Multispecific antigen binding proteins and uses thereof

Abstract

The present invention relates to multispecific antigen binding proteins (MSAPs), such as trispecific antigen binding proteins (TSAPS), that specifically bind to CD3, CD8, and a target antigen (e.g., tumor-associated antigen or a tumor-specific antigen). The present invention also provides antibodies or antigen-binding fragments thereof targeting CD8 or CD3, and MSAPs comprising thereof. Compositions, kits, methods of use (e.g., treating cancer), and methods of making thereof are also provided.

Description

Abstract This invention relates to multispecific antigen-binding proteins (MSAPs), such as trispecific antigen-binding proteins (TSAPs), that specifically bind to CD3, CD8, and target antigens (e.g., tumor-associated antigens or tumor-specific antigens). The invention also provides antibodies targeting CD8 or CD3, or antigen-binding fragments thereof, and MSAPs comprising them. Compositions, kits, methods of use (e.g., for treating cancer), and methods of manufacturing the same are also provided.

Claims

1.A multispecific antigen binding protein comprising:i) an anti-CD3 moiety that specifically binds to CD3;ii) an anti-CD8 moiety that specifically binds to CD8; andiii) an anti-target epitope moiety that specifically binds to a target epitope,wherein a first moiety of the three moieties is a Fab fragment, wherein the Fab fragment comprises a first polypeptide comprising a heavy chain variable region (VH) and a heavy chain constant region (CH1) , and a second polypeptide comprising a light chain variable region (VL) and a light chain constant region (CL) ;wherein a second moiety of the three moieties is a first antigen binding fragment;wherein a third moiety of the three moieties is a second antigen binding fragment; and wherein:(a) the first antigen binding fragment is fused to the N-terminus of the VH of the Fab fragment, and the second antigen binding fragment is fused to the N-terminus of the VL of the Fab fragment;(b) the first antigen binding fragment is fused to the C-terminus of the CH1 of the Fab fragment, and the second antigen binding fragment is fused to the N-terminus of the VL of the Fab fragment;(c) the first antigen binding fragment is fused to the N-terminus of the VH of the Fab fragment, and the second antigen binding fragment is fused to the C-terminus of the CL of the Fab fragment;(d) the first antigen binding fragment is fused to the N-terminus of the VH of the Fab fragment, and the second antigen binding fragment is fused to the C-terminus of the CH1 of the Fab fragment; or(e) the first antigen binding fragment is fused to the N-terminus of the VL of the Fab fragment, and the second antigen binding fragment is fused to the C-terminus of the CL of the Fab fragment.2.The multispecific antigen binding protein of claim 1, wherein(a) the anti-CD3 moiety is the Fab fragment ( “anti-CD3 Fab fragment” ) , the anti-CD8 moiety is the first antigen binding fragment ( “anti-CD8 first antigen binding fragment” ) , and the anti-target epitope moiety is the second antigen binding fragment ( “anti-target epitope second antigen binding fragment” ) ;(b) the anti-CD3 moiety is the Fab fragment, the anti-target epitope moiety is the first antigen binding fragment ( “anti-target epitope first antigen binding fragment” ) , and the anti-CD8 moiety is the second antigen binding fragment ( “anti-CD8 second antigen binding fragment” ) ;(c) the anti-CD8 moiety is the Fab fragment ( “anti-CD8 Fab fragment” ) , the anti-CD3 moiety is the first antigen binding fragment ( “anti-CD3 first antigen binding fragment” ) , and the anti-target epitope moiety is the second antigen binding fragment;(d) the anti-CD8 moiety is the Fab fragment, the anti-target epitope moiety is the first antigen binding fragment, and the anti-CD3 moiety is the second antigen binding fragment ( “anti-CD3 second antigen binding fragment” ) ;(e) the anti-target epitope moiety is the Fab fragment ( “anti-target epitope Fab fragment” ) , the anti-CD3 moiety is the first antigen binding fragment, and the anti-CD8 moiety is the second antigen binding fragment; or(f) the anti-target epitope moiety is the Fab fragment, the anti-CD8 moiety is the first antigen binding fragment, and the anti-CD3 moiety is the second antigen binding fragment.3.The multispecific antigen binding protein of claim 1 or 2, wherein the first antigen binding fragment and the second antigen binding fragment are independently selected from the group consisting of Fab, Fab’, Fab’-SH, F (ab’) 2, Fv, sdAb, scFv, and any combination thereof.4.The multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-3, wherein the first antigen binding fragment and the second antigen binding fragment are both scFv.5.The multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-4, wherein the anti-CD8 moiety specifically binds to CD8α, and wherein the anti-CD8 moiety comprises:i) a heavy chain hypervariable region-1 (HVR-H1) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, a light chain hypervariable region-1 (HVR-L1) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6;ii) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6;iii) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6;iv) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6;v) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; orvi) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23.6.The multispecific antigen binding protein of claim 5, wherein the anti-CD8 moiety comprises:i) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25;ii) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27;iii) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29;iv) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25;v) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 33; orvi) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35.7.The multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-6, wherein the anti-CD8 moiety is an anti-CD8 scFv, and wherein the anti-CD8 scFv comprises the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 21, 44-49, and 51-55.8.The multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-7, wherein the anti-CD3 moiety comprises:(a) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 37, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41;(b) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 157, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 158, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41; or(c) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 166, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41.9.The multispecific antigen binding protein of claim 8, wherein the anti-CD3 moiety comprises:(a) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43; or(b) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 159, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43; or(c) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 167, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43.10.The multispecific antigen binding protein of claim 8 or 9, wherein the anti-CD3 moiety is an anti-CD3 scFv, and wherein the anti-CD3 scFv comprises the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 50, 56, 163, 164, 183, and 184.11.The multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-14, wherein the anti-target epitope moiety specifically recognizes a target epitope of a tumor-associated antigen (TAA) or a tumor-specific antigen (TSA) ; optionally wherein the (i) TAAis CD19 or EpCAM, or (ii) the TSA is WT1.12.The multispecific antigen binding protein of claim 11, wherein the anti-target epitope moiety specifically recognizes CD19 (anti-CD19 moiety) , and wherein the anti-CD19 moiety comprises an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62.13.The multispecific antigen binding protein of claim 12, wherein the anti-CD19 moiety comprises a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 64.14.The multispecific antigen binding protein of claim 12 or 13, wherein the anti-CD19 moiety is an anti-CD19 scFv, and wherein the anti-CD19 scFv comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65 or 66.15.The multispecific antigen binding protein of any one of claims 12-14, wherein the anti-CD19 moiety is an anti-CD19 Fab, and wherein the anti-CD19 Fab fragment comprises a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 137, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 139 or 169.16.The multispecific antigen binding protein of claim 11, wherein the anti-target epitope moiety specifically recognizes EpCAM (anti-EpCAM moiety) , and wherein the anti-EpCAM moiety comprises an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72.17.The multispecific antigen binding protein of claim 16, wherein the anti-EpCAM moiety comprises a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 74.18.The multispecific antigen binding protein of claim 16 or 17, wherein the anti-EpCAM moiety is an anti-EpCAM scFv, and wherein the anti-EpCAM scFv comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75 or 78.19.The multispecific antigen binding protein of claim 11, wherein the anti-target epitope moiety specifically recognizes WT1 (anti-WT1 moiety) , and wherein the anti-WT1 moiety comprises an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 84.20.The multispecific antigen binding protein of claim 19, wherein the anti-WT1 moiety comprises a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86.21.The multispecific antigen binding protein of claim 20 or 21, wherein the anti-WT1 moiety  is an anti-WT1 scFv, and wherein the anti-WT1 scFv comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87 or 88.22.The multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-9 and 11-21, wherein the multispecific antigen binding protein comprises:i) an anti-CD3 Fab fragment, an anti-CD8 first scFv, and an anti-WT1 second scFv;ii) an anti-CD3 Fab fragment, an anti-WT1 first scFv, and an anti-CD8 second scFv;iii) an anti-CD3 Fab fragment, an anti-EpCAM first scFv, and an anti-CD8 second scFv;iv) an anti-CD3 Fab fragment, an anti-CD8 first scFv, and an anti-EpCAM second scFv;v) an anti-CD3 Fab fragment, an anti-CD19 first scFv, and an anti-CD8 second scFv; orvi) an anti-CD3 Fab fragment, an anti-CD8 first scFv, and an anti-CD19 second scFv.23.The multispecific antigen binding protein of claim 22, wherein the anti-CD3 Fab fragment comprises:(i) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 89, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90 or 179;(ii) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 160, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90 or 179; or(iii) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 168, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90 or 179.24.The multispecific antigen binding protein of claim 22 or 23, wherein the multispecific antigen binding protein comprises a first fusion polypeptide comprising an anti-WT1 first scFv fused to the N-terminus of the VH of the anti-CD3 Fab fragment via a first linker, and a second fusion polypeptide comprising an anti-CD8 second scFv fused to the N-terminus of the VL of the anti-CD3 Fab fragment via a second linker; and wherein the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 96.25.The multispecific antigen binding protein of claim 22 or 23, wherein the multispecific antigen binding protein comprises a first fusion polypeptide comprising an anti-EpCAM first scFv fused to the N-terminus of the VH of the anti-CD3 Fab fragment via a first linker, and a second fusion polypeptide comprising an anti-CD8 second scFv fused to the N-terminus of the VL of the  anti-CD3 Fab fragment via a second linker; and wherein the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 101, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.26.The multispecific antigen binding protein of claim 22 or 23, wherein the multispecific antigen binding protein comprises a first fusion polypeptide comprising an anti-CD19 first scFv fused to the N-terminus of the VH of the anti-CD3 Fab fragment via a first linker, and a second fusion polypeptide comprising an anti-CD8 second scFv fused to the N-terminus of the VL of the anti-CD3 Fab fragment via a second linker; and wherein:i) the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104;ii) the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 106; oriii) the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 106.27.The multispecific antigen binding protein of any one of 1-9, 11-13, and 15, wherein the multispecific antigen binding protein comprises:i) an anti-CD19 Fab fragment, an anti-CD8 first scFv, and an anti-CD3 second scFv; orii) an anti-CD19 Fab fragment, an anti-CD3 first scFv, and an anti-CD8 second scFv.28.The multispecific antigen binding protein of claim 27, wherein the multispecific antigen binding protein comprises a first fusion polypeptide comprising an anti-CD3 first scFv fused to the C-terminus of the CH1 of the anti-CD19 Fab fragment via a first linker, and a second fusion polypeptide comprising an anti-CD8 second scFv fused to the N-terminus of the VL of the anti-CD19 Fab fragment via a second linker; and wherein the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 170, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 171.29.The multispecific antigen binding protein of claim 27, wherein the multispecific antigen binding protein comprises a first fusion polypeptide comprising an anti-CD8 first scFv fused to the C-terminus of the CH1 of the anti-CD19 Fab fragment via a first linker, and a second fusion polypeptide comprising an anti-CD3 second scFv fused to the N-terminus of the VL of the anti- CD19 Fab fragment via a second linker; and wherein:a) the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 172, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 173,b) the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 174, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 175,c) the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 172, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 176, ord) the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 172, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182.30.The multispecific antigen binding protein of claim 27, wherein the multispecific antigen binding protein comprises a first fusion polypeptide comprising an anti-CD3 first scFv fused to the N-terminus of the VH of the anti-CD19 Fab fragment via a first linker, and a second fusion polypeptide comprising an anti-CD8 second scFv fused to the C-terminus of the CL of the anti-CD19 Fab fragment via a second linker; and wherein the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 177, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 178.31.The multispecific antigen binding protein of claim 27, wherein the multispecific antigen binding protein comprises: i) a fusion polypeptide comprising an anti-CD3 first scFv fused to the N-terminus of the VH of the anti-CD19 Fab fragment via a first linker, and an anti-CD8 second scFv fused to the C-terminus of the CH1 of the anti-CD19 Fab fragment via a second linker, and ii) the second polypeptide of the anti-CD19 Fab fragment; and wherein the fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 180, and the second polypeptide of the anti-CD19 Fab fragment comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 169.32.The multispecific antigen binding protein of claim 27, wherein the multispecific antigen binding protein comprises i) the first polypeptide of the anti-CD19 Fab fragment, and ii) a fusion polypeptide comprising an anti-CD3 first scFv fused to the N-terminus of the VL of the anti-CD19 Fab fragment via a first linker, and an anti-CD8 second scFv fused to the C-terminus of the CL of the anti-CD19 Fab fragment via a second linker; and wherein the first polypeptide of the anti-CD19 Fab fragment comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 137, and the fusion  polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 181.33.The multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-11, 16, and 17, wherein the multispecific antigen binding protein comprises:i) an anti-EpCAM Fab fragment, an anti-CD3 first scFv, and an anti-CD8 second scFv; orii) an anti-EpCAM Fab fragment, an anti-CD8 first scFv, and an anti-CD3 second scFv.34.The multispecific antigen binding protein of claim 33, wherein the anti-EpCAM Fab fragment comprises a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77.35.The multispecific antigen binding protein of claim 33 or 34, wherein the multispecific antigen binding protein comprises a first fusion polypeptide comprising an anti-CD3 first scFv fused to the N-terminus of the VH of the anti-EpCAM Fab fragment via a first linker, and a second fusion polypeptide comprising an anti-CD8 second scFv fused to the N-terminus of the VL of the anti-EpCAM Fab fragment via a second linker; and wherein the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 97, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98.36.The multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-6, 8-11, and 16-18, wherein the multispecific antigen binding protein comprises:i) an anti-CD8 Fab fragment, an anti-EpCAM first scFv, and an anti-CD3 second scFv; orii) an anti-CD8 Fab fragment, an anti-CD3 first scFv, and an anti-EpCAM second scFv.37.The multispecific antigen binding protein of claim 36, wherein the anti-CD8 Fab fragment comprises:i) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 147, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 148;ii) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 149, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 150;iii) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 92;iv) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 151, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 148;v) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 153, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 154; orvi) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 155, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 156.38.The multispecific antigen binding protein of claim 36 or 37, wherein the multispecific antigen binding protein comprises a first fusion polypeptide comprising an anti-EpCAM first scFv fused to the N-terminus of the VH of the anti-CD8 Fab fragment via a first linker, and a second fusion polypeptide comprising an anti-CD3 second scFv fused to the N-terminus of the VL of the anti-CD8 Fab fragment via a second linker; and wherein the first fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 99, and the second fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 100.39.Apharmaceutical composition comprising the multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-38, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier.40.A method of treating a disease associated with a target epitope in an individual, comprising administering to the individual an effective amount of the multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-38 or the pharmaceutical composition of claim 39.41.The method of claim 40, wherein the disease associated with the target epitope is a cancer expressing the target epitope.42.The method of claim 39 or 40, wherein the cancer is Burkitt lymphoma, Wilms’ tumor, or colorectal cancer.43.The method of any one of claims 40-42, wherein the multispecific antigen binding protein or the pharmaceutical composition is administered subcutaneously or intravenously.44.An anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to CD8, wherein the anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof comprises: an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 1, 7, 13, and 20, or a variant thereof  comprising up to about 5 amino acid variations; an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 2, 8, 14, 16, and 18, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations; an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 3, 9, 15, 17, 19, and 22, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations; an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 or 10, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations; an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 or 11, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations; and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 6, 12, and 23, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations.45.The anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof of claim 44, wherein the anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof comprises:i) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6;ii) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6;iii) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6;iv) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6;v) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; orvi) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23.46.The anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof of claim 44 or 45, wherein the anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof comprises:i) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25;ii) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27;iii) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29;iv) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25;v) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 33; orvi) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35.47.The anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof of any one of claims 44-46, wherein the anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof is selected from the group consisting of a full-length antibody, a Fab, a Fab’, a Fab’-SH, a F (ab’) 2, an Fv, an scFv, and any combination thereof.48.The anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof of claim 47, wherein the anti-CD8 antigen binding fragment is an anti-CD8 scFv, and wherein the anti-CD8 scFv comprises the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 21, 44-49, and 51-55.49.The anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof of claim 47, wherein the anti-CD8 antigen binding fragment is an anti-CD8 Fab fragment, and wherein the anti-CD8 Fab fragment comprises:i) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 147, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 148;ii) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 149, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 150;iii) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 92;iv) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 151, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 148;v) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 153, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 154; orvi) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 155, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 156.50.An anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to CD3, wherein the anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof comprises: an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations; an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 37, 157, and 166, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations; an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38 or 158, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations; an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations; an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations; and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41, or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid variations.51.The anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof of claim 50, wherein the anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof comprises:(a) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 37, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41;(b) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 157, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 158, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41; or(c) an HVR-H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, an HVR-H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 166, an HVR-H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, an HVR-L1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, an HVR-L2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, and an HVR-L3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41.52.The anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof of claim 50 or 51, wherein the anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof comprises:(a) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43;(b) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 159, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43; or(c) a VH comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 167, and a VL comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43.53.The anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof of any one of claims 50-52, wherein the anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof is selected from the group consisting of a full-length antibody, a Fab, a Fab’, a Fab’-SH, a F (ab’) 2, an Fv, an scFv, and any combination thereof.54.The anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof of claim 53, wherein the anti-CD3 antigen binding fragment is an anti-CD3 scFv, and wherein the anti-CD3 scFv comprises the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 50, 56, 163, 164, 183, and 184.55.The anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof of claim 53, wherein the anti-CD3 antigen binding fragment is an anti-CD3 Fab fragment, and wherein the anti-CD3 Fab fragment comprises:(a) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 89, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90 or 179;(b) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 160, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90 or 179; or(c) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 168, and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90 or 179.56.A multispecific antigen binding protein comprising the anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof of any one of claims 44-49 and / or the anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof of any one of claims 50-55.57.An isolated nucleic acid encoding i) the anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof of any one of claims 44-49, ii) the anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof of any one of claims 50-55, or iii) the multispecific antigen binding protein of any one of claims 1-38 and 56.58.A vector comprising the isolated nucleic acid of claim 57.59.A host cell comprising the isolated nucleic acid of claim 57 or the vector of claim 58.60.A method of making an anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof, anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof, or a multispecific antigen binding protein thereof, comprising:i) culturing a host cell comprising the isolated nucleic acid of claim 57 or the vector of claim 58, or the host cell of claim 59, under a condition suitable for the expression of the anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof, anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof, or the multispecific antigen binding protein thereof; andii) obtaining the expressed anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof, anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof, or the multispecific antigen binding protein thereof, from said host cell.61.A pharmaceutical composition comprising:(a) i) the anti-CD8 antibody or antigen binding fragment thereof of any one of claims 44-49, and optionally ii) a pharmaceutically acceptable carrier; and / or(b) i) the anti-CD3 antibody or antigen binding fragment thereof of any one of claims 50-55, or the multispecific antigen binding protein of claim 56, and optionally ii) a pharmaceutically acceptable carrier.

Images