Compounds, conjugates and uses thereof

Abstract

Provided is a compound of formula (I), an antibody-drug conjugate including the said compound, and the uses thereof. The compound contain a group having the ability of self-immolative cleavage, thereby benefiting for a control release effect.

Description

COMPOUNDS, CONJUGATES AND USES THEREOFTECHNICAL FIELD

[0001] The present disclosure relates to the biopharmaceutical field, in particular, to the compounds of linker-payloads, conjugates containing the linker-payloads and uses thereof.BACKGROUND

[0002] The statements in this section merely provide background information related to the present disclosure and do not necessarily constitute prior art.

[0003] The selective delivery of drugs to the site of disease represents a widely pursued research goal, aimed at improving the efficacy and tolerability of pharmacological interventions. In this context, the covalent conjugation of pharmaceutical ingredients to antibodies (resulting in Antibody-Drug Conjugates, ADCs) represents one of the most validated technologies (C. Ceci, P.M. Lacal, G. Graziani, Pharmacol. Ther. 2022, 236, 108106) . The linker has a key role in ADC outcomes because its characteristics substantially impact the therapeutic index efficacy and pharmacokinetics of these drugs. Stable linkers and ADCs can maintain antibody concentration in blood circulation, and they do not release the cytotoxic drug or functional payload before it reaches its target, thus resulting in minimum off-target effects.

[0004] The design of linkers for ADCs is a challenge in terms of extracellular stability and intracellular release, and intracellular circumstances, such as the acid environment, the reducing environment and protease such as cathepsin, are considered as the catalysts to activate the triggers for initiating the cleavage of ADCs.

[0005] Therefore, there remains a need for linker-payloads that allow for control release of the payloads.SUMMARY

[0006] For the above-mentioned purpose, provided herein is the novel compounds of linker-payload and the conjugates containing the linker-payload, which release payloads in different speed.

[0007] In one aspect, the present disclosure provides a compound having formula (I) , or pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,

[0008] wherein:

[0009] R1 is H, hydroxyl, carboxyl, amide, substituted or not substituted -C (O) O (C1-C3 alkyl) , 5-6 membered heterocyclooxy substituted with more than one hydroxyl, -O (CH2CH2O) n11CH3, or -O (CH2CH2O) n12CH2COOH, n11 and n12 are each independently an anger of 0 to 24;

[0010] R2 is C1-C3 alky, - (CH2) n21 (CR21) NR22R23, - (CH2) n22R24R25, substituted or not substituted -CH2-phenyl, substituted or not substituted -CH2- (5-6 membered heterocyclyl) , -CH2- (5-6 membered heteroaryl) substituted or not substituted with one, two or three electron donating groups, R21 is H, C1-C3 alkyl, carboxyl;

[0011] R22 and R23 each independently are C1-C3 alkyl, - (C1-C3 alkyl) -COOH, - (C1-C3 alkyl) -OH;

[0012] R24 is -O-, -S-, -SO-, -SO2-, -CO-, -HPO2-, -O-HPO2-;

[0013] R25 is H, C1-C3 alkyl, hydroxy, -NR251R252;

[0014] R251 and R252 are each independently H, C1-C3 alkyl;

[0015] n21 and n22 are each independently 0, 1, 2, or 3;

[0016] R3 is a first functional molecule moiety;

[0017] n is an anger of 0, 1, or 2.

[0018] In another aspect, the present disclosure provides a compound having formula (II) , or pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,

[0019] L1-B1   (II)

[0020] Wherein:

[0021] B1 is a compound moiety of the compound described above, having the structure

[0022] L1 is a cleavable or non-cleavable linker.

[0023] In another aspect, the present disclosure provides a conjugate having formula (III) , or pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,

[0024] Ab1- [L1-B1] p   (III)

[0025] Wherein:

[0026] Ab1 is a first targeting moiety;

[0027] [L1-B1] is a compound moiety of the compound of formula (II) ;

[0028] p is an anger of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.

[0029] In another aspect, provided is a method of preparing the compounds described above.

[0030] In another aspect, the present disclosure provides a pharmaceutical composition comprising the compounds or the conjugates described above, and at least a pharmaceutical excipient.

[0031] In another aspect, the present disclosure provides a kit comprising the compounds or the conjugates described above.

[0032] In another aspect, the present disclosure provides a use of the compounds, conjugates, pharmaceutical compositions, or the kits in the manufacture of a therapeutic agent for prevention, diagnosis, or treatment of a disease or disorder.

[0033] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating a neoplastic disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject a therapeutically effective amount of the conjugates, the pharmaceutical compositions, or the kits provided above.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0034] The following is a brief description of the drawings, which are presented for the purposes of illustrating the exemplary embodiments disclosed herein and not for the purposes of limiting the same.

[0035] Figure 1 shows the mechanism of the self-immolative cleavage of the compound of formula (I) , (II) and the conjugates of formula (III) .

[0036] Figure 2 shows the cleavage curves of the linker-payload compounds 1-1 to 1-7.

[0037] Figure 3 shows the cleavage curves of the linker-payload compounds 1-1, 1-9, 1-10 and 1-11.

[0038] Figure 4 shows the cleavage curves of the linker-payload compounds 1-11, 1-13 and 1-14.

[0039] Figure 5 shows the NIC-N87 cell killing curves on treatment 7-day.

[0040] Figure 6 shows the NIC-N87 cell killing curves on treatment 5-day.

[0041] Figure 7 shows the Calu3 cell killing curves on treatment 5-day.

[0042] Figure 8 shows the OVCAR3 cell killing curves on treatment 5-day with cell density of 3000 cell / well.

[0043] Figure 9 shows the OVCAR3 cell killing curves on treatment 5-day with cell density of 1500 cell / well.

[0044] Figure 10 shows the HIC-HPLC (Hydrophobic Interaction Chromatography-High Performance Liquid Chromatography) chromatogram of BP03-AB001-AC010.

[0045] Figure 11 shows the HIC-HPLC chromatogram of BP03-AB001-AC012.

[0046] Figure 12 shows the HIC-HPLC chromatogram of BP03-AB001-AC014.

[0047] Figure 13 shows the HIC-HPLC chromatogram of BP04-AB002-AC001.

[0048] Figure 14 shows the HIC-HPLC chromatogram of BP04-AB002-AC002.

[0049] Figure 15 shows the HIC-HPLC chromatogram of BP04-AB002-AC004.

[0050] Figure 16 shows the tumor volume-time curve following administration of BP04-AB005-AC029.DETAILED DESCRIPTION

[0051] The present disclosure is explained in greater detail below. This description is not intended to be a detailed catalog of all the different ways in which the invention may be implemented, or all the features that may be added to the instant invention. For example, features illustrated with respect to one embodiment may be incorporated into other embodiments, and features illustrated with respect to a particular embodiment may be deleted from that embodiment. In addition, numerous variations and additions to the various embodiments suggested herein will be apparent to those skilled in the art in light of the instant disclosure which do not depart from the instant invention. Hence, the following description is intended to illustrate some particular embodiments of the invention, and not to exhaustively specify all permutations, combinations, and variations thereof.

[0052] Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the disclosure pertains. Although any methods and materials similar or equivalent to those described herein may be used in the practice for testing of the present disclosure, the preferred materials and methods are described herein. In describing and claiming the present disclosure, the following terminology will be used.

[0053] Compounds of Formula I

[0054] The present disclosure provides examples of compound having formula (I) , or pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,

[0055] wherein:

[0056] R1 is H, hydroxyl, carboxyl, amide, substituted or not substituted -C (O) O (C1-C3 alkyl) , 5-6 membered heterocyclooxy substituted with more than one hydroxyl, -O (CH2CH2O) n11CH3, or -O (CH2CH2O) n12CH2COOH, n11 and n12 are each independently an anger of 0 to 24;

[0057] R2 is C1-C3 alky, - (CH2) n21 (CR21) NR22R23, - (CH2) n22R24R25, substituted or not substituted -CH2-phenyl, substituted or not substituted -CH2- (5-6 membered heterocyclyl) , -CH2- (5-6 membered heteroaryl) substituted or not substituted with one, two or three electron donating groups, R21 is H, C1-C3 alkyl, carboxyl;

[0058] R22 and R23 each independently are C1-C3 alkyl, - (C1-C3 alkyl) -COOH, - (C1-C3 alkyl) -OH;

[0059] R24 is -O-, -S-, -SO-, -SO2-, -CO-, -HPO2-, -O-HPO2-;

[0060] R25 is H, C1-C3 alkyl, hydroxy, -NR251R252;

[0061] R251 and R252 are each independently H, C1-C3 alkyl;

[0062] n21 and n22 are each independently 0, 1, 2, or 3;

[0063] R3 is a first functional molecule moiety;

[0064] n is an anger of 0 to 2, e.g., 0, 1, 2.

[0065] As used herein, the term “alkyl” refers to a straight or branched hydrocarbon chain radical consisting solely of carbon and hydrogen atoms, containing no unsaturation.

[0066] The term “C1-C3 alkyl” , as used herein, refers to a straight or branched hydrocarbon chain radical consisting solely of carbon and hydrogen atoms, containing no unsaturation, having from one to three carbon atoms, and which is attached to the rest of the molecule by a single bond. Non-limiting examples of “C1-C3 alkyl” groups include methyl (a C1 alkyl) , ethyl (a C2 alkyl) , 1-methylethyl (a C3 alkyl) , n-propyl (a C3 alkyl) and isopropyl (a C3 alkyl) .

[0067] As used herein, the term “C1-C3 alkoxyl” refers to a “C1-C3 alkyl” group, as defined herein, appended to a molecular moiety through an oxygen atom.

[0068] The term “heterocyclyl” refers to a non-aromatic monocyclic cycloalkyl group that includes at least one heteroatom in ring selected from nitrogen, oxygen, and sulfur. The “heterocyclyl” group is either saturated or partially unsaturated. A heterocyclic ring can be attached to its pendant group at any heteroatom or carbon atom that results in a stable structure and any of the ring atoms can be optionally substituted. Examples of such saturated or partially unsaturated heterocyclic radicals include, without limitation, tetrahydrofuranyl, tetrahydrothiophenyl pyrrolidinyl, piperazinyl, tetrahydropyranyl.

[0069] As used herein, the term “heterocyclooxy” refers to a heterocyclyl group, as defined herein, appended to a molecular moiety through an oxygen atom.

[0070] The term “halo” refers to fluorine, chlorine, bromine, and iodine.

[0071] The term “heteroaryl” used alone or as part of a larger moiety, refers to unsaturated 5-to 12 membered mono-or bicyclic aryl group that includes at least one heteroatom in ring selected from nitrogen, oxygen, and sulfur. Heteroaryl groups include, without limitation, thienyl, furanyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, triazolyl, tetrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, thiadiazolyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, indolizinyl, purinyl, naphthyridinyl, and pteridinyl.

[0072] The term “electron donating group” refers to a functional group or electropositive atom that increases electron density of an atom to which it is bonded either inductively and / or through resonance, whichever is more dominant (i.e., a functional group or atom may be electron withdrawing inductively but may overall be electron donating through resonance) , and tends to stabilize cations or electron poor systems. The electron donating effect is typically transmitted through resonance to other atoms attached to the bonded atom that has been made electron rich by the electron donating group thus affecting the nucleophilicity of a more remote reactive center. Exemplary electron donating groups include, but are not limited to, -OH, -OR’, -NH2, -NHR’ and N (R’) 2, wherein each R’ is an independently selected alkyl, typically C1-C3 alkyl. Depending on their substituents, an aryl, heteroaryl or unsaturated alkyl moiety may also be an electron donating group.

[0073] The term “electron withdrawing group” as the term is used herein refers to a functional group or electronegative atom that draws electron density away from an atom to which it is bonded either inductively and / or through resonance, whichever is more dominant (i.e., a functional group or atom may be electron donating through resonance but may overall be electron withdrawing inductively) , and tends to stabilize anions or electron rich moieties. The electron withdrawing effect is typically transmitted inductively, albeit in attenuated form, to other atoms attached to the bonded atom that has been made electron deficient by the electron withdrawing group thus affecting the electrophilicity of a more remote reactive center. Exemplary electron withdrawing groups include, but are not limited to -C (═O) , -CN, -NO2, -CX3, -X, -C (O) OR’, -C (O) NH2, -C (O) N (R’) Rop, -C (O) R’, -C (O) X, -S (O) 2Rop, -S (O) 2OR’, -SO3H2, -S (O) 2NH2, -S (O) 2N (R’) Rop, -PO3H2, -NO, -NH2, -NH (R’) (Rop) , -N (Rop) 3+, and salts thereof, wherein X is -F, -Br, -Cl, or -I, and Rop is, at each occurrence, independently selected from a group previously described for optional substituents and is sometimes selected from the group consisting of C1-C3 alkyl and phenyl and R’ is selected from a group previously described for optional substituents and is sometimes a C1-C3 alkyl. Exemplary electron withdrawing groups can also include aryl groups (e.g., phenyl) depending on substitution and certain heteroaryl groups (e.g., pyridine) . Thus, the term “electron withdrawing group” also includes aryls or heteroaryls that are further substituted with electron withdrawing groups. Typically, electron withdrawing groups are -C (O) , -CN, -NO2, -CX3, and -X, wherein X is halogen. Depending on their substituents, an unsaturated alkyl moiety may also be an electron withdrawing group.

[0074] The term “functional molecule” refers to any compound possessing a desired biological activity and a reactive group that may be used to incorporate the compound into the linker-payload group of the disclosure. The desired biological activity includes the diagnosis, cure, mitigation, treatment, or prevention of disease in man or other animals. In some embodiments, the functional molecule is a drug.

[0075] The term “reactive group” , as used herein, is a functional group capable of forming a covalent bond with a functional group of an antibody or antibody fragment. Non limiting examples of such functional groups in functional molecule include hydroxyl, carboxyl, amino, succinimidyl.

[0076] In some embodiments, the compound has the following formula:

[0077] wherein the R1, R2 and R3 are defined as above.

[0078] In some embodiments, R1 is H, hydroxyl, carboxyl, amide, -C (O) O (C1-C3 alkyl) , -O- (tetrahydropyran-2-yl) substituted with hydroxyl, carboxy or combination thereof, -O (CH2CH2O) n11CH3, or -O (CH2CH2O) n12CH2COOH, n11 and n12 are each independently an anger of 0 to 12, such as 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12.

[0079] In some embodiments, R1 is H, -OH, -C (O) OH, -C (O) OCH3, -C (O) NH2, -O (CH2CH2O) n11CH3, or -O (CH2CH2O) n12CH2COOH,  n11 and n12 are each independently an anger of 0 to 6, or 0 to 3, such as 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6.

[0080] As used herein, when partial structures of the compounds are illustrated, a wavy line indicates the point of attachment of the partial structure to the rest of the molecule.

[0081] In some embodiments, R1 is H or hydroxyl.

[0082] In some embodiments, in R2 group, n21 is 1 or 2.

[0083] In some embodiments, n22 is 1 or 2.

[0084] In some embodiments, R21 is H, carboxyl, or -CH3.

[0085] In some embodiments, R22 and R23 are each independently methyl, -CH2CH2COOH, or -CH2CH2OH.

[0086] In some embodiments, R25 is H, methyl, hydroxymethyl, hydroxy, amino, or -N (CH3) 2.

[0087] In some embodiments, in R2 group, the phenyl is substituted with one, two or three C1-C3 alkoxyl groups. In some embodiments, in R2 group, the phenyl is substituted with one, two or three groups of -OCH3.

[0088] In some embodiments, in R2 group, the 5-6 membered heterocyclyl is tetrahydropyrrolyl, or morpholinyl,

[0089] In some embodiments, in R2 group, the 5-6 membered heteroaryl comprises one, two or three heteroatoms in the ring selected from N, O, S or the combination thereof, where the N or S is oxidized or unoxidized. In some embodiments, in R2 group, the 5-6 membered heteroaryl comprises one or two heteroatoms in the ring selected from the group consisting of N and S. In some embodiments, the 5-6 membered heteroaryl comprises one N or S atom in the ring. In some embodiments, the 5-6 membered heteroaryl comprises two N atoms in the ring. In some embodiments, the 5-6 membered heteroaryl comprises one N atom and one S atom in the ring.

[0090] In some embodiments, the electron donating group comprises at least one of C1-C3 alkoxyl, carboxyl, nitrile, halo, and amide. In some embodiments, the electron donating group comprises -OCH3, -OCH2CH3, F, Cl, Br, or -NH2.

[0091] In some embodiments, R24 is -SO2-or -CO-, R25 is C1-C3 alkyl or NR251R252, R251 and R252 are each independently H, C1-C3 alkyl.

[0092] In some embodiments, R24 is -O-, -CO-, -S-, -SO2-, or -HPO2-; R25 is H, -CH3, -NH2, or -OH.

[0093] In some embodiments, R2 is 5-6 membered heteroaryl, including but not limited to, pyridinyl, pyrimidyl, thienyl, imidazolyl, thiazolyl, oxazolyl, furanyl,  In some embodiments, the pyrimidyl is substituted with 1 to 2 substituents selected from -OCH3, F, Cl, Br, I, CF3, CN, COOH and CONH2, or the combination thereof.

[0094] In some embodiments, R2 is 5-6 membered heteroaryl selected from the group consisting of pyridinyl, pyrimidyl, thienyl and thiazolyl, and the heteroaryl is optionally substituted with -OCH3 and / or F. In some embodiments, R2 is 5-6 membered heteroaryl selected from the group consisting of pyridinyl, pyrimidyl, thienyl and thiazolyl, and the pyrimidyl is optionally substituted with -OCH3 or F.

[0095] In some embodiments, R2 is H, -CH3,

[0096] X is NO2, -OCH3, F, Cl, Br, I, CN, C (O) OH or C (O) NH2.

[0097] In some embodiments, R2 is H, -CH3,  X is -OCH3 or F. In some embodiments, R2 is -CH3,

[0098] In some embodiments, the first functional molecule moiety is a cytotoxic agent, label, nucleic acid, radionuclide, hormones, immunomodulator or derivative thereof, optionally the functional molecule moiety is cytotoxic agents selected from DNA alkylator, TLR7 agonist, TLR8 agonist, TLR9 agonist, Sting agonist, tubulin inhibitors, splicesome inhibitor, RNA polymerase inhibitor and topoisomerase inhibitors.

[0099] In some embodiments, the first functional molecule moiety is MMAE, eribulin, camptothecin, trabectedin, duocarmysin, resiquimod, amanitin or derivative thereof.

[0100] In some embodiments, the first functional molecule moiety is selected from any of the following: SN38, DXd, Belotecan, trabectedin, duocarmysin, resiquimod, MMAE,

[0101] In some embodiments, the first functional molecule moiety is BRYT-1002, BRYT-1011 or BRYT-1101.

[0102] In some embodiments, the compound has a structure of formula (I-A) ,

[0103] R2 and R3 are defined as above.

[0104] In some embodiments, provided herein is the compound having structure as formula (I-1) ,

[0105] wherein:

[0106] R1 is H or hydroxyl;

[0107] R2 is H, methyl,

[0108] Z1 is F or H;

[0109] Z2 is H, methyl, hydroxyl or

[0110] Z3 is H, -NH2, -NHCH3,

[0111] In some embodiments, the compound of formula (I-1) has the following structure:

[0112] Z3 is R2 is methyl,

[0113] In some embodiments, provided herein is the compound having structure as formula (I-2) ,

[0114] wherein

[0115] R2 is

[0116] In some embodiments, provided herein is the compound having structure as formula (I-3) ,

[0117] wherein

[0118] R2 is H, -CH3,

[0119] X is NO2, -OCH3, F, Cl, Br, I, CN, C (O) OH or C (O) NH2.

[0120] In some embodiments, the compound of formula (I) is selected from the following:

[0121] The compound of formula (I) could be applied to conjugates, such as antibody-drug conjugates, peptide-drug conjugates, or polymer-drug conjugates combination with or without other linker.

[0122] The present disclosure also provides the preparation method of the compound of formula (I) , comprising the following procedures:

[0123] (1)

[0124] (2)

[0125] (3)

[0126] the R1, R2, and R3 are defined as above.

[0127] The preparation method further comprises procedure of purification and / or lyophilization.

[0128] Compound of Formula II

[0129] In some further embodiments, the present disclosure provides a compound having formula (II) , or pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,

[0130] L1-B1   (II)

[0131] Wherein

[0132] B1 is a compound moiety of the compound of formula (I) , having the structure wherein the R1, R2 and R3 are defined as above.

[0133] L1 is a cleavable or non-cleavable linker.

[0134] In some embodiments, L1 has the structure

[0135] R4 is nitrogen atom, -O-or -NH-;

[0136] R5 has the formula -Q1-Q2-Q3,

[0137] Q1 is H, -C (O) -, -C (O) NH (CH2) 2NH-,  or combination thereof; m is an anger of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15; *refers to attachment point to Q2 or Q3; .

[0138] When there is only one attachment point in Q1, Q2 and Q3 are absent.

[0139] When there are two attachment points in Q1, either attach points links to phenyl, the other links to Q2.

[0140] In some embodiments, Q2 is absent. In some embodiments, Q2 is absent provided that Q1 has one attachment point.

[0141] In some embodiments, Q2 is m2 is an anger of 1 to 10, either attach points in Q2 links to Q1, the other links to Q3.

[0142] In some embodiments, m2 is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.

[0143] In some embodiments, Q3 is absent. In some embodiments, Q3 is absent provided that Q1 has one attachment point.

[0144] In some embodiments, Q3 is

[0145] In some embodiments, R6 is a cleavable linker susceptible to Cathepsin, β-glucuronidase, Legumain, Neutrophil elastase (NE) , Matrix metalloproteinases-2 (MMP-2) , Matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) , AKR1C3, FAP, Plasmin or sulfatase digestion.

[0146] In some embodiments, -R4 (R6) is -O-SO3H.

[0147] In some embodiments, R6 is J1-J2-, J1 is absent provided that J2 has one attachment point, or J1 is

[0148] J2 comprises any of the following structures or the combination thereof,

[0149] (1) susceptible to Cathepsin: -VC-, -VA-, -GGFG-, -GGVA-, -VKG-, -EVC-, -VK-,  **refers to attachment point to R4;

[0150] (2) susceptible to β-glucuronidase:

[0151] (3) susceptible to Legumain: -AAN-, -PAN-, -PTN-,

[0152] (4) susceptible to Neutrophil elastase (NE) : -NPV-, -AAPV-,

[0153] (5) susceptible to Matrix metalloproteinases-2 (MMP-2) ;

[0154] (6) susceptible to Matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) : -GPLGL-,

[0155] (7) susceptible to Sulfatase:

[0156] (8) susceptible to FAP: -GGP-, -GP-,

[0157] (9) susceptible to Plasmin: -dAFK-, -dVLK-,

[0158] (10) susceptible to AKR1C3:

[0159] In some embodiments, L1 is selected from the following:

[0160] In some embodiments, the L1 is L1-18.

[0161] In some embodiments, the compound having formula II is

[0162] In some embodiments, the compound having formula II is any of the following:

[0163] LP1-1: MC-VC-PAB-tertiary amine-DXd

[0164] LP1-2: MC-VC-PAB-methyl-DXd

[0165] LP1-3: MC-VC-PAB-sulfuryl-DXd

[0166] LP1-4: MC-VC-PAB-tertiary amine-1002

[0167] LP1-5: MC-VC-PAB-sulfuryl-1002

[0168] LP1-6: MC-VC-PAB-1-1002

[0169] LP1-7: MC-VC-PAB-12-1002

[0170] LP1-8: MC-VC-PAB-15-1002

[0171] LP1-9

[0172] LP1-10: MC-VC-PAB-12-1011

[0173] When applied to a conjugate, the attach point of L1 to a targeting moiety is easily confirmed to those skilled in the art without affording mass effort.

[0174] Conjugate of Formula III

[0175] In another aspect, provided herein is a conjugate having formula (III) , or pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,

[0176] Ab1- [L1-B1] p   (III)

[0177] Wherein:

[0178] Ab1 is a first targeting moiety;

[0179] [L1-B1] is a compound moiety of the compound of formula (II) ;

[0180] p is an anger of 1 to 8, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8.

[0181] L1 links to the Ab1 via a reactive group, the reactive group is easily known by those skilled in the art. In some embodiments, the reactive group in L1 is succinimidyl.

[0182] Ab1 could target to an objective site and could be an antibody, peptide, or polymer. In some embodiments, the Ab1 is an antibody, peptide or polymer that is covalently linked to the R5 or R6 group in L1 moiety via one or more (e.g., 1, 2, 3) reactive groups. In some embodiments, the reactive group in Ab1 is thiol group.

[0183] In some embodiments, the reactive groups in L1 moiety comprise. hydroxyl, carboxyl, amino, succinimidyl, or the combination thereof.

[0184] In some embodiments, the reactive groups in Ab1 comprise thiol group.

[0185] In some embodiments, Ab1 links to L1 via -S-Succinimidyl-.

[0186] In some embodiments, the Ab1 is an antibody including an anti-HER2, anti-FRα, anti-Trop2, anti-HER3, anti-EGFR, anti-Nectin4, anti-CD19, anti-CD30, anti-CD79b, anti-C-Met, anti-B7H3, anti-B7H4, anti-LIV-1, anti-ROR1, anti-ROR2, anti-CDH6, anti-CDH3, anti-FOLR1, anti-PSMA, anti-5T4, anti-MUC1, anti-MUC16, anti-DLL3, anti-MSLN, anti-FGFR2b, anti-FGFR3, anti-CLDN6, anti-Claudin18.2, anti-CD20, anti-CD25, anti-CCR8, anti-BCMA, anti-GPRC5D, anti-GPC3, anti-CDH17, anti-PD-L1, anti-TNFα, anti-GD2, anti-TfR1, anti-CD22, anti-CD33, anti-FAP, anti-CD44, anti-SnT, or anti-CD47 antibody. In some embodiments, the antibody is an anti-HER2 antibody, anti-FRα antibody, anti-Trop2 antibody, or anti-BCMA antibody.

[0187] The antibody could be any commercial antibody product or the antibody in research, such as Transtuzumab, Farletuzumab, Sacituzumab, Belantamab, or variants thereof.

[0188] In some embodiments, the antibody is a variant of Transtuzumab having a heavy chain as shown in SEQ ID NO: 1 and a light chain as shown in SEQ ID NO: 2. In some embodiments, the antibody is a variant of Farletuzumab having a heavy chain as shown in SEQ ID NO: 3 and a light chain as shown in SEQ ID NO: 4. In some embodiments, the antibody is a variant of Farletuzumab having a heavy chain as shown in SEQ ID NO: 5 and a light chain as shown in SEQ ID NO: 6.

[0189] “Antibody” as used herein is used in the broadest sense and specifically covers intact monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, monospecific antibodies, multispecific antibodies (e.g., bispecific antibodies) , single-domain antibody, and antibody fragments (e.g., single-chain variable fragment) that exhibit the desired biological activity provided that the antibody fragment have the requisite number of attachment points for a drug-linker. The native form of an antibody is a tetramer and consists of two identical pairs of immunoglobulin chains, each pair having one light chain and one heavy chain. In each pair, the light and heavy chain variable regions (VL and VH) are together primarily responsible for binding to an antigen. The light chain and heavy chain variable domains consist of a framework region interrupted by three hypervariable regions, also called “complementarity determining regions” or “CDRs. ” The constant regions may be recognized by and interact with the immune system (see, e.g., Janeway et al., 2001, Immunol. Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York) . An antibody can be of any type (e.g., IgG, IgE, IgM, IgD, and IgA) , class (e.g., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 and IgA2) or subclass. The antibody can be derived from any suitable species. In some embodiments, the antibody is of human or murine origin. An antibody can be, for example, human, humanized or chimeric. An antibody or antibody fragment thereof, is an exemplary targeting agent that corresponds to or is incorporated into the present disclosure.

[0190] In some embodiments, the Ab1 is a peptide including: (1) the antibody includes an anti-HER2, anti-FRα, anti-Trop2, anti-HER3, anti-EGFR, anti-Nectin4, anti-CD19, anti-CD30, anti-CD79b, anti-C-Met, anti-B7H3, anti-B7H4, anti-LIV-1, anti-ROR1, anti-ROR2, anti-CDH6, anti-CDH3, anti-FOLR1, anti-PSMA, anti-5T4, anti-MUC1, anti-MUC16, anti-DLL3, anti-MSLN, anti-FGFR2b, anti-FGFR3, anti-CLDN6, anti-Claudin18.2, anti-CD20, anti-CD25, anti-CCR8, anti-BCMA, anti-GPRC5D, anti-GPC3, anti-CDH17, anti-PD-L1, anti-TNFα, anti-GD2, anti-TfR1, anti-CD22, anti-CD33, anti-FAP, anti-CD44, anti-SnT, or anti-CD47 antibody; optionally, the antibody is Transtuzumab, Sacituzumab or Belantamab.

[0191] (2) the peptide includes any of HSA (Human Serum Albumin) or HSA binding protein or peptide with thiol, amino group or carboxylic acid as reactive group, TAA (tumor associated antigen) targeting peptide with thiol, amino group, or carboxylic acid as reactive group.

[0192] (3) the polymer is selected from PEG, polysarcosine, Hyaluronicacid with thiol, amino group, or carboxylic acid as reactive group; optionally the polymer is

[0193] N1 is an anger of 0-5000, optionally, 0 to1000, 0 to 100, 0 to 20, M1 is an anger of 3 to 2000, optionally 3 to 1000, 3 to 500, 3 to 100, 3 to 10.

[0194] In some embodiments, N1 is 0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 14, 16, 18, 20, 50, 80, 100, 200, 400 or 800.

[0195] In some embodiments, M1 is 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000 or 2000.

[0196] The compound of formula (I) , (II) and the conjugates of formula (III) are capable of undergoing a spontaneous degradation in a circumstance of pH value above 6.5 to release the functional molecule but stay stable under pH below 5.5.

[0197] Without the bound of any theory, the mechanism of the self-immolative cleavage of the compound of formula (I) , (II) and the conjugates of formula (III) is shown in Figure 1. In additional, the degradation process or the self-immolative cleavage, is controlled by kinetic of the cleavage.

[0198] Generally, the pH value of the tumor mircroenviroment is higher than that in normal tissue or blood, thus, the functional molecule in the compound of formula (I) , (II) and the conjugates of formula (III) with the ability of self-immolative cleavage are enrich in the tumor site, enhancing the targeting effect and decreasing the off-target effect, thereby improve the therapeutic efficacy.

[0199] Pharmaceutical Compositions

[0200] Provided herein is a pharmaceutical composition comprising the compound of formula (I) , (II) , or the conjugate of formula (III) , and at least a pharmaceutical excipient.

[0201] Pharmaceutical compositions provided herein may be formulated in any manner known in the art, such as, pharmaceutical compositions provided herein can be formulated for parenteral (e.g., intravenous, intraarterial, intramuscular, intradermal, subcutaneous, or intraperitoneal) administration in dosage unit form (i.e., physically discrete units containing a predetermined quantity of active compound for ease of administration and uniformity of dosage) .

[0202] Pharmaceutical compositions are formulated to be compatible with their intended route of administration (e.g., intravenous, intraarterial, intramuscular, intradermal, subcutaneous, or intraperitoneal) .

[0203] Pharmaceutical excipient for use in the pharmaceutical compositions disclosed herein may include, for example, pharmaceutically acceptable liquid, gel, or solid carriers, aqueous vehicles, nonaqueous vehicles, antimicrobial agents, isotonic agents, buffers, antioxidants, anesthetics, suspending / dispending agents, sequestering or chelating agents, diluents, adjuvants, excipients, or non-toxic auxiliary substances, other components known in the art, or various combinations thereof.

[0204] Suitable components may include, for example, antioxidants, fillers, binders, disintegrants, buffers, preservatives, lubricants, flavorings, thickeners, coloring agents, emulsifiers, or stabilizers such as sugars and cyclodextrins. Suitable antioxidants may include, for example, methionine, ascorbic acid, EDTA, sodium thiosulfate, platinum, catalase, citric acid, cysteine, thioglycerol, thioglycolic acid, thiosorbitol, butylated hydroxyanisole, butylated hydroxytoluene, and / or propyl gallate. As disclosed herein, inclusion of one or more antioxidants such as methionine in a composition comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof and conjugates provided herein decreases oxidation of the antibody or antigen-binding fragment thereof. This reduction in oxidation prevents or reduces loss of binding affinity, thereby improving antibody stability, and maximizing shelf-life. Therefore, in certain embodiments, pharmaceutical compositions are provided that comprise one or more antibodies or antigen-binding fragments thereof as disclosed herein and one or more antioxidants such as methionine.

[0205] In some embodiments, the pharmaceutical compositions can be a liquid solution, suspension, or emulsion. In some embodiments, the pharmaceutical compositions are formulated into an injectable composition. The injectable pharmaceutical compositions may be prepared in any conventional form, such as for example liquid solution, suspension, emulsion, or solid forms suitable for generating liquid solution, suspension, or emulsion. Preparations for injection may include sterile and / or non-pyretic solutions ready for injection, sterile dry soluble products, such as lyophilized powders, ready to be combined with a solvent just prior to use, including hypodermic tablets, sterile suspensions ready for injection, sterile dry insoluble products ready to be combined with a vehicle just prior to use, and sterile and / or non-pyretic emulsions. The solutions may be either aqueous or nonaqueous.

[0206] Kit

[0207] Provided herein is a kit comprising the compound of formula (I) or (II) , the conjugate of formula (III) .

[0208] Such kits can further include, if desired, one or more of various conventional pharmaceutical kit components, such as, for example, containers with one or more pharmaceutically acceptable carriers, additional containers etc., as will be readily apparent to a person skilled in the art. Instructions, either as inserts or a labels, indicating quantities of the components to be administered, guidelines for administration, and / or guidelines for mixing the components, can also be included in the kit.

[0209] Methods of Use

[0210] The present disclosure also provides the use of the compound of formula (I) or (II) , the conjugate of formula (III) , the kit, or the pharmaceutical composition described above in the manufacture of a therapeutic agent for prevention, diagnosis, or treatment of a disease or disorder.

[0211] As use herein, the term “treatment” refers to alleviating or ameliorating the disease (i.e., slowing or arresting the development of the disease or at least one of the clinical symptoms thereof) ; or alleviating or ameliorating at least one physical parameter or biomarker associated with the disease, including those which may not be discernible to the patient. For cancer, “treating” may refer to dampen or slow the tumor or malignant cell growth, proliferation, or metastasis, or some combination thereof. For tumors, “treating” includes removal of all or part of the tumor, inhibiting or slowing tumor growth and metastasis, delaying the development of a tumor, or some combination thereof.

[0212] As used herein, the term “prevention” of any disease refers to the prophylactic treatment of the disease; or delaying the onset or progression of the disease.

[0213] In some embodiments, the disease or the disorder is neoplastic disease, including but not limited to, carcinoma, lymphoma, blastema, sarcoma, and leukemia or lymphoid malignancies. More particular examples of the cancer include squamous cell cancer (e.g., epithelial squamous cell cancer) , lung cancer including small-cell lung cancer, non-small cell lung cancer ( “NSCLC” ) , adenocarcinoma of the lung and squamous carcinoma of the lung, cancer of the peritoneum, hepatocellular cancer, gastric or stomach cancer including gastrointestinal cancer, pancreatic cancer, glioblastoma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, colorectal cancer, endometrial or uterine carcinoma, salivary gland carcinoma, kidney or renal cancer, prostate cancer, vulval cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma, anal carcinoma, penile carcinoma, as well as head and neck cancer.

[0214] The present disclosure also provides a method of treating a neoplastic disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject a therapeutically effective amount of the conjugate of formula (III) , or the pharmaceutical composition described above.

[0215] As used herein, the term "a therapeutically effective amount" refers to an amount of the compound, the linker conjugate or the antibody drug conjugates of the present disclosure that will elicit the biological or medical response of a subject, for example, ameliorate symptoms, alleviate conditions, slow or delay disease progression, or prevent a disease, etc. The therapeutically effective amount will vary with the type and severity of the condition to be alleviated. It is to be further understood that for any particular subject, specific dosage regimens should be adjusted over time according to the individual need and the professional judgment of the person administering or supervising the administration of the compositions. In some embodiment, the therapeutically effective amount is based on a variety of factors, such as the type of disease, the age, weight, sex, medical condition of the patient, the severity, of the condition, the route of administration, and the particular antibody employed. In some embodiments, the therapeutically effective amount can vary widely, but can be determined routinely using standard methods. In some embodiment, the therapeutically effective amount can be adjusted based on the pharmacokinetic or pharmacodynamic parameters, which may include clinical effects such as toxic effects and / or laboratory values.

[0216] As use herein, the term “subject” refers to mammals, such as primates (e.g., humans, male or female) , rodents, swine, dogs, rabbits. In certain embodiments, the subject is a primate. In yet other embodiments, the subject is human, mouse, pigs, and cynomolgus monkey.

[0217] It will be readily apparent to those skilled in the art that other suitable modifications and adaptations of the present disclosure described herein are obvious and may be made using suitable equivalents without departing from the scope of the disclosure or the embodiments disclosed herein. Having now described the disclosure in detail, the same will be more clearly understood by reference to the following examples, which are included for purposes of illustration only and are not intended to be limiting. Further, unless specifically described otherwise, the reagent and the solvent described in the description can be easily obtained from a commercial supplier.

[0218] EXAMPLES

[0219] The invention is further described in the following examples, which do not limit the scope of the invention described in the claims.

[0220] Example 1

[0221] General procedure A

[0222] 200 mg of 0.5 mmol CPT (1 equiv. ) was dissolved in 2mL of CH2Cl2 (DCM) and then cooled to 0 ℃. 420.85 mg of 3.44 mmol 4-dimethylaminopyridine (DMAP, 6 equiv. ) and 347 mg of 1.72 mmol 4-nitrophenyl chloroformate (3 equiv. ) were added for reaction. After 1 h, a white precipitate was observed. The mixture was continuously stirred at room temperature (20℃-30℃) for 4 h, with reaction progress monitored by Liquid Chromatograph Mass Spectrometer (LC-MS) until complete consumption of CPT was observed. The mixture was concentrated and then purified by flash chromatography (gradient from 0%to 20%MeOH in CH2Cl2) to give a crude product carbonate CPT-PNP.

[0223] General procedure B

[0224] Step 1: 20mg of 0.1 mmol Boc- (L) -Prolinal (1 equiv. ) was dissolved in a mixture of 2mL of MeOH and 100μl of AcOH , followed by addition of 2 equiv. NaBH3CN and 10.62mg of 0.12 mmol reactant NH2-R N, N-dimethylethylenediamine (1.2 equiv. ) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours with progress monitored by LC-MS until the complete consumption of the substrate was observed, and then the resulting mixture was concentrated by rotary evaporation to remove the solvent, 20ml of AcOEt was added, the mixture was washed with saturated brine (3 x 10 ml) , dried and concentrated in vacuum to yield Int1 as a colorless oil.

[0225] Step 2: To a solution of 20 mg of 39 μmol CPT-PNP (1 equiv. ) in anhydrous CH2Cl2 was added 21.14mg of 78 μmol Int1 (2 equiv. ) , followed by addition of 20 μL of 155.8 μmol N, N-Diisopropylethylamine (DIPEA, 4 equiv. ) . The reaction was stirred at 25 ℃ for 2 h and without any further purification, directly for the next reaction.

[0226] Step 3: The resulting crude product was dissolved in 1 mL of anhydrous CH2Cl2 and 20%volume of trifluoroacetic acid (TFA) was added dropwise at 0 ℃, the mixture was stirred at room temperature for 1 h. The solvent was evaporated and then CH2Cl2 was added for two times to the residue followed by evaporation under vacuum, to afford the amine trifluoroacetic acid salt. The crude product was then purified by pre-HPLC and then lyophilized to give compound 1-2 as a yellow solid.

[0227] Compounds 1-1 to 1-18 were synthesized following General procedure B with variations shown in the following Table 1.

[0228] Table 1

[0229] Example 2

[0230] Step 1, TBDPS-DXd: To a suspension of 50 mg of 114.82μmol Exatecan mesylate dx8951f (1.0 eq) and substituted acid (1.2 eq) in DMF (1mL) was added 60.39μL of 459.29 μmmol DIPEA (4.0 equiv. ) , followed by addition of 52.39 mg of 137.79μmol 2- (7-Azabenzotriazol-1-yl) -N, N, N', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HATU, 1.5 equiv. ) at room temperature. The mixture was stirred at room temperature, with progress monitored by LCMS until complete consumption of dx8951f was observed. The resulting mixture was purified by RP-column (Acetonitrile / water (0.1%TFA) =20%～80%) and the eluent was lyophilized to give desired product.

[0231] Step 2, TBDPS-DXd-PNP : the method was the same as the general procedure A in Example 1.

[0232] Step 3, TBDPS-DXd-tertiary amine-Boc: To a solution of 20 mg of 39 μmol TBDPS-DXd-PNP (1 equiv. ) in anhydrous CH2Cl2 was added 21.14 mg of 78 μmol  (2 equiv. ) , followed by addition of 20 μL of 155.8 μmol DIPEA (4 equiv. ) . The reaction was stirred at 25 ℃ for 2 h and without any further purification, directly for the next reaction.

[0233] Step 4, Tertiary amine-DXd. TFA: The resulting crude product was dissolved in 1 mL of anhydrous THF and 2 equiv. tetrabutylammonium fluoride (TBAF) was added dropwise at 0 ℃, the mixture was stirred at room temperature for 1 h. Upon addition of 20%volume of TFA, the mixture was continuously stirred at room temperature for 1 h. The solvent was evaporated and then CH2Cl2 was added for two times to the residue followed by evaporation under vacuum, to afford the amine TFA salt. The crude product was then purified by pre-HPLC, then lyophilized to give Tertiary amine-DXd. TFA as a yellow solid.

[0234] Step 5, VC-PAB-tertiary amine-DXd: 10mg of 14.48μmol Tertiary amine-DXd. TFA (1 equiv. ) was dissolved in 1ml of DMF with 13.32mg of 17.37μmol Fmoc-VC-PAB-PNP (1.2 equiv. ) , followed by addition of 5.7 μL of 43.43μmol DIPEA (3 equiv. ) . The reaction was stirred at room temperature for 2 h, with progress monitored by LCMS until complete consumption of the substrate was observed. Without further purification, 3 μL of 36.64 μmol pyrrolidine (5 equiv. ) was added to the resulting mixture to remove the protect group and to give the crude product. The crude product was purified by pre-HPLC, then lyophilized to give VC-PAB-tertiary amine-Dxd as a pale solid.

[0235] Step 6, MC-VC-PAB-tertiary amine-DXd: For the final procedure, 10mg of 9.12μmol VC-PAB-tertiary amine-DXd (1 equiv. ) was dissolved with 3.37mg of 10.95μmol active ester N-Succinimidyl 6-Maleimidohexanoate (1.2 eq) in 1ml of DMF. 3.6 μL of 27.37μmol DIPEA (3 equiv. ) was dropped into the reaction mixture, the mixture was stirred for further 3 h, then purified by pre-HPLC and lyophilized to give the product compound 2-1 as a pale solid.

[0236] The following compounds were synthesized following the procedures in Example 2 with variations shown in the following Table 2.

[0237] Table 2

[0238] Example 3

[0239] Step 1, BRYT1003-1002: To a suspension of 200 mg of 459.29μmol Exatecan mesylate dx8951f (1.0 eq) in 2mL of N, N-Dimethylformamide (DMF) was added 181.2μL of 1.38μmol DIPEA (3.0 equiv. ) , followed by addition of 52 μL of 505.22 μmol isopropylsulphonyl choride (1.2 equiv. ) at room temperature. The mixture was stirred for 2h at room temperature and purified by RP-HPLC (Acetonitrile / water (0.1%TFA) =20%～80%) , the eluent was lyophilized to give the titled product as yellow solid. Exact mass calc. for C27H28FN3O6S 539.58, found (M+H) + 540.24.

[0240] Other procedures were the same as the steps 2, 3, 5, and 6 in Example 2. The method didn’ t need the procedure of step 4 in Example 2.

[0241] The compounds synthesized following the procedures in Example 3 were shown in Table 3.

[0242] Table 3

[0243] Example 4

[0244] Procedure A: Synthesis of intermediates: LK-2

[0245] Step1: To a solution of 1.31g of 3.0 mmol compound 1 (1.0 equiv. ) and 0.58g of 3.6mmol N-Boc-Ethylenediamine (1.2 equiv. ) in 20mL of DMF was added 1.0mL of 6.0mmol DIPEA (2.0 equiv. ) followed 1.3g of 3.3mmol HATU (1.1 equiv. ) at room temperature. The mixture was stirred for 2 h at room temperature, and then was poured into 120mL of ice-water and extracted with EtOAc (40mL×3) . The combined organic layer was washed with brine (40mL) , dried over Na2SO4 and filtered. The filtrate was concentrated and purified by flash column (EtOAc / petroleum ether = 0%～50%) to give compound 2 (1.5g, 86.5%yield) as light yellow solid. Exact mass calc. for C31H39N3O6Si: 577.26, found: 578.53, [M+H] +.

[0246] Step2: To a solution of 1.5 g of 2.6 mmol compound 2 (1.0 equiv. ) in 20mL of MeOH and 10mL of EtOAc was added Pd / C (150mg) under N2 atmosphere. The mixture was degassed 3 times and purged with H2, then stirred for 5 h at room temperature. The mixture was filtered through a Celite pad, the filtrate was concentrated to give crude product 3 (1.3 g, yield 91.4%) . Exact mass calc. for C31H41N3O4Si: 547.29, found: 548.45, [M+H] +.

[0247] Step3: To a solution of 1.3 g of 2.4 mmol compound 3 (1.0 equiv. ) and 1.2 g of 2.4 mmol Fmoc-Val-Cit (1.0 equiv. ) in 30mL of DCM and 5mL of MeOH was added 880.3mg of 3.6mmol 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1, 2-dihydroquinoline (EEDQ, 1.5 equiv. ) . The mixture was degassed 3 times and purged with N2, then stirred for 16 h at room temperature. The mixture was concentrated and purified by flash column (MeOH / DCM= 0%～10%) to give compound 4 (2.0 g, 82.1%yield) as yellow solid. Exact mass calc. for C57H71N7O9Si: 1025.51, found: 1026.68, [M+H] +.

[0248] Step4: To a solution of 2.0 g of 2.0 mmol compound 4 (1.0 equiv. ) in 30mL of THF was added 4.0mL of 4.0mmol TBAF (2.0eq, 1M in THF) under N2 atmosphere. The mixture was stirred for 4 h at room temperature. The mixture was concentrated and purified by flash column (MeOH / DCM=0%～10%) to give compound 5 (1.3 g, 84.7%yield) as yellow solid. Exact mass calc. for C41H53N7O9: 787.39, found: 788.56, [M+H] +.

[0249] Step5: To a solution of 1.3 g of 1.7 mmol compound 5 (1.0 equiv. ) in 15mL of DMF was added 592.7μL of 3.4mmol DIPEA (2.0 equiv. ) followed by 602.3 mg of 2.0 mmol Bis (4-nitrophenyl) carbonate (1.2 equiv. ) . The mixture was stirred for 3 h at room temperature. The mixture was concentrated and purified by flash column (MeOH / DCM=0～10%) to give product LK-2 (1.2 g, 76.3%yield) as yellow solid. Exact mass calc. for C48H56N8O13: 952.40, found: 953.57, [M+H] +.

[0250] Procedure B: Synthesis of LW026

[0251] 20 mg of 0.1 mmol Boc- (L) -Prolinal (1 equiv. ) was dissolved in a mixture of 2mL of MeOH and 100μl of AcOH with 10.62mg of 0.12 mmol reactant N, N-dimethylethylenediamine (1.2 equiv. ) . The reaction was stirred at room temperature for 3 h, with reaction progress monitored by LC-MS until complete consumption of substrate was observed. MeOH was removed through rotary evaporation, the crude was resuspended with 20ml of AcOEt and washed with brine solution (10 ml×3) , dried and concentrated under vacuum. Affording Int1 as a colorless oil.

[0252] 20mg of 37 μmol BRYT1003-1002 (1 equiv. ) was dissolved in 1mL of CH2Cl2 and cooled to 0 ℃. 27.17mg of 222.4 μmol DMAP (6 equiv. ) and 22.41mg of 111.2 μmol 4-nitrophenyl chloroformate (3 equiv. ) were added. The mixture monitored by LC-MS until BRYT1003-1002 was consumed completely. The crude product was purified with column chromatography (gradient from 0%to 20%MeOH in CH2Cl2) to give Int 2.

[0253] To a solution of 20mg of 28.38 μmol Int2 (1 equiv. ) in anhydrous CH2Cl2 was added 15.41 mg of 56.76 μmol Int 1 (2 equiv. ) followed by 20 μL of 113.53 μmol DIPEA (4 equiv. ) . The reaction was stirred at 25 ℃ for 2 h and without any further purification, directly for the next reaction.

[0254] The crude product was dissolved in 1 mL of anhydrous CH2Cl2 and 20%volume of TFA was added dropwise at 0 ℃, the mixture was stirred at room temperature for 1 h. The solvent was evaporated and then CH2Cl2 was added for two times to the residue followed by evaporation under vacuum, to afford the amine trifluoroacetic acid salt. The crude product was purified by pre-HPLC, then lyophilized to give compound 1. Exact mass calc. for C37H45FN6O7S: 736.31, found: 737.51, [M+H] +.

[0255] Step1: 100 mg of 0.136 mmol compound 1 and 129 mg of 0.136 mmol compound 2 (LK-2) was dissolved in 2 mL of DMF. The mixture was stirred at room temperature for 3 h, until the reaction was complete as indicated by LC-MS. The mixture was purified by C18 reversed-phase chromatography to give the desired compound 3 (168 mg, 0.108 mmol, 80%yield) . Exact mass calc. for C79H96FN13O17S: 1549.68, found: 1550.9, [M+H) +.

[0256] Step2: 168 mg of 0.108 mmol compound 3 was dissolved in 5 mL DCM, then 2 mL of TFA was added. The mixture was stirred at room temperature for 1 h, until the reaction was complete as indicated by LC-MS. The solvent was evaporated to give the desired compound 4 (154 mg, 0.107 mmol, 99%yield) . Exact mass calc. for C74H88FN13O15S: 1449.62, found: 1450.8, [M+H] +.

[0257] Step3: 154 mg of 0.107 mmol compound 4 and 29 mg of 0.107 mmol compound 5 was dissolved in DMF, followed by addition of 37 μL of 0.214 mmol DIPEA. 41 mg of 0.107 mmol HATU was added to the mixture at 0 ℃ and stirred for 1 h. The mixture was purified by C18 reversed-phase chromatography to give the desired compound 6 (127 mg, 0.075 mmol, 80%yield) . Exact mass calc. for C83H103FN14O22S: 1698.71, found: 1699.9, [M+H] +.

[0258] Step4: 127 mg of 0.075 mmol compound 6 was dissolved in2 mL of DMF, followed by addition of 25 μL of 0.3 mmol Pyrrolidine. The mixture was stirred at room temperature for 1 hand then purified by C18 reversed-phase chromatography to give the desired compound 7 (88 mg, 0.06 mmol, 80%yield) . Exact mass calc. for C68H93FN14O20S: 1476.64, found: 1477.84, [M+H) +.

[0259] Step5: 88 mg of 0.06 mmol compound 7 was dissolved in 2 mL of DMF, followed by addition of 27 mg of 0.06 mmol compound 8 and 21 μL of 0.12 mmol DIPEA. The mixture was stirred at room temperature for 1 h and then purified by C18 reversed-phase chromatography to give the desired product LW026 (87 mg, 0.048 mmol, 80%yiled) . Exact mass calc. for C83H114FN15O27S: 1803.77, found: 1804.98, [M+H] +.

[0260] Example 5

[0261] Original molecules prepared by Example 1 was dissolved in a 20mM BES buffer (pH7.4) at a final concentration of 1mM and the lysate solution was placed at 37℃ for self-cleavage. 10 μL of lysate solution sample was extracted at 0h, 1h, 2h, 3h, 4h, 5h, 6h, 7h and 23h, then a mixed solution of H2O: acetonitrile (8: 2, v / v) containing 2‰TFA was added to stop the self-cleavage. RP-HPLC was performed to test the self-lysate level (half-life, t1 / 2) of the original molecules.

[0262] The t1 / 2 values were shown in Table 4.

[0263] Table 4

[0264] Figures 2-4 further showed the cleavage curves of compounds 1-1 to 1-14, indicating different self-cleavage speed of compound 1-1 to 1-14. Different speed of self-cleavage results from R2 group of formula I (or R group in NH2-R of step 1 of General procedure B) , which may assist the formation of cleavage transition state in different strength.

[0265] Example 6

[0266] General procedure A: Preparation of ADC with DAR4 (D4)

[0267] (a) 0.04 mM of TCEP (2.4 equiv. ) and 0.0167 mM of antibody were incubated in the presence of 0.3 mM of Zn2+ (30 equiv. ) in a buffer system BES (20 mM, pH7.0) for 4 h at 4℃;

[0268] (b) 1.34 mM of EDTA (80 eq) and 0.1169 mM of drug / linker-payload (7 equiv. ) were introduced to react with reduced thiol groups resulted from step (a) for 1 h at room temperature. The succinimide group was linked to the antibody.

[0269] (c) then recovering the resultant antibody-drug conjugate followed by a purification step using a de-salting column (Thermo, type: 40K, 0.5 mL, REF: 87766, Lot SJ251704) .

[0270] The DAR value was measured by homogeneity assay of MMAE, which was as the following:

[0271] The ADC distribution was analyzed using HIC-HPLC (Agilent1200) with a TSK gel Butyl-NPR column (4.6 mm IDX 3.5cm) (commercially available from Tosoh Biosciences) at a flow rate of 0.5 mL / min at 30 ℃. Solvent A was 1.5 M (NH4) 2SO4 and 50 mM potassium phosphate pH 7. Solvent B was 75%v / v 50 mM potassium phosphate pH 7 and 25%v / v isopropanol. The washout procedure was as follows:

[0272] The detailed reactants and the DAR values were summarized in Table 5.

[0273] Table 5

[0274] “Mutant 25” refers to a variant of Trastuzumab having a heavy chain sequence of SEQ ID NO: 1 and a light chain sequence of SEQ ID NO: 2.

[0275] “Mutant 4” refers to a variant of Farletuzumab having a heavy chain sequence of SEQ ID NO: 3 and a light chain sequence of SEQ ID NO: 4.

[0276] General procedure B: Preparation of ADC with DAR6 (D6)

[0277] (1) 0.99 mM of ZnCl2 (30 equiv. ) and 0.112 mM of reductant TCEP (3.4 equiv. ) were added to a solution of 0.033 mM of a monoclonal antibody Mutant 13 (1 equiv. ) in 20 mM of BES buffer with pH7.0, the reaction mixture was allowed to stay at 25 ℃ for 1h;

[0278] (2) 2.64 mM of EDTA-2Na (80 equiv. ) and 0.26 mM of linker-payload LW026 (8 equiv. ) in DMA were introduced for reaction at room temperature for 1 h;

[0279] (3) Purifying ADC from step (2) using ultrafiltration tube (a) , UF-DF (b) or chromatography (c) to give ADC with D6.

[0280] The DAR value was measured following the method in General procedure A of Example 6, and was summarized in Table 6.

[0281] Table 6

[0282] “Mutant 13” refers to a variant of Farletuzumab having a heavy chain sequence of SEQ ID NO: 5 and a light chain sequence of SEQ ID NO: 6.

[0283] Example 7

[0284] Cell cytotoxicity assay

[0285] Re-suspend cells (NCI-N87, Calu3 or OVCAR3) with proper medium and adjust cell density to recommended information (1500cell / well, 2000cell / well, 2500cell / well or 5000cell / well) . Add 90 μL-100 μL cell suspension medium to each well of assay plate. Incubate cells at 37℃, 5%CO2 95%air and 100%relative humidity overnight. Day 0 Compound treatment.

[0286] Preparation of ADC stock plate (10X stock plates) : Serially dilute (four-fold serial dilution) the stock solution from highest concentration down to lowest in medium according to plate map.

[0287] Diluted stock to 1X with proper medium. Add 10 μL-25 μL ADC (BP03-AB001-AC010, BP03-AB001-AC012, BP03-AB001-AC014, BP04-AB002-AC001, BP04-AB002-AC002 or BP04-AB002-AC004) to each well as plate map. The final concentration of ADC in each well is ranged in 0.015 nM -1000 nM.

[0288] Incubate the assay plate in incubator for 4, 5 or 7 days. Then equilibrate assay plate and CCK8 kit (TargetMol, C005) assay or Promega CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay Kit (Promega, G7573) assay to room temperature for nearly 30 minutes. Add 15 μL CCK8 or 50 μL CellTiter-Glo assay reagent to each well. Shake and incubate the plate at room temperature for 10 minutes to 4 h before signal reading. Detect the plate using absorbance or luminescence and calculate the inhibition rate (IR) of the tested compounds by any of the following formulas:

[0289] IR (%) = [1- (APC-ABlank)  /  (ANC-ABlank) ] ×100% (I)

[0290] IR (%) = [1- (LPC-LBlank)  /  (LNC-LBlank) ] ×100% (II)

[0291] APC and LPC refer to the absorbance or luminescence of the testing sample containing ADC and cells, respectively. ANC and LNC refer to the absorbance or luminescence of the testing sample containing cells, respectively. ABlank and LBlank refer to the absorbance or luminescence of the testing sample containing medium only, respectively.

[0292] The IC50 values of ADCs were calculated based on IR values, as shown in Table 7 and Table 8.

[0293] Table 7

[0294] Table 8

[0295] Figures 5-9 and the Tables 7-8 above show that ADCs made from Linker-payloads bearing different self-immolative motif exhibit significant difference in vitro efficacy. This effect of toxin release rate on ADC efficacy points out that adjusting self-immolative cleavage rate could be a reasonable approach to find better balance point between efficacy and safety. The present disclosure included herein provides necessary technology and knowledge to flexibly adjust self-immolative cleavage rate.

[0296] Example 8

[0297] Evaluation of Cytotoxicity of the ADC in vivo

[0298] A total of 10 female C-NKG mice (6-8 weeks, weighting 18-22 g) were procured from Cyagen Biosciences Inc. (Suzhou facility) . All animals were housed in SPF conditions with a 12-h light / dark cycle. Each mouse was inoculated subcutaneously at the right upper flank with OVCAR-3 (ClinBridge Biotech Co. Ltd. ) tumor cells (1×107 / mouse) in 0.2 mL of blank medium for tumor development. Take special care to ensure subcutaneous delivery of cells by lifting up the fold of skin with one hand and injection of cells with the other. During implantation, new syringe and needle for every mouse were used to minimize tumor ulceration. Carefully wipe off any droplets on the skin with a Kim Wipe after injection to further minimize chance for tumor ulceration. The animals were grouped randomly into 2 groups according to tumor volume when the average tumor volume reached approximately ～140 mm3 (CV < 0.3) for efficacy study. On Day 0, the mice in treated group received a single intravenous (i. v. ) dose of 0.2ml of 2.5 mg / kg BP04-AB005-AC029, while those in vehicle group received an equivalent volume of solvent. Tumor volumes were measured every three days until Day 42. Relative tumor inhibition rate, TGITV (%) was calculate by the formula: TGI = [1 - (ΔT  / ΔC) ] × 100 %

[0299] Where:

[0300] ΔT represents the change in tumor volume in the treated group during a specific period.

[0301] ΔC represents the change in tumor volume in the vehicle group during the same period.

[0302] For comparison between two groups, an independent sample will be used. Data was analyzed using T-test in GraphPad Prism 6.0. Table 10 and Figure 16 show the result of tumor inhibition of BP04-AB005-AC029 on OVCAR-3.

[0303] Table 10 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, p< 0.05 is considered to be statistically significant.

[0304] While particular embodiments have been described, alternatives, modifications, variations, improvements, and substantial equivalents that are or may be presently unforeseen may arise to applicants or others skilled in the art. Accordingly, the appended claims as filed and as they may be amended are intended to embrace all such alternatives, modifications, variations, improvements, and substantial equivalents.

Claims

1.A compound having formula (I) , or pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof, wherein:R1 is H, hydroxyl, carboxyl, amide, substituted or not substituted -C (O) O (C1-C3 alkyl) , 5-6 membered heterocyclooxy substituted with more than one hydroxyl, -O (CH2CH2O) n11CH3, or -O (CH2CH2O) n12CH2COOH, n11 and n12 are each independently an anger of 0 to 24;R2 is C1-C3 alky, - (CH2) n21 (CR21) NR22R23, - (CH2) n22R24R25, substituted or not substituted -CH2-phenyl, substituted or not substituted -CH2- (5-6 membered heterocyclyl) , -CH2- (5-6 membered heteroaryl) substituted or not substituted with one, two or three electron donating groups,R21 is H, C1-C3 alkyl, carboxyl;R22 and R23 each independently are C1-C3 alkyl, - (C1-C3 alkyl) -COOH, - (C1-C3 alkyl) -OH;R24 is -O-, -S-, -SO-, -SO2-, -CO-, -HPO2-, -O-HPO2-;R25 is H, C1-C3 alkyl, hydroxy, -NR251R252;R251 and R252 are each independently H, C1-C3 alkyl;n21 and n22 are each independently 0, 1, 2, or 3;R3 is a first functional molecule moiety;n is an anger of 0, 1 or 2.2.The compound of claim 1, wherein R1 is H, hydroxyl, carboxyl, amide, -C (O) O (C1-C3 alkyl) , -O- (tetrahydropyran-2-yl) substituted with hydroxyl, carboxy or combination thereof, -O (CH2CH2O) n11CH3, or -O (CH2CH2O) n12CH2COOH, n11 and n12 are each independently an anger of 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, or 12;preferably, R1 is H, -OH, -C (O) OH, -C (O) OCH3, -C (O) NH2, -O (CH2CH2O) n11CH3, or -O (CH2CH2O) n12CH2COOH, n11 and n12 are each independently an anger of 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;further preferably, R1 is H or OH.3.The compound of claim 1 or 2, wherein in R2 group,(1) n21 is 1 or 2;(2) n22 is 1 or 2;(3) R21 is H, carboxyl, -CH3;(4) R22 and R23 are each independently methyl, -CH2CH2COOH, -CH2CH2OH;(5) R25 is H, methyl, hydroxymethyl, hydroxy, amino, -N (CH3) 2;(6) the phenyl is substituted with one, two or three C1-C3 alkoxyl groups, optionally -OCH3;(7) the 5-6 membered heterocyclyl is tetrahydropyrrolyl, morpholinyl, (8) the 5-6 membered heteroaryl comprises one, two or three heteroatoms in ring selected from N, O, S or the combination thereof, where the N or S is oxidized or unoxidized;(9) the electron donating group comprises at least one of C1-C3 alkoxyl, carboxyl, nitrile, halo, and amide;(10) R24 is -SO2-or -CO-, R25 is C1-C3 alkyl or NR251R252, R251 and R252 are each independently H, C1-C3 alkyl; and / or(11) R24 is -O-, -CO-, -S-, -SO2-, or -HPO2-, and R25 is H, -CH3, -NH2, or -OH.4.The compound of any of claims 1-3, wherein the 5-6 membered heteroaryl is pyridinyl, pyrimidyl, thienyl, imidazolyl, thiazolyl, oxazolyl, furanyl,  optionally the pyrimidyl is substituted with 1 to 2 substituents selected from -OCH3, F, Cl, Br, I, CF3, CN, COOH and CONH2, or the combination thereof; orR2 is 5-6 membered heteroaryl selected from the group consisting of pyridinyl, pyrimidyl, thienyl and thiazolyl, and the heteroaryl is optionally substituted with -OCH3 and / or F.5.The compound of any of claims 1-4, wherein R2 is H, -CH3,  X is NO2, -OCH3, F, Cl, Br, I, CN, C (O) OH or C (O) NH2;preferably, R2 is H, -CH3, X is -OCH3 or F;further preferably, R2 is -CH3, 6.The compound of any of claims 1-5, whereinthe first functional molecule moiety is a cytotoxic agent, label, nucleic acid, radionuclide, hormones, immunomodulator or derivative thereof, optionally the functional molecule moiety is cytotoxic agents selected from DNA alkylator, TLR7 / agonist, TLR8 agonist, TLR9 agonist, Sting agonist, tubulin inhibitors, splicesome inhibitor, RNA polymerase inhibitor and topoisomerase inhibitors.7.The compound of any of claims 1-6, wherein the first functional molecule moiety is MMAE, eribulin, camptothecin, trabectedin, duocarmysin, resiquimod, amanitin or derivative thereof;optionally the first functional molecule moiety is selected from any of the following: SN38, DXd, Belotecan, trabectedin, duocarmysin, resiquimod, MMAE,preferably, the first functional molecule moiety is BRYT-1002, BRYT-1011 or BRYT-1101.8.The compound of claims 1-7, wherein the compound has a structure of formula (I-A) , R2 and R3 are defined as any of claims 1-7.9.The compound of any of claims 1-8, wherein the compound is shown as formula (I-1) , wherein:R1 is H or hydroxyl;R2 is H, methyl, Z1 is F or H;Z2 is H, methyl, hydroxyl orZ3 is H, -NH2, -NHCH3, optionally, the compound of formula (I-1) has the following structure:Z3 isR2 is methyl, 10.The compound of any of claims 1-8, wherein the compound is shown as formula (I-2) , whereinR2 is11.The compound of any of claims 1-8, wherein the compound is shown as formula (I-3) , whereinR2 is H, -CH3, X is NO2, -OCH3, F, Cl, Br, I, CN, C (O) OH or C (O) NH2.12.The compound of any of claims 1-11, wherein the compound comprises any of the following: 13.A compound having formula (II) , or pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,L1-B1 (II)WhereinB1 is a compound moiety of the compound of any of claims 1-12, having the structureL1 is a cleavable or non-cleavable linker.14.The compound of claim 13, whereinL1 has the structureR4 is nitrogen atom, -O-or -NH-;R5 has the formula -Q1-Q2-Q3,Q1 is H, -C (O) -, -C (O) NH (CH2) 2NH-, or combination thereof; m is an anger of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or 15; *refers to attachment point to Q2 or Q3;Q2 is absent, or Q2 ism2 is an anger of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10; either attach points in Q2 links to Q1, the other links to Q3;Q3 is absent provided that Q1 has one attachment point, or Q3 isR6 is a cleavable linker susceptible to Cathepsin, β-glucuronidase, Legumain, Neutrophil elastase (NE) , Matrix metalloproteinases-2 (MMP-2) , Matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) , AKR1C3, FAP, Plasmin or sulfatase digestion;or -R4 (R6) is -O-SO3H.15.The compound of claim 13 or 14, wherein R6 is J1-J2-,J1 is absent provided that J2 has one attachment point, or J1 isJ2 comprises any of the following structures or the combination thereof,(1) susceptible to Cathepsin: -VC-, -VA-, -GGFG-, -GGVA-, -VKG-, -EVC-, -VK-,**refers to attachment point to R4;(2) susceptible to β-glucuronidase: (3) susceptible to Legumain: -AAN-, -PAN-, -PTN-, (4) susceptible to Neutrophil elastase (NE) : -NPV-, -AAPV-,(5) susceptible to Matrix metalloproteinases-2 (MMP-2) ;(6) susceptible to Matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) : -GPLGL-, (7) susceptible to Sulfatase: (8) susceptible to FAP: -GGP-, -GP-, (9) susceptible to Plasmin: -dAFK-, -dVLK-, (10) susceptible to AKR1C3: 16.The compound of any of claims 13-15 wherein L1 is 17.The compound of any of claims 13-16, wherein the compound having formula II is 18.The compound of any of claims 13-17, wherein the compound having formula II is any of the following: LP1-1: MC-VC-PAB-tertiary amine-DXdLP1-2: MC-VC-PAB-methyl-DXdLP1-3: MC-VC-PAB-sulfuryl-DXdLP1-4: MC-VC-PAB-tertiary amine-1002LP1-5: MC-VC-PAB-sulfuryl-1002LP1-6: MC-VC-PAB-1-1002LP1-7: MC-VC-PAB-12-1002LP1-8: MC-VC-PAB-15-1002LP1-9LP1-10: MC-VC-PAB-12-101119.A conjugate having formula (III) , or pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,Ab1- [L1-B1] p (III)Wherein:Ab1 is a first targeting moiety;[L1-B1] is a compound moiety of the compound of any of claims 13-18;p is an anger of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.20.The conjugate of claim 19, wherein the Ab1 is an antibody, peptide or polymer that is covalently linked to the R5 or R6 group in L1 moiety via one or more reactive groups,optionally, the reactive groups in L1 moiety comprise hydroxyl, carboxyl, amino, succinimidyl, or the combination thereof;optionally, the reactive groups in Ab1 comprise thiol group.21.The conjugate of claim 19 or 20, wherein the Ab1 is one of the following:(1) the antibody includes an anti-HER2, anti-FRα, anti-Trop2, anti-HER3, anti-EGFR, anti-Nectin4, anti-CD19, anti-CD30, anti-CD79b, anti-C-Met, anti-B7H3, anti-B7H4, anti-LIV-1, anti-ROR1, anti-ROR2, anti-CDH6, anti-CDH3, anti-FOLR1, anti-PSMA, anti-5T4, anti-MUC1, anti-MUC16, anti-DLL3, anti-MSLN, anti-FGFR2b, anti-FGFR3, anti-CLDN6, anti-Claudin18.2, anti-CD20, anti-CD25, anti-CCR8, anti-BCMA, anti-GPRC5D, anti-GPC3, anti-CDH17, anti-PD-L1, anti-TNFα, anti-GD2, anti-TfR1, anti-CD22, anti-CD33, anti-FAP, anti-CD44, anti-SnT, or anti-CD47 antibody; optionally, the antibody is an anti-HER2, anti-FRα, anti-Trop2, or anti-BCMA antibody;optionally, the antibody is Transtuzumab, Farletuzumab, Sacituzumab, Belantamab, or variants thereof; preferably, the antibody is a variant of Transtuzumab having a heavy chain as shown in SEQ ID NO: 1 and a light chain as shown in SEQ ID NO: 2; or the antibody is a variant of Farletuzumab having a heavy chain as shown in SEQ ID NO: 3 and a light chain as shown in SEQ ID NO: 4; or the antibody is a variant of Farletuzumab having a heavy chain as shown in SEQ ID NO: 5 and a light chain as shown in SEQ ID NO: 6;(2) the peptide includes any of HSA (Human Serum Albumin) or HSA binding protein or peptide with thiol, amino group or carboxylic acid as reactive group, TAA (tumor associated antigen) targeting peptide with thiol, amino group or carboxylic acid as reactive group;(3) the polymer is selected from PEG, polysarcosine, Hyaluronicacid with thiol, amino group, or carboxylic acid as reactive group; optionally the polymer isN1 is an anger of 0-5000, optionally, 0 to1000, 0 to 100, 0 to 20, M1 is an anger of 3 to 2000, optionally 3 to 1000, 3 to 500, 3 to 100, 3 to 10.22.A method of preparing the compound of any of claims 1-18 or the conjugates of any of claims 19-21, comprising the following procedures:(1) (2) (3) the R1, R2, and R3 are defined as any of claims 1-21.23.A pharmaceutical composition comprising the compound of any of claims 1-18, or the conjugate of any of claims 19-21, and at least a pharmaceutical excipient.24.A kit comprising the compound of any of claims 1-18, or the conjugate of any of claims 19-21.25.Use of the compound of any of claims 1-18, the conjugate of any of claims 19-21, the pharmaceutical composition of claim 23, the kit of claim 24 in the manufacture of a therapeutic agent for prevention, diagnosis, or treatment of a disease or disorder;optionally, the disease or disorder is neoplastic disease.26.A method of treating a neoplastic disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject a therapeutically effective amount of the conjugate of any of claims 19-21, the pharmaceutical composition of claim 23, or the kit of claim 24.

Images