Anti-DLL3 antibodies and use thereof

Abstract

Provided relates to anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof, isolated polynucleotides encoding the same, pharmaceutical compositions comprising the same and the uses thereof.

Description

ANTI-DLL3 ANTIBODIES AND USE THEREOFTECHNICAL FIELD

[0001] The present disclosure generally relates to novel anti-DLL3 antibodies and uses thereof.BACKGROUND OF THE DISCLOSURE

[0002] Small-cell lung cancer (SCLC) is an aggressive, poorly differentiated, and high-grade neuroendocrine carcinoma arising in current or former smokers. SCLC is composed of 15%lung cancer, amounting 250,000 new cases and at least 200,000 deaths worldwide (J Natl Compr Canc Netw 2018 Oct; 16 (10) : 1171-1182) . Regardless of recognition of distinct biological subtypes based on transcription factor expression profile, the current clinical approach to treat SCLC is consistent irrespective of subtype (Mol Ther Oncolytics. 2021 Feb 6: 20: 470-483) . In rare cases, patients in very early-stage can be diagnosed and treated with surgery and adjuvant platinum-based chemotherapy. However, most patients at the time of diagnosis present advanced stage and characterized by high proliferative rate, a propensity to early metastasis and transient responses to current standard-of-care therapies that are almost always followed by the development of drug resistance and relapse.

[0003] According to National Comprehensive Cancer Network (NCCN) guidelines version 3.2023, preferred treatments for patients with extensive-stage SCLC are the programmed death ligand-1 (PD-L1) -targeted immune checkpoint inhibitors (ICI) , atezolizumab or durvalumab, plus platinum plus etoposide with over 50%overall survival rate. However, grade 3 or 4 adverse events are above 60%; most patients after current initial treatment relapse with relatively resistant disease. Many other strategies such as irinotecan-based regimens or ipilimumab-based chemotherapy attempting to improve long-term survival rates have yield no significant advantages. Novel ICIs with higher overall response rate, longer durable responses, advanced safety profile of toxicity for SCLC patients are urging by patients as well the market.

[0004] Delta-like ligand 3 (DLL3) has emerged as an attractive tumor-specific target uniquely overexpressed on the cell surface of SCLC and other high-grade neuroendocrine carcinoma such as large cell neuroendocrine carcinoma and neuroendocrine prostate cancer. Up to 85%of human SCLC tumor express DLL3 protein on the cell surface, independent of sex, age, tumor, stage, performance status and number of prior lines of therapy (Lung Cancer. 2020 Sep: 147: 237-243) . Therefore, DLL3 is an attractive therapeutic target for treatment in SCLC, which is of great interest in the anti-cancer areas.

[0005] Therefore, needs remain for novel anti-DLL3 antibodies.SUMMARY OF THE DISCLOSURE

[0006] The present disclosure relates to an anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof, a nucleic acid molecule encoding the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof, a pharmaceutical composition comprising the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof, and uses of the same.

[0007] In one aspect, the present disclosure provides an anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof, comprising: a heavy chain complementary determining region 1 (HCDR1) , a HCDR2 and a HCDR3 respectively having at least 70%sequence identity of the HCDR1, HCDR2 and HCDR3 comprised in the heavy chain variable region as set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39 and 176-188; and / or a light chain complementary determining region 1 (LCDR1) , a LCDR2 and a LCDR3 respectively having at least 70%sequence identity of the LCDR1, LCDR2 and LCDR3 comprised in the heavy chain variable region as set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 and 163-175, 202.

[0008] In some embodiments, the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof comprises an HCDR1 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 41, 44, 47, 49, 56, 59, 63, 68, 71, 74, 77, 80, 83 and SSVMX1 (SEQ ID NO: 157) or a homologous sequence having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X1 is selected from G or T; an HCDR2 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 42, 45, 50, 52, 60, 64, 69, 72, 75, 78, 81 and X2ISX3X4GELX5YYADSVKG (SEQ ID NO: 158) or a homologous sequence having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X2 is selected from L or S; X3 is selected from P, I or V; X4 is selected from G or R; and X5 is selected from T, D or L; an HCDR3 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 43, 46, 48, 51, 53, 54, 55, 57, 58, 61, 62, 65, 66, 67, 70, 73, 76, 79, 82, 84 and DX6X7YAX8DX9 (SEQ ID NO: 159) or a homologous sequence having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X6 is selected from N, S or T; X7 is selected from A or G; X8 is selected from F, N or L; and X9 is selected from I or F; an LCDR1 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 85, 88, 91, 94, 97, 100, 103, 108, 111, 117, 121, 123, 128 and RAX10QGIX11SWLA (SEQ ID NO: 160) or a homologous sequence having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X10 is selected from R, S or E; and X11 is selected from T or S; an LCDR2 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 86, 89, 92, 95, 98, 101, 104, 106, 109, 112, 115, 124, 126 and AAX12X13LX14X15 (SEQ ID NO: 161) or a homologous sequence having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X12 is selected from S or A; X13 is selected from S, H or L; X14 is selected from Q or A; and X15 is selected from N, A or Q; and / or an LCDR3 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 87, 90, 93, 96, 99, 102, 105, 107, 110, 113, 114, 116, 118, 119, 120, 122, 125, 127, 129 and QQX16X17X18FPLT (SEQ ID NO: 162) or a homologous sequence having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X16 is selected from A or V; X17 is selected from H, D, S, Y; and X18 is selected from S, I, H or N.

[0009] In another aspect, the present disclosure provides a nucleic acid molecule encoding the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof provided herein. In another aspect, the present disclosure provides a vector comprising the isolated polynucleotide provided herein. In another aspect, the present disclosure provides a host cell comprising the vector provided herein. In another aspect, the present disclosure provides a conjugate comprising the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof provided herein.

[0010] In another aspect, the present disclosure provides a pharmaceutical composition, comprising: (i) the anti-DLL3 antibody or an antigen-binding fragment thereof provided herein, or the nucleic acid molecule provided herein, or the conjugate provided herein; and (ii) a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.

[0011] In another aspect, the present disclosure provides a method of expressing the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof disclosed herein, comprising culturing the host cell of the present disclosure under the condition at which the vector of the present disclosure is expressed.

[0012] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating, preventing or alleviating a DLL3-related disease or disorder in a subject, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof provided herein, or the nucleic acid molecule encoding the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragment thereof provided herein, and / or the pharmaceutical composition disclosed herein.

[0013] In another aspect, the present disclosure provides a method of detecting the presence or amount of DLL3 in a sample, comprising contacting the sample with the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof disclosed herein, and determining the presence or the amount of DLL3 in the sample.DESCRIPTION OF DRAWINGS

[0014] [Rectified under Rule 91, 15.10.2025]FIGs. 1A and 1B show the binding of purified anti-DLL3 mAbs to coated recombinant human DLL3 his tag protein by ELISA.

[0015] [Rectified under Rule 91, 15.10.2025]FIGs. 2A and 2B show the binding of purified anti-DLL3 mAbs to HEK293-huDLL3 cells by FACS. Eight different mAb concentrations (20 ug / mL, 5 ug / mL, 1.25 ug / mL, 0.313 ug / mL, 0.078 ug / mL, 0.019 ug / mL, 0.004 ug / mL, 0.001 ug / mL) were used in the assay.

[0016] [Rectified under Rule 91, 15.10.2025]FIGs. 3A and 3B exhibit the binding of purified anti-DLL3 mAbs to coated recombinant cynomolgus DLL3 his tag protein by ELISA.

[0017] [Rectified under Rule 91, 15.10.2025]FIGs. 4A and 4B reveal the binding affinity of purified anti-DLL3 mAbs towards recombinant mouse DLL3 his tag protein by ELISA.

[0018] FIG. 5 shows the results of analysis of anti-DLL3 mAbs binding to human paralogues DLL1 and DLL4.

[0019] FIG. 6 shows the binding affinity results of purified mAbs at different mAb concentrations (5 ug / mL, 0.5 ug / mL, 0.05 ug / mL, 0.005 ug / mL) to SHP77 cells.

[0020] FIG. 7 shows the binding affinity results of purified mAbs at different mAb concentrations (5 ug / mL, 0.5 ug / mL, 0.05 ug / mL, 0.005 ug / mL) to H524 cells.

[0021] FIG. 8 shows the results of the anti-DLL3 antibodies from affinity maturation libraries binding affinity against human DLL3 N-ter His tag.

[0022] FIG. 9 shows the results of the anti-DLL3 antibodies from affinity maturation libraries binding affinity against cynomolgus DLL3 N-ter His tag.

[0023] FIG. 10 shows the results of the anti-DLL3 antibodies from affinity maturation libraries binding affinity against mouse DLL3 N-ter His tag.

[0024] FIG. 11 show anti-DLL3 mAbs specificity against human DLL3 paralogs DLL1 and DLL4.

[0025] FIG. 12 exhibit anti-DLL3 antibodies binding affinity against HEK293-DLL3 cell line.

[0026] FIG. 13 shows WT-098 binding epitope domain. WT-098 binds to full length DLL3 extracellular domain, E3-E6 domain, E4-E6 domain, but not DLS region.

[0027] FIG. 14 shows non-specific binding evaluation of WT-098 against human immune cells, platelets, neutrophil, eosinophil, monocyte, T cells, B cells, and NK cells.

[0028] FIG. 15 exhibits WT-098 N56Q binding affinities compared to WT-098 on SHP77, NCI-H82, and NCI-H524 SCLC cell lines.

[0029] FIG. 16 shows WT-098 and WT-098 N56Q internalization abilities.

[0030] FIG. 17 shows DLL3 ADC cytotoxicity activity against SHP77 SCLC cell line.DETAILED DESCRIPTION

[0031] Reference will now be made in detail to certain embodiments of the invention, examples of which are illustrated in the accompanying structures and formulas. While the invention will be described in conjunction with the enumerated embodiments, it will be understood that they are not intended to limit the invention to those embodiments. On the contrary, the invention is intended to cover all alternatives, modifications, and equivalents, which may be included within the scope of the present invention as defined by the claims. One skilled in the art will recognize many methods and materials similar or equivalent to those described herein, which could be used in the practice of the present invention. The present invention is in no way limited to the methods and materials described. In the event that one or more of the incorporated literature and similar materials differs from or contradicts this application, including but not limited to defined terms, term usage, described techniques, or the like, this application controls.

[0032] It is appreciated that certain features of the present disclosure, which are, for clarity, described in the context of separate embodiments, can also be provided in combination in a single embodiment. Conversely, various features of the present disclosure, which are, for brevity, described in the context of a single embodiment, can also be provided separately or in any suitable sub-combination.

[0033] It must be noted that, as used in the specification and the appended claims, the singular forms “a, ” “an, ” and “the” include plural forms of the same unless the context clearly dictates otherwise. In this specification and in the claims that follow, reference will be made to a number of terms that shall be defined to have the following meanings unless a contrary intention is apparent.DEFINITIONS

[0034] The term “antibody” as used herein includes any immunoglobulin, monoclonal antibody, polyclonal antibody, multivalent antibody, bivalent antibody, monovalent antibody that binds to a specific antigen. A native intact antibody comprises two heavy (H) chains and two light (L) chains. Mammalian heavy chains are classified as alpha, delta, epsilon, gamma, and mu, each heavy chain consists of a variable region (VH) and a first, second, third, and optionally fourth constant region (CH1, CH2, CH3, CH4 respectively) ; mammalian light chains are classified as λ or κ, while each light chain consists of a variable region (VL) and a constant region. The antibody has a “Y” shape, with the stem of the Y consisting of the second and third constant regions of two heavy chains bound together via disulfide bonding. Each arm of the Y includes the variable region and first constant region of a single heavy chain bound to the variable and constant regions of a single light chain. The variable regions of the light and heavy chains are responsible for antigen binding. The variable regions in both chains generally contain three highly variable loops called the complementarity determining regions (CDRs) (light chain CDRs including LCDR1, LCDR2, and LCDR3, heavy chain CDRs including HCDR1, HCDR2, HCDR3) . CDR boundaries for the antibodies and antigen-binding fragments disclosed herein may be defined or identified by the conventions of Kabat, IMGT, Chothia, or Al-Lazikani (Al-Lazikani, B., Chothia, C., Lesk, A.M., J. Mol. Biol., 273 (4) , 927 (1997) ; Chothia, C. et al., J Mol Biol. Dec 5; 186 (3) : 651-63 (1985) ; Chothia, C. and Lesk, A.M., J. Mol. Biol., 196, 901 (1987) ; Chothia, C. et al., Nature. Dec 21-28; 342 (6252) : 877-83 (1989) ; Kabat E.A. et al., Sequences of Proteins of immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991) ; Marie-Paule Lefranc et al., Developmental and Comparative Immunology, 27: 55-77 (2003) ; Marie-Paule Lefranc et al., Immunome Research, 1 (3) , (2005) ; Marie-Paule Lefranc, Molecular Biology of B cells (second edition) , chapter 26, 481-514, (2015) ) . The three CDRs are interposed between flanking stretches known as framework regions (FRs) (light chain FRs including LFR1, LFR2, LFR3, and LFR4, heavy chain FRs including HFR1, HFR2, HFR3, and HFR4) , which are more highly conserved than the CDRs and form a scaffold to support the highly variable loops. The constant regions of the heavy and light chains are not involved in antigen-binding, but exhibit various effector functions. Antibodies are assigned to classes based on the amino acid sequences of the constant regions of their heavy chains. The five major classes or isotypes of antibodies are IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM, which are characterized by the presence of alpha, delta, epsilon, gamma, and mu heavy chains, respectively. Several of the major antibody classes are divided into subclasses such as IgG1 (gamma1 heavy chain) , IgG2 (gamma2 heavy chain) , IgG3 (gamma3 heavy chain) , IgG4 (gamma4 heavy chain) , IgA1 (alpha1 heavy chain) , or IgA2 (alpha2 heavy chain) .

[0035] In certain embodiments, the antibody provided herein encompasses any antigen-binding fragments thereof. The term “antigen-binding fragment” as used herein refers to an antibody fragment formed from a portion of an antibody comprising one or more CDRs, or any other antibody fragment that binds to an antigen but does not comprise an intact native antibody structure. Examples of antigen-binding fragment include, without limitation, a diabody, a Fab, a Fab', a F (ab') 2, an Fd, an Fv fragment, a disulfide stabilized Fv fragment (dsFv) , a (dsFv) 2, a bispecific dsFv (dsFv-dsFv') , a disulfide stabilized diabody (ds diabody) , a single-chain antibody molecule (scFv) , an scFv dimer (bivalent diabody) , a camelized single domain antibody, a nanobody, a domain antibody, and a bivalent domain antibody. An antigen-binding fragment is capable of binding to the same antigen to which the parent antibody binds.

[0036] “Fab” with regard to an antibody refers to that portion of the antibody consisting of a single light chain (both variable and constant regions) bound to the variable region and first constant region of a single heavy chain by a disulfide bond.

[0037] “Fab'” refers to a Fab fragment that includes a portion of the hinge region.

[0038] “F (ab') 2” refers to a dimer of Fab’ .

[0039] “Fd” refers to a Fd fragment that includes a heavy chain variable region and a CH1 region of an antibody.

[0040] “Fc” with regard to an antibody (e.g., of IgG, IgA, or IgD isotype) refers to that portion of the antibody consisting of the second and third constant domains of a first heavy chain bound to the second and third constant domains of a second heavy chain via disulfide bonding. Fc with regard to antibody of IgM and IgE isotype further comprises a fourth constant domain. The Fc portion of the antibody is responsible for various effector functions such as antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) , and complement dependent cytotoxicity (CDC) , but does not function in antigen binding.

[0041] “Fv” with regard to an antibody refers to the smallest fragment of the antibody to bear the complete antigen binding site. An Fv fragment consists of the variable region of a single light chain bound to the variable region of a single heavy chain.

[0042] “Single-chain Fv antibody” or “scFv” refers to an engineered antibody consisting of a light chain variable region and a heavy chain variable region connected to one another directly or via a peptide linker sequence (Huston JS et al. Proc Natl Acad Sci USA, 85: 5879 (1988) ) .

[0043] “Single-chain Fv-Fc antibody” or “scFv-Fc” refers to an engineered antibody consisting of an scFv connected to the Fc region of an antibody.

[0044] “Camelized single domain antibody, ” “heavy chain antibody, ” or “HCAb” refers to an antibody that contains two VH domains and no light chains (Riechmann L. and Muyldermans S., J Immunol Methods. Dec 10; 231 (1-2) : 25-38 (1999) ; Muyldermans S., J Biotechnol. Jun; 74 (4) : 277-302 (2001) ; WO94 / 04678; WO94 / 25591; U.S. Patent No. 6,005,079) . Heavy chain antibodies were originally derived from Camelidae (camels, dromedaries, and llamas) . Although devoid of light chains, camelized antibodies have an authentic antigen-binding repertoire (Hamers-Casterman C. et al., Nature. Jun 3; 363 (6428) : 446-8 (1993) ; Nguyen VK. et al. Immunogenetics. Apr; 54 (1) : 39-47 (2002) ; Nguyen VK. et al. Immunology. May; 109 (1) : 93-101 (2003) ) . The variable domain of a heavy chain antibody (VHH domain) represents the smallest known antigen-binding unit generated by adaptive immune responses (Koch-Nolte F. et al., FASEB J. Nov; 21 (13) : 3490-8. Epub 2007 Jun 15 (2007) ) .

[0045] A “nanobody” refers to an antibody fragment that consists of a VHH domain from a heavy chain antibody and two constant domains, CH2 and CH3.

[0046] A “diabody” or “dAb” includes small antibody fragments with two antigen-binding sites, wherein the fragments comprise a VH domain connected to a VL domain in the same polypeptide chain (VH-VL or VL-VH) (see, e.g., Holliger P. et al., Proc Natl Acad Sci USA. Jul 15; 90 (14) : 6444-8 (1993) ; EP404097; WO93 / 11161) . By using a linker that is too short to allow pairing between the two domains on the same chain, the domains are forced to pair with the complementary domains of another chain, thereby creating two antigen-binding sites. The antigen-binding sites may target the same or different antigens (or epitopes) . In certain embodiments, a “bispecific ds diabody” is a diabody target two different antigens (or epitopes) .

[0047] A “domain antibody” refers to an antibody fragment containing only the variable region of a heavy chain or the variable region of a light chain. In certain instances, two or more VH domains are covalently joined with a peptide linker to create a bivalent or multivalent domain antibody. The two VH domains of a bivalent domain antibody may target the same or different antigens.

[0048] The term “valent” as used herein refers to the presence of a specified number of antigen binding sites in a given molecule. The term “monovalent” refers to an antibody or an antigen-binding fragment having only one single antigen-binding site; and the term “multivalent” refers to an antibody or an antigen-binding fragment having multiple antigen-binding sites. As such, the terms “bivalent” , “tetravalent” , and “hexavalent” denote the presence of two binding sites, four binding sites, and six binding sites, respectively, in an antigen-binding molecule. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is bivalent.

[0049] In certain embodiments, an “scFv dimer” is a bivalent diabody or bispecific scFv (BsFv) comprising VH-VL (linked by a peptide linker) dimerized with another VH-VL moiety such that VH's of one moiety coordinate with the VL's of the other moiety and form two binding sites which can target the same antigens (or epitopes) or different antigens (or epitopes) . In other embodiments, an “scFv dimer” is a bispecific diabody comprising VH1-VL2 (linked by a peptide linker) associated with VL1-VH2 (also linked by a peptide linker) such that VH1 and VL1 coordinate and VH2 and VL2 coordinate, and each coordinated pair has a different antigen specificity.

[0050] A “dsFv” refers to a disulfide-stabilized Fv fragment that the linkage between the variable region of a single light chain and the variable region of a single heavy chain is a disulfide bond. In some embodiments, a “ (dsFv) 2” or “ (dsFv-dsFv') ” comprises three peptide chains: two VH moieties linked by a peptide linker (e.g., a long flexible linker) and bound to two VL moieties, respectively, via disulfide bridges. In some embodiments, dsFv-dsFv'is bispecific in which each disulfide paired heavy and light chain has a different antigen specificity.

[0051] The term “chimeric” as used herein, means an antibody or antigen-binding fragment, having a portion of heavy and / or light chain derived from one species, and the rest of the heavy and / or light chain derived from a different species. In an illustrative example, a chimeric antibody may comprise a constant region derived from human and a variable region from a non-human animal, such as from mouse. In some embodiments, the non-human animal is a mammal, for example, a mouse, a rat, a rabbit, a goat, a sheep, a guinea pig, or a hamster.

[0052] The term “humanized” as used herein means that the antibody or antigen-binding fragment comprises CDRs derived from non-human animals, FR regions derived from human, and when applicable, the constant regions derived from human.

[0053] The term “affinity” as used herein refers to the strength of non-covalent interaction between an immunoglobulin molecule (i.e., antibody) or fragment thereof and an antigen.

[0054] The term “specific binding” or “specifically binds” as used herein refers to a non-random binding reaction between two molecules, such as for example between an antibody and an antigen. Specific binding can be characterized in binding affinity, for example, represented by KD value, i.e., the ratio of dissociation rate to association rate (koff / kon) when the binding between the antigen and antigen-binding molecule reaches equilibrium. KD may be determined by using any conventional method known in the art, including but are not limited to, surface plasmon resonance method, microscale thermophoresis method, HPLC-MS method and flow cytometry (such as FACS) method. A KD value of ≤10-6 M (e.g. ≤5x10-7 M, ≤2x10-7 M, ≤10-7 M, ≤5x10-8 M, ≤2x10-8 M, ≤10-8 M, ≤5x10-9 M, ≤4x10-9 M, ≤3x10-9 M, ≤2x10-9 M, or ≤10-9 M) can indicate specific binding between an antibody or antigen binding fragments thereof and DLL3 (e.g., human DLL3) .

[0055] The term “epitope” as used herein refers to the specific group of atoms or amino acids on an antigen to which an antibody binds. Two antibodies may bind the same or a closely related epitope within an antigen if they exhibit competitive binding for the antigen. An epitope can be linear or conformational (i.e., including amino acid residues spaced apart) .

[0056] The term “amino acid” as used herein refers to an organic compound containing amine (-NH2) and carboxyl (-COOH) functional groups, along with a side chain specific to each amino acid. The names of amino acids are also represented as standard single letter or three-letter codes in the present disclosure, which are summarized as follows.

[0057] A “conservative substitution” with reference to amino acid sequence refers to replacing an amino acid residue with a different amino acid residue having a side chain with similar physiochemical properties. For example, conservative substitutions can be made among amino acid residues with hydrophobic side chains (e.g., Met, Ala, Val, Leu, and Ile) , among amino acid residues with neutral hydrophilic side chains (e.g., Cys, Ser, Thr, Asn and Gln) , among amino acid residues with acidic side chains (e.g., Asp, Glu) , among amino acid residues with basic side chains (e.g., His, Lys, and Arg) , or among amino acid residues with aromatic side chains (e.g., Trp, Tyr, and Phe) . As known in the art, conservative substitution usually does not cause significant change in the protein conformational structure, and therefore could retain the biological activity of a protein.

[0058] The term “homologous” as used herein refers to nucleic acid sequences (or its complementary strand) or amino acid sequences that have sequence identity of at least 60% (e.g., at least 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) to another sequence when optimally aligned.

[0059] “Percent (%) sequence identity” with respect to amino acid sequence (or nucleic acid sequence) is defined as the percentage of amino acid (or nucleic acid) residues in a candidate sequence that are identical to the amino acid (or nucleic acid) residues in a reference sequence, after aligning the sequences and, if necessary, introducing gaps, to achieve the maximum number of identical amino acids (or nucleic acids) . In other words, percent (%) sequence identity of an amino acid sequence (or nucleic acid sequence) can be calculated by dividing the number of amino acid residues (or bases) that are identical relative to the reference sequence to which it is being compared by the total number of the amino acid residues (or bases) in the candidate sequence or in the reference sequence, whichever is shorter. Conservative substitution of the amino acid residues may or may not be considered as identical residues. Alignment for purposes of determining percent amino acid (or nucleic acid) sequence identity can be achieved, for example, using publicly available tools such as BLASTN, BLASTp (available on the website of U.S. National Center for Biotechnology Information (NCBI) , see also, Altschul S.F. et al., J. Mol. Biol., 215: 403-410 (1990) ; Stephen F. et al., Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402 (1997) ) , ClustalW2 (available on the website of European Bioinformatics Institute, see also, Higgins D.G. et al., Methods in Enzymology, 266: 383-402 (1996) ; Larkin M.A. et al., Bioinformatics (Oxford, England) , 23 (21) : 2947-8 (2007) ) , and ALIGN or Megalign (DNASTAR) software. A person skilled in the art may use the default parameters provided by the tool or may customize the parameters as appropriate for the alignment, such as for example, by selecting a suitable algorithm.

[0060] “Effector functions” as used herein refer to biological activities attributable to the binding of Fc region of an antibody to its effectors such as C1 complex and Fc receptor. Exemplary effector functions include complement dependent cytotoxicity (CDC) mediated by interaction of antibodies and C1q on the C1 complex; antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) mediated by binding of Fc region of an antibody to Fc receptor on an effector cell; and phagocytosis. Effector functions can be evaluated using various assays such as Fc receptor binding assay, C1q binding assay, and cell lysis assay.

[0061] An “isolated” substance has been altered by the hand of man from the natural state. If an “isolated” composition or substance occurs in nature, it has been changed or removed from its original environment, or both. For example, a polynucleotide or a polypeptide naturally present in a living animal is not “isolated, ” but the same polynucleotide or polypeptide is “isolated” if it has been sufficiently separated from the coexisting materials of its natural state so as to exist in a substantially pure state. An “isolated nucleic acid sequence” refers to the sequence of an isolated nucleic acid molecule. In certain embodiments, an “isolated antibody or an antigen-binding fragment thereof” refers to the antibody or antigen-binding fragments thereof having a purity of at least 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%as determined by electrophoretic methods (such as SDS-PAGE, isoelectric focusing, capillary electrophoresis) , or chromatographic methods (such as ion exchange chromatography or reverse phase HPLC) .

[0062] The term “nucleic acid molecule” as used herein refers to a polymer of DNA or RNA, or modified forms thereof, which can be single-stranded or double-stranded, synthesized or obtained (e.g., isolated and / or purified) from natural sources, which can contain natural, non-natural or altered nucleotides, and which can contain a natural, non-natural or altered inter-nucleotide linkage, such as a phosphoroamidate linkage or a phosphorothioate linkage, instead of the phosphodiester found between the nucleotides of an unmodified oligonucleotide. The nucleic acid can comprise any nucleotide sequence which encodes any of the antigen-binding proteins of the present disclosure.

[0063] The term “vector” as used herein refers to a vehicle into which a genetic element may be operably inserted so as to bring about the expression of that genetic element, such as to produce the protein, RNA or DNA encoded by the genetic element, or to replicate the genetic element. A vector may be used to transform, transduce, or transfect a host cell so as to bring about expression of the genetic element it carries within the host cell. Examples of vectors include plasmids, phagemids, cosmids, artificial chromosomes such as yeast artificial chromosome (YAC) , bacterial artificial chromosome (BAC) , or P1-derived artificial chromosome (PAC) , bacteriophages such as lambda phage or M13 phage, and animal viruses. A vector may contain a variety of elements for controlling expression, including promoter sequences, transcription initiation sequences, enhancer sequences, selectable elements, and reporter genes. In addition, the vector may contain an origin of replication. A vector may also include materials to aid in its entry into the cell, including but not limited to a viral particle, a liposome, or a protein coating. A vector can be an expression vector or a cloning vector. The present disclosure provides vectors (e.g., expression vectors) containing the nucleic acid sequence provided herein encoding the antibody or an antigen-binding fragment thereof, at least one promoter (e.g., SV40, CMV, EF-1α) operably linked to the nucleic acid sequence, and at least one selection marker.

[0064] The phrase “host cell” as used herein refers to a cell into which an exogenous polynucleotide and / or a vector can be or has been introduced.

[0065] The term “subject” includes human and non-human animals. Non-human animals include all vertebrates, e.g., mammals and non-mammals, such as non-human primates, mice, rats, cats, rabbits, sheep, dogs, cows, chickens, amphibians, and reptiles. Except when noted, the terms “patient” or “subject” are used herein interchangeably.

[0066] “Treating” or “treatment” of a disease, disorder or condition as used herein includes preventing or alleviating a disease, disorder or condition, slowing the onset or rate of development of a disease, disorder or condition, reducing the risk of developing a disease, disorder or condition, preventing or delaying the development of symptoms associated with a disease, disorder or condition, reducing or ending symptoms associated with a disease, disorder or condition, generating a complete or partial regression of a disease, disorder or condition, curing a disease, disorder or condition, or some combination thereof.

[0067] The term “diagnosis” “diagnoses” or “diagnosing” refers to the identification of a pathological state, disease or condition, such as identification of a DLL3 related disease, or refer to identification of a subject with a DLL3 related disease who may benefit from a particular treatment regimen. In some embodiments, the DLL3 related disease provided herein refers to a disease or disorder that is responsive to DLL3 inhibition. In some embodiments, diagnosis contains the identification of abnormal amount or activity of DLL3. In some embodiments, diagnosis refers to the identification of an inflammatory disease, an autoimmune disease, or a cancer in a subject.

[0068] As used herein, the term “sample” or “biological sample” refers to a biological composition that is obtained or derived from a subject of interest that contains a cellular and / or other molecular entity that is to be characterized and / or identified, for example based on physical, biochemical, chemical and / or physiological characteristics. A biological sample includes, but is not limited to, cells, tissues, organs and / or biological fluids of a subject, obtained by any method known by those of skill in the art. In some embodiments, the biological sample is a fluid sample. In some embodiments, the fluid sample is whole blood, plasma, blood serum, mucus (including nasal drainage and phlegm) , peritoneal fluid, pleural fluid, chest fluid, saliva, urine, synovial fluid, cerebrospinal fluid (CSF) , thoracentesis fluid, abdominal fluid, ascites or pericardial fluid. In some embodiments, the biological sample is a tissue or cell obtained from heart, liver, spleen, lung, kidney, skin or blood vessels of the subject.

[0069] “DLL3” , which is short for Delta-like 3, is a protein which in humans is encoded by the DLL3 gene. DLL3 belongs to a member of the delta protein ligand family. This family functions as Notch ligands that are characterized by a DSL domain, EGF repeats, and a transmembrane domain. Expression of DLL3 is highest in fetal brain. It plays a key role in somitogenesis within the paraxial mesoderm.

[0070] Together with DLL1, DLL4, JAG1 and JAG2, DLL3 is an inhibitory ligand of the Notch receptor and located in the Golgi apparatus in healthy cells. When DLL3 is pathologically overexpressed, it results in aberrant growth, migration and invasion of neuroendocrine tumor cells through achaete-scute homolog-1 (ASCL1) transcriptional factor (Cancer Sci. 2019; 110 (5) : 1599-608) .

[0071] DLL3 has high, homogeneous cell surface expression in tumors, versus low, cytoplasmic expression in a subset of normal tissues. Both IHC and FACS analyses on primary SCLC tumors reveal that DLL3 shows robust membrane expression in ～85%population with 68%of the patients with high DLL3 expression (>75%of tumor cells) (Lung Cancer. 2020 Sep: 147: 237-243) .

[0072] The term “anti-DLL3 antibody” refers to an antibody that is capable of specifically binding to DLL3 (e.g., human DLL3) . The term “anti-human DLL3 antibody” refers to an antibody that is capable of specifically binding to human DLL3.

[0073] A “DLL3-related” disease, disorder or condition refers to any disease or condition linked to increased or decreased expression or activities of DLL3.

[0074] In some embodiments, the DLL3-related disease, disorder or condition is associated with dysregulation of DLL3 mediated signaling compared to the control level. In some embodiments, the dysregulation of DLL3 mediated signaling includes dysregulation of DLL3-expressing cell proliferation. In some embodiments, the control level is the level in a healthy individual.

[0075] In some embodiments, the DLL3-related disease, disorder or condition is a disorder related to excessive cell proliferation, such as, for example, cancer. In certain embodiments, the DLL3-related disease or condition is characterized in expressing or over-expressing of DLL3 gene. In certain embodiments, the DLL3-related disease or condition is characterized in over-expression of DLL3 and / or dysregulation of DLL3 mediated signaling.

[0076] The term “pharmaceutically acceptable” indicates that the designated carrier, vehicle, diluent, excipient (s) , and / or salt is generally chemically and / or physically compatible with the other ingredients comprising the formulation, and physiologically compatible with the recipient thereof.Anti-DLL3 Antibodies

[0077] The present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof. The anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments provided herein are capable of specific binding to DLL3 (e.g., human DLL3) .

[0078] In certain embodiments, the antibodies and the antigen-binding fragments thereof provided herein specifically bind to human DLL3 (i.e., long-form DLL3) at a KD value of no more than 10-6 M, no more than 10-7 M, no more than 8×10-8 M, no more than 5×10-8 M, no more than 2×10-8 M, no more than 8×10-9 M, no more than 5×10-9 M, no more than 2×10-9 M, no more than 10-9 M, no more than 8×10-10 M, no more than 7×10-10 M, or no more than 6×10-10 M by Surface Plasmon Resonance (SPR) assay, see, for example, Murphy, M. et al., Current protocols in protein science, Chapter 19, unit 19.14, 2006.

[0079] Binding of the antibodies or the antigen-binding fragments thereof provided herein to human DLL3 can also be represented by “half maximal effective concentration” (EC50) value. As used herein, the term “half maximal effective concentration” or “EC50” refers to the concentration of an antibody where 50%of its maximal binding is observed. The EC50 value can be measured by binding assays known in the art, for example, direct or indirect binding assay such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) , flow cytometry (FACS) assay, and other binding assays.

[0080] In some embodiments, the antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein selectively bind to DLL3. The term “selectively bind” means that preferably binding to DLL3 while binding to any other member of the Notch family of ligands, (such as DLL1 and DLL4 proteins) are much lower or not detectable. In some embodiments, the antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein bind to DLL3 and do not bind to any other member of the DLL family, such as DLL1 and DLL4. In some embodiments, the antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein have a higher selectivity for binding to DLL3 than to other members of the DLL family. In some embodiments, the antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein have a selectivity for DLL3 which is at least 600-fold, 500-fold, 400-fold, 300-fold, 200-fold, 100-fold, 90-fold, 80-fold, 70-fold, 60-fold, 50-fold, 40-fold, 30-fold, 20-fold, 10-fold, 5-fold, 4-fold, 3-fold, 2-fold greater than the selectivity of the antibodies and antigen-binding fragments thereof for DLL1, DLL4, or a combination thereof. Selectivity may be based on the EC50 exhibited by the antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein for DLL3, or a DLL family member, wherein the EC50 may be determined by techniques known in the art, e.g., ELISA or FACS-based affinity assay.

[0081] The DLL3 protein from its N-terminal to C-terminal comprises a DSL domain, six EGF like repeat sequences, and a transmembrane domain. Taking human DLL3 for example, the DSL domain is from the position Ala27 to Glu215 (SEQ ID NO: 190) ; an E3 domain (i.e., the third EGF like repeat) starts from Val311; an E4 domain (i.e., the fourth EGF like repeat) starts from Lys353; and an E6 domain (i.e., the six EGF like repeat) ends at Ala479 of the DLL3 protein. Ala27 corresponds to position 1 of the sequence SEQ ID NO: 189. Glu215 corresponds to position 189 of the sequence SEQ ID NO: 189. Val311 corresponds to position 285 of the sequence SEQ ID NO: 189. Lys353 corresponds to position 326 of the sequence SEQ ID NO: 189. Ala479 corresponds to position 453 of the sequence SEQ ID NO: 70.

[0082] Amino acid sequence of human DLL3 ECD region (SEQ ID NO: 189)

[0083] Amino acid sequence of human DLL3 DSL region, aa27-215 (SEQ ID NO: 190)

[0084] Amino acid sequence of human DLL3 E3-E6 region, aa311-479 (SEQ ID NO: 191)

[0085] Amino acid sequence of human DLL3 E4-E6 region, aa352-479 (SEQ ID NO: 192)

[0086] In some embodiments, the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments provided herein recognizes and binds to E3-E6 domains (SEQ ID NO: 191) of DLL3 protein. In some embodiments, the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments provided herein recognizes and binds to E4-E6 domains (SEQ ID NO: 192) of DLL3 protein. In some embodiments, the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments provided herein does not recognize or bind to the DSL domain of DLL3 protein.

[0087] In some embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein binds to DLL3 endogenously expressed by human lung cancer cells, e.g., SHP-77 cells and H524 cells, and exhibits a binding EC50 less than about 10 nM (e.g., less than about 10 nM, less than about 9 nM, less than about 8 nM, less than about 7 nM, less than about 6 nM, less than about 5 nM, less than about 4 nM, less than about 3 nM, less than about 2 nM, less than about 1 nM) in flow cytometry (FACS) binding affinity assay with above several cells.

[0088] In some embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein is linked to one or more conjugate moieties. As used herein, the term “conjugate moiety” refers to any molecule (chemical or biochemical, naturally-occurring or non-naturally-occurring) which is different from the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein. In some embodiments, the conjugate moiety is selected from a polymer, a carbohydrate, a lipid, a nucleic acid, an oligonucleotide, a DNA or RNA, an amino acid, peptide, polypeptide, protein, therapeutic agent, or a diagnostic agent.Illustrative Anti-DLL3 Antibodies

[0089] In some embodiments, the present disclosure provides an anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof, comprising a heavy chain complementary determining region 1 (HCDR1) , a HCDR2 and a HCDR3 respectively having an at least 70%sequence identity of the HCDR1, HCDR2 and HCDR3 comprised in the heavy chain variable region as set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39 and 176-188; and / or a light chain complementary determining region 1 (LCDR1) , a LCDR2 and a LCDR3 respectively having an at least 70%sequence identity of the LCDR1, LCDR2 and LCDR3 comprised in the heavy chain variable region as set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 and 163-175.

[0090] Antibody “A093” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 1, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 2.

[0091] Antibody “B008” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 3, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 4.

[0092] Antibody “B016” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 5, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 6.

[0093] Antibody “B017” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 7, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 8.

[0094] Antibody “B043” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 9, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 10.

[0095] Antibody “B046” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 11, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 12.

[0096] Antibody “B050” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 13, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 14.

[0097] Antibody “B066” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 15, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 16.

[0098] Antibody “B073” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 17, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 18.

[0099] Antibody “B078” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 19, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 20.

[0100] Antibody “B092” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 21, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 22.

[0101] Antibody “B093” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 23, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 24.

[0102] Antibody “B103” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 25, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 26.

[0103] Antibody “B121” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 27, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 28.

[0104] Antibody “B145” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 29, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 30.

[0105] Antibody “B168” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 31, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 32.

[0106] Antibody “B187” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 33, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 34.

[0107] Antibody “B196” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 35, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 36.

[0108] Antibody “B204” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 37, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 38.

[0109] Antibody “B226” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 39, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 40.

[0110] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising one or more (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, or 6) CDRs sequences of Antibody A093, B008, B016, B017, B043, B046, B050, B066, B073, B078, B092, B093, B103, B121, B145, B168, B187, B196, B204 or B226.

[0111] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising HCDR1 comprising the sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 41, 44, 47, 49, 56, 59, 63, 68, 71, 74, 77, 80 and 83; HCDR2 comprising the sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 42, 45, 50, 52, 60, 64, 69, 72, 75, 78 and 81; HCDR3 comprising the sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 43, 46, 48, 51, 53, 54, 55, 57, 58, 61, 62, 65, 66, 67, 70, 73, 76, 79, 82 and 84; LCDR1 comprising the sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 85, 88, 91, 94, 97, 100, 103, 108, 111, 117, 121, 123 and 128; LCDR2 comprising the sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 86, 89, 92, 95, 98, 101, 104, 106, 109, 112, 115, 124 and 126; and LCDR3 comprising the sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 87, 90, 93, 96, 99, 102, 105, 107, 110, 113, 114, 116, 118, 119, 120, 122, 125, 127 and 129.

[0112] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising a HCDR1 comprising the sequence of SEQ ID NO: 41, a HCDR2 comprising the sequence of SEQ ID NO: 42, a HCDR3 comprising the sequence of SEQ ID NO: 43, and / or a LCDR1 comprising the sequence of SEQ ID NO: 85, a LCDR2 comprising the sequence of SEQ ID NO: 86, and a LCDR3 comprising the sequence of SEQ ID NO: 87.

[0113] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 45, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 46, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 88, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 89, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 90.

[0114] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 47, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 45, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 48, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 91, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 92, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 93.

[0115] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 49, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 50, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 94, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96.

[0116] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 99.

[0117] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 100, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 101, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0118] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 55, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 103, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 104, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 105.

[0119] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 56, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 106, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 107.

[0120] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 49, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 108, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110.

[0121] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 111, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 112, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 113.

[0122] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 106, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 114.

[0123] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 64, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 94, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 115, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 116.

[0124] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 66, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 117, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 118.

[0125] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 117, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 119.

[0126] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 94, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 120.

[0127] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 121, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 122.

[0128] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 74, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 125.

[0129] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 79, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 126, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 127.

[0130] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0131] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 83, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 84, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 128, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 129.

[0132] Table 1 below shows the CDR amino acid sequences of antibodies A093, B008, B016, B017, B043, B046, B050, B066, B073, B078, B092, B093, B103, B121, B145, B168, B187, B196, B204 and B226. The CDR boundaries were defined or identified by the convention of Kabat. Table 2 below shows the heavy chain and light chain variable region amino acid sequences of antibodies A093, B008, B016, B017, B043, B046, B050, B066, B073, B078, B092, B093, B103, B121, B145, B168, B187, B196, B204 or B226.

[0133] Table 1. CDR amino acid sequences of the exemplary antibodies

[0134] Table 2. Variable region amino acid sequences of the exemplary antibodies

[0135] Given that each of antibodies A093, B008, B016, B017, B043, B046, B050, B066, B073, B078, B092, B093, B103, B121, B145, B168, B187, B196, B204 and B226 can bind to DLL3 and that antigen-binding specificity is provided primarily by the CDR1, CDR2 and CDR3 regions, the HCDR1, HCDR2 and HCDR3 sequences and LCDR1, LCDR2 and LCDR3 sequences of antibodies A093, B008, B016, B017, B043, B046, B050, B066, B073, B078, B092, B093, B103, B121, B145, B168, B187, B196, B204 and B226 can be “mixed and matched” (i.e., CDRs from different antibodies can be mixed and matched, but each antibody must contain a HCDR1, HCDR2 and HCDR3 and a LCDR1, LCDR2 and LCDR3) to create anti-DLL3 binding molecules of the present disclosure. DLL3 binding of such “mixed and matched” antibodies can be tested using the binding assays described above and in the Examples. Preferably, when VH CDR sequences are mixed and matched, the HCDR1, HCDR2 and / or HCDR3 sequence from a particular VH sequence is replaced with a structurally similar CDR sequence (s) . Likewise, when VL CDR sequences are mixed and matched, the LCDR1, LCDR2 and / or LCDR3 sequence from a particular VL sequence preferably is replaced with a structurally similar CDR sequence (s) . It will be readily apparent to a person skilled in the art that novel VH and VL sequences can be created by substituting one or more VH and / or VL CDR region sequences with structurally similar sequences from the CDR sequences disclosed herein for monoclonal antibodies A093, B008, B016, B017, B043, B046, B050, B066, B073, B078, B092, B093, B103, B121, B145, B168, B187, B196, B204 and B226.

[0136] CDRs are known to be responsible for antigen binding. However, it has been found that not all of the 6 CDRs are indispensable or unchangeable. In other words, it is possible to replace or change or modify one or more CDRs in anti-DLL3 antibodies A093, B008, B016, B017, B043, B046, B050, B066, B073, B078, B092, B093, B103, B121, B145, B168, B187, B196, B204 and B226, yet substantially retain the specific binding affinity to DLL3.

[0137] Further, the anti-DLL3 antibodies can be modified by affinity maturation. Antibodies selected from phage libraries undergo affinity maturation process. Single saturation mutations to (LCDR1 + LCDR3 + HCDR3) or to (LCDR2 + HCDR1 +HCDR2) , double saturation mutations to LCDR3 or to HCDR3 regions were introduced to selected anti-DLL3 antibody CDR regions, respectively. Antibody variants from generated libraries were selected, sequenced and screened by ELISA against specific antigens, if binding affinities are enhanced compared to parental antibodies.

[0138] As used herein, the term “affinity matured antibody” refers to antibodies obtained by affinity maturation modification of parent antibodies (such as antibodies A093, B008, B016, B017, B043, B046, B050, B066, B073, B078, B092, B093, B103, B121, B145, B168, B187, B196, B204 or B226 as provided herein) , which are, for example, originally obtained by immunizing mice using the specific antigen.

[0139] In some embodiments, the present disclosure provides affinity matured antibodies. In some embodiments, the present application provides affinity matured antibodies based on the parent Antibody B204. In some embodiments, the present disclosure provides affinity matured antibodies comprising one or more (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, or 6) CDRs sequences of antibodies B204-033-B204-111, B204-WT-B204-098, B204-WT-B204-098_N56Q, B204-WT-B204-038, B204-004-B204-004, B204-109-B204-WT, B204-060-B204-088, B204-079-B204-WT, B204-065-B204-065, B204-WT-B204-047, B204-094-B204-094, B204-054-B204-054, B204-072-B204-072, B204-108-B204-108, B204-025-B204-WT, B204-060-B204-WT, B204-033-B204-033, B204-017-B204-017, B204-WT-B204-004 and B204-005-B204-WT.

[0140] Antibody “B204-033-B204-111” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 180, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 175.

[0141] Antibody “B204-WT-B204-098” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 37, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 173. Antibody “B204-WT-B204-098_N56Q” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 37, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 202.

[0142] Antibody “B204-WT-B204-038” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 37, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 166.

[0143] Antibody “B204-004-B204-004” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 176, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 163.

[0144] Antibody “B204-109-B204-WT” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 188, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 38.

[0145] Antibody “B204-060-B204-088” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 182, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 171.

[0146] Antibody “B204-079-B204-WT” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 185, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 38.

[0147] Antibody “B204-065-B204-065” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 183, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 169.

[0148] Antibody “B204-WT-B204-047” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 37, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 167.

[0149] Antibody “B204-094-B204-094” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 186, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 172.

[0150] Antibody “B204-054-B204-054” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 181, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 168.

[0151] Antibody “B204-072-B204-072” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 184, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 170.

[0152] Antibody “B204-108-B204-108” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 187, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 174.

[0153] Antibody “B204-025-B204-WT” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 179, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 38.

[0154] Antibody “B204-060-B204-WT” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 182, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 38.

[0155] Antibody “B204-033-B204-033” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 180, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 165.

[0156] Antibody “B204-017-B204-017” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 178, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 164.

[0157] Antibody “B204-WT-B204-004” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 37, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 163.

[0158] Antibody “B204-005-B204-WT” as used herein refers to a monoclonal antibody comprising a heavy chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 177, and a light chain variable region having the sequence of SEQ ID NO: 38.

[0159] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising HCDR1 comprising the sequence of SSVMX1 (SEQ ID NO: 157) ; HCDR2 comprising the sequence of X2ISX3X4GELX5YYADSVKG (SEQ ID NO: 158) ; HCDR3 comprising the sequence of DX6X7YAX8DX9 (SEQ ID NO: 159) ; LCDR1 comprising the sequence of RAX10QGIX11SWLA (SEQ ID NO: 160) ; LCDR2 comprising the sequence of AAX12X13LX14X15 (SEQ ID NO: 161) ; and LCDR3 comprising the sequence of QQX16X17X18FPLT (SEQ ID NO: 162) ; wherein X1 is selected from G or T; X2 is selected from L or S; X3 is selected from P, I or V; X4 is selected from G or R; X5 is selected from T, D or L; X6 is selected from N, S or T; X7 is selected from A or G; X8 is selected from F, N or L; and X9 is selected from I or F; X10 is selected from R, S or E; and X11 is selected from T or S; X12 is selected from S or A; X13 is selected from S, H or L; X14 is selected from Q or A; X15 is selected from N, A or Q; X16 is selected from A or V; X17 is selected from H, D, S, Y; and X18 is selected from S, I, H or N.

[0160] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising a HCDR1 comprising the sequence of SEQ ID NO: 80, a HCDR2 comprising the sequence of SEQ ID NO: 81, a HCDR3 comprising the sequence of SEQ ID NO: 130, and / or a LCDR1 comprising the sequence of SEQ ID NO: 143, a LCDR2 comprising the sequence of SEQ ID NO: 124, and a LCDR3 comprising the sequence of SEQ ID NO: 144.

[0161] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124 or 201, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 145.

[0162] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 146.

[0163] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 147.

[0164] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 132, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0165] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 133, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 148.

[0166] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0167] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 135, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 136, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 149, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0168] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 150.

[0169] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 137, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 151, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0170] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 138, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 152, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0171] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 135, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 139, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 153, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0172] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 135, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 154, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0173] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0174] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 133, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0175] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 130, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 155, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0176] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 141, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 156, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 148.

[0177] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 147.

[0178] In certain embodiments, the present disclosure provides anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof comprising an HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 142, an LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and an LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

[0179] Table 3 below shows the CDR amino acid sequences of antibodies B204-033-B204-111, B204-WT-B204-098, B204-WT-B204-098_N56Q, B204-WT-B204-038, B204-004-B204-004, B204-109-B204-WT, B204-060-B204-088, B204-079-B204-WT, B204-065-B204-065, B204-WT-B204-047, B204-094-B204-094, B204-054-B204-054, B204-072-B204-072, B204-108-B204-108, B204-025-B204-WT, B204-060-B204-WT, B204-033-B204-033, B204-017-B204-017, B204-WT-B204-004 and B204-005-B204-WT. The CDR boundaries were defined or identified by the convention of Kabat. Table 4 below shows the heavy chain and light chain variable region amino acid sequences of antibodies B204-033-B204-111, B204-WT-B204-098, B204-WT-B204-098_N56Q, B204-WT-B204-038, B204-004-B204-004, B204-109-B204-WT, B204-060-B204-088, B204-079-B204-WT, B204-065-B204-065, B204-WT-B204-047, B204-094-B204-094, B204-054-B204-054, B204-072-B204-072, B204-108-B204-108, B204-025-B204-WT, B204-060-B204-WT, B204-033-B204-033, B204-017-B204-017, B204-WT-B204-004 and B204-005-B204-WT.

[0180] Table 3. CDR amino acid sequences of the exemplary affinity matured antibodies

[0181] Table 4. Variable region amino acid sequences of the exemplary affinity matured antibodies

[0182] In certain embodiments, the antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein comprise suitable framework region (FR) sequences, as long as the antibodies and antigen-binding fragments thereof can specifically bind to DLL3. In certain embodiments, the antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein are humanized.

[0183] In some embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments provided herein comprise all or a portion of the heavy chain variable domain and / or all or a portion of the light chain variable domain. In one embodiment, the anti-DLL3 antibody or an antigen-binding fragment thereof provided herein is a single domain antibody which consists of all or a portion of the heavy chain variable domain provided herein. More information of such a single domain antibody is available in the art (see, e.g., U.S. Pat. No. 6,248,516) .

[0184] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or the antigen-binding fragments thereof provided herein further comprise an immunoglobulin (Ig) constant region, which optionally further comprises a heavy chain and / or a light chain constant region. In certain embodiments, the heavy chain constant region comprises CH1, hinge, and / or CH2-CH3 regions (or optionally CH2-CH3-CH4 regions) . In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or the antigen-binding fragments thereof provided herein comprises heavy chain constant regions of human IgG1, IgG2, IgG3, or IgG4. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or the antigen-binding fragments thereof provided herein comprises heavy chain constant regions of human IgG1. In certain embodiments, the light chain constant region comprises Cκ or Cλ. The constant region of the anti-DLL3 antibodies or the antigen-binding fragments thereof provided herein may be identical to the wild-type constant region sequence or be different in one or more mutations.

[0185] In certain embodiments, the heavy chain constant region comprises an Fc region. Fc region is known to mediate effector functions such as antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) and complement-dependent cytotoxicity (CDC) of the antibody. Fc regions of different Ig isotypes have different abilities to induce effector functions. For example, Fc regions of IgG1 and IgG3 have been recognized to induce both ADCC and CDC more effectively than those of IgG2 and IgG4. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein comprises an Fc region of IgG1 or IgG3 isotype, which could induce ADCC or CDC; or alternatively, a constant region of IgG4 or IgG2 isotype, which has reduced or depleted effector function. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein comprise a wild type human IgG4 Fc region or other wild type human IgG4 alleles. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein comprise a human IgG4 Fc region comprising an S228P mutation. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein comprise a human IgG4 Fc region comprising an M252Y / S254T / T256E (YTE) mutation. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein comprise a human IgG4 Fc region comprising a T307Q / N434A (QA) mutation. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein comprise a human IgG4 Fc region comprising an S228P mutation, and an M252Y / S254T / T256E (YTE) mutation. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein comprise a human IgG4 Fc region comprising an S228P mutation, and a T307Q / N434A (QA) mutation. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein comprise a human IgG4 Fc region comprising a S228P mutation, an M252Y / S254T / T256E (YTE) mutation and a T307Q / N434A (QA) mutation.

[0186] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein comprise the heavy chain constant region with an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 194.

[0187] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein comprise the light chain constant region with an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 193.

[0188] Amino acid sequence of an exemplary light chain constant region (SEQ ID NO: 193)

[0189] Amino acid sequence of an exemplary heavy chain constant region (SEQ ID NO: 194)

[0190] In certain embodiments, the antibodies or the antigen-binding fragments thereof provided herein have a specific binding affinity to human DLL3 which is sufficient to provide for diagnostic and / or therapeutic use.

[0191] The antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein can be a monoclonal antibody, a polyclonal antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody, a recombinant antibody, a labeled antibody, a bivalent antibody, an anti-idiotypic antibody, or a fusion protein. A recombinant antibody is an antibody prepared in vitro using recombinant methods rather than in animals.Antibody Variants

[0192] The anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments thereof provided herein also encompass various variants of the anti-DLL3 antibody sequences provided herein.

[0193] In certain embodiments, the antibody variants comprise one or more modifications or substitutions in one or more of the CDR sequences as provided in Table 1 or 3 above, one or more of the non-CDR sequences of the heavy chain variable region provided in Table 2 or 4 above, and / or the constant region (e.g., Fc region) . Such variants retain binding specificity to DLL3 of their parent antibodies but have one or more desirable properties conferred by the modification (s) or substitution (s) . For example, the antibody variants may have improved antigen-binding affinity, improved glycosylation pattern, reduced risk of glycosylation, reduced deamination, reduced or depleted effector function (s) , improved FcRn receptor binding, increased pharmacokinetic half-life, pH sensitivity, and / or compatibility to conjugation (e.g., one or more introduced cysteine residues) .

[0194] The parent antibody sequence may be screened to identify suitable or preferred residues to be modified or substituted, using methods known in the art, for example “alanine scanning mutagenesis” (see, for example, Cunningham and Wells (1989) Science, 244: 1081-1085) . Briefly, target residues (e.g., charged residues such as Arg, Asp, His, Lys, and Glu) can be identified and replaced by a neutral or negatively charged amino acid (e.g., alanine or polyalanine) , and the modified antibodies are produced and screened for the interested property. If substitution at a particular amino acid location demonstrates an interested functional change, then the position can be identified as a potential residue for modification or substitution. The potential residues may be further assessed by substituting with a different type of residue (e.g., cysteine residue, positively charged residue, etc. ) .

[0195] Affinity Variants

[0196] Affinity variants of antibodies may contain modifications or substitutions in one or more CDR sequences as provided in Table 1 or 3 above, or the heavy chain variable region sequences provided in Table 2 or 4 above. FR sequences can be readily identified by a person skilled in the art based on the CDR sequences in Table 1 above and variable region sequences in Table 2 above, as it is well-known in the art that a CDR region is flanked by two FR regions in the variable region. The affinity variants retain specific binding affinity to DLL3 of the parent antibody, or even have improved DLL3 specific binding affinity over the parent antibody. In certain embodiments, at least one (or all) of the substitution (s) in the CDR sequences, FR sequences, or variable region sequences comprises a conservative substitution.

[0197] A person skilled in the art will understand that in the CDR sequences provided in Table 1 above, and variable region sequences provided in Table 2 above, one or more amino acid residues may be substituted yet the resulting antibody or antigen-binding fragment still retain the binding affinity or binding capacity to DLL3, or even have an improved binding affinity or capacity. Various methods known in the art can be used to achieve this purpose. For example, a library of antibody variants (such as Fab or scFv variants) can be generated and expressed with phage display technology, and then screened for the binding affinity to human DLL3. For another example, computer software can be used to virtually simulate the binding of the antibodies to human DLL3 and identify the amino acid residues on the antibodies which form the binding interface. Such residues may be either avoided in the substitution so as to prevent reduction in binding affinity or targeted for substitution to provide for a stronger binding.

[0198] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragment thereof provided herein comprises one or more amino acid residue substitutions in one or more of the CDR sequences, and / or one or more of the FR sequences. In certain embodiments, an affinity variant comprises no more than 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, or 1 substitution (s) in the CDR sequences and / or FR sequences in total.

[0199] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof comprise 1, 2, or 3 CDR sequences having at least 80% (e.g., at least 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) sequence identity to that (or those) listed in Table 1 or 3 above yet retaining the specific binding affinity to DLL3 at a level similar to or even higher than its parent antibody.

[0200] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof comprise one or more variable region sequences having at least 80%(e.g., at least 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) sequence identity to that (or those) listed in Table 2 above yet retaining the specific binding affinity to DLL3 at a level similar to or even higher than its parent antibody. In some embodiments, a total of 1 to 10 amino acids have been substituted, inserted, or deleted in a variable region sequence listed in Table 2 or 4 above. In some embodiments, the substitutions, insertions, or deletions occur in regions outside the CDRs (e.g., in the FRs) .

[0201] Glycosylation Variants

[0202] The anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein also encompass glycosylation variants, which can be obtained to either increase or decrease the extent of glycosylation of the antibodies or antigen binding fragments thereof.

[0203] The antibodies or antigen binding fragments thereof may comprise one or more modifications that introduce or remove a glycosylation site. A glycosylation site is an amino acid residue with a side chain to which a carbohydrate moiety (e.g., an oligosaccharide structure) can be attached. Glycosylation of antibodies is typically either N-linked or O-linked. N-linked refers to the attachment of the carbohydrate moiety to the side chain of an asparagine residue, for example, an asparagine residue in a tripeptide sequence such as asparagine-X-serine and asparagine-X-threonine, where X is any amino acid except proline. O-linked glycosylation refers to the attachment of one of the sugars N-aceylgalactosamine, galactose, or xylose to a hydroxyamino acid, most commonly to serine or threonine. Removal of a native glycosylation site can be conveniently accomplished, for example, by altering the amino acid sequence such that one of the above-described tripeptide sequences (for N-linked glycosylation sites) or serine or threonine residues (for O-linked glycosylation sites) present in the sequence in the is substituted. A new glycosylation site can be created in a similar way by introducing such a tripeptide sequence or serine or threonine residue.

[0204] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments provided herein comprise a mutation at N297 (e.g., N297A, N297Q, or N297G) to remove the glycosylation site.

[0205] Cysteine-engineered Variants

[0206] The anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein also encompass cysteine-engineered variants, which comprise one or more introduced free cysteine amino acid residues.

[0207] A free cysteine residue is one which is not part of a disulfide bridge. A cysteine-engineered variant is useful for conjugation with for example, a cytotoxic and / or imaging compound, a label, or a radioisoptype among others, at the site of the engineered cysteine, through for example a maleimide or haloacetyl. Methods for engineering antibodies or antigen-binding fragments thereof to introduce free cysteine residues are known in the art, see, for example, WO2006 / 034488.

[0208] Fc Variants

[0209] The anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein also encompass Fc variants, which comprise one or more amino acid residue modifications or substitutions at the Fc region and / or hinge region, for example, to provide for altered effector functions such as ADCC and CDC. Methods of altering ADCC activity by antibody engineering have been described in the art, see for example, Shields RL. et al., J Biol Chem. 2001. 276 (9) : 6591-604; Idusogie EE. et al., J Immunol. 2000. 164 (8) : 4178-84; Steurer W. et al., J Immunol. 1995, 155 (3) : 1165-74; Idusogie EE. et al., J Immunol. 2001, 166 (4) : 2571-5; Lazar GA. et al., PNAS, 2006, 103 (11) : 4005-4010; Ryan MC. et al., Mol. Cancer Ther., 2007, 6: 3009-3018; Richards JO, . et al., Mol Cancer Ther. 2008, 7 (8) : 2517-27; Shields R.L. et al., J. Biol. Chem, 2002, 277: 26733-26740; Shinkawa T. et al., J. Biol. Chem, 2003, 278: 3466-3473.

[0210] CDC activity of the antibodies or antigen-binding fragments provided herein can also be altered, for example, by improving or diminishing C1q binding and / or CDC (see, for example, WO99 / 51642; Duncan &Winter Nature 322: 738-40 (1988) ; U.S. Pat. No. 5,648,260; U.S. Pat. No. 5,624,821; and WO94 / 29351 concerning other examples of Fc region variants) . One or more amino acids selected from amino acid residues 329, 331 and 322 of the Fc region can be replaced with a different amino acid residue to alter Clq binding and / or reduced or abolished complement dependent cytotoxicity (CDC) (see, U.S. Pat. No. 6,194,551 by Idusogie et al. ) . One or more amino acid substitution (s) can also be introduced to alter the ability of the antibody to fix complement (see PCT Publication WO 94 / 29351 by Bodmer et al. ) .

[0211] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein has reduced effector functions, and comprise one or more amino acid substitution (s) in IgG1 at a position selected from the group consisting of: 234, 235, 237, and 238, 268, 297, 309, 330, and 331. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein is of IgG1 isotype and comprise one or more amino acid substitution (s) selected from the group consisting of: N297A, N297Q, N297G, L235E, L234A, L235A, L234F, L235E, P331S, and any combination thereof. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein is of IgG2 isotype, and comprises one or more amino acid substitution (s) selected from the group consisting of: H268Q, V309L, A330S, P331S, V234A, G237A, P238S, H268A, and any combination thereof (e.g., H268Q / V309L / A330S / P331S, V234A / G237A / P238S / H268A / V309L / A330S / P331S) . In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein is of IgG4 isotype, and comprises one or more amino acid substitution (s) selected from the group consisting of: N297A, N297Q, N297G, L235E, L234A, L235A, M252Y / S254T / T256E, T307Q / N434 and any combination thereof. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein is of IgG2 / IgG4 cross isotype. Examples of IgG2 / IgG4 cross isotype is described in Rother RP et al., Nat Biotechnol 25: 1256-1264 (2007) .

[0212] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments provided herein is of IgG4 isotype and comprises the amino acid substitutions of S228P / F234A / L235A (PAA) . In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments provided herein is of IgG4 isotype and comprises the amino acid substitutions of M252Y / S254T / T256 (YTE) . In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments provided herein is of IgG4 isotype and comprises the amino acid deletion of K447del.

[0213] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments provided herein is of IgG4 isotype and comprises one or more amino acid substitution (s) , for example at the point of 228. In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies and antigen-binding fragments provided herein is of IgG4 isotype and comprises one or more mutations selected from the group consisting of S228P, F234A, L235A, M252Y, S254T, T256E and K447del in the Fc region, or any combination thereof.

[0214] Unless otherwise specified, the numbering of the Fc regions described in the present disclosure are according to EU numbering index.

[0215] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof comprise one or more amino acid substitution (s) that improves pH-dependent binding to neonatal Fc receptor (FcRn) . Such a variant can have an extended pharmacokinetic half-life, as it binds to FcRn at acidic pH which allows it to escape from degradation in the lysosome and then be translocated and released out of the cell. Methods of engineering an antibody or antigen-binding fragment thereof to improve binding affinity with FcRn are well-known in the art, see, for example, Vaughn, D. et al., Structure, 6 (1) : 63-73, 1998; Kontermann, R. et al., Antibody Engineering, Volume 1, Chapter 27: Engineering of the Fc region for improved PK, published by Springer, 2010; Yeung, Y. et al., Cancer Research, 70: 3269-3277 (2010) ; and Hinton, P. et al., J. Immunology, 176: 346-356 (2006) .

[0216] In certain embodiments, anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof comprise one or more amino acid substitution (s) in the interface of the Fc region to facilitate and / or promote heterodimerization. These modifications comprise introduction of a protuberance into a first Fc polypeptide and a cavity into a second Fc polypeptide, wherein the protuberance can be positioned in the cavity so as to promote interaction of the first and second Fc polypeptides to form a heterodimer or a complex. Methods of generating antibodies with these modifications are known in the art, e.g., as described in U.S. Pat. No. 5,731,168.

[0217] Conjugates

[0218] In some embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof further comprise one or more conjugate moieties. The conjugate moiety can be linked to the antibodies or antigen-binding fragments thereof. A conjugate moiety is a moiety that can be attached to the antibody or antigen-binding fragment thereof. It is contemplated that a variety of conjugate moieties may be linked to the antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein (see, for example, “Conjugate Vaccines” , Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse and R.E. Lewis, Jr. (eds. ) , Carger Press, New York, (1989) ) . These conjugate moieties may be linked to the antibodies or antigen-binding fragments thereof by covalent binding, affinity binding, intercalation, coordinate binding, complexation, association, blending, or addition, among other methods. In some embodiments, the antibodies or antigen-binding fragments thereof can be linked to one or more conjugates via a linker.

[0219] The therapeutic agents or drugs useful as the conjugate moiety can be those which are useful for treating a DLL3 related disease or disorder (e.g., SCLC) .Polynucleotides and Recombinant Methods

[0220] The present disclosure provides isolated polynucleotides that encode the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein. The term “nucleic acid” or “polynucleotide” as used herein refers to deoxyribonucleic acids (DNA) or ribonucleic acids (RNA) and polymers thereof in either single-or double-stranded form. Unless otherwise indicated, a particular polynucleotide sequence also implicitly encompasses conservatively modified variants thereof (e.g. degenerate codon substitutions) , alleles, orthologs, SNPs, and complementary sequences as well as the sequence explicitly indicated. Specifically, degenerate codon substitutions may be achieved by generating sequences in which the third position of one or more selected (or all) codons is substituted with mixed-base and / or deoxyinosine residues (see Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19: 5081 (1991) ; Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260: 2605-2608 (1985) ; and Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8: 91-98 (1994) ) .

[0221] DNA encoding the monoclonal antibody is readily isolated and sequenced using conventional procedures (e.g., by using oligonucleotide probes that are capable of binding specifically to genes encoding the heavy and light chains of the antibody) . The encoding DNA may also be obtained by synthetic methods.

[0222] The isolated polynucleotide that encodes the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof can be inserted into a vector for further cloning (amplification of the DNA) or for expression, using recombinant techniques known in the art. Many vectors are available. The vector components generally include, but are not limited to, one or more of the following: a signal sequence, an origin of replication, one or more marker genes, an enhancer element, a promoter (e.g., SV40, CMV, EF-1α) , and a transcription termination sequence.

[0223] The present disclosure provides vectors comprising the isolated polynucleotide provided herein. In certain embodiments, the polynucleotide provided herein encodes the antibodies or antigen-binding fragments thereof, at least one promoter (e.g., SV40, CMV, EF-1α) operably linked to the nucleic acid sequence, and at least one selection marker. Examples of vectors include, but are not limited to, retrovirus (including lentivirus) , adenovirus, adeno-associated virus, herpesvirus (e.g. herpes simplex virus) , poxvirus, baculovirus, papillomavirus, papovavirus (e.g. SV40) , lambda phage, and M13 phage, plasmid pcDNA3.3, pMD18-T, pOptivec, pCMV, pEGFP, pIRES, pQD-Hyg-GSeu, pALTER, pBAD, pcDNA, pCal, pL, pET, pGEMEX, pGEX, pCI, pEGFT, pSV2, pFUSE, pVITRO, pVIVO, pMAL, pMONO, pSELECT, pUNO, pDUO, Psg5L, pBABE, pWPXL, pBI, p15TV-L, pPro18, pTD, pRS10, pLexA, pACT2.2, pCMV-SCRIPT. RTM., pCDM8, pCDNA1.1 / amp, pcDNA3.1, pRc / RSV, PCR 2.1, pEF-1, pFB, pSG5, pXT1, pCDEF3, pSVSPORT, pEF-Bos etc.

[0224] Vectors comprising the polynucleotide sequence encoding the antibody or antigen-binding fragment thereof can be introduced to a host cell for cloning or gene expression. Suitable host cells for cloning or expressing the DNA in the vectors herein are the prokaryote, yeast, or higher eukaryote cells described above. Suitable prokaryotes for this purpose include eubacteria, such as Gram-negative or Gram-positive organisms, for example, Enterobacteriaceae such as Escherichia, e.g., E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, e.g., Salmonella typhimurium, Serratia, e.g., Serratia marcescans, and Shigella, as well as Bacilli such as B. subtilis and B. licheniformis, Pseudomonas such as P. aeruginosa, and Streptomyces.

[0225] In addition to prokaryotes, eukaryotic microbes such as filamentous fungi or yeast are suitable cloning or expression hosts for anti-DLL3 antibody-encoding vectors. Saccharomyces cerevisiae, or common baker’s yeast, is the most commonly used among lower eukaryotic host microorganisms. However, a number of other genera, species, and strains are commonly available and useful herein, such as Schizosaccharomyces pombe; Kluyveromyces hosts such as, e.g. K. lactis, K. fragilis (ATCC 12, 424) , K. bulgaricus (ATCC 16, 045) , K. wickeramii (ATCC 24, 178) , K. waltii (ATCC 56, 500) , K. drosophilarum (ATCC 36, 906) , K. thermotolerans, and K. marxianus; yarrowia (EP 402, 226) ; Pichia pastoris (EP 183, 070) ; Candida; Trichoderma reesia (EP 244, 234) ; Neurospora crassa; Schwanniomyces such as Schwanniomyces occidentalis; and filamentous fungi such as, e.g. Neurospora, Penicillium, Tolypocladium, and Aspergillus hosts such as A. nidulans and A. niger.

[0226] Suitable host cells for the expression of glycosylated antibodies or antigen-fragment thereof provided herein are derived from multicellular organisms. Examples of invertebrate cells include plant and insect cells. Numerous baculoviral strains and variants and corresponding permissive insect host cells from hosts such as Spodoptera frugiperda (caterpillar) , Aedes aegypti (mosquito) , Aedes albopictus (mosquito) , Drosophila melanogaster (fruiffly) , and Bombyx mori have been identified. A variety of viral strains for transfection are publicly available, e.g., the L-1 variant of Autographa californica NPV and the Bm-5 strain of Bombyx mori NPV, and such viruses may be used as the virus herein according to the present invention, particularly for transfection of Spodoptera frugiperda cells. Plant cell cultures of cotton, corn, potato, soybean, petunia, tomato, and tobacco can also be utilized as hosts.

[0227] However, interest has been greatest in vertebrate cells, and propagation of vertebrate cells in culture (tissue culture) has become a routine procedure. Examples of useful mammalian host cell lines are monkey kidney CV1 line transformed by SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651) ; human embryonic kidney line (293 or 293 cells subcloned for growth in suspension culture, Graham et al., J. Gen Virol. 36: 59 (1977) ) ; baby hamster kidney cells (BHK, ATCC CCL 10) ; Chinese hamster ovary cells / -DHFR (CHO, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216 (1980) ) ; mouse sertoli cells (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980) ) ; monkey kidney cells (CV1 ATCC CCL 70) ; African green monkey kidney cells (VERO-76, ATCC CRL-1587) ; human cervical carcinoma cells (HELA, ATCC CCL 2) ; canine kidney cells (MDCK, ATCC CCL 34) ; buffalo rat liver cells (BRL 3A, ATCC CRL 1442) ; human lung cells (W138, ATCC CCL 75) ; human liver cells (Hep G2, HB 8065) ; mouse mammary tumor (MMT 060562, ATCC CCL51) ; TRI cells (Mather et al., Annals N. Y. Acad. Sci. 383: 44-68 (1982) ) ; MRC 5 cells; FS4 cells; and a human hepatoma line (Hep G2) . In some embodiments, the host cell is a mammalian cultured cell line, such as CHO, BHK, NS0, 293 and their derivatives.

[0228] Host cells are transformed with the above-described expression or cloning vectors for anti-DLL3 antibody production and cultured in conventional nutrient media modified as appropriate for inducing promoters, selecting transformants, or amplifying the genes encoding the desired sequences. In another embodiment, the antibody may be produced by homologous recombination known in the art. In certain embodiments, the host cell is capable of producing the antibody or antigen-binding fragment thereof provided herein.

[0229] The present disclosure also provides a method of expressing the antibody or an antigen-binding fragment thereof provided herein, comprising culturing the host cell provided herein under the condition at which the vector of the present disclosure is expressed. The host cells used to produce the antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein may be cultured in a variety of media. Commercially available media such as Ham's F10 (Sigma) , Minimal Essential Medium (MEM) , (Sigma) , RPMI-1640 (Sigma) , and Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) , Sigma) are suitable for culturing the host cells. In addition, any of the media described in Ham et al., Meth. Enz. 58: 44 (1979) , Barnes et al., Anal. Biochem. 102: 255 (1980) , U.S. Pat. No. 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655; or 5,122,469; WO 90 / 03430; WO 87 / 00195; or U.S. Pat. Re. 30,985 may be used as culture media for the host cells. Any of these media may be supplemented as necessary with hormones and / or other growth factors (such as insulin, transferrin, or epidermal growth factor) , salts (such as sodium chloride, calcium, magnesium, and phosphate) , buffers (such as HEPES) , nucleotides (such as adenosine and thymidine) , antibiotics (such as GENTAMYCINTM drug) , trace elements (defined as inorganic compounds usually present at final concentrations in the micromolar range) , and glucose or an equivalent energy source. Any other necessary supplements may also be included at appropriate concentrations that would be known to a person skilled in the art. The culture conditions, such as temperature, pH, and the like, are those previously used with the host cell selected for expression, and will be apparent to a person skilled in the art.

[0230] When using recombinant techniques, the antibody can be produced intracellularly, in the periplasmic space, or directly secreted into the medium. If the antibody is produced intracellularly, as a first step, the particulate debris, either host cells or lysed fragments, is removed, for example, by centrifugation or ultrafiltration. Carter et al., Bio / Technology 10: 163-167 (1992) describe a procedure for isolating antibodies which are secreted to the periplasmic space of E. coli. Briefly, cell paste is thawed in the presence of sodium acetate (pH 3.5) , EDTA, and phenylmethylsulfonylfluoride (PMSF) over about 30 min. Cell debris can be removed by centrifugation. Where the antibody is secreted into the medium, supernatants from such expression systems are generally first concentrated using a commercially available protein concentration filter, for example, an Amicon or Millipore Pellicon ultrafiltration unit. A protease inhibitor such as PMSF may be included in any of the foregoing steps to inhibit proteolysis and antibiotics may be included to prevent the growth of adventitious contaminants.

[0231] The anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof prepared from the cells can be purified using, for example, hydroxylapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, ammonium sulfate precipitation, salting out, and affinity chromatography, with affinity chromatography being the preferred purification technique.

[0232] In certain embodiments, Protein A immobilized on a solid phase is used for immunoaffinity purification of the antibody and antigen-binding fragment thereof. The suitability of protein A as an affinity ligand depends on the species and isotype of any immunoglobulin Fc domain that is present in the antibody. Protein A can be used to purify antibodies that are based on human gamma1, gamma2, or gamma4 heavy chains (Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62: 1-13 (1983) ) . Protein G is recommended for all mouse isotypes and for human gamma3 (Guss et al., EMBO J. 5: 1567 1575 (1986) ) . The matrix to which the affinity ligand is attached is most often agarose, but other matrices are available. Mechanically stable matrices such as controlled pore glass or poly (styrenedivinyl) benzene allow for faster flow rates and shorter processing times than can be achieved with agarose. Where the antibody comprises a CH3 domain, the Bakerbond ABXTM resin (J.T. Baker, Phillipsburg, N.J. ) is useful for purification. Other techniques for protein purification such as fractionation on an ion-exchange column, ethanol precipitation, Reverse Phase HPLC, chromatography on silica, chromatography on heparin SEPHAROSETM chromatography on an anion or cation exchange resin (such as a polyaspartic acid column) , chromatofocusing, SDS-PAGE, and ammonium sulfate precipitation are also available depending on the antibody to be recovered.

[0233] Following any preliminary purification step (s) , the mixture comprising the antibody of interest and contaminants may be subjected to low pH hydrophobic interaction chromatography using an elution buffer at a pH between about 2.5-4.5, preferably performed at low salt concentrations (e.g., from about 0-0.25M salt) .Pharmaceutical Composition

[0234] The present disclosure further provides pharmaceutical compositions comprising the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof and one or more pharmaceutically acceptable carriers.

[0235] The present disclosure further provides a pharmaceutical composition comprising the polynucleotides encoding the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof, and one or more pharmaceutically acceptable carriers. Antibodies provided herein can also be produced in vivo by delivery of polynucleotides encoding the antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein, such as, for example, in-vitro-transcribed mRNA, or expression vectors. Methods are known in the art for polynucleotide delivery for antibody expression in vivo, see, for example, Rybakova, Y. et al, Molecular Therapy, vol. 27 (8) , pp. 1415-1423 (2019) ; Deal, C.E. et al, Vaccines, 2021, 9, 108.

[0236] The present disclosure further provides pharmaceutical compositions comprising an expression vector comprising the polynucleotides encoding the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof, and one or more pharmaceutically acceptable carriers.

[0237] In certain embodiments, the expression vector comprises a viral vector or a non-viral vector. Examples of viral vectors include, without limitation, adeno-associated virus (AAV) vector, lentivirus vector, retrovirus vector, and adenovirus vector. Examples of non-viral vectors include, without limitation, naked DNA, plasmid, exosome, mRNA, and so on. In certain embodiments, the expression vector is suitable for gene therapy in human. Suitable vectors for gene therapy include, for example, adeno-associated virus (AAV) , or adenovirus vector. In certain embodiments, the expression vector comprises a DNA vector or a RNA vector. In certain embodiments, the pharmaceutically acceptable carriers are polymeric excipients, such as without limitation, microspheres, microcapsules, polymeric micelles and dendrimers. The polynucleotides, or polynucleotide vectors of the present disclosure may be encapsulated, adhered to, or coated on the polymer-based components by methods known in the art (see for example, W. Heiser, Nonviral gene transfer techniques, published by Humana Press, 2004; U.S. patent 6025337; Advanced Drug Delivery Reviews, 57 (15) : 2177-2202 (2005) ) .

[0238] Pharmaceutical acceptable carriers for use in the pharmaceutical compositions disclosed herein may include, for example, pharmaceutically acceptable liquid, gel, or solid carriers, aqueous vehicles, nonaqueous vehicles, antimicrobial agents, isotonic agents, buffers, antioxidants, anesthetics, suspending / dispending agents, sequestering or chelating agents, diluents, adjuvants, excipients, or non-toxic auxiliary substances, other components known in the art, or various combinations thereof.

[0239] Suitable components may include, for example, antioxidants, fillers, binders, disintegrants, buffers, preservatives, lubricants, flavorings, thickeners, coloring agents, emulsifiers or stabilizers such as sugars and cyclodextrins. Suitable antioxidants may include, for example, methionine, ascorbic acid, EDTA, sodium thiosulfate, platinum, catalase, citric acid, cysteine, thioglycerol, thioglycolic acid, thiosorbitol, butylated hydroxanisol, butylated hydroxytoluene, and / or propyl gallate. As disclosed herein, inclusion of one or more antioxidants such as methionine in a composition comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof and conjugates provided herein decreases oxidation of the antibody or antigen-binding fragment thereof. This reduction in oxidation prevents or reduces loss of binding affinity, thereby improving antibody stability and maximizing shelf-life. Therefore, in certain embodiments, pharmaceutical compositions are provided that comprise one or more antibodies or antigen-binding fragments thereof as disclosed herein and one or more antioxidants such as methionine. Further provided are methods for preventing oxidation of, extending the shelf-life of, and / or improving the efficacy of an antibody or antigen-binding fragment provided herein by mixing the antibody or antigen-binding fragment with one or more antioxidants such as methionine.

[0240] To further illustrate, pharmaceutical acceptable carriers may include, for example, aqueous vehicles such as sodium chloride injection, Ringer's injection, isotonic dextrose injection, sterile water injection, or dextrose and lactated Ringer's injection, nonaqueous vehicles such as fixed oils of vegetable origin, cottonseed oil, corn oil, sesame oil, or peanut oil, antimicrobial agents at bacteriostatic or fungistatic concentrations, isotonic agents such as sodium chloride or dextrose, buffers such as phosphate or citrate buffers, antioxidants such as sodium bisulfate, local anesthetics such as procaine hydrochloride, suspending and dispersing agents such as sodium carboxymethylcelluose, hydroxypropyl methylcellulose, or polyvinylpyrrolidone, emulsifying agents such as Polysorbate 80 (TWEEN-80) , sequestering or chelating agents such as EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) or EGTA (ethylene glycol tetraacetic acid) , ethyl alcohol, polyethylene glycol, propylene glycol, sodium hydroxide, hydrochloric acid, citric acid, or lactic acid. Antimicrobial agents utilized as carriers may be added to pharmaceutical compositions in multiple-dose containers that include phenols or cresols, mercurials, benzyl alcohol, chlorobutanol, methyl and propyl p-hydroxybenzoic acid esters, thimerosal, benzalkonium chloride and benzethonium chloride. Suitable excipients may include, for example, water, saline, dextrose, glycerol, or ethanol. Suitable non-toxic auxiliary substances may include, for example, wetting or emulsifying agents, pH buffering agents, stabilizers, solubility enhancers, or agents such as sodium acetate, sorbitan monolaurate, triethanolamine oleate, or cyclodextrin.

[0241] The pharmaceutical compositions can be a liquid solution, suspension, emulsion, pill, capsule, tablet, sustained release formulation, or powder. Oral formulations can include standard carriers such as pharmaceutical grades of mannitol, lactose, starch, magnesium stearate, polyvinyl pyrollidone, sodium saccharine, cellulose, magnesium carbonate, etc.

[0242] In certain embodiments, the pharmaceutical compositions are formulated into an injectable composition. The injectable pharmaceutical compositions may be prepared in any conventional form, such as for example liquid solution, suspension, emulsion, or solid forms suitable for generating liquid solution, suspension, or emulsion. Preparations for injection may include sterile and / or non-pyretic solutions ready for injection, sterile dry soluble products, such as lyophilized powders, ready to be combined with a solvent just prior to use, including hypodermic tablets, sterile suspensions ready for injection, sterile dry insoluble products ready to be combined with a vehicle just prior to use, and sterile and / or non-pyretic emulsions. The solutions may be either aqueous or nonaqueous.

[0243] In certain embodiments, unit-dose parenteral preparations are packaged in an ampoule, a vial or a syringe with a needle. All preparations for parenteral administration should be sterile and not pyretic, as is known and practiced in the art.

[0244] In certain embodiments, a sterile, lyophilized powder is prepared by dissolving an antibody or antigen-binding fragment as disclosed herein in a suitable solvent. The solvent may contain an excipient which improves the stability or other pharmacological components of the powder or reconstituted solution, prepared from the powder. Excipients that may be used include, but are not limited to, water, dextrose, sorbital, fructose, corn syrup, xylitol, glycerin, glucose, sucrose or other suitable agent. The solvent may contain a buffer, such as citrate, sodium or potassium phosphate or other such buffer known to a person skilled in the art at, in one embodiment, about neutral pH. Subsequent sterile filtration of the solution followed by lyophilization under standard conditions known to a person skilled in the art provides a desirable formulation. In one embodiment, the resulting solution will be apportioned into vials for lyophilization. Each vial can contain a single dosage or multiple dosages of the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragment thereof or composition thereof. Overfilling vials with a small amount above that needed for a dose or set of doses (e.g. about 10%) is acceptable so as to facilitate accurate sample withdrawal and accurate dosing. The lyophilized powder can be stored under appropriate conditions, such as at about 4 ℃ to room temperature.

[0245] Reconstitution of a lyophilized powder with water for injection provides a formulation for use in parenteral administration. In one embodiment, for reconstitution the sterile and / or non-pyretic water or other liquid suitable carrier is added to lyophilized powder. The precise amount depends upon the selected therapy being given, and can be empirically determined.Kits

[0246] The present disclosure also provides pharmaceutical kits comprising one or more containers filled with one or more of the anti-DLL3 antibodies or conjugates and / or compositions of the present disclosure, optionally together with additional therapeutical agents, a device (s) for administering the anti-DLL3 antibodies, conjugates and / or compositions, and written instructions in a form prescribed by a governmental agency regulating the manufacture, use or sale of pharmaceuticals or biological products. The anti-DLL3 antibodies, conjugates or compositions described herein can be packaged as a single dose or for continuous or periodic discontinuous administration. For continuous administration, a package or kit can include the anti-DLL3 antibodies, conjugates, or compositions in each dosage unit (e.g., solution or other unit described above or utilized in drug delivery) , and optionally instructions for administering the doses daily, weekly, or monthly, for a predetermined length of time or as prescribed. If varying dosing level of the anti-DLL3 antibodies, conjugates or compositions over time is desired, a package or kit may contain a sequence of dosage units which provide the desired variability.Chimeric Antigen Receptor (CAR) Composition

[0247] The present disclosure also provides chimeric antigen receptors (CARs) comprising an anti-DLL3 antigen binding domain as provided herein and a T-cell activation domain. Chimeric antigen receptors (CARs) are engineered chimeric receptors that combine an antigen-binding domain of an antibody with one or more signaling domains for T cell activation. Immune cells such as T cells and Nature Killer (NK) cells can be genetically engineered to express CARs. T cells expressing a CAR are referred to as CAR-T cells. CAR can mediate antigen-specific cellular immune activity in the T cells, enabling the CAR-T cells to eliminate cells (e.g. tumor cells) expressing the targeted antigen. In one embodiment, binding of the CAR-T cells provided herein to DLL3 expressed on cells such as cancer cells, results in proliferation and / or activation of said CAR-T cells, wherein said activated CAR-T cells can release cytotoxic factors, e.g. perforin, granzymes, and granulysin, and initiate cytolysis and / or apoptosis of the cancer cells.

[0248] In certain embodiments, the CAR comprises an anti-DLL3 antigen binding domain, a transmembrane domain, a costimulatory signaling region, and a TCR signaling domain, wherein the antigen binding domain specifically binds to DLL3 and comprises an antigen-binding fragment of the antibodies provided herein.Use

[0249] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating, preventing or alleviating a DLL3-related disease or disorder in a subject in need thereof. In another aspect, methods are provided to treat a disease, disorder or condition that is responsive to DLL3 inhibition in a subject in need thereof.

[0250] In some embodiments, the method comprises administering to the subject a therapeutically effective amount of the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragment thereof provided herein, the nucleic acid molecule encoding the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragment thereof, the conjugates and / or the pharmaceutical composition provided herein. In certain embodiments, the subject is human.

[0251] In some embodiments, the subject to be treated has been identified as having a DLL3-related disease or disorder. In some embodiments, the DLL3 related disease, disorder or condition is responsive to DLL3 inhibition. In some embodiments, the DLL3 related disease, disorder or condition is associated with dysregulation of DLL3 mediated signaling, or more specifically, associated with up-regulated DLL3 signaling.

[0252] In some embodiments, the disease or disorder is associated with cells dysregulation of DLL3 mediated signaling. In some embodiments, the dysregulation of DLL3 mediated signaling includes dysregulation of DLL3 -expressing cell proliferation, compared with control level (e.g., the level in a healthy subject) .

[0253] In some embodiments, the disease or disorder is a cancer.

[0254] In certain embodiments, the cancer is lung cancer, which is selected from: small cell lung cancer (SCLC) and non-small cell lung cancer (NSCLC) , in particular squamous cell lung carcinoma and adenocarcinoma, glioblastoma multiforme (GBM) , low-grade glioma (LGG) , skin cutaneous melanoma (SKCM) ..

[0255] In certain embodiments, the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragment thereof provided herein may be administered at a therapeutically effective dosage of about 0.01 mg / kg to about 100 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 5 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 4 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 3 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 2 mg / kg or about 0.1 mg / kg to about 1 mg / kg of the subject's body weight. In certain embodiments, the administration dosage may change over the course of treatment. For example, in certain embodiments the initial administration dosage may be higher than subsequent administration dosages. In certain embodiments, the administration dosage may vary over the course of treatment depending on the reaction of the subject.

[0256] Dosage regimens may be adjusted to provide the optimum desired response (e.g., a therapeutic response) . For example, a single dose may be administered, or several divided doses may be administered over time.

[0257] The anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein may be administered by any route known in the art, such as for example parenteral (e.g., subcutaneous, intraperitoneal, intravenous, including intravenous infusion, intramuscular, or intradermal injection) or non-parenteral (e.g., oral, intranasal, intraocular, sublingual, rectal, or topical) routes.

[0258] In some embodiments, the anti-DLL3 antibodies or antigen-binding fragments thereof provided herein may be administered alone or in combination a therapeutically effective amount of a second therapeutic agent. For example, the antibodies or antigen-binding fragments thereof or the antibody drug conjugates disclosed herein may be administered in combination with a second therapeutic agent.

[0259] In some embodiments, the second therapeutic agent is selected from a chemotherapeutic agent, radiation, or an agent that modulates, e.g., enhances or inhibits, the expression or activity of an Fc receptor, e.g. an Fc-gamma receptor, such as a cytokine. Typical cytokines for administration during treatment include granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) , granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) , interferon-γ (IFN-γ) , and tumor necrosis factor (TNF) . Typical therapeutic agents include, among others, anti-neoplastic agents such as doxorubicin, cisplatin, taxotere, 5-fluoruracil, methotrexat, gemzitabin and cyclophosphamide.

[0260] In certain of these embodiments, the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragment thereof or the conjugates provided herein that is administered in combination with one or more additional therapeutic agents may be administered simultaneously with the one or more additional therapeutic agents, and in certain of these embodiments the antibody or antigen-binding fragment thereof or the antibody drug conjugates and the additional therapeutic agent (s) may be administered as part of the same pharmaceutical composition. However, an antibody or antigen-binding fragment thereof or the antibody drug conjugates administered “in combination” with another therapeutic agent does not have to be administered simultaneously with or in the same composition as the agent. An antibody or antigen-binding fragment thereof or the antibody drug conjugates administered prior to or after another agent is considered to be administered “in combination” with that agent as the phrase is used herein, even if the antibody or antigen-binding fragment or the antibody drug conjugates and the second agent are administered via different routes. Where possible, additional therapeutic agents administered in combination with the antibodies or antigen-binding fragments thereof or the antibody drug conjugates disclosed herein are administered according to the schedule listed in the product information sheet of the additional therapeutic agent, or according to the Physicians'Desk Reference 2003 (Physicians'Desk Reference, 57th Ed; Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002) ) or protocols well known in the art.

[0261] In another aspect, the present disclosure provides methods of detecting the presence or amount of DLL3 in a sample.

[0262] The presence and / or amount of DLL3 in an interested biological sample can be indicative of whether the subject from whom the biological sample is derived could likely respond to an anti-DLL3 antibody. Various methods can be used to determine the presence and / or amount of DLL3 in a test biological sample from the subject. For example, the test biological sample can be exposed to anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragment thereof, which binds to and detects the expressed DLL3 protein. Alternatively, DLL3 can also be detected at nucleic acid expression level, using methods such as qPCR, reverse transcriptase PCR, microarray, serial analysis of gene expression (SAGE) , fluorescence in situ hybridization (FISH) , and the like. In some embodiments, the method provided herein comprises contacting a test sample with the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof provided herein, and determining the presence or the amount of DLL3 in the test sample. In some embodiments, the test sample is derived from an epithelial tissue. In certain embodiments, presence or up-regulated level of the DLL3 in the test biological sample indicates likelihood of responsiveness. The term “up-regulated” as used herein, refers to an overall increase of no less than 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%or greater, in the expression level of DLL3 in the test sample, as compared to the DLL3 expression level in a reference sample as detected using the same method. The reference sample can be a control sample obtained from a healthy or non-diseased individual, or a healthy or non-diseased sample obtained from the same individual from whom the test sample is obtained.

[0263] In another aspect, the present disclosure provides a method of diagnosing a DLL3 related disease, disorder or condition in a subject, comprising a) contacting a sample obtained from the subject with the antibody or an antigen-binding fragment thereof or the antibody drug conjugates provided herein; b) determining the presence or amount of DLL3 in the sample; and c) correlating the presence or the amount of DLL3 to existence or status of the DLL3 related disease, disorder or condition in the subject.

[0264] In another aspect, the present disclosure also provides use of the antibody or antigen-binding fragment thereof or the conjugates provided herein in the manufacture of a medicament for treating, preventing or alleviating a DLL3 related disease, disorder or condition in a subject, in the manufacture of a diagnostic reagent for diagnosing a DLL3 related disease, disorder or condition.

[0265] Some of the Examples provided herein describe the synthesis of the compounds and conjugates disclosed herein as well as intermediates used to prepare the compounds and conjugates. However, it is to be understood that these examples do not limit the present disclosure and are only meant to suggest a method of practicing the present disclosure. Persons skilled in the art will recognize that the chemical reactions described may be readily adapted to prepare a number of other compounds or conjugates of the present disclosure, and alternative methods for preparing the compounds and conjugates of the present disclosure are deemed to be within the scope of the present disclosure. Besides, persons skilled in the art will also understand that individual steps described herein or in the separate batches of a compound may be combined. Alternatively, other reactions disclosed herein or known in the art will be recognized as having applicability for preparing other compounds of the present disclosure.

[0266] It will be understood that many variations can be made in the procedures herein described while still remaining within the bounds of the present invention. It is the intention of the inventors that such variations are included within the scope of the invention.Examples

[0267] For the purpose of illustration, the following examples are included. The Examples provided herein describe the synthesis of the compounds and conjugates disclosed herein as well as intermediates used to prepare the compounds and conjugates. However, it is to be understood that these examples do not limit the present disclosure and are only meant to suggest a method of practicing the present disclosure. Persons skilled in the art will recognize that the chemical reactions described may be readily adapted to prepare a number of other compounds or conjugates of the present disclosure, and alternative methods for preparing the compounds and conjugates of the present disclosure are deemed to be within the scope of the present disclosure. Besides, persons skilled in the art will also understand that individual steps described herein or in the separate batches of a compound may be combined. Alternatively, other reactions disclosed herein or known in the art will be recognized as having applicability for preparing other compounds of the present disclosure. The following description is, therefore, not intended to limit the scope of the present disclosure, but rather is specified by the claims appended hereto.Example 1. Generation of anti-DLL3 antibodies

[0268] In order to acquire monoclonal antibodies against DLL3, 6-8 weeks old female Balb / c mice were immunized with three strategies. For first strategy, mice were immunized with 100 μg human DLL3 protein Fc tag (Acro Biosystems, Cat. No. DL3-H525x) and complete freund’s adjuvant at a ratio of 1: 1 for the first dose. Every other week, mice were immunized with 50 ug human DLL3 protein Fc tag 1: 1 ratio mixed with incomplete freund’s adjuvant for immunization enhancement. For the second strategy, mice were immunized with 100ug human DLL3 protein Fc tag on the first week, and 50 μg human DLL3 protein his tag on the third and fourth week. This immunization schedule repeat once on fifth week. The last enhancement immunization was with 100ug human DLL3 protein Fc tag. For the third strategy, mice were immunized alternatively with 1 × 107 HEK293 cells that overexpressed human DLL3 and 50 μg human DLL3 protein Fc tag recombinant protein. Plasma titers were determined by ELISA. After euthanization, spleens were collected to produce immunization libraries for screening by ELISA using human DLL3 protein his tag (Acro Biosystems, Cat. No. DL3-H52H4) or by FACS using stable cell line of HEK293-huDLL3. Some of the positive clones were isolated and sequenced.

[0269] Sub-trillion humanized single domain library was also used for anti-DLL3 Fab screening. Both solid-supported and solution-binding sorting strategies were utilized. In solid-supported sorting, the antibody phage libraries were panned with either his tagged or Llama IgG2b Fc tagged DLL3 antigens coated on 96-well half-area microplate. In solution-binding sorting method, phage libraries were incubated with decreasing concentration of biotinylated antigen in solution, which then was captured by neutravidin coated magnetic beads. Decreasing concentration allowed more stringency in panning to fish for tighter binders. To efficiently screen out potent binders against human DLL3 antigen,  libraries were screening against solid-supported and / or solution-binding sorting during the 3 round of screening.

[0270] Thereafter, enriched phage pool ELISA was performed against both recombinant human and cynomolgus DLL3. Those pools with positive signals for both antigens were kept for further single clone selection. Over 80 clones were isolated, sequenced and constructed to full length human IgG1 framed antibodies. 20 clones were picked by ELISA using human, cynomolgus and mouse DLL3 his tagged antigens and by FACS using human DLL3 overexpressed HEK293 cell line.

[0271] Sequences of heavy and light chain variable regions for anti-DLL3 monoclonal antibodies are provided in Table 2, and the CDR regions for the anti-DLL3 mAbs are provided in Table 1.Example 2. Production and purification of anti-DLL3 mAbs from the culture media of transfected cells

[0272] To obtain the recombinant anti-DLL3 mAbs, the expression vectors containing the variable regions (VH and VL) fused to the constant regions of human IgG1 heavy chain (SEQ ID NO: 194) and kappa light chain (SEQ ID NO: 193) , respectively, were transiently transfected into HEK293 or CHO-Scells. The recombinant antibodies produced in suspension of the cells were purified using Protein A affinity chromatography.Example 3. ELISA binding analysis of purified anti-DLL3 antibodies

[0273] Purified anti-DLL3 antibodies were tested in an ELISA assay for their ability to bind to immobilized human DLL3 antigen. His tagged-huDLL3 in 1× PBS (30 μl / well at 2 μg / mL) was coated on an ELISA plate overnight at 4℃. After washed with PBST (Phosphate Buffered Saline with Tween-20) , the ELISA plate was blocked in 5%PBSM (Phosphate Buffered Saline with 5 %skim milk) for 2 hours at room temperature (RT) and washed again. Anti-DLL3 mAb was diluted in 1%PBSM and added to ELISA plate (30 μl / well) for 60 min at RT. The plate was washed and the binding of anti-DLL3 mAb to the immobilized his tagged-huDLL3 was detected by adding a secondary antibody, anti-human-Fc-IgG-HRP (horseradish peroxidase) (ratio 1: 5000, Abcam, Cat. No. 97225) in 1 %PBSM for 50min at RT. The ELISA was developed using 30 μl TMB (3, 3’ , 5, 5’ -Tetramethylbenzidine) per well for 5-10 min and reaction was stopped with 2M H2SO4. Absorbance was measured at 450 nm. An isotype control IgG1 mAb that does not cross-react with DLL3 was used as negative control (illustrated in FIG. 1 as “NC” for short) to ensure assay specificity. Binding results of the anti-DLL3 mAbs are provided in FIG. 1, wherein MFI refers to mean fluorescence intensity.

[0274] Rovalpituzumab, used as the positive control in the Examples, comprises a heavy chain with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 195 and a light chain with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 196.Rovalpituzumab HC (SEQ ID NO: 195) Rovalpituzumab LC (SEQ ID NO: 196)

[0275] The EC50 values for huDLL3 binding by the mAbs are provided in Table 5. The results show that binding affinity against human DLL3 of selected anti DLL3 antibodies are in the 1-10 ng / mL range.Table 5 mAb binding affinity against human DLL3 Example 4. FACS analysis of purified anti-DLL3 antibodies

[0276] huDLL3-HEK293 stable cell line (Genomeditech, Cat. No. GM-C12896) was used in the FACS assay. The cells (10,000 cells per well in 96-well plates) were incubated with purified mAbs at various concentrations (starting from 20 μg / ml with 5× dilutions) or an isotype human IgG1 mAb control in PBS buffer at 4℃ for 60 min. The presence of the mAb on huDLL3-HEK293 was measured by FACS using anti-human IgG Fcγ PE (Jackson ImmunoResearch, Cat. No. 109-115-098) secondary antibody.

[0277] The result of the FACS binding analysis is provided in FIG. 2, wherein MFI refers to mean fluorescence intensity. The results show that, compared to rovalpituzumab, anti-DLL3 antibodies showed either comparable or relatively weaker binding on huDLL3-HEK293 cell lineExample 5. Interspecies Cross-Reactivity of anti-DLL3 antibodies

[0278] For confirmation of binding to cynomolgus DLL3 and mouse DLL3, mAbs of the invention were tested by ELISA using recombinant cynomolgus DLL3, his tag (KactusBio, Cat. No. DLL3-CM103) and mouse DLL3 his tag (KactusBio, Cat. No. DLL3-MM103) . Cynomolgus and mouse DLL3 were coated on a 96-well plate and mAb binding affinities were measured at 450 nm. The results of the ELISA are shown in FIGs. 3 and 4. An isotype control IgG1 mAb that does not cross-react with DLL3 was used as negative control (illustrated in FIGs. 3 and 4 as “NC” for short) to ensure assay specificity, and 1%skim milk in PBS was used as background control (illustrated in FIG. 3 as “BC” for short) . The EC50 values for cynomolgus DLL3 binding by the mAbs and mouse DLL3 binding are summarized in Table 6 and Table 7, respectively. These results show that most of anti-DLL3 mAbs showed cross-binding against human, cynomolgus, and mouse DLL3.

[0279] Cynomolgus DLL3 ECD region was used herein, which comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 197. Mouse DLL3 ECD region was used herein, which comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 198.

[0280] Amino acid sequence of cynomolgus DLL3 ECD region (SEQ ID NO: 197)

[0281] Amino acid sequence of mouse DLL3 ECD region (SEQ ID NO: 198) Table 6 mAb binding affinity against cynomolgus DLL3 Table 7 mAb binding affinity against mouse DLL3 Example 6. Biacore-based SPR determination of antibody affinity to his-tagged human DLL3

[0282] Biacore SPR analysis were performed using his tagged huDLL3 to determine target binding of the antibody constructs of the invention.

[0283] In detail, Protein A chips were immobilized with approximately 0.5 μg / ml anti-DLL3 mAb with contact time of 60 s, flow rate of 10 μl / min. The his tagged DLL3 antigen was loaded in a dilution series of the following concentrations: 2 μg / ml, 1 μg / ml, 0.5 μg / ml, 0.25 μg / ml and 0.125 μg / ml in HBS-EP + 1× buffer pH7.4 running buffer. Loading rate was 30 μl / min for 120 s, then HBS-EP + 1x buffer pH7.4 running buffer was applied for 200 s at 30 μl / min for 200 s. Regeneration of the chip was performed using glycine 1.5 solution with flow rate of 30 μl / min, 30 s.

[0284] The affinity values are shown in Table 8. According to the results, the kinetic binding abilities (KD) of selected anti DLL3 antibodies is in 10-70 nM range.Table 8 Affinities of anti-DLL3 antibody to human DLL3 as determined by Biacore analysis. Example 7. Evaluation of specificity of antibody to human DLL3 paralogues

[0285] The reactivity of the antibodies against recombinant human DLL3 (KactusBio, Cat. No. DLL-HM103) paralogues DLL1 (KactusBio, Cat. No. DLL-HM101, SEQ ID NO: 203) and DLL4 (KactusBio, Cat. No. DLL-HM104, SEQ ID NO: 204) were evaluated. First, 1 μg / ml DLL3, DLL1 or DLL4 antigen was coated to 96-well plate at 4℃ for overnight. Each well was washed with PBST, and then 200 μl / well of 5 %non-fat powered milk in PBS was added and incubated at 37℃ for 2 hours for blocking. Each well was washed with PBST, and 100 μl of 4ug / ml antibodies was added and allowed to react at 37℃ for 2 hours. Each well was washed with PBST again, and 100 μl / well HRP streptavidin with 1: 2000 ratio dilution in PBST was added. Plates were allowed to react at 37℃ for 1 hour and washed with PBST. 100 μl TMB solution was added and allowed for sufficient color development. 100 μL 2M H2SO4 was then added to terminate the reaction and absorbance at 450 nm was measured.

[0286] Results are enclosed in FIG. 5, which show that most of the candidates do not have non-specific binding against either DLL1 or DLL4.

[0287] Amino acid sequence of human DLL1 ECD region (SEQ ID NO: 203)

[0288]

[0289] Amino acid sequence of human DLL4 ECD region (SEQ ID NO: 204)

[0290] Example 8. Generation of affinity maturation libraries

[0291] For case demonstration, B204 mAb was further used for affinity maturation. To improve the affinity of anti DLL3 mAb, mutations were introduced to B204 mAb LCDR and HCDR regions using oligonucleotides containing the NNK codon. Four libraries with 6.34×106, 5.6×106, 3.2×103, and 2.8×103 theoretical diversities were constructed with single saturation mutations to (LCDR1 + LCDR3 + HCDR3) , (LCDR2 + HCDR1 + HCDR2) or double saturation mutations to LCDR3, or HCDR3 regions, respectively. Full lengths of scFv were obtained by the means of overlap PCR method.

[0292] Prior to selection, DNA sequencing was performed to confirm that the library integrality proportion of enzyme site is above 95%and empty vector proportion is below 10%, and that the library is not biased. After using more stringent conditions by decreasing the antigen concentration and increasing the washing time, a large number of clones with strong binding signals in phage ELISA was enriched. Several scFv mutants were picked for Sanger sequencing. 49 clones with unique sequences, high binding affinities towards recombinant human and cynomolgus DLL3 antigens were converted into human IgG1 / kappa. Purified mAbs with 5, 0.5, 0.05, and 0.005 ug / ml binding to SHP77 and H524 were measured.

[0293] The binding affinity were compared with parental B204 mAb by flow cytometry and results were included in FIG. 6 and FIG. 7, respectively. The CDR and variable region sequences of anti-DLL3 antibodies with enhanced cell binding ability than parental antibody B204 were listed in Tables 3 and 4.Example 9. Gator-based determination of matured antibody affinity to his-tagged human DLL3

[0294] Biacore SPR analysis were performed using his tagged huDLL3 (Acro Biosystems, DL3-H52H4-100 μg) to determine target binding of the antibody constructs of the invention. In detail, Protein A chips were immobilized with approximately 0.5 μg / ml anti-DLL3 mAb with contact time 60 s, flow rate 10 μl / min. The his tagged DLL3 antigen was loaded in a dilution series of the following concentrations: 2 μg / ml, 1 μg / ml, 0.5 μg / ml, 0.25 μg / ml and 0.125 μg / ml in HBS-EP +1× buffer pH7.4 running buffer. Loading rate was 30 μl / min for 120 s, then HBS-EP +1x buffer pH7.4 running buffer was applied for 200 s at 30 μl / min for 200 s. Regeneration of the chip was performed using glycine 1.5 solution with flow rate of 30 μl / min, 30 s. The affinity values are shown in Table 9.Table 9. Binding characters of anti-DLL3 affinity matured antibody to human DLL3 as determined by Biacore SPR analysis.

[0295] Anti-DLL3 antibody variants were purified and measured on human (FIG. 8) , cynomolgus (FIG. 9) and mouse DLL3 (FIG. 10) . EC50 of anti-DLL3 antibodies against DLL3 were listed in Table 10.Table 10. Anti-DLL3 mAbs Binding Affinities Against His Tagged Human, Cynomolgus and Mouse DLL3 Example 10. Dynamic Affinity Evaluation of anti DLL3 Antibodies (SPR)

[0296] Dynamic affinities of anti-DLL3 antibodies were determined by Biacore. In detail, Protein A chips were immobilized with approximately 0.5 μg / mL anti-DLL3 mAb with contact time 60 s with flow rate of 10 μL / min. The His tagged DLL3 antigen was loaded in a dilution series of the following concentrations: 2 μg / mL, 1 μg / mL, 0.5 μg / Ll, 0.25 μg / mL and 0.125 μg / mL in HBS-EP + 1 × buffer pH7.4 running buffer. Antibody loading rate was 30 μL / min for 120 s, then HBS-EP+1x buffer pH7.4 running buffer was applied at 30 μL / min for 200 s. Regeneration of the chip was performed using glycine 1.5 solution with flow rate of 30 μL / min, 30 s. The affinity measurement results are summarized in Table 11.Table 11. Affinity of anti-DLL3 mAbs to human DLL3 as determined by Biacore Example 11. Evaluation of specificity of anti-DLL3 mAbs to human DLL3 paralogs

[0297] The reactivity of anti-DLL3 mAbs against human DLL3 paralogues DLL1 (KactusBio, Cat. No. DLL-HM101) and DLL4 (KactusBio, Cat. No. DLL-HM104) were evaluated. First, 1 μg / mL DLL1 or DLL4 antigen was coated to 96-well plate at 4℃overnight. Each well was washed with PBST, and then 200 μL / well of PBSM was added and incubated at 37 ℃ for 2 hours. Each well was washed with PBST, and then 100 μL of 4 μg / mL antibodies was added and allowed to react at 37 ℃ for 2 hours. Each well was washed with PBST again, and 100 μL / well anti-hIgG HRP (Cat. No. 32935, Cell Signaling Technology) with 1: 20000 ratio dilution in PBST was added. Plates were allowed to react at 37 ℃ for 1 hour. After washing, 100 μL TMB solution was added and allowed for sufficient color development. 100 μL 2N H2SO4 was then added to terminate the reaction and A450 was measured. Positive control anti DLL1 antibody is from Sino Biology (Cat. No. 11635-R306) and anti DLL4 antibody is from Cusabio (Cat. No. CSB-PA006949LA01HU) .

[0298] Results are enclosed in FIG. 11. Most of the anti-DLL3 candidates do not show non-specific binding against DLL1 and DLL4.Example 12. Anti-DLL3 mAbs Binding Affinity on SCLC Tumor Cell Lines

[0299] SCLC tumor cell lines expressing DLL3, such as SHP77, NCI-H82 (ATCC No. HTB-175) and NCI-H524, were used for anti-DLL3 mAbs in vitro cell binding evaluation. Human IgG1 anti Hexanoyl-Lysine (HEL) was used as the isotype antibody control (SEQ ID NOs: 199-200) , referred as hIgG1. The DLL3 specific antibody rovalpituzumab (SEQ ID NOs: 195-196) was used as positive antibody control.HEL LC (SEQ ID NO: 199) HEL HC (SEQ ID NO: 200)

[0300] Briefly, SHP77, NCI-H82, NCI-H524 and HEK293-DLL3 cells were harvested by accutase (ThermoFisher, Cat. No. A1110501) and washed with FACS buffer (1%FBS in pre-cooled PBS) . 105 cells (50 μL) were attributed to each well in 96-well plates. Anti-DLL3 mAbs in 5-fold dilutions starting from 100 nM to 0.00128 nM were added to tumor cells in the conical bottom plates and incubated on ice for 1 hour. Tumor cells were then washed with FACS buffer and mixed with anti-human PE fluorescent secondary antibody for FACS detection by CytoFlex Cytometry, Backman. Data were analyzed with the built-in analysis software of CytoFlex.

[0301] Most of the anti-DLL3 antibodies have sub-nanomolar EC50 value in HEK293-DLL3 cell line binding (FIG. 12) , comparable as positive control rovalpituzumab.Example 13. Anti-DLL3 mAbs Endocytosis Ability on SCLC Tumor Cell Lines

[0302] Target mediated endocytosis was measured for anti-DLL3 mAb candidates on DLL3 expressing cell lines SHP77, NCI-H82 and NCI-H524. Cells were harvested with accutase with cell density adjusted to 2×106 cells / ml. 50 μL cells / well were then plated in the 96-well cell culture plates and incubated with 50 μL DLL3 antibody candidates at final concentration of 100 nM. The mixtures were incubated at 4 ℃ in an atmosphere of 5 %CO2 in air for 1 hour. Cells were then washed three times with pre-cooled FACS buffer and then incubated at 37 ℃ in an atmosphere of 5 %CO2 in air for three time points (0, 1and 4 hours) . After incubation cells were washed twice and then incubated with 1×PE anti-human IgG Fc Antibody (Cat. No. 366904, Biolegend) at 4 ℃ and 5 %CO2 for another one hour. After the two-step washing by FACS buffer, cells were resuspended in 100 μL FACS buffer, CytoFlex Cytometry was used to detect the fluorescent signals of cells. Curves of internalization rate versus incubation time (hours) were plotted with the Graphpad Prism.

[0303] The MFI value indicating antibody endocytosis ability and internalization rates (4 h timepoint) in NCI-H82 and SHP77 cells were showed in Table 12 and Table 13, respectively. Anti-DLL3 mAbs in generation showed promising endocytosis ability; in 4-hour more than 50 %of antibodies were internalized indicating rapid internalization of DLL3. Several candidates indicated faster internalization rate compared to benchmark rovalpituzumab.Table 12. MFI value of Internalization Assay on NCI-H82 cells Table 12. MFI value of internalization assay on H82 cells, continued Table 13. MFI value of internalization assay on SHP77 cells Table 13. MFI value of internalization assay on SHP77 cells, continued Example 14. Domain Mapping of Anti-DLL3 mAbs

[0304] In order to characterize and position the domains that the disclosed anti-DLL3 mAbs bind to, domain-level epitope mapping was performed using individual domains of DLL3 comprising specific amino acid sequences expressed by HEK293 cells, DLL3 DSL region (Kactusbio, Cat. No. DLL-HM13D, Ala27-Glu215) , EGF-like domain 3 (E3) -E6 region (Kactusbio, Cat. No. DLL-HM4D1, Val311-Ala479) , E4-E6 region (Kactusbio, Cat. No. DLL-HM4D2, Lys353-Ala479) and full length DLL3.

[0305] Antibodies were tested for their binding ability to each of these domains via ELISA. Briefly, 2 μg / mL of DSL, E3-E6, E4-E6, and full length DLL3 were coated to 96-well plate overnight at 4 ℃ in PBS before they were washed and blocked with 5%Milk in PBST (PBS, 0.1%Tween20) for 1 h. B204-WT-B204-098 (referred to as WT-098) , rovalpituzumab and anti-HEL antibody were diluted from 30 nM to 0.002 nM (3-fold dilution) , and 50 μL was applied to ELISA plates (1 h at RT) . HRP-conjugated anti-human Fc antibody (Cat. No. 32935, Cell Signaling Technology) was added and signals were detected by Elmer Perkings microplate reader.

[0306] According to ELISA results (FIG. 13) , unlike rovalpituzumab binding to DSL region of DLL3, WT-098 binds to E4-E6 region of DLL3 which is closer to the transmembrane region.Example 15. Non-specific Binding Evaluation of anti-DLL3 Antibody on human immune cells

[0307] To determine candidate WT-098 does not have non-specific binding towards human immune cells causing unexpected off-target toxicity, whole blood was utilized to measure whether WT-098 binding to six immune cells. Fresh whole blood was lyzed with Biolegend 1 × RBC buffer and incubated with or without Biolegend TruStain FcX Fc Blocking solution. Without washing, the cells were stained with specific antibodies for CD45 PE-CF594, CD41a FITC, CD66 BV605, CD16 PE-Cy7, CD3 V500, CD14 BV421, CD19 APC, and WT-098 PE or anti-HEL PE. Platelets were identified as CD41b+ CD45-, neutrophil CD66b+ CD16+, eosinophil CD66b+ CD16-, monocyte CD3-CD14+, T cells CD3+, B cells CD19+, and NK cells CD3-CD14-CD16+.

[0308] According to the FACS results (FIG. 14) , WT-098 did not show any unwanted binding towards immune cells, including platelets, neutrophils, eosinophils, monocyte, T cells, B cells, and NK cells.Example 16. Site mutation modification of WT-098 and biological characters.

[0309] One site mutation (N56Q) was introduced to WT-098 light chain CDR2 region to potentially decrease antibody deamination. Similar as Example 12, tumor cell binding affinities were measured comparing mutated version of WT-098 N56Q and WT-098 (FIG. 15) . According to the cell binding assays, N56Q mutation did not hamper anti-DLL3 mAb binding affinity on all three SCLC cell lines, SHP77, NCI-H82 and NCI-H524. Meanwhile, according to Biacore SPR result (Table 14) , KD value remains the same.Table 14 Binding character comparison of WT-098 N56Q and WT-098 by Biacore

[0310] Moreover, to evaluate whether mutation may interfere with endocytosis of the antibody, following experimental steps mentioned in Example 13, WT-098 N56Q and WT-098 were tested (FIG. 16) . Regarding of internalization rates, for all time points measured (0.5h, 1h, 2h, 3h and 4h) , WT-098 N56Q shared same internalization pattern as WT-098. All these data indicating site mutation do not harm WT-098 biological characters.Example 17. Determination of DLL3 ADC cytotoxic activity

[0311] Both WT-098 and WT-098 N56Q were conjugated with Compound 2 to give DLL3 ADC molecules PLAD-189 and PLAD-222, with anti-HEL antibody conjugated to Compound 2 as the isotype ADC control.

[0312] The chemical structure of compound 2 was as below.

[0313] DLL3 ADCs cytotoxic activities were measured in SCLC tumor cell line SHP77. Specifically, in this example, 3D cytotoxic methods with cells in 96-well plates were used. Firstly, cells were plated at a density of 8000 cells per well of 96-well round bottom ultra-low attachment plates (FDcell, C064096) in a volume of 135 μL in their recommended culture media supplement with 10%fetal bovine serum. Immediately after plating, the ULA plate was centrifuged for 3 minutes, 1200 RPM, at room temperature and then incubated at 37 ℃, 5%CO2 overnight. Concentration of each dose of ADCs and antibody to be tested was prepared in triplicate by serial dilution of the ADCs and antibody stock in culture medium. 15 μL of each tested was added to cells in replicates such that final ADCs and antibody concentration ranged from 100 nM to 0.00128 nM. The treated cells were cultured for 7 days at 37 ℃ in a humidified incubator. The metabolic activity was determined using CellTiter-Glo 3D Luminescent Viability Assay (#G9683) from Promega according to manufacturer’s instructions. Recorded luminescence on the EnVision Multi-Mode Plate Reader. Data were plotted as percent metabolic activity relative to untreated control. RelC50 values were determined using logistic non-linear regression analysis between the maximal viability and the maximal response (peak inhibition) with GraphPad Prism Software.

[0314] The in vitro potency of DLL3 ADCs PLAD-189 and PLAD-222 were measured. As shown in FIG. 17, both PLAD-189 and PLAD-222 exhibited strong tumor cytotoxicity, with an over 400-fold therapeutic window compared to PLAD-181 ADC control.

[0315] The foregoing description is considered as illustrative only of the principles of the present disclosure. Further, since numerous modifications and changes will be readily apparent to those skilled in the art, it is not desired to limit the invention to the exact construction and process shown as described above. Accordingly, all suitable modifications and equivalents may be considered to fall within the scope of the invention as defined by the claims that follow.

[0316] The words "comprise" , "comprising" , "include" , "including" , and "includes" when used in this specification and in the following claims are intended to specify the presence of stated features, integers, components, or steps, but they do not preclude the presence or addition of one or more other features, integers, components, steps, or groups thereof.

Claims

1.An anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof, comprising:a heavy chain complementary determining region 1 (HCDR1) , a HCDR2 and a HCDR3 respectively having at least 70%sequence identity of the HCDR1, HCDR2 and HCDR3 comprised in the heavy chain variable region as set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39 and 176-188 ; and / ora light chain complementary determining region 1 (LCDR1) , a LCDR2 and a LCDR3 respectively having at least 70%sequence identity of the LCDR1, LCDR2 and LCDR3 comprised in the light chain variable region as set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 163-175 and 202.2.An anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof, comprising:a HCDR1 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 41, 44, 47, 49, 56, 59, 63, 68, 71, 74, 77, 80, 83, and SSVMX1 (SEQ ID NO: 157) , and any homologous sequence thereof having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X1 is selected from G or T;a HCDR2 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 42, 45, 50, 52, 60, 64, 69, 72, 75, 78, 81 and X2ISX3X4GELX5YYADSVKG (SEQ ID NO: 158) , and any homologous sequence thereof having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X2 is selected from L or S; X3 is selected from P, I or V; X4 is selected from G or R; and X5 is selected from T, D or L;a HCDR3 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 43, 46, 48, 51, 53, 54, 55, 57, 58, 61, 62, 65, 66, 67, 70, 73, 76, 79, 82, 84 and DX6X7YAX8DX9 (SEQ ID NO: 159) , and any homologous sequence thereof having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X6 is selected from N, S or T; X7 is selected from A or G; X8 is selected from F, N or L; and X9 is selected from I or F;a LCDR1 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 85, 88, 91, 94, 97, 100, 103, 108, 111, 117, 121, 123, 128 and RAX10QGIX11SWLA (SEQ ID NO: 160) , and any homologous sequence thereof having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X10 is selected from R, S or E; and X11 is selected from T or S;a LCDR2 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 86, 89, 92, 95, 98, 101, 104, 106, 109, 112, 115, 124, 126 and AAX12X13LX14X15 (SEQ ID NO: 161) , and any homologous sequence thereof having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X12 is selected from S or A; X13 is selected from S, H or L; X14 is selected from Q or A; and X15 is selected from N, A or Q; and / ora LCDR3 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 87, 90, 93, 96, 99, 102, 105, 107, 110, 113, 114, 116, 118, 119, 120, 122, 125, 127, 129 and QQX16X17X18FPLT (SEQ ID NO: 162) , and any homologous sequence thereof having 1-3 amino acid residue mutations therein, wherein X16 is selected from A or V; X17 is selected from H, D, S, Y; andX18 is selected from S, I, H or N.3.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of claim 1 or 2, wherein(a) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 41, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 42, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 43, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 86, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 87;(b) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 45, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 46, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 88, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 89, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 90;(c) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 47, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 45, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 48, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 91, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 92, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 93;(d) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 49, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 50, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 51, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 94, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96;(e) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 99;(f) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 100, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 101, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(g) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 55, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 103, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 104, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 105;(h) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 56, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 106, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 107;(i) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 49, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 108, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 110;(j) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 111, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 112, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 113;(k) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 106, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 114;(l) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 64, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 94, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 115, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 116;(m) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 66, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 117, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 118;(n) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 117, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 119;(o) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 94, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 120;(p) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 121, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 109, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 122;(q) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 74, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 125;(r) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 79, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 126, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 127; or(s) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 83, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 84, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 128, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 129.(t) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SSVMX1 (SEQ ID NO: 157) , the HCDR2 comprises an amino acid sequence of X2ISX3X4GELX5YYADSVKG (SEQ ID NO: 158) , the HCDR3 comprises an amino acid sequence of DX6X7YAX8DX9 (SEQ ID NO: 159) , the LCDR1 comprises an amino acid sequence of RAX10QGIX11SWLA (SEQ ID NO: 160) , the LCDR2 comprises an amino acid sequence of AAX12X13LX14X15 (SEQ ID NO: 161) , and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of QQX16X17X18FPLT (SEQ ID NO: 162) ;wherein X1 is selected from G or T; X2 is selected from L or S; X3 is selected from P, I or V; X4 is selected from G or R; X5 is selected from T, D or L; X6 is selected from N, S or T; X7 is selected from A or G; X8 is selected from F, N or L; X9 is selected from I or F; X10 is selected from R, S or E; X11 is selected from T or S; X12 is selected from S or A; X13 is selected from S, H or L; X14 is selected from Q or A; X15 is selected from N, A or Q; X16 is selected from A or V; X17 is selected from H, D, S, Y; and X18 is selected from S, I, H or N.4.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of claim 3, wherein(t1) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t2) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 130, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 143, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 144;(t3) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124 or 201, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 145;(t4) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 146;(t5) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 131, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 147;(t6) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 132, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t7) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 133, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 148;(t8) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t9) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 135, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 136, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 149, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t10) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 150;(t11) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 137, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 151, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t12) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 138, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 152, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t13) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 135, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 139, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 153, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t14) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 135, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 154, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t15) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t16) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 133, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t17) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 130, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 155, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102;(t18) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 141, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 156, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 148;(t19) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 147; or(t20) the HCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, the HCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, the HCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 142, the LCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, the LCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the LCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.5.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, comprising:a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence as set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39 and 176-188, or a homologous sequence thereof having at least 70%sequence identity; and / ora light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence as set forth in any one of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 163-175 or 202, or a homologous sequence thereof having at least 70%sequence identity.6.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, comprising:(a) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 1 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 2;(b) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 3 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 4;(c) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 5 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 6;(d) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 7 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 8;(e) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 9 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 10;(f) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 11 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 12;(g) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 13 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 14;(h) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 15 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 16;(i) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 17 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 18;(j) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 19 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 20;(k) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 21 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 22;(l) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 23 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 24;(m) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 25 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 26;(n) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 27 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 28;(o) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 29 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 30;(p) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 31 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 32;(q) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 33 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 34;(r) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 35 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 36; or(s) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 39 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 40.7.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, comprising:(t1) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 37 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 38;(t2) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 180 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 175;(t3) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 37 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 173 or 202;(t4) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 37 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 166;(t5) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 176 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 163;(t6) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 188 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 38;(t7) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 182 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 171;(t8) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 185 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 38;(t9) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 183 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 169;(t10) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 37 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 167;(t11) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 186 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 172;(t12) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 181 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 168;(t13) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 184 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 170;(t14) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 187 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 174;(t15) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 179 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 38;(t16) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 182 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 38;(t17) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 180 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 165;(t18) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 178 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 164;(t19) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 37 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 163; or(t20) a heavy chain variable region comprising SEQ ID NO: 177 and a light chain variable region comprising SEQ ID NO: 38.8.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, further comprising one or more amino acid residue substitutions or modifications yet retains binding specificity to DLL3.9.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of claim 8, wherein the DLL3 is selected from human DLL3, cynomolgus DLL3 or mouse DLL3.10.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of claim 8, wherein at least one of the substitutions or modifications is in one or more of the complementarity determining region (CDR) sequences of the heavy chain variable region or light chain variable region.11.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of claim 8, wherein at least one of the substitutions or modifications is in one or more of the non-CDR sequences of the heavy chain variable region or light chain variable region.12.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, further comprising an Fc region, optionally an Fc region of human immunoglobulin (Ig) , or optionally an Fc region of human IgG.13.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, wherein the Fc region is derived from human IgG1.14.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, comprising a heavy chain constant region comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 194.15.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 193.16.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, which is humanized.17.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, which is a monoclonal antibody, a bispecific antibody, a multi-specific antibody, a recombinant antibody, a chimeric antibody, a labeled antibody, a bivalent antibody, an anti-idiotypic antibody or a fusion protein.18.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, which is a diabody, a Fab, a Fab', a F (ab') 2, a Fd, an Fv fragment, a disulfide stabilized Fv fragment (dsFv) , a (dsFv) 2, a bispecific dsFv (dsFv-dsFv') , a disulfide stabilized diabody (ds diabody) , a single-chain antibody molecule (scFv) , an scFv dimer (bivalent diabody) , a multispecific antibody, a camelized single domain antibody, a nanobody, a domain antibody, or a bivalent domain antibody.19.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any of the preceding claims, which selectively binds to DLL3.20.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any of the preceding claims, which binds to extracellular domain 4 (E4) , E5 or E6 of the extracellular domain (ECD) of DLL3.21.The anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims, which is linked to one or more conjugate moieties.22.The anti-DLL3 antibody or an antigen-binding fragment thereof of claim 21, wherein the conjugate moiety is selected from a polymer, a carbohydrate, a lipid, a nucleic acid, an oligonucleotide, a DNA or RNA, an amino acid, peptide, polypeptide, protein, therapeutic agent, or a diagnostic agent.23.A nucleic acid molecule encoding the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of the preceding claims.24.A vector comprising the isolated polynucleotide of claim 23.25.A host cell comprising the vector of claim 24.26.A conjugate comprising the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of claims 1-22.27.A pharmaceutical composition, comprising:(i) the anti-DLL3 antibody or an antigen-binding fragment thereof of any one of claims 1-22, or the nucleic acid molecule of claim 23, or the conjugate of claim 26; and(ii) a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.28.The pharmaceutical composition of claim 27, further comprising an additional therapeutic agent.29.The pharmaceutical composition of claim 28, wherein the additional therapeutic agent is an agent for treating a DLL3-related disease or disorder, optionally a cancer.30.A method of expressing the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of claims 1-22, comprising culturing the host cell of claim 25 under the condition at which the vector of claim 26 is expressed.31.A method of treating, preventing or alleviating a DLL3-related disease or disorder in a subject, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of claims 1-22, the nucleic acid molecule of claim 23, the conjugate of claim 26, and / or the pharmaceutical composition of any one of claim 27-29.32.The method of claim 31, wherein the DLL3-related disease or disorder is associated with abnormally up-regulated expression of DLL3 compared to the control level.33.The method of claim 31 or 32, wherein the DLL3-related disease or disorder is a cancer.34.The method of claim 33, wherein the cancer is small-cell lung cancer (SCLC) .35.A method of detecting the presence or amount of DLL3 in a sample, comprising contacting the sample with the anti-DLL3 antibody or antigen-binding fragments thereof of any one of claims 1-22, and determining the presence or the amount of DLL3 in the sample.36.The method of claim 35, further comprising a step of determining whether DLL3 is over-expressed in the cells in the sample.

Images