EGFR / c-met bispecific binding protein and use thereof

Abstract

Related to the field of disease treatment, and provided are bispecific antibodies against EGFR and c-MET, nucleic acid molecules encoding them, and methods for preparing them. Said anti-EGFR and c-MET bispecific antibodies have high specificity and high affinity for EGFR and c-MET. Also provided is the use of said bispecific antibodies in the treatment and diagnosis of diseases.

Description

EGFR / C-MET BISPECIFIC BINDING PROTEIN AND USE THEREOFFIELD OF THE INVENTION

[0001] The present disclosure relates to therapeutic bispecific antibodies, and more specifically, to bispecific antibodies against EGFR and c-MET and methods of use thereof.BACKGROUND OF THE INVENTION

[0002] EGFR (epidermal growth factor receptor, abbreviated as EGFR, ErbB-1 or HER1) is a member of the epidermal growth factor receptor (HER) family. This family includes HER1 (erbB1, EGFR) , HER2 (erbB2, NEU) , HER3 (erbB3) and HER4 (erbB4) . The HER family plays an important regulatory role in cellular physiological processes. EGFR is a type I transmembrane glycoprotein composed of 1210 amino acids, with a molecular weight of about 170KD. Its main structure includes a ligand-binding extracellular domain, a hydrophobic transmembrane region, and an intracellular region comprising tyrosine kinase. EGFR is highly expressed in various tumors such as colorectal cancer, head and neck cancer, and non-small cell lung cancer, and it is also expressed in normal epithelial tissues such as skin and lungs. Highly expressed EGFR in tumor tissue undergoes homologous or heterologous dimerization through the binding of ligands such as EGF or TGFα, and the dimerization leads to the activation of tyrosine kinases and protein phosphorylation in tumor cells, mediating gene transcription and activation of various cell signaling pathways in cell cycle progression, which plays an important role in promoting the survival, proliferation and migration of tumor cells and tumor angiogenesis.

[0003] Tyrosine protein kinase Met (c-MET) , also known as hepatocyte growth factor receptor (HGFR) , is a heterodimeric transmembrane tyrosine kinase receptor encoded by the Met proto-oncogene. c-MET is a type I transmembrane glycoprotein composed of 1390 amino acids, with a molecular weight of about 190KD, and comprises two polypeptide chains connected by disulfide bonds through cleavage, namely the α chain (50 kDa) and the β chain (140 kDa) . MET protein can be divided into SEMA domain (Semaphorin domain, SEMA) , PSI domain (Plexin-semaphorin-integrin domain, PSI) , four immunoglobulin-like repeat domains (Immunoglobulin-plexins-transcription domain, IPT) , a transmembrane region, a juxtamembrane region (JM) , a tyrosine kinase domain (TK) and a carboxy-terminal tail region (CT) . The natural ligand for the c-MET receptor is hepatocyte growth factor (HGF) , an inactive protein that is converted to its active form by proteolytic cleavage. Aberrant regulation of c-MET has been reported in a variety of cancers, including colorectal cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, and breast cancer. High  activation of c-MET and its downstream signaling pathways have been shown to trigger hyperproliferation, tumor invasion, and angiogenesis, and be associated with poor survival.

[0004] Anti-EGFR macromolecular antibody drugs, such as cetuximab, panitumumab, nimotuzumab, necitumumab have been approved for marketing, targeting colorectal cancer, non-small cell lung cancer, etc. EGFR-tyrosine kinase inhibitors (TKIs) , such as osimertinib, almonertinib, and avitinib, have become the standard treatment for advanced cancer patients positive for EGFR mutation. c-MET-TKIs have also achieved good efficacy in non-small cell lung cancer. The EGFR and c-MET signaling pathways have been clinically verified respectively.

[0005] Nearly 60%of tumors resistant to EGFR-TKIs had increased c-Met expression, amplified c-Met, or increased c-Met ligand HGF (Turke et al., Cancer Cell, 17: 77-88, 2010) , suggesting that c-Met signaling compensates for EGFR signaling, in the tumor cell. Both EGFR and c-MET signal through the same survival and anti-apoptotic pathways (ERK and AKT) . The bispecific antibody targeting EGFR and c-MET at the same time is expected to simultaneously inhibit the signaling pathways of EGFR and c-MET, avoiding the occurrence and development of tumors caused by the activation of c-MET signaling pathway after EGFR inhibition, thereby improving the overall efficacy and safety.

[0006] Anti-c-MET and anti-EGFR antibodies are known in the art, for example, Telisotuzumab vedotin (Teliso-v or ABBV399) , which is disclosed in U.S. Patent No. 10603389, is anti-c-MET antibody ABT-700 conjugated to vc-MMAE (vedotin) , and MRG003 (ADC-3 or MYK-3) , which is disclosed in WO2023040941, is anti-EGFR antibody BA03 conjugated to vedotin.

[0007] Several EGFR / c-Met bispecific antibodies have been disclosed in the art. Bispecific antibody BSAB01 disclosed in WO2010115551 comprises the EGFR binding VH / VL pair (Fab) of cetuximab and the c-Met binding VH / VL pair (Fab) of onartuzumab, which is currently in Phase III trials. Amivantamab, a bispecific antibody marketed under the tradename is disclosed in U.S. Patent No. 9593164. Amivantamab comprises an Anti-EGFR Fab comprising the VH and VL of Zalutumumab (See, U.S. Patent No. 7247301 and U.S. Patent No. 7595378) and an anti-cMET Fab comprising the VH and VL of antibody 069 disclosed in U.S. Patent No. 9068011. There is a need in the art for EGFR / c-MET bispecific antibodies that bind both EGFR and c-MET and / or block the downstream signaling pathways of EGFR and c-MET by, e.g., simultaneously blocking the binding of EGF to EGFR and of HGF to c-MET.SUMMARY OF THE INVENTION

[0008] The present invention provides a high-affinity EGFR / c-MET bispecific antibody,  which can specifically recognize or bind EGFR and c-MET and simultaneously block the binding of EGF to EGFR and the binding of HGF to c-MET, thus, simultaneously blocking the downstream signaling pathways of both EGFR and c-MET, and thereby increasing inhibition of cell proliferation.

[0009] The present invention provides a bispecific antibody, comprising a first antigen-binding domain specifically binding to c-MET and a second antigen-binding domain specifically binding to EGFR; wherein, the first antigen-binding domain comprises a first light chain variable region (VL) and a first heavy chain variable region (VH) , and the first VL and the first VH collectively form a domain capable of specifically binding to c-MET; and the second antigen-binding domain comprises a second VL and a second VH, and the second VL and the second VH together form a domain capable of specifically binding to EGFR. In a further embodiment, the bispecific antibody binds to c-MET and EGFR with increased affinity relative to other known antibodies.

[0010] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first antigen-binding domain and the second antigen-binding domain are each independently scFv or Fab.

[0011] In a further embodiment of the bispecific antibody, the bispecific antibody further comprises an Fc domain, wherein the Fc domain comprises a first Fc domain monomer and a second Fc domain monomer, and the first and second Fc domain monomers each independently comprise one or more modifications that promote heterodimerization of the Fc domain monomers.

[0012] In a further embodiment of the bispecific antibody, the Fc domain comprises a first Fc domain monomer comprising modifications that form a knob structure and a second Fc domain monomer comprising modifications that form a hole structure, wherein the hole structure can be paired with the knob structure to form a heterodimeric Fc domain.

[0013] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first Fc domain monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 101, and the second Fc domain monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 102; or the first Fc domain monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 103, and the second Fc domain monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 104.

[0014] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first antigen-binding domain and the second antigen-binding domain are each linked to one of the first and second Fc domain monomers. In a further embodiment of the bispecific antibody, the first antigen-binding domain is linked to the first Fc domain monomer, and the second antigen-binding domain is linked to the second Fc domain monomer; or the first antigen-binding domain is linked to the second Fc domain monomer, and the second antigen-binding domain is linked to the first Fc domain monomer.

[0015] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first VL comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18; and / or the first VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19.

[0016] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first VL comprises:

[0017] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 41, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 43, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 45; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0018] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 41, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 43, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 45; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0019] (iii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 41, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 43, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 45; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0020] (iv) LCDR1 comprising the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 42, LCDR2 comprising the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 44, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 45; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system; and / or the first VH comprises:

[0021] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 46, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 50, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 54; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0022] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 47, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 51, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 54; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0023] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 49, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 53, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 54; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0024] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 48,  HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 52, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 55; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0025] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first VL comprises:

[0026] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 41, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 43, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 45; or

[0027] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 42, LCDR2 comprising the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 44, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 45; and / or

[0028] the first VH comprises:

[0029] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 46, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 50, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 54;

[0030] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 47, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 51, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 54;

[0031] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 49, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 53, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 54; or

[0032] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 48, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 52, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 55.

[0033] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18, and / or the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19.

[0034] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first VL comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24; and / or the first VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25.

[0035] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first VL comprises:

[0036] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 86, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 88, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 90; wherein the CDRs are defined by the Kabat  numbering system;

[0037] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 86, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 88, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 90; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0038] (iii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 86, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 88, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 90; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0039] (iv) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 87, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 89, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 90; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system; and / or the first VH comprises:

[0040] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 91, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 95, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 99; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0041] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 92, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 96, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 99; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0042] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 94, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 98, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 99; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0043] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 93, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 97, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 100; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0044] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first VL comprises:

[0045] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 86, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 88, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 90; or

[0046] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 87,  LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 89, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 90; and / or

[0047] the first VH comprises:

[0048] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 91, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 95, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 99;

[0049] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 92, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 96, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 99;

[0050] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 94, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 98, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 99; or

[0051] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 93, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 97, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 100.

[0052] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24, and / or the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25.

[0053] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16; and / or the second VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17.

[0054] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises:

[0055] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 26, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 28, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0056] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 26, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 28, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0057] (iii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 26, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 28, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30; wherein the CDRs are defined by the Abm  numbering system; or

[0058] (iv) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 27, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 29, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system; and / or

[0059] the second VH comprises:

[0060] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 31, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 35, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 39; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0061] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 32, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 36, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 39; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0062] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 34, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 38, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 39; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0063] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 33, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 37, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 40; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0064] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises:

[0065] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 26, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 28, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30; or

[0066] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 27, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 29, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30; and / or

[0067] the second VH comprises:

[0068] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 31, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 35, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 39;

[0069] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 32,  HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 36, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 39;

[0070] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 34, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 38, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 39; or

[0071] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 33, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 37, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 40.

[0072] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, and / or the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17.

[0073] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20; and / or the second VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21.

[0074] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises:

[0075] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 56, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 58, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 60; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0076] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 56, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 58, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 60; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0077] (iii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 56, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 58, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 60; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0078] (iv) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 57, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 59, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 60; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system; and / or the second VH comprises:

[0079] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 61, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 65, and HCDR3 comprising  the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 69; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0080] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 62, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 66, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 69; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0081] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 64, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 68, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 69; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0082] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 63, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 67, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 70; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0083] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises:

[0084] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 56, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 58, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 60; or

[0085] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 57, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 59, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 60; and / or

[0086] the second VH comprises:

[0087] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 61, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 65, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 69;

[0088] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 62, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 66, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 69;

[0089] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 64, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 68, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 69; or

[0090] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 63, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 67, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 70.

[0091] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, and / or the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21.

[0092] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22; and / or the second VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23.

[0093] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises:

[0094] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 71, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 73, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 75; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0095] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 71, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 73, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 75; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0096] (iii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 71, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 73, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 75; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0097] (iv) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 72, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 74, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 75; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system; and / or the second VH comprises:

[0098] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 76, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 80, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 84; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0099] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 77, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 81, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 84; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0100] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 79, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 83, and HCDR3 comprising  the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 84; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0101] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 78, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 82, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 85; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0102] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises:

[0103] (i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 71, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 73, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 75; or

[0104] (ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 72, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 74, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 75; and / or

[0105] the second VH comprises:

[0106] (i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 76, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 80, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 84;

[0107] (ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 77, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 81, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 84;

[0108] (iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 79, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 83, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 84; or

[0109] (iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 78, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 82, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 85.

[0110] In a further embodiment of the bispecific antibody, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, and / or the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23.

[0111] In a further embodiment of the bispecific antibody, (1) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:16, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17;

[0112] (2) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18, the  first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, and the second VH comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21;

[0113] (3) the first VL comprises the sequence shown in SEQ ID NO: 18, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23;

[0114] (4) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17;

[0115] (5) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21; or

[0116] (6) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23.

[0117] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first antigen-binding domain is a Fab, and the second antigen-binding domain is an scFv.

[0118] In a further embodiment of the bispecific antibody, the bispecific antibody comprises a peptide chain I-A, a peptide chain I-B and a peptide chain I-C; wherein, the peptide chain I-A comprises the first VL and a light chain constant region; the peptide chain I-B comprises: the first VH, a heavy chain CH1 region and the first Fc domain monomer (or the second Fc domain monomer) ; the peptide chain I-C comprises: the second VL, the second VH and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) .

[0119] In a further embodiment of the bispecific antibody, the peptide chain I-A comprises from N-terminus to C-terminus the first VL and the light chain constant region; the peptide chain I-B comprises from N-terminus to C-terminus: the first VH, the heavy chain CH1 region and the first Fc domain monomer (or the second Fc domain monomer) ; and / or the peptide chain I-C comprises from N-terminus to C-terminus: (i) the second VL, the second VH and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) ; or (ii) the second VH, the second VL and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) . In a further embodiment, the  adjacent domains of the peptide chain I-A are connected optionally with or without a linker; the adjacent domains of the peptide chain I-B are connected optionally with or without a linker; and / or the adjacent domains of the peptide chain I-C are connected optionally with or without a linker.

[0120] In a further embodiment of the bispecific antibody, the linkers are each independently the same peptide linker or different peptide linkers (e.g., rigid peptide linkers or flexible peptide linkers) . In a further embodiment of the bispecific antibody, the peptide linkers are each independently selected from the group consisting of peptide linkers comprising one or more glycines (G) and / or serines (S) , for example, having the structure shown as (GGGGS) n, wherein, n is selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 (SEQ ID NOs: 107-109, or 114-120) . In a further embodiment of the bispecific antibody, the peptide linkers each independently comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NOs: 107-110, 112, or 114-120.

[0121] In a further embodiment of the bispecific antibody, the light chain constant region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 105 or 113, and / or the heavy chain CH1 region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 106.

[0122] In a further embodiment of the bispecific antibody, (1) (a) the peptide chain I-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, and the peptide chain I-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2; or (b) the peptide chain I-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, and the peptide chain I-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7; and / or (2) the peptide chain I-C comprises the amino acid sequence shown in any one of SEQ ID NO: 3-5.

[0123] In a further embodiment of the bispecific antibody, the first antigen-binding domain is an scFv, and the second antigen-binding domain is a Fab. In a further embodiment of the bispecific antibody, the bispecific antibody comprises a peptide chain II-A, a peptide chain II-B and a peptide chain II-C; wherein, the peptide chain II-A comprises the second VL and a light chain constant region; the peptide chain II-B comprises: the second VH, a heavy chain CH1 region and the first Fc domain monomer (or the second Fc domain monomer) ; the peptide chain II-C comprises: the first VL, the first VH and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) .

[0124] In a further embodiment of the bispecific antibody, the peptide chain II-A comprises from N-terminus to C-terminus the second VL and the light chain constant region ; the peptide chain II-B comprises from N-terminus to C-terminus the second VH, the CH1 region of the heavy chain and the first Fc domain monomer (or the second Fc domain monomer) , and / or the peptide chain II-C comprises from N-terminus to C-terminus: (i) the first VL, the first VH and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) , or (ii) the first VH, the first VL and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) .

[0125] In a further embodiment of the bispecific antibody, the adjacent domains of the peptide chain II-A are connected optionally with or without a linker; the adjacent domains of the peptide chain II-B are connected optionally with or without a linker; and / or the adjacent domains of the peptide chain II-C are connected optionally with or without a linker.

[0126] In a further embodiment of the bispecific antibody, the linkers are each independently the same peptide linker or different peptide linkers (e.g., rigid peptide linkers or flexible peptide linkers) . In a further embodiment of the bispecific antibody, the peptide linkers are each independently selected from the group consisting of peptide linkers comprising one or more glycines (G) and / or serines (S) , for example, having the structure shown as (GGGGS) n, wherein, n is selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 (SEQ ID NOs: 107-109, or 114-120) . In a further embodiment of the bispecific antibody, the peptide linkers each independently comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NOs: 107-110, 112, or 114-120.

[0127] In a further embodiment of the bispecific antibody, the light chain constant region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 105 or 113, and / or the heavy chain CH1 region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 106.

[0128] In a further embodiment of the bispecific antibody, (1) (a) the peptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8, and the peptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9; (b) the peptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11, and the peptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12; or (c) the peptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13, and the peptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14; and / or (2) the peptide chain II-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NOs: 10 or 15.

[0129] In a further embodiment of the bispecific antibody, the bispecific antibody comprises (1) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4;

[0130] (2) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5;

[0131] (3) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3;

[0132] (4) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6,  peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4;

[0133] (5) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5;

[0134] (6) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10;

[0135] (7) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10;

[0136] (8) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15;

[0137] (9) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15; or

[0138] (10) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15.

[0139] In a further embodiment of the bispecific antibody, the bispecific antibody has an enhanced tumor suppressive effect relative to monospecific anti-c-MET antibody and / or monospecific anti-EGFR antibody; wherein, the amino acid sequences of the CDRs of the monospecific anti-c-MET antibody are identical to the amino acid sequences of the CDRs of the first antigen-binding domain, and the amino acid sequences of the CDRs of the monospecific anti-EGFR antibody are identical to the amino acid sequences of the CDRs of the second antigen-binding domain. In a further embodiment, the tumor suppression effect comprises: inhibition of EGFR and c-MET signaling pathways, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) activity and / or complement-dependent cytotoxicity (CDC) activity.

[0140] The present invention further provides an isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules comprising a nucleotide sequence encoding any one of the bispecific antibody disclosed herein. The present invention further provides one or more vectors comprising the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules. In particular embodiments, the nucleotide sequences encoding the different peptide chains of the bispecific antibody are located  in different vector molecules. In a further embodiment, the one or more vectors is a cloning vector or an expression vector.

[0141] The present invention further provides a host cell comprising the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, or the one or more vectors.

[0142] The present invention further provides a method for preparing any one of the bispecific antibodies disclosed herein, comprising culturing a host cell comprising the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, or the one or more vectors under conditions allowing the expression of the bispecific antibody, and recovering the bispecific antibody from the culture of the host cell.

[0143] The present invention further provides a conjugate comprising any one of the bispecific antibodies disclosed herein and a conjugation moiety linked thereto. In a further embodiment of the conjugate the conjugation moiety is selected from a therapeutic agent, such as a cytotoxic agent, cytokine, toxin or radionuclide.

[0144] The present invention further provides a pharmaceutical composition comprising any one of the bispecific antibodies disclosed herein, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, or the one or more vectors, or the host cell, or the conjugate, and a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient. In a further embodiment, the pharmaceutical composition further comprises an additional pharmaceutically active agent. In a further embodiment, the additional pharmaceutically active agent is a drug with antitumor activity. In a further embodiment, the additional pharmaceutically active agent is selected from the group consisting of: EGFR inhibitors, HER2 inhibitors, HER3 inhibitors, HER4 inhibitors, IGFR-1 inhibitors, mTOR inhibitors, PI3 kinase inhibitors, c-met or VEGF inhibitors, chemotherapeutic agents, or any combination thereof. In particular embodiments of the pharmaceutical composition, the bispecific antibody and the additional pharmaceutically active agent are provided as separate components or as mixed components.

[0145] The present invention further provides for the use of any one of the bispecific antibodies disclosed herein, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, or the one or more vectors, or the host cell, or the conjugate, or the forementioned pharmaceutical composition, in the preparation of a medicament, wherein the medicament is used for preventing and / or treating and / or acting as an adjuvant in treating diseases related to c-MET and / or EGFR in a subject, and / or for inhibiting c-MET and / or EGFR activity in vitro or in a subject. In a further embodiment of the use, the disease related to c-MET and / or EGFR is cancer. In a further embodiment, the cancer is associated with EGFR activating mutations, EGFR gene amplification, elevated levels of circulating HGF, c-Met activating mutations and / or c -Met gene amplification.  In a further embodiment, the cancer is epithelial cell carcinoma, breast cancer, ovarian cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, oral cavity cancer, colorectal cancer, anal cancer, prostate cancer, bladder cancer, pharyngeal cancer, nasal cancer, pancreas cancer, skin cancer, tongue cancer, esophagus cancer, vagina cancer, cervix cancer, spleen cancer, testis cancer, gastric cancer, thymus cancer, thyroid cancer, hepatocellular carcinoma, sporadic or hereditary papillary renal cell carcinoma, colon cancer, liver cancer, kidney cancer or head and neck cancer.

[0146] In a further embodiment of the use, the bispecific antibody, isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, one or more vectors, host cell, conjugate, or pharmaceutical composition is administered in combination with another pharmaceutically active agent, such as administered simultaneously, separately or sequentially. In a further embodiment, the additional pharmaceutically active agent is a drug with antitumor activity.

[0147] In a further embodiment, the additional pharmaceutically active agent is selected from the group consisting of: EGFR inhibitors, HER2 inhibitors, HER3 inhibitors, HER4 inhibitors, IGFR-1 inhibitors, mTOR inhibitors, PI3 kinase inhibitors, c-met or VEGF inhibitors, chemotherapeutic agents, or any combination thereof. In a further embodiment, the subject is resistant to erlotinib, gefitinib, afatinib, CO-1686, AZD9192 or cetuximab treatment.

[0148] The present invention further provides a method for inhibiting the activity of c-MET and / or EGFR in a cell, comprising contacting the cell with of any one of the bispecific antibodies disclosed herein, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, or the one or more vectors, or the host cell, or the conjugate, or the forementioned pharmaceutical composition. In a further embodiment, the cell expresses c-Met and / or EGFR, such as tumor cells.

[0149] The present invention further provides a method for preventing and / or treating and / or acting as an adjuvant in treating diseases associated with c-MET and / or EGFR in a subject, wherein the method comprises administering to the subject in need thereof an effective amount of any one of the bispecific antibodies disclosed herein, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, or the one or more vectors, or the host cell, or the conjugate, or the forementioned pharmaceutical composition.

[0150] In a further embodiment, the disease associated with c-MET and / or EGFR is cancer; preferably, the cancer is associated with EGFR activating mutations, EGFR gene amplification, elevated levels of circulating HGF, c-Met activating mutations and / or c -Met gene amplification.

[0151] In a further embodiment, the cancer is epithelial cell carcinoma, breast cancer, ovarian cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, oral cavity cancer, colorectal cancer, anal cancer, prostate cancer, bladder cancer, pharyngeal cancer, nasal  cancer, pancreas cancer, skin cancer, tongue cancer, esophagus cancer, vagina cancer, cervix cancer, spleen cancer, testis cancer, gastric cancer, thymus cancer, thyroid cancer, hepatocellular carcinoma, sporadic or hereditary papillary renal cell carcinoma, colon cancer, liver cancer, kidney cancer or head and neck cancer.

[0152] In a further embodiment of the method, the method further comprises administering to the subject a second therapy selected from the group consisting of surgery, chemotherapy, radiotherapy, immunotherapy, gene therapy, DNA therapy, RNA therapy, nanotherapy, viral therapy, adjuvant therapy and any combination thereof; optionally, the second therapy may be applied simultaneously, separately or sequentially. In a further embodiment, the subject is resistant to erlotinib, gefitinib, afatinib, CO-1686, AZD9192 or cetuximab treatment.

[0153] DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0154] Fig. 1: Schematic diagram of the bispecific antibody structure.

[0155] Fig. 2: Determination of the binding activity of bispecific antibodies to human non-small cell lung cancer cells HCC827.

[0156] Fig. 3: Determination of the binding activity of bispecific antibodies to human gastric cancer cells MKN45.

[0157] Fig. 4: Determination of the binding activity of bispecific antibody to human lung adenocarcinoma cells H1975.DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

[0158] Antibodies

[0159] In one aspect, the application provides a bispecific antibody comprising a first antigen-binding domain that specifically binds c-MET and a second antigen-binding domain that specifically binds EGFR.

[0160] In certain embodiments, the first antigen-binding domain comprises a first light chain variable region (VL) and a first heavy chain variable region (VH) , and the first VL and the first VH collectively form a domain capable of specifically binding c-MET. In certain embodiments, the second antigen-binding domain comprises a second VL and a second VH, the second VL and the second VH together form a domain capable of specifically binding EGFR.

[0161] In certain embodiments, the first antigen-binding domain and the second antigen-binding domain are each independently scFv or Fab.

[0162] Unless expressly stated otherwise, the Fab domains may be arranged according to  their native orientation or comprise domain substitutions or swaps that promote correct VH and VL pairing (e.g., domain swaps in the Crossmab format) .

[0163] In certain embodiments, the domain swap of the CrossMab format is selected from:

[0164] CrossMabFab: In Fab, the antibody light chain CL-VL and the antibody heavy chain CH1-VH are swapped;

[0165] CrossMabVH-VL: In Fab, the VL and VH of the antibody are swapped;

[0166] CrossMabCH1-CL: In Fab, the CH1 and CL of the antibody are swapped.

[0167] CrossMab is a method to prevent the mismatch between light chain and heavy chains. This method mainly uses the principle that the same parts of the antibody repel each other, that is, VH and VH repel each other, CH1 and CH1 repel each other, CL and CL repel each other, and VL and VL repel each other. The purpose of preventing light chain mismatch is achieved by regional interchange of the heavy and light chains of one of the Fab in bispecific antibodies (e.g., light chain CL-VL is exchanged with heavy chain CH1-VH, VL and VH are interchanged, or CH1 and CL are interchanged) .

[0168] In certain embodiments, the bispecific antibody further comprises an Fc domain. In certain embodiments, the Fc domain comprises a first Fc domain monomer and a second Fc domain monomer. In certain embodiments, the first and second Fc domain monomers each independently comprise one or more modifications that promote heterodimerization of the Fc domain monomers.

[0169] In certain embodiments, the Fc domain comprises a first Fc domain monomer comprising modifications that form a knob structure and a second Fc domain monomer comprising modifications that form a hole structure, wherein the hole structure can be paired with the knob structure to form a heterodimeric Fc domain.

[0170] Those skilled in the art may easily understand, that the hole structure can be paired with the knob structure to form a “knob in hole structure” , which can be used to reduce heavy chain mismatch in the bispecific antibody. A “knob” structure and a “hole” structure can be introduced by mutation in the corresponding positions of the CH3 domains of two Fc domain monomers to form a specific interaction interface between two Fc domain monomers (see Ridgway et al., Protein Eng., 9: 617-621 (1996) ; WO 2006 / 028936; incorporated herein by reference in its entirety) . Amino acid substitutions that can be used to form a “knob” structure include, but are not limited to, S354C and T366W, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme. Amino acid substitutions that can be used to form a “hole” structure include, but are not limited to, Y349C, T366S, L368A, and Y407V, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme. Due to mutual attraction between the “knob” structure and “hole” structure, as well as mutual repulsion between the “knob” structure and the “knob” structure, the “knob in hole structure” can effectively  reduce the heavy chain mismatch in the bispecific antibody.

[0171] In certain embodiments, the Fc domain monomer is derived from the Fc domain of a human immunoglobulin and comprises modifications that form a knob structure or a hole structure. In certain embodiments, the human immunoglobulin is IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4. In certain embodiments, the Fc domain monomer comprises one or more modifications that form a knob structure, wherein the one or more modifications comprise S354C and / or T366W amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme. In certain embodiments, the Fc domain monomer comprises S354 and T366W amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme. In certain embodiments, the Fc domain monomer comprises one or more modifications that form a hole structure, wherein the one or more modifications comprise Y349C, T366S, L368A, and / or Y407V amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme. In certain embodiments, the Fc domain monomer comprises Y349C, T366S, L368A, and Y407V amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme.

[0172] In certain embodiments, the Fc domain further has altered effector function (e.g., enhanced ADCC activity) compared to a wild-type Fc region. Said altered effector functions may be introduced by, for example, mutation or chemical modification.

[0173] In further embodiments of the first and second Fc monomers further comprise one or more amino acid substitutions that reduce or ablate effector function of the Fc region. In particular embodiments, the first and second Fc monomers further comprise: (i) E233A and L235A (EALA) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (ii) L234A and L235A (LALA) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (iii) L234A L235A D265S (LALADS) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (iv) L234A L235A P329G (LALAPG) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (v) L235E (LE) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (vi) D265A (DS) amino acid substitution, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (vii) D265A N297G (DANG) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (viii) N297X amino acid substitution, wherein X is any amino acid other than N, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (ix) N297A / D356E / L358M (NADELM) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to Eu numbering scheme; or (x) D356E L358M (DELM) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to Eu numbering scheme.

[0174] In certain embodiments, the first Fc domain monomer comprises the amino acid  sequence set forth in SEQ ID NO: 101, and the second Fc domain monomer comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 102. In certain embodiments, the first Fc domain monomer comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 103, and the second Fc domain monomer comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 104.

[0175] In certain embodiments, said first antigen-binding domain and said second antigen-binding domain are each linked to one of the first and second Fc domain monomers.

[0176] In certain embodiments, the first antigen-binding domain is linked to the first Fc domain monomer, and the second antigen-binding domain is linked to the second Fc domain monomer; or the first antigen-binding domain is linked to the second Fc domain monomer, and the second antigen-binding domain is linked to the first Fc domain monomer.

[0177] The individual CDRs of an antigen-binding domain disclosed herein can be determined according to any CDR numbering scheme known in the art.

[0178] In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the LCDR1, LCDR2, and / or LCDR3 of a VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22 and 24 as determined by the Kabat numbering scheme. In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the HCDR1, HCDR2, and / or HCDR3 of a VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23 and 25 as determined by the Kabat numbering scheme.

[0179] In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the LCDR1, LCDR2, and / or LCDR3 of a VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22 and 24 as determined by the Chothia numbering scheme. In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the HCDR1, HCDR2, and / or HCDR3 of a VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23 and 25 as determined by the Chothia numbering scheme.

[0180] In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the LCDR1, LCDR2, and / or LCDR3 of a VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22 and 24 as determined by the MacCallum numbering scheme. In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the HCDR1, HCDR2, and / or HCDR3 of a VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23 and 25 as determined by the MacCallum numbering scheme.

[0181] In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the LCDR1, LCDR2, and / or LCDR3 of a VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22 and 24 as determined by the IMGT numbering scheme. In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the HCDR1,  HCDR2, and / or HCDR3 of a VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23 and 25 as determined by the IMGT numbering scheme.

[0182] In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the LCDR1, LCDR2, and / or LCDR3 of a VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22 and 24 as determined by the AbM numbering scheme. In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the HCDR1, HCDR2, and / or HCDR3 of a VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23 and 25 as determined by the AbM numbering scheme.

[0183] In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the LCDR1, LCDR2, and / or LCDR3 of a VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22 and 24 as determined by the AHo numbering scheme. In certain embodiments, an antigen-binding domain of an antibody provided herein comprises the HCDR1, HCDR2, and / or HCDR3 of a VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23 and 25 as determined by the AHo numbering scheme.

[0184] In certain embodiments, the individual CDRs of an antigen-binding domain of an antibody provided herein are each independently determined according to one of the Kabat, Chothia, MacCallum, IMGT, AHo, or AbM numbering schemes, or by structural analysis of the antigen-binding domain, wherein the structural analysis identifies residues in the variable region (s) predicted to make contact with an epitope region of c-MET or EGFR.

[0185] In certain embodiments, the instant disclosure provides a bispecific antibody comprising a first antigen-binding domain specifically binding to c-MET and a second antigen-binding domain specifically binding to EGFR, wherein the first antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 or 24, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 or 25 and / or wherein the second antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, 20 or 22, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, 21 or 23, wherein each CDR is independently determined according to one of the Kabat, Chothia, MacCallum, IMGT, AHo, or AbM numbering schemes, or by structural analysis of the bispecific molecule, wherein the structural analysis identifies residues in the variable region (s) predicted to make contact with an epitope region of c-MET or EGFR.

[0186] In certain embodiments, the instant disclosure provides a bispecific antibody  comprising a first antigen-binding domain specifically binding to c-MET and a second antigen-binding domain specifically binding to EGFR, wherein the first antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 and / or wherein the second antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21, wherein each CDR is independently determined according to one of the Kabat, Chothia, MacCallum, IMGT, Aho, or AbM numbering schemes, or by structural analysis of the bispecific molecule, wherein the structural analysis identifies residues in the variable region (s) predicted to make contact with an epitope region of c-MET or EGFR.

[0187] In certain embodiments, the instant disclosure provides a bispecific antibody comprising a first antigen-binding domain specifically binding to c-MET and a second antigen-binding domain specifically binding to EGFR, wherein the first antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 and / or wherein the second antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23, wherein each CDR is independently determined according to one of the Kabat, Chothia, MacCallum, IMGT, AHo, or AbM numbering schemes, or by structural analysis of the bispecific molecule, wherein the structural analysis identifies residues in the variable region (s) predicted to make contact with an epitope region of c-MET or EGFR.

[0188] In certain embodiments, the instant disclosure provides a bispecific antibody comprising a first antigen-binding domain specifically binding to c-MET and a second antigen-binding domain specifically binding to EGFR, wherein the first antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25 and / or wherein the second antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence  set forth in SEQ ID NO: 17, wherein each CDR is independently determined according to one of the Kabat, Chothia, MacCallum, IMGT, AHo, or AbM numbering schemes, or by structural analysis of the bispecific molecule, wherein the structural analysis identifies residues in the variable region (s) predicted to make contact with an epitope region of c-MET or EGFR.

[0189] In certain embodiments, the instant disclosure provides a bispecific antibody comprising a first antigen-binding domain specifically binding to c-MET and a second antigen-binding domain specifically binding to EGFR, wherein the first antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25 and / or wherein the second antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21, wherein each CDR is independently determined according to one of the Kabat, Chothia, MacCallum, IMGT, AHo, or AbM numbering schemes, or by structural analysis of the bispecific molecule, wherein the structural analysis identifies residues in the variable region (s) predicted to make contact with an epitope region of c-MET or EGFR.

[0190] In certain embodiments, the instant disclosure provides a bispecific antibody comprising a first antigen-binding domain specifically binding to c-MET and a second antigen-binding domain specifically binding to EGFR, wherein the first antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25 and / or wherein the second antigen-binding domain comprises a VL comprising the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22, and a VH comprising the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23, wherein each CDR is independently determined according to one of the Kabat, Chothia, MacCallum, IMGT, AHo, or AbM numbering schemes, or by structural analysis of the bispecific molecule, wherein the structural analysis identifies residues in the variable region (s) predicted to make contact with an epitope region of c-MET or EGFR.

[0191] In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 or 24. In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 or 24. In  certain embodiments, the first VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 or 24.

[0192] In certain embodiments, the first VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 or 25. In certain embodiments, the first VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 or 25. In certain embodiments, the first VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 or 25.

[0193] In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 or 24 and the first VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 or 25. In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 or 24 and the first VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 or 25. In certain embodiments, the first VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 or 24 and the first VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 or 25.

[0194] In certain embodiments of the bispecific antibodies provided herein, the first VL comprises:

[0195] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 41, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 43, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 45; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0196] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 41, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 43, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 45; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0197] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 41, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 43, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 45; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0198] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 42, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 44, and LCDR3 comprising the amino  acid sequence set forth in SEQ ID NO: 45; wherein said CDRs are defined by the IMGT numbering system; and / or

[0199] the first VH comprises:

[0200] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 46, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 50, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 54; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0201] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 47, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 51, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 54; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0202] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 49, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 53, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 54; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0203] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 48, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 52, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 55; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0204] In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18. In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18. In certain embodiments, the first VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18.

[0205] In certain embodiments, the first VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19. In certain embodiments, the first VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19. In certain embodiments, the first VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19.

[0206] In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 and the first VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence  set forth in SEQ ID NO: 19. In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 and the first VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19. In certain embodiments, the first VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 and the first VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19.

[0207] In certain embodiments, said first VL comprises:

[0208] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 86, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 88, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 90; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0209] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 86, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 88, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 90; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0210] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 86, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 88, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 90; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0211] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 87, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 89, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 90; wherein said CDRs are defined by the IMGT numbering system; and / or

[0212] the first VH comprises:

[0213] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 91, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 95, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 99; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0214] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 92, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 96, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 99; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0215] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 94, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 98, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 99; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0216] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 93, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 97, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 100; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0217] In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24. In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24. In certain embodiments, the first VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24.

[0218] In certain embodiments, the first VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25. In certain embodiments, the first VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25. In certain embodiments, the first VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25.

[0219] In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24 and the first VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25. In certain embodiments, the first VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24 and the first VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25. In certain embodiments, the first VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24 and the first VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25.

[0220] In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, 20, or 22. In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, 20, or 22. In certain embodiments, the second VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, 20, or 22.

[0221] In certain embodiments, the second VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, 21, or 23. In certain embodiments, the second VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, 21, or 23. In certain embodiments, the second VH consists of the amino acid sequence set forth  in SEQ ID NO: 17, 21, or 23.

[0222] In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, 20, or 22 and the second VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100%(e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, 21, or 23. In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, 20, or 22 and the second VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, 21, or 23. In certain embodiments, the second VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, 20, or 22 and the second VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, 21, or 23.

[0223] In certain embodiments, the second VL comprises:

[0224] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30; wherein said CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0225] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30; wherein said CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0226] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0227] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 27, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30; wherein said CDRs are defined by the IMGT numbering system;

[0228] and / or

[0229] the second VH comprises:

[0230] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 31, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 39; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0231] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 36, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 39; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0232] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 38, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 39; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0233] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 37, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 40; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0234] In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16. In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16. In certain embodiments, the second VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16.

[0235] In certain embodiments, the second VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17. In certain embodiments, the second VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17. In certain embodiments, the second VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17.

[0236] In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16 and the second VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17. In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16 and the second VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17. In certain embodiments, the second VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16 and the second VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17.

[0237] In certain embodiments, the second VL comprises:

[0238] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 58, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 60; wherein said CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0239] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 58, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 60; wherein said CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0240] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 58, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 60; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0241] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 57, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 59, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 60; wherein said CDRs are defined by the IMGT numbering system; and / or

[0242] the second VH comprises:

[0243] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 61, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 65, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 69; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0244] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 62, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 66, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 69; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0245] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 64, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 68, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 69; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0246] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 63, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 67, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 70; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0247] In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20. In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20. In certain embodiments, the second VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20.

[0248] In certain embodiments, the second VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21. In certain embodiments, the second VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21. In certain embodiments, the second VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21.

[0249] In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20 and the second VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21. In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20 and the second VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21. In certain embodiments, the second VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20 and the second VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21.

[0250] In certain embodiments, the second VL comprises:

[0251] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 71, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 73, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 75; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0252] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 71, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 73, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 75; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0253] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 71, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 73, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 75; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering  system; or

[0254] LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 72, LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 74, and LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 75; wherein said CDRs are defined by the IMGT numbering system; and / or

[0255] the second VH comprises:

[0256] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 76, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 80, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 84; wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0257] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 77, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 81, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 84; wherein the CDRs are defined by the Chothia numbering system;

[0258] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 79, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 83, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 84; wherein the CDRs are defined by the Abm numbering system; or

[0259] HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 78, HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 82, and HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 85; wherein the CDRs are defined by the IMGT numbering system.

[0260] In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22. In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22. In certain embodiments, the second VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22.

[0261] In certain embodiments, the second VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23. In certain embodiments, the second VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23. In certain embodiments, the second VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23.

[0262] In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22 and the second VH comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23. In certain embodiments, the second VL comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22 and the second VH comprises an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23. In certain embodiments, the second VL consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22 and the second VH consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23.

[0263] In certain embodiments, the bispecific antibody comprises:

[0264] the first VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 and the first VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19; the second VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, and the second VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17;

[0265] the first VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 and the first VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19; the second VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20, and the second VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21;

[0266] the first VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 and the first VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19; the second VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22, and the second VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23;

[0267] the first VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24 and the first VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25; the second VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, and the second VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17;

[0268] the first VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24 and the first VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25; the second VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20, and the second VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21;

[0269] or

[0270] the first VL comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24 and the first VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25; the second VL comprising  the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22, and the second VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23.

[0271] In certain embodiments, the instant disclosure provides a bispecific antibody that cross-competes for binding to c-MET and / or EGFR with any of the antibodies described herein. In certain embodiments, the instant disclosure provides a bispecific antibody that binds to the same or an overlapping epitope of c-MET and / or EGFR as an antibody described herein.

[0272] In certain embodiments, the epitope of an antibody can be determined by, e.g., NMR spectroscopy, surface plasmon resonance X-ray diffraction crystallography studies, ELISA assays, hydrogen / deuterium exchange coupled with mass spectrometry (e.g., liquid chromatography electrospray mass spectrometry) , array-based oligo-peptide scanning assays, and / or mutagenesis mapping (e.g., site-directed mutagenesis mapping) . For X-ray crystallography, crystallization may be accomplished using any of the known methods in the art (e.g., Giegé R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50 (Pt 4) : 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303, all of which are herein incorporated by reference in their entireties) . Antibody: antigen crystals may be studied using well known X-ray diffraction techniques and may be refined using computer software such as X-PLOR (Yale University, 1992, distributed by Molecular Simulations, Inc.; see, e.g., Meth Enzymol (1985) volumes 114 &115, eds. Wyckoff HW et al.; U.S. Patent Application No. 2004 / 0014194) , and BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49 (Pt 1) : 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56 (Pt 10) : 1316-1323, all of which are herein incorporated by reference in their entireties) . Mutagenesis mapping studies may be accomplished using any method known to one of skill in the art. See, e.g., Champe M et al., (1995) and Cunningham BC &Wells JA (1989) for a description of mutagenesis techniques, including alanine scanning mutagenesis techniques. In a specific embodiment, the epitope of an antibody is determined using alanine scanning mutagenesis studies. In addition, bispecific antibodies that recognize and bind to the same or overlapping epitopes of c-MET and / or EGFR can be identified using routine techniques such as an immunoassay, for example, by showing the ability of one antibody to block the binding of another antibody to a target antigen, i.e., a competitive binding assay. Competition binding assays also can be used to determine whether two antibodies have similar binding specificity for an epitope. Competitive binding can be determined in an assay in which the immunoglobulin under test inhibits specific binding of a reference antibody to a common antigen, such as c-MET or EGFR. Numerous types of competitive binding assays are known, for example: solid phase direct or indirect radioimmunoassay (RIA) , solid phase direct or indirect enzyme immunoassay (EIA) , sandwich  competition assay (see Stahli C et al., (1983) Methods Enzymol 9: 242-253) ; solid phase direct biotin-avidin EIA (see Kirkland TN et al., (1986) J Immunol 137: 3614-9) ; solid phase direct labeled assay, solid phase direct labeled sandwich assay (see Harlow E &Lane D, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press) ; solid phase direct label RIA using I-125 label (see Morel GA et al., (1988) Mol Immunol 25 (1) : 7-15) ; solid phase direct biotin-avidin EIA (see Cheung RC et al., (1990) Virology 176: 546-52) ; and direct labeled RIA (see Moldenhauer G et al., (1990) Scand J Immunol 32: 77-82) , all of which are herein incorporated by reference in their entireties. Typically, such an assay involves the use of purified antigen (e.g., c-MET or EGFR) bound to a solid surface or cells bearing either of these, an unlabeled test immunoglobulin and a labeled reference immunoglobulin. Competitive inhibition can be measured by determining the amount of label bound to the solid surface or cells in the presence of the test immunoglobulin. Usually, the test immunoglobulin is present in excess. Usually, when a competing antibody is present in excess, it will inhibit specific binding of a reference or antibody to a common antigen by at least 50-55%, 55-60%, 60-65%, 65-70%, 70-75%, or more. A competition binding assay can be configured in a large number of different formats using either labeled antigen or labeled antibody. In a common version of this assay, the antigen is immobilized on a 96-well plate. The ability of unlabeled antibodies to block the binding of labeled antibodies to the antigen is then measured using radioactive or enzyme labels. For further details see, e.g., Wagener C et al., (1983) J Immunol 130: 2308-2315; Wagener C et al., (1984) J Immunol Methods 68: 269-274; Kuroki M et al., (1990) Cancer Res 50: 4872-4879; Kuroki M et al., (1992) Immunol Invest 21: 523-538; Kuroki M et al., (1992) Hybridoma 11: 391-407 and Antibodies: A Laboratory Manual, Ed Harlow E &Lane D editors supra, pp. 386-389, all of which are herein incorporated by reference in their entireties.

[0273] In certain embodiments of the bispecific antibodies provided herein, one, two, or more mutations (e.g., amino acid substitutions) are introduced into an Fc region (e.g., a CH2 domain (residues 231-340 of human IgG1) ) and / or a CH3 domain (residues 341-447 of human IgG1, numbered according to the EU numbering system) and / or a hinge region (residues 216-230, numbered according to the EU numbering system) , to alter one or more functional properties of the antibody, such as serum half-life, complement fixation, Fc receptor binding, and / or antigen-dependent cellular cytotoxicity.

[0274] In certain embodiments, one, two, or more mutations (e.g., amino acid substitutions) are introduced into an Fc region to, e.g., reduce or ablate effector function of the Fc region. In certain embodiments, the antibodies comprise an Fc region comprising: (i) E233A and L235A (EALA) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (ii) L234A and L235A (LALA) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the  Eu numbering scheme; (iii) L234A L235A D265S (LALADS) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (iv) L234A L235A P329G (LALAPG) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (v) L234A L235A P329A (LALAPA) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (vi) L235E (LE) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (vii) D265A (DS) amino acid substitution, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (viii) D265A N297G (DANG) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (ix) N297X amino acid substitution, wherein X is any amino acid other than N, wherein the numbering is according to the Eu numbering scheme; (x) N297A / D356E / L358M (NADELM) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to Eu numbering scheme; or (x1) D356E L358M (DELM) amino acid substitutions, wherein the numbering is according to Eu numbering scheme.

[0275] In certain embodiments, any of the constant region mutations or modifications described herein can be introduced into one or both heavy chain constant regions of an antibody described herein having two heavy chain constant regions.

[0276] Polypeptides

[0277] In another aspect, provided herein are polypeptides comprising one or more LCDR, HCDR, VL, and / or VH amino acid sequences as described above. In certain embodiments, the polypeptide comprises the LCDR1, LCDR2, and / or LCDR3 of the VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22, and 24, as determined by any of the methods discussed above. In certain embodiments, the polypeptide comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22, and 24. In certain embodiments, the polypeptide comprises the LCDR1, LCDR2, and / or LCDR3 amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 41, 43, and 45; 42, 44, and 45; 86, 88, and 90; 87, 89, and 90; 26, 28, and 30; 27, 29, and 30; 56, 58, and 60; 57, 59, and 60; 71, 73, and 75; and 72, 74, and 75, respectively.

[0278] In certain embodiments, the polypeptide comprises the HCDR1, HCDR2, and / or HCDR3 of the VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23, and 25, as determined by any of the methods discussed above. In certain embodiments, the polypeptide comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23, and 25. In certain embodiments, the polypeptide comprises the HCDR1, HCDR2, and / or HCDR3 amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 46, 50, and 54; 47, 51, and 54; 49, 53, and 54; 48, 52, and 55; 91, 95, and 99; 92, 96, and 99; 94, 98, and 99; 93, 97,  and 100; 31, 35, and 39; 32, 36, and 39; 34, 38, and 39; 33, 37, and 40; 61, 65, and 69; 62, 66, and 69; 64, 68, and 69; 63, 67, and 70; 76, 80, and 84; 77, 81, and 84; 79, 83, and 84; and 78, 82, and 85, respectively.

[0279] In certain embodiments, the polypeptide comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22, and 24. In certain embodiments, the polypeptide comprises the VL amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 16, 18, 20, 22, and 24.

[0280] In certain embodiments, the polypeptide comprises an amino acid sequence that is at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% (e.g., at least 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99%) identical to the VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23, and 25. In certain embodiments, the polypeptide comprises the VH amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 19, 21, 23, and 25.

[0281] Fab-scFv structure

[0282] In certain embodiments, the first antigen-binding domain is a Fab that binds c-MET and the second antigen-binding domain is an scFv that binds EGFR.

[0283] In certain embodiments, the bispecific antibody comprises polypeptide chain I-A, polypeptide chain I-B, and polypeptide chain I-C; wherein (a) the elements comprised in polypeptide chain I-A comprise a first VL and a first CL; the elements comprised in polypeptide chain I-B comprise a first VH, a first heavy chain CH1 region, and a first Fc monomer; and the elements comprised in polypeptide chain I-C comprise a second VL, a second VH, a second heavy chain CH1 hinge region, and a second Fc monomer; or (b) the elements comprised in polypeptide chain I-A comprise a first VL and a CL; the elements comprised in polypeptide chain I-B comprise a first VH, a first heavy chain CH1 region, and a second Fc monomer; and the elements comprised in polypeptide chain I-C comprise a second VL, a second VH, a second heavy chain CH1 hinge region, and a first Fc monomer.

[0284] In certain embodiments, (a) the elements comprised in polypeptide chain I-A comprise from N-terminus to C-terminus the first VL and the first CL; the elements comprised in polypeptide chain I-B comprises from N-terminus to C-terminus the first VH, the first heavy chain CH1 region, and the first Fc monomer; and / or the elements comprised in polypeptide chain I-C comprise from N-terminus to C-terminus (i) the second VL, the second VH, the second heavy chain CH1 hinge region, and the second Fc monomer, or (ii) the second VH, the second VL, the second heavy chain CH1 hinge region, and the second Fc monomer; or (b) the elements comprised in  polypeptide chain I-A comprise from N-terminus to C-terminus the first VL and the first CL; the elements comprised in polypeptide chain I-B comprise from N-terminus to C-terminus the first VH, the first heavy chain CH1 region, and the second Fc monomer; and / or the elements comprised in polypeptide chain I-C comprise from N-terminus to C-terminus (i) the second VL, the second VH, the second heavy chain CH1 hinge region, and the first Fc monomer, or (ii) the second VH, the second VL, the second heavy chain CH1 hinge region, and the first Fc monomer.

[0285] In certain embodiments, the adjacent elements comprised in the polypeptide chain I-A are optionally connected to each other by peptide linkers or not; the adjacent elements comprised in the polypeptide chain I-B are optionally connected to each other by peptide linkers or not; and / or the adjacent elements comprised in the polypeptide chain I-C are optionally connected by a peptide linker or not.

[0286] In certain embodiments, the linkers are each independently the same or different peptide linkers (e.g., rigid peptide linkers or flexible peptide linkers) . In certain embodiments, each of the peptide linkers independently consists of 3 to 55 (e.g., 3-10, 10-25, 10-20, 10-17, 10-15, 10-25, 10-35, 10-45, 10-55) amino acid residues. In certain embodiments, each of the peptide linkers is independently selected from peptide linkers comprising one or more glycine (G) and / or serine (S) . In certain embodiments, each peptide linker may independently comprise 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 glycine residues. In certain embodiments, each peptide linker may independently comprise the peptide GGGG (SEQ ID NO: 110) . In certain embodiments, the peptide linkers each independently comprise 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 tandem copies of the peptide linker subunit GGGGS (SEQ ID NO: 108) , which may be represented by (GGGGS) n, wherein n is selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 (SEQ ID NOs: 107-109, or 114-120) . In certain embodiments, the peptide linkers each independently comprise the amino acid sequence GRGRGS (SEQ ID NO: 112) . In certain embodiments, the peptide linkers each independently comprise the amino acid sequence set forth in SEQ ID NOs: 107-110, 112, or 114-120.

[0287] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17 and the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16. In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21 and the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20. In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23 and the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22.

[0288] In certain embodiments, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19 and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18. In certain embodiments, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25  and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24.

[0289] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18.

[0290] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18.

[0291] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18.

[0292] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24.

[0293] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24.

[0294] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24.

[0295] In certain embodiments, the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 101 and the second Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 102. In certain embodiments, the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 103 and the second Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 104.

[0296] In certain embodiments, the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 102 and the second Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 101. In certain embodiments, the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 104 and the second Fc monomer comprises the amino acid  sequence shown in SEQ ID NO: 103.

[0297] In certain embodiments, the light chain constant region comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 105 or 113, and / or the heavy chain CH1 region comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 106.

[0298] In certain embodiments, said peptide chain I-A comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1, and the peptide chain I-B comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2.

[0299] In certain embodiments, said peptide chain I-A comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 6, and the peptide chain I-B comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 7.

[0300] In some embodiments, the peptide chain I-C comprises the amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3, 4, or 5.

[0301] scFv-Fab structure

[0302] In certain embodiments, the first antigen-binding domain is an scFv and the second antigen-binding domain is a Fab.

[0303] In certain embodiments, the bispecific antibody comprises polypeptide chain II-A, polypeptide chain II-B, and polypeptide chain II-C; wherein (a) the elements comprised in polypeptide chain II-A comprise a second VL and a second CL; the elements comprised in polypeptide chain II-B comprise a second VH, a second heavy chain CH1 region, and a first Fc monomer; the elements comprised in polypeptide chain II-C comprise a first VL, a first VH, a first heavy chain CH1 hinge region, and a second Fc monomer, or (b) the elements comprised in polypeptide chain II-A comprise a second VL and a second CL; the elements comprised in polypeptide chain II-B comprise a second VH, a second heavy chain CH1 region, and a second Fc monomer; and the elements comprised in polypeptide chain II-C comprise a first VL, a first VH, a first heavy chain CH1 hinge region, and a first Fc monomer.

[0304] In certain embodiments, (a) the elements comprised in the polypeptide chain II-A comprise from N-terminus to C-terminus the second VL and the second CL; the elements comprised in polypeptide chain II-B comprise from N-terminus to C-terminus the second VH, the second heavy chain CH1 region, and the first Fc monomer; and / or the elements comprised in polypeptide chain II-C comprise from N-terminus to C-terminus: (i) the first VL, the first VH, the first heavy chain CH1 hinge region, and the second Fc monomer, or (ii) the first VH, the first VL, the first heavy chain CH1 hinge region, and the second Fc monomer, or (b) the elements comprised in polypeptide chain II-A comprise from N-terminus to C-terminus the second VL and the second  CL; the elements comprised in polypeptide chain II-B comprise from N-terminus to C-terminus the second VH, the second heavy chain CH1 region, and the second Fc monomer; and / or the elements comprised in polypeptide chain II-C comprise from N-terminus to C-terminus: (i) the first VL, the first VH, the first heavy chain CH1 hinge region, and the first Fc monomer, or (ii) the first VH, the first VL, the first heavy chain CH1 hinge region, and the first Fc monomer.

[0305] In certain embodiments, the adjacent elements comprised in the polypeptide chain II-A are optionally connected to each other by a peptide linker or not; the adjacent elements comprised in the peptide chain II-B are optionally connected to each other by a peptide linker or not; and / or the adjacent elements comprised in the peptide chain II-C are optionally connected to each other by a peptide linker or not.

[0306] In certain embodiments, the linkers are each independently the same or different peptide linkers (e.g., rigid peptide linkers or flexible peptide linkers) . In certain embodiments, each of the peptide linkers independently consists of 3 to 55 (e.g., 3-10, 10-25, 10-20, 10-17, 10-15, 10-25, 10-35, 10-45, 10-55) amino acid residues. In certain embodiments, each of the peptide linkers is independently selected from peptide linkers comprising one or more glycine (G) and / or serine (S) . In certain embodiments, each peptide linker may independently comprise 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 glycine residues. In certain embodiments, each peptide linker may independently comprise the peptide GGGG (SEQ ID NO: 110) . In certain embodiments, the peptide linkers each independently comprise 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 tandem copies of the peptide linker subunit GGGGS (SEQ ID NO: 108) , which may be represented by (GGGGS) n, wherein n is selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 (SEQ ID NO: 107-109, or 114-120) . In certain embodiments, the peptide linkers each independently comprise the amino acid sequence GRGRGS (SEQ ID NO: 112) . In certain embodiments, the peptide linkers each independently comprise the amino acid sequence set forth in SEQ ID NOs: 107-110, 112, or 114-120.

[0307] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17 and the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16. In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21 and the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20. In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23 and the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22.

[0308] In certain embodiments, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19 and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18. In certain embodiments, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25 and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24.

[0309] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18.

[0310] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18.

[0311] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18.

[0312] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24.

[0313] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24.

[0314] In certain embodiments, the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, and the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24.

[0315] In certain embodiments, the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 101 and the second Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 102. In certain embodiments, the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 103 and the second Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 104.

[0316] In certain embodiments, the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 102 and the second Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 101. In certain embodiments, the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 104 and the second Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 103.

[0317] In certain embodiments, the light chain constant region comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 105 or 113, and / or the heavy chain CH1 region comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 106.

[0318] In certain embodiments, said peptide chain II-A comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 8, and the peptide chain II-B comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9.

[0319] In certain embodiments, said peptide chain II-A comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11, and the peptide chain II-B comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12.

[0320] In certain embodiments, said peptide chain II-A comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13, and the peptide chain II-B comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14.

[0321] In some embodiments, the peptide chain II-C comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 10 or 15.

[0322] In certain embodiments, the bispecific antibody of the invention comprises:

[0323] peptide chain I-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 4;

[0324] peptide chain I-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 5;

[0325] peptide chain I-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 6, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 7, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 3;

[0326] peptide chain I-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 6, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 7, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 4;

[0327] peptide chain I-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 6, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 7, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 5;

[0328] peptide chain II-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 10;

[0329] peptide chain II-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13,  peptide chain II-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 10;

[0330] peptide chain II-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 8, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 15;

[0331] peptide chain II-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 15; or

[0332] peptide chain II-A comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 15.

[0333] In certain embodiments, the bispecific antibody has an enhanced tumor suppressive effect relative to the monospecific anti-c-MET antibody and / or the monospecific anti-EGFR antibody; wherein the amino acid sequences of the CDRs of the monospecific anti-c-MET antibody are identical to the amino acid sequences of the CDRs of the first antigen-binding domain, and the amino acid sequences of the CDRs of the monospecific anti-EGFR antibody are identical to the amino acid sequences of the CDRs of the second antigen-binding domain.

[0334] In certain embodiments, the tumor suppressive effects include: inhibition of EGFR and c-MET signaling, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) activity and / or complement-dependent cytotoxicity (CDC) activity.

[0335] Polynucleotides, Vectors, and Methods of Producing Antibodies

[0336] In another aspect, the application provides an isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules comprising a nucleotide sequence encoding a bispecific antibody as described above.

[0337] According to the codon degeneracy in the field, in some embodiments, the nucleotide sequence can be replaced according to the codon degeneracy. In certain embodiments, the nucleotide sequence is codon optimized.

[0338] In another aspect, the present application provides a vector comprising an isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules as described above.

[0339] In certain embodiments, vectors of the invention are, for example, plasmids, cosmids, phages, lentiviruses, and the like. In certain embodiments, the vector is capable of expressing a bispecific antibody of the invention in a subject (e.g., a mammal, such as a human) .

[0340] For example, when the bispecific antibody of the present invention comprises three  peptide chains, the vector comprises a first nucleotide sequence encoding the first peptide chain of the bispecific antibody of the present invention, a second nucleotide sequence encoding the second peptide chain of the bispecific antibody of the present invention, and a third nucleotide sequence encoding the third peptide chain of the bispecific antibody of the present invention, wherein the first nucleotide sequence, the second nucleotide sequence and the third nucleotide sequence exist in the same or different vectors. When the first nucleotide sequence, the second nucleotide sequence and the third nucleotide sequence are present on different vectors, the vector of the present invention comprises a first vector comprising the first nucleotide sequence, a second vector comprising the second nucleotide sequence, and a third vector comprising the third nucleotide sequence.

[0341] In certain embodiments, the nucleotide sequences encoding the different peptide chains of the bispecific antibody are located on different vector molecules.

[0342] In certain embodiments, the vector is a cloning vector or an expression vector.

[0343] In another aspect, the application provides a host cell comprising an isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules as described above, or a vector as described above. Host cells can be eukaryotic cells (e.g., mammalian cells, insect cells, yeast cells) or prokaryotic cells (e.g., E. coli) . Suitable eukaryotic cells include, but are not limited to, NSO cells, Vero cells, Hela cells, COS cells, CHO cells, ExpiCHO cells, HEK293 cells, Expi293 cells, BHK cells, and MDCKII cells. Suitable insect cells include, but are not limited to, Sf9 cells. In certain embodiments, the host cell of the invention is a mammalian cell, such as a CHO (e.g., CHO-K1, CHO-S, CHO DXB11, ExpiCHO, CHO DG44) .

[0344] The bispecific antibody of the present invention can be prepared by various methods known in the art, for example, by genetic engineering and recombination techniques. For example, a DNA molecule encoding the peptide chain of the bispecific antibody of the present invention is obtained by chemical synthesis or PCR amplification. The resulting DNA molecule is inserted into an expression vector, which is then transfected into a host cell. Then, the transfected host cells are cultured under specific conditions, and express the bispecific antibody of the present invention.

[0345] In another aspect, the present application provides a method for preparing the above-mentioned bispecific antibody, which comprises, under conditions that allow the expression of the bispecific antibody, culturing the above-mentioned host cell, and recovering the bispecific antibody from the culture of the host cell.

[0346] Therapeutic applications

[0347] A bispecific antibody of the invention may be derivatized, e.g., linked to another molecule (e.g., another polypeptide or protein) . In general, derivatization of antibodies does not  adversely affect their binding to EGFR and c-MET. Accordingly, the bispecific antibodies of the invention are also intended to include such derivatized forms. For example, a bispecific antibody of the invention may be functionally linked (by chemical coupling, genetic fusion, non-covalent linkage or otherwise) to one or more other molecular moieties, such as another antibody, a detection reagent, a pharmaceutical reagent, and / or proteins or polypeptides (e.g., avidin or polyhistidine tags) capable of mediating the binding of the bispecific antibody to another molecule.

[0348] Accordingly, in one aspect, the present application provides a conjugate comprising the bispecific antibody as described above and a conjugation moiety linked thereto.

[0349] In certain embodiments, the conjugation moiety is selected from a therapeutic agent (e.g., a cytotoxic agent, cytokine, toxin, or radionuclide) .

[0350] In certain embodiments, the conjugation moiety is selected from substances capable of improving the biological properties of the bispecific antibody (such as increasing the serum half-life) , such as chemical groups such as polyethylene glycol (PEG) , methyl group or ethyl group, or sugar group.

[0351] In another aspect, the present application provides a pharmaceutical composition comprising the bispecific antibody as described above, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules as described above, or the vector as described above, or the host cell as described above, or a conjugate as described above, and a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient.

[0352] In certain embodiments, the pharmaceutical compositions further comprise an additional pharmaceutically active agent.

[0353] In certain embodiments, the additional pharmaceutically active agent is a drug having antineoplastic activity.

[0354] In certain embodiments, the additional pharmaceutically active agent is selected from the group consisting of: EGFR inhibitors, HER2 inhibitors, HER3 inhibitors, HER4 inhibitors, IGFR-1 inhibitors, mTOR inhibitors, PI3 kinase inhibitors, c-met or VEGF inhibitors, chemotherapy drugs, or any combination thereof.

[0355] In certain embodiments, the bispecific antibody and the additional pharmaceutically active agent are provided as separate components or as mixed components.

[0356] In certain embodiments, the bispecific antibody, isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, vector, host cell, conjugate in the pharmaceutical composition of the invention is sufficient (e.g., in a subject) to exert a tumor suppressive effect (e.g., a tumor suppressive effect superior to a monospecific anti-c-MET antibody and / or a monospecific anti-EGFR antibody, wherein the amino acid sequences of CDRs of the monospecific anti-c-MET  antibody are identical to the amino acid sequences of CDRs of the first antigen-binding domain, and the amino acid sequences of CDRs of the monospecific anti-EGFR antibody is the identical to the amino acid sequences of CDRs of the second antigen-binding domain) .

[0357] In certain embodiments, the tumor suppressive effects include: inhibition of EGFR and c-MET signaling pathways, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) activity and / or complement-dependent cytotoxicity (CDC) activity.

[0358] In another aspect, the application provides use of the bispecific antibody as described above, or the isolated nucleic acid molecule or a set of nucleic acid molecules as described above, or the vector as described above, or the host cell as described above, or the conjugate as described above, or the pharmaceutical composition as described above in the preparation of medicine, wherein the medicine is used for preventing and / or treating and / or acting as an adjuvant in treating diseases related to c-MET and / or EGFR in a subject, and / or for inhibiting the activity of c-MET and / or EGFR in vitro or in a subject.

[0359] In certain embodiments, the disease related to c-MET and / or EGFR is cancer. In certain embodiments, the cancer is associated with EGFR activating mutations, EGFR gene amplification, elevated levels of circulating HGF, c-Met activating mutations and / or c-Met gene amplification.

[0360] In certain embodiments, the cancer is epithelial cell carcinoma, breast cancer, ovarian cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, oral cancer, colorectal cancer, anal cancer, prostate cancer, bladder cancer, pharyngeal cancer, nasal cancer, pancreas cancer, skin cancer, tongue cancer, esophagus cancer, vagina cancer, cervix cancer, spleen cancer, testis cancer, gastric cancer, thymus cancer, thyroid cancer, hepatocellular carcinoma, sporadic or hereditary papillary renal cell carcinoma, colon cancer, liver cancer, kidney cancer or head and neck cancer.

[0361] In certain embodiments, the bispecific antibody, isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, vector, host cell, conjugate, or pharmaceutical composition is administered in combination with another pharmaceutically active agent, such as administered simultaneously, separately, or sequentially.

[0362] In certain embodiments, the additional pharmaceutically active agent is a drug having antineoplastic activity.

[0363] In certain embodiments, the additional pharmaceutically active agent is selected from the group consisting of: EGFR inhibitors, HER2 inhibitors, HER3 inhibitors, HER4 inhibitors, IGFR-1 inhibitors, mTOR inhibitors, PI3 kinase inhibitors, c-met or VEGF inhibitors, chemotherapy drugs, or any combination thereof.

[0364] In certain embodiments, the subject is resistant to treatment with erlotinib, gefitinib, afatinib, CO-1686, AZD9192, or cetuximab.

[0365] In another aspect, the present application provides a method for inhibiting the activity of c-MET and / or EGFR in a cell, comprising contacting the cell with the bispecific antibody as described above, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules as described above, or the above-mentioned vector, or the above-mentioned host cell, or the above-mentioned conjugate, or the above-mentioned pharmaceutical composition.

[0366] In certain embodiments, the cells are cells expressing c-MET and / or EGFR, such as tumor cells.

[0367] In another aspect, the present application provides a method for preventing and / or treating and / or acting as an adjuvant in treating a disease related to c-MET and / or EGFR in a subject, wherein the method comprises: administering to the subject in need thereof an effective amount of the above-mentioned bispecific antibody, or the above-mentioned isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, or the above-mentioned vector, or the above-mentioned host cell, or the above-mentioned conjugate, or pharmaceutical compositions as described above.

[0368] In certain embodiments, the disease related to c-MET and / or EGFR is cancer. In certain embodiments, the cancer is associated with EGFR activating mutations, EGFR gene amplification, elevated levels of circulating HGF, c-Met activating mutations and / or c-Met gene amplification.

[0369] In certain embodiments, the cancer is epithelial cell carcinoma, breast cancer, ovarian cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, oral cancer, colorectal cancer, anal cancer, prostate cancer, bladder cancer, pharyngeal cancer, nasal cancer, pancreas cancer, skin cancer, tongue cancer, esophagus cancer, vagina cancer, cervix cancer, spleen cancer, testis cancer, gastric cancer, thymus cancer, thyroid cancer, hepatocellular carcinoma, sporadic or hereditary papillary renal cell carcinoma, colon cancer, liver cancer, kidney cancer or head and neck cancer.

[0370] In certain embodiments, the method further comprises administering to the subject a second therapy selected from surgery, chemotherapy, radiotherapy, immunotherapy, gene therapy, DNA therapy, RNA therapy, nanotherapy, virotherapy, adjuvant therapy, and any combination thereof.

[0371] In certain embodiments, the second therapy may be applied simultaneously, separately or sequentially to the methods described above.

[0372] In certain embodiments, the subject is resistant to treatment with erlotinib, gefitinib, afatinib, CO-1686, AZD9192, or cetuximab.

[0373] The bispecific antibody of the present invention and the pharmaceutical composition of the present invention can be formulated into any dosage form known in the medical field, for example, tablet, pill, suspension, emulsion, solution, gel, capsule, powder, granule, elixir, lozenge, suppository, injection (including solution for injection, sterile powder for injection and concentrated solution for injection) , inhalant, spray, etc. The preferred dosage form depends on the intended mode of administration and therapeutic use. Pharmaceutical compositions of the invention should be sterile and stable under the conditions of manufacture and storage. A preferred dosage form is injection. Such injection can be a sterile solution for injection. For example, the sterile solution for injection can be prepared by incorporating in an appropriate solvent a necessary dose of the bispecific antibody or the pharmaceutical composition of the present invention, and optionally, simultaneously incorporating other desired ingredients (including but not limited to, pH adjusting agent, surfactant, adjuvant, ionic strength enhancer, isotonic agent, preservative, diluent, or any combination thereof) , followed by filter sterilization. In addition, a sterile solution for injection can be prepared as sterile lyophilized powder (e.g., by vacuum drying or freeze-drying) for ease of storage and use. Such sterile lyophilized powder can be dispersed in a suitable carrier before use, such as sterile pyrogen-free water.

[0374] Furthermore, the bispecific antibodies of the present invention may be presented in pharmaceutical compositions in unit dosage form for ease of administration.

[0375] The bispecific antibody and the pharmaceutical composition of the present invention can be administered by any suitable method known in the art, including but not limited to, oral, buccal, sublingual, ocular, topical, parenteral, rectal, intrathecal Intracytoplasmic reticulum, groin, intravesical, topical (e.g., powder, ointment, or drops) , or nasal route. However, for many therapeutic uses, the preferred route / mode of administration is parenteral (e.g., intravenous injection, subcutaneous injection, intraperitoneal injection, intramuscular injection) . The skilled artisan will understand that the route and / or mode of administration will vary depending on the intended purpose. In some preferred embodiments, the bispecific antibody and the pharmaceutical composition of the present invention are administered by intravenous injection or injection.

[0376] The pharmaceutical composition of the present invention may comprise a “therapeutically effective amount” or “prophylactically effective amount” of the bispecific antibody of the present invention. The “prophylactically effective amount” means an amount sufficient to prevent, arrest, or delay the occurrence of a disease. The “therapeutically effective amount” refers to an amount sufficient to cure, or at least partially prevent the disease and its complications in a patient already suffering from the disease. The therapeutically effective amount of the bispecific antibody of the invention may vary according to the following factors: the severity  of the disease to be treated, the general state of the patient's immune system, the general condition of the patient such as age, weight and sex, the mode of administration of the drug, and other treatments administered at the same time, etc.

[0377] In the present invention, dosing regimens can be adjusted to obtain the optimum desired response (e.g., a therapeutic or prophylactic response) . For example, a single dose can be administered, multiple doses can be administered over time or the dose can be proportionally reduced or increased as indicated by the exigencies of the therapeutic situation.

[0378] In the present invention, the subject may be a mammal, such as a human.

[0379] A bispecific antibody described herein can also be used to assay c-MET and / or EGFR protein levels in a biological sample using classical immunohistological methods known to those of skill in the art, including immunoassays, such as the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) , immunoprecipitation, or Western blotting. Suitable antibody assay labels are known in the art and include enzyme labels, such as, glucose oxidase; radioisotopes, such as iodine (125I, 121I) , carbon (14C) , sulfur (35S) , tritium (3H) , indium (121In) , and technetium (99Tc) ; luminescent labels, such as luminol; and fluorescent labels, such as fluorescein and rhodamine, and biotin. Such labels can be used to label a bispecific antibody described herein. Alternatively, a second antibody that recognizes a bispecific antibody described herein can be labeled and used in combination with a bispecific antibody to detect c-MET and / or EGFR protein levels. Therefore, in certain embodiments, the present disclosure relates to the use of a bispecific antibody of the present disclosure for in vitro detection of c-MET and / or EGFR protein in a biological sample. In a further embodiment, the present disclosure relates to the use of a bispecific antibody of the disclosure, for assaying and / or detecting c-MET and / or EGFR protein levels in a biological sample in vitro, optionally wherein the bispecific antibody is conjugated to a radionuclide or detectable label, and / or carries a label described herein, and / or wherein an immunohistological method is used.

[0380] Assaying for the expression level of c-MET and / or EGFR protein is intended to include qualitatively or quantitatively measuring or estimating the level of c-MET and / or EGFR protein in a first biological sample either directly (e.g., by determining or estimating absolute protein level) or relatively (e.g., by comparing to the disease associated protein level in a second biological sample) . c-MET and / or EGFR polypeptide expression level in the first biological sample can be measured or estimated and compared to a standard c-MET and / or EGFR protein level, the standard being taken, for example, from a second biological sample obtained from an individual not having the disorder or being determined by averaging levels from a population of individuals not having the disorder. As will be appreciated in the art, once the “standard” c-MET and / or EGFR polypeptide level is known, it can be used repeatedly as a standard for comparison. Therefore, in a  further embodiment, the present disclosure relates to an in vitro method for assaying and / or detecting c-MET and / or EGFR protein levels in a biological sample, comprising qualitatively or quantitatively measuring or estimating the level of c-MET and / or EGFR protein in a biological sample, by an immunohistological method.

[0381] As used herein, the term “biological sample” refers to any biological sample obtained from a subject, cell line, tissue, or other source of cells potentially expressing c-MET and / or EGFR. Methods for obtaining tissue biopsies and body fluids from animals (e.g., humans or cynomolgus monkeys) are well known in the art. Biological samples include peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) .

[0382] A bispecific antibody described herein can be used for prognostic, diagnostic, monitoring, and screening applications, including in vitro and in vivo applications well known and standard to the skilled artisan and based on the present description. Prognostic, diagnostic, monitoring, and screening assays and kits for in vitro assessment and evaluation of cancer (e.g., tumorigenesis) or other disorders may be utilized to predict, diagnose, and monitor to evaluate patient samples, including those known to have or suspected of having cancer or other disorders, or with regard to an anticipated or desired therapeutic response. The assessment and evaluation of cancer or other disorders are also useful in determining the suitability of a patient for a clinical trial of a drug or for the administration of a particular chemotherapeutic agent, a radiotherapeutic agent, or an antibody, including combinations thereof, versus a different agent or antibody. This type of prognostic and diagnostic monitoring and assessment is already in practice utilizing antibodies against the HER2 protein in breast cancer (HercepTestTM, Dako) where the assay is also used to evaluate patients for antibody therapy using In vivo applications include directed cell therapy and immune system modulation and radio imaging of immune responses. Therefore, in certain embodiments, the present disclosure relates to a bispecific antibody and / or pharmaceutical composition of the present disclosure for use as a diagnostic. In certain embodiments, the present disclosure relates to a bispecific antibody and / or pharmaceutical composition of the present disclosure for use in a method for the prediction, diagnosis, and / or monitoring of a subject having or suspected to have cancer or another disorder, and / or with regard to an anticipated or desired therapeutic response. In another embodiment, the present disclosure relates to the use of a bispecific antibody of the disclosure, for predicting, diagnosing, and / or monitoring of a subject having or suspected to have cancer or another disorder, and / or with regard to an anticipated or desired therapeutic response by assaying and / or detecting c-MET and / or EGFR protein levels in a biological sample of the subject in vitro.

[0383] In certain embodiments, a bispecific antibody of the present disclosure can be used  in immunohistochemistry of biopsy samples. In certain embodiments, the method is an in vitro method. In another embodiment, a bispecific antibody of the present disclosure can be used to detect levels of c-MET and / or EGFR, or levels of cells which contain c-MET and / or EGFR on their membrane surface, the levels of which can then be linked to certain disease symptoms. Bispecific antibodies described herein may carry a detectable or functional label and / or may be conjugated to a radionuclide or detectable label. When fluorescence labels are used, currently available microscopy and fluorescence-activated cell sorter analysis (FACS) or combination of both methods procedures known in the art may be utilized to identify and to quantitate the specific binding members. Bispecific antibodies described herein may carry or may be conjugated to a fluorescence label. Exemplary fluorescence labels include, for example, reactive and conjugated probes, e.g., Aminocoumarin, Fluorescein and Texas red, Alexa Fluor dyes, Cy dyes, and DyLight dyes. The Bispecific antibody of the present disclosure may carry or may be conjugated to a radioactive label or radionuclide, such as the isotopes 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 67Cu, 90Y, 99Tc, 111In, 117Lu, 121I, 124I, 125I, 131I, 198Au, 211At, 213Bi, 225Ac, and 186Re. When radioactive labels are used, currently available counting procedures known in the art may be utilized to identify and quantitate the specific binding of a bispecific antibody to c-MET and / or EGFR. In the instance where the label is an enzyme, detection may be accomplished by any of the presently utilized colorimetric, spectrophotometric, fluorospectrophotometric, amperometric, or gasometric techniques as known in the art. This can be achieved by contacting a sample or a control sample with bispecific antibody under conditions that allow for the formation of a complex between the bispecific antibody and c-MET and / or EGFR. Any complexes formed between the bispecific antibody and c-MET and / or EGFR are detected and compared in the sample and the control. In light of the specific binding of the bispecific antibodies described herein for c-MET and EGFR, the bispecific antibodies can be used to specifically detect c-MET and / or EGFR. The bispecific antibodies described herein can also be used to purify c-MET and / or EGFR via immunoaffinity purification. Also included herein is an assay system which may be prepared in the form of a test kit, kit, or kit-of-parts for the quantitative analysis of the extent of the presence of, for instance, c-MET and / or EGFR ligand complexes. The system, test kit, kit, or kit-of-parts may comprise a labeled component, e.g., a labeled antibody, and one or more additional immunochemical reagents.

[0384] Kits

[0385] Also provided are kits comprising one or more bispecific antibodies described herein, or pharmaceutical compositions or conjugates thereof. In a specific embodiment, provided herein is a pharmaceutical pack or kit comprising one or more containers filled with one or more  of the ingredients of the pharmaceutical compositions described herein, such as one or more bispecific antibodies provided herein. In certain embodiments, the kits contain a pharmaceutical composition described herein and any prophylactic or therapeutic agent, such as those described herein. In certain embodiments, the kits may contain a T cell mitogen, such as, e.g., phytohaemagglutinin (PHA) and / or phorbol myristate acetate (PMA) , or a TCR complex stimulating antibody, such as an anti-CD3 antibody and anti-CD28 antibody. Optionally associated with such container (s) can be a notice in the form prescribed by a governmental agency regulating the manufacture, use or sale of pharmaceuticals or biological products, which notice reflects approval by the agency of manufacture, use or sale for human administration.

[0386] Also provided are kits that can be used in the above methods. In certain embodiments, a kit comprises a bispecific antibody described herein, preferably purified antibody, in one or more containers. In a specific embodiment, kits described herein contain a substantially isolated c-MET and / or EGFR antigen as a control. In another specific embodiment, the kits described herein further comprise a control antibody which does not react with c-MET or EGFR antigen. In another specific embodiment, kits described herein contain one or more elements for detecting the binding of an antibody to a c-MET and / or EGFR antigen (e.g., the antibody can be conjugated to a detectable substrate such as a fluorescent compound, an enzymatic substrate, a radioactive compound or a luminescent compound, or a second antibody which recognizes the first antibody can be conjugated to a detectable substrate) . In specific embodiments, a kit provided herein can include a recombinantly produced or chemically synthesized c-MET and / or EGFR antigen. The antigen provided in the kit can also be attached to a solid support. In a more specific embodiment, the detecting means of the above-described kit includes a solid support to which a c-MET and / or EGFR antigen is attached. Such a kit can also include a non-attached reporter-labeled anti-human antibody or anti-mouse / rat antibody. In this embodiment, binding of the bispecific antibody to the antigen can be detected by binding of the said reporter-labeled antibody. In certain embodiments, the present disclosure relates to the use of a kit of the present disclosure for in vitro assaying and / or detecting c-MET and / or EGFR antigen in a biological sample.

[0387] Specific embodiments of the present invention include:

[0388] Embodiment 1. A bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof comprising a first antigen-binding domain that specifically binds to c-MET and a second antigen-binding domain that specifically binds to EGFR, optionally wherein the bispecific antibody binds to c-MET and EGFR with increased affinity relative to other known antibodies.

[0389] Embodiment 2. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of embodiment 1, wherein the first antigen-binding domain comprises a first VL and a first VH, the first VL and the first VH together form a domain capable of specifically binding c-MET; the second antigen-binding domain includes a second VL and a second VH, which together form a specific domain that binds EGFR;

[0390] wherein, the first VL comprises:

[0391] (a) a complementarity determining region (CDR) -L1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 41, a CDR-L2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 43, and a CDR-L3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 45, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system; or

[0392] (b) a CDR-L1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 86, a CDR-L2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 88, and a CDR-L3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 90, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system; and / or

[0393] the first VH contains:

[0394] (a) a CDR-H1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 46, a CDR-H2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 50, and a CDR-H3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 54, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system; or

[0395] (b) a CDR-H1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 91, a CDR-H2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 95, and a CDR-H3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 99, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system.

[0396] Embodiment 3. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of embodiment 2, wherein the second VL comprises:

[0397] (a) a CDR-L1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 26, a CDR-L2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 28, and a CDR-L3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 30, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0398] (b) a CDR-L1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 56, a CDR-L2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 58, and a CDR-L3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 60, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system; or

[0399] (c) a CDR-L1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 71, a  CDR-L2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 73, and a CDR-L3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 75, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system; and / or

[0400] the second VH contains:

[0401] (a) a CDR-H1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 31, a CDR-H2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 35, and a CDR-H3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 39, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system;

[0402] (b) a CDR-H1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 61, a CDR-H2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 65, and a CDR-H3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 69, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system; or

[0403] (c) a CDR-H1 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 76, a CDR-H2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 80, and a CDR-H3 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 84, wherein the CDRs are defined by the Kabat numbering system.

[0404] Embodiment 4. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof any one of embodiments 2-3, wherein

[0405] (a) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18 and the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19; or

[0406] (b) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24 and the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25.

[0407] Embodiment 5. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of any one of embodiments 2-4, wherein

[0408] (a) the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, and / or the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17;

[0409] (b) the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, and / or the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21; or

[0410] (c) the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, and / or the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23.

[0411] Embodiment 6. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1 to 5, wherein the bispecific antibody or its antigen-binding fragment further comprises an Fc dimer comprising first and second Fc monomers, and the first and second Fc monomers each independently comprise a modification of one or more amino  acids that promotes heterodimerization of the first and second Fc monomers.

[0412] Embodiment 7. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of embodiment 6, wherein the Fc comprises a first Fc monomer containing amino acid modifications capable of forming a knob structure and a second Fc monomer containing amino acid modifications capable of forming a hole structure, wherein the hole structure is capable of pairing with the knob structure to form a heterodimeric Fc dimer.

[0413] Embodiment 8. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of embodiment 6 or 7, wherein (a) the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 101, and the second Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 102; or (b) the first Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 103, and the second Fc monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:104.

[0414] Embodiment 9. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 6-8, wherein the first antigen-binding domain and the first Fc monomer are connected and the second antigen-binding domain is connected to the second Fc monomer; or the first antigen-binding domain and the second Fc monomer are connected and the second antigen-binding domain is connected to the first Fc monomer.

[0415] Embodiment 10. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof described in any one of embodiments 1-9, wherein the first antigen-binding domain is an scFv, and the second antigen-binding domain is a Fab or the first antigen-binding domain is a Fab and the second antigen-binding domain is an scFv.

[0416] Embodiment 11. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof in any one of embodiments 1-10, wherein the bispecific antibody comprises polypeptide chain I-A, polypeptide chain I-B, and polypeptide chain I-C; wherein,

[0417] (a) the elements comprised in polypeptide chain I-A comprise from N-terminus to C-terminus the first VL and CL; the elements comprised in polypeptide chain I-B comprise from N-terminus to C-terminus the first VH, the heavy chain CH1 region, and the first Fc monomer; and / or the elements comprised in polypeptide chain I-C comprise from N-terminus to C-terminus (i) the second VL, the second VH, and the second Fc monomer; or (ii) the second VH, the second VL, and the second Fc monomer; or

[0418] (b) the elements comprised in polypeptide chain I-A comprise from N-terminus to C-terminus the first VL and CL; the elements comprised in polypeptide chain I-B comprise from N-terminus to C-terminus the first VH, the heavy chain CH1 region, and the second Fc monomer; and / or the elements comprised in polypeptide chain I-C comprise from N-terminus to C-terminus (i)  the second VL, the second VH, and the first Fc monomer; or (ii) the second VH, the second VL, and the first Fc monomer.

[0419] Embodiment 12. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof in embodiment 11, wherein (a) the polypeptide chain I-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1; the polypeptide chain I-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2; and / or the polypeptide chain I-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4; (b) the polypeptide chain I-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1; the polypeptide chain I-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2; and / or the polypeptide chain I-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5; (c) the polypeptide chain I-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6; the polypeptide chain I-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7; and / or the polypeptide chain I-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5; (d) the polypeptide chain I-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6; the polypeptide chain I-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7; and / or the polypeptide chain I-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4.; or (e) the polypeptide chain I-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6; the polypeptide chain I-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7; and / or the polypeptide chain I-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3.

[0420] Embodiment 13. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof in any one of embodiments 1-10, wherein

[0421] (a) the bispecific antibody comprises polypeptide chain II-A, polypeptide chain II-B, and polypeptide chain II-C; wherein, the elements comprised in polypeptide chain II-A from the N-terminal end to the C-terminal end comprise the second VL and the CL; the elements comprised in polypeptide chain II-B from the N-terminal end to the C-terminal end comprise the second VH, the heavy chain CH1 region, and the first Fc monomer; and / or the elements comprised in polypeptide chain II-C from N-terminal end to C-terminal end comprise:

[0422] (i) the first VL, the first VH, and the second Fc monomer; or

[0423] (ii) the first VH, the first VL, and the second Fc monomer; or

[0424] (b) the bispecific antibody comprises polypeptide chain II-A, polypeptide chain II-B, and polypeptide chain II-C; wherein, the elements comprised in polypeptide chain II-A from the N-terminal end to the C-terminal end comprise the second VL and the CL; the elements comprised in polypeptide chain II-B from the N-terminal end to the C-terminal end comprise the second VH, the heavy chain CH1 region, and the second Fc monomer; and / or the elements comprised in polypeptide chain II-C from the N-terminal end to the C-terminal end comprise:

[0425] (i) the first VL, the first VH, and the first Fc monomer; or

[0426] (ii) the first VH, the first VL, and the first Fc monomer.

[0427] Embodiment 14. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof in embodiments 13, wherein (a) the polypeptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11; the polypeptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12; and / or the polypeptide chain II-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10; (b) the polypeptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11; the polypeptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12; and / or the polypeptide chain II-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15; (c) the polypeptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13; the polypeptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14; and / or the polypeptide chain II-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10; (d) the polypeptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13; the polypeptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14; and / or the polypeptide chain II-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15; or (e) the polypeptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8; the polypeptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9; and / or the polypeptide chain II-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15.

[0428] Embodiment 15. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of in any one of embodiments 11-14, wherein adjacent elements comprised in each of the polypeptide chains are optionally connected through a peptide linker or not.

[0429] Embodiment 16. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of embodiment 15, wherein each peptide linker is independently the same peptide linker or a different peptide linker, wherein each peptide linker selected from the group consisting of a rigid peptide linker and a flexible peptide linker.

[0430] Embodiment 17. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of embodiment 16, wherein each peptide linker is independently selected from peptide linkers comprising one or more glycine (G) and / or serine (S) residues.

[0431] Embodiment 18. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of embodiment 16, wherein each peptide linker independently comprises 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 tandem copies of a peptide linker subunit comprising the amino acid sequence GGGGS (SEQ ID NO: 108) .

[0432] Embodiment 19. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of embodiment 16, wherein each peptide linker independently comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NOs: 107-110, 112, or 114-120.

[0433] Embodiment 20. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of in any one of embodiments 11-15, wherein the CL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 105 or 113; and / or the heavy chain CH1 region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 106.

[0434] Embodiment 21. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 11 to 20, wherein the bispecific antibody or its antigen-binding fragment comprises:

[0435] (a) polypeptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, polypeptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, and / or polypeptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4;

[0436] (b) polypeptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, polypeptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, and / or polypeptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5;

[0437] (c) polypeptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8, polypeptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9, and / or polypeptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15;

[0438] (d) polypeptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, polypeptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7, and / or polypeptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3;

[0439] (e) polypeptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, polypeptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7, and / or polypeptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4;

[0440] (f) polypeptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, polypeptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7, and / or polypeptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5;

[0441] (g) polypeptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11, polypeptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12, and / or polypeptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10;

[0442] (h) polypeptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11, polypeptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12, and / or polypeptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15;

[0443] (i) polypeptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in  SEQ ID NO: 13, polypeptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14, and / or polypeptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10; or

[0444] (j) polypeptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13, polypeptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14, and / or polypeptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15.

[0445] Embodiment 22. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1 to 21, wherein the bispecific antibody or its antigen-binding fragment has an enhanced tumor inhibitory effect compared to the monospecific anti-c-MET antibody and / or the monospecific anti-EGFR antibody; and wherein

[0446] (a) the amino acid sequences of the CDRs of the monospecific anti-c-MET antibody are the same as the amino acid sequences of the CDRs of the first antigen-binding domain and the amino acid sequence of the CDRs of the monospecific anti-EGFR antibody are the same as the amino acid sequences of the CDRs of the second antigen-binding domain, or

[0447] (b) the amino acid sequences of the CDRs of the monospecific anti-c-MET antibody are the same as the amino acid sequences of the CDRs of the second antigen-binding domain and the amino acid sequence of the CDRs of the monospecific anti-EGFR antibody are the same as the amino acid sequences of the CDRs of the first antigen-binding domain.

[0448] Embodiment 23. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of embodiment 22, wherein the tumor inhibitory effect includes inhibition of the EGFR and c-MET signaling pathways, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) activity, and / or complement-dependent cytotoxicity (CDC) activity.

[0449] Embodiment 24. An isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, comprising a nucleotide sequence encoding the bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of any one of embodiments 1-23.

[0450] Embodiment 25. A vector, comprising the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules of embodiment 24.

[0451] Embodiment 26. The vector according to embodiment 25, wherein the nucleotide sequences encoding the different peptide chains of the bispecific antibody are located in different vector molecules.

[0452] Embodiment 27. The vector according to embodiment 25 or 26, wherein the vector is a cloning vector or an expression vector.

[0453] Embodiment 28. A host cell comprising the isolated nucleic acid molecule or set of  nucleic acid molecules of embodiment 24, or the vector of any one of embodiments 25-27.

[0454] Embodiment 29. A method for preparing the bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-23, comprising culturing the host cell of embodiment 28 under conditions allowing the expression of the bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof, and recovering the bispecific antibody from the culture of the host cell.

[0455] Embodiment 30. A pharmaceutical composition containing one or more bispecific antibodies or bispecific antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-23 and one or more pharmaceutically acceptable carriers and / or excipients.

[0456] Embodiment 31. The pharmaceutical composition of embodiment 30, wherein the pharmaceutical composition further comprises one or more additional pharmaceutically active agents selected from the group consisting of: EGFR inhibitors, HER2 inhibitors, HER3 inhibitors, HER4 inhibitors, IGFR-1 inhibitors, mTOR inhibitors, PI3 kinase inhibitors, c-MET or VEGF inhibitors, chemotherapy drugs, or any combination thereof.

[0457] Embodiment 32. Use of the bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1 to 23 or the pharmaceutical composition according to embodiment 30 or 31 in preparation of a medicament, wherein the medicament is used to prevent and / or treat and / or assist in the treatment of diseases related to c-MET and / or EGFR in a subject, and / or for inhibiting c-MET cells or activity of c-MET and / or EGFR in vitro or in the body of a subject; wherein, the diseases related to c-MET and / or EGFR are EGFR activating mutations, EGFR gene amplification, elevated circulating HGF levels, c-MET activating mutations and / or c-MET cancers associated with MET gene amplification.

[0458] Embodiment 33. The use of according to embodiment 32, wherein the cancer is selected from epithelial cell carcinoma, breast cancer, ovarian cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, oral cancer, colorectal cancer, anal cancer, prostate cancer, bladder cancer, pharyngeal cancer, nasal cancer, pancreatic cancer, skin cancer, tongue cancer, esophageal cancer, vaginal cancer, cervical cancer, spleen cancer, testicular cancer, stomach cancer, thymus cancer, thyroid cancer, liver cell carcinoma, sporadic or hereditary papillary renal cell carcinoma, colon cancer, liver cancer, kidney cancer, and head and neck cancer.

[0459] Embodiment 34. The use of according to embodiment 32 or 33, wherein said bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof or pharmaceutical composition thereof and another pharmaceutically active agent are administered in combination, either simultaneously, separately or sequentially; wherein the another pharmaceutically active agent is selected from: EGFR inhibitors, HER2 inhibitors, HER3 inhibitors, HER4 inhibitors, IGFR-1  inhibitors, mTOR inhibitors, PI3 kinase inhibitors, c-MET or VEGF inhibitors, chemotherapy drugs, or any combination thereof.

[0460] Embodiment 35. The use of any one of embodiments 32-34, wherein the medicament is used in a subject is resistant to treatment with erlotinib, gefitinib, afatinib, CO-1686, AZD9192 or cetuximab.

[0461] Embodiment 36. A method for inhibiting the activity of c-MET and / or EGFR in cells, comprising contacting the cells with the bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof of any one of embodiments 1-23 or the composition or the pharmaceutical composition of embodiment 30 or 31; wherein the cells are cells that express c-MET and / or EGFR.

[0462] Embodiment 37. A method for preventing and / or treating and / or adjunctive treatment of a disease associated with c-MET and / or EGFR in a subject, the method comprising administering an effective amount to a subject in need thereof the bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1 to 23 or the pharmaceutical composition according to embodiment 30 or 31, wherein the disease associated with c-MET and / or EGFR is a cancer comprising EGFR activating mutations, EGFR gene amplification, elevated circulating HGF levels, c-MET activating mutations, and / or c-MET gene amplification.

[0463] Embodiment 38. The method of embodiment 37, wherein the cancer is selected from the group consisting of epithelial cell carcinoma, breast cancer, ovarian cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, oral cancer, colorectal cancer, anal cancer, and prostate cancer, bladder cancer, pharyngeal cancer, nasal cancer, pancreatic cancer, skin cancer, tongue cancer, esophageal cancer, vaginal cancer, cervical cancer, spleen cancer, testicular cancer, stomach cancer, thymus cancer, thyroid cancer, hepatocellular carcinoma, sporadic or hereditary papillary renal cell carcinoma, colon cancer, liver cancer, kidney cancer, or head and neck cancer.

[0464] Embodiment 39. The method of embodiment 37 or 38, wherein the method further comprises administering a second therapy to the subject, the second therapy being selected from the group consisting of surgery, chemotherapy, radiotherapy, immunotherapy, gene therapy, DNA therapy, RNA therapy, nanotherapy, viral therapy, adjuvant therapy and any combination thereof; optionally, the second therapy can be applied simultaneously, separately or sequentially.

[0465] Embodiment 40. The method of any one of embodiments 37-39, wherein the subject is resistant to treatment with erlotinib, gefitinib, afatinib, CO-1686, AZD9192, or cetuximab.

[0466] Embodiment 41. A bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1 to 23 or the pharmaceutical composition according  to embodiment 30 or 31, for preventing and / or treating and / or adjunctive treatment of a disease associated with c-MET and / or EGFR in a subject, wherein the disease associated with c-MET and / or EGFR is a disease comprising EGFR activating mutations, EGFR gene amplification, elevated circulating HGF levels, c-MET activating mutations, and / or c-MET gene amplification cancer.

[0467] Embodiment 42. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof or the pharmaceutical composition of embodiment 41, wherein the cancer is selected from the group consisting of epithelial cell carcinoma, breast cancer, ovarian cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, oral cancer, colorectal cancer, anal cancer, and prostate cancer, bladder cancer, pharyngeal cancer, nasal cancer, pancreatic cancer, skin cancer, tongue cancer, esophageal cancer, vaginal cancer, cervical cancer, spleen cancer, testicular cancer, stomach cancer, thymus cancer, thyroid cancer, hepatocellular carcinoma, sporadic or hereditary papillary renal cell carcinoma, colon cancer, liver cancer, kidney cancer, or head and neck cancer.

[0468] Embodiment 43. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof or the pharmaceutical composition of embodiment 41 or 42, wherein the method further comprises administering a second therapy to the subject, the second therapy being selected from the group consisting of surgery, chemotherapy, radiotherapy, immunotherapy, gene therapy, DNA therapy, RNA therapy, nanotherapy, viral therapy, adjuvant therapy and any combination thereof; optionally, the second therapy can be applied simultaneously, separately or sequentially.

[0469] Embodiment 44. The bispecific antibody or bispecific antigen-binding fragment thereof or the pharmaceutical composition of any one of embodiments 41-43, wherein the subject is resistant to treatment with erlotinib, gefitinib, afatinib, CO-1686, AZD9192, or cetuximab.

[0470] Acronyms

[0471] Definitions

[0472] In the present disclosure, unless otherwise specified, the scientific and technical terms used herein have the meanings commonly understood by those skilled in the art. In addition, the operation steps in cell culture, biochemistry, nucleic acid chemistry, and immunology laboratories used in this paper are all routine steps widely used in the corresponding fields. Meanwhile, in order to better understand the present disclosure, definitions and explanations of related terms are provided below.

[0473] As used herein, the term “antibody” is used in the broadest sense to include various antibody structures including, but not limited to, monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies (e.g., bispecific antibodies) and antibody fragments so long as they exhibit the desired antigen-binding activity. For example, an immunoglobulin molecule may be composed of two pairs of polypeptide chains, each pair having one light chain (LC) and one heavy chain (HC) . Antibody light chains can be classified as kappa (κ) and lambda (λ) light chains. Heavy chains can be classified as mu, delta, gamma, alpha, or epsilon, and define the antibody's isotype as IgM, IgD, IgG, IgA, and IgE, respectively. Within the light and heavy chains, the variable and constant regions are joined by a “J” region of about 12 or more amino acids, with the heavy chain also comprising a “D” region of about 3 or more amino acids. Each heavy chain is composed of a VH and a heavy chain constant region (CH) . The heavy chain constant region consists of 3 domains (CH1, CH2 and CH3) . Each light chain is composed of a VL and a light chain constant region (CL) . The light chain constant region consists of one domain, CL. The constant domains are not directly involved in antibody-antigen-binding, but exhibit a variety of effector functions, such as mediating the binding of immunoglobulin with host tissues or factors, including various cells of the immune system (e.g., effector cells) and the first component (C1q) of the classical complement system (C1q) . The VH and VL regions can also be subdivided into regions of high variability called complementarity determining regions (CDRs) , interspersed with more conserved regions called framework regions (FRs) . Each VH and VL is composed of 3 CDRs and 4 FRs arranged from the amino terminal to the carboxyl terminal in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, and FR4. The variable regions (VH and VL) of each heavy chain / light chain pair form the antigen-binding site, respectively. The allocation of amino acids in each region or domain can follow the definition of Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991) ) , or Chothia &Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917 and  Chothia et al. (1989) Nature 342: 878-883.

[0474] The term “antibody” further includes embodiments in which heavy chain constant domains may comprise a C-terminal lysine or lack either a C-terminal lysine or a C-terminal glycine-lysine dipeptide. The term further includes embodiments in which the N-terminal amino acid of the antibody variable domains has undergone cyclization to pyroglutamate. Thus, in a composition comprising antibodies as disclosed herein, various species of the antibodies therein may independently comprise a C-terminal lysine, lack a C-terminal lysine, lack a C-terminal glycine-lysine and / or comprise an N-terminal glutamine or glutamic acid or cyclization of the N-terminal amino acid to pyroglutamate.

[0475] Herein, unless the context clearly dictates otherwise, when the term “antibody” is referred to, it includes not only whole antibodies but also antigen-binding fragments of antibodies.

[0476] As used herein, the term “complementarity determining region” or “CDR” refers to the amino acid residues in the variable region of an antibody that are responsible for antigen-binding. The precise boundaries of these amino acid residues can be defined according to various numbering systems known in the art, for example according to the AbM numbering system (Martin ACR, Cheetham JC, Rees AR (1989) Modeling antibody hypervariable loops: A combined algorithm. Proc Natl Acad Sci USA 86: 9268 –9272) , the MacCallum numbering system (MacCallum et al., (1996) J Mol Biol 262: 732-745, see also, e.g., Martin A. “Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains, ” in Antibody Engineering, Kontermann and Dübel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001) ) , the AHo numbering system (Honegger and Plückthun, A., J. Mol. Biol. 309: 657-670 (2001) ) , or the IMGT numbering system (Lefranc et al., Dev. Comparat. Immunol. 27: 55-77, 2003) . For a given antibody, those skilled in the art will readily identify the CDRs defined by each numbering system. Also, the correspondence between different numbering systems is well known to those skilled in the art (for example, see Lefranc et al., Dev. Comparat. Immunol. 27: 55-77, 2003) .

[0477] In the present invention, the CDRs comprised in the antibody of the present invention or an antigen-binding fragment thereof can be determined according to various numbering systems known in the art. In certain embodiments, the antibodies or antigen-binding fragments thereof of the invention comprise CDRs preferably identified by the IMGT, Kabat, Chothia or AbM numbering system.

[0478] The following general rules disclosed in www. bioinf. org. uk : Prof. Andrew C. R. Martin's Group and reproduced below may be used to define the CDRs in an antibody sequence that includes those amino acids that specifically interact with the amino acids comprising the epitope in the antigen to which the antibody binds. There are rare examples where these generally  constant features do not occur; however, the Cys residues are the most conserved feature.

[0479] The entire amino acid sequence of the VH is commonly numbered according to Kabat while the three CDRs within the variable region may be defined according to any one of the aforementioned numbering schemes. In particular embodiments, the numbering of the amino acid positions in the VH may be sequential beginning with amino acid position 1 and continuing sequentially to the end of the sequence or according to Kabat. Unless specified otherwise, the amino acid positions in the VH and VL herein are defined according to sequential numbering.

[0480] The numbering of the amino acid positions in the heavy chain constant domain may be sequential beginning with amino acid position 1 and continuing sequentially to the end of the sequence or according to Eu numbering. The IgG1 heavy chain constant domain amino acid sequence has 330 amino acids sequentially numbered 1 to 330. The corresponding sequence numbered according to Eu begins with position number 118 and ends with position number 447. Unless specified otherwise, the amino acid positions in the heavy and light chains herein are defined according to sequential numbering.

[0481] As used herein, the term “framework region” or “FR” residues refers to those amino acid residues in an antibody variable region other than the CDR residues as defined above.

[0482] The term “antibody” is not limited to any particular method of producing antibodies. For example, it includes recombinant antibodies, monoclonal antibodies and polyclonal antibodies. Antibodies can be of different isotypes, e.g., IgG (e.g., IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 subtype) , IgAl, IgA2, IgD, IgE or IgM antibodies.

[0483] As used herein, the term “bispecific antibody” refers to an antibody with binding specificities for two different antigens (or epitopes) , which comprises two antibodies with binding specificities for different antigens (or epitopes) . Antigen-binding domains, thereby being able to bind two different binding sites and / or target molecules. Each antigen-binding domain comprised in the bispecific antibody can be independently selected from a full-length antibody (such as an IgG antibody) or an antigen-binding fragment thereof (such as Fv, Fab, scFab or scFv) . In some cases, the individual antigen-binding domains are linked by a peptide linker.

[0484] As used herein, the term “Fv fragment” means an antibody fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody. The Fv fragment is generally considered to be the smallest antibody fragment capable of forming a complete antigen-binding site. It is generally believed that the six CDRs confer antigen-binding specificity to an antibody. However, even a variable region (such as the Fd fragment, which comprises only three CDRs specific for an antigen) is able to recognize and bind antigens, although perhaps with a lower affinity than the full binding site.

[0485] As used herein, the term “Fc fragment” means a fragment formed by disulfide bonding of the second and third constant regions of the first heavy chain of an antibody and the second and third constant regions of the second heavy chain antibody fragments. The Fc fragment of an antibody has many different functions but is not involved in antigen-binding.

[0486] As used herein, the term “scFv” refers to a single polypeptide chain comprising VL and VH domains, wherein the VL and VH are linked by a linker. Such scFv molecules may have the general structure: NH2-VL-linker-VH-COOH or NH2-VH-linker-VL-COOH. Suitable prior art  peptide linkers consist of the repeated GGGGS amino acid sequence (SEQ ID NO: 108) or variants thereof. For example, a linker having the amino acid sequence (GGGGS) 4 (SEQ ID NO: 109) can be used, but variants thereof can also be used. In some cases, there may also be a disulfide bond between the VH and VL of the scFv.

[0487] As used herein, the term “Fab fragment” means an antibody fragment consisting of VL, VH, CL and CH1 domains, usually consisting of one peptide chain comprising VL and CL and another peptide chain comprising VH and CH1. However, those skilled in the art understand that the Fab domains may be arranged according to the natural orientation described above, but may also comprise domain substitutions or exchanges that promote correct VH and VL pairing (such as domain swaps in the CrossMab format) .

[0488] As used herein, the terms “monoclonal antibody” and “mAb” have the same meaning and are used interchangeably to refer to one antibody molecule from a group of highly homogeneous antibody molecules or a fragment of an antibody, that is, a population of antibody molecules that are identical except for natural mutations that may arise spontaneously. mAbs are highly specific for a single epitope on an antigen. Compared with monoclonal antibodies, polyclonal antibodies usually contain at least two or more different antibodies, and these different antibodies usually recognize different epitopes on antigens. In addition, the modifier “monoclonal” only indicates that the antibody is characterized as being obtained from a highly homogeneous antibody population of antibodies and is not to be construed as requiring that the antibody be prepared by any particular method.

[0489] As used herein, the term “bispecific antibody” or “BsAb” refers to an antibody having two distinct binding domains that enable the bispecific antibody to bind to two different antigens or two different epitopes of the same antigen simultaneously.

[0490] As used herein, the term “CrossMab” refers to a method in the construction of bispecific antibodies that enables the correct association of the light chains and their cognate heavy chains by exchange of heavy-chain and light-chain domains within the antigen-binding fragment (Fab) of one half of the bispecific antibody. This “crossover” retains the antigen-binding affinity but makes the two arms so different that light-chain mispairing can no longer occur. The three possible “CrossMab” formats are: CrossMabFab, which refers to crossover or exchange in position of the complete VH-CH1 and VL-CL domains of one half of the bispecific antibody; CrossMabVH-VL, which refers to the crossover or exchange in position of only the VH and VL domains of one half of the bispecific antibody; and CrossMabCH1-CL, which refers to the crossover or exchange in position of the CH1 and CL domains within the Fab region of one half of the bispecific antibody. CrossMab antibodies have been described or claimed in WO2009080252, WO2009080253,  WO2009080251, WO2009080254, WO2010136172, WO2010145792 and WO2013026831. The term "CrossMab" antibody is generally recognized in the art; e.g., see Brinkmannand Kontennann, MAbs 9 (2) : 182-212 (2017) ; Kontermannand Brinkmann, Drug Discovery Today 20 (7) : 838-846 (2015) ; Schaefer et al., PNAS, 108 11187-1191 (2011) ; Kleinet al., MAbs 8 (6) : 1010-1020 (2016) ; and Klein et al., MAbs 4 (6) : 653-663 (2012) .

[0491] As used herein, the term “specific binding” refers to a non-random binding reaction between two molecules, such as the reaction between an antibody and its antigen. The strength or affinity of a specific binding interaction can be measured by the equilibrium dissociation constant (KD) or the half-maximal effect concentration (EC50) of the interaction.

[0492] The specific binding properties between two molecules can be determined using methods well known in the art. One method involves measuring the rate of antigen-binding site / antigen complex formation and dissociation. Both the “association rate constant” (ka or kon) and the “dissociation rate constant” (kdis or koff) can be calculated from the concentration and the actual rates of association and dissociation (see Malmqvist M, Nature, 1993, 361: 186-187) . The ratio kdis / kon is equal to the dissociation constant KD (see Davies et al., Annual Rev Biochem, 1990; 59: 439-473) . KD, kon and kdis values can be measured by any effective method. In certain embodiments, dissociation constants can be measured using bioluminescence interferometry (e.g., the ForteBio Octet method) . Alternatively, surface plasmon resonance techniques (e.g., Biacore) or Kinexa can be used to measure dissociation constants.

[0493] As used herein, the term “vector” refers to a nucleic acid delivery vehicle into which a polynucleotide can be inserted. When the vector is capable of achieving expression of the protein encoded by the inserted polynucleotide, the vector is called an expression vector. A vector can be introduced into a host cell by transformation, transduction or transfection, so that the genetic material elements it carries can be expressed in the host cell. Vectors are well known to those skilled in the art and include, but are not limited to: Plasmid; Phagemid; Cosmid; Artificial chromosome, such as yeast artificial chromosome (YAC) , bacterial artificial chromosome (BAC) or P1-derived artificial chromosome (PAC) ; bacteriophage such as lambda phage or M13 phage and animal virus, etc. Animal viruses that can be used as vectors include, but are not limited to, retroviruses (including lentiviruses) , adenoviruses, adeno-associated viruses, herpesviruses (such as herpes simplex virus) , poxviruses, baculoviruses, papillomaviruses, Polyoma vacuolar virus (e.g., SV40) . A vector can comprise a variety of elements that control expression, including but not limited to, promoter sequences, transcription initiation sequences, enhancer sequences, selection elements, and reporter genes. In addition, the vector may also comprise an origin of replication.

[0494] Expression and cloning vectors comprise nucleic acid sequences that enable the  vector to replicate in one or more selected host cells. Typically, in cloning vectors, this sequence is one that enables the vector to replicate independently of the host chromosomal DNA, and it includes origins of replication or autonomously replicating sequences. The term “expression vector” as used herein refers to a vector comprising a recombinant polynucleotide comprising an expression control sequence operably linked to a nucleotide sequence to be expressed. Expression vectors comprise sufficient cis-acting elements for expression; other elements for expression may be provided by the host cell or by an in vitro expression system. Expression vectors include all those known in the art, such as cosmids, plasmids (e.g., naked or contained in liposomes) , and viruses (e.g., lentiviruses, retroviruses, adenoviruses, and adeno-associated viruses) .

[0495] As used herein, the term “host cell” refers to cells that can be used to introduce vectors, including, but not limited to, prokaryotic cells such as Escherichia coli or Bacillus subtilis, fungal cells such as yeast cells or Aspergillus, insect cells such as S2 Drosophila cells or Sf9, or such as fibroblasts, NS0 cells, Vero cells, Hela cells, COS cells, CHO cells (such as CHO-K1, CHO-S, CHO DXB11, ExpiCHO, CHO DG44 cells ) , ExpiCHO cells, HEK293 cells, Expi293 cells, BHK cells, and MDCKII cells and other animal cells.

[0496] As used herein, the term “identity” is used to refer to the match of sequences between two polypeptides or between two nucleic acids. When a position in both sequences being compared is occupied by the same base or amino acid monomer subunit (for example, a position in each of the two DNA molecules is occupied by an adenine, or both a position in each of the polypeptides is occupied by lysine) , then the molecules are identical at that position. “Percent identity” between two sequences is a function of the number of matching positions shared by the two sequences divided by the number of compared positions multiplied by 100. For example, two sequences are 60%identical if 6 out of 10 positions match. For example, the DNA sequences CTGACT and CAGGTT share 50%identity (3 out of a total of 6 positions match) . Typically, comparisons are made when two sequences are aligned for maximum identity. Such alignments can be achieved using, for example, the method of Needleman et al. (1970) J. Mol. Biol. 48: 443-453 which can be conveniently performed by computer programs such as the Align program (DNAstar, Inc. ) . The algorithm of E. Meyers and W. Miller (Comput. The algorithm of Appl Biosci., 4: 11-17 (1988) ) which has been incorporated into the ALIGN program (version 2.0) can also be used to determine the percent identity between two amino acid sequences by using the PAM120 weight residue table, a gap length penalty of 12, and a gap penalty of 4. Alternatively, the algorithm of Needleman and Wunsch (J MoI Biol. 48: 444-453 (1970) ) that has been integrated into the GAP program of the GCG software package (available at www. gcg. com) can be used to determine the percent identity between two amino acid sequences by using the Blossum 62 matrix or PAM250 matrix with a gap  weight of 16, 14, 12, 10, 8, 6 or 4 and a length weight of 1, 2, 3, 4, 5 or 6.

[0497] The writing of the twenty conventional amino acids referred to herein follows conventional usage. See, e.g., Immunology-A Synthesis (2nd Edition, E. S. Golub and D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991) ) , which is incorporated herein by reference. In the present invention, the terms “polypeptide” and “protein” have the same meaning and are used interchangeably. And in the present invention, amino acids are generally represented by single-letter and three-letter abbreviations known in the art. For example, alanine can be represented by A or Ala.

[0498] As used herein, the term “pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient” refers to a carrier and / or excipient that is pharmacologically and / or physiologically compatible with the subject and the active ingredient, which is well known in the art (see e.g. Remington's Pharmaceutical Sciences. Edited by Gennaro AR, 19th ed. Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1995) , and include but are not limited to: pH adjusting agents, surfactants, adjuvants, ionic strength enhancers, diluents, agents to maintain osmotic pressure, agents to delay absorption, preservatives. For example, pH adjusting agents include, but are not limited to, phosphate buffers. Surfactants include but are not limited to cationic, anionic or nonionic surfactants such as Tween-80. Ionic strength enhancers include, but are not limited to, sodium chloride. Preservatives include, but are not limited to, various antibacterial and antifungal agents, such as parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, and the like. Agents to maintain osmotic pressure include, but are not limited to, sugars, NaCl, and the like. Agents that delay absorption include, but are not limited to, monostearates and gelatin. Diluents include, but are not limited to, water, aqueous buffers (e.g., buffered saline) , alcohols and polyols (e.g., glycerol) , and the like. Stabilizer has the meaning generally understood by those skilled in the art, and it can stabilize the desired activity of the active ingredient in the medicine, including but not limited to sodium glutamate, gelatin, SPGA, sugars (such as sorbitol, mannitol, starch, sucrose, lactose, dextran, or glucose) , amino acids (such as glutamic acid, glycine) , proteins (such as dry whey, albumin or casein) or their degradation products (such as lactalbumin hydrolyzate) , etc.

[0499] As used herein, the term “prevention” refers to methods performed to prevent or delay the occurrence of a disease or disorder or symptom (e.g., a tumor) in a subject. As used herein, the term “treatment” refers to a method performed to obtain a beneficial or desired clinical outcome. For the purposes of this invention, a beneficial or desired clinical outcome includes, but is not limited to, relief of symptoms, reduction of the extent of the disease, stabilization (i.e., no longer worsening) of the disease state, delay or slowing of the progression, amelioration or palliation of the disease status, and relief of symptoms (whether partial or total) , whether detectable or not.  Additionally, “treatment” can also refer to prolonging survival as compared to expected survival if not receiving treatment.

[0500] As used herein, the term “subject” refers to a mammal, such as a primate mammal, such as a human. In certain embodiments, the subject (e.g., human) has a tumor, or is at risk of having a disease as described above.

[0501] As used herein, the term “effective amount” refers to an amount sufficient to achieve, or at least partially achieve, the desired effect. For example, an effective amount for preventing a disease (for example, a tumor) refers to an amount sufficient to prevent, arrest, or delay the occurrence of a disease (for example, a tumor) ; an effective amount for treating a disease refers to an amount sufficient to cure or at least partially prevent an existing disease or complications. Determining such an effective amount is well within the capability of those skilled in the art. For example, amounts effective for therapeutic use will depend on the severity of the disease being treated, the general state of the patient's own immune system, the general condition of the patient such as age, weight and sex, the mode of administration of the drug, and other treatments administered concomitantly, etc.

[0502] As used herein, the term “effector function (effector function) ” refers to those biological activities that can be attributed to the antibody Fc region (native sequence Fc region or amino acid sequence variant Fc region) , and which are associated with the antibody varies with antibody isotype. Examples of antibody effector functions include, but are not limited to: Fc receptor binding affinity, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) , complement-dependent cytotoxicity (CDC) , antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP) , cell surface receptors such as B cell receptor, B cell activation, cytokine secretion, half-life / clearance rate of antibodies and antigen-antibody complexes, etc. Methods of altering the effector function of antibodies are known in the art, for example by introducing mutations in the Fc region.

[0503] As used herein, the term “antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) ” refers to a form of cytotoxicity in which Ig binds to Fc receptors (FcR) present on cytotoxic cells such as natural killer (NK) cells, neutrophils, or macrophages, allowing these cytotoxic effector cells to specifically bind to the antigen-attached target cells, and then kill the target cells by secreting cytotoxins.

[0504] As used herein, the term “combination therapy” comprises combining a bispecific antibody or pharmaceutical composition of the invention with one or more additional active therapeutic agents (e.g. chemotherapeutic agents) of a second therapy or other prophylactic or therapeutic modalities (e.g. radiotherapy) . In such combination therapies, the various active agents often have different complementary mechanisms of action, and the combination therapy  may result in a synergistic effect. Combination therapy includes therapeutic agents that affect the immune response (e.g., enhance or activate the response) and therapeutic agents that affect (e.g., inhibit or kill) tumor / cancer cells. Combination therapy reduces the likelihood of drug-resistant cancer cells developing. Combination therapy may allow dose reduction of one or more of the agents to reduce or eliminate adverse effects associated with one or more of the agents. Such combination therapies may have a synergistic therapeutic or prophylactic effect on the underlying disease, disorder or condition.

[0505] As used herein, “combination” includes therapies that may be administered separately, e.g., formulated separately for separate administration (e.g., may be provided in a kit) , as well as therapies that may be administered together in a single formulation (i.e., a “co-formulation” ) . In certain embodiments, the bispecific antibodies of the invention may be administered sequentially. In other embodiments, the bispecific antibodies can be administered simultaneously. The bispecific antibodies of the invention may be used in any combination with at least one other (active) agent.

[0506] The terms “cancer” and “tumor” are used interchangeably and refer to a broad class of diseases characterized by the uncontrolled growth of abnormal cells in the body. Unregulated cell division may lead to the formation of malignant tumors or cells that invade adjacent tissues and may metastasize to distant sites in the body through the lymphatic system or bloodstream. Cancer includes benign and malignant cancers as well as dormant tumors or micrometastases. Cancer also includes hematological malignancies.

[0507] Sequence information

[0508] A description of the sequences referred to in this application is provided in the table below.

[0509] The invention will now be described with reference to the following examples, which are intended to illustrate the invention, but not to limit it.

[0510] Unless otherwise specified, the molecular biology experimental and immunoassay methods used in the present invention are performed basically according to the methods described in J. Sambrook et al., Molecular Cloning: Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, and F. M. Ausubel et al., A Laboratory Guide to Molecular Biology, 3rd Edition, John Wiley &Sons, Inc., 1995; and restriction enzymes were used in accordance with product manufacturer's recommendations.

[0511] EXAMPLE 1

[0512] Preparation of anti-EGFR and anti-c-MET bispecific antibody and control antibody  protein

[0513] Construction and expression of recombinant anti-EGFR and anti-c-MET bispecific antibodies

[0514] (1) Fab-scFv-Fc (KIH) bispecific antibodies

[0515] The (1) Fab-scFv-Fc (KIH) bispecific antibodies comprise the Fab-scFv-Fc (KIH) bispecific antibody structure. The knob-in-hole (KIH) structure is used between the heavy chains to prevent mismatching. The schematic diagram of the structure is shown in Fig. 1. The amino acid sequences comprising the anti-EGFR and anti-c-MET bispecific Fab-scFv-Fc (KIH) bispecific antibodies are shown in Table 1.

[0516] Table 1: Fab-scFv-Fc (KIH) bispecific antibody amino acid sequences

[0517] The above amino acid sequences were sent to Genscript Biotechnology Co., Ltd. for codon optimization and DNA synthesis, and the light and heavy chains of the bispecific antibody were cloned into pKL GS expression vector (containing two expression cassettes) . The promoter of the first expression cassette is the mouse CMV promoter and the polyA signal sequence is the sv40 polyA signal sequence. The promoter of the second expression cassette is the mouse CMV promoter and the polyA signal sequence is the thymidine kinase (TK) polyA signal sequence. The scFv-Fc of each bispecific antibody was separately cloned into pKL5 Vector (containing 1 expression cassette; the promoter is the mouse CMV promoter and the polyA signal sequence is the CMV polyA signal sequence) or pKL8 expression vector (containing 1 expression cassette; the promoter is mouse CMV promoter and the polyA signal sequence is the CMV polyA signal sequence) . For each plasmid pair of the plasmid expressing the light and heavy chains of a bispecific antibody and the plasmid expressing the bispecific antibody scFv-Fc as shown in Table 1, the plasmid pair was co-transfected into CHO-K1 cells (obtained from American Type Culture Collection (ATCC) , Manasas, VA) and the cells were cultured in a cell culture medium for expression of the bispecific antibodies. After allowing expression of the bispecific antibodies for a period of time, the bispecific antibodies were harvested from the culture medium and Protein A (MabSelectTM SuRe, GE) chromatography was used to capture the bispecific antibodies. The bispecific antibodies were then purified using cation chromatography ( CPX, Merck KGaA) to provide bispecific antibodies.

[0518] Construction and expression of recombinant anti-EGFR monoclonal antibody and anti-c-MET monoclonal antibody

[0519] The sequences of anti-EGFR monoclonal antibodies Cetuximab, Zalutumumab, Necitumumab and Nimotuzumab are from the Imunogenetics website, wherein the International Nonproprietary Name (INN) number of Cetuximab is 7906, the INN number of Zalutumumab is 8605, the INN number of Necitumumab is 9083, and the INN number of Nimotuzumab is 8545. The sequence of BA03 monoclonal antibody is from patent CN106999606B; the sequences of anti-c-MET monoclonal antibody Onartuzumab and Telisotuzumab are from the  website, wherein the INN number of Onartuzumab is 9368, the INN number of Telisotuzumab is 10366, and the sequence of CE355621 monoclonal antibody is from patent CN107207564A.

[0520] To obtain the monospecific monoclonal antibodies, expression plasmids were constructed that encoded the heavy and light chains of the monospecific antibodies. The expression plasmids were separately transfected into CHO-K1 cells and the transfected cells cultivated in culture medium under suitable conditions for expression of the monospecific antibodies into the  culture medium. After allowing expression of the monospecific antibodies for a period of time, the monospecific antibodies were harvested from the culture medium and Protein A (MabSelectTM SuRe LX, GE) affinity Chromatography is used to capture the monospecific antibodies. The monospecific antibodies were then purified using cation chromatography ( CPX, Merck KGaA) to provide the monospecific antibodies.

[0521] Hydrophilicity properties of bispecific antibodies

[0522] The hydrophilicity of the bispecific antibodies was detected by using Agilent 1260 with TSKgel Butyl-NPR column. Column temperature: 30 ℃, detection wavelength: 280 nm, flow rate: 0.5 ml / min, mobile phase A: 1.5 mol / L (NH4) 2SO4, mobile phase B: 25 mmol / L Na2HPO4, pH=7.0, 25%IPA. A suitable amount of the test sample was diluted with diluent (0.75 mol / L (NH4) 2SO4) to make a solution of 1.0 mg / mL as the test sample solution. The control antibodies (Tagitanlimab as a hydrophilic control is disclosed in WO2017148424 and Sacituzumab as a hydrophobic control is disclosed in WO2019114666. Both antibodies are produced by Kelun-Biotech. ) were respectively diluted with the diluent to make a solution of 1.0 mg / ml as the system suitability solution. About 40 μg of sample was injected and analyzed in gradient elution: 0-3 min, maintaining mobile phase A of 95%and mobile phase B of 5%; 3-40 min, mobile phase B from 5%to 100%; 40-45 min, maintaining mobile phase A of 95%and mobile phase B of 5%. The hydrophobicity value of the test sample was calculated according to the control sample with the formula: (retention time of the test sample -retention time of the hydrophilic control)  /  (retention time of the hydrophobic control -retention time of the hydrophilic control) , and the smaller the value of the retention time and the hydrophobicity value, the better the hydrophilicity of the antibody. The results are shown in Table 2. The bispecific antibodies all have good hydrophilicity. Good hydrophilicity will be beneficial for the production of antibodies, quality control or conjugation with small molecules, etc., and will enhance the in vivo drug efficacy and improve the pharmacokinetic properties and the medication safety.

[0523] Table 2: Hydrophilicity properties of bispecific antibodies

[0524] EXAMPLE 2

[0525] Evaluation of protein binding activity of bispecific antibodies

[0526] Evaluation of the binding activity of bispecific antibodies to EGFR protein

[0527] Human EGFR-His protein was diluted to 1 μg / mL with Carbonate-Bicarbonate Buffer (CBS) coating solution and the solution was added to the wells of a 96-well microtiter plate at 100 ng / well. The microtiter plate was incubated overnight at 4℃. The next day, the microtiter plate was washed once with PBST (0.05%Tween-20) . Then 100 μL of a blocking solution containing 2%BSA was added to each well of the microtiter plate and the plate was incubated at 37℃ for 2 hours. The purified bispecific antibody and control antibody were serially diluted with 2%BSA, starting at 10 μg / mL with 3-fold gradient and 11 concentration points. The blocking solution was then removed from the wells and the serially diluted antibody solutions added to the wells of the ELISA microtiter plate. The plate was incubated at 37℃ for 2 hours. Afterwards, the plate was washed 3 times with PBST (0.05%Tween-20) , 320 μl per well. After drying the plate, 100 μL HRP conjugated Goat anti-human IgG was added to each well of the microtiter plate, and the plate was incubated at 37℃ for 1 hour. Afterwards, the plate was washed 5 times with PBST (0.05%Tween-20) , 320 μL per well after drying the plate, 100 μL of 3, 3', 5, 5'-tetramethylbenzidine (TMB) (Huzhou Yingchuang Biotechnology Co., Ltd. ) chromogenic substrate was added to each well of the microtiter plate and allowed to react at room temperature for 10 minutes. Then 50 μL 2M H2SO4 was added to terminate the reaction. The plate was read at OD450nm absorbance value with a microplate reader. The raw data was imported into GraphPad Prism 6 software for nonlinear curve fitting and calculation of the EC50 of the binding of bispecific antibody and control antibody to EGFR-His. The results showed that all the bispecific antibodies could normally bind to EGFR-His protein. The specific results are shown in Table 3.

[0528] Table 3: Binding activity of bispecific antibody to EGFR protein

[0529] Evaluation of the binding activity of bispecific antibodies to c-MET protein

[0530] Human c-MET-His protein was diluted to 1 μg / mL with Carbonate-Bicarbonate Buffer (CBS) coating solution and the solution was added to the wells of a 96-well microtiter plate at 100 ng / well. The microtiter plate was incubated overnight at 4℃. The next day, the microtiter plate was washed once with PBST (0.05%Tween-20) . Then 100 μL of a blocking solution containing 2%BSA was added to each well of the microtiter plate and the plate incubated at 37℃for 2 hours. The purified bispecific antibody and control antibody were serially diluted with 2%BSA, starting at 10 μg / mL with 3-fold gradient and 11 concentration points. The blocking solution was then removed from the wells and the serially diluted antibody solutions added to the wells of the microtiter plate. The plate was incubated at 37℃ for 2 hours. Afterwards, the plate was washed 3 times with PBST (0.05%Tween-20) , 320 μl per well. After drying the plate, 100 μL HRP conjugated Goat anti-human IgG was added to each well of the microtiter plate, and the plate was incubated at 37 ℃ for 1 hour. Afterwards, the plate was washed 5 times with PBST (0.2%Tween-20) , 320 μL per well; after drying the plate, 100 μl 3, 3', 5, 5'-tetramethylbenzidine (TMB) (Huzhou Yingchuang Biotechnology Co., Ltd. ) chromogenic substrate was added to each well, and allowed to react at room temperature for 3-5 minutes. Afterwards, 50 μL 2 M H2SO4 was added to each well to terminate the reaction, and the plate was read at OD450nm absorbance with a microplate reader. The raw data was imported into GraphPad Prism 6 software for nonlinear curve fitting and calculation of the EC50 of the binding of bispecific antibody and control antibody to c-MET-His. The results showed that all bispecific antibodies could normally bind to c-MET-His protein. The specific results are shown in Table 4.

[0531] Table 4: Binding activity of bispecific antibody to c-MET protein

[0532] EXAMPLE 3

[0533] Evaluation of cell-binding activity of bispecific antibodies

[0534] Flow cytometry (Beckman, model Cytoflex) was used to detect the binding activity of bispecific antibody to human non-small cell lung cancer cell HCC827 (ATCC) with high expression of EGFR and low expression of c-MET, human gastric cancer cell MKN45 (Nanjing Kebai) with high expression of c-MET and low expression of EGFR and human lung adenocarcinoma cell NCI-H1975 (Nanjing Kebai) with low expression of EGFR and c-MET. The protocol is as follows:

[0535] The adherent cells were digested with Trypsin-EDTA (0.25%, Shanghai Yuanpei) solution, and the cell density adjusted to 4.0×106 / mL. The cells were washed twice with 1%BSA and resuspended in 1%BSA solution. Then 50 μL of cell suspension was added to each well of a 96-well sharp-bottomed plate (the number of cells was 2×105 per well) ; The bispecific antibody was diluted with 1%BSA, starting from a final concentration of 10 μg / mL, under 3-fold serial dilution, with a total of 11 concentration points. Then 50 μL of the diluted antibody was added to the wells of the conical bottom plate and the plate was incubated at 4℃ for 60 minutes. The cells were washed twice with 1%BSA and then 50 μL of diluted secondary antibody was added to each well, mixed well, and the plate allowed to incubate at 4℃ for 30 minutes. Afterwards, the cells were washed twice  with 1%BSA and then resuspended in 200 μL 1%BSA for flow cytometry detection.

[0536] Data processing: The Median PE value was exported into GraphPad Prism 6 software for calculating the EC50. The results are shown in Figs. 2-4 and Table 5, wherein, hlgG1 is an irrelevant negative control antibody. The results showed that bispecific antibodies could effectively bind to EGFR and c-MET regardless of their expression levels. In HCC827 cells with high expression of EGFR and MKN45 cells with high expression of c-MET, the maximum signal values of the bispecific antibodies were stronger than that of EGFR and c-MET monoclonal antibodies, that is, tumor cells can bind to more bispecific antibodies than monoclonal antibodies, which may lead to stronger tumor suppressor effects.

[0537] Table 5: Detection of binding ability of bispecific antibody to tumor cells

[0538] EXAMPLE 4

[0539] Detection of internalizing activity of bispecific antibodies

[0540] Flow cytometry (Beckman, model Cytoflex) was used to detect the internalizing activity of bispecific antibodies on human non-small cell lung cancer cell HCC827 with high expression of EGFR and low expression of c-MET, human gastric cancer cell MKN45 with high expression of c-MET and low expression of EGFR, and human lung adenocarcinoma cell NCI-H1975 with low expression of EGFR and c-MET.

[0541] The adherent cells were digested with TrypleTM Express (Thermo) solution and counted. The cell density was adjusted to 4×106 cells / mL with 1%BSA and 50 μL of cell suspension was added to the wells of a 96-well microtiter plate (the number of cells per well was 2×105 cells / well) . The bispecific antibody was diluted with 1%BSA starting from 5 μg / mL, under 4-fold serial dilution, with a total of 8 concentration points. Then 50 μL of diluted bispecific antibody per well was added to the wells of the 96-well microtiter plate and the plate incubated at 4℃ for 40 minutes. Afterwards, the wells were washed twice with 1%BSA and the secondary antibody (anti-human  F (ab') 2 Alexa Fluor 660) diluted 1: 200 with 1%BSA was added at 50 μL per well. The plates were incubated at 4℃ for 20 minutes, then the wells were washed twice with 1%BSA and the cells therein resuspended in 150 μL of complete medium. The resuspended cells were incubated at 4℃and 3℃ for 4 hours after resuspension. Afterwards, the cells were centrifuged at 500g for 3 minutes to remove the medium, and 100 μL of pH 2.0 acid solution was added per well and the wells incubates for 2 minutes. Next, 60 μL of pH 13 base solution was added for neutralization followed by centrifugation to remove the supernatant fraction. Then, the cells were resuspended in 1%BSA for FACS analysis.

[0542] Data processing: Median APC values were exported and imported into GraphPad Prism 6 software to calculate EC50. The results are shown in Table 6. The bispecific antibodies have good internalizing activity on tumor cells and may produce a stronger tumor inhibitory effect.

[0543] Table 6: Bispecific antibody internalizing activity assay

[0544] EXAMPLE 5

[0545] Cross-arm binding activity of bispecific antibodies to EGFR and c-MET

[0546] Human EGFR-His protein was diluted to 1 μg / mL with Carbonate-Bicarbonate Buffer (CBS) coating solution and added to the wells of a 96-well ELISA microtiter plate at 100 ng / well. The plate was incubated overnight at 4℃. The next day, the 96-well ELISA microtiter plate was washed once with PBST (0.05%Tween-20) and 100 μL of 2%BSA blocking solution was then added to each well of the ELISA microtiter plate and the plate incubated at 37℃ for 2 hours. The purified bispecific antibody was serially diluted with 2%BSA, starting at 10 μg / mL, 3-fold gradient, 11 concentration points. The blocking solution was removed from the wells and the serially diluted antibody solutions added to the wells of the ELISA microtiter plate. The plate was incubated at 37℃for 2 hours. Afterwards, the plates were washed 3 times with PBST (0.05%Tween-20) at 320 μL per well. The plates were dried and then 100 μL of 1 μg / mL human c-MET-His-biotin protein  (Sichuan Kelun-Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd. ) was added to each well of the ELISA microtiter plate and the plate was incubated at 37℃ for 2 hours. Afterwards, the wells of the plate were washed 3 times with 320 μL per well of PBST (0.05%Tween-20) . After drying the plate, 100 μL peroxidase-conjugated streptavidin secondary antibody was added to each well of the ELISA microtiter plate and the plate incubated at 37℃ for 1 hour. Afterwards, the wells were washed 5 times with 320 μL per well of PBST (0.05%Tween-20) . The wells were pat dried and 100 μL 3, 3', 5, 5'-tetramethylbenzidine (TMB) (Huzhou Yingchuang Biotechnology Co., Ltd. ) chromogenic substrate was added to each well. After 10 minutes at room temperature, 50 μL of 2 M H2SO4 was added to the wells to terminate the reaction and the plate was read at OD450 nm absorbance with a microplate reader.

[0547] The raw data were imported into GraphPad Prism 6 software for nonlinear curve fitting, and the EC50 of bispecific antibodies cross-arm binding to c-MET and EGFR was calculated. The experimental results are shown in Table 7. The designed bispecific antibody molecules can bind to c-MET and EGFR simultaneously, showing that after the bispecific antibodies binds to one protein, the binding of the bispecific antibodies to the second protein is not affected, and that the bispecific antibodies can efficiently bind to two proteins simultaneously. That is to say, the bispecific antibodies can inhibit the signaling pathways of tumor cell growth mediated by c-MET and EGFR at the same time.

[0548] Table 7: Cross-arm binding activity of bispecific antibodies to EGFR and c-MET

[0549] EXAMPLE 6

[0550] Bispecific antibody blocks the binding of EGF to EGFR

[0551] Human EGF-His protein was diluted to 2 μg / mL with Carbonate-Bicarbonate Buffer (CBS) coating solution and added to the wells of a 96-well ELISA microtiter plate at 200  ng / well. The plate was incubated overnight at 4℃. The next day, the 96-well ELISA microtiter plate was washed once with PBST (0.05%Tween-20) and 100 μL of 2%BSA blocking solution was then added to each well of the ELISA microtiter plate and the plate incubated at 37℃ for 2 hours. The purified bispecific antibodies were serially diluted with 2%BSA, starting at 500 μg / mL, 3-fold gradient, 11 concentration points or starting from 100 μg / mL, 3-fold gradient, 11 concentration points. EGFR-hFc-biotin (Kactus Biosystems) was diluted to 600 ng / mL with 2%BSA (the final concentration of EGFR-hFc-biotin was 300 ng / mL) . The blocking solution was removed from the wells and 50 μL aliquots of the serially diluted bispecific antibody solutions and EGFR-hFc-biotin solution were added to the wells of the ELISA microtiter plate. The plate was incubated at 37℃ for 2 hours. Afterwards, the plates were washed 3 times with PBST (0.05%Tween-20) at 320 μL per well. The plates were dried and then 100 μL of peroxidase-conjugated anti-streptavidin antibody was added to each well of the ELISA microtiter plate and the plate incubated at 37℃ for 1 hour. Afterwards, the wells of the plate were washed 5 times with 320 μL per well of PBST (0.05%Tween-20) . After drying the plate, 100 μL 3, 3', 5, 5'-tetramethylbenzidine (TMB) (Huzhou Yingchuang Biotechnology Co., Ltd. ) chromogenic substrate was added to each well. After 20 minutes at room temperature, 50 μL of 2 M H2SO4 was added to the wells to terminate the reaction and the plate was read at OD450 nm absorbance with a microplate reader.

[0552] The raw data were imported into GraphPad Prism 6 software for nonlinear curve fitting, and the IC50 of bispecific antibodies blocking the binding of EGF to EGFR was calculated. The experimental results are shown in Table 8, indicating that the bispecific antibody molecules can block the binding of EGF to EGFR.

[0553] Table 8: Bispecific antibody molecules block the binding of EGF to EGFR

[0554] EXAMPLE 7

[0555] The bispecific antibody blocks the binding of HGF to c-MET

[0556] Human c-MET-hFc protein (Kactus Biosystems) was diluted with Carbonate-Bicarbonate Buffer (CBS) coating solution to 1 μg / mL and 100 ng / well was added to a 96-well microtiter plate, and placed overnight at 4 ℃. The next day, the 96-well ELISA microtiter plate was washed once with PBST (0.05%Tween-20) and 100 μL of 2%BSA blocking solution was then added to each well of the ELISA microtiter plate and the plate incubated at 37℃ for 2 hours. The purified bispecific antibodies were serially diluted with 2%BSA, starting at 500 μg / mL, 3-fold gradient, 11 concentration points. HGF-his solution was diluted to 600 ng / mL with 2%BSA (the final concentration of HGF-his was 300 ng / mL) . The blocking solution was removed from the wells and 50 μL aliquots of the serially diluted antibody solutions and EGFR-hFc-biotin solution were added to the wells of the ELISA microtiter plate. The plate was incubated at 37℃ for 2 hours. Afterwards, the plates were washed 3 times with PBST (0.05%Tween-20) at 320 μL per well. The plates were dried and then 100 μL of HRP-conjugated anti-his antibody was added to each well of the ELISA microtiter plate and the plate was incubated at 37℃ for 1 hour. Afterwards, the wells of the plate were washed 5 times with 320 μL per well of PBST (0.05%Tween-20) . After drying the plate, 100 μL 3, 3', 5, 5'-tetramethylbenzidine (TMB) (Huzhou Yingchuang Biotechnology Co., Ltd. ) chromogenic substrate was added to each well. After 10 minutes at room temperature, 50 μL of 2 M H2SO4 was added to the wells to terminate the reaction and the plate was read at OD450 nm absorbance with a microplate reader.

[0557] The raw data were imported into GraphPad Prism 6 software for nonlinear curve fitting, and the IC50 of the bispecific antibody blocking the binding of HGF to c-MET was calculated. The experimental results are shown in Table 9. The bispecific antibody molecules can block the binding of HGF to c-MET.

[0558] Table 9: Bispecific antibody molecules block the binding of HGF to c-MET

[0559] EXAMPLE 8

[0560] Proliferation inhibitory activity of bispecific antibody on human tumor cells

[0561] Adherent human lung cancer cells NCI-H292 cells (Nanjing Kebai) and human bronchoalveolar carcinoma cells NCI-H322M cells (Nanjing Kebai) were digested with Trypsin-EDTA (0.25%, Shanghai Yuanpei) solution and counted. The cell density was adjusted to 5×103 and 1×104 cells / mL, respectively. 100 μL of cell suspension was added to a 96-well microtiter plate (final density 500 cells / well for NCI-H292 cells, 1000 cells / well for NCI-H322M cells) and the 96-well microtiter plate was incubated at 37℃ in a CO2 incubator for 24 hours. Afterwards, the bispecific antibody to be tested and the control antibodies (Onartuzumab and Telisotuzumab) were diluted with complete medium, starting at a final concentration of 500 μg / mL, 3-fold gradient, with a total of 11 concentration points. 100 μl of the diluted bispecific and control antibody was added to the 96-well microtiter plate an incubated at 37℃, 5%CO2 for 8 days. Afterwards, 20 μL of Cell Counting-Lite reagent (Nanjing Novizan Biotechnology Co., Ltd. ) was added to each well of the 96-well microtiter plate and the plate shaken at 600 rpm for 5 minutes at room temperature. A microplate reader was used to detect the luminescence signal value.

[0562] The raw data was imported into GraphPad Prism 6 software for calculating the IC50. The results of bispecific antibody proliferation inhibitory activity on NCI-H292 are shown in Table 10. The tested bispecific antibodies all had proliferation inhibitory activity on NCI-H292, with IC50 values significantly better than that of onartuzumab and Telisotuzumab.

[0563] Table 10 Inhibitory activity of bispecific antibody molecules on NCI-H292 cell proliferation

[0564] The results of bispecific antibody proliferation inhibitory activity on NCI-H322M are shown in Table 11. All the bispecific antibodies tested had proliferation inhibitory activity on NCI-H322M.

[0565] Table 11: The proliferation inhibitory activity of bispecific antibody molecules on NCI-

[0566] H322M cells

[0567] The invention is not to be limited in scope by the specific embodiments described herein. Indeed, various modifications of the invention in addition to those described will become apparent to those skilled in the art from the foregoing description and accompanying figures. Such modifications are intended to fall within the scope of the appended claims.

[0568] All references (e.g., publications or patents or patent applications) cited herein are incorporated herein by reference in their entireties and for all purposes to the same extent as if each individual reference (e.g., publication or patent or patent application) was specifically and individually indicated to be incorporated by reference in its entirety for all purposes. Other embodiments are within the following claims

Claims

1.A bispecific antibody, comprising a first antigen-binding domain specifically binding to c-MET and a second antigen-binding domain specifically binding to EGFR;wherein, the first antigen-binding domain comprises a first light chain variable region (VL) and a first heavy chain variable region (VH) , and the first VL and the first VH collectively form a domain capable of specifically binding to c-MET; and the second antigen-binding domain comprises a second VL and a second VH, and the second VL and the second VH together form a domain capable of specifically binding to EGFR.2.The bispecific antibody of claim 1, wherein the first antigen-binding domain and the second antigen-binding domain are each independently scFv or Fab.3.The bispecific antibody according to claim 1 or 2, further comprising an Fc domain, wherein the Fc domain comprises a first Fc domain monomer and a second Fc domain monomer, and the first and second Fc domain monomers each independently comprise one or more modifications that promote heterodimerization of the Fc domain monomers.4.The bispecific antibody according to claim 3, wherein the Fc domain comprises a first Fc domain monomer comprising modifications that form a knob structure and a second Fc domain monomer comprising modifications that form a hole structure, wherein the hole structure can be paired with the knob structure to form a heterodimeric Fc domain.5.The bispecific antibody according to claim 4, wherein the first Fc domain monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 101, and the second Fc domain monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 102; or wherein the first Fc domain monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 103, and the second Fc domain monomer comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 104.6.The bispecific antibody of any one of claims 1-5, wherein the first antigen-binding domain and the second antigen-binding domain are each linked to one of the first and second Fc domain monomers;preferably, the first antigen-binding domain is linked to the first Fc domain monomer, and the second antigen-binding domain is linked to the second Fc domain monomer; or the first antigen-binding domain is linked to the second Fc domain monomer, and the second antigen-binding domain is linked to the first Fc domain monomer.7.The bispecific antibody of any one of claims 1-6, wherein the first VL comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18; and / or the first VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19.8.The bispecific antibody of any one of claims 1-7, wherein:the first VL comprises:(i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 41, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 43, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 45; or(ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 42, LCDR2 comprising the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 44, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 45; and / orthe first VH comprises:(i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 46, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 50, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 54;(ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 47, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 51, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 54;(iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 49, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 53, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 54; or(iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 48, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 52, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 55.9.The bispecific antibody according to any one of claims 1-8, wherein the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18, and / or the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19.10.The bispecific antibody of any one of claims 1-6, wherein the first VL comprises the  LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24; and / or the first VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25.11.The bispecific antibody of any one of claims 1-6 or 10, wherein:the first VL comprises:(i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 86, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 88, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 90; or(ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 87, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 89, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 90; and / orthe first VH comprises:(i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 91, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 95, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 99;(ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 92, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 96, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 99;(iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 94, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 98, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 99; or(iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 93, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 97, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 100.12.The bispecific antibody of any one of claims 1-6, 10 or 11, wherein the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24, and / or the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25.13.The bispecific antibody of any one of claims 1-12, wherein the second VL comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16; and / or the second VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17.14.The bispecific antibody of any one of claims 1-13, wherein:the second VL comprises:(i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 26, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 28, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30; or(ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 27, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 29, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30; and / orthe second VH comprises:(i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 31, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 35, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 39;(ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 32, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 36, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 39;(iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 34, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 38, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 39; or(iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 33, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 37, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 40.15.The bispecific antibody of any one of claims 1-14, wherein the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, and / or the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17.16.The bispecific antibody of any one of claims 1-12, wherein the second VL comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20; and / or the second VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21.17.The bispecific antibody of any one of claims 1-12 or 16, wherein:the second VL comprises:(i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 56, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 58, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 60; or(ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 57, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 59, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 60; and / orthe second VH comprises:(i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 61, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 65, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 69;(ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 62, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 66, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 69;(iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 64, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 68, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 69; or(iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 63, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 67, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 70.18.The bispecific antibody of any one of claims 1-12, 16, or 17, wherein the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, and / or the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21.19.The bispecific antibody of any one of claims 1-12, wherein the second VL comprises the LCDR1, LCDR2, and LCDR3 amino acid sequences of a VL amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22; and / or the second VH comprises the HCDR1, HCDR2, and HCDR3 amino acid sequences of a VH amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23.20.The bispecific antibody of any one of claims 1-12 or 19, wherein:the second VL comprises:(i) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 71, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 73, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 75; or(ii) LCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 72, LCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 74, and LCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 75; and / orthe second VH comprises:(i) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 76, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 80, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 84;(ii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 77, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 81, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 84;(iii) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 79, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 83, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 84; or(iv) HCDR1 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 78, HCDR2 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 82, and HCDR3 comprising the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 85.21.The bispecific antibody of any one of claims 1-12, 19, or 20, wherein the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, and / or the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23.22.The bispecific antibody of any one of claims 1-21, wherein:(1) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17;(2) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21;(3) the first VL comprises the sequence shown in SEQ ID NO: 18, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 19, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23;(4) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 17;(5) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21;or(6) the first VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 24, the first VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 25, the second VL comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 22, and the second VH comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 23.23.The bispecific antibody according to any one of claims 1-22, wherein the first antigen-binding domain is a Fab, and the second antigen-binding domain is an scFv.24.The bispecific antibody according to claim 23, wherein the bispecific antibody comprises a peptide chain I-A, a peptide chain I-B and a peptide chain I-C; wherein, the peptide chain I-A comprises the first VL and a light chain constant region; the peptide chain I-B comprises: the first VH, a heavy chain CH1 region and the first Fc domain monomer (or the second Fc domain monomer) ; the peptide chain I-C comprises: the second VL, the second VH and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) .25.The bispecific antibody according to claim 24, wherein the peptide chain I-A comprises from N-terminus to C-terminus the first VL and the light chain constant region; the peptide chain I-B comprises from N-terminus to C-terminus: the first VH, the heavy chain CH1 region and the first Fc domain monomer (or the second Fc domain monomer) ; and / or the peptide chain I-C comprises from N-terminus to C-terminus: (i) the second VL, the second VH and the second Fc domain monomer (or said first Fc domain monomer) ; or (ii) the second VH, the second VL and the second Fc domain monomer (or said first Fc domain monomer) .26.The bispecific antibody according to claim 24 or 25, wherein the adjacent domains of the peptide chain I-A are connected optionally with or without a linker; the adjacent domains of the  peptide chain I-B are connected optionally with or without a linker; and / or the adjacent domains of the peptide chain I-C are connected optionally with or without a linker.27.The bispecific antibody according to claim 26, wherein the linkers are each independently the same or different peptide linkers (e.g., rigid peptide linkers or flexible peptide linkers) ; or the peptide linkers are each independently selected from peptide linkers comprising one or more glycine (G) and / or serine (S) , for example, having the structure shown in (GGGGS) n, wherein, n is selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 (SEQ ID NOs: 107-109, or 114-120) ; or the peptide linkers each independently comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NOs: 107-110, 112, or 114-120.28.The bispecific antibody according to any one of claims 24-27, wherein the light chain constant region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 105 or 113, and / or the heavy chain CH1 region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 106.29.The bispecific antibody according to any one of claims 24-28, wherein:(1) (a) the peptide chain I-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, and the peptide chain I-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2; or (b) the peptide chain I-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, and the peptide chain I-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7;and / or(2) the peptide chain I-C comprises the amino acid sequence shown in any one of SEQ ID NO: 3-5.30.The bispecific antibody according to any one of claims 1-22, wherein the first antigen-binding domain is an scFv, and the second antigen-binding domain is a Fab.31.The bispecific antibody according to claim 30, wherein the bispecific antibody comprises a peptide chain II-A, a peptide chain II-B and a peptide chain II-C; wherein, the peptide chain II-A comprises the second VL and a light chain constant region; the peptide chain II-B comprises: the second VH, a heavy chain CH1 region and the first Fc domain monomer (or the second Fc domain monomer) ; the peptide chain II -C comprises: the first VL, the first VH and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) .32.The bispecific antibody according to claim 31, wherein the peptide chain II-A comprises from N-terminus to C-terminus the second VL and the light chain constant region; the peptide chain II-B comprises from N-terminus to C-terminus: the second VH, the CH1 region of the heavy chain and the first Fc domain monomer (or the second Fc domain monomer) , and / or the peptide chain II-C comprises from N-terminus to C-terminus: (i) the first VL, the first VH and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) , or (ii) the first VH, the first VL and the second Fc domain monomer (or the first Fc domain monomer) .33.The bispecific antibody according to claim 31 or 32, wherein the adjacent domains of the peptide chain II-A are connected optionally with or without a linker; the adjacent domains of the peptide chain II-B are connected optionally with or without a linker; and / or the adjacent domains of the peptide chain II-C are connected optionally with or without a linker.34.The bispecific antibody according to claim 33, wherein the linkers are each independently the same or different peptide linkers (e.g., rigid peptide linkers or flexible peptide linkers) ; or the peptide linkers are each independently selected from peptide linkers comprising one or more glycine (G) and / or serine (S) , for example, having the structure shown in (GGGGS) n, wherein, n is selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 (SEQ ID NOs: 107-109, or 114-120) ; or the peptide linkers each independently comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 107-110, 112, or 114-120.35.The bispecific antibody according to any one of claims 31-34, wherein the light chain constant region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 105 or 113, and / or the heavy chain CH1 region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 106.36.The bispecific antibody according to any one of claims 31-35, wherein:(1) (a) the peptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8, and the peptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9; (b) the peptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11, and the peptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12; or (c) the peptide chain II-A comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13, and the peptide chain II-B comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14;and / or(2) the peptide chain II-C comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NOs: 10 or 15.37.The bispecific antibody of any one of claims 1-36, comprising:(1) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4;(2) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5;(3) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3;(4) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4;(5) peptide chain I-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, peptide chain I-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7, and peptide chain I-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5;(6) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10;(7) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10;(8) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15;(9) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15;or(10) peptide chain II-A comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13, peptide chain II-B comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14, and peptide chain II-C comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15.38.The bispecific antibody according to any one of claims 1-37, which has an enhanced tumor suppressive effect relative to monospecific anti-c-MET antibody and / or monospecific anti-EGFR antibody; wherein, the amino acid sequences of the CDRs of the monospecific anti-c-MET antibody are identical to the amino acid sequences of the CDRs of the first antigen-binding domain, and the amino acid sequences of the CDRs of the monospecific anti-EGFR antibody are identical to the amino acid sequences of the CDRs of the second antigen-binding domain.39.The bispecific antibody according to claim 38, wherein the tumor suppression effect includes: inhibition of EGFR and c-MET signaling pathways, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) activity and / or complement-dependent cytotoxicity (CDC) activity.40.An isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules comprising a nucleotide sequence encoding the bispecific antibody of any one of claims 1-39.41.One or more vectors comprising the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules of claim 40; or the nucleotide sequences encoding the different peptide chains of the bispecific antibody are located in different vector molecules; or the vector is a cloning vector or an expression vector.42.A host cell comprising the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules of claim 40, or the vector of claim 41.43.A method for preparing the bispecific antibody according to any one of claims 1-39, comprising culturing the host cell according to claim 42 under conditions allowing the expression of the bispecific antibody, and recovering the bispecific antibody from the culture of the host cell.44.A conjugate comprising the bispecific antibody of any one of claims 1-39 and a conjugation moiety linked thereto.45.The conjugate of claim 44, wherein the conjugation moiety is selected from a therapeutic agent, such as a cytotoxic agent, cytokine, toxin or radionuclide.46.A pharmaceutical composition comprising the bispecific antibody of any one of claims  1-39, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules of claim 40, or the one or more vectors of claim 41, or the host cell of claim 42, or the conjugate of claim 44 or 45, and a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient.47.The pharmaceutical composition of claim 46, wherein the pharmaceutical composition further comprises an additional pharmaceutically active agent.48.The pharmaceutical composition of claim 47, wherein said additional pharmaceutically active agent is a drug with antitumor activity.49.The pharmaceutical composition of claim 47, wherein said additional pharmaceutically active agent is selected from the group consisting of: EGFR inhibitors, HER2 inhibitors, HER3 inhibitors, HER4 inhibitors, IGFR-1 inhibitors, mTOR inhibitors, PI3 kinase inhibitors, c-met or VEGF inhibitors, chemotherapeutic agents, or any combination thereof.50.The pharmaceutical composition of any one of claims 47-49, wherein said bispecific antibody and said additional pharmaceutically active agent are provided as separate components or as mixed components.51.Use of the bispecific antibody of any one of claims 1-39, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules of claim 40, or the one or more vectors of claim 41, or the host cell of claim 42, or the conjugate of claim 44 or 45, or the pharmaceutical composition of any one of claims 46-50, in the preparation of a medicament, wherein the medicament is used for preventing and / or treating and / or acting as an adjuvant in treating diseases related to c-MET and / or EGFR in a subject, and / or for inhibiting c-MET and / or EGFR activity in vitro or in a subject.52.The use of claim 51, wherein the disease related to c-MET and / or EGFR is cancer.53.The use of claim 52, wherein the cancer is associated with EGFR activating mutations, EGFR gene amplification, elevated levels of circulating HGF, c-Met activating mutations and / or c -Met gene amplification.54.The use of claim 52 or 53, wherein the cancer is epithelial cell carcinoma, breast cancer,  ovarian cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, oral cavity cancer, colorectal cancer, anal cancer, prostate cancer, bladder cancer, pharyngeal cancer, nasal cancer, pancreas cancer, skin cancer, tongue cancer, esophagus cancer, vagina cancer, cervix cancer, spleen cancer, testis cancer, gastric cancer, thymus cancer, thyroid cancer, hepatocellular carcinoma, sporadic or hereditary papillary renal cell carcinoma, colon cancer, liver cancer, kidney cancer or head and neck cancer.55.The use of any one of claims 51-54, wherein the bispecific antibody, isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules, one or more vectors, host cell, conjugate, or pharmaceutical composition is administered in combination with another pharmaceutically active agent, such as administered simultaneously, separately or sequentially.56.The use of claim 55, wherein the additional pharmaceutically active agent is a drug with antitumor activity.57.The use of claim 55, wherein the additional pharmaceutically active agent is selected from the group consisting of: EGFR inhibitors, HER2 inhibitors, HER3 inhibitors, HER4 inhibitors, IGFR-1 inhibitors, mTOR inhibitors, PI3 kinase inhibitors, c-met or VEGF inhibitors, chemotherapeutic agents, or any combination thereof.58.The use of any one of claims 51-57, wherein the subject is resistant to erlotinib, gefitinib, afatinib, CO-1686, AZD9192 or cetuximab treatment.59.A method for inhibiting the activity of c-MET and / or EGFR in a cell, comprising contacting the cell with the bispecific antibody of any one of claims 1-39, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules of claim 40, or the one or more vectors of claim 41, or the host cell of claim 42, or the conjugate of claim 44 or 45, or the pharmaceutical composition of any one of claims 46-50.60.The method of claim 59, wherein the cell expresses c-Met and / or EGFR, such as tumor cells.61.A method for preventing and / or treating and / or acting as an adjuvant in treating diseases associated with c-MET and / or EGFR in a subject, wherein the method comprises administering to  the subject in need thereof an effective amount of the bispecific antibody of any one of claims 1-39, or the isolated nucleic acid molecule or set of nucleic acid molecules of claim 40, or the one or more vectors of claim 41, or the host cell of claim 42, or the conjugate of claim 44 or 45, or the pharmaceutical composition of any one of claims 46-50.62.The method of claim 61, wherein the disease associated with c-MET and / or EGFR is cancer; preferably, the cancer is associated with EGFR activating mutations, EGFR gene amplification, elevated levels of circulating HGF, c-Met activating mutations and / or c -Met gene amplification.63.The method of claim 62, wherein the cancer is epithelial cell carcinoma, breast cancer, ovarian cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, oral cavity cancer, colorectal cancer, anal cancer, prostate cancer, bladder cancer, pharyngeal cancer, nasal cancer, pancreas cancer, skin cancer, tongue cancer, esophagus cancer, vagina cancer, cervix cancer, spleen cancer, testis cancer, gastric cancer, thymus cancer, thyroid cancer, hepatocellular carcinoma, sporadic or hereditary papillary renal cell carcinoma, colon cancer, liver cancer, kidney cancer or head and neck cancer.64.The method of any one of claims 61-63, wherein the method further comprises administering to the subject a second therapy selected from the group consisting of surgery, chemotherapy, radiotherapy, immunotherapy, gene therapy, DNA therapy, RNA therapy, nanotherapy, viral therapy, adjuvant therapy and any combination thereof; optionally, said second therapy may be applied simultaneously, separately or sequentially.65.The method of any one of claims 61-64, wherein the subject is resistant to erlotinib, gefitinib, afatinib, CO-1686, AZD9192 or cetuximab treatment.

Images