Dosing regimen of GLP-1 conjugates

Abstract

The present disclosure provides use of GLP-1 conjugates in certain dosing regimens for treating metabolic conditions, such as type 2 diabetes and obesity.

Description

DOSING REGIMEN OF GLP-1 CONJUGATESFIELD OF THE INVENTION

[0001] The present invention relates to dosing regimen of GLP-1 conjugates for treating metabolic conditions, such as type 2 diabetes and obesity.BACKGROUND

[0002] Metabolic disorders or metabolic disease are a group of conditions characterized by the inability of the body to properly transform foods into energy, and to utilize and / or store energy, with the most prominent metabolic disorder being diabetes. Metabolic disorders are commonly associated with insulin resistance, visceral adiposity, atherogenic dyslipidemia, etc., which pose major and escalating public health and clinical challenge worldwide.

[0003] Glucagon-like-peptide-1 (GLP-1) is a proglucagon-derived peptide that is secreted from intestinal L-cells in response to nutrient ingestion. GLP-1 primarily acts as an incretin, i.e. an endocrine hormone, to increase the insulin response following oral intake of food, by generally regulating the concentrations of glucagons, slowing down gastric emptying, stimulating the biosynthesis of (Pro-) insulin, increasing the sensitivity toward insulin, and stimulating the insulin-independent biosynthesis of glycogen, etc. Because GLP-1 can rapidly lower glucose levels in both normal and diabetic subjects, there has been considerable interest in developing GLP-1 based pharmaceutical agents (i.e. referred to as GLP-1 compounds hereinafter) for preventing and / or treating metabolic disorders.

[0004] Currently, it is known that human GLP-1 in its native form (having 37 amino acid residues) is poorly active, and the two major naturally-occurring and biologically active truncated versions of the native GLP-1 include a 30-and 31-amino acid peptide fragment, i.e. GLP-1 (7-36) or GLP-1 (7-37) , which derive from the posttranslational processing of the proglucagon peptide, have extremely short in vivo half-lives due primarily to the N-terminal cleavage and inactivation by the dipeptidyl peptidase DPP-IV. Although tremendous efforts have been invested in developing newer and better GLP-1 compounds, existing GLP-1 compounds still have far from ideal half-lives, efficacy, and / or dosing frequency.

[0005] Therefore, there is a need for an improved design for GLP-1 compounds and accompanying dosing regimens that provide high efficacy with a safety profile.SUMMARY OF THE INVENTION

[0006] Provided herein are methods of using GLP-1 conjugates in certain dosing regimes for treating metabolic conditions.

[0007] In one aspect, the present disclosure provides a method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012, or Molecule 001) to result in a AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL (e.g. at least about 563 h*ug / mL, 1500 h*ug / mL, 1574 h*ug / mL, 1700 h*ug / mL, 3100 h*ug / mL, 3149 h*ug / mL, 4500 h*ug / mL, 6200 h*ug / mL, 6298 h*ug / mL, 9000 h*ug / mL, 12000 h*ug / mL, 12596 h*ug / mL, or 18000 h*ug / mL) in the subject, wherein the metabolic condition is selected from the group consisting of: a) increased HbA1c; b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes; c) overweight or obesity, increased body weight and / or food intake; and d) any combination of a) , b) and / or c) .

[0008] In certain embodiments, the GLP-1 conjugate is administered in one or more doses so as to result in the AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL (e.g. at least about 563 h*ug / mL, 1500 h*ug / mL, 1574 h*ug / mL, 1700 h*ug / mL, 3100 h*ug / mL, 3149 h*ug / mL, 4500 h*ug / mL, 6200 h*ug / mL, 6298 h*ug / mL, 9000 h*ug / mL, 12000 h*ug / mL, 12596 h*ug / mL, or 18000 h*ug / mL) in the subject.

[0009] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising administering a GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012, or Molecule 001) once every four weeks at a dose of about 16 mg to about 320 mg, 18 mg to about 320 mg, about 20 mg to about 320 mg, about 30 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 320 mg, about 80 mg to about 320 mg, about 120 mg to about 320 mg, or about 160 mg to about 320 mg.

[0010] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising administering a GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012, or Molecule 001) once bi-weekly at a dose of about 8 mg to about 160 mg, about 9 mg to about 160 mg, about 10 mg to about 160 mg, about 16 mg to about 160 mg, about 18 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 30 mg to about 160 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 160 mg, about 80 mg to about 160 mg, or about 120 mg to about 160 mg.

[0011] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising step S1 comprising administering a GLP-1 conjugate to a subject in one or more doses that provide a total amount of about 16 mg to about 320 mg of the GLP-1 conjugate every four weeks, thereby treating the metabolic condition, wherein the metabolic condition is selected from the group consisting of: a) increased HbA1c; b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes; c) overweight or obesity, or increased body weight and / or food intake; and d) any combination of a) , b) and / or c) .

[0012] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate no more frequently than once weekly, once bi-weekly, once every three weeks, once every four weeks, once every five weeks, once every six weeks, once every seven weeks, once every eight weeks, once every nine weeks, or once every ten weeks.

[0013] In some embodiments, the step S1 comprises administering GLP-1 conjugate to the subject in one or more doses that provide a total amount of about 18 mg to about 320 mg, about 20 mg to about 320 mg, about 30 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 320 mg, about 60 mg to about 320 mg, about 80 mg to about 320 mg, about 120 mg to about 320 mg, or about 160 mg to about 320 mg of the GLP-1 conjugate every four weeks.

[0014] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once every four weeks at a dose of about 16 mg to about 320 mg, 18 mg to about 320 mg, about 20 mg to about 320 mg, about 30 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 320 mg, about 80 mg to about 320 mg, about 120 mg to about 320 mg, or about 160 mg to about 320 mg.

[0015] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once bi-weekly at a dose of about 8 mg to about 160 mg, about 9 mg to about 160 mg, about 10 mg to about 160 mg, about 16 mg to about 160 mg, about 18 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 30 mg to about 160 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 160 mg, about 80 mg to about 160 mg, or about 120 mg to about 160 mg.

[0016] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once weekly at a dose of about 4 mg to about 80 mg, about 5 mg to about 80 mg, about 8 mg to about 80 mg, about 9 mg to about 80 mg, about 10 mg to about 80 mg, about 10 mg to about 40 mg, about 5 mg to about 40 mg, about 16 mg to about 80 mg, about 18 mg to about 80 mg, about 20 mg to about 80 mg, about 30 mg to about 80 mg, about 40 mg to about 80 mg, or about 60 mg to about 80 mg.

[0017] In some embodiments, the method provided herein further comprises a step S0 prior to the step S1, wherein the step S0 comprises administering the GLP-1 conjugate to the subject in one or more titration doses, wherein each titration dose is lower than the one or more doses in step S1.

[0018] In some embodiments, the step S0 comprises administering the one or more titration doses no more frequently than once weekly, once bi-weekly, once every three weeks, or once every four weeks.

[0019] In some embodiments, the step S0 comprises administering the one or more titration doses once weekly, once bi-weekly or once every four weeks.

[0020] For all the methods provided above, in some embodiments, the subject is human.

[0021] For all the methods provided above, in some embodiments, the subject has a fasting blood glucose level of 6.1 mmol / L or greater.

[0022] For all the methods provided above, in some embodiments, the subject has a HbA1c level of 6.5%or higher.

[0023] For all the methods provided above, in some embodiments, the subject has a random blood glucose level of 11.1 mmol / L or greater.

[0024] For all the methods provided above, in some embodiments, the subject has a 2-h postprandial blood glucose level of 7.8 mmol / L or greater.

[0025] For all the methods provided above, in some embodiments, the subject has a body mass index (BMI) of at least or higher than 24.

[0026] For all the methods provided above, in some embodiments, the subject is male and has a waistline of 90 cm or longer, or the subject is female and has a waistline of 85 cm or longer.

[0027] For all the methods provided above, in some embodiments, the subject is overweight or suffers from obesity and / or diabetes.

[0028] For all the methods provided above, in some embodiments, the GLP-1 conjugate comprises: a) a GLP-1 analog and a peptide linker that is attached to C-terminus of the GLP-1  analog, and b) a first clearance-reducing moiety (CRM) conjugated to a first CRM residue in the  peptide linker, and a second CRM conjugated to a second CRM residue in the GLP-1 analog, wherein: the first CRM residue is at least 5 (10, 15, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,  32, 35, 38, 40, 45, 46, 50, 55, 58, 60, 65, 70, 75, or 78) amino acid residues away from the C-terminal amino acid of the GLP-1 analog.

[0029] For all the methods provided above, in some embodiments, the GLP-1 conjugate comprises a structure shown below, where the amino acid residues are represented as one letter abbreviations in circles:

[0030] In another aspect, the present disclosure provides a GLP-1 conjugate for use in treating a metabolic condition in a subject in need thereof, wherein the use comprises administering to the subject a GLP-1 conjugate to result in a AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL in the subject, and wherein the metabolic condition is selected from the group consisting of: a) increased HbA1c; b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes; c) overweight or obesity, or increased body weight and / or food intake; and d) any combination of a) , b) and / or c) ; wherein the GLP-1 conjugate, subject and / or administering optionally is defined as  herein.

[0031] In still another aspect, the present disclosure provides a GLP-1 conjugate for use in treating a metabolic condition in a subject in need thereof, wherein the use comprises step S1 comprising administering the GLP-1 conjugate to the subject in one or more doses that provide a total amount of about 16 mg to about 320 mg GLP-1 conjugate every four weeks, and wherein the metabolic condition is selected from the group consisting of: a) increased HbA1c; b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes; c) overweight or obesity, increased body weight and / or food intake; and d) any combination of a) , b) and / or c) ; wherein the GLP-1 conjugate, subject and / or administering optionally is defined as  herein.

[0032] Throughout the present disclosure, the articles “a, ” “an, ” and “the” are used herein to refer to one or to more than one (i.e., to at least one) of the grammatical object of the article. By way of example, “afusion polypeptide” means one fusion polypeptide or more than one fusion polypeptides.

[0033] In all occurrences in this application where there are a series of recited numerical values, it is to be understood that any of the recited numerical values may be the upper limit or lower limit of a numerical range. It is to be further understood that the invention encompasses all such numerical ranges, i.e., a range having a combination of an upper numerical limit and a lower numerical limit, wherein the numerical value for each of the upper limit and the lower limit can be any numerical value recited herein. Ranges provided herein are understood to include all values within the range. For example, 1-10 is understood to include all of the values 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, and 10, and fractional values as appropriate. Similarly, ranges delimited by “at least” are understood to include the lower value provided and all higher numbers.

[0034] As used herein, “about” is understood to include within three standard deviations of the mean or within standard ranges of tolerance in the specific art. In certain embodiments, about is understood a variation of no more than 0.5.

[0035] The term “including” is used herein to mean, and is used interchangeably with, the phrase “including but not limited to” . Similarly, “such as” is used herein to mean, and is used interchangeably, with the phrase “such as but not limited to” .

[0036] The term “or” is used inclusively herein to mean, and is used interchangeably with, the term “and / or, ” unless context clearly indicates otherwise. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

[0037] Figure 1 shows plasma concentrations over time after single dose of Molecule 012 ranging from 0.03 to 0.26 mg / kg.

[0038] Figure 2 shows dose-proportional over the dose range.

[0039] Figure 3 shows that a single dose of Molecule 012 promotes sustained weight loss. Data presented as least square mean values (LSM ± SE) .

[0040] Figure 4 shows dosing regimen of Phase 1c.

[0041] Figure 5 shows mean body weight change from baseline in phase 1c.

[0042] Figure 6 shows mean HbA1c change from baseline in phase 1d.

[0043] Figure 7 shows mean body weight change from baseline in phase 2.

[0044] Figures 8A-8C show all the sequences disclosed in the present disclosure.DETAILED DESCRIPTION

[0045] The following description of the invention is merely intended to illustrate various embodiments of the invention. As such, the specific modifications discussed are not to be construed as limitations on the scope of the invention. It will be apparent to one skilled in the art that various equivalents, changes, and modifications may be made without departing from the scope of the invention, and it is understood that such equivalent embodiments are to be included herein. All references cited herein, including publications, patents and patent applications are incorporated herein by reference in their entirety.Definitions

[0046] The term “amino acid” as used herein refers to an organic compound containing amine (-NH2) and carboxyl (-COOH) functional groups, along with a side chain specific to each amino acid.

[0047] “Percent (%) sequence identity” is defined as the percentage of amino acid (or nucleic acid) residues in a candidate sequence that are identical to the amino acid (or nucleic acid) residues in a reference sequence, after aligning the sequences and, if necessary, introducing gaps, to achieve the maximum number of identical amino acids (or nucleic acids) . In other words, percent (%) sequence identity of an amino acid sequence (or nucleic acid sequence) can be calculated by dividing the number of amino acid residues (or bases) that are identical relative to the reference sequence to which it is being compared by the total number of the amino acid residues (or bases) in the candidate sequence or in the reference sequence, whichever is shorter. Conservative substitution of the amino acid residues is not considered as identical residues. Alignment for purposes of determining percent amino acid (or nucleic acid) sequence identity can be achieved, for example, using publicly available tools such as BLASTN, BLASTp (available on the website of U.S. National Center for Biotechnology Information (NCBI) , see also, Altschul S.F. et al, J. Mol. Biol., 215: 403–410 (1990) ; Stephen F. et al, Nucleic Acids Res., 25: 3389–3402 (1997) ) , ClustalW2 (available on the website of European Bioinformatics Institute, see also, Higgins D.G. et al, Methods in Enzymology, 266: 383-402 (1996) ; Larkin M. A. et al, Bioinformatics (Oxford, England) , 23 (21) : 2947-8 (2007) ) , and ALIGN or Megalign (DNASTAR) software. Those skilled in the art may use the default parameters provided by the tool, or may customize the parameters as appropriate for the alignment, such as for example, by selecting a suitable algorithm.

[0048] A “conservative substitution” with reference to amino acid sequence refers to replacing an amino acid residue with a different amino acid residue having a side chain with similar physiochemical properties. For example, conservative substitutions can be made among amino acid residues with hydrophobic side chains (e.g. Met, Ala, Val, Leu, and Ile) , among residues with neutral hydrophilic side chains (e.g. Cys, Ser, Thr, Asn and Gln) , among residues with acidic side chains (e.g. Asp, Glu) , among amino acids with basic side chains (e.g. His, Lys, and Arg) , or among residues with aromatic side chains (e.g. Trp, Tyr, and Phe) . As known in the art, conservative substitution usually does not cause significant change in the protein conformational structure, and therefore could retain the biological activity of a protein.

[0049] The expression “retain substantial biological activity” , as used herein, means exhibiting at least part of (for example, no less than about 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, or 90%) or all of the biological activity of the parent molecule. A functional form of a parent polypeptide may include both naturally-occurring variant forms and non-naturally occurring forms such as those obtained by recombinant methods or chemical synthesis. The functional forms may contain non-natural amino acid residues.

[0050] The term "variant" as used herein refers to a polypeptide having at least 70%sequence identity to the parent polypeptide. A variant may differ from the parent peptide by one or more amino acid residues. For example, a variant may have substitutions, additions, deletions, insertions, or truncations of one more amino acid residue of the parent polypeptide.

[0051] The term "fragment" as used herein refers to partial sequence of the parent polypeptide of any length. A fragment can still retain at least partial function of the parent polypeptide.

[0052] The term "derivative" as used herein refers to a chemically modified polypeptide or fusion polypeptide, in which one or more well-defined number of substituent groups have been covalently attached to one or more specific amino acid residues of the polypeptide or fusion polypeptide. Exemplary chemical modification can be, e.g. alkylation, acylation, esterification, amidation, phosphorylation, glycosylation, labeling, methylation of one or more amino acids, or conjugation with one or more moieties.

[0053] The term "mimetics" as used herein refers to molecular structures that serve as substitutes for amino acids, peptides, polypeptides, or fusion polypeptide. For example, amino acid mimetics, as used herein, can be synthetic structures (either known or yet unknown) , which may or may not be an amino acid, but retain the functional features of the parent amino acids while the structure of the amino acid mimetic is different from the structure of the parent amino acid. Examples include a methacryloyl or acryloyl derivative of an amide, β-, γ-, δ-imino acids (such as piperidine-4-carboxylic acid) and the like.

[0054] “Treating” or “treatment” of a condition as used herein includes preventing or alleviating a condition, slowing the onset or rate of development of a condition, reducing the risk of developing a condition, preventing or delaying the development of symptoms associated with a condition, reducing or ending symptoms associated with a condition, generating a complete or partial regression of a condition, curing a condition, or some combination thereof.

[0055] The term “subject” or “individual” or “animal” or “patient” as used herein refers to human or non-human animal, including a mammal or a primate, in need of diagnosis, prognosis, amelioration, prevention and / or treatment of a disease or disorder. Mammalian subjects include humans, domestic animals, farm animals, and zoo, sports, or pet animals such as dogs, cats, guinea pigs, rabbits, rats, mice, horses, swine, cows, bears, and so on.Dosing regimen

[0056] In one aspect, the present disclosure provides a dosing regimen for a GLP-1 conjugate provided herein, for treating a metabolic condition. The terms “dose regimen” , “dosing regimen” or “regimen” as used herein interchangeably and refer to how, when, how much, and for how long a dose of the GLP-1 conjugate provided herein can be administered to a subject.

[0057] In certain embodiments, the present disclosure provides a method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012, or Molecule 001) , wherein the metabolic condition is selected from the group consisting of: a) increased HbA1c; b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes; c) overweight or obesity, increased body weight and / or food intake; and d) any combination of a) , b) and / or c) .

[0058] The term “administering” , “administered” or “administration” as used herein refers to the act of delivering a dose of the GLP-1 conjugate to said subject. The GLP-1 conjugate provided herein may be administered by any route known in the art, such as for example parenteral (e.g., subcutaneous, intraperitoneal, intravenous, including intravenous infusion, intramuscular, or intradermal injection) or non-parenteral (e.g., oral, intranasal, intraocular, sublingual, rectal, or topical) routes. In certain embodiments, the GLP-1 conjugate is administered by injection. In certain embodiments, the GLP-1 conjugate is administered by subcutaneous injection.

[0059] In certain embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) is administered to result in a steady state plasma concentration of at least about 744 ng / mL, preferably at least about 800 ng / mL, more preferably at least about 838 ng / mL.

[0060] The term “steady state” as used herein refers to a condition where the overall intake of the GLP-1 conjugate is dynamic equilibrium with its elimination, resulting in a stable concentration of the GLP-1 conjugate in the plasma over time with regular dosing. At steady state, the average rate at which the GLP-1 conjugate is absorbed equals the average rate at which it is cleared, leading to a consistent level of the GLP-1 conjugate in the body.

[0061] The term “plasma concentration” of GLP-1 conjugate refers to the concentration of GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) present in the plasma. The plasma concentration of GLP-1 conjugate can be determined by standard analytical procedures and methods available in the art, such as for example, automated or manual immunoassay methods, liquid chromatography or liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MSMS) etc. In an illustrative embodiment, the method employed to measure initial plasma concentration of the GLP-1 conjugate is consistent with the method used to monitor and re-measure plasma concentration of the GLP-1 conjugate during clinical testing or during GLP-1 conjugate therapy for a subject.

[0062] In certain embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) is administered to result in a AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL in the subject. In certain embodiments, the subject is human. In certain embodiments, the subject is human having a metabolic condition provided herein.

[0063] The term “AUC0-t” as used herein refers to the area under the curve (AUC) of a plasma concentration-versus-time graph determined for an analyte (e.g. the GLP-1 conjugate) from the time 0 to time “t” . For example, “AUC0-672h” refers to the AUC of a plasma concentration-versus-time graph determined for the GLP-1 conjugate from the time 0 to 672 hours after time 0, in other words, the AUC over four weeks. AUC gives insight into the extent of exposure to a drug and its clearance rate from the body. AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL is believed to reflect an exposure to the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) that can achieve effective treatment effect, for example in lowering body weight.

[0064] While AUC0-672h reflects the overall exposure of the subject to the GLP-1 conjugate, it does not impose any restriction on the dosing frequency. For example, the AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL can be achieved by any suitable dosing frequency, such as a single dose over four weeks or multiple doses administered over the same period. The specific dose amount can be selected based on the dosing frequency such that it would provide the AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL in the subject. For example, if administered at a single dose of 16 mg over four weeks, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can result in AUC0-672h of around 563 h*ug / mL in the subject. Increasing the single dose amount to exceed 16 mg over four weeks would likely achieve an AUC0-672h higher than 563 h*ug / mL in the subject. For another example, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can alternatively be administered in 8 mg bi-weekly or 4 mg weekly and result in AUC0-672h of around 563 h*ug / mL in the subject. Increasing the dose amount to exceed 8 mg bi-weekly or 4 mg weekly would likely achieve an AUC0-672h higher than 563 h*ug / mL in the subject.

[0065] In some embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) is administered to result in a AUC0-672h of at least about 1500 h*ug / mL. For example, if administered at a single dose of 40 mg over four weeks, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can result in AUC0-672h of around 1574 h*ug / mL in the subject. Increasing the single dose amount to exceed 40 mg over four weeks would likely achieve an AUC0-672h higher than 1574 h*ug / mL in the subject. For another example, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can alternatively be administered in 20 mg bi-weekly or 10 mg weekly and result in AUC0-672h of around 1574 h*ug / mL in the subject. Increasing the dose amount to exceed 20 mg bi-weekly or 10 mg weekly would likely achieve an AUC0-672h higher than 1574 h*ug / mL in the subject.

[0066] In some embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) is administered to result in a AUC0-672h of at least about 3100 h*ug / mL. For example, if administered at a single dose of 80 mg over four weeks, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can result in AUC0-672h of around 3149 h*ug / mL in the subject. Increasing the single dose amount to exceed 80 mg over four weeks would likely achieve an AUC0-672h higher than 3149 h*ug / mL in the subject. For another example, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can alternatively be administered in 40 mg bi-weekly or 20 mg weekly and result in AUC0-672h of around 3149 h*ug / mL in the subject. Increasing the dose amount to exceed 40 mg bi-weekly or 20 mg weekly would likely achieve an AUC0-672h higher than 3149 h*ug / mL in the subject.

[0067] In some embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) is administered to result in a AUC0-672h of at least about 6200 h*ug / mL. For example, if administered at a single dose of 160 mg over four weeks, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can result in AUC0-672h of around 6298 h*ug / mL in the subject. Increasing the single dose amount to exceed 160 mg over four weeks would likely achieve an AUC0-672h higher than 6298 h*ug / mL in the subject. For another example, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can alternatively be administered in 80 mg bi-weekly or 40 mg weekly and result in AUC0-672h of around 6298 h*ug / mL in the subject. Increasing the dose amount to exceed 80 mg bi-weekly or 40 mg weekly would likely achieve an AUC0-672h higher than 6298 h*ug / mL in the subject.

[0068] In some embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) is administered to result in a AUC0-672h of at least about 12000 h*ug / mL. For example, if administered at a single dose of 320 mg over four weeks, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can result in AUC0-672h of around 12596 h*ug / mL in the subject. Increasing the single dose amount to exceed 320 mg over four weeks would likely achieve an AUC0-672h higher than 12596 h*ug / mL in the subject. For another example, the GLP-1 conjugate such as Molecule 012 or Molecule 001 can alternatively be administered in 160 mg bi-weekly or 80 mg weekly and result in AUC0-672h of around 12596 h*ug / mL in the subject. Increasing the dose amount to exceed 160 mg bi-weekly or 80 mg weekly would likely achieve an AUC0-672h higher than 12596 h*ug / mL in the subject.

[0069] A skilled person would understand how to calculate AUC0-672h. In general, after administration of the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) to a subject, the plasma concentrations of the GLP-1 conjugate are determined at different time points from time 0 to 672 hours, and the data are used to calculate AUC0-672h using Pharmacokinetic software such as WinNonlin.

[0070] In certain embodiments, the GLP-1 conjugate is administered in one or more doses so as to result in the AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL (e.g. at least about 563 h*ug / mL, 1500 h*ug / mL, 1574 h*ug / mL, 1700 h*ug / mL, 3100 h*ug / mL, 3149 h*ug / mL, 4500 h*ug / mL, 6200 h*ug / mL, 6298 h*ug / mL, 9000 h*ug / mL, 12000 h*ug / mL, 12596 h*ug / mL, or 18000 h*ug / mL) in the subject.

[0071] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising administering a GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012, or Molecule 001) once every four weeks at a dose of about 16 mg to about 320 mg, 18 mg to about 320 mg, about 20 mg to about 320 mg, about 30 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 320 mg, about 80 mg to about 320 mg, about 120 mg to about 320 mg, or about 160 mg to about 320 mg.

[0072] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising administering a GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012, or Molecule 001) once bi-weekly at a dose of about 8 mg to about 160 mg, about 9 mg to about 160 mg, about 10 mg to about 160 mg, about 16 mg to about 160 mg, about 18 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 30 mg to about 160 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 160 mg, about 80 mg to about 160 mg, or about 120 mg to about 160 mg.

[0073] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising a step S1 comprising administering a GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) to a subject in one or more doses that provide a total amount of about 16 mg to about 320 mg GLP-1 conjugate every four weeks, thereby treating the metabolic condition.

[0074] In some embodiments, the metabolic condition is selected from the group consisting of: a) increased HbA1c; b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes; c) overweight or obesity, increased body weight and / or food intake; and d) any combination of a) , b) and / or c) .

[0075] The phrase “one or more doses that provide a total amount …every four weeks” , as used herein, is intended to broadly encompass all dosing regimens that result in the administration of the defined cumulative amount of the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) to the subject within a four-week period. Such administration can be carried out in various ways, without any restriction on the dosing frequency or individual dose amounts. The GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) can be administered as a single dose or divided into multiple doses over the four-week period. The dosing regimen can be tailored according to the needs of the subject or the desired pharmacokinetic profile, as long as the cumulative amount of the drug conjugate administered within the four-week period falls within the range of about 16 mg to about 320 mg. This flexibility allows for any combination of dosing schedules and amounts, such as weekly, bi-weekly, once every four weeks, or any other dosing interval, as well as any dose amount per administration, provided the total administered dose over the four weeks is within the specified range.

[0076] In addition, there is no restriction on the specific dosing period itself. The reference to “every four weeks” or a “four-week period” does not imply that dosing must occur strictly within a four-week timeframe or follow a four-week cycle. Instead, the concept is intended to cover any dosing schedule where the cumulative amount of the drug conjugate administered over any period is equivalent to the total amount defined for a four-week period. For example, dosing could be spread out over a shorter or longer duration, such as two weeks, six weeks, or any other interval, as long as the total amount of the drug conjugate administered within that timeframe falls within the specified range when adjusted to a four-week equivalent.

[0077] Thus, the term “every four weeks” should be understood as a flexible guideline, allowing for any dosing regimen where the cumulative amount of the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) administered to the subject, when calculated over any timeframe, matches the defined amount for an equivalent four-week period. This flexibility ensures that various dosing strategies can be employed to achieve the desired therapeutic effect while staying within the cumulative dosage range specified.

[0078] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) no more frequently than once weekly, once bi-weekly, once every three weeks, once every four weeks, once every five weeks, once every six weeks, once every seven weeks, once every eight weeks, once every nine weeks, or once every ten weeks.

[0079] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once weekly, once bi-weekly, once every three weeks, once every four weeks, once every five weeks, once every six weeks, once every seven weeks, once every eight weeks, once every nine weeks, or once every ten weeks.

[0080] In some embodiments, the step S1 comprises administering GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) to the subject in one or more doses that provide a total amount of about 16 mg to about 320 mg, about 18 mg to about 320 mg, about 20 mg to about 320 mg, about 30 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 320 mg, about 60 mg to about 320 mg, about 80 mg to about 320 mg, about 120 mg to about 320 mg, or about 160 mg to about 320 mg of the GLP-1 conjugate every four weeks.

[0081] In some embodiments, the step S1 comprises administering GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) to the subject in one or more doses that provide a total amount of about 16 mg, about 18 mg, about 20 mg, about 30 mg, about 40 mg, about 60 mg, about 80 mg, about 120 mg, about 160 mg or about 320 mg of the GLP-1 conjugate every four weeks.

[0082] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once every four weeks at a dose of about 16 mg to about 320 mg, 18 mg to about 320 mg, about 20 mg to about 320 mg, about 30 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 320 mg, about 80 mg to about 320 mg, about 120 mg to about 320 mg, or about 160 mg to about 320 mg.

[0083] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once every four weeks at a dose of about 16 mg, about 18 mg, about 20 mg, about 30 mg, about 40 mg, about 60 mg, about 80 mg, about 120 mg, about 160 mg or about 320 mg.

[0084] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once every four weeks at a dose of about 40 mg, about 80 mg, about 120 mg, about 160 mg or about 320 mg.

[0085] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once every four weeks at a dose of about 0.16 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.18 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.2 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.26 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.3 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.4 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.4 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.2 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.6 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.8 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 1.2 mg / kg to about 3.2 mg / kg, or about 1.6 mg / kg to about 3.2 mg / kg.

[0086] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once every four weeks at a dose of about 0.16 mg / kg, about 0.18 mg / kg, about 0.2 mg / kg, about 0.26 mg / kg, about 0.3 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, about 0.8 mg / kg, about 1.2 mg / kg, about 1.6 mg / kg or about 3.2 mg / kg.

[0087] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once every four weeks at a dose of about 0.4 mg / kg, about 0.8 mg / kg, about 1.2 mg / kg, about 1.6 mg / kg or about 3.2 mg / kg.

[0088] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once bi-weekly at a dose of about 8 mg to about 160 mg, about 9 mg to about 160 mg, about 10 mg to about 160 mg, about 16 mg to about 160 mg, about 18 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 30 mg to about 160 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 160 mg, about 80 mg to about 160 mg, or about 120 mg to about 160 mg.

[0089] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once bi-weekly at a dose of about 8 mg, about 9 mg, about 10 mg, about 16 mg, about 18 mg, about 20 mg, about 30 mg, about 40 mg, about 60 mg, about 80 mg, about 120 mg, or about 160 mg.

[0090] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once bi-weekly at a dose of about 20 mg, about 40 mg, about 60 mg, about 80 mg, about 120 mg, or about 160 mg.

[0091] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once bi-weekly at a dose of about 0.08 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.09 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.13 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.16 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.18 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.2 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.26 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.3 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.4 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.6 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.8 mg / kg to about 1.6 mg / kg, or about 1.2 mg / kg to about 1.6 mg / kg.

[0092] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once bi-weekly at a dose of about 0.08 mg / kg, about 0.09 mg / kg, about 0.1 mg / kg, about 0.13 mg / kg, 0.16 mg / kg, about 0.18 mg / kg, about 0.2 mg / kg, about 0.26 mg / kg, about 0.3 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, about 0.8 mg / kg, about 1.2 mg / kg, or about 1.6 mg / kg.

[0093] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once bi-weekly at a dose of about 0.2 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, about 0.8 mg / kg, about 1.2 mg / kg, or about 1.6 mg / kg.

[0094] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once weekly at a dose of about 4 mg to about 80 mg, about 5 mg to about 80 mg, about 8 mg to about 80 mg, about 9 mg to about 80 mg, about 10 mg to about 80 mg, about 10 mg to about 40 mg, about 5 mg to about 40 mg, about 16 mg to about 80 mg, about 18 mg to about 80 mg, about 20 mg to about 80 mg, about 30 mg to about 80 mg, about 40 mg to about 80 mg, or about 60 mg to about 80 mg.

[0095] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once weekly at a dose of about 4 mg, about 5 mg, about 8 mg, about 9 mg, about 10 mg, about 16 mg, about 18 mg, about 20 mg, about 30 mg, about 40 mg, about 60 mg, or about 80 mg.

[0096] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once weekly at a dose of about 5 mg, about 10 mg, about 20 mg, about 40 mg, about 60 mg, or about 80 mg.

[0097] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once weekly at a dose of about 0.04 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.05 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.08 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.09 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 0.4 mg / kg, about 0.05 mg / kg to about 0.4 mg / kg, about 0.13 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.16 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.18 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.2 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.26 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.3 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.4 mg / kg to about 0.8 mg / kg, or about 0.6 mg / kg to about 0.8 mg / kg.

[0098] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once weekly at a dose of about 0.04 mg / kg, about 0.05 mg / kg, about 0.08 mg / kg, about 0.09 mg / kg, about 0.1 mg / kg, about 0.13 mg / kg, 0.16 mg / kg, about 0.18 mg / kg, about 0.2 mg / kg, about 0.26 mg / kg, about 0.3 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, or about 0.8 mg / kg.

[0099] In some embodiments, the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) once weekly at a dose of about 0.05 mg / kg, about 0.1 mg / kg, about 0.2 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, or about 0.8 mg / kg.

[0100] In some embodiments, the method provided herein further comprises a step S0 prior to the step S1, wherein the step S0 comprises administering the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) to the subject in one or more titration doses, wherein each titration dose is lower than the one or more doses in step S1.

[0101] In some embodiments, the step S1 can be referred to as maintenance phase or maintenance regimen. The term “maintenance dose” as used herein refers to a dose administered after titration phase to keep the drug's concentration within the therapeutic range and maintain its desired effect over time.

[0102] In some embodiments, the step S0 can also be referred to as titration phase or titration regimen. The term “titration dose” as used herein refers to an adjustable dosage of a therapeutic agent that can be incrementally modified to achieve the desired therapeutic effect while reducing the risk of developing side effects. The term “titration phase” or “titration regimen” as used herein refers to a process of gradually adjusting the dose of a therapeutic agent over a certain period of time, based on the subject’s response and tolerance. During the titration phase, the subject’s response to the therapeutic agent can be closely monitored, including any side effects or therapeutic effects.

[0103] Titration doses may involve starting with a lower initial dose and gradually adjusting it over time based on the subject’s response and tolerance. These adjustments can be made in small increments or, if necessary, small decrements, depending on how the subject responds to the treatment. The titration process is intended to be adaptable, accommodating various dosing strategies to effectively transition the subject to the maintenance phase or maintenance regimen.

[0104] Titration phase can consist of a single dose or multiple doses, depending on the therapeutic needs of the subject and the specific GLP-1 conjugate being administered. In certain embodiments, the titration process may involve a series of escalating titration doses, where each subsequent titration dose is higher than the previous one.

[0105] In certain embodiments, the step S0 comprises administering a first titration dose followed by a second titration dose, wherein the second titration dose is higher than the first titration dose.

[0106] In certain embodiments, the step S0 further comprises administering a third titration dose after the second titration dose, wherein the third titration dose is higher than the second titration dose.

[0107] In certain embodiments, the step S0 further comprises administering a fourth titration dose after the third titration dose, wherein the fourth titration dose is higher than the third titration dose.

[0108] In certain embodiments, the step S0 further comprises administering a fifth titration dose after the fourth titration dose, wherein the fifth titration dose is higher than the fourth titration dose.

[0109] In certain embodiments, the step S0 further comprises administering additional titration dose (s) after the fifth titration dose, wherein the additional titration dose (s) is higher than the fifth titration dose.

[0110] The flexibility of titration dosing means that the regimen can be customized to suit the individual requirements of the subject. For instance, the intervals between dose adjustments and the amount by which each dose is increased can vary based on factors such as the subject's condition, tolerance, and response to the medication. This adaptability ensures that the titration process can be tailored to facilitate a smooth transition to the maintenance phase or regimen, optimizing therapeutic outcomes for each subject.

[0111] In some embodiments, the step S0 comprises administering the one or more titration doses no more frequently than once weekly, once bi-weekly, once every three weeks, or once every four weeks.

[0112] In some embodiments, the step S0 comprises administering the one or more titration doses once weekly, once bi-weekly or once every four weeks.

[0113] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 20 mg, and the one or more doses in step S1 is 20 mg, optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly or once every four weeks, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once bi-weekly or once every four weeks.

[0114] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 20 mg, and the one or more doses in step S1 is 20 mg. In certain embodiments, the step S0 comprises administering one or more titration doses selected from the group consisting of 5 mg, 10 mg, and 15 mg, optionally wherein the one or more titration doses is / are administered once bi-weekly or once every four weeks. In certain embodiments, the one or more doses in step S1 is 20 mg and is administered once bi-weekly or once every four weeks.

[0115] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 40 mg, and the one or more doses in step S1 is 40 mg, optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly or once every four weeks, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once bi-weekly or once every four weeks.

[0116] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 40 mg, and the one or more doses in step S1 is 40 mg. In certain embodiments, the step S0 comprises administering one or more titration doses selected from the group consisting of 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, and 35 mg, optionally wherein the one or more titration doses is / are administered once bi-weekly or once every four weeks. In certain embodiments, the one or more doses in step S1 is 40 mg and is administered once bi-weekly or once every four weeks. In certain embodiments, the step S0 comprises administering a first titration dose of 10 mg once bi-weekly or once every four weeks, a second titration dose of 20 mg once bi-weekly or once every four weeks, and the step S1 comprises administering one or more doses of 40 mg once bi-weekly or once every four weeks.

[0117] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 80 mg, and the one or more doses in step S1 is 80 mg; optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly or once every four weeks, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once bi-weekly or once every four weeks.

[0118] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 80 mg, and the one or more doses in step S1 is 80 mg. In certain embodiments, the step S0 comprises administering one or more titration doses selected from the group consisting of 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, and 75 mg, optionally wherein the one or more titration doses is / are administered once bi-weekly or once every four weeks. In certain embodiments, the one or more doses in step S1 is 80 mg and is administered once bi-weekly or once every four weeks. In certain embodiments, the step S0 comprises administering a first titration dose of 10 mg once bi-weekly or once every four weeks, a second titration dose of 20 mg once bi-weekly or once every four weeks, a third titration dose of 40 mg once bi-weekly or once every four weeks, and the step S1 comprises administering one or more doses of 80 mg once bi-weekly or once every four weeks.

[0119] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 160 mg, and the one or more doses in step S1 is 160 mg; optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly or once every four weeks, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once bi-weekly or once every four weeks.

[0120] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 160 mg, and the one or more doses in step S1 is 160 mg. In certain embodiments, the step S0 comprises administering one or more titration doses selected from the group consisting of 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 85 mg, 90 mg, 95 mg, 100 mg, 105 mg, 110 mg, 115 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, and 150 mg, optionally wherein the one or more titration doses is / are administered once bi-weekly or once every four weeks. In certain embodiments, the one or more doses in step S1 is 160 mg and is administered once bi-weekly or once every four weeks. In certain embodiments, the step S0 comprises administering a first titration dose of 10 mg once bi-weekly or once every four weeks, a second titration dose of 20 mg once bi-weekly or once every four weeks, a third titration dose of 40 mg once bi-weekly or once every four weeks, a fourth titration dose of 80 mg once bi-weekly or once every four weeks, and the step S1 comprises administering one or more doses of 160 mg once bi-weekly or once every four weeks.

[0121] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 320 mg, and the one or more doses in step S1 is 320 mg; optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly or once every four weeks, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once every four weeks.

[0122] In certain embodiments, the one or more titration doses are lower than 320 mg, and the one or more doses in step S1 is 320 mg. In certain embodiments, the step S0 comprises administering one or more titration doses selected from the group consisting of 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 85 mg, 90 mg, 95 mg, 100 mg, 105 mg, 110 mg, 115 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg, 200 mg, 210 mg, 220 mg, 230 mg, 240 mg, 250 mg, 260 mg, 270 mg, 280 mg, 290 mg, 300 mg, and 310 mg, optionally wherein the one or more titration doses is / are administered once bi-weekly or once every four weeks. In certain embodiments, the one or more doses in step S1 is 320 mg and is administered once every four weeks. In certain embodiments, the step S0 comprises administering a first titration dose of 10 mg once bi-weekly or once every four weeks, a second titration dose of 20 mg once bi-weekly or once every four weeks, a third titration dose of 40 mg once bi-weekly or once every four weeks, a fourth titration dose of 80 mg once bi-weekly or once every four weeks, a fifth titration dose of 160 mg once every four weeks, and the step S1 comprises administering one or more doses of 320 mg once every four weeks.

[0123] In some embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) has a mean plasma half-life in humans of at least 160 hours, at least 170 hours, at least 180 hours, at least 190 hours, at least 200 hours, at least 210 hours, at least 220 hours, at least 230 hours, or at least 240 hours.

[0124] In some embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) has a mean plasma half-life in humans of about 210 to about 300 hours.

[0125] In some embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) is administered by parenteral administration.

[0126] In certain embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) is administered subcutaneously.

[0127] In some embodiments, the GLP-1 conjugate (e.g. Molecule 012 or Molecule 001) may be administered alone or in combination with an additional therapeutic agent.

[0128] In certain embodiments, when used for treating a metabolic disease, the GLP-1 conjugate provided herein may be administered in combination with any other therapeutic agent for use in the treatment of a metabolic disease or any medical disorder that related. “Administered in combination” as used herein includes administration simultaneously as part of the same pharmaceutical composition, simultaneously as separate compositions, or at different timings as separate compositions. A GLP-1 conjugate administered prior to or after another agent is considered to be administered “in combination” with that agent as the phrase is used herein, even if the GLP-1 conjugate and the second agent are administered via different routes. Where possible, additional therapeutic agents administered in combination with the GLP-1 conjugate provided herein are administered according to the schedule listed in the product information sheet of the additional therapeutic agent, or according to the Physicians' Desk Reference (Physicians' Desk Reference, 70th Ed (2016) ) or protocols well known in the art.

[0129] A non-limiting list of examples of compounds that can be administered in combination with the GLP-1 conjugates provided herein, include rosiglitizone, pioglitizone, repaglinide, nateglitinide, metformin, exenatide, stiagliptin, pramlintide, glipizide, glimeprirideacarbose, and miglitol.Therapeutic Applications

[0130] In one aspect, the present disclosure provides use of the GLP-1 conjugate provided herein as a medicament. In particular embodiments, the GLP-1 conjugate provided herein may be used in a subject for the following medical treatments:

[0131] (i) preventing and / or treating all forms of diabetes, such as hyperglycemia, impaired glucose tolerance, type 1 diabetes, non-insulin dependent diabetes, MODY (maturity onset diabetes of the young) , gestational diabetes; and / or reducing HbA1c;

[0132] (ii) delaying or preventing diabetic disease progression, such as progression in type 2 diabetes, delaying the progression of impaired glucose tolerance (IGT) to insulin requiring type 2 diabetes, and / or delaying the progression of non-insulin requiring type 2 diabetes to insulin requiring type 2 diabetes;

[0133] (iii) preventing and / or treating eating disorders, such as obesity, e.g. by decreasing food intake, reducing body weight, suppressing appetite, inducing satiety; treating or preventing binge eating disorder, bulimia nervosa, and / or obesity induced by administration of an antipsychotic or a steroid; reduction of gastric motility; and / or delaying gastric emptying; or

[0134] (iv) any combination of i) , ii) and / or iii) .

[0135] In some embodiments, the subject is human.

[0136] In some embodiments, the subject is overweight or suffers from obesity and / or diabetes.

[0137] In some embodiments, the subject suffers from diabetes.

[0138] In certain embodiments, the diabetes includes diabetic complications such as angiopathy.

[0139] In some embodiments, the subject has a fasting blood glucose level of 6.1 mmol / L or greater.

[0140] In some embodiments, the subject has a HbA1c level of 6.5%or higher.

[0141] In some embodiments, the subject has a random blood glucose level of 11.1 mmol / L or greater.

[0142] In some embodiments, the subject has a 2-h postprandial blood glucose level of 7.8 mmol / L or greater.

[0143] The term "diabetes" or "diabetes mellitus" as used herein includes insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) , non-insulin dependent diabetes mellitus (NIDDM) , gestational diabetes (during pregnancy) and other states that cause hyperglycaemia. The term is used for a metabolic disorder in which the pancreas produces insufficient amounts of insulin, or in which the cells of the body fail to respond appropriately to insulin thus preventing cells from absorbing glucose. As a result, glucose builds up in the blood.

[0144] Insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) , also called type 1 diabetes or juvenile-onset diabetes, is caused by B-cell destruction, usually leading to absolute insulin deficiency.

[0145] Non-insulin dependent diabetes mellitus (NIDDM) , also known as type 2 diabetes or adult-onset diabetes, is associated with predominant insulin resistance and thus relative insulin deficiency and / or a predominantly insulin secretory defect with insulin resistance.

[0146] Diabetes often requires treatment to establish proper metabolic control, comprising mainly glycemic control.

[0147] In some embodiments, the GLP-1 conjugate of the present invention provides beneficial glycemic control in a patient suffering from non-insulin dependent diabetes.

[0148] In some embodiments, the beneficial glycemic control can be determined by measurement of levels of glycated haemoglobin (HbA1c) . In one embodiment beneficial glycemic control is defined as a reduction of at least 0.5%HbA1c relative to baseline HbA1c; preferably a reduction of at least 0.7%relative to baseline HbA1c; more preferably a reduction of at least 0.9%relative to baseline HbA1c; more preferably reduction of at least 1%relative to baseline HbA1c; more preferably a reduction of at least 1.2%relative to baseline HbA1c; most preferably a reduction of 1.3%relative to baseline HbA1c.

[0149] The term “baseline HbA1c” as used herein refers to the level HbA1c before treatment. In some embodiments, the baseline HbA1c is 6.5%or higher.

[0150] In another embodiment, beneficial glycemic control can be determined by a decrease of the levels of HbA1c to, in one embodiment, about 7%or less; in another embodiment to about 6.5%or less.

[0151] In some embodiments, beneficial glycemic control can be determined by measurement of levels of fasting blood glucose. In some embodiments, beneficial glycemic control is defined as a reduction of fasting blood glucose to a level of 7 mmol / L, more preferably 6 mmol / L.

[0152] In some embodiments, the subject is overweight or suffers from obesity.

[0153] In some embodiments, the subject has at least one weight-related comorbid condition (such as hypertension, type 2 diabetes mellitus, or dyslipidemia) . In some embodiments, the subject of the method of the invention has sleep apnoea and / or urine incontinence. In some embodiments, the subject in the methods of the present invention has at least one weight-related comorbid condition selected from the group consisting of hypertension, type 2 diabetes mellitus, dyslipidemia, sleep apnoea, and urine incontinence.

[0154] In some embodiments, the subject has a body mass index (BMI) of at least or higher than 24.

[0155] In some embodiments, the subject is male and has a waistline of 90 cm or longer, or the subject is female and has a waistline of 85 cm or longer.

[0156] The term “overweight” as used herein refers to the condition wherein the subject has a BMI of at least 24 to less than 28, including any number in between. The term “obesity” as used herein refers to the condition wherein the subject has a BMI of at least 28, such as at least 28 to less than 40, including any number in between. The term “BMI” as used herein refers to the weight of a subject in kilograms divided by the square of the height of this subject in meters; BMI has the unit of kg / m2.

[0157] In some embodiments, the method of the invention provides a beneficial weight control. The beneficial weight control can be determined by a decrease of BMI to about 30 or less; preferably to about 27 or less, more preferably to about 24 or less.

[0158] In some embodiments, the method of the invention provides a beneficial glycemic control and / or weight control along with an improved safety profile.

[0159] The term “safety profile” as used herein refers to adverse effects of an administered drug or other substance and includes gastrointestinal adverse events, such as nausea and vomiting. In some embodiments, the methods of the present invention provide acceptable tolerability while improving the treatment, e.g. improved weight management in the form of increased body weight loss. In some embodiments, the term “safety profile” as used herein refers to tolerability. The term “gastrointestinal adverse event” as used herein refers to symptoms of the system organ class gastrointestinal disorders as defined by the MedDRA classification (e.g. version 19.1) . In some embodiments, the gastrointestinal adverse event refers to symptoms selected from the group consisting of nausea, vomiting, diarrhoea and constipation. In some embodiments, the gastrointestinal adverse event refers to nausea.GLP-1 Conjugates

[0160] In one aspect, the GLP-1 conjugate provided herein comprises: a) a GLP-1 analog and a peptide linker that is attached to C-terminus of the GLP-1  analog, and b) a first clearance-reducing moiety (CRM) conjugated to a first CRM residue in the  peptide linker, and a second CRM conjugated to a second CRM residue in the GLP-1 analog; wherein: the first CRM residue is at least 5 (10, 15, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,  32, 35, 38, 40, 45, 46, 50, 55, 58, 60, 65, 70, 75, or 78) amino acid residues away from the C-terminal amino acid of the GLP-1 analog.

[0161] The term “peptide” and "polypeptide" are used interchangeably herein and refer a polymer of amino acid residues linked by covalent bonds such as peptide bonds. A peptide or polypeptide as provided herein can comprise naturally occurring or non-natural amino acid residues, or both. Polypeptides and peptides provided herein can comprise any suitable length of amino acid residues, for example, from at least 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, or more amino acid residues in length.

[0162] The term “clearance-modifying moiety” or “CRM” as used herein refers to moiety that can alter one or more pharmacokinetic (PK) properties (for example, to increase the half-life in vivo) . Examples of CRMs can include, without limitation, fatty acid, polyethylene glycol (PEG) , glucuronic acid or other sugar based linkers, polar, positively or negatively charged groups that can increase the rates of hydrolysis of a succinimidyl ring and reduce or minimize the rate of reverse Michael reaction, therefore reduce or minimize the rate of loss of drug and the linker group from the biologically active peptide to other thiol-containing proteins and small molecules.

[0163] “CRM residue” as used herein refers to the amino acid residue that is conjugated to a CRM.

[0164] The term “conjugate” as used herein refers to a compound as a result of two or more molecules joined together to form one physical entity. For example, the conjugate of the present disclosure means a compound as a result of the polypeptide and one or more clearance-modifying moieties joined together. The molecules may attach together by covalent, non-covalent bonds, linkers, chemical modification, or protein fusion or by any means known to one skilled in the art. Preferably, the molecules may attach together by covalent bonds. The joining may be permanent or reversible. In some embodiments, certain cleavable or non-cleavable linkages may be included.

[0165] In certain embodiments, the first CRM residue is at least 10, 15, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 35, 38, 40, 45, 46, 50, 55, 58, 60, 65, 70, 75, or 78 amino acid residues (exclusive of the CRM residue) away from the C-terminal amino acid residue of the GLP-1. In certain embodiments, the distance between the first CRM residue and the C-terminal amino acid of the GLP-1 analog is between 10 to 120, 15 to 120, 20 to 120, 25 to 120, 30 to 120, 31 to 120, 32 to 120, 33 to 120, 34 to 120, 35 to 120, 36 to 120, 37 to 120, 38 to 120, 39 to 120, 40 to 120, 30 to 80, 31 to 80, 32 to 80, 33 to 80, 34 to 80, 35 to 80, 36 to 80, 37 to 80, 38 to 80, 39 to 80, or 40 to 80.GLP-1 analog

[0166] The term "Glucagon-like peptide-1 analog” or “GLP-1 analog” as used herein is intended to broadly encompasses native GLP-1 peptide and all its functional variants, fragments, fusions, derivatives and mimetics.

[0167] The term "native GLP-1 peptide" as used herein refers to the native human Glucagon-Like Peptide-1 (GLP-1 (7-37) ) , the sequence of which is set forth in SEQ ID NO: 1. As used herein, when referring to a particular amino acid residue in SEQ ID NO: 1 (i.e. GLP-1 (7-37) ) , the numbering of the GLP-1 (1-37) is followed. In other words, SEQ ID NO: 1 corresponds to GLP-1 (7-37) , and therefore the 1st residue (which is Histidine (H) ) in SEQ ID NO: 1 is referred to as 7H, meaning that it corresponds to the 7th residue in GLP(1-37) ; and the 31st residue (which is Glycine (G) ) in SEQ ID NO: 1 is referred to as 37G, meaning that it corresponds to the 37th residue in GLP (1-37) .

[0168] An analog of the native GLP-1 peptide is capable of activating the GLP-1 receptor at a level comparable to, or no less than about 20% (or no less than 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%) of, that of the native GLP-1 peptide. Activation of the GLP-1 receptor typically initiates signal transduction pathway resulting in insulinotropic action or other physiological effects as is known in the art. Analogs of the native GLP-1 peptide can contain one or more substitutions, additions, or deletions relative to SEQ ID NO: 1.

[0169] In certain embodiments, the GLP-1 analog comprises no more than 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, or 2 mutations (e.g. addition, deletion, substitution) relative to SEQ ID NO: 1 while retaining substantial biological activity of SEQ ID NO: 1. In certain embodiments, the GLP-1 analog comprises at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9 mutations (e.g. addition, deletion, substitution) relative to SEQ ID NO: 1 while retaining substantial biological activity of SEQ ID NO: 1.

[0170] In certain embodiments, the GLP-1 analog comprises an amino acid sequence of X7X8EGTFTSDVSSYLEX22 X23AAX26X27FI X30WLVX34GX36G (SEQ ID NO: 2) , wherein: the X7 is H, imidazole-4-acetate (IA) , or imidazolepropionic acid (IPA) ; the X8 is A, G, S, V, Aib, T, I, or L; the X22 is G, or E; the X23 is Q, C or K; the X26 is K, R, or C; the X27 is E, K, or C; the X30 is A, C or K; the X34 is R, K, or C, and the X36 is R, or G.

[0171] In certain embodiments, X7 is H, X8 is G or Aib, the X22 is G or E; the X23 is Q, C or K; the X26 is K, R or C; the X27 is E, K, or C; the X30 is A, C or K; the X34 is K, R or C, and the X36 is R, or G.

[0172] In certain embodiments, the GLP-1 analog comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 1 (native GLP-1) ; (8Aib, 34R, 36G) GLP-1, (8Aib, 26R, 27K, 34R, 36G) GLP-1, (8Aib, 26R 34R, 36G) GLP-1, (8Aib, 22E, 34R, 36G) GLP-1, (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R, 36G) GLP-1, (8Aib, 22E, 26R, 34R, 36G) GLP-1, (8Aib, 34R) GLP-1, (8Aib, 26R, 27K, 34R) GLP-1, (8Aib, 26R, 34R) GLP-1, (8Aib, 22E, 34R) GLP-1, (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R) GLP-1, (8Aib, 22E, 26R, 34R) GLP-1, (8G, 34R, 36G) GLP-1, (8G, 26R, 27K, 34R, 36G) GLP-1, (8G, 26R, 34R, 36G) GLP-1, (8G, 22E, 34R, 36G) GLP-1, (8G, 22E, 26R, 27K, 34R, 36G) GLP-1, (8G, 22E, 26R, 34R, 36G) GLP-1, (8G, 34R) GLP-1, (8G, 26R, 34R) GLP-1, (8G, 22E, 34R) GLP-1, (8G, 22E, 26R, 27K, 34R) GLP-1, (8G, 22E, 26R, 34R) GLP-1, (8G, 22E, 36G) GLP-1, (8G, 36G) GLP-1, (8G, 22E) GLP-1, and (8G) GLP-1.

[0173] In certain embodiments, the GLP-1 analog comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 3.Peptide Linker

[0174] In the GLP-1 conjugate, the GLP-1 is attached to the N-terminus of the peptide linker. The GLP-1 can be attached to the peptide linker via a direct linkage, such as for example, a covalent bond such as a peptide bond.

[0175] The peptide linker can be made up of amino acid residues linked together by peptide bonds. The peptide linker can further comprise one or more non-natural amino acids.

[0176] In certain embodiments, the peptide linker has a length of at least 10 amino acid residues (e.g. at least 15, 20, 24, 40, 50, 60, 70, or 80 amino acid resides) . In certain embodiments, the polypeptide linker has a length of from 10 to 120, 15 to 120, 20 to 120, 25 to 120, 30 to 120, 31 to 120, 32 to 120, 33 to 120, 34 to 120, 35 to 120, 36 to 120, 37 to 120, 38 to 120, 39 to 120, 40 to 120, 20 to 80, 30 to 80, 31 to 80, 32 to 80, 33 to 80, 34 to 80, 35 to 80, 36 to 80, 37 to 80, 38 to 80, 39 to 80, or 40 to 80 amino acid residues. In certain embodiments, the polypeptide linker has a length of from 12 to 80, 20 to 60, 30 to 60, 30 to 50, 30 to 40, 40 to 50, 30 to 45, or 35 to 45 amino acid residues.

[0177] In certain embodiments, the peptide linker has a length of 12-80 amino acid residues.

[0178] Any suitable polypeptide linkers can be used. For example, the polypeptide linker may comprise or consist of amino acid residues selected from the amino acids glycine (G) , serine (S) , alanine (A) , methionine (M) , asparagine (N) , glutamine (Q) , cysteine (C) and lysine (K) . In some embodiments, the polypeptide linker can be made up of a majority of amino acids that are sterically unhindered, such as glycine and alanine. In some embodiments, linkers are polyglycines, polyalanines, combinations of glycine and alanine (such as poly (Gly-Ala) ) , or combinations of glycine and serine (such as poly (Gly-Ser) ) .

[0179] In certain embodiments, the peptide linker consists of amino acid residues selected from the group consisting of G, Q, A, E, P, S and T, except for the CRM residue.

[0180] In certain embodiments, the peptide linker comprises or consists of one or more repeats of a repeating sequence, except for the CRM residue. In certain embodiments, the peptide linker comprises or consists of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, or 30 repeats of a repeating sequence, or within any numerical range defined by any two numbers listed above.

[0181] In certain embodiments, the repeating sequence comprises or consists of no more than 4, 5 or 6 types of amino acid residues selected from the group consisting of: G, Q, A, E, P, T and S. In certain embodiments, the repeating sequence comprises or consists of no more than 4, 5 or 6 types of amino acid residues selected from the group consisting of:G, Q, A, E, P, and S. In certain embodiments, the repeating sequence comprises Q. In certain embodiments, the repeating sequence consists of Q and no more than 3, 4 or 5 types of amino acid residues selected from the group consisting of: G, A, E, P, and S.

[0182] In certain embodiments, the repeating sequence consists of G, Q, A, E, and P. In certain embodiments, the repeating sequence consists of G, Q, A, and P.

[0183] In certain embodiments, the peptide linker comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5.CRM residue

[0184] The GLP-1 conjugate provided herein comprises the first CRM residue in the peptide linker and the second CRM residue in the GLP-1 analog. In certain embodiments, both the first CRM residue and the second CRM residue is lysine residue, and the GLP-1 conjugate comprises only two lysine residues. In certain embodiments, the peptide linker comprises only one lysine residue, and the GLP-1 analog also comprises only one lysine residue.

[0185] In certain embodiments, the first CRM residue in the peptide linker can be at any suitable distance from the second CRM residue in the GLP-1 analog, as long as both CRM residues can be properly conjugated. In certain embodiments, the second CRM residue is a naturally occurring residue found in the native GLP-1 sequence, or an introduced residue, for example, by substitution of a naturally occurring residue, or by insertion of a new residue.

[0186] In certain embodiments, the first CRM residue in the peptide linker is at least 5 (10, 15, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 35, 38, 40, 45, 46, 50, 55, 58, 60, 65, 70, 75, or 78) amino acid residues away from the C-terminal amino acid of the GLP-1 analog.CRM

[0187] In certain embodiments, the CRM is conjugated to a lysine residue, optionally the lysine residue is in the peptide linker and / or in the GLP-1 analog.

[0188] In some embodiments, the CRM comprises the structure of below formula (also referred to as -HOOC- (CH2) 16-CO-gGlu-2XADO, where 2XADO means two consecutive ADO moieties, and ADO is short for 8-amino-3, 6-dioxaoctanoic acid) :

[0189] In some embodiments, the CRM comprises the structure of below formula (also referred to as HOOC- (CH2) 16-CO-gGlu-2XADO-EDA-CO-CH2) or HOOC-(CH2) 20-CO-gGlu-2XADO-EDA-CO-CH2) : Conjugates

[0190] In certain embodiments, the GLP-1 conjugate comprises or consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 or SEQ ID NO: 6 .

[0191] In certain embodiments, the GLP-1 conjugate provided herein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 or SEQ ID NO: 6, and two CRMs attached respectively to the two lysine residues. In certain embodiments, the CRM comprises the structure of -HOOC- (CH2) 16-CO-gGlu-2XADO.

[0192] Table 1 below shows the detailed information of each of the exemplary polypeptide conjugates, including SEQ ID NOs of the polypeptide portion, the GLP-1, and the peptide linker, and the CRM residue. Mutations in the GLP-1, as well as the repeating sequences and number of repeats in the peptide linker sequences are also shown. Table 1. Exemplary polypeptide conjugate sequences **: Mutations in GLP-1 means mutations relative to SEQ ID NO: 1, wherein the first residue is 7H, and  the last residue is 37G;#:CRM residue (s) means position of the CRM residue counted from N to C in the polypeptide  sequence containing GLP-1 (wherein the first residue is 7H) with its C-terminus attached to the peptide linker.&:Moiety A refers to HOOC- (CH2) 16-CO-gGlu-2XADO or

[0193] In certain embodiments, the polypeptide conjugate comprises a structure shown below, where the amino acid residues are represented as one letter abbreviations in grey circles: Molecule 001: or Molecule 012: Pharmaceutical composition

[0194] In some embodiments, the GLP-1 conjugate is administered in the form of a suitable pharmaceutical composition comprising the GLP-1 conjugate and a pharmaceutically acceptable excipient. In some embodiments, the pharmaceutical composition is a liquid pharmaceutical composition. In some embodiments, the pharmaceutically acceptable excipient comprises a buffer and an isotonic agent.

[0195] The term “pharmaceutically acceptable” indicates that the designated excipient (s) is generally chemically and / or physically compatible with the other ingredients comprising the formulation, and physiologically compatible with the recipient thereof.

[0196] A “pharmaceutically acceptable excipient” refers to an ingredient in a pharmaceutical formulation, other than an active ingredient, which is bioactivity acceptable and nontoxic to a subject.

[0197] Examples of pharmaceutical acceptable excipients for liquid formulation may include, pharmaceutically acceptable liquid, gel, solid carriers, aqueous vehicles, nonaqueous vehicles, antimicrobial agents, isotonic agents, buffers, antioxidants, anesthetics, suspending / dispending agents, sequestering or chelating agents, diluents, adjuvants, excipients, or non-toxic auxiliary substances, other components known in the art, or various combinations thereof.

[0198] In some embodiments, the liquid pharmaceutical composition is an aqueous solution. An aqueous solution can contain, for example, at least 70%w / w, at least 75%w / w, at least 80%, at least 85%w / w, at least 90%w / w, or at least 95%w / w water.

[0199] In certain embodiments, the buffer is selected from the group consisting of a phosphate buffer, citrate buffer, acetate buffer, histidine buffer, glycine buffer, carbonate buffer, borate buffer, glutamate buffer, glycylglycine buffer, lysine buffer, and arginine buffer.

[0200] In certain embodiments, the buffer is a phosphate buffer.

[0201] In certain embodiments, the phosphate buffer is selected from the group consisting of sodium dihydrogen phosphate, disodiumhydrogen phosphate, sodium phosphate, or a hydrate thereof.

[0202] In certain embodiments, the hydrate is dodecahydrate or dihydrate.

[0203] In certain embodiments, the phosphate buffer is disodiumhydrogen phosphate dodecahydrate or disodium phosphate dehydrate.

[0204] In certain embodiments, the buffer is a citrate buffer.

[0205] In certain embodiments, the citrate buffer comprises a mixture of citric acid anhydrous and trisodium citrate (or a hydrate thereof, e.g. trisodium citrate dihydrate) .

[0206] In certain embodiments, the buffer is a histidine buffer.

[0207] In certain embodiments, the isotonic agent is selected from the group consisting of sodium chloride, propylene glycol, sorbitol, sucrose, glycine, mannitol, lactose monohydrate, arginine, myoinositol and dimethylsulfon.

[0208] In certain embodiments, the isotonic agent is sodium chloride.

[0209] In certain embodiments, the isotonic agent is propylene glycol.

[0210] In certain embodiments, the isotonic agent is mannitol.

[0211] In certain embodiments, the pharmaceutical excipient further comprises a preservative, a chelating agent, and / or a stabilizer.

[0212] In certain embodiments, the pharmaceutical composition has a pH of about 6.5 to about 8.3 (e.g. about 6.5 to 7.4, or from 7.4 to 8.3) .

[0213] In certain embodiments, the pharmaceutical composition has a pH of about 7.4.

[0214] In certain embodiments, the pharmaceutical composition has about 1-80 mg / ml, 1-100 mg / ml or 1-120 mg / ml, or optionally, 5-40 mg / ml, 5-80 mg / mL, 5-100 mg / ml, or 5-120 mg / ml of the GLP-1 conjugate (e.g. about 5-90 mg / mL, about 5-70 mg / mL, about 5-60 mg / mL, about 5-50 mg / mL, about 5-30 mg / mL, about 5-20 mg / mL, about 5-10 mg / mL) . In certain embodiments, the pharmaceutical composition has about 20 mg / ml of the GLP-1 conjugate. EXAMPLES

[0215] Below examples illustrate the clinical trials on healthy, overweight or obese, or Type 2 diabetic subjects involving using a GLP-1 conjugate, i.e., Molecule 012 having a structure shown below: Example 1. A phase 1, randomized, parallel assignment, double-blind, placebo- controlled, single ascending dose, safety, tolerability, and pharmacokinetic study of Molecule 012 in healthy participants.

[0216] 1.1 Study Objectives

[0217] Primary Objectives:

[0218] To assess safety, tolerability of a single escalation dose of Molecule 012 in healthy participants

[0219] Secondary Objectives:

[0220] To assess the pharmacokinetics (PK) profile of a single escalation dose of Molecule 012 in healthy participants.

[0221] To assess and characterize the anti-drug antibody (ADA) response.

[0222] Exploratory Objectives:

[0223] To assess the change in pharmacodynamics (PD) parameters (including plasma FPG, insulin, C-peptide, glucose AUC 0-72h, insulin AUC 0-72h, C-peptide AUC 0-72h, oral glucose tolerance test (OGTT) , glucose AUC0-2h, insulin AUC0-2h, body weight, appetite and meal completion) following a single escalation dose of Molecule 012 in healthy participants.

[0224] 1.2 Methodology

[0225] This study comprises a randomized, parallel assignment, double-blind, placebo-controlled, single ascending dose, sequential cohort design. In each of 4 cohorts (Cohorts 1 to 4) , 6 participants received Molecule 012, and 2 participants received placebo, for a total of 8 participants.

[0226] Potential participants were screened to assess their eligibility to enter the study in a Screening period from Days -28 to -2, with a Check-in visit on Day -1, prior to the scheduled treatment on Day 1. Each participant participated in one treatment period and one cohort only.

[0227] All participants received a single subcutaneous (SC) Molecule 012 dose or volume-matched placebo, of 0.03, 0.09, 0.13, or 0.26 mg / kg respectively, for Cohorts 1 to 4. Study drug was administered under fasted conditions.

[0228] 1.3 Participants

[0229] Number of Participants: 32

[0230] Main Inclusion Criteria:

[0231] Male or female, age 18-55 years, both inclusive, at time of informed consent.

[0232] Body Mass Index (BMI) between 22-35.0 kg / m2, both included.

[0233] In good health, determined by no clinically significant findings from medical history, physical examination, 12-lead ECG, vital signs measurements, and clinical laboratory evaluations at Screening and before administration of study drug, as assessed by the Investigator.

[0234] 1.4 Investigational Product, Dosage, and Mode of Administration

[0235] Investigational Product: Molecule 012 injection.

[0236] Dose and Form: 1 ml (vial) .

[0237] Mode of Administration: SC.

[0238] Subcutaneously administered single dose of Molecule 012, ranging from 0.03 to 0.26 mg / kg by cohort.

[0239] 1.5 Primary and Secondary Endpoints

[0240] Primary Endpoints:

[0241] Number of treatment-emergent adverse events (TEAEs)  / serious adverse events (SAEs) from Baseline to 71 days after dosing.

[0242] Secondary Endpoints:

[0243] Maximum observed plasma concentration of Molecule 012 (Cmax) ;

[0244] Area under the drug-time curve from 0 h after dosing to the last quantifiable concentration time point (AUC0-last) ;

[0245] Area under the drug-time curve to infinity (AUC0-inf) ;

[0246] Additional PK parameters: elimination half-life (t1 / 2) , time to maximum observed concentration (Tmax) , apparent clearance (CL / F) , and apparent volume of distribution (VZ / F) ;

[0247] The Incidence of ADA developed against Molecule 012 after dosing;

[0248] Incidence and severity of local injection site reactions.

[0249] 1.6 Results

[0250] Figure 1 shows plasma concentrations over time after single dose administration of Molecule 012 to the subject, ranging from 0.03 to 0.26 mg / kg. Figure 2 shows dose-proportional over the dose range.

[0251] Table 2 shows Pharmacokinetics of Molecule 012. PK profile of Molecule 012 supports bi-weekly or monthly dosing (mean t1 / 2 of 260-273 hours) . Table 2. Pharmacokinetics of Molecule 012

[0252] Figure 3 shows that a single dose of Molecule 012 promotes sustained weight loss. Dose-dependent weight loss was observed after a single dose of Molecule 012 administration. The dose level of 0.03 mg / kg and placebo didn’ t induce weight loss. However, the dose level of ≥ 0.09 mg / kg yielded robust weight loss persisting for at least 15 days. Notably, weight loss effects persisted for up to 71 days following single dose administration at 0.26 mg / kg dose level. Therefore, the dose level of 0.09 mg / kg (equal to 8 mg per dose) is considered as the minimum effective dose. The 2-week exposure AUC0-336h of 0.09 mg / kg is 282 h*ug / mL and thus the total 4-week exposure AUC0-672h with biweekly dosing is 563 h*ug / mL) .

[0253] 1.7 Discussion

[0254] This study is the first in human trial of Molecule 012 (≤0.26mg / kg) in Australian healthy people. It was safe and tolerable, no serious adverse events (SAEs) , and no subjects withdrew from the study due to adverse events (AEs) .

[0255] There are no clinically significant abnormal changes in the subjects’ vital signs and electrocardiograms. Only one case of clinically significant abnormal changes was noted in laboratory tests: elevated blood lipase, 2 days after Molecule 012 administration.

[0256] Most of the drug-related AEs were gastrointestinal adverse reactions (related to the drug mechanism of action, such as nausea, decreased appetite and vomiting) , and considered as mild (Grade I) or moderate (Grade II) . Most of the gastrointestinal related adverse reactions occurred within 1-2 days after the single dose administration, and were completely normalized without drug intervention during follow-up period. PK profile and durable weight loss support further clinical investigation of Molecule 012 with biweekly or monthly dosing. Example 2. A phase Ic study. PartA: randomized, double-blind, placebo-controlled,  multi-dose escalation study to evaluate the safety, tolerability and pharmacokinetics of Molecule 012 injection in overweight or obese subjects. Part B: open-label extension Study, investigating the safety, tolerability and pharmacokinetics of Molecule 012

[0257] 2.1 Study Objectives

[0258] Primary Objectives:

[0259] To evaluate the safety and tolerability of Molecule 012 injection after multiple doses in overweight or obese subjects.

[0260] Secondary Objectives:

[0261] To evaluate the pharmacokinetics (PK) of Molecule 012 injection after multiple doses in overweight or obese subjects.

[0262] To evaluate the pharmacodynamics (PD) of Molecule 012 injection after multiple doses in overweight or obese subjects. PD includes changes from baseline in body weight, waist circumference, hip circumference, BMI, blood pressure, heart rate, lipids and HbA1c levels. Proportion of subjects with body weight loss ≥ 5.0%, 10%, 15%from baseline)

[0263] To evaluate the immunogenicity of Molecule 012 injection.

[0264] Exploratory Objectives:

[0265] To explore the maintenance effect on weight loss after administering Molecule 012 injection once every four weeks.

[0266] 2.2 Methodology

[0267] Part A: This is a single-center, randomized, double-blind, placebo -controlled Phase Ic study in overweight or obese subjects to evaluate the safety, tolerability, pharmacokinetics, and pharmacodynamics of multiple dose escalation of Molecule 012 injection.

[0268] A total of at least 28 subjects are planned to be enrolled, and 2 dose groups, 14 subjects in each group. Based on the results of dose escalation, if the maximum tolerated dose (MTD) is not reached, a higher dose may be explored to increase the number of subjects. Subjects receive either Molecule 012 injection or an equal volume of placebo.

[0269] Part B: This is an extension study to be conducted in Cohort 2 to evaluate the safety, tolerability, pharmacokinetics of Molecule 012 injection administered once every 4 weeks and to explore the maintenance effect on weight loss.

[0270] 2.3 Participants

[0271] Sample Size:

[0272] Part A: 28 subjects, divided into two dose groups, 14 subjects in each dose group (10 subjects in the Molecule 012 injection group and 4 subjects in the placebo group) .

[0273] Part B: 8 participants in total (from Cohort 2)

[0274] Key inclusion criteria: 24 kg / m2 ≤ BMI < 28 kg / m2 with at least one comorbidity (prediabetes, T1 D or T2D excluded) , or 28 kg / m2 ≤ BMI ≤ 40 kg / m2 with or without comorbidities.

[0275] 2.4 Investigational Product, Dosage, and Mode of Administration

[0276] Investigational product: Molecule 012 Injection. Dosage: 20 mg / mL, 1.0 mL

[0277] Reference drug: Placebo Injection. Dosage: 1.0 mL

[0278] Mode of Administration: SC.

[0279] 2.5 Dosing Regimen

[0280] Part A: The study drug was administered by subcutaneous abdominal injection once every 2 weeks throughout the study period. An equal volume to Molecule 012 injection is administered in the placebo group. The specific dosing regimen is shown in the below Table 3 and Figure 4: Table 3. dosing regimen of phase Ic study.

[0281] Part B: Participants from Cohort 2, who agreed to participate in the extension study, received 120 mg of Molecule 012 injection, administered via subcutaneous abdominal injection for a total of three times, once every 4 weeks, at W0, W4 and W8, respectively (see Figure 4) .

[0282] 2.6 Results

[0283] Safety: In patients with overweight / obesity, Molecule 012, up-titrated to and maintained at 40 mg Q2W, 80 mg Q2W and 120 mg Q4W was safe and well-tolerated in overweight or obese subjects. The majority of TEAEs during the study were Grade 1 or 2, with no TRAEs leading to drug discontinuation or drug-related SAEs occurring. No dose modification was performed. The most common TEAEs were gastrointestinal adverse events (including nausea, diarrhoea, and vomiting) and decreased appetite, and the incidence of gastrointestinal TEAEs / TRAEs decreased over time with increased number of administrations, suggesting development of tolerance to GIAEs. All AEs were typical for GLP-1 RA drugs and no additional risk signals were observed.

[0284] Pharmacokinetics: Table 4 shows the PK parameters at steady state. Multiple administrations of Molecule 012 showed no significant accumulation at target doses. The exposure levels of Molecule 012 were proportional across the dose range studied. The mean t1 / 2, ss ranging between 228 h to 256 h. Combined with the weight changes during the follow-up period, these findings support a dosing interval of once every two weeks or once a month. Table 9 shows the exposure AUC0-672 of doses 16 mg, 40 mg, 80 mg and 160 mg and 320 mg. Table 4 Pharmacokinetics of Molecule 012 at steady state

[0285] Pharmacodynamics: The figure 5 shows the body weight change from baseline. Molecule 012 demonstrated significantly higher weight reduction compared to placebo. The percentage change from baseline in body weight was -9.6%and -13.0%in the Molecule 012 40 mg Q2W group (Week 12) and 80 mg Q4W group (Week 14) , respectively17.1%body weight reduction at 30 weeks in part B further with Molecule 012 120 mg Q4W. Notably, during the titration phase, the dose levels of 10 mg and 20 mg induced profound weight loss at week 2 and week 4, respectively, indicating that 10 mg could be considered an effective dose with biweekly dosing.

[0286] Clinically relevant improvements were observed in blood pressure, waist circumference, insulin sensitivity and lipids.

[0287] Overall, the results support further investigation of Molecule 012 dosed biweekly or monthly as a treatment for obesity. Example 3. A phase Id / IIa, single-center, randomized, double-blind, placebo- controlled, multiple-dose escalation study to evaluate the safety, tolerability, and pharmacokinetics of Molecule 012 injection monotherapy in Chinese adult subjects with type 2 diabetes mellitus (T2DM)

[0288] 3.1 Study Objectives

[0289] Primary Objectives:

[0290] To evaluate the safety and tolerability of multiple doses of Molecule 012 injection in subjects with type 2 diabetes mellitus.

[0291] Secondary Objectives:

[0292] To evaluate the pharmacokinetic (PK) profile of multiple doses of Molecule 012 injection in subjects with type 2 diabetes mellitus.

[0293] To evaluate the pharmacodynamic (PD) profile of multiple doses of Molecule 012 injection in subjects with type 2 diabetes mellitus.

[0294] To evaluate the immunogenicity of Molecule 012 injection.

[0295] Exploratory Objectives:

[0296] To evaluate the preliminary clinical efficacy of Molecule 012 injection in subjects with type 2 diabetes mellitus.

[0297] 3.2 Methodology

[0298] This is a single-center, randomized, double-blind, placebo -controlled, multiple-dose escalation phase Id / IIa study in Chinese subjects with type 2 diabetes mellitus intervened with dietary and exercise and / or treated with oral hypoglycemic agents. The aim of this study is to evaluate the safety, tolerability, pharmacokinetics, pharmacodynamics, and preliminary clinical efficacy of Molecule 012 injection in adult subjects with type 2 diabetes mellitus.

[0299] A total of 28 subjects were enrolled. There are two dose groups (40 mg and 80 mg) , with 14 subjects in each group (10 subjects in the Molecule 012 injection group and 4 subjects in the placebo group) . During the study, Subjects received either Molecule 012 injection or an equal volume of placebo.

[0300] 3.3 Participants

[0301] A total of 28 subjects are to be enrolled. There are two dose groups, with 14 subjects in each group (10 subjects in the Molecule 012 injection group and 4 subjects in the placebo group) .

[0302] Key inclusion criteria:

[0303] At the time of screening and before randomization: 7.0%≤ glycosylated hemoglobin (HbA1c) ≤ 10.5%

[0304] 3.4 Investigational Product, Dosage, and Mode of Administration

[0305] Investigational product: Molecule 012 Injection. Dosage: 20 mg / mL, 1.0 mL

[0306] Reference drug: Placebo Injection. Dosage: 1.0 mL

[0307] Mode of Administration: SC, administered once bi-weekly.

[0308] 3.5 Dosing Regimen

[0309] There were 2 dose groups: 40 mg and 80 mg, and each subject received only one corresponding dose. Each cohort started with an initial dose of 10 mg.

[0310] The specific dosing regimen is shown in the Table 5 below: Table 5. dosing regimen of phase Id / IIa study.

[0311] 3.6 Results

[0312] Safety: In subjects with type 2 diabetes mellitus, Molecule 012, up-titrated to and maintained at 40 mg Q2W and 80 mg Q2W was safe and well-tolerated. The majority of TEAEs during the study were Grade 1 or 2, with no SAEs or TEAEs leading to drug discontinuation. No dose modification was performed. The most common TEAEs were gastrointestinal adverse events (including nausea, diarrhoea, and vomiting) and decreased appetite, and the incidence of gastrointestinal TEAEs / TRAEs decreased over time with increased number of administrations, suggesting development of tolerance to GIAEs. All AEs were typical for GLP-1 RA drugs and no additional risk signals were observed.

[0313] Pharmacodynamics: The figure 6 shows the HbA1c change from baseline. Molecule 012 demonstrated significantly HbA1c reduction compared to placebo. The percentage change from baseline in HbA1c was -1.94%and -2.52%in the Molecule 012 40 mg Q2W group and 80 mg Q2W group at week 14. Placebo-adjusted HbA1c reduction at week 12 (40 mg Q2W: -1.45%; 80 mg Q2W: -1.89%) maintained for 4 weeks after the last dose, by week 16 (40 mg Q2W: -1.68%; 80 mg Q2W: -2.38%) . Notably, during the titration phase, the dose levels of 20 mg induced profound HbA1c reduction at week 4, indicating that 20 mg could be considered an effective dose with biweekly dosing in type 2 diabetes mellitus.

[0314] Clinically relevant improvements were observed in fasting plasma glucose, fasting glucagon, body weight, waist circumference and hip circumference.

[0315] Overall, the results support further investigation of Molecule 012 dosed biweekly or monthly as a treatment for type 2 diabetes mellitus. Example 4. A Phase II, randomized, double-blind, placebo-controlled study to  evaluate the efficacy, safety, and pharmacokinetic characteristics of Molecule 012 injection in overweight or obese subjects.

[0316] 4.1 Study Objectives

[0317] Primary Objectives:

[0318] To evaluate the percentage change in body weight from baseline after 24 weeks of treatment with Molecule 012 injection in overweight / obese subjects.

[0319] Secondary Objectives:

[0320] To evaluate the effects of Molecule 012 injection on other weight-related parameters in overweight / obese subjects.

[0321] To evaluate the effects of Molecule 012 injection on cardiovascular and metabolic-related parameters in overweight / obese subjects.

[0322] To evaluate the safety of Molecule 012 injection in overweight / obese subjects.

[0323] To evaluate the pharmacokinetic (PK) profile of Molecule 012 injection in overweight / obese subjects.

[0324] To evaluate the immunogenicity of Molecule 012 injection in overweight / obese subjects.

[0325] Exploratory Objectives:

[0326] To explore the effects of Molecule 012 injection on biomarkers (high-sensitivity C-reactive protein [hsCRP] ) in overweight / obese subjects.

[0327] 4.2 Methodology

[0328] The study employs a multi-center, randomized, double-blind, placebo-controlled, parallel design to evaluate the efficacy, safety, immunogenicity, and PopPK characteristics of Molecule 012 injection in adult subjects in China who are obese (BMI ≥28 kg / m2) or overweight (24 kg / m2 ≤ BMI < 28 kg / m2) and have at least one weight-related comorbidity.

[0329] The study plans to enroll a total of 300 subjects, who are randomly assigned in a 2: 2: 3: 3: 2 ratio to the following groups: Molecule 012 injection 160 mg Q2W group, 80 mg Q2W group, 160 mg Q4W group, 80 mg Q4W group, and placebo group. The placebo group subjects are matched to the above Molecule 012 injection dose groups in a 2:2: 3: 3 ratio. The blinding of the placebo and Molecule 012 injection dose groups are maintained by matching the volume and frequency of administration.

[0330] 4.3 Participants

[0331] A total of 300 subjects are planned to be enrolled. Among them, there are 75 subjects in each group of Molecule 012 injection 80 mg Q4W group and 160 mg Q4W group, and 50 subjects in each group of Molecule 012 injection 80 mg Q2W group, 160 mg Q2W group, and placebo group.

[0332] Key inclusion criteria:

[0333] Body mass index (BMI) at the time of screening: a) BMI ≥ 28 kg / m2, regardless of the comorbidity; b) 24 kg / m2 ≤ BMI < 28 kg / m2, with at least one comorbidity (prediabetes, hypertension, hyperlipidemia, fatty liver, over weight-induced obstructive sleep apnea syndrome, weight-bearing joint pain, etc. ) .

[0334] 4.4 Investigational Product, Dosage, and Mode of Administration

[0335] Investigational product: Molecule 012 Injection. Dosage: 60 mg / mL, 1.0 mL

[0336] Reference drug: Placebo Injection. Dosage: 1.0 mL

[0337] Mode of Administration: SC, administered once bi-weekly or once every four weeks.

[0338] 4.5 Dosing Regimen

[0339] The specific dosing regimen is shown in the Table 6 below: Table 6. dosing regimen of phase II study.

[0340] 4.6 Results

[0341] Safety: In patients with overweight / obesity, Molecule 012, up-titrated to and maintained at 80 mg Q4W, 160 mg Q4W, 80 mg Q2W and 160 mg Q2W was safe and well-tolerated in overweight or obese subjects. Six (2%) of 252 participants treated with Molecule 012 discontinued treatment due to adverse events. Gastrointestinal adverse events, which were mostly mild to moderate, were reported in 51 (68%) in the Molecule 012 80 mg Q4W group, 55 (72%) in the Molecule 012 160 mg Q4W group, 34 (68%) in the Molecule 012 80 mg Q2W group, 31 (61%) in the Molecule 012 160 mg Q2W group, and 9 (18%) in the placebo group.

[0342] Pharmacokinetics: Table 7 shows the PK parameters at steady state. Multiple administrations of Molecule 012 showed no significant accumulation at target doses. Both dose groups achieved peak concentrations at 24 hours post-dose, and exhibited comparable drug exposure over the dosing interval. The mean t1 / 2, ss ranging between 242 h to 282 h. Table 7 Pharmacokinetics of Molecule 012 at steady state

[0343] Pharmacodynamics: Figure 7 shows the percentage weight change from baseline. At week 24, the mean percentage change in body weight was -10.4% (SE 0.6) in the Molecule 012 80 mg Q4W group, -13.7% (0.6) in the Molecule 012 160 mg Q4W group, -12.9% (0.8) in the Molecule 012 80 mg Q2W group, -14.0% (0.8) in the Molecule 012 160 mg Q2W group versus -2.3% (0.8) in the placebo group, and the estimated treatment differences versus placebo were -8.0% (95%CI -10.0 to -6.1) , -11.3% (-13.3 to -9.4) , -10.6% (-12.7 to -8.5) , and -11.7% (-13.8 to -9.6) , respectively (all p<0.0001) . Example 5. A Phase II, randomized, double-blind, placebo-controlled study to  evaluate the efficacy and safety of Molecule 012 injection in type 2 diabetes mellitus subjects.

[0344] 5.1 Study Objectives

[0345] Primary Objectives:

[0346] To evaluate the efficacy of Molecule 012 injection after 20 weeks of treatment in type 2 diabetes mellitus (T2DM) subjects.

[0347] Secondary Objectives:

[0348] To evaluate the safety of Molecule 012 injection after 20 weeks of treatment in T2DM subjects

[0349] To evaluate the immunogenicity of Molecule 012 injection in T2DM subjects

[0350] To evaluate the population pharmacokinetics (PopPK) of Molecule 012 injection in T2DM subjects

[0351] 5.2 Methodology

[0352] The study employs a multi-center, randomized, double-blind, placebo-controlled, parallel design to evaluate the efficacy and safety, immunogenicity, and PopPK characteristics of Molecule 012 injection in adult T2DM subjects in China.

[0353] The study plans to enroll a total of 216 T2DM subjects, who are inadequately controlled by life style intervention or metformin monotherapy, randomly assigned in 1: 1: 1: 1 ratio to the following groups: Molecule 012 injection 40 mg Q2W group, 80 mg Q2W group, 120 mg Q4W group, and placebo group, stratified by receiving metformin or not at screening. The placebo group subjects are matched to the above Molecule 012 injection dose groups in 1: 1: 1 ratio. The blinding of the placebo and Molecule 012 injection dose groups are maintained by matching the volume and frequency of administration.

[0354] 5.3 Participants

[0355] A total of 216 subjects are planned to be enrolled and there are 54 subjects in each group.

[0356] Key inclusion criteria:

[0357] Diagnosed as T2DM (WHO criteria 1999 and supplementary criteria 2011) and meet either of the following 2 criteria: 1. Received diet and exercise intervention only without any antidiabetics for ≥8 weeks before screening; 2. Received stable dose of metformin ≥ 1500 mg / day (or maximum tolerated dose ≥ 1000 mg / day) on the basis of diet and exercise intervention for ≥8 weeks before screening. HbA1c ≥7.5 and ≤11.0% (local lab) , HbA1c ≥7.0 and ≤10.5% (central lab) at screening.

[0358] 5.4 Investigational Product, Dosage, and Mode of Administration

[0359] Investigational product: Molecule 012 Injection. Dosage: 60 mg / mL, 1.0 mL

[0360] Reference drug: Placebo Injection. Dosage: 1.0 mL

[0361] Mode of Administration: SC, administered once bi-weekly or once every four weeks.

[0362] 5.5 Dosing Regimen

[0363] The specific dosing regimen is shown in the Table 8 below. Table 8. dosing regimen of phase II study. Example 6 The exposure of Molecule 012 effective doses. Based on the data from the  clinical trials, a total amount of 16 mg-320 mg Molecule 012 every four weeks administered to a subject in one or more doses can effectively reduce body weight or improve glycemic control.

[0364] Table 9 shows the exposure of AUC0-672h resulting from administering a total amount of Molecule 012 every four weeks (16mg, 40mg, 80mg, 160mg, 320mg) . Table 9. Summary of AUC0-672h resulting from administering a total amount of Molecule  012 every four weeks. Example 7 Pharmacokinetic measurement of Molecule 012 and Molecule 001 in rats  (data cited from WO2022068920A)

[0365] Method: 6-8 weeks male SD rats were administrated in a single subcutaneous dose of 15 nmol / kg protein (n=3 / group) and a single intravenous dose of 15 nmol / kg protein (n=3 / group) , respectively. Plasma samples were collected pre-dose (-5 min) , 0.5 hr, 1 hr, 2 hr, 4 hr, 6 hr, 8 hr, 24 hr, 32 hr, 48 hr, 72 hr, 96 hr, 120 hr, 144 hr, 168 hr, 192 hr, 216 hr and 240 hr after subcutaneous administration. Plasma samples were collected pre-dose (-5 min) , 0.083 hr, 0.25 hr, 0.5 hr, 1 hr, 2 hr, 4 hr, 6 hr, 8 hr, 24 hr, 32 hr, 48 hr, 72 hr, 96 hr and 120 hr after intravenous administration The concentrations of the polypeptide conjugates in the plasma were measured by LC-MS / MS method. Based on the graph showing plasma concentration of each polypeptide conjugate versus time after subcutaneous injection, the pharmacokinetic parameters were calculated by WinNonlin. Table 10: Pharmacokinetic parameters of GLP-1 polypeptide conjugates in rats.  Pharmacokinetic data were analyzed by WinNonlin software. Tmax, Cmax, T1 / 2, AUC were calculated for each molecule. NA: not available.

[0366] Conclusion: As shown in Table 10, Molecule 001 and 012 showed comparable pharmacokinetic profiles in rat. Thus, the dosing regimen of Molecule 012 can also be applied to Molecule 001.

Claims

1.A method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a GLP-1 conjugate to result in a AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL in the subject, wherein the metabolic condition is selected from the group consisting of:a) increased HbA1c;b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes;c) overweight or obesity, increased body weight and / or food intake; andd) any combination of a) , b) and / or c) .2.The method of claim 1, the GLP-1 conjugate is administered to result in a AUC0-672h of at least about 1500 h*ug / mL.3.The method of claim 1 or 2, the GLP-1 conjugate is administered to result in a AUC0-672h of at least about 3100 h*ug / mL.4.The method of any one of the preceding claims, the GLP-1 conjugate is administered to result in a AUC0-672h of at least about 6200 h*ug / mL.5.The method of any one of the preceding claims, the GLP-1 conjugate is administered to result in a AUC0-672h of at least about 12000 h*ug / mL.6.A method of treating a metabolic condition in a subject in need thereof, comprising step S1 comprising administering GLP-1 conjugate to a subject in one or more doses that provide a total amount of about 16 mg to about 320 mg GLP-1 conjugate every four weeks, thereby treating the metabolic condition, wherein the metabolic condition is selected from the group consisting of:a) increased HbA1c;b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes;c) overweight or obesity, increased body weight and / or food intake; andd) any combination of a) , b) and / or c) .7.The method of claim 6, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate no more frequently than once weekly, once bi-weekly, once every three weeks, once every four weeks, once every five weeks, once every six weeks, once every seven weeks, once every eight weeks, once every nine weeks, or once every ten weeks.8.The method of claim 6, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once weekly, once bi-weekly, once every three weeks, once every four weeks, once every five weeks, once every six weeks, once every seven weeks, once every eight weeks, once every nine weeks, or once every ten weeks.9.The method of any one of claims 6-8, wherein the step S1 comprises administering GLP-1 conjugate to the subject in one or more doses that provide a total amount of about 18 mg to about 320 mg, about 20 mg to about 320 mg, about 30 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 320 mg, about 60 mg to about 320 mg, about 80 mg to about 320 mg, about 120 mg to about 320 mg, or about 160 mg to about 320 mg of the GLP-1 conjugate every four weeks.10.The method of any one of claims 6-9, wherein the step S1 comprises administering GLP-1 conjugate to the subject in one or more doses that provide a total amount of about 16 mg, about 18 mg, about 20 mg, about 30 mg, about 40 mg, about 60 mg, about 80 mg, about 120 mg, about 160 mg or about 320 mg of the GLP-1 conjugate every four weeks.11.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once every four weeks at a dose of about 16 mg to about 320 mg, 18 mg to about 320 mg, about 20 mg to about 320 mg, about 30 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 320 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 320 mg, about 80 mg to about 320 mg, about 120 mg to about 320 mg, or about 160 mg to about 320 mg.12.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once every four weeks at a dose of about 16 mg, about 18 mg, about 20 mg, about 30 mg, about 40 mg, about 60 mg, about 80 mg, about 120 mg, about 160 mg or about 320 mg.13.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once every four weeks at a dose of about 40 mg, about 80 mg, about 120 mg, about 160 mg or about 320 mg.14.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once every four weeks at a dose of about 0.16 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.18 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.2 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.26 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.3 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.4 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.4 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.2 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.6 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 0.8 mg / kg to about 3.2 mg / kg, about 1.2 mg / kg to about 3.2 mg / kg, or about 1.6 mg / kg to about 3.2 mg / kg.15.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once every four weeks at a dose of about 0.16 mg / kg, about 0.18 mg / kg, about 0.2 mg / kg, about 0.26 mg / kg, about 0.3 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, about 0.8 mg / kg, about 1.2 mg / kg, about 1.6 mg / kg or about 3.2 mg / kg.16.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once every four weeks at a dose of about 0.4 mg / kg, about 0.8 mg / kg, about 1.2 mg / kg, about 1.6 mg / kg or about 3.2 mg / kg.17.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once bi-weekly at a dose of about 8 mg to about 160 mg, about 9 mg to about 160 mg, about 10 mg to about 160 mg, about 16 mg to about 160 mg, about 18 mg to about 160 mg, about 20 mg to about 160 mg, about 30 mg to about 160 mg, about 40 mg to about 160 mg, about 60 mg to about 160 mg, about 80 mg to about 160 mg, or about 120 mg to about 160 mg.18.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once bi-weekly at a dose of about 8 mg, about 9 mg, about 10 mg, about 16 mg, about 18 mg, about 20 mg, about 30 mg, about 40 mg, about 60 mg, about 80 mg, about 120 mg, or about 160 mg.19.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once bi-weekly at a dose of about 20 mg, about 40 mg, about 60 mg, about 80 mg, about 120 mg, or about 160 mg.20.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once bi-weekly at a dose of about 0.08 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.09 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.13 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.16 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.18 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.2 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.26 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.3 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.4 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.6 mg / kg to about 1.6 mg / kg, about 0.8 mg / kg to about 1.6 mg / kg, or about 1.2 mg / kg to about 1.6 mg / kg.21.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once bi-weekly at a dose of about 0.08 mg / kg, about 0.09 mg / kg, about 0.1 mg / kg, about 0.13 mg / kg, 0.16 mg / kg, about 0.18 mg / kg, about 0.2 mg / kg, about 0.26 mg / kg, about 0.3 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, about 0.8 mg / kg, about 1.2 mg / kg, or about 1.6 mg / kg.22.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once bi-weekly at a dose of about 0.2 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, about 0.8 mg / kg, about 1.2 mg / kg, or about 1.6 mg / kg.23.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once weekly at a dose of about 4 mg to about 80 mg, about 5 mg to about 80 mg, about 8 mg to about 80 mg, about 9 mg to about 80 mg, about 10 mg to about 80 mg, about 10 mg to about 40 mg, about 5 mg to about 40 mg, about 16 mg to about 80 mg, about 18 mg to about 80 mg, about 20 mg to about 80 mg, about 30 mg to about 80 mg, about 40 mg to about 80 mg, or about 60 mg to about 80 mg.24.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once weekly at a dose of about 4 mg, about 5 mg, about 8 mg, about 9 mg, about 10 mg, about 16 mg, about 18 mg, about 20 mg, about 30 mg, about 40 mg, about 60 mg, or about 80 mg.25.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once weekly at a dose of about 5 mg, about 10 mg, about 20 mg, about 40 mg, about 60 mg, or about 80 mg.26.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once weekly at a dose of about 0.04 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.05 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.08 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.09 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.1 mg / kg to about 0.4 mg / kg, about 0.05 mg / kg to about 0.4 mg / kg, about 0.13 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.16 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.18 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.2 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.26 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.3 mg / kg to about 0.8 mg / kg, about 0.4 mg / kg to about 0.8 mg / kg, or about 0.6 mg / kg to about 0.8 mg / kg.27.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once weekly at a dose of about 0.04 mg / kg, about 0.05 mg / kg, about 0.08 mg / kg, about 0.09 mg / kg, about 0.1 mg / kg, about 0.13 mg / kg, 0.16 mg / kg, about 0.18 mg / kg, about 0.2 mg / kg, about 0.26 mg / kg, about 0.3 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, or about 0.8 mg / kg.28.The method of any one of claims 6-10, wherein the step S1 comprises administering the GLP-1 conjugate once weekly at a dose of about 0.05 mg / kg, about 0.1 mg / kg, about 0.2 mg / kg, about 0.4 mg / kg, about 0.6 mg / kg, or about 0.8 mg / kg.29.The method of any one of claims 6-28, further comprising a step S0 prior to the step S1, wherein the step S0 comprises administering the GLP-1 conjugate to the subject in one or more titration doses, wherein each titration dose is lower than the one or more doses in step S1.30.The method of claim 29, wherein the step S0 comprises administering a first titration dose followed by a second titration dose, wherein the second titration dose is higher than the first titration dose.31.The method of claim 30, wherein the step S0 further comprises administering a third titration dose after the second titration dose, wherein the third titration dose is higher than the second titration dose.32.The method of claim 29, wherein the step S0 comprises administering the one or more titration doses no more frequently than once weekly, once bi-weekly, once every three weeks, or once every four weeks.33.The method of claim 29, wherein the step S0 comprises administering the one or more titration doses once weekly, once bi-weekly, or once every four weeks.34.The method of any one of claims 29-33, wherein:i) the one or more titration doses are lower than 20 mg, and the one or more doses in step S1 is 20 mg, optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly or once every four weeks, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once bi-weekly or once every four weeks;ii) the one or more titration doses are lower than 40 mg, and the one or more doses in step S1 is 40 mg, optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly or once every four weeks, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once bi-weekly or once every four weeks; oriii) the one or more titration doses are lower than 80 mg, and the one or more doses in step S1 is 80 mg; optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once bi-weekly or once every four weeks, oriv) the one or more titration doses are lower than 160 mg, and the one or more doses in step S1 is 160 mg; optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once bi-weekly or once every four weeks, orv) the one or more titration doses are lower than 320 mg, and the one or more doses in step S1 is 320 mg; optionally wherein the titration doses are administered once bi-weekly, and optionally the one or more doses in step S1 is administered once every four weeks.35.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 conjugate has a mean plasma half-life in humans of at least 160 hours, at least 170 hours, at least 180 hours, at least 190 hours, at least 200 hours, at least 210 hours, at least 220 hours, at least 230 hours, or at least 240 hours.36.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 conjugate has a mean plasma half-life in humans of about 210 to about 300 hours.37.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 conjugate is administered by parenteral administration.38.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 conjugate is administered subcutaneously.39.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 conjugate is administered in combination with an additional therapeutic agent.40.The method of any one of the preceding claims, wherein the subject is human.41.The method of any one of the preceding claims, wherein the subject has a fasting blood glucose level of 6.1 mmol / L or greater.42.The method of any one of the preceding claims, wherein the subject has a HbA1c level of 6.5%or higher.43.The method of any one of the preceding claims, wherein the subject has a random blood glucose level of 11.1 mmol / L or greater.44.The method of any one of the preceding claims, wherein the subject has a 2-h postprandial blood glucose level of 7.8 mmol / L or greater.45.The method of any one of the preceding claims, wherein the subject has a body mass index (BMI) of at least or higher than 24.46.The method of any one of the preceding claims, wherein the subject is male and has a waistline of 90 cm or longer, or the subject is female and has a waistline of 85 cm or longer.47.The method of any one of the preceding claims, wherein the subject is overweight or suffers from obesity and / or diabetes.48.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 conjugate comprises:a) a GLP-1 analog and a peptide linker that is attached to C-terminus of the GLP-1 analog, andb) a first clearance-reducing moiety (CRM) conjugated to a first CRM residue in the peptide linker, and a second CRM conjugated to a second CRM residue in the GLP-1 analog;wherein:the first CRM residue is at least 5 (10, 15, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 35, 38, 40, 45, 46, 50, 55, 58, 60, 65, 70, 75, or 78) amino acid residues away from the C-terminal amino acid of the GLP-1 analog.49.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 analog comprises no more than 9, 8, 7, 6, 5, or 4 mutations relative to SEQ ID NO: 1 while retaining substantial biological activity of SEQ ID NO: 1.50.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 comprises an amino acid sequence of X7X8EGTFTSDVSSYLEX22 X23AAX26X27FI X30WLVX34GX36G (SEQ ID NO: 2) , wherein: the X7 is H, imidazole-4-acetate (IA) , or imidazolepropionic acid (IPA) ; the X8 is A, G, S, V, Aib, T, I, or L; the X22 is G, or E; the X23 is Q, C or K, the X26 is K, R, or C; the X27 is E, K, or C; the X30 is A, C or K the X34 is R, K, or C, and the X36 is R or G.51.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 analog comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 3.52.The method of any one of the preceding claims, wherein the polypeptide linker has a length of 12-80 amino acid residues.53.The method of any of the preceding claims, wherein the peptide linker consists of amino acid residues selected from the group consisting of G, Q, A, E, P, S and T, except for the CRM residue.54.The method of any one of claims 1-53, wherein the first and the second CRM residues are both lysine residues, and the GLP-1 conjugate comprises only two lysine residues.55.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 conjugate comprises or consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 or SEQ ID NO: 6.56.The method of any one of the preceding claims, wherein the CRM comprises the structure of below formula: 57.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 conjugate comprises a structure shown below, where the amino acid residues are represented as one letter abbreviations in circles: 58.The method of any one of the preceding claims, wherein the GLP-1 conjugate is administered in the form of a liquid pharmaceutical composition comprising the GLP-1 conjugate and a pharmaceutically acceptable excipient.59.A GLP-1 conjugate for use in treating a metabolic condition in a subject in need thereof, wherein the use comprises administering to the subject a GLP-1 conjugate to result in a AUC0-672h of at least about 500 h*ug / mL in the subject, and wherein the metabolic condition is selected from the group consisting of:a) increased HbA1c;b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes;c) overweight or obesity, increased body weight and / or food intake; andd) any combination of a) , b) and / or c) ;wherein the GLP-1 conjugate, subject and / or administering optionally is as defined in any one of claims 6-58.60.A GLP-1 conjugate for use in treating a metabolic condition in a subject in need thereof, wherein the use comprises step S1 comprising administering the GLP-1 conjugate to the subject in one or more doses that provide a total amount of about 16 mg to about 320 mg GLP-1 conjugate every four weeks, and wherein the metabolic condition is selected from the group consisting of:a) increased HbA1c;b) hyperglycemia, impaired glucose tolerance, or non-insulin dependent diabetes;c) overweight or obesity, increased body weight and / or food intake; andd) any combination of a) , b) and / or c) ;wherein the GLP-1 conjugate, subject and / or administering optionally is as defined in any one of claims 6-58.

Images