Compounds for the treatment of cardiac conditions

Abstract

Disclosed herein are methods of treating conditions characterized by pathological increase in INa,L in subjects in need thereof by administering compounds of the general formula (I), wherein X1, X2, X3, Ra, Rb1, Rb2, Rb3, Rb4, Rc and Rd are as disclosed herein.

Description

COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF CARDIAC CONDITIONS  CROSS‐REFERENCE TO RELATED APPLICATION

[0001] This application claims the benefit of US Provisional Application 63 / 583,036, filed on  September 15, 2023, the contents of which are hereby incorporated in its entirety.  BACKGROUND

[0002] Sudden cardiac death and arrhythmias account for between 230,000 and 350,000  deaths per year in the United States. In fact, arrhythmias account for ~ 50% of deaths in heart  failure patients. The voltage‐gated Na+ channel, Nav1.5, plays a critical role in the regulation of  myocyte excitability and cardiac function. However, a small “late” component of Nav current, INa  (INa,L) increases in response to heightened adrenergic conditions and is linked with fatal forms of  congenital and acquired arrhythmia. Many cardiac conditions are associated with abnormal INa,L  enhancement, which contributes to both electrical and contractile dysfunction.  Regulation of  INa,L is controlled by a host of structural and regulatory proteins that not only target and  stabilize, but also modulate Nav1.5 activity in both physiological and pathological states. The  majority of work has focused on molecular pathways for positive regulation of INa,L. On the other  hand, significantly less is known about pathways for negative regulation to maintain  physiological levels of INa,L. These pathways are critical for the design of new therapies to alter  the pathogenic INa,L in fatal forms of arrhythmia.

[0003] There remains a need for improved compositions and methods for treating arrhythmias.   There remains a need for improved compositions and methods to modulate and control levels  of INa,L. There remains a need for improved compositions and methods to counter heightened  levels of INa,L.    BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

[0004] Fig. 1: Nav1.5 macromolecular signaling complex. CaMKIIδ and PP2A‐B56α regulate INa,L at  the intercalated disc.

[0005] Fig. 2: OSU‐2S specifically targets PP2A by disrupting the protein phosphatase 2A inhibitor  (I2PP2A / SET), which associates with PP2A‐B56α.

[0006] Fig. 3. Co‐immunoprecipitation (Co‐IP) experiments were performed from mouse heart  lysates using beads conjugated to Nav1.5‐Ig or control‐Ig. Bound protein was eluted and  immunoblotted with (A) ankyrin‐G, (B) CaMKIIδ, (C) PP2A‐C, (D) PP2A‐B56α or (E) PP2A‐A. (F)  Co‐IP experiments were performed from mouse heart lysates using beads conjugated to PP2A‐ C‐Ig or control‐Ig. Bound protein was immunoblotted with ankyrin‐G. Data are representative of  experiments repeated three times.

[0007] Fig. 4. Mouse design. (A) Illustration of the targeted exon in the mouse genome. (B)  Agarose gel illustrating the presence of both loxP sites in the homozygous mouse. (C‐E) B56α  expression is lost in the hearts of cKO compared to other tissues at baseline (n=3 / genotype). No  changes in B56α in brain at baseline and post isoproterenol (Iso) (n=4 for floxed controls and  n=5 for cKO mice).

[0008] Fig. 5. Intercalated disc Nav1.5‐B56α complex. (A) Nav1.5 (green) and (B) PP2A‐B56α  (green) at the myocyte intercalated disc (co‐labelled with α‐actinin, red). (C) N‐cadherin (green)  merged with B56α (red) at the myocyte intercalated disc. Scale bars represent 10 microns.

[0009] Fig. 6. Total B56α‐KO hearts display no changes in the localization of the PP2A complex  at the myocyte intercalated disc. (A‐B) Co‐expression of ankyrin‐G, CaMKIIδ and PP2A‐C at the  intercalated disc of WT and B56α‐KO cryoslices. Scale bars represent 10 microns. n=3 / genotype.

[0010] Fig. 7. PP2A and PP1 activities in floxed and B56α‐cKO mice at baseline. (A) Increase in  PP2A activity in hearts of B56α‐cKO mice with (B) no differences in brain in both groups (n=4‐ 6 / group for hearts and n=4‐5 / group for brain samples). (C) No significant differences in PP1  activity in hearts between both groups of mice (n=4 / group).

[0011] Fig. 8. Total B56α‐KO myocytes are resistant to isoproterenol‐induced increases in INa,L.  (A‐B) Representative voltage‐gated Na+ current (INa) traces from WT and B56α‐KO ventricular  myocytes ± Iso (100nM). (C‐D) Summary data for peak INa (at ‐30 mV), and INa,L in response to Iso  (*p<0.05). (E) Cell capacitance was not different between groups (p=N.S., WT, WT Iso N=5, 4;  n=10, 9 and B56α‐KO, B56α‐KO Iso N=4, 4; n= 9, 7).

[0012] Fig. 9. (A‐B) No significant changes in INa current‐voltage relationship between vehicle  (or OSU‐2S) at baseline and after Iso. (C‐D) No significant changes are noted in INa current‐ voltage relationship between vehicle and OSU‐2S at baseline and after Iso. Data were collected  from (N=8; n=15 for DMSO and N=5; n=10 for OSU‐2S).

[0013] Fig. 10. (A‐B) Representative voltage‐gated Na+ current (INa) traces from WT treated with  DMSO or OSU‐2S ± Iso (2 µM) at ‐30mV. (C‐D) INa,L recordings display an increase in INa,L in DMSO   treated cells after Iso at various voltages (‐35, ‐30, ‐25, ‐20, ‐15 and ‐10 mV) compared to a  resistance to INa,L enhancement in OSU‐2S. (E) OSU‐2S treated myocytes demonstrate a  significant resistance to INa,L enhancement after Iso compared to DMSO (N=8; n=14 for DMSO  group and N=5; n=10 for OSU‐2S). *p<0.05 and #p<0.01.

[0014] Fig. 11. Immunoblotting data show (A, D) no changes in total Nav1.5, (B, D) a significant  reduction in Nav1.5pSer571 and (C, D) no changes in CaMKIIδ in B56α‐cKO hearts post Iso (n=4‐ 5 / genotype).

[0015] Fig. 12. (A) Increase in PP2A activity in OSU‐2S treated myocytes 3 hrs. post treatment  (n=4) (n.s. not significant). (B) No significant changes in PP1 activity between DMSO and OSU‐2S  treated cells (n=4). (C‐D) Reduction in Nav1.5pSer571 in OSU‐2S vs. DMSO at 2 and 1µM Iso. No  changes are noted in Nav1.5 expression. OSU‐2S concentration is 2 µM and treatment is for 3  hours (cells collected for 2 µM are from one mouse and cells collected for 1 µM are from a  different mouse and therefore GAPDH levels are different between the two preparations) (n=7  for 2 µM Iso and n=5 for 1 µM Iso). (E‐F) No significant changes in Cav1.2pSer1927 in OSU‐2S vs.  DMSO at 2 and 1µM Iso (n=3 for 2 µM Iso and n=4 for 1 µM Iso).

[0016] Fig. 13. B56α‐cKO mice do not display changes in normalized (A) Cav1.2, (B)  Cav1.2pSer1927, (C) PLBpThr17, (D) RyR2, (E) RyR2pSer2808 and (F) RyRpSer2814 compared to  floxed hearts in response to Iso. (G) Statistical analysis, n=4‐5 /  genotype.

[0017] Fig. 14. Myofilament proteins are phosphorylated to a similar level in floxed and B56α‐ cKO hearts as denoted by Pro‐Q stain that detects phospho‐protein levels normalized to total  protein, post Iso, n=4‐5 /  genotype.

[0018] Fig. 15. Expression of PP2A subunits in floxed and cKO mice showing no differences in  (A) PP2A‐A, (B) PP2A‐C, (C) PP2A‐B56ε, (D) PP2A‐B56δ, (E‐G), and a significant upregulation in  PP2A‐B56γ and PP2A‐B56β in cKO mice following Iso injection. (H‐I) No differences in PP1‐C  (catalytic) expression in floxed and cKO mice. (n=4 ‐5 / group).

[0019] Fig. 16. Echocardiographic findings at baseline and post transverse aortic constriction  (TAC). (A) Floxed and B56α‐cKO mice reveal no differences in baseline EF (n=7, floxed and n=6,  B56α‐cKO). (B) Floxed mice show a trending reduction in EF at 2‐wks and a significant reduction  at 4‐ and 6‐wks post TAC vs. cKO (n=4, floxed and n=3, B56α‐cKO). (C‐F) Representative images  from floxed and cKO mice at baseline and 6 wks post TAC.

[0020] Fig. 17. A. Failing mouse hearts (post TAC) display higher I2PP2A / SET compared to  control hearts, n=4 / group. B. Failing heart tissues display a higher expression of AT1 receptor,  n=3‐4 for non‐failing control and failing mouse tissues (post TAC).    DETAILED DESCRIPTION

[0021] Before the present methods and systems are disclosed and described, it is to be  understood that the methods and systems are not limited to specific synthetic methods, specific  components, or to particular compositions.  It is also to be understood that the terminology  used herein is for the purpose of describing particular embodiments only and is not intended to  be limiting.

[0022] As used in the specification and the appended claims, the singular forms “a,” “an” and  “the” include plural referents unless the context clearly dictates otherwise.  Ranges may be  expressed herein as from “about” one particular value, and / or to “about” another particular  value.  When such a range is expressed, another embodiment includes¬ from the one particular  value and / or to the other particular value.  Similarly, when values are expressed as  approximations, by use of the antecedent “about,” it will be understood that the particular  value forms another embodiment.  It will be further understood that the endpoints of each of  the ranges are significant both in relation to the other endpoint, and independently of the other  endpoint.

[0023] “Optional” or “optionally” means that the subsequently described event or  circumstance may or may not occur, and that the description includes instances where said  event or circumstance occurs and instances where it does not.

[0024] Throughout the description and claims of this specification, the word “comprise” and  variations of the word, such as “comprising” and “comprises,” means “including but not limited  to,” and is not intended to exclude, for example, other additives, components, integers or steps.  “Exemplary” means “an example of” and is not intended to convey an indication of a preferred  or ideal embodiment.  “Such as” is not used in a restrictive sense, but for explanatory purposes.

[0025] Disclosed are components that can be used to perform the disclosed methods and  systems. These and other components are disclosed herein, and it is understood that when  combinations, subsets, interactions, groups, etc. of these components are disclosed that while  specific reference of each various individual and collective combinations and permutation of  these may not be explicitly disclosed, each is specifically contemplated and described herein, for   all methods and systems.  This applies to all aspects of this application including, but not limited  to, steps in disclosed methods. Thus, if there are a variety of additional steps that can be  performed it is understood that each of these additional steps can be performed with any  specific embodiment or combination of embodiments of the disclosed methods.

[0026] Compounds disclosed herein may be provided in the form of acceptable salts, for  example pharmaceutically acceptable salts. Examples of such salts are acid addition salts formed  with inorganic acids, for example, hydrochloric, hydrobromic, sulfuric, phosphoric, and nitric  acids and the like; salts formed with organic acids such as acetic, oxalic, tartaric, succinic, maleic,  fumaric, gluconic, citric, malic, methanesulfonic, p‐toluenesulfonic, napthalenesulfonic, and  polygalacturonic acids, and the like; salts formed from elemental anions such as chloride,  bromide, and iodide; salts formed from metal hydroxides, for example, sodium hydroxide,  potassium hydroxide, calcium hydroxide, lithium hydroxide, and magnesium hydroxide; salts  formed from metal carbonates, for example, sodium carbonate, potassium carbonate, calcium  carbonate, and magnesium carbonate; salts formed from metal bicarbonates, for example,  sodium bicarbonate and potassium bicarbonate; salts formed from metal sulfates, for example,  sodium sulfate and potassium sulfate; and salts formed from metal nitrates, for example,  sodium nitrate and potassium nitrate.

[0027] The term "alkyl" refers to a radical of a straight‐chain or branched hydrocarbon group  having a specified range of carbon atoms (e.g., a "C1‐16 alkyl" can have from 1 to 16 carbon  atoms). An alkyl group can be a saturated alkyl group or an unsaturated alkyl group, i.e., an alkyl  group having one or more carbon‐carbon double / triple bonds, i.e., an alkenyl or alkynyl group.   Unless specified to the contrary, an “alkyl” group includes both saturated alkyl groups and  unsaturated alkyl groups.

[0001] The term "heteroalkyl" refers to an alkyl group, which further includes at least one  heteroatom (e.g., 1, 2, 3, or 4 heteroatoms) selected from oxygen, nitrogen, or sulfur within  (i.e., inserted between adjacent carbon atoms of) and / or placed at one or more terminal  position(s) of the parent chain. By way of example, a heteroC1‐6alkyl (which may also be  designated a C1‐6heteroalkyl) group includes, but is not limited to, the following structures:

[0002] The term “heteroalkyl” preceded by a separate heteroatom refers to a heteroalkyl  group bonded through the specified heteroatom.  By way of example, a OC1‐6heteroalkyl group  includes, but it not limited to, the following structures:

[0003] When a range of values is listed, it is intended to encompass each value and sub‐range  within the range. For example, "C1‐6 alkyl" is intended to encompass C1, C2, C3, C4, C5, C6, C1‐6, C1‐5,  C1‐4, C1‐3, C1‐2, C2‐6, C2‐5, C2‐4, C2‐3, C3‐6, C3‐5, C3‐4, C4‐6, C4‐5, and C5‐6 alkyl.

[0004] Affixing the suffix "‐ene" to a group indicates the group is a polyvalent moiety, e.g.,  boned to two or more groups.  Alkylene is the polyvalent moiety of alkyl, alkenylene is the  divalent moiety of alkenyl, alkynylene is the divalent moiety of alkynyl, heteroalkylene is the  divalent moiety of heteroalkyl, heteroalkenylene is the divalent moiety of heteroalkenyl,  heteroalkynylene is the divalent moiety of heteroalkynyl, carbocyclylene is the divalent moiety  of carbocyclyl, heterocyclylene is the divalent moiety of heterocyclyl, arylene is the divalent  moiety of aryl, and heteroarylene is the divalent moiety of heteroaryl (each of which parent  groups as defined herein).

[0005] The term "alkoxy" refers to an alkyl group, as defined herein, appended to the parent  molecular moiety through an oxygen atom.

[0006] The term "aryl" refers to a radical of a monocyclic or polycyclic (e.g., bicyclic or tricyclic)  4n+2 aromatic ring system (e.g., having 6, 10, or 14 π electrons shared in a cyclic array) having 6‐ 14 ring carbon atoms and zero heteroatoms provided in the aromatic ring system ("C6‐14 aryl").  "Aryl" also includes ring systems wherein the aryl ring, as defined above, is fused with one or  more carbocyclyl or heterocyclyl groups wherein the radical or point of attachment is on the aryl  ring, and in such instances, the number of carbon atoms continue to designate the number of  carbon atoms in the aryl ring system. Unless otherwise specified, each instance of an aryl group  is independently unsubstituted (an "unsubstituted aryl") or substituted (a "substituted aryl")  with one or more substituents.

[0007] "Aralkyl" is a subset of "alkyl" and refers to an alkyl group substituted by an aryl group,  wherein the point of attachment is on the alkyl moiety.

[0008] The term "heteroaryl" refers to a radical of a 5‐14 membered monocyclic or polycyclic  (e.g., bicyclic, tricyclic) 4n+2 aromatic ring system (e.g., having 6, 10, or 14 π electrons shared in  a cyclic array) having ring carbon atoms and 1‐4 ring heteroatoms provided in the aromatic ring  system, wherein each heteroatom is independently selected from nitrogen, oxygen, and sulfur  ("5‐14 membered heteroaryl"). In heteroaryl groups that contain one or more nitrogen atoms,  the point of attachment can be a carbon or nitrogen atom, as valency permits. Heteroaryl  polycyclic ring systems can include one or more heteroatoms in one or both rings. "Heteroaryl"  includes ring systems wherein the heteroaryl ring, as defined above, is fused with one or more  carbocyclyl or heterocyclyl groups wherein the point of attachment is on the heteroaryl ring,  and in such instances, the number of ring members continue to designate the number of ring  members in the heteroaryl ring system. "Heteroaryl" also includes ring systems wherein the  heteroaryl ring, as defined above, is fused with one or more aryl groups wherein the point of  attachment is either on the aryl or heteroaryl ring, and in such instances, the number of ring  members designates the number of ring members in the fused polycyclic (aryl / heteroaryl) ring  system. Polycyclic heteroaryl groups wherein one ring does not contain a heteroatom (e.g.,  indolyl, quinolinyl, carbazolyl, and the like) the point of attachment can be on either ring, i.e.,  either the ring bearing a heteroatom (e.g., 2‐indolyl) or the ring that does not contain a  heteroatom (e.g., 5‐indolyl).

[0009] Exemplary heteroaryl and heterocyclyl rings include: benzimidazolyl, benzofuranyl,  benzothiofuranyl, benzothiophenyl, benzoxazolyl, benzoxazolinyl, benzthiazolyl, benztriazolyl,  benztetrazolyl, benzisoxazolyl, benzisothiazolyl, benzimidazolinyl, carbazolyl, 4aH carbazolyl,  carbolinyl, chromanyl, chromenyL cirrnolinyl, decahydroquinolinyl, 2H,6H~ 1,5,2‐dithiazinyl,  dihydrofuro[2,3 b]tetrahydrofuran, furanyl, furazanyl, imidazolidinyl, imidazolinyl, imidazolyl, lH‐ indazolyl, indolenyl, indolinyl, indolizinyl, indolyl, 3H‐indolyl, isatinoyl, isobenzofuranyl,  isochromanyl, isoindazolyl, isoindolinyl, isoindolyl, isoquinolinyl, isothiazolyl, isoxazolyl,  methylenedioxyphenyl, morpholinyl, naphthyridinyl, octahydroisoquinolinyl, oxadiazolyl, 1,2,3‐ oxadiazolyl, 1,2,4‐oxadiazolyl, 1,2,5‐oxadiazolyl, 1,3,4‐oxadiazolyl, oxazolidinyl, oxazolyl,  oxindolyl, pyrimidinyl, phenanthridinyl, phenanthrolinyl, phenazinyl, phenothiazinyl,  phenoxathinyl, phenoxazinyl, phthalazinyl, piperazinyl, piperidinyl, piperidonyl, 4‐piperidonyl,  piperonyl, pteridinyl, purinyl, pyranyl, pyrazinyl, pyrazolidinyl, pyrazolinyl, pyrazolyl, pyridazinyl,  pyridooxazole, pyridoimidazole, pyridothiazole, pyridinyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyrrolidinyl,  pyrrolinyl, 2H‐pyrrolyl, pyrrolyl, quinazolinyl, quinolinyl, 4H‐quinolizinyl, quinoxalinyl, quinuclidinyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydroisoquinolinyl, tetrahydroquinolinyl, tetrazolyl, 6H‐ 1,2,5‐thiadiazinyl, 1,2,3‐thiadiazolyl, 1,2,4‐thiadiazolyl, 1,2,5‐thiadiazolyl, 1,3,4‐thiadiazolyl,  thianthrenyl, thiazolyl, thienyl, thienothiazolyl, thienooxazolyl, thienoimidazolyl, thiophenyl, and  xanthenyl.

[0010] Unless specified to the contrary, the alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl,  heteroalkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl groups defined herein (and the  “ene” versions of said groups) may be substituted or unsubstituted.  A substituted group  includes a non‐hydrogen substituent at a position where in the unsubstituted version a  hydrogen atom would be found.   Substituents include, but are not limited to, halogen,  hydroxy, alkyl, alkoxy, nitro, cyano, oxo, carbocyclyl, carbocycloalkyl, heterocarbocyclyl,  heterocarbocycloalkyl, aryl, arylalkyl, heteroaryl, heteroarylalkyl, ‐NRaRb, ‐NRaC(=O)Rb, ‐ NRaC(=O)NRaNRb, ‐NRaC(=O)ORb, ‐ NRaSO2Rb, ‐C(=O)Ra, ‐C(=O)ORa, ‐C(=O)NRaRb, ‐ OC(=O)NRaRb, ‐ORa, ‐SRa, ‐SORa, ‐ S(=O)2Ra, ‐OS(=O)2Ra and ‐S(=O)2ORa. Ra and Rb in this  context can be the same or different and independently hydrogen, halogen, hydroxyl,  alkyl, alkoxy, alkyl, amino, alkylamino, dialkylamino, carbocyclyl, carbocycloalkyl,  heterocarbocyclyl, heterocarbocycloalkyl, aryl, arylalkyl, heteroaryl, or heteroarylalkyl.

[0011] As used herein, the designation of a polyvalent moiety without specifying the specific  order of attachment is intended to cover all possible arrangements.  By way of example, a  compound represented by the formula:  A‐X‐B,  wherein X is NHC(=O) embraces both:   and  .

[0012] As used herein, a chemical bond depicted:  represents either a single, double, or triple  bond, valency permitting.  By way of example,

[0013] Some compounds disclosed herein may exist as one or more tautomers.  Tautomers are  interconvertible structural isomers that differ in the position of one or more protons or other  labile atom.  By way of example: .

[0014] Unless stated to the contrary, a substituent drawn without explicitly specifying the point  of attachment indicates that the substituent may be attached at any possible atom.  For  example, in a benzofuran depicted: ,  the substituent may be present at any one of the six possible carbon atoms.

[0015] As used herein, the term “null,” when referring to a possible identity of a chemical  moiety, indicates that the group is absent, and the two adjacent groups are directly bonded to  one another.  By way of example, for a genus of compounds having the formula CH3‐X‐CH3, if X is  null, then the resulting compound has the formula CH3‐CH3.  A group having the subscript ‘0’ is  understood to represent a null group as well.  By way of example, in the compound CH3‐(X)z‐CH3,  if X is CH2 and z is 0, then the compound has the formula CH3‐CH3.

[0016] A bracketed functional group with a subscripted variable should be understood to  denote the number of repeated bracketed groups present.  For example, a number that is  selected from 0 or 1 should be interpreted as follows:

[0017] In certain instances, two or more variable groups may together form a ring.  It is  understood that any depicted atoms separated the identified groups will themselves form part  of the ring:     When the variable groups are substituted on an aromatic system the new ring will be a fused  ring, and unless specified to the contrary may be either aromatic or non‐aromatic, carbocyclic or  heterocyclic:   The ring may further be defined by the number of carbon atoms in the specific ring formed by  the variable groups, which includes the atoms separating the variable groups:   Each of the above results when R1 and R2 together form a six membered (or six atom) ring.   Other rings, including 3, 4, 5, 7, and 8‐member rings may also be formed, and may be further  limited by a specified number of carbon atoms.  Although the singular “a ring” may be used to  define the group, unless specified to the contrary both monocyclic and polycyclic rings are  possible:

[0018] Unless stated to the contrary, a formula with chemical bonds shown only as solid lines  and not as wedges or dashed lines contemplates each possible isomer, e.g., each enantiomer,  diastereomer, and meso compound, and a mixture of isomers, such as a racemic or scalemic  mixture.  Unless stated to the contrary, a formula depicting one or more stereochemical  features does not exclude the presence of other isomers.

[0019] Some compounds disclosed herein may exist as one or more tautomers.  Tautomers are  interconvertible structural isomers that differ in the position of one or more protons or other  labile atom.  By way of example:   .

[0020] The prevalence of one tautomeric form over another will depend on the specific  chemical compound as well as its local chemical environment.  Unless specified to the contrary,  the depiction of one tautomeric form is inclusive of all possible tautomeric forms.

[0021] Disclosed herein are methods of treating of treating a condition characterized by  pathological increase in INa,L in a subject in need thereof by administering to a subject in need  thereof a compound having the formula: ,  or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein  X1 has the formula (CH2)x, wherein x is from 1‐6;  X2 has the formula (CH2)y, wherein y is from 1‐6;  Ra is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  Rb1 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  Rb2 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  or Rb1 and Rb2, together with the carbon atoms to which they are attached form a five or six  membered ring;   Rb3 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  Rb4 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  or Rb3 and Rb4, together with the carbon atoms to which they are attached form a five or six  membered ring;   X3 is null or (CH2)z, wherein z is from 1‐3;  Rc is C1‐6alkyl, C3‐8cycloalkyl, aryl, or heteroaryl; and  Rd is H or C(=O)C1‐4alkyl.

[0022] As used herein, a pathological increase refers to an increase in INa,L outside the bounds of  a normally functioning cardiac system.  An increase in INa,L can be associated with one or more of  the disease states described herein.

[0023] In some implementations, the compound is provided as a pharmaceutically acceptable  salt.  In some implementations, the compound is provided as the free base.

[0024] In some implementations X1 is CH2CH2CH2.

[0025] In some implementations X2 is CH2.

[0026] In some implementations Ra is H or CH3, preferably H.

[0027] In some implementations Rb1 is H.

[0028] In some implementations Rb2 is H.

[0029] In some implementations Rb3 is H.

[0030] In some implementations Rb4 is H.

[0031] In some implementations Rb1, Rb2, Rb3, and Rb4 are each H. In other implementations Rb1,  Rb2, and Rb3 are each H, and Rb4 is OH or OCH3. In further implementations Rb1, Rb2, and Rb4 are  each H, and Rb3 is OH or OCH3.

[0032] In some implementations X3 is null or CH2.

[0033] In some implementations Rc is n‐propyl, isopropyl, cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl.   In further implementations Rc is n‐propyl.

[0034] In some implementations Rd is H. In other implementations, Rd forms a prodrug moiety,  i.e., a group that is cleaved in vivo to generate the parent alcohol functional group.  In some  implementations Rd is C(=O)C1‐4alkyl and in other implementations Rd is a different prodrug as  known in the art, for example acetals, acetal‐carbonates, phosphonates, and the like.

[0035] In some implementations the compound is a compound of Formula (A):

[0036] In some implementations of the compound of Formula (A) X1 is CH2CH2CH2.

[0037] In some implementations of the compound of Formula (A) X2 is CH2.

[0038] In some implementations of the compound of Formula (A) Ra is H or CH3, preferably H.

[0039] In some implementations of the compound of Formula (A) Rb1 is H.

[0040] In some implementations of the compound of Formula (A) Rb2 is H.

[0041] In some implementations of the compound of Formula (A) Rb3 is H.

[0042] In some implementations of the compound of Formula (A) Rb4 is H.

[0043] In some implementations of the compound of Formula (A) Rb1, Rb2, Rb3, and Rb4 are each  H.  In other implementations of the compound of Formula (A) Rb1, Rb2, and Rb3 are each H, and  Rb4 is OH or OCH3.  In further implementations of the compound of Formula (A) Rb1, Rb2, and Rb4  are each H, and Rb3 is OH or OCH3.

[0044] In some implementations of the compound of Formula (A) X3 is null or CH2, preferably  null.

[0045] In some implementations of the compound of Formula (A) Rc is n‐propyl, isopropyl,  cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl, preferably n‐propyl. In certain implementations, X3 is CH2  and RC is cyclopropyl or cyclobutyl.  In certain implementations, X3 is null and RC is n‐propyl,  isopropyl, or isobutyl.

[0046] In some implementations of the compound of Formula (A) Rd is H.

[0047] In some implementations the compound is a compound of Formula (B):

[0048] In some implementations of the compound of Formula (B) X1 is CH2CH2CH2.

[0049] In some implementations of the compound of Formula (B) X2 is CH2.

[0050] In some implementations of the compound of Formula (B) Ra is H or CH3, preferably H.

[0051] In some implementations the compound is a compound of Formula (C): [Formula (C)].

[0052] In some implementations of the compound of Formula (C) Rb1 is H.

[0053] In some implementations of the compound of Formula (C) Rb2 is H.

[0054] In some implementations of the compound of Formula (C) Rb3 is H.

[0055] In some implementations of the compound of Formula (C) Rb4 is H.

[0056] In some implementations of the compound of Formula (C) Rb1, Rb2, Rb3, and Rb4 are each  H.  In other implementations of the compound of Formula (C) Rb1, Rb2, and Rb3 are each H, and  Rb4 is OH or OCH3.  In further implementations of the compound of Formula (C) Rb1, Rb2, and Rb4  are each H, and Rb3 is OH or OCH3.

[0057] In some implementations of the compound of Formula (C) X3 is null or CH2, preferably  null.

[0058] In some implementations of the compound of Formula (C) Rc is n‐propyl, isopropyl,  cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl, preferably n‐propyl. In certain implementations, X3 is CH2  and RC is cyclopropyl or cyclobutyl.  In certain implementations, X3 is null and RC is n‐propyl,  isopropyl, or isobutyl.

[0059] In some implementations of the compound of Formula (C) Rd is H.

[0060] In some implementations the compound is a compound of Formula (D): [Formula (D)].

[0061] In some implementations of the compound of Formula (D) X3 is null or CH2, preferably  null.

[0062] In some implementations of the compound of Formula (D) Rc is n‐propyl, isopropyl,  cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl, preferably n‐propyl. In certain implementations, X3 is CH2  and RC is cyclopropyl or cyclobutyl. In certain implementations, X3 is null and RC is n‐propyl,  isopropyl, or isobutyl.

[0063] In some implementations of the compound of Formula (D) Rd is H.

[0064] In some implementations the compound is a compound of Formula (E):

[0065] In some implementations of the compound of Formula (E) X1 is CH2CH2CH2.

[0066] In some implementations of the compound of Formula (E) X2 is CH2.

[0067] In some implementations of the compound of Formula (E) Ra is H or CH3, preferably H.

[0068] In some implementations of the compound of Formula (E) X3 is null or CH2, preferably  null.

[0069] In some implementations of the compound of Formula (E) Rc is n‐propyl, isopropyl,  cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl, preferably n‐propyl.  In certain implementations, X3 is CH2  and RC is cyclopropyl or cyclobutyl.  In certain implementations, X3 is null and RC is n‐propyl,  isopropyl, or isobutyl.

[0070] In some implementations of the compound of Formula (E) Rd is H.

[0071] In some implementations the compound is OSU‐2S, having the formula

[0072] In certain implementations the subject is not diagnosed with cancer.

[0073] In some implementations the condition characterized by pathological increase in INa,L comprises congenital pathological increase in INa,L or acquired pathological increase in INa,L.  As  used herein a congenital pathological increase refers to an increase caused by an abnormality  present in the subject since birth.  Such abnormalities may be genetic in nature.  In some  implementations, congenital pathological increase in INa,L is caused by abnormal SCN5A (LQT3),   CAV3 (LQT9), SCN4B (LQT10), or SNTA1 (LQT12), for example due to a mutation in one of these  genes.  As used herein, an acquired pathological increase in INa,L refers to any abnormal increase  not caused by genetic mutation.

[0074] In some implementations condition characterized by pathological increase in INa,L can be  cardiac hypertrophy, hypertrophic cardiomyopathy, myocardial infarction, long QT, or intoxicant  exposure, for example exposure to carbon monoxide.

[0075] In some implementations the condition characterized by pathological increase in INa,L can  be atrial arrhythmia, ventricular arrhythmia, congestive heart failure, diastolic heart failure,  systolic heart failure, acquired long QT, congenital long QT, acute heart failure, Prinzmetal's  angina, stable angina,  unstable angina, exercise induced angina, congestive heart disease,   myocardial infarction (including non‐STE myocardial infarction), ischemia, recurrent ischemia,  reperfusion injury, intermittent claudication, peripheral arterial disease, and acute coronary  syndrome.

[0076] In some implementations, the compound may be administered in combination with one  of more additional therapeutic agents.  In some implementations the compound may be  administered in combination with a beta blocker, calcium channel blocker, potassium channel  blocker, or combination thereof.  Exemplary therapeutic agents that can be administered  include atenolol, bisoprolol, carvedilol, metoprolol, propranolol, timolol, diltiazem, verapamil,  digoxin propafenone, quinidine, amiodarone, sotalol, or a combination thereof.

[0077] The compositions may be administered at a variety of dosage levels and dosing regimes.   In some implementations, the subject receives from 0.1‐1,000 mg / day, from 0.1‐500 mg / day,  from 0.1‐250 mg / day, from 0.1‐100 mg / day, from 0.1‐50 mg / day, from 0.1‐25 mg / day, from 0.1‐ 10 mg / day, from 0.1‐5 mg / day, from 0.1‐2.5 mg / day, from 0.1‐1 mg / day, from 0.5‐1 mg / day,  from 0.5‐2.5 mg / day, from 1‐2.5 mg / day, from 1‐5 mg / day, from 1‐10 mg / day, from 5‐25  mg / day, from 10‐25 mg / day, from 10‐50 mg / day, from 25‐100 mg / day, or from 50‐100 mg / day.   For implementations in which the compound is administered as a pharmaceutically acceptable  salt, the dosage levels described herein are calculated based on the amount of the free base of  the compound.  In some implementations, the daily dose may be administered in a single dose  (once per day dosing).  In some implementations the daily dose may be administered in two,  three, of four doses, administered throughout the day at roughly evenly spaced intervals.  In  some implementations, the compound may be administered less frequently than once daily, for  example administered every other day, every third day, or once a week.

[0078] The compounds disclosed herein may be formulated in a pharmaceutical composition  suitable for administration to a subject.  In some implementations the compound is formulated  for oral administration, for example in a suitable capsule, tablet, pill, or the like.  The tablets,  troches, pills, capsules, and the like may also contain one or more of the following: a binder such  as gum tragacanth, acacia, corn starch or gelatin; an excipient such as dicalcium phosphate; a  disintegrating agent such as corn starch, potato starch, alginic acid, and the like; a lubricant such  as magnesium stearate; a sweetening agent such as sucrose, fructose, lactose, or aspartame;  and a natural or artificial flavoring agent. When the unit dosage form is a capsule, it may further  contain a liquid carrier, such as a vegetable oil or a polyethylene glycol. Various other materials  may be present as coatings or to otherwise modify the physical form of the solid unit dosage   form. For instance, tablets, pills, or capsules may be coated with gelatin, wax, shellac, sugar, and  the like. A syrup or elixir may contain one or more of a sweetening agent, a preservative such as  methyl‐ or propylparaben, an agent to retard crystallization of the sugar, an agent to increase  the solubility of any other ingredient, such as a polyhydric alcohol, for example glycerol or  sorbitol, a dye, and flavoring agent. The material used in preparing any unit dosage form is  substantially nontoxic in the amounts employed. The active agent may be incorporated into  sustained‐release preparations and devices.    EXAMPLES

[0079] The following examples are for the purpose of illustration of the invention only and are  not intended to limit the scope of the present invention in any manner whatsoever.  Generation of in‐vivo cardio‐selective B56α knockout mice (B56‐cKO)

[0080] C57Bl / 6 mice with inserted lox‐P sites into the introns surrounding the second exon  (exon 2) of Ppp2r5a were purchased from Michigan State University. Mice were backcrossed  onto a pure C57Bl / 6 mice background for more than five backcrosses. B56α cKO were generated  by crossing pure C57Bl / 6 mice with α‐MHC Cre mice (purchased from Jackson Immuno Research  Laboratories, PA, USA). Genotype was confirmed by PCR. Selective B56α deficiency in was  confirmed by immunoblot. For all experiments age‐matched male and female mice were used.   Immunoblots and antibodies

[0081] Male and female C57Bl / 6 mice were injected with isoproterenol (2 mg / Kg). Mice were  euthanized after 10 minutes and whole hearts were lysed in phosphor‐safe buffer (Millipore).  Following protein quantification, whole‐heart tissue lysates were analyzed on Mini‐PROTEAN  tetra cell (Bio‐Rad) on a 4–15% precast TGX gel (BioRad) in Tris / glycine / SDS buffer (Bio‐Rad) as  previously described. Briefly, for each lysate, 40 μg of sample was loaded with 20 μl of a 19:1  mixture of Laemmli sample buffer (Bio‐Rad) and β‐mercaptoethanol. Samples were boiled at 95  °C for 5 min before loading. Gels were transferred to a nitrocellulose membrane using the Mini‐ PROTEAN tetra cell (Bio‐Rad) in Tris / glycine buffer with 20% methanol (v / v, Bio‐Rad).  Membranes were blocked for 1 h at room temperature in a 5% casein / BSA solution and  incubated with primary antibodies overnight at 4 °C. Following antibodies were used: PP2A‐A,  PP2A‐C (1:500, Millipore 05‐421, CA, USA), PP2A‐B56α (1:500, Abcam ab72028, MA, USA), PP2A‐ B56δ, PP2A‐B56γ, PP2A‐B56ε, Nav1.5 (1:500, custom made by Covance), Nav1.5 pSer571 (1:500,   custom made by Covance), CaMKIIδ (1:2000, Badrilla A010‐56AP, United Kingdom), and GAPDH  (1:10000, Fitzgerald 10R‐G109A, MA, USA). Secondary antibodies included donkey anti‐mouse  horseradish peroxidase HRP (715‐035‐150) and donkey anti‐rabbit HRP (711‐ 035‐152) (Jackson  Immuno Research Laboratories, PA, USA). Densitometry was performed using Image J software,  and data were normalized to GAPDH in each sample.   Immunofluorescence

[0082] Adult ventricular cardiomyocytes were isolated and processed for immunofluorescence.  For adult ventricular cardiomyocytes, staining experiments were performed in solution. Briefly,  cells were blocked for 1 hour in blocking solution (3% fish gel, 0.1% triton100(10%) and 1%  DMSO). Cells were incubated in primary antibodies at room temperature for 3 hours. For  cryoslices, frozen heart sections from WT and B56α KO mice were blocked in blocking solution  and then incubated overnight at 4 °C. For control experiments, parallel samples were incubated  with only secondary antibodies for 2 hours at room temperature and processed to ensure lack  of non‐specific secondary antibody staining. After secondary antibody incubation for 2 hours,  cells / slices were extensively washed and covered with Vectashield imaging medium (Vector  Laboratories), and coverslips (#1) were applied. For co‐localization experiments, TO‐PRO stain  was used for nuclear counter staining. Images were collected on a confocal microscope (510  Meta; Carl Zeiss, Inc.) with a 63× oil 1.40 NA or 40× oil 1.30 NA lens (pinhole equals 1.0 airy disc;  Carl Zeiss, Inc.) using imaging software (release Version 4.0 SP1; Carl Zeiss, Inc.). Images were  collected using similar confocal protocols at room temperature. Images were imported into  Photoshop CS (Adobe) for cropping and linear contrast adjustment  Protein Phosphatase assay

[0083] PP2A activity was assayed using a PP2A immunoprecipitation phosphatase assay kit (17‐ 313, Millipore). Protein phosphatase activity was determined for both heart and brain lysates  from floxed and B56α‐cKO mice at baseline. The mouse heart samples were resuspended in  phosphate free homogenization buffer (50 mM Tris‐HCl pH 7.35, 0.32 M sucrose, 2.5 mM EGTA,  5 mM EDTA, and 10 mm NaCl, 1mM PMSF, 1mM AEBSF, 10μg / μl of each leupeptin, pepstatin,  aprotinin, antipain, and trypsin) and were homogenized by mechanical agitation with a Dounce  homogenizer followed by centrifugation for 30 min at 14000 × g. 500 μg of supernatant was  incubated with 4μg of Anti‐PP2A‐C and 30 μl of Protein‐A slurry at 4 °C for 2 hr. After incubation,  the supernatant was removed from the beads, and the beads were washed 3 times with 1X TBS  and Ser / Thr Assay Buffer, followed by incubation with 80ul of 750 μM threonine   phosphopeptide for 20 min at 30 °C with constant rocking. Lastly, free phosphates in the  supernatant was measured by Malachite Green Phosphate Detection Solution at 650 nm. All  experiments were performed in triplicates and were repeated three times to ensure linearity of  the reaction.  Isolation of cardiomyocytes  Adult mouse ventricular myocytes were isolated as we previously described. Murine  hearts from male and female wild type C57Bl / 6 mice were obtained after animals were  euthanized by acute CO2 asphyxiation followed by cervical dislocation in accordance with the  Guide for the Care and Use of Laboratory Animals published by the National Institutes of Health  and Institutional Animal Care and Use Committees‐approved protocols.  Electrophysiology   Ventricular myocytes were isolated from Langendorff‐perfused adult mouse hearts. INa  recordings were performed on freshly isolated (<1 h in culture) myocytes at room temperature  (20–22 C) by a conventional whole‐cell patch clamp technique with an Axon 200B patch‐clamp  amplifier controlled by a personal computer using a Digidata 1440A acquisition board and the  pClamp 10.4 software (Axon Instruments). Voltage dependent activation of INa was assessed by  generating conductance voltage relationships (m‐infinity curves) and fitting the data with a  standard Boltzmann function (Origin 2015, Northampton, MA, USA). INa,L was measured by  determining the ratio of late sodium current in reference to peak sodium current. Only cells with  membrane resistance greater than 1 GΩ were used. Appropriate whole cell capacitance and  series resistance compensation (≥60%) was applied. All analyses were done using Clampfit 10.4  software. A concentration of 2uM Isoproterenol was used to elicit INa,L.   Echocardiography  Transthoracic echocardiography using (GE Logiq e) with the L10‐22 (mHz) transducer  was performed on mice anesthetized using 2% isoflurane in 1 L / min oxygen. Anesthesia was  maintained by administration of oxygen and approximately 1.25% isoflurane during the whole  imaging procedure. HR was monitored throughout imaging, and recordings taken at an HR less  than 400bpm were excluded from the analysis. Mice were immobilized on a heated imaging  stage during image acquisition, and a temperature probe was inserted into the rectum of the  mouse to monitor its core temperature of approximately 37 °C. Electrode gel was placed on the  ECG sensors of the heated platform. Parasternal long‐axis images inclusive of two‐dimensional  loops and freeze‐frame, end‐diastolic images were collected to measure end‐diastolic LV cavity   dimension (LVID, d) and posterior wall thickness (LVPW, d). Parasternal short axis images at the  level of papillary muscles using M‐mode were also collected to determine LVPW and LVID, in  both systole (s) and diastole (d), as previously described. Parasternal short axis and M mode  measurements were used to calculate functional parameters including fractional shortening  (FS%) and ejection fraction (EF%).  Statistics

[0086] Data are presented as mean ± SEM. For the comparison of two groups, we performed  unpaired and paired two‐tailed student t‐test when data passed normality test (Shapiro‐Wilk  normality test). When data did not pass Shapiro‐Wilk normality test, we performed Mann‐ Whitney U test (non‐parametric for unpaired comparison) and Wilcoxon signed‐rank test (non‐ parametric test for paired comparison) to compare two groups. For the comparison of greater  than two groups, we applied two‐way analysis of variance (ANOVA) test when data were  normally distributed (passed Shapiro‐Wilk normality test). When data were not normally  distributed, non‐parametric (Kruskal‐Wallis test) was performed for comparing more than two  groups. For our study, a value of p< 0.05 was considered statistically significant.

[0087] Association of PP2A‐B56α with Nav1.5. We performed co‐immunoprecipitation  experiments using mouse heart lysates and we observed the association of ankyrin‐G and  CaMKIIδ with Nav1.5. We also demonstrated the association of PP2A‐C (catalytic subunit), PP2A‐ B56α (regulatory subunit) and the PP2A‐A (scaffolding subunit) with Nav1.5. Ankyrin‐G was also  associated with PP2A‐C (Fig. 3). We also showed the interaction between Nav1.5 and PP2A‐C in  non‐failing human heart lysates. Data are representative of experiments repeated three times.  In summary, the PP2A‐B56α holoenzyme associates with the Nav1.5 complex (Figs. 1‐3).

[0088] Novel mouse model with B56α deletion in the heart. We specifically designed a mouse  model using CRISPR‐cas9 technology targeting loxP sites to flanking regions of exon 2 of the  gene encoding the B56α. To induce a cardiac specific deletion of B56α, an αMHC‐Cre mouse was  intercrossed with a mouse homozygous for the floxed sites. B56α‐cKO mice displayed loss of  B56α in the hearts with normal B56α expression in other tissues including the brain, liver and  lung (n=3 / genotype, Fig. 4) confirming no compensation from other tissues. No changes in B56α  in brain tissues were noted after Isoproterenol (Iso) (n=4‐5 / genotype for Iso) (Fig. 4).

[0089] Intercalated disc Nav1.5‐B56α complex. While present at multiple membrane domains,  Nav1.5 is enriched at the intercalated disc of cardiac myocytes. In support of a regulatory role of   B56α in INa,L regulation, B56α is localized to the intercalated disc of WT myocytes (Fig. 5). We  also observed significant expression of CaMKIIδ and ankyrin‐G at sites co‐localized with PP2A‐C  at the intercalated disc in triple‐labeling experiments. Notably, the localization of ankyrin‐G,  CaMKIIδ, and PP2A‐C is independent (no changes in localization) of the B56α in total body B56α‐ KO hearts (n=3 / genotype) (Fig. 6).

[0090] Increase in PP2A activity in hearts of B56αcKO. We observed an increase in PP2A activity  (using PP2A immunoprecipitation phosphatase kit utilizing malachite green) in hearts of B56α‐ cKO hearts vs. floxed. We also assessed the PP2A activity in the brains and we found no  differences in the activity between both groups since our mice have selective deletion of B56α  in hearts (n≥4 / genotype). This data confirms that the change in PP2A activity is cardiac specific.  Finally, no significant differences were noted in cardiac PP1 activity between both groups of  mice (Fig. 7C). PP1 is one of the most abundant serine threonine phosphatases in the heart.

[0091] Wild type (WT) myocytes displayed a significant increase in both peak INa and INa,L when  treated with isoproterenol (Iso) to mimic the increased adrenergic tone (Fig.8 A and C‐D). In  contrast, consistent with a critical role of B56α in INa,L regulation, we observed no significant  changes in peak INa or INa,L in B56α‐KO myocytes after Iso (Fig.8 B‐D). No changes in cell  capacitance were noted (Fig.8 E) (WT, WT‐Iso N (mouse) =5, 4; n (cell)=10, 9 and B56α‐KO,  B56α‐KO‐Iso N=4,4; n= 9,7). In summary, myocytes from total B56α‐KO myocytes showed  reduced sensitivity to iso‐induced increase in INa and notably the arrhythmogenic INa,L.

[0092] Patch‐clamp experiments comparing OSU‐2S and vehicle treated mouse ventricular  myocytes ± Iso revealed no significant changes in INa current‐voltage relationship between OSU‐ 2S treated cells at baseline (without Iso) and after Iso. Additionally, no changes in INa current‐ voltage were observed in both vehicle and drug treated myocytes at baseline and after Iso.  (N=8; n=15 for DMSO and N=5; n=10 for OSU‐2S, N refers to mouse and n refers to cell) (Fig. 9).  Our data show that OSU‐2S does not target the peak INa like other INa,L modulators that function  in voltage dependent manner on INa and INa,L. as OSU‐2S and B56α target INa,L by counteracting  CaMKII phosphorylation that increases INa,L.

[0093] INa,L recordings displayed an increase in INa,L in DMSO treated cells after Iso (2 µM) at  various voltages (‐35, ‐30, ‐25, ‐20, ‐15 and ‐10 mV). However, OSU‐2S treated cells illustrated a  resistance to Iso‐induced INa,L prolongation. Notably, OSU‐2S treated cells demonstrated a   resistance to the increase in INa,L compared to vehicle treated cells after Iso at various voltages  (N=8; n=14 for DMSO and N=5; n=10 for OSU‐2S) (Fig. 10).

[0094] Previous data on Nav1.5pSer571 showed an increase in phosphorylation at this residue  in human failing hearts and canine models of myocardial infarction. Additionally, previous data  from mice harboring the Nav1.5 phospho‐mimetic S571E showed an enhanced INa,L and  arrhythmic phenotypes. Our data show that B56α‐cKO mice (cardiac specific mouse model)  displayed reduced Nav1.5pSer571 after stimulation with Iso (2mg / kg) for 10 minutes (n=4‐ 5 / genotype) (Fig. 11). No changes in total Nav1.5 and total CaMKIIδ protein expression were  noted in both groups. These data support a role of B56α in the regulation of INa,L.

[0095] OSU‐2S has previously been shown to be biologically tolerated in canine cells at 2 µM.  We isolated and cultured ventricular myocytes from mice and treated them with a 2 µM dose of  OSU‐2S for 1, 2, 3 and 4 hours. Our data illustrate an increase / a peak in PP2A activity in OSU‐2S  treated myocytes 3 hours post treatment, n=4 (Fig. 12 A). No significant changes in PP1 activity  were noted in OSU‐2S treated myocytes vs. DMSO after 3 hours of treatment (Fig. 12 B).  Further, we isolated ventricular myocytes from C57Bl / 6 mice as previously described and cells  were plated in laminin coated plates in plating medium for 1 hour. We added OSU‐2S and  vehicle (DMSO) to the cells for 3 hours and then treated the cells with Iso for 10 minutes. Our  data show a reduction in normalized Nav1.5pSer571 after Iso in OSU‐2S treated cells vs. DMSO  at 2 µM and 1 µM Iso (n=7 for 2 µM Iso and n=5 for 1 µM Iso). No changes were noted in Nav1.5  expression in DMSO and OSU‐2S (Fig. 12 C‐D). Also, no changes in normalized Cav1.2pSer1927  were noted in OSU‐2S treated cells vs. DMSO (n=3 for 2 µM Iso and n=4 for 1 µM Iso) (Fig. 12 E‐ F).

[0096] To examine the specificity of B56α to intercalated disc CaMKII versus non‐intercalated  disc CaMKII, we analyzed the phosphorylation of non‐intercalated disc CaMKII target proteins  RyR2 (RyR2pSer2814) and phospholamban (PLBpThr17). Our data show no changes in  normalized RyR2pSer2814 and PLBpThr17 in B56α‐cKO hearts in response to Iso (mice were  injected 2mg / kg Iso) (n=4‐5 / genotype). Control PKA specific targets RyR2pSer2808 and  Cav1.2pSer1927 were not different in the cKO hearts. These results suggest that RyRSer2814 and  PLBpThr17 are not direct targets of the PP2A‐B56α regulatory subunit (Fig. 13). Finally,  myofilament proteins were phosphorylated to a similar extent in both groups suggesting that  they are not direct targets of B56α (n=4‐5 / genotype) (Fig.14).

[0097] B56α‐cKO mice displayed no changes in the expression of PP2A‐C (catalytic subunit),  PP2A‐A scaffolding subunit, PP2A‐B56ε and PP2A‐B56δ. However, they displayed a significant  increase in the PP2A‐B56γ and PP2A‐B56β regulatory subunits after Iso (n=4‐5 / genotype) (Fig.  15). Interestingly, previous data showed that B56γ1 overexpression is able to increase PP2A  activity by increasing the substrate specificity without an increase in PP2A‐C protein expression.  Further, mouse models with an overexpression of the catalytic subunit showed cardiac  hypertrophy and impaired cardiac function. Finally, B56α‐cKO mice displayed no changes in the  expression of PP1‐C compared to floxed control mice (Fig. 15H‐I). Of note, PP1 is one of the  most abundant serine threonine phosphatases in the heart and dephosphorylates both RyR2  and phospholamban.

[0098] Echocardiographic evaluation of floxed and B56α‐cKO mice revealed no differences in  left ventricular structure and importantly no changes in cardiac function at baseline (data was  collected every 2 wks. between 8‐16 weeks of age). Ejection fraction (EF) at 16 weeks of age is  displayed in (Fig. 16 A). (n=7, floxed and n=6, B56α‐cKO).

[0099] We performed a transverse aortic constriction (TAC) surgery to induce pressure  overload in floxed and B56α‐cKO hearts as described. Floxed and B56α‐cKO mice displayed no  differences in ejection fraction at baseline as previously mentioned. However, floxed mice  showed a significant reduction in EF at 4‐ and 6‐weeks post TAC surgery compared to B56α‐cKO  mice (Fig. 16 B). Doppler imaging was performed and we only included mice with successful TAC  surgeries. Representative echocardiographic images from floxed and cKO mice at baseline and  6‐weeks post TAC surgery are in (Fig. 16 C‐F).

[0100] Previous findings using FTY720 (fingolimod) showed that FTY720 increased PP2A activity  and not PP1. For OSU‐2S, pharmacological inhibition of PP2A using okadaic acid at a  concentration that is specific for PP2A inhibition confirmed the specific involvement of PP2A  activation in OSU‐2S mediated action. OSU‐2S targets PP2A via targeting SET, which interacts  with PP2A‐B56α. We also analyzed the expression of I2PP2A / SET in control mouse hearts (non‐ failing) and failing mouse heart lysates (post TAC). Our data indicate an increase in the  normalized expression of SET in failing heart lysates (n=4 / group) (Fig. 17A). Finally, our data also  demonstrate an increase in the normalized expression of AT1 receptor in failing mouse heart  lysates (post TAC) compared to the control mouse tissues (n=3‐4 / group) (Fig.17B).      ADDITIONAL ASPECTS

[0101] Aspect 1: A method of treating of treating a condition characterized by pathological  increase in INa,L in a subject in need thereof, comprising administering to a subject in need  thereof a compound having the formula: ,  or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein  X1 has the formula (CH2)x, wherein x is from 1‐6;  X2 has the formula (CH2)y, wherein y is from 1‐6;  Ra is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  Rb1 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  Rb2 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  or Rb1 and Rb2, together with the carbon atoms to which they are attached form a five or six  membered ring;   Rb3 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  Rb4 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  or Rb3 and Rb4, together with the carbon atoms to which they are attached form a five or six  membered ring;   X3 is null or (CH2)z, wherein z is from 1‐3;  Rc is C1‐6alkyl, C3‐8cycloalkyl, aryl, or heteroaryl; and  Rd is H or C(=O)C1‐4alkyl.

[0102] Aspect 2: The method according to aspect 1, wherein X1 is CH2CH2CH2.

[0103] Aspect 3: The method according to any of aspects 1‐2, wherein X2 is CH2.

[0104] Aspect 4: The method according to any of aspects 1‐3, wherein Ra is H.

[0105] Aspect 5: The method according to any of aspects 1‐4, wherein Rb1 is H.

[0106] Aspect 6: The method according to any of aspects 1‐5, wherein Rb2 is H.

[0107] Aspect 7: The method according to any of aspects 1‐6, wherein Rb3 is H.

[0108] Aspect 8: The method according to any of aspects 1‐7, wherein Rb4 is H.

[0109] Aspect 9: The method according to any of aspects 1‐3, wherein Rb1, Rb2, Rb3, and Rb4 are  each H.

[0110] Aspect 10: The method according to any of aspects 1‐3, wherein Rb1, Rb2, and Rb3 are  each H, and Rb4 is OH or OCH3.

[0111] Aspect 11: The method according to any of aspects 1‐3, wherein Rb1, Rb2, and Rb4 are  each H, and Rb3 is OH or OCH3.

[0112] Aspect 12: The method according to any of aspects 1‐11, wherein X3 is null or CH2.

[0113] Aspect 13: The method according to any of aspects 1‐12, wherein Rc is n‐propyl,  isopropyl, cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl.

[0114] Aspect 14: The method according to any of aspects 1‐13, wherein Rc is n‐propyl.

[0115] Aspect 15: The method according to any of aspects 1‐14, wherein Rd is H.

[0116] Aspect 16: The method according to aspect 1, wherein the compound has the formula: .

[0117] Aspect 17: The method according to aspect 16, wherein X1 is CH2CH2CH2.

[0118] Aspect 18: The method according to aspect 16 or 17, wherein X2 is CH2.

[0119] Aspect 19: The method according to any of aspects 16‐18, wherein Ra is H or CH3,  preferably H.

[0120] Aspect 20: The method according to any of aspects 16‐19, wherein Rb1 is H.

[0121] Aspect 21: The method according to any of aspects 16‐20, wherein Rb2 is H.

[0122] Aspect 22: The method according to any of aspects 16‐21, wherein Rb3 is H.

[0123] Aspect 23: The method according to any of aspects 16‐22, wherein Rb4 is H.

[0124] Aspect 24: The method according to any of aspects 16‐19, wherein Rb1, Rb2, Rb3, and Rb4  are each H.

[0125] Aspect 25: The method according to any of aspects 16‐19, wherein Rb1, Rb2, and Rb3 are  each H, and Rb4 is OH or OCH3.

[0126] Aspect 26: The method according to any of aspects 16‐19, wherein Rb1, Rb2, and Rb4 are  each H, and Rb3 is OH or OCH3.

[0127] Aspect 27: The method according to any of aspects 16‐26, wherein X3 is null or CH2,  preferably null.

[0128] Aspect 28: The method according to any of aspects 16‐27, wherein Rc is n‐propyl,  isopropyl, cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl, preferably n‐propyl.

[0129] Aspect 29: The method according to any of aspects 16‐29, wherein X3 is CH2 and RC is  cyclopropyl or cyclobutyl.

[0130] Aspect 30: The method according to any of aspects 16‐29, wherein X3 is null and RC is n‐ propyl, isopropyl, or isobutyl.

[0131] Aspect 31: The method according to any of aspects 16‐30, wherein Rd is H.

[0132] Aspect 32: The method according to aspect 1, wherein the compound has the formula: .

[0133] Aspect 33: The method according to aspect 32, wherein X1 is CH2CH2CH2.

[0134] Aspect 34: The method according to aspect 32 or 33, wherein X2 is CH2.

[0135] Aspect 35: The method according to any of aspects 32‐34, wherein Ra is H or CH3,  preferably H.

[0136] Aspect 36: The method according to aspect 1, wherein the compound has the formula: .

[0137] Aspect 37: The method according to aspect 37, wherein Rb1 is H.

[0138] Aspect 38: The method according to any of aspects 36‐37, wherein Rb2 is H.

[0139] Aspect 39: The method according to any of aspects 36‐38, wherein Rb3 is H.

[0140] Aspect 40: The method according to any of aspects 36‐39, wherein Rb4 is H.

[0141] Aspect 41: The method according to any of aspects 36‐40, wherein Rb1, Rb2, Rb3, and Rb4  are each H.

[0142] Aspect 42: The method according to aspect 36, wherein Rb1, Rb2, and Rb3 are each H, and  Rb4 is OH or OCH3.

[0143] Aspect 43: The method according to aspect 36, wherein Rb1, Rb2, and Rb4 are each H, and  Rb3 is OH or OCH3.

[0144] Aspect 44: The method according to any of aspects 36‐43, wherein X3 is null or CH2,  preferably null.

[0145] Aspect 45: The method according to any of aspects 36‐44, wherein Rc is n‐propyl,  isopropyl, cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl, preferably n‐propyl.

[0146] Aspect 46: The method according to any of aspects 36‐45, wherein X3 is CH2 and RC is  cyclopropyl or cyclobutyl.

[0147] Aspect 47: The method according to any of aspects 36‐45, wherein X3 is null and RC is n‐ propyl, isopropyl, or isobutyl.

[0148] Aspect 48: The method according to any of aspects 36‐37, wherein Rd is H.

[0149] Aspect 49: The method according to aspect 1, wherein the compound has the formula: .

[0150] Aspect 50: The method according to aspect 49, wherein X3 is null or CH2, preferably null.

[0151] Aspect 51: The method according to any of aspects 49‐50, wherein Rc is n‐propyl,  isopropyl, cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl, preferably n‐propyl.

[0152] Aspect 52: The method according to any of aspects 49‐51, wherein X3 is CH2 and RC is  cyclopropyl or cyclobutyl.

[0153] Aspect 53: The method according to any of aspects 49‐51, wherein X3 is null and RC is n‐ propyl, isopropyl, or isobutyl.

[0154] Aspect 54: The method according to any of aspects 49‐53, wherein Rd is H.

[0155] Aspect 55: The method according aspect 1, wherein the compound has the formula:   .

[0156] Aspect 56: The method according to aspect 55, wherein X1 is CH2CH2CH2.

[0157] Aspect 57: The method according to aspect 55 or 56, wherein X2 is CH2.

[0158] Aspect 58: The method according to any of aspects 55‐57, wherein Ra is H or CH3,  preferably H.

[0159] Aspect 59: The method according to any of aspects 55‐58, wherein X3 is null or CH2,  preferably null.

[0160] Aspect 60: The method according to any of aspects 55‐59, wherein Rc is n‐propyl,  isopropyl, cyclopropyl, isobutyl, or cyclobutyl, preferably n‐propyl.

[0161] Aspect 61: The method according to any of aspects 55‐60, wherein X3 is CH2 and RC is  cyclopropyl or cyclobutyl.

[0162] Aspect 62: The method according to any of aspects 55‐60, wherein X3 is null and RC is n‐ propyl, isopropyl, or isobutyl.

[0163] Aspect 63: The method according to any of aspects 55‐63, wherein Rd is H.

[0164] Aspect 64: The method according to aspect 1, wherein the compound has the formula: .

[0165] Aspect 65: The method according to any of aspects 1‐64, wherein the subject is not  diagnosed with cancer.

[0166] Aspect 66: The method according to any of aspects 1‐66, wherein the condition  characterized by pathological increase in INa,L comprises congenital pathological increase in INa,L  or acquired pathological increase in INa,L.

[0167] Aspect 67: The method according to aspect 66, wherein the congenital pathological  increase in INa,L is caused by abnormal LQT3, LQT9, LQT10, or LQT12.

[0168] Aspect 68: The method according to any of aspects 1‐67, wherein the condition  characterized by pathological increase in INa,L comprises cardiac hypertrophy, hypertrophic  cardiomyopathy, myocardial infarction, long QT, or intoxicant exposure.

[0169] Aspect 69: The method according to any of aspects 68, wherein the intoxicant comprises  carbon monoxide.

[0170] Aspect 70: The method of any of aspects 1‐69, wherein the condition characterized by  pathological increase in INa,L comprises atrial arrhythmia, ventricular arrhythmia, congestive  heart failure, diastolic heart failure, systolic heart failure, acquired long QT, congenital long QT,  acute heart failure, Prinzmetal's angina, stable angina,  unstable angina, exercise induced  angina, congestive heart disease, myocardial infarction (including non‐STE myocardial  infarction), ischemia, recurrent ischemia, reperfusion injury, intermittent claudication,  peripheral arterial disease, and acute coronary syndrome.

[0171] Aspect 71: The method according to any of aspects 1‐70, further comprising  administering to the subject a beta blocker, calcium channel blocker, potassium channel blocker,  or combination thereof.

[0172] Aspect 72: The method according to any of aspects 1‐71, further comprising  administering atenolol, bisoprolol, carvedilol, metoprolol, propranolol, timolol, diltiazem,  verapamil, digoxin propafenone, quinidine, amiodarone, sotalol, or a combination thereof.

[0173] Aspect 73: The method according to any of aspects 1‐72, wherein the compound is  orally administered.

[0174] Aspect 74: The method according to any of aspects 1‐73, wherein the compound is  administered at a dose from 0.1‐1,000 mg / day, from 0.1‐500 mg / day, from 0.1‐250 mg / day,  from 0.1‐100 mg / day, from 0.1‐50 mg / day, from 0.1‐25 mg / day, from 0.1‐10 mg / day, from 0.1‐5  mg / day, from 0.1‐2.5 mg / day, from 0.1‐1 mg / day, from 0.5‐1 mg / day, from 0.5‐2.5 mg / day,  from 1‐2.5 mg / day, from 1‐5 mg / day, from 1‐10 mg / day, from 5‐25 mg / day, from 10‐25 mg / day,  from 10‐50 mg / day, from 25‐100 mg / day, or from 50‐100 mg / day.

[0175] The compositions and methods of the appended claims are not limited in scope by the  specific compositions and methods described herein, which are intended as illustrations of a few  aspects of the claims and any compositions and methods that are functionally equivalent are  intended to fall within the scope of the claims. Various modifications of the compositions and  methods in addition to those shown and described herein are intended to fall within the scope  of the appended claims. Further, while only certain representative compositions and method   steps disclosed herein are specifically described, other combinations of the compositions and  method steps also are intended to fall within the scope of the appended claims, even if not  specifically recited. Thus, a combination of steps, elements, components, or constituents may be  explicitly mentioned herein or less, however, other combinations of steps, elements,  components, and constituents are included, even though not explicitly stated. The term  “comprising” and variations thereof as used herein is used synonymously with the term  “including” and variations thereof and are open, non‐limiting terms. Although the terms  “comprising” and “including” have been used herein to describe various embodiments, the  terms “consisting essentially of” and “consisting of” can be used in place of “comprising” and  “including” to provide for more specific embodiments of the invention and are also disclosed.  Other than in the examples, or where otherwise noted, all numbers expressing quantities of  ingredients, reaction conditions, and so forth used in the specification and claims are to be  understood at the very least, and not as an attempt to limit the application of the doctrine of  equivalents to the scope of the claims, to be construed in light of the number of significant digits  and ordinary rounding approaches

Claims

CLAIMS  What is claimed is:

1. A method of treating of treating a condition characterized by pathological increase in INa,L in a  subject in need thereof, comprising administering to a subject in need thereof a compound  having the formula: ,  or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein  X1 has the formula (CH2)x, wherein x is from 1‐6;  X2 has the formula (CH2)y, wherein y is from 1‐6;  Ra is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  Rb1 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  Rb2 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  or Rb1 and Rb2, together with the carbon atoms to which they are attached form a five or six  membered ring;   Rb3 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  Rb4 is H, OH, C1‐3alkyl, or OC1‐3alkyl;  or Rb3 and Rb4, together with the carbon atoms to which they are attached form a five or six  membered ring;   X3 is null or (CH2)z, wherein z is from 1‐3;  Rc is C1‐6alkyl, C3‐8cycloalkyl, aryl, or heteroaryl; and  Rd is H or C(=O)C1‐4alkyl.

2. The method according to claim 1, wherein X1 is CH2CH2CH2.

3. The method according to claim 1, wherein X2 is CH2.

4. The method according to claim 1, wherein Ra is H.

5. The method according to claim 1, wherein Rb1 is H.

6. The method according to claim 1, wherein Rb2 is H.

7. The method according to claim 1, wherein Rb3 is H.

8. The method according to claim 1, wherein Rb4 is H.

9. The method according to claim 1, wherein Rb1, Rb2, Rb3, and Rb4 are each H.

10. The method according to claim 1, wherein Rb1, Rb2, and Rb3 are each H, and Rb4 is OH or OCH3.

11. The method according to claim 1, wherein Rb1, Rb2, and Rb4 are each H, and Rb3 is OH or OCH3.

12. The method according to claim 1, wherein X3 is null or CH2.

13. The method according to claim 1, wherein Rc is n‐propyl, isopropyl, cyclopropyl, isobutyl, or  cyclobutyl.

14. The method according to claim 1, wherein Rc is n‐propyl.

15. The method according to claim 1, wherein Rd is H.

16. The method according to claim 1, wherein the compound has the formula: .

17. The method according to claim 1, wherein the compound has the formula: .

18. The method according to claim 1, wherein the compound has the formula: .

19. The method according to claim 1, wherein the compound has the formula:   .

20. The method according to claim 1, wherein the compound has the formula: .

21. The method according to claim 1, wherein the subject is not diagnosed with cancer.

22. The method according to claim 1, wherein the condition characterized by pathological increase  in INa,L comprises congenital pathological increase in INa,L or acquired pathological increase in INa,L.

23. The method according to claim 22, wherein the congenital pathological increase in INa,L is caused  by abnormal LQT3, LQT9, LQT10, or LQT12.

24. The method according to claim 1, wherein the condition characterized by pathological increase  in INa,L comprises cardiac hypertrophy, hypertrophic cardiomyopathy, myocardial infarction, long  QT, or intoxicant exposure.

25. The method according to claim 25, wherein the intoxicant comprises carbon monoxide.

26. The method of claim 1, wherein the condition characterized by pathological increase in INa,L comprises atrial arrhythmia, ventricular arrhythmia, congestive heart failure, diastolic heart  failure, systolic heart failure, acquired long QT, congenital long QT, acute heart failure,  Prinzmetal's angina, stable angina,  unstable angina, exercise induced angina, congestive heart  disease, myocardial infarction (including non‐STE myocardial infarction), ischemia, recurrent  ischemia, reperfusion injury, intermittent claudication, peripheral arterial disease, and acute  coronary syndrome.

27. The method according to any of claims 1‐28, further comprising administering to the subject a  beta blocker, calcium channel blocker, potassium channel blocker, or combination thereof.

28. The method according to any of claims 1‐29, further comprising administering atenolol,  bisoprolol, carvedilol, metoprolol, propranolol, timolol, diltiazem, verapamil, digoxin  propafenone, quinidine, amiodarone, sotalol, or a combination thereof.

Images