Oncolytic peptide and use thereof for inhibiting cancer cell viability

Abstract

Provided is a novel oncolytic peptide. Additionally, the novel oncolytic peptide can be used to treat cancer and inhibit tumor growth more effectively.

Description

ONCOLYTIC PEPTIDE AND USE THEREOF FOR INHIBITING CANCER CELL VIABILITYFIELD OF THE INVENTION

[0001] This disclosure relates to peptide-based therapeutic compositions and methods for resulting in an anti-tumor response and the effective regression of the cancer.BACKGROUND OF THE INVENTION

[0002] Cancer is a leading cause of death worldwide. Different types of cancer correspond to various cell types of the body. Cancer cells are characterized by uncontrolled proliferation and the ability to invade surrounding normal tissue or distant sites by homological and / or lymphatic spread.

[0003] The difficulty for the effective treatment of cancer relates to establishing the distinction between malignant and normal cells of the body. Both are derived from the same source and are very similar, and for this reason, there is no significant recognition by the immune system as to the threat.

[0004] Despite the advances made in cancer therapy over the past few decades, such as surgery, radiotherapy, chemotherapy and immunotherapy, these therapeutic modalities are still associated with significant side effects.

[0005] For example, this can be achieved through surgery, but the propensity of the disease to invade adjacent tissues or to spread to distant sites (metastasis) often limits its effectiveness. The chemotherapy effectiveness is, in most cases, limited by its toxicity to other tissues (cells) of the organism, as well as radiotherapy, which can also damage normal tissues. In immunotherapy, carcinogenic cells developed mechanisms to escape from the immune response, a phenomenon known as resistance to treatment

[0006] There is an unmet need for anti-cancer treatments with less side effects and / or for chemotherapy resistant or immunotherapy resistant cancers. The present  invention addresses this and other needs.SUMMARY OF THE INVENTION

[0007] Accordingly, the present invention provides the search for new ways to treat cancer is a process in constant progress, and within this dynamic, new active principles were developed to be useful in the treatment of cancer.

[0008] Another aspect of the present invention provides methods for inhibiting or reducing cancer cells by administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the peptides.

[0009] Detailed description of the invention is given in the following embodiments with reference to the accompanying drawing.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0010] The drawings described herein are for illustration purposes only and are not intended to limit the scope of the present teachings in any way.

[0011] Fig. 1A-1B are schematic diagram of Hepa 1-6 hepatocellular carcinoma experiments. The right flank of the mouse was administrated with SEQ ID NO: 4 in Fig. 1A. Fig. 1B shows that Hepa 1-6 tumor cells were harvested, and washed in medium and injected subcutaneously (S.C. ) into the right flank of C57BL / 6 mice. (3×106 Hepa 1-6 cells per mouse / 50μl RPMI-1640) . Palpable tumors (80-100 mm3) were injected (I.T. ) with single doses of SEQ ID NO: 4 dissolved in PBS (1.0 mg peptide / 50μl PBS) once a day for 3 consecutive days, and the vehicle control was saline only (0.9%NaCl) .

[0012] Fig. 2A-2D show that the antitumor effects of SEQ ID NO: 4 in hepatocellular carcinoma tumor-bearing mice model. Representative images of Hepa 1-6 tumors-bearing mice before treatment and after SEQ ID NO: 4 treatment or untreated groups (Fig. 2A) . The changes of tumor sizes on left flank or on right flank of Hepa 1-6 tumor-bearing mice (Fig. 2B) . The changes of body weight (Fig. 2C) and feed intake (Fig. 2D) compared to control group.

[0013] Fig. 3 are schematic diagram of EO771 breast cancer experiments. Fig. 3 shows that EO771 tumor cells were harvested, and washed in medium and injected subcutaneously (S.C. ) into the right flank of C57BL / 6 mice. (2×105 EO771 cells per mouse / 50μl RPMI-1640) . Palpable tumors (75 mm3) were injected (I.T. ) with single doses of SEQ ID NO: 4 dissolved in PBS (1.0 mg peptide / 50μl PBS) once a day for 5 consecutive days, and the vehicle control was saline only (0.9%NaCl) . On the other hand, the right flank of the mouse was administrated with SEQ ID NO: 4 as shown in Fig. 1A.

[0014] Fig. 4A-4C show that the antitumor effects of SEQ ID NO: 4 in EO771 tumor-bearing mice model. Representative images of EO771 tumors-bearing mice before treatment and after SEQ ID NO: 4 treatment or untreated groups (Fig. 4A) . The changes of tumor sizes on right flank of EO771 tumor-bearing mice (Fig. 4B) . Survival curve of SEQ ID NO: 4-treated mice compared to untreated mice. Animal survival curves (Kaplan–Meier plot) were compared using the log-rank (Mantel–Cox) test. (Fig. 4C) .

[0015] Fig. 5A-5B show that treatment of SEQ ID NO: 4 in EO7711tumor-bearing mice model remained the body weight and feed intake compared to control group. The body weight of control (wild-type) , and SEQ ID NO: 4 treated group (Fig. 5A) . The percentage of intake of control (wild-type) , and SEQ ID NO: 4 treated group (Fig. 5B) .

[0016] Fig. 6A-6B are schematic diagram of B16-F10 melanoma experiments. The right flank of the mouse was administrated with SEQ ID NO: 4, and the left flank of the mouse was an untreated flank (tumor only) in Fig. 6A. Fig. 6B shows that B16-F10 tumor cells were harvested, and washed in medium and injected intradermally (i.d. ) into the both flanks of C57BL / 6 mice. (3×106 B16-F10 cells per mouse / 50μl RPMI-1640) . Palpable tumors (20–30 mm3) were injected (I.T. ) with single doses of SEQ ID NO: 4 dissolved in PBS (1.0 mg peptide / 50μl PBS) once a day for 5 consecutive days, and the vehicle control was saline only (0.9%NaCl) .

[0017] Fig. 7A-7D show the antitumor effects of SEQ ID NO: 4 in B16-F10 tumor-bearing mice model. Representative images of B16F10 tumors-bearing mice on day 8 (before treatment) and on day 12 after SEQ ID NO: 4 treatment or untreated groups (Fig. 7A) . The changes of tumor sizes on left flank (Fig. 7B) or on right flank  (Fig. 7C) of B16-F10 tumor-bearing mice. Survival curve of SEQ ID NO: 4 treated mice compared to untreated mice. Animal survival curves (Kaplan–Meier plot) were compared using the log-rank (Mantel–Cox) test (Fig. 7D) .

[0018] Fig. 8A-8B show the treatment of SEQ ID NO: 4 in B16-F10 tumor-bearing mice model remained the body weight and feed intake compared to control group. The body weight of untreated (tumor only) , and SEQ ID NO: 4 treated group (Fig. 8A) . The percentage of intake of control (wild-type) , and SEQ ID NO: 4 treated group (Fig. 8B) .

[0019] Fig. 9 are schematic diagram of MN-11 fibrosarcoma experiments. MN-11 tumor cells were harvested, and washed in medium and injected subcutaneously (S. C. ) into the both flanks of C57BL / 6 mice. (5×105 MN-11 cells per mouse / 50μl RPMI-1640) . Palpable tumors (100 mm3) were injected (I.T. ) with single doses of SEQ ID NO: 4 dissolved in PBS (1.0 mg peptide / 50μl PBS) once a day for 5 consecutive days, and the vehicle control was saline only (0.9%NaCl) . On the other hand, the right flank of the mouse was administrated with SEQ ID NO: 4, and the left flank of the mouse was an untreated flank (tumor only) as shown in Fig. 6A.

[0020] Fig. 10A-10D show that the antitumor effects of SEQ ID NO: 4 in MN-11tumor-bearing mice model. Representative images of MN-11 tumors-bearing mice before treatment and after SEQ ID NO: 4 treatment or untreated groups (Fig. 10A) . The changes of tumor sizes on left flank or on right flank of MN-11 tumor-bearing mice (Fig. 10B-10C) . Survival curve of SEQ ID NO: 4-treated mice compared to untreated mice.. Animal survival curves (Kaplan–Meier plot) were compared using the log-rank (Mantel–Cox) test (Fig. 10D) .

[0021] Fig. 11A-11B show that treatment of SEQ ID NO: 4 in MN-11tumor-bearing mice model remained the body weight and feed intake compared to control group. The body weight of control (wild-type) , and SEQ ID NO: 4 treated group (Fig. 11A) . The percentage of intake of control (wild-type) , and SEQ ID NO: 4 treated group (Fig. 11B) .DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

[0022] While preferred embodiments of the invention are shown and described herein, such embodiments are provided by way of example only and are not intended to otherwise limit the scope of the invention. Various alternatives to the described embodiments of the invention may be employed in practicing the invention.

[0023] Unless otherwise defined, all technical terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs.

[0024] The terms “amino acid sequence, ” “protein, ” “polypeptide” and “peptide” are used interchangeably herein to refer to two or more amino acids, or “residues, ” covalently linked by an amide bond or equivalent. Amino acid sequences can be linked by non-natural and non-amide chemical bonds.

[0025] In one embodiment, An oncoytic peptide of formula (I) : Km- (WBp K) n

[0026] wherein K is a basic amino acid; wherein W is an aromatic amino acid; wherein B is selected from the group consisting of a basic amino acid, a non-polar acid, and a non-natural amino acid; wherein m is 3 or 4; wherein n is 2 or 3; and wherein p is 1 or 2 of formula (I) .

[0027] In another embodiment, the basic acid is selected from the group consisting of lysine, arginine, and histidine.

[0028] In the other embodiment, the aromatic amino acid is selected from the group consisting of tryptophan, phenylalanine, and tyrosine.

[0029] In the other embodiment, the non-polar acid is selected from the group consisting of leucine, alanine, valine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine, and tryptophan.

[0030] In the other embodiment, the non-natural amino acid is selected from the group consisting of β-naphthylalanine (Nal) , (benzothien-3-yl) alanine (Bal) , diphenylalanine (Dip) , (4, 4′-biphen-yl) alanine (Bip) , (anthracen-9-yl) alanine (Ath) and (2, 5, 7-tri-tert-butyl-indol-3-yl) alanine (Tht) .

[0031] In the other embodiment, a C-terminus of the oncoytic peptide is formed in  part by the group of modifications consisting of amidation, acetylation, formylation, hydroxylation, lipid modification, methylation and phosphorylation.

[0032] The present invention further provides a pharmaceutical composition for treating cancer or inhibiting tumor growth, comprising a therapeutically effective amount of an oncolytic peptide of the present invention and a pharmaceutically acceptable excipient.

[0033] In one embodiment, the cancer comprises melanoma, fibrosarcoma, prostate cancer, breast cancer, uterine cancer, leukemia, ovarian cancer, endometrial cancer, cervical cancer, colorectal cancer, testicular cancer, lymphoma, rhabdomyosarcoma, neuroblastoma, pancreatic cancer, lung cancer, brain tumor, skin cancer, stomach cancer, oral cancer, liver cancer, laryngeal cancer, gallbladder cancer, thyroid cancer, liver cancer, kidney cancer, or nasopharyngeal carcinoma.

[0034] The cancer cells may be from an established cancer cell line. Alternatively, the cancer cells are primary cancer cells obtained from a cancer subject / cancer patient. In some examples, the cancer cells are lung cancer cells, oral cancer cells, salivary gland cancer cells, tongue cancer cells, pharyngeal cancer cells, esophagus cancer cells, stomach cancer cells, pancreatic cancer cells, liver cancer cells, bile duct cancer cells, duodenal cancer cells, small intestine cancer cells, large bowel cancer cells, colon cancer cells, rectal cancer cells, renal cancer cells, bladder cancer cells, prostatic cancer cells, penile cancer cells, testicular tumor cells, endometrium cancer cells, uterine cervix cancer cells, ovarian cancer cells, thyroid cancer cells, parathyroid gland cancer cells, nasal cavity cancer cells, paranasal sinus cancer cells, skin cancer cells, malignant melanoma cells, blood cancer cells, leukemia cells, malignant lymphoma, myeloma cells, angiosarcoma cells, skin cancer cells, breast cancer cells or brain tumor cells.

[0035] The term “therapeutically effective amount” as used herein means an amount of an ncolytic peptide effective in producing the desired therapeutic response in a particular patient (subject) suffering from cancer. Particularly, the term “therapeutically effective amount” includes the amount of the therapeutic agents, which when administered will achieve the desired therapeutic effects. In the context of the present invention the desired therapeutic effects includes partial or total inhibition, delay or prevention of the progression of cancer including cancer  metastasis; inhibition, delay or prevention of the recurrence of cancer including cancer metastasis; and / or the prevention of the onset or development of cancer in a subject. In respect of the therapeutic amount of the therapeutic agents i.e. the oncolytic peptides, consideration is also given that the amount of each of the therapeutic agent used for the treatment of a subject is low enough to avoid undesired or severe side effects, within the scope of sound medical judgment. The therapeutically effective amount when used in combination will vary with the age and physical condition of the end user, the severity of cancer, the duration of the treatment, the nature of any other concurrent therapy, the specific type of therapeutic agent employed for the treatment, the particular pharmaceutically acceptable carrier utilized in the pharmaceutical compositions containing the therapeutic agents and other relevant factors.

[0036] “Subjects” as used herein are generally human subjects and includes, but is not limited to, cancer patients. The subjects may be male or female and may be of any race or ethnicity. The subjects may be of any age, including newborn, neonate, infant, child, adolescent, adult, and geriatric. Subjects may also include animal subjects, particularly mammalian subjects such as canines, felines, bovines, caprines, equines, ovines, porcines, rodents (e.g. mouse, rat, guinea pig, and hamster) , lagomorphs, primates (including non-human primates) , etc.

[0037] The dose of the oncolytic peptide of the present invention is appropriately determined depending upon a purpose for therapy, and conditions such as sexuality, age, weight of a test subject, an administration route, and degree of a disease.

[0038] The term “administration” or “administering” includes routes of introducing the oncolytic peptides of the invention to a subject to perform their intended function. The oncolytic peptide of the present invention can be administered orally, buccally, parenterally, by inhalation spray, rectally, intradermally, transdermally, or topically in dosage unit formulations containing conventional nontoxic pharmaceutically acceptable carriers, adjuvants, and vehicles as desired.

[0039] “Treating” or “treatment” as used herein refers to the treating or treatment of a disease or medical condition (such as cancer, tumor, neoplasm conditions) in a subject / patient, such as a mammal (particularly a human) which includes ameliorating the disease or medical condition, i.e., eliminating or causing regression of the disease  or medical condition in a subject / patient; suppressing the disease or medical condition, i.e., slowing or arresting the development of the disease or medical condition in a subject / patient; or alleviating the symptoms of the disease or medical condition in a subject / patient.

[0040] The term “pharmaceutically acceptable” as used herein means the carrier, diluent, excipient, and / or salt used in the composition should be compatible with the other ingredients of the formulation, and not deleterious to the recipient thereof. “Pharmaceutically acceptable” also means that the compositions or dosage forms are within the scope of sound medical judgment, suitable for use for a subject such as an animal or human without excessive toxicity, irritation, allergic response, or other problems or complication, commensurate with a reasonable benefit / risk ratio.

[0041] The oncolytic peptide of the present invention can be administered in a single dose, in multiple doses throughout a 24-hour period, or by continuous infusion. When administered by continuous infusion, the compounds can be supplied by methods well known in the art, such as, but not limited to, intravenous gravity drip, intravenous infusion pump, implantable infusion pump, or any topical routes. Length of treatment will vary depending on many factors. Treatment of the subject with the oncolytic peptide of the present invention alone or in combination with other agents may last until the treatment will continue for the life of the subject.

[0042] Additional specific embodiments of the present invention include, but are not limited to the following:

[0043] EXAMPLES

[0044] The embodiments encompassed herein are now described with reference to the following examples. These examples are provided for the purpose of illustration only and the disclosure encompassed herein should in no way be construed as being limited to these examples, but rather should be construed to encompass any and all variations which become evident as a result of the teachings provided herein.

[0045] The data of following EXAMPLES were analyzed and performed by the GraphPad Prism Version. All results of the following EXAMPLES were presented as a mean±SD of at least two independent experiments. The results were using the one-way ANOVA and Student's t-test. P-value<0.05 were considered statistically  significant. On the other hand, Animal survival curves (Kaplan–Meier plot) were compared using the log-rank (Mantel–Cox) test.

[0046] EXAMPLE 1

[0047] Oncolytic peptides

[0048] Optionally, in an exemplary embodiment of the present invention, the oncolytic peptides of the present invention includes, but are not limited to, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, and SEQ ID NO: 6.

[0049] Sequences of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 6 which can be employed in accordance with the invention are shown in Table 1 as follows.

[0050] Table 1. Oncolytic peptides sequence

[0051] EXAMPLE 2

[0052] Determination of half inhibitory concentration via cytotoxicity of oncolytic peptides against cancer cell lines

[0053] MTT assay is a colorimetric method for measuring the activity of enzymes in living cells that reduce Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT) to formazan  dyes, giving a purple color. In this embodiment, a colorimetric 3- (4.5-dimethylthiazol-2-yl) -2.5-diphenyltetrazodium bromide (MTT) viability assay was used to assess the in vitro cytotoxicity of oncolytic peptides.

[0054] The half inhibition concentration (IC50) is the concentration required by the oncolytic peptides to reach fifty percent inhibition. In one embodiment, the oncolytic peptides were used for IC50 test via MTT colorimetric assay.

[0055] Human lung cancer line PC9 and A549, murine pancreatic cancer cell line Panc02 were cultured in RPMI medium supplemented with 10%fetal bovine serum and antibiotic in this embodiment. On the other side, murine hepatoma cell line Hepa 1-6, murine melanoma cell line B16-F10, murine fibrosarcoma cell line MN-11, murine mammary cancer cell line EO771 and human diploid fibroblast (HFW) were cultured in DMEM medium supplemented with 10%fetal bovine serum and antibiotic. Cells were cultured in a humidified incubator containing 5%CO2 at 37℃.

[0056] All cancer cell lines were seeded in 96-well plate with concentration 5000-8000 cells / 100μl / well and incubated for 24 hrs. After medium was removed, 100μl fresh medium containing peptide (ranging from 50μM to 0.8μM) was added to the wells. Following 24 hours incubation, fresh medium with MTT (0.5 mg / ml) was replaced and incubated for 3 hours. After medium / MTT was removed, DMSO was added at 100μl for dissolving the formazan crystal. Cell survival rate was calculated by measuring the absorbance at 540 nm using Multi-labeled Microplate Reader (SunriseTM, TECAN) .

[0057] The data showed that the oncolytic peptides have potent anticancer activities against different cancer cell lines (Table 2) .

[0058] Table 2. Half inhibitory concentration of the oncolytic peptides were administrated to cancerous cell lines.

[0059] The rank of anticancer ability in Table 2 is SEQ ID NO: 4≈SEQ ID NO: 5>SEQ ID NO: 2>SEQ ID NO: 1>SEQ ID NO: 3≈SEQ ID NO: 6 in the order.

[0060] EXAMPLE 3

[0061] Peptide Stability in serum

[0062] Since this kind of peptide is highly toxic, the inventors hope that oncoytic peptides can be decomposed after inducing cancer cells to release danger-associated molecular patterns (DAMPs) , and will not stay in the body for too long. After exposure to 25% (vol / vol) bovine calf serum, the residues of peptides were analyzed by liquid chromatography, and the stability at different time points was calculated. The results showed that the oncoytic peptide of SEQ ID NO: 4 decreased by nearly 40%at the fourth hour, and left 35%after eight hours, indicating that peptide should be decomposed after it interacts with tumor cells and will not accumulate in the human body (Table 3) .

[0063] Table 3. Serum stability results for SEQ ID NO. 1-SEQ ID NO. 6.

[0064] EXAMPLE 4

[0065] Animal experiments

[0066] Female C57BL / 6 mice (4-to 6-week old) as allogeneic model animals were purchased from the BioLASCO Taiwan Co., Ltd. and maintained in a specific pathogen-free and controlled environment. During the experiments, female mice, weighing 180–240 g each, were kept in groups of 4 to 6 animals per cage under  climate-controlled conditions, with 12 h light / dark cycles and an ambient temperature. The mice were housed in an enriched individually ventilated cage (IVC) system with free access to standard rodent chow and water ad libitum. The animals were anesthetized during the experimental procedures with 2.5%Isoflurane gas. The animals were monitored daily. All the procedures were conducted according to the regulations of Laboratory Animal Care and Use Committee or Group Setup and Management and the law ofAnimal Protection.

[0067] Palpable tumors (for example, 80-100 mm3 for Hepa 1-6 tumor-bearing mice, 20–30 mm3 for B16-F10 tumor-bearing mice, 100 mm3 for MN-11 tumor-bearing mice, 75 mm3 for EO771 tumor-bearing mice) were injected (I. T. ) with single doses of SEQ ID NO: 4 dissolved in PBS (1.0 mg oncolytic peptide / 50μl PBS) once a day for 3 or 5 consecutive days, and the vehicle control was saline only (0.9%NaCl) .

[0068] Tumor size was measured 3 times a week using a caliper, and the volume of tumors were calculated using the following formula: Tumor size (mm3) =0.5×(width2×length) . The results were shown as volume±SEM. The survival rates of tumor-bearing mice were observed and recorded continuously until all animals were dead.

[0069] EXAMPLE 5

[0070] Pre-cultured B16-F10 was harvested in a DMEM medium and i. d. inoculated total of3×106 cells (mixed equal volume of matrigel) into the both flank of C57BL / 6 mice (6 / group) . Established tumors (100 mm3 mean tumor size) were i. t. injected with peptides (dissolved in sterile H2O with 0.9%NaCl) . Treatment doses of peptides, 1 mg / mouse, 50μl, 1 time / day and give 5 times. Use a 0.5mL syringe needle 29G x 12.7mm (Becton, Dickinson and Company; Franklin Lakes, New Jersey) . Tumor size was measured 3 times a week using a caliper, and the volume of tumors was calculated using the following formula: Tumor size (mm3) =0.5× (width2×length) . Animals were terminated when the tumor exceeded 2000 mm3. The results were shown as volume±SEM. The survival rates of tumor-bearing mice were observed and recorded continuously until all animals were dead.

[0071] Pre-cultured MN-11 were harvested in a DMEM medium and s. c.  inoculated total of5×105 cells (mixed equal volume of matrigel) into the both flank of C57BL / 6 mice (6 / group) . Established tumors (100 mm3 mean tumor size) were i. t. injected with peptides (dissolved in sterile H2O with 0.9%NaCl) . Treatment doses of peptides, 1 mg / mouse, 50μl, 1 time / day and give 5 times. Use a 0.5mL syringe needle 29G x 12.7mm (Becton, Dickinson and Company; Franklin Lakes, New Jersey) . Tumor size was measured 3 times a week using a caliper, and the volume of tumors was calculated using the following formula: Tumor size (mm3) =0.5× (width2×length) . Animals were terminated when the tumor exceeded 2000 mm3. The results were shown as volume±SEM. The survival rates of tumor-bearing mice were observed and recorded continuously until all animals were dead.

[0072] EXAMPLE 6

[0073] Inhibiting hepatocellular carcinoma growth in allograft animal model and prolongs the survival in vivo

[0074] To evaluate the effect of SEQ ID NO: 4 in vivo, the embodiment was used the Hepa 1-6 allogeneic model in C57BL / 6 mice (Fig. 1A-1B) . Hepa 1-6 tumor cells were harvested, and washed in medium and injected intradermally (i. d. ) into the both flanks of C57BL / 6 mice. (3×106 Hepa 1-6 cells per mouse / 50μl RPMI-1640) .

[0075] The embodiment demonstrated that SEQ ID NO: 4 significantly inhibited tumor growth in vivo compared with the saline control group (Fig. 2A-2B) . Furthermore, treatment with SEQ ID NO: 4 did not result in significant changes in body weight or food intake in the mice, implying that SEQ ID NO: 4 may not have toxic effects in vivo (Fig. 2C-2D) . The reason for the weight loss after treatment was presumed to be caused by the tumor excessive swelling.

[0076] EXAMPLE 7

[0077] Inhibiting murine Breast cancer growth in allograft mouse model and prolongs the survival in vivo

[0078] To evaluate the effect of SEQ ID NO: 9 in vivo, the embodiment was used the EO771 allogeneic model in C57BL / 6 mice (Fig. 3) . EO771 tumor cells were harvested, and washed in medium and injected subcutaneously (S.C. ) into the right flank ofC57BL / 6 mice (2×105 EO771 cells per mouse / 50μl RPMI-1640) .

[0079] The embodiment demonstrated that SEQ ID NO: 4 significantly inhibited tumor growth in vivo compared to the saline control group (Fig. 4A-4C) . In addition, there was no significant change in the body weight and food intake of the mice during the treatment of SEQ ID NO: 4, which means that SEQ ID NO: 4 may not have toxic effects in vivo (Fig. 5A-5B) .

[0080] EXAMPLE 8

[0081] Inhibiting melanoma growth in allograft animal model and prolongs the survival in vivo

[0082] To evaluate the effect of SEQ ID NO: 4 in vivo, the embodiment was used the B16-F10 allogeneic model in C57BL / 6 mice (Fig. 6A-6B) . B16-F10 tumor cells were harvested, and washed in medium and injected intradermally (i. d. ) into the both flanks of C57BL / 6 mice. (3×106 B16-F10 cells per mouse / 50μl RPMI-1640) .

[0083] The embodiment demonstrated that SEQ ID NO: 4 significantly inhibited tumor growth in vivo compared with the saline control group, and the inhibitory effect was a systemic response, and the distal tumor (left side) was also inhibited (Fig. 7A-7D) . Furthermore, treatment with SEQ ID NO: 4 did not result in significant changes in body weight or food intake in the mice, implying that SEQ ID NO: 4 may not have toxic effects in vivo (Fig. 8A-8B) . The reason for the weight loss after treatment was presumed to be caused by the tumor excessive swelling.

[0084] EXAMPLE 9

[0085] Inhibiting fibrosarcoma growth in allograft animal model and prolongs the survival in vivo

[0086] To evaluate the effect of SEQ ID NO: 4 in vivo, the embodiment was used the MN-11 allogeneic model in C57BL / 6 mice (Fig. 9) . MN-11 tumor cells were harvested, and washed in medium and injected subcutaneously (S.C. ) into the both flanks of C57BL / 6 mice. (5×105 MN-11 cells per mouse / 50μl RPMI-1640) .

[0087] The embodiment demonstrated that SEQ ID NO: 4 significantly inhibited unilateral (right side) tumor growth in vivo compared to the saline control group (panel) (Fig. 10A-10D) . In addition, there was no significant change in the body weight and food intake of the mice during the treatment of SEQ ID NO: 4, which  means that SEQ ID NO: 4 may not have toxic effects in vivo. The reason for the weight loss after treatment was presumed to be caused by the tumor excessive swelling (Fig. 11A-11B) .

[0088] To sum up, SEQ ID NO: 4 in the present invention extended the lifespan of tumor-bearing mice (Fig. 4C, Fig. 7D and Fig. 10D) . These results indicated that SEQ ID NO: 4 could significantly inhibit tumor growth and improve the survival rate of tumor-bearing C57BL / 6 mice.

[0089] The foregoing is illustrative of the present invention, and is not to be construed as limiting thereof. The invention is defined by the following claims, with equivalents of the claims to be included therein.

Claims

1.An oncoytic peptide of formula (I) , Km- (WBp K) nwherein K is a basic amino acid;wherein W is an aromatic amino acid;wherein B is selected from the group consisting of a basic amino acid, a non-polar acid, and a non-natural amino acid;wherein m is 3 or 4;wherein n is 2 or 3; andwherein p is 1 or 2.2.The oncoytic peptide according to claim 1, wherein the basic acid is selected from the group consisting of lysine, arginine, and histidine.3.The oncoytic peptide according to claim 1, wherein the aromatic amino acid is selected from the group consisting of tryptophan, phenylalanine, and tyrosine.4.The oncoytic peptide according to claim 1, wherein the non-polar acid is selected from the group consisting of leucine, alanine, valine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine, and tryptophan.5.The oncoytic peptide according to claim 1, wherein the non-natural amino acid is selected from the group consisting of β-naphthylalanine (Nal) , (benzothien-3-yl) alanine (Bal) , diphenylalanine (Dip) , (4, 4′-biphen-yl) alanine (Bip) , (anthracen-9-yl) alanine (Ath) and (2, 5, 7-tri-tert-butyl-indol-3-yl) alanine (Tht) .6.The oncoytic peptide according to claim 5, wherein a C-terminus of the oncoytic peptide is formed in part by the group of modifications consisting of amidation, acetylation, formylation, hydroxylation, lipid modification, methylation and phosphorylation.7.The oncoytic peptide according to claim 6, wherein the oncoytic peptide is selected from SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5  and SEQ ID NO: 6.8.An oncoytic peptide for use in a method comprising administering the pharmaceutical composition in a therapeutically effective amount of any one of claim 1 to claim 7 to a subject in need thereof.9.The oncoytic peptide for use according to claim 8, wherein the subject is diagnosed with cancer.10.The oncoytic peptide for use according to claim 9, wherein the cancer comprises melanoma, fibrosarcoma, prostate cancer, breast cancer, uterine cancer, leukemia, ovarian cancer, endometrial cancer, cervical cancer, colorectal cancer, testicular cancer, lymphoma, rhabdomyosarcoma, neuroblastoma, pancreatic cancer, lung cancer, brain tumor, skin cancer, stomach cancer, oral cancer, liver cancer, laryngeal cancer, gallbladder cancer, thyroid cancer, liver cancer, kidney cancer, or nasopharyngeal carcinoma.11.The oncoytic peptide for use according to claim 8, wherein the subject is selected from mammals.12.The oncoytic peptide for use according to claim 11, wherein the mammals are selected from cat, dog, rabbit, cattle, horse, sheep, goat, monkey, mouse, rat, gerbil, guinea pig, pig and the human.13.The method for inhibiting cancer cell viability and destroying cancer cell, comprising:preparing an oncoytic peptide of formula (I) according to claim 1; andallowing the oncoytic peptide to inhibit cancer cells growth and decrease tumor volume.14.The method according to claim 13, wherein the cancer cells comprise lung cancer cells, oral cancer cells, salivary gland cancer cells, tongue cancer cells, pharyngeal cancer cells, esophagus cancer cells, stomach cancer cells, pancreatic cancer cells, liver cancer cells, bile duct cancer cells, duodenal cancer cells, small intestine cancer cells, large bowel cancer cells, colon cancer cells, rectal cancer cells, renal cancer cells, bladder cancer cells, prostatic cancer cells, penile cancer cells, testicular tumor cells, endometrium cancer cells, uterine cervix cancer cells, ovarian cancer cells, thyroid  cancer cells, parathyroid gland cancer cells, nasal cavity cancer cells, paranasal sinus cancer cells, skin cancer cells, malignant melanoma cells, blood cancer cells, leukemia cells, malignant lymphoma, myeloma cells, angiosarcoma cells, skin cancer cells, breast cancer cells or brain tumor cells.15.The method according to claim 13, wherein the oncoytic peptide is selected from SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 6.

Images