Antibodies specifically binding to camptothecin derivatives and uses thereof

Abstract

The invention provides antibodies or antigen-binding fragments thereof specifically binding to a camptothecin derivative, and the uses thereof.

Description

ANTIBODIES SPECIFICALLY BINDING TO CAMPTOTHECIN DERIVATIVES AND USES THEREOF

[0001] CLAIM OF PRIORITY

[0002] This application claims the benefit of PCT Application No. PCT / CN2024 / 078239, filed February 23, 2024. The entire content of the foregoing application is incorporated herein by reference.TECHNICAL FIELD

[0003] This disclosure relates to antibodies specifically binding to a camptothecin derivative and uses thereof.BACKGROUND

[0004] In the field of cancer treatment, the application of small molecule compounds with anti-cancer properties is often limited due to their toxicity towards normal tissues. This issue can be effectively mitigated by conjugating these compounds with monoclonal antibodies, leading to the development of Antibody-Drug Conjugates (ADCs) .

[0005] Camptothecin derivatives have shown promising potential in ADC therapeutics. For instance, Daiichi Sankyo has invented another ADC drug DS-8201a using the camptothecin DXd as the warhead molecule, which has shown good anti-tumor effects. AstraZeneca published a class of novel DNA topoisomerase 1 inhibitor antibody-drug conjugates (Design and Preclinical Evaluation of a Novel B7-H4-Directed Antibody-Drug Conjugate, AZD8205, Alone and in Combination with the PARP1-Selective Inhibitor AZD5305. Clin Cancer Res 2022: OF1-OF16. ) , in which the linker toxin AZ'0133 showed better in vivo efficacy. ADCs are typically heterogeneous and require comprehensive assessment of exposure-efficacy and exposure-safety relationships in both preclinical and clinical studies. Hence, there is a contemporary technological imperative to develop reagents and methodologies for detecting drugs that comprise camptothecin derivatives, such as antibody drugs conjugated with camptothecin derivatives.SUMMARY

[0006] This disclosure relates to antibodies specifically binding to a camptothecin derivative, antigen-binding fragment thereof, and the uses thereof.

[0007] In one aspect, the disclosure is related to an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to a camptothecin derivative comprising:

[0008] a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3, wherein the VH CDR1 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VH CDR1 amino acid sequence, the VH CDR2 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VH CDR2 amino acid sequence, and the VH CDR3 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VH CDR3 amino acid sequence; and

[0009] a light chain variable region (VL) comprising CDRs 1, 2, and 3, wherein the VL CDR1 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VL CDR1 amino acid sequence, the VL CDR2 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VL CDR2 amino acid sequence, and the VL CDR3 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VL CDR3 amino acid sequence,

[0010] wherein the selected VH CDRs 1, 2, and 3 amino acid sequences and the selected VL CDRs 1, 2, and 3 amino acid sequences are one of the following:

[0011] (1) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 1, 2, 3, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, 33, respectively;

[0012] (2) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 4, 5, 6, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, 36, respectively;

[0013] (3) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 7, 8, 9, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, 39, respectively;

[0014] (4) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 10, 11, 12, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, 39, respectively;

[0015] (5) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 13, 14, 15, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, 42, respectively;

[0016] (6) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 16, 17, 18, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, 33, respectively;

[0017] (7) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 19, 20, 21, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, 36, respectively;

[0018] (8) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 22, 23, 24, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, 39, respectively;

[0019] (9) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 25, 26, 27, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, 39, respectively; and

[0020] (10) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 28, 29, 30, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, 42, respectively.

[0021] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 1, 2, and 3 respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, and 33, respectively, according to Kabat definition.

[0022] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 4, 5, and 6 respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, and 36, respectively, according to Kabat definition.

[0023] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 7, 8, and 9 respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, according to Kabat definition.

[0024] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 10, 11, and 12 respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, according to Kabat definition.

[0025] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 13, 14, and 15 respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, and 42, respectively, according to Kabat definition.

[0026] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 16, 17, and 18, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, and 33, respectively, according to Chothia definition.

[0027] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 19, 20, and 21, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, and 36, respectively, according to Chothia definition.

[0028] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 22, 23, and 24, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, according to Chothia definition.

[0029] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 25, 26, and 27, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, according to Chothia definition.

[0030] In some embodiments, the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 28, 29, and 30, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, and 42, respectively, according to Chothia definition.

[0031] In one aspect, the disclosure is related to an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to a camptothecin derivative comprising a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence that is at least 90%identical to a selected VH sequence, and a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence that is at least 90%identical to a selected VL sequence, wherein the selected VH sequence and the selected VL sequence are one of the following:

[0032] (1) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 43, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 44;

[0033] (2) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 45, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 46;

[0034] (3) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 47, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 48;

[0035] (4) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 49, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 50; and

[0036] (5) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 51, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 52.

[0037] In some embodiments, the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 43 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 44.

[0038] In some embodiments, the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 45 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 46.

[0039] In some embodiments, the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 47 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 48.

[0040] In some embodiments, the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 49 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 50.

[0041] In some embodiments, the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 51 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 52.

[0042] In one aspect, the disclosure is related to an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to a camptothecin derivative comprising a heavy chain variable region (VH) comprising VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 that are identical to VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 of a selected VH sequence; and a light chain variable region (VL) comprising VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 that are identical to VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 of a selected VL sequence,

[0043] wherein the selected VH sequence and the selected VL sequence are one of the following:

[0044] (1) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 43, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 44;

[0045] (2) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 45, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 46;

[0046] (3) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 47, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 48;

[0047] (4) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 49, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 50; and

[0048] (5) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 51, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 52.

[0049] In one aspect, the disclosure is related to an antibody or antigen-binding fragment thereof comprising the VH CDRs 1, 2, 3, and the VL CDRs 1, 2, 3 of the antibody or antigen-binding fragment thereof described herein.

[0050] In some embodiments, the VH when paired with a VL specifically binds to a camptothecin derivative, or the VL when paired with a VH specifically binds to a camptothecin derivative.

[0051] In some embodiments, the camptothecin derivative is a compound of the following general formula (I) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof:

[0052] LG-L-D (I) ,

[0053] wherein LG represents none or a ligand; L represents none or a linker; and D is a compound of the following structural formula (II) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof:

[0054] wherein R1 and R2 individually represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group which may contain a halogen atom, a nitro or cyano group, a C2-6 alkenyl group, a C1-6 alkoxyl group, aC1-6 aminoalkoxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a mercapto group, a alkylthio group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl groups which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 aminoalkylamino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 alkyl group with a heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, acarbonyl with a-heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a C1-6 alkylamino group with a heterocyclic ring which may contain C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino (which may contain a protective group) , halogeno, nitro, cyano or a protective group, an amino-heterocyclic group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, a heterocyclic-amino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, or a carbamoyl group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group;

[0055] R3 represents a C1-6 alkyl group;

[0056] R4 represents a C1-6 alkyl, an amino group which may contain a protective group, a quaternary trialkyl ammonium such as-N. sup. + (CH3) 3, a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, a sulfonic acid group, or a carboxyl group;

[0057] Z represents an oxygen atom, a sulfur atom, CR5 R6, wherein R5 and R6 individually represent a hydrogen atom or a C1-6 alkyl, or N-R7, wherein R7 stands for a hydrogen atom, a C1-6 alkyl group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, or a protective group for the amino group; and m and n individually represent 0, 1, or 2.

[0058] In some embodiments, the camptothecin derivative is a compound of the following general formula (I) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof:

[0059] LG-L-D (I) ,

[0060] wherein LG represents none or a ligand; L represents none or a linker; and D is a compound of the following structural formula (VI) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof:

[0061] wherein R1 and R2 individually represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group which may contain a halogen atom, a nitro or cyano group, a C2-6 alkenyl group, a C1-6 alkoxyl group, a C1-6 aminoalkoxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a mercapto group, a alkylthio group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl groups which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 aminoalkylamino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 alkyl group with a heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, acarbonyl with a-heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a C1-6 alkylamino group with a heterocyclic ring which may contain C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino (which may contain a protective group) , halogeno, nitro, cyano or a protective group, an amino-heterocyclic group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, a heterocyclic-amino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, or a carbamoyl group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group;

[0062] or R1 and R2, taken together with the atoms to which they are attached form a 3-, 4-, 5-, or 6-membered heterocycloalkyl or a 3-, 4-, 5-, or 6-membered cycloalkyl, wherein the 3-6 membered heterocycloalkyl or 3-6 membered cycloalkyl is optionally substituted with 1, 2, 3, or 4 substituents selected from a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group which may contain a halogen atom, anitro or cyano group, a C2-6 alkenyl group, a C1-6 alkoxyl group, a C1-6aminoalkoxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a mercapto group, a alkylthio group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl groups which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 aminoalkylamino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 alkyl group with a heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a carbonyl with a-heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a C1-6 alkylamino group with a heterocyclic ring which may contain C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino (which may contain a protective group) , halogeno, nitro, cyano or a protective group, an amino-heterocyclic group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, a heterocyclic-amino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, or a carbamoyl group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group;

[0063] R3 represents a C1-6 alkyl group;

[0064] Z’represents a hydrogen atom, a deuterium atom, an oxygen atom, a sulfur atom, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 haloalkyl, C6-10 aryl, C3-14 cycloalkyl, 5-14 membered heteroaryl, 4-14 membered heterocycloalkyl, C6-10 aryl-C1-4alkyl-, C3-14 cycloalkyl-C1-4 alkyl-, (5-14 membered heteroaryl) -C1-4 alkyl-, (4-14 membered heterocycloalkyl) -C1-4 alkyl-, OR8, C (O) R8, C (O) NR8R8, C (O) OR8, S (O) 2R8, and S (O) 2NR8R8, wherein the C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-10aryl, C3-14 cycloalkyl, 5-14 membered heteroaryl, 4-14 membered heterocycloalkyl, C6-10 aryl-C1-4alkyl-, C3-14 cycloalkyl-C1-4 alkyl-, (5-14 membered heteroaryl) -C1-4 alkyl-, and (4-14 membered heterocycloalkyl) -C1-4 alkyl-of Z’ is each optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 independently selected substituents selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, an amino group which may contain a protective group, a quaternary trialkyl ammonium such as-N. sup. + (CH3) 3, a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, a sulfonic acid group, or a carboxyl group; and

[0065] wherein R8 is selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen atom, a nitro group, acyano group, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, or a protective group for the amino group.

[0066] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is a single-chain variable fragment (scFv) .

[0067] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment is a mouse IgG1 antibody or antigen-binding fragment thereof.

[0068] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment further comprises a detectable label.

[0069] In some embodiments, the detectable label is an enzyme label, a biotin label or a luciferin label.

[0070] In one aspect, the disclosure is related to a nucleic acid comprising a polynucleotide encoding a polypeptide comprising:

[0071] (1) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 1, 2, and 3, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 44 binds to a camptothecin derivative;

[0072] (2) an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, and 33, respectively, and wherein the VL, when paired with a VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 43 binds to a camptothecin derivative;

[0073] (3) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 4, 5, and 6, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 46 binds to a camptothecin derivative;

[0074] (4) an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, and 36, respectively, and wherein the VL, when paired with a VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 45 binds to a camptothecin derivative;

[0075] (5) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 7, 8, and 9, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 48 binds to a camptothecin derivative;

[0076] (6) an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, and wherein the VL, when paired with a VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 47 binds to a camptothecin derivative;

[0077] (7) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 10, 11, and 12, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 50 binds to a camptothecin derivative;

[0078] (8) an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, and wherein the VL, when paired with a VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 49 binds to a camptothecin derivative;

[0079] (9) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 13, 14, and 15, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 52 binds to a camptothecin derivative;

[0080] (10) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a light chain variable region (VL) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, and 42, respectively, and wherein the VL, when paired with a heavy chain variable region (VH) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 51 binds to a camptothecin derivative;

[0081] (11) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 16, 17, and 18, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 44 binds to a camptothecin derivative;

[0082] (12) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 19, 20, and 21, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 46 binds to a camptothecin derivative;

[0083] (13) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 22, 23, and 24, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 48 binds to a camptothecin derivative;

[0084] (14) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 25, 26, and 27, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 50 binds to a camptothecin derivative; or

[0085] (15) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 28, 29, and 30, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 52 binds to a camptothecin derivative.

[0086] In some embodiments, the nucleic acid comprises a polynucleotide encoding a polypeptide comprising an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a VH comprising CDRs 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 1, 2, and 3, respectively.

[0087] In some embodiments, the nucleic acid comprises a polynucleotide encoding a polypeptide comprising an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a VH comprising CDRs 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 16, 17, and 18, respectively.

[0088] In some embodiments, the nucleic acid comprises a polynucleotide encoding a polypeptide comprising an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising CDRs 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, and 33, respectively.

[0089] In some embodiments, the VH when paired with a VL specifically binds to a camptothecin derivative, or the VL when paired with a VH specifically binds to a camptothecin derivative.

[0090] In some embodiments, the immunoglobulin heavy chain or the fragment thereof is a mouse immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof (e.g., a mouse IgG1 heavy chain or a fragment thereof) , and the immunoglobulin light chain or the fragment thereof is a mouse immunoglobulin light chain or a fragment thereof.

[0091] In some embodiments, the nucleic acid encodes a single-chain variable fragment (scFv) . In some embodiments, the nucleic acid is cDNA.

[0092] In one aspect, the disclosure is related to a vector comprising one or more of the nucleic acids described herein.

[0093] In one aspect, the disclosure is related to a vector comprising two of the nucleic acids described herein, wherein the vector encodes the VL region and the VH region that together bind to a camptothecin derivative.

[0094] In one aspect, the disclosure is related to a pair of vectors, wherein each vector comprises one of the nucleic acids described herein, wherein together the pair of vectors encodes the VL region and the VH region that together bind to a camptothecin derivative.

[0095] In one aspect, the disclosure is related to a cell comprising the vector described herein, or the pair of vectors described herein.

[0096] In some embodiments, the cell is a CHO cell.

[0097] In one aspect, the disclosure is related to a cell comprising one or more of the nucleic acids described herein.

[0098] In one aspect, the disclosure is related to a cell comprising two of the nucleic acids described herein.

[0099] In some embodiments, the two nucleic acids together encode the VL region and the VH region that together bind to a camptothecin derivative.

[0100] In one aspect, the disclosure is related to a method of producing an antibody or an antigen-binding fragment thereof, the method comprising:

[0101] (a) culturing the cell described herein under conditions sufficient for the cell to produce the antibody or the antigen-binding fragment; and

[0102] (b) collecting the antibody or the antigen-binding fragment produced by the cell.

[0103] In one aspect, the disclosure is related to a composition comprising the antibody or antigen-binding fragment thereof described herein. In some embodiments, the composition further comprises buffered solution.

[0104] In one aspect, the disclosure is related to a kit comprising the antibody or antigen-binding fragment thereof described herein.

[0105] In some embodiments, the kit is an enzyme-linked immunosorbent assay kit, a fluorescent immunoassay kit, or a chemiluminescent immunoassay kit.

[0106] In one aspect, the disclosure is related to a method of detecting a sample comprising a camptothecin derivative, the method comprising contacting the sample with the antibody or antigen-binding fragment thereof, or the composition described herein.

[0107] In one aspect, the disclosure is related to a method of detecting a sample comprising a camptothecin derivative, the method comprising using the kit described herein.

[0108] In some embodiments, the sample is a tissue sample, a blood sample, a serum sample, or a plasma sample.

[0109] In some embodiments, the sample is obtained from a subject that has been administered with a therapeutic agent comprising a camptothecin derivative.

[0110] In one aspect, the disclosure is related to a method of detecting a sample comprising a camptothecin derivative for non-diagnostic and non-therapeutic purposes.

[0111] As used herein, the term “antibody” refers to any antigen-binding molecule that contains at least one (e.g., one, two, three, four, five, or six) complementary determining region (CDR) (e.g., any of the three CDRs from an immunoglobulin light chain or any of the three CDRs from an immunoglobulin heavy chain) and is capable of specifically binding to an epitope. Non-limiting examples of antibodies include: monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multi-specific antibodies (e.g., bi-specific antibodies) , single-chain antibodies, chimeric antibodies, human antibodies, and humanized antibodies. In some embodiments, an antibody can contain an Fc region of a human antibody. The term antibody also includes derivatives, e.g., bi-specific antibodies, single-chain antibodies, diabodies, linear antibodies, and multi-specific antibodies formed from antibody fragments.

[0112] As used herein, the term “antigen-binding fragment” refers to a portion of a full-length antibody, wherein the portion of the antibody is capable of specifically binding to an antigen. In some embodiments, the antigen-binding fragment contains at least one variable domain (e.g., a variable domain of a heavy chain or a variable domain of light chain) . Non-limiting examples of antibody fragments include, e.g., Fab, Fab’ , F (ab’ ) 2, and Fv fragments.

[0113] As used herein, the term “human antibody” refers to an antibody that is encoded by an endogenous nucleic acid (e.g., rearranged human immunoglobulin heavy or light chain locus) present in a human. In some embodiments, a human antibody is collected from a human or produced in a human cell culture (e.g., human hybridoma cells) . In some embodiments, a human antibody is produced in a non-human cell (e.g., a mouse or hamster cell line) . In some embodiments, a human antibody is produced in a bacterial or yeast cell. In some embodiments, a human antibody is produced in a transgenic non-human animal (e.g., a bovine) containing an unrearranged or rearranged human immunoglobulin locus (e.g., heavy or light chain human immunoglobulin locus) .

[0114] As used herein, the term “chimeric antibody” refers to an antibody that contains a sequence present in at least two different antibodies (e.g., antibodies from two different mammalian species such as a human and a mouse antibody) . A non-limiting example of a chimeric antibody is an antibody containing the variable domain sequences (e.g., all or part of a light chain and / or heavy chain variable domain sequence) of a non-human (e.g., mouse) antibody and the constant domains of a human antibody. Additional examples of chimeric antibodies are described herein and are known in the art.

[0115] As used herein, the term “humanized antibody” refers to a non-human antibody which contains minimal sequence derived from a non-human (e.g., mouse) immunoglobulin and contains sequences derived from a human immunoglobulin. In non-limiting examples, humanized antibodies are human antibodies (recipient antibody) in which hypervariable (e.g., CDR) region residues of the recipient antibody are replaced by hypervariable (e.g., CDR) region residues from a non-human antibody (e.g., a donor antibody) , e.g., a mouse, rat, or rabbit antibody, having the desired specificity, affinity, and capacity. In some embodiments, the Fv framework residues of the human immunoglobulin are replaced by corresponding non-human (e.g., mouse) immunoglobulin residues. In some embodiments, humanized antibodies may contain residues which are not found in the recipient antibody or in the donor antibody. These modifications can be made to further refine antibody performance. In some embodiments, the humanized antibody contains substantially all of at least one, and typically two, variable domains, in which all or substantially all of the hypervariable loops (CDRs) correspond to those of a non-human (e.g., mouse) immunoglobulin and all or substantially all of the framework regions are those of a human immunoglobulin. The humanized antibody can also contain at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc) , typically, that of a human immunoglobulin. Humanized antibodies can be produced using molecular biology methods known in the art. Non-limiting examples of methods for generating humanized antibodies are described herein.

[0116] As used herein, the term “single-chain antibody” refers to a single polypeptide that contains at least two immunoglobulin variable domains (e.g., a variable domain of a mammalian immunoglobulin heavy chain or light chain) that is capable of specifically binding to an antigen. Non-limiting examples of single-chain antibodies are described herein.

[0117] As used herein, the terms “subject” and “patient” are used interchangeably throughout the specification and describe an animal, human or non-human, to whom treatment according to the methods of the present invention is provided. Veterinary and non-veterinary applications are contemplated by the present invention. Human patients can be adult humans or juvenile humans (e.g., humans below the age of 18 years old) . In addition to humans, patients include but are not limited to mice, rats, hamsters, guinea-pigs, rabbits, ferrets, cats, dogs, and primates. Included are, for example, non-human primates (e.g., monkey, chimpanzee, gorilla, and the like) , rodents (e.g., rats, mice, gerbils, hamsters, ferrets, rabbits) , lagomorphs, swine (e.g., pig, miniature pig) , equine, canine, feline, bovine, and other domestic, farm, and zoo animals.

[0118] As used herein, when referring to an antibody, the phrases “specifically binding” and “specifically binds” mean that the antibody interacts with its target molecule (e.g., a camptothecin derivative) preferably to other molecules, because the interaction is dependent upon the presence of a particular structure on the target molecule; in other words, the reagent is recognizing and binding to molecules that include a specific structure rather than to all molecules in general. An antibody that specifically binds to the target molecule may be referred to as a target-specific antibody. For example, an antibody that specifically binds to a camptothecin derivative molecule may be referred to as a camptothecin derivative-specific antibody or an anti-camptothecin derivative antibody.

[0119] As used herein, the terms “polypeptide, ” “peptide, ” and “protein” are used interchangeably to refer to polymers of amino acids of any length of at least two amino acids.

[0120] As used herein, the terms “polynucleotide, ” “nucleic acid molecule, ” and “nucleic acid sequence” are used interchangeably herein to refer to polymers of nucleotides of any length of at least two nucleotides, and include, without limitation, DNA, RNA, DNA / RNA hybrids, and modifications thereof.

[0121] As used herein, the singular forms “a” , “an” , and “the” include plural referents unless expressly stated to the contrary.

[0122] As used herein, the terms “comprise” and “include” are intended to specify the presence of stated features, integers, components, or steps, but they do not preclude the presence or addition of one or more other features, integers, components, steps, or groups thereof.

[0123] As used herein, the term “about” means approximately, in the region of, roughly, or around. When the term “about” is used in conjunction with a numerical range, it modifies that range by extending the boundaries above and below the numerical values set forth. In general, the term “about” is used herein to modify a numerical value above and below the given value by a variance of 20%, typically 10%, more typically 5%, and even more typically 1%. Sometimes, such a range can lie within the experimental error, type of standard methods used for the measurement and / or determination of a given value or range.

[0124] Definitions of specific functional groups and chemical terms are described in more detail below. For purpose of this invention, the chemical elements are identified in accordance with the Periodic Table of the Elements, CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Edition, inside cover, and specific functional groups are generally defined as described therein. Additionally, general principles of organic chemistry, as well as specific functional moieties and reactivity, are described in Organic Chemistry, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March, March’s Advanced Organic Chemistry, 5th Edition, John Wiley&Sons, Inc., New York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989; Carruthers, Some Modem Methods ofOrganic Synthesis, 3rd Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 1987.

[0125] When a range of values is listed, it is intended to encompass each value and sub-range within the range. For example, “C1-6” is intended to encompass, C1, C2, C3, C4, C5, C6, C1-6, C1-5, C1-4, C1-3, C1-2, C2-6, C2-5, C2-4, C2-3, C3-6, C3-5, C3-4, C4-6, C4-5, and C5-6.

[0126] As used herein, the term “alkyl” , whether as part of another term or used independently, refers to an acyclic straight or branched chain saturated hydrocarbon group, which may be optionally substituted (i.e., unsubstituted or substituted) independently with one or more substituents described below. The term “Ci-j alkyl” refers to an alkyl having i to j carbon atoms. In certain embodiments, alkyl groups contain 1 to 12 carbon atoms. In certain embodiments, alkyl groups contain 1 to 11 carbon atoms. In certain embodiments, alkyl groups contain 1 to 11 carbon atoms, 1 to 10 carbon atoms, 1 to 9 carbon atoms, 1 to 8 carbon atoms, 1 to 7 carbon atoms, 1 to 6 carbon atoms, 1 to 5 carbon atoms, 1 to 4 carbon atoms, 1 to 3 carbon atoms, or 1 to 2 carbon atoms. Non-limiting examples of alkyl groups include methyl; ethyl; n-and iso-propyl; n-, sec-, iso-and tert-butyl; neopentyl, and the like. Alkyl groups may be optionally substituted, as valency permits, with one, two, three, or, in the case of alkyl groups of two carbons or more, four or more substituents independently selected from the group consisting of: alkoxy; acyloxy; amino; aryl; aryloxy; azido; cycloalkyl; cycloalkoxy; halo; heterocyclyl; heteroaryl; heterocyclylalkyl; heteroarylalkyl; heterocyclyloxy; heteroaryloxy; hydroxy; nitro; thiol; silyl; cyano; =O; =S; and=NR’ , where R’ is H, alkyl, aryl, or heterocyclyl. In certain embodiments, alkyl groups may be optionally substituted with halo, amino, hydroxy, methoxy, nitro, cyano, etc. Each of the substituents may itself be unsubstituted or, as valency permits, substituted with unsubstituted substituent (s) defined herein for each respective group.

[0127] As used herein, the term “alkenyl” , whether as part of another term or used independently, refers to linear or branched-chain hydrocarbon radical having at least one carbon-carbon double bond, which may be optionally substituted (i.e., unsubstituted or substituted) independently with one or more substituents described herein, and includes radicals having “cis” and “trans” orientations. In certain embodiments, alkenyl groups contain 2 to 12 carbon atoms. In certain embodiments, alkenyl groups contain 2 to 11 carbon atoms. In certain embodiments, alkenyl groups contain 2 to 11 carbon atoms, 2 to 10 carbon atoms, 2 to 9 carbon atoms, 2 to 8 carbon atoms, 2 to 7 carbon atoms, 2 to 6 carbon atoms, 2 to 5 carbon atoms, 2 to 4 carbon atoms, 2 to 3 carbon atoms. In certain embodiments, alkenyl groups contain 2 carbon atoms. Non-limiting examples of alkenyl groups include ethylenyl (or vinyl) , propenyl, butenyl, pentenyl, 1-methyl-2-buten-1-yl, 5-hexenyl, and the like. An optionally substituted alkenyl is an alkenyl that is optionally substituted as described herein for alkyl.

[0128] As used herein, the term “alkoxy” , whether as part of another term or used independently, refers to a chemical substituent of formula-OR, where R is an alkyl group, particularly C1-12alkyl, C1-10alkyl, C1-6 alkyl, etc. Alkoxy groups may be unsubstituted or substituted. An optionally substituted alkoxy is an alkoxy group that is optionally substituted as defined herein for alkyl.

[0129] As used herein, the term “halogen” or “halo” refers to fluoride, chloride, bromide and iodide, particularly fluoride and chloride, and more particularly fluoride.

[0130] As used herein, the term “heteroatom” refers to nitrogen (N) , oxygen (O) , and sulfur (S) , and may include any oxidized form of nitrogen and sulfur, and any quaternized form of a basic nitrogen, unless otherwise stated.

[0131] As used herein, the term “heterocyclyl” or “heterocyclic ring” , whether as part of another term or used independently, refers to a monocyclic, bicyclic, tricyclic, or tetracyclic ring system having fused or bridged 4-, 5-, 6-, 7-, or 8-membered rings, unless otherwise specified, the ring system containing one, two, three, or four heteroatoms independently selected from the group consisting of nitrogen, oxygen, and sulfur. Heterocyclyl groups may be 3-to 12-membered, for example, 3-to 10-membered, 4-to 12-membered, 4-to 10-membered, 5-to 12-membered, 5-to 10-membered, 5-to 8-membered. Heterocyclyl may be aromatic or non-aromatic. An aromatic heterocyclyl is heteroaryl as described herein. Non-aromatic 5-membered heterocyclyl has zero or one double bonds, non-aromatic 6-and 7-membered heterocyclyl groups have zero to two double bonds, and non-aromatic 8-membered heterocyclyl groups have zero to two double bonds and / or zero or one carbon-carbon triple bond. Heterocyclyl groups have a carbon count of 1 to 16 carbon atoms unless otherwise specified. Certain heterocyclyl groups may have a carbon count up to 9 carbon atoms. Non-aromatic heterocyclyl groups include pyrrolinyl, pyrrolidinyl, pyrazolinyl, pyrazolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, piperidinyl, homopiperidinyl, piperazinyl, pyridazinyl, oxazolidinyl, isoxazolidiniyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, thiazolidinyl, isothiazolidinyl, thiazolidinyl, tetrahydrofuranyl, dihydrofuranyl, tetrahydrothienyl, dihydrothienyl, pyranyl, dihydropyranyl, dithiazolyl, etc.

[0132] Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. Methods and materials are described herein for use in the present invention; other, suitable methods and materials known in the art can also be used. The materials, methods, and examples are illustrative only and not intended to be limiting. All publications, patent applications, patents, sequences, database entries, and other references mentioned herein are incorporated by reference in their entirety. In case of conflict, the present specification, including definitions, will control.

[0133] Other features and advantages of the invention will be apparent from the following detailed description and figures, and from the claims.DESCRIPTION OF DRAWINGS

[0134] FIG. 1 lists CDR sequences of anti-camptothecin derivative antibodies as defined by Kabat numbering.

[0135] FIG. 2 lists CDR sequences of anti-camptothecin derivative antibodies as defined by Chothia numbering.

[0136] FIG. 3 lists amino acid sequences of heavy chain variable regions and light chain variable regions of anti-camptothecin derivative antibodies.

[0137] FIG. 4 lists certain amino acid sequences discussed in the disclosure.

[0138] FIGs. 5A-5D show the standard curve using antibody concentration (ng / mL) as the X-axis and calibrated absorbance values (delta represents OD450nm-OD630nm) as the Y-axis when determining the concentrations of Trastuzumab analog (FIG. 5A) , T-CPT2 (FIG. 5B) , T-VA-AZ0132 (FIG. 5C) , and T-GGFG-Dxd (FIG. 5D) respectively by ELISA, using 1D12 as the detection antibody.

[0139] FIGs. 6A-6D show the standard curve using antibody concentration (ng / mL) as the X-axis and calibrated absorbance values (delta represents OD450nm-OD630nm) as the Y-axis when determining the concentrations of Trastuzumab analog (FIG. 6A) , T-CPT2 (FIG. 6B) , T-VA-AZ0132 (FIG. 6C) , and T-GGFG-Dxd (FIG. 6D) respectively by ELISA, using Anti-Dxd mIgG antibody as the detection antibody.

[0140] FIG. 7 shows the standard curve using antibody concentration (ng / mL) as the X-axis and optical density values as the Y-axis when determining the concentrations of T-CPT2, T-VA-AZ0132 and T-GGFG-Dxd by ELISA, using 1D12 as the detection antibody.

[0141] FIG. 8 shows the standard curve using toxin molecule concentration (nM) as the X-axis and optical density values as the Y-axis when using 1D12 to detect ISO-GGFG-Dxd, add different concentrations of Dxd, Exatecan, CTP2, AZ0132, SN38, or MMAE as competitive molecules.

[0142] FIG. 9 shows the Immunohistochemistry (IHC) results of Trastuzumab deruxtecan in vivo in a NUGC-4 xenografts mouse model. Biotin-1D12 was used as the detection antibody.DETAILED DESCRIPTION

[0143] The present disclosure provides examples of antibodies, antigen-binding fragment thereof, that bind to a camptothecin derivative.

[0144] Camptothecin derivative

[0145] As used herein, the term "camptothecin derivative" refers to a compound includes structural parts represented by the structural formula (II) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof. These are derived from the natural product camptothecin. For example, it can be a compound represented by the structural formula (II) , or a conjugate of the compound represented by the structural formula (II) with a ligand through a linker.

[0146] In some embodiments, the camptothecin derivative is a compound of the following general formula (I) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof:

[0147] LG-L-D (I) ,

[0148] wherein LG represents none or a ligand; L represents none or a linker; and D is a compound of the following structural formula (II) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof,

[0149] wherein R1 and R2 individually represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group which may contain a halogen atom, a nitro or cyano group, a C2-6 alkenyl group, a C1-6 alkoxyl group, aC1-6 aminoalkoxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a mercapto group, a alkylthio group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl groups which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 aminoalkylamino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 alkyl group with a heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a carbonyl with a-heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a C1-6 alkylamino group with a heterocyclic ring which may contain C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino (which may contain a protective group) , halogeno, nitro, cyano or a protective group, an amino-heterocyclic group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, a heterocyclic-amino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, or a carbamoyl group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group;

[0150] R3 represents a C1-6 alkyl group;

[0151] R4 represents a C1-6 alkyl, an amino group which may contain a protective group, a quaternary trialkyl ammonium such as-N. sup. + (CH3) 3, a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, a sulfonic acid group, or a carboxyl group;

[0152] Z represents an oxygen atom, a sulfur atom, CR5 R6, wherein R5 and R6 individually represent a hydrogen atom or a C1-6 alkyl, or N-R7, wherein R7 stands for a hydrogen atom, a C1-6 alkyl group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, or a protective group for the amino group; and m and n individually represent 0, 1 or 2.

[0153] In some embodiments, D in formula (I) is represented by the following structural formula (III) :

[0154] wherein R1 and R2 individually represent a hydrogen atom, C1-3 alkyl, C2-3 alkenyl, hydroxymethyl, hydroxyl, C1-3 alkoxyl, halogen, nitro, amino, C1-3 alkylamino, cyano-C1-3 alkyl, aminomethyl, and the like.

[0155] R3represents an Ethyl group.

[0156] R4 represents a C1-3 alkyl, a hydrogen atom, amino group which may contain a protective group, aC1-6 alkylamino, a amino-C1-6 alkyl, or a C1-6 alkylamino-C1-6 alkyl group. Among these, especially preferable are hydrogen atom, amino, methylamino, dimethylamino, aminomethyl, ethylamino, diethylamino, aminoethyl, methylaminomethyl, dimethylaminomethyl, hydroxy ethylamino and the like.

[0157] Z represents an oxygen atom, a sulfur atom, CR5 R6, wherein R5 and R6 individually represent a hydrogen atom or a C1-6 alkyl.

[0158] In some embodiments, D in formula (I) is represented by the following structural formula (Ⅳ) :

[0159] examples of preferable combination ofR4, R1 and R2 include such that:

[0160] R4 is H, NH2, NHCH3 or N (CH3) 2, and

[0161] R1 or R2 is H, CH3 or F.

[0162] Among them, the most preferred combination is where R4 is H or NH2, R1 is 4-methyl and R2 is 5-fluoro, or R1 and R2 are both H.

[0163] In some embodiments, D in formula (I) is a compound selected from the group consist of the following compounds or ADCs using them as payload:

[0164] In some embodiments, the camptothecin derivative can be a compound represented by the structural formula (VI) , or a conjugate of the compound represented by the structural formula (VI) with a ligand through a linker.

[0165] In some embodiments, the camptothecin derivative is a compound of the following general formula (I) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof:

[0166] LG-L-D (I) ,

[0167] wherein LG represents none or a ligand; L represents none or a linker; and D is a compound of the following structural formula (VI) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof,

[0168] wherein R1 and R2 individually represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group which may contain a halogen atom, a nitro or cyano group, a C2-6 alkenyl group, a C1-6 alkoxyl group, aC1-6 aminoalkoxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a mercapto group, a alkylthio group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl groups which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 aminoalkylamino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 alkyl group with a heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, acarbonyl with a-heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a C1-6 alkylamino group with a heterocyclic ring which may contain C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino (which may contain a protective group) , halogeno, nitro, cyano or a protective group, an amino-heterocyclic group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, a heterocyclic-amino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, or a carbamoyl group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group;

[0169] or R1 and R2, taken together with the atoms to which they are attached form a 3-, 4-, 5-, or 6-membered heterocycloalkyl or a 3-, 4-, 5-, or 6-membered cycloalkyl, wherein the 3-6 membered heterocycloalkyl or 3-6 membered cycloalkyl is optionally substituted with 1, 2, 3, or 4 substituents selected from a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group which may contain a halogen atom, anitro or cyano group, a C2-6 alkenyl group, a C1-6 alkoxyl group, a C1-6aminoalkoxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a mercapto group, a alkylthio group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl groups which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 aminoalkylamino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 alkyl group with a heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a carbonyl with a-heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a C1-6 alkylamino group with a heterocyclic ring which may contain C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino (which may contain a protective group) , halogeno, nitro, cyano or a protective group, an amino-heterocyclic group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, a heterocyclic-amino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, or a carbamoyl group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group;

[0170] R3 represents a C1-6 alkyl group;

[0171] Z’represents a hydrogen atom, a deuterium atom, an oxygen atom, a sulfur atom, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 haloalkyl, C6-10 aryl, C3-14 cycloalkyl, 5-14 membered heteroaryl, 4-14 membered heterocycloalkyl, C6-10 aryl-C1-4alkyl-, C3-14 cycloalkyl-C1-4 alkyl-, (5-14 membered heteroaryl) -C1-4 alkyl-, (4-14 membered heterocycloalkyl) -C1-4 alkyl-, OR8, C (O) R8, C (O) NR8R8, C (O) OR8, S (O) 2R8, and S (O) 2NR8R8, wherein the C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-10aryl, C3-14 cycloalkyl, 5-14 membered heteroaryl, 4-14 membered heterocycloalkyl, C6-10 aryl-C1-4alkyl-, C3-14 cycloalkyl-C1-4 alkyl-, (5-14 membered heteroaryl) -C1-4 alkyl-, and (4-14 membered heterocycloalkyl) -C1-4 alkyl-of Z’ is each optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 independently selected substituents selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, an amino group which may contain a protective group, aquaternary trialkyl ammonium such as-N. sup. + (CH3) 3, a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, a sulfonic acid group, or a carboxyl group; and

[0172] wherein R8 is selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, or a protective group for the amino group.

[0173] In some embodiments, D in formula (I) is represented by the following structural formula (VII)

[0174] wherein R1 and R2 individually represent a hydrogen atom, C1-3 alkyl, C2-3 alkenyl, hydroxymethyl, hydroxyl, C1-3 alkoxyl, halogen, nitro, amino, C1-3 alkylamino, cyano-C1-3 alkyl, aminomethyl, and the like;

[0175] or R1 and R2, taken together with the atoms to which they are attached form a 5-or 6-membered heterocycloalkyl, wherein the 5-or 6-membered heterocycloalkyl is optionally substituted with 1, 2, 3, or 4 substituents selected from a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 alkylamino group, an amino-C1-6 alkyl group, or a C1-6 alkylamino-C1-6 alkyl group.

[0176] R3 represents a C1-3 alkyl group. In some embodiments, R3 is ethyl.

[0177] Z’represents a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen atom, a hydroxyl group, C1-6 alkyl, C3-14 cycloalkyl, C6-10 aryl-C1-4 alkyl-, C3-14cycloalkyl-C1-4alkyl-, (5-14 membered heteroaryl) -C1-4alkyl-, (4-14 membered heterocycloalkyl) -C1-4alkyl-, wherein the C1-6 alkyl, C3-14cycloalkyl, C6-10 aryl-C1-4 alkyl-, C3-14 cycloalkyl-C1-4 alkyl-, (5-14 membered heteroaryl) -C1-4 alkyl-, and (4-14 membered heterocycloalkyl) -C1-4 alkyl-of Z’ is each optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 independently selected substituents selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, an amino group which may contain a protective group, aquaternary trialkyl ammonium such as-N. sup. + (CH3) 3, a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, a sulfonic acid group, or a carboxyl group.

[0178] In some embodiments, Z’ represents a hydrogen atom, C1-6 alkyl, C3-14cycloalkyl, and C3-14 cycloalkyl-C1-4 alkyl-, wherein the C1-6 alkyl, C3-14 cycloalkyl, and C3-14cycloalkyl-C1-4 alkyl-of Z’ is each optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 independently selected substituents selected from a hydrogen atom, an amino group which may contain a protective group, a quaternary trialkyl ammonium such as-N. sup. + (CH3) 3, a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, a sulfonic acid group, or a carboxyl group.

[0179] In some embodiments, Z’ represents a hydrogen atom.

[0180] In some embodiments, Z’ represents C1-6 alkyl, such as methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, and n-butyl. In some embodiments, Z’ represents ethyl.

[0181] In some embodiments, the C1-6 alkyl of Z’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 independently selected substituents selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, an amino group which may contain a protective group, and a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group. In some embodiments, the protective group present in the amino and C1-6 alkylamino group of Z’ includes methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, methoxy, methoxy, ethoxy, propoxy, a sulfonyl group optionally substituted with one or more methyl, one or more ethyl, one or more n-propyl, or one or more iso-propyl, and a phosphinyl group optionally substituted with one or more methyl, one or more ethyl, one or more n-propyl, or one or more iso-propyl.

[0182] In some embodiments, Z’ represents C3-14 cycloalkyl, such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl, bicyclo [2.1.0] pentan-1-yl. In some embodiments, the C3-14 cycloalkyl of Z’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 independently selected substituents selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, an amino group which may contain a protective group, and a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group. In some embodiments, the protective group present in the amino and C1-6 alkylamino group of Z’ includes methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, methoxy, methoxy, ethoxy, propoxy, a sulfonyl group optionally substituted with one or more methyl, one or more ethyl, one or more n-propyl, or one or more iso-propyl, and a phosphinyl group optionally substituted with one or more methyl, one or more ethyl, one or more n-propyl, or one or more iso-propyl.

[0183] In some embodiments, D in formula (I) is a compound selected from the group consist of the following compounds or ADCs using them as payload:

[0184] As used herein, the term "ligand" refers to a compound that recognizes and binds an antigen or receptor associated with a target cell. Ligand can be a cell-binding agents. “cell-binding agents” of the present invention can be of any kind presently known, or that become known, including peptides and non-peptides that binds to a cell or cell component (e.g., receptor, protein, DNA, RNA, etc. ) . Generally, these can be antibodies (such as polyclonal antibodies and monoclonal antibodies, especially monoclonal antibodies) or fragments thereof, lymphokines, hormones, growth factors, vitamins (such as folate etc., which can bind to a cell surface receptor thereof, e.g., a folate receptor) , nutrient-transport molecules (such as transferrin) , probodies, nanobodies, or any other cell-binding molecule or substance.

[0185] In certain embodiments, the cell-binding agent is an antibody, a single chain antibody, an antibody fragment that specifically binds to the target cell, a monoclonal antibody, a single chain monoclonal antibody, a monoclonal antibody fragment that specifically binds to a target cell, a chimeric antibody, a chimeric antibody fragment that specifically binds to the target cell, a domain antibody (e.g., sdAb) , or a domain antibody fragment that specifically binds to the target cell. In certain embodiments, the cell-binding agent is a humanized antibody, a humanized single chain antibody, or a humanized antibody fragment. In certain embodiments, the cell-binding agent is a resurfaced antibody, a resurfaced single chain antibody, or a resurfaced antibody fragment. In certain embodiments, the cell-binding agent is an antibody or an antigen-binding portion thereof (including antibody derivatives) . The cell-binding agent may bind to a ligand on the target cell, such as a cell-surface ligand, including cell-surface receptors. In certain embodiments, the cell-binding agent binds to target cells selected from tumor cells, virus infected cells, microorganism infected cells, parasite infected cells, autoimmune cells, activated cells, myeloid cells, activated T-cells, B cells, or melanocytes. In some embodiments, the cell-binding agent binds to cells expressing any one or more of 5T4, ADAM-9, ALK, AMHRII, ASCT2, Axl, B7-H3, BCMA, C4.4a, CA6, CA9, CanAg, CD123, CD138, CD142, CD166, CD184, CD19, CD20, CD205, CD22, CD248, CD25, CD3, CD30, CD33, CD352, CD37, CD38, CD40L, CD44v6, CD45, CD46, CD48, CD51, CD56, CD7, CD70, CD71, CD74, CD79b, CDH6, CEACAM5, CEACAM6, cKIT, CLDN18.2, CLDN6, CLL-1, c-MET, Cripto, CSP-1, CXCR5, DLK-1, DLL3, DPEP3, Dysadherin, EFNA4, EGFR, EGFRviii, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, ETBR, FGFR2, FGFR3, FLT3, FOLR-alpha, FSH, GCC, GD2, GD3, Globo H, GPC-1, GPC3, gpNMB, HER-2, HER-3, HLA-DR, HSP90, IGF-1R, IL-13R, IL1RAP, IL7R, Interleukin-4 Receptor (IL4R) , KAAG-1, LAMP-1, Lewis Y antigen, LGALS3BP, LGR5, LH / hCG, LHRH, LIV-1, LRP-1, LRRC15, Ly6E, MAGE, Mesothelin (MSLN) , MET, MHC class I chain-related protein A and B (MICA and MICB) , MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC1, MUC16, NaPi2b, Nectin-4, NOTCH3, OAcGD2, OX001L, p-Cadherin, PD-L1, Phosphatidylserine (PS) , Polymorphic epithelial mucin (PEM) , Prolactin Receptor (PRLR) , PSMA, PTK7, RNF43, ROR1, ROR2, SAIL, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, SSTR2, STEAP-1, STING, STn, TIM-1, TM4SF1, TNF-alpha, TRA, TROP-2, Tumor-associated glycoprotein 72 (TAG-72) , tumor-specific epitope of mucin-1 (TA-MUC1) , CD5, TIM-3, UPK2, or UPK1b antigen. In certain embodiments, the cell-binding agent is a cysteine-engineered antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to cells expressing any one or more of the 5T4, ADAM-9, ALK, AMHRII, ASCT2, Axl, B7-H3, BCMA, C4.4a, CA6, CA9, CanAg, CD123, CD138, CD142, CD166, CD184, CD19, CD20, CD205, CD22, CD248, CD25, CD3, CD30, CD33, CD352, CD37, CD38, CD40L, CD44v6, CD45, CD46, CD48, CD51, CD56, CD7, CD70, CD71, CD74, CD79b, CDH6, CEACAM5, CEACAM6, cKIT, CLDN18.2, CLDN6, CLL-1, c-MET, Cripto, CSP-1, CXCR5, DLK-1, DLL3, DPEP3, Dysadherin, EFNA4, EGFR, EGFRviii, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, ETBR, FGFR2, FGFR3, FLT3, FOLR-alpha, FSH, GCC, GD2, GD3, Globo H, GPC-1, GPC3, gpNMB, HER-2, HER-3, HLA-DR, HSP90, IGF-1R, IL-13R, IL1RAP, IL7R, Interleukin-4 Receptor (IL4R) , KAAG-1, LAMP-1, Lewis Y antigen, LGALS3BP, LGR5, LH / hCG, LHRH, LIV-1, LRP-1, LRRC15, Ly6E, MAGE, Mesothelin (MSLN) , MET, MHC class I chain-related protein A and B (MICA and MICB) , MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC1, MUC16, NaPi2b, Nectin-4, NOTCH3, OAcGD2, OX001L, p-Cadherin, PD-L1, Phosphatidylserine (PS) , Polymorphic epithelial mucin (PEM) , Prolactin Receptor (PRLR) , PSMA, PTK7, RNF43, ROR1, ROR2, SAIL, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, SSTR2, STEAP-1, STING, STn, TIM-1, TM4SF1, TNF-alpha, TRA, TROP-2, Tumor-associated glycoprotein 72 (TAG-72) , tumor-specific epitope of mucin-1 (TA-MUC1) , CD5, TIM-3, UPK2, or UPK1b antigen.

[0186] As used herein, the term "linker" or “linking agent compound” refers to a compound that can connect a ligand (e.g., cell-bingding agents described herein) and therapeutic agents (e.g., camptothecin derivatives described herein) together to form a ligand-drug conjugate by reacting with a group of the ligand compound and the therapeutic agent compound respectively by, for example, a coupling reaction. “linker” of the present invention can be of any kind presently known, or that become known.

[0187] Antibodies and Antigen Binding Fragments

[0188] The present disclosure provides anti-camptothecin derivative antibodies and antigen-binding fragments thereof. In general, antibodies (also called immunoglobulins) are made up of two classes of polypeptide chains, light chains and heavy chains. A non-limiting antibody of the present disclosure can be an intact, four immunoglobulin chain antibody comprising two heavy chains and two light chains. The heavy chain of the antibody can be of any isotype including IgM, IgG, IgE, IgA, or IgD or sub-isotype including IgG1, IgG2, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgG4, IgE1, IgE2, etc. The light chain can be a kappa light chain or a lambda light chain. An antibody can comprise two identical copies of a light chain and two identical copies of a heavy chain. The heavy chains, which each contain one variable domain (or variable region, VH) and multiple constant domains (or constant regions) , bind to one another via disulfide bonding within their constant domains to form the “stem” of the antibody. The light chains, which each contain one variable domain (or variable region, VL) and one constant domain (or constant region) , each bind to one heavy chain via disulfide binding. The variable region of each light chain is aligned with the variable region of the heavy chain to which it is bound. The variable regions of both the light chains and heavy chains contain three hypervariable regions sandwiched between more conserved framework regions (FR) .

[0189] These hypervariable regions, known as the complementary determining regions (CDRs) , form loops that comprise the principle antigen binding surface of the antibody. The four framework regions largely adopt a beta-sheet conformation and the CDRs form loops connecting, and in some cases forming part of, the beta-sheet structure. The CDRs in each chain are held in close proximity by the framework regions and, with the CDRs from the other chain, contribute to the formation of the antigen-binding region.

[0190] Methods for identifying the CDR regions of an antibody by analyzing the amino acid sequence of the antibody are well known, and a number of definitions of the CDRs are commonly used. The Kabat definition is based on sequence variability, and the Chothia definition is based on the location of the structural loop regions. These methods and definitions are described in, e.g., Martin, "Protein sequence and structure analysis of antibody variable domains, " Antibody engineering, Springer Berlin Heidelberg, 2001. 422-439; Abhinandan, et al. "Analysis and improvements to Kabat and structurally correct numbering of antibody variable domains, " Molecular immunology 45. 14 (2008) : 3832-3839; Wu, T.T. and Kabat, E.A. (1970) J. Exp. Med. 132: 211-250; Martin et al., Methods Enzymol. 203: 121-53 (1991) ; Morea et al., Biophys Chem. 68 (1-3) : 9-16 (Oct. 1997) ; Morea et al., J Mol Biol. 275 (2) : 269-94 (Jan. 1998) ; Chothia et al., Nature 342 (6252) : 877-83 (Dec. 1989) ; Ponomarenko and Bourne, BMC Structural Biology 7: 64 (2007) ; each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

[0191] In some embodiments, the antibody is an intact immunoglobulin molecule (e.g., IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgM, IgD, IgE, IgA) . The IgG subclasses (IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4) are highly conserved, differ in their constant region, particularly in their hinges and upper CH2 domains. The sequences and differences of the IgG subclasses are known in the art, and are described, e.g., in Vidarsson, et al, "IgG subclasses and allotypes: from structure to effector functions. " Frontiers in immunology 5 (2014) ; Irani, et al. "Molecular properties of human IgG subclasses and their implications for designing therapeutic monoclonal antibodies against infectious diseases. " Molecular immunology 67.2 (2015) : 171-182; Shakib, Farouk, ed. The human IgG subclasses: molecular analysis of structure, function and regulation. Elsevier, 2016; each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

[0192] The antibody can also be an immunoglobulin molecule that is derived from any species (e.g., human, rodent, mouse, camelid) . Antibodies disclosed herein also include, but are not limited to, polyclonal, monoclonal, monospecific, polyspecific antibodies, and chimeric antibodies that include an immunoglobulin binding domain fused to another polypeptide. The term “antigen binding domain” or “antigen binding fragment” is a portion of an antibody that retains specific binding activity of the intact antibody, i.e., any portion of an antibody that is capable of specific binding to an epitope on the intact antibody’s target molecule. It includes, e.g., Fab, Fab', F (ab') 2, and variants of these fragments. Thus, in some embodiments, an antibody or an antigen binding fragment thereof can be, e.g., a scFv, a Fv, a Fd, a dAb, a bispecific antibody, a bispecific scFv, a diabody, a linear antibody, a single-chain antibody molecule, a multi-specific antibody formed from antibody fragments, and any polypeptide that includes a binding domain which is, or is homologous to, an antibody binding domain. Non-limiting examples of antigen binding domains include, e.g., the heavy chain and / or light chain CDRs of an intact antibody, the heavy and / or light chain variable regions of an intact antibody, full length heavy or light chains of an intact antibody, or an individual CDR from either the heavy chain or the light chain of an intact antibody.

[0193] In some embodiments, the scFv has one heavy chain variable domain, and one light chain variable domain.

[0194] Anti-camptothecin derivative Antibodies and Antigen-Binding Fragments

[0195] The present disclosure provides antibodies that specifically bind to a camptothecin derivative with high affinity and yet do not bind at a detectable level to a non-camptothecin derivative. These antibodies are particular useful as reagents for detecting a camptothecin derivative in preclinical pharmacology studies of therapeutic agents comprising a camptothecin derivative in cynomolgus monkey or another non-human primate. The present antibodies also can be used in preclinical immunohistochemistry studies.

[0196] The present antibodies may bind to the six ring structures of the parent nucleus structure of the camptothecin derivative (rings A, B, C, D, E, F of compounds represented by the following structural formula (II) . These advantages include higher binding affinity and specificity and more diverse epitope recognition.

[0197] The present antibodies may also bind to the five ring structures of the parent nucleus structure of the camptothecin derivative (rings B, C, D, E, F of compounds represented by the following structural formula (II) . These advantages include higher binding affinity and specificity and more diverse epitope recognition.

[0198] The disclosure provides antibodies and antigen-binding fragments thereof that specifically bind to a camptothecin derivative. The antibodies and antigen-binding fragments described herein are capable of binding to a camptothecin derivative.

[0199] The disclosure provides e.g., anti-camptothecin derivative antibody 1D12, 1B4, 1B7, 1C2 and 1E4, the chimeric antibodies thereof, and the human or humanized antibodies thereof.

[0200] The CDR sequences for 1D12, and 1D12 derived antibodies include CDRs of the heavy chain variable domain, SEQ ID NOs: 1-3, and CDRs of the light chain variable domain, SEQ ID NOs: 31-33 as defined by Kabat numbering. The CDRs can also be defined by Chothia system. Under the Chothia numbering, the CDR sequences of the heavy chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 16-18 and CDR sequences of the light chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 31-33.

[0201] The amino acid sequence for the heavy chain variable region of 1D12 antibody is set forth in SEQ ID NO: 43. The amino acid sequence for the light chain variable region of 1D12 antibody is set forth in SEQ ID NO: 44.

[0202] The CDR sequences for 1B4, and 1B4 derived antibodies include CDRs of the heavy chain variable domain, SEQ ID NOs: 4-6, and CDRs of the light chain variable domain, SEQ ID NOs: 34-36 as defined by Kabat numbering. The CDRs can also be defined by Chothia system. Under the Chothia numbering, the CDR sequences of the heavy chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 19-21 and CDR sequences of the light chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 34-36.

[0203] The amino acid sequence for the heavy chain variable region of 1B4 antibody is set forth in SEQ ID NO: 45. The amino acid sequence for the light chain variable region of 1B4 antibody is set forth in SEQ ID NO: 46.

[0204] The CDR sequences for 1B7, and 1B7 derived antibodies include CDRs of the heavy chain variable domain, SEQ ID NOs: 7-9, and CDRs of the light chain variable domain, SEQ ID NOs: 37-39 as defined by Kabat numbering. The CDRs can also be defined by Chothia system. Under the Chothia numbering, the CDR sequences of the heavy chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 22-24 and CDR sequences of the light chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 37-39.

[0205] The amino acid sequence for the heavy chain variable region of 1B7 antibody is set forth in SEQ ID NO: 47. The amino acid sequence for the light chain variable region of 1B7antibody is set forth in SEQ ID NO: 48.

[0206] The CDR sequences for 1C2, and 1C2 derived antibodies include CDRs of the heavy chain variable domain, SEQ ID NOs: 10-12, and CDRs of the light chain variable domain, SEQ ID NOs: 37-39 as defined by Kabat numbering. The CDRs can also be defined by Chothia system. Under the Chothia numbering, the CDR sequences of the heavy chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 25-27 and CDR sequences of the light chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 37-39.

[0207] The amino acid sequence for the heavy chain variable region of 1C2 antibody is set forth in SEQ ID NO: 49. The amino acid sequence for the light chain variable region of 1C2 antibody is set forth in SEQ ID NO: 50.

[0208] The CDR sequences for 1E4, and 1E4 derived antibodies include CDRs of the heavy chain variable domain, SEQ ID NOs: 13-15, and CDRs of the light chain variable domain, SEQ ID NOs: 40-42 as defined by Kabat numbering. The CDRs can also be defined by Chothia system. Under the Chothia numbering, the CDR sequences of the heavy chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 28-30 and CDR sequences of the light chain variable domain are set forth in SEQ ID NOs: 40-42.

[0209] The amino acid sequence for the heavy chain variable region of 1E4 antibody is set forth in SEQ ID NO: 51. The amino acid sequence for the light chain variable region of 1E4 antibody is set forth in SEQ ID NO: 52.

[0210] The amino acid sequences for heavy chain variable regions and light variable regions of the modified antibodies are also provided. In some embodiments, the heavy chain variable region is at least 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%identical to SEQ ID NOs: 43, 45, 47, 49 or 51. In some embodiments, the light chain variable region is at least 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%identical to SEQ ID NO: 44, 46, 48, 50 or 52. The heavy chain variable region sequence can be paired with the corresponding light chain variable region sequence, and together they bind to a camptothecin derivative.

[0211] Humanization percentage means the percentage identity of the heavy chain or light chain variable region sequence as compared to human antibody sequences in International Immunogenetics Information System (IMGT) database. The top hit means that the heavy chain or light chain variable region sequence is closer to a particular species than to other species. For example, top hit to human means that the sequence is closer to human than to other species. Top hit to human and Macaca fascicularis means that the sequence has the same percentage identity to the human sequence and the Macaca fascicularis sequence, and these percentages identities are highest as compared to the sequences of other species. In some embodiments, humanization percentage is greater than 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, or 95%. A detailed description regarding how to determine humanization percentage and how to determine top hits is known in the art, and is described, e.g., in Jones, et al. "The INNs and outs of antibody nonproprietary names. " MAbs. Vol. 8. No. 1. Taylor&Francis, 2016, which is incorporated herein by reference in its entirety. A high humanization percentage often has various advantages, e.g., more safe and more effective in humans, more likely to be tolerated by a human subject, and / or less likely to have side effects. In some embodiments, the variable regions are fully human, e.g., derived from human heavy chain immunoglobulin locus sequences (e.g., recombination of human IGHV, human IGHD, and human IGHJ genes) , and / or human kappa chain immunoglobulin locus sequences (e.g., recombination of human IGKV and human IGKJ genes) .

[0212] Furthermore, in some embodiments, the antibodies or antigen-binding fragments thereof described herein can also contain one, two, or three heavy chain variable region CDRs selected from the group of SEQ ID NOs: 1-3, SEQ ID NOs: 4-6, SEQ ID NOs: 7-9, SEQ ID NOs: 10-12, SEQ ID NOs: 13-15, SEQ ID NOs: 16-18, SEQ ID NOs: 19-21, SEQ ID NOs: 22-24, SEQ ID NOs: 25-27, and SEQ ID NOs: 28-30; and / or one, two, or three light chain variable region CDRs selected from the group of SEQ ID NOs: 31-33, SEQ ID NOs: 34-36, SEQ ID NOs: 37-39, and SEQ ID NOs: 40-42.

[0213] In some embodiments, the antibodies can have a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, 3, wherein the CDR1 region comprises or consists of an amino acid sequence that is at least 80%, 85%, 90%, or 95%identical to a selected VH CDR1 amino acid sequence, the CDR2 region comprises or consists of an amino acid sequence that is at least 80%, 85%, 90%, or 95%identical to a selected VH CDR2 amino acid sequence, and the CDR3 region comprises or consists of an amino acid sequence that is at least 80%, 85%, 90%, or 95%identical to a selected VH CDR3 amino acid sequence. In some embodiments, the antibody can have a light chain variable region (VL) comprising CDRs 1, 2, 3, wherein the CDR1 region comprises or consists of an amino acid sequence that is at least 80%, 85%, 90%, or 95%identical to a selected VL CDR1 amino acid sequence, the CDR2 region comprises or consists of an amino acid sequence that is at least 80%, 85%, 90%, or 95%identical to a selected VL CDR2 amino acid sequence, and the CDR3 region comprises or consists of an amino acid sequence that is at least 80%, 85%, 90%, or 95%identical to a selected VL CDR3 amino acid sequence. The selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are shown in FIG. 1 (Kabat CDR) and FIG. 2 (Chothia CDR) .

[0214] To determine the percent identity of two amino acid sequences, or of two nucleic acid sequences, the sequences are aligned for optimal comparison purposes (e.g., gaps can be introduced in one or both of a first and a second amino acid or nucleic acid sequence for optimal alignment and non-homologous sequences can be disregarded for comparison purposes) . The amino acid residues or nucleotides at corresponding amino acid positions or nucleotide positions are then compared. When a position in the first sequence is occupied by the same amino acid residue or nucleotide as the corresponding position in the second sequence, then the molecules are identical at that position. The percent identity between the two sequences is a function of the number of identical positions shared by the sequences, taking into account the number of gaps, and the length of each gap, which need to be introduced for optimal alignment of the two sequences. For example, the comparison of sequences and determination of percent identity between two sequences can be accomplished using a Blossum 62 scoring matrix with a gap penalty of 12, a gap extend penalty of 4, and a frameshift gap penalty of 5.

[0215] The disclosure also provides nucleic acid comprising a polynucleotide encoding a polypeptide comprising an immunoglobulin heavy chain or an immunoglobulin light chain. The immunoglobulin heavy chain or immunoglobulin light chain comprises CDRs as shown in FIG. 1 or FIG. 2, or have sequences as shown in FIG. 3. When the polypeptides are paired with corresponding polypeptide (e.g., a corresponding heavy chain variable region or a corresponding light chain variable region) , the paired polypeptides bind to a camptothecin derivatives.

[0216] The anti-camptothecin derivative antibodies and antigen-binding fragments can also be antibody variants (including derivatives and conjugates) of antibodies or antibody fragments and multi-specific (e.g., bi-specific) antibodies or antibody fragments. Additional antibodies provided herein are polyclonal, monoclonal, multi-specific (multimeric, e.g., bi-specific) , human antibodies, chimeric antibodies (e.g., human-mouse chimera) , single-chain antibodies, intracellularly-made antibodies (i.e., intrabodies) , and antigen-binding fragments thereof. The antibodies or antigen-binding fragments thereof can be of any type (e.g., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, and IgY) , class (e.g., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, and IgA2) , or subclass. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is an IgG antibody or antigen-binding fragment thereof.

[0217] Fragments of antibodies are suitable for use in the methods provided so long as they retain the desired affinity and specificity of the full-length antibody. Thus, a fragment of an antibody that binds to a camptothecin derivative will retain an ability to bind to a camptothecin derivative. An Fv fragment is an antibody fragment which contains a complete antigen recognition and binding site. This region consists of a dimer of one heavy and one light chain variable domain in tight association, which can be covalent in nature, for example in scFv. It is in this configuration that the three CDRs of each variable domain interact to define an antigen binding site on the surface of the VH-VL dimer. Collectively, the six CDRs or a subset thereof confer antigen binding specificity to the antibody. However, even a single variable domain (or half of an Fv comprising only three CDRs specific for an antigen) can have the ability to recognize and bind antigen, although usually at a lower affinity than the entire binding site.

[0218] Single-chain Fv (scFv) or antibody fragments comprise the VH and VL domains (or regions) of antibody, wherein these domains are present in a single polypeptide chain. Generally, the scFv polypeptide further comprises a polypeptide linker between the VH and VL domains, which enables the scFv to form the desired structure for antigen binding.

[0219] The Fab fragment contains a variable and constant domain of the light chain and a variable domain and the first constant domain (CH1) of the heavy chain. F (ab') 2 antibody fragments comprise a pair of Fab fragments which are generally covalently linked near their carboxy termini by hinge cysteines between them. Other chemical couplings of antibody fragments are also known in the art.

[0220] An anti-camptothecin derivative antibody or antigen-binding portion of the present disclosure can be derivatized or linked to another molecule (e.g., another peptide or protein) . In general, the antibodies or portions thereof are derivatized such that camptothecin derivative binding is not affected adversely by the derivatization or labeling. For example, an antibody or antibody portion of the present disclosure can be functionally linked (by chemical coupling, genetic fusion, noncovalent association or otherwise) to one or more other molecular entities, such as another antibody or a detectable label or tag. Examples include, but are not limited to, radioisotopes or radionuclides (e.g., 3H, 14C, 15N, 35S) fluorescent labels (e.g., FITC, rhodamine, lanthanide phosphors, phycoerythrin, or the Alexa dyes) , enzymatic labels (e.g., horseradish peroxidase, b-galactosidase, luciferase, alkaline phosphatase) , chemiluminescent markers, biotinyl groups, predetermined polypeptide epitopes recognized by a secondary reporter (e.g., leucine zipper pair sequences, binding sites for secondary antibodies, metal binding domains, epitope tags) , and magnetic agents such as gadolinium chelates. In some embodiments, labels are attached by spacer arms of various lengths to reduce potential steric hindrance.

[0221] Antibody Characteristics

[0222] The present disclosure provides antibodies that specifically bind to a camptothecin derivative with high affinity.

[0223] General techniques for measuring the affinity of an antibody for the camptothecin derivative include, e.g., ELISA, RIA, BLI (biolayer interferometry) and surface plasmon resonance (SPR) .

[0224] In some implementations, the antibody (or antigen-binding fragments thereof) specifically binds to a camptothecin derivative with a dissociation rate (koff) of less than 0.1 s-1, less than 0.01 s-1, less than 0.001 s-1, less than 0.0001 s-1, less than 0.00001 s-1, less than 0.000001 s-1 or less than 0.0000001 s-1. In some embodiments, the dissociation rate (koff) is greater than 0.01 s-1, greater than 0.001 s-1, greater than 0.0001 s-1, greater than 0.00001 s-1, greater than 0.000001 s-1, greater than 0.0000001 s-1 or greater than 0.00000001 s-1.

[0225] In some embodiments, kinetic association rates (kon) is greater than 1 x 102 / Ms, greater than 1 x 103 / Ms, greater than 1 x 104 / Ms, greater than 1 x 105 / Ms, or greater than 1 x 106 / Ms. In some embodiments, kinetic association rates (kon) is less than 1 x 105 / Ms, less than 1 x 106 / Ms, or less than 1 x 107 / Ms.

[0226] Affinities can be deduced from the quotient of the kinetic rate constants (KD=koff / kon) . In some embodiments, KD is less than 1 x 10-6M, less than 1 x 10-7M, less than 1 x 10-8 M, less than 1 x 10-9 M, less than 1 x 10-10 M, less than 1 x 10-11 M, less than 1 x 10-12 M, less than 1 x 10-13 M or less than 1 x 10-14 M. In some embodiments, the KD is less than 50 nM, 30 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, or 1 nM. In some embodiments, KD is greater than 1 x 10-7M, greater than 1 x 10-8M, greater than 1 x 10-9 M, greater than 1 x 10-10 M, greater than 1 x 10-11 M, greater than 1 x 10-12 M, greater than 1 x 10-13 M, greater than 1 x 10-14 M.

[0227] In some embodiments, thermal stabilities are determined. The antibodies or antigen binding fragments as described herein can have a Tm greater than 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, or 95℃. In some embodiments, Tm is less than 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, or 95℃.

[0228] In some embodiments, the Fc region is human IgG1, human IgG2, human IgG3, or human IgG4. In some embodiments, the antibody is a human IgG1 antibody, optionally with SI mutations, LALA mutations, N297A mutation, YTE mutations, and / or FLAA mutations. In some embodiments, the antibody is a human IgG4 antibody, optionally with SI mutations, LALA mutations, N297A mutation, YTE mutations, and / or FLAA mutations.

[0229] In some embodiments, the antibodies or antigen binding fragments do not have a functional Fc region. For example, the antibodies or antigen binding fragments are Fab, Fab’ , F (ab’ ) 2, and Fv fragments. In some embodiments, the Fc region has LALA mutations (L234A and L235A mutations according to EU numbering) , or LALA-PG mutations (L234A, L235A, P329G mutations according to EU numbering) . In some embodiments, the Fc region has FLAA mutations (F234A and L235A according to EU numbering) . In some embodiments, the Fc has N297A mutation according to EU numbering. In some embodiments, the Fc has YTE mutations (M252Y, S254T and T256E according to EU numbering) .

[0230] Methods of Making Anti-Camptothecin derivative Antibodies

[0231] A camptothecin derivative conjugated to Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH) or Ovalbumin (OVA) can be used as an immunogen to generate antibodies using standard techniques for polyclonal and monoclonal antibody preparation. Polyclonal antibodies can be raised in animals by multiple injections (e.g., subcutaneous or intraperitoneal injections) of an antigenic peptide or protein. In some embodiments, the antigenic peptide or protein is injected with at least one adjuvant. In some embodiments, the antigenic peptide or protein can be conjugated to an agent that is immunogenic in the species to be immunized. Animals can be injected with the antigenic peptide or protein more than one time (e.g., twice, three times, or four times) .

[0232] An immunogen typically is used to prepare antibodies by immunizing a suitable subject (e.g., human or transgenic animal expressing at least one human immunoglobulin locus) . An appropriate immunogenic preparation can contain, for example, a conjugate of a camptothecin derivative with KLH or OVA. The preparation can further include an adjuvant, such as Freund’s complete or incomplete adjuvant, or a similar immunostimulatory agent.

[0233] The antibody titer in the immunized subject can be monitored over time by standard techniques, such as with an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using the immobilized a camptothecin derivative polypeptide or peptide. If desired, the antibody molecules can be isolated from the mammal (e.g., from the blood) and further purified by well-known techniques, such as protein A of protein G chromatography to obtain the IgG fraction. At an appropriate time after immunization, e.g., when the specific antibody titers are highest, antibody-producing cells can be obtained from the subject and used to prepare monoclonal antibodies by standard techniques, such as the hybridoma technique originally described by Kohler et al. (Nature 256: 495-497, 1975) , the human B cell hybridoma technique (Kozbor et al., Immunol. Today 4: 72, 1983) , the EBV-hybridoma technique (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96, 1985) , or trioma techniques. The technology for producing hybridomas is well known (see, generally, Current Protocols in Immunology, 1994, Coligan et al. (Eds. ) , John Wiley&Sons, Inc., New York, NY) . Hybridoma cells producing a monoclonal antibody are detected by screening the hybridoma culture supernatants for antibodies that bind the camptothecin derivative, e.g., using a standard ELISA assay.

[0234] Variants of the antibodies or antigen-binding fragments described herein can be prepared by introducing appropriate nucleotide changes into the DNA encoding a human, humanized, or chimeric antibody, or antigen-binding fragment thereof described herein, or by peptide synthesis. Such variants include, for example, deletions, insertions, or substitutions of residues within the amino acids sequences that make-up the antigen-binding site of the antibody or an antigen-binding domain. In a population of such variants, some antibodies or antigen-binding fragments will have increased affinity for the target, e.g., a camptothecin derivative. Any combination of deletions, insertions, and / or combinations can be made to arrive at an antibody or antigen-binding fragment thereof that has increased binding affinity for the target. The amino acid changes introduced into the antibody or antigen-binding fragment can also alter or introduce new post-translational modifications into the antibody or antigen-binding fragment, such as changing (e.g., increasing or decreasing) the number of glycosylation sites, changing the type of glycosylation site (e.g., changing the amino acid sequence such that a different sugar is attached by enzymes present in a cell) , or introducing new glycosylation sites.

[0235] Antibodies disclosed herein can be derived from any species of animal, including mammals. Non-limiting examples of native antibodies include antibodies derived from humans, primates, e.g., monkeys and apes, cows, pigs, horses, sheep, camelids (e.g., camels and llamas) , chicken, goats, and rodents (e.g., rats, mice, hamsters and rabbits) , including transgenic rodents genetically engineered to produce human antibodies.

[0236] Human and humanized antibodies include antibodies having variable and constant regions derived from (or having the same amino acid sequence as those derived from) human germline immunoglobulin sequences. Human antibodies may include amino acid residues not encoded by human germline immunoglobulin sequences (e.g., mutations introduced by random or site-specific mutagenesis in vitro or by somatic mutation in vivo) , for example in the CDRs.

[0237] A humanized antibody, typically has a human framework (FR) grafted with non-human CDRs. Thus, a humanized antibody has one or more amino acid sequence introduced into it from a source which is non-human. These non-human amino acid residues are often referred to as “import” residues, which are typically taken from an “import” variable domain. Humanization can be essentially performed by e.g., substituting rodent CDRs or CDR sequences for the corresponding sequences of a human antibody. These methods are described in e.g., Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986) ; Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988) ; Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988) ; each of which is incorporated by reference herein in its entirety. Accordingly, “humanized” antibodies are chimeric antibodies wherein substantially less than an intact human V domain has been substituted by the corresponding sequence from a non-human species. In practice, humanized antibodies are typically mouse antibodies in which some CDR residues and some FR residues are substituted by residues from analogous sites in human antibodies.

[0238] The choice of human VH and VL domains to be used in making the humanized antibodies is very important for reducing immunogenicity. According to the so-called “best-fit” method, the sequence of the V domain of a mouse antibody is screened against the entire library of known human-domain sequences. The human sequence which is closest to that of the mouse is then accepted as the human FR for the humanized antibody (Sims et al., J. Immunol., 151: 2296 (1993) ; Chothia et al., J. Mol. Biol., 196: 901 (1987)) .

[0239] It is further important that antibodies be humanized with retention of high specificity and affinity for the antigen and other favorable biological properties. To achieve this goal, humanized antibodies can be prepared by a process of analysis of the parental sequences and various conceptual humanized products using three-dimensional models of the parental and humanized sequences. Three-dimensional immunoglobulin models are commonly available and are familiar to those skilled in the art. Computer programs are available which illustrate and display probable three-dimensional conformational structures of selected candidate immunoglobulin sequences. Inspection of these displays permits analysis of the likely role of the residues in the functioning of the candidate immunoglobulin sequence, i.e., the analysis of residues that influence the ability of the candidate immunoglobulin to bind its antigen. In this way, FR residues can be selected and combined from the recipient and import sequences so that the desired antibody characteristic, such as increased affinity for the target antigen (s) , is achieved.

[0240] Ordinarily, amino acid sequence variants of the human, humanized, or chimeric anti-camptothecin derivative antibody will contain an amino acid sequence having at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%percent identity with a sequence present in the light or heavy chain of the original antibody.

[0241] In some embodiments, Balb / c mice is used to generate antibodies.

[0242] Identity or homology with respect to an original sequence is usually the percentage of amino acid residues present within the candidate sequence that are identical with a sequence present within the human, humanized, or chimeric anti-camptothecin derivative antibody or fragment, after aligning the sequences and introducing gaps, if necessary, to achieve the maximum percent sequence identity, and not considering any conservative substitutions as part of the sequence identity.

[0243] Additional modifications to the anti-camptothecin derivative antibodies or antigen-binding fragments can be made. For example, a cysteine residue (s) can be introduced into the Fc region, thereby allowing interchain disulfide bond formation in this region. The homodimeric antibody thus generated may have any increased half-life in vitro and / or in vivo. Homodimeric antibodies with increased half-life in vitro and / or in vivo can also be prepared using heterobifunctional cross-linkers as described, for example, in Wolff et al. (Cancer Res. 53: 2560-2565, 1993) . Alternatively, an antibody can be engineered which has dual Fc regions (see, for example, Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230, 1989) .

[0244] In some embodiments, a covalent modification can be made to the anti-camptothecin derivative antibody or antigen-binding fragment thereof. These covalent modifications can be made by chemical or enzymatic synthesis, or by enzymatic or chemical cleavage. Other types of covalent modifications of the antibody or antibody fragment are introduced into the molecule by reacting targeted amino acid residues of the antibody or fragment with an organic derivatization agent that is capable of reacting with selected side chains or the N-or C-terminal residues.

[0245] Recombinant Vectors

[0246] The present disclosure also provides recombinant vectors (e.g., an expression vectors) that include an isolated polynucleotide disclosed herein (e.g., a polynucleotide that encodes a polypeptide disclosed herein) , host cells into which are introduced the recombinant vectors (i.e., such that the host cells contain the polynucleotide and / or a vector comprising the polynucleotide) , and the production of recombinant antibody polypeptides or fragments thereof by recombinant techniques.

[0247] As used herein, a “vector” is any construct capable of delivering one or more polynucleotide (s) of interest to a host cell when the vector is introduced to the host cell. An “expression vector” is capable of delivering and expressing the one or more polynucleotide (s) of interest as an encoded polypeptide in a host cell into which the expression vector has been introduced. Thus, in an expression vector, the polynucleotide of interest is positioned for expression in the vector by being operably linked with regulatory elements such as a promoter, enhancer, and / or a poly-A tail, either within the vector or in the genome of the host cell at or near or flanking the integration site of the polynucleotide of interest such that the polynucleotide of interest will be translated in the host cell introduced with the expression vector.

[0248] A vector can be introduced into the host cell by methods known in the art, e.g., electroporation, chemical transfection (e.g., DEAE-dextran) , transformation, transfection, and infection and / or transduction (e.g., with recombinant virus) . Thus, non-limiting examples of vectors include viral vectors (which can be used to generate recombinant virus) , naked DNA or RNA, plasmids, cosmids, phage vectors, and DNA or RNA expression vectors associated with cationic condensing agents.

[0249] In some implementations, a polynucleotide disclosed herein (e.g., a polynucleotide that encodes a polypeptide disclosed herein) is introduced using a viral expression system (e.g., vaccinia or other pox virus, retrovirus, or adenovirus) , which may involve the use of a non-pathogenic (defective) , replication competent virus, or may use a replication defective virus. In the latter case, viral propagation generally will occur only in complementing virus packaging cells. Suitable systems are disclosed, for example, in Fisher-Hoch et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 317-321; Flexner et al., 1989, Ann. N.Y. Acad Sci. 569: 86-103; Flexner et al., 1990, Vaccine, 8: 17-21; U.S. Pat. Nos. 4,603,112, 4,769,330, and 5,017,487; WO 89 / 01973; U.S. Pat. No. 4,777,127; GB 2,200,651; EP 0,345,242; WO 91 / 02805; Berkner-Biotechniques, 6: 616-627, 1988; Rosenfeld et al., 1991, Science, 252: 431-434; Kolls et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 215-219; Kass-Eisler et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 11498-11502; Guzman et al., 1993, Circulation, 88: 2838-2848; and Guzman et al., 1993, Cir. Res., 73: 1202-1207. Techniques for incorporating DNA into such expression systems are well known to those of ordinary skill in the art. The DNA may also be “naked, ” as described, for example, in Ulmer et al., 1993, Science, 259: 1745-1749, and Cohen, 1993, Science, 259: 1691-1692. The uptake of naked DNA may be increased by coating the DNA onto biodegradable beads that are efficiently transported into the cells.

[0250] For expression, the DNA insert comprising an antibody-encoding or polypeptide-encoding polynucleotide disclosed herein can be operatively linked to an appropriate promoter (e.g., a heterologous promoter) , such as the phage lambda PL promoter, the E. coli lac, trp and tac promoters, the SV40 early and late promoters and promoters of retroviral LTRs, to name a few. Other suitable promoters are known to the skilled artisan. The expression constructs can further contain sites for transcription initiation, termination and, in the transcribed region, a ribosome binding site for translation. The coding portion of the mature transcripts expressed by the constructs may include a translation initiating at the beginning and a termination codon (UAA, UGA, or UAG) appropriately positioned at the end of the polypeptide to be translated.

[0251] As indicated, the expression vectors can include at least one selectable marker. Such markers include dihydrofolate reductase or neomycin resistance for eukaryotic cell culture and tetracycline or ampicillin resistance genes for culturing in E. coli and other bacteria. Representative examples of appropriate hosts include, but are not limited to, bacterial cells, such as E. coli, Streptomyces, and Salmonella typhimurium cells; fungal cells, such as yeast cells; insect cells such as Drosophila S2 and Spodoptera Sf9 cells; animal cells such as CHO, COS, Bowes melanoma, and HK 293 cells; and plant cells. Appropriate culture mediums and conditions for the host cells described herein are known in the art.

[0252] Non-limiting vectors for use in bacteria include pQE70, pQE60 and pQE-9, available from Qiagen; pBS vectors, Phagescript vectors, Bluescript vectors, pNH8A, pNH16a, pNH18A, pNH46A, available from Stratagene; and ptrc99a, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, pRIT5 available from Pharmacia. Non-limiting eukaryotic vectors include pWLNEO, pSV2CAT, pOG44, pXT1 and pSG available from Stratagene; and pSVK3, pBPV, pMSG and pSVL available from Pharmacia. Other suitable vectors will be readily apparent to the skilled artisan.

[0253] Non-limiting bacterial promoters suitable for use include the E. coli lacI and lacZ promoters, the T3 and T7 promoters, the gpt promoter, the lambda PR and PL promoters and the trp promoter. Suitable eukaryotic promoters include the CMV immediate early promoter, the HSV thymidine kinase promoter, the early and late SV40 promoters, the promoters of retroviral LTRs, such as those of the Rous sarcoma virus (RSV) , and metallothionein promoters, such as the mouse metallothionein-I promoter.

[0254] In the yeast Saccharomyces cerevisiae, a number of vectors containing constitutive or inducible promoters such as alpha factor, alcohol oxidase, and PGH may be used. For reviews, see Ausubel et al. (1989) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley&Sons, New York, N.Y, and Grant et al., Methods Enzymol., 153: 516-544 (1997) .

[0255] Introduction of the construct into the host cell can be effected by calcium phosphate transfection, DEAE-dextran mediated transfection, cationic lipid-mediated transfection, electroporation, transduction, infection or other methods. Such methods are described in many standard laboratory manuals, such as Davis et al., Basic Methods In Molecular Biology (1986) , which is incorporated herein by reference in its entirety.

[0256] Transcription of DNA encoding an antibody of the present disclosure by higher eukaryotes may be increased by inserting an enhancer sequence into the vector. Enhancers are cis-acting elements ofDNA, usually about from 10 to 300 bp that act to increase transcriptional activity of a promoter in a given host cell-type. Examples of enhancers include the SV40 enhancer, which is located on the late side of the replication origin at base pairs 100 to 270, the cytomegalovirus early promoter enhancer, the polyoma enhancer on the late side of the replication origin, and adenovirus enhancers.

[0257] For secretion of the translated protein into the lumen of the endoplasmic reticulum, into the periplasmic space or into the extracellular environment, appropriate secretion signals may be incorporated into the expressed polypeptide. The signals may be endogenous to the polypeptide or they may be heterologous signals.

[0258] The polypeptide (e.g., antibody) can be expressed in a modified form, such as a fusion protein (e.g., a GST-fusion) or with a histidine-tag, and may include not only secretion signals, but also additional heterologous functional regions. For instance, a region of additional amino acids, particularly charged amino acids, may be added to the N-terminus of the polypeptide to improve stability and persistence in the host cell, during purification, or during subsequent handling and storage. Also, peptide moieties can be added to the polypeptide to facilitate purification. Such regions can be removed prior to final preparation of the polypeptide. The addition of peptide moieties to polypeptides to engender secretion or excretion, to improve stability and to facilitate purification, among others, are familiar and routine techniques in the art.

[0259] Application of Antibodies

[0260] The antibodies or antigen-binding fragments thereof of the present disclosure can be used to detect a sample comprising a camptothecin derivative.

[0261] The present anti-camptothecin derivative antibody and antigen-binding fragment of the present disclosure are useful for detecting and / or measuring the level of a camptothecin derivative in a sample.

[0262] The term “sample” could include but is not limited to biological samples (such as blood, tissue, cells) , environmental samples (like soil or water) , chemical mixtures or synthesized compounds. The sample may be in a raw state or it may have undergone some form of processing such as purification, concentration, dilution or extraction. The purpose of examining the sample is to detect and possibly quantify the presence of a camptothecin derivative using antibodies or antigen-binding fragments thereof.

[0263] In some embodiments, the antibodies and antigen binding fragment can be used to detect and / or measure the level of a camptothecin derivative in a sample from an animal (e.g., a non-human primate such as a cynomolgus or rhesus monkey) . In some embodiments, the antibodies and antigen binding fragment can be used to detect and / or measure the level of a camptothecin derivative in a sample from a human. Suitable detection and measurement methods include immunological methods such as enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) , radioimmuno assays, and immunohistology. In some embodiments, the antibodies and antigen-binding portions can be used to detect and / or measure the level of a camptothecin derivative in a sample from a human for preclinical or clinical immunohistochemistry (IHC) studies.

[0264] The antibodies or antigen-binding fragments thereof of the present disclosure can be used to prepare a kit that can be used to detect a sample containing a camptothecin derivative.

[0265] In some embodiments, the kit may further comprise means for determining the reactivity of the antibodies or antigen binding fragment to the camptothecin derivative in a sample. For example, the kit may contain reagents, detectable labels and / or containers which may be used for measuring specific binding of the antibody or antigen binding fragment of the invention to the camptothecin derivative.

[0266] In some embodiments, the kit further contains a buffer solution.

[0267] Also provided herein are compositions that contain at least one (e.g., one, two, three, or four) of the antibodies, or antigen-binding fragments, described herein. Two or more (e.g., two, three, or four) of any of the antibodies, or antigen-binding fragments described herein can be present in a composition in any combination. The compositions may be formulated in any manner known in the art.

[0268] The methods described herein include detecting a sample comprising a camptothecin derivative, the methods comprising contacting the sample with the antibody or antigen-binding fragment thereof, or the composition comprising a camptothecin derivative.

[0269] In some embodiments, the sample is a tissue sample, a blood sample, a serum sample, or a plasma sample.

[0270] In some embodiments, the sample is obtained from a subject that has been administered with therapeutic agent comprising a camptothecin derivative.

[0271] EXAMPLES

[0272] The invention is further described in the following examples, which do not limit the scope of the invention described in the claims.

[0273] Example 1. Generating antibody specifically binding to a camptothecin derivative

[0274] Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH) conjugated with compound CPT2 (formulaⅤ-2) and / or Ovalbumin (OVA) conjugated with compound CPT2 were emulsified with adjuvants, and then used to immunize Balb / c mice. The antibody immune response was monitored by an antigen-specific immunoassay.

[0275] When a desired immune response was achieved, antigen-specific immune cells were isolated from the immunized mice to further obtain antibodies specifically binding to a camptothecin derivative or to obtain the light chain and heavy chain variable region sequences of these antibodies. For example, single cell technology (for example, using Optofluidic System, Berkeley Lights Inc. ) was used to screen and find plasma cells that secrete antigen-specific monoclonal antibodies, and reverse transcription and PCR sequencing were used to obtain antibody variable region sequences. The obtained variable region sequences were cloned into a vector containing a sequence encoding the mouse IgG1 constant region for antibody expression. The binding affinity of the expressed antibody to specifically binding to a camptothecin derivative was verified using ELISA or BLI.

[0276] Exemplary antibodies obtained included 1D12, 1B4, 1B7, 1C2, and 1E4. FIG. 1 shows the CDR sequences according to Kabat definition, FIG. 2 shows the CDR sequences according to Chothia definition. The heavy and light chain variable regions of these antibodies are shown in FIG. 3.

[0277] Example 2. Binding affinity of antibody specifically binding to a camptothecin derivative

[0278] Binding affinity to BSA and BSA-CPT2

[0279] The affinity of the antibodies to bovine serum albumin (BSA, Solarbio Life Science, Cat#: A8020) or BSA-CPT2 (obtained by coupling BSA with Compound CPT2 through a chemical linker) was verified by bio-layer interferometry (BLI) using ForteBio Octet system equipped with the AMC Biosensors.

[0280] The supernatant samples of the antibodies were captured by the AMC Biosensors at 1000rpm for 200 seconds. BSA or BSA-CPT2 at a concentration of 200 nM was subsequently injected at 1000rpm for 180 seconds. Dissociation was monitored for 600 seconds. The chip was regenerated after the last injection of the titration with glycine (pH 1.7, 1000rpm / min for 30 seconds) .

[0281] Kinetic association rates (kon) and dissociation rates (koff) were obtained simultaneously by fitting the data globally to a 1: 1 Langmuir binding model (Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B., 1994. Methods Enzymology 6. 99-110) using Octec Analysis Studio 12.2.2.26. Affinities were deduced from the quotient of the kinetic rate constants (KD=koff / kon) .

[0282] As a person of ordinary skill in the art would understand, the same method with appropriate adjustments for parameters (e.g., antibody concentration) was performed for each tested antibody. The results for the tested antibodies are shown in Table 1.

[0283] Table 1 ( “-” means no binding)

[0284] The results demonstrated that the antibodies 1D12, 1B4, 1B7, 1C2, and 1E4 can bind to BSA-CPT2, but cannot bind to BSA.

[0285] Binding affinity to anti-EGFR / TROP2 bispecific antibody, anti-HER3 antibody andADC thereof

[0286] The binding affinity of the tested antibodies to the anti-EGFR / TROP2 bispecific antibody, anti-HER3 antibody or ADC thereof was verified using the same experimental procedure as described previously. The results are shown in the table below.

[0287] T-6F7-E-6C4 is an anti-EGFR / TROP2 IgG1 bispecific antibody having anti-TROP2 antigen binding domains (T-6F7, VH: SEQ ID NO: 54, VL: SEQ ID NO: 53) and anti-EGFR antigen binding domains (E-6C4, VH: SEQ ID NO: 55, VL: SEQ ID NO: 53) . 3E1 is an anti-HER3 IgG1 monoclonal antibody with its heavy chain and light chain sequences shown as SEQ ID NO: 56 and SEQ ID NO: 53, respectively. T-6F7-E-6C4 and 3E1 were coupled with compound CPT-2 through a CPT-L linker (the formula of which is shown below) to obtain ADCs with the drug-to-antibody ratio (DAR) of about 8, named as T-6F7-E-6C4-CPT2 and 3E1-CPT2, respectively.

[0288] Table 2 ( “-” means no binding)

[0289] The results demonstrated that the antibodies 1D12, 1B4, 1B7, 1C2 and 1E4 can bind to T-6F7-E-6C4-CPT2 and 3E1-CPT2, but cannot bind to T-6F7-E-6C4 and 3E1.

[0290] Binding affinity to antibodies targeting different targets or ADCs with different payloads

[0291] The affinity of the tested antibodies to antibodies targeting different targets or ADCs with different payloads was verified using the same experimental procedure as described previously. The results are shown in the table below.

[0292] Trastuzumab is a humanized monoclonal antibody against human HER2, and its heavy chain and light chain sequences are shown in SEQ ID NOs: 57-58. The VH and VL sequences of Trastuzumab were linked to the IgG1 constant region, resulting in the Trastuzumab analog. The Trastuzumab analog was also coupled with compound CPT-2 through a CPT-L linker to obtain ADCs with the DAR of about 8, named as T-CPT2.

[0293] Sacituzumab govitecan (TrodelvyTM) is an antibody-drug conjugate comprising a humanized anti-Trop2 monoclonal antibody and a SN-38 payload originated by Immunomedics (now Gilead) . The heavy chain and light chain sequences of the antibody portion in Sacituzumab govitecan are shown as SEQ ID NO:59-60.

[0294] Compounds VA-AZ0132 (Mal-PEG8-amide-Val-Ala- (4-NH2) -Exatecan, MedChemExpress, Cat#: HY-145399) and GGFG-Dxd (Deruxtecan, MedChemExpress, Cat#: HY-13631E) were each conjugated with Trastuzumab analog at a DAR of about 8, and the resulting ADCs are T-VA-AZ0132 and T-GGFG-Dxd, respectively. The formulas of T-VA-AZ0132 and T-GGFG-Dxd are shown below (n is about 8) .

[0295] Table 3 ( “-” means no binding)

[0296] The results demonstrated that the antibodies 1D12, 1B4, 1B7, 1C2, and 1E4 can bind to T-6F7-E-6C4-CPT2, T-VA-AZ0132, and T-GGFG-Dxd, but cannot bind to T-6F7-E-6C4, Sacituzumab govitecan, Trastuzumab analog, or Sacituzumab analog.

[0297] The above binding affinity experiment results indicate that 1D12, 1B4, 1B7, 1C2, and 1E4 exhibited specific binding to camptothecin derivatives (such as Compound CPT2, AZ0132, and Dxd) with high affinity.

[0298] Example 3. Detection of samples containing a camptothecin derivative using 1D12 and anti-Dxd mIgG Antibody

[0299] In this experiment, 1D12 and anti-Dxd mIgG antibody (Abmart, Cat#: ADC-Ab001) were used to determine the concentrations of T-CPT2, T-VA-AZ0132, T-GGFG-Dxd, and Trastuzumab analog respectively.

[0300] Specifically, 1D12 or anti-Dxd mIgG antibody was diluted to a final concentration of 2000 ng / mL, added to a 96-well plate (ELISA plate) at 100μL / well, and then incubated overnight at 2-8℃. After the incubation, the plate was washed with PBS-T buffer (PBS supplemented with TweenTM20) 4 times. Antibody-unbound areas were blocked with 2%BSA (bovine serum albumin) for 2 hours at 37℃. Afterwards, the plate was washed with PBS-T buffer 4 times. Serially diluted samples (T-CPT2, T-VA-AZ0132, T-GGFG-Dxd or Trastuzumab analog) containing 1%BSA were added to each well and incubated at 37℃for 1 hour. After washing the plate with PBS-T buffer 4 times, anti-Kappa light chain-HRP(Abcam, Cat#: ab202549) diluted in 1%PBS was added at 100μL / well to each well of the plate, and incubated at 37℃ for 1 hour. After washing the plate again, tetramethylbenzidine (TMB) solution was added at 100μL / well to the 96-well plate as the substrate. After incubating at room temperature for 5-10 minutes in the dark, 100μL stop solution (Beyotime, Cat#: P0215) was added to each well. Luminescent signals of the plate were measured at 450 nm and 630 nm to calculate the concentrations. The absorbance value and corresponding concentration of the calibration sample prepared by each test product was used to create a standard curve, as shown in FIGs. 5A-5D and FIGs. 6A-6D.

[0301] The results showed that 1D12 can be used to effectively detect T-CPT2, T-VA-AZ0132, or T-GGFG-Dxd with strong responses and high sensitivity in the ELISA analysis (FIG. 5B, FIG. 5C, FIG. 5D) . However, no response was observed when used to detect the Trastuzumab analog (FIG. 5A) . Conversely, the anti-Dxd mIgG antibody can be used to effectively detect T-GGFG-Dxd with a strong response and high sensitivity (FIG. 6D) , but no response or very low sensitivity to T-CPT2, T-VA-AZ0132, and Trastuzumab analog (FIG. 6A, FIG. 6B, FIG. 6C) . This suggests that 1D12 can specifically bind to T-CPT2, T-VA-AZ0132, and T-GGFG-Dxd but not to Trastuzumab analog, indicating its specificity towards Camptothecin derivatives. In contrast, the anti-Dxd mIgG antibody only specifically binds to T-GGFG-Dxd, making it useful solely for the detection of components containing Dxd compounds.

[0302] In another experiment, the binding activity of 1D12 to T-CPT2, T-VA-AZ0132, and T-GGFG-Dxd was evaluated using ELISA. T-CPT2, T-VA-AZ0132, and T-GGFG-Dxd were diluted to a concentration of 1μg / mL, introduced to an ELISA plate, and incubated overnight at 2-8℃. After washing with PBS-T buffer, antibody-unbound areas were blocked with 2%casein blocking solution for 2 hours at 37℃. Afterwards, serially diluted 1D12 (the highest concentration: 1000 ng / mL, 3-fold dilutions, 7 gradients) or anti-Dxd mIgG antibody was added to each corresponding well and incubated at 37℃for 1 hour. Then, anti-mouse IgG-HRP-labeled diluted in 0.5%casein was added to each well, and incubated at 37℃ for 1 hour. After washing, TMB solution was added and incubated at room temperature for 5-10 minutes in the dark. 100μL stop solution was added to each corresponding well. Luminescent signals of the plate were measured at 450 nm and 570 nm to determine the antibody concentrations. A fitting curve was generated based on the optical density values and corresponding antibody concentrations. As shown in FIG. 7, 1D12 exhibited a strong response and high sensitivity to T-CPT2, T-VA-AZ0132, and T-GGFG-Dxd.

[0303] In another experiment, the binding activity of 1D12 to Dxd, Exatecan, AZ0132, CPT2, SN38, and MMAE was also evaluated using ELISA. Human IgG1 was coupled with compound Dxd through GGFG linker to generate an ADC with a drug-to-antibody ratio (DAR) of about 8, referred to as ISO-GGFG-Dxd. Specifically, ISO-GGFG-Dxd was diluted to a concentration of 1μg / mL, introduced to an ELISA plate, and incubated overnight at 2-8℃. HRP-labeled antibody 1D12 was diluted to a concentration of 5 ng / mL as a diluent (referred to as HRP-1D12 diluent) . MMAE or camptothecin derivative Dxd, Exatecan, AZ0132, CPT2, or SN38 was serially diluted with HRP-1D12 diluent (the highest concentration: 10000 nM, 3-fold dilutions, 10 gradients) , and added to the ELISA plate for incubatation. Following treatment withTMB solution and stop solution, luminescent signals were measured at 450 nm and 570 nm. As shown in FIG. 8, the binding of 1D12 and ISO-GGFG-Dxd was inhibited by Dxd, Exatecan, AZ0132, CPT2, and SN38. However, it was not inhibited by MMAE, further indicating 1D12's specific inhibitory activity toward camptothecin derivatives.

[0304] Example 4. Detection of the concentration of anti-EGFR / TROP2 bispecific antibody ADC in monkey serum

[0305] The concentration of T-6F7-E-6C4-CPT2 in monkey serum was detected by ELISA. 1D12 was diluted with PBS to a concentration of 2μg / mL, added to a 96-well plate (ELISA plate) at 100 μL / well, and then incubated overnight at 2-8℃. After the incubation, the plate was washed with PBS-T buffer (PBS supplemented with TweenTM20) 3 times. Antibody-unbound areas were blocked with BlockerTM Casein in PBS for 2 hours at25℃. Afterwards, the plate was washed with PBS-T buffer 3 times. All Cynomolgus Monkey serum samples containing T-6F7-E-6C4-CPT2 were diluted200-fold with BlockerTM Casein in PBS and added to each well (100μL / well) , then incubated at 25℃for 1.5 hours. After washing the plate with PBS-T buffer 3 times, Anti-Human Kappa Light Chain Goat IgG Biotin (Monkey Absorbed) (IBL, Cat#: 17249) deionized aqueous solution was diluted with BlockerTM Casein in PBS and added at 100μL / well to each well of the plate, and incubated at 25℃ for 1 hour. After washing the plate again, the Streptavidin-HRP bridging solution was added at 100μL / well to the well plate and incubated at25℃ for 20 min. Then, 100μL tetramethylbenzidine (TMB) was added to the well as the substrate. After incubating at 25℃ for4-5 minutes, 100μL stop solution sulfuric acid was added to each well. Luminescent signals of the plate were measured at 450 nm and 630 nm to calculate the concentrations.

[0306] The results showed that when 1D12 was used for coating, it had good selectivity and stability within the quantitative range of 6.4～0.2μg / mL, indicating that 1D12 can be used to effectively detect the concentration of T-6F7-E-6C4-CPT2 in serum.

[0307] Example 5. Immunohistochemistry (IHC) analysis

[0308] In vivo distribution of Trastuzumab deruxtecan was evaluated using 1D12 in mice bearing human gastric cancer cells (NUGC-4) . Trastuzumab deruxtecan is a HER2-targeted ADC consisting of the humanized monoclonal antibody trastuzumab covalently linked to Dxd with GGFG a linker.

[0309] Specifically, about 5×106 NUGC-4 cells were subcutaneously injected into B-NDG mice (Biocytogen, Cat#: B-CM-002) . When the tumor volume reached about 300 mm3, the mice were randomly assigned into different groups based on the tumor volume (2 mice per group) . The mice were then injected with phosphate buffer saline (PBS) (G1) or Trastuzumab deruxtecan (G2) by intravenosus (i.v. ) administration. Tumor harvest was carried out 24 hours post-administration. The tumor was fixed in a 10%formalin solution and later processed for FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) . Five-micrometer sections were subsequently cut using a microtome for further analysis.

[0310] Immunohistochemical staining was performed on FFPE sections using a fully automated Bond-RX (Leica Biosystems) system. The FFPE sections were deparaffinized, followed by antigen-retrieval with ER2 Buffer for 20 minutes. After blocking, slides were then incubated with primary antibody biotinylated 1D12 (Biotin-1D12) at 37℃for 60 minutes. The slides were then incubated in ABC solution at 37℃for 30 minutes. DAB was used as a chromogen, and hematoxylin was used as a background stain. Images of the slides were captured using a Leica slide scanner, with20×and 200×magnifications for each slide in each treatment group.

[0311] As shown in FIG. 9, a distinct brown signal was observed in the G2 treatment group, indicating that 1D12 can be effectively utilized for the detection of camptothecin and its derivatives.

[0312] OTHER EMBODIMENTS

[0313] It is to be understood that while the invention has been described in conjunction with the detailed description thereof, the foregoing description is intended to illustrate and not limit the scope of the invention, which is defined by the scope of the appended claims. Other aspects, advantages, and modifications are within the scope of the following claims.

Claims

1.An antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to a camptothecin derivative comprising:a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3, wherein the VH CDR1 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VH CDR1 amino acid sequence, the VH CDR2 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VH CDR2 amino acid sequence, and the VH CDR3 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VH CDR3 amino acid sequence; anda light chain variable region (VL) comprising CDRs 1, 2, and 3, wherein the VL CDR1 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VL CDR1 amino acid sequence, the VL CDR2 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VL CDR2 amino acid sequence, and the VL CDR3 region comprises an amino acid sequence that is at least 80%identical to a selected VL CDR3 amino acid sequence,wherein the selected VH CDRs 1, 2, and 3 amino acid sequences and the selected VL CDRs 1, 2, and 3 amino acid sequences are one of the following:(1) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 1, 2, 3, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, 33, respectively;(2) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 4, 5, 6, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, 36, respectively;(3) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 7, 8, 9, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, 39, respectively;(4) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 10, 11, 12, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, 39, respectively;(5) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 13, 14, 15, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, 42, respectively;(6) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 16, 17, 18, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, 33, respectively;(7) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 19, 20, 21, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, 36, respectively;(8) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 22, 23, 24, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, 39, respectively;(9) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 25, 26, 27, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, 39, respectively; and(10) the selected VH CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 28, 29, 30, respectively, and the selected VL CDRs 1, 2, 3 amino acid sequences are set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, 42, respectively.2.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 1, 2, and 3 respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, and 33, respectively, according to Kabat definition.3.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 4, 5, and 6 respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, and 36, respectively, according to Kabat definition.4.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 7, 8, and 9 respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, according to Kabat definition.5.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 10, 11, and 12 respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, according to Kabat definition.6.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 13, 14, and 15, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, and 42, respectively, according to Kabat definition.7.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 16, 17, and 18, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, and 33, respectively, according to Chothia definition.8.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 19, 20, and 21, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, and 36, respectively, according to Chothia definition.9.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 22, 23, and 24, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, according to Chothia definition.10.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 25, 26, and 27, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, according to Chothia definition.11.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 28, 29, and 30, respectively, and the VL comprises CDRs 1, 2, 3 with the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, and 42, respectively, according to Chothia definition.12.An antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to a camptothecin derivative comprising a heavy chain variable region (VH) comprising an amino acid sequence that is at least 90%identical to a selected VH sequence, and a light chain variable region (VL) comprising an amino acid sequence that is at least 90%identical to a selected VL sequence, wherein the selected VH sequence and the selected VL sequence are one of the following:(1) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 43, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 44;(2) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 45, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 46;(3) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 47, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 48;(4) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 49, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 50; and(5) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 51, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 52.13.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 12, wherein the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 43 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 44.14.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 12, wherein the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 45 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 46.15.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 12, wherein the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 47 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 48.16.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 12, wherein the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 49 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 50.17.The antibody or antigen-binding fragment thereof of claim 12, wherein the VH comprises the sequence of SEQ ID NO: 51 and the VL comprises the sequence of SEQ ID NO: 52.18.An antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to a camptothecin derivative comprising a heavy chain variable region (VH) comprising VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 that are identical to VH CDR1, VH CDR2, and VH CDR3 of a selected VH sequence; and a light chain variable region (VL) comprising VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 that are identical to VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 of a selected VL sequence,wherein the selected VH sequence and the selected VL sequence are one of the following:(1) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 43, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 44;(2) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 45, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 46;(3) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 47, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 48;(4) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 49, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 50; and(5) the selected VH sequence is SEQ ID NO: 51, and the selected VL sequence is SEQ ID NO: 52.19.The antibody or antigen-binding fragment thereof of any one of claims 1-18, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof specifically binds to a camptothecin derivative,wherein the camptothecin derivative is a compound of the following general formula (I) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof:LG-L-D (I) ,wherein LG represents none or a ligand; L represents none or a linker; and D is a compound of the following structural formula (II) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof:wherein R1 and R2 individually represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group which may contain a halogen atom, a nitro or cyano group, a C2-6 alkenyl group, a C1-6 alkoxyl group, a C1-6 aminoalkoxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a mercapto group, a alkylthio group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl groups which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 aminoalkylamino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 alkyl group with a heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a carbonyl with a-heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a C1-6 alkylamino group with a heterocyclic ring which may contain C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino (which may contain a protective group) , halogeno, nitro, cyano or a protective group, an amino-heterocyclic group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, a heterocyclic-amino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, or a carbamoyl group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group;R3 represents a C1-6 alkyl group;R4 represents a C1-6 alkyl, an amino group which may contain a protective group, a quaternary trialkyl ammonium such as-N. sup. + (CH3) 3, a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, a sulfonic acid group, or a carboxyl group;Z represents an oxygen atom, a sulfur atom, CR5 R6, wherein R5 and R6 individually represent a hydrogen atom or a C1-6 alkyl, or N-R7, wherein R7 stands for a hydrogen atom, a C1-6 alkyl group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, or a protective group for the amino group; andm and n individually represent 0, 1 or 2.20.The antibody or antigen-binding fragment thereof of any one of claims 1-18, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof specifically binds to a camptothecin derivative, wherein the camptothecin derivative is a compound of the following general formula (I) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof: LG-L-D (I) ,wherein LG represents none or a ligand; L represents none or a linker; and D is a compound of the following structural formula (VI) or a salt, solvate, stereoisomer, or isotopic variant thereof:wherein R1 and R2 individually represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group which may contain a halogen atom, a nitro or cyano group, a C2-6 alkenyl group, a C1-6 alkoxyl group, a C1-6 aminoalkoxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a mercapto group, a alkylthio group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl groups which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 aminoalkylamino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 alkyl group with a heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a carbonyl with a-heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a C1-6 alkylamino group with a heterocyclic ring which may contain C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino (which may contain a protective group) , halogeno, nitro, cyano or a protective group, an amino-heterocyclic group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, a heterocyclic-amino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, or a carbamoyl group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group;or R1 and R2, taken together with the atoms to which they are attached form a 3-, 4-, 5-, or 6-membered heterocycloalkyl or a 3-, 4-, 5-, or 6-membered cycloalkyl, wherein the 3-6 membered heterocycloalkyl or 3-6 membered cycloalkyl is optionally substituted with 1, 2, 3, or 4 substituents selected from a hydrogen atom, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group which may contain a halogen atom, a nitro or cyano group, a C2-6 alkenyl group, a C1-6 alkoxyl group, a C1-6 aminoalkoxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a mercapto group, a alkylthio group, an amino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl groups which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 aminoalkylamino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the amino-position, a C1-6 alkyl group with a heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a carbonyl with a-heterocyclic ring which may contain a C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino, halogeno, nitro, or cyano group, a C1-6 alkylamino group with a heterocyclic ring which may contain C1-6 alkyl, C1-6 alkoxyl, amino (which may contain a protective group) , halogeno, nitro, cyano or a protective group, an amino-heterocyclic group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, a heterocyclic-amino group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group at the nitrogen atom of the heterocyclic ring moiety or at the amino position, or a carbamoyl group which may contain a protective group or a C1-6 alkyl group;R3 represents a C1-6 alkyl group;Z’ represents a hydrogen atom, a deuterium atom, an oxygen atom, a sulfur atom, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 haloalkyl, C6-10 aryl, C3-14 cycloalkyl, 5-14 membered heteroaryl, 4-14 membered heterocycloalkyl, C6-10 aryl-C1-4 alkyl-, C3-14 cycloalkyl-C1-4 alkyl-, (5-14 membered heteroaryl) -C1-4 alkyl-, (4-14 membered heterocycloalkyl) -C1-4 alkyl-, OR8, C (O) R8, C (O) NR8R8, C (O) OR8, S (O) 2R8, and S (O) 2NR8R8, wherein the C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C6-10 aryl, C3-14 cycloalkyl, 5-14 membered heteroaryl, 4-14 membered heterocycloalkyl, C6-10 aryl-C1-4 alkyl-, C3-14 cycloalkyl-C1-4 alkyl-, (5-14 membered heteroaryl) -C1-4 alkyl-, and (4-14 membered heterocycloalkyl) -C1-4 alkyl-of Z’ is each optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 independently selected substituents selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, an amino group which may contain a protective group, a quaternary trialkyl ammonium such as-N. sup. + (CH3) 3, a C1-6 alkylamino group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, a sulfonic acid group, or a carboxyl group; andwherein R8 is selected from a hydrogen atom, a deuterium atom, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, a C1-6 alkyl group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 aminoalkyl group which may contain a protective group, a C1-6 alkylaminoalkyl group which may contain a protective group, or a protective group for the amino group.21.The antibody or antigen-binding fragment thereof of any one of claims 1-20, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof is a single-chain variable fragment (scFv) .22.The antibody or antigen-binding fragment thereof of any one of claims 1-21, wherein the antibody or antigen-binding fragment further comprising a detectable label.23.A nucleic acid comprising a polynucleotide encoding a polypeptide comprising:(1) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 1, 2, and 3, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 44 binds to a camptothecin derivative;(2) an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, and 33, respectively, and wherein the VL, when paired with a VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 43 binds to a camptothecin derivative;(3) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 4, 5, and 6, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 46 binds to a camptothecin derivative;(4) an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 34, 35, and 36, respectively, and wherein the VL, when paired with a VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 45 binds to a camptothecin derivative;(5) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 7, 8, and 9, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 48 binds to a camptothecin derivative;(6) an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, and wherein the VL, when paired with a VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 47 binds to a camptothecin derivative;(7) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 10, 11, and 12, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 50 binds to a camptothecin derivative;(8) an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 37, 38, and 39, respectively, and wherein the VL, when paired with a VH comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 49 binds to a camptothecin derivative;(9) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 13, 14, and 15, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 52 binds to a camptothecin derivative;(10) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a light chain variable region (VL) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 40, 41, and 42, respectively, and wherein the VL, when paired with a heavy chain variable region (VH) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 51 binds to a camptothecin derivative;(11) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 16, 17, and 18, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 44 binds to a camptothecin derivative;(12) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 19, 20, and 21, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 46 binds to a camptothecin derivative;(13) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 22, 23, and 24, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 48 binds to a camptothecin derivative;(14) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 25, 26, and 27, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 50 binds to a camptothecin derivative; or(15) an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a heavy chain variable region (VH) comprising complementarity determining regions (CDRs) 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 28, 29, and 30, respectively, and wherein the VH, when paired with a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 52 binds to a camptothecin derivative.24.The nucleic acid of claim 23, wherein the nucleic acid comprises a polynucleotide encoding a polypeptide comprising an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a VH comprising CDRs 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 1, 2, and 3, respectively.25.The nucleic acid of claim 23, wherein the nucleic acid comprises a polynucleotide encoding a polypeptide comprising an immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof comprising a VH comprising CDRs 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 16, 17, and 18,respectively.26.The nucleic acid of claim 23, wherein the nucleic acid comprises a polynucleotide encoding a polypeptide comprising an immunoglobulin light chain or a fragment thereof comprising a VL comprising CDRs 1, 2, and 3 comprising the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 31, 32, and 33, respectively.27.The nucleic acid of any one of claims 23-26, wherein the VH when paired with a VL specifically binds to a camptothecin derivative, or the VL when paired with a VH specifically binds to a camptothecin derivative.28.The nucleic acid of any one of claims 23-27, wherein the immunoglobulin heavy chain or the fragment thereof is a mouse immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof (e.g., a mouse IgG1 heavy chain or a fragment thereof) , and the immunoglobulin light chain or the fragment thereof is a mouse immunoglobulin light chain or a fragment thereof.29.The nucleic acid of any one of claims 23-28, wherein the nucleic acid encodes a single-chain variable fragment (scFv) .30.The nucleic acid of any one of claims 23-29, wherein the nucleic acid is cDNA.31.A vector comprising one or more of the nucleic acids of any one of claims 23-30.32.A vector comprising two of the nucleic acids of any one of claims 23-30, wherein the vector encodes the VL region and the VH region that together bind to a camptothecin derivative.33.A pair of vectors, wherein each vector comprises one of the nucleic acids of any one of claims 23-30, wherein together the pair of vectors encodes the VL region and the VH region that together bind to a camptothecin derivative.34.A cell comprising the vector of claim 31 or 32, or the pair of vectors of claim 33.35.The cell of claim 34, wherein the cell is a CHO cell.36.A cell comprising one or more of the nucleic acids of any one of claims 23-30.37.A cell comprising two of the nucleic acids of any one of claims 23-30.38.The cell of claim 37, wherein the two nucleic acids together encode the VL region and the VH region that together bind to a camptothecin derivative.39.A method of producing an antibody or an antigen-binding fragment thereof, the method comprising(a) culturing the cell of any one of claims 34-38 under conditions sufficient for the cell to produce the antibody or the antigen-binding fragment; and(b) collecting the antibody or the antigen-binding fragment produced by the cell.40.A composition comprising the antibody or antigen-binding fragment thereof of any one of claims 1-22.41.A kit comprising the antibody or antigen-binding fragment thereof of any one of claims 1-22.42.A method of detecting a sample comprising a camptothecin derivative, the method comprising contacting the sample with the antibody or antigen-binding fragment thereof of any one of claims 1-22, or the composition of claim 40.43.A method of detecting a sample comprising a camptothecin derivative, the method comprising using the kit of claim 41.44.The method of claim 42 or 43, wherein the sample is a tissue sample, a blood sample, a serum sample, or a plasma sample.45.The method of any one of claims 42-44, wherein the sample is obtained from a subject that has been administered with therapeutic agent comprising a camptothecin derivative.

Images