Ligand-cytotoxicity drug conjugates and pharmaceutical uses thereof

Abstract

Provided is an antitumor drug having antitumor effect and safety. Provided is an anti-cadherin 17 antibody comprising a heavy chain variable region and a light chain variable region, a drug conjugate thereof, and a composition containing the anti-cadherin 17 antibody or the drug conjugate thereof, and an application thereof as a drug.

Description

LIGAND-CYTOTOXICITY DRUG CONJUGATES AND PHARMACEUTICAL USES THEREOFFIELD OF THE INVENTION

[0001] The present invention relates to a novel cadherin 17 antibody or functional fragments thereof, comprising engineered heavy chains and light chains. The present invention further relates to conjugates of the improved cadherin 17 antibodies with small molecule drugs. The present invention further relates to the use of the antibody and its conjugates in the manufacture of drugs for treating cancers.BACKGROUND ART

[0002] Cadherin 17 (CDH17) is a cell surface marker belonging to cadherin superfamily with a unique biological structure. It has 7 extracellular cadherin repeats compared to the classic 5 repeats cadherin proteins and has a very short intracellular region of 20 amino acid residues lacking the conserved intracellular domain. (Berndorff et al. J Cell Biol. 1994, 125 (6) : 1353-1369) . Although the biological function of CDH17 has not been fully explored yet, it has been reported that CDH17 can regulate water resorption in a Ca2+ -dependent manner. (Ahl et al. Biol. Med. Model. 2011, 8 (18) ) CDH17 also involves in maintaining tissue integrity by interacting with integrin within the extracellular tight junctions. It mainly expresses in the human gastrointestinal (GI) tract and pancreas.

[0003] CDH17 has been reported to be highly expressed in tumors including colorectal, gastric, and pancreatic tumors in both DNA and protein levels (Takamura et al. Med Mol Morphol. 2013, 46: 1-7) . It plays an important role in regulating cancer metastasis and tumor growth. There are several signaling pathways involved in the CDH17 manipulated tumor activities. One of the most important mechanisms related to CDH17-integrin interaction. It has been proved that the RDG motif of CDH17 binds to α2β1 integrin which induces the β1 integrin activation leading to increase cancer cell proliferation and adhesion (Bartomome et al. J Biol Chem. 2014 , 289 (50) : 34801-34914) . It has also been shown that CDH17 regulates the cancer invasion through Wnt / β -catenin signaling (Qiu et al. PloS one 2013, 8 (3) ) and NFκB signaling pathway (Wang et al. Cancer biology &therapy. 2013, 14 (3) : 262-270) in GI cancers. The restricted expression in normal tissue and high expression in various cancers makes CDH17 a good cancer target.

[0004] Several CDH17-targeted antibody-based drugs have been studied in the field. Two bispecific antibody drugs BI905711 (Boehringer Ingelheim) and ARB202 (Arbele) are in phase I trials, anti-CDH17 CAR (Chimeric therapeutics) in phase 1 / 2, and anti-CDH17 antibody-drug conjugate (ADC) TORL-3-600 (TORL Biotherapeutics) in phase I. However, TORL-3-600 used MMAE as the ADC payload which has been reported as a substrate for ATP-binding cassette (ABC) transporter. This transporter can pump out the MMAE payload from the cancer cells, reducing the efficacy of ADC drug and resulting in developed drug resistance in patients.

[0005] Antibody-drug conjugates (ADC) represent a new class of therapeutics comprising an antibody conjugated to a cytotoxic drug via a chemical linker. The therapeutic concept of ADCs is to combine the binding capabilities of an antibody with a drug, where the antibody is used to deliver the drug to a tumor cell by means of binding to a target surface antigen.

[0006] Eribulin is a new choice of ADC payload, which has the potential to overcome ADC resistance with different MOA. It is a fully synthetic macrocyclic ketone analog that derived from marine natural product halichondrin B, which belongs to microtubule inhibitors. Eribulin itself has been approved as an anti-cancer drug for breast cancer and liposarcoma. It’s also been conjugated with anti-FRα (WO2017151979A1) and anti-HER2 (Wang et al. Antibody Therapeutics 7.3 (2024) : 221-232) antibodies and has shown good efficacies in preclinical studies and promising clinical results.

[0007] Accordingly, there remains a need in the art for anti-CDH17 antibodies and ADCs that can be used for therapeutic purposes in the treatment of CDH17 expression cancers. We design to combine anti-CDH17 and Eribulin to explore its anti-cancer potential as ADC therapy in the treatment of CDH17 expression cancers. The conjugates have better biological activity, stability, homogeneity, and reduced toxic side effects.SUMMARY OF THE INVENTION

[0008] The invention provides anti-CDH17 antibodies and antibody-drug conjugates and methods of using the same. The anti-cancer efficacy of antibody-drug conjugates is thought to rely on their uptake by cancer cells expressing the surface antigen, so the insufficient internalization of CDH17-targeting monoclonal antibody is an urgent problem to be solved. In general ADC development needs to take into account all these key components, including the selection of target antigen, antibody, toxin drug, as well as linker.

[0009] The technical problem to be solved by the present invention is to develop the advanced anti-CDH17 antibody-drug conjugate which show very strong antitumor effects in cancers. The antitumor effects may be due to higher DAR and robust endocytosis.

[0010] Specifically, the present invention encompasses the following aspects:

[0011] The present disclosure relates to an immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, the immunoconjugate is as shown in general formula (I)

[0012] wherein:

[0013] D is a cytotoxic drug or cytostatic;

[0014] L is a linking units;

[0015] y is a number of 1 to 20, preferably 2 to10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 4, 6, 8;

[0016] Ab is the antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to CDH17.

[0017] In some embodiments, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is a monoclonal antibody or antigen-binding fragment thereof, a polyclonal antibody or antigen-binding fragment thereof, a multi-specific antibody or antigen-binding fragment thereof, a murine antibody or antigen-binding fragment thereof, a chimeric antibody or antigen-binding fragment thereof, a humanized antibody or antigen-binding fragment thereof, a recombinant antibody or antigen-binding fragment thereof, a human antibody or antigen-binding fragment thereof; preferably, the multi-specific antibody is a bispecific antibody, a tri-specific antibody or a tetra-specific antibody.

[0018] In some embodiments, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) ,

[0019] the VH comprises: a) an HCDR1 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 07, 13, or 19, b) an HCDR2 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 08, 14, or 20, c) an HCDR3 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 09, 15, or 21; and

[0020] the VL comprises: d) an LCDR1 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 10, 16, or 22, e) an LCDR2 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 11, 17, or 23, f) an LCDR3 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 12, 18, or 24.

[0021] In some embodiments, wherein:

[0022] a) the VH comprises the HCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 07, the HCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 08, and the HCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 09, and the VL comprises the LCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, the LCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, and the LCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; or

[0023] b) the VH comprises the HCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, the HCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, and the HCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, and the VL comprises the LCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, the LCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, and the LCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18; or

[0024] c) the VH comprises the HCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, the HCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20, and the HCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21, and the VL comprises the LCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, the LCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23, and the LCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24.

[0025] In some embodiments, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises: a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence selected from: SEQ ID NOs: 01, 03, 05, or sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; and / or a light chain variable region comprising an amino acid sequence selected from: SEQ ID NOs: 02, 04, 06, or sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith.

[0026] In some embodiments, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprising:

[0027] the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 01, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 02, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith;

[0028] or

[0029] the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 03, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 04, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith;

[0030] or

[0031] the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 05, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 06, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith;

[0032] In some embodiments, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprising:

[0033] the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 01; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 02;

[0034] or

[0035] the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 03; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 04;

[0036] or

[0037] the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 05; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 06.

[0038] In some embodiments, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprising:

[0039] the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 01; and the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 02;

[0040] or

[0041] the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 03; and the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 04;

[0042] or

[0043] the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 05; and the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 06.

[0044] In some embodiments, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof further comprising human antibody constant regions;

[0045] preferably, the heavy chain constant region of the human antibody constant regions is selected from constant regions of human IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 and conventional variants thereof, and the light chain constant region of the human antibody constant regions is selected from κ and λ chain constant regions of human antibody and conventional variants thereof;

[0046] more preferably, the full-length antibody comprises a human antibody heavy chain constant region of SEQ ID NO: 31 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith, a human light chain constant region of SEQ ID NO: 32 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith;

[0047] further preferably, the full-length antibody comprises a human antibody heavy chain constant region of SEQ ID NO: 31 and a human light chain constant region of SEQ ID NO: 32.

[0048] In some embodiments, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprising:

[0049] a heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 25 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith, and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 28 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; or

[0050] a heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 26 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith, and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 29 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; or

[0051] a heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 27 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith, and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith.

[0052] In some embodiments, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprising:

[0053] a heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 25 and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 28; or

[0054] a heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 26 and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 29; or

[0055] a heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 27 and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30.

[0056] In some embodiments, wherein the antigen-binding fragment is selected from the group consisting of Fab, Fab', F (ab') 2, variable fragment (Fv) , single chain variable fragment (scFv) , dimerized domain V (diabody) , disulfide stabilized Fv (dsFv) and CDR-containing peptides.

[0057] In some embodiments, wherein the cytotoxic or cytostatic drug is seleted from the group consisting of auristatin analogues, camptothecin derivatives, maytansine analogues, eribulin derivatives;

[0058] more preferably the cytotoxic or cytostatic drug is selected from the group consisting of MMAE, MMAF, Exatecan, MMAD, DM1, DM4, eribulin, pyrrolobenzodiazepine (PBD) , SN-38, irinotecan, topotecan, belotecan, rubitecan, doxorubicin, PNU-159682, DGN-549-C, duocarmycin, daunorubicin, mitoxantrone, podophyllotoxin, etoposide, α-amanitin, or a pharmaceutically acceptable salt, ester or analog thereof.

[0059] In some embodiments, wherein the cytotoxic drug is as shown in general formula (A) :

[0060] R1 is selected from the group consisting of H, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, aryl and heteroaryl, and the alkyl, cycloalkyl, aryl and heteroaryl are each independently optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of alkyl, alkoxy, halogen, deuterium, amino, cyano, nitro, hydroxy, hydroxyalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl and heteroaryl, R1 is preferably hydrogen;

[0061] R2 is selected from the group consisting of H, alkyl, cycloalkyl, aryl and heteroaryl, and the alkyl, cycloalkyl, aryl and heteroaryl are each independently optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of alkyl, alkoxy, halogen, deuterium, amino, cyano, nitro, hydroxy, hydroxyalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl and heteroaryl, R2 is preferably methyl.

[0062] In some embodiments, wherein L is a chemical moiety represented by formula below:

[0063] -LA -LB -LC-;

[0064] LA is a stretcher unit;

[0065] LC is a spacer unit;

[0066] LB is composed of one or more of the following groups: C1-6 alkylene, -N (R') -, carbonyl, -O-, Val, Cit, Phe, Lys, D-Val, Leu, Gly, Ala, Asn, Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Lys (Ac) , Phe-Lys, Phe-Lys (Ac) , D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn, Ala-Ala-Ala, Val-Lys-Ala, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Phe-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly-Gly, preferably Val-Cit, Val-Lys, Gly-Gly-Phe-Gly.

[0067] In some embodiments, wherein

[0068] -LA-is selected from a chemical moiety represented by the following formula:

[0069] wherein, R is selected from: - (CH2) r-, - (CHRm) r-, -O- (CH2) r-, - (CH2CH2O) r-, - (CH2CH2O) r- (CH2) t-, - (CH2) rC (O) NRm (CH2) s-, - (CH2) rC (O) NRm (CH2CH2O) s-, - (CH2CH2O) rC (O) NRm (CH2) s-, - (CH2CH2O) rC (O) NRm (CH2CH2O) s-, - (CH2) rC (O) NRm (CH2CH2O) s- (CH2) t-, - (CH2CH2O) rC (O) NRm (CH2CH2O) s- (CH2) t-, arylene, - (CH2) r-arylene-, -arylene- (CH2) r-, C3-8 cycloalkyl, - (CH2) r- (C3-8 cycloalkyl) -, - (C3-8 cycloalkyl) - (CH2) r-, - (CH2) r- (C3-8 cycloalkyl) -C (O) NRm (CH2CH2O) s-, - (CH2) r- (C3-8 cycloalkyl) -C (O) NRm (CH2CH2O) s- (CH2) t-, C3-8 heterocycloalkyl, - (CH2) r- (C3-8 heterocycloalkyl) -, - (C3-8 heterocycloalkyl) - (CH2) r-, preferably - (CH2) r-, - (CH2CH2O) r- (CH2) t-;

[0070] wherein:

[0071] each Rm is independently selected from H, C1-6 alkyl, C3-8 carbocyclyl, phenyl or benzyl;

[0072] each r and s is independently selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10;

[0073] t is 0, 1, 2, 3 or 4.

[0074] In some embodiments, wherein -LC-is independently

[0075] wherein,

[0076] each R3 is independently selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -NO2 or halogen, m is 0, 1, 2, 3 or 4;

[0077] each R4 is independently a chemical moiety represented by V-E-, the V-E-provides a glycosidic bond cleavable by an intracellularly located glycosidase, and E is selected from the group consisting of -O-, -S-; further, V is selected from

[0078] n is 0, 1, 2, 3 or 4;

[0079] R5 and R6 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, C1-6 alkyl and C3-6 cycloalkyl, preferably hydrogen; or R5 and R6, together with carbon atoms connected thereto, form C3-6 cycloalkyl;

[0080] R7 is selected from the group consisting of COOH, CH2OH;

[0081] X1 is selected from the group consisting of -O-, -NH-.

[0082] In some embodiments, wherein:

[0083] -LC-is selected from the group consisting of:

[0084] In some embodiments, wherein:

[0085] LC is –K3-K4-;

[0086] wherein, K3 is –NR8 (CR9R10) t-, R8, R9 or R10 are each independently hydrogen, hydroxyl, amino, C1-6 alkyl, halogen, C1-6 haloalkyl, and C1-6 hydroxyalkyl, and t is 1 or 2;

[0087] K4 is selected from the group consisting of -O- (CR11R12) m-CR13R14-C (O) -, -O-CR13R14- (CR11R12) m-, -NH- (CR11R12) m-CR13R14-C (O) -and -S- (CR11R12) m-CR13R14-C (O) -;

[0088] R11 and R12 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen and C1-6 alkyl;

[0089] R13 is hydroxyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl C6-12 aryl or C3-8 cycloalkyl;

[0090] R14 is selected from the group consisting of hydrogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-12 aryl and C3-8 cycloalkyl;

[0091] or, R13 and R14 and the carbon atom to which they are linked form a C3-8 cycloalkyl;

[0092] m is 0, 1, 2, 3 or 4.

[0093] In some embodiments, wherein LC is selected from:

[0094] In some embodiments, wherein:

[0095] L-D is represented by a formula selected from the group consisting of:

[0096] wherein,

[0097] R3 is independently C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -NO2 or halogen, m is 0, 1, 2, 3 or 4;

[0098] R13 is hydroxyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl C6-12 aryl or C3-8 cycloalkyl;

[0099] R14 is selected from the group consisting of hydrogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-12 aryl and C3-8 cycloalkyl;

[0100] or, R13 and R14 and the carbon atom to which they are linked form a C3-8 cycloalkyl;

[0101] R is as defined above.

[0102] In some embodiments, wherein:

[0103] L-D is selected from the following structures:

[0104] wherein:

[0105] R3 is independently C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -NO2 or halogen, m is 0, 1, 2, 3 or 4;

[0106] R13 is hydroxyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl C6-12 aryl or C3-8 cycloalkyl;

[0107] R14 is selected from the group consisting of hydrogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-12 aryl and C3-8 cycloalkyl;

[0108] or, R13 and R14 and the carbon atom to which they are linked form a C3-8 cycloalkyl.

[0109] In some embodiments, wherein the immunoconjugate is represented by the following formulas:

[0110] wherein:

[0111] R3 is independently C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -NO2 or halogen, m is 0, 1, 2, 3 or 4;

[0112] R13 is hydroxyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl C6-12 aryl or C3-8 cycloalkyl;

[0113] R14 is selected from the group consisting of hydrogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-12 aryl and C3-8 cycloalkyl;

[0114] or, R13 and R14 and the carbon atom to which they are linked form a C3-8 cycloalkyl;

[0115] y is a number of 1 to 20, preferably 2 to10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 4, 6, 8.

[0116] In some embodiments, wherein the immunoconjugate is represented by the following formulas:

[0117] y is a number of 1 to 20, preferably 2 to10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 4, 6, 8.

[0118] In some embodiments, wherein the immunoconjugate is represented by the following formulas:

[0119] y is a number of 1 to 20, preferably 2 to10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 4, 6, 8.

[0120] In another aspect, the present disclosure provides a pharmaceutical composition comprising the immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof as mentioned above, and a pharmaceutically acceptable carrier.

[0121] In another aspect, the present disclosure provides use of the immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof as mentioned above, or the pharmaceutical composition as mentioned above in preparing a medicament for the treatment and / or prevention of a CDH17-mediated disease or condition.

[0122] In some embodiments, wherein the CDH17-mediated disease or condition is a cancer with high CDH17 expression.

[0123] In some embodiments, wherein the CDH17-mediated disease or condition is a cancer with moderate CDH17 expression.

[0124] In another aspect, the present disclosure provides use of the immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof as mentioned above, or the pharmaceutical composition as mentioned above in preparing a medicament for the treatment and / or prevention of a tumor or cancer; preferably the tumor or cancer is gastrointestinal cancer, gastroesophageal cancer, gastric cancer, pancreatic cancer, gallbladder cancer, cholangiocarcinoma, stomach cancer, intestinal cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, lung cancer, breast cancer, anal cancer, prostate cancer, kidney cancer, bladder cancer, pharynx cancer, cancer of the nose, skin cancer, oral cancer, cancer of the tongue, esophageal cancer, vaginal cancer, cervical cancer, cancer of the spleen, testicular cancer, or glioblastoma.

[0125] The active compound (e.g., a ligand-drug conjugate according to the present disclosure, or the pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof) may be formulated in a form suitable for administration by any suitable route, preferably in a form of a unit dose, or in a form of a single dose that can be self-administered by a subject. The unit dose of the present disclosure may be in a tablet, a capsule, a cachet, a vial, a powder, a granule, a lozenge, a suppository, a regenerating powder or a liquid formulation.

[0126] The administration dose of the active compound or composition used in the treatment method of the present disclosure will generally vary with the severity of the disease, the weight of the subject, and the efficacy of the active compound. However, as a general guide, a suitable unit dose may be 0.01 to 1000 mg.

[0127] The pharmaceutical composition of the present disclosure may comprise, in addition to the active compound, one or more excipients selected from the group consisting of: a filler, a diluent, a binder, a wetting agent, a disintegrating agent, an excipient and the like. Depending on the method of administration, the composition may comprise 0.01 to 99.9 wt. %of active compound.

[0128] Advantageous Effects of the Invention:

[0129] The CDH17 antibody and the antibody-drug conjugate provided by the present disclosure have good affinity for cell surface antigens, good endocytosis efficiency and high tumor inhibition efficiency as well as wider drug application windows, and are suitable for clinical drug application.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0130] Figure 1 (A) 20B4-E-4 showed good cell binding affinity to CDH17+ cells, (B) 20B4-E-4 showed no biding affinity to CDH17-cells.

[0131] Figure 2 (A) - (G) 20B4-E-4 showed good in vitro cytotoxicity in multiple CDH17+ cell lines

[0132] Figure 3 (A) 20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in IM95 CDX model (B) 20B4-E-4 showed good safety in IM95 CDX model

[0133] Figure 4 (A) 20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in SNU16 CDX model (B) 20B4-E-4 showed good safety in SNU16 CDX model

[0134] Figure 5 (A) 20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in COLO205 CDX model (B) 20B4-E-4 showed good safety in COLO205 CDX model

[0135] Figure 6 (A) 20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in GP2d CDX model (B) 20B4-E-4 showed good safety in GP2d CDX model

[0136] Figure 7 (A) 20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in HPAF-II CDX model (B) 20B4-E-4 showed good safety in HPAF-II CDX model

[0137] Figure 8 (A) 20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in OE19 CDX model (B) 20B4-E-4 showed good safety in OE19 CDX model

[0138] Figure 9 (A) 20B4 mAb showed better internalization compared to ref1 (B) Schematic illustration of cell internalization assayDETAILED DESCRIPTION

[0139] DEFINITIONS OF TERMS

[0140] The present invention is based on the development of an antibody which can specifically bind to CDH17. Antibodies of the present invention may optionally be conjugated to a growth inhibitory agent or cytotoxic agent such as a toxin, including, for example, a topoisomerase inhibitor or auristatin.

[0141] The titles used in the present section are for convenience of specification only, and do not limit the present invention. Unless otherwise defined herein, the scientific and technical terms used herein have the same meaning as commonly understood by those skilled in the art. Further, unless the context specifically requires, the singular includes the plural, and the plural includes the singular. The abbreviation of the amino acid residue is the standard three-letter and / or one-letter code used in the art, which represents one of the 20 common L-amino acids.

[0142] The terms "CDH17" and "CDH17 antigen" are used interchangeably herein, and include any variants, isoforms and species homologs of human CDH17 which are naturally expressed by cells or are expressed on cells transfected with the CDH17 gene.

[0143] "CDH17" as the target should be widely interpreted herein, aims to cover various forms of molecules of CDH17 at various stages in a mammalian (such as human) , such as but not limited to molecules generated during the amplification, replication, transcription, splicing, translation, and modification of CDH17 gene (such as precursor CDH17, mature CDH17, membrane-expressed CDH17, CDH17 splicing variants, modified CDH17, or fragments thereof) . This term also covers artificially prepared or in vitro expressed CDH17.

[0144] The term "antibody" or "antibodies" is meant in a broad sense and includes immunoglobulin molecules including monoclonal antibodies including murine, human, humanized and chimeric monoclonal antibodies, full-length antibodies, antigen binding fragments, multispecific antibodies, such as bispecific, trispecific, tetraspecific etc., dimeric, tetrameric or multimeric antibodies, single chain antibodies, domain antibodies and any other modified configuration of the immunoglobulin molecule that comprises an antigen binding site of the required specificity.

[0145] The "bispecific" refers to an antibody that specifically binds two distinct antigens or two distinct epitopes within the same antigen. The bispecific antibody may have cross-reactivity to other related antigens, for example to the same antigen from other species (homologs) , such as human or monkey, for example Macaca cynomolgus (cynomolgus, cyno) or Pan troglodytes, or may bind an epitope that is shared between two or more distinct antigens.

[0146] The term "antibody" refers to a protein comprising at least two heavy (H) chains and two light (L) chains inter-connected by disulfide bonds, or an antigen binding portion thereof. Each heavy chain is comprised of a heavy chain variable region (abbreviated herein as VH) and a heavy chain constant region. Each light chain is comprised of a light chain variable region (abbreviated herein as VL) and a light chain constant region. The VH and VL regions can be further subdivided into regions of hyper variability, termed complementarity determining regions (CDR) , interspersed with regions that are more conserved, termed framework regions (FR) . Each VH and VL is composed of three CDRs and four FRs, arranged from amino-terminus to carboxyl-terminus in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. The variable regions of the heavy and light chains contain a binding domain that interacts with an antigen. The constant regions of the antibodies may mediate the binding of the immunoglobulin to host tissues or factors, including various cells of the immune system (e.g., effector cells) and the first component (C1q) of the classical complement system.

[0147] The term "antigen-binding fragment" of an antibody, as used herein, refers to one or more fragments of an antibody that retain the ability to specifically bind to an antigen (e.g., CDH17) . It has been shown that the antigen-binding function of an antibody can be performed by fragments of a full-length antibody. Examples of binding fragments encompassed within the term "antigen-binding fragment " of an antibody include (i) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL and CHI domains; (ii) a F (ab') 2 fragment, a bivalent fragment comprising two Fab fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region; (iii) a Fd fragment consisting of the VH and CHI domains; (iv) a Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody, (v) a dAb fragment (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546) , which consists of a VH domain; (vi) an isolated complementarity determining region (CDR) , and (vii) a combination of two or more isolated CDRs which may optionally be joined by a synthetic linker. Furthermore, although the two domains of the Fv fragment, VL and VH, are coded for by separate genes, they can be joined, using recombinant methods, by a synthetic linker that enables them to be made as a single protein chain in which the VL and VH regions pair to form monovalent molecules (known as single chain Fv (scFv) ; see e.g., Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci.  85 : 5879-5883) . Such single chain antibodies are also intended to be encompassed within the term "antigen-binding portion" of an antibody.

[0148] The term "human antibody" , as used herein, is intended to include antibodies having variable and constant regions derived from human germline immunoglobulin sequences. The human antibodies of the invention may include amino acid residues not encoded by human germline immunoglobulin sequences (e.g., mutations introduced by random or site-specific mutagenesis in vitro or by somatic mutation in vivo) . However, the term "human antibody" , as used herein, is not intended to include antibodies in which CDR sequences derived from the germline of another mammalian species, such as a mouse, have been grafted onto human framework sequences.

[0149] The term "recombinant human antibody" , as used herein, includes all human antibodies that are prepared, expressed, created or isolated by recombinant means, such as (a) antibodies isolated from an animal (e.g., a mouse) that is transgenic or trans chromosomal for human immunoglobulin genes or a hybridoma prepared therefrom (described further in Section I, below) , (b) antibodies isolated from a host cell transformed to express the antibody, e.g., from a transfectoma, (c) antibodies isolated from a recombinant, combinatorial human antibody library, and (d) antibodies prepared, expressed, created or isolated by any other means that involve splicing of human immunoglobulin gene sequences to other DNA sequences. Such recombinant human antibodies have variable and constant regions derived from human germline immunoglobulin sequences. In certain embodiments, however, such recombinant human antibodies can be subjected to in vitro mutagenesis (or, when an animal transgenic for human Ig sequences is used, in vivo somatic mutagenesis) and thus the amino acid sequences of the VH and VL regions of the recombinant antibodies are sequences that, while derived from and related to human germline VH and VL sequences, may not naturally exist within the human antibody germline repertoire in vivo.

[0150] The term "CDR" refers to one of the six hypervariable regions within the variable domain of an antibody that primarily contributes to antigen binding. One of the most commonly used definitions for the six CDRs is provided by Kabat E. A. et al. (1991) Sequences of proteins of immunological interest. NIH Publication 91-3242. As used herein, the Kabat definition of CDR only applies to CDR1, CDR2 and CDR3 of the light chain variable domain (LCDR1, LCDR2, LCDR3 or L1, L2, L3) , as well as CDR1, CDR2 and CDR3 of heavy chain variable domain (HCDR1, HCDR2, HCDR3 or H1, H2, H3) .

[0151] Methods and techniques for identifying CDRs within HCVR and LCVR amino acid sequences are well known in the art and can be used to identify CDRs within the specified HCVR and / or LCVR amino acid sequences disclosed herein. Exemplary conventions that can be used to identify the boundaries of CDRs including, e.g., Chothia based on the three-dimensional structure of antibodies and the topology of the CDR loops (Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883) , Kabat based on antibody sequence variability (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th edition, US Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987) ) , AbM (University of Bath) , Contact (University College London) , International ImMunoGeneTics database (IMGT) (imgt. cines. fr / on the World Wide Web) , and North CDR definition based on the affinity propagation clustering using a large number of crystal structures. Those skilled in the art can easily identify the CDRs defined by each numbering system.

[0152] A useful comparison of CDR numbering is as below:

[0153] Note 1: some of these definitions (particularly for Chothia loops) vary depending on the individual publication examined; Note2: any of the numbering schemes can be used for these CDR defintions, except the contact definition uses the Chothia or Martin (enhanced Chothia) definition; Note 3: the end of the Chothia HCDR1 loop when numbered using the Kabat numbering convention varies between H32 and H34 depending on the length of the loop. This is because the Kabat numbering scheme places the insertions at H35A and H35B.

[0154] The term "Fab fragment" includes a heavy chain variable domain and a light chain variable domain, and also includes the constant domain of the light chain and the first constant domain (CH1) of the heavy chain. An "Fab′ fragment" differs from the Fab fragment due to addition of some residues (including one or more cysteine from an antibody hinge region) to the carboxyl terminal of the heavy chain CH1 domain. "Fab′-SH" refers to an Fab′in which the cysteine residue of the constant domain carries a free thiol group. An F (ab′) 2 antibody fragment was originally generated as paired Fab′fragments with hinge cysteines between the Fab′fragments. Other chemical couplings of antibody fragments are also known.

[0155] The term "Fc region" is used herein to define a C-terminal region of an immunoglobulin heavy chain, comprising at least a portion of a constant region. The term includes Fc regions and variant Fc regions of native sequences. In certain embodiments, a human IgG heavy chain Fc region extends from Cys226 or Pro230 to the carbonyl end of the heavy chain. However, the C-terminal lysine (Lys447) of the Fc region may or may not be present. Unless otherwise stated, the numbering of amino acid residues in the Fc region or constant region is based on an EU numbering system, which is also called EU index as described in Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991.

[0156] As will be appreciated by those in the art, the exact numbering and placement of the heavy constant region domains can be different among different numbering systems. A useful comparison of heavy constant region numbering according to EU and Kabat is as below, see Edelman et al., 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63: 78-85 and Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service. National Institutes of Health, Bethesda, entirely incorporated by reference.

[0157] "Conservative modification" or "conservative replacement or substitution" or "conventional variant" refers to substitutions of amino acids in a protein with other amino acid having similar characteristics (e.g., charge, side chain size, hydrophobicity / hydrophilicity, backbone conformation and rigidity, etc. ) , such that the substitutions can be frequently made without altering the biological activity of the protein. It will be appreciated by those skilled in the art that, in general, a single amino acid substitution in a non-essential region of polypeptide does not substantially alter biological activity (see, for example, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin / Cummings Pub. Co., Page 224, (4th edition) ) . In addition, substitutions with structurally or functionally similar amino acids are unlikely to affect biological activity.

[0158] The term "nucleic acid molecule" as used herein refers to a DNA molecule and a RNA molecule. The nucleic acid molecule may be single stranded or double stranded but is preferably a double stranded DNA. A nucleic acid is “effectively linked” when it is placed into functional relationship with another nucleic acid sequence. For example, if a promoter or enhancer affects transcription of a coding sequence, the promoter or enhancer is effectively linked to the coding sequence.

[0159] The preparation method of the nucleic acid is a conventional preparation method in the art. Preferably, it comprises the following steps: obtaining the nucleic acid molecule encoding the above-mentioned protein by gene cloning technology, or obtaining the nucleic acid molecule encoding the above-mentioned protein by the method of artificial full-length sequence synthesis.

[0160] Those skilled in the art know that the base sequence encoding the amino acid sequence of the protein can be replaced, deleted, changed, inserted or added appropriately to provide a polynucleotide homolog. The homolog of the polynucleotide of the present invention can be prepared by replacing, deleting or adding one or more bases of the gene encoding the protein sequence within the scope of maintaining the activity of the antibody.

[0161] The term "linking unit" as used herein means the part which links the antibody with the drug in the antibody-drug conjugate (i.e. ADC) , which could be cleavable or uncleavable. The cleavable linker (i.e., breakable linker or biodegradable linker) may be broken in or on the target cells, and thereby releasing the drug. In some embodiments, the linking unit or linker of the present invention has very good stability and greatly decreases the release of the drug during the process of delivering to the target (e.g., in blood) , thereby reducing the side effect and toxicity. In some particular embodiments, the linking unit or linker of the present invention is selected from cleavable linker, such as the linker based on disulphide (which is selectively broken in the tumor cells at a higher thiol concentration) , peptide linker (which is cleaved by the enzyme in the tumor cells) , and hydrazone linker.

[0162] The "linking unit" may comprise one or more linker elements. Exemplary linker elements include 6-maleimidocaproyl ("MC") , maleimidopropionyl ("MP") , valine-citrulline ("val-cit" or "vc") , alanine-phenylalanine ("ala-phe") , p-aminobenzyloxycarbonyl ("PAB") , N-succinimidyl 4-(2-pyridylthio) pentanoate ("SPP") , N-succinimidyl 4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1 carboxylate ("SMCC", also referred to herein as "MCC") , and N-succinimidyl (4-iodo-acetyl) aminobenzoate ("SIABTM") . The linker may comprise one or more of the following elements, or a combination thereof: a stretcher unit, a spacer unit and an amino acid unit, and may be synthesized by methods known in the art. The linker may be a "cleavable linker" favoring the release of drugs in cells. For example, acid-labile linkers (e.g., hydrazones) , protease-sensitive (e.g., peptidase-sensitive) linkers, photolabile linkers, dimethyl linkers or disulfide-containing linkers can be used (Chari et al, Cancer Research, 52: 127-131 (1992) ; U.S. Patent No. 5,208,020) .

[0163] The term "toxin drug" or "cytotoxic drug" means a chemical molecule capable of strongly destructing normal growth in tumor cells. In principle, toxin drugs can kill tumor cells in high enough concentrations, but due to the lack of specificity, when killing tumor cells, it also leads to apoptosis in normal cells, leading to serious side effects. The cytotoxic drug may be selected from any agent that is detrimental to (e.g., kills) cells. Suitable cytotoxic agents for forming immunoconjugates of the present invention include but not limited to taxol, tubulysins, duostatins, cytochalasin B, gramicidin D, ethidium bromide, emetine, mitomycin, etoposide, tenoposide, vincristine, vinblastine, 48haracteri, doxorubicin, daunorubicin, dihydroxy anthracin dione, maytansine or an analog or derivative thereof, mitoxantrone, mithramycin, actinomycin D, 1  glucocorticoids, procaine, tetracaine, lidocaine, propranolol, and puromycin; calicheamicin or analogs or derivatives thereof; antimetabolites (such as methotrexate, 6 mercaptopurine, 6 thioguanine, cytarabine, 48haracteriz, 5 fluorouracil, 48haracteriz, hydroxyurea, asparaginase, gemcitabine, cladribine) , alkylating agents (such as mechlorethamine, thioepa, chlorambucil, melphalan, carmustine (BSNU) , lomustine (CCNU) , cyclophosphamide, busulfan, dibromomannitol, streptozotocin, dacarbazine (DTIC) , procarbazine, mitomycin C, cisplatin and other platinum derivatives, such as carboplatin; as well as duocarmycin A, duocarmycin SA, CC-1065 (a.k.a. rachelmycin) , or analogs or derivatives of CC-1065) , dolastatin, auristatin, pyrrolo [2, 1-c] [1, 4] benzodiazepins (PDBs) , indolinobenzodiazepine (IGNs) or analogues thereof, antibiotics (such as dactinomycin (formerly actinomycin) , bleomycin, daunorubicin (formerly daunomycin) , doxorubicin, idarubicin, mithramycin, mitomycin, mitoxantrone, plicamycin, anthramycin (AMC) ) , anti-mitotic agents (e.g., tubulin-targeting agents) , such as diphtheria toxin and related molecules (such as diphtheria A chain and active fragments thereof and hybrid molecules) ; ricin toxin (such as ricin A or a deglycosylated ricin A chain toxin) , cholera toxin, a Shiga-like toxin (SLT I, SLT II, SLT IIV) , LT toxin, C3 toxin, Shiga toxin, pertussis toxin, tetanus toxin, soybean Bowman-Birk protease inhibitor, Pseudomonas exotoxin, alorin, saporin, modeccin, gelanin, abrin A chain, modeccin A chain, alpha-sarcin, Aleurites fordii proteins, dianthin proteins, Phytolacca 48haracter proteins (PAPI, PAPII, and PAP S) , 48haracter charantia inhibitor, curcin, crotin, Sapaonaria officinalis inhibitor, gelonin, mitogellin, restrictocin, phenomycin, and 48haracte toxins. Other suitable conjugated molecules include antimicrobial / lytic peptides such as CLIP, Magainin 2, mellitin, Cecropin, and P18; ribonuclease (Rnase) , Dnase I, Staphylococcal enterotoxin A, pokeweed antiviral protein, diphtherin toxin, and Pseudomonas endotoxin.

[0164] In particular, the toxin drug may be selected from mitotic inhibitors, DNA alkylating agents, tyrosine kinase inhibitors, topoisomerase inhibitors, and DNA synthesis inhibitors, preferably tubulin inhibitors, topoisomerase inhibitors.

[0165] The term "alkyl" refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group that is a linear or branched group containing 1 to 20 carbon atoms, preferably alkyl containing 1 to 12 carbon atoms, more preferably alkyl containing 1 to 10 carbon atoms, and most preferably alkyl containing 1 to 6 carbon atoms (containing 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms) . Non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1, 1-dimethylpropyl, 1, 2-dimethylpropyl, 2, 2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1, 1, 2-trimethylpropyl, 1, 1-dimethylbutyl, 1, 2-dimethylbutyl, 2, 2-dimethylbutyl, 1, 3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2, 3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhexyl, 5-methylhexyl, 2, 3-dimethylpentyl, 2, 4-dimethylpentyl, 2, 2-dimethylpentyl, 3, 3-dimethylpentyl, 2-ethylpentyl, 3-ethylpentyl, n-octyl, 2, 3-dimethylhexyl, 2, 4-dimethylhexyl, 2, 5-dimethylhexyl, 2, 2-dimethylhexyl, 3, 3-dimethylhexyl, 4, 4-dimethylhexyl, 2-ethylhexyl, 3-ethylhexyl, 4-ethylhexyl, 2-methyl-2-ethylpentyl, 2-methyl-3-ethylpentyl, n-nonyl, 2-methyl-2-ethylhexyl, 2-methyl-3-ethylhexyl, 2, 2-diethylpentyl, n-decyl, 3, 3-diethylhexyl, 2, 2-diethylhexyl, and various side-chain isomers thereof, and the like. More preferred is a lower alkyl having 1 to 6 carbon atoms, and non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1, 1-dimethylpropyl, 1, 2-dimethylpropyl, 2, 2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1, 1, 2-trimethylpropyl, 1, 1-dimethylbutyl, 1, 2-dimethylbutyl, 2, 2-dimethylbutyl, 1, 3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2, 3-dimethylbutyl and the like. Alkyl may be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent may be substituted at any available connection site, wherein the substituent is preferably one or more of the following groups independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio and oxo.

[0166] The term "ligand-cytotoxicity drug conjugate" means that a ligand is linked to a biologically active drug through a linking unit. In some particular embodiments, the “ligand-cytotoxicity drug conjugate” is preferably an antibody-drug conjugate (ADC) , which means that a monoclonal antibody or antibody fragment is linked to a cytotoxic drug with biological activity through a linking unit.

[0167] The term "Drug to Antibody Ratio (DAR) " means the average number of cytotoxic drugs loaded on each ligand, and can also be represented as ratio of drug amount and antibody amount. The range of drug loading for each ligand (Ab) can be 1-20 cytotoxic drugs (D) . In the embodiment of the present invention, the Drug to Antibody Ratio is represented as y. The average number of drugs in each ADC molecule after the coupling reaction can be identified by conventional methods, such as UV / visible spectroscopy, mass spectrometry, ELISA test, and HPLC characteristic identification.

[0168] The term "transfectoma" , as used herein, includes recombinant eukaryotic host cell expressing the antibody, such as CHO cells, NS / 0 cells, HEK293 cells, plant cells, or fungi, including yeast cells.

[0169] The sequence of the DNA molecule for the antibody or a fragment thereof according to the present invention can be obtained by conventional techniques, for example, methods such as PCR amplification or genomic library screening. In addition, the sequences encoding light chain and heavy chain can be fused together, to form a single-chain antibody.

[0170] Once a relevant sequence is obtained, the relevant sequence can be obtained in bulk using a recombination method. This is usually carried out by cloning the sequence into a vector, transforming a cell with the vector, and then separating the relevant sequence from the proliferated host cell by conventional methods.

[0171] In addition, a relevant sequence can be synthesized artificially, especially when the fragment is short in length. Usually, several small fragments are synthesized first, and then are linked together to obtain a fragment with a long sequence.

[0172] At present, it is possible to obtain a DNA sequence encoding the antibody of the present invention (or fragments thereof, or derivatives thereof) completely by chemical synthesis. The DNA sequence can then be introduced into a variety of existing DNA molecules (or, for example, vectors) and cells known in the art. In addition, mutations can also be introduced into the protein sequences of the present invention by chemical synthesis.

[0173] In general, under conditions suitable for expression of the antibody according to the present invention, the host cell obtained is cultured. Then, the antibody of the present invention is purified by using conventional immunoglobulin purification steps, for example, the conventional separation and purification means well known to those skilled in the art, such as protein A-Sepharose, hydroxyapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, molecular sieve chromatography or affinity chromatography.

[0174] The monoclonal antibody obtained can be identified by conventional means. For example, the binding specificity of a monoclonal antibody can be determined by immunoprecipitation or an in vitro binding assay (such as radioimmunoassay (RIA) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ) . The binding affinity of a monoclonal antibody can be determined by, for example, the Scatchard analysis (Munson et al., Anal. Biochem., 107: 220 (1980) ) .

[0175] The antibody according to the present invention can be expressed in a cell or on the cell membrane, or is secreted extracellularly. If necessary, the recombinant protein can be separated and purified by various separation methods according to its physical, chemical, and other properties. These methods are well known to those skilled in the art. The examples of these methods comprise, but are not limited to, conventional renaturation treatment, treatment by protein precipitant (such as salt precipitation) , centrifugation, cell lysis by osmosis, ultrasonic treatment, supercentrifugation, molecular sieve chromatography (gel chromatography) , adsorption chromatography, ion exchange chromatography, high performance liquid chromatography (HPLC) , and any other liquid chromatography, and the combination thereof.

[0176] The term “identity" of sequences refers to the relationship between the sequences of two or more polypeptide molecules or two or more nucleic acid molecules, as determined by aligning sequences. Generally, identity refers to the number or percentage of identical positions shared by two amino acid or nucleic acid sequences, taking into account the number of gaps, and the length of each gap, which need to be introduced for optimal alignment of the two sequences. Generally, before calculating the percentage of identity between two amino acid or nucleotide sequences, sequence alignment is performed, and gap (if any) is introduced. If the amino acid residues or bases in the two sequences are the same at a certain alignment position, the two sequences are considered to be identical or matched at that position. If the amino acid residues or bases in the two sequences are different, it is considered that they are inconsistent or mismatched at this position. In some algorithms, the number of matching positions is divided by the total number of positions in the alignment window to obtain sequence identity. In other algorithms, the number of notches and / or the length of notches are also taken into account. For the purpose of the present disclosure, the well-known alignment software BLAST (which can be found on the web page ncbi. nlm. nih. gov) can be used to obtain the best sequence alignment and calculate the sequence identity between the two amino acid or nucleotide sequences by using the default settings. When an amino acid sequence is described as being at least 85%or at least 90%or at least 95%identical to another amino acid sequence, the difference in the amino acid sequence may lie in conservative substitution (including all substitutions therein are conservative substitutions) .

[0177] The term "variant" of a polypeptide such as for example, an antigen-binding fragment, a protein, or an antibody is a polypeptide in which one or more amino acid residues are inserted, deleted, added, and / or substituted, as compared to another polypeptide sequence, and includes a fusion polypeptide. In addition, a protein variant includes one modified by protein enzyme cutting, phosphorylation, or other posttranslational modification, but maintaining biological activity of the antibody disclosed herein, for example, binding to CDH17 and specificity. The variant may be about 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, or 80%identical to the sequence of the antibody or its antigen-binding fragment disclosed herein. The percent identity (%) or homology may be calculated with reference to the following description.

[0178] In one embodiment, the percent homology or identity may be calculated as 100 x [ (identical position)  / min (TGA, TGB) ] , and in the formula, TGA, TGB are the sum of the number of residues of sequences A and B compared and the internal gap position (Russell et al., J. Mol Biol., 244: 332-350 (1994) .

[0179] In the present invention, the antibody of the present invention also includes a conservative variant thereof, which means that, compared to the amino acid sequence of the antibody of the present invention, there are up to 10, preferably up to 8 and more preferably up to 5, most preferably up to 3 amino acids are replaced by amino acids with similar or similar properties to form a polypeptide. These conservative variant polypeptides are preferably produced by amino acid substitution according to Table A.

[0180] Table A

[0181] The term "KD " (M) , as used herein, is intended to refer to the dissociation equilibrium constant of a particular antibody-antigen interaction. "KD" refers to the dissociation constant, which is obtained from the ratio of Kd to Ka (i.e., Kd / Ka) and is expressed as a molar concentration (M) . KD values for antibodies can be determined using methods in the art in view of the present disclosure. For example, the KD of an antibody can be determined by using surface plasmon resonance, such as by using a biosensor system, e.g., a system, or by using bio-layer interferometry technology, such as an Octet RED96 system.

[0182] The term "affinity" is the strength of interaction between an antibody or its antigen-binding fragment and an antigen, and it is determined by properties of the antigen such as size, shape and / or charge of antigen, and CDR sequences of the antibody or antigen-binding fragment. The methods for determining the affinity are known in the art, and the followings can be referred.

[0183] The antibody or its antigen-binding fragment is called "specifically binding" to its target such as an antigen, when a dissociation constant (KD) is < l0-6 M. The antibody specifically binds to a target with "high affinity" , when KD is < l0-9 M.

[0184] The term "Pharmaceutical composition" , as used herein, is intended to refer to a mixture containing one or more of the compounds or a physiological / pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof described herein with other chemical components, such as physiological  / pharmaceutically acceptable carriers and excipients. The purpose of the pharmaceutical composition is to promote the administration to the organism, which is beneficial to the absorption of the active ingredient and exerts the biological activity.

[0185] "Administration" and "treatment" , when applied to an animal, human, experimental subject, cell, tissue, organ, or biological fluid, refer to contact with an exogenous pharmaceutical, therapeutic, diagnostic reagent, or composition with the animal, human, subject, cell, tissue, organ, or biological fluid. "Administration" and "treatment" can refer, e.g., to therapeutic, pharmacokinetic, diagnostic, research, and experimental methods. Treatment of a cell encompasses contacting the cell with a reagent, as well as contacting a fluid with a reagent, wherein the fluid is in contact with the cell. "Administration" and "treatment" also mean in vitro and ex vivo treatments, e.g., of a cell, by a reagent, diagnostic, binding composition, or by another cell. "Treatment, " when applied to a human, veterinary, or research subject, refers to therapeutic treatment, prophylactic or preventative measures, research, and diagnostic applications.

[0186] "Therapeutically effective amount" refers to an amount effective, at doses and for periods of time necessary, to achieve a desired therapeutic result. A therapeutically effective amount may vary depending on factors such as the disease state, age, sex, and weight of the individual, and the ability of a therapeutic or a combination of therapeutics to elicit a desired response in the individual. Exemplary indicators of an effective therapeutic or combination of therapeutics that include, for example, improved well-being of the patient.

[0187] The present disclosure also comprises various deuterated forms of the compounds of formula (I) and (A) . Each available hydrogen atom connected to a carbon atom may be independently substituted with a deuterium atom. Those skilled in the art are able to synthesize the compounds of formula (I) and (A) in deuterated form with reference to the relevant literature. Commercially available deuterated starting materials can be used in preparing the deuterated forms of the compounds of formula (I) and (A) , or they can be synthesized using conventional techniques with deuterated reagents including, but not limited to, deuterated borane, tri-deuterated borane in tetrahydrofuran, deuterated lithium aluminum hydride, deuterated iodoethane, deuterated iodomethane, and the like.

[0188] In addition, the present disclosure includes a medicament for treating a disease associated with CDH17, comprising an antibody, an antigen-binding fragment, or an antibody-drug conjugate thereof of the present disclosure as an active ingredient.

[0189] There is no limitation on the diseases related to CDH17, as long as it is a disease associated with CDH17, for example, the therapeutic response induced by the molecules disclosed in the present disclosure can be reduced by binding human CDH17. Therefore, the molecules of the present disclosure are very useful for those who suffer from a tumor, cancer, or infectious disease when in preparations and formulations suitable for therapeutic applications.

[0190] In addition, the present disclosure relates to a method for immunologically detecting or measuring CDH17, a reagent for immunologically detecting or measuring CDH17, a method for immunologically detecting or measuring cells expressing CDH17, and a diagnostic reagent for diagnosis of disease related to CDH17-positive cells, comprising the antibody or antigen-binding fragment of the present disclosure that specifically recognizes human CDH17, as an active ingredient.

[0191] In the present disclosure, the method for detecting or determining the amount of CDH17 may be any known method. For example, it includes immune-detection or assay.

[0192] The immune-detection or assay is a method of detecting or determining the amount of antibody or antigen by using labeled antigen or antibody. Examples of immune-detection or assay include a radioactive substance labeled immunological antibody method (RIA) , an enzyme immunoassay (EIA or ELISA) , a fluorescent immunoassay (FIA) , a luminescent immunoassay, a western blotting method, physicochemical methods, etc.

[0193] The above-mentioned diseases related to CDH17-positive cells can be diagnosed by detecting or measuring cells expressing CDH17 by using the antibodies or antibody fragments thereof of the present invention.

[0194] In order to detect cells expressing the polypeptide, a known immune-detection can be used, and preferably immunoprecipitation, fluorescent cell staining, or immunohistochemically staining, etc. can be used. Furthermore, a fluorescent antibody staining method, etc. using FMAT8100HTS system (Applied Bio system) can be used.

[0195] EXAMPLES

[0196] The invention is further illustrated by the following specific examples. It is to be understood that these examples are for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the invention. The experimental methods without detailed conditions in the following examples are generally in accordance with the conditions described in the conventional conditions such as Sambrook. J et al. "Guide to Molecular Cloning Laboratory" (translated by Huang Peitang et al., Beijing: Science Press, 2002) , or in accordance with the conditions recommended by the manufacturer (for example, product manuals) . Percentages and parts are by weight unless otherwise stated. The experimental materials and reagents used in the following examples are commercially available unless otherwise specified.

[0197] The room temperature described in the examples is a conventional room temperature in the art, and is generally 10-30℃.

[0198] EXAMPLE 1. Preparation of Anti-CDH17 Antibody

[0199] Anti-CDH17 Antibody could be derived from any suitable antibody, including antibodies such as 20B4, 10E11 and 14B12 described in PCT / CN2024 / 078324 (incorporated herein by reference in its entirety) . The amino acid sequences of the variable regions of 20B4, 10E11 and 14B12 are as follows:

[0200] Table 1. Sequences of heavy chain and light chain variable domains for anti-CDH17 antibodies

[0201] In the above sequences of anti-CDH17 antibodies. The CDRs of anti-CDH17 antibodies are shown in Table 2:

[0202] Table 2. CDRs of molecules specifically binding to CDH17

[0203] Note: the above CDRs are determined according to the Kabat numbering scheme.

[0204] Molecular cloning of recombinant antibodies

[0205] The cDNA sequences that encode VH and VL regions of selected clones were directly synthesized as DNA fragments with 5’-end in-frame leader sequence (MGWSCIILFLVATATGVHS) . These DNA fragments were cloned into selected vectors using NEBuilder DNA Assembly Cloning Kit (New England Biolabs) . VH region was cloned into pFUSE-CHIg_hG1 vector (InvivoGen #pfuse-hchg1) , which in-frame with constant region of hIgG1 heavy chain in the vector. VL region was cloned into pFUSE2-CLIg_hk vector (InvivoGen, #pfuse2-hclk) , which in-frame with constant region of hIg kappa light chain in the vector. The amino acid sequences of the constant region of hIgG1 heavy chain and the constant region of hIg kappa light chain are as follow:

[0206] >Heavy chain constant region (SEQ ID NO: 31) :

[0207] >Light chain constant region (SEQ ID NO: 32) :

[0208] The IgG form of antibodies were disclosed as the following heavy chain and light chain full-lengths in Table 3.

[0209] Table 3. Sequences of heavy chain and light chain full lengths for anti-CDH17 recombinant antibodies

[0210] Expression and purification of recombinant antibodies

[0211] The heavy chain expression plasmid and light chain plasmids were co-transfected into CHO cells (ATCC, Cat#CCL-61) using ExpiFectamine 293 Transfection Kit (ThermoFisher, A14524) , or into ExpiCHO-S cells (ThermoFisher #A29127) using ExpiFectamine CHO Transfection Kit (ThermoFisher, A29129) . Based on the manufacturer’s instructions, plasmid DNA concentration reached 1.0 μg per ml of suspended cells, with LC: HC vector ratio 1: 1. The transfected cells were cultured 5 to 7 days on an orbital shaker at 37 C, 8%CO2. Conditioned medium was collected and antibodies were purified using HiTrap MabSelect SuRe column (Cytiva, #17549112) on AKTA Pure 25 machine (Cytiva) . Eluted antibodies were neutralized with Tris Buffer (pH 9.0) and subjected to PBS buffer exchange. Product concentration was measured by UV absorption, and quality was determined by SDS-PAGE and HPLC.

[0212] EXAMPLE 2. Generation of Anti-CDH17 Antibody Drug Conjugates (ADCs)

[0213] The antibodies of the present invention have cell affinity activity and endocytosis activity, making them suitable for coupling with drugs to form antibody-drug conjugates for treating CDH17-mediated diseases.

[0214] Purification of the Monoclonal Antibody

[0215] Purification of the monoclonal Antibody referring to the preparation procedures of the monoclonal antibody described in Example 1, Mota, 10E11, 14B12, 20B4, HBMAB-81 and TORL reference antibodies: ref1 (07-0646-h7) , ref2 (07-0653-h43) , and ref3 (07-0663-h7) (See WO2023107558A1, refer Table 1-Table4C) are purified for drug conjugation. Motavizumab also known as MOTA, a monoclonal antibody against respiratory syncytial virus, referring to US8852608B2.

[0216] Preparation of Intermediates as Drugs

[0217] The following intermediate compound was used for the generation of antibody-drug conjugates (ADCs) for anti-CDH17 antibodies, Compound D may be generated similar to the procedure described in US 2005 / 0238649, Compound E was prepared by a method disclosed in PCT Patent Application. (See WO2021148003, filed Jan 22, 2021) .

[0218] Conjugation of Monoclonal Antibody with Drug Molecule

[0219] Compound D

[0220] Anti-CDH17 antibody (5 mg / mL in PBS, pH 7.4) was treated with 10 mM of (tris (2-carboxylethyl) phosphine (TCEP) in excess equivalence at 37℃ for 1 hour. Sufficient molar equivalence (8eq) of drug linker (Compound D in DMSO) was added to the reduced antibody in PBS. The samples were then incubated for 1 hour with Compound D at room temperature. The drug-to-antibody ratio (DAR) of the ADCs was determined using a 6230 LC / MS-TOF system (Agilent) and the average values were summarized in Table 4. The average DAR values of the anti-CDH17 ADCs conjugated to vc-MMAE were approximately 4.0.

[0221] Compound E

[0222] Anti-CDH17 antibody (5 mg / mL in PBS, pH 7.4) was treated with 10 mM of (tris (2-carboxylethyl) phosphine (TCEP) in sufficient molar equivalence (2.0-2.2 eq) at 37℃ for 2 hours. Sufficient molar equivalence (8 eq) of drug linker (compound E, in DMSO) was added to the reduced antibody in PBS. The samples were then incubated overnight with compound E, at 4℃with rotation. The drug-to-antibody ratio (DAR) of the ADCs was determined using a 6230 LC / MS-TOF system (Agilent) and the average values were summarized in Table 4.

[0223] Table 4. Conjugation of monoclonal antibody and linker / payload moiety

[0224] EXAMPLE 3. Binding characterization of anti-CDH17 ADCs to CDH17 positive and CDH17 negative cell lines by flow cytometry

[0225] Binding of the anti-CDH17 ADCs to the cell surface CDH17 was determined by FACS analysis using cancer cell lines including CDH17 positive cancer cell AsPC1 cells and CDH17 negative cancer cell SW480 cells.

[0226] AsPC1 cells were maintained in RPMI-1640 medium supplemented with 10%FBS and 1%penicillin and streptomycin. SW480 cells were maintained in DMEM medium supplemented with 10%FBS and 1%penicillin and streptomycin. Cells were cultured at 37℃ with 5%CO2 in humidified atmosphere.

[0227] To determine the binding of anti-CDH17 ADCs to cell surface CDH17 receptors, cells were first harvested and resuspended in cell staining buffer (BioLegend, Cat#420201) at 2×106 cells / mL. Then, the cells were treated with human Fc receptor blocking reagent (BioLegend, Cat#422302) on the ice for 10 min. The resulting cell suspension was aliquoted into 50 μL aliquots. 25 μL of recombinant antibody at various concentrations were mixed with the cell aliquots. The cells were incubated on the ice for 1 hour and then washed with cell staining buffer twice. 50 μL of secondary antibody (PE conjugated goat anti-human Fc, eBioscienceTM, 1: 250 dilution) was added to each sample to resuspend the cells. The cells were incubated on the ice for another 20 min. Cells were subsequently washed twice with cell staining buffer and resuspended in 4%PFA to fix the cells. The samples were analyzed using iQue3 to measure the median fluorescence intensity using corresponding channels.

[0228] As a result, it was confirmed that the anti-CDH17 ADCs of the present disclosure specifically bind to the human CDH17 as originally expressed in cells in a concentration-dependent pattern, the result was shown in table 5 and Figure 1 (A) -1 (B) .

[0229] Table 5. Binding activities of anti-CDH17 ADCs to AsPC1 and SW480 cells.

[0230] EXAMPLE 4. Inhibitory Effect of the ADCs on Growth of Tumor Cells

[0231] The ADC immunoconjugates, which had different antibodies targeting CDH17 with different internalization, were analyzed for this Example. CDH17-mediated cell toxicities by these conjugates were tested in cell culture to define the potency of various linker-cytotoxic agent combinations.

[0232] We used two methods (Cell titer glo and Cytation5) to test the cytotoxicity of immunoconjugates in multiple cell lines with different CDH17 expression levels. SNU16, AsPC1, SKCO1 are cells lines with high CDH17 expression level; COLO205 is cell line with moderate CDH17 expression level; SW48 is the cell line with low CDH17 expression level; SW480 is the CDH17 negative cell line. For the Cytation5 method, cells were collected in log phase growth and distributed into 96-well plates at 5000 cells / well with propidium iodide (abcam, Cat#ab14083) at 500 ng / mL and SPY650-DNA (Cytoskeleton, Inc., Cat#CYSC501) at 1: 2000 dilution. Cells were incubated overnight at 37℃ in 5%CO2. The immunoconjugates were diluted with cell culture medium containing 500 ng / mL propidium iodide and 2000-fold diluted SPY650-DNA, then added to each well. Cytation5 (Agilent) was used to detect the viability of the cells in each well by imaging the plates every 12 h for 96 h. For Cell titer glo method. The cells were seeded in 96 well plates at 2000 cells / well. After overnight incubation, the immunoconjugates were added to each well. After 5 or 7 days of incubation, the cell viability in each well was determined by Cell Titer Glo 2.0 Assay (Promega) .

[0233] Curves and IC50 values were generated in GraphPad Prism using a sigmoidal dose-response non-linear regression fit. The result was shown in table 6 and Figure 2. All the 20B4-E-4 ADC molecule showed good potential of cytotoxicity on tumor cells.

[0234] Table 6. Evaluation of the in vitro cytotoxicity of antibody-drug conjugates on tumor cells

[0235] Note1: *: Cytotoxicity assay using Cytation5 (96 h) . The others are using Celltiter Glo assay (7 days) .

[0236] Note2: NA: not applicable or IC50 is not conclusive based on current dose-response curve (indicating no / low toxicity)

[0237] Example 5. Efficacy of anti-CDH17 ADCs in Human Gastric Cancer Cell Xenograft Mouse Models

[0238] IM95 cells or SNU16 cells were engrafted subcutaneously into female BALB / c nude mice. When the tumor volume reached approximately 150-200 mm3, the engrafted mice were randomized into several groups (6 mice per group) . Mice were treated with ADCs (1, 2.5, 5 mg / kg or 0.3, 1, 3 mg / kg) with a single dose. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0239] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0240] The results of the study were shown in Table 7 and 8 and Figure 3 and 4.20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in both IM95 and SNU16 CDX models. In both models, 20B4-E-4 showed tumor regression in medium and high dose groups, while showing tumor inhibition in the low dose group.

[0241] Table 7. In vivo efficacy of 20B4-E-4 in IM95 gastric cancer CDX model

[0242] Table 8. In vivo efficacy of 20B4-E-4 in SNU16 gastric cancer CDX model

[0243] Example 6. Efficacy of anti-CDH17 ADCs in Human Colorectal Cancer Cell xenograft mouse models

[0244] COLO205 cells or GP2d cells were engrafted subcutaneously into female BALB / c nude mice. When the tumor volume reached approximately 150-200 mm3, the engrafted mice were randomized into several groups (7 or 8 mice per group) . Mice were treated with ADCs (1, 2.5, 5 mg / kg) with a single dose. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0245] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0246] The results of the study were shown in Table 9 and 10 and Figure 5 and 6.20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in both high CDH17 expression GP2d CDX model and moderate CDH17 expression COLO205 CDX model.

[0247] Table 9. In vivo efficacy of 20B4-E-4 in COLO205 colorectal cancer CDX model

[0248] Table 10. In vivo efficacy of 20B4-E-4 in GP2d colorectal cancer CDX model

[0249] Example 7. Efficacy of anti-CDH17 ADCs in Human Pancreatic Cancer Cell xenograft mouse models

[0250] HPAF-II cells have medium to high CDH17 expression. In this model, HPAF-II cells were engrafted subcutaneously into female BALB / c nude mice. When the tumor volume reached approximately 150-200 mm3, the engrafted mice were randomized into several groups (5 mice per group) . Mice were treated with ADCs (0.3, 1, 3 mg / kg) with a single dose. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0251] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0252] The results of the study were shown in Table 11 and Figure 7.20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in HPAF-II CDX model.

[0253] Table 11. In vivo efficacy of 20B4-E-4 in HPAF-II Pancreatic cancer CDX model

[0254] Example 8. Efficacy of anti-CDH17 ADCs in Human Gastroesophageal Cancer Cell xenograft mouse models

[0255] OE19 cells showed high CDH17 expression and sensitive to Eribulin. OE19 cells were engrafted subcutaneously into female BALB / c nude mice. When the tumor volume reached approximately 150-200 mm3, the engrafted mice were randomized into several groups (6 mice per group) . Mice were treated with ADCs (1, 2.5, 5 mg / kg) with a single dose. Mean tumor growth inhibition (TGI) was calculated utilizing the following formula:

[0256] TGI = ( (mean (C) -mean (C0) ) - (mean (T) -mean (T0) ) )  /  (mean (C) -mean (C0) ) *100%; T is current group value, C is control group value, T0 and C0 represent the tumor volume at the beginning of the test.

[0257] The results of the study were shown in Table 12 and Figure 8.20B4-E-4 showed good in vivo dose-dependent efficacy in OE19 CDX model.

[0258] Table 12. In vivo efficacy of 20B4-E-4 in OE19 gastroesophageal cancer CDX model

[0259] Example 9. Binding to Hu / Cyno CDH17 Proteins by SPR

[0260] Biacore 8 K SPR system was used to characterize the binding affinity of 20B4 mAb to human and cyno CDH17 proteins at pH7.4, RT. 20B4 mAb (0.8-1 μg / mL) was immobilized onto Protein G chip (Cytiva) . Human or cyno CDH17 proteins were prepared by 3-fold dilution starting from 0.6 μM. Kinetics parameters were determined by 1: 1 binding fitting model. The results showed (Table 13) that 20B4 mAb can bind to different species of CDH17 protein. 20B4 binds to human CDH17 with a KD of 1.38E-09 and binds to cyno CDH17 protein with a KD of 1.04E-08.

[0261] Table 13. Binding affinity of 20B4 to human and cyno CDH17 proteins

[0262] Example 10. Internalization into CDH17+ cells

[0263] To determine the internalization kinetics of 20B4 mAb, antibodies labeled with AF488 were incubated with CDH17+ AsPC1 cells on ice in the RPMI + 2%FBS buffer to allow the anti-CDH17-AF488 antibodies to saturate the surface target on the cells. Cells were incubated at 37℃ for 0, 30, 60, 120, 240 mins to allow the anti-CDH17-AF488 to be internalized into the AsPC1 cells, then the cells will be transferred onto the ice to stop the further internalization activity. Cell staining buffer (Cat: 420201, Biolegend) was used to wash off the extra antibodies in the solution. The cells were incubated with 10 μg / mL anti-AF488 (A11094, Thermo Fisher) antibody to quench the surface fluorescenceiQue3 was used to measure the fluorescent changes of the cells. The internalization rate was calculated based on the equation: Normalized 20B4 mAb showed better internalization compared to ref1 (Figure 9A) .

Claims

1.An immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, the immunoconjugate is as shown in general formula (I)Ab- (L-D) y(I)wherein:D is a cytotoxic drug or cytostatic;L is a linking units;y is a number of 1 to 20, preferably 2 to10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 4, 6 or 8;Ab is the antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to CDH17.2.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 1, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is a monoclonal antibody or antigen-binding fragment thereof, a polyclonal antibody or antigen-binding fragment thereof, a multi-specific antibody or antigen-binding fragment thereof, a murine antibody or antigen-binding fragment thereof, a chimeric antibody or antigen-binding fragment thereof, a humanized antibody or antigen-binding fragment thereof, a recombinant antibody or antigen-binding fragment thereof, a human antibody or antigen-binding fragment thereof; preferably, the multi-specific antibody is a bispecific antibody, a tri-specific antibody or a tetra-specific antibody.3.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claims 1 or 2, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) ,the VH comprises: a) an HCDR1 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 07, 13, or 19, b) an HCDR2 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 08, 14, or 20, c) an HCDR3 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 09, 15, or 21; andthe VL comprises: d) an LCDR1 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 10, 16, or 22, e) an LCDR2 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 11, 17, or 23, f) an LCDR3 comprising an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 12, 18, or 24.4.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof of any one of claims 1-3, wherein:a) the VH comprises the HCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 07, the HCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 08, and the HCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 09, and the VL comprises the LCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, the LCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, and the LCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; orb) the VH comprises the HCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, the HCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, and the HCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, and the VL comprises the LCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, the LCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, and the LCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18; orc) the VH comprises the HCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, the HCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20, and the HCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21, and the VL comprises the LCDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, the LCDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23, and the LCDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24.5.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof of any one of claims 1-4, wherein:wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises: a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence selected from: SEQ ID NOs: 01, 03, 05, or sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; and / or a light chain variable region comprising an amino acid sequence selected from: SEQ ID NOs: 02, 04, 06, or sequence having at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith.6.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof of any one of claims 1-5, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprising:the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 01, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 02, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith;orthe heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 03, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 04, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith;orthe heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 05, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 06, or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith;7.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to anyone of claims 1 to 6, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprising:the heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 01; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 02;orthe heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 03; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 04;orthe heavy chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 05; and / or the light chain variable region having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 06.8.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to anyone of claims 1 to 7, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof further comprising human antibody constant regions;preferably, the heavy chain constant region of the human antibody constant regions is selected from constant regions of human IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 and conventional variants thereof, and the light chain constant region of the human antibody constant regions is selected from κ and λ chain constant regions of human antibody and conventional variants thereof;more preferably, the full-length antibody comprises a human antibody heavy chain constant region of SEQ ID NO: 31 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith, a human light chain constant region of SEQ ID NO: 32 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith;further preferably, the full-length antibody comprises a human antibody heavy chain constant region of SEQ ID NO: 31 and a human light chain constant region of SEQ ID NO: 32.9.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 8, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprising:a heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 25 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith, and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 28 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; ora heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 26 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith, and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 29 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith; ora heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 27 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith, and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30 or having the amino acid sequence of at least 80%, 85%, 90%, 95%or 99%sequence identity therewith.10.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 9, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprising:a heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 25 and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 28; ora heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 26 and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 29; ora heavy chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 27 and a light chain having the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 30.11.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 10, wherein the antigen-binding fragment is selected from the group consisting of Fab, Fab', F (ab') 2, variable fragment (Fv) , single chain variable fragment (scFv) , dimerized domain V (diabody) , disulfide stabilized Fv (dsFv) and CDR-containing peptides.12.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 11, wherein the cytotoxic or cytostatic drug is seleted from the group consisting of auristatin analogues, camptothecin derivatives, maytansine analogues, eribulin derivatives;more preferably the cytotoxic or cytostatic drug is selected from the group consisting of MMAE, MMAF, Exatecan, MMAD, DM1, DM4, eribulin, pyrrolobenzodiazepine (PBD) , SN-38, irinotecan, topotecan, belotecan, rubitecan, doxorubicin, PNU-159682, DGN-549-C, duocarmycin, daunorubicin, mitoxantrone, podophyllotoxin, etoposide, α-amanitin, or a pharmaceutically acceptable salt, ester or analog thereof.13.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 12, wherein the cytotoxic drug is as shown in general formula (A) : R1 is selected from the group consisting of H, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, aryl and heteroaryl, and the alkyl, cycloalkyl, aryl and heteroaryl are each independently optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of alkyl, alkoxy, halogen, deuterium, amino, cyano, nitro, hydroxy, hydroxyalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl and heteroaryl, preferably hydrogen;R2 is selected from the group consisting of H, alkyl, cycloalkyl, aryl and heteroaryl, and the alkyl, cycloalkyl, aryl and heteroaryl are each independently optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of alkyl, alkoxy, halogen, deuterium, amino, cyano, nitro, hydroxy, hydroxyalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl and heteroaryl, preferably methyl.14.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 12 or 13, wherein L is a chemical moiety represented by formula below:-LA -LB -LC-;LA is a stretcher unit;LC is a spacer unit;LB is composed of one or more of the following groups: C1-6 alkylene, -N (R') -, carbonyl, -O-, Val, Cit, Phe, Lys, D-Val, Leu, Gly, Ala, Asn, Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Lys (Ac) , Phe-Lys, Phe-Lys (Ac) , D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn, Ala-Ala-Ala, Val-Lys-Ala, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Phe-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly-Gly, preferably Val-Cit, Val-Lys, Gly-Gly-Phe-Gly.15.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 14, wherein-LA-is selected from a chemical moiety represented by the following formula:wherein, R is selected from: - (CH2) r-, - (CHRm) r-, -O- (CH2) r-, - (CH2CH2O) r-, - (CH2CH2O) r- (CH2) t-, - (CH2) rC (O) NRm (CH2) s-, - (CH2) rC (O) NRm (CH2CH2O) s-, - (CH2CH2O) rC (O) NRm (CH2) s-, - (CH2CH2O) rC (O) NRm (CH2CH2O) s-, - (CH2) rC (O) NRm (CH2CH2O) s- (CH2) t-, - (CH2CH2O) rC (O) NRm (CH2CH2O) s- (CH2) t-, arylene, - (CH2) r-arylene-, -arylene- (CH2) r-, C3-8 cycloalkyl, - (CH2) r- (C3-8 cycloalkyl) -, - (C3-8 cycloalkyl) - (CH2) r-, - (CH2) r- (C3-8 cycloalkyl) - C (O) NRm (CH2CH2O) s-, - (CH2) r- (C3-8 cycloalkyl) -C (O) NRm (CH2CH2O) s- (CH2) t-, C3-8 heterocycloalkyl, - (CH2) r- (C3-8 heterocycloalkyl) -, - (C3-8 heterocycloalkyl) - (CH2) r-, preferably - (CH2) r-, - (CH2CH2O) r- (CH2) t-;wherein:each Rm is independently H, C1-6 alkyl, C3-8 carbocyclyl, phenyl or benzyl;each r and s is independently selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10;t is 0, 1, 2, 3 or 4.16.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 14 to 15, wherein -LC-is independently wherein,each R3 is independently selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -NO2 or halogen, m is 0, 1, 2, 3 or 4;each R4 is independently a chemical moiety represented by V-E-, the V-E-provides a glycosidic bond cleavable by an intracellularly located glycosidase, and E is selected from the group consisting of -O-, -S-; further, V is selected fromn is 0, 1, 2, 3 or 4;R5 and R6 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, C1-6 alkyl and C3-6 cycloalkyl, preferably hydrogen; or R5 and R6, together with carbon atoms connected thereto, form C3-6 cycloalkyl;R7 is selected from the group consisting of COOH, CH2OH;X1 is selected from the group consisting of -O-, -NH-.17.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 16, wherein:-LC-is selected from the group consisting of:18.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 14, wherein:LC is –K3-K4-;wherein, K3 is –NR8 (CR9R10) t-, R8, R9 or R10 are each independently hydrogen, hydroxyl, amino, C1-6 alkyl, halogen, C1-6 haloalkyl, and C1-6 hydroxyalkyl, and t is 1 or 2;K4 is selected from the group consisting of -O- (CR11R12) m-CR13R14-C (O) -, -O-CR13R14- (CR11R12) m-, -NH- (CR11R12) m-CR13R14-C (O) -and -S- (CR11R12) m-CR13R14-C (O) -;R11 and R12 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, halogen and C1-6 alkyl;R13 is hydroxyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl C6-12 aryl or C3-8 cycloalkyl;R14 is selected from the group consisting of hydrogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-12 aryl and C3-8 cycloalkyl;or, R13 and R14 and the carbon atom to which they are linked form a C3-8 cycloalkyl;m is 0, 1, 2, 3 or 4.19.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 18, wherein LC is selected from: 20.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 14-19, wherein:L-D is represented by a formula selected from the group consisting of:wherein,R3 is independently C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -NO2 or halogen, m is 0, 1, 2, 3 or 4;R13 is hydroxyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl C6-12 aryl or C3-8 cycloalkyl;R14 is selected from the group consisting of hydrogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-12 aryl and C3-8 cycloalkyl;or, R13 and R14 and the carbon atom to which they are linked form a C3-8 cycloalkyl;R is as defined in claim 15.21.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 20, wherein:L-D is selected from the following structures:wherein:R3 is independently C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -NO2 or halogen, m is 0, 1, 2, 3 or 4;R13 is hydroxyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl C6-12 aryl or C3-8 cycloalkyl;R14 is selected from the group consisting of hydrogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-12 aryl and C3-8 cycloalkyl;or, R13 and R14 and the carbon atom to which they are linked form a C3-8 cycloalkyl.22.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 14-21, wherein the immunoconjugate is represented by the following formulas: wherein:R3 is independently C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -NO2 or halogen, m is 0, 1, 2, 3 or 4;R13 is hydroxyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl C6-12 aryl or C3-8 cycloalkyl;R14 is selected from the group consisting of hydrogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-12 aryl and C3-8 cycloalkyl;or, R13 and R14 and the carbon atom to which they are linked form a C3-8 cycloalkyl;y is a number of 1 to 20, preferably 2 to10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 4, 6, 8.23.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to claim 22, wherein the immunoconjugate is represented by the following formulas: y is a number of 1 to 20, preferably 2 to10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 4, 6, 8.24.The immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 13-23, wherein the immunoconjugate is represented by the following formulas: y is a number of 1 to 20, preferably 2 to10, more preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 or 4 to 8, most preferably 2, 4, 6, 8.25.A pharmaceutical composition comprising the immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1-24, and a pharmaceutically acceptable carrier.26.Use of the immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 24, or the pharmaceutical composition according to claim 25 in preparing a medicament for the treatment and / or prevention of a CDH17-mediated disease or condition.27.The use according to claim 26, wherein the CDH17-mediated disease or condition is a cancer with high CDH17 expression.28.The use according to claim 26, wherein the CDH17-mediated disease or condition is a cancer with moderate CDH17 expression.29.Use of the immunoconjugate or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof according to any one of claims 1 to 24, or the pharmaceutical composition according to claim 25 in preparing a medicament for the treatment and / or prevention of a tumor or cancer; preferably the tumor or cancer is gastrointestinal cancer, gastroesophageal cancer, gastric cancer, pancreatic cancer, gallbladder cancer, cholangiocarcinoma, stomach cancer, intestinal cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, lung cancer, breast cancer, anal cancer, prostate cancer, kidney cancer, bladder cancer, pharynx cancer, cancer of the nose, skin cancer, oral cancer, cancer of the tongue, esophageal cancer, vaginal cancer, cervical cancer, cancer of the spleen, testicular cancer, or glioblastoma.

Images