Solid form of KRAS inhibitor

Abstract

Provided herein are new crystalline form of the compound of formula (A), which is a hydrate, and its pharmaceutical composition and use of the same in treating cancer.

Description

SOLID FORM OF KRAS INHIBITORFIELD OF THE INVENTIONThe present disclosure belongs to the pharmaceutical field and relates in particular to a new crystalline polymorph of 2- ( (S) -4- ( (S) -7- (3-amino-2-fluoro-5-methyl-6- (trifluoromethyl) phenyl) -2- ( ( (2R, 7aS) -2-fluorohexahydro-1H-pyrrolizin-7a-yl) methoxy) -7, 8-dihydro-5H-pyrano [4, 3-d] pyrimidin-4-yl) -1- (2-fluoroacryloyl) piperazin-2-yl) acetonitrile (the compound of formula (A) ) , as well as the preparation procedures thereof, and use thereof in treating cancer.BACKGROUND OF THE INVENTIONThe compound of formula (A) is a potent KRAS inhibitor, which has a sub-nanomolar IC50 against KRASG12C mutant MIA-PA-CA-2 cells and KRASG12C mutant H358 cells, shows good metabolic stability in hepatocellular metabolism experiments, liver microsome metabolism experiments, plasma stability experiments, and whole blood stability experiments, and exhibits high protein unbound rate in plasma, and excellent in vivo pharmacokinetics.The compound of formula (A) was first disclosed in WO2021 / 180181A1, and the crystalline form A of the compound of formula (A) dihydrate was disclosed in WO2023 / 036282A1, both of which are incorporated herein by reference in their entirety.New crystalline forms of the compound of formula (A) were further investigated, and the results was disclosed in this invention.SUMMARY OF THE INVENTIONIn one aspect, the present disclosure provides a crystalline form B of the compound of formula (A) hydrate:wherein the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form B obtained using CuKα radiation includes at least the characteristic peaks located at the following °2θ: 6.035±0.2, 8.079±0.2 and 14.538±0.2.In another aspect, the present disclosure provides a pharmaceutical composition, comprising the crystalline form B disclosed herein, and pharmaceutically acceptable excipients.In another aspect, the present disclosure provides a use of the crystalline form B disclosed herein in the manufacture of a medicament for treating and / or preventing cancer.In another aspect, the present disclosure provides the crystalline form B disclosed herein, for use in treating and / or preventing cancer.In another aspect, the present disclosure provides a method of treating and / or preventing cancer in a subject, comprising administrating to the subject the crystalline form B disclosed herein, or the pharmaceutical composition disclosed herein.In a specific aspect, the cancer mentioned above is solid cancer, such as lung cancer and rectal cancer.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGSFIG. 1 to FIG. 3 show XRPD overlay of polymorphs and pseudo-polymorphs disclosed in the application.FIG. 4 shows XRPD pattern of Form B.FIG. 5 shows DSC thermogram of Form B.FIG. 6 shows TGA thermogram of Form B.FIG. 7 shows DVS isotherm plot of Form B at 25℃.FIG. 8 shows DVS isotherm plot of Form B at 50℃.DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTIONThe present disclosure can be understood more readily by reference to the following detailed description of embodiments of the disclosure and the examples included herein. It is to be understood that the terms used herein are intended to describe specific embodiments only and are not intended to be limiting. It is to be further understood that unless specifically defined by the context, terms used herein shall be given their ordinary meanings as known in the relevant art.As used herein, the singular forms "a" , "an" and "the" include plural references unless specified otherwise. For example, the term "a" compound includes one or more compounds.The term "about" means having a value that falls within the standard error of the accepted mean when considered by a person of ordinary skill in the art. For example, "about" means ±10%of the indicated amount, or ±5%of the indicated amount.As used herein, the term "substantially" means taking into account the typical variability of a particular method and the standard error of a measured value. For example, with respect to the location of an X-ray powder diffraction peak, the term "substantially" is meant to take into account the typical variability in peak location and intensity. Those skilled in the art will recognize that peak location (2θ) will exhibit some variability, typically up to ±0.2°. In addition, those skilled in the art will recognize that relative peak intensities will reveal inter-device variability as well as variability due to crystallinity, preferred orientation, sample surface tested, and other factors known to those of skill in the art.As used herein, the terms "crystalline" , "form" and "crystalline form" refer to a solid composed of molecules with regular repetitive arrangement. Crystalline forms may differ in terms of thermodynamic stability, physical parameters, X-ray structure and preparation processes.The term "amorphous" refers to a solid composed of molecules with disordered arrangement.As used herein, the term "solvate" refers to a crystalline form having a stoichiometric or non-stoichiometric amount of a solvent (e.g., water, methanol, ethyl acetate, etc., or mixtures thereof) in the crystal lattice through non-covalent intermolecular bonding. The term "hydrate" refers to a solvate in which the solvent is water. "Dihydrate" means two equivalent of water molecules are present in the crystal lattice through non-covalent intermolecular bonding.As used herein, the term "anhydrous" refers to a crystalline form that contains less than about 1% (w / w) adsorbed moisture as determined by standard methods such as Karl Fisher analysis.Form B of the compound of formula (A) hydrateThe XRPD pattern of the Form B is listed below:Water activity experiments show Form B is thermodynamically less stable than dihydrate Form A across the whole water activity range at 25℃. Dehydration-rehydration behavior of Form B was investigated by DVS at 25℃ and VH-XRPD.Form B is a hydrate. It can be obtained from DCM, ACN, or ACN / water mixture by equilibration experiments, from ACN / water mixture by slow cooling or fast cooling, from DCM / heptane mixture by reverse anti-solvent addition experiment, or by exposure intermediate forms Form G, J, or K to ambient condition (23-26℃, 75%-85%RH) . Form B is of medium crystallinity. It contains about 3.3 equivalents (8%by weight) of water according to KF result and 2.0 equivalents (5.0%by weight) of water according to TGA result. DSC shows a dehydration peak from about 4℃ and a broad melting peak from about 80℃. TGA shows about 5.0%weight loss at about 80℃. 1H-NMR shows no detectable residual solvent. SEM shows Form B consists of aggregated plate-like particles with a particle size ranging from about 1 μm to 150 μm.Interconversion relationship between anhydrate Form N and hydrates Form B and M was investigated by variable temperature XRPD experiments, variable humidity XRPD experiments and DVS test. Form B converted to anhydrate Form N in <10%RH. Form N is only stable in very low humidity and it converted back to Form B in ≥10%RH at 25℃. When humidity increased to >50%RH at 25℃, Form B converted to hydrate Form M. Form M is only stable in high humidity. It converted back to Form B in <50%RH at 25℃.Form B was kinetically stable in humidity range of 10%RH-50%RH and was considered to be a developable form. Therefore, it was selected for further evaluation in terms of stability, solubility and hygroscopicity and mechanical properties to determine whether Form B also has potential developability.Bulk stability of Form B was evaluated at 25℃ / 92.5%RH in an open container, at 40℃ / 75%RH in an open container, at 25℃ / 60%RH in an open container, and at 60℃ in a tight container for 1 week and 4 weeks. Form B was also stressed under visible light for 1.2 million lux-hrs at 25℃. Form B was chemically stable under these conditions over 1 week. Form B was also stable after stressed at 60℃ in a tight container over 1 week. However, it was not tolerance to high humidity. Form B converted to Form M at 25℃ / 92.5%RH in an open container, at 40℃ / 75%RH in an open container, and at 25℃ / 60%RH in an open container after 1 week. Besides, Form B also converted to Form M in 52%-53%RH chamber at 25℃ after 1 week. Form B remained as Form B in 47%RH. These results suggest that critical relative humidity between Form B and Form M should be close to 50%RH at 25℃.Suspension stability of Form B in 0.5% (w / v) methylcellulose (400 cP) medium was evaluated at 25℃. 2 target concentrations, including 2 mg / mL and 100 mg / mL, were applied. For the suspension of Form B, though no obvious degradation was observed in 0.5% (w / v) methylcellulose (400 cP) medium at 25℃ at 48 hours with 2 selected target concentrations, Form B converted to Form M after 2 hours.Solubility of Form B was investigated in pH 1.2 HCl buffer, pH 4.5 50 mM acetate buffer, pH 6.8 50 mM phosphate buffer, water and pH 1.6 FaSSGF, pH 6.5 FaSSIF-v1, pH 5.0 FeSSIF-v1 at 37℃ for 2h and 24h. Form B showed pH dependent solubility. It showed >173 mg / mL solubility in pH 1.2 HCl buffer, >135 mg / mL solubility in FaSSGF, >2 mg / mL solubility in FeSSIF-v1 and >14 mg / mL solubility in pH 4.5 acetate buffer. While its solubility dropped to 0.5 mg / mL in FaSSIF-v1 and 0.1-0.2 mg / mL in pH 6.8 phosphate buffer. After the solubility test, Form B converted to Form M in FaSSIF-v1, pH 6.8 phosphate buffer and pure water. Since Form M is more stable than Form B in aqueous media, form conversion could also be one of the reasons that leads to solubility decrease over time.Hygroscopicity of Form B was evaluated by dynamic vapor sorption (DVS) test at 25℃ and 50℃. Based on hydration-dehydration behavior of Form B investigated by VH-XRPD at 25℃, Form B converted to hydrate Form M in >50%RH. When relative humidity decreased to 0%RH, Form B dehydrated and converted to Form N. After the DVS test at 25℃, obtained sample remained as Form B. In the DVS test at 50℃, Form B showed similar sorption and desorption behavior in the first cycle as that at 25℃. However, resorption kinetic was slower during the second sorption curve and about 4%moisture gain was observed at 60%RH at 50℃. After the DVS test at 50℃, obtained sample remained as Form B but crystallinity decrease.Mechanical properties for Form B were evaluated by compression, grinding, granulation simulation experiments. Form B showed good tolerance to compression with no form change and no obvious or only slight crystallinity decrease. However, Form B was sensitive to dry grinding and wet granulation in water or ethanol. Form B converted to Form M after wet granulation in water and converted to an amorphous form after wet granulation in ethanol.Form B is a kinetically stable metastable form. It showed reversible dehydration-rehydration behavior at 25℃. It showed overall better solubility than hydrate Form A. Therefore, Form B has potential to be developed. ExampleAcronymsThe Acronyms used in the examples are listed below.Instrumental methodsThe Instruments used in the examples are listed below.Example 1: Preparation of the compound of formula (A)The compound of formula (A) could be prepared according to the procedures disclosed in WO2021 / 180181A1, and WO2023 / 036282A1, and the following route was recited as an example:Example 2: Preparation of the crystalline form A of the compound of formula (A) dihydrateThe procedures in Example 3 of WO2023 / 036282A1 were followed to obtain the crystalline form A of the compound of formula (A) dihydrate.Particularly, the compound of formula (A) was added to ethanol, and the mixture was heated to 50℃. After it was dissolved, water was slowly added (ethanol: water = 5: 1 V / V) to the solution. After stirring at 50℃ for 72 hours, the crystalline form A was filtered and collected.As an alternative method, the compound of formula (A) was added to ethanol (4 V) and stirred until the solution became clear. Water (1 V) was slowly added to the system and crystal seeds of the crystalline form A was added at 20-30℃. Stirring at this temperature for 15 hours, water (3V) was slowly added and the stirring was continued for 1-3 hours. The crystalline form A was filtered and collected.Example 3: Polymorph screening of the compound of formula (A)A supplementary polymorph screening study of the compound of formula (A) was conducted in this invention, trying to identify more potential new polymorphs and pseudo-polymorphs for use in clinical trials.In this study, the crystalline form A and amorphous form of the compound of formula (A) were used as starting material. Polymorphic behaviors of the compound of formula (A) were investigated by equilibration, slow evaporation, fast evaporation, slow cooling, fast cooling, anti-solvent addition, reverse anti-solvent addition and vapor diffusion experiments.In total, 16 crystalline forms were identified to be polymorphs or pseudo-polymorphs of the compound of formula (A) (Table 2) , including 5 hydrates, named as form A, B, M, I and L, 2 anhydrates, named as form D and N, 5 solvates, named as form C, E, F, H and O, and 4 intermediate forms, named as form G, J, K, and P. In addition, amorphous forms were also obtained from most of solvent systems by slow evaporation or fast evaporation, from MeOH / water mixture by anti-solvent addition / reverse anti-solvent addition, from EtOH / water mixture by anti-solvent addition, or by dry grinding of form A or form B, or wet granulation of form B in EtOH.Table 2. Polymorphs or pseudo-polymorphs obtained in the supplementary polymorph screening study and their generation conditionsExample 3.1: Approximate solubility of form A at 25℃ and at 50℃About 5 mg of form A was weighed to a 2 mL glass vial. 20 μL aliquots of each solvents were added to dissolve the drug substance at 25℃. Vortex and sonication were applied to assist dissolution. Max. volume of each solvents added was 1 mL. Approximate solubility was determined by visual observation.About 10 mg of form A was weighed to a 2 mL glass vial. 20 μL aliquots of each solvents were added to dissolve the drug substance at 50℃. Vortex and sonication were applied to assist dissolution. Max. volume of each solvents added was 1 mL. Approximate solubility was determined by visual observation.The results of both solubility tests are shown in Table 3.Table 3. Approximate solubility of form A at 25℃ and at 50℃Explanation “ / / ” : Not carried outExample 3.2: Equilibration with solvents at 25 ℃Based on the above approximate solubility results, about 25 mg of the amorphous form was equilibrated in 0.05-0.33 mL of solvents at 25 ℃ with a stirring bar on a magnetic stirring plate at a rate of 300 rpm.Suspensions with birefringence were filtered through a 0.45 μm nylon membrane filter by centrifugation at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD.The results of the equilibration test are shown in Table 4.Table 4. Equilibration of the amorphous form with solvents at 25℃Explanation “ / / ” : Not carried out.“-” : No comments.“*” : Water activity is calculated by UNIFAC method.Example 3.3: Equilibration with solvents at 5℃ for 2 weeksBased on the above approximate solubility results, about 50 mg of form A was equilibrated in 0.05-0.4 mL of solvents at 5℃ for 2 weeks with a stirring bar on a magnetic stirring plate at a rate of 300 rpm.Obtained suspensions were filtered through a 0.45 μm nylon membrane filter by centrifugation at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD. For samples with different XRPD forms, additional analysis including DSC, TGA and 1H-NMR were performed.The results of the equilibration test are shown in Table 5.Table 5. Equilibration with solvents at 5℃ for 2 weeksExplanation “ / / ” : Not carried out.“-” : No comments.“*” : Water activity is calculated by UNIFAC method.Example 3.4: Equilibration with solvents at 25℃ for 2 weeksBased on the above approximate solubility results, about 40 mg of form A was equilibrated in 0.04-0.4 mL of solvents at 25℃ for 2 weeks with a stirring bar on a magnetic stirring plate at a rate of 300 rpm.Obtained suspensions were filtered through a 0.45 μm nylon membrane filter by centrifugation at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD.The results of the equilibration test are shown in Table 6.Table 6. Equilibration with solvents at 25℃ for 2 weeksExplanation “ / / ” : Not carried out.“-” : No comments.“*” : Water activity is calculated by UNIFAC method.Example 3.5: Equilibration with solvents at 50℃ for 1 weekBased on the above approximate solubility results, about 50 mg of form A was equilibrated in 0.04-0.5 mL of solvents at 50℃ for 1 week with a stirring bar on a magnetic stirring plate at a rate of 300 rpm.Obtained suspensions were filtered through a 0.45 μm nylon membrane filter by centrifugation at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD.The results of the equilibration test are shown in Table 7.Table 7. Equilibration with solvents at 50℃ for 1 weekExplanation “ / / ” : Not carried out.“-” : No comments.“*” : Water activity is calculated by UNIFAC method.Example 3.6: Equilibration under a temperature cycleClear solutions, sticky materials or oil materials obtained from Example

[0060] , Example

[0064] , and Example

[0068] were equilibrated in 0.2-0.5 mL of solvents under a temperature cycle between 5℃ to 50℃ at a heating / cooling rate of 0.1℃ / min for 10 cycles. The temperature was held at 5℃ for 3 hours for each cycle. The equilibration was executed with a stirring bar on a magnetic stirring plate at a rate of 300 rpm.Obtained suspensions were filtered through a 0.45 μm nylon membrane filter by centrifugation at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD.The results of the equilibration test are shown in Table 8.Table 8. Equilibration under a temperature cycleExplanation “-” : No comments.Example 3.7: Crystallization at room temperature by slow evaporationBased on the above approximate solubility results, about 40 mg of Form A was dissolved in 0.32-1.75 mL of solvents. Obtained solutions were filtered through a 0.45 μm syringe nylon membrane filter. The clear solutions were slowly evaporated in ambient condition (about 21-27℃, 76%-86%RH) .Solid residues were investigated by XRPD. For samples with different XRPD forms, additional analysis including DSC, TGA and 1H-NMR were performed.The results of the slow evaporation test are shown in Table 9.Table 9. Crystallization at room temperature by slow evaporationExplanation “ / / ” : Not carried out.Example 3.8: Crystallization at room temperature by fast evaporationBased on the above approximate solubility results, about 40 mg of form A was dissolved in 0.32-1.75 mL of solvents. Obtained solutions were filtered through a 0.45 μm syringe membrane filter. The clear solutions were fast evaporated at room temperature (about 21-27℃) under a dry nitrogen flow.Solid residues were investigated by XRPD.The results of the fast evaporation test are shown in Table 10.Table 10. Crystallization at room temperature by fast evaporationExample 3.9: Crystallization from hot saturated solutions by slow coolingBased on the above approximate solubility results, about 40 mg of form A was dissolved in the minimal amount of selected solvents at 50℃. Obtained solutions were filtered through a 0.45 μm syringe membrane filter. The clear solutions were cooled to 5℃ at 0.1℃ / min. Samples without precipitates at 5℃ were further cooled to -20℃.Precipitates were collected by centrifugation filtration through a 0.45 μm nylon membrane filter at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD.The results of the slow cooling test are shown in Table 11.Table 11. Crystallization from hot saturated solutions by slow coolingExplanation “ / / ” : Not carried out.“-” : No comments.Example 3.10: Crystallization from hot saturated solutions by fast coolingBased on the above approximate solubility results, about 40 mg of form A was dissolved in the minimal amount of selected solvents at 50℃. Obtained solutions were filtered through a 0.45 μm syringe membrane filter. The clear solutions were put into a 0℃ ice bath and agitated.Precipitates were collected by centrifugation filtration through a 0.45 μm nylon membrane filter at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD. Samples without precipitates were kept at 5℃ for about 36 days. Samples without precipitates at 5℃ were further cooled to -20℃.The results of the fast cooling test are shown in Table 12.Table 12. Crystallization from hot saturated solutions by fast coolingExplanation “ / / ” : Not carried out.“-” : No comments.Example 3.11: Crystallization by addition of anti-solventBased on the above approximate solubility results, about 40 mg of form A was dissolved in the minimal amount of selected good solvents at ambient temperature (about 22-28℃) . Obtained solutions were filtered through a 0.45 μm syringe membrane filter. 4-8 folds of anti-solvent were added into the clear solutions slowly until a large amount of solids precipitated out.Precipitates were collected by centrifugation filtration through a 0.45 μm nylon membrane filter at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD.The results of the anti-solvent addition test are shown in Table 13.Table 13. Crystallization by addition of anti-solventExplanation “ / / ” : Not carried out.“-” : No comments.Example 3.12: Crystallization by reverse addition of anti-solventBased on the above approximate solubility results, about 40 mg of form A was dissolved in the minimal amount of selected good solvents at ambient temperature (about 22-28℃) . Obtained solutions were filtered through a 0.45 μm syringe membrane filter. The clear solutions were added into 4-8 folds of anti-solvent quickly.Precipitates were collected by centrifugation filtration through a 0.45 μm nylon membrane filter at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD.The results of the anti-solvent reverse addition test are shown in Table 14.Table 14. Crystallization by reverse addition of anti-solventExplanation “ / / ” : Not carried out.“-” : No comments.Example 3.13: Crystallization by vapor diffusionBased on the above approximate solubility results, about 40-80 mg of form A was dissolved in the minimal amount of selected solvents at room temperature (about 21-27℃) . Obtained solutions were filtered through a 0.45 μm syringe membrane filter. The clear solutions were transferred into 4 mL glass vials covered by aluminized paper with pinholes. Then these 2 or 4 mL lid less vials were placed to 20 mL glass vials. To the 20 mL vials were added anti-solvents. Then the 40 mL vials were capped tightly and placed at room temperature.Precipitates were collected by centrifugation filtration through a 0.45 μm nylon membrane filter at 14,000 rpm. Solid parts (wet cakes) were investigated by XRPD.The results of the vapor diffusion test are shown in Table 15.Table 15. Crystallization by vapor diffusionExplanation “ / / ” : Not carried out.“-” : No comments.Example 4: Interrelationship investigation of polymorphsInterrelationship of form A, B, I and M was investigated with water activity, variable temperature XRPD and variable humidity XRPD experiments.Form transition of hydrate Form A and Form B upon dehydration was investigated by VT-XRPD or VH-XRPD.Example 4.1: Water activity experimentsSince only Form A and Form B were identified as hydrates at first, the first round of water activity experiments were conducted at 25℃ in different solvent systems to determine critical water activity between Form A and Form B.About 5 mg of Form A, 5 mg of Form B, about 1 mg of samples with extra peaks including Form B with three extra peaks, and a mixture of Form A and Form B with extra peaks were added to 0.2-0.5 mL saturated solutions of the solvent systems. Obtained suspensions were stirred at 25℃ for 3 days, respectively. Solid parts (wet cakes) were isolated by centrifugation filtration and investigated by XRPD. (Table 16)Table 16. Water activity experiments-1Initial polymorphs: Form A, Form B, Form B with extra peaks, a mixture of Form A + Form B with extra peaksNote: water activity is calculated by UNIFAC method.Explanation “ / / ” : Not carried out.Since a new hydrate Form I was identified, a second round of water activity experiments were conducted at 25℃ in different solvent systems to determine critical water activity among Form A, Form B, and Form I.About 5 mg of Form A, 5 mg of Form B, about 1 mg of samples with extra peaks including Form B with three extra peaks, a mixture of Form A and Form B with extra peaks, and about 1 mg of free form Form I were added to 0.2-0.5 mL saturated solutions of the solvent systems. Obtained suspensions were stirred at 25℃ for 10 days, respectively. Solid parts (wet cakes) were isolated by centrifugation filtration and investigated by XRPD. (Table 17)Table 17. Water activity experiments-2Note: water activity is calculated by UNIFAC method.Explanation “ / / ” : Not carried out.Since a new hydrate Form M was identified later, a third round of water activity experiments were conducted at 25℃ in different solvent systems to determine critical water activity among Form A, Form B, Form I and Form M.About 5 mg of Form A, 5 mg of Form B, about 5 mg of Form I, and 5 mg of free form Form M were added to 0.1-0.25 mL saturated solutions of the solvent systems. Obtained suspensions were stirred at 25℃ for 2 days, respectively. Solid parts (wet cakes) were isolated by centrifugation filtration and investigated by XRPD. (Table 18)About 3 mg of Form A, and 3 mg of Form M were added to 0.2-0.5 mL saturated solutions of the solvents system. Obtained suspensions were stirred at 25℃ for 1 day, respectively. Solid parts (wet cakes) were isolated by centrifugation filtration and investigated by XRPD. (Table 18)Table 18. Water activity experiments-3Note: water activity is calculated by UNIFAC method.Explanation “ / / ” : Not carried out.Example 4.2: Dehydration study on Form ADehydration behavior of Form A was investigated by variable temperature XRPD.Form A was used as starting material. The temperature cycle, 25℃ (initial) -50℃ (60 min) -25℃, was applied. Initial XRPD analysis was carried out in ambient condition. All the other XRPD analysis was carried out in nitrogen atmosphere at each specific temperature. (Table 19)Table 19. Variable temperature XRPD (VT-XRPD) experiments for Form AExample 4.3: Dehydration study on Form BDehydration behavior of Form B was investigated by variable temperature XRPD.Form B was used as starting material. The temperature cycle, 25℃ (initial) -50℃ (60 min) -25℃, was applied. Initial XRPD analysis was carried out in ambient condition. All the other XRPD analysis was carried out in nitrogen atmosphere at each specific temperature. (Table 20)Table 20. Variable temperature XRPD (VT-XRPD) experiments for Form BExample 4.4: Variable humidity XRPD (VH-XRPD) experiments of Form BInterconversion relationship of Form B, Form M and Form N was investigated by variable humidity XRPD.Form B was used as starting material. One RH cycle was applied at 25℃. XRPD analysis was carried out in each specific relative humidity. Cycle: 40%RH (1h) -80%RH (1h) -40%RH (1h) -10%RH (1h) -0%RH (6h) -10%RH (2h) -20%RH (1h) -40%RH (1h) -80%RH (1h) . (Table 21)Table 21. Variable humidity XRPD (VH-XRPD) experiments of Form BExample 5: Evaluation of Form BExample 5.1: Bulk stability of Form BForm B was placed at 25℃ / 92.5%RH in an open container, at 40℃ / 75%RH in an open container, at 25℃ / 60%RH in an open container and at 60℃ in a closed container for 1 week and 4 weeks. Samples after the stress were characterized by XRPD under protection of Kapton film and HPLC and inspected for color change. The Form B was also stressed under visible light for 1.2 million lux-hrs at 25℃. Samples after the stress were characterized by XRPD under protection of Kapton film and HPLC and inspected for color change. (Table 22)Table 22 Bulk stabilityExplanation A: no change of color; B: slight discolorationC:medium discoloration; D: strong discolorationExample 5.2: Suspension stability of Form BAbout 40 mg or 1003 mg of Form B (equivalent to 40 or 1000 mg of anhydrous free form) was weighed into a 20 mL glass vial, respectively. 20 mL or 10 mL of solubility medium (0.5% (w / v) methylcellulose (400 cP) in purified water) was added. Obtained suspensions were stirred at room temperature (23-25℃) at 400 rpm for 2 hours, 6 hours, 12 hours, 24 hours and 48 hours and then centrifuged at room temperature (23-25℃) at 14,000 rpm for 5 min. Residual solids (wet cakes) were characterized by XRPD under protection of Kapton film to determine physical form. Chemical purity of suspensions was investigated by HPLC. (Table 23)Table 23 Suspension stability for Form B at room temperatureExplanation “ / / ” : Not carried out.Example 5.3: Solubility of Form B22 mg, 152 mg, 520 mg or 566 mg of Form B (equivalent to 20 mg, 150 mg, 500 mg or 550 mg of anhydrous free form, respectively) was weighed into a 20 mL glass vial. 10 mL, 5mL or 3 mL of solubility medium was added. Obtained suspensions / solutions were stirred at 37℃ at 400 rpm for 2 hours and 24 hours and then centrifuged at 37℃ at 14,000 rpm for 5 min. Supernatants were analyzed by HPLC and pH meter for solubility and pH, respectively. Residual solids (wet cakes) were characterized by XRPD under protection of Kapton film to determine physical form. (Table 24)Table 24 Solubility of Form BExample 5.4: Hygroscopicity of Form B at 25℃ and 50℃Water sorption and desorption behavior of Form B was investigated by DVS at 25℃ and 50℃ with a cycle of 40-95-0-95-40%RH, respectively. XRPD was measured after the DVS test to determine form change. (Table 25 and 26)Table 25 Water sorption and desorption experiments of Form B at 25℃Water uptake=water sorption in a specific RH (80%to 95%) -water sorption in 40%RHThe criteria are modified from the European Pharmacopeia criteria about hygroscopicity.Table 26 Water sorption and desorption experiments of Form B at 50℃Water uptake=water sorption in a specific RH (80%to 95%) -water sorption in 40%RHThe criteria are modified from the European Pharmacopeia criteria about hygroscopicity.Example 5.5: Compression simulation experimentsAbout 10mg of Form B was compressed for 5 minutes under 2 MPa, 5 MPa and 10 MPa with a hydraulic press. Potential form change and degree of crystallinity were evaluated by XRPD. (Table 27)Table 27 Compression simulation experimentsExample 5.6: Dry grinding simulation experimentsAbout 10 mg of Form B was ground manually with a mortar and a pestle for 1, 3 and 5 min. Potential form change and degree of crystallinity were evaluated by XRPD. (Table 28)Table 28 Dry grinding simulation experimentsExample 5.7: Wet granulation simulation experimentsWater or ethanol was added drop wise to about 10 mg of Form B until the sample was wetted sufficiently. Wet sample was ground gently with in a mortar and a pestle. Post granulation sample was dried under ambient condition for 10 min. Potential form change and degree of crystallinity were evaluated by XRPD with Kapton film. (Table 29)Table 29 Wet granulation simulation experiments

Claims

1.A crystalline form B of the compound of formula (A) hydrate: wherein the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form B obtained using CuKα radiation includes at least the characteristic peaks located at the following °2θ: 6.035±0.2, 8.079±0.2 and 14.538±0.2.2.The crystalline form B of claim 1, wherein the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form B obtained using CuKα radiation further includes the characteristic peaks located at the following °2θ: 12.045±0.2, 17.216±0.2, 17.724±0.2, 25.608±0.2 and 25.763±0.2.3.The crystalline form B of claim 1 or 2, wherein the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form B obtained using CuKα radiation further includes the characteristic peaks located at the following °2θ: 12.874±0.2, 16.586±0.2, 18.081±0.2, and 18.892±0.2.4.The crystalline form B of claim 1, wherein the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form B obtained using CuKα radiation has the following characteristic peaks: 5.The crystalline form B of claim 1, which has an X-ray powder diffraction pattern substantially as shown in FIG. 1.6.The crystalline form B of any one of claims 1-5, which has an endothermic peak at 60±2℃ in differential scanning calorimetry analysis.7.The crystalline form B of claim 6, which has a differential scanning calorimetry thermogram substantially as shown in FIG. 2.8.The crystalline form B of any one of claims 1-7, which has a weight loss of about 4.9±1%prior to 80℃ in thermogravimetric analysis.9.The crystalline form B of claim 8, which has a thermogravimetric analysis thermogram substantially as shown in FIG. 3.10.A pharmaceutical composition, comprising the crystalline form B of any one claim 1-9, and pharmaceutically acceptable excipients.11.Use of the crystalline form B of any one claim 1-9 in the manufacture of a medicament for treating and / or preventing cancer.12.The crystalline form B of any one claim 1-9, for use in treating and / or preventing cancer.13.A method of treating and / or preventing cancer in a subject, comprising administrating to the subject the crystalline form B of any one claim 1-9, or the pharmaceutical composition of claim 10.14.The use of claim 11, or the crystalline form B for use of claim 12, or the method of claim 13, wherein the cancer is solid cancer, such as lung cancer and rectal cancer.

Images