranded DNA of the cell’s genome at the specific location targeted by the guide sequence, allowing the nucleoside deaminase to remove an amino group from a specific type of nucleoside (e.g., cytosine or adenine) at a specific location.

[0140] Transcription Activator-like Effector Nuclease (TALEN) : As used herein, the terms “Transcription Activator-like Effector Nuclease” or “TALEN” refer to a gene editing system that utilizes an endonuclease, including e.g., Fokl, fused to a transcription activator-like effector (TALE) that is engineered to bind to a desired DNA sequence to promote DNA cleavage by the endonuclease at the specific location designated by the TALE.

[0141] Zinc-finger nuclease (ZFN) : As used herein, the terms “Zinc-finger nuclease” or “ZFN” refer to a gene editing system that utilizes an endonuclease, including e.g., Fokl, fused to a plurality of zinc fingers. Each zinc finger targets a specific nucleotide sequence at which the endonuclease generates a double-stranded DNA break.

[0142] Endonuclease: As used herein, the term “endonuclease” refers to an enzyme that cleaves a phosphodiester bond of a polynucleotide molecule. An endonuclease that targets a specific sequence of nucleotides is a restriction endonuclease. As used herein, the terms “homing endonuclease” and “meganuclease” refer to an endonuclease that targets specific asymmetric sequences of about 12 to and 45 base pairs in length, usually about 14 to about 25 base pairs in length.

[0143] Transfection: As used herein, the term "transfection" refers to a variety of techniques for introducing a foreign nucleic acid molecule (e.g., DNA) into a host cell, including electroporation, physical transfection (e.g., microinjection, particle bombardment, or phototransfection) , lipid-mediated transfection, diethylaminoethyl (DEAE) -dextran transfection, calcium phosphate precipitation, cationic polymer transfection, or viral transfection.

[0144] Interferon-gamma receptor: As used herein, the terms “interferon-gamma receptor, ” “IFNGR, ” and “IFN-γ receptor” refer to a cytokine receptor comprising a heterodimer. The heterodimer of IFNGR comprises interferon-gamma receptor 1 (IFNGR1) and interferon-gamma receptor 2 (IFNGR2) . The interferon-gamma cytokine binds to the IFNGR.

[0145] CD132: As used herein, the terms “CD132, ” “the common γ chain (γc) of interleukin-2 receptor, ” and “IL2RG” refer to a cytokine receptor subunit that is common to the cytokine receptor complexes of at least IL-2, IL-15, IL-4, IL-7, IL9, and IL-21. CD132 comprises an intracellular domain, a transmembrane domain, and a membrane-proximal region.

[0146] Interleukin-2 receptor beta subunit: As used herein, the terms “interleukin-2 receptor beta subunit, ” “interleukin-2 receptor subunit beta, ” “CD122, ” and “IL2RB” refer to a cytokine receptor subunit of the cytokine receptor complex of IL-2.

[0147] As used herein, the terms “IFNγR-IL2 / IL15R” , “IFNγR-IL2 / IL15R signal converter” , “IFNγR-IL2 / IL15R SC” , “IFNγR-IL2R” , “IFNγR-IL2R signal converter” and “IFNγR-IL2R SC” refer to a chimeric signaling converter comprising a heterodimer. It comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) .

[0148] As used herein, “unmodified control” and “unmodified cell” refer to a control cell relative to which a comparison is performed. In some embodiments, the unmodified control is the same as the modified cell herein, except that the unmodified control expresses endogenous levels of BIM splice variants as that of a wild-type cell (e.g., αβT cell) . In some embodiments, the unmodified control is the same as the modified cell herein, except that the unmodified control expresses endogenous level of a specific protein or protein combination (under comparison) as that of a wild-type cell (e.g., αβT cell) . The unmodified control can also have further modifications (other than the protein (s) under comparison) as those in the modified cell to be compared with.

[0149] As used herein, “suppresses or eliminates” means any reduction in the level of a functional protein expressed from a gene as compared to a non-modified control.

[0150] As used herein, “inactivating nucleic acid mutation” means any nucleic acid mutation causing any reduction in the level of a functional protein expressed from a gene as compared to a non-modified control.

[0151] B2M-HLA-E: As used herein, the terms “B2M-HLA-E” , “B2M-HLAE” , “B2M-HLA-E fusion protein” refer to a fusion protein comprising at least a portion of B2M and a portion of HLA-E, wherein at least a portion of B2M and a portion of HLA-E is connected directly or indirectly via a linker. In some embodiments, B2M-HLA-E is able to engage the inhibitory receptors on the surface of NK cells. In some embodiments, B2M-HLA-E comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81.

[0152] TRAC: As used herein, the term “TRAC” refers to the T-cell receptor alpha constant region gene. It is part of the T-cell receptor (TCR) complex, which is responsible for recognizing antigens in the context of the major histocompatibility complex (MHC) on antigen-presenting cells.

[0153] TRBC1 / 2: As used herein, the term “TRBC1 / 2” or (TRBC1 / TRBC2) refers to the T-cell receptor beta constant region 1 gene and / or T-cell receptor beta constant region 2 gene. TRBC1 and TRBC2 are genes that encode the beta constant region of the T-cell receptor (TCR) . Each TCR irreversibly selects one of TRBC1 and TRBC2 for expression, in a random and mutually exclusive manner.

[0154] “Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog (KRAS) ” refers to an important member of the RAS protein family. The upstream of KRAS is regulated by the epidermal growth factor receptor EGFR family. The EGFR signal can activate the SOS protein, thereby regulating the activation of KRAS. The inactivation and activation state transitions of the KRAS protein in the cell are determined by the molecules it binds to. The guanine nucleotide exchange factor GEF catalyzes KARS to bind to GTP and activate KRAS; while the GTPase activating protein GAP can promote the hydrolysis of GTP bound to KRAS into GDP and lead to KRAS inactivation. Activated KRAS regulates its downstream signaling pathways such as MAPK and PI3K that are related to cell proliferation, cell migration and other functions. KRAS mutations cause it to continuously bind to GTP and remain activated, leading to continuous activation of downstream signaling pathways, thereby promoting tumorigenesis.

[0155] “KRAS_G12V" refers to a KRAS protein with a G12V mutation, which can be specifically detected by the immune system of an organism. “G12V” or “G12V mutation” are used interchangeably and refer to a KRAS protein in which the glycine at position 12 is replaced by valine.

[0156] “T cell receptor (TCR) ” is the protein (s) on the surface of T cells that is responsible for the specific recognition of antigenic peptides bound to MHC (major histocompatibility complex) . When TCR binds to antigenic peptides and MHC, T lymphocytes are activated through signal transduction and enter the subsequent immune response process. There are 4 TCR genes in the human genome: two encoding light chain TCRs: TRA gene encodes TCRα, TRG gene encodes TCRγ; two encoding heavy chain TCRs: TRB gene encodes TCRβ, TRD gene encodes TCRδ. Heavy chain TCR and light chain TCR form heterodimers to form a complete TCR. There are two types of TCR in humans: TCRα / β and TCRγ / δ, of which 95%of T cells express TCRα / β, called αβT cells; 5%of T cells express TCRγ / δ, called γ / δT cells. This ratio changes during individual development and in diseased states (such as leukemia) , and varies between species. Each chain comprises two extracellular domains: a Variable (V) region and a Constant (C) region. The Constant region is proximal to the cell membrane, followed by a transmembrane region and a short cytoplasmic tail, while the Variable region binds to the peptide / MHC complex. The Variable domain of both the TCRα and TCRβ each have three complementarity-determining regions (CDRs) , which play a major role in antigen recognition. Among them, CDR1 and CDR2 are relatively conservative and are responsible for recognizing MHC; CDR3 is the main CDR responsible for recognizing antigens.

[0157] “TCRαβ” or “TCRα / β” comprises a TCR α chain or a functional fragment thereof and a TCR β chain or a functional fragment thereof.

[0158] “Anti-KRAS G12V TCR” , “anti-KRAS G12V TCRαβ” , or “KRAS G12V TCR” refer to TCRαβ which specifically binds KRAS G12V.

[0159] The term “CAR” and “chimeric antigen receptor” refers to a chimeric receptor engineered to endow them with antigen specificity while retaining or enhancing their ability to recognize, trigger signaling pathway and kill a target cell. Chimeric antigen receptor may comprise, for example, (i) an extracellular binding domain, comprising an antigen-specific component, (e.g., a scFv binding to a specific antigen) and optionally a hinge region; (ii) a transmembrane domain; and (iii) intracellular signaling domain, e.g., one or more costimulatory domains and one or more activation domains. Each domain may be heterogeneous, i.e., comprised of sequences derived from (or corresponding to) different protein chains.

[0160] The term “suicide switch” refers to a genetically encoded, inducible safety mechanism introduced into engineered cells (e.g., CAR-T, TCR-T, or other modified immune cells) that allows the selective elimination of those cells upon administration of a specific activating agent.

[0161] The term “HSV-TK” or “Herpes Simplex Virus thymidine kinase” is a viral enzyme that phosphorylates nucleoside analogues such as Ganciclovir (GCV) , converting them into toxic triphosphate metabolites that become incorporated into DNA and trigger apoptosis. An HSV-tk polypeptide or a functional variant thereof refers to the wild-type HSV-tk as well as any engineered, truncated, mutated, or otherwise modified version thereof that preserves the functional capacity to phosphorylate GCV or related nucleoside analogues and thereby induce cell death.

[0162] The terms “administration, ” “administering, ” “treating, ” and “treatment” as used herein, when applied to an animal, human, experimental subject, cell, tissue, organ, or biological fluid, means contact of an exogenous pharmaceutical, therapeutic, diagnostic agent, or composition to the animal, human, subject, cell, tissue, organ, or biological fluid. Treatment of a cell encompasses contact of a reagent to the cell, as well as contact of a reagent to a fluid, where the fluid is in contact with the cell. The term “administration” and “treatment” also means in vitro and ex vivo treatments, e.g., of a cell, by a reagent, diagnostic, binding compound, or by another cell. Treating any disease or disorder refer in one aspect, to ameliorating the disease or disorder (i.e., slowing or arresting or reducing the development of the disease or at least one of the clinical symptoms thereof) . In another aspect, "treat, " "treating, " or "treatment" refers to alleviating or ameliorating at least one physical parameter including those which may not be discernible by the patient. In yet another aspect, "treat, " "treating, " or "treatment" refers to modulating the disease or disorder, either physically, (e.g., stabilization of a discernible symptom) , physiologically, (e.g., stabilization of a physical parameter) , or both. In yet another aspect, "treat, " "treating, " or "treatment" refers to preventing or delaying the onset or development or progression of the disease or disorder.

[0163] The term “subject” in the context of the present disclosure is a mammal, e.g., a primate, preferably a higher primate, e.g., a human (e.g., a patient comprising, or at risk of having, a disorder described herein) .

[0164] As used herein, an antibody “specifically binds” to a target protein, meaning the antibody exhibits preferential binding to that target as compared to other proteins, but this specificity does not require absolute binding specificity. An antibody “specifically binds” or “selectively binds, ” is used in the context of describing the interaction between an antigen (e.g., a protein) and an antibody, or antigen binding antibody fragment, refers to a binding reaction that is determinative of the presence of the antigen in a heterogeneous population of proteins and other biologics, for example, in a biological sample, blood, serum, plasma or tissue sample. Thus, under certain designated immunoassay conditions, the antibodies or antigen-binding fragments thereof specifically bind to a particular antigen at least two times when compared to the background level and do not specifically bind in a significant amount to other antigens present in the sample. In one aspect, under designated immunoassay conditions, the antibody or antigen-binding fragment thereof, specifically bind to a particular antigen at least ten (10) times when compared to the background level of binding and does not specifically bind in a significant amount to other antigens present in the sample.

[0165] The terms “cancer” or “tumor” herein has the broadest meaning as understood in the art and refers to the physiological condition in mammals that is typically characterized by unregulated cell growth. In the context of the present disclosure, the cancer is not limited to certain type or location.

[0166] The term “nucleic acid” is used herein interchangeably with the term “polynucleotide” and refers to deoxyribonucleotides or ribonucleotides and polymers thereof in either single-or double-stranded form. The term encompasses nucleic acids containing known nucleotide analogs or modified backbone residues or linkages, which are synthetic, naturally occurring, and non-naturally occurring, which have similar binding properties as the reference nucleic acid, and which are metabolized in a manner similar to the reference nucleotides. Examples of such analogs include, without limitation, phosphorothioates, phosphoramidates, methyl phosphonates, chiral-methyl phosphonates, 2-O-methyl ribonucleotides, peptide-nucleic acids (PNAs) .

[0167] As used herein, the term “pharmaceutically acceptable carrier” includes any and all solvents, dispersion media, isotonic and absorption delaying agents, and the like that are physiologically compatible. The carrier can be suitable for intravenous, intramuscular, subcutaneous, parenteral, rectal, spinal or epidermal administration (e.g., by injection or infusion) .

[0168] The term “therapeutically effective amount” as herein used, refers to the amount of a therapeutic agent that, when administered to a subject for treating a disease, or at least one of the clinical symptoms of a disease or disorder, is sufficient to effect such treatment for the disease, disorder, or symptom. The “therapeutically effective amount” can vary with the therapeutic agent, the disease, disorder, and / or symptoms of the disease or disorder, severity of the disease, disorder, and / or symptoms of the disease or disorder, the age of the subject to be treated, and / or the weight of the subject to be treated. An appropriate amount in any given instance can be apparent to those skilled in the art or can be determined by routine experiments. In the case of combination therapy, the “therapeutically effective amount” refers to the total amount of the combination objects for the effective treatment of a disease, a disorder or a condition.II. MODIFIED CELLS AND INCORPORATED COMPONENTS

[0169] Disclosed herein are modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) ) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., iHSC, iCLP, and immature iαβT cells) ) .Modified cells with one or more genomic disruptions

[0170] In one aspect, such modified cells comprise one or more genomic disruptions selected from the following: 1) a genomic disruption in the SOCS1 gene, 2) a genomic disruption in the CISH gene, 3) a genomic disruption in the BIM gene, 4) a genomic disruption in the B2M gene, 5) a genomic disruption in the CIITA gene, 6) a genomic disruption in the FAS gene, and 7) a genomic disruption in the TRAC gene and / or a genomic disruption in the TRBC1 / 2 gene.

[0171] In another aspect, such modified cells (e.g., iPSC or αβT cell) comprise at least two genomic disruptions –1) in the suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene; and 2) in the cytokine-inducible sh2-containing protein (CISH) gene. In some embodiments, the modified cells comprise at least three genomic disruptions –1) in the SOCS1 gene, 2) in the CISH gene, and 3) in the Bcl-2 interacting mediator of cell death (BIM) gene. In some embodiments, the modified cells comprise at least four genomic disruptions –1) in the SOCS1 gene, 2) in the CISH gene, 3) in the BIM gene, and, for example, 4) in the FAS cell surface death receptor (FAS) gene. In some embodiments, the modified cells comprise at least five genomic disruptions –1) in the SOCS1 gene, 2) in the CISH gene, 3) in the BIM gene, and, for example, 4) in the β-2-Microglobulin (B2M) gene, and 5) in the class II transactivator (CIITA) gene. In some embodiments, the modified cells comprise at least six genomic disruptions –1) in the SOCS1 gene, 2) in the CISH gene, 3) in the BIM gene, and, for example, 4) in the B2M gene, 5) in the CIITA gene, and 6) in the FAS gene. In some embodiments, the modified cells comprise at least seven genomic disruptions –1) in the SOCS1 gene, 2) in the CISH gene, 3) in the BIM gene, and, for example, 4) in the B2M gene, 5) in the CIITA gene, 6) in the FAS gene, and 7) in the TRAC gene and / or a genomic disruption in the TRBC1 / 2 gene.

[0172] In another aspect, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) comprises at least two genomic disruptions –1) a genomic disruption in the SOCS1 gene (e.g., in exon 2 of the SOCS1 gene) , and 2) a genomic disruption in the CISH gene (in exon 3 of the CISH gene) . In some embodiments, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) comprises at least three genomic disruptions –1) a genomic disruption in the SOCS1 gene (e.g., in exon 2 of the SOCS1 gene) , 2) a genomic disruption in the CISH gene (in exon 3 of the CISH gene) , and 3) a genomic disruption in the BIM gene (e.g., in exon 2C of the BIM gene) . In some embodiments, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) comprises at least four genomic disruptions –1) a genomic disruption in the SOCS1 gene (e.g., in exon 2 of the SOCS1 gene) , 2) a genomic disruption in the CISH gene (in exon 3 of the CISH gene) , 3) a genomic disruption in the BIM gene (e.g., in exon 2C of the BIM gene) , and, for example, 4) a genomic disruption in the FAS gene. In some embodiments, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) comprises at least five genomic disruptions –1) a genomic disruption in the SOCS1 gene (e.g., in exon 2 of the SOCS1 gene) , 2) a genomic disruption in the CISH gene (in exon 3 of the CISH gene) , 3) a genomic disruption in the BIM gene (e.g., in exon 2C of the BIM gene) , 4) a genomic disruption in the B2M gene, and 5) a genomic disruption in the CIITA gene. In some embodiments, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) comprises at least six genomic disruptions –1) a genomic disruption in the SOCS1 gene (e.g., in exon 2 of the SOCS1 gene) , 2) a genomic disruption in the CISH gene (in exon 3 of the CISH gene) , 3) a genomic disruption in the BIM gene (e.g., in exon 2C of the BIM gene) , 4) a genomic disruption in the FAS gene, 5) a genomic disruption in the B2M gene, and 6) a genomic disruption in the CIITA gene. In some embodiments, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) further comprises at least seven genomic disruptions –1) a genomic disruption in the SOCS1 gene (e.g., in exon 2 of the SOCS1 gene) , 2) a genomic disruption in the CISH gene (in exon 3 of the CISH gene) , 3) a genomic disruption in the BIM gene (e.g., in exon 2C of the BIM gene) , 4) a genomic disruption in the FAS gene, 5) a genomic disruption in the B2M gene, 6) a genomic disruption in the CIITA gene, and 7) a genomic disruption in the TRAC gene and / or a genomic disruption in the TRBC1 / 2 gene.Modified cells with one or more genomic disruptions and one or more polynucleotide incorporations

[0173] In one aspect, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) comprises one or more modifications selected from the following: 1) a genomic disruption in the SOCS1 gene (e.g., in exon 2 of the SOCS1 gene) , 2) a genomic disruption in the CISH gene (in exon 3 of the CISH gene) , 3) a genomic disruption in the BIM gene (e.g., in exon 2C of the BIM gene) , 4) a genomic disruption in the FAS gene, 5) a genomic disruption in the B2M gene, 6) a genomic disruption in the CIITA gene, 7) a genomic disruption in the TRAC gene and / or a genomic disruption in the TRBC1 / 2 gene, 8) an exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E (e.g., inserted into a B2M locus) , and 9) one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter comprising a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit (e.g., the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus and the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus, or vice versa) , and 10) an exogenous polynucleotide encoding a suicide switch, which comprises a herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) polypeptide or a functional variant thereof capable of inducing cell death upon administration of Ganciclovir (GCV) .

[0174] In another aspects, in addition to the genomic disruption combination described above, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) further comprises at least one or two of the following: 1) an exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E (e.g., inserted into a B2M locus) , and 2) one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter.

[0175] In another aspects, in addition to the genomic disruption combination described above, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) further comprises 1) an exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E (e.g., inserted into a B2M locus) , and 2) one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, and optionally 3) an exogenous polynucleotide encoding a suicide switch, which comprises a herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) polypeptide or a functional variant thereof capable of inducing cell death upon administration of Ganciclovir (GCV) .

[0176] In one embodiment, the modified cell (e.g., iPSC or αβT cell) further comprises all the modifications selected from the following: 1) a genomic disruption in the SOCS1 gene (e.g., in exon 2 of the SOCS1 gene) , 2) a genomic disruption in the CISH gene (in exon 3 of the CISH gene) , 3) a genomic disruption in the BIM gene (e.g., in exon 2C of the BIM gene) , 4) a genomic disruption in the FAS gene, 5) a genomic disruption in the B2M gene, 6) a genomic disruption in the CIITA gene, 7) a genomic disruption in the TRAC gene and / or a genomic disruption in the TRBC1 / 2 gene, 8) an exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E (e.g., inserted into a B2M locus) , and 9) one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter comprising a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit (e.g., the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus and the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus, or vice versa) , and optionally 10) an exogenous polynucleotide encoding a suicide switch, which comprises a herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) polypeptide or a functional variant thereof capable of inducing cell death upon administration of Ganciclovir (GCV) .

[0177] In some embodiments, the modified cell is a αβT cell. In some embodiments, the αβT cell can be modified before reprogramming to an iPSC. In some embodiments, the modified cell is an iPSC-derived αβT cell (iαβT) . In some embodiments, the αβT cell can be a primary αβT cell. In some embodiments, the modified αβT cell is differentiated from the modified iPSC.

[0178] In some embodiments, the modified cell is an iPSC. In some embodiments, a somatic cell (e.g., T cell or PBMC) can be modified before reprogramming to an iPSC. An iPSC is a PSC that is generated from a somatic cell using induced pluripotent reprogramming factors. In some embodiments, the somatic cell is a T cell, including a αβ (alpha / beta) T cell, a peripheral blood mononuclear cell (PBMC) , a fibroblast, or a cord blood cell.

[0179] In some embodiments, the modified cell is an iPSC derived from a primary T cell (T-iPSC) .

[0180] In some embodiments, the modified cell is a αβT-iPSC. A αβT-iPSC is an iPSC that is generated from a αβ (alpha / beta) T cell (αβT cell) using induced pluripotent reprogramming factors.

[0181] In some embodiments, the modified cell is a primary αβT cell. In some embodiments, the modified cell is an iPSC-derived αβT (iαβT) cell. In some embodiments, the modified cell is an iαβT cell from a T-iPSC (T-iαβT) . In some embodiments, the modified cell is a αβT cell from αβT-iPSC (αβT-iαβT) .

[0182] In some embodiments, the modified cell is an iHSC. An iHSC refers to a hematopoietic stem cell generated from an iPSC. In some embodiments, the modified cell is a αβT-iHSC. An αβT-iHSC refers to a hematopoietic stem cell generated from a αβT-iPSC.

[0183] In some embodiments, the modified cell is an iCLP cell, which is a common lymphoid progenitor cell that is differentiated from an iHSC. In some embodiments, the modified cell is a αβT-iCLP, which is a common lymphoid precursor cell that is differentiated from a αβT-iHSC.

[0184] In some embodiments, the modified cell is an immature iT cell, which is an immature T cell that is differentiated from an iHSC and / or an iCLP cell. In some embodiments, the modified cell is an immature T-iαβT cell, which is an immature αβT cell that is differentiated from a αβT-iCLP.

[0185] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, CIITA, TRAC gene, TRBC1 / 2 gene are genomically disrupted in a αβT-iPSC, αβT-iHSC, αβT-iCLP, or immature T-iαβT cell before differentiation into the T-iαβT cell.

[0186] In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in a αβT-iPSC, αβT-iHSC, αβT-iCLP, or immature T-iαβT cell before differentiation into the T-iαβT cell. In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in a αβT-iPSC, αβT-iHSC, αβT-iCLP, or immature T-iαβT cell before differentiation into the T-iαβT cell. In some embodiments, the genomic disruptions of the SOCS1 and CISH genes each occur in distinct cell differentiation stages, e.g., the SOCS1 gene is genomically disrupted in the T-iCLP cell and the CISH gene is genomically disrupted in the immature T-iαβT cell that is differentiated from the T-iCLP containing the genomically disrupted SOCS1 gene. A cell differentiation stage is any one of the following cell types: a stem cell having self-renewal and pluripotency properties (e.g., an induced pluripotent stem cell) , an adult stem cell (e.g., hematopoietic stem cell) that is differentiated from the stem cell having self-renewal and pluripotency properties; a progenitor cell (e.g., a common lymphoid progenitor) that is differentiated from the adult stem cell; a specific type of cell (e.g., an immature T cell) that is differentiated from the progenitor cell; and a mature specific type of cell (e.g., a αβT cell) that is differentiated from the specific type of cell. A cell differentiation stage is any one of αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, immature T-iαβT cell, or T-iαβT cell.

[0187] In some embodiments, the genomic disruptions of the SOCS1, CISH, and BIM genes each occur in distinct cell differentiation stages, e.g., the SOCS1 gene is genomically disrupted in the T-iHSC, the CISH gene is genomically disrupted in the T-iCLP differentiated from the T-iHSC containing the genomically disrupted SOCS1 gene, and the BIM gene is genomically disrupted in the immature T-iαβT cell that is differentiated from the T-iCLP containing the SOCS1 and CISH genomic disruptions. In some embodiments, genomic disruptions of two of the genes selected from SOCS1, CISH, and BIM occur in a single cell differentiation stage and a third genomic disruption of the remaining undisrupted gene occurs in a second cell differentiation stage, e.g., the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in the T-iHSC and the BIM gene is genomically disrupted in the T-iCLP differentiated from the T-iHSC containing the genomically disrupted SOCS1 and CISH genes. In some embodiments, genomic disruptions of two of the genes selected from SOCS1, CISH, and BIM occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions in each of the three genes selected from SOCS1, CISH, and BIM occur in a single cell differentiation stage.

[0188] In some embodiments, the cells comprise genomic disruptions of the SOCS1, CISH, BIM, and FAS genes. In some embodiments, the genomic disruptions of the SOCS1, CISH, BIM, and FAS genes each occur in a distinct cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions of three of the genes selected from FAS, SOCS1, CISH, and BIM occur in a single cell differentiation stage and a fourth genomic disruption of the remaining undisrupted gene occurs in a second cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions of two of the genes selected from FAS, SOCS1, CISH, and BIM occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, a genomic disruption of one of the genes selected from FAS, SOCS1, CISH, and BIM occurs in a single cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions in each of the four genes selected from FAS, SOCS1, CISH, and BIM occur in a single cell differentiation stage.

[0189] In some embodiments, the cells comprise genomic disruptions of the SOCS1, CISH, BIM, B2M and CIITA genes. In some embodiments, the genomic disruptions of the SOCS1, CISH, BIM, B2M and CIITA genes each occur in a distinct cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions of four of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M and CIITA occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions of three of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M and CIITA occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions of two of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M and CIITA occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, a genomic disruption of one of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M and CIITA occurs in a single cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions in each of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M and CIITA occur in a single cell differentiation stage.

[0190] In some embodiments, the cells comprise genomic disruptions of the SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS genes. In some embodiments, the genomic disruptions of the SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS genes each occur in a distinct cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions of five of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions of four of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions of three of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions of two of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, a genomic disruption of one of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS occur in a single cell differentiation stage. In some embodiments, genomic disruptions in each of the genes selected from SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS occur in a single cell differentiation stage.

[0191] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes are genomically disrupted in an iPSC cell. In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in the iPSC cell. In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iPSC cell. In some embodiments, the FAS, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iPSC cell. In some embodiments, the B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iPSC cell. In some embodiments, the FAS, B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iPSC cell.

[0192] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes are genomically disrupted in a αβT-iPSC cell. In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC cell. In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC cell. In some embodiments, the FAS, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC cell. In some embodiments, the B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC cell. In some embodiments, the FAS, B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC cell.

[0193] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes are genomically disrupted in an iPSC-derived αβT cell (iαβT cell) . In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted the iPSC-derived αβT cell (iαβT cell) . In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iαβT cell. In some embodiments, the FAS, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iαβT cell. In some embodiments, the B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iαβT cell. In some embodiments, the FAS, B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iαβT cell.

[0194] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes are genomically disrupted in a T-iPSC-derived αβT cell (T-iαβT cell) . In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted the T-iPSC-derived αβT cell (T-iαβT cell) . In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the T-iPSC-derived αβT cell (T-iαβT cell) . In some embodiments, the FAS, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the T-iPSC-derived αβT cell (T-iαβT cell) . In some embodiments, the B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the T-iPSC-derived αβT cell (T-iαβT cell) . In some embodiments, the FAS, B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the T-iPSC-derived αβT cell (T-iαβT cell) .

[0195] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes are genomically disrupted in a αβT-iPSC-derived αβT cell (αβT-iαβT cell) . In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC-derived αβT cell (αβT-iαβT cell) . In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC-derived αβT cell (αβT-iαβT cell) . In some embodiments, the FAS, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC-derived αβT cell (αβT-iαβT cell) . In some embodiments, the B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC-derived αβT cell (αβT-iαβT cell) . In some embodiments, the FAS, B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC-derived αβT cell (αβT-iαβT cell) .

[0196] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes are genomically disrupted in an iHSC. In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted the iHSC. In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iHSC. In some embodiments, the FAS, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iHSC. In some embodiments, the B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iHSC. In some embodiments, the FAS, B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iHSC.

[0197] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes are genomically disrupted in a αβT-iHSC. In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted the αβT-iHSC. In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iHSC. In some embodiments, the FAS, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iHSC. In some embodiments, the B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iHSC. In some embodiments, the FAS, B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iHSC.

[0198] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes are genomically disrupted in an iCLP cell. In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted the iCLP cell. In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iCLP cell. In some embodiments, the FAS, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iCLP cell. In some embodiments, the B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iCLP cell. In some embodiments, the FAS, B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the iCLP cell.

[0199] In some embodiments, one or more of the SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes are genomically disrupted in a αβT-iCLP cell. In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted the αβT-iCLP cell. In some embodiments, the SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iCLP cell. In some embodiments, the FAS, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iCLP cell. In some embodiments, the B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iCLP cell. In some embodiments, the FAS, B2M, CIITA, SOCS1, CISH, and BIM genes are genomically disrupted in the αβT-iCLP cell.

[0200] In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in the αβT-iPSC cell, and the FAS, B2M, CIITA, and / or BIM gene is genomically disrupted in any one of T-iαβT, immature T-iαβT cell, αβT-iHSC, or αβT-iCLP cell.

[0201] In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in the immature T-iαβT cell, and the FAS, B2M, CIITA, and / or BIM gene is genomically disrupted in any one of αβT-iPSC, T-iαβT, αβT-iHSC, or αβT-iCLP cell.

[0202] In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in the T-iαβT cell, and the FAS, B2M, CIITA, and / or BIM gene is genomically disrupted in any one of αβT-iPSC, immature T-iαβT cell, αβT-iHSC, or αβT-iCLP cell.

[0203] In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in the αβT-iHSC, and the FAS, B2M, CIITA, and / or BIM gene is genomically disrupted in any one of αβT-iPSC, immature T-iαβT cell, T-iαβT, or αβT-iCLP cell.

[0204] In some embodiments, the SOCS1 and CISH genes are genomically disrupted in the αβT-iCLP cell, and the FAS, B2M, CIITA, and / or BIM gene is genomically disrupted in any one of αβT-iPSC, immature T-iαβT cell, T-iαβT, or αβT-iHSC.

[0205] In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E is incorporated into a B2M locus of an iPSC (e.g., αβT-iPSC) and / or one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter are incorporated into an iPSC (e.g., αβT-iPSC) .

[0206] In some embodiments, the cell is mammalian. In some embodiments, the cell is human cell.

[0207] In some embodiments, the cell is in vivo, in vitro, ex vivo, or in a human subject.

[0208] Also encompassed are populations of cells comprising one or more modified cells described herein.

[0209] In some embodiments, the cells are stored for a length of time before use. In some embodiments, the time is weeks or months. In some embodiments, the time is months or years.

[0210] In some embodiments, the cells are stored frozen in liquid nitrogen (-196 degrees Celsius) .A. SUPPRESSOR OF CYTOKINE SIGNALING 1 (SOCS1) GENOMIC DISRUPTION

[0211] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six, or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three, or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is a genomic disruption of the endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous SOCS1 gene. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified (e.g., alone or with any one or more genomic disruptions in CISH, BIM, FAS, B2M, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter and a suicide switch) or unmodified αβT-iPSC, modified or unmodified T-iHSC, modified or unmodified T-iCLP, or modified or unmodified immature T-iαβT cell. In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0212] In some embodiments, the modified cell comprises a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of the SOCS1 gene relative to an unmodified control. In some embodiments, the genomic disruption in the SOCS1 gene is an inactivating nucleic acid mutation (e.g., knock out) . In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the SOCS1 gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. As used herein, “suppresses or eliminates” means any reduction in the level of a functional protein expressed from a gene as compared to a non-modified control. As used herein, “inactivating nucleic acid mutation” means any nucleic acid mutation causing any reduction in the level of a functional protein expressed from a gene as compared to a non-modified control. In some embodiments, the genomic disruption in the SOCS1 gene is an endonuclease-mediated insertion-deletion (indel) . In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the SOCS1 gene is an endonuclease-mediated indel, such as a targeted knockout obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) designed to target SOCS1.

[0213] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous SOCS1 gene is in exon 2. In some embodiments, the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in SOCS1 that comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 23, or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%or 100%) identity thereto.

[0214] Assays for determining the relative expression of a gene or function of a protein encoded by the gene in a modified cell (e.g., T-iαβT-cell) can be performed using various methods. For example, the relative expression of the SOCS1 gene in a modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification can be determined using quantitative polymerase chain reaction (qPCR) , digital PCR (dPCR) , droplet digital PCR (ddPCR) , or nucleotide sequencing (e.g., next generation sequencing) . ddPCR can be performed using suitable nucleic acid quantification kits or instruments, including e.g., Qubit BR dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Qubit HS dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Nanodrop spectrophotometer (Thermo Fischer Scientific) , Stunner spectrophotometer (Unchained Labs) , and Lunatic spectrophotometer (Unchained Labs) . Nucleotide sequencing can be performed using NextSeq (Ilumina) , GridION (Oxford Nanopore Technologies) , Revio System (Pacific Biosciences) , and the like.B. CYTOKINE-INDUCIBLE SH2-CONTAINING PROTEIN (CISH) GENOMIC DISRUPTION

[0215] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six, or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three, or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is a genomic disruption of the endogenous cytokine-inducible sh2-containing protein (CISH) gene. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous CISH gene. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified (e.g., alone or with any one or more genomic disruptions in SOCS1, BIM, FAS, B2M, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter and a suicide switch) or unmodified αβT-iPSC, a modified or unmodified T-iHSC, a modified or unmodified T-iCLP, or a modified or unmodified immature T-iαβT cell. In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0216] In some embodiments, the cell comprises a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of the CISH gene relative to an unmodified control. In some embodiments, the genomic disruption in the CISH gene is an inactivating nucleic acid mutation (e.g., knock out) . In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the CISH gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption in the CISH gene is an endonuclease-mediated indel. In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the CISH gene is an endonuclease-mediated indel, such as a targeted knockout obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) designed to target CISH.

[0217] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous CISH gene is in exon 3, exon 4, or a combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 3, exon 4, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in the CISH gene that comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 24 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto.

[0218] Assays for determining the relative expression of a gene or function of a protein encoded by the gene in modified cell (e.g., T-iαβT-cell) can be performed using various methods. For example, the relative expression of a CISH gene in a modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification can be determined using qPCR, dPCR, ddPCR, or nucleotide sequencing (e.g., next generation sequencing) . ddPCR can be performed using suitable nucleic acid quantification kits or instruments, including e.g., Qubit BR dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Qubit HS dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Nanodrop spectrophotometer (Thermo Fischer Scientific) , Stunner spectrophotometer (Unchained Labs) , and Lunatic spectrophotometer (Unchained Labs) . Nucleotide sequencing can be performed using NextSeq (Ilumina) , GridION (Oxford Nanopore Technologies) , Revio System (Pacific Biosciences) , and the like.C. Bcl-2 INTERACTING MEDIATOR OF CELL DEATH (BIM) GENOMIC DISRUPTION

[0219] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six, or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three, or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is a genomic disruption of the endogenous Bcl-2 interacting mediator of cell death (BIM) gene. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous BIM gene. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified (e.g., alone or with any one or more genomic disruptions in SOCS1, CISH, FAS, B2M, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter and a suicide switch) or unmodified αβT-iPSC, modified or unmodified T-iHSC, modified or unmodified T-iCLP, or modified or unmodified immature T-iαβT cell. In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0220] In some embodiments, the genomic disruption in the BIM gene is an inactivating nucleic acid mutation (e.g., knock out) . In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the BIM gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption in the BIM gene is an endonuclease-mediated indel. In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the BIM gene is an endonuclease-mediated indel such as a targeted knockout obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) designed to target BIM.

[0221] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene is in exon 2A. In some embodiments, the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2A. In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene in the modified cell reduces the expression and / or function of all splice variant of BIM, BIMEL, BIML and BIMs, relative to an unmodified control.

[0222] In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in BIM that comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%or 100%) identity thereto.

[0223] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene is in exon 2C. In some embodiments, the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2C.

[0224] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene in the modified cell reduces the expression and / or function of a splice variant of BIM, BIMEL, relative to an unmodified control. In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene reduces the expression and / or function of a splice variant of BIM, BIML, relative to an unmodified control. In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene reduces the expression and / or function of a splice variants BIMEL and BIML relative to an unmodified control.

[0225] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene in the modified cell retains the expression and / or function of a splice variant of BIM, BIMs, relative to an unmodified control.

[0226] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene reduces the expression and / or function of a splice variants BIMEL and BIML, while retaining the expression and / or function of a splice variant of BIM, BIMs, relative to an unmodified control.

[0227] In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in BIM that comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, or SEQ ID NO: 22 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%or 100%) identity thereto.

[0228] Assays for determining the relative expression of a gene or function of a protein in a modified cell can be performed using various methods. Similarly, assays for determining the relative expression or function of a splice variant can be performed using various methods. For example, the relative expression of BIMs, BIMEL and BIML in a modified cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified control (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) can be determined using qPCR, dPCR, ddPCR, or nucleotide sequencing (e.g., next generation sequencing) . Additionally, the relative expression of BIMs, BIMEL and BIML in a modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to each other in the modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) can be determined using qPCR, dPCR, ddPCR, or nucleotide sequencing (e.g., next generation sequencing) .D. FAS CELL SURFACE DEATH RECEPTOR (FAS) GENOMIC DISRUPTION

[0229] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six, or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three, or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is a genomic disruption of the endogenous FAS cell surface death receptor (FAS) gene. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous FAS gene. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified (e.g., with any one or more genomic disruptions in SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter and a suicide switch) or unmodified αβT-iPSC, modified or unmodified T-iHSC, modified or unmodified T-iCLP, or modified or unmodified immature T-iαβT cell. In some embodiments, the genomic disruptions are of at least two or all three of SOCS1, CISH, and BIM, and further in FAS, and optionally further in CIITA and / or B2M. In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0230] In some embodiments, the modified cell comprises a genomic disruption in an endogenous FAS gene that suppresses or eliminates expression of the FAS gene relative to an unmodified control. In some embodiments, the genomic disruption in the FAS gene is an inactivating nucleic acid mutation (e.g., knock out) . In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the FAS gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption in the FAS gene is an endonuclease-mediated indel. In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the FAS gene is an endonuclease-mediated indel, such as a targeted knockout obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) designed to target FAS.

[0231] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous FAS gene is in exon 1. In some embodiments, the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 1. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in FAS that comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 62 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%or 100%) identity thereto.

[0232] Assays for determining the relative expression of a gene or function of a protein encoded by the gene in a modified cell (e.g., T-iαβT-cell) can be performed using various methods. For example, the relative expression of the FAS gene in a modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification can be determined using quantitative polymerase chain reaction (qPCR) , digital PCR (dPCR) , droplet digital PCR (ddPCR) , or nucleotide sequencing (e.g., next generation sequencing) . ddPCR can be performed using suitable nucleic acid quantification kits or instruments, including e.g., Qubit BR dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Qubit HS dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Nanodrop spectrophotometer (Thermo Fischer Scientific) , Stunner spectrophotometer (Unchained Labs) , and Lunatic spectrophotometer (Unchained Labs) . Nucleotide sequencing can be performed using NextSeq (Ilumina) , GridION (Oxford Nanopore Technologies) , Revio System (Pacific Biosciences) , and the like.E. β-2-MICROGLOBULIN (B2M) GENOMIC DISRUPTION

[0233] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six, or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three, or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is a genomic disruption of the endogenous β-2-Microglobulin (B2M) gene. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous B2M gene. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified (e.g., with any one or more genomic disruptions in SOCS1, CISH, BIM, FAS, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter and a suicide switch) or unmodified αβT-iPSC, modified or unmodified T-iHSC, modified or unmodified T-iCLP, or modified or unmodified immature T-iαβT cell. In some embodiments, the genomic disruptions are of at least two or all three of SOCS1, CISH, and BIM, and further in CIITA and / or B2M, and optionally further in FAS. In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0234] In some embodiments, the modified cell comprises a genomic disruption in an endogenous B2M gene that suppresses or eliminates expression of the B2M gene relative to an unmodified control. In some embodiments, the genomic disruption in the B2M gene is an inactivating nucleic acid mutation (e.g., knock out) . In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the B2M gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption in the B2M gene is an endonuclease-mediated indel. In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the B2M gene is an endonuclease-mediated indel, such as a targeted knockout obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) designed to target B2M.

[0235] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous B2M gene is in exon 2. In some embodiments, the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in B2M that comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 56 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%or 100%) identity thereto.

[0236] Assays for determining the relative expression of a gene or function of a protein encoded by the gene in a modified cell (e.g., T-iαβT-cell) can be performed using various methods. For example, the relative expression of the B2M gene in a modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification can be determined using quantitative polymerase chain reaction (qPCR) , digital PCR (dPCR) , droplet digital PCR (ddPCR) , or nucleotide sequencing (e.g., next generation sequencing) . ddPCR can be performed using suitable nucleic acid quantification kits or instruments, including e.g., Qubit BR dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Qubit HS dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Nanodrop spectrophotometer (Thermo Fischer Scientific) , Stunner spectrophotometer (Unchained Labs) , and Lunatic spectrophotometer (Unchained Labs) . Nucleotide sequencing can be performed using NextSeq (Ilumina) , GridION (Oxford Nanopore Technologies) , Revio System (Pacific Biosciences) , and the like.F. CLASS II TRANSACTIVATOR (CIITA) GENOMIC DISRUPTION

[0237] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six, or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three, or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is a genomic disruption of the endogenous Class II transactivator (CIITA) gene. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous CIITA gene. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified (e.g., with any one or more genomic disruptions in SOCIS1, CISH, BIM, FAS, B2M, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter and a suicide switch) or unmodified αβT-iPSC, modified or unmodified T-iHSC, modified or unmodified T-iCLP, or modified or unmodified immature T-iαβT cell. In some embodiments, the genomic disruptions are of at least two or all three of SOCS1, CISH, and BIM, and further in CIITA and / or B2M, and optionally further in FAS. In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0238] In some embodiments, the modified cell comprises a genomic disruption in an endogenous CIITA gene that suppresses or eliminates expression of the CIITA gene relative to an unmodified control. In some embodiments, the genomic disruption in the CIITA gene is an inactivating nucleic acid mutation (e.g., knock out) . In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the CIITA gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption in the CIITA gene is an endonuclease-mediated indel. In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the CIITA gene is an endonuclease-mediated indel, such as a targeted knockout obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) designed to target CIITA.

[0239] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous CIITA gene is in exon 3. In some embodiments, the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in exon 3. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in CIITA that comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 59 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%or 100%) identity thereto.

[0240] Assays for determining the relative expression of a gene or function of a protein encoded by the gene in a modified cell (e.g., T-iαβT-cell) can be performed using various methods. For example, the relative expression of the CIITA gene in a modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification can be determined using quantitative polymerase chain reaction (qPCR) , digital PCR (dPCR) , droplet digital PCR (ddPCR) , or nucleotide sequencing (e.g., next generation sequencing) . ddPCR can be performed using suitable nucleic acid quantification kits or instruments, including e.g., Qubit BR dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Qubit HS dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Nanodrop spectrophotometer (Thermo Fischer Scientific) , Stunner spectrophotometer (Unchained Labs) , and Lunatic spectrophotometer (Unchained Labs) . Nucleotide sequencing can be performed using NextSeq (Ilumina) , GridION (Oxford Nanopore Technologies) , Revio System (Pacific Biosciences) , and the like.G. TRAC and / or TRBC1 / 2 GENOMIC DISRUPTION

[0241] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six or seven or more genomic disruptions and / or one, two or three or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is a genomic disruption in TRAC gene and / or a genomic disruption in TRBC1 / 2 gene. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising a genomic disruption in the endogenous TRAC gene and / or a genomic disruption in the TRBC1 / 2 gene. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising a genomic disruption in the endogenous TRAC gene and a genomic disruption in the TRBC1 / 2 gene. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising a genomic disruption in the endogenous TRAC gene and a genomic disruption in the TRBC1 and TRBC2 gene. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified αβT-iPSC (e.g., with any one or more genomic disruptions in SOCIS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter) or unmodified αβT-iPSC, modified or unmodified T-iHSC, modified or unmodified T-iCLP, or modified or unmodified immature T-iαβT cell. In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0242] In some embodiments, the modified cell comprises a genomic disruption in an endogenous TRAC gene that suppresses or eliminates expression of the TRAC gene relative to an unmodified control and / or a genomic disruption in an endogenous TRBC1 / 2 gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRBC1 / 2 protein. In some embodiments, the modified cell comprises a genomic disruption in an endogenous TRAC gene that suppresses or eliminates expression of the TRAC gene relative to an unmodified control and a genomic disruption in an endogenous TRBC1 and TRBC2 gene that suppresses or eliminates expression of the functional TRBC1 and TRBC2 protein. In some embodiments, the genomic disruption in the TRAC gene and / or TRBC1 / 2 gene is an inactivating nucleic acid mutation (e.g., knock out) . In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the TRAC gene and / or TRBC1 / 2 gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption in the TRAC gene and / or TRBC1 / 2 gene is an endonuclease-mediated indel. In some embodiments, the inactivating nucleic acid mutation in the TRAC gene and / or TRBC1 / 2 gene is an endonuclease-mediated indel, such as a targeted knockout obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) designed to target TRAC and / or TRBC1 / 2 gene.

[0243] Assays for determining the relative expression of a gene or function of a protein encoded by the gene in a modified cell (e.g., T-iαβT-cell) can be performed using various methods. For example, the relative expression of the SOCIS1, CISH, BIM, FAS, B2M, CIITA, TRAC gene, or TRBC1 / 2 gene in a modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification can be determined using quantitative polymerase chain reaction (qPCR) , digital PCR (dPCR) , droplet digital PCR (ddPCR) , or nucleotide sequencing (e.g., next generation sequencing) . ddPCR can be performed using suitable nucleic acid quantification kits or instruments, including e.g., Qubit BR dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Qubit HS dsDNA assay (Thermo Fisher Scientific) , Nanodrop spectrophotometer (Thermo Fischer Scientific) , Stunner spectrophotometer (Unchained Labs) , and Lunatic spectrophotometer (Unchained Labs) . Nucleotide sequencing can be performed using NextSeq (Ilumina) , GridION (Oxford Nanopore Technologies) , Revio System (Pacific Biosciences) , and the like.H. B2M-HLA-E INCORPORATION

[0244] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is an incorporation of B2M-HLA-E. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising an exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified iPSC (e.g., alone or with any one or more genomic disruptions in SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of signal converter and a suicide switch) . In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0245] In some embodiments, the modified cell comprises an exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E which results in the expression of B2M-HLA-E relative to an unmodified control. In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E is incorporated to the modified cell by knock-in. In some embodiments, the knock-in is a targeted knock-in obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) targeting a genomic locus of interest, in combination with a donor template comprising the exogenous polynucleotide for integration into the genomic locus of interest by homologous-directed repair. In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E is inserted into a B2M locus. In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E is incorporated to the modified cell by a lentiviral vector.

[0246] In some embodiments, B2M-HLA-E is a fusion protein comprising at least a portion of B2M fused with at least of a portion of HLA-E. In some embodiments, the B2M-HLA-E comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81. In some embodiments, the B2M-HLA-E consists essentially of or consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81.

[0247] In some embodiments, the CAG promoter was used to drive the expression from the exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E.I. SIGNAL CONVERTER

[0248] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is an incorporation of a signal converter. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified iPSC (e.g., alone or with any one or more genomic disruptions in SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or an incorporation of B2M-HLA-E and / or a suicide switch) . In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0249] In some embodiments, the signal converter is a chimeric structure of two or more different cytokine receptors, wherein the extracellular structure of the signal converter is from one cytokine receptor A and the intracellular structure of the signal converter is from another cytokine receptor B, the binding of cytokine A with the extracellular structure of the cytokine receptor A will transfer, transit or convert the intracellular signaling via the intracellular structure of the cytokine receptor B, which activates or improves the signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling in the cell which is not, little or less activated by the natural cytokine receptor A when binding with cytokine A. In some embodiments, the extracellular structure of the signal converter comprises one or more extracellular domains, from same or different cytokine receptor, or from one or more cytokine receptors. In some embodiments, the intracellular structure of the signal converter comprises one or more intracellular domains, from same or different cytokine receptor, or from one or more cytokine receptors.

[0250] In some embodiment, the extracellular structure of the signal converter is from interferon gamma receptor. In some embodiment, the intracellular structure of the signal converter is from interleukin-2 receptor. In some embodiments, the extracellular structure of the signal converter and the intracellular structure is linked via transmembrane structure, wherein the transmembrane structure comprises transmembrane domain from same or different cytokine receptors where the extracellular structure of the signal converter and the intracellular structure are from. In some embodiments, the transmembrane structure comprises transmembrane domain from same cytokine receptors where the extracellular structure of the signal converter or the intracellular structure is from. In some embodiments, the signal converter comprises membrane-proximal region between the ECD and the intracellular domain, said membrane-proximal region is from the same or different cytokine receptors where the extracellular structure of the signal converter and the intracellular structure is from. In some embodiments, the membrane-proximal region is from the same cytokine receptor where the extracellular domain of the signal converter is from, or and the same cytokine receptor where the intracellular domain of the signal converter is from. In some embodiments, the signal converter further comprises a signal peptide that enables trafficking of the signal converter to the cell membrane. In some embodiments, the signal peptide is removed from the signal converter after localization to the membrane.Signal converter comprising ECD of IFNGR and ICD of IL2R

[0251] In some embodiment, the extracellular structure of the signal converter comprises both the extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and the extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) . In some embodiments, the intracellular structure of the signal converter comprises the intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) and the intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) , wherein one ECD of IFNGR1 and IFNGR2 is linked or fused with one ICD of IL2RG and IL2RB to form a first fusion protein subunit, and the other ECD is linked or fused with the other ICD to form a second fusion protein subunit. In some embodiments, the signal converter further comprises transmembrane domains of IFNGR1 and IFNGR2, or the signal converter further comprises transmembrane domains of IL2RG and IL2RB. In some embodiments, the signal converter further comprises membrane-proximal regions of IFNGR1 and IFNGR2, or the signal converter further comprises membrane-proximal regions of IL2RG and IL2RB. In some embodiments, one of the IFNGR1 or IFNGR2 extracellular domain is fused sequentially with transmembrane domain, and intracellular domain of IL2RG to form the first fusion protein subunit, the other IFNGR2 or IFNGR1 extracellular domain is fused sequentially with transmembrane domain, and intracellular domain of IL2RB to form the second fusion protein subunit. In some embodiment, one of the IFNGR1 or IFNGR2 extracellular domain is fused sequentially with membrane-proximal region, transmembrane domain, and intracellular domain of IL2RG to form the first fusion protein subunit, the other IFNGR2 or IFNGR1 extracellular domain is fused sequentially with membrane-proximal region, transmembrane domain, and intracellular domain of IL2RB to form the second fusion protein subunit. In some embodiments, the first fusion protein subunit and the second fusion protein subunit of the signal converter further comprise a signal peptide.

[0252] In some embodiments, the signal peptide of the first fusion protein subunit comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73 or SEQ ID NO: 74, and the signal peptide of the second fusion protein subunit comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73 or SEQ ID NO: 74.

[0253] In some embodiments, the amino acid sequence of the signal peptide of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 73, and the amino acid sequence of the signal peptide of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 74. In some embodiments, the amino acid sequence of extracellular domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 63, and the amino acid sequence of extracellular domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 64. In some embodiments, the amino acid sequence of intracellular domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 69, and the amino acid sequence of intracellular domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 70. In some embodiments, the amino acid sequence of transmembrane domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 67, and the amino acid sequence of transmembrane domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 68. The amino acid sequence of membrane-proximal region of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 65, and the amino acid sequence of membrane-proximal region of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 66.

[0254] In some embodiments, the present disclosure provides a signal converter, wherein the signal converter comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) . In some embodiments, the first fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72. In some embodiments, the first fusion protein subunit of the signal converter consists essentially of or consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter consists essentially of or consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72. In some embodiments, the first exogenous polynucleotide encoding an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 75 (the first fusion protein subunit with signal peptide) , and the second exogenous polynucleotide encoding an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 76 ( (the second fusion protein subunit with signal peptide) ) .

[0255] In some embodiments, the modified cell comprises one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, which results in the expression of signal converter relative to an unmodified control. In some embodiments, the one or more exogenous polynucleotides encoding the signal converter are incorporated to the modified cell by knock-in. In some embodiments, the knock-in is a targeted knock-in obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) targeting a genomic locus of interest, in combination with a donor template comprising the exogenous polynucleotide for integration into the genomic locus of interest by homologous-directed repair. In some embodiments, one or more exogenous polynucleotides encoding the signal converter are incorporated to the modified cell by a lentiviral vector.

[0256] In some embodiments, the first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus. In some embodiments, the second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus.

[0257] In some embodiments, the first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus. In some embodiments, the second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus.

[0258] In some embodiments, the CAG promoter was used to drive the expression from the first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit and the second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit.J. SUICIDE SWITCH INCORPORATION

[0259] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is an incorporation of B2M-HLA-E. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising an exogenous polynucleotide encoding B2M-HLA-E. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified iPSC (e.g., alone or with any one or more genomic disruptions in SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter) . In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0260] In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding a suicide switch is incorporated to the modified cell by knock-in. In some embodiments, the knock-in is a targeted knock-in obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) targeting a genomic locus of interest, in combination with a donor template comprising the exogenous polynucleotide for integration into the genomic locus of interest by homologous-directed repair. In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding the suicide switch is inserted into a Rogi2 locus. In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding the suicide switch is inserted into a FAS locus. In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding a suicide switch is incorporated to the modified cell by a lentiviral vector.

[0261] In some embodiments, the suicide switch comprises a herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) polypeptide or a functional variant thereof capable of inducing cell death upon administration of Ganciclovir (GCV) . In some embodiments, the suicide switch comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85. In some embodiments, the suicide switch consists essentially of or consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85.K. SINGLE, DOUBLE, TRIPLE, QUADRUPLE, QUINTUPLE, AND SEXTUPLE OR MORE GENOMIC DISRUPTIONS

[0262] The present disclosure provides single-gene, double-gene, triple-gene, quadruple-gene, quintuple-gene, or sextuple-gene modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one or more genomic disruptions in the following genes: the endogenous SOCS1 gene, CISH gene, BIM gene, FAS gene, B2M gene, and CIITA gene. The present disclosure provides double-gene, triple-gene, quadruple-gene, quintuple-gene, or sextuple-gene modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising a genomic disruption of the endogenous SOCS1 and CISH genes, optionally a BIM gene, optionally a FAS gene, optionally a B2M gene, and, optionally a CIITA gene. In some embodiments, the modified cell is a T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous SOCS1 and CISH genes. In some embodiments, the modified cell is a T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous SOCS1, CISH, and BIM genes. In some embodiments, the modified cell is a T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous SOCS1, CISH, BIM, and FAS genes. In some embodiments, the modified cell is a T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous SOCS1, CISH, BIM, B2M, and CIITA genes. In some embodiments, the modified cell is a T-iαβT cell comprising a genomic disruption of the endogenous SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, and CIITA genes. In some embodiments, the modified cell is differentiated from a αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell, where the modifications can occur at any of these cell development stages and be carried through to αβT maturity, or wherein the modifications can occur at αβT maturity, i.e., at the T-iαβT stage.

[0263] In some embodiments, the modified cell comprises a genomic disruption in an endogenous SOCS1 and CISH genes that suppresses or eliminates expression of the SOCS1 and CISH genes.

[0264] The present disclosure provides modified iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., αβT-iPSC, αβT-iHSC, αβT-iCLP) ) comprising a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1, a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, and, optionally, a genomic disruption in an endogenous BIM gene that suppresses or eliminates expression of BIM.

[0265] The present disclosure provides modified iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., αβT-iPSC, αβT-iHSC, αβT-iCLP) ) comprising a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1, a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, optionally a genomic disruption in an endogenous BIM gene that suppresses or eliminates expression of BIM, and, optionally a genomic disruption in an endogenous FAS gene that suppresses or eliminates expression of FAS.

[0266] The present disclosure provides modified iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., αβT-iPSC, αβT-iHSC, αβT-iCLP) ) comprising a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1, a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, optionally a genomic disruption in an endogenous BIM gene that suppresses or eliminates expression of BIM, optionally a genomic disruption in an endogenous B2M gene that suppresses or eliminates expression of B2M, and, optionally a genomic disruption in an endogenous CIITA gene that suppresses or eliminates expression of CIITA.

[0267] The present disclosure provides modified iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., αβT-iPSC, αβT-iHSC, αβT-iCLP) ) comprising a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1, a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, optionally a genomic disruption in an endogenous BIM gene that suppresses or eliminates expression of BIM, optionally a genomic disruption in an endogenous FAS gene that suppresses or eliminates expression of FAS, optionally a genomic disruption in an endogenous B2M gene that suppresses or eliminates expression of B2M, and, optionally a genomic disruption in an endogenous CIITA gene that suppresses or eliminates expression of CIITA.

[0268] In some embodiments, the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control. In some embodiments, the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell.

[0269] In some embodiments, the single-gene, double-gene, triple-gene, quadruple-gene, quintuple-gene, or sextuple-gene modified αβT-cells could further comprise a genomic disruption of the TRAC gene and / or TRBC1 / 2 gene.

[0270] In some embodiments, the genomic disruption is made by administering guide RNAs to the cell, optionally wherein the guide RNAs are single-guide RNAs (sgRNAs) , and wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease is also administered to the cell. Further information on the guide RNA and endonuclease could be found in other sections of the present disclosure, e.g., Section V: Gene editing systems.

[0271] Also encompassed are populations of cells comprising the single-, double-, triple-, quadruple-, quintuple-, or sextuple-genomic disruptions described herein.

[0272] In some embodiments, the cells are stored for a length of time before use. In some embodiments, the time is weeks or months. In some embodiments, the time is months or years.

[0273] In some embodiments, the cells are stored frozen in liquid nitrogen at -196 degrees Celsius.III. MODIFIED CELLS COMPRISING CAR and / or TCRαβ, e.g., anti-KRAS G12V TCR

[0274] The modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC herein, including Section II, can serve as a platform cell for introduction of an antigen receptor, such as chimeric antigen receptor (CAR) or T cell receptor (TCR) .

[0275] The modified cells herein, e.g., the modified cells described in Section II, further comprise one or more exogenous polynucleotides encoding a T cell receptor (TCR) .

[0276] The modified cells herein, e.g., the modified cells described in Section II, further comprise one or more exogenous polynucleotides encoding a chimeric antigen receptor (CAR) , to recognize tumor-associated antigens (TAAs) expressed on the surface of cancer cells.

[0277] The modified cells herein, e.g., the modified cells described in Section II, further comprise one or more exogenous polynucleotides encoding CAR (e.g., an exogenous polynucleotide encoding anti-CD19 CAR and / or an exogenous polynucleotide encoding anti-CD20 CAR) and / or TCRαβ, e.g., the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V (anti-KRAS G12V TCR) .

[0278] In some embodiments, the modified cells herein, e.g., the modified cells described in Section II, further comprise one or more exogenous polynucleotides encoding TCRαβ, e.g., the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V (anti-KRAS G12V TCR) .

[0279] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is an incorporation of anti-KRAS G12V TCR. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising an exogenous polynucleotide encoding anti-KRAS G12V TCR. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified iPSC (e.g., with any one or more genomic disruptions in SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter, and CAR) . In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0280] In some embodiments, the modified cell comprises one or more exogenous polynucleotides encoding anti-KRAS G12V TCR which results in the expression of anti-KRAS G12V TCR relative to an unmodified control. In some embodiments, the one or more exogenous polynucleotides encoding anti-KRAS G12V TCR are incorporated to the modified cell by knock-in. In some embodiments, the knock-in is a targeted knock-in obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) targeting a genomic locus of interest, in combination with a donor template comprising the exogenous polynucleotide for integration into the genomic locus of interest by homologous-directed repair. In some embodiments, the one or more exogenous polynucleotides encoding anti-KRAS G12V TCR are inserted into a TRAC locus. In some embodiments, the one or more exogenous polynucleotides encoding anti-KRAS G12V TCR is incorporated to the modified cell by a lentiviral vector.

[0281] In some embodiments, anti-KRAS G12V TCR comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80. In some embodiments, anti-KRAS G12V TCR comprises an α chain consisting essentially of or consisting of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 79 and a β chain consisting essentially of or consisting of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80.

[0282] In some embodiments, anti-KRAS G12V TCR comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83. In some embodiments, anti-KRAS G12V TCR comprises an α chain consisting essentially of or consisting of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and a β chain consisting essentially of or consisting of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.

[0283] In some embodiments, the exogenous TCRαβ (e.g., anti-KRAS G12V TCR) further comprised in the modified cells herein is used to improve the differentiation efficiency from iPSC to αβT when the wide type TCRαβ therein is not functional (e.g., without a functional TRAC; e.g., TRAC KO) . In some embodiments, the exogenous TCRαβ (e.g., anti-KRAS G12V TCR) further comprised in the modified cells herein is used to target KRAS G12V on cancer cells.

[0284] In some embodiments, the modified cells herein, e.g., the modified cells described in Section II, further comprise an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) , e.g., a CAR which specifically binds human CD19 (anti-CD19 CAR) , optionally further comprising an exogenous polynucleotide encoding a TCRαβ, e.g., the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V (anti-KRAS G12V TCR) .

[0285] In some embodiments, the modified cells herein, e.g., the modified cells described in Section II, further comprise an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) , e.g., a CAR which specifically binds human CD20 (anti-CD20 CAR) , optionally further comprising an exogenous polynucleotide encoding a TCRαβ, e.g., the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V (anti-KRAS G12V TCR) .

[0286] In some embodiments, the modified cells herein, e.g., the modified cells described in Section II, further comprise an exogenous polynucleotide encoding a CAR which specifically binds human CD19 (anti-CD19 CAR) and an exogenous polynucleotide encoding a CAR which specifically binds human CD20 (anti-CD20 CAR) , optionally further comprising an exogenous polynucleotide encoding a TCRαβ, e.g., the TCRαβ which specifically binds KRAS G12V (anti-KRAS G12V TCR) .

[0287] The present disclosure provides modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising one, two, three, four, five, six or seven or more genomic disruptions and / or one, two, three or four or more of exogenous polynucleotide incorporations, one of which is an incorporation of anti-CD19 CAR and / or anti-CD20 CAR. In some embodiments, the modified cell is a modified T-iαβT cell comprising an exogenous polynucleotide encoding anti-CD19 CAR and / or anti-CD20 CAR. In some embodiments, the modified cell is a αβT-cell that is differentiated from a modified iPSC (e.g., with any one or more genomic disruptions in SOCS1, CISH, BIM, FAS, B2M, CIITA, TRAC and TRBC1 / 2, and / or any one or more incorporations of B2M-HLA-E and signal converter, and TCR) . In some embodiments, the modified cell is from a primary αβT-cell.

[0288] In some embodiments, the modified cell comprises an exogenous polynucleotide encoding anti-CD19 CAR which results in the expression of anti-CD19 CAR relative to an unmodified control. In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding anti-CD19 CAR is incorporated to the modified cell by knock-in. In some embodiments, the knock-in is a targeted knock-in obtainable by a CRISPR-Cas system (e.g., Cas9, Cas12 or MAD7) targeting a genomic locus of interest, in combination with a donor template comprising the exogenous polynucleotide for integration into the genomic locus of interest by homologous-directed repair. In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding anti-CD19 CAR is inserted into an AAVS1 locus, which is a safe harbor. In some embodiments, the exogenous polynucleotide encoding anti-CD19 CAR is incorporated to the modified cell by a lentiviral vector.

[0289] In some embodiments, anti-CD19 CAR comprising an amino acid sequence of SED ID NO: 93. In some embodiments, anti-human CLL1 CAR comprises an amino acid sequence of SED ID NO: 94. In some embodiments, anti-CD19 CAR consists essentially of or consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 or SEQ ID NO: 94.

[0290] In some embodiments, the anti-CD19 CAR further comprises a signal peptide (e.g., comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 87) that enables trafficking of the CAR to the cell membrane. In some embodiments, the signal peptide is removed from the signal converter after localization to the membrane.

[0291] In some embodiments, the CAG promoter was used to drive the expression from the exogenous polynucleotide encoding anti-CD19 CAR.IV. FUNCTIONAL ENHANCEMENT OF PROLIFERATION AND KILLING ACTIVITY

[0292] In some embodiments, the present disclosure presents modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) with functional enhancement of proliferation and / or tumor killing activity. More specifically, the functional enhancement is achieved by activating or improved activation of signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling in the cell. Also disclosed is the method of improving the proliferation and / or tumor killing activity of αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) , by activating or improved activation of signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling in the cell.

[0293] In some embodiments, the method of functional enhancement of proliferation and / or tumor killing activity is achieved by introducing one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter into the iPSC or αβT-cells.

[0294] Further information on the signal converter could be found in other sections of the present disclosure, e.g., Section II (I) : Signal converter.

[0295] In some embodiments, the amino acid sequence of ECD of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 63, and the amino acid sequence of ECD of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 64. In some embodiments, the amino acid sequence of intracellular domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 69, and the amino acid sequence of intracellular domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 70. In some embodiments, the amino acid sequence of transmembrane domain of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 67, and the amino acid sequence of transmembrane domain of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 68. The amino acid sequence of membrane-proximal region of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 65, and the amino acid sequence of membrane-proximal region of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 66.

[0296] In some embodiments, the present disclosure provides the modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) comprising a signal converter, wherein the signal converter comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) , optionally further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19 and / or an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20, optionally wherein the exogenous polynucleotide encoding the CAR which specifically binds human CD19 is inserted into an AAVS1 locus , optionally wherein the CAR which specifically binds human CD19 comprises, consists essentially of or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 or SEQ ID NO: 94.

[0297] In some embodiments, the first fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72. In some embodiments, the first fusion protein subunit of the signal converter consists essentially of or consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter consists essentially of or consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72. In some embodiments, the first exogenous polynucleotide encoding an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 75 (the first fusion protein subunit with signal peptide) , and the second exogenous polynucleotide encoding an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 76 ( (the second fusion protein subunit with signal peptide) ) .

[0298] In some embodiments, the amino acid sequence of the first fusion protein subunit is SEQ ID NO: 71, and the amino acid sequence of the second fusion protein subunit is SEQ ID NO: 72.

[0299] The modified αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) with functional enhancement of proliferation and / or tumor killing activity disclosed herein can be previously or further subject to gene editing for suppressing cytokine signaling disclosed in the other sections of this disclosure.V. GENE EDITING SYSTEMS

[0300] Disclosed herein are gene editing systems that are optimized to disrupt the genomes of the cells herein (e.g., the αβT cell, iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) , specifically within the genes of SOCS1; CISH; BIM; SOCS1 and CISH; SOCS1, CISH, and BIM; SOCS1, CISH, and FAS; SOCS1, CISH, BIM, and FAS; B2M, CIITA, CISH, SOCS1, and BIM; B2M, CIITA, CISH, SOCS1, BIM, and FAS.A. CLUSTERED REGULARLY INTERSPACE SHORT PALINDROMIC REPEATS (CRISPR)

[0301] In some embodiments, the gene editing system used to modify αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) is clustered regularly interspace short palindromic repeats (CRISPR) system comprising one or more guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding a nuclease. The CRISPR gene editing system comprises a guide RNA, including e.g., a single guide RNA (sgRNA) or crRNA, and a nuclease, including e.g., an endonuclease, or a nucleic acid encoding a nuclease, including e.g., a nucleic acid encoding an endonuclease.

[0302] In some embodiments, the guide RNA comprises a guide sequence that binds to a target sequence in SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and / or FAS of the cells used herein (e.g., the T-iαβT cell, the αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) . In some embodiments, the genomic disruption within SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, or FAS gene is made by administering a nuclease (e.g., endonuclease) , a plurality of nucleases (e.g., endonucleases) , or a nucleic acid encoding an endonuclease (s) and a guide RNA or a plurality of guide RNAs to the cells used herein (e.g., the T-iαβT cell, the αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) .

[0303] In some embodiments, the administration of the nuclease and the guide RNA to the cells used herein (e.g., the T-iαβT cell, the αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is performed sequentially in which a guide RNA targeting a first gene (e.g., SOCS1) is administered initially, followed by administration of a guide RNA targeting a second gene (e.g., CISH) . In some embodiments, an administration of a guide RNA targeting a third gene (e.g., BIM) can be performed. In some embodiments, an administration of a guide RNA targeting a fourth gene (e.g., FAS) can be performed. In some embodiments, an administration of a guide RNA targeting a fifth gene (e.g., B2M) can be performed. In some embodiments, an administration of a guide RNA targeting a sixth gene (e.g., CIITA) can be performed. The sequential administration of guide RNA targeting a gene can be performed in any order.

[0304] Disclosed herein are single guide RNA (sgRNA) or crRNA nucleotide sequences that bind to a target sequence in the SOCS1 gene in which the sgRNA or crRNA nucleotide sequence comprises any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, 37, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto. Disclosed herein are sgRNA or crRNA nucleotide sequences that bind to a target sequence in the CISH gene in which the sgRNA or crRNA nucleotide sequence comprises any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, 38, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto. Disclosed herein are sgRNA or crRNA nucleotide sequences that bind to a target sequence in the BIM gene in which the sgRNA or crRNA nucleotide sequence comprises any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, 36, or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto. Disclosed herein are sgRNA nucleotide sequences that bind to a target sequence in the FAS gene in which the sgRNA nucleotide sequence comprises any one or more of SEQ ID NOs: 60, 61, or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto. Disclosed herein are sgRNA nucleotide sequences that bind to a target sequence in the B2M gene in which the sgRNA nucleotide sequence comprises any one or more of SEQ ID NOs: 54, 55, or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto. Disclosed herein are sgRNA nucleotide sequences that bind to a target sequence in the CIITA gene in which the sgRNA nucleotide sequence comprises any one or more of SEQ ID NOs: 57, 58, or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto.

[0305] Disclosed herein is a gene editing system comprising one or more guide RNA (e.g., sgRNA or crRNA) and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, in which the one or more guide RNA comprises a guide sequence or a sgRNA / crRNA sequence comprising:(1) any one of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37;(2) any one of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38;(3) any one of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10 and 36;(4) any one of SEQ ID NOs: 60 and 61;(5) any one of SEQ ID NOs: 54 and 55;(6) any one of SEQ ID NOs: 57 and 58;(7) any one of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37 and any one of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38;(8) any one of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37, any one of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38, and any one of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10 and 36;(9) any one of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37, any one of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38, any one of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10 and 36, and any one of SEQ ID NOs: 60 and 61;(10) any one of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37, any one of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38, any one of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10 and 36, any one of SEQ ID NOs: 54 and 55, and any one of SEQ ID NOs: 57 and 58; or(11) any one of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37, any one of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38, any one of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10 and 36, any one of SEQ ID NOs: 54 and 55, any one of SEQ ID NOs: 57 and 58, and any one of SEQ ID NOs: 60 and 61.

[0306] Disclosed herein is a gene editing system comprising one or more guide RNA (e.g., sgRNA or crRNA) and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, in which the one or more guide RNA comprises a guide sequence or a sgRNA / crRNA sequence comprising:(1) any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, 37, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37;(2) any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, 38, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38;(3) any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, and 36, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10 and 36;(4) any one of SEQ ID NOs: 60, 61, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 60 and 61;(5) any one of SEQ ID NOs: 54, 55, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 54 and 55;(6) any one of SEQ ID NOs: 57, 58, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 57 and 58;(7) any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, 37, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37 and any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, 38, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38;(8) any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, 37, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37, any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, 38, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38, and any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, 36, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, and 36;(9) any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, 37, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37, any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, 38, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38, any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, 36, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, and 36, and any one of SEQ ID NOs: 60, 61 and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 60 and 61;(10) any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, 37, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37, any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, 38, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38, any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, 36, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, and 36, any one of SEQ ID NOs: 54, 55, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 54 and 55, and any one of SEQ ID NOs: 57, 58, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 57 and 58;(11) or any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, 37, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, and 37, any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, 38, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, and 38, any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, 36, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, and 36, any one of SEQ ID NOs: 54, 55, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 54 and 55, any one of SEQ ID NOs: 57, 58, and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 57 and 58, and any one of SEQ ID NOs: 60, 61 and a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one or more of SEQ ID NOs: 60 and 61.

[0307] Disclosed herein is a gene editing system comprising one or more sgRNA and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, in which the one or more sgRNA comprises a guide sequence that binds to a target sequence in a target gene. In some embodiments, the target sequence comprises:(1) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24;(2) any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22;(3) SEQ ID NO: 62;(4) SEQ ID NO: 56;(5) SEQ ID NO: 59;(6) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24 and any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22;(7) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24, any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22, and SEQ ID NO: 62;(8) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24, any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22, SEQ ID NO: 56, and SEQ ID NO: 59; or(9) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24, any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 56, and SEQ ID NO: 59.In some embodiments, the target sequence comprises:(1) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, 24, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24;(2) any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, 22, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22;(3) any one or more of SEQ ID NO: 62 and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to SEQ ID NO: 62;(4) any one or more of SEQ ID NO: 56 and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to SEQ ID NO: 56;(5) any one or more of SEQ ID NO: 59 and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to SEQ ID NO: 59;(6) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, 24, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24 and any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, 22, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22;(7) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, 24, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24, any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, 22, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22, and any one or more of SEQ ID NO: 62 and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to SEQ ID NO: 62;(8) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, 24, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24, any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, 22, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22, any one or more of SEQ ID NO: 56 and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to SEQ ID NO: 56, and any one or more of SEQ ID NO: 59 and a nucleotide sequence having at least 70%(e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to SEQ ID NO: 59;(9) any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, 24, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 17, 23, 15, 16, and 24, any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, 22, and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to any one or more of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22, any one or more of SEQ ID NO: 56 and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to SEQ ID NO: 56, any one or more of SEQ ID NO: 59 and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to SEQ ID NO: 59, and any one or more of SEQ ID NO: 62 and a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity to SEQ ID NO: 62.

[0308] Suitable endonucleases for use in the disclosed gene editing systems may include endonucleases known in the art, including e.g., a Cas endonuclease. In some embodiments, the Cas endonuclease is a Cas9, Cas12i2, Cas12a, Cas12b, Cas12c, Cas13a (C2c2) , Cas13b, or MAD7.

[0309] In some embodiments, the endonuclease used in the CRISPR gene editing system is a MAD7 endonuclease; and the target sequence of the guide RNA of the CRISPR gene editing system comprises SEQ ID NO: 22 and / or the guide RNA comprises a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from SEQ ID NO: 10. In some embodiments, the endonuclease used in the CRISPR gene editing system is a MAD7 endonuclease; and the target sequence of the guide RNA of the CRISPR gene editing system comprises SEQ ID NO: 23 and / or the guide RNA comprises a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from SEQ ID NO: 11. In some embodiments, the endonuclease used in the CRISPR gene editing system is a MAD7 endonuclease; and, the target sequence of the guide RNA of the CRISPR gene editing system comprises SEQ ID NO: 24 and / or the guide RNA comprises a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from SEQ ID NO: 12.

[0310] In some embodiments, the endonuclease used in the CRISPR gene editing system is a Cas9 endonuclease; and the target sequence of the guide RNA of the CRISPR gene editing system comprises any one of SEQ ID NO: 14, 18, 19, 20, and 21, and / or the guide RNA comprises a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, and 9. In some embodiments, the endonuclease used in the CRISPR gene editing system is a Cas9 endonuclease; and the target sequence of the guide RNA of the CRISPR gene editing system comprises SEQ ID NO: 17 and / or the guide RNA comprises a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from SEQ ID NO: 5. In some embodiments, the endonuclease used in the CRISPR gene editing system is a Cas9 endonuclease; and, the target sequence of the guide RNA of the CRISPR gene editing system comprises any one of SEQ ID NOs: 15 or 16 and / or the guide RNA comprises a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from SEQ ID NOs: 3 or 4. In some embodiments, the endonuclease used in the CRISPR gene editing system is a Cas9 endonuclease; and, the target sequence of the guide RNA of the CRISPR gene editing system comprises SEQ ID NOs: 62 and / or the guide RNA comprises a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from SEQ ID NO: 61. In some embodiments, the endonuclease used in the CRISPR gene editing system is a Cas9 endonuclease; and, the target sequence of the guide RNA of the CRISPR gene editing system comprises SEQ ID NOs: 56 and / or the guide RNA comprises a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from SEQ ID NO: 55. In some embodiments, the endonuclease used in the CRISPR gene editing system is a Cas9 endonuclease; and, the target sequence of the guide RNA of the CRISPR gene editing system comprises SEQ ID NOs: 59 and / or the guide RNA comprises a sequence differing by no more than 5, 4, 3, 2, or 1 nucleotide (s) from SEQ ID NO: 58.

[0311] In some embodiments, the guide RNA comprises SEQ ID NO: 5 (SOCS1) , SEQ ID NO: 29 (SOCS1) , SEQ ID NO: 11 (SOCS1) , SEQ ID NO: 37 (SOCS1) , SEQ ID NO: 27 (CISH) , SEQ ID NO: 28 (CISH) , SEQ ID NO: 12 (CISH) , SEQ ID NO: 38 (CISH) , SEQ ID NO: 2 (BIM) , SEQ ID NO: 26 (BIM) , SEQ ID NO: 6 (BIM) , SEQ ID NO: 32 (BIM) , SEQ ID NO: 7 (BIM) , SEQ ID NO: 33 (BIM) , SEQ ID NO: 8 (BIM) , SEQ ID NO: 34 (BIM) , SEQ ID NO: 9 (BIM) , SEQ ID NO: 35 (BIM) SEQ ID NO: 10 (BIM) , SEQ ID NO: 36 (BIM) , SEQ ID NO: 61 (FAS) , SEQ ID NO: 60 (FAS) , SEQ ID NO: 55 (B2M) , SEQ ID NO: 54 (B2M) , SEQ ID NO: 58 (CIITA) , or SEQ ID NO: 57 (CIITA) .

[0312] In some embodiments, the guide RNA comprises a CRISPR RNA (crRNA) sequence, in which the crRNA sequence comprises a 2'-O-Methyl modification at each of the first three positions of the 5’ end, and three 2'-O-Methyl modifications at the 3’ end of the crRNA, but not the very last base of the crRNA (e.g., for a 56 nucleotide crRNA, at base 53, 54, 55 of the crRNA, but not at base 56; for a 60 nucleotide crRNA, at base 57, 58, and 59, but not at base 60) , and a phosphorothioate linkage between each base in the first three positions of the 5’ end, and a phosphorothioate linkage between each base of the last 3 positions of the crRNA sequence at the 3’ end. In some embodiments, the last base is modified to facilitate use with MAD7. In some embodiments, the guide RNA binds to MAD7. In some embodiments, the methyl modifications at the 5’ end and the phosphorothioate linkages at the 3’ end are to increase the crRNA stability.

[0313] In some embodiments, the crRNA is about 56 bases long. In some embodiments, the crRNA sequence is 56 bases long, and comprises a 2'-O-Methyl modification at each of positions 53, 54, and 55 of the crRNA sequence on the 3’ end. In some embodiments, the crRNA sequence is 56 bases long, and comprises a 2'-O-Methyl modification at each of positions 53, 54, and 55 of the crRNA sequence on the 3’ end, and a 2'-O-Methyl modification at each of positions 1, 2, and 3 of the crRNA sequence at the 5’ end. In some embodiments, the crRNA sequence is 56 bases long, and comprises a 2'-O-Methyl modification at each of positions 53, 54, and 55 of the crRNA sequence on the 3’ end, and a 2'-O-Methyl modification at each of positions 1, 2, and 3 of the crRNA sequence at the 5’ end, and a phosphorothioate linkage between each base in the first three positions of the 5’ end, and a phosphorothioate linkage between each base of the last 3 positions of the crRNA sequence at the 3’ end. In some embodiments, the crRNA comprises SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, or SEQ ID NO: 38, which include the above-described modification pattern. In some embodiments, the last nucleotide at the 3’ end of the crRNA is modified with a nucleotide that anchors the crRNA binding to MAD7. In some embodiments, the last nucleotide at the 3’ end of the crRNA is modified with a pseudoknot that anchors the crRNA binding to MAD7.B. PROGRAMMABLE ADDITION VIA SITE-SPECIFIC TARGET ELEMENTS (PASTE)

[0314] In some embodiments, the gene editing system used to modify the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) is a Programmable Addition via Site-Specific Target Elements (PASTE) (see, e.g., Yarnall MTN, Ioannidi EI, Schmitt-Ulms C, Krajeski RN, Lim J, Villiger L, Zhou W, Jiang K, Garushyants SK, Roberts N, Zhang L, Vakulskas CA, Walker JA 2nd, Kadina AP, Zepeda AE, Holden K, Ma H, Xie J, Gao G, Foquet L, Bial G, Donnelly SK, Miyata Y, Radiloff DR, Henderson JM, Ujita A, Abudayyeh OO, Gootenberg JS. Drag-and-drop genome insertion of large sequences without double-strand DNA cleavage using CRISPR-directed integrases. Nat Biotechnol. 2023 Apr; 41 (4) : 500-512. ) . The PASTE gene editing system comprises a guide RNA, e.g., an attachment site-containing guide RNA (atgRNA) that incorporates a prime-editing guide RNA (pegRNA) sequence, which both specifies the target site and encodes the desired genomic disruption, and an attachment site for serine integrases. PASTE further comprises a CRISPR-Cas9 nickase fused to a reverse transcriptase and a serine integrase. In some embodiments, the pegRNA targets SOCS1. In some embodiments, the pegRNA targets CISH. In some embodiments, the pegRNA targets BIM. In some embodiments, the pegRNA targets B2M. In some embodiments, the pegRNA targets CIITA. In some embodiments, the pegRNA targets FAS. In some embodiments, the PASTE gene is transfected into αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) that is used to generate a modified T-iαβT cell.C. PRIME EDITING

[0315] In some embodiments, the gene editing system used to modify the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) is a Prime Editing (see Anzalone AV, Randolph PB, Davis JR, Sousa AA, Koblan LW, Levy JM, Chen PJ, Wilson C, Newby GA, Raguram A, Liu DR. Search-and-replace genome editing without double-strand breaks or donor DNA. Nature. 2019 Dec; 576 (7785) : 149-157. ) . The Prime Editing gene editing system comprises a guide RNA, including e.g., a pegRNA, which both specifies the target site and encodes the desired genomic disruption, and a CRISPR-Cas9 endonuclease fused to a reverse transcriptase. In some embodiments, the pegRNA targets SOCS1. In some embodiments, the pegRNA targets CISH. In some embodiments, the pegRNA targets BIM. In some embodiments, the pegRNA targets B2M. In some embodiments, the pegRNA targets CIITA. In some embodiments, the pegRNA targets FAS. In some embodiments, the Prime Editing gene editing system is transfected into αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) that is used to generate a modified T-iαβT cell.D. BASE EDITING

[0316] In some embodiments, the gene editing system used to modify the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) is base editing (see, e.g., Gaudelli NM, Komor AC, Rees HA, Packer MS, Badran AH, Bryson DI, Liu DR. Programmable base editing of A·T to G·C in genomic DNA without DNA cleavage. Nature. 2017 Nov 23; 551 (7681) : 464-471. ) . Base editing comprises a base editor, including e.g., a cytosine base editor or an adenine base editor, and a guide sequence used to target the base editor to a specific nucleotide sequence. The base editor comprises a Cas9 nickase and a nucleoside deaminase, including e.g., a cytosine deaminase or an adenine deaminase. The Cas9 nickase cuts one strand of DNA at a specific location determined by the guide sequence, and the nucleoside deaminase removes an amino group from a specific type of nucleoside (e.g., cytosine or adenine) . In some embodiments, the guide sequence targets SOCS1. In some embodiments, the guide sequence targets CISH. In some embodiments, the guide sequence targets BIM. In some embodiments, the sequence targets B2M. In some embodiments, the guide sequence targets CIITA. In some embodiments, the guide sequence targets FAS. In some embodiments, the base editing gene editing system is transfected into αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) that is used to generate a modified T-iαβT cell.E. TRANSCRIPTION ACTIVATOR-LIKE EFFECTOR NUCLEASES (TALENs)

[0317] In some embodiments, the gene editing system used to modify the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) is a transcription activator-like effector nuclease (TALEN) (see, e.g., Christian M, Cermark T, Doyle EL, Schmidt C, Zhang F, Hummel A, Bogdanove AJ, Voytas DF. Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases. Genetics. 2010; 186: 757–761. Further, see Miller JC, Tan S, Qiao G, Barlow KA, et al. A TALE nuclease architecture for efficient genome editing. Nat Biotechnol. 2011; 29: 143–148. Also, see Mussolino C, Morbitzer R, Lütge F, Dannemann N, Lahaye T, Cathomen T.A novel TALE nuclease scaffold enables high genome editing activity in combination with low toxicity. Nucl Acids Res. 2011; 39: 9283–9293. ) . The TALEN gene editing system comprises the TALEN, which is a restriction endonuclease, e.g., Fokl, fused to a transcription activator-like effector (TALE) that is engineered to bind to a desired DNA sequence to promote DNA cleavage at a specific location. In some embodiments, two distinct TALENs each target distinct regions of SOCS1. In some embodiments, two distinct TALENs each target distinct regions of CISH. In some embodiments, two distinct TALENs each target distinct regions of BIM. In some embodiments, two distinct TALENs each target distinct regions of B2M. In some embodiments, two distinct TALENs each target distinct regions of CIITA. In some embodiments, two distinct TALENs each target distinct regions of FAS. In some embodiments, the TALENs are transfected into αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) that is used to generate a modified T-iαβT cell.F. ZINC-FINGER NUCLEASES (ZFNs)

[0318] In some embodiments, the gene editing system used to modify the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) is a zinc-finger nuclease (ZFN) (see, e.g., Kim Y-G, Cha J, Chandrasegaran S. Hybrid restriction enzymes: Zinc finger fusions to FokI cleavage domain. Proc Natl Acad Sci USA. 1996; 93: 1156–1160. ) . In some embodiments, the ZFN comprises an endonuclease, including, e.g., Fokl, fused to zinc finger, in which each zinc finger domain of a zinc finger targets a sequence. In some embodiments, two distinct ZFNs each target distinct regions of SOCS1. In some embodiments, two distinct ZFNs each target distinct regions of CISH. In some embodiments, two distinct ZFNs each target distinct regions of BIM. In some embodiments, two distinct ZFNs each target distinct regions of B2M. In some embodiments, two distinct ZFNs each target distinct regions of CIITA. In some embodiments, two distinct ZFNs each target distinct regions of FAS. In some embodiments, ZFNs are transfected into αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) that is used to generate a modified T-iαβT cell.G. ENDONUCLEASES

[0319] Described herein are restriction endonuclease for use in the methods described herein, and also as components of the gene editing systems. For example, homing endonucleases and meganucleases are provided. In some embodiments, meganucleases, restriction endonucleases, and / or homing endonucleases are engineered to confer a genomic disruption or inactivating nucleic acid mutation in any one or more of BIM, SOCS, and CISH; SOCS1 and CISH, and, optionally, BIM, B2M, CIITA, and / or FAS in the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) . In some embodiments, one meganuclease targets SOCS1 and a second meganuclease targets CISH. In some embodiments, a third meganuclease targets BIM. In some embodiments, a fourth meganuclease targets B2M. In some embodiments, a fifth meganuclease targets CIITA. In some embodiments, a sixth meganuclease targets FAS. In some embodiments, one restriction endonuclease targets SOCS1 and a second restriction endonuclease targets CISH. In some embodiments, a third restriction endonuclease targets BIM. In some embodiments, a fourth restriction endonuclease targets B2M. In some embodiments, a fifth restriction endonuclease targets CIITA. In some embodiments, a sixth restriction endonuclease targets FAS. In some embodiments, one homing endonuclease targets SOCS1 and a second homing endonuclease targets CISH. In some embodiments, a third homing endonuclease targets BIM. In some embodiments, a fourth homing endonuclease targets B2M. In some embodiments, a fifth homing endonuclease targets CIITA. In some embodiments, a sixth homing endonuclease targets FAS. In some embodiments, the restriction endonuclease, homing endonucleases, and / or meganucleases are transfected into αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) that is used to generate a modified T-iαβT cell.H. TRANSFECTION

[0320] The present disclosure provides methods of modifying the cell used herein (e.g., the T-iαβT cell, the αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) by transfection, including e.g., electroporation (e.g.,   (Lonza Cologne GmbH, Cologne Germany) ) , physical transfection (e.g., microinjection, particle bombardment, or phototransfection) , lipid-mediated transfection, diethylaminoethyl (DEAE) -dextran transfection, calcium phosphate precipitation, cationic polymer transfection, or viral transfection.

[0321] To generate a genomic disruption or inactivating nucleic acid mutation, the cell can be transfected (e.g., nucleofected) with a gene editing system. In some embodiments, the gene editing system comprises an endonuclease, including, e.g., Cas9 or MAD7, and an sgRNA that targets SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, or FAS. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) undergoes a sequential transfection of the gene editing system. For example, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets SOCS1; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets CISH; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets SOCS1 and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease.

[0322] In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets SOCS1; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets BIM and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets CISH; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets SOCS1 and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets BIM and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets SOCS1; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets BIM and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets CISH; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets BIM and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets SOCS1 and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets BIM; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets SOCS1 and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets BIM; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets SOCS1 and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease.

[0323] In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets SOCS1; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets FAS and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets CISH; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets SOCS1 and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets FAS and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets SOCS1; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets FAS and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets CISH; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets FAS and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets SOCS1 and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets FAS; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets SOCS1 and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets FAS; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; then, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets SOCS1 and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease.

[0324] In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets SOCS1; and, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; and, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets BIM and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, or the first endonuclease; and, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets B2M and, optionally, a fourth endonuclease, the third endonuclease, the second endonuclease, or the first endonuclease; and, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CIITA; and, optionally, a fifth endonuclease; the fourth endonuclease, the third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with the sgRNA that targets SOCS1, the sgRNA that targets CISH, the sgRNA that targets BIM, and the sgRNA that targets B2M, the sgRNA that targets CIITA in any order. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with the first endonuclease, the second endonuclease, the third endonuclease, the fourth endonuclease, the fifth endonuclease, or any combination thereof in any order.

[0325] In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with a first endonuclease and an sgRNA that targets SOCS1; and, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CISH and, optionally, a second endonuclease or the first endonuclease; and, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets BIM and, optionally, a third endonuclease, the second endonuclease, or the first endonuclease; and, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets B2M and, optionally, a fourth endonuclease, the third endonuclease, the second endonuclease, or the first endonuclease; and, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets CIITA; and, optionally, a fifth endonuclease, the fourth endonuclease, the third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease; and, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with an sgRNA that targets FAS; and, optionally, a sixth endonuclease, the fifth endonuclease, the fourth endonuclease, the third endonuclease, the second endonuclease, and / or the first endonuclease. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with the sgRNA that targets SOCS1, the sgRNA that targets CISH, the sgRNA that targets BIM, the sgRNA that targets B2M, the sgRNA that targets CIITA, the sgRNA that targets B2M, and the sgRNA that targets FAS in any order. In some embodiments, the cell (e.g., T-iαβT cell, αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) is transfected with the first endonuclease, the second endonuclease, the third endonuclease, the fourth endonuclease, the fifth endonuclease, the sixth endonuclease or any combination thereof in any order.VI. METHODS OF GENERATING THE MODIFIED CELLS

[0326] In some embodiments, methods of inhibiting expression of any one or more of a SOCS1 gene, a CISH gene and a BIM gene in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) are provided.

[0327] In some embodiments, methods of inhibiting expression of a SOCS1 gene and a CISH gene in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) are provided. In some embodiments, methods of inhibiting expression of a SOCS1 gene, a CISH gene, and a BIM gene in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) are provided. In some embodiments, methods of inhibiting expression of a SOCS1 gene, a CISH gene, a BIM gene, and a FAS gene in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) are provided. In some embodiments, methods of inhibiting expression of a SOCS1 gene, a CISH gene, a BIM gene, a B2M gene, and a CIITA gene in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) are provided. In some embodiments, methods of inhibiting expression of a SOCS1 gene, a CISH gene, a BIM gene, a B2M gene, a CIITA gene, and a FAS gene in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells (and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) ) are provided. In some embodiments, the method suppresses or eliminates expression of SOCS1 and CISH. In some embodiments, the method suppresses or eliminates expression of SOCS1, CISH, and BIM. In some embodiments, the method suppresses or eliminates expression of SOCS1, CISH, BIM, and FAS. In some embodiments, the method suppresses or eliminates expression of SOCS1, CISH, BIM, B2M, and CIITA. In some embodiments, the method suppresses or eliminates expression of SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS. In some instances, the expression of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) . In some embodiments, the expression of BIMS splice variant is retained in the modified cell.

[0328] Described herein is a method of inhibiting expression of SOCS1 and / or CISH genes in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) that is used to generate a modified T-iαβT cell. The method comprises using a gene editing system (e.g., gene editing system described in Section V) to modify the αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . For example, the cells (e.g., the T-iαβT cell, the αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) can be contacted with guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, wherein the contacting results in a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1 and / or a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH. In some embodiments, the genomic disruption within SOCS1 and / or CISH is made by administering guide RNAs to the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) . In some embodiments, the guide RNAs are sgRNAs. In some embodiments, the guide RNAs comprise any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, 37 and / or any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, or 38. In some embodiments, the endonuclease that is administered to the cell is a Cas endonuclease. In some embodiments, the Cas endonuclease that is administered to the cell is MAD7 endonuclease. The MAD7 endonuclease is an engineered class 2 type V-ACRISPR–Cas (Cas12a / Cpf1) system.

[0329] Described herein is a method of inhibiting expression of BIM gene in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) that is used to generate a modified T-iαβT cell. The method comprises using a gene editing system (e.g., gene editing system described in Section V) to modify the αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . For example, the cells (e.g., the T-iαβT cell, the αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) can be contacted with guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, wherein the contacting results in a genomic disruption in an endogenous BIM gene that suppresses or eliminates expression of BIM, wherein the genomic disruption is in an exon 2C of an endogenous BIM gene, and the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell. In some embodiments, the genomic disruption within BIM is made by administering guide RNAs to the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) . In some embodiments, the guide RNAs are sgRNAs. In some embodiments, the guide RNAs comprise any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 8, 34, 9, 35, 10 and 36. In some embodiments, the endonuclease that is administered to the cell is a Cas endonuclease. In some embodiments, the Cas endonuclease that is administered to the cell is MAD7 endonuclease. The MAD7 endonuclease is an engineered class 2 type V-A CRISPR–Cas (Cas12a / Cpf1) system.

[0330] Described herein is a method of inhibiting expression of a SOCS1, CISH, and BIM genes by causing a genomic disruption in the SOCS1, CISH, and BIM genes in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . The method comprises using a gene editing system (e.g., gene editing system described in Section V) to modify αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . For example, the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) can be contacted with guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, wherein the contacting results in a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1, a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, and a genomic disruption in an endogenous BIM gene that suppresses or eliminates expression of BIM. In some embodiments, the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified αβT-cell relative to that in an unmodified αβT-cell or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified αβT-cell.

[0331] Described herein is a method of inhibiting expression of a SOCS1, CISH, BIM, and FAS genes by causing a genomic disruption in the SOCS1, CISH, BIM, and FAS genes in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . The method comprises using a gene editing system (e.g., gene editing system described in Section V) to modify αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . For example, the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) can be contacted with guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, wherein the contacting results in a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1, a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, a genomic disruption in an endogenous BIM gene that suppresses or eliminates expression of BIM, and a genomic disruption in an endogenous FAS gene that suppresses or eliminates expression of FAS. In some embodiments, the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified αβT-cell relative to that in an unmodified αβT-cell or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified αβT-cell.

[0332] Described herein is a method of inhibiting expression of a SOCS1, CISH, BIM, B2M, and CIITA genes by causing a genomic disruption in the SOCS1, CISH, BIM, B2M and CIITA genes in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . The method comprises using a gene editing system to modify the αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . For example, the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) can be contacted with guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, wherein the contacting results in a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1, a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, a genomic disruption in an endogenous BIM gene that suppresses or eliminates expression of BIM, a genomic disruption in an endogenous B2M gene that suppresses or eliminates expression of B2M, and a genomic disruption in an endogenous CIITA gene that suppresses or eliminates expression of CIITA. In some embodiments, the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified αβT-cell relative to that in an unmodified αβT-cell or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified αβT-cell.

[0333] Described herein is a method of inhibiting expression of a SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS genes by causing a genomic disruption in the SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS genes in αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . The method comprises using a gene editing system to modify the αβT-cells, e.g., iPSC-derived αβT-cells, and their precursors (e.g., an iPSC (e.g., αβT-iPSC) , or an intermediate cell differentiated from an iPSC (e.g., αβT-iHSC, αβT-iCLP, and immature T-iαβT cells) ) . For example, the cells herein (e.g., the iαβT cell, iPSC, iHSC, iCLP cell, or immature iT cell) can be contacted with guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, wherein the contacting results in a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1, a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, a genomic disruption in an endogenous BIM gene that suppresses or eliminates expression of BIM, a genomic disruption in an endogenous B2M gene that suppresses or eliminates expression of B2M, a genomic disruption in an endogenous CIITA gene that suppresses or eliminates expression of CIITA, and a genomic disruption in an endogenous FAS gene that suppresses or eliminates expression of FAS. In some embodiments, the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified αβT-cell relative to that in an unmodified αβT-cell or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified αβT-cell.

[0334] In some embodiments, the genomic disruption and / or inactivating mutation of the SOCS1 and BIM genes; SOCS1, CISH, and BIM genes; SOCS1, CISH, BIM, and FAS genes; SOCS1, CISH, BIM, B2M, and CIITA genes; or, SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and FAS genes is made by administering guide RNAs to a cell (e.g., a T-iαβT cell, the αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) . In some embodiments, the guide RNAs are sgRNAs. In some embodiments, the guide RNAs that target the SOCS1 gene comprise any one or more of SEQ ID NOs: 5, 29, 11, 37; the guide RNAs that target the CISH gene comprise any one or more of SEQ ID NOs: 3, 27, 4, 28, 12, or 38; the guide RNAs that target the BIM gene comprise any one or more of SEQ ID NOs: 2, 26, 6, 32, 7, 33, 8, 34, 9, 35, 10, and 36; the guide RNAs that target the FAS gene comprise any one or more of SEQ ID NOs: 60 and 61; the guide RNAs that target the B2M gene comprise any one or more of SEQ ID NOs: 54 and 55; and the guide RNAs that target the CIITA gene comprise any one or more of SEQ ID NOs: 57 and 58. In some embodiments, a nuclease is administered to the cell (e.g., a T-iαβT cell, the αβT-iPSC, T-iHSC, T-iCLP, or immature T-iαβT cell) with the guide RNA. In some embodiments, the nuclease is an endonuclease. In some embodiments, the endonuclease that is administered to the cell is a Cas endonuclease. In some embodiments, the Cas endonuclease that is administered to a cell is a Cas9 endonuclease or a MAD7 endonuclease.

[0335] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous SOCS1 gene suppresses or eliminates expression of the SOCS1 gene in the modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the genomic disruption in the SOCS1 gene is in exon 2 of the SOCS1 gene. In some embodiments, the genomic disruption in the SOCS1 gene is an inactivating nucleic acid mutation. In some embodiments, the genomic disruption in the SOCS1 gene is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2 of the SOCS1 gene. In some embodiments, a genomic disruption or inactivating nucleic acid mutation in the SOCS1 gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in SOCS1 that comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 23, or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto.

[0336] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous CISH gene suppresses or eliminates expression of the CISH gene in the modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the genomic disruption in the CISH gene is in exon 3, exon 4, or a combination thereof of the CISH gene. In some embodiments, the genomic disruption in the CISH gene is an inactivating nucleic acid mutation. In some embodiments, the genomic disruption in the CISH gene is an inactivating nucleic acid mutation in exon 3, exon 4, or a combination thereof of the CISH gene. In some embodiments, a genomic disruption or inactivating nucleic acid mutation in the CISH gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in CISH that comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 24 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto.

[0337] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene in the modified αβT-cell reduces the expression and / or function of a splice variant of BIM, BIMEL, relative to an unmodified αβT-cell generated from a αβT-iPSC (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene reduces the expression and / or function of a splice variant of BIM, BIML, relative to an unmodified αβT-cell generated from a αβT-iPSC (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene in the modified αβT-cell reduces the expression and / or function of a splice variants BIMEL and BIML relative to an unmodified αβT-cell generated from a αβT-iPSC (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous BIM gene in the modified αβT-cell retains the expression and / or function a splice variant of BIM, BIMs, relative to an unmodified αβT-cell generated from a αβT-iPSC (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the genomic disruption of the BIM gene is in exon 2C of an endogenous BIM gene. In some embodiments, the genomic disruption of the BIM gene is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2C of an endogenous BIM gene. In some embodiments, the inactivating mutation is an insertion, deletion, or substitution. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in BIM that comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, or SEQ ID NO: 22 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto.

[0338] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous FAS gene suppresses or eliminates expression of the FAS gene in the modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the genomic disruption in the FAS gene is in exon 1 of the FAS gene. In some embodiments, the genomic disruption in the FAS gene is an inactivating nucleic acid mutation. In some embodiments, the genomic disruption in the FAS gene is an inactivating nucleic acid mutation in exon 1 of the FAS gene. In some embodiments, a genomic disruption or inactivating nucleic acid mutation in the FAS gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in FAS that comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 62 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto.

[0339] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous B2M gene suppresses or eliminates expression of the B2M gene in the modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the genomic disruption in the B2M gene is in exon 2 of the B2M gene. In some embodiments, the genomic disruption in the B2M gene is an inactivating nucleic acid mutation. In some embodiments, the genomic disruption in the B2M gene is an inactivating nucleic acid mutation in exon 2 of the B2M gene. In some embodiments, a genomic disruption or inactivating nucleic acid mutation in the B2M gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in B2M that comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 56 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto.

[0340] In some embodiments, the genomic disruption of the endogenous CIITA gene suppresses or eliminates expression of the CIITA gene in the modified αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) relative to an unmodified αβT-cell (e.g., an unmodified T-iαβT-cell) or relative to the αβT-cell (e.g., T-iαβT-cell) before modification. In some embodiments, the genomic disruption in the CIITA gene is in exon 3 of the CIITA gene. In some embodiments, the genomic disruption in the CIITA gene is an inactivating nucleic acid mutation. In some embodiments, the genomic disruption in the CIITA gene is an inactivating nucleic acid mutation in exon 3 of the CIITA gene. In some embodiments, a genomic disruption or inactivating nucleic acid mutation in the CIITA gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof. In some embodiments, the genomic disruption is within a target sequence in CIITA that comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 59 or a nucleotide sequence having at least 70% (e.g., at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%) identity thereto.

[0341] In some embodiments, a genomic disruption or inactivating nucleic acid mutation in the SOCS1, CISH, BIM, B2M, CIITA, and / or FAS gene is an insertion, deletion, substitution, or any combination thereof.

[0342] In some embodiments, the method comprises contacting the cell with guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding an endonuclease, wherein the contacting results in a genomic disruption in an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of SOCS1 and a genomic disruption in an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH. If BIM is also being disrupted, then a guide RNA is used that results in inhibiting expression of an endogenous BIM gene. If B2M is also being disrupted, then a guide RNA is used that results in inhibiting expression of an endogenous B2M gene. If CIITA is also being disrupted, then a guide RNA is used that results in inhibiting expression of an endogenous CIITA gene. If FAS is also being disrupted, then a guide RNA is used that results in inhibiting expression of an endoge...

Claims

1.A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising a genomic disruption in an endogenous suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein and a genomic disruption in an endogenous cytokine-inducible SH2-containing protein (CISH) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CISH protein.2.The modified cell of claim 1, wherein the genomic disruption in the endogenous SOCS1 gene is in exon 2 of the SOCS1 gene; and / or wherein the genomic disruption in the endogenous CISH gene is in exon 3 or exon 4 of the CISH gene; and optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.3.The modified cell of any one of claims 1-2, wherein the genomic disruption in the endogenous SOCS1 gene is within a target sequence in SOCS1 that comprises SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 23 and / or the genomic disruption in the endogenous CISH gene is within a target sequence in CISH that comprises SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 24.4.The modified cell of any one of claims 1-3, wherein the genomic disruption within SOCS1 and / or CISH is made by administering guide RNAs to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or a MAD7 endonuclease; optionally wherein the guide RNAs comprise the guide sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 5, 11, 3, 4, and 12, or comprise the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 29, 37, 27, 28, and 38.5.The modified cell of claim 4, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 11, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 37; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 5, or comprise the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 29.6.The modified cell of claim 4 or claim 5, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of SEQ ID NO: 12, or comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 38; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNAs comprise the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 3 and 4, or comprise the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 27 and 28.7.The modified cell of any one of claims 1-6, further comprising a genomic disruption in an endogenous Bcl-2 Interacting Mediator of cell death (BIM) gene.8.The modified cell of claim 7, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is in exon 2C of the BIM gene; and optionally wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell; and optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in an exon 2C of an endogenous BIM gene, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.9.The modified cell of any one of claims 7-8, wherein the genomic disruption in the endogenous BIM gene is within a target sequence in BIM that comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 18, 19, 20, 21, and 22.10.The modified cell of any one of claims 7-9, wherein the genomic disruption within BIM is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or a MAD7 endonuclease; and optionally wherein the guide RNA comprises the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 9, and 10, or comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, 35, and 36.11.The modified cell of claim 10, wherein (1) the endonuclease is the MAD7 endonuclease, and the guide RNA comprises the guide sequence of SEQ ID NO: 10, or comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36; or (2) the endonuclease is the Cas9 endonuclease, and the guide RNA comprises the guide sequence of any one of SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, and 9, or comprises the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 32, 33, 34, and 35.12.The modified cell of any one of claims 1-11, further comprising a genomic disruption in an endogenous FAS cell surface death receptor (FAS) gene that suppresses or eliminates expression of a functional FAS protein.13.The modified cell of any one of claims 1-12, further comprising a genomic disruption in an endogenous β-2-Microglobulin (B2M) gene that suppresses or eliminates expression of a functional B2M protein.14.The modified cell of any one of claims 1-13, further comprising a genomic disruption in an endogenous Class II transactivator (CIITA) gene that suppresses or eliminates expression of a functional CIITA protein.15.The modified cell of any one of claims 1-14, further comprising a genomic disruption in an endogenous T-cell receptor alpha constant region (TRAC) gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRAC protein and / or a genomic disruption in an endogenous TRBC1 / 2 gene that suppresses or eliminates expression of a functional TRBC1 / 2 protein.16.The modified cell of any one of claims 1-15, wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution.17.The modified cell of any one of claims 1-16, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, wherein the signal converter comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) .18.The modified cell of claim 17, wherein (A) a first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus, and a second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus; or (B) a first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus, and a second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus.19.The modified cell of any one of claims 17-18, the first fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72; optionally the first exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 75, and the second exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 76.20.The modified cell of any one of claims 1-19, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a B2M-HLA-E fusion protein (B2M-HLA-E) comprising at least a portion of B2M fused with at least a portion of HLA-E; and optionally wherein the exogenous polynucleotide encoding the B2M-HLA-E is inserted into a B2M locus; and optionally wherein the B2M-HLA-E comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81.21.The modified cell of any one of claims 1-20, further comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a TCRαβ; and optionally wherein the one or more exogenous polynucleotides encoding the TCRαβ are inserted into a TRAC locus.22.The modified cell of claim 21, wherein the TCRαβ specifically binds KRAS G12V; and optionally wherein the TCRαβ comprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80; or the TCRαβcomprises an α chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and a β chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.23.The modified cell of any one of claims 1-22, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19 and / or an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20.24.The modified cell of claim 23, wherein the exogenous polynucleotide encoding the CAR which specifically binds human CD19 is inserted into an AAVS1 locus; and optionally wherein the CAR which specifically binds human CD19 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 or SEQ ID NO: 94.25.The modified cell of any one of claims 1-24, further comprising an exogenous polynucleotide encoding a suicide switch, which comprises a herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) polypeptide or a functional variant thereof capable of inducing cell death upon administration of Ganciclovir (GCV) .26.The modified cell of claims 25, wherein the suicide switch comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85; optionally wherein the suicide switch is inserted into a Rogi2 locus, or wherein the suicide switch is inserted into a FAS locus.27.A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising a genomic disruption in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the modified cell relative to that in an unmodified control, and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained in the modified cell; optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation in the exon 2C, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution; and wherein the genomic disruption within BIM is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell, and optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or a MAD7 endonuclease.28.The modified cell of claim 27, wherein the genomic disruption is within a target sequence in BIM that comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 20, 21, and 22.29.The modified cell of any one of claims 27-28, wherein the guide RNA comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one or more of SEQ ID NOs: 26, 34, 35 and 36, or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one or more of SEQ ID Nos: 2, 8, 9 and 10.30.The modified cell of claim 29, wherein (1) the guide RNA comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36 or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 10, and the endonuclease is a MAD7 endonuclease; or (2) the guide RNA comprises the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 34, and 35, or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one of SEQ ID Nos: 2, 8, and 9, and the endonuclease is a Cas9 endonuclease.31.A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising a genomic disruption in a target sequence of an endogenous SOCS1 gene that suppresses or eliminates expression of a functional SOCS1 protein, wherein the target sequence comprises SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 23; and optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution; andwherein the genomic disruption within SOCS1 is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell; and optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or a MAD7 endonuclease; and optionally wherein the guide RNA comprises the sgRNA or crRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 29 and 37, or comprises the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 5 or 11.32.The modified cell of claim 31, wherein (1) the guide RNA comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 37 or comprises the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 11, and the endonuclease is a MAD7 endonuclease; or (2) the guide RNA comprises the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 29 or comprises the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 5, and the endonuclease is a Cas9 endonuclease.33.A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising a genomic disruption in a target sequence of an endogenous CISH gene that suppresses or eliminates expression of CISH, wherein the target sequence comprises SEQ ID NO: 24; and optionally wherein the genomic disruption is an inactivating nucleic acid mutation, optionally wherein the mutation is an insertion, deletion, or substitution; andwherein the genomic disruption within CISH is made by administering a guide RNA to said cell, and optionally wherein an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease is also administered to said cell; and optionally wherein the endonuclease is a Cas9 endonuclease or a MAD7 endonuclease; and optionally wherein the guide RNA comprises the crRNA sequence of SEQ ID NO: 38 or comprises the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 12, and the endonuclease is a MAD7 endonuclease.34.A modified iPSC, αβT cell, or intermediate cell differentiated from an iPSC, comprising one or more exogenous polynucleotides encoding a signal converter, wherein the signal converter comprises a first fusion protein subunit and a second fusion protein subunit, wherein the first fusion protein subunit comprises an extracellular domain (ECD) of interferon gamma receptor 1 (IFNGR1) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit gamma (IL2RG) , and wherein the second fusion protein subunit comprises an ECD of interferon gamma receptor 2 (IFNGR2) and an intracellular domain of interleukin-2 receptor subunit beta (IL2RB) ; and optionally further comprising an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD19 and / or an exogenous polynucleotide encoding a chimeric antigen receptor (CAR) which specifically binds human CD20.35.The modified cell of claim 34, wherein the exogenous polynucleotide encoding the CAR which specifically binds human CD19 is inserted into an AAVS1 locus, optionally wherein the CAR which specifically binds human CD19 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 or SEQ ID NO: 94.36.The modified cell of any one of claim 34-35, wherein (A) a first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus, and a second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus; or (B) a first exogenous polynucleotide encoding the first fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a ROSA26 locus, and a second exogenous polynucleotide encoding the second fusion protein subunit of the signal converter is inserted into a SOCS1 locus.37.The modified cell of any one of claims 34-36, the first fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and the second fusion protein subunit of the signal converter comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72; optionally the first exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 75, and the second exogenous polynucleotide encodes an amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 76.38.The modified cell of any one of claims 1-37, wherein the iPSC is derived from a primary T cell (T-iPSC) .39.The modified cell of any one of claims 1-38, wherein the αβT cell is an iPSC-derived αβT (iαβT) cell; or wherein the αβT cell is a αβT cell derived from a T-iPSC (T-iαβT) ; or wherein the αβT cell is a αβT cell differentiated from a αβT-iPSC (αβT-iαβT) .40.A pharmaceutical composition comprising the modified αβT cell of any one of claims 1-39 and a pharmaceutically acceptable carrier.41.A method of killing B cells which are CD19 positive and have abnormal B cell function, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the modified αβT cell of any one of claims 1-39 or the pharmaceutical composition of claim 40.42.The method of claim 41, wherein the B cells are the CD19 positive B cells in B‐cell Acute Lymphoblastic Leukemia (B-ALL) patients.43.A method of treating B-ALL, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the modified αβT cell of any one of claims 1-39 or the pharmaceutical composition of claim 40.44.A gene editing system comprising one or more guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease, wherein the one or more guide RNAs comprise one or more guide sequences that binds to a target sequence in an exon 2C of an endogenous BIM gene, wherein upon administering the gene editing system to a cell, the expression and / or function of BIMEL and BIML splice variants are reduced in the cell relative to that in an unmodified control, and the expression and / or function of BIMS splice variant is retained, and optionally the targe sequence comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 20, 21, and 22.45.The gene editing system of claim 44, wherein (1) the endonuclease is a MAD7 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 36 or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 10; or (2) the endonuclease is a Cas9 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the sgRNA sequence of any one of SEQ ID NOs: 26, 34, and 35, or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from any one of SEQ ID NOs: 2, 8, and 9.46.A gene editing system comprising one or more guide RNAs and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease, wherein the one or more guide RNAs comprise one or more guide sequences which binds to a target sequence in CISH gene that comprises SEQ ID NO: 24; wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 38 or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 12.47.A gene editing system comprising one or more guide RNA and an endonuclease or a nucleic acid encoding the endonuclease, wherein (1) the one or more guide RNAs comprise one or more guide sequences which binds to a target sequence in SOCS1 gene that comprises SEQ ID NO: 23; wherein the endonuclease is a MAD7 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the crRNA sequence of SEQ ID NO: 37 or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 11; or (2) the one or more guide RNAs comprise one or more guide sequences which binds to a target sequence in SOCS1 gene that comprises SEQ ID NO: 17, the endonuclease is a Cas9 endonuclease, and the one or more guide RNAs comprise the sgRNA sequence of SEQ ID NO: 29, or the guide sequence differing by no more than 3 nucleotides from SEQ ID NO: 5.48.A guide RNA comprising a CRISPR RNA (crRNA) sequence, wherein the crRNA sequence comprises a 2'-O-Methyl modification at each of the first three positions on the 5’ end and at each of the fourth to last, third to last, and second to last positions of the crRNA sequence on the 3’ end, and a phosphorothioate linkage between each base in the first three positions on the 5’ end and a phosphorothioate linkage between each base of the last three positions of the crRNA sequence at the 3’ end; and optionally wherein the guide RNA functions with a MAD7 endonuclease; and optionally wherein the crRNA is about 56 bases long.49.The guide RNA of claim 48, wherein the crRNA sequence comprises a 2'-O-Methyl modification at each of positions 1, 2, 3, 53, 54, and 55 of the crRNA sequence on the 3’ end.50.The guide RNA of any one of claims 48-49, wherein the crRNA comprises SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, or SEQ ID NO: 38, including its modifications.

Images