Combination therapies

Abstract

Provided are combination therapies and related compositions and methods for treating diseases such as cancers and autoimmune diseases, which include a combination of YM155 monobromide and at least one Bruton'sTyrosine Kinase (BTK) inhibitor.

Description

COMBINATION THERAPIESBackgroundTechnical Field

[0001] Embodiments of the present disclosure relate to combination therapies and related compositions and methods for treating diseases such as cancers and autoimmune diseases, which include a combination of YM155 monobromide and at least one Bruton’s Tyrosine Kinase (BTK) inhibitor.

[0002] Description of the Related Art

[0003] YM155 monobromide is a small-molecule that exhibits potent antitumor activity (see, e.g., Minematsu et al., Drug Metabolism and Disposition, 37: 619-628, 2008) . YM155 exerts anti-tumor effects in various in vivo cancer models, including prostate, pancreatic, and lung cancer (see, e.g., Nakahara et al., Cancer Research 67: 8014-8021, 2007; and Na et al., PLoS One 7 (6) , 2012) .

[0004] However, there is a need in the art to identify optimal combination therapies with YM155 monobromide, and thereby improve its clinical utility in the treatment of cancers and other diseases.

[0005] Brief Summary

[0006] Embodiments of the present disclosure include methods for treating a disease or condition in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a combination comprising:

[0007] (a) YM155 monobromide [1- (2-Methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1 H-naphtho [2, 3-d] imidazolium bromide] , or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and

[0008] (b) a Bruton’s Tyrosine Kinase inhibitor (BTKi) .

[0009] In some embodiments, the BTKi is selected from ibrutinib, acalabrutinib, BMS-935177, BMS-986142, branebrutinib, CGI-1746, elsubrutinib, evobrutinib, fenebrutinib, G-278, G-744, GDC-0834, GNE-431, orelabrutinib, pirtobrutinib, poseltinib, remibrutinib, rilzabrutinib, RN-486, spebrutinib, TAK-020, tirabrutinib, tolebrutinib, vecabrutinib, and zanubrutinib.

[0010] In some embodiments, the disease is a cancer, for instance, a blood (hematological) cancer. In certain embodiments, the blood cancer is selected from a lymphoma and a leukemia, including Non-Hodgkin’s lymphoma and Hodgkin’s lymphoma. In specific embodiments, the lymphoma is selected from Mantle cell lymphoma (MCL) , small lymphocytic lymphoma (SLL) including SLL / CLL optionally with 17p depletion, follicular  lymphoma (FL) , Marginal zone lymphoma (MZL) ,  macroglobulinemia (WM) , CNS lymphoma, Burkitt’s lymphoma (BL) , and diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) , and lymphoplasmacytic lymphoma. In certain embodiments, the leukemia is selected from chronic lymphocytic leukemia (CLL) including SLL / CLL, acute lymphoblastic leukemia (ALL) , acute myelogenous leukemia (AML) , and chronic myelogenous leukemia (CML) .

[0011] In some embodiments, the BTKi is ibrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL (for example, with 17p depletion) , MZL, WM, BL, and DLBCL. In certain embodiments, the BTKi is acalabrutinib and the blood cancer is selected from MCL and SLL / CLL. In particular embodiments, the BTKi is zanubrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL, WM, MZL, FL, BL, and DLBCL. In certain embodiments, the BTKi is tirabrutinib and the blood cancer is selected from MCL, CLL, WM, CNS lymphoma, and lymphoplasmacytic lymphoma. In some embodiments, the BTKi is orelabrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL, and WM. In certain embodiments, the BTKi is pirtobrutinib and the blood cancer is selected from MCL and CLL / SLL.

[0012] In certain embodiments, the combination of (a) and (b) reduces cancer cell growth and / or increases cancer cell-killing in the subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to (a) or (b) alone. In some embodiments, the combination of (a) and (b) synergistically reduces cancer cell growth and / or synergistically increases cancer cell-killing in the subject relative to (a) or (b) alone.

[0013] In certain embodiments, the disease or condition is an autoimmune disease or inflammatory immune-mediated disease. In particular embodiments, the disease is selected from graft versus host disease (GVHD) , rheumatoid arthritis (RA) , multiple sclerosis (MS) , systemic lupus erythematosus (SLE) , pemphigus vulgaris (PV) , Sjogren’s disease (SJ) , chronic spontaneous urticaria (CSU) , and asthma. In certain embodiments, the BTKi is ibrutinib and the disease is GVHD. In some embodiments, the BTKi is tirabrutinib and the disease is selected from RA, PV, and SJ.

[0014] In certain embodiments, the combination of (a) and (b) reduces (aberrant) lymphocyte activity in the subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to (a) or (b) alone. In particular embodiments, the combination of (a) and (b) synergistically reduces (aberrant) lymphocyte activity in the subject relative to (a) or (b) alone.

[0015] In certain embodiments, the subject is a human subject. Some methods comprise administering (a) and (b) to the subject as separate compositions. Certain methods comprise administering (a) and (b) to the subject in the same composition.

[0016] Also included are therapeutic compositions, comprising:

[0017] (a) YM155 monobromide [1- (2-Methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1 H-naphtho [2, 3-d] imidazolium bromide] , or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and

[0018] (b) a Bruton’s Tyrosine Kinase inhibitor (BTKi) .

[0019] In certain embodiments, the BTKi is selected from ibrutinib, acalabrutinib, BMS-935177, BMS-986142, branebrutinib, CGI-1746, elsubrutinib, evobrutinib, fenebrutinib, G-278, G-744, GDC-0834, GNE-431, orelabrutinib, pirtobrutinib, poseltinib, remibrutinib, rilzabrutinib, RN-486, spebrutinib, TAK-020, tirabrutinib, tolebrutinib, vecabrutinib, and zanubrutinib.

[0020] Some therapeutic compositions are for use in treating a disease or condition in a subject in need thereof. Also included is the use of a therapeutic composition described herein in the manufacture of a medicament for treating a disease or condition in a subject in need thereof. In certain embodiments, the disease is a cancer, for example, a blood (hematological) cancer. In certain embodiments, the blood cancer is selected from a lymphoma and a leukemia, including Non-Hodgkin’s lymphoma and Hodgkin’s lymphoma. In some embodiments, the lymphoma is selected from Mantle cell lymphoma (MCL) , small lymphocytic lymphoma (SLL) including SLL / CLL optionally with 17p depletion, follicular lymphoma (FL) , Marginal zone lymphoma (MZL) ,  macroglobulinemia (WM) , CNS lymphoma, Burkitt’s lymphoma (BL) , and diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) , and lymphoplasmacytic lymphoma. In specific embodiments, the leukemia is selected from chronic lymphocytic leukemia (CLL) including SLL / CLL, acute lymphoblastic leukemia (ALL) , acute myelogenous leukemia (AML) , and chronic myelogenous leukemia (CML) .

[0021] In certain embodiments, the BTKi is ibrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL (for instance, with 17p depletion) , MZL, WM, BL, and DLBCL. In certain embodiments, the BTKi is acalabrutinib and the blood cancer is selected from MCL and SLL / CLL. In some embodiments, the BTKi is zanubrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL, WM, MZL, FL, BL, and DLBCL. In certain embodiments, the BTKi is tirabrutinib and the blood cancer is selected from MCL, CLL, WM, CNS lymphoma, and lymphoplasmacytic lymphoma. In particular embodiments, the BTKi is orelabrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL, and WM. In some embodiments, the BTKi is pirtobrutinib and the blood cancer is selected from MCL and CLL / SLL.

[0022] In certain embodiments, the combination of (a) and (b) reduces cancer cell growth and / or increases cancer cell-killing in the subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to (a) or (b) alone. In some embodiments, the combination of (a) and (b) synergistically reduces cancer cell growth and / or synergistically increases cancer cell-killing in the subject relative to (a) or (b) alone.

[0023] In certain embodiments, the disease or condition is an autoimmune disease or inflammatory immune-mediated disease. In some embodiments, the disease is selected from graft versus host disease (GVHD) , rheumatoid arthritis (RA) , multiple sclerosis (MS) , systemic lupus erythematosus (SLE) , pemphigus vulgaris (PV) , Sjogren’s disease (SJ) , chronic spontaneous urticaria (CSU) , and asthma. In certain embodiments, the BTKi is ibrutinib and the disease is GVHD. In particular embodiments, the BTKi is tirabrutinib and the disease is selected from RA, PV, and SJ.

[0024] In some embodiments, the combination of (a) and (b) reduces (aberrant) lymphocyte activity in the subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to (a) or (b) alone. In certain embodiments, the combination of (a) and (b) synergistically reduces (aberrant) lymphocyte activity in the subject relative to (a) or (b) alone. In certain embodiments, the subject is a human subject.

[0025] Also included are patient care kits, comprising:

[0026] (a) YM155 monobromide [1- (2-Methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1 H-naphtho [2, 3-d] imidazolium bromide] , or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and

[0027] (b) a Bruton’s Tyrosine Kinase inhibitor (BTKi) .

[0028] In certain embodiments, the BTKi is selected from ibrutinib, acalabrutinib, BMS-935177, BMS-986142, branebrutinib, CGI-1746, elsubrutinib, evobrutinib, fenebrutinib, G-278, G-744, GDC-0834, GNE-431, orelabrutinib, pirtobrutinib, poseltinib, remibrutinib, rilzabrutinib, RN-486, spebrutinib, TAK-020, tirabrutinib, tolebrutinib, vecabrutinib, and zanubrutinib.Brief Description of the Drawings

[0029] Figure 1 shows that YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of mantle cell lymphoma cell line (JeKo-1) .

[0030] Figure 2 shows that YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of mantle cell lymphoma cell line (Z138) .

[0031] Figure 3 shows that YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of mantle cell lymphoma cell line (Mino) .

[0032] Figure 4 shows that YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of chronic lymphocytic leukemia (MEC-1) .

[0033] Figure 5 shows that YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of Human Burkitt’s Lymphoma cells (RAMOS) .

[0034] Figure 6 shows apoptosis analysis of cells following YM155 and Ibrutinib treatment as measured by FACS assay. Values reported as means, error bars represent standard deviation (SD) (n=3) . **: P<0.01; ***: P<0.001.

[0035] Figures 7A-7D show Fractional Affect (Fa) values determined by comparing the results (MTS) obtained for untreated controls and treated cells following 48 or 72-hour exposure to agents administered at a fixed ratio (YM155: Ibrutinib, 1: 5000) . The Combination Index (CI) was then analyzed. CI values less than 1.0 denote a synergistic interaction. SU-DHL2 (7A) and SU-DHL-4 (7C) cells were treated for 48 hours, and Jeko-1 (7B) and RAMOS (7D) cells were treated for 72 hours.

[0036] Figures 8A-8D show Fractional Affect (Fa) values determined by comparing the results (MTS) obtained for untreated controls and treated cells following 48 or 72-hour exposure to agents administered at a fixed ratio (YM155: Zanubrutinib, 1: 10000) . The Combination Index (CI) was then analyzed. CI values less than 1.0 denote a synergistic interaction. SU-DHL2 (8A) and SU-DHL-4 (8C) cells were treated for 48 hours, and Jeko-1 (8B) and RAMOS (8D) cells were treated for 72 hours.DETAILED DESCRIPTION

[0037] Embodiments of the present disclosure relate to the discovery to the unexpected synergy between YM155 monobromide and a variety of Bruton’s Tyrosine Kinase (BTK) inhibitors (or BTKis) in modulating the cell death / apoptosis of lymphocytes such as lymphoma and leukemia cells. Such could provide clinical utility in treating cancers such as hematological cancers, and autoimmune / inflammatory diseases associated with aberrant lymphocyte activity such as GVHD.

[0038] Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by those of ordinary skill in the art to which the disclosure belongs. Although any methods, materials, compositions, reagents, cells, similar or equivalent similar or equivalent to those described herein can be used in the practice or testing of the subject matter of the present disclosure, preferred methods and materials are described. All publications and references, including but not limited to patents and patent applications, cited in this specification are herein incorporated by reference in their entirety as if each individual publication or reference were specifically and individually indicated to be incorporated by reference herein as being fully set forth. Any patent application to which this application claims priority is also incorporated by reference herein in its entirety in the manner described above for publications and references.

[0039] For the purposes of the present disclosure, the following terms are defined below.

[0040] The articles “a” and “an” are used herein to refer to one or to more than one (i.e., to at least one) of the grammatical object of the article. By way of example, “an element” means one element or more than one element.

[0041] An “antagonist” or “inhibitor” refers to biological structure or chemical agent that interferes with or otherwise reduces the physiological action of another molecule, such as a protein. In some instances, the antagonist or inhibitor specifically binds to the other molecule and / or a functional ligand of the other molecule. In some instances, the antagonist or inhibitor down-regulates the expression of the other molecule. Included are full and partial antagonists.

[0042] An “agonist” or “activator” refers to biological structure or chemical agent that increases or enhances the physiological action of another agent or molecule. In some instances, the agonist specifically binds to the other agent or molecule. Included are full and partial agonists.

[0043] By “about” is meant a quantity, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight or length that varies by as much as 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, or 1%to a reference quantity, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight, or length.

[0044] The term “binding” refers to a direct association between two molecules, due to, for example, covalent, electrostatic, hydrophobic, and ionic and / or hydrogen-bond interactions, including interactions such as salt bridges and water bridges.

[0045] Throughout this disclosure, unless the context requires otherwise, the words “comprise, ” “comprises, ” and “comprising” will be understood to imply the inclusion of a stated step or element or group of steps or elements but not the exclusion of any other step or element or group of steps or elements.

[0046] By “consisting of” is meant including, and limited to, whatever follows the phrase “consisting of. ” Thus, the phrase “consisting of” indicates that the listed elements are required or mandatory, and that no other elements may be present. By “consisting essentially of” is meant including any elements listed after the phrase, and limited to other elements that do not interfere with or contribute to the activity or action specified in the disclosure for the listed elements. Thus, the phrase “consisting essentially of” indicates that the listed elements are required or mandatory, but that other elements are optional and may or may not be present depending upon whether or not they materially affect the activity or action of the listed elements.

[0047] The term “half maximal effective concentration” or “EC50” refers to the concentration of an agent as described herein at which it induces a response halfway between the baseline and maximum after some specified exposure time; the EC50 of a graded dose response curve therefore represents the concentration of a compound at which 50%of its  maximal effect is observed. EC50 also represents the plasma concentration required for obtaining 50%of a maximum effect in vivo. Similarly, the “EC90” refers to the concentration of an agent or composition at which 90%of its maximal effect is observed. The “EC90” can be calculated from the “EC50” and the Hill slope, or it can be determined from the data directly, using routine knowledge in the art. In some embodiments, the EC50 of an agent is less than about 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200 or 500 nM. In some embodiments, an agent will have an EC50 value of about 1 nM or less.

[0048] The “half maximal inhibitory concentration” (or “IC50” ) is a measure of the potency of an agent in inhibiting a specific biological or biochemical function. This quantitative measure indicates how much of a particular agent (inhibitor) is needed to inhibit a given biological process (or component of a process, i.e. an enzyme, cell, cell receptor or microorganism) by half. The values are typically expressed as molar concentration. The concentration is commonly used as a measure of antagonist drug potency in pharmacological research. In some instances, IC50 represents the concentration of an agent that is required for 50%inhibition in vitro. The IC50 of an agent can be determined by constructing a dose-response curve and examining the effect of different concentrations of the agent on the desired activity, for example, inhibition of tumor cell proliferation, tumor-cell killing.

[0049] The “half-life” of an agent refers to the time it takes for the agent to lose half of its pharmacologic, physiologic, or other activity, relative to such activity at the time of administration into the serum or tissue of an organism, or relative to any other defined time-point. “Half-life” can also refer to the time it takes for the amount or concentration of an agent to be reduced by half of a starting amount administered into the serum or tissue of an organism, relative to such amount or concentration at the time of administration into the serum or tissue of an organism, or relative to any other defined time-point. The half-life can be measured in serum and / or any one or more selected tissues.

[0050] The terms “modulating” and “altering” include “increasing, ” “enhancing” or “stimulating, ” as well as “decreasing” or “reducing, ” typically in a statistically significant or a physiologically significant amount or degree relative to a control. An “increased, ” “stimulated” or “enhanced” amount is typically a “statistically significant” amount, and may include an amount that is about or at least about 1.1, 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000-fold or more of the amount produced by no composition or a control composition (e.g., the absence of agent or a different agent) . An “increased, ” “stimulated” or “enhanced” amount may also include an amount that is about or at least about 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 200%, 300%, 400%,  500%, 600%, 700%, 800%, 900%, 1000%, 2000%, 3000%, 4000%, 5000%or more of the amount produced by no composition or a control composition. A “decreased” or “reduced” amount is typically a “statistically significant” amount, and may include an amount that is about or at least about 1.1, 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, or 5000-fold less of the amount produced by no composition or a control composition. A “decreased” or “reduced” amount may also include a 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900%, 1000%, 2000%, 3000%, 4000%, or 5000%less of the amount produced by no composition or a control composition. Examples of comparisons and “statistically significant” amounts are described herein.

[0051] “Prodrug” is meant to indicate a compound that may be converted under physiological conditions or by solvolysis to a biologically active compound described herein, for example, a GSI compound. Thus, the term “prodrug” refers to a metabolic precursor of a compound that is pharmaceutically acceptable. A prodrug may be inactive when administered to a subject in need thereof, but is converted in vivo to an active compound. Prodrugs may be rapidly transformed in vivo to yield the parent compound, for example, by hydrolysis in blood. The prodrug compound often offers advantages of solubility, tissue compatibility or delayed release in a mammalian organism (see, for example, Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985) , pp. 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam) ) . A discussion of prodrugs is provided in Higuchi, T., et al., A. C. S. Symposium Series, Vol. 14, and in Bioreversible Carriers in Drug Design, Ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987. Examples of prodrugs include, but are not limited to, acetate, formate, and benzoate derivatives of alcohol or amide derivatives of amine functional groups in the compounds of the disclosure and the like.

[0052] The term “prodrug” is also meant to include any covalently bonded carriers, which release the active compound in vivo when such prodrug is administered to a subject. Prodrugs of a compound may be prepared by modifying functional groups present in the compound in such a way that the modifications are cleaved, either in routine manipulation or in vivo, to the parent compound. Prodrugs include compounds where a hydroxy, amino, or mercapto group is bonded to any group that, when the prodrug of the compound is administered to a subject, cleaves to form a free hydroxy, free amino, or free mercapto group, respectively.

[0053] “Pharmaceutically-acceptable carrier, diluent or excipient” includes without limitation any adjuvant, carrier, excipient, glidant, sweetening agent, diluent, preservative, dye / colorant, flavor enhancer, surfactant, wetting agent, dispersing agent, suspending agent, stabilizer,  isotonic agent, solvent, or emulsifier, for example, which has been approved by the United States Food and Drug Administration as being acceptable for use in humans or domestic animals.

[0054] “Pharmaceutically acceptable salt” includes both acid and base addition salts.

[0055] “Pharmaceutically acceptable acid addition salt” refers to those salts which retain the biological effectiveness and properties of the free bases, which are not biologically or otherwise undesirable, and which are formed with inorganic acids such as, but are not limited to, hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid and the like, and organic acids such as, but not limited to, acetic acid, 2, 2-dichloroacetic acid, adipic acid, alginic acid, ascorbic acid, aspartic acid, benzenesulfonic acid, benzoic acid, 4-acetamidobenzoic acid, camphoric acid, camphor-10-sulfonic acid, capric acid, caproic acid, caprylic acid, carbonic acid, cinnamic acid, citric acid, cyclamic acid, dodecylsulfuric acid, ethane-1, 2-disulfonic acid, ethanesulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, formic acid, fumaric acid, galactaric acid, gentisic acid, glucoheptonic acid, gluconic acid, glucuronic acid, glutamic acid, glutaric acid, 2-oxo-glutaric acid, glycerophosphoric acid, glycolic acid, hippuric acid, isobutyric acid, lactic acid, lactobionic acid, lauric acid, maleic acid, malic acid, malonic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, mucic acid, naphthalene-1, 5-disulfonic acid, naphthalene-2-sulfonic acid, 1-hydroxy-2-naphthoic acid, nicotinic acid, oleic acid, orotic acid, oxalic acid, palmitic acid, pamoic acid, propionic acid, pyroglutamic acid, pyruvic acid, salicylic acid, 4-aminosalicylic acid, sebacic acid, stearic acid, succinic acid, tartaric acid, thiocyanic acid, p-toluenesulfonic acid, trifluoroacetic acid, undecylenic acid, and the like.

[0056] “Pharmaceutically acceptable base addition salt” refers to those salts which retain the biological effectiveness and properties of the free acids, which are not biologically or otherwise undesirable. These salts are prepared from addition of an inorganic base or an organic base to the free acid. Salts derived from inorganic bases include, but are not limited to, the sodium, potassium, lithium, ammonium, calcium, magnesium, iron, zinc, copper, manganese, aluminum salts and the like. Preferred inorganic salts are the ammonium, sodium, potassium, calcium, and magnesium salts. Salts derived from organic bases include, but are not limited to, salts of primary, secondary, and tertiary amines, substituted amines including naturally occurring substituted amines, cyclic amines and basic ion exchange resins, such as ammonia, isopropylamine, trimethylamine, diethylamine, triethylamine, tripropylamine, diethanolamine, ethanolamine, deanol, 2-dimethylaminoethanol, 2-diethylaminoethanol, dicyclohexylamine, lysine, arginine, histidine, caffeine, procaine, hydrabamine, choline, betaine, benethamine, benzathine, ethylenediamine, glucosamine, methylglucamine, theobromine, triethanolamine, tromethamine, purines, piperazine, piperidine, N-ethylpiperidine, polyamine resins and the like. Particularly preferred organic  bases are isopropylamine, diethylamine, ethanolamine, trimethylamine, dicyclohexylamine, choline and caffeine.

[0057] Specific examples of YM155 salts include a pamoate salt of YM155 monobromide, 1- (2-methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1H-naphtho [2, 3-d]imidazolium pamoate. In some embodiments, the pamoate salt is an anhydrate. In some embodiments, the pamoate salt is a solvate, for example, an ethanol solvate, an N-methyl pyrrolidone solvate, an N, N-dimethylacetamide solvate, a hexafluoroisopropyl acrylate solvate, or an N, N-dimethylformamide solvate (see, for example, PCT / CN2023 / 071763) .

[0058] As used herein, the term “solvate” refers to an aggregate that comprises one or more molecules of a compound described herein with one or more molecules of solvent. The solvent may be water, in which case the solvate may be a hydrate. Alternatively, the solvent may be a biologically-inert organic solvent. Thus, the compounds described herein may exist as a hydrate, including a monohydrate, dihydrate, hemihydrate, sesquihydrate, trihydrate, tetrahydrate and the like, as well as the corresponding solvated forms. The compound of the disclosure may be true solvates, while in other cases, the compound may merely retain adventitious water or be a mixture of water plus some adventitious solvent.

[0059] A “pharmaceutical composition” refers to a formulation of an agent described herein (e.g., YM155, BTKi) and a medium generally accepted in the art for the delivery of the biologically active compound to mammals, e.g., humans. Such a medium includes all pharmaceutically acceptable carriers, diluents, and excipients.

[0060] The YM155 and BTKi compounds described herein, or their pharmaceutically-acceptable salts, may contain one or more asymmetric centers and may thus give rise to enantiomers, diastereomers, and other stereoisomeric forms that may be defined, in terms of absolute stereochemistry, as (R) -or (S) -or, as (D) -or (L) -for amino acids. The present disclosure is meant to include all such possible isomers, as well as their racemic and optically pure forms. Optically active (+) and (-) , (R) -and (S) -, or (D) -and (L) -isomers may be prepared using chiral synthons or chiral reagents, or resolved using conventional techniques, for example, chromatography and fractional crystallization. Conventional techniques for the preparation / isolation of individual enantiomers include chiral synthesis from a suitable optically pure precursor or resolution of the racemate (or the racemate of a salt or derivative) using, for example, chiral high pressure liquid chromatography (HPLC) . When the compounds described herein contain olefinic double bonds or other centers of geometric asymmetry, and unless specified otherwise, it is intended that the compounds include both E and Z geometric isomers. Likewise, all tautomeric forms are also intended to be included.

[0061] In certain embodiments, the “purity” of any given agent in a composition may be defined. For instance, certain compositions may comprise an agent that is at least 80%, 85%,  90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%pure on a weight-weight basis, including all decimals and ranges in between, as measured, for example and by no means limiting, by high performance liquid chromatography (HPLC) , a well-known form of column chromatography used frequently in biochemistry and analytical chemistry to separate, identify, and quantify compounds.

[0062] The term “solubility” refers to the property of an agent provided herein to dissolve in a liquid solvent and form a homogeneous solution. Solubility is typically expressed as a concentration, either by mass of solute per unit volume of solvent (g of solute per kg of solvent, g per dL (100 mL) , mg / ml, etc. ) , molarity, molality, mole fraction or other similar descriptions of concentration. The maximum equilibrium amount of solute that can dissolve per amount of solvent is the solubility of that solute in that solvent under the specified conditions, including temperature, pressure, pH, and the nature of the solvent. In certain embodiments, solubility is measured at physiological pH, or other pH, for example, at pH 5.0, pH 6.0, pH 7.0, pH 7.4, pH 7.6, pH 7.8, or pH 8.0 (e.g., about pH 5-8) . In certain embodiments, solubility is measured in water or a physiological buffer such as PBS or NaCl (with or without NaPO4) . In specific embodiments, solubility is measured at relatively lower pH (e.g., pH 6.0) and relatively higher salt (e.g., 500mM NaCl and 10mM NaPO4) . In certain embodiments, solubility is measured in a biological fluid (solvent) such as blood or serum. In certain embodiments, the temperature can be about room temperature (e.g., about 20, 21, 22, 23, 24, 25℃) or about body temperature (37℃) . In certain embodiments, an agent has a solubility of at least about 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 or 100 mg / ml at room temperature or at 37℃.

[0063] “Stable compound” and “stable structure” are meant to indicate a compound that is sufficiently robust to survive isolation to a useful degree of purity from a reaction mixture, and formulation into a therapeutic agent.

[0064] The term “polynucleotide” and “nucleic acid” includes mRNA, RNA, cRNA, cDNA, and DNA including genomic DNA. The term typically refers to polymeric form of nucleotides of at least 10 bases in length, either ribonucleotides or deoxynucleotides or a modified form of either type of nucleotide. The term includes single and double stranded forms of DNA.

[0065] A “gene” refers to a hereditary unit consisting of a sequence of DNA that occupies a specific location on a chromosome and codes for a functional molecule or protein. The structure of a gene consists of many elements of which the actual protein coding sequence is often only a small part. These elements include DNA regions that are not transcribed as well as untranslated regions of the RNA. Additionally, genes can have expression-altering regulatory regions that lie many kilobases upstream or downstream of the coding sequence.  The information in a gene can also be represented by (or found in) a sequence of RNA or encoded protein.

[0066] A “subject” or a “subject in need thereof” includes a mammalian subject such as a human subject.

[0067] By “statistically significant” it is meant that the result was unlikely to have occurred by chance. Statistical significance can be determined by any method known in the art. Commonly used measures of significance include the p-value, which is the frequency or probability with which the observed event would occur, if the null hypothesis were true. If the obtained p-value is smaller than the significance level, then the null hypothesis is rejected. In simple cases, the significance level is defined at a p-value of 0.05 or less.

[0068] “Substantially” or “essentially” means nearly totally or completely, for instance, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%or greater of some given reference quantity, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight, length, or other.

[0069] A “stereoisomer” refers to a compound made up of the same atoms bonded by the same bonds but having different three-dimensional structures, which are not interchangeable. The present disclosure includes various stereoisomers and mixtures thereof and includes “enantiomers” , which refers to two stereoisomers whose molecules are non-superimposeable mirror images of one another.

[0070] A “tautomer” refers to a proton shift from one atom of a molecule to another atom of the same molecule. The present disclosure includes tautomers of any said compounds.

[0071] “Therapeutic response” refers to improvement of symptoms (whether or not sustained) based on the administration of the therapeutic response.

[0072] As used herein, the terms “therapeutically effective amount” , “therapeutic dose, ” “prophylactically effective amount, ” or “diagnostically effective amount” is the amount of an agent needed to elicit the desired biological response following administration.

[0073] As used herein, “treatment” of a subject (e.g. a mammal, such as a human) or a cell is any type of intervention used in an attempt to alter the natural course of the subject or cell. Treatment includes, but is not limited to, administration of a pharmaceutical composition, and may be performed either prophylactically or subsequent to the initiation of a pathologic event or contact with an etiologic agent. Also included are “prophylactic” treatments, which can be directed to reducing the rate of progression of the disease or condition being treated, delaying the onset of that disease or condition, or reducing the severity of its onset. “Treatment” or “prophylaxis” does not necessarily indicate complete eradication, cure, or prevention of the disease or condition, or associated symptoms thereof.

[0074] The term “wild-type” refers to a gene or gene product (e.g., a polypeptide) that is most frequently observed in a population and is thus arbitrarily designed the “normal” or “wild-type” form of the gene.

[0075] Each embodiment in this specification is to be applied to every other embodiment unless expressly stated otherwise.

[0076] Embodiments of the present disclosure relate generally to combination therapies for treating a disease or condition in a subject in need thereof, comprising:

[0077] (a) YM155 monobromide [1- (2-Methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1 H-naphtho [2, 3-d] imidazolium bromide] , or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and

[0078] (b) a Bruton’s Tyrosine Kinase inhibitor (BTKi) .

[0079] “YM155 monobromide” refers to the small molecule [1- (2-Methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1 H-naphtho [2, 3-d] imidazolium bromide] , having the molecular formula C20H19N4O3 ·Br, and the CAS Number 781661-94-7, and includes pharmaceutically-acceptable salts and acids thereof, or pharmaceutically-acceptable salt and acid alternatives thereof.

[0080] “Bruton’s Tyrosine Kinase” refers to is a tyrosine kinase that is encoded by the BTK gene in humans (see UniProt: Q06187) . BTK contains five different protein interaction domains: an amino terminal pleckstrin homology (PH) domain, a proline-rich TEC homology (TH) domain, SRC homology (SH) domains SH2 and SH3, as well as a protein kinase domain with tyrosine phosphorylation activity. In certain embodiments the BTKi is a “small molecule” BTKi inhibitor. A small molecule refers to an organic compound that is of synthetic or biological origin (biomolecule) , but which is typically not a polymer. Organic compounds refer to a large class of chemical compounds whose molecules contain carbon, typically excluding those that contain only carbonates, simple oxides of carbon, or cyanides. A “biomolecule” refers generally to an organic molecule that is produced by a living organism, including large polymeric molecules (biopolymers) such as peptides, polysaccharides, and nucleic acids as well, and small molecules such as primary secondary metabolites, lipids, phospholipids, glycolipids, sterols, glycerolipids, vitamins, and hormones. A “polymer” refers generally to a large molecule or macromolecule composed of repeating structural units, which are typically connected by covalent chemical bond.

[0081] In certain embodiments, a small molecule has a molecular weight of less than about 1000-2000 Daltons, typically between about 300 and 700 Daltons, and including about 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 500, 650, 600, 750, 700, 850, 800, 950, 1000 or 2000 Daltons. Certain small molecules can have the “specific binding” characteristics. For instance, in some embodiments, a small molecule specifically binds to a target described herein (BTK or a domain thereof) with a binding affinity (Kd) of about, at least about, or less than about, 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, or 50 nM.

[0082] In certain embodiments, the BTKi is selected from ibrutinib, acalabrutinib, BMS-935177, BMS-986142, branebrutinib, CGI-1746, elsubrutinib, evobrutinib, fenebrutinib, G-278, G-744, GDC-0834, GNE-431, olmutinib, orelabrutinib, pirtobrutinib, poseltinib, remibrutinib, rilzabrutinib, RN-486, spebrutinib, TAK-020, tirabrutinib, tolebrutinib, vecabrutinib, and zanubrutinib.

[0083] In some embodiments, the disease is a cancer. In specific embodiments, the cancer is a blood (or hematological) cancer. General examples of blood cancers include lymphomas and leukemias.

[0084] Exemplary lymphomas include Non-Hodgkin’s lymphoma and Hodgkin’s lymphoma. In specific embodiments, the lymphoma is selected from mantle cell lymphoma (MCL) , small lymphocytic lymphoma (SLL) including SLL / CLL optionally with 17p depletion, follicular lymphoma (FL) , Marginal zone lymphoma (MZL) ,  macroglobulinemia (WM) , CNS lymphoma, Burkitt’s lymphoma (BL) , and diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) , and lymphoplasmacytic lymphoma. Exemplary leukemias include chronic lymphocytic leukemia (CLL) including SLL / CLL, acute lymphoblastic leukemia (ALL) , acute myelogenous leukemia (AML) , and chronic myelogenous leukemia (CML) .

[0085] In some embodiments, the blood cancer is MCL, characterized, for example, by CD5 positive antigen-naive pregerminal center B-cells within the mantle zone that surround normal germinal center follicles. In some embodiments, the MCL cells over-express cyclin D1 due to the t (11: 14) translocation. In some embodiments, the subject with MCL has undergone one or two prior lines of therapy, and has, for example, relapsed from the prior therapy. Examples of prior frontline therapy include CHOP (cyclophosphamide, hydroxydaunorubicin (or doxorubicin, adriamycin) , oncovine (or vincristine) , and prednisone or prednisolone) optionally with rituximab (anti-CD20 mAb) , or HyperCVAD (alternating courses of cyclophosphamide, vincristine, doxorubicin, and dexamethasone; and methotrexate and cytarabine) . Examples of second line therapy include fludarabine, combined with cyclophosphamide and / or mitoxantrone, optionally with rituximab.

[0086] In some embodiments, the blood cancer is SLL or CLL, including SLL / CLL. SLL and CLL are types of non-Hodgkin’s lymphoma. In SLL, the cancer appears primarily in the lymph nodes. In CLL, the cancer appears mainly in the blood and bone marrow. In some instances, a subject with CLL is characterized by more than about 5,000 monoclonal lymphocytes per cubic millimeter (mm3) in the blood, and a subject with SLL is characterized by less than about 5,000 monoclonal lymphocytes per mm3 in the blood. In some embodiments, the subject with SLL and / or CLL has the 17p depletion, a microdeletion syndrome characterized by an abnormality in the short (p) arm of chromosome 17, and / or mutations in the TP53 gene (see, for example, Sellner et al., Curr Hematol Malig Rep. 8 (1) : 81-90, 2013) . In some embodiments, the subject has CLL classified as Stage 0  (increased white blood cell count and near-normal red blood cell and platelet counts but no enlargement of the lymph nodes, spleen, or liver) , Stage 1 (increased white blood cell count but near-normal red blood cell and platelet counts and enlarged lymph node) , Stage 2 (increased white blood cell count but near-normal red blood cell and platelet counts; enlarged spleen and possibly an enlarged liver and lymph nodes) , Stage 3 (increased white blood cell count with low red blood cell count and normal platelets; lymph nodes, spleen, and liver may or may not be enlarged) , or Stage 4 (increased white blood cell count with low or almost normal red blood cell count and low platelets; lymph nodes, spleen, and liver are enlarged) .

[0087] In some embodiments, the lymphoma is BL, an aggressive non-Hodgkin B-cell lymphoma. In certain embodiments, the subject has BL characterized by a MYCC translocation (chromosome 8) and optionally MYCC overexpression.

[0088] In some embodiments, the lymphoma is DLBCL. In some embodiments, the subject has DLBCL characterized by increased MYCC gene copy number and / or a MYCC translocation. In certain embodiments, the DLBCL expresses or overexpresses BCL2, BCL6, or both. In some instances, the DLBCL comprises an alteration of the BCL2 gene (18q21 locus) , an alteration of the BCL-6 gene (3q27 locus) , or both. In some embodiments, the subject with DLBCL has undergone one or two prior lines of therapy, and has, for example, relapsed from the prior therapy. Examples of prior therapies include CHOP (cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine, and prednisone) , an anti-CD20 antibody, bendamustine, and PARP inhibitor therapy, including combinations thereof, such as R-CHOP (ritixumab + CHOP) . Additional examples of prior therapies include BCL2 inhibitor therapy such as ABT199 (venetoclax) , ABT-263 (navitoclax) , ABT-737, GX-15-070 (obatoclax) , GDC-0199, BP1002 (antisense) , AT-101, and SPC2996.

[0089] In specific embodiments for treating cancer, the BTKi is ibrutinib. In some embodiments, the combination of YM155 and ibrutinib is for treating a blood cancer such as MCL, CLL / SLL (for example, with 17p depletion) , WM, MZL, BL, or DLBCL. In some embodiments, the combination of YM155 and ibrutinib is for treating GVHD. In certain embodiments, the dosage of ibrutinib is about 50 to about 1000 mg daily, or about 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 mg daily, or about 300-600, 300-500, 300-400, 400-600, or 400-500 mg daily. In specific embodiments, the dosage of ibrutinib is about 420 mg daily for CLL / SLL or about 560 mg daily for MCL or MZL. In some embodiments, the ibrutinib is provided as 140 mg oral capsules.

[0090] In specific embodiments for treating cancer, the BTKi is acalabrutinib. In some embodiments, the combination of YM155 and acalabrutinib is for treating a blood cancer such as MCL or SLL / CLL. In some embodiments, the dosage of acalabrutinib is about 50 to  about 500 mg daily, or about 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 mg daily, for example as one or two daily dosages. In some embodiments, the dosage of acalabrutinib is about 100 mg approximately every 12 hours. In specific embodiments, acalabrutinib is provided as 100 mg oral capsules.

[0091] In specific embodiment for treating cancer, the BTKi is orelabrutinib. In some embodiments, the combination of YM155 and orelabrutinib is for treating a blood cancer such as MCL, SLL / CLL, or WM. In some embodiments, the dosage orelabrutinib is about 50 to about 500 mg daily, or about 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 mg daily, for example as one or two daily dosages. In some embodiments, the dosage of orelabrutinib is about 150 mg daily.

[0092] In specific embodiments for treating cancer, the BTKi is pirtobrutinib. In some embodiments, the combination of YM155 and pirtobrutinib is for treating a blood cancer such as MCL (including relapsed or refractory MCL, for example, after at least two lines of systemic therapy, including a BTKi) or CLL / SLL (for example, in a subject that has received at least two prior lines of therapy, including a BTKi and / or a BCL-2 inhibitor) . In some embodiments, the dosage of pirtobrutinib is about 50 to about 500 mg daily, or about 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 mg daily, for example as one or two daily dosages. In some embodiments, the dosage of pirtobrutinib is about 200 mg once daily. In specific embodiments, pirtobrutinib is provided as 50 or 100 mg oral tablets.

[0093] In specific embodiments for treating cancer, the BTKi is tirabrutinib. In some embodiments, the combination of YM155 and tirabrutinib is for treating a blood cancer such as CLL, WM, CNS lymphoma, and lymphoplasmacytic lymphoma. In some embodiments, the dosage of tirabrutinib is about 50 to about 1000 mg daily, or about 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 mg daily, or about 200-600, 200-500, 300-500, 300-400, or 400-500 mg daily. In specific embodiments, the dosage of tirabrutinib is about 320 mg daily or about 480 mg daily.

[0094] In specific embodiments for treating cancer, the BTKi is zanubrutinib. In some embodiments, the combination of YM155 and zanubrutinib is for treating a blood cancer such as MCL (for example, in a subject that has received at least one prior therapy for MCL) , SLL / CLL, WM, MZL (for example, relapsed or refractory MZL) , FL, BL, or DLBCL. In some embodiments, the dosage of zanubrutinib is about 50 to about 500 mg daily, or about 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 mg daily, for example as one or two daily dosages. In some embodiments, the dosage of zanubrutinib is about 160 mg twice daily or about 320 mg once daily. In specific embodiments, zanubrutinib is provided as 80 mg oral capsules.

[0095] In certain embodiments for treating cancers, the combination therapies described herein are sufficient to result in tumor regression, as indicated by a statistically significant  decrease in the amount of viable tumor, for example, at least a 10%, 20%, 30%, 40%, 50%or greater decrease in tumor mass or tumor volume, or by altered (e.g., decreased with statistical significance) scan dimensions. In certain embodiments, the combination therapies described are sufficient to result in stable disease. In certain embodiments, the combination therapies described herein are sufficient to result in clinically relevant reduction in symptoms of a particular disease indication known to the skilled clinician.

[0096] In some embodiments, the combination therapies described herein reduce cancer cell growth and / or increase cancer cell-killing in a subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to the YM155 or the BTKi alone. In certain instances, the combination therapies described herein synergistically reduces cancer cell growth and / or synergistically increase cancer cell-killing in a subject relative to YM155 or the BTKi alone. In certain embodiments, the combination therapies described herein are sufficient to result in tumor regression, as indicated by a statistically significant decrease in the amount of viable tumor, for example, at least a 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%or greater decrease in tumor mass, or by altered (e.g., decreased with statistical significance) scan dimensions.

[0097] The combination therapies for treating cancers can be combined with other therapeutic modalities. For example, a combination therapy described herein can be administered to a subject before, during, or after other therapeutic interventions, including symptomatic care, radiotherapy, surgery, transplantation, hormone therapy, photodynamic therapy, antibiotic therapy, or any combination thereof. Symptomatic care includes administration of corticosteroids, to reduce cerebral edema, headaches, cognitive dysfunction, and emesis, and administration of anti-convulsants, to reduce seizures. Radiotherapy includes whole-brain irradiation, fractionated radiotherapy, and radiosurgery, such as stereotactic radiosurgery, which can be further combined with traditional surgery.

[0098] In certain embodiments, the disease or condition is an autoimmune disease or inflammatory immune-mediated disease, for example, an immune disease associated with aberrant or pathological lymphocyte activity. The ability of the combination therapies described herein to synergistically kill aberrant lymphocytes evidences clinical utility in this type of disease indication. Thus, in specific embodiments, the autoimmune disease or inflammatory immune-mediated disease is associated with aberrant or otherwise pathological lymphocyte activity. Exemplary diseases or conditions of this type include graft versus host disease (GVHD) , rheumatoid arthritis (RA) , multiple sclerosis (MS) , systemic lupus erythematosus (SLE) , pemphigus vulgaris (PV) , Sjogren’s disease (SJ) , chronic spontaneous urticaria (CSU) , and asthma.

[0099] In some embodiments, the condition is GVHD, a condition that is commonly associated with allogeneic transplants, including bone marrow transplants, stem cell transplants, and certain blood transfusions. Certain embodiments include treating acute classic GVHD (aGVHD) , which typically occurs within about the first 10 to 100 days post-transplant; or persistent, recurrent, or late-onset aGVHD, which manifests with clinical features of classic acute GVHD but after 100 days of transplantation. Some embodiments include treating classic chronic GVHD (cGVHD) , which typically begins about 90 to 600 days post-transplant, and includes moderate to severe cases of cGVHD. In some embodiments, the GVHD is associated with the skin (skin GVHD) , liver (hepatic GVHD) , or gastrointestinal tract (GI VGHD) , including combinations thereof. In some embodiments, the subject with GVHD has undergone or is undergoing IV glucocorticoid therapy, such as prednisone therapy, or steroid-sparing immunosuppression / immunomodulation therapies such as calcineurin inhibitor therapy, including cyclosporine or tacrolimus therapy. In certain embodiments, the subject with GVHD has undergone or is undergoing sirolimus, pentostatin, etanercept, and / or alemtuzumab therapy.

[0100] In specific embodiments, the BTKi is ibrutinib and the disease is GVHD. In some embodiments, the BTKi is tirabrutinib and the disease is selected from RA, PV, and SJ.

[0101] In some embodiments for treating autoimmune and / or inflammatory immune-mediated diseases, the combination therapies described herein reduce lymphocyte activity (e.g., aberrant lymphocyte activity) in a subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to the YM155 or the BTKi alone. In certain instances, the combination therapies described herein synergistically reduce lymphocyte activity (e.g., aberrant lymphocyte activity) in a subject relative to YM155 or the BTKi alone.

[0102] In some embodiments, the combination therapies described herein increase median survival time of a subject by at least 4 weeks, 5 weeks, 6 weeks, 7 weeks, 8 weeks, 9 weeks, 10 weeks, 15 weeks, 20 weeks, 25 weeks, 30 weeks, 40 weeks, 50 weeks, 60 weeks, 70 weeks, 80 weeks, 90 weeks, 100 weeks, or longer. In certain embodiments, the combination therapies described herein increase median survival time of a subject by at least 1 year, 2 years, 3 years, 4 years, 5 years, or longer. In some embodiments, the combination therapies described herein increase progression-free survival by 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks, 5 weeks, 6 weeks, 7 weeks, 8 weeks, 9 weeks, 10 weeks, 15 weeks, 20 weeks, 25 weeks, 30 weeks, 40 weeks, 50 weeks, 60 weeks, 70 weeks, 80 weeks, 90 weeks, 100 weeks, or longer. In certain embodiments, the combination therapies described herein increase disease progression-free survival by 1 year, 2 years, 3 years, 4 years, 5 years, or longer. In certain embodiments, the combination therapies described herein are sufficient to result in stable disease. In certain embodiments, the combination therapies described herein are sufficient  to result in clinically relevant reduction in symptoms of a particular disease indication known to the skilled clinician.

[0103] Methods for identifying subjects with one or more of the diseases or conditions described herein are known in the art.

[0104] For in vivo use, for instance, for the treatment of human disease or testing, the agents described herein are generally incorporated into one or more therapeutic or pharmaceutical compositions prior to administration.

[0105] To prepare a therapeutic or pharmaceutical composition, an effective or desired amount of one or more agents is typically mixed with any pharmaceutical carrier (s) or excipient known to those skilled in the art to be suitable for the particular agent and / or mode of administration. A pharmaceutical carrier may be liquid, semi-liquid or solid. Solutions or suspensions used for parenteral, intradermal, subcutaneous or topical application may include, for example, a sterile diluent (such as water) , saline solution (e.g., phosphate buffered saline; PBS) , fixed oil, polyethylene glycol, glycerin, propylene glycol or other synthetic solvent; antimicrobial agents (such as benzyl alcohol and methyl parabens) ; antioxidants (such as ascorbic acid and sodium bisulfite) and chelating agents (such as ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) ) ; buffers (such as acetates, citrates and phosphates) . If administered intravenously (e.g., by IV infusion) , suitable carriers include physiological saline or phosphate buffered saline (PBS) , and solutions containing thickening and solubilizing agents, such as glucose, polyethylene glycol, polypropylene glycol and mixtures thereof.

[0106] Administration of agents described herein, in pure form or in an appropriate therapeutic or pharmaceutical composition, can be carried out via any of the accepted modes of administration of agents for serving similar utilities. The therapeutic or pharmaceutical compositions can be prepared by combining an agent-containing composition with an appropriate physiologically acceptable carrier, diluent or excipient, and may be formulated into preparations in solid, semi-solid, liquid or gaseous forms, such as tablets, capsules, powders, granules, ointments, solutions, suppositories, injections, inhalants, gels, microspheres, and aerosols. In addition, other pharmaceutically active ingredients (including other small molecules as described elsewhere herein) and / or suitable excipients such as salts, buffers and stabilizers may, but need not, be present within the composition.

[0107] Administration may be achieved by a variety of different routes, including oral, parenteral, nasal, intravenous, intradermal, intramuscular, subcutaneous, or topical. Preferred modes of administration depend upon the nature of the condition to be treated or prevented. Particular embodiments include administration by IV infusion.

[0108] Carriers can include, for example, pharmaceutically-or physiologically-acceptable carriers, excipients, or stabilizers that are non-toxic to the cell or mammal being exposed thereto at the dosages and concentrations employed. Often the physiologically-acceptable carrier is an aqueous pH buffered solution. Examples of physiologically acceptable carriers include buffers such as phosphate, citrate, and other organic acids; antioxidants including ascorbic acid; low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptide; proteins, such as serum albumin, gelatin, or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates including glucose, mannose, or dextrins; chelating agents such as EDTA; sugar alcohols such as mannitol or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; and / or nonionic surfactants such as polysorbate 20 (TWEENTM) polyethylene glycol (PEG) , and poloxamers (PLURONICSTM) , and the like.

[0109] In some embodiments, one or more agents can be entrapped in microcapsules prepared, for example, by coacervation techniques or by interfacial polymerization (for example, hydroxymethylcellulose or gelatin-microcapsules and poly-(methylmethacylate) microcapsules, respectively) , in colloidal drug delivery systems (for example, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nano-particles and nanocapsules) , or in macroemulsions. Such techniques are disclosed in Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Oslo, A., Ed., (1980) . The particle (s) or liposomes may further comprise other therapeutic or diagnostic agents.

[0110] The precise dosage and duration of treatment is a function of the disease being treated and may be determined empirically using known testing protocols or by testing the compositions in model systems known in the art and extrapolating therefrom. Controlled clinical trials may also be performed. Dosages may also vary with the severity of the condition to be alleviated. A pharmaceutical composition is generally formulated and administered to exert a therapeutically useful effect while minimizing undesirable side effects. The composition may be administered one time, or may be divided into a number of smaller doses to be administered at intervals of time. For any particular subject, specific dosage regimens may be adjusted over time according to the individual need.

[0111] Certain embodiments include administering a dosage regimen of YM155 via continuous intravenous administration, for example, at about 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, or 5.0 mg / m2 / day of YM155 by continuous intravenous infusion for about 5, 6, or 7 days. In some instances, the foregoing dosing regimen is repeated every 2, 3, or 4 weeks or so.

[0112] Typical routes of administering these and related therapeutic or pharmaceutical compositions thus include, without limitation, oral, topical, transdermal, inhalation, parenteral, sublingual, buccal, rectal, vaginal, and intranasal. The term parenteral as used herein  includes subcutaneous injections, intravenous, intramuscular, intrasternal injection or infusion techniques. Therapeutic or pharmaceutical compositions according to certain embodiments of the present disclosure are formulated so as to allow the active ingredients contained therein to be bioavailable upon administration of the composition to a subject or patient. Compositions that will be administered to a subject or patient may take the form of one or more dosage units, where for example, a tablet may be a single dosage unit, and a container of a herein described agent in aerosol form may hold a plurality of dosage units. Actual methods of preparing such dosage forms are known, or will be apparent, to those skilled in this art; for example, see Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition (Philadelphia College of Pharmacy and Science, 2000) . The composition to be administered will typically contain a therapeutically effective amount of an agent described herein, for treatment of a disease or condition of interest.

[0113] A therapeutic or pharmaceutical composition may be in the form of a solid or liquid. In one embodiment, the carrier (s) are particulate, so that the compositions are, for example, in tablet or powder form. The carrier (s) may be liquid, with the compositions being, for example, an oral oil, injectable liquid or an aerosol, which is useful in, for example, inhalatory administration. When intended for oral administration, the pharmaceutical composition is preferably in either solid or liquid form, where semi-solid, semi-liquid, suspension and gel forms are included within the forms considered herein as either solid or liquid. Certain embodiments include sterile, injectable solutions.

[0114] As a solid composition for oral administration, the pharmaceutical composition may be formulated into a powder, granule, compressed tablet, pill, capsule, chewing gum, wafer or the like. Such a solid composition will typically contain one or more inert diluents or edible carriers. In addition, one or more of the following may be present: binders such as carboxymethylcellulose, ethyl cellulose, microcrystalline cellulose, gum tragacanth or gelatin; excipients such as starch, lactose or dextrins, disintegrating agents such as alginic acid, sodium alginate, Primogel, corn starch and the like; lubricants such as magnesium stearate or Sterotex; glidants such as colloidal silicon dioxide; sweetening agents such as sucrose or saccharin; a flavoring agent such as peppermint, methyl salicylate or orange flavoring; and a coloring agent. When the pharmaceutical composition is in the form of a capsule, for example, a gelatin capsule, it may contain, in addition to materials of the above type, a liquid carrier such as polyethylene glycol or oil.

[0115] The therapeutic or pharmaceutical composition may be in the form of a liquid, for example, an elixir, syrup, solution, emulsion or suspension. The liquid may be for oral administration or for delivery by injection, as two examples. When intended for oral administration, preferred composition contain, in addition to the present compounds, one or more of a sweetening agent, preservatives, dye / colorant and flavor enhancer. In a  composition intended to be administered by injection, one or more of a surfactant, preservative, wetting agent, dispersing agent, suspending agent, buffer, stabilizer and isotonic agent may be included.

[0116] The liquid therapeutic or pharmaceutical compositions, whether they be solutions, suspensions or other like form, may include one or more of the following adjuvants: sterile diluents such as water for injection, saline solution, preferably physiological saline, Ringer’s solution, isotonic sodium chloride, fixed oils such as synthetic mono or diglycerides which may serve as the solvent or suspending medium, polyethylene glycols, glycerin, propylene glycol or other solvents; antibacterial agents such as benzyl alcohol or methyl paraben; antioxidants such as ascorbic acid or sodium bisulfite; chelating agents such as ethylenediaminetetraacetic acid; buffers such as acetates, citrates or phosphates and agents for the adjustment of tonicity such as sodium chloride or dextrose. The parenteral preparation can be enclosed in ampoules, disposable syringes or multiple dose vials made of glass or plastic. Physiological saline is a preferred adjuvant. An injectable pharmaceutical composition is preferably sterile.

[0117] A liquid therapeutic or pharmaceutical composition intended for either parenteral or oral administration should contain an amount of an agent such that a suitable dosage will be obtained. Typically, this amount is at least 0.01%of the agent of interest in the composition. When intended for oral administration, this amount may be varied to be between 0.1 and about 70%of the weight of the composition. Certain oral therapeutic or pharmaceutical compositions contain between about 4%and about 75%of the agent of interest. In certain embodiments, therapeutic or pharmaceutical compositions and preparations according to the present invention are prepared so that a parenteral dosage unit contains between 0.01 to 10%by weight of the agent of interest prior to dilution.

[0118] The therapeutic or pharmaceutical composition may include various materials, which modify the physical form of a solid or liquid dosage unit. For example, the composition may include materials that form a coating shell around the active ingredients. The materials that form the coating shell are typically inert, and may be selected from, for example, sugar, shellac, and other enteric coating agents. Alternatively, the active ingredients may be encased in a gelatin capsule. The therapeutic or pharmaceutical compositions in solid or liquid form may include a component that binds to agent and thereby assists in the delivery of the compound. Suitable components that may act in this capacity include monoclonal or polyclonal antibodies, one or more proteins or a liposome.

[0119] The compositions described herein may be prepared with carriers that protect the agents against rapid elimination from the body, such as time release formulations or coatings. Such carriers include controlled release formulations, such as, but not limited to, implants and microencapsulated delivery systems, and biodegradable, biocompatible  polymers, such as ethylene vinyl acetate, polyanhydrides, polyglycolic acid, polyorthoesters, polylactic acid and others known to those of ordinary skill in the art.

[0120] The therapeutic or pharmaceutical compositions may be prepared by methodology well known in the pharmaceutical art. For example, a therapeutic or pharmaceutical composition intended to be administered by injection may comprise one or more of salts, buffers and / or stabilizers, with sterile, distilled water so as to form a solution. A surfactant may be added to facilitate the formation of a homogeneous solution or suspension. Surfactants are compounds that non-covalently interact with the agent so as to facilitate dissolution or homogeneous suspension of the agent in the aqueous delivery system.

[0121] Certain embodiments include patient care kits, comprising: (a) YM155 monobromide [1- (2-Methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1 H-naphtho [2, 3-d] imidazolium bromide] , or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (b) a Bruton’s Tyrosine Kinase inhibitor (BTKi) , as described herein. In some embodiments, a patient care kit contains separate containers, dividers, or compartments for the composition (s) and informational material (s) . For example, the composition (s) or reagents can be contained in a bottle, vial, or syringe, and the informational material (s) can be contained in association with the container. In some embodiments, the separate elements of the kit are contained within a single, undivided container. For example, the composition (s) or reagents are contained in a bottle, vial or syringe that has attached thereto the informational material in the form of a label. In some embodiments, the kit includes a plurality (e.g., a pack) of individual containers, each containing one or more compositions, reagents, unit dosage forms of YM155 monobromide, and / or unit dosage forms of at least one BTKi. For example, the kit includes a plurality of syringes, ampules, foil packets, or blister packs, each containing a reagent or a single unit dose of YM155 monobromide and at least one BTKi. The containers of the kits can be air tight, waterproof (e.g., impermeable to changes in moisture or evaporation) , and / or light-tight.

[0122] The patient care kit optionally includes a device suitable for administration of the agent (s) , e.g., a syringe, inhalant, dropper (e.g., eye dropper) , swab (e.g., a cotton swab or wooden swab) , or any such delivery device. In some embodiments, the device is an implantable device that dispenses metered doses of the agent (s) . Also included are methods of providing a kit, e.g., by combining the components described herein.

[0123] All publications, patent applications, and issued patents cited in this specification are herein incorporated by reference as if each individual publication, patent application, or issued patent were specifically and individually indicated to be incorporated by reference.

[0124] Although the foregoing invention has been described in some detail by way of illustration and example for purposes of clarity of understanding, it will be readily apparent to  one of ordinary skill certain changes and modifications may be made thereto without departing from the spirit or scope of the description or appended claims. The following examples are provided by way of illustration only and not by way of limitation. Those of skill in the art will readily recognize a variety of noncritical parameters that could be changed or modified to yield essentially similar results.

[0125] EXAMPLES

[0126] Example 1

[0127] YM155 and BTK Inhibiters are Synergistic for Killing Aberrant Lymphocytes

[0128] Experiments were performed to evaluate the ability of YM155 in combination with Bruton’s Tyrosine Kinase (BTK) inhibitors to kill blood cancer cells, including lymphoma and leukemia cells.

[0129] Cell culture. Human mantle cell lymphoma cells, JeKo-1, Mino, JVM-2 cells (Meisen CTCC) were cultured in RPMI 1640 (HycloneTM) supplemented with 10-20%fetal bovine serum (Gibco) . Z-138 cells (COBIOER Biosciences) were cultured in IMDM (Gibco) supplemented with 10%fetal bovine serum (Gibco) . Human chronic leukemia cell, MEC-1 cells (Procell) were cultured in IMDM (Gibco) supplemented with 10%fetal bovine serum (Gibco) . Human Burkitt lymphoma cells, Ramos and NAMALWA cells (COBIOER Biosciences) were cultured in RPMI 1640 (HycloneTM) supplemented with 10%fetal bovine serum (Gibco) . Raji cells (National Biomedical Cell-Line Resource Center) were cultured in RPMI 1640 (HycloneTM) supplemented with 10%fetal bovine serum (Gibco) . Cultures were incubated at 37℃, in 5%CO2.

[0130] Apoptosis Assay. Apoptosis was detected by Annexin V  / PI staining kit (Thermo Fisher) according to the manufacturer’s instructions. Briefly, cells were treated with the presence or absence of indicated agent (s) for indicated time. Then the cells were harvested and test for apoptosis by Annexin V and PI staining. Cell analysis was performed using a FACSAria (BD) .

[0131] MTS Assay. 20μL of the combined MTS / PMS solution (Promega) was pipetted into each well of the 96 well assay plate containing 200μL of cells in culture medium. The plate was incubated for 4 hours at 37℃ in a humidified, 5%CO2 atmosphere. The absorbance was recorded at 490nm using a Microplate reader (Molecular Devices, Spectra 190) .

[0132] Results. As shown in Figure 1, YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of mantle cell lymphoma cell line (JeKo-1) . JeKo-1 cells were plated in the presence or absence of indicated agent (s) for 72h. Then cellular apoptosis was measured by PI / Annexin V. YM155: 5nM. Ibrutinib, Acalabrutinib Zanubrutinib,  Tirabrutinib, Orelabrutinib and Pirtobrutinib: 20μM. Table E1 shows the summarized apoptosis rate (including early apoptosis and late apoptosis) from Figure 1.

[0133] As shown in Figure 2, YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of mantle cell lymphoma cell line (Z138) . Z138 cells were plated in the presence or absence of indicated agent (s) for 72h. Then cellular apoptosis was measured by PI / Annexin V. YM155: 5nM. Ibrutinib, Acalabrutinib, Zanubrutinib and Orelabrutinib: 20μM. Table E2 shows the summarized apoptosis rate (including early apoptosis and late apoptosis) from Figure 2.

[0134] As shown in Figure 3, YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of mantle cell lymphoma cell line (Mino) . Mino cells were plated in the presence or absence of indicated agent (s) for 48h. Then cellular apoptosis was measured by PI / Annexin V. YM155: 5nM. Ibrutinib, Zanubrutinib, Tirabrutinib, Orelabrutinib and Pirtobrutinib: 20μM. Table E3 shows the summarized apoptosis rate (including early apoptosis and late apoptosis) from Figure 3.

[0135] As shown in Figure 4, YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of chronic lymphocytic leukemia (MEC-1) . MEC-1 cells were plated in the presence or absence of indicated agent (s) for 48h. Then cellular apoptosis was measured by PI / Annexin V. YM155: 5nM. Ibrutinib, Zanubrutinib and Pirtobrutinib: 20μM. Table E4 shows the summarized apoptosis rate (including early apoptosis and late apoptosis) from Figure 4.

[0136] As shown in Figure 5, YM155 (PC-002) in combination with BTK inhibitors synergistically induces apoptosis of Human Burkitt’s Lymphoma cells (RAMOS) . RAMOS cells were plated in the presence or absence of indicated agent (s) for 72h. Then cellular apoptosis was measured by PI / Annexin V. YM155: 10nM. Ibrutinib and Zanubrutinib: 20μM. Table E5 shows the summarized apoptosis rate (including early apoptosis and late apoptosis) from Figure 5.

[0137] Figure 6 shows apoptosis analysis of cells following YM155 and Ibrutinib treatment as measured by FACS assay. Cells were treated with low toxic concentrations of YM155 (JeKo-1 2nM, Mino 10nM, JVM-2 50nM, Z-138 2nM, MEC-1 2nM, Ramos 5nM, NAMALWA 5nM, Raji 5nM, SU-DHL2 5nM, SU-DHL4 2nM, SU-DHL-10 5nM, SU-DHL-6 2nM, OCI-LY7 2nM) in the presence or absence of Ibrutinib (JeKo-1 10μM, Mino 10μM, JVM-2 10μM, Z-138 20μM, MEC-1 10μM, Ramos 20μM, NAMALWA 20μM, Raji 20μM, SU-DHL2 10μM, SU-DHL4 10μM, SU-DHL-10 5μM, SU-DHL-6 2μM, OCI-LY7 20μM) for a period of time (JeKo-1, MEC-1, and Mino for 72 hours; JVM-2, Z-138, Ramos, NAMALWA, Raji, SU-DHL2, SU-DHL4, SU-DHL-10, SU-DHL-6, and OCI-LY7 for 48 hours) . Cell apoptosis was then monitored by PI / Annexin V. Values reported as means, error bars represent standard deviation (SD) (n=3) . **: P<0.01; ***: P<0.001.

[0138] Figures 7A-7D show Fractional Affect (Fa) values determined by comparing the results (MTS) obtained for untreated controls and treated cells following 48 or 72-hour exposure to agents administered at a fixed ratio (YM155: Ibrutinib, 1: 5000) . The Combination Index (CI) was then analyzed. CI values less than 1.0 denote a synergistic interaction. SU-DHL2 (7A) and SU-DHL-4 (7C) cells were treated for 48 hours, and Jeko-1 (7B) and RAMOS (7D) cells were treated for 72 hours.

[0139] Figures 8A-8D show Fractional Affect (Fa) values determined by comparing the results (MTS) obtained for untreated controls and treated cells following 48 or 72-hour exposure to agents administered at a fixed ratio (YM155: Zanubrutinib, 1: 10000) . The Combination Index (CI) was then analyzed. CI values less than 1.0 denote a synergistic interaction. SU-DHL2 (8A) and SU-DHL-4 (8C) cells were treated for 48 hours, and Jeko-1 (8B) and RAMOS (8D) cells were treated for 72 hours.

[0140] The foregoing results show synergy between YM155 and various BTK inhibitors in a variety of blood cancers including lymphomas and leukemias.

Claims

A method for treating a disease or condition in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a combination comprising:(a) YM155 monobromide [1- (2-Methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1H-naphtho [2, 3-d] imidazolium bromide] , or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and(b) a Bruton’s Tyrosine Kinase inhibitor (BTKi) .The method of claim 1, wherein the BTKi is selected from ibrutinib, acalabrutinib, BMS-935177, BMS-986142, branebrutinib, CGI-1746, elsubrutinib, evobrutinib, fenebrutinib, G-278, G-744, GDC-0834, GNE-431, orelabrutinib, pirtobrutinib, poseltinib, remibrutinib, rilzabrutinib, RN-486, spebrutinib, TAK-020, tirabrutinib, tolebrutinib, vecabrutinib, and zanubrutinib.The method of claim 1 or 2, wherein the disease is a cancer, optionally a blood (hematological) cancer.The method of claim 3, wherein the blood cancer is selected from a lymphoma and a leukemia, including Non-Hodgkin’s lymphoma and Hodgkin’s lymphoma.The method of claim 4, wherein the lymphoma is selected from Mantle cell lymphoma (MCL) , small lymphocytic lymphoma (SLL) including SLL / CLL optionally with 17p depletion, follicular lymphoma (FL) , Marginal zone lymphoma (MZL) , macroglobulinemia (WM) , CNS lymphoma, Burkitt’s lymphoma (BL) , and diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) , and lymphoplasmacytic lymphoma.The method of claim 4, wherein the leukemia is selected from chronic lymphocytic leukemia (CLL) including SLL / CLL, acute lymphoblastic leukemia (ALL) , acute myelogenous leukemia (AML) , and chronic myelogenous leukemia (CML) .The method of any one of claims 3-6, wherein the BTKi is ibrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL optionally with 17p depletion, MZL, WM, BL, and DLBCL.The method of any one of claims 3-6, wherein the BTKi is acalabrutinib and the blood cancer is selected from MCL and SLL / CLL.The method of any one of claims 3-6, wherein the BTKi is zanubrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL, WM, MZL, FL, BL, and DLBCL.The method of any one of claims 3-6, wherein the BTKi is tirabrutinib and the blood cancer is selected from MCL, CLL, WM, CNS lymphoma, and lymphoplasmacytic lymphoma.The method of any one of claims 3-6, wherein the BTKi is orelabrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL, and WM.The method of any one of claims 3-6, wherein the BTKi is pirtobrutinib and the blood cancer is selected from MCL and CLL / SLL.The method of any one of claims 3-12, wherein the combination of (a) and (b) reduces cancer cell growth and / or increases cancer cell-killing in the subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to (a) or (b) alone.The method of claim 13, wherein the combination of (a) and (b) synergistically reduces cancer cell growth and / or synergistically increases cancer cell-killing in the subject relative to (a) or (b) alone.The method of claim 1 or 2, wherein the disease or condition is an autoimmune disease or inflammatory immune-mediated disease.The method of claim 15, wherein the disease is selected from graft versus host disease (GVHD) , rheumatoid arthritis (RA) , multiple sclerosis (MS) , systemic lupus erythematosus (SLE) , pemphigus vulgaris (PV) , Sjogren’s disease (SJ) , chronic spontaneous urticaria (CSU) , and asthma.The method of claim 16, wherein the BTKi is ibrutinib and the disease is GVHD.The method of claim 16, wherein the BTKi is tirabrutinib and the disease is selected from RA, PV, and SJ.The method of any one of claims 15-18, wherein the combination of (a) and (b) reduces (aberrant) lymphocyte activity in the subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to (a) or (b) alone.The method of claim 13, wherein the combination of (a) and (b) synergistically reduces (aberrant) lymphocyte activity in the subject relative to (a) or (b) alone.The method of any one of claims 1-20, wherein the subject is a human subject.The method of any one of claims 1-21, comprising administering (a) and (b) to the subject as separate compositions.The method of any one of claims 1-21, comprising administering (a) and (b) to the subject in the same composition.A therapeutic composition, comprising:(a) YM155 monobromide [1- (2-Methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1H-naphtho [2, 3-d] imidazolium bromide] , or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and(b) a Bruton’s Tyrosine Kinase inhibitor (BTKi) .The therapeutic composition of claim 24, wherein the BTKi is selected from ibrutinib, acalabrutinib, BMS-935177, BMS-986142, branebrutinib, CGI-1746, elsubrutinib, evobrutinib, fenebrutinib, G-278, G-744, GDC-0834, GNE-431, orelabrutinib, pirtobrutinib, poseltinib, remibrutinib, rilzabrutinib, RN-486, spebrutinib, TAK-020, tirabrutinib, tolebrutinib, vecabrutinib, and zanubrutinib.The therapeutic composition of claim 24 or 25, for use in treating a disease or condition in a subject in need thereof.Use of the therapeutic composition of claim 24 or 25 in the manufacture of a medicament for treating a disease or condition in a subject in need thereof.The therapeutic composition of claim 26, or the use of claim 27, wherein the disease is a cancer, optionally a blood (hematological) cancer.The therapeutic composition or use of claim 28, wherein the blood cancer is selected from a lymphoma and a leukemia, including Non-Hodgkin’s lymphoma and Hodgkin’s lymphoma.The therapeutic composition or use of claim 29, wherein the lymphoma is selected from Mantle cell lymphoma (MCL) , small lymphocytic lymphoma (SLL) including SLL / CLL optionally with 17p depletion, follicular lymphoma (FL) , Marginal zone lymphoma (MZL) , macroglobulinemia (WM) , CNS lymphoma, Burkitt’s lymphoma (BL) , and diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) , and lymphoplasmacytic lymphoma.The therapeutic composition or use of claim 30, wherein the leukemia is selected from chronic lymphocytic leukemia (CLL) including SLL / CLL, acute lymphoblastic leukemia (ALL) , acute myelogenous leukemia (AML) , and chronic myelogenous leukemia (CML) .The therapeutic composition or use of any one of claims 28-31, wherein the BTKi is ibrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL optionally with 17p depletion, MZL, WM, BL, and DLBCL.The therapeutic composition or use of any one of claims 28-31, wherein the BTKi is acalabrutinib and the blood cancer is selected from MCL and SLL / CLL.The therapeutic composition or use of any one of claims 28-31, wherein the BTKi is zanubrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL, WM, MZL, FL, BL, and DLBCL.The therapeutic composition or use of any one of claims 28-31, wherein the BTKi is tirabrutinib and the blood cancer is selected from MCL, CLL, WM, CNS lymphoma, and lymphoplasmacytic lymphoma.The therapeutic composition or use of any one of claims 28-31, wherein the BTKi is orelabrutinib and the blood cancer is selected from MCL, SLL / CLL, and WM.The therapeutic composition or use of any one of claims 28-31, wherein the BTKi is pirtobrutinib and the blood cancer is selected from MCL and CLL / SLL.The therapeutic composition or use of any one of claims 28-37, wherein the combination of (a) and (b) reduces cancer cell growth and / or increases cancer cell-killing in the subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to (a) or (b) alone.The therapeutic composition or use of claim 38, wherein the combination of (a) and (b) synergistically reduces cancer cell growth and / or synergistically increases cancer cell-killing in the subject relative to (a) or (b) alone.The therapeutic composition of claim 26, or the use of claim 27, wherein the disease or condition is an autoimmune disease or inflammatory immune-mediated disease.The therapeutic composition or use of claim 40, wherein the disease is selected from graft versus host disease (GVHD) , rheumatoid arthritis (RA) , multiple sclerosis (MS) , systemic lupus erythematosus (SLE) , pemphigus vulgaris (PV) , Sjogren’s disease (SJ) , chronic spontaneous urticaria (CSU) , and asthma.The therapeutic composition or use of claim 41, wherein the BTKi is ibrutinib and the disease is GVHD.The therapeutic composition or use of claim 41, wherein the BTKi is tirabrutinib and the disease is selected from RA, PV, and SJ.The therapeutic composition or use of any one of claims 40-43, wherein the combination of (a) and (b) reduces (aberrant) lymphocyte activity in the subject by about or at least about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000%or more relative to (a) or (b) alone.The therapeutic composition or use of claim 44, wherein the combination of (a) and (b) synergistically reduces (aberrant) lymphocyte activity in the subject relative to (a) or (b) alone.The therapeutic composition or use of any one of claims 27-45, wherein the subject is a human subject.A patient care kit, comprising:(a) YM155 monobromide [1- (2-Methoxyethyl) -2-methyl-4, 9-dioxo-3- (pyrazin-2-ylmethyl) -4, 9-dihydro-1H-naphtho [2, 3-d] imidazolium bromide] , or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and(b) a Bruton’s Tyrosine Kinase inhibitor (BTKi) .The patient care kit of claim 47, wherein the BTKi is selected from ibrutinib, acalabrutinib, BMS-935177, BMS-986142, branebrutinib, CGI-1746, elsubrutinib, evobrutinib, fenebrutinib, G-278, G-744, GDC-0834, GNE-431, orelabrutinib, pirtobrutinib, poseltinib, remibrutinib, rilzabrutinib, RN-486, spebrutinib, TAK-020, tirabrutinib, tolebrutinib, vecabrutinib, and zanubrutinib.

Images