Il-18 variant polypeptides

Abstract

Provided are interleukin 18 (IL-18) variant polypeptides having at least one mutation at a residue selected from the group consisting of: C38, C68, C76, S117, and C127, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. Also provided are IL-18 variant polypeptides bind IL-18Rα and exhibit substantially reduced binding to IL-18BP relative to the wild-type IL-18. Also provided are IL-18 variant polypeptides that exhibit increased binding IL-18Rα relative to the wild-type IL-18 and substantially reduced binding to IL-18BP relative to the wild-type IL-18. Also provided are related nucleic acids, vectors, host cells, methods of producing IL-18 variant polypeptides, pharmaceutical compositions comprising IL-18 variant polypeptides, and uses of such pharmaceutical compositions.

Description

IL-18 VARIANT POLYPEPTIDES

[0001] CROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATION

[0002] This application claims priority to International Applications PCT / CN2023 / 072886, filed on January 18, 2023, and PCT / CN2023 / 117197, filed on September 6, 2023, the content of which are incorporated by reference in their entirety for all purposes.

[0003] REFERENCE TO AN ELECTRONIC SEQUENCE LISTING

[0004] The contents of the electronic sequence listing (233002001543SEQLIST. xml; Size: 362, 677 bytes; and Date of Creation: January 16, 2024) is herein incorporated by reference in its entirety.

[0005] FIELD OF THE APPLICATION

[0006] The present application relates to interleukin 18 (IL-18) variant polypeptides comprising at least one amino acid substitution relative to a wild-type IL-18 (e.g. a wild-type human IL-18) , methods of making such variant polypeptides, and methods of using such variant polypeptides in therapeutic applications.

[0007] BACKGROUND OF THE APPLICATION

[0008] IL-18 has been found to stimulate innate lymphocytes, myeloid cells, antigen-experienced,  T cells (see, e.g., Guo et al. (2012) Trends Immunol. 33, 598–606) , and antigen-experienced natural killer (NK cells) . Therapeutically, recombinant IL-18 has been reported to synergize with immune checkpoint inhibitors (ICIs) (Ma et al. (2016) Clin Cancer Res 22: 2969–2980) and chimeric antigen receptor T (CAR-T) cells in pre-clinical models (Hu et al. (2017) Cell Rep 20, 3025–3033) . IL-18 has been administered to patients in clinical trials and found to be safe and well-tolerated (Robertson et al. (2006) Clin Cancer Res 12, 4265–4273) . However, clinical development of IL-18 has been curtailed by its limited efficacy. Thus, there is a need in the art for compositions and methods for activating IL-18 receptor-mediated signaling in an individual and / or stimulating antigen-experienced T cells or NK cells in an individual for treating cancer and other IL-18-mediated diseases and disorders.

[0009] The disclosures of all publications, patents, patent applications and published patent applications referred to herein are hereby incorporated herein by reference in their entirety.SUMMARY

[0010] In some embodiments, provided is an interleukin 18 (IL-18) variant polypeptide comprising at least one mutation at a residue selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises at least one mutation at a residue selected from the group consisting of: G3, E6, D54, and N91, wherein the amino acid positions is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises at least one mutation at a residue selected from the group consisting of Q56, P57, M60, Q103, R104, M113, and N155, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. Exemplary IL-18 polypeptides can be found in e.g., WO2020069398A1, WO2021097376A1, WO2023161853A1, WO2022038417A2, which are incorporated herein by reference in their entirety.

[0011] In some embodiments, the IL-18 polypeptide comprises at least one mutation at a residue selected from the group consisting of: G3, Q24, L29, Q56, P57, M60, A61, N91, K96, R104, R107, K140, N155, and I149, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein the IL-18 polypeptide comprises mutations at G3, E6, D54, and N91, further optionally wherein the variant polypeptide comprises mutations: (i) G3P; (ii) E6R or E6K; (iii) D54W, D54H, D54S, or D54Q; and (iv) N91V, N91A, N91G, or N91S. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 3P, 6K, 54G, 56G, 57A, and 91T. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 6G, 54L, 56T, 57E, 91G, and 104S.

[0012] In some embodiments, the IL-18 polypeptide comprises one substitution or a set of substitution combination selected from the group consisting of: 1) G3P, E6K, D54H, Q56D, P57R, N91V, and R104V; 2) G3S, E6K, D54W, Q56P, P57D, N91G, and R104T; 3) G3P, E6K, D54W, Q56H, P57V, N91A, and R104Y; 4) G3P, E6K, D54W, Q56G, P57V, N91V, and R104F; 5) G3E, E6T, D54W, Q56P, P57W, N91V, R104T, and N155K; 6) G3P, E6R, D54W, Q56T, N91V, and R104T; 7) G3P, E6R, D54H, Q56T, P57A, and N91A; 8) G3P, E6R, D54W, Q56P, P57A, N91A, and R104L; 9) G3P, E6R, D54W, Q56R, P57A, N91S, and R104S; 10) G3P, E6R, D54Q, Q56L, P57W, and N91S; 11) G3P, E6R, D54S, Q56R, P57N, N91G, and R104T; 12) G3P, E6K, D54G, Q56G, P57A, and N91T; 13) G3P, E6K, D54Q, Q56I, and P57W; 14) G3N, E6K, D54P, Q56S, P57S, N91R, and R104A; 15) G3P, E6R, D54S, Q56Y, P57T, and N91G; 16) G3P, E6R, D54S, Q56R, P57N, N91G, and R104S; 17) G3P, E6R, D54L, Q56T, P57A, and N91G; 18) G3P, E6R, D54S, Q56R, P57R, N91G, and R104S; 19) G3P, E6K, D54H, Q56E, P57Q, and N91A; 20) G3P, E6R, D54S, Q56R, P57S, N91G, and R104S; 21) G3P, E6R, D54S, Q56S, P57T, N91G, and R104S; 22) G3P, E6R, D54Y, Q56R, P57G, N91K, and R104S; 23) G3P, E6R, D54Y,  Q56T, and P57R; 24) G3P, E6R, D54Y, Q56T, and P57S; 25) G3P, E6R, D54L, Q56T, P57T, and N91R; 26) G3P, E6R, D54H, Q56D, P57K, N91V, and R104Y; 27) G3P, E6R, D54H, Q56Y, P57T, N91V, and R104Y; 28) G3P, E6A, D54W, Q56G, P57G, N91V, and R104Y; 29) G3P, E6M, D54F, Q56D, P57R, and N91P; 30) G3P, E6L, D54H, Q56T, P57V, and N91S; 31) G3P, E6R, D54H, Q56I, P57H, N91I, and R104Y; 32) G3P, E6G, D54S, Q56S, and P57R; 33) G3E, E6H, D54R, Q56T, and P57H; 34) G3P, E6R, D54H, Q56R, P57N, N91V, and R104E; 35) G3P, E6R, D54G, Q56G, P57A, and N91G; 36) G3P, E6S, D54A, Q56D, P57Q, and N91G; 37) G3P, E6G, D54Q, Q56V, and P57W; 38) G3P, E6S, D54W, Q56G, P57A, N91V, and R104I; 39) G3P, E6R, D54W, Q56P, P57G, N91V, and R104L; 40) G3D, E6K, D54P, Q56S, P57W, and N91W; 41) G3P; 42) G3P, E6K, D54G, Q56G, and P57A; 43) G3P, E6R, D54L, Q56G, P57S, and N91V; 44) G3P, E6R, V11I, D54G, Q56G, P57A, and N91G; 45) G3P, E6K, D54H, Q56Y, and P57S; 46) E6R, D54W, Q56S, and P57Q; 47) G3P, E6K, D54L, Q56T, P57Q, and N91V; 48) G3A, E6Y, D54R, Q56S, P57L, and N91G; 49) G3P, E6R, D54L, Q56T, P57I, and N91G; 50) E6G, D54L, Q56T, P57E, N91G, and R104S; 51) G3A, E6Y, D54R, Q56S, P57L, and N91A; 52) M60K, and K96D; 53) G3P, E6R, and K96E; 54) M60K; 55) G3P, and E6R; 56) G3P, and E6K; 57) G3D, E6K, and N91S; 58) G3S, and I149M; 59) G3P, E6R, and N91S; 60) E6R; 61) E6R, and N91S; 62) V11I; and 63) G3S, and K140R.

[0013] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises at least one mutation at a residue selected from the group consisting of: C38, C68, C76, D98, S117, and C127, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the at least one mutation comprises a substitution at C38, a substitution at C68, and an S117C substitution. In some embodiments, the at least one mutation is selected from the group consisting of: C38S, C68S, C76S, and C127S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (such as further comprises) C38S, C68S, and C76S mutations. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a set of mutations selected from the group consisting of: (a) C38I, C68S, and S117C; (b) C38V, C68I, S117C, and C127A; (c) C38S, C68I, S117C, and C127I; (d) C38I, C68I, C76V, and C127I; and (e) C38I, C68L, and C76Y. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 3P, 6K, 54G, 56G, 57A, and 91T. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 6G, 54L, 56T, 57E, 91G, and 104S.

[0014] In some embodiments, provided is an interleukin 18 (IL-18) variant polypeptide comprising at least one mutation at a residue selected from the group consisting of: C38, C68, C76, D98, S117, and C127, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the at least one mutation comprises a substitution at C38, a substitution at C68, and an S117C substitution. In some embodiments, the at least one mutation is selected from the group consisting of: C38S, C68S, C76S, and C127S. In some embodiments, the IL-18 variant comprises C38S, C68S, and C76S  mutations. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of mutations selected from the group consisting of: (a) C38I, C68S, and S117C; (b) C38V, C68I, S117C, and C127A; (c) C38S, C68I, S117C, and C127I; (d) C38I, C68I, C76V, and C127I; and (e) C38I, C68L, and C76Y. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 3P, 6K, 54G, 56G, 57A, and 91T. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 6G, 54L, 56T, 57E, 91G, and 104S.

[0015] In some embodiments the wild-type IL-18 is human IL-18 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide specifically binds to IL-18 receptor α (IL-18Rα) and exhibits reduced binding to IL-18 binding protein (IL-18BP) relative to the wild-type IL-18. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide exhibits an increased binding to IL-18Rαrelative to the wild-type IL-18. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of less than about 5 x 10-5 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rαwith a KD of between about 5 x 10-5 and about 5 x 10-11 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18BP with a KD of more than 5 x 10-9 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide exhibits no binding (such as no detectable binding, as measured, e.g., via surface plasmon resonance) to IL-18BP.

[0016] In some embodiments, the variant polypeptide comprises a mutation at residue G3, wherein the mutation is selected from the group consisting of: G3P, G3D, G3E, G3F, G3K, G3T, G3W, G3N, and G3S. In some embodiments, the mutation is G3P. In some embodiments, the variant polypeptide comprises a mutation at residue E6, wherein the mutation is selected from the group consisting of: E6R, E6K, E6G, E6T, E6A, E6S, E6H, E6L, E6M, E6N, E6P, E6Q, E6V, E6W, and E6Y. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of: E6R, E6K, E6G, E6T, E6A, and E6S. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of: E6R and E6K.

[0017] In some embodiments, the variant polypeptide comprises a mutation at residue D54, wherein the mutation is selected from the group consisting of: D54W, D54H, D54I, D54S, D54Q, D54L, D54M, D54Y, D54P, D54R, D54A, D54F, D54G, D54V, and D54T. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of: D54W, D54H, D54S, D54Q, D54L, and D54Y.

[0018] In some embodiments, the variant polypeptide comprises a mutation at residue N91, wherein the mutation is selected from the group consisting of: N91V, N91A, N91D, N91F, N91G, N91S, N91I, N91P, N91R, N91L, N91T, N91C, N91K, N91Y and N91W. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of: N91V, N91A, N91G, and N91S.

[0019] In some embodiments, the variant polypeptide further comprises a mutation at residue R104, wherein the mutation is selected from the group consisting of: R104S, R104Y, R104T, R104L, R104M,  R104V, R104A, R104C, R104E, R104G, R104F, R104H, R104I, and R104N. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of: R104S, R104Y, and R104T.

[0020] In some embodiments, the variant polypeptide comprises no mutation at residue R104.

[0021] In some embodiments, the variant polypeptide comprises a mutation at residue Q56, wherein the mutation is selected from the group consisting of: Q56A, Q56T, Q56G, Q56R, Q56S, Q56D, Q56P, Q56I, Q56Y, Q56H, Q56I, Q56K, Q56W, Q56L, Q56E, Q56F, Q56N, and Q56V. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of: Q56T, Q56G, Q56R, Q56S, Q56D, Q56P, Q56I, and Q56Y.

[0022] In some embodiments, the variant polypeptide comprises no mutation at residue Q56.

[0023] In some embodiments, the variant polypeptide comprises a mutation at residue P57, wherein the mutation is selected from the group consisting of: P57A, P57E, P57F, P57G, P57R, P57W, P57S, P57T, P57V, P57Q, P57H, P57I, P57K, P57L, P57N, P57Y, and P57D. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of: P57A, P57G, P57R, P57W, P57S, P57T, and P57V.

[0024] In some embodiments, the variant polypeptide comprises no mutation at residue P57.

[0025] In some embodiments, the variant polypeptide comprises mutations at G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the variant polypeptide comprises mutations: (i) G3P; (ii) E6R or E6K; (iii) D54W, D54H, D54S, or D54Q; and (iv) N91V, N91A, N91G, or N91S. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises mutations at Q56 and P57.

[0026] In some embodiments, the variant polypeptide comprises the amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2-299 and 307-318.

[0027] In some embodiments, provided is a fusion polypeptide comprising an IL-18 variant polypeptide described herein and a human IgG Fc domain or variant thereof. In some embodiments, the fusion polypeptide comprises a human IgG1 Fc domain variant that comprises an N297A mutation (EU numbering) . In some embodiments, the C-terminus of the IL-18 variant polypeptide is fused to the N-terminus of the human IgG Fc domain or variant thereof. In some embodiments, the C-terminus of the human IgG Fc domain or variant thereof is fused to the N-terminus of the IL-18 variant polypeptide. In some embodiments, the fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 319-332 and 336-347.

[0028] In some embodiments, provided is a dimer comprising two fusion polypeptides described herein. In some embodiments, the dimer is a homodimer. In some embodiments, the dimer is a heterodimer.

[0029] In some embodiments, provided is a nucleic acid encoding an IL-18 variant polypeptide or a fusion polypeptide described herein. In some embodiments, the nucleic acid comprises a polynucleotide sequence having at least 80%identity to any one of SEQ ID NOs: 301-306 and 333-335. In some embodiments, provided is a vector comprising a nucleic acid described herein. In some embodiments, provided is a host cell comprising a nucleic acid or a vector described herein. In some embodiments, provided is a method of producing an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide, comprising: (a) culturing a host cell described herein under conditions where the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide is expressed; and (b) recovering the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide produced by the host cell. In some embodiments, the host cell is a mammalian host cell (e.g., a CHO cell or an HEK293 cell) . In some embodiments, the method comprises (such as further comprises) purifying the IL-18 variant polypeptide or the fusion polypeptide.

[0030] The present application in another aspect provides a method of engineering an IL-18 variant polypeptide from an IL-18 polypeptide, comprising introducing a cysteine at position 117 and / or position 76 of the IL-18 polypeptide, thereby promoting a disulfide bond between C117 and C76, wherein the amino acid position of the IL-18 polypeptide is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. Methods for engineering are disclosed in the examples of the present application, as well as e.g., Cytokine. 2006 Apr; 34 (1-2) : 114-24, WO2022038417A2, Nat Commun 14, 2411 (2023) , the content of which are incorporated herein in their entirety.

[0031] The present application in another aspect provides a method of promoting yield and / or purity of an IL-18 variant polypeptide, comprising engineering an IL-18 polypeptide by introducing a cysteine at position 117 and / or position 76 of the IL-18 polypeptide, thereby promoting a disulfide bond between C117 and C76 of the variant polypeptide, wherein the amino acid position of the IL-18 polypeptide is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 3P, 6K, 54G, 56G, 57A, and 91T. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 6G, 54L, 56T, 57E, 91G, and 104S.

[0032] In some embodiments according to any one of the methods described above, the method comprises a) introducing a cysteine at position 117, and b) retaining the cysteine at position 76 when the IL-18 polypeptide comprises a cysteine at position 76, or introducing a cysteine at position 76 when the IL-18 polypeptide comprises a non-cysteine at position 76.

[0033] In some embodiments according to any one of the methods described above, the method comprises a) introducing a cysteine at position 76, and b) retaining the cysteine at position 117 when the IL-18 polypeptide comprises a cysteine at position 117, or introducing a cysteine at position 117 when the IL-18 polypeptide comprises a non-cysteine at position 117.

[0034] In some embodiments according to any one of the methods described above, introducing a cysteine at position 117 or position 76 comprises a substitution of the amino acid at position 117 or position 76 with a cysteine. In some embodiments, a substitution of the amino acid at position 117 comprises a S117C substitution.

[0035] In some embodiments according to any one of the methods described above, the method further comprises removing one or both cysteines at position 38 and / or position 68 when the IL-18 polypeptide comprises cysteine at one or both position 38 and position 68. In some embodiments, removing one or both cysteines at position 38 and / or position 68 comprises a substitution of cysteine at position 38 and / or position 68 with a different amino acid. In some embodiments, the substitution of cysteine at position 38 comprises C38S, C38I, C38L, C38V, or C38M, optionally wherein the substitution of cysteine at position 38 comprises C38S, C38I, and C38V. In some embodiments, the substitution of cysteine at position 68 comprises C68S, C68I, C68V, C68L or C68D, optionally wherein the substitution of cysteine at position 38 comprises C68S, C68I, and C68L.

[0036] In some embodiments according to any one of the methods described above, the method further comprises retaining the cysteine at position 127 when the IL-18 polypeptide comprises a cysteine at position 127, or introducing a cysteine at position 127 when the IL-18 polypeptide comprises a non-cysteine at position 127.

[0037] In some embodiments according to any one of the methods described above, the method further comprises introducing an alanine or an amino acid that does not have a hydrophobic side chain at position 127, optionally the amino acid that does not have a hydrophobic side chain is selected from the group consisting of cysteine, serine, threonine, asparagine, glutamine, glycine, and proline, further optionally the amino acid that does not have a hydrophobic side chain is selected from the group consisting of cysteine, serine, and threonine. In some embodiments, introducing an alanine or an amino acid that does not have a hydrophobic side chain at position 127 comprises substitution of the amino acid at position 127 of the IL-18 polypeptide with an alanine or an amino acid that does not have a hydrophobic side chain.

[0038] In some embodiments according to any one of the methods described above, the IL-18 variant polypeptide comprises: a) I38, V38, or S38, b) I68, S68, or L68, c) C76, and d) C117. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises I38, S68, C76, and C117. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises V38, I68, C76, C117, optionally wherein the variant polypeptide further comprises A127. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 3P, 6K, 54G, 56G, 57A, and 91T. In some embodiments, the variant IL-18 polypeptide comprises 6G, 54L, 56T, 57E, 91G, and 104S.

[0039] In some embodiments according to any one of the methods described above, the IL-18 variant polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 311-312, 314-315, and 316-317, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 311-312, 314-315, and 316-317.

[0040] The present application in another aspect provides a method of engineering an IL-18 variant polypeptide from an IL-18 polypeptide, comprising a) replace the cysteine by another amino acid at position 38, b) replace the cysteine at position 68, and / or c) replace the cysteine at position 76, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises no free cysteine at each of the positions 38, 68, and 76. In some embodiments, the substituted amino acid in a) , b) or c) is an amino acid with hydrophobic side chain. In some embodiments, the amino acid with a hydrophobic side chain in a) , b) or c) is selected from the group consisting of alanine, valine, isoleucine, leucine, methionine, phenylamine, tyrosine, and tryptophan, optionally wherein the method comprises a) introducing any one of valine, isoleucine, leucine, and methionine into position 38, b) introducing any one of valine, isoleucine, and leucine into position 68, and / or c) introducing any one of valine and tyrosine into position 76, further optionally wherein introducing an amino acid with a hydrophobic side chain at position 38, 68, or 76 comprises substitution the amino acid at position 38, 68, or 76 with an amino acid with a hydrophobic side chain. In some embodiments, the method comprises a) introducing an isoleucine into position 38, b) introducing an isoleucine or leucine into position 68, and / or c) introducing any one of valine and tyrosine into position 76. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises 38S, 38I, 38V, 38L, or 38M, optionally wherein IL-18 variant polypeptide comprises 38S, 38I, or 38V, further optionally wherein the IL-18 variant polypeptide comprises 38I. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises 68S, 68I, 68V, 68L or 68D, optionally wherein the IL-18 variant polypeptide comprises 68S, 68I, or 68L, further optionally wherein the IL-18 variant polypeptide comprises 68S, or 68L. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises 76V or 76Y. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises: a) 38I, b) 68I or 68L, and c) 76V or 76Y. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise 117C. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a cysteine, alanine or an amino acid that does not have a hydrophobic side chain at position 127. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises 38I, 68I, and 76V, optionally wherein the IL-18 variant polypeptide comprises 117S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises 127I. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises 38I, 68L, and 76Y, optionally wherein the IL-18 variant polypeptide comprises S117. In some embodiments according to any one of the methods described above, the IL-18 variant polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 314-315, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 314-315.

[0041] In some embodiments according to any one of the methods described above, the IL-18 polypeptide comprises an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-299, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 1-299, optionally wherein the IL-18 polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 9, 17, 27, 39, 43, 49, 94, 105, 116-117, 133, and 143-150, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: SEQ ID NOs: 1, 3, 9, 17, 27, 39, 43, 49, 94, 105, 116-117, 133, and 143-150, further optionally wherein the IL-18 polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 9, 17, 27, 39, 43, 49, 94, 105, 29, and 117, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 9, 17, 27, 39, 43, 49, 94, 105, 29, and 117, further optionally wherein the IL-18 polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 39, and 133, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 1, 39, and 133.

[0042] The present application in another aspect provides an IL-18 variant polypeptide produced by any of the methods described above.

[0043] The present application in another aspect provides an IL-18 variant polypeptide comprising an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 311-312, 314-315, and 316-317, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 311-312, 314-315, and 316-317.

[0044] The present application in another aspect provides an IL-18 variant polypeptide comprising a cysteine at position 117 and a cysteine at position 76, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise a cysteine at position 38, or the IL-18 variant polypeptide does not comprise a cysteine at position 68. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise a cysteine at position 38, and the IL-18 variant polypeptide does not comprise a cysteine at position 68. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises 38S, 38I, 38V, 38L, or 38M, optionally wherein IL-18 variant polypeptide comprises 38S, 38I, or 38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises 68S, 68I, 68V, 68L or 68D, optionally wherein the IL-18 variant polypeptide comprises 68S, 68I, or 68L. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises 127C. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises at position 127 an alanine or an amino acid that does not have a hydrophobic side chain at position 127, optionally wherein the amino acid that does not have a hydrophobic side chain is selected from the group consisting of cysteine, serine, threonine, asparagine, glutamine, glycine, and proline, further optionally wherein the amino acid that does not have a hydrophobic side chain is selected  from the group consisting of cysteine, serine, and threonine. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises: a) I38, V38, or S38, b) I68, S68, or L68, c) C76, and d) C117. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises I38, S68, C76, and C117. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises V38, I68, C76, C117, optionally wherein the variant polypeptide further comprises A127.

[0045] The present application in another aspect provides a fusion polypeptide comprising a) any one of the IL-18 variant polypeptides described above and b) a second moiety. In some embodiments, the second moiety comprises a half-life extending moiety, optionally wherein the half-life extending moiety is an albumin binding moiety or a Fc domain. In some embodiments, the half-life extending moiety comprises a Fc domain, optionally wherein the Fc domain is a human IgG Fc domain, further optionally wherein the human IgG Fc domain is a human IgG1 domain. In some embodiments, the Fc domain is a modified Fc domain with reduced effector function, optionally wherein the Fc domain comprises a human IgG1 Fc domain comprising an N297A mutation (EU numbering) . In some embodiments, the second moiety is fused to the N-terminus of the IL-18 variant polypeptide. In some embodiments, the second moiety is fused to the C-terminus of the IL-18 variant polypeptide. In some embodiments, the fusion polypeptide further comprises a linker between the IL-18 variant polypeptide and the second moiety, optionally wherein the linker is a peptide linker (such as a GS linker) . In some embodiments, the fusion polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 323-324, 326-328, 330-332, 340-341, 343-345 and 347, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 323-324, 326-328, 330-332, 340-341, 343-345 and 347.

[0046] The present application in another aspect provides a dimer comprising two fusion polypeptides selected from any one or two of the fusion polypeptides described herein. In some embodiments, the dimer is a homodimer. In some embodiments, the dimer is a heterodimer.

[0047] The present application in another aspect provides a nucleic acid encoding any of the IL-18 variant polypeptide or any of the fusion polypeptide described above.

[0048] The present application in another aspect provides a nucleic acid comprising a nucleic acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 333-335.

[0049] The present application in another aspect provides a vector comprising any of the nucleic acids described above.

[0050] The present application in another aspect provides a host cell comprising any of the nucleic acids or any of the vectors described above. In some embodiments, the host cell is a eukaryotic cell. In some embodiments, the host cell is a mammalian cell. In some embodiments, the host cell is a CHO cell or a  HEK293 cell.

[0051] The present application in another aspect provides a method of producing an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide, comprising: (a) culturing any of the host cells described above under conditions where the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide is expressed; and (b) recovering the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide produced by the host cell.

[0052] The present application in another aspect provides a pharmaceutical composition comprising any of the IL-18 variant polypeptide, any of the fusion polypeptides, any of the dimers, any of the nucleic acids, or any of the vectors described above.

[0053] The present application in another aspect provides a method of treating a disease in an individual, comprising administering to the individual an effective amount of any of the pharmaceutical compositions described above.

[0054] The present application in another aspect provides a method of activating hIL-18 receptor mediated signal in an individual, comprising administering to the individual an effective amount of any of the pharmaceutical compositions described above.

[0055] The present application in another aspect provides a method of stimulating antigen-experienced immune cells in an individual in need thereof, comprising administering to the individual an effective amount of any of the pharmaceutical compositions described above.

[0056] It is to be understood that one, some, or all of the properties of the various embodiments described herein may be combined to form other embodiments of the present invention. These and other aspects of the invention will become apparent to one of skill in the art. These and other embodiments of the invention are further described by the detailed description that follows.

[0057] The disclosures of all publications, patents, patent applications and published patent applications referred to herein are hereby incorporated herein by reference in their entirety.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0058] FIG 1A illustrates the screening process in which magnetic-activated cell sorting- (MACS-) or fluorescence-activated cell sorting- (FACS-) based methods were used to identify IL-18 variant polypeptides described herein.

[0059] FIG 1B illustrates the abilities of the output library pools from Rounds 1, 2, 3, 4, and 5 to bind either 1 μM IL-18BP or 50 nM IL-18Rα.

[0060] FIG 1C illustrates the abilities of representative single IL-18 variant clones M12 (SED ID NO: 39) and M17 (SEQ ID NO: 43) to bind IL-18Rα. SEQ ID NO: 1 is wild-type IL-18.

[0061] FIG 2A provides an SDS-PAGE analysis and SEC-HPLC analysis of wild-type human IL-18 (SEQ ID NO: 1) after purification.

[0062] FIG 2B provides an SDS-PAGE analysis and SEC-HPLC analysis of IL-18 variant M12 (SEQ ID NO: 39) after purification.

[0063] FIG 2C provides an SDS-PAGE analysis and SEC-HPLC analysis of IL-18 variant MM5 (SEQ ID NO: 133) after purification.

[0064] FIG 2D provides an SDS-PAGE analysis and SEC-HPLC analysis of IL-18 variant WM6 (SEQ ID NO: 145) after purification.

[0065] FIG 2E provides an SDS-PAGE analysis and SEC-HPLC analysis of IL-18 variant M17 (SEQ ID NO: 43) after purification.

[0066] FIG 2F provides an SDS-PAGE analysis and SEC-HPLC analysis of IL-18 variant M24 (SEQ ID NO: 105) after purification.

[0067] FIG 3 illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by exemplary IL-18 variant polypeptides of the present application.

[0068] FIG 4 illustrates hIFNγ release induced by exemplary IL-18 variant polypeptides of the present application.

[0069] FIG 5A illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by wild-type IL-18, fusion polypeptide IL-18-SSS-Fc_N297A, and fusion polypeptide IL-18-SSS-Fc_N297A in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) .

[0070] FIG 5B illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by IL-18 polypeptide variant M12, fusion polypeptide M12-SSS-Fc_N297A, and fusion polypeptide M12-SSS-Fc_N297A in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) .

[0071] FIG 5C illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by IL-18 polypeptide variant MM5, fusion polypeptide MM5-SSS-Fc_N297A, and fusion polypeptide MM5-SSS-Fc_N297A in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) .

[0072] FIG 6A illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by fusion polypeptide WT IL-18, WT IL-18 in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) , fusion polypeptide M12-DB6-Fc_N297A, and M12-DB6-Fc_N297A in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) .

[0073] FIG 6B illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by fusion polypeptide WT IL-18, fusion polypeptide M12-DB7-Fc_N297A, and M12-DB7-Fc_N297A in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) .

[0074] FIG 6C illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by fusion polypeptide WT IL-18, fusion polypeptide M12-DB9-Fc_N297A, and M12-DB9-Fc_N297A in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) .

[0075] FIG 6D illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by fusion polypeptide WT IL-18, fusion polypeptide M12-DB10-Fc_N297A.

[0076] FIG 7A illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by wild-type IL-18, wild-type IL-18 in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) , fusion polypeptide WT IL-18-DB6-Fc_N297A, and WT IL-18-DB6-Fc_N297A in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) .

[0077] FIG 7B illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by wild-type IL-18, wild-type IL-18 in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) , fusion polypeptide MM5-DB6-Fc_N297A, and MM5-DB6-Fc_N297A in the presence of IL-18 binding protein ( “BP” ) .

[0078] FIG 7C illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by wild-type IL-18, and fusion polypeptide Fc_N297A-MM5-DB6.

[0079] FIG 7D illustrates activation of hIL-18 receptor mediated signaling by wild-type IL-18, and fusion polypeptide Fc_N297A-M12-DB6.

[0080] DETAILED DESCRIPTION OF THE APPLICATION

[0081] Overview

[0082] Components of the interleukin-18 (IL-18) pathway have been found to be upregulated on tumor infiltrating lymphocytes (TIL) (see, e.g., Zhou et al. (2020) Nature 583: 609–614) , suggesting that IL-18 therapy could enhance anti-tumor immunity. However, IL-18 has not demonstrated significant efficacy in clinical trials. IL-18BP, a high-affinity inhibitor of IL-18 (KD < 1nM, see, e.g., Dinarello et al. (2013) Front Immunol 4: 289, doi: 10.3389 / fimmu. 2013.00289) , is frequently upregulated in diverse human and murine tumors and is believed to limit the anti-tumor activity of IL-18 in mice and clinical trial. Moreover, the effective production of IL-18 is often challenging due to low yield and / or low purity. Applicant identified IL-18 variant polypeptides that induce IL-18 receptor-mediated signaling, even in the presence of IL-18BP. It was found that by being substituted one or a set of amino acids (e.g., G3, e.g., E6) , IL-18 variant polypeptides exhibit resistance to IL-18BP while still being able to bind to and activate IL-18  receptor. See, e.g., Example 6, FIGs. 3-4, Tables 3 and 4. Applicant further found that by engeineering one or more hotspots (e.g., with C38, C68, C76, S117, and / or C127 substituted) , a higher yield, more purified, and / or more potent IL-18 variant polypeptides can be obtained. See, e.g., Example 7, FIGs. 5A-7D, Tables 5-9. Strikingly, Applicant found that by engineering a disulfide bound between C76 and C117 while removing the cysteine of C38 and C68, the yield and purity of the engineered variant IL-18 are increased dramatically. See e.g., DB6 and DB7 versions of IL-18 polypeptides in Table 10.

[0083] Definitions

[0084] As used herein, the terms “specifically binds, ” “specifically recognizing, ” and “is specific for” refer to measurable and reproducible interactions, such as binding between a cytokine and a receptor thereof, which is determinative of the presence of the target in the presence of a heterogeneous population of molecules, including biological molecules. For example, a cytokine that specifically recognizes a receptor is the cytokine that binds this receptor with greater affinity, avidity, more readily, and / or with greater duration than its bindings to other targets. In some embodiments, the extent of binding of cytokine to an unrelated target is less than about 10%of the binding of the cytokine to the receptor thereof as measured, e.g., by a radioimmunoassay (RIA) . In some embodiments, a cytokine that specifically binds the receptor thereof has a dissociation constant (KD) of ≤10-5 M, ≤10-6 M, ≤10-7 M, ≤10-8 M, ≤10-9 M, ≤10-10 M, ≤10-11 M, or ≤10-12 M. In some embodiments, said specific binding can include, but does not require exclusive binding. Binding specificity of the cytokine can be determined experimentally by methods known in the art. Such methods comprise, but are not limited to, e.g., Western blots, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIACORETM -tests and peptide scans.

[0085] An “isolated” nucleic acid molecule encoding a polypeptides or a cytokine as described herein is a nucleic acid molecule that is identified and separated from at least one contaminant nucleic acid molecule with which it is ordinarily associated in the environment in which it was produced. Preferably, the isolated nucleic acid is free of association with all components associated with the production environment. In some embodiments, the isolated nucleic acid molecules encoding the polypeptides or the cytokine described herein is in a form other than in the form or setting in which it is found in nature.

[0086] The term “vector, ” as used herein, refers to a nucleic acid molecule capable of propagating another nucleic acid to which it is linked. The term includes the vector as a self-replicating nucleic acid structure as well as the vector incorporated into the genome of a host cell into which it has been introduced. Certain vectors are capable of directing the expression of nucleic acids to which they are operatively linked. Such vectors are referred to herein as “expression vectors. ”

[0087] The term “transfected” or “transformed” or “transduced” as used herein refers to a process by  which exogenous nucleic acid is transferred or introduced into the host cell. A “transfected” or “transformed” or “transduced” cell is one which has been transfected, transformed or transduced with exogenous nucleic acid. The cell includes the primary subject cell and its progeny.

[0088] The terms “host cell, ” “host cell line, ” and “host cell culture” are used interchangeably and refer to cells into which exogenous nucleic acid has been introduced, including the progeny of such cells. Host cells include “transformants” and “transformed cells, ” which include the primary transformed cell and progeny derived therefrom without regard to the number of passages. Progeny may not be completely identical in nucleic acid content to a parent cell, and may contain mutations. Mutant progeny that have the same function or biological activity as screened or selected for in the originally transformed cell are included herein.

[0089] As used herein, “treatment” or “treating” is an approach for obtaining beneficial or desired results, including clinical results. For purposes of this application, beneficial or desired clinical results include, but are not limited to, one or more of the following: alleviating one or more symptoms resulting from the disease, diminishing the extent of the disease, stabilizing the disease (e.g., preventing or delaying the worsening of the disease) , preventing or delaying the spread (e.g., metastasis) of the disease, preventing or delaying the recurrence of the disease, delaying or slowing the progression of the disease, ameliorating the disease state, providing a remission (partial or total) of the disease, decreasing the dose of one or more other medications required to treat the disease, delaying the progression of the disease, increasing or improving the quality of life, increasing weight gain, and / or prolonging survival. Also encompassed by “treatment” is a reduction of pathological consequence of cancer (such as, for example, tumor volume) . The methods of the application contemplate any one or more of these aspects of treatment.

[0090] In the context of cancer, the term “treating” includes any or all of: inhibiting growth of cancer cells, inhibiting replication of cancer cells, lessening of overall tumor burden and ameliorating one or more symptoms associated with the disease.

[0091] The terms “inhibition” or “inhibit” refer to a decrease or cessation of any phenotypic characteristic or to the decrease or cessation in the incidence, degree, or likelihood of that characteristic. To “reduce” or “inhibit” is to decrease, reduce or arrest an activity, function, and / or amount as compared to that of a reference. In certain embodiments, by “reduce” or “inhibit” is meant the ability to cause an overall decrease of 20%or greater. In another embodiment, by “reduce” or “inhibit” is meant the ability to cause an overall decrease of 50%or greater. In yet another embodiment, by “reduce” or “inhibit” is meant the ability to cause an overall decrease of 75%, 85%, 90%, 95%, or greater.

[0092] The terms “subject, ” “individual, ” and “patient” are used interchangeably herein to refer to a  mammal, including, but not limited to, human, bovine, horse, feline, canine, rodent, or primate. In some embodiments, the individual is a human.

[0093] It is understood that embodiments of the application described herein include “consisting” and / or “consisting essentially of” embodiments.

[0094] Reference to “about” a value or parameter herein includes (and describes) variations that are directed to that value or parameter per se. For example, description referring to “about X” includes description of “X” .

[0095] As used herein, reference to “not” a value or parameter generally means and describes “other than” a value or parameter. For example, the method is not used to treat cancer of type X means the method is used to treat cancer of types other than X.

[0096] The term “about X-Y” used herein has the same meaning as “about X to about Y. ”

[0097] As used herein and in the appended claims, the singular forms “a, ” “or, ” and “the” include plural referents unless the context clearly dictates otherwise.

[0098] Interleukin 18 (IL-18) Variant Polypeptides

[0099] Interleukin-18 (IL-18, also known as interferon-gamma inducing factor) is a protein which in humans is encoded by the IL-18 gene. It is a proinflammatory cytokine which potentially can be produced by hematopoietic cells and non-hematopoietic cells. IL-18 can modulate both innate and adaptive immunity and its dysregulation can cause autoimmune or inflammatory diseases.

[0100] In one aspect, provided herein are interleukin 18 ( “IL-18” ) variant polypeptides comprising mutation (s) at one or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, wherein amino acid positions are relative to a wild type (WT) human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the wild-type IL-18 is human IL-18 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.

[0101] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at two or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the two or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at three or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and  I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the three or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at four or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the four or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at five or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the five or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at six or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the six or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at seven or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the seven or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at eight or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the eight or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at nine or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the nine or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at ten or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the ten or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at eleven or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the eleven or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at twelve or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the twelve or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at thirteen or more of F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96,  R107, K140, and I149, e.g., in any combination. In some embodiments, the thirteen or more mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise mutations at positions other than F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant comprises (or further comprises) mutations at positions other than at F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises one or more mutations (such as any of 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or 15 mutations) , wherein at least one, at least 2, at least 3, or at least 4 mutations are selected from the group consisting of: F2, G3, E6, V11, Q24, L29, D54, A61, N91, K96, R107, K140, and I149. In some embodiments, the wild-type IL-18 is human IL-18 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.

[0102] In some embodiments, the one or more mutations are selected from the group consisting of: G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at two or more of G3, E6, D54, and N91, e.g., in any combination. In some embodiments, the two or more mutations are selected from the group consisting of: G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at three or more of G3, E6, D54, and N91, e.g., in any combination. In some embodiments, the three or more mutations are selected from the group consisting of: G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise mutations at positions other than G3, E6, D54, and / or N91. In some embodiments, the IL-18 variant comprises (or further comprises) mutations at positions other than at G3, E6, D54, and / or N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises one or more mutations (such as any of 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or 15 mutations) , wherein at least one, at least 2, at least 3, or at least 4 mutations are selected from the group consisting of: G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the wild-type IL-18 is human IL-18 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.

[0103] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (e.g., further comprises) at least one mutation at a residue selected from the group consisting of Q56, P57, M60, Q103, R104, M113, and N155, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1.

[0104] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises at least one mutation (or two, or three) at a residue selected from the group consisting of G3, E6, and M60, wherein the amino acid positions is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18  variant polypeptide comprises at least one of a) G3P, G3S, G3E, G3N, G3D, or G3A; b) E6K, E6T, E6R, E6A, E6M, E6L, E6G, E6H, E6S, or E6Y; or c) M60K. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises at least one or more (e.g., two, three, four, or five) mutations at a residue selected from the group consisting of V11, D54, Q56, P57, N91, K96, R104, R140, I149, and N155. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises at least one of a) D54H, D54W, D54Q, D54S, D54G, D54P, D54L, D54Y, D54F, D54R, or D54A; b) Q56D, Q56P, Q56H, Q56G, Q56T, Q56R, Q56L, Q56I, Q56S, Q56Y, Q56E, or Q56V; c) P57R, P57D, P57V, P57W, P57A, P57N, P57S, P57T, P57Q, P57G, P57K, P57H, P57L, P57I or P57E; d) N91V, N91G, N91A, N91S, N91T, N91R, N91K, N91P, N91I, or N91W; e) R104V, R104T, R104Y, R104F, R104T, R104L, R104S, R104A, R104E, R104I; f) N155K; g) V11I; h) K96D or K96E; i) I149M; or j) K140R.

[0105] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6K, D54H, Q56D, P57R, N91V, and R104V, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some  embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0106] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3S, E6K, D54W, Q56P, P57D, N91G, and R104T, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0107] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6K, D54W, Q56H, P57V, N91A, and R104Y, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or  three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0108] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6K, D54W, Q56G, P57V, N91V, and R104F, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the  substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0109] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3E, E6T, D54W, Q56P, P57W, N91V, R104T, and N155K, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In  some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0110] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54W, Q56T, N91V, and R104T, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0111] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54H, Q56T, P57A, and N91A, wherein the amino acid position (s) is  relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0112] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54W, Q56P, P57A, N91A, and R104L, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution,  optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0113] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54W, Q56R, P57A, N91S, and R104S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group  consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0114] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54Q, Q56L, P57W, and N91S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0115] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54S, Q56R, P57N, N91G, and R104T, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0116] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6K, D54G, Q56G, P57A, and N91T, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared  to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0117] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6K, D54Q, Q56I, and P57W, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant  polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0118] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3N, E6K, D54P, Q56S, P57S, N91R, and R104A, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some  embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0119] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54S, Q56Y, P57T, and N91G, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0120] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54S, Q56R, P57N, N91G, and R104S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or  three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0121] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54L, Q56T, P57A, and N91G, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the  substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0122] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54S, Q56R, P57R, N91G, and R104S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In  some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0123] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6K, D54H, Q56E, P57Q, and N91A, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0124] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54S, Q56R, P57S, N91G, and R104S, wherein the amino acid  position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0125] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54S, Q56S, P57T, N91G, and R104S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution,  optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0126] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54Y, Q56R, P57G, N91K, and R104S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group  consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0127] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54Y, Q56T, and P57R, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0128] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54Y, Q56T, and P57S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0129] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54L, Q56T, P57T, and N91R, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared  to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0130] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54H, Q56D, P57K, N91V, and R104Y, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments,  the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0131] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54H, Q56Y, P57T, N91V, and R104Y, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some  embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0132] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6A, D54W, Q56G, P57G, N91V, and R104Y, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0133] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6M, D54F, Q56D, P57R, and N91P, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three  mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0134] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6L, D54H, Q56T, P57V, and N91S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the  substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0135] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54H, Q56I, P57H, N91I, and R104Y, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In  some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0136] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6G, D54S, Q56S, and P57R, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0137] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3E, E6H, D54R, Q56T, and P57H, wherein the amino acid position (s) is relative  to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0138] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54H, Q56R, P57N, N91V, and R104E, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution,  optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0139] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54G, Q56G, P57A, and N91G, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group  consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0140] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6S, D54A, Q56D, P57Q, and N91G, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0141] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6G, D54Q, Q56V, and P57W, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0142] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6S, D54W, Q56G, P57A, N91V, and R104I, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared  to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0143] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54W, Q56P, P57G, N91V, and R104L, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments,  the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0144] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3D, E6K, D54P, Q56S, P57W, and N91W, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some  embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0145] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises one substitution (e.g., a single substitution) which is G3P, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0146] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6K, D54G, Q56G, and P57A, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or  substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0147] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54L, Q56G, P57S, and N91V, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the  substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0148] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, V11I, D54G, Q56G, P57A, and N91G, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In  some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0149] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6K, D54H, Q56Y, and P57S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0150] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising E6R, D54W, Q56S, and P57Q, wherein the amino acid position (s) is relative to a  wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0151] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6K, D54L, Q56T, P57Q, and N91V, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution,  optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0152] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3A, E6Y, D54R, Q56S, P57L, and N91G, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group  consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0153] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, D54L, Q56T, P57I, and N91G, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0154] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising E6G, D54L, Q56T, P57E, N91G, and R104S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0155] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3A, E6Y, D54R, Q56S, P57L, and N91A, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared  to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0156] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising M60K, and K96D, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant  polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0157] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, and K96E, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant  polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0158] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises one substitution (e.g., a single substitution) comprising M60K, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0159] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P and E6R, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the  wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0160] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P and E6K, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V.  In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0161] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3D, E6K, and N91S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some  embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0162] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3S, and I149M, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0163] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3P, E6R, and N91S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type  human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0164] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises one substitution (e.g., a single substitution) comprising E6R, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a  C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0165] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising E6R and N91S, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of  C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0166] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises one substitution (e.g., a single substitution) comprising V11I, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0167] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a set of substitution combination comprising G3S and K140R, wherein the amino acid position (s) is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise any other mutation relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises one, two or three mutations or substitutions relative to the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1, optionally wherein IL-18 variant polypeptide has a) a comparable or more potent binding affinity with IL-18 receptor (e.g., IL-18Ra) , and / or b) a comparable or lower binding affinity with IL-18 binding protein, as compared to the corresponding IL-18 variant polypeptide without the one, two or three additional mutations or substitutions. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a S117C substitution, optionally wherein the S117C substitution promotes a C76-C117 disulfide bond. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C38, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C38I, C38V, C38L, and C38M, further optionally wherein the substitution is C38I or C38V. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C68, optionally wherein the substitution is selected from the group consisting of C68I, C68V, C68S, and C68D, further optionally wherein the substitution is C68I, C68L, or C38S. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises a substitution at C76 and / or C127, optionally wherein the C76 substitution is C76Y or C76V, and optionally wherein the C127 substitution is selected from the group consisting of C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L, further optionally wherein the C127 substitution is C127A or C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68S, and C76S substitutions, optionally wherein the variant polypeptide further comprises a C127S substitution. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68S, and S117C. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38V, C68I, S117C, and C127A. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38S, C68I, S117C, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68I, C76V, and C127I. In some embodiments, the variant polypeptide further comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0168] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-4, 8-9, 11-12, 17, 21-22, 26-28, 35, 38-39, 41, 43-44, 49-50, 54-56, 58-59, 65-66, 72-74, 81, 91, 94, 99, 104-105, 114, 116-117, 121-125, 131-134, 139-145, 147, and 149-153.

[0169] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2-4, 8-9, 11-12, 17, 21, 22, 26-28, 35, 38, 39, 41, 43, 44, 49, 50, 54-56, 58-59, 65-66, 72-74, 81, 91, 94, 99, 104-105, 114, 116-117, 121-125, 131-134, 139-145, 147, and 149-150.

[0170] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises an amino acid sequence set  forth in any one of 3, 9, 17, 27, 39, 43, 49, 94, 105, 116-117, 133, and 143-150.

[0171] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises) at least one, at least two, at least three, at least four, at least five, or six mutation at residues selected from the group consisting of C38, C68, C76, D98, S117, and C127, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises) a substitution at C38 (i.e., wherein the wild-type cysteine at position 38 is substituted with any amino acid) , a substitution at C68 (i.e., wherein the wild-type cysteine at position 68 is substituted with any amino acid) , and an S117C substitution. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises) a C38I, C38V, C38L, C38M or C38S mutation. Additionally or alternatively, in some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises) a C68S, C68I, C68D, C68V or C68L mutation. Additionally or alternatively, in some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises) a C76S, C76V, or C76Y mutation. Additionally or alternatively, in some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises) an S117C mutation. Additionally or alternatively, in some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises) a C127A, C127Y, C127F, C127L or C127I mutation. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises) at least one, at least two, at least three, or four mutations selected from the group consisting of C38S, C68S, C76S, and C127S, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises) C38S, C68S, and C76S mutations. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises or consists of) C38I, C68S, and S117C mutations. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises or consists of) C38V, C68I, S117C, and C127A mutations. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises or consists of) C38S, C68I, S117C, and C127I mutations. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises or consists of) C38I, C68I, C76V, and C127I mutations. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises (or further comprises or consists of) C38I, C68L, and C76Y mutations.

[0172] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises mutation (s) at one or more of Q56, P57, and R104. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises mutations at two or more of Q56, P57, and R104. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises mutations at Q56, P57, and R104. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise mutations at positions other than G3, E6, D54, Q56, P57, N91, and / or R104. In some embodiments, the IL-18 variant comprises (or further comprises) mutations at positions other than G3, E6, D54, Q56, P57, N91, and / or R104. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises one or  more mutations (such as any of 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or 15 mutations) , wherein at least one, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, or at least 7 mutations are selected from the group consisting of: G3, E6, D54, Q56, P57, N91, and R104. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise substitutions at Q56 and P57, wherein the amino acid positions are relative to SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the wild-type IL-18 is human IL-18 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.

[0173] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide specifically binds to IL-18 receptor α( “IL-18Rα” ) , e.g., human IL-18Rα or “hIL-18α, ” and exhibits substantially reduced binding to IL-18 binding protein ( “IL-18BP” ) , e.g., human IL-18 or “hIL-18BP. ” In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide exhibits substantially reduced binding to IL-18BP, relative to the WT human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the affinity of the IL-18 variant polypeptide for IL-18Rα (e.g., hIL-18Rα) is comparable to the affinity of WT human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1 for IL-18Rα (e.g., hIL-18Rα) . In some embodiments, the affinity of the IL-18 variant polypeptide for IL-18Rα (e.g., hIL-18Rα) is increased as compared to the affinity of WT human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1 for IL-18Rα (e.g., hIL-18Rα) .

[0174] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of less than about 5 x 10-5 M, less than about 5 x 10-6 M, less than about 5 x 10-7 M, less than about 5 x 10-8 M, less than about 5 x 10-9 M, less than about 5 x 10-10 M, or less than about 5 x 10-11 M, including any range in between these values. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-5 and about 5 x 10-11 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rαwith a KD of between about 5 x 10-7 and about 5 x 10-11 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-7 and about 5 x 10-10 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-7 and about 5 x 10-9 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-8 and about 5 x 10-11 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-9 and about 5 x 10-11 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-8 and about 5 x 10-10 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-7 and about 5 x 10-10 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-9 and about 5 x 10-10 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-7 and about 5 x 10-9 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-8 and about 5 x 10-9 M. In some embodiments, the IL-18 variant binds IL-18Rα (e.g., hIL-18Rα) with a KD between about 5 x 10-5 and 5 x  10-11 M, e.g., about any one of 5 x 10-5, 6 x 10-5, 7 x 10-5, 8 x 10-5, 9 x 10-5, 1 x 10-6, 2 x 10-6, 3 x 10-6, 4 x 10-6, 5 x 10-6, 6 x 10-6, 7 x 10-6, 8 x 10-6, 9 x 10-6, 1 x 10-7, 2 x 10-7, 3 x 10-7, 4 x 10-7, 5 x 10-7, 6 x 10-7, 7 x 10-7, 8 x 10-7, 9 x 10-7, 1 x 10-8, 2 x 10-8, 3 x 10-8, 4 x 10-8, 5 x 10-8, 6 x 10-8, 7 x 10-8, 8 x 10-8, 9 x 10-8, 1 x 10-9, 2 x 10-9, 3 x 10-9, 4 x 10-9, 5 x 10-9, 6 x 10-9, 7 x 10-9, 8 x 10-9, 9 x 10-9, 1 x 10-10, 2 x 10-10, 3 x 10-10, 4 x 10-10, 5 x 10-10, 6 x 10-10, 7 x 10-10, 8 x 10-10, 9 x 10-10, 1 x 10-11, 2 x 10-11, 3 x 10-11, 4 x 10-11, or 5 x 10-11 M, including any range in between these values. In some embodiments, the affinity of the IL-18 variant polypeptide for IL-18Rα (e.g., hIL-18Rα) is higher than the affinity of the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1 for IL-18Rα (e.g., hIL-18Rα) . In some embodiments, the affinity of the IL-18 variant polypeptide for IL-18Rα (e.g., hIL-18Rα) is comparable to (e.g., about the same as) the affinity of the wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1 for IL-18Rα (e.g., hIL-18Rα) .

[0175] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide exhibits substantially reduced binding to IL-18 binding protein (IL-18BP) relative to the wild-type IL-18. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18BP with a KD of more than 5 x 10-9 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18BP with a KD of more than 5 x 10-8 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18BP with a KD of more than 5 x 10-7 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18BP with a KD of more than 5 x 10-6 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18BP with a KD of more than 5 x 10-5 M. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide exhibits no binding (such as no detectable binding) to IL-18BP (e.g., hIL-18BP) . In some embodiments, an IL-18 variant polypeptide that exhibits no binding (e.g., no detectable binding) to IL-18BP (e.g., hIL-18BP) binds to IL-18BP (e.g., hIL-18BP) with a KD greater than 10-3 M.

[0176] The affinities of the IL-18 described herein for IL-18Rα and / or IL-18BP can be determined experimentally by methods known in the art. Such methods include, but are not limited to, e.g., Western blots, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) , radioimmunoassay (RIA) , electrochemiluminescence (ECL) assay, immunoradiometric (IRMA) assay, enzyme immunoassay (EIA) , surface plasmon resonance (SPR) , peptide scans, and fluorescence activated cell sorting (FACS) -based kinetic competition screening.

[0177] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a mutation at residue G3, wherein the mutation is selected from the group consisting of G3P, G3D, G3E, G3N, and G3S. As used herein, “G3X” means that G, i.e., the wild-type amino acid at position 3 of SEQ ID NO: 1, has been replaced with amino acid X. In some embodiments, the mutation is G3P, i.e., the wild type G at position 3 of SEQ ID NO: 1 has been replaced with amino acid P.

[0178] In some embodiments, the variant polypeptide comprises (such as further comprises) a mutation at residue E6, wherein the mutation is selected from the group consisting of E6R, E6K, E6G, E6T, E6A, E6S, E6E, E6L, E6M, and E6N. In some embodiments, the mutation is selected from the group  consisting of E6R, E6K, E6G, E6T, E6A, and E6S. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of E6R and E6K.

[0179] In some embodiments, the variant polypeptide comprises (such as further comprises) a mutation at residue D54, wherein the mutation is selected from the group consisting of D54W, D54H, D54S, D54Q, D54L, D54Y, D54P, D54A, D54F, D54G, and D54T. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of D54W, D54H, D54S, D54Q, D54L, and D54Y.

[0180] In some embodiments, the variant polypeptide comprises (such as further comprises) a mutation at residue N91, wherein the mutation is selected from the group consisting of N91V, N91A, N91G, N91S, N91I, N91P, N91R, N91T, N91C, N91K, and N91W. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of N91V, N91A, N91G, and N91S.

[0181] In some embodiments, the variant polypeptide further comprises a mutation at residue R104, wherein the mutation is selected from the group consisting of R104S, R104Y, R104T, R104L, R104V, R104A, R104F, R104H, R104I, and R104N. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of R104S, R104Y, and R104T. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises no mutation at residue R104.

[0182] In some embodiments, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises (such as further comprises) a mutation at residue Q56, the mutation is selected from the group consisting of Q56T, Q56G, Q56R, Q56S, Q56D, Q56P, Q56I, Q56Y, Q56H, Q56L, Q56E, Q56F, Q56N, and Q56V. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of Q56T, Q56G, Q56R, Q56S, Q56D, Q56P, Q56I, and Q56Y.

[0183] In some embodiments, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises (such as further comprises) a mutation at residue P57, the mutation is selected from the group consisting of P57A, P57G, P57R, P57W, P57S, P57T, P57V, P57Q, P57H, P57K, P57N, P57Y, and P57D. In some embodiments, the mutation is selected from the group consisting of P57A, P57G, P57R, P57W, P57S, P57T, and P57V.

[0184] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at one or more of G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at two or more of G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at three or more of G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises mutations at G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises a G3P mutation. Additionally or alternatively, in some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a E6R or E6K mutation. Additionally or alternatively, in some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a D54W, D54H, D54S, or D54Q mutation. Additionally or  alternatively, in some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises a N91V, N91A, N91G, or N91S mutation. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise mutations at positions other than G3, E6, D54, and / or N91. In some embodiments, the IL-18 variant further comprises mutations at positions other than at G3, E6, D54, and / or N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises one or more mutations (such as any of 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or 15 mutations) , wherein at least one, at least 2, at least 3, or at least 4 mutations are selected from the group consisting of: G3, E6, D54, and N91. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises mutations at Q56 and / or P57. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide does not comprise mutations at positions other than G3, E6, D54, N91, Q56 and / or P57. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide further comprises mutations at positions other than at G3, E6, D54, N91, Q56 and / or P57. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises one or more mutations (such as any of 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or 15 mutations) , wherein at least one, at least 2, at least 3, at least 4 mutations, at least 5 mutations, or at least 6 mutations are selected from the group consisting of: G3, E6, D54, N91, Q56, and P57.

[0185] In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises an amino acid sequence having at least about 75%, at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, at least about 91%, at least about 92%, at least about 93%, at least about 94%, at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, at least about 98%, or at least about 99%identity with the sequence of any one of SEQ ID NOs: 2-299, 307-318. In some embodiments, the IL-18 variant polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 2-299, 307-318. The amino acid sequences of SEQ ID NOs: 2-299, 307-318 are provided in the Sequence Summary Table below the Examples.

[0186] Fusion Polypeptides

[0187] In some embodiments, an activatable IL-18 polypeptide of the present disclosure comprises a fusion polypeptide comprising wild-type IL-18 or an IL-18 variant polypeptide described herein. In some embodiments, the fusion polypeptide comprises (1) a wild-type IL-18 or an IL-18 variant polypeptide and (2) a dimerization domain. In some embodiments, the fusion polypeptide comprises (1) two or more wild-type IL-18s, two or more IL-18 variant polypeptides, or two or more of a wild-type IL-18 and an IL-18 variant polypeptide in any combination, and (2) a dimerization domain. In some embodiments, the dimerization domain is or comprises a leucine zipper (LZ) element. Leucine zippers have been identified, generally, as stretches of about 35 amino acids containing 4-5 leucine residues separated from each other by six amino acids (Maniatis and Abel (1989) Nature 341 : 24-25) . Exemplary leucine zippers occur in a variety of eukaryotic DNA binding proteins, such as GCN4, C / EBP, c-Fos, c-Jun, c-Myc and c-Max. In some embodiments, the dimerization domain is or comprises a helix-loop-helix domain (Murre, C. et al.  (1989) Cell 58: 537-544) . Dimerization domains may also be selected from other proteins, such as the retinoic acid receptor, the thyroid hormone receptor or other nuclear hormone receptors (Kurokawa et al. (1993) Genes Dev. 7: 1423-1435) or from the yeast transcription factors GAL4 and HAP1 (Marmonstein et al. (1992) Nature 356: 408-414; Zhang et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2851 -2855) . Dimerization domains are further described in U.S. Patent No. 5,624,818 by Eisenman. In some embodiments, the dimerization domain is an antibody Fc domain.

[0188] In some embodiments, the fusion polypeptide comprises a wild-type IL-18 (e.g., the wild-type IL-18 who amino acid sequence is set forth in SEQ ID NO: 1) and an antibody Fc domain. In some embodiments, the fusion polypeptide comprises a IL-18 variant polypeptide (e.g., an IL-18 variant polypeptide described herein) and an antibody Fc domain. In some embodiments the C-terminus of the wild-type IL-18 or the C-terminus of the IL-18 variant polypeptide is fused to the N-terminus of the antibody Fc domain. In some embodiments the C-terminus of the antibody Fc domain is fused to the N-terminus of the wild-type IL-18 or the N-terminus of the IL-18 variant polypeptide. In some embodiments, the Fc domain is a human Fc domain or a variant thereof comprising one or more amino acid substitutions. In some embodiments, the Fc domain is an human IgG Fc domain or variant thereof, e.g., a human IgG1, IgG2, or IgG4 Fc domain or a variant of any of the preceding. In some embodiments, the fusion polypeptide comprises, N-terminus-to-C-terminus, an IL-18 variant polypeptide described herein and a human IgG1 Fc variant that comprises an N297A mutation, wherein the amino acid numbering is according to the EU numbering system, also called the EU index, as described in Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991. In some embodiments, the fusion polypeptide comprises, N-terminus-to-C-terminus, a wild-type IL-18 and a human IgG1 Fc variant that comprises an N297A mutation. In some embodiments, the fusion polypeptide comprises the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 319-332 and 336-347.

[0189] Nucleic Acids, Vectors, Host Cell, and Methods of Producing IL-18 Variant Polypeptides

[0190] Nucleic acid molecules encoding the IL-18 variant polypeptides described herein or fusion polypeptides described herein are also contemplated. In some embodiments, provided is a nucleic acid encoding an IL-18 variant polypeptide or a fusion polypeptide described herein. In some embodiments, the nucleic acid comprises a polynucleotide sequence having at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99%identity with a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO 301-306 and 333-335. In some embodiments, the nucleic acid comprises a polynucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 301-306 and 333-355. The nucleic acid sequences of SEQ ID NOs: 301-306 and 333-335 are provided in  the Sequence Summary Table below the Examples.

[0191] Also provided are vectors in which a nucleic acid described herein is inserted.

[0192] In brief summary, the expression of an IL-18 variant polypeptide or a fusion polypeptide described herein by a natural or synthetic nucleic acid encoding the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide can be achieved by inserting the nucleic acid into an appropriate expression vector, such that the nucleic acid is operably linked to 5’a nd 3’ regulatory elements, including for example a promoter (e.g., a constitutive, regulatable, tissue-specific promoter) and a 3’ untranslated region (UTR) . The vectors can be suitable for replication and integration in eukaryotic host cells. Typical cloning and expression vectors contain transcription and translation terminators, initiation sequences, and promoters useful for regulation of the expression of the desired nucleic acid sequence.

[0193] The nucleic acid can be cloned into a number of types of vectors. For example, the nucleic acid can be cloned into a vector including, but not limited to a plasmid, a phagemid, a phage derivative, an animal virus, and a cosmid. Vectors of particular interest include expression vectors, replication vectors, probe generation vectors, and sequencing vectors.

[0194] Further, the expression vector may be provided to a cell in the form of a viral vector. Viral vector technology is well known in the art and is described, for example, in Sambrook et al. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York) , and in other virology and molecular biology manuals. Viruses which are useful as vectors include, but are not limited to, retroviruses, adenoviruses, adeno-associated viruses, herpes viruses, and lentiviruses. In general, a suitable vector contains an origin of replication functional in at least one organism, a promoter sequence, convenient restriction endonuclease sites, and one or more selectable markers (see, e.g., WO 01 / 96584; WO 01 / 29058; and U.S. Pat. No. 6,326,193) .

[0195] A number of viral based systems have been developed for gene transfer into mammalian cells. For example, retroviruses provide a convenient platform for gene delivery systems. A selected gene can be inserted into a vector and packaged in retroviral particles using techniques known in the art. The recombinant virus can then be isolated and delivered to cells of the subject either in vivo or ex vivo. A number of retroviral systems are known in the art. In some embodiments, adenovirus vectors are used. A number of adenovirus vectors are known in the art. In some embodiments, lentivirus vectors are used. Vectors derived from retroviruses such as the lentivirus are suitable tools to achieve long-term gene transfer since they allow long-term, stable integration of a transgene and its propagation in daughter cells. Lentiviral vectors have the added advantage over vectors derived from onco-retroviruses such as murine leukemia viruses in that they can transduce non-proliferating cells, such as hepatocytes. They also have the added  advantage of low immunogenicity.

[0196] Additional promoter elements, e.g., enhancers, regulate the frequency of transcriptional initiation. Typically, these are located in the region 30-110 base pairs (bp) upstream of the start site, although a number of promoters have recently been shown to contain functional elements downstream of the start site as well. The spacing between promoter elements frequently is flexible, so that promoter function is preserved when elements are inverted or moved relative to one another. In the thymidine kinase (tk) promoter, the spacing between promoter elements can be increased to 50 bp apart before activity begins to decline.

[0197] One example of a suitable promoter is the immediate early cytomegalovirus (CMV) promoter sequence. This promoter sequence is a strong constitutive promoter sequence capable of driving high levels of expression of any polynucleotide sequence operatively linked thereto. Another example of a suitable promoter is Elongation Growth Factor-1α (EF-1α) . However, other constitutive promoter sequences may also be used, including, but not limited to the simian virus 40 (SV40) early promoter, mouse mammary tumor virus (MMTV) , human immunodeficiency virus (HIV) long terminal repeat (LTR) promoter, MoMuLV promoter, an avian leukemia virus promoter, an Epstein-Barr virus immediate early promoter, a Rous sarcoma virus promoter, as well as human gene promoters such as, but not limited to, the actin promoter, the myosin promoter, the hemoglobin promoter, and the creatine kinase promoter. Further, the invention should not be limited to the use of constitutive promoters. Inducible promoters are also contemplated as part of the invention. The use of an inducible promoter provides a molecular switch capable of turning on expression of the polynucleotide sequence which it is operatively linked when such expression is desired, or turning off the expression when expression is not desired. Examples of inducible promoters include, but are not limited to a metallothionine promoter, a glucocorticoid promoter, a progesterone promoter, and a tetracycline promoter.

[0198] In some embodiments, the expression of the nucleic acid (s) encoding the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide is inducible. In some embodiments, the nucleic acid (s) encoding the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide is operably linked to an inducible promoter, including any inducible promoter known in the art. In some embodiments, the nucleic acid (s) encoding an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide described herein has been engineered to encode an epitope tag, e.g., to facilitate purification or detection of the polypeptide. Exemplary epitope tags include, but are not limited to, e.g., 6x His (also known as His-tag or hexahistidine tag) , FLAG, HA, Myc, V5, GFP (green fluorescent protein, e.g., enhanced green fluorescent protein or EGFP) , SUMO (Small ubiquitin-like modifier) , GST (glutathione-S-transferase) , β-GAL (β-galactosidase) , Luciferase, MBP (Maltose Binding Protein) , RFP (Red Fluorescence Protein) , and VSV-G (Vesicular Stomatitis Virus Glycoprotein) .

[0199] An IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide of the present disclosure may be produced by any means known in the art. Exemplary techniques for polypeptide production are described below; however, these exemplary techniques are provided for illustrative purposes only and are not intended to be limiting.

[0200] An IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide described herein can be produced using recombinant methods. For recombinant production of an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide, a nucleic acid encoding the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide is isolated and inserted into a replicable vector for further cloning (amplification of the DNA) or for expression. DNA encoding the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide may be readily isolated and sequenced using conventional procedures (e.g., by using oligonucleotide probes that are capable of binding specifically to genes encoding the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide) . Many vectors are available. The vector components generally include, but are not limited to, one or more of the following: a signal sequence, an origin of replication, one or more marker genes, an enhancer element, a promoter, and a transcription termination sequence.

[0201] Both expression and cloning vectors contain a nucleic acid sequence that enables the vector to replicate in one or more selected host cells, e.g., to allow the vector to replicate independently of the host chromosomal DNA. This sequence can include origins of replication or autonomously replicating sequences. Such sequences are well known for a variety of bacteria, yeast, and viruses. Generally, the origin of replication component is not needed for mammalian expression vectors (the SV40 origin may be used because it contains the early promoter) .

[0202] Expression and cloning vectors can contain a selection gene or selectable marker. Typical selection genes encode proteins that (a) confer resistance to antibiotics or other toxins, e.g., ampicillin, neomycin, methotrexate, or tetracycline, (b) complement auxotrophic deficiencies, or (c) supply critical nutrients not available from complex media. Examples of dominant selection use the drugs neomycin, mycophenolic acid and hygromycin. Another example of suitable selectable markers for mammalian cells are those that enable the identification of cells competent to take up IL-18 variant polypeptide-or fusion polypeptide-encoding nucleic acid, such as DHFR, glutamine synthetase (GS) , thymidine kinase, metallothionein-I and -II, preferably primate metallothionein genes, adenosine deaminase, ornithine decarboxylase, and the like. For example, a Chinese hamster ovary (CHO) cell line deficient in endogenous DHFR activity transformed with the DHFR gene is identified by culturing the transformants in a culture medium containing methotrexate (Mtx) , a competitive antagonist of DHFR.

[0203] Alternatively, host cells (particularly wild-type hosts that contain endogenous DHFR) transformed or co-transformed with DNA sequences encoding an IL-18 variant polypeptide or fusion  polypeptide of interest, wild-type DHFR gene, and another selectable marker such as aminoglycoside 3'-phosphotransferase (APH) can be selected by cell growth in medium containing a selection agent for the selectable marker such as an aminoglycosidic antibiotic, e.g., kanamycin, neomycin, or G418.

[0204] Expression and cloning vectors generally contain a promoter that is recognized by the host organism and is operably linked to nucleic acid encoding an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide. Promoters suitable for use with prokaryotic hosts include the phoA promoter, β-lactamase and lactose promoter systems, alkaline phosphatase promoter, a tryptophan (trp) promoter system, and hybrid promoters such as the tac promoter. However, other known bacterial promoters are suitable. Promoter sequences are known for eukaryotes. Yeast promoters are well known in the art and can include inducible promoters / enhancers regulated by growth conditions. Virtually all eukaryotic genes have an AT-rich region located approximately 25 to 30 bases upstream from the site where transcription is initiated. Examples include without limitation the promoters for 3-phosphoglycerate kinase or other glycolytic enzymes, such as enolase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, hexokinase, pyruvate decarboxylase, phosphofructokinase, glucose-6-phosphate isomerase, 3-phosphoglycerate mutase, pyruvate kinase, triosephosphate isomerase, phosphoglucose isomerase, and glucokinase. The transcription of an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide from vectors in mammalian host cells can be controlled, for example, by promoters obtained from the genomes of viruses. The early and late promoters of the SV40 virus are conveniently obtained as an SV40 restriction fragment that also contains the SV40 viral origin of replication. The immediate early promoter of the human cytomegalovirus is conveniently obtained as a HindIII restriction fragment. Alternatively, the Rous Sarcoma Virus long terminal repeat can be used as the promoter.

[0205] Transcription of a DNA encoding an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide described herein by higher eukaryotes is often increased by inserting an enhancer sequence into the vector. Many enhancer sequences are now known from mammalian genes (globin, elastase, albumin, α-fetoprotein, and insulin) . Typically, however, one will use an enhancer from a eukaryotic cell virus.

[0206] Expression vectors used in eukaryotic host cells (yeast, fungi, insect, plant, animal, human, or nucleated cells from other multicellular organisms) will also contain sequences necessary for the termination of transcription and for stabilizing the mRNA.

[0207] Suitable host cells for cloning or expressing the DNA in the vectors herein are the prokaryote, yeast, or higher eukaryote cells described above. Suitable prokaryotes for this purpose include eubacteria, such as Gram-negative or Gram-positive organisms, for example, Enterobacteriaceae such as Escherichia, e.g., E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, e.g., Salmonella typhimurium, Serratia, e.g., Serratia marcescans, and Shigella, etc. In addition to prokaryotes, eukaryotic microbes such  as filamentous fungi or yeast are suitable cloning or expression hosts for IL-18 polypeptide variant-or fusion polypeptide-encoding vectors. Saccharomyces cerevisiae, or common baker's yeast, is the most commonly used among lower eukaryotic host microorganisms. Certain fungi and yeast strains may be selected in which glycosylation pathways have been “humanized, ” resulting in the production of an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide with a partially or fully human glycosylation pattern. See, e.g., Li et al., Nat. Biotech. 24: 210-215 (2006) .

[0208] Plant cell cultures of cotton, corn, potato, soybean, petunia, tomato, duckweed (Leninaceae) , alfalfa (M. truncatula) , and tobacco can also be utilized as hosts.

[0209] Suitable host cells for the expression of a glycosylated IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide are also derived from multicellular organisms (invertebrates and vertebrates) . Examples of invertebrate cells include plant and insect cells. Numerous baculoviral strains and variants and corresponding permissive insect host cells from hosts such as Spodoptera frugiperda (caterpillar) , Aedes aegypti (mosquito) , Aedes albopictus (mosquito) , Drosophila melanogaster (fruitfly) , and Bombyx mori have been identified.

[0210] Vertebrate cells may be used as hosts, and propagation of vertebrate cells in culture (tissue culture) has become a routine procedure. Examples of useful mammalian host cell lines are monkey kidney CV1 line transformed by SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651) ; human embryonic kidney line (293 or 293 cells subcloned for growth in suspension culture, Graham et al., J. Gen Virol. 36: 59 (1977) ) ; baby hamster kidney cells (BHK, ATCC CCL 10) ; mouse sertoli cells (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980) ) ; monkey kidney cells (CV1 ATCC CCL 70) ; African green monkey kidney cells (VERO-76, ATCC CRL-1587) ; human cervical carcinoma cells (HELA, ATCC CCL 2) ; canine kidney cells (MDCK, ATCC CCL 34) ; buffalo rat liver cells (BRL 3A, ATCC CRL 1442) ; human lung cells (W138, ATCC CCL 75) ; human liver cells (Hep G2, HB 8065) ; mouse mammary tumor (MMT 060562, ATCC CCL51) ; TRI cells (Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68 (1982) ) ; MRC 5 cells; FS4 cells; and a human hepatoma line (Hep G2) . Other useful mammalian host cell lines include Chinese hamster ovary (CHO) cells, including DHFR-CHO cells (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216 (1980) ) ; and myeloma cell lines such as NS0 and Sp2 / 0. For a review of certain mammalian host cell lines suitable for production, see, e.g., Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003) , pp. 255-268.

[0211] The host cells of the present disclosure may be cultured in a variety of media. Commercially available media such as Ham's F10 (Sigma) , Minimal Essential Medium ( (MEM) , (Sigma) , RPMI-1640 (Sigma) , and Dulbecco's Modified Eagle's Medium ( (DMEM) , Sigma) are suitable for culturing the host cells. In addition, any of the media described in Ham et al., Meth. Enz. 58: 44 (1979) , Barnes et al., Anal.  Biochem. 102: 255 (1980) , U.S. Pat. Nos. 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655; or 5,122,469; WO 90 / 03430; WO 87 / 00195; or U.S. Pat. Re. 30,985 may be used as culture media for the host cells. Any of these media may be supplemented as necessary with hormones and / or other growth factors (such as insulin, transferrin, or epidermal growth factor) , salts (such as sodium chloride, calcium, magnesium, and phosphate) , buffers (such as HEPES) , nucleotides (such as adenosine and thymidine) , antibiotics (such as GENTAMYCINTM drug) , trace elements (defined as inorganic compounds usually present at final concentrations in the micromolar range) , and glucose or an equivalent energy source. Any other necessary supplements may also be included at appropriate concentrations that would be known to those skilled in the art. The culture conditions, such as temperature, pH, and the like, are those previously used with the host cell selected for expression, and will be apparent to one of skill in the art.

[0212] When using recombinant techniques, the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide can be produced intracellularly, in the periplasmic space, or directly secreted into the medium. If the polypeptide is produced intracellularly, as a first step, the particulate debris, either host cells or lysed fragments, are removed, for example, by centrifugation or ultrafiltration. Carter et al., Bio / Technology 10: 163-167 (1992) describe a procedure for isolating antibodies which are secreted to the periplasmic space of E. coli.

[0213] The polypeptide composition prepared from the cells can be purified using, for example, hydroxyapatite chromatography, hydrophobic interaction chromatography, gel electrophoresis, dialysis, and affinity chromatography, with affinity chromatography being among one of the typically preferred purification steps. In some embodiments, an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide described herein comprises an epitope tag (e.g., a tag attached to the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide via a cleavable linker) to facilitate purification. Exemplary epitope tags include, but are not limited to, e.g., 6x His (also known as His-tag or hexahistidine tag) , FLAG, HA, Myc, V5, GFP (green fluorescent protein, e.g., enhanced green fluorescent protein or EGFP) , SUMO (Small ubiquitin-like modifier) , GST (glutathione-S-transferase) , β-GAL (β-galactosidase) , Luciferase, MBP (Maltose Binding Protein) , RFP (Red Fluorescence Protein) , and VSV-G (Vesicular Stomatitis Virus Glycoprotein.

[0214] Methods of Treating Disease, Activating hIL-18 receptor-mediated signaling, and Stimulating Antigen-Experienced T-cells or NK cells

[0215] Also provided here are methods of treating a disease or condition in an individual. The methods comprise administering an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide described herein, a nucleic acid described herein, a vector described herein, and / or a pharmaceutical composition described herein to an individual having the disease or condition. In some embodiments, the disease or condition is a proliferative disorder. In some embodiments the proliferative disorder is cancer.

[0216] In some embodiments, provided are methods of activating hIL-18 receptor mediated signal in an individual, which methods comprise administering an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide described herein, a nucleic acid described herein, a vector described herein, and / or a pharmaceutical composition described herein to the individual. In some embodiments, provided herein are methods of stimulating antigen-experienced T cells or NK cells in an individual, which methods comprise administering an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide described herein, a nucleic acid described herein, a vector described herein, and / or a pharmaceutical composition described herein to the individual. In some embodiments of any of the methods herein, the individual is a mammal (e.g., human, non-human primate, rat, mouse, cow, horse, pig, sheep, goat, dog, cat, etc. ) . In some embodiments, the individual is a human. In some embodiments, the individual is a clinical patient, a clinical trial volunteer, an experimental animal, etc.

[0217] Compositions, Kits and Articles of Manufacture

[0218] Also provided herein are compositions (such as formulations) comprising an IL-18 variant polypeptide, a fusion polypeptide, a nucleic acid, a vector, or a host cell described herein.

[0219] Suitable composition be obtained by mixing the IL-18 variant polypeptide, the fusion polypeptide, the nucleic acid, the vector, or the host cell having the desired degree of purity with optional pharmaceutically acceptable carriers, excipients or stabilizers (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980) ) .

[0220] Also provided are kits comprising an IL-18 variant polypeptide, a fusion polypeptide, a nucleic acid, a vector, or a host cell comprising a nucleic acid or vector described herein. The kits may be useful for any of the methods of treatment described herein.

[0221] The kits of the present application are in suitable packaging. Suitable packaging includes, but is not limited to, vials, bottles, jars, flexible packaging (e.g., sealed Mylar or plastic bags) , and the like. Kits may optionally provide additional components such as buffers and interpretative information.

[0222] The present application thus also provides articles of manufacture. The article of manufacture can comprise a container and a label or package insert on or associated with the container. Suitable containers include vials (such as sealed vials) , bottles, jars, flexible packaging, and the like. Generally, the container holds a composition, and may have a sterile access port (for example the container may be an intravenous solution bag or a vial having a stopper pierceable by a hypodermic injection needle) .

[0223] Those skilled in the art will recognize that several embodiments are possible within the scope and spirit of this invention. The invention will now be described in greater detail by reference to the following non-limiting examples. The following examples further illustrate the invention but, of course,  should not be construed as in any way limiting its scope.

[0224] EXEMPLARY EMBODIMENTS

[0225] 1. An interleukin 18 (IL-18) variant polypeptide comprising at least one mutation at a residue selected from the group consisting of: C38, C68, C76, S117, and C127, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1.

[0226] 2. The IL-18 variant polypeptide of embodiment 1, wherein the at least one mutation comprises a substitution at C38 and a substitution at C68.

[0227] 3. The IL-18 variant polypeptide of embodiment 2, wherein the at least one mutation comprises an S117C substitution.

[0228] 4. The IL-18 variant polypeptide of embodiment 2 or embodiment 3, wherein the substitution at C38 comprises C38I, C38S, C38V, C38L, or C38M, optionally wherein the substitution at C38 comprises C38I, C38S, or C38V.

[0229] 5. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 2-4, wherein the substitution at C68 comprises C68I, C68V, C68S, or C68D, optionally wherein the substitution at C68 comprises C68S, C68I or C68L.

[0230] 6. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 2-5, wherein the variant polypeptide does not comprise a mutation at C76.

[0231] 7. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 2-6, wherein the variant polypeptide comprises a) a substitution at C38, b) a substitution at C68, c) C76, and d) a S117C substitution.

[0232] 8. The IL-18 variant polypeptide of embodiment 7, wherein the variant polypeptide comprises a) I38, S68, C76, and C117, or b) V38, I68, C76, and C117.

[0233] 9. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-8, wherein the variant polypeptide does not comprise a mutation at C127.

[0234] 10. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-8, wherein the variant polypeptide comprises a mutation at C127, optionally wherein the variant polypeptide comprises C127A, C127Y, C127F, or C127L, further optionally wherein the variant polypeptide comprises C127A.

[0235] 11. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-2, 4-5, and 9-10, wherein the at least one mutation comprises a substitution at C76, optionally wherein the substitution at C76 comprises  C76V or C76Y.

[0236] 12. The IL-18 variant polypeptide of embodiments 1-5 and 9-11, wherein the at least one mutation comprises a substitution at C38, a substitution at C68, and a substitution at C76, optionally wherein the substitution at C38 comprises C38I, C38V, C38L, C38S, or C38M, optionally wherein the substitution at C68 comprises C68I, C68V, C68S, C68L, or C68D, and optionally wherein the substitution at C76 comprises C76Y, C76S, or C76V.

[0237] 13. The IL-18 variant polypeptide of embodiment 11, wherein the variant polypeptide comprises C38I, C68I, and C76V.

[0238] 14. The IL-18 variant polypeptide of embodiment 11, wherein the variant polypeptide comprises C38I, C68L, and C76Y.

[0239] 15. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 11-14, wherein the variant polypeptide further comprises a mutation at C127, optionally wherein the mutation at C127 is C127A, C127I, C127Y, S127S, C127F, or C127L.

[0240] 16. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 11-14, wherein the variant polypeptide does not comprises a C127S.

[0241] 17. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-16, wherein the variant polypeptide comprises: a) S38, S68, S76, S117, and C127, b) S38, S68, S76, S117, and S127, c) I38, S68, C76, C117, and C127, d) V38, I68, C76, C117, and A127, e) I38, I68, V76, S117, and I127, or f) I38, L68, Y76, S117, and C127.

[0242] 18. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-17, wherein the variant polypeptide comprises I38, S68, C76, C117, and C127.

[0243] 19. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-18, wherein the IL-18 variant polypeptide specifically binds to IL-18 receptor α (IL-18Rα) and exhibits substantially reduced binding to IL-18 binding protein (IL-18BP) relative to the wild-type IL-18.

[0244] 20. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-19, wherein the IL-18 variant polypeptide exhibits an increased binding to IL-18Rα relative to the wild-type IL-18.

[0245] 21. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-20, wherein the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of less than about 5 x 10-5 M.

[0246] 22. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-21, wherein the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18Rα with a KD of between about 5 x 10-5 and about 5 x 10-11 M.

[0247] 23. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-22, wherein the IL-18 variant polypeptide binds to IL-18BP with a KD of more than 5 x 10-9 M.

[0248] 24. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-23, wherein the IL-18 variant polypeptide exhibits no binding to IL-18BP.

[0249] 25. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-24, wherein the variant polypeptide comprises a mutation at residue G3, wherein the mutation is selected from the group consisting of:G3P, G3D, G3E, G3F, G3K, G3T, G3W, G3N, and G3S, optionally wherein the mutation is G3P.

[0250] 26. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-25, wherein the variant polypeptide comprises a mutation at residue E6, wherein the mutation is selected from the group consisting of:E6R, E6K, E6G, E6T, E6A, E6S, E6H, E6L, E6M, E6N, E6P, E6Q, E6V, E6W, and E6Y, optionally wherein the mutation is selected from the group consisting of: E6R, E6K, E6G, E6T, E6A, and E6S, further optionally wherein the mutation is selected from the group consisting of: E6R and E6K.

[0251] 27. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-26, wherein the variant polypeptide comprises a mutation at residue D54, wherein the mutation is selected from the group consisting of: D54W, D54H, D54I, D54S, D54Q, D54L, D54M, D54Y, D54P, D54R, D54A, D54F, D54G, D54V, and D54T, optionally wherein the mutation is selected from the group consisting of: D54W, D54H, D54S, D54Q, D54L, and D54Y.

[0252] 28. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-27, wherein the variant polypeptide comprises a mutation at residue N91, wherein the mutation is selected from the group consisting of: N91V, N91A, N91D, N91F, N91G, N91S, N91I, N91P, N91R, N91L, N91T, N91C, N91K, N91Y and N91W, optionally wherein the mutation is selected from the group consisting of: N91V, N91A, N91G, and N91S.

[0253] 29. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-28, wherein the variant polypeptide further comprises a mutation at residue R104, wherein the mutation is selected from the group consisting of: R104S, R104Y, R104T, R104L, R104M, R104V, R104A, R104C, R104E, R104G, R104F, R104H, R104I, and R104N, optionally wherein the mutation is selected from the group consisting of: R104S, R104Y, and R104T.

[0254] 30. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-28, wherein the variant polypeptide comprises no mutation at residue R104.

[0255] 31. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-30, wherein the variant polypeptide comprises a mutation at residue Q56, wherein the mutation is selected from the group  consisting of: Q56A, Q56T, Q56G, Q56R, Q56S, Q56D, Q56P, Q56I, Q56Y, Q56H, Q56I, Q56K, Q56W, Q56L, Q56E, Q56F, Q56N, and Q56V, optionally wherein the mutation is selected from the group consisting of: Q56T, Q56G, Q56R, Q56S, Q56D, Q56P, Q56I, and Q56Y.

[0256] 32. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-30, wherein the variant polypeptide comprises no mutation at residue Q56.

[0257] 33. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-32, wherein the variant polypeptide comprises a mutation at residue P57, wherein the mutation is selected from the group consisting of: P57A, P57E, P57F, P57G, P57R, P57W, P57S, P57T, P57V, P57Q, P57H, P57I, P57K, P57L, P57N, P57Y, and P57D, optionally wherein the mutation is selected from the group consisting of: P57A, P57G, P57R, P57W, P57S, P57T, and P57V.

[0258] 34. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-32, wherein the variant polypeptide comprises no mutation at residue P57.

[0259] 35. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-34, wherein the variant polypeptide comprises mutations at G3, E6, D54, and N91, optionally wherein the variant polypeptide comprises mutations: (i) G3P; (ii) E6R or E6K; (iii) D54W, D54H, D54S, or D54Q; and (iv) N91V, N91A, N91G, or N91S.

[0260] 36. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-31, 33, and 35, wherein the variant polypeptide further comprises mutations at Q56 and P57.

[0261] 37. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 17-36, wherein the variant polypeptide comprises a polypeptide that is identical to any one of SEQ ID NOs: 1-299 except comprising S38, S68, S76, S117, and C127.

[0262] 38. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 17-36, wherein the variant polypeptide comprises a polypeptide that is identical to any one of SEQ ID NOs: 1-299 except comprising S38, S68, S76, S117, and S127.

[0263] 39. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 17-36, wherein the variant polypeptide comprises a polypeptide that is identical to any one of SEQ ID NOs: 1-299 except comprising I38, S68, C76, C117, and C127.

[0264] 40. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 17-36, wherein the variant polypeptide comprises a polypeptide that is identical to any one of SEQ ID NOs: 1-299 except comprising V38, I68, C76, C117, and A127.

[0265] 41. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 17-36, wherein the variant  polypeptide comprises a polypeptide that is identical to any one of SEQ ID NOs: 1-299 except comprising I38, I68, V76, S117, and I127.

[0266] 42. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 17-36, wherein the variant polypeptide comprises a polypeptide that is identical to any one of SEQ ID NOs: 1-299 except comprising I38, L68, Y76, S117, and C127.

[0267] 43. The IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-42, wherein the variant polypeptide comprises the amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 307-312 and 314-317.

[0268] 44. A fusion polypeptide comprising the IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-43 and a half-life extending moiety, optionally wherein the half-life extending moiety comprises an Fc domain, further optionally wherein the Fc domain comprises a human IgG Fc domain, further optionally wherein the Fc domain is a modified Fc domain with reduced effector function, further optionally wherein the Fc domain comprises a human IgG1 Fc domain comprising an N297A mutation (EU numbering) .

[0269] 45. The fusion polypeptide of embodiment 44, wherein the half-life extending moiety is fused to the N-terminus of the IL-18 variant polypeptide.

[0270] 46. The fusion polypeptide of embodiment 44, wherein the half-life extending moiety is fused to the C-terminus of the IL-18 variant polypeptide.

[0271] 47. A dimer comprising two fusion polypeptides of any one of embodiments 44-46, optionally wherein the dimer is a) a homodimer or b) a heterodimer.

[0272] 48. A nucleic acid encoding the IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-43 or the fusion polypeptide of any one of embodiments 44-46.

[0273] 49. A vector comprising the nucleic acid of embodiment 48.

[0274] 50. A host cell comprising the nucleic acid of embodiment 48 or the vector of embodiment 49.

[0275] 51. A method of producing an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide, comprising:

[0276] (a) culturing the host cell of embodiment 50 under conditions where the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide is expressed; and (b) recovering the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide produced by the host cell.

[0277] 52. A pharmaceutical composition comprising the IL-18 variant polypeptide of any one of embodiments 1-43, the fusion polypeptide of any one of embodiments 44-46, the nucleic acid of embodiment 48, or the vector of embodiment 49.

[0278] 53. A method of treating a disease in an individual, comprising administering to the individual  an effective amount of the pharmaceutical composition of embodiment 52.

[0279] 54. A method of activating hIL-18 receptor mediated signal in an individual, comprising administering to the individual an effective amount of the pharmaceutical composition of embodiment 52.

[0280] 55. A method of stimulating antigen-experienced immune cells in an individual in need thereof, comprising administering to the individual an effective amount of the pharmaceutical composition of embodiment 52.

[0281] 56. A method of increasing the yield and / or purity of an IL-18 variant polypeptide produced from a host cell, comprising removing one or more cysteine at position 38, 68, 76, and / or 127 of an IL-18 polypeptide, wherein the amino acid position of the IL-18 polypeptide is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1.

[0282] 57. The method of embodiment 56, comprising removing at least two cysteines at positions 38 and 68, optionally wherein the removing cysteine at position 38 comprises a substitution of C38 selected from the group consisting of C38I, C38S, C38V, C38L, and C38M, optionally wherein the removing cysteine at position 68 comprises a substitution of C68 selected from the group consisting of C68I, C68S, C68V, C68S, and C68D.

[0283] 58. The method of embodiment 56 or embodiment 57, comprising introducing a S117C mutation and retaining cysteine at position 76.

[0284] 59. The method of any one of embodiments 56-58, comprising removing the cysteine at position 127, optionally wherein the removing cysteine at position 127 comprises a substitution of C127 selected from the group consisting of C127S, C127A, C127I, C127Y, C127F, and C127L.

[0285] 60. The method of any one of embodiments 56-57 and 59, comprising removing the cysteine at position 76, optionally wherein the removing cysteine at position 76 comprises a substitution of C76 selected from the group consisting of C76S, C76V, and C76Y.

[0286] 61. The method of any one of embodiments 56-60, comprising: a) introducing to the IL-18 polypeptide C38S, C68S, and C76S; b) introducing to the IL-18 polypeptide C38S, C68S, C76S, and C127S; c) introducing to the IL-18 polypeptide C38I, C68S, S117C; d) introducing to the IL-18 polypeptide C38V, C68I, S117C, C127A; e) introducing to the IL-18 polypeptide C38I, C68I, C76V, and C127I; or f) introducing to the IL-18 polypeptide C38I, C68L, and C76Y.

[0287] 62. The method of any one of embodiments 56-61, wherein the host cell is a mammalian cell, optionally wherein the host cell is a CHO cell or a HEK293 cell.

[0288] 63. The method of any one of embodiments 56-62, wherein the IL-18 polypeptide comprises  an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-299.EXAMPLES

[0289] The following examples are put forth so as to provide those of ordinary skill in the art with a complete disclosure and description of how to make and use the present invention, and are not intended to limit the scope of what the inventors regard as their invention nor are they intended to represent that the experiments below are all or the only experiments performed. Efforts have been made to ensure accuracy with respect to numbers used (e.g. amounts, temperature, etc. ) but some experimental errors and deviations should be accounted for. The examples below are intended to be purely exemplary of the application and should therefore not be considered to limit the application in any way. The following examples and detailed description are offered by way of illustration and not by way of limitation.

[0290] Example 1: Construction of a Yeast Expression Library of IL-18 Variant Polypeptides that Do Not Bind IL-18BP

[0291] Interleukin 18 ( “IL-18” ) stimulates T and NK cells by binding to its heterodimer receptor complex, which is composed of IL-18Rα and IL-18Rβ subunits. IL-18 binding protein ( “IL-18BP” ) is a natural inhibitor of IL-18 activity. IL-18BP has much higher affinity for IL-18 than IL-18Rα, and the binding of IL-18BP to IL-18 blocks IL-18’s interaction with IL-18Rα. To develop variants of human IL-18 ( “hIL-18” ) that do not bind IL-18BP or have reduced binding affinity for IL-18BP, an artificial-intelligence guided molecular design method was utilized to identify amino acid positions in wild-type hIL-18 for mutations. Next, a yeast library displaying hIL-18 variant polypeptides comprising identified mutation (s) relative to wild-type IL-18 (SEQ ID NO: 1) was constructed using NNK mutagenesis, and the final library diversity was ～2.72×108. A c-myc tag was fused to each of the IL-18 variants for expression testing.

[0292] Example 2: Screening for IL-18 Variant Polypeptides that Bind Human IL-18Rα

[0293] A positive / negative selection strategy was used to screen the library constructed in Example 1 to identify IL-18 variant polypeptides that bind to hIL-18Rα, but not to hIL-18BP and IL-18 variant polypeptides that have reduced binding affinity for hIL-18BP, as compared to wild-type IL-18. Briefly, recombinant hIL-18Rα extracellular domain ( “hIL-18Rα ECD” ) was labeled with biotin and immobilized on a first set of streptavidin (SA) magnetic microbeads or anti-biotin magnetic microbeads for magnetic activated cell sorting (MACS) -based screening. Recombinant hIL-18BP was immobilized on a second set of SA magnetic microbeads or anti-biotin magnetic microbeads. The hIL-18Rα ECD-bound beads and the hIL-18BP-bound beads were used to perform three rounds of selection on the library constructed in Example 1, as illustrated in FIG 1A.

[0294] Next, two additional rounds of FACS-based kinetic competition screening were performed (i.e.,  rounds 4 and 5 as shown in FIG 1A) to further enrich IL-18 variant polypeptides that exhibited: (a) higher or comparable affinities for hIL-18Rα as compared to WT hIL-18 and (b) no detectable or reduced binding to hIL-18BP (e.g., with a KD for hIL-18BP of >10-3 M) . Then, single yeast cells from round 4 and round 5 output pools were isolated. Plasmids encoding the isolated IL-18 variant polypeptides were extracted from the yeast and sequenced via next generation sequencing (NGS) .

[0295] After each round of screening, output library size was determined by FACS. The binding ability of output library to 50 nM hIL-18Rα ECD or 1 μM hIL-18BP were also confirmed by FACS. As shown in FIG 1B, after above screening, most of the displayed IL-18 variants did not bind to hIL-18BP or exhibited reduced binding to hIL-18BP, and meanwhile the binding ability to hIL-18Rα ECD was maintained or increased.

[0296] Example 3: Single Clone Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS) of Yeast Cells Displaying IL-18 Variant Polypeptides.

[0297] Following the screens described in Example 2, single clone FACS analysis was performed to verify the binding of selected yeast cell surface-expressed IL-18 variant polypeptides from Round 4 and Round 5 to 10 nM hIL-18Rα-ECD. Briefly, each yeast clone at the same density was incubated with 10 nM IL-18Rα-ECD labeled by fluorescent probe, respectively, followed by washing step. Then the ratio of fluorescent positive IL-18Rα ECD binding yeasts in the population of each clone were analyzed.

[0298] As exemplarily shown in Table 1 and FIG 1C (which shows WT IL-18 (SEQ ID NO. 1) , and clones M12 (SEQ ID NO: 39) and M17 (SEQ ID NO: 43) as examples) , among the 192 IL-18 variant clones tested, 117 (i.e., SEQ ID NOs 2-118) were identified as positive clones (>0.1%cells with fluorescence in the population of the clone) . SEQ ID NO: 1 is wild-type human IL-18. Table 1:

[0299] Table 1. Single-Clone FACS Results for 117 Clones

[0300] Example 4: Recombinant hIL-18 expression and purification

[0301] WT hIL-18 and selected IL-18 variant polypeptides described above were expressed in an E. coli system. Briefly, PET30a plasmids comprising codon optimized sequences encoding WT hIL-18 or hIL-18 variant polypeptides were transfected into E. coli BL21 (DE3) cells. Then the transfected E. coli cells were expanded in culture medium, and the expressed polypeptide were harvested and purified.

[0302] FIGs 2A-2F illustrate WT hIL-18 and five exemplary variants (M12, MM5, WM6, M17 and M24) with purity of over 95%, as determined via SDS-PAGE and SEC-HPLC.

[0303] Example 5: Affinities of IL-18 Variant Polypeptides for hIL-18Rα

[0304] The affinities of IL-18 variant polypeptides for hIL-18Rα were assessed by Biolayer Interferometry (BLI) on Octet RED96 using Protein A sensor coated with hIL-18Rα ECD-Fc fusion protein, and WT hIL-18 was used as a control. The binding affinities of WT hIL-18 and IL-18 variant  polypeptides for hIL-18Rα ECD-Fc were as shown in Table 2A.

[0305] Table 2A. Affinities of IL-18 variant polypeptides for hIL-18Rα (as determined by BLI)

[0306] The mutations of theses IL-18 variant polypeptides (i.e., M1-M41, LM1-LM5, MM1-MM2, MM4-MM6, WM1-WM6, WM8, WM10-WM14, corresponding to SEQ ID NOs: 1-4, 8-9, 11-12, 17, 21-22, 26-28, 35, 38-39, 41, 43-44, 49-50, 54-56, 58-59, 65-66, 72-74, 81, 91, 94, 99, 104-105, 114, 116-117, 121-125, 131-134, 139-145, 147, 149-153) were shown in Table 2B.

[0307] Table 2B.

[0308] Example 6: Functional Characterization of IL-18 Variant Polypeptides

[0309] 6.1 Activation of hIL-18 Receptor-Mediated Signaling by IL-18 Variant Polypeptides

[0310] An NFκB-luc / hIL-18RαRβ HEK293 cell line stably expressing hIL-18Rα, hIL-18Rβ and an  NFκB luciferase reporter gene was used as the reporter cell to determine the abilities of IL-18 variant polypeptides in activating hIL-18 receptor mediated signaling.

[0311] Briefly, the reporter cells were first seeded in the wells of a white 96-well plate at a density of 3.0 × 104 cells per well. WT hIL-18 or IL-18 variant polypeptides were serially diluted in medium in (a) the presence and (b) the absence of 1 μg / mL hIL-18 BP-hFc. Luminescence intensity was measured after 16 hours of incubation at 37℃.

[0312] As shown in FIG 3 and Table 3, all the IL-18 variant polypeptides tested showed potency of activating IL-18 receptor-mediated signaling in a dose dependent manner. Unlike WT hIL-18, the activity of which was greatly decreased (by about 80-fold) in the presence of 1 μg / mL hIL-18BP-hFc, the IL-18 variant polypeptides (i.e., M1-M7, M9-M41, LM1-LM5, MM1-MM2, MM4-MM6, WM1-WM6, WM8, WM10-11, corresponding to SEQ ID NOs: 2-4, 8-9, 11-12, 17, 21, 22, 26-28, 35, 38, 39, 41, 43, 44, 49, 50, 54-56, 58-59, 65-66, 72-74, 81, 91, 94, 99, 104-105, 114, 116-117, 121-125, 131-134, 139-145, 147, 149-150) demonstrated Hil-18 BP-resistant activity with changes of EC50 by no more than 3 folds, indicating that the IL-18 variant polypeptides were significantly less affected by Hil-18BP in view of Hil-18 receptor-mediated signaling activation. One exception is WM6, EC50 of which shows ～12-fold potency loss in the presence of 1 μg / Ml Hil-18BP-hFc, which is still a lot better than the WT hIL-18.

[0313] Table 3. EC50s of IL-18 Variant Polypeptides in hIL-18 Reporter Assay, in the Presence or Absence of 1 μg / mL hIL-18BP-hFc

[0314] 6.2 Human PBMC-Based hIFNγ Release Assays

[0315] PBMC-based assays were performed to test abilities of IL-18 variant polypeptides in activating T / NK cells and inducing hIFNγ release. Briefly, human PBMC cells were seeded in the wells of 96-well plate at a density of 5.0×105 cells per well and cultured for 5 hours before treatment. WT hIL-18 or IL-18 variant polypeptides were serially diluted with 1 ng / mL human IL-12 in (a) the presence or (b) the absence of 1 μg / mL hIL-18 BP-hFc, and then supplemented to the wells. Culture medium was collected from each well after 16 hour incubation at 37℃, and hIFNγ concentration was measured via FRET using a kit (62HIFNGPEG, Cisbio) according to manufacturer’s instructions.

[0316] As shown in FIG 4, the tested IL-18 variant polypeptides showed potency of inducing hIFNγrelease from PBMC in a dose dependent manner. In addition, as shown in Table 4, the activity of WT hIL-18 was greatly attenuated in the presence of 1 μg / mL hIL-18BP-hFc, with a decrease of EC50 by about 35 folds. In contrast, the IL-18 variant polypeptides (i.e., M11-M13, M15, M17, M21, M24, M29, M32-M33, M35-M36, MM5, WM4-WM6, WM8, WM10-11, corresponding to SEQ ID NOs: 3, 9, 17, 27, 39, 43, 49, 94, 105, 116-117, 133, 143-150) demonstrated hIL-18 BP-resistant activity with changes of EC50 by no more than 2 folds, indicating that the IL-18 variant polypeptides were significantly less affected by hIL-18BP in view of hIFNγ induction.

[0317] Table 4. EC50s of IL-18 Variant Polypeptides in PBMC Assay, in the Presence or Absence of 1 μg / mL hIL-18BP

[0318] 6.3 Mouse Splenocyte-Based mIFNγ Release Assay

[0319] To assess in vivo efficacy of the IL-18 variant polypeptides of the present application, mouse splenocyte-based murine IFNγ ( “mIFNγ” ) release assays are performed as follows.

[0320] Briefly, fresh isolated mouse splenocytes are seeded in the wells of a 96-well plate at a density of 6.5 ×105 cells per well. WT hIL-18 or IL-18 variant polypeptides were serially diluted with 1 ng / mL mouse IL-12 in (a) the presence or (b) the absence of 1 μg / mL mouse IL-18BP-Fc, and then supplemented to the wells. Culture medium is collected from each well after 16 hour incubation at 37℃, and then mIFNγconcentration in the medium is measured via FRET using a kit (62MIFNGPEG, Cisbio) according to manufacturer’s instructions.

[0321] Example 7: Generation and Characterization of IL-18 Variant Polypeptides comprising Serine→Cysteine and / or Cysteine→ Serine Substitutions

[0322] 7.1 Wild-type IL-18 or IL-18 Polypeptide Variants Comprising Cysteine→ Serine Substitutions

[0323] Although the potent immune stimulation activity of IL-18 has been reported, the recombinant IL-18 is mainly expressed in E. coli. system, which is poorly suited to good manufacturing pactice (GMP) -compatible manufacturing standards that mostly using mammalian host cell. Human IL-18 has four unpaired cysteines and does not contain disulfide bond. Among the four cysteines, C38, C68 and C76 are highly solvent-exposed while C127 is partially exposed. When expressed, IL-18 is prone to form undesirable aggregates due to the exposed free cysteines, resulting in decreased yield and / or purity. To improve the proper folding and stability of IL-18, i.e. aiming for higher yield with qualified purity, we engineered IL-18 variant by using cysteine mutation strategy and disulfide bond introduction strategies. The following experiments were performed to assess the effects of Cys to Ser ( “C→S” ) mutations on the druggability of IL-18 variants and on the expression of IL-18 variants in mammalian cells, such as CHO cells and 293F cells. Wild-type IL-18 and IL-18 variant polypeptides M12 and MM5 were modified (or further modified) to comprise C38S, C68S, and C76S substitutions to generate new variants comprising the amino acid sequences below:

[0324] IL-18 VARIANT COMPRISING C38S, C68S, and C76S substitutions in WT hIL-18 background ( “IL-18-SSS” ) :

[0325] IL-18 VARIANT COMPRISING C38S, C68S, and C76S substitutions in M12 background ( “M12-SSS” ) :

[0326] IL-18 VARIANT COMPRISING C38S, C68S, and C76S substitutions in MM5 background ( “MM5-SSS” ) :

[0327] Fc fused cytokines can improve the pharmacokinetics and be suitable for broadly applicated manufacturing processes. Next, the C-termini of each of IL-18-SSS, M12-SSS, and M5-SSS were fused to the N-terminus of a human IgG1 Fc comprising an N297A substitution (EU numbering) to generate IL-18-SSS-Fc_N297A (SEQ ID NO: 319) , M12-SSS_N297A (SEQ ID NO: 320) , and MM5-SSS_N-297A (SEQ ID NO: 321) . The fusion polypeptides were expressed in CHO cells, harvested, and purified via Protein A chromatography. The yield of IL-18-SSS-Fc_N297A obtained following one step Protein A purification was 14.7 mg / L, with 65%purity. By contrast, the yield of WT IL-18-Fc_N297A obtained following one step Protein A purification was ～ 16 mg / L, with 11%purity. The yield of M12-SSS-Fc_N297A obtained following one step Protein A purification was 5.6 mg / ml, with 72%purity. By contrast, M12-Fc_N297A was not expressed at a detectable level in 100 mL CHO host cells. The yield of MM5-SSS-Fc_N297A obtained following one step Protein A chromatography was 24.5 mg / L, with 46%purity. Following a further purification step by gel filtration, the yield of MM5-SSS-Fc_N297 was 3.4 mg / L, with 99%purity. By contrast, MM5-Fc_N297A was not expressed at a detectable level in 100 mL CHO host cells.

[0328] M12-SSS was further modified to comprise a C127S substitution to generate M12-SSSS:

[0329] The C-terminus of M12-SSSS was fused to the N-terminus of a human IgG1 Fc variant comprising an N297A substitution (EU numbering) to generate M12-SSSS-Fc_N297A (SEQ ID NO: 322) . M12-SSSS-Fc_N297A was expressed in CHO cells, harvested, and purified via Protein A chromatography.  Introduction of the extra C127S substitution (i.e., a fourth C→S substitution) led to better expression yield and purity than M12-Fc_N297A, however, it has decreased yield and purity of M12-SSSS-Fc_N297A as compared to the yield and purity of M12-SSS-Fc_N297A (data not shown) , suggesting that the C127 mutation may compromised conformation benefits of the first three cycteine mutations.

[0330] Next, the potencies of IL-18-SSS-Fc_N297A and M12-SSS-Fc_N297A in activating IL-18 receptor-mediated signaling were characterized using the in vitro assay described in Section 6.1 of Example 6. The potency of IL-18-SSS-Fc_N297A showed was comparable to that of wild-type IL-18 (see FIG 5A) , whereas M12-SSS-Fc_N297A showed a ～7-fold potency loss as compared to M12 (see FIG 5B) . The signaling activity of IL-18-SSS-Fc_N297A decreased in the presence of 1 μg / ml hIL-18 BP-hFc ( “BP” ) , whereas M12-SSS-Fc_N297A demonstrated hIL-18 BP-resistant activity in the presence of 1 μg / ml hIL-18BP-hFc. See FIGs 5A and 5B. As shown in FIG 5C, MM5-SSS-Fc_N297A showed a ～220-fold potency loss as compared to MM5, but demonstrated hIL-18 BP-resistant activity in the presence of 1 μg / ml hIL-18BP-hFc. Such results indicate that that the 3 cysteine → serine substitutions do not affect IL-18 BP resistance property. These data suggests that mutations at C38, C68, and C76 which prevent undesirable intra-and inter molecular disulfide bond formation of the three exposed cysteines are critical for improving the yield and purity of IL-18 and of IL-18 polypeptide-Fc fusion protein. In addition to this, the Fc fused IL-18 and IL-18 variant is expected to exhibit a higher half-life.

[0331] 7.2 IL-18 Polypeptide or IL-18 Polypeptide Variants Comprising Amino Acid Substitutions that Remove and / or Introduce Cysteine Residues

[0332] The following experiments were performed to assess the effects of substitutions that delete inherent cysteines (i.e., naturally occurring cysteines in a polypeptide sequence) and / or introduce a disulfide bond on the druggability, expression, and purification of IL-18 variant polypeptides. M12 is used as a representative variant for engineering strategies selection. First, in silico screening was performed based on molecular dynamic simulation, and following AI-based stability assessment, mutation hot spots on each of the four cysteines (C38, C68, C76, and C127) of M12 seperately were identified as listed. See Table 5. In addition, structure-guided design was used to identify amino acids in spatial positions which, when substituted to Cys residue (s) , would permit the formation of new, non-native disulfide bond (s) . The mutation strategies shown in Table 5 (i.e., DB6, DB7, DB8, DB9, and DB10) were proposed. It was hypothesized that introducing a S117C mutation while retaining C76 would promote a disulfide bond between C117 and C76.

[0333] Table 5. M12-Derived IL-18 Polypeptide Variants

[0334] The mutation strategies in Table 5 were introduced into IL-18 polypeptide variant M12 to generate new variants M12-DB6, M12-DB7, M12-DB8, M12-DB9, and M12-DB10. The mutation hot spot on single site is from the in silico screening. In silico screening was performed based on molecular dynamic simulation, and following AI-based stability assessment, mutation hot spots on each of the four cysteines (C38, C68, C76, and C127) of M12 were identified as listed.

[0335] M12-DB6

[0336] M12-DB7

[0337] M12-DB8

[0338] M12-DB9

[0339] M12-DB10

[0340] The C-termini of each of M12-DB6, M12-DB7, M12-DB8, M12-DB9, and M12-DB10 variant was fused to a human IgG1 Fc variant comprising an N297A substitution (EU numbering) . The resulting fusion polypeptides, i.e., M12-DB6-Fc_N297A (SEQ ID NO: 323) , M12-DB7-Fc_N297A (SEQ ID NO: 324) , M12-DB8-Fc_N297A (SEQ ID NO: 325) , M12-DB9-Fc_N297A (SEQ ID NO: 326) , and M12-DB10-Fc_N297A (SEQ ID NO: 327) , were expressed in CHO cells, harvested, and purified via one-step Protein A chromatography. The purified preparations were analyzed via SEC and SDS PAGE (data not shown) . See Table 6 below.

[0341] Table6. Expression and Purification of M12-DB6, M12-DB7, M12-DB8, M12-DB9, and M12-DB10 Fc_N297A fusion proteins

[0342] “ / ” means there is no detectable protein purified.

[0343] M12-DB6-Fc_N297A, M12-DB7-Fc_N297A, M12-DB9-Fc_N297A, and M12-DB10-Fc_N297A showed greatly improved expression yields and / or purity (see Table 6) than either M12-Fc_N297A or M12-SSS-Fc_N297A. Among M12-DB6-Fc_N297A, M12-DB7-Fc_N297A, M12-DB9-Fc_N297A, and M12-DB10-Fc_N297A, M12-DB6-Fc_N297A exhibited the highest expression yield (313 mg / L) with 89.8%purity (as determined by SEC-HPLC) after one-step Protein A purification. M12-DB8-Fc_N297A was not expressed at detectable levels. The expression yield of M12-DB7-Fc_N297A was about 50%of the yield of M12-DB6-Fc_N297A. M12-DB7-Fc_N297A showed similar purity with M12-DB6-Fc_N297A following Protein A chromatography.

[0344] The high yield and purity, especially the high yield, of DB6 and DB7 are striking. The M12-DB6 format is about 60-fold of the SSS format. The data suggests that the strategy of removing cysteine at position 38 and 68 while introducing C117 to promote a disulfide bond between C117 and C76 is highly advantageous.

[0345] The lower yield of DB7 and undetectableness of DB8 suggests that a C127X substitution may not further improve polypeptide production in mammalian cells. Mutation on the partially exposed site C127 needs delicate design. Based on C38X+C68X+C76+S117C strategy, the 127 site prefers C over A, while the hydrophobic 127I impacts dramatically to the proper folding of IL-18 polypeptide. We further tested corresponding variant IL-18-DB6 polypeptide with C127N, C127T and C127S, and all three can be expressed at comparable levels as DB6. Given the partial exposure nature of the 127 site and the results, one should avoid introducing an amino acid with a hydrophobic side chain at the 127 site under this strategy.

[0346] Next, the potencies of M12-DB6-Fc_N297A, M12-DB7-Fc_N297A, M12-DB9-Fc_N297A, and M12-DB10-Fc_N297A in activating IL-18 receptor-mediated signaling were characterized using the in vitro assay described in Section 6.1 of Example 6. As shown in FIGs 6A-6D and in Table 7 below, M12-DB6-Fc_N297A (FIG 6A) , M12-DB7-Fc_N297A (FIG 6B) , M12-DB9-Fc_N297A (FIG 6C) , and M12-DB10-Fc_N297A (FIG 6D) showed much higher potency in activating IL-18 receptor-mediated signaling than WT IL-18. The signaling activities of M12-DB6-Fc_N297A (FIG 6A) , M12-DB7-Fc_N297A (FIG 6B) , and M12-DB9-Fc_N297A (FIG 6C) tested were not inhibited in the presence of 1 μg / ml hIL-18BP-hFc. See Table 7.

[0347] Table 7. EC50s of M12-DB6-Fc_N297A, M12-DB7-Fc_N297A, M12-DB9-Fc_N297A, and M12-DB10-Fc_N297A in an in vitro IL-18 Receptor Mediated Signaling Assay

[0348] Next, “DB6” substitutions, i.e., C38I, C68S, and S117C, were introduced into variant MM5 to generate MM5-DB6:

[0349] MM5-DB6

[0350] “DB6” substitutions were also introduced into wild-type IL-18 to generate WT IL18-DB6:

[0351] WT IL18-DB6

[0352] An additional variant, WT-DBo was designed by introducing an S117C substitution into wild-type IL-18:

[0353] WT IL-18-DBo

[0354] The C-termini of each of WT IL-18-DB6, WT IL-18-DBo, and MM5-DB6 was fused to the N-terminus of a human IgG1 Fc variant comprising an N297A substitution (EU numbering) . The resulting fusion polypeptides, WT IL18-DB6-Fc_N297A (SEQ ID NO: 328) , WT IL-18-DBo-Fc_N297A (SEQ ID NO: 329) , and MM5-DB6-Fc_N297A (SEQ ID NO: 330) , were expressed in CHO cells, harvested, and purified via Protein A chromatography. The purified preparations were analyzed via SEC and SDS PAGE (data not shown) . As shown in Table 8 below, there is no detectable protein of WT IL18-DBo-Fc_N297A after same expression and purification procedure. The expression yield of WT IL18-DB6-Fc was 157 mg / L, and WT IL18-DB6-Fc_N297A was 91.6%pure (as determined by SEC-HPLC) following one-step Protein A chromatography (see Table 8) . This data confirmed the highly advantageous strategy of promoting a disulfide bond between C76 and C117 while removing cysteine at position 38 and 68. Such data also indicate that merely introducing a disulfide bond between C76 and C117 may not be sufficient to improve fusion polypeptide expression in mammalian cells. Improved expression in mammalian cells is achieved with fusion polypeptides comprising an IL-18 variant that comprises (i) an engineered C76-C117 disulfide bond, (ii) a C38 substitution (see Table 5) , and (iii) a C68 substitution (see Table 5) . MM5-DB6-Fc_N297A consistently shows much higher expression yield and purity than MM5-SSS-Fc_N297A (see Table 8) . Such data also suggests that the C38X+C68X+C76+S117C mutation strategy such as “DB6” or “DB7” substitutions are suitable for improving the yield of WT IL-18 and IL-18 variant polypeptides during production in mammalian cells and following purification.

[0355] Next, fusion polypeptides in which the C-terminus of a human IgG1 Fc comprising an N297A  substitution (EU numbering) was fused to the N termini of each of variants M12-DB6 and MM5-DB6 were designed. The resulting fusion polypeptides, i.e., Fc_N297A-MM5-DB6 (SEQ ID NO: 332) and Fc_N297A-M12-DB6 (SEQ ID NO: 331) were expressed in CHO cells, harvested and purified via Protein A chromatography. As shown in Table 8, both Fc_N297A-MM5-DB6 and Fc_N297A-M12-DB6 demonstrated comparable expression yield and purity in CHO cells when compared to the M12-DB6-Fc_N297A or MM5-DB6-Fc_N297A, respectively. Following one-step Protein A chromatography purification, Fc_N297A-MM5-DB6 was ～97%pure (as determined by SEC-HPLC) , and Fc_N297A-M12-DB6 was 89%pure (as determined by SEC-HPLC) . These data suggest that the cystine mutation plus disulfide bond introduction strategy is eligible for Fc fusion in either fusion order.

[0356] Table 8. Yield and Purity of WT IL18-DB6-Fc_N297A, WT IL18-DBo-Fc_N297A, MM5-DB6-Fc_N297A, Fc_N297A-MM5-DB6, and Fc_N297A-M12-DB6 following expression in CHO cells and Protein A Chromatography

[0357] Next, the potencies of WT IL18-DB6-Fc_N297A, MM5-DB6-Fc_N297A, Fc_N297A-MM5-DB6 and Fc_N297A-M12-DB6 in activating IL-18 receptor-mediated signaling were characterized using the in vitro assay described in Section 6.1 of Example 6. Both WT IL18-DB6-Fc_N297A and MM5-DB6-Fc_N297A exhibited potent IL-18 receptor cell activation signal, stronger than that of WT IL-18 (see FIGs 7A, 7B, and Table 9) . Fc_N297A-MM5-DB6 shown similar potency with WT IL-18, while Fc_N297A-M12-DB6 resulted in much stronger activation signal to the IL-18 reporter cell (see FIGs 7C, 7D, and Table 9) . In the presence of 1 μg / mL IL-18BP-hFc, activity of WT IL18-DB6-Fc_N297A was greatly decreased, whereas the activity of MM5-DB6-Fc_N297A was resistant to inhibition by IL-18 BP (see FIGs 7A, 7B, and Table 9) . Both M12-DB6-Fc_N297A and MM5-DB6-Fc_N297A keeps the IL-18 BP resistant activity, meanwhile activity of WT IL18-DB6-Fc_N297A keeps decreased by IL-18 BP, indicating that the “DB6” set of mutations (i.e., C38I, C68S, and S117C, see Table 5) improve expression profile of IL-18 and IL-18 variant without affecting the  IL-18BP’s dependency.

[0358] Above all, such results demonstrate that the strategy of introduction C38X+C68X+C76+S117C mutation into a WT IL-18-Fc fusion polypeptide or into an IL-18 variant-Fc fusion polypeptide dramatically improves the expression yield of the fusion polypeptide during production in mammalian cells and improves the yield of purified fusion polypeptide following chromatography, without affecting the IL-18 BP resistant activity. Further, WT IL-18 and IL-18 variants that have been engineered to comprise the “DB6” set of mutations exhibit higher potencies of activating IL-18 receptor-mediated signaling. Such results were observed with fusion polypeptides in which the C-terminus of the Fc region was fused to the N-terminus of the IL-18 variant, as well as with fusion polypeptide in which the C-terminus of the IL-18 variant was fused to the N-terminus of the Fc domain (see Table 10) .

[0359] Table 9. EC50s of WT IL-18-DB6-Fc_N297A, MM5-DB6-Fc_N297A, Fc_N297A-MM5-DB6, and -Fc_N297A-M12-DB6 in an in vitro IL-18 Receptor Mediated Signaling Assay

[0360] See Table 10 below as a summary of data described above.

[0361] Table 10.

[0362] The present disclosure is not to be limited in scope by the specific embodiments described which are intended as single illustrations of individual aspects of the disclosure, and any compositions or methods which are functionally equivalent are within the scope of this disclosure. It will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made in the methods and compositions of the present disclosure without departing from the spirit or scope of the disclosure. Thus, it is intended that the present disclosure cover the modifications and variations of this disclosure provided they come within the scope of the appended claims and their equivalents.

[0363] All publications and patent applications mentioned in this specification are herein incorporated by reference to the same extent as if each individual publication or patent application was specifically and individually indicated to be incorporated by reference.

[0364] The present invention has been described in terms of particular embodiments found or proposed by the present inventor to comprise preferred modes for the pra...

Claims

1.A method of engineering an IL-18 variant polypeptide from an IL-18 polypeptide, comprising introducing a cysteine at position 117 and / or position 76 of the IL-18 polypeptide, thereby promoting a disulfide bond between C117 and C76, wherein the amino acid position of the IL-18 polypeptide is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1.2.The method of claim 1, wherein the method comprises a) introducing a cysteine at position 117, and b) retaining the cysteine at position 76 when the IL-18 polypeptide comprises a cysteine at position 76, or introducing a cysteine at position 76 when the IL-18 polypeptide comprises a non-cysteine at position 76.3.The method of claim 1 or claim 2, wherein the method comprises a) introducing a cysteine at position 76, and b) retaining the cysteine at position 117 when the IL-18 polypeptide comprises a cysteine at position 117, or introducing a cysteine at position 117 when the IL-18 polypeptide comprises a non-cysteine at position 117.4.The method of any one of claim 1-3, wherein introducing a cysteine at position 117 or position 76 comprises a substitution of the amino acid at position 117 or position 76 with a cysteine.5.The method of claim 4, wherein a substitution of the amino acid at position 117 comprises a S117C substitution.6.The method of any one of claims 1-5, further comprising removing one or both cysteines at position 38 and / or position 68 when the IL-18 polypeptide comprises cysteine at one or both position 38 and position 68.7.The method of claim 6, wherein removing one or both cysteines at position 38 and / or position 68 comprises a substitution of cysteine at position 38 and / or position 68 with a different amino acid.8.The method of claim 7, wherein the substitution of cysteine at position 38 comprises C38S, C38I, C38L, C38V, or C38M, optionally wherein the substitution of cysteine at position 38 comprises C38S, C38I, and C38V.9.The method of claim 7 or claim 8, wherein the substitution of cysteine at position 68 comprises C68S, C68I, C68V, C68L or C68D, optionally wherein the substitution of cysteine at position 38 comprises C68S, C68I, and C68L.10.The method of any one of claims 1-9, wherein the method further comprises retaining the cysteine at position 127 when the IL-18 polypeptide comprises a cysteine at position 127, or introducing a cysteine at position 127 when the IL-18 polypeptide comprises a non-cysteine at position 127.11.The method of any one of claims 1-9, wherein the method further comprises introducing an Alanine or an amino acid that does not have a hydrophobic side chain at position 127, optionally the amino acid that does not have a hydrophobic side chain is selected from the group consisting of cysteine, serine, threonine, asparagine, glutamine, glycine, and proline, further optionally the amino acid that does not have a hydrophobic side chain is selected from the group consisting of cysteine, serine, and threonine.12.The method of claim 11, wherein introducing an Alanine or an amino acid that does not have a hydrophobic side chain at position 127 comprises substitution of the amino acid at position 127 of the IL-18 polypeptide with an Alanine or an amino acid that does not have a hydrophobic side chain.13.The method of any one of claims 1-12, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises:a) I38, V38, or S38,b) I68, S68, or L68,c) C76, andd) C117.14.The method of claim 13, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises I38, S68, C76, and C117.15.The method of claim 13, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises V38, I68, C76, C117, optionally wherein the variant polypeptide further comprises A127.16.The method of any one of claims 1-15, wherein the IL-18 polypeptide comprises an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-299, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 1-299, optionally wherein the IL-18 polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 9, 17, 27, 39, 43,  49, 94, 105, 116-117, 133, and 143-150, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: SEQ ID NOs: 1, 3, 9, 17, 27, 39, 43, 49, 94, 105, 116-117, 133, and 143-150, further optionally wherein the IL-18 polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 9, 17, 27, 39, 43, 49, 94, 105, 29, and 117, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 9, 17, 27, 39, 43, 49, 94, 105, 29, and 117, further optionally wherein the IL-18 polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1, 39, and 133, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 1, 39, and 133.17.The method of any one of claims 1-16, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 311-312, 314-315, and 316-317, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 311-312, 314-315, and 316-317.18.A IL-18 variant polypeptide produced by the method of any one of claim 1-17.19.A IL-18 variant polypeptide comprising an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 311-312, 314-315, and 316-317, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 311-312, 314-315, and 316-317.20.An IL-18 variant polypeptide comprising a cysteine at position 117 and a cysteine at position 76, wherein the amino acid position is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1.21.The IL-18 variant polypeptide of claim 20, wherein the IL-18 variant polypeptide does not comprise a cysteine at position 38, or the IL-18 variant polypeptide does not comprise a cysteine at position 68.22.The IL-18 variant polypeptide of claim 21, wherein the IL-18 variant polypeptide does not comprise a cysteine at position 38, and the IL-18 variant polypeptide does not comprise a cysteine at position 68.23.The IL-18 variant polypeptide of any one of claims 20-22, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises 38S, 38I, 38V, 38L, or 38M, optionally wherein IL-18 variant polypeptide comprises 38S, 38I, or 38V.24.The IL-18 variant polypeptide of any one of claims 20-23, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises 68S, 68I, 68V, 68L or 68D, optionally wherein the IL-18 variant polypeptide comprises 68S, 68I, or 68L.25.The IL-18 variant polypeptide of any one of claims 20-24, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises 127C.26.The IL-18 variant polypeptide of any one of claims 20-24, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises at position 127 an Alanine or an amino acid that does not have a hydrophobic side chain at position 127, optionally wherein the amino acid that does not have a hydrophobic side chain is selected from the group consisting of cysteine, serine, threonine, asparagine, glutamine, glycine, and proline, further optionally wherein the amino acid that does not have a hydrophobic side chain is selected from the group consisting of cysteine, serine, and threonine.27.The IL-18 variant polypeptide of any one of claims 20-25, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises:a) I38, V38, or S38,b) I68, S68, or L68,c) C76, andd) C117.28.The IL-18 variant polypeptide of claim 27, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises I38, S68, C76, and C117.29.The IL-18 variant polypeptide of claim 27, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises V38, I68, C76, C117, optionally wherein the variant polypeptide further comprises A127.30.A fusion polypeptide comprising a) a IL-18 variant polypeptide of any one of claims 18-29 and b) a second moiety.31.The fusion polypeptide of claim 30, wherein the second moiety comprises a half-life extending moiety, optionally wherein the half-life extending moiety is an albumin binding moiety or a Fc domain.32.The fusion polypeptide of claim 31, wherein the half-life extending moiety comprises a Fc domain, optionally wherein the Fc domain is a human IgG Fc domain, further optionally wherein the human IgG Fc domain is a human IgG1 domain.33.The fusion polypeptide of claim 31 or claim 32, wherein the Fc domain is a modified Fc domain with reduced effector function, optionally wherein the Fc domain comprises a human IgG1 Fc domain comprising an N297A mutation (EU numbering) .34.The fusion polypeptide of any one of claims 30-33, wherein the second moiety is fused to the N-terminus of the IL-18 variant polypeptide.35.The fusion polypeptide of any one of claims 30-33, wherein the second moiety is fused to the C-terminus of the IL-18 variant polypeptide.36.The fusion polypeptide of any one of claims 30-35, wherein the fusion polypeptide further comprises a linker between the IL-18 variant polypeptide and the second moiety, optionally wherein the linker is a peptide linker.37.The fusion polypeptide of any one of claims 30-36, wherein the fusion polypeptide comprises an amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 323-324, 326-328, 330-332, 340-341, 343-345 and 347, or a functional variant thereof having at least 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, or 99%sequence identity as any one of SEQ ID NOs: 323-324, 326-328, 330-332, 340-341, 343-345 and 347.38.A dimer comprising two fusion polypeptides of any one of claims 30-37.39.The dimer of claim 38, wherein the dimer is a homodimer.40.The dimer of claim 38, wherein the dimer is a heterodimer.41.A nucleic acid encoding the IL-18 variant polypeptide of any one of claims 18-29 or the fusion polypeptide of any one of claims 30-37.42.A nucleic acid comprising a nucleic acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 333-335.43.A vector comprising the nucleic acid of claim 41 or claim 42.44.A host cell comprising the nucleic acid of claim 41 or claim 42 or the vector of claim 43, optionally wherein the host cell is a eukaryotic cell, further optionally wherein the host cell is a mammalian cell, further optionally wherein the host cell is a CHO cell or a HEK293 cell.45.A method of producing an IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide, comprising:(a) culturing the host cell of claim 44 under conditions where the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide is expressed; and(b) recovering the IL-18 variant polypeptide or fusion polypeptide produced by the host cell.46.A pharmaceutical composition comprising the IL-18 variant polypeptide of any one of claims 18-29, the fusion polypeptide of any one of claims 30-37, the dimer of any one of claims 38-40, the nucleic acid of claim 41 or claim 42, or the vector of claim 43.47.A method of treating a disease in an individual, comprising administering to the individual an effective amount of the pharmaceutical composition of claim 46.48.A method of activating hIL-18 receptor mediated signal in an individual, comprising administering to the individual an effective amount of the pharmaceutical composition of claim 46.49.A method of stimulating antigen-experienced immune cells in an individual in need thereof, comprising administering to the individual an effective amount of the pharmaceutical composition of claim 46.50.A method of engineering an IL-18 variant polypeptide from an IL-18 polypeptide, comprising a) introducing an amino acid with a hydrophobic side chain at position 38, b) introducing an amino acid with a hydrophobic side chain at position 68, and / or c) introducing an amino acid with a hydrophobic side chain at position 76, wherein the IL-18 variant polypeptide comprises an amino acid with a hydrophobic side chain at each of the positions 38, 68, and 76, wherein the amino acid position of the IL-18 polypeptide is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1.51.An IL-18 variant polypeptide comprising a) an amino acid with a hydrophobic side chain at position 38, b) an amino acid with a hydrophobic side chain at position 68, and / or c) an amino acid with a hydrophobic side chain at position 76, wherein the amino acid position of the IL-18 polypeptide is relative to a wild-type human IL-18 set forth in SEQ ID NO: 1.

Images