CDCP1 antibody agents and uses thereof

Abstract

The present application provides antibody agents comprising an anti-CDCP1 antibody moiety, for example, a humanized anti-CDCP1 antibody moiety. The present application further provides multispecific antibody agents comprising an anti-CDCP1 antibody moiety, such as bispecific and trispecific antibodies suitable for treating CDCP1-positive cancers.

Description

CDCP1 ANTIBODY AGENTS AND USES THEREOF

[0001] The present application relates to antibody agents (i.e., antibody agents) that target CDCP1 and uses thereof.BACKGROUND

[0002] CUB domain-containing protein 1 (CDCP1) , as an emerging transmembrane protein, is overexpressed in a variety of malignant tumors including respiratory tumors, digestive system cancers, hematological malignancies and urogenital cancers. Several cancer-related proteins have been reported to interact with CDCP1. It acts as a crucial hub in multiple classical signaling pathways of tumorigenesis and progression. Its overexpression and activation are also associated with prognosis and drug resistance. See e.g., Life Sci. 2022 Jul 15: 301: 120600.

[0003] There is a need for treatments for CDCP1-positive cancers, such as antibody agents that specifically target CDCP1. BRIEF SUMMARY

[0004] In some aspects, provided herein is an antibody agent comprising an antibody moiety that specifically binds to CUB domain-containing protein 1 (CDCP1) , wherein the antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein: (1) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 3, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 4, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 5, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 6, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs; (2) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 7, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 8, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 10, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs; (3) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 15, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs; (4) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs; or (5) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 27, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs.

[0005] In some aspects, provided herein is an antibody agent comprising an antibody moiety that specifically binds to CUB domain-containing protein 1 (CDCP1) , wherein the antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein: (1) a heavy chain (HC) -CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 31, 54, 55, 56, 57, 58, and 59 and a light chain (LC) -CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32, 60, 61, and 62; (2) a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 37, 63, 64, 65, 66, 67, and 68, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 38, 69, 70, 71; (3) a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33, 72, 73, 74, and 75, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 34, 76, 77, 78, and 79; (4) a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in SEQ ID NO: 35, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in SEQ ID NO: 36; or (5) a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in SEQ ID NO: 39, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in SEQ ID NO: 40.

[0006] In some embodiments, (1) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 31, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 31, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 32, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 32; (2) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 54, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60; (3) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 55 or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 55, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 61; (4) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 56, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 56, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60; (5) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 57, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60; (6) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 58, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60; (7) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 59, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60; (8) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 54, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 62; (9) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 57, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 61; or (10) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 58, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 61.

[0007] In some embodiments, (1) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 33, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 33, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 34; (2) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 72, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 76; (3) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 73, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 79, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 79; (4) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 74, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 74, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 78; (5) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 73, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 77; (6) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 75, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 76; or (7) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 72, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 78.

[0008] In some embodiments, (1) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 37, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 37, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 38; (2) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 65, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 71; (3) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 63, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 69; (4) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 64, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 64, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 70; (5) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 66, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 66, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 69; (6) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 67, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 70; (7) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 68, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 70; or (8) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 68, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 69.

[0009] In some embodiments, the antibody moiety is an antibody or antigen-binding fragment thereof selected from the group consisting of a full-length antibody, a bispecific antibody, a single-chain Fv (scFv) fragment, a Fab fragment, a Fab’ fragment, a F (ab’) 2, an Fv fragment, a disulfide stabilized Fv fragment (dsFv) , a (dsFv) 2, a Fv-Fc fusion, a scFv-Fc fusion, a scFv-Fv fusion, a diabody, a tribody, and a tetrabody. In some embodiments, the antibody moiety is a full-length antibody. In some embodiments, the antibody moiety is humanized. In some embodiments, the antibody moiety has an Fc fragment selected from the group consisting of Fc fragments from IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, and combinations and hybrids thereof. In some embodiments, the Fc fragment is selected from the group consisting of Fc fragments from IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, and combinations and hybrids thereof. In some embodiments, the Fc fragment has an enhanced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc fragment. In some embodiments, the Fc fragment has a reduced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc fragment. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of a) at least any of 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, or 75%, or 80%, or b) no more than any of 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, or 50%, optionally wherein the internalization rate is assessed on MDA-MB-231 cells after incubation for 4 hours via flow cytometry. In some embodiments, the antibody agent binds to a human wildtype CDCP1 with a KD of no more than 5x10-8 M, optionally wherein the KD is assessed via surface plasmon resonance (SPR) . In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about any of 0.5 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM, 0.025, or 0.001 nM against MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about any of 500 nM, 250 nM, 100 nM, 80 nM, 60 nM, 50 nM, 25 nM, 10 nM, 1 nM, 0.1 nM, 0.05 nM, 0.01 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent a) binds to a human wildtype CDCP1 with a KD of no more than 5x10-8, optionally wherein the KD is assessed via surface plasmon resonance (SPR) ; and b) has an internalization rate of at least any of 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, or 80%, or has an internalization rate of no more than any of 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, or 50%optionally wherein the internalization rate is assessed on MDA-MB-231 cells after incubation for 4 hours via flow cytometry. In some embodiments, the CDCP1 is a human wildtype CDCP1.

[0010] In some embodiments, the antibody agent comprises a second antibody moiety that binds to a second antigen. In some embodiments, the second antigen is different from CDCP1. In some embodiments, the antibody moiety comprises a full length antibody comprising: a) a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 55, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 55, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 61; b) a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 75, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 76; or c) a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 68, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 69.

[0011] In some embodiments, the antibody is a multispecific antibody. In some embodiments, the antibody is a bispecific antibody. In some embodiments, the bispecific antibody comprises an antibody moiety that specifically binds to CDCP1 and an antibody moiety that binds to CD3. In some embodiments, the antibody is a trispecific antibody. In some embodiments, the trispecific antibody comprises an antibody moiety that specifically binds to CDCP1, an antibody moiety that binds to CD3 and an antibody moiety that binds to 4-1BB. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 51, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 52; wherein the CD3 antibody moiety comprises a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 123, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 124; or wherein the CD3 antibody moiety comprises a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 120, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 120, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 121, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 121.

[0012] In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety comprises a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 44.

[0013] In some embodiments, the antibody agent comprises a) a first polypeptide comprising from N-terminus to C-terminus: a first CDCP1 antibody moiety, a first Fc fragment, and a first 4-1BB antibody moiety that targets 4-1BB and b) a second polypeptide comprising from N-terminus to C-terminus: a second CDCP1 antibody moiety, a CD3 antibody moiety that targets CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB antibody moiety, and wherein the first Fc fragment and the second Fc fragment comprises an Fc domain. In some embodiments, the antibody agent comprises: i) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 113, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 113; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 114, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 114, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 115, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 115, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 115; ii) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 116, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 116; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 117, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 117, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 118, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 118; iii) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 108, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 108; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 109, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 110, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 110; iv) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 111, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 111; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 112, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 112, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 110, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 110; v) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 102; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 103, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 103, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 104, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 104, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 104, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 104; or vi) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 105, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 105; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 106, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 106, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 107, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 107, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 107, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 107

[0014] In some embodiments according to any of the trispecific antibodies described above, the antibody agent activates T cells in the presence of CDCP1-positive tumor cells, and wherein the antibody agent does not activate T cells or activate T cells to a significantly lesser extent in the absence of CDCP1-positive tumor cells but in the presence of CDCP1-negative cells, optionally wherein the CDCP1-negative cells are CDCP1-negative tumor cells. In some embodiments, the CD3 activation signal of the antibody agent in the presence of CDCP1-positive tumor cells are at least any of 3-fold, 5-fold, 10-fold, 20-fold, 50-fold, 100-fold, 200-fold, 500-fold, 1000-fold, 2000-fold, 5000-fold, 10,000-fold, 20,000-fold, 50,000-fold, or 100,000-fold of the CD3 activation signal of the antibody agent in the presence of the CDCP1-negative cells but in the absence of CDCP1-positive tumor cells at a concentration that is equivalent to the EC50 (half maximum effective concentration) or the Emax (maximum effective concentration) in the presence of the CDCP1-positive tumor cells. In some embodiments, the 4-1BB activation signal of the antibody agent in the presence of CDCP1-positive tumor cells are at least any of 3-fold, 5-fold , 10-fold, 20-fold, 50-fold, 100-fold, 200-fold, 500-fold, 1000-fold, 2000-fold, 5000-fold, 10,000-fold, 20,000-fold, 50,000-fold, or 100,000-fold of the 4-1BB activation signal of the antibody agent in the presence of the CDCP1-negative cells but in the absence of CDCP1-positive tumor cells at a concentration that is equivalent to the EC50 or the Emax in the presence of the CDCP1-positive tumor cells. In some embodiments, the antibody agent results in a cytotoxicity of no more than any of 10%, 7.5%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, or 1%of the CDCP1-negative cells at a concentration that is equivalent to the EC50 or the Emax in the presence of the CDCP1-positive tumor cells, optionally wherein the ratio of the T cells and the CDCP1 negative cells is about or no more than about any of 4: 1, 3: 1, 2: 1, 1: 1, 1: 2, 1: 3, 1: 4, 1: 5, 1: 6, 1: 7, 1: 8, 1: 9 or 1: 10. In some embodiments, the antibody agent results in a cytotoxicity of no less than any of 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, or 80%of the CDCP1-positive tumor cells at a concentration that is equivalent to the EC50 or the Emax in the presence of the CDCP1-positive tumor cells. In some embodiments, the ratio of the T cells and the CDCP1-positive tumor cells is about or no more than about any of 4: 1, 3: 1, 2: 1, 1: 1, 1: 2, 1: 3, 1: 4, 1: 5, 1: 6, 1: 7, 1: 8, 1: 9 or 1: 10. In some embodiments, the ratio of the T cells and the CDCP1-negative cells is the same as the ratio of the T cells and the CDCP1-positive tumor cells. In some embodiments, the CDCP1-positive tumor cells have at least any of 100, 200, 500, 700, 1000, 2000, 5000, 7000, 10,000, 15,000, 20,000, 25,000, 30,000, 35,000, 40,000, 45,000, or 50,000 tumor molecules on the surface, optionally wherein the CDCP1 positive tumor cells have: a) about 100-15000 CDCP1 molecules on the surface; b) about 15000-50000 CDCP1 molecules on the surface; c) more than 50000 CDCP1 molecules on the surface. In some embodiments, the T cells comprise primary T cells, optionally wherein the T cells comprise CD8+ T cells.

[0015] In some aspects, provided herein is pharmaceutical composition comprising the antibody agent of any one of the preceding embodiments, and a pharmaceutically acceptable carrier. In some aspects, provided herein is a nucleic acid encoding the antibody agent of any one of the preceding constructs or a portion thereof. In some aspects, provided herein is a vector comprising the nucleic acid of the preceding embodiment. In some aspects, provided herein is a host cell comprising the nucleic acid of the preceding embodiment, or the vector of the preceding embodiment. In some aspects, provided herein is a method of producing an antibody agent comprising: a) culturing the host cell of the preceding embodiment under conditions effective to express the antibody agent; and b) obtaining the expressed antibody agent from the host cell.

[0016] In some aspects, provided herein is a method of treating a disease or disorder, comprising administering to an individual in need thereof a composition comprising the antibody agent of any one of the preceding embodiments, or the pharmaceutical composition of the preceding embodiments. In some embodiments, the disease or disorder is a cancer, optionally wherein the cancer expresses CDCP1. In some embodiments, the cancer is a cervical cancer, a prostate cancer, a breast cancer, a lung cancer, a pancreatic cancer, an ovarian cancer, a colorectal cancer, a clear cell renal cancer carcinoma (ccRCC) , a thyroid cancer, a urothelial cancer, a stomach cancer, a carcinoid, a liver cancer, a glioma, an endometrial cancer, a renal cancer, or a testis cancer. In some embodiments, the individual is a human.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0017] The drawings illustrate certain embodiments of the features and advantages of this disclosure. These embodiments are not intended to limit the scope of the appended claims in any manner.

[0018] FIGS. 1A-1F show soluble protein binding by antibody concentration for different anti-CDCP1 antibodies, as measured via ELISA. FIG. 1A shows soluble protein binding of the 38, 49, and 261 anti-CDCP1 antibodies to the full-length human CDCP1 extracellular domain (ECD-FL) . FIG. 1B shows soluble protein binding of the 38, 49, and 261 anti-CDCP1 antibodies to the amino terminal fragment extracellular domain of human CDCP1 (ECD-ATF) . FIG. 1C shows soluble protein binding of the 38, 49, and 261 anti-CDCP1 antibodies to the full-length extracellular domain of Rhesus macaque CDCP1 (ECD-FL) . FIG. 1D shows soluble protein binding of the 749 and 808 anti-CDCP1 antibodies to the full-length extracellular domain of human CDCP1. FIG. 1E shows soluble protein binding of the 749 and 808 anti-CDCP1 antibodies to the amino terminal fragment extracellular domain of human CDCP1. FIG. 1F shows soluble protein binding of the 749 and 808 anti-CDCP1 antibodies to the full-length extracellular domain of Rhesus macaque CDCP1.

[0019] FIGS. 2A-2E show cell-based binding by antibody concentration for different anti-CDCP1 antibodies, as measured via FACS. FIG. 2A shows cell-based binding of the 38, 261, and 49 anti-CDCP1 antibodies to MDA-MB-231 cells. FIG. 2B shows cell-based binding of the 808 and 749 anti-CDCP1 antibodies to MDA-MB-231 cells compared to isotype. FIG. 2C shows cell-based binding of the 38, 261, and 49 anti-CDCP1 antibodies to PC-3 cells. FIG. 2D shows cell-based binding of 49, 38, and 749 anti-CDCP1 antibodies to HEK293-hCDCP1 human cells compared to isotype IgG. FIG. 2E shows cell-based binding of 261 and 808 CDCP1 antibodies to HEK293-hCDCP1 human cells compared to isotype IgG.

[0020] FIG. 3 shows a structural diagram of trispecific CDCP1XCD3x4-1BB antibodies in “F6” antibody format.

[0021] FIGS. 4A-4D show CDCP1-dependent and CDCP1-independent 4-1BB activation for trispecific CDCP1xCD3x4-1BB antibodies with different anti-CDCP1 antibody domains. FIG. 4A-4B shows CDCP1-dependent 4-1BB activation in MDA-MB-231 CDCP1+ cells for a set of antibodies comprising different anti-CDCP1 antibody domains. FIG. 4C-4D shows rates of CDCP1-independent 4-1BB activation in Chok1 CDCP1-cells for a set of antibodies comprising different anti-CDCP1 antibody domains.

[0022] FIGS. 5A-5B show CDCP1-dependent and CDCP1-independent CD3 activation for trispecific CDCP1xCD3x4-1BB antibodies with different anti-CDCP1 antibody domains. FIG. 5A shows CDCP1-dependent CD3 activation in MDA-MB-231 CDCP1+ cells for a set of antibodies comprising different anti-CDCP1 antibody domains. FIG. 5B shows rates of CDCP1-independent CD3 activation in Chok1 CDCP1-cells for a set of antibodies comprising different anti-CDCP1 antibody domains.

[0023] FIGS. 6A-6D show CD8+ T cell dependent cytotoxicity for trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies comprising different anti-CDCP1 antibody domains. FIG. 6A-6C shows CD8+ T cell-dependent cytotoxicity in MDA-MB-231 CDCP1+ cells for a set of antibody variants comprising different CDCP1 antibody domains. FIG. 6D shows CD8+ T cell-dependent cytotoxicity in PC-3 cells.

[0024] FIGS. 7A-7B show measured IL-2 release of CD8+ T cell co-cultured with CDCP1+tumor cells following incubation of trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibody variants comprising different anti-CDCP1 antibody domains. FIG. 7A shows IL-2 release in PC-3 cells. FIG. 7B shows IL-2 release in MDA-MB-231 cells.

[0025] FIG. 8 shows the internalization rate for different anti-CDCP1 antibody domains four hours after incubation, measured by FACS.

[0026] FIGS. 9A-9C show cell binding affinity evaluation for different humanized anti-CDCP1 antibody domains in MDA-MB-231 cells. FIG. 9A shows cell binding affinity for humanized variants of the 38 antibody. FIG. 9B shows cell binding affinity for humanized variants of the 49 antibody. FIG. 9C shows cell binding affinity for humanized variants of the 808 antibody.

[0027] FIG. 10 shows CDCP1-dependent CD3 activation levels for humanized anti-CDCP1 antibody domains in PC-3 cells.

[0028] FIGS. 11A-11D show cytotoxicity of trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies comprising different humanized anti-CDCP1 antibody domains and anti-CD3 variants. FIG. 11A shows cytotoxicity of trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies in CD8+ T cell &MDA-MB-231 cells co-culture system. FIG. 11B shows cytotoxicity of trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies in CD8+ T cell &PC-3 cells co-culture system. FIG. 11C shows cytotoxicity of antibody variants in PBMC &PC-3 cells co-culture system. FIG. 11D shows cytotoxicity of antibody variants in PBMC &CDCP1-ES-2 cells co-culture system.

[0029] FIGS. 12A-12D show cytokine release induced by trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies comprising different humanized anti-CDCP1 antibody domains and anti-CD3 variants. FIG. 12A-12B shows IFNγ and IL-2 release in PBMC &CDCP1+ MDA-MB-231 cells co-culture system. FIG. 12C-12D shows IFNγ and IL-2 release in PBMC &CDCP1-ES-2 cells co-culture system.

[0030] FIG. 13 shows evaluation of in vivo tumor growth inhibition in a PC-3 xenograft model by trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies comprising different CD3 antibody domains.

[0031] FIG. 14 shows pharmacokinetics of Tri-38H-2 and Tri-38-H6 CDCP1x4-1BBxCD3 humanized trispecific antibodies in mice. CDCP1 binder arm in Tri-38H-2 and Tri-38H-6 both comprise VH2+VL2 (SEQ ID NOs: 55 and 61) .

[0032] FIGS. 15A-15B show cytotoxicity rates of CDCP1xCD3 bispecific and CDCP1x4-1BBxCD3 trispecific antibodies in CD8+ T cell &MDA-MB-231 cells co-culture system. FIG. 15A shows cytotoxicity in MDA-MB-231 cells with high CDCP1 expression. FIG. 15B shows cytotoxicity in NCI-H1975 cells with low CDCP1 expression.

[0033] FIGS. 16A-16B show cytotoxicity of trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 vs bispecific CDCP1xCD3 antibody agents at a low E: T ratio (1: 10) in human CD8+ T cell and PC3 co-culture system. FIG. 16A shows a comparison of cytotoxicity rates in PC-3 cells obtained from a first donor. FIG. 16B shows a comparison of cytotoxicity rates in PC-3 cells obtained from a second donor.

[0034] FIGS. 17A-17B show cytokine release of trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 vs bispecific antibody CDCP1xCD3 constructs at a low E: T ratio (1: 10) in human CD8+ T cell and PC3 co-culture system. FIG. 17A shows IFNγ release in PC-3 cells obtained from a first donor. FIG. 17B shows IFNγ release in PC-3 cells obtained from a second donor.

[0035] FIG. 18 shows evaluation of in vivo tumor growth inhibition in a hCD3 / h4-1BB knock-in mouse syngeneic model by trispecific CDCP1xCD3x4-1BB antibody Tri-38H-2 and corresponding CDCP1xCD3 antibody 3-38H-2.DETAILED DESCRIPTION

[0036] The present application provides compositions for antibody agents that specifically bind to CUB domain-containing protein 1 (CDCP1) . Exemplary antibody agents include anti-CDCP1 antibody moieties as described herein that are capable of binding CDCP1.

[0037] The present application also provides compositions and methods of treatment using antibody agents comprising multispecific antibodies comprising CDCP1 antibody moieties, for example bi-specific, tri-specific, tetraspecific, biparatopic, or multispecific antibody agents. In some embodiments, the present invention provides bispecific antibodies that specifically bind CDCP1 and CD3. In some embodiments, the present invention provides trispecific antibodies that specifically bind CDCP1, CD3, and 4-1BB. In some embodiments, the present invention provides tetraspecific antibodies that specifically bind CDCP1, CD3, 4-1BB, and a tumor-associated antigen (i.e., a tumor-associated antigen that is not CDCP1) . In some embodiments, the present invention provides trispecific antibody agents comprising a humanized CDCP1 antibody moiety, a 4-1BB antibody moiety, and a CD3 antibody moiety. In some embodiments, the present invention provides trispecific antibody agents comprising a first CDCP1 antibody moiety, a second CDCP1 antibody moiety, a CD3 antibody moiety, and a 4-1BB antibody moiety. In some embodiments, the first CDCP1 antibody moiety and the second CDCP1 antibody moiety target the same portion of the target antigen. In some embodiments, the first CDCP1 antibody moiety and the second CDCP1 antibody moiety target a different portion of the target antigen. In some embodiments, the first CDCP1 antibody moiety and the second CDCP1 antibody moiety are the same. In some embodiments, the first CDCP1 antibody moiety and the second CDCP1 antibody moiety are different. In some embodiments, the first CDCP1 antibody moiety and / or the second CDCP1 antibody moiety is a humanized CDCP1 antibody moiety.

[0038] The present invention provides novel CDCP1 antibody agents including novel humanized antibodies that exhibit advantageous effects such as high binding affinity to CDCP1 and high internalization rates on CDCP1-positive target cells.

[0039] Also provided are pharmaceutical compositions, kits, and articles of manufacture comprising any of the antibody agents (such as the anti-CDCP1 antibody agents or multispecific antibody agents) described herein. Also provided are methods of treating a CDCP1-positive cancer in an individual using any of the antibody agents described herein, or a pharmaceutical composition thereof. Methods for making any of the antibody agents described herein are also provided. I. Definitions

[0040] The term “therapeutic agent” as used herein refers to a molecule having a therapeutic effect. The therapeutic agent may be of any suitable molecular entity, except for oligonucleotides.

[0041] The term “conjugation” refers to chemically joining two chemical groups or moieties together via one or more covalent or non-covalent bonds. Conjugation may be direct between the two chemical groups or moieties, or indirect through a third chemical group or moiety (e.g., a linker) that bridges the two chemical groups or moieties.

[0042] The term “conjugation site” refers to a site that directly joins two chemical moieties.

[0043] The term “antibody, ” “antibody agent” , is used in its broadest sense and encompasses various structures that have an antibody moiety, including but not limited to monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies (e.g., bispecific antibodies) , full-length antibodies and antigen-binding fragments thereof, so long as they exhibit the desired antigen-binding activity. The term “antibody moiety” refers to a moiety that binds to an antigen, such as a full-length antibody, a scFv, a Fab, a VHH.

[0044] A full-length antibody comprises two heavy chains and two light chains. The variable regions of the light and heavy chains are responsible for antigen binding. The variable domains of the heavy chain and light chain may be referred to as “VH” and “VL” , respectively. The variable regions in both chains generally contain three highly variable loops called the complementarity determining regions (CDRs) (light chain (LC) CDRs including LC-CDR1, LC-CDR2, and LC-CDR3, heavy chain (HC) CDRs including HC-CDR1, HC-CDR2, and HC-CDR3) . CDR boundaries for the antibodies and antigen-binding fragments disclosed herein may be defined or identified by the conventions of Kabat, Chothia, or Al-Lazikani (Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991) . The three CDRs of the heavy or light chains are interposed between flanking stretches known as framework regions (FRs) , which are more highly conserved than the CDRs and form a scaffold to support the hypervariable loops. The constant regions of the heavy and light chains are not involved in antigen binding but exhibit various effector functions. Antibodies are assigned to classes based on the amino acid sequence of the constant region of their heavy chain. The five major classes or isotypes of antibodies are IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM, which are characterized by the presence of α, δ, ε, γ, and μ heavy chains, respectively. Several of the major antibody classes are divided into subclasses such as lgG1 (γ1 heavy chain) , lgG2 (γ2 heavy chain) , lgG3 (γ3 heavy chain) , lgG4 (γ4 heavy chain) , lgA1 (α1 heavy chain) , or lgA2 (α2 heavy chain) . Chimeric Fc regions (such as IgG2 / 4 mixture) are also contemplated herein.

[0045] The term “antigen-binding fragment” as used herein refers to an antibody fragment including, for example, a diabody, a Fab, a Fab’, a F (ab’) 2, an Fv fragment, a disulfide stabilized Fv fragment (dsFv) , a (dsFv) 2, a bispecific dsFv (dsFv-dsFv’) , a disulfide stabilized diabody (ds diabody) , a single-chain Fv (scFv) , an scFv dimer (bivalent diabody) , a multispecific antibody formed from a portion of an antibody comprising one or more CDRs, a camelid single domain antibody, a nanobody, a domain antibody, a bivalent domain antibody, or any other antibody fragment that binds to an antigen but does not comprise a complete antibody structure. An antigen-binding fragment is capable of binding to the same antigen to which the parent antibody or a parent antibody fragment (e.g., a parent scFv) binds. In some embodiments, an antigen-binding fragment may comprise one or more CDRs from a particular human antibody grafted to a framework region from one or more different human antibodies.

[0046] “Fv” is the minimum antibody fragment, which contains a complete antigen-recognition and -binding site. This fragment consists of a dimer of one heavy-and one light-chain variable region domain in tight, non-covalent association. From the folding of these two domains emanate six hypervariable loops (3 loops each from the heavy and light chain) that contribute the amino acid residues for antigen binding and confer antigen binding specificity to the antibody. However, even a single variable domain (or half of an Fv comprising only three CDRs specific for an antigen) has the ability to recognize and bind antigen, although often at a lower affinity than the entire binding site.

[0047] “Single-chain Fv, ” also abbreviated as “sFv” or “scFv, ” are antibody fragments that comprise the VH and VL antibody domains connected into a single polypeptide chain. In some embodiments, the scFv polypeptide further comprises a polypeptide linker between the VH and VL domains which enables the scFv to form the desired structure for antigen binding. For a review of scFv, see Plückthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994) .

[0048] As used herein, the term “CDR” or “complementarity determining region” is intended to mean the non-contiguous antigen combining sites found within the variable region of both heavy and light chain polypeptides. These particular regions have been described by Kabat et al., J. Biol. Chem. 252: 6609-6616 (1977) ; Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, “Sequences of proteins of immunological interest” (1991) ; Chothia et al., J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987) ; Al-Lazikani B. et al., J. Mol. Biol., 273: 927-948 (1997) ; MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996) ; Abhinandan and Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839 (2008) ; Lefranc M. P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27: 55-77 (2003) ; and Honegger and Plückthun, J. Mol. Biol., 309: 657-670 (2001) , where the definitions include overlapping or subsets of amino acid residues when compared against each other. Nevertheless, application of either definition to refer to a CDR of an antibody or grafted antibodies or variants thereof is intended to be within the scope of the term as defined and used herein. The amino acid residues which encompass the CDRs as defined by each of the above-cited references are set forth below in Table 1 as a comparison. CDR prediction algorithms and interfaces are known in the art, including, for example, Abhinandan and Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839 (2008) ; Ehrenmann F. et al., Nucleic Acids Res., 38: D301-D307 (2010) ; and Adolf-Bryfogle J. et al., Nucleic Acids Res., 43: D432-D438 (2015) . The contents of the references cited in this paragraph are incorporated herein by reference in their entireties for use in the present application and for possible inclusion in one or more claims herein. In some embodiments, the CDR sequences provided herein are based on IMGT definition. For example, the CDR sequences may be determined by the VBASE2 tool (http:  / / www. vbase2. org / vbase2. php, see also Retter I, Althaus HH, Münch R, Müller W: VBASE2, an integrative V gene database. Nucleic Acids Res. 2005 Jan 1; 33 (Database issue) : D671-4, which is incorporated herein by reference in its entirety) . Table 1: CDR Definitions 1Residue numbering follows the nomenclature of Kabat et al., supra2Residue numbering follows the nomenclature of Chothia et al., supra3Residue numbering follows the nomenclature of MacCallum et al., supra4Residue numbering follows the nomenclature of Lefranc et al., supra5Residue numbering follows the nomenclature of Honegger and Plückthun, supra

[0049] The expression “variable-domain residue-numbering as in Kabat” or “amino-acid-position numbering as in Kabat, ” and variations thereof, refers to the numbering system used for heavy-chain variable domains or light-chain variable domains of the compilation of antibodies in Kabat et al., supra. Using this numbering system, the actual linear amino acid sequence may contain fewer or additional amino acids corresponding to a shortening of, or insertion into, a FR or hypervariable region (HVR) of the variable domain. For example, a heavy-chain variable domain may include a single amino acid insert (residue 52a according to Kabat) after residue 52 of H2 and inserted residues (e.g. residues 82a, 82b, and 82c, etc. according to Kabat) after heavy-chain FR residue 82. The Kabat numbering of residues may be determined for a given antibody by alignment at regions of homology of the sequence of the antibody with a “standard” Kabat numbered sequence.

[0050] “Framework” or “FR” residues are those variable-domain residues other than the CDR residues as herein defined.

[0051] The term “monoclonal antibody” as used herein refers to an antibody obtained from a population of substantially homogeneous antibodies, i.e., the individual antibodies comprising the population are identical except for possible naturally occurring mutations and / or post-translation modifications (e.g., isomerizations, amidations) that may be present in minor amounts. Monoclonal antibodies are highly specific, being directed against a single antigenic site. In contrast to polyclonal antibody preparations which typically include different antibodies directed against different determinants (epitopes) , each monoclonal antibody is directed against a single determinant on the antigen. In addition to their specificity, the monoclonal antibodies are advantageous in that they are synthesized by the hybridoma culture, uncontaminated by other immunoglobulins. The modifier “monoclonal” indicates the character of the antibody as being obtained from a substantially homogeneous population of antibodies, and is not to be construed as requiring production of the antibody by any particular method. For example, the monoclonal antibodies to be used in accordance with the present application may be made by a variety of techniques, including, for example, the hybridoma method (e.g., Kohler and Milstein., Nature, 256: 495-97 (1975) ; Hongo et al., Hybridoma, 14 (3) : 253-260 (1995) , Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988) ; Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N. Y., 1981) ) , recombinant DNA methods (see, e.g., U.S. Pat. No. 4,816,567) , phage-display technologies (see, e.g., Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991) ; Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992) ; Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338 (2) : 299-310 (2004) ; Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5) : 1073-1093 (2004) ; Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (34) : 12467-12472 (2004) ; and Lee et al., J. Immunol. Methods 284 (1-2) : 119-132 (2004) , and technologies for producing human or human-like antibodies in animals that have parts or all of the human immunoglobulin loci or genes encoding human immunoglobulin sequences (see, e.g., WO 1998 / 24893; WO 1996 / 34096; WO 1996 / 33735; WO 1991 / 10741; Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993) ; Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993) ; Bruggemann et al., Year in Immunol. 7: 33 (1993) ; U.S. Pat. Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; and 5,661,016; Marks et al., Bio / Technology 10: 779-783 (1992) ; Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994) ; Morrison, Nature 368: 812-813 (1994) ; Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996) ; Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996) ; and Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995) .

[0052] The monoclonal antibodies herein specifically include “chimeric” antibodies (immunoglobulins) in which a portion of the heavy and / or light chain is identical with or homologous to corresponding sequences in antibodies derived from a particular species or belonging to a particular antibody class or subclass, while the remainder of the chain (s) is (are) identical with or homologous to corresponding sequences in antibodies derived from another species or belonging to another antibody class or subclass, as well as fragments of such antibodies, so long as they exhibit the desired biological activity (U.S. Pat. No. 4,816,567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984) ) . Chimeric antibodies of interest herein include antibodies wherein the antigen-binding region of the antibody is derived from an antibody produced by, e.g., immunizing macaque monkeys with an antigen of interest. As used herein, “humanized antibody” is used a subset of “chimeric antibodies” .

[0053] “Humanized” forms of non-human (e.g., rodent) antibodies are chimeric antibodies that contain minimal sequence derived from the non-human antibody. For the most part, humanized antibodies are human immunoglobulins (recipient antibody) in which residues from a hypervariable region (HVR) of the recipient are replaced by residues from a hypervariable region of a non-human species (donor antibody) such as mouse, rat, rabbit or non-human primate having the desired antibody specificity, affinity, and capability. In some instances, framework region (FR) residues of the human immunoglobulin are replaced by corresponding non-human residues. Furthermore, humanized antibodies can comprise residues that are not found in the recipient antibody or in the donor antibody. These modifications are made to further refine antibody performance. In general, the humanized antibody will comprise substantially all of at least one, and typically two, variable domains, in which all or substantially all of the hypervariable loops correspond to those of a non-human immunoglobulin and all or substantially all of the FRs are those of a human immunoglobulin sequence. The humanized antibody optionally also will comprise at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc) , typically that of a human immunoglobulin. For further details, See Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986) ; Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988) ; and Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992) .

[0054] “Percent (%) amino acid sequence identity” or “homology” with respect to the polypeptide and antibody sequences identified herein is defined as the percentage of amino acid residues in a candidate sequence that are identical with the amino acid residues in the polypeptide being compared, after aligning the sequences considering any conservative substitutions as part of the sequence identity. Alignment for purposes of determining percent amino acid sequence identity can be achieved in various ways that are within the skill in the art, for instance, using publicly available computer software such as BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign (DNASTAR) , or MUSCLE software. Those skilled in the art can determine appropriate parameters for measuring alignment, including any algorithms needed to achieve maximal alignment over the full-length of the sequences being compared. For purposes herein, however, %amino acid sequence identity values are generated using the sequence comparison computer program MUSCLE (Edgar, R.C., Nucleic Acids Research 32 (5) : 1792-1797, 2004; Edgar, R.C., BMC Bioinformatics 5 (1) : 113, 2004) .

[0055] “Homologous” refers to the sequence similarity or sequence identity between two polypeptides or between two nucleic acid molecules. When a position in both of the two compared sequences is occupied by the same base or amino acid monomer subunit, e.g., if a position in each of two DNA molecules is occupied by adenine, then the molecules are homologous at that position. The percent of homology between two sequences is a function of the number of matching or homologous positions shared by the two sequences divided by the number of positions compared times 100. For example, if 6 of 10 of the positions in two sequences are matched or homologous then the two sequences are 60%homologous. By way of example, the amino acid sequences TKLEIK and TALGIE share 50%homology. Generally, a comparison is made when two sequences are aligned to give maximum homology.

[0056] The term “constant domain” refers to the portion of an immunoglobulin molecule having a more conserved amino acid sequence relative to the other portion of the immunoglobulin, the variable domain, which contains the antigen-binding site. The constant domain contains the CH1, CH2 and CH3 domains (collectively, CH) of the heavy chain and the CHL (or CL) domain of the light chain.

[0057] The “light chains” of antibodies (immunoglobulins) from any mammalian species can be assigned to one of two clearly distinct types, called kappa ( “κ” ) and lambda ( “λ” ) , based on the amino acid sequences of their constant domains.

[0058] The “CH1 domain” (also referred to as “C1” of “H1” domain) usually extends from about amino acid 118 to about amino acid 215 (EU numbering system) .

[0059] “Hinge region” is generally defined as a region in IgG corresponding to Glu216 to Pro230 of human IgG1 (Burton, Molec. Immunol. 22: 161-206 (1985) ) . Hinge regions of other IgG isotypes may be aligned with the IgG1 sequence by placing the first and last cysteine residues forming inter-heavy chain S-Sbonds in the same positions.

[0060] The “CH2 domain” of a human IgG Fc region (also referred to as “C2” domain) usually extends from about amino acid 231 to about amino acid 340. The CH2 domain is unique in that it is not closely paired with another domain. Rather, two N-linked branched carbohydrate chains are interposed between the two CH2 domains of an intact native IgG molecule. It has been speculated that the carbohydrate may provide a substitute for the domain-domain pairing and help stabilize the CH2 domain. Burton, Molec Immunol. 22: 161-206 (1985) .

[0061] The “CH3 domain” (also referred to as “C2” domain) comprises the stretch of residues C-terminal to a CH2 domain in an Fc region (i.e. from about amino acid residue 341 to the C-terminal end of an antibody sequence, typically at amino acid residue 446 or 447 of an IgG) .

[0062] The term “Fc region” or “fragment crystallizable region” herein is used to define a C-terminal region of an immunoglobulin heavy chain, including native-sequence Fc regions and variant Fc regions. Although the boundaries of the Fc region of an immunoglobulin heavy chain might vary, the human IgG heavy-chain Fc region is usually defined to stretch from an amino acid residue at position Cys226, or from Pro230, to the carboxyl-terminus thereof. The C-terminal lysine (residue 447 according to the EU numbering system) of the Fc region may be removed, for example, during production or purification of the antibody, or by recombinantly engineering the nucleic acid encoding a heavy chain of the antibody. In some cases, the subsequent C-terminal glycine (residue 446 according to the EU numbering system) of the Fc region may also be removed. Accordingly, a composition of intact antibodies may comprise antibody populations with all K447 residues removed, antibody populations with no K447 residues removed, and antibody populations having a mixture of antibodies with and without the K447 residue. Suitable native-sequence Fc regions for use in the antibodies described herein include human IgG1, IgG2 (IgG2A, IgG2B) , IgG3 and IgG4.

[0063] “Fc receptor” or “FcR” describes a receptor that binds the Fc region of an antibody. The preferred FcR is a native sequence human FcR. Moreover, a preferred FcR is one which binds an IgG antibody (a gamma receptor) and includes receptors of the FcγRI, FcγRII, and FcγRIII subclasses, including allelic variants and alternatively spliced forms of these receptors, FcγRII receptors include FcγRIIA (an “activating receptor” ) and FcγRIIB (an “inhibiting receptor” ) , which have similar amino acid sequences that differ primarily in the cytoplasmic domains thereof. Activating receptor FcγRIIA contains an immunoreceptor tyrosine-based activation motif (ITAM) in its cytoplasmic domain. Inhibiting receptor FcγRIIB contains an immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif (ITIM) in its cytoplasmic domain. (See M.  Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997) . FcRs are reviewed in Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991) ; Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994) ; and de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995) . Neonatal Fc receptors (FcRN) are encompassed herein. Other FcRs, including those to be identified in the future, are also encompassed by the term “FcR” herein.

[0064] The terms “polypeptide” or “peptide” are used herein to encompass all kinds of naturally occurring and synthetic proteins, including protein fragments of all lengths, fusion proteins and modified proteins, including without limitation, glycoproteins, as well as all other types of modified proteins (e.g., proteins resulting from phosphorylation, acetylation, myristoylation, palmitoylation, glycosylation, oxidation, formylation, amidation, polyglutamylation, ADP-ribosylation, pegylation, biotinylation, etc. ) .

[0065] The term “fusion” refers to genetically joining two polypeptide fragments to provide a single continuous polypeptide ( “fusion polypeptide” ) . The two polypeptide fragments may be directly joined to each other, or joined via another polypeptide disposed therebetween. Routine recombinant DNA techniques or chemical gene synthesis can be used to provide nucleic acids that genetically encode a fusion polypeptide.

[0066] The term “biparatopic” as used herein refers to an antibody comprising two antigen binding domains recognizing two different epitopes on the same protein target.

[0067] The term “epitope” as used herein refers to the specific group of atoms or amino acids on an antigen to which an antibody or antibody moiety binds. Two antibodies or antibody moieties may bind the same epitope within an antigen if they exhibit competitive binding for the antigen.

[0068] As used herein, a first antibody or fragment thereof “competes” for binding to a target antigen with a second antibody or fragment thereof when the first antibody or fragment thereof inhibits the target antigen binding of the second antibody of fragment thereof by at least about 50%(such as at least about any one of 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%or 99%) in the presence of an equimolar concentration of the first antibody or fragment thereof, or vice versa. A high throughput process for “binning” antibodies based upon their cross-competition is described in PCT Publication No. WO 03 / 48731.

[0069] As used herein, the terms “specifically binds, ” “specifically recognizing, ” and “is specific for” refer to measurable and reproducible interactions, such as binding between a target and an antibody or antibody moiety, which is determinative of the presence of the target in the presence of a heterogeneous population of molecules, including biological molecules. For example, an antibody or antibody moiety that specifically recognizes a target (which can be an epitope) is an antibody or antibody moiety that binds this target with greater affinity, avidity, more readily, and / or with greater duration than its bindings to other targets. In some embodiments, the extent of binding of an antibody to an unrelated target is less than about 10%of the binding of the antibody to the target as measured, e.g., by a radioimmunoassay (RIA) . In some embodiments, an antibody that specifically binds a target has a dissociation constant (KD) of ≤10-5 M, ≤10-6 M, ≤10-7 M, ≤10-8 M, ≤10-9 M, ≤10-10 M, ≤10-11 M, or ≤10-12 M. In some embodiments, an antibody specifically binds an epitope on a protein that is conserved among the protein from different species. In some embodiments, specific binding can include, but does not require exclusive binding. Binding specificity of the antibody or antigen-binding domain can be determined experimentally by methods known in the art. Such methods comprise, but are not limited to Western blots, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIACORETM -tests and peptide scans.

[0070] An “isolated” antibody (or construct) is one that has been identified, separated and / or recovered from a component of its production environment (e.g., natural or recombinant) . Preferably, the isolated polypeptide is free of association with all other components from its production environment. Contaminant components of its production environment, such as that resulting from recombinant transfected cells, are materials that would typically interfere with research, diagnostic or therapeutic uses for the antibody, and may include enzymes, hormones, and other proteinaceous or non-proteinaceous solutes. In preferred embodiments, the polypeptide will be purified: (1) to greater than 95%by weight of antibody as determined by, for example, the Lowry method, and in some embodiments, to greater than 99%by weight; (2) to a degree sufficient to obtain at least 15 residues of N-terminal or internal amino acid sequence by use of a spinning cup sequenator, or (3) to homogeneity by SDS-PAGE under non-reducing or reducing conditions using Coomassie blue or, preferably, silver stain. Isolated antibody includes the antibody in situ within recombinant cells since at least one component of the antibody's natural environment will not be present. Ordinarily, however, an isolated polypeptide or antibody will be prepared by at least one purification step.

[0071] As used herein, “link, ” “conjugate, ” “ligate” , and “fuse” are used interchangeably to refer to connection of two chemical moieties either covalently or non-covalently. The connection may be direct or indirect, e.g., through a linker.

[0072] An “isolated” nucleic acid molecule encoding a construct, antibody, or antigen-binding fragment thereof described herein is a nucleic acid molecule that is identified and separated from at least one contaminant nucleic acid molecule with which it is ordinarily associated in the environment in which it was produced. Preferably, the isolated nucleic acid is free of association with all components associated with the production environment. The isolated nucleic acid molecules encoding the polypeptides and antibodies described herein is in a form other than in the form or setting in which it is found in nature. Isolated nucleic acid molecules therefore are distinguished from nucleic acid encoding the polypeptides and antibodies described herein existing naturally in cells. An isolated nucleic acid includes a nucleic acid molecule contained in cells that ordinarily contain the nucleic acid molecule, but the nucleic acid molecule is present extrachromosomally or at a chromosomal location that is different from its natural chromosomal location.

[0073] The term “control sequences” refers to DNA sequences necessary for the expression of an operably linked coding sequence in a particular host organism. The control sequences that are suitable for prokaryotes, for example, include a promoter, optionally an operator sequence, and a ribosome binding site. Eukaryotic cells are known to utilize promoters, polyadenylation signals, and enhancers.

[0074] Nucleic acid is “operably linked” when it is placed into a functional relationship with another nucleic acid sequence. For example, DNA for a presequence or secretory leader is operably linked to DNA for a polypeptide if it is expressed as a preprotein that participates in the secretion of the polypeptide; a promoter or enhancer is operably linked to a coding sequence if it affects the transcription of the sequence; or a ribosome binding site is operably linked to a coding sequence if it is positioned so as to facilitate translation. Generally, “operably linked” means that the DNA sequences being linked are contiguous, and, in the case of a secretory leader, contiguous and in reading frame. However, enhancers do not have to be contiguous. Linking is accomplished by ligation at convenient restriction sites. If such sites do not exist, the synthetic oligonucleotide adaptors or linkers are used in accordance with conventional practice.

[0075] The term “vector, ” as used herein, refers to a nucleic acid molecule capable of propagating another nucleic acid to which it is linked. The term includes the vector as a self-replicating nucleic acid structure as well as the vector incorporated into the genome of a host cell into which it has been introduced. Certain vectors are capable of directing the expression of nucleic acids to which they are operatively linked. Such vectors are referred to herein as “expression vectors. ”

[0076] The term “transfected” or “transformed” or “transduced” as used herein refers to a process by which exogenous nucleic acid is transferred or introduced into the host cell. A “transfected” or “transformed” or “transduced” cell is one which has been transfected, transformed or transduced with exogenous nucleic acid. The cell includes the primary subject cell and its progeny.

[0077] The terms “host cell, ” “host cell line, ” and “host cell culture” are used interchangeably and refer to cells into which exogenous nucleic acid has been introduced, including the progeny of such cells. Host cells include “transformants” and “transformed cells, ” which include the primary transformed cell and progeny derived therefrom without regard to the number of passages. Progeny may not be completely identical in nucleic acid content to a parent cell, and may contain mutations. Mutant progeny that have the same function or biological activity as screened or selected for in the originally transformed cell are included herein.

[0078] The term “immunoconjugate” includes reference to a covalent linkage of a therapeutic agent or an oligonucleotide to an antibody such as an antibody moiety described herein. The linkage can be direct or indirect through a linker (such as a peptide linker) .

[0079] As used herein, “treatment” or “treating” is an approach for obtaining beneficial or desired results, including clinical results. For purposes of this application, beneficial or desired clinical results include, but are not limited to, one or more of the following: alleviating one or more symptoms resulting from the disease, diminishing the extent of the disease, stabilizing the disease (e.g., preventing or delaying the worsening of the disease) , preventing or delaying the spread (e.g., metastasis) of the disease, preventing or delaying the recurrence of the disease, delaying or slowing the progression of the disease, ameliorating the disease state, providing a remission (partial or total) of the disease, decreasing the dose of one or more other medications required to treat the disease, delaying the progression of the disease, increasing or improving the quality of life, increasing weight gain, and / or prolonging survival. The methods of the application contemplate any one or more of these aspects of treatment.

[0080] The terms “inhibition” or “inhibit” refer to a decrease or cessation of any phenotypic characteristic or to the decrease or cessation in the incidence, degree, or likelihood of that characteristic. To “reduce” or “inhibit” is to decrease, reduce or arrest an activity, function, and / or amount as compared to that of a reference. In certain embodiments, by “reduce” or “inhibit” is meant the ability to cause an overall decrease of 20%or greater. In another embodiment, by “reduce” or “inhibit” is meant the ability to cause an overall decrease of 50%or greater. In yet another embodiment, by “reduce” or “inhibit” is meant the ability to cause an overall decrease of 75%, 85%, 90%, 95%, or greater.

[0081] A “reference” as used herein, refers to any sample, standard, or level that is used for comparison purposes. A reference may be obtained from a healthy and / or non-diseased sample. In some examples, a reference may be obtained from an untreated sample. In some examples, a reference is obtained from a non-diseased or non-treated sample of an individual. In some examples, a reference is obtained from one or more healthy individuals who are not the individual or patient.

[0082] As used herein, “delaying development of a disease" means to defer, hinder, slow, retard, stabilize, suppress and / or postpone development of the disease. This delay can be of varying lengths of time, depending on the history of the disease and / or individual being treated. As is evident to one skilled in the art, a sufficient or significant delay can, in effect, encompass prevention, in that the individual does not develop the disease.

[0083] “Preventing” as used herein, includes providing prophylaxis with respect to the occurrence or recurrence of a disease in an individual that may be predisposed to the disease but has not yet been diagnosed with the disease.

[0084] The terms “subject, ” “individual, ” and “patient” are used interchangeably herein to refer to a mammal, including, but not limited to, human, bovine, horse, feline, canine, rodent, or primate. In some embodiments, the individual is a human.

[0085] An “effective amount” of an agent refers to an amount effective, at dosages and for periods of time necessary, to achieve the desired therapeutic or prophylactic result. The specific dose may vary depending on one or more of: the particular agent chosen, the dosing regimen to be followed, whether it is administered in combination with other compounds, timing of administration, the tissue to be imaged, and the physical delivery system in which it is carried.

[0086] The terms “pharmaceutical formulation” and “pharmaceutical composition” refer to a preparation which is in such form as to permit the biological activity of the active ingredient (s) to be effective, and which contains no additional components which are unacceptably toxic to an individual to which the formulation would be administered. Such formulations may be sterile.

[0087] A “pharmaceutically acceptable carrier” refers to a non-toxic solid, semisolid, or liquid filler, diluent, encapsulating material, formulation auxiliary, or carrier conventional in the art for use with a therapeutic agent that together comprise a “pharmaceutical composition” for administration to an individual. A pharmaceutically acceptable carrier is non-toxic to recipients at the dosages and concentrations employed and is compatible with other ingredients of the formulation. The pharmaceutically acceptable carrier is appropriate for the formulation employed.

[0088] A “sterile” formulation is aseptic or essentially free from living microorganisms and their spores.

[0089] Administration “in combination with” one or more further therapeutic agents includes simultaneous (concurrent) and consecutive or sequential administration in any order.

[0090] The term “concurrently” is used herein to refer to administration of two or more therapeutic agents, where at least part of the administration overlaps in time or where the administration of one therapeutic agent falls within a short period of time relative to administration of the other therapeutic agent. For example, the two or more therapeutic agents are administered with a time separation of no more than about 60 minutes, such as no more than about any of 30, 15, 10, 5, or 1 minutes.

[0091] The term “sequentially” is used herein to refer to administration of two or more therapeutic agents where the administration of one or more agent (s) continues after discontinuing the administration of one or more other agent (s) . For example, administration of the two or more therapeutic agents are administered with a time separation of more than about 15 minutes, such as about any of 20, 30, 40, 50, or 60 minutes, 1 day, 2 days, 3 days, 1 week, 2 weeks, or 1 month, or longer.

[0092] As used herein, “in conjunction with” refers to administration of one treatment modality in addition to another treatment modality. As such, “in conjunction with” refers to administration of one treatment modality before, during or after administration of the other treatment modality to the individual.

[0093] The term “package insert” is used to refer to instructions customarily included in commercial packages of therapeutic products, that contain information about the indications, usage, dosage, administration, combination therapy, contraindications and / or warnings concerning the use of such therapeutic products.

[0094] An “article of manufacture” is any manufacture (e.g., a package or container) or kit comprising at least one reagent, e.g., a medicament for treatment of a disease or disorder, or a probe for specifically detecting a biomarker described herein. In certain embodiments, the manufacture or kit is promoted, distributed, or sold as a unit for performing the methods described herein.

[0095] It is understood that embodiments of the application described herein include “consisting” and / or “consisting essentially of” embodiments.

[0096] Reference to “about” a value or parameter herein includes (and describes) variations that are directed to that value or parameter per se. For example, description referring to “about X” includes description of “X” .

[0097] As used herein, reference to “not” a value or parameter generally means and describes “other than” a value or parameter. For example, the method is not used to treat a disease of type X means the method is used to treat the disease of types other than X.

[0098] The term “about X-Y” used herein has the same meaning as “about X to about Y. ”

[0099] As used herein and in the appended claims, the singular forms “a, ” “or, ” and “the” include plural referents unless the context clearly dictates otherwise.

[0100] The term “and / or” as used herein a phrase such as “A and / or B” is intended to include both A and B; A or B; A (alone) ; and B (alone) . Likewise, the term “and / or” as used herein a phrase such as “A, B, and / or C” is intended to encompass each of the following embodiments: A, B, and C; A, B, or C; A or C; A or B; B or C; A and C; A and B; B and C; A (alone) ; B (alone) ; and C (alone) . II. Anti-CDCP1 antibody agents

[0101] The present application provides anti-CUB domain-containing protein 1 (CDCP1) antibody agents comprising an anti-CDCP1 antibody moiety that specifically binds to CDCP1 as described herein. In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent is a multispecific (e.g., trispecific) antibody agent. In some embodiments, the antibody agent comprises a second binding moiety (e.g., a second antibody moiety) that targets a second antigen. In some embodiments, the antibody agent comprises a third binding moiety (e.g., a third antibody moiety) that targets a third antigen. The second and / or the third antigen can be any antigen.

[0102] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a bispecific antibody comprising a first antibody moiety that binds to CDCP1, a second antibody moiety that binds to CD3.

[0103] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a first antibody moiety that binds to CDCP1, a second antibody moiety that binds to CD3, and a third antibody moiety that binds to 4-1BB. CDCP1

[0104] CUB domain-containing protein 1 (CDCP1) is a cell surface glycoprotein also known as subtractive immunization associated 135 kDa (SIMA135) , gp140, and transmembrane and associated with Src kinases (Trask) and has been assigned the cluster of differentiation (CD) designation CD318. CDCP1 is an 836 amino acid cell surface glycoprotein containing a 29-residue amino terminal signal peptide and extracellular, transmembrane, and cytoplasmic domains of 636, 21, and 150 amino acids, respectively (SEQ ID NO. 106) . 14 consensus N-glycosylation sites and 20 cysteines likely involved in disulfide bond formation. 12 of the consensus N-glycosylation sites and 19 of the extracellular cysteines are conserved in human, chimpanzee, dog, cow, mouse. Its serine protease (plasmin, matriptase, tPA) cleavage sites is at arginine-368 (R368) and lysine-369 (K369) .

[0105] Exploration of mechanisms regulating CDCP1 expression have to date focused on two key drivers of cancer progression: hypoxia and growth factor signaling. In the case of hypoxia, CDCP1 is strongly upregulated by hypoxia-inducible factor (HIF) family members. CDCP1 is also upregulated in response to signaling from growth factors including EGF / EGFR, PDGF / PDGFR / ERK, HGF / cMET, mRAS / ERK, PTENnull / PI3K / AKT, and STAT3 / FBXL14. CDCP1 expression is negatively regulated by genome methylation, demethylating agent (5-Aza) induces robust transcription of CDCP1. At the posttranscriptional level, methylation of the untranslated region of the CDCP1 mRNA, by the m6A methyltransferase METTL3, is a key contributor to effective translation of the CDCP1 protein.

[0106] CDCP1 is activated through proteolysis, wherein cleavage of the CDCP1 amino terminal fragment (ATF) facilitates formation of the phospho (p) -CDCP1-CTF / Src / PKCδ trimeric complex. Cleavage is predominantly performed by serine proteases, such as plasmin, matriptase, and tissue plasminogen activator (tPA) , at residues arginine-368 and lysine-369, although there is also evidence of trypsin cleavage at lysine-277. Formation of phospho (p) -CDCP1-CTF / Src / PKCδ trimer is key to downstream signal transduction. Following cleavage, the ATF domain may hybridize to the remaining extracellular portion of phospho (p) -CDCP1-CTF / Src / PKCδ trimer. Alternatively, phospho (p) -CDCP1-CTF / Src / PKCδ trimer may homodimerize or heterodimerize with β1 integrin, for example, which can initiate signaling via SRC and PKCδ.

[0107] Activated phospho (p) -CDCP1-CTF / Src / PKCδ trimeric complex is capable of crosstalk with the cancer surfaceome to modulate intracellular signaling. For example, heterodimerization of phospho (p) -CDCP1-CTF / Src / PKCδ with HER2 can activate PI3K / AKT and / or ERK signaling. Heterodimerization of phospho (p) -CDCP1-CTF / Src / PKCδ trimeric with EGFR can also facilitate nuclear translocation of E-cadherin to the nucleus.

[0108] CDCP1 activity intersects with key metabolic pathways in cancer cells. For instance, in triple-negative breast cancer (TNBC) cells, CDCP1 has been shown to bind to acyl Coenzyme A (CoA) -synthetase ligase (ACSL) , inhibiting its synthesis of acyl-CoA from the combination of fatty acids and CoA, thereby promoting increased fatty acid oxidation in the mitochondria to fuel oxidative phosphorylation. In mutant KRAS colorectal cancer (mKRAS CRC) cells, CDCP1 promotes switching of glucose metabolism to the oxidative pentose phosphate pathway.

[0109] CDCP1 has been shown to be upregulated to high expression levels in many malignancies. Exemplary malignancies include thyroid cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, urothelial cancer, prostate cancer, stomach cancer, carcinoids, breast cancer, ovarian cancer, liver cancer, gliomas, lung cancer, cervical cancer, endometrial cancer, renal cancer, and testis cancer. Elevated CDCP1 expression is associated with poorer prognosis, particularly in pancreatic cancer, suggesting it may functionally contribute to disease progression. CDCP1 antibody moiety

[0110] In some aspects, provided herein is a CDCP1 antibody moiety. In some embodiments, provided herein is an antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a scFv antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a Fab antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a VHH antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a humanized CDCP1 antibody moiety.

[0111] In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 1, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 2, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 3. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 4, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 5, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 6.

[0112] In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 7, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 8, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 9. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 10, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 11, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 12.

[0113] In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 13, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 14, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 15. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 16, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 17, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 18.

[0114] In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 19, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 20, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 21. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 22, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 23, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 24.

[0115] In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 25, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 26, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 27. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 28, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 29, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 30.

[0116] In some embodiments, provided herein is an antibody agent comprising a first CDCP1 antibody moiety and a second CDCP1 antibody moiety. In some embodiments, the first CDCP1 antibody moiety and the second CDCP1 antibody moiety target and bind to the same portion of CDCP1. In some embodiments, the first CDCP1 antibody moiety and the second CDCP1 antibody moiety target and bind to different parts of CDCP1. In some embodiments, the antibody agent is a biparatopic anti-CDCP1 antibody agent. In some embodiments, the biparatopic anti-CDCP1 antibody agent is a multispecific antibody agent. In some embodiments, the biparatopic anti-CDCP1 antibody agent also comprises an anti-CD3 antibody moiety. In some embodiments, the biparatopic anti-CDCP1 antibody agent also comprises an anti-CD3 antibody moiety and an anti-4-1BB antibody moiety.

[0117] In some embodiments, there is provided an anti-CDCP1 antibody agent comprising an anti-CDCP1 antibody moiety comprising a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein: the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 3, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 4, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 5, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 6, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs. In some embodiments, the antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein: a heavy chain (HC) -CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 31, 54, 55, 56, 57, 58 or 59, and a light chain (LC) -CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32, 60, 61, or 62. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 31, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 32. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 55, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 56, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 62. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61. In some embodiments, the antibody moiety is an antibody or antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the antibody moiety is a full-length antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a bispecific antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a single-chain Fv (scFv) fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab’ fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a F (ab’) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is an Fv fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a disulfide-stabilized Fv fragment (dsFv) , In some embodiments, the antibody moiety is a (dsFv) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fv fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a tribody. In some embodiments, the antibody moiety is a tetrabody. In some embodiments, the antibody moiety is humanized. In some embodiments, the antibody moiety comprises an Fc fragment. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG1. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG2. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG3. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG4. In some embodiments, the Fc fragment is from IgA. In some embodiments, the Fc fragment is from IgD. In some embodiments, the Fc fragment is from IgE. In some embodiments, the Fc fragment is from IgM. In some embodiments, the Fc fragment has an enhanced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the Fc fragment has a reduced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 3%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 4%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 5%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 10%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 20%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 30%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 40%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 50%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 60%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 70%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 75%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 80%. In some embodiments, the internalization rate is assessed at 4 hours via flow cytometry in the presence of MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent binds to a human wildtype CDCP1 with a KD of no more than 5x10-8. In some embodiments, the KD is assessed via surface plasmon resonance (SPR) . In some embodiments, the antibody agent comprises a second antibody moiety that binds to a second antigen. In some embodiments, the second antigen is different from CDCP1. In some embodiments, the second antigen is CD3. In some embodiments, the antibody agent comprises a third antibody moiety that binds to a third antigen. In some embodiments, the third antibody moiety is 4-1BB.

[0118] In some embodiments, there is provided an anti-CDCP1 antibody agent comprising an anti-CDCP1 antibody moiety comprising a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein: the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 7, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 8, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 10, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs. In some embodiments, the antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein: a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33, 72, 73, 74 or 75, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 34, 76, 77, 78 or 79. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 33, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 34. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 79. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 74, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 77. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78. In some embodiments, the antibody moiety is an antibody or antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the antibody moiety is a full-length antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a bispecific antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a single-chain Fv (scFv) fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab’ fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a F (ab’) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is an Fv fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a disulfide-stabilized Fv fragment (dsFv) , In some embodiments, the antibody moiety is a (dsFv) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fv fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a tribody. In some embodiments, the antibody moiety is a tetrabody. In some embodiments, the antibody moiety is humanized. In some embodiments, the antibody moiety comprises an Fc fragment. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG1. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG2. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG3. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG4. In some embodiments, the Fc fragment is from IgA. In some embodiments, the Fc fragment is from IgD. In some embodiments, the Fc fragment is from IgE. In some embodiments, the Fc fragment is from IgM. In some embodiments, the Fc fragment has an enhanced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the Fc fragment has a reduced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 3%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 4%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 5%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 10%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 20%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 30%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 40%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 50%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 60%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 70%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 75%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 80%. In some embodiments, the internalization rate is assessed at 4 hours via flow cytometry in the presence of MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent binds to a human wildtype CDCP1 with a KD of no more than 5x10-8. In some embodiments, the KD is assessed via surface plasmon resonance (SPR) . In some embodiments, the antibody agent comprises a second antibody moiety that binds to a second antigen. In some embodiments, the second antigen is different from CDCP1.

[0119] In some embodiments, there is provided an anti-CDCP1 antibody agent comprising an anti-CDCP1 antibody moiety comprising a heavy chain variable region (VH) . In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent additionally comprises a light chain variable region (VL) . In some embodiments, the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21. In some embodiments, VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs. In some embodiments, the antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein: a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 37, 63, 64, 65, 66, 67 or 68, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 38, 69, or 70 or 71. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 37, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 38. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 64, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 66, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70. In some embodiments, the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69. In some embodiments, the antibody moiety is an antibody or antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the antibody moiety is a full-length antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a bispecific antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a single-chain Fv (scFv) fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab’ fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a F (ab’) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is an Fv fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a disulfide-stabilized Fv fragment (dsFv) , In some embodiments, the antibody moiety is a (dsFv) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fv fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a tribody. In some embodiments, the antibody moiety is a tetrabody. In some embodiments, the antibody moiety is humanized. In some embodiments, the antibody moiety comprises an Fc fragment. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG1. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG2. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG3. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG4. In some embodiments, the Fc fragment is from IgA. In some embodiments, the Fc fragment is from IgD. In some embodiments, the Fc fragment is from IgE. In some embodiments, the Fc fragment is from IgM. In some embodiments, the Fc fragment has an enhanced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the Fc fragment has a reduced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 3%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 4%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 5%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 10%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 20%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of no more than 50%. In some embodiments, the internalization rate is assessed at 4 hours via flow cytometry in the presence of MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent binds to a human wildtype CDCP1 with a KD of no more than 5x10-8. In some embodiments, the KD is assessed via surface plasmon resonance (SPR) . In some embodiments, the antibody agent comprises a second antibody moiety that binds to a second antigen. In some embodiments, the second antigen is different from CDCP1.

[0120] In some embodiments, there is provided an anti-CDCP1 antibody agent comprising an anti-CDCP1 antibody moiety comprising a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 15, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs. In some embodiments, the antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein: a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in SEQ ID NO: 35, , and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in SEQ ID NO: 36. In some embodiments, the antibody moiety is an antibody or antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the antibody moiety is a full-length antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a bispecific antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a single-chain Fv (scFv) fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab’ fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a F (ab’) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is an Fv fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a disulfide-stabilized Fv fragment (dsFv) , In some embodiments, the antibody moiety is a (dsFv) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fv fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a tribody. In some embodiments, the antibody moiety is a tetrabody. In some embodiments, the antibody moiety is humanized. In some embodiments, the antibody moiety comprises an Fc fragment. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG1. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG2. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG3. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG4. In some embodiments, the Fc fragment is from IgA. In some embodiments, the Fc fragment is from IgD. In some embodiments, the Fc fragment is from IgE. In some embodiments, the Fc fragment is from IgM. In some embodiments, the Fc fragment has an enhanced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the Fc fragment has a reduced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the antibody agent binds to a human wildtype CDCP1 with a KD of no more than 5x10-8. In some embodiments, the KD is assessed via surface plasmon resonance (SPR) . In some embodiments, the antibody agent comprises a second antibody moiety that binds to a second antigen. In some embodiments, the second antigen is different from CDCP1.

[0121] In some embodiments, there is provided an anti-CDCP1 antibody agent comprising an anti-CDCP1 antibody moiety comprising a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 27, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs. In some embodiments, the antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein: a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in SEQ ID NO: 39, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in SEQ ID NO: 40. In some embodiments, the antibody moiety is an antibody or antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the antibody moiety is a full-length antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a bispecific antibody. In some embodiments, the antibody moiety is a single-chain Fv (scFv) fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fab’ fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a F (ab’) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is an Fv fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a disulfide-stabilized Fv fragment (dsFv) , In some embodiments, the antibody moiety is a (dsFv) 2 fragment. In some embodiments, the antibody moiety is a Fv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fc fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a scFv-Fv fusion. In some embodiments, the antibody moiety is a tribody. In some embodiments, the antibody moiety is a tetrabody. In some embodiments, the antibody moiety is humanized. In some embodiments, the antibody moiety comprises an Fc fragment. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG1. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG2. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG3. In some embodiments, the Fc fragment is from IgG4. In some embodiments, the Fc fragment is from IgA. In some embodiments, the Fc fragment is from IgD. In some embodiments, the Fc fragment is from IgE. In some embodiments, the Fc fragment is from IgM. In some embodiments, the Fc fragment has an enhanced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the Fc fragment has a reduced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 3%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 4%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 5%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 10%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 20%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 30%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 40%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 50%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 60%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 70%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 75%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 80%. In some embodiments, the internalization rate is assessed at 4 hours via flow cytometry in the presence of MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent binds to a human wildtype CDCP1 with a KD of no more than 5x10-8. In some embodiments, the KD is assessed via surface plasmon resonance (SPR) . In some embodiments, the antibody agent comprises a second antibody moiety that binds to a second antigen. In some embodiments, the second antigen is different from CDCP1.

[0122] In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 0.5 nM against MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 0.25 nM against MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 0.1 nM against MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 0.05 nM against MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 0.025 nM against MDA-MB-231. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 0.001 nM against MDA-MB-231.

[0123] In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 500 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 250 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 100 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 80 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 60 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 50 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 25 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 10 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 1 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 0.1 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 0.05 nM against PC-3. In some embodiments, the antibody agent has a cytotoxicity EC50 of no more than about 0.01 nM against PC-3. a) Antibody affinity

[0124] Binding specificity of the antibody moieties can be determined experimentally by methods known in the art. Such methods comprise, but are not limited to Western blots, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIACORETM -tests and peptide scans.

[0125] In some embodiments, the KD of the binding between the antibody moiety and CDCP1 is about 10-8-M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-9 M, about 10-9 M to about 10-10 M, about 10-10 M to about 10-11 M, about 10-11 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-12 M, about 10-9 M to about 10-12 M, about 10-10 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-11 M, about 10-9 M to about 10-11 M, or about 10-8 M to about 10-10 M. In some embodiments, the KD of the binding between the antibody moiety and CDCP1 is stronger than about any one of 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, or 10-12 M. In some embodiments, the KD of the binding between the antibody moiety and CDCP1 is no more than 5x10-8 M. In some embodiments, the CDCP1 is a human CDCP1.

[0126] In some embodiments, the Kon of the binding between the antibody moiety and CDCP1 is about 103 M-1s-1 to about 108 M-1s-1, about 103 M-1s-1 to about 104 M-1s-1, about 104 M-1s-1 to about 105 M-1s-1, about 105 M-1s-1 to about 106 M-1s-1, about 106 M-1s-1 to about 107 M-1s-1, or about 107 M-1s-1 to about 108 M-1s-1. In some embodiments, the Kon of the binding between the antibody moiety and CDCP1 is about 103 M-1s-1 to about 105 M-1s-1, about 104 M-1s-1 to about 106 M-1s-1, about 105 M-1s-1 to about 107 M-1s-1, about 106 M-1s-1 to about 108 M-1s-1, about 104 M-1s-1 to about 107 M-1s-1, or about 105 M-1s-1 to about 108 M-1s-1. In some embodiments, the Kon of the binding between the antibody moiety and CDCP1 is no more than about any one of 103 M-1s-1, 104 M-1s-1, 105 M-1s-1, 106 M-1s-1, 107 M-1s-1 or 108 M-1s-1. In some embodiments, CDCP1 is human CDCP1.

[0127] In some embodiments, the Koff of the binding between the antibody moiety and CDCP1 is about 1 s-1 to about 10-6 s-1, about 1 s-1 to about 10-2 s-1, about 10-2 s-1 to about 10-3 s-1, about 10-3 s-1 to about 10-4 s-1, about 10-4 s-1 to about 10-5 s-1, about 10-5 s-1 to about 10-6 s-1, about 1 s-1 to about 10-5 s-1, about 10-2 s-1 to about 10-6 s-1, about 10-3 s-1 to about 10-6 s-1, about 10-4 s-1 to about 10-6 s-1, about 10-2 s-1 to about 10-5 s-1, or about 10-3 s-1 to about 10-5 s-1. In some embodiments, the Koff of the binding between the antibody moiety and CDCP1 is at least about any one of 1 s-1, 10-2 s-1, 10-3 s-1, 10-4 s-1, 10-5 s-1 or 10-6 s-1. In some embodiments, CDCP1 is human CDCP1.

[0128] In some embodiments, the binding affinity of the anti-CDCP1 antibody moiety or anti-CDCP1 antibody agent are higher (for example, has a smaller KD value) than an existing anti-CDCP1 antibody (e.g., anti-human CDCP1 antibody, e.g., CUB4) . b) Internalization rate

[0129] In some embodiments, the antibody agent is capable of being internalized by CDCP1-expressing cells. In some embodiments, internalization of the antibody agent follows binding of the anti-CDCP1 antibody moiety comprised in the antibody agent to CDCP1 on the CDCP1-expressing cells. Internalization rate defines the proportion of CDCP1-expressing cells that internalize the antibody agent following binding of the anti-CDCP1 moiety to CDCP1 on the CDCP1-expressing cells. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 3%, at least 4%, at least 5%, at least 10%, at least 20%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, or at least 80%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 40%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of at least 60%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of no more than 60%, 50%, 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, or 5%. In some embodiments, the antibody has an internalization rate of no more than 20%. In some embodiments, the antibody has an internalization rate of no more than 10%. In some embodiments, the antibody agent has an internalization rate of no more than 5%. In some embodiments, the internalization rate is assessed at 4 hours via flow cytometry. In some embodiments, the internalization rate is assessed using MDA-MB-231 cells. Multispecific antibody agents

[0130] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent is a multispecific (e.g., trispecific) antibody agent. In some embodiments, the antibody agent comprises a second binding moiety (e.g., a second antibody moiety) that targets a second antigen. In some embodiments, the antibody agent comprises a third binding moiety (e.g., a third antibody moiety) that targets a third antigen. The second and / or the third antigen can be any antigen.

[0131] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a bispecific antibody comprising a first antibody moiety that binds to CDCP1, a second antibody moiety that binds to CD3.

[0132] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a first antibody moiety that binds to CDCP1, a second antibody moiety that binds to CD3, and a third antibody moiety that binds to 4-1BB.

[0133] In some embodiments, the multispecific antibody agents are tetraspecific antibody agents comprising an anti-CDCP1 antibody moiety, an anti-CD3 antibody moiety, an anti-4-1BB antibody moiety, and an antibody moiety targeting a tumor-associated antigen (TAA) .

[0134] In some embodiments, a multispecific antibody provided herein has a multispecific antibody format that is advantageous for reduced toxicity, increased cell killing, increased internalization, reduced off-target effects, increased binding affinity, or any combination thereof. In some embodiments, a multispecific antibody agent provided herein has improved ability to target CDCP1-positive cancer cells. In some embodiments, a multispecific antibody agent provided herein is advantageous for treating an individual with a CDCP1-positive cancer.

[0135] In some embodiments, the multispecific antibody agent provided herein comprises a first anti-CDCP1 antibody domain, an anti-CD3 antibody domain, and a second anti-CDCP1 antibody domain. In some embodiments, the multispecific antibody agent provided herein comprises a first anti-CDCP1 antibody domain, an anti-CD3 antibody domain, a second anti-CDCP1 antibody domain, and an anti-4-1BB antibody domain. In some embodiments, the anti-4-1BB antibody domain is a VHH domain. In some embodiments, the anti-CD3 antibody domain is partially sterically blocked by the first or the second anti-CDCP1 antibody domain. In some embodiments, a multispecific antibody agent provided herein comprises an antibody structure as shown in FIG. 3.

[0136] In some embodiments, multispecific (e.g., trispecific) antibody agents provided herein have increased efficacy, increased targeting efficiency, decreased off-target effects, and / or other advantages for treating CDCP1-positive cancers compared to other antibody agents.

[0137] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a VL1-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) ; a second polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH1-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , a first Fc fragment, and a first 4-1BB binding moiety; a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a third anti-CDCP1 moiety comprising a VH2-CDCP1, a second heavy chain constant region (CH-2) , a CD3 antibody moiety (e.g., a scFv) comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB binding moiety; and a fourth polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a fourth anti-CDCP1 moiety comprising VL2-CDCP1 and a second light chain constant region (CL-2) , wherein the first anti-CDCP1 moiety and the second anti-CDCP1 moiety form a first anti-CDCP1 antibody binding domain, and the third anti-CDCP1 moiety and the fourth anti-CDCP1 moiety form a second anti-CDCP1 antibody binding domain.

[0138] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a VL-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) ; a second polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , a first Fc fragment, and a first 4-1BB binding moiety; and a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a third anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 moiety comprising a VHH-CDCP1, a second heavy chain constant region (CH-2) , a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB binding moiety.

[0139] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH1-CDCP1 and a VL1-CDCP1, a first Fc fragment, and a first 4-1BB binding moiety; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH1-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB binding moiety; and a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising VL-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) . In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH2-CDCP1 and the VL2-CDCP1. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL2-CDCP1 and the VH2-CDCP1.

[0140] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a first anti-CDCP1 scFv comprising a VH1-CDCP1 and a VL1-CDCP1, a first Fc fragment, and a first 4-1BB binding moiety; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH2-CDCP1 and a VL2-CDCP1, a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB binding moiety. In some embodiments, the first anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH1-CDCP1 and the VL1-CDCP1. In some embodiments, the first anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL1-CDCP1 and the VH1-CDCP1. In some embodiments, the second anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH2-CDCP1 and the VL2-CDCP1. In some embodiments, the second anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL2-CDCP1 and the VH2-CDCP1.

[0141] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, a first Fc fragment, and a first 4-1BB binding moiety; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 moiety comprising a VHH-CDCP1, a second heavy chain constant region (CH-2) , a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, the second Fc fragment, and a second 4-1BB binding moiety. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1.

[0142] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 single domain antibody comprising a V HH-CDCP1 , a first Fc fragment, and a first 4-1BB binding moiety; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB binding moiety; and a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a third anti-CDCP1 moiety (a second anti-CDCP1 moiety of the second CDCP1 domain) comprising VL-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) .

[0143] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 single domain antibody comprising a VHH-CDCP1, a first Fc fragment, and a first 4-1BB binding moiety; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB binding moiety. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1.

[0144] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, an anti-CDCP1 moiety comprising a first anti-CDCP1 single domain antibody comprising a VHH-CDCP1, a first Fc fragment, and a first 4-1BB binding moiety; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 moiety comprising a VHH-CDCP1, a second heavy chain constant region (CH-2) , a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, the second Fc fragment, and a second 4-1BB binding moiety. In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety and the second 4-1BB moiety are a single domain antibody comprising a VHH-41BB.

[0145] In some embodiments, provided herein is a bispecific antibody with a “Y-body” antibody structure. In some embodiments, an antibody provided herein comprises a first anti-CDCP1 moiety, a second anti-CDCP1 moiety, an anti-CD3 moiety, and a knob-into-hole Fc fragment.

[0146] In some embodiments, there is provided a bispecific antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a VL and a first light chain constant region (CL-1) ; a second polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , and a first Fc fragment; a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a third anti-CDCP1 moiety comprising a VH-CDCP1, a second heavy chain constant region (CH-2) , a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, and a second Fc fragment; and a fourth polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a fourth anti-CDCP1 moiety comprising VL-CDCP12 and a second light chain constant region (CL-2) , wherein the first anti-CDCP1 moiety and the second anti-CDCP1 moiety form a first anti-CDCP1 antibody binding domain, and the third anti-CDCP1 moiety and the fourth anti-CDCP1 moiety form a second anti-CDCP1 antibody binding domain.

[0147] In some embodiments, there is provided a bispecific antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a VL-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) ; a second polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH-CDCP1, and a first heavy chain constant region (CH-1) , a first Fc fragment; and a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a third anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, and a second Fc fragment, wherein the first anti-CDCP1 moiety and the second anti-CDCP1 moiety form a first anti-CDCP1 antibody binding domain. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1.

[0148] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, and a first Fc fragment; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, and a second Fc fragment; and a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising VL-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) . In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1.

[0149] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a first anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, and a first Fc fragment; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, and a second Fc fragment. In some embodiments, the first anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the first anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1. In some embodiments, the second anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the second anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1.

[0150] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a VL1-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) ; a second polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH1-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , a first Fc fragment, and a first 4-1BB binding moiety; and a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a third anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH2-CDCP1 and a VL2-CDCP1, a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB binding moiety, wherein the first anti-CDCP1 moiety and the second anti-CDCP1 moiety form a first anti-CDCP1 antibody binding domain. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH2-CDCP1 and the VL2-CDCP1. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL2-CDCP1 and the VH2-CDCP1.

[0151] In some embodiments, the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 are identical or comprise the same CDRs. In some embodiments, the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 are identical or comprise the same CDRs. In some embodiments, the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 are distinct. In some embodiments, the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 are distinct.

[0152] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0153] In some embodiments, the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 are distinct. In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0154] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 64, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0155] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 66, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0156] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0157] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0158] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0159] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0160] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 55, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0161] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 56, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0162] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0163] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0164] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0165] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0166] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0167] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0168] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0169] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 79, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0170] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 74, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0171] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0172] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0173] In some embodiments, one or both of the VH1-CDCP1 and VH2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity; and one or both of the VL1-CDCP1 and VL2-CDCP1 comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0174] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a third polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, and a fourth polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0175] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 106, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a third polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 107, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, and a fourth polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 107, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0176] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 108, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a third polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, and a fourth polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0177] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 111, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 112, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a third polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, and a fourth polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0178] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a third polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, and a fourth polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity.

[0179] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent comprises a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 117, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, a third polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity, and a fourth polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, or a variant comprising an amino acid sequence with at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%sequence identity. Second binding moiety (e.g., antibody moiety) and / or third binding moiety (e.g. third antibody moiety)

[0180] The present application provides multispecific antibody agents that further comprise a second and / or a third binding moiety. The second and / or the third binding moiety that bind to a second or third antigen described herein can be any antigen. In some embodiments, the second antigen is CD3. In some embodiments, the second antigen is CD3, and the third antigen is 4-1BB.

[0181] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent is a trispecific antibody that that further comprises a CD3 antibody moiety and a 4-1BB antibody moiety.

[0182] The multispecific antibody agents described herein can have any formats as far as they can bind to the antigens that they target.

[0183] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a VL1-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) ; a second polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH1-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , a first Fc fragment, and a first 4-1BB antibody moiety; a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a third anti-CDCP1 moiety comprising a VH2-CDCP1, a second heavy chain constant region (CH-2) , a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB antibody moiety; and a fourth polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a fourth anti-CDCP1 moiety comprising VL2-CDCP1 and a second light chain constant region (CL-2) , wherein the first anti-CDCP1 moiety and the second anti-CDCP1 moiety form a first anti-CDCP1 antibody binding domain, and the third anti-CDCP1 moiety and the fourth anti-CDCP1 moiety form a second anti-CDCP1 antibody binding domain.

[0184] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a VL-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) ; a second polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , a first Fc fragment, and a first 4-1BB antibody moiety; and a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a third anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB antibody moiety, wherein the first anti-CDCP1 moiety and the second anti-CDCP1 moiety form a first anti-CDCP1 antibody binding domain. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1.

[0185] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, a first Fc fragment, and a first 4-1BB antibody moiety; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising a VH-CDCP1, a first heavy chain constant region (CH-1) , a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB antibody moiety; and a third polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising VL-CDCP1 and a first light chain constant region (CL-1) . In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1.

[0186] In some embodiments, there is provided an antibody comprising a first polypeptide chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a first anti-CDCP1 moiety comprising a first anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, a first Fc fragment, and a first 4-1BB antibody moiety; a second polypeptide comprising, from N-terminus to C-terminus, a second anti-CDCP1 moiety comprising an anti-CDCP1 scFv comprising a VH-CDCP1 and a VL-CDCP1, a CD3 antibody moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB antibody moiety. In some embodiments, the first anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the first anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1. In some embodiments, the second anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VH-CDCP1 and the VL-CDCP1. In some embodiments, the second anti-CDCP1 scFv comprises from N-terminus to C-terminus, the VL-CDCP1 and the VH-CDCP1.

[0187] In some embodiments, the CD3 moiety is an scFv. CD3 antibody moieties

[0188] The CD3 antibody moieties can be any antibody moieties that bind to CD3 (e.g., human CD3) . The present application further provides CD3 antibody moieties described herein.

[0189] In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv moiety comprising a VH-CD3 and a VL-CD3. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a single domain antibody (e.g., a VHH) . In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a single-chain Fab (scFab) .

[0190] some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a variable antibody moiety (e.g., a VH or a VL) of a CD3 antibody domain. In some embodiments, the CD3 antibody domain comprises a Fab, a diabody, a dsFv or a knob-into-hole Fv, wherein the Fab, diabody, dsFv or KIH Fv binds to CD3.

[0191] In some aspects, provided herein is a multispecific antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety and a CD3 antibody moiety, wherein the CDCP1 antibody moiety is selected from the group consisting of: a scFv antibody moiety, a Fab antibody moiety, and a VHH antibody moiety, and wherein the CD3 antibody moiety is selected from the group consisting of: a scFv antibody moiety, a Fab antibody moiety, and a VHH antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a scFv antibody moiety and the CD3 antibody moiety is a scFv antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a scFv antibody moiety and the CD3 antibody moiety is a Fab antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a scFv antibody moiety and the CD3 antibody moiety is a VHH moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a Fab antibody moiety and the CD3 antibody moiety is a scFv antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a Fab antibody moiety and the CD3 antibody moiety is a Fab antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a Fab antibody moiety and the CD3 antibody moiety is a VHH antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a VHH antibody moiety and the CD3 antibody moiety is an scFv antibody moiety. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety is a VHH antibody moiety and the CD3 antibody moiety is a Fab antibody moiety.

[0192] In some embodiments, the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a CD3 scFv comprising a CD3 heavy chain variable region (VH-CD3) . In some embodiments, the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a CD3 light chain variable region (VL-CD3) . In some embodiments, the VH-CD3 and VL-CD3 are linked via a linker ( “CD3 scFv linker” ) . In some embodiments, the CD3 scFv linker is a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker is a GS linker. In some embodiments, the peptide linker has a length of about 3-25 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has a length of about 5 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has a length of about 10 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has a length of about 15 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has a length of about 20 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has a length of about 25 amino acids. In some embodiments, the linker has a sequence of SEQ ID NO: 101.

[0193] In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-7 M to about 10-12 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-8 M to about 10-11 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-7 M to about 10-11 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-9 M to about 10-12 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-10 M to about 10-12 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-7 M to about 10-9 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-9 M to about 10-11 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-8 M to about 10-12 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-7 M to about 10-8 M, about 10-8 M to about 10-9 M, about 10-9 M to about 10-10 M, about 10-10 M to about 10-11 M, or about 10-11 M to about 10-12 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-7 M to about 10-10 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-8 M to about 10-9 M. In some embodiments, the CD3 antibody moiety binds to CD3 with a KD of about 10-8 mM to about 10-9 mM, about 10-9 mM to about 10-10 mM, about 10-10 mM to about 10-11 mM, about 10-11 mM to about 10-12 mM, about 10-8 mM to about 10-12 mM, about 10-9 mM to about 10-12 mM, about 10-10 mM to about 10-12 mM, about 10-8 mM to about 10-11 mM, about 10-9 mM to about 10-11 mM, or about 10-8 mM to about 10-10 mM. In some embodiments, the CD3 antibody domain binds to CD3 with a KD of that is about 10-8 mM to about 10-12 mM, about 10-8 mM to about 10-9 mM, about 10-9 mM to about 10-10 mM, about 10-10 mM to about 10-11 mM, about 10-11 mM to about 10-12 mM, about 10-8 mM to about 10-12 mM, about 10-9 mM to about 10-12 mM, about 10-10 mM to about 10-12 mM, about 10-8 mM to about 10-11 mM, about 10-9 mM to about 10-11 mM, or about 10-8 mM to about 10-10 mM. In some embodiments, the CD3 is a human CD3.

[0194] In some aspects, herein is provided an antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety, wherein the antibody agent further comprises a CD3 antibody moiety comprising a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein the VH comprises: a) a heavy chain CDR1 (HC-CDR1) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 45, b) a HC-CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 46, and c) a HC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 47 or 119, and wherein the VL-3 comprises: a) a light chain CDR1 (LC-CDR1) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 48, b) a LC-CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 49, and c) a LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 50 or 127. In some aspects, herein is provided an antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety, wherein the antibody agent further comprises a CD3 antibody moiety comprising a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein the VH comprises: a) a heavy chain CDR1 (HC-CDR1) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 45, b) a HC-CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 46, and c) a HC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 47, and wherein the VL-3 comprises: a) a light chain CDR1 (LC-CDR1) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 48, b) a LC-CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 49, and c) a LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 50. In some aspects, herein is provided an antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety, wherein the antibody agent further comprises a CD3 antibody moiety comprising a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein the VH comprises: a) a heavy chain CDR1 (HC-CDR1) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 45, b) a HC-CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 46, and c) a HC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 119, and wherein the VL-3 comprises: a) a light chain CDR1 (LC-CDR1) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 48, b) a LC-CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 49, and c) a LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 127.

[0195] In some embodiments, provided herein is an antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety, wherein the antibody agent further comprises a CD3 antibody moiety comprising a heavy chain variable region (VH) . In some embodiments, the VH comprises: a) a heavy chain CDR1 (HC-CDR1) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 45, b) a HC-CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 46, and c) a HC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 47 or 119.

[0196] In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 51. In some embodiments, the CD3 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 52. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 53.

[0197] In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 123. In some embodiments, the CD3 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 124. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 125, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 125.

[0198] In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 120, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 120. In some embodiments, the CD3 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 121, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 121. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 122, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 122.

[0199] In some embodiments, provided herein is a multispecific antibody comprising a CDCP1 antibody moiety and a CD3 antibody moiety, wherein the CDCP1 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 1, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 2, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 3, and wherein the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 45, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 46, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 47 or 119. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 4, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 5, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 6. In some embodiments, the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 48, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 49, and a LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 50 or SEQ ID NO: 127.

[0200] In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 7, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 8, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 9, and the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 45, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 46, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 47 or 119. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 10, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 11, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 12. In some embodiments, the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 48, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 49, and a LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 50 or SEQ ID NO: 127.

[0201] In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 13, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 14, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 15, and the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 45, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 46, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 47 or 119. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 16, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 17, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 18. In some embodiments, the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 48, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 49, and a LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 50 or SEQ ID NO: 127.

[0202] In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 19, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 20, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 21, and the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 45, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 46, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 47 or 119. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 22, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 23, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 24. In some embodiments, the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 48, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 49, and a LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 50 or SEQ ID NO: 127.

[0203] In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety of the multispecific agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 25, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 26, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 27, and the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent comprises a VH comprising a HC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 45, a HC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 46, and a HC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 47 or 119. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 28, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 29, and a LC-CDR3 with a sequence of SEQ ID NO: 30. In some embodiments, the CD3 antibody moiety of the multispecific antibody agent additionally comprises a VL comprising a LC-CDR1 with a sequence of SEQ ID NO: 48, a LC-CDR2 with a sequence of SEQ ID NO: 49, and a LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 50 or SEQ ID NO: 127.

[0204] In some embodiments, provided herein is a multispecific antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety and a CD3 antibody moiety, wherein the CDCP1 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 31, 54, 55, 56, 57, 58 or 59, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 31, 54, 55, 56, 57, 58 or 59, and the CD3 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, 123 or 120, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 51, 123 or 120. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 32, 60, 61 or 62, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32, 60, 61 or 62. In some embodiments, the CD3 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, 124, or 121. or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 52, 124, or 121. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 53. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 125, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 125. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 122, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 122.

[0205] In some embodiments, provided herein is a multispecific antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety and a CD3 antibody moiety, wherein the CDCP1 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 33, 72, 73, 74 or 75, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 33, 72, 73, 74 or 75, and the CD3 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, 123 or 120, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 51, 123 or 120. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 32, 60, 61 or 62, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32, 60, 61 or 62. In some embodiments, the CD3 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, 124, or 121, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 52, 124, or 121. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 53. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 125, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 125. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 122, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 122.

[0206] In some embodiments, provided herein is a multispecific antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety and a CD3 antibody moiety, wherein the CDCP1 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 33, 72, 73, 74, or 75, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 33, 72, 73, 74 or 75, and the CD3 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, 123 or 120, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 51, 123 or 120. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 34, 76, 77, 78 or 79, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 34, 76, 77, 78 or 79. In some embodiments, the CD3 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, 124, or 121, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 52, 124, or 121. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 53. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 125, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 125. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 122, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 122.

[0207] In some embodiments, provided herein is a multispecific antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety and a CD3 antibody moiety, wherein the CDCP1 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 37, 63, 64, 65, 66, 67 or 68, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 37, 63, 64, 65, 66, 67 or 68, and the CD3 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, 123 or 120, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 51, 123 or 120. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence selected from any one of SEQ ID NOs: 38, 69, 70 or 71, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 38, 69, or 70 or 71. In some embodiments, the CD3 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, 124, or 121, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 52, 124, or 121. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 53. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 125, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 125. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 122, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 122.

[0208] In some embodiments, provided herein is a multispecific antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety and a CD3 antibody moiety, wherein the CDCP1 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 35, and the CD3 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, 123 or 120, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 51, 123 or 120. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 36. In some embodiments, the CD3 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, 124, or 121, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 52, 124, or 121. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 53. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 125, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 125. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 122, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 122.

[0209] In some embodiments, provided herein is a multispecific antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety and a CD3 antibody moiety, wherein the CDCP1 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 39, and the CD3 antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, 123 or 120, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 51, 123 or 120. In some embodiments, the CDCP1 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 40. In some embodiments, the CD3 antibody moiety additionally comprises a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, 124, or 121, or an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 52, 124, or 121. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 53. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 125, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 125. In some embodiments, the CD3 antibody moiety comprises a scFv comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 122, or comprising an amino acid sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 122.

[0210] In some embodiments, the CD3 VH comprises one or more engineered framework mutations. In some embodiments, the one or more engineered framework mutations comprise one or more amino acid substitutions in FR-H1, FR-H2, FR-H3, and / or FR-H4 of VH. In some embodiments, the VH comprises a G44C substitution. In some embodiments, the CD3 VL comprises one or more framework mutations. In some embodiments, the one or more framework mutations comprise one or more amino acid substitutions in FR-L1, FR-L2, FR-L3, and / or FR-L4 of VL-CD3. In some embodiments, the scFv comprises a disulfide bond between FR-H2 and FR-L4. In some embodiments, the VL-CD3 comprises a G102C substitution. In some embodiments, the VH-CD3 comprises a G44C substitution and VL-CD3 comprises a G102C substitution. In some embodiments, the VH-CD3comprises a FR-H1 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 128, a FR-H2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 136, a FR-H3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 130, and a FR-H4 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 131. In some embodiments, the VL-CD3comprises a FR-L1 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 132, a FR-L2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 133, a FR-L3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, and a FR-L4 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 137. In some embodiments, the VH-CD3 comprises a G44C substitution and VL-CD3 comprises a G102C substitution. In some embodiments, the VH-CD3comprises a FR-H1 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 128, a FR-H2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 129, a FR-H3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 130, and a FR-H4 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 131. In some embodiments, the VL-CD3comprises a FR-L1 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 132, a FR-L2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 133, a FR-L3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, and a FR-L4 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 135. 4-1BB antibody moieties

[0211] The 4-1BB antibody moiety described herein can be any antibody moiety that binds to 4-1BB (e.g., human 4-1BB) .

[0212] In some embodiments, provided herein is a multispecific (e.g., trispecific) antibody agent comprising a CDCP1 antibody moiety, a 4-1BB antibody moiety, and a third antibody moiety. In some embodiments, the third antibody moiety is a CD3 antibody moiety. In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety is a scFv antibody moiety. In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety is a Fab antibody moiety. In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety is a VHH antibody moiety.

[0213] In some embodiments, the multispecific (e.g., trispecific) antibody agent described herein comprises a 4-1BB binding domain. In some embodiments, the 4-1BB binding domain is a VHH domain. In some embodiments, the 4-1BB binding domain is a scFv domain. In some embodiments, the 4-1BB binding domain is a Fab domain.

[0214] In some embodiments, the antibody agent described herein comprises a first 4-1BB antibody moiety and a second 4-1BB antibody moiety. In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety and the second 4-1BB antibody moiety target the same epitope of 4-1BB. In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety and the second 4-1BB antibody moiety target different epitopes of 4-1BB. In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety and / or second 4-1BB antibody moiety comprises a) an scFv, a single-domain antibody (sdAb) , or a single-chain Fab (scFab) , or b) a variable antibody moiety of a 4-1BB antibody domain comprising a Fab, a diabody, a dsFv or a knob-into-hole Fv, wherein the Fab, diabody, dsFv or KIH Fv binds to 4-1BB.

[0215] In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety or the 4-1BB antibody domain binds to 4-1BB with a KD of about 10-7 M to about 10-12 M. In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety or the 4-1BB antibody domain binds to 4-1BB with a KD of about 10-7 M to about 10-8 M, about 10-8 M to about 10-9 M, about 10-9 M to about 10-10 M, about 10-10 M to about 10-11 M, about 10-11 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-9 M, about 10-9 M to about 10-10 M, about 10-10 M to about 10-11 M, about 10-11 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-12 M, about 10-9 M to about 10-12 M, about 10-10 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-11 M, about 10-9 M to about 10-11 M, or about 10-8 M to about 10-10 M. In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety binds to 4-1BB with a KD of that is about 10-8 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-9 M, about 10-9 M to about 10-10 M, about 10-10 M to about 10-11 M, about 10-11 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-12 M, about 10-9 M to about 10-12 M, about 10-10 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-11 M, about 10-9 M to about 10-11 M, or about 10-8 M to about 10-10 M. In some embodiments, the 4-1BB antibody domain binds to 4-1BB with a KD of that is about 10-8 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-9 M, about 10-9 M to about 10-10 M, about 10-10 M to about 10-11 M, about 10-11 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-12 M, about 10-9 M to about 10-12 M, about 10-10 M to about 10-12 M, about 10-8 M to about 10-11 M, about 10-9 M to about 10-11 M, or about 10-8 M to about 10-10 M. In some embodiments, the 4-1BB is a human 4-1BB.

[0216] In some embodiments, one or both of the first 4-1BB antibody moiety and the second 4-1BB antibody moiety comprise a single domain antibody moiety comprising a) a CDR1 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 41, b) a CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 42, and c) a CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 43. In some embodiments, the single domain antibody moiety comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44. In some embodiments the first 4-1BB single domain antibody moiety and the second single domain antibody moiety each comprises a) a CDR1 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 41, b) a CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 42, and c) a CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 43. In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety and the second 4-1BB antibody moiety both comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44. In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety and the second 4-1BB antibody moiety both comprise a variant comprising at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to sequence identity to SEQ ID NO: 44.

[0217] In some embodiments, the antibody agent described herein comprises a first 4-1BB antibody moiety and a second 4-1BB antibody moiety, wherein the first 4-1BB antibody moiety and the second 4-1BB antibody moiety each comprises a single domain antibody moiety comprising a) a CDR1 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 41, a CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 42, and c) a CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 43. In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety and the second 4-1BB antibody moiety each comprises a single domain antibody moiety comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44. In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety and the second 4-1BB antibody moiety together comprise a 4-1BB binding VHH domain.

[0218] In some embodiments, provided herein is a multispecific (e.g., trispecific) antibody agent comprising a 4-1BB antibody moiety, wherein the 4-1BB antibody moiety is a VHH domain. In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety comprises a VH domain comprising a) a CDR1 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 41, b) a CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 42, and c) a CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 43. In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety comprises a VH domain comprising a sequence of SEQ ID NO: 44. In some embodiments, the 4-1BB antibody moiety comprises a VH domain comprising a sequence with at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 44.

[0219] In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety is fused to the first Fc fragment via a linker ( “the Fc-first 4-1BB linker” ) . In some embodiments, the second 4-1BB antibody moiety is fused to the second Fc fragment via a linker ( “the Fc-second 4-1BB linker” ) . In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety is fused to the first Fc fragment via a linker ( “the Fc-first 4-1BB linker” ) , and the second 4-1BB antibody moiety is fused to the second Fc fragment via a linker ( “the Fc-second 4-1BB linker” ) . In some embodiments, the Fc-first 4-1BB linker is a peptide linker. In some embodiments, the Fc-second 4-1BB linker is a peptide linker. In some embodiments, optionally, the Fc-first 4-1BB linker and the Fc-second 4-1BB linker both comprise a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker has 1-50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has 0-50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has 0-30 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has about 0-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-35, 35-40, 40-45, or 45-50 amino acids. Fc region

[0220] In some aspects, an antibody agent provided herein comprises a first Fc fragment and a second Fc fragment, wherein the first Fc fragment and the second Fc fragment comprises an Fc domain.

[0221] The term “Fc region, ” “Fc domain, ” “Fc domain” or “Fc” refers to a C-terminal non-antigen binding region of an immunoglobulin heavy chain that contains at least a portion of the constant region. The term includes native Fc regions and variant Fc regions. In some embodiments, a human IgG heavy chain Fc region extends from Cys226 to the carboxyl-terminus of the heavy chain. However, the C-terminal lysine (Lys447) of the Fc region may or may not be present, without affecting the structure or stability of the Fc region. Unless otherwise specified herein, numbering of amino acid residues in the IgG or Fc region is according to the EU numbering system for antibodies, also called the EU index, as described in Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.

[0222] In some embodiments, the Fc domain is selected from the group consisting of Fc fragments from IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, and combinations and hybrids thereof. In some embodiments, the Fc domain is an IgG Fc fragment, or a combination or hybrid thereof. In some embodiments, the Fc domain is an IgA Fc fragment, or a combination or hybrid thereof. In some embodiments, the Fc domain is an IgE Fc fragment, or a combination or hybrid thereof. In some embodiments, the Fc domain is an IgM Fc fragment, or a combination or hybrid thereof.

[0223] In some embodiments, the Fc domain is selected from the group consisting of Fc fragments from IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, and combinations and hybrids thereof. In some embodiments, the Fc domain is an IgG1 Fc fragment, or hybrid or combination thereof. In some embodiments, the Fc domain is an IgG2 Fc fragment, or hybrid or combination thereof. In some embodiments, the Fc domain is an IgG3 Fc fragment, or hybrid or combination thereof. In some embodiments, the Fc domain is an IgG4 Fc fragment, or hybrid or combination thereof.

[0224] In some embodiments, the Fc domain has an altered effector function as compared to a corresponding wildtype Fc domain. In some embodiments, the Fc domain has an enhanced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc domain. In some embodiments, the Fc fragment has a reduced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc domain.

[0225] In some embodiments, the first Fc fragment and the second Fc fragment comprise one mutation that promotes a “knob-into-hole” structure between the two Fc fragments. In some embodiments, the first Fc fragment comprises a T366W mutation, and the second Fc fragment comprises a T366S mutation, a L368A mutation, and a Y407V mutation. In some embodiments, the second Fc fragment comprises a T366W mutation, and the first Fc fragment comprises a T366S mutation, a L368A mutation, and a Y407V mutation.

[0226] In some embodiments, the Fc domain has a reduced effector function as compared to corresponding wildtype Fc domain (such as at least about 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, or 95%reduced effector function as measured by the level of antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) ) .

[0227] In some embodiments, the Fc domain is an IgG1 Fc domain. In some embodiments, the IgG1 Fc domain comprises a L234A mutation and / or a L235A mutation. In some embodiments the IgG1 Fc domain comprises an L235A mutation and / or a G237A mutation. In some embodiments, the Fc domain is an IgG2 or IgG4 Fc domain. In some embodiments, the Fc domain is an IgG4 Fc domain comprising a S228P, F234A, and / or a L235A mutation. In some embodiments, the Fc domain comprises a N297A mutation. In some embodiments, the Fc domain comprises a N297G mutation.

[0228] In some embodiments, one or more amino acid modifications may be introduced into the Fc region of the antibody moiety, thereby generating an Fc region variant. The Fc region variant may comprise a human Fc region sequence (e.g., a human IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 Fc region) comprising an amino acid modification (e.g. a substitution) at one or more amino acid positions.

[0229] In some embodiments, the Fc domain possesses some but not all effector functions, which make it a desirable candidate for applications in which the half-life of the antibody moiety in vivo is important yet certain effector functions (such as complement and ADCC) are unnecessary or deleterious. In vitro and / or in vivo cytotoxicity assays can be conducted to confirm the reduction / depletion of CDC and / or ADCC activities. For example, Fc receptor (FcR) binding assays can be conducted to ensure that the antibody lacks FcgR binding (hence likely lacking ADCC activity) , but retains FcRn binding ability. The primary cells for mediating ADCC, NK cells, express FcγRIII only, whereas monocytes express FcγRI, FcγRII and FcγRIII. FcR expression on hematopoietic cells is summarized in Table 2 on page 464 of Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991) . Non-limiting examples of in vitro assays to assess ADCC activity of a molecule of interest is described in U.S. Patent No. 5,500,362 (see, e.g. Hellstrom, I. et al. Proc. Nat’ l Acad. Sci. USA 83: 7059-7063 (1986) ) and Hellstrom, I et al., Proc. Nat’ l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502 (1985) ; 5, 821, 337 (See Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166: 1351-1361 (1987) ) . Alternatively, non-radioactive assays methods may be employed (see, for example, ACTITM non-radioactive cytotoxicity assay for flow cytometry (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; and CytoTox  non-radioactive cytotoxicity assay (Promega, Madison, WI) ) . Useful effector cells for such assays include peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and Natural Killer (NK) cells. Alternatively, or additionally, ADCC activity of the molecule of interest may be assessed in vivo, e.g., in an animal model such as that disclosed in Clynes et al. Proc. Nat’ l Acad. Sci. USA 95: 652-656 (1998) . C1q binding assays may also be carried out to confirm that the antibody is unable to bind C1q and hence lacks CDC activity. See, e.g., C1q and C3c binding ELISA in WO 2006 / 029879 and WO 2005 / 100402. To assess complement activation, a CDC assay may be performed (see, for example, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996) ; Cragg, M. S. et al., Blood 101: 1045-1052 (2003) ; and Cragg, M. S. and M. J. Glennie, Blood 103: 2738-2743 (2004) ) . FcRn binding and in vivo clearance / half-life determinations can also be performed using methods known in the art (see, e.g., Petkova, S. B. et al., Int’ l. Immunol. 18 (12) : 1759-1769 (2006) ) .

[0230] Antibodies with reduced effector function include those with substitution of one or more of Fc region residues 238, 265, 269, 270, 297, 327 and 329 (U.S. Patent No. 6,737,056) . Such Fc mutants include Fc mutants with substitutions at two or more of amino acid positions 265, 269, 270, 297 and 327, including the so-called “DANA” Fc mutant with substitution of residues 265 and 297 to alanine (US Patent No. 7, 332, 581) . In some embodiments, the Fc domain comprises a N297A mutation. In some embodiments, the Fc domain comprises a N297G mutation.

[0231] Certain antibody variants with improved or diminished binding to FcRs are described. (See, e.g., U.S. Patent No. 6,737,056; WO 2004 / 056312, and Shields et al., J. Biol. Chem. 9 (2) : 6591-6604 (2001) . )

[0232] In some embodiments, the antibody moiety comprises an Fc region with one or more amino acid substitutions which improve ADCC, e.g., substitutions at positions 298, 333, and / or 334 of the Fc region (EU numbering of residues) .

[0233] In some embodiments, alterations are made in the Fc region that result in altered (i.e., either improved or diminished) C1q binding and / or Complement Dependent Cytotoxicity (CDC) , e.g., as described in US Patent No. 6, 194, 551, WO 99 / 51642, and Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000) .

[0234] In some embodiments, the Fc domain has one or more mutations at Thr250, Met252, Ser254, The256, Thr307. Glu 380, Met428, His433, and / or Asn 434.

[0235] In some embodiments, the antibody moiety variant comprising a variant Fc region comprising one or more amino acid substitutions which alters half-life and / or changes binding to the neonatal Fc receptor (FcRn) . Antibodies with increased half-lives and improved binding to the neonatal Fc receptor (FcRn) , which is responsible for the transfer of maternal IgGs to the fetus (Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994) ) , are described in US2005 / 0014934A1 (Hinton et al. ) . Those antibodies comprise an Fc region with one or more substitutions therein which alters binding of the Fc region to FcRn. Such Fc variants include those with substitutions at one or more of Fc region residues, e.g., substitution of Fc region residue 434 (US Patent No. 7,371,826) .

[0236] See also Duncan &Winter, Nature 322: 738-40 (1988) ; U.S. Patent No. 5,648,260; U.S. Patent No. 5,624,821; and WO 94 / 29351 concerning other examples of Fc region variants. Linkers

[0237] In some embodiments, a multispecific antibody agent provided herein comprises one or more linkers. Suitable linkers include any linkers as described in the sections below. a. Between CD3 antibody moiety and CDCP1-antibody moiety

[0238] In some embodiments, the CD3 moiety of the antibody agent is fused with the second CDCP1 antibody moiety via a linker (the “CD3-2nd CDCP1 linker” ) . In some embodiments, the CD3-2nd CDCP1 linker is a peptide linker. In some embodiments, the CD3-2nd CDCP1 linker comprises a G4S linker (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser) . In some embodiments, the CD3-2nd CDCP1 linker comprises 1 repeat of the G4S linker. In some embodiments, the CD3-2nd CDCP1 linker comprises 2 repeats of the G4S linker. In some embodiments, the CD3-2nd CDCP1 linker comprises 3 repeats of the G4S linker. In some embodiments, the CD3-2nd CDCP1 linker comprises 3 or more repeats of the G4S linker. In some embodiments, the peptide linker comprises 0, at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 10, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, or at least 50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker comprises no greater than 3, no greater than 4, no greater than 5, no greater than 10, no greater than 15, no greater than 20, no greater than 25, no greater than 30, no greater than 35, no greater than 40, no greater than 45, or no greater than 50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker comprises a length of about 3-5, about 5-10, about 10-15, about 15-20, about 20-25, about 25-30, about 35-40, about 40-45, or about 45-50 amino acids. In some embodiments, the length of the linker modulates the binding affinity range of the CD3 antibody moiety. In some embodiments, the length of the linker modulates one or more characteristics of the antibody agent selected from: in vivo stability, cytotoxicity, activity range, CDCP1-dependent T cell activation, CDCP1-dependent CD3 activation, CDCP1-dependent 4-1BB activation, CDCP1-independent CD3 activation, CDCP1-independent 4-1BB activation, cytokine release, IFNγ release, and pharmacokinetics.

[0239] In some embodiments, the CD3 moiety of the antibody agent is not fused with the second CDCP1 antibody moiety via a linker. b. Between Fc and 4-1BB antibody moiety

[0240] In some embodiments, the first 4-1BB antibody moiety is fused to the first Fc fragment via a linker ( “the Fc-first 4-1BB linker” ) , and / or the second 4-1BB antibody moiety is fused to the second Fc fragment via a linker ( “the Fc-second 4-1BB linker” ) . In some embodiments, the Fc-first 4-1BB linker and / or the Fc-second 4-1BB linker is a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker has 0-50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has 1-50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker has 0-30 amino acids.

[0241] In some embodiments, the peptide linker comprises 0, at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 10, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, or at least 50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker comprises no greater than 3, no greater than 4, no greater than 5, no greater than 10, no greater than 15, no greater than 20, no greater than 25, no greater than 30, no greater than 35, no greater than 40, no greater than 45, or no greater than 50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker comprises a length of about 3-5, about 5-10, about 10-15, about 15-20, about 20-25, about 25-30, about 35-40, about 40-45, or about 45-50 amino acids. c. Between Fc and CD3 antibody moiety

[0242] In some embodiments, the CD3 antibody moiety of the antibody agent is fused with the Fc via a linker (the “Fc-CD3 linker” ) . In some embodiments, the Fc-CD3 linker is a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker comprises 0, at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 10, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, or at least 50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker comprises no greater than 3, no greater than 4, no greater than 5, no greater than 10, no greater than 15, no greater than 20, no greater than 25, no greater than 30, no greater than 35, no greater than 40, no greater than 45, or no greater than 50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker comprises a length of about 3-5, about 5-10, about 10-15, about 15-20, about 20-25, about 25-30, about 35-40, about 40-45, or about 45-50 amino acids. d. CD3 scFv antibody linker

[0243] In some embodiments, the CD3 antibody moiety of the antibody agent a scFv comprising a VH domain and a VL domain. In some embodiments, the VH domain and the VL domain are joined by a linker ( “CD3 scFv linker” ) . In some embodiments, the CD3-scFv linker is a peptide linker. In some embodiments, the CD3 scFv linker comprises a G4S linker (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser) . In some embodiments, the CD3 scFv linker comprises 1 repeat of the G4S linker. In some embodiments, the CD3 scFv linker comprises 2 repeats of the G4S linker. In some embodiments, the CD3 scFv linker comprises 3 repeats of the G4S linker. In some embodiments, the CD3 scFv linker comprises 3 or more repeats of the G4S linker.

[0244] In some embodiments, the peptide linker comprises 0, at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 10, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, or at least 50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker comprises no greater than 3, no greater than 4, no greater than 5, no greater than 10, no greater than 15, no greater than 20, no greater than 25, no greater than 30, no greater than 35, no greater than 40, no greater than 45, or no greater than 50 amino acids. In some embodiments, the peptide linker comprises a length of about 3-5, about 5-10, about 10-15, about 15-20, about 20-25, about 25-30, about 35-40, about 40-45, or about 45-50 amino acids. Modifications of antibody agents a) Chimeric or humanized antibodies

[0245] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent is a chimeric antibody. In some embodiments, a chimeric antibody comprises a non-human variable region (e.g., a variable region derived from mouse) and a human constant region. In some embodiments, a chimeric antibody is a “class switched” antibody in which the class or subclass has been changed from that of the parent antibody. Chimeric antibodies include antigen-binding fragments thereof.

[0246] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent is a humanized antibody. Typically, a non-human antibody is humanized to reduce immunogenicity to humans, while retaining the specificity and affinity of the parental non-human antibody. Generally, a humanized antibody comprises one or more variable domains in which HVRs, e.g., CDRs, (or portions thereof) are derived from a non-human antibody, and FRs (or portions thereof) are derived from human antibody sequences. A humanized antibody optionally will also comprise at least a portion of a human constant region. In some embodiments, some FR residues in a humanized antibody are substituted with corresponding residues from a non-human antibody (e.g., the antibody from which the HVR residues are derived) , e.g., to restore or improve antibody specificity or affinity.

[0247] Humanized antibodies and methods of making them are reviewed, e.g., in Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008) , and are further described, e.g., in Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988) ; Queen et al., Proc. Nat’ l Acad. Sci. USA 86: 10029-10033 (1989) ; US Patent Nos. 5, 821, 337, 7, 527, 791, 6, 982, 321, and 7, 087, 409; Kashmiri et al., Methods 36: 25-34 (2005) (describing SDR (a-CDR) grafting) ; Padlan, Mol. Immunol. 28: 489-498 (1991) (describing “resurfacing” ) ; Dall’A cqua et al., Methods 36: 43-60 (2005) (describing “FR shuffling” ) ; and Osbourn et al., Methods 36: 61-68 (2005) and Klimka et al., Br. J. Cancer, 83: 252-260 (2000) (describing the “guided selection” approach to FR shuffling) .

[0248] Human framework regions that may be used for humanization include but are not limited to: framework regions selected using the “best-fit” method (see, e.g., Sims et al. J. Immunol. 151: 2296 (1993) ) ; Framework regions derived from the consensus sequence of human antibodies of a particular subgroup of light or heavy chain variable regions (see, e.g., Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285 (1992) ; and Presta et al. J. Immunol., 151: 2623 (1993) ) ; human mature (somatically mutated) framework regions or human germline framework regions (see, e.g., Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008) ) ; and framework regions derived from screening FR libraries (see, e.g., Baca et al., J. Biol. Chem. 272: 10678-10684 (1997) and Rosok et al., J. Biol. Chem. 271: 22611-22618 (1996) ) .

[0249] It is understood that the humanization of mouse derived antibodies is a common and routinely used art. It is therefore understood that a humanized format of any and all of the anti-CDCP1 antibodies disclosed in Sequence Table can be used in a preclinical or clinical setting. In cases where a humanized format of any of the referenced anti-CDCP1 antibodies or their antigen-binding regions thereof is used in such a preclinical or clinical setting, the then humanized format is expected to bear the same or similar biological activities and profiles as the original non-humanized format. b) Substitution, insertion, deletion and variants

[0250] In some embodiments, antibody variants having one or more amino acid substitutions are provided. Sites of interest for substitutional mutagenesis include the HVRs (or CDRs) and FRs. Conservative substitutions are shown in Table 2 under the heading of “Preferred substitutions. ” More substantial changes are provided in Table 2 under the heading of “exemplary substitutions, ” and as further described below in reference to amino acid side chain classes. Amino acid substitutions may be introduced into an antibody of interest and the products screened for a desired activity, e.g., retained / improved antigen binding, decreased immunogenicity, or improved ADCC or CDC. Table 2. Amino acid substitutions

[0251] Amino acids may be grouped according to common side-chain properties: (1) hydrophobic: Norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) neutral hydrophilic: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) acidic: Asp, Glu; (4) basic: His, Lys, Arg; (5) residues that influence chain orientation: Gly, Pro; and (6) aromatic: Trp, Tyr, Phe.

[0252] Non-conservative substitutions will entail exchanging a member of one of these classes for another class.

[0253] One type of substitutional variant involves substituting one or more hypervariable region residues of a parent antibody (e.g., a humanized or human antibody) . Generally, the resulting variant (s) selected for further study will have modifications (e.g., improvements) in certain biological properties (e.g., increased affinity, reduced immunogenicity) relative to the parent antibody and / or will have substantially retained certain biological properties of the parent antibody. An exemplary substitutional variant is an affinity matured antibody, which may be conveniently generated, e.g., using phage display-based affinity maturation techniques such as those described herein. Briefly, one or more HVR residues are mutated and the variant antibodies displayed on phage and screened for a particular biological activity (e.g. binding affinity) .

[0254] Alterations (e.g., substitutions) may be made in HVRs, e.g., to improve antibody affinity. Such alterations may be made in HVR “hotspots, ” i.e., residues encoded by codons that undergo mutation at high frequency during the somatic maturation process (see, e.g., Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207: 179-196 (2008) ) , and / or SDRs (a-CDRs) , with the resulting variant VH or VL being tested for binding affinity. Affinity maturation by constructing and reselecting from secondary libraries has been described, e.g., in Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O’ Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001) ) . In some embodiments of affinity maturation, diversity is introduced into the variable genes chosen for maturation by any of a variety of methods (e.g., error-prone PCR, chain shuffling, or oligonucleotide-directed mutagenesis) . A secondary library is then created. The library is then screened to identify any antibody variants with the desired affinity. Another method to introduce diversity involves HVR-directed approaches, in which several HVR residues (e.g., 4-6 residues at a time) are randomized. HVR residues involved in antigen binding may be specifically identified, e.g., using alanine scanning mutagenesis or modeling. CDR-H3 and CDR-L3 in particular are often targeted.

[0255] In some embodiments, substitutions, insertions, or deletions may occur within one or more HVRs so long as such alterations do not substantially reduce the ability of the antibody to bind antigen. For example, conservative alterations (e.g., conservative substitutions as provided herein) that do not substantially reduce binding affinity may be made in HVRs. Such alterations may be outside of HVR “hotspots” or CDRs.

[0256] A useful method for identification of residues or regions of an antibody that may be targeted for mutagenesis is called “alanine scanning mutagenesis” as described by Cunningham and Wells (1989) Science, 244: 1081-1085. In this method, a residue or group of target residues (e.g., charged residues such as Arg, Asp, His, Lys, and Glu) are identified and replaced by a neutral or negatively charged amino acid (e.g., alanine or polyalanine) to determine whether the interaction of the antibody with antigen is affected. Further substitutions may be introduced at the amino acid locations demonstrating functional sensitivity to the initial substitutions. Alternatively, or additionally, a crystal structure of an antigen-antibody complex to identify contact points between the antibody and antigen. Such contact residues and neighboring residues may be targeted or eliminated as candidates for substitution. Variants may be screened to determine whether they contain the desired properties.

[0257] Amino acid sequence insertions include amino-and / or carboxyl-terminal fusions ranging in length from one residue to polypeptides containing a hundred or more residues, as well as intrasequence insertions of single or multiple amino acid residues. Examples of terminal insertions include an antibody with an N-terminal methionyl residue. Other insertional variants of the antibody molecule include the fusion to the N-or C-terminus of the antibody to an enzyme (e.g., for ADEPT) or a polypeptide which increases the serum half-life of the antibody. c) Glycosylation variants

[0258] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent is altered to increase or decrease the extent to which the construct is glycosylated. Addition or deletion of glycosylation sites to an antibody may be conveniently accomplished by altering the amino acid sequence such that one or more glycosylation sites is created or removed.

[0259] Where the antibody moiety comprises an Fc region, the carbohydrate attached thereto may be altered. Native antibodies produced by mammalian cells typically comprise a branched, biantennary oligosaccharide that is generally attached by an N-linkage to Asn297 of the CH2 domain of the Fc region. See, e.g., Wright et al. TIBTECH 15: 26-32 (1997) . The oligosaccharide may include various carbohydrates, e.g., mannose, N-acetyl glucosamine (GlcNAc) , galactose, and sialic acid, as well as a fucose attached to a GlcNAc in the “stem” of the biantennary oligosaccharide structure. In some embodiments, modifications of the oligosaccharide in the antibody moiety may be made in order to create antibody variants with certain improved properties.

[0260] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody moiety has a carbohydrate structure that lacks fucose attached (directly or indirectly) to an Fc region. For example, the amount of fucose in such antibody may be from 1%to 80%, from 1%to 65%, from 5%to 65%or from 20%to 40%. The amount of fucose is determined by calculating the average amount of fucose within the sugar chain at Asn297, relative to the sum of all glycostructures attached to Asn 297 (e.g., complex, hybrid and high mannose structures) as measured by MALDI-TOF mass spectrometry, as described in WO 2008 / 077546, for example. Asn297 refers to the asparagine residue located at about position 297 in the Fc region (EU numbering of Fc region residues) ; however, Asn297 may also be located about ± 3 amino acids upstream or downstream of position 297, i.e., between positions 294 and 300, due to minor sequence variations in antibodies. Such fucosylation variants may have improved ADCC function. See, e.g., US Patent Publication Nos. US 2003 / 0157108 (Presta, L. ) ; US 2004 / 0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd) . Examples of publications related to “defucosylated” or “fucose-deficient” antibody variants include: US 2003 / 0157108; WO 2000 / 61739; WO 2001 / 29246; US 2003 / 0115614; US 2002 / 0164328; US 2004 / 0093621; US 2004 / 0132140; US 2004 / 0110704; US 2004 / 0110282; US 2004 / 0109865; WO 2003 / 085119; WO 2003 / 084570; WO 2005 / 035586; WO 2005 / 035778; WO2005 / 053742; WO2002 / 031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004) ; Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004) . Examples of cell lines capable of producing defucosylated antibodies include Lec13 CHO cells deficient in protein fucosylation (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249: 533-545 (1986) ; US Patent Application No.US 2003 / 0157108 A1, Presta, L; and WO 2004 / 056312 A1, Adams et al., especially at Example 11) , and knockout cell lines, such as alpha-1, 6-fucosyltransferase gene, FUT8, knockout CHO cells (see, e.g., Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004) ; Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94 (4) : 680-688 (2006) ; and WO2003 / 085107) .

[0261] In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent has bisected oligosaccharides, e.g., in which a biantennary oligosaccharide attached to the Fc region of the antibody is bisected by GlcNAc. Such antibody variants may have reduced fucosylation and / or improved ADCC function. Examples of such antibody variants are described, e.g., in WO 2003 / 011878 (Jean-Mairet et al. ) ; US Patent No. 6,602,684 (Umana et al. ) ; and US 2005 / 0123546 (Umana et al. ) . Antibody variants with at least one galactose residue in the oligosaccharide attached to the Fc region are also provided. Such antibody variants may have improved CDC function. Such antibody variants are described, e.g., in WO 1997 / 30087 (Patel et al. ) ; WO 1998 / 58964 (Raju, S. ) ; and WO 1999 / 22764 (Raju, S. ) . d) Cysteine engineered antibody variants

[0262] In some embodiments, it may be desirable to create cysteine engineered antibody moieties, e.g., “thioMAbs, ” in which one or more residues of an antibody are substituted with cysteine residues. In particular embodiments, the substituted residues occur at accessible sites of the antibody. By substituting those residues with cysteine, reactive thiol groups are thereby positioned at accessible sites of the antibody and may be used to conjugate the antibody to other moieties, such as drug moieties or linker-drug moieties, to create an immunoconjugate, as described further herein. In some embodiments, any one or more of the following residues may be substituted with cysteine: A118 (EU numbering) of the heavy chain; and S400 (EU numbering) of the heavy chain Fc region. Cysteine engineered antibody moieties may be generated as described, e.g., in U.S. Patent No. 7,521,541. e) Antibody derivatives

[0263] In some embodiments, the antibody moiety described herein may be further modified to comprise additional nonproteinaceous moieties that are known in the art and readily available. The moieties suitable for derivatization of the antibody include but are not limited to water soluble polymers. Non-limiting examples of water soluble polymers include, but are not limited to, polyethylene glycol (PEG) , copolymers of ethylene glycol / propylene glycol, carboxymethylcellulose, dextran, polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, poly-1, 3-dioxolane, poly-1, 3, 6-trioxane, ethylene / maleic anhydride copolymer, polyaminoacids (either homopolymers or random copolymers) , and dextran or poly (n-vinyl pyrrolidone) polyethylene glycol, propropylene glycol homopolymers, prolypropylene oxide / ethylene oxide co-polymers, polyoxyethylated polyols (e.g., glycerol) , polyvinyl alcohol, and mixtures thereof. Polyethylene glycol propionaldehyde may have advantages in manufacturing due to its stability in water. The polymer may be of any molecular weight, and may be branched or unbranched. The number of polymers attached to the antibody may vary, and if more than one polymer are attached, they can be the same or different molecules. In general, the number and / or type of polymers used for derivatization can be determined based on considerations including, but not limited to, the particular properties or functions of the antibody to be improved, whether the antibody derivative will be used in diagnosis under defined conditions, etc.

[0264] In some embodiments, the antibody moiety may be further modified to comprise one or more biologically active protein, polypeptides or fragments thereof. “Bioactive” or “biologically active” , as used herein interchangeably, means showing biological activity in the body to carry out a specific function. For example, it may mean the combination with a particular biomolecule such as protein, DNA, etc., and then promotion or inhibition of the activity of such biomolecule. In some embodiments, the bioactive protein or fragments thereof include proteins and polypeptides that are administered to patients as the active drug substance for prevention of or treatment of a disease or condition, as well as proteins and polypeptides that are used for diagnostic purposes, such as enzymes used in diagnostic tests or in vitro assays, as well as proteins and polypeptides that are administered to a patient to prevent a disease such as a vaccine. IV. Methods of producing an antibody agent.

[0265] In some aspects, provided herein are methods of producing an antibody agent, comprising: a) culturing a host cell under conditions effective to express the antibody agent, and b) obtaining the expressed antibody agent from the host cell. In some embodiments, the of producing an antibody agent comprises first culturing the host cell under conditions effective to express the antibody agent; and then obtaining the expressed antibody agent from the host cell. The host cell may be any suitable host cell for expressing the antibody agent. In some embodiments, the host cell is a CHO. Antibody Expression and Production

[0266] The antibodies described herein can be prepared using any known methods in the art, including those described below and in the Examples. A. Monoclonal antibodies

[0267] Monoclonal antibodies are obtained from a population of substantially homogeneous antibodies, i.e., the individual antibodies comprising the population are identical except for possible naturally occurring mutations and / or post-translational modifications (e.g., isomerizations, amidations) that may be present in minor amounts. Thus, the modifier “monoclonal” indicates the character of the antibody as not being a mixture of discrete antibodies. For example, the monoclonal antibodies may be made using the hybridoma method first described by Kohler et al., Nature, 256: 495 (1975) , or may be made by recombinant DNA methods (U.S. Pat. No. 4,816,567) . In the hybridoma method, a mouse or other appropriate host animal, such as a hamster or a llama, is immunized as hereinabove described to elicit lymphocytes that produce or are capable of producing antibodies that will specifically bind the protein used for immunization. Alternatively, lymphocytes may be immunized in vitro. Lymphocytes then are fused with myeloma cells using a suitable fusing agent, such as polyethylene glycol, to form a hybridoma cell (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986) . Also See Example 1 for immunization in Camels.

[0268] The immunizing agent will typically include the antigenic protein or a fusion variant thereof. Generally, either peripheral blood lymphocytes ( “PBLs” ) are used if cells of human origin are desired, or spleen cells or lymph node cells are used if non-human mammalian sources are desired. The lymphocytes are then fused with an immortalized cell line using a suitable fusing agent, such as polyethylene glycol, to form a hybridoma cell. Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986) , pp. 59-103.

[0269] Immortalized cell lines are usually transformed mammalian cells, particularly myeloma cells of rodent, bovine and human origin. Usually, rat or mouse myeloma cell lines are employed. The hybridoma cells thus prepared are seeded and grown in a suitable culture medium that preferably contains one or more substances that inhibit the growth or survival of the unfused, parental myeloma cells. For example, if the parental myeloma cells lack the enzyme hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase (HGPRT or HPRT) , the culture medium for the hybridomas typically will include hypoxanthine, aminopterin, and thymidine (HAT medium) , which are substances that prevent the growth of HGPRT-deficient cells.

[0270] Preferred immortalized myeloma cells are those that fuse efficiently, support stable high-level production of antibody by the selected antibody-producing cells, and are sensitive to a medium such as HAT medium. Among these, preferred are murine myeloma lines, such as those derived from MOPC-21 and MPC-11 mouse tumors available from the Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, Calif. USA, and SP-2 cells (and derivatives thereof, e.g., X63-Ag8-653) available from the American Type Culture Collection, Manassas, Va. USA. Human myeloma and mouse-human heteromyeloma cell lines also have been described for the production of human monoclonal antibodies (Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984) ; Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987) ) .

[0271] Culture medium in which hybridoma cells are growing is assayed for production of monoclonal antibodies directed against the antigen. Preferably, the binding specificity of monoclonal antibodies produced by hybridoma cells is determined by immunoprecipitation or by an in vitro binding assay, such as radioimmunoassay (RIA) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) .

[0272] The culture medium in which the hybridoma cells are cultured can be assayed for the presence of monoclonal antibodies directed against the desired antigen. Preferably, the binding affinity and specificity of the monoclonal antibody can be determined by immunoprecipitation or by an in vitro binding assay, such as radioimmunoassay (RIA) or enzyme-linked assay (ELISA) . Such techniques and assays are known in the in art. For example, binding affinity may be determined by the Scatchard analysis of Munson et al., Anal. Biochem., 107: 220 (1980) .

[0273] After hybridoma cells are identified that produce antibodies of the desired specificity, affinity, and / or activity, the clones may be subcloned by limiting dilution procedures and grown by standard methods (Goding, supra) . Suitable culture media for this purpose include, for example, D-MEM or RPMI-1640 medium. A cell sorter may also be used. In addition, the hybridoma cells may be grown in vivo as tumors in a mammal.

[0274] The monoclonal antibodies secreted by the subclones are suitably separated from the culture medium, ascites fluid, or serum by conventional immunoglobulin purification procedures such as, for example, protein A-Sepharose, hydroxylapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis, or affinity chromatography.

[0275] Monoclonal antibodies may also be made by recombinant DNA methods, such as those described in U.S. Pat. No. 4,816,567, and as described above. DNA encoding the monoclonal antibodies is readily isolated and sequenced using conventional procedures (e.g., by using oligonucleotide probes that are capable of binding specifically to genes encoding the heavy and light chains of murine antibodies) . The hybridoma cells serve as a preferred source of such DNA. Once isolated, the DNA may be placed into expression vectors, which are then transfected into host cells such as E. coli cells, simian COS cells, HEK cells, Chinese hamster ovary (CHO) cells, or myeloma cells that do not otherwise produce immunoglobulin protein, in order to synthesize monoclonal antibodies in such recombinant host cells. Review articles on recombinant expression in bacteria of DNA encoding the antibody include Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5: 256-262 (1993) and Plückthun, Immunol. Revs. 130: 151-188 (1992) .

[0276] In a further embodiment, antibodies can be isolated from antibody phage libraries generated using the techniques described in McCafferty et al., Nature, 348: 552-554 (1990) . Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991) describe the isolation of murine and human antibodies, respectively, using phage libraries. Subsequent publications describe the production of high affinity (nM range) human antibodies by chain shuffling (Marks et al., Bio / Technology, 10: 779-783 (1992) ) , as well as combinatorial infection and in vivo recombination as a strategy for constructing very large phage libraries (Waterhouse et al., Nucl. Acids Res., 21: 2265-2266 (1993) ) . Thus, these techniques are viable alternatives to traditional monoclonal antibody hybridoma techniques for isolation of monoclonal antibodies.

[0277] The DNA also may be modified, for example, by substituting the coding sequence for human heavy-and light-chain constant domains in place of the homologous murine sequences (U.S. Pat. No. 4,816,567; Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81: 6851 (1984) ) , or by covalently joining to the immunoglobulin coding sequence all or part of the coding sequence for a non-immunoglobulin polypeptide. Typically, such non-immunoglobulin polypeptides are substituted for the constant domains of an antibody, or they are substituted for the variable domains of one antigen-combining site of an antibody to create a chimeric bivalent antibody comprising one antigen-combining site having specificity for an antigen and another antigen-combining site having specificity for a different antigen.

[0278] The monoclonal antibodies described herein may by monovalent, the preparation of which is well known in the art. For example, one method involves recombinant expression of immunoglobulin light chain and a modified heavy chain. The heavy chain is truncated generally at any point in the Fc region so as to prevent heavy chain crosslinking. Alternatively, the relevant cysteine residues may be substituted with another amino acid residue or are deleted so as to prevent crosslinking. In vitro methods are also suitable for preparing monovalent antibodies. Digestion of antibodies to produce fragments thereof, particularly Fab fragments, can be accomplished using routine techniques known in the art.

[0279] Chimeric or hybrid antibodies also may be prepared in vitro using known methods in synthetic protein chemistry, including those involving crosslinking agents. For example, immunotoxins may be constructed using a disulfide-exchange reaction or by forming a thioether bond. Examples of suitable reagents for this purpose include iminothiolate and methyl-4-mercaptobutyrimidate. B. Nucleic acid molecules encoding antibody moieties

[0280] In some embodiments, there is provided a polynucleotide encoding any one of the CDCP1x4-1BBxCD3 constructs or antibody moieties described herein. In some embodiments, there is provided a polynucleotide prepared using any one of the methods as described herein. In some embodiments, a nucleic acid molecule comprises a polynucleotide that encodes a heavy chain or a light chain of an antibody moiety (e.g., anti-CD3 antibody moiety, anti-4-1BB antibody moiety, or anti-CDCP1 antibody moiety) . In some embodiments, a nucleic acid molecule comprises both a polynucleotide that encodes a heavy chain and a polynucleotide that encodes a light chain, of an antibody moiety (e.g., anti-CD3 antibody moiety, anti-4-1BB antibody moiety, or anti-CDCP1 antibody moiety) . In some embodiments, a first nucleic acid molecule comprises a first polynucleotide that encodes a heavy chain and a second nucleic acid molecule comprises a second polynucleotide that encodes a light chain.

[0281] In some such embodiments, the heavy chain and the light chain are expressed from one nucleic acid molecule, or from two separate nucleic acid molecules, as two separate polypeptides. In some embodiments, such as when an antibody is an scFv, a single polynucleotide encodes a single polypeptide comprising both a heavy chain and a light chain linked together.

[0282] In some embodiments, a polynucleotide encoding a heavy chain or light chain of an antibody moiety (e.g., anti-CD3 antibody moiety, anti-4-1BB antibody moiety, or anti-CDCP1 antibody moiety) comprises a nucleotide sequence that encodes a leader sequence, which, when translated, is located at the N terminus of the heavy chain or light chain. As discussed above, the leader sequence may be the native heavy or light chain leader sequence, or may be another heterologous leader sequence.

[0283] In some embodiments, the polynucleotide is a DNA. In some embodiments, the polynucleotide is an RNA. In some embodiments, the RNA is an mRNA.

[0284] Nucleic acid molecules may be constructed using recombinant DNA techniques conventional in the art. In some embodiments, a nucleic acid molecule is an expression vector that is suitable for expression in a selected host cell. 1. Nucleic acid construct

[0285] In some embodiments, there is provided a nucleic acid construct comprising any one of the polynucleotides described herein. In some embodiments, there is provided a nucleic acid construct prepared using any method described herein.

[0286] In some embodiments, herein is provided a nucleic acid encoding any of the antibody agents disclosed herein, or a portion thereof. In some embodiments, herein is provided a vector comprising the nucleic acid encoding any of the antibody agents disclosed herein, or a portion thereof. In some embodiments, herein is provided a host cell comprising the nucleic acid encoding any of the antibody agents disclosed herein, or a portion thereof. In some embodiments, herein is provided a host cell comprising the vector comprising the nucleic acid encoding any of the antibody agents disclosed herein, or a portion thereof.

[0287] In some embodiments, the nucleic acid construct further comprises a promoter operably linked to the polynucleotide. In some embodiments, the polynucleotide corresponds to a gene, wherein the promoter is a wild-type promoter for the gene. C. Vectors

[0288] In some embodiments, there is provided a vector comprising any polynucleotides that encode the heavy chains and / or light chains of any one of the antibody moieties described herein (e.g., anti-CDCP1 antibody moieties, anti-CD3 antibody moieties, or anti-4-1BB antibody moieties) or nucleic acid construct described herein. In some embodiments, there is provided a vector prepared using any method described herein. Vectors comprising polynucleotides that encode any of constructs such as antibodies, scFvs, fusion proteins or other forms of constructs described herein are also provided. Such vectors include, but are not limited to, DNA vectors, phage vectors, viral vectors, retroviral vectors, etc. In some embodiments, a vector comprises a first polynucleotide sequence encoding a heavy chain and a second polynucleotide sequence encoding a light chain. In some embodiments, the heavy chain and light chain are expressed from the vector as two separate polypeptides. In some embodiments, the heavy chain and light chain are expressed as part of a single polypeptide, such as, for example, when the antibody is an scFv,

[0289] In some embodiments, a first vector comprises a polynucleotide that encodes a heavy chain and a second vector comprises a polynucleotide that encodes a light chain. In some embodiments, the first vector and second vector are transfected into host cells in similar amounts (such as similar molar amounts or similar mass amounts) . In some embodiments, a mole-or mass-ratio of between 5: 1 and 1: 5 of the first vector and the second vector is transfected into host cells. In some embodiments, a mass ratio of between 1: 1 and 1: 5 for the vector encoding the heavy chain and the vector encoding the light chain is used. In some embodiments, a mass ratio of 1: 2 for the vector encoding the heavy chain and the vector encoding the light chain is used.

[0290] In some embodiments, a vector is selected that is optimized for expression of polypeptides in CHO or CHO-derived cells, or in NSO cells. Exemplary such vectors are described, e.g., in Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20: 880-889 (2004) . D. Host Cells

[0291] In some embodiments, there is provided a host cell comprising any polypeptide, nucleic acid construct and / or vector described herein. In some embodiments, there is provided a host cell prepared using any method described herein. In some embodiments, the host cell is capable of producing any of antibody moieties described herein under a fermentation condition.

[0292] In some embodiments, the antibody moieties described herein may be expressed in prokaryotic cells, such as bacterial cells; or in eukaryotic cells, such as fungal cells (such as yeast) , plant cells, insect cells, and mammalian cells. Such expression may be carried out, for example, according to procedures known in the art. Exemplary eukaryotic cells that may be used to express polypeptides include, but are not limited to, COS cells, including COS 7 cells; 293 cells, including 293-6E cells; CHO cells, including CHO-S, CHO-GS, DG44. Lec13 CHO cells, and FUT8 CHO cells; PER.  cells (Crucell) ; HEK cells, and NSO cells. In some embodiments, the antibody moieties described herein may be expressed in yeast. See, e.g., U.S. Publication No. US 2006 / 0270045 A1. In some embodiments, a particular eukaryotic host cell is selected based on its ability to make desired post-translational modifications to the heavy chains and / or light chains of the antibody moiety. For example, in some embodiments, CHO cells produce polypeptides that have a higher level of sialylation than the same polypeptide produced in 293 cells.

[0293] Introduction of one or more nucleic acids into a desired host cell may be accomplished by any method, including but not limited to, calcium phosphate transfection, DEAE-dextran mediated transfection, cationic lipid-mediated transfection, electroporation, transduction, infection, etc. Non-limiting exemplary methods are described, e.g., in Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001) . Nucleic acids may be transiently or stably transfected in the desired host cells, according to any suitable method.

[0294] The present application also provides host cells comprising any of the polynucleotides or vectors described herein. In some embodiments, the invention provides a host cell comprising an antibody agent described herein. Any host cells capable of over-expressing heterologous DNAs can be used for the purpose of isolating the genes encoding the antibody, polypeptide or protein of interest. Non-limiting examples of mammalian host cells include but not limited to COS, HeLa, and CHO cells. See also PCT Publication No. WO 87 / 04462. Suitable non-mammalian host cells include prokaryotes (such as E. coli or B. subtillis) and yeast (such as S. cerevisae, S. pombe; or K. lactis) .

[0295] In some embodiments, the antibody moiety is produced in a cell-free system. Non-limiting exemplary cell-free systems are described, e.g., in Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009) ; Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004) ; Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003) . E. Culture Medium

[0296] In some embodiments, there is provided a culture medium comprising any antibody moiety, polynucleotide, nucleic acid construct, vector, and / or host cell described herein. In some embodiments, there is provided a culture medium prepared using any method described herein.

[0297] In some embodiments, the medium comprises hypoxanthine, aminopterin, and / or thymidine (e.g., HAT medium) . In some embodiments, the medium does not comprise serum. In some embodiments, the medium comprises serum. In some embodiments, the medium is a D-MEM or RPMI-1640 medium.

[0298] In some embodiments the culture medium is chemically defined. In some embodiments the culture medium is specifically derived for a specific cell line (e.g., CHO GS cells) . F. Purification of antibody agents

[0299] The antibody agents provided herein may be purified by any suitable method. Such methods include, but are not limited to, the use of affinity matrices or hydrophobic interaction chromatography. Suitable affinity ligands include the ROR1 ECD and ligands that bind antibody constant regions. For example, a Protein A, Protein G, Protein A / G, or an antibody affinity column may be used to bind the constant region and to purify an antibody agent comprising an Fc fragment. Hydrophobic interactive chromatography, for example, a butyl or phenyl column, may also be suitable for purifying some polypeptides such as antibodies. Ion exchange chromatography (e.g. anion exchange chromatography and / or cation exchange chromatography) may also be suitable for purifying some polypeptides such as antibodies. Mixed-mode chromatography (e.g. reversed phase / anion exchange, reversed phase / cation exchange, hydrophilic interaction / anion exchange, hydrophilic interaction / cation exchange, etc. ) may also be suitable for purifying some polypeptides such as antibodies. Many methods of purifying polypeptides are known in the art. V. Methods of treatment

[0300] In some embodiments, herein is provided a method of treating a disease or disorder, comprising administering to an individual in need thereof a composition comprising any of the antibody agents disclosed herein. In some embodiments, a method provided herein comprises administering to an individual in need thereof a pharmaceutical composition comprising any of the antibody agents disclosed herein and a pharmaceutically acceptable carrier. In some embodiments, the disease is a cancer. In some aspects, the cancer is a CDCP1-positive cancer.

[0301] In some embodiments, the cancer is selected from the group consisting of cervical cancer, prostate cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, clear cell renal cancer carcinoma (ccRCC) , thyroid cancer, urothelial cancer, stomach cancer, carcinoid, liver cancer, glioma, endometrial cancer, renal cancer, and testis cancer.

[0302] In some embodiments, the cancer is selected from the group consisting of lung cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, melanoma, renal cancer, bladder cancer, breast cancer, liver cancer, lymphoma, malignant hematological disease, head and neck cancer, glioma, stomach cancer, nasopharyngeal cancer, laryngeal cancer, cervical cancer, uterine corpus carcinoma, and osteosarcoma. In some embodiments, the disease is cancer. In some embodiments, the cancer is selected from the group consisting of cervical cancer, prostate cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, clear cell renal cancer carcinoma (ccRCC) , thyroid cancer, urothelial cancer, stomach cancer, carcinoid, liver cancer, glioma, endometrial cancer, renal cancer, and testis cancer.

[0303] In some embodiments, the CDCP1-positive cancer cells have at least any of any of 100-200, 200-500, 500-700, 700-1000, 1000-2000, 2000-5000, 5000-7000, 7000-10000, 10000-20000, 20000-30000, 30000-40000, 40000-50000, 50000-60000, 60000-70000, 70000-80000, 80000-90000, 90000-100000, 100000-500000, 500000-1000000, or 1000000-2000000 CDCP1 molecules (e.g., expressed on the surface of cancer cell) . A. Dosing and Method of Administering the anti-CDCP1 antibody agent

[0304] The dosing regimen of the anti-CDCP1 antibody agent (such as the specific dosages and frequencies) used for treating a disease or disorder as described herein administered into the individual may vary with the particular anti-CDCP1 antibody agent, the mode of administration, and the type of disease or condition being treated. In some embodiments, the effective amount of the anti-CDCP1 antibody agent is an amount that is effective to alleviate at least one symptom of the disease or condition. In some embodiments, the effective amount of the anti-CDCP1 antibody agent is an amount that is sufficient to prolong overall survival of the individual (such as a human) . In some embodiments, the effective amount of the anti-CDCP1 antibody agent is an amount that is sufficient to produce clinical benefit of more than about any of 50%, 60%, 70%, 80%, or 90%among a population of individuals treated with the anti-CDCP1 antibody agent.

[0305] In some embodiments, the effective amount of the anti-CDCP1 antibody agent is an amount that slows or inhibits the progression of the disease or condition (for example, by at least about 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%) as compared to that of the individual not receiving the treatment. In some embodiments, the disease or condition is an autoimmune disease. In some embodiments, the disease or condition is an infection. In some embodiments, the disease or condition is cancer.

[0306] The anti-CDCP1 antibody agent can be administered to an individual (such as human) via various routes, including, for example, intravenous, intra-arterial, intraperitoneal, intrapulmonary, oral, inhalation, intravesicular, intramuscular, intra-tracheal, subcutaneous, intraocular, intrathecal, transmucosal, and transdermal. In some embodiments, the anti-CDCP1 antibody agent is included in a pharmaceutical composition while administered into the individual. In some embodiments, sustained continuous release formulation of the composition may be used. In some embodiments, the composition is administered intravenously. In some embodiments, the composition is administered intraperitoneally. In some embodiments, the composition is administered intravenously. In some embodiments, the composition is administered intraperitoneally. In some embodiments, the composition is administered intramuscularly. In some embodiments, the composition is administered subcutaneously. In some embodiments, the composition is administered intravenously. In some embodiments, the composition is administered orally.

[0307] The effective amount, suitable dose, and dosing schedule of the antibody agent (or isolated anti-CDCP1 antibody agent) administered to an individual can vary depending on the particular composition, the route of administration, and the particular type of disease being treated.

[0308] In some embodiments, the individual is a mammal, such as human, rodents, or primates. In some embodiments, the individual is human. In some embodiments, the individual is any of: mouse, rat, rabbit, guinea pig, hamster, dog, cat, bird (e.g., chicken) , cow, sheep, goat, horse, donkey, monkey, or chimpanzee.

[0309] The methods provided herein may be practiced in an adjuvant setting. In some embodiments, the method is practiced in a neoadjuvant setting, i.e., the method may be carried out before the primary / definitive therapy. In some embodiments, the method is used to treat an individual (such as human) who has previously been treated. Any of the methods of treatment provided herein may be used to treat an individual (such as human) who has not previously been treated. In some embodiments, the method is used as a first line therapy. In some embodiments, the method is used as a second line therapy. VI. Compositions, Kits and Articles of Manufacture

[0310] Also provided herein are compositions (such as formulations) comprising any one of the anti-CDCP1 antibody agents or anti-CDCP1 antibody moieties described herein, nucleic acid encoding the antibody moieties, vector comprising the nucleic acid encoding the antibody moieties, or host cells comprising the nucleic acid or vector.

[0311] Suitable formulations of the anti-CDCP1 antibody agents described herein can be obtained by mixing the anti-CDCP1 antibody agents or anti-CDCP1 antibody moieties having the desired degree of purity with optional pharmaceutically acceptable carriers, excipients or stabilizers (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980) ) , in the form of lyophilized formulations or aqueous solutions. Acceptable carriers, excipients, or stabilizers are nontoxic to recipients at the dosages and concentrations employed, and include buffers such as phosphate, citrate, and other organic acids; antioxidants including ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or propylparaben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol; and m-cresol) ; low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; proteins, such as serum albumin, gelatin, or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine, or lysine; monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates including glucose, mannose, or dextrins; chelating agents such as EDTA; sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counter-ions such as sodium; metal complexes (e.g. Zn-protein complexes) ; and / or non-ionic surfactants such as TWEENTM, PLURONICSTM or polyethylene glycol (PEG) . Lyophilized formulations adapted for subcutaneous administration are described in WO97 / 04801. Such lyophilized formulations may be reconstituted with a suitable diluent to a high protein concentration and the reconstituted formulation may be administered subcutaneously to the individual to be imaged, diagnosed, or treated herein.

[0312] The formulations to be used for in vivo administration must be sterile. This is readily accomplished by, e.g., filtration through sterile filtration membranes.

[0313] Also provided are kits comprising any one of the anti-CDCP1 antibody agents or anti-CDCP1 antibody moieties described herein. The kits may be useful for any of the methods of modulating cell composition or treatment described herein.

[0314] In some embodiments, there is provided a kit comprising an anti-CDCP1 antibody agent specifically binding to CDCP1.

[0315] In some embodiments, the kit further comprises a device capable of delivering the anti-CDCP1 antibody agent into an individual. One type of device, for applications such as parenteral delivery, is a syringe that is used to inject the composition into the body of a subject. Inhalation devices may also be used for certain applications.

[0316] In some embodiments, the kit further comprises a therapeutic agent for treating a disease or condition, e.g., infectious disease, autoimmune disease, or transplantation.

[0317] The kits of the present application are in suitable packaging. Suitable packaging includes, but is not limited to, vials, bottles, jars, flexible packaging (e.g., sealed Mylar or plastic bags) , and the like. Kits may optionally provide additional components such as buffers and interpretative information.

[0318] The present application thus also provides articles of manufacture. The article of manufacture can comprise a container and a label or package insert on or associated with the container. Suitable containers include vials (such as sealed vials) , bottles, jars, flexible packaging, and the like. Generally, the container holds a composition, and may have a sterile access port (for example the container may be an intravenous solution bag or a vial having a stopper pierceable by a hypodermic injection needle) . The label or package insert indicates that the composition is used for imaging, diagnosing, or treating a particular condition in an individual. The label or package insert will further comprise instructions for administering the composition to the individual and for imaging the individual. The label may indicate directions for reconstitution and / or use. The container holding the composition may be a multi-use vial, which allows for repeat administrations (e.g. from 2-6 administrations) of the reconstituted formulation. Package insert refers to instructions customarily included in commercial packages of diagnostic products that contain information about the indications, usage, dosage, administration, contraindications and / or warnings concerning the use of such diagnostic products. Additionally, the article of manufacture may further comprise a second container comprising a pharmaceutically-acceptable buffer, such as bacteriostatic water for injection (BWFI) , phosphate-buffered saline, Ringer's solution and dextrose solution. It may further include other materials desirable from a commercial and user standpoint, including other buffers, diluents, filters, needles, and syringes.

[0319] The kits or article of manufacture may include multiple unit doses of the compositions and instructions for use, packaged in quantities sufficient for storage and use in pharmacies, for example, hospital pharmacies and compounding pharmacies.

[0320] Those skilled in the art will recognize that several embodiments are possible within the scope and spirit of this invention. The invention will now be described in greater detail by reference to the following non-limiting examples. The following examples further illustrate the invention but, of course, should not be construed as in any way limiting its scope. EXAMPLES

[0321] The examples below are intended to be purely exemplary of the application and should therefore not be considered to limit the application in any way. The following examples and detailed description are offered by way of illustration and not by way of limitation. Example 1: Evaluation of binding characteristics of different CDCP1 binding antibody domains

[0322] Antibodies that bind to CDCP1 were generated via the following workflow: first, mice were immunized with CDCP1 extracellular domain (ECD) protein. Antibody titer detection was performed by serum ELISA and the mice with high titers of anti-CDCP1 immunoglobulin were selected for fusion and further screening. Then the mouse splenocytes, isolated from the mice, were fused with a mouse myeloma cell line based upon standard protocols. Single cell suspensions of splenic lymphocytes from immunized mice were fused to one-third the number of SP2 / 0 non secreting mouse myeloma cells with electrofusion machine. Individual wells of hybridoma were then screened by ELISA for mouse anti-CDCP1 monoclonal IgG antibodies. The stable sub clones were then cultured in vitro to generate small amount of antibody in tissue culture medium for further characterization with various functional assays. Clones 38, 49, 749, 808, and 261 showing strong binding ability to CDCP1 protein and CDCP1 expressed cells were selected for sequencing and antibodies generation. VH and VL sequences for each were identified via sequencing. See Table 3. Table 3. CDCP1 binding antibodies.

[0323] Anti-CDCP1 antibodies were then screened for soluble protein binding via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) . On the first day, both human and rhesus CDCP1 ECD recombinant proteins and human CDCP1 amino-terminal fragment were respectively diluted to 2 μg / mL in coating buffer (DPBS) . The dilutions were added into the 96-well high binding assay plate at 100 μL per well and incubated at 4℃ overnight. The next day, the plates were washed with washing buffer for 3 times and blocked with 200 μL of blocking buffer (2%BSA in DPBS) for 2 hours at room temperature. After blocking, the plates were washed again with washing buffer for 3 times and the antibody solutions and human control IgG solutions were diluted in blocking buffer (2%BSA in DPBS) according to the layout table. 100 μL of diluted antibodies were added into each well for 1 hour at room temperature. After incubation, the wells were washed again with washing buffer for 3 times; HRP-conjugated goat anti-human IgG Fc was diluted in blocking buffer (1%BSA in DPBS) at 1: 10,000 or 1: 5000; The samples were incubated with 100 μL of diluted HRP-conjugated goat anti-human IgG Fc for 1 hour. The plates were washed again with washing buffer for 6 times. 100 μL of TMB was added into each well and incubate for 5 minutes for color development. The reaction was stopped by addition of 100 μL of stop solution. The absorbance at 450 nm was measured by EnVision.

[0324] As shown in FIGS. 1A-1F. Anti-CDCP1 antibodies 38, 49, and 261 were screened via ELISA for soluble protein binding against the full-length extracellular domain of human CDCP1 (CDCP1 ECD-FL) , as shown in FIG. 1A. The 38 and 49 anti-CDCP1 antibodies (top line, overlapping) showed the highest levels of soluble protein binding against the full-length human extracellular domain, with the 261 anti-CDCP1 antibody showing slightly lower binding affinity by comparison. The same set of anti-CDCP1 antibodies was screened via ELISA for soluble protein binding against the human CDCP1 extracellular domain-amino terminal fragment (CDCP1 ECD-ATF) , as shown in FIG. 1B. The 49 anti-CDCP1 and the 261 anti-CDCP1 antibodies showed high levels of soluble protein binding against the amino terminal fragment, while the 38 anti-CDCP1 antibody domain showed almost no binding. The same set of anti-CDCP1 antibodies was assayed against the rhesus CDCP1 full length extracellular domain (Rhesus CDCP1 ECD-FL) , with results as shown in FIG. 1C. The 38 anti-CDCP1 antibody and 49 anti-CDCP1 antibody showed the highest levels of soluble protein binding against the rhesus ECD, with the 261 anti-CDCP1 antibody showing slightly less. The 749 and 808 anti-CDCP1 antibodies were assayed via ELISA for soluble protein binding in FIGS. 1D-1F. First, binding to the human CDCP1 full length extracellular domain was assayed via ELISA. As shown in FIG. 1D, both the 749 and 808 anti-CDCP1 antibodies bound to the soluble human CDCP1 full length extracellular domain, with the 868 anti-CDCP1 antibody showing higher binding affinity. Next, binding to the human CDCP1 amino terminal fragment domain was assayed via ELISA. The 808 anti-CDCP1 antibody bound to the human CDCP1 amino terminal fragment, while the 749 anti-CDCP1 antibody did not, as shown in FIG. 1E. Finally, the same set of antibodies was assessed for soluble protein binding to rhesus full length CDCP1 extracellular domain via ELISA. As shown in FIG. 1F, both the 808 and 749 anti-CDCP1 antibodies bound to the rhesus CDCP1 ECD-FL, with the 808 anti-CDCP1 antibody showing higher affinity.

[0325] Next, different anti-CDCP1 antibodies were assessed for cell-based binding capabilities using fluorescence-activated cell sorting (FACS) . Exogenous CDCP1 expressing HEK293-hCDCP1 cells (human CDCP1 stable overexpressed in HEK293 cell, produced by lentivirus transfection) and endogenous CDCP1 expressing MDA-MB-231 or PC3 cells were harvested by centrifugation of the 96 well-U table (loaded cell suspension) at 300g for 5 minutes. 100 μL of the gradient diluted anti-CDCP1 mAbs were added respectively (Control IgG used as negative control, CUB4 antibody used as positive control) into 96 well-U plate to suspend cells and incubate the mixture at 4℃ for 1 hour in the dark. Thereafter, the reaction mixtures were washed twice with at least 200 μL FACS buffer, and then stained with a PE-labeled secondary antibody and incubated at 4℃ for 40 minutes in the dark. After washed twice, the cell pellets were resuspended in 100 μL FACS buffer and Flow cytometric analysis was performed.

[0326] As shown in FIGS. 2A-2E. Anti-CDCP1 antibodies 38, 49, and 261 and isotype control were screened via FACS for cell-based binding against MDA-MB-231 CDCP1+ cells, as shown in FIG. 2A. Anti-CDCP1 antibodies 49 and 261 showed greater cell-based binding affinity than anti-CDCP1 antibody 38. Similarly, anti-CDCP1 antibodies 749 and 808 and an isotype control were screened via FACS for cell-based binding against MDA-MB-231 cells, as shown in FIG. 2B. The 808 anti-CDCP1 antibody showed greater cell-based binding affinity in MDA-MB-231 compared to the 749 anti-CDCP1 antibody. Next, anti-CDCP1 antibodies 38, 49, and 261 and isotype control were screened via FACS for cell-based binding against PC-3 CDCP1+ cells, as shown in FIG. 2C. Similarly to in MDA-MB-231 cells, the 38 anti-CDCP1 antibody showed decreased cell-based binding affinity in PC-3 cells compared to the 49 and 261 anti-CDCP1 antibodies. Anti-CDCP1 antibodies 38, 49, and 749 were screened via FACS for cell-based binding against HEK293 cells expressing human CDCP1 (hCDCP1) . As shown in FIG. 2D, the 49 anti-CDCP1 antibody showed greater cell-based binding than the 38 and 749 anti-CDCP1 antibodies. Anti-CDCP1 antibodies 261 and 808 were screened via FACS for cell-based binding against HEK293 cells expressing human CDCP1 (hCDCP1) . The 261 anti-CDCP1 antibody showed slightly increased cell-based binding compared to the 808 anti-CDCP1 antibody.

[0327] Together, these results show that the five anti-CDCP1 antibodies generated show robust soluble protein binding and cell-based binding to CDCP1 and humanized CDCP1. The five anti-CDCP1 antibodies (38, 49, 261, 749, and 808) were advanced for further evaluation in a multi-specific antibody format. Example 2: Evaluation of trispecific CDCP1xCD3x4-1BB antibodies comprising different CDCP1 binding antibody domains

[0328] Trispecific CDCP1xCD3x4-1BB antibodies comprising different antibody domains that bind to CDCP1 ( “CDCP1 antibody domains” ) were generated and characterized. The trispecific antibodies share the same structure (see FIG. 3) and each comprise an identical anti-CD3 antibody moiety with a HC-CDR1 comprising SEQ ID NO: 45, a HC-CDR2 comprising SEQ ID NO: 46, a HC-CDR3 comprising SEQ ID NO: 47, a LC-CDR1 comprising SEQ ID NO: 48, a LC-CDR2 comprising SEQ ID NO: 49, and a LC-CDR3 comprising SEQ ID NO: 50; and comprise an identical anti-4-1BB antibody moiety with a HC-CDR1 comprising SEQ ID NO: 41, a HC-CDR2 comprising SEQ ID NO: 42, and a HC-CDR3 comprising SEQ ID NO: 43. A diagram of the format of the CDCP1xCD3x4-1BB trispecific antibodies is shown in FIG. 3.

[0329] CDCP1-dependent 4-1BB activation was assayed in MDA-MB-231 CDCP1+ or Chok1 CDCP1 negative cells using the Jurkat NFκB reporter assay for trispecific antibody agents Tri-261C, Tri-808C, Tri-749C, Tri-49C, Tri-38C and Isotype IgG. In this assay, Jurkat 4-1BB-NFκB cell line was used as effector cells. It stably expresses 4-1BB and has an NFκB luciferase reporter construct integrated into the genome. MDA-MB-231 or Chok1 cells were pre-seeding in 5000 per well for overnight incubation. Gradient dilutions of Tri-261C, Tri-808C, Tri-749C, Tri-49C and Tri-38C were co-cultured with pre-seeding MDA-MB-231 or Chok1 cells and Jurkat 4-1BB-NFκB reporter cells suspension at E / T ratio of 2 / 1 for 6 hours.

[0330] As shown in FIG. 4A, the Tri-749C antibody showed the greatest CDCP1-dependent 4-1BB activation relative to the other constructs. Tri-49C, Tri-38C, and Tri-749C antibodies were evaluated for CDCP1-dependent 4-1BB activation in MDA-MB-231 CDCP1+ cells. As shown in FIG. 4B, again, the Tri-749C showed the highest degree of CDCP1-dependent 4-1BB activation. CDCP1-independent 4-1BB activation was assessed in Chok1 CDCP1-cells for Tri-749C, Tri-808C, Tri-38C, and Tri-49C antibodies compared to isotype control, with all three trispecific antibodies tested showing a minor degree of CDCP1-independent 4-1BB activation as shown in FIG. 4C. CDCP1-independent 4-1BB activation was assessed in Chok1 CDCP1- cells for Tri-261C antibodies compared to isotype IgG antibodies and U-mab antibodies . Isotype IgG and U-mab are both commercial IgG1 mono-antibodies including Fab and Fc. U-mab is used as a positive control for inducing 4-1BB activation. U-mab showed some CDCP1-independent 4-1BB activation, while the isotype and Tri-261C antibodies did not show any CDCP1-independent 4-1BB activation. Overall, the reporter assay results suggest that CDCP1x4-1BBxCD3 trispecific antibodies showed a robust advantage for CDCP1 dependent 4-1BB activation, as these CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies showed robust CDCP1-dependent 4-1BB activation and little to no CDCP1-independent 4-1BB activation.

[0331] Next, CDCP1-dependent and CDCP1-independent CD3 activation was measured via Jurkat NFAT reporter assay. In this assay, Jurkat NFAT cell line was used as effector cells. MDA-MB-231 or Chok1 cells were pre-seeding in 5000 per well for overnight incubation. Gradient dilutions of Tri-261C, Tri-808C, Tri-749C, Tri-49C and Tri-38C were co-cultured with pre-seeding MDA-MB-231 or Chok1 cells and Jurkat NFAT reporter cells suspension at E / T ratio of 2 / 1 for 6 hours.

[0332] As shown in FIGS. 5A-5B. CDCP1-dependent CD3 activation was measured in MDA-MB-231 CDCP1+ cells for Tri-261C, Tri-38C, Tri-808C, Tri-749C, and Tri-49C trispecific antibodies. As shown in FIG. 5A, all antibodies tested showed robust CDCP1-dependent CD3 activation, and Tri-38C and Tri-749C trispecific antibodies showed the highest CDCP1-dependent CD3 activation compared to the other antibodies tested. The Tri-749C antibody showed remarkable potency decreased CDCP1-dependent CD3 activation compared to the other trispecific antibodies tested at low concentrations. Finally, CDCP1-independent CD3 activation was assessed in Chok1 CDCP1-cells compared to OKT3 and the isotype IgG. As shown in FIG. 5B, treatment with OKT3 induced robust CDCP1-independent CD3 activation; in contrast, treatment with any of the trispecific antibodies or the isotype IgG did not induce CDCP1-independent CD3 activation. Overall, these results indicate that the tested trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies all produced robust CDCP1-dependent NFAT activation.

[0333] Next, CD8+ T cell-dependent cytotoxicity of trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies comprising different CDCP1 domains was assessed. T cell directed cytotoxicity was assessed in vitro in MDA-MB-231 or PC-3 CDCP1+ cells. MDA-MB-231 or PC-3 cells were pre-seeding in 5000 per well for overnight incubation. Gradient dilutions of Tri-261C, Tri-808C, Tri-749C, Tri-49C and Tri-38C were co-cultured with pre-seeding MDA-MB-231 or PC-3 cells and isolated CD8+T cells suspension at E / T ratio of 4 / 1 for 72 hours.

[0334] First, cytotoxicity was assessed in MDA-MB-231 CDCP1+ cells for trispecific antibodies Tri-38C, Tri-749C, and Tri-808C compared to the isotype IgG (negative control) . As shown in FIG. 6A, the isotype IgG did not induce cytotoxicity, but all of the trispecific antibodies tested did, with the Tri-38C antibody showing the greatest cytotoxicity by concentration. Cytotoxicity was also assessed in MDA-MB-231 CDCP1+ cells for trispecific antibodies Tri-49C and Tri-261C compared to an ICL negative control. As shown in FIG. 6B, the Tri-49C and Tri-261C antibodies both showed robust CD8+ T cell dependent cytotoxicity, while administration of ICL did not result in cell killing. Cytotoxicity was assessed in MDA-MB-231 CDCP1+ cells for trispecific antibodies Tri-38C, Tri-808C, and Tri-49C compared to the isotype IgG (negative control) . All trispecific antibodies produced a robust cytotoxic response, as shown in FIG. 6C, with the Tri-38C antibody showing the strongest cytotoxicity response. Cytotoxicity was assessed in PC-3 CDCP1+ cells for trispecific antibodies Tri-49C, Tri-808C, and Tri-38C compared to the isotype IgG (negative control) . As shown in FIG. 6D, all of the trispecific antibodies tested produced a robust CD8+ T cell-dependent cytotoxicity response.

[0335] Next, CD8+ T cell-dependent cytokine release was assessed. T cell directed IL-2 release was assessed in vitro in MDA-MB-231 or PC-3 CDCP1+ cells. MDA-MB-231 or PC-3 cells were pre-seeding in 5000 per well for overnight incubation. Gradient dilutions of Tri-808C, Tri-49C and Tri-38C were co-cultured with pre-seeding MDA-MB-231 or PC-3 cells and isolated CD8+T cells suspension at E / T ratio of 4 / 1 for 48 hours. Assay plates were centrifuged for supernatants collection for IL-2 detection by HTRF.

[0336] First, IL-2 release was measured for trispecific antibodies Tri-808C, Tri-49C, and Tri-38C in CD8+ T cell and PC3 co-culture system. As shown in FIG. 7A, the Tri-38C antibody produced the largest concentration-dependent IL-2 release at high antibody concentrations. IL-2 release was similarly measured in MDA-MB-231 cells for trispecific antibodies Tri-808C, Tri-49C and Tri-38C. As shown in FIG. 7B, incubation of the Tri-38C antibody produced the greatest IL-2 release.

[0337] Finally, the internalization rate over 4 hours was measured for each CDCP1 antibody moiety (49, 261, 749, 808, and 38) compared to the 14A043 bench marker antibody of CDCP1, see WO2021132427A1 and to isotype. Internalization was measured using a pulse-chase methodology that quantitates non-internalized cell surface antibody at 0, 30, 60, 180 and 240 minutes using flow cytometry. MDA-MB-231 cells were harvested by centrifugation of the 96 well-U plate loading cell suspension at 300g for 5 minutes. mAbs were diluted to a saturated binding concentration (20 nM) and incubated with cell suspension for 20 minutes at 4℃. After saturated binding, the cell &antibody mixtures were divided into 5 wells and incubated at 37℃ for 0, 30, 60, 180 and 240 minutes to induce CDCP1 internalization, respectively. Internalization was terminated by transferring the samples to ice. A time course for antibody internalization was generated for each test article as described above, after which antibody remaining on the cell surface was detected using a PE-labeled secondary antibody. In brief, the cells were washed twice with at least 200 μL FACS buffer and centrifuged at 300g for 5 minutes, then resuspended with 100 μL PE labeled secondary antibody and incubated at 4℃ for 40 minutes in the dark. Final, wash the cells twice with at least 200 μL FACS buffer and centrifuge at 300g for 5 minutes. Resuspend the cell pellet in 100 μL FACS buffer and performed flow cytometric analysis (FACS) . The median fluorescent intensity (MFI) was quantitated and the degree of CDCP1 internalization was determined using the amount of the antibody present at each time point when compared to the amount present at time=0.

[0338] As shown in FIG. 8, the 38 CDCP1 antibody showed the lowest internalization rate at 4 hour time point, while the 14A043 benchmark had highest internalization rate, followed by 261, 49 and 808 CDCP1 antibodies moieties.

[0339] Taken together, the activation, cytotoxicity, and IL-2 release data suggested that the Tri-38C, Tri-49C, and Tri-808C trispecific antibodies were the most promising antibodies for moving forward. Example 3: Generation and evaluation of humanized CDCP1 binding antibody domains

[0340] Next, humanized antibody variants were generated from each of the three anti-CDCP1 antibodies. The variable regions of mouse antibodies were employed to create humanized antibodies. In the first step of this process, the amino acid sequences of the VH and VK were compared against the available database of human Ig gene sequences to identify the overall best-matching human germline Ig gene sequences. At the same time, a three-dimensional molecular model of the mouse antibody was prepared according to a conventional method. Then, based on this molecular model, the residues considered to be important for the structure formation of CDR and the residues considered to be essential for the reaction with the antigen were estimated from the amino acid sequence of the framework region. Thereafter, a sequence was designed by ligating the sequence of the framework part of the searched best-matching human germline to the CDR sequence of each anti-hCDCP1 antibody, and further, the sequence of residues considered to be essential for the structure formation of CDR and the reaction with the antigen was transplanted into the above-designed sequence, so as to design a humanized antibody sequence with at least comparable activity with parental mouse antibody.

[0341] Humanized variant sequences were generated for the 38 anti-CDCP1 antibody. Specifically, 6 humanized VH variants and 3 humanized VL variants of the 38 anti-CDCP1 antibody were generated. From these VH and VL components, 9 unique VH / VL pairs were generated based on humanized variants of the 38 anti-CDCP1 antibody, each comprising a humanized anti-CDCP1 antibody comprising a humanized VH and a humanized VL. Specifically, humanized 38 anti-CDCP1 antibody domains were generated from humanized 38-H1L1 (VH1+VL1; SEQ ID NOS: 54 and 60) , 38-H2L2 (VH2+VL2; SEQ ID NOS: 55 and 61) , 38-H3L1 (VH3+VL1; SEQ ID NOS: 56 and 60) , 38-H4L1 (VH4+VL1; SEQ ID NOS: 57 and 60) , 38-H5L1 (VH5+VL1; SEQ ID NOS: 58 and 60) , 38-H6L1 (VH6+VL1; SEQ ID NOS: 59 and 60) , 38-H1L3 (VH1+VL3; SEQ ID NOS: 54 and 62) , 38-H4L2 (VH4+VL2; SEQ ID NOS: 57 and 61) , and 38-H5L2 (VH5+VL2; SEQ ID NOS: 58 and 61) . Cell binding affinity was evaluated in MDA-MB-231 cells for each of the 9 humanized 38 CDCP1 binding antibody domains compared to the 38 parental antibody domain and the isotype IgG. As shown in FIG. 9A, humanized 38 anti-CDCP1 antibody domains showed similar cell binding affinity compared to the 38 parental anti-CDCP1 antibody domain.

[0342] Humanized variant sequences were generated for the 49 anti-CDCP1 antibody. Specifically, 4 humanized VH variants and 4 humanized VL variants of the 49 anti-CDCP1 antibody were generated. From these VH and VL components, 6 unique VH / VL pairs were generated based on humanized variants of the 49 anti-CDCP1 antibody, each comprising a humanized anti-CDCP1 antibody comprising a humanized VH and a humanized VL. Specifically, humanized anti-49 CDCP1 antibody domains were generated from humanized 49-H1L1 (VH1+VL1; SEQ ID NOS: 72 and 76) , 49-H2L4 (VH2+VL4; SEQ ID NOS: 73 and 79) , 49-H3L3 (VH3+VL3; SEQ ID NOS: 74 and 78) , 49-H2L2 (VH2+VL2; SEQ ID NOS: 73 and 77) , 49-H4L1 (VH4+VL1; SEQ ID NOS: 75 and 76) , and 49-H1L3 (VH1+VL3; SEQ ID NOS: 72 and 78) . Cell binding affinity was evaluated in MDA-MB-231 cells for each of the 6 humanized anti-CDCP1 49 binding antibody domains compared to the parental 49 CDCP1 antibody domain and the isotype IgG. As shown in FIG. 9B, most anti-CDCP1 antibodies showed comparable cell binding affinity compared to the 49 parental anti-CDCP1 antibody while the anti-CDCP1 49-H2L4 antibody domain showed slightly decreased cell binding affinity compared to the parental 49 anti-CDCP1 antibody domain.

[0343] Humanized variant sequences were generated for the 808 anti-CDCP1 antibody. Specifically, 6 humanized VH variants and 3 humanized VL variants of the 808 anti-CDCP1 antibody were generated. From these VH and VL components, 7 unique VH / VL pairs were generated based on humanized variants of the 808 anti-CDCP1 antibody, each comprising a humanized CDCP1 antibody domain comprising a humanized VH and a humanized VL. Specifically, humanized 808 anti-CDCP1 antibody domains were generated from humanized 808-H3L3 (VH3+VL3; SEQ ID NOS: 65 and 71) , 808-H1L1 (VH1+VL1; SEQ ID NOS: 63 and 69) , 808-H2L2 (VH2+VL2; SEQ ID NOS: 64 and 70) , 808-H2L1 (VH4+VL1; SEQ ID NOS: 66 and 69) , 808-H5L2 (VH5+VL2; SEQ ID NOS: 67 and 70) , 808-H6L2 (VH6+VL2; SEQ ID NOS: 68 and 70) , and 808-H6L1 (VH6+VL1; SEQ ID NOS: 68 and 69) . Cell binding affinity was evaluated in MDA-MB-231 cells for each of the 7 humanized CDCP1 binding antibody domains compared to the parental 808 antibody and the isotype IgG. As shown in FIG. 9C, the 808-H6L2, 808-H2L2, 808-H4-L1 and 808-H3L3 humanized CDCP1 antibody showed similar binding affinity to the parental 808 anti-CDCP1 antibody, while the 808-H6-L1, isotype IgG, and 808-H4L1 humanized anti-CDCP1 antibodies showed decreased binding affinity compared to the 808 parental CDCP1 antibody.

[0344] Surface plasmon resonance (SPR) was used to evaluate kinetic parameters of humanized and parental anti-CDCP1 antibodies. Results are shown in Table 4. Table 4. Kinetic parameters of humanized anti-CDCP1 antibodies as measured via SPR.

[0345] Based on these results, trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies were generated comprising selected humanized anti-CDCP1 antibodies. Example 4: Generation and evaluation of trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibody agents comprising humanized CDCP1 binding antibody domains

[0346] Trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies Tri-38H-2, Tri-38H-6, Tri-49H-1, Tri-49H-5, Tri-808H-2, and Tri-808H-6 were generated and evaluated. Polypeptide sequences for the trispecific antibodies tested are shown in Table 5. CDCP1 binder arm in Tri-38H-2 and Tri-38H-6 both comprise VH2+VL2 (SEQ ID NOS: 55 and 61) . CDCP1 binder arm in Tri-49H-1 and Tri-49H-5 both comprise VH4+VL1. CDCP1 binder arm in Tri-808H-2 and Tri-808H-6 both comprise VH6+VL2. A Jurkat NFAT reporter assay was performed in PC-3 CDCP1+ cells to assess CDCP1-dependent CD3 activation as described before. As shown in FIG. 10, the Tri-38H-6 antibody showed the highest CDCP1-dependent CD3 activation, followed by the Tri-38H-2 antibody and the Tri-49H-5 antibody. The Tri-49H-1 antibody showed only a small degree of CDCP1-dependent CD3 activation, while the Tri-ICL-6 and Tri-ICL-2 antibodies (negative control antibodies corresponding to the structure and sequence of CDCP1x4-1BBxCD3 antibodies but with a negative isotype Fab that does not bind to any antigen on cell) showed no CDCP1-dependent CD3 activation. Table 5: Polypeptide sequences of humanized trispecific CDCP1x4-1BBxCD3 antibody agents.

[0347] PBMC-dependent or CD8+T dependent cytotoxicity of trispecific antibodies with humanized CDCP1 antibody domains and anti-CD3 variants was assessed as shown in FIGS. 11A-11D. CD8+ T cell-dependent cytotoxicity of trispecific antibodies Tri-808H-2, Tri-808H-6, Tri-38H-2, Tri-38H-6, Tri-ICL-2, and Tri-ICL-6 was assessed in MDA-MB-231 cells as described before. As shown in FIG. 11A, the antibodies comprising the 808-derived and 38-derived CDCP1 humanized antibody domains and anti-CD3 variants all showed robust CD8+T cell-dependent cytotoxicity in MDA-MB-231 cells. CD8+ T cell-dependent cytotoxicity of trispecific antibodies Tri-808H-2, Tri-808H-6, Tri-38H-2, Tri-38H-6, Tri-ICL-2, and Tri-ICL-6 was assessed in PC-3 cells. As shown in FIG. 11B, the antibodies comprising the 808-derived and 38-derived CDCP1 humanized antibody domains and anti-CD3 variants all showed robust CD8+ T cell-dependent cytotoxicity in PC-3 cells. PBMC-dependent cytotoxicity of trispecific antibodies Tri-49H-1, Tri-49H-5, Tri-38H-2, Tri-38H-6, Tri-ICL-2, and Tri-ICL-6 was assessed in PC-3 CDCP1+ cells. As shown in FIG. 11C, the antibodies comprising the 38-derived CDCP1 humanized antibody domains showed higher PBMC-dependent cytotoxicity in PC-3 cells than the antibodies comprising the 49-derived CDCP1 humanized antibody domains. PBMC-dependent cytotoxicity of trispecific antibodies Tri-49H-1, Tri-49H-5, Tri-38H-2, Tri-38H-6, Tri-ICL-2, and Tri-ICL-6 was assessed in ES-2 CDCP1-cells. As shown in FIG. 11D, no PBMC-dependent cytotoxicity was observed for any of the trispecific antibody agents tested in ES-2 cells.

[0348] PBMC-dependent cytokine release following trispecific antibody administration was assessed as shown in FIGS. 12A-12D. IL-2 and IFNγ release was measured in MDA-MB-231 CDCP1+ cells or ES-2 CDCP1 negative cells administered a trispecific antibody selected from Tri-808H-6, Tri-808H-2, Tri-38H-6, Tri-38H-2, Tri-ICL-6, or Tri-ICL-2.

[0349] As shown in FIG. 12A, the Tri-38H-6 antibody induced the largest IFNγ release followed by the Tri-808H-6 and Tri-38H-2 antibodies, while the Tri-808H-2 antibody resulted in a smaller degree of IFNγ release. IL-2 release was measured in MDA-MB-231 CDCP1+ cells that were administered trispecific antibodies Tri-808H-6, Tri-808H-2, Tri-38H, 6, Tri-38H-2, Tri-ICL-6, or Tri-ICL-2. As shown in FIG. 12B, the Tri-38H-6 antibody induced the greatest degree of IL-2 release, while the Tri-808H-2 antibody induced the smallest degree of IL-2 release. IFNγ release was measured in ES-2 CDCP1-cells administered a trispecific antibody selected from Tri-808H-6, Tri-808H-2, Tri-38H-6, Tri-38H-2, Tri-ICL-6, or Tri-ICL-2. As shown in FIG. 12C, Tri-38H-6 showed a weak degree of CDCP1-independent IFNγ release, while no IFNγ release was directed for the other antibodies. IL-2 release was measured in ES-2 cells. As shown in FIG. 12D, no IL-2 release was detected for any of the antibodies tested.

[0350] Overall, based on CD3 activation data, PBMC-dependent and CD8+ T cell-dependent cytotoxicity data, and cytokine release data, the Tri-38H-2 and Tri-38H-6 trispecific antibodies were selected to move forward with in vivo testing. Example 5: In vivo testing of humanized CDCP1x4-1BBxCD3 trispecific antibodies

[0351] Next, efficacy of humanized CDCP1x4-1BBxCD3 trispecific antibodies Tri-38H-2 and Tri-38H-6 was evaluated in the NOG PC-3 xenograft mice model. PC-3 cells, which endogenously expressing CDCP1 were subcutaneously transplanted into the right flank of NOG mice. When tumors grew to an average of 90 mm3, the mice were randomized and grouped (6 mice per group) based on the tumor volume of each mouse. Then, the mice were intravenously treated with (G1) PBS as vehicle, (G2) Tri-38H-2 (1 mg / kg, QW*4) , (G3) Tri-38H-2 (5 mg / kg, QW*4) and (G4) Tri-38H-6 (1 mg / kg, QW*4) . For each tumor measurement taken at regular intervals the tumor volume was calculated and an average tumor size + / -the standard error of the mean (SEM) was derived per cohort of surviving animals to determine tumor growth inhibition as shown in FIG. 13, Tri-38H-2 at 5 mg / kg or 1 mg / kg and Tri-38H-6 at 1 mg / kg markedly inhibit tumor growth. Tri-38H-2 at 5 mg / kg and Tri-38H-6 at 1 mg / kg both achieved a TGI over 100%. Specifically, after three administrations of the trispecific antibodies, tumor volume shrunk in all three treated groups, with G2 and G4 achieving a continuous shrinking until the end of the study (Day 28) , suggesting durable effects of the treatment.

[0352] Pharmacokinetics of Tri-38H-2 and Tri-38H-6 were assessed in C57BL / 6 mice at a dose of 5 mg / kg body weight. A preliminary PK study was conducted in C57BL / 6 mice (n=3) at a dose of 5 mg / kg. Serum was collected on 10 mins, 24 hours, 48 hours, day 4, day 7, day 10 and day 14 after intravenous administration. Sandwich ELISA method was used to detect intact multispecific antibody in serum. The method is as follows briefly. Human 4-1BB ECD recombinant protein was diluted to 1 μg / mL in coating buffer (DPBS) for overnight incubation at 4℃. After blocking by 2%BSA in DPBS for 2 hours at room temperature, 100 μL of serum and standard dilution were added into each well and incubate for 1 hour at room temperature. After serum incubation, the biotinylated human CDCP1 was diluted to 1 μg / mL per wells for 1 hour incubation at room temperature. SA-HRP conjugates was diluted in blocking buffer (1%BSA in DPBS) at 1: 8,000 for 1 hour incubation. TMB was added into each well and incubate for 5 mins for color development after sufficient washing. The absorbance at 450 nm was measured by EnVision. The PK parameters were calculated by PKSolver. As shown in FIG. 14, both antibodies achieved a half-life of more than 200 hours. Example 6: Comparison of humanized CDCP1x4-1BBxCD3 trispecific antibodies and CDCP1xCD3 bispecific antibodies

[0353] Bispecific CDCP1xCD3 antibodies 3-38H-2 and 3-38H-6 were generated with a similar structure except not having the 4-1BB antibody moiety linked to the C-terminus of the two heavy chains. 3-38H-2 and 3-38H-6 have the CDCP1 antibody domains from the Tri-38H-2 and Tri-38H-6 antibodies evaluated in the previous example. The 3-38H-2 CDCP1xCD3 bispecific antibody comprises a first heavy chain of SEQ ID NO: 95, a second heavy chain of SEQ ID NO: 96, and a light chain of SEQ ID NO: 97. The 3-38H-6 CDCP1xCD3 bispecific antibody comprises a first heavy chain of SEQ ID NO: 98, a second heavy chain of SEQ ID NO: 99, and a light chain of SEQ ID NO: 100.

[0354] CDCP1-dependent cytotoxicity of CD3 bispecific antibodies was evaluated for Tri-38H-6 and the corresponding bispecific antibody 3-38H-6 as well as Tri-38H-2 and the corresponding bispecific antibody 3-38H-2. MDA-MB-231 with high CDCP1 expression or NCI-H1975 cells with middle / low CDCP1 expression were pre-seeding in 5000 per well for overnight incubation. Gradient dilutions of Tri-38H-6, Tri-38H-2, 3-38H-6, and 3-38H-2 were co-cultured with pre-seeding MDA-MB-231 or PC-3 cells and isolated CD8+T cells suspension at E / T ratio of 4 / 1 for 72 hours.

[0355] Cytotoxicity in MDA-MB-231 or NCI-H1975 cells was measured with results shown in FIG. 15A, indicating that all antibodies tested produced a robust cytotoxic response. Specifically, NCI-H1975 is a CDCP1 low expression cancer cell line to mimic the limited target expression condition in tumor. Cytotoxicity in NCI-H1975 cells was measured, with results as shown in FIG. 15B, indicating that the bispecific 3-38H-2 antibody was less effective at killing proliferating cells than the trispecific Tri-38H-2 antibody under the condition of low CDCP1 expression.

[0356] Cytotoxicity over the course of a week following antibody administration was then assessed in PC-3 cells with low E: T ratio (E: T = 1: 10) collected from two different donors and treated with Tri-38H-2, 3-38H-2, or Tri-ICL-2 antibody, as shown in FIGS. 16A-16B. Cytotoxicity results for cells from the first donor, Donor1, are shown in FIG. 16A, and cytotoxicity results for cells from the second donor, Donor2, are shown in FIG. 16B. Results from both donors indicate that Tri-38H-2 could still markedly inhibit cancer cell proliferation on day 7 following administration, thereby achieving a persistent and durable cytotoxicity effect against tumor cells, while the 3-38H-2 antibody lacking the 4-1BB moiety had lost that ability.

[0357] Finally, cytokine release was measured over the course of a week following antibody administration to PC-3 cells with low E: T ratio collected from two donors and treated with Tri-38H-2, 3-38H-2, or Tri-ICL-2 antibodies, as shown in FIGS. 17A-17B. IFNγ release over time in cells collected from the first donor, Donor1, is shown in FIG. 17A. IFNγ release over time in cells collected from the second donor, Donor2, is shown in FIG. 17B. Results from both donors indicate that Tri-38H-2 antibody administration induced IFNγ release while the 3-38H-2 and Tri-ICL-2 antibodies did not. This suggests that Tri-38H-2 could markedly promote IFNγrelease, while the 3-38H-2 in contrast did not show detectable IFNγ release at any point during incubation at the low E: T ratio (E: T = 1: 10) condition.

[0358] Tables 6-12 describe sequences of the antibodies described herein. Table 6. CD3 sequences of exemplary trispecific antibodies. Table 7.4-1BB sequences of exemplary 4-1BB moiety Table 8. Humanized CDCP1 sequences Table 9. Humanized CDCP1 sequences Table 10. Humanized CDCP1 sequences Table 11. Sequences of exemplary multispecific antibodies

[0359] Example 7: Assessment of in vivo efficacy of CDCP1xCD3x4-1BB and corresponding CDCP1xCD3 antibodies in syngeneic mouse model

[0360] Double knock-in mice (biocytogen) with humanized CD3 and humanized 4-1BB were generated and used to evaluate in vivo efficacy of Tri-38H-2 (CDCP1xCD3x4-1BB) and 3-38H-2 (CDCP1xCD3) . hCDCP1 overexpressing MC38 cells were subcutaneously transplanted into the right flank of hCD3 / h4-1BB double knock-in mice. When tumors grew to an average of about 80 mm3, the mice were randomized and grouped (6 mice per group) based on the tumor volume of each mouse. Then, the mice were intravenously treated with (G1) PBS as vehicle, (G2) Tri-38H-2 (1.5 mg / kg) , (G3) Tri-38H-2 (5 mg / kg) and (G4) 3-38H-2 (1.3 mg / kg) for single dose. For each tumor measurement taken at regular intervals the tumor volume was calculated and an average tumor size + / -the standard error of the mean (SEM) was derived per cohort of surviving animals to determine tumor growth inhibition as shown in FIG. 18, Tri-38H-2 at 1.5 mg / kg or 5 mg / kg markedly inhibit tumor growth, as all mice in 5mg / kg group of Tri-38H-2 achieved tumor free. While 3-38H-2 showed weak tumor growth inhibition.

[0361] The present disclosure is not intended to be limited in scope to the particular disclosed embodiments, which are provided, for example, to illustrate various aspects of the disclosure. Various modifications to the compositions and methods described will become apparent from the description and teachings herein. Such variations may be practiced without departing from the true scope and spirit of the disclosure and are intended to fall within the scope of the present disclosure. SEQUENCE TABLE

Claims

1.An antibody agent comprising an antibody moiety that specifically binds to CUB domain-containing protein 1 (CDCP1) , wherein the antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein:(1) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 3, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 4, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 5, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 6, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs;(2) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 7, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 8, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 10, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs;(3) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 15, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs;(4) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs; or(5) the VH comprises a heavy chain (HC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25, a HC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, and a HC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 27, and the VL comprises a light chain (LC) -CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28, a LC-CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, and a LC-CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, or a variant comprising one or more conservative substitutions in the CDRs.2.An antibody agent comprising an antibody moiety that specifically binds to CUB domain-containing protein 1 (CDCP1) , wherein the antibody moiety comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) , wherein:(1) a heavy chain (HC) -CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 31, 54, 55, 56, 57, 58, and 59 and a light chain (LC) -CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32, 60, 61, and 62;(2) a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 37, 63, 64, 65, 66, 67, and 68, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 38, 69, 70, and 71;(3) a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33, 72, 73, 74, and 75, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 34, 76, 77, 78, and 79;(4) a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in SEQ ID NO: 35, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in SEQ ID NO: 36; or(5) a HC-CDR1, a HC-CDR2, and a HC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VH having the sequence set forth in SEQ ID NO: 39, and a LC-CDR1, a LC-CDR2, and a LC-CDR3, respectively comprises the amino acid sequences of a CDR1, a CDR2, and a CDR3 within the VL having the sequence set forth in SEQ ID NO: 40.3.The antibody agent of claim 1 or 2, wherein:(1) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 55 or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 55, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 61;(2) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 31, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 31, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 32, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 32;(3) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 54, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60;(4) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 56, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 56, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60;(5) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 57, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60;(6) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 58, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60;(7) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 59, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 60;(8) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 54, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 62;(9) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 57, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 61; or(10) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 58, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 61.4.The antibody agent of claim 1 or 2, wherein:(1) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 33, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 33, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 34;(2) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 72, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 76;(3) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 73, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 79, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 79;(4) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 74, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 74, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 78;(5) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 73, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 77;(6) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 75, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 76; or(7) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 72, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 78.5.The antibody agent of claim 1 or 2, wherein:(1) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 37, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 37, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 38;(2) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 65, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 71;(3) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 63, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 69;(4) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 64, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 64, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 70;(5) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 66, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 66, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 69;(6) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 67, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 70;(7) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 68, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 70; or(8) the VH comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 68, and the VL comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 69.6.The antibody agent of any one of claims 1-5, wherein the antibody moiety is an antibody or antigen-binding fragment thereof selected from the group consisting of a full-length antibody, a bispecific antibody, a single-chain Fv (scFv) fragment, a Fab fragment, a Fab’ fragment, a F(ab’ ) 2, an Fv fragment, a disulfide stabilized Fv fragment (dsFv) , a (dsFv) 2, a Fv-Fc fusion, a scFv-Fc fusion, a scFv-Fv fusion, a diabody, a tribody, and a tetrabody.7.The antibody agent of claim 6, wherein the antibody moiety is a full-length antibody.8.The antibody agent of any one of claims 1-7, wherein the antibody moiety is humanized.9.The antibody agent of any one of claims 1-8, wherein the antibody moiety has an Fc fragment selected from the group consisting of Fc fragments from IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, and combinations and hybrids thereof.10.The antibody agent of claim 9, wherein the Fc fragment is selected from the group consisting of Fc fragments from IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, and combinations and hybrids thereof.11.The antibody agent of any one of claims 1-10, wherein the Fc fragment has an enhanced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc fragment.12.The antibody agent of any one of claims 1-10, wherein the Fc fragment has a reduced effector function as compared to a corresponding wildtype Fc fragment.13.The antibody agent of any one of claims 1-12, wherein the CDCP1 is a human wildtype CDCP1.14.The antibody agent of any one of claims 1-13, wherein the antibody agent comprises a second antibody moiety that binds to a second antigen.15.The antibody agent of claim 14, wherein the second antigen is different from CDCP1.16.The antibody agent of any one of claims 1-15, wherein the antibody moiety comprises a full length antibody comprising:a) a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 55, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or greater sequence identity to SEQ ID NO: 55, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 61;b) a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 75, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 76; orc) a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 68, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or an amino acid sequence with at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 69.17.The antibody agent of any one of claims 1-16, wherein the antibody is a multispecific antibody.18.The antibody agent of claim 17, wherein the antibody is a bispecific antibody.19.The antibody agent of claim 18, wherein the bispecific antibody comprises an antibody moiety that specifically binds to CDCP1 and an antibody moiety that binds to CD3.20.The antibody agent of claim 17, wherein the antibody is a trispecific antibody.21.The antibody agent of claim 20, wherein the trispecific antibody comprises an antibody moiety that specifically binds to CDCP1, an anti-an antibody moiety that binds to CD3 and an antibody moiety that binds to 4-1BB.22.The antibody agent of claim 21, wherein the CD3 antibody moiety comprises a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 51, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 52;wherein the CD3 antibody moiety comprises a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 123, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 124; or wherein the CD3 antibody moiety comprises a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 120, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 120, and a VL comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 121, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 121.23.The antibody agent of claim 21 or claim 22, wherein the 4-1BB antibody moiety comprises a VH comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 44.24.The antibody agent of any one of claims 20-23, wherein the antibody agent comprises a) a first polypeptide comprising from N-terminus to C-terminus: a first CDCP1 antibody moiety, a first Fc fragment, and a first 4-1BB antibody moiety that targets 4-1BB and b) a second polypeptide comprising from N-terminus to C-terminus: a second CDCP1 antibody moiety, a CD3 antibody moiety that targets CD3, a second Fc fragment, and a second 4-1BB antibody moiety, and wherein the first Fc fragment and the second Fc fragment comprises an Fc domain.25.The antibody agent of claim 24, wherein the antibody agent comprises:i) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 102; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 103, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 103, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 104, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 104, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 104, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 104;ii) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 105, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 105; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 106, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 106, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 107, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 107, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 107, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 107;iii) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 113, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 113; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 114, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 114, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 115, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 115, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 115;iv) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 116, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 116; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 117, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 117, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 118, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 118;v) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 108, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 108; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 109, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 110, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 110; orvi) a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 111, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 111; b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 112, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 112, c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 110, and d) a fourth polypeptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110, or a variant comprising at least any of 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%sequence identity to SEQ ID NO: 110.26.The antibody agent of any one of claims 20-25, wherein the antibody agent activates T cells in the presence of CDCP1-positive tumor cells, and wherein the antibody agent does not activate T cells or activate T cells to a significantly lesser extent in the absence of CDCP1-positive tumor cells but in the presence of CDCP1-negative cells, optionally wherein the CDCP1-negative cells are CDCP1-negative tumor cells.27.The antibody agent of claim 26, wherein the CD3 activation signal of the antibody agent in the presence of CDCP1-positive tumor cells are at least any of 3-fold, 5-fold, 10-fold, 20-fold, 50-fold, 100-fold, 200-fold, 500-fold, 1000-fold, 2000-fold, 5000-fold, 10,000-fold, 20,000-fold, 50,000-fold, or 100,000-fold of the CD3 activation signal of the antibody agent in the presence of the CDCP1-negative cells but in the absence of CDCP1-positive tumor cells at a concentration that is equivalent to the EC50 (half maximum effective concentration) or the Emax (maximum effective concentration) in the presence of the CDCP1-positive tumor cells.28.The antibody agent of claim 26 or 27, wherein the 4-1BB activation signal of the antibody agent in the presence of CDCP1-positive tumor cells are at least any of 3-fold, 5-fold , 10-fold, 20-fold, 50-fold, 100-fold, 200-fold, 500-fold, 1000-fold, 2000-fold, 5000-fold, 10,000-fold, 20,000-fold, 50,000-fold, or 100,000-fold of the 4-1BB activation signal of the antibody agent in the presence of the CDCP1-negative cells but in the absence of CDCP1-positive tumor cells at a concentration that is equivalent to the EC50 or the Emax in the presence of the CDCP1-positive tumor cells.29.The antibody agent of any one of claims 26-28, wherein the antibody agent results in a cytotoxicity of no more than any of 10%, 7.5%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, or 1%of the CDCP1-negative cells at a concentration that is equivalent to the EC50 or the Emax in the presence of the CDCP1-positive tumor cells, optionally wherein the ratio of the T cells and the CDCP1 negative cells is about or no more than about any of 4: 1, 3: 1, 2: 1, 1: 1, 1: 2, 1: 3, 1: 4, 1: 5, 1: 6, 1: 7, 1: 8, 1: 9 or 1: 10.30.The antibody agent of any one of claims 26-29, wherein the antibody agent results in a cytotoxicity of no less than any of 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, or 80%of the CDCP1-positive tumor cells at a concentration that is equivalent to the EC50 or the Emax in the presence of the CDCP1-positive tumor cells.31.The antibody agent of any one of claims 26-28 and 30, wherein the ratio of the T cells and the CDCP1-positive tumor cells is about or no more than about any of 4: 1, 3: 1, 2: 1, 1: 1, 1: 2, 1: 3, 1: 4, 1: 5, 1: 6, 1: 7, 1: 8, 1: 9 or 1: 10.32.The antibody agent of any one of claims 26-28, wherein the ratio of the T cells and the CDCP1-negative cells is the same as the ratio of the T cells and the CDCP1-positive tumor cells.33.The antibody agent of any one of claims 26-32, wherein the CDCP1-positive tumor cells have at least any of 100, 200, 500, 700, 1000, 2000, 5000, 7000, 10,000, 15,000, 20,000, 25,000, 30,000, 35,000, 40,000, 45,000, or 50,000 tumor molecules on the surface, optionally wherein the CDCP1 positive tumor cells have:a) about 100-15000 CDCP1 molecules on the surface;b) about 15000-50000 CDCP1 molecules on the surface;c) more than 50000 CDCP1 molecules on the surface.34.The antibody agent of any one of claims 26-33, wherein the T cells comprise primary T cells, optionally wherein the T cells comprise CD8+ T cells.35.A pharmaceutical composition comprising the antibody agent of any one of claims 1-34, and a pharmaceutically acceptable carrier.36.A nucleic acid encoding the antibody agent of any one of claims 1-34 or a portion thereof.37.A vector comprising the nucleic acid of claim 36.38.A host cell comprising the nucleic acid of claim 36, or the vector of claim 37.39.A method of producing an antibody agent comprising:a) culturing the host cell of claim 38 under conditions effective to express the antibody agent; andb) obtaining the expressed antibody agent from the host cell.40.A method of treating a disease or disorder, comprising administering to an individual in need thereof a composition comprising the antibody agent of any one of claims 1-34, or the pharmaceutical composition of claim 35.41.The method of claim 40, wherein the disease or disorder is a cancer, optionally wherein the cancer expresses CDCP1.42.The method of claim 41, wherein the cancer is a cervical cancer, a prostate cancer, a breast cancer, a lung cancer, a pancreatic cancer, an ovarian cancer, a colorectal cancer, a clear cell renal cancer carcinoma (ccRCC) , a thyroid cancer, a urothelial cancer, a stomach cancer, a carcinoid, a liver cancer, a glioma, an endometrial cancer, a renal cancer, or a testis cancer.43.The method of any one of claims 40-42, wherein the individual is a human.

Images