RNA-lipid particles comprising polysarcosine-lipid conjugate

Abstract

Provided are RNA-lipid particles and formulations comprising novel lipids and therapeutic agents, methods of preparing RNA-lipid particles, and methods of delivering and / or administering RNA-lipid particles. In particular, provided are RNA-lipid particles comprising a polysarcosine-based lipid conjugate or a conjugate of polysarcosine and lipid-like material, and RNA such as single-stranded messenger RNA which encodes a peptide or protein of interest, and methods of preparing the RNA-lipid particles. The particles comprising mRNA and polysarcosine are delivered to target tissues after administered via intramuscular, intravenous, or subcutaneous route.

Description

RNA-lipid particles comprising polysarcosine-lipid conjugate

[0001] CROSS REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS

[0002] This application claims the benefit of, and priority to, PCT Application No. PCT / CN2023 / 120760, filed September 22, 2023. The contents of these applications are incorporated herein by reference in their entireties for all purposes.FIELD OF THE INVENTION

[0003] The present disclosure relates to RNA-lipid particles for delivery of RNA to target tissues after administration. The RNA particles comprise single-stranded RNA such as mRNA which encodes a peptide or protein of interest.BACKGROUND

[0004] Messenger RNA (mRNA) has emerged as a new category of pharmaceutical agent for various therapeutic applications, including viral vaccines, protein replacements, immunotherapy, and gene editing. To function in vivo, mRNA requires safe, effective and stable delivery systems that protect the nucleic acid from degradation and that allow cellular uptake and mRNA release. To date, the most successful delivery system for mRNA in clinical trials are lipid-based carrier vehicles which are dissolved in ethanol and then mixed with an aqueous solution of the nucleic acid to form lipid nanoparticles (LNPs) . In general, LNPs comprise four key components: an ionizable-cationic lipid that complexes the negatively charged RNA and improves endosomal escape through its pH-dependent charge, cholesterol that enhances LNP stability and promotes membrane fusion, a phospholipid that structuralizes the lipid bilayer and optionally facilitates endosomal escape through its fusogenic properties, and polyethylene glycol (PEG) -conjugated lipid that prevents aggregation during particle formation and allows the controlled manufacturing of particles with defined diameters (from 50 to 150 nm) .

[0005] Among them, PEG-lipids have multiple effects on physicochemical properties of lipid nanoparticles such as decreasing the particle size, preventing LNP aggregation during storage, and adjusting zeta potential. In addition, PEG has also been extensively used as a stealth coating in the pharmaceutical industry. When stealth-like lipids are incorporated, LNP exhibits a significantly enhanced blood-circulation time and improved particle pharmacokinetics, due to reduced interaction with proteins and cells present in the blood. However, the PEGylation of nanoparticles can also have substantial disadvantages concerning activity and safety, which may lead to the lowering of the transfection potency by hindrance cellular uptake and processing. It has been associated with the accelerated blood clearance (ABC) phenomenon, typically induced by the formation of anti-PEG antibodies following repeated systemic administration.

[0006] Thus, there is still an urgent need in the art for efficient methods and compositions for introducing RNA into cells which avoid the disadvantages accompanied by use of PEG-based  lipids. The present disclosure addresses these and other needs. In contrast to PEG, polysarcosine (pSar) is based on the endogenous amino acid sarcosine (N-methylated glycine) and biodegradable, but has also demonstrated stealth-like properties in vitro, as well as in vivo. Several studies have demonstrated that using pSar-based lipids as a tool for engineering RNA-LNPs instead of PEG-based lipids exhibited improved biological activity and safety.SUMMARY

[0007] In one aspect, the present disclosure relates to a composition comprising a plurality of RNA-lipid particles, wherein each particle comprises:

[0008] (i) RNA;

[0009] (ii) a cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material;

[0010] (iii) a polysarcosine-lipid conjugate or a conjugate of polysarcosine and a lipid-like material; and

[0011] (iv) a non-cationic lipid or lipid-like material;

[0012] wherein,

[0013] the cationic or cationically lipid or lipid like material comprises from about 35 mol %to about 60 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0014] the polysarcosine-lipid conjugate or conjugate of polysarcosine and a lipid-like material comprises from about 2.5 mol %to about 15 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0015] the non-cationic lipid or lipid-like material comprises from about 35 mol %to about 60 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0016] preferably,

[0017] the cationic or cationically lipid or lipid like material comprises from about 35 mol %to about 40 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0018] the polysarcosine-lipid conjugate or conjugate of polysarcosine and a lipid-like material comprises about 5 mol %or less of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0019] the non-cationic lipid or lipid-like material comprises from about 50 mol %to about 60 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles.

[0020] In one embodiment, the particles optionally further comprise or do not comprise a polyethyleneglycol-lipid conjugate or a conjugate of polyethyleneglycol and a lipid-like material.

[0021] In one embodiment, the RNA is mRNA.

[0022] In one embodiment, the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a phospholipid.

[0023] In one embodiment, the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a cholesterol or a cholesterol derivative.

[0024] In one embodiment, the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a mixture of a phospholipid and cholesterol or a cholesterol derivative.

[0025] In one embodiment, the phospholipid is selected from the group consisting of DSPC, DOPC, DOPE, DPPC, and a mixture thereof.

[0026] In one embodiment, the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a mixture of DSPC and cholesterol.

[0027] In one embodiment, the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a mixture of phospholipid and cholesterol or a cholesterol derivative, preferably, the phospholipid comprises from about 15 mol %to about 20 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles; the cholesterol comprises from about 35 mol %to about 40 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles.

[0028] In one embodiment, the present disclosure relates to a composition comprising a plurality of RNA-lipid particles, wherein each particle comprises:

[0029] (i) RNA;

[0030] (ii) a cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material;

[0031] (iii) a polysarcosine-lipid conjugate or a conjugate of polysarcosine and a lipid-like material;

[0032] (iv) a phospholipid; and

[0033] (v) cholesterol or a cholesterol derivative;

[0034] wherein,

[0035] the cationic or cationically lipid or lipid like material comprises from about 35 mol %to about 40 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0036] the polysarcosine-lipid conjugate or conjugate of polysarcosine and a lipid-like material comprises about 5 mol %or less of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0037] the phospholipid comprises from about 15 mol %to about 20 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0038] the cholesterol or a cholesterol derivative comprises from about 35 mol %to about 40 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0039] preferably, the particles optionally further comprise or do not comprise a polyethyleneglycol-lipid conjugate or a conjugate of polyethyleneglycol and a lipid-like material.

[0040] In one embodiment, the phospholipid is selected from the group consisting of DSPC, DOPC, DOPE, DPPC, and a mixture thereof. Preferably, the DSPC comprises from about 5 mol %to about 15 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles; the cholesterol comprises from about 25 mol %to about 55 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles.

[0041] In one embodiment, the polysarcosine-lipid conjugate or a conjugate of polysarcosine and a lipid-like material comprises the following general formula (I) :

[0042] wherein R1 is optionally substituted C10-C18 alkyl; R2 is independently H or methyl; R3 is optionally substituted H, methyl, acetyl, or a functional group comprising a hydrophobic or hydrophilic group; n is ranging from 10 to 50.

[0043] In one embodiment, the particles are nanoparticles.

[0044] In one embodiment, the particles have a size of from about 35 nm to about 400 nm, preferable about 60 nm to about 250 nm.

[0045] In a further aspect, the disclosure relates to a method for delivering RNA to cells of a subject, the method comprising administering to a subject a composition described herein.

[0046] In a further aspect, the disclosure relates to a method for delivering a therapeutic peptide or protein to a subject, the method comprising administering to a subject a composition described herein, wherein the RNA encodes the therapeutic peptide or protein.

[0047] In a further aspect, the disclosure relates to a method for treating or preventing a disease or disorder in a subject, the method comprising administering to a subject a composition described herein, wherein delivering the RNA to cells of the subject is beneficial in treating or preventing the disease or disorder.

[0048] In a further aspect, the disclosure relates to a method for treating or preventing a disease or disorder in a subject, the method comprising administering to a subject a composition described herein, wherein the RNA encodes a therapeutic peptide or protein and wherein delivering the therapeutic peptide or protein to the subject is beneficial in treating or preventing the disease or disorder.

[0049] In one embodiment, the subject is a mammal.

[0050] In one embodiment, the mammal is a human.

[0051] In one embodiment, the RNA encodes a vaccine peptide or protein.

[0052] In one embodiment, the vaccine peptide or protein is a peptide or protein from an infectious agent or an immunologically equivalent fragment or variant thereof.

[0053] In one embodiment, the method described herein is a method for intramuscular vaccination.

[0054] In one embodiment, the method described herein is a method for intravenous administration.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0055] FIG. 1 shows a chart comparing the in vitro luciferase expression in cells transfected by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0056] FIG. 2 shows a chart comparing the in vitro luciferase expression in cells transfected by LNPs comprising polysarcosine formulated with different salt concentration.

[0057] FIG. 3 shows a chart comparing the in vitro luciferase expression in cells transfected by LNPs comprising polysarcosine formulated at different pH buffer.

[0058] FIG. 4 shows a chart comparing the in vitro luciferase expression in cells transfected by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0059] FIG. 5 shows a chart comparing the in vitro luciferase expression in cells transfected by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0060] FIG. 6 shows a chart comparing the in vitro luciferase expression in cells transfected by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0061] FIG. 7 shows a chart comparing the in vitro luciferase expression in cells transfected by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0062] FIG. 8 shows a chart comparing the in vitro luciferase expression in cells transfected by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0063] FIG. 9 shows a picture comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0064] FIG. 10 shows an image comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0065] FIG. 11 shows an image comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0066] FIG. 12 shows an image comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0067] FIG. 13 shows an image comparing the tissue biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0068] FIG. 14 shows an image comparing the tissue biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0069] FIG. 15 shows a chart comparing the in vitro luciferase expression in cells transfected by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0070] FIG. 16 shows an image comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0071] FIG. 17 shows an image comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0072] FIG. 18 shows a chart comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0073] FIG. 19 shows an image comparing the tissue biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0074] FIG. 20 shows an image comparing the tissue biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0075] FIG. 21 shows a chart comparing the tissue biodistribution of luciferase expression in the mouse administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0076] FIG. 22 shows a chart comparing the anti-G IgG level induced by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0077] FIG. 23 shows a chart comparing the neutralizing antibody titers induced by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0078] FIG. 24 shows a chart comparing the IFNγ T cell immunity induced by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0079] FIG. 25 shows a chart comparing the IFNγ T cell immunity induced by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0080] FIG. 26 shows a chart comparing the anti-G IgG induced by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0081] FIG. 27 shows a chart comparing the IFNγ T cell immunity induced by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0082] FIG. 28 shows a chart comparing the anti-G IgG induced by LNPs comprising polysarcosine formulated with different N / P ratios.

[0083] FIG. 29 shows a chart comparing the anti-G IgG induced by LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0084] FIG. 30 shows a chart comparing the IFNγ T cell immunity induced by LNPs comprising polysarcosine formulated with different N / P ratios.

[0085] FIG. 31 shows a chart comparing the anti-G IgG induced by LNPs comprising polysarcosine formulated with MC3, SM102 and ALC0315, respectively.

[0086] FIG. 32 shows a chart comparing the IFNγ T cell immunity induced by LNPs comprising polysarcosine formulated with MC3, SM102 and ALC0315, respectively.

[0087] FIG. 33 shows an image comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse intravenously administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0088] FIG. 34 shows an image comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse intravenously administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0089] FIG. 35 shows an image comparing the tissue biodistribution of luciferase expression in the mouse intravenously administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0090] FIG. 36 shows an image comparing the tissue biodistribution of luciferase expression in the mouse intravenously administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0091] FIG. 37 shows an image comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse intravenously administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0092] FIG. 38 shows an image comparing the whole-body biodistribution of luciferase expression in the mouse intravenously administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0093] FIG. 39 shows an image comparing the tissue biodistribution of luciferase expression in the mouse intravenously administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.

[0094] FIG. 40 shows an image comparing the tissue biodistribution of luciferase expression in the mouse intravenously administered with LNPs comprising polysarcosine and PEG, respectively.DETAILED DESCRIPTION

[0095] It is to be understood that this disclosure is not limited to the particular methodologies, protocols and reagents described herein as these may vary. It is also to be understood that the terminology used herein is for the purpose of describing particular embodiments only, and is not intended to limit the scope of the present disclosure which will be limited only by the appended claims. Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meanings as commonly understood by one of ordinary skill in the art.

[0096] The term "about"means approximately or nearly, and in the context of a numerical value or range set forth herein in one embodiment means ± 20%, ± 10%, ± 5%, or ± 3%of the numerical value or range recited or claimed.

[0097] The terms "a" and "an" and "the" and similar reference used in the context of describing the disclosure (especially in the context of the claims) are to be construed to cover both the singular and the plural, unless otherwise indicated herein or clearly contradicted by context. Recitation of ranges of values herein is merely intended to serve as a shorthand method of referring individually to each separate value falling within the range.

[0098] Unless expressly specified otherwise, the term "comprising" is used in the context of the present document to indicate that further members may optionally be present in addition to the members of the list introduced by "comprising". It is, however, contemplated as a specific embodiment of the present disclosure that the term "comprising" encompasses the possibility of no further members being present, i.e. for the purpose of this embodiment "comprising" is to be understood as having the meaning of "consisting of' .

[0099] Definitions

[0100] As used in the present disclosure, "mol %" is defined as the ratio of the number of moles of one component to the total number of moles of all components, multiplied by 100.

[0101] In the context of the present disclosure, the term "particle" relates to a structured entity formed by molecules or molecule complexes. In one embodiment, the term "particle" relates to a micro-or nano-sized structure, such as a micro-or nano-sized compact structure dispersed in a medium. The term "RNA-lipid particle"relates to a particle that contains RNA. Electrostatic interactions between positively charged molecules such as polymers and lipids and negatively charged RNA are involved in particle formation. This results in complexation and spontaneous formation of RNA particles. In one embodiment, an RNA-lipid particle is a nanoparticle. As used in the present disclosure, "nanoparticle" refers to a particle having an average diameter suitable for intravenous administration. An "RNA-lipid particle" can be used to deliver nucleic acid to a target site of interest (e.g., cell, tissue, organ, and the like) . RNA particles include lipid nanoparticle (LNP) -based and lipoplex (LPX) -based formulations. Generally, the RNA-lipid particles described herein are obtainable by mixing an RNA containing phase with a lipid containing phase. This can be mixing an ethanol phase or other water-miscible solvent comprising lipids, such as cationic lipids like DODMA, and additional lipids, with an aqueous phase comprising RNA. Another option is mixing an aqueous phase comprising the lipids, for example comprising lipids in form of liposomes or other types of lipid dispersions, with another aqueous phase comprising RNA. Methods for preparing RNA-lipid particles described herein may involve obtaining a colloid comprising at least one cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material and mixing the colloid with RNA to obtain nucleic acid particles.

[0102] The terms "lipid" and "lipid-like material" are broadly defined herein as molecules which comprise one or more hydrophobic moieties or groups and optionally also one or more hydrophilic moieties or groups. Molecules comprising hydrophobic moieties and hydrophilic moieties are also frequently denoted as amphiphiles. Lipids are usually poorly soluble in water. In an aqueous environment, the amphiphilic nature allows the molecules to self-assemble into organized structures and different phases. One of those phases consists of lipid bilayers, as they  are present in vesicles, multilamellar / unilamellar liposomes, or membranes in an aqueous environment. Hydrophobicity can be conferred by the inclusion of apolar groups that include, but are not limited to, long-chain saturated and unsaturated aliphatic hydrocarbon groups and such groups substituted by one or more aromatic, cycloaliphatic, or heterocyclic group (s) . The hydrophilic groups may comprise polar and / or charged groups and include carbohydrates, phosphate, carboxylic, sulfate, amino, sulfhydryl, nitro, hydroxyl, and other like groups.

[0103] According to the disclosure, lipids and lipid-like materials may be cationic, anionic or neutral. Neutral lipids or lipid-like materials exist in an uncharged or neutral zwitterionic form at a selected pH. . In some embodiments, RNA-lipid particles described herein comprise a cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material.

[0104] Cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material

[0105] In one embodiment, the RNA-lipid particles described herein include at least one cationic lipid. Examples of cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material include, but are not limited to (20Z, 23Z) -N, N-dimethylnonacosa-20, 23-dien-10-amine, (17Z, 20Z) -N, N-dimethylhexacosa-17, 20-dien-9-amine, (1Z, 19Z) -N, N-dimethylpentacosa-l6, 19-dien-8-amine, (13Z, 16Z) -N, N-dimethyldocosa-13, 16-dien-5-amine, (12Z, 15Z) -N, N-dimethylhenicosa-12, 15-dien-4-amine, (14Z, 17Z) -N, N-dimethyltricosa-14, 17-dien-6-amine, (15Z, 18Z) -N, N-dimethyltetracosa-15, 18-dien-7-amine, (18Z, 21Z) -N, N-dimethylheptacosa-18, 21-dien-10-amine, (15Z, 18Z) -Ν, Ν-dimethyltetracosa-15, 18-dien-5-amine, (14Z, 17Z) -N, N-dimethyltricosa-14, 17-dien-4-amine, (19Z, 22Z) -N, N-dimethyloctacosa-19, 22-dien-9-amine, (18Z, 21Z) -N, N-dimethylheptacosa-18, 21-dien-8-amine, (17Z, 20Z) -N, N-dimethylhexacosa-17, 20-dien-7-amine, (16Z, 19Z) -N, N-dimethylpentacosa-16, 19-dien-6-amine, (22Z, 25Z) -N, N-dimethylhentriaconta-22, 25-dien-10-amine, (21Z, 24Z) -N, N-dimethyltriaconta-21, 24-dien-9-amine, (18Z) -N, N-dimethylheptacos-18-en-10-amine, (17Z) -N, N-dimethylhexacos-17-en-9-amine, (19Z, 22Z) -N, N-dimethyloctacosa-19, 22-dien-7-amine, N, N-dimethylheptacosan-10-amine, (20Z, 23Z) -N-ethyl-N-methylnonacosa-20, 23-dien-l0-amine, 1- [ (11Z, 14Z) -l-nonylicosa-11, 14-dien-l-yl] pyrrolidine, (20Z) -N, N-dimethylheptacos-20-en-10-amine, (15Z) -N, N-dimethyl heptacos-15-en-10-amine, (14Z) -N, N-dimethylnonacos-14-en-10-amine, (17Z) -N, N-dimethylnonacos-17-en-10-amine, (24Z) -N, N-dimethyltritriacont-24-en-10-amine, (20Z) -N, N-dimethylnonacos-20-en-10-amine, (22Z) -N, N-dimethylhentriacont-22-en-10-amine, (16Z) -N, N-dimethylpentacos-16-en-8-amine, (12Z, 15Z) -N, N-dimethyl-2-nonylhenicosa-12, 15-dien-1-amine, (13Z, 16Z) -N, N-dimethyl-3-nonyldocosa-l3, 16-dien-l-amine, N, N-dimethyl-l- [ (lS, 2R) -2-octylcyclopropyl] heptadecan-8-amine, 1- [ (1S, 2R) -2-hexylcyclopropyl] -N, N-dimethylnonadecan-10-amine, Ν, Ν-dimethyl-1- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] nonadecan-10-amine, N, N-dimethyl-21- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] henicosan-10-amine, Ν, Ν-dimethyl-1- [ (1S, 2S) -2- { [ (1R, 2R) -2-pentylcyclopropyl] methyl} cyclopropyl] nonadecan-10-amine, Ν, Ν-dimethyl-1- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] hexadecan-8-amine, Ν, Ν-dimethyl- [ (1R, 2S) -2-undecylcyclopropyl] tetradecan-5-amine, N, N-dimethyl-3- {7- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] heptyl} dodecan-1-amine, 1- [ (1R, 2S) -2-heptylcyclopropyl] -Ν, Ν- dimethyloctadecan-9-amine, 1- [ (1S, 2R) -2-decylcyclopropyl] -N, N-dimethylpentadecan-6-amine, N, N-dimethyl-l- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] pentadecan-8-amine, R-N, N-dimethyl-1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] -3- (octyloxy) propan-2-amine, S-N, N-dimethyl-1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] -3- (octyloxy) propan-2-amine, 1- {2- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] -1- [ (octyloxy) methyl] ethyl} pyrrolidine, (2S) -N, N-dimethyl-1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] -3- [ (5Z) -oct-5-en-1-yloxy] propan-2-amine, 1- {2- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] -1- [ (octyloxy) methyl] ethyl} azetidine, (2S) -1- (hexyloxy) -N, N-dimethyl-3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] propan-2-amine, (2S) -1- (heptyloxy) -N, N-dimethyl-3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] propan-2-amine, Ν, Ν-dimethyl-1- (nonyloxy) -3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] propan-2-amine, Ν, Ν-dimethyl-1- [ (9Z) -octadec-9-en-1-yloxy] -3- (octyloxy) propan-2-amine; (2S) -N, N-dimethyl-1- [ (6Z, 9Z, 12Z) -octadeca-6, 9, 12-trien-1-yloxy] -3- (octyloxy) propan-2-amine, (2S) -1- [ (11Z, 14Z) -icosa-11, 14-dien-1-yloxy] -N, N-dimethyl-3- (pentyloxy) propan-2-amine, (2S) -1- (hexyloxy) -3- [ (11Z, 14Z) -icosa-11, 14-dien-1-yloxy] -N, N-dimethylpropan-2-amine, 1- [ (11Z, 14Z) -icosa-11, 14-dien-1-yloxy] -Ν, Ν-dimethy1-3- (octyloxy) propan-2-amine, 1- [ (13Z, 16Z) -docosa-l3, 16-dien-l-yloxy] -N, N-dimethyl-3- (octyloxy) propan-2-amine, (2S) -1- [ (13Z, 16Z) -docosa-13, 16-dien-1-yloxy] -3- (hexyloxy) -N, N-dimethylpropan-2-amine, (2S) -1- [ (13Z) -docos-13-en-1-yloxy] -3- (hexyloxy) -N, N-dimethylpropan-2-amine, 1- [ (13Z) -docos-13-en-1-yloxy] -N, N-dimethyl-3- (octyloxy) propan-2-amine, 1- [ (9Z) -hexadec-9-en-1-yloxy] -N, N-dimethyl-3- (octyloxy) propan-2-amine, (2R) -N, N-dimethyl- (1-methyloctyl) oxy] -3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] propan-2-amine, (2R) -1- [ (3, 7-dimethyloctyl) oxy] -N, N-dimethyl-3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] propan-2-amine, N, N-dimethyl-1- (octyloxy) -3- ( {8- [ (1S, 2S) -2- { [ (1R, 2R) -2-pentylcyclopropyl] methyl} cyclopropyl] octyl} oxy) propan-2-amine, N, N-dimethyl-1- { [8- (2-octylcyclopropyl) octyl] oxy} -3- (octyloxy) propan-2-amine and (11E, 20Z, 23Z) -N, N-dimethylnonacosa-11, 20, 2-trien-10-amine or a pharmaceutically acceptable salt or stereoicertainr thereof.

[0106] In certain embodiments, examples of cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material include, but are not limited to 1, 3-Bis- (l, 2-bis-tetradecyloxy-propyl-3-dimethylethoxyammoniumbromide) -propan-2-ol ( (R) -PLC-2) , 2- (Dinonylamino) ethan-1-ol (17-10) , 2- (Didodecylamino) ethan-1-ol (17-11) , 3- (Didodecylamino) propan-1-ol (17-12) , 4- (Didodecylamino) butan-1-ol (17-13) , 2- (Hexyl ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) ethan-1-ol (17-2) , 2- (Nonyl ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) ethan-1-ol (17-3) , 2- (Dodecyl ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) ethan-1-ol (17-4) , 2- ( ( (9Z, 12Z) -Octadeca-9, 12-dien-1-yl) (tetradecyl) amino) ethan-1-ol (17-5) , 2- ( ( (9Z, 12Z) -Octadeca-9, 12-dien-1-yl) (octadecyl) amino) ethan-1-ol (17-6) , 2- (Ditetradecylamino) ethan-1-ol (17-7) , 2- (Di( (Z) -octadec-9-en-1-yl) amino) ethan-1-ol (17-8) , (9Z, 12Z) -N- (2-Methoxyethyl) -N- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) octadeca-9, 12-dien-1-amine (17-9) , N-Nonyl-N- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) nonan-1-amine (19-1) , N-Dodecyl-N- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) dodecan-1-amine (19-2) , (9Z, 12Z) -N- ( (9Z, 12Z) -Octadeca-9, 12-dien-1-yl) -N- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) octadeca-9, 12-dien-1-amine (19-3) , N-Dodecyl-N- (2- (4-methylpiperazin-1-yl) ethyl) dodecan-1-amine-1, 2- (Didodecylamino) ethan-1-ol (19-4) , N-Dodecyl-N- (2- (4- (4- methoxybenzyl) piperazin-1-yl) ethyl) dodecan-1-amine (19-5) , (9Z, 12Z) -N- (2- (4-Dodecylpiperazin-1-yl) ethyl) -N- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) octadeca-9, 12-dien-1-amine (19-6) , (3- ( (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yloxy) -N, N-dimethylpropan-1-amine) (1-1) , N- (2- (Didodecylamino) ethyl) -N-dodecylglycine (20-1) , Dinonyl8, 8'- ( (2- (dodecyl (2-hydroxyethyl) amino) ethyl) azanediyl) dioctanoate (20-10) , 3- ( (2- (Ditetradecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) propan-1-ol (20-11) , 2- ( (2- (Ditetradecylamino) ethyl) (tetradecyl) amino) ethan-1-ol (20-12) , 2- ( (2- (Di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) ethyl) (dodecyl) amino) ethan-1-ol (20-13) , 2- ( (2- (Di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) ethyl) ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) ethan-1-ol (20-14) , 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (hexyl) amino) ethan-1-ol (20-15) , 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) ethan-1-ol (20-16) , 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (nonyl) amino) ethan-1-ol (20-17) , 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (dodecyl) amino) ethan-1-ol (20-18) , 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) amino) ethan-1-ol (20-19) , Pentyl6- (dodecyl (2- (dodecyl (2- hydroxyethyl) amino) ethyl) amino) hexanoate (20-2) , 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) ethan-1-ol (20-20) , 3- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) propan-1-ol (20-21) , 4- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) butan-1-ol (20-22) , (Z) -2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (dodec-6-en-1-yl) amino) ethan-1-ol (20-23) , 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (tetradecyl) amino) ethan-1-ol (20-24) , 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) ethan-1-ol (20-25) , Pentyl6- ( (2- (didodecylamino) ethyl) (2-hydroxyethyl) amino) hexanoate (20-3) , Dipentyl6, 6'- ( (2- (dodecyl (2-hydroxyethyl) amino) ethyl) azanediyl) dihexanoate (20-4) , Diheptyl6, 6'- ( (2- ( (6- (heptyloxy) -6-oxohexyl) (2hydroxyethyl) amino) ethyl) azanediyl) dihexanoate (20-5) , Pentyl6- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (2-hydroxyethyl) amino) hexanoate (20-6) , Heptyl6- (dodecyl (2- (dodecyl (2-hydroxyethyl) amino) ethyl) amino) hexanoate (20-7) , Nonyl8- ( (2- (didodecylamino) ethyl) (2-hydroxyethyl) amino) octanoate (20-8) , Heptadecan-9-yl8- ( (2- (didodecylamino) ethyl) (2-hydroxyethyl) amino) octanoate (20-9) , 1- (2, 2-Di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) cyclopropyl) -N, N-dimethylmethanamine (21-1) , 3, 3-Di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) cyclobutyl4- (dimethylamino) butanoate (21-2) , 3, 3-Di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) cyclopentyl3- (dimethylamino) propanoate (21-3) , 3, 3-Di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) cyclopentyl4- (dimethylamino) butanoate (21-4) , 1- (2, 3-Di ( (8Z, 11Z) -heptadeca-8, 11-dien-1-yl) cyclopropyl) -N, N-dimethylmethanamine (21-6) , poly {4- ( (2- (dimethylamino) ethyl) thio) tetrahydro-2H-pyran-2-one} -r-poly {4- (octylthio) tetrahydro-2H-pyran-2-one} (A7) , (3aR5s, 6aS) -N, N-dimethyl-2, 2-di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienyl) tetrahydro-3aH-cyclopenta-1, 3dioxol-5-amine (ALN100) , (3aR, 5s, 6aS) -N, N-dimethyl-2, 2-di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienyl) tetrahydro-3aH-cyclopenta [d] [1, 3] dioxol-5-amine (ALN1001) , ( (3aR, 5s, 6aS) -N, N-dimethyl-2, 2-di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienyl) tetrahydro-3aH-cyclopenta [d] [1, 3] dioxol-5-amine) ) (ALNY-100) , dimyristoyltrimethylammoniumpropane (Amino Lipid 6) , BADACA, N, N-dihydroxyethylmethyl-N-2- (cholesteryloxycarbonylamino) ethylammoniumbromide (BHEM- Chol) , N, N-bis- (2-hydroxyethyl) -N-methyl-N- (2-cholesteryloxycarbonylamino-ethyl) ammoniumbromide (BHEM-Chol1) , 2- {4- [ (3β) -cholest-5-en-3-yloxy] butoxy} -N, N-dimethyl-3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] propan-1-amine (Butyl-CLinDMA) , (2R) - 2- {4- [ (3β) -cholest-5-en-3-yloxy] butoxy} -N, N-dimethyl-3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-l-yloxylpropan-1-amine (Butyl-CLinDMA (2R) ) , (2R) -2- {4- [ (3β) -cholest-5-en-3-yloxy] butoxy} -N, N-dimethyl-3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-l-yloxy] propan-1-amine (Butyl-CLinDMA (2S) ) , 1, 1'- (2- (4- (2- ( (2- (bis (2-hydroxydodecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydodecyl) amino) ethyl) piperazin-l-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol (C 12-200) , 1, 1’ - ( (2- (4- (2- ( (2- (bis (2-hydroxydodecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydodecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) azanediyl) bis (dodecan-2-ol) (C12-200) , Cholesteryl-succinyl Silane (C2) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( (4- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) (Cationic Lipid A2) , (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate (Cationic Lipid A3) , l- (3-cholesteryl) -oxycarbonyl-aminomethylimidazole (CHIM) , [ (2-Morpholine-4-yl-ethylcarbamoyl) methyl] -carbamicacidcholesterylester (Chol-C3N-Mo2) , [ (2-Morpholine-4-yl-ethylcarbamoyl) -ethyl] -carbamicacidcholesterylester (Chol-DMC3N-Mo2) , [l-Methyl-2- (2-morpholine-4-yl-ethylcarbamoyl) -propyl] -carbamicacidcholesterylester (Chol-C4N-Mo2) , 1, 17-bis (2-octylcyclopropyl) heptadecan-9-yl4- (dimethylamino) butanoate (CL) , heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yl-4- (dimethylamino) -butanoate (CL01) , cholesteryl3- (dimethylamino) propanoate (CL06) , cholesteryl2- (dimethylamino) acetate (CL08) , N, N-dimethyl-2, 3-bis ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) propan-1-amine (CL-1) , N-methyl-2- (( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) -N- (2- ( ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-diene-1-yl) oxy) ethyl) ethan-1-amine (CL-11) , (3R, 4R) -3, 4-bis ( ( (Z) -hexadec-9-en-1-yl) oxy) -1-methylpyrrolidine (CompoundCL-12) (CL-12) , 2- (Dimethylamino) -N- ( (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -Heptatriconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yl) acetamide (CL-13) , 3- (Dimethylamino) propane-1, 2-diyl (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -bis (octadeca-9, 12-dienoate) (CL-14) , (9Z, 12Z) -di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amine (CL-15) , 7-Hydroxy7- (4- ( (1-methylpiperidine-4-carbonyl) oxy) butyl) tridecane-1, 13-diyldidodecanoate (CL15B6) , 7-Hydroxy7- (4- ( (1-methylpiperidine-4-carbonyl) oxy) butyl) tridecane-1, 13-diylditetradecanoate (CL15C6) , 7-Hydroxy7- (4- ( (1-methylpiperidine-4-carbonyl) oxy) butyl) tridecane-1, 13-diyldipalmitate (CL15D6) , 7-Hydroxy7- (4- ( (1-methylpiperidine-4-carbonyl) oxy) butyl) tridecane-1, 13-diyldioleate (CL15H6) , Bis (2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) ethyl) amine (CL-16) , (9Z, 12Z) -N-Methyl-N- (2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) ethyl) octadeca-9, 12-dien-1-amine (CL-17) , (9Z, 12Z) -N- (3- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) propyl) octadeca-9, 12-dien-1-amine (CL-18) , (1-Methylpiperidin-3-yl) methyldi ( (11Z, 14Z) -icosa-11, 14-dien-1-yl) carbamate (CL-19) , N-methyl-N, N-bis (2- ( (Z) -hexadec-9-enyloxy) ethyl) amine (CL-2) , (13Z, 16Z) -N, N-Dimethyl-4- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) docosa-3, 13, 16-trien-1-amine (CL-20) , (S) -2-Amino-3-hydroxy-N, N-bis (2- ( ( (Z) -octadeca-9-en-1-yl) oxy) ethyl) propanamide (CL-21) , N, N-dihexadecyl-N'- (3-triethoxysilylpropyl) succinamide (CL3) , trans-1-Methyl-3, 4-bis ( ( ( (Z) -octadec-9-en-1-yl) oxy) methyl) pyrrolidine (CL-3) , trans-1-methylpyrrolidine-3, 4- diyl) bis (methylene) (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -bis (octadeca-9, 12-dienoate) (CL-4) , 7- (4- (Diisopropylamino) butyl) -7-hydroxytridecane-1, 13-diylditetradecanoate (CL4C6) , 7- (4- (Diisopropylamino) butyl) -7-hydroxytridecane-1, 13-diyldipalmitate (CL4D6) , 11- (4- (Diisopropylamino) butyl) -11-hydroxyhenicosane-1, 21-diyldioleate (CL4H10) , 7- (4- (Diisopropylamino) butyl) -7-hydroxytridecane-1, 13-diyldioleate (CL4H6) , 9- (4- (Diisopropylamino) butyl) -7-hydroxyheptadecane-1, 17-diyldioleate (CL4H8) , (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -Heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yl4- (dimethylamino) butanoate (CL-5) , 2- (Dimethylamino) -N- (2- ( ( (Z) -octadeca-9-en-1-yl) oxy) ethyl) -N- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-diene-1-yl) acetamide (CL-53) , 3- ( (2- ( ( (Z) -octadeca-9-en-1-yl) oxy) ethyl) ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) propane-1-ol (CL-54) , 1-Methyl-3, 3-bis ( ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) methyl) azetidine (CL-55) , 1-Methyl-3, 3-bis (2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) ethyl) azetidine (CL-56) , 1-Methyl-3, 3-bis (2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) propyl) azetidine (CL-57) , 2- (3, 3-di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) azetidin-1-yl) ethan-1-ol (CL-58) , 2- (3, 3-di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) azetidin-1-yl) propan-1-ol (CL-59) , 3- (Di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) propan-1-ol (CL-6) , 3- (Dimethylamino) propyl3, 3-di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) azetidine-1-carboxylate (CL-60) , 2- (Di ( (Z) -octadeca-9-en-1-yl) amino) ethane-1-ol (CL-61) , 3- (Di ( (Z) -octadeca-9-en-1-yl) amino) propan-1-ol (CL-62) , (11Z, 14Z) -2- ( (Dimethylamino) methyl) -2- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) icosa-11, 14-dien-1-ol (CL-63) , (11Z, 14Z) -2- (Dimethylamino) -2- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) icosa-11, 14-dien-1-ol (CL-64) , 3- (Dimethylamino) -2, 2-bis ( ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) methyl) propan-1-ol (CL-65) , (9Z, 12Z) -N- (2- ( ( (Z) -Octadeca-9-en-1-yl) oxy) ethyl) octadeca-9, 12-dien-1-amine (CL-7) , 1-Methyl-3, 3-di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) azetidine (CL-8) , N, 2-Dimethyl-1, 3-bis ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) oxy) propan-2-amine (CL-9) , 3-Dimethylamino-2- (Cholest-5-en-3β-oxybutan-4-oxy) -1- (cis, cis-9, 12-octadecadienoxy) propane (CLinDMA) , 2- [5′- (cholest-5-en-3-oxy) -3′-oxapentoxy) -3-dimethyl-1- (cis, cis-9′, 12′-octadecadienoxy) propane (CpLinDMA) , cetyltrimethylammoniumbromide (CTAB) , 1, 2-Diarachidonyloxy- (N, N-dimethyl) -propyl-3-amine (DAraDMA) , O, O'-ditetradecanoyl-N- (α-trimethylammonioacetyl) diethanolaminechloride (DC-6-14) , 3β- [N- (N′, N′-dimethylaminoethane) carbamoyl] cholesterol (DC-Chol) , dimethyldioctadecylammonium (DDA) , dimethyldioctadecylammoniumbromide (DDA) , N, N-distearyl-N, N-dimethylammoniumbromide (DDAB) , l, 2-Didocosahexaenyloxy- (N, N-dimethyl) -propyl-3-amine (DDocDMA) , N- (2- (dimethylamino) ethyl) -4, 5-bis (dodecylthio) pentanamide (DEDPA) , 3-Dimethylamino-2- (Cholest-5-en-3β-oxypent-3-oxa-en-5-oxy) -1- (cis, cis-9, 12-octadecadienoxy) propane (DEG-CLinDMA) , 1, 6-DioleoylTriethylenetetramide (dio-TETA) , N1, N19-bis ( (S, 23E, 25E, 27E, 29E) -16- ( (2E, 4E, 6E, 8E) -3, 7-dimethyl-9- (2, 6, 6-trimethylcyclo-hex-1-en-1-yl) nona-2, 4, 6, 8-tetraenamido) -24, 28-dimethyl-15, 22-dioxo-30- (2, 6, 6-trimethylcyclohex-1-en-1-yl) -4, 7, 10-trioxa-14, 21-diazatriaconta-23, 25, 27, 29-tetraen-1-yl) -4, 7, 10, 13, 16-pentaoxanonadecane-1, 19-diamide (diVA-PEG-diVA) , DiLin-N-Methylpiperazine (DL-033) , DiLin-N, N-DimethylGlycine (DL-036) , Dioleyl-N, N-DimethylGlycine (DL-048) , 3- ( (1, 3-bis ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyl) oxy) propan-2- yl) amino) propanoicacid (DLAPA) , 1, 2-dilinolenyloxy-3-dimethylaminopropane (DLenDMA) , 1-Linoleoyl-2-linoleyloxy-3-dimethylaminopropane (DLin-2-DMAP) , 3- (N, N-Dilinoleylamino) -1, 2-propanediol (DLinAP) , 1, 2-N, N′-Dilinoleylcarbamyl-3-dimethylaminopropane (DLincarbDAP) , 1, 2-Dilinoleoylcarbamyl-3-dimethylaminopropane (DLinCDAP) , 1, 2-Dilinoleylcarbamoyloxy-3-dimethylaminopropane (DLin-C-DAP) , 1, 2-Dilinoleyoxy-3- (dimethylamino) acetoxypropane (DLin-DAC) , 1, 2-Dilinoleoyl-3-dimethylaminopropane (DLinDAP) , 1, 2-DiLinoleyloxy-N, N-dimethylaminopropane (DLinDMA) , 1, 2-dilinoleyloxy-3-dimethylaminopropane (DLinDMA 1) , 1, 2-Dilinoleyloxo-3- (2-N, N-dimethylamino) ethoxypropane (DLin-EG-DMA) , dilinoleoyl-4-aminobutyricacid (DLinFAB) , 2, 2-dilinoleyl-4- (2-dimethylaminoethyl) - [1, 3] -dioxolane (DLin-K-C2-DMA) , 2, 2-Dilinoleyl-4-dimethylaminomethyl- [1, 3] -dioxolane (DLin-K-DMA) , 1, 2-Dilinoleyoxy-3-morpholinopropane (DLin-MA) , (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraene-19-yl4- (dimethylamino) butanoate (DLin-MC3-DMA) , 1, 2-Dilinoleyloxy-3- (N-methylpiperazino) propane (DLinMPZ) , 1, 2-Dilinoleyloxy-3- (N-methylpiperazino) propane (DLin-MPZ) , Dilinoleyloxy3-piperidinopropylamine (DLinPip) , 1, 2-Dilinoleyloxy3- (3'-hydroxypiperidino) -propylamine (DLinPip-3OH) , 1, 2-Dilinoleyloxy3- (4'-hydroxypiperidino) -propylamine (DLinPip-4OH) , 1, 2-Dilinoleyloxy-3-hydroxypropane (DLinPO) , 1, 2-Dilinoleylthio-3-dimethylaminopropane (DLin-S-DMA) , 1, 2-Dilinoleoyl-3-trimethylaminopropane (DLinTAP) , 1, 2-Dilinoleoyl-3-trimethylaminopropanechloridesalt (DLin-TAP. Cl) , 1, 2-Dilinoleyloxy-3-trimethylaminopropane (DLinTMA) , 1, 2-Dilinoleyloxy-3-trimethylaminopropanechloridesalt (DLin-TMA. Cl) , 3- ( (1, 3-bis ( ( (9Z, 12Z, 15Z) -octadeca-9, 12, 15-trienoyl) oxy) propan-2-yl) amino) propanoicacid (DLLAPA) , 1, 2-Dilinoleyloxy3- (N, N-dimethyl) -propylamine (DLmDEA) , 1, 2-Dilauroyl-sn-Glicero-3-Phosphoethanolamine (DLPE) , 1, 2-Dilauroyl-sn-Glicero-3-Glycerol (DLPG) , N, N-Dimethyl-3, 4-dioleyloxybenzylamine (DMOBA) , dimyristoylphosphatidylserine (DMPS) , N- [l- (2, 3-dimyristyloxy) propyl] -N, N-dimethyl-N- (2-hydroxyethyl) ammoniumbromide (DMRIE) , 1, 2-Dimyristyloxypropyl-3-dimethyl-hydroxyethylammoniumbromide (DMRIE1) , 1, 2-dimyristoyl-3-trimethylammoniumpropane (DMTAP) , 3- (N, N-Dioleylamino) -1, 2-propanediol (DOAP) , 3- ( (1, 3-bis (oleoyloxy) propan-2-yl) amino) propanoicacid (DOAPA) , 1, 2-N, N′-dioleylcarbamyl-3-dimethylaminopropane (DOcarbDAP) , 1, 2-Dioleoylcarbamyl-3-Dimethylammonium-propane (DOCDAP) , N, N-dioleyl-N, N-dimethylammoniumchloride (DODAC) , 1, 2-Dioleoyl-3-Dimethylammonium-propane (DODAP) , N, N-dihydroxyethylΝ, Ν-dioctadecylammoniumchloride (DODEAC) , N, N-dimethyl-2, 3-dioleyloxypropylamine (DODMA) , dioleoyl-4-aminobutyricacid (DOFAB) , Dioctadecylamidoglycylspermine (DOGS) , 1, 2-Dioleoyl-3-methyl- (methoxycarbonyl-ethyl) ammonium-Propane (DOMCAP) , 1, 2-Dioleoyl-3-N-pyrrolidine-propane (DOP5P) , 1, 2-Dioleoyl-3-N-pyrridinium-propane, bromidesalt (DOP6P) , 1, 2-dioleoyl-3-dimethyl-hydroxyethylammoniumbromide (DORI) , 1, 2-dioleyloxypropyl-3-dimethyl-hydroxyethylammoniumbromide (DORIE) , 1, 2-dioleyloxypropyl-3-dimethyl-hydroxybutylammoniumbromide (DORIE-HB) , 1, 2-dioleyloxypropyl-3-dimethyl-hydroxypropylammoniumbromide (DORIE-HP) , 1, 2-dioleyloxypropyl-3-dimethyl-hydroxypentylammoniumbromide (DORIE-Hpe) , 2, 3- dioleyloxy-N- [2 (spermine-carboxamido) ethyl] -N, N-dimethyl-1-propanaminiumtrifluoroacetate (DOSPA) , 1, 3-dioleoyloxy-2- (6-carboxy-spermyl) -propylamide (DOSPER) , N- (1- (2, 3-dioleoyloxy) propyl) -N, N, N-trimethylammoniumchloride (DOTAP) , 1, 2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane (DOTAP1) , N- [5'- (2', 3'-dioleoyl) uridine] -Ν', Ν', Ν'-trimethylammoniumtosylate (DOTAU) , 1- [2- (9 (Z) -octadecenoyloxy) ethyl] -2- (8 (Z) -heptadecenyl-3- (2-hydroxyethyl) imidazoliniumchloride (DOTIM) , N- (1- (2, 3-dioleyloxy) propyl) -N, N, N-trimethylammoniumchloride (DOTMA) , dioleylphosphatidyluridinephosphatidylcholine (DOUPC) , 1, 2-Diphytanyloxy- (N, N-dimethyl) -butyl-4-amine (DPan-C2-DMA) , l, 2-Diphytanyloxy-3- (N, N-dimethyl) -propylamine (DPanDMA) , 2, 3-bis (dodecylthio) propyl (2- (dimethylamino) ethyl) carbamate (DPDEC) , dipalmitoyl-4-aminobutyricacid (DPFAB) , 1, 2-dipalmityloxypropyl-3-dimethyl-hydroxyethylammoniumbromide (DPRIE) , 1, 2-dipalmitoyl-3-trimethylammoniumpropane (DPTAP) , 1- [2- (hexadecanoyloxy) ethyl] -2-pentadecyl-3- (2-hydroxyethyl) imidazoliniumchloride (DPTIM) , 3- ( (1, 3-bis (stearoyloxy) propan-2-yl) amino) propanoicacid (DSAPA) , distearyldimethylammonium (DSDMA) , 1, 2-distearyloxy-N,N-dimethylaminopropane (DSDMA1) , 1, 2-distearyloxypropyl-3-dimethyl-hydroxyethylammoniumbromide (DSRIE) , 1, 2-distearoyl-3-trimethylammoniumpropane (DSTAP) , ditetradecyltrimethylammonium (DTDTMA) , 1, 2-dioleoyl-sn-glycero-3-ethylphosphocholine (EDOPC) , N2- [N2, N5-bis (3-aminopropyl) -L-ormithyl] -N, N-dioctadecyl-L-glutaminetetrahydrotrifluoroacetate (GC33) , Cholest-5-en-3-ol (3P) -, 3- [ (3-aminopropyl) [4- [ (3-aminopropyl) amino] butyl] carbamate] (GL67) , glycerylmono-oleate (GMO) , Guanidino-dialkyl-carboxylicacid (GUADACA) , 2- (bis (2-(tetradecanoyloxy) ethyl) amino) -N- (2-hydroxyethyl) -N, N-dimethyl-2-oxoethan-aminiumbromide (HEDC) , 2, 2'- (tert-butoxycarbonylazanediyl) bis (ethane-2, 1-diyl) ditetradecanoate (HEDC-BOC-TN) , 1- (2- ( ( (3S, 10R, 13R) -10, 13-dimethyl-17- ( (R) -6-methylheptan-2-yl) -2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-tetradecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yldisulfanyl) ethyl) guanidine (HGT4002) , (15Z, 18Z) -N, N-dimethyl-6- (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) tetracosa-l5, 18-dien-l-amine (HGT5000) , (15Z, 18Z) -N, N-dimethyl-6- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-l-yl) tetracosa-4, 15, 18-trien-l-amine (HGT5001) , Histaminyl-Cholesterolhemisuccinate (HisChol) , histidinylcholesterolhemisuccinate (Hist-Chol) , HydroSoyPC (HSPC) , imidazolecholesterolester (ICE) , 3- (didodecylamino) -N1, N1, 4-tridodecyl-1-piperazineethanamine (KL10) , N1- [2- (didodecylamino) ethyl] -N1, N4, N4-tridodecyl-1, 4-piperazinediethanamine (KL22) , 14, 25-ditridecyl-15, 18, 21, 24-tetraaza-octatriacontane (KL25) , N,N-di-n-tetradecyl, N-methyl-N- (2-guanidinyl) ethylammonium chloride (Lipid 1) , N, N-di-n-octadecyl, N-methyl-N- (2-guanidinyl) ethylammonium chloride (Lipid 2) , 3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) propyl (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoate (Lipid A) , (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate (Lipid A1) , 2, 2-Dilinoleyl-4-dimethylaminoethyl- [1, 3] -dioxolane (Lipid A2) , ( (5- ( (dimethylamino) methyl) - 1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, l-diyl) bis (decanoate) (Lipid B) , 2- ( (4- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-l, 3-diyl (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -bis (octadeca-9, 12-dienoate) (Lipid C) , 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -13- (octanoyloxy) tridecyl3-octylundecanoate (Lipid D) , (6Z, 16Z) -12- ( (Z) -dec-4-en-1-yl) docosa-6, 16-dien-11-yl5- (dimethylamino) pentanoate (Lipid I) , Dioctadecyl- (2-hydroxyl-3-propylamino) aminopolylysine (Lipid T) , (3- ( (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yloxy) -N, N-dimethylpropan-1-amine (MC3 Ether) , describedin U.S. ProvisionalApplicationNo. 61 / 384,050 (MC3 Thioester) , (4- ( (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yloxy) -N, N-dimethylbutan-1-amine (MC4 Ether) , 3- ( (2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyl) oxy) ethyl) amino) propanoicacid (MLAPA) , 3- ( (2- ( ( (9Z, 12Z, 15Z) -octadeca-9, 12, 15-trienoyl) oxy) ethylamino) propanoic acid (MLLAPA) , monomycolylglycerol (MMG) , 3- ( (2- (oleoyloxy) ethyl) amino) propanoicacid (MOAPA) , 4- (2-Aminoethyl) -Morpholino-Cholesterolhemisuccinate (MoChol) , 1, 2-Dioleoyl-3-N-morpholine-propane (MoDO) , Methylpyridiyl-dialkyl-carboxylicacid (MPDACA) , monopalmitoylphosphatidylcholine (MPPC) , 3- ( (2- (stearoyloxy) ethyl) amino) propanoicacid (MSAPA) , N1- [2- ( (lS) -1- [ (3-aminopropyl) amino] -4- [di (3-amino-propyl) amino] butylcarboxamido) ethyl] -3, 4-di [oleyloxy] -benzamide (MVL5) , 2- ( {8- [ (3β) -cholest-5-en-3-yloxy] octyl} oxy) -N, N-dimethyl-3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] propan-1-amine (Octyl-CLinDMA) , (2R) -2- ( {8- [ (3β) -cholest-5-en-3-yloxy] octyl} oxy) -N, N-dimethyl-3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] propan-1-amine (Octyl-CLinDMA (2R) ) , phosphatidylcholines (PC) , l, 3-Bis- (1, 2-bis-tetradecyloxy-propyl-3-dimethylethoxyammoniumbromide) -propane-2-ol (PCL-2) , palmitoyl-oleoyl-nor-arginine (PONA) , stearylamine (STA) , 2- ( ( (tert-Butyldimethylsilyl) oxy) methyl) -2- (hydroxymethyl) propane-1, 3-diol (Synthesis Example 1 (A) ) , 3- ( (tert-Butyl (dimethyl) silyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (9Z) -tetradec-9-enoyloxy) methyl) propyl (9Z) -tetradec-9-enoate (Synthesis Example 1 (B) ) , 3-Hydroxy-2, 2-bis ( ( (9Z) -tetradec-9-enoyloxy) methyl) propyl (9Z) -tetradec-9-enoate (Synthesis Example 1 (C) ) , 3- ( (4- (Dimethylamino) butanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (9Z) -tetradec-9-enoyloxy) methyl) propyl (9Z) -tetradec-9-enoate (Synthesis Example 1 (D) ) , 3- (5- (bis (2-hydroxydodecyl) amino) pentan-2-yl) -6- (5- ( (2-hydroxydodecyl) (2-hydroxyundecyl) amino) pentan-2-yl) -l, 4-dioxane-2, 5-dione) (Target 24) , trehalose6'6'-dibehenate (TDB) , 1, 1'- (2- (4- (2- ( (2- (bis (2-hydroxydodecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydodecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol (Tech G1) , 3- ( (1, 3-bis ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyl) oxy) -2- ( ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyl) oxy) methyl) propan-2-yl) amino) propanoicacid (TLAPA) , (l- (2, 3-linoleyloxypropoxy) -2- (linoleyloxy) - (N, N-dimethyl) -propyl-3-amine) (TLinDMA) , 3- ( (1, 3-bis ( ( (9Z, 12Z, 15Z) -octadeca-9, 12, 15-trienoyl) oxy) -2- ( ( ( (9Z, 12Z, 15E) -octadeca-9, 12, 15-trienoyl) oxy) methyl) propan-2-yl) amino) propanoicacid (TLLAPA) , N- (α-trimethylammonioacetyl) -didodecyl-D-glutamatechloride (TMAG) , 3- ( (1, 3-bis ( ( (Z) -octadec-9-enoyl) oxy) -2- ( ( ( (Z) -octadec-9-enoyl) oxy) methyl) propan-2-yl) amino) propanoicacid (TOAPA) , 3- ( (1, 3-bis (stearoyloxy) -2- ( (stearoyloxy) methyl) propan-2-yl) amino) propanoicacid (TSAPA) , 1, N19- bis ( (16E, 18E, 20E, 22E) -17, 21-dimethyl-15-oxo-23- (2, 6, 6-trimethylcyclohex-1-en-1-yl) -4, 7, 10-trioxa-14-azatricosa-16, 18, 20, 22-tetraen-1-yl) -4, 7, 10, 13, 16-pentaoxanonadecane-1, 19-diamide (VA-PEG-VA) , 2, 2-Dilinoleyl-4-dimethylaminoethyl- [1, 3] -dioxolane (XTC) , 1, 2-di-γ-linolenyloxy-N, N-dimethylaminopropane (γ-DLenDMA) , α-D-Tocopherolhemisuccinoyl, (9Z, 9’ Z, 12Z, 12’ Z) -2- ( (2- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) tetradecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , 2- ( ( (13Z, 16Z) -4- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) docosa-13, 16-dienoyl) oxy) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- ( ( (13Z, 16Z) -4- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) docosa-13, 16-dienoyl) oxy) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- ( (4- ( ( (3- (ethyl (methyl) amino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- ((4- ( ( (3- (ethyl (methyl) amino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylbis (decanoate) , 2- ( (4- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylbis (decanoate) , 2- (10-dodecyl-3-ethyl-8, 14-dioxo-7, 9, 13-trioxa-3-azaicosan-20-yl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- ( ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) methyl) -2- ( (octanoyloxy) methyl) propane-1, 3-diyl (9Z, 9′Z) bis-tetradec-9-enoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( ( (1- (cyclopropylmethyl) piperidine-4-carbonyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , ( (2- ( ( (1-isopropylpiperidine-4-carbonyl) oxy) methyl) -1, 4-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) bis (decanoate) , 2- ( (4- ( ( (3- (ethyl (methyl) amino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diyldidodecanoate, 2- ( (4- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diyldidodecanoate, 2- ( (4- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diyldidodecanoate, 2- ( (4- ( ( (3- (ethyl (methyl) amino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylditetradecanoate, 2- ( (4- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylditetradecanoate, 2- ((4- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylditetradecanoate, (Z) -2- ( (4- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diyldioleate, (9Z, 9’ Z, 12Z, 12’ Z, 15Z, 15’ Z) -2- ( (4- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12, 15-trienoate) , (9Z, 9’ Z, 12Z, 12’ Z) -2- ( (4- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , (9Z, 9’ Z, 12Z, 12’ Z) -2- ( (4- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexadecanoyl) oxy) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , N, N, N-trimethyl-5-oxo-5- (3- ( (3-pentyloctanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (3-pentyloctanoyl) oxy) methyl) propoxy) pentane-1-Aminiumiodide, 3- ( (5- (dimethylamino) pentanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (3-pentyloctanoyl) oxy) methyl) propyl3-pentyloctanoate, 3-dimethylaminopropylcarbonate (9Z, 12Z) -octacosa-19, 22-dien-11-yl, 2-  ( ( (N, N-dimethyl-β-alanyl) oxy] methyl} -2- [ (octanoyloxy) methyl) propane-1, 3-diyl (9Z, 9′Z) bis-tetradec-9-enoate, O1- (2- (7-dodecyl-14-methyl-3, 9-dioxo-2, 4, 8, 10-tetraoxa-14-azapentadecyl) propane-1, 3-diyl) 8-dimethyldioctanedioate, 8-dimethyl Ο’ , O1- (2- ( ( (1-methylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diyl) dioctanedioate, 1- (3- ( (6, 6-bis ( (2-propylpentyl) oxy) hexanoyl) oxy) -2- ( ( (1, 4-dimethylpiperidine-4-carbonyl) oxy) methyl) propyl) 8-methyloctanedioate, (9Z, 12Z) -5- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -7-octylpentadecyloctadeca-9, 12-dienoate, 5- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -7-octylpentadecyloctanoate, 1- (3- ( (6, 6-bis ( (2-propylpentyl) oxy) hexanoyl) oxy) -2- ( ( (1, 4-dimethylpiperidine-4-carbonyl) oxy) methyl) propyl) 10-octyldecanedioate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -5-octyltridecyldecanoate, 1- (16- ( ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) methyl) -9-dodecyl-2-methyl-7, 13-dioxo-6, 8, 12, 14-tetraoxa-2-azaheptadecan-17-yl) 8-methyloctanedioate, 3- ( (5- (dimethylamino) pentanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (9Z) -tetradec-9-enoyloxy) methyl) propyl (9Z, 12Z) -octadec-9, 12-dienoate, 3- ( (5- (Dimethylamino) pentanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (3-pentyloctanoyl) oxy) methyl) propyl3-pentyloctanoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( ( (3- (diethylamino) propanoyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , ( (2- ( ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) methyl) -1, 4-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) bis (decanoate) , 1- (3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (1-methylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) methyl) propyl) 8-methyloctanedioate, 3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( (palmitoyloxy) methyl) propyl1-methylpyrrolidine-3-carboxylate, 3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( (tetradecanoyloxy) methyl) propyl1-methylpyrrolidine-3-carboxylate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -13- (octanoyloxy) tridecyl9-pentyltetradecanoate, 3-( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( (dodecanoyloxy) methyl) propyl1-methylpyrrolidine-3-carboxylate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -13-hydroxytridecyl9-pentyltetradecanoate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -13- (octanoyloxy) tridecyl7-hexyltridecanoate, 2- (5- (3- ( (1-methylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) -2- ( (tetradecanoyloxy) methyl) propoxy) -5-oxopentyl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -13- (octanoyloxy) tridecyl5-heptyldodecanoate, 2- (5- (3- ( (1-methylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) -2- ( (palmitoyloxy) methyl) propoxy) -5-oxopentyl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -13-hydroxytridecyl5-heptyldodecanoate, 2- ( ( (1-methylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (6, 6-bis (octyloxy) hexanoate) , (9Z, 12Z) -3- ( ( (3-dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -13- (octanoyloxy) tridecyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( (5- (dimethylamino) pentanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (9Z) -tetradec-9-enoyloxy) methyl) propyl (9Z) -octadec-9-enoate, 2- (10-dodecyl-3-ethyl-8, 14-dioxo-7, 9, 13-trioxa-3-azanonadecan-19-yl) propane-1, 3-diyldioctanoate, ( (2- ( ( (1-methylpiperidine-4-carbonyl) oxy) methyl) -1, 4-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) bis (decanoate) , 2- ( ( (3- (dimethylamino) propanoyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (4, 4-bis (octyloxy) butanoate) , (9Z, 12Z) -2- ( ( (11Z, 14Z) -2- ( (3- (dimethylamino) propanoyl) oxy) icosa-11, 14-dien-1-yl) oxy) ethyloctadeca-9, 12-dienoate, 2- ( ( (1, 3-dimethylpyrrolidine-3- carbonyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (4, 4-bis (octyloxy) butanoate) , (13Z, 16Z) -4- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) docosa-13, 16-dien-1-ylheptadecan-9-ylsuccinate, 2, 2-bis (heptyloxy) ethyl3- ( (3-ethyl-10- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) -8, 15-dioxo-7, 9, 14-trioxa-3-azaheptadecan-17-yl) disulfanyl) propanoate, 2- ( ( (1-methylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (4, 4-bis (octyloxy) butanoate, 1- (3- ( (1, 3-dimethylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl) 10-octyldecanedioate, (13Z, 16Z) -4- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) docosa-13, 16-dien-1-yl2, 2-bis (heptyloxy) acetate, (13Z, 16Z) -4- ( ( (2- (dimethylamino) ethoxy) carbonyl) oxy) docosa-13, 16-dien-1-yl2, 2-bis (heptyloxy) acetate, Aceticacid (20, 23R) -2-methyl-9- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl] -7-oxo-6, 8, 11-trioxa-2-azanonacosa-20-en-23-yl3- (dimethylamino) propylcarbonate (11Z, 14Z) -1- { [ (9Z, 12R) -12-hydroxyoctadec-9-en-1-yl] , (12Z, 15Z) -1- ( ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) carbonyl) oxy) henicosa-12, 15-dien-3-yl3- (dimethylamino) propanoate, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( (3- (dimethylamino) propyl) carbamoyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, (12Z, 15Z) -3- ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) henicosa-12, 15-dien-1-yl9-pentyltetradecanoate, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( ( (1, 2, 2, 6, 6-pentamethylpiperidin-4-yl) oxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, (12Z, 15Z) -3- ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) henicosa-12, 15-dien-1-yl7-hexyltridecanoate, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( ( (1-methylpiperidin-4-yl) methoxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, (12Z, 15Z) -3- ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) henicosa-12, 15-dien-1-yl5-heptyldodecanoate, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( ( (1-ethylpiperidin-4-yl) oxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, (12Z, 15Z) -3- ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) henicosa-12, 15-dien-1-yl3-octylundecanoate, formatesalt, 3- ( (5- (dimethylamino) pentanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (9Z) -tetradec-9-enoyloxy) methyl) propyl (9Z) -hexadec-9-enoate, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( ( (1-methylazetidin-3-yl) oxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, (9Z, 12Z) - (12Z, 15Z) -3- ( (3- (dimethylamino) propanoyl) oxy) henicosa-12, 15-dien-1-yloctadeca-9, 12-dienoate, 2- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) tetradecyl4, 4-bis ( (2-ethylhexyl) oxy) butanoate, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( ( (1-methylpiperidin-4-yl) oxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( ( (1-methylpyrrolidin-3-yl) oxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, (9Z, 12Z) -3- ( ( (2- (dimethylamino) ethoxy) carbonyl) oxy) pentadecyloctadeca-9, 12-dienoate, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( (3- (4-methylpiperazin-1-yl) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- (Dimethylamino) propyltriacontan-11-ylcarbonateTriacontan-11-ol, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( (3- (pyrrolidin-1-yl) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, (9Z, 12Z) -3- ( ( (3- (ethyl (methyl) amino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( (4, 4- bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl4- ( (diethylamino) methyl) benzoate, (9Z, 12Z) -3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl3- ( (dimethylamino) methyl) benzoate,(9Z, 12Z) -3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyloctadeca-9, 12-dienoate,3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl1-methylpiperidine-3-carboxylate, 3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl1-methylpiperidine-4-carboxylate, 3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl1, 4-dimethylpiperidine-4-carboxylate, 3- ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (9Z) -tetradec-9-enoyloxy) methyl) propyl (9Z) -hexadec-9-enoate, 2- (10-dodecyl-3-ethyl-8, 14-dioxo-7, 9, 13-trioxa-3-azahexadecan-16-yl) propane-1, 3-diyldioctanoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( ( (4- (piperidin-1-yl) butanoyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , 3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl4-methylmorpholine-2-carboxylate, (2R) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl1-methylpyrrolidine-2-carboxylate, (2S) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl1-methylpyrrolidine-2-carboxylate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( ( ( (1-ethylpiperidin-3-yl) methoxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl1- (cyclopropylmethyl) piperidine-4-carboxylate, 3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) propyl1-isopropylpiperidine-4-carboxylate, (9Z, 12Z) -3- ( (4, 4-bis (octyloxy) butanoyl) oxy) -2- ( ( (3- (dimethylamino) propanoyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, 4- (dimethylamino) butylcarbonate (6Z, 9Z, 26Z, 29Z) -pentatriacontour-6, 9, 26, 29-tetraen-18-yl, 3- ( (6- (dimethylamino) hexanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (9Z) -tetradec-9-enoyloxy) methyl) propyl (9Z) -tetradec-9-enoate, 2, 5-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienyloxy) benzyl3- (dimethylamino) propylcarbonate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( ( (4- (pyrrolidin-1-yl) butanoyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl5-heptyldodecanoate, Aceticacid (7R, 9Z) -18- ( { [3- (dimethylamino) propyloxy] carbonyl} oxy) octacosa-9-en-7-yl, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl9-pentyltetradecanoate, (9Z, 12Z) -3- ( (6, 6-bis (octyloxy) hexanoyl) oxy) -2- ( ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl7-hexyltridec-6-enoate, (9Z, 12Z) -3- (2, 2-bis (heptyloxy) acetoxy) -2- ( ( ( (2- (dimethylamino) ethoxy) carbonyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl3-octylundec-2- enoate, (9Z, 12Z) -3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -2- ( ( (5-heptyldodecanoyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( ( (3-dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl3-octylundecanoate, (9Z, 12Z) -3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -2- ( ( (9-pentyltetradecanoyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, Diaceticacid (7R, 9Z, 26Z, 29R) -18- ( { [3- (dimethylamino) propoxy] carbonyl} oxy) pentatriaconta-9, 26-diene-7, 29-diyl, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl8, 8-bis ( (2-propylpentyl) oxy) octanoate, (9Z, 12Z) -3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -2- ( ( (7-hexyltridecanoyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( ( (3- (ethyl (methyl) amino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl8, 8-bis ( (2-propylpentyl) oxy) octanoate, (9Z, 12Z) -3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -2- ( ( (3-octylundecanoyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl8, 8-bis ( (2-propylpentyl) oxy) octanoate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl8, 8-dibutoxyoctanoate, 3- ( (5- (dimethylamino) pentanoyl) oxy) -2, 2-bis ( ( (9Z) -tetradec-9-enoyloxy) methyl) propyl (9Z) -tetradec-9-enoate, 3- (Dimethylamino) propylcarbonate (6Z, 9Z, 26Z, 29Z) -pentatriacontour-6, 9, 26, 29-tetraen-18-yl, 2, 5-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) benzyl3- (dimethylamino) propanoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( ( (3- (4-methylpiperazin-1-yl) propanoyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl8, 8-bis (octyloxy) octanoate, 3- (Dimethylamino) propyloctacosane-11-ylcarbonate, 2, 4-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienyloxy) benzyl4- (dimethylamino) butanoate, (9Z, 12Z) -3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) -2- ( ( (2-heptylundecanoyl) oxy) methyl) propyloctadeca-9, 12-dienoate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis ( (2-ethylhexyl) oxy) hexanoate, 2- ( ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (2-heptylundecanoate) , 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (hexyloxy) hexanoate, 4-methyl-2, 5-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) benzyl4- (dimethylamino) butanoate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 4- (dimethylamino) butyl4-methyl-2, 5-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienyloxy) benzylcarbonate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl4, 4-bis ( (2-propylpentyl) oxy) butanoate, 2- (12-dodecyl-3-ethyl-8, 14-dioxo-7, 9, 13-trioxa-3-azaoctadecan-18-yl) propane-1, 3-diyldioctanoate,2- (5-oxo-5- ( (3- ( ( (3- (piperidin-1-yl) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl) oxy) pentyl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 3-(dimethylamino) propyl4-methyl-2, 5-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) benzylcarbonate, 3- ( ( (3- (ethyl (methyl) amino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl4, 4-bis ( (2-propylpentyl) oxy) butanoate, 2- (11-dodecyl-3-ethyl-9, 15-dioxo-8, 10, 14-trioxa-3-azanonadecan-19-yl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- (10-dodecyl-3-ethyl-8, 15-dioxo-7, 9, 14-trioxa-3-azanonadecan-19-yl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- (5- ( (4- ( ( ( (1-methylpiperidin-4-yl) oxy) carbonyl) oxy) hexadecyl) oxy) -5-oxopentyl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- (5- ( (4- ( ( ( (1-ethylpiperidin-3-yl) methoxy) carbonyl) oxy) hexadecyl) oxy) -5-oxopentyl) propane-1, 3- diyldioctanoate, 2- (5- ( (4- ( ( ( ( (R) -1-methylpyrrolidin-3-yl) oxy) carbonyl) oxy) hexadecyl) oxy) -5-oxopentyl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- (5- ( (4- ( ( ( ( (S) -1-methylpyrrolidin-3-yl) oxy) carbonyl) oxy) hexadecyl) oxy) -5-oxopentyl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- (5-oxo-5- ( (4- ( ( (S) -pyrrolidine-2-carbonyl) oxy) hexadecyl) oxy) pentyl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- (5- ( (4- ( (1, 3-dimethylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) hexadecyl) oxy) -5-oxopentyl) propane-1, 3-diyldioctanoate,2- (5- ( (4- ( (1, 4-dimethylpiperidine-4-carbonyl) oxy) hexadecyl) oxy) -5-oxopentyl) propane-1, 3-diyldioctanoate,4, 4-bis (octyloxy) butyl (3- (diethylamino) propyl) pentadecane-1, 3-diyldicarbonate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl4, 4-bis ( (2-propylpentyl) oxy) butanoate, ( (2- ( ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) -1, 4-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) bis (decanoate) , 4, 4-bis (octyloxy) butyl5- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) heptadecanoate, 6- ( (6, 6-bis (octyloxy) hexanoyl) oxy) -4- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) hexyloctanoate, (12Z, 15Z) -3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) henicosa-12, 15-dien-1-yl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) tridecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) undecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl5- (4, 6-diheptyl-1, 3-dioxan-2-yl) pentanoate, 3- ( (5- (diethylamino) pentanoyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 1- ( (6, 6-bis (octyloxy) hexanoyl) oxy) pentadecan-3-yl1, 4-dimethylpiperidine-4-carboxylate, 3- ( (3- (1-methylpiperidin-4-yl) propanoyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 1- ( (6, 6-bis (octyloxy) hexanoyl) oxy) pentadecan-3-yl1, 3-dimethylpyrrolidine-3-carboxylate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl4, 4-bis ( (2-ethylhexyl) oxy) butanoate, 2- ( ( (1, 3-dimethylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (8- (octanoyloxy) octanoate) , ( (2- ( ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) -1, 4-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) bis (decanoate) , (2R) -1- ( (6, 6-bis (octyloxy) hexanoyl) oxy) pentadecan-3-ylpyrrolidine-2-carboxylate, (2S) -1- ( (6, 6-bis (octyloxy) hexanoyl) oxy) pentadecan-3-yl1-methylpyrrolidine-2-carboxylate, (2R) -1- ( (6, 6-bis (octyloxy) hexanoyl) oxy) pentadecan-3-yl1-methylpyrrolidine-2-carboxylate, 3- ( ( (3-(dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis ( (3-ethylpentyl) oxy) hexanoate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis ( (2-propylpentyl) oxy) hexanoate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis ( (2-propylpentyl) oxy) hexanoate, 3- ( ( (2- (diethylamino) ethoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 3- ( ( (3-morpholinoproproxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 3- ( ( ( (1-methylpiperidin-4-yl) methoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 3- ( ( (3- (4-methylpiperazin-1-yl) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 3- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl4, 4-bis (octyloxy) butanoate,2- ( ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) methyl) -2- ( (dodecanoyloxy) methyl) propane-1, 3-diyl (9Z, 9′Z) bis-tetradec-9-enoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , 3- ( ( (4- (diethylamino) butoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 3- ( ( (3- (piperazin-1-yl) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate,3- ( ( (3- piperidin-1-yl) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl6, 6-bis (octyloxy) hexanoate, 3- ( ( (3- (dimethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) pentadecyl4, 4-bis (octyloxy) butanoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- (9-dodecyl-2-methyl-7, 12-dioxo-6, 8, 13-trioxa-2-azatetradecan-14-yl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , (9Z, 12Z) -10-dodecyl-3-ethyl-14- (2- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) ethyl) -8, 13-dioxo-7, 9-dioxa-3, 14-diazahexadecan-16-yloctadeca-9, 12-dienoate, 2- ( (2- ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) tetradecanoyl) oxy) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- (9-dodecyl-2-methyl-7, 13-dioxo-6, 8, 12-trioxa-2-azanonadecan-19-yl) propane-1, 3-diyldioctanoate, 2- ( (decanoyloxy) methyl) -2- ( ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diyl (9Z, 9′Z) bis-tetradec-9-enoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( ( (3-morpholinopropanoyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , 3- (Dimethylamino) propylcarbonate (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -heptatriconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yl, 2, 5-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) benzyl4- (dimethylamino) butanoate, 2- (10-dodecyl-3-ethyl-8, 14-dioxo-7, 9, 13-trioxa-3-azaoctadecan-18-yl) propane-1, 3-diyldioctanoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -2- ( ( (1, 3-dimethylpyrrolidine-3-carbonyl) oxy) methyl) propane-1, 3-diylbis (octadeca-9, 12-dienoate) , ( (5- ( (dimethylamino) methyl) benzene-1, 2, 3-triyl) tris (oxy) ) tris (decane-10, 1-diyl) trioctanoate, O', O- ( ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (propane-3, 1-diyl) ) 9-dioctyldinonanedioate, (9Z, 12Z) -3- (3- ( (dimethylamino) methyl) -5- (3- ( (3-octylundecanoyl) oxy) propoxy) phenoxy) propyloctadeca-9, 12-dienoate, ( ( ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (propane-3, 1-diyl) ) bis (oxy) ) bis (4-oxobutane-4, 1-diyl) bis (decanoate) , (R) -4- (3- ( (R) -3, 4-bis (octanoyloxy) butoxy) -5- ( (dimethylamino) methyl) phenoxy) butane-1, 2-diyldioctanoate, (S) -4- (3- ( (S) -3, 4-bis (octanoyloxy) butoxy) -5- ( (dimethylamino) methyl) phenoxy) butane-1, 2-diyldioctanoate, (R) -4- (3- ( (S) -3, 4-bis (octanoyloxy) butoxy) -5- ( (dimethylamino) methyl) phenoxy) butane-1, 2-diyldioctanoate, 4, 4'- ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-1, 2-diyl) tetraoctanoate, didodecyl6, 6'- ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) dihexanoate, di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) 5, 5'- ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) dipentanoate, ( ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) ) bis (oxy) ) bis (6-oxohexane-6, 1-diyl) bis (decanoate) , (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) bis (8- (octanoyloxy) octanoate) , (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) bis (10- (octanoyloxy) decanoate) , ( ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) ) bis (oxy) ) bis (6-oxohexane-6, 1-diyl) dioctanoate, ( ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) ) bis (oxy) ) bis (8-oxooctane-8, 1-diyl) bis (decanoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) ) bis (oxy) ) bis (4-oxobutane-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , O', O- ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) ) 8-dinonyldioctanedioate, O, O'- ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) ) bis (10- (octanoyloxy) decyl) disuccinate, O, O'- ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) ) di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) disuccinate,  (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - (5- ( ( ( (3- (diethylamino) propoxy) carbonyl) oxy) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (9Z, 12Z) -4- (3- ( (dimethylamino) methyl) -5- (4- (oleoyloxy) butoxy) phenoxy) butyloctadeca-9, 12-dienoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z, 15Z, 15'Z) - ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12, 15-trienoate) , ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) ditetradecanoate, (Z) - ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) dioleate, ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (hexane-6, 1-diyl) didodecanoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( ( ( (5- ( (diethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (ethane-2, 1-diyl) ) bis (oxy) ) bis (ethane-2, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , didecyl8, 8'- ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) dioctanoate, ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (propane-3, 1-diyl) bis (3-octylundecanoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- ( (diethylamino) methyl-2-methyl-1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) didodecanoate, ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) bis (decanoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- ( (dimethylamino) methyl-2-methyl-1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (8Z, 8'Z) - ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (hexane-bis (dodec-8-enoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- ( (3-hydroxyazetidin-1-yl) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (hexane-6, 1-diyl) dioctanoate, ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (hexane-6, 1-diyl) bis (decanoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- ( (dimethylamino) methyl-1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (hexane-6, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (decane-10, 1-diyl) dihexanoate, ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (decane-10, 1-diyl) dioctanoate, ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) dioctanoate, ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) dihexanoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (ethane-2, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (propane-3, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) ditridecanoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (2, 6-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) pyridin-4-yl) methyl3- (dimethylamino) propanoate, (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -5- ( ( (3- (dimethylamino) propanoyl) oxy) methyl) -1, 3-phenylenebis (octadeca-9, 12-dienoate) , 1- (3, 5-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) phenyl) -N, N-dimethylmethanamine,3, 5-bis ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) benzyl3- (dimethylamino) propanoate, 1- (3, 5-bis (4, 4-bis (octyloxy) butoxy) phenyl) -N, N-dimethylmethanamine, ( ( ( (5-  ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) ) bis (oxy) ) bis (propane-3, 2, 1-triyl) tetraoctanoate,( (5- ( ( (4- (dimethylamino) butanoyl) oxy) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) bis (decanoate) , ( (5- ( ( (3- (dimethylamino) propanoyl) oxy) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (octane-8, 1-diyl) bis (decanoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- (3-morpholinopropyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- (3- (dimethvlamino) propyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- (3- (piperidin-1-yl) propyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) , (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) bis (9-pentyltetradecanoate) , (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) bis (7-hexyltridecanoate) ,(5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) bis (5-heptyldodecanoate) , ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (3-octylundecanoate) , ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (5-heptyldodecanoate) ,( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (9-pentyltetradecanoate) ,( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) bis (7-hexyltridecanoate) , (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) - ( (5- (pyrrolidin-1-ylmethyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butan-4, 1-diyl) bis (octadeca-9, 12-dienoate) ,( ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (methylene) ) bis (propane-3, 2, 1-triyl) tetraoctanoate, ( ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (oxy) ) bis (butane-4, 1-diyl) ) bis (propane-3, 2, 1-triyl) tetraoctanoate, (9Z, 12Z) -4- (3- ( (dimethylamino) methyl-5- (4- ( (3-octylundecanoyl) oxy) butoxy) phenoxy) butyloctadeca-9, 12-dienoate, bis (1, 3-bis (octanoyloxy) propan-2-yl) O, O'- ( (5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) ) disuccinate,(5- ( (dimethylamino) methyl) -1, 3-phenylene) bis (methylene) bis (6- ( ( (nonyloxy) carbonyl) oxy) hexanoate) , 2- (3- (4- (5- ( (dimethylamino) methyl) -2-methyl-3- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) phenoxy) butoxy) -3-oxopropyl) propane-1, 3-diyldihexanoate, 3- ( (dimethylamino) methyl) -5- ( ( (8- (octanoyloxy) octanoyl) oxy) methyl) benzyl3-octylundecanoate, ( (5- ( (diethylamino) methyl) benzene-1, 2, 3-triyl) tris (oxy) ) tris (decane-10, 1-diyl) trioctanoate, 1- (3, 5-bis ( (Z) -octadec-9-en-1-yloxy) phenyl) -N, N-dimethylmethanamine, N’-methyl-N’ , N” , N” -tris ( (2E, 6E) -3, 7, 11-trimethyldodeca-2, 6, 10-trien-1-propane-1, 3-diamine, l, 17-bis (2- ( (2-pentylcyclopropyl) methyl) cyclopropyl) heptadecan-9-yl4- (dimethylamino) butanoate, ethyl (7Z) -17- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} hexacos-7-enoate, (Z) -methyl6- (2- (dimethylamino) -3- (octadec-9-en-1-yloxy) propoxy) hexanoate, 2- (Didodecylamino) -1- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-dodecylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, 3- ( (3- (1- (3- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperidin-4-yl) propyl) (nonyl) amino) propylhexanoate, 3- ( (3- (4- (3- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperazin-1-yl) -3-oxopropyl) (nonyl) amino) propylhexanoate, 3- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (4- (3- (dinonylamino) propyl) piperidin-1-yl) propan-1-one, Pentyl4- ( (3- (1- (3- ( (2-  (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperidin-4-yl) propyl) (nonyl) amino) butanoate, Pentyl4- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) butanoate,Pentyl4- ( ( (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) methyl) (nonyl) amino) butanoate,Pentyl4- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) ethyl) (nonyl) amino) butanoate, Pentyl4- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-3-yl) ethyl) (nonyl) amino) butanoate, 2- (Didodecylamino) -1- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (3- (2- (dinonylamino) ethyl) piperidin-1-yl) ethan-1-one, Dipentyl4, 4'- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) azanediyl) dibutyrate, Pentyl4- (nonyl (2- (4- (N-nonyl-N- (2- (nonyl (4-oxo-4- (pentyloxy) buryl) amino) ethyl) glycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) amino) butanoate, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (3- ( (dinonylamino) methyl) pyrrolidin-1-yl) ethan-1-one, 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) -1- (4- (dinonylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (3- (2- (dinonylamino) ethyl) pyrrolidin-1-yl) ethan-1-one, Pentyl4- ( (3- (4- (3- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperazin-1-yl) -3-oxopropyl) (nonyl) amino) butanoate, 3- ( (2- (1- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) propylhexanoate, Butyl5- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) pentanoate, 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (4- (dinonylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, Propyl6- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) hexanoate, Ethyl7- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) heptanoate, Methyl8- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) octanoate, 3- ( (2- (4- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) propylhexanoate, Butyl5- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) pentanoate, Propyl6- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-2-oxoethyl) (nonyl) amino) hexanoate, Ethyl7- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) heptanoate, 3- (Dinonylamino) -1- (4- (3- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperazin-1-yl) propan-1-one, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (4- (ditetradecylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, 2- (Dinonylamino) -1- (4- (2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) ethyl) piperidin-1-yl) ethan-1-one, 2- (Dinonylamino) -l- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-dodecylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (4- (2- (dinonylamino) ethyl) piperidin-1-yl) ethan-1-one, Methyl8- ( (2- (4- (dinonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (2- ( (8-methoxy-8-oxooctyl) (nonyl) amino) ethyl) amino) octanoate, Methyl8- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (2- (4- (dinonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) amino) octanoate, Methyl8- ( (2- ( (2- (4- (dinonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) ethyl) (nonyl) amino) octanoate, Pentyl4- ( (2- (4- (N- (2-  (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-2-oxoethyl) (nonyl) amino) butanoate, Methyl8- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) octanoate, 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) -1- (5- (dinonylglycyl) -2, 5-diazabicyclo [2.2.1] heptan-2-yl) ethan-1-one, 1, 2- (Dinonylamino) -1- (5- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) -2, 5-diazabicyclo [2.2.1] heptan-2-yl) ethan-1-one, N1, N1, N2-Tri ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) -N2- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, N1, N1, N2-Tri ( (Z) -octadec-9-en-1-yl) -N2- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, 2- (Dinonylamino) -l- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-l-yl) ethan-l-one, N1, N1, N2-Tridodecyl-N2- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, N1, N1, N2-Trinonyl-N2- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, N1, N1, N2-Trihexyl-N2- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Didodecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tri ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) ethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Didodecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tri ( (Z) -octadec-9-en-1-yl) ethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Ditetradecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tritetradecylethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Didodecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tritetradecylethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Dinonylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tritetradecylethane-1, 2-diamine, 2- (Didodecylamino) -l- (4- (2- ( (2- (didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, N1- (2- (4- (2- (Di( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Di ( (Z) -octadec-9-en-1-yl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethane-1, 2-diamine, N1, N1, N2-Tridodecyl-N2- (2- (4- (2- (dodecyl ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Ditetradecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Di ( (Z) -dodec-6-en-l-yl) amino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethane-1, 2-diamine, (Z) -N1- (2- (4- (2- (Dodec-6-en-l-yl (dodecyl) amino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N, N2, N2-tridodecylethane-1, 2-diamine, N1- (2-(4- (2- (Dinonylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Dioctylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethane-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Dihexylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethan-1, 2-diamine, N1- (2- (4- (2- (Ditetradecylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-trinonylethane-1, 2-diamine,2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) -l- (4- (2-(didodecylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethan-l-one, N1- (2- (4- (2-(Didodecylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-trinonylethane-1, 2-diamine, N1- (2-(4- (2- (Dinonylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-trinonylethane-1, 2-diamine, N1-(2- (4- (2- (Didodecylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-trihexylethane-1, 2-diamine, Dimethyl12, 12'- ( (2- (4- (2- ( (2- (didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) azanediyl) didodecanoate, Methyl12- ( (2- (4- (2- ( (2-(didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) (dodecyl) amino) dodecanoate, Dipentyl6, 6'- ( (2- (4- (2- ( (2-(didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) azanediyl) dihexanoate, Pentyl6- ( (2- (4- (2- ( (2- (ditetradecylamino) ethyl) (tetradecyl) amino) ethyl) piperazin-1- yl) ethyl) (dodecyl) amino) hexanoate, Pentyl6- ( (2- (4- (2- ( (2-(didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) (dodecyl) amino) hexanoate, 2- (Didodecylamino) -1- (4- (N- (2- (didodecylamino) ethyl) -N-dodecylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, 2- (Didodecylamino) -1- (4- (N- (2- (didodecylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, 2- (Didodecylamino) -N- (2- (4- (2- (didodecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N-dodecylacetamide,( (2- ( (3’S , 4R) -3, 4-dihydroxypyrrolidin-1-yl) acetyl) azanediyl) bis (ethane-2, 1-diyl) (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -bis (octadeca-9, 12-dienoate) , 2-amino-N, N-dihexadecyl-3- (1H-imidazol-5-yl) propanamide, (2-amino-N, N-dihexadecyl-3- (1H-imidazol-5-yl) propanamide, methyl (9Z) -19- [2- (dimethylamino) ethyl] heptacos-9-enoate, methyl8- (2- {9- [2- (dimethylamino) ethyl] octadecyl} cyclopropyl) octanoate, methyl (9Z) -19- [2- (dimethylamino) ethyl] octacos-9-enoate, ethyl8- (2- {11- [ (dimethylamino) methyl] heptadecyl} cyclopropyl) octanoate, ethyl8- (2- {11- [ (dimethylamino) methyl] octadecyl} cyclopropyl) octanoate, di ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-l-yl) 3- ( ( (2- (dimethylamino) ethoxy) carbonyl) amino) pentanedioate, Heptyl6- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) hexanoate, ethyl8- (2- {11- [ (dimethylamino) methyl] nonadecyl} cyclopropyl) octanoate, Pentyl8- ( (2- (l- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) octanoate, ethyl8- (2- {11- [ (dimethylamino) methyl] icosyl} cyclopropyl) octanoate, ethyl8- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] pentadecyl} cyclopropyl) octanoate, 3- ( (2- (1- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) propyldecanoate, Heptyl6- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (tetradecyl) amino) hexanoate, ethyl8- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] hexadecyl} cyclopropyl) octanoate, Pentyl8- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-2-oxoethyl) (tetradecyl) amino) octanoate, ethyl8- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] heptadecyl} cyclopropyl) octanoate, methyl6- (2- (8- (2- (dimethylamino) -3- (nonyloxy) propoxy) octyl) cyclopropyl) hexanoate,methyl (9Z) -21- (dimethylamino) heptacos-9-enoate, methyl (9Z) -21- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} heptacos-9-enoate, (2R) -N, N-dimethyl-1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] dodecan-2-amine, (15Z, 18Z) -Ν, Ν-dimethyltetracosa-15, 18-dien-5-amine, ethyl8- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] octadecyl} cyclopropyl) octanoate, 3- ( (2- (4- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (tetradecyl) amino) propyldecanoate, ethyl4- (2- {11- [ (dimethylamino) methyl] icosyl} cyclopropyl) butanoate, ethyl8- (2- {7- [ (dimethylamino) methyl] hexadecyl} cyclopropyl) octanoate, 3- ( (3- (1- (3- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperidin-4-yl) propyl) (nonyl) amino) propylhexanoate, ethyl6- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] pentadecyl} cyclopropyl) hexanoate, 3- ( (3- (4- (3- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperazin-l-yl) -3-oxopropyl) (nonyl) amino) propylhexanoate, ethyl6- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] hexadecyl} cyclopropyl) hexanoate, 3- ( (2-  (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (4- (3- (dinonylamino) propyl) piperidin-1-yl) propan-1-one, Pentyl4- ( (3- (l- (3- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperidin-4-yl) propyl) (nonyl) amino) butanoate, ethyl6- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] heptadecyl} cyclopropyl) hexanoate,Pentyl4- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) butanoate, ethyl6- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] octadecyl} cyclopropyl) hexanoate, Pentyl4- ( ( (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) methyl) (nonyl) amino) butanoate, ethyl (9Z) -21- [ (dimethylamino) methyl] heptacos-9-enoate, Pentyl4- ( (2- (l- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) ethyl) (nonyl) amino) butanoate, ethyl (9Z) -21- [ (dimethylamino) methyl] octacos-9-enoate, ( (2- ( (3’S , 4R) -3, 4-dihydroxypyrrolidin-l-yl) acetyl) azanediyl) bis (ethane-2, 1-diyl) (9Z, 9'Z, 12Z, 12'Z) -bis (octadeca-9, 12-dienoate) , Pentyl4- ( (2- (l- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-3-yl) ethyl) (nonyl) amino) butanoate,ethyl (9Z) -21- [ (dimethylamino) methyl] nonacos-9-enoate, methyl6- (2- (8- (2- (dimethylamino) -3- (heptyloxy) propoxy) octyl) cyclopropyl) hexanoate, methyl (9Z) -21- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} octacos-9-enoate, methyl (9Z) -21- (dimethylamino) octacos-9-enoate, 2- (Didodecylamino) -1- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) ethanol, (2S) -N, N-dimethyl-1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] nonan-2-amine, (18Z, 21Z) -N, N-dimethylheptacosa-18, 21-dien-10-amine, ethyl (9Z) -21- [ (dimethylamino) methyl] triacont-9-enoate, ethyl (9Z) -19- [ (dimethylamino) methyl] pentacos-9-enoate, ethyl (9Z) -19- [ (dimethylamino) methyl] hexacos-9-enoate, ethyl (9Z) -19- [ (dimethylamino) methyl] heptacos-9-enoate, ethyl (9Z) -19- [ (dimethylamino) methyl] octacos-9-enoate, ethyl (5Z) -17- [ (dimethylamino) methyl] hexacos-5-enoate, ethyl (9Z) -17- [ (dimethylamino) methyl] hexacos-9-enoate, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (3- (2- (dinonylamino) ethyl) piperidin-l-yl) ethan-l-one, ethyl (7Z) -17- [ (dimethylamino) methyl] tricos-7-enoate, Dipentyl4, 4'- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) azanediyl) dibutyrate, Pentyl4- (nonyl (2- (4- (N-nonyl-N- (2- (nonyl (4-oxo-4- (pentyloxy) butyl) amino) ethyl) glycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) amino) butanoate, ethyl (7Z) -17- [ (dimethylamino) methyl] tetracos-7-enoate, ethyl (7Z) -17- [ (dimethylamino) methyl] pentacos-7-enoate, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -l- (3- ( (dinonylamino) methyl) pyrrolidin-1-yl) ethan-1-one, trans-3- [ (3, 7-dimethyloctyl) oxy] -1-methyl-4- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxypyrrolidine, methyl6- (2- (8- (2- (dimethylamino) -3- (hexyloxy) propoxy) octyl) cyclopropyl) hexanoate, methyl (9Z) -21- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} nonacos-9-enoate, methyl (9Z) -21- (dimethylamino) nonacos-9-enoate, (2S) -N, N-dimethyl-1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] tridecan-2-amine, (15Z, 18Z) -N, N-dimethyltetracosa-15, 18-dien-7-amine, ethyl (7Z) -17- [ (dimethylamino) methyl] hexacos-7-enoate, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -l- (3- (2- (dinonylamino) ethyl) pyrrolidin-1-yl) ethan-1-one, methyl6- (2- {11- [ (dimethylamino) methyl] icosyl} cyclopropyl) hexanoate, methyl10- (2- {7- [ (dimethylamino) methyl] hexadecyl} cyclopropyl) decanoate,methyl8- (2- {11-  [ (dimethylamino) methyl] heptadecyl} cyclopropyl) octanoate,methyl8- (2- {11- [ (dimethylamino) methyl] octadecyl} cyclopropyl) octanoate, methyl8- (2- {11- [ (dimethylamino) methyl] nonadecyl} cyclopropyl) octanoate, methyl8- (2- {11- [ (dimethylamino) methyl] icosyl} cyclopropyl) octanoate,Pentyl4- ( (3- (4- (3- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperazin-l-yl) -3-oxopropyl) (nonyl) amino) butanoate, methyl8- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] pentadecyl} cyclopropyl) octanoate, methyl8- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] hexadecyl} cyclopropyl) octanoate, 3- ( (2- (1- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) propylhexanoate, methyl8- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] heptadecyl} cyclopropyl) octanoate, methyl8- (2- (dimethylamino) -3- ( (6- ( (2-octylcyclopropyl) methoxy) -6-oxohexyl) oxy) propoxy) octanoate, Butyl5- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) pentanoate, trans-1-methyl-3- [ (12Z) -octadec-12-en-1-yloxy] -4- (octyloxy) pyrrolidine, methyl (9Z) -21- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} triacont-9-enoate, methyl (9Z) -21- (dimethylamino) triacont-9-enoate, 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (4- (dinonylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, MethylN- (2- (didodecylamino) ethyl) -N-nonylglycinate, 1- ( (2R, 3S, 5R) -3- (bis (hexadecyloxy) methoxy) -5- (5-methyl-2, 4-dioxo-3, 4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) tetrahydromethanesulfonate, (Z) -methyl16- (3- (decyloxy) -2- (dimethylamino) propoxy) hexadec-7-enoate,(2S) -1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] nonan-2-amine, (14Z, 17Z) -N, N-dimethyltricosa-14, 17-dien-6-amine, Propyl6- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) hexanoate, methyl7- (2- (dimethylamino) -3- ( (6- ( (2-octylcyclopropyl) methoxy) -6-oxohexyl) oxy) propoxy) heptanoate, methyl (7Z) -19- [ (dimethylamino) methyl] octacos-7-enoate, methyl (8Z) -19- [ (dimethylamino) methyl] octacos-11-enoate, Ethyl7- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) heptanoate, (2-octylcyclopropyl) methyl6- (2- (dimethylamino) -3- ( (5-methoxy-5-oxopentyl) oxy) propoxy) hexanoate,Methyl8- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) octanoate, methyl (9Z) -21- [ (dimethylamino) methyl] heptacos-9-enoate,(2-octylcyclopropyl) methyl6- (2- (dimethylamino) -3- (4-methoxy-4-oxobutoxy) propoxy) hexanoate, methyl (9Z) -21- [ (dimethylamino) methyl] octacos-9-enoate, 3- ( (2- (4- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) propylhexanoate, (Z) -methyl8- (2- (dimethylamino) -3- ( (6-oxo-6- (undec-2-en-1-yloxy) hexyl) oxy) propoxy) octanoate, methyl (9Z) -21- [ (dimethylamino) methyl] nonacos-9-enoate, Butyl5- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) pentanoate, (Z) -methyl7- (2- (dimethylamino) -3- ( (6-oxo-6- (undec-2-en-l-yloxy) hexyl) oxy) propoxy) heptanoate,Propyl6- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) hexanoate, methyl (9Z) -21- [ (dimethylamino) methyl] triacont-9-enoate, (Z) -undec-2-en-1-yl6- (2- (dimethylamino) -3- ( (5-methoxy-5-oxopentyl) oxy) propoxy) hexanoate, methyl (9Z) -19-  [ (dimethylamino) methyl] pentacos-9-enoate, Ethyl7- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) heptanoate, (Z) -undec-2-en-1-yl6- (2- (dimethylamino) -3- (4-methoxy-4-oxobutoxy) propoxy) hexanoate, methyl6- (2- (dimethylamino) -3- ( (6- ( (2-octylcyclopropyl) methoxy) -6-oxohexyl) oxy) propoxy) hexanoate, methyl (9Z) -19- [ (dimethylamino) methyl] hexacos-9-enoate, 3- (Dinonylamino) -1- (4- (3- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) propanoyl) piperazin-1-yl) propan-1-one, methyl (9Z) -19- [ (dimethylamino) methyl] heptacos-9-enoate, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (4- (ditetradecylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, (Z) -methyl6- (2- (dimethylamino) -3- ( (6-oxo-6- (undec-2-en-1-yloxy) hexyl) oxy) propoxy) hexanoate, methyl8- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2- (6-methoxy-6-oxohexyl) cyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) octanoate, methyl8- (2- {9- [ (dimethylamino) methyl] octadecyl} cyclopropyl) octanoate, 2- (Dinonylamino) -1- (4- (2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) ethyl) piperidin-1-yl) ethan-1-one, trans-1-methyl-3- [ (9Z) -octadec-9-en-1-yloxy] -4- (octyloxy) pyrrolidine, methyl (9Z) -19- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} pentacos-9-enoate, methyl (9Z) -19- (dimethylamino) pentacos-9-enoate, (Z) -methyl16- (2- (dimethylamino) -3- (nonyloxy) propoxy) hexadec-7-enoate, (2S) -1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] decan-2-amine, (12Z, 15Z) -N, N-dimethylhenicosa-12,15-dien-4-amine, methyl7- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2- (6-methoxy-6-oxohexyl) cyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) heptanoate, methyl (9Z) -19- [ (dimethylamino) methyl] octacos-9-enoate, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -1- (4- (2- (dinonylamino) ethyl) piperidin-1-yl) ethan-1-one, Methyl8- ( (2- (4- (dinonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (2- ( (8-methoxy-8-oxooctyl) (nonyl) amino) ethyl) amino) octanoate, methyl6- (2- (8- (2- (dimethylamino) -3- ( (5-methoxy-5-oxopentyl) oxy) propoxy) octyl) cyclopropyl) hexanoate, ethyl8- {2- [11- (dimethylamino) heptadecyl] cyclopropyl} octanoate, Methyl8- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (2- (4- (dinonylglycyl) piperazin-l-yl) -2-oxoethyl) amino) octanoate, methyl6- (2- (8- (2- (dimethylamino) -3- (4-methoxy-4-oxobutoxy) propoxy) octyl) cyclopropyl) hexanoate,ethyl8- {2- [11- (dimethylamino) octadecyl] cyclopropyl} octanoate, Methyl8- ( (2- ( (2- (4- (dinonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) ethyl) (nonyl) amino) octanoate, ethyl8- {2- [11- (dimethylamino) nonadecyl] cyclopropyl} octanoate, (Z) -methyl16- (2- (dimethylamino) -3- ( (8-methoxy-8-oxooctyl) oxy) propoxy) hexadec-7-enoate, Pentyl4- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) butanoate, ethyl8- {2- [11- (dimethylamino) icosyl] cyclopropyl} octanoate, (Z) -methyl16- (2- (dimethylamino) -3- ( (7-methoxy-7-oxoheptyl) oxy) propoxy) hexadec-7-enoate, Methyl8- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) octanoate, ethyl8- {2- [9- (dimethylamino) pentadecyl] cyclopropyl} octanoate, (Z) -methyl16- (2- (dimethylamino) -3- ( (5-methoxy-5-oxopentyl) oxy) propoxy) hexadec-7-enoate, (11E, 20Z, 23Z) -N, N-dimethylnonacosa-11, 20, 23-trien-10-amine, N, N-dimethyl-1- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] pentadecan-8-amine, ethyl8- {2- [9- (dimethylamino) hexadecyl] cyclopropyl} octanoate, 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) -l- (5- (dinonylglycyl) -2, 5-diazabicyclo [2.2.1] heptan- 2-yl) ethan-1-one, (Z) -methyl16- (2- (dimethylamino) -3- (4-methoxy-4-oxobutoxy) propoxy) hexadec-7-enoate, methyl6- (2- (8- (2- (dimethylamino) -3- ( (6-methoxy-6-oxohexyl) oxy) propoxy) octyl) cyclopropyl) hexanoate, ethyl8- {2- [9- (dimethylamino) heptadecyl] cyclopropyl} octanoate, 2- (Dinonylamino) -l- (5- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) -2, 5-diazabicyclo [2.2.1] heptan-2-yl) ethan-1-one, 1- [ (1S, 2R) -2-decylcyclopropyl] -N, N-dimethylpentadecan-6-amine, N1, N1, N2-Tri ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-l-yl) -N2- (2- (piperazin-l-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, ethyl8- {2- [9- (dimethylamino) octadecyl] cyclopropyl} octanoate, 1- [ (1R, 2S) -2-heptylcyclopropyl] -Ν, Ν-dimethyloctadecan-9-amine, (Z) -methyl16- (2- (dimethylamino) -3- ( (6-methoxy-6-oxohexyl) oxy) propoxy) hexadec-7-enoate, N1, N1, N2-Tri ( (Z) -octadec-9-en-l-yl) -N2- (2- (piperazin-l-yl) ethyl) ethane-l, 2-diamine, N, N-dimethyl-3- {7- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] heptyl} dodecan-1-amine, methyl8- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2- ( (2-pentylcyclopropyl) methyl) cyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) octanoate, ethyl4- {2- [11- (dimethylamino) icosyl] cyclopropyl} butanoate, trans-1-Methyl-3- [ ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienyl) oxy] -4-octyloxy-pyrrolidine, methyl (9Z) -19- (dimethylamino) hexacos-9-enoate, methyl (9Z) -19- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} hexacos-9-enoate, (Z) -methyl16- (2- (dimethylamino) -3- (heptyloxy) propoxy) hexadec-7-enoate, (2R) -1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] dodecan-2-amine, (13Z, 16Z) -N, N-dimethyldocosa-13, 16-dien-5-amine, Ν, Ν-dimethyl-1- [ (1R, 2S) -2-undecylcyclopropyl] tetradecan-5-amine, methyl7- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2- ( (2-pentylcyclopropyl) methyl) cyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) heptanoate, ethyl8- {2- [7- (dimethylamino) hexadecyl] cyclopropyl} octanoate, 2- (Didodecylamino) -N-dodecyl-N- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) acetamide, Ν, Ν-dimethyl-1- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] hexadecan-8-amine, N1- (2- (Piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tritetradecylethane-1, 2-diamine, methyl6- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2- ( (2-pentylcyclopropyl) methyl) cyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) hexanoate, ethyl6- {2- [9- (dimethylamino) pentadecyl] cyclopropyl} hexanoate, Ν, Ν-dimethyl-1- [ (1S, 2S) -2- { [ (1R, 2R) -2-pentylcyclopropyl] methyl} cyclopropyl] nonadecan-10-amine, N, N1, N2-Tridodecyl-N2- (2- (piperazin-l-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, methyl5- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2- ( (2-pentylcyclopropyl) methyl) cyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) pentanoate, ethyl6- {2- [9- (dimethylamino) hexadecyl] cyclopropyl} hexanoate, N, N-dimethyl-21- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] henicosan-10-amine, N, N, N2-Trinonyl-N2- (2- (piperazin-l-yl) ethyl) ethane-l, 2-diamine, methyl4- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2- ( (2-pentylcyclopropyl) methyl) cyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) butanoate,ethyl6- {2- [9- (dimethylamino) heptadecyl] cyclopropyl} hexanoate, Ν, Ν-dimethyl-1- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] nonadecan-10-amine, N1, N1, N2-Trihexyl-N2- (2- (piperazin-l-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, methyl8- (2- (dimethylamino) -3- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-l-yloxy) propoxy) octanoate, ethyl6- {2- [9- (dimethylamino) octadecyl] cyclopropyl} hexanoate, N1- (2- (4- (2- (Didodecylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tri ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yl) ethane-1, 2-diamine, methyl7- (2- (dimethylamino) -3- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) propoxy) heptanoate, ethyl (9Z) -21- (dimethylamino) heptacos-9-enoate, 1- [ (1S, 2R) -2-hexylcyclopropyl] -N, N-dimethylnonadecan-10-amine, 1-methyl18- [ (2Z) -non-2- en-1-yl] 9- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} octadecanedioate, N1- (2- (4- (2- (Didodecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tri ( (Z) -octadec-9-en-1-yl) ethane-l, 2-diamine, N, N-dimethyl-1- [ (1S, 2R) -2-octylcyclopropyl] heptadecan-8-amine, methyl6- (2- (dimethylamino) -3- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) propoxy) hexanoate, ethyl (9Z) -21- (dimethylamino) octacos-9-enoate, dimethyl (9Z) -19- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} heptacos-9-enedioate, N1- (2- (4- (2- (Ditetradecylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tritetradecylethane-1, 2-diamine, methyl5- (2- (dimethylamino) -3- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, l2-dien-1-yloxy) propoxy) pentanoate, ethyl8- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} -15- (2-octylcyclopropyl) pentadecanoate, ethyl (9Z) -21- (dimethylamino) nonacos-9-enoate, (13Z, 16Z) -N, N-dimethyl-3-nonyldocosa-13, 16-dien-1-amine,N1- (2- (4- (2- (Didodecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tritetradecylethane-1, 2-diamine, methyl9- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} -16- (2-octylcyclopropyl) hexadecanoate, methyl4- (2- (dimethylamino) -3- ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy) propoxy) butanoate, ethyl (9Z) -21- (dimethylamino) triacont-9-enoate, (12Z, 15Z) -N, N-dimethyl-2-nonylhenicosa-12, 15-dien-1-amine, methyl8- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2-octylcyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) octanoate, ethyl (9Z) -19- (dimethylamino) pentacos-9-enoate, ethyl (18Z, 21Z) -8- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} heptacosa-18, 21-dienoate, (16Z) -N, N-dimethylpentacos-16-en-8-amine, methyl (9Z) -19- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} heptacos-9-enoate, methyl (9Z) -19- (dimethylamino) heptacos-9-enoate, 2- (Didodecylamino) -1- (4- (2- ( (2- (didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, (Z) -methyl16- (2- (dimethylamino) -3- (hexyloxy) propoxy) hexadec-7-enoate, (2S) -1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] dodecan-2-amine, (16Z, 19Z) -N, N-dimethylpentacosa-16, 19-dien-8-amine, N1- (2- (4- (2- (Dinonylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tritetradecylethane-1, 2-diamine, methyl7- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2-octylcyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) heptanoate, methyl (19Z, 22Z) -9- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} octacosa-19, 22-dienoate, ethyl (9Z) -19- (dimethylamino) hexacos-9-enoate, (22Z) -N, N-dimethylhentriacont-22-en-10-amine, N1- (2- (4- (2- (Di ( (Z) -octadec-9-en-1-yl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1-tridodecyl ethane-1, 2- diamine, methyl5- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2-octylcyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) pentanoate, ethyl (9Z) -19- (dimethylamino) heptacos-9-enoate, (2-butylcyclopropyl) methyl12- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} henicosanoate, (20Z) -N, N-dimethylnonacos-20-en-10-amine, N1, N1, N2-Tridodecyl-N2- (2- (4- (2- (dodecyl ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-yl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) ethane-1, 2-diamine, methyl4- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2-octylcyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) butanoate, ethyl (9Z) -19- (dimethylamino) octacos-9-enoate, (2-octylcyclopropyl) methyl8- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} heptadecanoate, (24Z) -N, N-dimethyltritriacont-24-en-10-amine, N1- (2- (4- (2- (Ditetradecylamino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethane-1, 2-diamine, ethyl (5Z) -17- (dimethylamino) hexacos-5-enoate, (Z) -methyl8- (2- (dimethylamino) -3- (octadec-9-en-1-yloxy) propoxy) octanoate, (2Z) -hept-2-en-l-yl12- { [4-  (dimethylamino) butanoyl] oxy} henicosanoate, (17Z) -N, N-dimethylnonacos-17-en-10-amine, N1- (2- (4- (2- (Di ( (Z) -dodec-6-en-1-yl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethane-1, 2, -diamine, ethyl (9Z) -17- (dimethylamino) hexacos-9-enoate, (Z) -methyl7- (2- (dimethylamino) -3- (octadec-9-en-1-yloxy) propoxy) heptanoate, (2Z) -undec-2-en-1-yl8- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} heptadecanoate, (14Z) -N, N-dimethylnonacos-14-en-10-amine, ethyl (7Z) -17- (dimethylamino) tricos-7-enoate, (Z) -N1- (2- (4- (2- (Dodec-6-en-1-yl (dodecyl) amino) ethyl) piperazin-N, N-tridodecylethane-1, 2-diamine, (Z) -methyl5- (2- (dimethylamino) -3- (octadec-9-en-1-yloxy) propoxy) pentanoate, (2-hexylcyclopropyl) methyl10- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} nonadecanoate, (15Z) -N, N-dimethylheptacos-15-en-10-amine, ethyl (7Z) -17- (dimethylamino) tetracos-7-enoate, (Z) -methyl4- (2- (dimethylamino) -3- (octadec-9-en-1-yloxy) propoxy) butanoate, (2Z) -non-2-en-1-yl10- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} nonadecanoate, (20Z) -N, N-dimethylheptacos-20-en-10-amine, N1- (2- (4- (2- (Dioctylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-tridodecylethane-l, 2-diamine, methyl6- (2- (dimethylamino) -3- ( (8- (2-octylcyclopropyl) octyl) oxy) propoxy) hexanoate, ethyl6- [2- (9- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} octadecyl) cyclopropyl] hexanoate, ethyl (7Z) -17- (dimethylamino) pentacos-7-enoate, 1- [ (11Z, 14Z) -1-nonylicosa-11, 14-dien-1-yl] pyrrolidine, ethyl (7Z) -17- (dimethylamino) hexacos-7-enoate, (20Z, 23Z) -N-ethyl-N-methylnonacosa-20, 23-dien-10-amine,N, N-dimethylheptacosan-10-amine,methyl6- {2- [11- (dimethylamino) icosyl] cyclopropyl} hexanoate, methyl6- [2- (11- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} icosyl) cyclopropyl] hexanoate, (2-octylcyclopropyl) methyl6- (3- (decyloxy) -2- (dimethylamino) propoxy) hexanoate, methyl8- {2- [9- (dimethylamino) octadecyl] cyclopropyl} octanoate, methyl8- [2- (9- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} octadecyl) cyclopropyl] octanoate,methyl7- (2- (8- (2- (dimethylamino) -3- (octyloxy) propoxy) octyl) cyclopropyl) heptanoate, Heptadecan-9-yl8- ( (2-hydroxyethyl) (tetradecyl) amino) octanoate, 2- ( (2- (Didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) -1- (4- (2- (didodecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, (2S) -1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] undecan-2-amine, (17Z, 20Z) -N, N-dimethylhexacosa-17, 20-dien-9-amine, (18Z) -heptacos-18-en-10-yl4- (dimethylamino) butanoate, (2S) -1- ( {6- [3-cholest-5-en-3-yloxy] hexyl} oxy) -N, N-dimethyl-3- [ (9Z) -octadec-9-en-1-yloxy] propan-2-amine, methyl10- {2-[7- (dimethylamino) hexadecyl] cyclopropyl} decanoate, methyl10- [2- (7- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} hexadecyl) cyclopropyl] decanoate, (2S) -N, N-dimethyl-1- ( {8- [ (lR, 2R) -2- { [ (lS, 2S) -2-pentylcyclopropyl] methyl} cyclopropyl] octyl} oxy) tridecan-2-amine, (2-octylcyclopropyl) methyl6- (2- (dimethylamino) -3- (nonyloxy) propoxy) hexanoate, (19Z, 22Z) -N, N-dimethyloctacosa-19, 22-dien-7-amine, 4- ( (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) oxy) pentan-2-yldinonylglycinate,3-Hydroxybutan-2-yl- (2- (dimethylamino) ethyl) -N-nonyl, Di (heptadecan-9-yl) 8, 8'- (26, 28-dimethyl-11, 24, 30, 43-tetraoxo-10, 25, 29, 44-tetraoxa-19, 35-diazatripentacontane-19, 35-diyl) dioctanoate, Di (heptadecan-9-yl) 8, 8'- (26, 27-dimethyl-11, 24, 29, 42-tetraoxo-10, 25, 28, 43-tetraoxa-19, 34-diazadopentacontane-19, 34-diyl) dioctanoate, Di (heptadecan-9-yl) 8, 8'- (11, 24, 29, 42-tetraoxo-10, 25, 28, 43-tetraoxa-19, 34-diazadopentacontane-19, 34-diyl) dioctanoate, Di (heptadecan-9- yl) 8, 8'- ( (piperazine-1, 4-diylbis (5-oxopentane-5, 1-diyl) ) bis ( (8- (nonyloxy) -8-oxooctyl) azanediyl) ) dioctanoate, Di (heptadecan-9-yl) 15, 18-dimethyl-9, 24-bis (8- (nonyloxy) -8-oxooctyl) -14, 19-dioxo-9, 15, 18, 24-tetraazadotriacontanedioate, Di (heptadecan-9-yl) 15, 19-dimethyl-9, 25-bis (8- (nonyloxy) -8-oxooctyl) -14, 20-dioxo-9, 15, 19, 25-tetraazatritriacontanedioate, Di (heptadecan-9-yl) 15, 18-diethyl-9, 24-bis (8- (nonyloxy) -8-oxooctyl) -14, 19-dioxo-9, 15, 18, 24-tetraazadotriacontanedioate, N, N-dimethyl-3- { [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] methyl} dodecan-1-amine, methyl8- [2- (11- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} octadecyl) cyclopropyl] octanoate, methyl8- {2- [11- (dimethylamino) heptadecyl] cyclopropyl} octanoate (Compound18) , Heptadecan-9-yl8- ( (2-hydroxyethyl) (8- (nonyloxy) -8-oxooctyl) amino) octanoate, (2-octylcyclopropyl) methyl6- (2-(dimethylamino) -3- (heptyloxy) propoxy) hexanoate, (17Z) -N, N-dimethylhexacos-17-en-9- amine, N1- (2- (4- (2- (Didodecylamino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) -N1, N2, N2-trihexylethane-1, 2-diamine, N, N-dimethyl-2- { [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] methyl} undecan-1-amine, methyl8- {2- [11- (dimethylamino) octadecyl] cyclopropyl} octanoate, (2-octylcyclopropyl) methyl6- (2- (dimethylamino) -3- (hexyloxy) propoxy) hexanoate, (18Z) -N, N-dimethylheptacos-18-en-10-amine, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) ethyltetradecanoate, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) ethylnonanoate, TetradecylN- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycinate, NonylN- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycinate, 4- (2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) acetamido) butylpentanoate,1, 1'- (Piperazine-1, 4-diyl) bis (5- (didecylamino) pentan-1-one,2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -N-tetradecylacetamide, N-decyl-2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) , N1- (3- (3- (dinonylamino) propoxy) propyl) -N1, N2, N2-trinonylethane-l, 2-diamine, N1- (2- (dinonylamino) ethyl) -N, N8, N8-trinonyloctane-l, 8-diamine, methyl8- [2- (11- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} nonadecyl) cyclopropyl] octanoate,methyl8- {2- [11- (dimethylamino) nonadecyl] cyclopropyl} octanoate, (Z) -undec-2-en-1-yl6- (3- (decyloxy) -2- (dimethylamino) propoxy) hexanoate, (2R, 12Z, 15Z) -N, N-dimethyl-1- (undecyloxy) henicosa-12, 15-dien-2-amine, (21Z, 24Z) -N, N-dimethyltriaconta-21, 24-dien-9-amine, 2- (dinonylamino) -N- (4- (2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -N-methylacetamido) butyl) -N-methylacetamide, 7, 10-dimethyl-13, 16-dinonyl-6, 11-dioxo-4-tetradecyl-4, 7, 10, 13, 16-pentaazapentacosyldecanoate, 2- (dinonylamino) -N- (2- (2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -N-ethylacetamido) ethyl) -N-ethylacetamide,2- (dinonylamino) -N- (3- (2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -N-methylacetamido) propyl) -N-methylacetamide, 2- ( (2- (di ( (Z) -non-3-en-1-yl) amino) ethyl) ( (Z) -non-3-en-1-yl) amino) -N- (2- (2- (dinonylamino) -N-methylacetamido) ethyl) -N-methylacetamide, 2- (dinonylamino) -N- (2- (2- ((2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) acetamido) ethyl) acetamide, Pentyl8, 11-dimethyl-5, 14, 17-trinonyl-7, 12-dioxo-5, 8, 11, 14, 17-pentaazahexacosanoate,2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -N-methyl-N- (2- (methylamino) ethyl) acetamide, 2- (Dinonylamino) -N- (2- (2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) -N-methylacetamido) ethyl) -N-methylacetamide, 2- (Dinonylamino) -N-methyl-N- (2- (methylamino) ethyl) acetamide, 2- ( (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) oxy) ethyldinonylglycinate, 2- Hydroxyethyldinonylglycinate,methyl8- [2- (11- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} icosyl) cyclopropyl] octanoate,methyl8- {2- [11- (dimethylamino) icosyl] cyclopropyl} octanoate, (Z) -undec-2-en-1-yl6- (2- (dimethylamino) -3- (nonyloxy) propoxy) hexanoate, (2R, 12Z, 15Z) -1- (hexadecyloxy) -N, N-dimethylhenicosa- 12, 15-dien-2-amine, (22Z, 25Z) -N, N-dimethylhentriaconta-22, 25-dien-10-amine, 1, 1- (Piperazine-l, 4-diyl) bis (4- (didecylamino) butan-1-one) tert-Butyl4- (didecylamino) butanoate, Heptyl5- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-l-yl) -5-oxopentanoate5- (Heptyloxy) -5-oxopentanoicacid, Heptyl5- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -5-oxopentanoate, 5- (Heptyloxy) -5-oxopentanoic acid, (Z) -4- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (tetradecyl) amino) but-2-en-1-y1nonanoate (Z) -4-Hydroxybut-2-en-1-ylnonanoate, (Z) -3- ( (2- (4- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (tetradec-9-en-1-yl) amino) propyldecanoate, (Z) -Tetradec-9-en-1-ylmethanesulfonate, methyl8- [2- (9- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} pentadecyl) cyclopropyl] octanoate, methyl8- {2- [9- (dimethylamino) pentadecyl] cyclopropyl} octanoate,(Z) -undec-2-en-1-yl6- (2- (dimethylamino) -3- (heptyloxy) propoxy) hexanoate,(2R, 12Z, 15Z) -1- (hexyloxy) -N, N-dimethylhenicosa-12, 15-dien-2-amine, (16Z, 19Z) -N, N-dimethylpentacosa-16, 19-dien-6-amine, Methyl8- ( (2- (4- (N- (2- (Di ( (Z) -non-3-en-1-yl) amino) ethyl) -N- ( (Z) -non-3-en-1-yl) glycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) octanoate, tert-Butyl4- (nonylglycyl) piperazine-1-carboxylate, 3- ( (2- (4- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-l-yl) -2-oxoethyl) (tetradecyl) amino) propyl (Z) -dec-3-enoate (Z) -Dec-3-en-1-ol, 2- ( (2- (Di ( (Z) -non-3-en-1-yl) amino) ethyl) ( (Z) -non-3-en-1-yl) amino) -1- (4- (dinonylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one (Z) -1-Bromonon-4-ene, 3- ( (2- (4- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-oxoethyl) (dodecyl) amino) propyloctanoatert-Butyldodecylglycinate, S-Pentyl4- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) butanethioate, 3- ( (2- (l- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidine-1-yl) ethyl) (nonyl) amino) propyl3-methylhexanoate, tert-Butyl 4- (2- ( (3- ( (3-methylhexanoyl) oxy) propyl) (nonyl) amino) ethyl) piperidine, 1, 3- ( (2- (1- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (nonyl) amino) -2-methylpropylhexanoate, 3- ( (2- (4- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-oxoethyl) (nonyl) amino) propyl3-methylhexanoate, 3- ( (2- (4- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-oxoethyl) (nonyl) amino) -2-methylpropylhexanoate, methyl8- [2- (9- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} hexadecyl) cyclopropyl] octanoate, methyl8- {2- [9- (dimethylamino) hexadecyl] cyclopropyl} octanoate, (Z) -undec-2-en-1-yl6- (2- (dimethylamino) -3- (hexyloxy) propoxy) hexanoate, (2R, 12Z, 15Z) -1- (decyloxy) -N, N-dimethylhenicosa-12, 15-dien-2-amine, (17Z, 20Z) -N, N-dimethylhexacosa-17, 20-dien-7-amine, 2- ( (2- (Dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) ethyl1- (dinonylglycyl) piperidine-4-carboxylate, l- (2- (Dinonylamino) ethyl) 4- (2- ( (2- (dinonylamino) ethyl) (nonyl) amino) ethyl) cyclohexane-1, 4-dicarboxylate2- (Dinonylamino) ethan-1-ol, Methyl12- ( (2- (l- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) dodecanoate, tert-Butyl3- (2- ( (12- methoxy-12-oxododecyl) (tetradecyl) amino) ethyl) pyrrolidine-1-carboxylate, 3- ( (2- (1- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) propyldecanoate, tert-Butyl3- (2- ( (3- (decanoyloxy) propyl) (tetradecyl) amino) ethyl) pyrrolidine-1-carboxylate, Heptyl6- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) hexanoate, tert-Butyl3- (2- ( (6- (heptyloxy) -6-oxohexyl) (tetradecyl) amino) ethyl) pyrrolidine-1-carboxylate, Pentyl8- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) octanoate, tert-Butyl3- (2- (tetradecylamino) ethyl) pyrrolidine-1-carboxylate, Methyl12- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-3-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) dodecanoate, Butyl3- (2- ( (12-methoxy-12-oxododecyl) (tetradecyl) amino) ethyl) piperidine-1-carboxylate,3- ( (2- (1- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-3-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) propyldecanoate, Heptyl6- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-3-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) hexanoate,Pentyl8- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-3-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) octanoate, Pentyl6- ( (2- (4- (2- ( (2- (didodecylamino) ethyl) (dodecyl) amino) ethyl) piperazin-l-yl) ethyl) (dodecyl) amino) hexanoate, Pentyl6-bromohexanoate, methyl8- [2- (9- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} heptadecyl) cyclopropyl] octanoate, methyl8- {2- [9- (dimethylamino) heptadecyl] cyclopropyl} octanoate, (2S, 12Z, 15Z) -N, N-dimethyl-1- (octyloxy) henicosa-12, 15-dien-2-amine, (2-octylcyclopropyl) methyl6- (2- (dimethylamino) -3- (octyloxy) propoxy) hexanoate, (18Z, 21Z) -N, N-dimethylheptacosa-18, 21-dien-8-amine, trans-1-methyl-3, 4-bis ( ( (Z) -hexadec-9-enoyloxy) methyl) pyrrolidine, (Z) -Non-2-en-l-yl4- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (tetradecyl) amino) butanoate, trans-1-methyl-3, 4-bis ( ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienoyloxy) methyl) pyrrolidine, Methyl12- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) (tetradecyl) amino) dodecanoate, ethyl (7Z) -17- [2- (dimethylamino) ethyl] hexacos-7-enoate, trans-1-methyl-3, 4-bis ( ( (Z) -octadeca-9-enoyloxy) methyl) pyrrolidine, methyl6- (2- (1- (N- (2- (dimethylamino) ethyl] icosyl) cyclopropyl) hexanoate, Methyl12- ( (2- (1- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyl) (tetradecyl) amino) dodecanoate, methyl10- (2-N-2- (dimethylamino) ethyl] hexadecyl} cyclopropyl) decanoate, methyl8- (2- {N1-2- (dimethylamino) ethyl] heptadecyl} cyclopropyl) octanoate, 2- (1- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperidin-4-yl) ethyldinonylglycinate, tert-Butyl4- (2- ( (dinonylglycyl) oxy) ethyl) piperidine-1-carboxylate, methyl8- (2- {N1-2- (dimethylamino) ethyl] octadecyl} cyclopropyl) octanoate, methyl8- (2- (N1-2- (dimethylamino) ethyl] nonadecyl} cyclopropyl) octanoate, 1- (piperazine-1, 4-diyl) bis (2- (dinonylamino) ethan-1-one) , methyl8- [2- {N1-2- (dimethylamino) ethyl] icosyl} cyclopropyl) octanoate, methyl8- (2- {9- [2- (dimethylamino) ethyl] pentadecyl} cyclopropyl) octanoate,methyl (7Z) -19- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} octacos-7-enoate, methyl (7Z) -19- (dimethylamino) octacos-7- enoate, cis-1-methyl-3- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] -4- (octyloxy) pyrrolidine, 2-  (Didodecylamino) -1- (4- (N- (2- (didodecylamino) ethyl) -N-dodecylglycyl) piperazin-1-yl) ethan-1-one, (Z) -undec-2-en-l-yl6- (2- (dimethylamino) -3- (octyloxy) propoxy) hexanoate, (N, N-dimethyl-1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] decan-2-amine (Compound11) , (19Z, 22Z) -N, N-dimethyloctacosa-19, 22-dien-9-amine, methyl8- (2- {9- [2- (dimethylamino) ethyl] hexadecyl} cyclopropyl) octanoate,5- ( (2- (4- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-oxoethyl) (nonyl) amino) pentylmethylcarbonate, methyl8- (2- {9- [2- (dimethylamino) ethyl] heptadecyl} cyclopropyl) octanoate, methyl (7Z) -19- [2- (dimethylamino) ethyl] octacos-7-enoate, (Z) -Pent-2-en-1-y14- ( (2- (4- (N- (2- (dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) piperazin-l-yl) -2-oxoethyl) (nonyl) amino) butanoate, methyl (11Z) -19- [2- (dimethylamino) ethyl] octacos-11-enoate, methyl (9Z) -21- [2- (dimethylamino) ethyl] heptacos-9-enoate, methyl (9Z) -21- [2- (dimethylamino) ethyl] octacos-9-enoate, methyl (9Z) -21- [2- (dimethylamino) ethyl] nonacos-9-enoate, 2- (1- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) ethyldinonylglycinate, methyl (9Z) -21- [2- (dimethylamino) ethyl] triacont-9-enoate, (1- (N- (2- (Dinonylamino) ethyl) -N-nonylglycyl) pyrrolidin-3-yl) methyldinonylglycinate,methyl (9Z) -19- [2- (dimethylamino) ethyl] pentacos-9-enoate, methyl (9Z) -19- [2- (dimethylamino) ethyl] hexacos-9-enoate, methyl6- (2- (8- (3- (decyloxy) -2- (dimethylamino) propoxy) octyl) cyclopropyl) hexanoate, methyl (11Z) -19- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} octacos-11-enoate, methyl (11Z) -19- (dimethylamino) octacos-11-enoate, (2S) -N, N-dimethyl-1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] dodecan-2-amine, (14Z, 17Z) -N, N-dimethyltricosa-14, 17-dien-4-amine, Methyldi ( (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dienyl) amine, methyl (9Z) -19- { [4- (dimethylamino) butanoyl] oxy} octacos-9-enoate, methyl (9Z) -19- (dimethylamino) octacos-9-enoate, (Z) -methyl17- (2- (dimethylamino) -3- (octyloxy) propoxy) heptadec-8-enoate, (3R, 4R) -3, 4-bis ( (Z) -hexadec-9-enyloxy) -1-methylpyrrolidine, (2S) -N, N-dimethyl-1- [ (9Z, 12Z) -octadeca-9, 12-dien-1-yloxy] undecan-2-amine, (20Z, 23Z) -nonacosa-20, 23-dien-10-yl4- (dimethylamino) butanoate, (20Z, 23Z) -N, N-dimethylnonacosa-20, 23-dien-10-amine, 3- ( (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yloxy) -N, N-dimethylpropan-l-amine, 3- ( (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yloxy) -N, N-dimethylpropan-1-amine, (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yl4- (dimethylamino) butanoate) , (6Z, 16Z) -12- ( (Z) -dec-4-enyl) docosa-6, 16-dien-11-yl5- (dimethylamino) pentanoate, (6Z, 16Z) -12- ( (Z) -dec-4-enyl) docosa-6, 16-dien-11-yl5- (dimethylamino) pentanoate, (6Z, 16Z) -12- ( (Z) -dec-4-enyl) docosa-6, 16-dien-11-yl5- (dimethylamino) pentanoate, L-arginine-alpha- (2, 3-dilauryloxy) propylamide, L-lysine-alpha- (2, 3-dilauryloxy) propylamide, 2, 3-dioleyloxypropylamine, 2, 3-distearyloxypropylamine, 2, 3-dilauryloxypropylamine, dilinoleylmethyl4- (dimethylamino) propylether) , dilinoleylmethyl4- (dimethylamino) butylether) , and 2, 2-dilinoleyl-4- (2-dimethylaminoethyl) - [1, 3] -dioxolane. Non-cationic lipid or lipid-like material

[0107] Examples of non-cationic lipid or lipid-like material include, but are not limited to 1, 2-di-O-octadecenyl-sn-glycero-3-phosphocholine (18: 0 Diether PC) , DSPC but with 3 unsaturated  double bonds per tail (18: 3 PC) , Acylcarnosine (AC) , 1-hexadecyl-sn-glycero-3-phosphocholine (C16 Lyso PC) , N-oleoyl-SPM (C18: l) , N-lignocerylSPM (C24: 0) , N-nervacylC (C24: l) , cetylphosphate (Cet-P) , cholesterolhemisuccinate (CHEMS) , cholesterol (Chol) , Cholesterolhemidodecane dicarboxylicacid (Chol-C12) , 12-Cholesteryloxycarbonylaminododecanoicacid (Chol-C13N) , Cholesterolhemioxalate (Chol-C2) , Cholesterolhemimalonate (Chol-C3) , N- (Cholesteryl-oxycarbonyl) glycine (Chol-C3N) , Cholesterolhemiglutarate (Chol-C5) , Cholesterolhemiadipate (Chol-C6) , Cholesterolhemipimelate (Chol-C7) , Cholesterolhemisuberate (Chol-C8) , Cardiolipid (CL) , 1, 2-bis (tricosa-10, 12-diynoyl) -sn-glycero-3-phosphocholine (DC8-9PC) , dicetylphosphate (DCP) , dihexadecylphosphate (DCP1) , 1, 2-Dipalmitoyglycerol-3-hemisuccinate (DGSucc) , short-chainbis-n-heptadecanoylphosphatidylcholine (DHPC) , dihexadecoylphosphoethanolamine (DHPE) , 1, 2-dilinoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DLPC) , l, 2-dilauroyl-sn-glycero-3-PE (DLPE) , Dimyristoylglycerolhemisuccinate (DMGS) , dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) , dimyristoylphosphoethanolamine (DMPE) , dimyristoylphosphatidylglycerol (DMPG) , dioleyloxybenzylalcohol (DOBA) , 1, 2-dioleoylglyceryl-3-hemisuccinate (DOGHEMS) , N- [2- (2- {2- [2- (2, 3-Bis-octadec-9-enyloxy-propoxy) -ethoxy] -ethoxy} -ethoxy) -ethyl] -3- (3, 4, 5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydro-pyran-2-ylsulfanyl) -propionamide (DOGP4αMan) , dioleoylphosphatidylcholine (DOPC) , dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE) , dioleoyl-phosphatidylethanolamine4- (N-maleimidomethyl) -cyclohexane-1-carboxylate (DOPE-mal) , dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG) , 1, 2-dioleoyl-sn-glycero-3- (phospho-L-serine) (DOPS) , acell-fusogenicphospholipid (DPhPE) , dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) , dipalmitoylphosphatidylethanolamine (DPPE) , dipalmitoylphosphatidylglycerol (DPPG) , dipalmitoylphosphatidylserine (DPPS) , distearoylphosphatidylcholine (DSPC) , distearoyl-phosphatidyl-ethanolamine (DSPE) , distearoylphosphoethanolamineimidazole (DSPEI) , 1, 2-diundecanoyl-sn-glycero-phosphocholine (DUPC) , eggphosphatidylcholine (EPC) , N-histidinylcholesterolcarbamate (HCChol) , histaminedistearoylglycerol (HDSG) , N-histidinylcholesterolhemisuccinate (HistChol) , 1, 2-Dipalmitoylglycerol-hemisuccinate-Nα-Histidinyl-Hemisuccinate (HistSuccDG) , N- (5'-hydroxy-3'-oxypentyl) -10, 12-pentacosadiynamide (h-Peg1-PCDA) , 2- [1-hexyloxyethyl] -2-devinylpyropheophorbide-a (HPPH) , hydrogenatedsoybeanphosphatidylcholine (HSPC) , 1, 2-Dipalmitoylglycerol-Oα-histidinyl-Nα-hemisuccinate (IsohistsuccDG) , mannosializeddipalmitoylphosphatidylethanolamine (ManDOG) , 1, 2-Dioleoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N- [4- (p-maleimidomethyl) cyclohexane-carboxamide] (MCC-PE) , 1, 2-diphytanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (ME 16.0 PE) , 1-myristoyl-2-hydroxy-sn-glycero-phosphocholine (MHPC) , athiol-reactivemaleimide head group lipid, 1, 2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- [4- (p-maleimidophenyl) butyramide (MPB-PE) , NervonicAcid (NA) , sodiumcholate (NaChol) , 1, 2-dioleoyl-sn-glycero-3- [phosphoethanolamine-N-dodecanoyl (NC12-DOPE) , ND98, N-glutarylphosphatidylethanolamine (NG-PE) , N-hydroxysulfosuccinimide (NHS-'x') , dicarboxylicacid-derivatized phosphatidylethanolamines (NωPE-'x') , OleicAcid (OA) , 1-oleoyl-2-cholesterylhemisuccinoyl-sn-glycero-3- phosphocholine (OChemsPC) , phosphatidicacid (PA) , phosphatidylethanolaminelipid (PE) , PElipidconjugatedwithpolyethyleneglycol (PEG) , polyethyleneglycol-distearoylphosphatidylethanolaminelipid (PEG-PE) , phosphatidylglycerol (PG) , partiallyhydrogenatedsoyphosphatidylchloline (PHSPC) , phosphatidylinositollipid (PI) , phosphotidylinositol-4-phosphate (PIP) , palmitoyloleoylphosphatidylcholine (POPC) , phosphatidylethanolamine (POPE) , palmitoyloleoylphosphatidylglycerol (POPG) , phosphatidylserine (PS) , lissaminerhodamineB-phosphatidylethanolaminelipid (Rh-PE) , purifiedsoy-derivedmixtureofphospholipids (SIOO) , phosphatidylcholine (SM) , 18-1-transPE, 1-stearoyl-2-oleoyl-phosphatidylethanolamine (SOPE) , soybeanphosphatidylcholine (SPC) , sphingomyelins (SPM) , alpha-alpha'-trehalose6, 6'-dibehenate (TDB) , l, 2-dielaidoyl-sn-glycero-3-phophoethanolamine (transDOPE) , ( (23S, 5R) -3- (bis (hexadecyloxy) methoxy) -5- (5-methyl-2, 4-dioxo-3, 4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) tetrahydrofuran-2-yl) methylmethylphosphate, 1, 2-diarachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1, 2-diarachidonoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, 1, 2-didocosahexaenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1, 2-didocosahexaenoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, 1, 2-dilinolenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1, 2-dilinolenoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, 1, 2-dilinoleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, 1, 2-dioleyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, 1, 2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, 16-O-monomethylPE, 16-O-dimethylPE, and dioleylphosphatidylethanolamine.

[0108] In some embodiments, the disclosure relates to a composition comprising a plurality of RNA-lipid particles, wherein each particle comprises:

[0109] (i) RNA;

[0110] (ii) a cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material;

[0111] (iii) a polysarcosine-lipid conjugate or a conjugate of polysarcosine and a lipid-like material; and

[0112] (iv) a non-cationic lipid or lipid-like material;

[0113] wherein,

[0114] the cationic or cationically lipid or lipid like material comprises from about 35 mol %to about 40 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0115] the polysarcosine-lipid conjugate or conjugate of polysarcosine and a lipid-like material comprises from about 5 mol %or less of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0116] the non-cationic lipid or lipid-like material comprises from about 50 mol %to about 60 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0117] preferably, the particles optionally further comprise a polyethyleneglycol-lipid conjugate or a conjugate of polyethyleneglycol and a lipid-like material.

[0118] In some embodiments, the cationic or cationically lipid or lipid like material may comprise from about 35 mol %to about 40 mol %, for example about 35 mol %, about 36 mol %, about 37 mol %, about 38 mol %, about 39 mol %, about 40 mol %, of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles.

[0119] In some embodiments, the polysarcosine-lipid conjugate or conjugate of polysarcosine and a lipid-like material may comprise about 5 mol %or less, for example about 5 mol %, about 4.5 mol %, about 4 mol %, about 3.5 mol %, about 3 mol %, about 2.5 mol %, of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles.

[0120] In some embodiments, the non-cationic lipid or lipid-like material may comprise from about 50 mol %to about 60 mol %, for example about 50 mol %, about 51 mol %, about 52 mol %, about 53 mol %, about 54 mol %, about 55 mol %, about 56 mol %, about 57 mol %, about 58 mol %, about 59 mol %, about 60 mol %, of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles.

[0121] In some embodiments, the non-cationic lipid or lipid-like material is a phospholipid.

[0122] In some embodiments, the non-cationic lipid or lipid-like material is a cholesterol or cholesterol derivative.

[0123] In one embodiment, the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a mixture of a phospholipid and cholesterol or a cholesterol derivative.

[0124] In one embodiment, the present disclosure relates to a composition comprising a plurality of RNA-lipid particles, wherein each particle comprises:

[0125] (i) RNA;

[0126] (ii) a cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material;

[0127] (iii) a polysarcosine-lipid conjugate or a conjugate of polysarcosine and a lipid-like material;

[0128] (iv) a phospholipid; and

[0129] (v) cholesterol or a cholesterol derivative,

[0130] wherein,

[0131] the cationic or cationically lipid or lipid like material comprises from about 35 mol %to about 40 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0132] the polysarcosine-lipid conjugate or conjugate of polysarcosine and a lipid-like material comprises about about 5 mol %or less of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0133] the phospholipid comprises from about 15 mol %to about 20 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles; the cholesterol comprises from about 35  mol %to about 40 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0134] preferably, the particles optionally further comprise a polyethyleneglycol-lipid conjugate or a conjugate of polyethyleneglycol and a lipid-like material.

[0135] In some embodiments, the phospholipid may comprise from about 15 mol %to about 20 mol %, for example about 15 mol %, about 16 mol %, about 17 mol %, about 18 mol %, about 19 mol %, about 20 mol %, of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;

[0136] In some embodiments, the cholesterol or a cholesterol derivative may comprise from about 35 mol %to about 40 mol %, for example about 35 mol %, about 36 mol %, about 37 mol %, about 38 mol %, about 39 mol %, about 40 mol %, of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles.

[0137] In some embodiments, the polysarcosine-lipid conjugate or a conjugate of polysarcosine and a lipid-like material comprises the following general formula (I) :

[0138] wherein R1 is optionally substituted C10-C18 alkyl;

[0139] R2 is independently H or methyl;

[0140] R3 is optionally substituted H, methyl, acetyl, or a functional group comprising a hydrophobic or hydrophilic group;

[0141] n is ranging from 10 to 50.

[0142] In some embodiment, the RNA is mRNA. As used herein, the term “Messenger RNA” (mRNA) refers to any polynucleotide that encodes a (at least one) polypeptide (anaturally-occurring, non-naturally-occurring, or modified polymer of amino acids) and can be translated to produce the encoded polypeptide in vitro, in vivo, in situ or ex vivo. The skilled artisan will appreciate that, except where otherwise noted, polynucleotide sequences set forth in the instant application will recite “T” s in a representative DNA sequence but where the sequence represents RNA (e.g., mRNA) , the “T” s would be substituted for “U” s. Thus, any of the RNA polynucleotides encoded by a DNA identified by a particular sequence identification number may also comprise the corresponding RNA (e.g., mRNA) sequence encoded by the DNA, where each “T” of the DNA sequence is substituted with “U. ”

[0143] In some embodiments, the particles are nanoparticles, the RNA-lipid particles can be characterized by their size. In some embodiments, the size of an RNA-lipid particle can be  defined as the diameter of its largest circular cross section, referred to herein simply as its diameter. In certain embodiments, the RNA-lipid particles may have a diameter between about 35 nm to about 2400 nm, preferably about 60 nm to about 250 nm. In certain embodiments, the RNA-lipid particle may have diameters ranging between about 60 to about 200 nm, about 60 nm to about 150 nm, about 60 nm to about 100 nm, about 70 nm to about 150 nm, or about 80 nm to about 150 nm, about 90 nm to about 150 nm, about 100 nm to about 150 nm, about 110 nm to about 150 nm, about 120 nm to about 150 nm, about 130 nm to about 150 nm, or about 140 nm to about 150 nm.

[0144] In some embodiments, uniformity may be expressed in certain embodiments as the polydispersity index (PDI) of the population. In certain embodiments, uniformity may be expressed in certain embodiments as the disparity  of the population. The terms “polydispersity index” and “disparity” are understood herein to be equivalent and may be used interchangeably. In certain embodiments, a population of RNA-lipid particle resulting from a given formulation will have a PI of between about 0.1 and 1. In certain embodiments, a population of RNA-lipid particles resulting from a giving formulation will have a PI of less than about 1, less than about 0.5, less than about 0.4, less than about 0.3, less than about 0.2, less than about 0.1. In certain embodiments, a population of RNA-lipid particles resulting from a given formulation will have a PI of between about 0.1 to 1, 0.1 to 0.8, 0.1 to 0.6, 0.1 to 0.4, 0.1 to 0.2, 0.2 to 1, 0.2 to 0.8, 0.2 to 0.6, 0.2 to 0.4, 0.4 to 1, 0.4 to 0.8, 0.4 to 0.6, 0.6 to 1, 0.6 to 0.8, and 0.8 to 1.

[0145] In some embodiments, the RNA-lipid particle may fully or partially encapsulate a cargo, such as nucleic acid constructs of the present disclosure. In certain embodiments, essentially 0%of the cargo present in the final formulation is exposed to the environment outside of the RNA-lipid particle (i.e., the cargo is fully encapsulated) . In certain embodiments, the cargo is associated with the RNA-lipid particle but is at least partially exposed to the environment outside of the RNA-lipid particle. In certain embodiments, the RNA-lipid particle may be characterized by the %of the cargo not exposed to the environment outside of the RNA-lipid particle, e.g., the encapsulation efficiency. For the sake of clarity, an encapsulation efficiency of about 100%refers to an RNA-lipid particle formulation where essentially all the cargo is fully encapsulated by the RNA-lipid particle, while an encapsulation rate of about 0%refers to an RNA-lipid particle where essentially none of the cargo is encapsulated in the RNA-lipid particle, such as with an RNA-lipid particle where the cargo is bound to the external surface of the RNA-lipid particle. In certain embodiments, an RNA-lipid particle may have an encapsulation efficiency of less than about 100%, less than about 95%, less than about 85%, less than about 80%, less than about 75%, less than about 70%, less than about 65%, less than about 60%, less than about 55%, less than about 50%, less than about 45%, less than about 40%, less than about 35%, less than about 30%, less than about 25%, less than about 20%, less than about 15%, less than about 10%, or less than 5%. In certain embodiments, an RNA-lipid particle may have an encapsulation efficiency of between about 90 to 100%, 80 to 100%, 70 to 100%, 60 to 100%, 50 to 100%, 40 to 100%, 30 to 100%, 20 to 100%, 10 to 100%, 80 to 90%, 70 to  90%, 60 to 90%, 50 to 90%, 40 to 90%, 30 to 90%, 20 to 90%, 10 to 90%, 70 to 80%, 60 to 80%, 50 to 80%, 40 to 80%, 30 to 80%, 20 to 80%, 10 to 80%, 60 to 70%, 50 to 70%, 40 to 70%, 30 to 70%, 20 to 70%, 10 to 70%, 40 to 50%, 30 to 50%, 20 to 50%, 10 to 50%, 30 to 40%, 20 to 40%, 10 to 40%, 20 to 30%, 10 to 30%, and 10 to 20%.

[0146] Examples

[0147] The disclosure is further described by the following illustrative examples. The examples do not limit the disclosure in any way. They merely serve to clarify the disclosure.

[0148] Example 1: Materials and Methods

[0149] 1. Materials

[0150] mRNAs that encode for luciferase or rabies glycoprotein (G) were synthesized in house by in vitro transcription method. The ionizable cationic lipids DLin-MC3-DMA (MC3, (6Z, 9Z, 28Z, 31Z) -Heptatriaconta-6, 9, 28, 31-tetraen-19-yl 4- (dimethylamino) butanoate) , SM-102 (9-Heptadecanyl 8- { (2-hydroxyethyl) [6-oxo-6 (undecyloxy) hexyl] amino} octanoate) , ALC-0315 ( [ (4-Hydroxybutyl) azanediyl] di (hexane-6, 1-diyl) bis (2-hexyldecanoate) , and C12-200 (1, 1 ‘- ( (2- (4- (2- ( (2- (bis (2-hydroxydodecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydodecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethyl) azanediyl) bis (dodecan-2-ol) ) were purchased from SINOPEG. The ionizable cationic lipid 3DP-DMA ( (6Z, 16Z) -12- ( (Z) -dec-4-en-1-yl) docosa-6, 16-dien-11-yl 5- (dimethyl amino) pentanoate) was provided in house. The phospholipids DSPC and DOPE were purchased from Avanti Polar Lipids. Cholesterol was purchased from Sigma Aldrich. Polysarcosine conjugated lipids were synthesized in house except polysarcosine19 which was purchased from SINOPEG. DMG-PEG2000 was purchased from Avanti polar Lipids.

[0151] 2. Synthesis of polysarcosine conjugated lipids

[0152] 2.1 Synthesis of EVB-001 (pSar11) .

[0153] Resin loading (Step 1)

[0154] A mixture of 2-chlorotrityl chloride resin beads (3 g, 100-200 mesh, 1%DVB, 0.4-1.2 mmol / g) was swollen in DMF (10 mL) for 10 min. N- ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) -N-methylglycine (3.36 g, 10.8 mmol) dissolved in DMF (20 mL) and DIPEA (1.88 mL, 10.8 mmol) were added. The reaction vessel was agitated for 16 hours at room temperature. After draining, the resin was washed with DMF (20 mL × 3) . The resin was used in the next step directly.

[0155] Fmoc-Sar-OH coupling procedure (Step 2 and Step 3)

[0156] A mixture of the resin in 20%Piperidine in DMF (20 mL) was agitated for 1 hour at room temperature. After draining, the resin was washed with DMF (20 mL × 3) . To the resin were added a solution of N- ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) -N-methylglycine (3.36 g, 10.8 mmol) , HATU (5.47 g, 14.4 mmol) and DIEA (1.88 mL, 10.8 mmol) in DMF (30 mL) . The reaction vessel was agitated for 1 hours and the resin was extensively washed with DMF (20 mL × 3) . The resin was used in the next step directly. Repeat step 2 and step 3 until desired oligomer length was obtained.

[0157] Resin cleavage (Step 4)

[0158] To a stirred solution of the resin in DCM (30 mL) was added TFA (6 mL) at room temperature, the reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. After filtered, the filtrate was concentrated under reduced pressure. The crude product was purified by Prep-HPLC with the following conditions: (Waters 3767, Column: Shim-pack Scepter C18-120, 20.0*250mm, 5um; Mobile Phase A: 0.05%TFA / H2O, B: ACN; flow rate: 20ml / min; gradient: 34-34%; Retention Time: 7.5-8.1min of 17min) . This resulted in desired product (250 mg) .

[0159] LC-MS: RT = 1.493 min, m / z = 1022.6 [M + H] + ;

[0160] Preparation of EVB-001 (Step 5)

[0161] To a stirred solution of EVB-001-10 (300 mg, 0.29 mmol) in DMF (5 mL) were added HATU (330 mg, 0.87 mmol) and DIEA (112 mg, 0.87 mmol) at 0 ℃. The resulting mixture was stirred for 0.5 hours at 0 ℃. To the above mixture was added tridecan-1-amine (69.3 mg, 0.35 mmol) at 0 ℃. The mixture was stirred for 0.5 hours at room temperature. The resulting mixture was diluted with water (100 mL) and extracted with EtOAc (60 mL × 3) . The combined organic layers were washed with brine (150 mL × 1) , dried over anhydrous Na2SO4. After filtration, the filtrate was concentrated under vacuum. The residue was purified by C18 column chromatography, eluted with ACN: Water (0.1%FA) = 30%-80%gradient in 20 min; detector, UV 214 nm. This resulted in desired product (240 mg, 65.9%) as a white solid.

[0162] LC-MS: RT = 2.25 min, m / z = 602.6 [M / 2 + H] + ;

[0163] Preparation of EVB-001 (pSar11) (Step 6)

[0164] To a mixture of EVB-001-1 (200 mg, 0.17 mmol) in DMF (5 mL) was added piperidine (1 mL) in portions at room temperature. The resulting mixture was stirred for 1 hour at room temperature. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified  by C18 column chromatography eluted with ACN: Water (0.1%FA) =5%-70%gradient in 25 min; detector, UV 214 nm to afford product (120 mg, 72.8%) as a white solid.

[0165] LC-MS: RT = 1.412 min, m / z = 982.2 [M + H] + ;

[0166] 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.39 -3.86 (m, 22 H) , 3.10 -2.70 (m, 35 H) , 2.40 (s, 1 H) , 2.34 (s, 1 H) , 1.38 (s, 2 H) , 1.24 (s, 20 H) , 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3 H) .

[0167] 2.2 Synthesis of EVB-003 (pSar23)

[0168] Preparation of EVB-003-1 (Step 1)

[0169] To a mixture of EVB-003-SM1 (200 mg, 0.18mmol) and EVB-001 (211 mg, 0.216 mmol) in DMF (5 mL) were added HATU (205 mg, 0.54 mmol) and DIEA (69.7 mg, 0.54 mmol) in portions at room temperature under air atmosphere. The resulting mixture was stirred for 5 hours at room temperature under air atmosphere. Desired product could be detected by LCMS. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by C18 column chromatography eluted with ACN: Water (0.1%FA) = 30%-70%gradient in 20 min; detector, UV 254 nm to afford product (210 mg, 54.7%) as a white solid.

[0170] LC-MS: RT = 2.01 min, m / z = 1029.2 [M / 2 + H] + ;

[0171] Preparation of EVB-003 (pSar23) (Step 2)

[0172] To a mixture of EVB-003-1 (130 mg, 0.063 mmol) in DMF (3 mL) was added piperidine (1 mL) in portions at room temperature. The resulting mixture was stirred for 1 hour at room temperature. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by C18 column chromatography eluted with ACN: Water (0.1%FA) = 30%-70%gradient in 20 min; detector, UV 214 nm to afford product (80 mg, 68.3%) as a white solid.

[0173] LC-MS: RT = 1.61 min (method A) , m / z = 1835.1 [M + H] +;

[0174] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 4.45 –3.84 (m, 46 H) , 3.14 –2.65 (m, 71 H) , 2.45 (d, J = 5.6 Hz, 2 H) , 1.37 (s, 2 H) , 1.24 (s, 20 H) , 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3 H) .

[0175] 2.3 Synthesis of EVB-012 (pSar17) .

[0176] Preparation of EVB-012-2 (Step 1)

[0177] To a mixture of pSar6-Fmoc (89.69 mg, 0.13 mmol) and DIEA (0.107 mL, 0.61 mmol) in DMF (3 mL) was added HATU (139.50 mg, 0.37 mmol) in portions at 0 ℃. The resulting mixture was stirred for 30 min at 0 ℃. To the above mixture was added EVB-001 (120 mg, 0.12 mmol) at 0 ℃. The resulting mixture was stirred for 2 hours at room temperature. The residue was purified by C18 column chromatography eluted with ACN (0.1%TFA) in water (0.1%TFA) (5%-95%) to afford desired product (140 mg, 70.2%) as colorless oil.

[0178] LC-MS: RT = 2.099 min, m / z = 815.8 [M / 2 + H] +;

[0179] Preparation of EVB-012-0 (Step 2)

[0180] To a mixture of EVB-012-2 (140 mg, 0.09 mmol) in DMF (2 mL) was added piperidine (0.4 mL) dropwise at room temperature. The resulting mixture was stirred for 1 hour at room temperature. The residue was purified by C18 column chromatography eluted with ACN (0.1%TFA) in water (0.1%TFA) (5%-95%) to afford desired product (40.5 mg, 33.54%) as a white solid.

[0181] LC-MS: RT = 1.366 min, m / z = 704.8 [M / 2 + H] +;

[0182] 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 4.39 -3.86 (m, 34H) , 3.10 -2.70 (m, 53H) , 2.40 (br, 2H) , 1.38 (brs, 2H) , 1.24 (brs, 20H) , 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .

[0183] 2.4 Synthesis of EVB-009 (pSar34) .

[0184] Preparation of EVB-009-1 (Step 1)

[0185] To a mixture of EVB-001-10 (150 mg, 0.14 mmol) and EVB-003-0 (310 mg, 0.17mmol) in DMF (4 mL) was added DIEA (54.2 mg, 0.42 mmol) and HATU (159.7 mg, 0.42 mmol) in portions at room temperature under air atmosphere. The resulting mixture was stirred for 5 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by C18 column chromatography eluted with ACN / Water (0.1%FA) = 30%-70%gradient in 20 min; detector, UV 254 nm to afford product (160 mg, 41.0%) as a white solid.

[0186] LC-MS: RT = 1.91 min, m / z = 968.9 [M / 3 + Na] +;

[0187] Preparation of EVB-009 (Step 2)

[0188] To a mixture of EVB-009-1 (160 mg, 0.056 mmol) in DMF (3mL) was added piperidine (1 mL) at room temperature. The resulting mixture was stirred for 2 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by C18 column  chromatography eluted with ACN: Water (0.1%FA) =20%-70%gradient in 30 min; detector, UV 214 nm to afford product (80 mg, 53.7%) as a white solid.

[0189] LC-MS: RT = 1.365 min (method A) , m / z = 873.0 [M / 3 + H] +;

[0190] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.34 –3.93 (m, 68 H) , 3.05 –2.64 (m, 104 H) , 2.36 (s, 1 H) , 2.31 (s, 1 H) , 1.37 (s, 2 H) , 1.24 (s, 20 H) , 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3 H) .

[0191] 2.5 Synthesis of EVB-021 (pSar45) .

[0192] Preparation of EVB-021-5 (Step 1) :

[0193] To a mixture of EVB-001-10 (255 mg, 0.25 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (0.14 mL, 0.83 mmol) at room temperature. To the above mixture was added HATU (316 mg, 0.83 mmol) at 0 ℃. The resulting mixture was stirred for 0.5 hour at 0 ℃. Then EVB-014-4 (330 mg, 0.17 mmol) was added into the mixture at 0 ℃. The resulting mixture was stirred for 1 hour at room temperature. The resulting mixture was purified by C18 column chromatography eluted with ACN / H2O (0.05%TFA) (50～95%) to afford EVB-021-5 (380 mg, 82.62 %) as a white solid.

[0194] LC-MS: RT = 1.911 min, m / z = 1406.4 [M / 2 + Na] +;

[0195] Preparation of EVB-021-6 (Step 2) :

[0196] To a mixture of EVB-021-5 (380 mg, 0.14 mmol) in DMF (6 mL) was added piperidine (1.2 mL) at room temperature. The resulting mixture was stirred for 2 hours at room temperature. The resulting mixture was purified by C18 column chromatography eluted with ACN / H2O (0.1%TFA) (20～95%) to afford EVB-021-6 (320 mg, 86.9%) as a white solid.

[0197] LC-MS: RT = 1.701 min, m / z = 849.4 [M / 3 + H] +;

[0198] Preparation of EVB-021-7 (Step 3) :

[0199] To a mixture of EVB-003-3 (96.65 mg, 0.09 mmol) in DMF (3 mL) was added DIEA (0.049 mL, 0.29 mmol) at room temperature. To the above mixture was added HATU (112.05 mg, 0.29 mmol) at 0 ℃. The resulting mixture was stirred for 0.5 hour at 0 ℃. Then EVB-021-6 (150 mg, 0.06 mmol) was added into the mixture at 0 ℃. The resulting mixture was stirred for 1 hour at room temperature. The resulting mixture was purified by C18 column chromatography eluted with ACN / H2O (0.05%TFA) (50～95%) to afford EVB-021-7 (170 mg, 79.6%) as a white solid.

[0200] LC-MS: RT = 1.167 min, m / z = 1229.8 [M / 3 + Na] +;

[0201] Preparation of EVB-021 (Step 4) :

[0202] To a mixture of EVB-021-7 (150 mg, 0.04 mmol) in DMF (5 mL) was added piperine (1 mL, 3.81 mmol) at room temperature. The resulting mixture was stirred for 3 hours at room temperature. The resulting mixture was purified by C18 column chromatography eluted with ACN / H2O (0.1%TFA) (20～95%) to afford EVB-021 (55.20 mg, 39.21%) as a white solid.

[0203] LC-MS: RT = 1.685 min, m / z =1133.6 [M / 3 + H] +;

[0204] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 4.35 –3.92 (m, 90H) , 3.13 –2.62 (m, 139H) , 1.38 (brs, 2H) , 1.24 (brs, 20H) , 0.85 (t, J = 8.0 Hz, 3H) .

[0205] 2.6 Synthesis of EVB-005.

[0206] To a mixture of EVB-003 (150 mg, 0.082 mmol) and acetyl acetate (25.11 mg, 0.25 mmol) in DCM (3 mL) was added TEA (24.89 mg, 0.25 mmol) at room temperature. The resulting mixture was stirred for 3 hours at room temperature. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by C18 column chromatography eluted with ACN: Water (0.1%FA) =25%-80%gradient in 25 min; detector, UV 214 nm to afford product (92 mg, 59.9%) as a white solid .

[0207] LC-MS: RT = 1.86 min (Method A) , m / z = 939.8 [M / 2 + H] +;

[0208] 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 4.30 -3.92 (m, 46H) , 3.09 -2.82 (m, 71H) , 2.01 -1.87 (m, 3H) , 1.43 (brs, 2H) , 1.27 (s, 20H) , 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .

[0209] 2.7 Synthesis of EVB-013.

[0210] To a mixture of EVB-003 (130 mg, 0.071 mmol) in DCM (10mL) was added Formaldehyde (40%wt in water) (106.6 mg, 1.42 mmol) and Sodium Triacetoxyborohydride (150.48 mg, 0.71 mmol) in portions at room temperature. The resulting mixture was stirred for 6 hours at room temperature. Desired product could be detected by LCMS. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by C18 column chromatography eluted  with ACN: Water (0.1%FA) = 35%-70%gradient in 30 min; detector, UV 214 nm to afford product (60 mg, 44.8%) as a white solid.

[0211] LC-MS: RT = 1.23 min (method A) , m / z = 1849.9 [M + H] +;

[0212] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.51 –3.83 (m, 46 H) , 3.15 –2.66 (m, 74 H) , 2.13 (s, 1 H) , 1.37 (s, 2 H) , 1.24 (s, 20 H) , 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3 H) .

[0213] 2.8 Synthesis of EVB-022.

[0214] EVB-022 was synthesized using dodecan-1-amine as a starting material by the same sequence of steps as described for EVB-003 (pSar23) .

[0215] LC-MS: RT = 1.682 min, m / z = 910.8 [M / 2 + H] +;

[0216] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8.70 (br, 1H) , 4.34 –3.93 (m, 46H) , 3.03 –2.67 (m, 71H) , 2.57 (s, 2H) , 1.38 (brs, 2H) , 1.24 (brs, 18H) , 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .

[0217] 2.9 Synthesis of EVB-023.

[0218] EVB-023 was synthesized using tetradecan-1-amine as a starting material by the same sequence of steps as described for EVB-003 (pSar23) .

[0219] LC-MS: RT =1.786 min, m / z = 924.8 [M / 2 + H] +;

[0220] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8.69 (br, 1H) , 4.34 –4.01 (m, 46H) , 3.02 –2.67 (m, 71H) , 2.57 (brs, 2H) , 1.38 (brs, 2H) , 1.24 (s, 22H) , 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .

[0221] 2.10 Synthesis of EVB-035.

[0222] EVB-035 was synthesized using undecan-1-amine as a starting material by the same sequence of steps as described for EVB-003 (pSar23) .

[0223] LC-MS: RT = 1.646 min, m / z = 903.8 [M / 2 + H] +;

[0224] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 4.34 –3.93 (m, 46H) , 2.95 –2.74 (m, 71H) , 2.58 –2.55 (m, 2H) , 1.37 (brs, 2H) , 1.24 (s, 16H) , 0.85 (t, J = 6.6 Hz, 3H) .

[0225] 2.11 Synthesis of EVB-039.

[0226] EVB-039 was synthesized using hexadecan-1-amine as a starting material by the same sequence of steps as described for EVB-003 (pSar23) .

[0227] LC-MS: RT = 1.868 min, m / z = 938.8 [M / 2 + H] + ;

[0228] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 4.34 –3.90 (m, 46H) , 2.97 –2.73 (m, 71H) , 2.58 –2.55 (m, 2H) , 1.38 (s, 2H) , 1.23 (brs, 26H) , 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .

[0229] 3. Preparation of lipid nanoparticle containing polysarcosine conjugated lipids or PEG conjugated lipid

[0230] A mix of lipids was dissolved in ethanol, and RNA was dissolved in a sterile and RNase free 25 mM sodium acetate buffer pH 5.6 prior to preparation. Lipid nanoparticles were prepared by a rapid mixing an ethanol phase containing the ionizable cationic lipid, phospholipid, cholesterol and polysarcosine conjugated lipid with an aqueous phase containing the RNA using a microfluidic mixing device, MPE-L2 (AITESEN, China) . One volume of lipid mixture in ethanol and three volumes of RNA in 25 mM sodium acetate buffer pH 5.6 were rapidly mixed at a total flow rate of 9, 12 or 20 mL / min, and directly mixed and diluted with 5-10 volumes of 1x phosphate buffered saline (PBS) . The lipid nanoparticles containing RNA were subjected to diafiltration and ultrafiltration using Amicon Ultra-15 Centrifugal filters (Millipore) or Tangential Flow Filtration. The final lipid nanoparticle products were stored in 1x PBS at 4 ℃till use.

[0231] 4. Measurement of lipid nanoparticle size and PDI

[0232] The LNP size and PDI (polydispersity) were determined by dynamic light scattering using a Malvern Panalytical zetasizer Pro (Malvern Panalytical) . Prior to measurement, the particles were diluted with 1x PBS to a final concentration of 0.004 –0.01 mg / mL. One milliliter of diluted samples were transferred to a clean, disposable plastic cuvettes for measurement.

[0233] 5. Measurement of zeta potential

[0234] Prior to measurements, the lipid nanoparticles were diluted with 0.1x PBS to a final concentration of 0.005 –0.01 mg / mL. One milliliter of diluted samples was transferred to a  plastic cuvettes for measurement using Malvern Panalytical Zetasizer Pro (Malvern Panalytical) .

[0235] 6. Measurement of RNA concentration and encapsulation efficiency by RiboGreen Assay

[0236] Total RNA concentration and encapsulation efficiency of RNA by lipid nanoparticles were determined using the Quant-iT RiboGreen RNA assay (Thermo Fisher) . The RNA encapsulation efficiency was calculated as the equation shows below. For the free RNA measurement, final formulation was diluted with 1x TE buffer to a range of final concentration of 50-500 pg / μL. For the total RNA measurement, final formulation was first added by Triton X-100 to a final concentration of 2%. After the mixture was sonicated at 20 ℃ for 5 min to completely rupture the particles, it was diluted with 1x TE buffer to a range of final concentration of 50-500 pg / μL. The RiboGreen RNA reagents were added to each sample as 1: 1 volume ratio, and the fluorescent signals were measured at an excitation wavelength of 485 nm and the emission 535 nm. The final concentration of Triton X-100 in the measured total RNA samples was below 0.01%, which did not interfere with measurement of the assay.

[0237] RNA encapsulation %= [1- (free RNA)  /  (total RNA) ] ×100

[0238] 7. In vitro cell transfection and assays

[0239] HEK293T cells (ATCC) were seeded in a 96-well plate at concentration of cells per well for luciferase assay and western blot, respectively. The cells were incubated at 37 ℃ and 5%CO2. For transfection of mRNA by transfection reagent (MessengerMax, Thermo Fisher Scientific) , MessengerMax reagent was incubated with OptiMEM I reduced serum medium for 5 min at room temperature before mixing with mRNA. For transfection by lipid nanoparticle, lipid nanoparticle solution was diluted with OptiMEM I reduced serum medium before added to cells. The mixture was added to 293T cells and incubated at 37 ℃ for 24 h. Cells were harvested, and lysated with RIPA lysis buffer following the manufacture’s instruction. For luciferase reporter assay, Britelite plus Reporter assay (PerkinElmer) was performed according to manufacture’s instruction. Bioluminescence signals (RLU) were recorded using a Plate Reader. For detection of antigen by Western blot, cell lysates were prepared as described above. After thawing, the concentration of total protein in each cell lysate sample was determined by Bradford assay (Thermo Fisher) . Cell lysates were adjusted to the same concentration as PBS. Western samples were prepared by mixing cell lysates with 5× SDS loading buffer. The mixtures were heated at 100℃ for 5 min. The mixtures were then loaded onto 4-12%gradient SDS-PAGE (Thermo Fisher) and ran under 150V for 60 min. After running, proteins were transferred to a PVDF membrane with iBlot 2 system (Invitrogen) . Membranes were then blocked with Block buffer (5%non-fat milk in TBST) at room temperature for 1 h. After blocking, membranes were incubated with 1: 1000 diluted primary antibody in Block buffer. The membranes were then incubated with the secondary antibody, washed, and developed.

[0240] 8. In vivo bioluminescence imaging

[0241] Lipid nanoparticles encapsulating luciferase mRNA (100 μL) were injected intramuscularly into the muscle of mouse right thigh at a single dose of 0.5 mg per kilogram body weight. At the 6h, 24h, and 48h post administration, mice were injected intraperitoneally with D-luciferin substrate (Thermo Fisher Scientific) at 150 mg per kilogram body weight. Mice were then anesthetized and imaged in the chamber of an IVIS spectrum (Perkin Elmer) 10 minutes after injection of substrate. At each time point, mice were sacrificed to collect tissues including heart, liver, spleen, lung, kidney, draining lymph nodes, and muscles of injection site. The bioluminescent signals of tissues were also recorded. Results were analyzed using the LivingImage (Pekin Elmer) .

[0242] 9. In vivo immunogenicity study

[0243] Mice were intramuscularly immunized with rabies G mRNA vaccine formulated with lipid nanoparticles twice, 7 days apart. 100 μL of mRNA vaccine was injected into the muscle of mouse right thigh. At day 0, 7, 14 and 21, Mice were bled via submandibular vein puncture or heart puncture (termination) . Collected sera were stored at -80 ℃ till use for determination of anti-rabies G antibody and neutralizing antibody. At the termination date, mice were euthanized to collect spleen samples that were harvested in pre-chilled sterile DPBS (containing 1%PS and 5%FBS) (Invitrogen) . Mouse spleens were put onto 70 μm cell strainers and grinded with 2 mL syringes. Cells were washed with DPBS containing 5%FBS and pelleted by centrifugation. Cells were resuspended in 1× RBC Lysis Buffer (eBioscience) and incubated at room temperature with occasional shaking, then the lysis process was stopped by adding DPBS (Invitrogen) containing 5%FBS (QuanLab) . Cells were resuspended in RPMI medium 1640 (Invitrogen) containing 10%FBS and counted with  Rigel S2.

[0244] 10. Quantification of anti-rabies G specific total IgG

[0245] Anti-rabies G specific total IgG was quantified by ELISA. For calibration curve, an unlabeled mouse IgG standard (Southern Biotech) were coated on a 96 well plates (Eppendorf) starting from 800 ng / mL with a serial 2x dilution, overnight at 4℃. After washed and blocked with 3%BSA (Beyotime) for 1 h at room temperature, plates were added with goat anti-mouse IgG HRP (1: 5000) (Southern Biotech) , followed by detection with TMB substrate (Invitrogen) . For sample measurements, a serial 2-fold diluted mouse sera, starting from 1: 300 (day 7 sera) , 1: 500 (day 14 sera) or 1: 8000 (day 21 and 28 sera) , were added to a 96 well plates pre-coated with rabies G standards (5 ng / mL) (Sino Biological) . The mixture was incubated for about 1 h at room temperature. After rinsed with wash buffer three times, plates were added with goat anti-mouse IgG HRP (1: 10000) , followed by detection with TMB substrate. Optical density (OD) at 450 nm was measured by a SpectraMax Microplate reader (MD) .

[0246] 11. Neutralizing antibody by pseudovirus

[0247] 293T cells were seeded in 96-well plates at the density of 40,000 / well per well, 100 μL per well, and cultured at 37℃ and 5%CO2 overnight. Test serum samples were inactivated at 56℃ for 30 minutes and then serial diluted with assay medium. National anti-rabies standard was used  as the reference control sample. The diluted test / reference samples were mixed with equal volume of PsV. The mixtures were pre-incubated at 37℃ and 5%CO2 for 1 hour, and then added into the cells. The cell control (cell, no sample treatment or virus infection) and virus control (cell infected with virus, no sample treatment) were tested in parallel. The final volume of the cell culture was 200 μL per well, and the final infection dose of PsV was 1600 TCID50 per well. The resulting cultures were kept at 37℃ and 5%CO2 for additional 2 days. Britelite plus was used to measure the luciferase expression of PsV. The raw data was used for the calculation of neutralizing activity of test samples. ID50 and EC50 values were calculated using the Prism software for test samples and reference control sample, respectively.

[0248] 12. Evaluation of Rabies G protein specific T cell response by IFN-γ ELISpot assay IFN-γ-producing T cells in mouse splenocytes were quantified by an enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay with Rabies G protein specific peptide stimulation. Briefly, splenocytes were cultured with Rabies G peptide pool (GenScript) in commercial ELISpot plates (Mabtech) coated with anti-IFN-γ antibody for 38 hours. ConA (Invitrogen) was used to treat the splenocytes as the positive control and the cell number was 1×105 per well, and medium only was included as negative control. Splenocytes from each mouse were stimulated with each stimulus in triplicates. Then spot-forming cells were revealed by incubation with the detection antibody at RT (room temperature) for 2 h, then streptavidin-ALP at RT for 1 h and BCIP / NBT chromogen substrate (Invitrogen) at RT for 5 min. The specific IFN-γ-secreting cells were counted using the AID ELISPOT reader (CTL) .

[0249] 13. Evaluation of Rabies G protein specific T cell response by Intracellular cytokine staining

[0250] Intracellular Cytokine staining (ICS) was performed to evaluate the Rabies G protein specific T cell response. In brief, the cells were stimulated with culture medium (negative control) , PMA / Ionomycin (positive control) (eBioscience) and Rabies G protein peptide pool for 16h followed by 4-hour-incubation of protein transport inhibitors. The concentration of Rabies G peptide pool was 2.5 μg / mL. Then the cells were collected for staining. First, L / D dye (BD) was added for dead and live staining, at the same time, added Fc receptor blocking and incubated for 5 min at 4 ℃ in the dark. Then added antibody for cell surface markers (Panel 1: CD3, CD8) (BD) and incubated at 4℃ for 30 min in dark. Added PharmingenTM TF Fix / Perm Buffer and incubated at 4 ℃ for 30 min in dark. Then washed twice with wash buffer, added intracellular antibodies (Panel 1: CD4, IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-13, IL-4) and incubated at 4 ℃for 30 min in the dark.

[0251] Example 2: Impact of total flow rate on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine

[0252] The impact of total flow rate on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine was determined using polysarcosine-17. RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3 (SinoPEG) , DPSC (Avanti) ,  cholesterol (Sigma-Aldrich) , and polysarcosine-17 (pSar17, synthesized in house) , and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 12, 20, 28 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The mRNA concentration was 0.1 mg / mL in 10 mM sodium acetate buffer pH 5.6. The N: P ratio of formulation was 6. Molar ratio of MC3, DSPC, cholesterol and pSar17 was 40 / 10 / 40 / 10.

[0253] Table 1. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17

[0254] As shown in Table 1, physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17 showed that an increased total flow rate from 12 mL / min to 20 mL / min had no impact of the average size of LNPs, but generated LNPs with smaller PDI.

[0255] Example 3: Impact of N: P ratio on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine

[0256] The impact of total flow rate on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine was determined using polysarcosine-17. RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine-17, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The mRNA concentration was 0.1 mg / mL in 10 mM sodium acetate buffer pH 5.6. The N: P ratio of formulation was 3, 4, or 6.

[0257] Table 2. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17 with N: P ratios of 3, 4 or 6

[0258] As shown in Table 2, N / P ratios had minimal impact on the average size and EE%of formulated particles, but LNP comprising pSar with N / P ratio of 3 had smallest PDI.

[0259] As shown in FIG. 1, luciferase signals of LNPs comprising pSar were higher than PEG-LNPs in transfected 293T cells.

[0260] Example 4: Impact of salt concentration of aqueous buffer on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine

[0261] The impact of salt concentration of aqueous buffer on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine was determined using polysarcosine-17. RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine-17, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The mRNA concentration was 0.1 mg / mL in 10-, 100-, or 300-mM sodium acetate buffer pH 5.5. The N: P ratio of formulation was 6.

[0262] Table 3. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17 formulated in 10-, 100-, or 300-mM sodium acetate buffer pH 5.5

[0263] As shown in Table 3, RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17 formulated at 10 Mm acetate had the highest EE%. RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17 formulated at a higher salt concentration had a larger particle size and smaller particle PDI.

[0264] As shown in FIG. 2, luciferase signals of LNPs comprising polysarcosine formulated at 10 mM acetate were the highest.

[0265] Example 5: Impact of aqueous buffer pH on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine

[0266] The impact of aqueous buffer pH on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine was determined using polysarcosine-17. RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine-17, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The mRNA concentration was 0.1 mg / mL in sodium acetate buffer with pH values ranging from 4.0 to 6.0. The N: P ratio of formulation was 6.

[0267] Table 4. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17 formulated in sodium acetate buffer with pH values ranging from 4.0 to 6.0

[0268] Table 5. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17 formulated in sodium acetate buffer with pH values ranging from 5.1 to 5.7

[0269] As shown in Table 4 and Table 5, pH of formulation buffer had similar particle size and zeta potential of nanoparticles, but lower pH of formulation buffer produced nanoparticles with smaller PDI.

[0270] As shown in FIG. 3, luciferase signals of LNPs comprising polysarcosine formulated at pH buffer ranging from 5.1 to 5.7 were similar.

[0271] Example 6: Impact of ionizable lipid on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine

[0272] The impact of ionizable lipid on the formation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine was determined using polysarcosine-17. RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising an ionizable lipid, DPSC, cholesterol, and polysarcosine-17, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The mRNA concentration was 0.1 mg / mL in sodium acetate buffer 5.6. The N: P ratio of formulation was 6.

[0273] Table 6. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17 formulated with different ionizable lipids.

[0274] As shown in Table 6, LNPs comprising polysarcosine formulated with MC3 and SM102 had similar particle size, PDI and EE%. LNPs comprising polysarcosine formulated WITH C12-200 had larger particle size and lower EE%.

[0275] Example 7: Formulation of mRNA-lipid nanoparticles comprising different molar ratios of polysarcosine

[0276] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine-17, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in the Table 7.

[0277] Table 7. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17

[0278] As shown in Table 7, LNPs comprising of polysarcosine had particle sizes ranging from 76 to 198 nm and PDI ranging from 0.02 to 0.25, respectively. The EE%of LNPs comprising polysarcosine ranged from 55%to 96%.

[0279] As shown in FIG. 4, LNPs comprising polysarcosine had higher RLU than LNPs comprising PEG. LNP formulations showing highest RLU were 40 / 17.5 / 40 / 2.5 and 40 / 15 / 40 / 15.

[0280] As shown in FIG. 5, LNPs comprising polysarcosine had higher RLU than LNPs comprising PEG. LNP formulations showing highest RLU were the ones with a molar ratio of polysarcosine at 5%, molar ratios of ionizable lipid at 45-40%and molar ratios of DSPC at 15-25%.

[0281] Example 8: Formulation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine-17, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in Table 8.

[0282] Table 8. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar17

[0283] As shown in Table 8, LNPs comprising polysarcosine had similar particle size, PDI and EE%.

[0284] As shown in FIG. 6, LNP formulations showing highest RLU were the ones with molar compositions of 35: 20: 40: 5, 40: 20: 35: 5, 35: 15: 45: 5, and 40: 15: 40: 5. LNPs comprising polysarcosine had higher RLU than LNPs comprising PEG.

[0285] Example 9: Formulation of mRNA-lipid nanoparticles comprising polysarcosine with different repeat units

[0286] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine with different repeat units (pSar11, pSar17, pSar23, pSar34) , and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) .

[0287] Table 9. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar with different repeat units

[0288] As shown in Table 9, LNPs comprising polysarcosine had similar particle size, PDI and EE%, except the formulation of 40 / 20 / 35 / 5.

[0289] As shown in FIG. 7, LNPs comprising polysarcosine had considerably higher RLU than LNPs comprising PEG, especially at higher transfected doses at 500 ng and 1500 ng. LNP formulations showing highest RLU were the ones with molar compositions of 35 / 20 / 40 / 5, 40 / 20 / 35 / 5, 35 / 15 / 45 / 5, and 40 / 15 / 40 / 5.

[0290] Example 10: In vivo biodistribution of luciferase mRNA-LNPs comprising polysarcosine or PEG

[0291] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine-17 or PEG, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in Table 10. The RNA-LNP particles were intramuscularly administered to the mice at a single dose of 0.5 mpk body weight. At 6h, 24h and 48h post administration, mice were injected intraperitoneally with D-luciferin substrate at 150 mg per kilogram body weight. Mice were then anesthetized and imaged in the chamber of an IVIS spectrum 10 minutes after injection of substrate. At each time point, three mice were sacrificed to collect  tissues including heart, liver, spleen, lung, kidney, draining lymph nodes, and muscles of injection site.

[0292] Table 10. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar

[0293] As shown in Table 10, LNPs comprising polysarcosine had similar particle size, PDI and EE%.

[0294] As shown in FIG. 8, LNPs comprising polysarcosine had higher RLU than LNPs comprising PEG in transfected cells. pSar-LNP-19, pSar-LNP-20, pSar-LNP-22 and pSar-LNP-24 had higher or comparable RLU than pSar-LNP-BM5.

[0295] As shown in FIG. 9, whole body bioluminescence of luciferase RLU was measured at 6 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5 mpk body weight.

[0296] As shown in FIG. 10, whole body bioluminescence of luciferase RLU was measured at 24 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5 mpk body weight.

[0297] As shown in FIG. 11, whole body bioluminescence of luciferase RLU was measured at 48 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5 mpk body weight.

[0298] As shown in FIG. 12, tissues bioluminescence of luciferase RLU was measured at 6 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5 mpk body weight. pSar-LNP-19, pSar-LNP20, pSar-LNP-22, and pSar-LNP-24 had higher RLU in the injection sites and spleens than pSar-LNP-BM5 and PEG-LNP.

[0299] As shown in FIG. 13, tissues bioluminescence of luciferase RLU was measured at 24 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5 mpk body weight. pSar-LNP-19, pSar-LNP20, pSar-LNP-22, and pSar-LNP-24 had higher RLU in the injection sites and spleens than pSar-LNP-BM5 and PEG-LNP.

[0300] As shown in FIG. 14, tissues bioluminescence of luciferase RLU was measured at 48 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5  mpk body weight. pSar-LNP-19, pSar-LNP20, pSar-LNP-22, and pSar-LNP-24 had higher RLU in the injection sites and spleens than pSar-LNP-BM5 and PEG-LNP.

[0301] Example 11: In vivo biodistribution of luciferase mRNA-LNPs comprising polysarcosine with different repeat units or PEG

[0302] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine with different repeat units or PEG, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in Table 11. The RNA-LNP particles were intramuscularly administered to the mice at a single dose of 0.5 mpk body weight. At 6h and 24h post administration, mice were injected intraperitoneally with D-luciferin substrate at 150 mg per kilogram body weight. Mice were then anesthetized and imaged in the chamber of an IVIS spectrum 10 minutes after injection of substrate. At each time point, three mice were sacrificed to collect tissues including heart, liver, spleen, lung, kidney, draining lymph nodes, and muscles of injection site.

[0303] Table 11. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar

[0304] As shown in Table 11, LNPs comprising different repeat units of polysarcosine had similar particle size, PDI and EE%.

[0305] As shown in FIG. 15, LNPs comprising polysarcosine had higher RLU than LNPs comprising PEG in transfected cells.

[0306] As shown in FIG. 16, whole body bioluminescence of luciferase RLU was measured at 6 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5 mpk body weight.

[0307] As shown in FIG. 17, whole-body bioluminescence of luciferase RLU was measured at 24 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5 mpk body weight.

[0308] As shown in FIG. 18, LNPs comprising polysarcosine and PEG had comparable luciferase RLU at the injection site of the whole-body bioluminescence.

[0309] As shown in FIG. 19, tissues bioluminescence of luciferase RLU was measured at 6 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5 mpk body weight. pSar-LNP-28, pSar-LNP24, pSar-LNP-32, and pSar-LNP-36 had higher RLU in the injection sites and spleens than PEG-LNP. pSar-LNP-28 and pSar-LNP24 had considerably lower RLU in the liver than PEG-LNP.

[0310] As shown in FIG. 20, tissues bioluminescence of luciferase RLU was measured at 24 h post intramuscular administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.5 mpk body weight. pSar-LNP-28, pSar-LNP24, pSar-LNP-32, and pSar-LNP-36 had higher RLU in the injection sites and spleens than PEG-LNP, but they had considerably lower RLU in the liver than PEG-LNP.

[0311] As shown in FIG. 21, the RLU ratios of spleen to liver of LNPs comprising polysarcosine were higher than the RLU ratios of LNP-PEG, especially the pSar11-LNP-28 and pSar17-LNP-24.

[0312] Example 12: In vivo immunogenicity study of rabies G mRNA-LNPs comprising polysarcosine with different repeat units or PEG

[0313] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine with different repeat units or PEG, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in Table 12. Mice were intramuscularly immunized with rabies G mRNA vaccine formulated with lipid nanoparticles twice, 7 days apart. 100 μL of mRNA vaccine was injected into the muscle of mouse right thigh. At day 0, 7, and 14, mice were bled via submandibular vein puncture or heart puncture (termination) . Collected sera were stored at -80 ℃ till use for determination of anti-rabies G antibody and neutralizing antibody. At the termination date, mice were euthanized to collect spleen samples that were harvested in pre-chilled sterile DPBS (containing 1%PS and 5%FBS) . Mouse spleens were put onto 70 μm cell strainers and grinded with 2 mL syringes. Cells were washed with DPBS containing 5%FBS and pelleted by centrifugation. Cells were resuspended in 1× RBC Lysis Buffer and incubated at room temperature with occasional shaking, then the lysis process was stopped by adding DPBS containing 5%FBS. Cells were resuspended in RPMI medium 1640 containing 10%FBS and counted with Rigel S2. ELISpot and ICS were measured for evaluation of T cell responses.

[0314] Table 12. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar

[0315] As shown in FIG. 22, pSar-LNP-24 induced significantly higher anti-G total IgG than PEG-LNP and pSar-LNP-BM5 at day 7 post the 1st vaccination. On Day 14 –7 days post 2nd vaccination, pSar-LNP-19, pSar-LNP-20, and pSar-LNP-24 induced higher anti-G IgG than pSar-LNP-BM5.

[0316] As shown in FIG. 23, pSar-LNP-24 induced higher neutralizing antibody than PEG-LNP.

[0317] As shown in FIG. 24, pSar-LNP-19, pSar-LNP-20, pSar-LNP-23, and pSar-LNP-24 induced significantly higher IFNγ T cells than PEG-LNP and pSar-LNP-BM5 on day 14, 7 days post the 2nd vaccination.

[0318] As shown in FIG. 25, pSar-LNP-19, pSar-LNP-20, pSar-LNP-23, and pSar-LNP-24 induced significantly higher IFNγ CD8+ T cells than PEG-LNP and pSar-LNP-BM5 on day 14, 7 days post the 2nd vaccination. LNPs comprising polysarcosine induced significantly higher IFNγCD4+ T cells than PEG-LNP on day 14.

[0319] Example 13: In vivo immunogenicity study of rabies G mRNA-LNPs comprising polysarcosine with different repeat units or PEG

[0320] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine with different repeat units or PEG, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in Table 13. Mice were intramuscularly immunized with rabies G mRNA vaccine formulated with lipid nanoparticles twice, 7 days apart. 100 μL of mRNA vaccine was injected into the muscle of mouse right thigh. At day 0, 7, and 14, mice were bled via submandibular vein puncture or heart puncture (termination) . Collected sera were stored at -80 ℃ till use for determination of anti-rabies G antibody and neutralizing antibody. At the termination date, mice were euthanized to collect spleen samples that were harvested in pre-chilled sterile DPBS (containing 1%PS and 5%FBS) . Mouse spleens were put onto 70 μm cell strainers and grinded with 2 mL syringes. Cells were washed with DPBS containing 5%FBS and pelleted by centrifugation. Cells were resuspended in 1× RBC Lysis Buffer and incubated at room temperature with occasional shaking, then the lysis process was stopped by adding DPBS containing 5%FBS. Cells were resuspended in RPMI medium 1640 containing 10%FBS and counted with Rigel S2. ELISpot and ICS were measured for evaluation of T cell responses.

[0321] Table 13. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar

[0322] As shown in FIG. 26, LNPs comprising polysarcosine induced higher anti-G IgG than PEG-LNP at day 7. Day-14 serum IgG values induced by LNPs comprising polysarcosine and PEG are comparable. Serum IgG induced by LNPs comprising different repeat units of polysarcosine are comparable.

[0323] As shown in FIG. 27, LNPs comprising different repeat units of polysarcosine induced higher IFNγ T cells than PEG-LNP on day 14.

[0324] Example 14: The impact of ratios of N / P on the in vivo immunogenicity study of mRNA-LNPs comprising polysarcosine

[0325] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine with different repeat units or PEG, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in Table 14. Mice were intramuscularly immunized with rabies G mRNA vaccine formulated with lipid nanoparticles. 100 μL of mRNA vaccine was injected into the muscle of mouse right thigh. On day 0 and 7, mice were bled via submandibular vein puncture. Collected sera were stored at -80 ℃ till use for determination of anti-rabies G antibody and neutralizing antibody. Mouse spleens were put onto 70 μm cell strainers and grinded with 2 mL syringes. Cells were washed with DPBS containing 5%FBS and pelleted by centrifugation. Cells were resuspended in 1× RBC Lysis Buffer and incubated at room temperature with occasional shaking, then the lysis process was stopped by adding DPBS containing 5%FBS. Cells were resuspended in RPMI medium 1640 containing 10%FBS and counted with Rigel S2. ELISpot and ICS were measured for evaluation of T cell responses.

[0326] Table 14. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar

[0327] As shown in FIG. 28, LNPs comprising polysarcosine formulated at different N / P ratios induced comparable serum IgG.

[0328] As shown in FIG. 29, LNP comprising polysarcosine scored higher serum IgG than LNP comprising PEG lipid at day 7, but they scored comparable IgG at day 14.

[0329] As shown in FIG. 30, LNPs comprising polysarcosine formulated at different N / P ratios induced comparable IFNγ T cells. LNPs comprising polysarcosine induced higher IFNγ T cells than LNPs comprising PEG.

[0330] Example 15: The impact of ionizable lipids on the in vivo immunogenicity study of mRNA-LNPs comprising polysarcosine

[0331] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising an ionizable lipid, DPSC, cholesterol, and polysarcosine with different repeat units or PEG, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in Table 15. Mice were intramuscularly immunized with rabies G mRNA vaccine formulated with lipid nanoparticles twice, 7 days apart. 100 μL of mRNA vaccine was injected into the muscle of mouse right thigh. At day 0, 7, and 14, mice were bled via submandibular vein puncture or heart puncture (termination) . Collected sera were stored at -80 ℃ till use for determination of anti-rabies G antibody and neutralizing antibody. At the termination date, mice were euthanized to collect spleen samples that were harvested in pre-chilled sterile DPBS (containing 1%PS and 5%FBS) . Mouse spleens were put onto 70 μm cell strainers and grinded with 2 mL syringes. Cells were washed with DPBS containing 5%FBS and pelleted by centrifugation. Cells were resuspended in 1× RBC Lysis Buffer and incubated at room temperature with occasional shaking, then the lysis process was stopped by adding DPBS containing 5%FBS. Cells were resuspended in RPMI medium 1640 containing 10%FBS and counted with Rigel S2. ELISpot and ICS were measured for evaluation of T cell responses.

[0332] Table 15. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar

[0333] As shown in FIG. 31, LNPs comprising polysarcosine formulated with MC3, SM102 and ALC0315 induced comparable anti-G IgG.

[0334] As shown in FIG. 32, LNPs comprising polysarcosine formulated with MC3 scored higher IFNγT cells than LNPs formulated with SM102 and ALC0315.

[0335] Example 16: In vivo biodistribution of luciferase mRNA-LNPs comprising polysarcosine or PEG

[0336] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine-17 or PEG, and mRNA aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in Table 16. The RNA-LNP particles were intravenously administered to the mice at a single dose of 0.25 mpk body weight. At 6h and 24h post administration, mice were injected intraperitoneally with D-luciferin substrate at 150 mg per kilogram body weight. Mice were then anesthetized and imaged in the chamber of an IVIS spectrum 10 minutes after injection of substrate. At each time point, three mice were sacrificed to collect tissues including heart, liver, spleen, lung, kidney, draining lymph nodes, and muscles of injection site.

[0337] Table 16. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar

[0338] As shown in FIG. 33, whole body bioluminescence of luciferase RLU was measured at 6 h post intravenous administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.25 mpk body weight.

[0339] As shown in FIG. 34, whole body bioluminescence of luciferase RLU was measured at 24 h post intravenous administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.25 mpk body weight.

[0340] As shown in FIG. 35, tissue bioluminescence of luciferase RLU was measured at 6 h post intravenous administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.25 mpk body weight.

[0341] As shown in FIG. 36, tissue bioluminescence of luciferase RLU was measured at 24 h post intravenous administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.25 mpk body weight.

[0342] Example 17: In vivo biodistribution of luciferase mRNA-LNPs comprising polysarcosine with different repeat units or PEG

[0343] RNA-lipid nanoparticles were formulated by a rapid mixing of ethanolic phase comprising MC3, DPSC, cholesterol, and polysarcosine with different repeat units or PEG, and mRNA  aqueous phase at a total flow rate of 20 mL / min (1 volume organic phase: 3 volumes aqueous phase) . The four lipid molar ratios are shown in Table 17. The RNA-LNP particles were intravenously administered to the mice at a single dose of 0.25 mpk body weight. At 6h and 24h post administration, mice were injected intraperitoneally with D-luciferin substrate at 150 mg per kilogram body weight. Mice were then anesthetized and imaged in the chamber of an IVIS spectrum 10 minutes after injection of substrate. At each time point, three mice were sacrificed to collect tissues including heart, liver, spleen, lung, kidney, draining lymph nodes, and muscles of injection site.

[0344] Table 17. Physiochemical properties of RNA-lipid nanoparticles comprising pSar

[0345] As shown in FIG. 37, whole body bioluminescence of luciferase RLU was measured at 6 h post intravenous administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.25 mpk body weight.

[0346] As shown in FIG. 38, whole body bioluminescence of luciferase RLU was measured at 24 h post intravenous administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.25 mpk body weight.

[0347] As shown in FIG. 39, tissue bioluminescence of luciferase RLU was measured at 6 h post intravenous administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.25 mpk body weight.

[0348] As shown in FIG. 40, tissue bioluminescence of luciferase RLU was measured at 24 h post intravenous administration of LNPs comprising polysarcosine or PEG at a single dose of 0.25 mpk body weight.

[0349] EQUIVALENTS

[0350] All references, patents and patent applications disclosed herein are incorporated by reference with respect to the subject matter for which each is cited, which in some cases may encompass the entirety of the document.

Claims

1.A composition comprising a plurality of RNA-lipid particles, wherein each particle comprises:(i) RNA;(ii) a cationic or cationically ionizable lipid or lipid-like material;(iii) a polysarcosine-lipid conjugate or a conjugate of polysarcosine and a lipid-like material; and(iv) a non-cationic lipid or lipid-like material;whereinthe cationic or cationically lipid or lipid like material comprises from about 35 mol %to about 40 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;the polysarcosine-lipid conjugate or conjugate of polysarcosine and a lipid-like material comprises about 5 mol %or less of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;the non-cationic lipid or lipid-like material comprises from about 50 mol %to about 60 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles;preferably, the particles optionally further comprise a polyethyleneglycol-lipid conjugate or a conjugate of polyethyleneglycol and a lipid-like material.2.The composition of claim 1, wherein the RNA is mRNA.3.The composition of any one of claims 1-2, wherein the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a phospholipid.4.The composition of any one of claims 1-3, wherein the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a cholesterol or a cholesterol derivative.5.The composition of any one of claims 1-4, wherein the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a mixture of a phospholipid and cholesterol or a cholesterol derivative.6.The composition of any one of claims 1-5, wherein phospholipid is selected from the group consisting of DSPC, DOPC, DOPE, DPPC, and a mixture thereof.7.The composition of any one of claims 1-6, wherein the non-cationic lipid or lipid-like material comprises a mixture of phospholipid and cholesterol or a cholesterol derivative,preferably, the phospholipid comprises from about 15 mol %to about 20 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles; the cholesterol comprises from about 35 mol %to about 40 mol %of the total lipid and lipid-like material present in the RNA-lipid particles.8.The composition of any one of claims 1-7, wherein the polysarcosine-lipid conjugate or a conjugate of polysarcosine and a lipid-like material comprises the following general formula (I) : wherein R1 is optionally substituted C10-C18 alkyl; R2 is independently H or methyl; R3 is optionally substituted H, methyl, acetyl, or a functional group comprising a hydrophobic or hydrophilic group; n is ranging from 10 to 50.9.The composition of any one of claims 1-8, wherein the particles are nanoparticles.10.The composition of any one of claims 1-9, wherein the particles have a size of from about 60 nm to about 250 nm.11.A method for delivering RNA to cells of a subject, the method comprising administering to a subject a composition of any one of claims 1 to 10.12.A method for delivering a therapeutic peptide or protein to a subject, the method comprising administering to a subject a composition of any one of claims 1 to 10, wherein the RNA encodes the therapeutic peptide or protein.13.A method for treating or preventing a disease or disorder in a subject, the method comprisingadministering to a subject a composition of any one of claims 1 to 10, wherein delivering the RNA to cells of the subject is beneficial in treating or preventing the disease or disorder.14.A method for treating or preventing a disease or disorder in a subject, the method comprising administering to a subject a composition of any one of claims 1 to 10, wherein the RNA encodes a therapeutic peptide or protein and wherein delivering the therapeutic peptide or protein to the subject is beneficial in treating or preventing the disease or disorder.15.The method of any one of claims 11 to 14, wherein the subject is a mammal.16.The method of claim 15, wherein the mammal is a human.17.The method of any one of claims 11 to 16, wherein the RNA encodes a vaccine peptide or protein.18.The method of claim 17, wherein the vaccine peptide or protein is a peptide or protein from an infectious agent or an immunologically equivalent fragment or variant thereof.19.The method of any one of claims 11 to 18, which is a method for intramuscular vaccination.

Images