Antibody-drug conjugates targeting TRBV12 and uses thereof

Abstract

Disclosed herein are antibody-drug conjugates (ADCs) targeting TRBV12. Pharmaceutical compositions comprising the ADCs, and methods of producing the ADCs are also provided herein. Medical uses of these ADCs are also disclosed.

Description

ANTIBODY-DRUG CONJUGATES TARGETING TRBV12 AND USES THEREOF

[0001] This application claims priority to PCT International Application No. PCT / CN2024 / 096483, filed May 30, 2024, which is entirely incorporated herein by reference. 1. Reference to Sequence Listing Submitted Electronically

[0002] This application incorporates by reference a Sequence Listing as an XML file entitled “720A005WO02_SL” created on May 23, 2025 and having a size of 29, 868 bytes.2. Field

[0003] The present invention relates to molecular biology and immunology. Provided herein include novel antibody-drug conjugates targeting TRBV12, as well as uses thereof in treating cancers.3. Background

[0004] T cell malignancies represent a diverse group of hematologic cancers. These cancers typically behave aggressively. Outcomes are worse than those for equivalent B cell cancers. While immunotherapies for B cell malignancies that target pan–B cell antigens and deplete the normal B cell compartment is surprisingly well tolerated, the situation is different with T cells, where the T cell aplasia consequent to targeting a pan–T cell antigen would lead to profound and unacceptable immunosuppression. As such, despite advances in the understanding of these diseases, treatment options remain limited for T cell malignancies.

[0005] Thus, there exists an urgent unmet need to develop safe and effective therapeutic agents for treating T malignancies. Compositions and methods disclosed herein address this need and provide related advantages.4. Summary

[0006] Provided herein are antibody-drug conjugates ( “ADCs” ) comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof conjugated to a therapeutic moiety, wherein the antibody or antigen-binding fragment specifically binds human TRBV12.

[0007] In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises: (a) a light chain variable region (VL) comprising: VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 from a VL having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs; and / or (b) a heavy chain variable region (VH) comprising VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 from a VH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs.

[0008] In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises: (a) VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, and 3, respectively; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs; and / or (b) VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6, respectively; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 and VH CDR3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5 and 6, respectively.

[0009] In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is humanized. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises: (a) a VL having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; and / or (b) a VH having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a VL and a VH have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 13, respectively.

[0010] In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is a monoclonal antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is an IgG1 antibody, an IgG2 antibody, an IgG3 antibody, or an IgG4 antibody. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is selected from the group consisting of a Fab, a Fab’, a F (ab’) 2, a Fv, a scFv, a (scFv) 2, a single domain antibody (sdAb) , and a heavy chain antibody (HCAb) .

[0011] In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof further comprises a light chain constant (CL) region and a heavy chain constant (CH) region. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the CL region is kappa CL (Cκ; SEQ ID NO: 18) or lambda CL (Cλ; SEQ ID NO: 19) , or a variant thereof having up to ten amino acids substitutions. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the CH region is IgG1 CH (SEQ ID NO: 22) , IgG2 CH (SEQ ID NO: 23) , IgG3 CH (SEQ ID NO: 24) , or IgG4 CH (SEQ ID NO: 25) , or a variant of any of the above having up to ten amino acids substitutions. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is an IgG1 antibody.

[0012] In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a light chain having an amino acid sequence that is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14; and a heavy chain having an amino acid sequence that is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14; and a heavy chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.

[0013] In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the antibody or antigen-binding fragment is conjugated to the therapeutic moiety via a linker. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the linker is In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the linker is

[0014] In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the therapeutic moiety is a cytotoxic agent. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the therapeutic moiety is monomethyl auristatin or topoisomerase I inhibitor. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the therapeutic moiety is monomethyl auristatin E (MMAE) , monomethyl auristatin F (MMAF) , or Dxd. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the therapeutic moiety is MMAE. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the therapeutic moiety is MMAF. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the therapeutic moiety is Dxd.

[0015] In some embodiments of the ADCs disclosed herein, the ADC has the structure:  wherein Ab is the antibody or antigen-binding fragment, and p denotes a number ranging from 1 to 16. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein p is a number ranging from 2 to 8. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein p is 4. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, wherein the average value of p in a population of the ADC is about 4. In some embodiments of the ADCs disclosed herein, the ADC has the structure:

[0016] Provided herein are also ADCs comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof conjugated to a therapeutic moiety; wherein the antibody or antigen-binding fragment specifically binds to human TRBV12, and has a VL and a VH having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 13, respectively; and wherein the therapeutic moiety is MMAE or MMAF.

[0017] Provided herein are also methods of producing the ADCs disclosed herein, comprising conjugating the antibody or antigen-binding fragment to the therapeutic moiety.

[0018] Provided herein are also pharmaceutical compositions comprising the ADC disclosed herein, and a pharmaceutically acceptable carrier.

[0019] Provided herein are also methods of treating a cancer in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the ADC disclosed herein. In some embodiments of the methods disclosed herein, wherein the subject is a human. Provided herein are also uses of the ADCs disclosed herein in treating a cancer. Provided herein are also uses of the ADCs disclosed herein for the preparation of a medicament for treating a cancer.

[0020] In some embodiments of the methods or the uses disclosed herein, wherein the cancer is T cell leukemia or lymphoma. In some embodiments of the methods or the uses disclosed herein, wherein the cancer is peripheral T-cell lymphoma, not otherwise specified (PTCL-NOS) , angioimmunoblastic T cell lymphomas (AITL) , T cell prolymphocytic leukemia (TPLL) , adult T cell leukemia / lymphoma (ATLL) , anaplastic large cell lymphoma (ALCL) , cutaneous T cell lymphomas (CTCL) , extranodal NK / T-cell lymphoma, nasal type (ENKTL) , subcutaneous panniculitis-like T-cell lymphoma (SPTCL) , cutaneous gamma-delta T-cell lymphoma (CGD-TCL) , systemic Epstein–Barr virus-positive T-cell lymphoproliferative disorders of childhood (EBVTCLD) , enteropathy-associated T-cell lymphoma (EATL) , monomorphic epitheliotropic intestinal T cell lymphoma (MEITL) , hepatosplenic T-cell lymphoma (HSTCL) , relapsed T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) or T cell large granular lymphocyte leukemia (T-LGL) . In some embodiments of the methods or the uses disclosed herein, wherein the cancer is relapsed. In some embodiments of the methods or the uses disclosed herein, wherein the cancer is TRBV12 positive. In some embodiments of the methods or the uses disclosed herein, wherein the ADC is administered in combination with an additional therapy.

[0021] Provided herein are also kits comprising the ADC disclosed herein.5. Brief Description of Drawings

[0022] FIG. 1 shows results of binding assays of the exemplary anti-TRBV12 antibody HX029. The flow cytometry results demonstrated the binding of HX029 to TRBV12+ Jurkat cell line.

[0023] FIG. 2 shows results of an internalization assay of the exemplary anti-TRBV12 antibody HX029 and exemplary ADC HX129, demonstrating that both HX029 and HX129 were efficiently internalized into a TRBV12+ Jurkat cell.

[0024] FIG. 3 shows results of an antibody-dependent cell cytotoxicity (ADCC) assay of HX029, demonstrating that the exemplary anti-TRVB12 HX029 triggered significant ADCC (IC50: 18.5nM) from NK cells against a TRBV12+ Jurkat cell line. mAb: HX029.

[0025] FIG. 4 shows results of an in vitro killing assay of the exemplary anti-TRBV12 antibody HX029 and exemplary ADC HX129, demonstrating that both HX029 and HX129 effectively killed TRBV12+ Jurkat cells in vitro.

[0026] FIG. 5 provides diagrams illustrating strong anti-lymphoma activity of exemplary anti-TRBV12 antibody HX029 and exemplary ADC HX129 in vivo. As shown, the changes in Jurkat tumor volume over time demonstrated that both HX029 and HX129 effectively inhibited the Jurkat tumor growth in vivo, and that HX129 inhibited tumor growth in a dose-dependent manner.6. Detailed Description

[0027] T cell receptors (TCR) can be found on the surface of T cells. TCRs recognize antigens, e.g., peptides, presented on, e.g., bound to, major histocompatibility complex (MHC) molecules on the surface of cells, e.g., antigen-presenting cells. TCRs are heterodimeric molecules and can comprise an alpha chain, a beta chain, a gamma chain or a delta chain. TCRs comprising an alpha chain and a beta chain are also referred to as TCRαβ. The TCR beta chain consists of the following regions (also known as segments) : variable (V) , diversity (D) , joining (J) and constant (C) (see Mayer and Nyland (2010) Chapter 10: Major Histocompatibility Complex and T-cell Receptors-Role in Immune Responses. In: MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY on-line, University of South Carolina School of Medicine) . The TCR alpha chain consists of V, J and C regions. The rearrangement of the T-cell receptor (TCR) through somatic recombination of V (variable) , D (diversity) , J (joining) , and C (constant) regions is a defining event in the development and maturation of a T cell.

[0028] TCRs can comprise a receptor complex, known as the TCR complex, which comprises a TCR heterodimer comprising of an alpha chain and a beta chain, and dimeric signaling molecules, e.g., CD3 co-receptors, e.g., CD3δ / ε, and / or CD3γ / ε.

[0029] Diversity in the immune system enables protection against a huge array of pathogens. Since the germline genome is limited in size, diversity is achieved not only by the process of V (D) J recombination but also by junctional (junctions between V-D and D-J segments) deletion of nucleotides and addition of pseudo-random, non-templated nucleotides. The TCR beta gene undergoes gene arrangement to generate diversity. The TCR V beta repertoire varies between individuals and populations because of, e.g., 7 frequently occurring inactivating polymorphisms in functional gene segments and a large insertion / deletion-related polymorphism encompassing 2 V beta gene segments.

[0030] The alpha-beta T-cell receptor (αβ-TCR) is a transmembrane heterodimer expressed not only on normal T cells but also on cells affected in T-cell malignancies. Importantly, every T-cell and T-cell malignancy uniquely expresses a TCR β-chain derived from one of 30 TCR β-chain variable gene families (TRBV1 to TRBV30) due to VDJ recombination, a process essential for generating T-cell receptor diversity. TCR beta V families and subfamilies are known in the art, e.g., as described in Yassai et al., (2009) Immune genetics 61 (7) : 493-502; Wei and Concannon (1994) Human Immunology 41 (3) pp: 201-206.

[0031] TRBV12 (T cell receptor beta variable region 12) is part of the broader TCR β-chain repertoire, which is found to be expressed in certain T-cell malignancies. Targeting a single TRBV12 family member expressed in malignant T cells could promote killing of these cancer cells, while preserving healthy T cells that express any of the other 29 possible TRBV family members.

[0032] A few exemplary human TRBV12 sequences are provided below. Exemplary amino acid sequences for TRBV12 family members can also be found on the ImMunoGeneTics Information System website: http:  / / www. imgt. org.

[0033] Provided herein are anti-TRBV12 antibody-drug-conjugates (ADCs) demonstrating robust and specific killing of TRBV12 positive cancer cells. Methods of their manufacture and uses, including medical uses, are provided herein.

[0034] Before the present disclosure is further described, it is to be understood that the disclosure is not limited to the particular embodiments set forth herein, and it is also to be understood that the terminology used herein is for the purpose of describing particular embodiments, and is not intended to be limiting. 6.1 Definitions

[0035] Unless otherwise defined herein, scientific and technical terms used in the present disclosures shall have the meanings that are commonly understood by those of ordinary skill in the art. For example, the CONCISE DICTIONARY OF BIOMEDICINE AND MOLECULAR BIOLOGY, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; THE DICTIONARY OF CELL AND MOLECULAR BIOLOGY, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the OXFORD DICTIONARY OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, Revised, 2000, Oxford University Press, provide one of skill with a general dictionary of many of the terms used in this disclosure.

[0036] Unless otherwise required by context, singular terms shall include pluralities and plural terms shall include the singular. Generally, nomenclatures used in connection with, and techniques of, cell and tissue culture, molecular biology, immunology, microbiology, genetics and protein and nucleic acid chemistry and hybridization described herein are those well-known and commonly used in the art.

[0037] The term “a” or “an” entity refers to one or more of that entity; for example, “an antibody, ” is understood to represent one or more antibodies.

[0038] The term “and / or” where used herein is to be taken as specific disclosure of each of the two specified features or components with or without the other. Thus, the term “and / or” as used in a phrase such as “A and / or B” herein is intended to include “A and B, ” “A or B, ” “A” (alone) , and B” (alone) . Likewise, the term “and / or” as used in a phrase such as “A, B, and / or C” is intended to encompass each of the following aspects: A, B, and C; A, B, or C; A or C; A or B; B or C; A and C; A and B; B and C; A (alone) ; B (alone) ; and C (alone) .

[0039] As used herein, the term “about” is used to indicate that a value includes the inherent variation of error for the device, the method being employed to determine the value, or the variation that exists among the study subjects. The term “about” encompasses the exact number recited. In some embodiments, “about” means within plus or minus 10%of a given value or range. In certain embodiments, “about” means that the variation is ±5%, ±4%, ±3%, ±2%, ±1%, ±0.5%, ±0.2%, or ±0.1%of the value to which “about” refers. In some embodiments, “about” means that the variation is ±1%, ±0.5%, ±0.2%, or ±0.1%of the value to which “about” refers.

[0040] The terms “peptide, ” “peptide chain, ” “polypeptide, ” “protein, ” and their grammatical equivalents as used interchangeably herein refer to polymers of amino acids of any length, which can be linear or branched. It can include unnatural or modified amino acids or be interrupted by non-amino acids. A polypeptide, peptide, polypeptide chain, peptide chain, or protein can also be modified with, for example, disulfide bond formation, glycosylation, lipidation, acetylation, phosphorylation, or any other manipulation or modification.

[0041] The terms “polynucleotide, ” “nucleic acid, ” and their grammatical equivalents as used interchangeably herein mean polymers of nucleotides of any length and include DNA and RNA. The nucleotides can be deoxyribonucleotides, ribonucleotides, modified nucleotides or bases, and / or their analogs, or any substrate that can be incorporated into a polymer by DNA or RNA polymerase.

[0042] The term “variant” as used herein in relation to a protein or a polypeptide with particular sequence features (the “reference protein” or “reference polypeptide” ) refers to a different protein or polypeptide having one or more (such as, for example, about 1 to about 25, about 1 to about 20, about 1 to about 15, about 1 to about 10, or about 1 to about 5) amino acid substitutions, deletions, and / or additions as compared to the reference protein or reference polypeptide. The changes to an amino acid sequence can be amino acid substitutions. The changes to an amino acid sequence can be conservative amino acid substitutions. A functional fragment or a functional variant of a protein or polypeptide maintains the basic structural and functional properties of the reference protein or polypeptide.

[0043] As used herein and understood in the art, an “antibody” is an immunoglobulin molecule that recognizes and specifically binds a target (e.g., a protein) through at least one antigen-binding fragment which is typically within the variable region of the immunoglobulin molecule. An “antibody” can be of many different types and structures. For example, antibodies can be polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, multispecific antibodies, bispecific antibodies, monospecific antibodies, monovalent antibodies, or any other modified immunoglobulin molecule comprising an antigen-binding site. Antibodies also include, but are not limited to, mouse antibodies, camel antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies, and human antibodies. An antibody can be any of the five major classes of immunoglobulins: IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM, or subclasses (isotypes) thereof (e.g., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 and IgA2) , based on the identity of their heavy-chain constant domains referred to as alpha, delta, epsilon, gamma, and mu, respectively. Unless expressly indicated otherwise, the term “antibody” as used herein includes “antigen-binding fragment” of intact antibodies. The term “antigen-binding fragment” as used herein refers to a portion or fragment of an intact antibody that is the antigenic determining variable region of an intact antibody. Examples of antigen-binding fragments include, but are not limited to, Fab, Fab', F (ab’) 2, Fv, linear antibodies, single chain antibody molecules (e.g., scFv) , heavy chain antibodies (HCAbs) , light chain antibodies (LCAbs) , disulfide-linked scFv (dsscFv) , diabodies, tribodies, tetrabodies, minibodies, dual variable domain antibodies (DVD) , single variable domain antibodies (sdAbs; e.g., camelid antibodies, alpaca antibodies) , and single variable domain of heavy chain antibodies (VHH) .

[0044] The structure of immunoglobulins has been well characterized (see, e.g., FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989) ) . Typically, immunoglobulins comprise two pairs of polypeptide chains, one pair of light (L; low molecular weight) chains and one pair of heavy (H; high molecular weight) chains, all four inter-connected by disulfide bonds.

[0045] Each light chain of an immunoglobulin typically includes a light chain variable region ( “VL region” ) and a light chain constant region ( “CL region” ) . There are two distinct types of light chains, referred to as kappa (κ) of lambda (λ) based on the amino acid sequence of the CL region. The amino acid sequences of the CL regions are well known in the art.

[0046] Each heavy chain typically includes a heavy chain variable region (a “VH region” ) and a heavy chain constant region (a “CH region” ) . The VH region can be one of five distinct types, referred to as alpha (α) , delta (δ) , epsilon (ε) , gamma (γ) and mu (μ) , based on the amino acid sequence. When combined with a light chain, these distinct types of heavy chains give rise to five well known classes of antibodies, IgA, IgD, IgE, IgG and IgM, respectively. There are four subclasses of IgG, namely, IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4. The amino acid sequences of the CH regions of different classes of antibodies are well known in the art.

[0047] The CH region of immunoglobulins comprise more than one domain. For example, the CH region of an IgG antibody is comprised of three domains, heavy chain constant domain 1 (CH1) , heavy chain constant domain 2 (CH2) , and heavy chain constant domain 3 (CH3) . The highly flexible region between the CH1 and CH2 domains is referred to as the “hinge region. ” Disulfide bonds in the hinge region are part of the interactions between two heavy chains in an immunoglobulin. The “Fc region” refers to the C-terminal region of an immunoglobulin heavy chain that contains at least a portion of the constant region. In IgG, IgA and IgD isotypes, the Fc region is comprised of the CH2 domain and the CH3 domain; IgM and IgE Fc regions contain three heavy chain constant domains (CH domains 2–4) . The amino acid sequences of the Fc region of human IgG, IgA, IgD, IgM and IgE, and subtypes IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4 are known to those of ordinary skill in the art. The native Fc regions can be modified.

[0048] Unless otherwise stated or contradicted by context, reference to amino acid positions in the constant regions is according to the EU-numbering (Edelman et al., PNAS. 1969; 63: 78-85, Kabat et al., SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, Fifth Edition. 1991 NIH Publication No. 91-3242) . A list of exemplary amino acid sequences for constant domains / regions of the human IgG antibodies is provided below. Some exemplary variants are also included, with more variants disclosed in sections below.

[0049] Table 1 Amino acid sequences of light chain constant regions of the human IgG antibodies

[0050] Table 2 Amino acid sequences of heavy chain constant regions of the human IgG antibodies

[0051] The term “variable region” refers to a portion of the light or heavy chains of an immunoglobulin that is generally located at the amino-terminal of the light or heavy chain and used in the binding and specificity of each particular antibody for its particular antigen. The variable region of a light chain is referred to as a “light chain variable region” or “VL region, ” which includes at least one, typically one, “light chain variable domain” or “VL. ” The variable region of a heavy chain is referred to as a “heavy chain variable region” or “VH region, ” which includes at least one, typically one, “heavy chain variable domain” or “VH. ” The variable domains differ extensively in sequence between different antibodies. A “pair of VL and VH” can associate with each other and form a binding site that specifically binds the target antigen or epitope.

[0052] The VL and VH regions can be further subdivided into regions of hypervariability (or hypervariable regions which may be hypervariable in sequence and / or form of structurally defined loops) , also termed complementarity determining regions (CDRs) , interspersed with regions that are more conserved, termed framework regions (FRs) . The variability in sequence is concentrated in the CDRs while the less variable portions in the variable domain are referred to as framework regions (FR) . The CDRs of the light and heavy chains are primarily responsible for the interaction of the antibody with antigen. Each VH and VL is typically composed of three CDRs and four FRs, arranged from amino-terminus to carboxy-terminus in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4 (see also Chothia and Lesk, J Mol Biol 1987; 196: 901-17) .

[0053] A CDR refers to one of three hypervariable regions (H1, H2 or H3) within the non-framework region of the immunoglobulin (Ig or antibody) VH β-sheet framework, or one of three hypervariable regions (L1, L2 or L3) within the non-framework region of the antibody VL β-sheet framework. CDR regions are well known to those skilled in the art and have been defined by a variety of methods / systems. These systems and / or definitions have been developed and refined over years and include Kabat, Chothia, IMGT, AbM, and Contact. For example, Kabat defines the regions of most hypervariability within the antibody variable (V) domains (Kabat et al, J. Biol. Chem. 252: 6609-6616 (1977) ; Kabat, Adv. Prot. Chem. 32: 1-75 (1978) ) . Software programs (e.g., abYsis) are available and known to those of skill in the art for analysis of antibody sequence and determination of CDRs.

[0054] The term “humanized antibody” as used herein refers to forms of non-human (e.g., murine) antibodies that are specific immunoglobulin chains, chimeric immunoglobulins, or fragments thereof that contain minimal non-human sequences. Typically, humanized antibodies are human immunoglobulins. In some instances, the variable region residues of a human immunoglobulin are replaced with the corresponding residues in an antibody from a non-human species. In some instances, residues of the CDRs are replaced by residues from the CDRs of a non-human species (e.g., mouse, rat, hamster, camel, rabbit, goat, shark, llama) that have the desired specificity, affinity, and / or binding capability. The humanized antibody can be further modified by the substitution of additional residues either in the variable region and / or within the replaced non-human residues to refine and optimize antibody specificity, affinity, and / or binding capability. The term “human antibody” as used herein refers to an antibody produced by a human or an antibody having an amino acid sequence corresponding to an antibody produced by a human made using any of the techniques known in the art.

[0055] The term “specifically bind, ” as used herein, means that a polypeptide or molecule interacts more frequently, more rapidly, with greater duration, with greater affinity, or with some combination of the above to the epitope, protein, or target molecule than with alternative substances, including related and unrelated proteins. A binding moiety (e.g., antibody) that specifically binds a target molecule (e.g., antigen) can be identified, for example, by immunoassays, ELISAs, Bio-Layer Interferometry ( “BLI” ) , SPR (e.g., Biacore) , or other techniques known to those of skill in the art. Typically, a specific reaction will be at least twice background signal or noise and can be more than 10 times background. See, e.g., Paul, ed., 1989, FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY SECOND EDITION, Raven Press, New York at pages 332-336 for a discussion regarding antibody specificity. A binding moiety that specifically binds a target molecule can bind the target molecule at a higher affinity than its affinity for a different molecule. In some embodiments, a binding moiety that specifically binds a target molecule can bind the target molecule with an affinity that is at least 20 times greater, at least 30 times greater, at least 40 times greater, at least 50 times greater, at least 60 times greater, at least 70 times greater, at least 80 times greater, at least 90 times greater, or at least 100 times greater, than its affinity for a different molecule. In some embodiments, a binding moiety that specifically binds a particular target molecule binds a different molecule at such a low affinity that binding cannot be detected using an assay described herein or otherwise known in the art. In some embodiments, “specifically binds” means, for instance, that a binding moiety binds a molecule target with a KD of about 0.1 mM or less. In some embodiments, “specifically binds” means that a polypeptide or molecule binds a target with a KD of at about 10 μM or less or about 1 μM or less. In some embodiments, “specifically binds” means that a polypeptide or molecule binds a target with a KD of at about 0.1 μM or less, about 0.01 μM or less, or about 1 nM or less. Because of the sequence identity between homologous proteins in different species, specific binding can include a polypeptide or molecule that recognizes a protein or target in more than one species. Likewise, because of homology within certain regions of polypeptide sequences of different proteins, specific binding can include a polypeptide or molecule that recognizes more than one protein or target. It is understood that, in some embodiments, a binding moiety (e.g., antibody) that specifically binds a first target may or may not specifically bind a second target. As such, “specific binding” does not necessarily require (although it can include) exclusive binding, i.e., binding to a single target. Thus, a binding moiety (e.g., antibody) can, in some embodiments, specifically bind more than one target. For example, an antibody can, in certain instances, comprise two identical antigen-binding sites, each of which specifically binds the same epitope on two or more proteins.

[0056] The term “binding affinity” as used herein generally refers to the strength of the sum total of noncovalent interactions between a binding moiety and a target molecule (e.g., antigen) . The binding of a binding moiety and a target molecule is a reversible process, and the affinity of the binding is typically reported as an equilibrium dissociation constant (KD) . KD is the ratio of a dissociation rate (koff or kd) to the association rate (kon or ka) . The lower the KD of a binding pair, the higher the affinity. A variety of methods of measuring binding affinity are known in the art, any of which can be used for purposes of the present disclosure. Specific illustrative embodiments include the following. In some embodiments, the “KD” or “KD value” can be measured by assays known in the art, for example by a binding assay. The KD may be measured in a radiolabeled antigen binding assay (RIA) (Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293: 865-881) . The KD or KD value can also be measured by using biolayer interferometry (BLI) using, for example, the Gator system (Probe Life) , or the Octet-96 system (Sartorius AG) . The KD or KD value can also be measured by using surface plasmon resonance assays (SPR) by Biacore, using, for example, a BIAcoreTM-2000 or a BIAcoreTM-3000 BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) .

[0057] The term “antibody-drug conjugate, ” or “ADC, ” refers to a type of molecule designed for targeted cancer therapy. An ADC is constituted of a monoclonal antibody, which provides specificity targeting pathological cells (such as cancer cells) , a therapeutic moiety, which provides therapeutic effects (e.g., cytotoxicity) to the targeted cancer cells, and a linker facilitating the conjugation of the two main components. Upon binding, the ADC is internalized into the cancer cell, releasing the therapeutic moiety.

[0058] The terms “TRBV12 expressing” , “TRBV12+” and “TRBV12 positive” as used herein in connection with a cell are interchangeable, referring to a cell with detectable TRBV12 expression. In some embodiments, the cell has detectable TRBV12 expression on its surface. The term “TRBV12-expressing” , “TRBV12+” and “TRBV12 positive” as used herein in connection with a cancer or tumor refers to a cancer or tumor having cells with detectable TRBV12 expression. A person of ordinary skill in the art can readily determine whether a cancer or tumor has TRBV12 expression using any methods known and available in the art, including, for example, immunohistochemistry (IHC) , immunocytochemistry (ICC) , an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) , flow cytometry (FACS) , etc.

[0059] The term “vector, ” and its grammatical equivalents as used herein refer to a vehicle that is used to carry genetic material (e.g., a polynucleotide sequence) , which can be introduced into a host cell, where it can be replicated and / or expressed. Vectors applicable for use include, for example, expression vectors, plasmids, phage vectors, viral vectors, episomes and artificial chromosomes, which can include selection sequences or markers operable for stable integration into a host cell’s chromosome. Additionally, the vectors can include one or more selectable marker genes and appropriate expression control sequences. Selectable marker genes that can be included, for example, provide resistance to antibiotics or toxins, complement auxotrophic deficiencies, or supply critical nutrients not in the culture media. Expression control sequences can include constitutive and inducible promoters, transcription enhancers, transcription terminators, and the like which are well known in the art. When two or more polynucleotides are to be co-expressed, both polynucleotides can be inserted, for example, into a single expression vector or in separate expression vectors. For single vector expression, the encoding polynucleotides can be operationally linked to one common expression control sequence or linked to different expression control sequences, such as one inducible promoter and one constitutive promoter. The introduction of polynucleotides into a host cell can be confirmed using methods well known in the art. It is understood by those skilled in the art that the polynucleotides are expressed in a sufficient amount to produce a desired product, and it is further understood that expression levels can be optimized to obtain sufficient expression using methods well known in the art.

[0060] As used herein, the term “encode” and its grammatical equivalents refer to the inherent property of specific sequences of nucleotides in a polynucleotide or a nucleic acid, such as a gene, a cDNA, or an mRNA, to serve as templates for synthesis of other polymers and macromolecules in biological processes having either a defined sequence of nucleotides (i.e., rRNA, tRNA and mRNA) or a defined sequence of amino acids and the biological properties resulting therefrom. Thus, a gene encodes a protein if transcription and translation of mRNA corresponding to that gene produces the protein. Unless otherwise specified, a “nucleotide sequence encoding an amino acid sequence” includes all nucleotide sequences that are degenerate versions of each other and that encode the same amino acid sequence. Nucleotide sequences that encode proteins and RNA can include introns.

[0061] The term “polynucleotide that encodes a polypeptide” encompasses a polynucleotide which includes only coding sequences for the polypeptide as well as a polynucleotide which includes additional coding and / or non-coding sequences. The polynucleotides of the disclosure can be in the form of RNA or in the form of DNA. DNA can be cDNA, genomic DNA, or synthetic DNA, and can be double-stranded or single-stranded. Single stranded DNA can be the coding strand or non-coding (anti-sense) strand. The polynucleotides of the disclosure can be mRNA.

[0062] The terms “identical, ” percent “identity, ” and their grammatical equivalents as used herein in the context of two or more polynucleotides or polypeptides, refer to two or more sequences or subsequences that are the same or have a specified percentage of nucleotides or amino acid residues that are the same, when compared and aligned (introducing gaps, if necessary) for maximum correspondence, not considering any conservative amino acid substitutions as part of the sequence identity. The percent identity can be measured using sequence comparison software or algorithms or by visual inspection. Various algorithms and software that can be used to obtain alignments of amino acid or nucleotide sequences are well-known in the art. These include, but are not limited to, BLAST, ALIGN, Megalign, BestFit, GCG Wisconsin Package, and variants thereof. In some embodiments, two polynucleotides or polypeptides provided herein are substantially identical, meaning they have at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, and in some embodiments at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%nucleotide or amino acid residue identity, when compared and aligned for maximum correspondence, as measured using a sequence comparison algorithm or by visual inspection. In some embodiments, identity exists over a region of the amino acid sequences that is at least about 10 residues, at least about 20 residues, at least about 40-60 residues, at least about 60-80 residues in length or any integral value there between. In some embodiments, identity exists over a longer region than 60-80 residues, such as at least about 80-100 residues, and in some embodiments the sequences are substantially identical over the full length of the sequences being compared, such as the coding region of a target protein or an antibody. In some embodiments, identity exists over a region of the nucleotide sequences that is at least about 10 bases, at least about 20 bases, at least about 40-60 bases, at least about 60-80 bases in length or any integral value there between. In some embodiments, identity exists over a longer region than 60-80 bases, such as at least about 80-1000 bases or more, and in some embodiments the sequences are substantially identical over the full length of the sequences being compared, such as a nucleotide sequence encoding a protein of interest.

[0063] A polypeptide, peptide, protein, antibody, polynucleotide, vector, cell, or composition which is “isolated” is a polypeptide, peptide, protein, antibody, polynucleotide, vector, cell, or composition which is in a form not found in nature. Isolated polypeptides, peptides, proteins, antibodies, polynucleotides, vectors, cells, or compositions include those which have been purified to a degree that they are no longer in a form in which they are found in nature. In some embodiments, a polypeptide, peptide, protein, antibody, polynucleotide, vector, cell, or composition which is isolated is substantially pure.

[0064] The term “pharmaceutically acceptable carrier” or “pharmaceutically acceptable excipient” refers to a material that is suitable for drug administration to an individual along with an active agent without causing undesirable biological effects or interacting in a deleterious manner with any of the other components of the pharmaceutical composition. In some embodiments, the pharmaceutical compositions disclosed herein can comprise one or more of a buffer system, a preservative, a tonicity agent, a chelating agent, a stabilizer and / or a surfactant, as well as various combinations thereof. The use of preservatives, isotonic agents, chelating agents, stabilizers and surfactants in pharmaceutical compositions is well-known to the skilled person. Reference may be made to REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, 19th edition, 1995.

[0065] The term “treat” and its grammatical equivalents as used herein in connection with a disease or a condition, or a subject having a disease or a condition refer to an action, intervention and / or measure that suppresses, eliminates, reduces, and / or ameliorates a symptom, the severity of the symptom, and / or the frequency of the symptom associated with the disease or disorder being treated.

[0066] The term “administer” and its grammatical equivalents as used herein refer to the act of delivering, or causing to be delivered, a therapeutic or a pharmaceutical composition to the body of a subject by a method described herein or otherwise known in the art. The therapeutic can be a compound, a polypeptide, an antibody, an antibody-drug conjugate, or a cell. Administering a therapeutic or a pharmaceutical composition includes prescribing a therapeutic or a pharmaceutical composition to be delivered into the body of a subject. Exemplary forms of administration include oral dosage forms, such as tablets, capsules, syrups, suspensions; injectable dosage forms, such as intravenous (IV) , intramuscular (IM) , or intraperitoneal (IP) ; transdermal dosage forms, including creams, jellies, powders, or patches; buccal dosage forms; inhalation powders, sprays, suspensions, and rectal suppositories.

[0067] The terms “effective amount, ” “therapeutically effective amount, ” and their grammatical equivalents as used herein refer to the administration of an agent to a subject, either alone or as a part of a pharmaceutical composition and either in a single dose or as part of a series of doses, in an amount that is capable of having any detectable, positive effect on any symptom, aspect, or characteristics of a disease, disorder or condition when administered to the subject. The therapeutically effective amount can be ascertained by measuring relevant physiological effects. The exact amount required varies from subject to subject, depending on the age, weight, and general condition of the subject, the severity of the condition being treated, the judgment of the clinician, and the like. An appropriate “effective amount” in any individual case can be determined by one of ordinary skill in the art using routine experimentation.

[0068] The term “subject” as used herein refers to any animal (e.g., a mammal) , including, but not limited to, humans, non-human primates, canines, felines, rodents, and the like, which is to be the recipient of a particular treatment. Mammals include, but are not limited to, farm animals, sport animals, pets, primates, horses, dogs, cats, mice and rats. A human subject who needs the treatment may be a human subject having, at risk for, or suspected of having a disease. A subject having a disease can be identified by routine medical examination, e.g., a physical examination, a laboratory test, an organ functional test, a CT scan, or an ultrasound. A subject suspected of having any of such a disease can show one or more symptoms of the disease. A subject at risk for the disease can be a subject having one or more of the risk factors for that disease. A subject can be a human. A subject can have a particular disease or condition.

[0069] Ranges: throughout this disclosure, various aspects of the invention can be presented in a range format. It should be understood that the description in range format is merely for convenience and brevity and should not be construed as an inflexible limitation on the scope of the invention. Accordingly, the description of a range should be considered to have specifically disclosed all the possible subranges as well as individual numerical values within that range. For example, description of a range such as from 1 to 6 should be considered to have specifically disclosed subranges such as from 1 to 3, from 1 to 4, from 1 to 5, from 2 to 4, from 2 to 6, from 3 to 6 etc., as well as individual numbers within that range, for example, 1, 2, 2.7, 3, 4, 5, 5.3, and 6. This applies regardless of the breadth of the range.

[0070] Exemplary genes and polypeptides are described herein with reference to GenBank numbers, GI numbers and / or SEQ ID NOS. It is understood that one skilled in the art can readily identify homologous sequences by reference to sequence sources, including but not limited to Uniprot (https:  / / www. uniprot. org / ) , GenBank (ncbi. nlm. nih. gov / genbank / ) and EMBL (embl. org / ) . 6.2 Antibody-drug conjugates (ADCs)

[0071] An anti-TRBV12 antibody can be conjugated to a therapeutic moiety to form an ADC. In some embodiments, provided herein are ADCs comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof conjugated to a therapeutic moiety, wherein the antibody or antigen-binding fragment specifically binds human TRBV12. The ADCs provided herein can comprise any anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragment thereof disclosed herein or otherwise known in the art, conjugated to any therapeutic moiety disclosed herein or otherwise known in the art.

[0072] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment having the sequence features described below. The specific CDR sequences defined herein are generally based on either Kabat or IMGT definition. However, it is understood that a general reference to a heavy chain CDR or CDRs and / or a light chain CDR or CDRs of a specific antibody encompasses all CDR definitions as known to those of skill in the art. In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment having the VL CDRs and / or VH CDRs of antibody HX029 disclosed herein, wherein the CDRs are defined by Kabat, Chothia, IMGT, AbM, or Contact. In some embodiments, the CDRs are defined by Kabat (as exemplified in detail below) . In some embodiments, the CDRs are defined by Chothia. In some embodiments, the CDRs are defined by IMGT. In some embodiments, the CDRs are defined by AbM. In some embodiments, the CDRs are defined by Contact.

[0073] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment designated as HX029. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment of the ADCs provided herein has a VL from HX029 (SEQ ID NO: 12) . In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment of the ADCs provided herein has a VH from HX029 (SEQ ID NO: 13) . The anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment of the ADCs provided herein can have both the VL and the VH from HX029. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment of the ADCs provided herein has a VL that comprises VL CDRs 1, 2, and 3 from the VL from HX029 (SEQ ID NO: 12) . In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment of the ADCs provided herein has a VH that comprises VH CDRs 1, 2, and 3 from the VH from HX029 (SEQ ID NO: 13) . The anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment of the ADCs provided herein can have a VL comprising VL CDRs 1, 2, and 3 and a VH comprising VH CDRs 1, 2, and 3 from the VL and VH of HX029, respectively. The CDRs can be defined by any system known in the art. In some embodiments, the CDRs are defined by Kabat, Chothia, IMGT, AbM, or Contact. In some embodiments, the CDRs are defined by Kabat as detailed herein. In some embodiments, the CDRs are defined by IMGT. In some embodiments, the CDRs are defined by Chothia. In some embodiments, the CDRs are defined by AbM. In some embodiments, the CDRs are defined by Contact.

[0074] In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment of the ADCs provided herein is a variant of HX029. The HX029 variant can have a VL that is a variant of the VL of HX029 having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in SEQ ID NO: 12. The HX029 variant can have a VL that is a variant of the VL of HX029 having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in SEQ ID NO: 12. The HX029 variant can have a VH that is a variant of the VH of HX029 having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in SEQ ID NO: 13. The HX029 variant can have a VH that is a variant of the VH of HX029 having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in SEQ ID NO: 13. The amino acid substitutions, additions, and / or deletions can be in the VH CDRs or VL CDRs. In some embodiments, the amino acid substitutions, additions, and / or deletions are not in the CDRs. In some embodiments, the variant of HX029 has up to about 5 conservative amino acid substitutions. In some embodiments, the variant of HX029 has up to 3 conservative amino acid substitutions. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment of the ADCs provided herein is a humanized antibody or antigen-binding fragment derived from HX029. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment of the ADCs provided herein is a human antibody or antigen-binding fragment derived from HX029.

[0075] In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments of the ADCs provided herein comprise one, two, three, four, five, and / or six CDRs of any one of the antibodies described herein. In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments of the ADCs provided herein comprise a light chain variable region (VL) comprising one, two, and / or three, light chain CDRs (VL CDRs) from Table 3. In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments of the ADCs provided herein comprise a heavy chain variable region (VH) comprising one, two, and / or three heavy chain CDRs (VH CDRs) from Table 4. In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments of the ADCs provided herein comprise one, two, and / or three VL CDRs from Table 3 and one, two, and / or three VH CDRs from Table 4.

[0076] Table 3 Amino acid sequences of light chain variable region CDRs (VL CDRs) of HX029

[0077] Table 4 Amino acid sequences of heavy chain variable region CDRs (VH CDRs) of HX029

[0078] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VL comprising (1) a VL CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1; (2) a VL CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2; and / or (3) a VL CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs; and / or a VH comprising (1) a VH CDR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4; (2) a VH CDR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5; and / or (3) a VH CDR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs.

[0079] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VL comprising (1) a VL CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1; (2) a VL CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2; or (3) a VL CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDR. In some embodiments, the variant has up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDR. In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VL comprising (1) a VL CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1; (2) a VL CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2; and (3) a VL CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDR. In some embodiments, the variant has up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDR.

[0080] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VL, wherein the VL comprises VL CDR1, CDR2 and CDR3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, and 3, respectively, as defined by Kabat; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs. In some embodiments, the variant has up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs.

[0081] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VH comprising (1) a VH CDR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4; (2) a VH CDR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5; or (3) a VH CDR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDR. In some embodiments, the variant has up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDR. In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VH comprising (1) a VH CDR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4; (2) a VH CDR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5; and (3) a VH CDR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs. In some embodiments, the variant has up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs.

[0082] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VH, wherein the VH comprises VH CDR1, CDR2 and CDR3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6, respectively, as defined by Kabat; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs. In some embodiments, the variant has up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs.

[0083] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises, as defined by Kabat, (a) a VL comprising VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, and 3, respectively; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs; and / or (b) a VH comprising VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6, respectively; or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs.

[0084] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 and VH CDR3, having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5 and 6, respectively, as defined by Kabat, or a variant thereof having up to about 3, about 5, about 8, about 10, about 12, or about 15 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the CDRs.

[0085] Table 5 Amino acid sequences of light chain variable region (VL) and heavy chain variable region (VH) of humanized antibody HX029.

[0086] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VL having at least 85%, at least 86%, at least 87%, at least 88%, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12. In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VH having at least 85%, at least 86%, at least 87%, at least 88%, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.

[0087] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises: (a) a VL having at least 85%, at least 86%, at least 87%, at least 88%, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; and (b) a VH having at least 85%, at least 86%, at least 87%, at least 88%, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VL and a VH, wherein the VL and VH have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 13, respectively.

[0088] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VL, wherein the VL has at least 80%, at least 85%, at least 86%, at least 87%, at least 88%, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 12. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VL having at least 85%sequence identity to SEQ ID NO: 12. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VL having at least 90%sequence identity to SEQ ID NO: 12. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VL having at least 95%sequence identity to SEQ ID NO: 12. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VL having at least 98%sequence identity to SEQ ID NO: 12. In some embodiments, provided herein are antibodies or antigen-binding fragments thereof that specifically bind TRBV12 comprising a VL having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.

[0089] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a VH, wherein the VH has at least 80%, at least 85%, at least 86%, at least 87%, at least 88%, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 13. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH having at least 85%sequence identity to SEQ ID NO: 13. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH having at least 90%sequence identity to SEQ ID NO: 13. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH having at least 95%sequence identity to SEQ ID NO: 13. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH having at least 98%sequence identity to SEQ ID NO: 13. In some embodiments, provided herein are antibodies or antigen-binding fragments thereof that specifically bind TRBV12 comprising a VH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.

[0090] In some embodiments, ADCs provided herein comprise anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments that comprise VL CDRs from a VL described herein (SEQ ID NO: 12) , and / or VH CDRs from a VH described herein (SEQ ID NO: 13) . Methods to identify CDRs are well known in the art. For example, software programs (e.g., abYsis) on publicly available websites are known to those of skill in the art for analysis of antibody sequence and determination of CDRs.

[0091] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises (a) a VL comprising VL CDRs 1, 2, and 3 from a VL having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; or (b) a VH comprising VH CDRs 1, 2, and 3 from a VH having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. The CDRs can be defined by Kabat, Chothia, IMGT, AbM, or Contact. In some embodiments, the CDRs are defined by Kabat. In some embodiments, the CDRs are defined by Chothia. In some embodiments, the CDRs are defined by IMGT. In some embodiments, the CDRs are defined by AbM. In some embodiments, the CDRs are defined by Contact.

[0092] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises (a) a VL comprising VL CDRs 1, 2, and 3 from a VL having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; and (b) a VH comprising VH CDRs 1, 2, and 3 from a VH having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.

[0093] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a light chain and a heavy chain. The light chain can comprise a light chain constant domain (CL) and a light chain variable domain (VL) . The heavy chain can comprise a heavy chain variable domain (VH) and a heavy chain constant domain (CH) . The VL / VH can be any VL / VH disclosed herein. In some embodiments, the light chain constant region (CL) is kappa CL (Cκ; SEQ ID NO: 18) . In some embodiments, the light chain constant region (CL) is lambda CL (Cλ; SEQ ID NO: 19) . In some embodiments, the heavy chain can comprise a heavy chain constant domain (CH) from human IgA. In some embodiments, the heavy chain can comprise a heavy chain constant domain (CH) from human IgD. In some embodiments, the heavy chain can comprise a heavy chain constant domain (CH) from human IgE. In some embodiments, the heavy chain can comprise a heavy chain constant domain (CH) from human IgG. In some embodiments, the heavy chain can comprise a heavy chain constant domain (CH) from human IgM. In some embodiments, the heavy chain can comprise a heavy chain constant domain (CH) from human IgG1 (e.g., SEQ ID NO: 22) . In some embodiments, the heavy chain can comprise a heavy chain constant domain (CH) from human IgG2 (e.g., SEQ ID NO: 23) . In some embodiments, the heavy chain can comprise a heavy chain constant domain (CH) from human IgG3 (e.g., SEQ ID NO: 24) . In some embodiments, the heavy chain can comprise a heavy chain constant domain (CH) from human IgG4 (e.g., SEQ ID NO: 25) . The CH can further include a C-terminal lysine (K) . Expressly contemplated here are any and all combinations of the VL / VH pairs disclosed herein that specifically bind TRBV12 (e.g., human TRBV12) and the CL / CH disclosed herein or otherwise known in the art.

[0094] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a light chain constant region (CL) having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 18. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a CL having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18. In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises a light chain constant region (CL) having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 19. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a CL having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a heavy chain constant region (CH) having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 22. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a CH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a CH having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 23. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a CH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a CH having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 24. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a CH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a CH having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%sequence identity to SEQ ID NO: 25. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein have a CH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25.

[0095] In some embodiments, the ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment that comprises: (1) a light chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a VL and a light chain constant (CL) region; and / or (2) a heavy chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a VH and a heavy chain constant (CH) region. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein comprise a light chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a VL and a light chain constant (CL) region, wherein light chain has an amino acid sequence that is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%identical to SEQ ID NO: 14. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein comprise a heavy chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a VH and a heavy chain constant (CH) region, wherein heavy chain has an amino acid sequence that is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%identical to SEQ ID NO: 15. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein comprise a light chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a VL and a light chain constant (CL) region, wherein light chain has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein comprise a heavy chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a VH and a heavy chain constant (CH) region, wherein heavy chain has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15. In some embodiments, ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody having a light chain having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14; and a heavy chain having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15. In some embodiments, ADCs provided herein comprise an anti-TRBV12 antibody having: (1) a light chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a VL and a light chain constant (CL) region; and (2) a heavy chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a VH and a heavy chain constant (CH) region; wherein light chain has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 and heavy chain has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.

[0096] The anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments can comprise a leader region. In some embodiments, the leader region is a signal peptide whose functions are well known in the art, such as acting as a signal for guiding the newly synthesized protein to its correct location within the cell, helping in the translocation of the nascent protein across the membrane of organelles (e.g., endoplasmic reticulum) , etc. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies provided herein comprise: (1) a light chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a leader region, a VL and a CL region; and / or (2) a heavy chain comprising, from N-terminus to C-terminus, a leader region, a VH and a CH region. In some embodiments, the leader region comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 27.

[0097] Table 6 Amino acid sequences of the light chain and heavy chain of humanized antibody HX029.

[0098] Epitope mapping is a method of identifying the binding site, region, or epitope on a target protein where an antibody binds. A variety of methods are known in the art for mapping epitopes on target proteins. These methods include mutagenesis, including but not limited to, shotgun mutagenesis, site-directed mutagenesis, and alanine scanning; domain or fragment scanning; peptide scanning (e.g., Pepscan technology) ; display methods (e.g., phage display, microbial display, and ribosome / mRNA display) ; methods involving proteolysis and mass spectroscopy; and structural determination (e.g., X-ray crystallography and NMR) . In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein are characterized by assays including, but not limited to, N-terminal sequencing, amino acid analysis, HPLC, mass spectrometry, ion exchange chromatography, and papain digestion.

[0099] The anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments of the present disclosure can be analyzed for their physical, chemical and / or biological properties by various methods known in the art. In some embodiments, an anti-TRBV12 antibody is tested for its ability to bind TRBV12 (e.g., human TRBV12) . Binding assays include, but are not limited to, BLI, SPR (e.g., Biacore) , ELISA, and FACS. In addition, antibodies can be evaluated for solubility, stability, thermostability, viscosity, expression levels, expression quality, and / or purification efficiency.

[0100] In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein have antitumor activities. In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein can treat cancer (e.g., T cell cancer) . In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein can treat T cell leukemia or lymphoma. In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein can treat peripheral T-cell lymphoma, not otherwise specified (PTCL-NOS) , angioimmunoblastic T cell lymphomas (AITL) , T cell prolymphocytic leukemia (TPLL) , adult T cell leukemia / lymphoma (ATLL) , anaplastic large cell lymphoma (ALCL) , cutaneous T cell lymphomas (CTCL) , extranodal NK / T-cell lymphoma, nasal type (ENKTL) , subcutaneous panniculitis-like T-cell lymphoma (SPTCL) , cutaneous gamma-delta T-cell lymphoma (CGD-TCL) , systemic Epstein–Barr virus-positive T-cell lymphoproliferative disorders of childhood (EBVTCLD) , enteropathy-associated T-cell lymphoma (EATL) , monomorphic epitheliotropic intestinal T cell lymphoma (MEITL) , hepatosplenic T-cell lymphoma (HSTCL) , relapsed T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) or T cell large granular lymphocyte leukemia (T-LGL) . In some embodiments, the cancer that can be treated with the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein is TRBV12 positive. In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein can specifically target and kill TRBV12-expressing cancer cells (e.g., TRBV12-expressing cancerous T cells) .

[0101] The present disclosure further contemplates additional variants and equivalents that are substantially homologous to the recombinant, monoclonal, chimeric, and humanized antibodies, or antibody fragments thereof, described herein. In some embodiments, it is desirable to improve the binding affinity of the antibody. In some embodiments, it is desirable to modulate biological properties of the antibody, including but not limited to, specificity, thermostability, expression level, effector function (s) , glycosylation, immunogenicity, and / or solubility. Those skilled in the art will appreciate that amino acid changes may alter post-translational processes of an antibody, such as changing the number or position of glycosylation sites or altering membrane anchoring characteristics.

[0102] Variations can be a substitution, deletion, or insertion of one or more nucleotides encoding the antibody or polypeptide that results in a change in the amino acid sequence as compared with the native antibody or polypeptide sequence. In some embodiments, amino acid substitutions are the result of replacing one amino acid with another amino acid having similar structural and / or chemical properties, such as the replacement of a leucine with a serine, e.g., conservative amino acid replacements. Insertions or deletions can be in the range of about 1 to 5 amino acids. In some embodiments, the substitution, deletion, or insertion includes less than 25 amino acid substitutions, less than 20 amino acid substitutions, less than 15 amino acid substitutions, less than 10 amino acid substitutions, less than 5 amino acid substitutions, less than 4 amino acid substitutions, less than 3 amino acid substitutions, or less than 2 amino acid substitutions relative to the parent molecule. In some embodiments, variations in the amino acid sequence that are biologically useful and / or relevant can be determined by systematically making insertions, deletions, or substitutions in the sequence and testing the resulting variant proteins for activity as compared to the parent protein.

[0103] In some embodiments, provided herein are variants of anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein. In some embodiments, provided herein are variants of anti-TRBV12 antibody HX029. In some embodiments, a variant comprises one to 30 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the parent antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, a variant comprises one to 25 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the parent antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, a variant comprises one to 20 substitutions, additions, and / or deletions in the parent antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, a variant comprises one to 15 substitutions, additions, and / or deletions in the parent antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, a variant comprises one to 10 substitutions, additions, and / or deletions in the parent antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, a variant comprises one to five amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the parent antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, a variant comprises one to three amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the parent antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, the amino acid substitution (s) is in a CDR of the antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, the amino acid substitution (s) is not in a CDR of the antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, the amino acid substitution (s) is in a framework region of the antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, the amino acid substitutions, additions, and / or deletions are conservative amino acid substitutions.

[0104] It is known in the art that the constant region (s) of an antibody mediates several effector functions and these effector functions can vary depending on the isotype of the antibody. For example, binding of the C1 component of complement to the Fc region of IgG or IgM antibodies (bound to antigen) activates the complement system. Activation of complement is important in the opsonization and lysis of cell pathogens. The activation of complement also stimulates the inflammatory response and can be involved in autoimmune hypersensitivity. In addition, the Fc region of an antibody can bind a cell expressing a Fc receptor (FcR) . There are a number of Fc receptors which are specific for different classes of antibody, including IgG (gamma receptors) , IgE (epsilon receptors) , IgA (alpha receptors) and IgM (mu receptors) . Binding of antibody to Fc receptors on cell surfaces triggers a number of important and diverse biological responses including engulfment and destruction of antibody-coated particles, clearance of immune complexes, lysis of antibody-coated target cells by killer cells (called antibody-dependent cell cytotoxicity or ADCC) , release of inflammatory mediators, placental transfer, and control of immunoglobulin production.

[0105] In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein comprise a constant region of a human IgA antibody. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein comprise a constant region of a human IgD antibody. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein comprise a constant region of a human IgE antibody. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein comprise a constant region of a human IgG antibody. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein comprise a constant region of a human IgM antibody. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein comprise a constant region of a human IgG1 antibody. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein comprise a constant region of a human IgG2 antibody. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein comprise a constant region of a human IgG3 antibody. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein comprise a constant region of a human IgG4 antibody.

[0106] In some embodiments, at least one or more of the constant regions has been modified or deleted in the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment described herein. In some embodiments, the antibodies comprise modifications to one or more of the three heavy chain constant regions (CH1, CH2 or CH3) and / or to the light chain constant region (CL) .

[0107] In some embodiments, the heavy chain constant region of the modified antibodies comprises at least one human constant region. In some embodiments, the heavy chain constant region of the modified antibodies comprises more than one human constant region. In some embodiments, modifications to the constant region comprise additions, deletions, or substitutions of one or more amino acids in one or more regions. In some embodiments, one or more regions are partially or entirely deleted from the constant regions of the modified antibodies. In some embodiments, the entire CH2 domain has been removed from an antibody (ΔCH2 constructs) . In some embodiments, a deleted constant region is replaced by a short amino acid spacer that provides some of the molecular flexibility typically imparted by the absent constant region. In some embodiments, a modified antibody comprises a CH3 domain directly fused to the hinge region of the antibody. In some embodiments, a modified antibody comprises a peptide spacer inserted between the hinge region and modified CH2 and / or CH3 domains.

[0108] Human constant regions show allotypic variation and isoallotypic variation between different individuals, that is, the constant regions can differ in different individuals at one or more polymorphic positions. Isoallotypes differ from allotypes in that sera recognizing an isoallotype binds to a non-polymorphic region of a one or more other isotypes.

[0109] One or several amino acids at the amino or carboxy terminus of the light and / or heavy chain, such as the C-terminal lysine of the heavy chain, can be missing or derivatized in a proportion or all of the molecules. Substitutions can be made in the constant regions to reduce or increase effector function such as complement-mediated cytotoxicity or ADCC (see, e.g., US Patent No. 5,624,821; US Patent No. 5,834,597; and Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103: 4005, 2006) , or to prolong half-life in humans (see, e.g., Hinton et al., J. Biol. Chem. 279: 6213, 2004) .

[0110] The conjugation between the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment and a therapeutic moiety can be any conjugations disclosed herein or otherwise known in the art. In some embodiments, the conjugation site of the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments for generating the ADCs disclosed herein can be at any amino acid positions disclosed herein or otherwise known in the art. In some embodiments, the conjugation site can be lysine residues or cysteine residues. In some embodiments, the amino acid residue (e.g., lysine residue or cysteine residue) is the native amino acid residue of the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments. In some embodiments, the conjugation site is a native cysteine residue of the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments. In some embodiments, the amino acid residue (e.g., lysine residue or cysteine residue) is introduced to the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments. For illustrative purposes, in some embodiments, the presence of an additional cysteine residue allows interchain disulfide bond formation. Such interchain disulfide bond formation can cause steric hindrance, thereby reducing the affinity of the Fc region-FcγR binding interaction. The cysteine residue (s) introduced in or in proximity to the Fc region of an IgG constant region can serve as sites for conjugation to therapeutic moieties (i.e., coupling cytotoxic drugs using thiol specific reagents such as maleimide derivatives of drugs) . The presence of a therapeutic moiety causes steric hindrance, thereby further reducing the affinity of the Fc region-FcγR binding interaction. In some embodiments, the conjugation site is a cysteine residue substituting a native amino acid of the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments. Exemplary substitutions include the amino acid substitution of the native amino acid to a cysteine residue is introduced at amino acid position 234, 235, 237, 239, 267, 298, 299, 326, 330, or 332, preferably an S239C mutation in a human IgG1 isotype (US 20100158909) . A linker can be employed for the conjugation. In some embodiments, the cysteine residue is introduced to serve as sites for conjugation to therapeutic moieties through the linker.

[0111] The variant antibodies or antigen-binding fragments described herein can be generated using methods known in the art, including but not limited to, site-directed mutagenesis, alanine scanning mutagenesis, and PCR mutagenesis. Methods for mutagenesis and nucleotide sequence alterations are well known in the art. See, for example, Walker and Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York) ; Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488-492 (1985) ; Kunkel et al., Methods Enzymol. 54: 367-382 (1987) ; Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, N.Y. ) ; U.S. Pat. No. 4,873,192; and the references cited therein; herein incorporated by reference. Guidance as to appropriate amino acid substitutions that do not affect biological activity of the polypeptide of interest can be found in the model of Dayhoff et al. (1978) in Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C. ) , pp. 345-352, herein incorporated by reference in its entirety. The model of Dayhoff et al. uses the Point Accepted Mutation (PAM) amino acid similarity matrix (PAM 250 matrix) to determine suitable conservative amino acid substitutions. Conservative substitutions, such as exchanging one amino acid with another having similar properties, can be beneficial. Examples of conservative amino acid substitutions as taught by the PAM 250 matrix of the Dayhoff et al. model include, but are not limited to, Gly→Ala, Val→Ile→Leu, Asp→Glu, Lys→Arg, Asn→Gln, and Phe→Trp→Tyr.

[0112] In some embodiments, a variant of an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein can retain the ability to bind TRBV12 to a similar extent, the same extent, or to a higher extent, as the parent antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, the variant can be at least about 80%, about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, about 99%or more identical in amino acid sequence to the parent antibody or antigen-binding fragment. In some embodiments, a variant of an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment comprises the amino acid sequence of the parent anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment with one or more conservative amino acid substitution. Conservative amino acid substitutions are known in the art and include amino acid substitutions in which one amino acid having certain physical and / or chemical properties is exchanged for another amino acid that has the same or similar chemical or physical properties.

[0113] In some embodiments, a variant of an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment comprises the amino acid sequence of the parent antibody or antigen-binding fragment with one or more non-conservative amino acid substitutions. In some embodiments, a variant of an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment comprises the amino acid sequence of the parent binding antibody or antigen-binding fragment with one or more non-conservative amino acid substitution, wherein the one or more non-conservative amino acid substitutions do not interfere with or inhibit one or more biological activities of the variant (e.g., TRBV12 binding) . In some embodiments, the one or more conservative amino acid substitutions and / or the one or more non-conservative amino acid substitutions can enhance a biological activity of the variant, such that the biological activity of the functional variant is increased as compared to the parent antibody or antigen-binding fragment.

[0114] In some embodiments, the variant can have 1, 2, 3, 4, or 5 amino acid substitutions in the CDRs (e.g., VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 and VL CDR3) of the binding moiety. In some embodiments, the amino acid substitution is conservative amino acid substitution.

[0115] In some embodiments, anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein are chemically modified naturally or by intervention. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments have been chemically modified by glycosylation, acetylation, pegylation, phosphorylation, amidation, derivatization by known protecting / blocking groups, proteolytic cleavage, and / or linkage to a cellular ligand or other protein. Any of numerous chemical modifications can be carried out by known techniques. The anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments can comprise one or more analogs of an amino acid (including, for example, unnatural amino acids) , as well as other modifications known in the art.

[0116] ADCs provided herein can comprise any suitable therapeutic moiety disclosed herein or otherwise known in the art. In some embodiments, the therapeutic moieties suitable for conjugation with an anti-TRBV12 antibody include, for example, cytotoxic agents (e.g., chemotherapeutic agents) , immune regulative agents (e.g., Toll-like receptors (TLR) agonists, Stimulator of interferon genes (STING) agonists) , prodrug converting enzymes, radioactive isotopes or compounds, and toxins (e.g., a cytostatic or cytocidal agent such as, e.g., abrin, ricin A, pseudomonas exotoxin, or diphtheria toxin) .

[0117] In some embodiments, ADCs provided herein can comprise a cytotoxic agent as therapeutic moiety. Useful classes of cytotoxic agents to conjugate to anti-TRBV12 antibodies include, for example, anti-tubulin agents, DNA minor groove binding agents, DNA replication inhibitors, chemotherapy sensitizers, or the like. Other exemplary classes of cytotoxic agents include anthracyclines, auristatins, camptothecins, duocarmycins, etoposides, maytansinoids and vinca alkaloids. The cytotoxic agent can be a chemotherapeutic such as, for example, doxorubicin, morpholino-doxorubicin, and cyanomorpholino-doxorubicin, paclitaxel, melphalan, vinca alkaloids, methotrexate, mitomycin C or etoposide. The agent can also be a CC-1065 analogue, calicheamicin, maytansine, an analog of dolastatin 10, rhizoxin, or palytoxin.

[0118] The therapeutic moiety of the ADCs provided herein can be an anti-tubulin agent. Examples of antitubulin agents include taxanes (e.g.,   (paclitaxel) ,   (docetaxel) ) , T67 (Tularik) , vinca alkyloids (e.g., vincristine, vinblastine, vindesine, and vinorelbine) , and auristatins (e.g., auristatin E, auristatin F phenylenediamine (AFP) , monomethyl auristatin F (MMAF) , monomethyl auristatin E (MMAE) , auristatin EB (AEB) , auristatin EFP (AEFP) ) .

[0119] In some embodiments, ADCs provided herein include an auristatin as the therapeutic moiety. In some embodiments, the therapeutic moiety is a monomethyl auristatin. In some embodiments, the therapeutic moiety is an auristatin T. In some embodiments, the therapeutic moiety is MMAF. In some embodiments, the therapeutic moiety is MMAE.

[0120] In some embodiments, ADCs provided herein include a maytansinoid, another group of anti-tubulin agents (e.g., DM1, DM2, DM3, DM4) , as therapeutic moiety. For example, the maytansinoid can be maytansine or a maytansine containing drug linker such as DM-1 or DM-4 (ImmunoGen, Inc.; see also Chari et al., 1992, Cancer Res. )

[0121] Other suitable antitubulin agents include, for example, baccatin derivatives, taxane analogs (e.g., epothilone A and B) , nocodazole, colchicine and colcimid, estramustine, cryptophysins, cemadotin, maytansinoids, combretastatins, discodermoide, eleuthrobin, and tubulysin M

[0122] The therapeutic moiety can be a topoisomerase I inhibitor. Examples of topoisomerase I inhibitors include camptothecin, Dxd, SN-38 and exatecan (DX-8951) . In some embodiments, the therapeutic moiety can be Dxd. In some embodiments, the therapeutic moiety can be camptothecin. In some embodiments, the therapeutic moiety can be SN-38. In some embodiments, the therapeutic moiety can be exatecan.

[0123] The therapeutic moiety of the ADCs provided herein can be a DNA minor groove binding agent. (See, e.g., U.S. Patent No. 6,130,237. ) For example, the minor groove binding agent can be a CBI compound, an enediyne (e.g., calicheamicin) , or a lexitropsin.

[0124] The therapeutic moiety of the ADCs provided herein can be a DNA-crosslinking agent. Exemplary DNA-crosslinking agents include benzodiazepine (e.g., pyrrolo [1, 4] benzodiazepine dimers (PBD dimer) , indolinobenzodiazepine dimers, and oxazolidinobenzodiazepine dimers) .

[0125] The therapeutic moiety of the ADCs provided herein can be an immune regulative agent. Useful classes of immune regulative agents include, for example, TLR agonist and STING agonist. Exemplary TLR agonists include, for example, CpG oligonucleotides, imiquimod, resiquimod, poly (I: C) , and monophosphoryl lipid A (MPLA) . Exemplary STING agonists include, for example, ADU-S100 (MIW815) , MK-2118, Benzothiophene oxobutanoic acid (MSA-2) , and RVU-25466.

[0126] The therapeutic moiety of the ADCs provided herein can also a pro-drug converting enzyme. Exemplary pro-drug converting enzymes are carboxypeptidase G2, beta-glucuronidase, penicillin-V-amidase, penicillin-G-amidase, b-lactamase, b-glucosidase, nitroreductase and carboxypeptidase A.

[0127] For illustrative purposes, ADCs provided herein can comprise an anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment disclosed herein conjugated to a therapeutic moiety, wherein the therapeutic moiety is N-acetyl-γ-calicheamicin (ozogamicin) , MMAE, MMAF, DM1, pseudomonas exotoxin A (PE38) , Dxd, SG3199 (PBD dimer) , IRDye700DX, exatecan, or DM4. In some embodiments, the therapeutic moiety is N-acetyl-γ-calicheamicin. In some embodiments, the therapeutic moiety is MMAE. In some embodiments, the therapeutic moiety is MMAF. In some embodiments, the therapeutic moiety is DM1. In some embodiments, the therapeutic moiety is pseudomonas exotoxin A. In some embodiments, the therapeutic moiety is Dxd. In some embodiments, the therapeutic moiety is SG3199 (PBD dimer) . In some embodiments, the therapeutic moiety is IRDye700DX. In some embodiments, the therapeutic moiety of the ADCs provided herein is exatecan. In some embodiments, the therapeutic moiety is DM4.

[0128] In some embodiments, ADCs provided herein comprise a linker region between the therapeutic moiety and the anti-TRBV12 antibody. The linker can be, for example, a cleavable linker (e.g., a peptidyl linker, a carbohydrate linker) or a non-cleavable linker (e.g., linker released by degradation of the antibody) .

[0129] In some embodiments, the linker is cleavable under intracellular conditions, such that cleavage of the linker releases the therapeutic moiety from the antibody in the intracellular environment (e.g., within a lysosome or endosome or caveolea) . The therapeutic moiety can be conjugated in a manner that reduces its activity unless it is cleaved off the antibody (e.g., by hydrolysis, by antibody degradation or by a cleaving agent) . Such therapeutic moiety is attached to the antibody with a cleavable linker that is sensitive to cleavage in the intracellular environment of the TRBV12-expressing cancer cell but is not substantially sensitive to the extracellular environment, such that the conjugate is cleaved from the antibody when it is internalized by the TRBV12-expressing cancer cell (e.g., in the endosomal or lysosomal or caveolear environment, for example by virtue of pH sensitivity or protease sensitivity, in the lysosomal environment or in the caveolear environment) .

[0130] The linker can be, e.g., a peptidyl linker that is cleaved by an intracellular peptidase or protease enzyme, including a lysosomal or endosomal protease. Typically, the peptidyl linker is at least two amino acids long or at least three amino acids long. Cleaving agents can include cathepsins B and D and plasmin (see, e.g., Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83: 67-123) . Most typical are peptidyl linkers that are cleavable by enzymes that are present in TRBV12-expressing cells. For example, a peptidyl linker that is cleavable by the thiol-dependent protease cathepsin-B, which is highly expressed in cancerous tissue, can be used (e.g., a linker comprising a Phe-Leu or a Gly-Phe-Leu-Gly peptide) . Other such linkers are described, e.g., in U.S. Patent No. 6,214,345. In specific embodiments, the peptidyl linker cleavable by an intracellular protease comprises a Val-Cit linker or a Phe-Lys dipeptide (see, e.g., U.S. patent 6,214,345, which describes the synthesis of doxorubicin with the Val-Cit linker) . One advantage of using intracellular proteolytic release of the therapeutic moiety is that the agent is typically attenuated when conjugated and the serum stabilities of the conjugates are typically high.

[0131] The cleavable linker can be pH-sensitive, i.e., sensitive to hydrolysis at certain pH values. Typically, the pH-sensitive linker is hydrolyzable under acidic conditions. For example, an acid-labile linker that is hydrolyzable in the lysosome (e.g., a hydrazone, semicarbazone, thiosemicarbazone, cis-aconitic amide, orthoester, acetal, ketal, or the like) can be used. (See, e.g., U.S. Patent Nos. 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83: 67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264: 14653-14661. ) Such linkers are relatively stable under neutral pH conditions, such as those in the blood, but are unstable at below pH 5.5 or 5.0, the approximate pH of the lysosome. In certain embodiments, the hydrolyzable linker is a thioether linker (such as, e.g., a thioether attached to the therapeutic moiety via an acylhydrazone bond (see, e.g., U.S. Patent No. 5,622,929) ) .

[0132] Other linkers are cleavable under reducing conditions (e.g., a disulfide linker) . Disulfide linkers include those that can be formed using SATA (N-succinimidyl-S-acetylthioacetate) , SPDP (N-succinimidyl-3- (2-pyridyldithio) propionate) , SPDB (N-succinimidyl-3- (2-pyridyldithio) butyrate) and SMPT (N-succinimidyl-oxycarbonyl-alpha-methyl-alpha- (2-pyridyl-dithio) toluene) , SPDB and SMPT. (See, e.g., Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47: 5924-5931; Wawrzynczak et al., In IMMUNOCONJUGATES: ANTIBODY CONJUGATES IN RADIOIMAGERY AND THERAPY OF CANCER (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987. See also U.S. Patent No. 4,880,935. )

[0133] The linker can also be a malonate linker (Johnson et al., 1995, Anticancer Res. 15: 1387-93) , a maleimidobenzoyl linker (Lau et al, 1995, Bioorg-Med-Chem. 3 (10) : 1299-1304) , or a 3'-N-amide analog (Lau et al, 1995, Bioorg-Med-Chem. 3 (10) : 1305-12) .

[0134] The linker also can be a non-cleavable linker, such as an maleimido-alkylene-or maleimide-aryl linker that is directly attached to the therapeutic moiety (e.g., a drug) . An active drug-linker is released by degradation of the antibody.

[0135] Typically, the linker is not substantially sensitive to the extracellular environment meaning that no more than about 20%, typically no more than about 15%, more typically no more than about 10%, and even more typically no more than about 5%, no more than about 3%, or no more than about 1%of the linkers in a sample of the ADC is cleaved when the ADC present in an extracellular environment (e.g., in plasma) .

[0136] Whether a linker is not substantially sensitive to the extracellular environment can be determined, for example, by incubating independently with plasma both (a) the ADC (the “ADC sample” ) and (b) an equal molar amount of unconjugated antibody or therapeutic moiety (the “control sample” ) for a predetermined time period (e.g., 2, 4, 8, 16, or 24 hours) and then comparing the amount of unconjugated antibody or therapeutic moiety present in the ADC sample with that present in control sample, as measured, for example, by high performance liquid chromatography.

[0137] The linker can also promote cellular internalization. The linker can promote cellular internalization when conjugated to the therapeutic moiety (i.e., in the milieu of the linker-therapeutic moiety of the ADC or ADC derivative as described herein) . Alternatively, the linker can promote cellular internalization when conjugated to both the therapeutic moiety and the anti-TRBV12 antibody (i.e., in the milieu of the ADC as described herein) .

[0138] The anti-TRBV12 antibody can be conjugated to the linker via a heteroatom of the antibody. These heteroatoms can be present on the antibody in its natural state or can be introduced into the antibody. In some embodiments, the anti-TRBV12 antibody can be conjugated to the linker via a nitrogen atom of a lysine residue. In other embodiments, the anti-TRBV12 antibody can be conjugated to the linker via a sulfur atom of a cysteine residue. The cysteine residue can be naturally occurring or one that is engineered into the antibody. Methods of conjugating linkers and drug-linkers to antibodies via lysine and cysteine residues are known in the art.

[0139] In some embodiments, ADCs provided herein have the anti-TRBV12 antibody or antigen-binding fragment conjugated to a therapeutic moiety via a linker.

[0140] In some embodiments, the linker has the following structure:

[0141] In some embodiments, the linker can be in the following stereochemical form: (CAS: 159857-80-4) .

[0142] In some embodiments, the linker has the following structure:

[0143] In some embodiments, the linker can be in the following stereochemical form: (CAS: 1599440-25-1) .

[0144] Accordingly, in some embodiments, exemplary therapeutic moiety-linkers (i.e., the conjugate of the therapeutic moiety and the linker) include MMAE-linkers and MMAF-linkers. In some embodiments, ADCs provided herein have an anti-TRBV12 antibody conjugated to a therapeutic moiety via a linker, wherein the therapeutic moiety and the linker together has the following structure:  or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0145] A preferred stereochemistry for such drug-linker is shown below: (CAS: 646502-53-6) .

[0146] In some embodiments, the therapeutic moiety and the linker together has the following structure:  pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0147] A preferred stereochemistry for such drug-linker is shown below: (CAS: 863971-17-9) .

[0148] In some embodiments, the therapeutic moiety and the linker together has the following structure:  or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0149] A preferred stereochemistry for such drug-linker is shown below: (Deruxtecan, CAS: 1599440-13-7) .

[0150] Accordingly, exemplary ADCs provided herein can be any of the following structures, or pharmaceutically acceptable salts thereof:

[0151] The exemplary ADCs can be in the following stereochemical forms, or pharmaceutically acceptable salt thereof:

[0152] Generally, there are 1 to 16 drug-linkers attached to each antibody.

[0153] In structures (I) , (II) , (Ia) , and (IIa) disclosed above, the subscript p represents the ratio between the therapeutic moiety and the antibody (or the drug-antibody ratio, DAR) , and, depending on the context, can represent the number of molecules of linker-therapeutic moiety conjugate molecules attached to an individual antibody molecule and as such, is an integer value, or can represent an average DAR and, as such, can be an integer or non-integer value but is typically a non-integer value. An average DAR represents the average number of linker-therapeutic moiety conjugate molecules per antibody in a population. In some embodiments, when we refer to an antibody, e.g., a monoclonal antibody, we are referring to a population of antibody molecules. In a composition comprising a population of ADC molecules, the average DAR is an important quality attribute as it determines the amount of drug that can be delivered to a target cell. The percentage of unconjugated antibody molecules in the composition is included in the average drug load value.

[0154] In some embodiments, the DAR when referring to the number of molecules of linker-therapeutic moiety conjugate molecules attached to an individual antibody molecule is an integer value of 1 to 16, preferably 1 to 14, more preferably 1 to 10. In some embodiments, the DAR is an integer value of 2 to 8. In some embodiments, the DAR is 2. In some embodiments, the DAR is 3. In some embodiments, the DAR is 4. In some embodiments, the DAR is 5. In some embodiments, the DAR is 6. In some embodiments, the DAR is 7. In some embodiments, the DAR is 8.

[0155] In some embodiments, the average DAR when referring to a composition comprising a population of ADC compounds is from 1 to about 16, preferably about 1 to about 14, more preferably about 1 to about 10. In some embodiments, the average drug load is about 1, about 2, about 2.5, about 3, about 3.5, about 4, about 4.5, about 5, about 5.5, about 6, about 6.5, about 7, about 7.5, about 8, about 8.5, about 9, about 9.5, about 10, about 10.5, about 11, about 11.5, or about 12. In some embodiments, the average DAR is about 4.

[0156] For MMAE ADCs, such as those exemplified herein, in some embodiments, the therapeutic moiety-linkers are conjugated to the cysteine residues of the reduced inter-chain disulfides. In some embodiments, the actual DAR for individual antibody molecules (e.g., the number of molecules of therapeutic moiety-linker molecules attached to an individual antibody molecule) in the population of ADC compounds is from 1 to 8, 2 to 8, 1 to 4, 2 to 4 or 1 to 2 with a predominant DAR of 4. In some embodiments, the actual DAR for individual antibody molecules in the population of ADC compounds is from 2 to 8. In some embodiments, the DAR is an integer value of 2 to 8. In some embodiments, the DAR is 2. In some embodiments, the DAR is 3. In some embodiments, the DAR is 4. In some embodiments, the DAR is 5. In some embodiments, the DAR is 6. In some embodiments, the DAR is 7. In some embodiments, the DAR is 8. In some embodiments, the average DAR is about 4. In some embodiments, the DAR disclosed herein (e.g., the DAR of integer value of 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8, or the average DAR of about 4) is achieved via cysteine site conjugation, wherein the cysteine residue is the native cysteine residue of the antibody. In some embodiments, the DAR disclosed herein (e.g., the DAR of integer value of 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8, or the average DAR of about 4) can be achieved via site specific conjugation techniques (e.g., engineered cysteines introduced to the antibody including at position 239, according to the EU Index numbering system) . A higher DAR or average DAR can be achieved, for example, if, in addition to the interchain disulfides, drug-linker is conjugated to introduced cysteine residues (such as a cysteine residue introduced at position 239, according to the EU index)

[0157] PEG (polyethylene glycol) can be introduced in the drug linker to form a PEGylated ADC. The PEG (polyethylene glycol) portion of the drug linker can range from 8 to 36, preferably 8 to 14, 8 to 12, 10 to 12 or 10 to 14, a PEG of 12 ethylene oxide units is particularly preferably. It is found that the incorporation of a polyethylene glycol polymer into a cleavable b-glucuronide provides TRBV12 targeting antibody drug-conjugates with decreased plasma clearance and increased antitumor activity in xenograft models as compared to a non-PEGylated control.

[0158] Polydisperse PEGs, monodisperse PEGs and discrete PEGs can be used to make the PEGylated ADCs disclosed herein. Polydisperse PEGs are a heterogenous mixture of sizes and molecular weights whereas monodisperse PEGs are typically purified from heterogenous mixtures and are therefore provide a single chain length and molecular weight. Preferred PEG Units are discrete PEGs, compounds that are synthesized in stepwise fashion and not via a polymerization process. Discrete PEGs provide a single molecule with defined and specified chain length.

[0159] In some embodiments, covalent attachment of the antibody to the drug-linker is accomplished through a sulfhydryl functional group of the antibody interacting with a maleimide functional group of a drug linker to form a thio-substituted succinimide. The sulfhydryl functional group can be present on the Ligand Unit in the Ligand’s natural state, for example, in a naturally occurring residue (inter-chain disulfide resides) , or can be introduced into the Ligand via chemical modification or by biological engineering, or a combination of the two. It will be understood that an antibody-substituted succinimide may exist in hydrolyzed form (s) . For example, in preferred embodiments, an ADC is comprised of a succinimide moiety that when bonded to the antibody is represented by the structure of:  or is comprised of its corresponding acid-amide moiety that when bonded to the antibody is represented by the structure of:  The wavy line indicates linkage to the remainder of the drug-linker.

[0160] In some embodiments, an anti-TRBV12 antibody comprising a VL and VH having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 13, respectively, is conjugated to MMAE via a linker forming an ADC having the structure: wherein p denotes  a number from 1 to 16; preferably a number from 1 to 10. In some embodiments, p is a number from 2 to 8. In some embodiments, p is 2. In some embodiments, p is 3. In some embodiments, p is 4. In some embodiments, p is 5. In some embodiments, p is 6. In some embodiments, p is 7. In some embodiments, p is 8. In some embodiments, the average value of p in a population of the ADC is about 4. In some embodiments, a preferred stereochemistry for such ADC is

[0161] The ADCs described herein have antitumor activities. In some embodiments, ADCs described herein can treat cancer (e.g., T cell cancer) . In some embodiments, ADCs described herein can treat T cell leukemia or lymphoma. In some embodiments, ADCs described herein can treat peripheral T-cell lymphoma, not otherwise specified (PTCL-NOS) , angioimmunoblastic T cell lymphomas (AITL) , T cell prolymphocytic leukemia (TPLL) , adult T cell leukemia / lymphoma (ATLL) , anaplastic large cell lymphoma (ALCL) , cutaneous T cell lymphomas (CTCL) , extranodal NK / T-cell lymphoma, nasal type (ENKTL) , subcutaneous panniculitis-like T-cell lymphoma (SPTCL) , cutaneous gamma-delta T-cell lymphoma (CGD-TCL) , systemic Epstein–Barr virus-positive T-cell lymphoproliferative disorders of childhood (EBVTCLD) , enteropathy-associated T-cell lymphoma (EATL) , monomorphic epitheliotropic intestinal T cell lymphoma (MEITL) , hepatosplenic T-cell lymphoma (HSTCL) , relapsed T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) or T cell large granular lymphocyte leukemia (T-LGL) . In some embodiments, the cancer that can be treated with the ADCs described herein is relapsed. In some embodiments, the cancer that can be treated with the ADCs described herein is TRBV12 positive. In some embodiments, ADCs described herein can specifically target and kill TRBV12-expressing cancer cells (e.g., TRBV12-expressing cancerous T cells) . 6.3 Methods of production

[0162] The anti-TRBV12 antibodies or antigen-binding fragments described herein can be produced by any method known in the art, including chemical synthesis and recombinant expression techniques. The practice of the invention employs, unless otherwise indicated, conventional techniques in molecular biology, microbiology, genetic analysis, recombinant DNA, organic chemistry, biochemistry, PCR, oligonucleotide synthesis and modification, nucleic acid hybridization, and related fields within the skill of the art.

[0163] In some embodiments, monoclonal antibodies are made using recombinant DNA techniques as known to one skilled in the art. Polynucleotides of the antibodies or antigen-binding fragments provided herein can be prepared, manipulated, and / or expressed using any of the well-established techniques known and available in the art. In some embodiments, polynucleotides of the antibodies or antigen-binding fragments provided herein can be prepared recombinantly. Many vectors can be used. Exemplary vectors include, without limitation, plasmids, phagemids, cosmids, artificial chromosomes such as yeast artificial chromosome (YAC) , bacterial artificial chromosome (BAC) , or P1-derived artificial chromosome (PAC) , bacteriophages such as lambda phage or M13 phage, and animal viruses. Examples of categories of animal viruses useful as vectors include, without limitation, retrovirus (including lentivirus) , adenovirus, adeno-associated virus, herpesvirus (e.g., herpes simplex virus) , poxvirus, baculovirus, papillomavirus, and papovavirus (e.g., SV40) . Examples of expression vectors are pClneo vectors (Promega) for expression in mammalian cells; pLenti4 / V5-DESTTM, pLenti6 / V5-DESTTM, and pLenti6.2 / V5-GW / lacZ (Invitrogen) for lentivirus-mediated gene transfer and expression in mammalian cells.

[0164] In some embodiments, a recombinant expression vector is used to express a polynucleotide encoding a polypeptide described herein. For example, a recombinant expression vector can be a replicable DNA construct that includes synthetic or cDNA-derived DNA fragments encoding a polypeptide operatively linked to suitable transcriptional and / or translational regulatory elements derived from mammalian, microbial, viral or insect genes. In some embodiments, coding sequences of polypeptides disclosed herein can be ligated into such expression vectors for their expression in mammalian cells. In some embodiments, a viral vector is used. DNA regions are “operatively linked” when they are functionally related to each other. For example, a promoter is operatively linked to a coding sequence if it controls the transcription of the sequence; or a ribosome binding site is operatively linked to a coding sequence if it is positioned so as to permit translation. In some embodiments, structural elements intended for use in yeast expression systems include a leader sequence enabling extracellular secretion of translated protein by a host cell. In some embodiments, in situations where recombinant protein is expressed without a leader or transport sequence, a polypeptide can include an N-terminal methionine residue.

[0165] A wide variety of expression host / vector combinations can be employed. Suitable host cells for expression include prokaryotes, yeast cells, insect cells, or higher eukaryotic cells under the control of appropriate promoters. Appropriate cloning and expression vectors for use with bacterial, fungal, yeast, and mammalian cellular hosts, as well as methods of protein production, including antibody production are well-known in the art. Useful expression vectors for bacterial hosts include known bacterial plasmids, such as plasmids from E. coli, including pCR1, pBR322, pMB9 and their derivatives, and wider host range plasmids, such as M13 and other filamentous single-stranded DNA phages.

[0166] Useful expression vectors for eukaryotic hosts include, for example, vectors comprising expression control sequences from SV40, bovine papilloma virus, adenovirus, and cytomegalovirus. Examples of suitable mammalian host cell lines include, but are not limited to, COS-7 (monkey kidney-derived) , L-929 (murine fibroblast-derived) , C127 (murine mammary tumor-derived) , 3T3 (murine fibroblast-derived) , CHO (Chinese hamster ovary-derived) , HeLa (human cervical cancer-derived) , BHK (hamster kidney fibroblast-derived) , HEK-293 (human embryonic kidney-derived) cell lines and variants thereof. Mammalian expression vectors can comprise non-transcribed elements such as an origin of replication, a suitable promoter and enhancer linked to the gene to be expressed, and other 5’ or 3’ flanking non-transcribed sequences, and 5’ or 3’ non-translated sequences, such as necessary ribosome binding sites, a polyadenylation site, splice donor and acceptor sites, and transcriptional termination sequences. Expression of recombinant proteins in insect cell culture systems (e.g., baculovirus) also offers a robust method for producing correctly folded and biologically functional proteins. Baculovirus systems for production of heterologous proteins in insect cells are well-known to those of skill in the art.

[0167] Peptides can also be synthesized, in whole or in part, using chemical methods (see, e.g., Caruthers (1980) . Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 215; Horn (1980) ; and Banga, A.K., THERAPEUTIC PEPTIDES AND PROTEINS, FORMULATION, PROCESSING AND DELIVERY SYSTEMS (1995) Technomic Publishing Co., Lancaster, PA) . Peptide synthesis can be performed using various solid phase techniques (see, e.g., Roberge, Science 269: 202 (1995) ; Merrifield, Methods. Enzymol. 289: 3 (1997) ) and automated synthesis may be achieved, e.g., using the ABI 431A Peptide Synthesizer (Perkin Elmer) in accordance with the manufacturer’s instructions. Peptides can also be synthesized using combinatorial methodologies. Synthetic residues and polypeptides can be synthesized using a variety of procedures and methodologies known in the art (see, e.g., ORGANIC SYNTHESES COLLECTIVE VOLUMES, Gilman, et al. (Eds) John Wiley &Sons, Inc., NY) . Modified peptides can be produced by chemical modification methods (see, for example, Belousov, Nucleic Acids Res. 25: 3440 (1997) ; Frenkel, Free Radic. Biol. Med. 19: 373 (1995) ; and Blommers, Biochemistry 33: 7886 (1994) ) . Peptide sequence variations, derivatives, substitutions and modifications can also be made using methods such as oligonucleotide-mediated (site-directed) mutagenesis, alanine scanning, and PCR based mutagenesis. Site-directed mutagenesis (Carter et al., Nucl. Acids Res., 13: 4331 (1986) ; Zoller et al., Nucl. Acids Res. 10: 6487 (1987) ) , cassette mutagenesis (Wells et al., Gene 34: 315 (1985) ) , restriction selection mutagenesis (Wells et al., Philos. Trans. R. Soc. London SerA 317: 415 (1986) ) and other techniques can be performed on cloned DNA to produce peptide sequences, variants, fusions and chimeras, and variations, derivatives, substitutions and modifications thereof.

[0168] A variety of methods are known in the art to purify anti-TRBV12 antibodies, such as affinity chromatography. Eluted IgG can be checked by gel electrophoresis and high-performance liquid chromatography to ensure purity. The buffer solution can be exchanged, and the concentration can be determined. The monoclonal antibodies can be aliquoted and stored.

[0169] Methods for analyzing binding affinity, cross-reactivity, and binding kinetics of various anti-TRBV12 antibodies include standard assays known in the art, for example, Western Blot, ELISA, and flow cytometry. Further methods available in the art include biolayer interferometry (BLI) using, for example, Gator system (Probe Life) or the Octet-96 system (Sartorius AG) , or BIACORETM surface plasmon resonance (SPR) analysis using a BIACORETM 2000 SPR instrument (Biacore AB, Uppsala, Sweden) .

[0170] Provided herein are also methods to prepare the anti-TRBV12 ADCs disclosed herein (e.g., HX129) comprising conjugating the anti-TRBV12 antibodies disclosed herein (e.g., HX029) with the therapeutic moiety. Techniques for conjugating therapeutic moieties to proteins, and in particular to antibodies, are well-known. (See, e.g., Arnon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy, ” in MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY (Reisfeld et al. eds., Alan R. Liss, Inc., 1985) ; Hellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery, ” in CONTROLLED DRUG DELIVERY (Robinson et al. eds., Marcel Dekker, Inc., 2nd ed. 1987) ; Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review, ” in MONOCLONAL ANTIBODIES '84: BIOLOGICAL AND CLINICAL APPLICATIONS (Pinchera et al. eds., 1985) ; “Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy, ” in MONOCLONAL ANTIBODIES FOR CANCER DETECTION AND THERAPY (Baldwin et al. eds., Academic Press, 1985) ; and Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62: 119-58. See also, e.g., PCT publication WO 89 / 12624. )

[0171] Any methods disclosed herein or otherwise known in the art can be used for the conjugation. In general, at least three categories of approaches are available and known in the art, including chemical conjugation, enzymatic conjugation, and click chemistry.

[0172] In some embodiments, methods provided herein include chemical conjugation. For example, the therapeutic moiety can be chemically coupled either to lysine or cysteine side chain of the antibody. In some embodiments, methods provided herein include Lys conjugation. Activated ester groups (such as NHS) can react with solvent accessible amino groups present on lysine residue side chains, resulting in a stable amide-bond formation. In some embodiments, methods provided herein include Cys conjugation. This synthetic process is also divided into two steps: an activation (reduction) step (e.g., using tris- (2-carboxyethyl) -phosphine (TCEP) ) followed by thiol-maleimide coupling.

[0173] Various approaches are known in the art and can be adopted to further improve the therapeutic characteristics of ADCs disclosed herein. To reduce the hydrophobicity of therapeutic moieties responsible for early clearance of ADC in vivo, the hydrophobic character of the therapeutic moiety can be masked with a hydrophilic linker containing PEG (Lyon et al. (2015) Biotechnol. 33 (7) : 733-5) . The XTEN platform can be used extend the half-life of highly-loaded ADCs (Podust et al. (2016) , J Control Release 240: 52-66) . XTEN is peptide linker consisting of alanine, glycine, glutamic acid, proline, serine and threonine.

[0174] Additionally, cysteine rebridging can be used to prepare site-specific ADCs with relatively low DARs. The process requires relatively small molecular weight reductants (e.g., TCEP) and drug-linkers incorporating hydrophilic spacers. Bis-alkylating reagents, such as bromomethylene pyrrolones, dithiomaleimides, dibromopyridazinedione, arylenedipropiolonitrile and bis (vinylsulfonyl) piperazine are effective in site-specific conjugation reactions with antibodies.

[0175] Chemical conjugation utilizing affinity compounds (e.g., Z33 peptide, Z34 peptide, and Fc III derivative peptide) , termed affinity labeling, can also be used for the site-specific modification of antibodies. (Starovasnik et al. (1997) Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (19) : 10080-5; DeLano et al. (2000) , Science 287 (5456) : 1279-83; Shiraiwa et al. (2020) Cell Chem Biol. 27 (8) : 970-985. ) Photo affinity labeling can be used for the conjugation. An activated ester, (e.g., 4-fluorophenyl carbamate lysine (FPheK) or NHS esters) can also be used.

[0176] In some embodiments, methods provided herein include enzymatic conjugation. Several enzymes have been used to conjugate native or genetically engineered antibodies with various therapeutic moieties or to introduce suitable bio-orthogonal functional groups into antibodies. These enzymes modify antibodies in a site-specific manner, which generally allows for production of single occupancy ADCs with well-controlled DAR. Enzymes that can be used include, e.g., sortase A, trypsiligase, transglutaminase, formylglycine-generating enzyme, and tyrosinase.

[0177] In some embodiments, methods provided herein include using click chemistry. The representative reaction of click chemistry, which is azide-alkyne cycloaddition (AAC) , can be used. Also, ADCs can be synthesized without using natural amino acid residues in the mAb. The two main types of AACs are copper-catalyzed AAC (CuAAC) and strainpromoted AAC (SPAAC) (VanBrunt et al. (2015) Bioconjug Chem 26 (11) : 2249–2260.; Chio and Bane (2020) , Methods Mol Biol 2078: 83–97) . CuAAC is synthesized by combining a linear alkyne with an azide catalyzed by copper to form a heterocycle (Li et al. (2014) Angew Chem 53 (28) : 7179–7182) . On the other hand, SPAAC is synthesized by the ring modification of cyclooctyne and can be used to get the homogenous ADC products (Tsuchikama and An (2018) Protein Cell, 9 (1) : 33–46. ) . CuAAC has been observed to oxidize certain amino acids in the antibodies owing to the presence of copper, and the oxidized proteins may be immunogenic (Van Geel et al. (2015) , Bioconjug Chem 26 (11) : 2233–2242. )  6.4 Pharmaceutical compositions

[0178] Provided herein are pharmaceutical compositions comprising the ADCs (e.g., HX129) disclosed herein. In some embodiments, the pharmaceutical compositions provided herein further comprise a pharmaceutically acceptable carrier. In some embodiments, the pharmaceutical composition comprises a therapeutically effective amount of the ADCs disclosed herein (e.g., HX129) and a pharmaceutically acceptable carrier. In some embodiments, the pharmaceutical compositions are useful in inhibiting tumor growth in a subject (e.g., a human patient) . In some embodiments, the pharmaceutical compositions are useful in treating cancer in a subject (e.g., a human patient) .

[0179] In some embodiments, the pharmaceutical compositions provided herein comprise ADCs provided herein (e.g., HX129) . The ADCs can be present at various concentrations. In some embodiments, the pharmaceutical compositions provided herein comprise a soluble ADC provided herein at 1-1000 mg / ml. In some embodiments, the pharmaceutical compositions comprise a soluble ADC provided herein at 10-500 mg / ml, 10-400 mg / ml, 10-300 mg / ml, 10-200 mg / ml, 10-100 mg / ml, 20-100 mg / ml, or 50-100 mg / ml. In some embodiments, the pharmaceutical compositions provided herein comprise ADCs provided herein at about 10 mg / ml, about 20 mg / ml, about 30 mg / ml, about 40 mg / ml, about 50 mg / ml, about 60 mg / ml, about 70 mg / ml, about 80 mg / ml, about 90 mg / ml, about 100 mg / ml, about 120 mg / ml, about 150 mg / ml, about 180 mg / ml, about 200 mg / ml, about 300 mg / ml, about 500 mg / ml, about 800 mg / ml, or about 1000 mg / ml. Dosages can be readily adjusted by those skilled in the art; for example, a decrease in purity may require an increase in dosage.

[0180] Provided herein are also kits for preparation of pharmaceutical compositions having the ADCs disclosed herein. In some embodiments, the kit comprises the ADCs disclosed herein and a pharmaceutically acceptable carrier in one or more containers. In some embodiments, the kits can comprise the ADCs disclosed herein for administration to a subject. In specific embodiments, the kits comprise instructions regarding the preparation and / or administration of the ADCs disclosed herein.

[0181] In some embodiments, provided herein is a pharmaceutical composition comprising the ADCs disclosed herein wherein the composition is suitable for local administration. In some embodiments, local administration comprises intratumoral injection, peritumoral injection, juxtatumoral injection, intralesional injection and / or injection into a tumor draining lymph node, or essentially any tumor-targeted injection where the antitumor agent is expected to leak into primary lymph nodes adjacent to targeted solid tumor.

[0182] Pharmaceutically acceptable carriers that can be used in compositions provided herein include any and all solvents, dispersion media, coatings, antibacterial and antifungal agents, isotonic and absorption delaying agents, and the like that are physiologically compatible. In some embodiments, the carrier is suitable for intravenous, intramuscular, subcutaneous, parenteral, spinal or epidermal administration (e.g., by injection or infusion) . Depending on the route of administration, the active ingredient (i.e., the ADCs disclosed herein) , can be coated in a material to protect the active ingredient from the action of acids and other natural conditions that can inactivate the active ingredient.

[0183] Provided herein are also pharmaceutical compositions or formulations that improve the stability of the ADCs disclosed herein to allow for their long-term storage. In some embodiments, the pharmaceutical composition or formulation disclosed herein comprises: (a) ADCs disclosed herein; (b) a buffering agent; (c) a stabilizing agent; (d) a salt; (e) a bulking agent; and / or (f) a surfactant. In some embodiments, the pharmaceutical composition or formulation is stable for at least 1 month, at least 2 months, at least 3 months, at least 6 months, at least 1 year, at least 2 years, at least 3 years, at least 5 years or more. In some embodiments, the pharmaceutical composition or formulation is stable when stored at 4℃, 25℃, or 40℃.

[0184] Buffering agents useful in the pharmaceutical compositions or formulations disclosed herein can be a weak acid or base used to maintain the acidity (pH) of a solution near a chosen value after the addition of another acid or base. Suitable buffering agents can maximize the stability of the pharmaceutical formulations by maintaining pH control of the formulation. Suitable buffering agents can also ensure physiological compatibility or optimize solubility. Rheology, viscosity and other properties can also depend on the pH of the formulation. Common buffering agents include, but are not limited to, histidine, citrate, succinate, acetate and phosphate. In some embodiments, a buffering agent comprises histidine (e.g., L-histidine) with isotonicity agents and potentially pH adjustment with an acid or a base known in the art. In some embodiments, the buffering agent is L-histidine. In some embodiments, the pH of the formulation is maintained between about 2 and about 10, or between about 4 and about 8.

[0185] Stabilizing agents are added to a pharmaceutical product to stabilize that product. Such agents can stabilize proteins in different ways. Common stabilizing agents include, but are not limited to, amino acids such as glycine, alanine, lysine, arginine, or threonine, carbohydrates such as glucose, sucrose, trehalose, rafftnose, or maltose, polyols such as glycerol, mannitol, sorbitol, cyclodextrins or destrans of any kind and molecular weight, or PEG. In some embodiments, the stabilizing agent is chosen to maximize the stability of FIX polypeptide in lyophilized preparations. In some embodiments, the stabilizing agent is sucrose and / or arginine.

[0186] Bulking agents can be added to a pharmaceutical composition or formulation to add volume and mass to the product, thereby facilitating precise metering and handling thereof. Common bulking agents include, but are not limited to, lactose, sucrose, glucose, mannitol, sorbitol, calcium carbonate, or magnesium stearate.

[0187] Surfactants are amphipathic substances with lyophilic and lyophobic groups. A surfactant can be anionic, cationic, zwitterionic, or nonionic. Examples of nonionic surfactants include, but are not limited to, alkyl ethoxylate, nonylphenol ethoxylate, amine ethoxylate, polyethylene oxide, polypropylene oxide, fatty alcohols such as cetyl alcohol or oleyl alcohol, cocamide MEA, cocamide DEA, polysorbates, or dodecyl dimethylamine oxide. In some embodiments, the surfactant is polysorbate 20 or polysorbate 80.

[0188] The pharmaceutical compositions disclosed herein can further comprise one or more of a buffer system, a preservative, a tonicity agent, a chelating agent, a stabilizer and / or a surfactant, as well as various combinations thereof. The use of preservatives, isotonic agents, chelating agents, stabilizers and surfactants in pharmaceutical compositions is well-known to the skilled person. Reference may be made to Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995.

[0189] In some embodiments, the pharmaceutical composition is an aqueous formulation. Such a formulation is typically a solution or a suspension, but can also include colloids, dispersions, emulsions, and multi-phase materials. The term “aqueous formulation” is defined as a formulation comprising at least 50%w / w water. Likewise, the term “aqueous solution” is defined as a solution comprising at least 50 %w / w water, and the term “aqueous suspension” is defined as a suspension comprising at least 50 %w / w water.

[0190] In some embodiments, the pharmaceutical compositions disclosed herein are freeze-dried, to which the physician or the patient adds solvents and / or diluents prior to use.

[0191] Pharmaceutical compositions disclosed herein can also include a pharmaceutically acceptable antioxidant. Examples of pharmaceutically acceptable antioxidants include: (1) water soluble antioxidants, such as ascorbic acid, cysteine hydrochloride, sodium bisulfate, sodium metabisulfite, sodium sulfite and the like; (2) oil-soluble antioxidants, such as ascorbyl palmitate, butylated hydroxyanisole (BHA) , butylated hydroxytoluene (BHT) , lecithin, propyl gallate, alpha-tocopherol, and the like; and (3) metal chelating agents, such as citric acid, ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) , sorbitol, tartaric acid, phosphoric acid, and the like.

[0192] Examples of suitable aqueous and nonaqueous carriers that can be employed in the pharmaceutical compositions or formulations described herein include water, ethanol, polyols (such as glycerol, propylene glycol, polyethylene glycol, and the like) , and suitable mixtures thereof, vegetable oils, such as olive oil, and injectable organic esters, such as ethyl oleate. Proper fluidity can be maintained, for example, by the use of coating materials, such as lecithin, by the maintenance of the required particle size in the case of dispersions, and by the use of surfactants.

[0193] These compositions can also contain adjuvants such as preservatives, wetting agents, emulsifying agents and dispersing agents. Prevention of presence of microorganisms can be ensured both by sterilization procedures, supra, and by the inclusion of various antibacterial and antifungal agents, for example, paraben, chlorobutanol, phenol sorbic acid, and the like. It can also be desirable to include isotonic agents, such as sugars, sodium chloride, and the like into the compositions. In addition, prolonged absorption of the injectable pharmaceutical form can be brought about by the inclusion of agents which delay absorption such as aluminum monostearate and gelatin.

[0194] Pharmaceutically acceptable carriers include sterile aqueous solutions or dispersions and sterile powders for the extemporaneous preparation of sterile injectable solutions or dispersion. The use of such media and agents for pharmaceutically active substances is known in the art. Except insofar as any conventional media or agent is incompatible with the active compound, use thereof in the pharmaceutical compositions described herein is contemplated. A pharmaceutical composition or formulation can comprise a preservative or can be devoid of a preservative. Supplementary active compounds can be incorporated into the compositions.

[0195] Pharmaceutical compositions or formulations typically must be sterile and stable under the conditions of manufacture and storage. The composition can be formulated as a solution, microemulsion, liposome, or other ordered structure suitable to high drug concentration. The carrier can be a solvent or dispersion medium containing, for example, water, ethanol, polyol (for example, glycerol, propylene glycol, and liquid polyethylene glycol, and the like) , and suitable mixtures thereof. The proper fluidity can be maintained, for example, by the use of a coating such as lecithin, by the maintenance of the required particle size in the case of dispersion and by the use of surfactants. In many cases, the compositions can include isotonic agents, for example, sugars, polyalcohols such as mannitol, sorbitol, or sodium chloride in the composition. Prolonged absorption of the injectable compositions can be brought about by including in the composition an agent that delays absorption, for example, monostearate salts and gelatin.

[0196] Sterile injectable solutions can be prepared by incorporating the active compound in the required amount in an appropriate solvent with one or a combination of ingredients enumerated above, as required, followed by sterilization microfiltration. Generally, dispersions are prepared by incorporating the active compound into a sterile vehicle that contains a basic dispersion medium and the required other ingredients from those enumerated herein. In the case of sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions, some methods of preparation are vacuum drying and freeze-drying (lyophilization) that yield a powder of the active ingredient plus any additional desired ingredient from a previously sterile-filtered solution thereof.

[0197] The amount of active ingredient which can be combined with a carrier material in the pharmaceutical compositions or formulations disclosed herein can vary. In some embodiments, the amount of active ingredient which can be combined with a carrier material is the amount that produces a therapeutic effect. Generally, out of one hundred percent, this amount will range from about 0.01 percent to about ninety-nine percent of active ingredient, from about 0.1 percent to about 70 percent, or from about 1 percent to about 30 percent of active ingredient in combination with a pharmaceutically acceptable carrier.

[0198] The pharmaceutical compositions disclosed herein can be prepared with carriers that protect the active ingredient against rapid release, such as a controlled release formulation, including implants, transdermal patches, and microencapsulated delivery systems. Biodegradable, biocompatible polymers can be used, such as ethylene vinyl acetate, polyanhydrides, polyglycolic acid, collagen, polyorthoesters, and poly lactic acid. Many methods for the preparation of such formulations are patented or generally known to those skilled in the art. See. e.g., Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978. 6.5 Methods and uses

[0199] The ADCs, compositions or methods described herein have numerous in vitro and in vivo utilities involving, for example, cancerous T cell depletion, such as by eliminating, lysing and / or killing the cancerous T cell.

[0200] In some embodiments, the ADCs (e.g., HX129) described herein can be administered to human subjects, e.g., in vivo, to eliminating, lysing and / or killing cancerous cells (e.g., cancerous T cells) . Accordingly, provided herein are methods of killing cancerous cells in a subject comprising administering to the subject an ADC described herein, such that the proliferation and / or function of the cancerous cells is inhibited. In some embodiments, provided herein are methods of inhibiting the proliferation of cancerous cells in a subject comprising administering to the subject an ADC described herein. In some embodiments, provided herein are methods of inhibiting the function of cancerous cells in a subject comprising administering to the subject an ADC described herein. In some embodiments, the cancerous cell is cancerous T cell. In some embodiments, the cancerous cell is TRBV12 positive. In some embodiments, the cancerous cell is TRBV12 positive cancerous T cell. In some embodiments, the ADC (e.g., HX129) described herein selectively eliminates, lyses and / or kills TRBV12 positive cells (e.g., TRBV12 positive cancerous T cell) . In some embodiments, the ADC (e.g., HX129) described herein selectively eliminates, lyses and / or kills the cancerous cell (e.g., cancerous T cells or TRBV12 positive cancerous T cell) while preserving most normal immune cells (e.g., normal T cells) , such that treatment-related immunosuppression could be avoided. In some embodiments, provided herein are methods of inhibiting the proliferation of TRBV12 positive cancerous cells (e.g., TRBV12 positive cancerous T cells) without causing treatment-related immunosuppression in a subject comprising administering to the subject an ADC (e.g., HX129) described herein. In some embodiments, provided herein are methods of inhibiting the function of TRBV12 positive cancerous cells (e.g., TRBV12 positive cancerous T cells) without causing treatment-related immunosuppression in a subject comprising administering to the subject an ADC (e.g., HX129) described herein.

[0201] The present disclosure also provides methods of uses of the ADCs or pharmaceutical compositions having such ADCs disclosed herein in treating cancer.

[0202] Without being bound by theory, in some embodiments, the ADCs can specifically target TRBV12 positive cancer cells in vivo, thereby delivering their therapeutic effect of eliminating, lysing and / or killing cancer cells.

[0203] In some embodiments, the ADCs, compositions and methods described herein can be used to target and treat tumors and cancers. In some embodiments, provided are methods for inhibiting growth of cancer cells in a subject comprising administering to the subject an anti-TRBV12 ADC described herein (e.g., HX129) such that growth of the cancer is inhibited in the subject. Provided herein are also methods of treating a cancer in a subject in need thereof comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of an ADC disclosed herein (e.g., HX129) . Provided herein are also uses of an ADC disclosed herein (e.g., HX129) as a medicament. Provided herein are also uses of an ADC disclosed herein in treating a cancer. Provided herein are also uses of an ADC disclosed herein (e.g., HX129) for the preparation of a medicament for treating a cancer. In some embodiments, provided herein are methods of treating a cancer in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the pharmaceutical composition disclosed herein. In some embodiments, provided herein are uses of the pharmaceutical compositions disclosed herein in treating a cancer. In some embodiments, provided herein are uses of the pharmaceutical compositions provided herein for the preparation of a medicament in treating a cancer.

[0204] In some embodiments, cancers that can be treated with the methods disclosed herein are solid tumors. In some embodiments, cancers that can be treated with the methods disclosed herein are liquid cancers, or hematological cancers. In some embodiments, the cancer is a liquid cancer. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is T cell leukemia or lymphoma. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is peripheral T-cell lymphoma, not otherwise specified (PTCL-NOS) , angioimmunoblastic T cell lymphomas (AITL) , T cell prolymphocytic leukemia (TPLL) , adult T cell leukemia / lymphoma (ATLL) , anaplastic large cell lymphoma (ALCL) , cutaneous T cell lymphomas (CTCL) , extranodal NK / T-cell lymphoma, nasal type (ENKTL) , subcutaneous panniculitis-like T-cell lymphoma (SPTCL) , cutaneous gamma-delta T-cell lymphoma (CGD-TCL) , systemic Epstein–Barr virus-positive T-cell lymphoproliferative disorders of childhood (EBVTCLD) , enteropathy-associated T-cell lymphoma (EATL) , monomorphic epitheliotropic intestinal T cell lymphoma (MEITL) , hepatosplenic T-cell lymphoma (HSTCL) , relapsed T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) or T cell large granular lymphocyte leukemia (T-LGL) . In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is T cell leukemia. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is T cell lymphoma.

[0205] In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is PTCL-NOS. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is AITL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is TPLL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is adult T cell leukemia. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is adult T cell lymphoma. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is ALCL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is CTCL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is ENKTL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is SPTCL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is CGD-TCL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is EBVTCLD. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is EATL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is MEITL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is HSTCL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is T-ALL. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is T-LGL. In some embodiments, the cancer that can be treated with the methods disclosed herein is relapsed. In some embodiments, cancer that can be treated with the methods disclosed herein is TRBV12 positive.

[0206] For illustrative purposes, in some embodiments, provided herein are methods of treating PTCL-NOS in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the anti-TRBV12 ADCs disclosed herein. In some embodiments, provided herein are uses of the anti-TRBV12 ADCs disclosed herein in the treatment of PTCL-NOS. In some embodiments, provided herein are uses of the anti-TRBV12 ADCs provided herein for the preparation of a medicament for the treatment of PTCL-NOS. In some embodiments, the PTCL-NOS is relapsed. In some embodiments, the PTCL-NOS is TRBV12+.

[0207] Actual dosage levels of the active ingredients (i.e., the ADCs) described herein can be varied so as to obtain an amount of the active ingredient which is effective to achieve the desired therapeutic response for a particular patient, composition, and mode of administration, without being toxic to the patient. The selected dosage level will depend upon a variety of pharmacokinetic factors including the activity of the particular compositions described herein, the route of administration, the time of administration, the rate of excretion, the duration of the treatment, other drugs, compounds and / or materials used in combination with the particular compositions employed, the age, sex, weight, condition, general health and prior medical history of the patient being treated, and like factors well known in the medical arts. In some embodiments, the ADCs described herein can be administered at a dosage that provides a therapeutic benefit without causing high immune related adverse effect or hematoxicity (anemia and / or thrombocytopenia) .

[0208] The ADCs described herein can be administered as a sustained release formulation, in which case less frequent administration is required. Dosage and frequency vary depending on the half-life of the ADCs in the patient. In therapeutic applications, a relatively high dosage at relatively short intervals is sometimes required until progression of the disease is reduced or terminated, and until the patient shows partial or complete amelioration of symptoms of disease.

[0209] The ADCs or pharmaceutical compositions provided herein can be administered to a subject by any methods known in the art, including, but not limited to, pleural administration, intravenous administration, subcutaneous administration, intranodal administration, intratumoral administration, intramuscular administration, intradermal administration, intrathecal administration, intrapleural administration, intraperitoneal administration, intracranial administration, spinal or other parenteral routes of administration, for example by injection or infusion, or direct administration to the thymus. The phrase “parenteral administration” as used herein means modes of administration other than enteral and topical administration, usually by injection, and includes, without limitation, intravenous, intramuscular, intraarterial, intrathecal, intracapsular, intraorbital, intracardiac, intradermal, intraperitoneal, transtracheal, subcutaneous, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subarachnoid, intraspinal, epidural and intrastemal injection and infusion. In some embodiments, subcutaneous administration is adopted. In some embodiments, intravenous administration is adopted. In some embodiments, oral administration is adopted. In some embodiments, the ADCs provided herein can be administered to a subject by intratumoral injection, peritumoral injection, juxtatumoral injection, intralesional injection and / or injection into a tumor draining lymph node, or essentially any tumor-targeted injection where the antitumor agent is expected to leak into primary lymph nodes adjacent to targeted solid tumor. In some embodiments, the ADCs provided herein can be delivered regionally to a tumor using well-known methods, including but not limited to, hepatic or aortic pump; limb, lung or liver perfusion; in the portal vein; through a venous shunt; in a cavity or in a vein that is nearby a tumor, and the like. In another embodiment, the ADCs provided herein can be administered systemically. In a preferred embodiment, the ADCs are administered regionally at the site of a tumor. The ADCs can also be administered intratumorally, for example, by direct injection of the cells at the site of a tumor and / or into the tumor vasculature. For example, in the case of malignant pleural disease, mesothelioma or lung cancer, administration is preferably by intrapleural administration (see Adusumilli et al., Science Translational Medicine 6 (261) : 261ra151 (2014) ) . One skilled in the art can select a suitable mode of administration based on the type of cancer and / or location of a tumor to be treated. The ADCs can be introduced by injection or catheter. In one embodiment, ADCs are pleurally administered to the subject in need, for example, using an intrapleural catheter.

[0210] In some embodiments, an ADC is administered to patients having a cancer that exhibited an inadequate response to, or progressed on, a prior treatment, or patients having a cancer that is refractory or resistant, either intrinsically refractory or resistant, or a wherein the resistance or refractory state is acquired. For example, subjects who are not responsive or not sufficiently responsive to a first therapy or who see disease progression following treatment, can be treated by administration of an ADC (e.g., HX129) , alone or in combination with another therapy.

[0211] An ADC can be administered with a standard of care treatment. An ADC can be administered as a maintenance therapy, e.g., a therapy that is intended to prevent the occurrence or recurrence of tumors. An ADC can be administered with another treatment, e.g., radiation, surgery, or chemotherapy. For example, an ADC adjunctive therapy can be administered when there is a risk that micrometastases can be present and / or in order to reduce the risk of a relapse.

[0212] Combination therapy using agents with different mechanisms of action can result in additive or synergetic effects. Combination therapy can allow for a lower dose of each agent than is used in monotherapy, thereby reducing toxic side effects and / or increasing the therapeutic index of the agent disclosed herein. Combination therapy can decrease the likelihood that resistant cancer cells will develop. In some embodiments, the additional therapy results in an increase in the therapeutic index of the ADCs or pharmaceutical compositions described herein. In some embodiments, the additional therapy results in a decrease in the toxicity and / or side effects of the ADCs or pharmaceutical compositions described herein. In some embodiments, the ADCs or pharmaceutical compositions described herein can be administered in combination with an additional therapy. In some embodiments, the additional therapy can be surgical resection, radiotherapy, or chemotherapy.

[0213] The additional therapy can be administered prior to, concurrently with, or subsequent to administration of the ADCs, or pharmaceutical compositions described herein. Combined administration can include co-administration, either in a single pharmaceutical formulation or using separate formulations, or consecutive administration in either order but generally within a time period such that all active agents can exert their biological activities simultaneously. A person skilled in the art can readily determine appropriate regimens for administering a pharmaceutical composition described herein and an additional therapy in combination, including the timing and dosing of an additional agent to be used in a combination therapy, based on the needs of the subject being treated.

[0214] In cancer treatment, eliminating cancer or tumor cells in a subject can occur, but any clinical improvement constitutes a benefit. An anti-tumor effect can be manifested by a decrease in tumor volume, a decrease in the number of tumor cells, a decrease in the number of metastases, an increase in life expectancy, or amelioration of various physiological symptoms associated with the cancerous condition. An anti-tumor effect can also be manifested by the ability of the ADCs, or pharmaceutical compositions provided herein in prevention of the occurrence of tumor in the first place. In some embodiments, an “anti-tumor effect” can be manifested by the reduction in cancer-induced immunosuppression. Clinical improvement comprises decreased risk or rate of progression or reduction in pathological consequences of the cancer or tumor. It is also understood that a method of treating cancer can include any effect that ameliorates a sign or symptom associated with cancer. Such signs or symptoms include, but are not limited to, reducing tumor burden, including inhibiting growth of a tumor, slowing the growth rate of a tumor, reducing the size of a tumor, reducing the number of tumors, eliminating a tumor, all of which can be measured using routine tumor imaging techniques well known in the art. Other signs or symptoms associated with cancer include, but are not limited to, fatigue, pain, weight loss, and other signs or symptoms associated with various cancers.

[0215] In some embodiments, the methods or uses provided herein can reduce tumor burden. Thus, administration of the ADCs, or pharmaceutical compositions disclosed herein can reduce the number of tumor cells, reduce tumor size, and / or eradicate the tumor in the subject. Methods for monitoring patient response to administration of a pharmaceutical composition disclosed herein are known in the art and can be employed in accordance with methods disclosed herein.

[0216] In some embodiments, treatments of subjects having cancer with an ADC described herein can lead to prolonged survival, e.g., long-term durable response relative to the current standard of care; long term survival of at least 3 months, 6 months, 9 months, 1, 2, 3, 4, 5, 10 or more years, or recurrence-free survival of at least 3 months, 6 months, 9 months, 1, 2, 3, 4, 5, or 10 or more years. In some embodiments, treatment of a subject having cancer with an ADC described herein prevents recurrence of cancer or delays recurrence of cancer by, e.g., 3 months, 6 months, 9 months, 1, 2, 3, 4, 5, or 10 or more years. Treatment of a subject having cancer with an ADC described herein can result in, e.g., stable disease, partial response, increased overall survival, increased disease-free survival, or enhanced progression free survival.

[0217] In the methods disclosed herein, a therapeutically effective amount of the ADCs or pharmaceutical compositions disclosed herein is administered to a subject in need of cancer treatment. The subject can be a mammal. In some embodiments, the subject is a human. In some embodiments, these individuals have no clinically measurable tumor. However, they are suspected of being at risk for progression of the disease, either near the original tumor site, or by metastases. This group can be further subdivided into high-risk and low-risk individuals. The subdivision is made on the basis of features observed before or after the initial treatment. These features are known in the clinical arts and are suitably defined for different types of cancers. Features typical of high-risk subgroups are those in which the tumor has invaded neighboring tissues, or who show involvement of lymph nodes.

[0218] The ADCs, or pharmaceutical compositions provided herein can be administered with medical devices known in the art. For example, in some embodiments, a needleless hypodermic injection device can be used, such as the devices disclosed in U.S. Patent Nos. 5,399,163; 5,383,851; 5,312,335; 5,064,413; 4,941,880; 4,790,824; or 4,596,556. Examples of well-known implants and modules for use described herein include: U.S. Patent No. 4,487,603, which discloses an implantable micro-infusion pump for dispensing medication at a controlled rate; U.S. Patent No. 4,486,194, which discloses a therapeutic device for administering medicaments through the skin; U.S. Patent No. 4,447,233, which discloses a medication infusion pump for delivering medication at a precise infusion rate; U.S. Patent No. 4,447,224, which discloses a variable flow implantable infusion apparatus for continuous drug delivery; U.S. Patent No. 4,439,196, which discloses an osmotic drug delivery system having multi-chamber compartments; and U.S. Patent No. 4,475,196, which discloses an osmotic drug delivery system. These patents are incorporated herein by reference. Many other such implants, delivery systems, and modules are known to those skilled in the art. 6.6 Kits and device

[0219] In some embodiments, the present disclosure provides a variety of kits for conveniently and / or effectively carrying out methods of the present disclosure. Typically, kits will comprise sufficient amounts and / or numbers of components to allow a user to perform multiple treatments of a subject (s) and / or to perform multiple experiments.

[0220] Any of the ADCs or pharmaceutical compositions of the present disclosure may be comprised in a kit. In some embodiments, kits can further include reagents and / or instructions for creating and / or synthesizing compounds and / or pharmaceutical compositions of the present disclosure. In some embodiments, kits can also include one or more buffers. In some embodiments, kits of the disclosure can include solid supports.

[0221] In some embodiments, kit components can be packaged either in aqueous media or in lyophilized form. The container means of the kits will generally include at least one vial, test tube, flask, bottle, syringe or other container means, into which a component can be placed, and suitably aliquoted. Where there is more than one kit component, (labeling reagent and label may be packaged together) , kits can also generally contain second, third or other additional containers into which additional components may be separately placed. In some embodiments, kits can also comprise a second container means for containing sterile, pharmaceutically acceptable buffers and / or other diluents. In some embodiments, various combinations of components can be comprised in one or more vials. Kits of the present disclosure can also typically include means for containing ADCs and / or pharmaceutical compositions of the present disclosure, e.g., compounds, proteins, nucleic acids, and any other reagent containers in close confinement for commercial sale. Such containers can include injection or blow-molded plastic containers into which desired vials are retained.

[0222] In some embodiments, kit components are provided in one and / or more liquid solutions. In some embodiments, liquid solutions are aqueous solutions, with sterile aqueous solutions being particularly used. In some embodiments, kit components can be provided as dried powder (s) . When reagents and / or components are provided as dry powders, such powders can be reconstituted by the addition of suitable volumes of solvent. In some embodiments, it is envisioned that solvents can also be provided in another container means.

[0223] In some embodiments, kits can include instructions for employing kit components as well the use of any other reagent not included in the kit. Instructions can include variations that may be implemented. 6.7 Exemplified Embodiments

[0224] Embodiment 1. An antibody-drug conjugate ( “ADC” ) comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof conjugated to a therapeutic moiety, wherein the antibody or antigen-binding fragment specifically binds human TRBV12.

[0225] Embodiment 2. The ADC of Embodiment 1, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises: (a) a light chain variable region (VL) comprising: VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 from a VL having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs; and / or (b) a heavy chain variable region (VH) comprising VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 from a VH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs.

[0226] Embodiment 3. The ADC of Embodiment 1 or 2, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises: (a) VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, and 3, respectively; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs; and / or (b) VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6, respectively; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs.

[0227] Embodiment 4. The ADC of any one of Embodiments 1 to 3, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 and VH CDR3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5 and 6, respectively.

[0228] Embodiment 5. The ADC of any one of Embodiments 1 to 4, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is humanized.

[0229] Embodiment 6. The ADC of any one of Embodiments 1 to 5, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises: (a) a VL having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; and / or (b) a VH having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.

[0230] Embodiment 7. The ADC of Embodiment 1, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a VL and a VH have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 13, respectively.

[0231] Embodiment 8. The ADC of any one of Embodiments 1 to 7, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is a monoclonal antibody or antigen-binding fragment.

[0232] Embodiment 9. The ADC of any one of Embodiments 1 to 8, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is an IgG1 antibody, an IgG2 antibody, an IgG3 antibody, or an IgG4 antibody.

[0233] Embodiment 10. The ADC of any one of Embodiments 1 to 8, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is selected from the group consisting of a Fab, a Fab’, a F (ab’) 2, a Fv, a scFv, a (scFv) 2, a single domain antibody (sdAb) , and a heavy chain antibody (HCAb) .

[0234] Embodiment 11. The ADC of any one of Embodiments 1 to 10, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof further comprises a light chain constant (CL) region and a heavy chain constant (CH) region.

[0235] Embodiment 12. The ADC of Embodiment 11, wherein the CL region is kappa CL (Cκ; SEQ ID NO: 18) or lambda CL (Cλ; SEQ ID NO: 19) , or a variant thereof having up to ten amino acids substitutions.

[0236] Embodiment 13. The ADC of Embodiment 11 or 12, wherein the CH region is IgG1 CH (SEQ ID NO: 22) , IgG2 CH (SEQ ID NO: 23) , IgG3 CH (SEQ ID NO: 24) , or IgG4 CH (SEQ ID NO: 25) , or a variant of any of the above having up to ten amino acids substitutions.

[0237] Embodiment 14. The ADC of Embodiment 9, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is an IgG1 antibody.

[0238] Embodiment 15. The ADC of any one of Embodiments 1 to 14, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a light chain having an amino acid sequence that is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14; and a heavy chain having an amino acid sequence that is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.

[0239] Embodiment 16. The ADC of Embodiment 1, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14; and a heavy chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.

[0240] Embodiment 17. The ADC of any one of Embodiments 1 to 16, wherein the antibody or antigen-binding fragment is conjugated to the therapeutic moiety via a linker.

[0241] Embodiment 18. The ADC of Embodiment 17, wherein the linker is

[0242] Embodiment 19. The ADC of Embodiment 17 or 18, wherein the linker is

[0243] Embodiment 20. The ADC of any one of Embodiments 1 to 19, wherein the therapeutic moiety is a cytotoxic agent.

[0244] Embodiment 21. The ADC of Embodiment 20, wherein the therapeutic moiety is monomethyl auristatin or topoisomerase I inhibitor.

[0245] Embodiment 22. The ADC of Embodiment 21, wherein the therapeutic moiety is monomethyl auristatin E (MMAE) , monomethyl auristatin F (MMAF) , or Dxd.

[0246] Embodiment 23. The ADC of Embodiment 22, wherein the therapeutic moiety is MMAE.

[0247] Embodiment 24. The ADC of Embodiment 22, wherein the therapeutic moiety is MMAF.

[0248] Embodiment 25. The ADC of Embodiment 22, wherein the therapeutic moiety is Dxd.

[0249] Embodiment 26. The ADC of Embodiment 23, having the structure: wherein Ab is the  antibody or antigen-binding fragment, and p denotes a number ranging from 1 to 16.

[0250] Embodiment 27. The ADC of Embodiment 26, wherein p is a number ranging from 2 to 8.

[0251] Embodiment 28. The ADC of Embodiment 27, wherein p is 4.

[0252] Embodiment 29. The ADC of Embodiment 26, wherein the average value of p in a population of the ADC is about 4.

[0253] Embodiment 30. The ADC of any one of Embodiments 26 to 29, having the structure:

[0254] Embodiment 31. An ADC comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof conjugated to a therapeutic moiety; wherein the antibody or antigen-binding fragment specifically binds to human TRBV12, and has a VL and a VH having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 13, respectively; and wherein the therapeutic moiety is MMAE or MMAF.

[0255] Embodiment 32. A method of producing the ADC of any one of Embodiments 1 to 31 comprising conjugating the antibody or antigen-binding fragment to the therapeutic moiety.

[0256] Embodiment 33. A pharmaceutical composition comprising the ADC of any one of Embodiments 1 to 31, and a pharmaceutically acceptable carrier.

[0257] Embodiment 34. A method of treating a cancer in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the ADC of any one of Embodiments 1 to 31.

[0258] Embodiment 35. The method of Embodiment 34, wherein the subject is a human.

[0259] Embodiment 36. Use of the ADC of any one of Embodiments 1 to 31 in treating a cancer.

[0260] Embodiment 37. Use of the ADC of any one of Embodiments 1 to 31 for the preparation of a medicament for treating a cancer.

[0261] Embodiment 38. The method or use of any one of Embodiments 34 to 37, wherein the cancer is T cell leukemia or lymphoma.

[0262] Embodiment 39. The method or use of Embodiment 38, wherein the cancer is peripheral T-cell lymphoma, not otherwise specified (PTCL-NOS) , angioimmunoblastic T cell lymphomas (AITL) , T cell prolymphocytic leukemia (TPLL) , adult T cell leukemia / lymphoma (ATLL) , anaplastic large cell lymphoma (ALCL) , cutaneous T cell lymphomas (CTCL) , extranodal NK / T-cell lymphoma, nasal type (ENKTL) , subcutaneous panniculitis-like T-cell lymphoma (SPTCL) , cutaneous gamma-delta T-cell lymphoma (CGD-TCL) , systemic Epstein–Barr virus-positive T-cell lymphoproliferative disorders of childhood (EBVTCLD) , enteropathy-associated T-cell lymphoma (EATL) , monomorphic epitheliotropic intestinal T cell lymphoma (MEITL) , hepatosplenic T-cell lymphoma (HSTCL) , relapsed T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) or T cell large granular lymphocyte leukemia (T-LGL) .

[0263] Embodiment 40. The method or use of any one of Embodiments 34 to 39, wherein the cancer is relapsed.

[0264] Embodiment 41. The method or use of any one of Embodiments 34 to 40, wherein the cancer is TRBV12 positive.

[0265] Embodiment 42. The method or use of any one of Embodiments 34 to 41, wherein the ADC is administered in combination with an additional therapy.

[0266] Embodiment 43. A kit comprising the ADC of any one of Embodiments 1 to 31. 6.8 Experimental

[0267] The examples provided below are for purposes of illustration only, which are not intended to be limiting unless otherwise specified. Thus, the invention should in no way be construed as being limited to the following examples, but rather, should be construed to encompass any and all variations which become evident as a result of the teaching provided herein. 6.8.1 Example 1: Preparation of HX029 and ADC HX129

[0268] Preparation of HX029: A transient expression plasmid was constructed with plasmid pCI-neo-TM29 L for the light chain and plasmid pCI-neo-TM29 H for the heavy chain. The plasmid dosage was 4 μg / mL, with a light-to-heavy chain plasmid ratio of 1: 1 and a DNA-to-PEI ratio of 1:2.5. The buffer system used was EmCD CHO-S203 supplemented with 6 mM GlutaMAX, at a ratio of 8%each. The plasmid and PEI buffer solutions were allowed to stand for 5 minutes before being mixed and allowed to stand for another 5 minutes to initiate the transient transfection, which had a total volume of 200 mL. Between 16 to 22 hours post-transfection, the cells were maintained in a shaker at 32 ℃ and harvested over a period of 14 days. The harvested protein underwent affinity purification and cation exchange purification. Subsequently, the resulting antibody sample was transferred into a stable buffer and stored at -80 ℃ after ultrafiltration.

[0269] ADC HX129 Preparation: 15.8 mg of HX029 antibody was transferred into a reduction buffer solution (25 mM sodium borate, 25 mM NaCl, 1 mM DTPA, pH 8.0) using a 15 mL 30 kDa ultrafiltration tube, performing this step four times. The final volume was approximately 5 mL, and the antibody concentration was measured. Based on this concentration, TCEP was added to the antibody at a 3: 1 molar ratio and incubated at 25 ℃ for 2 hours. The resulting sample was ultrafiltered using a 50 mL 30 kDa ultrafiltration tube, also performed four times, and replaced into a conjugate buffer (50 mM Tris, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, pH 7.2) . The antibody concentration and free sulfhydryl number of the sample were measured. Based on the antibody concentration, MC-VC-MMAE (CAS: 646502-53-6; structure below) was added to the antibody at an 8: 1 molar ratio. The resulting samples were mixed and reacted at 25 ℃ for 2 hours with shaking. The coupled ADC (HX129) was then immediately transferred into a temporary buffer (25 mM phosphate, 150 mM NaCl, pH 7.0) . The activity and purity of each target in the sample were subsequently measured. 6.8.2 Example 2: Binding of exemplary anti-TRBV12 antibody to TRBV12 expressing  cells

[0270] Materials and Methods:

[0271] Jurkat cells were incubated with titrated doses of HX029 in serial dilutions (approximately 200nM -0.012nM) at 4 ℃ for 1 hour. Bound antibodies were detected with Alexa 647(AF647) -conjugated AffiniPure Goat Anti-Human IgG (H+L) secondary antibody (Jackson Immuno Research-109-605-003) , and analyzed by flow cytometry. EC50 values were calculated from best-fit binding curves using GraphPad Prism software.

[0272] Results:

[0273] As shown in FIG. 1, HX029 efficiently and specifically bound to TRBV12 expressing Jurkat cells with an EC50 of about 3.0 nM. HX029 did not bind to other tested cell lines of different TRBV subtypes (data not shown) . 6.8.3 Example 3: Internalization of exemplary anti-TRBV12 antibody and ADC by  TRBV12 expressing cells

[0274] Materials and Methods:

[0275] ZenonTM pHrodoTM iFL IgG Labeling Reagent was incubated with 4nM mAb for 5 minutes at room temperature to allow the labeling complexes to form. TRBV12 expressing Jurkat cells were incubated with the labeling complex for 24 hours at 37℃ in a 5%CO2, humidified incubator. Internalization was then analyzed by flow cytometry.

[0276] Results:

[0277] As shown in FIG. 2, HX029 and HX129 were both efficiently internalized by the TRBV12+Jurkat cells at an antibody concentration of 4nM. 6.8.4 Example 4: ADCC activity of exemplary anti-TRBV12 antibody

[0278] Materials and Methods:

[0279] The NK cells were isolated from healthy donors using Ficoll density gradient separation (GE) and served as the effector cells. The TRBV12 expressing Jurkat cell line was used as the target cells, which were labeled with carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) dye for 20 minutes. Then, the Jurkat cells were incubated with NK cells at an effector to target (E: T) ratio of 5: 1 and titrated doses of HX029 in a 96-well culture plate for 4 hours at 37 ℃. After incubation, the cells were harvested and stained with Fixable Viability Stain 780 anti-CD56-BV421, then analyzed by FACS using a CytoFLEX LX. Cytotoxicity percentage was calculated as: %Cytotoxicity = [Sample (FITC+APC-A750+) -Blank (FITC+APC-A750+) ] .

[0280] Results:

[0281] As shown in FIG. 3, HX029 induced ADCC effect against TRBV12+ Jurkat cells in vitro with an IC50 of 18.5nM. 6.8.5 Example 5: Effective killing of cancer cells by exemplary anti-TRBV12 antibody  and ADC

[0282] Materials and Methods:

[0283] TRBV12 expressing Jurkat cells were seeded at 10,000 cells per well and incubated with serial dilutions of HX029, HX129, and the isotype control ADC for 3 days at 37℃ in a 5%CO2, humidified incubator. Cell viability was assessed using the CellCounting-Lite2.0 reagent (Vazyme Biotech Co., Ltd) following the manufacturer’s instructions. IC50 values were determined using GraphPad software (GraphPad) . The means and standard errors of two independent EC50 values were determined.

[0284] Results

[0285] As shown in FIG. 5, HX129 effectively killed TRBV12+ Jurkat cells in vitro with an IC50 of about 0.1 nM. HX129 showed little killing toward other T cell lines of different TRBV subtypes (data not shown) . HX029 also demonstrated efficient killing of TRBV12+ Jurkat cells in vitro with an IC50 of about 0.13 nM. 6.8.6 Example 6: Anti-tumor activities of exemplary anti-TRBV12 antibody and ADC  in xenograft model

[0286] Materials and Methods:

[0287] 6 to 7-week-old female NOD SCID mice were γ-irradiated at 200 rads. The following day, Jurkat Clone E6-1 tumor cells were inoculated into the right front flank region of the mice to induce tumor development. Once the mean tumor size reached approximately 150 mm3, 30 tumor-bearing mice were enrolled and randomized into 5 groups, 6 mice per group based on their tumor size and body weight. After randomization, each group received its designated treatment as follows: vehicle, i.p., Q2W; MAL-VC-MMAE, 0.18 mg / kg, i.p., Q2W; HX029, 5 mg / kg, i.p., QW; HX129, 10 mg / kg, i.p., QW; HX129, 5 mg / kg, i.p., Q2W or QW; HX129, 2 mg / kg, i.p., QW; HX129, 1 mg / kg, i.p., Q2W; HX129, 0.2 mg / kg, i.p., Q2W. Tumor volume and body weight were measured twice weekly. The efficacy of HX029 and HX129 in inhibiting tumor growth was assessed as an index of its anti-tumor activity.

[0288] Results

[0289] As shown in FIG. 5, HX129 exhibited strong and dose dependent anti-TRBV12+ lymphoma activity in vivo. As shown, wherein 4 of 6 achieved complete remission (CR) with the regimen of 5 mg / kg QW and 5 of 6 achieved CR with the regimen of 10 mg / kg QW. HX029 also showed robust activity in inhibiting tumor growth. ***

[0290] All publications and patents cited in this specification are herein incorporated by reference as if each individual publication or patent were specifically and individually indicated to be incorporated by reference and are incorporated herein by reference to disclose and describe the methods and / or materials in connection with which the publications are cited. The citation of any publication is for its disclosure prior to the filing date and should not be construed as an admission that the present invention is not entitled to antedate such publication by virtue of prior invention. Further, the dates of publication provided may be different from the actual publication dates which may need to be independently confirmed.

Claims

1.An antibody-drug conjugate ( “ADC” ) comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof conjugated to a therapeutic moiety, wherein the antibody or antigen-binding fragment specifically binds human TRBV12.2.The ADC of claim 1, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises:(a) a light chain variable region (VL) comprising: VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 from a VL having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs; and / or(b) a heavy chain variable region (VH) comprising VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 from a VH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs.3.The ADC of claim 1 or 2, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises:(a) VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, and 3, respectively; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VL CDRs; and / or(b) VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6, respectively; or a variant thereof having up to about 5 amino acid substitutions, additions, and / or deletions in the VH CDRs.4.The ADC of any one of claims 1 to 3, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 and VH CDR3 having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5 and 6, respectively.5.The ADC of any one of claims 1 to 4, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is humanized.6.The ADC of any one of claims 1 to 5, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises:(a) a VL having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; and / or(b) a VH having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.7.The ADC of claim 1, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a VL and a VH have the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 13, respectively.8.The ADC of any one of claims 1 to 7, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is a monoclonal antibody or antigen-binding fragment.9.The ADC of any one of claims 1 to 8, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is an IgG1 antibody, an IgG2 antibody, an IgG3 antibody, or an IgG4 antibody.10.The ADC of any one of claims 1 to 8, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is selected from the group consisting of a Fab, a Fab’, a F (ab’) 2, a Fv, a scFv, a (scFv) 2, a single domain antibody (sdAb) , and a heavy chain antibody (HCAb) .11.The ADC of any one of claims 1 to 10, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof further comprises a light chain constant (CL) region and a heavy chain constant (CH) region.12.The ADC of claim 11, wherein the CL region is kappa CL (Cκ; SEQ ID NO: 18) or lambda CL (Cλ; SEQ ID NO: 19) , or a variant thereof having up to ten amino acids substitutions.13.The ADC of claim 11 or 12, wherein the CH region is IgG1 CH (SEQ ID NO: 22) , IgG2 CH (SEQ ID NO: 23) , IgG3 CH (SEQ ID NO: 24) , or IgG4 CH (SEQ ID NO: 25) , or a variant of any of the above having up to ten amino acids substitutions.14.The ADC of claim 9, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is an IgG1 antibody.15.The ADC of any one of claims 1 to 14, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a light chain having an amino acid sequence that is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14; and a heavy chain having an amino acid sequence that is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.16.The ADC of claim 1, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14; and a heavy chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.17.The ADC of any one of claims 1 to 16, wherein the antibody or antigen-binding fragment is conjugated to the therapeutic moiety via a linker.18.The ADC of claim 17, wherein the linker is 19.The ADC of claim 17 or 18, wherein the linker is 20.The ADC of any one of claims 1 to 19, wherein the therapeutic moiety is a cytotoxic agent.21.The ADC of claim 20, wherein the therapeutic moiety is monomethyl auristatin or topoisomerase I inhibitor.22.The ADC of claim 21, wherein the therapeutic moiety is monomethyl auristatin E (MMAE) , monomethyl auristatin F (MMAF) , or Dxd.23.The ADC of claim 22, wherein the therapeutic moiety is MMAE.24.The ADC of claim 22, wherein the therapeutic moiety is MMAF.25.The ADC of claim 22, wherein the therapeutic moiety is Dxd.26.The ADC of claim 23, having the structure:wherein Ab is the antibody or antigen-binding fragment, and p denotes a number ranging from 1 to 16.27.The ADC of claim 26, wherein p is a number ranging from 2 to 8.28.The ADC of claim 27, wherein p is 4.29.The ADC of claim 26, wherein the average value of p in a population of the ADC is about 4.30.The ADC of any one of claims 26 to 29, having the structure: 31.An ADC comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof conjugated to a therapeutic moiety; wherein the antibody or antigen-binding fragment specifically binds to human TRBV12, and has a VL and a VH having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 13, respectively; and wherein the therapeutic moiety is MMAE or MMAF.32.A method of producing the ADC of any one of claims 1 to 31 comprising conjugating the antibody or antigen-binding fragment to the therapeutic moiety.33.A pharmaceutical composition comprising the ADC of any one of claims 1 to 31, and a pharmaceutically acceptable carrier.34.A method of treating a cancer in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the ADC of any one of claims 1 to 31.35.The method of claim 34, wherein the subject is a human.36.Use of the ADC of any one of claims 1 to 31 in treating a cancer.37.Use of the ADC of any one of claims 1 to 31 for the preparation of a medicament for treating a cancer.38.The method or use of any one of claims 34 to 37, wherein the cancer is T cell leukemia or lymphoma.39.The method or use of claim 38, wherein the cancer is peripheral T-cell lymphoma, not otherwise specified (PTCL-NOS) , angioimmunoblastic T cell lymphomas (AITL) , T cell prolymphocytic leukemia (TPLL) , adult T cell leukemia / lymphoma (ATLL) , anaplastic large cell lymphoma (ALCL) , cutaneous T cell lymphomas (CTCL) , extranodal NK / T-cell lymphoma, nasal type (ENKTL) , subcutaneous panniculitis-like T-cell lymphoma (SPTCL) , cutaneous gamma-delta T-cell lymphoma (CGD-TCL) , systemic Epstein–Barr virus-positive T-cell lymphoproliferative disorders of childhood (EBVTCLD) , enteropathy-associated T-cell lymphoma (EATL) , monomorphic epitheliotropic intestinal T cell lymphoma (MEITL) , hepatosplenic T-cell lymphoma (HSTCL) , relapsed T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) or T cell large granular lymphocyte leukemia (T-LGL) .40.The method or use of any one of claims 34 to 39, wherein the cancer is relapsed.41.The method or use of any one of claims 34 to 40, wherein the cancer is TRBV12 positive.42.The method or use of any one of claims 34 to 41, wherein the ADC is administered in combination with an additional therapy.43.A kit comprising the ADC of any one of claims 1 to 31.

Images