Aromatic nitrogen-containing compounds, preparation methods and medicinal uses thereof

Abstract

Aromatic nitrogen-containing compounds, the preparation method thereof, pharmaceutical compositions comprising the compounds, and the pharmaceutical uses for the treatment of related diseases or disorders are disclosed.

Description

AROMATIC NITROGEN-CONTAINING COMPOUNDS, PREPARATION METHODS AND MEDICINAL USES THEREOFFIELD OF THE INVENTION

[0001] The present invention belongs to the field of medicine, and relates to aromatic nitrogen-containing compound, preparation methods thereof, pharmaceutical compositions comprising the compounds, and medical uses thereof.

[0002] BACKGROUD OF THE INVENTION

[0003] Cells in any living organism possess multiple DNA repair machineries to maintain the genome stability and integrity, which is essential for survival. DNA mismatch repair (MMR) is a highly conserved pathway that plays a critical role in maintaining genomic stability by correcting errors occurred during DNA replication, recombination, and repairing processes. (Pecina-Slaus, N., Kafka, A., Salamon, I. &Bukovac, A. Mismatch Repair Pathway, Genome Stability and Cancer. Front Mol. Biosci. 7, 122 (2020) ) . Deficiency in MMR machinery creates genomic hypermutation and instability, manifested as the high frequency of insertion and deletions at short tracts of repetitive DNA sequences (microsatellites) throughout the genome, a phenomenon known as microsatellite instability (MSI) . (Kim, T.M., Laird, P.W. &Park, P.J. The landscape of microsatellite instability in colorectal and endometrial cancer genomes. Cell 155, 858–868 (2013) , Vernole, P. et al. Common fragile sites in colon cancer cell lines: role of mismatch repair, RAD51 and poly (ADP-ribose) polymerase-1. Mutat. Res 712, 40–48 (2011) ) . . Microsatellites are generated by DNA polymerase slippage during replication or mismatch repair and are susceptible to misalignment and frame shift mutation, which can be recognized and corrected by MMR process in normal cells. However, in cancer cells lacking normal MMR machinery, errors occurred during replication or repair processes are accumulated and the mutation rate in genome is increased (Lower, S.S., McGurk, M.P., Clark, A.G., et al, Satellite DNA evolution: old ideas, new approaches. Curr. Opin. Genet. Dev., 2018; 49: 70-78) . High frequency of deletion and insertion in microsatellites lead to MSI, which contributes to the  development of 10-30%of ovarian, colon, gastric and endometrial cancers (Aaltonen, L.A. et al. Clues to the pathogenesis of familial colorectal cancer, Science 260, 812-816 (1993) , Bonneville R et al., Landscape of Microsatellite Instability Across 39 Cancer Types. JCO Precis Oncol. 1: PO. 17.00073 (2017) ) . While MSI-high (MSI-H) cancer patients show a better overall prognosis and reduced metastatic potential with higher tumor mutation burden and immunogenicity comparing to MSS cancers (Kang, S. et al. The significance of microsatellite instability in colorectal cancer after controlling for clinicopathological factors. Med. (Baltim. ) 97, e0019 (2018) ) , MSI-H tumors tend to develop resistance to immunotherapy and chemotherapy (Le, D.T. et al. Phase II Open-Label Study of Pembrolizumab in Treatment-Refractory, Microsatellite Instability-High / Mismatch Repair-Deficient Metastatic Colorectal Cancer: KEYNOTE-164. J. Clin. Oncol. 38, 11–19 (2020) , Overman, M.J. et al. Nivolumab in patients with metastatic DNA mismatch repair-deficient or microsatellite instability-high colorectal cancer (CheckMate 142) : an open-label, multicentre, phase 2 study. Lancet Oncol. 18, 1182–1191 (2017) , Fuca, G. et al. Ascites and resistance to immune checkpoint inhibition in dMMR / MSI-H metastatic colorectal and gastric cancers. J. Immunother. Cancer 10, 4001 (2022) ) .

[0004] Recently, multiple independent large scale functional genomics screen using more than 300 human cancer cell lines identified Werner syndrome RecQ helicase (WRN) as being selectively required for survival of MSI-H cells (Behan, F.M. et al. Prioritization of cancer therapeutic targets using CRISPR-Cas9 screens. Nature 568, 511–516 (2019) , McDonald E.R. et al., Project DRIVE: A Compendium of Cancer Dependencies and Synthetic Lethal Relationships Uncovered by Large-Scale, Deep RNAi Screening. Cell 170 (3) : 577-592 (2017) , Chan, E.M. et al. WRN helicase is a synthetic lethal target in microsatellite unstable cancers. Nature 568, 551–556 (2019) ) . WRN, one of 5 RecQ-like helicases in human, is a multifunctional enzyme with helicase and exonuclease activities and plays important roles in multiple pathways of DNA repair and maintenance of genome integrity including DNA replication, transcription, DNA repair, and telomere maintenance (Bohr, V.A. Rising from the RecQ-age: the role of human  RecQ helicases in genome maintenance. Trends Biochem Sci. 33, 609–620 (2008) , Singh, D.K., Ahn, B. &Bohr, V.A. Roles of RECQ helicases in recombination based DNA repair, genomic stability and aging. Biogerontology 10, 235–252 (2009) , Rossi, M.L., Ghosh, A.K. &Bohr, V.A. Roles of Werner syndrome protein in protection of genome integrity. DNA Repair (Amst. ) 9, 331–344 (2010) ) .

[0005] Deletion of WRN leads various defects in cell and genomic structure including cell cycle arrest, DNA breaks, mitotic defects, chromosome shattering, and apoptosis in MSI but not MSS cell lines. (Behan, F.M. et al. Prioritization of cancer therapeutic targets using CRISPR-Cas9 screens. Nature 568, 511–516 (2019) , McDonald E.R. et al., Project DRIVE: A Compendium of Cancer Dependencies and Synthetic Lethal Relationships Uncovered by Large-Scale, Deep RNAi Screening. Cell 170 (3) : 577-592 (2017) , Chan, E.M. et al. WRN helicase is a synthetic lethal target in microsatellite unstable cancers. Nature 568, 551–556 (2019) ) . In addition, loss-of-function mutation and deletion studies on WRN further pinpoint the helicase function of WRN as indispensable for the survival MSI cells (Lieb, S. et al. Werner syndrome helicase is a selective vulnerability of microsatellite instability-high tumor cells. Elife 8, e43333 (2019) ) . These results clearly show that targeting WRN, in particular, the Helicase domain can be a promising strategy for the treatment of for MSI-high cancers.SUMMARY OF THE INVENTION

[0006] The present invention, in one aspect, provides a compound of formula (I) , (I-1) , or (I-2) , (I-3) , (I-4) , (I-5) , (I-6) or tautomers, cis-or trans-isomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, deuterated derivative or or mixtures thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof:

[0007] wherein,

[0008] Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7 are each independently selected from bond, CH, CH2, NH, N, O or S;

[0009] represents the vinylidene can be Z or E or its mixture;

[0010] linking L3 and C with *is single bond or double bond;

[0011] L3 is -N=, -O-, -C (O) -, -S (O) -, -S (O) 2-, -S-, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1i: -NH-, -CH=, -CONH-, C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, -C1-C6 alkylene-NH-, -C2-C6 alkenylene-NH-, -C2-C6 alkynylene-NH-, -C1-C6 alkylene-O-, -C2-C6 alkenylene-O-, -C2-C6 alkynylene -O-, -C1-C6 alkylene-S-, -C2-C6 alkenylene-S-, -C2-C6 alkynylene -S-, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -, -S (O) (NH) -, or any combination of two or three or more of them; Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8 are each independently selected from CH, NH, N, O or S; preferably, in formula (I) , Y1, Y2, Y3 are N; in formula (I-1) , Y1, Y2, Y3, Y6 are N, Y4, Y5, Y7, Y8 are C;

[0012] X1 and X2 are each independently CH or N;

[0013] M2 is CH, N;

[0014] linking Y2 and C atom with #is single bond or double bond,  linking Y3 and C atom with #is single bond or double bond , with the proviso that are not double bond simultaneously;

[0015] each is independently single bond or double bond, with the proviso that adjacent are not double bond simultaneously;

[0016] the represent vinylidene, which can be Z or E or its mixture;

[0017] La is selected from bond, -O-, -C (O) -, -S (O) -, -S (O) 2-, -S-, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1a: -NH-, –NHC (O) CR17R18-, –NHC (O) (CR17R18) n1-, -CONH-, C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, C1-C6 alkylene-NH-, C2-C6 alkenylene-NH-, C2-C6 alkynylene-NH-, C1-C6 alkylene-O-, C2-C6 alkenylene-O-, C2-C6 alkynylene -O-, C1-C6 alkylene-S-, C2-C6 alkenylene-S-, C2-C6 alkynylene -S-, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -, -S (O) (NH) -, or any combination of two or three or more of them;

[0018] each R1, R3 R4, R5 and R7, RA, RB, R12, R16, R10A are identical or different, and are independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;

[0019] alternatively, two of R3 together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10 cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl or C6-C10 aryl or C1-C9 heteroaryl, wherein the cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1c;

[0020] alternatively, R4 and R5, together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10 cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl, wherein the cycloalkyl and heterocyclyl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1d;

[0021] alternatively, two of R7 together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10  cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl or C6-C10 aryl or C1-C9 heteroaryl, wherein the cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1e;

[0022] alternatively, two of R12 together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10 cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl or C6-C10 aryl or C1-C9 heteroaryl, wherein the cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1f;

[0023] L2 is selected from bond, -O-, -C (O) -, -S (O) -, -S (O) 2-, -S-, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1g: -NH-, -CONH-, C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, -C1-C6 alkylene-NH-, -C2-C6 alkenylene-NH-, -C2-C6 alkynylene-NH-, -C1-C6 alkylene-O-, -C2-C6 alkenylene-O-, -C2-C6 alkynylene -O-, -C1-C6 alkylene-S-, -C2-C6 alkenylene-S-, -C2-C6 alkynylene -S-, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -, -S (O) (NH) -, or any combination of two or three or more of them;

[0024] Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl and alkynyl;

[0025] ring C is aryl or heteroaryl or cycloalkyl or heterocyclyl;

[0026] ring D is cycloalkyl or heterocyclyl;

[0027] preferably, ring C is C6-C10 aryl or C2-C9 heteroaryl or C3-C10 cycloalkyl or C3-C10 heterocyclyl;

[0028] R10 is selected from the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1h: aryl or heteroaryl or cycloalkyl or heterocyclyl;

[0029] preferably, R10 is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5, 6 or 7 ring carbon atoms which is optionally additionally fused to a heterocyclyl or cycloalkyl; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5, 6 or 7 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon  atoms and 1 or 2 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, and wherein said heterocyclyl is unbridged or bridged, and said bridge is 1 or 2 carbon atoms; or heteroaryl, wherein said heteroaryl is a 5 or 6 membered fully unsaturated monocyclic group comprising ring carbon atoms and 1, 2, 3 or 4 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, preferably 1 or 2 ring heteraoms, wherein the total number of ring S atoms does not exceed 1, and the total number of ring O atoms does not exceed 1; or phenyl; wherein said cycloalkenyl, heterocyclyl, heteroaryl, phenyl are unsubstituted or substituted by one or more substituents selected from halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;

[0030] or, R10 is C2-C4 alkenyl, optional substituted by R19 or–O-R20;

[0031] each R1a, R1b, R1c, R1d, R1e, R1f, R1g, R1h, R1i are identical or different, and are independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rp: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R21, -C (O) OR22, -OC (O) R23, -S (O) 2R24, -S (O) 2OR25, -OS (O) 2R26, -B (OR27) (OR28) , -P (O) (OR29) (OR30) ;

[0032] each Rp is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rq: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C3-40 cycloalkenyl, C3-40 cycloalkynyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C3-40 cycloalkenyloxy, C3-40  cycloalkynyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C3-40 cycloalkenylthio, C3-40 cycloalkynylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R31, -C (O) OR32, -OC (O) R33, -S (O) 2R34, -S (O) 2OR35, -OS (O) 2R36, -B (OR37) (OR38) , -P (O) (OR39) (OR40) and –S (O) (NH) -R41;

[0033] each Rq is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) C1-40 alkyl, -C (O) NH2, -C (O) NHC1-40 alkyl, -C (O) -NH-OH, -COOC1-40 alkyl, -COOH, -OC (O) C1-40 alkyl, -OC (O) H, -S (O) 2C1-40 alkyl, S (O) 2H, -S (O) 2OC1-40 alkyl, -OS (O) 2C1-40 alkyl, -P (O) (OH) 2, -B (OH) 2, and –S (O) (NH) C1-40alkyl;

[0034] R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 and R41 are identical or different, and are each independently selected from H, deuterium, C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, and NH2;

[0035] p is 0, 1, 2 or 3;

[0036] q is 0, 1, 2 or 3, 4 or 5;

[0037] r is 0, 1, 2 or 3;

[0038] t is 0, 1, 2 or 3;

[0039] w is 0, 1, 2 or 3;

[0040] n1 is 0, 1, 2 or 3;

[0041] n2 is 0, 1, 2 or 3.

[0042] With regrads to the definition that is single bond or double bond, with the proviso that are not double bond simultaneously in the formula of the present invention, people in the prior art can understand that linking Y2 and C with #is single bond or double bond,  linking Y3 and C with #is single bond or double bond, with the proviso that are not double bond simultaneously. And people in the prior art can also understand that the bond should follow the chemical valence bond rules. For example, when Y2 is N, the linking Y3 and C with #can only be a single bond.

[0043] In an embodiment, the compound is of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, including tautomers, cis-or trans-isomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, deuterated derivative, or mixtures thereof:

[0044] Y1 is CH, NH, N, O or S;

[0045] Y2 is CH, NH, N, O or S;

[0046] Y3 is CH, NH, N, O or S;

[0047] X1 and X2 are each independently CH or N;

[0048] M2 is each independently CH, NH, N, O or S;

[0049] is single bond or double bond, with the proviso that are not double bond simultaneously;

[0050] R1, R3 and R4 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;

[0051] R5 is independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;

[0052] R7 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;

[0053] or, two of R7 together with atom to which they are bound with form a C3-C10 cycloalkyl or C3-C10 heterocyclyl,

[0054] L2 is bond, O, -C (O) , -CONH-, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, -C1-C6 alkyl-NH-, -C2-C6 alkenyl-NH-, C2-C6 alkynyl, C1-C6 alkoxy, C1-C6 alkylthio, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -;

[0055] Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;

[0056] ring C is C6-C10 aryl or C2-C9 heteroaryl;

[0057] R10 is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5 or 6 ring carbon atoms; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5 or 6 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon atoms and 1 or 2 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, and wherein said heterocyclyl is unbridged or bridged, and said bridge is 1 or 2 carbon atoms; or heteroaryl, wherein said heteroaryl is a 5 or 6 membered fully unsaturated monocyclic group comprising ring carbon atoms and 1, 2, 3 or 4 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, preferably 1 or 2 ring heteraoms, wherein the total number of ring S atoms does not exceed 1, and the total number of ring O atoms does not exceed 1; or phenyl; wherein said cycloalkenyl, heterocyclyl, heteroaryl, phenyl are unsubstituted or substituted by one of more substituents selected from halogen, amino,  cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;

[0058] or, R10 is C2-C4 alkenyl, optional substituted by R4 or–O-R4;

[0059] R12 are each selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl and-O-haloalkyl;

[0060] R16 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl and-O-haloalkyl;

[0061] p is 0, 1, 2 or 3;

[0062] q is 0, 1, 2 or 3;

[0063] r is 0, 1, 2 or 3;

[0064] t is 0, 1, 2 or 3;

[0065] w is 0, 1, 2 or 3.

[0066] In an embodiment, the compound is of formula (I-A) , (I-B) , (I-C) , (I-D) , (II) , (II-A) or (II-B) , or tautomers, cis-or trans-isomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, deuterated derivative or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof or mixtures thereof,

[0067] the meaning of every group or sign are as difined as formula (I) .

[0068] In an embodiment, the compound is of formula (III) ,  or tautomers, cis-or trans-isomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, deuterated derivative or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof or mixtures thereof, the meaning of every group or sign are as difined as formula (I) .

[0069] In an embodiment, the compound is of formula (IV) , (IV-A) or (IV-B) ,  the meaning of every group or sign are as difined as formula (I) . In the formula (IV-B) , preferably, each R7 is independently selected from the group consisting of deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl and alkynyl, preferably alkyl.

[0070] In an embodiment, the compound is of formula (V) , (V-A) , (V-B) or (V-C) or tautomers, cis-or trans-isomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, deuterated derivative or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof or  mixtures thereof

[0071] , the meaning of every group or sign are as difined as formula (I) . In the formula (V-B) , preferably, each R7 is each independently selected from the group consisting of deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl and alkynyl.

[0072] In an embodiment, the compound is of formula (VI) or (VI-A) or tautomers, cis-or trans-isomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, deuterated derivative or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof or mixtures thereof  the meaning of every group or sign are as difined as formula (I) .

[0073] In an embodiment, the compound is of formula (VII) , (VII-A) or (VII-B) , (VII-C) or tautomers, cis-or trans-isomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, deuterated derivative or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof  or mixtures thereof the meaning of every group or sign are as difined as formula (I) . In the formula (VII-B) and (VII-C) , preferably, each R7 is each independently selected from the group consisting of deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl and alkynyl, preferably alkyl.

[0074] In an embodiment, the compound is of formula (VIII) - (X) or tautomers, cis-or trans-isomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, deuterated derivative or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof or mixtures thereof

[0075] the meaning of every group or sign are as difined as formula (I) ;

[0076] wherein, p1 is 0, 1, 2 or 3;

[0077] each R3a is independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1a: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O- haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;

[0078] ring H is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5 or 6 or 7 ring carbon atoms which is optionally additionally fused to a heterocyclyl or cycloalkyl; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5 or 6 or 7 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon atoms and 1 or 2 ring oxygen atoms; wherein when the heterocyclyl is partially unsaturated, there is only one unsaturated bond.

[0079] preferably,  is selected from more preferably,  is selected from most preferably,  is selected from

[0080] In an embodiment, Y1, Y2 and Y3 are N.

[0081] In an embodiment, in the above fomulas, R10 is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5 or 6 or 7 ring carbon atoms which is optionally additionally fused to a C2-C5 heterocyclyl; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5 or 6 or 7 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon atoms and 1 or 2 ring oxygen atoms, wherein said cycloalkenyl, heterocyclyl are unsubstituted or substituted by one or more substituents selected from halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl; wherein when the heterocyclyl is partially unsaturated, there is only one unsaturated bond. Preferably, R10 is selected from more preferably, R10 is selected from most preferably, R10 is selected from

[0082] wherein, p1 is 0, 1, 2 or 3;

[0083] each R3a is independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium,  halogen, hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1a: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl.

[0084] In an embodiment,  or R10 is selected from

[0085] In an embodiment, R1, R3, R4 and R5 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 hydroxyalkyl, C2-C6 alkenyl and C3-C6 cycloalkyl;

[0086] In a preferred embodiment, R1, R3, R4 and R5 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C3 alkyl, -CF3, -CH2F, CHF2, .

[0087] In an embodiment, R7 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium,  halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy, C1-C6 haloalkyl and C1-C6 hydroxyalkyl; preferably, R7 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, C1-C3 haloalkyl and C1-C3 hydroxyalkyl; more preferably, R7 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C3 alkyl, -CF3, most preferably, C1-C3 alkyl.

[0088] In an embodiment, L2 is bond, O, -C (O) -, -CONH-, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, -C1-C3 alkyl-NH-, -C2-C3 alkenyl-NH-, C2-C3 alkynyl, C1-C3 alkoxy, C1-C3 alkylthio, C1-C3 haloalkyl and -CON (Rc) -; preferably, L2 is -C (O) -;

[0089] Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, C1-C3 haloalkyl and C1-C3 hydroxyalkyl;

[0090] In an embodiment,  is selected from

[0091] In an embodiment, ring C is or fused C1-C12 heteroaryl or bicyclo [1.1.1] pentane; and ring C is optionally substituted by (R12) q.

[0092] Preferably,  or RB is selected from

[0093] more preferably,  or RB is selected from

[0094] In an embodiment, w is preferably 0, 1;

[0095] p is preferably 0, 1, 2;

[0096] t is preferably 1;

[0097] r is preferably 1;

[0098] q is preferably 0, 1, 2;

[0099] p1 is preferably 0, 1.

[0100] In an embodiment,  or RA is selected from

[0101] The present invention also provides a compound of formulas (XI) or (XII) or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or salt or solvate thereof,

[0102] RB is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;

[0103] each R10A is independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;

[0104] M2 is CH, N;

[0105] La is selected from bond, -O-, -C (O) -, -S (O) -, -S (O) 2-, -S-, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1a: -NH-, –NHC (O) CR17R18-, –NHC (O) (CR17R18) n1-, -CONH-, C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene,  C2-C6 alkynylene, C1-C6 alkylene-NH-, C2-C6 alkenylene-NH-, C2-C6 alkynylene-NH-, C1-C6 alkylene-O-, C2-C6 alkenylene-O-, C2-C6 alkynylene -O-, C1-C6 alkylene-S-, C2-C6 alkenylene-S-, C2-C6 alkynylene -S-, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -, -S (O) (NH) -, or any combination of two or three or more of them;

[0106] Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, deuterated hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl and alkynyl;

[0107] R42 is hydrogen, deuterium, or a nitrogen protecting group;

[0108] R43 is hydrogen, deuterium, or carboxylic acid protecting group;

[0109] Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8 are each independently selected from CH, NH, N, O, C or S;

[0110] each is independently single bond or double bond, with the proviso that adjacent are not double bond simultaneously;

[0111] R1 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;

[0112] R4 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;

[0113] R5 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;

[0114] R7 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;

[0115] R16 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;

[0116] alternatively, R4 and R5, together with atom (s) to which they are attached to form a C3-C10 cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl, wherein the cycloalkyl and heterocyclyl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1d;

[0117] alternatively, two of R7 together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10 cycloalkyl or C3-C10 heterocyclyl or C6-C10 aryl or C1-C10 heteroaryl, wherein the cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1e;

[0118] R10 is selected from the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1h: C6-C10 aryl or C1-C9 heteroaryl or C3-C10 cycloalkyl or C1-C9 heterocyclyl;

[0119] preferably, R10 is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5, 6 or 7 ring carbon atoms which is optionally additionally fused to a heterocyclyl or cycloalkyl; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5, 6 or 7 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon atoms and 1 or 2 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, and wherein said heterocyclyl is unbridged or bridged, and said bridge is 1 or 2 carbon atoms; or  heteroaryl, wherein said heteroaryl is a 5 or 6 membered fully unsaturated monocyclic group comprising ring carbon atoms and 1, 2, 3 or 4 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, preferably 1 or 2 ring heteraoms, wherein the total number of ring S atoms does not exceed 1, and the total number of ring O atoms does not exceed 1; or phenyl; wherein said cycloalkenyl, heterocyclyl, heteroaryl, phenyl are unsubstituted or substituted by one or more substituents selected from halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;

[0120] or, R10 is C2-C4 alkenyl, optional substituted by R19 or–O-R20;

[0121] each R1a, R1b, R1d, R1e, R1h are identical or different, and are independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rp: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R21, -C (O) OR22, -OC (O) R23, -S (O) 2R24, -S (O) 2OR25, -OS (O) 2R26, -B (OR27) (OR28) , -P (O) (OR29) (OR30) ;

[0122] each Rp is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2 or more Rq: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C3-40 cycloalkenyl, C3-40 cycloalkynyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C3-40 cycloalkenyloxy, C3-40 cycloalkynyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C3-40 cycloalkenylthio, C3-40 cycloalkynylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20- membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R31, -C (O) OR32, -OC (O) R33, -S (O) 2R34, -S (O) 2OR35, -OS (O) 2R36, -B (OR37) (OR38) , -P (O) (OR39) (OR40) and –S (O) (NH) -R41;

[0123] each Rq is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) C1-40 alkyl, -C (O) NH2, -C (O) NHC1-40 alkyl, -C (O) -NH-OH, -COOC1-40 alkyl, -COOH, -OC (O) C1-40 alkyl, -OC (O) H, -S (O) 2C1-40 alkyl, S (O) 2H, -S (O) 2OC1-40 alkyl, -OS (O) 2C1-40 alkyl, -P (O) (OH) 2, -B (OH) 2, and –S (O) (NH) C1-40alkyl;

[0124] R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 and R41 are identical or different, and are each independently selected from H, deuterium, C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, and NH2;

[0125] w is 0, 1, 2 or 3;

[0126] n1 is 0, 1, 2 or 3;

[0127] n2 is 0, 1, 2 or 3;

[0128] r is 0, 1, 2 or 3;

[0129] t is 0, 1, 2 or 3;

[0130] preferably one R7 or two R7 is substituted on the *position;

[0131] the represent vinylidene, which can be Z or E or its mixture.

[0132] Preferably, the compound is selected from:

[0133] The compound of formulas (XI) or (XII) is an intermediate to prepare the compounds of formulas all above.

[0134] The present invention also provides a method for preparing a compound of formula (I-2) or formula (I-2’ ) , deuterated derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising:

[0135] RW is a leaving group, preferably, halogen or OH;

[0136] L2 is selected from bond, -O-, -C (O) -, -S (O) -, -S (O) 2-, -S-, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1g: -NH-, -CONH-, C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, -C1-C6 alkylene-NH-, -C2-C6 alkenylene-NH-, -C2-C6 alkynylene-NH-, -C1-C6 alkylene-O-, -C2-C6 alkenylene-O-, -C2-C6 alkynylene -O-, -C1-C6 alkylene-S-, -C2-C6 alkenylene-S-, -C2-C6 alkynylene -S-, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -, -S (O) (NH) -, or any combination of two or three or more of them;

[0137] Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, deuterated hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl and alkynyl;

[0138] RA is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;

[0139] R1b, R1g are identical or different, and are independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rp: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered  heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R21, -C (O) OR22, -OC (O) R23, -S (O) 2R24, -S (O) 2OR25, -OS (O) 2R26, -B (OR27) (OR28) , -P (O) (OR29) (OR30) ;

[0140] each Rp is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rq: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C3-40 cycloalkenyl, C3-40 cycloalkynyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C3-40 cycloalkenyloxy, C3-40 cycloalkynyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C3-40 cycloalkenylthio, C3-40 cycloalkynylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R31, -C (O) OR32, -OC (O) R33, -S (O) 2R34, -S (O) 2OR35, -OS (O) 2R36, -B (OR37) (OR38) , -P (O) (OR39) (OR40) and –S (O) (NH) -R41;

[0141] each Rq is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) C1-40 alkyl, -C (O) NH2, -C (O) NHC1-40 alkyl, -C (O) -NH-OH, -COOC1-40 alkyl, -COOH, -OC (O) C1-40 alkyl, -OC (O) H, -S (O) 2C1-40 alkyl, S (O) 2H, -S (O) 2OC1-40 alkyl, -OS (O) 2C1-40 alkyl, -P (O) (OH) 2, -B (OH) 2, and –S (O) (NH) C1-40alkyl;

[0142] R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 and  R41 are identical or different, and are each independently selected from H, deuterium, C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, and NH2;

[0143] formula (XI) and formula (XII) are as defined above.

[0144] The present invention also provides a pharmaceutical composition, comprising a therapeutically effective amount of a compound of any of formulas, or a tautomer, cis-or trans isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, together with one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.

[0145] In some embodiments, in above stated pharmaceutical composition, the amount of the compound, tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof is about 0.1-95%by weight of free base; preferably, is about 5-70%, e.g. 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%.

[0146] In some embodiment, above stated pharmaceutical composition is formulated as a tablet, capsule, liquid form or injection form.

[0147] In some embodiment, in above stated pharmaceutical composition, the amount of the compound, tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof is about 1-1000mg; preferably, is about 1-500mg, more preferably, is about 1mg, 2mg, 3mg, 5mg, 10mg, 20mg, 40mg, 50mg, 60mg, 80mg, 100mg, 200mg, 300mg, 400m or 500mg.

[0148] In some embodiment, the compound, tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof is can be administered by any suitable route of administration, e.g. oral, parenteral, buccal, sublingual, nasal, rectal, intrathecal or transdermal administration, and the pharmaceutical compositions adapted accordingly.

[0149] In some embodiment, the compound, tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salts is formulated as a soild or liquid form, e.g. syrups, suspension, emulsion, tablets, capsules, powders, granules or lozenges.

[0150] In another aspect, the present invention relates to a method for treatment of a disorder or disease mediated by WRN, comprising administering to a subject in need thereof an  effective amount of a compound of of any formulas, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt solvate, or prodrug thereof, or the pharmaceutical composition comprising the same. preferably, the disorder or disease is cancer; more preferably, the cancer is characterized as microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) ; further preferably, the cancer characterized as microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) is selected from colorectal, gastric, prostate, endometrial, adrenocortical, uterine, cervical, esophageal, breast, colon, kidney and ovarian cancer; further preferably, the cancer characterized as microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) is selected from prostate cancer, uterine corpus endometrial carcinoma, colon adenocarcinoma, stomach adenocarcinoma, rectal adenocarcinoma, adrenocortical carcinoma, uterine carcinosarcoma, cervical squamous cell carcinoma, endocervical adenocarcinoma, esophageal carcinoma, breast carcinoma, kidney renal clear cell carcinoma and ovarian serous cystadenocarcinoma

[0151] In another aspect, the present invention relates to a method for treating cancer comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a compound of any formulas, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt solvate, or prodrug thereof, or the pharmaceutical composition comprising the same.

[0152] In a preferred embodiment, the cancer is selected from the group consisting of microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) , preferably the microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) is selected from colorectal, gastric, prostate, endometrial, adrenocortical, uterine, cervical, esophageal, breast, kidney and ovarian cancer. More preferably, the microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) is selected from prostate cancer, uterine corpus endometrial carcinoma, colon adenocarcinoma, stomach adenocarcinoma, rectal adenocarcinoma, adrenocortical carcinoma, uterine carcinosarcoma, cervical squamous cell carcinoma, endocervical  adenocarcinoma, esophageal carcinoma, breast carcinoma, kidney renal clear cell carcinoma and ovarian serous cystadenocarcinoma.

[0153] The present invention described and requested herein is intended to include all suitable isotopic variations of compounds of formulas and embodiments thereof.

[0154] For example, different isotopic forms of hydrogen (H) include protium (1H) and deuterium (2H, also denoted here as D) .

[0155] Where used as a medicament, the compound of the present disclosure can be administered in the form of a pharmaceutical composition. Said composition can be prepared using methods well known in the art of pharmacy and can be administered through a variety of routes, depending on whether topical or systemic treatment is needed and on the area to be treated. The administration may be topical administration (e.g., transdermal, dermal, ocular and mucosal administration, including intranasal, vaginal and rectal delivery) , pulmonary administration (e.g., inhalation or insufflation of powders or aerosols, including using a nebulizer; intratracheal or intranasal administration) , oral administration or parenteral administration. Parenteral administration comprises intravenous administration, intraarterial administration, subcutaneous administration, intraperitoneal administration or intramuscular injection or infusion; or intracranial administration, e.g., intrathecal or intraventricular administration. Parenteral administration may be performed at a single large dose, or may be performed using, for example, a continuous infusion pump. Pharmaceutical compositions and formulations for topical administration may comprise transdermal patches, ointments, lotions, creams, gels, drops, suppositories, sprays, liquids and powders. Conventional pharmaceutical carriers, water, powdered or oily bases and thickeners and the like may be necessary or desirable.

[0156] In preparing the composition of the present disclosure, the active ingredient is typically mixed with an excipient, diluted with an excipient or enclosed within such a carrier as capsules, sachets, paper or other container forms. Where the excipient serves as a diluent, it may be a solid, semi-solid, or liquid substance used as a vehicle, carrier, or medium for the active ingredient. Thus, the composition may be in the following  forms: tablets, pills, powders, lozenges, sachets, cachets, elixirs, suspensions, emulsions, solutions, syrups, aerosols (solid or dissolved in a liquid vehicle) ; ointments, soft and hard gelatin capsules, suppositories, sterile solutions for injection and sterile packaged powders comprising, for example, up to 10%by weight of active compound.

[0157] Some examples of suitable excipients comprise lactose, glucose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia, calcium phosphate, alginate, tragacanth, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, and methylcellulose. Formulations may also comprise: lubricants such as talc, magnesium stearate and mineral oil, humectants; emulsifiers and suspending agents; preservatives such as methyl benzoate and hydroxypropyl benzoate; sweeteners and flavoring agents. The composition of the present disclosure can be formulated using known methods in the art so as to provide immediate release, sustained release or delayed release of the active ingredient upon being administered to patients.

[0158] The composition may be formulated in unit dosage form. Each dose comprises about 5-1000 mg, more typically about 100-500 mg, of the active ingredient. The term “unit dosage form” refers to physically isolated, single dosage units suitable for human patients and other mammals, each unit comprising a predetermined amount of active substance that can produce the desired therapeutic effects according to calculation and is mixed with a suitable pharmaceutical excipient.

[0159] The effective dose of the active compound may range widely. The active compound is generally administered in a pharmaceutically effective amount. It will be understood, however, that the amount of compound actually administered is generally determined by a physician in light of the relevant circumstances, including the condition to be treated, the chosen route of administration, the actual compound administered; the age, weight and response of the individual patient; the severity of symptoms in the patient, etc.

[0160] In preparing solid compositions such as tablets, the main active ingredient is mixed with pharmaceutical excipients to form a solid preformulation composition of a homogeneous mixture comprising the compound of the present disclosure. Where  referring to these preformulation compositions as being homogeneous, it is meant that the active ingredient is generally distributed evenly throughout the composition so the compositions may be readily divided into equally effective unit dosage forms such as tablets, pills and capsules. The solid preformulation is then divided into unit dosage forms of the type described above comprising, for example, about 0.1-1000 mg of the active ingredient of the present disclosure.

[0161] The tablets or pills of the present disclosure may be coated or compounded to give a dosage form affording the advantage of prolonged action. For example, a tablet or pill comprises an inner dosage component and an outer dosage component, the latter being the coated form of the former. The two components can be separated by an enteric coating layer, which serves to resist disintegration in the stomach so that the inner component passes through the duodenum intact or that release is delayed. A variety of substances may be used for such enteric coating layers or coating agents. Such substances comprise various polymeric acids and mixtures of polymeric acids and such substances as shellac, cetyl alcohol and cellulose acetate.

[0162] Liquid forms for oral administration or injection administration in which the compound and composition of the present disclosure may be incorporated comprise aqueous solutions, a suitable flavoring syrup, aqueous or oil suspensions; and emulsions flavored with edible oils such as cottonseed oil, sesame oil, coconut oil or peanut oil: as well as elixirs and similar pharmaceutical vehicles.

[0163] Compositions for inhalation or insufflation comprise solutions and suspensions in pharmaceutically acceptable water or organic solvents or mixtures thereof, and powders. Liquid or solid compositions may comprise suitable pharmaceutically acceptable excipients as described above. In certain embodiments, the composition is administered through the oral or nasal respiratory route to achieve topical or systemic effects. The composition may be nebulized using an inert gas. Nebulized solution can be inhaled directly via a nebulizing device, or the nebulizing device can be connected to a mask or an intermittent positive pressure ventilator. Solution, suspension or powder compositions can be administered orally, or nasally via a device that delivers a  formulation in a suitable manner.

[0164] The amount of the compound or composition administered to a patient is not fixed and depends on the drug administered, the purpose of the administration such as prevention or treatment; the condition of the patient, the route of administration, etc. In therapeutic applications, the composition may be administered to a patient that is suffering from a disease in an amount sufficient to cure or at least partially suppress the symptoms of the disease and its complications. The effective dosage should depend on the state of the disease to be treated and the judgment of the attending clinician, and the judgment depends on factors such as the severity of the disease, the age, weight and general condition of the patient, etc.

[0165] The composition administered to the patient may be in the form of the pharmaceutical composition described above. These compositions can be sterilized by using conventional sterilization techniques or by filtration. Aqueous solutions can be packaged for use as is, or lyophilized. The lyophilized formulation is mixed with a sterile aqueous carrier prior to administration. The pH of the compound formulation is usually 3-11, more preferably 5-9, and most preferably 7-8. It can be understood that the use of a certain excipient, carrier or stabilizer described above may result in the formation of a pharmaceutical salt.

[0166] The therapeutic dosage of the compound of the present disclosure can be determined, for example, according to: the specific use of the treatment, the route of administration of the compound, the health and condition of the patient, and the judgment of the prescriber. The proportion or concentration of the compound of the present disclosure in the pharmaceutical composition may vary and depends on a variety of factors including the dosage, the chemical properties (e.g., hydrophobicity) , and the route of administration. For example, the compound of the present disclosure can be provided by a physiological buffered aqueous solution comprising about 0.1-10%w / v of the compound parenteral administration. Certain typical dosage ranges are from about 1 μg / kg to about 1 g / kg of body weight / day. In certain embodiments, the dosage range is from about 0.01 mg / kg to about 100 mg / kg of body weight / day. The dosage is  likely to depend upon such variables as the type and extent of progression of the disease or condition, the general health of the particular patient, the relative biological potency of the compound selected, the excipient formulation and its route of administration. The effective dosage can be extrapolated from a dose-response curve derived from an in vitro or animal model test system.DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

[0167] Given below are definitions of terms used in this application. Any term not defined herein takes the normal meaning as the skilled person would understand the term.

[0168] “Alkyl” refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group including C1-C20 straight chain and branched chain groups. Preferably an alkyl group is an alkyl having 1 to 12, sometimes preferably 1 to 6, sometimes more preferably 1 to 4, carbon atoms. Representative examples include, but are not limited to methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1, 1-dimethyl propyl, 1, 2-dimethyl propyl, 2, 2-dimethyl propyl, 1-ethyl propyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1, 1, 2-trimethylpropyl, 1, 1-dimethylbutyl, 1, 2-dimethylbutyl, 2, 2-dimethylbutyl, 1, 3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2, 3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhexyl, 5-methylhexyl, 2, 3-dimethylpentyl, 2, 4-dimethylpentyl, 2, 2-dimethylpentyl, 3, 3-dimethylpentyl, 2-ethylpentyl, 3-ethylpentyl, n-octyl, 2, 3-dimethylhexyl, 2, 4-dimethylhexyl, 2, 5-dimethylhexyl, 2, 2-dimethylhexyl, 3, 3-dimethylhexyl, 4, 4-dimethylhexyl, 2-ethylhexyl, 3-ethylhexyl, 4-ethylhexyl, 2-methyl-2-ethylpentyl, 2-methyl-3-ethylpentyl, n-nonyl, 2-methyl-2-ethylhexyl, 2-methyl-3-ethylhexyl, 2, 2-diethylpentyl, n-decyl, 3, 3-diethylhexyl, 2, 2-diethylhexyl, and the isomers of branched chain thereof. More preferably an alkyl group is a lower alkyl having 1 to 6 carbon atoms. Representative examples include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1, 1-dimethylpropyl, 1, 2-dimethylpropyl, 2, 2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1, 1, 2-trimethylpropyl, 1, 1-dimethylbutyl, 1, 2-dimethylbutyl, 2, 2-dimethylbutyl, 1, 3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2, 3-dimethylbutyl, etc. The alkyl group can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) can be substituted at any available connection point, preferably the substituent group (s) is one or more substituents independently selected from the group consisting of alkyl, halogen, alkoxy, alkenyl, alkynyl, alkylsulfo, alkylamino, thiol, hydroxy, nitro, cyano, amino, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic, cycloalkylthio, heterocylic alkylthio and oxo group.

[0169] “Alkenyl” refers to an alkyl defined as above that has at least two carbon atoms  and at least one carbon-carbon double bond, for example, vinyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-, 2-, or 3-butenyl, etc., preferably C2-20 alkenyl, more preferably C2-12 alkenyl, and most preferably C2-6 alkenyl. The alkenyl group can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, group (s) independently selected from the group consisting of alkyl, halogen, alkoxy, alkenyl, alkynyl, alkylsulfo, alkylamino, thiol, hydroxy, nitro, cyano, amino, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic, cycloalkylthio, heterocylic alkylthio and oxo group.

[0170] “Alkynyl” refers to an alkyl defined as above that has at least two carbon atoms and at least one carbon-carbon triple bond, for example, ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, 1-, 2-, or 3-butynyl etc., preferably C2-20 alkynyl, more preferably C2-12 alkynyl, and most preferably C2-6 alkynyl. The alkynyl group can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, group (s) independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylsulfo, alkylamino, halogen, thiol, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic alkoxyl, cycloalkylthio and heterocylic alkylthio.

[0171] “Alkylene” refers to a saturated linear or branched aliphatic hydrocarbon group, wherein having 2 residues derived by removing two hydrogen atoms from the same carbon atom of the parent alkane or two different carbon atoms. The straight or branched chain group containing 1 to 20 carbon atoms, preferably has 1 to 12 carbon atoms, more preferably 1 to 6 carbon atoms. Non-limiting examples of alkylene groups include, but are not limited to, methylene (-CH2-) , 1, 1-ethylene (-CH (CH3) -) , 1, 2-ethylene (-CH2CH2) -, 1, 1-propylene (-CH (CH2CH3) -) , 1, 2-propylene (-CH2CH (CH3) -) , 1, 3-propylene (-CH2CH2CH2-) , 1, 4-butylidene (-CH2CH2CH2CH2-) etc. The alkylene group can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, group (s) independently selected from the group consisting of selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylsulfo, alkylamino, halogen, thiol, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic alkoxyl, cycloalkylthio and heterocylic alkylthio.

[0172] “Alkenylene” refers to an alkylene defined as above that has at least two carbon atoms and at least one carbon-carbon double bond, preferably C2-20 alkenylene, more preferably C2-12 alkenylene, and most preferably C2-6 alkenylene. Non-limiting examples of alkenylene groups include, but are not limited to, -CH=CH-, -CH=CHCH2-, -CH=CHCH2CH2-, -CH2CH=CHCH2-etc. The alkenylene group can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, group (s) independently selected from the group consisting of selected from alkyl, alkenyl,  alkynyl, alkoxy, alkylsulfo, alkylamino, halogen, thiol, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic alkoxyl, cycloalkylthio and heterocylic alkylthio.

[0173] “Alkynylene” refers to an alkynyl defined as above that has at least two carbon atoms and at least one carbon-carbon triple bond, preferably C2-20 alkynylene, more preferably C2-12 alkynylene, and most preferably C2-6 alkynylene. Non-limiting examples of alkenylene groups include, but are not limited to, -CH≡CH-, -CH≡CHCH2-, -CH≡CHCH2CH2-, -CH2CH≡CHCH2-etc. The alkynylene group can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, group (s) independently selected from the group consisting of selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylsulfo, alkylamino, halogen, thiol, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic alkoxyl, cycloalkylthio and heterocylic alkylthio.

[0174] “Cycloalkyl” refers to a saturated and / or partially unsaturated monocyclic or polycyclic hydrocarbon group having 3 to 20 carbon atoms, preferably 3 to 12 carbon atoms, more preferably 3 to 10 carbon atoms, and most preferably 3 to 8 carbon atoms or 3 to 6 carbon atoms. Representative examples of monocyclic cycloalkyls include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cycloheptatrienyl, cyclooctyl, etc. Polycyclic cycloalkyl includes a cycloalkyl having a spiro ring, fused ring or bridged ring.

[0175] “Spiro Cycloalkyl” refers to a 5 to 20 membered polycyclic group with rings connected through one common carbon atom (called a spiro atom) , wherein one or more rings can contain one or more double bonds, but none of the rings has a completely conjugated pi-electron system. Preferably a spiro cycloalkyl is 6 to 14 membered, and more preferably 7 to 10 membered. According to the number of common spiro atoms, a spiro cycloalkyl is divided into mono-spiro cycloalkyl, di-spiro cycloalkyl, or poly-spiro cycloalkyl, and preferably refers to a mono-spiro cycloalkyl or di-spiro cycloalkyl, more preferably 4-membered / 4-membered, 4-membered / 5-membered, 4-membered / 6-membered, 5-membered / 5-membered, or 5-membered / 6-membered mono-spiro cycloalkyl. Representative examples of spiro cycloalkyl include, but are not limited to the following substituents:

[0176] “Fused Cycloalkyl” refers to a 5 to 20 membered polycyclic hydrocarbon group,  wherein each ring in the system shares an adjacent pair of carbon atoms with another ring, wherein one or more rings can contain one or more double bonds, but none of the rings has a completely conjugated pi-electron system. Preferably, a fused cycloalkyl group is 6 to 14 membered, more preferably 7 to 10 membered. According to the number of membered rings, fused cycloalkyl is divided into bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic fused cycloalkyl, and preferably refers to a bicyclic or tricyclic fused cycloalkyl, more preferably 5-membered / 5-membered, or 5-membered / 6-membered bicyclic fused cycloalkyl. Representative examples of fused cycloalkyls include, but are not limited to, the following substituents:

[0177] “Bridged Cycloalkyl” refers to a 5 to 20 membered polycyclic hydrocarbon group, wherein every two rings in the system share two disconnected carbon atoms. The rings can have one or more double bonds, but have no completely conjugated pi-electron system. Preferably, a bridged cycloalkyl is 6 to 14 membered, and more preferably 7 to 10 membered. According to the number of membered rings, bridged cycloalkyl is divided into bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic bridged cycloalkyl, and preferably refers to a bicyclic, tricyclic or tetracyclic bridged cycloalkyl, more preferably a bicyclic or tricyclic bridged cycloalkyl. Representative examples of bridged cycloalkyls include, but are not limited to, the following substituents:

[0178] The cycloalkyl can be fused to the ring of an aryl, heteroaryl or heterocyclic alkyl, wherein the ring bound to the parent structure is cycloalkyl. Representative examples include, but are not limited to indanylacetic, tetrahydronaphthalene, benzocycloheptyl and so on. The cycloalkyl is optionally substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, substituents independently selected from the group consisting of alkyl, halogen, alkoxy, alkenyl, alkynyl, alkylsulfo, alkylamino, thiol, hydroxy, nitro, cyano, amino, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic, cycloalkylthio, heterocylic alkylthio and oxo group.

[0179] “Heterocyclyl” refers to a 3 to 20 membered saturated and / or partially unsaturated monocyclic or polycyclic hydrocarbon group having one or more, sometimes  preferably one to five, sometimes more preferably one to three, heteroatoms selected from the group consisting of N, O, and S (O) m (wherein m is 0, 1, or 2) as ring atoms, but excluding -O-O-, -O-S-or-S-S-in the ring, the remaining ring atoms being C. Preferably, heterocyclyl is a 3 to 12 membered having 1 to 4 heteroatoms; more preferably a 3 to 10 membered having 1 to 3 heteroatoms; more preferably a 4 to 8 membered having 1 to 3 heteroatoms; most preferably a 5 to 6 membered having 1 to 2 heteroatoms. Representative examples of monocyclic heterocyclyls include, but are not limited to, oxetanyl, azabutyl, pyrrolidyl, piperidyl, piperazinyl, morpholinyl, sulfo-morpholinyl, homopiperazinyl, and so on. Polycyclic heterocyclyl includes the heterocyclyl having a spiro ring, fused ring or bridged ring.

[0180] “Spiro heterocyclyl” refers to a 5 to 20 membered polycyclic heterocyclyl with rings connected through one common carbon atom (called a spiro atom) , wherein said rings have one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, heteroatoms selected from the group consisting of N, O, and S (O) m (wherein m is 0, 1 or 2) as ring atoms, the remaining ring atoms being C, wherein one or more rings can contain one or more double bonds, but none of the rings has a completely conjugated pi-electron system. Preferably a spiro heterocyclyl is 6 to 14 membered, and more preferably 7 to 10 membered. According to the number of common spiro atoms, spiro heterocyclyl is divided into mono-spiro heterocyclyl, di-spiro heterocyclyl, or poly-spiro heterocyclyl, and preferably refers to mono-spiro heterocyclyl or di-spiro heterocyclyl, more preferably 4-membered / 4-membered, 4-membered / 5-membered, 4-membered / 6-membered, 5-membered / 5-membered, or 5-membered / 6-membered mono-spiro heterocyclyl. Representative examples of spiro heterocyclyl include, but are not limited to the following substituents:

[0181] “Fused Heterocyclyl” refers to a 5 to 20 membered polycyclic heterocyclyl group, wherein each ring in the system shares an adjacent pair of carbon atoms with the other ring, wherein one or more rings can contain one or more double bonds, but none of the rings has a completely conjugated pi-electron system, and wherein said rings have one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, heteroatoms selected from the group consisting of N, O, and S (O) p (wherein p is 0, 1, or 2) as ring atoms, the remaining ring atoms being C. Preferably a fused heterocyclyl is 6 to 14 membered, and more preferably 7 to 10 membered. According to the number of membered rings, fused heterocyclyl is divided into bicyclic, tricyclic, tetracyclic or  polycyclic fused heterocyclyl, preferably refers to bicyclic or tricyclic fused heterocyclyl, more preferably 5-membered / 5-membered, or 5-membered / 6-membered bicyclic fused heterocyclyl. Representative examples of fused heterocyclyl include, but are not limited to, the following substituents:

[0182] “Bridged Heterocyclyl” refers to a 5 to 14 membered polycyclic heterocyclic alkyl group, wherein every two rings in the system share two disconnected atoms, the rings can have one or more double bonds, but have no completely conjugated pi-electron system, and the rings have one or more heteroatoms selected from the group consisting of N, O, and S (O) m (wherein m is 0, 1, or 2) as ring atoms, the remaining ring atoms being C. Preferably a bridged heterocyclyl is 6 to 14 membered, and more preferably 7 to 10 membered. According to the number of membered rings, bridged heterocyclyl is divided into bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic bridged heterocyclyl, and preferably refers to bicyclic, tricyclic or tetracyclic bridged heterocyclyl, more preferably bicyclic or tricyclic bridged heterocyclyl. Representative examples of bridged heterocyclyl include, but are not limited to, the following substituents:

[0183] The ring of said heterocyclyl can be fused to the ring of an aryl, heteroaryl or cycloalkyl, wherein the ring bound to the parent structure is heterocyclyl. Representative examples include, but are not limited to the following substituents:

[0184] etc.

[0185] The heterocyclyl is optionally substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, group (s) independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylsulfo, alkylamino, halogen, thiol, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic alkoxyl, cycloalkylthio, heterocylic alkylthio.

[0186] “Aryl” refers to a 6 to 14 membered all-carbon monocyclic ring or a polycyclic fused ring (a "fused" ring system means that each ring in the system shares an adjacent pair of carbon atoms with another ring in the system) group, and has a completely conjugated pi-electron system. Preferably aryl is 6 to 10 membered, such as phenyl and naphthyl, most preferably phenyl. The aryl can be fused to the ring of heteroaryl, heterocyclyl or cycloalkyl, wherein the ring bound to parent structure is aryl. Representative examples include, but are not limited to, the following substituents:

[0187] The aryl group can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, substituents independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylsulfo, alkylamino, halogen, thiol, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic alkoxyl, cycloalkylthio and heterocylic alkylthio.

[0188] “Heteroaryl” refers to an aryl system having 1 to 4 heteroatoms selected from the group consisting of O, S and N as ring atoms and having 5 to 14 annular atoms. Preferably a heteroaryl is 5-to 10-membered, more preferably 5-or 6-membered, for example, thiadiazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, oxadiazolyl, imidazolyl, triazolyl, thiazolyl, furyl, thienyl, pyridyl, pyrrolyl, N-alkyl pyrrolyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, imidazolyl, tetrazolyl, and the like. The heteroaryl can be fused with the ring of an aryl, heterocyclyl or cycloalkyl, wherein the ring bound to parent structure is heteroaryl. Representative examples include, but are not limited to, the following substituents:

[0189] The heteroaryl group can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent group (s) is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, substituents independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylsulfo, alkylamino, halogen, thiol, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic alkoxyl, cycloalkylthio, heterocylic alkylthio and -NR9R10.

[0190] “Alkoxy” refers to both an -O- (alkyl) and an -O- (unsubstituted cycloalkyl) group, wherein the alkyl is defined as above. Representative examples include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, cyclopropyloxy, cyclobutyloxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy, and the like. The alkoxyl can be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent is preferably one or more, sometimes preferably one to five, sometimes more preferably one to three, substituents independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylsulfo, alkylamino, halogen, thiol, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocyclic alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxyl, heterocylic alkoxyl, cycloalkylthio and heterocylic alkylthio.

[0191] “Bond” refers to a covalent bond using a sign of “-” .

[0192] "Hydroxyalkyl" refers to an alkyl group substituted by a hydroxy group, wherein alkyl is as defined above.

[0193] “Hydroxy” refers to an -OH group.

[0194] “Halogen” refers to fluoro, chloro, bromo or iodo atoms.

[0195] “Amino” refers to a -NH2 group.

[0196] “Cyano” refers to a -CN group.

[0197] “Nitro” refers to a -NO2 group.

[0198] “Oxo group” refers to a =O group.

[0199] “Carboxyl” refers to a -C (O) OH group.

[0200] “Alkoxycarbonyl” refers to a -C (O) O (alkyl) or (cycloalkyl) group, wherein the alkyl and cycloalkyl are defined as above.

[0201] “Optional” or “optionally” means that the event or circumstance described subsequently can, but need not, occur, and the description includes the instances in which the event or circumstance may or may not occur. For example, “the heterocyclic group optionally substituted by an alkyl” means that an alkyl group can be, but need not be, present, and the description includes the case of the heterocyclic group being substituted with an alkyl and the heterocyclic group being not substituted with an alkyl.

[0202] “Substituted” refers to one or more hydrogen atoms in the group, preferably up to  5, more preferably 1 to 3 hydrogen atoms, independently substituted with a corresponding number of substituents. It goes without saying that the substituents exist in their only possible chemical position. The person skilled in the art is able to determine if the substitution is possible or impossible without paying excessive efforts by experiment or theory. For example, the combination of amino or hydroxyl group having free hydrogen and carbon atoms having unsaturated bonds (such as olefinic) may be unstable.

[0203] The in the formulas represent Z / E isomer mixture of vinylidene, or the vinylidene can be either E or Z, for example in the formula (I) .

[0204] Unless specifically defined, asubunit may be connected to a group from either end. For instance, in the formula (I) , L2 can be –CONH-, in this case, it contains two connection methods. One is that the M2 link directly with C (O) to form M2-CONH-. Another is that M2 link directly with NH to form M2-NH-CO-.

[0205] The meaning of “one or more” in “substituted by one or more substituents” is that it can be 1, 2, 3, 4, 5, etc., but it cannot exceed the maximum value of its replaceable stably sites, which can be determined by a person skilled in the art for a specific structure.

[0206] As used herein, “deuterated derivative” refers to a compound having the same chemical structure as a reference compound, but with one or more hydrogen atoms replaced by a deuterium atom ( “D” or “2H” ) . It will be recognized that some variation of natural isotopic abundance occurs in a synthesized compound depending on the origin of chemical materials used in the synthesis. Notwithstanding this variation, the concentration of naturally abundant stable hydrogen isotopes is small and immaterial as compared to the degree of stable isotopic substitution of deuterated derivatives described herein. Thus, unless otherwise stated, when a reference is made to a “deuterated derivative” of a compound of the disclosure, at least one hydrogen is replaced with deuterium at a level that is well above its natural isotopic abundance, which is typically about 0.015%. In some embodiments, the deuterated derivatives disclosed herein have an isotopic enrichment factor for each deuterium atom, of at least 3500 (52.5%deuterium incorporation at each designated deuterium) , at least 4500 (67.5%deuterium incorporation at each designated deuterium) , at least 5000 (75%deuterium incorporation at each designated deuterium) , at least 5500 (82.5%deuterium incorporation at each designated deuterium) , at least 6000 (90%deuterium incorporation at each designated deuterium) , at least 6333.3 (95%deuterium incorporation at each designated deuterium) , at least 6466.7 (97%deuterium incorporation at each designated deuterium) , or at least 6600 (99%deuterium incorporation at each designated deuterium) . The term “isotopic enrichment factor” as used herein means the ratio between the isotopic abundance and the natural abundance of a specified isotope.

[0207] A “pharmaceutical composition” refers to a mixture of one or more of the compounds described in the present invention or physiologically / pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof and other chemical components such as physiologically / pharmaceutically acceptable carriers and excipients. The purpose of a pharmaceutical composition is to facilitate administration of a compound to an  organism, which is conducive to the absorption of the active ingredient and thus displaying biological activity.

[0208] “Pharmaceutically acceptable salts” refer to salts of the compounds of the invention, such salts being safe and effective when used in a mammal and have corresponding biological activity.

[0209] Dosage Forms: the pharmaceutical composition or combination of the present invention may, for example, be in unit dosage of about 1-1000 mg of active ingredient (s) for a subject of about 50-70 kg.

[0210] In some embodiments, in above stated pharmaceutical composition, the amount of the compound, tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof is about 0.1-95%by weight of free base; preferably, is about 5-70%, e.g. 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%.

[0211] In some embodiment, above stated pharmaceutical composition is formulated as a tablet, capsule, liquid form or injection form.

[0212] In some embodiment, in above stated pharmaceutical composition, the amount of the compound, tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof is about 1-1000mg, 0.1-95%by weight of free base; preferably, is about 1-500mg, more preferably, is about 1mg, 2mg, 3mg, 5mg, 10mg, 20mg, 40mg, 50mg, 60mg, 80mg, 100mg, 200mg, 300mg, 400m or 500mg.

[0213] In some embodiment, the compound, tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof is can be administered by any suitable route of administration, e.g. oral, parenteral, buccal, sublingual, nasal, rectal, intrathecal or transdermal administration, and the pharmaceutical compositions adapted accordingly.

[0214] In some embodiment, the compound, tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salts is formulated as a soild or liquid form, e.g. syrups, suspension, emulsion, tablets, capsules, powders, granules or lozenges.

[0215] As used herein, the term nitrogen protecting group refers to a group that should protect the functional groups concerned against unwanted secondary reactions, such as acylations, etherifications, esterifications, oxidations, solvolysis and similar reactions. It may be removed under deprotection conditions. Depending on the protecting group  employed, the skilled person would know how to remove the protecting group to obtain the free amine NH2 group by reference to known procedures.

[0216] Preferred nitrogen protecting groups generally comprise: C1-C6 alkyl (e.g. tert-butyl) , preferably C1-C4 alkyl, more preferably C1-C2 alkyl, most preferably C1 alkyl which is mono-, di-or tri-substituted with trialkylsilyl-C1-C7 alkoxy (eg. trimethylsilyethoxy) , aryl, preferably phenyl, or a heterocyclic group (e.g., benzyl, cumyl, benzhydryl, pyrrolidinyl, trityl, pyrrolidinylmethyl, 1-methyl-1, 1-dimethylbenzyl, (phenyl) methylbenzene) wherein the aryl ring or the heterocyclic group is unsubstituted or substituted with one or more, e.g. two or three, residues, e.g. selected from the group consisting of C1-C7 alkyl, hydroxy, C1-C7 alkoxy (e.g. para-methoxy benzyl (PMB) ) , C2-C8-alkanoyl-oxy, halogen, nitro, cyano, and CF3, aryl-C1-C2-alkoxycarbonyl (preferably phenyl-C1-C2-alkoxycarbonyl (eg. benzyloxycarbonyl (Cbz) , benzyloxymethyl (BOM) , pivaloyloxymethyl (POM) ) , C1-C10-alkenyloxycarbonyl, C1-C6 alkylcarbonyl (eg. acetyl or pivaloyl) , C6-C10-arylcarbonyl; C1-C6-alkoxycarbonyl (eg. tertbutoxycarbonyl (Boc) , methylcarbonyl, trichloroethoxycarbonyl (Troc) , pivaloyl (Piv) , allyloxycarbonyl) , C6-C10-arylC1-C6-alkoxycarbonyl (e.g. 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) ) , allyl or cinnamyl, sulfonyl or sulfenyl, succinimidyl group, silyl groups (e.g. triarylsilyl, trialkylsilyl, triethylsilyl (TES) , trimethylsilylethoxymethyl (SEM) , trimethylsilyl (TMS) , tri / sopropylsilyl or tertbutyldimethylsilyl) .

[0217] According to the disclosure, the preferred protecting group can be selected from the group comprising tert-butyloxycarbonyl (Boc) , benzyloxycarbonyl (Cbz) , para-methoxy benzyl (PMB) , methyloxycarbonyl and benzyl. The protecting group (PG) is preferably tert-butyloxycarbonyl (Boc) .

[0218] “Carboxy-protecting group” refers to a carbonyl group which has been esterified with one of the commonly used carboxylic acid protecting ester groups employed to block or protect the carboxylic acid function while reactions involving other functional sites of the compound are carried out. Representative carboxy-protecting groups include, for example, alkyl esters (preferably C1-6 alkyl-OC (O) -) , secondary amides (preferably, C1-6 alkyl NHC (O) -) and the like.

[0219] The term "carboxylic acid protecting group" refers to protecting groups conventionally used to replace the acidic proton of a carboxylic acid. Examples of such groups are described in Greene, T., Protective Groups in Organic Synthesis, Chapter 5, pp. 152-192 (John Wiley and Sons, Inc. 1981) , incorporated herein by reference. Preferably these examples include C1-6 alkyl, methoxy-methyl, methylthiomethyl, 2, 2, 2-trichloroethyl, 2-haloethyl, 2- (trimethylsilanyDethyl, t-butyl, allyl, benzyl, triphenylmethyl (trityl) , benzhydryl, p-nitrobenzyl, p-methoxybenzyl, trimethylsilanyl, triethylsilanyl, t-butyldimethylsilanyl, i-propyl-dimethylsilanyl. Preferred are  benzhydryl, t-butyl, p-nitrobenzyl, p-methoxybenzyl and allyl.

[0220] EXAMPLES

[0221] Procedure for Int-A

[0222] (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetic acid, Int-A

[0223] Step 1: ethyl 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate

[0224] 2-bromo-5-ethyl- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-7 (4H) -one (19 g, 78.17 mmol) was dissolved in 1, 4-dioxane (300 mL) . DIPEA (40.41 g, 312.68 mmol, 54.46 mL) and ethyl 2-bromoacetate (18.28 g, 109.44 mmol) were added and the mixture was heated to 80 ℃and stirred for 5 h. The mixture was diluted with DCM and water, and extracted with DCM. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was beaten with 1, 4-dioxane and filtered to give ethyl 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (22 g) .

[0225] Mass calc C11H13BrN4O3 for 328.02 found: 329.02 (M+H) + ESI.

[0226] Step 2: ethyl 2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate

[0227] A mixture of ethyl 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (12 g, 36.46 mmol) , 2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolane (7.66 g, 36.46 mmol) , Pd (dppf) Cl2 (2.95 g, 3.65 mmol) , K2CO3 (15.12 g, 109.37 mmol) , Water (18 mL) and Tol (300 mL) was stirred at 90 ℃ under N2 atmosphere overnight. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography (DCM: MeOH=2%) to give ethyl 2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (9.18 g, 75.76%yield) .

[0228] Mass calc C16H20O4N4 for 332.15 found: 333.17 (M+H) + ESI.

[0229] Step 3: ethyl 2- (6-bromo-2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate

[0230] A mixture of ethyl 2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (6.6g, 19.86mmol) , MeCN (60 mL) , AcOH (30 mL) and NBS (4.24 g, 23.83 mmol) was stirred at 75 ℃ for 2 h. The mixture was quenched with Na2S2O3 aq. . The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography (DCM: MeOH=2%) to give ethyl 2- (6-bromo-2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (8 g) .

[0231] Mass calc C16H19O4N4Br for 410.06 found: 411.02, 413.02 (M+H) + ESI.

[0232] Step 4: tert-butyl (E) -4- ( (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate

[0233] A mixture of ethyl 2- (6-bromo-2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (2 g, 4.86 mmol) , tert-butyl (4Z) -2, 2-dimethyl-4- [ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene] pyrrolidine-1- carboxylate (1.64 g, 4.86 mmol) , Pd (dppf) Cl2·DCM (0.4 g, 0.49 mmol) , Potassium carbonate (2.02 g, 14.58 mmol) , H2O (4 mL) and Tol (40 mL) was stirred at 100 ℃under N2 atmosphere overnight. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography (DCM: MeOH=2%) to give tert-butyl (E) -4- ( (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate.

[0234] Mass calc C28H39O6N5 for 541.29 found: 442.21 (M-Boc+H) + ESI.

[0235] Step 5: ethyl (E) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate HCl / dioxane (15 mL) was added to a solution of tert-butyl (E) -4- ( (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (2.2 g, 4.06 mmol) in DCM (10 mL) . The mixture was stirred at RT for 2 h. The mixture was concentrated under reduced pressure and used for next step without purification. Mass calc C23H31O4N5 for 441.24 found: 442.26 (M+H) + ESI.

[0236] Step 6: ethyl (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate

[0237] A mixture of ethyl (E) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (1.44 g, 3.26 mmol) , 5-benzyloxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (1.59 g, 6.52 mmol) , Pyridine (773.94 mg, 9.78 mmol, 788.21 μL) , EDCI (1.25 g, 6.52 mmol) , HOBT (881.37 mg, 6.52 mmol) and DMF (10.00 mL) was stirred at 30 ℃ overnight. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was used for next step without  purification.

[0238] Mass calc C36H41O6N7 for 667.31 found: 668.33 (M+H) + ESI.

[0239] Step 7: (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetic acid

[0240] Lithium hydroxide monohydrate (722.63 mg, 17.22 mmol) was added to a solution of ethyl (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (2.3 g, 3.44 mmol) in THF (30 mL) . The mixture was stirred at 50 ℃ for 4 h. The mixture was adjusted to pH < 7 with diluted hydrochloric acid. After concentrated under reduced pressure, the RM was purified by reverse phase column (C18 column) to give (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetic acid (700 mg, 30%yield) .

[0241] Mass calc C34H37N7O6 for 639.28 found: 640.30 (M+H) + ESI.

[0242] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.86 (s, 1H) , 7.48-7.39 (m, 5H) , 6.84-6.83 (m, 1H) , 6.10-6.09 (m, 1H) , 5.08 (s, 2H) , 4.92-4.91 (m, 2H) , 4.27 (s, 2H) , 4.08 (s, 2H) , 3.82-3.80 (m, 2H) , 2.67-2.65 (m, 2H) , 2.37-2.36 (m, 2H) , 1.49 (s, 6H) , 1.06-1.02 (m, 3H) .

[0243] PREPARATION EXAMPLE 1

[0244] N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0245] Compound 25

[0246] Step 1: tert-butyl 2-methyl-4- ( (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene) pyrrolidine-1-carboxylate, 25-2

[0247] n-BuLi (2.5 M, 1.94 mL) was added to a solution of 2, 2, 6, 6-Tetramethylpiperidine (685.26 mg, 4.85 mmol) in THF (10 mL) at -30 ℃ and the mixture was stirred at -30 ℃for 0.5 h. After cooling to -78 ℃, 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- [ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methyl] -1, 3, 2-dioxaborolane (1 g, 3.73 mmol) in THF (5 mL) was added and stirred for 0.5 h. Then tert-butyl 3-oxopyrrolidine-1-carboxylate (829.45 mg, 4.48 mmol) in THF (5 mL) was dropwise added to the mixture, gradually heat to RT and stirred at RT for 3 h. The mixture was added NH4Cl aq. and stirred for 1 h, filtrated and concentrated under reduced pressure to remove THF. The residue was diluted with EA and water, extracted once with EA and the organic layer was washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The crude product was purified by column chromatography to give 25-2 (860 mg, 74.53 %yield) .

[0248] Mass calc C16H28BNO4 for 309.21 found: 310.26 (M+H) + ESI.

[0249] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 5.33-5.29 (m, 1H) , 4.17 (s, 1H) , 3.99-3.98 (m, 1H) , 3.51-3.42 (m, 2H) , 2.85-2.82 (m, 1H) , 2.67-2.63 (m, 1H) , 1.47-1.46 (m, 9H) , 1.26-1.22 (m, 16H) .

[0250] Step 2: tert-butyl 4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate, 25-3

[0251] Int-2 (500 mg, 0.89 mmol) was suspended in 1'4-dioxane (15 mL) , H2O (1 mL) , K3PO4 (567.81 mg, 2.67 mmol) and 25-2 (288.22 mg, 0.89 mmol) were added and the mixture was degassed for 10 minutes with argon, Pd (dppf) Cl2. DCM (36.14 mg, 44.58 μmol) was added and the mixture was stirred at 85 ℃ overnight. The mixture was diluted with EA and water, the organic layer was washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography to give 25-3 (260 mg, 43.06 %yield) .

[0252] Mass calc C32H36ClF3N6O5 for 676.24, 679.24 found: 577.29, 579.3 (M-Boc+H) + ESI.

[0253] Step 3: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 25-4

[0254] 25-3 (80 mg, 0.05 mmol) was suspended in DCM (2 mL) , TFA (0.5 mL) was added and the mixture was stirred at RT overnight. The mixture was washed with NaHCO3 aq., dried over Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The RM was concentrated under reduce pressure and used without purification.

[0255] Mass calc C27H28ClF3N6O3 for 576.19, 578.18 found: 577.3, 579.4 (M+H) + ESI.

[0256] Step 4: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, Compound 25

[0257] To a mixture of 5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (9.35 mg, 0.06 mmol) , HOBT (16.39 mg, 0.12 mmol) and EDCI (23.26 mg, 0.12 mmol) in DCM (1 mL) was added Pyridine (14.39 mg, 0.18 mmol) at 0 ℃. After stirring at 0 ℃ for 0.5 h, the mixture was added 25-4 (35 mg, 0.06 mmol) and stirred at RT for 2 h. The RM was purified by reverse phase column (C18 column) to provide the product Compound 25 (4.88 mg, 11.28 %yield) .

[0258] Mass calc C33H32ClF3N8O5 for 712.21, 714.21 found: 711.32, 713.30 (M-H) -ESI. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.60 (br, 1H) , 10.40 (br, 1H) , 8.64-8.61 (m, 1H) , 8.10-8.06 (m, 1H) , 7.96 (s, 1H) , 7.74-7.72 (m, 1H) , 6.87-6.84 (m, 1H) , 6.31-6.25 (m, 1H) , 5.40-5.34 (m, 2H) , 4.80-4.59 (m, 2H) , 4.28-4.27 (m, 3H) , 3.84-3.79 (m, 2H) , 3.08-2.99 (m, 1H) , 2.87-2.73 (m, 2H) , 2.55-2.54 (m, 3H) , 2.40 (s, 3H) , 1.23-1.08 (m, 6H) .

[0259] PREPARATION EXAMPLE 2

[0260] (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0261] Compound 52

[0262] Step 1: tert-butyl (R) -2-methyl-4- ( (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene) pyrrolidine-1-carboxylate, 52-2

[0263] n-BuLi (2.5 M, 19.4 mL) was added to a solution of 2, 2, 6, 6-Tetramethylpiperidine (6.85g, 48.5 mmol) in THF (100 mL) at -30 ℃ and the mixture was stirred at -30 ℃for 0.5 h. After cooling to -78 ℃, 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- [ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methyl] -1, 3, 2-dioxaborolane (10 g, 37.3 mmol) in THF (5 mL) was added and stirred for 0.5 h. Then 52-1 (8.3g, 44.8 mmol) in THF (50 mL) was dropwise added to the mixture, gradually heat to RT and stirred at RT for 3 h. The mixture was added NH4Cl aq. and stirred for 1 h, filtrated and concentrated under reduced pressure to remove THF. The residue was diluted with EA and water, extracted once with EA and the organic layer was washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The crude product was purified by column chromatography to give 52-2 (8.6g, 74.53 %yield, Z / E mixture, Z / E～75 / 25) .

[0264] Mass calc C16H28BNO4 for 309.21 found: 310.26 (M+H) + ESI.

[0265] Step 2: tert-butyl (R, E) -2-methyl-4- ( (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene) pyrrolidine-1-carboxylate, 52-2A

[0266] 52-2A was obtained by SFC to give 2g, 23.26%yield.

[0267] Preparative separation method: Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-26) ; Column: ChiralPak AD, 250×30mm I.D., 10μm; Mobile phase: A for CO2 and B for Ethanol, Gradient: B 8%; Flow rate: 120 mL  / min; Back pressure: 100 bar; Column temperature: 38℃; Wavelength: 220nm

[0268] Step 3: tert-butyl (R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate, 52-3

[0269] Int-2 (500 mg, 0.89 mmol) was suspended in 1'4-dioxane (15 mL) , H2O (1 mL) , K3PO4 (567.81 mg, 2.67 mmol) and 52-2A (288.22 mg, 0.89 mmol) were added and the mixture was degassed for 10 minutes with argon, Pd (dppf) Cl2. DCM (36.14 mg, 44.58 μmol) was added and the mixture was stirred at 85 ℃ overnight. The mixture was diluted with EA and water, the organic layer was washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography to give 52-3 (260 mg, 43.06 %yield) .

[0270] Mass calc C32H36ClF3N6O5 for 676.24, 679.24 found: 577.29, 579.3 (M-Boc+H) + ESI.

[0271] Step 4: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 52-4

[0272] 52-3 (80 mg, 0.05 mmol) was suspended in DCM (2 mL) , TFA (0.5 mL) was added and the mixture was stirred at RT overnight. The mixture was washed with NaHCO3 aq., dried over Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The RM was concentrated under reduce pressure and used without purification.

[0273] Mass calc C27H28ClF3N6O3 for 576.19, 578.18 found: 577.3, 579.4 (M+H) + ESI.

[0274] Step 5: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 52

[0275] To a mixture of 5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (9.35 mg, 0.06 mmol) , HOBT (16.39 mg, 0.12 mmol) and EDCI (23.26 mg, 0.12 mmol) in DCM (1 mL) was added Pyridine (14.39 mg, 0.18 mmol) at 0 ℃. After stirring at 0 ℃ for 0.5 h, the mixture was added 52-4 (35 mg, 0.06 mmol) and stirred at RT for 2 h. The RM was purified by reverse phase column (C18 column) to provide the product 52 (4.88  mg, 11.28 %yield) .

[0276] Mass calc C33H32ClF3N8O5 for 712.21, 714.21 found: 711.32, 713.30 (M-H) -ESI. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.60 (br, 1H) , 10.40 (br, 1H) , 8.64-8.61 (m, 1H) , 8.10-8.06 (m, 1H) , 7.96 (s, 1H) , 7.74-7.72 (m, 1H) , 6.87-6.84 (m, 1H) , 6.31-6.25 (m, 1H) , 5.40-5.34 (m, 2H) , 4.80-4.59 (m, 2H) , 4.28-4.27 (m, 3H) , 3.84-3.79 (m, 2H) , 3.08-2.99 (m, 1H) , 2.87-2.73 (m, 2H) , 2.55-2.54 (m, 3H) , 2.40 (s, 3H) , 1.23-1.08 (m, 6H) .

[0277] PREPARATION EXAMPLE 3

[0278] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (3-hydroxypicolinoyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, Compound 88-E

[0279] Step 1: tert-butyl 2, 2-dimethyl-4-oxo-pyrrolidine-1-carboxylate, 88-E-2

[0280] A mixture of 88-E-1 (5 g, 23.22 mmol) and DMP (14.78 g, 34.84 mmol) in DCM (10 mL) was stirred at RT overnight. The mixture was quenched with water, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give 88-E-2 (4.1 g, 19.22 mmol, 82.78%yield) .

[0281] 88-E-2 was detected by TLC.

[0282] Step 2: 2- (3- (allyloxy) but-1-en-2-yl) -4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolane, 88-E-3

[0283] 2, 2, 6, 6-Tetramethylpiperidine (3.18 g, 22.51 mmol) was dissolved in THF (15 mL) . After cooled to -30 ℃, n-BuLi (1.1 mL) was added and the solution was stirred for 30 min. After cooled to -78 ℃, Bis (4, 4, 5, 5-tetraMethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) Methane (6.03 g, 22.51 mmol) in THF (15 mL) was added and the solution was stirred for 30  min. Then the solution of 88-E-3 (4 g, 18.76 mmol) in THF (15 mL) was dropwise added to the mixture and stirred at RT overnight. The mixture was quenched to 0 ℃with NH4Cl aq. and stirred for 30 min. The reaction was filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give 88-E-3 (5.5 g, 86.95%yield, Z / E mixture, Z / E～65 / 35) .

[0284] 88-E-3 was detected by TLC.

[0285] Step 3: tert-butyl (E) -2, 2-dimethyl-4- ( (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene) pyrrolidine-1-carboxylate, 88-E-3A

[0286] 88-E-3A was obtained by SFC to give 1.5g, 32.73%yield.

[0287] Preparative separation method:

[0288] Instrument: MG Ⅱ preparative SFC (SFC-14) ; Column: ChiralPak IC, 250×30mm I.D., 5μm; Mobile phase: A for CO2 and B for Ethanol; Gradient: B 10%;

[0289] Flow rate: 120 mL  / min; Back pressure: 100 bar; Column temperature: 38℃;

[0290] Wavelength: 220nm; Cycle time: ～4min;

[0291] Step 4: tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate, 88-E-4

[0292] A solution of 2- [6-bromo-2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (1 g, 1.78 mmol) , tert-butyl (4E) -2, 2-dimethyl-4-[ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene] pyrrolidine-1-carboxylate (721.73 mg, 2.14 mmol) , K3PO4 (1.14 g, 5.35 mmol) and Pd (dppf) Cl2. DCM (72.28 mg, 89.17 μmol) in 1'4-Dioxane (20 mL) and H2O (2 mL) was degassed with N2 for 3 times and the resulting solution was stirred at 85 ℃ under N2 atmosphere. The mixture was concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by purified by reverse phase column (C18 column) to provide the product 88-E-4.

[0293] Mass calc C33H38O5N6ClF3 for 690.25, found: 591.32 (M-Boc+H) +ESI.

[0294] Step 5: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 88-E-5

[0295] TFA (28.95 mg, 253.93 μmol, 0.5 mL) was added to the solution of 88-E-4 (390 mg, 253.93 μmol) in DCM (2 mL) and stirred at RT for 3 h. The mixture was extracted with NaHCO3 aq. for 2 times, washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to give a residue. The crude was used for next step without purification.

[0296] Mass calc C28H30O3N6ClF3 for 590.20, found: 591.31 (M+H) +ESI.

[0297] Step 6: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (3-hydroxypicolinoyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 88-E

[0298] Py (40.15 mg, 507.59 μmol, 40.89 μL) was added to the solution of 3 -hydroxypyridine-2-carboxylic acid (35.31 mg, 253.80 μmol) , HOBT (45.72 mg, 338.40 μmol) and EDCI (64.87 mg, 338.40 μmol) in DCM (10.06 mL) at 0 ℃ and the resulting solution was stirred at 0 ℃ for 15 min. Then N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- [ (E) - (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl] -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (100.00 mg, 169.20 μmol) was added and the resulting solution was stirred at rt for 18 h. The mixture was concentrated under reduced pressure and purified by reverse phase column (C18 column) to provide the product 88-E (30 mg, 24.90%yield) .

[0299] Mass calc C34H33O5N7ClF3 for 711.12, found: 710.20 (M-H) -ESI.

[0300] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.946 (br, 1H) , 10.395 (br, 1H) , 8.096-8.059 (m, J =2.8 Hz, 2H) , 7.974-7.970 (m, 1H) , 7.737-7.711 (dd, J =8.8 Hz, 1.6 Hz, 1H) , 7.355-7.261 (m, 2H) , 6.850 (s, 1H) , 6.154 (s, 1H) , 5.346 (s, 2 H) , 4.309-4.265 (m, 4H) , 3.830-3.803 (m, 2H) , 2.773-2.718 (m, 2H) , 2.527 (s, 2H) , 2.376-2.345 (m, 2H) , 1.506 (s, 6H) , 1.143-1.105 (m, 3H) .

[0301] PREPARATION EXAMPLE 4

[0302] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, Compound 87-E

[0303] Step 1: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 87-E

[0304] Py (40.15 mg, 507.59 μmol, 40.89 μL) was added to the solution of 5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (39.12 mg, 253.80 μmol) , HOBT (45.72 mg, 338.40 μmol) and EDCI (64.87 mg, 338.40 μmol) in DCM (10.06 mL) at 0 ℃, the resulting solution was stirred at 0 ℃ for 15 min. Then 88-E-5 (100.00 mg, 169.20 μmol) was added and the resulting solution was stirred at rt for 18 h. The mixture was concentrated under reduced pressure and purified by reverse phase column (C18 column) to provide the product 87-E (50 mg, 40.64%yield) .

[0305] Mass calc C34H34O5N8ClF3 for 726.23, found: 725.20 (M-H) -ESI.

[0306] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.901 (br, 1H) , 10.390 (br, 1H) , 8.614 (s, 1H) , 8.079-8.058 (m, 1H) , 7.979-7.976 (m, 1H) , 7.742-7.716 (m, 1H) , 6.851 (s, 1H) , 6.179 (s, 1H) , 5.350 (s, 2H) , 4.414-4.266 (m, 4H) , 3.831-3.804 (m, 2H) , 2.776-2.673 (m, 4H) , 2.464-2.389 (m, 5H) , 1.512 (s, 6H) , 1.145-1.127 (m, 3H) .

[0307] PREPARATION EXAMPLE 5

[0308] (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0309] Compound 166

[0310] Step 1: 4-bromo-2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepine and 5-bromo-2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepine, 166-2A and 166-2B

[0311] Br2 (18.20 g, 113.89 mmol, 5.83 mL) was added to a solution of Triphenyl phosphite (40.78 g, 131.42 mmol, 34.44 mL) in DCM (150 mL) at -60 ℃ under N2. After stirred at -60 ℃ for 0.5 h, TEA (17.73 g, 175.22 mmol, 24.44 mL) was added and the resulting solution was stirred at -60 ℃ for 0.5 h. Then oxepan-4-one (10 g, 87.61 mmol) in DCM (50 mL) was added and the resulting solution was stirred at rt over night. TLC (Petroleum ether : Ethyl acetate = 10 : 1, Rf = 0.72) showed the reactant was consumed completely. The mixture was quenched with water, partitioned between DCM and water, and the organic phase was dried and concentrated to afford the residue. The residue was purified by silica gel column chromatography (1%EA in PE) to afford 4-bromo-2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepine (8.2 g, 46.32 mmol, 52.87%yield) , which was a mixture of P1 and P2.

[0312] Step 2: 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane, 166-3A and 166-3B

[0313] A solution of 4-bromo-2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepine (8.2 g, 46.32 mmol) , (BPin) 2 (11.17 g, 44.00 mmol) , KOAc (13.64 g, 138.95 mmol) and Pd (dppf) Cl2. DCM (3.75 g, 4.63 mmol) in 1'4-Dioxane (120 mL) was degassed with N2 for three times and stirred at 80 ℃ for 2 h. TLC (Petroleum ether : Ethyl acetate = 10 : 1, Rf = 0.60) showed the reactant was consumed completely. The mixture was partitioned between EtOAc and water and the organic phase was washed with brine, dried and concentrated. The the residue was purified by silica gel column chromatography (3%EA in PE) to afford 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (4.5 g, 20.08 mmol, 43.35%yield) .

[0314] Step 3: N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide, 166-5A and 166-5B

[0315] A solution of 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl) -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (1 g, 2.09 mmol) , 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (936.40 mg, 4.18 mmol) , K3PO4 (1.33 g, 6.27 mmol) and Pd (dppf) Cl2. DCM (84.67 mg, 104.46 μmol) in 1'4-Dioxane (20 mL) and H2O (5 mL) was degassed with N2 for three times and the resulting solution was stirred at 80 ℃ under N2 for 2 h. Reaction mixture was partitioned between EtOAc and water, washed with brine, dried over and filtered to afford the residue, and the residue was puried by silica gel column chromatography (100%EA) to afford N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (500 mg, 1.01 mmol, 48.26%yield) , as a mixture isomers.

[0316] Mass calc C22H21O3N5ClF3 for 495.13 found: 496.16 (M+H) + ESI.

[0317] Step 4: 2- [6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide, 166-6A and 166-6B

[0318] NBS (279.96 mg, 1.57 mmol) was to a solution of N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (600 mg, 1.21 mmol) in AcOH (2.5 mL) and ACN (5 mL) and the resulting solution was stirred at 70 ℃ for 2 h. H2O was dropwise added to the mxiture under stirring. After stirred for 10 min, the precipitate was collected and dried to afford 2- [6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (350 mg, 608.93 μmol, 50.33%yield) , and it was used directly into next step.

[0319] Mass calc C22H20O3N5ClF3Br for 573.04 found: 574 (M+H) + ESI.

[0320] Step 5: tert-butyl (R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate, 166-7A and 166-7B

[0321] A solution of 2- [6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (350 mg, 608.93 μmol) , tert-butyl (R, E) -2-methyl-4- ( (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene) pyrrolidine-1-carboxylate (393.65 mg, 1.22 mmol) , K3PO4 (387.77 mg, 1.83 mmol) and Pd (dppf) Cl2. DCM (49.36 mg, 60.89 μmol) in 1'4-Dioxane (8 mL) and H2O (2 mL) was degassed with N2 three times. The resulting solution was stirred at 85 ℃ under N2 overnight. The mixture was partitioned between EtOAc and water, and the organic phase was washed with brine, dried, filtered and concentrated, then purified by reverse phase column (C18 column) to afford 180 mg mixture isomers.

[0322] Mass calc C33H38ClF3N6O5 for 690.25 found: 591.20 (M-Boc+H) + ESI.

[0323] Step 6: tert-butyl (R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate (139 mg, 201.12 μmol, 33.03%yield and tert-butyl (2R, 4E) -4- [ [4- [2- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) anilino] -2-oxo-ethyl] -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepin-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl] methylene] -2-methyl- pyrrolidine-1-carboxylate, 166-7 Peak 1 and Peak 2

[0324] Then separated by SFC to afford Peak 1 (tert-butyl (R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate (139 mg, 201.12 μmol, 33.03%yield) ) and Peak 2 (tert-butyl (2R, 4E) -4- [ [4- [2- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) anilino] -2-oxo-ethyl] -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepin-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl] methylene] -2-methyl-pyrrolidine-1-carboxylate (32 mg, 46.30 μmol, 7.60%yield) ) .

[0325] Preparative separation method: Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-26) ; Column: ChiralCel OD, 250×30 mm I. D., 10 μm; Mobile phase: A for CO2 and B for Isopropanol (0.1%NH3H2O) ; Gradient: B 35%; Flow rate: 120 mL  / min; Back pressure: 100 bar; Column temperature: 38 ℃; Wavelength: 220 nm; Cycle time: ～4 min.

[0326] Step 7: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 166-8

[0327] HCl / dioxane (4 M, 502.79 μL) was added to a solution of tert-butyl (2R, 4E) -4- [ [4- [2- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) anilino] -2-oxo-ethyl] -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl] methylene] -2-methyl-pyrrolidine-1-carboxylate (139 mg, 201.12 μmol) in DCM (2 mL) at 0 ℃ and the resulting solution was stirred at rt for 3 h. The mixture was concentrated to afford (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (110 mg, crude) , which was used directly into next step.

[0328] Mass calc C28H31Cl2F3N6O3 for 590.20 found: 591.22 (M +H) + ESI.

[0329] Step 8: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2-  (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 166

[0330] Py (25.21 mg, 318.73 μmol, 25.68 μL) was added to a solution of 5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (18.42 mg, 119.52 μmol) , HOBT (21.53 mg, 159.37 μmol) and EDCI (30.55 mg, 159.37 μmol) in DCM (3 mL) at 0 ℃ and the resulting solution was stirred at 0 ℃ for 15 min. Then (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (50 mg, 79.68 μmol, HCl) was added and the resulting solution was stirred at rt overnight. The mixture was concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (10 mg, 13.75 μmol, 17.26%yield) .

[0331] Mass calc C34H34ClF3N8O5 for 726.23 found: 725.32 (M-H) -ESI.

[0332] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.640-8.605 (m, 1H) , 8.083-8.061 (m, 2H) , 7.976-7.972 (m, 1H) , 7.736-7.710 (m, 1H) , 7.157-7.127 (m, 1H) , 6.304 (d, J=31.6 Hz, 1H) , 5.406-5.286 (m, 2H) , 4.647-4.301 (m, 3H) , 3.679-3.621 (m, 4H) , 2.923-2.922 (m, 2H) , 2.771-2.720 (m, 3H) , 2.490-2.443 (m, 5H) , 2.086-2.043 (m, 1H) , 1.169-1.054 (m, 6H) .

[0333] PREPARATION EXAMPLE 6

[0334] N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [5-ethyl-6- [ (Z) - [ (5R) -1- (5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carbonyl) -5-methyl-pyrrolidin-3-ylidene] methyl] -7-oxo-2- (2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepin-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide,

[0335] Compound 167

[0336] Step 1: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0337] Tert-butyl (2R, 4E) -4- [ [4- [2- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) anilino] -2-oxo-ethyl] -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepin-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl] methylene] -2-methyl-pyrrolidine-1-carboxylate (32.00 mg, 46.30 μmol) in DCM (1 mL) at 0 ℃ was added to a solution of HCl / dioxane (4 M, 115.75 μL) and the resulting solution was stirred at rt for 3 h. The mixture was concentrated to afford (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (23 mg, crude, HCl) , and it was used directly into next step.

[0338] Mass calc C28H31Cl2F3N6O3 for 590.20 found: 591.22 (M+H) + ESI.

[0339] Step 2: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0340] Py (11.60 mg, 146.62 μmol, 11.81 μL) was added to a solution of 5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (8.47 mg, 54.98 μmol) , HOBT (9.91 mg, 73.31 μmol) and EDCI (14.05 mg, 73.31 μmol) in DCM (2 mL) at 0 ℃ and the resulting solution was stirred at 0℃ for 15 min. Then (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (23 mg, 36.65 μmol, HCl) was added and the resulting solution was stirred at rt overnight. The mixture was concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (5 mg, 6.88 μmol, 18.76%yield) .

[0341] Mass calc C34H34ClF3N8O5 for 726.23 found: 725.29 (M-H) -ESI.

[0342] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.641-8.606 (m, 1H) , 8.074-8.052 (m, 2H) , 7.973-7.969 (m, 1H) , 7.734-7.708 (m, 1H) , 6.938-6.916 (m, 1H) , 6.305 (d, J=31.6 Hz, 1H) , 5.402-5.326 (m, 2H) , 4.649-4.582 (m, 3H) , 4.303-4.265 (m, 3H) , 3.825-3.798 (m, 2H) , 2.859-2.722 (m, 5H) , 2.453-2.444 (m, 3H) , 2.090-2.050 (m, 1H) , 1.879-1.857 (m, 1H) , 1.171-1.056 (m, 6H) .

[0343] PREPARATION EXAMPLE 7

[0344] (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1-formyl-5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, Compound 157A

[0345] PREPARATION EXAMPLE 8

[0346] N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [5-ethyl-6- [ (Z) - [ (5R) -1- (5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carbonyl) -5-methyl-pyrrolidin-3-ylidene] methyl] -7-oxo-2- (2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepin-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide,

[0347] Compound 162

[0348] Step 1: 5-methoxy-2, 6-dimethylpyrimidine-4-carboxylic acid, acid 20-2

[0349] A mixture of methyl 2, 6-dichloro-5-methoxy-pyrimidine-4-carboxylate (2 g, 8.44 mmol) , Methylboronic acid (1.77 g, 29.53 mmol) , Pd (dppf) Cl2. DCM (3.42 g, 4.22  mmol) and K2CO3 (3.49 g, 25.31 mmol) in 1'4-Dioxane (5 mL) and water (5 mL) was stirred at 85 ℃ for 16 h under N2 atmosphere. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The crude was used for next step without purification.

[0350] Mass calc C8H10N2O3 for 182.18

[0351] acid 20-2 was detected by TLC.

[0352] Step 2: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-methoxy-2, 6-dimethylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 162-1

[0353] A mixture of N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- [ (E) - [ (2R) -2-methylpyrrolidin-3-ylidene] methyl] -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (300 mg, 519.93 μmol) , 5-methoxy-2,6-dimethyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (189.44 mg, 1.04 mmol) , py (157.84 mg, 2.00 mmol, 160.75 μL) , EDCI (294.23 mg, 779.90 μmol) and HOBt (105.38 mg, 779.90 μmol) in DCM (10 mL) was stirred at 25 ℃ for 16 h. The reaction mixture was extrated by EA and purified by reverse phase column (C18 column) to afford N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- [ (E) - [ (2R) -1- (5-methoxy-2, 6-dimethyl-pyrimidine-4-carbonyl) -2-methyl-pyrrolidin-3-ylidene] methyl] -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (85 mg, 114.69 μmol, 22.06%yield) .

[0354] Mass calc C35H36N8O5ClF3 for 740.24 found: 741.26 (M+H) + ESI.

[0355] Step 3: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-2, 6-dimethylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 162

[0356] Lithium chloride (8.58 mg, 202.39 μmol) was added to a solution of N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- [ (E) - [ (2R) -1- (5- methoxy-2, 6-dimethyl-pyrimidine-4-carbonyl) -2-methyl-pyrrolidin-3-ylidene] methyl] -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (60 mg, 80.95 μmol) in DMF (1 mL) and the resulting solution was stirred at 140 ℃ for 3 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to afford N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- [ (E) - [ (2R) -1- (5-hydroxy-2, 6-dimethyl-pyrimidine-4-carbonyl) -2-methyl-pyrrolidin-3-ylidene] methyl] -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (15 mg, 20.63 μmol, 25.48%yield) .

[0357] Mass calc C34H34N8O5ClF3 for 726.23 found: 727.30 (M+H) + ESI.

[0358] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.082-8.061 (m, 1H) , 7.975-7.969 (m, 1H) , 7.736-7.715 (m, 1H) , 6.851-6.816 (m, 1H) , 6.300 (d, J=37.2 Hz, 1H) , 5.416-5.298 (m, 2H) , 4.659-4.556 (m, 2H) , 4.269-4.233 (m, 2H) , 3.813-3.798 (m, 2H) , 2.849-2.696 (m, 4H) , 2.539-2.503 (m, 5H) , 2.410-2.401 (m, 3H) , 1.179-1.067 (m, 6H) .

[0359] PREPARATION EXAMPLE 9

[0360] (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (1- (2-chloro-5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0361] Compound 160

[0362] Step 1: methyl 2-chloro-5-methoxy-6-methylpyrimidine-4-carboxylate, 160-1B

[0363] A mixture of methyl 2, 6-dichloro-5-methoxypyrimidine-4-carboxylate (1.6 g, 6.75 mmol) , methylboronic acid (606.08 mg, 10.12 mmol) , potassium phosphate (2.87 g, 13.50 mmol) , Dichloro [1, 1'-bis (diphenylphosphino) ferrocene] palladium (II) dichloromethane adduct (550.79 mg, 674.99 μmol) and 1'4-Dioxane (10 mL) was stirred for 1 h at 85 ℃ under Ar atmosphere. The mixture was diluted with DCM and water, and extracted with DCM. The organic layers were combined, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give 160-1B (881 mg, 60.25%yield) .

[0364] Mass calc C8H9ClN2O3 for 216.03 found: 217.06 (M+H) + ESI.

[0365] Step 2: 2-chloro-5-methoxy-6-methylpyrimidine-4-carboxylic acid, 160-1

[0366] A solution of 160-1B (100 mg, 461.64 μmol) DCE (5 mL) and trimethylstannanol (417.37 mg, 2.31 mmol) was stirred at 80 ℃ for 1 h. The mixture was concentrated under reduced pressure. The crude product was used for next step without purification. Mass calc C7H7ClN2O3 for 202.01 found: 203.05 (M+H) + ESI.

[0367] Step 3: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide hydrochloride, 160-2  52-3 (250 mg, 369.22 μmol) was suspended in HCl (13.46 mg, 369.22 μmol) and 1'4-Dioxane (5 mL) and the mixture was stirred at RT for 1 h. The mixture was concentrated under reduced pressure to give a residue. The RM was concentrated under reduced pressure and used for next step without purification.

[0368] Mass calc C27H28ClF3N6O3 for 576.19 found: 575.1 (M-H) -ESI.

[0369] Step 4: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (1- (2-chloro-5-methoxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 160-3

[0370] A mixture of 160-2 (100 mg, 163.01 μmol) , 160-1 (42.93 mg, 211.91 μmol) , acetonitrile (10 mL) , 1-methyl-imidazole (40.15 mg, 489.03 μmol) and CHLORO-N, N, N', N'-TETRAMETHYLFORMAMIDINIUM HEXAFLUOROPHOSPHATE (68.61 mg, 244.52 μmol) was stirred at 35 ℃ for 16 h. The mixture was concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give 160-3 (129 mg, 169.39 μmol, 103.91%yield) .

[0371] Mass calc C34H33Cl2F3N8O5 for 760.19 found: 761.11 (M+H) + ESI.

[0372] Step 5: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (1- (2-chloro-5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 160

[0373] A solution of 160-3 (30 mg, 39.39 μmol) and lithium chloride (16.70 mg, 393.92 μmol) in DMF (2 mL) was stirred at 140 ℃ for 2 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The crude product was purified by reverse phase column (C18 column) to provide the product 160 (1.5 mg, 2.01 μmol, 5.09%yield) .

[0374] Mass calc C33H31Cl2F3N8O5 for 746.17 found: 746.16 (M-H) -ESI.

[0375] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.041 (br, 1H) , 8.470 (d, J=10.8 Hz, 1H) , 8.075 (d, J=8.4 Hz, 1H) , 7.983-7.980 (m, 1H) , 7.732 (d, J=8.4 Hz, 1H) , 6.852 (s, 1H) , 6.280 (d,  J=56.4 Hz, 1H) , 5.415-5.340 (m, 2H) , 4.483-4.465 (m, 1H) , 4.267-4.207 (m, 4H) , 3.815 (s, 2H) , 2.800-2.662 (m, 3H) , 2.108-2.040 (m, 1H) , 1.168-1.110 (m, 4H) , 0.991-0.975 (m, 1H) .

[0376] PREPARATION EXAMPLE 10

[0377] (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (5-ethyl-1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) pyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0378] Compound 97

[0379] Step 1: (R) -2- (prop-2-yn-1-ylamino) butan-1-ol, 97-1

[0380] (2R) -2-aminobutan-1-ol (21.73 g, 243.78 mmol) was dissolved in MeCN (400 mL) , and K2CO3 (23.24 g, 168.12 mmol) was added. After cooled down to -20 ℃, 3-bromoprop-1-yne (20 g, 168.12 mmol) was added slowly and then the mixture was heated to 75 ℃ and stirred for 1 h. The RM was filtered and concentratred. The residue was purified by column chromatography to give 97-1 (8.5 g, 91.05%yield) .

[0381] Mass calc C7H13NO for 127.18 found: 128 (M+H) + ESI.

[0382] Step 2: 2, 2, 2-trichloroethyl (R) - (1-hydroxybutan-2-yl) (prop-2-yn-1-yl) carbamate, 97-2

[0383] (2R) -2- (prop-2-ynylamino) butan-1-ol (2 g, 15.73 mmol) and 2, 2, 2-Trichloroethyl chloroformate (4.00 g, 18.87 mmol) were dissolved in MeCN (20 mL) . K2CO3 (3.26 g, 23.59 mmol) was added and the RM was stirred at rt for 2 h. The RM was filtered  and concentratred. The residue was purified by column chromatography to give 97-2 (4 g, 84.07%yield) .

[0384] Mass calc C10H14O3NCl3 for 301.10 found: 302 / 304 (M+H) + ESI.

[0385] Step 3: 2, 2, 2-trichloroethyl (R) - (1-bromobutan-2-yl) (prop-2-yn-1-yl) carbamate, 97-3

[0386] 2, 2, 2-trichloroethyl (R) - (1-hydroxybutan-2-yl) (prop-2-yn-1-yl) carbamate (4 g, 13.22 mmol) was dissolved in THF (15 mL) . PPh3 (4.33 g, 16.52 mmol) , CBr4 (5.48 g, 16.52 mmol) and Imidazole (539.99 mg, 7.93 mmol) was added at 0 ℃. The RM was stirred at rt for 2 h. The mixture was concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford 97-3 (4.3 g, 89.00%yield) .

[0387] Mass calc C10H13BrNO2Cl3 for 365.48 found: 365 / 367 (M+H) + ESI.

[0388] Step 4: 2, 2, 2-trichloroethyl (R, Z) -2-ethyl-4- ( (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene) pyrrolidine-1-carboxylate, 97-4

[0389] potassium 2-methylpropan-2-olate (1 M, 14.12 mL) was added to a solution of [Cu] Cl (93.18 mg, 941.23 μmol) , PPh3 (246.88 mg, 941.23 μmol) and 4, 4, 4', 4', 5, 5, 5', 5'-octamethyl-2, 2'-bi (1, 3, 2-dioxaborolane) (3.59 g, 14.12 mmol) in THF (30 mL) at 0 ℃under N2 atmosphere. After stirred at rt for 1 h, 2, 2, 2-trichloroethyl (R) - (1-bromobutan-2-yl) (prop-2-yn-1-yl) carbamate (4.3 g, 11.77 mmol) was added and the RM was stirred at 32 ℃ overnight under N2 atmosphere. The mixture was concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford 97-4 (1.6 g, 32.96%yield) .

[0390] Mass calc C16H25NBO4Cl3 for 284.00 found: 285 (M+H) + ESI.

[0391] Step 5: 2, 2, 2-trichloroethyl (R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-ethylpyrrolidine-1-carboxylate, 97-5

[0392] 2- (6-bromo-2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (1.6 g, 2.85 mmol) and 2, 2, 2-trichloroethyl (R) -2-ethyl-4- ( (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene) pyrrolidine-1-carboxylate (1.53 g, 3.71 mmol) were  dissolved in a mixture of water (1 mL) and 1'4-Dioxane (10 mL) . K2CO3 (1.18 g, 8.56 mmol) and Pd (dppf) Cl2. DCM (231.29 mg, 285.33 μmol) were added and the RM was stirred at 80 ℃ overnight under N2 atmosphere. The mixture was filtered, concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford 97-5 (300 mg, 13.72%yield) .

[0393] Mass calc C31H31Cl4F3N6O5 for 766.10 found: 767 / 769 (M+H) + ESI.

[0394] Step 6: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 97-6

[0395] 2, 2, 2-trichloroethyl (R) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-ethylpyrrolidine-1-carboxylate (300 mg, 391.43 μmol) was dissolved in a mixture of DCM (3 mL) and AcOH (1 mL) . Zn (255.96 mg, 3.91 mmol) was added and the RM was stirred at 32 ℃ for 3 h. The mixture was filtered, and the filtrate was adjusted pH to 9-10. The mixture was extracted and the organic layer was collected and concentrated. The RM was concentratred and used for next step without purification.

[0396] Mass calc C28H30ClN6O3F3 for 590.20 found: 591 / 593 (M+H) + ESI.

[0397] Step 7: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (5-ethyl-1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) pyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 97

[0398] (R) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (5-ethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (50 mg, 84.60 μmol) and 5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carboxylic acid (19.56 mg, 126.90 μmol) were dissolved in DCM (2.0 mL) . Py (53.53 mg, 676.79 μmol, 54.52 μL) , HOBT (22.86 mg, 169.20 μmol) and EDCI (32.40 mg, 169.20 μmol) were added, and the RM was stirred at rt overnight under N2  atmosphere. The mixture was concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford 97 (24 mg, 33.01 μmol, 39.02%yield) .

[0399] Mass calc C34H34O5N8F3Cl for 726.23 found: 725.20 (M-H) -ESI.

[0400] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.130-10.103 (m, 1H) , 8.631 (s, 1H) , 7.872-7.269 (m, 1H) , 7.703-7.682 (m, 1H) , 6.867 (s, 1H) , 6.248-6.227 (m, 1H) , 5.366-5.356 (m, 2H) , 4.749-4.721 (m, 2H) , 4.289-4.282 (m, 2H) , 3.844 (m, 2H) , 3.111-3.094 (m, 1H) , 3.074-2.818 (m, 2H) , 2.798-2.778 (m, 1H) , 2.695 (s, 2H) , 2.576-2.481 (m, 3H) , 2.319-2.281 (m, 1H) , 1.805-1.703 (m, 1H) , 1.218-1.181 (m, 3H) , 0.857-0.703 (m, 3H) .

[0401] PREPARATION EXAMPLE 11

[0402] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (4-fluoro-3-hydroxypicolinoyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, Compound 115

[0403] Step 1: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 115-1

[0404] A mixture of tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (40 mg, 57.88 μmol) , HCl (2.11 mg, 57.88 μmol) and 1'4-Dioxane (0.7 mL) was stirred at rt for 1 h.

[0405] The mixture was concentrated to afford the crude, and it was used directly for next step. Mass calc C28H30O3N6F3Cl for 590.20 found: 591.22 (M+H) + ESI.

[0406] Step 2: (E) -2- (6- ( (1- (3- (benzyloxy) -4-fluoropicolinoyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide, 115-2  A solution of (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (50 mg, 84.60 μmol) , EDCI (32.44 mg, 169.20 μmol) , HOBT (22.86 mg, 169.20 μmol) , Py (26.77 mg, 338.40 μmol, 27.26 μL) and DCM (272.74 μL) stirred at 0℃ for 15 min. 3- (benzyloxy) -4-fluoropicolinic acid (41.83 mg, 169.20 μmol) was added at 0 ℃ and the resulting solution was stirred at RT for 3 h. The mixture was concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford 115-2 (28 mg, 34.14 μmol, 40.35%yield) .

[0407] Mass calc C41H38O5N7F4Cl for 819.26 found: 820.20 (M+H) + ESI.

[0408] Step 3: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (4-fluoro-3-hydroxypicolinoyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 115

[0409] A solution of (E) -2- (6- ( (1- (3- (benzyloxy) -4-fluoropicolinoyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (23 mg, 28.04 μmol) and TFA (3.20 mg, 28.04 μmol, 0.5 mL) was stirred at 75 ℃ for 6 h. The mixture was concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford 115 (10 mg, 13.70 μmol, 48.85%yield) .

[0410] Mass calc C34H32O5N7F4Cl for 729.21 found: 728.22 (M-H) -ESI.

[0411] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.108-8.057 (m, 2H) , 7.977-7.973 (m, 1H) , 7.740-7.714 (m, 1H) , 7.420-7.380 (m, 1H) , 6.849-6.846 (m, 1H) , 6.158-6.153 (m, 1H) , 5.347-5.298 (m, 2H) , 4.293-4.265 (m, 4H) , 3.829-3.802 (m, 2H) , 2.771-2.672 (m, 3H) , 2.382-2.330 (m, 3H) , 1.507 (s, 6H) , 1.142-1.104 (m, 3H) .

[0412] PREPARATION EXAMPLE 12

[0413] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (4-fluoro-3-hydroxy-6-methylpicolinoyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0414] Compound 121

[0415] Step 1: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 121-2

[0416] Tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (42 mg, 60.77 μmol) was dissolved in DCM (2 mL) . HCl. dioxane (4 M, 151.92 μL) was added and the mixture was stirred at rt for 2 h. The RM was concentratred and used for next step without purification.

[0417] Mass calc C28H30ClF3N6O3 for 590.20 found: 591 / 593 (M+H) + ESI.

[0418] Step 2: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (4-fluoro-3-hydroxy-6-methylpicolinoyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, Compound 121

[0419] 121-2 (35 mg, 59.22 μmol) and 4-fluoro-3-hydroxy-6-methylpicolinic acid (15.20 mg, 88.83 μmol) were dissolved in DCM (2.02 mL) . Py (37.47 mg, 473.75 μmol, 38.16 μL) , HOBT (16.00 mg, 118.44 μmol) and EDCI (22.68 mg, 118.44 μmol) were added, and the RM was stirred at rt for 2 h under N2 atmosphere. The mixture was concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford 121 (15 mg, 20.16 μmol, 34.04%yield) .

[0420] Mass calc C35H34ClF4N7O5 for 743.22 found: 744.33 (M+H) + ESI.

[0421] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.929-10.854 (m, 1H) , 10.402-10.350 (m, 1H) , 8.078-8.057 (m, 1H) , 7.980-7.973 (m, 1H) , 7.739-7.717 (m, 1H) , 7.273-7.249 (m, 1H) , 6.848-6.841 (m, 1H) , 6.158-6.153 (m, 1H) , 5.346-5.298 (m, 2H) , 4.420-4.268 (m, 4H) ,  3.814-3.801 (m, 2H) , 2.753-2.735 (m, 2H) , 2.410-2.368 (m, 3H) , 1.492 (s, 6H) , 1.139-1.102 (m, 3H) .

[0422] PREPARATION EXAMPLE 13

[0423] N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (E) - ( (R) -1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, Compound 201

[0424] Step 1: 3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl

[0425] trifluoromethanesulfonate

[0426] A solution of LIHMDS (1 M, 5.35 mL) was dropwise added to solution of tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5 (3H) -one (450 mg, 3.57 mmol) in THF (27.40 μL) at -78 ℃under N2 atmosphere. After stirred for 1 h, the solution of 1, 1, 1-trifluoro-N-phenyl-N- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) methanesulfonamide (1.91 g, 5.35 mmol) in THF (27.40 μL) was added at and the mixture was stirred at RT overnight. The mixture was quenched with NH4Cl aq. and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give 3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl trifluoromethanesulfonate (800 mg, 86.85% yield) .

[0427] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7.41-7.39 (m, 3H) , 7.34-7.28 (m, 5H) , 5.57-5.56 (m, 5H) , 4.18-4.13 (m, 1H) , 3.96-3.92 (m, 1H) , 3.86-3.82 (m, 1H) , 3.70-3.62 (m, 2H) , 3.02-3.00 (m, 1H) , 2.95-2.88 (m, 1H) , 2.46-2.41 (m, 1H) , 2.08 (s, 1H) , 1.30-1.27 (m, 1H) .

[0428] Step 2: 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane

[0429] A solution of 4, 4, 4', 4', 5, 5, 5', 5'-octamethyl-2, 2'-bi (1, 3, 2-dioxaborolane) (737.58 mg, 2.90 mmol) , 3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl trifluoromethanesulfonate (750 mg, 2.90 mmol) , Pd (dppf) Cl2 (117.72 mg, 145.23 μmol) and Potassium Acetate (855.18 mg, 8.71 mmol) in 1'4-Dioxane (1 mL) Was stirred at 80 ℃ for 2 h. The mixture was quenched with water, diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (420 mg, 61.24%yield) .

[0430] Mass calc C13H21O3B for 235.16 found: 236.15 (M+H) + ESI.

[0431] Step 3: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0432] A solution of 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (2 g, 4.18 mmol) , K3PO4 (2.66 g, 12.54 mmol) and Pd (dppf) Cl2. DCM (677.40 mg, 835.68 μmol) in 1, 4-dioxane (5 mL) and water (1 mL) was degassed with N2 for three time, and then 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (986.58 mg, 4.18 mmol) was added. The resulting solution was stirred at 100 ℃ under N2 for 12 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography  to give N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (1.76 g, 3.47 mmol, 82.93%yield) .

[0433] Mass calc C23H21O3N5F3Cl for 507.13 found: 508.16 (M+H) + ESI.

[0434] Step 4: 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0435] A solution of N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (22 g, 47.68 mmol) , 1-bromopyrrolidine-2, 5-dione (10.18 g, 57.21 mmol) in AcOH (100.00 mL) and MeCN (100.00 mL) was stirred at 75 ℃ for 0.5 h. The mixture was concentrated under reduced pressure, beaten with acetonitrile and filtered to afford filter cake. The filter cake was washed with water and acetonitrile and dried over Na2SO4 to give a crued.

[0436] Mass calc C23H20O3N5F3ClBr for 585.04 found: 586.13 (M+H) + ESI.

[0437] Step 5: benzyl (2R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate

[0438] A solution of 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (146.12 mg, 409.01 μmol) , benzyl (R, E) -2-methyl-4- ( (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene) pyrrolidine-1-carboxylate (146.12 mg, 409.01 μmol) , K3PO4 (217.05 mg, 1.02 mmol) and Pd (dppf) Cl2. DCM (13.81 mg, 17.04 μmol) in 1'4-Dioxane (20 mL) and H2O (2 mL) was stirred at 85 ℃under N2 atmosphere. The mixture was concentrated under reduced pressure and purified by reverse phase column (C18 column) to give benzyl (2R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin- 6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate (65 mg, 88.18 μmol, 25.87%yield) .

[0439] Mass calc C37H36O5N6F3Cl for 736.24 found: 735.2 (M-H) -ESI.

[0440] Step 6: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (E) - ( (R) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide A solution of benzyl (2R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate (60 mg, 81.39 μmol) in TFA (2.97 mg, 26.03 μmol, 2 mL) was stirred at 75 ℃ for 1 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure and used for next step without purification.

[0441] Mass calc C29H30O3N6F3Cl for 602.20 found: 601.2 (M-H) -ESI.

[0442] Step 7: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (E) - ( (R) -1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0443] A mixture of N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (E) - ( (R) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (50 mg, 82.91 μmol) , 5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carboxylic acid (12.78 mg, 82.91 μmol) , EDC (25.74 mg, 165.83 μmol) , HOBt (22.41 mg, 165.83 μmol) and Pyridine (19.68 mg, 248.74 μmol, 20.04 μL) in DCM (5 mL) was stirred at RT for 2 h. The mixture was diluted with DCM and water, and extracted with DCM. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (E) - ( (R) -1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) - 7-oxo-2- (3, 3a, 4, 6a-tetrahydro-1H-cyclopenta [c] furan-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (, yield) .

[0444] Mass calc C35H34O5N8F3Cl for 738.23 found: 737.20 (M-H) -ESI.

[0445] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.41 (br, 1H) , 8.64-8.61 (m, 1H) , 8.09-8.07 (m, 1H) , 7.98 (s, 1H) , 7.74-7.72 (m, 1H) , 6.47 (s, 1H) , 6.35-6.27 (m, 1H) , 5.42-5.30 (m, 2H) , 4.74-4.55 (m, 2H) , 4.31-4.27 (m, 1H) , 3.78-3.75 (m, 1H) , 3.65-3.64 (m, 2H) , 3.54-3.53 (m, 2H) , 3.02-2.96 (m, 2H) , 2.83-2.74 (m, 2H) , 2.70-2.59 (m, 2H) , 2.46-2.45 (m, 3H) , 1.23-1.17 (m, 6H) .

[0446] PREPARATION EXAMPLE 14

[0447] (E) -N- (2-chloro-5-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0448] Compound 202

[0449] Step 1: (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-5-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0450] T3P (937.58 mg, 2.95 mmol, 884.51 μL) was added to a solution of (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetic acid (65 mg, 101.61 μmol) , 2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) aniline (26.04 mg, 121.93 μmol) and TEA (154.23 mg, 1.52 mmol, 212.58 μL) in EtOAc (5 mL) at 0 ℃. Then the mixture was stirred at RT overnight. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column  (C18 column) to give (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-5-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (20 mg, 23.95 μmol, 23.57%yield) .

[0451] Mass calc C41H39N8O5ClF4 for 834.27 found: 833.20 (M-H) -ESI.

[0452] Step 2: (E) -N- (2-chloro-5-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0453] A solution of (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-5-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (20 mg, 23.95 μmol) in TFA (1 mL) was stirred at 70 ℃ for 3 h. The mixture was concentrated and purified by reverse phase column (C18 column) to afford (E) -N- (2-chloro-5-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (4.1 mg, 5.50 μmol, 22.98%yield) .

[0454] Mass calc C34H33N8O5ClF4 for 744.32 found: 743.23 (M-H) -ESI.

[0455] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.56 (br, 1H) , 8.61 (s, 1H) , 8.14-8.10 (m, 1H) , 8.03-8.02 (m, 1H) , 6.84 (s, 1H) , 6.18 (s, 1H) , 5.38 (s, 2H) , 4.43-4.40 (m, 2H) , 4.27-4.26 (m, 2H) , 3.81 (t, J=5.4 Hz, 2H) , 2.76-7.71 (m, 2H) , 2.46 (s, 2H) , 2.39 (s, 2H) , 1.51 (s, 6H) , 1.12 (t, J=7.6 Hz, 3H) .

[0456] PREPARATION EXAMPLE 15

[0457] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0458] Compound 205

[0459] Step 1: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide A mixture of 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (2.0 g, 4.18 mmol) , 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (2 g, 8.92 mmol) (mixed with 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane) , K3PO4 (3.55 g, 16.73 mmol) and Pd (dppf) Cl2. DCM (226.06 mg, 278.89 μmol) in 1'4-Dioxane (20 mL) and H2O (5 mL) was stirred at 80 ℃ under N2 atmosphere for 2 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography (100%EA) to give N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (1.5 g, 54.23%yield) . (mixed with N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide)

[0460] Mass calc C22H21O3N5ClF3 for 495.13 found: 496.18 (M+H) + ESI.

[0461] Step 2: 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0462] NBS (699.90 mg, 3.93 mmol) was added to a solution of N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (1.5 g, 3.02 mmol) (mixed with N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide) in AcOH (0.25 mL) and ACN (0.5 mL) and the mixture was stirred at 70 ℃ for 2 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (0.92 g, 1.60 mmol, 52.91%yield) . (mixed with 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide)

[0463] Mass calc C22H20O3N5ClF3Br for 573.04 found: 574 (M+H) + ESI.

[0464] Step 3: tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate

[0465] A solution of 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (900 mg, 1.57 mmol) (mixed with 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide) , tert-butyl (4E) -2, 2-dimethyl-4- [ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene] pyrrolidine-1-carboxylate (1.06 g, 3.13 mmol) , K3PO4 (997.11 mg, 4.70 mmol) and Pd (dppf) Cl2. DCM (126.92 mg, 156.58 μmol) in 1'4-Dioxane (8 mL) and H2O (2 mL) was stirred at 85 ℃ under N2 overnight. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and  concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give mixture isomers (410 mg, 40%yield) (mixed with tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate) .

[0466] Mass calc C34H40ClF3N6O5 for 704.27 found: 705.3 (M+H) + ESI.

[0467] Step 4: tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate, (205-3) , and tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate, (205-3’ )

[0468] Tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (mixture isomers, 410 mg) was separated by SFC to afford tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (205-3, 263 mg) and tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (205-3', 46 mg) .

[0469] Preparative separation method:

[0470] Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-26) , Column: ChiralCel OD, 250×30 mm I.D., 10 μm, Mobile phase: A for CO2 and B for Ethanol (0.1%NH3H2O) Gradient: B 30%, Flow rate: 120 mL  / min, Back pressure: 100 bar, Column temperature: 38 ℃, Wavelength: 220 nm

[0471] Step 5: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin- 3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0472] HCl / dioxane (1 mL) was added to a mixture of tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (0.1 g, 141.81 μmol) in DCM (2 mL) and stirred at 25 ℃ for 1 h. The mixture was diluted with EA and NaHCO3 aq., and extracted with EA.The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was used for next step without purification.

[0473] Mass calc C29H32ClF3N6O3 for 604.22 found: 603.2 (M-H) -ESI.

[0474] Step 6: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0475] A solution of 5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (11.46 mg, 74.37 μmol) , HOBt (10.05 mg, 74.37 μmol) , EDCI (28.06 mg, 74.37 μmol) and py (11.77 mg, 148.75 μmol) was stirred at 0 ℃. After 10 min, (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (30 mg, 49.58 μmol) was added and the mixture was stirred at 25 ℃ for 3 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (30 mg, 40.48 μmol, 81.64%yield) .

[0476] Mass calc C35H36ClF3N8O5 for 740.24 found: 739.22 (M-H) -ESI.

[0477] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.90 (br, 1H) , 10.45 (s, 1H) , 8.54-8.53 (m, 1H) , 8.07-7.98 (m, 2H) , 7.74-7.72 (m, 1H) , 7.16-7.13 (m, 1H) , 6.18-6.17 (m, 1H) , 5.35-5.33 (m, 2H) , 4.40-4.39 (m, 2H) , 3.70-3.63 (m, 2H) , 2.94-2.92 (m, 2H) , 2.75-2.73 (m, 2H) , 2.46 (s, 3H) , 1.51 (s, 6H) , 1.14-1.12 (m, 3H) .

[0478] PREPARATION EXAMPLE 16

[0479] (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide,

[0480] Compound 211

[0481] Step 1: (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0482] 2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) aniline (20.03 mg, 93.79 μmol) and TEA (142.37 mg, 1.41 mmol, 196.23 μL) were added to a solution of (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetic acid (60 mg, 93.79 μmol) in EA (1 mL) . After cooled to 0 ℃ and stirred for 30 min, T3P (865.46 mg, 2.72 mmol, 816.47 μL) was added and the mixture was stirred at RT overnight. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (30 mg, 38.29%yield) .

[0483] Mass calc C41H39N8O5ClF4 for 834.27 found: 835.23 (M+H) + ESI.

[0484] Step 2: (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0485] A solution of (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (30 mg, 35.92 μmol) in TFA (1 mL) was stirred at 70 ℃ for 2 h. The mixture was diluted with EA and NaHCO3 aq., and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (10 mg, 13.42 μmol, 37.36%yield) .

[0486] Mass calc C34H33N8O5ClF4 for 744.22 found: 743.25 (M-H) -ESI.

[0487] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.90 (s, 1H) , 10.56 (s, 1H) , 8.62 (s, 1H) , 7.97-7.95 (m, 1H) , 7.80-7.76 (m, 1H) , 6.84 (s, 1H) , 6.18 (s, 1H) , 5.38 (s, 2H) , 4.41 (m, 2H) , 4.27-4.26 (m, 2H) , 3.83-3.81 (m, 2H) , 2.75-2.74 (m, 2H) , 2.46 (s, 3H) , 2.39 (m, 2H) , 1.51 (s, 6H) , 1.14-1.10 (m, 3H) .

[0488] PREPARATION EXAMPLE 17

[0489] Step 1

[0490] A mixture of 2-methyltetrahydropyran-4-one (10 g, 87.61 mmol) n THF (200 mL) was stirred at -78 ℃, Lithium bis (trimethylsilyl) amide (17.59 g, 105.13 mmol) was added, and the mixture was stirred at -78 ℃ for 1 h. 1, 1, 1-trifluoro-N-phenyl-N- (trifluoromethylsulfonyl) methanesulfonamide (31.30 g, 87.61 mmol) was added, and the mixture was stirred at 25 ℃ for 15 h. TLC (PE: EA=10: 1) showed new point was detected and the starting material was consumed completely. The reaction was quenched with NaHCO3 (800 mL) and extracted with EA (800 mL x 3) , The organic layer was separated, and washed with brine (300 mL x 3) . The organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to give crude  residue which was purified by HPLC to give mixture of 2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl trifluoromethanesulfonate (6 g, 24.37 mmol, 55.63%yield) , 6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl trifluoromethanesulfonate (6 g, 24.37 mmol, 55.63%yield) as yellow oil.

[0491] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.82-5.71 (m, 1H) , 4.36-4.07 (m, 2H) , 3.78-3.69 (m, 1H) , 2.66-2.21 (m, 2H) , 1.31 (dd, J = 6.5, 4.4 Hz, 3H) .

[0492] Step 2

[0493] To a solution of (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) trifluoromethanesulfonate (5 g, 20.31 mmol) and (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) trifluoromethanesulfonate (5.00 g, 20.31 mmol) and 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (12.38 g, 48.74 mmol) in 1'4-Dioxane (300 mL) was added KOAc (11.96 g, 121.85 mmol) and Pd (dppf) Cl2·DCM (3.32 g, 4.06 mmol) and the mixture was stirred for 18 h at 90 ℃ under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was cooled to rt then quenched with water (100 mL) , extracted with EA (3 x 200 mL) , the combine organic was washed with brine (200 mL) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to give the residue which was purified using silica gel column chromatography eluting with 8 %ethyl acetate in petroleum ether to afford the mixture product 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (3.7 g, 16.51 mmol, 81.30%yield) , 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (3.7 g, 16.51 mmol, 81.30%yield) as white oil.

[0494] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6.547-6.431 (m, 1H) , 4.291-3.962 (m, 2H) , 3.661-3.581 (m, 1H) , 2.163-2.047 (m, 2H) , 1.289-1.239 (m, 15H) .

[0495] Step 3

[0496] To a solution of 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (3.3 g, 14.73 mmol) , 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (3.30 g, 14.73 mmol) and 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (11.28 g, 23.56 mmol) in 1'4-Dioxane (150 mL) ,  Water (30 mL) was added K3PO4 (15.63 g, 73.63 mmol) and Pd (dppf) Cl2·DCM (2.41 g, 2.95 mmol) and the mixture was stirred for 3 h at 80 ℃ under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was cooled to rt, quenched with water (100 mL) , extracted with EA (3 x 200 mL) , and the combine organic was washed with brine (200 mL) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to give the residue which was purified using silica gel column chromatography eluting with 8 %ethyl acetate in petroleum ether to afford the mixture N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (2.5 g, 5.04 mmol, 34.24%yield) , N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (2.5 g, 5.04 mmol, 34.24%yield) .

[0497] Mass calc C22H21ClF3N5O3 for 495.13, found: 496.2 (M+H) + ESI.

[0498] Step 4

[0499] A solution of N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [5-ethyl-2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (2.4 g, 4.84 mmol) , N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [5-ethyl-2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (2.40 g, 4.84 mmol) , NBS (2.58 g, 14.52 mmol) was dissolved in DMF. The reaction was stirred at 60 ℃ for 3 h. The RM was concentrated under reduced pressure. The crude product was diluted with EtOAc and water, extracted once with EtOAc and the organic layer was washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The cruded was purified by HPLC to provide the mixture product 2- [6-bromo-5-ethyl-2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (2.6 g, 4.52 mmol, 93.46%yield) , 2- [6-bromo-5-ethyl-2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (2.6 g, 4.52 mmol, 93.46%yield) .

[0500] Mass calc C22H20BrClF3N5O3 for 573.04, found: 574.1 (M+H) + ESI.

[0501] Step 5

[0502] A solution of 2- [6-bromo-5-ethyl-2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (0.4 g, 695.92 μmol) , 2- [6-bromo-5-ethyl-2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (400.00 mg, 695.92 μmol) , tert-butyl (4E) -2, 2-dimethyl-4- [ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene] pyrrolidine-1-carboxylate (469.41 mg, 1.39 mmol) , K3PO4 (1.70 g, 8.02 mmol) and 1, 1μ-Bis (di-cyclohexylphosphino) ferrocene palladium dichloride (105.21 mg, 139.18 μmol) in 1'4-Dioxane (12 mL) and Water (1.2 mL) was degassed with N2 for three times, and the resulting solution was stirred at 85 ℃ under N2 for 3 h. LC-MS observed compound.

[0503] Mass calc C34H40ClF3N6O5 for 704.27, found: 705.3 (M+H) + ESI.

[0504] The mixture was concentrated and purified by prep-HPLC to afford the mixture product tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (110 mg, 155.99 μmol, 22.42%yield) and tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (110 mg, 155.99 μmol, 22.42%yield) .

[0505] Step 6

[0506] Tert-butyl (4Z) -4- [ [4- [2- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) anilino] -2-oxo-ethyl] -5-ethyl-2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl] methylene] -2, 2-dimethyl-pyrrolidine-1-carboxylate (100 mg, 141.81 μmol) , tert-butyl (4Z) -4- [ [4- [2- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) anilino] -2-oxo-ethyl] -5-ethyl-2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl] methylene] -2, 2-dimethyl-pyrrolidine-1-carboxylate (100.00 mg, 141.81 μmol) was suspended in DCM (4 mL) , TFA (1 g, 8.77 mmol) was added and the mixture was  stirred at RT for 1 h. The RM was concentrated under reduce pressure and used without purification.

[0507] Mass calc C29H32ClF3N6O3 for 604.22 found: 605.3 (M+H) + ESI

[0508] Step 7

[0509] 5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carboxylic acid (86.61 mg, 561.94 μmol) , Pyridine (66.67 mg, 842.91 μmol, 67.90 μL) , EDCI (107.61 mg, 561.94 μmol) and HOBT (75.93 mg, 561.94 μmol) were dissolved in DCM, to this solution was added N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [6- [ (E) - (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl] -5-ethyl-2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (85 mg, 140.48 μmol) , N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [6- [ (E) - (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl] -5-ethyl-2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (85.00 mg, 140.48 μmol) at 25℃. After stirring for 1 h, the RM was purified by HPLC to provide the mixture product (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (2-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (55 mg, 74.21 μmol, 52.82%yield) and (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (6-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (55 mg, 74.21 μmol, 52.82%yield) .

[0510] Mass calc C35H36ClF3N8O5 for 740.24, found: 741.3 (M+H) + ESI.

[0511] Step 8:

[0512] 105 / 106 (mg) was separated by SFC to afford 105 Peak 1 (mg) , 105 ‘Peak 2 (mg) , 106 Peak 1 (mg) and 106’ Peak 2 (mg) .

[0513] Compound 105 (Peak 1) :

[0514] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.59-8.56 (m, 1H) , 8.18-8.15 (m, 1H) , 7.81 (s, 1H) , 7.63-7.60 (m, 1H) , 6.96-6.95 (m, 1H) , 6.20-6.19 (m, 1H) , 5.42 (s, 2H) , 4.85 (s, 2H) , 4.38-4.37 (m, 2H) , 3.77-3.72 (m, 1H) , 2.88-2.82 (m, 2H) , 2.74-2.72 (m, 1H) , 2.52-2.50  (m, 5H) , 2.33-2.24 (m, 1H) , 1.60 (s, 6H) , 1.32-1.23 (m, 6H) .

[0515] Compound 105’ Peak 2:

[0516] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.46-8.44 (m, 1H) , 8.17-8.15 (m, 1H) , 7.81 (s, 1H) , 7.63-7.60 (m, 1H) , 6.96-6.95 (m, 1H) , 6.17-6.16 (m, 1H) , 5.42 (s, 2H) , 4.86 (s, 2H) , 4.38-4.37 (m, 2H) , 3.77-3.72 (m, 1H) , 2.88-2.82 (m, 2H) , 2.74-2.65 (m, 2H) , 2.50-2.47 (m, 5H) , 1.59 (s, 6H) , 1.32-1.29 (m, 7H) .

[0517] Compound 106 (Peak 1) :

[0518] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.88 (s, 1H) , 8.18-8.16 (m, 1H) , 7.82 (s, 1H) , 7.63-7.60 (m, 1H) , 6.88-6.87 (m, 1H) , 6.20-6.19 (m, 1H) , 5.42 (s, 2H) , 4.85 (s, 2H) , 4.40-4.38 (m, 1H) , 4.12-4.08 (m, 1H) , 3.76-3.71 (m, 1H) , 2.88-2.83 (m, 2H) , 2.60-2.59 (m, 2H) , 2.52-2.50 (m, 5H) , 1.60 (s, 6H) , 1.32-1.23 (m, 6H) .

[0519] Compound 106’ (Peak 2) :

[0520] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.68 (s, 1H) , 8.18-8.15 (m, 1H) , 7.82 (s, 1H) , 7.63-7.60 (m, 1H) , 6.88-6.87 (m, 1H) , 6.19 (m, 1H) , 5.42 (s, 2H) , 4.85 (s, 2H) , 4.40-4.38 (m, 1H) , 4.12-4.09 (m, 1H) , 3.77-3.71 (m, 1H) , 2.88-2.83 (m, 2H) , 2.60-2.59 (m, 2H) , 2.51-2.50 (m, 5H) , 1.60 (s, 6H) , 1.30-1.25 (m, 6H) .

[0521] Compound 105 was obtained by the first SFC:

[0522] Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-01)

[0523] Column: ChiralPak OD, 250×30mm I. D., 5μm

[0524] Mobile phase: A for CO2 and B for Ethanol [0.1%NH3 (7M in MeOH) ]

[0525] Gradient: B 30%

[0526] Flow rate: 100 mL  / min

[0527] Back pressure: 100 bar

[0528] Column temperature: 35℃

[0529] Wavelength: 214nm

[0530] Cycle time: ～14.8min

[0531] Sample preparation: Compound was dissolved in ～ 9.5ml Methanol

[0532] Injection: 2ml per injection.

[0533] Compound 105’ was obtained by the second SFC:

[0534] Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-01)

[0535] Column: ChiralPak IC, 250×30mm I. D., 5μm

[0536] Mobile phase: A for CO2 and B for Methanol : DCM = 1: 1 [0.1%NH3 (7M in MeOH) ]

[0537] Gradient: B 45%

[0538] Flow rate: 100 mL  / min

[0539] Back pressure: 100 bar

[0540] Column temperature: 35℃

[0541] Wavelength: 246nm

[0542] Cycle time: ～6.8min

[0543] Sample preparation: Compound was dissolved in ～ 3.1ml Methanol

[0544] Injection: 0.6ml per injection.

[0545] Compound 106 and 106’ was obtained by the third SFC:

[0546] Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-01)

[0547] Column: ChiralPak AD, 250×30mm I. D., 5μm

[0548] Mobile phase: A for CO2 and B for Isopropanol [0.1%NH3 (7M in MeOH) ]

[0549] Gradient: B 35%

[0550] Flow rate: 100 mL  / min

[0551] Back pressure: 100 bar

[0552] Column temperature: 35℃

[0553] Wavelength: 246nm

[0554] Cycle time: ～4.5min

[0555] Sample preparation: Compound was dissolved in ～ 3.5ml Methanol

[0556] Injection: 0.2ml per injection.

[0557] PREPARATION EXAMPLE 18

[0558] (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (5-fluoro-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0559] Step 1: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (5-fluoro-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0560] A mixture of SM1 (1.3 g, 2.72 mmol) , SM2 (650.40 mg, 2.85 mmol) , Pd (dppf) Cl2 (220.15 mg, 271.60 μmol) , K3PO4 (1.73 g, 8.15 mmol) , 1'4-Dioxane (26 mL) and water (13 mL) was stirred at 90 ℃ overnight under N2 atmosphere. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (5-fluoro-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (102-1, 696 mg) .

[0561] Mass calc C21H18ClF4N5O3 for 499.10 found: 500.10 (M+H) + ESI.

[0562] Step 2: 2- (6-bromo-5-ethyl-2- (5-fluoro-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0563] NBS (342 mg, 1.92 mmol) and AcOH (4 mL) were added to a solution of 102-1 (800 mg, 1.6 mmol) in MeCN (8 mL) . The mixture was stirred at 75 ℃ for 3 h. The mixture was cooled to RT, filtered and the filter cake was washed with water to give a crude 102-2 (480 mg) .

[0564] Mass calc C21H17BrClF4N5O3 for 577.10 found: 578.10 (M+H) + ESI.

[0565] Step 3: benzyl (R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-2- (5-fluoro-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate

[0566] A mixture of 102-2 (600 mg, 1.04 mmol) , Bpin (1.11 g, 3.11 mmol) , Pd (dppf) Cl2·DCM (82 mg, 103.67 μmol) , Potassium carbonate (429.86 mg, 3.11 mmol) , 1'4-Dioxane (6 mL) and H2O (0.6 mL) was stirred at 80 ℃ under N2 atmosphere. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined,  washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give 102-3 (340 mg) .

[0567] Mass calc C35H33ClF4N6O5 for 728.21 found: 727.18 (M-H) -ESI.

[0568] Step 4: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (5-fluoro-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0569] 102-3 (150 mg, 205.73 μmol) was dissolved in TFA (2 mL) . The mixture was stirred at 70 ℃ for 2 h. The mixture was diluted with EA and NaHCO3 aq., and extracted with EA.The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give 404A (110 mg) .

[0570] Mass calc C27H27ClF4N6O3 for 594.18 found: 593.18 (M+H) + ESI.

[0571] Step 5: (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (5-fluoro-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0572] EDCI (25.75 mg, 134.46 μmol) was added to the solution of tert-butyl (R, E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2-methylpyrrolidine-1-carboxylate (102-4, 40 mg, 67.23 μmol) , 3-hydroxypyridine-2-carboxylic acid (9.35 mg, 67.23 μmol) , HOBT (18.17 mg, 134.46 μmol) and Pyridine (15.95 mg, 201.69 μmol, 16.25 μL) in DCM (3 mL) at 0 ℃ and the resulting solution was stirred at 25 ℃ for 16 h. The RM was diluted with EtOAc and water, extracted once with EtOAc and the organic layer was washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The RM was purified by reverse phase column (C18 column) to provide the product (R, E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (5-fluoro-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5-methylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-  [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (8mg, 13.02%yield) .

[0573] Mass calc C33H30N7O5ClF4 for 715.19, found: 714.18 (M-H) -ESI.

[0574] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.165-8.110 (m, 1H) , 8.077-8.055 (m, 1H) , 7.975-7.967 (m, 1H) , 7.739-7.718 (m, 1H) , 7.413-7.367 (m, 2H) , 6.309 (d, J=35.6 Hz, 1H) , 5.377-5.347 (m, 2H) , 4.597-4.578 (m, 3H) , 4.298-4.259 (m, 2H) , 3.821-3.809 (m, 2H) , 2.810-2.634 (m, 5H) , 2.100-2.060 (m, 1H) , 1.177-1.162 (m, 5H) , 1.138-1.013 (m, 1H) .

[0575] PREPARATION EXAMPLE 19

[0576] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0577] Step 1: 2-bromo-5-ethyl- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-7 (4H) -one

[0578] Phosphoric acid (28.8 g, 293.78 mmol, 17.1 mL) was added to a solution of 3-bromo-1H-1, 2, 4-triazol-5-amine (48 g, 293.77 mmol) and ethyl 3-oxopentanoate (55.23 g, 381.84 mmol) in EtOH (150 mL) . Then the resulting solution was stirred at 80 ℃ for 48 h. Then the mixture was concentrated to remove EtOH, diluted with EA, stirred at 0 ℃ for 10 min, extracted and filtered three times, and dried the solid to obtain 2-bromo-5-ethyl- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-7 (4H) -one (46.50 g, 56%yield) as a white solid.

[0579] Mass calc C7H7BrN4O, for 241.98; found, 242.98 [M+H] + ESI.

[0580] 1H NMR (400 MHz, DMSO) , δ 13.33 (s, 1H) , 5.86 (s, 1H) , 2.61-2.55 (dd, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.22-1.89 (t, J = 8.0 Hz, 3H) .

[0581] Step 2: 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0582] DIPEA (17.02 g, 131.65 mmol, 22.93 mL) was added 2-bromo-5-ethyl- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-7 (4H) -one (8 g, 32.91 mmol) , 2-bromo-N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (10.94 g, 34.56 mmol) in 1'4-Dioxane (1.26 L) . The mixture was stirred at 80 ℃ for 5 h. After cooled to 0 ℃, the mixture was filtered, the filter cake was washed with water, dried over Na2SO4, and used for next step without purification.

[0583] Mass calc C16H12BrN5O2F3Cl for 476.98 found: 478 (M+H) + ESI.

[0584] Step 3: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0585] A solution of 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (1.1 g, 2.30 mmol) , 2- (4-methoxy-4-methyl-cyclohexen-1-yl) -4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolane (695.39 mg, 2.76 mmol) , K3PO4 (1.46 g, 6.89 mmol) and Pd (dppf) Cl2·DCM (186.28 mg, 229.81 μmol) in 1'4-Dioxane (2 mL) and H2O (0.2 mL) was degassed with N2 for three times, and the resulting solution was stirred at 85 ℃ under N2 atmosphere. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (0.8 g, 1.53 mmol, 66.44%yield) .

[0586] Mass calc C24H25O3N5ClF3 for 523.16 found: 524.18 (M+H) + ESI.

[0587] Step 4: 2- (6-bromo-5-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0588] NBS (353.29 mg, 1.98 mmol) was added to a solution of N- (2-chloro-4-  (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (800 mg, 1.53 mmol) in AcOH (1 mL) and ACN (2 mL) . The mixture was stirred at 50 ℃ for 2 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give 2- (6-bromo-5-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (400 mg, 663.54 μmol, 43.46%yield) .

[0589] Mass calc C24H24BrN5O3F3Cl for 601.07 found: 602.16 (M+H) + ESI.

[0590] Step 5: tert-butyl (E) -4- ( (8- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -7-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -5-oxo-5, 8-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate

[0591] A mixture of 2- (6-bromo-5-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (360 mg, 597.18 μmol) , tert-butyl (4E) -2, 2-dimethyl-4- [ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene] pyrrolidine-1-carboxylate (201.41 mg, 597.18 μmol) , Bis (triphenylphosphine) palladium (II) chloride (41.92 mg, 59.72 μmol) and K3PO4 (380.29 mg, 1.79 mmol) in H2O (0.2 mL) and 1'4-Dioxane (1 mL) was degassed with N2 for three times and the resulting solution was stirred at 85 ℃ under N2 atmosphere. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give tert-butyl (E) -4- ( (8- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -7-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -5-oxo-5, 8-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (186 mg, 253.68 μmol, 42.48%yield) .

[0592] Mass calc C36H44O5N6F3Cl for 731.31 found: 732.43 (M+H) + ESI.

[0593] Step 6: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0594] HCl / dioxane (4 M, 5.03 mL) was added to a solution of tert-butyl (E) -4- ( (8- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -7-ethyl-2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -5-oxo-5, 8-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (160.00 mg, 98.20 μmol) in DCM (24.97 mL) . The mixture was stirred at RT for 2 h. The mixture was concentrated under reduced pressure and used for next step without purification.

[0595] Mass calc C31H36O3N6ClF3 for 632.25 found: 633.3 (M+H) + ESI.

[0596] Step 7: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0597] The mixture of N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] -2- [6- [ (Z) - (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl] -5-ethyl-2- (4-methoxy-4-methyl-cyclohexen-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetamide (175 mg, 276.42 μmol) , 5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (63.90 mg, 414.62 μmol) , py (65.59 mg, 829.25 μmol, 66.80 μL) , HOBT (74.70 mg, 552.83 μmol) and EDCI (105.98 mg, 552.83 μmol) in DCM (30.13 mL) at 0 ℃ was stirred at RT for 18 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (60 mg, 78.00 μmol, 28.22%yield) .

[0598] Mass calc C37H40O5N8ClF3 for 768.22 found: 767.33 (M-H) -ESI.

[0599] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.38 (br, 1H) , 8.61-8.60 (m, 1H) , 8.08-8.06 (m, 1H) , 7.98-7.97 (m, 1H) , 7.74-7.71 (m, 1H) , 6.74-6.73 (m, 1H) , 6.17-6.16 (m, 1H) , 5.34-5.33 (m, 2H) , 4.41-4.40 (m, 2H) , 3.13 (s, 3H) , 2.77-2.71 (m, 2H) , 2.46-2.38 (m, 2H) , 2.23-2.18 (m, 1H) , 2.03-1.98 (m, 1H) , 1.88-1.83 (m, 1H) , 1.69-1.65 (m, 1H) .

[0600] Step 8: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4(7H) -yl) acetamide

[0601] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (Compound 193, 178 mg) was separated by SFC to afford (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (Compound 193 Peak 1, 78 mg) and (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxy-4-methylcyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (Compound 193’ Peak 2, 71 mg) .

[0602] Preparative separation method: Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-26) ; Column: ChiralPak IK, 250×30 mm I.D., 10μm; Mobile phase: A for CO2 and B for Methanol (0.1%NH3H2O) ; Gradient: B 50%; Flow rate: 120 mL  / min; Back pressure: 100 bar; Column temperature: 38 ℃; Wavelength: 220 nm; Cycle time: ～5 min.

[0603] Compound 193 Peak 1:

[0604] Mass calc C37H40O5N8ClF3 for 768.22 found: 767.20 (M-H) -ESI.

[0605] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.91 (br, 1H) , 10.38 (br, 1H) , 8.61-8.60 (m, 1H) , 8.08-8.06 (m, 1H) , 7.98-7.97 (m, 1H) , 7.74-7.71 (m, 1H) , 6.74-6.73 (m, 1H) , 6.17-6.16 (m, 1H) , 5.34-5.33 (m, 2H) , 4.41-4.40 (m, 2H) , 3.13 (s, 3H) , 2.77-2.71 (m, 2H) , 2.46-2.38 (m, 2H) , 2.23-2.18 (m, 1H) , 2.03-1.96 (m, 1H) , 1.92-1.80 (m, 1H) .

[0606] Compound 193 Peak 2:

[0607] Mass calc C37H40O5N8ClF3 for 768.22 found: 767.33 (M-H) -ESI.

[0608] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.92-10.91 (m, 1H) , 10.38 (br, 1H) , 8.61-8.60 (m, 1H) , 8.08-8.06 (m, 1H) , 7.98-7.97 (m, 1H) , 7.74-7.71 (m, 1H) , 6.74-6.73 (m, 1H) , 6.17-6.16 (m, 1H) , 5.34-5.33 (m, 2H) , 4.42-4.40 (m, 2H) , 3.13 (s, 3H) , 2.77-2.71 (m, 2H) , 2.46-2.38 (m, 2H) , 2.23-2.18 (m, 1H) , 2.03-1.96 (m, 1H) , 1.89-1.84 (m, 1H) , 1.68-1.65 (m, 1H) .

[0609] PREPARATION EXAMPLE 20

[0610] (E) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (3-hydroxypicolinoyl) pyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (4-methyl-3- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0611] Step 1: 2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (3-hydroxypicolinoyl) pyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (4-methyl-3- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0612] A mixture of 13-1 (93 mg, 171.41 μmol) , 3-hydroxypyridine-2-carboxylic acid (47.69 mg, 342.82 μmol) , HOBT (46.32 mg, 342.82 μmol) , EDCI (65.65 mg, 342.82 μmol) , Pyridine (40.68 mg, 514.24 μmol, 41.43 μL) and DCM (5 mL) was stirred at RT for 2 h.The mixture was concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give 2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (3-hydroxypicolinoyl) pyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (4-methyl-3- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (65 mg, 57.14%yield) .

[0613] Mass calc C33H32O5N7F3 for 663.24 found: 664.2 (M+H) + ESI.

[0614] Step 2: (E) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (3-hydroxypicolinoyl) pyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5- a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (4-methyl-3- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0615] 2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (3-hydroxypicolinoyl) pyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (4-methyl-3- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (100 mg) was separated by Chiral column to (E) -2- (2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -5-ethyl-6- ( (1- (3-hydroxypicolinoyl) pyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (4-methyl-3- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (25 mg) .

[0616] Preparation Method:

[0617] Column: CHIRALPAK IH 0.46cm×25cm

[0618] Mobile phase: A: 0.1%Formic acid B: ACN

[0619] B:0min (5%) -25min (95%) -25.1min (5%) -30min (5%)

[0620] Flow rate: 1ml / min

[0621] Wave length: UV 254 nm

[0622] Temperature: 35 ℃

[0623] HPLC equipment: waters 2695

[0624] Compound 13-E:

[0625] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.79-10.76 (m, 1H) , 8.11-7.99 (m, 2H) , 7.66-7.64 (m, 1H) , 7.42-7.28 (m, 3H) , 6.82-6.79 (m, 1H) , 6.25-6.21 (m, 1H) , 5.21-5.17 (m, 2H) , 4.25-4.20 (m, 3H) , 3.93-3.90 (m, 1H) , 3.82-3.79 (m, 1H) , 3.78-3.75 (m, 3H) , 2.85-2.73 (m, 4H) , 2.50-2.49 (m, 2H) , 2.43 (s, 3H) , 2.05 (s, 3H) .

[0626] PREPARATION EXAMPLE 21

[0627] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0628] Step 1: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0629] A solution of 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (1 g, 2.09 mmol) , 4- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) cyclohex-3-en-1-ol (561.84 mg, 2.51 mmol) , caesium carbonate (1.36 g, 4.18 mmol) and Pd (dppf) Cl2·DCM (169.35 mg, 208.92 μmol) in 1'4-Dioxane (40 mL) and H2O (4 mL) was degassed with N2 for three times. The resulting solution was stirred at 90 ℃ under N2 atmosphere. The mixture was diluted with DCM and water, and extracted with DCM. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (650 mg, 1.31 mmol, 62.74%yield) .

[0630] Mass calc C22H21O3N5ClF3 for 495.13 found: 496.16 (M+H) + ESI.

[0631] Step 2: 2- (6-bromo-5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4-  (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0632] NBS (256.63 mg, 1.44 mmol) was added to a solution of N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (550 mg, 1.11 mmol) in AcOH (4 mL) and ACN (8 mL) . The mixture was stirred at 50 ℃ for 2 h. The mixture was concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give 2- (6-bromo-5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (350 mg, 608.93 μmol, 54.90%yield) .

[0633] Mass calc C22H20BrN5O3F3Cl for 573.04 found: 574 (M+H) + ESI.

[0634] Step 3: tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate

[0635] A solution of 2- (6-bromo-5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (310 mg, 539.34 μmol) , tert-butyl (4E) -2, 2-dimethyl-4- [ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene] pyrrolidine-1-carboxylate (181.90 mg, 539.34 μmol) , Bis (triphenylphosphine) palladium (II) chloride (37.86 mg, 53.93 μmol) and K3PO4 (343.45 mg, 1.62 mmol) in H2O (2 mL) and 1'4-Dioxane (10 mL) was degassed with N2 for three times. The resulting solution was stirred at 85 ℃ under N2 atmosphere. The mixture was concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (148 mg, 209.88 μmol, 38.91%yield) .

[0636] Mass calc C34H40O5N6F3Cl for 704.27 found: 605.27 (M-boc+H) + ESI.

[0637] Step 4: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin- 3-ylidene) methyl) -5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0638] HCl / dioxane (4 M, 4.18 mL) was added to a solution of tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (128 mg, 81.68 μmol) in DCM (25.82 mL) . The mixture was stirred at 85℃ under N2 atmosphere. The mixture was concentrated under reduced pressure and used for next step without purification.

[0639] Mass calc C29H33O3N6Cl2F3 for 604.22 found: 605.27 (M+H) + ESI.

[0640] Step 5: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0641] Py (59.19 mg, 748.23 μmol, 60.28 μL) was added to a solution of 5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (38.44 mg, 249.41 μmol) , HOBT (67.40 mg, 498.82 μmol) and EDCI (95.62 mg, 498.82 μmol) in DCM (6 mL) at 0 ℃. After stirred at 0℃for 15 min, (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (160 mg, 249.41 μmol) was added, and the resulting solution was stirred at RT for 18 h. The mixture was concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (61.75 mg, 83.32 μmol, 33.40%yield) .

[0642] Mass calc C35H36O5N8ClF3 for 740.24 found: 739.1 (M-H) -ESI.

[0643] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.60 (s, 1H) , 8.07-8.05 (m, 1H) , 7.97-7.96 (m, 1H) , 7.73-7.70 (m, 1H) , 6.75-6.74 (m, 1H) , 6.16-6.15 (m, 1H) , 5.33 (s, 1H) , 4.73-4.72 (m, 1H) , 4.41-4.40 (m, 2H) , 3.82-3.81 (m, 1H) , 2.80-2.79 (m, 2H) , 2.76-2.71 (m, 1H) , 2.60- 2.59 (m, 2H) , 2.45-2.44 (m, 1H) , 2.42-2.38 (m, 2H) , 2.10-2.09 (m, 1H) , 1.87-1.85 (m, 1H) , 1.59-1.50 (m, 6H) , 1.13-1.05 (m, 3H) .

[0644] Step 6: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0645] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (58 mg) was separated by SFC to afford (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (Peak 1, 28 mg) and (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-hydroxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (Peak 2, 22 mg) .

[0646] Preparative separation method: Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-26) ; Column: ChiralCel OD, 250×30mm I. D., 10 μm; Mobile phase: A for CO2 and B for Ethanol (0.1%NH3H2O) ; Gradient: B 35%; Flow rate: 120 mL  / min; Back pressure: 100 bar; Column temperature: 38 ℃; Wavelength: 220 nm

[0647] Peak 1:

[0648] Mass calc C35H36O5N8ClF3 for 740.24 found: 739.1 (M-H) -ESI.

[0649] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.37 (m, 1H) , 8.61 (s, 1H) , 8.07-8.05 (m, 1H) , 7.97-7.96 (m, 1H) , 7.73-7.70 (m, 1H) , 6.75-6.74 (m, 1H) , 6.16-6.15 (m, 1H) , 5.33 (s, 1H) , 4.73-4.72 (m, 1H) , 4.41-4.40 (m, 2H) , 3.82-3.80 (m, 1H) , 2.74-2.72 (m, 2H) , 2.61-2.60 (m, 2H) , 2.46-2.44 (m, 1H) , 2.42-2.38 (m, 2H) , 2.10-2.09 (m, 1H) , 1.87-1.85 (m, 1H) , 1.59-1.50 (m, 6H) , 1.13-1.10 (m, 3H) .

[0650] Peak 2:

[0651] Mass calc C35H36O5N8ClF3 for 740.24 found: 739.1 (M-H) -ESI.

[0652] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.37 (m, 1H) , 8.61 (s, 1H) , 8.07-8.05 (m, 1H) , 7.97-7.96 (m, 1H) , 7.73-7.70 (m, 1H) , 6.75-6.74 (m, 1H) , 6.16-6.15 (m, 1H) , 5.33 (s, 1H) , 4.73-4.72 (m, 1H) , 4.41-4.40 (m, 2H) , 3.82-3.80 (m, 1H) , 2.74-2.72 (m, 2H) , 2.61-2.60 (m, 2H) , 2.46-2.44 (m, 1H) , 2.42-2.38 (m, 2H) , 2.10-2.09 (m, 1H) , 1.86-1.85 (m, 1H) , 1.59-1.50 (m, 6H) , 1.13-1.05 (m, 3H) .

[0653] PREPARATION EXAMPLE 22

[0654] (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0655] Step 1: 4-bromo-2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepine and 5-bromo-2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepine  Br2 (18.20 g, 113.89 mmol, 5.83 mL) was added to a solution of Triphenyl phosphite (40.78 g, 131.42 mmol, 34.44 mL) in DCM (150 mL) at -60 ℃ under N2. After stirred at -60 ℃ for 0.5 h, TEA (17.73 g, 175.22 mmol, 24.44 mL) was added and the resulting solution was stirred at -60 ℃ for 0.5 h. Then oxepan-4-one (10 g, 87.61 mmol) in DCM (50 mL) was added and the resulting solution was stirred at rt over night. TLC (Petroleum ether : Ethyl acetate = 10 : 1, Rf = 0.72) showed the reactant was consumed completely. The mixture was quenched with water, partitioned between DCM and water, and the organic phase was dried and concentrated to afford the residue. The residue was purified by silica gel column chromatography (1%EA in PE) to afford 4-bromo-2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepine (mixture, 8.2 g, 46.32 mmol, 52.87%yield) .

[0656] Step 2: 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane and 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane A solution of 4-bromo-2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepine (mixture with 5-bromo-2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepine, 9 g, 50.84 mmol) , (BPin) 2 (12.26 g, 48.29 mmol) , KOAc (14.97 g, 152.51 mmol) and Pd (dppf) Cl2·DCM (4.12 g, 5.08 mmol) in 1'4-Dioxane (120 mL) was degassed with N2 three times and stirred at 80 ℃ for 2 h. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (mixture with 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane, 7 g, 31.24 mmol, 61.44%yield) .

[0657] Mass calc C12H21O3B for 224.16 found: 225.16 (M+H) + ESI.

[0658] Step 3: ethyl 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate

[0659] Ethyl 2-bromoacetate (9.62 g, 57.60 mmol) and DIPEA (21.27 g, 164.57 mmol, 28.66 mL) were added to a solution of 2-bromo-5-ethyl-4H- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-7-one (10 g, 41.14 mmol) in 1'4-Dioxane (149.99 mL) . The mixture was stirred at 80 ℃overnight under N2 atmosphere. The mixture was diluted with EA and water, and  extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was diluted with Dioxane and beaten to give ethyl 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (6.5 g, 48.00%yield) .

[0660] Mass calc C11H13BrN4O3 for 328.02 found: 329.0 (M+H) + ESI.

[0661] Step 4: ethyl 2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate and ethyl 2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate

[0662] A mixture of ethyl 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl) acetate (6.3 g, 19.14 mmol) , 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (mixture with 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane, 4.29 g, 19.14 mmol) , Pd (dppf) Cl2 (1.55 g, 1.91 mmol) and K2CO3 (7.94 g, 57.42 mmol) in Water (15 mL) and Tol (250 mL) was stirred at 90 ℃overnight under N2 atmosphere. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give ethyl 2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (mixture with ethyl 2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate, 1.1 g, 3.18 mmol, 16.59%yield) .

[0663] Mass calc C17H22O4N4 for 346.16 found: 347.13 (M+H) + ESI.

[0664] Step 5: ethyl 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate and ethyl 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate AcOH (7 mL) and NBS (283.63 mg, 1.59 mmol) were added to a solution of ethyl 2- [5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepin-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetate (mixture with ethyl 2- (5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate, 690 mg, 1.99 mmol) in MeCN (14 mL) . The mixture was stirred at 75 ℃ for 3 h. The mixture was diluted with EA and  water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give ethyl 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (mixture with ethyl 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate, 340 mg, 799.48 μmol, 40.13%yield) .

[0665] Mass calc C17H21O4N4Br for 424.07 found: 425.07 (M+H) + ESI.

[0666] Step 6: tert-butyl (E) -4- ( (4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 2, 4, 7-tetrahydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate and tert-butyl (E) -4- ( (4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 2, 4, 7-tetrahydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate

[0667] A mixture of ethyl 2- [6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepin-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetate (mixture with ethyl 2- (6-bromo-5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate, 550 mg, 1.29 mmol) , tert-butyl (4Z) -2, 2-dimethyl-4- [ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene] pyrrolidine-1-carboxylate (436.17 mg, 1.29 mmol) , Pd(dppf) Cl2·DCM (104.76 mg, 129.33 μmol) and Potassium carbonate (536.23 mg, 3.88 mmol) in H2O (5.5 mL) and Tol (55 mL) was stirred at 100 ℃ overnight under N2 atmosphere. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give tert-butyl (E) -4- ( (4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 2, 4, 7-tetrahydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (mixture with tert-butyl (E) -4- ( (4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 2, 4, 7-tetrahydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6- yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate, 380 mg, 683.87 μmol, 52.88%yield) .

[0668] Mass calc C29H41O6N5 for 557.32 found: 558.32 (M+H) + ESI.

[0669] Step 7: ethyl (E) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate and ethyl (E) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate A solution of tert-butyl (E) -4- ( (4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 2, 4, 7-tetrahydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (mixture with tert-butyl (E) -4- ( (4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) -1, 2, 4, 7-tetrahydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate, 380 mg, 683.87 μmol) in HCl / 1, 4 Dioxane (5 mL) was stirred at RT for 2 h. The mixture was concentrated under reduced pressure and used for next step without purification.

[0670] Mass calc C24H33O4N5 for 455.25 found: 456.34 (M+H) + ESI.

[0671] Step 8: ethyl (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate and ethyl (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate

[0672] Ethyl 2- [6- [ (E) - (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl] -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepin-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] acetate (mixture with ethyl (E) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate, 380 mg, 834.16 μmol) , 5-benzyloxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (407.48 mg, 1.67 mmol) , EDCI (319.48 mg, 1.67 mmol) and HOBT (225.42 mg, 1.67 mmol) were dissolved in DCM (30.92 mL) . After cooled to 0 ℃, Pyridine (527.86 mg, 6.67 mmol,  537.59 μL) was added and the mixture was stirred at RT overnight. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give ethyl (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (mixture with ethyl (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate, 300 mg, 440.03 μmol, 52.75%yield) .

[0673] Mass calc C37H43O6N7 for 681.33 found: 682.36 (M+H) + ESI.

[0674] Step 9: (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetic acid and (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetic acid

[0675] Lithium hydroxide monohydrate (36.93 mg, 880.05 μmol) and water (0.2 mL) were added to a solution of ethyl (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate (mixture with ethyl (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetate, 200 mg, 293.35 μmol) in THF (4 mL) . The mixture was concentrated under reduced pressure, adjusted to pH= 5 with Diluted hydrochloric acid (1 M) . The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was used for next step without purification.

[0676] Mass calc C35H39N7O6 for 653.30 found: 654.39 (M+H) + ESI.

[0677] Step 10: (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide and (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0678] T3P (3.50 g, 11.01 mmol, 3.31 mL) was added to a solution of (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetic acid (mixture with (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetic acid, 240 mg, 367.13 μmol) , 2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) aniline (94.08 mg, 440.55 μmol) and TEA (557.24 mg, 5.51 mmol, 768.08 μL) in EtOAc (5 mL) at 0 ℃and the resulting solution was stirred at rt overnight. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (mixture with (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide, 180 mg, 211.95 μmol, 57.73%yield) .

[0679] Mass calc C42H41N8O5ClF4 for 848.28 found: 849.32 (M+H) + ESI.

[0680] Step 11: (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5- hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide and

[0681] A solution of 2- [6- [ (E) - [1- (5-benzyloxy-6-methyl-pyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethyl-pyrrolidin-3-ylidene] methyl] -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 4, 7-tetrahydrooxepin-5-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (mixture with (E) -2- (6- ( (1- (5- (benzyloxy) -6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide, 180 mg, 211.95 μmol) in TFA (1 mL) was stirred at 70 ℃ for 3 h. The mixture was concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (mixture with (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide, 100 mg, 131.73 μmol, 62.15%yield) .

[0682] Mass calc C35H35N8O5ClF4 for 758.24 found: 757.16 (M-H) -ESI.

[0683] Step 12: (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide and (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0684] The mixture (110 mg) was separated by SFC to afford (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4- carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 5, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (13 mg) and (E) -N- (2-chloro-3-fluoro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -7-oxo-2- (2, 3, 6, 7-tetrahydrooxepin-4-yl) - [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (13 mg) .

[0685] Preparative separation method: Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-26) ; Column: ChiralCel OD, 250×30mm I. D., 10μm; Mobile phase: A for CO2 and B for Methanol (0.1%NH3H2O) ; Gradient: B 40%; Flow rate: 120 mL  / min; Back pressure: 100 bar; Column temperature: 38 ℃; Wavelength: 220 nm; Cycle time: ～5 min

[0686] Compound 176:

[0687] Mass calc C35H35N8O5ClF4 for 758.24 found: 757.16 (M-H) -ESI.

[0688] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.90-10.89 (m, 1H) , 10.54-10.53 (m, 1H) , 8.62-8.61 (m, 1H) , 7.97-7.94 (m, 1H) , 7.90-7.76 (m, 1H) , 6.93-6.91 (m, 1H) , 6.18-6.17 (m, 1H) , 5.37-5.36 (m, 2H) , 4.42-4.41 (m, 2H) , 4.29-4.27 (m, 2H) , 2.86-2.85 (m, 2H) , 2.75-2.73 (m, 2H) , 2.47 (s, 3H) , 2.39-2.38 (m, 2H) , 1.89-1.87 (m, 2H) , 1.51 (s, 6H) , 1.14-1.10 (m, 3H) .

[0689] Compound 177:

[0690] Mass calc C35H35N8O5ClF4 for 758.24 found: 757.20 (M-H) -ESI.

[0691] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.91-10.90 (m, 1H) , 10.54-10.53 (m, 1H) , 8.62-8.61 (m, 1H) , 7.98-7.95 (m, 1H) , 7.80-7.76 (m, 1H) , 7.15-7.12 (m, 1H) , 6.18-6.17 (m, 1H) , 5.37-5.33 (m, 2H) , 4.42-4.41 (m, 2H) , 3.70-3.63 (m, 4H) , 2.94-2.93 (m, 2H) , 2.75-2.71 (m, 2H) , 2.47 (s, 3H) , 2.39-2.38 (m, 2H) , 1.51 (s, 6H) , 1.14-1.10 (m, 3H) .

[0692] PREPARATION EXAMPLE 22

[0693] (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0694] Step 1: N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0695] A mixture of 2- (2-bromo-5-ethyl-7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide (2 g, 4.18 mmol) , 2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolane (1.49 g, 6.27 mmol) , K3PO4 (2.66 g, 12.54 mmol) and Pd (dppf) Cl2 (305.73 mg, 417.84 μmol) in 1'4-Dioxane (30 mL) and water (6 mL) was stirred at 80 ℃ for 3 h under N2 atmosphere. The mixture was diluted with EA and water, and extracted with EA. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by column chromatography to give N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (1.03 g, 2.02 mmol, 48.34%yield) .

[0696] Mass calc C23H23O3N5F3Cl for 509.14 found: 510.14 (M+H) + ESI.

[0697] Step 2: 2- (6-bromo-5-ethyl-2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) acetamide

[0698] NBS (2.76 g, 15.53 mmol) was added to a solution of N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (7.2 g, 14.12 mmol) in DMF (15 mL) . The mixture was stirred at 100 ℃ overnight. After cooled to RT, the mixture was diluted with Na2S2O3 aq. and water, filtered, washed with water, and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was used for next step without purification.

[0699] Mass calc C23H22O3N5F3ClBr for 587.05 found: 588.06 (M+H) + ESI.

[0700] Step 3: tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate

[0701] A solution of 2- [6-bromo-5-ethyl-2- (4-methoxycyclohexen-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4-yl] -N- [2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl] acetamide (500 mg, 849.18 μmol) , tert-butyl (4E) -2, 2-dimethyl-4- [ (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) methylene] pyrrolidine-1-carboxylate (343.67 mg, 1.02 mmol) , K3PO4 (540.76 mg, 2.55 mmol) and [1, 1'-Bis (di-cyclohexylphosphino) ferrocene] dichloropalladium (II) (64.19 mg, 84.92 μmol) in 1'4-Dioxane (8 mL) and H2O (0.6 mL) was degassed with N2 for three times, and the resulting solution was stirred at 85 ℃ under N2 atmosphere. The mixture was concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by reverse phase column (C18 column) to give tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (133 mg, 184.93 μmol, 43.55%yield) .

[0702] Mass calc C35H42O5N6ClF3 for 718.29 found: 719.3 (M+H) + ESI.

[0703] Step 4: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0704] TFA (26.00 mg, 228.03 μmol, 2 mL) was added to a solution of tert-butyl (E) -4- ( (4- (2- ( (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -5-ethyl-2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo-4, 7-dihydro- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-6-yl) methylene) -2, 2-dimethylpyrrolidine-1-carboxylate (164 mg, 228.03 μmol) in DCM (10 mL) . The mixture was stirred at RT for 2 h. The mixture was adjusted to pH= 9 with NaHCO3 aq., diluted with DCM and water, and extracted with DCM. The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was used for next step without purification.

[0705] Mass calc C30H34O3N6F3Cl for 618.23 found: 617.2 (M-H) -ESI.

[0706] Step 5: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0707] A mixture of (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (6- ( (5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -5-ethyl-2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (125 mg, 201.91 μmol) , 5-hydroxy-6-methyl-pyrimidine-4-carboxylic acid (37.34 mg, 242.30 μmol) , Pyridine (47.91 mg, 605.74 μmol, 48.80 μL) , EDCI (77.41 mg, 403.83 μmol) , HOBT (54.57 mg, 403.83 μmol) and DCM (10 mL) was stirred at RT overnight. The mixture was concentrated under reduced pressure to give (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (crude) .

[0708] Mass calc C36H38O5N8F3Cl for 754.26 found: 753.2 (M-H) -ESI.

[0709] Step 6: (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide

[0710] The (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (crude) was seperated by SFC in Xtalpi to afford (E) -N- (2-chloro-4- (trifluoromethyl) phenyl) -2- (5-ethyl-6- ( (1- (5-hydroxy-6-methylpyrimidine-4-carbonyl) -5, 5-dimethylpyrrolidin-3-ylidene) methyl) -2- (4-methoxycyclohex-1-en-1-yl) -7-oxo- [1, 2, 4] triazolo [1, 5-a] pyrimidin-4 (7H) -yl) acetamide (P1-Compound 108) .

[0711] Preparative separation method:

[0712] Instrument: WATERS 150 preparative SFC (SFC-01) ; Column: ChiralPak OD, 250×30mm I.D., 5μm; Mobile phase: A for CO2 and B for Ethanol [0.1%NH3 (7M in MeOH) ] ; Gradient: B 35%; Flow rate: 100 mL  / min; Back pressure: 100 bar; Column temperature: 35 ℃; Wavelength: 248 nm

[0713] P1-Compound 108:

[0714] Mass calc C36H38O5N8F3Cl for 754.26 found: 755.2 (M+H) + ESI.

[0715] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.54 (s, 1H) , 8.17-8.15 (m, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 7.63-7.60 (m, 1H) , 6.91-6.89 (m, 1H) , 6.18 (s, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 4.85-4.80 (m, 2H) , 4.85-4.80 (m, 2H) , 3.61-3.55 (m, 1H) , 3.39 (s, 3H) , 2.87-2.85 (m, 2H) , 2.83-2.81 (m, 1H) , 2.77-2.71 (m, 2H) , 2.61-2.57 (m, 5H) , 2.24-2.17 (m, 1H) , 2.05-2.01 (m, 1H) , 1.82-1.74 (m, 1H) , 1.60 (s, 6H) , 1.28-1.23 (m, 3H) .

[0716] The compounds in the table below were synthesized with the same or similar route as Examples described above.

[0717] Table 1

[0718] Each compound noted with stereisomer in Table 1 means a single isomer.

[0719] The in the Table 1 means the Z / E isomer mixture of vinylidene.

[0720] BIOLOGICAL ASSAYS

[0721] WRN Helicase Assay

[0722] To assess the inhibition properties of the invented compounds on WRN helicase activity, a fluorescent assay using forked DNA was set up. In the helicase assay, in-house produced His-WRN527-1072 was used. The fluorescent forked DNA, prepared by annealing of OLIGOA-BHQ2 (TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGTACCCGATGTGTTCGTTC-BHQ2) and OLIGOB-TAMRA (TAMRA-GAACGAACACATCGGGTACGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT) , was used as the substrate. 2.5-fold serial dilution of test compounds were prepared for 7 gradient points with DMSO, and then 1.5 μl of each concentration were added to 48.5 μl of assay buffer (25mM Tris-HCl (pH 8.0) , 50 mM NaCl, 2 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.05%Tween-20, and 2.5 μg / ml BSA) for further dilution. 5 μl of 45 nM WRN protein and 5μl of each diluted compound solution were transferred to 384-well assay plate,  and pre-incubated at room temperature for 30 minutes. Each concentration of the compounds was added as triplicate in the plate. Controls were included in the test to validate the assay. Instead of compound solution, assay buffer containing 3%DMSO were added to the positive control (no inhibition) , and no proteins were added to the negative control (maximal inhibition) . Forked DNA and ATP were diluted into 300 nM and 6 mM, respectively, with assay buffer. To initiate the reaction, 5μl of the dsDNA and ATP solution were added to the assay plate. After 60 minutes room temperature incubation, the plate was transferred to Victor Nivo multimode plate reader (Perkin Elmer, Waltham, MA) and the fluorescence outputs were monitored. GraphPad Prism 9 (GraphPad Software, San Diego, CA) was used to carry out the dose-response curves, deriving IC50s.

[0723] WRN ATPase Assay

[0724] To evaluate the inhibition properties of the invented compounds on DNA dependent WRN ATPase activity, an ATPase assay using ADP-Glo assay kit (Promega, Madison, WI) was established. In the ATPase assay, the same WRN protein and DNA substrate as described in helicase assay were used. The serial dilution of the compounds in DMSO was same as helicase assay. In further dilution, 2 μl of each concentration were transferred to 48 μl of assay buffer. 5 μl of 100nM WRN proteins and 2.5 μl of each diluted compound solution were pre-incubated at room temperature for 30 minutes in the 384-well assay plate. All the test wells were set as triplicate. Afterwards, 2.5 μl of assay buffer containing 400 nM DNA substrate and 4 mM ATP were added to each well and incubated for 60 minutes. The protein-free control (maximal inhibition) and no-compound control (no inhibition) were included in the test. To stop the reaction and deplete the excessive ATP, 10 μl of the ADP-GloTM Reagent from the assay kit were added and incubated for 40 minutes. Then, 20 μl of the ATP detection reagent was added. After 30 minutes incubation, the luminescence was measured using Victor Nivo multimode plate reader (Perkin Elmer, Waltham, MA) . Dose-response curves, spanning IC50s, were generated by GraphPad Prism 9 (GraphPad Software, San Diego, CA) .

[0725] Cell Viability Assay

[0726] High microsatellite instability (MSI) cell line SW48 and microsatellite stable MSS cell line SW480 were purchased from ATCC and cultured in DMEM-GlutaMax medium (Gibco, 10564-011) composed of penicillin-streptomycin (Gibco, 15140122) and 10%fetal calf serum (Gibco, 10082-147) at 37℃ in a humidified 5%CO2 incubator.

[0727] Cells were seeded at 3000 cells / well into white-clear-bottom 384 well plates (PerkinElmer) . Next day, twelve 3-fold serial dilutions of 10mM compound stock in DMSO were added into each duplicate well. Blank well contained medium without cells, and DMSO control well contained cells and DMSO only. After 72 hours-treatment, cell viability was analyzed by using  2.0 Assay (Promega, G9243) and luminescent signal was detected on a VICTOR NivoTM multimode plate reader (PerkinElmer) following 10-minute incubation at room temperature. For data analysis, all data points were normalized via subtracting the blank value and calculated a ratio of DMSO control value. The IC50 values were calculated using GraphPad Prism 9.

[0728] Table 2

[0729] In vivo Efficacy Study and Pharmacokinetic / Pharmacodynamic (PKPD) analysis Method

[0730] The in vivo efficacy studies were performed in female 8–10-week BALB / c nude mice (Shanghai Bikai Keyi Biotechnology) . SW48 human colorectal cancer cells (CBP60018, COBIOER) were cultured in DMEM medium (11995-065, Gibco) supplemented with 10%FBS (A5669701, Gibco) at 37 ℃ in 5%CO2 incubator. Mice were injected with 3 million SW48 cells / Matrigel (356234, Corning) mixture subcutaneously into the upper right flank of mice. After the inoculation, tumor bearing mice were monitored regularly and randomly enrolled into treatment groups (n=6 or 7 / group) when tumor reached appropriate volume.

[0731] The test compounds were dissolved in 10%2-hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HPBCD) solution. Mice were treated with vehicle, 10mpk, 20mpk or 40mpk of a test compound by oral gavage (PO) daily (QD) .

[0732] Mice were weighed and tumor volume was measured twice per week. Tumor volume (mm3) was calculated according to 0.5*D*d2, where D=length and d=width of the tumor. Tumor growth inhibition (TGI%) was calculated according to [1- (△ tumor volume  treated / △tumor volume control) *100 and tumor regression was calculated according to – (△tumor volume treated / tumor volume treated at day 0) *100 where △ tumor volume represents tumor volume on the measure day minus tumor volume at day 0. Efficacy was calculated according to (△ tumor volume treated / △tumor volume control) *100. Data of tumor growth and body weight change were analyzed using GraphPad Prism 10.

[0733] At the sampling time points after the last dose of the experiment, the blood samples were collected into 1.5ml EDTA-K2 tubes. The sampling time points are 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 and 24h. The blood samples were centrifuged at 8000rpm for 5 minutes at room temperature. The plasma samples were transferred into pre-labeled tubes and stored at -80℃. For blood PK analysis, an aliquot of 5μl plasma sample was added with 100μl IS (Glipizide, 50 ng / ml) in MeOH. The mixture was vortexed for 1 minute and centrifuged at 5228g for 10 minutes. The supernatant was analyzed by LC-MS / MS-24 (Triple Quad6500) . Data of PK data were analyzed using GraphPad Prism 10.

[0734] At 4h or 24h after the last dosing of the experiment, tumors were collected, separated, and processed with snap-freezing method in dry ice.

[0735] For tumor PK analysis, tumor samples were homogenized with 3 volumes (v / w) of PBS. An aliquot of 20μl sample was added with 400μl IS (Glipizide, 50 ng / ml) in MeOH. The mixture was vortexed for 1 minute, and centrifuged at 5228g for 10 min. The supernatant was analyzed by LC-MS / MS-24 (Triple Quad6500) . Data of PK data were analyzed using GraphPad Prism 10.

[0736] For tumor PD analysis, tumor tissue was prepared in 3x volume of RIPA buffer containing phosphatase / protease inhibitors and smashed on ice with homogenizer. Homogenized Sample was mixed several time and place on ice for 30 minutes. After centrifuging at 14, 000g for 20 minutes at 4℃ to pellet down cell debris, supernatants were transferred to a fresh tube for protein quantification using Piece BCA protein Assay Kit (#23225) and western blotting analysis.

[0737] 30μg of tumor protein lysate was loaded and separated by pre-cast gels (4-12%Bis-Tris Midi Gels, Thermofisher, WG1403BOX) , transferred onto polyvinylidene difluoride (PVDF) membrane or pre-wetting Nitrocellulose (NC) membrane, blocked with 5%milk diluted with Tris-buffered saline / Tween (TBST) for 1 h, and then incubated with diluted primary antibody overnight at 4 ℃. The antibodies for detecting protein targets, WRN antibody (8H3, #4665) , phospho-histone H2A. X Ser139 antibody (20E3 #9718) , phospho-Chk2 Thr68 antibody (C13C1 #2197) , p21 Waf1 / Cip1 antibody (12D1 #2947) , were obtained from Cell Signaling Technology. After washing in 0.1%TBST for 5 minutes three times, membrane was incubated with secondary appropriate antibodies diluted in TBST with 5%mild for 1 hour at room temperature on a nutator. After washing membrane, target proteins were detected with Tanon 5200 chemiluminescence image system using the ECL method. Loading control is scanned with Odyssey Infrared  Imager. Data of target protein expression level in tumor were analyzed using GraphPad Prism 10.

[0738] Results

[0739] The compounds in the present invention have good tumor inhibitory activity, safety and PK.

[0740] For tumor inhibition, the TGI on day 28 of 10mpk is above 50%under the above experimental conditions. Preferably, the TGI on day 28 is above 80%. More preferably, the tumor regression rate on day 28 reach 10-80%.

[0741] Under the above experimental conditions, the body weight change on day 28 of the mice treated with 10mpk is within ±15%, preferably within ±10%.

[0742] The AUClast (hr*ng / ml) (10mpk, PO, the last dose of efficacy study) of the compound of the present invention in plasma or tumor range from 1000-40000, preferably from 5000-20000.

[0743] Table 3-5 show the detailed results for representative compounds.

[0744] 1.By orally dosed daily at 10mg / kg, Compound 87-E, Compound 205 and Compound 211 showed significant tumor regression rate of about 47%, 57%and 41%on day 28 respectively. Compound 202 showed tumor inhibition of about 99%. There is no significant body weight loss observed in all treatment groups.

[0745] Table 3: Tumor Growth Inhibition

[0746] Note: i. *indicates tumor regression rate, meaning that the tumor volume is smaller than that at day 0.

[0747] ii. Tumor growth inhibition (TGI%) was calculated according to [1- (△ tumor volume  treated / △tumor volume control) *100;

[0748] iii. Tumor regression was calculated according to – (△tumor volume treated / tumor volume treated at day 0) *100 where △ tumor volume represents tumor volume on the measure day minus tumor volume at day 0.

[0749] Table 4: Body Weight Change

[0750] 2. As shown in the table 5, compounds in present invention showed great exposure in plasma.

[0751] Table 5: PK analysis of the efficacy study

[0752] Single Dose Pharmacokinetic / Pharmacodynamic (PKPD) Study in SW48 Xenograft model

[0753] Method

[0754] The studies were performed in SW48 Xenograft model for investigating PKPD of the preferred compounds.

[0755] SW48 human colorectal cancer cells (CBP60018, COBIOER) were cultured in DMEM medium (11995-065, Gibco) supplemented with 10%FBS (A5669701, Gibco) at 37 ℃in 5%CO2 incubator.

[0756] BALB / c nude mice (female 8-10 week, Shanghai Bikai Keyi Biotechnology) were injected with 3 million SW48 cells / Matrigel (356234, Corning) mixture subcutaneously into the upper right flank of mice. After the inoculation, tumor bearing mice were monitored regularly and randomly enrolled into treatment groups (n=3 / group) when tumor reached appropriate volume.

[0757] The test compounds were dissolved in 10%2-hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HPBCD) solution. Mice were treated with vehicle, 5mpk, 10mpk, 20mpk or 40mpk of a test compound by oral gavage (PO) .

[0758] Plasma PK Sampling points are 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 48h and 72h after administration. Tumor PK / PD Sampling points are 0.5, 2, 4, 8, 24, 48 and 72h after administration.

[0759] At PK sampling points, blood samples were collected into 1.5ml EDTA-K2 tubes. The blood samples were centrifuged at 8000 rpm for 5 minutes at room temperature. The plasma samples were transferred into pre-labeled tubes and stored at -80℃. Tumor samples were collected, separated, and processed with snap-freezing method in dry ice. For blood PK analysis, an aliquot of 5μl plasma sample was added with 100μl IS (Glipizide, 50 ng / ml) in MeOH. The mixture was vortexed for 1 minute and centrifuged at 5228g for 10 minutes. The supernatant was analyzed by LC-MS / MS-24 (Triple Quad6500) . Data was analyzed using GraphPad Prism 10.

[0760] At tumor sampling points, tumors were collected, separated, and processed with snap- freezing method in dry ice.

[0761] For tumor PK analysis, tumor samples were homogenized with 3 volumes (v / w) of PBS. An aliquot of 20μl sample was added with 400μl IS (Glipizide, 50 ng / ml) in MeOH. The mixture was vortexed for 1 minute, and centrifuged at 5228g for 10 min. The supernatant was analyzed by LC-MS / MS-24 (Triple Quad6500) . Half value of detection limit was used when plasma concentration is below a detection limit (1ng / ml) for making PK graph. Data was analyzed using GraphPad Prism 10.

[0762] For tumor PD analysis, tumor tissue was prepared in 3x volume of RIPA buffer containing phosphatase / protease inhibitors and smashed on ice with homogenizer. Homogenized Sample was mixed several time and place on ice for 30 minutes. After centrifuging at 14, 000g for 20 minutes at 4℃ to pellet down cell debris, supernatants were transferred to a fresh tube for protein quantification using Piece BCA protein Assay Kit (#23225) and western blotting analysis.

[0763] 30 μg of tumor protein lysate was loaded and separated by pre-cast gels (4-12%Bis-Tris Midi Gels, Thermofisher, WG1403BOX) , transferred onto polyvinylidene difluoride (PVDF) membrane or pre-wetting Nitrocellulose (NC) membrane, blocked with 5%milk diluted with Tris-buffered saline / Tween (TBST) for 1 h, and then incubated with diluted primary antibody overnight at 4 ℃. The antibodies for detecting protein targets, WRN antibody (8H3, #4665) , phospho-histone H2A. X Ser139 antibody (20E3 #9718) , phospho-Chk2 Thr68 antibody (C13C1 #2197) , p21 Waf1 / Cip1 antibody (12D1 #2947) , were obtained from Cell Signaling Technology. After washing in 0.1%TBST for 5 minutes three times, membrane was incubated with secondary appropriate antibodies diluted in TBST with 5%mild for 1 hour at room temperature on a nutator. After washing membrane, target proteins were detected with Tanon 5200 chemiluminescence image system using the ECL method. Loading control is scanned with Odyssey Infrared Imager. Data of target protein expression level in tumor were analyzed using GraphPad Prism 10.

[0764] Result

[0765] The compounds in the present invention show superior PK.

[0766] The AUClast (hr*ng / ml) (10mpk, PO, the last dose of efficacy study) of the compounds of the present invention in the plasma or tumor range from 5000-60000, preferably from 10000-50000.

[0767] In vivo Efficacy Study and Pharmacokinetic / Pharmacodynamic (PKPD) analysis

[0768] Method

[0769] HCT-116 human colorectal cancer cells (JNO-H0125, GuangZhou Jennio Biotech Co. ltd) were cultured in McCoy’s 5A medium (12230-031, Gibco) supplemented with 10%FBS (A5669701, Gibco) at 37 ℃ in 5%CO2 incubator.

[0770] The in vivo HCT-116 efficacy study was performed in female 8–10-week BALB / c nude mice (Shanghai Bikai Keyi Biotechnology) . Mice were injected with 4 million human colorectal cancer HCT-116 cells subcutaneously into the upper right flank of mice. After the inoculation, tumor bearing mice were monitored regularly and randomly enrolled into treatment groups (n=7 / group)  when tumor reached appropriate volume.

[0771] The test compounds were dissolved in 10%2-hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HPBCD) solution. Mice were treated with vehicle, 10mpk, 20mpk or 40mpk of a test compound by oral gavage (PO) daily (QD) .

[0772] Mice were weighed and tumor volume was measured twice per week. Tumor volume (mm3) was calculated according to 0.5*D*d2, where D=length and d=width of the tumor.

[0773] Tumor growth inhibition (TGI%) was calculated according to [1- (△ tumor volume treated / △tumor volume control) *100 and tumor regression was calculated according to – (△tumor volume treated / tumor volume treated at day 0) *100 where △ tumor volume represents tumor volume on the measure day minus tumor volume at day 0. Efficacy was calculated according to (△ tumor volume treated / △tumor volume control) *100. Data of tumor growth and body weight change were analyzed using GraphPad Prism 10.

[0774] At the sampling time points after the last dose of the experiment, the blood samples were collected into 1.5ml EDTA-K2 tubes. The sampling time points are 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 and 24h. The blood samples were centrifuged at 8000rpm for 5 minutes at room temperature. The plasma samples were transferred into pre-labeled tubes and stored at -80℃. For blood PK analysis, an aliquot of 5μl plasma sample was added with 100μl IS (Glipizide, 50 ng / ml) in MeOH. The mixture was vortexed for 1 minute and centrifuged at 5228g for 10 minutes. The supernatant was analyzed by LC-MS / MS-24 (Triple Quad6500) . Data of PK data were analyzed using GraphPad Prism 10.

[0775] At 4h or 24h after the last dosing of the experiment, tumors were collected, separated, and processed with snap-freezing method in dry ice.

[0776] For tumor PK analysis, tumor samples were homogenized with 3 volumes (v / w) of PBS. An aliquot of 20μl sample was added with 400μl IS (Glipizide, 50 ng / ml) in MeOH. The mixture was vortexed for 1 minute, and centrifuged at 5228g for 10 min. The supernatant was analyzed by LC-MS / MS-24 (Triple Quad6500) . Data of PK data were analyzed using GraphPad Prism 10.

[0777] For tumor PD analysis, tumor tissue was prepared in 3x volume of RIPA buffer containing phosphatase / protease inhibitors and smashed on ice with homogenizer. Homogenized Sample was mixed several time and place on ice for 30 minutes. After centrifuging at 14, 000g for 20 minutes at 4℃ to pellet down cell debris, supernatants were transferred to a fresh tube for protein quantification using Piece BCA protein Assay Kit (#23225) and western blotting analysis.

[0778] 30μg of tumor protein lysate was loaded and separated by pre-cast gels (4-12%Bis-Tris Midi Gels, Thermofisher, WG1403BOX) , transferred onto polyvinylidene difluoride  (PVDF) membrane or pre-wetting Nitrocellulose (NC) membrane, blocked with 5%milk diluted with Tris-buffered saline / Tween (TBST) for 1 h, and then incubated with diluted primary antibody overnight at 4 ℃. The antibodies for detecting protein targets, WRN antibody (8H3, #4665) , phospho-histone H2A. X Ser139 antibody (20E3 #9718) , phospho-Chk2 Thr68 antibody (C13C1 #2197) , p21 Waf1 / Cip1 antibody (12D1 #2947) , were obtained from Cell Signaling Technology. After washing in 0.1%TBST for 5 minutes three times, membrane was incubated with secondary appropriate antibodies diluted in TBST with 5%mild for 1 hour at room temperature on a nutator. After washing membrane, target proteins were detected with Tanon 5200 chemiluminescence image system using the ECL method. Loading control is scanned with Odyssey Infrared Imager. Data of target protein expression level in tumor were analyzed using GraphPad Prism 10.

[0779] Result

[0780] The compounds in the present invention have good tumor inhibitory activity, safety and PK.

[0781] For tumor inhibition, the TGI on day 28 of 10mpk is above 50%under the above experimental conditions. Preferably, the TGI on day 28 is above 80%. More preferably, the tumor regression rate on day 28 reach 10-80%.

[0782] Under the above experimental conditions, the body weight change on day 28 of the mice treated with 10mpk is within ±15%, preferably within ±10%.

[0783] The AUClast (hr*ng / ml) (10mpk, PO, the last dose of efficacy study) of the compound of the present invention in plasma or tumor range from 1000-50000, preferably from 5000-40000.

[0784] Table 6-8 show the detailed results for representative compounds.

[0785] 1. Compound 52 and Compound 87-E orally dosed daily at 3, 10 and 20mpk. 20mpk Compound 52 showed 50.36%regression while 3, 10 and 20mpk Compound 87-E showed 44.56%, 41.32%and 59.75%regression on day 28 respectively. There is no significant body weight loss observed in all treatment groups.

[0786] Table 6: Tumor Growth Inhibition

[0787] Note: i. *indicates tumor regression rate, meaning that the tumor volume is smaller than that at day 0.

[0788] ii. Tumor growth inhibition (TGI%) was calculated according to [1- (△ tumor volume treated / △tumor volume control) *100;

[0789] iii. Tumor regression rate was calculated according to – (△tumor volume treated / tumor volume treated at day 0) *100 where △ tumor volume represents tumor volume on the measure day minus tumor volume at day 0.

[0790] Table 7: Body Weight Change

[0791] 2. Compound 52 and Compound 87-E showed great exposure.

[0792] Table 8: PK analysis of the efficacy study

Claims

1.A compound of formulas (I) , (I-1) , or (I-2) or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, wherein, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8 are each independently selected from CH, NH, N, O, C or S;preferably, in formula (I) , Y1, Y2, Y3 are N; in formula (I-1) , Y1, Y2, Y3, Y6 are N, Y4, Y5, Y7, Y8 are C;X1 and X2 are each independently CH or N;M2 is CH, N;linking Y2 and C atom with #is single bond or double bond, linking Y3 and C atom with #is single bond or double bond, with the proviso thatare not double bond simultaneously;eachis independently single bond or double bond, with the proviso that adjacentare not double bond simultaneously;therepresent vinylidene, which can be Z or E or its mixture;La is selected from bond, -O-, -C (O) -, -S (O) -, -S (O) 2-, -S-, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1a: -NH-, –NHC (O) CR17R18-, –NHC (O) (CR17R18) n1-, -CONH-, C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, C1-C6 alkylene-NH-, C2-C6 alkenylene-NH-, C2-C6 alkynylene-NH-, C1-C6 alkylene-O-, C2-C6 alkenylene-O-, C2-C6 alkynylene -O-, C1-C6 alkylene-S-, C2-C6 alkenylene-S-, C2-C6 alkynylene -S-, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -, -S (O) (NH) -, or any combination of two or three or more of them;each R1, R3 R4, R5 and R7, RA, RB, R12, R16, R10A are identical or different, and are independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;alternatively, two of R3 together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10 cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl or C6-C10 aryl or C1-C9 heteroaryl, wherein the cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1c;alternatively, R4 and R5, together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10 cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl, wherein the cycloalkyl and heterocyclyl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1d;alternatively, two of R7 together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10 cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl or C6-C10 aryl or C1-C9 heteroaryl, wherein the cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1e;alternatively, two of R12 together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10 cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl or C6-C10 aryl or C1-C9 heteroaryl, wherein the cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1f;L2 is selected from bond, -O-, -C (O) -, -S (O) -, -S (O) 2-, -S-, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1g: -NH-, -CONH-, C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, -C1-C6 alkylene-NH-, -C2-C6 alkenylene-NH-, -C2-C6 alkynylene-NH-, -C1-C6 alkylene-O-, -C2-C6 alkenylene-O-, -C2-C6 alkynylene -O-, -C1-C6 alkylene-S-, -C2-C6 alkenylene-S-, -C2-C6 alkynylene -S-, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -, -S (O) (NH) -, or any combination of two or three or more of them;Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl and alkynyl;ring C is aryl or heteroaryl or cycloalkyl or heterocyclyl; preferably, ring C is C6-C10 aryl or C2-C9 heteroaryl or C3-C10 cycloalkyl or C3-C10 heterocyclyl;R10 is selected from the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1h: aryl or heteroaryl or cycloalkyl or heterocyclyl;preferably, R10 is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5, 6 or 7 ring carbon atoms which is optionally additionally fused to a heterocyclyl or cycloalkyl; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5, 6 or 7 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon atoms and 1 or 2 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, and wherein said heterocyclyl is unbridged or bridged, and said bridge is 1 or 2 carbon atoms; or heteroaryl, wherein said heteroaryl is a 5 or 6 membered fully unsaturated monocyclic group comprising ring carbon atoms and 1, 2, 3 or 4 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, preferably 1 or 2 ring heteraoms, wherein the total number of ring S atoms does not exceed 1, and the total number of ring O atoms does not exceed 1; or phenyl; wherein said cycloalkenyl, heterocyclyl, heteroaryl, phenyl are unsubstituted or substituted by one or more substituents selected from halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;or, R10 is C2-C4 alkenyl, optional substituted by R19 or –O-R20;each R1a, R1b, R1c, R1d, R1e, R1f, R1g, R1h are identical or different, and are independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rp: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R21, -C (O) OR22, -OC (O) R23, -S (O) 2R24, -S (O) 2OR25, -OS (O) 2R26, -B (OR27) (OR28) , -P (O) (OR29) (OR30) ;each Rp is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rq: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C3-40 cycloalkenyl, C3-40 cycloalkynyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C3-40 cycloalkenyloxy, C3-40 cycloalkynyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C3-40 cycloalkenylthio, C3-40 cycloalkynylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R31, -C (O) OR32, -OC (O) R33, -S (O) 2R34, -S (O) 2OR35, -OS (O) 2R36, -B (OR37) (OR38) , -P (O) (OR39) (OR40) and –S (O) (NH) -R41;each Rq is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) C1-40 alkyl, -C (O) NH2, -C (O) NHC1-40 alkyl, -C (O) -NH-OH, -COOC1-40 alkyl, -COOH, -OC (O) C1-40 alkyl, -OC (O) H, -S (O) 2C1-40 alkyl, S (O) 2H, -S (O) 2OC1-40 alkyl, -OS (O) 2C1-40 alkyl, -P (O) (OH) 2, -B (OH) 2, and –S (O) (NH) C1-40alkyl;R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 and R41 are identical or different, and are each independently selected from H, deuterium, C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, and NH2;p is 0, 1, 2 or 3;q is 0, 1, 2, 3, 4 or 5;r is 0, 1, 2 or 3;t is 0, 1, 2 or 3;w is 0, 1, 2 or 3;n1 is 0, 1, 2 or 3;n2 is 0, 1, 2 or 3.2.The compound is of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, including tautomers, cis-or trans-isomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, deuterated derivative, or mixtures thereof: Y1 is CH, NH, N, O or S;Y2 is CH, NH, N, O or S;Y3 is CH, NH, N, O or S;X1 and X2 are each independently CH or N;M2 is each independently CH, N;is single bond or double bond, with the proviso thatare not double bond simultaneously;R1, R3 and R4 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;R5 is independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;R7 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;or, two of R7 together with atom to which they are bound with form a C3-C10 cycloalkyl or C3-C10 heterocyclyl,L2 is bond, O, -C (O) , -CONH-, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, -C1-C6 alkyl-NH-, -C2-C6 alkenyl-NH-, C2-C6 alkynyl, C1-C6 alkoxy, C1-C6 alkylthio, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -;Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;ring C is C6-C10 aryl or C2-C9 heteroaryl;R10 is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5 or 6 ring carbon atoms; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5 or 6 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon atoms and 1 or 2 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, and wherein said heterocyclyl is unbridged or bridged, and said bridge is 1 or 2 carbon atoms; or heteroaryl, wherein said heteroaryl is a 5 or 6 membered fully unsaturated monocyclic group comprising ring carbon atoms and 1, 2, 3 or 4 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, preferably 1 or 2 ring heteraoms, wherein the total number of ring S atoms does not exceed 1, and the total number of ring O atoms does not exceed 1; or phenyl; wherein said cycloalkenyl, heterocyclyl, heteroaryl, phenyl are unsubstituted or substituted by one of more substituents selected from halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;or, R10 is C2-C4 alkenyl, optional substituted by R4 or –O-R4;R12 are each selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl and -O-haloalkyl;R16 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl and -O-haloalkyl;p is 0, 1, 2 or 3;q is 0, 1, 2 or 3;r is 0, 1, 2 or 3;t is 0, 1, 2 or 3;w is 0, 1, 2 or 3.3.The compound of claim 1, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, the compound is of formula (I-A) , (I-B) , (I-C) , (I-D) , (II) , (II-A) or (II-B) , (III) , (IV) , (IV-A) or (IV-B) , (V) , (V-A) , (V-B) or (V-C) , (VI) or (VI-A) , (VII) , (VII-A) or (VII-B) , (VII-C) , 4.The compound of claim 1, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, the compound is of formula (VIII) - (X) ,  wherein, p1 is 0, 1, 2 or 3;each R3a is independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1a: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;ring H is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5, 6 or 7 ring carbon atoms which is optionally additionally fused to a heterocyclyl or cycloalkyl; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5, 6 or 7 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon atoms and 1 or 2 ring oxygen atoms, wherein when the heterocyclyl is partially unsaturated, there is only one unsaturated bond;preferably, is selected frommore preferably, is selected frommost preferably, is selected from5.The compound of any one of claims 1-3, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, R10 is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5, 6 or 7 ring carbon atoms which is optionally additionally fused to a C2-C5 heterocyclyl or C3-C6 cycloalkyl; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5, 6 or 7 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon atoms and 1 or 2 ring oxygen atoms, wherein said cycloalkenyl, heterocyclyl are unsubstituted or substituted by one or more substituents selected from halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl; wherein when the heterocyclyl is partially unsaturated, there is only one unsaturated bond;preferably, R10 is selected frommore preferably, R10 is selected frommost preferably, R10 is selected fromwherein, p1 is 0, 1, 2 or 3;each R3a is independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1a: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl.6.The compound of claim 4, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof,or R10 is selected from7.The compound of any one of claims 1-4, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, wherein, R1, R3, R4 and R5 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 hydroxyalkyl, C2-C6 alkenyl and C3-C6 cycloalkyl;preferably, R1, R3, R4 and R5 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C3 alkyl, -CF3.8.The compound of any one of claims 1-4, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, wherein, R7 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy, C1-C6 haloalkyl and C1-C6 hydroxyalkyl; preferably, R7 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C3 alkyl, -CF3, -CH2F, CHF2, more preferably, C1-C3 alkyl.9.The compound of any one of claims 1-4, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, wherein, R12, R16 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 hydroxyalkyl and C2-C6 alkenyl;preferably, R12, R16 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C3 alkyl, -CF3.10.The compound of any one of claims 1-4, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, wherein, L2 is bond, O, -C (O) -, -CONH-, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, -C1-C3 alkyl-NH-, -C2-C3 alkenyl-NH-, C2-C3 alkynyl, C1-C3 alkoxy, C1-C3 alkylthio, C1-C3 haloalkyl and -CON (Rc) -; preferably, L2 is -C (O) -;Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, C1-C3 haloalkyl and C1-C3 hydroxyalkyl.11.The compound of any one of claims 1-4, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, wherein,  is selected from 12.The compound of any one of claims 1-4, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, wherein, ring C is or fused C1-C12 heteroaryl or bicyclo [1.1.1] pentane; and ring C is optionally substituted by (R12) q;preferably, or RB is selected frommore preferably, or RB is selected from13.The compound of any one of claims 1-4, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, wherein,w is 0, 1;p is 0, 1, 2;t is 1;r is 1;q is 0, 1, 2;p1 is 0, 1.14.The compound of any one of claims 1-4, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, wherein,or RA is selected from15.The compound of claim 1, selected from the group consisting of: or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof.16.A pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of the compound of any one of claims 1 to 15 or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt solvate, or prodrug thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.17.A method of treating cancer in a subject in need thereof, comprising administering to the subject an effective amount of the compound of any one of claims 1-15, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt solvate, or prodrug thereof, or the pharmaceutical composition of claim 16; preferably, the  cancer is selected from the group consisting of microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) ; more preferably the microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) is selected from colorectal, gastric, prostate, endometrial, adrenocortical, uterine, cervical, esophageal, breast, colon, kidney and ovarian cancer, further preferably the microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) is selected from prostate cancer, uterine corpus endometrial carcinoma, colon adenocarcinoma, stomach adenocarcinoma, rectal adenocarcinoma, adrenocortical carcinoma, uterine carcinosarcoma, cervical squamous cell carcinoma, endocervical adenocarcinoma, esophageal carcinoma, breast carcinoma, kidney renal clear cell carcinoma and ovarian serous cystadenocarcinoma.18.A method of treating a disorder or disease which can be treated by WRN inhibition in a subject, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the compound of any one of claims 1 to 15, or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt solvate, or prodrug thereof, or the pharmaceutical composition of claim 16, preferably, the disorder or disease is cancer; more preferably, the cancer is characterized as microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) ; further preferably, the cancer characterized as microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) is selected from colorectal, gastric, prostate, endometrial, adrenocortical, uterine, cervical, esophageal, breast, colon, kidney and ovarian cancer; further preferably, the cancer characterized as microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) is selected from prostate cancer, uterine corpus endometrial carcinoma, colon adenocarcinoma, stomach adenocarcinoma, rectal adenocarcinoma, adrenocortical carcinoma, uterine carcinosarcoma, cervical squamous cell carcinoma, endocervical adenocarcinoma, esophageal carcinoma, breast carcinoma, kidney renal clear cell carcinoma and ovarian serous cystadenocarcinoma.19.A compound of formulas (XI) or (XII) , or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer,  racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or salt or solvate thereof, RB is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;each R10A is independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;M2 is CH, N;La is selected from bond, -O-, -C (O) -, -S (O) -, -S (O) 2-, -S-, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1a: -NH-, –NHC (O) CR17R18-, –NHC (O) (CR17R18) n1-, -CONH-, C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, C1-C6 alkylene-NH-, C2-C6 alkenylene-NH-, C2-C6 alkynylene-NH-, C1-C6 alkylene-O-, C2-C6 alkenylene-O-, C2-C6 alkynylene -O-, C1-C6 alkylene-S-, C2-C6 alkenylene-S-, C2-C6 alkynylene -S-, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -, -S (O) (NH) -, or any combination of two or three or more of them;Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, deuterated hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl and alkynyl;R42 is hydrogen, deuterium, or a nitrogen protecting group;R43 is hydrogen, deuterium, or carboxylic acid protecting group;Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8 are each independently selected from CH, NH, N, O, C or S;eachis independently single bond or double bond, with the proviso that adjacentare not double bond simultaneously;R1 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;R4 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;R5 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;R7 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;R16 is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, C1-12 alkyl, C1-12 alkoxy, C1-12 haloalkyl, C1-12 hydroxyalkyl, C2-12 alkenyl, C2-12 alkynyl and C3-10 cycloalkyl, C1-12 haloalkoxy, C1-12 hydroxyalkoxy, -O-C1-12 haloalkyl, C6-10 aryl, C1-10 heteroaryl, C1-10 heterocyclyl;alternatively, R4 and R5, together with atom (s) to which they are attached to form a C3-C10 cycloalkyl or C1-C10 heterocyclyl, wherein the cycloalkyl and heterocyclyl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1d;alternatively, two of R7 together with atom (s) to which they are attached form a C3-C10 cycloalkyl or C3-C10 heterocyclyl or C6-C10 aryl or C1-C10 heteroaryl, wherein the cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted or substituted with 1, 2, 3 or more R1e;R10 is selected from the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1h: C6-C10 aryl or C1-C9 heteroaryl or C3-C10 cycloalkyl or C1-C9 heterocyclyl;preferably, R10 is cycloalkenyl, wherein said cycloalkenyl is a partially unsaturated monocyclic ring containing 5, 6 or 7 ring carbon atoms which is optionally additionally fused to a heterocyclyl or cycloalkyl; or heterocyclyl, wherein said heterocyclyl is a 5, 6 or 7 membered fully saturated or partially unsaturated group comprising ring carbon atoms and 1 or 2 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, and wherein said heterocyclyl is unbridged or bridged, and said bridge is 1 or 2 carbon atoms; or heteroaryl, wherein said heteroaryl is a 5 or 6 membered fully unsaturated monocyclic group comprising ring carbon atoms and 1, 2, 3 or 4 ring heteroatoms independently selected from N, O and S, preferably 1 or 2 ring heteraoms, wherein the total number of ring S atoms does not exceed 1, and the total number of ring O atoms does not exceed 1; or phenyl; wherein said cycloalkenyl, heterocyclyl, heteroaryl, phenyl are unsubstituted or substituted by one or more substituents selected from halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl and hydroxyalkyl;or, R10 is C2-C4 alkenyl, optional substituted by R19 or –O-R20;each R1a, R1b, R1d, R1e, R1h are identical or different, and are independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rp: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R21, -C (O) OR22, -OC (O) R23, -S (O) 2R24, -S (O) 2OR25, -OS (O) 2R26, -B (OR27) (OR28) , -P (O) (OR29) (OR30) ;each Rp is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2 or more Rq: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C3-40 cycloalkenyl, C3-40 cycloalkynyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C3-40 cycloalkenyloxy, C3-40 cycloalkynyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C3-40 cycloalkenylthio, C3-40 cycloalkynylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R31, -C (O) OR32, -OC (O) R33, -S (O) 2R34, -S (O) 2OR35, -OS (O) 2R36, -B (OR37) (OR38) , -P (O) (OR39) (OR40) and –S (O) (NH) -R41;each Rq is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) C1-40 alkyl, -C (O) NH2, -C (O) NHC1-40 alkyl, -C (O) -NH-OH, -COOC1-40 alkyl, -COOH, -OC (O) C1-40 alkyl, -OC (O) H, -S (O) 2C1-40 alkyl, S (O) 2H, -S (O) 2OC1-40 alkyl, -OS (O) 2C1-40 alkyl, -P (O) (OH) 2, -B (OH) 2, and –S (O) (NH) C1-40alkyl;R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 and R41 are identical or different, and are each independently selected from H, deuterium, C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, and NH2;w is 0, 1, 2 or 3;n1 is 0, 1, 2 or 3;n2 is 0, 1, 2 or 3;r is 0, 1, 2 or 3;t is 0, 1, 2 or 3;preferably one R7 or two R7 is substituted on the *position;therepresent vinylidene, which can be Z or E or its mixture;preferably, the compound is selected from: 20.A method for preparing a compound of formula (I-2) or formula (I-2’) , or a tautomer, cis-or trans-isomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, deuterated derivative or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or prodrug thereof, comprising: RW is a leaving group, preferably, halogen or OH;L2 is selected from bond, -O-, -C (O) -, -S (O) -, -S (O) 2-, -S-, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1g: -NH-, -CONH-, C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, -C1-C6 alkylene-NH-, -C2-C6 alkenylene-NH-, -C2-C6 alkynylene-NH-, -C1-C6 alkylene-O-, -C2-C6 alkenylene-O-, -C2-C6 alkynylene -O-, -C1-C6 alkylene-S-, -C2-C6 alkenylene-S-, -C2-C6 alkynylene -S-, C1-C6 haloalkyl and -CON (Rc) -, -S (O) (NH) -, or any combination of two or three or more of them;Rc is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, amino, cyano, oxo, hydroxy, deuterated hydroxy, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl and alkynyl;RA is selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen, hydroxy, deuterated hydroxy, cyano, NO2, oxo, and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more R1b: amino, alkyl, alkoxy, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl, haloalkoxy, hydroxyalkoxy, -O-haloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl;R1b, R1g are identical or different, and are independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rp: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R21, -C (O) OR22, -OC (O) R23, -S (O) 2R24, -S (O) 2OR25, -OS (O) 2R26, -B (OR27) (OR28) , -P (O) (OR29) (OR30) ;each Rp is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , and the following groups unsubstituted or optionally substituted with 1, 2, 3 or more Rq: C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C3-40 cycloalkenyl, C3-40 cycloalkynyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C3-40 cycloalkenyloxy, C3-40 cycloalkynyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C3-40 cycloalkenylthio, C3-40 cycloalkynylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) R31, -C (O) OR32, -OC (O) R33, -S (O) 2R34, -S (O) 2OR35, -OS (O) 2R36, -B (OR37) (OR38) , -P (O) (OR39) (OR40) and –S (O) (NH) -R41;each Rq is identical or different, and is independently selected from H, deuterium, halogen, OH, deuterated hydroxy, CN, NO2, oxo (═O) , thio (═S) , C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, C1-40 alkyloxy, C2-40 alkenyloxy, C2-40 alkynyloxy, C3-40 cycloalkyloxy, C6-20 aryloxy, 5-to 20-membered heteroaryloxy, 3-to 20-membered heterocyclyloxy, C1-40 alkylthio, C2-40 alkenylthio, C2-40 alkynylthio, C3-40 cycloalkylthio, C6-20 arylthio, 5-to 20-membered heteroarylthio, 3-to 20-membered heterocyclylthio, NH2, -C (O) C1-40 alkyl, -C (O) NH2, -C (O) NHC1-40 alkyl, -C (O) -NH-OH, -COOC1-40 alkyl, -COOH, -OC (O) C1-40 alkyl, -OC (O) H, -S (O) 2C1-40 alkyl, S (O) 2H, -S (O) 2OC1-40 alkyl, -OS (O) 2C1-40 alkyl, -P (O) (OH) 2, -B (OH) 2, and –S (O) (NH) C1-40alkyl;R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 and R41 are identical or different, and are each independently selected from H, deuterium, C1-40 alkyl, C2-40 alkenyl, C2-40 alkynyl, C3-40 cycloalkyl, C6-20 aryl, 5-to 20-membered heteroaryl, 3-to 20-membered heterocyclyl, and NH2;formula (XI) and formula (XII) are as defined in claim 19.

Images