A novel conjugate, method and use thereof, an antibody mutant and use thereof

Abstract

The present disclosure relates to a conjugate, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof, which charactered in that, the conjugates comprise (1) a targeting agent; (2) a payload; (3) a linker, wherein, the payloads comprise a payload 1 and a payload 2, the linkers comprise a linker 1 and a linker 2, the payload 1 and the payload 2 are different, the linker 1 is different from the linker 2 or the linker 1 is the same as the linker 2, the payloads are linked to the targeting agents through the linkers, optionally, the action mechanism of the payload 1 and the payload 2 is different. The conjugates of the present disclosure have higher cytotoxic activity. The present disclosure also relates to an antibody mutant. The antibody mutant is helpful to provide suitable site linked with linker and improve the homogeneity of antibody-drug conjugate.

Description

A NOVEL CONJUGATE, METHOD AND USE THEREOF, AN ANTIBODY MUTANT AND USE THEREOF

[0001] CROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS

[0002] The application claims the priority to PCT Application No. PCT / CN2024 / 114922, filed on August 27, 2024, PCT Application No. PCT / CN2024 / 114914, filed on August 27, 2024, PCT Application No. PCT / CN2024 / 114924, filed on August 27, 2024, and PCT Application No. PCT / CN2025 / 088033, filed on April 9, 2025. The content of the prior PCT applications are considered as a part of the present disclosure and are incorporated herein in its entirety.TECHNICAL FIELD

[0003] The present disclosure relates to the pharmaceutical field, specifically to a novel conjugate, method and use thereof, an antibody mutant and use thereof.BACKGROUND

[0004] Antibody-drug conjugates (ADCs) are innovative biopharmaceutical products in which a monoclonal antibody is linked to a small molecule drug with a linker. ADCs ideally combine the specificity of antibodies and high potency of cytotoxic drugs by delivering potent cytotoxic drugs to antigen-expressing cells, thereby enhancing their targeted cytotoxic activity and safety.

[0005] However, in considering the tumor heterogeneity and clinical occurrence of drug-resistance, there still exists a great need of evolving ADC technology to further improve the cytotoxic activity and safety of the ADCs.SUMMARY

[0006] For the above-mentioned purpose, the present disclosure provides a conjugate, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof, which charactered in that, the conjugates comprise (1) a targeting agent; (2) a payload; (3) a linker, wherein, the payloads comprise a payload 1 and a payload 2, the linkers comprise a linker 1 and a linker 2, the payload 1 and the payload 2 are different, the linker 1 is different from the linker 2 or the linker 1 is the same as the linker 2, the payloads are linked to the targeting agents through the linkers, optionally, the action mechanism of the payload 1 and the payload 2 is different.

[0007] Through the combination of the payload 1 and the payload 2 linked to the targeting agent, the conjugates of the present disclosure have higher cytotoxic activity.

[0008] Specifically, the present disclosure provides a conjugate a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof, the conjugates having the following formula (I) , (P2-L4-L2) n2-Targeting agent- (L1-L3-P1) n1 (I)

[0009] wherein,

[0010] “-” is a suitable binding way connecting the parts of the left and the right of “-” ;

[0011] P1 is the payload 1, P2 is the payload 2;

[0012] L1-L3 is the linker 1; L2-L4 is the linker 2;

[0013] optionally, n1 is 1-9, n2 is 1-9, n1+n2 is 2-10.

[0014] In some embodiments, (1) P1 is a topoisomerase inhibitor and P2 is a microtubule-targeting agent (MTA) ; and / or, (2) P1 is a poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor and P2 is a MTA; and / or, (3) P1 is an ATR inhibitor and P2 is a MTA; and / or, (4) P1 is a ATR inhibitor or a topoisomerase inhibitor, and P2 is a topoisomerase inhibitor or an ATR inhibitor; and / or, P1 is a topoisomerase inhibitor, and P2 is a poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor.

[0015] The present disclosure provides a method of preparing the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to the present disclosure.

[0016] The present disclosure provides a pharmaceutical composition comprising the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to the present disclosure.

[0017] The present disclosure provides use of the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to the present disclosure, or the pharmaceutical compositions according to the present disclosure in the manufacture of a drug for preventing or treating a disease.

[0018] The present disclosure also provides a method of preventing or treating a disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject a therapeutically effective amount of the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to the present disclosure, or the pharmaceutical compositions according to the present disclosure.

[0019] The present disclosure provides an antibody mutant or an antigen-binding fragment thereof, wherein, the antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof comprises a heavy chain and a light chain, wherein,

[0020] the heavy chain of the antibody mutant comprises SX1X2KTX3TCPPX4PAPEX5X6GGPX7V, wherein, X1 is selected from C or S, X2 is selected from D or H, X3 is selected from H or D, X4 is selected from C, S or V, X5 is selected from L or A, X6 is selected from L or A and X7 is selected from S or C;

[0021] light chain of the antibody mutant comprises SFNRGEX8, wherein, X8 is selected from C or S;

[0022] provided that X1 is not C, X2 is not D, X3 is not H, X4 is not C, X5 is not L, X6 is not L, X7 is not S and X8 is not C at the same time.

[0023] The antibody mutant is helpful to provide suitable site linked with linker and improve the homogeneity of antibody-drug conjugate.

[0024] Additional aspects and advantages of the present disclosure will become readily apparent to those skilled in this art from the following detailed description, wherein only illustrative embodiments of the present disclosure are shown and described. As will be realized, the present disclosure is capable of other and different embodiments, and its several details are capable of modifications in various obvious respects, all without departing from the disclosure. Accordingly, the drawings and description are to be regarded as illustrative in nature, and not as restrictive.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0025] Figure 1 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 05- [LW016] 1, Farletuzumab Mut 13- [LW023] 6 and ADC I-1-1.

[0026] Figure 2 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 05- [LW016] 1, Farletuzumab Mut 13- [LW030] 6 and ADC I-2-1.

[0027] Figure 3 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 05- [LW016] 1, Farletuzumab Mut 13- [LW025] 6 and ADC II-1-1.

[0028] Figure 4 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 05- [LW016] 1, Farletuzumab Mut 13- [LW026] 6 and ADC III-1-1.

[0029] Figure 5 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 05- [LW016] 1, Farletuzumab Mut 13- [MC-GGFG-DXd] 6 and ADC III-3-1.

[0030] Figure 6A shows HIC-HPLC chromatogram of Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 conjugate prepared of example 10.1; Figure 6B shows HIC-HPLC chromatogram of Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 conjugate prepared of example 10.2; Figure 6C shows HIC-HPLC chromatogram of Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 conjugate prepared of example 10.3; Figure 6D shows HIC-HPLC chromatogram of Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 conjugate prepared of example 10.4.

[0031] Figure 7A shows HIC-HPLC chromatogram of Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 4 conjugate prepared of example 10.5; Figure 7B shows HIC-HPLC chromatogram of Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 4 conjugate prepared of comparative example 10.1; Figure 7C shows HIC-HPLC chromatogram of Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 4 conjugate prepared of example 10.6; Figure 7D shows HIC-HPLC chromatogram of Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 4 conjugate prepared of comparative example 10.2.

[0032] Figure 8 shows HIC-HPLC chromatogram of Farletuzumab Mut 31- [MC-VC-PAB-MMAE] 4 conjugate prepared of example 10.7.

[0033] Figure 9 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 13- [LW023] 6, Farletuzumab Mut 05- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 and ADC I-3-1.

[0034] Figure 10 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 05- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 and ADC I-3-2.

[0035] Figure 11 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1 and ADC I-4-1.

[0036] Figure 12 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 13- [LW030] 6, Farletuzumab Mut 05- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 and ADC I-5-1.

[0037] Figure 13 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 13- [LW026] 6, Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1 and ADC III-6-1.

[0038] Figure 14 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 38- [LW042] 4, Farletuzumab Mut 05- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 and ADC III-8-1.

[0039] Figure 15 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 05- [LW042] 6, Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1 and ADC III-7-1.

[0040] Figure 16 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 38- [LW042] 4, Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1 and ADC III-7-2.

[0041] Figure 17 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 20- [LW031] 4, and ADC IV-1-1.

[0042] Figure 18 depicts the inhibition curve of the tumor volume of Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1, Farletuzumab Mut 13- [LW026] 6 and ADC III-6-1 at the dose of 1mpk.

[0043] Figure 19 depicts the inhibition curve of the tumor volume of Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1, Farletuzumab Mut 13- [LW026] 6 and ADC III-6-1 at the dose of 2.5mpk.

[0044] Figure 20 depicts the inhibition curve of the tumor volume of Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1, Farletuzumab Mut 05- [LW042] 6 and ADC III-7-1 at the dose of 1mpk.

[0045] Figure 21 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB003-AC011.

[0046] Figure 22 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB003-AC009.

[0047] Figure 23 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of 20250701-C91.

[0048] Figure 24 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB003-AC019.

[0049] Figure 25 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB005-AC018.

[0050] Figure 26 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB005-AC019.

[0051] Figure 27 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB005-AC029.

[0052] Figure 28 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of 20250610-CH569.

[0053] Figure 29 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB003-AC023.

[0054] Figure 30 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB006-AC002.

[0055] Figure 31 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB007-AC001.

[0056] Figure 32 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB006-AC001.

[0057] Figure 33 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB010-AC001.

[0058] Figure 34 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of 20250610-CH568.

[0059] Figure 35 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB003-AC010.

[0060] Figure 36 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB005-AC024.

[0061] Figure 37 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB007-AC003.

[0062] Figure 38 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB007-AC002.

[0063] Figure 39 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB005-AC025.

[0064] Figure 40 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB005-AC032.

[0065] Figure 41 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB010-AC004.

[0066] Figure 42 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of 20250625-CH576.

[0067] Figure 43 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of 20250625-CH570.

[0068] Figure 44 show the chromatograms of HIC-HPLC and chromatograms of SEC of BP04-AB006-AC003.

[0069] Figure 45 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 05- [LW042] 6, Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1 and ADC III-7-1.

[0070] Figure 46 depicts the curve of cell killing assay of Farletuzumab Mut 38- [LW042] 4, Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1 and ADC III-7-2.

[0071] Figure 47 depicts the curve of cell killing assay of ADC III-7-1, ADC III-7-2 and IMGN-853.

[0072] Figure 48 depicts the inhibition curve of the tumor volume of Farletuzumab Mut 05- [LW042] 6, Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1 and ADC III-7-1 at the dose of 0.3 mpk.

[0073] Figure 49 depicts the inhibition curve of the tumor volume of Farletuzumab Mut 38- [LW042] 4, Farletuzumab Mut 05- [LW033] 1 and ADC III-7-2 at the dose of 0.3 mpk.

[0074] Figure 50 depicts the inhibition curve of the tumor volume of ADC III-7-1, ADC III-7-2 and IMGN-853 at the dose of 0.3 mpk.

[0075] Figure 51 depicts the curve of the binding test of ADC III-7-1, ADC III-7-2 and Farletuzumab Mut 38 in example 7.

[0076] Figure 52 depicts the curve of the endocytosis test of ADC III-7-1, ADC III-7-2 and antibody KLH in example 8.DETAILED DESCRIPTION

[0077] The present disclosure is explained in greater detail below. This description is not intended to be a detailed catalog of all the different ways in which the invention may be implemented, or all the features that may be added to the instant invention. For example, features illustrated with respect to one embodiment may be incorporated into other embodiments, and features illustrated with respect to a particular embodiment may be deleted from that embodiment. In addition, numerous variations and additions to the various embodiments suggested herein will be apparent to those skilled in the art in light of the instant disclosure which do not depart from the instant invention. Hence, the following description is intended to illustrate some particular embodiments of the invention, and not to exhaustively specify all permutations, combinations and variations thereof.

[0078] Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the disclosure pertains. Although any methods and materials similar or equivalent to those described herein may be used in the practice for testing of the present disclosure, the preferred materials and methods are described herein. In describing and claiming the present disclosure, the following terminology will be used.

[0079] Unless otherwise defined herein, scientific and technical terms used in connection with the present disclosure shall have the meanings that are commonly understood by those of ordinary skill in the art. Further, unless otherwise required by context, singular terms shall include pluralities and plural terms shall include the singular. More specifically, as used in this specification and the appended claims, the singular forms “a, ” “an” and “the” include plural referents unless the context clearly dictates otherwise. Thus, for example, reference to “an antibody” includes a plurality of antibodies; reference to “atransition metal ion” includes mixtures of transition metal ions, and the like. In this application, the use of “or” means “and / or” unless stated otherwise.

[0080] Throughout this disclosure, unless the context requires otherwise, the words “comprise” , “comprises” , “comprising” , “contain” , “contains” and “containing” will be understood to imply the inclusion of a stated step or element or group of steps or elements but not the exclusion of any other step or element or group of steps or elements. By “consisting of” is meant including, and limited to, whatever follows the phrase “consisting of” . Thus, the phrase “consisting of” indicates that the listed elements are required or mandatory, and that no other elements may be present. By “consisting essentially of” is meant including any elements listed after the phrase, and limited to other elements that do not interfere with or contribute to the activity or action specified in the disclosure for the listed elements. Thus, the phrase “consisting essentially of” indicates that the listed elements are required or mandatory, but that other elements are optional and may or may not be present depending upon whether or not they affect the activity or action of the listed elements.

[0081] As used herein, the term “one embodiment, ” “an embodiment, ” “aparticular embodiment, ” “arelated embodiment, ” “acertain embodiment, ” “an additional embodiment, ” or “afurther embodiment” or combinations thereof means that a particular feature, structure or characteristic described in connection with the embodiment is included in at least one embodiment of the present disclosure. Thus, the appearances of the foregoing phrases in various places throughout this specification are not necessarily all referring to the same embodiment. Furthermore, the particular features, structures, or characteristics may be combined in any suitable manner in one or more embodiments.

[0082] Conjugates

[0083] In one aspect, the present disclosure provides a conjugate, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof, the conjugates comprise (1) a targeting agent; (2) a payload; (3) a linker, wherein, the payloads comprise a payload 1 and a payload 2, the linkers comprise a linker 1 and a linker 2, the payload 1 and the payload 2 are different, the linker 1 is different from the linker 2 or the linker 1 is the same as the linker 2, the payloads are linked to the targeting agents through the linkers.

[0084] In some embodiments, the action mechanism of the payload 1 and the payload 2 is different.

[0085] As used herein, the term “salt” or “salts” refers to an acid addition or base addition salt of a compound of the present invention. “Salt” include in particular “apharmaceutical acceptable salt” . The term “apharmaceutically acceptable salt” refers to salt that retain the biological effectiveness and properties of the compounds of this invention and, which typically are not biologically or otherwise undesirable. In many cases, the compounds of the present invention are capable of forming acid and / or base salts by virtue of the presence of amino and / or carboxyl groups or groups similar thereto. When both a basic group and an acid group are present in the same molecule, the compounds of the present invention may also form internal salts, e.g., zwitterionic molecules.

[0086] As used herein, the term “stereoisomer” refers to mean a stable isomer that has at least one chiral atom or restricted rotation giving rise to perpendicular dissymmetric planes (e.g., certain biphenyls, allenes, and spiro compounds) and can rotate plane-polarized light. Because asymmetric centers and other chemical structure exist in the compounds of the disclosure which may give rise to stereoisomerism, the disclosure contemplates stereoisomers and mixtures thereof. The compounds of the disclosure and their salts include asymmetric carbon atoms and may therefore exist as single stereoisomers, racemates, and as mixtures of enantiomers and diastereomers. Typically, such compounds will be prepared as a racemic mixture. If desired, however, such compounds can be prepared or isolated as pure stereoisomers, i.e., as individual enantiomers or diastereomers, or as stereoisomer-enriched mixtures. As discussed in more detail below, individual stereoisomers of compounds are prepared by synthesis from optically active starting materials containing the desired chiral centers or by preparation of mixtures of enantiomeric products followed by separation or resolution, such as conversion to a mixture of diastereomers followed by separation or recrystallization, chromatographic techniques, use of chiral resolving agents, or direct separation of the enantiomers on chiral chromatographic columns. Starting compounds of particular stereochemistry are either commercially available or are made by the methods described below and resolved by techniques well-known in the art.

[0087] As used herein, the term “enantiomer” refers to a pair of stereoisomers that are non-superimposable mirror images of each other.

[0088] As used herein, the term “diastereomer” refers to optical isomers which are not mirror images of each other.

[0089] As used herein, the term “racemate” refers to a mixture containing equal parts of individual enantiomers.

[0090] As used herein, the term “solvate” refers to a complex of variable stoichiometry formed by a solute, for example, a compound of Formula (I) and solvent, for example, water, ethanol, or acetic acid. This physical association may involve varying degrees of ionic and covalent bonding, including hydrogen bonding. In certain instances, the solvate will be capable of isolation, for example, when one or more solvent molecules are incorporated in the crystal lattice of the crystalline solid. In general, such solvents selected for the purpose of the disclosure do not interfere with the biological activity of the solute. Solvates encompasses both solution-phase and isolatable solvates. Representative solvates include hydrates, ethanolates, methanolates, and the like.

[0091] As used herein, the term “payload” refers to any cytotoxic molecule or any molecule of medical interest bears at least one substituted group or a partial structure allowing connection to a linker. The payload may kill cancer cells and / or inhibit growth, proliferation, or metastasis of cancer cells, thereby reducing, alleviating, or eliminating one or more symptoms of a disease or disorder.

[0092] As used herein, the term “linker” refers to a chemical structure or a fragment wherein one terminal can be connected to one group and the other terminal can be connected to the other group. Specifically, the linker can be connected to the targeting agent, the payload and / or other linker moiety.

[0093] In some embodiments, the conjugates having the following formula (I) , (P2-L4-L2) n2-Targeting agent- (L1-L3-P1) n1 (I)

[0094] wherein,

[0095] “-” is a suitable binding way connecting the parts of the left and the right of “-” ;

[0096] P1 is the payload 1, P2 is the payload 2;

[0097] L1-L3 is the linker 1; L2-L4 is the linker 2;

[0098] optionally, n1 is 1-9, n2 is 1-9, n1+n2 is 2-10.

[0099] In some embodiments, P1 and P2 comprise reactive amino groups and / or reactive hydroxyl groups.

[0100] As used herein, the term “reactive amino groups” refers to the amino group with chemically reactive, which could connect the payload and the linker.

[0101] As used herein, the term “reactive hydroxyl groups” refers to the hydroxyl group with chemically reactive, which could connect the payload and the linker.

[0102] In some embodiments, the payload and the linker could be connected with a “N-chemical group” bond or a “O-chemical group” bond.

[0103] In some embodiments, n1 and n2 are independently selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 or 9.

[0104] In some embodiments, n1 refers to the theoretical amount of P1-L3-L1-linked to the targeting agents. In some embodiments, n2 refers to the theoretical amount of P2-L4-L2-linked to the targeting agents.

[0105] As used herein, the term “DAR” refers to the drug-antibody ratio which is the average amount of the payloads linked to the antibody.

[0106] As used herein, the term “Dx” or “the ADC with Dx” refers to the ADC in which the theoretical average number of payloads coupling to a single antibody molecule is about x. For example, D2 or the ADC with D2 means that about two drug molecules (e.g., 1.6, 2.0, 2.4 molecules) are coupled to one single antibody molecule on average. In some embodiments, x is selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10.

[0107] As used herein, the term “Dy+Dz” or “the ADC with Dy+Dz” refers to ADC in which the theoretical average number of “L1-L3-P1” (in some embodiments, also named the first linker-payload; in some embodiments, could named the second linker-payload) coupling to a single antibody molecule is about y, and the theoretical average number of “L2-L4-P2” (in some embodiments, also named the second linker-payload; in some embodiments, could named the first linker-payload) coupling to a single antibody molecule is about z. In some embodiments, y is selected from n1, and z is selected from n2. For example, D6+D1 or the ADC with D6+D1 means that about six of the L1-L3-P1 (e.g., 5.6, 5.7, 5.9, 6.0, 6.2, 6.4 or 6.5) and about one of the L2-L4-P2 (e.g., 0.6, 0.7, 0.9, 1.0, 1.2 or 1.4) are coupled to one single antibody molecule on average.

[0108] In some embodiments, when n1 is 1, the DAR referring to P1-L3-L1-could be 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3 or 1.4. In some embodiments, when n1 is 2, the DAR referring to P1-L3-L1-could be 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3 or 2.4. In some embodiments, when n1 is 3, the DAR referring to P1-L3-L1-could be 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3 or 3.4. In some embodiments, when n1 is 4, the DAR referring to P1-L3-L1-could be 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3 or 3.4. In some embodiments, when n1 is 5, the DAR referring to P1-L3-L1-could be 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3 or 5.4. In some embodiments, when n1 is 6, the DAR referring to P1-L3-L1-could be 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3 or 6.4. In some embodiments, when n1 is 7, the DAR referring to P1-L3-L1-could be 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3 or 7.4. In some embodiments, when n1 is 8, the DAR referring to P1-L3-L1-could be 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3 or 8.4. In some embodiments, when n1 is 9, the DAR referring to P1-L3-L1-could be 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3 or 9.4.

[0109] In some embodiments, when n2 is 1, the DAR referring to P2-L4-L2-could be 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3 or 1.4. In some embodiments, when n2 is 2, the DAR referring to P2-L4-L2-could be 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3 or 2.4. In some embodiments, when n2 is 3, the DAR referring to P2-L4-L2-could be 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3 or 3.4. In some embodiments, when n2 is 4, the DAR referring to P2-L4-L2-could be 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3 or 3.4. In some embodiments, when n2 is 5, the DAR referring to P2-L4-L2-could be 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3 or 5.4. In some embodiments, when n2 is 6, the DAR referring to P2-L4-L2-could be 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3 or 6.4. In some embodiments, when n2 is 7, the DAR referring to P2-L4-L2-could be 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3 or 7.4. In some embodiments, when n2 is 8, the DAR referring to P2-L4-L2-could be 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3 or 8.4. In some embodiments, when n2 is 9, the DAR referring to P2-L4-L2-could be 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3 or 9.4.

[0110] The Combination of the payloads

[0111] In some embodiments, P1 is a topoisomerase inhibitor (Top inhibitors) and P2 is a microtubule-targeting agent (MTA) .

[0112] In some embodiments, P1 is the topoisomerase inhibitors; n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the MTA; n2 is 1 or 2.

[0113] In some embodiments, P1 is a poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor (PARP inhibitors) and P2 is a MTA.

[0114] In some embodiments, P1 is the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor; n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the MTA, n2 is 1 or 2.

[0115] In some embodiments, P1 is an ATR inhibitor and P2 is a MTA.

[0116] In some embodiments, P1 is the ATR inhibitors; n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the MTA; n2 is 1 or 2.

[0117] In some embodiments, P1 is an ATR inhibitor and P2 is a topoisomerase inhibitor.

[0118] In some embodiments, P1 is the ATR inhibitor; n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the topoisomerase inhibitor; n2 is 2, 4, 6 or 8; n1+n2 is 4-10.

[0119] In some embodiments, P1 is a topoisomerase inhibitor and P2 is an ATR inhibitor.

[0120] In some embodiments, P1 is the topoisomerase inhibitor; n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the ATR inhibitor; n2 is 2, 4, 6 or 8; n1+n2 is 4-10.

[0121] In some embodiments, P1 is a topoisomerase inhibitor, and P2 is a poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor.

[0122] In some embodiments, P1 is the topoisomerase inhibitors, n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors, n2 is 2, 4, 6 or 8.

[0123] In some embodiments, P1 and P2 can be exchanged. In some embodiments, when P1 and P2 are exchanged, the structure of the conjugates dose not change.

[0124] As used herein, the term “ATR” refers to a serine / threonine protein kinase. ATR is member of the phosphatidylinositol 3-kinase related kinase (PIKK) family. During normal DNA replication, ATR is recruited at stalled replication forks, which can progress to double strand breaks if left unrepaired. ATR is also recruited to single strand DNA coated with Replication Protein A (RPA) following single strand DNA damage or the resection of double strand breaks. Recruitment and activation of ATR leads to cell cycle arrest in the S-phase while the DNA is repaired and the stalled replication fork resolved, or nuclear fragmentation and entry into programmed cell death (apoptosis) .

[0125] In some embodiments, the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors are selected from Talazoparib, Rucaparib, Niraparib, Olaparib, BMN 673, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof.

[0126] In some embodiments, the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors are selected from Talazoparib, Rucaparib or Niraparib, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof.

[0127] As used herein, the term “Talazoparib” refers to the following structure:

[0128] As used herein, the term “Rucaparib” refers to the following structure:

[0129] As used herein, the term “Niraparib” refers to the following structure:

[0130] As used herein, the term “Olaparib” refers to the following structure:

[0131] As used herein, the term “BMN 673” refers to the following structure:

[0132] In some embodiments, the MTA are selected from MMAE, MMAF, MMAD, Eribulin, Maytansinoid, DM1, DM4, DM21, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof.

[0133] In some embodiments, the MTA are selected from MMAE, MMAF, Eribulin, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof.

[0134] As used herein, the term “MMAE” refers to the following structure:

[0135] As used herein, the term “MMAF” refers to the following structure:

[0136] As used herein, the term “MMAD” refers to the following structure:

[0137] As used herein, the term “Eribulin” refers to the following structure:

[0138] As used herein, the term “Maytansinoid” refers to the following structure:

[0139] As used herein, the term “DM1” refers to the following structure:

[0140] As used herein, the term “DM4” refers to the following structure:

[0141] In some embodiments, the ATR inhibitors are selected from VE-822, VE-821, NU6027, CP-466722, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof.

[0142] In some embodiments, the ATR inhibitors are selected from VE-822, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof.

[0143] As used herein, the term “VE-822” refers to the following structure:

[0144] As used herein, the term “VE-821” refers to the following structure:

[0145] As used herein, the term “NU6027” refers to the following structure:

[0146] As used herein, the term “CP-466722” refers to the following structure:

[0147] In some embodiments, the topoisomerase inhibitors are selected from DXd, DX8951, SN38, Belotecan, the topoisomerase inhibitors are selected from any one of the following, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,

[0148] As used herein, the term “DXd” refers to the following structure:

[0149] As used herein, the term “DX8951” refers to the following structure:

[0150] As used herein, the term “SN38” refers to the following structure:

[0151] As used herein, the term “Belotecan” refers to the following structure:

[0152] In some embodiments, the topoisomerase inhibitors are selected from DXd, DX8951, SN38, BRYT1003-1002, BRYT1003-1011 or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof.

[0153] Linkers

[0154] In some embodiments, -L1-and -L2-are independently selected from any one of the following,

[0155] the targeting agents are attached at *site, the payloads are attached at **site.

[0156] L32-L33, L39, L44, L46-L53 could improve hydrophilicity and stability of the conjugates of the present disclosure.

[0157] In some embodiments, P1 is the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors, L1 is selected from L32, L35 or L39.

[0158] In some embodiments, P2 is the MTA, L2 is selected from X1, X2, L33 or L44.

[0159] In some embodiments, P1 is the ATR inhibitors, L1 is selected from L32, L39 or L46.

[0160] In some embodiments, P1 is the topoisomerase inhibitors, L1 is selected from L26, L32, L35, L39, L47, L48, L49, L50, L51, L52, L53, L55, LZ1, LZ2, LZ3, LZ4, LZ5, LZ6, LZ7, LZ8, LZ9, LZ10, LZ11, LZ12, LZ13, LZ14, LZ15, LZ16, LZ17 or LZ18.

[0161] In some embodiments, P1 is the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors, L1 is selected from L32 or L39; P2 is the MTA inhibitors, L2 is selected from X1, L33 or L44.

[0162] In some embodiments, P1 is the ATR inhibitors, L1 is selected from L32 or L39; P2 is the MTA inhibitors, L2 is selected from X1, L33 or L44.

[0163] In some embodiments, P1 is the topoisomerase inhibitors, L1 is selected from LZ3, LZ12, L39, L35 or L52; P2 is the MTA inhibitor, L2 is selected from X1, L33 or L44.

[0164] In some embodiments, P1 is the ATR inhibitors, L1 is selected from L32, L39 or 46; P2 is the topoisomerase inhibitors, L2 is selected from L32, L39 or L52.

[0165] In some embodiments, P1 is the topoisomerase inhibitors, L1 is selected from L32, L39 or L52; P2 is the ATR inhibitors, L2 is selected from L32, L39 or 46.

[0166] In some embodiments, P1 is the topoisomerase inhibitors, L1 is selected from L52; P2 is the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors, L2 is selected from L35.

[0167] In some embodiments, -L3-and -L4-are independently selected from absent or -O-C (=O) -.

[0168] In some embodiments, -L1-L3-P1 or -L2-L4-P2 are independently selected from any one of the following,

[0169] The payload, the linkers, -L1-L3-P1 and -L2-L4-P2 could be obtained by commercially or produced by any method known to those skilled in the art.

[0170] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW023, LW030 or LW046; -L2-L4-P2 is selected from LW016, LW024, LW033, MC-VC-PAB-MMAE or MC-MMAF. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW023 or LW030; -L2-L4-P2 is selected from LW016, LW024, LW033 or MC-VC-PAB-MMAE.

[0171] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW023; -L2-L4-P2 is selected from LW016. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW030; -L2-L4-P2 is selected from LW016. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW023; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW023; -L2-L4-P2 is selected from LW033. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW030; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE.

[0172] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW023; -L2-L4-P2 is selected from LW016; n1 is 6, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW030; -L2-L4-P2 is selected from LW016, n1 is 6 or 2, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW023; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE; n1 is 6, n2 is 2. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW023; -L2-L4-P2 is selected from LW033; n1 is 4, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW030; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE; n1 is 6, n2 is 2.

[0173] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW025, LW029 or LW034; -L2-L4-P2 is selected from LW016, LW024, LW033, MC-VC-PAB-MMAE or MC-MMAF. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW025 or LW029; -L2-L4-P2 is selected from LW016, LW033 or MC-VC-PAB-MMAE.

[0174] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW025; -L2-L4-P2 is selected from LW016. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW029; -L2-L4-P2 is selected from LW033. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW029; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE.

[0175] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW025; -L2-L4-P2 is selected from LW016; n1 is 6, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW029; -L2-L4-P2 is selected from LW033; n1 is 6, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW029; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE; n1 is 6, n2 is 2.

[0176] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW015, LW026, LW031, LW035, LW036, LW037, LW041, LW042, LW043, LW044, LW045, LW047, LW048, LW049, LW052, LW053, LW054, LW055, LW056, LW057, LW058, LW059, LW060, LW061, LW062, LW063, LW064 or MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW016, LW024, LW033, MC-VC-PAB-MMAE or MC-MMAF. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW026, LW031, LW042 or MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW016, LW033 or MC-VC-PAB-MMAE.

[0177] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW026; -L2-L4-P2 is selected from LW016. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW031; -L2-L4-P2 is selected from LW033. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW016. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW031; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW033. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW026; -L2-L4-P2 is selected from LW033. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW042; -L2-L4-P2 is selected from LW033. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW042; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE.

[0178] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW026; -L2-L4-P2 is selected from LW016; n1 is 6, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW031; -L2-L4-P2 is selected from LW033; n1 is 6 or 4, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW016; n1 is 6, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW031; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE; n1 is 6 or 4, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW033; n1 is 6, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW026; -L2-L4-P2 is selected from LW033; n1 is 6, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW042; -L2-L4-P2 is selected from LW033; n1 is 6, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW042; -L2-L4-P2 is selected from LW033; n1 is 4, n2 is 1. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW042; -L2-L4-P2 is selected from MC-VC-PAB-MMAE; n1 is 4, n2 is 2.

[0179] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW025, LW029 or LW034; -L2-L4-P2 is selected from LW015, LW026, LW031, LW035, LW036, LW037, LW041, LW042, LW043, LW044, LW045, LW047, LW048, LW049, LW052, LW053, LW054, LW055, LW056, LW057, LW058, LW059, LW060, LW061, LW062, LW063, LW064 or MC-GGFG-DXd. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW025, LW029 or LW034; -L2-L4-P2 is selected from LW015, LW031 or LW042.

[0180] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW029; -L2-L4-P2 is selected from LW031. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW029; -L2-L4-P2 is selected from LW015. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW034; -L2-L4-P2 is selected from LW042.

[0181] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW029; -L2-L4-P2 is selected from LW031; n1 is 4, n2 is 4. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW029; -L2-L4-P2 is selected from LW015; n1 is 6 or 4, n2 is 2 or 4. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW034; -L2-L4-P2 is selected from LW042; n1 is 4, n2 is 4.

[0182] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW015, LW026, LW031, LW035, LW036, LW037, LW041, LW042, LW043, LW044, LW045, LW047, LW048, LW049, LW052, LW053, LW054, LW055, LW056, LW057, LW058, LW059, LW060, LW061, LW062, LW063, LW064 or MC-GGFG-DXd; -L2-L3-P2 is selected from LW025, LW029 or LW034. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW015, LW031 or LW042; -L2-L4-P2 is selected from LW025, LW029 or LW034.

[0183] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW031; -L2-L4-P2 is selected from LW029. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW015; -L2-L4-P2 is selected from LW029. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW042; -L2-L4-P2 is selected from LW034.

[0184] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW031; -L2-L4-P2 is selected from LW029; n1 is 4, n2 is 4. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW015; -L2-L4-P2 is selected from LW029; n1 is 2 or 4, n2 is 4 or 6. In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW042; -L2-L4-P2 is selected from LW034; n1 is 4, n2 is 4.

[0185] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW015, LW026, LW031, LW035, LW036, LW037, LW041, LW042, LW043, LW044, LW045, LW047, LW048, LW049, LW052, LW053, LW054, LW055, LW056, LW057, LW058, LW059, LW060, LW061, LW062, LW063, LW064 or MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW023, LW030 or LW046.

[0186] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW042; -L2-L4-P2 is selected from LW046.

[0187] In some embodiments, -L1-L3-P1 is selected from LW042; -L2-L4-P2 is selected from LW046; n1 is 4, n2 is 4.

[0188] Targeting agent

[0189] In some embodiments, the targeting agent comprises an antibody, peptide, RNA, or DNA molecule.

[0190] In some embodiments, the antibody is a monoclonal antibody, a polyclonal antibody, a mono-specific antibody or a multi-specific antibody.

[0191] As used herein, the term “antibody” refers to any immunoglobulin that binds to a specific antigen. A native intact antibody comprises two heavy chains and two light chains. Each heavy chain consists of a variable region and a first, second, and third constant region, while each light chain consists of a variable region and a constant region. The heavy chain from any vertebrate species can be assigned to one of five different classes (or isotypes) : IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM.

[0192] As used herein, the term “Fc region” refers to a monomeric, dimeric or heterodimeric protein having at least an immunoglobulin CH2 and CH3 domain. The CH2 and CH3 domains can form at least a part of the dimeric region of the protein / molecule (e.g., antibody) .

[0193] In some embodiments, the antibody is a human antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody or an antigen-binding moiety thereof.

[0194] As used herein, the term “human antibody” refers to one which possesses an amino acid sequence which corresponds to that of an antibody produced by a human or a human cell or derived from anon-human source that utilizes human antibody repertoires or other human antibody-encoding sequences. This definition of a human antibody specifically excludes a humanized antibody comprising non-human antigen-binding residues.

[0195] As used herein, the term “humanized antibody” refers to a chimeric antibody comprising amino acid residues from non-human heavy chain variable regions (HVRs) and amino acid residues from human FRs. In certain embodiments, a humanized antibody will comprise substantially all or at least one, and typically two, variable domains, in which all or substantially all of the HVRs (e.g., CDRs) correspond to those of a non-human antibody, and all or substantially all of the FRs correspond to those of a human antibody. A humanized antibody optionally may comprise at least a portion of an antibody constant region derived from a human antibody. A “humanized form” of an antibody, e.g., a non-human antibody, refers to an antibody that has undergone humanization.

[0196] As used herein, the term “chimeric antibody” refers to an antibody in which a portion of the heavy and / or light chain is derived from a particular source or species, while the remainder of the heavy and / or light chain is derived from a different source or species.

[0197] In some embodiments, the antibody means an immunoglobulin and is a molecule containing an antigen-binding site immunospecifically binding to an antigen. In some embodiment, the class of the antibody is IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, or IgY. In some embodiments, the class of the antibody is IgG.

[0198] In some embodiments, the class of the antibody is IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4. In some embodiments, the antibody is IgG1 or IgG4.

[0199] In some embodiments of the present application, the antibody comprises at least one mutation in the Fc region. In some embodiments, the at least one mutation modulates effector function, or attenuates or eliminates Fc-g receptor binding.

[0200] In some embodiments, the one or more mutations are to stabilize the antibody and / or to increase half-life. In some instances, the one or more mutations are to modulate Fc receptor interactions, to reduce or eliminate Fc effector functions such as FcγR, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) , or complement-dependent cytotoxicity (CDC) . In additional instances, the one or more mutations are to modulate glycosylation.

[0201] In some embodiments, the one or more mutations are located in the Fc region. In some instances, the Fc region comprises a mutation at residue position L234, L235, or a combination thereof. In some instances, the mutations comprise L234 and L235. In some instances, the mutations comprise L234A and L235A. In some cases, the residue positions are in reference to IgGl.

[0202] In some embodiments, the Fc region comprises a mutation at residue position L234, L235, D265, N21, K46, L52, or P53, or a combination thereof. In some instances, the mutations comprise L234 and L235 in combination with a mutation at residue position K46, L52, or P53.

[0203] In some embodiments, the Fc region comprises mutations at L234, L235, and K46. In some cases, the Fc region comprises mutations at L234, L235, and L52. In some cases, the Fc region comprises mutations at L234, L235, and P53. In some cases, the Fc region comprises mutations at D265 and N21. In some cases, the residue position is in reference to IgGl.

[0204] In some instances, the Fc region comprises L234A, L235A, D265A, N21G, K46G, L52R, or P53G, or a combination thereof. In some instances, the Fc region comprises L234A and L235A in combination with K46G, L52R, or P53G. In some cases, the Fc region comprises L234A, L235A, and K46G. In some cases, the Fc region comprises L234A, L235A, and L52R. In some cases, the Fc region comprises L234A, L235A, and P53G. In some cases, the Fc region comprises D265A and N21G. In some cases, the residue position is in reference to IgGl.

[0205] In some embodiments, the Fc region comprises a mutation at residue position L233, L234, D264, N20, K45, L51, or P52. In some instances, the Fc region comprises mutations at L233 and L234. In some instances, the Fc region comprises mutations at L233 and L234 in combination with a mutation at residue position K45, L51, or P52. In some cases, the Fc region comprises mutations at L233, L234, and K45. In some cases, the Fc region comprises mutations at L233, L234, and L51. In some cases, the Fc region comprises mutations at L233, L234, and K45. In some cases, the Fc region comprises mutations at L233, L234, and P52. In some instances, the Fc region comprises mutations at D264 and N20. In some cases, equivalent positions to residue L233, L234, D264, N20, K45, L51, or P52 in an IgGl, IgG2, IgG3, or IgG4 framework are contemplated.

[0206] In some embodiments, the Fc region comprises L233A, L234A, D264A, N20G, K45G, L51R, or P52G. In some instances, the Fc region comprises L233A and L234A. In some instances, the Fc region comprises L233A and L234A in combination with K45G, L51R, or P52G. In some cases, the Fc region comprises L233A, L234A, and K45G. In some cases, the Fc region comprises L233A, L234A, and L51R. In some cases, the Fc region comprises L233A, L234A, and K45G. In some cases, the Fc region comprises L233A, L234A, and P52G. In some instances, the Fc region comprises D264A and N20G.

[0207] In some embodiments, the human IgG constant region is modified to alter antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) and / or complement-dependent cytotoxicity (CDC) , e.g., with an amino acid modification described in Natsume et al., 2008 Cancer Res, 68 (10) : 3863-72;Idusogie et al., 2001 J Immunol, 166 (4) : 2571-5; Moore et al., 2010 mAbs, 2 (2) : 181-189; Lazar etal, 2006 PNAS, 103 (11) : 4005-4010, Shields etal, 2001 JBC, 276 (9) : 6591-6604; Stavenhagen etal., 2007 Cancer Res, 67 (18) : 8882-8890; Stavenhagen etal., 2008 Advan. Enzyme Regul., 48: 152-164; Alegre et al, 1992 J Immunol, 148: 3461-3468; Reviewed in Kaneko and Niwa, 2011 Biodrugs, 25 (1) : 1-11.

[0208] In some embodiments, the antibody of IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 is human or humanized antibody. The information of IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 can be obtained on NCBI or UniProt (https:  / / www. uniprot. org / ) .

[0209] In some embodiments, the antibody is bispecific antibodies. In some embodiments of the present application, the antibody is IgG1 like bispecific antibodies.

[0210] In some embodiment, those skilled in the art can select suitable method to prepare the bispecific antibodies. In some embodiments, the bispecific antibodies can be obtained by Knobs-in-holes technology (Ridgway J B B, Presta L G, Paul C. 'Knobs-into-holes'engineering of antibody CH3 domains for heavy chain heterodimerization [J] . Protein Engineering (7) : 617 (2023-08-11) . ) , format chain exchange (FORCE) technology, a common light chain format technology (De Nardis C, Hendriks L J A, Poirier E, et al . Anew approach for generating bispecific antibodies based on a common light chain format and the stable architecture of human immunoglobulin G1 [J] . Journal of Biological Chemistry, 2017: jbc. M117.793497. ) , controlled Fab arm exchange technology (Yanakieva De, Pekar L, Evers A, et al. Beyond bispecificity: Controlled Fab arm exchange for the generation of antibodies with multiple specificities [J] . MABS, 2022, 14 (1) , e2018960) , CrossMAb technology (Klein C, Schaefer W, Regula J T. The use of CrossMAb technology for the generation of bi-and multispecific antibodies [J] . MABS, 2016, 8 (6) , P1010-P1020. ) or their combination.

[0211] As used herein, the term “knobs-into-holes” is used in its broadest sense and encompasses various situations, such as the CH1 domain of one heavy chain with the knob mutations and the CH1 domain of the other heavy chain with the hole mutations, the CH2 domain of one heavy chain with the knob mutations and the CH2 domain of the other heavy chain with the hole mutations, and / or the CH3 domain of one heavy chain with the knob mutations and the CH3 domain of the other heavy chain with the hole mutations. For example, and generally, “knobs-into-holes” may refer to an intra-interface modification between two antibody heavy chains in the CH3 domains: i) in the CH3 domain of one heavy chain (first CH3 domain) , an amino acid residue is substituted with another amino acid residue bearing a large side chain, thereby creating a protrusion ( “knob” ) in the interface in the first CH3 domain; ii) in the CH3 domain of the other heavy chain (second CH3 domain) , an amino acid residue is substituted with another amino acid residue bearing a smaller side chain, thereby creating a cavity ( “hole” ) within the interface in the second CH3 domain, in which a protrusion ( “knob” ) in the first CH3 domain can be placed.

[0212] In some embodiments, the antibody is selected from any one of cytotoxic antibodies, inhibitors of cell proliferation, regulators of cell activation and interaction, regulators of the human immune system, neutralizations of antigens, antibodies that are immunospectific for viral antigens or antibodies that are immunospectific for microbial antigens.

[0213] In some embodiments, the target of the antibody comprises FOLR1.

[0214] In some embodiments, the targeting agents are selected from Farletuzumab or an antibody mutant.

[0215] In some embodiments, the antibody mutant comprises Farletuzumab mutant, a heavy chain of the antibody mutant comprises SX1X2KTX3TCPPX4PAPEX5X6GGPX7V, wherein, X1 is selected from C or S, X2 is selected from D or H, X3 is selected from H or D, X4 is selected from C, S, L or V, X5 is selected from L or A, X6 is selected from L or A and X7 is selected from S or C;light chain of the antibody mutant comprises SFNRGEX8, wherein, X8 is selected from C or S.

[0216] In some embodiments, the antibody mutant comprises Farletuzumab mutant, a heavy chain of the antibody mutant comprises SX1X2KTX3TCPPX4PAPEX5X6GGPX7V, wherein, X1 is selected from C or S, X2 is selected from D or H, X3 is selected from H or D, X4 is selected from C, S, L or V, X5 is selected from L or A, X6 is selected from L or A and X7 is selected from S or C;light chain of the antibody mutant comprises SFNRGEX8, wherein, X8 is selected from C or S, provided that X1 is not C, X2 is not D, X3 is not H, X4 is not C, X5 is not L, X6 is not L, X7 is not S and X8 is not C at the same time.

[0217] In some embodiments, the heavy chain of the antibody mutant comprises any one of the groups selected from the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 117, 119, 125, 127, 129, 131, 133 or 135; the light chain of the antibody mutant comprises any one of the groups selected from the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 118, 120, 126, 128, 130, 132, 134 or 136.

[0218] In some embodiments, the antibody mutant comprises:

[0219] (1) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 1, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 2; or

[0220] (2) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 3, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 4; or

[0221] (3) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 5, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 6; or

[0222] (4) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or

[0223] (5) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 9, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 10; or

[0224] (6) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 11, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 12; or

[0225] (7) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 13, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 14; or

[0226] (8) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 15, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 16; or

[0227] (9) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 17, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 18; or

[0228] (10) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 19, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 20; or

[0229] (11) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 21, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 22; or

[0230] (12) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 23, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 24; or

[0231] (13) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 25, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 26; or

[0232] (14) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 27, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 28; or

[0233] (15) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 29, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 30; or

[0234] (16) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 31, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 32; or

[0235] (17) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 33, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 34; or

[0236] (18) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 35, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 36; or

[0237] (19) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 37, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 38; or

[0238] (20) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 39, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 40; or

[0239] (21) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 41, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 42; or

[0240] (22) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44; or

[0241] (23) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 45, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 46; or

[0242] (24) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 47, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 48; or

[0243] (25) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 49, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 50; or

[0244] (26) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 51, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 52; or

[0245] (27) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 53, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 54; or

[0246] (28) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 55, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 56; or

[0247] (29) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 57, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 58; or

[0248] (30) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 117, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 118; or

[0249] (31) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 119, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 120; or

[0250] (32) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 125, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 126; or,

[0251] (33) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 127, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 128; or,

[0252] (34) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 129, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 130; or,

[0253] (35) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 131, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 132; or,

[0254] (36) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 133, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 134; or,

[0255] (37) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136.

[0256] In some embodiments, n1 is 6 and n2 is selected from 1 or 2, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 15 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 16; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 23 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 24; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 31 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 32; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 37 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 38.

[0257] In some embodiments, n1 is 4 and n2 is selected from 1 or 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 3 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 4; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 5 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 6; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 11 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 12; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 13 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 14; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 19 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 20; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 21 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 22; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 27 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 28; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 29 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 30; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 45 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 46; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 117 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 118; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO:119 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 120, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136.

[0258] In some embodiments, n1 is 4 and n2 is 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 33 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 34; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 35 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 36; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 39 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 40; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 41 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 42, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136.

[0259] In some embodiments, n1 is 4 and n2 is selected from 4 or 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 31 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 32; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 37 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 38, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136.

[0260] In some embodiments, n1 is selected from 2, 6, 8 and n2 is selected from 1 or 2, or when n1 is 8 and n2 is selected from 1 or 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 47 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 48; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 49 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 50; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 51 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 52; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 53, anda light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 54.

[0261] In some embodiments, n1 is 6 and n2 is 4, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 55 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 56; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 57and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 58.

[0262] In some embodiments, n1 is selected from 1 or 2, and n2 is selected from 1 or 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 1 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 2; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 9 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 10; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 17 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 18; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 25 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 26.

[0263] In some embodiments, n1 is 5, and n2 is 1, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 5 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 6; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO:13 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 14; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 15 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 16.

[0264] In some embodiments, the Farletuzumab mutant comprises:

[0265] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 59, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 60; or

[0266] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 61, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 62; or

[0267] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 63, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 64; or

[0268] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; or

[0269] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 67, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 68; or

[0270] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 69, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 70; or

[0271] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 71, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 72; or

[0272] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 73, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 74; or

[0273] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 75, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 76; or

[0274] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 77, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 78; or

[0275] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 79, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 80; or

[0276] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or

[0277] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 83, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 84; or

[0278] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 85, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 86; or

[0279] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 87, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 88; or

[0280] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 89, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 90; or

[0281] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 91, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 92; or

[0282] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 93, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 94; or

[0283] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96; or

[0284] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 97, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 98; or

[0285] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 99, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 100; or

[0286] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 101, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 102; or

[0287] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 103, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 104; or

[0288] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 105, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 106; or

[0289] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 107, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 108; or

[0290] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 109, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 110; or

[0291] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 111, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 112; or

[0292] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 113, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 114; or

[0293] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 115, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 116; or

[0294] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 121, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 122; or

[0295] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 123, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 124; or

[0296] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 137, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 138; or

[0297] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 139, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 140; or

[0298] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 141, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 142; or

[0299] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 143, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 144; or

[0300] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 145, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 146; or

[0301] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148.

[0302] In some embodiments, the conjugates are selected from any of the following,

[0303] In some embodiments, n1 is selected from 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.

[0304] In some embodiments, n2 is selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.

[0305] In some embodiments, in ADC I-1, n1 is 6, n2 is 1; and / or, in ADC I-2, n1 is 6, n2 is 1; and / or, in ADC I-3, n1 is 6 or 4, n2 is 2; and / or, in ADC I-4, n1 is 6 or 4, n2 is 1; and / or, in ADC I-5, n1 is 6, n2 is 2.

[0306] In some embodiments, in ADC II-1, n1 is 6, n2 is 1; and / or, in ADC II-2, n1 is 6, n2 is 1; and / or, in ADC II-3, n1 is 6 or 4, n2 is 2.

[0307] In some embodiments, in ADC III-1, n1 is 6, n2 is 1; and / or, in ADC III-2, n1 is 6 or 4, n2 is 1; and / or, in ADC III-3, n1 is 6, n2 is 1; and / or, in ADC III-4, n1 is 6 or 4, n2 is 2; and / or, in ADC III-5, n1 is 6, n2 is 1; and / or, in ADC III-6, n1 is 6, n2 is 1; and / or, in ADC III-7, n1 is 6 or 4, n2 is 1; and / or, in ADC III-8, n1 is 4, n2 is 2.

[0308] In some embodiments, in ADC IV-1, n1 is 4, n2 is 4; and / or, in ADC IV-2, n1 is 6 or 4, n2 is 2 or 4; and / or, in ADC IV-3, n1 is 4, n2 is 4.

[0309] In some embodiments, in ADC V-1, n1 is 4, n2 is 4.

[0310] In some embodiments, in ADC I-1 and / or ADC I-2, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82.

[0311] In some embodiments, in ADC I-3, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant; optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 101 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 102; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 103 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 104.

[0312] In some embodiments, in ADC I-4, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant; optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 101 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 102; or, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 103 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 104; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148.

[0313] In some embodiments, in ADC I-5, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96.

[0314] In some embodiments, in ADC II-1, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82.

[0315] In some embodiments, in ADC II-2 and / or ADC II-3, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant.

[0316] In some embodiments, in ADC III-1, ADC III-3 and / or ADC III-6, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82.

[0317] In some embodiments, in ADC III-2, ADC III-4 and / or ADC III-5, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant.

[0318] In some embodiments, in ADC III-7, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant; optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148.

[0319] In some embodiments, in ADC III-8, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant; optionally, the antibody mutant comprises the antibody mutant and the antibody comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148.

[0320] In some embodiments, in ADC IV-1, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96.

[0321] In some embodiments, in ADC IV-2, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the Farletuzumab mutant.

[0322] In some enbodiments, in ADC IV-3, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the Farletuzumab mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96.

[0323] In some embodiments, in ADC V-1, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96.

[0324] A method of preparing the conjugates

[0325] In one aspect, the present disclosure provides a method of preparing the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to the present disclosure.

[0326] In some embodiments, the method of preparing the ADC with D6+D1 or the ADC with D6+D2, comprising steps:

[0327] (a) incubating proper reductant (such as TCEP) or their salt thereof and the transition metal ions in the presence of the antibody in the buffer system to selectively reduce interchain disulfide bonds within the antibody to afford the antibody bearing reduced thiol groups, the molar ratio of reductant and the antibody is 3: 1 to 15: 1;

[0328] (b) introducing the metal chelators and the first linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (a) ;

[0329] (c) purifying ADC from step (b) using desalting column, UF-DF or chromatography purification;

[0330] (d) incubating the ADC from step (c) with D6 and the second reductant in the buffer system to reduce the interchain disulfide bonds within the ADC with D6;

[0331] (e) introducing the incubation product from step (d) and the second linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (d) .

[0332] (f) purifying ADC from step (e) using desalting column, UF-DF or chromatography purification.

[0333] In some embodiments, the transition metal ions are selected from the group consisting of Zn2+, Cd2+, Hg2+, Ni2+, Co2+, or the combination thereof.

[0334] In some embodiments, the method of preparing the ADC with D4+D1 or the ADC with D4+D2, comprising steps:

[0335] (a) incubating proper reductant (such as TCEP) or their salt thereof and the transition metal ions in the presence of the antibody in the buffer system to selectively reduce interchain disulfide bonds and de-block unpaired cysteines within the antibody to afford the antibody bearing reduced thiol groups, the molar ratio of reductant and the antibody is 2: 1 to 6: 1;

[0336] (b) introducing the metal chelators and the first linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (a) ;

[0337] (c) purifying ADC from step (b) using desalting column, UF-DF or chromatography purification;

[0338] (d) incubating the ADC from step (c) with D4 and the second reductant in the buffer system to reduce the interchain disulfide bonds within the ADC with D4;

[0339] (e) introducing the incubation product from step (d) and the second linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (d) .

[0340] (f) purifying ADC from step (e) using desalting column, UF-DF or chromatography purification.

[0341] In some embodiments, when preparing the ADC with D4+D1 or the ADC with D4+D2, the antibody is the antibody mutant.

[0342] In some embodiments, the method of preparing the ADC with D2+D4, comprising steps:

[0343] (a) incubating proper reductant (such as TCEP, TCEPNO) or their salt thereof and the transition metal ions in the presence of the antibody in the buffer system to selectively de-block unpaired cysteines within the antibody to afford the antibody bearing reduced thiol groups, optionally, the molar ratio of the reductant and the antibody is 0.5: 1 to 3: 1; optionally, the molar ratio of reductant and the transition metal ions is 1: 0.4 to 1: 250;

[0344] (b) introducing the metal chelators and the first linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (a) ;

[0345] (c) purifying ADC from step (b) using desalting column, UF-DF or chromatography purification;

[0346] (d) incubating the ADC from step (c) with D2 and the second reductant in the buffer system to reduce the interchain disulfide bonds within the ADC with D2;

[0347] (e) introducing the incubation product from step (d) and the second linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (d) .

[0348] (f) purifying ADC from step (e) using desalting column, UF-DF or chromatography purification.

[0349] In some embodiments, when preparing the ADC with D2+D4, the antibody is the antibody mutant.

[0350] In some embodiments, the method of preparing the ADC with D4+D4:

[0351] (a) incubating proper reductant (such as TCEP) or their salt thereof and the transition metal ions in the presence of the antibody in the buffer system to selectively reduce interchain disulfide bonds within the antibody to afford the antibody bearing reduced thiol groups, the molar ratio of reductant and the antibody is 1: 1 to 15: 1;

[0352] (b) introducing the metal chelators and the first linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (a) ;

[0353] (c) purifying ADC from step (b) using desalting column, UF-DF or chromatography purification;

[0354] (d) incubating the ADC from step (c) with D4 or D2 and the second reductant in the buffer system to reduce the interchain disulfide bonds within the ADC with D4 or D2;

[0355] (e) introducing the incubation product from step (d) and the second linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (d) .

[0356] (f) purifying ADC from step (e) using desalting column, UF-DF or chromatography purification.

[0357] In some embodiments, the method of preparing the ADC with D2+D8, the ADC with D2+D2, the ADC with D2+D1 and the ADC with D2+D6, comprising steps:

[0358] (a) incubating proper reductant (such as TCEP) or salt thereof in the presence of the antibody in the buffer system to selectively reduce interchain disulfide bonds and de-block unpaired cysteins within the antibody to afford the antibody bearing reduced thiol groups, the molar ratio of reductant and the antibody is 5: 1 to 15: 1;

[0359] (b) incubating the product form step (a) and oxidant (such as DHAA) to rebridge interchain disulfide bonds;

[0360] (c) introducing the first linker-payload to react with the unpaired thiol groups resulted from step (b) ;

[0361] (d) purifying ADC from step (c) using desalting column, UF-DF or chromatography purification.

[0362] (e) incubating the ADC from step (d) with D2 and the second reductant with or without metal ions in the buffer system to reduce all or part of the interchain disulfide bonds within the ADC with D2;

[0363] (f) introducing the incubation product from step (d) and the second linker-payload with or without metal chelator to react with the reduced thiol groups resulted from step (e) .

[0364] (g) purifying ADC from step (f) using desalting column, UF-DF or chromatography purification.

[0365] In some embodiments, when preparing the ADC with D2+D8, the ADC with D2+D2, the ADC with D2+D1 and the ADC with D2+D6, the antibody is the antibody mutant.

[0366] In some embodiments, the method of preparing the ADC with D8+D2 or the ADC with D8+D1, comprising steps:

[0367] (a) incubating proper reductant (such as TCEP) or their salt thereof and the transition metal ions in the presence of the antibody in the buffer system to selectively reduce interchain disulfide bonds and de-block unpaired cysteines within the antibody to afford the antibody bearing reduced thiol groups, the molar ratio of reductant and the antibody is 4: 1 to 15: 1;

[0368] (b) introducing the metal chelators and the first linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (a) ;

[0369] (c) purifying ADC from step (b) using desalting column, UF-DF or chromatography purification;

[0370] (d) incubating the ADC from step (c) with D8 and the second reductant in the buffer system to reduce the interchain disulfide bonds within the ADC with D8;

[0371] (e) introducing the incubation product from step (d) and the second linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (d) .

[0372] (f) purifying ADC from step (e) using desalting column, UF-DF or chromatography purification.

[0373] In some embodiments, when preparing the ADC with D8+D2 or the ADC with D8+D1, the antibody is the antibody mutant.

[0374] In some embodiments, the method of preparing the ADC with D6+D4, comprising steps:

[0375] (a) incubating proper reductant (such as TCEP) or their salt thereof and the transition metal ions in the presence of the antibody in the buffer system to selectively reduce interchain disulfide bonds and de-block unpaired cysteines within the antibody to afford the antibody bearing reduced thiol groups, the molar ratio of reductant and the antibody is 3: 1 to 15: 1;

[0376] (b) introducing the metal chelators and the first linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (a) ;

[0377] (c) purifying ADC from step (b) using desalting column, UF-DF or chromatography purification;

[0378] (d) incubating the ADC from step (c) with D6 and the second reductant in the buffer system to reduce the interchain disulfide bonds within the ADC with D6;

[0379] (e) introducing the incubation product from step (d) and the second linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (d) .

[0380] (f) purifying ADC from step (e) using desalting column, UF-DF or chromatography purification.

[0381] In some embodiments, when preparing the ADC with D6+D4, the antibody is the antibody mutant.

[0382] In some embodiments, the method of preparing the ADC with D2+D2, the ADC with D2+D1, the ADC with D1+D2 or the ADC with D1+D1, comprising steps:

[0383] (a) incubating proper reductant (such as TCEP) or their salt thereof and the transition metal ions in the presence of the antibody in the buffer system to selectively reduce interchain disulfide bonds within the antibody to afford the antibody bearing reduced thiol groups, the molar ratio of reductant and the antibody is 1: 1 to 15: 1;

[0384] (b) introducing the metal chelators and the first linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (a) ;

[0385] (c) purifying ADC from step (b) using desalting column, UF-DF or chromatography purification;

[0386] (d) incubating the ADC from step (c) with D2 or D1 and the second reductant in the buffer system to reduce the interchain disulfide bonds within the ADC with D2 or D1;

[0387] (e) introducing the incubation product from step (d) and the second linker-payload to react with the reduced thiol groups resulted from step (d) .

[0388] (f) purifying ADC from step (e) using desalting column, UF-DF or chromatography purification.

[0389] In some embodiments, when preparing the ADC with D2+D2, the ADC with D2+D1, the ADC with D1+D2 and the ADC with D1+D1, the antibody is the antibody mutant.

[0390] In some embodiments, the first linker-payload comprises -L1-L3-P1, and the second linker-payload comprises -L2-L4-P2. In some embodiments, the first linker-payload comprises -L2-L4-P2, and the second linker-payload comprises -L1-L3-P1.

[0391] A pharmaceutical composition

[0392] In one aspect, the present disclosure provides a pharmaceutical composition comprising the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to the present disclosure.

[0393] The pharmaceutical compositions provided herein may be formulated in any manner known in the art, such as, pharmaceutical compositions provided herein can be formulated for parenteral (e.g., intravenous, intraarterial, intramuscular, intradermal, subcutaneous, or intraperitoneal) administration in dosage unit form (i.e., physically discrete units containing a predetermined quantity of active compound for ease of administration and uniformity of dosage) .

[0394] The pharmaceutical compositions are formulated to be compatible with their intended route of administration (e.g., intravenous, intraarterial, intramuscular, intradermal, subcutaneous, or intraperitoneal) .

[0395] In some embodiments, the pharmaceutical compositions comprise one or more of pharmaceutically acceptable carrier.

[0396] In some embodiments, the pharmaceutical acceptable carriers for use in the pharmaceutical compositions disclosed herein may include, for example, pharmaceutically acceptable liquid, gel, or solid carriers, aqueous vehicles, nonaqueous vehicles, antimicrobial agents, isotonic agents, buffers, antioxidants, anesthetics, suspending / dispending agents, sequestering or chelating agents, diluents, adjuvants, excipients, or non-toxic auxiliary substances, other components known in the art, or various combinations thereof.

[0397] Suitable components may include, for example, antioxidants, fillers, binders, disintegrants, buffers, preservatives, lubricants, flavorings, thickeners, coloring agents, emulsifiers or stabilizers such as sugars and cyclodextrins. Suitable antioxidants may include, for example, methionine, ascorbic acid, EDTA, sodium thiosulfate, platinum, catalase, citric acid, cysteine, thioglycerol, thioglycolic acid, thiosorbitol, butylated hydroxyanisole, butylated hydroxytoluene, and / or propyl gallate. As disclosed herein, inclusion of one or more antioxidants such as methionine in a composition comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof and conjugates provided herein decreases oxidation of the antibody or antigen-binding fragment thereof. This reduction in oxidation prevents or reduces loss of binding affinity, thereby improving antibody stability and maximizing shelf-life. Therefore, in certain embodiments, pharmaceutical compositions are provided that comprise one or more antibodies or antigen-binding fragments thereof as disclosed herein and one or more antioxidants such as methionine.

[0398] In some embodiments, the pharmaceutical compositions can be a liquid solution, suspension, or emulsion. In some embodiments, the pharmaceutical compositions are formulated into an injectable composition. The injectable pharmaceutical compositions may be prepared in any conventional form, such as for example liquid solution, suspension, emulsion, or solid forms suitable for generating liquid solution, suspension, or emulsion. Preparations for injection may include sterile and / or non-pyretic solutions ready for injection, sterile dry soluble products, such as lyophilized powders, ready to be combined with a solvent just prior to use, including hypodermic tablets, sterile suspensions ready for injection, sterile dry insoluble products ready to be combined with a vehicle just prior to use, and sterile and / or non-pyretic emulsions. The solutions may be either aqueous or nonaqueous.

[0399] Use of the conjugates

[0400] In one aspect, the present disclosure provides the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to the present disclosure, or the pharmaceutical compositions according to the present disclosure in the manufacture of a drug for preventing or treating a disease.

[0401] A method of preventing or treating a disease

[0402] In one aspect, the present disclosure provides a method of preventing or treating a disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject a therapeutically effective amount of the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to the present disclosure, or the pharmaceutical compositions according to the present disclosure.

[0403] As use herein, the term “treat a disease” or “treating a disease” refers to alleviating or ameliorating the disease (i.e., slowing or arresting the development of the disease or at least one of the clinical symptoms thereof) ; or alleviating or ameliorating at least one physical parameter or biomarker associated with the disease, including those which may not be discernible to the patient. For cancer, “treating” may refer to dampen or slow the tumor or malignant cell growth, proliferation, or metastasis, or some combination thereof. For tumors, “treating” includes removal of all or part of the tumor, inhibiting or slowing tumor growth and metastasis, delaying the development of a tumor, or some combination thereof.

[0404] As used herein, the term “prevent” or “preventing” of any disease refers to the prophylactic treatment of the disease; or delaying the onset or progression of the disease.

[0405] As use herein, the term “subject” refers to mammals, primates (e.g., humans, male or female) , dogs, rabbits, guinea pigs, pigs, rats and mice. In certain embodiments, the subject is a primate. In yet other embodiments, the subject is a human.

[0406] As used herein, the term "a therapeutically effective amount" refers to an amount of the conjugates or the pharmaceutical compositions of the present disclosure that will elicit the biological or medical response of a subject, for example, ameliorate symptoms, alleviate conditions, slow or delay disease progression, or prevent a disease, etc. The therapeutically effective amount will vary with the type and severity of the condition to be alleviated. It is to be further understood that for any particular subject, specific dosage regimens should be adjusted over time according to the individual need and the professional judgment of the person administering or supervising the administration of the conjugates or the pharmaceutical composition. In some embodiment, the therapeutically effective amount is based on a variety of factors, such as the type of disease, the age, weight, sex, medical condition of the patient, the severity, of the condition, the route of administration, and the particular antibody employed. In some embodiments, the therapeutically effective amount can vary widely, but can be determined routinely using standard methods. In some embodiment, the therapeutically effective amount can be adjusted based on the pharmacokinetic or pharmacodynamic parameters, which may include clinical effects such as toxic effects and / or laboratory values.

[0407] In some embodiments, the disease comprises a tumor or cancer. In some embodiments, the disease is an autoimmune disease and the like.

[0408] In some embodiments, the cancer can include, but not limited to, carcinoma, lymphoma, blastema, sarcoma, and leukemia or lymphoid malignancies. More particular examples of the cancer include squamous cell cancer (e.g., epithelial squamous cell cancer) , lung cancer including small-cell lung cancer, non-small cell lung cancer ( “NSCLC” ) , adenocarcinoma of the lung and squamous carcinoma of the lung, cancer of the peritoneum, hepatocellular cancer, gastric or stomach cancer including gastrointestinal cancer, pancreatic cancer, glioblastoma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, colorectal cancer, endometrial or uterine carcinoma, salivary gland carcinoma, kidney or renal cancer, prostate cancer, vulval cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma, anal carcinoma, penile carcinoma, as well as head and neck cancer.

[0409] An antibody mutant

[0410] In one aspect, the present disclosure provides an antibody mutant or an antigen-binding fragment thereof, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain and a light chain, wherein,

[0411] the heavy chain of the antibody mutant comprises SX1X2KTX3TCPPX4PAPEX5X6GGPX7V, wherein, X1 is selected from C or S, X2 is selected from D or H, X3 is selected from H or D, X4 is selected from C, S, L or V, X5 is selected from L or A, X6 is selected from L or A and X7 is selected from S or C;

[0412] light chain of the antibody mutant comprises SFNRGEX8, wherein, X8 is selected from C or S;

[0413] provided that X1 is not C, X2 is not D, X3 is not H, X4 is not C, X5 is not L, X6 is not L, X7 is not S and X8 is not C at the same time.

[0414] In some embodiments, the antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof binds to FOLR1.

[0415] In some embodiments, the heavy chain of the antibody mutant comprises any one of the groups selected from the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 117, 119, 125, 127, 129, 131, 133 or 135; the light chain of the antibody mutant comprises any one of the groups selected from the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 118, 120, 126, 128, 130, 132, 134 or 136.

[0416] The antibody mutant is helpful to provide suitable site linked with linker and improve the homogeneity of antibody-drug conjugate. Specific, the antibody mutant of the present disclosure is helpful to prepare the ADC with D1, the ADC with D2, the ADC with D4, D4+D1, the ADC with D4+D2, the ADC with D2+D4, the ADC with D4+D4, the ADC with D2+D4, the ADC with D2+D8, the ADC with D2+D2, the ADC with D2+D1, the ADC with D8+D2, the ADC with D8+D1, the ADC with D6+D4, the ADC with D1+D2, the ADC with D1+D3, the ADC with D1+D5 or the ADC with D1+D1.

[0417] In some embodiments, the antibody mutant comprises:

[0418] (1) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 1, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 2; or

[0419] (2) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 3, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 4; or

[0420] (3) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 5, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 6; or

[0421] (4) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or

[0422] (5) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 9, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 10; or

[0423] (6) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 11, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 12; or

[0424] (7) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 13, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 14; or

[0425] (8) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 15, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 16; or

[0426] (9) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 17, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 18; or

[0427] (10) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 19, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 20; or

[0428] (11) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 21, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 22; or

[0429] (12) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 23, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 24; or

[0430] (13) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 25, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 26; or

[0431] (14) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 27, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 28; or

[0432] (15) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 29, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 30; or

[0433] (16) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 31, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 32; or

[0434] (17) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 33, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 34; or

[0435] (18) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 35, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 36; or

[0436] (19) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 37, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 38; or

[0437] (20) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 39, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 40; or

[0438] (21) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 41, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 42; or

[0439] (22) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44; or

[0440] (23) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 45, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 46; or

[0441] (24) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 47, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 48; or

[0442] (25) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 49, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 50; or

[0443] (26) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 51, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 52; or

[0444] (27) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 53, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 54; or

[0445] (28) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 55, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 56; or

[0446] (29) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 57, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 58; or

[0447] (30) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 117, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 118; or

[0448] (31) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 119, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 120; or

[0449] (32) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 125, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 126; or,

[0450] (33) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 127, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 128; or,

[0451] (34) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 129, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 130; or,

[0452] (35) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 131, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 132; or,

[0453] (36) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 133, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 134; or,

[0454] (37) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136.

[0455] In some embodiments, the antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof comprises:

[0456] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 59, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 60; or

[0457] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 61, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 62; or

[0458] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 63, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 64; or

[0459] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; or

[0460] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 67, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 68; or

[0461] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 69, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 70; or

[0462] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 71, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 72; or

[0463] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 73, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 74; or

[0464] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 75, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 76; or

[0465] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 77, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 78; or

[0466] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 79, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 80; or

[0467] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or

[0468] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 83, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 84; or

[0469] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 85, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 86; or

[0470] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 87, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 88; or

[0471] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 89, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 90; or

[0472] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 91, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 92; or

[0473] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 93, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 94; or

[0474] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96; or

[0475] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 97, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 98; or

[0476] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 99, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 100; or

[0477] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 101, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 102; or

[0478] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 103, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 104; or

[0479] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 105, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 106; or

[0480] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 107, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 108; or

[0481] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 109, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 110; or

[0482] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 111, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 112; or

[0483] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 113, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 114; or

[0484] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 115, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 116; or

[0485] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 121, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 122; or

[0486] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 123, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 124; or

[0487] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 137, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 138; or

[0488] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 139, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 140; or

[0489] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 141, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 142; or

[0490] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 143, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 144; or

[0491] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 145, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 146; or

[0492] a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148.

[0493] In one aspect, the present disclosure provides an isolated polynucleotide encoding the antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof according to the present disclosure.

[0494] As used herein, the term “polynucleotides” or “polynucleotide” can be composed of any polyribonucleotide or polydeoxyribonucleotide, which can be unmodified RNA or DNA or modified RNA or DNA. For example, polynucleotides can be composed of single-and double-stranded DNA, DNA that is a mixture of single-and double-stranded regions, single-and double-stranded RNA, and RNA that is mixture of single-and double-stranded regions, hybrid molecules comprising DNA and RNA that can be single-stranded or, more typically, double-stranded or a mixture of single-and double-stranded regions. In addition, the polynucleotide can be composed of triple-stranded regions comprising RNA or DNA or both RNA and DNA. A polynucleotide can also contain one or more modified bases or DNA or RNA backbones modified for stability or for other reasons. "Modified" bases include, for example, tritylated bases and unusual bases such as inosine. A variety of modifications can be made to DNA and RNA; thus, "polynucleotide" embraces chemically, enzymatically, or metabolically modified forms.

[0495] In one aspect, the present disclosure provides an isolated vector comprising the polynucleotide according to the present disclosure.

[0496] In one aspect, the present disclosure provides a host cell comprising the isolated polynucleotide according to the present disclosure or the isolated vector according to the present disclosure.

[0497] In one aspect, the present disclosure provides use of the antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof according to the present disclosure in the manufacture of conjugates.

[0498] In some embodiments, the conjugates comprise an antibody-drug conjugate (ADC) .

[0499] It will be readily apparent to those skilled in the art that other suitable modifications and adaptations of the present disclosure described herein are obvious and may be made using suitable equivalents without departing from the scope of the disclosure or the embodiments disclosed herein. Having now described the disclosure in detail, the same will be more clearly understood by reference to the following examples, which are included for purposes of illustration only and are not intended to be limiting. Further, unless specifically described otherwise, the reagent and the solvent described in the description can be easily obtained from a commercial supplier.

[0500] EXAMPLES

[0501] The disclosure is further described in the following examples, which do not limit the scope of the disclosure described in the claims.

[0502] Reagent and Manufacturer

[0503] Unless stated otherwise, all commercially available starting building blocks could be purchased from commercial vendors.

[0504] MMAE, MMAF, Eribulin, DXd, DX8951f are commercially available from Haoyuan Chemexpress. SN38, Rucaparib, Niraparib and VE-822 are commercially available from Bidepharm. MC-VC-PAB-MMAE (CAS Number: 646502-53-6) is commercially available from MedChemExpress and the catalog number is HY-15575. MC-GGFG-DXd (CAS Number: 1599440-13-7) is available from MedChemExpress and the catalog number is HY-13631E. Farletuzumab is produced by HOEKBIO.

[0505] LCMS analyses were performed on ACQUITY UPLC system which is commercially available from Waters, HPLC 1260 Infinity II is commercially available from Angilent, prep-HPLC 1220 Infinity II is commercially available from Angilent.

[0506] Abbreviations

[0507] Example 1. Synthesis of the payloads

[0508] Example 1.1. Synthesis of BRYT1003-1002

[0509] To a suspension of Exatecan mesylate (10 mg, 20μmol, 1.0 eq) in DMF (1mL) was added DIPEA (10.5uL, 60ummol, 3.0eq) followed by cyclopropylsulphonyl choride (1.2 eq) at room temperature. The mixture was stirred for 6h at room temperature. The mixture was purified by prep-HPLC (Acetonitrile / water (0.1%TFA) =20%～80%) and the eluent was lyophilized to give BRYT1003-1002 (65.5%yield) . Exact mass calc. for C27H26FN3O6S: 539.15, found: 540.30, (M+H) +.

[0510] Example 1.2. Synthesis of BRYT1003-1011

[0511] To a suspension of Exatecan mesylate (10 mg, 20umol, 1.0 eq) and 4, 6-difluoropyrimidine (1.5 eq) in DMF (2mL) was added DIPEA (10.5uL, 60ummol, 3.0eq) . The mixture was stirred for 16 hours at 80℃. LC-MS showed Exatecan was consumed completely. The mixture was purified by prep-HPLC (Acetonitrile / water (0.1%TFA) =20%～80%) and the eluent was lyophilized to give desired product BRYT1003-1011 (75.2%yield) . Exact mass calc. for [C27H26FN3O6S] : 531.17, found: 532.34, (M+H) +.

[0512] Example 2. Synthesis of the linker-paylaod

[0513] Synthesis of intermediates: LK-2

[0514] Step1: To a solution of compound 1 (1.31g, 3.0 mmol, 1.0 eq) and N-Boc-Ethylenediamine (0.58g, 3.6mmol, 1.2eq) in DMF (20mL) was added DIPEA (1.0mL, 6.0mmol, 2.0eq) followed HATU (1.3g, 3.3mmol, 1.1eq) at r.t.. The mixture was stirred for 2h at r.t.. The mixture was poured into ice-water (120mL) and extracted with EtOAc (40mL*3) . The combined organic layer was washed with brine (40mL) , dried over Na2SO4 and filtered. The filtrate was concentrated and purified by flash column (EtOAc / petroleum ether = 0%～50%) to give product 2 (1.5g, 86.5%yield) as light yellow solid. Exact mass calc. for C31H39N3O6Si: 577.26, found: 578.53, (M+H) +.

[0515] Step2: To a solution of compound 2 (1.5 g, 2.6 mmol, 1.0 eq) in MeOH (20mL) and EtOAc (10mL) was added Pd / C (150mg) under N2 atmosphere. The mixture was degassed 3 times and purged with H2, then stirred for 5 h at r.t. The mixture was filtered through a Celite pad, the filtrate was concentrated to give crude product 3 (1.3 g, yield 91.4%) . Exact mass calc. for C31H41N3O4Si: 547.29, found: 548.45, (M+H) +.

[0516] Step3: To a solution of compound 3 (1.3 g, 2.4 mmol, 1.0 eq) and Fmoc-Val-Cit (1.2 g, 2.4 mmol, 1.0 eq) in DCM (30mL) and MeOH (5mL) was added EEDQ (880.3mg, 3.6mmol, 1.5eq) . The mixture was degassed 3 times and purged with N2, then stirred for 16 h at r.t.. The mixture was concentrated and purified by flash column (MeOH / DCM= 0%～10%) to give product 4 (2.0 g, 82.1%yield) as yellow solid. Exact mass calc. for C57H71N7O9Si: 1025.51, found: 1026.68, (M+H) +.

[0517] Step4: To a solution of compound 4 (2.0 g, 2.0 mmol, 1.0 eq) in THF (30mL) was added TBAF (4.0mL, 4.0mmol, 2.0eq, 1M in THF) under N2 atmosphere. The mixture was stirred for 4h at r.t.. The mixture was concentrated and purified by flash column (MeOH / DCM= 0%～10%) to give product 5 (1.3 g, 84.7%yield) as yellow solid. Exact mass calc. for C41H53N7O9: 787.39, found: 788.56, (M+H) +.

[0518] Step5: To a solution of compound 5 (1.3 g, 1.7 mmol, 1.0 eq) in DMF (15mL) was added DIPEA (592.7uL, 3.4mmol, 2.0eq) followed by Bis (4-nitrophenyl) carbonate (602.3mg, 2.0mmol, 1.2eq) . The mixture was stirred for 3h at r.t.. The mixture was concentrated and purified by flash column (MeOH / DCM=0～10%) to give product LK-2 (1.2 g, 76.3%yield) as yellow solid. Exact mass calc. for C48H56N8O13: 952.40, found: 953.57, (M+H) +.

[0519] Synthesis of intermediate 1 in LW034

[0520] Step1: A reaction mixture of compound 1 (1.8 g, 10 mmol) , tert-butyl 3-aminopropanoate (145 mg, 1 mmol) , NaBH3CN (502 mg, 8 mmol) and potassium dihydrogen phosphate (81.6 mg, 0.6 mmol) in water (20 mL) and ethanol (10 mL) was stirred at 50 ℃ under N2 for 36 hr, until the reaction was complete as indicated by LCMS. The solvents were evaporated, and the residue was purified by C18 reversed-phase chromatography to give the desired product 2 (220 mg, 0.47 mmol, 47%yield) . Exact mass calc. for C19H39NO12: 473.25, found: 474.40, (M+H) +.

[0521] Step2: compound 2 (220 mg, 0.47 mmol) was dissolved in DCM (5 mL) . TAF (2 mL) was added and the mixture was stirred for 1 h at room temperature. The solvent was evaporated and then dissolved in ACN (5 mL) . DIPEA (3 mL) was added and the mixture was stirred for 1 h at room temperature to remove the TFA ester byproduct. The solvents were evaporated, and the residue was purified by C18 reversed-phase chromatography to give the desired product 3 (198 mg, 0.42 mmol, 90%yield) . Exact mass calc. for C15H31NO12: 417.18, found: 418.34, (M+H) +.

[0522] Example 2.1. Synthesis of LW015

[0523] Step1: To a solution of D-glucamine (1.1 g, 6.0 mmol, 1.0 eq) and 3-tert-Butoxy-3-oxopropanoic acid (960.0mg, 6.0mmol, 1.0eq) in DMF (15mL) was added DIPEA (2.1mL, 12.0mmol, 1.0eq) followed by HATU (2.7 g, 7.2mmol, 1.2eq) at 0℃. The mixture was stirred for 2h at 0℃. The mixture was quenched by adding water (3mL) . The mixture was purified by RP-column (MeCN / water = 5～95%) to give product tert-butyl 3-oxo-3- ( ( (2S, 3R, 4R, 5R) -2, 3, 4, 5, 6-pentahydroxyhexyl) amino) propanoate (compound 2, 1.5 g, 4.6mmol, 77.3%yield) . Exact mass calc. for C13H25NO8: 323.16, found: 324, 31, (M+H) +.

[0524] Step2: To a solution of compound 2 (500.0 mg, 1.5mmol, 1.0 eq) in DCM (5.0 mL) was added TFA (1.0mL) . The mixture was stirred for 1 h at r.t. and was concentrated to give crude product 3-oxo-3- ( ( (2S, 3R, 4R, 5R) -2, 3, 4, 5, 6-pentahydroxyhexyl) amino) propanoic acid (compound 3, 400 mg, crude) . Exact mass calc. for C9H17NO8: 267.23, found: 268.38, (M+H) +.

[0525] Step3: To a solution of compound 4 (45.0 mg, 42.0 μmol, 1.0 eq) in DMF (1.0 mL) was added pyrrolidine (200μL) . The mixture was stirred for 1 h at r.t.. The mixture was purified by RP-column (MeCN / water = 30%～90%) to give product 5 (30.0 mg, 81.1%) . Exact mass calc. for C51H63FN10O12: 1026.46, found: 1027.63, (M+H) +.

[0526] Wherein, compound 4 was obtained by compound LK-2 and dx8951f. To a solution of compound LK-2 (120 mg, 0.13mmol, 1.0eq) and dx8951f (75.1 mg, 141.5umol, 1.2eq) in DMF(1.0 mL) was added DIPEA (62.8 uL, 0.36mmol, 3.0eq) at r.t.. The mixture was stirred for 4 h at r.t.. The mixture was purified by RP-column (MeCN / water = 20%～100%) to give compound 4 (100 mg, 46.5%yield) . Exact mass calc. for C66H73FN10O14: 1248.53, found: 1249.70, (M+H) +.

[0527] Step4: To a solution of compound 5 (30.0 mg, 29.2umol, 1.0eq) and compound 3 (9.4 mg, 35.1umol, 1.2 eq) in DMF (1.0 mL) was added DIPEA (10.2 uL, 58.4umol, 2.0eq ) followed by HATU (13.3mg, 35.0umol, 1.2eq) at 0℃. The mixture was stirred for 1 h at 0℃. The mixture was purified by RP-column (MeCN / water = 20%～90%) to give product compound 6 (25.0 mg, 67.1%yield) . Exact mass calc. for C60H78FN11O19: 1275.55, found: 1276.77, (M+H) +.

[0528] Step5: To a solution of compound 6 (25 mg, 19.6μmol, 1.0eq) in DCM (1.0 mL) was added TFA (200uL) . The mixture was stirred for 1 h at r.t. and was concentrated to give crude product 7 (20 mg, crude) , which was used in next step directly, without further purification. Exact mass calc. for C55H70FN11O17: 1175.49, found: 1176.68, (M+H) +.

[0529] Step6: To a solution of compound 7 (10 mg, 8.5 μmol, 1.0 eq) in DMF (0.5 mL) was added DIPEA (5.4uL, 31.0umol, 3.0eq) followed by 2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl 1- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) -3, 6, 9, 12-tetraoxapentadecan-15-oate (6.9 mg, 15.5umol, 1.5eq) . The mixture was stirred for 1 h at r.t.. Then the mixture was purified by prep-HPLC (MeCN / water =20～95%) to give product LW015 (1.8 mg, 14.1%yield) . Exact mass calc. for C70H91FN12O24: 1502.63, found: 1503.81, (M+H) +.

[0530] Similar to the synthesis of LW015, the linker-payload listed in the following table can be obtained.

[0531] Example 2.4. Synthesis of LW034

[0532] Step1: To mixture of VE-822 (92.8 mg, 0.2 mmol, 1.0eq) in DMF (3.0 mL) was added DIPEA (140uL, 0.8 mmol, 4.0eq) followed by LK-2 (238.5 mg, 1.25mmol, 1.0eq) . The mixture was stirred for 2h at room temperature, LCMS showed VE822 was consumed completely and desired MS was detected. To the mixture pyrrolidine (83.7uL, 1.0 mmol, 5eq) was added. The mixture was stirred for 0.5 h at room temperature. LCMS showed reaction was completed and desired MS was detected. The mixture was purified by RP-column, to give product LW034_2 (220 mg, 94.8%yield of two steps) as yellow solid. Exact mass calc. for C51H66N12O11S: 1054.47, found: 1054.5 (M+H) +.

[0533] Step2: To a mixture of LW034_2 (70.0 mg, 66.4umol, 1.0eq) and LW034_1 (52.9 mg, 99.5 umol, 1.5eq) in DMF (1mL) was added DIPEA (34.8uL, 0.2mmol, 3.0eq) followed by HATU (37.8 mg, 99.5umol, 1, 5eq) . The mixture was stirred for 1h at room temperature. LCMS showed LW034_2 was consumed completely, and desired MS was detected. The mixture was purified by RP-column (MeCN / Water = 5～50%) and the eluent was concentrated and lyophilized to give product LW034_3 (50 mg, 60.5%yield) as yellow solid. Exact mass calc. for C66H95N13O22S: 1453.64, found: 1454.6 (M+H) +.

[0534] Step3: To a mixture of LW034_3 (50.0 mg, 34.4umol, 1.0eq) in DCM (3mL) was added TFA(1mL, ) . The mixture was stirred for 0.5 h at room temperature. LCMS showed LW034_3 was consumed completely, and desired MS was detected. The mixture was concentrated to give product LW034_4 (46 mg, crude) , which was used in next step directly without further purification. Exact mass calc. for C61H87N13O20S: 1353.59 found: 1354.6 (M+H) +.

[0535] Step4: To a mixture of LW034_4 (46.0 mg, crude) in DMF (3mL) was added DIPEA (12uL, 67.9umol, 2.0eq) followed by Mal-PEG4-NHS ester (15.0mg, 34.0umol, 1.0eq) . The mixture was stirred for 1 h at room temperature. LCMS showed LW034_4 was consumed completely, and desired MS was detected. The mixture was purified by prep-HPLC (MeCN / water = 35～45%) , the eluent was concentrated and lyophilization to give product LW034 (10 mg, 17.5%yield) as yellow solid. Exact mass calc. for: C76H108N14O27S: 1680.72, found: 1681.8 (M+H) +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.2 (s, 1H) , 8.95 (s, 1H) , 8.53 (s, 1H) , 8.43 (s, 1H) , 8.38 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 8.28 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 8.19 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.94 (d, J = 8.2 Hz, 3H) , 7.78 (s, 1H) , 7.73 –7.58 (m, 2H) , 7.43-7.32 (m, 3H) , 7.24-7.11 (m, 2H) , 7.01 (s, 2H) , 6.03 (s, 1H) , 5.41 (s, 3H) , 5.20 (s, 2H) , 4.88 –4.35 (m, 9H) , 4.29 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 4.00 (s, 2H) , 3.69 (d, J = 5.0 Hz, 2H) , 3.64 –3.46 (m, 17H) , 3.42-3.19 (m, 22H) , 2.99 (s, 2H) , 2.85 (s, 3H) , 2.80-2.67 (m, 2H) , 2.31 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 1.97 (s, 1H) , 1.68-1.60 (m, 2H) , 1.45-1.36 (m, 2H) , 1.19 (d, J = 6.7 Hz, 6H) , 0.85 (dd, J = 14.8, 6.6 Hz, 6H) .

[0536] Example 2.5. Synthesis of LW016

[0537] To a solution of compound 1 (obtained used the procedure described in WO2017151979A1, 10.0 mg, 8.8μmol, 1.0eq) and compound 2 (obtained used the procedure described in US20130052130A1, 7.4mg, 10.6μmol, 1.2eq) in DMF (0.5mL) was added DIPEA (3.1 μL, 17.6μmol, 2.0eq) and HATU (5.0 mg, 13.2umol, 1.5eq) at 0℃. The mixture was stirred for 1h at 0℃, then was purified by prep-HPLC (MeCN / water = 20%～95%) to give LW016 (7.8 mg, 29.9%yield) . Exact mass calc. for C61H73FN12O17: 1811.90, found: 1813.25, (M+H) +.

[0538] Similar to the synthesis of LW016, the linker-payload listed in the following table can be obtained.

[0539] Example 2.7. Synthesis of LW033

[0540] Step1: To a mixture of Lysine (328.4 mg, 2.0 mmol, 1.0eq; purchased from Bide pharma) and DIPEA (1.4mL, 8.0mmol, 4.0eq) in DMF (15mL) was added N-Succinimidyl 3-maleimidopropionate (1.2g, 4.4mmol, 2.2eq) . The mixture was stirred for 16h at room temperature. LCMS showed Lysine was consumed completely and desired MS was detected. The mixture was purified by RP-column (MeCN / water (0.1%of TFA) = 0～50%) to give product LW033_int2 (400 mg 44.6%yield) as white solid. Exact mass calc. for C20H24N4O8: 448.16, found: 449.2, (M+H) +.

[0541] Step 2: To a solution of compound LW033-int1 (obtained used the procedure described in WO2017151979A1, 20.0 mg, 17.6μmol, 1.0eq) and compound LW033-int2 (9.5 mg, 21.1μmol, 1.2eq) in DMF (0.5mL) was added DIPEA (10.0μL, 52.8umol, 3.0eq) and HATU (8.0 mg, 21.1umol, 1.2eq) at 0℃. The mixture was stirred for 1h at 0℃, then was purified by prep-HPLC (MeCN / water = 20%～95%) to give LW033 (17 mg, 61.6%yield) . Exact mass calc. for C79H108N10O23: 1564.76, found: 783.9, 1566.9 (M+2H) +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.01 (s, 1H) , 8.11 (dd, J = 14.5, 7.6 Hz, 2H) , 7.90 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 7.72 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.27 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 7.08 (t, J = 5.9 Hz, 1H) , 6.99 (s, 4H) , 5.97 (s, 1H) , 5.41 (s, 1H) , 5.05 (s, 1H) , 5.00 (s, 1H) , 4.93 (s, 2H) , 4.83 (s, 1H) , 4.75 (s, 1H) , 4.55 (t, J = 4.2 Hz, 1H) , 4.37 (q, J = 7.2 Hz, 1H) , 4.30 –3.98 (m, 8H) , 3.84 –3.65 (m, 3H) , 3.59 (t, J = 7.3 Hz, 4H) , 3.53-3.50 (m, 3H) , 3.39 (s, 2H) , 3.25 (s, 4H) , 3.06-2.91 (m, 6H) , 2.86 –2.63 (m, 3H) , 2.59-2.53 (m, 1H) , 2.41 (p, J = 7.1 Hz, 2H) , 2.35 –2.09 (m, 8H) , 2.05 –1.82 (m, 7H) , 1.75 –1.12 (m, 22H) , 1.03 (d, J = 6.4 Hz, 3H) , 0.96 (t, J = 11.9 Hz, 1H) , 0.83 (dd, J = 11.3, 6.7 Hz, 6H) .

[0542] Example 2.8. Synthesis of LW025

[0543] Step1: To a solution of compound 1 (LK-2, 95 mg, 0.10 mmol, 1.0 eq) and VE-822 (50 mg, 0.11 mmol, 1.1 eq) in DMF (1.0 mL) was added DIPEA (62.8 uL, 0.36mmol, 3.0eq) at r.t.. The mixture was stirred for 4 h at r.t.. The mixture was purified by RP-column (MeCN / water = 20%～100%) to give compound 2 (90.0 mg, 70.9%yield) . Exact mass calc. for C66H76N12O13S: 1276.54, found: 1277.75, (M+H) +.

[0544] Step2: Compound 3 was obtained used the procedure described in example 2.1, step5, however compound 6 in example 2.1 was replaced by compound 2 (45.0mg) in example 2.7. Compound 3 (45.0mg, crude product) was used in next step directly without further purification. Exact mass calc. for C61H68N12O11S: 1176.49, found: 1177.70, (M+H) +.

[0545] Step3: Compound 4 was obtained used the procedure described in example 2.1, step 4, however compound 5 in example 2.1 was replaced by compound 3 (45.0mg, crude) in example 2.7. Compound 4 (40.0 mg, 28.0μmol) was obtained by RP-column (MeCN / water (0.1%TFA) = 20%～90%) . Exact mass calc. for C70H83N13O18S: 1425.57, found: 1426.76, (M+H) +.

[0546] Step4: Compound 5 was obtained used the procedure described in example 2.1, step 3, however compound 4 in example 2.1 was replaced by compound 4 (40.0mg, 28.0μmol) in example 2.7. Compound 5 (23.0mg, 19.1μmol) was obtained by RP-column (MeCN / water (0.1%TFA) = 20%～90%) . Exact mass calc. for C55H73N13O16S: 1203.50, found: 1204.72, (M+H) +.

[0547] Step5: LW025 was obtained used the procedure described in example 2.1, step 6, however compound 7 in example 2.1 was replaced by compound 5 (23.0mg, 19.1μmol) in example 2.7. LW025 (10.8mg, 7.1μmol) was obtained by prep-HPLC (MeCN / water (0.1%TFA) = 30%～60%) . Exact mass calc. for C70H94N14O23S: 1530.63, found: 1531.85, (M+H) +.

[0548] Similar to the synthesis of LW025, the linker-payload listed in the following table can be obtained.

[0549] Example 2.11 Synthesis of LW026

[0550] Synthesis of Compound 1:

[0551] Boc- (L) -Prolinal (20mg, 0.1 mmol, 1 equiv. ) was dissolved in MeOH / AcOH (2mL / 100μl) with reactant MR1 N, N-dimethylethylenediamine (10.62mg, 0.12 mmol, 1.2 equiv. ) . The reaction was stirred at R. T. for 3 hours to monitored by LC-MS until substrate was consumed completely. MeOH was removed through rotary evaporation, the crude was resuspended with AcOEt (20ml) and washed with brine solution (3 x 10 ml) , dried and concentrated under vacuum. Affording Int1 as a colorless oil.

[0552] BRYT1003-1002 (20mg, 37μmol, 1 equiv. ) was dissolved in CH2Cl2 (1mL) and cooled to 0 ℃. DMAP (27.17mg, 222.4μmol 6 eq) and 4-nitrophenyl chloroformate (22.41mg, 111.2μmol, 3 eq) were added. The mixture monitored by LCMS until BRYT1003-1002 was consumed completely. The crude product was purified with column chromatography (gradient from 0%to 20%MeOH in CH2Cl2) to give Int 2.

[0553] To a solution of Int2 (20mg, 28.38μmol, 1 equiv. ) in dry CH2Cl2 was added Int 1 (15.41 mg, 56.76 μmol, 2 equiv. ) followed by DIPEA (20 μL, 113.53 μmol, 4 equiv. ) . The reaction was stirred at 25 ℃ for 2h and without any further purification, directly for the next reaction.

[0554] The crude product was dissolved in dry CH2Cl2 (1 mL) and 20%volume of TFA was added dropwise at 0 ℃, the mixture was stirred at R. T. for 1 hour. The solvent was evaporated and then CH2Cl2 was added for two times to the residue followed by evaporation under vacuum, to afford the amine Trifluoroacetic acid (TFA) salt. The crude product was then purified by pre-HPLC. The purified product was lyophilized to give compound 1. Exact mass calc. for C37H45FN6O7S: 736.31, found: 737.51, (M+H) +.

[0555] Step1: compound 1 (100 mg, 0.136 mmol) and compound 2 (LK-2, 129 mg, 0.136 mmol) was dissolved in DMF (2 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 3 h, until the reaction was complete as indicated by LCMS. The mixture was purified by C18 reversed-phase chromatography to give the desired compound 3 (168 mg, 0.108 mmol, 80%yield) . Exact mass calc. for C79H96FN13O17S: 1549.68, found: 1550.9, (M+H) +.

[0556] Step2: compound 3 (168 mg, 0.108 mmol) was dissolved DCM (5 mL) , and TFA (2 mL) was added. The mixture was stirred at room temperature for 1 h, until the reaction was complete as indicated by LCMS. The solvent was evaporated to give the desired compound 4 (154 mg, 0.107 mmol, 99%yield) . Exact mass calc. for C74H88FN13O15S: 1449.62, found: 1450.8, (M+H) +.

[0557] Step3: compound 4 (154 mg, 0.107 mmol) and compound 5 (29 mg, 0.107 mmol) was dissolved in DMF. DIPEA (37 μL, 0.214 mmol) was added. HATU (41 mg, 0.107 mmol) was added to the mixture at 0 ℃ and stirred for 1 hour. The mixture was purified using C18 reversed-phase chromatography to give the desired compound 6 (127 mg, 0.075 mmol, 80%yield) . Exact mass calc. for C83H103FN14O22S: 1698.71, found: 1699.9, (M+H) +.

[0558] Step4: compound 6 (127 mg, 0.075 mmol) was dissolved in DMF (2 mL) . Pyrrolidine (25 μL, 0.3 mmol) was added to the solution and stirred for 1 hour at room temperature. The mixture was purified by C18 reversed-phase chromatography to give the desired compound 7 (88 mg, 0.06 mmol, 80%yield) . Exact mass calc. for C68H93FN14O20S: 1476.64, found: 1477.84, (M+H) +.

[0559] Step5: compound 7 (88 mg, 0.06 mmol) was dissolved in DMF (2 mL) . compound 8 (27 mg, 0.06 mmol) and DIPEA (21 μL, 0.12 mmol) was added to the solution and stirred for 1 hour at room temperature. The mixture was purified using C18 reversed-phase chromatography to give the desired product LW026 (87 mg, 0.048 mmol, 80%yiled) . Exact mass calc. for C83H114FN15O27S: 1803.77, found: 1804.98, (M+H) +.

[0560] Example 2.12 Synthesis of LW042

[0561] Synthesis of intermediate (Compound 1)

[0562] Step1: To a mixture of 1_1 (9.0g, 50.0mmol, 1.0eq, purchased from Bide pharma) and N-Boc-EthylenediaMine (12.7 g, 75.4mmol, 1.5eq) in DMF (100mL) was added DBU (1.5 mL, 10.1mmol, 0.2 eq) . The mixture was stirred for 16 hrs at room temperature. LCMS showed 1_1 was consumed completely. The mixture was poured into water (1L) and extracted with EtOAc (500mL*3) . The organic layer was dried over Na2SO4 and filtered. The filtrate was concentrated and purified by flash-column (EtOAc / Petroleum ether = 0～50%) to give product 1_2 (8.0 g, 47%yield) . Exact mass calc. for C15H21N3O6: 339.14, found: 340.4, (M+H) +.

[0563] Step2: To a mixture of 1_2 (8.0g, 23.6mmol, 1.0eq) and imidazole (3.2 g, 47.2mmol, 2.0 eq) in DCM (100mL) was added TBDPS-Cl (7.8g, 28.3mmol, 1.2 eq) . The mixture was stirred for 16hrs at room temperature. LCMS showed 1_2 was consumed completely. The mixture was washed with water (50mL*2) , dried over Na2SO4 and filtered. The filtrate was concentrated and purified by flash-column (EtOAc / Petroleum ether = 0～50%) to give product 1_3 (9.0 g, 66.1%yield) . Exact mass calc. for C31H39N3O6Si : 577.26, found: 578.8, (M+H) +.

[0564] Step3: To a solution of compound 1_3 (9.0 g, 15.6 mmol, 1.0 eq) in MeOH (100mL) was added Pd / C (0.9 g) under N2 atmosphere. The mixture was degassed 3 times and purged with H2, then stirred for 16 h at r.t. The mixture was filtered through a Celite pad, the filtrate was concentrated to give crude product 1_4 (8.0 g, yield 93.8 %) . Exact mass calc. for C31H41N3O4Si: 547.29, found: 548.45, (M+H) +.

[0565] Step4: To a solution of compound 1_4 (8.0 g, 14.6 mmol, 1.0 eq) and Fmoc-Val-Cit (7.3 g, 14.6 mmol, 1.0 eq) in DCM (100mL) and MeOH (20mL) was added EEDQ (5.4 g, 21.9 mmol, 1.5eq) . The mixture was degassed 3 times and purged with N2, then stirred for 16 h at r.t.. The mixture was concentrated and purified by flash column (MeOH / DCM= 0%～10%) to give product 1_5 (3.6 g, 24.0 %yield) as white solid. Exact mass calc. for C57H71N7O9Si: 1025.51, found: 1026.5, (M+H) +.

[0566] Step5: To a solution of compound 1_5 (3.6 g, 3.5 mmol, 1.0 eq) in THF (40mL) was added HF-Py (1.0 mL, 7.0 mmol, 2.0eq, 1M in THF) under N2 atmosphere. The mixture was stirred for 2h at r.t. LCMS showed 1_5 was remained and another 1 mL of HF-Py was added. The mixture was stirred for 2h at r.t. LCMS showed 1_5 was consumed completely. The mixture was concentrated to remove THF and the residue was poured into ice-water (30mL) . The precipitate was collected by filtration and dried over vacuum to give product 1_6 (2.8 g, crude) as white solid. Exact mass calc. for C41H53N7O9: 787.39, found: 788.6, (M+H) +.

[0567] Step6: To a solution of compound 1_6 (2.8g, 3.5 mmol, 1.0 eq) in DMF (30mL) was added DIPEA (1.6mL, 7.0 mmol, 2.0eq) followed by Bis (4-nitrophenyl) carbonate (1.3 g, 4.2mmol, 1.2eq) . The mixture was stirred for 3h at r.t.. The mixture was poured into MTBE (200mL) . The precipitate was collected by filtration and dried over vacuum to give product 1_7 (2.2 g, 65%yield) as yellow solid. Exact mass calc. for C48H56N8O13: 952.40, found: 953.57, (M+H) +.

[0568] Step7: To a mixture of DX8951 (278.9 mg, 0.52mmol, 1.0eq) in DMF (5mL) was added DIPEA (1.1mL, 1.1mmol, 2.0eq) followed by 1_7 (500mg, 0.52mmol, 1.0eq) , the mixture was stirred for 16h at room temperature. LCMS showed 1_7 was consumed completely, DX8951 was remained and desired MS was detected. The mixture was poured into ice-water (50mL) , the precipitate was collected by filtration. The filter cake was washed with water and dried over vacuum. The crude product was purified by flash column (MeOH / DCM=0～10%) to give product (Compound 1_8, 370 mg, 56.5%yield) as brown solid.

[0569] Step8: To the mixture of 1_8 (370 mg, 0.30mmol, 1.0eq ) in DMF (3mL) was added pyrrolidine (1.5mL, 17.5mmol, 5eq) . The mixture was stirred for 0.5 h at room temperature. LCMS showed reaction was completed and desired MS was detected. The mixture was poured into MTBE (20mL) and the precipitate was collected by filtration. The filter cake was washed with MTBE (5mL) and dried over vacuum to give product 1 (300 mg, 98.6%yield) as yellow solid, which was used in next step directly without further purification. Exact mass calc. for C51H63FN10O12: 1026.46, found: 1027.7 (M+H) +.

[0570] Synthesis of LW042

[0571] Step1: To a mixture of D-gluconolactone (1.8g, 10.1mmol, 1.0eq, purchased from Adamas) and β-alanine t-butyl ester hydrochloride (1.8 g, 10.1mmol, 1.0eq, purchased from Bide pharma) in DMF (20mL) was added DBU (2.3mL, 15.2mmol, 1.5eq) . The mixture was stirred for 16hrs at room temperature. LCMS showed β-alanine t-butyl ester hydrochloride was consumed completely. The mixture was purified by RP-column (MeCN / water = 0～50%) to give product B (3.5 g, impure, DBU was remained) . The impure product was used in next step directly without further purification. Exact mass calc. for C13H25NO8: 323.16, found: 324.3, (M+H) +.

[0572] Step2: To a solution of compound B (3.5 g, 1.0 eq) in DCM (15.0 mL) was added TFA (5.0mL) . The mixture was stirred for 1 h at r.t. and was concentrated to give crude product, which was purified by RP-column (MeCN / water = 0～50%) and the eluent was lyophilized to give product C (1.5g, 55.5%yield of two steps) as white solid. Exact mass calc. for C9H17NO8: 267.10, found: 268.3, (M+H) +.

[0573] Step3: To a solution of compound 1 (105 mg, 0.1mmol, 1.0eq) and compound C (32.8 mg, 0.12 mmol, 1.2 eq) in DMF (1.0 mL) was added DIPEA (53.5 uL, 0.31mmol, 3.0eq) followed by HATU (13.3mg, 35.0umol, 1.2eq) at room temperature. The mixture was stirred for 1h at 0℃. The mixture was purified by RP-column (MeCN / water = 20%～90%) to give product compound 2 (100 mg, 76.6%yield) . Exact mass calc. for C60H78FN11O19: 1275.55, found: 1276.7, (M+H) +.

[0574] Step4: To a solution of compound 2 (100.0 mg, 78.4umol, 1.0eq) in DCM (1.0 mL) was added TFA (400uL) . The mixture was stirred for 1 h at r.t. LCMS showed compound 2 was consumed completely. The mixture was concentrated to give crude product 3 (90.0 mg, crude) , which was used in next step directly, without further purification. Exact mass calc. for C55H70FN11O17: 1175.49, found: 1176.7, (M+H) +.

[0575] Step5: To a solution of compound 3 (90.0 mg, 76.5 umol, 1.0 eq) in DMF (1.0 mL) was added DIPEA (40.0 uL, 0.23mmol, 3.0eq) followed by Mal-PEG4-NHS ester (37.2 mg, 84.2 umol, 1.1eq) . The mixture was stirred for 1 h at r.t.. Then the mixture was purified by prep-HPLC (MeCN / water = 10～95%) to give product LW042 (35.0 mg, 30.4%yield) . Exact mass calc. for C70H91FN12O24: 1502.63, found: 1503.8, (M+H) +; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.10 (s, 1H) , 8.16 (d, J = 7.4 Hz, 1H) , 8.05 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.96 -7.86 (m, 2H) , 7.78 (d, J = 10.8 Hz, 1H) , 7.70 (dt, J = 13.0, 4.9 Hz, 3H) , 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 7.01 (s, 2H) , 5.99 (s, 1H) , 5.44 (s, 2H) , 5.29 (d, J = 7.6 Hz, 3H) , 5.21 (s, 2H) , 4.39 (q, J = 7.3 Hz, 1H) , 4.21 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 3.97 (d, J = 3.6 Hz, 1H) , 3.91 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 3.67 -3.52 (m, 14H) , 3.52 -3.45 (m, 13H) , 3.40 -3.07 (m, 14H) , 2.98 (d, J = 17.8 Hz, 2H) , 2.38 (s, 4H) , 2.29 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 2.19 (s, 1H) , 1.90 (ddd, J = 31.3, 14.8, 7.0 Hz, 3H) , 1.71 -1.53 (m, 2H) , 1.43 (s, 2H) , 0.85 (dd, J =12.9, 6.9 Hz, 9H) .

[0576] Example 2.13 Synthesis of LW046

[0577] Step1: To a solution of compound 1 (266 mg, 1 mmol) and Pyridine (0.097 mL, 1.2 mmol) in THF (4 mL) and 1, 2-Dimethylbenzene (12 mL) was added Pb (OAc) 4 (532 mg, 1.2 mmol) at 25 ℃ and the mixture was stirred at 80 ℃ for 12 hrs. LC-MS showed compound 1 was consumed completely. The reaction mixture was cooled to RT, filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by SGC (Petroleum ether / Ethyl acetate = 10 / 1 to 1 / 1) . Compound 2 (146 mg, 0.52 mmol, 52%yield) was obtained as a light yellow solid. Exact mass calc. for C13H16N2O5: 280.11, found: 281.26, (M+H) +.

[0578] Step2: To a solution of compound 3 (Talazoparib, 38 mg, 0.1 mmol) and compound 2 (42 mg, 0.15 mmol) in DMF (8 mL) was added Cs2CO3 (49 mg, 0.15 mmol) and the mixture was stirred at 25 ℃ for 3 hrs. LC-MS showed compound 3 was consumed completely and two peaks with desired MS. The reaction mixture was purified by RP-column (MeCN / water (0.1%TFA) =20%～90%) to give compound 4 (46 mg, 0.076 mmol, 76%yield) and 4a (4 mg) . Exact mass calc. for C30H26F2N8O4: 600.20, found: 601.36, (M+H) +.

[0579] 4: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (t, J = 6.2 Hz, 1H) , 7.77 (d, J = 10.6 Hz, 2H) , 7.52 (dd, J = 8.5, 5.5 Hz, 2H) , 7.41 –7.22 (m, 6H) , 7.16 (t, J = 8.7 Hz, 2H) , 7.10 (dd, J = 8.9, 2.4 Hz, 1H) , 6.92 (dd, J = 11.1, 2.4 Hz, 1H) , 5.30 (dd, J = 12.8, 5.8 Hz, 1H) , 5.18 (dd, J = 12.8, 6.6 Hz, 1H) , 5.08 (d, J = 10.8 Hz, 1H) , 5.02 (d, J = 5.4 Hz, 3H) , 3.75 (s, 3H) , 3.57 (d, J = 6.1 Hz, 2H) .

[0580] 4a: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.69 (t, J = 6.2 Hz, 1H) , 7.71 (s, 1H) , 7.63 (s, 1H) , 7.44 –7.29 (m, 6H) , 7.22 –7.08 (m, 5H) , 6.95 (dd, J = 11.3, 2.5 Hz, 1H) , 5.42 (dd, J = 12.8, 5.5 Hz, 1H) , 5.29 (dd, J = 12.8, 6.8 Hz, 1H) , 5.09 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 5.01 (s, 2H) , 4.79 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 3.62 (d, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.97 (s, 3H) . Step3:

[0581] Compound 4 (46 mg, 0.076 mmol) was dissolved in MeOH (10 mL) and 10%Pt / C (5 mg) was introduced. The mixture was stirred for 1 hour under hydrogen atmosphere. The solution was filtered and concentrated under reduce pressure. Compound 5 (32 mg, 0.07 mmol, 91%yield) was obtained. Exact mass calc. for C22H20F2N8O2: 466.17, found: 467.32, (M+H) +.

[0582] Step4: Compound 5 (32 mg, 0.07 mmol) and compound 6 (is commercially available from Bide Pharmatech Co., Ltd. 33 mg, 0.07) was dissolved in DMF (5 mL) . HATU (27 mg, 0.07 mmol) and DIPEA (0.024 mL, 0.14 mmol) was introduced. The mixture was stirred for 1 hour at 25 ℃. The mixture was purified by RP-column (MeCN / water (0.1%TFA) = 20%～90%) to give compound LW046 (53 mg, 0.06 mmol, 83%yield) . Exact mass calc. for C45H46F2N12O8: 920.35, found: 921.55, (M+H) +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.56 (t, J = 6.2 Hz, 1H) , 8.20 (t, J = 5.7 Hz, 1H) , 8.13 –8.02 (m, 2H) , 7.98 (t, J = 5.7 Hz, 1H) , 7.79 (s, 1H) , 7.76 (s, 1H) , 7.52 (dd, J = 8.6, 5.5 Hz, 2H) , 7.24 (d, J = 6.5 Hz, 4H) , 7.19 –7.07 (m, 4H) , 6.99 (s, 2H) , 6.92 (dd, J = 11.2, 2.5 Hz, 1H) , 5.30 (dd, J = 12.8, 5.9 Hz, 1H) , 5.18 (dd, J = 12.8, 6.5 Hz, 1H) , 5.12 –4.98 (m, 2H) , 4.57-4.46 (m, 1H) , 3.70 –3.55 (m, 9H) , 3.36 (t, J = 7.1 Hz, 2H) , 3.02 (dd, J =13.8, 4.4 Hz, 1H) , 2.76 (dd, J = 14.0, 9.9 Hz, 1H) , 2.09 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 1.52-1.42 (m, 4H) , 1.24-1.14 (m, 2H) .

[0583] Example 3. Synthesis of ADCs

[0584] DAR value assay

[0585] The DAR value is tested by MMAE test through HIC-HPLC or LC-MS.

[0586] SEC assay

[0587] The ADCs monomeric purity is analyzed using SEC-HPLC (Agilent1200) with a BioCore SEC-300 column (5μm, 7.8×300mm) (commercially available from NanoChrom) at a flow rate of 0.75 mL / min at 30 ℃. Mobile phase is 0.25 M KCl and 20 mM potassium phosphate pH 7.

[0588] General procedure A: Preparation of ADC with D1

[0589] (1) ZnCl2 (0.51 mM, 30eq) and reductant TCEPNO (0.017mM, 1.0eq, obtained used the procedure described in WO2024041541A1) were added to a solution of a monoclonal antibody (0.017 mM, 1eq. ) in BES buffer (pH7.0, 20 mM) and the reaction mixture was allowed to stay at 4 ℃ for 1h;

[0590] (2) EDTA-2Na (1.36 mM, 80eq. ) and the linker-payload (0.03 mM, 1.8eq. ) in DMA was introduced and the reaction was continued at room temperature for 1h;

[0591] (3) Purifying ADC from step (2) using ultrafiltration tube (a) , UF-DF (b) or chromatography (c) to give ADC with D1.

[0592] ADCs listed in the table below were prepared from general procedure A and the specific linker-payload, monoclonal antibody and DAR value are listed in the table below, wherein, the monoclonal antibody Farletuzumab Mut 05 is provided by HOEKBIO, and the amino acid sequences of the Farletuzumab Mut 05 are shown in the table below.

[0593] General procedure B: Preparation of ADC with D6

[0594] (1) ZnCl2 (0.99 mM, 30eq. ) and reductant TCEP (0.112 mM, 3.4eq. ) were added to a solution of a monoclonal antibody (0.033 mM, 1eq. ) in BES buffer (pH7.0, 20 mM) and the reaction mixture was allowed to stay at 25 ℃ for 1h;

[0595] (2) EDTA-2Na (2.64 mM, 80eq. ) and the linker-payload (0.26 mM, 8eq. ) in DMA was introduced and the reaction was continued at room temperature for 1h;

[0596] (3) Purifying ADC from step (2) using ultrafiltration tube (a) , UF-DF (b) or chromatography (c) to give ADC with D6.

[0597] ADCs listed in the table below were prepared from general procedure B and the specific linker-payload, monoclonal antibody and DAR value are listed in the table below, wherein, the monoclonal antibody Farletuzumab Mut 05 and Farletuzumab Mut 13 is provided by HOEKBIO, and the amino acid sequences are shown in the table below.

[0598] General procedure C-1: Preparation of ADC with D6+D2

[0599] (1) The ADC with D6 (0.017 mM, 1eq. ) from General procedure B in BES buffer (pH7.0, 20mM) and the second reductant THPP (0.077 mM, 4.5eq. ) were incubating at 37℃ for 1 h;

[0600] (2) After IPC, excess reductant was removed by desalting column. A second linker-payload (0.068 mM, 4eq. ) in DMA was added. The reaction was continued at room temperature for 0.5hr.

[0601] (3) Purifying the resultant product using an ultrafiltration column to give ADC with D6+D1.

[0602] The DAR value of the dual payload ADC is calculated by assuming that all the disulfide bonds have been reduced, the DAR value of the first linker-payload is calculated, and the remainder is taken by the second linker-payload.

[0603] General procedure C-2: Preparation of ADC with D6+D1

[0604] (1) The ADC with D6 (0.033 mM, 1eq) from General procedure B and the second reductant THPP (0.26 mM, 8eq. ) were incubating at 37 for 1h;

[0605] (2) ZnCl2 (0.33 mM, 10eq. ) was added to the reaction mixture before purified by a desalting column to remove the excess reductant THPP. EDTA-2Na (0.99 mM, 30eq. ) and a second linker-paylaod was added. The reaction was continued at room temperature for 1hr.

[0606] (3) Purifying the resultant product using a desalting column or UF-DF to give ADC with D6+D1.

[0607] The DAR value of the dual payload ADC is calculated by assuming that all the disulfide bonds have been reduced, the DAR value of the first linker-payload is calculated, and the remainder is taken by the second linker-paylaod.

[0608] General procedure D: Preparation of ADC with D4

[0609] (1) ZnCl2 (0.51 mM, 30eq. ) and reductant TCEP (0.042 mM, 2.5eq) were added to a solution of monoclonal antibody (0.017 mM, 1eq. ) in BES buffer (pH7.0, 20 mM) and the reaction mixture was allowed to stay at 4 ℃ for 1h;

[0610] (2) EDTA-2Na (1.36 mM, 80eq. ) and the linker-payload (0.102 mM, 6eq. ) in DMA was introduced and the reaction was continued at room temperature for 1h;

[0611] (3) Purifying ADC from step (2) using ultrafiltration tube (a) , UF-DF (b) or chromatography (c) to give ADC with D4.

[0612] ADC listed in the table below were prepared from general procedure D and the specific linker-payload, monoclonal antibody and DAR value are listed in the table below, wherein, the monoclonal antibody Farletuzumab Mut 20, Farletuzumab Mut 24 and Farletuzumab Mut 38 are provided by HOEKBIO, and the amino acid sequences are shown in the table below.

[0613] General procedure E: Preparation of ADC with D4+D4

[0614] (1) The ADC with D4 (0.033 mM, 1eq) from General procedure D and the second reductant THPP (0.26 mM, 8eq. ) were incubating at 37 for 1h;

[0615] (2) A second linker-payload (0.363 mM, 11eq. ) was added and the reaction was continued at room temperature for 1h.

[0616] (3) Purifying the resultant product using a desalting column or UF-DF to give ADC with D4+D4.

[0617] General procedure F-1: Preparation of ADC with D4+D1

[0618] (1) The ADC with D4 (0.033 mM, 1eq. ) from General procedure D and the second reductant THPP (0.099 mM, 3eq) were incubating at 25℃ for 18 h;

[0619] (2) A second linker-payload (0.099 mM, 3eq) was added. The reaction was continued at room temperature for 1hr.

[0620] (3) Purifying the resultant product using a desalting column or UF-DF to give ADC with D4+D1.

[0621] The DAR value of the dual payload ADC is calculated by assuming that all the disulfide bonds have been reduced, the DAR value of the first linker-payload is calculated, and the remainder is taken by the second linker-payload.

[0622] General procedure F-2: Preparation of ADC with D4+D2

[0623] (1) The ADC with D4 (0.033 mM, 1eq. ) from General procedure D and the second reductant THPP (0.099 mM, 3eq) were incubating at 25℃ for 18 h;

[0624] (2) A second linker-payload (0.165 mM, 5eq) was added. The reaction was continued at room temperature for 1hr.

[0625] (3) Purifying the resultant product using a desalting column or UF-DF to give ADC with D4+D2.

[0626] The DAR value of the dual payload ADC is calculated by assuming that all the disulfide bonds have been reduced, the DAR value of the first linker-payload is calculated, and the remainder is taken by the second linker-payload.

[0627] General procedure G: Preparation of ADC with D2

[0628] (1) ZnCl2 (0.51 mM, 30eq) and reductant TCEPNO (0.017mM, 1.0eq, obtained used the procedure described in WO2024041541A1) were added to a solution of a monoclonal antibody (0.017 mM, 1eq. ) in BES buffer (pH7.0, 20 mM) and the reaction mixture was allowed to stay at 4 ℃ for 1h;

[0629] (2) EDTA-2Na (1.36 mM, 80eq. ) and the linker-payload (0.07 mM, 4eq. ) in DMA was introduced and the reaction was continued at room temperature for 1h;

[0630] (3) Purifying ADC from step (2) using ultrafiltration tube (a) , UF-DF (b) or chromatography (c) to give ADC with D1.

[0631] ADC listed in the table below were prepared from general procedure G and the specific linker-payload, monoclonal antibody and DAR value are listed in the table below, wherein, the monoclonal antibody Farletuzumab Mut 05 is provided by HOEKBIO, and the amino acid sequences of the Farletuzumab Mut 05 are shown in the table below.

[0632] Example 3. I: Preparation of ADCs (P1 is the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor and P2 is MTA)

[0633] Example 3. I-1-1: Preparation of ADC I-1-1 (Farletuzumab Mut 13- [LW023] 6 [LW016] 1; BP04-AB005-AC020-AD0607)

[0634] The ADC I-1-1 was prepared from general procedure C-2, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut 13- [LW023] 6, and the second linker-payload in step 2 is LW016. In the ADC I-1-1, the DAR of LW023 is 6 and the DAR of LW016 is 1.

[0635] Example 3. I-2-1: Preparation of ADC I-2-1 (Farletuzumab Mut 13- [LW030] 6 [LW016] 1, BP04-AB005-AC021-AD0607)

[0636] The ADC I-2-1 was prepared from general procedure C-2, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut 13- [LW030] 6, and the second linker-payload in step 2 is LW016. In the ADC I-2-1, the DAR of LW030 is 6 and the DAR of LW016 is 1.

[0637] Example 3. I-3-1: Preparation of ADC I-3-1 (Farletuzumab Mut 13- [LW023] 6 [MC-VC-PAB-MMAE] 2; BP04-AB005-AC024)

[0638] The ADC I-3-1 was prepared from general procedure C-1, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut 13- [LW023] 6 (BP04-AB005-AC018) , and the second linker-payload in step 2 is MC-VC-PAB-MMAE. In the ADC I-3-1, the DAR of LW023 is 6.00 and the DAR of MC-VC-PAB-MMAE is 2.00. Figure 36A shows chromatograms of HIC-HPLC, and figure 36B shows chromatograms of SEC.

[0639] Example 3. I-3-2: Preparation of ADC I-3-2 (Farletuzumab Mut 24- [LW023] 4 [MC-VC-PAB-MMAE] 2; BP04-AB007-AC003)

[0640] The ADC I-3-2 was prepared from general procedure F-2, wherein, the ADC with D4 in step 1 is Farletuzumab Mut 24- [LW023] 4 (BP04-AB007-AC001) , and the second linker-payload in step 2 is MC-VC-PAB-MMAE. In the ADC I-3-2, The DAR of LW023 is 4.15 and the DAR of MC-VC-PAB-MMAE is 1.93. Figure 37A shows chromatograms of HIC-HPLC, and figure 37B shows chromatograms of SEC.

[0641] Example 3. I-4-1: Preparation of ADC I-4-1 (Farletuzumab Mut 24- [LW023] 4 [LW033] 1; BP04-AB007-AC002)

[0642] The ADC I-4-1 was prepared from general procedure F-1, wherein, the ADC with D4 in step 1 is (Farletuzumab Mut 24- [LW023] 4 (BP04-AB007-AC001) , and the second linker-payload in step 2 is LW033. In the ADC I-4-1, the DAR of LW023 is 4.15 and the DAR of LW033 is 0.97. Figure 38A shows chromatograms of HIC-HPLC, and figure 38B shows chromatograms of SEC.

[0643] Example 3. I-5-1: Preparation of ADC I-5-1 (Farletuzumab Mut13- [LW030] 6 [MC-VC-PAB-MMAE] 2; BP04-AB005-AC025)

[0644] The ADC I-5-1 was prepared from general procedure C-1, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut13- [LW030] 4 (BP04-AB005-AC019) , and the second linker-payload in step 2 is MC-VC-PAB-MMAE. In the ADC I-5-1, the DAR of LW030 is 6.13 and the DAR of MC-VC-PAB-MMAE is 1.87. Figure 39A shows chromatograms of HIC-HPLC, and figure 39B shows chromatograms of SEC.

[0645] Example 3. II: Preparation of ADCs (P1 is the ATR inhibitor and P2 is MTA)

[0646] Example 3. II-1-1: Preparation of ADC II-1-1 (Farletuzumab Mut 13- [LW025] 6 [LW016] 1; BP04-AB005-AC012-AD0523)

[0647] The ADC II-1-1 was prepared from general procedure C-2, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut 13- [LW025] 6, and the second linker-payload in step 2 is LW016. In the ADC II-1-1, the DAR of LW025 is 6.26 and the DAR of LW016 is 0.87.

[0648] Example 3. III: Preparation of ADCs (P1 is the topoisomerase inhibitor and P2 is MTA)

[0649] Example 3. III-1-1: Preparation of ADC III-1-1 (Farletuzumab Mut 13- [LW026] 6 [LW016] 1; BP04-AB005-AC016-AD0529)

[0650] The ADC III-1-1 was prepared from general procedure C-2, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut 13- [LW026] 6, and the second linker-payload in step 2 is LW016. In the ADC III-1-1, the DAR of LW026 is 5.89 and the DAR of LW016 is 1.06.

[0651] Example 3. III-2-1: Preparation of ADC III-3-1 (Farletuzumab Mut 13- [MC-GGFG-DXd] 6 [LW016] 1; BP04-AB005-AC017-AD0529)

[0652] The ADC III-3-1 was prepared from general procedure C-2, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut 13- [MC-GGFG-DXd] 6, and the second linker-payload in step 2 is LW016. In the ADC III-3-1, the DAR of LW026 is 6.23 and the DAR of LW016 is 0.89.

[0653] Example 3. III-3-1: Preparation of ADC III-6-1 (Farletuzumab Mut 13- [LW026] 6 [LW033] 1; BP04-AB005-AC032)

[0654] The ADC III-6-1 was prepared from general procedure C-2, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut 13- [LW026] 6 (BP04-AB005-AC029) , and the second linker-payload in step 2 is LW033. In the ADC III-6-1, the DAR of LW026 is 6.04 and the DAR of LW016 is 0.93. Figure 40A shows chromatograms of HIC-HPLC, and figure 40B shows chromatograms of SEC.

[0655] Example 3. III-4-1: Preparation of ADC III-8-1 (Farletuzumab Mut 38- [LW042] 4 [MC-VC-PAB-MMAE] 2; BP04-AB010-AC004)

[0656] The ADC III-8-1 was prepared from general procedure F-2, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut 38- [LW026] 6 (BP04-AB010-AC001) , and the second linker-payload in step 2 is MC-VC-PAB-MMAE. In the ADC III-8-1, the DAR of LW026 is 3.96 and the DAR of MC-VC-PAB-MMAE is 2.04. Figure 41A shows chromatograms of HIC-HPLC, and figure 41B shows chromatograms of SEC.

[0657] Example 3. III-5-1: Preparation of ADC III-7-1 (Farletuzumab Mut 05- [LW042] 6 [LW033] 1; 20250625-CH576)

[0658] The ADC III-7-1 was prepared from general procedure C-2, wherein, the ADC with D6 in step 1 is Farletuzumab Mut 05- [LW042] 6 (20250610-CH569) , and the second linker-payload in step 2 is LW033. In the ADC III-7-1, the DAR of LW042 is 6.17 and the DAR of LW033 is 0.92. Figure 42A shows chromatograms of HIC-HPLC, and figure 42B shows chromatograms of SEC.

[0659] Example 3. III-5-2: Preparation of ADC III-7-2 (Farletuzumab Mut 38- [LW042] 4 [LW033] 1; 20250625-CH570)

[0660] The ADC III-7-2 was prepared from general procedure F-1, wherein, the ADC with D4 in step 1 is Farletuzumab Mut 38- [LW042] 4 (20250610-CH568) , and the second linker-payload in step 2 is LW033. In the ADC III-7-1, the DAR of LW042 is 4.17 and the DAR of LW033 is 0.92. Figure 43A shows chromatograms of HIC-HPLC, and figure 44B shows chromatograms of SEC.

[0661] Example 3. IV: Preparation of ADCs (P1 is the topoisomerase inhibitor and P2 is ATR inhibitor)

[0662] Example 3. IV-1-1: Preparation of ADC IV-1-1 (Farletuzumab Mut 20- [LW031] 4 [LW029] 4, BP04-AB006-AC003)

[0663] The ADC IV-1-1 was prepared from general procedure E, wherein, the ADC with D4 in step 1 is Farletuzumab Mut 20- [LW031] 4 (BP04-AB006-AC002) , and the second linker-payload in step 2 is LW029. In the ADC IV-1-1, the DAR of LW031 is 4.02 and the DAR of LW029 is 3.98. Figure 44A shows chromatograms of HIC-HPLC, and figure 44B shows chromatograms of SEC.

[0664] Example 4. In vitro cytotoxicity of the ADCs in the present disclosure in cancer cell lines

[0665] The cytotoxicity in vitro of the ADCs were tested on OVCAR3 ovarian cancer cells (in table 1, table 2-1～2-6, and table 2-9, OVCAR3 ovarian cancer cells granted by Dr. Min Hong) and IGROV-1 ovarian cancer cell line. The cytotoxicity in vitro of the ADC in table 2-7 ～ 2-8 and table 2-10～2-11 was tested in ClinBridge Biotech Co. Ltd. In the cytotoxicity in vitro of the ADCs on IGROV-1 ovarian cancer cell line, Mirvetuximab Soravtansine (IMGN-853, home made according to the method reported in US20130295119A1) is positive control.

[0666] Re-suspend cells with proper medium (RPMI-1640 (22400-089, GIBCO) ) and adjust cell density to recommended information (3000cell / well) . Add 90 μL-100 μL cell suspension medium to each well of assay plate. Incubate cells at 37℃, 5%CO2, 95%air and 100%relative humidity overnight.

[0667] Preparation of compound stock plate (10X stock plates) : Serially dilute the stock solution from highest concentration down to lowest in medium according to plate map. Diluted stock to 1X with proper medium. Add the ADCs (1000nM, 250nM, 62.5nM, 15.6nM, 3.9nM, 1.0nM, 0.24nM, 0.06nM, 0.015nM) to each well as plate map. Incubate the assay plate in incubator for 4, 5 or 7 days.

[0668] Equlibrate assay plate and CCK8 assay (C005, TargetMol) or CellTiter-Glo Assay (G7573, Promega) to room temperature for nearly 30 minutes. Add 15 μL CCK8 or 50 μL CellTiter-Glo Assay reagent to each well. Skake and incubate the plate at room temperature for 10 minutes to 4 h before signal reading. Detect the plate using absorbance or luminescence.

[0669] Data analysis:

[0670] Inhibition rate (IR) of the tested ADCs was determined by the following formula: IR (%) = [1- (PC-Blank)  /  (NC-Blank) ] *100%, wherein, the PC hole: adding the ADCs, the medium and the cells; the NC hole: adding the medium and the cells; and the Blank hole: adding the medium. The data were interpreted by GraphPad Prism.

[0671] The combination index CI was calculated by chou-talatay, specifically, by the following formula: CI = AbIC50 (ADC with dual linker-payloads)  / AbIC50 (ADC with single linker payload 1) + AbIC50 (ADC with dual linker-payloads)  / AbIC50 (ADC with single linker-payload 2) . CI<0.5: Strong synergization; CI>1: Antagonization. AbIC50 refers to Absolute half maximal inhibitory concentration.

[0672] Table 1. IC50 in OVCAR3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve.

[0673] Table 2-1 IC50 in OVCAR-3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve.

[0674] Table 2-2 IC50 in OVCAR-3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve.

[0675] Table 2-3 IC50 in OVCAR-3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve.

[0676] Table 2-4 IC50 in OVCAR-3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve.

[0677] Table 2-5 IC50 in OVCAR-3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve.

[0678] Table 2-6 IC50 in OVCAR-3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve.

[0679] Table 2-7 IC50 in OVCAR-3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve.

[0680] Table 2-8 IC50 in OVCAR-3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve.

[0681] Table 2-9 IC50 in OVCAR-3 of ADCs / *: IC50 cannot be calculated by the killing curve. / **CI cannot be calculated due to the killing curve of top inhibition is less than 50%in Farletuzumab Mut  20- [LW031] 4.

[0682] Table 2-10 IC50 in IGROV-1 of ADCs

[0683] Table 2-11 IC50 in IGROV-1 of ADCs

[0684] As the result in Table 1, table 2-1～table 2-9 and the cell killing assay curve in Figures 1 to Figure 5, Figure 9 to Figure 17, Figure 45, Figure 46 and Figure 47, all the ADCs with dual linker-payloads exhibited relatively strong synergy in compared with their corresponding ADCs with single linker-payloads, wherein, Farletuzumab Mut 05- [LW042] 6 [LW033] 1 and Farletuzumab Mut 38- [LW042] 4 [LW033] 1 exhibit superior in vitro efficacy compared to the benchmark IMGN853.

[0685] Example 5: Activity of the ADCs in vivo of the present disclosure

[0686] The cytotoxicity in vivo of the ADCs were tested on OVCAR-3 CDX model (operated in ClinBridge Biotech Co. Ltd. ) .

[0687] The OVCAR-3 cell culture methods correspond with those used in in vitro experiments. Female C-NKG mice (n=112; age: 6-8 weeks; weight: 18-22 g) were procured from Cyagen Biosciences Inc. (Suzhou facility) . All animals were housed in SPF conditions with a 12h light / dark cycle.

[0688] Each mouse will be inoculated subcutaneously at the right upper flank with OVCAR-3 tumor cells (1×107 / mouse) in 0.2 mL of blank medium for tumor development. Take special care to ensure subcutaneous delivery of cells by lifting up the fold of skin with one hand and injection of cells with the other. During implantation, use new syringe and needle for every mouse to minimize tumor ulceration. Carefully wipe off any droplets on the skin with a Kim Wipe after injection to further minimize chance for tumor ulceration. The animals will be randomized and treatment will be started when the average tumor volume reaches approximately ～140 mm3 (CV < 0.3) for efficacy study. The test article administration and the animal numbers in each group are shown in the following experimental design table 3.

[0689] Data analysis: TGITV = [1 - (ΔT  / ΔC) ] × 100%

[0690] Where:

[0691] ΔT represents the change in tumor volume in the treated group during a specific period.

[0692] ΔC represents the change in tumor volume in the vehicle group during the same period.

[0693] Table 3 Experimental design table Na: number of animals per group.

[0694] Table 4-1 Tumor growth inhibition in OVCAR-3 CDX of ADCs

[0695] Tumor volumn (mm3) b: Average tumor volumn±SEM.

[0696] Pc: For comparison between two groups, an independent sample t-test will be used. For comparison among three or more groups, a one-way ANOVA will be performed. Data will be presented by MS Excel and analyzed by GraphPad Prism 6.0. Survival data will be analyzed via Log-rank (Mantel-Cox) test in GraphPad Prism. (*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001) , p< 0.05 is considered to be statistically significant.

[0697] Table 4-2 Tumor growth inhibition in OVCAR-3 CDX of ADCs

[0698] Table 4-2 (continued) “\” : TGI and p-value could not be calculated beyond Day 56 as the Vehicle group and BP04-AB003-AC019 (Farletuzumab  Mut 05- [LW033] 1) was terminated on that day.

[0699] Table 4-3 Tumor growth inhibition in OVCAR-3 CDX of ADCs

[0700] Table 4-4 Tumor growth inhibition in OVCAR-3 CDX of ADCs

[0701] As the result in Table 4-1, the tumor volume-time curve in Figures 18 to Figure 19, compare with the corresponding ADCs containing single linker-payloads, the TGITV %of Farletuzumab Mut 13- [LW026] 6 [LW033] 1 increased at different dose. According to Table 4-2～4-4, Figure 20, and Figures 48-50, Farletuzumab Mut 05- [LW042] 6 [LW033] 1 and Farletuzumab Mut 38-[LW042] 4 [LW033] 1 showed great inhibitory activity against OVCAR-3 in vivo and they surpass the benchmark IMGN853 in their tumor-suppressing efficacy. Further, according to table 4-2 and figure 20, compare with the corresponding ADCs containing single linker-payloads, Farletuzumab Mut 05- [LW042] 6 [LW033] 1 exerted prolonged tumor suppression.

[0702] In conclusion, considering the confirmed efficacy in vivo and in vitro, as well as the synergistic effects, the present disclosure discloses here a variety of unique and effective approaches from the perspective of dual-payload ADC drug design, which combines the use of the TOP inhibitors and the MTA, the TOP inhibitors and the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor, the TOP inhibitors and the ATR inhibitor, the MTA and the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor, and the MTA and ATR inhibitor.

[0703] Example 6: The affinity test of the ADCs of the present disclosure

[0704] The affinity is determined using bilayer interferometry (Octet RED96e) , and the experiment is conducted by the testing and analysis center of ARCO Biotechnology Co., Ltd.

[0705] Table 5 The results of the affinity of ADCs

[0706] As show in the table 5, both Farletuzumab-mut 05- [LW042] 6 [LW033] 1 and Farletuzumab-mut 38- [LW042] 4 [LW033] 1 exhibit moderate affinity for the recombinant human FOLR1 protein (ARCO, Cat. No. FO1-H52H1) , with KD values of 9.02E-08 and 9.28E-08, respectively.

[0707] Example 7: The binding test of the ADCs of the present disclosure

[0708] The binding experiment was conducted by ClinBridge Biotech Co., Ltd. The binding efficiencies of ADC III-7-1, ADC III-7-2, and the corresponding naked antibody Farletuzumab mut38 to IGROV-1 cells were tested respectively. The test samples were serially diluted 4-fold from a starting concentration of 400 nM, generating an 8-point concentration gradient. Cells were first adjusted to a density of 4×106 cells / mL and seeded into a 24-well plate. Subsequently, the unlabeled test samples were added and incubated with the cells at 4℃ for 1 hour. A fluorescently-labeled secondary antibody was then added, followed by incubation at 4℃ for 30 minutes in the dark. After washing, 10,000 cells per sample were collected by flow cytometry. The mean fluorescence intensity (MFI) and the half-maximal effective concentration (EC50) were determined. The results are presented in the table below.

[0709] Table 6 The results of the binding of ADCs in IGROV-1

[0710] As the results in the table 6 and Figure 51, both ADC III-7-1 (Farletuzumab- [LW042] 6 [LW033] 1) and ADC III-7-2 (Farletuzumab- [LW042] 4 [LW033] 1) exhibit strong binding abilities for FOLR1 positive cells IGROV-1, with EC50 values of 1.449 nM and 1.378 nM, respectively, which are close to that of the naked antibody Farletuzumab mut38.

[0711] Example 8: The endocytosis test of the ADCs of the present disclosure

[0712] The endocytosis experiment was conducted by ClinBridge Biotech Co., Ltd. The internalization efficiencies of ADC III-7-1, ADC III-7-2, and the isotype control KLH (expressed and purified from HOEKBIO) were tested in IGROV-1 cells. Each test article was labeled with pHrodoTM iFL GREEN STP ester, an amine-reactive dye (Invitrogen, Cat. No. P36013) , and then incubated with cells at a density of 5×105 cells per well. The incubation concentration was 90 nM.Samples were collected at different time points for analysis. A flow cytometer was used to detect 10,000 cells per sample, with the mean fluorescence intensity (MFI) as the detection indicator. The results are shown in the table below.

[0713] Table 7 The results of the endocytosis of ADCs in IGROV-1

[0714] As the results in the table 7 and Figure 52, both ADC III-7-1 (Farletuzumab- [LW042] 6 [LW033] 1) and ADC III-7-2 (Farletuzumab- [LW042] 4 [LW033] 1) can be efficiently internalized into IGROV-1 cells, unlike the isotype antibody KLH.

[0715] Example 9: Stability of plasma

[0716] The stability test of plasma was conducted at Shanghai Niyan Biotechnology Co., Ltd. The test samples were ADC III-7-1 (Farletuzumab-mut05- [LW042] 6 [LW033] 1) and ADC III-7-2 (Farletuzumab-mut38- [LW042] 4 [LW033] 1) .

[0717] 100ug / ml ADC samples were incubated in human plasma, mouse plasma or monkey plasma at 37℃. Samples were taken at 0, 1, 3, 5, and 7 days respectively. The concentrations of free payload (DX8951 and Eribulin) were detected by LC-MS, and the proportion of free small molecules was calculated, wherein, BQL means below the quantification limit. The results are as follows:

[0718] Table 8-1 The results of the stability of human plasma of ADCs

[0719] Table 8-2 The results of the stability of mouse plasma of ADCs

[0720] Table 8-3 The results of the stability of monkey plasma of ADCs

[0721] Since most of the data falls below the detection limit, it cannot be graphed. The stability incubation test results demonstrate that the small molecular toxins linked by ADC III 7-1 and ADC III 7-2 are both highly stable, with detachment rates for both toxins remaining below 2%over a 7-day period. The results shows that the ADCs in the present disclosure demonstrates excellent safety.

[0722] Example 10: the homogeneity assay of the ADCs with the antibody mutant

[0723] Example 10.1: Preparation of Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 conjugate (the ADC with D2) with the transition metal ions

[0724] (1) ZnCl2 (0.51 mM, 30eq. ) and TCEP (0.024mM, 1.4eq) were added to a solution of a monoclonal antibody Farletuzumab Mut 15 (0.017 mM, 1eq. ) in BES buffer (pH7.0, 20 mM) and the reaction mixture was allowed to stay at 4 ℃ for 1h;

[0725] (2) EDTA-2Na (1.36 mM, 80eq. ) and MC-VC-PAB-MMAE (0.153 mM, 9eq. ) in DMA were introduced and the reaction was continued at room temperature for 1h;

[0726] (3) Purifying ADC from step (2) using an ultrafiltration tube to give Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 2.

[0727] Farletuzumab Mut 15 is provided by HOEKBIO, and a heavy chain is the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 85 and a light chain is the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 86.

[0728] Example 10.2: Preparation of Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 conjugate (the ADC with D2) without the transition metal ions

[0729] The method of example 10.2 is the same as example 10.1, and the difference is that there is not ZnCl2 in step 1 in example 10.2.

[0730] Example 10.3: Preparation of Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 conjugate (the ADC with D2) with the transition metal ions

[0731] (1) ZnCl2 (0.51 mM, 30eq. ) and TCEP (0.027mM, 1.6eq) were added to a solution of a monoclonal antibody Farletuzumab Mut 16 (0.017 mM, 1eq. ) in BES buffer (pH7.0, 20 mM) and the reaction mixture was allowed to stay at 4 ℃ for 1h;

[0732] (2) EDTA-2Na (1.36 mM, 80eq. ) and MC-VC-PAB-MMAE (0.153 mM, 9eq. ) in DMA introduced and the reaction was continued at room temperature for 1h;

[0733] (3) Purifying ADC from step (2) using an ultrafiltration tube to give Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 2.

[0734] Farletuzumab Mut 16 is provided by HOEKBIO, and a heavy chain is the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 87 and a light chain is the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 89.

[0735] Example 10.4: Preparation of Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 2 conjugate (the ADC with D2) without the transition metal ions

[0736] The method of example 10.4 is the same as example 10.3, and the difference is that there is not ZnCl2 in step 1 in example10.4.

[0737] Example 10.5: Preparation of Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 4 conjugate (the ADC with D4) with the transition metal ions

[0738] (1) ZnCl2 (0.51 mM, 30eq. ) and TCEP (0.068mM, 4.0eq) were added to a solution of a monoclonal antibody Farletuzumab Mut 15 (0.017 mM, 1eq. ) in BES buffer (pH7.0, 20 mM) and the reaction mixture was allowed to stay at 4 ℃ for 1h;

[0739] (2) EDTA-2Na (1.36 mM, 80eq. ) and MC-VC-PAB-MMAE (0.153 mM, 9eq. ) in DMA were introduced and the reaction was continued at room temperature for 1h;

[0740] (3) Purifying ADC from step (2) using an ultrafiltration tube to give Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 4.

[0741] Example 10.6: Preparation of Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 4 conjugate (the ADC with D4) with the transition metal ions

[0742] (1) ZnCl2 (0.51 mM, 30eq. ) and TCEP (0.088mM, 5.2eq) were added to a solution of a monoclonal antibody Farletuzumab Mut 16 (0.017 mM, 1eq. ) in BES buffer (pH7.0, 20 mM) and the reaction mixture was allowed to stay at 4 ℃ for 1h;

[0743] (2) EDTA-2Na (1.36 mM, 80eq. ) and MC-VC-PAB-MMAE (0.153 mM, 9eq. ) in DMA introduced and the reaction was continued at room temperature for 1h;

[0744] (3) Purifying ADC from step (2) using an ultrafiltration tube to give Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 4.

[0745] The method of example 10.7 (Farletuzumab Mut 31- [MC-VC-PAB-MMAE] 4) is the same as example 10.5, and the difference is that the time is 2h, the amount of TCEP is 0.039mM (2.3eq) and the monoclonal antibody is Farletuzumab Mut 31 in step (1) and the amount of MC-VC-PAB-MMAE is (0.119 mM, 7eq. ) in step (2) . Farletuzumab Mut 31 is provided by HOEKBIO, and a heavy chain is the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 121 and a light chain is the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 122.

[0746] Comparative Example 10.1: Preparation of Farletuzumab Mut 15- [MC-VC-PAB-MMAE] 4 conjugate (the ADC with D4) without the transition metal ions

[0747] The method of comparative example 10.1 is the same as example 10.5, and the difference is that there is not ZnCl2 in step 1 in comparative example 10.1.

[0748] Comparative Example 10.2: Preparation of Farletuzumab Mut 16- [MC-VC-PAB-MMAE] 4 conjugate (the ADC with D4) without the transition metal ions

[0749] The method of comparative example 10.2 is the same as example 10.6, and the difference is that there is not ZnCl2 in step 1 in comparative example 10.2.

[0750] Homogeneity assay

[0751] The ADCs distribution is analyzed using HIC-HPLC (Agilent1200) with a TSK gel Butyl-NPR column (4.6 mm IDX 3.5cm) (commercially available from Tosoh Biosciences) at a flow rate of 0.5 mL / min at 30 ℃. Solvent A was 1.5 M (NH4) 2SO4 and 50 mM potassium phosphate pH 7. Solvent B was 75%v / v 50 mM potassium phosphate pH 7 and 25%v / v isopropanol. The washout procedure is as follows:

[0752] Results and discussions

[0753] Table 9-1 “E” was short for Example, and “C” was short for comparative example in the present disclosure.

[0754] Table 9-2

[0755] As shown in example 10.1 to 10.4, the results demonstrate that the content of the ADC with D2 is generally up to 70%, which indicated that Farletuzumab Mut 16 and Farletuzumab Mut 15 show benign D2 selectivity against TCEP reduction with or without the transition metal ions.

[0756] As shown in table 9-1 and table 9-2, in example 10.5 to 10.7, the results demonstrate that the content of the ADC with D4 is generally up to 84%, and in comparative example 10.1 to 10.2, the results demonstrate that the content of the ADC with D4 is generally down to 60%, which indicated that Farletuzumab Mut 16 and Farletuzumab Mut 15 show benign D4 selectivity against TCEP reduction with the transition metal ions.

[0757] All of the articles and methods disclosed and claimed herein can be made and executed without undue experimentation in light of the present disclosure. While the articles and methods of this disclosure have been described in terms of preferred embodiments, it will be apparent to those of skill in the art that variations may be applied to the articles and methods without departing from the spirit and scope of the disclosure. All such variations and equivalents apparent to those skilled in the art, whether now existing or later developed, are deemed to be within the spirit and scope of the disclosure as defined by the appended claims. All patents, patent applications, and publications mentioned in the specification are indicative of the levels of those of ordinary skill in the art to which the disclosure pertains. All patents, patent applications, and publications are herein incorporated by reference in their entirety for all purposes and to the same extent as if each individual publication was specifically and individually indicated to be incorporated by reference in its entirety for any and all purposes. The disclosure illustratively described herein suitably may be practiced in the absence of any element (s) not specifically disclosed herein. Thus, it should be understood that although the present disclosure has been specifically disclosed by preferred embodiments and optional features, modification and variation of the concepts herein disclosed may be resorted to by those skilled in the art, and that such modifications and variations are considered to be within the scope of this invention as defined by the appended claims.

Claims

1.A conjugate, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof, which charactered in that, the conjugates comprise (1) a targeting agent; (2) a payload; (3) a linker, wherein, the payloads comprise a payload 1 and a payload 2, the linkers comprise a linker 1 and a linker 2, the payload 1 and the payload 2 are different, the linker 1 is different from the linker 2 or the linker 1 is the same as the linker 2, the payloads are linked to the targeting agents through the linkers, optionally, the action mechanism of the payload 1 and the payload 2 is different.2.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to claim 1, which charactered in that, the conjugates having the following formula (I) ,(P2-L4-L2) n2-Targeting agent- (L1-L3-P1) n1 (I)wherein,“-” is a suitable binding way connecting the parts of the left and the right of “-” ;P1 is the payload 1, P2 is the payload 2;L1-L3 is the linker 1; L2-L4 is the linker 2;optionally, n1 is 1-9, n2 is 1-9, n1+n2 is 2-10.3.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to claim 2, wherein,(1) P1 is a topoisomerase inhibitor and P2 is a P2 is a microtubule-targeting agent (MTA) ; and / or,(2) P1 is a poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor and P2 is a MTA; and / or,(3) P1 is an ATR inhibitor and P2 is a MTA; and / or,(4) P1 is an ATR inhibitor or a topoisomerase inhibitor, and P2 is a topoisomerase inhibitor or an ATR inhibitor; and / or,(5) P1 is a topoisomerase inhibitor, and P2 is a poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor.4.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 2-3, wherein,(1) P1 is the topoisomerase inhibitors; n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the MTA; n2 is 1 or 2; and / or,(2) P1 is the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors; n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the MTA, n2 is 1 or 2; and / or,(3) P1 is the ATR inhibitors; n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the MTA; n2 is 1 or 2; and / or,(4) P1 is the ATR inhibitor or the topoisomerase inhibitor; n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the topoisomerase inhibitor or the ATR inhibitor; n2 is 2, 4, 6 or 8; n1+n2 is 4-10; and / or,(5) P1 is the topoisomerase inhibitors, n1 is 2, 4, 6 or 8; P2 is the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors, n2 is 2, 4, 6 or 8.5.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to claim 3 or 4, wherein, the poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors are selected from Talazoparib, Rucaparib, Niraparib, Olaparib, BMN 673, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof; and / or,the MTA are selected from MMAE, MMAF, MMAD, Eribulin, Maytansinoid, DM1, DM4, DM21, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof; and / or,the ATR inhibitors are selected from VE-822, VE-821, NU6027, CP-466722, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof; and / or,the topoisomerase inhibitors are selected from DXd, DX8951, SN38, Belotecan, the topoisomerase inhibitors are selected from any one of the following, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof,6.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 2-5, wherein, -L1-and -L2-are independently selected from any one of the following, the targeting agents are attached at *site, the payloads are attached at **site.7.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 2-6, wherein, -L3-and -L4-are independently selected from absent or -O-C (=O) -.8.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 3-7, wherein, -L1-L3-P1 or -L2-L4-P2 are independently selected from any one of the following, 9.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 2-8, wherein,(1) -L1-L3-P1 is selected from LW015, LW026, LW031, LW035, LW036, LW037, LW041, LW042, LW043, LW044, LW045, LW047, LW048, LW049, LW052, LW053, LW054, LW055, LW056, LW057, LW058, LW059, LW060, LW061, LW062, LW063, LW064 or MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW016, LW024, LW033, MC-VC-PAB-MMAE or MC-MMAF; and / or,(2) -L1-L3-P1 is selected from LW023, LW030 or LW046; -L2-L4-P2 is selected from LW016, LW024, LW033, MC-VC-PAB-MMAE or MC-MMAF; and / or,(3) -L1-L3-P1 is selected from LW025, LW029 or LW034; -L2-L4-P2 is selected from LW016, LW024, LW033, MC-VC-PAB-MMAE or MC-MMAF; and / or,(4) -L1-L3-P1 is selected from LW025, LW029 or LW034; -L2-L4-P2 is selected from LW015, LW026, LW031, LW035, LW036, LW037, LW041, LW042, LW043, LW044, LW045, LW047, LW048, LW049, LW052, LW053, LW054, LW055, LW056, LW057, LW058, LW059, LW060, LW061, LW062, LW063, LW064 or MC-GGFG-DXd; and / or,(5) -L1-L3-P1 is selected from LW015, LW026, LW031, LW035, LW036, LW037, LW041, LW042, LW043, LW044, LW045, LW047, LW048, LW049, LW052, LW053, LW054, LW055, LW056, LW057, LW058, LW059, LW060, LW061, LW062, LW063, LW064 or MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW025, LW029 or LW034; and / or,(6) -L1-L3-P1 is selected from LW015, LW026, LW031, LW035, LW036, LW037, LW041, LW042, LW043, LW044, LW045, LW047, LW048, LW049, LW052, LW053, LW054, LW055, LW056, LW057, LW058, LW059, LW060, LW061, LW062, LW063, LW064 or MC-GGFG-DXd; -L2-L4-P2 is selected from LW023, LW030 or LW046.10.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 1-9, wherein, the targeting agent comprises an antibody, peptide, RNA, or DNA molecule.11.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 1-10, wherein, the antibody is a monoclonal antibody, a polyclonal antibody, a mono-specific antibody or a multi-specific antibody, optionally, the antibody is a human antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody or an antigen-binding moiety thereof, more optionally, the target of the antibody comprises FOLR1.12.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 1-11, wherein, the targeting agents are selected from Farletuzumab or an antibody mutant, wherein,the antibody mutant comprises Farletuzumab mutant, wherein,a heavy chain of the antibody mutant comprises SX1X2KTX3TCPPX4PAPEX5X6GGPX7V, wherein, X1 is selected from C or S, X2 is selected from D or H, X3 is selected from H or D, X4 is selected from C, S, L or V, X5 is selected from L or A, X6 is selected from L or A and X7 is selected from S or C;a light chain of the antibody mutant comprises SFNRGEX8, wherein, X8 is selected from C or S.13.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to claim 12, wherein, the antibody mutant comprises:(1) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 1, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 2; or(2) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 3, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 4; or(3) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 5, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 6; or(4) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or(5) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 9, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 10; or(6) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 11, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 12; or(7) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 13, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 14; or(8) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 15, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 16; or(9) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 17, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 18; or(10) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 19, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 20; or(11) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 21, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 22; or(12) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 23, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 24; or(13) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 25, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 26; or(14) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 27, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 28; or(15) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 29, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 30; or(16) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 31, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 32; or(17) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 33, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 34; or(18) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 35, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 36; or(19) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 37, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 38; or(20) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 39, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 40; or(21) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 41, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 42; or(22) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44; or(23) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 45, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 46; or(24) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 47, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 48; or(25) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 49, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 50; or(26) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 51, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 52; or(27) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 53, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 54; or(28) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 55, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 56; or(29) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 57, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 58; or(30) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 117, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 118; or(31) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 119, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 120; or,(32) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 125, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 126; or,(33) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 127, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 128; or,(34) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 129, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 130; or,(35) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 131, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 132; or,(36) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 133, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 134; or,(37) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136.14.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to claim 12 or 13, wherein, the Farletuzumab mutant comprises:a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 59, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 60; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 61, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 62; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 63, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 64; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 67, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 68; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 69, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 70; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 71, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 72; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 73, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 74; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 75, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 76; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 77, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 78; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 79, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 80; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 83, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 84; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 85, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 86; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 87, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 88; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 89, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 90; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 91, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 92; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 93, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 94; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 97, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 98; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 99, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 100; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 101, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 102; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 103, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 104; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 105, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 106; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 107, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 108; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 109, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 110; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 111, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 112; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 113, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 114; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 115, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 116; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 121, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 122; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 123, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 124; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 137, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 138; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 139, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 140; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 141, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 142; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 143, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 144; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 145, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 146; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148.15.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to claim 13 or 14, wherein,(1) n1 is 6 and n2 is selected from 1 or 2, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 15 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 16; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 23 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 24; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 31 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 32; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 37 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 38; and / or,(2) n1 is 4 and n2 is selected from 1 or 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 3 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 4; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 5 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 6; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 11 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 12; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 13 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 14; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 19 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 20; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 21 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 22; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 27 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 28; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 29 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 30; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 45 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 46; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 117 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 118; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 119 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 120, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136; and / or,(3) n1 is 4 and n2 is 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 33 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 34; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 35 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 36; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 39 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 40; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 41 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 42, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136; and / or,(4) n1 is 4 and n2 is selected from 4 or 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 31 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 32; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 37 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 38, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44, or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136; and / or(5) n1 is selected from 2, 6, 8 and n2 is selected from 1 or 2, or when n1 is 8 and n2 is selected from 1 or 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 47 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 48; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 49 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 50; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 51 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 52; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 53, anda light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 54; and / or(6) n1 is 6 and n2 is 4, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 55 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 56; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 57and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 58; and / or(7) n1 is selected from 1 or 2, and n2 is selected from 1 or 2, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 1 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 2; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 9 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 10; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 17 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 18; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 25 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 26; and / or(8) n1 is 5, and n2 is 1, the targeting agents are selected from the antibody mutant, wherein, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 5 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 6; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 13 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 14; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 15 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 16.16.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 1-15, wherein, the conjugates are selected from any of the following, 17.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to claim 16, wherein,in ADC I-1, n1 is 6, n2 is 1; and / or,in ADC I-2, n1 is 6, n2 is 1; and / or,in ADC I-3, n1 is 6 or 4, n2 is 2; and / or,in ADC I-4, n1 is 6 or 4, n2 is 1; and / or,in ADC I-5, n1 is 6, n2 is 2; and / or,in ADC II-1, n1 is 6, n2 is 1; and / or,in ADC II-2, n1 is 6, n2 is 1; and / or,in ADC II-3, n1 is 6 or 4, n2 is 2; and / or,in ADC III-1, n1 is 6, n2 is 1; and / or,in ADC III-2, n1 is 6 or 4, n2 is 1; and / or,in ADC III-3, n1 is 6, n2 is 1; and / or,in ADC III-4, n1 is 6 or 4, n2 is 2; and / or,in ADC III-5, n1 is 6, n2 is 1; and / or,in ADC III-6, n1 is 6, n2 is 1; and / or,in ADC III-7, n1 is 6 or 4, n2 is 1; and / or,in ADC III-8, n1 is 4, n2 is 2; and / or,in ADC IV-1, n1 is 4, n2 is 4; and / or,in ADC IV-2, n1 is 6 or 4, n2 is 2 or 4; and / or,in ADC IV-3, n1 is 4, n2 is 4; and / or,in ADC V-1, n1 is 4, n2 is 4.18.The conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to claim 16 or 17, wherein,in ADC I-1 and / or ADC I-2, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; and / or,in ADC I-3, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant; optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 101 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 102; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 103 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 104; and / or,in ADC I-4, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant; optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 101 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 102; or, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 103 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 104; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148; and / or,in ADC I-5, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96; and / or,in ADC II-1, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; and / or,in ADC II-2 and / or ADC II-3, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant; and / or,in ADC III-1, ADC III-3 and / or ADC III-6, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; and / or,in ADC III-2, ADC III-4 and ADC III-5, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant; and / or,in ADC III-7, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant; optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148; and / or,in ADC III-8, the targeting agents are selected from Farletuzumab, the antibody mutant and the antibody comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; or, a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148; and / or; and / or,in ADC IV-1, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96; and / orin ADC IV-2, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the Farletuzumab mutant; and / or,in ADC IV-3, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the Farletuzumab mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96; and / orin ADC V-1, the targeting agents are selected from Farletuzumab and the antibody mutant, optionally, the antibody mutant comprises a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95 and a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96.19.A method of preparing the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 1-18.20.A pharmaceutical composition comprising the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 1-18.21.Use of the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 1-18, or the pharmaceutical compositions according to claim 20 in the manufacture of a drug for preventing or treating a disease.22.A method of preventing or treating a disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject a therapeutically effective amount of the conjugates, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, enantiomer, diastereomer, racemate, solvate, prodrug, or deuterated counterpart thereof according to any one of claims 1-18, or the pharmaceutical compositions according to claim 20.23.An antibody mutant or an antigen-binding fragment thereof, wherein, the antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof comprises a heavy chain and a light chain, wherein,the heavy chain of the antibody mutant comprises SX1X2KTX3TCPPX4PAPEX5X6GGPX7V, wherein, X1 is selected from C or S, X2 is selected from D or H, X3 is selected from H or D, X4 is selected from C, S, L or V, X5 is selected from L or A, X6 is selected from L or A and X7 is selected from S or C;light chain of the antibody mutant comprises SFNRGEX8, wherein, X8 is selected from C or S;provided that X1 is not C, X2 is not D, X3 is not H, X4 is not C, X5 is not L, X6 is not L, X7 is not S and X8 is not C at the same time.24.The antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof according to claim 23, wherein, the antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof binds to FOLR1.25.The antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof according to claim 23 or 24, wherein, the heavy chain of the antibody mutant comprises any one of the groups selected from the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 117, 119, 125, 127, 129, 131, 133 or 135; the light chain of the antibody mutant comprises any one of the groups selected from the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 118, 120, 126, 128, 130, 132, 134 or 136.26.The antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 23-25, wherein, the antibody mutant comprises:(1) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 1, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 2; or(2) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 3, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 4; or(3) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 5, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 6; or(4) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 7, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 8; or(5) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 9, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 10; or(6) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 11, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 12; or(7) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 13, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 14; or(8) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 15, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 16; or(9) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 17, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 18; or(10) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 19, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 20; or(11) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 21, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 22; or(12) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 23, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 24; or(13) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 25, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 26; or(14) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 27, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 28; or(15) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 29, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 30; or(16) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 31, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 32; or(17) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 33, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 34; or(18) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 35, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 36; or(19) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 37, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 38; or(20) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 39, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 40; or(21) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 41, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 42; or(22) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 43, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 44; or(23) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 45, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 46; or(24) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 47, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 48; or(25) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 49, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 50; or(26) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 51, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 52; or(27) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 53, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 54; or(28) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 55, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 56; or(29) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 57, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 58; or(30) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 117, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 118; or(31) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 119, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 120; or(32) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 125, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 126; or,(33) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 127, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 128; or,(34) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 129, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 130; or,(35) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 131, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 132; or,(36) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 133, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 134; or,(37) a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 135, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 136.27.The antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 23-26, wherein, the antibody mutant comprises:a heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 59, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 60; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 61, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 62; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 63, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 64; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 65, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 66; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 67, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 68; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 69, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 70; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 71, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 72; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 73, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 74; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 75, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 76; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 77, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 78; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 79, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 80; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 81, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 82; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 83, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 84; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 85, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 86; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 87, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 88; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 89, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 90; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 91, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 92; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 93, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 94; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 95, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 96; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 97, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 98; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 99, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 100; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 101, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 102; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 103, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 104; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 105, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 106; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 107, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 108; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 109, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 110; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 111, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 112; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 113, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 114; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 115, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 116; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 121, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 122; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 123, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 124; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 137, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 138; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 139, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 140; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 141, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 142; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 143, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 144; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 145, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 146; ora heavy chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 147, a light chain comprising the amino acid sequences as set forth in SEQ ID NO: 148.28.An isolated polynucleotide encoding the antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof according to any of claims 23-27.29.An isolated vector comprising the polynucleotide according to claim 28.30.A host cell comprising the isolated polynucleotide according to claim 28 or the isolated vector according to claim 29.31.Use of the antibody mutant or the antigen-binding fragment thereof according to any one of claims 23-27 in the manufacture of conjugates, optionally, the conjugates comprise an antibody-drug conjugate.

Images