Antibody drug conjugates

Abstract

Provided are antibody drug conjugates comprising an antibody binding to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof.

Description

ANTIBODY DRUG CONJUGATES

[0001] CROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS

[0002] This application claims priority to and benefit of International Application No. PCT / CN2023 / 086988 filed on April 7, 2023 and International Application No. PCT / CN2024 / 084464 filed on March 28, 2024, which are incorporated herein by reference in their entirety for all purposes.FIELD OF THE INVENTION

[0003] The invention relates to antibody drug conjugates comprising an antibody binding to integrin β 4 (ITGB4) , or an antigen binding fragment thereof.

[0004] SEQUENCE LISTING

[0005] This application contains a Sequence Listing as an XML file entitled C24W8581-Sequence Listing. xml having a size of 103, 642 bytes and created on March 29, 2024. The information contained in the Sequence Listing is incorporated by reference herein.BACKGROUND OF THE INVENTION

[0006] Integrin β 4 (ITGB4) is a transmembrane protein that is part of the integrin family. Integrins are heterodimers composed of alpha and beta subunits, that are noncovalently associated with transmembrane glycoprotein receptors. Integrin β4 only binds to integrin α6 to form a heterodimer (refer as α6β4) with laminin as an extracellular ligand. Different from the other beta subunits, the cytoplasmic tail of ITGB4 is longer and contains approximately 1000 amino acids, including four fibronectin type III repeats.

[0007] ITGB4 is found primarily on epithelial cells, which are cells that line the surfaces and cavities of the body. The α6β4 integrin protein plays a particularly important role in strengthening and stabilizing the skin. ITGB4 is involved in cell adhesion, migration, and signaling (J Cell Biol (1996) 134 (2) : 559–572) . It has been widely reported as a prognostic and predictive molecule in patients with various cancers (Biomolecules. 2021 Aug; 11 (8) : 1197) . Overexpression of ITGB4 is related to aggressive tumor behavior and poor prognosis. High ITGB4 expression levels were  positively associated with a poor prognosis of overall survival for adrenocortical carcinoma (P = 0.0044) , kidney chromophobe (P = 0.041) , brain lower grade glioma (P < 0.001) and lung adenocarcinoma (P = 0.00073) within the TCGA project (Int J Gen Med. 2021 Dec 11; 14: 9629-9645. ) .

[0008] It is accordingly an object of the present disclosure to provide highly specific and effective anti-ITGB4 antibodies and the according antibody drug conjugates, in particular for the treatment of cancer.SUMMARY OF THE INVENTION

[0009] In a first aspect, provided is an antibody drug conjugate (i.e., ADC) of the formula (I) : Ab- (L-D) p (I)

[0010] wherein,

[0011] Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof,

[0012] L is a linker;

[0013] D is a drug moiety;

[0014] p ranges from 1 to about 20.

[0015] In some embodiments, the antibody or antigen binding fragment comprises an immunoglobulin heavy chain variable region (VH) comprising a HCDR1, HCDR2, and HCDR3, and an immunoglobulin light chain variable region (VL) comprising a LCDR1, LCDR2 and LCDR3, wherein the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups:

[0016] 1) SEQ ID NOs: 11-16 respectively;

[0017] 2) SEQ ID NOs: 31, 32, 3 and 46-48 respectively;

[0018] 3) SEQ ID NOs: 52-55, 15 and 56 respectively;

[0019] 4) SEQ ID NOs: 61-63 and 66-68 respectively, or SEQ ID NOs: 64, 65, 63 and 66-68 respectively;

[0020] 5) SEQ ID NOs: 1-6 respectively;

[0021] 6) SEQ ID NOs: 21-26 respectively;

[0022] 7) SEQ ID NOs: 31, 32, 3 and 33-35 respectively; and

[0023] 8) SEQ ID NOs: 1-3 and 40-42 respectively.

[0024] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in any  of the following groups:

[0025] 1) SEQ ID NOs: 17 and 18 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 17 and 18;

[0026] 2) SEQ ID NOs: 36 and 49 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 36 and 49;

[0027] 3) SEQ ID NOs: 57 and 58 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 57 and 58;

[0028] 4) SEQ ID NOs: 69 and 70 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 69 and 70;

[0029] 5) SEQ ID NOs: 7 and 8 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 7 and 8;

[0030] 6) SEQ ID NOs: 27 and 28 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 27 and 28;

[0031] 7) SEQ ID NOs: 36 and 37 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 36 and 37; and

[0032] 8) SEQ ID NOs: 7 and 43 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 7 and 43.

[0033] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups:

[0034] 1) SEQ ID NOs: 73 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 73 and 74;

[0035] 2) SEQ ID NOs: 75 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 75 and 74;

[0036] 3) SEQ ID NOs: 76 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 76 and 74;

[0037] 4) SEQ ID NOs: 77 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 77 and 74;

[0038] 5) SEQ ID NOs: 78 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 78 and 74;

[0039] 6) SEQ ID NOs: 79 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 79 and 74;

[0040] 7) SEQ ID NOs: 80 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 80 and 74;

[0041] 8) SEQ ID NOs: 81 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 81 and 74;

[0042] 9) SEQ ID NOs: 82 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 82 and 74;

[0043] 10) SEQ ID NOs: 83 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 83 and 74;

[0044] 11) SEQ ID NOs: 84 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 84 and 74;

[0045] 12) SEQ ID NOs: 85 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 85 and 74;

[0046] 13) SEQ ID NOs: 86 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 86 and 74;

[0047] 14) SEQ ID NOs: 73 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 73 and 87;

[0048] 15) SEQ ID NOs: 75 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 75 and 87;

[0049] 16) SEQ ID NOs: 76 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 76 and 87;

[0050] 17) SEQ ID NOs: 77 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 77 and 87;

[0051] 18) SEQ ID NOs: 78 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 78 and 87;

[0052] 19) SEQ ID NOs: 79 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 79 and 87;

[0053] 20) SEQ ID NOs: 80 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 80 and 87;

[0054] 21) SEQ ID NOs: 81 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 81 and 87;

[0055] 22) SEQ ID NOs: 82 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 82 and 87;

[0056] 23) SEQ ID NOs: 83 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 83 and 87;

[0057] 24) SEQ ID NOs: 84 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 84 and 87;

[0058] 25) SEQ ID NOs: 85 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 85 and 87; and

[0059] 26) SEQ ID NOs: 86 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 86 and 87.

[0060] In some embodiments, the antibody is a murine antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, or a fully human antibody. In some embodiments, the antibody is a humanized antibody.

[0061] In some embodiments, the antibody is a monoclonal antibody, a bi-specific antibody or a multi-specific antibody.

[0062] In some embodiments, the antibody is a bispecific antibody comprising a further antigen binding domain binding to a second antigen, preferably wherein the second antigen is selected from the group consisting of CD3, CD138, CD20, CD40, CD19, CD33, CD16, CD38, CD22, CD40, CD8, IL-6, CSPGs, RGM A, CTLA-4, BTN02, IGF1, IGF2, Erb2B, IGF-1R, EGFR, CD13, ErbB3, EGFR-2, IGFR, VEGFR-2, Met, VEGF-A, Angiopoietin-2 (Ang-2) , IL-12, TWEAK, IL-13, IL-lbeta, RGM A, NgR, NogoA, OMGp, PDL-1, PD-1, PD-1, TIM-3, VEGF, Lag-3, OX40, DLL-4, PDGFR, EpCAM, CD16a, PSMA, CEA, TROP-2, HSG, HGF, PDGF, ICOS, CD47, RGM B, Te38, TNFa, Blys, GP130, IL-12, RANK ligand, ITGB6, Nectin-4, and Folate receptor.

[0063] In some embodiments, the antibody is of an isotype selected from the group consisting of IgG, IgA, IgM, IgE, and IgD, preferably wherein the antibody is of a subtype selected from the  group consisting of IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4.

[0064] In some embodiments of any one of the antibody or antigen binding fragment described herein, the antibody or antigen binding fragment is a full-length antibody or a single chain variable fragment (scFv) . In some embodiments, the antibody or antigen binding fragment is a VHH antibody, also called nanobody, which is the antigen binding fragment of heavy chain only antibodies. In some embodiments, the antibody or antigen binding fragment is a diabody, a noncovalent dimer of single-chain Fv (scFv) fragment. In some embodiments, the antibody or antigen binding fragment is a Fab fragment, comprising VH and CH1 on the heavy chain, and VL and CL on the light chain. In some embodiments, the antibody or antigen binding fragment is a Fab’ fragment, which is a Fab fragment having one or more cysteine residues at the C-terminus of the CH1 domain. In some embodiments, the antibody or antigen binding fragment is a F (ab’) 2 fragment, comprising two Fab’ fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region.

[0065] In some embodiments, the antibody comprises an immunoglobulin heavy chain (HC) and an immunoglobulin light chain (LC) , wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups:

[0066] 1) SEQ ID NOs: 19 and 20 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 19 and 20;

[0067] 2) SEQ ID NOs: 50 and 51 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 50 and 51;

[0068] 3) SEQ ID NOs: 59 and 60 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 59 and 60;

[0069] 4) SEQ ID NOs: 71 and 72 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 71 and 72;

[0070] 5) SEQ ID NOs: 9 and 10 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 9 and 10;

[0071] 6) SEQ ID NOs: 29 and 30 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 29 and 30;

[0072] 7) SEQ ID NOs: 38 and 39 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 38 and 39; and

[0073] 8) SEQ ID NOs: 44 and 45 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 44 and 45.

[0074] In some embodiments, the antibody comprises an immunoglobulin heavy chain (HC) and an immunoglobulin light chain (LC) , wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups:

[0075] 1) SEQ ID NOs: 88 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 88 and 89;

[0076] 2) SEQ ID NOs: 90 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 90 and 89;

[0077] 3) SEQ ID NOs: 91 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 91 and 89;

[0078] 4) SEQ ID NOs: 92 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 92 and 89;

[0079] 5) SEQ ID NOs: 93 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 93 and 89;

[0080] 6) SEQ ID NOs: 94 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 94 and 89;

[0081] 7) SEQ ID NOs: 95 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 95 and 89;

[0082] 8) SEQ ID NOs: 96 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 96 and 89;

[0083] 9) SEQ ID NOs: 97 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 97 and 89;

[0084] 10) SEQ ID NOs: 98 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 98 and 89;

[0085] 11) SEQ ID NOs: 99 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 99 and 89;

[0086] 12) SEQ ID NOs: 100 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 100 and 89;

[0087] 13) SEQ ID NOs: 101 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 101 and 89;

[0088] 14) SEQ ID NOs: 88 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 88 and 102;

[0089] 15) SEQ ID NOs: 90 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 90 and 102;

[0090] 16) SEQ ID NOs: 91 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 91 and 102;

[0091] 17) SEQ ID NOs: 92 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 92 and 102;

[0092] 18) SEQ ID NOs: 93 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 93 and 102;

[0093] 19) SEQ ID NOs: 94 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 94 and 102;

[0094] 20) SEQ ID NOs: 95 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 95 and 102;

[0095] 21) SEQ ID NOs: 96 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 96 and 102;

[0096] 22) SEQ ID NOs: 97 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 97 and 102;

[0097] 23) SEQ ID NOs: 98 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 98 and 102;

[0098] 24) SEQ ID NOs: 99 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 99 and 102;

[0099] 25) SEQ ID NOs: 100 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 100 and 102; and

[0100] 26) SEQ ID NOs: 101 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 101 and 102.

[0101] In some embodiments, the linker comprises a cleavable linker or a non-cleavable linker.

[0102] In some embodiments, the cleavable linker comprises an acid-labile linker, a hydrophilic linker, a protease-sensitive linker, photolabile linker, a hydrazone linker, a dimethyl linker or a disulfide-containing linker.

[0103] In some embodiments, the linker is selected from the group consisting of: sulfo-SPDB (N-succinimidyl-4- (2-pyridyldithio) -2-sulfo-butanoate) , MC (6-maleimidocaproyl) , Val-Cit (valine-citrulline) , para-amino-benzyloxycarbonyl (PABC) , dimethylethylamine (DMEA) , Val-Cit-PABC, MC-Val-Cit-PABC, CL2A, Mal-PEG8-Val-Ala-PABC, MC-VC-PABC-DMEA, GGFG (Glycine-Glycine-Phenylalanine-Glycine) , MC-GGFG-aminomethyl, AcBut (4- (4-acetylphenoxy) -butanoic acid) , dimethylhydrazide (3-methyl-3-mercaptobutane hydrazide) , AcBut-dimethylhydrazide or SMCC (N-Succinimidyl 4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-carboxylate) .

[0104] In some embodiments, the -L-D is selected from the group consisting of:

[0105] 1)

[0106] 2)

[0107] 3)

[0108] 4)

[0109] 5)

[0110] 6)

[0111] 7)

[0112] 8)  or

[0113] 9)

[0114] wherein the indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0115] In some embodiments, the drug moiety is selected from a group consisting of tubulin inhibitors and microtubule polymerization inhibitors, antibiotics, DNA synthesis inhibitors, topoisomerase I inhibitors, topoisomerase II inhibitors, RNA polymerase II inhibitors, RNA spliceosome inhibitors, and immune stimulators.

[0116] In some embodiments, the drug moiety is tubulin inhibitors and microtubule polymerization inhibitors selected from a group consisting of auristatins, maytansines, tubulysins, cryptophycins, and rhizoxin.

[0117] In some embodiments, the drug moiety is antibiotics selected from a group consisting of calicheamicins, doxorubicin, and anthracyclines.

[0118] In some embodiments, the drug moiety is DNA synthesis inhibitors selected from a group consisting of duocarmycins, PBDs (Benzodiazepines) , and IGNs (indolinobenzodiazepines) .

[0119] In some embodiments, the drug moiety is topoisomerase II inhibitors selected from a group consisting of anthracycline analogs (e.g. doxorubicin) .

[0120] In some embodiments, the drug moiety is topoisomerase I inhibitors selected from a group  consisting of camptothecin analogs.

[0121] In some embodiments, the drug moiety is RNA polymerase II inhibitors selected from a group consisting of amanitins.

[0122] In some embodiments, the drug moiety is RNA spliceosome inhibitors selected from a group consisting of spliceostatins and thailanstatins.

[0123] In some embodiments, the drug moiety is immune stimulators selected from a group consisting of toll like receptors agonists and STING agonists.

[0124] In some embodiments, the drug moiety is selected from:

[0125] wherein the indicates the attachment site to the linker.

[0126] In some embodiments, the antibody drug conjugate is selected from:

[0127] 1)

[0128] 2)

[0129] 3)

[0130] 4)

[0131] 5)

[0132] 6)

[0133] 7)

[0134] 8)

[0135] 9)

[0136] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof,p ranges from 1 to about 20.

[0137] In some preferred embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0138] wherein, Ab is an antibody comprising an immunoglobulin heavy chain (HC) and an immunoglobulin light chain (LC) , wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 38 and 39, SEQ ID NOs: 44 and 45, SEQ ID NOs: 50 and 51, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102.

[0139] In some preferred embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0140] wherein, Ab is an antibody comprising a HC and a LC, wherein the HC and LC comprise amino  acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 38 and 39, SEQ ID NOs: 44 and 45, SEQ ID NOs: 50 and 51, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102. In more preferred embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102.

[0141] In some preferred embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0142] wherein, Ab is an antibody comprising a HC and a LC, wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 38 and 39, SEQ ID NOs: 44 and 45, SEQ ID NOs: 50 and 51, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102. In more preferred embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 19 and 20 or SEQ ID NOs: 94 and 102.

[0143] In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0144] In a second aspect, provided is a humanized antibody or an antigen binding fragment thereof, wherein the humanized antibody or antigen binding fragment comprises an immunoglobulin heavy chain variable region (VH) and an immunoglobulin light chain variable region (VL) , wherein the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups:

[0145] 1) SEQ ID NOs: 73 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 73 and 74;

[0146] 2) SEQ ID NOs: 75 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity  as SEQ ID NOs: 75 and 74;

[0147] 3) SEQ ID NOs: 76 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 76 and 74;

[0148] 4) SEQ ID NOs: 77 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 77 and 74;

[0149] 5) SEQ ID NOs: 78 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 78 and 74;

[0150] 6) SEQ ID NOs: 79 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 79 and 74;

[0151] 7) SEQ ID NOs: 80 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 80 and 74;

[0152] 8) SEQ ID NOs: 81 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 81 and 74;

[0153] 9) SEQ ID NOs: 82 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 82 and 74;

[0154] 10) SEQ ID NOs: 83 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 83 and 74;

[0155] 11) SEQ ID NOs: 84 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 84 and 74;

[0156] 12) SEQ ID NOs: 85 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity  as SEQ ID NOs: 85 and 74;

[0157] 13) SEQ ID NOs: 86 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 86 and 74;

[0158] 14) SEQ ID NOs: 73 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 73 and 87;

[0159] 15) SEQ ID NOs: 75 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 75 and 87;

[0160] 16) SEQ ID NOs: 76 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 76 and 87;

[0161] 17) SEQ ID NOs: 77 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 77 and 87;

[0162] 18) SEQ ID NOs: 78 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 78 and 87;

[0163] 19) SEQ ID NOs: 79 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 79 and 87;

[0164] 20) SEQ ID NOs: 80 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 80 and 87;

[0165] 21) SEQ ID NOs: 81 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 81 and 87;

[0166] 22) SEQ ID NOs: 82 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity  as SEQ ID NOs: 82 and 87;

[0167] 23) SEQ ID NOs: 83 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 83 and 87;

[0168] 24) SEQ ID NOs: 84 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 84 and 87;

[0169] 25) SEQ ID NOs: 85 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 85 and 87; and

[0170] 26) SEQ ID NOs: 86 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 86 and 87.

[0171] In some embodiments, the humanized antibody comprises an immunoglobulin heavy chain (HC) and an immunoglobulin light chain (LC) , wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups:

[0172] 1) SEQ ID NOs: 88 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 88 and 89;

[0173] 2) SEQ ID NOs: 90 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 90 and 89;

[0174] 3) SEQ ID NOs: 91 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 91 and 89;

[0175] 4) SEQ ID NOs: 92 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 92 and 89;

[0176] 5) SEQ ID NOs: 93 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity  as SEQ ID NOs: 93 and 89;

[0177] 6) SEQ ID NOs: 94 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 94 and 89;

[0178] 7) SEQ ID NOs: 95 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 95 and 89;

[0179] 8) SEQ ID NOs: 96 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 96 and 89;

[0180] 9) SEQ ID NOs: 97 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 97 and 89;

[0181] 10) SEQ ID NOs: 98 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 98 and 89;

[0182] 11) SEQ ID NOs: 99 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 99 and 89;

[0183] 12) SEQ ID NOs: 100 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 100 and 89;

[0184] 13) SEQ ID NOs: 101 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 101 and 89;

[0185] 14) SEQ ID NOs: 88 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 88 and 102;

[0186] 15) SEQ ID NOs: 90 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence  identity as SEQ ID NOs: 90 and 102;

[0187] 16) SEQ ID NOs: 91 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 91 and 102;

[0188] 17) SEQ ID NOs: 92 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 92 and 102;

[0189] 18) SEQ ID NOs: 93 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 93 and 102;

[0190] 19) SEQ ID NOs: 94 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 94 and 102;

[0191] 20) SEQ ID NOs: 95 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 95 and 102;

[0192] 21) SEQ ID NOs: 96 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 96 and 102;

[0193] 22) SEQ ID NOs: 97 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 97 and 102;

[0194] 23) SEQ ID NOs: 98 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 98 and 102;

[0195] 24) SEQ ID NOs: 99 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 99 and 102;

[0196] 25) SEQ ID NOs: 100 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence  identity as SEQ ID NOs: 100 and 102; and

[0197] 26) SEQ ID NOs: 101 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 101 and 102.

[0198] In a third aspect, provided is a composition comprising the antibody drug conjugate or the humanized antibody of the present disclosure, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.

[0199] In a fourth aspect, provided is a method for preventing and / or treating a disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject the antibody drug conjugate or the humanized antibody of the present disclosure or the composition thereof.

[0200] In some embodiments, the disease is a cancer.

[0201] In some embodiments, the cancer is ITGB4 positive, preferably wherein the cancer is selected from the group consisting of head and neck cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate cancer, breast cancer, leukemia, myeloma, epithelial squamous cell cancer, melanoma, brain cancer, cervical cancer, liver cancer, bladder cancer, breast cancer, renal cancer, testicular cancer, and thyroid cancer.

[0202] In some embodiments, the method further comprises administering to the subject a second therapeutic agent, preferably wherein the second therapeutic agent is selected from an antibody, a chemotherapeutic agent and a small molecule drug.

[0203] It is to be understood that one, some, or all of the properties of the various embodiments described herein may be combined to form other embodiments of the present disclosure. These and other aspects of the disclosure will become apparent to one of skill in the art. These and other embodiments of the disclosure are further described by the detailed description that follows.

[0204] BRIEF DESCRIPTIONS OF THE DRAWINGS

[0205] Fig. 1 shows ITGB4 highly expressed in many tumor types from bioinformatics datasets.

[0206] Fig. 2 shows ITGB4 highly expressed in CRC, NSCLC, ESCC, SCCHN samples with IHC staining.

[0207] Fig. 3 shows ITGB4 highly expressed in many tumor cell lines by flow cytometry.

[0208] Fig. 4 shows tested antibodies can bind to ITGB4 expressing tumor cells.

[0209] Fig. 5 shows some of these antibodies can bind to cynomolgus or mouse ITGB4, but not to human ITGB1.

[0210] Fig. 6 shows that tested antibodies trigger the internalization of the targets on HCT-116 cells and H292 cells.

[0211] Fig. 7 shows conjugated ADCs sustained their binding ability of tumor cells.

[0212] Fig. 8 shows conjugated ADCs sustained their ability to trigger internalization on tumor cells.

[0213] Fig. 9 shows that tested ADCs exhibits in vitro cytotoxicity against ITGB4 expressing tumor cell lines.

[0214] Fig. 10 shows the tested ADCs inhibited the growth of xenograft tumors in nude BALB / c mice or SCID Beige mice.

[0215] Fig. 11 shows tested humanized clones recognize the same epitope as parental clone does with epitope binning assessment.

[0216] Fig. 12 shows tested humanized antibodies can bind to ITGB4 expressing tumor cells.

[0217] Fig. 13 shows the internalization results of humanized antibodies in SW620 cells.

[0218] Fig. 14 shows ADCs with humanized antibodies sustained their binding ability of tumor cells.

[0219] Fig. 15 shows the internalization results of ADCs with humanized antibodies in tumor cells.

[0220] Fig. 16 shows the cytotoxicity of ADCs with humanized antibodies in tumor cells.

[0221] Fig. 17 shows ADCs with humanized antibodies inhibited the growth of xenograft tumors in nude BALB / c mice.

[0222] Fig. 18 shows PK profiles of the ADCs in rat.

[0223] SEQUENCE LISTING

[0224] The CDR sequences (according to the Kabat numbering system) , VH and VL sequences, and whole heavy chain and light chain sequences of the parental anti-ITGB4 antibodies of the invention (001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 and 008) and humanized clones (H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, and H813.2) are shown in  the Table below. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

[0225] Definitions

[0226] Before describing the embodiments in detail, it is to be understood that the present disclosure is not limited to particular compositions or biological systems, which can, of course, vary. It is also to be understood that the terminology used herein is for the purpose of describing particular embodiments only, and is not intended to be limiting.

[0227] As used in this specification and the appended claims, the singular forms “a, ” “an, ” and “the” include plural referents unless the content clearly dictates otherwise. Thus, for example,  reference to “amolecule” optionally includes a combination of two or more such molecules, and the like.

[0228] The term “about” generally refers to plus or minus 10%of the indicated number. For example, “about 10%” may indicate a range of 9%to 11%, and “about 1” may mean from 0.9-1.1. Other meanings of “about” may be apparent from the context, such as rounding off, so, for example “about 1” may also mean from 0.5 to 1.4.

[0229] As disclosed herein, a number of ranges of values are provided. It is understood that each intervening value, to the tenth of the unit of the lower limit, unless the context clearly dictates otherwise, between the upper and lower limits of that range is also specifically disclosed. Each smaller range between any stated value or intervening value in a stated range and any other stated or intervening value in that stated range is encompassed within the disclosure. The upper and lower limits of these smaller ranges may independently be included or excluded in the range, and each range where either, neither, or both limits are included in the smaller ranges is also encompassed within the disclosure, subject to any specifically excluded limit in the stated range. Where the stated range includes one or both of the limits, ranges excluding either or both of those included limits are also included in the disclosure.

[0230] As used herein, the terms “percent identity” and “%identity, ” as applied to nucleic acid or polynucleotide sequences, refer to the percentage of residue matches between at least two nucleic acid or polynucleotide sequences aligned using a standardized algorithm. Such an algorithm may insert, in a standardized and reproducible way, gaps in the sequences being compared in order to optimize alignment between two sequences, and therefore achieve a more meaningful comparison of the two sequences.

[0231] Percent identity between nucleic acid or polynucleotide sequences may be determined using a suite of commonly used and freely available sequence comparison algorithms provided by the National Center for Biotechnology Information (NCBI) Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) (Altschul, S.F. et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410) , which is available from several sources, including the NCBI, Bethesda, Md., and on the Internet at http:  / / www. ncbi. nlm. nih. gov / BLAST / .

[0232] Nucleic acid or polynucleotide sequences that do not show a high degree of identity may nevertheless encode similar amino acid sequences due to the degeneracy of the genetic code. It is  understood that changes in a nucleic acid sequence can be made using this degeneracy to produce multiple nucleic acid sequences that all encode substantially the same protein. Specifically, degenerate codon substitutions may be achieved by generating sequences in which the third position of one or more selected (or all) codons is substituted with mixed-base and / or deoxyinosine residues (Batzer et al., 1991) Nucleic Acid Res 19: 5081; Ohtsuka et al. (1985) J Biol Chem 260: 2605-2608; Cassol et al. (1992) ; Rossolini et al. (1994) Mol Cell Probes 8: 91-98) . The term “nucleic acid” refers to deoxyribonucleotides or ribonucleotides and polymers thereof in either single-or double-stranded form. Unless specifically limited, the term encompasses nucleic acids containing known analogues of natural nucleotides which have similar binding properties as the reference nucleic acid and are metabolized in a manner similar to naturally occurring nucleotides. The term nucleic acid is used interchangeably with polynucleotide, and (in appropriate contexts) gene, cDNA, and mRNA encoded by a gene.

[0233] As used herein, “percent (%) amino acid sequence identity” with respect to a peptide, polypeptide or protein sequence is defined as the percentage of amino acid residues in a candidate sequence that are identical with the amino acid residues in another peptide or polypeptide sequence, after aligning the sequences and introducing gaps, if necessary, to achieve the maximum percent sequence identity, and not considering any conservative substitutions as part of the sequence identity. Percent amino acid sequence identity in the current disclosure is measured using BLAST software. Those skilled in the art can determine appropriate parameters for measuring alignment, including any algorithms needed to achieve maximal alignment over the full length of the sequences being compared. The term “pharmaceutical composition” refers to the combination of an active agent with a carrier, inert or active, making the composition especially suitable for diagnostic or therapeutic use in vivo or ex vivo.

[0234] As used herein, “pharmaceutically acceptable carrier” includes any and all solvents, dispersion media, coatings, antibacterial and antifungal agents, isotonic and absorption delaying agents, and the like that are physiologically compatible. A “pharmaceutically acceptable carrier” , after administered to or upon a subject, does not cause undesirable physiological effects. The carrier in the pharmaceutical composition must be “acceptable” also in the sense that it is compatible with the active ingredient and can be capable of stabilizing it. One or more solubilizing agents can be utilized as pharmaceutical carriers for delivery of an active agent. Examples of a  pharmaceutically acceptable carrier include, but are not limited to, biocompatible vehicles, adjuvants, additives, and diluents to achieve a composition usable as a dosage form. Examples of other carriers include colloidal silicon oxide, magnesium stearate, cellulose, and sodium lauryl sulfate. Additional suitable pharmaceutical carriers and diluents, as well as pharmaceutical necessities for their use, are described in Remington’s Pharmaceutical Sciences. Preferably, the carrier is suitable for intravenous, intramuscular, subcutaneous, parenteral, spinal or epidermal administration (e.g., by injection or infusion) . The therapeutic compounds may include one or more pharmaceutically acceptable salts. A “pharmaceutically acceptable salt” refers to a salt that retains the desired biological activity of the parent compound and does not impart any undesired toxicological effects (see e.g., Berge, S.M., et al. J. Pharm. Sci. 1997, 66, 1-19) .

[0235] As used herein, “treating” or “treatment” refers to administration of a compound or agent to a subject who has a disorder or is at risk of developing the disorder with the purpose to cure, alleviate, relieve, remedy, delay the onset of, prevent, or ameliorate the disorder, the symptom of the disorder, the disease state secondary to the disorder, or the predisposition toward the disorder.

[0236] An “effective amount” refers to the amount of an active compound / agent that is required to confer a therapeutic effect on a treated subject. Effective doses will vary, as recognized by those skilled in the art, depending on the types of conditions treated, route of administration, excipient usage, and the possibility of co-usage with other therapeutic treatment. A therapeutically effective amount of a combination to treat a neoplastic condition is an amount that will cause, for example, a reduction in tumor size, a reduction in the number of tumor foci, or slow the growth of a tumor, as compared to untreated animals.

[0237] It is understood that aspects and embodiments of the present disclosure include “comprising, ” “consisting, ” and “consisting essentially of” aspects and embodiments.

[0238] As used herein, the term “antibody” is used in the broadest sense and specifically covers intact antibodies (e.g., full length antibodies) , antibody fragments (including without limitation Fab, F (ab’) 2, scFv, scFv-Fc, single domain antibodies (sdAb, also known as nanobody) , single heavy chain antibodies, and single light chain antibodies) , monoclonal antibodies, and polyclonal antibodies, so long as they exhibit the desired biological activity (e.g., epitope binding) .

[0239] The term “antibody” refers to an immunoglobulin molecule which has the ability to specifically bind to a specific antigen. Such molecule often comprises two heavy (H) chains and  two light (L) chains inter-connected by disulfide bonds. Each heavy chain is comprised of a heavy chain variable region (or domain) (abbreviated herein as VH) and a heavy chain constant region. The heavy chain constant region is comprised of three domains, CH1, CH2 and CH3. Each light chain is comprised of a light chain variable region (or domain) (abbreviated herein as VL) and a light chain constant region. The light chain constant region is comprised of one domain, CL. The variable regions of the heavy and light chains of antibodies contain a binding domain that interacts with an antigen. The constant regions of antibodies may mediate the binding of the immunoglobulin to host tissues or factors, including various cells of the immune system (such as effector cells) and components of the complement system such as C1q, the first component in the classical pathway of complement activation.

[0240] The heavy chain of immunoglobulins can be divided into three functional regions: the Fd region, the hinge region, and the Fc region (fragment crystallizable) . The Fd region comprises the VH and CH1 domains and, in combination with the light chain, forms Fab (antigen-binding fragment) . The Fc fragment is responsible for the immunoglobulin effector functions, which includes, for example, complement fixation and binding to cognate Fc receptors of effector cells. The hinge region, found in IgG, IgA, and IgD immunoglobulin classes, acts as a flexible spacer that allows the Fab portion to move freely in space relative to the Fc region. The hinge domains are structurally diverse, varying in both sequence and length among immunoglobulin classes and subclasses.

[0241] A “light chain variable region” (VL) or “heavy chain variable region” (VH) consists of a “framework” region interrupted by three “complementarity determining regions” or “CDRs” . The framework regions serve to align the CDRs for specific binding to an epitope of an antigen. The CDRs include the amino acid residues of an antibody that are primarily responsible for antigen binding. From amino-terminus to carboxyl-terminus, both VL and VH domains comprise the following framework (FR) and CDR regions: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, and FR4. CDRs 1, 2, and 3 of a VL domain are also referred to herein, respectively, as LCDR1, LCDR2, and LCDR3; CDRs 1, 2, and 3 of a VH domain are also referred to herein, respectively, as HCDR1, HCDR2, and HCDR3.

[0242] The assignment of amino acids to each VL and VH domain is in accordance with any conventional definition of CDRs. Conventional definitions include, the Kabat definition (Kabat,  Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991) , the Chothia definition (Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917, 1987; Chothia et al., Nature 342: 878-883, 1989) ; a composite of Chothia Kabat CDR in which CDR-H1 is a composite of Chothia and Kabat CDRs; the AbM definition used by Oxford Molecular’s antibody modelling software; and the CONTACT definition of Martin et al. (world wide web bioinfo. org. uk / abs) . Kabat provides a widely used numbering convention (Kabat numbering system) in which corresponding residues between different heavy chains or between different light chains are assigned the same number. Unless otherwise specified, references to the numbering of specific amino acid residue positions in an antibody variable region are according to the Kabat numbering system.

[0243] Table A. CDR definitions

[0244] Note: numbering of all CDR definitions in Table A is according to the numbering conversion set forth by Kabat et al (see above) .

[0245] Based on the amino acid sequence of heavy chain constant regions of the antibody, an immunoglobulin molecule can be divided into five classes (isotypes) : IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM, and can be further divided into different subtypes, such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, etc. The light chain of the antibody can be classified as a lambda (λ) chain or a kappa (κ) chain, based on the amino acid sequence of the light chain.

[0246] As used herein, the term “chimeric antibody” refers to an antibody molecule in which a portion of the heavy and / or light chain is identical with or homologous to corresponding sequences in antibodies derived from a particular species or belonging to a particular antibody class or subclass, while the remainder of the chain (s) is identical with or homologous to corresponding sequences in  antibodies derived from another species or belonging to another antibody class or subclass, as well as fragments of such antibodies, so long as they exhibit the desired biological activity. Chimeric antibody molecules can include, for example, one or more VH and / or VL antigen binding domains from an antibody of a mouse, rat, or other species, with human constant regions.

[0247] As used herein, the term “humanized antibody” refers to antibody molecules from a non-human species, where the antibodies that bind the desired antigen have one or more CDRs from the non-human species, and framework and constant regions from a human immunoglobulin molecule. Often, framework residues in the human framework regions will be substituted with the corresponding residue from the CDR donor antibody to alter, preferably improve, antigen binding. These framework substitutions are identified by methods well known in the art, e.g., by modeling of the interactions of the CDR and framework residues to identify framework residues important for antigen binding and sequence comparison to identify unusual framework residues at particular positions.

[0248] As used herein, the term “monoclonal antibody” refers to an antibody obtained from a substantially homogeneous antibody population. That is, each of the antibodies constituting the population are the same, except for possible naturally occurring mutations in small amount. Monoclonal antibodies are highly specific and are directed against a single antigen. The term "monoclonal antibody" herein is not limited to antibodies produced by hybridoma technology, and should not be interpreted as requiring production of antibodies by any specific method.

[0249] As used herein, the term “bispecific antibody” in the context of the present invention is to be understood as an antibody having two different antigen-binding regions defined by different antibody sequences. This can be understood as different target binding but includes as well binding to different epitopes in one target. The term "bispecific antibody" as used herein should be understood in its broadest meaning, and includes full-length bispecific antibodies and antigen binding fragments thereof. The bispecific antibody may contain additional modifications, such as non-naturally occurring amino acids, mutations in Fc regions, and mutations in glycosylation sites. Bispecific antibodies also include post-translation modified antibodies, fusion proteins containing the antigenic determinants of the antibody, and immunoglobulin molecules containing any other modifications to antigen recognition sites, as long as these antibodies exhibit desired biological activity.

[0250] As used herein, the term “antigen binding fragment” of an antibody refers to one or more fragments of an antibody that retain the ability to specifically bind to an antigen. It has been shown that the antigen binding function of an antibody can be performed by fragments of a full-length antibody.

[0251] Examples of antigen binding fragments encompassed within the term "antigen binding portion" of an antibody include (i) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL and CH1 domains; (ii) a F (ab') 2 fragment, a bivalent fragment comprising two Fab fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region; (iii) a Fab' fragment, which is essentially an Fab with part of the hinge region; (iv) a Fd fragment consisting of the VH and CH1 domains; (v) a Fd' fragment having VH and CH1 domains and one or more cysteine residues at the C-terminus of the CH1 domain; (vi) a Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody, (vii) a dAb fragment, which consists of a VH domain; (viii) an isolated complementarity determining region (CDR) ; and (ix) a nanobody, a heavy chain variable region containing a single variable domain and two constant domains. Furthermore, although the two domains of the Fv fragment, VL and VH are coded for by separate genes, they can be joined, using recombinant methods, by a synthetic linker that enables them to be made as a single protein chain in which the VL and VH regions pair to form monovalent molecules (known as single chain Fv (scFv) ) . Such single chain antibodies are also intended to be encompassed within the term "antigen binding fragment" of an antibody. Furthermore, the term also includes a "linear antibody" comprising a pair of tandem Fd segments (VH-CH1-VH-CH1) , which forms an antigen binding region together with a complementary light chain polypeptide, and a modified version of any of the foregoing fragments, which retains antigen binding activity.

[0252] These antigen binding fragments can be obtained using conventional techniques known to those with skill in the art, and the fragments are screened for utility in the same manner as are intact antibodies.

[0253] As used herein, the term "binding" or "specifically binding" refers to a non-random binding reaction between two molecules, such as between an antibody and its target antigen. The binding specificity of an antibody can be determined based on affinity and / or avidity. The affinity, represented by the equilibrium constant for the dissociation of an antigen with an antibody (KD) , is a measure for the binding strength between an antigenic determinant and an antigen-binding site on  the antibody: the lesser the value of the KD, the stronger the binding strength between an antigenic determinant and the antibody. Alternatively, the affinity can also be expressed as the affinity constant (KA) , which is 1 / KD.

[0254] Avidity is the measure of the strength of binding between an antibody and the pertinent antigen. Avidity is related to both the affinity between an antigenic determinant and its antigen binding site on the antibody and the number of pertinent binding sites present on the antibody. Typically, an antibody will bind to an antigen with a dissociation constant (KD) of 10-5 to 10 -12 M or less, and preferably 10-7 to 10 -12 M or less and more preferably 10 -8 to 10 -12 M, and / or with a binding affinity of at least 107 M -1, preferably at least 108 M -1, more preferably at least 109 M -1, such as at least 1012 M -1. Any KD value greater than 10 -4 M is generally considered to indicate non-specific binding. Specifically binding of an antibody to an antigen or antigenic determinant can be determined in any suitable manner known, including, for example, Scatchard analysis and / or competitive binding assays, such as radioimmunoassays (RIA) , enzyme immunoassays (EIA) and sandwich competition assays, and the different variants thereof known in the art.

[0255] The term “epitope” refers to a site on an antigen to which an antibody binds. An epitope can be formed from contiguous amino acids or noncontiguous amino acids juxtaposed by tertiary folding of one or more proteins. Epitopes formed from contiguous amino acids (also known as linear epitopes) are typically retained on exposure to denaturing solvents whereas epitopes formed by tertiary folding (also known as conformational epitopes) are typically lost on treatment with denaturing solvents. An epitope typically includes at least 3, and more usually, at least 5 or 8-10 amino acids in a unique spatial conformation. The epitope defines the smallest binding site of an antibody and therefore is the specific target of the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0256] As used herein, the term “sequence identity” refers to the extent to which two sequences (amino acid) have the same residue at the same positions in an alignment. For example, “an amino acid sequence is X%identical to SEQ ID NO: Y” refers to %identity of the amino acid sequence to SEQ ID NO: Y and is elaborated as X%of residues in the amino acid sequence are identical to the residues of sequence disclosed in SEQ ID NO: Y. Generally, computer programs are employed for such calculations. Exemplary programs that compare and align pairs of sequences, include ALIGN (Myers and Miller, 1988) , FASTA (Pearson and Lipman, 1988; Pearson, 1990) and gapped BLAST (Altschul et al., 1997) , BLASTP, BLASTN, or GCG (Devereux et al., 1984) .

[0257] Also, in determining the degree of sequence identity between two amino acid sequences, the skilled person may take into account so-called "conservative" amino acid substitutions, which can generally be described as amino acid substitutions in which an amino acid residue is replaced with another amino acid residue of similar chemical structure and which has little or essentially no influence on the function, activity or other biological properties of the polypeptide. Such conservative amino acid substitutions are well known in the art.

[0258] Such conservative substitutions preferably are substitutions in which one amino acid within the following groups (a) - (e) is substituted by another amino acid residue within the same group: (a) small aliphatic, nonpolar or slightly polar residues: Ala, Ser, Thr, Pro and Gly; (b) polar, negatively charged residues and their (uncharged) amides: Asp, Asn, Glu and Gln; (c) polar, positively charged residues: His, Arg and Lys; (d) large aliphatic, nonpolar residues: Met, Leu, Ile, Val and Cys; and (e) aromatic residues: Phe, Tyr and Trp.

[0259] Particularly preferred conservative substitutions are as follows: Ala into Gly or into Ser; Arg into Lys; Asn into Gln or into His; Asp into Glu; Cys into Ser; Gln into Asn; Glu into Asp; Gly into Ala or into Pro; His into Asn or into Gln; Ile into Leu or into Val; Leu into Ile or into Val; Lys into Arg, into Gln or into Glu; Met into Leu, into Tyr or into Ile; Phe into Met, into Leu or into Tyr; Ser into Thr; Thr into Ser; Trp into Tyr; Tyr into Trp; and / or Phe into Val, into Ile or into Leu.

[0260] I. Antibody drug conjugate

[0261] In one aspect of the disclosure, antibody drug conjugates of the formula (I) are provided: Ab- (L-D) p (I)

[0262] wherein,

[0263] Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof,

[0264] L is a linker;

[0265] D is a drug moiety;

[0266] p ranges from 1 to about 20.

[0267] In the antibody drug conjugate of formula (I) , the drug moiety D can be linked to the antibody through a linker L. L is any chemical moiety that is capable of linking the antibody Ab to the drug moiety D. The linker, L attaches the antibody Ab to the drug D through covalent bond (s) . The linker reagent is a bifunctional or multifunctional moiety which can be used to link  a drug moiety D and an antibody Ab to form antibody drug conjugates. Antibody drug conjugates can be prepared using a linker having a reactive functionality for binding to the drug moiety D and to the antibody Ab. A cysteine, thiol or an amine, e.g., N-terminus or amino acid side chain such as lysine of the antibody can form a bond with a functional group of a linker reagent.

[0268] In some embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0269] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20. In some embodiments, Ab is the antibody 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 or 008, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, Ab is the humanized antibody H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, or H813.2, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0270] In some embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0271] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20. In some embodiments, Ab is the antibody 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 or 008, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, Ab is the humanized antibody H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, or H813.2, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some  embodiments, p is 8.

[0272] In some embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0273] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20. In some embodiments, Ab is the antibody 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 or 008, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, Ab is the humanized antibody H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, or H813.2, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0274] In some embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0275] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20. In some embodiments, Ab is the antibody 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 or 008, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, Ab is the humanized antibody H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, or H813.2, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0276] In some embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0277] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20. In some embodiments, Ab is the antibody 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 or 008, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, Ab is the humanized antibody H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, or H813.2, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0278] In some embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0279] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20. In some embodiments, Ab is the antibody 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 or 008, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, Ab is the humanized antibody H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, or H813.2, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0280] In some embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0281] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20. In some embodiments, Ab is the antibody 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 or 008, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, Ab is the humanized antibody H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, or H813.2, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0282] In some embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0283] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20. In some embodiments, Ab is the antibody 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 or 008, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, Ab is the humanized antibody H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, or H813.2, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0284] In some embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0285] wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20. In some embodiments, Ab is the antibody 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 or 008, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, Ab is the humanized antibody H81.1, H82.1, H83.1, H84.1, H85.1, H86.1, H87.1, H88.1, H89.1, H810.1, H811.1, H812.1, H813.1, H81.2, H82.2, H83.2, H84.2, H85.2, H86.2, H87.2, H88.2, H89.2, H810.2, H811.2, H812.2, or H813.2, or an antigen binding fragment thereof. In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0286] In some preferred embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0287] wherein, Ab is an antibody comprising an immunoglobulin heavy chain (HC) and an immunoglobulin light chain (LC) , wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 38 and 39, SEQ ID NOs: 44 and 45, SEQ ID NOs: 50 and 51, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102.

[0288] In some preferred embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0289] wherein, Ab is an antibody comprising a HC and a LC, wherein the HC and LC comprise amino  acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 38 and 39, SEQ ID NOs: 44 and 45, SEQ ID NOs: 50 and 51, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102. In more preferred embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102.

[0290] In some preferred embodiments, the antibody drug conjugate is:

[0291] wherein, Ab is an antibody comprising a HC and a LC, wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 38 and 39, SEQ ID NOs: 44 and 45, SEQ ID NOs: 50 and 51, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102. In more preferred embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 19 and 20 or SEQ ID NOs: 94 and 102.

[0292] In some embodiments, p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 8.

[0293] II. Antibody

[0294] The antibody that binds to ITGB4 or antigen binding fragment thereof of the disclosure comprises an immunoglobulin heavy chain variable region (VH) comprising a HCDR1, HCDR2, and HCDR3, and an immunoglobulin light chain variable region (VL) comprising a LCDR1, LCDR2 and LCDR3.

[0295] In some embodiments, the CDRs are determined by any numbering system known in the art, e.g., Kabat numbering system, Chothia numbering system, AbM numbering system, CONTACT numbering system, etc. In some preferred embodiments, the CDRs are determined by Kabat numbering system.

[0296] In some embodiments, the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 11-16 respectively.

[0297] In some embodiments, the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, 3 and 46-48 respectively.

[0298] In some embodiments, the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 52-55, 15 and 56 respectively.

[0299] In some embodiments, the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 61-63 and 66-68 respectively.

[0300] In some embodiments, the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 1-6 respectively.

[0301] In some embodiments, the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 21-26 respectively.

[0302] In some embodiments, the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, 3 and 33-35 respectively.

[0303] In some embodiments, the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 1-3 and 40-42 respectively.

[0304] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 17 and 18 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 17 and 18.

[0305] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 36 and 49 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 36 and 49.

[0306] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 57 and 58 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 57 and 58.

[0307] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 69 and 70 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least  90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 69 and 70.

[0308] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 7 and 8 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 7 and 8.

[0309] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 27 and 28 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 27 and 28.

[0310] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 36 and 37 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 36 and 37.

[0311] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 7 and 43 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 7 and 43.

[0312] In some embodiments, the VH comprises a functional variant of the amino acid sequence as set forth in any one of SEQ ID NOs: 17, 36, 57, 67, 7 and 27 formed by insertion, deletion and / or substitution of one or more amino acid (s) therein, provided that the functional variant retains the ability of binding to ITGB4. In some embodiments, the VL comprises a functional variant of the amino acid sequence as set forth in any one of SEQ ID NOs: 18, 49, 58, 68, 8, 28, 37 and 43 formed by insertion, deletion and / or substitution of one or more amino acid (s) therein, provided that the functional variant retains the ability of binding to ITGB4. The functional variant comprises or consists of an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.1%, at least 99.2%, at least 99.3%, at least 99.4%, at least 99.5%, at least 99.6%, at least 99.7%, at least 99.8%, or at least 99.9%sequence identity to the amino acid sequence of the parent polypeptide.

[0313] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ  ID NOs: 73 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 73 and 74.

[0314] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 75 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 75 and 74.

[0315] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 76 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 76 and 74.

[0316] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 77 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 77 and 74.

[0317] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 78 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 78 and 74.

[0318] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 79 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 79 and 74.

[0319] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 80 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 80 and 74.

[0320] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 81 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as  SEQ ID NOs: 81 and 74.

[0321] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 82 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 82 and 74.

[0322] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 83 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 83 and 74.

[0323] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 84 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 84 and 74.

[0324] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 85 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 85 and 74.

[0325] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 86 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 86 and 74.

[0326] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 73 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 73 and 87.

[0327] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 75 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 75 and 87.

[0328] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ  ID NOs: 76 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 76 and 87.

[0329] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 77 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 77 and 87.

[0330] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 78 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 78 and 87.

[0331] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 79 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 79 and 87.

[0332] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 80 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 80 and 87.

[0333] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 81 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 81 and 87.

[0334] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 82 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 82 and 87.

[0335] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 83 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as  SEQ ID NOs: 83 and 87.

[0336] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 84 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 84 and 87.

[0337] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 85 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 85 and 87.

[0338] In some embodiments, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 86 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 86 and 87.

[0339] In the context of the functional variant, the number of the inserted, deleted and / or substituted amino acid is preferably no more than 40%of the total number of amino acids in the parent amino acid sequence, more preferably no more than 35%, more preferably 1-33%, and more preferably 5-30%, more preferably 10-25%, more preferably 15-20%. For example, the number of the inserted, deleted and / or substituted amino acid can be 1-20, preferably 1-10, more preferably 1-7, still more preferably 1-5, and most preferably 1-2. In a preferred embodiment, the number of the inserted, deleted and / or substituted amino acid is 1, 2, 3, 4, 5, 6, or 7.

[0340] In some embodiments, the insertion, deletion and / or substitution can be performed at framework (FR) regions, e.g., at FR1, FR2, FR3, and / or FR4.

[0341] In some embodiments, the substitution of one or more amino acid (s) can be conservative substitution of one or more amino acid (s) . Such conservative substitutions preferably are substitutions in which one amino acid within the following groups (a) - (e) is substituted by another amino acid residue within the same group: (a) small aliphatic, nonpolar or slightly polar residues: Ala, Ser, Thr, Pro and Gly; (b) polar, negatively charged residues and their (uncharged) amides: Asp, Asn, Glu and Gln; (c) polar, positively charged residues: His, Arg and Lys; (d) large aliphatic, nonpolar residues: Met, Leu, Ile, Val and Cys; and (e) aromatic residues: Phe, Tyr and Trp.

[0342] Particularly preferred conservative substitutions are as follows: Ala into Gly or into Ser;  Arg into Lys; Asn into Gln or into His; Asp into Glu; Cys into Ser; Gln into Asn; Glu into Asp; Gly into Ala or into Pro; His into Asn or into Gln; Ile into Leu or into Val; Leu into Ile or into Val; Lys into Arg, into Gln or into Glu; Met into Leu, into Tyr or into Ile; Phe into Met, into Leu or into Tyr; Ser into Thr; Thr into Ser; Trp into Tyr; Tyr into Trp; and / or Phe into Val, into Ile or into Leu.

[0343] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 17 and 18 respectively.

[0344] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 36 and 49 respectively.

[0345] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 57 and 58 respectively.

[0346] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 69 and 70 respectively.

[0347] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 7 and 8 respectively.

[0348] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 27 and 28 respectively.

[0349] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 36 and 37 respectively.

[0350] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 7 and 43 respectively.

[0351] In some embodiments, the antibody is a murine antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, or a fully human antibody.

[0352] In some embodiments, the antibody is a humanized antibody.

[0353] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 73 and 74 respectively.

[0354] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 75 and 74 respectively.

[0355] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 76 and 74 respectively.

[0356] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth  in SEQ ID NOs: 77 and 74 respectively.

[0357] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 78 and 74 respectively.

[0358] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 79 and 74 respectively.

[0359] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 80 and 74 respectively.

[0360] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 81 and 74 respectively.

[0361] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 82 and 74 respectively.

[0362] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 83 and 74 respectively.

[0363] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 84 and 74 respectively.

[0364] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 85 and 74 respectively.

[0365] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 86 and 74 respectively.

[0366] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 73 and 87 respectively.

[0367] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 75 and 87 respectively.

[0368] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 76 and 87 respectively.

[0369] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 77 and 87 respectively.

[0370] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 78 and 87 respectively.

[0371] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth  in SEQ ID NOs: 79 and 87 respectively.

[0372] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 80 and 87 respectively.

[0373] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 81 and 87 respectively.

[0374] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 82 and 87 respectively.

[0375] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 83 and 87 respectively.

[0376] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 84 and 87 respectively.

[0377] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 85 and 87 respectively.

[0378] In a preferred embodiment, the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 86 and 87 respectively.

[0379] In some embodiments, the antibody is a monoclonal antibody, a bi-specific antibody or a multi-specific antibody.

[0380] In some embodiments, the antibody is a monoclonal antibody.

[0381] In some embodiments, the antibody comprises an immunoglobulin heavy chain (HC) and an immunoglobulin light chain (LC) .

[0382] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 88 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 88 and 89.

[0383] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 90 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 90 and 89.

[0384] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 91 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least  90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 91 and 89.

[0385] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 92 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 92 and 89.

[0386] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 93 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 93 and 89.

[0387] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 94 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 94 and 89.

[0388] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 95 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 95 and 89.

[0389] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 96 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 96 and 89.

[0390] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 97 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 97 and 89.

[0391] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 98 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 98 and 89.

[0392] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 99 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 99 and 89.

[0393] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 100 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 100 and 89.

[0394] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 101 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 101 and 89.

[0395] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 88 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 88 and 102.

[0396] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 90 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 90 and 102.

[0397] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 91 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 91 and 102.

[0398] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 92 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 92 and 102.

[0399] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 93 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at  least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 93 and 102.

[0400] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 94 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 94 and 102.

[0401] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 95 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 95 and 102.

[0402] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 96 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 96 and 102.

[0403] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 97 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 97 and 102.

[0404] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 98 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 98 and 102.

[0405] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 99 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 99 and 102.

[0406] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 100 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 100 and 102.

[0407] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 101 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 101 and 102.

[0408] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 19 and 20 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 19 and 20.

[0409] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 50 and 51 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 50 and 51.

[0410] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 59 and 60 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 59 and 60.

[0411] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 71 and 72 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 71 and 72.

[0412] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 9 and 10 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 9 and 10.

[0413] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 29 and 30 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 29 and 30.

[0414] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 38 and 39 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least  90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 38 and 39.

[0415] In some embodiments, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 44 and 45 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 44 and 45.

[0416] In some embodiments, the heavy chain comprises a functional variant of the amino acid sequence as set forth in any one of SEQ ID NOs: 19, 50, 59, 69, 9, 29, 38, and 44 formed by insertion, deletion and / or substitution of one or more amino acid (s) therein, provided that the functional variant retains the ability of binding to ITGB4. In some embodiments, the light chain comprises a functional variant of the amino acid sequence as set forth in any one of SEQ ID NOs: 20, 51, 60, 70, 10, 30, 39, and 45 formed by insertion, deletion and / or substitution of one or more amino acid (s) therein, provided that the functional variant retains the ability of binding to ITGB4.

[0417] The functional variant comprises or consists of an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.1%, at least 99.2%, at least 99.3%, at least 99.4%, at least 99.5%, at least 99.6%, at least 99.7%, at least 99.8%, or at least 99.9%sequence identity to the amino acid sequence of the parent polypeptide.

[0418] In some embodiments, the number of the inserted, deleted and / or substituted amino acid is preferably no more than 40%of the total number of amino acids in the parent amino acid sequence, more preferably no more than 35%, more preferably 1-33%, and more preferably 5-30%, more preferably 10-25%, more preferably 15-20%. For example, the number of the inserted, deleted and / or substituted amino acid can be 1-50, preferably 1-20, more preferably 1-10, still more preferably 1-5. In a preferred embodiment, the number of the inserted, deleted and / or substituted amino acid is 1, 2, 3, 4, 5, 6, or 7.

[0419] In some embodiments, the insertion, deletion and / or substitution can be performed at framework (FR) regions, e.g., at FR1, FR2, FR3, and / or FR4; and / or constant regions, e.g., CL, CH1, CH2, and / or CH3.

[0420] In some embodiments, the substitution of one or more amino acid (s) can be conservative substitution of one or more amino acid (s) . Examples of conservative substitutions are as described  above.

[0421] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 88 and 89 respectively.

[0422] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 90 and 89 respectively.

[0423] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 91 and 89 respectively.

[0424] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 92 and 89 respectively.

[0425] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 93 and 89 respectively.

[0426] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 94 and 89 respectively.

[0427] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 95 and 89 respectively.

[0428] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 96 and 89 respectively.

[0429] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 97 and 89 respectively.

[0430] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 98 and 89 respectively.

[0431] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 99 and 89 respectively.

[0432] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 100 and 89 respectively.

[0433] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 101 and 89 respectively.

[0434] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 88 and 102 respectively.

[0435] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in  SEQ ID NOs: 90 and 102 respectively.

[0436] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 91 and 102 respectively.

[0437] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 92 and 102 respectively.

[0438] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 93 and 102 respectively.

[0439] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 94 and 102 respectively.

[0440] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 95 and 102 respectively.

[0441] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 96 and 102 respectively.

[0442] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 97 and 102 respectively.

[0443] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 98 and 102 respectively.

[0444] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 99 and 102 respectively.

[0445] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 100 and 102 respectively.

[0446] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 101 and 102 respectively.

[0447] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 19 and 20 respectively.

[0448] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 50 and 51 respectively.

[0449] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 59 and 60 respectively.

[0450] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth  in SEQ ID NOs: 71 and 72 respectively.

[0451] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 9 and 10 respectively.

[0452] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 29 and 30 respectively.

[0453] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 38 and 39 respectively.

[0454] In a preferred embodiment, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 44 and 45 respectively.

[0455] In some embodiments, the antibody is a bispecific antibody comprising a further antigen binding domain binding to a second antigen.

[0456] In some embodiments, the second antigen is a tumor associated antigen or an immune cell antigen.

[0457] "Tumor associated antigen" refers to an antigen that is differentially expressed in cancer cells compared to normal cells, and therefore can be used to target cancer cells. Many tumor associated antigens associated with specific cancers have been identified in the art. In some embodiments, tumor-associated antigens are antigens that can potentially stimulate an obvious tumor-specific immune response. Some of these antigens are encoded by normal cells, but not necessarily expressed by normal cells. These antigens can be characterized as those that are usually silent (i.e., not expressed) in normal cells, those that are expressed only during certain stages of differentiation, and those that are expressed over time, such as embryonic and fetal antigens. Other cancer antigens are encoded by mutant cell genes such as oncogenes (e.g., activated ras oncogene) , suppressor genes (e.g., mutant p53) , and fusion proteins produced by internal deletions or chromosomal translocations. Other cancer antigens can be encoded by viral genes, such as those carried on RNA and DNA tumor viruses. Many other tumor associated antigens and antibodies against them are known and / or commercially available, and can also be produced by those skilled in the art.

[0458] Examples of tumor associated antigens include but are not limited to 5T4, alphafetoprotein, CA-125, carcinoembryonic antigen, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD40, CD56, CD79, CD78, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, IgM, C-type lectin-like molecule 1  (CLL-1) , EGFR, EGFRvIII, epithelial tumor antigen, ERBB2, FLT3, folate binding protein, GD2, GD3, HIV-1 envelope glycoprotein gp41, HIV-1 envelope glycoprotein gpl20, melanoma-associated antigen, MUC-1, mutated p53, mutated ras, ROR1, GPC3, VEGFR2, and combinations thereof.

[0459] In some embodiments of the bispecific antibody comprising a further antigen binding domain binding to a second antigen described herein, the second antigen is a T-cell antigen. In some embodiments, the T-cell antigen is selected from the group consisting of T cell receptor (TCR) , CD3, CD4, CD8, CD16, CD25, CD28, CD38, CD44, CD62L, CD69, ICOS, 41-BB (CD137) , and NKG2D or any combination thereof. In some embodiments, the T-cell antigen is CD3, and the second antigen binding region binds to any of γ chain, δ chain, ε chain, ζ chain, and η chain of CD3.

[0460] In some preferred embodiments, the second antigen is selected from the group consisting of CD3, CD138, CD20, CD40, CD19, CD33, CD16, CD38, CD22, CD40, CD8, IL-6, CSPGs, RGM A, CTLA-4, BTN02, IGF1, IGF2, Erb2B, IGF-1R, EGFR, CD13, ErbB3, EGFR-2, IGFR, VEGFR-2, Met, VEGF-A, Angiopoietin-2 (Ang-2) , IL-12, TWEAK, IL-13, IL-lbeta, RGM A, NgR, NogoA, OMGp, PDL-1, PD-1, PD-1, TIM-3, VEGF, Lag-3, OX40, DLL-4, PDGFR, EpCAM, CD16a, PSMA, CEA, TROP-2, HSG, HGF, PDGF, ICOS, CD47, RGM B, Te38, TNFa, Blys, GP130, IL-12, RANK ligand, ITGB6, Nectin-4, and Folate receptor.

[0461] Based on the amino acid sequence of heavy chain constant regions of the antibody, an immunoglobulin molecule can be divided into five classes (isotypes) : IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM, and can be further divided into different subtypes, such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, etc. The light chain of the antibody can be classified as a lambda (λ) chain or a kappa (κ) chain, based on the amino acid sequence of the light chain. The antibodies disclosed herein can be of any classes or subtypes above.

[0462] In some embodiments, the antibody is of an isotype selected from the group consisting of IgG, IgA, IgM, IgE, and IgD. In some embodiments, the antibody is of a subtype selected from the group consisting of IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4. In a preferred embodiment, the antibody is an IgG1 antibody.

[0463] The antibody disclosed herein can be an intact antibody or the antigen binding fragment thereof. The antigen binding fragment can be any fragments of the antibody that retain the ability to specifically bind to ITGB4. Examples of antigen binding fragments include but are not limited to a  Fab fragment; a F (ab') 2 fragment; a Fab' fragment; a Fd fragment; a Fd' fragment; a Fv fragment; a scFv fragment; a VHH antibody; a dAb fragment; an isolated complementarity determining region (CDR) ; a nanobody; a linear antibody comprising a pair of tandem Fd segments (VH-CH1-VH-CH1) , and a modified version of any of the foregoing fragments, which retains antigen binding activity.

[0464] In some embodiments, the antigen binding fragment is selected from the group consisting of Fab, Fab’, F (ab') 2, Fv, scFv, VHH, and ds-scFv. In a preferred embodiment, the antigen binding fragment is Fab. In another preferred embodiment, the antigen binding fragment is Fv. In another preferred embodiment, the antigen binding fragment is scFv.

[0465] III. Linker

[0466] The one or more drug moieties (e.g., therapeutic agents and / or diagnostic agents) may be indirectly conjugated to the anti-ITGB4 antibodies (e.g. by way of a linker with direct covalent or non-covalent interactions) . Linkers can be chemical linking agents, such as homobifunctional and heterobifunctional cross-linkers, which are available from many commercial sources.

[0467] Linkers can be susceptible to cleavage (cleavable linker) , such as, acid-induced cleavage, photo-induced cleavage, peptidase-induced cleavage, esterase-induced cleavage, and disulfide bond cleavage, at conditions under which the compound or the antibody remains active. Alternatively, linkers can be substantially resistant to cleavage (e.g., stable linker or non-cleavable linker) .

[0468] In some embodiments, the linker is an acid-labile linker. In some embodiments, the linker is a photo-labile linker. In some embodiments, the linker is a protease-sensitive linker. In some embodiments, the linker is a hydrazone linker. In some embodiments, the linker is an esterase cleavable linker. In some embodiments, the linker is a dimethyl linker. In some embodiments, the linker is a disulfide-containing linker. In some embodiments, the linker is a hydrophilic linker. In some embodiments, the linker is a procharged linker. In some embodiments, the linker is an acid-based linker.

[0469] In some embodiments, the linker comprises an acid-labile linker. In some embodiments, the linker comprises a hydrophilic linker. In some embodiments, the linker comprises a protease-sensitive linker. In some embodiments, the linker comprises photolabile linker. In some embodiments, the linker comprises a hydrazone linker. In some embodiments, the linker  comprises a dimethyl linker. In some embodiments, the linker comprises a disulfide-containing linker.

[0470] In some embodiments, the linker may comprise an amino acid unit. In one such embodiment, the amino acid unit allows for cleavage of the linker by a protease, thereby facilitating release of the drug from the antibody drug conjugate upon exposure to intracellular proteases, such as lysosomal enzymes. Exemplary amino acid units include, but are not limited to, a dipeptide, a tripeptide, a tetrapeptide, and a pentapeptide. Exemplary dipeptides include: valine-citrulline (vc or val-cit) , alanine-phenylalanine (af or ala-phe) ; phenylalanine-lysine (fk or phe-lys) : or N-methyl-valine-citrulline (Me-val-cit) . Exemplary tripeptides include: glycine-valine-citrulline (gly-val-cit) and glycine-glycine-glycine (gly-gly-gly) . In some embodiments, a linker comprising vc (valine-citrulline) unit is preferred. Amino acid units can be designed and optimized in their selectivity for enzymatic cleavage by a particular enzyme, for example, a tumor-associated protease, cathepsin B, C and D, or a plasmin protease.

[0471] In one aspect, the linker used in the present disclosure is derived from a crosslinking reagent such as mc (6-maleimidocaproyl) , PABC (para-amino-benzyloxycarbonyl) , DMEA (dimethylethylamine) , Val-Cit-PABC, mc-Val-Cit-PABC, CL2A, mal-PEG8-Val-Ala-PABC, MC-VC-PABC-DMEA, GGFG (Glycine-Glycine-Phenylalanine-Glycine) , mc-GGFG-aminomethyl, AcBut (4- (4-acetylphenoxy) -butanoic acid) , dimethylhydrazide (3-methyl-3-mercaptobutane hydrazide) , AcBut-dimethylhydrazide, SPDP (N-succinimidyl-3- (2-pyridyldithio) propionate) , SPP (N-succinimidyl 4- (2-pyridyldithio) pentanoate) , SPDB (N-succinimidyl 4- (2-pyridyldithio) butanoate) , sulfo-SPDB (N-succinimidyl-4- (2-pyridyldithio) -2-sulfo-butanoate) , SIA (N-succinimidyl iodoacetate) , SIAB (N-succinimidyl (4-iodoacetyl) aminobenzoate) , maleimide PEG NHS, SMCC (N-succinimidyl 4- (maleimidomethyl) cyclohexanecarboxylate) , sulfo-SMCC (N-sulfosuccinimidyl 4- (maleimidomethyl) cyclohexanecarboxylate) or 2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl 17- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) -5, 8, 11, 14-tetraoxo-4, 7, 10, 13-tetraazaheptadecan-1-oate (CX1-1) .

[0472] In another aspect, the linker used in the present disclosure is derived from a cross-linking agent such as sulfo-SPDB (N-succinimidyl-4- (2-pyridyldithio) -2-sulfo-butanoate) , mc (6-maleimidocaproyl) , PABC (para-amino-benzyloxycarbonyl) , DMEA (dimethylethylamine) , Val-Cit-PABC, mc-Val-Cit-PABC, CL2A, mal-PEG8-Val-Ala-PABC, MC-VC-PABC-DMEA, GGFG  (Glycine-Glycine-Phenylalanine-Glycine) , mc-GGFG-aminomethyl, AcBut (4- (4-acetylphenoxy) -butanoic acid) , dimethylhydrazide (3-methyl-3-mercaptobutane hydrazide) , AcBut-dimethylhydrazide or SMCC (N-Succinimidyl 4- (maleimidomethyl) cyclohexane-carboxylate) .

[0473] In some embodiments, the linker used in the present disclosure is sulfo-SPDB, and the antibody drug conjugate is represented by wherein the indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0474] In some embodiments the linker used in the present disclosure is mc, and the antibody drug conjugate is represented by wherein the indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0475] In some embodiments, the linker used in the present disclosure is mc-Val-Cit-PABC, and the antibody drug conjugate is represented by  wherein the indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0476] In some embodiments, the linker used in the present disclosure is CL2A, and the antibody drug conjugate is represented by  wherein the  indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0477] In some embodiments, the linker used in the present disclosure is mal-PEG8-Val-Ala-PABC, and the antibody drug conjugate is represented by  wherein the indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0478] In some embodiments, the linker used in the present disclosure is mc-GGFG-aminomethyl, and the antibody drug conjugate is represented by  wherein the indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0479] In some embodiments, the linker used in the present disclosure is SMCC:  wherein the indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0480] In some embodiments, the linker used in the present disclosure is AcBut-dimethylhydrazide, and the antibody drug conjugate is represented by  wherein the indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0481] In some embodiments, the linker used in the present disclosure is MC-VC-PAB-DMEA, and the antibody drug conjugate is represented by  wherein the indicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.

[0482] IV. Drug

[0483] The terms “drug moiety, ” “drug payload, ” “therapeutic molecule, ” “therapeutic payload, ”  “therapeutic agents, ” and “therapeutic moieties, ” as used interchangeably herein, refers to a chemical or biological moiety that is conjugated to an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof.

[0484] Examples of drugs that may be used in ADCs, i.e., drugs that may be conjugated to the antibodies, are provided below, and include antibiotics, DNA synthesis inhibitors, RNA polymerase II inhibitors, and RNA spliceosome inhibitors, mitotic inhibitors (such as tubulin inhibitors and microtubule polymerization inhibitors) , antitumor antibiotics, immunomodulating agents, gene therapy vectors, alkylating agents, antiangiogenic agents, antimetabolites, boron-containing agents, chemoprotective agents, hormone agents, glucocorticoids, photoactive therapeutic agents, oligonucleotides, radioactive isotopes, radiosensitizers, topoisomerase inhibitors (such as topoisomerase I inhibitors) , tyrosine kinase inhibitors, and combinations thereof.

[0485] In some embodiments, tubulin inhibitors and microtubule polymerization inhibitors, antibiotics, DNA synthesis inhibitors, topoisomerase I inhibitors, RNA polymerase II inhibitors, and RNA spliceosome inhibitors is preferred.

[0486] In some embodiments, the drug moiety is tubulin inhibitors and microtubule polymerization inhibitors. In some specific embodiments, the drug moiety is auristatins. In some specific embodiments, the drug moiety is maytansines. In some specific embodiments, the drug moiety is tubulysins. In some specific embodiments, the drug moiety is cryptophycins. In some specific embodiments, the drug moiety is rhizoxin.

[0487] In some embodiments, the drug moiety is antibiotics. In some specific embodiments, the drug moiety is calicheamicins. In some specific embodiments, the drug moiety is doxorubicin. In some specific embodiments, the drug moiety is anthracyclines.

[0488] In some embodiments, the drug moiety is DNA synthesis inhibitors. In some specific embodiments, the drug moiety is duocarmycins. In some specific embodiments, the drug moiety is PBDs (pyrrolobenzodiazepines) . In some specific embodiments, the drug moiety is IGNs (indolinobenzodiazepines) .

[0489] In some embodiments, the drug moiety is topoisomerase I inhibitors. In some specific embodiments, the drug moiety is camptothecin analogs.

[0490] In some embodiments, the drug moiety is RNA polymerase II inhibitors. In some specific embodiments, the drug moiety is amanitins.

[0491] In some embodiments, the drug moiety is RNA spliceosome inhibitors selected from a group consisting of spliceostatins and thailanstatins.

[0492] In some embodiments, maytansinoids (DM1, DM2, DM3, DM4, maytansine, and ansamitocins) and their analogs is preferred.

[0493] In some specific embodiments, the maytansinoid drug moiety is N2’-deacetyl-N2’- (3-mercapto-1-oxopropyl) -maytansine (also known as DM1) . DM1 is represented by the following structural formula, wherein the indicates the attachment site to the linker.

[0494] In some specific embodiments, the maytansinoid drug moiety is N2’-deacetyl-N2’- (4-mercapto-1-oxopentyl) -maytansine (also known as DM3) . DM3 is represented by the following structural formula, wherein the indicates the attachment site to the linker.

[0495] In some specific embodiments, the maytansinoid drug moiety is N2’-deacetyl-N2’- (4-methyl-4-mercapto-1-oxopentyl) -maytansine (also known as DM4) . DM4 is represented by the following structural formula, wherein the indicates the attachment site to the linker.

[0496] In some embodiments, auristatins (MMAE, MMAF, MMAD, and ansamitocins) and their analogs is preferred.

[0497] In some specific embodiments, the auristatins drug moiety is monomethyl auristatin E (also known as MMAE) . MMAE is represented by the following structural formula, wherein the  indicates the attachment site to the linker.

[0498] In some specific embodiments, the auristatins drug moiety is monomethyl auristatin F (also known as MMAF) . MMAF is represented by the following structural formula, wherein the  indicates the attachment site to the linker.

[0499] In some embodiments, PBDs (pyrrolobenzodiazepines, or pyrrolo [2, l-c] [l, 4] -benzodiazepines, such as SG3199) are preferred. PBDs are sequence-selective DNA alkylating antibiotics with significant antitumor properties. PBDs have the ability to recognize and bond to specific sequences in DNA; one such sequence is is PuGPu (Purine-Guanine-Purine) . PBDs also can bond to PuGPy (Purine-Guanine-Pyrimidine) or PyGPu sequences, over PyGPy sequences.

[0500] In some embodiments, the PBDs drug moiety is SG3199, which is a cytotoxic DNA minor groove interstrand crosslinking pyrrolobenzodiazepine (PBD) dimer. SG3199 is represented by the following structural formula, wherein the indicates the attachment site to the linker.

[0501] In some embodiments, camptothecin analogs is preferred. Camptothecin analogs is a kind of DNA topoisomerase I inhibitor. Unlike monomethyl auristatin E, camptothecin-based therapies do not cause peripheral neuropathy clinically, suggesting that SGN-CD30C may have the potential to avoid one of the most common adverse events associated with BV.

[0502] In some specific embodiments, the camptothecin drug moiety is 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin (also known as SN38) . SN38 is represented by the following structural formula, wherein the indicates the attachment site to the linker.

[0503] In some specific embodiments, the camptothecin drug moiety is exatecan (also known as DX-8951) . Exatecan is represented by the following structural formula, wherein the indicates the attachment site to the linker.

[0504] In some specific embodiments, the camptothecin drug moiety is exatecan derivative (also known as DXd) . DXd is represented by the following structural formula, wherein the indicates the attachment site to the linker.

[0505] In some embodiments, calicheamicin is preferred, which is an antitumor antibiotic and a cytotoxic agent that causes double-strand DNA breaks. N-Acetyl calicheamicin is a derivative of calicheamicin and is a potent enediyne antitumor antibiotic.

[0506] In some specific embodiments, the calicheamicin drug moiety is N-acetyl Calicheamicin γ1, which is represented by the following structural formula, wherein the indicates the attachment site to the linker.

[0507] V. Pharmaceutical compositions

[0508] The present disclosure also provides a composition, e.g., a pharmaceutical composition, containing the antibody drug conjugate of the present disclosure, formulated together with a pharmaceutically acceptable carrier.

[0509] Therapeutic formulations of this disclosure can be prepared by mixing the antibody drug conjugate having the desired degree of purity with optional physiologically acceptable carriers, excipients or stabilizers in the form of lyophilized formulations or aqueous solutions. Acceptable carriers, excipients, or stabilizers are nontoxic to recipients at the dosages and concentrations employed, and include buffers such as phosphate, citrate, and other organic acids; antioxidants including ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzyl  ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride; benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or propyl paraben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol; and m-cresol) ; low molecular weight (less than about 10 amino acid residues) proteins, such as serum albumin, gelatin, or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine, or lysine; monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates; chelating agents such as EDTA; sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counter-ions such as sodium; metal complexes (e.g., Zn-protein complexes) ; and / or non-ionic surfactants such as Tween, Pluronics, or PEG.

[0510] The formulation may also contain more than one active compound as necessary for the particular indication being treated, preferably those with complementary activities that do not adversely affect each other. For instance, the formulation may further comprise another antibody or bispecific antibody, cytotoxic agent, chemotherapeutic agent or ADC. Such molecules are suitably present in combination in amounts that are effective for the purpose intended.

[0511] The active ingredients may also be entrapped in microcapsule prepared, for example, by coacervation techniques or by interfacial polymerization, for example, hydroxymethylcellulose or gelatin-microcapsule and poly- (methylmethacylate) microcapsule, respectively, in colloidal drug delivery systems (for example, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nano-particles and nanocapsules) or in macroemulsions. Such techniques are disclosed in Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980) .

[0512] Pharmaceutical compositions of the disclosure can be administered in combination therapy, i.e., combined with other agents. Examples of therapeutic agents that can be used in combination therapy are described in greater detail below.

[0513] The formulations to be used for in vivo administration must be sterile. This can be readily accomplished by filtration through sterile filtration membranes. Sterile injectable solutions can be prepared by incorporating the active compound in the required amount in an appropriate solvent with one or a combination of ingredients enumerated above, as required, followed by sterilization microfiltration. Generally, dispersions are prepared by incorporating the active compound into a sterile vehicle that contains a basic dispersion medium and the required other ingredients from those enumerated above. In the case of sterile powders for the preparation of  sterile injectable solutions, the preferred methods of preparation are vacuum drying and freeze-drying (lyophilization) that yield a powder of the active ingredient plus any additional desired ingredient from a previously sterile-filtered solution thereof.

[0514] VI. Dosage

[0515] The amount of active ingredient which can be combined with a carrier material to produce a single dosage form will vary depending upon the subject being treated, and the particular mode of administration. The amount of active ingredient which can be combined with a carrier material to produce a single dosage form will generally be that amount of the composition which produces a therapeutic effect. Generally, out of one hundred percent, this amount will range from about 0.01%to about 99%of active ingredient, preferably from about 0.1%to about 70%, most preferably from about 1%to about 30%of active ingredient in combination with a pharmaceutically acceptable carrier.

[0516] Dosage regimens are adjusted to provide the optimum desired response (e.g., a therapeutic response) . For example, a single bolus may be administered, several divided doses may be administered over time or the dose may be proportionally reduced or increased as indicated by the exigencies of the therapeutic situation. It is especially advantageous to formulate parenteral compositions in dosage unit form for ease of administration and uniformity of dosage. Dosage unit form as used herein refers to physically discrete units suited as unitary dosages for the subjects to be treated; each unit contains a predetermined quantity of active compound calculated to produce the desired therapeutic effect in association with the required pharmaceutical carrier. The specification for the dosage unit forms of the disclosure are dictated by and directly dependent on (a) the unique characteristics of the active compound and the particular therapeutic effect to be achieved, and (b) the limitations inherent in the art of compounding such an active compound for the treatment of sensitivity in individuals.

[0517] For administration of the antibody drug conjugate of this disclosure, the dosage ranges from about 0.0001 to 100 mg / kg, and more usually 0.01 to 50 mg / kg, of the host body weight. For example, dosages can be 0.3 mg / kg body weight, 1 mg / kg body weight, 3 mg / kg body weight, 5 mg / kg body weight or 10 mg / kg body weight or within the range of 1-10 mg / kg. An exemplary treatment regime entails administration daily, twice per week, once per week, once every two weeks,  once every three weeks, once every four weeks, once a month, once every 3 months or once every three to 6 months. Preferred dosage regimens for antibody drug conjugate of the disclosure include 1 mg / kg body weight or 3 mg / kg body weight via intravenous administration, with the antibody drug conjugate being given using one of the following dosing schedules: (i) every four weeks for six dosages, then every three months; (ii) every three weeks; (iii) 3 mg / kg body weight once followed by 1 mg / kg body weight every three weeks.

[0518] Alternatively, antibody drug conjugate can be administered as a sustained release formulation, in which case less frequent administration is required. Dosage and frequency vary depending on the half-life of the antibody drug conjugate in the patient. In general, human antibodies show the longest half-life, followed by humanized antibodies, chimeric antibodies, and nonhuman antibodies. The dosage and frequency of administration can vary depending on whether the treatment is prophylactic or therapeutic. In prophylactic applications, a relatively low dosage is administered at relatively infrequent intervals over a long period of time. Some patients continue to receive treatment for the rest of their lives. In therapeutic applications, a relatively high dosage at relatively short intervals is sometimes required until progression of the disease is reduced or terminated, and preferably until the patient shows partial or complete amelioration of symptoms of disease. Thereafter, the patient can be administered a prophylactic regime.

[0519] Actual dosage levels of the active ingredients in the pharmaceutical compositions of the present disclosure may be varied so as to obtain an amount of the active ingredient which is effective to achieve the desired therapeutic response for a particular patient, composition, and mode of administration, without being toxic to the patient. The selected dosage level will depend upon a variety of pharmacokinetic factors including the activity of the particular compositions of the present disclosure employed, the route of administration, the time of administration, the rate of excretion of the particular compound being employed, the duration of the treatment, other drugs, compounds and / or materials used in combination with the particular compositions employed, the age, sex, weight, condition, general health and prior medical history of the patient being treated, and like factors well known in the medical arts.

[0520] A “therapeutically effective dosage” of an ADC of the disclosure preferably results in a decrease in severity of disease symptoms, an increase in frequency and duration of disease symptom-free periods, or a prevention of impairment or disability due to the disease affliction. For  example, for the treatment of tumors, a “therapeutically effective dosage” preferably inhibits cell growth or tumor growth or metastasis by at least about 20%, more preferably by at least about 40%, even more preferably by at least about 60%, and still more preferably by at least about 80%relative to untreated subjects. The ability of an agent or compound to inhibit tumor growth can be evaluated in an animal model system predictive of efficacy in human tumors. Alternatively, this property of a composition can be evaluated by examining the ability of the compound to inhibit, such inhibition in vitro by assays known to the skilled practitioner. A therapeutically effective amount of a therapeutic compound can decrease tumor size, metastasis, or otherwise ameliorate symptoms in a subject. One of ordinary skill in the art would be able to determine such amounts based on such factors as the subject’s size, the severity of the subject’s symptoms, and the particular composition or route of administration selected.

[0521] VII. Administration

[0522] A composition of the disclosure can be administered via one or more routes of administration using one or more of a variety of methods known in the art. As will be appreciated by the skilled artisan, the route and / or mode of administration will vary depending upon the desired results. Preferred routes of administration for antibody drug conjugate of the disclosure include intravenous, intramuscular, intradermal, intraperitoneal, subcutaneous, spinal or other parenteral routes of administration, for example by injection or infusion. The phrase “parenteral administration” as used herein means modes of administration other than enteral and topical administration, usually by injection, and includes, without limitation, intravenous, intramuscular, intraarterial, intrathecal, intracapsular, intraorbital, intracardiac, intradermal, intraperitoneal, transtracheal, subcutaneous, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subarachnoid, intraspinal, epidural and intrasternal injection and infusion. Alternatively, an antibody drug conjugate of the disclosure can be administered via a non-parenteral route, such as a topical, epidermal or mucosal route of administration, for example, intranasally, orally, vaginally, rectally, sublingually or topically.

[0523] The active compounds can be prepared with carriers that will protect the compound against rapid release, such as a controlled release formulation, including implants, transdermal patches, and microencapsulated delivery systems. Biodegradable, biocompatible polymers can be  used, such as ethylene vinyl acetate, polyanhydrides, polyglycolic acid, collagen, polyorthoesters, and polylactic acid. Many methods for the preparation of such formulations are patented or generally known to those skilled in the art. See, e.g., Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.

[0524] Therapeutic compositions can be administered with medical devices known in the art. For example, a therapeutic composition of the disclosure can be administered with a needleless hypodermic injection device, such as the devices disclosed in US 5399163, US 5383851, US 5312335, US 5064413, US 4941880, US 4790824, and US 4596556. Examples of well-known implants and modules useful in the present disclosure include those described in US 4487603, US 4486194, US 4447233, US 4447224, US 4439196, and US 4475196. These patents are incorporated herein by reference. Many other such implants, delivery systems, and modules are known to those skilled in the art.

[0525] VIII. Treatment Methods

[0526] In one aspect, the present disclosure relates to treat a disease of a subject in vivo using the above-described antibody drug conjugate, wherein the disease is expressed by ITGB4. In one embodiment, the disclosure provides a method of preventing and / or treating a disease in a subject in need, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of an antibody drug conjugate or the composition comprising the antibody drug conjugate, wherein the disease is expressed by ITGB4. In one specific embodiment, the disease is a cancer.

[0527] In another aspect, the present disclosure relates to treatment of a subject in vivo using the above-described antibody drug conjugate such that growth and / or metastasis of cancerous tumors is inhibited. In one embodiment, the disclosure provides a method of inhibiting growth and / or restricting metastatic spread of tumor cells in a subject, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of an antibody drug conjugate.

[0528] Non-limiting examples of preferred cancers for treatment include chronic or acute leukemia including head and neck cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate cancer, breast cancer, leukemia, myeloma, epithelial squamous cell cancer, melanoma, leukemia, myeloma, stomach cancer, brain cancer, lung cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer,  breast cancer, colon cancer, renal cancer, prostate cancer, testicular cancer, and thyroid cancer, and head and neck cancer.

[0529] As used herein, the term “subject” is intended to include human and non-human animals. Non-human animals include all vertebrates, e.g., mammals and non-mammals, such as non-human primates, sheep, dogs, cats, cows, horses, chickens, amphibians, and reptiles, although mammals are preferred, such as non-human primates, sheep, dogs, cats, cows and horses. Preferred subjects include human patients in need of enhancement of an immune response. The methods are particularly suitable for treating human patients having a disorder that can be treated by augmenting the immune response.

[0530] The above treatment may also be combined with standard cancer treatments. For example, it may be effectively combined with chemotherapeutic regimes. In these instances, it may be possible to reduce the dose of chemotherapeutic reagent administered (Mokyr, M. et al. Cancer Res., 1998, 58, 5301–5304) .

[0531] Other antibodies which may be used to activate host immune responsiveness can be used in or with the bispecific molecule drug conjugate of this disclosure. These include molecules targeting on the surface of dendritic cells which activate DC function and antigen presentation. For example, anti-CD40 antibodies are able to substitute effectively for T cell helper activity (Ridge, J. et al. Nature, 1998, 393, 474–478) and can be used in conjunction with the bispecific molecule drug conjugate of this disclosure (Ito, N. et al. Immunobiology, 2000, 201, 527–540) . Similarly, antibodies targeting T cell costimulatory molecules such as CTLA-4 (US 5811097) , CD28 (Haan, J. et al. Immunol. Lett., 2014, 162, 103–112) , OX-40 (Weinberg, A. et al. J. Immunol., 2000, 164, 2160–2169) , 4-1BB (Melero, I. et al. Nature Med., 1997, 3, 682–685) , and ICOS (Hutloff, A. et al. Nature, 1999, 397, 262–266) or antibodies targeting PD-1 (US 8008449) and PD-L1 (US 7943743; US 8168179) may also provide for increased levels of T cell activation. In another example, the bispecific molecule drug conjugate of this disclosure can be used in conjunction with anti-neoplastic antibodies, such as RITUXAN (rituximab) , HERCEPTIN (trastuzumab) , BEXXAR (tositumomab) , ZEVALIN (ibritumomab) , CAMPATH (alemtuzumab) , LYMPHOCIDE (eprtuzumab) , AVASTIN (bevacizumab) , and TARCEVA (erlotinib) , and the like.

[0532] EXAMPLES

[0533] The following examples are put forth so as to provide those of ordinary skill in the art with a complete disclosure and description of how to make and use the present disclosure, and are not intended to limit the scope of what the inventors regard as their disclosure nor are they intended to represent that the experiments below are all or the only experiments performed. Efforts have been made to ensure accuracy with respect to numbers used (e.g., amounts, temperature, etc. ) but some experimental errors and deviations should be accounted for. Unless indicated otherwise, parts are parts by weight, molecular weight is weight average molecular weight, temperature is in degrees Centigrade, and pressure is at or near atmospheric.

[0534] Example 1: ITGB4 is highly expressed in multiple tumor types

[0535] The expression level of ITGB4 was analyzed in multiple tumor types compared to adjacent normal tissue using bioinformatics datasets (PCT / CN2022 / 074991) . It is demonstrated that ITGB4 is highly expressed in many tumor types including non-small cell lung cancer (NSCLC) , colorectal cancer (CRC) , esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) , squamous cell cancer of the head and neck (SCCHN) , etc. (Fig. 1)

[0536] Example 2: ITGB4 is highly expressed in many tumor samples with IHC staining

[0537] Anti-ITGB4 monoclonal antibody ab182120 (Abcam cat. AB182120) was found to be capable of sensitively and specifically binding to tumor cells expressing ITGB4, as compared to isotype control.

[0538] For IHC protocol, immunohistochemical staining was performed on 4 μm sections using the ab182120 (1: 400 dilution) rabbit monoclonal primary antibody (Abcam) on the Ventana Benchmark Ultra Autostainer according to the manufacturer’s protocol. Briefly, antigen retrieval was performed by placing unstained slides in Ventana Ultra CC1 buffer (Tris-EDTA / EGTA, pH 9) at 64 ℃ for 95 min followed by incubation of tissues with the primary antibody (ab182120) at 36 ℃ for 16 min. Antigen–antibody reaction was visualized using Universal DAB Detection Kit. Hematoxylin staining for 8 min followed by a bluing reagent (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ) for 4 min was used as a counter stain. To ensure antibody specificity, isotype controls were performed as above except primary antibodies were replaced with rabbit IgG. Immunohistochemical staining was evaluated semi-quantitatively for both percent positivity and  intensity and an H-score ranging from 0-300 was derived based on the percentage of tumor cells membrane stained multiplied by the intensity (0-3) of staining.

[0539] ITGB4 was found to be highly expressed in tumor samples (Bioaitech) of a subset of patients with CRC, NSCLC and all the patients with SCCHN and ESCC (Table 1, Fig. 2) . In this study, 68%, 42%, 100 %and 100%of CRC (Fig. 2b) , NSCLC (Fig. 2c) , ESCC (Fig. 2d) and SCCHN (Fig. 2e) respectively were observed to have tumor cells membrane ITGB4 expression H-score≥100 (Table 1) .

[0540] Table 1 Summary of H-score of tumor IHC samples

[0541] Example 3: ITGB4 is highly expressed in many tumor cell lines assessed with FACS

[0542] ITGB4 antigen density was assessed on COLO 201 (Meisen CTCC-007-0101) , DLD-1 (SIBS TCHu134) , H441 (Meisen CTCC-001-0355) , HCC827 (SIBS TCHu153) , HCT116 (SIBS TCHu99) , HT-29 (ATCC HTB-38) , LoVo (ATCC CCL-229) , LS1034 (Meisen CTCC-007-0089) , RKO (SIBS TCHu116) , SW480 (SIBS SCSP-5033) , SW620 (Meisen CTCC-003-0021) and T84 (SIBS TCHu211) cells with PE-rat anti-human CD104 (BD) , PE mouse anti-human CD104 (BD) , and clone 002 of the present application by FACS using BD QuantibriteTM Beads according to BD recommended protocol (BD, data summarized in Table 2) . All these cells mentioned above were cultured according to ATCC's guidance.

[0543] Table 2 Summary of antigen density (molecules per cell) assessed with different anti-ITGB4 clones.

[0544] Similar results were achieved with different anti-ITGB4 clones. LS1034, HT-29, HCT-116, DLD-1, SW480, SW620 were detected with more than 105 molecules per cell with at least one anti-ITGB4 antibody (Fig. 3) . LoVo, T84, Colo201, H441 and HCC827 had ITGB4 expressed ranging from 103 to 105 molecules on surface per cell. RKO was detected as having less than 103 molecules per cell, which could be considered as a negative control for ITGB4 expression. (Fig. 3)

[0545] Example 4: Assessment of antibodies binding on human ITGB4 by OCTET, ELISA, and FACS

[0546] The parental clone of 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 and 008, as well as Isotype were tested by BLI with ForteBio Octet RED96e with Anti-hIgG Fc Capture (AHC) Biosensors (Sartorius #18-5060) . The assay was performed at 30℃ with 1000 rpm mixing. All samples were diluted in 1× Kinetics Buffer (KB) prepared with 10× KB (Sartorius #18-1105) and PBS. Sensors were loaded with 10 μg / mL test antibody for 180 seconds followed with 1×KB for 120 seconds. The association of recombinant human integrin alpha 6 beta 4 protein (ITGα6β4. Sino #CT069-H2508H) was  performed at 100 nM, 10 nM, 1 nM and 0 nM for 180 seconds followed with 1× KB for 300 seconds for the assessment of dissociation. The data was analyzed with ForteBio Data Analysis software HT12.0. The OCTET binding results were shown in Table 3.

[0547] The parental clone of 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 and 008, as well as isotype were tested by ELISA. 96-well ELISA plates were coated with 2 μg / mL recombinant human ITGα6β4 (Sino #CT069-H2508H) solution in ELISA coating buffer (Solarbio #C1055) at 100 μL / well for overnight at 2-8℃. The plates were washed 3 times with 250 μL / well of 1×PBST and tapped on absorbent paper to remove excess liquid. The plates were blocked with SuperBlockTM blocking buffer (Thermo Fisher #37516) at room temperature according to the manufacture’s protocol. 100 μL / well of diluted test antibody was then added into plates and incubated at 37 ℃ for 1 hour. The concentrations of tested antibodies started from 10 μg / mL with 8 serial dilutions at a 5-fold dilution factor. After 5 times of washes with 250 μL / well of 1×PBST, 100 μL / well of 1: 8000 diluted Goat anti-Human IgG HRP (Sigma #A0170) in blocking buffer was added into plates and incubated at 37 ℃ for 1 hour. After another 5 times of washes with 250 μL / well of 1×PBST, 100 μL / well TMB solution (SeraCare #5120-0077) was added and incubated at room temperature for 10 minutes. 100 μL / well of Stop solution (Beyotime #P0215) was subsequently added to stop the chromogenic reaction. The absorbance at 450 nm was measured with BioTek Synergy 2 Microplate Reader. A nonlinear regression analysis with four adjustable parameters was conducted using GraphPad Prism 9.2 software. The ELISA results were shown in Table 3.

[0548] The parental antibody clone 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007 and 008, as well as isotype control were tested for binding to the tumor cell lines, H292 (ATCC CRL-1848) and HCT116 (SIBS TCHu99) , and an engineering cell CHO-S-human ITGA6B4-#5 (Celetrix) . All tested cells were cultured according to ATCC guidance. 105 cells per well were seeded into 96-well V-Bottom plates. Cells were washed twice with stain buffer (BD #554656) and pelleted at 300×g and 2-8℃ for 3 minutes. Cells were resuspended and incubated with 100 μL / well of cold diluted antibody in stain buffer as first antibody solution at 2-8℃ away from light for 40 minutes. The concentrations of tested antibodies started from 50 μg / mL with 8 serial dilutions at a 5-fold dilution factor. After twice washes, cells were resuspended with 100 μL / well of 1 μg / mL cold diluted Alexa  647 AffiniPure Goat Anti-Human IgG (H+L) (Jackson #109-605-088) as second antibody and incubated at 2-8℃ away from light for 30 minutes. After twice washes with stain buffer, the cells were  resuspended in 100 μL / well of stain buffer and analyzed by Beckman CytoFlex flow cytometer. For each sample, 10000 events were collected in APC channel. A nonlinear regression analysis with four adjustable parameters was conducted using GraphPad Prism 9.2 software. The related results were shown in Fig. 4.

[0549] All tested antibodies bound to human ITGB4 with high affinity, as detected with Octet and ELISA (Table 3) . When the antibodies were applied to tumors cells including HCT116 and H292 which endogenously express ITGB4, or ITGB4 transduced CHO-Sover-expressing ITGB4 (CHO-Shuman ITGA6B4 #5) , all tested antibodies had demonstrated high binding affinities within 10-fold difference excluding 001 and 003 with slightly lower binding affinity (Table 4, and Fig. 4) . Table 3 Summary of candidate antibodies binding affinity on human ITGB4assessed with Octet and ELISA

[0550] Table 4 Summary of candidate antibodies binding ability on tumor cells

[0551] Example 5: Assessment of cross reactivity of the tested antibodies with FACS binding

[0552] FACS assessment protocol is similar to that used in Example 4. To assess the cross reactivity, the tested cell lines included CHO cells which stably transfected to overexpress either cyno or mouse integrin α6β4 respectively (CHO-S-murine ITGA6B4-#12, CHO-S-cyno ITGA6B4-#8, Celetrix) , and 4T1 (ATCC) which express mouse integrin α6β4, and CHO-S-human integrin α6β1 (CHO-S-human ITGA6B1-#24, Celetrix) that stably transfected to overexpress human integrin α6β1.

[0553] The results showed that all tested antibodies recognize cyno ITGB4.008 and 002 clones demonstrated superior binding affinity to cyno ITGB4 (Fig. 5a) . In addition, all tested antibodies except for 002 and 008 clones bound to 4T1 (Fig. 5d) and CHO-S-mouse ITGB4 (Fig. 5c) . None of the tested antibodies could recognize human ITGB1 (Fig. 5b) .

[0554] Example 6: Assessment of the tested antibodies on internalization

[0555] To evaluate the internalization into tumor cell lines, the parental clones of 001, 002, 004, 005, 006, 007 and 008, as well as isotype control were tested with H292 (ATCC CRL-1848) , HCT116 (SIBS TCHu99) and DLD-1 (SIBS TCHu134) cells. All these cells were cultured according to ATCC’s guidance.

[0556] Regarding the indirect method of internalization (FACS surface binding) , H292, HCT116 and DLD-1 cells were tested with 2 μg / mL parental clone antibody solution at 0 hour and 24 hours. For 0-hour group as the initial value, the FACS procedure was the same as mentioned in Example 4. For 24-hour group, after incubating with first antibody solution, cells were washed twice with 200 μL / well culture medium, resuspended with 500 μL / well culture medium and transferred to 24 wells plate to culture for 24 hours at 37℃. The second antibody staining was conducted with collected cells after washed twice with stain buffer. The following FACS procedure was like Example 4. The internalization ratio of 24 hours was calculated with the formular as 100%- (MFI of 24 hours ÷ MFI of 0 hour) *100%. The related results of indirect method were shown in Fig. 6-a, b, c.

[0557] Regarding the direct method of internalization (pHAb) , H292 and HCT116 cells were tested with 2 μg / mL pHAb labeled parental clone antibody solution at 24 hours. The pH of 100 μg of antibody in PBS was adjusted to about 8.5. Antibody solution was diluted to 2 mg / mL with 10 mM pH8.5 NaHCO3 and then mixed with 1.2 μL of 10 mg / mL pHAb Amine Reactive Dye  (Promega #G9841) to incubate for 1 hour at room temperature in dark. Zeba Spin Desalting Columns (Thermo Fisher #89882) were applied to remove the unconjugated pHAb and change the buffer to PBS. The A280 and A532 of pHAb labeled antibody was tested by NanoDropTMOneC (Thermo Fisher) to calculate the concentration and ratio of pHAb labeling. 5x105 cells in 2 mL culture medium per well were seeded into 6-well plates and incubated for 24 hours. Subsequently, 2 mL of fresh culture medium with 4 μg pHAb-labeled antibody was applied to replace the culture medium. After another 24-hour incubation at 37℃ in dark, cells were collected and washed with stain buffer (BD #554656) , and then pelleted. Cells were next resuspended in 100 μL / well stain buffer and analyzed with Beckman CytoFlex flow cytometer. For each sample, 104 events were collected in the PE channel. The fold change between the MFI of each sample and the MFI of blank control MFI was analyzed with GraphPad Prism 9.2 software. The related results were shown in Fig. 6d.

[0558] Results demonstrated all the tested antibodies can trigger internalization on these two tumor cell lines. 002, 007 and 008 clones performed superior on both cell lines (Table 5, Fig 6) .

[0559] Table 5 The summary of internalization rate measured at 24h using direct method (pHAb)

[0560] Example 7: Synthesis and chemical profiling of anti-ITGB4 antibody-drug conjugates

[0561] 001, 002, 004, 005, 006, 008 antibody clones were produced transiently in CHO-K1 cell line. The antibodies were purified by Protein A chromatography according to standard procedures.  Next, the antibodies were conjugated to MC-VC-PABC-MMAE. Approximately 50 mg of 001, 002, 004, 005 or 006 was conjugated to MC-VC-PABC-MMAE. The drug-linker MC-VC-PABC-MMAE was alkylated to the cysteines of the reduced antibodies according to procedures described in the literature (Sun et al. (2005) Bioconjugate Chem. 16: 1282-1290; McDonagh et al., (2006) Protein Eng. Design Sel. 19: 299-307) . Briefly, the interchain disulfides of the anti-integrin α6β4 antibodies are reduced with 2.2-2.5 equivalent tris (2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride (TCEP) (10 mM) at 37℃ for 1h. This is followed by addition of solution of linker-payload (MC-VC-PABC-MMAE) to the reaction mixture. The linker-payload is added in sufficient stoichiometric excess to the mAb (5-6 equivalent) in order to conjugate all the interchain cysteines produced in the TCEP reduction steps. If the linker-payload is not soluble in buffer solution, 10%-30% (v / v) DMSO is added prior to the linker-payload to the conjugation mixture. The reaction was quenched by the addition of an excess of N-acetyicysteine. Any residual unconjugated drug was removed by purification and the final anti-integrin α6β4 antibody drug conjugates were formulated in 20mM Histidine pH6.0.

[0562] 002-DXd, 002-SN38, 008-DXd were synthesized with the protocol as below. The drug-linker MC-GGFG-DXd or MC-VC-PAB-DMEA-SN38 were alkylated to the cysteines of the reduced antibodies (002 or 008) according to procedures described in the literature (Nakada T et al. (2016) Bioorg Med Chem Lett. 26 (6) : 1542-1545. Kang MS et al. (2021) . Chem Sci. 12 (41) : 13613-13647. ) . Briefly, after buffer-exchange into 50 mM PB containing 5 mM EDTA (pH 7.2) using Amicon ultracel filters (MWCO 25 kDa) , the antibody samples were reduced with 8 equivalence of TCEP (10mM) at room temperature for 4h. Charge 12 equivalence of drug-linker (5 mM in DMSO) slowly (in 3-5min) at 20℃ for 30min. Quench the reaction with 15X NAC (20 mM) at 20℃ for 30min. Any residual unconjugated drug was removed by purification and the final antibody-drug conjugates were formulated in 20mM Histidine pH6.0. All the formed ADC samples were subsequently analyzed for concentration by absorbance at 280 nm. HIC / RP-HPLC to identify drug antibody ratio (DAR) and SEC to identify purity were applied to check the chemical quality of synthesized ADCs. The results demonstrated that all ADC were synthesized with good quality (Table 6) .

[0563] Table 6 Chemical profiles of synthesized ADCs

[0564] SEC, size exclusion chromatography; DAR, drug antibody ratio.

[0565] Example 8: Protein binding assessment and cell binding affinity for the ADCs

[0566] Experimental protocols of Octet (for protein binding assessment) and FACS (for cell binding affinity) were conducted as described in Example 4.

[0567] Results demonstrated that the conjugated ADC sustained their binding ability on ITGB4, when comparing to the unconjugated corresponding antibodies. (Table 7, Fig. 7) .

[0568] Table 7 The summary of binding affinity of tested ADCs on human ITGB4 protein assessed by Octet

[0569] Example 9: Assessment of the conjugated ADCs on internalization

[0570] pHAb assay was applied to test the internalization of the ADCs on their functionality of internalization on HT-29 and SW620 cells (Fig. 8a, b) . Indirect internalization assay was conducted to assess the internalization rate on SW620 and COLO205 (Fig. 8c) . The protocols were mentioned in Example 6.

[0571] Results demonstrated all the tested ADC induced high level internalization at 24 hours in both pHAb assay and surface binding FACS (Fig. 8) .

[0572] Example 10: Cytotoxicity effect of anti-ITGB4 ADCs on tumor cells

[0573] The cytotoxicity of MMAE conjugated ADCs with 001, 002, 004, 005 and 006 antibodies, as well as the free cytotoxin MMAE (Selleck #S7721) were tested in H292, HCT116, HCC827, HT-29, LoVo, SW480, SW620, COLO 201, RKO (negative control) , A549 (SIBS SCSP-503) and H1975 (ATCC CRL-5908) cells.

[0574] The cytotoxicity of SN38 and DXd conjugated parental clone of 002, as well as Isotype were tested in COLO201, HT-29, SW620, DLD-1, H292, LS1034, RKO (negative control) cells.

[0575] In brief, 1000 cells in 50 μL culture medium per well were seeded into 96-well flat bottom plates and incubated at 37℃ for 24 hours. The test samples were diluted with corresponding culture medium. For MMAE ADCs and related control samples, the 2x concentrations started from 2 μM with 9 serial dilutions at a 5-fold dilution. For SN38 or DXd ADCs and related control samples, the 2× concentrations started from 16 μM with 9 serial dilutions at a 5-fold dilution. 50 μL 2× test sample solutions were added to the 96-well plates with cells and incubated for 5-6 days. After incubation, 100 μL / well of CellTier-Glo (Promega #G7571) was added. The plates were then placed on an orbital shaker for 2 minutes and left on bench for 10 minutes to stabilize signal. The luminescence intensity was detected by BioTek Synergy 2. The inhibition ratio was calculated as 100%- (LUM of samples ÷ LUM of Blank) *100%. A nonlinear regression analysis with four adjustable parameters was conducted using GraphPad Prism 9.2 software and the absolute IC50 was interpolated. The related results were shown in Fig. 9.

[0576] Table 8 The summary of cell growth inhibition data. *n. a., not available; #n. d., not detected. TI: therapeutic index: corresponding isotype ADC IC50  / ADC IC50

[0577] Results demonstrated that 002-MMAE achieved highest potency (with lowest IC50) and TI on tumor cells killng among all the DAR4-MMAE based ADCs (Table 8, Figs. 9a-k) . When applied 002 clone with SN38 conjugates, 002-SN38 conjugate showed killing effect on the tested tumor cells including SW620, HT-29 and Colo201 with TI 1.34, 4.19 and 1.73 respectively, which demonstrates the target dependency of 002-SN38 (Table 8, Figs. 9l-n) . 002-DXd also showed killing effect on ITGB4 positive tumor cells, and with TI ranging from 2.55 (LS1034) to 62.96 (Colo201, Table 8, Figs. 9n-q) .

[0578] Example 11: Xenograft tumor growth inhibition of ADCs

[0579] For in vivo efficacy in cell-line derived xenografts, 5x106 of HCT116, H292, SW620, HT29 or colo201 cells were injected subcutaneously into female nude (BALB / c-nude) mice (GemPharmatech) or SCID / Beige mice (Charles River) . Mice were randomly divided into study groups and dosed with test ADCs via intravenous injection once the tumors reached approximately 300 mm3. Tumor volume was calculated with the formula (volume = 1 / 2 x length x width x width) . No weight loss or treatment-related toxicities were observed during the study. All animal procedures were performed under a protocol approved by the Institutional Animal Care and Use Committee of the animal facility. Efficacy studies grouping information is listed in Table 9 and the results are shown in Fig. 10.

[0580] Table 9 The list of efficacy studies grouping.

[0581] All ADCs demonstrated the efficacy in controlling tumor growth. 002-MMAE inhibited H292 tumor growth at 3mpk in SCID / Beige mice (Fig. 10a) , and HCT116 at 10mpk in BALB / c nude mice (Fig. 10b) ; 002-DXd demonstrated superior efficacy in SW620 (Fig. 10c) . The tumor inhibition on SW620 sustained for more than 55 days (Fig. 10c) . 002-DXd also showed target dependent tumor inhibition on COLO201 tumor at 10mpk single dose (Fig. 10d) . 008-DXd eradiated SW620 tumor even more effectively (Fig. 10g) . Both 008-MMAE and 008-DXd controlled COLO205 tumor growth effectively (Fig. 10f) . 008-DXd showed significant efficacy on SW620 tumor (Fig. 10e) .

[0582] Example 12: Humanization of 008

[0583] A range of humanized 008 clones were generated with subtle differences in framework and complementary determining region (CDR) sequences using CDR grafting in which the CDRs of 008 clone were grafted into human frameworks. 008 clone was a murine antibody comprising a light chain variable (VL) domain comprising the amino acid sequence (SEQ ID NO. 70) and a heavy chain variable (VH) domain comprising the amino acid sequence (SEQ ID NO. 69) .

[0584] Several humanized light and heavy chain variable domains were generated. The amino acid sequences of the candidates of humanized light chains and the amino acid sequences of the candidates of humanized heavy chains were then combined in various combinations to generate a panel of total 26 humanized full antibodies. The humanized ratios of all the candidates are provided in Table 10.

[0585] Table 10. The humanized ratio of 26 humanized 008 clones

[0586] Example 13: Assessment of humanized antibodies binding on human ITGB4 by OCTET, ELISA, and FACS

[0587] The epitope binning of the humanized antibodies with their parental clone 008 on ITGα6β4 was tested with BLI (ForteBio Octet RED96e) with. The assay was performed on anti-hIgG Fc Capture (AHC) Biosensors (Sartorius #18-5060) at 30℃ with 1000 rpm mixing. All samples were diluted in 1× KB or PBS. Sensors were initially loaded with 10 μg / mL 008 antibody for 180 seconds followed with 1×KB for 120 seconds. Subsequentially, the loaded sensors were blocked with 200 μg / mL Isotype control antibody for 600 seconds followed with 1× KB for 120 seconds. The association of recombinant human ITGα6β4 (Sino #CT069-H2508H) was then performed on the blocked sensors at 200 nM for 180 seconds followed with 1× KB for 120 seconds. At last, 002, 008, H84.2 and H86.2 were loaded at 10 μg / mL for 180 seconds followed with a dissociation step using 1×KB for 180 seconds. The response at each time points were analysed with ForteBio Data Analysis software HT12.0 and GraphPad Prism 9.2 software. The results were summarized in Fig. 11.

[0588] The humanized antibody clones H83.1, H83.2, H84.1, H84.2, H85.1, H85.2, H86.1, H86.2, H87.1, H87.2, H88.1, H88.2, H89.1, H89.2, H810.1, H810.2, H811.1, H811.2, H812.1, H812.2, H813.1 and H813.2, parental clone 008, as well as isotype control were tested for binding to the tumor cell line SW620, CHO-S-cyno ITGA6B4-#8 and CHO-S-human ITGA6B4-#5. The FACS procedure was mentioned in Example 4. Octet data demonstrated that all humanized clones maintained their high binding affinity on ITGB4. H811.1, H811.2 and H812.2 have affinity of less than 1 nM KD. All tested humanized antibodies bound to epitopes the same as their parental clones (Table 11) .

[0589] The tumor cells including SW620 endogenously expressing ITGB4 (Figs. 12 a, b, c) and human (Fig. 12d)  / cyno ITGB4 (Figs. 12e, f) transduced CHOS cells over expressing the same were confirmed in FACS assay. Clone H86.1 and H86.2 maintained their binding on cyno-ITGB4 with comparable affinity to human-ITGB4.

[0590] Table 11 Summary of humanized antibodies binding ability on human ITGB4 protein and epitope binning results n.d. not detected

[0591] Example 14: Assessment the internalization of humanized antibodies binding in tumor cells

[0592] The humanized antibody clones H83.1, H83.2, H84.1, H84.2, H85.1, H85.2, H86.1, H86.2, H87.1, H87.2, H88.1, H88.2, H89.1 and H89.2, parental clones 002 and 008, as well as isotype control were tested for internalization into SW620. Indirect internalization assay was applied using the protocol mentioned in Example 6. All tested humanized antibodies had superior internalization function compared to their parental clones (Fig. 13) .

[0593] Example 15: Developability assessment on humanized antibodies

[0594] To assess the developability of humanized antibodies H86.2 and H84.2, we evaluated transient expression level, purity, homogeneity, thermal stability and analyzed PTM hotspots.

[0595] Differential scanning fluorimetry (DSF) determines Tm by recording the change in fluorescence intensity of hydrophobic fluorescent dye added to the solution. The Tm was determined using ABI7500 Fast Real-Time PCR system. The Tm was assigned using the first minimum of the first derivative of the raw data.

[0596] Aggregation on set temperature (Tagg) measured by dynamic light scattering (DLS) can also indicate thermal stability. Samples were added to the CORNING assay plates (96 or 384 wells) with sealing tapes according to the minimum volume required for the plate. The plates were centrifuged to remove bubbles using a plate centrifuge. The plate was scanned from 25 ℃ to 85 ℃using a HT-DLS DynaPro Plate Reader III (Wyatt Technology) . The results were analyzed using the DYNAMICS software from Wyatt Technology.

[0597] For Hydrophobic Interaction Chromatography (HIC) analysis, approximately 20 μg samples (1 mg / mL) were loaded onto High Performance Liquid Chromatography (HPLC) (Thermo Scientific) equipped with a TSKgel butyl-NPR 4.6 mm Ⅹ 35 mm column (Tosoh Bioscience) at 25℃. Column was equilibrated in 90%buffer A with 10%buffer B and eluted using a linear gradient from 90%buffer A to 90%buffer B over 15 min at 0.7 mL / min with UV absorbance monitoring at 280 nm. Buffer A was 20 mM sodium phosphate and 1.5 M ammonium sulfate, pH 7.0, and buffer B was 20 mM sodium phosphate and 25%isopropanol, pH 7.0.

[0598] The thermal stability studies of H86.2 and H84.2 were performed at 40 ℃ for 28 days in 25 mM His and 2 mM EDTA at pH 6.5. The candidates were then tested by reduced and non-reduced SDS-PAGE, SEC-HPLC, and iCIEF at Day 0, Day 7, Day 14 and Day 28. The antibodies’ freeze-thaw stability was also examined in 25 mM His and 2 mM EDTA at pH 6.5. The candidates were then tested by reduced and non-reduced SDS-PAGE, SEC-HPLC, and iCIEF after 3 cycles and 5 cycles of F / T. Results are set forth in Table 12.

[0599] Table 12 Summary of developability of H84.2 and H86.2

[0600] Example 16: Synthesis and chemical profiling of antibody-drug conjugates with humanized antibodies

[0601] For the antibody-drug conjugates with humanized antibodies (referred as humanized ADCs in the following texts) , the same protocol was applied as mentioned in Example 7. The results of chemical characters were provided in Table 13.

[0602] Table 13 Summary of chemical characters of the humanized ADCs

[0603] DAR was measured with RP / HIC-HPLC.

[0604] Example 17: Assessment of humanized ADCs binding on human ITGB4 by OCTET, and FACS

[0605] The ability of humanized ADCs binding on human ITGB4 protein was assessed with Octet and FACS (cell binding) according to the protocol described in Example 4.

[0606] The results demonstrated that all the humanized ADCs have similar binding affinity as the corresponding unconjugated antibodies (Fig. 14) . An additional bladder urothelial carcinoma tumor cell line KU-19-19 (Cobioer CBP60593) was assessed in the assay as well.

[0607] Example 18: Assessment of internalization of humanized ADCs binding on tumor cells

[0608] To identify the internalization ability of humanized ADCs on SW620 tumor cells, indirect method (mentioned in Example 4) was applied. The results demonstrated that the conjugated ADCs have similar internalization ability as the corresponding unconjugated antibody H86.2 (Fig. 15) .

[0609] Example 19: Cytotoxicity effect of humanized ADCs on tumor cells

[0610] The cytotoxicity effect of humanized ADCs on tumor cells including MDA-MB-468, KU-19-19, T84, HT-29, SW620 and RKO was assessed with the protocol described in Example 10. The results were summarized as below (Table 14) , and showed in Fig. 16.

[0611] Table 14 Summary of CTG results assessed with humanized ADCs TI: corresponding isotype ADC IC50  / ADC IC50. *RKO is considered to be an ITGB4 negative cell line.

[0612] It is demonstrated that DAR8-DXd bearing ADCs could eliminate tumor cells except for RKO (ITGB4 negative) and HT-29 with high potency (IC50 was range from 5.97 nM to 99.54 nM) , and high target dependency (TI was range from 2.29 to 51.17) . DAR4-DXd bearing ADCs showed  slightly less potent (IC50 was range from 55.34 nM to 575.44 nM) , but similar TI ranging from 1.33 to 5.63. DAR4-MMAE based ADC killed tumor cells except for RKO more effectively with IC50 ranging from 0.7 nM to 8.79 nM, and achieved higher TI on all tumor cells excluding MDA-MB-468 (Table 14, Fig. 16) .

[0613] Example 20: Xenograft tumor growth inhibition of anti-ITGB4 ADCs

[0614] Protocol was described in Example 11. The grouping information was listed as below (Table 15) . The MTD of each drug in nude BALB / c mice were shown in the Table 16. It is demonstrated all DXd based ADCs no matter DAR4 or DAR8 had >200 mg / kg as their maximal tolerated dosage (MTD) in nude mice. MMAE bearing ADC had achieved >50 mg / kg as their MTD.

[0615] Both H86.2-DXd and H84.2-DXd inhibited SW620 tumor growth remarkably, which were comparable to the potency of 008-DXd (parental clone ADC, Fig. 17a) . H86.2-DXd demonstrated more potent than H86.2-MMAE in SW620 model (Fig. 17b) . While H86.2-MMAE eradiated HT-29 tumor more effectively than H86.2-DXd (Fig. 17c) .

[0616] Table 15 The list of efficacy studies grouping.

[0617] Table 16 The list of achieved MTD in nude BALB / c mice with all tested ADCs

[0618] Example 21: Rat PK studies

[0619] Male Sprague Dawley (SD) rats were randomly divided into study groups. A single dose of H84.2-DXd, H86.2-DXd, H86.2-DXd-DAR4, or the corresponding naked mAb H84.2 or H86.2 were administrated intravenously (Table 17) . Then blood samples were collected serially by venipunctures, processed to serum, and then subjected to ELISA-based quantitative bioanalysis for conjugated mAbs (ADC) , total mAbs (tAb) , and naked mAbs (unconjugated) . No obvious abnormality was observed during this study. All animal procedures were performed under a protocol approved by the Institutional Animal Care and Use Committee of the testing facility.

[0620] Table 17. Overview of the rat PK study

[0621] The pharmacokinetic (PK) profiles were presented in Fig. 18. The systemic exposures of conjugated mAbs were close to those of the tAbs. This indicates these ADCs were relatively stable in the systemic circulation. The terminal half-lives of these ADC molecules were ranged from 3 to 8 days.

Claims

1.An antibody drug conjugate of the formula (I) Ab- (L-D) p (I)wherein,Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof,L is a linker;D is a drug moiety;p ranges from 1 to about 20.2.The antibody drug conjugate of Claim 1, wherein the antibody or antigen binding fragment comprises an immunoglobulin heavy chain variable region (VH) comprising a HCDR1, HCDR2, and HCDR3, and an immunoglobulin light chain variable region (VL) comprising a LCDR1, LCDR2 and LCDR3, wherein the HCDRs 1-3 and LCDRs 1-3 comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups:1) SEQ ID NOs: 11-16 respectively;2) SEQ ID NOs: 31, 32, 3 and 46-48 respectively;3) SEQ ID NOs: 52-55, 15 and 56 respectively;4) SEQ ID NOs: 61-63 and 66-68 respectively, or SEQ ID NOs: 64, 65, 63 and 66-68 respectively;5) SEQ ID NOs: 1-6 respectively;6) SEQ ID NOs: 21-26 respectively;7) SEQ ID NOs: 31, 32, 3 and 33-35 respectively; and8) SEQ ID NOs: 1-3 and 40-42 respectively.3.The antibody drug conjugate of Claim 2, wherein the VH and VL comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups:1) SEQ ID NOs: 17 and 18 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 17 and 18;2) SEQ ID NOs: 36 and 49 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 36 and 49;3) SEQ ID NOs: 57 and 58 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 57 and 58;4) SEQ ID NOs: 69 and 70 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 69 and 70;5) SEQ ID NOs: 7 and 8 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 7 and 8;6) SEQ ID NOs: 27 and 28 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 27 and 28;7) SEQ ID NOs: 36 and 37 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 36 and 37;8) SEQ ID NOs: 7 and 43 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 7 and 43;9) SEQ ID NOs: 73 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 73 and 74;10) SEQ ID NOs: 75 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 75 and 74;11) SEQ ID NOs: 76 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 76 and 74;12) SEQ ID NOs: 77 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 77 and 74;13) SEQ ID NOs: 78 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 78 and 74;14) SEQ ID NOs: 79 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 79 and 74;15) SEQ ID NOs: 80 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 80 and 74;16) SEQ ID NOs: 81 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 81 and 74;17) SEQ ID NOs: 82 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 82 and 74;18) SEQ ID NOs: 83 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 83 and 74;19) SEQ ID NOs: 84 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 84 and 74;20) SEQ ID NOs: 85 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 85 and 74;21) SEQ ID NOs: 86 and 74 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 86 and 74;22) SEQ ID NOs: 73 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 73 and 87;23) SEQ ID NOs: 75 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 75 and 87;24) SEQ ID NOs: 76 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 76 and 87;25) SEQ ID NOs: 77 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 77 and 87;26) SEQ ID NOs: 78 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 78 and 87;27) SEQ ID NOs: 79 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 79 and 87;28) SEQ ID NOs: 80 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 80 and 87;29) SEQ ID NOs: 81 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 81 and 87;30) SEQ ID NOs: 82 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 82 and 87;31) SEQ ID NOs: 83 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 83 and 87;32) SEQ ID NOs: 84 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 84 and 87;33) SEQ ID NOs: 85 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 85 and 87; and34) SEQ ID NOs: 86 and 87 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 86 and 87.4.The antibody drug conjugate of any of Claims 1-3, wherein the antibody is a murine antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, or a fully human antibody.5.The antibody drug conjugate of any of Claims 1-4, wherein the antibody is a monoclonal antibody, a bi-specific antibody, or a multi-specific antibody.6.The antibody drug conjugate of Claim 5, wherein the antibody is a bispecific antibody comprising a further antigen binding domain binding to a second antigen, preferably wherein the second antigen is selected from the group consisting of CD3, CD138, CD20, CD40, CD19, CD33, CD16, CD38, CD22, CD40, CD8, IL-6, CSPGs, RGM A, CTLA-4, BTN02, IGF1, IGF2, Erb2B, IGF-1R, EGFR, CD13, ErbB3, EGFR-2, IGFR, VEGFR-2, Met, VEGF-A, Angiopoietin-2 (Ang-2) , IL-12, TWEAK, IL-13, IL-lbeta, RGM A, NgR, NogoA, OMGp, PDL-1, PD-1, PD-1, TIM-3, VEGF, Lag-3, OX40, DLL-4, PDGFR, EpCAM, CD16a, PSMA, CEA, TROP-2, HSG, HGF, PDGF, ICOS, CD47, RGM B, Te38, TNFa, Blys, GP130, IL-12, RANK ligand, ITGB6, Nectin-4, and Folate receptor.7.The antibody drug conjugate of any of Claims 1-6, wherein the antibody is of an isotype selected from the group consisting of IgG, IgA, IgM, IgE, and IgD, preferably wherein the antibody is of a subtype selected from the group consisting of IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4.8.The antibody drug conjugate of any of Claims 1-7, wherein the antigen binding fragment is selected from the group consisting of Fab, Fab’, F (ab’) 2, Fv, scFv, VHH, and ds-scFv.9.The antibody drug conjugate of any of Claims 1-8, wherein the antibody comprises an immunoglobulin heavy chain (HC) and an immunoglobulin light chain (LC) , wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups:1) SEQ ID NOs: 19 and 20 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 19 and 20;2) SEQ ID NOs: 50 and 51 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 50 and 51;3) SEQ ID NOs: 59 and 60 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 59 and 60;4) SEQ ID NOs: 71 and 72 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 71 and 72;5) SEQ ID NOs: 9 and 10 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 9 and 10;6) SEQ ID NOs: 29 and 30 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 29 and 30;7) SEQ ID NOs: 38 and 39 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 38 and 39;8) SEQ ID NOs: 44 and 45 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 44 and 45;9) SEQ ID NOs: 88 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 88 and 89;10) SEQ ID NOs: 90 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 90 and 89;11) SEQ ID NOs: 91 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 91 and 89;12) SEQ ID NOs: 92 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 92 and 89;13) SEQ ID NOs: 93 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 93 and 89;14) SEQ ID NOs: 94 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 94 and 89;15) SEQ ID NOs: 95 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 95 and 89;16) SEQ ID NOs: 96 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 96 and 89;17) SEQ ID NOs: 97 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 97 and 89;18) SEQ ID NOs: 98 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 98 and 89;19) SEQ ID NOs: 99 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 99 and 89;20) SEQ ID NOs: 100 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 100 and 89;21) SEQ ID NOs: 101 and 89 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 101 and 89;22) SEQ ID NOs: 88 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 88 and 102;23) SEQ ID NOs: 90 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 90 and 102;24) SEQ ID NOs: 91 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 91 and 102;25) SEQ ID NOs: 92 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 92 and 102;26) SEQ ID NOs: 93 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 93 and 102;27) SEQ ID NOs: 94 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 94 and 102;28) SEQ ID NOs: 95 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 95 and 102;29) SEQ ID NOs: 96 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 96 and 102;30) SEQ ID NOs: 97 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 97 and 102;31) SEQ ID NOs: 98 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 98 and 102;32) SEQ ID NOs: 99 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 99 and 102;33) SEQ ID NOs: 100 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 100 and 102; and34) SEQ ID NOs: 101 and 102 respectively, or amino acid sequences having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity as SEQ ID NOs: 101 and 102.10.The antibody drug conjugate of any of Claims 1-9, wherein the linker comprises a cleavable linker or a non-cleavable linker.11.The antibody drug conjugate of Claim 10, wherein the cleavable linker comprises an acid-labile linker, a hydrophilic linker, a protease-sensitive linker, photolabile linker, a hydrazone linker, a dimethyl linker or a disulfide-containing linker.12.The antibody drug conjugate of any one of Claims 1-11, wherein the linker is selected from the group consisting of: sulfo-SPDB (N-succinimidyl-4- (2-pyridyldithio) -2-sulfo-butanoate) , MC (6-maleimidocaproyl) , Val-Cit (valine-citrulline) , para-amino-benzyloxycarbonyl (PABC) , dimethylethylamine (DMEA) , Val-Cit-PABC, MC-Val-Cit-PABC, CL2A, Mal-PEG8-Val-Ala-PABC, MC-VC-PABC-DMEA, GGFG (Glycine-Glycine-Phenylalanine-Glycine) , MC-GGFG-aminomethyl, AcBut (4- (4-acetylphenoxy) -butanoic acid) , dimethylhydrazide (3-methyl-3- mercaptobutane hydrazide) , AcBut-dimethylhydrazide or SMCC (N-Succinimidyl 4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-carboxylate) .13.The antibody drug conjugate of any one of Claims 1-12, wherein the -L-D is selected from the group consisting of:1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) wherein theindicates the attachment site to the antibody or antigen binding fragment thereof.14.The antibody drug conjugate of any one of Claims 1-13, wherein the drug moiety is selected from a group consisting of tubulin inhibitors and microtubule polymerization inhibitors, antibiotics, DNA synthesis inhibitors, topoisomerase I inhibitors, topoisomerase II inhibitors, RNA polymerase II inhibitors, RNA spliceosome inhibitors, and immune stimulators.15.The antibody drug conjugate of Claim 14, wherein the drug moiety is tubulin inhibitors and microtubule polymerization inhibitors selected from a group consisting of auristatins, maytansines, tubulysins, cryptophycins, and rhizoxin;alternatively, wherein the drug moiety is antibiotics selected from a group consisting of calicheamicins, doxorubicin, and anthracyclines;alternatively, wherein the drug moiety is DNA synthesis inhibitors selected from a group consisting of duocarmycins, PBDs (Benzodiazepines) , and IGNs (indolinobenzodiazepines) ;alternatively, wherein the drug moiety is topoisomerase I inhibitors selected from a group consisting of camptothecin analogs;alternatively, wherein the drug moiety is topoisomerase II inhibitors selected from a group consisting of anthracycline analogs (e.g. doxorubicin) ;alternatively, wherein the drug moiety is RNA polymerase II inhibitors selected from a group consisting of amanitins;alternatively, wherein the drug moiety is RNA spliceosome inhibitors selected from a group consisting of spliceostatins and thailanstatins;alternatively, wherein the drug moiety is immune stimulators selected from a group consisting of toll like receptors agonists and STING agonists.16.The antibody drug conjugate of any one of Claims 1-15, wherein the drug moiety is selected from: wherein theindicates the attachment site to the linker.17.The antibody drug conjugate of any one of Claims 1-16, wherein the antibody drug conjugate is selected from:1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) or9) wherein, Ab is an antibody that binds to ITGB4, or an antigen binding fragment thereof, p ranges from 1 to about 20.18.The antibody drug conjugate of any one of Claims 1-17, wherein the antibody drug conjugate is: wherein, Ab is an antibody comprising an immunoglobulin heavy chain (HC) and an immunoglobulin light chain (LC) , wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 38 and 39, SEQ ID NOs: 44 and 45, SEQ ID NOs: 50 and 51, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102.19.The antibody drug conjugate of any one of Claims 1-17, wherein the antibody drug conjugate is: wherein, Ab is an antibody comprising a HC and a LC, wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 38 and 39, SEQ ID NOs: 44 and 45, SEQ ID NOs: 50 and 51, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102;preferably, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102.20.The antibody drug conjugate of any one of Claims 1-17, wherein the antibody drug conjugate is: wherein, Ab is an antibody comprising a HC and a LC, wherein the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in any of the following groups: SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 19 and 20, SEQ ID NOs: 38 and 39, SEQ ID NOs: 44 and 45, SEQ ID NOs: 50 and 51, SEQ ID NOs: 71 and 72, SEQ ID NOs: 94 and 102, and SEQ ID NOs: 92 and 102;preferably, the HC and LC comprise amino acid sequences as set forth in SEQ ID NOs: 19 and 20 or SEQ ID NOs: 94 and 102.21.The antibody drug conjugate of any one of Claims 1-20, wherein the p is an integer selected from 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably p is 4 or 8.22.A composition comprising the antibody drug conjugate of any of Claims 1-21, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.23.A method for preventing and / or treating a disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject the antibody drug conjugate of any of Claims 1-21 or the composition of Claim 22.24.The method of Claim 23, wherein the disease is a cancer.25.The method of Claim 24, wherein the cancer is ITGB4 positive, preferably wherein the cancer is selected from the group consisting of head and neck cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate cancer, breast cancer, leukemia, myeloma, epithelial squamous cell cancer, melanoma, brain cancer, cervical cancer, liver cancer, bladder cancer, breast cancer, renal cancer, testicular cancer, and thyroid cancer.26.The method of any of Claims 23-25, wherein the method further comprises administering to the subject a second therapeutic agent, preferably wherein the second therapeutic agent is selected from an antibody, a chemotherapeutic agent and a small molecule drug.

Images