Anti-CD276 monoclonal antibody, its conjugates, and use thereof

Abstract

The humanized monoclonal antibodies and the antibody drug conjugates targeting CD276 (B7-H3), derived from the murine monoclonal antibody clone 8H9. These antibodies and the antibody drug conjugates exhibit high affinity and specificity for human CD276, a member of the B7 family of immune regulatory proteins, which is overexpressed in various tumors and involved in immune checkpoint modulation. The humanized antibodies and the antibody drug conjugates are applied for targeted treatment of cancers and refractory diseases.

Description

ANTI-CD276 MONOCLONAL ANTIBODY, ITS CONJUGATES, AND USE THEREOFDESCRIPTION

[0001] INFORMATION OF PRIORITY

[0002] The present application claims partially the benefit of PCT / CN2024 / 133750 field on Nov 22, 2024, and PCT / CN2025 / 096662, filed May 22, 2025, which are incorporated herein reference.TECHNICAL FIELD

[0003] The present application relates to the field of antibody drugs. Specifically, the present application relates to an anti-CD276 monoclonal antibody, its conjugates, and use thereof.BACKGROUND

[0004] Cancer remains a significant global health challenge, with many tumors expressing high levels of CD276 (B7-H3, B7H3) , which is associated with tumor progression and immune evasion. Traditional cancer therapies often lack specificity and can cause severe side effects. Antibody-drug conjugates (ADCs) offer a targeted approach by linking cytotoxic agents to antibodies that specifically bind to tumor-associated antigens. Humanized anti-CD276 ADCs aim to selectively deliver cytotoxic drugs to CD276-overexpressing cancer cells, thereby improving therapeutic efficacy and reducing toxicity to healthy tissues. However, optimizing ADC stability, payload selection, minimizing immunogenicity, more importantly broadening clinical application in prostate cancer and other refractory diseases remain critical challenges. This application seeks to address these issues by developing a novel humanized anti-CD276 ADC with enhanced targeting and reduced toxicity for the treatment of prostate cancers and various other cancers.SUMMARY

[0005] The aim of this application is to provide an anti-CD276 (B7H3) monoclonal antibody, its conjugates and applications thereof.

[0006] Specifically, the technical solutions of this application are as follows:

[0007] 1. A compound represented by formula (I’ -c) :

[0008] wherein,

[0009] Drug is a cytotoxic agent;

[0010] L11, L13, and L14 are a linker component, which are independently selected from absent, C1-8 alkylene, C1-6 heteroalkylene, C2-6 alkenylene, C2-6 alkynylene, C3-10 cycloalkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, C6-14 heteroaryl, or C3-C14 heterocycyl, 1-8 carbon atoms of amide, amino, 1-8 carbon atoms of esters, 1-8 carbon atoms of ether, oxy, alkylcycloalkylene, heterocycloalkylene, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkylene, carboxyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl, 1-8 natural or unnatural amino acids, phosphino, phosphoryl, carbonyl, or polyethyleneoxy unit, wherein, the L11, L13, and L14 are the combination of the 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl;

[0011] R13 is independently selected from H or C1-C8 of alkyl;

[0012] L1v is a function group that link to an amino acid of an antibody or an antibody-like protein independently; L1v having the following structures:

[0013] wherein

[0014] is a site that links L14; “#” is a site that links a S (thiol) , O (phenol) , NH (amino) , CHO (aldehyde) , C (=O) (ketone) , C (O) (NH) (amide) and C (O) (OH) (carboxylate) of an antibody; Wherein X2 and X2’ are independently H, C (=O) H, C (=O) CH3, C1-C8 of alkyl; or combination above thereof;

[0015] the connecting bond “-” in the middle of the two atoms means it can link either one of the two atoms.

[0016] 2. The compound according to item 1, wherein

[0017] L11, L13, and L14 are a linker component, which are independently selected from C1-8 alkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, 1-8 carbon atoms of amide, amino, 1-8 carbon atoms of esters, 1-8 carbon atoms of ether, carboxyl, alkylcarbonyl, 1-8 natural or unnatural amino acids, carbonyl, or polyethyleneoxy unit,

[0018] wherein, the L11, L13, and L14 are the combination of the 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C6-alkyl, or carboxyl,

[0019] R13 is independently selected from H or C1-C4 of alkyl.

[0020] 3. The compound according to item 1, wherein

[0021] L11, L13, and L14 are a linker component, which are independently selected from C1-6 alkylene (preferably methylene, propylene, butylene, or pentylene) , C6-8 arylene (preferably phenylene) , C7-10 aralkylene (preferably benzylidene) , 1-6 carbon atoms of amide (preferably R11NHC (O) -R11, R11 is independently selected from absent, methylene, propylene, butylene, or pentylene) , amino, 1-6 carbon atoms of ether, carboxyl, carbonyl, or polyethyleneoxy unit,

[0022] wherein, the L11, L13, and L14 are the combination of the 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C3-alkyl (preferably methyl or isopropyl) , or carboxyl,

[0023] R13 is H.

[0024] 4. The compound according to item 1, wherein Drug has the following structure:

[0025] 5. The compound according to item 1, where in L14 has any one of the following structures:

[0026] or -NH-.

[0027] 6. The compound according to item 1, wherein L1v has any one of the following structures:

[0028] 7. The compound according to item 1, wherein R13-L13 has any one of the following structures:

[0029] and R13 is H.

[0030] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0031] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components selected from C1-8 alkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, 1-8 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0032] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components selected from C1-4 alkylene, C6-8 aryl, C7-10 aralkylene, 1-6 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0033] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components selected from methylene, phenylene, benzylidene, 1-2 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0034] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components selected from C1-8 alkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, 1-8 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C6-alkyl.

[0035] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components selected from C1-8 alkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, 1-8 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from methyl, ethyl, propyl or isopropyl.

[0036] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components selected from C1-8 alkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, 1-8 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from methyl, or isopropyl.

[0037] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components selected from C1-4 alkylene, C6-8 aryl, C7-10 aralkylene, 1-6 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C6-alkyl.

[0038] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components selected from C1-4 alkylene, C6-8 aryl, C7-10 aralkylene, 1-6 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from methyl, ethyl, propyl or isopropyl.

[0039] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 2, 3, or 4 linker components selected from C1-4 alkylene, C6-8 aryl, C7-10 aralkylene, 1-6 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from methyl, or isopropyl.

[0040] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 3 or 4 linker components selected from C1-4 alkylene, C6-8 aryl, C7-10 aralkylene, or 1-2 carbon atoms of amide; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C6-alkyl.

[0041] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 is a linker component, which is combination of 3 or 4 linker components selected from C1-4 alkylene, 1-2 carbon atoms of amide, or carbonyl; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C6-alkyl.

[0042] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L11 has the following formula:

[0043] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently selected from C1-8 alkylene, C1-6 heteroalkylene, C2-6 alkenylene, C2-6 alkynylene, C3-10 cycloalkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, C6-14 heteroaryl, or C3-C14 heterocycyl, 1-8 carbon atoms of amide, amino, 1-8 carbon atoms of esters, 1-8 carbon atoms of ether, oxy, alkylcycloalkylene, heterocycloalkylene, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkylene, carboxyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl, 1-8 natural or unnatural amino acids, phosphino, phosphoryl, carbonyl, or polyethyleneoxy unit; or L14 is the combination of the 2 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0044] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently selected from C1-8 alkylene, or 1-8 carbon atoms of amide; or L14 is the combination of the 2 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0045] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently 1-8 carbon atoms of amide; or L14 is the combination of C1-8 alkylene, and 1-8 carbon atoms of amide; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl. In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently R1NHC (O) -R1, or the combination of R1NHC (O) -R1 and C1-8 alkylene, wherein R1 is independently selected from present, methylene, propylene, butylene, or pentylene; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0046] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently R1NHC (O) -R1, or the combination of R1NHC (O) -R1 and C1-3 alkylene, wherein R1 is independently selected from present, or propylene; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0047] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently selected from C1-8 alkylene, or 1-8 carbon atoms of amide; or L14 is the combination of the 2 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C6-alkyl. In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently selected from C1-8 alkylene, or 1-8 carbon atoms of amide; or L14 is the combination of the 2 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C3-alkyl.

[0048] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently selected from C1-8 alkylene, or 1-8 carbon atoms of amide; or L14 is the combination of the 2 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from methyl or propyl.

[0049] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently 1-8 carbon atoms of amide; or L14 is the combination of the C1-8 alkylene, and 1-8 carbon atoms of amide; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C6-alkyl.

[0050] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently 1-8 carbon atoms of amide; or L14 is the combination of the C1-8 alkylene, and 1-8 carbon atoms of amide; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C3-alkyl.

[0051] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently 1-8 carbon atoms of amide; or L14 is the combination of the C1-8 alkylene, and 1-8 carbon atoms of amide; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from methyl or propyl.

[0052] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently R1NHC (O) -R1, or the combination of R1NHC (O) -R1 and C1-3 alkylene, wherein R1 is independently selected from present, or propylene; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C6-alkyl.

[0053] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently R1NHC (O) -R1, or the combination of R1NHC (O) -R1 and C1-3 alkylene, wherein R1 is independently selected from present, or propylene; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C3-alkyl.

[0054] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 is a linker component, which is independently R1NHC (O) -R1, or the combination of R1NHC (O) -R1 and C1-3 alkylene, wherein R1 is independently selected from present, or propylene; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from methyl or propyl.

[0055] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L14 has the following formula:

[0056] or -NH-.

[0057] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L13 is a linker component, which is independently selected from absent, C1-8 alkylene, C1-6 heteroalkylene, C2-6 alkenylene, C2-6 alkynylene, C3-10 cycloalkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, C6-14 heteroaryl, or C3-C14 heterocycyl, 1-8 carbon atoms of amide, amino, 1-8 carbon atoms of esters, 1-8 carbon atoms of ether, oxy, alkylcycloalkylene, heterocycloalkylene, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkylene, carboxyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl, 1-8 natural or unnatural amino acids, phosphino, phosphoryl, carbonyl, or polyethyleneoxy unit, wherein, the L13 is the combination of the 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0058] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L13 is a linker component, which is independently selected from C1-8 alkylene, C6-14 aryl, 1-8 carbon atoms of amide, amino, 1-8 carbon atoms of esters, 1-8 carbon atoms of ether, carboxyl, or polyethyleneoxy unit, wherein, the L13 is the combination of the 5, 6, 7, or 8 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0059] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L13 is a linker component, which is independently selected from C2-6 alkylene, C6-10 aryl, 1-6 carbon atoms of amide, amino, 1-2 carbon atoms of esters, 1-2 carbon atoms of ether, carboxyl, or polyethyleneoxy unit, wherein, the L13 is the combination of the 5, 6, 7, or 8 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl.

[0060] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L13 is a linker component, which is independently selected from C1-8 alkylene, C6-14 aryl, 1-8 carbon atoms of amide, amino, 1-8 carbon atoms of esters, 1-8 carbon atoms of ether, carboxyl, or polyethyleneoxy unit, wherein, the L13 is the combination of the 5, 6, 7, or 8 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from carboxyl.

[0061] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L13 is a linker component, which is independently selected from C2-6 alkylene, C6-10 aryl, 1-6 carbon atoms of amide, amino, 1-2 carbon atoms of esters, 1-2 carbon atoms of ether, carboxyl, or polyethyleneoxy unit, wherein, the L13 is the combination of the 5, 6, 7, or 8 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from carboxyl.

[0062] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , R13 is independently selected from H or C1-C8 of alkyl. In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , R13 is independently selected from H or C1-C4 of alkyl. In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , R13 is independently selected from H or methyl. In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , R13 is H.

[0063] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , R13-L13 has the following formula:

[0064] R13 is H.

[0065] In certain embodiments, in Formula (I’ -c) , L1v has the following structures:

[0066] In certain embodiments, the compound is any one of A001-A030, A034-A037, A069-A093, and A099-A107.

[0067] 8. A compound represented by formula (II’ -c) :

[0068] wherein,

[0069] Drug is a cytotoxic agent;

[0070] L11, L13, and L14 are a linker component, which are independently selected from absent, C1-8 alkylene, C1-6 heteroalkylene, C2-6 alkenylene, C2-6 alkynylene, C3-10 cycloalkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, C6-14 heteroaryl, or C3-C14 heterocycyl, 1-8 carbon atoms of amide, amino, 1-8 carbon atoms of esters, 1-8 carbon atoms of ether, oxy, alkylcycloalkylene, heterocycloalkylene, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkylene, carboxyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl, 1-8 natural or unnatural amino acids, phosphino, phosphoryl, carbonyl, or polyethyleneoxy unit, wherein, the L11, L13, and L14 are the combination of the 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from halogen atoms, C1-C6-alkyl, C3-C7-cycloalkyl, C3-C7-cycloalkyl-C1-C3-alkyl, C1-C6-fluoroalkyl, C1-C6-alkoxy, C1-C6-Fluoroalkoxy, cyano, nitro, carboxyl, C1=C6-sulfanyl, -S (O) -C1-C6-Alkyl, -S (O) 2-C1-C6-alkyl, or aryl;

[0071] R13 is independently selected from H or C1-C8 of alkyl;

[0072] L1v is a function group that link to an amino acid of an antibody or an antibody-like protein independently; and L1v has any one of the following structures:

[0073] wherein

[0074] is a site that links L14; “#” is a site that links a S (thiol) , O (phenol) , NH (amino) , CHO (aldehyde) , C (=O) (ketone) , C (O) (NH) (amide) and C (O) (OH) (carboxylate) of an antibody; wherein X2 and X2’ are independently H, C (=O) H, C (=O) CH3, C1-C8 of alkyl; or combination above thereof;

[0075] the connecting bond “-” in the middle of the two atoms means it can link either one of the two atoms.

[0076] 9. The compound according to item 8, wherein

[0077] L11, L13, and L14 are a linker component, which are independently selected from C1-8 alkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, 1-8 carbon atoms of amide, amino, 1-8 carbon atoms of esters, 1-8 carbon atoms of ether, carboxyl, alkylcarbonyl, 1-8 natural or unnatural amino acids, carbonyl, or polyethyleneoxy unit,

[0078] wherein, the L11, L13, and L14 are the combination of the 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C6-alkyl, or carboxyl,

[0079] R13 is independently selected from H or C1-C4 of alkyl.

[0080] 10. The compound according to item 8, wherein

[0081] L11, L13, and L14 are a linker component, which are independently selected from C1-6 alkylene (preferably methylene, propylene, butylene, or pentylene) , C6-8 arylene (preferably phenylene) , C7-10 aralkylene (preferably benzylidene) , 1-6 carbon atoms of amide (preferably R11NHC (O) -R11, R11 is independently selected from absent, methylene, propylene, butylene, or pentylene) , amino, 1-6 carbon atoms of ether, carboxyl, carbonyl, or polyethyleneoxy unit,

[0082] wherein, the L11, L13, and L14 are the combination of the 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 linker components; and the linker component is optionally substituted with one or more substituents, and the substituent may be the same or different from each other, selected from C1-C3-alkyl (preferably methyl or isopropyl) , or carboxyl,

[0083] R13 is H.

[0084] 11. The compound according to item 8, wherein Drug has any one of the following structures:

[0085] 12. The compound according to item 8, where in L14 has the following structure:

[0086] or -NH-.

[0087] 13. The compound according to item 8, wherein L1v has any one of the following structures:

[0088] 14. The compound according to item 8, wherein R13-L13 has the following structure:

[0089] and R13 is H.

[0090] In Formula (II’ -c) , the specific choices for L11, L13, L14, R13, and L1v are the same as that in Formula (I’-c) mentioned above.

[0091] In certain embodiments, the compound is any one of A031-A033, A068, and A080.

[0092] 15. An anti-CD276 antibody-drug conjugate represented by formula (I’ ) :

[0093] wherein mAb is an antibody or an antigen-binding fragment thereof;

[0094] the definition of Drug, L11, R13, L13, L14 and L1v are the same as that in Formula (I’ -c) mentioned above;

[0095] and n is any integar of 1-30, preferably 1-20, more preferably 2～8 (such as 2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8) . In some embodiment, the antibody is the anti-CD276 antibody of the present applicaition. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein comprises (a) a heavy chain variable region comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, wherein the amino acid sequence of the CDR-H1 is shown by SEQ ID NO: 1, the amino acid sequence of the CDR-H2 is shown by SEQ ID NO: 2, and the amino acid sequence of the CDR-H3 is shown by SEQ ID NO: 3; and (b) a light chain variable region comprising d three light chain complementarity determining regions CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, wherein the amino acid sequence of the CDR-L1 is shown by SEQ ID NO: 4, the amino acid sequence of the CDR-L2 is shown by SEQ ID NO: 5, and the amino acid sequence of the CDR-L3 is shown by SEQ ID NO: 6. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein may comprise a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 13 and / or a light chain variable region comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 14. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein may comprise a heavy chain comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 17 and / or a light chain comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 18. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein comprises (a) a heavy chain variable region comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, wherein the amino acid sequence of the CDR-H1 is shown by SEQ ID NO: 7, the amino acid sequence of the CDR-H2 is shown by SEQ ID NO: 8, and the amino acid sequence of the CDR-H3 is shown by SEQ ID NO: 9; and (b) a light chain variable region comprising d three light chain complementarity determining regions CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, wherein the amino acid sequence of the CDR-L1 is shown by SEQ ID NO: 10, the amino acid sequence of the CDR-L2 is shown by SEQ ID NO: 11, and the amino acid sequence of the CDR-L3 is shown by SEQ ID NO: 12. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein may comprise a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 15 and / or a light chain variable region comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 16. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein may comprise a heavy chain comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 19 and / or a light chain comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 20.

[0096] In certain embodiments, the conjugate is any one of C001-C030, C034-C037, C069-C093, and C099-C107.

[0097] 16. An anti-CD276 antibody-drug conjugate represented by formula (II’ ) :

[0098] wherein mAb is an antibody or an antigen-binding fragment thereof;

[0099] the definition of Drug, L11, R13, L13, L14 and L1v are the same as that in any one of caims 8-15; and n is any integar of 1-30, preferably 1-20, more preferably 2～8 (such as 2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8) . In some embodiment, the antibody is the anti-CD276 antibody as mentioned above for the conjugate represented by formula (I’ ) .

[0100] In certain embodiments, the conjugate is any one of A031-A033, C0068, and C080.

[0101] 17. An anti-CD276 antibody-drug conjugate represented by formula (III’ ) :

[0102]

(Drug-L200) m1

L100- (DUPA) m2

[0103] wherein,

[0104] Drug is a cytotoxic agent;

[0105] L100 and L200 are a linker component, which are independently selected from absent, C1-8 alkylene, C1-6 heteroalkylene, C2-6 alkenylene, C2-6 alkynylene, C3-10 cycloalkylene, C6-14 aryl, C7-15 aralkylene, C6-14 heteroaryl, or C3-C14 heterocycyl, 1-8 carbon atoms of amide, amino, 1-8 carbon atoms of esters, 1-8 carbon atoms of ether, oxy, alkylcycloalkylene, heterocycloalkylene, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkylene, carboxyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl, 1-8 natural or unnatural amino acids, phosphino, phosphoryl, carbonyl, or polyethyleneoxy unit; and wherein m1, m2, n1, and n2 are independently 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10.

[0106] In certain embodiments, the specific choices for L100 and L200 are the same as that in Formula (I’ -c) mentioned above.

[0107] 18. The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to item 17, wherein DUPA has any one of the following structures:

[0108] wherein the is the connecting site that is linked to the linker in the conjugate;

[0109] 19. The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to item 17, wherein Drug has any one of the following structures:

[0110] In certain embodiments, the conjugate is any one of C0094-C098, and C108.

[0111] This application provides an anti-CD276 monoclonal antibody, which exhibit high affinity and specificity for human CD276, a member of the B7 family of immune regulatory proteins, which is overexpressed in various tumors and involved in immune checkpoint modulation. The anti-CD276 monoclonal antibody of the application is humanized antibody. Humanization of antibodies is a process that modifies non-human monoclonal antibodies to reduce their immunogenicity in humans. By replacing most non-human sequences with human antibody sequences while retaining the antigen-binding regions (CDRs) , humanized antibodies maintain their specificity while minimizing immune reactions in the body. This enhances their safety, efficacy, and half-life, making them more suitable for clinical use in treating diseases like cancer and autoimmune disorders.

[0112] The anti-CD276 monoclonal antibody has been engineered to maintain the original binding specificity of clone 8H9 while reducing immunogenicity in humans. Importantly the anti-B7H3 antibody drug conjugate of this invention contains extra affinity to target PSMA antigens which have much broader application in targeted treatment of prostate cancers and other refractory diseases in comparison to the ifinatamab deruxtecan, the well-known anti-B7H3-ADC in the clinical phase III trial now.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0113] The drawings are intended for a better understanding of the present application and do not constitute undue limitations on the present application. Among them:

[0114] Figure 1 shows that the B7H3 antibodies from sequences 0-0.0 and 1-0.0 or from monoclonal 8H9 can bind to both B7H3-4Ig and B7H3-2Ig antigens with high affinity.

[0115] Figure 2 shows the examples of the size exclusion chromatography (SEC) -HPLC analysis the purity of the B7H3 antibodies and the B7H3-ADCs after purification: a: an antibody from sequence 0-0.0; b: an antibody from sequence 1-0.0; c: B7H3 mAb-C008 conjugate; d: B7H3 mAb-C017 conjugate; e. B7H3 mAb-C068 conjugate. The analytical figures here showed that all of the antibodies and the ADCs were over 98%pure.

[0116] Figure 3 shows the examples of hydrophobic interaction chromatography (HIC) -HPLC analysis the drug distributions of the B7H3-ADCs: a: B7H3 mAb-C067 made through the homogenous conjugation, D0, 0.44%; D2, 5.61%, D4, 85.25%; D6, 5.36%; D8, 3.34%; DAR=4.1; b: B7H3 mAb-C012 made through the homogenous conjugation, D0, 2.20%; D2, 11.59%, D3, 2.10%; D4, 80.54%; D6, 1.08%; D8, 2.49%; DAR=3.8.

[0117] Figure 4 shows the Extracted Ion Chromatograms (EIC) and MS / MS Spectra of the Drug-Conjugated Peptide [SC (221) DK] in B7H3-C067 ADC of batch C24015-241113 (DAR=4.1) . Figure a is Extracted Ion Chromatogram (EIC) of the precursor ion of the drug-conjugated peptide; Figures b and c are the MS / MS spectrum of the drug-conjugated peptide at a retention time (RT) of 53.28 min, and the zoomed-in MS / MS spectrum in the m / z range of 390 to 705, respectively. The drug was determined to conjugate at the C221 (cysteine-221) .

[0118] Figure 5 shows The Extracted Ion Chromatograms (EIC) and MS / MS Spectra of the Drug-Conjugated Peptide [GEC (214) ] in B7H3 mAb-C067 ADC of batch C24015-241113 (DAR=4.1) . Figure a is Extracted Ion Chromatogram (EIC) of the precursor ion of the drug-conjugated peptide; Figures b and c are the MS / MS spectrum of the drug-conjugated peptide at a retention time (RT) of 27.80 min, and the zoomed-in MS / MS spectrum in the m / z range of 395 to 705, respectively. The drug was determined to conjugate at the C214 (cysteine-214) .

[0119] Figure 6 shows the EIC and MS / MS Spectra of the Drug-Conjugated Peptide [THTC (227) PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK] in B7H3 mAb-C067 ADC (DAR=4.1) . Figure a is Extracted Ion Chromatogram (EIC) of the precursor ion of the drug-conjugated peptide; Figures b and c are the MS / MS spectrum of the drug-conjugated peptide at a retention time (RT) of 33.49 min, and the zoomed-in MS / MS spectrum in the m / z range of 390 to 705, respectively. The drug was determined to conjugate at the C227 (cysteine-227) .

[0120] Figure 7 shows the determination of the reduced molecular weight for the deglycosylated B7H3 mAb-C067 of batch C24015-241113 (DAR=4.1) by MS. a. molecular weight of light chain of antibody and its drug-conjugated form; b. molecular weight of heavy chain of antibody and its drug-conjugated form. It demonstrated that the drugs were mainly conjugated in heavy and light chains of Fab region.

[0121] Figure 8 shows the affinities of the B7H3 mAb -C067 conjugate and the isotype antibody (Suvizumab) to the B7H3 antigens from mouse, rat, cyno-monkey and human. It demonstrated that the B7H3-ADC only bound cyno-or human B7H3 antigens.

[0122] Figure 9 shows the affinities of the B7H3 mAb and the B7H3 mAb -C067 conjugate to the PSMA antigens from mouse, rat, cyno-monkey and human. It demonstrated that the B7H3-ADC, which contains a PSMA binder (aDUPA group) in the linker, can bind all the PSMA antigens from the four different species. But the B7H3 mAb alone, which does not contain the PSMA binder, cannot bind the PSMA antigens from the four different species.

[0123] Figure 10 shows the endocytosis of the B7H3 mAb, the B7H3 mAb -C067 conjugate and the isotype (suvizumab) into the VCaP cells. Since the VCaP cells highly express B7H3 antigens, it demonstrated that both the B7H3 mAb and the B7H3-ADC had very good trafficking ability into the VCaP cells, and both of them can internalize over 54%and 81%in 30 and 90 minutes respectively. The isotype which has almost no B7H3 binder, only can internalize less than 10%in 120 minutes.

[0124] Figure 11 shows the endocytosis of the B7H3 mAb, the B7H3 mAb -C067 conjugate and the isotype (suvizumab) into the MDA-MB-231 cells. it demonstrated that all three had very poor trafficking ability into the cells, and internalized less than 10%in 120 minutes, due to that the MDA-MB-231 cells do not express either B7H3 or PSMA antigens.

[0125] Figure 12 shows the DNA damage assays for the B7H3 mAb, B7H3 mAb-C067 conjugate, B7H3 mAb-DUPA (only linker without exatecan payload) and exatecan. It showed that both the ADC and the payload caused the DNA damage in NCI-H526 cells, when the compounds were given higher than 68.97 nM and 4 nM respectively among the tested three doses for each of the two compounds; In contrast, both B7H3 mAb and B7H3 mAb-DUPA did not cause the DMA damage since both did not contain the topoisomerase inhibitor (exatecan) .

[0126] Figure 13 shows the apoptosis assays for the B7H3 mAb, B7H3 mAb-C067 conjugate, B7H3 mAb-DUPA (only linker without exatecan payload) and exatecan. It showed that both the ADC and the payload caused the apoptosis of NCI-H526 cells, when the compounds were given higher than 2.8945 nM and 0.4 nM respectively among the tested three doses for each of the two compounds; In contrast, both B7H3 mAb and B7H3 mAb-DUPA did not cause the apoptosis damage since both did not contain the topoisomerase inhibitor (exatecan) .

[0127] Figure 14 shows the bystander assays of the B7H3 ADCs in the co-culture system of MDA-MB-231 (target-negative cells) and C4-2B (target-positive cells) along with the positive control of B7H3 mAb-vc-MMAE and the negative control of B7H3-mc-MMAF: a: in the co-culture of both MDA-MB-231 and C4-2B cells, MDA-MB-231 proliferation was inhibited by B7H3 mAb-C067 and the positive control MMAE, but not by the negative control MMAF; b: in the targeted culture of C4-2B cells only, all of the tested B7H3 mAb ADCs (B7H3-C067, B7H3-vc-MMAE and B7H3-mc-MMAF) can inhibit the cells growth well, although B7H3-mc-MMAF was worse than the others; c: in the none targeted culture of MDA-MB-231 cells only, all of the tested B7H3 mAb ADCs (B7H3-C067, B7H3-vc-MMAE and B7H3-mc-MMAF) were not able to inhibit the cell growth.

[0128] Figure 15 shows the ADCC and CDC assays of the B7H3 mAb and its ADCs along with the control of the isotype antibody (suvizumab) . It demonstrated that in the targeted C4-2B cells, both B7H3 mAb and B7H3 mAb ADCs (C067) had ADCC effects but no CDC effect at all.

[0129] Figure 16 shows the In Vitro tumor inhibition of the B7H3 mAb, B7H3 mAb-ADCs and isotype mAb-ADCs along with exatecan against both strong B7H3 (+++) antigen positive and strong PSMA (+++) antigen positive C4-2B cells. It demonstrated that the B7H3 mAb conjugates of the invention (C012, C067 and C068) , which have both B7H3 and PSMA binders, had the superior potencies to the other conjugates, wherein the CPT structure is the similar to C068 without DUPA group; iso mAb is Suvizumab (has no both B7H3 and PSMA binding ability) ; iso mAb-C068 contains PSMA binder but no B7H3 binding ability; B7H3 mAb-CPT has B7H3 binding ability but no PSMA binder; iso -CPT does not have both B7H3 and PSMA binders; and both B7H3 mAb-DUPA and B7H3 mAb have not carried a payload, thus could not show potency at all.

[0130] Figure 17 shows the In Vitro tumor inhibition of the B7H3 mAb, B7H3 mAb-ADCs and isotype mAb-ADCs against mild B7H3 (++) antigen positive and strong PSMA (+++) antigen positive PC-3-4B9 cells. The information of the conjugates is described in Figure 16. It demonstrated that both the B7H3 mAb-C067 conjugate and iso mAb-C067, which have strong PSMA binding, had the superior potencies to the other conjugates.

[0131] Figure 18 shows the in vitro tumor inhibition of the B7H3 mAb, B7H3 mAb-ADCs and isotype mAb-ADCs against strong B7H3 (+++) antigen positive and weak PSMA (+) antigen positive VCaP cells. The information of the conjugates is described in Figure 16. It demonstrated that both the B7H3 mAb-C067 and B7H3 mAb -C005 conjugate had much better potency than the other conjugates. B7H3 mAb-Dxd had worse potency than the former two conjugates, but exhibited better potency than iso mAb-C067 and iso mAb-CPT because B7H3-Dxd had the stronger B7H3 affinity than the iso mAb conjugates.

[0132] Figure 19 shows the in vitro tumor inhibition of the B7H3 mAb, B7H3 mAb-ADCs and isotype mAb-ADCs against both strong B7H3 (+++) antigen positive and PSMA (+++) antigen positive MDA-PCa-2b cells. The information of the conjugates is described in Figure 16. It demonstrated that both the B7H3 mAb-C067, B7H3 mAb-C068 and B7H3 mAb -C071 conjugates of the invention had much better potency than the other conjugates. Both B7H3 mAb-CPT (which has only B7H3 binder) and iso mAb-C067 (which contains only PSMA binder) , had worse potency the former three conjugates, but had better potency than iso mAb-CPT due to iso mAb-CPT had no affinity to against either B7H3 or PSMA antigens.

[0133] Figure 20 shows the in vitro tumor inhibition of the B7H3 mAb, B7H3 mAb-ADCs and isotype mAb-ADCs against mild B7H3 (++) antigen positive and weak PSMA (+) antigen positive 22RV1 cells. The information of the conjugates is described in Figure 16. It demonstrated that both the B7H3 mAb-C067, and B7H3 mAb-C068 conjugates of the invention had much better potency than the other conjugates. Both B7H3 mAb-CPT (which also contains mild B7H3 binder) , had a little worse potency the former two conjugates, but had better potency than B7H3-Dxd, iso mAb-CPT067 and iso mAb-CPT.

[0134] Figure 21 shows the in vitro tumor inhibition of the B7H3 mAb, B7H3 mAb-ADCs and isotype mAb-ADCs against both B7H3 (-) antigen negative and PSMA (-) antigen negative MDA-MB-231 cells. The information of the conjugates is described in Figure 16. It demonstrated that all the conjugates were not able to kill the cells except the small molecule, exatecan, due to the conjugates have no affinity to the cell.

[0135] Figure 22 shows in vivo change in tumor volume in a C4-2B prostate cancer cell xenograft mouse model in response to a single dose treatment with B7H3-ADCs of the invention along with Hum30-Dxd (Ifinatamab deruxtecan) , isotype mAb (suvizumab) -C067, and B7H3 mAb plus none conjugated exatecan over 28 days. It demonstrated that: 1. B7H3-ADCs of the invention exhibited much better anti-prostate cancer activity than Hum30-Dxd (Ifinatamab deruxtecan) , isotype mAb (suvizumab) -C067, and B7H3 mAb plus none conjugated exatecan; 2. B7H3-067 conjugate showed dose dependent activities; 3. All of the B7H3-ADCs of the invention (B7H3-C004, C005, C006, C007, C008, C009, C010 and C067) can eliminate the prostate tumors at dose 8.0 mg / kg) .

[0136] Figure 23 shows in vivo change in tumor volume in a 22Rv1-Luc prostate cancer cell xenograft mouse model in response to a single dose treatment with B7H3-ADCs of the invention along with Hum30-Dxd (Ifinatamab deruxtecan) , isotype mAb (suvizumab) -C067, and B7H3 mAb plus none conjugated exatecan over 18 days. It demonstrated that: 1. B7H3-ADCs of the invention exhibited much better anti-prostate cancer activity than Hum30-Dxd (Ifinatamab deruxtecan) , isotype mAb (suvizumab) -C067, and B7H3 mAb plus none conjugated exatecan; 2. B7H3-067 conjugate showed dose dependent in vivo activities; 3. The conjugates containing dual-DUPA function groups in the linker (C039, C041 and C043) exhibited better antitumor activities than those containing only mono-DUPA group in the linker (C016, C017, C018, C020, C026, and C067) .

[0137] Figure 24 shows in vivo change in tumor volume in a SHP77 small cell lung cancer cell xenograft mouse model in response to a single dose treatment with B7H3-ADCs of the invention along with Hum30-Dxd (Ifinatamab deruxtecan) , isotype mAb (suvizumab) -C067, and B7H3 mAb plus none conjugated exatecan over 15 days. It demonstrated that: 1. B7H3-ADCs of the invention exhibited much better anti-prostate cancer activity than Hum30-Dxd (Ifinatamab deruxtecan) , isotype mAb (suvizumab) -C067, and B7H3 mAb plus none conjugated exatecan; 2. B7H3-067 conjugate showed dose dependent activities; 3. All of the B7H3-ADCs of the invention (B7H3-C031, C032, C033, C046, C050, and C067) can eliminate the small cell lung tumors at dose 9.0 mg / kg) at the end of the experiment.

[0138] Figure 25 shows in vivo change in tumor volume in an A375 malignant melanoma cell xenograft mouse model in response to a single dose treatment with B7H3-ADCs of the invention along with Hum30-Dxd (Ifinatamab deruxtecan) , isotype mAb (suvizumab) -C067, and B7H3 mAb plus none conjugated exatecan over 21 days. It demonstrated that: 1. B7H3-ADCs of the invention exhibited much better anti-prostate cancer activity than Hum30-Dxd (Ifinatamab deruxtecan) , isotype mAb (suvizumab) -C067, and B7H3 mAb plus none conjugated exatecan; 2. B7H3-067 conjugate showed dose dependent activities; 3. All of the B7H3-ADCs of the invention (B7H3-C056, C058, C061, C063, C065, C066, C067 and C072) can eliminate the melanoma tumors at dose 4.0 mg / kg) .

[0139] Figure 26 shows in vivo pharmacokinetic study of B7H3-C067 in monkeys following single or multiple intravenous injection. It concludes that 1. B7H3-C067 exhibits linear pharmacokinetics with a half-life of 3.9-6.1 days at doses of 10 ～ 40 mg / kg; 2. No significant accumulation observed. B7H3-C067 accumulation factor (AUC (0-t) , D29 / D1) : 1.06–1.41; 3. Low detection of free small molecule. The sum of Exatecan AUC : less than 1 / 6800 of ADC AUC; 4. The pharmacokinetic profiles of total antibody and ADC are consistent, indicating good linker stability.

[0140] In the above figures, C067, B7H7-C067 and PSMA-B7H7-C067 have the same meaning.

[0141] DETAILED DESCRIPTION

[0142] The following provides an explanation of the exemplary examples of the present application, including various details to aid understanding. They should be considered merely exemplary. Therefore, those skilled in the art should recognize that various changes and modifications can be made to the examples described herein without departing from the scope and spirit of the present application. Similarly, for clarity and conciseness, descriptions of well-known functions and structures have been omitted in the following description.

[0143] Definition

[0144] The technical terms mentioned in this specification have the same meanings as those commonly understood by those skilled in the art. In case of conflict, the definitions in this specification shall prevail.

[0145] Generally speaking, the terms used in this specification have the following meanings.

[0146] As used herein, "monoclonal antibody" refers to an antibody derived from a population of essentially homologous antibodies, that is, various antibodies constituting the population are identical and / or bind to the same epitope, except for possible variant antibodies (such as those containing naturally occurring mutations or produced during the production process of monoclonal antibody products) , which typically exist in trace amounts. Unlike polyclonal antibody products that typically include different antibodies targeting different determinants (epitopes) , each monoclonal antibody in monoclonal antibody products targets a single determinant on the antigen. Therefore, the modifier 'monoclonal' indicates that the antibody is derived from a substantially homologous antibody population and should not be interpreted as requiring the production of the antibody by any specific method. For example, the monoclonal antibody to be used in this application can be prepared using various techniques, including but not limited to hybridoma methods, recombinant DNA methods, phage display methods, and methods using genetically modified animals containing all or part of the human immunoglobulin gene locus.

[0147] As used herein, "monoclonal antibody" is generally a human antibody, which can be prepared using techniques known to those skilled in the art. For example, human antibodies are generally described in van Dijk, M.A. and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-374 (2001) and Lonberg, N., Curr. Opin. Immunol. 20: 450-459 (2008) .

[0148] As used herein, “antigen-binding fragment” of an antibody refers to a fragment of a full-length antibody that retains the ability to specifically bind to an antigen (preferably with substantially the same binding affinity) . Examples of an antigen-binding fragment includes (i) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL and CH1 domains; (ii) a F (ab') 2 fragment, a bivalent fragment comprising two Fab fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region; (iii) a Fd fragment consisting of the VH and CHl domains; (iv) a Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody, (v) a dAb fragment (Ward el al, 1989 Nature 341 : 544-546) , which consists of a VH domain; and (vi) an isolated complementarity determining region (CDR) , disulfide-linked Fvs (dsFv) , and anti-idiotypic (anti-id) antibodies and intrabodies. Furthermore, although the two domains of the Fv fragment, VL and VH, are coded for by separate genes, they can be joined, using recombinant methods, by a synthetic linker that enables them to be made as a single protein chain in which the VL and VH regions pair to form monovalent molecules (known as single chain Fv (scFv) ) ; see e.g., Bird etal., Science 242: 423-426 (1988) and Huston etal, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883.

[0149] As used herein, an antibody “variable domain” refers to the variable region of the antibody light chain (VL) or the variable region of the antibody heavy chain (VH) , either alone or in combination. As known in the art, the variable regions of the heavy and light chains each consist of four framework regions (FR) connected by three complementarity determining regions (CDRs) , and contribute to the formation of the antigen-binding site of antibodies.

[0150] As used herein, an isolated antibody is one which has been identified and separated and / or recovered from a component of its natural environment. Contaminant components of its natural environment are materials which would interfere with diagnostic or therapeutic uses for the antibody, and may include enzymes, hormones, and other proteinaceous or nonproteinaceous solutes. The antibody may be purified (1) to greater than 95%by weight of antibody as determined by the Lowry method, or more than 99%by weight, (2) to a degree sufficient to obtain at least 15 residues of N-terminal or internal amino acid sequence by use of a spinning cup protein sequencer, or (3) to homogeneity by SDS-PAGE under reducing or non-reducing conditions using Coomassie blue or silver stain. Isolated antibody includes the antibody in situ within recombinant cells since at least one component of the antibody's natural environment will not be present. Ordinarily, however, isolated antibody will be prepared by at least one purification step.

[0151] Antibodies can be prepared by administering immunogens to genetically modified animals that have been modified so that antigen attack stimulates the production of intact human antibodies or intact antibodies with human variable regions. These animals typically contain some or all of the human immunoglobulin loci, which replace endogenous immunoglobulin loci, or exist outside the chromosome or randomly integrated into the animal's body. In such transgenic mice, the endogenous immunoglobulin loci are generally inactivated. For a review of methods for obtaining human antibodies from transgenic animals, please refer to Lonberg, N. Nat. Biotech. 23: 1117-1125 (2005) . You can also refer to, for example, XENOMOUSETM technology described in US Patent No. 6,075, 181 and No. 6, 150, 584,  technology described in US Patent No. 5, 770, 429, K-MMOUSETM technology described in US Patent No. 7, 041, 870, and  technology described in US Patent Application Publication No. US 2007 / 0061900. The human variable region of the complete antibody generated by such animals can be further modified, for example, by combining with different human constant regions.

[0152] As used herein, the terms "antibody fragment, " "antigen-binding fragment, " "functional fragment of an antibody, " and "antigen-binding portion" are used interchangeably herein and refer to one or more fragments or portions of an antibody that retain the ability to specifically bind to an antigen. The antibody fragment may comprise, for example, one or more CDRs, the variable region (or portions thereof) , the constant region (or portions thereof) , or combinations thereof. Examples of antibody fragments include, but are not limited to, (i) a Fab fragment, which is a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL, and CH1 domains; (ii) a F (ab') 2 fragment, which is a bivalent fragment comprising two Fab fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region; (iii) a Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody; (iv) a single chain Fv (scFv) , which is a monovalent molecule consisting of the two domains of the Fv fragment (i.e., VL and VH) joined by a synthetic linker which enables the two domains to be synthesized as a single polypeptide chain (see, e.g., Kabat EA, Wu TT., J Immunol. 1991, 147 (5) : 1709-19) and (v) a diabody, which is a dimer of polypeptide chains, wherein each polypeptide chain comprises a VH connected to a VL by a peptide linker that is too short to allow pairing between the VH and VL on the same polypeptide chain, thereby driving the pairing between the complementary domains on different VH-VL polypeptide chains to generate a dimeric molecule having two functional antigen binding sites (see, e.g. Hudson PJ, Kortt AA, J Immunol Methods. 1999, 231 (1-2) : 177-89; Holliger P, Winter G.Cancer Immunol Immunother. 1997, 45 (3-4) : 128-30) .

[0153] As used herein, “humanized” antibody refers to forms of non-human (e.g. murine) antibodies that are chimeric immunoglobulins, immunoglobulin chains, or fragments thereof (such as Fv, Fab, Fab', F (ab') 2 or other antigen binding subsequences of antibodies) that contain minimal sequence derived from non-human immunoglobulin. Preferably, humanized antibodies are human immunoglobulins (recipient antibody) in which residues from a complementarity determining region (CDR) of the recipient are replaced by residues from a CDR of a non-human species (donor antibody) such as mouse, rat, or rabbit having the desired specificity, affinity, and capacity. In some instances, Fv framework region (FR) residues of the human immunoglobulin are replaced by corresponding non-human residues. Furthermore, the humanized antibody may comprise residues that are found neither in the recipient antibody nor in the imported CDR or framework sequences, but are included to further refine and optimize antibody performance. In general, the humanized antibody will comprise substantially all of at least one, and typically two, variable domains, in which all or substantially all of the CDR regions correspond to those of a non-human immunoglobulin and all or substantially all of the FR regions are those of a human immunoglobulin consensus sequence. The humanized antibody optimally also will comprise at least a portion of an immunoglobulin constant region or domain (Fc) , typically that of a human immunoglobulin. Preferred are antibodies having Fc regions modified as described in WO 99 / 58572. Other forms of humanized antibodies have one or more CDRs (CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2, or CDR H3) which are altered with respect to the original antibody, which are also termed one or more CDRs “derived from” one or more CDRs from the original antibody.

[0154] As used herein, “chimeric antibody” is intended to refer to antibodies in which the variable region sequences are derived from one species and the constant region sequences are derived from another species, such as an antibody in which the variable region sequences are derived from a mouse antibody and the constant region sequences are derived from a human antibody.

[0155] As used herein, multispecific antibody, such as a bispecific antibody, is a hybrid antibody having two different antigen binding sites. The two antigen binding sites of a bispecific antibody bind to two different epitopes, which may reside on the same or different protein targets.

[0156] As used herein, "affinity" refers to the strength of the sum of non-covalent interactions between a single binding site of a molecule (e.g. antibody) and its binding partner (e.g. antigen) . Unless otherwise specified, the term 'binding affinity' used in this specification refers to the inherent binding affinity reflecting the 1: 1 interaction between members of a binding pair (e.g. antibody and antigen) . The affinity of molecule X for its partner Y can usually be shown by the equilibrium dissociation constant (KD) . Affinity can be measured by common methods known in this field.

[0157] As used herein, the percentage of “identity” , such as 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 98.5%, 99%, and 99.5%, refers to the degree of similarity determined by sequence alignment between amino acid sequences or nucleotide sequences, which is 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 98.5%, 99%, and 99.5%. For example, by introducing vacancies and other methods, two sequences can have the same residue in as many positions as possible, and the proportion of positions with the same base or amino acid residue to the total number of positions can be determined. The percentage of “identity” can be determined using software programs known in the art. The preferred method is to use default parameters for comparison. A preferred comparison program is BLAST. Preferred programs are BLASTN and BLASTP. The details of these programs can be found at the following internet address: ncbi. nlm. nih. gov / cgi-bin / BLAST.

[0158] As used herein, "isolated" nucleic acid refers to a nucleic acid molecule that has been separated from its natural environmental components. Isolated nucleic acids include nucleic acid molecules typically present in cells comprising nucleic acid molecules, but the nucleic acid molecules exist outside the chromosome or at a chromosomal position different from their natural chromosomal position.

[0159] As used herein, “isolated nucleic acid encoding the anti-CD276 monoclonal antibody” refers to one or more nucleic acid molecules encoding the heavy and light chains of the antibody, including such nucleic acid molecules in a single vector or separate vectors, as well as such nucleic acid molecules present at one or more positions in the host cell.

[0160] As used herein, "vector" refers to a nucleic acid molecule that can amplify another nucleic acid connected to it. This term includes vectors that serve as self-replicating nucleic acid structures and vectors integrated into the genome of host cells into which they have been introduced. Some vectors can guide the expression of nucleic acids that are operationally linked to them. This type of vector is referred to as an "expression vector" in this application.

[0161] As used herein, "host cell" , "host cell line" , and "host cell culture" are interchangeable and refer to cells in which exogenous nucleic acid has been introduced, including the offspring of such cells. Host cells include "transformants" and "transformed cells" , which include primary transformed cells and offspring derived from them (without considering the number of generations) . Offspring may not be completely identical to parental cells in terms of nucleic acid content, and may contain mutations. The mutant offspring with the same function or biological activity selected or screened from the initial transformed cells are included in this specification.

[0162] As used herein, "antibody-drug conjugate (ADC) " refers to a compound comprising a monoclonal antibody (mAb) attached to a cytotoxic agent (generally a small molecule drug with a high systemic toxicity) via chemical linkers.

[0163] As used herein, “cytotoxic agent” refers to a substance that inhibits or prevents a cellular function and / or causes cell death or destruction. A cytotoxin or cytotoxic agent of an ADC also is referred to in the art as the "payload" of the ADC. A number of classes of cytotoxic agents are known in the art to have potential utility in ADC molecules and can be used in the ADC described herein. Such classes of cytotoxic agents include, for example, anti-microtubule agents (e.g., tubulysins, auristatins and maytansinoids) , DNA minor groove binders (e.g. pyrrolobenzodiazepines (PBDs) or indolinobenzodiazepines (IGN) ) , RNA polymerase II inhibitors (e.g., amatoxins) , inhibitor of DNA topoisomerase I (e.g., camptothecins) , DNA topoisomerase II (doxorubicins, daunorubicins) , and DNA alkylating agents (e.g., duocarmycin, CC-1065, pyrrolobenzodiazepineor indolinobenzodiazepine pseudo dimers) . Examples of specific cytotoxic agents that may be used in the ADC described herein include, but are not limited to, tubulysins, amanitins, auristatins, calicheamicin, camptothecins, daunomycins, doxorubicins, duocarmycins, dolastatins, enediynes, lexitropsins, taxanes, puromycins, maytansinoids, vinca alkaloids, and pyrrolobenzodiazepines (PBDs) . More specifically, the cytotoxic agent may be, for example tubulysins, auristatins (AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, E) , paclitaxels, docetaxels, CC-1065 (ducarmysin, DC1, DC4, CBI-dimers) , camptothecins (exatecan, SN-38, topotecans) , morpholino-doxorubicin, rhizoxin, cyanomorpholino-doxorubicin, dolastatin-10, echinomycin, combretatstatin, chalicheamicin, maytansine (DM1, DM4, DM21) , vinblastine, methotrexate, netropsin, or derivatives or analogs thereof. Cytotoxins suitable for use in ADCs are also described in, for example, International Patent Application Publication No. PCT / CN2021 / 128453.

[0164] The term “alkyl” refers to a linear or branched saturated monovalent hydrocarbon radical. For example, C1-6 alkyl refers to a linear saturated monovalent hydrocarbon radical of 1 to 6 carbon atoms or a branched saturated monovalent hydrocarbon radical of 3 to 6 carbon atoms. In certain embodiments, the alkyl is a linear saturated monovalent hydrocarbon radical that has 1 to 6 (C1-6) carbon atoms, or branched saturated monovalent hydrocarbon radical of 3 to 6 (C3-6) carbon atoms. As used herein, linear C1-6 and branched C3-6 alkyl groups are also referred as “lower alkyl. ” Examples of alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, propyl (including all isomeric forms, e.g., n-propyl and isopropyl) , butyl (including all isomeric forms, e.g., n-butyl, isobutyl, sec-butyl, and t-butyl) , pentyl (including all isomeric forms, e.g., n-pentyl, isopentyl, sec-pentyl, neopentyl, and tert-pentyl) , and hexyl (including all isomeric forms, e.g., n-hexyl, isohexyl, and sec-hexyl) .

[0165] The term “alkylene” is used herein in reference to a linear or branched saturated divalent hydrocarbon radical. For example, C1-8 alkylene refers to a linear saturated divalent hydrocarbon radical of 1 to 8 carbon atoms or a branched saturated divalent hydrocarbon radical of 3 to 8carbon atoms. In certain embodiments, the alkylene is a linear saturated divalent hydrocarbon radical that has 1 to 8 (C1-8) carbon atoms, or branched saturated divalent hydrocarbon radical of 3 to 8 (C3-8) carbon atoms. As used herein, linear C1-8 and branched C3-8 alkylene groups are also referred as “lower alkylene. ” Examples of alkylene groups include, but are not limited to, methylene, ethylene (including all isomeric forms, e.g., ethane-1, 1-diyl and ethane-1, 2-diyl) , propylene (including all isomeric forms, e.g., propane-1, 1-diyl, propane-1, 2-diyl, and propane-1, 3-diyl) , butylene (including all isomeric forms, e.g., butane-1, 1-diyl, butane-1, 2-diyl, butane-1, 3-diyl, and butane-1, 4-diyl) , pentylene (including all isomeric forms, e.g., pentane-1, 1-diyl, pentane-1, 2-diyl, pentane-1, 3-diyl, and pentane-1, 5-diyl) , hexylidene (including all isomeric forms, e.g., hexane-1, 1-diyl, hexane-1, 2-diyl, hexane-1, 3-diyl, and hexane-1, 6-diyl) , heptylene (including all isomeric forms, e.g., heptane-1, 1-diyl, heptane-1, 2-diyl, heptane-1, 3-diyl, heptane-1, 6-diyl, heptane-1, 7-diyl) , and octyl (including all isomeric forms, e.g., octane-1, 1-diyl, octane-1, 2-diyl, ocptane-1, 3-diyl, octane-1, 6-diyl, octane-1, 7-diyl, octane-1, 8-diyl, ) . Examples of alkylene include, but are not limited to, –CH2–, – (CH2) 2–, – (CH2) 3–, – (CH2) 4–, – (CH2) 5–, – (CH2) 6–, – (CH2) 7–, – (CH2) 8–, etc.

[0166] The terms “heteroalkylene” is used herein in reference to a linear or branched saturated divalent hydrocarbon radical that contains one or more heteroatoms in its main chain, each independently selected from O, S, and N. For example, C1-6 heteroalkylene refers to a linear saturated divalent hydrocarbon radical of 1 to 6 carbon atoms or a branched saturated divalent hydrocarbon radical of 3 to 6 carbon atoms. In certain embodiments, the heteroalkylene is a linear saturated divalent hydrocarbon radical that has 1 to 6 (C1-6) carbon atoms, or branched saturated divalent hydrocarbon radical of 3 to 6 (C3-6) carbon atoms. As used herein, linear C1-6 and branched C3-6 heteroalkylene groups are also referred as “lower heteroalkylene. ” Examples of heteroalkylene groups include, but are not limited to, –CH2O–, – (CH2) 2O–, – (CH2) 3O–, – (CH2) 4O–, – (CH2) 5O–, – (CH2) 6O–, –CH2OCH2–, –CH2CH2O–, – (CH2CH2O) 2–, – (CH2CH2O) 3–, –CH2NH–, –CH2NHCH2–, –CH2CH2NH–, –CH2S–, –CH2SCH2–, and –CH2CH2S–.

[0167] The terms “alkenylene” is used herein in reference to a linear or branched divalent hydrocarbon radical, which contains one or more, in one embodiment, one, two, three, or four, in another embodiment, one, carbon-carbon double bond (s) . The term “alkenylene” embraces radicals having a “cis” or “trans” configuration or a mixture thereof, or alternatively, a “Z” or “E” configuration or a mixture thereof, as appreciated by those of ordinary skill in the art. For example, C2-6 alkenylene refers to a linear unsaturated divalent hydrocarbon radical of 2 to 6 carbon atoms or a branched unsaturated divalent hydrocarbon radical of 3 to 6 carbon atoms. In certain embodiments, the alkenylene is a linear divalent hydrocarbon radical of 2 to 6 (C2-6) carbon atoms, or a branched divalent hydrocarbon radical of 3 to 6 (C3-6) carbon atoms. Examples of alkenylene include, but are not limited to, ethenylene (including all isomeric forms, e.g., ethene-1, 1-diyl and ethene-1, 2-diyl) , propenylene (including all isomeric forms, e.g., 1-propene-1, 1-diyl, 1-propene-1, 2-diyl, and 1-propene-1, 3-diyl) , butenylene (including all isomeric forms, e.g., 1-butene-1, 1-diyl, 1-butene-1, 2-diyl, and 1-butene-1, 4-diyl) , pentylidene (including all isomeric forms, e.g., 1-pentene-1, 1-diyl, 1-pentene-1, 2-diyl, and 1-pentene-1, 5-diyl) , and hexenylene (including all isomeric forms, e.g., 1-hexene-1, 1-diyl, 1-hexene-1, 2-diyl, 1-hexene-1, 3-diyl, 1-hexene-1, 4-diyl, 1-hexene-1, 5-diyl, and 1-hexene-1, 6-diyl) .

[0168] The terms “alkynylene” is used interchangeably herein in reference to a linear or branched divalent hydrocarbon radical, which contains one or more, in one embodiment, one, two, three, or four, in another embodiment, one, carbon-carbon triple bond (s) . An alkynylene group does not contain a carbon-carbon double bond. For example, C2-6 alkynylene refers to a linear unsaturated divalent hydrocarbon radical of 2 to 6 carbon atoms or a branched unsaturated divalent hydrocarbon radical of 4 to 6 carbon atoms. In certain embodiments, the alkynylene is a linear divalent hydrocarbon radical of 2 to 6 (C2-6) carbon atoms, or a branched divalent hydrocarbon radical of 4 to 6 (C4-6) carbon atoms. Examples of alkynylene include, but are not limited to, ethynylene, propynylene (including all isomeric forms, e.g., 1-propyne-1, 3-diyl and 1-propyne-3, 3-diyl) , butynelene (including all isomeric forms, e.g., 1-butyne-1, 3-diyl, 1-butyne-1, 4-diyl, and 2-butyne-1, 1-diyl) , pentynylene (including all isomeric forms, e.g., 1-pentyne-1, 3-diyl, 1-pentyne-1, 4-diyl, and 2-pentyne-1, 1-diyl) , and hexyneylene (including all isomeric forms, e.g., 1-hexyne-1, 3-diyl, 1-hexyne-1, 4-diyl, and 2-hexyne-1, 1-diyl) .

[0169] The term “cycloalkylene” refers to a cyclic divalent hydrocarbon radical. In one embodiment, cycloalkylene groups may be saturated or unsaturated but non-aromatic, and / or bridged, and / or non-bridged, and / or fused bicyclic groups. In certain embodiments, the cycloalkylene has from 3 to 10 (C3-10) , or from 3 to 7 (C3-7) carbon atoms. Examples of cycloalkylene groups include, but are not limited to, cyclopropylene, cyclobutylene, cyclopentylene, cyclopentenylene, cyclohexylene, cyclohexenylene, cyclohexadienylene, cycloheptylene, and cycloheptenylene.

[0170] The term “aryl” refers to a monovalent monocyclic aromatic hydrocarbon radical and / or monovalent polycyclic aromatic hydrocarbon radical that contain at least one aromatic carbon ring. In certain embodiments, the aryl has from 6 to 14 (C6-14) ring carbon atoms. Examples of aryl groups include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, fluorenyl, azulenyl, anthryl, phenanthryl, and biphenyl. The aryl also refers to bicyclic or tricyclic carbon rings, where one of the rings is aromatic and the others of which may be saturated, partially unsaturated, or aromatic, for example, dihydronaphthyl, indenyl, indanyl, or tetrahydronaphthyl (tetralinyl) . In one embodiment, the aryl is monocyclic. In another embodiment, the aryl is bicyclic. In yet another embodiment, the aryl is tricyclic. In still another embodiment, the aryl is polycyclic.

[0171] The term “aralkylene” or “arylalkylene” refers to a divalent alkylene group substituted with one or more aryl groups. In certain embodiments, the aralkylene has from 7 to 15 (C7-15) carbon atoms. Examples of aralkylene groups include, but are not limited to, benzylene, 2-phenylethylene, and 3-phenylpropylene.

[0172] The term “heteroaryl” refers to a monovalent monocyclic aromatic group or monovalent polycyclic aromatic group that contain at least one aromatic ring, wherein at least one aromatic ring contains one or more heteroatoms, each independently selected from O, S, and N, in the ring. For a heteroaryl group containing a heteroaromatic ring and a nonaromatic heterocyclic ring, the heteroaryl group is not bonded to the rest of a molecule through its nonaromatic heterocyclic ring. Each ring of a heteroaryl group can contain one or two O atoms, one or two S atoms, and / or one to four N atoms; provided that the total number of heteroatoms in each ring is four or less and each ring contains at least one carbon atom. In certain embodiments, the heteroaryl has from 6 to 14 ring atoms. In one embodiment, the heteroaryl is monocyclic. In another embodiment, the heteroaryl is bicyclic. In yet another embodiment, the heteroaryl is tricyclic.

[0173] The term “heterocyclyl” or “heterocyclic” refers to a monovalent monocyclic non-aromatic ring system or monovalent polycyclic ring system that contains at least one non-aromatic ring, wherein one or more of the non-aromatic ring atoms are heteroatoms, each independently selected from O, S, and N; and the remaining ring atoms are carbon atoms. For a heterocycyl group containing a heteroaromatic ring and a nonaromatic heterocyclic ring, the heterocyclyl group is not bonded to the rest of a molecule through the heteroaromatic ring. In certain embodiments, the heterocyclyl or heterocyclic group has from from 3 to 14, from 3 to 10, from 3 to 8, from 4 to 7, or from 5 to 6 ring atoms. In certain embodiments, the heterocyclyl or heterocyclic group is a monocyclic, bicyclic, tricyclic, or tetracyclic ring system, which may be fused or bridged, and in which nitrogen or sulfur atoms may be optionally oxidized, nitrogen atoms may be optionally quaternized, and some rings may be partially or fully saturated, or aromatic. The heterocyclyl or heterocyclic group may be attached to the main structure at any heteroatom or carbon atom which results in the creation of a stable compound.

[0174] The term “halogen, ” refers to fluoro, chloro, bromo, and / or iodo.

[0175] The term “optionally substituted” is intended to mean that a group or substituent, such as an alkyl, alkylene, heteroalkyl, heteroalkylene, alkenyl, alkenylene, alkynyl, alkynylene, cycloalkyl, aryl, aralkyl, heteroaryl, or heterocyclyl group, may be substituted with one or more, in one embodiment, one, two, three, or four, substituents Q, each of which is independently selected from, e.g., (a) deuterium (–D) , cyano (–CN) , halo, imino (=NH) , nitro (–NO2) , and oxo (=O) ; (b) C1-6 alkyl, C1-6 heteroalkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C3-10 cycloalkyl, C6-14 aryl, C7-15 aralkyl, heteroaryl, and heterocyclyl; and (c) –C (O) Ra, –C (O) ORa, –C (O) NRbRc, –C (O) SRa, –C (NRa) NRbRc, –C (S) Ra, –C (S) ORa, –C (S) NRbRc, –ORa, –OC (O) Ra, –OC (O) ORa, –OC (O) NRbRc, –OC (O) SRa, –OC (NRa) NRbRc, –OC (S) Ra, –OC (S) ORa, –OC (S) NRbRc, –OP (O) (ORb) ORc, –OS (O) Ra, –OS (O) 2Ra, –OS (O) NRbRc, –OS (O) 2NRbRc, –NRbRc, –NRaC (O) Rd, –NRaC (O) ORd, –NRaC (O) NRbRc, –NRaC (O) SRd, –NRaC (NRd) NRbRc, –NRaC (S) Rd, –NRaC (S) ORd, –NRaC (S) NRbRc, –NRaS (O) Rd, –NRaS (O) 2Rd, –NRaS (O) NRbRc, –NRaS (O) 2NRbRc, =NORa, –SRa, –S (O) Ra, –S (O) 2Ra, –S (O) NRbRc, and –S (O) 2NRbRc, wherein each Ra, Rb, Rc, and Rd is independently (i) hydrogen or deuterium; or (ii) C1-6 alkyl, C1-6 heteroalkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C3-10 cycloalkyl, C6-14 aryl, C7-15 aralkyl, heteroaryl, or heterocyclyl. As used herein, all groups that can be substituted are “optionally substituted. ”

[0176] For a divalent group described herein, no orientation is implied by the direction in which the divalent group is presented. For example, unless a particular orientation is specified, the formula –C (O) O–represents both –C (O) O–and –OC (O) –.

[0177] As used herein, "pharmaceutical composition" refers to a product that presents in such a form that the biological activity of the active ingredient contained therein can exert the effect, and the composition does not contain any additional components that have unacceptable toxicity to the subject to whom the formulation is to be administered.

[0178] As used herein, "pharmaceutically acceptable excipient" refers to an ingredient in a pharmaceutical composition other than the active ingredient, which is non-toxic to the subject. Pharmaceutically acceptable excipients include, but are not limited to, buffering agents, excipients, stabilizers, or preservatives.

[0179] As used herein, the terms "treatment, " " treating, " and the like refer to obtaining a desired pharmacologic and / or physiologic effect. Preferably, the effect is therapeutic, i.e., the effect partially or completely cures a disease and / or adverse symptom attributable to the disease. To this end, the inventive method comprises administering a "therapeutically effective amount" of the antibody or ADC or the composition comprising the antibody or ADC and a pharmaceutically acceptable excipient. A "therapeutically effective amount" refers to an amount effective, at dosages and for periods of time necessary, to achieve a desired therapeutic result. The therapeutically effective amount may vary according to factors such as the disease state, age, sex, and weight of the individual, and the ability of the antibody or ADC to elicit a desired response in the individual.

[0180] Monoclonal antibody

[0181] Human B7H3 (also known as CD276) is a member of the B7 / CD28 immunoglobulin superfamily, which provides crucial costimulatory signals that regulate T cell function in the context of tumor surveillance as well as infectious and autoimmune diseases (Wilcox et al., 2012, Eur. J. Haematol. 88: 465-475) .

[0182] B7H3 is widely expressed on many solid tumor types, including in prostate cancer (Roth et al., 2007, Cancer Res. 67: 7893-900; Zang et al., 2007, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104: 19458-19463) renal cell carcinoma, urothelial cell carcinoma (Crispen et al. 2008, Clin. Cancer Res. 14: 5150-157; Boorjian et al., 2008, Clin. Cancer Res. 14: 4800-4808) , ovarian cancer (Zang et al., 2010, Mod. Pathol. 23: 1104-1112) , glioblastoma (Lemke et al., 2012, Clin. Cancer Res. 18: 105-117) , osteosarcoma (Wang et al., 2013, PLoS One 8: c70689) , neuroblastoma (Gregorio et al., 2008, Histopathology 53: 73-80) , diffuse intrinsic pontine glioma (DIPG) (Zhou et al., 2013, J. Neurooncol. 111: 257-264) , mesothelioma (Calabro et al., 2011, J. Cell Physiol. 226: 2595-600) and pancreatic cancer (Yamato et al., 2009, Br. J. Cancer 101: 1709-1716) .

[0183] B7H3 was initially identified as a type I transmembrane protein which, similar to all other B7 family members, has an extracellular region containing only one V-like and one C-like Ig domain (this form of B7H3 was termed 2Ig-B7H3) (Chapoval et al., 2001, Nat. Immunol. 2: 269-274) . Subsequently, a second form of human B7H3 (huB7H3) was identified (termed 4Ig-B7H3) that contains a duplication of the V-like and the C-like Ig domain in tandem (Steinberger et al., 2004, J. Immunol. 172: 2352-2359; Sun et al., 2002, J. Immunol. 168: 6294-6297) .

[0184] B7H3 is considered to be inhibitory for both NK cells and T-cells. The idea of an inhibitory role of B7H3 is supported by reports indicating that both the 2Ig and 4Ig forms of human B7H3 can inhibit T cell proliferation and cytokine production (Steinberger et al., 2004, J. Immunol. 172: 2352-2359; Sun et al. 2002 J. Immunol. 168: 6294-6297) . Studies in B7H3-deficient mice suggested that B7H3 preferentially down-regulates TH1- (as opposed to TH2-) mediated immune responses (Suh et al., 2003, Nat. Immunol. 4: 899-906) . And other investigations showed that the 4Ig-B7H3 form can inhibit NK-mediated lysis of neuroblastoma cells by interacting with a putative inhibitory receptor on the surface of NK cells (Castriconi et al., 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101: 12640-12645) . In more recent studies involving patients with prostate cancer, the level of B7H3 expression on tumor tissue at the time of surgery was strongly correlated with the extent as to which the tumor had metastasized, with an increased risk of clinical cancer recurrence and with cancer-specific death (Roth et al., 2007, Cancer Res. 67: 7893-7900; Zang et al., 2007, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104: 19458-19463) . Similarly, a high level of B7H3 expression on tumor tissue correlated with poor patient survival in clear cell renal cell carcinoma, urothelial cell carcinoma (Crispen et al., 2008, Clin. Cancer Res. 14: 5150-5157; Boorjian et al., 2008, Clin. Cancer Res. 14: 4800-4808) , ovarian cancer (Zang et al., 2010, Mod. Pathol. 23: 1104-1112) , glioblastoma (Lemke et al., 2012, Clin. Cancer Res. 18:105-117) osteosarcoma (Wang et al., 2013, PLoS One 8: e70689) , pancreatic cancer (Yamato et al., 2009, Br. J. Cancer 101: 1709-1716) and neuroblastoma (Gregorio et al., 2008, Histopathology 53: 73-80) .

[0185] Based on crystal structure data for murine B7H3 (muB7H3) , it was proposed that B7H3 inhibits T cell proliferation, at least in part, through the FG loop of its IgV domain (Vigdorovich et al., 2013, Structure 21: 707-717) .

[0186] On the other hand, B7H3 might also have T-cell stimulatory properties, depending on the receptors with which it interacts (Hofmeyer et al., 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105: 10277-10278) . For example, a few earlier reports indicated that human 2Ig-B7H3 promotes T cell activation and IFN-γ production by binding to a putative receptor on activated T cells (Chapoval et al., 2001, Nat. Immunol. 2: 269-274) . Moreover, studies using certain murine tumor models provided data suggesting that the immune system's antitumor response is enhanced by B7H3 expression (Sun et al., 2003, Gene Ther. 10: 1728-1734) . And studies in humans suggested that the presence of B7H3 is correlated with increased survival in gastric (Wu et al., 2006, World J. Gastroenterol. 12: 457-459) and pancreatic cancer (Loos et al., 2009, BMC Cancer 9: 463) .

[0187] A murine antibody, known as m8H9, that binds to B7H3 has been shown to target brain tumors, childhood sarcomas, and neuroblastomas, and to a lesser extent adenocarcinomas (Modak et al., 2001, Cancer Res. 61: 4048-4054; Xu et al., 2009, Cancer Res. 69: 6275-6281) . Among primary brain tumors, 15 of 17 tested glioblastomas, 3 of 4 tested mixed gliomas, 4 of 11 tested oligodendrogliomas, 6 of 8 tested astrocytomas, 2 of 2 tested meningiomas, 3 of 3 tested schwannomas, 2 of 2 tested medulloblastomas, 1 of 1 tested neurofibroma, 1 of 2 tested neuronoglial tumors, 2 of 3 tested ependymomas, and 1 of 1 tested pineoblastoma showed binding by 8H9. Among sarcomas, 21 of 21 tested Ewing's  / primitive neuroectodermal tumors, 28 of 29 tested rhabdomyosarcomas, 28 of 29 tested osteosarcomas, 35 of 37 tested desmoplastic small round cell tumors, 2 of 3 tested synovial sarcomas, 4 of 4 tested leiomyosarcomas, 1 of 1 malignant fibrous histiocytoma, and 2 of 2 tested undifferentiated sarcomas tested positive for 8H9 binding. Eighty-seven of 90 tested neuroblastomas, 12 of 16 tested melanomas, 3 of 4 tested hepatoblastomas, 7 of 8 tested Wilms' tumors, 3 of 3 tested rhabdoid tumors, and 12 of 27 tested adenocarcinomas also tested positive. In contrast, m8H9 did not bind to normal human tissues including bone marrow, colon, stomach, heart, lung, muscle, thyroid, testes, pancreas, and human brain (frontal lobe, cerebellum, pons, and spinal cord) (Modak et al., 2001 Cancer Res 61: 4048-4054) .

[0188] As noted above, 8H9 antibodies specifically bind to B7H3. Unlike other anti-B7H3 antibodies tested, only 8H9 can be used to bind the FG-loop of B7H3, and to block the immune-inhibitory function of B7H3.

[0189] Immuno-histochemical studies have demonstrated that m8H9 is broadly reactive with human solid tumors, including embryonal tumors and carcinomas (Modak et al., 2001, Cancer Res. 61: 4048-4054) . m8H9 has shown favorable tumor uptake for both sarcoma and brain tumors in xenograft models (Modak et al., 2005, Cancer Biother. Radiopharm. 20: 534-546; Luther et al., 2008, Neurosurgery 63: 1166-1174; discussion 1174) , and when the antibody is conjugated to cobra-venom factor, it induces efficient complement mediated tumor lysis (Juhl et al., 1997, Immunobiology 197: 444-459) . Moreover, the single chain Fv (scFv) form of m8H9 was shown to be capable of targeting a potent immunotoxin to sarcomas and gliomas in a preclinical model system (Onda et al., 2004, Cancer Res. 64: 1419-1424; Luther et al., 2010, Mol. Cancer Ther. 9: 1039-1046) .

[0190] As part of a chimeric antigen receptor (CAR) , the scFv form of m8H9 is capable of directing NK cells to kill B7H3 (+) positive tumor cells (Cheung et al., 2003, Hybrid Hybridomics 22: 209-218) . Moreover, certain early phase human clinical trials have shown that radioimmunotherapy with 131I-labeled 8H9 prolongs survival of high-risk patients with metastatic central nervous system (CNS) cancer (Kramer et al., 2007, American Association for Cancer Research LB-4 (Presentation) ; Kramer et al., 2008, Presentation at the ISPNO 2008) .

[0191] Several Phase 1 clinical trials are currently ongoing for m8H9-based radioimmunotherapy of leptomeningeal metastases (NCT00089245) (Kramer et al., 2010 J Neurooncol 97: 409-418) and diffuse intrinsic pontine glioma (DIPG) (NCT01502917) (Zhou et al., 2013, J. Neurooncol. 111: 257-264) . According to the inventors' knowledge, the only other anti-B7H3 antibody subject to a clinical trial is MGA271, a humanized IgG1 MAb (NCT01391143) (Loo et al., 2012, Clin. Cancer. Res. 18: 3834-3845, 2012) .

[0192] A radiolabeled m8H9 antibody is currently in clinical trials for treatment of desmoplastic small round cell tumors and other solid tumors involving the peritoneum (NCI Protocol ID 09-090 NCT01099644) .

[0193] Murine 8H9 (m8H9) is an IgG1 monoclonal antibody (MAb) that targets B7H3.

[0194] While m8H9 is promising as therapeutic agent for the treatment of cancer in humans, it is of murine origin. The use of human antibodies is preferred in this context, among other things because it reduces the likelihood of immune reactions against the administered antibody.

[0195] In order to overcome the problems in the prior arts, the application provides a humanized monoclonal antibody, that specifically binds to B7H3 (including 2Ig-B7H3 and 4Ig-B7H3) , and particularly to its FG-loop.

[0196] In some embodiments, the present application provides an anti-CD276 monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof, comprising three heavy chain complementarity determining regions CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, and three light chain complementarity determining regions CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, wherein CDR-H1 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 1, CDR-H2 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 2, CDR-H3 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 3, CDR-L1 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 4, CDR-L2 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 5, and CDR-L3 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 6.

[0197] In some embodiments, the monoclonal antibody comprises a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 13, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 13.

[0198] In some embodiments, the monoclonal antibody comprises a light chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 14, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 14.

[0199] In some embodiments, the monoclonal antibody comprises a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 13, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 13, and a light chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 14, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 14.

[0200] The antibody may be an IgG1, IgG2, IgG3, or IgG4; or IgM; IgA, IgE or IgD or a modified variant thereof. The constant domain of the antibody heavy chain may be selected accordingly. The light chain constant domain may be a kappa or lambda constant domain.

[0201] In some embodiments, the monoclonal antibody comprises a heavy chain comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 17, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 17, and a light chain comprises amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 18.

[0202] In some embodiments, the present application provides an anti-CD276 monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof, comprising three heavy chain complementarity determining regions CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, and three light chain complementarity determining regions CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, wherein CDR-H1 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 7, CDR-H2 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 8, CDR-H3 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 9, CDR-L1 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 10, CDR-L2 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 11, and CDR-L3 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 12.

[0203] In some embodiments, the monoclonal antibody comprises a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 15, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 15.

[0204] In some embodiments, the monoclonal antibody comprises a light chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 16, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 16.

[0205] In some embodiments, the monoclonal antibody comprises a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 15, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 15, and a light chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 16, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 16.

[0206] The antibody may be an IgG1, IgG2, IgG3, or IgG4; or IgM; IgA, IgE or IgD or a modified variant thereof. The constant domain of the antibody heavy chain may be selected accordingly. The light chain constant domain may be a kappa or lambda constant domain.

[0207] In some embodiments, the monoclonal antibody comprises a heavy chain comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 19, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 19, and a light chain comprises amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 20, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 20.

[0208] In some embodiments, the antibody described herein suppresses the inhibitory effect of B7H3 on T cell proliferation and function and / or enhance T-cell mediated cytotoxicity.

[0209] In some embodiments, the antibody described herein suppresses an inhibitory effect of B7H3 on NK cell activity and / or function.

[0210] In some embodiments, the antibody described herein suppresses an inhibitory effect of B7H3 on NK cell activity and / or function and / or enhance NK cell activity and / or function.

[0211] In some embodiments, the antibody described herein is a bispecific antibody. In some embodiments, the bispecific antibody has two specificities, one of which binds B7H3 and the other one of which binds CD3 on T cells or DOTA.

[0212] The antibodies of the present application may be produced by transfection of a host cell with an expression vector comprising the coding sequence for the antibody of the application. An expression vector or recombinant plasmid is produced by placing these coding sequences for the antibody in operative association with conventional regulatory control sequences capable of controlling the replication and expression in, and / or secretion from, a host cell. Regulatory sequences include promoter sequences, e.g., CMV promoter, and signal sequences which can be derived from other known antibodies. Similarly, a second expression vector can be produced having a DNA sequence which encodes a complementary antibody light or heavy chain. In certain embodiments this second expression vector is identical to the first except insofar as the coding sequences and selectable markers are concerned, so to ensure as far as possible that each polypeptide chain is functionally expressed. Alternatively, the heavy and light chain coding sequences for the antibody may reside on a single vector.

[0213] A selected host cell is co-transfected by conventional techniques with both the first and second vectors (or simply transfected by a single vector) to create the transfected host cell of the application comprising both the recombinant or synthetic light and heavy chains. The transfected cell is then cultured by conventional techniques to produce the engineered antibody of the application. The antibody which includes the association of both the recombinant heavy chain and / or light chain is screened from culture by appropriate assay, such as ELISA or RIA. Similar conventional techniques may be employed to construct other antibodies.

[0214] Suitable vectors of this application may be selected by one of skill in the art. For example, the conventional pUC series of cloning vectors may be used. One vector, pUC19, is commercially available from supply houses, such as Amersham Bioscience (Buckinghamshire, United Kingdom) or GenScript (Nanjing, China) . Additionally, any vector which is capable of replicating readily, has an abundance of cloning sites and selectable genes (e.g., antibiotic resistance) , and is easily manipulated may be used for cloning. Thus, the selection of the cloning vector is not a limiting factor in this application.

[0215] The present application also provides a host cell comprising the vector, such as a host cell transfected with a recombinant plasmid containing the coding sequences of the antibodies of the present application. Host cells useful for the cloning and other manipulations of these cloning vectors are also conventional. However, cells from various strains of E. Coli may be used for replication of the cloning vectors and other steps in the construction of antibodies of this application.

[0216] Suitable host cells or cell lines for the expression of the antibodies of the application include mammalian cells such as NS0, Sp2 / 0, CHO (e.g. DG44) , COS, HEK, a fibroblast cell (e.g., 3T3) , and myeloma cells, for example it may be expressed in a CHO or a myeloma cell. Human cells may be used, thus enabling the molecule to be modified with human glycosylation patterns.

[0217] Alternatively, other eukaryotic cell lines may be employed. The selection of suitable mammalian host cells and methods for transformation, culture, amplification, screening and product production and purification are known in the art. See, e.g., Sambrook et al., (1989) . Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.

[0218] Bacterial cells may prove useful as host cells suitable for the expression of the recombinant Fabs or other embodiments of the present application (see, e.g., Pluckthun, A., Immunol. Rev., 130: 151-188 (1992) ) . However, due to the tendency of proteins expressed in bacterial cells to be in an unfolded or improperly folded form or in a non-glycosylated form, any recombinant Fab produced in a bacterial cell would have to be screened for retention of antigen binding ability. If the molecule expressed by the bacterial cell was produced in a properly folded form, that bacterial cell would be a desirable host, or in alternative embodiments the molecule may express in the bacterial host and then be subsequently re-folded. For example, various strains of E. Coli used for expression are well-known as host cells in the field of biotechnology. Various strains of B. Subtilis, Streptomyces, other bacilli and the like may also be employed in this method.

[0219] Where desired, strains of yeast cells known to those skilled in the art are also available as host cells, as well as insect cells, e.g. Drosophila and Lepidoptera and viral expression systems. See, e.g. Miller et al., Genetic Engineering, 8: 277-298, Plenum Press (1986) and McGuire, S. et al, Trends Genet. (2004) 20, 384-391 and references cited therein.

[0220] The general methods by which the vectors may be constructed, the transfection methods required to produce the host cells of the application, and culture methods necessary to produce the antibody of the application from such host cell may all be conventional techniques. Such techniques are within the skill of the art and do not limit this application.

[0221] Antibody-drug conjugate

[0222] The present application also provides an Antibody-drug conjugate (ADC) comprising the above monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof conjugated to a cytotoxic agent.

[0223] Antibody-drug conjugates are an important class of highly potent biopharmaceutical drugs designed as a targeted therapy for the treatment of people with cancer. Unlike chemotherapy, the antibody-drug conjugates are intended to target and kill only the cancer cells and spare healthy cells.

[0224] In some embodiments, the antibody-drug conjugate comprises a variable region of the anti-CD276 monoclonal antibody of the application. In this respect, the ADC may comprise a light chain variable region, a heavy chain variable region, or both a light chain variable region and a heavy chain variable region of the anti-CD276 monoclonal antibody. Preferably, the ADC comprises a light chain variable region and a heavy chain variable region of the anti-CD276 monoclonal antibody.

[0225] In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein comprises (a) a heavy chain variable region comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, wherein the amino acid sequence of the CDR-H1 is shown by SEQ ID NO: 1, the amino acid sequence of the CDR-H2 is shown by SEQ ID NO: 2, and the amino acid sequence of the CDR-H3 is shown by SEQ ID NO: 3; and (b) a light chain variable region comprising d three light chain complementarity determining regions CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, wherein the amino acid sequence of the CDR-L1 is shown by SEQ ID NO: 4, the amino acid sequence of the CDR-L2 is shown by SEQ ID NO: 5, and the amino acid sequence of the CDR-L3 is shown by SEQ ID NO: 6. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein may comprise a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 13 and / or a light chain variable region comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 14. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein may comprise a heavy chain comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 17 and / or a light chain comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 18.

[0226] In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein comprises (a) a heavy chain variable region comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, wherein the amino acid sequence of the CDR-H1 is shown by SEQ ID NO: 7, the amino acid sequence of the CDR-H2 is shown by SEQ ID NO: 8, and the amino acid sequence of the CDR-H3 is shown by SEQ ID NO: 9; and (b) a light chain variable region comprising d three light chain complementarity determining regions CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, wherein the amino acid sequence of the CDR-L1 is shown by SEQ ID NO: 10, the amino acid sequence of the CDR-L2 is shown by SEQ ID NO: 11, and the amino acid sequence of the CDR-L3 is shown by SEQ ID NO: 12. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein may comprise a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 15 and / or a light chain variable region comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 16. In some embodiment, the monoclonal antibody of the ADC described herein may comprise a heavy chain comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 19 and / or a light chain comprising the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 20.

[0227] The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof, may be conjugated to a cytotoxic agent using any suitable method known in the art, including site-specific or non-site specific conjugation methods. Conventional conjugation strategies for antibodies typically rely on randomly (i.e., non-specifically) conjugating the payload to the antibody, antigen binding fragment thereof, through lysines or cysteines. Accordingly, in some aspects the antibody or antigen binding fragment thereof is randomly conjugated to a cytotoxic agent, for example, by partial reduction of the antibody or antibody fragment, followed by reaction with a desired agent with or without a linker moiety attached. For example, the antibody or antigen binding fragment thereof may be reduced using dithiothreitol (DTT) , Tris (2-carboxyethyl) phosphine (TCEP) , thiolethenol or a similar reducing agent. The cytotoxic agent, with or without a linker moiety attached thereto, can then be added at a molar excess to the reduced antibody or antibody fragment in the presence of dimethyl sulfoxide (DMSO) , or DMA. After conjugation, excess free cysteine may be added to quench unreacted agent. The cytotoxic agent, with or without a linker moiety having an amino-reactive, or phenol-reactive, or the others reactive group (e.g. NHS, PFP) thereto, can be added directly at a molar excess to the antibody or antibody fragment in the presence of DMSO, or DMA to form a conjugate. The reaction mixture may then be purified through chromatography or buffer-exchanged into phosphate buffered saline (PBS) .

[0228] Cytotoxic agents include, but are not limited to, radioactive isotopes (e.g., At211, I131, I125, Y90, In111, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212, Zr89, F18, and radioactive isotopes of Lu, e.g. Lu177) ; chemotherapeutic agents or drugs (e.g., a tubulysin, maytansin, auristatin, a DNA minor groove binder (such as PBD dimers) , a ducarmysin, a topoisomerase (I or II) inhibitor, RNA polymerase inhibitors, DNA alkylators, methotrexate, adriamicin, vinca alkaloids (vincristine, vinblastine, etoposide) , doxorubicin, melphalan, mitomycin C, chlorambucil, daunorubicin or other intercalating agents) ; growth inhibitory agents; enzymes and fragments thereof such as nucleolytic enzymes; antibiotics; toxins such as small molecule toxins or enzymatically active toxins of bacterial, fungal, plant or animal origin, including fragments and / or variants thereof; and the various antitumor or anticancer agents disclosed throughout the application.

[0229] In some embodiments, the cytotoxic agent is a chemotherapeutic agent.

[0230] A chemotherapeutic agent or a functional compoundis selected from the group consisting of:

[0231] a) . an alkylating agent: selected from the group consisting ofnitrogen mustards: chlorambucil, chlornaphazine, cyclophosphamide, dacarbazine, estramustine, ifosfamide, mechlorethamine, mechlorethamine oxide hydrochloride, mannomustine, mitobronitol, melphalan, mitolactol, pipobroman, novembichin, phenesterine, prednimustine, thiotepa, trofosfamide, uracil mustard; CC-1065 andadozelesin, carzelesin, bizelesinor their synthetic analogues; duocarmycinandits synthetic analogues, KW-2189, CBI-TMI, or CBI dimers; benzodiazepine dimers orpyrrolobenzodiazepine (PBD) dimers, tomaymycindimers, indolinobenzodiazepinedimers, imidazobenzothiadiazepinedimers, or oxazolidinobenzodiazepine dimers; Nitrosoureas: comprisingcarmustine, lomustine, chlorozotocin, fotemustine, nimustine, ranimustine; Alkylsulphonates: comprising busulfan, treosulfan, improsulfan and piposulfan) ; Triazenes or dacarbazine; Platinum containing compounds: comprising carboplatin, cisplatin, and oxaliplatin; aziridines, benzodopa, carboquone, meturedopa, or uredopa; ethylenimines andmethylamelaminesincluding altretamine, triethylenemelamine, trietylenephosphoramide, triethylenethiophosphoramide and trimethylolomelamine] ;

[0232] b) . A plant alkaloid: selected from the group consisting ofVinca alkaloids: comprising vincristine, vinblastine, vindesine, vinorelbine, and navelbin; Taxoids: comprisingpaclitaxel, docetaxol and their analogs, Maytansinoids comprising DM1, DM2, DM3, DM4, DM5, DM6, DM7, maytansine, ansamitocinsand their analogs, cryptophycins (including the group consisting of cryptophycin 1 and cryptophycin 8) ; epothilones, eleutherobin, discodermolide, bryostatins, dolostatins, auristatins, tubulysins, cephalostatins; pancratistatin; erbulins, a sarcodictyin; spongistatin;

[0233] c) . A DNA Topoisomerase Inhibitor: selected from the groups ofEpipodophyllins: comprising 9-aminocamptothecin, camptothecin, crisnatol, daunomycin, etoposide, etoposide phosphate, irinotecan, mitoxantrone, novantrone, retinoic acids (or retinols) , teniposide, topotecan, 9-nitrocamptothecin or RFS 2000; and mitomycins and their analogs;

[0234] d) . An antimetabolite: selected from the group consisting of { [Anti-folate: (DHFR inhibitors: comprising methotrexate, trimetrexate, denopterin, pteropterin, aminopterin (4-aminopteroic acid) or folic acid analogues) ; IMP dehydrogenase Inhibitors: (comprising mycophenolic acid, tiazofurin, ribavirin, EICAR) ; Ribonucleotide reductase Inhibitors: (comprisinghydroxyurea, deferoxamine) ] ; [pyrimidine analogs: Uracil analogs: (comprising ancitabine, azacitidine, 6-azauridine, capecitabine (Xeloda) , carmofur, cytarabine, dideoxyuridine, doxifluridine, enocitabine, 5-fluorouracil, floxuridine, ratitrexed (Tomudex) ) ; Cytosine analogs: (comprising cytarabine, cytosine arabinoside, fludarabine) ; Purine analogs: (comprising azathioprine, fludarabine, mercaptopurine, thiamiprine, thioguanine) ] ; folic acid replenisher, frolinic acid} ; and Inhibitors of nicotinamide phosphoribosyltransferase (NAMPT) ;

[0235] e) . A hormonal therapy: selected from the group consisting of {Receptor antagonists: [Anti-estrogen: (comprising megestrol, raloxifene, tamoxifen) ; LHRH agonists: (comprisinggoscrclin, leuprolide acetate) ; Anti-androgens: (comprising bicalutamide, flutamide, calusterone, dromostanolone propionate, epitiostanol, goserelin, leuprolide, mepitiostane, nilutamide, testolactone, trilostane and other androgens inhibitors) ] ; Retinoids / Deltoids: [Vitamin D3 analogs: (comprising CB 1093, EB 1089 KH 1060, cholecalciferol, ergocalciferol) ; Photodynamic therapies: (comprising verteporfin, phthalocyanine, photosensitizer Pc4, demethoxyhypocrellin A) ; Cytokines: (comprising Interferon-alpha, Interferon-gamma, tumor necrosis factor (TNFs) , human proteins containing a TNF domain) ] } ;

[0236] f) . A kinase inhibitor, selected from the group consisting ofBIBW 2992 (anti-EGFR / Erb2) , imatinib, gefitinib, pegaptanib, sorafenib, dasatinib, sunitinib, erlotinib, nilotinib, lapatinib, axitinib, pazopanib. vandetanib, E7080 (anti-VEGFR2) , mubritinib, ponatinib (AP24534) , bafetinib (INNO-406) , bosutinib (SKI-606) , cabozantinib, vismodegib, iniparib, ruxolitinib, CYT387, axitinib, tivozanib, sorafenib, bevacizumab, cetuximab, Trastuzumab, Ranibizumab, Panitumumab, ispinesib;

[0237] g) . A poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) inhibitors selected from the group consisting ofolaparib, niraparib, iniparib, talazoparib, veliparib, CEP 9722 (Cephalon’s) , E7016 (Eisai's) , BGB-290 (BeiGene’s) , or3-aminobenzamide.

[0238] h) . An antibiotic, selected from the group consisting ofan enediyne antibiotic (selected from the group consisting of calicheamicin, calicheamicin γ1, δ1, α1 or β1; dynemicin, including dynemicin A and deoxydynemicin; esperamicin, kedarcidin, C-1027, maduropeptin, orneocarzinostatin chromophore and related chromoprotein enediyne antibioticchromomophores) , aclacinomycins, actinomycin, authramycin, azaserine, bleomycins, cactinomycin, carabicin, carminomycin, carzinophilin; chromomycins, dactinomycin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-oxo-L-norleucine, doxorubicin, morpholino-doxorubicin, cyanomorpholino-doxorubicin, 2-pyrrolino-doxorubicin and deoxydoxorubicin, epirubicin, eribulin, esorubicin, idarubicin, marcellomycin, nitomycins, mycophenolic acid, nogalamycin, olivomycins, peplomycin, potfiromycin, puromycin, quelamycin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimex, zinostatin, zorubicin;

[0239] i) . A polyketide (acetogenin) , bullatacin and bullatacinone; gemcitabine, epoxomicinsandcarfilzomib, bortezomib, thalidomide, lenalidomide, pomalidomide, tosedostat, zybrestat, PLX4032, STA-9090, Stimuvax, allovectin-7, Xegeva, Provenge, Yervoy, Isoprenylation inhibitors and Lovastatin, Dopaminergic neurotoxins and1-methyl-4-phenylpyridinium ion, Cell cycle inhibitors (selected fromstaurosporine) , Actinomycins (comprising Actinomycin D, dactinomycin) , amanitins, Bleomycins (comprising bleomycin A2, bleomycin B2, peplomycin) , Anthracyclines (comprising daunorubicin, doxorubicin (adriamycin) , idarubicin, epirubicin, pirarubicin, zorubicin, mtoxantrone, MDR inhibitors or verapamil, Ca2+ATPase inhibitors or thapsigargin, Histone deacetylase inhibitors ( (comprisingVorinostat, Romidepsin, Panobinostat, Valproic acid, Mocetinostat (MGCD0103) , Belinostat, PCI-24781, Entinostat, SB939, Resminostat, Givinostat, AR-42, CUDC-101, sulforaphane, Trichostatin A) ; Thapsigargin, Celecoxib, glitazones, epigallocatechin gallate, Disulfiram, Salinosporamide A.; Anti-adrenals, selected from the group consisting of aminoglutethimide, mitotane, trilostane; aceglatone; aldophosphamide glycoside; aminolevulinic acid; amsacrine; arabinoside, bestrabucil; bisantrene; edatraxate; defofamine; demecolcine; diaziquone; eflornithine (DFMO) , elfomithine; elliptinium acetate, etoglucid; gallium nitrate; gacytosine, hydroxyurea; ibandronate, lentinan; lonidamine; mitoguazone; mitoxantrone; mopidamol; nitracrine; pentostatin; phenamet; pirarubicin; podophyllinic acid; 2-ethylhydrazide; procarbazine; razoxane; rhizoxin; sizofiran; spirogermanium; tenuazonic acid; triaziquone; 2, 2', 2” -trichlorotriethylamine; trichothecenes (including the group consisting ofT-2 toxin, verrucarin A, roridin A and anguidine) ; urethane, siRNA, antisense drugs;

[0240] (2) . An anti-autoimmune disease agent: cyclosporine, cyclosporine A, aminocaproic acid, azathioprine, bromocriptine, chlorambucil, chloroquine, cyclophosphamide, corticosteroids (including the group consisting of amcinonide, betamethasone, budesonide, hydrocortisone, flunisolide, fluticasone propionate, fluocortolone danazol, dexamethasone, Triamcinolone acetonide, beclometasone dipropionate) , DHEA, enanercept, hydroxychloroquine, infliximab, meloxicam, methotrexate, mofetil, mycophenylate, prednisone, sirolimus, tacrolimus.

[0241] (3) . An anti-infectious disease agentscomprising:

[0242] a) . Aminoglycosides: amikacin, astromicin, gentamicin (netilmicin, sisomicin, isepamicin) , hygromycin B, kanamycin (amikacin, arbekacin, bekanamycin, dibekacin, tobramycin) , neomycin (framycetin, paromomycin, ribostamycin) , netilmicin, spectinomycin, streptomycin, tobramycin, verdamicin;

[0243] b) . Amphenicols: azidamfenicol, chloramphenicol, florfenicol, thiamphenicol;

[0244] c) . Ansamycins: geldanamycin, herbimycin;

[0245] d) . Carbapenems: biapenem, doripenem, ertapenem, imipenem / cilastatin, meropenem, panipenem;

[0246] e) . Cephems: carbacephem (loracarbef) , cefacetrile, cefaclor, cefradine, cefadroxil, cefalonium, cefaloridine, cefalotin or cefalothin, cefalexin, cefaloglycin, cefamandole, cefapirin, cefatrizine, cefazaflur, cefazedone, cefazolin, cefbuperazone, cefcapene, cefdaloxime, cefepime, cefminox, cefoxitin, cefprozil, cefroxadine, ceftezole, cefuroxime, cefixime, cefdinir, cefditoren, cefepime, cefetamet, cefmenoxime, cefodizime, cefonicid, cefoperazone, ceforanide, cefotaxime, cefotiam, cefozopran, cephalexin, cefpimizole, cefpiramide, cefpirome, cefpodoxime, cefprozil, cefquinome, cefsulodin, ceftazidime, cefteram, ceftibuten, ceftiolene, ceftizoxime, ceftobiprole, ceftriaxone, cefuroxime, cefuzonam, cephamycin (cefoxitin, cefotetan, cefmetazole) , oxacephem (flomoxef, latamoxef) ;

[0247] f) . Glycopeptides: bleomycin, vancomycin (oritavancin, telavancin) , teicoplanin (dalbavancin) , ramoplanin;

[0248] g) . Glycylcyclines: tigecycline;

[0249] h) . β-Lactamase inhibitors: penam (sulbactam, tazobactam) , clavam (clavulanic acid) ;

[0250] i) . Lincosamides: clindamycin, lincomycin;

[0251] j) . Lipopeptides: daptomycin, A54145, calcium-dependent antibiotics (CDA) ;

[0252] k) . Macrolides: azithromycin, cethromycin, clarithromycin, dirithromycin, erythromycin, flurithromycin, josamycin, ketolide (telithromycin, cethromycin) , midecamycin, miocamycin, oleandomycin, rifamycins (rifampicin, rifampin, rifabutin, rifapentine) , rokitamycin, roxithromycin, spectinomycin, spiramycin, tacrolimus (FK506) , troleandomycin, telithromycin;

[0253] l) . Monobactams: aztreonam, tigemonam;

[0254] m) . Oxazolidinones: linezolid;

[0255] n) . Penicillins: amoxicillin, ampicillin, pivampicillin, hetacillin, bacampicillin, metampicillin, talampicillin, azidocillin, azlocillin, benzylpenicillin, benzathine benzylpenicillin, benzathine phenoxymethylpenicillin, clometocillin, procaine benzylpenicillin, carbenicillin (carindacillin) , cloxacillin, dicloxacillin, epicillin, flucloxacillin, mecillinam (pivmecillinam) , mezlocillin, meticillin, nafcillin, oxacillin, penamecillin, penicillin, pheneticillin, phenoxymethylpenicillin, piperacillin, propicillin, sulbenicillin, temocillin, ticarcillin;

[0256] o) . Polypeptides: bacitracin, colistin, polymyxin B;

[0257] p) . Quinolones: alatrofloxacin, balofloxacin, ciprofloxacin, clinafloxacin, danofloxacin, difloxacin, enoxacin, enrofloxacin, floxin, garenoxacin, gatifloxacin, gemifloxacin, grepafloxacin, kano trovafloxacin, levofloxacin, lomefloxacin, marbofloxacin, moxifloxacin, nadifloxacin, norfloxacin, orbifloxacin, ofloxacin, pefloxacin, trovafloxacin, grepafloxacin, sitafloxacin, sparfloxacin, temafloxacin, tosufloxacin, trovafloxacin;

[0258] q) . Streptogramins: pristinamycin, quinupristin / dalfopristin;

[0259] r) . Sulfonamides: mafenide, prontosil, sulfacetamide, sulfamethizole, sulfanilimide, sulfasalazine, sulfisoxazole, trimethoprim, trimethoprim-sulfamethoxazole (co-trimoxazole) ;

[0260] s) . Steroid antibacterials: selected fromfusidic acid;

[0261] t) . Tetracyclines: doxycycline, chlortetracycline, clomocycline, demeclocycline, lymecycline, meclocycline, metacycline, minocycline, oxytetracycline, penimepicycline, rolitetracycline, tetracycline, glycylcyclines (including tigecycline) ;

[0262] u) . Other antibiotics: selected from the group consisting of annonacin, arsphenamine, bactoprenol inhibitors (Bacitracin) , DADAL / AR inhibitors (cycloserine) , dictyostatin, discodermolide, eleutherobin, epothilone, ethambutol, etoposide, faropenem, fusidic acid, furazolidone, isoniazid, laulimalide, metronidazole, mupirocin, mycolactone, NAM synthesis inhibitors (fosfomycin) , nitrofurantoin, paclitaxel, platensimycin, pyrazinamide, quinupristin / dalfopristin, rifampicin (rifampin) , tazobactam tinidazole, uvaricin;

[0263] (4) . Anti-viral drugscomprising:

[0264] a) . Entry / fusion inhibitors: aplaviroc, maraviroc, vicriviroc, gp41 (enfuvirtide) , PRO 140, CD4 (ibalizumab) ;

[0265] b) . Integrase inhibitors: raltegravir, elvitegravir, globoidnan A;

[0266] c) . Maturation inhibitors: bevirimat, vivecon;

[0267] d) . Neuraminidase inhibitors: oseltamivir, zanamivir, peramivir;

[0268] e) . Nucleosides &nucleotides: abacavir, aciclovir, adefovir, amdoxovir, apricitabine, brivudine, cidofovir, clevudine, dexelvucitabine, didanosine (ddI) , elvucitabine, emtricitabine (FTC) , entecavir, famciclovir, fluorouracil (5-FU) , 3’ -fluoro-substituted 2’ , 3’ -dideoxynucleoside analogues (including the group consisting of3’ -fluoro-2’ , 3’ -dideoxythymidine (FLT) and 3’ -fluoro-2’ , 3’ -dideoxyguanosine (FLG) , fomivirsen, ganciclovir, idoxuridine, lamivudine (3TC) , l-nucleosides (including the group consisting ofβ-l-thymidine and β-l-2’ -deoxycytidine) , penciclovir, racivir, ribavirin, stampidine, stavudine (d4T) , taribavirin (viramidine) , telbivudine, tenofovir, trifluridine valaciclovir, valganciclovir, zalcitabine (ddC) , zidovudine (AZT) ;

[0269] f) . Non-nucleosides: amantadine, ateviridine, capravirine, diarylpyrimidines (etravirine, rilpivirine) , delavirdine, docosanol, emivirine, efavirenz, foscarnet (phosphonoformic acid) , imiquimod, interferon alfa, loviride, lodenosine, methisazone, nevirapine, NOV-205, peginterferon alfa, podophyllotoxin, rifampicin, rimantadine, resiquimod (R-848) , tromantadine;

[0270] g) . Protease inhibitors: amprenavir, atazanavir, boceprevir, darunavir, fosamprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, pleconaril, ritonavir, saquinavir, telaprevir (VX-950) , tipranavir;

[0271] h) . Other types of anti-virus drugs: abzyme, arbidol, calanolide a, ceragenin, cyanovirin-n, diarylpyrimidines, epigallocatechin gallate (EGCG) , foscarnet, griffithsin, taribavirin (viramidine) , hydroxyurea, KP-1461, miltefosine, pleconaril, portmanteau inhibitors, ribavirin, seliciclib.

[0272] (5) . A radioisotope that can be selected from the group consisting of (radionuclides) 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 90Y, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 203Pb, 212Pb, 211At, 213Bi, 224Ra and 225Ac. The metal radionuclides, 64Cu, 68Ga, 86Y, 90Y, 99Tc, 111In, 133Xe, 177Lu, 203Pb, 212Pb, 211At, 213Bi, 224Ra and 225Ac linked to an antibody through a chelator and a linker L1 of this patent application. The chelator is selected from DOTA, TETA, NOTA, NETA, DTPA, HBED, SHBED, and their structures are illustrated below:

[0273] (6) . A chromophore molecule, whichis capable of absorbing UV light, florescent light, IR light, near IR light, visual light; A class or subclass of xanthophores, erythrophores, iridophores, leucophores, melanophores, cyanophores, fluorophore molecules which are fluorescent chemical compounds reemitting light upon light, visual phototransduction molecules, photophore molecules, luminescence molecules, luciferin compounds; Non-protein organic fluorophores, selected from: Xanthene derivatives (comprising fluorescein, rhodamine, Oregon green, eosin, and Texas red) ; Cyanine derivatives: (comprising cyanine, indocarbocyanine, oxacarbocyanine, thiacarbocyanine, and merocyanine) ; Squaraine derivatives and ring-substituted squaraines, including Seta, SeTau, and Square dyes; Naphthalene derivatives (comprisingdansyl and prodan derivatives) ; Coumarin derivatives; Oxadiazole derivatives (comprisingpyridyloxazole, nitrobenzoxadiazole and benzoxadiazole) ; Anthracene derivatives (comprising anthraquinones, including DRAQ5, DRAQ7 and CyTRAK Orange) ; Pyrene derivatives (cascade blue) ; Oxazine derivatives (comprising Nile red, Nile blue, cresyl violet, oxazine 170) . Acridine derivatives (comprisingproflavin, acridine orange, acridine yellow) . Arylmethine derivatives (comprising auramine, crystal violet, malachite green) . Tetrapyrrole derivatives (comprising porphin, phthalocyanine, bilirubin) ; Any analogs and derivatives of the following fluorophore compounds comprising CF dye, DRAQ and CyTRAK probes, BODIPY, Alexa Fluor, DyLight Fluor, Atto and Tracy, FluoProbes, Abberior Dyes, DY and MegaStokes Dyes, Sulfo Cy dyes , HiLyte Fluor, Seta, SeTau and Square Dyes, Quasar and Cal Fluor dyes, SureLight Dyes (APC, RPEPerCP, Phycobilisomes) , APC, APCXL, RPE, BPE, Allophycocyanin (APC) , Aminocoumarin, APC-Cy7 conjugates, BODIPY-FL, Cascade Blue, Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy5, Cy5.5, Cy7, Fluorescein, FluorX, Hydroxycoumarin, Lissamine Rhodamine B, Lucifer yellow, Methoxycoumarin, NBD, Pacific Blue, Pacific Orange, PE-Cy5 conjugates, PE-Cy7 conjugates, PerCP, R-Phycoerythrin (PE) , Red 613, Seta-555-Azide, Seta-555-DBCO, Seta-555-NHS, Seta-580-NHS, Seta-680-NHS, Seta-780-NHS, Seta-APC-780, Seta-PerCP-680, Seta-R-PE-670, SeTau-380-NHS, SeTau-405-Maleimide, SeTau-405-NHS, SeTau-425-NHS, SeTau-647-NHS, Texas Red, TRITC, TruRed, X-Rhodamine, 7-AAD (7-aminoactinomycin D, CG-selective) , Acridine Orange, Chromomycin A3, CyTRAK Orange (red excitation dark) , DAPI, DRAQ5, DRAQ7, Ethidium Bromide, Hoechst33258, Hoechst33342, LDS 751, Mithramycin, PropidiumIodide (PI) , SYTOX Blue, SYTOX Green, SYTOX Orange, Thiazole Orange, TO-PRO: Cyanine Monomer, TOTO-1, TO-PRO-1, TOTO-3, TO-PRO-3, YOSeta-1, YOYO-1; A fluorophore compound: comprising DCFH (2'7'Dichorodihydro-fluorescein, oxidized form) , DHR (Dihydrorhodamine 123, oxidized form, light catalyzes oxidation) , Fluo-3 (AM ester. pH > 6) , Fluo-4 (AM ester. pH 7.2) , Indo-1 (AM ester, low / high calcium (Ca2+) ) , SNARF (pH 6 / 9) , Allophycocyanin (APC) , AmCyan1 (tetramer, Clontech) , AsRed2 (tetramer, Clontech) , Azami Green (monomer) , Azurite, B-phycoerythrin (BPE) , Cerulean, CyPet, DsRed monomer (Clontech) , DsRed2 ( "RFP" ) , EBFP, EBFP2, ECFP, EGFP (weak dimer) , Emerald (weak dimer) , EYFP (weak dimer) , GFP (S65A mutation) , GFP (S65C mutation) , GFP (S65L mutation) , GFP (S65T mutation) , GFP (Y66F mutation) , GFP (Y66H mutation) , GFP (Y66W mutation) , GFPuv, HcRed1, J-Red, Katusha, Kusabira Orange (monomer, MBL) , mCFP, mCherry, mCitrine, Midoriishi Cyan (dimer, MBL) , mKate (TagFP635, monomer) , mKeima-Red (monomer) , mKO, mOrange, mPlum, mRaspberry, mRFP1 (monomer) , mStrawberry, mTFP1, mTurquoise2, P3 (phycobilisome complex) , Peridinin Chlorophyll (PerCP) , R-phycoerythrin (RPE) , T-Sapphire, TagCFP (dimer) , TagGFP (dimer) , TagRFP (dimer) , TagYFP (dimer) , tdTomato (tandem dimer) , Topaz, TurboFP602 (dimer) , TurboFP635 (dimer) , TurboGFP (dimer) , TurboRFP (dimer) , TurboYFP (dimer) , Venus, Wild Type GFP, YPet, ZsGreen1 (tetramer) , ZsYellow1 (tetramer) and their derivatives.

[0274] (7) . The cell-binding ligands or receptor agonists, which can be selected from: Folate derivatives; Glutamic acid urea derivatives; Somatostatin and its analogs (selected from the group consisting of octreotide (Sandostatin) and lanreotide (Somatuline) ) ; Aromatic sulfonamides; Pituitary adenylate cyclase activating peptides (PACAP) (PAC1) ; Vasoactive intestinal peptides (VIP / PACAP) (VPAC1, VPAC2) ; Melanocyte-stimulating hormones (α-MSH) ; Cholecystokinins (CCK)  / gastrin receptor agonists; Bombesins (selected from the group consisting ofPyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)  / gastrin-releasing peptide (GRP) ; Neurotensin receptor ligands (NTR1, NTR2, NTR3) ; Substance P (NK1 receptor) ligands; Neuropeptide Y (Y1–Y6) ; Homing Peptides include RGD (Arg-Gly-Asp) , NGR (Asn-Gly-Arg) , the dimeric and multimeric cyclic RGD peptides (selected fromcRGDfV) , TAASGVRSMH and LTLRWVGLMS (Chondroitin sulfate proteoglycan NG2 receptor ligands) and F3 peptides; Cell Penetrating Peptides (CPPs) ; Peptide Hormones, selected from the group consisting of luteinizing hormone-releasing hormone (LHRH) agonists and antagonists, and gonadotropin-releasing hormone (GnRH) agonist, acts by targeting follicle stimulating hormone (FSH) and luteinising hormone (LH) , as well as testosterone production, selected from the group consisting of buserelin, Gonadorelin, Goserelin, Histrelin, leuprolide, Nafarelin, Triptorelin, Nafarelin, Deslorelin, Abarelix, Cetrorelix, Degarelix, and Ganirelix; Pattern Recognition Receptor (PRRs) , selected from the group consisting of Toll-like receptors’ (TLRs) ligands, C-type lectins and NodlikeReceptors’ (NLRs) ligands; Calcitoninreceptor agonists; integrin receptors’and their receptor subtypes’ (selected from the group consisting ofαVβ1, αVβ3, αVβ5, αVβ6, α6β4, α7β1, αLβ2, αIIbβ3) agonists (selected from the group consisting of GRGDSPK, cyclo (RGDfV) (L1) and its derives [cyclo (-N (Me) R-GDfV) , cyclo (R-Sar-DfV) , cyclo (RG-N (Me) D-fV) , cyclo (RGD-N (Me) f-V) , cyclo (RGDf-N (Me) V-) (Cilengitide) ] ; Nanobody (aderivative ofVHH (camelid Ig)) ; Domain antibodies (dAb, a derivative ofVH or VL domain) ; Bispecific T cell Engager (BiTE, a bispecific diabody) ; Dual Affinity ReTargeting (DART, abispecific diabody) ; Tetravalent tandem antibodies (TandAb, a dimerized bispecific diabody) ; Anticalin (aderivative of Lipocalins) ; Adnectins (10th FN3 (Fibronectin) ) ; Designed Ankyrin Repeat Proteins (DARPins) ; Avimers; EGF receptors and VEGF receptors’ agonists.

[0275] (8) . The pharmaceutically acceptable salts, acids, derivatives, hydrate or hydrated salt; or a crystalline structure; or an optical isomer, racemate, diastereomer or enantiomer of any of the above drugs.

[0276] In some embodiments, the ADC is represented as the formula of

[0277] wherein D, D1 and D2 are a small molecule cytotoxin or a functional small molecule, in general called payload; L, L1 and L2 are a linker; and mAb is an monoclonal antibody. In some embodiments, an ADC may comprise a small molecule cytotoxin that has been chemically modified to contain a linker, or a linker is part of payload which is called a traceless linker. The linker is generally used to conjugate the cytotoxin to the antibody, or antigen-binding fragment thereof. Upon binding to the target antigen on the surface of a cell, the ADC is internalized and trafficked to the lysosome where the cytotoxin is released by either proteolysis of a cleavable linker (e.g., by cathepsin B found in the lysosome) or by proteolytic degradation of the antibody, if attached to the cytotoxin via a non-cleavable linker. The cytotoxin then translocates out of the lysosome and into the cytosol or nucleus, where it can then bind to its target, depending on its mechanism of action.

[0278] In further embodiments, the anti-CD276 antibody-drug conjugate above, wherein the linker in the conjugate contains a DUPA group and / or an affinity ligand for broader and enhancement of targeted treatment of prostate cancer and other refractory diseases; wherein the DUPA is the following structure:

[0279] wherein the is the site linked side chain terminal of the linker in the conjugate.

[0280] In some embodiments, linkers include a divalent radical such as an alkyldiyl, an aryldiyl, a heteroaryldiyl, moieties such as: -- (CR2) nO (CR2) n--, repeating units of alkyloxy (e.g. polyethylenoxy, PEG, polymethyleneoxy) and alkylamino (e.g. polyethyleneamino) ; and diacid ester and amides including succinate, succinamide, diglycolate, malonate, and caproamide. In various embodiments, linkers may comprise one or more amino acid residues, such as glycine, analine, valine, glutamic acid, aspartic acid, cysteine, citrulline, arginine, phenylalanine, lysine, and homolysine.

[0281] As used herein, “linker” refers to a chemical moiety comprising a covalent bond or a chain of atoms that covalently attaches an antibody to a drug moiety. In various embodiments, linkers include a divalent radical such as an alkyldiyl, an aryldiyl, a heteroaryldiyl, moieties such as: -- (CR2) nO (CR2) n--, repeating units of alkyloxy (e.g. polyethylenoxy, PEG, polymethyleneoxy) and alkylamino (e.g. polyethyleneamino) ; and diacid ester and amides including succinate, succinamide, diglycolate, malonate, and caproamide. In various embodiments, linkers can comprise one or more amino acid residues, such as valine, phenylalanine, lysine, and homolysine.

[0282] In fuuurther embodiments, linkers may comprise one or more C3 ～C10 aromatic rings and the aromatic ring can be in the middle or a side chain of the linker L1 or / and L2.

[0283] In various fuuurther embodiments, the ADC structures represented as the formula of (I’ ) , (II’ ) or (III’ ) that contains one or more DUPA groups and the linker components described above or throughout the description of the invention can be applied to the other targeting ADCs beside the B7H3-ADC of the invention.

[0284] The antibody-drug conjugate described herein may comprise a whole antibody or an antibody fragment. A whole antibody typically consists of four polypeptides: two identical copies of a heavy (H) chain polypeptide and two identical copies of a light (L) chain polypeptide. Each of the heavy chains contains one N-terminal variable (VH) region and three C-terminal constant (CH1, CH2 and CH3) regions, and each light chain contains one N-terminal variable (VL) region and one C-terminal constant (CL) region. The variable regions of each pair of light and heavy chains form the antigen binding site of an antibody. The VH and VL regions have the same general structure, with each region comprising four framework regions, whose sequences are relatively conserved. The framework regions are connected by three complementarity determining regions (CDRs) . The three CDRs, known as CDR1, CDR2, and CDR3, form the "hypervariable region" of an antibody, which is responsible for antigen binding.

[0285] In further embodiments, the ADC formula (I’ ) , (II’ ) and (III’ ) are represented as the following formula (I) , (II) , (III) and (IV) accordingly:

[0286] and

[0287] Wherein,

[0288] D1 and D2 are a cytotoxic agent; mAb is the above antibody or an antigen-binding fragment thereof; n is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20, and these numbers may have a decimal;

[0289] L1, L2, La1, La2, Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, and Ld6 are a linker, which are independently selected from O, C, CH, CH2, NH, S, N, NH-NH, N-N, N (R3) , N (R3) N (R3’ ) , C (=O) , C (=O) N, C (=O) NH, C (=O) N-N, C2-C8 of alkyl (alkylene) , heteroalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; or 1-8 carbon atoms of esters, ether, or amide; or 1～8 natural or unnatural amino acids described in the definition; or polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) pOR3, (OCH2CH2) p, (OCH2CH (CH3) ) pOR3, NH (CH2CH2O) pR3, NH (CH2CH (CH3) O) pR3, or N [ (CH2CH2O) pR3] [ (CH2CH2O) pR3’ ] , (OCH2CH2) pCOOR3, CH2CH2 (OCH2CH2) pCOR3, or CH2CH2 (OCH2CH2) pCOOR3, wherein p and p’ are independently an integer selected from 0 to about 100, or combination thereof; wherein R3 and R3’ are independently H, C (=O) H, C (=O) CH3, NH, C (=O) , C (=O) NH, C1-C8 of alkyl, absent; or combination above thereof; and one or several of L1, L2, La1, La2, Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, and Ld6 can be absent thereof; In addition, linkers may comprise one or more C3 ～C10 aromatic rings and the aromatic ring can be in the middle or a side chain of the linker components.

[0290] In further addition, La1 and La2 are independently a peptide having 1～ 8 amino acids, which contain one or several lysines, glutamic acids, aspartic acidss, cysteine, glutamines, asparagines, tyrosines, and combination of these amino acids thereof, and these amino acids link A1, A2, A3, A4, A5 and A6 through Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, and Ld6 accordingly;

[0291] E1 and E2 are a joint group that link two reactonable groups, Lv1 and Lv2, which preferably can react to a thiol, amino, phenol, ketone, aldehyde, alkyne, hydroxyl, or carboxylic acid group in an antibody to form a group of Lv1’ and Lv2’ respectively. E1 and E2 are independently selected from CH, CH2, CH-CH, NH, NHNH, N (R3) , N (R3) N (R3’ ) , N=N, N-N, P, P (=O) , S, Si, C2-C8 of alkyl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; a peptide containing1～4 units of aminoacids, preferably selected from aspatic acid, glutamic acid, arginine, histidine, lysine, serine, threonine, asparagine, glutamine, cysteine, selenocysteine, tyrosine, phenylalanine, glycine, proline, tryptophan, alanine; or one of the following structures:

[0292] wherein  is the site of linkage; X1, X2, X3, X4, X5, or X6, are independently selected from NH; NHNH; N (R3) ; N(R3) N (R3’ ) ; O; S; C1-C6 of alkyl; R3 and R3’ are H, C1-C6 of alkyl; In addition, E1 can be absent, thus La1 or / and La2 can directly link to Lv1’ or Lv2’ ;

[0293] In addition, E1 can be absent, thus La1 or / and La2 can directly link to a group of Lv1’ or Lv2’ ;

[0294] m1, m2, m3, m4, m5, m6, m7, m8, m9, m10, m11 and m12 are independently 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 and these numbers may have a decimal; in addition, m2, m3, m8, m9 and / or m10 can be 0, thus Ld2-A2, Ld3-A3, Ld5-A5, and / or Ld6-A6 can be absent;

[0295] A1, A2, A3, A4, A5 and A6 are an affinity DUPA ligand, independently selected from:

[0296]

[0297] wherein Lv1’ and Lv2’ are a group that are resulted from reaction of Lv1 and Lv2 to an amino acid of an antibody or a cell-binding protein independently. Lv1’ and Lv2’ are independently or jointly having the following structures:

[0298] wherein is a site that links a drug or a site of linker L1 or L2; “#” is a site that links a S (thiol) , O (phenol) , NH (amino) , CHO (aldehyde) , C (=O) (ketone) , C (O) (NH) (amide) and C (O) (OH) (carboxylate) of an antibody; wherein R1 and R2 are H, C1-C6 of alkyl or a peptide containing 1～4 units of aminoacids; X1’ , X2’ and X are O, NH, S, CH2; the conneting bond “-” in the middle of the two atoms means it can link either one of the two atoms, Ar is an aromatic group;

[0299] In further embodiments, L1, L2, La1, La2, Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, and Ld6 are 1～4 natural or unnatural amino acids, C1-C8 of gamma amino-alkyl, aminoalkylcarboxyl, thioalkylcarboxyl or oxylalkylcarboxyl, or C3-C18 of gamma amino-benzyl or aromatic of ester, ether, urea, carbamate, carbonate, thiourea, thioether, thiourea, or amide, wherein aromatic is selected from phenyl, phenol, benzyloxyl, benzyloxyl, benzylamino, phenylcarboxyl, oxyl-phenyl-carboxyl, amino-phenyl-carboxyl, benzyloxycarbonyl, benzylaminocarbonyl, triazol, tetrazol, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazineyl, oxazole, thiazole. In addition, lysine and or glutamic acid among natural or unnatural amino acids can have a side chain of a polyethyleneoxy unit of formula C (O) (CH2CH2O) pR3, or NH (CH2CH2O) pR3 linked to the amino or carboxy group of lysine and or glutamic acid respectively, wherein p and R3 are described above; And one or several of L1, L2, La1, La2, Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, and Ld6 can be absent thereof.

[0300] In another embodiment, cytotoxic agent is preferably selected from a tubulysin and its analogs, a maytansinoid and its analogs, a taxanoid (taxane) and its analogs, a CC-1065 and its analogs, a daunorubicin or doxorubicin and its analogs, an amatoxin and its analogs, a benzodiazepine dimer (e.g., dimers of pyrrolobenzodiazepine (PBD) , tomaymycin, anthramycin, indolinobenzodiazepines, imidazobenzothiadiazepines, or oxazolidinobenzo-diazepines) and their analogs, a calicheamicin and the enediyne antibiotic and their analogs, an actinomycin and its analogs, an azaserine and its analogs, a bleomycin and its analogs, an epirubicin and its analogs, a tamoxifen and its analogs, an idarubicin and its analogs, a dolastatin and its analogs, an auristatin (including monomethyl auristatin E (MMAE) , MMAF, auristatin PYE, auristatin TP, Auristatins 2-AQ, 6-AQ, EB (AEB) , and EFP (AEFP) ) and its analogs, a combretastatin, a duocarmycin and its analogs, a camptothecin, a geldanamycin and its analogs, a methotrexate and its analogs, a thiotepa and its analogs, a vindesine and its analogs, a vincristine and its analogs, a hemiasterlin and its analogs, a nazumamide and its analogs, a spliceostatin, a pladienolide, a microginin and its analogs, a radiosumin and its analogs, an alterobactin and its analogs, a microsclerodermin and its analogs, a theonellamide and its analogs, an esperamicin and its analogs, PNU-159682 and its analogs, a protein kinase inhibitor, a MEK inhibitor, a KSP inhibitor, a nicotinamide phosphoribosyltransferase (NAMPT) inhibitor, an immunotoxin, a cell receptor agonist, a cell stimulating molecule or intracellular signaling molecule, one, two or more DNA, RNA, mRNA, small interfering RNA (siRNA) , microRNA (miRNA) , and PIWI interacting RNAs (piRNA) , and stereoisomers, isosteres, analogs, or derivatives thereof; .

[0301] In certain such embodiments, tubulysin and its analogs are preferably the cytotoxic agent of the present invention. Tubulysins can be isolated from natural sources according to known methods or prepared synthetically according to known methods (e.g. Balasubramanian, R., et al. J. Med. Chem., 2009, 52, 238–40; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2004, 6, 4057–60; Pando, O., et al. J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 7692–5; Reddy, J.A., et al. Mol. Pharmaceutics, 2009, 6, 1518–25; Raghavan, B., et al. J. Med. Chem., 2008, 51, 1530–33; Patterson, A.W., et al. J. Org. Chem., 2008, 73, 4362–9; Pando, O., et al. Org. Lett., 2009, 11 (24) , 5567–9; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2007, 9 (8) , 1605–7; Friestad, G.K., Org. Lett., 2004, 6, 3249–52; Peltier, H.M., et al. J. Am. Chem. Soc., 2006, 128, 16018–9; Chandrasekhar, S., et al J. Org. Chem., 2009, 74, 9531–4; Liu, Y., et al. Mol. Pharmaceutics, 2012, 9, 168–75; Friestad, G.K., et al. Org. Lett., 2009, 11, 1095–8; Kubicek, K., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2010.49: 4809-12; Chai, Y., et al., Chem Biol, 2010, 17: 296-309; Ullrich, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2009, 48, 4422-5; Sani, M., et al. Angew Chem Int Ed Engl, 2007, 46, 3526-9; Domling, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2006, 45, 7235-9; Patent applications: Zanda, M., et al, Can. Pat. Appl. CA 2710693 (2011) ; Chai, Y., et al. Eur. Pat. Appl. 2174947 (2010) , WO 2010034724; Leamon, C. et al, WO2010033733, WO 2009002993; Ellman, J., et al, PCT WO2009134279; WO 2009012958, US appl. 20110263650, 20110021568; Matschiner, G., et al, WO2009095447; Vlahov, I., et al, WO2009055562, WO 2008112873; Low, P., et al, WO2009026177; Richter, W., WO2008138561; Kjems, J., et al, WO 2008125116; Davis, M.; et al, WO2008076333; Diener, J.; et al, U.S. Pat. Appl. 20070041901, WO2006096754; Matschiner, G., et al, WO2006056464; Vaghefi, F., et al, WO2006033913; Doemling, A., Ger. Offen. DE102004030227, WO2004005327, WO2004005326, WO2004005269; Stanton, M., et al, U.S. Pat. Appl. Publ. 20040249130; Hoefle, G., et al, Ger. Offen. DE10254439, DE10241152, DE10008089; Leung, D., et al, WO2002077036; Reichenbach, H., et al, Ger. Offen. DE19638870; Wolfgang, R., US20120129779; Chen, H., US appl. 20110027274. The preferred structures of tubulysins for conjugation of cell binding molecules through process of the present patent application are described in the patent application of PCT / IB2012 / 053554.

[0302] Tubulysin analog having the following formula (IV’ ) :

[0303] or a pharmaceutically acceptable salt, hydrates, or hydrated salt; or a polymorphic crystalline structure; or an optical isomer, racemate, diastereomer or enantiomer thereof,

[0304] wherein is a linkage site that either one or two of them can link to L1 and / or L2 independently; when two of link to both L1 and L2, R1 and R2, or Z2 and Z3 are preferably the dual linkage sites;

[0305] wherein R1, R1’ , R2, R3, and R4 are independently H, C1～C8 alkyl; C2～C8 heteroalkyl, or heterocyclic; C3～C8 aryl, Ar-alkyl, cycloalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, carbocyclic, or alkylcarbonyl; or R1R2, R1R3, R2R3, R3R4, or R5R6 form a 3～7 membered carbocyclic, cycloalkyl, heterocyclic, heterocycloalkyl, aromatic or heteroaromatic ring system; R1 and R2 can be independently absent when they link to L1 or L2 independently or simultaneously, Y1 is N or CH;

[0306] Preferably R1, R1’ , R2, R3, and R4 are independently H, C1～C8 alkyl or heteroalkyl and Y1 is N;

[0307] wherein R5, R6, R8, R10 and R11 are independently H, or C1～C4 alkyl or heteroalkyl;

[0308] wherein R7 is independently H, R14, -R14C (=O) X1R15; or -R14X1R15; X1 is O, S, S-S, NH, CH2 or NR14;

[0309] wherein R9 is selected from H, OH, =O, -OR14, -OC (=O) R14, -OC (=O) NHR14, or -OC (=O) NR14R15; when R9 links L1 or L2, R9 is -O-, -OC (=O) NH-or -OC (=O) N (R14) -;

[0310] wherein R11 is H, or C1～C8 alkyl or C3～C8 Ar-alkyl;

[0311] wherein R12 is -COOH, -COSH, -CONH2, CONHNH2, CONHNHR15, -CONH (R15) , -COOR15, -R15COR16, -R15COOR16, -R15C (O) NH2, -R15C (O) NHR16, -COSR15, R15S (=O) 2R16, -R15P (=O) (OR17) 2, -R15OP (=O) (OR17) 2, -COOCH2OP (=O) (OR17) 2, -COX2SO2R17, -COOR15X2R16, tetrazole, imidazole, or triazole, where X2 is -O-, -S-, -NH-, -N (R15) -, -O-R15-, -S-R15-, CH2 or -NHR15-; when R12 links L1 or L2, R12 is -C (O) O-, -C (O) NH-, -C (=O) NHS (O) 2R15-or -C (=O) N (R15) -;

[0312] Preferably R12 is is -COOH, -CONH2, CONHNH2, CONHNHR15, -CONH (R15) , or -COOR15;

[0313] R13 and R14 are independently C1～C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 of alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl; Preferably R13 and R14 are independently C1～C8 alkyl;

[0314] Z2 and Z3 are independently H, O, S, NH, N (R15) , NHNH, -OH, -SH, -NH2, NHNH2, -NH (R15) , -OR15, CO, -COX2, -COX2R16, R17, F, Cl, Br, I, SR16, NR16R17, N=NR16, N=R16, NO2, SOR16R17, SO2R16, SO3R16, OSO3R16, PR16R17, POR16R17, PO2R16R17, OP (O) (OR17) 2, OCH2OP (O) (OR17) 2, OC (O) R17, OC (O) OP (O) (OR17) 2, PO (OR16) (OR17) , OP (O) (OR17) OP (O) (OR17) 2, OC (O) NHR17; -O- (C4-C12 glycoside) , -N- (C4-C12 glycoside) ; C1～C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 of alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl, or 2-8 carbon atoms of esters, ether, or amide; or peptides containing 1-8 amino acids (NH (Aa) 1～8, or CO (Aa) 1～8 (which are respectively N-terminal or C-terminal 1 -8 the same or different amino acids) ) , or polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 0 to about 100, or combination of above groups thereof; X2 is O, S, S-S, NH, CH2, OH, SH, NH2, CHR15 or NR15;

[0315] Preferably Z2 and Z3 are independently H, O, NH, NHNH, -OH, -NH2, NHNH2, -NH (R15) , -OR15, CO, -COX2, -COX2R16,

[0316] R15, R16 and R17 are independently H, C1～C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 of alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl, alkylcarbonyl, or Na+, K+, Cs+, Li+, Ca2+, Mg+, Zn2+, N+ (R1) (R2) (R3) (R4) , HN+ (C2H5OH) 3 salt; Preferably R15, R16 and R17 are independently H, C1～C8 alkyl;

[0317] Y1 and Y2 are independently N or CH; q is 0 or 1; when q=0, Y3 does not exist, Y4, Y5, Y6 and Y7 are independently CH, N, NH, O, S, or N (R1) , thus Y2, Y4, Y5, Y6 and Y7form a heteroaromatic ring of furan, pyrrole thiophene, thiazole, oxazole and imidazole, pyrazole, triazole, tetrazole, thiadiazole; when q=1, Y3, Y4, Y5, Y6 and Y7 are independently CH or N, thus Y2, Y3, Y4, Y5, Y6 and Y7 form aromatic ring of benzene, pyridine, pyridazine, pyrimidine, pyrazine, triazine, tetrazine, pentazine;

[0318] Examples of the structures of the tubulysin analogs are shown below:

[0319] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0320] wherein R20 is H; C1-C8 of linear or branched alkyl or heteroalkyl; C2-C8 of alkylcarbonyl, carbonate (-C (O) OR17) , carbamate (-C (O) NR17R18) ; or 1-8 carbon atoms of carboxylate, esters, ether, or amide; or 1～8 amino acids; or polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3)) p, wherein p is an integer from 0 to about 100; or R20 is absent and the oxygen forms a ketone, or combination above groups thereof;

[0321] Z3 and Z3 are independently H, OH, NH2, O, NH, COOH, COO, C (O) , C (O) NH, C (O) NH2, R18, OCH2OP (O) (OR18) 2, OC (O) OP (O) (OR18) 2, OPO (OR18) 2, NHPO (OR18) 2, OP (O) (OR18) OP (O) (OR18) 2, OC (O) R18, OC (O) NHR18, OSO2 (OR18) , O- (C4-C12-glycoside) , carbonate (-C (O) OR17) , carbamate (-C (O) NR17R18) ; R17and R18 are independently H, linear or branched alkyl or heteroalkyl;

[0322] R19 is H, OH, NH2, OSO2 (OR18) , XCH2OP (O) (OR18) 2, XPO (OR18) 2, XC (O) OP (O) (OR18) 2, XC (O) R18, XC (O) NHR18, C1～C8 alkyl or carboylate; or pharmaceutical salts;

[0323] X is O, S, NH, NHNH, or CH2;

[0324] R7 is defined the same above; wherein the linkage sites,  in formula IV-01 ～ IV-79 are having the same indication according to formula (IV’ ) .

[0325] In certain such embodiments, calicheamicins and their related enediyne antibiotics are preferably the cytotoxic agent of the present invention. They were described in: Nicolaou, K.C. et al, Science 1992, 256, 1172-1178; Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1993, 90, 5881-8) , U.S. Patent Nos. 4,970,198; 5,053,394; 5,108,912; 5,264,586; 5,384,412; 5,606,040; 5,712,374; 5,714,586; 5,739,116; 5,770,701; 5,770,710; 5,773,001; 5,877,296; 6,015,562; 6,124,310; 8,153,768. Exemplary enediynes include, but are not limited to, calicheamicin, esperamicin, uncialamicin, dynemicin, and their derivatives. The structure of calicheamicins is preferred the following formula:

[0326] or an isotope of a chemical element, or a pharmaceutically acceptable salt, hydrates, or hydrated salt; or a polymorphic crystalline structure; or an optical isomer, racemate, diastereomer or enantiomer thereof,

[0327] wherein is the site linked to L1 or L2;

[0328] In certain such embodiments, Geldanamycins are benzoquinone ansamycin antibiotic that bind to Hsp90 (Heat Shock Protein 90) and are preferably the cytotoxic agent of the present invention. Exemplary geldanamycins include, but are not limited to, 17-AAG (17-N-Allylamino-17-Demethoxygeldanamycin) and 17-DMAG (17-Dimethylamino-ethylamino-17-demethoxygeldanamycin) , having the following formula:

[0329] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0330] wherein is the site linked to L1 or L2;

[0331] In certain such embodiments, Maytansines or their derivatives maytansinoids inhibit cell proliferation by inhibiting the mcirotubules formation during mitosis through inhibition of polymerization of tubulin, and are peferably the cytotoxic agent of the present invention. See Remillard et al., Science 189: 1002-1005 (1975) . Exemplary maytansines and maytansinoids include, but are not limited to, mertansines (DM1, DM4) , maytansinol and its derivatives as well as ansamitocin. Maytansinoids are described in U.S. Patent Nos. 4,256,746, 4,361,650, 4,307,016, 4,294,757, 4,294,757, 4,371,533, 4,424,219, 4,331,598, 4,450,254, 4,364,866, 4,313,946, 4,315,929 4,362,663, 4,322,348, 4,371,533, 4,424,219, 5,208,020, 5,416,064, 5,208,020; 5,416,064; 6,333.410; 6,441,163; 6, 716,821, 7,276,497, 7,301,019, 7,303,749, 7,368,565, 7,411,063, 7,851,432, and 8,163,888. The structure of maytansinoids is preferred the following formula:

[0332] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0333] wherein is the site linked to L1 or L2.

[0334] In certain such embodiments, cryptophycin or their derivatives are peferably the cytotoxic agent of the present invention. The cryptophycins are a family of 16-membered macrolide antimitotic agents isolated from the cyanobacteria Nostoc sp. The mechanism of anticancer activity of the cryptophycins has been associated with their destabilization of microtubules and induction of bcl-2 phosphorylation leading to apoptosis. Cryptophycins demonstrated activity against the wide spectrum of solid tumors including those that overexpress the multidrug resistance efflux pump P-glycoprotein.

[0335] The structures of cryptophycins of this invention are preferred the following formula:

[0336] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0337] wherein X is O or NH, and is the site linked to L1 or L2.

[0338] In certain such embodiments, camptothecins (CPTs) and its derivatives are preferably the cytotoxic agent of the present invention. CPTs are topoisomerase I inhibitors to prevent DNA re-ligation and therefore to causes DNA damage resulting in apoptosis, and are described in: Shang, X.F. et al, Med Res Rev. 2018, 38 (3) : 775-828; Botella, P. and Rivero-Buceta, E. J Control Release. 2017, 247: 28-54; Martino, E. et al, Bioorg Med Chem Lett. 2017, 27 (4) : 701-707; Lu, A., et al, Acta Pharmacol Sin 2007, 28 (2) : 307–314. It includes SN-38, Topotecan, Irinotecan (CPT-11) , Silatecan (DB-67, AR-67) , Cositecan (BNP-1350) , Etirinotecan, Exatecan, Lurtotecan, Gimatecan (ST1481) , Belotecan (CKD-602) , Rubitecan and several others (Shang, X.F. et al, Med Res Rev. 2018, 38 (3) : 775-828) . So far three CPT analogues, topotecan, irinotecan, and belotecan have been approved and are used in cancer chemotherapy (Palakurthi, S., Expert Opin Drug Deliv. 2015; 12 (12) : 1911-21; Shang, X.F. et al, Med Res Rev. 2018, 38 (3) : 775-828) and both SN-38 and Exatecan have been successfully used as payloads for ADC conjugates in the clinical trials (Ocean, A.J. et al, Cancer. 2017, 123 (19) : 3843-3854; Starodub, A.N., et al, Clin Cancer Res. 2015, 21 (17) : 3870-8; Cardillo, T.M., et al, Bioconjug Chem. 2015, 26 (5) : 919-31; Ogitani, Y. et al, Bioorg Med Chem Lett. 2016, 26 (20) : 5069-5072; Takegawa, N. et al, Int J Cancer. 2017 Oct 15; 141 (8) : 1682-1689. US patents 7,591,994; 7,999,083, 8,080,250, 8,268,317; US patent applications 20130090458, 20140099258, 20150297748, 20160279259) .

[0339] The structure of Camptothecin (CPT) used for the patent is illustrated below formula:

[0340] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; wherein R1, R2 and R4 are independently selected from H, F, Cl, Br, CN, NO2, C1～C8 alkyl; O-C1～C8 alkyl; NH-C1～C8 alkyl; C2-C8 of heteroalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; or C2-C8 of esters, ether, amide, carbonate, urea, or carbamate; R3 is H, OH, NH2, C1～C8 alkyl; O-C1～C8 alkyl; NH-C1～C8 alkyl; C2-C8 of heteroalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl, O-C2～C8 alkylamine, NH-C2～C8 alkylamine, O-C2～C8 alkylalcohol, NH-C2～C8 alkylalcohol; or C2～C8 (2-8 carbon atoms) of esters, ether, amide, carbonate, urea, or carbamate; or R1R2, R2R3 and R3R4 independently form a 5～7 membered carbocyclic, heterocyclic, heterocycloalkyl, aromatic or heteroaromatic ring system;  is the site in the molecule that can be linked to L1 or L2.

[0341] The structures of camptothecins are preferred the following formula:

[0342] SN-38,  Topotecan,  Cositecan, analog,  Lurtotecan,

[0343] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; wherein is the site linked to L1 or L2;

[0344] Wherein P1 and R1 are independently H, F, Cl, Br, I, SO2R2, SO3H, CN, OH, NH2, COOH, C (O) NH2, OCH2OP (O) (OR18) 2, OC (O) OP (O) (OR18) 2, OPO (OR18) 2, NHPO (OR18) 2, OC (O) R18, OP (O) (OR18) OP (O) (OR18) 2, OC (O) NHR18, OC (O) N (C2H4) 2NCH3, OSO2 (OR18) , O- (C4-C12-glycoside) , OC (O) N (C2H4) 2CH2N (C2H4) 2CH3, O- (C1-C8 of linear or branched alkyl) , O- (C1-C8 of linear or branched alkyl) -OH, C1-C8 of linear or branched alkyl or heteroalkyl; C2-C8 of linear or branched alkenyl, alkynyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 linear or branched of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; carbonate (-C (O) OR17) , carbamate (-C (O) NR17R18) ;

[0345] R2, R3 and R4 are independently H, C1-C8 of linear or branched alkyl, or heteroalkyl, C2-C8 of linear or branched ether, amine, ester, or amide; in addition, R2 and R3 can be joint together to form five or six member ring or cycloalkyl, cycloalkylamine, or cycloalkylamide, cyclohexylalkylamide; R17and R18 are independently H, linear or branched alkyl or heteroalkyl;

[0346] X is NH, O, S, S (O2) , NHS (O2) , NHS (O2) NH, NHP (O) (OH) , N+ (R2) (R3) , NHC (O) NH, NHC (O) , NHC (O) O, N (CH2CH2) 2N, CON (CH2CH2) 2N, CON (CH2CH2) 2N+ (R2) (R3) , NHCH2, N (CH3) , OCH2, or CH2; X’ is O, NH, CH2, CH2NH, or CH2O.

[0347] In certain such embodiments, Combretastatins are natural phenols with vascular disruption properties in tumors and are preferably the cytotoxic agent of the invention. Exemplary combretastatins and their derivatives include, but are not limited to, combretastatin A-4 (CA-4) , CA4-βGals, CA-4PD, CA4-NPs and ombrabulin, having the following formula:

[0348] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0349] In certain such embodiments, Taxanes, which includes Paclitaxel (Taxol) , a cytotoxic natural product, and docetaxel (Taxotere) , a semi-synthetic derivative, and their analogs, are preferred for conjugation. Taxanes are exampled in: K C. Nicolaou et al., J. Am. Chem. Soc. 117, 2409-20, (1995) ; Ojima et al, J. Med. Chem. 39: 3889-3896 (1996) ; 40: 267-78 (1997) ; 45, 5620-3 (2002) ; Ojima et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 96: 4256-61 (1999) ; Kim et al., Bull. Korean Chem. Soc., 20, 1389-90 (1999) ; Miller, et al. J. Med. Chem., 47, 4802-5 (2004) ; U.S. Patent No. 5,475,011 5,728,849, 5,811,452; 6,340,701; 6,372,738; 6,391,913, 6.436,931; 6,589,979; 6,596,757; 6,706,708; 7,008,942; 7,186,851; 7,217,819; 7,276,499; 7,598,290; and 7,667,054. The structures of taxanes are preferred the following formula:

[0350] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0351] wherein is the site linked to L1 or L2; Ar and Ar’ are independently aryl or heteroaryl.

[0352] In certain such embodiments, Anthracyclines are preferably the cytoxic agents of the invention. Anthracyclines are mammalian DNA topoisomerases II inhibitors that are able to stabilize enzyme-DNA complexes wherein DNA strands are cut and covalently linked to the antibody. These anticancer agents maintain a prominent role in treating many forms of solid tumors and acute leukemias during the last several decades. However, anthracyclines cause cardiovascular morbidity and mortality (Sagi, J.C., et al, Pharmacogenomics. 2016, 17 (9) , 1075-87; McGowan, J.V., et al, Cardiovasc Drugs Ther. 2017, 31 (1) , 63-75) . Thus, to enhance specific activity of such molecules while reducing the cardiotoxicity, reasearchers actively are using the conjugation of anthracyclines to a cell-binding antibody, or antibody molecule as a general approach for improving the therapeutic index of these drugs, (Mollaev, M. et al, Int J Pharm. 2018 Dec 29. pii: S0378-5173 (18) 30991-8; Rossin, R., et al, Bioconjug Chem. 2016, 27 (7) : 1697-706; Dal Corso, A., et al, J Control Release. 2017, 264: 211-218) . Exemplary anthracyclines include, but are not limited to, daunorubicin, doxorubicin (i.e., adriamycin) , epirubicin, idarubicin, valrubicin, and mitoxantrone. The structures of anthracyclines used for the present application are preferred the following formula:

[0353] Idarubicin analog,  Mitoxantrone analog,  Pixantrone analog, Losoxantrone analog,  Amrubicin analog,

[0354] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0355] wherein is the site that links to L1 or L2.

[0356] In certain such embodiments, Vinca alkaloids are preferably the cytoxic agents of the invention. Vinca alkaloids are a set of anti-mitotic and anti-microtubule alkaloid agents that work by inhibiting the ability of cancer cells to divide. Vinca alkaloids include vinblastine, vincristine, vindesine, leurosine, vinorelbine, catharanthine, vindoline, vincaminol, vineridine, minovincine, methoxyminovincine, minovincinine, vincadifformine, desoxyvincaminol, vincamajine, vincamine, vinpocetine, and vinburnine. The structures of vinca alkaloids are preferred vinblastine, vincristine having the following formula:

[0357] vincristine (leurocristine) ,

[0358] vincristine (leurocristine) ,

[0359] vinblastine,

[0360] vinblastine;

[0361] Rifabutin analog,

[0362] rifabutin analog,

[0363] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0364] wherein is the site linked to L1 or L2;

[0365] In certain such embodiments, Dolastatins and their peptidic analogs and derivatives, auristatins, are preferably the cytoxic agents of the invention. They are highly potent antimitotic agents that have been shown to have anticancer and antifungal activity. See, e.g., U. S. Pat. No. 5, 663, 149 and Pettit et al., Antimicrob. Agents Chemother. 42: 2961-2965, 1998. Exemplary dolastatins and auristatins include, but are not limited to, dolastatin 10, auristatin E (AE) , auristatin EB (AEB) , auristatin EFP (AEFP) , MMAD (Monomethyl Auristatin D or monomethyl dolastatin 10) , MMAF (Monomethyl Auristatin F or N-methylvaline-valine-dolaisoleuine-dolaproine-phenylalanine) , MMAE (Monomethyl Auristatin E or N-methylvaline-valine-dolaisoleuine-dolaproine-norephedrine) , 5-benzoylvaleric acid-AE ester (AEVB) , Auristatin F phenylene diamine (AFP) and other novel auristatins. The auristatins are described in Int. J. Oncol. 15: 367-72 (1999) ; Molecular Cancer Therapeutics, vol. 3, No. 8, pp. 921-32 (2004) ; U. S. Application Nos. 11134826, 20060074008, 2006022925. U. S. Patent Nos. 4414205, 4753894, 4764368, 4816444, 4879278, 4943628, 4978744, 5122368, 5165923, 5169774, 5286637, 5410024, 5521284, 5530097, 5554725, 5585089, 5599902, 5629197, 5635483, 5654399, 5663149, 5665860, 5708146, 5714586, 5741892, 5767236, 5767237, 5780588, 5821337, 5840699, 5965537, 6004934, 6033876, 6034065, 6048720, 6054297, 6054561, 6124431, 6143721, 6162930, 6214345, 6239104, 6323315, 6342219, 6342221, 6407213, 6569834, 6620911, 6639055, 6884869, 6913748, 7090843, 7091186, 7097840, 7098305, 7098308, 7498298, 7375078, 7462352, 7553816, 7659241, 7662387, 7745394, 7754681, 7829531, 7837980, 7837995, 7902338, 7964566, 7964567, 7851437, 7994135. The structures of auristatin analogs are preferred the following formula (Ih-01) , (Ih-02) , (Ih-03) , (Ih-04) , (Ih-05) , (Ih-06) , (Ih-07) , (Ih-08) , (Ih-09) , (Ih-10) , and (Ih-11) :

[0366] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0367] wherein R1, R2, R3, R4 and R5 are independently H; C1-C8 linear or branched alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, ester, ether, amide, amines, heterocycloalkyl, or acyloxylamines; or peptides containing 1-8 aminoacids, or polyethyleneoxy unit having formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 1 to about 100. The two Rs: R1R2, R2R3, R1R3 or R3R4 together can form 3～8 member cyclic ring of alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, or alkylcycloalkyl group; Y1 and Y2 are independently O, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R2) , C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1 when linked to the connecting site  (that links to L1 and / or L2 independently) ; or OH, NH2, NHNH2, NHR5, SH, C (O) OH, C (O) NH2, OC (O) NH2, OC (O) OH, NHC (O) NH2, NHC (O) SH, OC (O) NH (R1) , N (R1) C (O) NH (R2) , C (O) NHNHC (O) OH and C (O) NHR1 when not linked to the connecting site R12 is OH, NH2, NHR1, NHNH2, NHNHCOOH, O-R1-COOH, NH-R1-COOH, NH- (Aa) nCOOH, O (CH2CH2O) pCH2CH2OH, O (CH2CH2O) pCH2CH2NH2, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NH2, NR1R1’ , NHOH, NHOR1, O (CH2CH2O) pCH2CH2COOH, NH (CH2CH2O) pCH2CH2COOH, NH-Ar-COOH, NH-Ar-NH2, O (CH2CH2O) pCH2CH2NH-SO3H, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O (CH2CH2O) pCH2-CH2NHPO3H2, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, R1-OPO3H2, O (CH2CH2O) pCH2CH2OPO3H2, OR1-NHPO3H2, NH-R1-NHPO3H2, NH (CH2CH2NH) pCH2-CH2NH2, NH (CH2CH2S) pCH2CH2NH2, NH (CH2CH2NH) pCH2CH2OH, NH (CH2CH2S) pCH2-CH2OH, NH-R1-NH2, or NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHPO3H2, wherein Aa is 1-8 the same or different aminoacids; p is 1 -100; R1, R2, R3, R4, R5, R5’ , Z1, Z2, and n are defined the same above.

[0368] Preferably R1, R2, R3, R4, R5, R5’ are independently H, C1-C8 alkyl, alkylcarbonyl; Y1 and Y2 are independently O, NH, NHNH, NR5, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, C (O) NHNHC (O) , C (O) NR1 OH, NH2, NHNH2, NHR5, C (O) OH, C (O) NH2, OC (O) NH2, OC (O) OH, NHC (O) NH2.

[0369] In certain such embodiments, Hemiasterlin and its analogues (e.g., HTI-286) are preferably the cytoxic agents of the invention. They bind to the tubulin, disrupt normal microtubule dynamics, and, at stoichiometric amounts, depolymerize microtubules. The structures of hemiasterlins are preferred the following formula:

[0370] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;

[0371] wherein wherein R1, R2, R3, R4 and R5 are independently H; C1-C8 linear or branched alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, ester, ether, amide, amines, heterocycloalkyl, or acyloxylamines; or peptides containing 1-8 aminoacids, or polyethyleneoxy unit having formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 1 to about 100; In addition, R2R3 can form 3～8 member cyclic ring of alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, or alkylcycloalkyl group.

[0372] In certain such embodiments, Eribulin is preferably the cytoxic agents of the invention. Eribulin is binding predominantly to a small number of high affinity sites at the plus ends of existing microtubules and has both cytotoxic and non-cytotoxic mechanisms of action. Its cytotoxic effects are related to its antimitotic activities, wherein apoptosis of cancer cells is induced following prolonged and irreversible mitotic blockade (Kuznetsov, G. et al, Cancer Research. 2004, 64 (16) : 5760-6.; Towle, M. J, et al, Cancer Research. 2010, 71 (2) : 496-505) . In addition to its cytotoxic, antimitotic-based mechanisms, preclinical studies in human breast cancer models have shown that eribulin also exerts complex effects on the biology of surviving cancer cells and residual tumors that appear unrelated to its antimitotic effects. Eribulin has been approved by US FDA for the treatment of metastatic breast cancer who have received at least two prior chemotherapy regimens for late-stage disease, including both anthracycline-and taxane-based chemotherapies, as well as for the treatment of liposarcoma (aspecific type of soft tissue sarcoma) that cannot be removed by surgery (unresectable) or is advanced (metastatic) . Eribulin has been used as payload for ADC conjugates (US20170252458) . The structure of Eribulin is preferred the following formula, Eb01:

[0373] is a linkage site that links to L1 and / or L2 independently;

[0374] In certain such embodiments, an Inhibitor of nicotinamide phosphoribosyltransferases (NAMPT) can be cytotoxic agent of the invention due to their unique mechanisms of high potent activity (Sampath D, et al, Pharmacol Ther 2015; 151, 16-31) . NAMPT regulates nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) levels in cells wherein NAD plays as an essential redox cofactor to support energy and anabolic metabolism. NAD has several essential roles in metabolism. It acts as a coenzyme in redox reactions, as a donor of ADP-ribose moieties in ADP-ribosylation reactions, as a precursor of the second messenger molecule cyclic ADP-ribose, as well as acting as a substrate for bacterial DNA ligases and a group of enzymes called sirtuins that use NAD+ to remove acetyl groups from proteins. In addition to these metabolic functions, NAD+ emerges as an adenine nucleotide that can be released from cells spontaneously and by regulated mechanisms (Smyth L.M, et al, J. Biol. Chem. 2004, 279 (47) , 48893-903; Billington R.A, et al, Mol Med. 2006, 12, 324-7) , and can therefore have important extracellular roles (Billington R. A, et al, Mol Med. 2006, 12, 324-7) . When inhibitors of NAMPT present, NAD levels decline below the level needed for metabolism resulting in energy crisis and therefore cell death. So far, clinical NAMPT inhibitor candidates FK-866, CHS-828, and GMX-1777 advanced to clinical trials but each encountered dose-limiting toxicities prior to any objective responses (Holen K., et al, Invest New Drugs 2008, 26, 45-51; Hovstadius, P., et al, Clin Cancer Res 2002, 8, 2843-50; Pishvaian, M.J., et al, J Clin Oncol 2009, 27, 3581) . Thus using ADCs for targeting delivery of NAMPT inhibitors might circumvent the systemic toxicities to achieve much broader therapeutic index. The structures of NAMPT inhibitors are preferred the following formula, NP01, NP02, NP03, NP04, NP05, NP06, NP07, NP08, and NP09:

[0375] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; wherein is the same above; X5 is F, Cl, Br, I, OH, OR1, R1, OPO3H2, OSO3H, NHR1, OCOR1, NHCOR1; R1 is H, C1～C8 alkyl, CH3CO, NH, NH2, NHCH3;

[0376] is a linkage site that links to L1 and / or L2 independently;

[0377] In certain such embodiments, a benzodiazepine dimer and its analogs are preferably the cytoxic agents of the invention. The benzodiazepine dimers, including: a dimer of pyrrolobenzodiazepine (PBD) or (tomaymycin) , a dimer of indolinobenzodiazepine (IGN) , a dimer of imidazobenzothiadia-zepine, or a dimer of oxazolidinobenzodiazepines, are anti-tumor agents that contain one or more immine functional groups, or their equivalents, that bind to duplex DNA. PBD and IGN molecules are based on the natural product athramycin, and interact with DNA in a sequence-selective manner, with a preference for purine-guanine-purine sequences. The preferred benzodiazepine dimers according to the present invention are exampled in: US Patent Nos. 8,163,736; 8,153,627; 8,034,808; 7,834,005; 7,741,319; 7,704,924; 7,691,848; 7,678,787; 7,612,062; 7,608,615; 7,557,099; 7,528,128; 7,528,126; 7,511,032; 7,429,658; 7,407,951; 7,326,700; 7,312,210; 7,265,105; 7,202,239; 7,189,710; 7,173,026; 7,109,193; 7,067,511; 7,064,120; 7,056,913; 7,049,311; 7,022,699; 7,015,215; 6,979,684; 6,951,853; 6,884,799; 6,800,622; 6,747,144; 6,660,856; 6,608,192; 6,562,806; 6,977,254; 6,951,853; 6,909,006; 6,344,451; 5,880,122; 4,935,362; 4,764,616; 4,761,412; 4,723,007; 4,723,003; 4,683,230; 4,663,453; 4,508,647; 4,464,467; 4,427,587; 4,000,304; US patent appl. 20100203007, 20100316656, 20030195196. Examples of the structures of the conjugate of the antibody-benzodiazepine dimers are illustrated below PB01 ～ PB30:

[0378] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; wherein X1, X2, Y1, Y2, Z1, Z2, and n are defined the same above; Preferably X1, X2, Y1 and Y2 are independently O, N, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R1) , CH, C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1;

[0379] R1, R2, R3, R1’ , R2’ , and R3’ are independently H; F; Cl; =O; =S; =CH2; =CH-R1, OH; SH; C1-C8 linear or branched alkyl, aryl, alkenyl, heteroaryl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, ester (COOR5 or –OC (O) R5) , ether (OR1) , amide (CONR1) , carbamate (OCONR1) , amines (NHR1, NR1R2) , heterocycloalkyl, or acyloxylamines (-C (O) NHOH, -ONHC (O) R1) ; or peptides containing 1-6 natural or unnatural aminoacids, or polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 1 to about 100. The two Rs: R1R2, R2R3, R1’ R2’ , or R2’R3’ , can independently form 3～8-member cyclic ring of C2～C10 alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, or alkylcycloalkyl group;

[0380] X3, X, X’ and Y3 are independently N, O, S, NH, CH2 or CR1; or one of X3, X, X’ and Y3 can be absent, thus the left X3, X, X’ or Y3 can be O, S, NH;

[0381] wherein R1, R2, R4, and R5, are C1-C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 aminoalkylcarbonyl, alkylaryloxyl, alkylarylamino, alkylarylthiol; or 1-6 the same or different sequence of aminao acid / peptides (Aa) r, r =1, 2, 3, 4, 5, or 6;

[0382] wherein R12 and R12’ are independently H, OH, NH2, NH (CH3) , NHNH2, COOH, SH, OZ3, SZ3, F, Cl, or C1-C8 linear or branched alkyl, C3-C8 aryl, heteroaryl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, acyloxylamines;

[0383] X6 is CH, N, P (O) NH, P (O) NR1, CHC (O) NH, C3-C8 aryl, heteroaryl, alkylcycloalkyl, acyloxyl, alkylaryl, alkylaryloxyl, alkylarylamino, or an Aa (amino acid, it is preferably selected from Lys, Phe, Asp, Glu, Ser, Thr, His, Cys, Tyr, Trp, Gln, Asn, Arg) ;

[0384] Y21 is Ms (mesyl) , Ts (tosyl) or Tf (trifyl) , SO3H, P (O) (OH) 2, CH2 (O) P (O) (OH) 2, glycoside;

[0385] R31 is H, C1 -C8 alkyl or Ar, CF3; “  “is defined the same above.

[0386] In certain such embodiments, a CC-1065 analog and doucarmycin analogs are also preferred to be a cytotoxic agent of the present invention. The examples of the CC-1065 analogues and doucarmycin analogs as well as their synthesis are described in: e.g. Warpehoski, et al, J. Med. Chem. 31:590-603 (1988) ; D. Boger et al., J. Org. Chem; 66; 6654-61, 2001; U. S. Patent Nos: 4169888, 4391904, 4671958, 4816567, 4912227, 4923990, 4952394, 4975278, 4978757, 4994578, 5037993, 5070092, 5084468, 5101038, 5117006, 5137877, 5138059, 5147786, 5187186, 5223409, 5225539, 5288514, 5324483, 5332740, 5332837, 5334528, 5403484, 5427908, 5475092, 5495009, 5530101, 5545806, 5547667, 5569825, 5571698, 5573922, 5580717, 5585089, 5585499, 5587161, 5595499, 5606017, 5622929, 5625126, 5629430, 5633425, 5641780, 5660829, 5661016, 5686237, 5693762, 5703080, 5712374, 5714586, 5739116, 5739350, 5770429, 5773001, 5773435, 5786377 5786486, 5789650, 5814318, 5846545, 5874299, 5877296, 5877397, 5885793, 5939598, 5962216, 5969108, 5985908, 6060608, 6066742, 6075181, 6103236, 6114598, 6130237, 6132722, 6143901, 6150584, 6162963, 6172197, 6180370, 6194612, 6214345, 6262271, 6281354, 6310209, 6329497, 6342480, 6486326, 6512101, 6521404, 6534660, 6544731, 6548530, 6555313, 6555693, 6566336, 6,586,618, 6593081, 6630579, 6,756,397, 6759509, 6762179, 6884869, 6897034, 6946455, 7,049,316, 7087600, 7091186, 7115573, 7129261, 7214663, 7223837, 7304032, 7329507, 7,329,760, 7,388,026, 7,655,660, 7,655,661, 7,906,545, and 8,012,978. Examples of the structures of the conjugate of the antibody-CC-1065 analogs via the linker of the patent are illustrated below CC01, CC02, CC03, CC04, CC05, CC06 and CC07:

[0387] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; wherein X1, X2, Y1 and Y2 are independently O, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R2) , C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1 when linked to the connecting site “ ” ; or OH, NH2, NHNH2, NHR1, SH, C (O) OH, C (O) NH2, OC (O) NH2, OC (O) OH, NHC (O) NH2, NHC (O) SH, OC (O) NH (R1) , N (R1) C (O) NH (R2) , C (O) NHNHC (O) OH and C (O) NHR1 when not linked to the connecting site “ ” ;

[0388] Z3 is H, PO (OM1) (OM2) , SO3M1, CH2PO (OM1) (OM2) , CH3N (CH2CH2) 2NC (O) -, O (CH2CH2) 2NC (O) -, R1, or glycoside; wherein R1, R2, and R3, are C1-C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 aminoalkylcarbonyl; or 1-4 the same or different sequence of aminao acid / peptides (Aa) r, r =1, 2, 3, 4;

[0389] M1, and M2 are pharmaceutical salt selected from Na, K, Ca, NH4, NH3CH2CH2OH or Zn;

[0390] In certain such embodiments, an amatoxin (amanita toxin) and its analogs which are a subgroup of at least ten toxic compounds originally found in several genera of poisonous mushrooms, most notably Amanita phalloides and several other mushroom species, are also preferred as cytotoxic agents of the present patent. These ten amatoxins, named α-Amanitin, β-Amanitin, γ-Amanitin, ε-Amanitin, Amanullin, Amanullinic acid, Amaninamide, Amanin, Proamanullin, are rigid bicyclic peptides that are synthesized as 35-amino-acid proproteins, from which the final eight amino acids are cleaved by a prolyl oligopeptidase (Litten, W. 1975 Scientific American232 (3) : 90–101; H.E. Hallen, et al, 2007 Proc. Nat. Aca. Sci. USA 104, 19097–101; K. Baumann, et al, 1993 Biochemistry 32 (15) : 4043–50; Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42 (4) : 339–49; Horgen, P.A. et al. 1978 Arch. Microbio. 118 (3) : 317–9) . Amatoxins kill cells by inhibiting RNA polymerase II (Pol II) , shutting down gene transcription and protein biosynthesis (Brodner, O.G. and Wieland, T. 1976 Biochemistry, 15 (16) : 3480–4; Fiume, L., Curr Probl Clin Biochem, 1977, 7: 23-8; Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42 (4) : 339–49; Chafin, D.R., Guo, H. &Price, D.H. 1995 J. Biol. Chem. 270 (32) : 19114-19; Wieland (1983) Int. J. Pept. Protein Res. 22 (3) : 257-76) . Amatoxins can be produced from collected Amanita phalloides mushrooms (Yocum, R. R. 1978 Biochemistry 17 (18) : 3786-9; Zhang, P. et al, 2005, FEMS Microbiol. Lett. 252 (2) , 223-8) , or from fermentation using a basidiomycete (Muraoka, S. and Shinozawa T., 2000 J. Biosci. Bioeng. 89 (1) : 73-6) or from fermentation using A. fissa (Guo, X.W., et al, 2006 Wei Sheng Wu Xue Bao 46 (3) : 373-8) , or from culturing Galerina fasciculata or Galerina helvoliceps, a strain belonging to the genus (WO / 1990 / 009799, JP11137291) . However, the yields from these isolation and fermentation were quite low (less than 5 mg / L culture) . Several preparations of amatoxins and their analogs have been reported in the past three decades (W.E. Savige, A. Fontana, Chem. Commun. 1976, 600–1; Zanotti, G., et al, Int J Pept Protein Res, 1981. 18 (2) : 162-8; Wieland, T., et al, Eur. J. Biochem. 1981, 117, 161–4; P.A. Bartlett, et al, Tetrahedron Lett. 1982, 23, 619–22; Zanotti, G., et al., Biochim Biophys Acta, 1986. 870 (3) : 454-62; Zanotti, G., et al., Int. J. Peptide Protein Res. 1987, 30, 323–9; Zanotti, G., et al., Int. J. Peptide Protein Res. 1987, 30, 450–9; Zanotti, G., et al., Int J Pept Protein Res, 1988. 32 (1) : 9-20; G. Zanotti, T. et al, Int. J. Peptide Protein Res. 1989, 34, 222–8; Zanotti, G., et al., Int J Pept Protein Res, 1990.35 (3) : 263-70; Mullersman, J.E. and J.F. Preston, 3rd, Int J Pept Protein Res, 1991. 37 (6) : 544-51; Mullersman, J.E., et al, Int J Pept Protein Res, 1991. 38 (5) : 409-16; Zanotti, G., et al, Int J Pept Protein Res, 1992. 40 (6) : 551-8; Schmitt, W. et al, J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 4380–7; Anderson, M.O., et al, J. Org. Chem., 2005, 70 (12) : 4578-84; J.P. May, et al, J. Org. Chem. 2005, 70, 8424–30; F. Brueckner, P. Cramer, Nat. Struct. Mol. Biol. 2008, 15, 811–8; J.P. May, D.M. Perrin, Chem. Eur. J. 2008, 14, 3404–9; J.P. May, et al, Chem. Eur. J. 2008, 14, 3410–17; Q. Wang, et al, Eur. J. Org. Chem. 2002, 834–9; May, J.P. and D. M. Perrin, Biopolymers, 2007. 88 (5) : 714-24; May, J.P., et al., Chemistry, 2008. 14 (11) : 3410-7; S. De Lamo Marin, et al, Eur. J. Org. Chem. 2010, 3985–9; Pousse, G., et al., Org Lett, 2010.12 (16) : 3582-5; Luo, H., et al., Chem Biol, 2014. 21 (12) : 1610-7; Zhao, L., et al., Chembiochem, 2015. 16 (10) : 1420-5) and most of these preparations were by partial synthesis. Because of their extreme potency and unique mechanism of cytotoxicity, amatoxins have been used as payloads for conjugations (Fiume, L., Lancet, 1969. 2 (7625) : 853-4; Barbanti-Brodano, G. and L. Fiume, Nat New Biol, 1973.243 (130) : 281-3; Bonetti, E., M. et al, Arch Toxicol, 1976. 35 (1) : p. 69-73; Davis, M.T., Preston, J.F. Science 1981, 213, 1385–1388; Preston, J.F., et al, Arch Biochem Biophys, 1981. 209 (1) : 63-71; H. Faulstich, et al, Biochemistry 1981, 20, 6498–504; Barak, L.S., et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1981. 78 (5) : 3034-8; Faulstich, H. and L. Fiume, Methods Enzymol, 1985. 112: 225-37; Zhelev, Z., A. et al, Toxicon, 1987. 25 (9) : 981-7; Khalacheva, K., et al, Eksp Med Morfol, 1990. 29 (3) : 26-30; U. Bermbach, H. Faulstich, Biochemistry 1990, 29, 6839–45; Mullersman, J.E. and J.F. Preston, Int. J. Peptide Protein Res. 1991, 37, 544–51; Mullersman, J.E. and J.F. Preston, Biochem Cell Biol, 1991. 69 (7) : 418-27; J. Anderl, H. Echner, H. Faulstich, Beilstein J. Org. Chem. 2012, 8, 2072–84; Moldenhauer, G., et al, J. Natl. Cancer Inst. 2012, 104, 622–34; A. Moshnikova, et al; Biochemistry 2013, 52, 1171–8; Zhao, L., et al., Chembiochem, 2015. 16 (10) : 1420-5; Zhou, B., et al., Biosens Bioelectron, 2015. 68: 189-96; WO2014 / 043403, US20150218220, EP 1661584) . We have been working on the conjugation of amatoxins for a while. Examples of the structures of the amatoxins used for the present application are preferred the following structures of Am01, Am02, and Am03:

[0391] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; wherein X1, and Y1 are independently O, NH, NHNH, NR1, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R1) , CH2, CHNH, CH2O, C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1; R7, R8, and R9 are independently H, OH, OR1, NH2, NHR1, C1-C6 alkyl, or absent; Y2 is O, O2, NR1, NH, or absent; R10 is CH2, O, NH, NR1, NHC (O) , NHC (O) NH, NHC (O) O, OC (O) O, C (O) , OC (O) , OC (O) (NR1) , (NR1) C (O) (NR1) , C (O) R1 or absent; R11 is OH, NH2, NHR1, NHNH2, NHNHCOOH, O-R1-COOH, NH-R1-COOH, NH- (Aa) rCOOH, O (CH2CH2O) pCH2CH2OH, O (CH2CH2O) pCH2CH2NH2, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NH2, NR1R2, O (CH2CH2O) pCH2CH2-COOH, NH (CH2CH2O) pCH2CH2COOH, NH-Ar-COOH, NH-Ar-NH2, O (CH2CH2O) pCH2CH2-NHSO3H, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O (CH2CH2O) p-CH2CH2NHPO3H2, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, R1-OPO3H2, O (CH2CH2O) pCH2CH2OPO3H2, OR1-NHPO3H2, NH-R1-NHPO3H2, or NH (CH2CH2O) pCH2-CH2NHPO3H2, wherein (Aa) r is r=1, 2, 3 or 4 aminoacids; n and m1 are independently 1～20; p is 1 -100; R1, R2 and Ar, are the same defined throughout the application; and R1 and R2 are preferably here H, C1～C8 alkyl;  is linkage site (which is defined the same above) .

[0392] In certain such embodiments, spliceostatins and pladienolides are anti-tumor compounds which inhibit splicing and interacts with spliceosome, SF3b, and are also preferred as cytotoxic agents of the present patent. Examples of spliceostatins include, but are not limited to, spliceostatin A, FR901464, and (2S, 3Z) -5- { [ (2R, 3R, 5S, 6S) -6- { (2E, 4E) -5- [ (3R, 4R, 5R, 7S) -7- (2-hydrazinyl-2-oxoethyl) -4-hydroxy-1, 6-dioxaspiro [2.5] oct-5-yl] -3-methylpenta-2, 4-dien-1-y-l} -2, 5-dimethyltetrahydro-2H-pyran-3-yl] amino} -5-oxopent-3-en-2-yl acetate having the core structure of:

[0393] Examples of pladienolides include, but are not limited to, Pladienolide B, Pladienolide D, and E7107.

[0394] In certain such embodiments, protein kinase inhibitors are also preferred as cytotoxic agents of the present patent. Protein kinase inhibitors block the action of an enzyme to add a phosphate (PO4) group to serine, threonine, or tyrosine amino acids on a protein, and can modulate the protein function. The protein kinase inhibitors can be used to treat diseases due to hyperactive protein kinases (including mutant or overexpressed kinases) in cancer or to modulate cell functions to overcome other disease drivers. The structures of protein kinase inhibitors are preferred to selected from Adavosertib, Afatinib, Axitinib, Bafetinib, Bosutinib, Cobimetinib, Crizotinib, Cabozantinib, Dasatinib, Entrectinib, Erdafitinib, Erlotinib, Erlotinib, Fostamatinib, Gefitinib, Ibrutinib, Imatinib, Lapatinib, Lenvatinib, Mubritinib, Nilotinib, Pazopanib, Pegaptanib, Ponatinib, Rebastinib, Regorafenib, Ruxolitinib, Sorafenib, Sunitinib, SU6656, Tofacitinib, Vandetanib, Vemurafenib, Entrectinib, Palbociclib, Ribociclib, Abemaciclib, Dacomitinib, Neratinib, Rociletinib (CO-1686) , Osimertinib, AZD3759, Nazartinib (EGF816) , having the following formula, PK01 ～ PK40:  PK01, Adavosertib,  PK02, Afatinib,  PK03, Axitinib, PK04, Bafetinib,  PK05, Bosutinib,  PK06, Crizotinib,  PK07, Cabozantinib,  PK08, Dasatinib,  PK09, Entrectinib,  PK10, Erdafitinib,  PK11, Erlotinib,  PK12, Fostamatinib,  PK13, Gefitinib,  PK14, Gefitinib,  PK15, Gefitinib,  PK16, Ibrutinib,  PK17, Imatinib,  PK18, Lapatinib,  PK19, Lenvatinib,  PK20, Mubritinib,  PK21, Nilotinib,  PK22, Pazopanib,  PK23, Ponatinib,  PK24, Ruxolitinib,  PK25, Sorafenib,  PK26, Sunitinib,  PK27, SU6656,  PK28, Tofacitinib,  PK29, Vandetanib,  PK30, Vemurafenib;  PK 31, Entrectinib;  PK-32, Palbociclib analog,  PK-33, Ribociclib,  PK-34, Abemaciclib,  PK-35, Dacomitinib,  PK-36, Neratinib,  PK-37, Rociletinib (CO-1686) ,  PK-38, Osimertinib,  PK-39, AZD3759,  PK-40,  PK-41, Nazartinib (EGF816) ,

[0395] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers;

[0396] wherein Z5 and Z5’ are independently selected from O, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R2) , C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1.

[0397] In certain such embodiments, proteinase inhibitors are also preferred as cytotoxic agents of the present patent. The proteinase inhibitors are selected from Carfilzomib, Clindamycin, Retapamulin, Indibulin, having the following formulae:

[0398] PI01, Carfilzomib,

[0399] PI02, Clindamycin,

[0400] PI03, Carmaphycin analog,

[0401] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers;

[0402] is a linkage site that links to L1 and / or L2 independently.

[0403] In certain such embodiments, an immunotoxin is also preferred as cytotoxic agents of the present patent. The immunotoxin is selected from Diphtheria toxin (DT) , Cholera toxin (CT) , Trichosanthin (TCS) , Dianthin, Pseudomonas exotoxin A (ETA) , Erythrogenic toxins, Diphtheria toxin, AB toxins, Type III exotoxins, proaerolysin, and topsalysin;

[0404] In certain such embodiments, an immunotoxin herein can be a cytotoxic agent of the invention. The immunotoxin herein is a macromolecular drug which is usually a cytotoxic protein derived from a bacterial or plant protein, such as Diphtheria toxin (DT) , Cholera toxin (CT) , Trichosanthin (TCS) , Dianthin, Pseudomonas exotoxin A (ETA′) , Erythrogenic toxins, Diphtheria toxin, AB toxins, Type III exotoxins, etc. It also can be a highly toxic bacterial pore-forming protoxin that requires proteolytic processing for activation. An example of this protoxin is proaerolysin and its genetically modified form, topsalysin. Topsalysin is a modified recombinant protein that has been engineered to be selectively activated by an enzyme in the prostate, leading to localized cell death and tissue disruption without damaging neighboring tissue and nerves; An immunotoxin herein is preferably conjugated via the process of the application through an amino acid having free amino, thiol or carboxyl acid group; and more preferably through N-terminal amino acid.

[0405] In addition, a certain cell receptor agonist, a cell stimulating molecule or intracellular signalling molecule can be as a chemotherapeutic  / cytotoxic agent conjugated to the antibody of the invention.

[0406] In certain embodiments, one, two or more DNA, RNA, mRNA, small interfering RNA (siRNA) , microRNA (miRNA) , and PIWI interacting RNAs (piRNA) can be as a chemotherapeutic  / function compound conjugated to the antibody of the invention:

[0407] wherein is the site to link the side chain linker of the present patent;  is single or double strands of DNA, RNA, mRNA, siRNA, miRNA, or piRNA; X1, and Y are independently O, NH, NHNH, NR1, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R1) , CH2, C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1.

[0408] In certain such embodiments, a MEK inhibitor can be the cytotoxic agent of the invention. A MEK inhibitor inhibits the mitogen-activated protein kinases MEK1 and / or MEK2 which is often overactive in some cancers. MEK inhibitors are especially used for treatment of BRAF-mutated melanoma, and KRAS / BRAF mutated colorectal cancer, breast cancer, and non-small cell lung cancer (NSCLC) . MEK inhibitors are selected from PD0325901, selumetinib (AZD6244) , cobimetinib (XL518) , refametinib, trametinib (GSK1120212) , pimasertib, Binimetinib (MEK162) , AZD8330, RO4987655, RO5126766, WX-554, E6201, GDC-0623, PD-325901 and TAK-733. The preferred MEK inhibitors are selected from Trametinib (GSK1120212) , Cobimetinib (XL518) , Binimetinib (MEK162) , selumetinib having the following formula:

[0409] MEK01, Trametinib,  MEK02, Cobimetinib,  MEK03, Binimetinib,  MEK04, selumetinib,

[0410] or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers;  is a linkage site;

[0411] wherein Z5 is selected from O, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R2) , C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1;

[0412] In a further embodiment, either one or both of Drug1 or / and Drug2 of the present patent application can be independently selected from a chemotherapeutical drug as following:

[0413] 1) . Poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors: also are called PARP inhibitors. Poly (ADP-ribose) polymerases (PARPs) are a family of related enzymes that share the ability to catalyze the transfer of ADP-ribose to target proteins. PARPs play an important role in various cellular processes, including modulation of chromatin structure, transcription, replication, recombination, and DNA repair. PARP inhibitors disrupt DNA repair mechanisms by inhibiting PARP enzymatic activity, leading to the accumulation of DNA damage and cell death. Examples of PARP inhibitors include but not limited are Olaparib, Niraparib, Rucaparib, Veliparib, Talazoparib, Pamiparib, Fluzoparib, 5F02, Simmiparib, DDHCB, BTH-8, YHP-836, ZC-22, Mefuparib, 1, 2, 4-triazoles, Mortaparib, 2X-121, NMS-03305293, AZD5305, RP12146, AZD9574, E7449, AMXI-5001, IMP4297, FluorThanatrace. The conjugatable structures (containing a linkage site) of the PARP inhibitors are illustrated below:

[0414] FluorThanatrace; wherein is the linkage site.

[0415] In certain embodiments, the antibody-drug conjugate of this invention is preferably having one of the following sructures (C01～C108) :

[0416] ,改了C087-C093, 下面改了A087-A093

[0417] ,

[0418] ,

[0419] ,

[0420] ,

[0421] ,

[0422] .

[0423] wherein mAb above is the antibody of the invention; n and n1 are 1 ～30 independently, preferably 1～20, more preferably 2～8 (2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, and these number can have decimals) independently.

[0424] In certain embodiments, the conjugates of Formula (I) , (II) and (III) are prepared readily via conjugation reaction of the antibody with compounds having the following formula (V) , (VI) and (VII) respectively:

[0425] Or the conjugate of Formula (IV) is prepared through sequential conjugation reaction of Formula (V) and Formula (V’ ) to an antibody:

[0426] Wherein D1, D2, L1, L2, La1, La2, Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, Ld6, A1, A2, A3, A4, A5, A6, E1, m1, m2, m3, m4, m5, m6, m7, m8, m9, m10, m11, and m12 are defined the same in the Formula (I) , (II) and (III) ;

[0427] Lv1 and Lv2 are a reactive group and are independently or jointly selected from:

[0428] Aryl-palladium complex,  wherein X1’ and X2’ are independently F, Cl, Br, I, OTf, OMs, OC6H4 (NO2) , OC6H3 (NO2) 2, OC6F5, OC6HF4, or Lv3; X2 is O, NH, N (R1) , or CH2; R3 and R5 are independently H, R1, aromatic, heteroaromatic, or aromatic group wherein one or several H atoms are replaced independently by -R1, -halogen, -OR1, -SR1, -NR1R2, -NO2, -S (O) R1, -S (O) 2R1, or -COOR1; Lv3 and Lv3’ are independently a leaving group selected from F, Cl, Br, I, nitrophenol; N-hydroxysuccinimide (NHS) ; phenol; benzenethiol, dinitrophenol; pentafluorophenol; tetrafluorophenol; difluorophenol; monofluorophenol; pentachlorophenol; triflate; imidazole; dichlorophenol; tetrachlorophenol; 1-hydroxybenzotriazole; tosylate; mesylate; 2-ethyl-5-phenylisoxazolium-3′-sulfonate, anhydrides formed its self, or formed with the other anhydride, e.g. acetyl anhydride, formyl anhydride; or an intermediate molecule generated with a condensation reagent for peptide coupling reactions or for Mitsunobu reactions;

[0429] In the formula (VI) and formula (VII) wherein and can be accordingly selected from:

[0430] 2- ( (alkyl or aryl-sulfonyl) methyl) acryl,  wherein Lv3, Lv3’ , X1’ , and X2’ , are described above; the connecting bond “-” in the middle of the two atoms means it can link either one of the two atoms.

[0431] Examples of Formula (V) , (VI) , (VII) and (V’ ) are illustrated below:

[0432] Pharmaceutical composition

[0433] The present application also provides a pharmaceutical composition, comprising the monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof described herein or the antibody-drug conjugate described herein, and a pharmaceutically acceptable excipient.

[0434] Exemplary solid pharmaceutical excipient includes starch, cellulose, talc, glucose, lactose, sucrose, gelatin, malt, rice, flour, chalk, silica gel, magnesium stearate, sodium stearate, glycerol monostearate, sodium chloride, dried skim milk and the like. Liquid and semisolid excipients may be selected from glycerol, propylene glycol, water, ethanol and various oils, including those of petroleum, animal, vegetable or synthetic origin, e g, peanut oil, soybean oil, mineral oil, sesame oil, etc. Preferred liquid excipients, particularly for injectable solutions, include water, saline, aqueous dextrose, and glycols.

[0435] Other suitable pharmaceutical excipients and their formulations are described in Remington's Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, 20th ed., 2000) .

[0436] The anti-CD276 monoclonal antibody or conjugate of the application can be formulated to liquid, or suitable to be lyophilized and subsequently be reconstituted to a liquid formulation, i.e., the pharmaceutical composition can be a liquid formulation or a formulated lyophilized powder. The antibody or conjugate in a liquid formulation or in the formulated lyophilized powder may take up 0.01%-99%by weight as major gradient in the formulation. In general, a liquid formulation comprising 0.1 g / L ～300 g / L of concentration of the conjugate active ingredient for delivery to a patient without high levels of antibody aggregation may include one or more polyols (e.g., sugars) , a buffering agent with pH 4.5 to 7.5, a surfactant (e.g., polysorbate 20 or 80) , an antioxidant (e.g., ascorbic acid and / or methionine) , a tonicity agent (e.g., mannitol, sorbitol or NaCl) , chelating agents such as EDTA; metal complexes (e.g., Zn-protein complexes) ; biodegradable polymers such as polyesters; a preservative (e.g., benzyl alcohol) and / or a free amino acid.

[0437] Suitable buffering agents for use in the formulations include, but are not limited to, organic acid salts such as sodium, potassium, ammounium, or trihydroxyethylamino salts of citric acid, ascorbic acid, gluconic acid, carbonic acid, tartaric acid, succinic acid, acetic acid or phtalic acid; Tris, tromethamine hydrochloride, sulfate or phosphate buffer. In addition, amino acid cationic components can also be used as buffering agent. Such amino acid component includes without limitation arginine, glycine, glycylglycine, and histidine. The arginine buffers include arginine acetate, arginine chloride, arginine phosphate, arginine sulfate, arginine succinate, etc. In one embodiment, the arginine buffer is arginine acetate. Examples of histidine buffers include histidine chloride-arginine chloride, histidine acetate-arginine acetate, histidine phosphate-arginine phosphate, histidine sulfate-arginine sulfate, histidine succinate-argine succinate, etc. The formulations of the buffers have a pH of 4.5 to pH 7.5, preferably from about 4.5 to about 6.5, more preferably from about 5.0 to about 6.2. In some embodiments, the concentration of the organic acid salts in the buffer is from about 10 mM to about 500 mM.

[0438] A “polyol” that may optionally be included in the formulation is a substance with multiple hydroxyl groups. Polyols can be used as stabilizing excipients and / or isotonicity agents in both liquid and lyophilized formulations. Polyols can protect biopharmaceuticals from both physical and chemical degradation pathways. Preferentially excluded co-solvents increase the effective surface tension of solvent at the protein interface whereby the most energetically favorable structural conformations are those with the smallest surface areas. Polyols include sugars (reducing and nonreducing sugars) , sugar alcohols and sugar acids. A “reducing sugar” is one which contains a hemiacetal group that can reduce metal ions or react covalently with lysine and other amino groups in proteins and a “nonreducing sugar” is one which does not have these properties of a reducing sugar. Examples of reducing sugars are fructose, mannose, maltose, lactose, arabinose, xylose, ribose, rhamnose, galactose and glucose. Nonreducing sugars include sucrose, trehalose, sorbose, melezitose and raffinose. Sugar alcohols are selected from mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, lactitol, erythritol, threitol, sorbitol and glycerol. Sugar acids include L-gluconate and metallic salts thereof. The polyol in the liquid formula or in the formulated lyophilized solid can be 0.0%-20%by weight. Preferably, a nonreducing sugar, sucrose or trehalose at a concentration of about from 0.1%to 15%is chosen in the formulation, wherein trehalose being preferred over sucrose, because of the solution stability of trehalose.

[0439] A surfactant optionally in the formulations is selected from polysorbate (polysorbate 20, polysorbate 40, polysorbate 65, polysorbate 80, polysorbate 81, polysorbate 85 and the like) ; poloxamer (e.g. poloxamer 188, poly (ethylene oxide) -poly (propylene oxide) , poloxamer 407 or polyethylene-polypropylene glycol and the like) ; Triton; sodium dodecyl sulfate (SDS) ; sodium laurel sulfate; sodium octyl glycoside; lauryl-, myristyl-, linoleyl-, or stearyl-sulfobetaine; lauryl-, myristyl-, linoleyl-or stearyl-sarcosine; linoleyl-, myristyl-, or cetyl-betaine; lauroamidopropyl-, cocamidopropyl-, linoleamidopropyl-, myristamidopropyl-, palmidopropyl-, or isostearamido-propyl-betaine (e.g. lauroamidopropyl) ; myristamidopropyl-, palmidopropyl-, or isostearamido-propyl-dimethylamine; sodium methyl cocoyl-, or disodium methyl oleyl-taurate; dodecyl betaine, dodecyl dimethylamine oxide, cocamidopropyl betaine and coco ampho glycinate; and the MONAQUATTM series (e.g., isostearylethylimidoniumethosulfate) ; polyethyl glycol, polypropyl glycol, and copolymers of ethylene and propylene glycol (e.g., Pluronics, PF68 etc) ; etc. Preferred surfactants are polyoxyethylenesorbitan fatty acid esters e.g., polysorbate 20, 40, 60 or 80 (Tween 20, 40, 60 or 80) . The concentration of a surfactant in the formulation is range from 0.0%to about 2.0%by weight. In certain embodiments, the surfactant concentration is from about 0.01%to about 0.2%. In one embodiment, the surfactant concentration is about 0.02%.

[0440] A “preservative” optionally in the formulations is a compound that essentially reduces bacterial action therein. Examples of potential preservatives include octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride, hexamethonium chloride, benzalkonium chloride (a mixture of alkylbenzyldimethylammonium chlorides in which the alkyl groups are long-chain compounds) , and benzethonium chloride. Other types of preservatives include aromatic alcohols such as phenoxyl, butyl and benzyl alcohol, alkyl parabens such as methyl or propyl paraben, catechol, resorcinol, cyclohexanol, 3-pentanol, and m-cresol. The preservative in the liquid formula or in the formulated lyophilized powder can be 0.0%-5.0%by weight. In one embodiment, the preservative herein is benzyl alcohol.

[0441] Suitable free amino acids as a bulky material, or tonicity agent, or osmotic pressure adjustment in the formulation, is selected from, but are not limited to, one or more of arginine, cystine, glycine, lysine, histidine, ornithine, isoleucine, leucine, alanine, glycine glutamic acid or aspartic acid. The inclusion of a basic amino acid is preferred i.e. arginine, lysine and / or histidine. If a composition includes histidine then this may act both as a buffering agent and a free amino acid, but when a histidine buffer is used it is typical to include a non-histidine free amino acid e.g. to include histidine buffer and lysine. An amino acid may be present in its D-and / or L-form, but the L-form is typical. The amino acid may be present as any suitable salt e.g. a hydrochloride salt, such as arginine-HCl. The amino acid in the liquid formula or in the formulated lyophilized powder can be 0.0%-30%by weight.

[0442] The formulations can optionally comprise methionine, glutathione, cysteine, cystine or ascorbic acid as an antioxidant at a concentration of about up to 5 mg / ml in the liquid formula or 0.0%-5.0%by weight in the formulated lyophilized powder; The formulations can optionally comprise metal chelating agent, e.g., EDTA, EGTA, etc., at a concentration of about up to 2 mM in the liquid formula or 0.0%-0.3%by weight in the formulated lyophilized powder.

[0443] The final formulation can be adjusted to the preferred pH with a buffer adjusting agent (e.g. an acid, such as HCl, H2SO4, acetic acid, H3PO4, citric acid, etc, or a base, such as NaOH, KOH, NH4OH, ethanolamine, diethanolamine or triethanol amine, sodium phosphate, potassium phosphate, trisodium citrate, tromethamine, etc) and the formulation should be controlled “isotonic” which is meant that the formulation of interest has essentially the same osmotic pressure as human blood. Isotonic formulations will generally have an osmotic pressure from about 250 to 350 mOsm. Isotonicity can be measured using a vapor pressure or ice-freezing type osmometer, for example. The isotonic agent is selected from mannitol, sorbitol, sodium acetate, potassium chloride, sodium phosphate, potassium phosphate, trisodium citrate, or NaCl. In general, both the buffer salts and the isotonic agent may take up to 30%by weight in the formulation.

[0444] Other excipients which may be useful in either a liquid or lyophilized formulation of the patent application include, for example, fucose, cellobiose, maltotriose, melibiose, octulose, ribose, xylitol, arginine, histidine, glycine, alanine, methionine, glutamic acid, lysine, imidazole, glycylglycine, mannosylglycerate, Triton X-100, Pluoronic F-127, cellulose, cyclodextrin, (2-Hydroxypropyl) -β-cyclodextrin, dextran (10, 40 and / or 70 kD) , polydextrose, maltodextrin, ficoll, gelatin, hydroxypropylmeth, sodium phosphate, potassium phosphate, ZnCl2, zinc, zinc oxide, sodium citrate, trisodium citrate, tromethamine, copper, fibronectin, heparin, human serum albumin, protamine, glycerin, glycerol, EDTA, metacresol, benzyl alcohol, phenoxyl, polyhydric alcohols, or polyalcohols, hydrogenated forms of carbohydrate having a carbonyl group reduced to a primary or secondary hydroxyl group.

[0445] Other contemplated excipients, which may be utilized in the aqueous pharmaceutical compositions of the patent application include, for example, flavoring agents, antimicrobial agents, sweeteners, antioxidants, antistatic agents, lipids such as phospholipids or fatty acids, steroids such as cholesterol, protein excipients such as serum albumin (human serum albumin) , recombinant human albumin, gelatin, casein, salt-forming counterions such sodium and the like. These and additional known pharmaceutical excipients and / or additives suitable for use in the formulations of the invention are known in the art, e.g., as listed in “The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th edition, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003) ; and Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 21th edition, Gennaro, Ed., Lippincott Williams &Wilkins (2005) .

[0446] Method and Use

[0447] The present application also provides a method for treating a disease related to abnormal expression of CD276, comprising administering a therapeutically effective amount of the pharmaceutical composition described herein to a subject.

[0448] The present application also provides use of the monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof described herein in the preparation of a medicament for treating a disease related to abnormal expression of CD276.

[0449] In some embodiment, the disease may be cancer selected from the group consisting of: prostate cancer, small cell lung cancer, glioblastoma multiforme, diffuse midline glioma, high-grade glioma, medulloblastoma, atypical teratoid / rhabdoid tumor, ependymoma osteosarcoma, rhabdomyosarcoma, neuroblastoma, Ewing sarcoma, Wilms tumor, adrenocortical cancer, desmoplastic small round cell tumor, germ cell cancer, rhabdoid tumor, clear cell sarcoma, hepatoblastoma, malignant peripheral nerve sheath tumor, soft tissue sarcoma, ovarian cancer, cervical cancer, endometrial cancer, triple-negative breast cancer, non-small cell lung cancer, colorectal cancer, gastric cancer, urothelial carcinoma, hepatocellular carcinoma, intrahepatic cholangiocarcinoma, head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) , and acute myeloid leukemia.

[0450] In some embodiment, the anti-CD276 monoclonal antibody or antibody-drug conjugate described herein, through directly targeting or bystander effects, is capable of targeting against a tumor cell, a virus infected cell, a microorganism infected cell, a parasite infected cell, an autoimmune disease cell, an activated tumor cell, a myeloid cell, or a dysfunctional cell expressing any one of the following antigens or receptors: CD1, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD1e, CD2, CD3, CD3d, CD3e, CD3g, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD8a, CD8b, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CD12w, CD14, CD15, CD16, CD16a, CD16b, CDw17, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31, CD32, CD32a, CD32b, CD33, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD39, CD40, CD41, CD42, CD42a, CD42b, CD42c, CD42d, CD43, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD49c, CD49d, CD49f, CD50, CD51, CD52, CD53, CD54, CD55, CD56, CD57, CD58, CD59, CD60, CD60a, CD60b, CD60c, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD65, CD65s, CD66, CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, CD67, CD68, CD69, CD70, CD71, CD72, CD73, CD74, CD75, CD75s, CD76, CD77, CD78, CD79, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85, CD85a, CD85b, CD85c, CD85d, CD85e, CD85f, CD85g, CD85g, CD85i, CD85j, CD85k, CD85m, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD92, CD93, CD94, CD95, CD96, CD97, CD98, CD99, CD100, CD101, CD102, CD103, CD104, CD105, CD106, CD107, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD110, CD111, CD112, CD113, CD114, CD115, CD116, CD117, CD118, CD119, CD120, CD120a, CD120b, CD121, CD121a, CD121b, CD122, CD123, CD123a, CD124, CD125, CD126, CD127, CD128, CD129, CD130, CD131, CD132, CD133, CD134, CD135, CD136, CD137, CD138, CD139, CD140, CD140a, CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD145, CDw145, CD146, CD147, CD148, CD149, CD150, CD151, CD152, CD153, CD154, CD155, CD156, CD156a, CD156b, CD156c, CD156d, CD157, CD158, CD158a, CD158b1, CD158b2, CD158c, CD158d, CD158e1, CD158e2, CD158f2, CD158g, CD158h, CD158i, CD158j, CD158k, CD159, CD159a, CD159b, CD159c, CD160, CD161, CD162, CD163, CD164, CD165, CD166, CD167, CD167a, CD167b, CD168, CD169, CD170, CD171, CD172, CD172a, CD172b, CD172g, CD173, CD174, CD175, CD175s, CD176, CD177, CD178, CD179, CD179a, CD179b, CD180, CD181, CD182, CD183, CD184, CD185, CD186, CDw186, CD187, CD188, CD189, CD190, CD191, CD192, CD193, CD194, CD195, CD196, CD197, CD198, CD199, CDw198, CDw199, CD200, CD201, CD202, CD202 (a, b) , CD203, CD203c, CD204, CD205, CD206, CD207, CD208, CD209, CD210, CDw210a, CDw210b, CD211, CD212, CD213, CD213a1, CD213a2, CD214, CD215, CD216, CD217, CD218, CD218a, CD218, CD21b9, CD220, CD221, CD222, CD223, CD224, CD225, CD226, CD227, CD228, CD229, CD230, CD231, CD232, CD233, CD234, CD235, CD235a, CD235b, CD236, CD237, CD238, CD239, CD240, CD240ce, CD240d, CD241, CD242, CD243, CD244, CD245, CD246, CD247, CD248, CD249, CD250, CD251, CD252, CD253, CD254, CD255, CD256, CD257, CD258, CD259, CD260, CD261, CD262, CD263, CD264, CD265, CD266, CD267, CD268, CD269, CD270, CD271, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD277, CD278, CD279, CD281, CD282, CD283, CD284, CD285, CD286, CD287, CD288, CD289, CD290, CD291, CD292, CD293, CD294, CD295, CD296, CD297, CD298, CD299, CD300, CD300a, CD300b, CD300c, CD301, CD302, CD303, CD304, CD305, CD306, CD307, CD307a, CD307b, CD307c, CD307d, CD307e, CD307f, CD308, CD309, CD310, CD311, CD312, CD313, CD314, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD320, CD321, CD322, CD323, CD324, CD325, CD326, CD327, CD328, CD329, CD330, CD331, CD332, CD333, CD334, CD335, CD336, CD337, CD338, CD339, CD340, CD341, CD342, CD343, CD344, CD345, CD346, CD347, CD348, CD349, CD350, CD351, CD352, CD353, CD354, CD355, CD356, CD357, CD358, CD359, CD360, CD361, CD362, CD363, CD364, CD365, CD366, CD367, CD368, CD369, CD370, CD371, CD372, CD373, CD374, CD375, CD376, CD377, CD378, CD379, CD381, CD382, CD383, CD384, CD385, CD386, CD387, CD388, CD389, CRIPTO, CRIPTO, CR, CR1, CRGF, CRIPTO, CXCR5, LY64, TDGF1, 4-1BB, APO2, ASLG659, BMPR1B, 4-1BB, 5AC, 5T4 (Trophoblastic glycoprotein, TPBG, 5T4, Wnt-Activated Inhibitory Factor 1 or WAIF1) , Adenocarcinoma antigen, AGS-5, AGS-22M6, Activin receptor-like kinase 1, AFP, AKAP-4, ALK, Alpha integrin, Alpha v beta6, Amino-peptidase N, Amyloid beta, Androgen receptor, Angiopoietin 2, Angiopoietin 3, Annexin A1, Anthrax toxin protective antigen, anti-transferrin receptor, AOC3 (VAP-1) , B7-H3, Bacillus anthracis anthrax, BAFF (B-cell activating factor) , BCMA, B-lymphoma cell, bcr-abl, Bombesin, BORIS, C5, C242 antigen, CA125 (carbohydrate antigen 125, MUC16) , CA-IX (or CAIX, carbonic anhydrase 9) , CALLA, CanAg, Canis lupus familiaris IL31, Carbonic anhydrase IX, Cardiac myosin, CCL11 (C-C motif chemokine 11) , CCR4 (C-C chemokine receptor type 4) , CCR5, CD3E (epsilon) , CEA (Carcinoembryonic antigen) , CEACAM3, CEACAM5 (carcino-embryonic antigen) , CFD (Factor D) , Ch4D5, Cholecystokinin 2 (CCK2R) , CLDN18 (Claudin-18) , Clumping factor A, cMet, CRIPTO, FCSF1R (Colony stimulating factor 1 receptor) , CSF2 (colony stimulating factor 2, Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) ) , CSP4, CTLA4 (cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4) , CTAA16.88 tumor antigen, CXCR4, C-X-C chemokine receptor type 4, cyclic ADP ribose hydrolase, Cyclin B1, CYP1B1, Cytomegalovirus, Cytomegalovirus glycoprotein B, Dabigatran, DLL3 (delta-like-ligand 3) , DLL4 (delta-like-ligand 4) , DPP4 (Dipeptidyl-peptidase 4) , DR5 (Death receptor 5) , E. coli shiga toxin type-1, E. coli shiga toxin type-2, ED-B, EGFL7 (EGF-like domain-containing protein 7) , EGFR, EGFRII, EGFRvIII, Endoglin, Endothelin B receptor, Endotoxin, EpCAM (epithelial cell adhesion molecule) , EphA2, Episialin, ERBB2 (Epidermal Growth Factor Receptor 2) , ERBB3, ERG (TMPRSS2 ETS fusion gene) , Escherichia coli, ETV6-AML, FAP (Fibroblast activation protein alpha) , FCGR1, alpha-Fetoprotein, Fibrin II, beta chain, Fibronectin extra domain-B, FOLR (folate receptor) , Folate receptor alpha, Folate hydrolase, Fos-related antigen 1F protein of respiratory syncytial virus, Frizzled receptor, Fucosyl GM1, GD2 ganglioside, G-28 (acell surface antigen glyvolipid) , GD3 idiotype, GloboH, Glypican 3, N-glycolylneuraminic acid, GM3, GMCSF receptor α-chain, Growth differentiation factor 8, GP100, GPNMB (Trans-membrane glycoprotein NMB) , GUCY2C (Guanylate cyclase 2C, guanylyl cyclase C (GC-C) , intestinal Guanylate cyclase, Guanylate cyclase-C receptor, Heat-stable enterotoxin receptor (hSTAR) ) , Heat shock proteins, Hemagglutinin, Hepatitis B surface antigen, Hepatitis B virus, HER1 (human epidermal growth factor receptor 1) , HER2, HER2 / neu, HER3 (ERBB-3) , IgG4, HGF / SF (Hepatocyte growth factor / scatter factor) , HHGFR, HIV-1, Histone complex, HLA-DR (human leukocyte antigen) , HLA-DR10, HLA-DRB , HMWMAA, Human chorionic gonadotropin, HNGF, Human scatter factor receptor kinase, HPV E6 / E7, Hsp90, hTERT, ICAM-1 (Intercellular Adhesion Molecule 1) , Idiotype, IGF1R (IGF-1, insulin-like growth factor 1 receptor) , IGHE, IFN-γ, Influenza hemagglutinin, IgE, IgE Fc region, IGHE, interleukins (comprising IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-6R, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-17A, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, or IL-28) , IL31RA, ILGF2 (Insulin-like growth factor 2) , Integrins (α4, αIIbβ3, αvβ3, α4β7, α5β1, α6β4, α7β7, αllβ3, α5β5, αvβ5) , Interferon gamma-induced protein, ITGA2, ITGB2, KIR2D, Kappa Ig, LCK, Le, Legumain, Lewis-Y antigen, LFA-1 (Lymphocyte function-associated antigen 1, CD11a) , LHRH, LINGO-1, Lipoteichoic acid, LIV1A, LMP2, LTA, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE A1, MAGE A3, MAGE 4, MART1, MCP-1, MIF (Macrophage migration inhibitory factor, or glycosylation-inhibiting factor (GIF) ) , MS4A1 (membrane-spanning 4-domains subfamily A member 1) , MSLN (mesothelin) , MUC1 (Mucin 1, cell surface associated (MUC1) or polymorphic epithelial mucin (PEM) ) , MUC1-KLH, MUC16 (CA125) , MCP1 (monocyte chemotactic protein 1) , MelanA / MART1, ML-IAP, MPG, MS4A1 (membrane-spanning 4-domains subfamily A) , MYCN, Myelin-associated glycoprotein, Myostatin, NA17, NARP-1, NCA-90 (granulocyte antigen) , Nectin-4 (ASG-22ME) , NGF, Neural apoptosis-regulated proteinase 1, NOGO-A, Notch receptor, Nucleolin, Neu oncogene product, NY-BR-1, NY-ESO-1, OX-40, OxLDL (Oxidized low-density lipoprotein) , OY-TES1, P21, p53 nonmutant, P97, Page4, PAP, Paratope of anti- (N-glycolylneuraminic acid) , PAX3, PAX5, PCSK9, PDCD1 (PD-1, Programmed cell death protein 1) , PDGF-Rα (Alpha-type platelet-derived growth factor receptor) , PDGFR-β, PDL-1, PLAC1, PLAP-like testicular alkaline phosphatase, Platelet-derived growth factor receptor beta, Phosphate-sodium co-transporter, PMEL 17, Polysialic acid, Proteinase3 (PR1) , Prostatic carcinoma, PS (Phosphatidylserine) , Prostatic carcinoma cells, Pseudomonas aeruginosa, PSMA, PSA, PSCA, Rabies virus glycoprotein, RHD (Rh polypeptide 1 (RhPI) ) , Rhesus factor, RANKL, RhoC, Ras mutant, RGS5, ROBO4, Respiratory syncytial virus, RON, ROR1, Sarcoma translocation breakpoints, SART3, Sclerostin, SEZ6, SLAMF7 (SLAM family member 7) , Selectin P, SDC1 (Syndecan 1) , sLe(a) , Somatomedin C, SIP (Sphingosine-1-phosphate) , Somatostatin, Sperm protein 17, SSX2, STEAP1 (six-transmembrane epithelial antigen of the prostate 1) , STEAP2, STn, TAG-72 (tumor associated glycoprotein 72) , Survivin, T-cell receptor, T cell transmembrane protein, TEM1 (Tumor endothelial marker 1) , TENB2, Tenascin C (TN-C) , TGF-α, TGF-β (Transforming growth factor beta) , TGF-β1, TGF-β2 (Transforming growth factor-beta 2) , Tie (CD202b) , Tie2, tissue factors, TIM-1 (CDX-014) , Tn, TNF, TNF-α, TNFRSF8, TNFRSF10B (tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B) , TNFRSF-13B (tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B) , TPBG (trophoblast glycoprotein) , TRAIL-R1 (Tumor necrosis apoptosis Inducing ligand Receptor 1) , TRAILR2 (Death receptor 5 (DR5) ) , tumor-associated calcium signal transducer 2, tumor specific glycosylation of MUC1, TWEAK receptor, TYRP1 (glycoprotein 75) , TRP-2, Tyrosinase, VCAM-1, VEGF, VEGF-A, VEGF-2, VEGFR-1, VEGFR2, or vimentin, WT1, XAGE 1, or dysfunctional cells expressing an insulin growth factor receptor, or any epidermal growth factor receptors.

[0451] The anti-CD276 monoclonal antibody or antibody-drug conjugate described herein will be administered in a therapeutically effective amount by any of the accepted administration modes for agents in the form of a pharmaceutical composition that serve similar utilities. The anti-CD276 monoclonal antibody or antibody-drug conjugate described herein may be administered at a dose that can be determined in a manner known in the art according to the particular circumstances surrounding the case, including, e.g., the specific agent being administered (e.g., therapeutic index) , the route of administration, and the subject or host being treated.

[0452] Administration of the pharmaceutical composition of the present application may be via any common route so long as the target tissue is available via that route. This includes oral, nasal, or buccal. Alternatively, administration may be by intratumoral, intradermal, subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal or intravenous injection, or by direct injection into cancer tissue.

[0453] The dose and duration of treatment relates to the relative duration of the antibody and the antibody-drug conjugate of the present application in the human circulation, and can be adjusted by one of skill in the art depending upon the condition being treated and the general health of the patient.

[0454] In some embodiments, suitable doses of the antibody and the antibody-drug conjugate of the present application may be calculated for patients according to their weight, for example suitable doses may be in the range of about 0.1 to about 200 mg / kg, for example about 1 to about 20 mg / kg, for example about 10 to about 20 mg / kg or for example about 1 to about 15 mg / kg, for example about 5 to about 15 mg / kg.

[0455] In some embodiments, the pharmaceutical composition of the present application can be administered over any suitable period of time, such as a period from about 1 day to about 12 months. In some embodiments, for example, the period of administration can be from about 1 day to 90 days; from about 1 day to 60 days; from about 1 day to 30 days; from about 1 day to 20 days; from about 1 day to 10 days; from about 1 day to 7 days. In some embodiments, the period of administration can be from about 1 week to 50 weeks; from about 1 week to 40 weeks; from about 1 week to 30 weeks; from about 1 week to 24 weeks; from about 1 week to 20 weeks; from about 1 week to 16 weeks; from about 1 week to 12 weeks; from about 1 week to 8 weeks; from about 1 week to 4 weeks; from about 1 week to 3 weeks; from about 1 week to 2 weeks; from about 2 weeks to 3 weeks; from about 2 weeks to 4 weeks; from about 2 weeks to 6 weeks; from about 2 weeks to 8 weeks; from about 3 weeks to 8 weeks; from about 3 weeks to 12 weeks; or from about 3 weeks to 54 weeks, or from about 3 weeks to 108 weeks. 3 ～ 108 weeks after treatment, the patient may receive a second course of treatment. Specific clinical protocols with regard to route of administration, excipients, diluents, dosages, times, etc., can be determined by the skilled clinicians.

[0456] Examples of medical conditions that can be treated according to the in vivo or ex vivo methods of killing selected cell populations include malignancy of any types of cancer, autoimmune diseases, graft rejections, and infections (viral, bacterial or parasite) .

[0457] The amount of a conjugate which is required to achieve the desired biological effect, will vary depending upon a number of factors, including the chemical characteristics, the potency, and the bioavailability of the conjugates, the type of disease, the species to which the patient belongs, the diseased state of the patient, the route of administration, all factors which dictate the required dose amounts, delivery and regimen to be administered.

[0458] In general terms, the conjugates of this invention may be provided in an aqueous physiological buffer solution containing 0.1 to 10%w / v conjugates for parenteral administration. Typical dose ranges are from 1 μg / kg to 0.1 g / kg of body weight daily; weekly, biweekly, triweekly, or monthly, a preferred dose range is from 0.01 mg / kg to 25 mg / kg of body weight weekly, biweekly, triweekly, or monthly, an equivalent dose in a human. The preferred dosage of drug to be administered is likely to depend on such variables as the type and extent of progression of the disease or disorder, the overall health status of the particular patient, the relative biological efficacy of the compound selected, the formulation of the compound, the route of administration (intravenous, intramuscular, or other) , the pharmacokinetic properties of the conjugates by the chosen delivery route, and the speed (bolus or continuous infusion) and schedule of administrations (number of repetitions in a given period of time) .

[0459] In some embodiment, when the reconstituted conjugates are injected under the skin, into a muscle, or into other tissues of the body, a hyaluronidase (HAase) is preferably administered together with the conjugates. The hyaluronidase here is used as an aid in helping patient body absorb the injected conjugates. The hyaluronidase is synergistically used 20 -200 unit doses, preferably in 40 –160 unit doses, or 1500 ～3000 units / ml dose.

[0460] In some embodiments, the pharmaceutical composition of the present application can be administered every day, every other day, every week, every 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks, 5 weeks, 6 weeks, 7 weeks, 8 weeks, 9 weeks, 10 weeks, 11 weeks, 12 weeks, 13 weeks, 14 weeks, 15 weeks, 16 weeks, 17 weeks, 18 weeks, 19 weeks, or every 20 weeks, or every month.

[0461] In yet another embodiment, a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of the antibody or the conjugate of Formula (I) , (II) , (III) , (IV) or any conjugates described through the present patent can be administered with the other therapeutic agents such as the chemotherapeutic agent, the radiation therapy, immunotherapy agents, autoimmune disorder agents, anti-infectious agents or the other conjugates for synergistically effective treatment or prevention of a cancer, or an autoimmune disease, or an infectious disease. The term "coadministered, " as used herein, refers to administering one or more additional therapeutic agents and the antibody or ADC described herein, or the antibody or ADC-containing composition, sufficiently close in time such that the antibody or ADC can enhance the effect of one or more additional therapeutic agents, or vice versa. In this regard, the antibody or ADC or the composition containing the same may be administered first, and the one or more additional therapeutic agents may be administered second, or vice versa. For example, the antibody or ADC or composition containing the same may be administered in combination with other agents (e.g., as an adjuvant) for the treatment or prevention of multiple myeloma. In this respect, the antibody or ADC or antibody or ADC-containing composition can be used in combination with at least one other anticancer agent including, for example, any suitable chemotherapeutic agent known in the art, ionization radiation, small molecule anticancer agents, cancer vaccines, biological therapies (e.g., other monoclonal antibodies, cancer-killing viruses, gene therapy, and adoptive T-cell transfer) , and / or surgery. The synergistic drugs or radiation therapy can be administered prior or subsequent to administration of a conjugate, in one aspect at least an hour, 12 hours, a day, a week, biweeks, triweeks, a month, in further aspects several months, prior or subsequent to administration of the antibody or the conjugate of the invention.

[0462] The synergistic agents are preferably selected from one or several of the following drugs: Abatacept, Abiraterone acetate, Abraxane, Acetaminophen / hydrocodone, Acalabrutinib, aducanumab, Adalimumab, ADXS31-142, ADXS-HER2, Afatinib dimaleate, Aldesleukin, Alectinib, Alemtuzumab, Alitretinoin, ado-trastuzumab emtansine, Amphetamine / dextroamphetamine, Anastrozole, Aripiprazole, anthracyclines, Aripiprazole, Atazanavir, Atezolizumab, Atorvastatin, Avelumab, Axicabtagene ciloleucel, Axitinib, Belinostat, BCG Live, Bevacizumab, Bexarotene, Blinatumomab, Bortezomib, Bosutinib, Brentuximab vedotin, Brigatinib, Budesonide, Budesonide / formoterol, Buprenorphine, Cabazitaxel, Cabozantinib, Capmatinib, Capecitabine, Carfilzomib, chimeric antigen receptor-engineered T (CAR-T) cells, Celecoxib, Ceritinib, Cetuximab, Chidamide, Ciclosporin, Cinacalcet, Crizotinib, Cobimetinib, Cosentyx, Crizotinib, CTL019, Dabigatran, Dabrafenib, Dacarbazine, Daclizumab, Dacomotinib, Daptomycin, Daratumumab, Darbepoetin alfa, Darunavir, Dasatinib, Denileukin diftitox, Denosumab, Depakote, Dexlansoprazole, Dexmethylphenidate, Dexamethasone, Dinutuximab, Doxycycline, Duloxetine, Duvelisib, Durvalumab, Elotuzumab, Emtricitabine / Rilpivirine / Tenofovir, Disoproxil fumarate, Emtricitbine / tenofovir / efavirenz, Enoxaparin, Ensartinib, Enzalutamide, Epoetin alfa, erlotinib, Esomeprazole, Eszopiclone, Etanercept, Everolimus, Exemestane, Everolimus, Exenatide ER, Ezetimibe, Ezetimibe / simvastatin, Fenofibrate, Filgrastim, Fingolimod, Fluticasone propionate, Fluticasone / salmeterol, Fulvestrant, Gazyva, Gefitinib, Glatiramer, Goserelin acetate, Icotinib, Imatinib, Ibritumomab tiuxetan, Ibrutinib, Idelalisib, Ifosfamide, Infliximab, Imiquimod, ImmuCyst, Immuno BCG, Iniparib, Insulin aspart, Insulin detemir, Insulin glargine, Insulin lispro, Interferon alfa, Interferon alfa-1b, Interferon alfa-2a, Interferon alfa-2b, Interferon beta, Interferon beta 1a, Interferon beta 1b, Interferon gamma-1a, Iapatinib, Ipilimumab, Ipratropium bromide / salbutamol, Ixazomib, Kanuma, Lanreotide acetate, Lenalidomide, Lenaliomide, Lenvatinib mesylate, Letrozole, Levothyroxine, Levothyroxine, Lidocaine, Linezolid, Liraglutide, Lisdexamfetamine, LN-144, Lorlatinib, Memantine, Methylphenidate, Metoprolol, Mekinist, Mericitabine / Rilpivirine / Tenofovir, Modafinil, Mometasone, Mycidac-C, Necitumumab, neratinib, Nilotinib, Niraparib, Nivolumab, Ofatumumab, Obinutuzumab, Olaparib, Olmesartan, Olmesartan / hydrochlorothiazide, Omalizumab, Omega-3 fatty acid ethyl esters, Oncorine, Oseltamivir, Osimertinib, Oxycodone, Palbociclib, Palivizumab, Panitumumab, Panobinostat, Pazopanib, Pembrolizumab, PD-1 antibody, PD-L1 antibody, PD-1 / VEGR antibody, PD-L1 / VEGR antibody, Pemetrexed, Pertuzumab, Pneumococcal conjugate vaccine, Pomalidomide, Poziotinib, Pregabalin, ProscaVax, Propranolol, Quetiapine, Rabeprazole, Radium 223 chloride, Raloxifene, Raltegravir, Ramucirumab, Ranibizumab, Regorafenib, Rituximab, Rivaroxaban, Romidepsin, Rosuvastatin, Ruxolitinib phosphate, Salbutamol, Savolitinib, Semaglutide, Sevelamer, Sildenafil, Siltuximab, Sipuleucel-T, Sitagliptin, Sitagliptin / metformin, Solifenacin, Solanezumab, Sonidegib, Sorafenib, Sunitinib, Tacrolimus, Tacrimus, Tadalafil, Tamoxifen, Tafinlar, Talimogene laherparepvec, Talazoparib, Telaprevir, Talazoparib, Temozolomide, Temsirolimus, Tenofovir / emtricitabine, Tenofovir disoproxil fumarate, Testosterone gel, Thalidomide, TICE BCG, Tiotropium bromide, Tisagenlecleucel, Toremifene, Trametinib, Trastuzumab, Trastuzumab deruxtecan, Trabectedin (ecteinascidin 743) , Trametinib, Tremelimumab, Trifluridine / tipiracil, Tretinoin, Uro-BCG, Ustekinumab, Valsartan, Veliparib, Vandetanib, Vemurafenib, Venetoclax, Vorinostat, Ziv-aflibercept, Zostavax, and their analogs, derivatives, pharmaceutically acceptable salts, carriers, diluents or excipients thereof or a combination above thereof.

[0463] In some embodiments, the disclosure also provides a composition comprising the above-described antibody or antibody-drug conjugate and a pharmaceutically acceptable (e.g., physiologically acceptable) carrier. Any suitable carrier known in the art can be used within the context of the invention. The choice of carrier will be determined, in part, by the particular site to which the composition may be administered and the particular method used to administer the composition. The composition optionally may be sterile. The compositions can be generated in accordance with conventional techniques described in, e.g., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams &Wilkins, Philadelphia, Pa. (2001) .

[0464] The composition of this invention desirably comprises the antibody or ADCs in an amount that is effective to treat or prevent cancers. As used herein, the terms "treatment, " "treating, " and the like refer to obtaining a desired pharmacologic and / or physiologic effect. Preferably, the effect is therapeutic, i.e., the effect partially or completely cures a disease and / or adverse symptom attributable to the disease. To this end, the inventive method comprises administering a "therapeutically effective amount" of the antibody or ADC or the composition comprising the antibody or ADC and a pharmaceutically acceptable carrier. A "therapeutically effective amount" refers to an amount effective, at dosages and for periods of time necessary, to achieve a desired therapeutic result. The therapeutically effective amount may vary according to factors such as the disease state, age, sex, and weight of the individual, and the ability of the antibody or ADC to elicit a desired response in the individual. For example, a therapeutically effective amount of the ADC of the invention is an amount which binds to a certain antigen on cancer cells and destroys them.

[0465] A pharmacologic and / or physiologic effect of treatment may be prophylactic, i.e., the effect completely or partially prevents a disease or symptom thereof. In this respect, the inventive method comprises administering a "prophylactically effective amount" of the ADC or a composition comprising the ADC to a mammal that is predisposed to multiple myeloma. A "prophylactically effective amount" refers to an amount effective, at dosages and for periods of time necessary, to achieve a desired prophylactic result (e.g., prevention of disease onset) . Therapeutic or prophylactic efficacy can be monitored by periodic assessment of treated patients. In one embodiment, the ADC described herein inhibits or suppresses proliferation of prostate cancer cells by at least about 10% (e.g., at least about 20%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, or at least about 100%) . Cell proliferation can be measured using any suitable method known in the art, such as measuring incorporation of labeled nucleosides (e.g., 3H-thymidine or bromodeoxyuridine Brd (U) ) into genomic DNA (see, e.g., Madhavan, H.N., J. Stem Cells Regen. Med., 3 (1) : 12-14 (2007)) .

[0466] According to a further object, the present invention also concerns pharmaceutical compositions comprising the antibody or ADCs of the invention together with a pharmaceutically acceptable carrier, diluent, or excipient for treatment of cancers, infections or autoimmune disorders. The method for treatment of cancers, infections and autoimmune disorders can be practiced in vitro, in vivo, or ex vivo. Examples of in vitro uses include treatments of cell cultures in order to kill all cells except for desired variants that do not express the target antigen; or to kill variants that express undesired antigen. Examples of ex vivo uses include treatments of hematopoietic stem cells (HSC) prior to the performance of the transplantation (HSCT) into the same patient in order to kill diseased or malignant cells. For instance, clinical ex vivo treatment to remove tumour cells or lymphoid cells from bone marrow prior to autologous transplantation in cancer treatment or in treatment of autoimmune disease, or to remove T cells and other lymphoid cells from allogeneic bone marrow or tissue prior to transplant in order to prevent graft-versus-host disease, can be carried out as follows. Bone marrow is harvested from the patient or other individual and then incubated in medium containing serum to which is added the conjugate of the invention, concentrations range from about 1 pM to 0.1 mM, for about 30 minutes to about 48 hours at about 37 ℃. The exact conditions of concentration and time of incubation (=dose) are readily determined by the skilled clinicians. After incubation, the bone marrow cells are washed with medium containing serum and returned to the patient by i. v. infusion according to known methods. In circumstances where the patient receives other treatment such as a course of ablative chemotherapy or total-body irradiation between the time of harvest of the marrow and reinfusion of the treated cells, the treated marrow cells are stored frozen in liquid nitrogen using standard medical equipment.

[0467] All references, including publications, patent applications, and patents, cited herein are hereby incorporated by reference to the same extent as if each reference were individually and specifically indicated to be incorporated by reference and were set forth in its entirety herein.

[0468] Preferred embodiments of this invention are described herein, including the best mode known to the inventors for carrying out the invention. Variations of those preferred embodiments may become apparent to those of ordinary skill in the art upon reading the foregoing description. The inventors expect skilled artisans to employ such variations as appropriate, and the inventors intend for the invention to be practiced otherwise than as specifically described herein. Accordingly, this invention includes all modifications and equivalents of the subject matter recited in the claims appended hereto as permitted by applicable law. Moreover, any combination of the above-described elements in all possible variations thereof is encompassed by the invention unless otherwise indicated herein or otherwise clearly contradicted by context.

[0469] The following examples further illustrate the invention but, of course, should not be construed as in any way limiting its scope.

[0470] EXAMPLES

[0471] The invention is further described in the following examples, which are not intended to limit the scope of the invention. Cell lines described in the following examples were generally maintained in culture according to the conditions specified by the American Type Culture Collection (ATCC) , The Shanghai Cell Culture Institute of Chinese Acadmy of Science, or Nanjing Cobioer Biosciences Co., unless otherwise specified. C4-2B Cells which was obtained from ATCC through license agreement with MD Anderson Cancer Center, Houston, TX, USA. 22RV1, SHP-77, A375, U87, NCI-N87, MKN-7, BxPC-3, MDA-MB-231, Calu-3, A431, AsPC-1, and NCI-H1975 cells were purchased from ATCC, Nanjing Cobioer and The Cell Bank of Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology, and the others. C4-2B and PC-3-4H7 are PSMA antigen high express cells, but medium expressed of B7H3 antigens. 22RV1 is low express cells for PSMA, B7H3 and DLL3 antigens. U87 is glioblastoma (GBM) cells, A431 is human epidermoid carcinoma. Calu-3, HCC827 and NCI-H1975 are a human lung adenocarcinoma.

[0472] Cell culture reagents were obtained from Invitrogen Corp., unless otherwise specified. All anhydrous solvents were commercially obtained and stored in Sure-seal bottles under nitrogen. PEG compounds were purchased from Biomatrik Inc, Jiaxing, China. Some chemical compounds, when were not referred synthesis from, were provided by CROs (e.g. Wuxi Apptec, Chemexpress, Raybow Pharma, GL Biochem, Asymchem, and Medicilin (in Hangzhou) in China. Dxd-GGFG payload / linker complex which was used for comparison with the payload / ligand / linker complexes of the present invention was purchased from Chemexpress (Shanghai) . Experimental animals were purchased from National Resource Center of Model Mice via GemPharmatech. Co., Ltd, Najing, China and Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd., Shanghai, China. All other reagents and solvents were purchased as the highest grade available and used without further purification. The preparative HPLC separations were performed with Varain PreStar HPLC. HPLC analysis was conducted on Agilent 1260. The mass spectral data were acquired on Waters Xevo QTOF mass spectrum equipped with Waters Acquity UPLC separations module and Acquity TUV detector. NMR spectra were recorded on Zhongke-niujin WNMR-I 400 MHz instrument at the Department of Chemistry of Zhejiang Sci-Tech University. Chemical shifts (δ) are reported in parts per million (ppm) referenced to tetramethylsilane at 0.00 and coupling constants (J) are reported in Hz. The elemental analysis of C, H, and / or N was provided by the Department of Chemistry of Zhejiang Sci-Tech University and conducted on Elementar UNICUBE. Quantitative analysis of metal atoms was performed on Agilent ICPOES 730 ICP-MS. The other materials, reagents, etc. used in the following examples were obtained from commercial sources unless otherwise specified.

[0473] Example 1: Synthesis of A001

[0474] STEP 1:

[0475] To a stirring solution of triphosgene (33.43 g, 112.677 mmol) in CH2Cl2 (300 mL) at -78℃ were added a solution of 2 (100.00 g, 338.066 mmol) in CH2Cl2 (400 mL) and a solution of DIPEA (235.55 mL, 1352.265 mmol) in CH2Cl2 (100 mL) in sequence. The resulting mixture was stirred at -78℃ for 2 h before a mixture solution of 1 (126.06 g, 338.066 mmol) and DIPEA (58.89 mL, 338.066 mmol) in CH2Cl2 (400 mL) were added. The resulting mixture was naturally warmed to room temperature and stirred for 5 h before it was quenched with water (1 L) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with CH2Cl2 (3 × 250 mL) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 3 was obtained as a colorless oil (207.86 g, 99%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 2: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C32H52N3O9+ [M + H] + 622.3698, found 622.3704.

[0476] STEP 2:

[0477] To a stirring solution of 3 (311.80 g, 501.472 mmol) in MeOH (2 L) at room temperature was added Pd / C (31.20 g, 10%wt / wt) . The resulting mixture was stirred at room temperature under H2 atmosphere for 12 h before it was filtered through a pad of celite. The filtrate was collected and concentrated in vacuo. The intermediate 4 was obtained as a yellow oil (244.54 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C24H46N3O7+ [M + H] + 488.3330, found 488.3331.

[0478] STEP 3:

[0479] To a stirring solution of 4 (244.54 g, 501.472 mmol) and 5 (189.02 g, 752.215 mmol) in CH2Cl2 (2.5 L) at 0 ℃ was added EDCI (144.20 g, 752.215 mmol) . The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for 2 h before it quenched with citric acid (10%wt / wt, aq., 500 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was washed with NaCl (sat. aq., 200 mL) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 5 was obtained as a white solid (240.20 g, 66%) by recrystallization (CH2Cl2: hexane = 1: 1, room temperature) . HRMS (ESI) : calcd for C37H61N4O10+ [M + H] + 721.4382, found 721.4385.

[0480] STEP 4:

[0481] To a stirring solution of 5 (80.27 g, 111.347 mmol) in MeOH (800 mL) at room temperature was added Pd / C (8.03 g, 10%wt / wt) . The resulting mixture was stirred at room temperature under H2 atmosphere for 3 h before it was filtered through a pad of celite. The filtrate was collected and concentrated in vacuo. The intermediate 5 was obtained as a yellow oil (65.34 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C29H55N4O8+ [M + H] + 587.4014, found 587.4022.

[0482] STEP 5:

[0483] To a stirring solution of 8 (100.00 g, 262.854 mmol) in CH2Cl2 (1.6 L) at 0 ℃ were added HATU (104.94 g, 275.996 mmol) , 9 (67.27g, 275.996 mmol) and DIPEA (84.93 g, 657.134 mmol) in sequence. The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for 4 h before it was quenched with citric acid (10%wt / wt, aq., 500 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was washed with NaCl (sat. aq., 200 mL) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 10 was obtained as a white solid (135.00 g, 90%) by recrystallization (CH2Cl2: hexane = 1: 20, room temperature) . HRMS (ESI) : calcd for C31H44N3O7+ [M + H] + 570.3174, found 570.3175.

[0484] STEP 6:

[0485] To a stirring solution of 10 (151.50 g, 265.929 mmol) in CH2Cl2 (1 L) at room temperature was added TFA (330 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 11 was obtained as a yellow oil (124.88 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C26H36N3O5+ [M + H] + 470.2649, found 470.2653.

[0486] STEP 7:

[0487] To a stirring solution of 12 (73.75 g, 265.940 mmol) in THF (1 L) at 0 ℃ was added HATU (106.18 g, 279.2374 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 20 min before addition of a solution of 11 (124.88 g, 265.929 mmol) in THF (500 mL) and DIPEA (103.12 g, 797.820 mmol) in sequence. The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for further 2 h before it was quenched with citric acid (10%wt / wt, aq., 1 L) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with CH2Cl2 (3 × 300 mL) . The combined organic layers were washed with NaCl (sat. aq., 500 mL) , dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 13 was obtained as a yellow oil (193.84 g, 100%) after flash column chromatography (silica gel, CH2Cl2: hexane = 10: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C38H57N4O10+ [M + H] + 729.4069, found 729.4074.

[0488] STEP 8:

[0489] To a stirring solution of 13 (193.84 g, 265.929 mmol) in CH2Cl2 (1 L) at room temperature was added TFA (500 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 14 was obtained as a yellow oil (167.22 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C33H49N4O8+ [M + H] + 629.3545, found 629.3545.

[0490] STEP 9:

[0491] To a stirring solution of 14 (167.22 g, 265.948 mmol) in CH2Cl2 (1.5 L) at 0 ℃ were added 15 (59.10 g, 265.948 mmol) and EDCI (76.47 g, 398.922 mmol) in sequnece. The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for 4 h before it quenched with citric acid (10%wt / wt, aq., 500 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was washed with Na2CO3 (5%wt / wt, aq., 200 mL) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 16 was obtained as a yellow oil (221.53, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C45H61N4O11+ [M + H] + 833.4331, found 833.4333.

[0492] STEP 10:

[0493] To a stirring solution of 16 (221.53 g, 265.948 mmol) in CH2Cl2 (600 mL) at 40 ℃ was added HCO2H (1.2 L) . The resulting mixture was stirred at 40 ℃ for 12 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dissolved with water (1 L) and extracted with EtOAc (1 L×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 17 was obtained as a white solid (162.00 g, 78%over 5 steps) by recrystallization (hexane: EtOAc = 1: 1, room temperature) . HRMS (ESI) : calcd for C41H53N4O11+ [M + H] + 777.3705, found 777.3706.

[0494] STEP 11:

[0495] To a stirring solution of 17 (49.20 g, 63.330 mmol) in CH2Cl2 (500 mL) at room temperature were added HATU (28.90 g, 75.996 mmol) and DIPEA (12.28 g, 94.995 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for 0.5 h before addition of a solution of 7 (37.16 g, 63.330 mmol) in CH2Cl2 (200 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was quenched with HCl (1 M aq, 200 mL) . The layers were separated and the aqueous layer was extracted with CH2Cl2 (3 × 100 mL) . The combined organic layers were washed with NaCl (sat. aq., 500 mL) , dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 18 was obtained as a yellow oil (75.23 g, 88%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: hexane = 10: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C70H105N8O18+ [M + H] + 1345.7541, found 1345.7543.

[0496] STEP 12:

[0497] To a stirring solution of 18 (100.00 g, 74.314 mmol) in MeOH (1 L) at room temperature was added Pd / C (10.00 g, 10%wt / wt) . The resulting mixture was stirred at room temperature under H2 atmosphere for 12 h before it was filtered through a pad of celite. The filtrate was collected and concentrated in vacuo. The intermediate 19 was obtained as a yellow solid (79.89 g, 96%) after trituration with EtOAc (500 mL) . HRMS (ESI) : calcd for C55H93N8O16+ [M + H] + 1121.6704, found 1121.6704.

[0498] STEP 13:

[0499] To a stirring solution of 19 (208.10 g, 185.575 mmol) in DMF (3 L) at room temperature were added 20 (77.77 g, 222.690 mmol) and DIPEA (59.96 g, 463.937 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 3 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 21 was obtained as a light yellow solid (165.00 g, 69%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: hexane = 10: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C63H100N9O19+ [M + H] + 1286.7130, found 1286.7136.

[0500] STEP 14:

[0501] To a stirring solution of 22 (22.00 g, 178.629 mmol) and 23 (33.80 g, 178.629 mmol) in THF (200 mL) at room temperature was added EEDQ (48.59 g, 196.492 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 24 was obtained as a light yellow solid (39.13 g, 74%) after trituration with hexane / EtOAc (50%V / V) . HRMS (ESI) : calcd for C15H23N2O4+ [M + H] + 295.1652, found 295.1654.

[0502] STEP 15:

[0503] To a stirring solution of 24 (20 g, 67.946 mmol) in THF (300 mL) at 0 ℃ were added PPh3 (35.64 g, 135.893 mmol) and NBS (24.19 g, 135.893 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 1 h before it was quenched with water (100 mL) . The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (3 × 50 mL) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 25 was obtained as a white solid (17.23 g, 72%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc= 2: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C15H22BrN2O3+ [M + H] + 357.0808, found 357.0806.

[0504] STEP 16:

[0505] To a stirring solution of 26 (30 g, 163.773 mmol) and 27 (43 g, 163.773 mmol) in toluene (600 mL) at room temperature was added PPTS (2.06 g, 8.189 mmol) . The resulting mixture was heated to reflux and stirred overnight before it was cooled to room temperature and filtered. The filter cake was collected and stirred in toluene at reflux for 2 h before it was cooled and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 28 was obtained as a dark yellow solid (61 g, 91%) . HRMS (ESI) : calcd for C22H20FN2O5+ [M + H] + 411.1351, found 411.1355.

[0506] STEP 17:

[0507] To a stirring solution of 28 (4.14 g, 10.088 mmol) and 29 (7.56 g, 60.526 mmol) in acetone (150 mL) at room temperature were added K2CO3 (4.18 g, 30.263 mmol) and KI (1.51 g, 10.088 mmol) in sequence. The resulting mixture was heated to 60 ℃ and stirred for 20 h before it was cooled to room temperature and concentrated in vacuo directly. The intermediate 30 was obtained as a dark yellow solid (2.6 g, 57%) after flash column chromatography purification (silica gel, DCM: MeOH = 10: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C24H24FN2O6+ [M + H] + 455.1613, found 455.1614.

[0508] STEP 18:

[0509] To a stirring solution of 30 (2.00 g, 4.401 mmol) in THF (50 mL) at 0 ℃ was added NaH (264 mg, 6.601 mmol, 60%dispersion in mineral oil) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 0.5 h before addition of 25 (1.57 g, 4.401 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 1 h before it was quenched with NH4Cl (sat. aq., 30 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (3 × 30 mL) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 31 was prepared after RP-HPLC purification and lyophilization as a yellow solid (2.88 g, 89%) . HRMS (ESI) : calcd for C39H44FN4O9+ [M + H] +731.3087, found 731.3090.

[0510] STEP 19:

[0511] To a stirring solution of 31 (2.00 g, 2.737 mmol) in 1, 4-dioxane (20 mL) at 0 ℃ was added HCl (3.42 mL, 13.684 mmol, 4.0 M in 1, 4-dioxane) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 32 was obtained as a yellow oil (1.92 g, 105%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C34H36FN4O7+ [M + H] +631.2563, found 631.2565.

[0512] STEP 20:

[0513] To a stirring solution of 21 (4.22 g, 3.284 mmol) in DMF (50 mL) at room temperature was added HATU (1.25 g, 3.284 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 32 (1.92 g, 2.737 mmol) and DIPEA (1.06 g, 3.284 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 33 was obtained as a yellow oil (8.08 g, 284%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C97H133FN13O25+ [M + H] + 1898.9514, found 1898.9514.

[0514] STEP 21:

[0515] To a stirring solution of 32 (8.08 g, 2.737 mmol) in CH2Cl2 (50 mL) at room temperature was added TFA (50 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 4 h before it was concentrated in vacuo. The product A001 was obtained as a yellow solid (1.02 g, 21%over 3 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C85H109FN13O25+ [M + H] +1730.7636, found 1730.7636.

[0516] Example 2: Synthesis of A002

[0517] STEP 1:

[0518] To a stirring solution of 23 (7.84 g, 41.420 mmol) in DMF (400 mL) at room temperature were added HATU (15.75 g, 41.420 mmol) and DIPEA (12.17 g, 94.135 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before addition of 34 (20.00 g, 37.654 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was quenched with EtOAc (2 L) and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 35 was obtained as a yellow solid (22.80 g, 99%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C32H36FN4O7+ [M + H] + 607.2563, found 607.2568.

[0519] STEP 2:

[0520] To a stirring solution of 35 (10.00 g, 16.484 mmol) in CH2Cl2 (150 mL) at room temperature was added TFA (75 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 36 was obtained as a yellow solid (9.22 g, 91%) after trituration with MTBE (1 L) . HRMS (ESI) : calcd for C27H28FN4O5+ [M + H] + 507.2038, found 507.2044.

[0521] STEP 3:

[0522] To a stirring solution of 21 (8.18 g, 6.358 mmol) in DMF (150 mL) at room temperature was added HATU (2.54 g, 6.676 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 10 min before addition of 36 (4.14 g, 6.676 mmol) and DIPEA (2.05 g, 15.895 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 37 was obtained as a dark yellow oil (11.29 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C90H125FN13O23+ [M + H] + 1774.8990, found 1774.8990.

[0523] STEP 4:

[0524] To a stirring solution of 37 (11.29 g, 6.360 mmol) in CH2Cl2 (50 mL) at room temperature was added TFA (100 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A002 was obtained as a yellow solid (5.68 g, 55%over 3 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C78H101FN13O23+ [M +H] + 1606.7112, found 1606.7113.

[0525] Example 3: Synthesis of A003

[0526] STEP 1:

[0527] To a stirring solution of 30 (700 mg, 1.540 mmol) and 23 (292 mg, 1.540 mmol) in CH2Cl2 (10 mL) at were room temperature added DCC (636 mg, 3.081 mmol) and DMAP (188.18 mg, 1.540 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 38 was obtained as a yellow solid (840 mg, 87%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: MeOH = 10: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C32H37FN3O9+ [M + H] + 626.2508, found 626.2516.

[0528] STEP 2:

[0529] To a stirring solution of 38 (150 mg, 0.240 mmol) in CH2Cl2 (4 mL) at room temperature was added TFA (2 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 0.5 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 39 was obtained as a yellow oil (153 mg, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C27H29FN3O7+ [M + H] + 526.1984, found 526.1983.

[0530] STEP 3:

[0531] To a stirring solution of 21 (280 mg, 0.218 mmol) in DMF (3 mL) at room temperature was added HATU (87 mg, 0.229 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 10 min before addition of 39 (153 mg, 0.240 mmol) and DIPEA (70 mg, 0.545 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 40 was obtained as a yellow oil (391 mg, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C90H126FN12O25+ [M + H] + 1793.8936, found 1794.2627.

[0532] STEP 4:

[0533] To a stirring solution of 40 (391 mg, 0.218 mmol) in CH2Cl2 (3 mL) at room temperature was added TFA (3 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A003 was obtained as a yellow solid (38.0 mg, 10%over 3 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C78H102FN12O25+ [M + H] + 1625.7058, found 1625.7060.

[0534] Example 4: Synthesis of A004

[0535] STEP 1:

[0536] To a stirring solution of 41 (3.00 g, 9.305 mmol) in MeCN (30 mL) at room temperature was added 25 (3.32 g, 9.305 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 24 h before it was quenched with henane / EtOAc (1: 1) and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 42 was obtained as a yellow solid (4.20 g, 75%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C35H43N4O5+ M+ 599.3228, found 599.3226.

[0537] STEP 2:

[0538] To a stirring solution of 42 (4.10 g, 6.836 mmol) in DMF (30 mL) at room temperature was added piperidine (3 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 43 was obtained as a white solid (2.58 g, 100%) after trituration with hexane (100 mL) . HRMS (ESI) : calcd for C20H33N4O3+ M+ 377.2547, found 377.2548.

[0539] STEP 3:

[0540] To a stirring solution of 34 (500 mg, 0.941 mmol) in DMF (10 mL) at 0 ℃ were added 44 (190 mg, 0.941 mmol) and DIPEA (486 mg, 0.941 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 30 min before addition of 43 (355 mg, 0.941 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 1 h before it was quenched with EtOAc (50 mL) and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 45 was obtained as a yellow solid (790 mg, 100%) without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C45H53FN7O8+ M+ 838.3934, found 838.3942.

[0541] STEP 4:

[0542] To a stirring solution of 45 (790 mg, 0.941 mmol) in CH2Cl2 (6 mL) at room temperature was added TFA (3 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 46 was obtained as a yellow oil (787 mg, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C40H45FN7O6+ M+ 738.3410, found 738.3416.

[0543] STEP 5:

[0544] To a stirring solution of 21 (1.00 g, 0.784 mmol) in DMF (15 mL) at room temperature was added HATU (358 mg, 0.941 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 46 (787 mg, 0.941 mmol) and DIPEA (304 mg, 2.353 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 47 was obtained as a dark yellow oil (1.57 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C103H142FN16O24+ [M + H] + 2006.0361, found 2006.0364.

[0545] STEP 6:

[0546] To a stirring solution of 47 (1.57 g, 0.784 mmol) in CH2Cl2 (20 mL) at room temperature was added TFA (10 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A004 was obtained as a yellow solid (350 mg, 20%over 4 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C91H118FN16O24+ [M + H] + 1837.8483, found 1837.8482.

[0547] Example 5: Synthesis of A005

[0548] STEP 1:

[0549] To a stirring solution of 48 (2.00 g, 9.847 mmol) and HNMe (OMe) ·HCl (1.15 g, 11.817 mmol) in CH2Cl2 (20 mL) at room temperature were added HATU (4.49 g, 11.817 mmol) and DIPEA (3.82 g, 29.541 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was quenched with Na2CO3 (5%wt / wt aq., 10 mL) . The layers were separated, and the organic layer was washed with HCl (1 M aq., 10 mL) and water (10 mL) . The organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 49 was obtained as a yellow solid (2.42 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C9H9F2N2O4+ [M + H] + 247.0525, found 247.0528.

[0550] STEP 2:

[0551] To a stirring solution of 49 (2.42 g, 9.847 mmol) and 50 (2.47 g, 14.746 mmol) in MeCN (20 mL) at room temperature was added K2CO3 (4.08 g, 29.492 mmol) . The resulting mixture was heated to 80 ℃ and stirred for 2 h before it was cooled to room temperature and quenched with water (50 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (50 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 51 was obtained as a yellow solid (3.87 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C18H21FN3O6+ [M + H] + 394.1409, found 394.1414.

[0552] STEP 3:

[0553] To a stirring solution of 51 (3.87 g, 9.847 mmol) in EtOH / H2O (30 mL, 50%V / V) at room temperature were added NH4Cl (5.26 g, 98.381 mmol) and Fe powder (3.85 g, 68.866 mmol) . The resulting mixture was heated to 80 ℃ and stirred for 2 h before it was cooled to room temperature and filtered through a pad of celite. The filtrate was collected and concentrated in vacuo. The intermediate 52 was obtained as a yellow solid (3.58 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C18H23FN3O4+ [M + H] + 364.1667, found 364.1672.

[0554] STEP 4:

[0555] To a stirring solution of 52 (3.58 g, 9.847 mmol) in 1, 4-dioxane / H2O (100 mL, 70%V / V) at 0 ℃ were added Na2CO3 (2.09 g, 19.694 mmol) and FmocCl (6.37 g, 24.618 mmol) . The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for 12 h before it was concentrated in vacuo. The residual aqueous layer was extracted with EtOAc (50 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 53 was obtained as a white solid (5.00 g, 87%over 4 steps) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 3: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C33H33FN3O6+ [M + H] + 586.2348, found 586.2351.

[0556] STEP 5:

[0557] To a stirring solution of 53 (53.00 g, 65.604 mmol) in THF (500 mL) at 0 ℃ was added EtMgBr (154.4 mL, 3.4 mol / L in 2-Me-THF, 524.831 mmol) . The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for 6 h before it was quenched with NH4Cl (sat. aq., 800 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (500 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 54 was obtained as a yellow oil (50.19 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C33H32FN2O5+ [M +H] + 555.2290, found 555.2298.

[0558] STEP 6:

[0559] To a stirring solution of 54 (50.19 g, 65.604 mmol) in DMF (500 mL) at room temperature was added piperidine (50 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 55 was obtained as a yellow solid (21.48 g, 71%over 2 steps) flash column chromatography (silica gel, hexane: EtOAc = 8: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C18H22FN2O3+ [M + H] + 333.1609, found 333.1618.

[0560] STEP 7:

[0561] To a stirring solution of 55 (25.30 g, 76.118 mmol) and 27 (20.04 g, 76.118 mmol) in toluene (500 mL) at room temperature was added PPTS (1.91 g, 7.612 mmol) . The resulting mixture was heated to reflux and stirred overnight before it was cooled to room temperature and filtered. The filter cake was collected and stirred in refluxing toluene for 2 h before it was cooled and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 56 was obtained as a dark yellow solid (35.54 g, 88%) . HRMS (ESI) : calcd for C31H31FN3O6+ [M + H] + 560.2191, found 560.2200.

[0562] STEP 8:

[0563] To a stirring solution of 56 (21 g, 37.527 mmol) in CH2Cl2 (40 mL) at room temperature was added TFA (20 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 57 was obtained as a yellow solid (10.20 g, 66%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: hexane = 20: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C22H21FN3O4+ [M + H] + 410.1511, found 410.1512.

[0564] STEP 9:

[0565] To a stirring solution of 58 (1.00 g, 4.061 mmol) in DMF (20 mL) at room temperature were added HATU (1.70 g, 4.467 mmol) and DIPEA (1.57 g, 12.183 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 57 (1.83 g, 4.467 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 59 was obtained as a dark yellow oil (1.31 g, 92%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: hexane = 20: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C32H37FN5O8+ [M + H] + 638.2621, found 638.2626.

[0566] STEP 10:

[0567] To a stirring solution of 59 (1.31 g, 2.054 mmol) in CH2Cl2 (10 mL) at room temperature was added TFA (5 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (50 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 60 was obtained as a yellow solid (1.31 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C27H29FN5O6+ [M + H] + 538.2096, found 538.2100.

[0568] STEP 11:

[0569] To a stirring solution of 21 (2.64 g, 2.054 mmol) in DMF (50 mL) at room temperature was added HATU (781 mg, 2.054 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 60 (1.31 g, 2.054 mmol) and DIPEA (797 mg, 6.162 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 61 was obtained as a dark yellow oil (3.71 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C90H126FN14O24+ [M + H] + 1805.9048, found 1805.9057.

[0570] STEP 12:

[0571] To a stirring solution of 61 (3.71 g, 2.054 mmol) in CH2Cl2 (50 mL) at room temperature was added TFA (25 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A005 was obtained as a yellow solid (1.51 g, 45%over 3 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C78H102FN14O24+ [M +H] + 1637.7170, found 1637.7172.

[0572] Example 6: Synthesis of A006

[0573] STEP 1:

[0574] To a stirring solution of 62 (300 mg, 2.605 mmol) in MeCN (10 mL) at room temperature was added 25 (930 mg, 2.605 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 12 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (50 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 63 was obtained as a white solid (1.19 g, 97%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C21H34N3O4+ M+ 392.2544, found 392.2547.

[0575] STEP 2:

[0576] To a stirring solution of 63 (1.19 g, 2.514 mmol) in MeCN (30 mL) at 0 ℃ were added 44 (608 mg, 3.016 mmol) and DIPEA (975 mg, 7.541 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 2 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (50 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo The intermediate 64 was obtained as a white solid (1.41 g, 90%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C28H37N4O7+ M+ 541.2657, found 541.2660.

[0577] STEP 3:

[0578] To a stirring solution of 64 (1.41 g, 2.265 mmol) in DMF (30 mL) at room temperature were added 34 (1.20 g, 2.265 mmol) and DIPEA (879 mg, 6.795 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (50 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The intermediate 65 was obtained as a yellow solid (2.11 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C46H54FN6O9+ M+ 853.3931, found 853.3935.

[0579] STEP 4:

[0580] To a stirring solution of 65 (2.11 g, 2.259 mmol) in CH2Cl2 (50 mL) at room temperature was added TFA (25 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (50 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo The intermediate 66 was obtained as a yellow solid (2.10 g, 99%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C41H46FN6O7+ M+ 753.3407, found 753.3407.

[0581] STEP 5:

[0582] To a stirring solution of 21 (2.90 g, 2.256 mmol) in DMF (50 mL) at room temperature was added HATU (858 mg, 2.256 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 66 (2.10 g, 2.256 mmol) and DIPEA (875 mg, 6.768 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 67 was obtained as a dark yellow oil (4.74 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C104H143FN15O25+ M+ 2021.0358, found 2021.0360.

[0583] STEP 6:

[0584] To a stirring solution of 67 (4.74 g, 2.256 mmol) in CH2Cl2 (50 mL) at room temperature was added TFA (25 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A006 was obtained as a yellow solid (1.95 g, 46%over 2 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C92H119FN15O25+ [M +H] + 1852.8480, found 1852.8484.

[0585] Example 7: Synthesis of A007

[0586] STEP 1:

[0587] To a stirring solution of 68 (300 mg, 2.908 mmol) in MeCN (10 mL) at room temperature was added 25 (1.04 g, 2.908 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 12 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (50 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The filtrate was collected and concentrated in vacuo. The intermediate 69 was obtained as a white solid (1.33 g, 99%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C20H34N3O4+ M+ 380.2544, found 380.2549.

[0588] STEP 2:

[0589] To a stirring solution of 69 (1.33 g, 2.889 mmol) in MeCN (30 mL) at 0 ℃ were added 44 (699 mg, 3.466 mmol) and DIPEA (1.17 g, 8.666 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 2 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (50 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo The intermediate 70 was obtained as a white solid (1.68 g, 95%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C27H37N4O7+ M+ 529.2657, found 529.2658.

[0590] STEP 3:

[0591] To a stirring solution of 70 (1.68 g, 2.756 mmol) in DMF (30 mL) at room temperature were added 34 (1.46 g, 2.756 mmol) and DIPEA (1.07 g, 8.269 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (50 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The intermediate 71 was obtained as a yellow solid (2.20 g, 88%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C44H52FN6O9+ M+ 827.3774, found 827.3778.

[0592] STEP 4:

[0593] To a stirring solution of 71 (2.20 g, 2.423 mmol) in CH2Cl2 (40 mL) at room temperature was added TFA (20 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (50 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo The intermediate 72 was obtained as a yellow solid (2.19 g, 99%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C39H45BrFN6O7+ M+ 807.2512, found 807.2514.

[0594] STEP 5:

[0595] To a stirring solution of 21 (3.11 g, 2.418 mmol) in DMF (50 mL) at room temperature was added HATU (920 mg, 2.418 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 72 (2.19 g, 2.418 mmol) and DIPEA (938 mg, 7.254 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 73 was obtained as a dark yellow oil (5.02 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C102H141FN15O25+ M+ 1995.0202, found 1995.0208.

[0596] STEP 6:

[0597] To a stirring solution of 73 (5.02 g, 2.418 mmol) in CH2Cl2 (50 mL) at room temperature was added TFA (25 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A007 was obtained as a yellow solid (2.52 g, 55%over 2 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C89H119FN15O25+ [M +H] + 1816.8480, found 1816.8487.

[0598] Example 8: Synthesis of A018

[0599] STEP 1:

[0600] To a stirring solution of 74 (1.50 g, 7.386 mmol) in THF (50 mL) at 0 ℃ was added NaH (650 mg, 16.248 mmol, 60%dispersion in mineral oil) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 0.5 h before addition of BnOH (2.00 g, 18.4638 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 1 h before it was quenched with NH4Cl (sat. aq., 30 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (3 × 30 mL) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 75 was obtained as a yellow solid (1.45 g, 67%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: MeOH= 20: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C14H11FNO5+ [M + H] + 292.0616, found 292.0620.

[0601] STEP 2:

[0602] To a stirring solution of 75 (1.45 g, 4.977 mmol) and HNMe (OMe) ·HCl (583 mg, 5.972 mmol) in CH2Cl2 (20 mL) at room temperature were added HATU (2.27 g, 5.972 mmol) and DIPEA (1.93 g, 14.931 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was quenched with Na2CO3 (5%wt / wt aq., 10 mL) . The layers were separated, and the organic layer was washed with HCl (1 M aq., 10 mL) and water (10 mL) . The organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 76 was obtained as a yellow solid (1.60 g, 96%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C16H16FN2O5+ [M + H] + 335.1038, found 335.1039.

[0603] STEP 3:

[0604] To a stirring solution of 76 (1.60 g, 4.786 mmol) in EtOH / H2O (30 mL, 50%V / V) at room temperature were added NH4Cl (2.56 g, 47.861 mmol) and Fe powder (1.87 g, 33.503 mmol) . The resulting mixture was heated to 80 ℃ and stirred for 2 h before it was cooled to room temperature and filtered through a pad of celite. The filtrate was collected and concentrated in vacuo. The intermediate 77 was obtained as a yellow solid (1.45 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C16H18FN2O3+ [M + H] + 305.1296, found 305.1300.

[0605] STEP 4:

[0606] To a stirring solution of 77 (1.45 g, 4.765 mmol) in 1, 4-dioxane / H2O (50 mL, 70%V / V) at 0 ℃were added Na2CO3 (1.51 g, 14.294 mmol) and FmocCl (3.08 g, 11.9118 mmol) . The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for 12 h before it was concentrated in vacuo. The residual aqueous layer was extracted with EtOAc (20 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 78 was obtained as a white solid (2.50 g, 100%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 2: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C31H28FN2O5+ [M + H] + 527.1977, found 527.1982.

[0607] STEP 5:

[0608] To a stirring solution of 78 (2.50 g, 65.604 mmol) in THF (30 mL) at 0 ℃ was added 79 (9.50 mL, 1.0 M in THF, 9.496 mmol) . The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for 6 h before it was quenched with NH4Cl (sat. aq., 20 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 80 was obtained as a yellow oil (2.00 g, 78%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 2: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C33H31FNO5+ [M + H] + 540.2181, found 540.2182.

[0609] STEP 6:

[0610] To a stirring solution of 80 (2.00 g, 3.706 mmol) in DMF (20 mL) at room temperature was added piperidine (2 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 81 was obtained as a yellow solid (1.10 g, 94%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 10: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C18H21FNO3+ [M + H] + 318.1500, found 318.1500.

[0611] STEP 7:

[0612] To a stirring solution of 81 (1.10 g, 3.466 mmol) and 27 (913 mg, 3.466 mmol) in toluene (30 mL) at room temperature was added PPTS (87 mg, 0.347 mmol) . The resulting mixture was heated to reflux and stirred overnight before it was cooled to room temperature and filtered. The filter cake was collected and stirred in toluene at reflux for 2 h before it was cooled and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 82 was obtained as a yellow solid (1.45 g, 77%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C31H30FN2O6+ [M + H] + 545.2082, found 545.2088.

[0613] STEP 8:

[0614] To a stirring solution of 82 (3.00 g, 5.509 mmol) in CH2Cl2 (40 mL) at room temperature was added TFA (20 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 83 was obtained as a yellow solid (2.20 g, 87%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: hexane = 20: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C24H24FN2O6+ [M + H] + 455.1613, found 455.1614.

[0615] STEP 9:

[0616] To a stirring solution of 83 (2.20 g, 4.841 mmol) and 29 (3.63 g, 29.046 mmol) in acetone (50 mL) at room temperature were added K2CO3 (2.01 g, 14.523 mmol) and KI (804 mg, 4.841 mmol) in sequence. The resulting mixture was heated to 60 ℃ and stirred for 20 h before it was cooled to room temperature and concentrated in vacuo directly. The intermediate 84 was obtained as a dark yellow solid (1.33 g, 55%) after flash column chromatography purification (silica gel, DCM: MeOH = 10: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C26H28FN2O7+ [M + H] + 499.1875, found 499.1875.

[0617] STEP 10:

[0618] To a stirring solution of 84 (1.00 g, 2.006 mmol) and 85 (1.53 g, 4.012 mmol) in DMF (30 mL) at room temperature was added p-TsOH·H2O (191 mg, 1.003 mmol) . The resulting mixture was heated to 60 ℃ and stirred for 2 h before it was cooled to room temperature and concentrated in vacuo directly. The intermediate 86 was obtained as a white solid (1.22 g, 74%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C45H46FN4O10+ [M + H] + 821.3192, found 821.3195.

[0619] STEP 11:

[0620] To a stirring solution of 86 (1.22 g, 1.486 mmol) in DMF (10 mL) at room temperature was added piperidine (1 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 87 was obtained as a yellow solid (823 mg, 92%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C30H36FN4O8+ [M + H] +599.2512, found 599.2513.

[0621] STEP 12:

[0622] To a stirring solution of 21 (1.77 g, 1.375 mmol) in DMF (30 mL) at room temperature was added HATU (523 mg, 1.375 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 86 (823 mg, 1.375 mmol) and DIPEA (533 mg, 4.124 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 87 was obtained as a dark yellow oil (2.57 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C93H133FN13O26+ [M + H] + 1866.9463, found 1866.9464.

[0623] STEP 13:

[0624] To a stirring solution of 87 (2.57 g, 1.375 mmol) in CH2Cl2 (30 mL) at room temperature was added TFA (15 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A018 was obtained as a yellow solid (880 mg, 38%over 2 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C81H109FN13O26+ [M + H] + 1698.7585, found 1698.7592.

[0625] Example 9: Synthesis of A019

[0626] STEP 1:

[0627] To a stirring solution of 78 (2.00 g, 3.800 mmol) in THF (30 mL) at 0 ℃ was added 88 (5.70 mL, 1.0 M in THF, 5.697 mmol) . The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for 6 h before it was quenched with NH4Cl (sat. aq., 20 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 89 was obtained as a yellow oil (1.46 g, 60%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 2: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C38H43FNO5Si+ [M + H] + 640.2889, found 640.2896.

[0628] STEP 2:

[0629] To a stirring solution of 89 (1.46 g, 2.282 mmol) and 27 (601 mg, 2.282 mmol) in toluene (30 mL) at room temperature was added PPTS (58 mg, 0.228 mmol) . The resulting mixture was heated to reflux and stirred overnight before it was cooled to room temperature and filtered. The filter cake was collected and stirred in toluene at reflux for 2 h before it was cooled and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 90 was obtained as a yellow solid (1.09 g, 74%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C36H42FN2O6Si+ [M + H] +645.2791, found 645.2793.

[0630] STEP 3:

[0631] To a stirring solution of 90 (1.09 g, 1.690 mmol) in THF (30 mL) at room temperature was added TBAF (2.54 mL, 1.0 M in THF, 2.536 mmol) . The resulting mixture was stirred at temperature and for 30 min before it was quenched with NH4Cl (sat. aq., 20 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 91 was obtained as a yellow solid (724 mg, 80%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 1: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C30H28FN2O6+ [M + H] + 531.1926, found 531.1934.

[0632] STEP 4:

[0633] To a stirring solution of 91 (724 mg, 1.365 mmol) in CH2Cl2 (10 mL) at room temperature were added Et3N (553 mg, 5.460 mmol) and Ac2O (279 mg, 2.730 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 h before it was quenched with NaHCO3 (sat. aq., 5 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with CH2Cl2 (10 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 92 was obtained as a yellow oil (655 mg, 84%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 1: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C32H30FN2O7+ [M + H] + 573.2032, found 573.2035.

[0634] STEP 5:

[0635] To a stirring solution of 92 (665 mg, 1.144 mmol) in CH2Cl2 (10 mL) at room temperature was added TFA (5 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 93 was obtained as a yellow solid (550 mg, 100%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: hexane = 20: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C25H24FN2O7+ [M + H] + 483.1562, found 483.1563.

[0636] STEP 6:

[0637] To a stirring solution of 84 (1.00 g, 5.230 mmol) and 94 (650 mg, 10.460 mmol) in THF (30 mL) at room temperature was added p-TsOH·H2O (498 mg, 2.615 mmol) . The resulting mixture was heated to 60 ℃ and stirred for 2 h before it was cooled to room temperature and concentrated in vacuo directly. The intermediate 95 was obtained as a colorless oil (1.20 g, 60%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 5: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C21H25N2O5+[M + H] + 385.1758, found 385.1765.

[0638] STEP 7:

[0639] To a stirring solution of 95 (439 mg, 1.144 mmol) in THF (10 mL) at 0 ℃ was added PPh3 (359 mg, 1.373 mmol) and DEAD (240 mg, 1.373 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 15 min before addition of 93 (550 mg, 1.144 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for further 1 h before it was with NaCl (sat. aq., 5 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (10 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 96 was obtained as a yellow oil (760 mg, 78%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C46H46FN4O11+ [M + H] + 849.3142, found 849.3144.

[0640] STEP 8:

[0641] To a stirring solution of 96 (760 mg, 0.895 mmol) in DMF (10 mL) at room temperature was added piperidine (1 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 97 was obtained as a yellow solid (400 mg, 71%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C31H36FN4O9+ [M + H] +627.2461, found 627.2461.

[0642] STEP 9:

[0643] To a stirring solution of 21 (820 mg, 0.638 mmol) in DMF (10 mL) at room temperature was added HATU (243 mg, 0.638 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 97 (400 mg, 0.638 mmol) and DIPEA (248 mg, 1.914 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 98 was obtained as a dark yellow oil (1.20 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C94H133FN13O27+ [M + H] + 1894.9412, found 1894.9418.

[0644] STEP 10:

[0645] To a stirring solution of 87 (1.20 g, 0.638 mmol) in CH2Cl2 (20 mL) at room temperature was added TFA (10 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A019 was obtained as a yellow solid (330 mg, 30%over 2 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C82H109FN13O27+ [M + H] + 1726.7534, found 1726.7534.

[0646] Example 10: Synthesis of A020

[0647] STEP 1:

[0648] To a stirring solution of 78 (5.00 g, 9.496 mmol) in THF (50 mL) at 0 ℃ was added MeMgBr (4.75 mL, 3.0 mol / L in Et2O, 14.243 mmol) . The resulting mixture was warmed to room temperature and stirred for 1 h before it was quenched with NH4Cl (sat. aq., 20 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 99 was obtained as a yellow solid (4.23 g, 93%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc =5: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C30H25FNO4+ [M + H] + 482.1762, found 482.1765.

[0649] STEP 2:

[0650] To a stirring solution of 99 (4.00 g, 8.307 mmol) and i-Pr2NH·HCl (3.97g, 41.535 mmol) and (HCHO) n (1.25 g, 41.535 mmol) in i-PrOH (100 mL) at room temperature was added conc. HCl (1.20 mL) . The resulting mixture was heated to reflux and stirred for 12 h before it was cooled to room temperature and quenched with MTBE (200 mL) . The resulting mixture was filtered and the filter cake was collected, stirred in refluxing MTBE (50 mL) for 2 h before it was cooled and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 100 was obtained as a yellow solid (2.50 g, 51%) . HRMS (ESI) : calcd for C34H34FN2O4+ [M + H] + 553.2497, found 553.2501.

[0651] STEP 3:

[0652] To a stirring solution of 100 (2.50 g, 4.244 mmol) in CH2Cl2 (50 mL) at 0 ℃ were added Et3N (1.72 g, 16.975 mmol) and MsCl (973 mg, 8.488 mmol) in sequence. The resulting mixture stirred at 0 ℃ for 1 h before it was quenched with NaHCO3 (sat. aq., 10 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with CH2Cl2 (10 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 101 was obtained as a yellow solid (2.65 g, 99%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc =4: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C35H36FN2O6S+ [M + H] + 631.2273, found 631.2276.

[0653] STEP 4:

[0654] To a stirring solution of 101 (2.65 g, 4.201 mmol) in DMF (30 mL) at room temperature was added piperidine (3 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 102 was obtained as a yellow solid (1.69 g, 98%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc =2: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C20H26FN2O4S+ [M + H] + 409.1592, found 409.1595.

[0655] STEP 5:

[0656] To a stirring solution of 102 (1.50 g, 3.672 mmol) and 27 (967 mg, 3.672 mmol) in toluene (30 mL) at room temperature was added PPTS (185 mg, 0.734 mmol) . The resulting mixture was heated to reflux and stirred overnight before it was cooled to room temperature and filtered. The filter cake was collected and stirred in refluxing toluene for 2 h before it was cooled and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 103 was obtained as a yellow solid (1.05 g, 45%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C33H35FN3O7S+ [M + H] +636.2174, found 636.2172.

[0657] STEP 6:

[0658] To a stirring solution of 103 (1.00 g, 1.573 mmol) in CH2Cl2 (20 mL) at room temperature was added TFA (10 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 104 was obtained as a yellow solid (858 mg, 100%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: hexane = 20: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C26H29FN3O7S+ [M + H] + 546.1705, found 546.1706.

[0659] STEP 7:

[0660] To a stirring solution of 95 (353 mg, 0.917 mmol) in THF (10 mL) at 0 ℃ was added PPh3 (289 mg, 1.100 mmol) and DEAD (192 mg, 1.100 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 15 min before addition of 104 (500 mg, 0.917 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for further 1 h before it was with NaCl (sat. aq., 5 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (10 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 105 was obtained as a yellow solid (433 mg, 52%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C47H51FN5O11S+ [M + H] + 912.3284, found 912.3285.

[0661] STEP 8:

[0662] To a stirring solution of 105 (433 mg, 0.475 mmol) in DMF (10 mL) at room temperature was added piperidine (1 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 106 was obtained as a yellow solid (300 mg, 92%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C32H41FN5O9S+ [M +H] + 690.2604, found 690.2609.

[0663] STEP 9:

[0664] To a stirring solution of 21 (466 mg, 0.362 mmol) in DMF (10 mL) at room temperature was added HATU (138 mg, 0.362 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 107 (250 mg, 0.362 mmol) and DIPEA (141 mg, 1.087 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 108 was obtained as a dark yellow oil (709 mg, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C95H138FN14O27S+ [M + H] + 1957.9555, found 1957.9561.

[0665] STEP 10:

[0666] To a stirring solution of 108 (709 mg, 0.362 mmol) in CH2Cl2 (3 mL) at room temperature was added TFA (1.5 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A020 was obtained as a yellow solid (250 mg, 39%over 2 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C83H114FN14O27S+ [M + H] + 1789.7677, found 1789.7686.

[0667] Example 11: Synthesis of A021

[0668] STEP 1～STEP 8:

[0669] Intermediate 108～114 and product A021 were prepared according to the procedures in A020.

[0670] A021: HRMS (ESI) : calcd for C82H113FN15O27S+ [M + H] + 1790.7630, found 1790.7638.

[0671] Example 12: Synthesis of A023

[0672] STEP 1:

[0673] To a stirring solution of 100 (5.00 g, 8.488 mmol) in CH2Cl2 (100 mL) at 0 ℃ were added Et3N (1.72 g, 16.975 mmol) and CbzCl (2.17 g, 12.731 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 2 h before it was quenched with NaHCO3 (sat. aq., 20 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with CH2Cl2 (20 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 115 was obtained as a yellow solid (5.80 g, 99%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc =5: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C42H40FN2O6+ [M + H] + 687.2865, found 687.2870.

[0674] STEP 2:

[0675] To a stirring solution of 115 (5.80 g, 8.445 mmol) in DMF (30 mL) at room temperature was added piperidine (3 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 116 was obtained as a yellow solid (3.90 g, 99%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc =2: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C27H30FN2O4+ [M + H] + 465.2184, found 465.2185.

[0676] STEP 3:

[0677] To a stirring solution of 116 (3.90 g, 8.395 mmol) and 27 (2.21 g, 8.395 mmol) in toluene (100 mL) at room temperature was added PPTS (422 mg, 1.679 mmol) . The resulting mixture was heated to reflux and stirred overnight before it was cooled to room temperature and filtered. The filter cake was collected and stirred in refluxing toluene for 2 h before it was cooled and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 117 was obtained as a yellow solid (4.17 g, 72%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C40H39FN3O7+ [M + H] +692.2767, found 692.2767.

[0678] STEP 4:

[0679] To a stirring solution of 117 (4.17 g, 6.08 mmol) in CH2Cl2 (50 mL) at room temperature was added TFA (25 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 118 was obtained as a yellow solid (3.50 g, 97%) after flash column chromatography purification (silica gel, CH2Cl2: hexane = 20: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C33H33FN3O7+ [M + H] + 602.2297, found 602.2298.

[0680] STEP 5:

[0681] To a stirring solution of 118 (3.50 g, 5.818 mmol) and 119 (4.85 g, 34.908 mmol) in acetone (50 mL) at room temperature were added K2CO3 (2.41 g, 17.44 mmol) and KI (966 mg, 5.818 mmol) in sequence. The resulting mixture was heated to 60 ℃ and stirred for 20 h before it was cooled to room temperature and concentrated in vacuo directly. The intermediate 120 was obtained as a dark yellow solid (3.20 g, 83%) after flash column chromatography purification (silica gel, DCM: MeOH = 10: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C36H39FN3O8+ [M + H] + 660.2716, found 660.2723.

[0682] STEP 6:

[0683] To a stirring solution of 121 (3.00 g, 4.547 mmol) in MeOH (30 mL) at room temperature was added Pd / C (3.00 g, 10%wt / wt) . The resulting mixture was stirred at room temperature under H2 atmosphere for 1 h before it was filtered through a pad of celite. The filtrate was collected and concentrated in vacuo. The intermediate 121 was obtained as a yellow oil (2.39 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C28H33FN3O6+ [M + H] + 526.2348, found 526.2348.

[0684] STEP 7:

[0685] To a stirring solution of 24 (5.00 g, 16.987 mmol) in MeCN (100 mL) at 0 ℃ were added DIPEA (3.29 g, 25.480 mmol) and 44 (4.11 g, 20.384 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 3 h before it was quenched with NaHCO3 (sat. aq., 20 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 122 was obtained as a yellow solid (6.33 g, 81%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 1: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C22H26N3O8+ [M + H] + 460.1714, found 460.1720.

[0686] STEP 8:

[0687] To a stirring solution of 121 (2.39 g, 4.547 mmol) in DMF (50 mL) at room temperature were added DIPEA (882 mg, 6.821 mmol) and 122 (2.51 g, 5.547 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 h before it was cooled to room temperature and concentrated in vacuo directly. The intermediate 123 was obtained as a dark yellow solid (3.45 g, 89%) after flash column chromatography purification (silica gel, DCM: MeOH = 20: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C44H53FN5O11+ [M + H] + 846.3720, found 846.3721.

[0688] STEP 9:

[0689] To a stirring solution of 123 (3.45 g, 4.078 mmol) in CH2Cl2 (40 mL) at room temperature was added TFA (20 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 124 was obtained as a yellow solid (3.50 g, 100%) after trituration with MTBE (100 mL) . HRMS (ESI) : calcd for C39H45FN5O9+ [M + H] + 746.3196, found 746.3196.

[0690] STEP 10:

[0691] To a stirring solution of 21 (5.24 g, 4.071 mmol) in DMF (100 mL) at room temperature was added HATU (1.55 g, 4.071 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 124 (3.50 g, 4.071 mmol) and DIPEA (1.58 g, 12.212 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 125 was obtained as a dark yellow oil (8.20 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C102H142FN14O27+ [M + H] + 2014.0147, found 2014.0152.

[0692] STEP 11:

[0693] To a stirring solution of 125 (8.20 g, 4.071 mmol) in CH2Cl2 (100 mL) at room temperature was added TFA (50 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A023 was obtained as a yellow solid (3.36 g, 45%over 2 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C89H116FN14O27+ [M +H] + 1831.8113, found 1831.8120.

[0694] Example 13: Synthesis of A022

[0695] STEP 1:

[0696] To a stirring solution of 126 (5.00 g, 25.616 mmol) and 27 (6.74 g, 25.616 mmol) in toluene (100 mL) at room temperature was added PPTS (3.22 g, 12.808 mmol) . The resulting mixture was heated to reflux and stirred overnight before it was cooled to room temperature and filtered. The filter cake was collected and stirred in refluxing toluene for 3 h before it was cooled and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 127 was obtained as a yellow solid (7.11 g, 66%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C23H20FN2O5+ [M + H] +423.1351, found 423.1355.

[0697] STEP 2:

[0698] To a stirring solution of 128 (10.00 g, 111.012 mmol) and 94 (84.91 g, 222.025 mmol) in THF (500 mL) at room temperature was added p-TsOH·H2O (10.56 g, 55.506 mmol) . The resulting mixture was heated to 60 ℃ and stirred for 2 h before it was cooled to room temperature and concentrated in vacuo directly. The intermediate 95 was obtained as a colorless oil (12.12 g, 24%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc = 5: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C22H25N2O6+ [M + H] + 413.1707, found 413.1713.

[0699] STEP 3:

[0700] To a stirring solution of 129 (1.95 g, 4.735 mmol) in THF (50 mL) at 0 ℃ was added PPh3 (1.49 g, 5.682 mmol) and DEAD (990 mg, 5.682 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 15 min before addition of 127 (2.00 g, 4.735 mmol) . The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for further 1 h before it was with NaCl (sat. aq., 20 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 130 was obtained as a yellow oil (1.45 g, 38%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C44H42FN4O10+ [M + H] + 805.2879, found 805.2880.

[0701] STEP 4:

[0702] To a stirring solution of 130 (1.45 g, 1.802 mmol) in DMF (20 mL) at room temperature was added piperidine (2 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 131 was obtained as a yellow solid (620 mg, 59%) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C29H32FN4O8+ [M + H] +583.2199, found 583.2204.

[0703] STEP 5:

[0704] To a stirring solution of 21 (1.37 g, 1.064 mmol) in DMF (20 mL) at room temperature was added HATU (405 mg, 1.064 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min before addition of 131 (620 mg, 1.064 mmol) and DIPEA (413 mg, 3.192 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The intermediate 132 was obtained as a dark yellow oil (1.97 g, 100%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C92H129FN13O26+ [M + H] + 1850.9150, found 1850.9151.

[0705] STEP 6:

[0706] To a stirring solution of 131 (1.97 g, 1.064 mmol) in CH2Cl2 (30 mL) at room temperature was added TFA (15 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The product A022 was obtained as a yellow solid (448 mg, 25%over 2 steps) after RP-HPLC purification and lyophilization. HRMS (ESI) : calcd for C80H105FN13O26+ [M + H] + 1682.7272, found 1682.7277.

[0707] Example 14: Synthesis of A026

[0708] STEP 1:

[0709] To a stirring solution of 99 (5.00 g, 10.384 mmol) and 133 (8.32 g, 51.919 mmol) and (HCHO) n (1.56 g, 51.919 mmol) in i-PrOH (120 mL) at room temperature was added conc. HCl (1.50 mL) . The resulting mixture was heated to reflux and stirred for 12 h before it was cooled to room temperature and quenched with MTBE (200 mL) . The resulting mixture was filtered and the filter cake was collected, stirred in refluxing MTBE (50 mL) for 2 h before it was cooled and filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 134 was obtained as a yellow solid (1.56 g, 22%) . HRMS (ESI) : calcd for C38H41FN3O6+ [M + H] + 654.2974, found 654.2975.

[0710] STEP 2:

[0711] To a stirring solution of 134 (1.56 g, 2.260 mmol) in CH2Cl2 (50 mL) at 0 ℃ were added Et3N (915 mg, 9.041 mmol) and MsCl (518 mg, 4.520 mmol) in sequence. The resulting mixture stirred at 0 ℃ for 1 h before it was quenched with NaHCO3 (sat. aq., 10 mL) . The layers were separated, and the aqueous layer was extracted with CH2Cl2 (10 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 135 was obtained as a yellow solid (1.11 g, 67%) after flash column chromatography purification (silica gel, hexane: EtOAc =2: 1) . HRMS (ESI) : calcd for C39H43FN3O8S+ [M + H] + 732.2749, found 732.2755.

[0712] STEP 3:

[0713] To a stirring solution of 135 (1.11 g, 1.517 mmol) in CH2Cl2 (40 mL) at room temperature was added TFA (20 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 h before it was concentrated in vacuo directly. The residue was dispersed with MTBE (100 mL) and stirred for 30 min before it was filtered. The filter cake was collected and dried in vacuo. The intermediate 136 was obtained as a yellow solid (1.12 g, 99%) and used without further purification. HRMS (ESI) : calcd for C34H35FN3O6S+ [M + H] + 632.2225, found 632.2228.

[0714] STEP 4:

[0715] To a stirring solution of 23 (341 mg, 1.802 mmol) in DMF (15 mL) at room temperature were added HATU (686 mg, 1.802 mmol) and DIPEA (583 mg, 4.506 mmol) in sequence. The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 min before addition of 136 (1.12 g, 1.502 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for further 1 h before it was quenched with NaHCO3 (sat. aq., 10 mL) . The mixture layers was extracted with CH2Cl2 (20 mL×3) . The combined organic layers were dried (Na2SO4) and concentrated in vacuo. The intermediate 137 was obtained as a yellow oil (1.02 mg, 85%) after flash co...

Claims

1.An anti-CD276 monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof, comprising three heavy chain complementarity determining regions CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, and three light chain complementarity determining regions CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, whereinCDR-H1 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 1, CDR-H2 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 2, CDR-H3 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 3, CDR-L1 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 4, CDR-L2 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 5, and CDR-L3 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 6; orCDR-H1 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 7, CDR-H2 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 8, CDR-H3 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 9, CDR-L1 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 10, CDR-L2 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 11, and CDR-L3 comprises an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 12.2.The monoclonal antibody or the antigen-binding fragment thereof according to claim 1, wherein the monoclonal antibody comprises a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 13 or SEQ ID NO: 15, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 13 or SEQ ID NO: 15, anda light chain variable region comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 14 or SEQ ID NO: 16, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 14 or SEQ ID NO: 16.3.The monoclonal antibody or the antigen-binding fragment thereof according to claim 1 or 2, wherein the monoclonal antibody comprises a heavy chain comprising an amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 19, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 19, anda light chain comprises amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 18 or SEQ ID NO: 20, or an amino acid sequence at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identical to the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 18 or SEQ ID NO: 20.4.The monoclonal antibody or the antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 1-3, wherein the monoclonal antibody is a humanized antibody.5.The monoclonal antibody or the antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 1-4, wherein the monoclonal antibody is an IgG antibody.6.An isolated nucleic acid encoding the monoclonal antibody or the antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 1-5.7.A vector comprising the nucleic acid according to claim 6.8.A host cell comprising the vector according to claim 7.9.An anti-CD276 antibody-drug conjugate comprising the monoclonal antibody or the antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 1-5 conjugated to a drug.10.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 9, wherein the drug is a cytotoxic agent.11.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 10, wherein the drug is a chemotherapeutic agent.12.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to any one of claims 9-11, wherein the monoclonal antibody or the antigen-binding fragment thereof is conjugated to the drug via a linker, and wherein the linker in the conjugate contains one or more DUPA groups and / or an affinity ligand group for broader and enhancement of targeted treatment of prostate cancer and other refractory diseases;wherein the DUPA group or the affinity ligand group has the following structure:wherein theis the connecting site that is linked to the linker in the conjugate.13.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to any one of claims 9-12, wherein the anti-CD276 antibody-drug conjugate has the following formula (I) , (II) , (III) and (IV) : wherein,D1 and D2 are a cytotoxic agent; mAb is the monoclonal antibody or the antigen-binding fragment thereof; n is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20, and these numbers may have a decimal;L1, L2, La1, La2, Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, and Ld6 are a linker, which are independently selected from O, C, CH, CH2, NH, S, N, NH-NH, N-N, N (R3) , N (R3) N (R3’ ) , C (=O) , C (=O) N, C (=O) NH, C (=O) N-N, C2-C8 of alkyl (alkylene) , heteroalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; or 1-8 carbon atoms of esters, ether, or amide; or 1～8 natural or unnatural amino acids described in the definition; or polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) pOR3, (OCH2CH2) p, (OCH2CH (CH3) ) pOR3, NH (CH2CH2O) pR3, NH (CH2CH (CH3) O) pR3, or N [ (CH2CH2O) pR3] [ (CH2CH2O) pR3’] , (OCH2CH2) pCOOR3, CH2CH2 (OCH2CH2) pCOR3, or CH2CH2 (OCH2CH2) pCOOR3, wherein p and p’ are independently an integer selected from 0 to about 100, or combination thereof; wherein R3 and R3’ are independently H, C (=O) H, C (=O) CH3, NH, C (=O) , C (=O) NH, C1-C8 of alkyl, absent; or combination above thereof; and one or several of L1, L2, La1, La2, Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, and Ld6 can be absent thereof;In addition, La1 and La2 are independently a peptide having 1～ 8 amino acids, which contain one or several lysines, glutamic acids, aspartic acidss, cysteine, glutamines, asparagines, tyrosines, and combination of these amino acids thereof, and these amino acids link A1, A2, A3, A4, A5 and A6 through Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, and Ld6 accordingly;E1 and E2 are a joint group that link two reactonable groups, Lv1 and Lv2, which preferably can react to a thiol, amino, phenol, ketone, aldehyde, alkyne, hydroxyl, or carboxylic acid group in an antibody to form a group of Lv1’ and Lv2’ respectively, E1 and E2 are independently selected from CH, CH2, CH-CH, NH, NHNH, N (R3) , N (R3) N (R3’ ) , N=N, N-N, P, P (=O) , S, Si, C2-C8 of alkyl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; a peptide containing1～4 units of aminoacids, preferably selected from aspatic acid, glutamic acid, arginine, histidine, lysine, serine, threonine, asparagine, glutamine, cysteine, selenocysteine, tyrosine, phenylalanine, glycine, proline, tryptophan, alanine; or one of the following structures:whereinis the site of linkage; X1, X2, X3, X4, X5, or X6, are independently selected from NH; NHNH; N (R3) ; N (R3) N (R3’ ) ; O; S; C1-C6 of alkyl; R3 and R3’ are H, C1-C6 of alkyl; In addition, E1 can be absent, thus La1 or / and La2 can directly link to Lv1’ or Lv2’;In addition, E1 can be absent, thus La1 or / and La2 can directly link to a group of Lv1’ or Lv2’;m1, m2, m3, m4, m5, m6, m7, m8, m9, m10, m11 and m12 are independently 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 and these numbers may have a decimal; in addition, m2, m3, m8, m9 and / or m10 can be 0, thus Ld2-A2, Ld3-A3, Ld5-A5, and / or Ld6-A6 can be absent;A1, A2, A3, A4, A5 and A6 are the affinity DUPA ligand, independently selected from:wherein Lv1’ and Lv2’ are a group that are resulted from reaction of Lv1 and Lv2 to an amino acid of an antibody or a cell-binding protein independently, Lv1’ and Lv2’ are independently or jointly having the following structures:whereinis a site that links a drug or a site of linker L1 or L2; “#” is a site that links a S (thiol) , O (phenol) , NH (amino) , CHO (aldehyde) , C (=O) (ketone) , C (O) (NH) (amide) and C (O) (OH) (carboxylate) of an antibody; wherein R1 and R2 are H, C1-C6 of alkyl or a peptide containing 1～4 units of aminoacids; X1’, X2’ and X are O, NH, S, CH2; the conneting bondin the middle of the two atoms means it can link either one of the two atoms, Ar is an aromatic group;14.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to any one of claims 9-13, wherein the drug is selected from: a tubulysin and its analogs, a maytansinoid and its analogs, a taxanoid (taxane) and its analogs, a CC-1065 and its analogs, a daunorubicin or doxorubicin and its analogs, an amatoxin and its analogs, a benzodiazepine dimer (e.g., dimers of pyrrolobenzodiazepine (PBD) , tomaymycin, anthramycin, indolinobenzodiazepines, imidazobenzothiadiazepines, or oxazolidinobenzo-diazepines) and their analogs, a calicheamicin and the enediyne antibiotic and their analogs, an actinomycin and its analogs, an azaserine and its analogs, a bleomycin and its analogs, an epirubicin and its analogs, a tamoxifen and its analogs, an idarubicin and its analogs, a dolastatin and its analogs, an auristatin (including monomethyl auristatin E (MMAE) , MMAF, auristatin PYE, auristatin TP, Auristatins 2-AQ, 6-AQ, EB (AEB) , and EFP (AEFP) ) and its analogs, a combretastatin, a duocarmycin and its analogs, a camptothecin, a geldanamycin and its analogs, a methotrexate and its analogs, a thiotepa and its analogs, a vindesine and its analogs, a vincristine and its analogs, a hemiasterlin and its analogs, a nazumamide and its analogs, a spliceostatin, a pladienolide, a microginin and its analogs, a radiosumin and its analogs, an alterobactin and its analogs, a microsclerodermin and its analogs, a theonellamide and its analogs, an esperamicin and its analogs, PNU-159682 and its analogs, a protein kinase inhibitor, a MEK inhibitor, a KSP inhibitor, a nicotinamide phosphoribosyl-transferase (NAMPT) inhibitor, an immunotoxin, a cell receptor agonist, a cell stimulating molecule or intracellular signaling molecule, one, two or more DNA, RNA, mRNA, small interfering RNA (siRNA) , microRNA (miRNA) , and PIWI interacting RNAs (piRNA) , and stereoisomers, isosteres, analogs, or derivatives thereof.15.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 is independently selected from: a tubulysin and its analogs having the following formula (IV’ ) : or a pharmaceutically acceptable salt, hydrates, or hydrated salt; or a polymorphic crystalline structure; or an optical isomer, racemate, diastereomer or enantiomer thereof,whereinis a linkage site that either one or two of them can link to L1 and / or L2 independently; when two oflink to both L1 and L2, R1 and R2, or Z2 and Z3 are preferably the dual linkage sites;wherein R1, R1’, R2, R3, and R4 are independently H, C1～C8 alkyl; C2～C8 heteroalkyl, or heterocyclic; C3～C8 aryl, Ar-alkyl, cycloalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, carbocyclic, or alkylcarbonyl; or R1R2, R1R3, R2R3, R3R4, or R5R6 form a 3～7 membered carbocyclic, cycloalkyl, heterocyclic, heterocycloalkyl, aromatic or heteroaromatic ring system; R1 and R2 can be independently absent when they link to L1 or L2 independently or simultaneously, Y1 is N or CH; Preferably R1, R1’, R2, R3, and R4 are independently H, C1～C8 alkyl or heteroalkyl and Y1 is N;wherein R5, R6, R8, R10 and R11 are independently H, or C1～C4 alkyl or heteroalkyl;wherein R7 is independently H, R14, -R14C (=O) X1R15; or -R14X1R15; X1 is O, S, S-S, NH, CH2 or NR14;wherein R9 is selected from H, OH, =O, -OR14, -OC (=O) R14, -OC (=O) NHR14, or -OC (=O) NR14R15; when R9 links L1 or L2, R9 is -O-, -OC (=O) NH-or -OC (=O) N (R14) -;wherein R11 is H, or C1～C8 alkyl or C3～C8 Ar-alkyl;wherein R12 is -COOH, -COSH, -CONH2, CONHNH2, CONHNHR15, -CONH (R15) , -COOR15, -R15COR16, -R15COOR16, -R15C (O) NH2, -R15C (O) NHR16, -COSR15, R15S (=O) 2R16, -R15P (=O) (OR17) 2, -R15OP (=O) (OR17) 2, -COOCH2OP (=O) (OR17) 2, -COX2SO2R17, -COOR15X2R16, tetrazole, imidazole, or triazole, where X2 is -O-, -S-, -NH-, -N (R15) -, -O-R15-, -S-R15-, CH2 or -NHR15-; when R12 links L1 or L2, R12 is -C (O) O-, -C (O) NH-, -C (=O) NHS (O) 2R15-or -C (=O) N (R15) -;Preferably R12 is is -COOH, -CONH2, CONHNH2, CONHNHR15, -CONH (R15) , or -COOR15;R13 and R14 are independently C1～C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 of alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl; Preferably R13 and R14 are independently C1～C8 alkyl;Z2 and Z3 are independently H, O, S, NH, N (R15) , NHNH, -OH, -SH, -NH2, NHNH2, -NH (R15) , -OR15, CO, -COX2, -COX2R16, R17, F, Cl, Br, I, SR16, NR16R17, N=NR16, N=R16, NO2, SOR16R17, SO2R16, SO3R16, OSO3R16, PR16R17, POR16R17, PO2R16R17, OP (O) (OR17) 2, OCH2OP (O) (OR17) 2, OC (O) R17, OC (O) OP (O) (OR17) 2, PO (OR16) (OR17) , OP (O) (OR17) OP (O) (OR17) 2, OC (O) NHR17; -O- (C4-C12 glycoside) , -N- (C4-C12 glycoside) ; C1～C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 of alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl, or 2-8 carbon atoms of esters, ether, or amide; or peptides containing 1-8 amino acids (NH (Aa) 1～8, or CO (Aa) 1～8 (which are respectively N-terminal or C-terminal 1 -8 the same or different amino acids) ) , or polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 0 to about 100, or combination of above groups thereof; X2 is O, S, S-S, NH, CH2, OH, SH, NH2, CHR15 or NR15;Preferably Z2 and Z3 are independently H, O, NH, NHNH, -OH, -NH2, NHNH2, -NH (R15) , -OR15, CO, -COX2, -COX2R16,R15, R16 and R17 are independently H, C1～C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 of alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl, alkylcarbonyl, or Na+, K+, Cs+, Li+, Ca2+, Mg+, Zn2+, N+ (R1) (R2) (R3) (R4) , HN+ (C2H5OH) 3 salt; Preferably R15, R16 and R17 are independently H, C1～C8 alkyl;Y1 and Y2 are independently N or CH; q is 0 or 1; when q=0, Y3 does not exist, Y4, Y5, Y6 and Y7 are independently CH, N, NH, O, S, or N (R1) , thus Y2, Y4, Y5, Y6 and Y7form a heteroaromatic ring of furan, pyrrole thiophene, thiazole, oxazole and imidazole, pyrazole, triazole, tetrazole, thiadiazole; when q=1, Y3, Y4, Y5, Y6 and Y7 are independently CH or N, thus Y2, Y3, Y4, Y5, Y6 and Y7 form aromatic ring of benzene, pyridine, pyridazine, pyrimidine, pyrazine, triazine, tetrazine, pentazine.16.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 15, wherein the tubulysin analog of formula (IV) has the following structures: or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;wherein R20 is H; C1-C8 of linear or branched alkyl or heteroalkyl; C2-C8 of alkylcarbonyl, carbonate (-C (O) OR17) , carbamate (-C (O) NR17R18) ; or 1-8 carbon atoms of carboxylate, esters, ether, or amide; or 1～8 amino acids; or polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 0 to about 100; or R20 is absent and the oxygen forms a ketone, or combination above groups thereof;R7 is independently H, R14, -R14C (=O) X1R15; or -R14X1R15; X1 is O, NH, CH2 or NR14;Z3 and Z3 are independently H, OH, NH2, O, NH, COOH, COO, C (O) , C (O) NH, C (O) NH2, R18, OCH2OP (O) (OR18) 2, OC (O) OP (O) (OR18) 2, OPO (OR18) 2, NHPO (OR18) 2, OP (O) (OR18) OP (O) (OR18) 2, OC (O) R18, OC (O) NHR18, OSO2 (OR18) , O- (C4-C12-glycoside) , carbonate (-C (O) OR17) , carbamate (-C (O) NR17R18) ; R17and R18 are independently H, linear or branched alkyl or heteroalkyl;R19 is H, OH, NH2, OSO2 (OR18) , XCH2OP (O) (OR18) 2, XPO (OR18) 2, XC (O) OP (O) (OR18) 2, XC (O) R18, XC (O) NHR18, C1～C8 alkyl or carboylate; or pharmaceutical salts;X is O, S, NH, NHNH, or CH2;wherein the linkage sites, in formula IV-01 ～ IV-79 are having the same indication according to claim 14, formula (IV’ ) .17.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from: calicheamicin (Ia) , Geldanamycins (I2-1, and I2-2) , maytansinoid (Ib) , cryptophycin (I3-1, I3-2, I3-3, I3-4, I3-5, I3-6, I3-7 and I3-8) , Combretastatins (CA-01, CA-02 and CA-03) , Taxanes (Id-01, Id-02, Id-03 and Id-04) , having the following formula: or an isotope of a chemical element, or a pharmaceutically acceptable salt, hydrates, or hydrated salt; or a polymorphic crystalline structure; or an optical isomer, racemate, diastereomer or enantiomer thereof,wherein X is O or NH; Ar and Ar’ are independently aryl or heteroaryl andis the connecting site linked to L1 or L2.18.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from: Camptothecin (CPT) having the following formula (Ic) : or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers;wherein R1, R2 and R4 are independently selected from H, F, Cl, Br, CN, NO2, C1～C8 alkyl; O-C1～C8 alkyl; NH-C1～C8 alkyl; C2-C8 of heteroalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; or C2-C8 of esters, ether, amide, carbonate, urea, or carbamate; R3 is H, OH, NH2, C1～C8 alkyl; O-C1～C8 alkyl; NH-C1～C8 alkyl; C2-C8 of heteroalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl, O-C2～C8 alkylamine, NH-C2～C8 alkylamine, O-C2～C8 alkylalcohol, NH-C2～C8 alkylalcohol; or C2～C8 (2-8 carbon atoms) of esters, ether, amide, carbonate, urea, or carbamate; or R1R2, R2R3 and R3R4 independently form a 5～7 membered carbocyclic, heterocyclic, heterocycloalkyl, aromatic or heteroaromatic ring system; is the site in the molecule that can be linked to L1 or L2.19.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from: Camptothecin (CPT) having the following formula:SN-38, Topotecan, Cositecan, analog, Lurtotecan,or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; whereinis the connecting site linked to L1 or L2;wherein P1 and R1 are independently H, F, Cl, Br, I, SO2R2, SO3H, CN, OH, NH2, COOH, C (O) NH2, OCH2OP (O) (OR18) 2, OC (O) OP (O) (OR18) 2, OPO (OR18) 2, NHPO (OR18) 2, OC (O) R18, OP (O) (OR18) OP (O) (OR18) 2, OC (O) NHR18, OC (O) N (C2H4) 2NCH3, OSO2 (OR18) , O- (C4-C12-glycoside) , OC (O) N (C2H4) 2CH2N (C2H4) 2CH3, O- (C1-C8 of linear or branched alkyl) , O- (C1-C8 of linear or branched alkyl) -OH, C1-C8 of linear or branched alkyl or heteroalkyl; C2-C8 of linear or branched alkenyl, alkynyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 linear or branched of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; carbonate (-C (O) OR17) , carbamate (-C (O) NR17R18) ;R2, R3 and R4 are independently H, C1-C8 of linear or branched alkyl, or heteroalkyl, C2-C8 of linear or branched ether, amine, ester, or amide; in addition, R2 and R3 can be joint together to form five or six member ring or cycloalkyl, cycloalkylamine, or cycloalkylamide, cyclohexylalkylamide; R17and R18 are independently H, linear or branched alkyl or heteroalkyl;X is NH, O, S, S (O2) , NHS (O2) , NHS (O2) NH, NHP (O) (OH) , N+ (R2) (R3) , NHC (O) NH, NHC (O) , NHC (O) O, N (CH2CH2) 2N, CON (CH2CH2) 2N, CON (CH2CH2) 2N+ (R2) (R3) , NHCH2, N (CH3) , OCH2, or CH2; X’ is O, NH, CH2, CH2NH, or CH2O.20.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, Anthracycline (Ie-01, Ie-02, Ie-03, Ie-04, Ie-05, Ie-06, Ie-07, Ie-08, Ie-09, Ie-10, Ie-11, Ie-12, Ie-13) ) , Vinca alkaloid (If-01, If-02, If-03, If-04, If-05, and If-06) , Eribulin (Eb01) , spliceostatin (Sp-01) and proteinase inhibitor (PI01, PI02 and PI03) having the following formula: or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; whereinis the connecting site that links to L1 or L2.21.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, Dolastatins and their peptidic analogs, having the following formula (Ih-01) , (Ih-02) , (Ih-03) , (Ih-04) , (Ih-05) , (Ih-06) , (Ih-07) , (Ih-08) , (Ih-09) , (Ih-10) , and (Ih-11) : or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, diastereomers or enantiomers;wherein R1, R2, R3, R4 and R5 are independently H; C1-C8 linear or branched alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, ester, ether, amide, amines, heterocycloalkyl, or acyloxylamines; or peptides containing 1-8 aminoacids, or polyethyleneoxy unit having formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 1 to about 100, the two Rs: R1R2, R2R3, R1R3 or R3R4 together can form 3～8 member cyclic ring of alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, or alkylcycloalkyl group; Y1 and Y2 are independently O, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R2) , C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1 when linked to the connecting site (that links to L1 and / or L2 independently) ; or OH, NH2, NHNH2, NHR5, SH, C (O) OH, C (O) NH2, OC (O) NH2, OC (O) OH, NHC (O) NH2, NHC (O) SH, OC (O) NH (R1) , N (R1) C (O) NH (R2) , C (O) NHNHC (O) OH and C (O) NHR1 when not linked to the connecting siteR12 is OH, NH2, NHR1, NHNH2, NHNHCOOH, O-R1-COOH, NH-R1-COOH, NH- (Aa) nCOOH, O (CH2CH2O) pCH2CH2OH, O (CH2CH2O) pCH2CH2NH2, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NH2, NR1R1’, NHOH, NHOR1, O (CH2CH2O) pCH2CH2COOH, NH (CH2CH2O) pCH2CH2COOH, NH-Ar-COOH, NH-Ar-NH2, O (CH2CH2O) pCH2CH2NH-SO3H, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O (CH2CH2O) pCH2-CH2NHPO3H2, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, R1-OPO3H2, O (CH2CH2O) pCH2CH2OPO3H2, OR1-NHPO3H2, NH-R1-NHPO3H2, NH (CH2CH2NH) pCH2-CH2NH2, NH (CH2CH2S) pCH2CH2NH2, NH (CH2CH2NH) pCH2CH2OH, NH (CH2CH2S) pCH2-CH2OH, NH-R1-NH2, or NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHPO3H2, wherein Aa is 1-8 the same or different aminoacids; p is 1 -100; R1, R2, R3, R4, R5, R5’, Z1, Z2, and n are defined the same above.Preferably R1, R2, R3, R4, R5, R5’ are independently H, C1-C8 alkyl, alkylcarbonyl; Y1 and Y2 are independently O, NH, NHNH, NR5, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, C (O) NHNHC (O) , C (O) NR1 OH, NH2, NHNH2, NHR5, C (O) OH, C (O) NH2, OC (O) NH2, OC (O) OH, NHC (O) NH2.22.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, Hemiasterlin and their peptidic analogs, having the following formula (Hs-01 and Hs-02) : wherein wherein R1, R2, R3, R4 and R5 are independently H; C1-C8 linear or branched alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, ester, ether, amide, amines, heterocycloalkyl, or acyloxylamines; or peptides containing 1-8 aminoacids, or polyethyleneoxy unit having formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 1 to about 100; In addition, R2R3 can form 3～8 member cyclic ring of alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, or alkylcycloalkyl group;is a linkage site that links to L1 and / or L2 independently.23.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, an Inhibitor of nicotinamide phosphoribosyltransferases (NAMPT) , having the following formula NP01, NP02, NP03, NP04, NP05, NP06, NP07, NP08, and NP09: or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; whereinis the same above; X5 is F, Cl, Br, I, OH, OR1, R1, OPO3H2, OSO3H, NHR1, OCOR1, NHCOR1; R1 is H, C1～C8 alkyl, CH3CO, NH2, NHCH3; is a linkage site that links to L1 and / or L2 independently.24.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, a benzodiazepine dimer, having the following formula PB01 ～ PB30: or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; wherein X1, X2, Y1, Y2, Z1, Z2, and n are defined the same above; Preferably X1, X2, Y1 and Y2 are independently O, N, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R1) , CH, C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1;R1, R2, R3, R1’, R2’, and R3’ are independently H; F; Cl; =O; =S; =CH2; =CH-R1, OH; SH; C1-C8 linear or branched alkyl, aryl, alkenyl, heteroaryl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, ester (COOR5 or –OC (O) R5) , ether (OR1) , amide (CONR1) , carbamate (OCONR1) , amines (NHR1, NR1R2) , heterocycloalkyl, or acyloxylamines (-C (O) NHOH, -ONHC (O) R1) ; or peptides containing 1-6 natural or unnatural aminoacids, or polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 1 to about 100, the two Rs: R1R2, R2R3, R1’R2’, or R2’R3’, can independently form 3～8-member cyclic ring of C2～C10 alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalkyl, or alkylcycloalkyl group;X3, X, X’ and Y3 are independently N, O, S, NH, CH2 or CR1; or one of X3, X, X’ and Y3 can be absent, thus the left X3, X, X’ or Y3 can be O, S, NH;wherein R1, R2, R4, and R5, are C1-C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 aminoalkylcarbonyl, alkylaryloxyl, alkylarylamino, alkylarylthiol; or 1-6 the same or different sequence of aminao acid / peptides (Aa) r, r =1, 2, 3, 4, 5, or 6;wherein R12 and R12’ are independently H, OH, NH2, NH (CH3) , NHNH2, COOH, SH, OZ3, SZ3, F, Cl, or C1-C8 linear or branched alkyl, C3-C8 aryl, heteroaryl, heteroalkyl, alkylcycloalkyl, acyloxylamines;X6 is CH, N, P (O) NH, P (O) NR1, CHC (O) NH, C3-C8 aryl, heteroaryl, alkylcycloalkyl, acyloxyl, alkylaryl, alkylaryloxyl, alkylarylamino, or an Aa (amino acid, it is preferably selected from Lys, Phe, Asp, Glu, Ser, Thr, His, Cys, Tyr, Trp, Gln, Asn, Arg) ;Y21 is Ms (mesyl) , Ts (tosyl) or Tf (trifyl) , SO3H, P (O) (OH) 2, CH2 (O) P (O) (OH) 2, glycoside;R31 is H, C1 -C8 alkyl or Ar, CF3;is a linkage site that links to L1 and / or L2 independently.25.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, a doucarmycin analog, having the following formula CC01, CC02, CC03, CC04, CC05, CC06 and CC07: or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers;wherein X1, X2, Y1 and Y2 are independently O, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R2) , C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1 when linked to the connecting siteor OH, NH2, NHNH2, NHR1, SH, C (O) OH, C (O) NH2, OC (O) NH2, OC (O) OH, NHC (O) NH2, NHC (O) SH, OC (O) NH (R1) , N (R1) C (O) NH (R2) , C (O) NHNHC (O) OH and C (O) NHR1 when not linked to the connecting siteZ3 is H, PO (OM1) (OM2) , SO3M1, CH2PO (OM1) (OM2) , CH3N (CH2CH2) 2NC (O) -, O (CH2CH2) 2NC (O) -, R1, or glycoside; wherein R1, R2, and R3, are C1-C8 alkyl, heteroalkyl; C2-C8 aminoalkylcarbonyl; or 1-4 the same or different sequence of aminao acid / peptides (Aa) r, r =1, 2, 3, 4; M1, and M2 are pharmaceutical salt selected from Na, K, Ca, NH4, NH3CH2CH2OH or Zn;26.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, an amatoxin, having the following formula Am01, Am02, and Am03: or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers;wherein X1, and Y1 are independently O, NH, NHNH, NR1, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R1) , CH2, CHNH, CH2O, C (O) NH-NHC (O) and C (O) NR1; R7, R8, and R9 are independently H, OH, OR1, NH2, NHR1, C1-C6 alkyl, or absent; Y2 is O, O2, NR1, NH, or absent; R10 is CH2, O, NH, NR1, NHC (O) , NHC (O) NH, NHC (O) O, OC (O) O, C (O) , OC (O) , OC (O) (NR1) , (NR1) C (O) (NR1) , C (O) R1 or absent; R11 is OH, NH2, NHR1, NHNH2, NHNHCOOH, O-R1-COOH, NH-R1-COOH, NH- (Aa) rCOOH, O (CH2CH2O) pCH2CH2OH, O (CH2CH2O) pCH2CH2NH2, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NH2, NR1R2, O (CH2CH2O) pCH2CH2-COOH, NH (CH2CH2O) pCH2CH2COOH, NH-Ar-COOH, NH-Ar-NH2, O (CH2CH2O) pCH2CH2-NHSO3H, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O (CH2CH2O) p-CH2CH2NHPO3H2, NH (CH2CH2O) pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, R1-OPO3H2, O (CH2CH2O) pCH2CH2OPO3H2, OR1-NHPO3H2, NH-R1-NHPO3H2, or NH (CH2CH2O) pCH2-CH2NHPO3H2, wherein (Aa) r is r=1, 2, 3 or 4 aminoacids; n and m1 are independently 1～20; p is 1 -100; R1, R2 and Ar, are the same defined throughout the application; and R1 and R2 are preferably here H, C1～C8 alkyl; is a linkage site that links to L1 and / or L2 independently.27.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, a protein kinase inhibitor, having the following formula PK01 ～ PK40: or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers;wherein Z5 and Z5’ are independently selected from O, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R2) , C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1; is a linkage site that links to L1 and / or L2 independently.28.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, an immunotoxin, selected from from Diphtheria toxin (DT) , Cholera toxin (CT) , Trichosanthin (TCS) , Dianthin, Pseudomonas exotoxin A (ETA) , Erythrogenic toxins, Diphtheria toxin, AB toxins, Type III exotoxins, proaerolysin, and topsalysin.29.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, one, two or more DNA, RNA, mRNA, small interfering RNA (siRNA) , microRNA (miRNA) , and PIWI interacting RNAs (piRNA) , having the following formula SI01 and SI02: whereinis the site to link the side chain linker of the present patent; is single or double strands of DNA, RNA, mRNA, siRNA, miRNA, or piRNA; X1, and Y are independently O, NH, NHNH, NR1, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R1) , CH2, C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1, is a linkage site.30.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from a MEK inhibitor having the following formula: or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; wherein Z5 is selected from O, NH, NHNH, NR5, S, C (O) O, C (O) NH, OC (O) NH, OC (O) O, NHC (O) O, NHC (O) NH, NHC (O) S, OC (O) N (R1) , N (R1) C (O) N (R2) , C (O) NHNHC (O) and C (O) NR1, is a linkage site.31.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein D1 and D2 are independently selected from, a Poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) inhibitor, having the following formula: or an isotope of one or more chemical elements, or pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrated salts; or the polymorphic crystalline structures of these compounds; or the optical isomers, racemates, diastereomers or enantiomers; whereinis the linkage site.32.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein L1, L2, La1, La2, Lb1, Lb2, Lc1 and Lc2independently contain:(a) . a self-immolative linker component having one of the following structures:wherein the (*) atom is the point of attachment of additional spacer or releasable linker units, or the cytotoxic agent, and / or the antibody; X1, Y1, Z2 and Z3 are independently NH, O, or S; Z1 is independently H, NH, O or S; v is 0 or 1; U1 is independently H, OH, C1～C6 alkyl, (OCH2CH2) nF, Cl, Br, I, OR5, SR5, NR5R5’, N=NR5, N=R5, NR5R5’, NO2, SOR5R5’, SO2R5, SO3R5, OSO3R5, PR5R5’, POR5R5’, PO2R5R5’, OPO (OR5) (OR5’) , or OCH2PO (OR5 (OR5’) wherein R5 and R5’ are as defined above; preferably R5 and R5’ are independently selected from H, C1～C8 alkyl; C2～C8 alkenyl, alkynyl, heteroalkyl; C3～C8 aryl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heterocycloalkyl, heteroaralkyl, alkylcarbonyl; or pharmaceutical cation salts;(b) . a non-self-immolative linker component having one of the following structures: * (CH2CH2O) r＊wherein the (*) atom is the point of attachment of additional spacer R1 or releasable linkers, the cytotoxic agents, and / or the binding molecules; X1, Y1, U1, R1, R5, R5’ are defined as above; r is 0～100; m and n are 0～6 independently;(c) . one or more linker components of 6-maleimidocaproyl ( “MC” ) , maleimidopropanoyl ( “MP” ) , valine-citrulline ( “val-cit” or “vc” ) , alanine-phenylalanine ( “ala-phe” or “af” ) , p-amino-benzyloxycarbonyl ( “PAB” ) , 4-thiopentanoate ( “SPP” ) , 4- (N-maleimidomethyl) -cyclohexane-1 carboxylate ( “MCC” ) , (4-acetyl) amino-benzoate ( “SIAB” ) , 4-thio-butyrate (SPDB) , 4-thio-2-hydroxysulfonyl-butyrate (2-Sulfo-SPDB) , or natural or unnatural peptides having 1～8 natural or unnatural amino acid unites, wherein lysine, glutamic acid, aspartic acid, cysteine, or tyrosine may contain a side chain polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) pOR3, (OCH2CH (CH3) ) pOR3, NH (CH2CH2O) pR3, C (O) (CH2CH2O) pR3, C (O) (CH2CH2OCH2CH) pR3, NH (CH2CH (CH3) O) pR3, C (O) (CH2OCH2CH) pR3, N [ (CH2CH2O) pR3] [ (CH2CH2O) p’R3’] , (OCH2CH2) pCOOR3, or CH2CH2 (OCH2CH2) pCOOR3, NH (CH2CH2O) pCH2CH2R3, wherein p and p’ are independently an integer selected from 0 to about 100, or combination thereof; wherein R3 and R3’ are independently H, OH, NH2, N (CH2) 2, N (C2H5) 2, N (C3H7) , C (=O) H, C (=O) CH3, C1-C8 of alkyl, NH (C4～C7 glycoside) or NH (C4～C7 glycoside) 2; or combination above thereof;(d) . one or several of the following structure units:or a combination above thereof; whereinis the site of linkage; X2, X3, X4, X5, or X6, are independently selected from NH; NHNH; N (R12) ; N (R12) N (R12’ ) ; O; S; C1-C6 of alkyl; C2-C6 of heteroalkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; CH2OR12, CH2SR12, CH2NHR12, or 1～8 amino acids; wherein R12 and R12’ are independently H; C1-C8 of alkyl; C2-C8 of hetero-alkyl, alkylcycloalkyl, heterocycloalkyl; C3-C8 of aryl, Ar-alkyl, heterocyclic, carbocyclic, cycloalkyl, heteroalkylcycloalkyl, alkylcarbonyl, heteroaryl; or 1-8 carbon atoms of esters, ether, or amide; or polyethyleneoxy unit of formula (OCH2CH2) p or (OCH2CH (CH3) ) p, wherein p is an integer from 0 to about 100.33.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein the structure of  in formula (I) is further having the structure of formula (Ia) ;wherein the structure ofin formula (II) is further having the structure of formula (Ib) or (Ic) ;wherein the structure ofin formula (III) is further having the structure of formula (Id) , (Ie) , (If) or (Ig) ,or whereinin formula (IV) is further having the structure of formula (Ia) ,wherein said (Ia) , (Ib) , (Ic) , (Id) , (Ie) , (If) and (Ig) are illustrated as following structures:Whereinis a site that links a drug; “#” is a site that links a S (thiol) , O (phenol) , NH (amino) , CHO (aldehyde) , C (=O) (ketone) , C (O) (NH) (amide) and C (O) (OH) (carboxylate) of an antibody; Aa is L-or D-natural or unnatural amino acids; “@” is a site that links Lc1 or Lc2 described in the formula (I) , (II) and (III) in Claim 1;R1 is H, C1-C8 alkyl, OH, CH2OH, CH2CH2OH, NH2, SH, SCH3, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH2CH2CH2CH2NH2, C6H5, CH2C6H5, CH2C6H4OH, CH (OH) CH3, CH2C (O) NH2, CH2CH2C (O) NH2, CH2CH2CH2NHC (=NH) NH2;r is 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8; when r is not 0, (Aa) r is the same or different amino acids or peptide units; when r=0, (Aa) r is absent;m1 = 1 –18 (0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ...., 18) ; m2 = 1-100 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ...., 100) ; m3 or m5= 1-8 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8) ; m4 = 0-8 (0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8) ;Y7 is NH, OCH2NH, NHC (=O) , NHNH, C (=O) NH, N (R1) , SO2, P (O) (OH) , NHS (O) 2, NHS (O) 2NH, NHS (O) 2NHC (O) , NHS (O) 2NHC (O) O, NHS (O) 2NHC (O) NH, NHP (O) (OH) , NHP (O) (OH) NH, OP (O) (OH) O, NHP (O) (OH) O, OP (O) (OH) NH, S, O, OP (O) (OH) OP (O) (OH) NH, NHP (O) (OH) OP (O) (OH) NH, NHP (O) (OH) OP (O) (OH) O, OCH2CH2O, OCH2CH2NH, N (CH2CH2) 2N, NHC6H4NH, CH2;Y8 is NHC (=O) , NHS (O2) , NH (SO) , NHS (O2) NH, NHP (O) (OH) NH, C (O) NH, OC (O) NH, NHC (O) NH, C (O) , N, NH, CH2, or CH;Lv1’ and Lv2’ are independently or jointly selected from:whereinis a connecting site that links to the linker component; “#” is the site as Lv1’ and Lv2’ indicated in the formulas that links a S (thiol) , O (phenol) , NH (amino) , CHO (aldehyde) , C (=O) (ketone) , C (O) (NH) (amide) and C (O) (OH) (carboxylate) of an antibody; wherein R1, m3, X1’ and X2’ are described above; X is O, NH, S, CH2; the conneting bondin the middle of the two atoms means it can link either one of the two atoms; Ar is an aromatic group; preferably R1 is H, CH2, C2-C8 of alkyl, ester, amide, ketone, alkylacid, alkylalcohol, or alkylamine.34.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein the core linker structure (L1”) contains the affinity ligand in formula (I) , wherein (L1”) , is further selected from Formula (Ia’) :wherein Aa is L-or D-natural or unnatural amino acids; A1 is the affinity ligand defined the same in Claim 1;R1 is H, C1-C8 alkyl, OH, CH2OH, CH2CH2OH, NH2, SH, SCH3, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH2CH2CH2CH2NH2, C6H5, CH2C6H5, CH2C6H4OH, CH (OH) CH3, CH2C (O) NH2, CH2CH2C (O) NH2, CH2CH2CH2NHC (=NH) NH2;r is 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8; when r is not 0, (Aa) r is the same or different amino acids or peptide units; when r=0, (Aa) r is absent;m1 = 1 –18 (0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ...., 18) ; m2 = 1-100 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ...., 100) ; m3 or m5= 1-8 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8) ; m4 = 0-8 (0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8) ;Y7 is NH, OCH2NH, NHC (=O) , NHNH, C (=O) NH, N (R1) , SO2, P (O) (OH) , NHS (O) 2, NHS (O) 2NH, NHS (O) 2NHC (O) , NHS (O) 2NHC (O) O, NHS (O) 2NHC (O) NH, NHP (O) (OH) , NHP (O) (OH) NH, OP (O) (OH) O, NHP (O) (OH) O, OP (O) (OH) NH, S, O, OP (O) (OH) OP (O) (OH) NH, NHP (O) (OH) OP (O) (OH) NH, NHP (O) (OH) OP (O) (OH) O, OCH2CH2O, OCH2CH2NH, N (CH2CH2) 2N, NHC6H4NH, CH2;Y8 is NHC (=O) , NH, O, NHS (O2) , NH (SO) , NHS (O2) NH, NHP (O) (OH) NH, C (O) O, C (O) , OC (O) NH, C (O) NH, or Ar;R9 is (O=) CR1, (O=) CNHR1, NHC (=O) , NH, O, NHS (O2) , NH (SO) , NHS (O2) NH, NHP (O) (OH) NH or C (O) NH, R1 (COCH2NH) m4H, R1 (Aa) r, (Aa) r, C (O) , Ar orwherein R3 is H, C1-C8 alkyl, ester, amide, Ar, ketone, alkyl acid, alkyl alcohol, alkyl amine, CH2C6H5, CH2C6H4OH, CH (OH) CH3, CH2C (O) NH2, CH2CH2C (O) NH2, CH2CH2CH2NHC (=NH) NH2; R1 is defined above.35.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein the core linker structure (called L1” and L2” fused jointly) has an affinity ligand in Formula (III) :(L1” and L2” fused jointly) ,which is further selected from the following formula (Ib) and (Ic) :wherein R1, Y7, Y8, R9, A1, Aa, r, m1, m2, m4, and m5 are defined the same in Claim 37 or 38.36.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein the antibody drug conjugate has a branch affinity ligand having the following structures: wherein mAb is the monoclonal antibody or the antigen-binding fragment thereof; n and n1 are 1 ～30 independently, preferably 1～20, more preferably 2～8 (2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, and these number can have decimals) independently.37.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 13, wherein the conjugates of Formula (I) , (II) , (III) and (IV) are prepared readily via conjugation reaction of the antibody with a compound having the following Formula (V) , (VI) and (VII) respectively: Or the conjugate of Formula (IV) is prepared through sequential conjugation reaction of Formula (V) and Formula (V’ ) to an antibody:Wherein D1, D2, L1, L2, La1, La2, Lb1, Lb2, Lc1, Lc2, Ld1, Ld2, Ld3, Ld4, Ld5, Ld6, A1, A2, A3, A4, A5, A6, E1, m1, m2, m3, m4, m5, m6, m7, m8, m9, m10, m11, and m12 are defined the same in the Claim 1; Lv1 and Lv2 are a reactive group and are independently or fused jointly selected from:Aryl-palladium complex, wherein X1’ and X2’ are independently F, Cl, Br, I, OTf, OMs, OC6H4 (NO2) , OC6H3 (NO2) 2, OC6F5, OC6HF4, or Lv3; X2 is O, NH, N (R1) , or CH2; R3 and R5 are independently H, R1, aromatic, heteroaromatic, or aromatic group wherein one or several H atoms are replaced independently by -R1, -halogen, -OR1, -SR1, -NR1R2, -NO2, -S (O) R1, -S (O) 2R1, or -COOR1; Lv3 and Lv3’ are independently a leaving group selected from F, Cl, Br, I, nitrophenol; N-hydroxysuccinimide (NHS) ; phenol; benzenethiol, dinitrophenol; pentafluorophenol; tetrafluorophenol; difluorophenol; monofluorophenol; pentachlorophenol; triflate; imidazole; dichlorophenol; tetrachlorophenol; 1-hydroxybenzotriazole; tosylate; mesylate; 2-ethyl-5-phenylisoxazolium-3′-sulfonate, anhydrides formed its self, or formed with the other anhydride, e.g. acetyl anhydride, formyl anhydride; or an intermediate molecule generated with a condensation reagent for peptide coupling reactions or for Mitsunobu reactions;38.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 37, wherein in Formula (VI) and (VII) , the joint structure of are accordingly selected from: wherein Lv3, Lv3’, X1’ and X2’ are described above in Claim 36; the connecting bondin the middle of the two atoms means it can link either one of the two atoms.39.The anti-CD276 antibody-drug conjugate according to claim 37, wherein the compound is represented as the following structures: 40.A pharmaceutical composition, comprising the monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 1-5, or the antibody-drug conjugate according to any one of claims 9-39, and a pharmaceutically acceptable excipient.41.The pharmaceutical composition according to claim 40, wherein the pharmaceutical composition has in vitro, in vivo or ex vivo cell killing activity.42.The pharmaceutical composition according to claim 40, wherein the pharmaceutical composition is administered concurrently with a chemotherapeutic agent, a radiation therapy, an immunotherapy agent, an autoimmune disorder agent, an anti-infectious agent or the other conjugates for use as a synergistical drug in treatment or prevention of a cancer.43.The pharmaceutical composition according to claim 42, wherein the synergistical drug is selected from one or several of the following drugs: Abatacept, Abiraterone acetate, Abraxane, Acetaminophen / hydrocodone, Acalabrutinib, aducanumab, Adalimumab, ADXS31-142, ADXS-HER2, Afatinib dimaleate, Aldesleukin, Alectinib, Alemtuzumab, Alitretinoin, ado-trastuzumab emtansine, Amphetamine / dextroamphetamine, Anastrozole, Aripiprazole, anthracyclines, Aripiprazole, Atazanavir, Atezolizumab, Atorvastatin, Avelumab, Axicabtagene ciloleucel, Axitinib, Belinostat, BCG Live, Bevacizumab, Bexarotene, Blinatumomab, Bortezomib, Bosutinib, Brentuximab vedotin, Brigatinib, Budesonide, Budesonide / formoterol, Buprenorphine, Cabazitaxel, Cabozantinib, Capmatinib, Capecitabine, Carfilzomib, chimeric antigen receptor-engineered T (CAR-T) cells, Celecoxib, Ceritinib, Cetuximab, Chidamide, Ciclosporin, Cinacalcet, Crizotinib, Cobimetinib, Cosentyx, Crizotinib, CTL019, Dabigatran, Dabrafenib, Dacarbazine, Daclizumab, Dacomotinib, Daptomycin, Daratumumab, Darbepoetin alfa, Darunavir, Dasatinib, Denileukin diftitox, Denosumab, Depakote, Dexlansoprazole, Dexmethylphenidate, Dexamethasone, Dinutuximab, Doxycycline, Duloxetine, Duvelisib, Durvalumab, Elotuzumab, Emtricitabine / Rilpivirine / Tenofovir, Disoproxil fumarate, Emtricitbine / tenofovir / efavirenz, Enoxaparin, Ensartinib, Enzalutamide, Epoetin alfa, erlotinib, Esomeprazole, Eszopiclone, Etanercept, Everolimus, Exemestane, Everolimus, Exenatide ER, Ezetimibe, Ezetimibe / simvastatin, Fenofibrate, Filgrastim, Fingolimod, Fluticasone propionate, Fluticasone / salmeterol, Fulvestrant, Gazyva, Gefitinib, Glatiramer, Goserelin acetate, Icotinib, Imatinib, Ibritumomab tiuxetan, Ibrutinib, Idelalisib, Ifosfamide, Infliximab, Imiquimod, ImmuCyst, Immuno BCG, Iniparib, Insulin aspart, Insulin detemir, Insulin glargine, Insulin lispro, Interferon alfa, Interferon alfa-1b, Interferon alfa-2a, Interferon alfa-2b, Interferon beta, Interferon beta 1a, Interferon beta 1b, Interferon gamma-1a, Iapatinib, Ipilimumab, Ipratropium bromide / salbutamol, Ixazomib, Kanuma, Lanreotide acetate, Lenalidomide, Lenaliomide, Lenvatinib mesylate, Letrozole, Levothyroxine, Levothyroxine, Lidocaine, Linezolid, Liraglutide, Lisdexamfetamine, LN-144, Lorlatinib, Memantine, Methylphenidate, Metoprolol, Mekinist, Mericitabine / Rilpivirine / Tenofovir, Modafinil, Mometasone, Mycidac-C, Necitumumab, neratinib, Nilotinib, Niraparib, Nivolumab, Ofatumumab, Obinutuzumab, Olaparib, Olmesartan, Olmesartan / hydrochlorothiazide, Omalizumab, Omega-3 fatty acid ethyl esters, Oncorine, Oseltamivir, Osimertinib, Oxycodone, Palbociclib, Palivizumab, Panitumumab, Panobinostat, Pazopanib, Pembrolizumab, PD-1 antibody, PD-L1 antibody, PD-1 / VEGR antibody, PD-L1 / VEGR antibody, Pemetrexed, Pertuzumab, Pneumococcal conjugate vaccine, Pomalidomide, Poziotinib, Pregabalin, ProscaVax, Propranolol, Quetiapine, Rabeprazole, Radium 223 chloride, Raloxifene, Raltegravir, Ramucirumab, Ranibizumab, Regorafenib, Rituximab, Rivaroxaban, Romidepsin, Rosuvastatin, Ruxolitinib phosphate, Salbutamol, Savolitinib, Semaglutide, Sevelamer, Sildenafil, Siltuximab, Sipuleucel-T, Sitagliptin, Sitagliptin / metformin, Solifenacin, Solanezumab, Sonidegib, Sorafenib, Sunitinib, Tacrolimus, Tacrimus, Tadalafil, Tamoxifen, Tafinlar, Talimogene laherparepvec, Talazoparib, Telaprevir, Talazoparib, Temozolomide, Temsirolimus, Tenofovir / emtricitabine, Tenofovir disoproxil fumarate, Testosterone gel, Thalidomide, TICE BCG, Tiotropium bromide, Tisagenlecleucel, Toremifene, Trametinib, Trastuzumab, Trastuzumab deruxtecan, Trabectedin (ecteinascidin 743) , Trametinib, Tremelimumab, Trifluridine / tipiracil, Tretinoin, Uro-BCG, Ustekinumab, Valsartan, Veliparib, Vandetanib, Vemurafenib, Venetoclax, Vorinostat, Ziv-aflibercept, Zostavax, and their analogs, derivatives, pharmaceutically acceptable salts, carriers, diluents or excipients thereof or a combination above thereof.44.Use of the monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 1-5, or the antibody-drug conjugate according to any one of claims 9-39, in the preparation of a medicament for treating a disease related to abnormal expression of CD276.45.The use according to claim 44, wherein the disease is cancer selected from the group consisting of: glioblastoma multiforme, diffuse midline glioma, high-grade glioma, medulloblastoma, atypical teratoid / rhabdoid tumor, ependymoma osteosarcoma, rhabdomyosarcoma, neuroblastoma, Ewing sarcoma, Wilms tumor, adrenocortical cancer, desmoplastic small round cell tumor, germ cell cancer, rhabdoid tumor, clear cell sarcoma, hepatoblastoma, malignant peripheral nerve sheath tumor, soft tissue sarcoma, ovarian cancer, cervical cancer, endometrial cancer, triple-negative breast cancer, non-small cell lung cancer, colorectal cancer, gastric cancer, urothelial carcinoma, hepatocellular carcinoma, intrahepatic cholangiocarcinoma, head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) , and acute myeloid leukemia.46.A method for treating a disease related to abnormal expression of CD276, comprising administering a therapeutically effective amount of the pharmaceutical composition according to any one of claim 40-43 to a subject.47.The method according to claim 46, wherein the disease is cancer selected from the group consisting of: glioblastoma multiforme, diffuse midline glioma, high-grade glioma, medulloblastoma, atypical teratoid / rhabdoid tumor, ependymoma osteosarcoma, rhabdomyosarcoma, neuroblastoma, Ewing sarcoma, Wilms tumor, adrenocortical cancer, desmoplastic small round cell tumor, germ cell cancer, rhabdoid tumor, clear cell sarcoma, hepatoblastoma, malignant peripheral nerve sheath tumor, soft tissue sarcoma, ovarian cancer, cervical cancer, endometrial cancer, triple-negative breast cancer, non-small cell lung cancer, colorectal cancer, gastric cancer, urothelial carcinoma, hepatocellular carcinoma, intrahepatic cholangiocarcinoma, head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) , and acute myeloid leukemia.48.Use of the monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 1-5, or the antibody-drug conjugate according to any one of claims 9-39, in the preparation of a medicament, through directly targeting or bystander effects, for treating a tumor cell, a virus infected cell, a microorganism infected cell, a parasite infected cell, an autoimmune disease cell, an activated tumor cell, a myeloid cell, or a dysfunctional cell expressing any one of the following antigens or receptors: CD1, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD1e, CD2, CD3, CD3d, CD3e, CD3g, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD8a, CD8b, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CD12w, CD14, CD15, CD16, CD16a, CD16b, CDw17, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31, CD32, CD32a, CD32b, CD33, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD39, CD40, CD41, CD42, CD42a, CD42b, CD42c, CD42d, CD43, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD49c, CD49d, CD49f, CD50, CD51, CD52, CD53, CD54, CD55, CD56, CD57, CD58, CD59, CD60, CD60a, CD60b, CD60c, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD65, CD65s, CD66, CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, CD67, CD68, CD69, CD70, CD71, CD72, CD73, CD74, CD75, CD75s, CD76, CD77, CD78, CD79, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85, CD85a, CD85b, CD85c, CD85d, CD85e, CD85f, CD85g, CD85g, CD85i, CD85j, CD85k, CD85m, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD92, CD93, CD94, CD95, CD96, CD97, CD98, CD99, CD100, CD101, CD102, CD103, CD104, CD105, CD106, CD107, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD110, CD111, CD112, CD113, CD114, CD115, CD116, CD117, CD118, CD119, CD120, CD120a, CD120b, CD121, CD121a, CD121b, CD122, CD123, CD123a, CD124, CD125, CD126, CD127, CD128, CD129, CD130, CD131, CD132, CD133, CD134, CD135, CD136, CD137, CD138, CD139, CD140, CD140a, CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD145, CDw145, CD146, CD147, CD148, CD149, CD150, CD151, CD152, CD153, CD154, CD155, CD156, CD156a, CD156b, CD156c, CD156d, CD157, CD158, CD158a, CD158b1, CD158b2, CD158c, CD158d, CD158e1, CD158e2, CD158f2, CD158g, CD158h, CD158i, CD158j, CD158k, CD159, CD159a, CD159b, CD159c, CD160, CD161, CD162, CD163, CD164, CD165, CD166, CD167, CD167a, CD167b, CD168, CD169, CD170, CD171, CD172, CD172a, CD172b, CD172g, CD173, CD174, CD175, CD175s, CD176, CD177, CD178, CD179, CD179a, CD179b, CD180, CD181, CD182, CD183, CD184, CD185, CD186, CDw186, CD187, CD188, CD189, CD190, CD191, CD192, CD193, CD194, CD195, CD196, CD197, CD198, CD199, CDw198, CDw199, CD200, CD201, CD202, CD202 (a, b) , CD203, CD203c, CD204, CD205, CD206, CD207, CD208, CD209, CD210, CDw210a, CDw210b, CD211, CD212, CD213, CD213a1, CD213a2, CD214, CD215, CD216, CD217, CD218, CD218a, CD218, CD21b9, CD220, CD221, CD222, CD223, CD224, CD225, CD226, CD227, CD228, CD229, CD230, CD231, CD232, CD233, CD234, CD235, CD235a, CD235b, CD236, CD237, CD238, CD239, CD240, CD240ce, CD240d, CD241, CD242, CD243, CD244, CD245, CD246, CD247, CD248, CD249, CD250, CD251, CD252, CD253, CD254, CD255, CD256, CD257, CD258, CD259, CD260, CD261, CD262, CD263, CD264, CD265, CD266, CD267, CD268, CD269, CD270, CD271, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD277, CD278, CD279, CD281, CD282, CD283, CD284, CD285, CD286, CD287, CD288, CD289, CD290, CD291, CD292, CD293, CD294, CD295, CD296, CD297, CD298, CD299, CD300, CD300a, CD300b, CD300c, CD301, CD302, CD303, CD304, CD305, CD306, CD307, CD307a, CD307b, CD307c, CD307d, CD307e, CD307f, CD308, CD309, CD310, CD311, CD312, CD313, CD314, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD320, CD321, CD322, CD323, CD324, CD325, CD326, CD327, CD328, CD329, CD330, CD331, CD332, CD333, CD334, CD335, CD336, CD337, CD338, CD339, CD340, CD341, CD342, CD343, CD344, CD345, CD346, CD347, CD348, CD349, CD350, CD351, CD352, CD353, CD354, CD355, CD356, CD357, CD358, CD359, CD360, CD361, CD362, CD363, CD364, CD365, CD366, CD367, CD368, CD369, CD370, CD371, CD372, CD373, CD374, CD375, CD376, CD377, CD378, CD379, CD381, CD382, CD383, CD384, CD385, CD386, CD387, CD388, CD389, CRIPTO, CRIPTO, CR, CR1, CRGF, CRIPTO, CXCR5, LY64, TDGF1, 4-1BB, APO2, ASLG659, BMPR1B, 4-1BB, 5AC, 5T4 (Trophoblastic glycoprotein, TPBG, 5T4, Wnt-Activated Inhibitory Factor 1 or WAIF1) , Adenocarcinoma antigen, AGS-5, AGS-22M6, Activin receptor-like kinase 1, AFP, AKAP-4, ALK, Alpha integrin, Alpha v beta6, Amino-peptidase N, Amyloid beta, Androgen receptor, Angiopoietin 2, Angiopoietin 3, Annexin A1, Anthrax toxin protective antigen, anti-transferrin receptor, AOC3 (VAP-1) , B7-H3, Bacillus anthracis anthrax, BAFF (B-cell activating factor) , BCMA, B-lymphoma cell, bcr-abl, Bombesin, BORIS, C5, C242 antigen, CA125 (carbohydrate antigen 125, MUC16) , CA-IX (or CAIX, carbonic anhydrase 9) , CALLA, CanAg, Canis lupus familiaris IL31, Carbonic anhydrase IX, Cardiac myosin, CCL11 (C-C motif chemokine 11) , CCR4 (C-C chemokine receptor type 4) , CCR5, CD3E (epsilon) , CEA (Carcinoembryonic antigen) , CEACAM3, CEACAM5 (carcino-embryonic antigen) , CFD (Factor D) , Ch4D5, Cholecystokinin 2 (CCK2R) , CLDN18 (Claudin-18) , Clumping factor A, cMet, CRIPTO, FCSF1R (Colony stimulating factor 1 receptor) , CSF2 (colony stimulating factor 2, Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) ) , CSP4, CTLA4 (cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4) , CTAA16.88 tumor antigen, CXCR4, C-X-C chemokine receptor type 4, cyclic ADP ribose hydrolase, Cyclin B1, CYP1B1, Cytomegalovirus, Cytomegalovirus glycoprotein B, Dabigatran, DLL3 (delta-like-ligand 3) , DLL4 (delta-like-ligand 4) , DPP4 (Dipeptidyl-peptidase 4) , DR5 (Death receptor 5) , E. coli shiga toxin type-1, E. coli shiga toxin type-2, ED-B, EGFL7 (EGF-like domain-containing protein 7) , EGFR, EGFRII, EGFRvIII, Endoglin, Endothelin B receptor, Endotoxin, EpCAM (epithelial cell adhesion molecule) , EphA2, Episialin, ERBB2 (Epidermal Growth Factor Receptor 2) , ERBB3, ERG (TMPRSS2 ETS fusion gene) , Escherichia coli, ETV6-AML, FAP (Fibroblast activation protein alpha) , FCGR1, alpha-Fetoprotein, Fibrin II, beta chain, Fibronectin extra domain-B, FOLR (folate receptor) , Folate receptor alpha, Folate hydrolase, Fos-related antigen 1F protein of respiratory syncytial virus, Frizzled receptor, Fucosyl GM1, GD2 ganglioside, G-28 (acell surface antigen glyvolipid) , GD3 idiotype, GloboH, Glypican 3, N-glycolylneuraminic acid, GM3, GMCSF receptor α-chain, Growth differentiation factor 8, GP100, GPNMB (Trans-membrane glycoprotein NMB) , GUCY2C (Guanylate cyclase 2C, guanylyl cyclase C (GC-C) , intestinal Guanylate cyclase, Guanylate cyclase-C receptor, Heat-stable enterotoxin receptor (hSTAR) ) , Heat shock proteins, Hemagglutinin, Hepatitis B surface antigen, Hepatitis B virus, HER1 (human epidermal growth factor receptor 1) , HER2, HER2 / neu, HER3 (ERBB-3) , IgG4, HGF / SF (Hepatocyte growth factor / scatter factor) , HHGFR, HIV-1, Histone complex, HLA-DR (human leukocyte antigen) , HLA-DR10, HLA-DRB , HMWMAA, Human chorionic gonadotropin, HNGF, Human scatter factor receptor kinase, HPV E6 / E7, Hsp90, hTERT, ICAM-1 (Intercellular Adhesion Molecule 1) , Idiotype, IGF1R (IGF-1, insulin-like growth factor 1 receptor) , IGHE, IFN-γ, Influenza hemagglutinin, IgE, IgE Fc region, IGHE, interleukins (comprising IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-6R, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-17A, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, or IL-28) , IL31RA, ILGF2 (Insulin-like growth factor 2) , Integrins (α4, αIIbβ3, αvβ3, α4β7, α5β1, α6β4, α7β7, αllβ3, α5β5, αvβ5) , Interferon gamma-induced protein, ITGA2, ITGB2, KIR2D, Kappa Ig, LCK, Le, Legumain, Lewis-Y antigen, LFA-1 (Lymphocyte function-associated antigen 1, CD11a) , LHRH, LINGO-1, Lipoteichoic acid, LIV1A, LMP2, LTA, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE A1, MAGE A3, MAGE 4, MART1, MCP-1, MIF (Macrophage migration inhibitory factor, or glycosylation-inhibiting factor (GIF) ) , MS4A1 (membrane-spanning 4-domains subfamily A member 1) , MSLN (mesothelin) , MUC1 (Mucin 1, cell surface associated (MUC1) or polymorphic epithelial mucin (PEM) ) , MUC1-KLH, MUC16 (CA125) , MCP1 (monocyte chemotactic protein 1) , MelanA / MART1, ML-IAP, MPG, MS4A1 (membrane-spanning 4-domains subfamily A) , MYCN, Myelin-associated glycoprotein, Myostatin, NA17, NARP-1, NCA-90 (granulocyte antigen) , Nectin-4 (ASG-22ME) , NGF, Neural apoptosis-regulated proteinase 1, NOGO-A, Notch receptor, Nucleolin, Neu oncogene product, NY-BR-1, NY-ESO-1, OX-40, OxLDL (Oxidized low-density lipoprotein) , OY-TES1, P21, p53 nonmutant, P97, Page4, PAP, Paratope of anti- (N-glycolylneuraminic acid) , PAX3, PAX5, PCSK9, PDCD1 (PD-1, Programmed cell death protein 1) , PDGF-Rα (Alpha-type platelet-derived growth factor receptor) , PDGFR-β, PDL-1, PLAC1, PLAP-like testicular alkaline phosphatase, Platelet-derived growth factor receptor beta, Phosphate-sodium co-transporter, PMEL 17, Polysialic acid, Proteinase3 (PR1) , Prostatic carcinoma, PS (Phosphatidylserine) , Prostatic carcinoma cells, Pseudomonas aeruginosa, PSMA, PSA, PSCA, Rabies virus glycoprotein, RHD (Rh polypeptide 1 (RhPI) ) , Rhesus factor, RANKL, RhoC, Ras mutant, RGS5, ROBO4, Respiratory syncytial virus, RON, ROR1, Sarcoma translocation breakpoints, SART3, Sclerostin, SEZ6, SLAMF7 (SLAM family member 7) , Selectin P, SDC1 (Syndecan 1) , sLe (a) , Somatomedin C, SIP (Sphingosine-1-phosphate) , Somatostatin, Sperm protein 17, SSX2, STEAP1 (six-transmembrane epithelial antigen of the prostate 1) , STEAP2, STn, TAG-72 (tumor associated glycoprotein 72) , Survivin, T-cell receptor, T cell transmembrane protein, TEM1 (Tumor endothelial marker 1) , TENB2, Tenascin C (TN-C) , TGF-α, TGF-β (Transforming growth factor beta) , TGF-β1, TGF-β2 (Transforming growth factor-beta 2) , Tie (CD202b) , Tie2, tissue factors, TIM-1 (CDX-014) , Tn, TNF, TNF-α, TNFRSF8, TNFRSF10B (tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B) , TNFRSF-13B (tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B) , TPBG (trophoblast glycoprotein) , TRAIL-R1 (Tumor necrosis apoptosis Inducing ligand Receptor 1) , TRAILR2 (Death receptor 5 (DR5) ) , tumor-associated calcium signal transducer 2, tumor specific glycosylation of MUC1, TWEAK receptor, TYRP1 (glycoprotein 75) , TRP-2, Tyrosinase, VCAM-1, VEGF, VEGF-A, VEGF-2, VEGFR-1, VEGFR2, or vimentin, WT1, XAGE 1, or dysfunctional cells expressing an insulin growth factor receptor, or any epidermal growth factor receptors.

Images