Heterocyclic compounds and their use as WRN helicase inhibitors

Abstract

Provided herein are certain heterocyclic compounds, such as a compound of Formula (I), as Werner Syndrome RecQ DNA helicase (WRN) inhibitors, pharmaceutical compositions comprising the compounds, and method of use of the compounds or pharmaceutical compositions in the treatment of diseases or disorders.

Description

HETEROCYCLIC COMPOUNDS AND THEIR USE AS WRN HELICASE INHIBITORS

[0001] The present application claims the priority of international application No. PCT / CN2024 / 135791 filed on November 29, 2024 and Chinese application No. 202511736954.3 filed on November 24, 2025, which is incorporated herein by reference in its entirety for all purpose.FIELD

[0002] Provided herein are certain heterocyclic compounds, such as a compound of Formula (I) , as Werner Syndrome RecQ DNA (WRN) helicase inhibitors, pharmaceutical compositions comprising the compounds, and method of use of the compounds or pharmaceutical compositions in the treatment of cancer characterized as microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) .BACKGROUND

[0003] Although immune checkpoint inhibitors such as PD-1 antibody have demonstrated significant clinical activity in cancers with Microsatellite-Instability-High (MSI-H) or DNA mismatch repair deficiency (dMMR) (Andre T, et al., N Engl J Med. 383 (23) : 2207-2218) , resistance to PD-1 inhibitor treatment still occurs. There is still unmet medical need for the patients with MSI-H / dMMR cancers, especially for the ones with resistance to existing therapies including immunotherapy.

[0004] Recently, Werner syndrome RecQ helicase (WRN) has been identified as a synthetic lethal target in MSI-H cancers (Fiona M. Behan, et al., Nature. 568 (7753) : 511-516; Edmond M Chan, et al., Nature 568 (7753) : 551-556) . WRN is a member of the human RecQ family of DNA helicases. It possesses both helicase and exonuclease activity, and helicase activity of WRN is required for supporting cell viability of MSI-H tumor cells (Edmond M Chan, et al., Nature 568 (7753) : 551-556) . Inhibition of WRN by siRNA or pharmacological tools induced WRN protein degradation, DNA damage accumulation, and loss of cell viability selectively in MSI-H cancer cells but not in MSS cancer cells (Edmond M Chan et al., Nature 568 (7753) : 551-556; Fernando Rodrigues Perez, et al., bioRxiv preprint) . The length of expanded TA repeats in the microsatellite region correlates with the sensitivity of MSI-H cancer cells to WRN inhibition (Niek van Wietmarschen, et al., Nature. 586 (7828) : 292-298) . Intriguingly, MSI-H / dMMR cancer cells with acquired resistance to targeted therapy and chemotherapy, or refractory to immunotherapy are still sensitive WRN inhibition (Gabriele Picco, et al., Cancer Discov. 11: 1923-1937) , making WRN an attractive therapeutic target for treating MSI-H / dMMR cancers.SUMMARY

[0005] In one aspect, provided herein are certain heterocyclic compounds as Werner Syndrome RecQ DNA helicase (WRN) inhibitors. In one embodiment, provided herein is a compound of Formula (I) :

[0006] or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R1, R2, R3, R4, X1 and X2 are as defined herein or elsewhere.

[0007] In a second aspect, provided herein are pharmaceutical compositions comprising a compound provided herein, or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient.

[0008] In a third aspect, provided herein are methods of inhibiting a WRN protein, comprising contacting the cells containing WRN protein with a compound provided herein or a pharmaceutical composition provided herein.

[0009] In a fourth aspect, provided herein are methods of treating diseases or conditions mediated by WRN or associated with WRN activity, comprising administering to a subject having the disorder or condition a therapeutically effective amount of a compound provided herein or a pharmaceutical composition provided herein.

[0010] In a fifth aspect, provided herein are use of the compound provided herein or a pharmaceutical composition provided herein in the manufacture of medicaments for preventing or treating diseases or conditions mediated by WRN or associated with WRN activity.

[0011] The compounds provided herein have improved activities as WRN helicase inhibitors as well as good pharmacokinetic behavior.DETAILED DESCRIPTION

[0012] DEFINITIONS

[0013] Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as is commonly understood by one of ordinary skill in the art. All patents, applications, published applications and other publications are incorporated by reference in their entirety. In the event that there is a plurality of definitions for a term herein, those in this section prevail unless stated otherwise.

[0014] As used herein, and in the specification and the accompanying claims, the indefinite articles “a” and “an” and the definite article “the” include plural as well as single referents, unless the context clearly indicates otherwise.

[0015] As used herein, the terms “comprising” and “including” can be used interchangeably. The terms “comprising” and “including” are to be interpreted as specifying the presence of the stated features or components as referred to, but does not preclude the presence or addition of one or more features, or components, or groups thereof. Additionally, the terms “comprising” and “including” are intended to include examples encompassed by the term “consisting of” . Consequently, the term “consisting of” can be used in place of the terms “comprising” and “including” to provide for more specific embodiments.

[0016] As used herein, the term “or” is to be interpreted as an inclusive “or” meaning any one or any combination. Therefore, “A, B or C” means any of the following: “A; B; C; A and B; A and C; B and C; A, B and C” . An exception to this definition will occur only when a combination of elements, functions, steps or acts are in some way inherently mutually exclusive.

[0017] As used herein, the phrase “and / or” as used in a phrase such as “A and / or B” herein is intended to include both A and B; A or B; A (alone) ; and B (alone) . Likewise, the phrase “and / or” as used in a phrase such as “A, B, and / or C” is intended to encompass each of the following embodiments: A, B, and C; A, B, or C; A or C; A or B; B or C; A and C; A and B; B and C; A (alone) ; B (alone) ; and C (alone) .

[0018] It should be noted that if there is a discrepancy between a depicted structure and a name for that structure, the depicted structure is to be accorded more weight.

[0019] As used herein, and unless otherwise specified, the term “alkyl” refers to a straight or branched hydrocarbon chain radical consisting solely of carbon and hydrogen atoms, which is saturated. In one embodiment, the alkyl group has, for example, from one to twenty-four carbon atoms (C1-C24 alkyl) , four to twenty carbon atoms (C4-C20 alkyl) , six to sixteen carbon atoms (C6-C16 alkyl) , six to nine carbon atoms (C6-C9 alkyl) , one to fifteen carbon atoms (C1-C15 alkyl) , one to twelve carbon atoms (C1-C12 alkyl) , one to eight carbon atoms (C1-C8 alkyl) or one to six carbon atoms (C1-C6 alkyl) and which is attached to the rest of the molecule by a single bond. Examples of alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, 1-methylethyl (isopropyl) , n-butyl, n-pentyl, 1, 1-dimethylethyl (t-butyl) , 3-methylhexyl, 2-methylhexyl, and the like. Unless otherwise specified, an alkyl group is optionally substituted.

[0020] As used herein, and unless otherwise specified, the term “alkenyl” refers to a straight or branched hydrocarbon chain radical consisting solely of carbon and hydrogen atoms, which contains one or more carbon-carbon double bonds. The term “alkenyl” also embraces radicals having “cis” and “trans” configurations, or alternatively, “E” and “Z” configurations, as appreciated by those of ordinary skill in the art. In one embodiment, the alkenyl group has, for example, from two to twenty-four carbon atoms (C2-C24 alkenyl) , four to twenty carbon atoms (C4-C20 alkenyl) , six to sixteen carbon atoms (C6-C16 alkenyl) , six to nine carbon atoms (C6-C9 alkenyl) , two to fifteen carbon atoms (C2-C15 alkenyl) , two to twelve carbon atoms (C2-C12 alkenyl) , two to eight carbon atoms (C2-C8 alkenyl) or two to six carbon atoms (C2-C6 alkenyl) and which is attached to the rest of the molecule by a single bond. Examples of alkenyl groups include, but are not limited to, ethenyl, prop-1-enyl, but-1-enyl, pent-1-enyl, penta-1, 4-dienyl, and the like. Unless otherwise specified, an alkenyl group is optionally substituted.

[0021] As used herein, and unless otherwise specified, the term “alkynyl” refers to a straight or branched hydrocarbon chain radical consisting solely of carbon and hydrogen atoms, which contains one or more carbon-carbon triple bonds. In one embodiment, the alkynyl group has, for example, from two to twenty-four carbon atoms (C2-C24 alkynyl) , four to twenty carbon atoms (C4-C20 alkynyl) , six to sixteen carbon atoms (C6-C16 alkynyl) , six to nine carbon atoms (C6-C9 alkynyl) , two to fifteen carbon atoms (C2-C15 alkynyl) , two to twelve carbon atoms (C2-C12 alkynyl) , two to eight carbon atoms (C2-C8 alkynyl) or two to six carbon atoms (C2-C6 alkynyl) and which is attached to the rest of the molecule by a single bond. Examples of alkynyl groups include, but are not limited to, ethynyl, propynyl, butynyl, pentynyl, and the like. Unless otherwise specified, an alkynyl group is optionally substituted.

[0022] As used herein, and unless otherwise specified, the term “cycloalkyl” or “carbocyclyl” refers to a non-aromatic monocyclic or polycyclic hydrocarbon radical consisting solely of carbon and hydrogen atoms, and which is saturated. Cycloalkyl group may include fused, bridged, or spiro ring systems. In one embodiment, the cycloalkyl has, for example, from 3 to 15 ring carbon atoms (C3-C15 cycloalkyl) , from 3 to 10 ring carbon atoms (C3-C10 cycloalkyl) , or from 3 to 8 ring carbon atoms (C3-C8 cycloalkyl) . The cycloalkyl is attached to the rest of the molecule by a single bond. Examples of monocyclic cycloalkyl radicals include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, and cyclooctyl. Examples of polycyclic cycloalkyl radicals include, but are not limited to, adamantyl, norbornyl, decalinyl, 7, 7-dimethyl-bicyclo [2.2.1] heptanyl, and the like. Unless otherwise specified, a cycloalkyl group is optionally substituted. Partially unsaturated cycloalkyl groups can be termed “cycloalkenyl” if the cycloalkyl contains at least one double bond, or “cycloalkynyl” if the cycloalkyl contains at least one triple bond.

[0023] As used herein, and unless otherwise specified, the term “aryl” refers to a monocyclic aromatic group and / or multicyclic aromatic group that contain at least one aromatic hydrocarbon ring. In certain embodiments, the aryl has from 6 to 18 ring carbon atoms (C6-C18 aryl) , from 6 to 14 ring carbon atoms (C6-C14 aryl) , or from 6 to 10 ring carbon atoms (C6-C10 aryl) . Examples of aryl groups include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, fluorenyl, azulenyl, anthryl, phenanthryl, pyrenyl, biphenyl, and terphenyl. The term “aryl” also refers to bicyclic, tricyclic, or other multicyclic hydrocarbon rings, where at least one of the rings is aromatic and the others of which may be saturated, partially unsaturated, or aromatic, for example, dihydronaphthyl, indenyl, indanyl, or tetrahydronaphthyl (tetralinyl) . Unless otherwise specified, an aryl group is optionally substituted.

[0024] As used herein, and unless otherwise specified, the term “heteroaryl” refers to a monocyclic aromatic group and / or multicyclic aromatic group that contains at least one aromatic ring, wherein at least one aromatic ring contains one or more (e.g., one, one or two, one to three, or one to four) heteroatoms independently selected from O, S, and N. The heteroaryl may be attached to the main structure at any heteroatom or carbon atom. In certain embodiments, the heteroaryl has from 5 to 20, from 5 to 15, or from 5 to 10 ring atoms. The term “heteroaryl” also refers to bicyclic, tricyclic, or other multicyclic rings, where at least one of the rings is aromatic and the others of which may be saturated, partially unsaturated, or aromatic, wherein at least one aromatic ring contains one or more heteroatoms independently selected from O, S, and N. Examples of monocyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, pyrrolyl, pyrazolyl, pyrazolinyl, imidazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, thiadiazolyl, isothiazolyl, furanyl, thienyl, oxadiazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, and triazinyl. Examples of bicyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, indolyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, benzothienyl, quinolinyl, tetrahydroisoquinolinyl, isoquinolinyl, benzimidazolyl, benzopyranyl, indolizinyl, benzofuranyl, isobenzofuranyl, chromonyl, coumarinyl, cinnolinyl, quinoxalinyl, indazolyl, purinyl, pyrrolopyridinyl, furopyridinyl, thienopyridinyl, dihydroisoindolyl, and tetrahydroquinolinyl. Examples of tricyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, carbazolyl, benzindolyl, phenanthrollinyl, acridinyl, phenanthridinyl, and xanthenyl. Unless otherwise specified, a heteroaryl group is optionally substituted.

[0025] As used herein, and unless otherwise specified, the term “heterocyclyl” refers to a monocyclic and / or multicyclic non-aromatic group that contains one or more (e.g., one, one or two, one to three, or one to four) heteroatoms independently selected from nitrogen, oxygen, phosphorous, and sulfur. The heterocyclyl may be attached to the main structure at any heteroatom or carbon atom. A heterocyclyl group can be a monocyclic, bicyclic, tricyclic, tetracyclic, or other multicyclic ring system, wherein the multicyclic ring systems can be a fused, bridged or spiro ring system. Heterocyclyl multicyclic ring systems can include one or more heteroatoms in one or more rings. A heterocyclyl group can be saturated or partially unsaturated. Saturated heterocycloalkyl groups can be termed “heterocycloalkyl” . Partially unsaturated heterocycloalkyl groups can be termed “heterocyclenyl” or “heterocycloalkenyl” if the heterocyclyl contains at least one double bond, or “heterocycloalkynyl” if the heterocyclyl contains at least one triple bond. In one embodiment, the heterocyclyl has, for example, 3 to 18 ring atoms (3-to 18-membered heterocyclyl) , 4 to 18 ring atoms (4-to 18-membered heterocyclyl) , 5 to 18 ring atoms (3-to 18-membered heterocyclyl) , 4 to 8 ring atoms (4-to 8-membered heterocyclyl) , or 5 to 8 ring atoms (5-to 8-membered heterocyclyl) . Examples of heterocyclyl groups include, but are not limited to, oxetanyl, azetidinyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, thiazolidinyl, pyrazolidinyl, isoxazolidinyl, isothiazolidinyl, morpholinyl, pyrrolidinyl, tetrahydrofuryl, tetrahydropyranyl, dihydropyridinyl, tetrahydropyridinyl, tetrahydrothiapyranyl, tetrahydrothiopyranyl, piperazinyl, and piperidinyl. Unless otherwise specified, a heterocyclyl group is optionally substituted.

[0026] As used herein, and unless otherwise specified, the terms “spirocyclyl” or “spiro ring” or “spirocyclic group” refers to a polycyclic group that shares one atom (called spiro atom) between substituted or unsubstituted monocyclic rings. The number of ring atoms in the spiro ring system includes but is not limited to 5 to 20, 6 to 14, 6 to 12, 6 to 10, wherein one or more rings may contain 0 or more (including but not limited to 1, 2, 3 or 4) double bonds. The terms “spiroheterocyclyl” , “heterospirocyclyl” or “spiro heterocycle” refers to a spiro ring which contains 0 to 5 heteroatoms independently selected from N, O or S (=O) n (n is 0, 1 or 2) .

[0027] As used herein, and unless otherwise specified, the terms “bridged ring” or “bridged carbocyclyl” refers to a substituted or unsubstituted polycyclic group that shares at least two atoms between substituted or unsubstituted monocyclic rings. The number of ring atoms in the bridged ring system includes but is not limited to 5 to 20, 6 to 14, 6 to 12, 6 to 10, wherein one or more rings may contain 0 or more (including but not limited to 1, 2, 3 or 4) double bonds. The terms “bridged heterocyclyl” or “heterobridged ring” refers to a bridged ring which contains 0 to 5 heteroatoms independently selected from N, O or S (=O) n (n is 0, 1 or 2) .

[0028] As used herein, and unless otherwise specified, the terms “halogen” , “halide” or “halo” refer to fluorine (F) , chlorine (Cl) , bromine (Br) , and / or iodine (I) .

[0029] As used herein, and unless otherwise specified, the terms “haloalkyl, ” “haloalkenyl, ” “haloalkynyl, ” and “haloalkoxy” refer to alkyl, alkenyl, alkynyl, and alkoxy structures that are substituted with one or more halo groups or with combinations thereof.

[0030] As used herein, and unless otherwise specified, the term “alkoxy” refers to -O- (alkyl) , wherein alkyl is defined above. As used herein, and unless otherwise specified, the term “aryloxy” refers to -O- (aryl) , wherein aryl is defined above.

[0031] As used herein, and unless otherwise specified, the term “hydroxy” refers to the -OH radical.

[0032] As used herein, and unless otherwise specified, the terms “amino” refers to the -NH2 radical.

[0033] As used herein, and unless otherwise specified, the terms “cyano” refers to the -CN radical.

[0034] As used herein, and unless otherwise specified, the term “optional” or “optionally” (e.g., optionally substituted) means that the subsequently described event of circumstances may or may not occur, and that the description includes instances where said event or circumstance occurs and instances in which it does not. For example, “optionally substituted alkyl” means that the alkyl radical may or may not be substituted and that the description includes both substituted alkyl radicals and alkyl radicals having no substitution.

[0035] When the groups described herein are said to be “substituted” , they may be substituted with any appropriate substituent or substituents. Illustrative examples of substituents include, but are not limited to, those found in the exemplary compounds and embodiments disclosed herein, as well as halogen (chloro, iodo, bromo, or fluoro) ; alkyl; alkenyl; alkynyl; hydroxyl; alkoxy; alkoxyalkyl; amino; alkylamino; carboxy; nitro; cyano; thiol; thioether; imine; imide; amidine; amido; guanidine; enamine; aminocarbonyl; acyl; acylamino; phosphonate; phosphine; thiocarbonyl; sulfinyl; sulfone; sulfonamide; ketone; aldehyde; ester; urea; urethane; oxime; hydroxyl amine; alkoxyamine; aryloxyamine, aralkoxyamine; N-oxide; hydrazine; hydrazide; hydrazone; azide; isocyanate; isothiocyanate; cyanate; thiocyanate; oxo (=O) ; B (OH) 2, O (alkyl) aminocarbonyl; cycloalkyl, which may be monocyclic or fused or non-fused polycyclic (e.g., cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, or cyclohexyl) , or a heterocyclyl, which may be monocyclic or fused or non-fused polycyclic (e.g., pyrrolidyl, piperidyl, piperazinyl, morpholinyl, oxetanyl, azetidinyl, imidazolidinyl, or thiazinyl) ; monocyclic or fused or non-fused polycyclic aryl or heteroaryl (e.g., phenyl, naphthyl, pyrrolyl, indolyl, furanyl, thiophenyl, imidazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, triazolyl, tetrazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, quinolinyl, isoquinolinyl, acridinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, benzimidazolyl, benzothiophenyl, or benzofuranyl) ; spirocyclyl; aryloxy; aralkyloxy; heteroaryloxy; heterocyclyloxy; and heterocyclylalkoxy.

[0036] As used herein, and unless otherwise specified, the term “stereoisomers” are isomers that differ only in the way the atoms are arranged in space. “Stereoisomers” can include enantiomers and diastereoisomers or a mixture thereof, E and Z isomers or a mixture thereof, and cis and trans isomers or a mixture thereof.

[0037] As used herein, and unless otherwise specified, the term “solvate” means that a solid form of a compound that crystallizes with one or more molecules of solvent trapped inside. Solvents that can be used to form solvates include, but not limited to, water, methanol, ethanol, isopropanol, butanol, C1-6 alcohol, tetrahydrofuran, acetone, ethylene glycol, propylene glycol, acetic acid, formic acid, water, and solvent mixtures thereof.

[0038] As used herein, and unless otherwise specified, the term “pharmaceutically acceptable salt” includes both acid and base addition salts.

[0039] Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts include, but are not limited to, hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid and the like, and organic acids such as, but not limited to, acetic acid, 2, 2-dichloroacetic acid, adipic acid, alginic acid, ascorbic acid, aspartic acid, benzenesulfonic acid, benzoic acid, 4-acetamidobenzoic acid, camphoric acid, camphor-10-sulfonic acid, capric acid, caproic acid, caprylic acid, carbonic acid, cinnamic acid, citric acid, cyclamic acid, dodecylsulfuric acid, ethane-1, 2-disulfonic acid, ethanesulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, formic acid, fumaric acid, galactaric acid, gentisic acid, glucoheptonic acid, gluconic acid, glucuronic acid, glutamic acid, glutaric acid, 2-oxo-glutaric acid, glycerophosphoric acid, glycolic acid, hippuric acid, isobutyric acid, lactic acid, lactobionic acid, lauric acid, maleic acid, malic acid, malonic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, mucic acid, naphthalene-1, 5-disulfonic acid, naphthalene-2-sulfonic acid, 1-hydroxy-2-naphthoic acid, nicotinic acid, oleic acid, orotic acid, oxalic acid, palmitic acid, pamoic acid, propionic acid, pyroglutamic acid, pyruvic acid, salicylic acid, 4-aminosalicylic acid, sebacic acid, stearic acid, succinic acid, tartaric acid, thiocyanic acid, p-toluenesulfonic acid, trifluoroacetic acid, undecylenic acid, and the like.

[0040] Examples of pharmaceutically acceptable base addition salt include, but are not limited to, salts prepared from addition of an inorganic base or an organic base to a free acid compound. Salts derived from inorganic bases include, but are not limited to, the sodium, potassium, lithium, ammonium, calcium, magnesium, iron, zinc, copper, manganese, aluminum salts and the like. In one embodiment, the inorganic salts are the ammonium, sodium, potassium, calcium, and magnesium salts. Salts derived from organic bases include, but are not limited to, salts of primary, secondary, and tertiary amines, substituted amines including naturally occurring substituted amines, cyclic amines and basic ion exchange resins, such as ammonia, isopropylamine, trimethylamine, diethylamine, triethylamine, tripropylamine, diethanolamine, ethanolamine, deanol, 2-dimethylaminoethanol, 2-diethylaminoethanol, dicyclohexylamine, lysine, arginine, histidine, caffeine, procaine, hydrabamine, choline, betaine, benethamine, benzathine, ethylenediamine, glucosamine, methylglucamine, theobromine, triethanolamine, tromethamine, purines, piperazine, piperidine, N-ethylpiperidine, polyamine resins and the like. In one embodiment, the organic bases are isopropylamine, diethylamine, ethanolamine, trimethylamine, dicyclohexylamine, choline and caffeine.

[0041] As used herein, and unless otherwise specified, the term “subject” refers to an animal, including, but not limited to, a primate (e.g., human) , cow, sheep, goat, horse, dog, cat, rabbit, rat, or mouse. The terms “subject” and “patient” are used interchangeably herein in reference, for example, to a mammalian subject, such as a human subject. In one embodiment, the subject is a mammal. In one embodiment, the subject is a human.

[0042] As used herein, and unless otherwise specified, the terms “treat, ” “treating, ” and “treatment” refer to the eradication or amelioration of a disease or disorder, or of one or more symptoms associated with the disease or disorder. In general, treatment occurs after the onset of the disease or disorder. In certain embodiments, the terms refer to minimizing the spread or worsening of the disease or disorder resulting from the administration of one or more prophylactic or therapeutic agents to a subject with such a disease or disorder.

[0043] As used herein, and unless otherwise specified, the terms “prevent, ” “preventing, ” and “prevention” refer to the prevention of the onset, recurrence or spread of a disease or disorder, or of one or more symptoms thereof. In general, prevention occurs prior to the onset of the disease or disorder.

[0044] As used herein, and unless otherwise specified, the term “therapeutically effective amount” is meant to include the amount of a compound that, when administered, is sufficient to prevent development of, or alleviate to some extent, one or more of the symptoms of the disorder, disease, or condition being treated. The term “therapeutically effective amount” also refers to the amount of a compound that is sufficient to elicit the biological or medical response of a cell, tissue, system, animal, or human, which is being sought by a researcher, veterinarian, medical doctor, or clinician.

[0045] As used herein, and unless otherwise specified, the term “IC50” refers an amount, concentration, or dosage of a compound that is required for 50%inhibition of a maximal response in an assay that measures such response.

[0046] As used herein, and unless otherwise specified, the term “pharmaceutically acceptable carrier” , “pharmaceutically acceptable excipient” , “physiologically acceptable carrier” , or “physiologically acceptable excipient” refers to a pharmaceutically acceptable material, composition, or vehicle, such as a liquid or solid filler, diluent, excipient, solvent, or encapsulating material. In one embodiment, each component is “pharmaceutically acceptable” in the sense of being compatible with the other ingredients of a pharmaceutical formulation, and suitable for use in contact with the tissue or organ of humans and animals without excessive toxicity, irritation, allergic response, immunogenicity, or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit / risk ratio. See, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams &Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5th Edition, Rowe et al., Eds., The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2005; and Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd Edition, Ash and Ash Eds., Gower Publishing Company: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, Gibson Ed., CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2004.

[0047] Unless otherwise stated, structures depicted herein are also meant to include compounds which differ only in the presence of one or more isotopically enriched atoms. Examples of isotopes that can be incorporated into disclosed compounds include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, sulfur, fluorine, and chlorine, such as, e.g., 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, and 36Cl, respectively. For example, compounds having the present structures except for the replacement or enrichment of a hydrogen by deuterium or tritium at one or more atoms in the molecule, or the replacement or enrichment of a carbon by 13C or 14C at one or more atoms in the molecule, are within the scope of this disclosure. In one embodiment, provided herein are isotopically labeled compounds having one or more hydrogen atoms replaced by or enriched by deuterium. In one embodiment, provided herein are isotopically labeled compounds having one or more hydrogen atoms replaced by or enriched by tritium. In one embodiment, provided herein are isotopically labeled compounds having one or more carbon atoms replaced or enriched by 13C. In one embodiment, provided herein are isotopically labeled compounds having one or more carbon atoms replaced or enriched by 14C.

[0048] As used herein, and unless otherwise specified, the term “about” or “approximately” means an acceptable error for a particular value as determined by one of ordinary skill in the art, which depends in part on how the value is measured or determined.

[0049] In certain embodiments, the term “about” or “approximately” means within 1, 2, 3, or 4 standard deviations. In certain embodiments, the term “about” or “approximately” means within 50%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, or 0.05%of a given value or range.

[0050] COMPOUNDS

[0051] In one embodiment, provided herein is the compound of Formula (I) :

[0052] wherein:

[0053] X1 is N or CRx1;

[0054] X2 is N or CRx2;

[0055] Rx1 and Rx2 are each independently selected from the group consisting of H, halogen, optionally substituted alkyl, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted alkenyl, optionally substituted alkynyl, optionally substituted amino, and optionally substituted alkyloxy;

[0056] R1 is selected from the group consisting of H, optionally substituted alkyl, optionally substituted aryl, optionally substituted heteroaryl, optionally substituted heterocyclyl, optionally substituted cycloalkyl, and optionally substituted cycloalkenyl;

[0057] R2 is selected from the group consisting of optionally substituted aryl, optionally substituted heteroaryl, optionally substituted heterocyclyl, optionally substituted heterocyclenyl, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted cycloalkenyl, optionally substituted spiroheterocyclyl, optionally substituted spirocyclyl, optionally substituted bridged heterocyclyl, optionally substituted bridged carbocyclyl, optionally substituted alkyl, optionally substituted N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, alkyl, alkenyl, alkynyl, haloalkyl, acyl, aminoalkyl, alkoxyalkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, cycloalkenyl, and heterocyclyl;

[0058] R3 is selected from the group consisting of H, optionally substituted alkyl, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted heteroaryl and optionally substituted heterocyclyl;

[0059] R4 is selected from the group consisting of optionally substituted alkyl, optionally substituted cycloalkyl, and optionally substituted heterocyclyl;

[0060] said heterocyclenyl, heterocyclyl, heteroaryl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contains 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S;

[0061] R7 is selected from the group consisting of H and halogen;

[0062] optionally, one or more hydrogen in said compound is replaced by deuterium;

[0063] or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0064] In one embodiment, X1 is CRx1, and X2 is CRx2. In one embodiment, X1 is N, and X2 is CRx2. In one embodiment, X1 is CRx1, and X2 is N.

[0065] In one embodiment, the compound is of Formula (Ia) :

[0066] wherein:

[0067] Rx1 and Rx2 are each independently selected from the group consisting of H, halogen, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C1-C6 alkenyl, optionally substituted C1-C6 alkynyl, optionally substituted amino, and optionally substituted C1-C6 alkyloxy;

[0068] R1 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl, optionally substituted 5-to 6-membered heterocyclyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted cycloalkenyl;

[0069] R2 is selected from the group consisting of optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 10-membered heteroaryl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclyl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclenyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkenyl, optionally substituted 5-to 12-membered spiroheterocyclyl, optionally substituted C5-C12 spirocyclyl, optionally substituted 5-to 12-membered bridged heterocyclyl, optionally substituted C5-C12 bridged carbocyclyl, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 acyl, C1-C6 aminoalkyl, (C1-C6 alkoxy) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, (C3-C8 cycloalkyl) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkenyl, and 3-to 8-membered heterocyclyl;

[0070] R3 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;

[0071] R4 is selected from the group consisting of optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;

[0072] said heterocyclenyl, heterocyclyl, heteroaryl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contains 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S;

[0073] R7 is selected from the group consisting of H and halogen;

[0074] optionally, one or more hydrogen in said compound is replaced by deuterium;

[0075] or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0076] In one embodiment, the compound is of Formula (Ib) :

[0077] wherein:

[0078] Rx2 is selected from the group consisting of H, halogen, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C1-C6 alkenyl, optionally substituted C1-C6 alkynyl, optionally substituted amino, and optionally substituted C1-C6 alkyloxy;

[0079] R1 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl, optionally substituted 5-to 6-membered heterocyclyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted cycloalkenyl;

[0080] R2 is selected from the group consisting of optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 10-membered heteroaryl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclyl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclenyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkenyl, optionally substituted 5-to 12-membered spiroheterocyclyl, optionally substituted C5-C12 spirocyclyl, optionally substituted 5-to 12-membered bridged heterocyclyl, optionally substituted C5-C12 bridged carbocyclyl, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 acyl, C1-C6 aminoalkyl, (C1-C6 alkoxy) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, (C3-C8 cycloalkyl) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkenyl, and 3-to 8-membered heterocyclyl;

[0081] R3 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;

[0082] R4 is selected from the group consisting of optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;

[0083] said heterocyclenyl, heterocyclyl, heteroaryl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contains 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S;

[0084] R7 is selected from the group consisting of H and halogen;

[0085] optionally, one or more hydrogen in said compound is replaced by deuterium;

[0086] or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0087] In one embodiment, the compound is of Formula (Ic) :

[0088] wherein:

[0089] Rx1 is selected from the group consisting of H, halogen, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C1-C6 alkenyl, optionally substituted C1-C6 alkynyl, optionally substituted amino, and optionally substituted C1-C6 alkyloxy;

[0090] R1 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl, optionally substituted 5-to 6-membered heterocyclyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted cycloalkenyl;

[0091] R2 is selected from the group consisting of optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 10-membered heteroaryl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclyl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclenyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkenyl, optionally substituted 5-to 12-membered spiroheterocyclyl, optionally substituted C5-C12 spirocyclyl, optionally substituted 5-to 12-membered bridged heterocyclyl, optionally substituted C5-C12 bridged carbocyclyl, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 acyl, C1-C6 aminoalkyl, (C1-C6 alkoxy) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, (C3-C8 cycloalkyl) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkenyl, and 3-to 8-membered heterocyclyl;

[0092] R3 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;

[0093] R4 is selected from the group consisting of optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;

[0094] said heterocyclenyl, heterocyclyl, heteroaryl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contain 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S;

[0095] R7 is selected from the group consisting of H and halogen;

[0096] optionally, one or more hydrogen in said compound is replaced by deuterium;

[0097] or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0098] In one embodiment, Rx1 and Rx2 are each independently selected from the group consisting of H, halogen, C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C6 alkenyl, C1-C6 alkynyl, amino and C1-C6 alkyloxy; said alkyl, alkenyl, alkynyl, alkyloxy and amino are each optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, amino, C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl and C1-C6 alkylamino.

[0099] In one embodiment, Rx1 is H. In one embodiment, Rx1 is methyl. In one embodiment, Rx1 is ethyl. In one embodiment, Rx1 is n-propyl. In one embodiment, Rx1 is iso-propyl. In one embodiment, Rx1 is methoxy. In one embodiment, Rx1 is ethoxy. In one embodiment, Rx1 is n-propoxy. In one embodiment, Rx1 is iso-propoxy. In one embodiment, Rx1 is amino. In one embodiment, Rx1 is methylamino. In one embodiment, Rx1 is ethylamino. In one embodiment, Rx1 is n-propylamino. In one embodiment, Rx1 is iso-propylamino. In one embodiment, Rx1 is cyclopropyl. In one embodiment, Rx1 is cyclobutyl. In one embodiment, Rx1 is cyclopentyl. In one embodiment, Rx1 is cyclohexyl. In one embodiment, Rx1 is cycloheptyl. In one embodiment, Rx1 is ethenyl. In one embodiment, Rx1 is propenyl. In one embodiment, Rx1 is butenyl. In one embodiment, Rx1 is pentenyl. In one embodiment, Rx1 is ethynyl. In one embodiment, Rx1 is propynyl. In one embodiment, Rx1 is butynyl. In one embodiment, Rx1 is pentynyl.

[0100] In one embodiment, Rx2 is H. In one embodiment, Rx2 is methyl. In one embodiment, Rx2 is ethyl. In one embodiment, Rx2 is n-propyl. In one embodiment, Rx2 is iso-propyl. In one embodiment, Rx2 is methoxy. In one embodiment, Rx2 is ethoxy. In one embodiment, Rx2 is n-propoxy. In one embodiment, Rx2 is iso-propoxy. In one embodiment, Rx2 is amino. In one embodiment, Rx2 is methylamino. In one embodiment, Rx2 is ethylamino. In one embodiment, Rx2 is n-propylamino. In one embodiment, Rx2 is iso-propylamino. In one embodiment, Rx2 is cyclopropyl. In one embodiment, Rx2 is cyclobutyl. In one embodiment, Rx2 is cyclopentyl. In one embodiment, Rx2 is cyclohexyl. In one embodiment, Rx2 is cycloheptyl. In one embodiment, Rx2 is ethenyl. In one embodiment, Rx2 is propenyl. In one embodiment, Rx2 is butenyl. In one embodiment, Rx2 is pentenyl. In one embodiment, Rx2 is ethynyl. In one embodiment, Rx2 is propynyl. In one embodiment, Rx2 is butynyl. In one embodiment, Rx2 is pentynyl.

[0101] In one embodiment, R1 is selected from the group consisting of C6-C10 aryl, 5-to 6-membered heteroaryl, 5-to 6-membered heterocyclyl, C3-C8 cycloalkyl, and C3-C8 cycloalkenyl; said heterocyclyl and heteroaryl each contain 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S, and said aryl, heteroaryl, heterocyclyl, cycloalkyl and cycloalkenyl are each optionally substituted with one or more R5, each R5 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, amino, and halogenated C1-C3 alkyl.

[0102] In one embodiment, R1 is selected from the group consisting of phenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl and 6-membered heteroaryl containing 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S; said phenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl and heteroaryl are each optionally substituted with one or more R5, each R5 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, amino, and halogenated C1-C3 alkyl.

[0103] In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is  In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is

[0104] In one embodiment, n is 0. In one embodiment, n is 1. In one embodiment, n is 2. In one embodiment, n is 3. In one embodiment, n is 4. In one embodiment, n is 5.

[0105] In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is  In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is  In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is  In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is  In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is  In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is In one embodiment, R1 is

[0106] In the above embodiments,  indicates the point of attachment.

[0107] In one embodiment, each R5 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-3 alkyl, C1-3 alkoxy, amino, and halogenated C1-3 alkyl. In a preferred embodiment, each R5 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy, amino, fluoromethyl, difluoromethyl and trifluoromethyl. In a more preferred embodiment, each R5 is independently selected from the group consisting of F, Cl and Br.

[0108] In one embodiment, R2 is selected from the group consisting of C6-C10 aryl, 5-to 10-membered heteroaryl, 3-to 8-membered heterocyclyl, 3-to 8-membered heterocyclenyl, C3-C8 cycloalkyl, C3-C8 cycloalkenyl, 5-to 12-membered spiroheterocyclyl, C5-C12 spirocyclyl, 5-to 12-membered bridged heterocyclyl, C5-C12 bridged carbocyclyl, C1-C6 alkyl, N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 acyl, C1-C6 aminoalkyl, (C1-C6 alkoxy) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, (C3-C8 cycloalkyl) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkenyl, and 3-to 8-membered heterocyclyl; optionally, said heteroaryl, heterocyclyl, heterocyclenyl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contain 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S.

[0109] In one embodiment, R2 is selected from the group consisting of: phenyl, naphthyl; cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl; cyclopropenyl, cyclobutenyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, cycloheptenyl, cyclooctenyl; pyrrolyl, pyrazolyl, imidazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, thiadiazolyl, isothiazolyl, furanyl, thienyl, oxadiazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, triazinyl, indolyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, benzothienyl, quinolinyl, isoquinolinyl, benzimidazolyl, benzofuranyl, isobenzofuranyl, cinnolinyl, quinoxalinyl, indazolyl, purinyl, pyrrolopyridinyl, furopyridinyl, thienopyridinyl; oxiranyl, aziridinyl, oxetanyl, azetidinyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, thiazolidinyl, pyrazolidinyl, isoxazolidinyl, isothiazolidinyl, morpholinyl, pyrrolidinyl, tetrahydrofuryl, tetrahydropyranyl, tetrahydrothiapyranyl, tetrahydrothiopyranyl, piperazinyl, piperidinyl, azepanyl, oxazepanyl; spiro [2, 3] hexyl, spiro [2, 4] heptyl, spiro [2, 5] octyl, spiro [3, 3] heptyl, spiro [3, 4] octyl, spiro [3, 5] nonyl, spiro [3, 6] decyl, spiro [4, 4] nonyl, spiro [4, 5] decyl, spiro [4, 6] undecyl, spiro [5, 5] undecyl, spiro [5, 6] dodecyl; hetero-spiro [2, 3] hexyl, hetero-spiro [2, 4] heptyl, hetero-spiro [2, 5] octyl, hetero-spiro [3, 3] heptyl, hetero-spiro [3, 4] octyl, hetero-spiro [3, 5] nonyl, hetero-spiro [3, 6] decyl, hetero-spiro [4, 4] nonyl, hetero-spiro [4, 5] decyl, hetero-spiro [4, 6] undecyl, hetero-spiro [5, 5] undecyl, hetero-spiro [5, 6] dodecyl; bicyclo [2.1.1] hexyl, bicyclo [3.1.0] hexyl, bicyclo [2.2.1] heptanyl, bicyclo [2.2.2] octanyl, bicyclo [3.2.1] octanyl; hetero-bicyclo [2.1.1] hexyl, hetero-bicyclo [3.1.0] hexyl, hetero-bicyclo [2.2.1] heptanyl, hetero-bicyclo [2.2.2] octanyl, hetero-bicyclo [3.2.1] octanyl; N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, sec-butyl, tert-butyl, vinyl, propenyl, butenyl, pentenyl, ethynyl, propinyl, propargyl, butynyl, chloromethyl, chloroethyl, chloropropyl, dichloromethyl, dichloroethyl, dichloropropyl, trichloromethyl, trichloroethyl, trichloropropyl, fluoromethyl, fluoroethyl, fluoropropyl, difluoromethyl, difluoroethyl, difluoropropyl, trifluoromethyl, trifluoroethyl, trifluoropropyl, perfluoroethyl, perfluoropropyl, acetyl, propionyl, aminomethyl, aminoethyl, aminopropyl, methoxymethyl, methoxyethyl, methoxypropyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclopropylmethyl, cyclobutylmethyl, cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl, cycloheptylmethyl, cyclopropylethyl, cyclobutylethyl, cyclopentylethyl, cyclohexylethyl, cycloheptylethyl, oxiranyl, aziridinyl, oxetanyl, azetidinyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, thiazolidinyl, pyrazolidinyl, isoxazolidinyl, isothiazolidinyl, morpholinyl, pyrrolidinyl, tetrahydrofuryl, tetrahydropyranyl, tetrahydrothiapyranyl, tetrahydrothiopyranyl, piperazinyl, piperidinyl, azepanyl, and oxazepanyl.

[0110] In one embodiment, R2 is substituted with one or more substituent independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy, amino, halogenated C1-C3 alkyl, methylene, halogenated methylene, C1-C6 acyl, C3-C8 cycloalkyl.

[0111] In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is  In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is In one embodiment, R2 is

[0112] In one embodiment, R3 is selected from the group consisting of C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, 5-to 6-membered heteroaryl and 3-to 6-membered heterocyclyl; wherein said heteroaryl and heterocyclyl each contain 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S; said alkyl, cycloalkyl, heteroaryl and heterocyclyl are each optionally substituted with one or more R6, each R6 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, amino, and halogenated C1-C3 alkyl.

[0113] In one embodiment, R3 is selected from the group consisting of C1-C3 alkyl, C3-C5 cycloalkyl and 3-to 5-membered heterocyclyl; said alkyl, cycloalkyl and heterocyclyl are each optionally substituted with one or more R6, each R6 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, amino, and halogenated C1-C3 alkyl.

[0114] In one embodiment, R3 is C1-C3 alkyl. In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In these embodiments,  indicates the point of attachment.

[0115] In one embodiment, m is 0. In one embodiment, m is 1. In one embodiment, m is 2. In one embodiment, m is 3. In one embodiment, m is 4. In one embodiment, m is 5. In one embodiment, m is 6. In one embodiment, m is 7. In one embodiment, m is 8.

[0116] In one embodiment, R3 is methyl. In one embodiment, R3 is ethyl. In one embodiment, R3 is n-propyl. In one embodiment, R3 is iso-propyl. In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is  In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is  In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is

[0117] In one embodiment, each R6 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-3 alkyl, C1-3 alkoxy, amino, and halogenated C1-3 alkyl. In a preferred embodiment, each R6 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy, amino, fluoromethyl, difluoromethyl and trifluoromethyl. In a more preferred embodiment, each R6 is independently selected from the group consisting of F, Cl and Br.

[0118] In one embodiment, R3 is methyl. In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is In one embodiment, R3 is

[0119] In one embodiment, R4 is selected from the group consisting of C1-C6 alkyl and C3-C8 cycloalkyl. In one embodiment, R4 is methyl. In one embodiment, R4 is ethyl. In one embodiment, R4 is n-propyl. In one embodiment, R4 is iso-propyl. In one embodiment, R4 is n-butyl. In one embodiment, R4 is sec-butyl. In one embodiment, R4 is tert-butyl. In one embodiment, R4 is cyclopropyl. In one embodiment, R4 is cyclobutyl. In one embodiment, R4 is cyclopentyl.

[0120] In one embodiment, R7 is H. In one embodiment, R7 is F. In one embodiment, R7 is Cl. In one embodiment, R7 is Br. In one embodiment, R7 is I.

[0121] In one embodiment, the compound is selected from the group consisting of the compounds in Table 1, or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Optionally, one or more hydrogen in said compound is replaced by deuterium.

[0122] Table 1

[0123] METHODS OF USE

[0124] The compounds of formula (I) of the present invention in free form or in pharmaceutically acceptable salt form, exhibit valuable pharmacological properties, e.g. WRN inhibiting properties, e.g. as indicated in vitro tests as provided in the next sections, and are therefore indicated for therapy, or for use as research chemicals, e.g. as chemical probe, and as tool compounds.

[0125] There is also provided a compound of formula (I) as described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the use in the treatment of cancer. Cancers that may be treated by WRN inhibition include cancers that are characterized as microsatellite instability-high (MSI-H) or mismatch repair deficient (dMMR) , such as colorectal, gastric, prostate, endometrial, adrenocortical, uterine, cervical, esophageal, breast, kidney, and ovarian cancer.

[0126] There is also provided a method of treating a disease or condition in a subject in need thereof, wherein the method comprises administering to the subject a therapeutically effective amount of the compound as defined herein, or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition as defined herein, wherein the disease or condition is mediated by WRN, or associated with WRN activity.

[0127] There is also provided a use of the compound as defined herein, or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition as defined herein in the manufacture of a medicament for preventing or treating a disease or condition, wherein the disease or condition is mediated by WRN, or associated with WRN activity.

[0128] In some embodiments, the disease or condition is a proliferative disease. In some embodiments, the disease or condition is selected from the group consisting of prostate cancer, colorectal cancer, gastric cancer, esophageal cancer, uterine corpus endometrial carcinoma, colon adenocarcinoma, stomach adenocarcinoma, rectal adenocarcinoma, adrenocortical carcinoma, uterine carcinosarcoma, cervical squamous cell carcinoma, endocervical adenocarcinoma, esophageal carcinoma, breast carcinoma, kidney cancer such as kidney renal clear cell carcinoma and ovarian cancer such as ovarian serous cystadenocarcinoma.

[0129] PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND KITS

[0130] Also provided herein are pharmaceutical compositions comprising a compound provided herein and a pharmaceutically acceptable excipient.

[0131] In some embodiments, the pharmaceutically acceptable excipient is selected from the group consisting of carriers, binders, filling agents, suspending agents, flavoring agents, sweetening agents, disintegrating agents, dispersing agents, surfactants, lubricants, colorants, diluents, solubilizers, moistening agents, plasticizers, stabilizers, penetration enhancers, wetting agents, anti-foaming agents, antioxidants, preservatives, and any combinations thereof.

[0132] The pharmaceutical formulations described herein include, but are not limited to, aqueous liquid dispersions, liquids, gels, syrups, elixirs, slurries, suspensions, self-emulsifying dispersions, solid solutions, liposomal dispersions, aerosols, solid oral dosage forms, powders, immediate release formulations, controlled release formulations, fast melt formulations, tablets, capsules, pills, powders, dragees, effervescent formulations, lyophilized formulations, delayed release formulations, extended release formulations, pulsatile release formulations, multiparticulate formulations, and mixed immediate and controlled release formulations.

[0133] In one embodiment, compounds provided herein are administered to a mammal in the form of a raw chemical without any other components present. In one embodiment, compounds provided herein are administered to a mammal as part of a pharmaceutical composition containing the compound combined with a suitable pharmaceutically acceptable carrier (see, for example, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drug facts Plus, 20th ed. (2003) ; Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004) ; Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000) ) . Such a carrier can be selected from pharmaceutically acceptable excipients and auxiliaries.

[0134] In one embodiment, a pharmaceutical composition provided herein may be prepared as liquid suspensions or solutions using a liquid, such as an oil, water, an alcohol, and combinations of these.

[0135] In one embodiment, a pharmaceutical composition provided herein may be prepared as a sterile injectable, which may be aqueous or oleaginous suspensions. These suspensions may be formulated according to techniques known in the art.

[0136] In one embodiment, a pharmaceutical composition provided herein may be orally administered in any orally acceptable dosage form including capsules, tablets, aqueous suspensions or solutions.

[0137] In one embodiment, a pharmaceutical composition provided herein may be administered in the form of suppositories for rectal administration.

[0138] In one embodiment, a pharmaceutical composition provided herein may also be administered topically, especially when the target of treatment includes areas or organs readily accessible by topical application, including diseases of the eye, the skin, or the lower intestinal tract. Topical application for the lower intestinal tract may be affected in a rectal suppository formulation (see above) or in a suitable enema formulation. Topically transdermal patches may also be used. For topical applications, the pharmaceutical compositions may be formulated in a suitable ointment, lotion, or cream containing the active component suspended or dissolved in one or more carriers.

[0139] In one embodiment, a pharmaceutical composition provided herein may also be administered ophthalmically and formulated as micronized suspensions in isotonic, pH adjusted sterile saline, or solutions in isotonic, pH adjusted sterile saline, either with or without a preservative such as benzyl alkonium chloride. In one embodiment, for ophthalmic uses, the pharmaceutical compositions may be formulated in an ointment such as petrolatum. In one embodiment, a pharmaceutical composition provided herein may also be administered by nasal aerosol or inhalation. Such compositions are prepared according to techniques well known in the art of pharmaceutical formulation and may be prepared as solutions in saline, employing benzyl alcohol or other suitable preservatives, absorption promoters to enhance bioavailability, fluorocarbons, and / or other conventional solubilizing or dispersing agents.

[0140] In one embodiment, the pharmaceutical compositions to be used for in vivo administration can be sterile. In one embodiment, this is accomplished by filtration through, e.g., sterile filtration membranes.

[0141] In one embodiment, pharmaceutical compositions provided herein include all compositions where a compound provided herein is combined with one or more pharmaceutically acceptable carriers. In one embodiment, the compound provided herein is present in the composition in an amount that is effective to achieve its intended therapeutic purpose.

[0142] In one embodiment, a pharmaceutical composition provided herein can be administered to any patient that may experience the beneficial effects of a compound provided herein. In one embodiment, the patients are mammals, e.g., humans and companion animals. In one embodiment, the patient is a human.

[0143] In one embodiment, also provided herein are kits which comprise a compound provided herein (or a composition comprising a compound provided herein) packaged in a manner that facilitates their use to practice methods provided herein.

[0144] In one embodiment, the kit includes a compound provided herein (or a composition comprising a compound provided herein) packaged in a container, such as a sealed bottle or vessel, with a label affixed to the container or included in the kit that describes use of the compound or composition to practice the method provided herein.

[0145] In one embodiment, the compound or composition is packaged in a unit dosage form. In one embodiment, the kit further includes a device suitable for administering the compound or composition according to the intended route of administration.

[0146] In one embodiment, the kit comprises a compound provided herein, and instructions for administering the compound to a patient having cancer.

[0147] EXAMPLES

[0148] Certain embodiments of the claimed subject matter are illustrated by the following non-limiting examples.

[0149] The disclosed compounds can generally be synthesized by the following general procedure or by an appropriate combination of generally well-known synthetic methods. Techniques useful in synthesizing these compounds are both readily apparent and accessible to those of skill in the relevant art, based on the instant disclosure. Many of the optionally substituted starting compounds and other reactants are commercially available or can be readily prepared by those skilled in the art using commonly employed synthetic method.

[0150] The example below is to illustrate certain methods for making the disclosed compounds and is not intended to limit the scope of reactions or reaction sequences that can be used in preparing the compounds provided herein.

[0151] Several methods for preparing the compounds provided herein are illustrated in the following examples. Unless otherwise noted, all starting materials were obtained from commercial suppliers and used without further purification, or alternatively can be synthesized by a skilled person by using well-known methods.

[0152] As used herein and unless otherwise specified, when the stereochemical configuration for a chiral center in a compound provided herein is drawn stereo specifically (e.g., with widget and / or dash bonds) , either without additional designation or being designated “R” (or “ (R) ” ) or “S’ (or “ (S) ” ) , it means the mixture (s) was separated and absolute stereochemistry was known, or only one enantiomer was obtained and absolute stereochemistry was known. For some compounds, the stereochemical configuration at indicated centers has been designated as “*R” (first eluted from the column in case the column conditions of the separation are described in the synthesis protocol and when only one stereocenter present or indicated) or “*S” (second eluted from the column in case the column conditions of the separation are described in the synthesis protocol and when only one stereocenter present or indicated) when the absolute stereochemistry is undetermined (even if the bonds are drawn stereo specifically) although the compound itself has been isolated as a single stereoisomer and is enantiomerically pure. In case a compound designated as “*R” is converted into another compound, the “*R” indication of the resulting compound is derived from its starting material.

[0153] Preparation of intermediates

[0154] For intermediates that were used in a next reaction step as a crude or as a partially purified intermediate, in some cases no molar amounts are mentioned for such intermediate in the next reaction step or alternatively estimated molar amounts or theoretical molar amounts for such intermediate in the next reaction step are indicated in the reaction protocols described below.

[0155] Preparation of intermediate 1

[0156] To a mixture of 5-bromo-4-chloro-2-methoxy-pyridine (2 g, 8.99 mmol) and phenylboronic acid (4.38 g, 35.96 mmol) in 1, 4-dioxane (20 mL) and water (5 mL) was added K2CO3 (3.73 g, 26.97 mmol) and bis (2-ditert-butylphosphanylcyclopenta-2, 4-dien-1-yl) iron; dichloropalladium (585.93 mg, 899.01 μmol) . After stirring at 80 ℃ under nitrogen atmosphere for 16 hr, the resulting mixture was diluted with H2O (50 mL) and extracted with EtOAc (30 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4. After filtration, the filtrate was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (30%to 50%) to afford intermediate 1 (2.2 g, 8.42 mmol, 93.65%yield) as a white solid.

[0157] Preparation of intermediate 2

[0158] A mixture of intermediate 1 (2 g, 7.65 mmol) and HBr (48 wt. %in water) (10 mL) in AcOH (10 mL) was stirred for 2 hr at 100 ℃. The reaction mixture was diluted with H2O (50 mL) and extracted with EtOAc (20 mL x 3) . The combined organic layers were washed with aqueous Na2CO3, dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum to give intermediate 2 (1.8 g, 7.28 mmol, 95.10%yield) as a yellow solid, which was used in the next step without further purification.

[0159] Preparation of intermediate 3

[0160] To a mixture of intermediate 2 (1.5 g, 6.07 mmol) , 1-cyclopropylprop-2-en-1-ol (714.37 mg, 7.28 mmol) and triphenylphosphine (2.39 g, 9.10 mmol) in THF (20 mL) was added DIAD (1.84 g, 9.10 mmol, 1.79 mL) dropwise at 0℃. The resulting mixture was stirred for 1 h. The resulting mixture was diluted with H2O (50 mL) and extracted with EtOAc (30 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (20%to 25%) to afford intermediate 3 (500 mg, 1.53 mmol, 25.18%yield) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.71 (s, 1H) , 7.33 –7.21 (m, 6H) , 7.15 (dt, J = 6.4, 1.6 Hz, 2H) , 7.10 –6.98 (m, 2H) , 6.61 (s, 1H) , 6.20 –6.10 (m, 1H) , 5.45 –5.33 (m, 2H) , 4.94 –4.89 (m, 1H) , 1.51 –1.43 (m, 1H) , 0.94 –0.81 (m, 2H) , 0.64 –0.58 (m, 1H) , 0.52 –0.48 (m, 1H) .

[0161] The following intermediate was synthesized by an analogous method as described above for intermediate 3.

[0162] Preparation of intermediate 4

[0163] To a mixture of intermediate 3 (200 mg, 610.84 μmol) in DCM (2 mL) and Water, Reagent (Deionized water) , ACS (2 mL) was added Potassium citrate (18.71 mg, 61.08 μmol) and NaIO4 (391.96 mg, 1.83 mmol) at 25 ℃. The resulting mixture was stirred for 16 hrs. The reaction mixture was diluted with aqueous Na2S2O3 (10 mL) and extracted with EtOAc (10 mL x 2) . The combined organic layers were washed with aqueous NaCl, dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 4 (130 mg, 394.67 μmol, 64.61%yield) as a colorless oil.

[0164] The following intermediate was synthesized by an analogous method as described above for intermediate 4.

[0165] Preparation of intermediate 5

[0166] To a mixture of 5-bromo-4-chloro-2-methoxy-pyridine (9 g, 40.46 mmol) and phenylboronic acid (4.62 g, 36.40 mmol) in Dioxane (100 mL) and Water (10 mL) was added bis (2-ditert-butylphosphanylcyclopenta-2, 4-dien-1-yl) iron; dichloropalladium (2.64 g, 4.05 mmol) and K2CO3 (11.17 g, 80.92 mmol) . The reaction was stirred for 1hr at 60 ℃ under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was diluted with H2O (200 mL) and extracted with EtOAc (100 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (0%to 2%) to afford intermediate 5 (7 g, 31.87 mmol, 78.77%yield) as a colorless oil.

[0167] Preparation of intermediate 6

[0168] A mixture of intermediate 5 (7 g, 31.87 mmol) and acetic acid (5 mL) in HBr (48 wt. %in water) (5 mL) was stirred for 2 hr at 100℃. The product was precipitated by the addition of H2O (300mL) . Intermediate 6 (5.9 g, 28.69 mmol, 90.03%yield) was collected by filtration.

[0169] Preparation of intermediate 7

[0170] To a mixture of 2- [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxyacetaldehyde (50 g, 286.84 mmol) in THF (307.37 mL) was added bromo (cyclopropyl) magnesium (1M, 573.68 mmol, 573.68 mL) dropwise at 0 ℃ under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred for 1 h at 0 ℃ under N2 atmosphere. The reaction was quenched with NaCl aq. at 0℃. The resulting mixture was diluted with water (50 mL) and extracted with PE (50 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The crude product was used in the next step directly without further purification.

[0171] Preparation of intermediate 8

[0172] To a stirred solution of intermediate 6 (5.8 g, 28.20 mmol) , intermediate 7 (9.15 g, 42.31 mmol) and PPh3 (11.10 g, 42.31 mmol) in THF (150 mL) at 0 ℃ was added DIAD (8.55 g, 42.31 mmol, 8.33 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred for 12 hr at 25℃ under N2 atmosphere. The reaction mixture was diluted with H2O (300 mL) and extracted with EtOAc (100 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (0%to 20%) to afford intermediate 8 (2.1 g, 5.20 mmol, 18.43%yield) as a white solid.

[0173] Preparation of intermediate 9

[0174] A mixture of intermediate 8 (1.9 g, 4.70 mmol) and TBAF (1.0 M in THF, 4.7 mL) in THF (10 mL) was stirred for 1 hr at 25 ℃. The reaction mixture was diluted with H2O (50 mL) and extracted with EtOAc (30 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 9 (800 mg, 2.76 mmol, 58.71%yield) as a white solid.

[0175] Preparation of intermediate 10

[0176] To a mixture of intermediate 9 (210 mg, 724.75 μmol) and (4-fluorophenyl) boronic acid (121.69 mg, 869.70 μmol) in Dioxane (5 mL) and Water (0.5 mL) was added K2CO3 (300.49 mg, 2.17 mmol) and bis (2-ditert-butylphosphanylcyclopenta-2, 4-dien-1-yl) iron; dichloropalladium (47.24 mg, 72.47 μmol) . After stirring for 1hr at 100 ℃ under nitrogen atmosphere, the resulting mixture was diluted with H2O (50 mL) and extracted with EtOAc (30 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4. After filtration, the filtrate was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%in 10 min) to afford intermediate 10 (250 mg, 715.52 μmol, 98.73%yield) as a yellow solid.

[0177] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 10.

[0178] Preparation of intermediate 11

[0179] A mixture of intermediate 10 (250 mg, 715.52 μmol) and Dess-Martin Periodinane (910.44 mg,2.15 mmol) in DCM (5 mL) was stirred for 1 hr at 25℃. The mixture was adjusted pH >10 with Na2CO3 aq. The resulting mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with DCM (20 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 11 (220 mg, 633.31 μmol, 88.51%yield) as a white solid.

[0180] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 11.

[0181] Preparation of intermediate 22

[0182] To a solution of (5-chloro-2-methoxypyridin-4-yl) boronic acid (1 g, 5.34 mmol) in dioxane (20 mL) and water (2 mL) were added bromobenzene (1.3 g, 8.01 mmol) , potassium carbonate (1.5 g, 10.67 mmol) , and Pd (dppf) Cl2 (390 mg, 0.53 mmol) . The reaction mixture was stirred at 100 ℃ for 3 hr under N2 atmosphere. The reaction was diluted with water and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 22 (1.2 g, 4.92 mmol, 92.1%yield) as a yellow oil.

[0183] Preparation of intermediate 23

[0184] To a solution of intermediate 22 (1.2 g, 5.46 mmol) in dioxane (20 mL) and water (2 mL) were added (4-fluorophenyl) boronic acid (1.2 g, 8.19 mmol) , potassium carbonate (1.5 g, 10.93 mmol) , and RuPhos Pd G3 (400 mg, 0.55 mmol) . The reaction was stirred at 100 ℃ for 5 hr under N2 atmosphere. The reaction was diluted with water and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 23 (1.2 g, 3.87 mmol, 70.9%yield) as a yellow oil.

[0185] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 23.

[0186] Preparation of intermediate 24

[0187] To a solution of intermediate 23 (500 mg, 1.79 mmol) in dioxane (10 mL) was added 6 N of HCl (aq) (10 mL) and the reaction was stirred at 100 ℃ for 12 hrs. The reaction mixture was basified to pH about 7 with NaHCO3 saturated aqueous and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, concentrated in vacuo and the residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 24 (300 mg, 1.02 mmol, 57.0%yield) as a yellow solid.

[0188] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 24.

[0189] Preparation of intermediate 25

[0190] To a solution of intermediate 24 (250 mg, 0.94 mmol) , 1-cyclopropylprop-2-en-1-ol (139 mg, 1.41 mmol) and PPh3 (494 mg, 1.88 mmol) in THF (10 mL) at 0 ℃ was added DIAD (381 mg, 1.88 mmol) under N2 atmosphere. The reaction was stirred at r.t. for 8 hr under N2 atmosphere. The reaction was concentrated and purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 25 (120 mg, 0.31 mmol, 33.0%yield) as a yellow oil.

[0191] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 25.

[0192] Preparation of intermediate 26

[0193] To a solution of intermediate 25 (120 mg, 0.31 mmol) in dioxane (5 mL) and water (2 mL) was added NaIO4 (372 mg, 1.74 mmol) and potassium osmate (VI) dihydrate (13 mg, 0.03 mmol) . The mixture was stirred at rt for 3 hr. The reaction mixture was diluted with water and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 26 (100 mg, 0.26 mmol, 83.9%yield) as a yellow oil.

[0194] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 26.

[0195] Preparation of intermediate 39

[0196] To a mixture of intermediate 9 (250 mg, 862.79 μmol) and tributyl (2-pyridyl) stannane (635.26 mg, 1.73 mmol) in DMF (2 mL) was added Pd (PPh3) 4 (99.70 mg, 86.28 μmol) , LiCl (109.73 mg, 2.59 mmol) . After stirring for 16 hr at 100 ℃ under nitrogen atmosphere, the resulting mixture was quenched with saturated KF solution (10 mL) , filtered and extracted with EtOAc (10 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4. After filtration, the filtrate was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%-10%) to afford intermediate 39 (150 mg, 451.27 μmol, 52.30%yield) as a yellow oil.

[0197] The following intermediate was synthesized by an analogous method as described above for intermediate 39.

[0198] Preparation of intermediate 55

[0199] To a solution of intermediate 8 (500 mg, 1.24 mmol) in Toluene (10 mL) was added piperidine (210.75 mg, 2.48 mmol, 244.49 μL) , Pd (OAc) 2 (13.89 mg, 61.88 μmol) , BINAP (77.06 mg, 123.76 μmol) and t-BuONa (356.80 mg, 3.71 mmol) . The mixture was stirred at 100 ℃ for 2 hr under N2 atmosphere. The reaction mixture was diluted with H2O (10 mL) and extracted with EtOAc (15 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (5%to 40%) to afford intermediate 55 (150 mg, 331.34 μmol, 26.77%yield) as a red oil.

[0200] Preparation of intermediate 56

[0201] To a solution of intermediate 55 (150 mg, 331.34 μmol) in THF (3 mL) was added TBAF (1.0 M in THF, 1 mL) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hr. The reaction mixture was diluted with H2O (5 mL) and extracted with EtOAc (10 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 6%) to afford intermediate 56 (100 mg, 295.47 μmol, 89.17%yield) as a yellow oil.

[0202] Preparation of intermediate 57

[0203] To a solution of intermediate 56 (100 mg, 295.47 μmol) in DCM (10 mL) was added Dess-Martin Periodinane (375.96 mg, 886.41 μmol) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hr. The mixture was quenched with NaHCO3 aq. (5 mL) and extracted with DCM (10 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 8%) to afford intermediate 57 (50 mg, 148.62 μmol, 50.3 %yield) as a yellow solid. Preparation of intermediate 58

[0204] To a solution of intermediate 9 (300 mg, 1.04 mmol) in DMSO (5 mL) was added 4, 4-difluoropiperidine (1.25 g, 10.35 mmol) , KF (120.30 mg, 2.07 mmol) and DIEA (1.34 g, 10.35 mmol, 1.80 mL) . The mixture was stirred at 120 ℃ for 48 hr. The mixture was quenched with water (10 mL) and extracted with DCM (15 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 58 (130 mg, 347.20 μmol, 33.53%yield) as a yellow solid.

[0205] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 58.

[0206] Preparation of intermediate 59

[0207] To a solution of intermediate 58 (130 mg, 347.20 μmol) in DCM (8 mL) was added Dess-Martin Periodinane (589.05 mg, 1.39 mmol) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 4 hr. The mixture was quenched with NaHCO3 aq. and extracted with DCM (10 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 5%) to afford intermediate 59 (70 mg, 187.97 μmol, 54.14%yield) as a yellow solid.

[0208] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 59.

[0209] Preparation of intermediate 69

[0210] A mixture of intermediate 68 (300 mg, 883.83 μmol) , acetic acid (47.77 mg, 795.45 μmol) , HATU (504.09 mg, 1.33 mmol) and DIEA (342.69 mg, 2.65 mmol) in DMF (3 mL) was stirred for 1 h at 25 ℃. The reaction mixture was diluted with water (30 mL) and extracted with EtOAc (10 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 69 (180 mg, 448.27 μmol, 50.72%yield) as a colorless oil.

[0211] Preparation of intermediate 73

[0212] To a solution of 5-bromo-4-chloro-2-methoxypyridine (1.3 g, 5.9 mmol) in DMSO (20 mL) were added (R) -2-methylmorpholine (3.0 g, 6.5 mmol) and DIEA (2.2 g, 17.7 mmol) . The reaction was stirred at 130 ℃ for 16 hr under N2 atmosphere. After cooling down to room temperature, the reaction mixture was diluted with water and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 73 (870 mg, 3.1 mmol, 51.4%yield) as a yellow oil.

[0213] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 73.

[0214] Preparation of intermediate 74

[0215] To a solution of intermediate 73 (870 mg, 3.1 mmol) in dioxane (15 mL) and water (3 mL) were added phenylboronic acid (756 mg, 6.2 mmol) , potassium carbonate (1.3 g, 9.3 mmol) , and Pd (dppf) Cl2 (226 mg, 0.31 mmol) . The reaction was stirred at 100 ℃ for 3 hr under N2 atmosphere. The reaction mixture was diluted with water and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 74 (750 mg, 2.6 mmol, 87.1%yield) as a yellow oil.

[0216] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 74.

[0217] Preparation of intermediate 75

[0218] To a solution of intermediate 74 (750 mg, 2.6 mmol) in dioxane (10 mL) was added HCl (20 mL, 6N) and the reaction was stirred at 100 ℃ for 12 hrs. After the reaction was completion, the reaction mixture was basified to pH about 7 using NaHCO3 saturated aqueous, it was extracted with EtOAc and the combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate. It was filtered and concentrated in vacuo to afford intermediate 75 (600 mg, 2.2 mmol, 84.2%yield) as a yellow solid.

[0219] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 75.

[0220] Preparation of intermediate 76

[0221] To a solution of intermediate 75 (600 mg, 2.2 mmol) , 1-cyclopropylprop-2-en-1-ol (323mg, 3.3 mmol) and PPh3 (1.1 g, 4.4 mmol) in THF (10 mL) was added DIAD (888 mg, 4.4 mmol) at 0 ℃ under N2 atmosphere. The reaction was stirred at rt for 8 hr under N2 atmosphere. The reaction mixture was diluted with water and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 76 (279 mg, 0.79 mmol, 35.9%yield) as a yellow oil.

[0222] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 76.

[0223] Preparation of intermediate 77

[0224] To a solution of intermediate 76 (190 mg, 0.54 mmol) in dioxane (5 mL) and water (2 mL) were added NaIO4 (575 mg, 2.7 mmol) and Potassium Osmate (VI) dihydrate (10 mg, 0.03 mmol) , the mixture was stirred at rt for 3 hrs. The reaction mixture was diluted with water and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to afford intermediate 77 (78 mg, 0.22 mmol, 41.5%yield) as a yellow oil.

[0225] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 77.

[0226] Preparation of intermediate 101

[0227] To a mixture of 5-bromo-4-chloro-pyridin-2-amine (50 g, 241.02 mmol) in 30%H2SO4 (300 mL) was added NaNO2 (16.63 g, 241.02 mmol, 7.67 mL) in portions at 0 ℃. The resulting mixture was stirred for 3 hr at 0 ℃. The mixture was adjusted pH to 7. The precipitated solids were collected by filtration and washed with water to give intermediate 101 (48 g, 230.28 mmol, 95.55%yield) as a white solid.

[0228] Preparation of intermediate 102

[0229] To a mixture of intermediate 101 (35.00 g, 167.91 mmol) , intermediate 7 (43.60 g, 201.49 mmol) , triphenylphosphine (66.06 g, 251.87 mmol) in THF (300 mL) was added DIAD (50.93 g, 251.87 mmol) dropwise at 0 ℃. The mixture was stirred for 16 hr. The reaction mixture was diluted with water (200 mL) and extracted with EtOAc (50 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (0%to 20%) to afford intermediate 102 (7 g, 17.21 mmol, 20.49%yield) as a white solid.

[0230] Preparation of intermediate 103

[0231] To a mixture of intermediate 102 (7 g, 17.21 mmol) in THF (50 mL) was added TBAF (1.0 M in THF, 50 mL) dropwise. The resulting mixture was stirred for 16 hr at 25 ℃. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (0%to 80%) to afford intermediate 103 (4.5 g, 15.38 mmol, 89.39%yield) as a yellow solid.

[0232] Preparation of intermediate 104

[0233] A mixture of intermediate 103 (200 mg, 684.93 μmol) and 2-azaspiro [3.3] heptane (335.31 mg, 3.45 mmol) , DIEA (446.04 mg, 3.45 mmol, 601.13 μL) and KF (200.50 mg, 3.45 mmol) in NMP (2 mL) was stirred for 48 h at 100℃. The reaction mixture was diluted with water (5 mL) and extracted with EtOAc (3 mL x 3) . The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 104 (180 mg, 509.92 μmol, 74.41%yield) as a yellow oil.

[0234] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 104.

[0235] Preparation of intermediate 105

[0236] To a mixture of intermediate 104 (180 mg, 509.92 μmol) and phenylboronic acid (149.05 mg, 1.22 mmol) in Dioxane (2 mL) and Water (0.5 mL) was added Pd (dtbpf) Cl2 (39.84 mg, 61.12 μmol) and K2CO3 (253.42 mg, 1.83 mmol) . After stirring for 16 hr at 100℃ under nitrogen atmosphere, the resulting mixture was diluted with water (15 mL) and extracted with EtOAc (10 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4. After filtration, the filtrate was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to10%) to afford intermediate 105 (160 mg, 456.54 μmol, 89.53%yield) as a white solid.

[0237] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 105.

[0238] Preparation of intermediate 106

[0239] A mixture of intermediate 105 (160 mg, 456.55 μmol) and DMP (1.09 g, 2.57 mmol) in DCM (3 mL) was stirred for 4 hr at 25 ℃. The mixture was basified to pH >10 with Na2CO3 aq. The resulting mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with DCM (20 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 106 (50 mg, 143.50 μmol, 31.43%yield) as a yellow oil.

[0240] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 106.

[0241] Preparation of intermediate 134

[0242] To a mixture of intermediate 9 (150 mg, 517.68 μmol) and potassium cyclopropyltrifluoroborate (153.21 mg, 1.04 mmol) in toluene (4 mL) and water (1 mL) was added butyl di-1-adamantylphosphine (25.78 mg, 77.65 μmol) , K2CO3 (235.98 mg, 1.71 mmol) and Pd (OAc) 2 (5.81 mg, 25.88 μmol) . After stirring for 1 h at 100 ℃ under nitrogen atmosphere, the resulting mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with EtOAc (10 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4. After filtration, the filtrate was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 134 (150 mg, 482.44 μmol, 93.19%yield) as a brown solid.

[0243] Preparation of intermediate 136

[0244] To a mixture of intermediate 9 (150 mg, 517.68 μmol) and 2- (cyclohexen-1-yl) -4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolane (215.46 mg, 1.04 mmol) in 1, 4-dioxane (3 mL) and Water (1 mL) was added K2CO3 (214.64 mg, 1.55 mmol) and Pd (dtbpf) Cl2 (33.74 mg, 51.77 μmol) . After stirring for 4 hr at 100 ℃ under nitrogen atmosphere, the resulting mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EtOAc (5 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2CO3. After filtration, the filtrate was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (50%to 100%) to afford intermediate 136 (150 mg, 447.18 μmol, 86.38%yield) as yellow oil.

[0245] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 136.

[0246] Preparation of intermediate 137

[0247] A mixture of intermediate 136 (120 mg, 357.74 μmol) , HCOONH4 (225 mg, 3.58 mmol) and Pd / C (11.42 mg, 107.32 μmol) in MeOH (2 mL) was stirred for 16 hr at 60 ℃. The resulting mixture was filtered, the filter cake was washed with MeOH. The filtrate was concentrated under vacuum to give intermediate 137 (100 mg, 296.34 μmol, 82.84%yield) as a white solid.

[0248] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 137.

[0249] Preparation of intermediate 145

[0250] To a solution of intermediate 2 (600 mg, 2.43 mmol) in DMF (10 mL) was added NBS (454 mg, 2.55 mmol) at 0 ℃ under N2 atmosphere. The reaction was stirred at 80 ℃ for 1 h under N2 atmosphere. The reaction was concentrated, and residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 145 (650 mg, 2.00 mmol, 82.3%) as a yellow solid.

[0251] Preparation of intermediate 146

[0252] To a solution of intermediate 145 (650 mg, 2.00 mmol) in dioxane (10 mL) and water (2 mL) were added 2, 4, 6-trimethyl-1, 3, 5, 2, 4, 6-trioxatriborinane (1.3 g, 10.00 mmol) , Potassium carbonate (553 mg, 4.00 mmol) and Pd (dppf) Cl2 (146 mg, 0.20 mmol) . The reaction was stirred at 100 ℃ for 5 hr under N2 atmosphere. The reaction was diluted with water and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 146 (120 mg, 0.46 mmol, 23.0%yield) as a yellow solid.

[0253] Preparation of intermediate 149

[0254] To a solution of 5-bromo-4-chloro-2- (methylsulfanyl) pyrimidine (2 g, 8.35 mmol) in dioxane (20 mL) and water (2 mL) were added phenylboronic acid (1.5 g, 12.53 mmol) , potassium carbonate (2.3 g, 16.70 mmol) , and Pd (dppf) Cl2 (611 mg, 0.84 mmol) . The reaction was stirred at 100 ℃ for 5 hr under N2 atmosphere. The reaction was diluted with water and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 149 (1.6 g, 5.17 mmol, 61.9%yield) as a yellow oil.

[0255] Preparation of intermediate 150

[0256] To a solution of intermediate 149 (1.6 g, 5.17 mmol) in EtOH (10 mL) was added 6 N of HCl (aq) (15 mL) and the reaction was stirred at 80 ℃ for 24 hrs. The reaction mixture was basified to pH about 7 with NaHCO3 saturated aqueous, the mixture was extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, filtered and concentrated in vacuo and the residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 150 (860 mg, 3.12 mmol, 60.3%yield) as a yellow solid.

[0257] Preparation of intermediate 151

[0258] To a solution of intermediate 150 (400 mg, 1.61 mmol) , 1-cyclopropylprop-2-en-1-ol (316 mg, 3.22 mmol) and PPh3 (845 mg, 3.22 mmol) in THF (20 mL) at 0 ℃, and it was added DIAD (652 mg, 3.22 mmol) under N2 atmosphere. The reaction was stirred at r.t. for 8 hr under N2 atmosphere. The reaction was concentrated and purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 151 (200 mg, 0.55 mmol, 34.2%) as a yellow oil.

[0259] Preparation of intermediate 152

[0260] To a solution of intermediate 151 (100 mg, 0.31 mmol) in dioxane (5 mL) and water (2 mL) was added NaIO4 (326 mg, 1.52 mmol) and potassium osmate (VI) dihydrate (6 mg, 0.02 mmol) , the mixture was stirred at r.t. for 3 hrs. The reaction mixture was diluted with water and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 152 (90 mg, 0.25 mmol, 80.6%yield) as a yellow oil.

[0261] Preparation of intermediate 153

[0262] To a solution of 5-bromo-4-chloro-2- (methylsulfanyl) pyrimidine (5 g, 20.88 mmol) in MeCN (50 mL) was added 4, 4-difluoropiperidine (3.0 g, 25.05 mmol) and potassium carbonate (5.8 g, 41.75 mmol) . The reaction was stirred at 50 ℃ for 5 hr under N2 atmosphere. The reaction was diluted with water and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 153 (5.9 g, 16.38 mmol, 78.4%) as a yellow solid.

[0263] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 153.

[0264] Preparation of intermediate 154

[0265] To a solution of intermediate 153 (5.9 g, 16.38 mmol) in dioxane (30 mL) and water (3 mL) were added phenylboronic acid (3.3 g, 27.30 mmol) , potassium carbonate (5.0 g, 36.40 mmol) , and Pd (dppf) Cl2 (666 mg, 0.91 mmol) . The reaction was stirred at 100 ℃ for 3 hr under N2 atmosphere. The reaction was diluted with water and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 154 (4.0 g, 11.20 mmol, 61.6%yield) as a yellow oil.

[0266] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 154.

[0267] Preparation of intermediate 155

[0268] To a solution of intermediate 154 (2.0 g, 6.22 mmol) in MeOH / THF / water (10 mL / 10 mL / 5 mL) was added OXONE (6.5 g, 18.67 mmol) and the reaction was stirred at r.t. for 16 hr. The reaction mixture was basified pH about 7 with NaHCO3 saturated aqueous, it was extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine. It was filtered and concentrated in vacuo to afford intermediate 155 (1.9 g, 4.81 mmol, 77.3%) as a yellow solid.

[0269] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 155.

[0270] Preparation of intermediate 156

[0271] To a solution of intermediate 155 (1.9 g, 5.38 mmol) in dioxane (20 mL) at 0 ℃, and was added 2 N of NaOH (aq. ) (8.1 mL, 16.14 mmol) . The reaction was stirred at r.t. for 3 hrs. The reaction was acidified pH about 7 with 2 N of HCl (aq. ) and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine. It was filtered and concentrated in vacuo, and the residue was purified using silica gel column chromatography eluting with MeOH in DCM to afford intermediate 156 (1500 mg, 4.63 mmol, 86.1%yield) as a yellow oil.

[0272] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 156.

[0273] Preparation of intermediate 157

[0274] To a solution of intermediate 156 (1 g, 3.43 mmol) , 1-cyclopropylprop-2-en-1-ol (674 mg, 6.87 mmol) and PPh3 (1.8 g, 6.87 mmol) in THF (20 mL) at 0 ℃ was added DIAD (1.4 g, 6.87 mmol) under N2 atmosphere. The reaction was stirred at r.t. for 8 hr under N2 atmosphere. The reaction was concentrated and purified using silica gel column chromatography eluting with ethyl acetate in petroleum ether to afford intermediate 157 (200 mg, 0.54 mmol, 15.7%yield) as a yellow oil.

[0275] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 157.

[0276] Preparation of intermediate 158

[0277] To a solution of intermediate 157 (200 mg, 0.54 mmol) in dioxane (5 mL) and water (2 mL) were added NaIO4 (576 mg, 2.69 mmol) and potassium osmate (VI) dihydrate (10 mg, 0.03 mmol) and the mixture was stirred at r.t. for 3 hr. The reaction mixture was diluted with water and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to afford intermediate 158 (160 mg, 0.43 mmol, 79.6%yield) as a yellow oil.

[0278] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 158.

[0279] Preparation of intermediate 189

[0280] To a solution of 5-iodopyrimidine-2, 4 (1H, 3H) -dione (25 g, 105.05 mmol) in a mixture of pyridine (70 mL) and acetonitrile (180 mL) was added benzoyl chloride (44.30 g, 315.15 mmol) at 0 ℃. The reaction mixture was stirred for 24 hr at room temperature. After evaporation of all the volatiles, the residue was stirred in K2CO3 aq. (0.25 mol, 150 mL) and dioxane (150 mL) for 1 hr at room temperature. After evaporation, the resulting mixture was acidified to pH = 3 with HCl (6 N) until white solid appeared. The solids were collected by filtration and washed with PE / EtOAc (100 ml, 9 / 1) to afford intermediate 189 (18 g, 52.62 mmol, 50.09%yield) as a white solid.

[0281] Preparation of intermediate 190

[0282] To a stirred solution of intermediate 189 (15 g, 43.85 mmol) , intermediate 7 (18.98 g, 87.70 mmol) and PPh3 (23.00 g, 87.70 mmol) in THF (200 mL) at 0℃ was added DIAD (17.73 g, 87.70 mmol) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred for 16 h at 25 ℃ under N2 atmosphere. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (0%to 20%) to afford intermediate 190 (10 g, 17.58 mmol, 40.09%yield) as a white solid.

[0283] Preparation of intermediate 191

[0284] A mixture of intermediate 190 (10 g, 18.50 mmol) in NH3 (4.0 M in methanol, 40 mL) was stirred for 1 h at 25 ℃. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The crude product was used in the next step directly without further purification.

[0285] Preparation of intermediate 192

[0286] A mixture of intermediate 191 (8 g, 18.33 mmol) , phenylboronic acid (3.35 g, 27.50 mmol) , K2CO3 (7.60 g, 55.00 mmol) and Pd (dppf) Cl2. CH2Cl2 (1.50 g, 1.83 mmol) in Dioxane (80 mL) and water (20 mL) was stirred for 1 hr at 100 ℃ under N2 atmosphere. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (0%to 20%) to afford intermediate 192 (3.5 g, 9.05 mmol, 49.39%yield) as a white solid.

[0287] Preparation of intermediate 193

[0288] A mixture of intermediate 192 (200 mg, 517.39 μmol) , 6-azaspiro [2.5] octane (115.05 mg, 1.03 mmol) , BOP (457.66 mg, 1.03 mmol) and DBU (157.53 mg, 1.03 mmol) in MeCN (1.8 mL) was stirred for 2 hr at 25 ℃ . The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (0%to 100%) to afford intermediate 193 (220 mg, 435.66 μmol, 84.20%yield) as a white solid.

[0289] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 193.

[0290] Preparation of intermediate 194

[0291] A mixture of intermediate 193 (220 mg, 458.59 μmol) in TBAF (1.0 M in THF, 2 mL) was stirred for 1 h at 25 ℃. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 194 (100 mg, 273.62 μmol, 59.67%yield) as a white solid.

[0292] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 194.

[0293] Preparation of intermediate 195

[0294] To a mixture of intermediate 194 (100 mg, 273.62 μmol) in DCM (5 mL) was added Dess-Martin Periodinane (348.16 mg, 820.87 μmol) in portions at 25℃. The resulting mixture was stirred for 1 h at 25℃. The mixture was basified to pH >10 with Na2CO3. The resulting mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with DCM (10 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with MeOH in DCM (0%to 10%) to afford intermediate 195 (85 mg, 222.18 μmol, 81.20%yield) as a colorless oil.

[0295] The following intermediates were synthesized by an analogous method as described above for intermediate 195.

[0296] Preparation of intermediate 256

[0297] To a solution of 4-chloro-3-nitro-1H-pyridin-2-one (6 g, 34.38 mmol) in DMF (60 mL) was added NaH (1.65 g, 41.25 mmol, 60%purity) at 0 ℃ dropwise under N2. After 10 mins, LiBr (5.97 g, 68.75 mmol, 1.73 mL) was added and the reaction mixture was allowed to stir at 25 ℃ for 15 mins followed by the addition of ethyl 2-bromo-2-cyclopropyl-acetate (7.12 g, 34.38 mmol) in DMF (10 mL) . The reaction mixture was stirred at 65 ℃ for 12 h. The reaction mixture was cooled to 0 ℃ and quenched with aq. NH4Cl (30 mL) . Water (150 mL) was added, the mixture was extracted with ethyl acetate (80 mL x 2) . The combined organic layers were washed with the saturated solution of lithium chloride (100 mL x 2) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: petroleum ether, B: ethyl acetate, 0%B to 50%B in A) to give intermediate 256 (3.3 g, 10.89 mmol, 31.69%yield, 99.25%purity) as a yellow solid.

[0298] Preparation of intermediate 257

[0299] To a solution of intermediate 256 (3.3 g, 10.97 mmol) and 4, 4-difluoropiperidine hydrochloride (1.73 g, 10.97 mmol) in DMF (30 mL) was added TEA (3.33 g, 32.92 mmol, 4.58 mL) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 h. Water (100 mL) was added, the mixture was extracted with ethyl acetate (80 mL x 2) . The combined organic layers were washed with the saturated solution of NH4Cl (80 mL x 3) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: petroleum ether, B: ethyl acetate, 0%B to 50%B in A) to give intermediate 257 (4 g, 10.26 mmol, 93.48%yield, 98.84%purity) as a yellow solid.

[0300] Preparation of intermediate 258

[0301] To a solution of intermediate 257 (4 g, 10.38 mmol) in DCM (50 mL) was added NBS (2.22 g, 12.46 mmol) under N2. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 12 h. The saturated solution of sodium bicarbonate (80 mL) was added and then the mixture was extracted with dichloromethane (50 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: petroleum ether, B: ethyl acetate, 0%B to 30%B in A) to give intermediate 258 (5 g, 9.80 mmol, 94.41%yield, 90.99%purity) as a yellow solid.

[0302] Preparation of intermediate 259

[0303] To a solution of intermediate 258 (5 g, 10.77 mmol) and phenylboronic acid (1.97 g, 16.15 mmol) in dioxane (50 mL) and H2O (5 mL) was added Cs2CO3 (7.02 g, 21.54 mmol) . The suspension was degassed under vacuum and purged with N2 atmosphere for three times, and then Pd (dppf) Cl2 (788.04 mg, 1.08 mmol) was added. The mixture was degassed under vacuum and purged with N2 atmosphere for three times and stirred at 95 ℃ for 1 h. The reaction mixture was cooled to 25 ℃, H2O (100 mL) was added, the mixture was extracted with ethyl acetate (80 mL x 2) . The combined organic layers were washed with the saturated solution of NaCl (80 mL x 2) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: petroleum ether, B: ethyl acetate, 0%B to 30%B in A) to give intermediate 259 (2.5 g, 5.38 mmol, 49.99%yield, 99.37%purity) as a yellow solid.

[0304] Preparation of intermediate 260

[0305] To a solution of intermediate 259 (2.5 g, 5.42 mmol) in THF (10 mL) , EtOH (10 mL) and H2O (10 mL) were added Fe (1.51 g, 27.09 mmol) and NH4Cl (2.90 g, 54.18 mmol) . The reaction mixture was stirred at 70 ℃ for 1 h. The reaction mixture was filtered white hot, the filter cake washed with DCM (50 mL) . H2O (80 mL) was added, the mixture was extracted with dichloromethane (50 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: n-hexane, B: ethyl acetate, 0%B to 65%B in A) to give intermediate 260 (1.4 g, 2.99 mmol, 55.18%yield, 92.14%purity) as a yellow solid.

[0306] Preparation of intermediate 261

[0307] To a solution of intermediate 260 (1.4 g, 3.24 mmol) in THF (20 mL) was added LiAlH4 (1 M, 15 mL) dropwise at 0 ℃ under N2. The reaction mixture was stirred at 0 ℃ for 2 h. The reaction mixture was quenched with H2O (0.6 mL) , 10%aq. NaOH (0.6 mL) and H2O (1.8 mL) at 0 ℃ dropwise. Then anhydrous Na2SO4 and DCM (30 mL) were added, and the mixture was stirred for 10 mins, filtered and concentrated under reduced pressure to give the crude product. The crude product was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: n-hexane, B: ethyl acetate, 0%B to 75%B in A) to give intermediate 261 (570 mg, 1.40 mmol, 43.14%yield, 95.63%purity) as a yellow solid.

[0308] Preparation of intermediate 262

[0309] A mixture of (COCl) 2 (161.33 mg, 1.27 mmol, 111.26 μL) in DCM (3 mL) was cooled to -78 ℃. A solution of DMSO (198.62 mg, 2.54 mmol, 198.62 μL) in DCM (3 mL) was added dropwise at -78 ℃ under N2. The reaction mixture was stirred at -78 ℃ for 30 mins under N2. Intermediate 261 (330 mg, 847.38 μmol) dissolved in DCM (3 mL) was added dropwise at -78 ℃ under N2. The reaction mixture was stirred at -78 ℃ for 30 mins. Then TEA (428.73 mg, 4.24 mmol, 589.72 μL) dissolved in DCM (3 mL) was added dropwise at -78 ℃ under N2. The reaction mixture was stirred at -78 ℃ for 30 mins and then warmed to 0 ℃. The reaction mixture was quenched with H2O (30 mL) at 0 ℃, DCM (30 mL) was added. The organic layer was separated and washed with brine (20 mL) and sat. aq. NaHCO3 (20 mL) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under reduce pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: n-hexane, B: ethyl acetate, 0%B to 75%B in A) to give intermediate 262 (130 mg, crude) as a yellow gum.

[0310] Preparation of intermediate 269

[0311] The solution of intermediate 192 (200 mg, 517.39 μmol) and DMAP (12.64 mg, 103.48 μmol) in DCM (2.0 mL) was cooled to 0℃. TEA (314.12 mg, 3.10 mmol) was added into the mixture. After stirring for 30 min at 0℃ , 2, 4, 6-trimethylbenzenesulfonyl chloride (384.72 mg, 1.76 mmol) was added. The reaction mixture was allowed to room temperature and stirred under nitrogen gas for 30 h. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (0%to 30%in 20 min) to afford intermediate 269 (150 mg, 263.71 μmol, 50.97%yield) as a white solid.

[0312] Preparation of intermediate 270

[0313] To a solution of intermediate 269 (400 mg, 703.24 μmol) in 1, 4-dioxane (5 mL) and water (1 mL) was added 2- (4, 4-difluorocyclohexen-1-yl) -4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolane (343.30 mg, 1.41 mmol) , K2CO3 (291.57 mg, 2.11 mmol) and Pd (dtbpf) Cl2 (45.83 mg, 70.32 μmol) . The mixture was stirred at 90 ℃ for 1 hr under N2 atmosphere. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with EtOAc in PE (0%to 50%in 20 min) to afford intermediate 270 (300 mg, 616.44 μmol, 87.66%yield) as a colorless oil.

[0314] The following intermediate was synthesized by an analogous method as described above for intermediate 270.

[0315] Preparation of intermediate 273

[0316] To a solution of 1- [ethoxy (iodomethyl) phosphoryl] oxyethane (1 g, 3.60 mmol) in DMF (12 mL) was added sodium ethanethiolate (605.10 mg, 7.19 mmol) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 14 hr. The reaction mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EtOAc (3 x 15 mL) . The combined organic layers were washed with brine (3 x 450 mL) , dried over Na2SO4 and concentrated to get the crude product. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluted with [MeOH] in [DCM] (0%to 5%in 15 min) to afford intermediate 273 (350 mg, 1.65 mmol, 45.85%yield) as a yellow oil.

[0317] Preparation of intermediate 274

[0318] To a solution of intermediate 273 (350 mg, 1.65 mmol) in MeOH (15 mL) and water, Reagent (Deionized water) , ACS (15 mL) was added Oxone (2.03 g, 3.30 mmol) . The reaction was stirred overnight at 25 ℃ . After 14 h, the reaction mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with ethyl acetate (3 x 20 mL) . The organic layer was washed with brine (2 x 20 mL) , dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo to afford the desired product intermediate 274 (250 mg, 1.02 mmol, 62.07%yield) as a yellow oil.

[0319] Preparation of intermediate 275

[0320] To a solution of 4-chloro-3-nitro-1H-pyridin-2-one (7 g, 40.11 mmol) and (4-fluorophenyl) boronic acid (5.61 g, 40.11 mmol) in dioxane (80 mL) and H2O (10 mL) was added K2CO3 (11.09 g, 80.21 mmol) . The suspension was degassed under vacuum and purged with N2 atmosphere for three times, and then Pd (dppf) Cl2 (1.47 g, 2.01 mmol) was added. The mixture was degassed under vacuum and purged with N2 atmosphere for three times and stirred at 95 ℃ for 4 h. The reaction mixture was cooled to 25 ℃, H2O (200 mL) was added, the mixture was extracted with ethyl acetate (120 mL x 3) . The combined organic layers were washed with the saturated solution of NaCl (100 mL x 2) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was triturated with MTBE (200 mL) at 25 ℃ for 1 h to afford intermediate 275 (9.1 g, 36.39 mmol, 90.75%yield, 93.66%purity) as a brown solid.

[0321] Preparation of intermediate 276

[0322] To a solution of intermediate 275 (9 g, 38.43 mmol) in DMF (90 mL) was added NaH (1.84 g, 46.12 mmol, 60%purity) at 0 ℃ dropwise under N2. After 10 mins, LiBr (6.68 g, 76.86 mmol, 1.93 mL) was added and the reaction mixture was allowed to stir at 25 ℃ for 15 mins followed by the addition of ethyl 2-bromo-2-cyclopropyl-acetate (7.96 g, 38.43 mmol) in DMF (10 mL) . The reaction mixture was stirred at 65 ℃ for 12 h. The reaction mixture was cooled to 0 ℃ and quenched with aq. NH4Cl (50 mL) . Water (300 mL) was added, the mixture was extracted with ethyl acetate (200 mL x 3) . The combined organic layers were washed with the saturated solution of NH4Cl (150 mL x 2) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: n-hexane, B: ethyl acetate, 0%B to 50%B in A) to give intermediate 276 (5.5 g, 12.39 mmol, 32.24%yield, 81.17%purity) as a yellow solid.

[0323] Preparation of intermediate 277

[0324] To a solution of intermediate 276 (5.5 g, 15.26 mmol) in DMF (55 mL) was added NBS (3.26 g, 18.32 mmol) under N2. The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 2 h. Water (200 mL) was added, the mixture was extracted with ethyl acetate (100 mL x 3) . The combined organic layers were washed with the saturated solution of NH4Cl (100 mL x 3) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: petroleum ether, B: ethyl acetate, 0%B to 30%B in A) to give intermediate 277 (6 g, 11.99 mmol, 78.54%yield, 87.76%purity) as a yellow solid.

[0325] Preparation of intermediate 278

[0326] To a solution of intermediate 277 (1.2 g, 2.73 mmol) and phenylboronic acid (499.67 mg, 4.10 mmol) in dioxane (10 mL) and H2O (1 mL) was added K3PO4 (1.16 g, 5.46 mmol) . The suspension was degassed under vacuum and purged with N2 atmosphere for three times, and then Pd (dppf) Cl2 (199.90 mg, 273.20 μmol) was added. The mixture was degassed under vacuum and purged with N2 atmosphere for three times and stirred at 85 ℃ for 2 h. The reaction mixture was cooled to 25 ℃, H2O (100 mL) was added, the mixture was extracted with ethyl acetate (80 mL x 2) . The combined organic layers were washed with the saturated solution of NaCl (80 mL x 2) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: petroleum ether, B: ethyl acetate, 0%B to 30%B in A) to give intermediate 278 (1.1 g, 2.42 mmol, 88.67%yield, 96.11%purity) as a yellow solid.

[0327] Preparation of intermediate 279

[0328] To a solution of intermediate 278 (1 g, 2.29 mmol) in THF (4 mL) , EtOH (4 mL) and H2O (4 mL) were added Fe (639.85 mg, 11.46 mmol) and NH4Cl (1.23 g, 22.91 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 1.5 h. The reaction mixture was filtered white hot, the filter cake washed with DCM (50 mL) and H2O (80 mL) . The mixture was extracted with dichloromethane (50 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: n-hexane, B: ethyl acetate, 0%B to 40%B in A) to give intermediate 279 (830 mg, 1.93 mmol, 84.02%yield, 94.27%purity) as a yellow solid.

[0329] Preparation of intermediate 280

[0330] To a solution of intermediate 279 (200 mg, 492.07 μmol, 1 eq) in DCM (5 mL) was added DIBAL-H (1 M, 590.48 μL) dropwise at -78 ℃ under N2. The reaction mixture was stirred at -78 ℃ for 3 h. The reaction mixture was quenched with sat. aq. NH4Cl (10 mL) at -78 ℃ under N2. H2O (30 mL) was added, the mixture was extracted with ethyl acetate (20 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: n-hexane, B: ethyl acetate, 0%B to 60%B in A) to give intermediate 280 (60 mg, crude) as a yellow oil.

[0331] Preparation of Compounds

[0332] Preparation of Compound 1

[0333] To a mixture of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (136.29 mg, 592.00 μmol) in THF (2 mL) was cooled to 0 ℃ and added NaH (60%dispersion in oil) (9.47 mg, 394.67 μmol) . After stirred for 1h, intermediate 4 (130 mg, 394.67 μmol) was added. The resulting mixture was stirred for 1 h at 0 ℃. The crude product was purified by Prep-HPLC with the following condition (column: Waters SunFire, 250*19mm, 5mm; mobile phase: [water (0.1%FA) -ACN] ; ACN%: 35%-49%, 10min) to afford Compound 1 (30 mg, 73.98 μmol, 18.75%yield) as a white solid.

[0334] Preparation of Compound 1A and 1B

[0335] Compound 1 (28 mg, 69.05 μmol) was purified by UPCC with the following conditions (column: DAICEL  OD-3, 100*3.0mm 3um; mobile phase: [Supercritical CO2-MeOH + (0.05%) DEA] ; MeOH %: 40%, 5 min) . The first faction was collected as Compound 1A (7.8 mg, 19.24 μmol, 55.71%yield) and the second fraction was collected as Compound 1B (5.5 mg, 13.56 μmol, 39.29%yield) .

[0336] Preparation of Compound 2

[0337] A solution of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (212.07 mg, 921.18 μmol) in THF (10 mL) was treated with NaH (14.74 mg, 368.47 μmol, 60%purity) for 0.5 h at 0℃ followed by the addition of intermediate 11 (160 mg, 460.59 μmol) dropwise at 0℃. The resulting mixture was stirred for 5 min at 0℃. The mixture was quenched with NH4Cl solution (3 mL) and extracted with EtOAc (8 mL x 2) . The mixture was dried over Na2SO4 and concentrated to get the crude product, which was purified by Prep-HPLC with the following conditions (column: Waters SunFire, 250*19mm, 5mm; mobile phase: [water (0.1%FA) -ACN] ; ACN%: 28%-40%, 10min) to afford Compound 2 (35 mg, 82.64 μmol, 17.94%yield) as a yellow solid.

[0338] The following compounds were synthesized by an analogous method as described above for Compound 2.

[0339] Preparation of Compound 8

[0340] To a solution of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (100 mg, 0.43 mmol) in THF (5 mL) was added NaH (7 mg, 0.29 mmol) at 0 ℃. The reaction was stirred at 0 ℃ for 4 hrs. The mixture was added to a solution of intermediate 26 (100 mg, 0.26 mmol) in THF (5 mL) at 0 ℃, the reaction was warmed up the rt and stirred for 2 hrs. The reaction was quenched with NH4Cl (sat. ) and extracted with EtOAc. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to give a residue, which was purified by prep-HPLC (WELCH Xtimate C18 21.2*250mm 10um) , Mobile Phase A: Water (0.1%FA) , Mobile Phase B: acetonitrile, UV: 214 nm, Flowrate: 30 mL  / min, Temperature: rt, Gradient: 40 -85 % (%B) ) to give Compound 8 (11 mg, 0.03 mmol, yield: 7.0%) as a white solid.

[0341] The following compounds were synthesized by an analogous method as described above for Compound 8.

[0342] Preparation of Compound 21

[0343] To a solution of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (68 mg, 297.5 μmol) in THF (4 mL) was added NaH (60%dispersion in oil) (5.35 mg, 133.75 μmol, 60%purity) at 0 ℃. The mixture was stirred at this temperature for 20 min. Then the solution was added dropwise into a mixture of intermediate 57 (50 mg, 148.63 μmol) in THF (4 mL) . The mixture was stirred at 0 ℃ for 10 min. The reaction mixture was diluted with NH4Cl aq. (5 mL) and extracted with EtOAc (6 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The crude product was purified by Prep-HPLC with the following conditions (column: Waters SunFire, 250*19mm, 5mm; mobile phase: [water (0.1%FA) -ACN] ; ACN%: 30%-44%, 10min) to afford Compound 21 (38 mg, 92.11 μmol, 61.99%yield) as a white solid.

[0344] Preparation of Compound 21A and 21B

[0345] Compound 21 (38 mg, 92.11 μmol) was purified by UPCC with the following conditions (column: DAICEL  IG-10, 25*250mm 10 μm; mobile phase: [Supercritical n-hexane-EtOH] ; EtOH%: 40%, 13.5min) . The first faction was collected as Compound 21A and the second fraction was collected as Compound 21B (12 mg, 29.09 μmol, 31.58%yield) as a white solid.

[0346] Preparation of Compound 23

[0347] To a solution of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (86.55 mg, 375.93 μmol) in (3 mL) was added NaH (60%dispersion in oil) (7.52 mg, 187.97 μmol, 60%purity) . After stirring for 30min at 0℃, intermediate 59 (70 mg, 187.97 μmol) was added into the mixture. The reaction mixture was diluted with NH4Cl aq. (2 mL) and extracted with EtOAc (5 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The crude product was purified by Prep-HPLC with the following conditions (column: Waters SunFire, 250*19mm, 5mm; mobile phase: [water (0.1%FA) -ACN] ; ACN%: 30%-44%, 10min) to afford Compound 23 (10 mg, 22.30 μmol, 11.86%yield) as a white solid.

[0348] The following compounds were synthesized by an analogous method as described above for Compound 23.

[0349] Preparation of Compound 29

[0350] To a solution of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (78 mg, 0.22 mmol) in THF (5 mL) was added NaH (4 mg, 0.17 mmol) at 0 ℃, the reaction was stirred at 40 ℃ for 4 hrs. The mixture was added to a solution of intermediate 77 (60 mg, 0.17 mmol) in THF (10 mL) at 0 ℃, the reaction was stirred at rt for 2 hrs. The reaction was quenched with NH4Cl (sat. ) and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine and dried over anhydrous sodium sulfate. It was filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue, which was purified by prep-HPLC (WELCH Xtimate C18 21.2*250mm 10um) , Mobile Phase A: Water (0.1%FA) , Mobile Phase B: acetonitrile, UV: 214 nm, Flowrate: 30 mL  / min, Temperature: rt, Gradient: 20 -70 % (%B) ) to give Compound 29 (10 mg, 0.02 mmol, yield: 10.5%) as a white solid.

[0351] The following compounds were synthesized by an analogous method as described above for Compound 29.

[0352] Preparation of Compound 42

[0353] To a solution of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (49.55 mg, 215.25 μmol) in THF (2 mL) was added NaH (60%dispersion in oil, 3.44 mg, 143.50 μmol) at 0℃. The mixture was stirred at this temperature for 20 min. Then intermediate 106 (50 mg, 143.50 μmol) was added into the mixture. The mixture was stirred at 0℃ for 0.5 h. The reaction mixture was diluted with NH4Cl aq. (5 mL) and extracted with EtOAc (6 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The crude product was purified by Prep-HPLC with the following conditions (column: Waters SunFire, 250*19 mm, 5 mm; mobile phase: [water (0.1%FA) -ACN] ; ACN%: 30%-44%, 10 min) to afford Compound 42 (10 mg, 22.23 μmol, 15.49%yield) as a white solid.

[0354] The following compounds were synthesized by an analogous method as described above for Compound 42.

[0355] Preparation of Compound 52

[0356] To a solution of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (94 mg, 0.41 mmol) in THF (5 mL) was added NaH (7 mg, 0.27 mmol) at 0 ℃, the reaction was stirred at 40 ℃ for 4 hrs. The mixture was added to a solution of intermediate 152 (90 mg, 0.27 mmol) in THF (5 mL) at 0 ℃, the reaction was stirred at r.t. for 2 hrs. The reaction was quenched with NH4Cl (sat. ) . It was extracted with EtOAc, the organic layers were washed with brine and dried over anhydrous sodium sulfate. It was filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue, which was purified by prep-HPLC (WELCH Xtimate C18 21.2*250mm 10um) , Mobile Phase A: Water (0.1%FA) , Mobile Phase B: acetonitrile, UV: 214 nm, Flowrate: 30 mL  / min, Temperature: rt, Gradient: 30 -70 % (%B) ) to give Compound 52 (10 mg, 0.02 mmol, yield: 8.1%) as a white solid.

[0357] Preparation of Compound 54A and 54B

[0358] To a solution of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (148 mg, 0.64 mmol) in THF (5 mL) was added NaH (11 mg, 0.43 mmol) at 0 ℃ and the reaction was stirred at 40 ℃ for 4 hrs. The mixture was added to a solution of intermediate 158 (160 mg, 0.43 mmol) in THF (10 mL) at 0 ℃ and the reaction was stirred at rt for 2 hr. The reaction was quenched with NH4Cl (sat. ) and extracted with EtOAc. The organic layers were washed with brine and dried over anhydrous sodium sulfate. It was filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue, which was purified by prep-HPLC (WELCH Xtimate C18 21.2*250mm 10um) , Mobile Phase A: Water (0.1%FA) , Mobile Phase B: acetonitrile, UV: 214 nm, Flowrate: 30 mL  / min, Temperature: rt, Gradient: 20 -70 % (%B) ) to give the racemic product (40 mg, 0.09 mmol, yield: 20.8%) as a white solid, which was separated by SFC (Instrument: Waters Acquity UPCC; Column: Daicel CHIRALPAK IC_3, 3.0*150mm, 3um; Mobile Phase: A / B: CO2 / MeOH (0.1%DEA) = 70 / 30; Flow rate: 2.0 mL / min; Column Temp: 37 degree) . The first fraction was collected as Compound 54A (18 mg, 0.04 mmol, yield: 36%) as a white solid and the second fraction was collected as Compound 54B (16 mg, 0.04 mmol, yield: 36%) as a white solid.

[0359] The following compounds were synthesized by an analogous method as described above for Compound 54A &54B.

[0360] Preparation of Compound 57

[0361] A solution of diethyl ( (methylsulfonyl) methyl) phosphonate (95.01 mg, 412.71 μmol) in THF (5 mL) was treated with NaH (60%dispersion in oil, 11.00 mg, 275.14 μmol, 60%purity) for 0.5 h at 0℃ followed by the addition of intermediate 195 (100 mg, 275.14 μmol) at 0℃. The resulting mixture was stirred for 1 h at 0℃. The reaction was quenched with NH4Cl at 0℃. The resulting mixture was diluted with water (5 mL) and extracted with EtOAc (10 mL x 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum. The crude product was purified by Prep-HPLC with the following conditions (column: Waters SunFire, 250*19mm, 5mm; mobile phase: [water (0.1%FA) -ACN] ; ACN%: 30%-44%, 10 min) to afford Compound 57 (6 mg, 13.51 μmol, 4.91%yield) as a white solid.

[0362] The following compounds were synthesized by an analogous method as described above for Compound 57.

[0363] Preparation of Compound 62A and 62B

[0364] Compound 62 (40 mg, 89.78 μmol) was purified by UPCC with the following conditions (column: DAICEL  IG-10, 25*250mm 10 μm; mobile phase: [Supercritical CO2-MeOH + 0.05%NH3·MeOH] ; MeOH%: 30%, 5.01min) . The first fraction was collected as Compound 62A (16 mg, 35.91 μmol, 40.00%yield) and the second fraction was collected as Compound 62B (16 mg, 35.91 μmol, 40.00%yield) .

[0365] Preparation of Compound 81

[0366] To a solution of 1- [ethoxy (methylsulfonylmethyl) phosphoryl] oxyethane (92.70 mg, 402.66 μmol) in THF (5 mL) was added NaH (13.42 mg, 335.55 μmol, 60%purity) under N2 at 0 ℃. The mixture was stirred at 0 ℃ for 10 mins. Then a solution of intermediate 262 (130 mg, 335.55 μmol) in THF (3 mL) was added. The reaction mixture was stirred at 0 ℃ for 10 mins. The reaction mixture was quenched by adding to cold sat. aq. NH4Cl (5 mL) at 0 ℃ under N2. H2O (30 mL) was added, the mixture was extracted with dichloromethane (20 mL x 3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography on silica gel (eluent: A: n-hexane, B: ethyl acetate, 0%B to 75%B in A) to give the crude product. The crude product was purified by prep-HPLC over column: CD01-Phenomenex luna C18 150*25mm*10um; mobile phase: [H2O (0.225%FA) -ACN] ; gradient: 36%-66%B over 11.0 min to afford Compound 81 (30 mg, 62.17 μmol, 18.53%yield, 96.06%purity) as an off-white solid.

[0367] The following compound was synthesized by an analogous method as described above for Compound 81.

[0368] Preparation of Compound 92

[0369] To a solution of intermediate 274 (41.86 mg, 171.40 μmol) in THF (3 mL) was added NaH (3.43 mg, 85.70 μmol, 60%purity) at 0℃. After stirring for 30 min, intermediate 158 (32.00 mg, 85.70 μmol) was added into the mixture. The mixture was further stirred for 10 min. The mixture was quenched with NH4Cl aq. (2 mL) and extracted with EtOAc (5 mL x 2) . The organic layer was dried over Na2SO4 and concentrated to get the crude product. The crude product was purified by Prep-HPLC with the following conditions (column: Waters SunFire, 250*19mm, 5mm; mobile phase: [water (0.1%FA) -ACN] ; ACN%: 30%-44%, 10min ) to afford Compound 92 (4 mg, 8.63 μmol, 10.07%yield) as a white solid.

[0370] Preparation of Compound 104A and 104B

[0371] To a solution of 1- [ethoxy- [fluoro (methylsulfonyl) methyl] phosphoryl] oxyethane (372.25 mg, 1.50 mmol) in ACN (20 mL) was added LiCl (63.57 mg, 1.50 mmol, 30.74 μL) , intermediate 158 (560 mg, 1.50 mmol) and TEA (227.64 mg, 2.25 mmol, 313.12 μL) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hr. The reaction mixture was quenched by addition water (30 mL) at 25 ℃, and the mixture was extracted with EtOAc (20 mL x 3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by prep-TLC (SiO2, Commercial hexanes : Ethyl acetate = 1: 1) to give the crude product which was further separated by chiral SFC (Column: Chiralcel OX-3 50x4.6mm I. D., 3um Mobile phase: Phase A for CO2, and Phase B for IPA (0.05%DEA) ; Gradient elution: B in A from 5%to 40%Flow rate: 3 mL / min; Detector: PDA; Column Temp: 35C; Back Pressure: 100Bar) . The first fraction was collected as Compound 104A and the second fraction was collected as Compound 104B.

[0372] LCMS (Liquid chromatography / Mass spectrometry)

[0373] General procedure

[0374] The High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) measurement was performed using a LC pump, a diode-array (DAD) or a UV detector and a column as specified in the respective methods. Flow from the column was brought to the Mass Spectrometer (MS) which was configured with an atmospheric pressure ion source. It is within the knowledge of the skilled person to set the tune parameters (e.g., scanning range, dwell time…) in order to obtain ions to allow the identification of the compound’s nominal monoisotopic molecular weight (MW) . Data acquisition was performed with appropriate software.

[0375] Compounds are described by their experimental retention times (Rt) and ions. If not specified differently in the table of data, the reported molecular ion corresponds to the [M+H] + (protonated molecule) and / or [M-H] - (deprotonated molecule) . All results were obtained with experimental uncertainties that are commonly associated with the method used.

[0376] Method 1

[0377] Mobile phase: Ramp from 30%ACN (0.018%TFA) in water (0.037%TFA) to 90%ACN in 2.00 min, Flow rate is set at 1.5 mL / min; then ramp from 90%ACN in water to 100%ACN in 1.70 min. Flow rate is set at 1.5 mL / min; return to 30%ACN in water and hold for 0.30 min. Flow rate is set at 2.0 mL / min. Column temperature at 50℃ and detector wavelength from 210 nm to 265 nm. The column is of  EVO C18 4.6 x 50 mm, 5 μm.

[0378] Method 2

[0379] Mobile phase: Ramp from 5%ACN (0.01875%TFA) in water (0.0375%TFA) to 95%ACN in 2.40 min, Flow rate is set at 2.0 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.30 minutes. Flow rate is set at 2.0 mL / min; return back to 5%ACN in water and hold for 0.30 min. Flow rate is set at 2.0 mL / min. Column temperature at 50℃. The column is of  EVO C18 4.6x50mm, 5 μm.

[0380] Method 3

[0381] Mobile phase: Ramp from 5%ACN (0.01875%TFA) in water (0.0375%TFA) to 95%ACN in 3.20 min, Flow rate is set at 1.5 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.30 minutes. Flow rate is set at 1.5 mL / min; return to 5%ACN in water and hold for 0.30 min. Flow rate is set at 2.0 mL / min. Column temperature at 50℃. The column is of  EVO C18 4.6 x 50 mm, 5 μm.

[0382] Method 4

[0383] Mobile phase: Ramp from 5%ACN in water (0.025%NH3·H2O) to 95%ACN in 3.00 min, Flow rate is set at 0.6 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.70 minutes Flow rate is set at 0.6 mL / min; return to 5%ACN in water and hold for 0.30 min. Flow rate is set at 1.2 mL / min. Column temperature at 40℃ and detector wavelength from 210 nm to 265 nm. The column is  XBridge C18 2.1 x 30 mm, 3.5 μm.

[0384] Method 5

[0385] Mobile phase: Ramp from 5%ACN (0.01875%TFA) in water (0.0375%TFA) to 95%ACN in 4.8 min, Flow rate is set at 0.6 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.60 minutes. Flow rate is set at 1.0 mL / min; return to 5%ACN in water and hold for 0.60 min. Flow rate is set at 1.0 mL / min. Column temperature at 50 ℃. The column is Kinetex EVO C18 2.1*50mm, 1.7 μm.

[0386] Method 6

[0387] Mobile phase: Ramp from 5%ACN (0.01875%TFA) in water (0.0375%TFA) to 95%ACN in 3.20 min, Flow rate is set at 1.5 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.30 minutes. Flow rate is set at 1.5 mL / min; return to 5%ACN in water and hold for 0.30 min. Flow rate is set at 2.0 mL / min. Column temperature at 50℃. The column is of  EVO C18 4.6 x50 mm, 5 μm.

[0388] Method 7

[0389] Mobile phase: Ramp from 5%ACN (0.01875%TFA) in water (0.0375%TFA) to 95%ACN in 2.40 min, Flow rate is set at 2.0 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.30 minutes Flow rate is set at 2.0 mL / min; return to 5%ACN in water and hold for 0.30 min. Flow rate is set at 2.0 mL / min. Column temperature at 50 ℃. The column is of  EVO C18 4.6 x 50 mm, 5 μm.

[0390] Method 8

[0391] Mobile phase: Ramp from 5%ACN (0.01875%TFA) in water (0.0375%TFA) to 95%ACN in 3.20 min, Flow rate is set at 1.5 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.30 minutes. Flow rate is set at 1.5 mL / min; return to 5%ACN in water and hold for 0.30 min. Flow rate is set at 2.0 mL / min. Column temperature at 50 ℃. The column is of  EVO C18 4.6 x 50 mm, 5 μm.

[0392] Method 9

[0393] Mobile phase: Ramp from 5%ACN (0.018%TFA) in water (0.037%TFA) to 95%ACN in 3.0 min, Flow rate is set at 1.0 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.60 minutes. Flow rate is set from 1.0 mL / min to 1.5 mL / min; return to 5%ACN in water and hold for 0.40 min. Flow rate is set at 1.5 mL / min. Column temperature at 50℃. The column is of Shim-pack Velox SP-C18 3.0 x 30 mm, 2.7 μm.

[0394] Method 10

[0395] Mobile phase: Ramp from 5%ACN in water (0.025%NH3·H2O) to 95%ACN in 2.60 min, Flow rate is set at 0.6 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.25 minutes. Flow rate is set at 0.8 mL / min; return to 5%ACN in water and hold for 0.15 min. Flow rate is set at 1.2 mL / min. Column temperature at 40℃ and detector wavelength from 210 nm to 265 nm. The column is of  XBridge C18 2.1 x 30 mm, 3.5 μm.

[0396] Method 11

[0397] Mobile phase: Ramp from 5%ACN (0.01875%TFA) in water (0.0375%TFA) to 95%ACN in water in 0.60 min, Flow rate is set at 2.0 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.18 minutes. Flow rate is set at 2.0 mL / min; return back to 5%ACN in water and hold for 0.02 min. Flow rate is set at 2.0 mL / min. Column temperature at 50℃. The column is of  EVO C18 2.1 x 30 mm, 5 μm.

[0398] Method 12

[0399] Mobile phase: Ramp from 5%ACN in water (0.025%NH3·H2O) to 95%ACN in 3.00 min, Flow rate is set at 0.9 mL / min; then hold at 95%ACN for 0.70 minutes. Flow rate is set at 0.9 mL / min; return to 5%ACN in water and hold for 0.30 min. Flow rate is set at 1.2 mL / min. Column temperature at 40℃ and detector wavelength from 210 nm to 265 nm. The column is of  XBridge C18 3.0 x 50 mm, 5 μm.

[0400] Method 13

[0401] Mobile phase: Ramp from 10%ACN (0.05%FA) in water (0.05%FA) to 95%ACN in 2.50 min, Flow rate is set at 1.5 mL / min; keep 95%ACN 1.90 min. Flow rate is set at 1.5 mL / min; return to 10%ACN in water in 0.1min and hold for 0.50 min. Flow rate is set at 1.5mL / min. Column temperature at 40℃ and detector wavelength from 190 nm to 400 nm. The column is YMC-Triart C18 4.6mm*50mm 3μm.

[0402] Method 14

[0403] Mobile phase: Ramp from 10%ACN (0.03%TFA) in water (0.03%TFA) to 95%ACN in 2.50 min, Flow rate is set at 1.5 mL  / min; keep 95%ACN 1.90 min. Flow rate is set at 1.5 mL / min; return to 10%ACN in water in 0.1min and hold for 0.50 min. Flow rate is set at 1.5mL / min. Column temperature at 40℃ and detector wavelength from 190 nm to 400 nm. The column is YMC-Triart C18 4.6mm*50mm 3μm.

[0404] Method 15

[0405] Mobile phase: Ramp from 10%ACN (0.05%NH3 H2O) in water (0.05%NH3 H2O) to 95%ACN in 2.50 min, Flow rate is set at 1.5 mL / min; keep 95%ACN 1.90 min. Flow rate is set at 1.5 mL / min; return to 10%ACN in water in 0.1min and hold for 0.50 min. Flow rate is set at 1.5mL / min. Column temperature at 40℃ and detector wavelength from 190 nm to 400 nm. The column is YMC-Triart C18 4.6mm*50mm 3μm.

[0406] Method 16

[0407] Mobile phase: Ramp from 10%ACN in water (5 mM NH4HCO3) to 95%ACN in 2.50 min, Flow rate is set at 1.5 mL / min; keep 95%ACN 1.90 min. Flow rate is set at 1.5 mL / min; return to 10%ACN in water in 0.1min and hold for 0.50 min. Flow rate is set at 1.5mL / min. Column temperature at 40 ℃ and detector wavelength from 190 nm to 400 nm. The column is YMC-Triart C18 4.6mm*50mm 3μm.

[0408] Analytical data

[0409] The LCMS analytical information listed in Table 2 below.

[0410] Table 2

[0411] NMR Methods:

[0412] NMR experiments were carried out using a Bruker Advance III 400 spectrometer at ambient temperature (298.6 K) , using internal deuterium lock, and equipped with BBO 400 MHz S1 5 mm probe head with z gradients and operating at 400 MHz for the proton and 100 MHz for carbon. Chemical shifts (δ) are reported in parts per million (ppm) . J values are expressed in Hz.

[0413] The NMR analytical information in Table 3 below.

[0414] Table 3

[0415] Biochemical WRN DNA unwinding assay

[0416] Biochemical DNA unwinding assay was set up to measure the ATP-dependent helicase activity of WRN and was used also to assess the inhibition rate (IC50) of compounds for the function of helicase core. Full length of recombinant human WRN protein (1-1432) was purchased from WuXi AppTec for the measurement. A pair of 50 bp DNA duplex, Fork A (5'-FAM-GAACGAACACATCGGGTACGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’) and Fork B (5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTC GTACCCGATGTGTTCGTTC-BHQ1-3’) , was synthesized from Azenta and used as a fluorogenic DNA substrate to measure the helicase activity by monitoring the dequenching of FAM-BHQ1 at the end of DNA duplex. Duplex substrate was prepared by first dissolving in the annealing buffer (50 mM Tris-HCl pH 7.5, 100 mM NaCl, 100 KCl, 2 mM MgCl2) to a final concentration of 5 μM. Annealing of DNA duplex was first incubated at 95℃ for 5 min, then gradually cool down to room temperature (over a period of no less than 30 min) . 10 mM stock compounds in DMSO were serially diluted as 1: 2 ratio to generate a 12-point then dispensed into 384-well low volume plate (Cat. 784076, Greiner) using liquid handler system (mosquito LV, SPT Labtech) . The reaction buffer was prepared in 50 mM Tris-HCl pH 7.5, 100 mM NaCl, 2 mM MgCl2, 0.01%Tween-20, and 1 mM DTT. WRN-FL protein was pre-mixed with 20 μM ADP for 20 min, dispensed to plate and add compounds for 1 h incubation at room temperature. The enzymatic reaction was initiated by adding the mixture including a final concentration of 100 nM DNA duplex and 200 μM ATP for 1-2 h. After the reaction, generated fluorescent intensity was measured by  multimode microplate reader (TECAN) with excitation = 480 nm, emission = 530 nm. All of measured IC50 values were analyzed in GraphPad Prism 8.0.2 (La Jolla California USA, www. graphpad. com) using four parameters dose-response inhibition model.

[0417] ELISA assay for measuring WRN protein levels

[0418] 120uL HCT116 (12,000 cells per well) and 120uL SW48 (30,000 cells per well) were seeded into 96-well plate (Costar, 3599) and incubated overnight. Compounds were serially diluted in complete medium starting from 50uM. Total 10 concentrations were prepared for each compound. 30uL serially diluted compound was added to each well of 96 well plate cultured with HCT116 or SW48 cells. The final concentration of DMSO at the top concentration was 0.1%. The cells were treated with compounds for 24 hours.

[0419] For WRN ELISA assay, the 96-well ELISA plate (Nunc, 439454) was coated with 100uL anti-WRN mouse mAb (Santa cruz, sc-376182, 1: 2000 diluted in TBST containing 1%BSA) at 4℃ overnight. On the day of the assay, the culture medium was discarded, and the cell lysate was prepared by adding 100uL lysis buffer (Beyotime, P0013) into each well. The cell culture plate was then shake for 1 hour at room temperature. The ELISA plate was blocked with 200uL TBST containing 3%BSA at room temperature for 1 hour. After discarding the blocking buffer, 80uL cell lysate from each well was transferred into ELISA plate and incubated at room temperature for 1 hour with constant shaking. The ELISA plate was then washed thrice with TBST. 100uL diluted anti-WRN antibody (Abbexa, abx239524, 1: 2000 diluted in TBST containing 1%BSA) was added into each well. The ELISA plate was incubated at room temperature for 1 hour with constant shaking. The ELISA plate was then washed thrice with TBST. 100uL diluted anti-rabbit secondary antibody (Signaling, 7074S, 1: 10000 diluted in TBST containing 1%BSA) was added into each well. After 1 hour incubation, the plate was washed with TBST and developed with TMB substrate (Abcam, 171523) and stop solution (Abcam, 171529) . The optical density at 450 nm was measured by microplate reader. Data was analyzed using GraphPad Prism. Curves were fitted by non-linear regression and IC50 value was determined based on curve-fitting.

[0420] Cell proliferation assay

[0421] Three cell lines were used for proliferation assay (HCT116 and SW48 as MSI-H cells, K562 as MSS cells) . HCT116 cells were cultured in McCOY's 5A medium (Basalmedia, L630KJ) containing 10%fetal bovine serum (FBS, Gibco, 10091-148) . SW48 cells were cultured in DMEM medium (Basalmedia, L120KJ) containing 10%FBS. K562 cells were cultured in RPMI1640 medium (Basalmedia, L210KJ) containing 10%FBS. 120uL HCT116 cells (400 cells per well) , 120uL SW48 cells (2,000 cells per well) and 120uL K562 cells (200 cells per well) were seeded into 96-well plate (Beyotime, FCP965) and incubated overnight.

[0422] Compounds were serially diluted in complete medium starting from 50uM. Total 10 concentrations were prepared for each compound. 30uL serially diluted compound was added to each well of 96 well plate cultured with HCT116, SW48 or K562 cells. HCT116 cells were treated with compounds for 3 days. SW48 and K562 cells were treated with compounds for 6 days. The final concentration of DMSO at the top concentration was 0.1%. Wells with culture medium alone were used as negative control.

[0423] After compound treatment, cell viability was measured using CellTiter-Glo luminescent cell viability assay (Promega, G7572) . 50uL of CellTiter-Glo Reagent was added into each well and the plates were shake for 20 minutes at room temperature. The luminescence signal was measured by microplate reader. The value of Negative control well was set at 100%and data was normalized to negative control. Curves were fitted by GraphPad Prism using non-linear regression and IC50 value was determined based on curve-fitting.

[0424] Biological Data

[0425] The biological activities of certain compounds using the assays described above are shown in Table 4. For WRN DNA unwinding assay IC50 (nM) : A denotes < 50 nM; B denotes 50 nM ≤IC50 < 200 nM; C denotes 200 nM ≤ IC50 < 500 nM; D denotes IC50 ≥500 nM. For SW48 ELISA assay IC50 (nM) : A denotes < 100 nM; B denotes 100 nM ≤ IC50 < 500 nM; C denotes 500 nM ≤IC50 < 1000 nM; D denotes IC50 ≥1000 nM. For SW48 anti-proliferation IC50 (nM) : A denotes <50 nM; B denotes 50 nM ≤ IC50 < 200 nM; C denotes 200 nM ≤ IC50 < 500 nM; D denotes IC50 ≥500 nM. For K562 anti-proliferation IC50 (nM) : A denotes < 100 nM; B denotes 100 nM ≤ IC50 < 1000 nM; C denotes 1000 nM ≤ IC50 < 10 uM; D denotes IC50 ≥10 uM.

[0426] Table 4

[0427] The embodiments described above are intended to be merely exemplary, and those skilled in the art will recognize, or will be able to ascertain using no more than routine experimentation, numerous equivalents of specific compounds, materials, and procedures. All such equivalents are considered to be within the scope of the invention and are encompassed by the appended claims.

Claims

1.A compound of Formula (I) : wherein:X1 is N or CRx1;X2 is N or CRx2;Rx1 and Rx2 are each independently selected from the group consisting of H, halogen, optionally substituted alkyl, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted alkenyl, optionally substituted alkynyl, optionally substituted amino, and optionally substituted alkyloxy;R1 is selected from the group consisting of H, optionally substituted alkyl, optionally substituted aryl, optionally substituted heteroaryl, optionally substituted heterocyclyl, optionally substituted cycloalkyl, and optionally substituted cycloalkenyl;R2 is selected from the group consisting of optionally substituted aryl, optionally substituted heteroaryl, optionally substituted heterocyclyl, optionally substituted heterocyclenyl, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted cycloalkenyl, optionally substituted spiroheterocyclyl, optionally substituted spirocyclyl, optionally substituted bridged heterocyclyl, optionally substituted bridged carbocyclyl, optionally substituted alkyl, optionally substituted N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, alkyl, alkenyl, alkynyl, haloalkyl, acyl, aminoalkyl, alkoxyalkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, cycloalkenyl, and heterocyclyl;R3 is selected from the group consisting of H, optionally substituted alkyl, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted heteroaryl and optionally substituted heterocyclyl;R4 is selected from the group consisting of optionally substituted alkyl, optionally substituted cycloalkyl, and optionally substituted heterocyclyl;said heterocyclenyl, heterocyclyl, heteroaryl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contains 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S;R7 is selected from the group consisting of H and halogen;optionally, one or more hydrogen in compound of Formula (I) is replaced by deuterium; or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.2.The compound according to claim 1, wherein the compound is of Formula (Ia) : wherein:Rx1 and Rx2 are each independently selected from the group consisting of H, halogen, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C1-C6 alkenyl, optionally substituted C1-C6 alkynyl, optionally substituted amino, and optionally substituted C1-C6 alkyloxy;R1 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl, optionally substituted 5-to 6-membered heterocyclyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted cycloalkenyl;R2 is selected from the group consisting of optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 10-membered heteroaryl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclyl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclenyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkenyl, optionally substituted 5-to 12-membered spiroheterocyclyl, optionally substituted C5-C12 spirocyclyl, optionally substituted 5-to 12-membered bridged heterocyclyl, optionally substituted C5-C12 bridged carbocyclyl, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 acyl, C1-C6 aminoalkyl, (C1-C6 alkoxy) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, (C3-C8 cycloalkyl) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkenyl, and 3-to 8-membered heterocyclyl;R3 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;R4 is selected from the group consisting of optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;said heterocyclenyl, heterocyclyl, heteroaryl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contains 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S;R7 is selected from the group consisting of H and halogen;optionally, one or more hydrogen in compound of Formula (Ia) is replaced by deuterium;or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.3.The compound according to claim 1, wherein the compound is of Formula (Ib) : wherein:Rx2 is selected from the group consisting of H, halogen, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C1-C6 alkenyl, optionally substituted C1-C6 alkynyl, optionally substituted amino, and optionally substituted C1-C6 alkyloxy;R1 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl, optionally substituted 5-to 6-membered heterocyclyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted cycloalkenyl;R2 is selected from the group consisting of optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 10-membered heteroaryl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclyl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclenyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkenyl, optionally substituted 5-to 12-membered spiroheterocyclyl, optionally substituted C5-C12 spirocyclyl, optionally substituted 5-to 12-membered bridged heterocyclyl, optionally substituted C5-C12 bridged carbocyclyl, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 acyl, C1-C6 aminoalkyl, (C1-C6 alkoxy) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, (C3-C8 cycloalkyl) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkenyl, and 3-to 8-membered heterocyclyl;R3 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;R4 is selected from the group consisting of optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;said heterocyclenyl, heterocyclyl, heteroaryl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contains 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S;R7 is selected from the group consisting of H and halogen;optionally, one or more hydrogen in compound of Formula (Ib) is replaced by deuterium;or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.4.The compound according to claim 1, wherein the compound is of Formula (Ic) : wherein:Rx1 is selected from the group consisting of H, halogen, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C1-C6 alkenyl, optionally substituted C1-C6 alkynyl, optionally substituted amino, and optionally substituted C1-C6 alkyloxy;R1 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl, optionally substituted 5-to 6-membered heterocyclyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted cycloalkenyl;R2 is selected from the group consisting of optionally substituted C6-C10 aryl, optionally substituted 5-to 10-membered heteroaryl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclyl, optionally substituted 3-to 8-membered heterocyclenyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkenyl, optionally substituted 5-to 12-membered spiroheterocyclyl, optionally substituted C5-C12 spirocyclyl, optionally substituted 5-to 12-membered bridged heterocyclyl, optionally substituted C5-C12 bridged carbocyclyl, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 acyl, C1-C6 aminoalkyl, (C1-C6 alkoxy) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, (C3-C8 cycloalkyl) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkenyl, and 3-to 8-membered heterocyclyl;R3 is selected from the group consisting of H, optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, optionally substituted 5-to 6-membered heteroaryl and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;R4 is selected from the group consisting of optionally substituted C1-C6 alkyl, optionally substituted C3-C8 cycloalkyl, and optionally substituted 3-to 6-membered heterocyclyl;said heterocyclenyl, heterocyclyl, heteroaryl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contain 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S;R7 is selected from the group consisting of H and halogen;optionally, one or more hydrogen in compound of Formula (Ic) is replaced by deuterium;or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.5.The compound according to any one of claims 1 to 4, wherein R1 is selected from the group consisting of C6-C10 aryl, 5-to 6-membered heteroaryl, 5-to 6-membered heterocyclyl, C3-C8 cycloalkyl, and C3-C8 cycloalkenyl; said heterocyclyl and heteroaryl each contain 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S, and said aryl, heteroaryl, heterocyclyl, cycloalkyl and cycloalkenyl are each optionally substituted with one or more R5, each R5 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, amino, and halogenated C1-C3 alkyl;preferably, R1 is selected from the group consisting of phenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl and 6-membered heteroaryl containing 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S; said phenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl and heteroaryl are each optionally substituted with one or more R5, each R5 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, amino, and halogenated C1-C3 alkyl;more preferably, R1 is selected from the group consisting of, wherein n is 0 to 5, indicates the point of attachment, and each R5 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy, amino, fluoromethyl, difluoromethyl and trifluoromethyl;in particular, R1 is selected from the group consisting ofwherein each R5 is independently selected from the group consisting of F, Cl and Br.6.The compound according to any one of claims 1 to 5, wherein R2 is selected from the group consisting of C6-C10 aryl, 5-to 10-membered heteroaryl, 3-to 8-membered heterocyclyl, 3-to 8-membered heterocyclenyl, C3-C8 cycloalkyl, C3-C8 cycloalkenyl, 5-to 12-membered spiroheterocyclyl, C5-C12 spirocyclyl, 5-to 12-membered bridged heterocyclyl, C5-C12 bridged carbocyclyl, C1-C6 alkyl, N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C1-C6 haloalkyl, C1-C6 acyl, C1-C6 aminoalkyl, (C1-C6 alkoxy) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, (C3-C8 cycloalkyl) C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkenyl, and 3-to 8-membered heterocyclyl; optionally, said heteroaryl, heterocyclyl, heterocyclenyl, spiroheterocyclyl and bridged heterocyclyl each contain 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S;preferably, R2 is selected from the group consisting of: phenyl, naphthyl; cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl; cyclopropenyl, cyclobutenyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, cycloheptenyl, cyclooctenyl; pyrrolyl, pyrazolyl, imidazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, thiadiazolyl, isothiazolyl, furanyl, thienyl, oxadiazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, triazinyl, indolyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, benzothienyl, quinolinyl, isoquinolinyl, benzimidazolyl, benzofuranyl, isobenzofuranyl, cinnolinyl, quinoxalinyl, indazolyl, purinyl, pyrrolopyridinyl, furopyridinyl, thienopyridinyl; oxiranyl, aziridinyl, oxetanyl, azetidinyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, thiazolidinyl, pyrazolidinyl, isoxazolidinyl, isothiazolidinyl, morpholinyl, pyrrolidinyl, tetrahydrofuryl, tetrahydropyranyl, tetrahydrothiapyranyl, tetrahydrothiopyranyl, piperazinyl, piperidinyl, azepanyl, oxazepanyl; spiro [2, 3] hexyl, spiro [2, 4] heptyl, spiro [2, 5] octyl, spiro [3, 3] heptyl, spiro [3, 4] octyl, spiro [3, 5] nonyl, spiro [3, 6] decyl, spiro [4, 4] nonyl, spiro [4, 5] decyl, spiro [4, 6] undecyl, spiro [5, 5] undecyl, spiro [5, 6] dodecyl; hetero-spiro [2, 3] hexyl, hetero-spiro [2, 4] heptyl, hetero-spiro [2, 5] octyl, hetero-spiro [3, 3] heptyl, hetero-spiro [3, 4] octyl, hetero-spiro [3, 5] nonyl, hetero-spiro [3, 6] decyl, hetero-spiro [4, 4] nonyl, hetero-spiro [4, 5] decyl, hetero-spiro [4, 6] undecyl, hetero-spiro [5, 5] undecyl, hetero-spiro [5, 6] dodecyl; bicyclo [2.1.1] hexyl, bicyclo [3.1.0] hexyl, bicyclo [2.2.1] heptanyl, bicyclo [2.2.2] octanyl, bicyclo [3.2.1] octanyl; hetero-bicyclo [2.1.1] hexyl, hetero-bicyclo [3.1.0] hexyl, hetero-bicyclo [2.2.1] heptanyl, hetero-bicyclo [2.2.2] octanyl, hetero-bicyclo [3.2.1] octanyl; N (Ra) (Rb) , wherein Ra and Rb are each selected independently selected from the group consisting of: H, methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, sec-butyl, tert-butyl, vinyl, propenyl, butenyl, pentenyl, ethynyl, propinyl, propargyl, butynyl, chloromethyl, chloroethyl, chloropropyl, dichloromethyl, dichloroethyl, dichloropropyl, trichloromethyl, trichloroethyl, trichloropropyl, fluoromethyl, fluoroethyl, fluoropropyl, difluoromethyl, difluoroethyl, difluoropropyl, trifluoromethyl, trifluoroethyl, trifluoropropyl, perfluoroethyl, perfluoropropyl, acetyl, propionyl, aminomethyl, aminoethyl, aminopropyl, methoxymethyl, methoxyethyl, methoxypropyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclopropylmethyl, cyclobutylmethyl, cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl, cycloheptylmethyl, cyclopropylethyl, cyclobutylethyl, cyclopentylethyl, cyclohexylethyl, cycloheptylethyl, oxiranyl, aziridinyl, oxetanyl, azetidinyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, thiazolidinyl, pyrazolidinyl, isoxazolidinyl, isothiazolidinyl, morpholinyl, pyrrolidinyl, tetrahydrofuryl, tetrahydropyranyl, tetrahydrothiapyranyl, tetrahydrothiopyranyl, piperazinyl, piperidinyl, azepanyl, and oxazepanyl;optionally, R2 is substituted with one or more substituent independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoxy, amino, halogenated C1-C3 alkyl, methylene, halogenated methylene, C1-C6 acyl, C3-C8 cycloalkyl.7.The compound according to any one of claims 1 to 6, wherein R2 is selected from the group consisting of:  wherein indicates the point of attachment.8.The compound according to any one of claims 1 to 7, wherein R3 is selected from the group consisting of C1-C6 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, 5-to 6-membered heteroaryl and 3-to 6-membered heterocyclyl; wherein said heteroaryl and heterocyclyl each contain 1-3 heteroatoms independently selected from the group consisting of O, N and S; said alkyl, cycloalkyl, heteroaryl and heterocyclyl are each optionally substituted with one or more R6, each R6 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, amino, and halogenated C1-C3 alkyl;preferably, R3 is selected from the group consisting of C1-C3 alkyl, C3-C5 cycloalkyl and 3-to 5-membered heterocyclyl; said alkyl, cycloalkyl and heterocyclyl are each optionally substituted with one or more R6, each R6 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy, amino, and halogenated C1-C3 alkyl;more preferably, R3 is selected from the group consisting of:C1-C3 alkyl, wherein m is 0 to 8, indicates the point of attachment, and each R6 is independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy, amino, fluoromethyl, difluoromethyl and trifluoromethyl;in particular, R3 is selected from the group consisting of: methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl,wherein each R6 is independently selected from the group consisting of F, Cl and Br.9.The compound according to any one of claims 1 to 8, wherein R4 is selected from the group consisting of C1-C6 alkyl and C3-C8 cycloalkyl; preferably, R4 is selected from the group consisting of methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, sec-butyl, tert-butyl, cyclopropyl, cyclobutyl and cyclopentyl; more preferably, R4 is selected from the group consisting of methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, sec-butyl and tert-butyl.10.The compound according to any one of claims 1-9, wherein the compound is selected from the group consisting of: optionally, one or more hydrogen in said compound is replaced by deuterium;or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.11.A pharmaceutical composition comprising the compound of any one of claims 1-10, or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient.12.A method of treating a disease or condition in a subject in need thereof, wherein the method comprises administering to the subject a therapeutically effective amount of the compound of any one of claims 1-10, or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition of claim 11, wherein the disease or condition is mediated by WRN, or associated with WRN activity; preferably, the disease or condition is selected from the group consisting of prostate cancer, uterine corpus endometrial carcinoma, colon adenocarcinoma, stomach adenocarcinoma, rectal adenocarcinoma, adrenocortical carcinoma, uterine carcinosarcoma, cervical squamous cell carcinoma, endocervical adenocarcinoma, esophageal carcinoma, breast carcinoma, kidney cancer and ovarian cancer.13.Use of the compound of any one of claims 1-10, or a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition of claim 11 in the manufacture of a medicament for preventing or treating a disease or condition, wherein the disease or condition is mediated by WRN, or associated with WRN activity; preferably, the disease or condition is selected from the group consisting of prostate cancer, uterine corpus endometrial carcinoma, colon adenocarcinoma, stomach adenocarcinoma, rectal adenocarcinoma, adrenocortical carcinoma, uterine carcinosarcoma, cervical squamous cell carcinoma, endocervical adenocarcinoma, esophageal carcinoma, breast carcinoma, kidney cancer and ovarian cancer.

Images