Anti-LRRC15 antibodies and antibody-drug conjugates

Abstract

It discloses anti-leucine-rich repeat-containing protein 15 (LRRC15) antibodies and antibody-drug-conjugates thereof, methods of making such LRRC15 binding antibodies and antibody-drug conjugates thereof, and compositions, methods, and uses of such LRRC15 binding antibodies and antibody-drug conjugates thereof for treating patients with cancer.

Description

ANTI-LRRC15 ANTIBODIES AND ANTIBODY-DRUG CONJUGATESTECHNICAL FIELD

[0001] The present disclosure relates to leucine-rich repeat-containing protein 15 (LRRC15) binding antibodies and antibody-drug conjugates thereof, methods of making such LRRC15 binding antibodies and antibody-drug conjugates thereof, and compositions, methods, and uses of such LRRC15 binding antibodies and antibody-drug conjugates thereof for treating patients with cancer.BACKGROUND

[0002] Multi-drug resistance to chemotherapeutics is a major contributor to tumor metastasis and relapse in patients. Extracellular matrix proteins produced by cancer-associated fibroblasts (CAFs) have been implicated in both resistance to chemotherapy as well as to the immunosuppressive environment that characterizes many solid tumors.

[0003] Human leucine-rich repeat-containing protein 15 (hLRRC15) is a cell membrane protein involved in cell-cell and cell-extracellular matrix interactions whose expression is highly restricted in nonmalignant adult cells but highly expressed in both mesenchymal-derived tumors and in CAFs in the tumor microenvironment of multiple solid tumors. In particular, LRRC15 is overexpressed in mesenchymal-derived tumors including sarcoma, glioblastoma, and melanoma and in CAFs in the tumor microenvironment (TME) of breast, head and neck, lung, and pancreatic tumors. Effective targeting of LRRC15 with a therapeutic agent has the potential to improve the outcome of patients with LRRC15-positive (LRRC15+) cancers of mesenchymal origin or stromal desmoplasia. Preliminary results from a Phase I clinical trial of antibody-drug conjugate ABBV-085 targeting hLRRC15 in adult patients with sarcomas or other advanced solid tumors indicate some antitumor activity in osteosarcoma and undifferentiated pleomorphic sarcoma (UPS) , but no additional clinical studies with this ADC have been conducted to date.

[0004] Despite various therapeutics in development to treat cancer, including those that target hLRRC15, there remains a high unmet need for improved therapeutics to treat cancer in patients, particularly patients with cancers that are highly chemo-refractive such as osteosarcoma and UPS.SUMMARY

[0005] The present disclosure provides anti-LRRC15 antibodies and antibody-drug conjugates thereof, methods of making such anti-LRRC15 antibodies and antibody-drug conjugates thereof, and compositions, methods, and uses of such anti-LRRC15 antibodies and antibody-drug conjugates thereof for treating patients with cancer. In particular, the antibody-drug-conjugates (ADCs) provided include an anti-LRRC15 antibody or antigen-binding portion thereof that is covalently conjugated to topoisomerase I inhibitor YL0010014 (also known as C24) derived from the antitumor agent camptothecin via a highly hydrophilic linker (i.e., methylsulfonylpyrimidine tripeptide) that is susceptible to proteolytic cleavage.

[0006] In one aspect, the present disclosure provides an isolated antibody or antigen-binding portion thereof that specifically binds human leucine-rich repeat-containing protein 15 including a heavy-chain variable (VH) region and a light-chain variable (VL) region wherein the VH region includes a first complementarity-determining region (CDR1) including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, a second complementarity-determining region (CDR2) including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and a third complementarity-determining region (CDR3) including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and the VL region includes a CDR1 including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, a CDR2 including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, and a CDR3 including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9. In one embodiment, the VH region includes an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, optionally, the VH region includes an amino acid sequence having 95%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10. In one embodiment, the VL region includes an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, optionally, the VL region includes an amino acid sequence having 95%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11. In one embodiment, the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, or SEQ ID NO: 17. In one embodiment, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12. In one embodiment, the isolated antibody or antigen-binding portion thereof is an IgG antibody, a Fab, a Fab’ , a F (ab′) 2, a Fv, or a ScFv. In one embodiment, the isolated antibody or antigen-binding portion thereof is an IgG antibody, optionally an IgG1 antibody.

[0007] In another aspect, the present disclosure provides isolated polynucleotides encoding any of the aforementioned antibodies or antigen-binding portions thereof.

[0008] In another aspect, the present disclosure provides expression vectors including any of the aforementioned polynucleotides.

[0009] In another aspect, the present disclosure provides host cells including any of the aforementioned expression vectors.

[0010] In another aspect, the present disclosure provides methods of preparing any of the aforementioned antibodies or antigen-binding portions thereof including culturing a host cell having the desired expression vector (wherein the expression vector includes a polynucleotide encoding the desired antibody or antigen-binding portion thereof) under conditions suitable for expressing the expression vector, optionally further including isolating the antibody or antigen-binding portion thereof.

[0011] In another aspect, the present disclosure provides an antibody-drug-conjugate (ADC) including any of the aforementioned antibodies or antigen binding portions thereof and a toxin connected by a linker wherein the ADC has a structure of formula (I) : and wherein q is between 1 and 8. In one embodiment of the ADC of the disclosure, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12. In one embodiment of the ADC of the disclosure, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, or SEQ ID NO: 17. In one embodiment of the ADC of the disclosure, the antibody or antigen-binding portion thereof is an IgG antibody, optionally an IgG1 antibody.

[0012] In another aspect, the present disclosure provides pharmaceutical compositions including a plurality of any of the aforementioned ADCs and a pharmaceutically acceptable carrier, optionally, wherein the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio between 7 and 8.

[0013] In another aspect, the present disclosure provides methods of treating a cancer associated with LRRC15 expression in a patient in need thereof including administering to the patient a therapeutically effective amount of any of the aforementioned ADCs. In one embodiment, the method further includes administering to the patient at least one other therapeutic agent. In one embodiment, the cancer is breast cancer, head and neck squamous cell carcinoma, liver cancer, lung cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, uterine cancer, prostate cancer, or bladder cancer. In one embodiment, the cancer is a sarcoma, a glioblastoma multiforme, or a melanoma, optionally, wherein the sarcoma is an osteosarcoma, a chondrosarcoma, a liposarcoma, a sarcomatoid carcinoma, a leiomyosarcoma, a synovial sarcoma, a rhabdomyosarcoma, or an undifferentiated pleomorphic sarcoma (UPS) .

[0014] Each of the embodiments described herein may be combined with any other embodiment (s) described herein not inconsistent with the embodiment (s) with which it is combined.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0015] Figure (FIG. ) 1 is a graph that depicts mean fluorescence intensity (MFI) corresponding to antibody binding to CHOK1. hLRRC15 cells following treatment thereof with different concentrations of anti-LRRC15 antibody AB2, humanized variants of AB2 (i.e., AB2.1, AB2.2, AB2.3, AB2.4, AB2.5, AB2.6) , or control antibody (human isotype IgG1 antibody referred to as “Ctrl mAb” ) .

[0016] FIG. 2 is a graph that depicts optical density (OD) at 450 nm (corresponding to non-specific binding) in BVP-ELISA using different concentrations of humanized variants of anti-LRRC15 antibody AB2 (i.e., AB2.1, AB2.2, AB2.3, AB2.4, AB2.5, AB2.6) , or reference antibody (i.e., pembrolizumab, dupilumab, adalimumab, and gantenerumab) .

[0017] FIG. 3 is a graph that depicts percentage cell viability following treatment of CHOK1. hLRRC15 cells with different concentrations of anti-LRRC15 antibody AB2, humanized variants of AB2 (i.e., AB2.1, AB2.2, AB2.3, AB2.4, AB2.5 and AB2.6) or antibody control (referred to as “hIgG1” ) together with a saporin-conjugated anti-human IgG Fab fragment (FabFc-ZAP human, Advanced Targeting Systems, Cat#IT-65) .

[0018] FIGs. 4A-4D are graphs that depict MFI corresponding to binding (of ADC or antibody) to various cells following treatment thereof with different concentrations of ADC or antibody. Specifically, FIGs. 4A and 4B are graphs that depict MFI in wild-type HT29 cells and HT29 cells stably transduced with hLRRC15 (referred to herein as HT29. hLRRC15) , respectively, following treatment thereof with either (i) ADC with AB2.1 conjugated to C24 payload (ADC referred to herein as “HuClone7-C24” ) , (ii) AB2.1 antibody in unconjugated format (referred to as “HuClone7” ) , (iii) ADC control (isotype IgG1 human antibody conjugated to C24 referred to herein as “Ctrl mAb-C24” ) , or (iv) antibody control (isotype IgG1 human antibody referred to as “Ctrl mAb” ) . FIG. 4C is a graph that depicts MFI in Saos-2 cells (endogenously express hLRRC15) , following treatment thereof with either ADC (HuClone7-C24, Ctrl mAb-C24, HuM25-MMAE, or Ctrl mAb-MMAE) or antibody (HuClone7, huM25 or Ctrl mAb) . FIG. 4D is a graph that depicts MFI corresponding to binding to different cell lines expressing hLRRC15 (namely, HT-29. hLRRC15, Saos-2 and RPMI-7951) following treatment thereof with ADC (i.e., HuClone7-C24 or Ctrl mAb-C24) .

[0019] FIGs. 5A-5D are graphs that depict internalization activity in a cell line that does not express hLRRC15 (HT29) and in cell lines that express hLRRC15 (namely, HT-29. hLRRC15, Saos-2 and RPMI-7951) following treatment thereof with different concentrations of ADC or antibody. Specifically, FIGs. 5A and 5B are graphs that depict MFI in wild-type HT29 cells and HT29. hLRRC15 cells, respectively, following treatment thereof with either HuClone7-C24, HuClone7, ADC control with C24 payload ( “Ctrl mAb-C24” ) , or antibody control ( “Ctrl mAb” ) . FIG. 5C is a graph that depicts MFI in Saos-2 cells following treatment thereof with either ADC (HuClone7-C24, Ctrl mAb-C24, HuM25-MMAE, or ADC control with MMAE payload (referred to herein as “Ctrl mAb-MMAE” ) or antibody (HuClone7, huM25 or Ctrl mAb) . FIG. 5D is a graph that depicts total near-infrared (NIR) (μm2 / image) in RPMI-7951 cells following treatment thereof with different concentrations of either HuClone7-C24 or ADC control with C24 payload (Ctrl mAb-C24) . FIGs. 6A-6C are graphs that depict percentage cell viability in various cell lines following treatment thereof with different concentrations of ADC or controls. Specifically, FIG. 6A is a graph that depicts MFI in HT29. hLRRC15 cells following treatment thereof with either HuClone7-C24, Ctrl mAb-C24, or unconjugated C24 payload control (referred to herein as “C24” ) . FIG. 6B is a graph that depicts MFI in Saos-2 cells following treatment thereof with either ADC (HuClone7-C24, Ctrl mAb-C24, HuM25-MMAE, or Ctrl mAb-MMAE) or unconjugated payload control (C24 and MMAE payload controls referred to as “C24” and “MMAE” , respectively) . FIG. 6C is a graph that depicts MFI in RPMI-7951 cells following treatment thereof with either ADC (HuClone7-C24 or Ctrl mAb-C24) .

[0020] FIG. 7 is a graph that depicts percentage cell viability (corresponding to cytotoxicity) of HEK293-luciferase cells (referred to herein as “Hek293-luc” ) that do not express hLRRC15 either cultured alone or co-cultured with HEK293 cells expressing hLRRC15 (referred to herein as “Hek293. hLRRC15” ) following treatment thereof with different concentrations of ADC (HuClone7-C24) or IgG1 isotype ADC control (referred to as Ctrl mAb-C24) .

[0021] FIG. 8A and FIG. 8B are graphs that depict percentage cell viability (corresponding to bystander killing) of HCT116-luciferase cells cultured with either RPMI-7951 or Saos-2 cells, respectively, following treatment of co-culture with different concentrations of ADC (HuClone7-C24) or IgG1 isotype ADC control (referred to as Ctrl mAb-C24) .

[0022] FIG. 9A and FIG. 9B are graphs that depict results from an established tumor model using BALB / c nude mice bearing tumors derived from HT29 cell line stably expressing human LRRC15 (referred to as HT29-hLRRC15) which were treated with either ADC (HuClone7-C24, isotype ADC control (IgG1-C24; referred to as “Ctrl mAb-C24” ) ) , or vehicle (with each ADC administered at a dose of 1 mg / kg or 3 mg / kg once a week for 3 weeks) . Specifically, FIG. 9A is a graph of tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment whereas FIG. 9B is a graph that depicts tumor weight (mg) from treated mice at the end of study (wherein “***” refers to statistically significant” and “ns” refers to not statistically significant) .

[0023] FIG. 10A and FIG. 10B are graphs that depict results from an established tumor model using NOD / SCID mice bearing tumors derived from Saos-2 cell line which were treated with either C24-conjugated ADC (HuClone7-C24 or Ctrl-mAb-C24) , MMAE-conjugated ADC (huM25-MMAE) , isotype MMAE control (IgG1-MMAE; referred to as “Isotype-MMAE” ) , or vehicle, with each ADC administered at a dose of 3 mg / kg once every 3 days (Q3D) . Specifically, FIG. 10A is a graph of tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment whereas FIG. 10B is a graph that depicts tumor weight (mg) from treated mice at the end of study (wherein “****” refers to statistically significant” and “ns” refers to not statistically significant) .

[0024] FIGs. 11A-11C are graphs that depict results from an established tumor model using BALB / c nude mice having tumors derived from sarcoma patients (chondrosarcoma SA4109 or osteosarcoma SA4237) , which were treated with either ADC (HuClone7-C24, reference ADC (huM25-MMAE) or isotype ADC controls (IgG1-C24 and IgG1-MMAE; referred to as “Ctrl mAb-C24” and “Ctrl mAb-MMAE” , respectively) ) , or vehicle, with each ADC administered at a dose of 6 mg / kg once every week (QW) . Specifically, FIG. 11A is a graph of tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment in mice bearing tumors derived from SA4109 whereas FIG. 11B is a graph that depicts tumor weight (mg) as recovered from mice bearing tumors derived from SA4109 at the end of study. FIG. 11C is a graph of tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment in mice bearing tumors derived from SA4237.

[0025] FIG. 12 is a graph that depicts tumor size (mm3) vs. days post-treatment initiation from an established tumor model using NOD SCID mice bearing tumors derived from U-118MG cells which were treated with either vehicle (i.e., PBS) , reference ADC huM25-MMAE (referred to herein as “huM25-VC-MMAE” ) or ADC having antibody AB2 (non-humanized parent antibody of AB2.1 also known as HuClone7) conjugated to the same linker-payload as huM25-VC-MMAE (referred to herein as “AB2-VC-MMAE” ) , with each ADC administered at a dose of 6 mg / kg twice a week for 3 weeks. Notably, the mean tumor volume and standard error of the mean (SEM) is provided for each treatment group.

[0026] FIG. 13 is a graph that depicts tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment in a SA4109 chondrosarcoma patient-derived xenograft (PDX) model wherein mice were treated once every week for 3 weeks (QWx3) with either (i) vehicle, (ii) isotype control ADC ( “Ctrl mAb-C24” ) at a dose of 3 mg / kg, or (iii) HuClone7-C24 ADC ( “HuClone7-C24” ) at a dose of 1 mg / kg, 3 mg / kg or 10 mg / kg.

[0027] FIG. 14 is a graph that depicts tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment in a SA4033 leiomyosarcoma PDX model wherein mice were treated once every week for 2 weeks (QWx2) with either (i) vehicle, (ii) isotype control ADC ( “Ctrl mAb-C24” ) at a dose of 3 mg / kg, or (iii) HuClone7-C24 ADC ( “HuClone7-C24” ) at a dose of 1 mg / kg, 3 mg / kg or 10 mg / kg.

[0028] FIG. 15 is a graph that depicts tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment in a SA3840 osteosarcoma PDX model wherein mice were treated once every week for 2 weeks (QWx2) with either (i) vehicle, (ii) isotype control ADC ( “Ctrl mAb-C24” ) at a dose of 3 mg / kg, or (iii) HuClone7-C24 ADC ( “HuClone7-C24” ) at a dose of 1 mg / kg, 3 mg / kg or 10 mg / kg.

[0029] FIG. 16 is a graph that depicts tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment in a EBC-1 human lung / NSCLC cell line-derived xenograft (CDX) model wherein mice were treated once every week for 2 weeks (QWx2) with either (i) vehicle, (ii) isotype control ADC ( “Ctrl mAb-C24” ) at a dose of 3 mg / kg, or (iii) mouse surrogate HuClone7-C24 ADC ( “Surrogate” ) at a dose of 3 mg / kg.

[0030] FIG. 17 is a graph that depicts tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment in a Detroit 562 human pharyngeal carcinoma CDX model wherein mice were treated once every week for 2 weeks (QWx2) with either (i) vehicle, (ii) isotype control ADC ( “Ctrl mAb-C24” ) at a dose of 3 mg / kg, or (iii) mouse surrogate HuClone7-C24 ADC ( “Surrogate” ) at a dose of 3 mg / kg or 10 mg / kg.

[0031] FIG. 18 is a graph that depicts tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment in a Panc 05.04 human pancreatic carcinoma CDX model wherein mice were treated once every week for 2 weeks (QWx2) with either (i) vehicle, (ii) isotype control ADC ( “Ctrl mAb-C24” ) at a dose of 3 mg / kg, or (iii) mouse surrogate HuClone7-C24 ADC ( “Surrogate” ) at a dose of 3 mg / kg or 10 mg / kg.

[0032] FIG. 19 is a graph that depicts tumor size (mm3) vs. days post-initial treatment in a PANC-1 human pancreatic carcinoma CDX model wherein mice were treated for 4 weeks with either (i) vehicle, (ii) gemcitabine at a dose of 50 mg / kg administered twice a week (BIW) , (iii) isotype control ADC ( “Ctrl mAb-C24” ) at a dose of 3 mg / kg administered once a week (QW) , (iv) mouse surrogate HuClone7-C24 ADC ( “Surrogate ADC” ) at a dose of 1 mg / kg or 3 mg / kg administered QW, or (v) gemcitabine at a dose of 50 mg / kg administered BIW and mouse surrogate HuClone7-C24 ADC ( “Surrogate ADC” ) at a dose of either 1 mg / kg or 3 mg / kg administered QW.DETAILED DESCRIPTION

[0033] The LRRC15 antibodies and antibody-drug-conjugates thereof and compositions, methods, and uses of such molecules of the present disclosure may be understood more readily by reference to the following detailed description of the embodiments of the present disclosure and the Examples included herein. Terms

[0034] As used herein, “huLRRC15” and “hLRRC15” are used interchangeably and refer to human leucine-rich repeat-containing protein 15 (LRRC15) , namely the truncated isoform having the amino acid sequence as follows:

[0035] As used herein, the term “antibody” refers to an immunoglobulin molecule that specifically binds to a particular antigen, with respect to anti-hLRRC15 antibodies the antigen is hLRRC15, more specifically, the extracellular domain of hLRRC15. Antibodies include complementarity-determining regions (CDRs) within the variable regions. There are three CDRs, designated as CDR1, CDR2, and CDR3, in each variable heavy-chain (VH) region and in each variable light-chain (VL) region. Unless otherwise indicated, VH and VL regions as well as CDRs described herein are in accordance with the well-known Kabat numbering system.

[0036] As used herein, the phrase “immunoglobulin molecule” refers to a molecule that contains an antigen-binding site which binds an antigen (e.g., LRRC15) . Structurally, it can represent a large family of molecules that include several types of molecules, such as IgG, IgD, IgA, IgM and IgE (including subclasses thereof, for example there are four subclasses of IgG, namely IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4) . It can include hybrid antibodies, modified antibodies, and antigen-binding portions of an antibody. An antigen-binding site specifically binds an antigen if it binds with greater affinity or avidity than it binds to other reference antigen (s) .

[0037] As used herein, the term “antigen-binding portion” with reference to an antibody refers to one or more antibody fragments that retain (s) the ability to specifically bind to an antigen (e.g., LRRC15) including, for example, (i) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL and CH1 domains; (ii) a F (ab') 2 fragment, a bivalent fragment comprising two Fab fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region; (iii) a Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody; and (iv) a single chain Fv . As is known in the art, although the two domains of the Fv fragment, VL and VH, are coded for by separate genes, they can be joined, using recombinant methods, by a synthetic linker that enables them to be made as a single protein chain in which the VL and VH regions pair to form monovalent molecules (i.e., scFv) . These antibody fragments are obtained using conventional techniques known to those with skill in the art, and the fragments are screened for utility in the same manner as are intact antibodies.

[0038] As used herein, “isolated” means separated from constituents, cellular and otherwise, in which the polynucleotide, peptide, polypeptide, protein, antibody, or fragments thereof, are normally associated with in nature.

[0039] As used herein, an “isolated antibody” refers to an antibody that is substantially free of other antibodies having different antigenic specificities (e.g., an isolated antibody that specifically binds LRRC15 is substantially free of antibodies that specifically bind antigens other than LRRC15) . An isolated antibody that specifically binds LRRC15 may, however, have cross-reactivity to other antigens, such as LRRC15 molecules from other species. Moreover, an isolated antibody may be substantially free of other cellular material and / or chemicals.

[0040] As used herein, the term “patient” refers to a human.

[0041] As disclosed herein, “payload” refers to a small molecule that can cause cell death. Examples of payloads include topoisomerase I inhibitors (e.g., camptothecin and derivatives thereof, including YL0010014 (also known as C24) ) and tubulin polymerase inhibitor (e.g., auristatin and derivatives thereof, including monomethyl auristatin (MMAE) ) .

[0042] As used herein, the term "drug-to-antibody ratio” (abbreviated “DAR” ) refers to the proportion of a payload molecule conjugated to a single antibody in an ADC, wherein a mixture of ADCs has an average DAR. For example, a mixture of ADCs having an average DAR of 8 refers to an average of 8 payload molecules conjugated per antibody in that mixture of ADCs.

[0043] As used herein, "a pharmaceutically acceptable excipient" means an excipient that is useful in preparing a pharmaceutical composition that is generally safe, non-toxic and neither biologically nor otherwise undesirable, and includes an excipient that is acceptable for human pharmaceutical use.

[0044] For the purposes of comparing two or more amino acid sequences or nucleotide sequences, the percentage of “sequence identity” between a first sequence and a second sequence may be calculated by dividing the number of amino acids or nucleotides in the first sequence that are identical to the amino acids or nucleotides at the corresponding positions in the second sequence by the total number of amino acids or nucleotides in the first sequence and multiplying by 100%, in which each deletion, insertion, substitution or addition of an amino acid or nucleotide in the second sequence-compared to the first sequence-is considered as a difference at a single amino acid or nucleotide (position) . Alternatively, the degree of sequence identity between two or more amino acid or nucleotide sequences may be calculated using a known computer algorithm for sequence alignment such as NCBI Blast v2.0, using standard settings.

[0045] As used herein, the terms “treating” and “treatment” refer to an approach for obtaining beneficial or desired clinical results in a patient having at least one symptom of a particular disorder including, but not limited to, one or more of the following: ameliorating at least one symptom of said disorder and increasing the quality of life of such patient. For example, treatment of cancer can be evidenced by reducing growth of cancer cells (such as reducing proliferation of cancer cells) and reducing the incidence of a non-cancerous cell becoming cancerous. It can also be evidenced by reduced tumor volume.

[0046] As used herein, the term “ameliorating” refers to a lessening or improvement of at least one symptom of a disorder including shortening or reducing the duration of at least one symptom as compared to not administering a binding molecule of the present disclosure.

[0047] As used herein, the phrase “cancer associated with LRRC15 expression” refers to a malignant neoplasm (i.e., a solid tumor) wherein LRRC15 is expressed in at least one of one or more malignant cell (s) or in tumor stroma. In solid tumors, stroma includes connective tissue, blood vessels, and, very often, inflammatory cells, all of which are interposed between the malignant cells and normal host tissues. In all tumors, stroma is largely a product of the host and is induced as the result of tumor cell-host interactions. Examples of a solid tumor associated with LRRC15 expression include a sarcoma, a glioblastoma multiforme, a melanoma, breast cancer, a head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) , a liver cancer, a lung cancer (e.g., non-small cell lung cancer (NSCLC) ) , a colorectal cancer (e.g., colon cancer) , a pancreatic cancer, a stomach cancer, an ovarian cancer, a uterine cancer, a prostate cancer, or a bladder cancer.

[0048] As used herein, “huM25” refers to a humanized monoclonal antibody that binds both rodent and human LRRC15 described in International Application No. PCT / US2016 / 063990, entitled “Anti-huLRRC15 antibody drug conjugates and methods for their use, ” published as International Publication No. WO 2017 / 095805. The heavy-chain of huM25 has an amino acid sequence as follows: EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYKFSSYWIEWVKQAPGQGLEWIGEILPGSDTTNYNEKFKDRATFTSDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDRGNYRAWFGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 2) . The light-chain of huM25 has an amino acid sequence as follows: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGGAVKFLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQGEALPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3) . In some embodiments, the antibodies disclosed herein do not compete with huM25 for binding to LRRC15 protein. An antibody is considered as not competing with a reference antibody if it still binds to LRRC15 at an amount that is at least 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, or 85%once the reference antibody (Ab) is considered fully bound to LRRC15. A specific assay and assay conditions useful for assessing whether an antibody competes for binding LRRC15 with a reference antibody (e.g., huM25) as described herein is provided in Example 6.

[0049] As used herein, “HuM25-MMAE” and “huM25-VC-MMAE” are used interchangeably and refer to an antibody-drug conjugate having huM25 antibody covalently conjugated to microtubule-disrupting cytotoxic agent monomethyl auristatin-E (MMAE) via a protease cleavable linker (i.e., maleimidocaproyl-valyl-citrullinyl-paminobenzyloxycarbonyl (mc-val-cit-PABC) ) , with an average drug-to-antibody ratio (DAR) of 4) . ABBV-085 (samrotamab vedotin) , an antibody-drug conjugate (described in International Application No. PCT / US2016 / 063998, entitled “Anti-huLRRC15 antibody drug conjugates and methods for their use, ” published as International Publication No. WO 2017 / 095808) also having huM25 antibody covalently conjugated to microtubule-disrupting cytotoxic agent monomethyl auristatin-E (MMAE) via a protease cleavable linker (i.e., maleimidocaproyl-valyl-citrullinyl-paminobenzyloxycarbonyl (mc-val-cit-PABC) ) , but having an average DAR of 2 was explored in Phase 1 clinical trials.

[0050] It is understood that aspects and embodiments of the present disclosure include “comprising, ” “consisting, ” and “consisting essentially of” aspects and embodiments. Anti-LRRC15 Antibodies

[0051] In one aspect, the present disclosure provides an isolated antibody or antigen-binding portion thereof that specifically binds human leucine-rich repeat-containing protein 15 (hLRRC15) including a heavy-chain variable (VH) region and a light-chain variable (VL) region wherein the VH region includes a first complementarity-determining region (CDR1) including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, a second complementarity-determining region (CDR2) including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and a third complementarity-determining region (CDR3) including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and the VL region includes a CDR1 including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, a CDR2 including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, and a CDR3 including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9.

[0052] In one embodiment, the VH region includes an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, optionally, the VH region includes an amino acid sequence having 95%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10. In one embodiment, the VH region includes an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10. In one embodiment, the VH region includes an amino acid sequence having at least 95%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10. In one embodiment, the VH region includes an amino acid sequence having 96%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10. In one embodiment, the VH region includes an amino acid sequence having at least 97%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10. In one embodiment, the VH region includes an amino acid sequence having 98%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10. In one embodiment, the VH region includes an amino acid sequence having at least 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10. In one embodiment, the VH region includes an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10.

[0053] In one embodiment, the VL region includes an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, optionally, the VL region includes an amino acid sequence having 95%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11. In one embodiment, the VL region includes an amino acid sequence having at least 96%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11. In one embodiment, the VL region includes an amino acid sequence having at least 97%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11. In one embodiment, the VL region includes an amino acid sequence having at least 98%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11. In one embodiment, the VL region includes an amino acid sequence having at least 99%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11. In one embodiment, the VL region includes an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11.

[0054] In one embodiment, the VL region includes an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 or humanized version thereof. In one embodiment, the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, or SEQ ID NO: 17. In one embodiment, the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12. In one embodiment, the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. In one embodiment, the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14. In one embodiment, the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15. In one embodiment, the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16. In one embodiment, the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17.

[0055] In one embodiment, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.

[0056] In one embodiment, the isolated antibody or antigen-binding portion thereof is an IgG antibody, a Fab, a Fab’ , a F (ab′) 2, a Fv, or a ScFv. In one embodiment, the isolated antibody or antigen-binding portion thereof is an IgG antibody. In one embodiment, the isolated antibody or antigen-binding portion thereof is a Fab, a Fab’ , a F (ab′) 2, a Fv, or a ScFv.

[0057] In one embodiment, the isolated antibody or antigen-binding portion thereof is an IgG antibody, optionally, an IgG1 antibody. In one embodiment, the isolated antibody or antigen-binding portion thereof is an IgG antibody. In one embodiment, the isolated antibody or antigen-binding portion thereof is an IgG1 antibody.

[0058] The anti-LRRC15 antibodies or antigen-binding portions thereof described herein can be prepared by recombinant DNA technology, synthetic chemistry techniques, or a combination thereof. For instance, sequences encoding the desired components of the anti-LRRC15 antibodies, including light-chain CDRs and heavy-chain CDRs are typically cloned into an expression vector using standard molecular techniques known in the art. These sequences may be assembled from other vectors encoding the desired protein sequence, from PCR-generated fragments using respective template nucleic acids, or by assembly of synthetic oligonucleotides encoding the desired sequences. Expression systems can be created by transfecting a suitable host cell with an expression vector which includes an anti-LRRC15 antibody of interest. Methods of producing anti-LRRC15 antibodies disclosed herein include culturing host cells expressing the expression vector encoding antibody sequences under conditions suitable for expressing the antibody sequences and isolating the antibody (or antigen-binding portion thereof) expressed by the host cell. The expressed antibody sequences can be isolated using a variety of protein purification techniques known in the art. Polynucleotides and Expression Vectors

[0059] Provided herein are polynucleotides encoding any of the aforementioned antibodies or antigen-binding portions thereof of the present disclosure as well as expression vectors including such polynucleotides.

[0060] Polynucleotides corresponding to various regions of the light or heavy chains of an antibody can be readily obtained and sequenced using convention techniques including but not limited to hybridization, PCR, and DNA sequencing. Additionally, polynucleotides encoding antibodies or antigen-binding portions thereof disclosed herein can be modified, for example, by substituting any non-human coding sequences with homologous human coding sequences (e.g., human heavy and light chain constant regions in place of non-human heavy and light chain constant regions) .

[0061] Due to the degeneracy of the genetic code, there can be considerable variation in nucleotides of an antigen binding unit coding sequence, as well as sequences suitable for construction of the polynucleotides and vectors of the present disclosure. Sequence variants may have modified DNA or amino acid sequences, one or more substitutions, deletions, or additions, the net effect of which is to retain the desired antigen-binding activity. For instance, various substitutions can be made in the coding region that either do not alter the amino acids encoded or result in conservative changes. These substitutions are encompassed by the present disclosure. Conservative amino acid substitutions include substitutions within the following groups: glycine, alanine; valine, isoleucine, leucine; aspartic acid, glutamic acid; asparagine, glutamine; serine, threonine; lysine, arginine; and phenylalanine, tyrosine. While conservative substitutions do effectively change one or more amino acid residues contained in the polypeptide to be produced, the substitutions are not expected to interfere with the antigen-binding activity of the resulting antigen binding units to be produced. Nucleotide substitutions that do not alter the amino acid residues encoded are useful for optimizing gene expression in different systems. Suitable substitutions are known to those of skill in the art and are made, for instance, to reflect preferred codon usage in the expression systems.

[0062] Where desired, the recombinant polynucleotides may include heterologous sequences that facilitate detection of the expression and purification of the gene product. Examples of such sequences are known in the art and include those encoding reporter proteins such as β-galactosidase, β-lactamase, chloramphenicol acetyltransferase (CAT) , luciferase, green fluorescent protein (GFP) and their derivatives. Other heterologous sequences that facilitate purification may code for epitopes such as Myc, HA (derived from influenza virus hemagglutinin) , His-6, FLAG, or the Fc portion of immunoglobulin, glutathione S-transferase (GST) , and maltose-binding protein (MBP) .

[0063] Polynucleotides disclosed herein can be conjugated to a variety of chemically functional moieties described above. Commonly employed moieties include labels capable of producing a detectable signal, signal peptides, agents that enhance immunologic reactivity, agents that facilitate coupling to a solid support, vaccine carriers, bioresponse modifiers, paramagnetic labels and drugs. The moieties can be covalently linked polynucleotide recombinantly or by other means known in the art.

[0064] Polynucleotides disclosed herein can include additional sequences, such as additional encoding sequences within the same transcription unit, controlling elements such as promoters, ribosome binding sites, and polyadenylation sites, additional transcription units under control of the same or a different promoter, sequences that permit cloning, expression, and transformation of a host cell, and any such construct as may be desirable to provide embodiments of the present disclosure.

[0065] Polynucleotides disclosed herein can be obtained using chemical synthesis, recombinant cloning methods, PCR, or any combination thereof. Methods of chemical polynucleotide synthesis are well known in the art. One of skill in the art can use the sequence data provided herein to obtain a desired polynucleotide by employing a DNA synthesizer or ordering from a commercial service.

[0066] Polynucleotides including a desired sequence can be inserted into a suitable vector, which in turn can be introduced into a suitable host cell for replication and amplification. Accordingly, a variety of vectors including one or more of the polynucleotides described above are contemplated herein.

[0067] Vectors generally include transcriptional or translational control sequences required for expressing the antigen binding units. Suitable transcription or translational control sequences include but are not limited to replication origin, promoter, enhancer, repressor binding regions, transcription initiation sites, ribosome binding sites, translation initiation sites, and termination sites for transcription and translation.

[0068] The choice of promoters will largely depend on the host cells in which the vector is introduced. It is also possible to utilize promoters normally associated with a desired light-chain or heavy-chain gene, provided that such control sequences are compatible with the host cell system. Cell-specific or tissue-specific promoters may also be used. A vast diversity of tissue specific promoters has been described and employed by artisans in the field. Exemplary promoters operative in selective animal cells include hepatocyte-specific promoters and cardiac muscle specific promoters. Depending on the choice of the recipient cell types, those skilled in the art will know of other suitable cell-specific or tissue-specific promoters applicable for the construction of the expression vectors of the present disclosure.

[0069] Using known molecular cloning or gene engineering techniques, appropriate transcriptional control sequences, enhancers, terminators, or any other genetic element known in the art can integrated in operative relationship, optionally, additionally with intact selectable fusion genes to be expressed in accordance with the present disclosure. In addition to the above-described elements, the vectors may contain a selectable marker (for example, a gene encoding a protein necessary for the survival or growth of a host cell transformed with the vector) , although such a marker gene can be carried on another polynucleotide sequence co-introduced into the host cell.

[0070] The polynucleotides and vectors described herein have several specific uses. They are useful, for example, in expression systems for the production of antigen binding units. Host Cells

[0071] Provided herein are host cells transfected with expression vectors of the present disclosure. The vectors can be introduced into a suitable prokaryotic or eukaryotic cell by any of a number of appropriate means, including electroporation, microprojectile bombardment; lipofection, infection (where the vector is coupled to an infectious agent) , transfection employing calcium chloride, rubidium chloride, calcium phosphate, DEAE-dextran, or other substances. The choice of the means for introducing vectors will often depend on features of the host cell.

[0072] For most animal cells, any of the above-mentioned methods is suitable for vector delivery. Preferred animal cells are vertebrate cells, preferably mammalian cells, capable of expressing exogenously introduced gene products in large quantity, e.g., at the milligram level. Non-limiting examples of preferred cells are NIH3T3 cells, COS, HeLa, and CHO cells.

[0073] Once introduced into a suitable host cell, expression of the desired antibody or antigen-binding fragment thereof can be determined using any nucleic acid or protein assay known in the art.

[0074] Also provided herein are methods for preparing antibodies or antigen-binding portions thereof, including culturing a suitable host cell (containing one or more expression vectors containing polynucleotide (s) encoding polypeptide (s) of the anti-LRRC15 antibody) under conditions such that the anti-LRRC15 antibody is produced and optionally, recovering the anti-LRRC15 antibody produced. Antibody-Drug-Conjugates

[0075] Provided herein are antibody-drug-conjugates (ADCs) including the antibody or antigen binding portion of the present disclosure and a toxin connected by a linker wherein the ADC has a structure of formula (I) : (wherein Tb-S is from the antibody) and wherein q is between 1 and 8. In one embodiment of the ADC, the antibody or antigen-binding portion thereof that specifically binds human leucine-rich repeat-containing protein 15 (hLRRC15) includes a heavy-chain variable (VH) region and a light-chain variable (VL) region wherein the VH region includes a first complementarity-determining region (CDR1) including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, a second complementarity-determining region (CDR2) including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and a third complementarity-determining region (CDR3) including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and the VL region includes a CDR1 including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, a CDR2 including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, and a CDR3 including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9. In one embodiment of the ADC, wherein the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.

[0076] In one embodiment of the ADC, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, or SEQ ID NO: 17. In one embodiment of the ADC, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12. In one embodiment of the ADC, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. In one embodiment of the ADC, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14. In one embodiment of the ADC, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15. In one embodiment of the ADC, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16. In one embodiment of the ADC, the VH region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17.

[0077] In one embodiment of the ADC, the antibody is an IgG antibody, optionally, an IgG1 antibody. In one embodiment of the ADC, the antibody is an IgG antibody. In one embodiment of the ADC, the antibody is an IgG1 antibody. Pharmaceutical Compositions of ADCs

[0078] Provided herein are pharmaceutical compositions including a plurality of the ADC of the present disclosure and a pharmaceutically acceptable carrier, optionally, wherein the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio between 7 and 8. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio between 7.5 to 8. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7.1. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7.2. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7.3. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7.4. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7.5. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7.6. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7.7. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7.8. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 7.9. In one embodiment, the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio of 8. Methods and Uses of ADCs

[0079] Provided herein are methods of treating a cancer associated with LRRC15 expression in a patient in need thereof including administering to the patient a therapeutically effective amount of any of the ADCs of the present disclosure.

[0080] In one embodiment, the cancer is breast cancer, head and neck squamous cell carcinoma, liver cancer, lung cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, uterine cancer, prostate cancer, or bladder cancer. In one embodiment, the cancer is breast cancer. In one embodiment, the cancer is head and neck squamous cell carcinoma. In one embodiment, the cancer is liver cancer. In one embodiment, the cancer is lung cancer. In one embodiment, the cancer is colorectal cancer. In one embodiment, the cancer is pancreatic cancer. In one embodiment, the cancer is stomach cancer. In one embodiment, the cancer is ovarian cancer. In one embodiment, the cancer is uterine cancer. In one embodiment, the cancer is prostate cancer. In one embodiment, the cancer is bladder cancer.

[0081] In one embodiment, the cancer is a sarcoma, a glioblastoma multiforme, or a melanoma, optionally, wherein the sarcoma is an osteosarcoma, a chondrosarcoma, a liposarcoma, a sarcomatoid carcinoma, a leiomyosarcoma, a synovial sarcoma, a rhabdomyosarcoma, or an undifferentiated pleomorphic sarcoma (UPS) .

[0082] As detailed in the Example section, ADCs disclosed herein can cause cytotoxicity to LRRC15-expressing cells. Patients to be treated with ADCs of the present disclosure may be selected based on LRRC15-positive expression in tumor sample or tumor stroma of the patient.

[0083] When the ADC disclosed herein is administered to a patient, it may be administered at a dose that can be determined in a manner known in the art according to the particular circumstances surrounding the case, at the discretion of the treating physician.

[0084] In some embodiments, the method further includes administering to the patient at least one other therapeutic agent. In some instances, the additional therapeutic agent includes a chemotherapeutic agent, an immunotherapeutic agent, a targeted therapeutic agent, a hormone-based therapeutic agent, or a stem-cell based therapeutic agent. In certain embodiments, at least one other therapeutic agent is an immune checkpoint inhibitor (e.g., a PD-1 antibody or a PD-L1 antibody) .

[0085] In some instances, the ADC and at least one other therapeutic agent are administered sequentially. In such instances, the ADC is administered to the patient prior to administering at least one other therapeutic agent. In other instances, the anti-LRRC15 antibody is administered to the patient after the additional therapeutic agent is administered. In some embodiments, the ADC and at least one other therapeutic agent are formulated as separate dosages.

[0086] Further, the present disclosure provides a use of any of the aforementioned ADCs for treatment of a cancer associated with LRRC15 expression in a patient in need thereof. Additionally, the present disclosure provides a use of any of the aforementioned ADCs for preparation of a medicament for treating a cancer associated with LRRC15 expression in a patient in need thereof. Additionally, the present disclosure provides any of the aforementioned ADCs for use in treating a cancer associated with LRRC15 expression in a patient in need thereof. EXAMPLES

[0087] The following examples of specific aspects for carrying out the molecules, compositions, methods, and uses of the present disclosure are provided for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the present disclosure in any way. Indeed, various modifications of the LRRC15 antibodies and antibody-drug-conjugates thereof and compositions, methods, and uses of such LRRC15 binding antibodies and antibody-drug conjugates thereof of the disclosure, in addition to those shown and described herein, will become apparent to those skilled in the art from the foregoing description and fall within the scope of the appended claims. Example 1. Preparation of anti-LRRC15 antibodies

[0088] Anti-LRRC15 antibodies described herein were prepared using standard recombinant technologies that are well-known in the art. Nucleic acids encoding the anti-LRRC15 antibodies can be synthesized using standard methods. For example, transfection of host cells with recombinant expression vector (carrying nucleic acids encoding anti-LRRC15 antibody) and culturing transfected host cells under conditions suitable for expression of such vector, followed by isolation of anti-LRRC15 antibody from the supernatant of such cultured cells. In brief, anti-LRRC15 antibodies having a human heavy-chain variable region and a murine light-chain variable (VL) region were generated using standard techniques with the resultant anti-LRRC15 antibodies screened for desirable pharmacokinetic properties (e.g., binding to hLRRC15) from which anti-LRRC15 antibody (referred to herein as “AB2” ) was identified. Example 2. Binding affinity of anti-LRRC15 antibodies to hLRRC15

[0089] Binding affinity of anti-LRRC15 antibodies to hLRRC15 was assessed using  Bio-Layer Interferometry (BLI) (Sartorius Bioanalytical Instruments, Inc. ) . In brief, before loading step, hLRRC15-his-biotin and anti-LRRC15 antibodies were diluted in running buffer (1 x kinetics buffer) to suitable concentrations. The 10 μg / mL antibody was immobilized on the Protein A Dip and Read Biosensors. In the analysis step, test protein human LRRC15-his-biotin was prepared to multiple concentrations in the running buffer, 150 nM, 75 nM, and 37.5 nM. The association and dissociation time were 42 seconds and 40 seconds, respectively.

[0090] Binding affinity of anti-LRRC15 antibodies to human LRRC15-his-biotin were determined with anti-LRRC15 antibody AB2 identified as exhibiting binding affinity in the nanomolar range (KD 2.89 nM with R2 0.9981) . Similarly, reference anti-LRRC15 antibody huM25 exhibited binding affinity to hLRRC15-his-biotin in the nanomolar range (KD 2.87 nM) . Example 3. Binding affinity of anti-LRRC15 antibodies to mouse LRRC15

[0091] Binding affinity of anti-LRRC15 antibodies to mouse LRRC15 was assessed using  BLI (Sartorius Bioanalytical Instruments, Inc. ) . In brief, before loading step, mouse LRRC15-his-biotin and antibodies were diluted in running buffer (1 x kinetics buffer) to suitable concentrations. The 10 μg / mL antibody was immobilized on the Protein A Dip and Read Biosensors. In the analysis step, test protein 100 nM mouse LRRC15-his-biotin was prepared in the running buffer. The association and dissociation time were each 60 seconds.

[0092] Anti-LRRC15 antibody AB2 did not exhibit cross-reactivity with mouse LRRC15-his-biotin (data not shown) . In contrast, reference anti-LRRC15 antibody huM25 exhibited binding affinity to mouse LRRC15-his-biotin in the nanomolar range (KD 1.75 nM) . Example 4. Binding affinity of anti-LRRC15 antibodies to cynomolgus monkey LRRC15

[0093] Binding affinity of anti-LRRC15 antibodies to cynomolgus monkey (cyno) LRRC15 was assessed using  BLI (Sartorius Bioanalytical Instruments, Inc. ) . In brief, before loading step, cyno LRRC15-his-biotin and antibodies were diluted in running buffer (1 x kinetics buffer) to suitable concentrations. The 10 μg / mL antibody was immobilized on the Protein A Dip and Read Biosensors. In the analysis step, test protein cyno LRRC15-his-biotin was prepared to multiple concentrations in the running buffer, 150 nM, 75 nM, and 37.5 nM. The association and dissociation time were 42 seconds and 40 seconds, respectively.

[0094] Anti-LRRC15 antibody AB2 exhibited binding affinity to cyno LRRC15-his-biotin in the nanomolar range (KD 1.24 nM with R2 0.9977) . In comparison, reference anti-LRRC15 antibody huM25 also exhibited binding affinity to cyno LRRC15-his-biotin in the nanomolar range (KD 3.08 nM) . Example 5. Binding activities of anti-LRRC15 antibodies in wild-type CHO-K1 cells and CHOK1. hLRRC15 cells

[0095] The binding activities of anti-LRRC15 antibodies were determined in wild-type CHO-K1 cells as well as in CHO-K1 cells that stably over-express hLRRC15 (referred to herein as “CHOK1. hLRRC15” ) . Briefly, a total of 5 x 104 mixed cells for each well were seeded in 96-well plate and washed with FACS buffer (DPBS containing 1%BSA) once. Cells were incubated by series diluted antibodies for 1 hour at 4 ℃. Anti-LRRC15 antibodies were prepared with 3-fold serial dilution ranging from 100 nM to 0.0016 nM in FACS buffer. Anti-LRRC15 antibody huM25 was used as a positive control whereas human IgG1 isotype antibody was used as a negative control. After primary antibody incubation, cells were washed with FACS buffer three times. Then, cells were stained with secondary antibody (Alexa Flu647-conjugated goat anti-human Fc, Jackson ImmunoResearch, #109606-170) at 1: 800 dilution in FACS buffer and incubated for 1 hour at 4 ℃. After secondary antibody incubation, cells were washed with FACS buffer 3 times, Alexa Fluor 647 signals of the stained cells were detected by BD FACS Celesta and MFI determined.

[0096] FlowJo software was used for analysis. Data was plotted as the logarithm of antibody concentration versus mean fluorescence signals. EC50 values were calculated in GraphPad Prism 8 (GraphPad Software) using a log (agonist) vs. response-Variable slope (4 parameters) curve fit.

[0097] Anti-LRRC15 antibody AB2 (as well as reference anti-LRRC15 antibody huM25) exhibited dose-dependent binding to CHOK1. hLRRC15 cells but no binding to wild-type CHO-K1 cells (data not shown) . The half maximal effective concentration (EC50) of anti-LRRC15 antibody AB2 to human LRRC15 was determined to be less than 0.5 nM (0.42 nM) whereas that of reference anti-LRRC15 antibody huM25 was greater than 0.5 nM (0.58 nM) . Example 6. Epitope binning analysis of anti-hLRRC15 antibodies (AB2 compared to huM25)

[0098] Epitope binning was conducted to assess whether anti-LRRC15 antibodies AB2 and reference huM25 competed for binding to hLRRC15. In brief, before loading step, hLRRC15-his-biotin and antibodies were diluted in running buffer (1 x kinetics buffer) to suitable concentrations. The 10 μg / mL hLRRC15-his-biotin was immobilized on the SA Dip and Read Biosensors. Test antibodies were prepared in the running buffer for the analysis step. The association time was 150 seconds. Anti-LRRC15 antibody huM25 was first associated with hLRRC15-his-biotin immobilized on the sensor, followed by AB2 association with human LRRC15-his-biotin in the next step. For the negative control, running buffer without any huM25 antibody was used in the first association step with human LRRC15-his-biotin.

[0099] AB2 binding to hLRRC15 post-huM25 binding was greater than 90% (data not shown) which indicates that the binding epitope of AB2 on human hLRRC15 differs from that of huM25. Example 7. Binding activity of anti-LRRC15 antibodies in BVP-ELISA

[0100] To exclude non-specific binding, anti-LRRC15 antibodies were assessed in BVP (Baculovirus Particle) -ELISA. The assay procedures include: coating plates with 50 μl / well 0.15%BV suspension and incubating at 4 ℃ overnight; washing the plates with 1xPBST 3 times, 300 μl / well; blocking the plates with 1%BSA in 1xPBST, 250 μl / well at 37 ℃ for 2 hours; washing the plates with 1xPBST 3 times, 300 μl / well; adding 50 μl serially diluted sample in duplicate to each well and incubating at 37 ℃ for 1 hour (with gantenerumab and dupilumab as positive controls and adalimumab and pembrolizumab as negative controls) ; washing the plates with 1xPBST 3 times, 300 μl / well; adding secondary antibody anti-human Fc HRP 50 μl / well and incubating at 37 ℃ for 0.5 hour; washing the plates with 1xPBST 6 times, 300 μl / well and then adding 100 μl / well TMB for 15 minutes; stopping the reaction by adding 50 μl / well 1N HCl; reading OD 450 nm on Envision.

[0101] Anti-LRRC15 antibody AB2 and huM25 exhibited comparable binding to BVP (data not shown) . Example 8. Preparation of humanized anti-LRRC15 antibodies and binding activity thereof in CHOK1. hLRRC15 cells

[0102] Humanized variants of anti-LRRC15 antibody AB2 were generated by grafting CDRs residues from the murine VL region onto a human germline framework. In brief, the sequence of the VL region of AB2 was compared to human germline sequences, and the best-fit germline acceptors were selected based on homology, canonical structure and physical properties. Subsequently, structure models of candidates were generated using homology modelling. The CDR regions in light chains of candidate antibodies were fixed, and the murine frameworks were replaced with selected human germline frameworks. Different residues between murine and human frameworks that potentially influence CDR conformation or VH / VL interface were subjected to back mutation. DNA fragments encoding humanized variants were synthesized and subcloned into IgG expression vectors. DNA sequences were confirmed by sequencing. Different combinations of humanized heavy and light chains were co-transfected into CHO-K1 cells for protein production and six humanized variants of parent anti-LRRC15 antibody AB2 were isolated (referred to herein as AB2.1, AB2.2, AB2.3, AB2.4, AB2.5, and AB2.6) .

[0103] Binding activity of humanized variants of anti-LRRC15 antibody AB2 was assessed in CHOK1. hLRRC15 cells (stably over-expressing human LRRC15) using FACS analysis. Briefly, a total of 5 x 104 mixed cells for each well were seeded in 96-well plate and washed with FACS buffer (DPBS containing 1%BSA) once. Cells were incubated by serially diluted anti-LRRC15 antibodies for 1 hour at 4 ℃. Anti-LRRC15 antibodies were prepared with 3-fold serial dilution ranging from 100 nM to 0.0016 nM in FACS buffer. AB2 was used as a positive control whereas hIgG1-isotype was used as a negative control. After primary antibody incubation, cells were washed with FACS buffer three times. Then, cells were stained with secondary antibody (Alexa Flu647-conjugated goat anti-human Fc, Jackson ImmunoResearch, #109606-170) at 1: 800 dilution in FACS buffer and incubated for 1 hour at 4 ℃. After secondary antibody incubation, cells were washed with FACS buffer 3 times, Alexa Fluor 647 signals of the stained cells were detected by BD FACS Celesta and MFI determined.

[0104] As reflected in FIG. 1, humanized antibody variants of AB2 exhibited dose-dependent binding to CHOK1. hLRRC15 cells whereas the negative control exhibited no binding to CHOK1. hLRRC15 cells. Table 1 summarizes the maximal binding signal (mean fluorescence intensity) detected for humanized anti-LRRC15 antibody variants of AB2. Notably, humanized anti-LRRC15 antibody AB2.1 exhibited the highest maximal binding to CHOK1. hLRRC15 cells as compared to other humanized variants of AB2, and higher maximal binding to CHOK1. hLRRC15 cells than parental anti-LRRC15 antibody AB2. Table 1. Binding activity of humanized anti-LRRC15 antibodies in CHOK1. hLRRC15 cells Example 9. Binding affinity of humanized anti-LRRC15 antibodies to cyno LRRC15-his-biotin

[0105] The binding affinity of humanized AB2 antibody variants to cyno LRRC15 was assessed using  BLI (Sartorius Bioanalytical Instruments, Inc. ) . In brief, before loading step, cyno LRRC15-his-biotin and antibodies were diluted in running buffer (1 x kinetics buffer) to suitable concentrations. The 10 μg / mL antibody was immobilized on the Protein A Dip and Read Biosensors. In the analysis step, test protein 100 nM cyno LRRC15-his-biotin was prepared in the running buffer. The association and dissociation time for each was 60 seconds. Binding affinity for anti-LRRC15 antibodies are summarized in Table 2. Table 2. Binding affinity of humanized anti-LRRC15 antibodies to cyno LRRC15-his-biotin Example 10. Binding activity of humanized anti-LRRC15 antibodies in BVP-ELISA

[0106] Non-specific binding activity of humanized AB2 antibody variants was assessed in BVP-ELISA. The assay procedures include: coating plates with 50 μl / well 0.15%BV suspension and incubating at 4 ℃overnight; washing the plates with 1xPBST 3 times, 300 μl / well; blocking the plates with 1%BSA in 1xPBST, 250 μl / well at 37 ℃ for 2 hours; washing the plates with 1xPBST 3 times, 300 μl / well; adding 50 μl serially diluted sample in duplicates to each well and incubating at 37 ℃ for 1 hour (with gantenerumab and dupilumab as positive controls, adalimumab and pembrolizumab as negative controls) ; washing the plates with 1xPBST 3 times, 300 μl / well; adding secondary antibody anti-human Fc HRP 50 μl / well and incubating at 37 ℃ for 0.5 hour; washing the plates with 1xPBST 6 times, 300 μl / well and then adding 100 μl / well TMB for 15 minutes; stopping the reaction by adding 50 μl / well 1N HCl; and reading OD 450 nm on Envision.

[0107] As reflected in FIG. 2, humanized AB2 antibody variants (i.e., AB2.1, AB2.2, AB2.3, AB2.4, AB2.5 and AB2.6) exhibited comparable binding to BVP as negative controls. Example 11. Internalization / cytotoxic activity of anti-LRRC15 antibodies in wild-type CHO-K1 cells and CHOK1. hLRRC15 cells

[0108] The internalization / cytotoxic activity of anti-LRRC15 antibodies was examined using CHOK1. hLRRC15 cells. The assay procedures include: digesting with Accutase and harvesting target cells by centrifugation and resuspending them with assay buffer (corresponding complete culture medium) ; adjusting target cell density and then transferring the target cell suspension to assay plate (5 x 103 cells per well with either CHOK1. hLRRC15 or wild-type CHO-K1 cell lines) ; incubating assay plate in cell incubator (37 ℃ with 5%CO2) overnight; preparing 4× working solutions of test samples and labeling reagents with assay buffer following sample preparation methods: mixing working solutions of test samples with labeling reagents at a molar ratio of 1: 3 and a volume ratio of 1: 1; then incubating for 15 minutes at 37 ℃ with 5%CO2 to allow conjugation; transferring the mixture to the above assay plate containing target cells; incubating assay plate in cell incubator (37 ℃ with 5%CO2) and capturing images at determined timepoint in  Live-Cell Analysis System with appropriate fluorescent module configured for indicated time.

[0109] Data analysis of internalization / cytotoxic activity assay: raw data and results were analyzed and exported with  Live-Cell Analysis System (Sartorius Bioanalytical Instruments, Inc. ) . The Total Red Object Integrated Intensity (GCU × μm2 / Image) was against the concentration of test samples.

[0110] Anti-LRRC15 antibody AB2 and reference anti-LRRC15 antibody huM25 exhibited dose-dependent internalization signal and comparable cytotoxicity in CHOK1. hLRRC15 cells whereas isotype human IgG1 antibody (negative control) did not exhibit cytotoxicity (data not shown) . Further, internalization signal of anti-LRRC15 antibodies in wild-type CHO-K1 cells was comparable to that of isotype human IgG1 antibody (data not shown) . Example 12. Internalization / cytotoxic activity of anti-LRRC15 antibodies coupled to FabFc-ZAP

[0111] The internalization / cytotoxic activity of LRRC15 targeting antibodies was further assessed using an endocytosis-based cytotoxicity assay that relies on the co-internalization of the target bound antibody and a saporin-conjugated anti-human IgG Fab fragment (FabFc-ZAP human, Advanced Targeting Systems, Cat#IT-65) . Saporin is a ribosome-inactivating protein that inhibits protein synthesis upon internalization and results in subsequent cell death.

[0112] In brief, CHOK1. hLRRC15 cells were harvested with 0.05%TrypLETM Express Enzyme (Gibco, 12605-010) and 4 x 103 cells / well were seeded in 50 μL complete F12 medium (Gibco, 11765-054) in a white opaque 96-well plate (Greiner, 655083) . Cells were incubated overnight in a 37 ℃ humidified CO2 incubator. For FabFc-ZAP / antibody mixtures preparation, 40 nM tested antibody (anti-LRRC15 antibody AB2, reference huM25, or IgG1 isotype control) and 120 nM FabFc-ZAP were mixed in equal volume in complete F12 medium and incubated for 15 minutes at room temperature. The working solution was prepared with 3-fold serial dilution in complete F12 medium and added onto 96-well plate at 50 μL per well (the final antibody concentration ranged from 10 nM to 0.00152 nM) . Cells were cultured for an additional 72 hours in a 37 ℃ humidified CO2 incubator. Afterwards, cell viability was analyzed using the  Reagent (Promega, G7572) according to the manufacturer’s instructions. The luminescence was measured using a luminometer (BioTek Synergy Neo reader) . Cell viability was calculated using the following equation: %Cell viability= (Lum Antibody+ FabFc-ZAP-Lum medium)  /  (Lum equivalent FabFc-ZAP -Lum medium) *100 Nonlinear regression analysis was performed by Prism 8 (GraphPad Software) and EC50 values were calculated (log [agonist] vs. response-Variable slope [four parameters] ) .

[0113] The EC50 of anti-LRRC15 antibody AB2 in hLRRC15-CHOK1 cells and that of reference antibody huM25 were comparable (0.169 nM and 0.172 nM, respectively) with maximum cytotoxic activity of these antibodies also being comparable (data not shown) . The data suggests that AB2 and the reference antibody huM25 display similar internalization and cytotoxic activities in CHOK1. hLRRC15 cells. Example 13. Internalization / cytotoxic activity of humanized anti-LRRC15 antibodies coupled to FabFc-ZAP

[0114] The internalization / cytotoxic activity of humanized AB2 antibody variants was assessed using the assay described in Example 12 with the exception that the final antibody concentration ranged from 10 nM to 0.0412 nM. As reflected in FIG. 3, humanized AB2 antibody variants (i.e., AB2.1, AB2.2, AB2.3, AB2.4, AB2.5 and 2.6) exhibited comparable internalization / cytotoxic activity as that of parental anti-LRRC15 antibody AB2 in CHOK1. hLRRC15 cells. Example 14. Preparation of antibody-drug-conjugate targeting hLRRC15

[0115] An antibody-drug-conjugate targeting hLRRC15 was generated using humanized AB2 antibody variant AB2.1 (also referred to herein as “HuClone7” ) having the structure of Formula (I) below:  wherein q is between 1 and 8 (the ADC is referred to herein as “HuClone7-C24” ) . This ADC includes an anti-LRRC15 antibody conjugated to topoisomerase I inhibitor YL0010014 (also known as C24) derived from the antitumor agent camptothecin via a highly hydrophilic linker (i.e., methylsulfonylpyrimidine tripeptide) that is susceptible to proteolytic cleavage. Methods for making the structure depicted in Formula (I) are disclosed in International Application No. PCT / CN2022 / 073822, entitled “Bioactive Substance Conjugate, Preparation Method Therefor and Use Thereof, ” published as International Publication No. WO 2022 / 170971 (incorporated herein by reference in its entirety) . Likewise, exemplary methods of conjugating an antibody to the linker-toxin depicted in Formula (I) are disclosed in International Application No. PCT / CN2023 / 107218, entitled “Antibody-Drug Conjugate, and Preparation Method Therefor and Use Thereof, ” published as International Publication No. WO 2024 / 012523. Example 15. Binding activity of ADC HuClone7-C24 in wild-type HT29 and hLRRC15-positive cell lines (HT29. hLRRC15, Saos-2 and RPMI-17951)

[0116] The binding activity of HuClone7-C24 was evaluated in (i) wild-type HT29 cells (colorectal adenocarcinoma cell line that do not endogenously express hLRRC15) , (ii) HT29 cells that stably overexpress hLRRC15 (referred to herein interchangeably as “HT29. hLRRC15” or “HT29-hLRRC15” ) , and (iii) two different cell lines that endogenously express hLRRC15, namely Saos-2 cell line (derived from patient with osteosarcoma) and RPMI-7951 cell line (derived from patient with malignant melanoma) . For each of HT29. hLRRC15, HT29, and Saos-2 cells, 5 x 104 cells per well were seeded in a 96-well V-bottom plate in the presence of serially diluted antibodies, starting at 100 nM (for HT29. hLRRC15 and HT29 cells) or 30 nM (for Saos-2 cells) , and incubated for 35-60 minutes. After washing with FACS buffer three times, 50 μL of AF647-conjugated anti-human Fc antibody was added at a final concentration of either 2 or 1.67 μg / mL, followed by an additional 30 minutes of incubation. The cells were then washed three times with FACS buffer and analyzed using a BD FACS CelestaTM cell analyzer (BD Biosciences) . For RPMI-7951 cells, the assay was conducted in a similar manner with the exception that 5 x 103 cells per well were seeded in a 96-well plate and 1 μg / mL of HuClone7-C24 was used for the FACS binding assay.

[0117] No binding was detected for either ADC HuClone7-C24 or unconjugated antibody HuClone7 in wild-type HT29 cells (FIG. 4A) whereas HuClone7-C24 and HuClone7 antibodies exhibited dose-dependent specific binding in HT29. hLRRC15 (FIG. 4B) and Saos-2 cells (FIG. 4C) . Notably, the binding activities of HuClone7-C24 and the unconjugated antibody HuClone7 in both HT29. hLRRC15 and Saos-2 cells were similar which suggest that conjugation of HuClone7 with C24-containing linker-payload in ADC HuClone7-C24 does not impact hLRRC15 binding activity. Likewise, as reflected in FIG. 4C, HuClone7-C24, HuClone7, HuM25-MMAE, and the reference huM25 antibody all demonstrated comparable binding in Saos-2 cells. Additionally, as reflected in FIG. 4D, HuClone7-C24 exhibited specific binding in RPMI-7951 cells as well as in Saos-2 and HT29. hLRRC15 cells. Table 3 below provides a summary of EC50 values of anti-LRRC15 ADC HuClone7-C24, reference ADC HuM25-MMAE, and unconjugated anti-LRRC15 antibodies, namely HuClone7 and huM25. Table 3. The EC50 values (nM) of ADCs and unconjugated antibodies thereof in cell lines expressing hLRRC15 ND: not detected (i.e., not assayed) Example 16. Internalization activity of ADCs and unconjugated antibodies thereof in cell lines expressing hLRRC15

[0118] The internalization activity of HuClone7-C24 was determined in cells that overexpress hLRRC15 (HT29. hLRRC15) as well as in cells with endogenous LRRC15 expression (Saos-2 and RPMI-7951 cells) . In brief, HuClone7-C24 was mixed with ZenonTM pHrodoTM iFL Green-labeled Fab fragment (Invitrogen) targeting human Fc at a 1: 3 ratio, followed by incubation with cells that either express hLRRC15 (HT29. hLRRC15, Saos-2, or RPMI-7951) or that do not express hLRRC15 (wild-type HT29) . Notably, pHrodoTM pH indicator dye remains non-fluorescent under neutral pH conditions but increases in fluorescence as the pH becomes more acidic within endosomes / lysosomes. After an incubation period of 6 hours for HT29. hLRRC15 and HT29 cells and 24 hours for Saos-2 cells, HT29. hLRRC15 samples were analyzed using a BD FACS CelestaTM cell analyzer (BD Biosciences) to quantify internalization activity indicated by fluorescence intensity. For RPMI-7951 cells, samples were monitored in an Incucyte incubator over 20 hours, with internalization activity determined based on the total near-infrared (NIR) signal.

[0119] As reflected in FIGs. 5A-5D, unlike in wild-type HT29 cells, HuClone7-C24 exhibited dose-dependent internalization activity in all cells that express LRRC15 (HT29. hLRRC15, Saos-2, and RPMI-7951) . Additionally, as reflected in FIGs. 5B and 5C, internalization activity of HuClone7-C24 in HT29. hLRRC15 and Saos-2 cells was comparable to that of unconjugated antibody HuClone7 which indicates that conjugation of antibody to payload does not affect internalization activity. Further, as reflected in FIG. 5C, in Saos-2 cells, internalization activity of HuClone7-C24 was comparable to that of reference ADC HuM25-MMAE. As reflected in FIG. 5D, in RPMI-7951 cells at concentrations above 10 nM, the isotype ADC control (isotype IgG1 mAb-C24) exhibited non-specific internalization activity. Example 17. Cytotoxic activity of ADCs, unconjugated antibodies and unconjugated payloads in human LRRC15-positive cells (HT29. hLRRC15, Saos-2 and RPMI-7951)

[0120] The cytotoxicity of HuClone7-C24 was assessed in HT29. hLRRC15, Saos-2, and RPMI-7951 cells. In brief, in a 96-well plate, 2 x 103 HT29. hLRRC15 cells, 5 x 103 Saos-2 cells, or 5 x 103 RPMI-7951 cells were mixed with serially diluted antibodies, starting at concentrations of 30 nM, 100 nM, or 16.7 nM, respectively, followed by incubation periods of 5 to 6 days. After incubation, CellTiter-Glo (CTG) reagent was added, and luminescence was measured using BackSeal.

[0121] As reflected in FIGs. 6A-6C, HuClone7-C24 exhibited dose-dependent cytotoxic activity in HT29. hLRRC15, Saos-2, and RPMI-7951 cells, with maximum cytotoxicity at the highest concentration assayed resulting in cell viability of 17%, 52%, and 51%, respectively. As reflected in FIGs. 6A and 6B, unconjugated payload C24 displayed cytotoxic activity on HT29. hLRRC15 and Saos-2 cells, respectively, with approximately five times more cytotoxic activity in Saos-2 cells than unconjugated payload MMAE. Table 5 summarizes EC50 values and minimum cell viability values (corresponding to maximal cytotoxicity) based on cytotoxicity curves of HT29. hLRRC15, Saos-2 and RPMI-7951 cell lines (depicted in FIGs. 6A-6C, respectively) . Table 5. EC50 values and minimum cell viability values for ADCs and unconjugated payloads from cytotoxicity assays NA: not applicable; ND: not detected (i.e., not assayed) Example 18. Bystander killing activity of ADC HuClone7-C24 on hLRRC15-negative cells co-cultured with hLRRC15-positive cells

[0122] The bystander killing activity of HuClone7-C24 was assessed in an in vitro model using cells expressing luciferase but not expressing hLRRC15 (referred to herein as “hLRRC15-negative cells” ) co-cultured with cells expressing hLRRC15 (referred to herein as “hLRRC15-positive cells” ) but not luciferase. Notably, luciferase served as a dependable reporter of cell viability in hLRRC15-negative cells wherein a reduction in luciferase activity indicated decreased cell viability. In particular, (i) HEK293-Luc (hLRRC15-negative) cells and HEK293. hLRRC15 (hLRRC15-positive) cells or (ii) HCT116-luc (hLRRC15-negative) cells and either RPMI-7951 or Saos-2 (hLRRC15-positive) cells were co-cultured and treated with either ADC HuClone7-C24 or unconjugated HuClone7 antibody. In brief, HEK293. hLRRC15 cells (5 x 103) were mixed with HEK293-luc cells (5 x 103) and seeded into a 96-well plate containing 100 μL of DMEM plus 10%FBS then co-cultured in a standard CO2 incubator. Likewise, RPMI-7951 cells (5 x 103) or Saos-2 cells (5 x 103) were co-mixed with HCT116-luc cells (5 x 103) . The following day, a 1: 3 serial dilution of ADCs in DMEM-10%FBS (20 μL) was added to each well in duplicate. The cultures were incubated at 37 ℃ with CO2 for 5-6 days. Luciferase activity was determined using the ONE-GloTm Luciferase Assay System Kit, and EC50 values and dose-response curves were calculated using GraphPad Prism 10 software.

[0123] As reflected in FIG. 7, in co-cultured HEK293-luc and HEK293-hLRRC15 cells, HuClone7-C24 exhibited potent bystander killing of LRRC15-negative HEK293-luc cells in a dose-dependent manner. Notably, HuClone7-C24 elicited no cytotoxicity of HEK293-luc cells in the absence of HEK293-hLRRC15 cells. Furthermore, as reflected in FIGs. 8A and 8B, HuClone7-C24 induced significant bystander killing of HCT116-luc cells in a dose-dependent manner in co-cultures with RPMI-7951 or Saos-2 cells, respectively. Table 6 summarizes EC50 values based on cytotoxicity curves of co-cultured cells (see FIGs. 7, 8A, and 8B) . Table 6. Summary of ADC HuClone7-C24 EC50 values in bystander killing assays Example 19. Antineoplastic activity of ADC HuClone7-C24 in BALB / c nude mice bearing tumors derived from HT29. hLRRC15 cell line

[0124] An established tumor model using BALB / c nude mice bearing tumors derived from HT29. hLRRC15 cell line was used to assess antineoplastic activity of ADC HuClone7-C24. In brief, HT29. hLRRC15 cells (1 x 106 cells) were subcutaneously inoculated into the right flank of female BALB / c nude mice. Tumor length (L) and width (W) were determined with an electronic caliper, with tumor volume calculated according to the following equation: V = (L x W2)  / 2. Mice were randomly assigned to treatment groups and treatment commenced 15 days after tumor inoculation when the average tumor size was approximately 167 mm3. Mice received intravenous doses of either ADC HuClone7-C24, control ADC (with C24 payload) , or vehicle once a week for three weeks (QW x 3) with ADC administered at a dose of either 1 mg / kg or 3 mg / kg and were monitored thrice weekly for signs of illness.

[0125] No clinical signs of toxicity or body weight loss was observed in any treatment group. ADC HuClone7-C24 exhibited significant antineoplastic activity in a dose-dependent manner. Specifically, as reflected in FIG. 9A, HuClone7-C24 exhibited a reduction in tumor volume in a dose-dependent manner. In particular, the tumor growth inhibition percentages by tumor volume (TGITV) following treatment with either 1 mg / kg HuClone7-C24, 3 mg / kg HuClone7-C24, 1 mg / kg Control mAb-C24, or 3 mg / kg Control mAb-C24 were 30%, 95%, 17%and 17%, respectively, as compared to the vehicle-treated group on Day 28 post-treatment. Correspondingly, at the end of the study (on Day 28 post-treatment) , the tumor weight in the 3 mg / kg HuClone7-C24 treated group was significantly lower compared to the vehicle group (see FIG. 9B) . Notably, HuClone7-C24 exhibited statistically significant antineoplastic activity in this tumor model at a dose of 3 mg / kg administered QW x 3 without inducing body weight loss or other clinical signs of toxicity. Example 20. Antineoplastic activity of ADC HuClone7-C24 compared to reference ADC HuM25-MMAE in NOD / SCID mice bearing tumors derived from Saos-2 cell line

[0126] An established tumor model using NOD / SCID mice bearing tumors derived from Saos-2 cell line was used to assess antineoplastic activity of ADC HuClone7-C24 compared to that of reference ADC HuM25-MMAE. Saos-2 cells (2 x 106 cells) were subcutaneously inoculated into the right flank of female NOD / SCID mice. When the average tumor size reached approximately 298 mm3, mice were randomized to treatment groups and treated with ADC HuClone7-C24, reference ADC HuM25-MMAE, control ADC conjugated with C24 payload ( “Ctrl mAb-C24” ) , control ADC conjugated with MMAE payload ( “Ctrl mAb-MMAE” ) or vehicle via IV injections at 3 mg / kg every 3 days for a total of 8 doses (Q3D x8) . These treated mice were then monitored twice a week for signs of illness.

[0127] No clinical signs of toxicity or body weight loss were observed in any treatment group. ADC HuClone7-C24 exhibited significant antineoplastic activity in this tumor model that was more potent than reference ADC HuM25-MMAE. As reflected in FIG. 10A, ADC HuClone7-C24 and Ctrl-mAb-C24 treated groups exhibited TGITV of 105%and 89%, respectively, as compared to the vehicle-treated group on Day 28 post-treatment. In comparison, reference ADC HuM25-MMAE and Control mAb-MMAE treated groups exhibited TGITV values of 71%and 43%, respectively. In summary, mice bearing tumors treated with either HuClone7-C24, Control mAb-C24, or HuM25-MMAE at a dose of 3 mg / kg administered Q3D x8 exhibited a significant reduction in tumor weight relative to the vehicle-treated group (see FIG. 10B) . Notably, HuClone7-C24 exhibited statistically significant antineoplastic activity in the Saos-2 cells derived human osteosarcoma tumor model compared to reference ADC HuM25-MMAE administered at the same dose. No body weight loss exceeding 10%or other clinical signs of toxicity was observed indicating the absence of severe treatment-related adverse effects. Example 21. Antineoplastic activity of HuClone7-C24 assayed using BALB / c nude mice bearing tumors from patient-derived xenografts (PDX)

[0128] Patient-derived chondrosarcoma SA4109 and osteosarcoma SA4237 xenografts, were selected based on LRRC15 RNA and protein expression levels. Specifically, immunohistochemistry staining revealed high LRRC15 expression in SA4109 PDX and SA4237 PDX tumor tissues (data not shown) .

[0129] For SA4109 and SA4237 PDX tumor models, immunocompromised BALB / c nude mice were inoculated subcutaneously with tumor tissues isolated from patients. After the average tumor size reached 150-170 mm3, mice were randomly assigned to treatment groups and treated with ADC HuClone7-C24 or Control mAb-C24 via IV injections at 6 mg / kg weekly for a total of 3 doses for SA4109 (QW x 3) and a total of 2 doses for SA4237 (QW x 2) . Additionally, a comparative group of mice bearing SA4237 tumors received ADC HuM25-MMAE or Control mAb-MMAE via IV injections at 6 mg / kg weekly for a total of 2 doses for SA4237 (QW x 2) . Clinical signs of illness were monitored twice a week.

[0130] In both PDX tumor models, no clinical signs of toxicity or body weight loss were observed in any treatment groups (data not shown) , indicating good tolerability. As reflected in FIG. 11A, in the SA4109 PDX tumor model, treatment with ADC HuClone7-C24 exhibited greater tumor growth inhibition than Control mAb-C24, with TGI values of 97%and 65%, respectively, on Day 21 post-treatment. HuClone7-C24 also demonstrated greater tumor volume reduction than the reference ADC HuM25-MMAE. Similarly, as reflected in FIG. 11B, HuClone7-C24 treatment exhibited a greater reduction in tumor weight than either Control mAb-C24 or reference ADC HuM25-MMAE in the SA4109 PDX tumor model. As reflected in FIG. 11C, in the SA4237 PDX tumor model, HuClone7-C24 and HuM25-MMAE exhibited noticeable tumor regression following the first dose, with TGITV values of 121%and 120%, respectively, on Day 25 post-initial treatment. In contrast, Control mAb-C24 and Control mAb-MMAE exhibited TGITV values of 77%and 39%, respectively. In summary, HuClone7-C24 significantly inhibited tumor growth in both human osteosarcoma PDX models at a weekly dose of 6 mg / kg, without inducing weight loss or other clinical signs of toxicity, indicating its favorable safety profile) . Example 22. Antineoplastic activity of ADC AB2-VC-MMAE compared to reference ADC HuM25-VC-MMAE in NOD SCID mice bearing tumors derived from U-118MG cell line

[0131] Female NOD SCID mice were inoculated with human glioma U-118MG cells (5 x 106 cells) subcutaneously at the right hind flank of each animal. Eleven days later, when the mean tumor volume reached approximately 100 mm3, mice were stratified and randomly assigned to treatment groups (with 8 mice per group) and treated with vehicle (PBS) , ADC huM25-VC-MMAE (DAR 4) , or ADC Ab2-VC-MMAE (DAR 4) via IV injections at a dose of 6 mg / kg twice a week for a total of three weeks (6 treatments) . Tumor length (L) and width (W) were determined with an electronic caliper, with tumor volume calculated according to the following equation: V = (L x W2)  / 2.

[0132] As reflected in FIG. 12, ADC AB2-VC-MMAE exhibited a greater reduction in tumor volume (reflecting greater anti-neoplastic activity) as compared to reference ADC huM25-VC-MMAE. Example 23. Summary of Amino Acid Sequences

[0133] Table 7 provides a summary of amino acid sequences for hLRRC15 and anti-LRRC15 antibodies described herein. Table 7. Summary of amino acid sequences for HuLRRC15 and anti-LRRC15 antibodies. Example 24. Antineoplastic activity of HuClone7-C24 assayed using BALB / c nude mice bearing tumors in PDX models

[0134] The antineoplastic activity of HuClone7-C24 was demonstrated in a series of PDX models using tumor cells derived from sarcomas with high LRRC15 expression (e.g., SA4109, SA4033, and SA3840) . Notably, from the preclinical studies, HuClone7-C24 binding and internalization will release C24 directly into the tumor cells resulting in cell death (see, e.g., Example 16) . SA4109 Chondrosarcoma PDX Model

[0135] The antineoplastic activity of HuClone7-C24 was evaluated in a PDX model of human chondrosarcoma SA4109 (LRRC15high) . SA4109 tumor fragments (2-3 mm) were inoculated subcutaneously into female BALB / c nude mice and when tumors reached approximately 165 mm3, mice were randomized to 5 groups (n=8) and treated with vehicle (saline) , HuClone7-C24 (1, 3, or 10 mg / kg) , or isotype control ADC (Ctrl mAb-C24, 3 mg / kg) via IV injections once weekly for 3 weeks (QWx3) . Tumor volumes and body weight were measured twice weekly, and tumor weight was recorded at study termination. Tolerability was assessed by monitoring body weight changes and mortality.

[0136] As reflected in FIG. 13 and detailed in Table 8, HuClone7-C24 demonstrated dose-dependent and significant antineoplastic activity at doses of 1, 3, and 10 mg / kg, with TGI values of 74.20% (P < 0.001) , 93.79% (P < 0.001) , and 97.66% (P < 0.001) , respectively. In contrast, the isotype control (ADC Ctrl mAb-C24) exhibited non-significant tumor suppression, with a TGI of 35.00% (P > 0.05) . No body weight loss exceeding 10%was observed in any group, indicating the absence of severe treatment-related adverse effects. Table 8. HuClone7-C24 antineoplastic activity in SA4109 chondrosarcoma PDX model Abbreviations: SD = standard deviation; TGI = tumor growth inhibition; T / C = treated / control; P value = Conover’s all-pairs test vs. control group; P < 0.05 is considered statistically significant. SA4033 Leiomyosarcoma PDX Model

[0137] The antineoplastic activity of HuClone7-C24 was evaluated in a PDX model of human leiomyosarcoma SA4033 (LRRC15high) . SA4033 tumor fragments (2 to 3 mm in diameter) were subcutaneously inoculated into female BALB / c nude mice and when tumors reached approximately 163 mm3, mice were randomized to 5 groups (n=8) and treated with saline, HuClone7-C24 (1, 3, and 10 mg / kg) , or isotype control ADC (Ctrl mAb-C24, 3 mg / kg) via IV injections once weekly (QW) for 2 doses. Tumor volumes and body weight were measured twice weekly, and tumor weight was recorded at the study termination. Tolerability was assessed by monitoring body weight changes and mortality.

[0138] As reflected in FIG. 14 and detailed in Table 9, HuClone7-C24 demonstrated dose-dependent and significant antineoplastic activity at doses of 1, 3, and 10 mg / kg, with TGI values of 86.53% (P < 0.001) , 102.77% (P < 0.001) and 105.34% (P < 0.001) respectively. The control isotype (Ctrl mAb-C24) dosed at 3 mg / kg exhibited strong suppression of tumor growth with a TGI of 96.37% (P < 0.001) in this study. No body weight loss exceeding 10%was observed in any group, indicating the absence of severe treatment-related adverse effects. Table 9. HuClone7-C24 antineoplastic activity in SA4033 leiomyosarcoma PDX model Abbreviations: SD = standard deviation; TGI = tumor growth inhibition; T / C = treated / control; P value = Conover's all-pairs test vs control group, P < 0.05 is considered statistically significant. SA3840 Osteosarcoma PDX Model

[0139] The antineoplastic activity of HuClone7-C24 was evaluated in a PDX model of human osteosarcoma SA3840 derived from a 12-year-old female patient (LRRC15high) . SA3840 tumor fragments (2 to 3 mm in diameter) were subcutaneously inoculated into female BALB / c nude mice and when tumors reached approximately 164 mm3, mice were randomized to 5 groups (n=8) and treated with saline, HuClone7-C24 (1, 3, and 10 mg / kg) , or isotype control ADC (Ctrl mAb-C24, 3 mg / kg) via IV injections once weekly (QW) for 2 doses. Tumor volumes and body weight were measured twice weekly, and tumor weight was recorded at the study termination. Tolerability was assessed by monitoring body weight changes and mortality.

[0140] As reflected in FIG. 15 and detailed in Table 10, HuClone7-C24 demonstrated dose-dependent and significant antineoplastic activity at doses of 1, 3, and 10 mg / kg, with TGI values of 83.42% (P <0.001) , 100.51% (P < 0.001) and 106.51% (P < 0.001) respectively. In contrast, the isotype control ADC (Ctrl mAb-C24) dosed at 3 mg / kg exhibited weak tumor growth inhibition with a TGI value of 51.96% (P < 0.05) . No body weight loss exceeding 10%was observed in any group, indicating the absence of severe treatment-related adverse effects. Table 10. HuClone7-C24 antineoplastic activity in SA3840 osteosarcoma PDX model Abbreviations: SD = standard deviation; TGI = tumor growth inhibition; T / C = treated / control; P value = Conover's all-pairs test vs control group, P < 0.05 is considered statistically significant. Example 25. Antineoplastic activity of mouse Surrogate ADC in tumors from CDX with LRRC15+ CAFs

[0141] As HuClone7-C24 does not cross-react with rodent LRRC15, a mouse surrogate LRRC-15 ADC was used to evaluate antineoplastic activity in solid tumor xenograft models in mice where LRRC15 is highly expressed on the surface of mouse stromal cells derived from CAFs but minimally expressed on the surface of human tumor cells, namely, lung / NSCLC (EBC-1) , HNSCC (Detroit 562) , and pancreatic cancers (PANC-1 and Panc 05.04) . In these LRRC15+ CAF models, mouse CAFs support the growth of human xenografts. This mouse surrogate LRRC15-ADC utilizes a rodent cross-reactive monoclonal antibody (mAb) , namely huM25, along with the same conjugation sites, DAR, and linker-payload as that of HuClone7-C24. The two mAbs demonstrate comparable binding and internalization in their corresponding human and murine cells, and HuClone7-C24 and surrogate ADC exhibit comparable binding to human and mouse LRRC15, respectively. This surrogate LRRC15-ADC (referred to herein as “Surrogate ADC” ) represents the closest available alternative to HuClone7-C24 to investigate antitumor effects elicited by targeting LRRC15+ CAFs in LRRC15+ CAF mouse models. Human EBC-1 NSCLC CDX model

[0142] The antineoplastic activity of Surrogate ADC was evaluated in an EBC-1 NSCLC CDX model (LRRC15high in CAFs and LRRC15negative in tumor cells) . In brief, female BALB / c nude mice were inoculated subcutaneously with human EBC-1 NSCLC tumor cells and when tumors reached approximately 168 mm3, mice were randomized to 3 groups (n=8) and treated with saline, Surrogate ADC (3 mg / kg) , or isotype control ADC (Ctrl mAb-C24, 3 mg / kg) via IV injections once weekly (QW) for 2 doses. Tumor volumes and body weight were measured twice weekly, and tumor weight was recorded at the study termination. Tolerability was assessed by monitoring body weight changes and mortality.

[0143] As reflected in FIG. 16 and detailed in Table 11, the Surrogate ADC exhibited significant antineoplastic activity with a TGI of 105.58% (P < 0.001) at a dose of 3 mg / kg. In contrast, the isotype control ADC (Ctrl mAb-C24) exhibited moderate antineoplastic activity with a TGI of 70.33% (P < 0.01) at a dose of 3 mg / kg. No body weight loss exceeding 10%was observed in any group, indicating the absence of severe treatment-related adverse effects. Table 11. Surrogate ADC antineoplastic activity in the EBC-1 human lung / NSCLC CDX model Abbreviations: SD = standard deviation; TGI = tumor growth inhibition; T / C = treated / control; P value = Conover’s all-pairs test vs. control group; P < 0.05 is considered to be statistically significant. Detroit 562 human pharyngeal carcinoma CDX model

[0144] The antineoplastic activity of Surrogate ADC was evaluated in a Detroit 562 human pharyngeal carcinoma CDX model (LRRC15high in CAFs and LRRC15negative in tumor cells) . In brief, female NPG mice were inoculated subcutaneously with Detroit 562 tumor cells and when tumors reached approximately 152 mm3, mice were randomized to 4 groups (n=8) and treated with saline, Surrogate ADC (3 and 10 mg / kg) , or isotype control ADC (Ctrl mAb-C24, 3 mg / kg) via IV injections once weekly (QW) for 2 doses. Tumor volumes and body weight were measured twice weekly, and tumor weight was recorded at the study termination. Tolerability was assessed by monitoring body weight changes and mortality.

[0145] As reflected in FIG. 17 and detailed in Table 12, the Surrogate ADC exhibited robust and dose-dependent antineoplastic activity at both 3 mg / kg and 10 mg / kg, with TGI values of 96.95% (P < 0.01) and 103.46% (P < 0.001) , respectively. In contrast, the isotype control ADC (Ctrl mAb-C24) exhibited weak antineoplastic activity with a TGI value of 20.79% (P < 0.01) at a dose of 3 mg / kg. No body weight loss exceeding 10%was observed in any group, indicating the absence of severe treatment-related adverse effects. Table 12. Surrogate ADC antineoplastic activity in human pharyngeal carcinoma CDX model Abbreviations: SD = standard deviation; TGI = tumor growth inhibition; T / C = treated / control; P value = Conover’s all-pairs test vs. control group; P < 0.05 is considered to be statistically significant. Panc 05.04 human pancreatic carcinoma CDX model

[0146] The antineoplastic activity of Surrogate ADC was evaluated in a Panc 05.04 human pancreatic carcinoma CDX model (LRRC15high in CAFs and LRRC15negative in tumor cells) . In brief, female BALB / c nude mice were inoculated subcutaneously with human Panc 05.04 tumor cells and when tumors reached approximately 181 mm3, mice were randomized to 4 groups (n=8) and treated with saline, Surrogate ADC (3 and 10 mg / kg) , or isotype control ADC (Ctrl mAb-C24, 3 mg / kg) via IV injections once weekly for 2 weeks (QWx2) . Tumor volumes and body weight were measured twice weekly, and tumor weight was recorded at the study termination. Tolerability was assessed by monitoring body weight changes and mortality.

[0147] As reflected in FIG. 18 and detailed in Table 13, the Surrogate ADC exhibited significant antineoplastic activity at both 3 and 10 mg / kg, with TGI values of 109.11% (P < 0.001) and 109.25% (P <0.001) , respectively. In contrast, the isotype control ADC (Ctrl mAb-C24) exhibited moderate antineoplastic activity with a TGI value of 77.70% (P < 0.01) at a dose of 3 mg / kg. No body weight loss exceeding 10%was observed in any group, indicating the absence of severe treatment-related adverse effects. Table 13. Surrogate ADC antineoplastic activity in human pancreatic carcinoma Panc 05.04 CDX model Abbreviations: SD = standard deviation; TGI = tumor growth inhibition; T / C = treated / control; P value = Conover's all-pairs test vs control group, P < 0.05 is considered statistically significant. PANC-1 Human Pancreatic Carcinoma CDX Model

[0148] The antineoplastic activity of Surrogate ADC as a single agent and in combination with gemcitabine was evaluated in a PANC-1 human pancreatic carcinoma CDX model (LRRC15high in CAFs and LRRC15low in tumor cells) . In brief, female BALB / c nude mice were inoculated subcutaneously with human PANC-1 tumor cells and when tumors reached approximately 168 mm3, mice were randomized to 7 groups (n=8) and treated with saline, gemcitabine (50 mg / kg) , isotype control ADC (Ctrl mAb-C24, 3 mg / kg) , Surrogate ADC (1 or 3 mg / kg) , or Surrogate ADC (1 mg / kg or 3 mg / kg) combined with gemcitabine (50 mg / kg) . ADC doses were administered via IV injections once a week (QW) for 4 weeks (for a total of 4 doses) . Gemcitabine doses were administered via IV injections twice a week (BIW) for 4 weeks (for a total of 8 doses) . Tumor volumes and body weight were measured twice weekly, and tumor weight was recorded at the study termination. Tolerability was assessed by monitoring body weight changes and mortality.

[0149] As reflected in FIG. 19 and detailed in Table 14, the Surrogate ADC exhibited dose-dependent antineoplastic activity at both 1 and 3 mg / kg, with TGI values of 53.39% (P < 0.01) and 77.23% (P <0.001) , respectively. In contrast, the isotype control ADC (Ctrl mAb-C24) exhibited non-significant antineoplastic activity with a TGI of 37.95% (P > 0.05) at a dose of 3 mg / kg whereas gemcitabine exhibited moderate antineoplastic activity with a TGI of 63.50% (P < 0.001) . Compared to monotherapy with either Surrogate ADC or gemcitabine alone, treatment with Surrogate ADC at a dose of 1 mg / kg or 3 mg / kg in combination with gemcitabine exhibited enhanced antineoplastic activity with TGI values of 84.53% (P < 0.001) and 89.13% (P < 0.001) , respectively. No body weight loss exceeding 10%was observed in any group, indicating the absence of severe treatment-related adverse effects. Table 14. HuClone7-C24 Surrogate ADC and gemcitabine antineoplastic activity in PANC-1 human pancreatic carcinoma CDX model Abbreviations: SD = standard deviation; TGI = tumor growth inhibition; T / C = treated / control; P value = Conover's all-pairs test vs control group, P < 0.05 is considered statistic EMBODIMENTS OF THE DISCLOSURE The following describes additional embodiments of the disclosure. Embodiment 1 (E1) . An isolated antibody or antigen-binding portion thereof that specifically binds human leucine-rich repeat-containing protein 15 comprising a heavy-chain variable (VH) region and a light-chain variable (VL) region wherein the VH region comprises a first complementarity-determining region (CDR1) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, a second complementarity-determining region (CDR2) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and a third complementarity-determining region (CDR3) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and the VL region comprises a CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, a CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, and a CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9. E2. The isolated antibody or antigen-binding portion of E1, wherein the VH region comprises an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to SEQ ID NO: 10, optionally, the VH region comprises an amino acid sequence having 95%sequence identity to SEQ ID NO: 10. E3. The isolated antibody or antigen-binding portion of E1, wherein the VL region comprises an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to SEQ ID NO: 11, optionally the VL region comprises an amino acid sequence having 95%sequence identity to SEQ ID NO: 11. E4. The isolated antibody or antigen-binding portion of E1, wherein the VL region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 17. E5. The isolated antibody or antigen-binding portion of E1, wherein the VH region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12. E6. The isolated antibody or antigen-binding portion of E1, which is an IgG antibody, a Fab, a Fab’ , a F (ab′) 2, a Fv, or a ScFv. E7. The isolated antibody or antigen-binding portion of E1, which is an IgG antibody, optionally an IgG1 antibody. E8. An isolated polynucleotide encoding the antibody or antigen-binding portion of E1. E9. An expression vector comprising the polynucleotide of E8. E10. A host cell comprising the expression vector of E9. E11. A method of preparing the antibody or antigen-binding portion of E1 comprising culturing the host cell of E10 under conditions suitable for expressing the expression vector, optionally further comprising isolating the antibody or antigen-binding portion thereof. E12. An antibody-drug-conjugate (ADC) comprising the antibody or antigen binding portion of E1 and a toxin connected by a linker wherein the ADC has a structure of formula (I) : and wherein q is between 1 and 8. E13. The ADC of E12, wherein the VH region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12. E14. The ADC of E12, wherein the VH region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 17. E15. The ADC of E12, wherein the antibody is an IgG antibody, optionally an IgG1 antibody. E16. A pharmaceutical composition comprising a plurality of the ADC of E12 and a pharmaceutically acceptable carrier, optionally, wherein the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio between 7 and 8. E17. A method of treating a cancer associated with LRRC15 expression in a patient in need thereof comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of the ADC of E12. E18. The method of E17, wherein the method further comprises administering to the patient at least one other therapeutic agent. E19. The method of E17, wherein the cancer is breast cancer, head and neck squamous cell carcinoma, liver cancer, lung cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, uterine cancer, prostate cancer, or bladder cancer. E20. The method of E17, wherein the cancer is a sarcoma, a glioblastoma multiforme, or a melanoma, optionally, wherein the sarcoma is an osteosarcoma, a chondrosarcoma, a liposarcoma, a sarcomatoid carcinoma, a leiomyosarcoma, a synovial sarcoma, a rhabdomyosarcoma, or an undifferentiated pleomorphic sarcoma (UPS) . E21. Use of the ADC of E12 for treating a cancer associated with LRRC15 expression. E22. The use of E21, further comprising at least one other therapeutic agent. E23. The use of E21, wherein the cancer is breast cancer, head and neck squamous cell carcinoma, liver cancer, lung cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, uterine cancer, prostate cancer, or bladder cancer. E24. The use of E21, wherein the cancer is a sarcoma, a glioblastoma multiforme, or a melanoma, optionally, wherein the sarcoma is an osteosarcoma, a chondrosarcoma, a liposarcoma, a sarcomatoid carcinoma, a leiomyosarcoma, a synovial sarcoma, a rhabdomyosarcoma, or an undifferentiated pleomorphic sarcoma (UPS) . E25. Use of the ADC of E12 in manufacture of a medicament for treating a cancer associated with LRRC15 expression. E26. The use of E25, further comprises at least one other therapeutic agent. E27. The use of E25, wherein the cancer is breast cancer, head and neck squamous cell carcinoma, liver cancer, lung cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, uterine cancer, prostate cancer, or bladder cancer. E28. The use of E25, wherein the cancer is a sarcoma, a glioblastoma multiforme, or a melanoma, optionally, wherein the sarcoma is an osteosarcoma, a chondrosarcoma, a liposarcoma, a sarcomatoid carcinoma, a leiomyosarcoma, a synovial sarcoma, a rhabdomyosarcoma, or an undifferentiated pleomorphic sarcoma (UPS) . E29. An antibody-drug-conjugate (ADC) for use in treating cancer in a patient in need thereof, wherein the ADC comprises an antibody or antigen-binding portion thereof that specifically binds human leucine-rich repeat-containing protein 15 and a toxin connected by a linker, wherein the antigen-binding portion thereof that specifically binds human leucine-rich repeat-containing protein 15 comprises a heavy-chain variable (VH) region and a light-chain variable (VL) region wherein the VH region comprises a first complementarity-determining region (CDR1) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, a second complementarity-determining region (CDR2) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and a third complementarity-determining region (CDR3) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and the VL region comprises a CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, a CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, and a CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, wherein the ADC has a structure of formula (I) : and wherein q is between 1 and 8. E30. The ADC for use of E29, wherein the antibody or antigen-binding portion comprises a VH region comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and optionally, the VH region comprises an amino acid sequence having 95%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10. E31. The ADC for use of E29, wherein the antibody or antigen-binding portion comprises a VL region comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, and optionally, the VL region comprises an amino acid sequence having 95%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11. E32. The ADC for use of E29, wherein the antibody or antigen-binding portion comprises a VL region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, or SEQ ID NO: 17. E33. The ADC for use of E29, wherein the antibody or antigen-binding portion comprises a VH region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and a VL region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12. E34. The ADC for use of E29, wherein the antibody or antigen-binding portion is an IgG antibody, a Fab, a Fab’ , a F (ab′) 2, a Fv, or a ScFv. E35. The ADC for use of E29, wherein the antibody or antigen-binding portion is an IgG antibody, and optionally, is an IgG1 antibody. E36. The ADC for use of E29, wherein the cancer is a cancer associated with LRRC15 expression. E37. The ADC for use of E36, wherein the cancer is breast cancer, head and neck squamous cell carcinoma, liver cancer, lung cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, uterine cancer, prostate cancer, or bladder cancer. E38. The ADC for use of E36, wherein the cancer is a sarcoma, a glioblastoma multiforme, or a melanoma, optionally, wherein the sarcoma is an osteosarcoma, a chondrosarcoma, a liposarcoma, a sarcomatoid carcinoma, a leiomyosarcoma, a synovial sarcoma, a rhabdomyosarcoma, or an undifferentiated pleomorphic sarcoma (UPS) . E39.The ADC for use of E29, further comprising at least one other therapeutic agent.

Claims

1.An isolated antibody or antigen-binding portion thereof that specifically binds human leucine-rich repeat-containing protein 15 comprising a heavy-chain variable (VH) region and a light-chain variable (VL) region wherein the VH region comprises a first complementarity-determining region (CDR1) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, a second complementarity-determining region (CDR2) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and a third complementarity-determining region (CDR3) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and the VL region comprises a CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, a CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, and a CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9.2.The isolated antibody or antigen-binding portion of claim 1, wherein the VH region comprises an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, optionally, the VH region comprises an amino acid sequence having 95%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10.3.The isolated antibody or antigen-binding portion of claim 1, wherein the VL region comprises an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, optionally, the VL region comprises an amino acid sequence having 95%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11.4.The isolated antibody or antigen-binding portion of claim 1, wherein the VL region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, or SEQ ID NO: 17.5.The isolated antibody or antigen-binding portion of claim 1, wherein the VH region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.6.The isolated antibody or antigen-binding portion of claim 1, which is an IgG antibody, a Fab, a Fab’ , a F (ab′) 2, a Fv, or a ScFv.7.The isolated antibody or antigen-binding portion of claim 1, which is an IgG antibody, optionally, an IgG1 antibody.8.An isolated polynucleotide encoding the antibody or antigen-binding portion of claim 1.9.An expression vector comprising the polynucleotide of claim 8.10.A host cell comprising the expression vector of claim 9.11.A method of preparing the antibody or antigen-binding portion of claim 1 comprising culturing the host cell of claim 10 under conditions suitable for expressing the expression vector, optionally, further comprising isolating the antibody or antigen-binding portion thereof.12.An antibody-drug-conjugate (ADC) comprising the antibody or antigen binding portion of claim 1 and a toxin connected by a linker wherein the ADC has a structure of formula (I) : and wherein q is between 1 and 8.13.The ADC of claim 12, wherein the VH region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.14.The ADC of claim 12, wherein the VH region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the VL region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, or SEQ ID NO: 17.15.The ADC of claim 12, wherein the antibody is an IgG antibody, optionally, an IgG1 antibody.16.A pharmaceutical composition comprising a plurality of the ADC of claim 12 and a pharmaceutically acceptable carrier, optionally, wherein the plurality of the ADC has an average drug-to-antibody ratio between 7 and 8.17.A method of treating a cancer associated with LRRC15 expression in a patient in need thereof comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of the ADC of claim 12.18.The method of claim 17, wherein the method further comprises administering to the patient at least one other therapeutic agent.19.The method of claim 17, wherein the cancer is breast cancer, head and neck squamous cell carcinoma, liver cancer, lung cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, ovarian cancer, uterine cancer, prostate cancer, or bladder cancer.20.The method of claim 17, wherein the cancer is a sarcoma, a glioblastoma multiforme, or a melanoma, optionally, wherein the sarcoma is an osteosarcoma, a chondrosarcoma, a liposarcoma, a sarcomatoid carcinoma, a leiomyosarcoma, a synovial sarcoma, a rhabdomyosarcoma, or an undifferentiated pleomorphic sarcoma (UPS) .

Images