Drug delivery system for locally controlled release of therapeutic agents and uses thereof

Abstract

It relates to drug delivery systems and methods for locally delivering therapeutic agents, and methods for using such drug delivery systems for the treatment of diseases.

Description

DRUG DELIVERY SYSTEM FOR LOCALLY CONTROLLED RELEASE OF THERAPEUTIC AGENTS AND USES THEREOFFIELD OF THE DISCLOSURE

[0001] The present disclosure relates to drug delivery systems and methods for locally delivering therapeutic agents, and methods for using such drug delivery systems for the treatment of diseases. BACKGROUND OF THE DISCLOSURE

[0002] Most of the therapeutic agents are delivered to the body systemically via oral / GI absorption or systemic injection. These delivery routes are convenient and suitable for treating systemic illnesses. However, many diseases are local disorders. Even though the theraputica agents administered systemically can effectively treat these disorders, they may also target other tissues or binding sites that can result in side effects or adverse effects. To reduce systemic side effects, a locally administered drug delivery system is desirable. Delivering therapeutic agents to the desirable sites is not as easy as taking drugs orally or via injection. Therefore, a long term, sustained release drug delivery system for locally delivering drug is a must for such a product to be acceptable by the doctors and patients. In addition, the release profile of the therapeutic agents to maintain an effective concentration at the delivery site after the drug being administered to a subject may dramatically affect the therapeutic agents’ effectiveness. Thus, delivery and controlled release of a therapeutic agent at a specific target tissue or site within the body represents a long-time challenge in the pharmaceutic industry.

[0003] Numerous drug delivery systems have been developed to provide controlled drug delivery with tissue specificity or desired release profile. The most common local drug delivery system is to use biodegradable polymers to control the release rate of the therapeutic agents. These drug delivery systems release drugs via both biopolymer erosion and drug molecule diffusion. This complicated release control has imposed a great challenge in drug product manufacturing and quality control. Therefore, there is a continuing need for developing drug delivery system that can locally deliver therapeutic agents to specific tissues with controlled release of the therapeutic agents and reduced side effects.

[0004] There are three critical properties for a successful local drug delivery system: the ability to maintain the delivery system at the delivery site; the ability to release the therapeutic agent at a desirable rate and profile; and the ability to treat local disorder with the therapeutic agent. The present disclosure provides a different approach to fulfill these critical properties for a local drug delivery system, i.e., the biopolymers, due to their large moculelar sizes, are to hold the drug delivery system at the delivery site; the therapeutic agents, are to be selected from marketed products or the activities have been proven by late stage clinical studies; and the linkers, covalently binding to the biopolymers and the therapeutic agents, are not stable chemically and upon degrading, release the therapeutic agents at a desirable rate for a specific delivery site and a specific disease. SUMMARY OF THE DISCLOSURE

[0005] In one aspect, the present disclosure provides a drug delivery system for locally delivering a therapeutic agent at a controlled rate, the drug delivery system comprising: a therapeutic agent comprising one or more amine groups as a first binding group  BG1; and a biopolymer comprising one or more carboxylic groups as a second binding  group BG2; a linker covalently linking the biopolymer to the therapeutic agent and capable of  retaining the therapeutic agent in the location of administration; wherein the linker comprises a structure of Formula (I) , Formula (II) or Formula (III) : wherein end of the linker is connected to the therapeutic agent through BG1 such  that a urea linkage is formed, and *end of the linker is connected to the biopolymer through BG2 such that at least one amide linkage is formed; U is selected from a direct bond, -N (RU) -*or wherein is  a heterocyclyl optionally substituted with one or more Ra, wherein the *end of U is connected to the biopolymer; X is a direct bond, -C (=O) -, -C (RX) 2-, -N (RX) -, -O-or -S-; A is selected from a direct bond, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl,  heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, or heteroaryl, wherein each of the alkyl, heteroalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, and heteroaryl is independently optionally substituted with one or more Rb; each of RU, RV, RX and RL is independently selected from the group consisting of  hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, and heteroaryl, wherein each of the alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, and heteroaryl is independently optionally substituted with one or more Rb; each of Ra and Rb is independently selected from halogen, hydroxyl, amino,  cyano, nitro, alkyl, or -C (=O) -alkyl; and p is 0, 1, 2 or 3.

[0006] In some embodiments, the linker in the drug delivery system provided herein comprises a structure selected from the group consisting of: wherein, A, RU, RV, RX and RL are as defined as supra.

[0007] In some embodiments, the biopolymer in the drug delivery system provided herein is selected from the group consisting of hyaluronic acid, chondroitin, or chondroitin sulfate, or derivatives thereof.

[0008] In some embodiments, the therapeutic agent in the drug delivery system provided herein is Janus kinase (JAK) inhibitors or vascular endothelial growth factor (VEGF) inhibitors.

[0009] In a further aspect, the present disclosure provides a pharmaceutical composition comprising the drug delivery system provided herein and a pharmaceutically acceptable excipient.

[0010] In another aspect, the present disclosure provides a method of treating a disorder in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutic effective amount of the drug delivery system or the pharmaceutical composition provided herein. DETAILED DESCRIPTION OF THE DISCLOSURE

[0011] Reference will now be made in detail to certain embodiments of the present disclosure, examples of which are illustrated in the accompanying structures and formulas. While the present disclosure will be described in conjunction with the enumerated embodiments, it will be understood that they are not intended to limit the present disclosure to those embodiments. On the contrary, the present disclosure is intended to cover all alternatives, modifications, and equivalents, which may be included within the scope of the present disclosure as defined by the claims. One skilled in the art will recognize many methods and materials similar or equivalent to those described herein, which could be used in the practice of the present disclosure. The present disclosure is in no way limited to the methods and materials described. In the event that one or more of the incorporated references and similar materials differs from or contradicts this application, including but not limited to defined terms, term usage, described techniques, or the like, the present disclosure controls. All references, patents, patent applications cited in the present disclosure are hereby incorporated by reference in their entireties.

[0012] It is appreciated that certain features of the present disclosure, which are, for clarity, described in the context of separate embodiments, can also be provided in combination in a single embodiment. Conversely, various features of the present disclosure, which are, for brevity, described in the context of a single embodiment, can also be provided separately or in any suitable sub-combination. It must be noted that, as used in the specification and the appended claims, the singular forms “a, ” “an, ” and “the” include plural forms of the same unless the context clearly dictates otherwise.Definitions

[0013] Definitions of specific functional groups and chemical terms are described in more detail below. For purposes of this disclosure, the chemical elements are identified in accordance with the Periodic Table of the Elements, CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed., inside cover, and specific functional groups are generally defined as described therein. Additionally, general principles of organic chemistry, as well as specific functional moieties and reactivity, are described in Organic Chemistry, Thomas Sorrell, 2nd Edition, University Science Books, Sausalito, 2006; Smith and March March’s Advanced Organic Chemistry, 6th Edition, John Wiley &Sons, Inc., New York, 2007; Larock, Comprehensive Organic Transformations, 3rd Edition, VCH Publishers, Inc., New York, 2018; Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 4th Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 2004; the entire contents of each of which are incorporated herein by reference.

[0014] At various places in the present disclosure, linking substituents are described. It is specifically intended that each linking substituent includes both the forward and backward forms of the linking substituent. For example, -NR (CR’ R” ) -includes both -NR(CR’ R” ) -and - (CR’ R” ) NR-. Where the structure clearly requires a linking group, the Markush variables listed for that group are understood to be linking groups. For example, if the structure requires a linking group and the Markush group definition for that variable lists “alkyl” , then it is understood that the “alkyl” represents a linking alkylene group.

[0015] When a bond to a substituent is shown to cross a bond connecting two atoms in a ring, then such substituent may be bonded to any atom in the ring. When a substituent is listed without indicating the atom via which such substituent is bonded to the rest of the compound of a given formula, then such substituent may be bonded via any atom in such formula. Combinations of substituents and / or variables are permissible, but only if such combinations result in stable compounds.

[0016] When any variable (e.g., Ri) occurs more than one time in any constituent or formula for a compound, its definition at each occurrence is independent of its definition at every other occurrence. Thus, for example, if a group is shown to be substituted with 0-2 Ri moieties, then the group may optionally be substituted with up to two Ri moieties and Ri at each occurrence is selected independently from the definition of Ri. Also, combinations of substituents and / or variables are permissible, but only if such combinations result in stable compounds.

[0017] As used herein, the term “Ci-j” indicates a range of the carbon atoms numbers, wherein i and j are integers and the range of the carbon atoms numbers includes the endpoints (i.e., i and j) and each integer point in between, and wherein j is greater than i. For examples, C1-6 indicates a range of one to six carbon atoms, including one carbon atom, two carbon atoms, three carbon atoms, four carbon atoms, five carbon atoms and six carbon atoms. In some embodiments, the term “C1-12” indicates 1 to 12, particularly 1 to 10, particularly 1 to 8, particularly 1 to 6, particularly 1 to 5, particularly 1 to 4, particularly 1 to 3 or particularly 1 to 2 carbon atoms.

[0018] As used herein, the term “alkyl” , whether as part of another term or used independently, refers to a saturated linear or branched-chain hydrocarbon radical, which may be optionally substituted independently with one or more substituents described below. The term “Ci-j alkyl” refers to an alkyl having i to j carbon atoms. In some embodiments, alkyl groups contain 1 to 10 carbon atoms. In some embodiments, alkyl groups contain 1 to 9 carbon atoms. In some embodiments, alkyl groups contain 1 to 8 carbon atoms, 1 to 7 carbon atoms, 1 to 6 carbon atoms, 1 to 5 carbon atoms, 1 to 4 carbon atoms, 1 to 3 carbon atoms, or 1 to 2 carbon atoms. Examples of “C1-10 alkyl” include, but are not limited to, methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, and decyl. Examples of “C1-6 alkyl” are methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, i-butyl, s-butyl, t-butyl, n-pentyl, 2-pentyl, 3-pentyl, 2-methyl-2-butyl, 3-methyl-2-butyl, 3-methyl-1-butyl, 2-methyl-1-butyl, 1-hexyl, 2-hexyl, 3-hexyl, 2-methyl-2-pentyl, 3-methyl-2-pentyl, 4-methyl-2-pentyl, 3-methyl-3-pentyl, 2-methyl-3-pentyl, 2, 3-dimethyl-2-butyl, 3, 3-dimethyl-2-butyl, and the like.

[0019] As used herein, the term “alkenyl” , whether as part of another term or used independently, refers to linear or branched-chain hydrocarbon radical having at least one carbon-carbon double bond, which may be optionally substituted independently with one or more substituents described herein, and includes radicals having “cis” and “trans” orientations, or alternatively, “E” and “Z” orientations. In some embodiments, alkenyl groups contain 2 to 12 carbon atoms. In some embodiments, alkenyl groups contain 2 to 11 carbon atoms. In some embodiments, alkenyl groups contain 2 to 11 carbon atoms, 2 to 10 carbon atoms, 2 to 9 carbon atoms, 2 to 8 carbon atoms, 2 to 7 carbon atoms, 2 to 6 carbon atoms, 2 to 5 carbon atoms, 2 to 4 carbon atoms, 2 to 3 carbon atoms, and in some embodiments, alkenyl groups contain 2 carbon atoms. Examples of alkenyl group include, but are not limited to, ethylenyl (or vinyl) , propenyl (allyl) , butenyl, pentenyl, 1-methyl-2 buten-1-yl, 5-hexenyl, and the like.

[0020] As used herein, the term “alkynyl” , whether as part of another term or used independently, refers to a linear or branched hydrocarbon radical having at least one carbon-carbon triple bond, which may be optionally substituted independently with one or more substituents described herein. In some embodiments, alkenyl groups contain 2 to 12 carbon atoms. In some embodiments, alkynyl groups contain 2 to 11 carbon atoms. In some embodiments, alkynyl groups contain 2 to 11 carbon atoms, 2 to 10 carbon atoms, 2 to 9 carbon atoms, 2 to 8 carbon atoms, 2 to 7 carbon atoms, 2 to 6 carbon atoms, 2 to 5 carbon atoms, 2 to 4 carbon atoms, 2 to 3 carbon atoms, and in some embodiments, alkynyl groups contain 2 carbon atoms. Examples of alkynyl group include, but are not limited to, ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, and the like.

[0021] As used herein, the term “amide” refers to -C (=O) NR’ -, wherein R’ represents hydrogen, an N-protecting group, alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl and other suitable organic groups.

[0022] As used herein, the term “amine” refers to derivatives of ammonia, wherein one or more hydrogen atoms are replaced by a substituent, and can be represented by N (H) n (R’ ) 3-n wherein n is 0, 1, or 2, and each R’ is independently hydroxyl, nitro, an N-protecting group, alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl and other suitable organic groups, or two R’ together with the nitrogen atom to which they are attached form an optionally substituted heterocyclyl or heteroaryl.

[0023] As used herein, the term “amino” refers to –NH2.

[0024] As used herein, the term “aryl” , whether as part of another term or used independently, refers to monocyclic and polycyclic ring systems having a total of 5 to 20 ring members, wherein at least one ring in the system is aromatic and wherein each ring in the system contains 3 to 12 ring members. In the case of polycyclic ring system, only one of the rings needs to be aromatic, although all of the rings may be aromatic, and the second ring can be a fused or bridged ring system. Examples of aryl include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, anthracyl and the like. Unless stated otherwise specifically in the specification, an aryl group can be optionally substituted at one or more ring positions with substituents as described herein.

[0025] As used herein, the term “aralkyl” , whether as part of another term or used independently, refers to -aryl-alkyl or -alkyl-aryl.

[0026] As used herein, the term “carboxylic group” or “carboxyl” refers to –COOH.

[0027] As used herein, the term “cyano” refers to -CN.

[0028] As used herein, the term “cycloalkyl” , whether as part of another term or used independently, refer to a non-aromatic, saturated or partially unsaturated monocyclic and polycyclic ring system, in which all the ring atoms are carbon. In some embodiments, the cycloalkyl may contain 3 to 12 ring forming carbon atoms, 3 to 10 ring forming carbon atoms, 3 to 9 ring forming carbon atoms, 3 to 8 ring forming carbon atoms, 3 to 7 ring forming carbon atoms, 3 to 6 ring forming carbon atoms, 3 to 5 ring forming carbon atoms, 4 to 12 ring forming carbon atoms, 4 to 10 ring forming carbon atoms, 4 to 9 ring forming carbon atoms, 4 to 8 ring forming carbon atoms, 4 to 7 ring forming carbon atoms, 4 to 6 ring forming carbon atoms, 4 to 5 ring forming carbon atoms. Cycloalkyl groups may be saturated or partially unsaturated. In some embodiments, the cycloalkyl group may be a saturated cyclic alkyl group. In some embodiments, the cycloalkyl group may be a partially unsaturated cyclic alkyl group that contains at least one double bond or triple bond in its ring system. In some embodiments, the cycloalkyl group may be monocyclic or polycyclic. In the case of polycyclic ring system, a cycloalkyl group may include fused (for example, a cycloalkyl ring fused with another cycloalkyl ring) , spiro, or bridged ring systems. Examples of monocyclic cycloalkyl group include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, 1-cyclopent-1-enyl, 1-cyclopent-2-enyl, 1-cyclopent-3-enyl, cyclohexyl, 1-cyclohex-1-enyl, 1-cyclohex-2-enyl, 1-cyclohex-3-enyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclononyl, cyclodecyl, cycloundecyl and cyclododecyl. Examples of polycyclic cycloalkyl group include, but are not limited to, adamantyl, norbornyl, fluorenyl, spiro-pentadienyl, spiro [3.6] -decanyl, bicyclo [1, 1, 1] pentenyl, bicyclo [2, 2, 1] heptenyl, and the like. Unless stated otherwise specifically in the specification, a cycloalkyl group can be optionally substituted at one or more ring positions with substituents as described herein.

[0029] As used herein, the term “cyano” refers to –CN.

[0030] As used herein, the term “halogen” refers to an atom selected from fluorine (or fluoro) , chlorine (or chloro) , bromine (or bromo) and iodine (or iodo) .

[0031] As used herein, the term “heteroatom” refers to nitrogen, oxygen, or sulfur, and includes any oxidized form of nitrogen or sulfur, and any quaternized form of a basic nitrogen (including N-oxides) .

[0032] “Heteroalkyl” , whether as part of another term or used independently, refers to an alkyl group in which one or more skeletal atoms of the alkyl are selected from heteroatoms, e.g., oxygen, nitrogen (e.g., -NH-, -N (alkyl) -) , sulfur, phosphorus, or combinations thereof. A heteroalkyl is attached to the rest of the molecule at a carbon atom of the heteroalkyl. In some embodiments, a heteroalkyl is a C1-C6 heteroalkyl wherein the heteroalkyl is comprised of 1 to 6 carbon atoms and one or more heteroatoms. Examples of such heteroalkyl are, for example, -CH2OCH3, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2OCH2CH2OCH3, -CH (CH3) OCH3, -CH2NHCH3, -CH2N (CH3) 2, -CH2CH2NHCH3, or -CH2CH2N (CH3) 2. Unless stated otherwise specifically in the specification, a heteroalkyl group can be optionally substituted at one or more ring positions with substituents as described herein.

[0033] “Heteroalkenyl” , whether as part of another term or used independently, refers to an alkenyl group in which one or more skeletal atoms of the alkenyl are selected from heteroatoms, e.g., oxygen, nitrogen (e.g., -NH-, -N (alkyl) -) , sulfur, phosphorus, or combinations thereof. A heteroalkenyl is attached to the rest of the molecule at a carbon atom of the heteroalkenyl. In some embodiments, a heteroalkenyl is a C2-C6 heteroalkenyl wherein the heteroalkenyl is comprised of 2 to 6 carbon atoms and one or more heteroatoms. Examples of such heteroalkenyl are, for example, -CH=CHOCH3, -CH=CHOCH2CH2OCH3, -CH2CH2OCH=CHOCH3, -C (=CH2) OCH3, -CH=NCH3, -CH2N=CH2, -CH=CHNHCH3, or -CH=CHN (CH3) 2. Unless stated otherwise specifically in the specification, a heteroalkenyl group can be optionally substituted at one or more ring positions with substituents as described herein.

[0034] “Heteroalkynyl” , whether as part of another term or used independently, refers to an alkynyl group in which one or more skeletal atoms of the alkynyl are selected from an atom other than carbon, e.g., oxygen, nitrogen, sulfur, phosphorus, or combinations thereof. A heteroalkynyl is attached to the rest of the molecule at a carbon atom of the heteroalkynyl. In some embodiments, a heteroalkynyl is a C2-C6 heteroalkynyl wherein the heteroalkynyl is comprised of 2 to 6 carbon atoms and one or more atoms other than carbon, e.g., oxygen, nitrogen, sulfur, phosphorus, or combinations thereof wherein the heteroalkynyl is attached to the rest of the molecule at a carbon atom of the heteroalkynyl. Examples of such heteroalkynyl are, for example, -C≡COCH3, -C≡COCH2CH2OCH3, -CH2CH2OC≡COCH3, -C≡C-NHCH3, or -C≡C-N (CH3) 2. Unless stated otherwise specifically in the specification, a heteroalkynyl group can be optionally substituted at one or more ring positions with substituents as described herein.

[0035] As used herein, the term “heteroaryl” , whether as part of another term or used independently, refers to an aryl group having, in addition to carbon atoms, one or more heteroatoms. The heteroaryl group can be monocyclic. Examples of monocyclic heteroaryl include, but are not limited to, thienyl, furanyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, triazolyl, tetrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, thiadiazolyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, indolizinyl, purinyl, naphthyridinyl, benzofuranyl and pteridinyl. The heteroaryl group also includes polycyclic groups in which a heteroaromatic ring is fused to one or more aryl, cycloaliphatic, or heterocyclyl rings. Examples of polycyclic heteroaryl include, but are not limited to, indolyl, isoindolyl, benzothienyl, benzofuranyl, benzo [1, 3] dioxolyl, dibenzofuranyl, indazolyl, benzimidazolyl, benzthiazolyl, quinolyl, isoquinolyl, dihydroquinolinyl, dihydroisoquinolinyl, tetrahydroquinolinyl, tetrahydroisoquinolinyl, cinnolinyl, phthalazinyl, quinazolinyl, quinoxalinyl, 4H-quinolizinyl, carbazolyl, acridinyl, phenazinyl, phenothiazinyl, phenoxazinyl, tetrahydroquinolinyl, tetrahydroisoquinolinyl, and the like.

[0036] As used herein, the term “heterocyclyl” refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic and polycyclic carbocyclyl group in which one or more ring atoms are heteroatoms independently selected from oxygen, sulfur, nitrogen, phosphorus, and the like, the remaining ring atoms being carbon. In some embodiments, the heterocyclyl is a saturated heterocyclyl. In some embodiments, the heterocyclyl is a partially unsaturated heterocyclyl having one or more double bonds in its ring system. In some embodiments, the heterocyclyl may contains any oxidized form of carbon, nitrogen or sulfur, and any quaternized form of a basic nitrogen. In the case of polycyclic ring system, a heterocyclyl may include fused (for example, a heterocyclyl ring fused with a cycloalkyl or another heterocyclyl ring) , spiro, or bridged ring systems. The heterocyclyl radical may be carbon linked or nitrogen linked where such is possible. In some embodiments, the heterocycle is carbon linked. In some embodiments, the heterocycle is nitrogen linked. Examples of heterocyclyl groups include, but are not limited to, aziridinyl, azetidinyl, oxetanyl, dioxolanyl, dihydrofuryl, thienyl [1, 3] dithianyl, decahydroisoquinolyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, isothiazolidinyl, isoxazolidinyl, morpholinyl, octahydroindolyl, octahydroisoindolyl, 2-oxopiperazinyl, 2-oxopiperidinyl, 2-oxopyrrolidinyl, oxazolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, 4-piperidonyl, pyrrolidinyl, pyrazolidinyl, quinuclidinyl, thiazolidinyl, tetrahydrofuryl, trithianyl, tetrahydropyranyl, thiomorpholinyl, thiamorpholinyl, 1-oxo-thiomorpholinyl, 3-oxo-1, 3-dihydroisobenzofuran-1-yl, hexamethylenetetraminyl, 3-aza-bicyclo [3.1.0] hexanyl, 1, 4-diazabicyclo [2.2.2] octane and the like.

[0037] As used herein, the term “hydroxyl” refers to –OH.

[0038] As used herein, the term “nitro” refers to –NO2.

[0039] As used herein, the term “urea” refers to –NR’ (C=O) NR” –, wherein R’a nd R” each independently represents hydrogen, an N-protecting group, alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl and other suitable organic groups.

[0040] As used herein, the term “binding group” or “BG” refers to a group at a particular position within a first entity (e.g., biopolymer, therapeutic agent as provided herein) , which is capable of reacting with another group from a second entity (e.g., linker as provided herein) to form a linkage, thereby joining the two entities together to form one entity. For example, carboxyl groups included in one entity may react with amino groups included in another entity to form amide linkage that links the two entities together, wherein the carboxyl and amino groups can be regarded as binding groups.

[0041] As used herein, the term “linkage” or “linker” refers to bonds or chemical moiety formed from a chemical reaction between the functional groups of at least two entities to be linked, thereby forming one molecule or maintaining association of the entities in sufficiently close proximity. A linker can be integrated in the resulting linked molecule or structure, with or without its reacted functional groups. Such linkages may be covalent or non-covalent. Hydrolytically unstable or degradable linkages mean that the linkages are degradable in water or in aqueous solutions, including for example, body fluid such as blood or tissue fluids. Enzymatically unstable or degradable linkages mean that the linkage can be degraded by one or more enzymes. Such degradable linkages include, but are not limited to ester linkages formed by the carboxylic acid in one entity with alcohol groups on a biologically active agent, wherein such ester groups generally hydrolyze under physiological conditions to release the biologically active agent. Other hydrolytically degradable linkages include but are not limited to carbonate linkages, imine linkages resulted from reaction of an amine and an aldehyde, phosphate ester linkages resulted from reaction of a phosphate group and an alcohol, hydrazone linkages resulted from reaction of a hydrazide and an aldehyde, acetal linkages resulted from reaction of an aldehyde and an alcohol, amide linkages resulted from reaction of an amine group and a carboxyl group.

[0042] As used herein, the term “partially unsaturated” refers to a radical that includes at least one double or triple bond. The term “partially unsaturated” is intended to encompass rings having multiple sites of unsaturation, but is not intended to include aromatic (i.e., fully unsaturated) moieties.

[0043] As used herein, the term “pharmaceutically acceptable” indicates that the substance or composition is compatible chemically and / or toxicologically, with the other ingredients comprising a formulation, and / or the subjects being treated therewith.

[0044] As used herein, the term “substituted” , whether preceded by the term “optionally” or not, means that one or more hydrogens of the designated moiety are replaced with a suitable substituent. It will be understood that “substitution” or “substituted with” includes the implicit proviso that such substitution is in accordance with permitted valence of the substituted atom and that the substitution results in a stable or chemically feasible compound, e.g., which does not spontaneously undergo transformation such as by rearrangement, cyclization, elimination, etc. Unless otherwise indicated, an “optionally substituted” group may have a suitable substituent at each substitutable position of the group, and when more than one position in any given structure may be substituted with more than one substituent selected from a specified group, the substituent may be either the same or different at every position. It will be understood by those skilled in the art that substituents can themselves be substituted, if appropriate. Unless specifically stated as “unsubstituted” , references to chemical moieties herein are understood to include substituted variants. For example, reference to an “aryl” group or moiety implicitly includes both substituted and unsubstituted variants.

[0045] As used herein, the terms “therapeutic agent” , “drug” , “biologically active molecule” , “biologically active agent” , “active agent” and the like refer to any substance which can affect any physical or biochemical properties of a biological organism, including but not limited to viruses, bacteria, fungi, plants, animals, and human. In particular, as used herein, therapeutic agents include any substance intended for diagnosis, cure, mitigation, treatment, or prevention of disease in humans or other animals, or to otherwise enhance physical or mental well-being of humans or animals.

[0046] Drug delivery of therapeutic agents to specific tissues or sites within a body presents a variety of challenges, particularly where local delivery of a high dose of a therapeutic agent having poor aqueous solubility to a specific tissue is desired, and where avoidance of high systemic concentration of the therapeutic agent leading to toxic side effects is desired.

[0047] Therefore, the present disclosure in one aspect provides a drug delivery system capable of locally delivering a therapeutic agent at a controlled rate. In some embodiments, the drug delivery system comprises a biopolymer, a therapeutic agent and a linker covalently linking the biopolymer to the therapeutic agent and capable of retaining the therapeutic agent in the location of administration.Therapeutic Agent

[0048] The present disclosure provides improved delivery system for local delivery of a variety of therapeutic agent.

[0049] In some embodiments, the therapeutic agent comprises at least a first binding group BG1, which is capable of reacting with a reactive functional group from a second entity (e.g., linker as provided herein) and an optional co-reactant to form a linkage, thereby linking the therapeutic agent to the second entity (e.g., the linker) .

[0050] In some embodiments, the therapeutic agent comprises at least a first binding group BG1. The BG1 serves as a binding site for the conjugation of linkers suitable for linking the therapeutic agents to the biopolymer.

[0051] In some embodiments, the therapeutic agent comprises one or more amine groups as BG1, which is capable of reacting with a reactive functional group of a suitable linker and an optional co-reactant to form a linkage connecting the amine-containing therapeutic agent to the linker.

[0052] In certain embodiments, the amine group in the therapeutic agent reacts with the reactive functional group of a linker and an optional co-reactant such that the therapeutic agent is linked to the linker via a urea linkage.

[0053] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is selected from the group consisting of Janus kinase (JAK) inhibitors or vascular endothelial growth factor (VEGF) inhibitors.

[0054] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is JAK inhibitor selected from the group consisting of Tofacitinib, Ruxolitinib, Baricitinib, Oclacitinib, Upadacitinib or Delgocitinib.

[0055] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is VEGF inhibitor selected from the group consisting of Axitinib, Nintedanib, or Sunitinib.

[0056] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is Tofacitinib.

[0057] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is Baricitinib.

[0058] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is Ruxolitinib.

[0059] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is Oclacitinib.

[0060] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is Delgocitinib.

[0061] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is Upadacitinib.

[0062] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is Axitinib.

[0063] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is Sunitinib.

[0064] In some embodiments, the therapeutic agent to be delivered is Nintedanib.Biopolymer

[0065] Biopolymers are natural polymers produced by living organisms and contain monomeric units that are covalently bonded to form larger structures. There are three main classes of biopolymers, classified according to the monomeric units used and the structure of the biopolymer formed: polynucleotides, polypeptides, and polysaccharides. More specifically, polynucleotides, such as RNA and DNA, are long polymers composed of 13 or more nucleotide monomers. Polypeptides or proteins are short polymers of amino acids, and some major examples include collagen, actin, and fibrin. Polysaccharides are often linear bonded polymeric carbohydrate structures, and some examples include cellulose and alginate. Other examples of biopolymers include rubber, suberin, melanin and lignin. Further examples of biopolymers include hyaluronic acid, chondroitin, and chondroitin sulfate.

[0066] A variety of biopolymers are useful as polymeric delivery vehicles for delivering the therapeutic agents to target cells or tissues. Biopolymers suitable for a particular application are selected based on their ability to target particular tissues, organs or cells, and their in vivo stability, i.e., the in vivo residence time in the circulatory system, or specific tissues, cells or organs.

[0067] In some embodiments, the biopolymer is selected from biocompatible polymers comprising at least a second binding group BG2, which is capable of reacting with a reactive functional group from a second entity (e.g., linker as provided herein) to form a linkage, thereby linking a biopolymer to the second entity (e.g., the linker) . The term “biocompatible” , as used herein, refers to a substance that has no medically unacceptable toxic or injurious effects on biological function, or which is tolerated by the body.

[0068] In some embodiments, the biopolymer is selected from biocompatible polymers comprising at least a first binding group BG2, wherein BG2 is carboxylic group. The BG2 serves as binding sites for the conjugation of linkers suitable for linking the therapeutic agents to the biopolymer. The BG2 may be present at any site within the backbone of the biopolymer, and thus the linkages formed between the biopolymer and the linker may be present at any part of the biopolymer.

[0069] In some embodiments, the biopolymers are biocompatible polymers comprising one or more carboxylic groups as BG2, which is capable of reacting with a reactive functional group of a suitable linker to form a linkage connecting the carboxylic group-containing biopolymer to the linker.

[0070] In certain embodiments, the reactive functional group of the linker is amino or amine, which reacts with the carboxylic group of the biopolymer such that an amide linkage is formed.

[0071] In some embodiments, the linkage formed from the reaction between the BG2 of the biopolymer and the reactive functional group of the linker is selected from -C (O) N (RU) -*or wherein RU is selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, or heteroaryl, and is a nitrogen-containing heterocyclyl optionally substituted with one or more Ra, and the *end of the linkage is connected to the biopolymer .

[0072] In certain embodiments, RU is hydrogen.

[0073] In certain embodiments, RU is alkyl, such as C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl. In certain embodiments, RU is methyl, ethyl, propyl, or butyl. In certain embodiments, RU is methyl.

[0074] In certain embodiments,  is

[0075] In some embodiments, the biopolymer may be selected from the group consisting of hyaluronic acid, chondroitin, or chondroitin sulfate.

[0076] In some embodiments, the biopolymer may have a number average molecular weight ranging from 400 to 3,000,000 Da, for example, from 1,000 to 3,000,000 Da, from 5,000 to 3,000,000 Da, from 10,000 to 3,000,000 Da, from 20,000 to 3,000,000 Da, from 30,000 to 3,000,000 Da, from 40,000 to 3,000,000 Da, from 50,000 to 3,000,000 Da, or from 50,000 to 2,000,000 Da.

[0077] In some embodiments, the biopolymer is hyaluronic acid. In certain embodiments, the hyaluronic acid can derive from any source.

[0078] In some embodiments, the hyaluronic acid may have a number average molecular weight ranging from 400 to 3,000,000 Da, for example, from 1,000 to 3,000,000 Da, from 5,000 to 3,000,000 Da, from 10,000 to 3,000,000 Da, from 20,000 to 3,000,000 Da, from 30,000 to 3,000,000 Da, from 40,000 to 3,000,000 Da, from 50,000 to 3,000,000 Da, or from 50,000 to 2,000,000 Da.Linker

[0079] The improved local delivery of therapeutic agents is achieved by linking a therapeutic agent to a biopolymer via a suitable linker. By selecting suitable linkers, the releasing rate of the therapeutic agent from the biopolymer can be controlled, thereby providing improved delivery of the therapeutic agent to target cells or tissues.

[0080] In some embodiments, a plurality of the linkers can be attached to a therapeutic agent via a cleavable linkage which is cleaved under biological conditions, thereby releasing the therapeutic agent.

[0081] A "cleavable linkage" is a relatively labile bond that cleaves under physiological conditions. An exemplary releasable linkage is a hydrolyzable bond that cleaves upon reaction with water (i.e., is hydrolyzed) . The tendency of a bond to hydrolyze in water may depend not only on the general type of linkage connecting two atoms but also on the substituents attached to these atoms. Appropriate hydrolytically unstable or weak linkages include but are not limited to carboxylate ester, phosphate ester, anhydrides, acetals, ketals, acyloxyalkyl ether, amide, imines, orthoesters, peptides, oligonucleotides, thioesters, urea, thiourea, carbamate, thiocabamate, phosphoramidate and carbonates. Certain functional groups have atoms that may be chemically degraded by a process other than hydrolysis. Exemplary releaseable linkages in this category include certain carbamates and Fmoc derivatives. Certain molecules containing these kinds of functionalities appropriately bonded may undergo chemical degradation (release) upon action of a base. In such cases “cleave” may occur at higher values of pH or through the action of biological molecules that contain basic moieties (e.g., histidines) . Another exemplary cleavable linkage is an enzymatically cleavable linkage. An "enzymatically cleavable linkage" means a linkage that is subject to cleavage by one or more enzymes.

[0082] Urea and amide groups are relatively stable toward hydrolysis in physiological condition and may take a longer time to hydrolytically cleave and release the attached therapeutic agent. On another hand, an ester group is relatively feasible toward hydrolysis in the physiological condition. Therefore, in some embodiments, an ester linkage is introduced as the cleavable group into the linker to control the rate of release of the therapeutic agent via hydrolysis. In some embodiments, the hydrolysis of the ester linkage within the linker produces a first hydrolysis intermediate comprising the therapeutic agent connected with a piece of linker residue and a second hydrolysis intermediate comprising the biopolymer connected with another piece of linker residue. In some embodiments, the hydrolysis of the ester linkage within the linker produces a first hydrolysis intermediate comprising the therapeutic agent connected with the biopolymer via a piece of linker residue and a second hydrolysis intermediate comprising another piece of linker residue. In some embodiments, the first hydrolysis intermediate undergoes a further cleavage process, thereby releasing the free therapeutic agent. In some embodiments, the further cleavage process occurs via an intramolecular cyclization elimination reaction.

[0083] In some embodiments, the linker is attached to the therapeutic agent via a linkage formed from another reactive functional group of the linker and the BG1 in the therapeutic agent and is attached to the biopolymer via a linkage formed from a reactive functional group of the linker and the BG2 in the biopolymer.

[0084] In some embodiments, the linker comprises a structure of Formula (I) , Formula (II) or Formula (III) : wherein wherein end of the linker is connected to the therapeutic agent through BG1  such that a urea linkage is formed, and *end of the linker is connected to the biopolymer through BG2 such that at least one amide linkage is formed; U is selected from a direct bond, -N (RU) -*or wherein is  a heterocyclyl optionally substituted with one or more Ra, wherein the *end of U is connected to the biopolymer; X is a direct bond, -C (=O) -, -C (RX) 2-, -N (RX) -, -O-or -S-; A is selected from a direct bond, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl,  heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, or heteroaryl, wherein each of the alkyl, heteroalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, and heteroaryl is independently optionally substituted with one or more Rb; each of RU, RV, RX and RL is independently selected from the group consisting of  hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, and heteroaryl, wherein each of the alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, and heteroaryl is independently optionally substituted with one or more Rb; each of Ra and Rb is independently selected from halogen, hydroxyl, amino,  cyano, nitro, alkyl, or -C (=O) -alkyl, and p is 0, 1, 2 or 3.

[0085] In some embodiments, the linker comprises a structure of Formula (I) .

[0086] In some embodiments, RV is alkyl (such as C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl) , alkynyl (such as C2-6 alkynyl, C2-5 alkynyl, C2-4 alkynyl, or C2-3 alkynyl) , aryl (such as C6-12 aryl, C6-11 aryl, C6-10 aryl, C6-9 aryl, or C6-8 aryl) or aralkyl (such as C7-18 aralkyl, C7-17 aralkyl, C7-16 aralkyl, C7-15 aralkyl, C7-14 aralkyl, C7-13 aralkyl, C7-12 aralkyl, C7-11 aralkyl, C7-10 aralkyl, C7-9 aralkyl, or C7-8 aralkyl) , each of which is optionally substituted with one or more Rb. In some embodiments, each Rb is independently selected from halogen, hydroxyl, amino, cyano, nitro, alkyl, or -C (=O) -alkyl.

[0087] In some embodiments, RV is methyl, ethyl, isopropyl, benzyl, phenyl or cyanomethyl.

[0088] In some embodiments, the linker comprises a structure of Formula (II) .

[0089] In some embodiments, each Ra is independently selected from halogen, hydroxyl, amino, cyano, nitro, alkyl (such as C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl) , and -C (=O) -alkyl (such as -C (=O) -C1-6 alkyl, -C (=O) -C1-5 alkyl, -C (=O) -C1-4 alkyl, -C (=O) -C1-3 alkyl, or -C (=O) -C1-2 alkyl) . In some embodiments, one or more Ra is C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl. In some embodiments, one or more Ra is -C (=O) -C1-6 alkyl, -C (=O) -C1-5 alkyl, -C (=O) -C1-4 alkyl, -C (=O) -C1-3 alkyl, or -C (=O) -C1-2 alkyl.

[0090] In some embodiments,  is selected from each of which is optionally substituted with one or more Ra. In some embodiments, each Ra is independently alkyl or -C (=O) -alkyl. In some embodiments, one or more Ra is C6 alkyl, C5 alkyl, C4 alkyl, C3 alkyl, C2 alkyl or C1 alkyl. In some embodiments, one or more Ra is -C (=O) -C6 alkyl, -C (=O) -C5 alkyl, -C (=O) -C4 alkyl, -C (=O) -C3 alkyl, -C (=O) -C2 alkyl or -C (=O) -C1 alkyl.

[0091] In some embodiments,  is selected from

[0092] In some embodiments, the linker comprises a structure of Formula (III) .

[0093] In some embodiments, each Ra is independently selected from halogen, hydroxyl, amino, cyano, nitro, or alkyl (such as C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl) . In some embodiments, one or more Ra is C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl.

[0094] In some embodiments,  is

[0095] In some embodiments,  is

[0096] In some embodiments, RL is alkyl. In certain embodiments, RL is C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl. In certain embodiments, RL is ethyl, n-propyl, isopropyl, or tert-butyl.

[0097] In some embodiments, U is -N (RU) -, and RU is hydrogen or alkyl (such as C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl) . In some embodiments, U is -N (RU) -, wherein RU is hydrogen, C6 alkyl, C5 alkyl, C4 alkyl, C3 alkyl, C2 alkyl or C1 alkyl.

[0098] In some embodiments, U is -NH-or -N (CH3) -.

[0099] In some embodiments, U is

[0100] In some embodiments, U is

[0101] In some embodiments, U is a direct bond.

[0102] In some embodiments, X is a direct bond, -C (=O) -, -O-, -C (RX) 2-, or -N (RX) -. In some embodiments, RX is hydrogen or alkyl (such as C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl) . In some embodiments, RX is hydrogen, C6 alkyl, C5 alkyl, C4 alkyl, C3 alkyl, C2 alkyl or C1 alkyl.

[0103] In certain embodiments, X is a direct bond, -C (=O) -, -O-, -CH2-or -N (CH3) -.

[0104] In some embodiments, A is a direct bond.

[0105] In some embodiments, A is alkyl, such as C1-10 alkyl, C1-9 alkyl, C1-8 alkyl, C1-7 alkyl, C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl. In some embodiments, A is selected from the group consisting of methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl and decyl.

[0106] In some embodiments, A is heteroalkyl. In some embodiments, A is heteroalkyl comprising 1-12 carbon atoms and 1-6 heteroatoms. In some embodiments, A is heteroalkyl comprising 1-11 carbon atoms and 1-5 heteroatoms. In some embodiments, A is heteroalkyl comprising 1-10 carbon atoms and 1-4 heteroatoms. In some embodiments, A is heteroalkyl comprising 1-9 carbon atoms and 1-6 heteroatoms. In some embodiments, A is heteroalkyl comprising 1-8 carbon atoms and 1-6 heteroatoms.

[0107] In some embodiments, A is – (OCH2CH2) p-, and p is an integer of 1-4.

[0108] In some embodiments, A is cycloalkyl, such as C3-12 cycloalkyl, C3-11 cycloalkyl, C3-10 cycloalkyl, C3-9 cycloalkyl, C3-8 cycloalkyl, C3-7 cycloalkyl, C3-6 cycloalkyl, C3-5 cycloalkyl, or C3-4 cycloalkyl. In some embodiments, A is monocyclic C3-8 cycloalkyl, monocyclic C3-7 cycloalkyl, monocyclic C3-6 cycloalkyl, monocyclic C3-5 cycloalkyl, or monocyclic C3-4 cycloalkyl. In some embodiments, A is bicyclic C4-12 cycloalkyl, bicyclic C4-11 cycloalkyl, bicyclic C4-10 cycloalkyl, bicyclic C4-9 cycloalkyl, bicyclic C4-8 cycloalkyl, bicyclic C4-7 cycloalkyl, bicyclic C4-6 cycloalkyl, or bicyclic C4-5 cycloalkyl.

[0109] In some embodiments, A is

[0110] In some embodiments, A is aralkyl. In certain embodiments, A is – (C6-12 aryl) (C1-6 alkyl) -, – (C6-11 aryl) (C1-6 alkyl) -, – (C6-10 aryl) (C1-6 alkyl) -, – (C6-9 aryl) (C1-6 alkyl) -, – (C6-8 aryl) (C1-6 alkyl) -, – (C6-7 aryl) (C1-6 alkyl) -, – (C6-12 aryl) (C1-5 alkyl) -, – (C6-12 aryl) (C1-4 alkyl) -, – (C6-12 aryl) (C1-3 alkyl) -, or – (C6-12 aryl) (C1-2 alkyl) -.

[0111] In certain embodiments, A is

[0112] In some embodiments, X is a direct bond, and A is a direct bond, alkyl, heteroalkyl, cycloalkyl, or aralkyl. In some embodiments, X is a direct bond, and A is a direct bond, C1-6 alkyl, heteroalkyl comprising 1-6 carbon atoms and 1-6 heteroatoms, C3-8 cycloalkyl, or (C6-12 aryl) (C1-6 alkyl) .

[0113] In some embodiments, X is -O-, and A is alkyl, aralkyl, or cycloalkyl. In some embodiments, X is -O-, and A is C1-6 alkyl, (C6-12 aryl) (C1-6 alkyl) , or C3-8 cycloalkyl.

[0114] In some embodiments, X is -CH2-, and A is heteroalkyl. In some embodiments, X is -CH2-, and A is heteroalkyl comprising 1-6 carbon atoms and 1-6 heteroatoms.

[0115] In some embodiments, X is -N (CH3) -, and A is alkyl. In some embodiments, X is -N (CH3) -, and A is C1-6 alkyl.

[0116] In some embodiments, X is -C (=O) -, and A is alkyl. In some embodiments, X is -C (=O) -, and A is C1-6 alkyl, C1-5 alkyl, C1-4 alkyl, C1-3 alkyl, or C1-2 alkyl.

[0117] In some embodiments, the linker provided herein comprises a structure selected from the group consisting of: wherein, RV, RU, RX, RL, and A are defined as supra, the *end of the linker is connected to the  biopolymer.

[0118] In some embodiments, the linker provided herein comprises a structure selected from the group consisting of: wherein q is an integer from 0 to 10, and the *end of the linker is connected to the  biopolymer.Drug Delivery System

[0119] In an aspect of the present disclosure, the therapeutic agent is attached to the biopolymer via a linker, thereby providing the drug delivery system for local delivery of the therapeutic agent to target sites.

[0120] The biopolymer of the drug delivery system provided herein may have one or more therapeutic agents conjugated via the linker. The biopolymer may be conjugated to the one or more therapeutic agents via one or more linkers at carboxylic group in the backbone of the biopolymer.

[0121] The drug delivery system of the present disclosure is obtained by conjugation between the biopolymer and the therapeutic agent by means of the linker through the formation of linkages between the biopolymer and the linker and linkage between the therapeutic agent and the linker.

[0122] In some embodiments, a reactive functional group of the linker, may first react with the BG1 of the therapeutic agent to form a linkage between the therapeutic agent and the linker, thereby providing a therapeutic agent-linker conjugate. The therapeutic agent-linker conjugate, which contains another reactive functional group at the terminal of the linker, may subsequently react with the BG2 of the biopolymer to form a linkage between the biopolymer and the linker, thereby providing the drug delivery system of the present disclosure.

[0123] In certain embodiments, it is possible to first react the BG2 of the biopolymer with a reactive functional group of the linker to form a biopolymer-linker conjugate, and subsequently react the BG1 of the therapeutic agent with another functional group of the linker in the biopolymer-linker conjugate, thereby providing the drug delivery system of the present disclosure.

[0124] In some embodiments, the biopolymer selected for the drug delivery system provided herein is hyaluronic acid, and the therapeutic agent selected for the drug delivery system provided herein is a JAK inhibitor selected from the group consisting of Tofacitinib, Ruxolitinib, Baricitinib, Oclacitinib, Upadacitinib and Delgocitinib. In some embodiments, the biopolymer selected for the drug delivery system provided herein is hyaluronic acid, and the therapeutic agent selected for the drug delivery system provided herein is a VEGF inhibitor selected from the group consisting of Axitinib, Nintedanib, and Sunitinib.

[0125] In certain embodiments, the drug delivery system provided herein is selected from the group consisting of: wherein n is in a range of 1-25000. In some embodiments, n is at least 5, at least 10,  at least 20, at least 30, at least 40, at least 50, at least 60, at least 70, at least 80, at least 90, at least 100, at least 200, at least 300, at least 400, at least 500, at least 600, at least 700, at least 800, at least 900, at least 1000, at least 1100, at least 1200, at least 1300, at least 1400, at least 1500, at least 1600, at least 1700, at least 1800, at least 1900, at least 2000, at least 2100, at least 2200, at least 2300, at least 2400, at least 2500, at least 2600, at least 2700, at least 2800, at least 2900, at least 3000, at least 4000, at least 5000, at least 6000, at least 7000, at least 8000, at least 9000, or at least 10000.

[0126] In some embodiments, the therapeutic agent can be conjugated to the biopolymer via the linker with a drug substitution rate to the biopolymer (DSR) as measured by NMR of at least 1%, at least 2%, at least 3%, at least 5%, at least 8%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, wherein the drug substitution rate to the biopolymer (DSR) refers to the ratio of the molar amount of groups on the biopolymer which are substituted with drugs to the total molar amount of groups on the biopolymer which are capable of being substituted with drugs.

[0127] The therapeutic agent may be released from the drug delivery system provided herein through the cleavage of the linkage between the linker and the biopolymer or the therapeutic agent. In some embodiments, the release of the therapeutic agent occurs where the linkage between the biopolymer and the linker is cleaved to release a therapeutic agent-linker conjugate, which may be considered as a prodrug. Subsequent release of the therapeutic agent from the linker may involve enzymatic or non-enzymatic cleavage of the linkage between the therapeutic agent and the linker. In some embodiments, the release of the therapeutic agent occurs where the linkage between the therapeutic agent and the linker is cleaved without or prior to the cleavage of the linkage between the biopolymer and the linker. The release of the therapeutic agent may also involve enzymatic or non-enzymatic processes.

[0128] In some embodiments, the therapeutic agent is released from the drug delivery system provided herein via a two-step process. In the first step, the drug delivery system undergoes hydrolysis through the hydrolysis of the cleavable linkage (such as ester linkage) within the linker, producing a first hydrolysis intermediate and a second hydrolysis intermediate. In some embodiments, the first hydrolysis intermediate comprises the therapeutic agent connected with a piece of linker residue, and the second hydrolysis comprises the biopolymer connected with another piece of linker residue. In some embodiments, the first hydrolysis intermediate comprises the therapeutic agent connected with the biopolymer via a piece of linker residue, and the second hydrolysis intermediate comprises another piece of linker residue. In the second step, the first hydrolysis intermediate undergoes a further cleavage process via an intramolecular cyclization and elimination reaction, releasing the free therapeutic agent. The first step is a relatively slow reaction at physiological condition and the second step is a relatively fast reaction. The scheme below shows the two-step process for the drug delivery system provided herein. Scheme 1. The two-step process for releasing the therapeutic agent from the drug  delivery system

[0129] The release of therapeutic agents may be affected by a variety of factors, for example, the selection of specific therapeutic agent, linker and the biopolymer, and the administration of the drug delivery system. The present disclosure contemplates biopolymers with varying molecular weight, binding group BG1, linkage with the linker; linkers with varying reactive functional groups and subunits; and therapeutic agents with varying binding group BG2, linkage with the linker.

[0130] The present disclosure also contemplates varying local administration of the drug delivery system provided herein. In some embodiments, the drug delivery system provided herein is locally administered to a subject in need thereof. In certain embodiments, the drug delivery system provided herein is locally administered to a subject in need thereof via injection. In certain embodiments, the drug delivery system provided herein is locally administered to a subject in need thereof via oral dosage form. In certain embodiments, the drug delivery system provided herein is locally administered to a subject in need thereof via inhalation. In certain embodiments, the drug delivery system provided herein is locally administered to a subject in need thereof via implant. In certain embodiments, the drug delivery system provided herein is locally administered to a subject in need thereof via topical application. Depending on the specific therapeutic agent, linker and the biopolymer combination, release of therapeutic agents may occur in a variety of locations upon administration to a subject. For example, release of therapeutic agents may occur at a site of administration.

[0131] In some embodiments, the administration of the drug delivery system provided herein to a subject may provide release of the therapeutic agent over a period of at least a few days to at least a few months.

[0132] The release of the therapeutic agent from the drug delivery system provided herein may be characterized bythe percent of the therapeutic agent released per day from the drug delivery system. In some embodiments, the release rate of the therapeutic agent may vary in a range of about 0.01%to about 20%per day, about 0.01%to about 15%per day, about 0.01%to about 10%per day, about 0.01%to about 9%per day, about 0.01%to about 8%per day, about 0.01%to about 7%per day, about 0.01%to about 6%per day, about 0.01%to about 5%per day, about 0.01%to about 4%per day, about 0.01%to about 3%per day, about 0.01%to about 2%per day, about 0.01%to about 1%per day, about 0.01%to about 0.5%per day, about 0.01%to about 0.4%per day, about 0.01%to about 0.3%per day, about 0.01%to about 0.2%per day, about 0.01%to about 0.1%per day, about 0.01%to about 0.05%per day, about 0.01%to about 0.04%per day, about 0.01%to about 0.03%per day, or about 0.01%to about 0.02%per day.Pharmaceutical Compositions

[0133] In a further aspect, there is provided pharmaceutical compositions comprising the drug delivery system of the present disclosure.

[0134] In another aspect, there is provided pharmaceutical compositions comprising the drug delivery system of the present disclosure, and at least one pharmaceutical acceptable excipient.

[0135] As used herein, the term “pharmaceutical composition” refers to a formulation containing the drug delivery system of the present disclosure in a form suitable for administration to a subject.

[0136] As used herein, the term “pharmaceutically acceptable excipient” means an excipient that is useful in preparing a pharmaceutical composition that is generally safe, non-toxic and neither biologically nor otherwise undesirable, and includes excipient that is acceptable for veterinary use as well as human pharmaceutical use. A “pharmaceutically acceptable excipient” as used herein includes both one and more than one such excipient. The term “pharmaceutically acceptable excipient” also encompasses “pharmaceutically acceptable carrier” and “pharmaceutically acceptable diluent” .

[0137] The pharmaceutical compositions provided herein can be in any form that allows for the composition to be administered to a subject, including, but not limited to a human, and formulated to be compatible with an intended route of administration.

[0138] A variety of routes are contemplated for the pharmaceutical compositions provided herein, and accordingly the pharmaceutical composition provided herein may be supplied in bulk or in unit dosage form depending on the intended administration route. For example, for oral, buccal, and sublingual administration, powders, granules, tablets, pills, capsules, gelcaps, and caplets may be acceptable as solid dosage forms, and emulsions, syrups, elixirs, suspensions, and solutions may be acceptable as liquid dosage forms. For injection administration, gel, solutions, emulsions and suspensions may be acceptable as liquid dosage forms, and a powder suitable for reconstitution with an appropriate solution as solid dosage forms. For inhalation administration, solutions, sprays, dry powders, and aerosols may be acceptable dosage form. For topical (including buccal and sublingual) or transdermal administration, powders, sprays, ointments, pastes, creams, lotions, gels, solutions, and patches may be acceptable dosage form. For vaginal administration, pessaries, tampons, creams, gels, pastes, foams and spray may be acceptable dosage form. For implant administration, solid, semi-solid, gel may be acceptable dosage form.

[0139] In some embodiments, the pharmaceutical compositions of the present disclosure may be in a form of formulation for oral administration.

[0140] In some embodiments, the pharmaceutical compositions of the present disclosure may be in a form of formulation for injection administration.

[0141] In some embodiments, the pharmaceutical compositions of the present disclosure may be in a form of formulation for inhalation administration.

[0142] In some embodiments, the pharmaceutical compositions of the present disclosure may be in a form of formulation for topical administration.

[0143] In certain embodiments, the pharmaceutical compositions provided herein may be formulated in the form of skin patches that are well known to those of ordinary skill in the art.

[0144] Besides those representative dosage forms described above, pharmaceutically acceptable excipients and carriers are generally known to those skilled in the art and are thus included in the present disclosure. Such excipients and carriers are described, for example, in “Remingtons Pharmaceutical Sciences” Mack Pub. Co., New Jersey (1991) , in “Remington: The Science and Practice of Pharmacy” , Ed. University of the Sciences in Philadelphia, 21st Edition, LWW (2005) , which are incorporated herein by reference.

[0145] In some embodiments, the pharmaceutical compositions of the present disclosure can be formulated as a single dose. The amount of the compounds provided herein in the single dose will vary depending on the subject treated and particular mode of administration.

[0146] In some embodiments, the pharmaceutical compositions of the present disclosure can be formulated to be administered to a subject at a time interval of a few days, a few weeks, a few months or even longer.

[0147] In a further aspect, there is also provided pharmaceutical compositions comprise the drug delivery system of the present disclosure, as two or more combination thearapy.Synthesis of the Drug Delivery System

[0148] Synthesis of the drug delivery system provided herein is illustrated in the synthetic schemes in the examples. The drug delivery system provided herein can be prepared using any known organic synthesis techniques and can be synthesized according to any of numerous possible synthetic routes, and thus these schemes are illustrative only and are not meant to limit other possible methods that can be used to prepare the compounds provided herein. Additionally, the steps in the schemes are for better illustration and can be changed as appropriate. The embodiments of the compounds in examples were synthesized for the purposes of research and potentially submission to regulatory agencies.

[0149] The reactions for preparing the drug delivery system of the present disclosure can be carried out in suitable solvents, which can be readily selected by one skilled in the art of organic synthesis. Suitable solvents can be substantially non-reactive with the starting materials (reactants) , the intermediates, or products at the temperatures at which the reactions are carried out, e.g., temperatures that can range from the solvent’s freezing temperature to the solvent's boiling temperature. A given reaction can be carried out in one solvent or a mixture of more than one solvent. Depending on the particular reaction step, suitable solvents for a particular reaction step can be selected by one skilled in the art.

[0150] Preparation of compounds of the present disclosure can involve the protection and deprotection of various chemical groups. The need for protection and deprotection, and the selection of appropriate protecting groups, can be readily determined by one skilled in the art. The chemistry of protecting groups can be found, for example, in T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., Wiley &Sons, Inc., New York (1999) , in P. Kocienski, Protecting Groups, Georg Thieme Verlag, 2003, and in Peter G. M. Wuts, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 5th Edition, Wiley, 2014, all of which are incorporated herein by reference in its entirety.

[0151] Reactions can be monitored according to any suitable method known in the art. For example, product formation can be monitored by spectroscopic means, such as nuclear magnetic resonance spectroscopy (e.g. 1H or 13C) , infrared spectroscopy, spectrophotometry (e.g. UV-visible) , mass spectrometry, or by chromatographic methods such as high performance liquid chromatography (HPLC) , liquid chromatography-mass spectroscopy (LCMS) , or thin layer chromatography (TLC) . Compounds can be purified by one skilled in the art by a variety of methods, including high performance liquid chromatography (HPLC) ( “Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization” Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs J. Combi. Chem. 2004, 6 (6) , 874-883, which is incorporated herein by reference in its entirety) , and normal phase silica chromatography.

[0152] The known starting materials of the present disclosure can be synthesized by using or according to the known methods in the art, or can be purchased from commercial suppliers. Unless otherwise noted, analytical grade solvents and commercially available reagents were used without further purification.

[0153] Unless otherwise specified, the reactions of the present disclosure were all done under a positive pressure of nitrogen or argon or with a drying tube in anhydrous solvents, and the reaction flasks were typically fitted with rubber septa for the introduction of substrates and reagents via syringe. Glassware was oven dried and / or heat dried.Method of treatment of disease

[0154] In a further aspect, there is provided a method of treating a disorder in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutic effective amount of the drug delivery system or the pharmaceutical composition provided herein.

[0155] The disorder to be treated depends on the selected therapeutic agent in the drug delivery system or the pharmaceutical composition provided herein. In some embodiments, the disorder can be selected from the group consisting of rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, ulcerative colitis, polyarticular course juvenile idiopathic arthritis; myelofibrosis, polycythemia vera, steroid-refractory acute graft-versus-host disease, coronavirus disease, atopic dermatitis, alopecia areata, plaque psoriasis, peripheral T-cell lymphoma, relapsed diffuse large T-cell lymphoma; atopic dermatitis and pruritus from allergic dermatitis in dogs, asthma and allergic dermatitis in cats; autoimmune disorders, hypersensitivity; Crohn's disease, ankylosing spondylitis, axial spondyloarthritis; Renal cell carcinoma; gastrointestinal stromal tumor, meningioma, pancreatic neuroendocrine tumors; idiopathic pulmonary fibrosis, lung cancer, retinal vein occlusion; age-related macular degeneration; uveitis; polypoidal choroidal vasculopathy; radiation-induced optic neuropathy; diabetic macular edema; neovascular glaucoma; diabetic retinopathy; corneal neovascularization; retinopathy of prematurity; coats disease; retinal capillary hemangioma; and myopic CNV.

[0156] In this context, the term “therapeutically effective amount” refers to an amount of a therapeutic agent selected in the drug delivery system provided herein or pharmaceutically acceptable salts thereof which is effective to provide “therapy” in a subject, or to “treat” discorders, diseases or conditions in a subject.EXAMPLES

[0157] For the purpose of illustration, the following examples are included. However, it is to be understood that these examples do not limit the present disclosure and are only meant to suggest a method of practicing the present disclosure. Persons skilled in the art will recognize that the chemical reactions described may be readily adapted to prepare a number of other compounds of the present disclosure, and alternative methods for preparing the compounds of the present disclosure are deemed to be within the scope of the present disclosure. For example, the synthesis of non-exemplified compounds according to the present disclosure may be successfully performed by modifications apparent to those skilled in the art, e.g., by appropriately protecting interfering groups, by utilizing other suitable reagents and building blocks known in the art other than those described, and / or by making routine modifications of reaction conditions. Alternatively, other reactions disclosed herein or known in the art will be recognized as having applicability for preparing other compounds of the present disclosure.

[0158] The foregoing description is considered as illustrative only of the principles of the present disclosure. Further, since numerous modifications and changes will be readily apparent to those skilled in the art, it is not desired to limit the invention to the exact construction and process shown as described above. Accordingly, all suitable modifications and equivalents may be considered to fall within the scope of the invention as defined by the claims that follow.

[0159] For the purpose of illustration, the following examples are included. However, it is to be understood that these examples do not limit the present disclosure and are only meant to suggest a method of practicing the present disclosure. Persons skilled in the art will recognize that the chemical reactions described may be readily adapted to prepare a number of other compounds of the present disclosure, and alternative methods for preparing the compounds of the present disclosure are deemed to be within the scope of the present disclosure. For example, the synthesis of non-exemplified compounds according to the present disclosure may be successfully performed by modifications apparent to those skilled in the art, e.g., by appropriately protecting interfering groups, by utilizing other suitable reagents and building blocks known in the art other than those described, and / or by making routine modifications of reaction conditions. Alternatively, other reactions disclosed herein or known in the art will be recognized as having applicability for preparing other compounds of the present disclosure.

[0160] The exemplary compounds provided herein are shown in table below. Example 1 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (1)

[0161] Step 1: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (1a)

[0162] To a stirred mixture of tofacitinib (300mg, 0.96mmol) in DMSO (3mL) was added bis (4-nitrophenyl) carbonate (307mg, 1mmol) and stirred at room temperature for 18 hours. Then (S) -morpholin-3-ylmethanol (117mg, 1mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Then 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoic acid (638mg, 3.14mmol) , 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (660mg, 3.44mmol) , N, N-dimethylpyridin-4-amine (12mg, 0.096mmol) and N, N-diisopropylethylamine (430mg, 3.33mmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The solution was diluted with EtOAc and washed with water. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM: MeOH=50: 1) to afford the title compound (1a) as a white solid (0.24g, Yield: 37.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H44N8O7, 641.74; found, 641.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.23 (d, J =6.3 Hz, 1H) , 7.35 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.80 (s, 2H) , 4.85 (s, 1H) , 4.54 (t, J = 10.4 Hz, 1H) , 4.27 –4.01 (m, 4H) , 3.98 –3.74 (m, 5H) , 3.72 –3.49 (m, 3H) , 3.47 –3.35 (m, 2H) , 3.28 (s, 3H) , 2.92 (dd, J = 12.6, 6.5 Hz, 2H) , 2.44 –2.12 (m, 3H) , 1.90 –1.77 (m, 1H) , 1.77 –1.50 (m, 3H) , 1.36 (s, 9H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0163] Step 2: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (1b)

[0164] To a stirred solution of compound 1a [ ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate] (220mg, 0.344mmol) in EtOAc (5mL) was slowly added 4M HCl in ethyl acetate (5mL) at ice-bath. The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The solution was diluted with EtOAc and evaporated under reduced pressure to afford the title compound (1b) as a white solid (0.163 g, yield: 82.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H36N8O5, 541.28; found, 541.3.

[0165] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (1)

[0166] To a solution of hyaluronic acid (MW 500KDa, 100mg, 0.25mmol carboxylic acid) in 20mL of deionized water and 10mL of acetonitrile was added 4-methylmorpholine (18mg, 0.175mmol) and the solution was then cooled to 0℃. 4- (4, 6-dimethoxy-1, 3, 5-triazin-2-yl) -4-morpholinium tetrafluoroborate (85.5mg, 0.26mmol) was added and stirred at room temperature for 1 hour. Then compound 1b [ (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride] (103mg, 0.174mmol) was added and stirred for 72 hours at room temperature. After NaCl (293mg, 5mmol) was added, the reaction mixture was stirred for 1 hour and followed by the dropwise addition of anhydrous alcohol (140mL) while stirring at -10℃. The mixture was filtered. The filter cake was washed with acetone and dried under vacuum to give the title compound as a white solid (0.136g, yield: 67%, DSR (Drug substitution rate w / w) =17%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.34 –8.22 (m, 0.17H) , 7.45 –7.29 (m, 0.17H) , 7.01 –6.82 (m, 0.17H) , 5.00 –4.43 (m, 2.68H) , 4.41 –2.97 (m, 12.89H) , 2.62 –1.53 (m, 4.19H) , 1.25 –0.95 (m, 0.51H) . Example 2 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) pyrrolidin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate (2)

[0167] Step 1: Preparation of ( (S) -1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) pyrrolidin-2-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (2a)

[0168] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using (S) -pyrrolidin-2-ylmethanol, as a white solid (0.4g, Yield: 78.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H44N8O6, 625.74; found, 625.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (d, J =6.3 Hz, 1H) , 7.35 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.86 –6.74 (m, 2H) , 4.89 (s, 1H) , 4.35 (s, 2H) , 4.17 –3.87 (m, 4H) , 3.84 –3.36 (m, 5H) , 3.28 (s, 3H) , 2.94 (d, J = 5.9 Hz, 2H) , 2.35 (dd, J = 11.7, 5.7 Hz, 3H) , 2.17 –2.05 (m, 1H) , 1.97 –1.51 (m, 7H) , 1.37 (s, 9H) , 1.00 (t, J = 8.0 Hz, 3H) .

[0169] Step 2: Preparation of ( (S) -1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) pyrrolidin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (2b)

[0170] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 2a, as a white solid (0.1g, yield: 96.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H36N8O4, 525.63; found, 525.23.

[0171] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) pyrrolidin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate (2)

[0172] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 2b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.112g, yield: 64.4%, DSR=20%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.23 –8.11 (m, 0.2H) , 7.42 –7.23 (m, 0.2H) , 6.93 –6.81 (m, 0.2H) , 4.79 –4.42 (m, 2.6H) , 4.29 –2.83 (m, 12.8H) , 2.55 –2.19 (m, 3.8H) , 2.16 –1.57 (m, 1.4H) , 1.14 –0.89 (m, 0.6H) . Example 3 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -1, 2, 3, 4-tetrahydroisoquinolin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (3)

[0173] Step 1: Preparation of ( (S) -2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -1,2, 3, 4-tetrahydroisoquinolin-3-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (3a)

[0174] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using (S) - (1, 2, 3, 4-tetrahydroisoquinolin-3-yl) methanol, as a white solid (0.24g, Yield: 21.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H46N8O6, 687.81; found, 687.2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.32 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.24 –7.12 (m, 5H) , 6.69 (d, J = 12.3 Hz, 1H) , 5.19 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 4.86 (d, J = 16.9 Hz, 2H) , 4.61 (t, J = 8.3 Hz, 2H) , 4.36 (dd, J =28.7, 11.8 Hz, 1H) , 4.16 (dt, J = 15.0, 7.5 Hz, 1H) , 4.07 –3.76 (m, 4H) , 3.68 –3.36 (m, 4H) , 3.24 –2.87 (m, 4H) , 2.80 –2.23 (m, 3H) , 2.11 –1.68 (m, 4H) , 1.44 (s, 9H) , 1.17 –1.02 (m, 3H) .

[0175] Step 2: Preparation of ( (S) -2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -1, 2, 3, 4-tetrahydroisoquinolin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (3b)

[0176] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 3a, as a white solid (0.2g, yield: 97.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H38N8O4, 587.70; found, 587.2.

[0177] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -1, 2, 3, 4-tetrahydroisoquinolin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (3)

[0178] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 3b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.047g, yield: 26.5%, DSR=14%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.23 –8.02 (m, 0.14H) , 7.49 –6.57 (m, 0.84H) , 5.14 –4.22 (m, 2.84H) , 4.21 –2.66 (m, 11.82H) , 2.65 –1.36 (m, 3.98H) , 1.14 –0.72 (m, 0.42H) . Example 4 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperidin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate (4)

[0179] Step 1: Preparation of (1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperidin-2-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (4a)

[0180] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using piperidin-2-ylmethanol, as a white solid (0.3g, yield: 29.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H46N8O6, 639.77; found, 639.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (s, 1H) , 7.31 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 6.81 (d, J = 19.7 Hz, 2H) , 5.05 –4.75 (m, 1H) , 4.62 –4.34 (m, 2H) , 4.20 –3.55 (m, 8H) , 3.31 –3.08 (m, 4H) , 2.94 –2.87 (m, 2H) , 2.43 –2.16 (m, 4H) , 1.95 –1.46 (m, 9H) , 1.36 (s, 9H) , 1.01 (t, J = 7.8 Hz, 3H) .

[0181] Step 2: Preparation of (1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperidin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (4b)

[0182] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 4a, as a white solid (0.24g, yield: 94.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H38N8O4, 539.65; found, 539.2.

[0183] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperidin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate (4)

[0184] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 4b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.11g, yield: 59.7%, DSR=18%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.25 –8.10 (m, 0.18H) , 7.34 –7.12 (m, 0.18H) , 6.94 –6.67 (m, 0.18H) , 4.74 –4.27 (m, 2.54H) , 4.26 –2.67 (m, 12.52H) , 2.59 –2.16 (m, 0.72H) , 2.15 –1.34 (m, 4.62H) , 1.15 –0.79 (m, 0.54H) . Example 5 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (5)

[0185] Step 1: Preparation of ( (S) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (5a)

[0186] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using (R) -morpholin-3-ylmethanol, as a white solid (0.32g, Yield: 52%) . MS (m / z) : [M+H] +calcd for C31H44N8O7, 641.74; found, 641.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.23 (d, J = 6.7 Hz, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 6.82 (d, J = 3.0 Hz, 2H) , 4.88 (s, 1H) , 4.52 (t, J = 10.4 Hz, 1H) , 4.23 –3.37 (m, 14H) , 3.28 (s, 3H) , 2.92 (dd, J = 12.8, 6.6 Hz, 2H) , 2.43 –2.15 (m, 3H) , 1.91 –1.51 (m, 4H) , 1.35 (s, 9H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0187] Step 2: Preparation of ( (S) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (5b)

[0188] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 5a, as a white solid (0.227g, yield: 86.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H36N8O5, 541.63; found, 541.2.

[0189] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (5)

[0190] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 5b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.057g, yield: 58.8%, DSR=19%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.28 –8.14 (m, 0.19H) , 7.41 –7.22 (m, 0.19H) , 6.98 –6.75 (m, 0.19H) , 4.87 –4.20 (m, 2.76H) , 4.19 –2.83 (m, 13.23H) , 2.57 –1.43 (m, 4.33H) , 1.18 –0.82 (m, 0.57H) . Example 6 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5-aminopentanoate (6)

[0191] Step 1: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) pentanoate (6a)

[0192] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using 5- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) pentanoic acid, as a white solid (0.271g, Yield: 43%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H46N8O7, 655.77; found, 655.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.23 (d, J = 5.7 Hz, 1H) , 7.36 (d, J = 3.5 Hz, 1H) , 6.84 –6.73 (m, 2H) , 4.84 (s, 1H) , 4.53 (t, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.20 –3.38 (m, 14H) , 3.21 (s, 3H) , 2.88 (dd, J =12.6, 6.4 Hz, 2H) , 2.45 –2.15 (m, 3H) , 2.02 –1.53 (m, 3H) , 1.50 –1.40 (m, 2H) , 1.39 –1.29 (m, 10H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0193] Step 2: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5-aminopentanoate hydrochloride (6b)

[0194] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 6a, as a white solid (0.185g, yield: 85.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H38N8O5, 555.65; found, 555.3.

[0195] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5-aminopentanoate (6)

[0196] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 6b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.051g, yield: 51.9%, DSR=17%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.28 –8.14 (m, 0.17H) , 7.45 –7.21 (m, 0.17H) , 7.00 –6.69 (m, 0.17H) , 4.87 –4.26 (m, 2.68H) , 4.25 –2.83 (m, 12.89H) , 2.58 –1.25 (m, 4.53H) , 1.17 –0.85 (m, 0.51H) . Example 7 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate (7)

[0197] Step 1: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoate (7a)

[0198] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoic acid, as a white solid (0.285g, Yield: 44.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H48N8O7, 669.80; found, 669.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.23 (d, J = 5.8 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.78 (d, J = 31.1 Hz, 2H) , 4.84 (s, 1H) , 4.53 (t, J = 10.4 Hz, 1H) , 4.19 –3.36 (m, 14H) , 3.27 (s, 3H) , 2.92 –2.77 (m, 2H) , 2.45 –2.18 (m, 3H) , 1.91 –1.41 (m, 5H) , 1.39 –1.31 (m, 12H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0199] Step 2: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate hydrochloride (7b)

[0200] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 7a, as a white solid (0.19g, yield: 86.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H40N8O5, 569.68; found, 569.3.

[0201] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate (7)

[0202] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 7b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.047g, yield: 47.3%, DSR=18%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.28 –8.15 (m, 0.18H) , 7.40 –7.23 (m, 0.18H) , 6.96 –6.71 (m, 0.18H) , 4.87 –4.33 (m, 2.72H) , 4.31 –2.79 (m, 13.06H) , 2.56 –1.56 (m, 4.62H) , 1.55 –0.85 (m, 0.9H) . Example 8 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate (8)

[0203] Step 1: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoate (8a)

[0204] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoic acid, as a white solid (0.304g, Yield: 45.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H52N8O7, 697.85; found, 697.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (d, J = 5.8 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.77 (d, J = 34.2 Hz, 2H) , 4.84 (s, 1H) , 4.53 (t, J = 10.4 Hz, 1H) , 4.23 –3.37 (m, 14H) , 3.27 (s, 3H) , 2.87 (dd, J = 13.0, 6.7 Hz, 2H) , 2.46 –2.14 (m, 3H) , 2.03 –1.40 (m, 6H) , 1.38 –1.27 (m, 6H) , 1.24 (dd, J = 13.1, 7.6 Hz, 9H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0205] Step 2: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate hydrochloride (8b)

[0206] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 8a, as a white solid (0.19g, yield: 76.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H44N8O5, 597.73; found, 597.3.

[0207] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate (8)

[0208] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 8b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.049g, yield: 48.1%, DSR=17%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.28 –8.14 (m, 0.17H) , 7.41 –7.19 (m, 0.17H) , 6.96 –6.66 (m, 0.17H) , 4.87 –4.32 (m, 2.51H) , 4.31 –2.89 (m, 13.06H) , 2.57 –1.53 (m, 4.53H) , 1.49 –0.85 (m, 1.53H) . Example 9 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (trans) -4-aminocyclohexane-1-carboxylate (9)

[0209] Step 1: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (trans) -4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) cyclohexane-1-carboxylate (9a)

[0210] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using (trans) -4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) cyclohexane-1-carboxylic acid, as a white solid (0.271g, Yield: 41.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C34H48N8O7, 681.81; found, 681.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.24 (d, J = 5.9 Hz, 1H) , 7.31 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.82 (s, 1H) , 6.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 4.84 (s, 1H) , 4.52 (t, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.21 –4.02 (m, 3H) , 3.99 –3.72 (m, 5H) , 3.71 –3.48 (m, 3H) , 3.39 (d, J = 18.9 Hz, 2H) , 3.31 –3.20 (m, 5H) , 3.19 –3.07 (m, 1H) , 2.44 –2.35 (m, 1H) , 2.18 (d, J = 11.9 Hz, 1H) , 1.98 –1.50 (m, 7H) , 1.40 –1.10 (m, 11H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0211] Step 2: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (trans) -4-aminocyclohexane-1-carboxylate hydrochloride (9b)

[0212] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 9a, as a white solid (0.147g, yield: 69%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H40N8O5, 581.31; found, 581.4.

[0213] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (trans) -4-aminocyclohexane-1-carboxylate (9)

[0214] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 9b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.057g, yield: 46.7%, DSR=7%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.29 –8.21 (m, 0.07H) , 7.39 –7.28 (m, 0.07H) , 6.96 –6.84 (m, 0.07H) , 4.87 –4.24 (m, 2.28H) , 4.23 –2.84 (m, 11.19H) , 2.57 –1.64 (m, 3.49H) , 1.51 –0.89 (m, 0.49H) . Example 10 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- (aminomethyl) benzoate (10)

[0215] Step 1: Preparation of ( (S) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- ( ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) benzoate (10a)

[0216] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using 4- ( ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) benzoic acid, as a white solid (0.145g, Yield: 21.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H44N8O7, 689.79; found, 689.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.20 (s, 1H) , 7.93 (s, 2H) , 7.61 –7.31 (m, 3H) , 7.24 –6.97 (m, 1H) , 6.77 (s, 1H) , 4.96 –4.70 (m, 2H) , 4.64 –4.30 (m, 2H) , 4.28 –4.01 (m, 5H) , 4.00 –3.68 (m, 5H) , 3.67 –3.39 (m, 4H) , 3.31 –3.16 (m, 3H) , 2.35 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 1.86 –1.57 (m, 2H) , 1.50 –1.32 (m, 9H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0217] Step 2: Preparation of ( (S) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- (aminomethyl) benzoate hydrochloride (10b)

[0218] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 10a, as a white solid (0.095g, yield: 85.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H36N8O5, 589.67; found, 589.2.

[0219] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- (aminomethyl) benzoate (10)

[0220] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 10b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.063g, yield: 62.3%, DSR=19%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.08 –7.60 (m, 0.57H) , 7.48 –7.26 (m, 0.38H) , 7.19 –6.84 (m, 0.19H) , 6.79 –6.41 (m, 0.19H) , 4.87 –4.22 (m, 2.95H) , 4.21 –2.75 (m, 13.04H) , 2.50 –1.36 (m, 3.57H) , 1.20 –0.72 (m, 0.57H) . Example 11 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate (11)

[0221] Step 1: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) nonanoate (11a)

[0222] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using 9- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) nonanoic acid, as a white solid (0.139g, Yield: 19.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H54N8O7, 711.88; found, 711.4.

[0223] Step 2: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate hydrochloride (11b)

[0224] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 11a, as a white solid (0.094g, yield: 78.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H46N8O5, 611.76; found, 611.3. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.36 (s, 1H) , 7.55 (s, 1H) , 7.13 –6.85 (m, 1H) , 4.79 –4.52 (m, 3H) , 4.37 –3.80 (m, 8H) , 3.75 –3.17 (m, 8H) , 3.02 –2.85 (m, 2H) , 2.66 –2.46 (m, 1H) , 2.42 –2.21 (m, 2H) , 2.04 –1.69 (m, 2H) , 1.67 –1.37 (m, 4H) , 1.35 –0.99 (m, 11H) .

[0225] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate (11)

[0226] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 11b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.051g, yield: 49.5%, DSR=12%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.26 –8.11 (m, 0.12H) , 7.38 –7.15 (m, 0.12H) , 6.92 –6.63 (m, 0.12H) , 4.86 –4.31 (m, 2.36H) , 4.30 –2.68 (m, 12.16H) , 2.53 –1.58 (m, 3.6H) , 1.53 –0.74 (m, 1.8H) . Example 12 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 10-aminodecanoate (12)

[0227] Step 1: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 10- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) decanoate (12a)

[0228] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using 10- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) decanoic acid, as a white solid (0.183g, Yield: 25.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C37H56N8O7, 725.90; found, 725.4.

[0229] Step 2: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 10-aminodecanoate hydrochloride (12b)

[0230] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 12a, as a white solid (0.152g, yield: 96.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H48N8O5, 625.79; found, 625.3. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.44 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 7.61 (d, J = 3.5 Hz, 1H) , 7.16 –6.96 (m, 1H) , 4.85 –4.60 (m, 3H) , 4.41 –3.86 (m, 8H) , 3.84 –3.29 (m, 8H) , 3.00 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 2.71 –2.54 (m, 1H) , 2.45 –2.21 (m, 2H) , 2.08 –1.76 (m, 2H) , 1.72 –1.43 (m, 4H) , 1.39 –1.05 (m, 13H) .

[0231] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 10-aminodecanoate (12)

[0232] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 12b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.065g, yield: 62.5%, DSR=16%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.23 –8.11 (m, 0.16H) , 7.38 –7.16 (m, 0.16H) , 6.90 –6.65 (m, 0.16H) , 4.86 –4.36 (m, 2.48H) , 4.28 –2.72 (m, 12.88H) , 2.55 –1.54 (m, 3.8H) , 1.50 –0.75 (m, 2.72H) . Example 13 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11-aminoundecanoate (13)

[0233] Step 1: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoate (13a)

[0234] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoic acid, as a white solid (0.12g, Yield: 24.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C38H58N8O7, 739.93; found, 739.4.

[0235] Step 2: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11-aminoundecanoate hydrochloride (13b)

[0236] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 13a, as a white solid (0.094g, yield: 90.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H50N8O5, 639.81; found, 639.3. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.45 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.62 (d, J = 2.9 Hz, 1H) , 7.20 –6.95 (m, 1H) , 4.81 –4.61 (m, 3H) , 4.38 –3.85 (m, 8H) , 3.80 –3.27 (m, 8H) , 3.01 (dd, J = 13.9, 6.7 Hz, 2H) , 2.71 –2.48 (m, 1H) , 2.45 –2.28 (m, 2H) , 2.08 –1.75 (m, 2H) , 1.73 –1.45 (m, 4H) , 1.44 –0.77 (m, 15H) .

[0237] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11-aminoundecanoate (13)

[0238] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 13b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.052g, yield: 49.3%, DSR=9%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.24 –8.12 (m, 0.09H) , 7.37 –7.17 (m, 0.09H) , 6.92 –6.69 (m, 0.09H) , 4.86 –4.30 (m, 2.27H) , 4.24 –2.67 (m, 11.62H) , 2.53 –1.58 (m, 3.45H) , 1.57 –0.70 (m, 1.71H) . Example 14 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate (14)

[0239] Step 1: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (tert-butoxycarbonyl) glycinate (14a)

[0240] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using (tert-butoxycarbonyl) glycine, as a white solid (0.84g, Yield: 21.4%) . MS (m / z) : [M+H] +calcd for C29H40N8O7, 613.69; found, 613.3.

[0241] Step 2: Preparation of ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate hydrochloride (14b)

[0242] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 14a, as a white solid (0.6g, yield: 89.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C24H32N8O5, 513.57; found, 513.2. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.44 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 7.62 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.07 (s, 1H) , 4.77 –4.46 (m, 3H) , 4.25 –3.87 (m, 8H) , 3.84 –3.22 (m, 8H) , 2.68 –2.48 (m, 1H) , 2.08 –1.76 (m, 2H) , 1.31 –1.05 (m, 5H) .

[0243] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (R) -4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate (14)

[0244] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 14b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.372g, yield: 52.9%, DSR=20%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.25 –8.09 (m, 0.2H) , 7.42 –7.23 (m, 0.2H) , 6.96 –6.68 (m, 0.2H) , 4.86 –4.32 (m, 2.6H) , 4.31 –2.85 (m, 13.4H) , 2.53 –1.48 (m, 3.4H) , 1.10 –0.76 (m, 1H) . Example 15 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate (15) Step 1: Preparation of tert-butyl (S) -4-acetyl-2- (hydroxymethyl) piperazine-1- carboxylate (15a)

[0245] To a mixture of tert-butyl (S) -2- (hydroxymethyl) piperazine-1-carboxylate (0.5g, 2.31mmol) in dichloromethane (100 mL) at -30℃ was added acetyl chloride (0.181g, 2.31mmol) dropwise under N2 and the reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h. The solution was diluted with dichloromethane and washed with 1M HCl solution and saturated aqueous sodium bicarbonate solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM / MeOH=150: 1～20: 1) to afford the title compound (15a) (0.55 g, Yield: 92.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C12H22N2O4, 259.32; found, 259.2.

[0246] Step 2: Preparation of tert-butyl (S) -2- ( ( (4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoyl) oxy) methyl) -4-acetylpiperazine-1-carboxylate (15b)

[0247] Compound 15a (530mg, 2.05mmol) , 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoic acid (734.5mg, 2.26mmol) , 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (381mg, 2.46mmol) , N, N-diisopropylethylamine (397mg, 3.08mmol ) and N, N-dimethylpyridin-4-amine (24.4mg, 0.2mmol) were dissolved in DCM (5mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The solution was diluted with DCM and washed with 1M HCl solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM / MeOH=150: 1～60: 1) to afford the title compound (15b) (810mg, Yield: 69.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H39N3O7, 566.67; found, 566.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.69 (d, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.47 –7.38 (m, 2H) , 7.37 –7.26 (m, 3H) , 4.35 –3.96 (m, 7H) , 3.85 –3.70 (m, 2H) , 3.30 –2.92 (m, 4H) , 2.84 –2.60 (m, 1H) , 2.38 –2.21 (m, 2H) , 2.05 –1.91 (m, 3H) , 1.71 –1.60 (m, 2H) , 1.41 (s, 9H) .

[0248] Step 3: Preparation of (S) - (4-acetylpiperazin-2-yl) methyl 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoate (15c)

[0249] To a stirred solution of compound 15b (800mg, 1.41mmol) in EtOAc (5mL) was slowly added 4M HCl in ethyl acetate (1mL) at ice-bath. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature and then was stirred at room temperature for 6 hours. The solution was diluted with EtOAc and washed with saturated sodium bicarbonate solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and evaporate under reduced pressure to afford the title compound as a white solid (0.6g, yield: 91.1%) MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H31N3O5, 466.55; found, 466.2.

[0250] Step 4: Preparation of ( (S) -4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoate (15d)

[0251] To a stirred mixture of compound 15c (500mg, 1.6mmol) in DCM (3mL) was added bis (4-nitrophenyl) carbonate (500mg, 1.64mmol) and stirred at room temperature for 18 hour. Then (S) - (4-acetylpiperazin-2-yl) methyl 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoate (782mg, 1.68mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 48 hours. The solution was diluted with dichloromethane and washed with 1M HCl solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM: MeOH=150: 1～60: 1) to afford the title compound (0.81g, Yield: 63%) as a white solid. MS (m / z) : [M+H] + calcd for C43H49N9O7, 804.92; found, 804.4.

[0252] Step 5: Preparation of ( (S) -4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (15e)

[0253] To a stirred mixture of compound 15d (400mg, 0.498mmol) in DCM (3mL) was added piperidine (1mL) and stirred at room temperature for 30 mins. Then ethanol (1mL) was added, and the reaction mixture was cooled to 0℃. Di-tert-butyl dicarbonate (5mL, 21.8mmol) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The solution was diluted with dichloromethane and washed with 1M HCl solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM: MeOH=150: 1～60: 1) to afford the title compound as a white solid (0.18g, Yield: 53%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H47N9O7, 682.80; found, 682.4. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.32 (s, 1H) , 7.26 (s, 1H) , 6.70 (s, 1H) , 5.14 (s, 1H) , 5.00 –4.31 (m, 4H) , 4.14 –3.74 (m, 4H) , 3.68 –3.25 (m, 10H) , 3.20 –2.95 (m, 2H) , 2.62 –2.42 (m, 1H) , 2.34 (s, 2H) , 2.13 (d, J = 16.6 Hz, 3H) , 2.07 –1.86 (m, 2H) , 1.85 –1.38 (m, 11H) , 1.10 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0254] Step 6: Preparation of ( (S) -4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate (15f)

[0255] To a stirred solution of compound 15e (180mg, 0.26mmol) in EtOAc (5mL) was slowly added 4M HCl in ethyl acetate (1mL) at ice-bath. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature and then was stirred at room temperature for 1 hour. The solution was diluted with EtOAc and evaporated under reduced pressure to afford the title compound as a white solid (0.142 g, yield: 92.8%) . MS (m / z) : [M+H] +calcd for C28H39N9O5, 582.68; found, 582.3.

[0256] Step 7: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -4-acetyl-1-(4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate (15)

[0257] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 15f and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (75mg, yield: 58.5%, DSR=22%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.31 –8.07 (m, 0.22H) , 7.40 –7.16 (m, 0.22H) , 6.98 –6.68 (m, 0.22H) , 4.77 –4.18 (m, 3.1H) , 4.17 –2.62 (m, 13.52H) , 2.60 –1.33 (m, 4.76H) , 1.16 –0.75 (m, 1.1H) . Example 16 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate (16) Step 1: Preparation of tert-butyl (S) -2- (hydroxymethyl) -4-methylpiperazine-1- carboxylate (16a)

[0258] To a mixture of tert-butyl (S) -2- (hydroxymethyl) piperazine-1-carboxylate (0.5g, 2.31mmol) in 2-methyltetrahydrofuran (10 mL) was added formaldehyde (37 wt. %in H2O, 0.281g, 3.47mmol) under N2, the reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Then the reaction mixture was cooled to 0℃ and sodium triacetoxyborohydride (0.975g, 4.62mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The solution was washed with 1M HCl solution and saturated aqueous sodium bicarbonate solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM / MeOH=150: 1～20: 1) to afford the title compound (0.48 g, Yield: 90.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C11H22N2O3, 231.31; found, 231.2.

[0259] Step 2: Preparation of tert-butyl (S) -2- ( ( (4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoyl) oxy) methyl) -4-methylpiperazine-1-carboxylate (16b)

[0260] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 2 by using compound 16a, as a white solid (0.77g, yield: 77%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H39N3O6, 538.66; found, 538.3.

[0261] Step 3: Preparation of (S) - (4-methylpiperazin-2-yl) methyl 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoate (16c)

[0262] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 3 by using compound 16b, as a white solid (0.6g, yield: 98.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H31N3O4, 438.54; found, 438.2.

[0263] Step 4: Preparation of ( (S) -1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoate (16d)

[0264] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 4 by using compound 16c, as a white solid (0.73g, yield: 73.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C42H49N9O6, 776.91; found, 776.4. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.73 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.55 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 7.36 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.27 (m, 2H) , 7.19 (dd, J = 9.6, 3.8 Hz, 1H) , 6.67 –6.48 (m, 1H) , 5.53 –4.99 (m, 2H) , 4.72 (t, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.59 –3.91 (m, 6H) , 3.84 –3.67 (m, 2H) , 3.66 –3.36 (m, 6H) , 3.35 –2.96 (m, 7H) , 2.95 –2.71 (m, 3H) , 2.70 –2.35 (m, 3H) , 1.96 –1.56 (m, 4H) , 1.12 –0.97 (m, 3H) .

[0265] Step 5: Preparation of (S) -1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (16e)

[0266] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 5 by using compound 16d, as a white solid (0.43g, yield: 72.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H47N9O6, 654.79; found, 654.4.

[0267] Step 6: Preparation of ( (S) -1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (16f)

[0268] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 6 by using compound 16e, as a white solid (0.32g, yield: 87.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H39N9O4, 554.67; found, 554.3.

[0269] Step 7: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (S) -1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 4-aminobutanoate (16)

[0270] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 16f and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (73mg, yield: 58.4%, DSR=21%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.31 –8.09 (m, 0.21H) , 7.44 –7.14 (m, 0.21H) , 7.01 –6.70 (m, 0.21H) , 4.78 –4.29 (m, 3.47H) , 4.28 –2.77 (m, 12.94H) , 2.76 –1.33 (m, 5.1H) , 1.19 –0.61 (m, 0.63H) . Example 17 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8-aminooctanoate (17)

[0271] Step 1: Preparation of tert-butyl 2- ( ( (8- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) octanoyl) oxy) methyl) -4-acetylpiperazine-1-carboxylate (17a)

[0272] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 2 by using 8- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) octanoic acid, as a white solid (0.66g, yield: 73%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H47N3O7, 622.78; found, 622.3. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.76 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.59 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.39 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.31 (td, J = 7.4, 0.9 Hz, 2H) , 4.87 (d, J = 45.5 Hz, 1H) , 4.61 –4.30 (m, 4H) , 4.27 –3.42 (m, 4H) , 3.35 –2.64 (m, 5H) , 2.34 –2.27 (m, 2H) , 2.18 –2.01 (m, 3H) , 1.67 –1.57 (m, 2H) , 1.56 –1.18 (m, 17H) .

[0273] Step 2: Preparation of (4-acetylpiperazin-2-yl) methyl 8- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) octanoate (17b)

[0274] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 3 by using compound 17a, as a white solid (0.33g, yield: 60.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H39N3O5, 522.66; found, 522.3.

[0275] Step 3: Preparation of (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) octanoate (17c)

[0276] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 4 by using compound 17b, as a white solid (0.28g, yield: 53%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C47H57N9O7, 861.03; found, 860.4.

[0277] Step 4: Preparation of (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoate (17d)

[0278] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 5 by using compound 17c, as a white solid (0.193g, yield: 83.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C37H55N9O7, 738.90; found, 738.4. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.33 (s, 1H) , 7.26 (s, 1H) , 6.71 (s, 1H) , 5.21 –5.11 (m, 1H) , 4.71 –4.33 (m, 4H) , 4.19 –3.57 (m, 6H) , 3.56 –2.91 (m, 10H) , 2.62 –2.40 (m, 1H) , 2.37 –2.23 (m, 2H) , 2.22 –1.86 (m, 5H) , 1.85 –1.52 (m, 4H) , 1.50 –1.37 (m, 9H) , 1.36 –1.17 (m, 6H) , 1.11 (t, J = 7.8 Hz, 3H) .

[0279] Step 5: Preparation of (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8-aminooctanoate hydrochloride (17e)

[0280] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 6 by using compound 17d, as a white solid (0.152g, yield: 91.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H47N9O5, 638.79; found, 638.3.

[0281] Step 6: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8-aminooctanoate (17)

[0282] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 17e and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.07g, yield: 55.3%, DSR=20%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.28 –8.08 (m, 0.2H) , 7.43 –7.17 (m, 0.2H) , 6.99 –6.74 (m, 0.2H) , 4.78 –4.22 (m, 3H) , 4.21 –2.56 (m, 13.2H) , 2.55 –1.52 (m, 4.6H) , 1.51 –0.59 (m, 2.6H) . Example 18 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate (18) Step 1: Preparation of tert-butyl 2- ( ( (11- ( ( ( (9H-fluoren-9- yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoyl) oxy) methyl) -4-acetylpiperazine-1-carboxylate (18a)

[0283] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 2 by using 11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoic acid, as a white solid (0.693g, yield: 77.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C38H53N3O7, 664.86; found, 664.4. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.76 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.59 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.39 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.32 –7.27 (m, 2H) , 4.79 (s, 1H) , 4.61 –4.28 (m, 4H) , 4.27 –3.64 (m, 4H) , 3.34 –2.96 (m, 4H) , 2.93 –2.63 (m, 1H) , 2.29 (dd, J = 14.5, 7.1 Hz, 2H) , 2.07 (t, J = 14.1 Hz, 3H) , 1.61 (d, J = 5.6 Hz, 2H) , 1.55 –1.37 (m, 11H) , 1.36 –1.16 (m, 12H) .

[0284] Step 2: Preparation of (4-acetylpiperazin-2-yl) methyl 11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoate (18b)

[0285] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 3 by using compound 18a, as a white solid (0.43g, yield: 74.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H45N3O5, 564.74; found, 564.3. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.77 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.61 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.41 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.36 –7.23 (m, 2H) , 4.93 (s, 1H) , 4.54 –4.18 (m, 4H) , 4.10 –3.93 (m, 2H) , 3.68 (dd, J = 9.8, 8.5 Hz, 1H) , 3.24 –2.70 (m, 6H) , 2.34 (dd, J = 13.8, 7.3 Hz, 2H) , 2.10 (s, 3H) , 1.70 –1.40 (m, 4H) , 1.38 –1.17 (m, 12H) .

[0286] Step 3: Preparation of (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoate (18c)

[0287] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 4 by using compound 18b, as a white solid (0.254g, yield: 39.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C50H63N9O7, 903.11; found, 902.5.

[0288] Step 4: Preparation of (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoate (18d)

[0289] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 5 by using compound 18c, as a white solid (0.125g, yield: 57.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C40H61N9O7, 780.98; found, 780.5. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.31 (s, 1H) , 7.25 (s, 1H) , 6.70 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 5.24 –5.09 (m, 1H) , 4.74 –4.33 (m, 4H) , 4.25 –3.76 (m, 5H) , 3.72 –3.27 (m, 9H) , 3.17 –2.97 (m, 2H) , 2.59 –2.46 (m, 1H) , 2.39 –2.26 (m, 2H) , 2.21 –1.89 (m, 5H) , 1.85 –1.56 (m, 4H) , 1.46 (s, 9H) , 1.37 –1.19 (m, 12H) , 1.18 –1.02 (m, 3H) .

[0290] Step 5: Preparation of (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate hydrochloride (18e)

[0291] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 6 by using compound 18d, as a white solid (0.093g, yield: 85.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H53N9O5, 680.87; found, 680.3.

[0292] Step 6: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoate (18)

[0293] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 18e and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.066g, yield: 50.5%, DSR=16%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.26 –8.07 (m, 0.16H) , 7.40 –7.18 (m, 0.16H) , 6.97 –6.68 (m, 0.16H) , 4.78 –4.22 (m, 2.8H) , 4.21 –2.53 (m, 12.56H) , 2.51 –1.58 (m, 4.28H) , 1.56 –0.49 (m, 3.04H) . Example 19 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate (19)

[0294] Step 1: Preparation of (4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propanoate (19a)

[0295] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using 3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propanoic acid, as a white solid (0.36g, yield: 59.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H42N8O7, 627.72; found, 627.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.23 (d, J = 6.5 Hz, 1H) , 7.39 (s, 1H) , 6.95 –6.74 (m, 2H) , 4.85 (s, 1H) , 4.55 (t, J = 9.9 Hz, 1H) , 4.19 –3.60 (m, 10H) , 3.59 –3.38 (m, 4H) , 3.28 (s, 3H) , 3.19 –3.03 (m, 2H) , 2.45 –2.29 (m, 3H) , 1.90 –1.50 (m, 2H) , 1.36 (s, 9H) , 1.07 –0.96 (m, 3H) .

[0296] Step 2: Preparation of (4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate hydrochloride (19b)

[0297] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 19a, as a white solid (0.298g, yield: 99%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H34N8O5, 527.60; found, 527.0.

[0298] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate (19)

[0299] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 19b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.052g, yield: 52%, DSR=17%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.26 –8.16 (m, 0.17H) , 7.39 –7.22 (m, 0.17H) , 6.97 –6.73 (m, 0.17H) , 4.87 –4.33 (m, 2.68H) , 4.32 –2.74 (m, 13.4H) , 2.60 –1.63 (m, 3.34H) , 1.53 –0.85 (m, 0.51H) . Example 20 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7-aminoheptanoate (20)

[0300] Step 1: Preparation of (4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) heptanoate (20a)

[0301] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using 7- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) heptanoic acid, as a white solid (0.18g, yield: 27.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C34H50N8O7, 683.82; found, 683.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.23 (d, J = 6.1 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 3.6 Hz, 1H) , 6.79 (d, J = 25.8 Hz, 2H) , 4.94 –4.75 (m, 1H) , 4.57 –4.47 (m, 1H) , 4.17 –3.63 (m, 11H) , 3.49 (d, J = 51.3 Hz, 3H) , 3.27 (s, 3H) , 2.87 (dd, J = 12.9, 6.5 Hz, 2H) , 2.43 –2.23 (m, 3H) , 1.89 –1.54 (m, 2H) , 1.52 –1.30 (m, 13H) , 1.21 (t, J = 11.6 Hz, 4H) , 1.02 (d, 6J = 7.1 Hz, 3H) .

[0302] Step 2: Preparation of (4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7-aminoheptanoate hydrochloride (20b)

[0303] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 20a, as a white solid (0.16g, yield: 98%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H42N8O5, 583.71; found, 583.1.

[0304] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7-aminoheptanoate (20)

[0305] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 20b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.056g, yield: 55.5%, DSR=11%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.25 –8.15 (m, 0.11H) , 7.39 –7.23 (m, 0.11H) , 6.94 –6.74 (m, 0.11H) , 4.86 –4.31 (m, 2.44H) , 4.30 –2.78 (m, 11.98H) , 2.60 –1.66 (m, 3.44H) , 1.53 –0.91 (m, 1.21H) . Example 21 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (21)

[0306] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (21a)

[0307] To a stirred mixture of tofacitinib (1000mg, 3.2mmol) in DMSO (20mL) was added bis (4-nitrophenyl) carbonate (1020mg, 3.35mmol) and stirred at room temperature for 18 hours. Then 2- (methylamino) ethan-1-ol (348mg, 3.2mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 mins. Then 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoic acid (1948.8mg, 9.6mmol) , 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (1840mg, 9.6mmol) , N, N-dimethylpyridin-4-amine (12mg, 0.096mmol) and N, N-diisopropylethylamine (1242mg, 9.6mmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The solution was diluted with EtOAc and washed with water. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM: EtOA: IPA=100: 10: 1) to afford the title compound as a white solid (1.2g, Yield: 62.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H42N8O6, 599.71; found, 599.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 –8.13 (m, 1H) , 7.29 (t, J = 10.4 Hz, 1H) , 6.78 (d, J = 3.7 Hz, 2H) , 4.81 (d, J = 33.3 Hz, 1H) , 4.37 –3.89 (m, 5H) , 3.87 –3.37 (m, 5H) , 3.27 (s, 3H) , 3.04 –2.84 (m, 5H) , 2.42 –2.24 (m, 3H) , 1.85 –1.54 (m, 4H) , 1.35 (s, 9H) , 0.99 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0308] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (21b)

[0309] To a stirred solution of compound 21a (1g, 1.67mmol) in EtOAc (5mL) was slowly added 4M HCl in ethyl acetate (8mL) at ice-bath. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature and then was stirred at room temperature for 5 hours. The solution was diluted with EtOAc and evaporated under reduced pressure to afford the title compound as a white solid (0.828g, yield: 99.5%) . MS (m / z) : [M+H] +calcd for C24H34N8O4, 499.27; found, 499.2.

[0310] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (21)

[0311] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 21b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.104g, yield: 61.1%, DSR=13%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.28 –8.13 (m, 0.13H) , 7.43 –7.24 (m, 0.13H) , 6.97 –6.75 (m, 0.13H) , 4.94 –4.42 (m, 2.52H) , 4.15 –2.97 (m, 11.95H) , 2.64 –2.20 (m, 0.39H) , 2.19 –1.45 (m, 3.52H) , 1.21 –0.92 (m, 0.39H) . Example 22 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl glycinate (22)

[0312] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl (tert-butoxycarbonyl) glycinate (22a)

[0313] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using (tert-butoxycarbonyl) glycine, as a white solid (0.2g, yield: 41.7%) . MS (m / z) : [M+H] +calcd for C27H38N8O6, 571.65; found, 571.3. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (d, J = 5.7 Hz, 1H) , 7.16 (dd, J = 8.9, 3.8 Hz, 1H) , 6.60 (t, J = 3.4 Hz, 1H) , 5.06 (s, 1H) , 4.55 –4.21 (m, 2H) , 4.06 –3.66 (m, 6H) , 3.61 –3.41 (m, 4H) , 3.33 (d, J = 14.5 Hz, 3H) , 3.14 –2.97 (m, 3H) , 2.53 –2.36 (m, 1H) , 2.00 –1.59 (m, 2H) , 1.40 (s, 9H) , 1.05 (dd, J = 12.3, 7.1 Hz, 3H) .

[0314] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl glycinate hydrochloride (22b)

[0315] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 22a, as a white solid (0.156g, yield: 93.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C22H30N8O4, 471.53; found, 471.3. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.38 (t, J = 7.1 Hz, 1H) , 7.60 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.02 (s, 1H) , 4.72 –4.34 (m, 3H) , 4.07 –3.80 (m, 6H) , 3.70 –3.58 (m, 2H) , 3.57 –3.24 (m, 5H) , 3.23 –2.89 (m, 3H) , 2.58 (d, J = 4.9 Hz, 1H) , 2.06 –1.68 (m, 2H) , 1.19 –1.12 (m, 3H) .

[0316] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl glycinate (22)

[0317] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 22b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.122g, yield: 67.1%, DSR=30%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.32 –8.10 (m, 0.3H) , 7.51 –7.25 (m, 0.3H) , 6.99 –6.66 (m, 0.3H) , 4.87 –4.28 (m, 2.9H) , 4.27 –2.71 (m, 14.8H) , 2.57 –2.23 (m, 0.3H) , 2.22 –1.37 (m, 3.6H) , 1.15 –0.67 (m, 0.9H) . Example 23 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 3-aminopropanoate (23)

[0318] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propanoate (23a)

[0319] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propanoic acid, as a white solid (0.12g, yield: 64.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H40N8O6, 585.68; found, 585.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (d, J = 5.1 Hz, 1H) , 7.32 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 6.75 (t, J = 21.0 Hz, 2H) , 4.85 (s, 1H) , 4.35 –3.89 (m, 5H) , 3.87 –3.35 (m, 5H) , 3.31 –2.79 (m, 8H) , 2.45 –2.29 (m, 3H) , 1.84 –1.51 (m, 2H) , 1.34 (s, 9H) , 1.00 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0320] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 3-aminopropanoate hydrochloride (23b)

[0321] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 23a, as a white solid (0.09g, yield: 98.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C23H32N8O4, 485.56; found, 485.1.

[0322] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 3-aminopropanoate (23)

[0323] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 23b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.107g, yield: 58.1%, DSR=18%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.28 –8.17 (m, 0.18H) , 7.43 –7.24 (m, 0.18H) , 6.97 –6.72 (m, 0.18H) , 4.94 –4.17 (m, 2.72H) , 4.15 –2.89 (m, 12.7H) , 2.79 –2.28 (m, 0.54H) , 2.20 –1.49 (m, 3.36H) , 1.24 –0.85 (m, 0.54H) . Example 24 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 5-aminopentanoate (24)

[0324] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 5- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) pentanoate (24a)

[0325] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 5- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) pentanoic acid, as a white solid (2.2g, yield: 62.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H44N8O6, 613.73; found, 613.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (d, J = 6.3 Hz, 1H) , 7.33 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.82 –6.71 (m, 2H) , 4.87 (s, 1H) , 4.37 –3.89 (m, 5H) , 3.87 –3.49 (m, 4H) , 3.39 (d, J = 13.8 Hz, 1H) , 3.28 (s, 3H) , 3.08 –2.82 (m, 5H) , 2.34 (dt, J = 44.5, 15.6 Hz, 3H) , 1.89 –1.69 (m, 1H) , 1.50 (d, J = 12.5 Hz, 3H) , 1.43 –1.29 (m, 11H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0326] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 5-aminopentanoate hydrochloride (24b)

[0327] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 24a, as a white solid (1.3g, yield: 97.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H36N8O4, 513.62; found, 513.3.

[0328] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 5-aminopentanoate (24)

[0329] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 24b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (1.3g, yield: 68.8%, DSR=13%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.31 –8.17 (m, 0.13H) , 7.46 –7.24 (m, 0.13H) , 6.99 –6.78 (m, 0.13H) , 4.94 –4.77 (m, 0.13H) , 4.76 –4.31 (m, 2.39H) , 4.15 –2.97 (m, 11.95H) , 2.64 –2.20 (m, 0.39H) , 2.19 –1.75 (m, 3.13H) , 1.74 –1.29 (m, 0.65H) , 1.21 –0.92 (m, 0.39H) .

[0330] With Step 3 of Example 24, reaction of hyaluronic acid (MW 1000 KDa) provided corresponding product (0.39 g, Yield: 68.7%, DSR: 20%) .

[0331] With Step 3 of Example 24, reaction of hyaluronic acid (MW 2000 KDa) provided corresponding product (0.36 g, Yield: 63.5%, DSR: 20%) . Example 25 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate (25)

[0332] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoate (25a)

[0333] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoic acid, as a white solid (0.156g, yield: 51.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H46N8O6, 627.76; found, 627.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (d, J = 6.2 Hz, 1H) , 7.33 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.80 (d, J = 3.1 Hz, 1H) , 6.73 (s, 1H) , 4.87 (s, 1H) , 4.41 –4.01 (m, 4H) , 4.00 –3.89 (m, 1H) , 3.73 (ddd, J = 26.4, 22.5, 13.3 Hz, 4H) , 3.42 (s, 1H) , 3.28 (s, 3H) , 3.12 –2.78 (m, 5H) , 2.46 –2.21 (m, 3H) , 1.95 –1.69 (m, 1H) , 1.68 –1.44 (m, 3H) , 1.42 –1.18 (m, 13H) , 1.03 (d, J =7.1 Hz, 3H) .

[0334] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate hydrochloride (25b)

[0335] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 25a, as a white solid (0.106g, yield: 80.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H38N8O4, 527.64; found, 527.3.

[0336] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate (25)

[0337] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 25b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.109g, yield: 57%, DSR=19%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.29 –8.15 (m, 0.19H) , 7.43 –7.24 (m, 0.19H) , 6.99 –6.75 (m, 0.19H) , 4.79 –4.31 (m, 2.19H) , 4.15 –2.95 (m, 13.42H) , 2.60 –1.65 (m, 3.76H) , 1.64 –1.22 (m, 1.33H) , 1.21 –0.92 (m, 0.57H) . Example 26 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-ethyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (26)

[0338] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-ethyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (26a)

[0339] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 2- (ethylamino) ethan-1-ol, as a white solid (0.13g, yield: 22%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H44N8O6, 613.73; found, 613.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (d, J =6.0 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.79 (d, J = 3.3 Hz, 2H) , 4.82 (d, J = 35.8 Hz, 1H) , 4.32 –3.90 (m, 5H) , 3.87 –3.51 (m, 4H) , 3.47 –3.09 (m, 6H) , 2.93 (dd, J = 12.5, 6.5 Hz, 2H) , 2.44 –2.19 (m, 3H) , 1.90 –1.47 (m, 4H) , 1.37 (s, 9H) , 1.20 –0.95 (m, 6H) .

[0340] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-ethyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (26b)

[0341] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 26a, as a white solid (0.106g, yield: 97.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H36N8O4, 513.62; found, 513.4.

[0342] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-ethyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (26)

[0343] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 26b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.108g, yield: 57.1%, DSR=9%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.25 –8.14 (m, 0.09H) , 7.40 –7.24 (m, 0.09H) , 6.97 –6.75 (m, 0.09H) , 4.79 –4.23 (m, 2.09H) , 4.14 –2.90 (m, 11.53H) , 2.71 –1.52 (m, 3.63H) , 1.39 –0.91 (m, 0.54H) . Example 27 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-isopropyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (27)

[0344] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-isopropyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (27a)

[0345] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 2- (isopropylamino) ethan-1-ol, as a white solid (0.41g, yield: 68.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H46N8O6, 627.76; found, 627.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (s, 1H) , 7.35 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.87 –6.72 (m, 2H) , 4.86 (s, 1H) , 4.22 –3.89 (m, 5H) , 3.88 –3.62 (m, 3H) , 3.60 –3.50 (m, 2H) , 3.48 –3.36 (m, 1H) , 3.28 (s, 3H) , 2.93 (dd, J = 12.6, 6.5 Hz, 2H) , 2.43 –2.24 (m, 3H) , 1.89 –1.69 (m, 1H) , 1.68 –1.50 (m, 3H) , 1.37 (s, 9H) , 1.27 –1.12 (m, 6H) , 1.02 (t, J = 6.4 Hz, 3H) .

[0346] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-isopropyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (27b)

[0347] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 27a, as a white solid (0.32g, yield: 95.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H38N8O4, 527.64; found, 527.3.

[0348] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-isopropyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (27)

[0349] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 27b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.105g, yield: 54.9%, DSR=14%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.27 –8.12 (m, 0.14H) , 7.37 –7.19 (m, 0.14H) , 6.97 –6.72 (m, 0.14H) , 4.82 –4.21 (m, 2.14H) , 4.09 –2.86 (m, 12.24H) , 2.59 –1.51 (m, 3.98H) , 1.41 –0.89 (m, 1.26H) . Example 28 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- (aminomethyl) benzoate (28)

[0350] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) benzoate (28a)

[0351] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 4- ( ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) benzoic acid, as a white solid (0.372g, yield: 59.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H42N8O6, 647.75; found, 647.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.14 (s, 1H) , 7.95 (s, 2H) , 7.52 –7.33 (m, 3H) , 7.25 (s, 1H) , 6.76 (s, 1H) , 4.85 (s, 1H) , 4.52 (s, 2H) , 4.25 –3.57 (m, 9H) , 3.42 (d, J = 5.3 Hz, 1H) , 3.28 –3.22 (m, 3H) , 3.01 (s, 3H) , 2.44 –2.26 (m, 1H) , 1.91 –1.68 (m, 1H) , 1.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 1.45 –1.31 (m, 9H) , 1.03 (t, J = 13.0 Hz, 3H) .

[0352] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- (aminomethyl) benzoate hydrochloride (28b)

[0353] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 28a, as a white solid (0.287g, yield: 96.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H34N8O4, 547.63; found, 547.3.

[0354] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- (aminomethyl) benzoate (28)

[0355] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 28b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.138g, yield: 70.8%, DSR=20%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.00 –7.56 (m, 0.6H) , 7.50 –6.90 (m, 0.6H) , 6.81 –6.34 (m, 0.2H) , 4.80 –4.22 (m, 2.6H) , 4.21 –2.76 (m, 13.2H) , 2.51 –1.39 (m, 3.6H) , 1.25 –0.65 (m, 0.6H) . Example 29 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl (trans) -4-aminocyclohexane-1-carboxylate (29)

[0356] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl (trans) -4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) cyclohexane-1-carboxylate (29a)

[0357] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using (trans) -4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) cyclohexane-1-carboxylic acid, as a white solid (0.1g, yield: 49.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H46N8O6, 639.77; found, 639.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.20 (d, J = 6.2 Hz, 1H) , 7.31 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.79 (s, 1H) , 6.69 (s, 1H) , 4.86 (s, 1H) , 4.29 –3.90 (m, 5H) , 3.83 –3.57 (m, 4H) , 3.41 –3.15 (m, 3H) , 3.05 –2.85 (s, 5H) , 2.44 –2.35 (m, 1H) , 2.20 (s, 1H) , 1.92 –1.54 (m, 6H) , 1.37 (s, 9H) , 1.17 (dd, J = 13.9, 7.0 Hz, 4H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0358] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl (trans) -4-aminocyclohexane-1-carboxylate hydrochloride (29b)

[0359] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 29a, as a white solid (0.08g, yield: 94.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H38N8O4, 539.65; found, 539.3.

[0360] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl (trans) -4-aminocyclohexane-1-carboxylate (29)

[0361] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 29b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.083g, yield: 49.7%, DSR=7%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.26 –8.15 (m, 0.07H) , 7.42 –7.28 (m, 0.07H) , 6.95 –6.75 (m, 0.07H) , 4.93 –4.35 (m, 2.07H) , 4.21 –3.07 (m, 11.19H) , 2.60 –1.57 (m, 3.84H) , 1.17 –0.98 (m, 0.21H) . Example 30 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-phenyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (30)

[0362] Step 1: Preparation of tert-butyl (2-hydroxyethyl) (phenyl) carbamate (30a)

[0363] To a stirred mixture of 2- (phenylamino) ethanol (600mg, 4.38mmol) in ethanol (10mL) was added di-tert-butyl dicarbonate (5mL) dropwise. The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM: MeOH=100: 1～50: 1) to afford the title compound as a white solid (0.976g, Yield: 94%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C13H19NO3, 238.30; found, 238.1.

[0364] Step 2: Preparation of 2- ( (tert-butoxycarbonyl) (phenyl) amino) ethyl 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoate (30b)

[0365] Compound 30a (963mg, 4.06mmol) , 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoic acid (1456mg, 4.48mmol) , 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (755mg, 4.87mmol) , N, N-diisopropylethylamine (787mg, 6.1mmol ) and N, N-dimethylpyridin-4-amine (49mg, 0.4mmol) were dissolved in DCM (10mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The solution was diluted with DCM and washed with 1M HCl solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM / MeOH=50: 1) to afford the title compound (1278mg, Yield: 57.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H36N2O6, 545.65; found, 545.3.

[0366] Step 3: Preparation of 2- (phenylamino) ethyl 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoate (30c)

[0367] To a stirred solution of compound 30b (1263mg, 2.32mmol) in EtOAc (10mL) was slowly added 4M HCl in ethyl acetate (2mL) at ice-bath. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature and then was stirred at room temperature for 6 hours. The solution was diluted with EtOAc and washed with saturated sodium bicarbonate solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and evaporated under reduced pressure to afford the title compound as a white solid (1g, yield: 97%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H28N2O4, 445.53; found, 445.2.

[0368] Step 4: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-phenyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) butanoate (30d)

[0369] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 4 by using compound 30c, as a white solid (0.778g, yield: 44.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C44H46N8O6, 783.90; found, 783.4.

[0370] Step 5: Preparation of Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-phenyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (30e)

[0371] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 5 by using compound 30d, as a white solid (0.38g, yield: 57.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C34H44N8O6, 661.78; found, 661.2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.83 –9.69 (m, 1H) , 8.29 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.71 (dd, J = 10.1, 4.0 Hz, 1H) , 7.30 (t, J = 7.8 Hz, 2H) , 7.17 (dd, J = 14.9, 7.6 Hz, 3H) , 6.58 (t, J = 4.2 Hz, 1H) , 5.20 –5.05 (m, 1H) , 4.23 (t, J = 5.6 Hz, 2H) , 4.13 –3.73 (m, 4H) , 3.65 –3.44 (m, 6H) , 3.38 (d, J = 18.2 Hz, 3H) , 2.51 (dt, J = 20.7, 5.3 Hz, 1H) , 2.33 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.05 –1.59 (m, 4H) , 1.51 –1.29 (m, 9H) , 1.09 (dd, J = 11.8, 7.1 Hz, 3H) .

[0372] Step 6: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-phenyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (30f)

[0373] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 30e, as a white solid (0.32g, yield: 99.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H36N8O4, 561.66; found, 561.3.

[0374] Step 7: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-phenyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (30)

[0375] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 30f and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.093g, yield: 47.1%, DSR=5%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.27 –8.16 (m, 0.05H) , 7.91 –6.98 (m, 0.3H) , 6.86 –6.77 (m, 0.05H) , 4.77 –4.34 (m, 2.05H) , 4.30 –2.90 (m, 10.75H) , 2.87 –1.47 (m, 3.35H) , 1.46–0.71 (m, 0.15H) . Example 31 Preparation of conjugate of chondroitin sulfate and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-phenyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (31)

[0376] The title compound was prepared in analogy to Example 30, step 7 by using chondroitin sulfate instead of hyaluronic acid, as a white solid (0.082g, yield: 42.6%, DSR=5%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.28 –8.16 (m, 0.05H) , 7.90 –7.00 (m, 0.3H) , 6.85 –6.75 (m, 0.05H) , 4.78 –4.32 (m, 2.05H) , 4.31 –2.94 (m, 10.75H) , 2.93 –1.48 (m, 3.35H) , 1.47 –0.69 (m, 0.15H) . Example 32 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 11-aminoundecanoate (32)

[0377] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoate (32a)

[0378] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoic acid, as a white solid (0.441g, yield: 65.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H56N8O6, 697.89; found, 697.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.20 (d, J = 6.3 Hz, 1H) , 7.32 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.81 –6.66 (m, 2H) , 4.86 (s, 1H) , 4.37 –3.91 (m, 5H) , 3.87 –3.51 (m, 4H) , 3.41 (d, J = 2.9 Hz, 1H) , 3.27 –3.21 (m, 3H) , 3.10 –2.81 (m, 5H) , 2.42 –2.21 (m, 3H) , 1.85 –1.66 (m, 1H) , 1.60 –1.43 (m, 3H) , 1.37 –1.27 (m, 10H) , 1.21 (s, 13H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0379] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 11-aminoundecanoate hydrochloride (32b)

[0380] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 32a, as a white solid (0.23g, yield: 62.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H48N8O4, 597.78; found, 597.4.

[0381] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 11-aminoundecanoate (32)

[0382] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 32b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.12g, yield: 59.1%, DSR=12%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.29 –8.13 (m, 0.12H) , 7.44 –7.21 (m, 0.12H) , 6.96 –6.69 (m, 0.12H) , 4.87 –4.25 (m, 2.36H) , 4.24 –2.84 (m, 11.92H) , 2.58 –1.70 (m, 3.6H) , 1.69 –0.87 (m, 2.28H) . Example 33 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8-aminooctanoate (33)

[0383] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoate (33a)

[0384] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoic acid, as a white solid (0.339g, yield: 53.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H50N8O6, 655.81; found, 655.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.20 (d, J = 6.3 Hz, 1H) , 7.32 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.85 –6.61 (m, 2H) , 5.01 –4.74 (m, 1H) , 4.43 –3.88 (m, 5H) , 3.85 –3.37 (m, 5H) , 3.30 (s, 3H) , 3.11 –2.79 (m, 5H) , 2.45 –2.11 (m, 3H) , 1.90 –1.42 (m, 4H) , 1.41 –1.09 (m, 17H) , 1.02 (d, J =7.1 Hz, 3H) .

[0385] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8-aminooctanoate hydrochloride (33b)

[0386] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 33a, as a white solid (0.208g, yield: 74.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H42N8O4, 555.70; found, 555.3.

[0387] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8-aminooctanoate (33)

[0388] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 33b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.109g, yield: 45.9%, DSR=16%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.32 –8.15 (m, 0.16H) , 7.48 –7.23 (m, 0.16H) , 7.00 –6.69 (m, 0.16H) , 4.87 –4.24 (m, 2.16H) , 4.10 –2.64 (m, 12.88H) , 2.56 –2.15 (m, 0.48H) , 2.14–1.58 (m, 3.96H) , 1.57 –0.70 (m, 1.44H) . Example 34 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6-aminospiro [3.3] heptane-2-carboxylate (34)

[0389] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) spiro [3.3] heptane-2-carboxylate (34a)

[0390] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) spiro [3.3] heptane-2-carboxylic acid, as a white solid (0.325g, yield: 50%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H46N8O6, 651.78; found, 651.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (d, J = 6.3 Hz, 1H) , 7.31 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.03 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 6.82 (d, J = 3.3 Hz, 1H) , 4.99 –4.77 (m, 1H) , 4.39 –3.92 (m, 5H) , 3.90 –3.37 (m, 6H) , 3.31 (s, 3H) , 3.15 –2.76 (m, 4H) , 2.46 –1.98 (m, 7H) , 1.96 –1.52 (m, 4H) , 1.36 (s, 9H) , 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3H) .

[0391] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6-aminospiro [3.3] heptane-2-carboxylate hydrochloride (34b)

[0392] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 34a, as a white solid (0.238g, yield: 93.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H38N8O4, 551.66; found, 551.3.

[0393] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6-aminospiro [3.3] heptane-2-carboxylate (34)

[0394] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 34b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.121g, yield: 61.8%, DSR=22%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.29 –8.11 (m, 0.22H) , 7.39 –7.18 (m, 0.22H) , 6.97 –6.67 (m, 0.22H) , 4.87 –4.36 (m, 2.22H) , 4.35 –2.74 (m, 13.96H) , 2.63 –1.47 (m, 5.42H) , 1.25 –0.82 (m, 0.66H) . Example 35 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 2- (2-aminoethoxy) acetate (35)

[0395] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 2- (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) ethoxy) acetate (35a)

[0396] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 2- (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) ethoxy) acetic acid, as a white solid (0.375g, yield: 63.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H42N8O7, 615.70; found, 615.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (d, J = 6.3 Hz, 1H) , 7.36 (d, J = 3.4 Hz, 1H) , 6.87 –6.69 (m, 2H) , 4.99 –4.75 (m, 1H) , 4.51 –3.91 (m, 7H) , 3.88 –3.41 (m, 7H) , 3.31 (s, 3H) , 3.20 –2.78 (m, 5H) , 2.48 –2.32 (m, 1H) , 1.90 –1.47 (m, 2H) , 1.38 (s, 9H) , 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0397] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 2- (2-aminoethoxy) acetate hydrochloride (35b)

[0398] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 35a, as a white solid (0.276g, yield: 89%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C24H34N8O5, 515.59; found, 515.3.

[0399] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 2- (2-aminoethoxy) acetate (35)

[0400] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 35b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.128g, yield: 67.6%, DSR=14%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.33 –8.11 (m, 0.14H) , 7.44 –7.20 (m, 0.14H) , 6.99 –6.68 (m, 0.14H) , 4.87 –4.41 (m, 2.42H) , 4.40 –2.61 (m, 12.8H) , 2.58 –1.42 (m, 3.42H) , 1.41 –0.70 (m, 0.42H) . Example 36 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl (1R, 5S, 6R) -3-azabicyclo [3.1.0] hexane-6-carboxylate (36)

[0401] Step 1: Preparation of 3- (tert-butyl) 6- (2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl) (1R, 5S, 6r) -3-azabicyclo [3.1.0] hexane-3, 6-dicarboxylate (36a)

[0402] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using (1R, 5S, 6R) -3- (tert-butoxycarbonyl) -3-azabicyclo [3.1.0] hexane-6-carboxylic acid, as a white solid (0.397g, yield: 66.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H42N8O6, 623.73; found, 623.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (d, J = 5.9 Hz, 1H) , 7.34 (d, J =3.8 Hz, 1H) , 6.79 (s, 1H) , 4.86 (s, 1H) , 4.34 –3.57 (m, 8H) , 3.54 –3.37 (m, 6H) , 3.27 (s, 3H) , 3.14 –2.79 (m, 3H) , 2.47 –2.27 (m, 1H) , 2.17 –1.90 (m, 2H) , 1.89 –1.45 (m, 3H) , 1.44 –1.29 (m, 9H) , 1.01 (t, J = 7.5 Hz, 3H) .

[0403] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl (1R, 5S, 6R) -3-azabicyclo [3.1.0] hexane-6-carboxylate hydrochloride (36b)

[0404] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 36a, as a white solid (0.29g, yield: 88.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H34N8O4, 523.61; found, 523.3.

[0405] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl (1R, 5S, 6R) -3-azabicyclo [3.1.0] hexane-6-carboxylate (36)

[0406] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 36b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.122g, yield: 63.9%, DSR=23%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.26 –8.08 (m, 0.23H) , 7.40 –7.20 (m, 0.23H) , 6.97 –6.69 (m, 0.23H) , 4.87 –4.34 (m, 2.23H) , 4.32 –2.79 (m, 14.6H) , 2.59 –1.40 (m, 4.38H) , 1.14 –0.89 (m, 0.69H) . Example 37 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 2- (2- (2-aminoethoxy) ethoxy) acetate (37)

[0407] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 2, 2-dimethyl-4-oxo-3, 8, 11-trioxa-5-azatridecan-13-oate (37a)

[0408] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 2, 2-dimethyl-4-oxo-3, 8, 11-trioxa-5-azatridecan-13-oic acid, as a white solid (0.18g, yield: 85.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H46N8O8, 659.76; found, 659.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 7.32 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 6.85 –6.65 (m, 2H) , 4.85 (s, 1H) , 4.43 –3.87 (m, 14H) , 3.53 –3.32 (m, 6H) , 3.14 –2.77 (m, 6H) , 2.43 –2.29 (m, 1H) , 1.85 –1.52 (m, 2H) , 1.35 (s, 9H) , 1.00 (s, 3H) .

[0409] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 2- (2- (2-aminoethoxy) ethoxy) acetate hydrochloride (37b)

[0410] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 37a, as a white solid (0.15g, yield: 98.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H38N8O6, 559.64; found, 559.3.

[0411] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 2- (2- (2-aminoethoxy) ethoxy) acetate (37)

[0412] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 37b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.117g, yield: 59.4%, DSR=9%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.27 –8.17 (m, 0.09H) , 7.41 –7.31 (m, 0.09H) , 6.96 –6.87 (m, 0.09H) , 4.87 –4.24 (m, 2.27H) , 4.02 –2.91 (m, 12.16H) , 2.54 –2.40 (m, 0.09H) , 2.13 –1.65 (m, 3.18H) , 1.17 –0.95 (m, 0.27H) . Example 38 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8-azabicyclo [3.2.1] octane-3-carboxylate (38)

[0413] Step 1: Preparation of 8- (tert-butyl) 3- (2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl) 8-azabicyclo [3.2.1] octane-3, 8-dicarboxylate (38a)

[0414] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 8- (tert-butoxycarbonyl) -8-azabicyclo [3.2.1] octane-3-carboxylic acid, as a white solid (0.402g, yield: 64.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H46N8O6, 651.78; found, 651.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (d, J = 6.4 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 3.0 Hz, 1H) , 6.81 (s, 1H) , 4.87 (s, 1H) , 4.46 –3.38 (m, 12H) , 3.22 (s, 3H) , 2.94 (s, 4H) , 2.38 (dd, J = 16.3, 9.5 Hz, 1H) , 1.95 –1.50 (m, 10H) , 1.38 (d, J = 10.0 Hz, 9H) , 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0415] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8-azabicyclo [3.2.1] octane-3-carboxylate hydrochloride (38b)

[0416] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 38a, as a white solid (0.301g, yield: 91.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H38N8O4, 551.66; found, 551.3.

[0417] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8-azabicyclo [3.2.1] octane-3-carboxylate (38)

[0418] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 38b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.104g, yield: 53.1%, DSR=9%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.28 –8.16 (m, 0.09H) , 7.39 –7.26 (m, 0.09H) , 6.98 –6.86 (m, 0.09H) , 4.87 –4.22 (m, 2.27H) , 4.21 –2.89 (m, 11.53H) , 2.61 –1.38 (m, 3.99H) , 1.23 –0.94 (m, 0.27H) . Example 39 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (N-benzyl-4- ( ( (3R, 4R) -1- (2- cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (39)

[0419] Step 1: Preparation of 2- (N-benzyl-4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (39a)

[0420] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 2- (benzylamino) ethan-1-ol, as a white solid (0.26g, yield: 24.7%) . MS (m / z) : [M+H] +calcd for C35H46N8O6, 675.80; found, 675.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.27 (dd, J = 12.2, 6.1 Hz, 1H) , 7.66 –7.11 (m, 6H) , 6.90 –6.71 (m, 2H) , 5.06 –4.47 (m, 3H) , 4.31 –3.89 (m, 5H) , 3.85 –3.53 (m, 5H) , 3.28 (s, 3H) , 2.98 –2.83 (m, 2H) , 2.44 –2.17 (m, 3H) , 1.89 –1.51 (m, 4H) , 1.37 (s, 9H) , 1.06 –0.93 (m, 3H) .

[0421] Step 2: Preparation of 2- (N-benzyl-4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (39b)

[0422] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 39a, as a white solid (0.18g, yield: 81.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H38N8O4, 575.69; found, 575.2.

[0423] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (N-benzyl-4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (39)

[0424] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 39b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.08g, yield: 44.7%, DSR=20%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.23 –7.93 (m, 0.2H) , 7.63 –6.38 (m, 1.4H) , 4.78 –4.20 (m, 2.6H) , 4.19 –2.60 (m, 13.6H) , 2.53 –1.21 (m, 3.8H) , 1.11 –0.53 (m, 0.6H) . Example 40 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- (methylamino) butanoate (40)

[0425] Step 1: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) butanoate (40a)

[0426] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using 4- ( (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) butanoic acid, as a white solid (0.395g, yield: 67.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H44N8O6, 613.73; found, 613.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (d, J = 6.5 Hz, 1H) , 7.33 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 6.81 (d, J = 3.3 Hz, 1H) , 4.87 (s, 1H) , 4.46 –3.91 (m, 5H) , 3.87 –3.52 (m, 4H) , 3.41 (dd, J = 15.1, 4.5 Hz, 1H) , 3.29 (s, 3H) , 3.21 –2.85 (m, 5H) , 2.74 (s, 3H) , 2.49 –2.20 (m, 3H) , 1.91 –1.52 (m, 4H) , 1.37 (s, 9H) , 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0427] Step 2: Preparation of 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- (methylamino) butanoate hydrochloride (40b)

[0428] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 40a, as a white solid (0.305g, yield: 95.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H36N8O4, 513.62; found, 513.3.

[0429] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- (methylamino) butanoate (40)

[0430] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 40b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.107g, yield: 56.6%, DSR=9%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.29 –8.17 (m, 0.09H) , 7.43 –7.28 (m, 0.09H) , 7.00 –6.85 (m, 0.09H) , 4.87 –4.24 (m, 2.27H) , 4.16 –2.68 (m, 11.44H) , 2.61 –1.43 (m, 3.9H) , 1.20 –0.84 (m, 0.27H) . Example 41 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate (41)

[0431] Step 1: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoate (41a)

[0432] The title compound was prepared in analogy to Example 25, step 1 by using axitinib, as a white solid (2.45g, yield: 90%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C37H44N6O6S, 701.86; found, 701.1.

[0433] Step 2: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate hydrochloride (41b)

[0434] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 41a, as a white solid (1.85g, yield: 66%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H36N6O4S, 601.74; found, 601.2. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.65 (d, J = 5.4 Hz, 1H) , 8.51 (dd, J = 12.3, 4.7 Hz, 1H) , 8.17 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.93 (t, J = 6.8 Hz, 1H) , 7.59 (dd, J = 12.6, 4.0 Hz, 2H) , 7.51 –7.43 (m, 2H) , 7.37 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 7.32 –7.21 (m, 2H) , 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 6.97 –6.91 (m, 1H) , 4.36 –4.21 (m, 2H) , 3.86 –3.73 (m, 2H) , 3.08 (s, 3H) , 2.90 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 2.79 (s, 3H) , 2.25 –2.06 (m, 2H) , 1.56 (dt, J = 15.4, 7.7 Hz, 2H) , 1.49 –1.33 (m, 2H) , 1.27 –1.19 (m, 2H) .

[0435] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate (41)

[0436] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 41b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.119g, yield: 70.4%, DSR=15%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.74 –8.66 (m, 0.15H) , 8.59 –6.77 (m, 1.8H) , 4.79 –4.25 (m, 2.3H) , 4.20 –2.40 (m, 11.5H) , 2.39 –1.84 (m, 3.3H) , 1.83 –0.83 (m, 0.9H) .

[0437] With Step 3 of Example 41, reaction of hyaluronic acid (MW 50 KDa) provided corresponding product (0.123 g, Yield: 72.7%, DSR: 18%) . Example 42 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl glycinate (42) Step 1: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3-  (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl (tert-butoxycarbonyl) glycinate (42a)

[0438] The title compound was prepared in analogy to Example 22, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.12g, yield: 48%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H36N6O6S, 645.75; found, 645.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.65 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 8.42 (q, J = 4.4 Hz, 1H) , 8.30 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 8.03 (s, 1H) , 7.97 –7.90 (m, 1H) , 7.86 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H) , 7.74 (dd, J = 12.1, 6.7 Hz, 2H) , 7.50 (dt, J = 8.8, 4.2 Hz, 1H) , 7.39 –7.28 (m, 4H) , 7.23 (t, J = 6.1 Hz, 1H) , 7.13 –7.09 (m, 1H) , 4.43 (s, 2H) , 3.85 (s, 2H) , 3.68 –3.48 (m, 2H) , 3.21 (s, 3H) , 2.77 (d, J = 4.6 Hz, 3H) , 1.35 (s, 9H) .

[0439] Step 2: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl glycinate hydrochloride (42b)

[0440] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 42a, as a white solid (0.1g, yield: 99.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H28N6O4S, 545.63; found, 545.3.

[0441] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl glycinate (42)

[0442] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 42b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.092g, yield: 75.6%, DSR=20%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.73 –6.77 (m, 2.6H) , 4.79 –4.25 (m, 2.4H) , 4.20 –2.31 (m, 12.0H) , 2.16 –1.78 (m, 3H) . Example 43 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 3-aminopropanoate (43) Step 1: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3-  (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propanoate (43a)

[0443] The title compound was prepared in analogy to Example 23, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.22g, yield: 64.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C34H38N6O6S, 659.77; found, 681.2 [M+Na] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 8.41 (d, J = 4.6 Hz, 1H) , 8.31 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 8.02 (s, 1H) , 7.94 (d, J = 16.3 Hz, 1H) , 7.87 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H) , 7.75 (dd, J = 12.1, 6.8 Hz, 2H) , 7.52 (dd, J = 7.2, 1.8 Hz, 1H) , 7.41 –7.27 (m, 4H) , 7.15 –7.10 (m, 1H) , 6.83 (s, 1H) , 4.38 (d, J = 5.0 Hz, 2H) , 3.88 (s, 2H) , 3.25 (d, J = 20.2 Hz, 3H) , 3.12 (d, J = 5.1 Hz, 2H) , 2.78 (d, J = 4.6 Hz, 3H) , 2.36 (s, 2H) , 1.34 (s, 9H) .

[0444] Step 2: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 3-aminopropanoate hydrochloride (43b)

[0445] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 43a, as a white solid (0.16g, yield: 98.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H30N6O4S, 559.66; found, 559.1.

[0446] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 3-aminopropanoate (43)

[0447] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 43b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.127g, yield: 64.1%, DSR=17%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.64 –6.97 (m, 2.21H) , 4.79 –4.23 (m, 2.34H) , 4.12 –2.46 (m, 12.04H) , 2.28 –1.40 (m, 3H) . Example 44 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (44) Step 1: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3-  (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (44a)

[0448] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.23g, yield: 66.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H40N6O6S, 673.80; found, 673.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 8.42 –8.36 (m, 1H) , 8.29 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.00 (d, J = 1.0 Hz, 1H) , 7.96 –7.89 (m, 1H) , 7.86 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H) , 7.77 –7.70 (m, 2H) , 7.50 (dd, J = 7.3, 1.8 Hz, 1H) , 7.40 –7.28 (m, 4H) , 7.12 (dd, J = 7.6, 1.4 Hz, 1H) , 6.84 –6.72 (m, 1H) , 4.36 (t, J = 5.4 Hz, 2H) , 3.88 (s, 2H) , 3.20 (s, 3H) , 2.90 –2.82 (m, 2H) , 2.77 (d, J = 4.6 Hz, 3H) , 2.19 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 1.63 –1.50 (m, 2H) , 1.34 (d, J = 6.6 Hz, 9H) .

[0449] Step 2: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (44b)

[0450] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 44a, as a white solid (0.18g, yield: 99%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H32N6O4S, 573.68; found, 573.3.

[0451] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (44)

[0452] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 44b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.126g, yield: 63%, DSR=13%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.64 –6.97 (m, 1.69H) , 4.79 –4.23 (m, 2.26H) , 4.12 –2.46 (m, 11.3H) , 2.20 –1.61 (m, 3.26H) , 1.42 –1.08 (m, 0.26H) . Example 45 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 5-aminopentanoate (45)

[0453] Step 1: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 5- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) pentanoate (45a)

[0454] The title compound was prepared in analogy to Example 24, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.32g, yield: 90%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H42N6O6S, 687.83; found, 687.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 8.39 (q, J = 4.3 Hz, 1H) , 8.29 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.00 (d, J = 1.0 Hz, 1H) , 7.96 –7.89 (m, 1H) , 7.86 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H) , 7.73 (dd, J = 12.1, 6.3 Hz, 2H) , 7.51 (dd, J = 7.2, 1.9 Hz, 1H) , 7.41 –7.27 (m, 4H) , 7.16 –7.09 (m, 1H) , 6.72 (s, 1H) , 4.35 (t, J = 5.3 Hz, 2H) , 3.89 (s, 2H) , 3.20 (s, 3H) , 2.84 (dd, J = 12.6, 6.4 Hz, 2H) , 2.77 (d, J = 4.6 Hz, 3H) , 2.16 (s, 2H) , 1.39 –1.28 (m, 13H) .

[0455] Step 2: Preparation of (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 5-aminopentanoate hydrochloride (45b)

[0456] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 45a, as a white solid (0.26g, yield: 99.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H34N6O4S, 587.71; found, 587.2.

[0457] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 5-aminopentanoate (45)

[0458] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 45b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.106g, yield: 52.5%, DSR=13%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.64 –6.97 (m, 1.69H) , 4.79 –4.23 (m, 2.26H) , 4.12 –2.46 (m, 11.3H) , 2.20 –1.61 (m, 3.26H) , 1.42 –1.08 (m, 0.52H) . Example 46 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-ethyl-6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (46) Step 1: Preparation of (E) -2- (N-ethyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2-  (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (46a)

[0459] The title compound was prepared in analogy to Example 26, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.206g, yield: 58.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H42N6O6S, 687.83; found, 687.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.65 (t, J = 4.1 Hz, 1H) , 8.44 –8.25 (m, 2H) , 7.95 –7.69 (m, 5H) , 7.55 –7.27 (m, 5H) , 7.20 –7.07 (m, 1H) , 6.85 (t, J = 24.2 Hz, 1H) , 4.36 (t, J = 5.4 Hz, 1H) , 3.83 (s, 1H) , 3.21 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.06 (q, J = 6.5 Hz, 2H) , 2.96 –2.78 (m, 2H) , 2.77 (dd, J = 4.6, 2.5 Hz, 3H) , 2.31 –2.12 (m, 2H) , 1.63 –1.48 (m, 2H) , 1.42 –1.21 (m, 12H) .

[0460] Step 2: Preparation of (E) -2- (N-ethyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (46b)

[0461] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 46a, as a white solid (0.13g, yield: 99.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H34N6O4S, 587.71; found, 587.1.

[0462] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) -2- (N-ethyl-6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (46)

[0463] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 46b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.083g, yield: 41.1%, DSR=13%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.64 –6.97 (m, 1.69H) , 4.79 –4.23 (m, 2.13H) , 4.12 –2.46 (m, 11.3H) , 2.30 –1.61 (m, 3.52H) , 1.42 –1.08 (m, 0.39H) . Example 47 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (E) - (4-acetyl-1- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 6-aminohexanoate (47) Step 1: Preparation of tert-butyl 2- ( ( (6- ( ( ( (9H-fluoren-9- yl) methoxy) carbonyl) amino) hexanoyl) oxy) methyl) -4-acetylpiperazine-1-carboxylate (47a)

[0464] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 2 by using 6- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) hexanoic acid, as a white solid (1.05g, yield: 84.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H43N3O7, 594.72; found, 594.3.

[0465] Step 2: Preparation of (4-acetylpiperazin-2-yl) methyl 6- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) hexanoate hydrochloride (47b)

[0466] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 3 by using compound 47a, as a white solid (0.749g, yield: 85.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H35N3O5, 494.60; found, 494.3.

[0467] Step 3: Preparation of (E) - (4-acetyl-1- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 6- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) hexanoate (47c)

[0468] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 4 by using compound 47b, as a white solid (0.313g, yield: 44.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C51H51N7O7S, 907.07; found, 906.4.

[0469] Step 3: Preparation of (E) - (4-acetyl-1- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoate (Compound 47d)

[0470] The title compound was prepared in analogy to Example 15, step 5 by using compound 47c, as a white solid (0.313g, yield: 51.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C41H49N7O7S, 784.95; found, 784.3.

[0471] Step 4: Preparation of (E) - (4-acetyl-1- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 6-aminohexanoate hydrochloride (47e)

[0472] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 47d, as a white solid (0.234g, yield: 85.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H41N7O5S, 684.83; found, 684.3. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.64 (d, J = 5.8 Hz, 1H) , 8.45 (t, J = 8.0 Hz, 1H) , 8.20 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.88 –7.72 (m, 3H) , 7.57 –7.40 (m, 6H) , 7.20 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 4.55 –4.07 (m, 5H) , 4.05 –3.82 (m, 2H) , 3.66 –3.25 (m, 4H) , 3.17 –2.89 (m, 2H) , 2.87 –2.68 (m, 3H) , 2.21 –2.10 (m, 3H) , 1.52 –1.03 (m, 6H) .

[0473] Step 5: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and ( (E) - (4-acetyl-1- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 6-aminohexanoate (47)

[0474] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 47e and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.075g, yield: 57.1%, DSR=20%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.68 –6.73 (m, 2.6H) , 4.78 –4.15 (m, 3H) , 4.14 –2.28 (m, 12.2H) , 2.27 –1.35 (m, 3.6H) , 1.34 –0.34 (m, 1.2H) . Example 48 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (48)

[0475] Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (48a)

[0476] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.235g, yield: 65.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C37H42N6O7S, 715.84; found, 715.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 8.40 (d, J = 4.6 Hz, 1H) , 8.30 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.00 (s, 1H) , 7.95 –7.81 (m, 2H) , 7.75 (dd, J = 16.4, 7.6 Hz, 2H) , 7.51 (dd, J = 7.2, 1.9 Hz, 1H) , 7.43 –7.31 (m, 4H) , 7.16 –7.12 (m, 1H) , 6.70 (s, 1H) , 4.79 (s, 1H) , 4.61 –4.53 (m, 1H) , 4.28 (s, 1H) , 3.91 (d, J = 11.9 Hz, 3H) , 3.75 (d, J = 9.3 Hz, 1H) , 3.61 –3.43 (m, 2H) , 2.84 –2.69 (m, 5H) , 2.17 –1.93 (m, 2H) , 1.52 –1.38 (m, 2H) , 1.31 (s, 9H) .

[0477] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (48b)

[0478] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 48a, as a white solid (0.18g, yield: 99.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H34N6O5S, 615.72; found, 615.1.

[0479] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (48)

[0480] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 48b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.088g, yield: 42.5%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.65 –8.55 (m, 0. 1H) , 8.46 –8.35 (m, 0.1H) , 8.20 –8.07 (m, 0.1H) , 8.02 –6.92 (m, 1H) , 4.74 –4.33 (m, 2.2H) , 4.17 –2.99 (m, 10.7H) , 2.90 –2.53 (m, 0.5H) , 2.36 –1.70 (m, 3.2H) , 1.67 –1.29 (m, 0.2H) . Example 49 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate (49)

[0481] Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propanoate (49a)

[0482] The title compound was prepared in analogy to Example 19, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.182g, yield: 67.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H40N6O7S, 701.81; found, 701.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 8.43 –8.38 (m, 1H) , 8.29 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.99 (s, 1H) , 7.95 –7.82 (m, 2H) , 7.78 –7.70 (m, 2H) , 7.51 (dd, J = 7.2, 1.8 Hz, 1H) , 7.40 –7.27 (m, 4H) , 7.17 –7.11 (m, 1H) , 6.72 (s, 1H) , 4.79 (s, 1H) , 4.61 –4.51 (m, 1H) , 4.34 –4.25 (m, 1H) , 4.04 –3.84 (m, 3H) , 3.74 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 3.61 –3.44 (m, 2H) , 2.99 (s, 2H) , 2.77 (d, J = 4.6 Hz, 3H) , 2.23 (d, J = 13.3 Hz, 2H) , 1.31 (s, 9H) .

[0483] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2-(pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate hydrochloride (49b)

[0484] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 49a, as a white solid (0.12g, yield: 99.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H32N6O5S, 601.69; found, 601.3.

[0485] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate (49)

[0486] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 49b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.097g, yield: 47.5%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.65 –8.56 (m, 0.1H) , 8.47 –8.32 (m, 0.1H) , 8.20 –8.12 (m, 0.1H) , 8.09 –7.01 (m, 1H) , 4.74 –4.37 (m, 2.2H) , 4.14 –2.91 (m, 10.7H) , 2.85 –2.57 (m, 0.5H) , 2.09 –1.61 (m, 3.2H) . Example 50 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5-aminopentanoate (50)

[0487] Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) pentanoate (50a)

[0488] The title compound was prepared in analogy to Example 6, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.195g, yield: 82%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C38H44N6O7S, 729.87; found, 729.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 8.44 –8.37 (m, 1H) , 8.30 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 8.01 (s, 1H) , 7.95 –7.84 (m, 2H) , 7.73 (dd, J = 14.0, 7.7 Hz, 2H) , 7.54 –7.49 (m, 1H) , 7.41 –7.29 (m, 4H) , 7.12 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H) , 6.67 (t, J = 5.4 Hz, 1H) , 4.83 (s, 1H) , 4.57 (t, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.31 –4.18 (m, 1H) , 3.99 –3.84 (m, 3H) , 3.76 (d, J = 9.5 Hz, 1H) , 3.64 –3.39 (m, 2H) , 2.77 (d, J = 4.6 Hz, 5H) , 2.14 –1.90 (m, 2H) , 1.37 –1.28 (m, 9H) , 1.26 –1.15 (m, 4H) .

[0489] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5-aminopentanoate hydrochloride (50b)

[0490] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 50a, as a white solid (0.14g, yield: 99.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H36N6O5S, 629.75; found, 629.4.

[0491] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5-aminopentanoate (50)

[0492] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 50b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.109g, yield: 52.2%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.64 –8.56 (m, 0.1H) , 8.48 –8.32 (m, 0.1H) , 8.24 –8.08 (m, 0.1H) , 8.04 –6.95 (m, 1H) , 4.74 –4.33 (m, 2.2H) , 4.32 –3.02 (m, 10.7H) , 2.99 –2.49 (m, 0.5H) , 2.30 –1.50 (m, 3.2H) , 1.42 –0.90 (m, 0.4H) . Example 51 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate (51)

[0493] Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoate (51a)

[0494] The title compound was prepared in analogy to Example 7, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.2g, yield: 52.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C39H46N6O7S, 743.89; found, 743.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 8.45 –8.39 (m, 1H) , 8.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.02 (s, 1H) , 7.95 –7.83 (m, 2H) , 7.74 (dd, J = 12.1, 6.3 Hz, 2H) , 7.55 –7.49 (m, 1H) , 7.40 –7.29 (m, 4H) , 7.13 –7.07 (m, 1H) , 6.66 (s, 1H) , 4.88 (s, 1H) , 4.62 –4.51 (m, 1H) , 4.23 (s, 1H) , 3.98 –3.84 (m, 3H) , 3.77 (d, J = 9.5 Hz, 1H) , 3.63 -3.39 (m, 2H) , 2.83 –2.70 (m, 5H) , 2.11 –1.89 (m, 2H) , 1.35 (s, 9H) , 1.29 –1.14 (m, 4H) , 1.02 (s, 2H) .

[0495] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate hydrochloride (51b)

[0496] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 51a, as a white solid (0.16g, yield: 99%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C34H38N6O5S, 643.78; found, 643.2.

[0497] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate (51)

[0498] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 51b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.109g, yield: 51.6%, DSR=8%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.65 –8.56 (m, 0.08H) , 8.49 –8.31 (m, 0.08H) , 8.22 –8.11 (m, 0.08H) , 8.05 –6.97 (m, 0.8H) , 4.72 –4.31 (m, 2.16H) , 4.24 –2.98 (m, 10.56H) , 2.96 –2.49 (m, 0.4H) , 2.25 –1.49 (m, 3.16H) , 1.40 –0.73 (m, 0.48H) . Example 52 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate (52)

[0499] Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (tert-butoxycarbonyl) glycinate (52a)

[0500] The title compound was prepared in analogy to Example 14, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.3g, yield: 81.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H38N6O7S, 687.78; found, 687.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 8.45 –8.39 (m, 1H) , 8.31 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 8.05 (s, 1H) , 7.94 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.89 –7.84 (m, 1H) , 7.79 –7.71 (m, 2H) , 7.54 –7.49 (m, 1H) , 7.35 (ddt, J =14.6, 7.6, 3.6 Hz, 4H) , 7.20 –7.08 (m, 2H) , 4.75 (s, 1H) , 4.60 –4.53 (m, 1H) , 4.41 (d, J = 6.7 Hz, 1H) , 3.93 (d, J = 12.1 Hz, 2H) , 3.75 (d, J = 9.8 Hz, 1H) , 3.66 –3.40 (m, 3H) , 3.31 (s, 2H) , 2.78 (d, J = 4.6 Hz, 3H) , 1.34 (s, 9H) .

[0501] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate hydrochloride (52b)

[0502] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 52a, as a white solid (0.235g, yield: 99.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H30N6O5S, 587.67; found, 587.2.

[0503] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate (52)

[0504] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 52b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.11g, yield: 54.5%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.63 –8.56 (m, 0.1H) , 8.47 –8.34 (m, 0.1H) , 8.18 –8.11 (m, 0.1H) , 7.98 –7.05 (m, 1H) , 4.71 –4.25 (m, 2.3H) , 4.10 –2.99 (m, 10.8H) , 2.67 –2.54 (m, 0.3H) , 1.97 –1.74 (m, 3H) . Example 53 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- ( (E) -2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (trans) -4-aminocyclohexane-1-carboxylate (53)

[0505] Step 1: Preparation of (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- ( (E) -2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (trans) -4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) cyclohexane-1-carboxylate (53a)

[0506] The title compound was prepared in analogy to Example 9, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.23g, yield: 80.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C40H46N6O7S, 755.90; found, 755.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.65 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 8.44 (d, J = 4.6 Hz, 1H) , 8.32 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 8.04 (s, 1H) , 7.96 –7.85 (m, 2H) , 7.75 (dd, J = 12.1, 6.9 Hz, 2H) , 7.53 (dd, J = 7.2, 1.8 Hz, 1H) , 7.42 –7.30 (m, 4H) , 7.18 –7.11 (m, 1H) , 6.58 (d, J = 7.7 Hz, 1H) , 4.99 –4.75 (m, 1H) , 4.65 –4.53 (m, 1H) , 4.24 (d, J = 5.5 Hz, 1H) , 3.91 (d, J = 12.2 Hz, 3H) , 3.77 (d, J = 9.7 Hz, 1H) , 3.63 –3.39 (m, 2H) , 3.10 –2.97 (m, 1H) , 2.79 (d, J = 4.6 Hz, 3H) , 2.10 –1.76 (m, 5H) , 1.73 –1.44 (m, 4H) , 1.36 (s, 9H) .

[0507] Step 2: Preparation of (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- ( (E) -2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (trans) -4-aminocyclohexane-1-carboxylate hydrochloride (53b)

[0508] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 53a, as a white solid (0.19g, yield: 99.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H38N6O5S, 655.79; found, 655.2.

[0509] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- ( (E) -2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (trans) -4-aminocyclohexane-1-carboxylate (53)

[0510] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 53b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.082g, yield: 49.5%, DSR=7%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.63 –8.56 (m, 0.07H) , 8.47 –8.34 (m, 0.07H) , 8.18 –8.11 (m, 0.07H) , 7.98 –7.05 (m, 0.7H) , 4.71 –4.28 (m, 2.14H) , 4.19 –2.84 (m, 10.56H) , 2.80 –2.48 (m, 0.21H) , 2.36 –1.24 (m, 3.63H) . Example 54 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminospiro [3.3] heptane-2-carboxylate (54)

[0511] Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) spiro [3.3] heptane-2-carboxylate (54a)

[0512] The title compound was prepared in analogy to Example 48, step 1 by using 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) spiro [3.3] heptane-2-carboxylic acid, as a white solid (0.24g, yield: 72.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C41H46N6O7S, 767.91; found, 767.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 8.41 (d, J = 4.6 Hz, 1H) , 8.31 (dd, J = 8.4, 2.2 Hz, 1H) , 8.02 (s, 1H) , 7.96 –7.84 (m, 2H) , 7.78 –7.70 (m, 2H) , 7.53 –7.50 (m, 1H) , 7.41 –7.30 (m, 4H) , 7.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 6.97 –6.89 (m, 1H) , 5.01 –4.72 (m, 1H) , 4.66 –4.54 (m, 1H) , 4.21 (d, J = 6.6 Hz, 1H) , 3.90 (d, J = 11.9 Hz, 3H) , 3.76 (d, J = 10.8 Hz, 1H) , 3.70 –3.40 (m, 3H) , 3.31 –3.17 (m, 1H) , 2.77 (d, J =4.6 Hz, 3H) , 2.19 –1.59 (m, 8H) , 1.32 (d, J = 15.2 Hz, 9H) .

[0513] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminospiro [3.3] heptane-2-carboxylate hydrochloride (54b)

[0514] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 54a, as a white solid (0.19g, yield: 99.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H38N6O5S, 667.80; found, 667.2.

[0515] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminospiro [3.3] heptane-2-carboxylate (54)

[0516] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 54b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.126g, yield: 58.3%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.64 –8.56 (m, 0.1H) , 8.49 –8.35 (m, 0.1H) , 8.23 –8.11 (m, 0.1H) , 8.04 –7.08 (m, 1H) , 4.71 –4.33 (m, 2.2H) , 4.28 –2.97 (m, 10.9H) , 2.90 –2.55 (m, 0.3H) , 2.15 –1.49 (m, 3.8H) . Example 55 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate (55)

[0517] Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoate (55a)

[0518] The title compound was prepared in analogy to Example 8, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.36g, yield: 86.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C41H50N6O7S, 771.95; found, 771.2.

[0519] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate hydrochloride (55b)

[0520] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 55a, as a white solid (0.3g, yield: 98%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H42N6O5S, 671.83; found, 671.4. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.59 (dd, J = 5.8, 0.9 Hz, 1H) , 8.41 (td, J = 8.1, 1.4 Hz, 1H) , 8.15 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.84 –7.67 (m, 3H) , 7.55 –7.43 (m, 3H) , 7.42 –7.32 (m, 2H) , 7.29 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.15 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 4.84 –4.76 (m, 1H) , 4.52 (t, J = 11.1 Hz, 1H) , 4.18 –4.06 (m, 1H) , 3.97 (d, J =10.0 Hz, 1H) , 3.89 (d, J = 12.4 Hz, 1H) , 3.81 (dd, J = 12.4, 2.9 Hz, 1H) , 3.73 (d, J =12.5 Hz, 1H) , 3.59 (dd, J = 12.7, 10.2 Hz, 1H) , 3.47 (d, J = 11.9 Hz, 1H) , 2.78 (t, J =7.5 Hz, 2H) , 2.72 (s, 3H) , 1.96 –1.68 (m, 2H) , 1.40 (dt, J = 15.0, 7.6 Hz, 2H) , 1.13 –0.81 (m, 8H) .

[0521] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate (55)

[0522] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 55b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.119g, yield: 55.1%, DSR=13%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.64 –8.57 (m, 0.13H) , 8.56 –8.33 (m, 0.13H) , 8.23 –8.13 (m, 0.13H) , 8.12 –7.06 (m, 1.3H) , 4.71 –4.34 (m, 2.26H) , 4.22 –2.99 (m, 10.91H) , 2.97 –2.66 (m, 0.65H) , 2.27 –1.65 (m, 3.26H) , 1.43 –0.59 (m, 1.3H) . Example 56 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11-aminoundecanoate (56) Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin- 2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoate (56a)

[0523] The title compound was prepared in analogy to Example 13, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.35g, yield: 80.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C44H56N6O7S, 814.03; found, 714.3 (M+H-100) .

[0524] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11-aminoundecanoate hydrochloride (56b)

[0525] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 56a, as a white solid (0.3g, yield: 99%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C39H48N6O5S, 713.91; found, 713.4. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.59 (d, J = 5.3 Hz, 1H) , 8.38 (t, J = 7.9 Hz, 1H) , 8.13 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.85 –7.71 (m, 3H) , 7.57 –7.43 (m, 3H) , 7.32 (dt, J = 24.8, 7.5 Hz, 2H) , 7.18 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.06 (d, J = 31.6 Hz, 1H) , 4.88 –4.74 (m, 1H) , 4.60 –4.45 (m, 1H) , 4.14 –4.05 (m, 1H) , 3.98 –3.64 (m, 4H) , 3.63 –3.33 (m, 2H) , 2.83 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.70 (d, J = 16.7 Hz, 3H) , 1.93 –1.62 (m, 2H) , 1.46 (dt, J = 15.3, 7.6 Hz, 2H) , 1.16 –0.64 (m, 14H) .

[0526] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11-aminoundecanoate (56)

[0527] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 56b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.117g, yield: 52.2%, DSR=12%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.63 –8.57 (m, 0.12H) , 8.56 –8.39 (m, 0.12H) , 8.23 –8.09 (m, 0.12H) , 8.02 –6.96 (m, 1.2H) , 4.70 –4.36 (m, 2.24H) , 4.34 –2.93 (m, 10.84H) , 2.92 –2.57 (m, 0.6H) , 2.28 –1.63 (m, 3.24H) , 1.45 –0.45 (m, 1.92H) . Example 57 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate (57)

[0528] Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) nonanoate (57a)

[0529] The title compound was prepared in analogy to Example 11, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.23g, yield: 71%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C42H52N6O7S, 785.97; found, 785.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 8.42 (q, J = 4.3 Hz, 1H) , 8.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.03 (s, 1H) , 7.95 –7.89 (m, 1H) , 7.86 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H) , 7.80 –7.70 (m, 2H) , 7.54 –7.50 (m, 1H) , 7.40 –7.27 (m, 4H) , 7.11 –7.06 (m, 1H) , 6.72 (t, J = 5.5 Hz, 1H) , 4.92 (s, 1H) , 4.60 (t, J = 10.7 Hz, 1H) , 4.20 (d, J = 6.6 Hz, 1H) , 3.84 (dd, J = 54.5, 11.1 Hz, 4H) , 3.63 –3.40 (m, 2H) , 2.82 (dd, J = 13.0, 6.7 Hz, 2H) , 2.77 (d, J = 4.6 Hz, 3H) , 2.13 –1.82 (m, 2H) , 1.35 (s, 9H) , 1.29 –0.93 (m, 12H) .

[0530] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate hydrochloride (57b)

[0531] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 57a, as a white solid (0.18g, yield: 99.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C37H44N6O5S, 685.86; found, 685.3.

[0532] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate (57)

[0533] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 57b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.057g, yield: 51.8%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.66 –8.56 (m, 0.1H) , 8.55 –6.97 (m, 1.2H) , 4.74 –4.39 (m, 2.2H) , 4.38 –2.65 (m, 11.2H) , 2.37 –1.62 (m, 3.2H) , 1.41 –0.43 (m, 1.2H) .

[0534] With Step 3 of Example 57, reaction of hyaluronic acid (MW 10 KDa) provided corresponding product (0.05g, Yield: 45.5%, DSR: 11%) . Example 58 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 10-aminodecanoate (58)

[0535] Step 1: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 10- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) decanoate (58a)

[0536] The title compound was prepared in analogy to Example 12, step 1 by using axitinib, as a white solid (0.14g, yield: 42.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C43H54N6O7S, 800.00; found, 799.2 (M+H-100) . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ8.64 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 8.42 (d, J = 4.6 Hz, 1H) , 8.33 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 8.03 (s, 1H) , 7.96 –7.89 (m, 1H) , 7.86 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H) , 7.79 –7.70 (m, 2H) , 7.52 (dd, J =7.0, 2.1 Hz, 1H) , 7.41 –7.28 (m, 4H) , 7.13 –7.05 (m, 1H) , 6.73 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 4.90 (s, 1H) , 4.61 (t, J = 10.1 Hz, 1H) , 4.26 –4.16 (m, 1H) , 3.84 (dd, J = 54.7, 11.0 Hz, 4H) , 3.63 –3.42 (m, 2H) , 2.90 –2.79 (m, 2H) , 2.76 (t, J = 4.4 Hz, 3H) , 2.11 –1.83 (m, 2H) , 1.36 (s, 9H) , 1.32 –0.93 (m, 14H) .

[0537] Step 2: Preparation of (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 10-aminodecanoate hydrochloride (58b)

[0538] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 58a, as a white solid (0.1g, yield: 99.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C38H46N6O5S, 699.88; found, 699.1.

[0539] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (E) - (4- (6- ( (2- (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 10-aminodecanoate (58)

[0540] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 58b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.058g, yield: 52.3%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.65 –8.55 (m, 0.1H) , 8.54 –6.99 (m, 1.2H) , 4.74 –4.33 (m, 2.2H) , 4.18 –2.58 (m, 11.2H) , 2.22 –1.59 (m, 3.2H) , 1.37 –0.43 (m, 1.4H) .

[0541] With Step 3 of Example 58, reaction of hyaluronic acid (MW 50 KDa) provided corresponding product (0.051g, Yield: 32.3%, DSR: 10%) . Example 59 Preparation of conjugate of chondroitin sulfate and (E) -2- (N-methyl-6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carboxamido) ethyl 5-aminopentanoate (59)

[0542] The title compound was prepared in analogy to Example 45, step 3 by using chondroitin sulfate instead of hyaluronic acid, as a white solid (0.068g, yield: 62%, DSR=18%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.69 –8.10 (m, 0.54H) , 7.94 –6.47 (m, 1.8H) , 4.79 –4.39 (m, 2.36H) , 4.38 –2.58 (m, 11.8H) , 2.24 –1.56 (m, 3.36H) , 1.55 –0.94 (m, 0.72H) . Example 60 Preparation of conjugate of chondroitin sulfate and (E) - (4- (6- ( (2-  (methylcarbamoyl) phenyl) thio) -3- (2- (pyridin-2-yl) vinyl) -1H-indazole-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate (60)

[0543] The title compound was prepared in analogy to Example 52, step 3 by using chondroitin sulfate instead of hyaluronic acid, as a white solid (0.07g, yield: 60.2%, DSR=15%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.66 –8.59 (m, 0.15H) , 8.58 –8.25 (m, 0.3H) , 8.20 –6.87 (m, 1.5H) , 4.71 –4.31 (m, 2.45H) , 4.30 –2.98 (m, 11.2H) , 2.97 –2.54 (m, 0.45H) , 2.14 –1.56 (m, 3H) . Example 61 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate (61)

[0544] Step 1: Preparation of tert-butyl 3- ( ( ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) glycyl) oxy) methyl) morpholine-4-carboxylate (61a) Tert-butyl 3- (hydroxymethyl) morpholine-4-carboxylate (500mg, 2.3mmol) , ( ( (9H- fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) glycine (684mg, 2.3mmol) , 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (880mg, 4.6mmol) , N, N-diisopropylethylamine (891mg, 6.9mmol ) and N, N-dimethylpyridin-4-amine (28.1mg, 0.23mmol) were dissolved in DCM (50mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 12 hours. The solution was diluted with DCM and washed with water and saturated brine solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (PE / EA=10: 1～1: 1) to afford the title compound (0.762g, Yield: 66.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H32N2O7, 497.56; found, 497.3.

[0545] Step 2: Preparation of morpholin-3-ylmethyl ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) glycinate (61b)

[0546] To a stirred solution of compound 61a (762mg, 1.54mmol) in DCM (20mL) was slowly added 4M HCl in methanol (10mL) at ice-bath. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature and then was stirred at room temperature for 5 hours. The solution was diluted with DCM and evaporated under reduced pressure to afford the title compound as a white solid (0.55g, yield: 90.4%) that was used without further purification. MS (m / z) : [M+H] + calcd for C22H24N2O5, 397.44; found, 397.3.

[0547] Step 3: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) glycinate (61c)

[0548] To a stirred mixture of baricitinib (500mg, 1.35mmol) in DMSO (3mL) was added bis (4-nitrophenyl) carbonate (410mg, 1.35mmol) and stirred at room temperature for 12 hours. Then compound 61b (585mg, 1.48mmol) and N, N-diisopropylethylamine (346mg, 2.68mmol ) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 12 hours. The solution was diluted with dichloromethane and washed with 1M HCl solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (PE / EA=10: 1～1: 1) to afford the title compound (0.35g, Yield: 47.7%) as a white solid. MS (m / z) : [M+H] + calcd for C39H39N9O8S, 794.86; found, 794.1.

[0549] Step 4: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate hydrochloride (61d)

[0550] To a stirred mixture of compound 61c (350mg, 0.44mmol) in DCM (10mL) was added piperidine (1mL) and stirred at room temperature for 3 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM: MeOH=50: 1～10: 1) to afford the title compound (0.07g, Yield: 24.4%) as a white solid. MS (m / z) : [M+H] + calcd for C24H29N9O6S, 572.20; found, 572.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (s, 1H) , 8.87 (d, J = 9.6 Hz, 1H) , 8.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 8.32 (s, 2H) , 7.93 (s, 1H) , 7.39 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 4.68 (t, J = 9.7 Hz, 1H) , 4.61 (d, J = 9.0 Hz, 2H) , 4.27 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 3.96 –3.53 (m, 12H) , 3.28 –3.23 (m, 2H) , 1.18 (t, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0551] Step 5: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate (61)

[0552] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 61d and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.05g, yield: 31.7%, DSR=15%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.90 –8.52 (m, 0.3H) , 8.51 –8.12 (m, 0.15H) , 7.83 –7.53 (m, 0.15H) , 7.22 –6.78 (m, 0.15H) , 4.78 –4.30 (m, 2.45H) , 4.29 –2.72 (m, 12.4H) , 2.43 –1.69 (m, 3H) , 1.43 –1.30 (m, 0.45H) . Example 62 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate (62)

[0553] Step 1: Preparation of 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoate (62a)

[0554] The title compound was prepared in analogy to Example 25, step 1 by using baricitinib, as a white solid (0.2g, yield: 71.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H43N9O7S, 686.80; found, 686.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (s, 1H) , 8.83 (s, 1H) , 8.52 (s, 1H) , 7.82 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.75 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 4.61 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 4.46 –3.98 (m, 4H) , 3.90 –3.55 (m, 4H) , 3.27 –2.94 (m, 5H) , 2.92 –2.79 (m, 2H) , 2.40 –2.21 (m, 2H) , 1.64 –1.42 (m, 2H) , 1.41 –1.16 (m, 16H) .

[0555] Step 2: Preparation of 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate hydrochloride (62b)

[0556] To a stirred solution of compound 62a (120mg, 0.175mmol) in isopropyl acetate (5mL) was slowly added 4M HCl in isopropanol (5mL) at ice-bath. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature and then was stirred at room temperature for 16 hours. The solution was diluted with isopropanol and evaporated under reduced pressure to afford the title compound as a white solid (0.1g, yield: 97.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H35N9O5S, 586.68; found, 586.3.

[0557] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- (1- (3-(cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate (62)

[0558] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 62b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.074g, yield: 36.6%, DSR=12%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.83 –8.62 (m, 0.24H) , 8.51 –8.13 (m, 0.12H) , 7.78 –7.55 (m, 0.12H) , 7.19 –6.92 (m, 0.12H) , 4.78 –4.21 (m, 2.72H) , 4.06 –2.72 (m, 11.32H) , 2.48 –1.62 (m, 3.24H) , 1.61 –0.94 (m, 1.08H) . Example 63 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (63)

[0559] Step 1: Preparation of 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (63a)

[0560] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using baricitinib, as a white solid (0.32g, yield: 36.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H39N9O7S, 658.75; found, 658.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.00 (s, 1H) , 8.84 (s, 1H) , 8.52 (s, 1H) , 7.83 (d, J = 3.6 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.86 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 4.61 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 4.45 –4.08 (m, 4H) , 3.90 –3.56 (m, 4H) , 3.36 –2.82 (m, 7H) , 2.39 –2.25 (m, 2H) , 1.75 –1.50 (m, 2H) , 1.37 (s, 9H) , 1.29 –1.22 (m, 3H) .

[0561] Step 2: Preparation of 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (63b)

[0562] The title compound was prepared in analogy to Example 62, step 2 by using compound 63a, as a white solid (0.26g, yield: 95.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C24H31N9O5S, 558.63; found, 558.1.

[0563] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (63)

[0564] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 63b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.08g, yield: 60.6%, DSR=15%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.76 –8.52 (m, 0.3H) , 8.50 –8.13 (m, 0.15H) , 7.74 –7.38 (m, 0.15H) , 7.12 –6.81 (m, 0.15H) , 4.76 –4.15 (m, 2.9H) , 4.13 –2.66 (m, 11.65H) , 2.56 –1.43 (m, 3.6H) , 1.42 –1.02 (m, 0.45H) . Example 64 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate (64)

[0565] Step 1: Preparation of tert-butyl 3- ( ( (3- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) propanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carboxylate (64a)

[0566] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 1 by using 3- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) propanoic acid, as a white solid (0.53g, yield: 45.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H34N2O7, 511.59; found, 511.2.

[0567] Step 2: Preparation of morpholin-3-ylmethyl 3- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) propanoate (64b)

[0568] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 2 by using compound 64a, as a white solid (0.43g, yield: 98.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C23H26N2O5, 411.47; found, 411.2.

[0569] Step 3: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) propanoate (64c)

[0570] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 3 by using compound 64b, as a white solid (0.32g, yield: 42.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C40H41N9O8S, 808.88; found, 808.1.

[0571] Step 4: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate hydrochloride (64d)

[0572] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 4 by using compound 64c, as a white solid (0.2g, yield: 86%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H31N9O6S, 586.64; found, 586.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.20 (s, 1H) , 8.95 (s, 1H) , 8.67 –8.61 (m, 1H) , 8.33 –8.15 (m, 2H) , 8.00 (s, 1H) , 7.49 (s, 1H) , 4.71 –4.54 (m, 3H) , 4.28 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 4.07 –3.51 (m, 12H) , 3.35 –3.23 (m, 2H) , 2.84 –2.70 (m, 2H) , 1.25 (d, J = 7.3 Hz, 3H) .

[0573] Step 5: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate (64)

[0574] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 64d and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.086g, yield: 54.5%, DSR=16%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.91 –8.36 (m, 0.48H) , 7.81 –7.50 (m, 0.16H) , 7.18 –6.68 (m, 0.16H) , 4.78 –4.23 (m, 2.48H) , 4.22 –2.37 (m, 12.88H) , 2.24 –1.44 (m, 3H) , 1.43 –1.22 (m, 0.48H) . Example 65 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate (65)

[0575] Step 1: Preparation of tert-butyl 3- ( ( (6- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) hexanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carboxylate (65a)

[0576] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 1 by using 6- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) hexanoic acid, as a white solid (0.8g, yield: 62.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H40N2O7, 553.67; found, 553.2.

[0577] Step 2: Preparation of morpholin-3-ylmethyl 6- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) hexanoate (65b)

[0578] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 2 by using compound 65a, as a white solid (0.65g, yield: 99.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H32N2O5, 453.55; found, 453.2.

[0579] Step 3: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) hexanoate (65c)

[0580] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 3 by using compound 65b, as a white solid (0.33g, yield: 41.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C43H47N9O8S, 850.96; found, 850.2.

[0581] Step 4: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate hydrochloride (65d)

[0582] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 4 by using compound 65c, as a white solid (0.19g, yield: 77.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H37N9O6S, 628.72; found, 628.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.07 (s, 1H) , 8.86 (s, 1H) , 8.53 (s, 1H) , 8.04 (s, 2H) , 7.85 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 7.44 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 4.66 –4.54 (m, 3H) , 4.27 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 3.98 –3.52 (m, 10H) , 3.28 –3.21 (m, 2H) , 2.84 –2.66 (m, 2H) , 2.40 –2.24 (m, 2H) , 1.73 –1.45 (m, 4H) , 1.32 –1.18 (m, 5H) .

[0583] Step 5: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate (65)

[0584] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 65d and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.1g, yield: 48.6%, DSR=8%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.93 –8.72 (m, 0.16H) , 8.57 –8.38 (m, 0.08H) , 7.81 –7.65 (m, 0.08H) , 7.24 –7.05 (m, 0.08H) , 4.78 –4.28 (m, 2.4H) , 4.27 –2.28 (m, 11.28H) , 2.26 –1.43 (m, 3.32H) , 1.42 –0.83 (m, 0.4H) . Example 66 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7-aminoheptanoate (66)

[0585] Step 1: Preparation of tert-butyl 3- ( ( (7- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) heptanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carboxylate (66a)

[0586] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 1 by using 7- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) heptanoic acid, as a white solid (0.83g, yield: 463.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H42N2O7, 567.70; found, 567.3.

[0587] Step 2: Preparation of morpholin-3-ylmethyl 7- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) heptanoate (66b)

[0588] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 2 by using compound 66a, as a white solid (0.654g, yield: 99.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H34N2O5, 467.58; found, 467.3.

[0589] Step 3: Preparation of ( (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-(ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) heptanoate (66c)

[0590] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 3 by using compound 66b, as a white solid (0.4g, yield: 49%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C44H49N9O8S, 864.99; found, 864.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.00 (s, 1H) , 8.85 (s, 1H) , 8.53 (s, 1H) , 7.91 –7.79 (m, 3H) , 7.68 (d, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.45 –7.26 (m, 5H) , 7.25 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 4.66 –4.52 (m, 3H) , 4.33 –4.17 (m, 5H) , 3.99 –3.78 (m, 3H) , 3.71 –3.44 (m, 7H) , 3.24 (q, J = 7.4 Hz, 2H) , 2.93 (d, J = 6.1 Hz, 2H) , 2.37 –2.18 (m, 2H) , 1.53 –1.14 (m, 11H) .

[0591] Step 4: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7-aminoheptanoate hydrochloride (66d)

[0592] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 4 by using compound 66c, as a white solid (0.21g, yield: 72.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H39N9O6S, 642.75; found, 642.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 8.87 (s, 1H) , 8.56 –8.50 (m, 1H) , 7.88 –7.82 (m, 1H) , 7.81 –7.66 (m, 2H) , 7.40 –7.35 (m, 1H) , 4.65 –4.53 (m, 3H) , 4.26 (d, J = 9.1 Hz, 2H) , 3.98 –3.53 (m, 10H) , 3.27 –3.19 (m, 2H) , 2.87 –2.66 (m, 2H) , 2.38 –2.19 (m, 2H) , 1.55 –1.17 (m, 11H) .

[0593] Step 5: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7-aminoheptanoate (66)

[0594] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 66d and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.075g, yield: 49.4%, DSR=11%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.87 –8.62 (m, 0.22H) , 8.52 –8.27 (m, 0.11H) , 7.79 –7.55 (m, 0.11H) , 7.24 –6.86 (m, 0.11H) , 4.78 –4.31 (m, 2.33H) , 4.30 –2.70 (m, 11.76H) , 2.48 –1.42 (m, 3.22H) , 1.41 –0.90 (m, 1.21H) . Example 67 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate (67)

[0595] Step 1: Preparation of tert-butyl 3- ( ( (8- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) octanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carboxylate (67a)

[0596] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 1 by using 8- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) octanoic acid, as a white solid (0.855g, yield: 64%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H44N2O7, 581.72; found, 581.2.

[0597] Step 2: Preparation of morpholin-3-ylmethyl 8- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) octanoate (67b)

[0598] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 2 by using compound 67a, as a white solid (0.64g, yield: 96.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H36N2O5, 481.61; found, 481.2.

[0599] Step 3: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) octanoate (67c)

[0600] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 3 by using compound 67b, as a white solid (0.38g, yield: 46%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C45H51N9O8S, 879.02; found, 879.2.

[0601] Step 4: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate hydrochloride (67d)

[0602] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 4 by using compound 67c, as a white solid (0.2g, yield: 72.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H41N9O6S, 656.78; found, 656.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (s, 1H) , 8.87 (s, 1H) , 8.54 (s, 1H) , 7.87 –7.72 (m, 3H) , 7.39 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 4.67 –4.51 (m, 3H) , 4.27 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 3.98 –3.56 (m, 10H) , 3.25 (q, J = 7.3 Hz, 2H) , 2.73 (dt, J = 18.6, 9.3 Hz, 2H) , 2.38 –2.18 (m, 2H) , 1.62 –1.40 (m, 4H) , 1.34 –1.13 (m, 9H) .

[0603] Step 5: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate (67)

[0604] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 67d and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.076g, yield: 50%, DSR=9%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.90 –8.55 (m, 0.18H) , 8.51 –8.25 (m, 0.09H) , 7.80 –7.51 (m, 0.09H) , 7.23 –7.01 (m, 0.09H) , 4.78 –4.32 (m, 2.27H) , 4.31 –2.65 (m, 11.44H) , 2.49 –1.45 (m, 3.54H) , 1.44 –0.76 (m, 0.81H) . Example 68 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate (68)

[0605] Step 1: Preparation of tert-butyl 3- ( ( (9- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) nonanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carboxylate (68a)

[0606] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 1 by using 9- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) nonanoic acid, as a white solid (0.87g, yield: 63.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C34H46N2O7, 595.75; found, 595.1.

[0607] Step 2: Preparation of morpholin-3-ylmethyl 9- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) nonanoate (68b)

[0608] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 2 by using compound 68a, as a white solid (0.7g, yield: 96.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H38N2O5, 495.63; found, 495.1.

[0609] Step 3: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) nonanoate (68c)

[0610] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 3 by using compound 68b, as a white solid (0.37g, yield: 43%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C46H53N9O8S, 893.05; found, 893.2.

[0611] Step 4: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate hydrochloride (68d)

[0612] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 4 by using compound 68c, as a white solid (0.198g, yield: 72.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H43N9O6S, 670.80; found, 670.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.13 (s, 1H) , 8.89 (s, 1H) , 8.59 (s, 1H) , 8.02 (s, 2H) , 7.88 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.46 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 4.58 (dd, J = 21.3, 9.7 Hz, 3H) , 4.27 (s, 2H) , 4.07 –3.71 (m, 10H) , 3.28 –3.21 (m, 2H) , 2.79 –2.66 (m, 2H) , 2.35 –2.15 (m, 2H) , 1.70 –1.40 (m, 4H) , 1.28 –1.12 (m, 11H) .

[0613] Step 5: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate (68)

[0614] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 68d and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.069g, yield: 45.4%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.87 –8.58 (m, 0.2H) , 8.52 –8.27 (m, 0.1H) , 7.82 –7.55 (m, 0.1H) , 7.20 –6.89 (m, 0.1H) , 4.78 –4.22 (m, 2.5H) , 4.21 –2.54 (m, 11.4H) , 2.37 –1.40 (m, 3.6H) , 1.39–0.47 (m, 1.1H) . Example 69 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11-aminoundecanoate (69)

[0615] Step 1: Preparation of tert-butyl 3- ( ( (11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carboxylate (69a)

[0616] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 1 by using 11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoic acid, as a white solid (1g, yield: 69.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H50N2O7, 623.80; found, 623.1.

[0617] Step 2: Preparation of morpholin-3-ylmethyl 11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoate (69b)

[0618] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 2 by using compound 69a, as a white solid (0.8g, yield: 95.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H42N2O5, 523.69; found, 523.1.

[0619] Step 3: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoate (69c)

[0620] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 3 by using compound 69b, as a white solid (0.36g, yield: 42%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C48H57N9O8S, 921.10; found, 921.2.

[0621] Step 4: Preparation of (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11-aminoundecanoate hydrochloride (69d)

[0622] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 4 by using compound 69c, as a white solid (0.23g, yield: 86.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H47N9O6S, 698.86; found, 698.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.06 (s, 1H) , 8.85 (s, 1H) , 8.54 (s, 1H) , 8.05 –7.90 (m, 2H) , 7.84 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 4.65 –4.50 (m, 3H) , 4.26 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 3.97 –3.49 (m, 10H) , 3.27 –3.19 (m, 2H) , 2.83 –2.66 (m, 2H) , 2.37 –2.14 (m, 2H) , 1.71 –1.40 (m, 4H) , 1.24 (m, 15H) .

[0623] Step 5: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 11-aminoundecanoate (69)

[0624] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 69d and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.068g, yield: 44.8%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.91 –8.59 (m, 0.2H) , 8.54 –8.20 (m, 0.1H) , 7.83 –7.57 (m, 0.1H) , 7.23 –6.93 (m, 0.1H) , 4.78 –4.23 (m, 2.5H) , 4.22 –2.52 (m, 11.4H) , 2.41 –1.71 (m, 3.2H) , 1.70–0.47 (m, 1.9H) . Example 70 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8-aminooctanoate (70)

[0625] Step 1: Preparation of 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoate (70a)

[0626] The title compound was prepared in analogy to Example 33, step 1 by using baricitinib, as a white solid (0.36g, yield: 37.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H47N9O7S, 714.86; found, 714.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (s, 1H) , 8.96 (s, 1H) , 8.53 (s, 1H) , 8.17 –8.09 (m, 1H) , 7.42 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 6.77 (d, J = 6.1 Hz, 1H) , 4.61 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 4.31 –4.04 (m, 4H) , 3.70 (s, 2H) , 3.62 –3.45 (m, 2H) , 3.26 –3.22 (m, 2H) , 2.94 –2.83 (m, 5H) , 2.32 –2.18 (m, 2H) , 1.54 –1.10 (m, 22H) .

[0627] Step 2: Preparation of 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8-aminooctanoate hydrochloride (70b)

[0628] The title compound was prepared in analogy to Example 62, step 2 by using compound 70a, as a white solid (0.28g, yield: 90.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H39N9O5S, 614.74; found, 614.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.09 (s, 1H) , 8.85 (d, J = 10.1 Hz, 1H) , 8.59 (d, J = 6.2 Hz, 1H) , 7.87 (d, J = 3.8 Hz, 3H) , 7.41 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 4.60 (t, J = 7.8 Hz, 2H) , 4.39 –4.17 (m, 4H) , 3.93 –3.61 (m, 4H) , 3.25 (dt, J = 10.8, 5.6 Hz, 2H) , 3.14 –2.91 (m, 3H) , 2.76 –2.69 (m, 2H) , 2.43 –2.19 (m, 2H) , 1.62 –1.41 (m, 10H) , 1.17 (dd, J = 6.8, 4.4 Hz, 3H) .

[0629] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 8-aminooctanoate (70)

[0630] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 70b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.1g, yield: 78.6%, DSR=20%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.90 –8.43 (m, 0.4H) , 8.41 –8.03 (m, 0.2H) , 7.85 –7.41 (m, 0.2H) , 7.23 –6.63 (m, 0.2H) , 4.78 –4.19 (m, 3.2H) , 4.18 –2.70 (m, 12.2H) , 2.55 –1.69 (m, 3.4H) , 1.67 –0.75 (m, 2.6H) . Example 71 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1-  (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 10-aminodecanoate (71)

[0631] Step 1: Preparation of 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 10- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) decanoate (71a)

[0632] The title compound was prepared in analogy to Example 62, step 1 by using 10- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) decanoic acid, as a white solid (0.37g, yield: 37%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H51N9O7S, 742.91; found, 742.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.00 (s, 1H) , 8.83 (s, 1H) , 8.53 (s, 1H) , 7.82 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.35 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.74 (t, J = 5.5 Hz, 1H) , 4.61 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 4.26 (d, J = 9.2 Hz, 4H) , 3.88 –3.56 (m, 4H) , 3.25 (q, J = 7.3 Hz, 2H) , 3.01 (d, J = 25.1 Hz, 3H) , 2.93 –2.83 (m, 2H) , 2.38 –2.19 (m, 2H) , 1.64 –1.13 (m, 26H) .

[0633] Step 2: Preparation of 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 10-aminodecanoate hydrochloride (71b)

[0634] The title compound was prepared in analogy to Example 62, step 2 by using compound 71a, as a white solid (0.3g, yield: 93.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H43N9O5S, 642.79; found, 642.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.12 –9.04 (m, 1H) , 8.87 (s, 1H) , 8.59 (s, 1H) , 7.88 (d, J = 3.8 Hz, 3H) , 7.41 (t, J = 3.4 Hz, 1H) , 4.61 (d, J = 9.2 Hz, 2H) , 4.41 –4.10 (m, 4H) , 3.85 –3.68 (m, 4H) , 3.29 –3.19 (m, 2H) , 3.14 –2.82 (m, 3H) , 2.76 –2.66 (m, 2H) , 2.40 –2.12 (m, 2H) , 1.55 –1.43 (m, 4H) , 1.37 –1.14 (m, 13H) .

[0635] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 10-aminodecanoate (71)

[0636] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 71b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.095g, yield: 67.8%, DSR=16%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.87 –8.45 (m, 0.32H) , 8.44 –8.09 (m, 0.16H) , 7.80 –7.45 (m, 0.16H) , 7.23 –6.72 (m, 0.16H) , 4.78 –4.19 (m, 2.96H) , 4.17 –2.68 (m, 11.76H) , 2.51 –1.64 (m, 3.32H) , 1.63 –0.47 (m, 2.72H) . Example 72 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- (1- (3-  (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate (72)

[0637] Step 1: Preparation of (4-acetyl-1- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoate (72a)

[0638] The title compound was prepared in analogy to Example 18, step 3 by using baricitinib, as a white solid (0.342g, yield: 37%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C50H60N10O8S, 962.15; found, 961.4.

[0639] Step 2: Preparation of (4-acetyl-1- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoate (72b)

[0640] The title compound was prepared in analogy to Example 61, step 4 by using compound 72a, as a white solid (0.253g, yield: 90.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C40H58N10O8S, 840.03; found, 839.4. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.87 (s, 1H) , 8.53 (s, 1H) , 8.32 (s, 1H) , 7.73 –7.56 (m, 1H) , 6.91 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 4.76 –4.37 (m, 5H) , 4.26 (d, J = 9.5 Hz, 2H) , 4.12 –3.73 (m, 2H) , 3.71 –3.30 (m, 5H) , 3.19 –2.89 (m, 5H) , 2.39 –2.04 (m, 3H) , 1.88 –1.13 (m, 30H) .

[0641] Step 3: Preparation of (4-acetyl-1- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate hydrochloride (72c)

[0642] The title compound was prepared in analogy to Example 62, step 4 by using compound 72b, as a white solid (0.176g, yield: 83.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H50N10O6S, 739.91; found, 739.3.

[0643] Step 4: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- (1- (3- (cyanomethyl) -1- (ethylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate (72)

[0644] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 72c and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.057g, yield: 41.6%, DSR=15%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.86 –8.53 (m, 0.3H) , 8.52 –8.10 (m, 0.15H) , 7.78 –7.44 (m, 0.15H) , 7.22 –6.77 (m, 0.15H) , 4.78 –4.22 (m, 3.05H) , 4.21 –2.62 (m, 11.8H) , 2.37 –1.70 (m, 3.45H) , 1.47 –0.56 (m, 3.15H) . Example 73 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate (73)

[0645] Step 1: Preparation of tert-butyl 2- ( ( (11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoyl) oxy) methyl) -4-methylpiperazine-1-carboxylate (73a)

[0646] The title compound was prepared in analogy to Example 16, step 2 by using 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoic acid, as a white solid (0.72g, yield: 56.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C37H53N3O6, 636.85; found, 636.4.

[0647] Step 2: Preparation of (4-methylpiperazin-2-yl) methyl 11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoate (73b)

[0648] The title compound was prepared in analogy to Example 16, step 3 by using compound 73a, as a white solid (0.583g, yield: 96.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H45N3O4, 536.73; found, 536.3.

[0649] Step 3: Preparation of (1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 11- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) undecanoate (73c)

[0650] The title compound was prepared in analogy to Example 16, step 4 by using compound 73b, as a white solid (0.413g, yield: 49.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C49H63N9O6, 875.10; found, 874.5.

[0651] Step 4: Preparation of (1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoate (73d)

[0652] The title compound was prepared in analogy to Example 16, step 5 by using compound 73c, as a white solid (0.237g, yield: 68.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C39H61N9O6, 752.97; found, 752.5. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.30 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.20 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 6.66 (d, J = 3.4 Hz, 1H) , 5.16 (s, 1H) , 5.00 –3.92 (m, 7H) , 3.91 –3.29 (m, 13H) , 3.19 –2.95 (m, 3H) , 2.57 –2.19 (m, 3H) , 2.02 –1.39 (m, 15H) , 1.38 –1.19 (m, 12H) , 1.14 –1.05 (m, 3H) .

[0653] Step 5: Preparation of (1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate hydrochloride (73e)

[0654] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 73d, as a white solid (0.147g, yield: 77%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C34H53N9O4, 652.86; found, 652.4.

[0655] Step 6: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (1- (4- ( ( (3R, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -4-methylpiperidin-3-yl) (methyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) -4-methylpiperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate (73)

[0656] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 73e and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.058g, yield: 45.3%, DSR=11%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.22 –8.10 (m, 0.11H) , 7.40 –7.20 (m, 0.11H) , 6.94 –6.67 (m, 0.11H) , 4.76 –4.22 (m, 2.88H) , 4.21 –2.71 (m, 11.76H) , 2.70 –1.52 (m, 3.99H) , 1.51 –0.47 (m, 1.65H) . Example 74 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate (74)

[0657] Step 1: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) nonanoate (74a)

[0658] The title compound was prepared in analogy to Example 11, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.105g, yield: 22.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C37H52N8O6, 705.87; found, 705.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 8.82 (s, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 7.81 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.26 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.75 (d, J = 5.4 Hz, 1H) , 4.62 –4.50 (m, 2H) , 4.24 –3.84 (m, 4H) , 3.64 –3.44 (m, 2H) , 3.29 –3.05 (m, 4H) , 2.87 (dd, J = 13.1, 6.6 Hz, 2H) , 2.49 –2.36 (m, 1H) , 2.35 –2.17 (m, 2H) , 1.81 (dt, J = 26.1, 11.3 Hz, 1H) , 1.67 –1.10 (m, 28H) .

[0659] Step 2: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate hydrochloride (74b)

[0660] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 74a, as a white solid (0.096g, yield: 99.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H44N8O4, 605.76; found, 605.3.

[0661] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 9-aminononanoate (74)

[0662] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 74b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.055g, yield: 54%, DSR=17%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.83 –8.46 (m, 0.34H) , 8.45 –8.18 (m, 0.17H) , 7.83 –7.57 (m, 0.17H) , 7.21 –6.84 (m, 0.17H) , 4.74 –4.31 (m, 2.34H) , 4.29 –2.73 (m, 11.7H) , 2.56 –1.76 (m, 4.02H) , 1.75 –0.68 (m, 3.23H) . Example 75 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate (75)

[0663] Step 1: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl (tert-butoxycarbonyl) glycinate (75a)

[0664] The title compound was prepared in analogy to Example 14, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.325g, yield: 82%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H38N8O6, 607.68; found, 607.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1H) , 8.83 (s, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 7.88 (s, 1H) , 7.24 (t, J = 4.8 Hz, 2H) , 4.54 (td, J = 9.6, 4.3 Hz, 2H) , 4.29 –3.55 (m, 9H) , 3.52 –3.38 (m, 1H) , 3.29 –3.14 (m, 2H) , 2.46 –2.33 (m, 1H) , 1.81 (dt, J = 15.1, 5.9 Hz, 1H) , 1.66 –1.12 (m, 16H) .

[0665] Step 2: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate hydrochloride (75b)

[0666] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 75a, as a white solid (0.28g, yield: 99.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H30N8O4, 507.57; found, 507.0.

[0667] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl glycinate (75)

[0668] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 75b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.057g, yield: 58.8%, DSR=9%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.87 –8.81 (m, 0.09H) , 8.72 –8.63 (m, 0.09H) , 8.50 –8.38 (m, 0.09H) , 7.84 –7.71 (m, 0.09H) , 7.24 –7.12 (m, 0.09H) , 4.68 –4.30 (m, 2.18H) , 4.29 –2.83 (m, 11.08H) , 2.66 –2.39 (m, 0.09H) , 2.14 –1.05 (m, 3.72H) . Example 76 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate (76)

[0669] Step 1: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propanoate (76a)

[0670] The title compound was prepared in analogy to Example 19, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.33g, yield: 81.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H40N8O6, 621.71; found, 621.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1H) , 8.82 (s, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 7.83 (s, 1H) , 7.25 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.83 (d, J = 5.3 Hz, 1H) , 4.64 –4.49 (m, 2H) , 4.04 –3.71 (m, 4H) , 3.67 –3.43 (m, 2H) , 3.32 –3.04 (m, 6H) , 2.47 –2.33 (m, 3H) , 1.82 (dt, J = 12.1, 7.5 Hz, 1H) , 1.67 –1.41 (m, 4H) , 1.38 –1.14 (m, 12H) .

[0671] Step 2: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate hydrochloride (76b)

[0672] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 76a, as a white solid (0.29g, yield: 99.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H32N8O4, 521.59; found, 521.0.

[0673] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 3-aminopropanoate (76)

[0674] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 76b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.057g, yield: 57%, DSR=13%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.89 –8.77 (m, 0.13H) , 8.73 –8.57 (m, 0.13H) , 8.53 –8.33 (m, 0.13H) , 7.80 –7.54 (m, 0.13H) , 7.23 –7.06 (m, 0.13H) , 4.67 –4.32 (m, 2.26H) , 4.18 –2.94 (m, 11.82H) , 2.75 –2.30 (m, 0.13H) , 2.12 –1.83 (m, 3.13H) , 1.81 –0.93 (m, 0.91H) . Example 77 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (77)

[0675] Step 1: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (77a)

[0676] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.2g, yield: 89%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H42N8O6, 635.74; found, 635.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1H) , 8.81 (d, J = 6.6 Hz, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 7.82 (d, J = 3.3 Hz, 1H) , 7.24 (t, J = 6.8 Hz, 1H) , 6.81 (s, 1H) , 4.62 –4.42 (m, 2H) , 4.28 –3.67 (m, 4H) , 3.65 –3.39 (m, 2H) , 3.33 –3.15 (m, 4H) , 2.98 –2.78 (m, 2H) , 2.46 –2.10 (m, 3H) , 1.88 –1.75 (m, 1H) , 1.66 –1.11 (m, 18H) .

[0677] Step 2: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (77b)

[0678] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 77a, as a white solid (0.15g, yield: 99%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H34N8O4, 535.62; found, 535.1.

[0679] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (77)

[0680] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 77b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.05g, yield: 45.5%, DSR=7%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.87 –8.71 (m, 0.07H) , 8.70 –8.55 (m, 0.07H) , 8.53 –8.31 (m, 0.07H) , 7.78 –7.53 (m, 0.07H) , 7.22 –7.02 (m, 0.07H) , 4.75 –4.34 (m, 2.14H) , 4.19 –2.82 (m, 10.84H) , 2.63 –2.20 (m, 0.21H) , 2.15 –1.78 (m, 3.07H) , 1.77 –0.92 (m, 0.63H) . Example 78 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5-aminopentanoate (78)

[0681] Step 1: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) pentanoate (78a)

[0682] The title compound was prepared in analogy to Example 6, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.238g, yield: 56.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H44N8O6, 649, 77; found, 649.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1H) , 8.82 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 7.81 (d, J = 3.4 Hz, 1H) , 7.25 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.78 (s, 1H) , 4.54 (td, J = 9.7, 4.5 Hz, 2H) , 4.02 –3.72 (m, 4H) , 3.64 –3.39 (m, 2H) , 3.31 –3.13 (m, 4H) , 2.88 (dd, J = 12.6, 6.3 Hz, 2H) , 2.42 (dt, J = 19.7, 10.0 Hz, 1H) , 2.37 –2.19 (m, 2H) , 1.81 (dt, J = 11.9, 5.8 Hz, 1H) , 1.65 –1.13 (m, 20H) .

[0683] Step 2: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5-aminopentanoate hydrochloride (78b)

[0684] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 78a, as a white solid (0.19g, yield: 99.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H36N8O4, 549.65; found, 549.1.

[0685] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 5-aminopentanoate (78)

[0686] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 78b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.06g, yield: 60%, DSR=14%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.87 –8.70 (m, 0.14H) , 8.69 –8.55 (m, 0.14H) , 8.53 –8.31 (m, 0.14H) , 7.77 –7.53 (m, 0.14H) , 7.20 –7.02 (m, 0.14H) , 4.74 –4.34 (m, 2.28H) , 4.19 –2.83 (m, 11.68H) , 2.61 –2.20 (m, 0.42H) , 2.14 –1.76 (m, 3.14H) , 1.75 –0.92 (m, 1.54H) . Example 79 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate (79)

[0687] Step 1: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoate (79a)

[0688] The title compound was prepared in analogy to Example 7, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.2g, yield: 46.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C34H46N8O6, 663.79; found, 663.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1H) , 8.80 (d, J = 6.1 Hz, 1H) , 8.41 (s, 1H) , 7.80 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.25 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.75 (d, J = 5.3 Hz, 1H) , 4.54 (td, J = 9.5, 4.5 Hz, 2H) , 4.21 –3.72 (m, 4H) , 3.66 –3.39 (m, 2H) , 3.29 –3.15 (m, 4H) , 2.87 (dd, J = 12.9, 6.6 Hz, 2H) , 2.43 (dd, J = 17.0, 8.5 Hz, 1H) , 2.35 –2.13 (m, 2H) , 1.82 (dt, J = 12.1, 7.5 Hz, 1H) , 1.64 –1.41 (m, 6H) , 1.39 –1.10 (m, 16H) .

[0689] Step 2: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate hydrochloride (79b)

[0690] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 79a, as a white solid (0.153g, yield: 99.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H38N8O4, 563.68; found, 563.2.

[0691] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 6-aminohexanoate (79)

[0692] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 79b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.055g, yield: 52.4%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.86 –8.72 (m, 0.1H) , 8.71 –8.53 (m, 0.1H) , 8.52 –8.31 (m, 0.1H) , 7.78 –7.54 (m, 0.1H) , 7.22 –7.00 (m, 0.1H) , 4.74 –4.33 (m, 2.2H) , 4.14 –2.82 (m, 11.2H) , 2.63 –2.16 (m, 0.3H) , 2.15 –1.81 (m, 3.1H) , 1.80 –0.89 (m, 1.3H) . Example 80 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7-aminoheptanoate (80)

[0693] Step 1: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) heptanoate (80a)

[0694] The title compound was prepared in analogy to Example 20, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.127g, yield: 29%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H48N8O6, 677.82; found, 677.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.88 (s, 1H) , 8.81 (d, J = 4.5 Hz, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 7.80 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 7.26 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.74 (d, J = 5.4 Hz, 1H) , 4.64 –4.46 (m, 2H) , 4.17 –3.68 (m, 4H) , 3.64 –3.42 (m, 2H) , 3.30 –3.10 (m, 4H) , 2.86 (dd, J = 13.0, 6.6 Hz, 2H) , 2.42 (dt, J = 16.9, 8.3 Hz, 1H) , 2.36 –2.08 (m, 2H) , 1.88 –1.77 (m, 1H) , 1.68 –1.12 (m, 24H) .

[0695] Step 2: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7-aminoheptanoate hydrochloride (80b)

[0696] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 80a, as a white solid (0.1g, yield: 99.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H40N8O4, 577.70; found, 577.2.

[0697] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 7-aminoheptanoate (80)

[0698] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 80b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.051g, yield: 50.5%, DSR=13%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.86 –8.47 (m, 0.26H) , 8.46 –8.17 (m, 0.13H) , 7.78 –7.49 (m, 0.13H) , 7.20 –6.83 (m, 0.13H) , 4.75 –4.32 (m, 2.26H) , 4.31 –2.77 (m, 11.56H) , 2.63 –2.32 (m, 0.39H) , 2.31 –1.78 (m, 3.13H) , 1.77 –0.82 (m, 1.95H) . Example 81 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate (81)

[0699] Step 1: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoate (81a)

[0700] The title compound was prepared in analogy to Example 8, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.18g, yield: 40%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H50N8O6, 691.85; found, 691.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.88 (s, 1H) , 8.81 (s, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 7.80 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.26 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.74 (t, J = 5.5 Hz, 1H) , 4.54 (td, J = 9.5, 4.5 Hz, 2H) , 4.19 –3.74 (m, 4H) , 3.65 –3.45 (m, 2H) , 3.33 –3.13 (m, 4H) , 2.92 –2.80 (m, 2H) , 2.42 (dt, J = 17.0, 8.6 Hz, 1H) , 2.36 –2.16 (m, 2H) , 1.82 (dt, J = 11.9, 7.2 Hz, 1H) , 1.67 –1.11 (m, 26H) .

[0701] Step 2: Preparation of (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate hydrochloride (81b)

[0702] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 81a, as a white solid (0.15g, yield: 99.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H42N8O4, 591.73; found, 591.1.

[0703] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 8-aminooctanoate (81)

[0704] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 81b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.055g, yield: 54%, DSR=15%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.88 –8.50 (m, 0.3H) , 8.48 –8.20 (m, 0.15H) , 7.79 –7.52 (m, 0.15H) , 7.21 –6.85 (m, 0.15H) , 4.72 –4.35 (m, 2.3H) , 4.34 –2.74 (m, 11.8H) , 2.62 –2.31 (m, 0.45H) , 2.30 –1.79 (m, 3.15H) , 1.78 –0.68 (m, 2.55H) . Example 82 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8-aminooctanoate (82)

[0705] Step 1: Preparation of (4-acetyl-1- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoate (82a)

[0706] The title compound was prepared in analogy to Example 17, step 3&4 by using ruxolitinib, as a white solid (0.119g, yield: 58.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C38H53N9O6, 732.90; found, 732.4. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.92 (s, 1H) , 8.52 –8.27 (m, 2H) , 7.66 (s, 1H) , 7.01 (d, J = 14.6 Hz, 1H) , 4.76 –4.26 (m, 4H) , 4.25 –3.36 (m, 4H) , 3.35 –2.93 (m, 4H) , 2.68 –2.50 (m, 1H) , 2.34 –1.84 (m, 5H) , 1.79 –0.99 (m, 29H) .

[0707] Step 2: Preparation of (4-acetyl-1- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8-aminooctanoate hydrochloride (82b)

[0708] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 82a, as a white solid (0.091g, yield: 95.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H45N9O4, 632.78; found, 632.4.

[0709] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8-aminooctanoate (82)

[0710] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 82b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.058g, yield: 55.3%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.86 –8.75 (m, 0.1H) , 8.74 –8.59 (m, 0.1H) , 8.46 –8.22 (m, 0.1H) , 7.80 –7.54 (m, 0.1H) , 7.22 –6.87 (m, 0.1H) , 4.77 –4.22 (m, 2.3H) , 4.21 –2.60 (m, 10.9H) , 2.59 –1.73 (m, 3.6H) , 1.72 –0.69 (m, 2H) . Example 83 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate (83)

[0711] Step 1: Preparation of (4-acetyl-1- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) undecanoate (83a)

[0712] The title compound was prepared in analogy to Example 82, step 1 by using compound 18b, as a white solid (0.163g, yield: 21.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C41H59N9O6, 774.98; found, 774.4. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.85 (s, 1H) , 8.41 (s, 1H) , 8.29 (s, 1H) , 7.64 –7.54 (m, 1H) , 6.91 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 4.80 –4.39 (m, 3H) , 4.32 –3.23 (m, 6H) , 3.19 –2.89 (m, 3H) , 2.70 –2.49 (m, 1H) , 2.37 –2.11 (m, 4H) , 1.99 –1.92 (m, 1H) , 1.81 –1.17 (m, 35H) .

[0713] Step 2: Preparation of (4-acetyl-1- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate hydrochloride (83b)

[0714] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 83a, as a white solid (0.124g, yield: 94.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H51N9O4, 674.86; found, 674.4.

[0715] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (4- (1- ( (R) -2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 11-aminoundecanoate (83)

[0716] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 83b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.039g, yield: 30%, DSR=14%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.85 –8.20 (m, 0.42H) , 7.83 –7.53 (m, 0.14H) , 7.21 –6.87 (m, 0.14H) , 4.76 –4.20 (m, 2.42H) , 4.19 –2.55 (m, 11.26H) , 2.54 –1.72 (m, 3.84H) , 1.71 –0.40 (m, 3.64H) . Example 84 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (R) -2- (4- (1- (2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (84)

[0717] Step 1: Preparation of (R) -2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (84a)

[0718] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.19g, yield: 49.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H40N8O5, 593.70; found, 593.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1H) , 8.81 (s, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 7.80 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.24 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.84 (s, 1H) , 4.61 –4.53 (m, 1H) , 4.40 –4.07 (m, 2H) , 3.89 –3.48 (m, 2H) , 3.30 –3.18 (m, 2H) , 3.14 –2.87 (m, 5H) , 2.44 (dd, J = 17.1, 8.5 Hz, 1H) , 2.37 –2.22 (m, 2H) , 1.89 –1.80 (m, 1H) , 1.76 –1.43 (m, 7H) , 1.40 –1.17 (m, 11H) .

[0719] Step 2: Preparation of (R) -2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (84b)

[0720] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 84a, as a white solid (0.15g, yield: 99.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H32N8O3, 493.58; found, 493.2.

[0721] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (R) -2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (84)

[0722] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 84b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.089g, yield: 59.5%, DSR=18%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.85 –8.63 (m, 0.18H) , 8.62 –8.49 (m, 0.18H) , 8.48 –8.24 (m, 0.18H) , 7.78 –7.48 (m, 0.18H) , 7.20 –6.98 (m, 0.18H) , 4.76 –4.19 (m, 2.54H) , 4.10 –2.80 (m, 11.62H) , 2.64 –2.23 (m, 0.54H) , 2.12 –0.92 (m, 4.8H) . Example 85 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (R) -2- (4- (1- (2-cyano-1- cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-ethyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (85)

[0723] Step 1: Preparation of (R) -2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-ethyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (85a)

[0724] The title compound was prepared in analogy to Example 26, step 1 by using ruxolitinib, as a white solid (0.23g, yield: 58%) MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H42N8O5, 607.73; found, 607.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1H) , 8.80 (s, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 7.82 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 7.24 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 6.83 (d, J = 4.7 Hz, 1H) , 4.56 (td, J = 9.6, 4.2 Hz, 1H) , 4.33 –3.99 (m, 2H) , 3.82 –3.40 (m, 3H) , 3.30 –3.14 (m, 2H) , 2.93 (dd, J = 12.7, 6.8 Hz, 3H) , 2.43 (dt, J = 17.0, 8.5 Hz, 1H) , 2.30 (s, 2H) , 1.89 –1.74 (m, 1H) , 1.70 –1.42 (m, 7H) , 1.41 –1.04 (m, 14H) .

[0725] Step 2: Preparation of (R) -2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-ethyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (85b)

[0726] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 85a, as a white solid (0.13g, yield: 99.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C26H34N8O3, 507.61; found, 507.2.

[0727] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (R) -2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-ethyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (85)

[0728] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 85b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.066g, yield: 45.3%, DSR=8%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.85 –8.75 (m, 0.08H) , 8.74 –8.61 (m, 0.08H) , 8.51 –8.40 (m, 0.08H) , 7.80 –7.58 (m, 0.08H) , 7.21 –7.01 (m, 0.08H) , 4.74 –4.21 (m, 2.24H) , 4.20 –2.78 (m, 10.64H) , 2.64 –0.94 (m, 4.28H) . Example 86 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (R) -2-aminoethyl (2- (4- (1- (2- cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl) carbonate (86)

[0729] Step 1: Preparation of (R) -2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 1H-imidazole-1-carboxylate (86a)

[0730] To a stirred mixture of ruxolitinib (300mg, 0.96mmol) in DMSO (3mL) was added bis (4-nitrophenyl) carbonate (307mg, 1mmol) and stirred at room temperature for 18 hours. Then 2- (methylamino) ethan-1-ol (117mg, 1mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Then N, N'-carbonyldiimidazole (638mg, 3.14mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 12 hours. The solution was diluted with EtOAc and washed with water. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then evaporated under reduced pressure to afford the title compound as a white solid (0.326g, yield: 67.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H27N9O3, 502.55; found, 502.2.

[0731] Step 2: Preparation of tert-butyl (R) - (2- ( ( (2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethoxy) carbonyl) oxy) ethyl) carbamate (86b)

[0732] To a stirred mixture of compound 86a (326mg, 0.65mmol) in DMF (30mL) was added 2- (tert-butoxycarbonylamino) -1-ethanol (161mg, 1mmol) and anhydrous potassium (276mg, 2mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 12 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc and washed with water. The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by column chromatography (DCM: MeOH=50: 1) to afford the title compound (0.18g, yield: 46.6%) as a white solid. MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H38N8O6, 595.67; found, 595.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1H) , 8.80 (s, 1H) , 8.41 (s, 1H) , 7.76 (s, 1H) , 7.23 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 7.06 –6.93 (m, 1H) , 4.55 (td, J = 9.6, 4.3 Hz, 1H) , 4.47 –3.94 (m, 4H) , 3.87 –3.53 (m, 2H) , 3.30 –2.88 (m, 7H) , 2.42 (dt, J = 17.0, 8.6 Hz, 1H) , 1.89 –1.75 (m, 1H) , 1.67 –1.12 (m, 16H) .

[0733] Step 3: Preparation of (R) -2-aminoethyl (2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl) carbonate hydrochloride (86c)

[0734] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 86b, as a white solid (0.13g, yield: 86.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C24H30N8O4, 495.56; found, 495.1.

[0735] Step 4: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (R) -2-aminoethyl (2- (4- (1- (2-cyano-1-cyclopentylethyl) -1H-pyrazol-4-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl) carbonate (86)

[0736] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 86c and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.074g, yield: 53%, DSR=8%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.84 –8.76 (m, 0.08H) , 8.73 –8.61 (m, 0.08H) , 8.49 –8.39 (m, 0.08H) , 7.77 –7.63 (m, 0.08H) , 7.21 –7.09 (m, 0.08H) , 4.73 –4.22 (m, 2.4H) , 4.09 –2.87 (m, 10.72H) , 2.65 –2.43 (m, 0.08H) , 2.26 –1.09 (m, 3.64H) . Example 87 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (8- ( (3R, 4S) -4-ethyl-1- ( (2, 2, 2- trifluoroethyl) carbamoyl) pyrrolidin-3-yl) -N-methyl-3H-imidazo [1, 2-a] pyrrolo [2, 3-e] pyrazine-3-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate (87)

[0737] Step 1: Preparation of 2- (8- ( (3R, 4S) -4-ethyl-1- ( (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl) pyrrolidin-3-yl) -N-methyl-3H-imidazo [1, 2-a] pyrrolo [2, 3-e] pyrazine-3-carboxamido) ethyl 6- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) hexanoate (87a)

[0738] The title compound was prepared in analogy to Example 25, step 1 by using upadacitinib, as a white solid (0.097g, yield: 26.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H45F3N8O6, 695.76; found, 695.3.

[0739] Step 2: Preparation of 2- (8- ( (3R, 4S) -4-ethyl-1- ( (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl) pyrrolidin-3-yl) -N-methyl-3H-imidazo [1, 2-a] pyrrolo [2, 3-e] pyrazine-3-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate hydrochloride (87b)

[0740] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 87a, as a white solid (0.08g, yield: 96.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H37F3N8O4, 595.64; found, 595.3. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.99 (d, J = 5.3 Hz, 1H) , 8.06 –7.92 (m, 2H) , 7.50 –7.36 (m, 1H) , 4.52 (s, 2H) , 4.22 –3.52 (m, 8H) , 3.41 –2.71 (m, 7H) , 2.56 –2.22 (m, 2H) , 1.75 –1.25 (m, 7H) , 1.00 –0.83 (m, 1H) , 0.72 (t, J = 7.3 Hz, 3H) .

[0741] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (8- ( (3R, 4S) -4-ethyl-1- ( (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl) pyrrolidin-3-yl) -N-methyl-3H-imidazo [1, 2-a] pyrrolo [2, 3-e] pyrazine-3-carboxamido) ethyl 6-aminohexanoate (87)

[0742] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 87b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.063g, yield: 51.6%, DSR=18%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.85 –8.44 (m, 0.18H) , 7.77 –7.38 (m, 0.36H) , 7.31 –6.92 (m, 0.18H) , 4.76 –4.06 (m, 2.36H) , 4.05 –2.50 (m, 12.7H) , 2.49 –1.60 (m, 3.36H) , 1.58 –0.34 (m, 1.98H) . Example 88 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (8- ( (3R, 4S) -4-ethyl-1-  ( (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl) pyrrolidin-3-yl) -3H-imidazo [1, 2-a] pyrrolo [2, 3-e] pyrazine-3-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8-aminooctanoate (88)

[0743] Step 1: Preparation of (4-acetyl-1- (8- ( (3R, 4S) -4-ethyl-1- ( (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl) pyrrolidin-3-yl) -3H-imidazo [1, 2-a] pyrrolo [2, 3-e] pyrazine-3-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) octanoate (88a)

[0744] The title compound was prepared in analogy to Example 82 step 1 by using upadacitinib, as a white solid (0.165g, yield: 22.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C48H56F3N9O7, 929.03; found, 928.4. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.76 (s, 1H) , 7.76 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.64 –7.56 (m, 3H) , 7.51 (d, J = 3.9 Hz, 1H) , 7.39 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.29 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 6.89 (d, J = 3.8 Hz, 1H) , 5.14 –4.94 (m, 1H) , 4.85 –4.56 (m, 2H) , 4.55 –4.30 (m, 3H) , 4.28 –4.12 (m, 2H) , 4.09 –3.62 (m, 7H) , 3.58 –3.25 (m, 3H) , 3.22 –2.94 (m, 3H) , 2.74 –2.56 (m, 1H) , 2.43 –2.25 (m, 2H) , 2.19 –2.06 (m, 3H) , 1.67 –1.15 (m, 11H) , 0.99 –0.85 (m, 1H) , 0.77 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .

[0745] Step 2: Preparation of (4-acetyl-1- (8- ( (3R, 4S) -4-ethyl-1- ( (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl) pyrrolidin-3-yl) -3H-imidazo [1, 2-a] pyrrolo [2, 3-e] pyrazine-3-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) octanoate (88b)

[0746] The title compound was prepared in analogy to Example 17, step 4 by using compound 88a, as a white solid (0.115g, yield: 80.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C38H54F3N9O7, 806.90; found, 806.4.

[0747] Step 3: Preparation of (4-acetyl-1- (8- ( (3R, 4S) -4-ethyl-1- ( (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl) pyrrolidin-3-yl) -3H-imidazo [1, 2-a] pyrrolo [2, 3-e] pyrazine-3-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8-aminooctanoate hydrochloride (88c)

[0748] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 88b, as a white solid (0.08g, yield: 98.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C33H46F3N9O5, 706.78; found, 706.3.

[0749] Step 4: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4-acetyl-1- (8- ( (3R, 4S) -4-ethyl-1- ( (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl) pyrrolidin-3-yl) -3H-imidazo [1, 2-a] pyrrolo [2, 3-e] pyrazine-3-carbonyl) piperazin-2-yl) methyl 8-aminooctanoate (88)

[0750] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 88c and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.063g, yield: 47.1%, DSR=11%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.83 –8.53 (m, 0.11H) , 7.79 –7.53 (m, 0.22H) , 7.36 –7.03 (m, 0.11H) , 4.78 –4.20 (m, 2.66H) , 4.19 –2.46 (m, 11.43H) , 2.43 –1.42 (m, 3.55H) , 1.41 –0.45 (m, 1.65H) . Example 89 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (N-methyl-4- (methyl ( (trans) -4-  ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (89)

[0751] Step 1: Preparation of 2- (N-methyl-4- (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (89a)

[0752] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using oclactinib, as a white solid (0.1g, yield: 24.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C28H45N7O7S, 624.77; found, 624.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (s, 1H) , 7.31 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 6.93 –6.72 (m, 2H) , 6.53 (s, 1H) , 4.67 (s, 2H) , 4.43 –3.90 (m, 3H) , 3.24 –2.81 (m, 10H) , 2.59 (d, J = 5.0 Hz, 3H) , 2.37 –2.22 (m, 2H) , 2.03 (t, J =14.2 Hz, 2H) , 1.89 –1.51 (m, 7H) , 1.36 (s, 9H) , 1.33 –1.21 (m, 2H) .

[0753] Step 2: Preparation of 2- (N-methyl-4- (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (89b)

[0754] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 89a, as a white solid (0.08g, yield: 95.3%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C23H37N7O5S, 524.65; found, 524.2.

[0755] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (N-methyl-4- (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (89)

[0756] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 89b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.044g, yield: 46.3%, DSR=9%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.47 –8.16 (m, 0.09H) , 7.70 –7.34 (m, 0.09H) , 7.17 –6.80 (m, 0.09H) , 4.78 –4.04 (m, 2.45H) , 3.99 –2.83 (m, 10.9H) , 2.82 –2.25 (m, 0.27H) , 2.24 –1.59 (m, 3.36H) , 1.57 –0.99 (m, 0.81H) . Example 90 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (methyl ( (trans) -4- ( (N- methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (90)

[0757] Step 1: Preparation of (4- (4- (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (90a)

[0758] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using oclactinib, as a white solid (0.15g, yield: 38.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H47N7O8S, 666.81; found, 666.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (s, 1H) , 7.33 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 6.93 –6.72 (m, 2H) , 6.58 (dd, J = 4.9, 1.6 Hz, 1H) , 4.81 –4.61 (m, 1H) , 4.53 (t, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.13 –3.48 (m, 6H) , 3.28 –3.09 (m, 4H) , 2.98 –2.83 (m, 5H) , 2.58 (d, J = 5.0 Hz, 3H) , 2.33 –2.25 (m, 2H) , 2.08 –1.54 (m, 9H) , 1.37 (s, 9H) , 1.33 –1.19 (m, 2H) .

[0759] Step 2: Preparation of (4- (4- (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (90b)

[0760] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 90a, as a white solid (0.08g, yield: 86.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C25H39N7O6S, 566.69; found, 566.1.

[0761] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (4- (4- (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (90)

[0762] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 90b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.041g, yield: 40%, DSR=8%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.33 –8.17 (m, 0.08H) , 7.52 –7.30 (m, 0.08H) , 7.07 –6.87 (m, 0.08H) , 4.78 –4.22 (m, 2.16H) , 4.20 –2.82 (m, 11.2H) , 2.81 –2.22 (m, 0.4H) , 2.19 –1.05 (m, 3.88H) . Example 91 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2-aminoethyl (2- (N-methyl-4-  (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl) carbonate (91)

[0763] Step 1: Preparation of tert-butyl (2- ( ( (2- (N-methyl-4- (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethoxy) carbonyl) oxy) ethyl) carbamate (91a)

[0764] The title compound was prepared in analogy to Example 86, step 1 by using oclactinib, as a white solid (0.32g, yield: 78.2%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C27H43N7O8S, 626.74; found, 626.3.

[0765] Step 2: Preparation of 2-aminoethyl (2- (N-methyl-4- (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl) carbonate hydrochloride (91b)

[0766] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 91a, as a white solid (0.152g, yield: 90.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C22H35N7O6S, 526.63; found, 526.1. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.29 (s, 1H) , 7.54 (s, 1H) , 6.99 (s, 1H) , 4.43 (t, J = 44.4 Hz, 6H) , 3.91 (s, 1H) , 3.43 –3.15 (m, 8H) , 3.02 (s, 2H) , 2.73 (s, 3H) , 2.09 (dd, J = 26.9, 7.8 Hz, 2H) , 2.03 –1.77 (m, 5H) , 1.54 –1.33 (m, 2H) .

[0767] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2-aminoethyl (2- (N-methyl-4- (methyl ( (trans) -4- ( (N-methylsulfamoyl) methyl) cyclohexyl) amino) -7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl) carbonate (91)

[0768] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 91b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.05g, yield: 47.6%, DSR=13%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.33 –8.17 (m, 0.13H) , 7.52 –7.30 (m, 0.13H) , 7.07 –6.87 (m, 0.13H) , 4.78 –4.22 (m, 2.78H) , 4.20 –2.82 (m, 11.43H) , 2.81 –2.22 (m, 0.39H) , 2.19 –1.05 (m, 4.17H) . Example 92 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( (3S, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) - 3-methyl-1, 6-diazaspiro [3.4] octan-6-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (92)

[0769] Step 1: Preparation of 2- (4- ( (3S, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -3-methyl-1, 6-diazaspiro [3.4] octan-6-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (92a)

[0770] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using delgocitinib, as a white solid (0.078g, yield: 40.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C29H40N8O6, 597.69; found, 597.3.

[0771] Step 2: Preparation of 2- (4- ( (3S, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -3-methyl-1, 6-diazaspiro [3.4] octan-6-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (92b)

[0772] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 92a, as a white solid (0.061g, yield: 93.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C24H32N8O4, 497.57; found, 497.3. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.23 (s, 1H) , 7.40 (s, 1H) , 7.02 (d, J = 48.0 Hz, 1H) , 4.47 –3.97 (m, 8H) , 3.96 –3.50 (m, 4H) , 3.30 –2.75 (m, 5H) , 2.64 –2.38 (m, 2H) , 1.79 (s, 3H) , 1.53 –1.09 (m, 5H) .

[0773] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and 2- (4- ( (3S, 4R) -1- (2-cyanoacetyl) -3-methyl-1, 6-diazaspiro [3.4] octan-6-yl) -N-methyl-7H-pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine-7-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (92)

[0774] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 92b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a white solid (0.055g, yield: 59.1%, DSR=15%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 8.21 –8.03 (m, 0.15H) , 7.37 –7.15 (m, 0.15H) , 6.98 –6.65 (m, 0.15H) , 4.76 –4.05 (m, 3.2H) , 4.04 –2.56 (m, 11.35H) , 2.52 –1.41 (m, 3.75H) , 1.33 –0.89 (m, 0.75H) . Example 93 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (Z) -2- (3- ( (4- ( (2-  (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-N-methyl-2-oxoindoline-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (93)

[0775] Step 1: Preparation of (Z) -2- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-N-methyl-2-oxoindoline-1-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (93a)

[0776] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using sunitinib, as a yellow solid (0.35g, yield: 38.7%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C35H49FN6O7, 685.81; found, 685.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.03 (d, J = 9.4 Hz, 1H) , 7.98 –7.78 (m, 2H) , 7.09 –6.93 (m, 3H) , 6.89 –6.73 (m, 1H) , 4.47 –4.02 (m, 2H) , 3.89 –3.54 (m, 2H) , 3.23 –2.79 (m, 6H) , 2.72 –2.53 (m, 7H) , 2.49 –2.30 (m, 8H) , 1.75 –1.51 (m, 2H) , 1.39 –1.33 (m, 9H) , 1.02 (t, J = 7.1 Hz, 6H) .

[0777] Step 2: Preparation of (Z) -2- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-N-methyl-2-oxoindoline-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (93b)

[0778] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 93a, as a yellow solid (0.2g, yield: 66.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C30H41FN6O5, 585.69; found, 585.1.

[0779] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (Z) -2- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-N-methyl-2-oxoindoline-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (93)

[0780] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 93b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a yellow solid (0.078g, yield: 46%, DSR=16%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.99 –6.50 (m, 0.64H) , 4.72 –4.20 (m, 2.32H) , 4.19 –2.70 (m, 11.28H) , 2.69 –1.64 (m, 5.72H) , 1.60 –1.02 (m, 0.96H)  Example 94 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (Z) -2- (3- ( (4- ( (2-  (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -N-ethyl-5-fluoro-2-oxoindoline-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (94)

[0781] Step 1: Preparation of (Z) -2- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -N-ethyl-5-fluoro-2-oxoindoline-1-carboxamido) ethyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (94a)

[0782] The title compound was prepared in analogy to Example 26, step 1 by using sunitinib, as a yellow solid (0.36g, yield: 39%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H51FN6O7, 699.84; found, 699.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.02 (s, 1H) , 7.99 –7.75 (m, 2H) , 7.10 –7.01 (m, 1H) , 7.00 –6.71 (m, 3H) , 4.53 –4.24 (m, 1H) , 4.09 (s, 2H) , 3.95 –3.53 (m, 5H) , 3.11 –2.76 (m, 14H) , 2.60 –2.24 (m, 2H) , 1.85 –1.65 (m, 2H) , 1.42 –1.01 (m, 18H) .

[0783] Step 2: Preparation of (Z) -2- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -N-ethyl-5-fluoro-2-oxoindoline-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate hydrochloride (94b)

[0784] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 94a, as a yellow solid (0.22g, yield: 71.9%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H43FN6O5, 599.72; found, 599.2.

[0785] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (Z) -2- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -N-ethyl-5-fluoro-2-oxoindoline-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (94)

[0786] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 94b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a yellow solid (0.085g, yield: 50.7%, DSR=14%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.96 –6.53 (m, 0.56H) , 4.77 –4.22 (m, 2.14H) , 4.21 –2.70 (m, 12.94H) , 2.69 –1.46 (m, 3.56H) , 1.45 –0.96 (m, 1.26H) . Example 95 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (Z) - (4- (3- ( (4- ( (2-  (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-2-oxoindoline-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (95)

[0787] Step 1: Preparation of (Z) - (4- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-2-oxoindoline-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoate (95a)

[0788] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using sunitinib, as a yellow solid (0.4g, yield: 41.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C37H51FN6O8, 727.85; found, 727.1. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.99 (s, 1H) , 7.38 (d, J = 12.3 Hz, 1H) , 7.31 –7.03 (m, 2H) , 6.90 (t, J = 7.9 Hz, 1H) , 4.99 –4.27 (m, 3H) , 4.16 –3.26 (m, 9H) , 3.21 –2.80 (m, 8H) , 2.59 (s, 3H) , 2.50 (s, 3H) , 2.45 –2.27 (m, 1H) , 2.17 –1.78 (m, 2H) , 1.51 –1.34 (m, 9H) , 1.30 –1.10 (m, 6H) .

[0789] Step 2: Preparation of (Z) - (4- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-2-oxoindoline-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate hydrochloride (95b)

[0790] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 95a, as a yellow solid (0.35g, yield: 96.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C32H43FN6O6, 627.73; found, 627.1.

[0791] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (Z) - (4- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-2-oxoindoline-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (95)

[0792] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 95b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a yellow solid (0.08g, yield: 50.1%, DSR=17%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.99 –6.41 (m, 0.68H) , 4.76 –4.26 (m, 2.51H) , 4.25 –2.62 (m, 12.89H) , 2.61 –1.46 (m, 4.53H) , 1.45 –0.99 (m, 1.02H) . Example 96 Preparation of conjugate of chondroitin sulfate and (Z) -2- (3- ( (4- ( (2-  (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-N-methyl-2-oxoindoline-1-carboxamido) ethyl 4-aminobutanoate (96)

[0793] The title compound was prepared in analogy to Example 93, step 3 by using chondroitin sulfate instead of hyaluronic acid, as a yellow solid (0.01g, yield: 56.1%, DSR=19%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.97 –6.33 (m, 0.76H) , 4.77 –4.32 (m, 2.38H) , 4.31 –2.75 (m, 11.52H) , 2.73 –1.63 (m, 6.23H) , 1.62 –1.01 (m, 1.14H) . Example 97 Preparation of conjugate of chondroitin sulfate and (Z) - (4- (3- ( (4- ( (2-  (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-2-oxoindoline-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl 4-aminobutanoate (97)

[0794] The title compound was prepared in analogy to Example 95, step 3 by using chondroitin sulfate instead of hyaluronic acid, as a yellow solid (0.095g, yield: 54.9%, DSR=20%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.99 –6.40 (m, 0.8H) , 4.77 –4.32 (m, 2.6H) , 4.31 –2.79 (m, 13.4H) , 2.78 –1.60 (m, 4.8H) , 1.59 –1.10 (m, 1.2H) . Example 98 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and (Z) -2-aminoethyl ( (4- (3- ( (4- ( (2-  (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-2-oxoindoline-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl) carbonate (98)

[0795] Step 1: Preparation of tert-butyl (Z) - (2- ( ( ( (4- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-2-oxoindoline-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methoxy) carbonyl) oxy) ethyl) carbamate (98a)

[0796] The title compound was prepared in analogy to Example 86, step 1 &2 by using sunitinib and morpholin-3-ylmethanol, as a yellow solid (0.35g, yield: 36%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C36H49FN6O9, 729.82; found, 729.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.96 –12.85 (m, 1H) , 7.87 –7.63 (m, 2H) , 7.20 –6.81 (m, 4H) , 4.84 –4.28 (m, 2H) , 4.19 –3.74 (m, 5H) , 3.43 –3.24 (m, 4H) , 3.27 –3.00 (m, 2H) , 2.76 –2.57 (m, 8H) , 2.45 (d, J = 10.2 Hz, 6H) , 1.33 (s, 9H) , 1.05 (t, J = 7.1 Hz, 6H) .

[0797] Step 2: Preparation of (Z) -2-aminoethyl ( (4- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-2-oxoindoline-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl) carbonate hydrochloride (98b)

[0798] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 98a, as a yellow solid (0.3g, yield: 94.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C31H41FN6O7, 629.70; found, 629.4.

[0799] Step 3: Preparation of conjugate of Hyaluronic acid and (Z) -2-aminoethyl ( (4- (3- ( (4- ( (2- (diethylamino) ethyl) carbamoyl) -3, 5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) -5-fluoro-2-oxoindoline-1-carbonyl) morpholin-3-yl) methyl) carbonate (98)

[0800] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 98b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a yellow solid (0.088g, yield: 53.5%, DSR=9%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.95 –7.46 (m, 0.18H) , 7.29 –6.81 (m, 0.18H) , 4.76 –4.32 (m, 2.18H) , 4.30 –2.80 (m, 10.99H) , 2.62 –1.58 (m, 4.26H) , 1.57 –1.21 (m, 0.54H) . Example 99 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and methyl (Z) -1- ( (2- ( (4- aminobutanoyl) oxy) ethyl) (methyl) carbamoyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (99)

[0801] Step 1: Preparation of methyl (Z) -1- ( (2- ( (4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoyl) oxy) ethyl) (methyl) carbamoyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (99a)

[0802] The title compound was prepared in analogy to Example 21, step 1 by using nintedanib, as a light yellow solid (0.38g, yield: 47.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C44H55N7O9, 826.96; found, 826.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.87 (s, 1H) , 7.73 –7.40 (m, 6H) , 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.17 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 6.96 (t, J = 16.3 Hz, 2H) , 6.77 (d, J = 35.5 Hz, 1H) , 5.83 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.49 –4.03 (m, 3H) , 4.02 –3.56 (m, 4H) , 3.28 –2.88 (m, 9H) , 2.84 –2.65 (m, 3H) , 2.40 –1.94 (m, 11H) , 1.90 –1.57 (m, 2H) , 1.35 (s, 9H) .

[0803] Step 2: Preparation of methyl (Z) -1- ( (2- ( (4-aminobutanoyl) oxy) ethyl) (methyl) carbamoyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate hydrochloride (99b)

[0804] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 99a, as a light yellow solid (0.3g, yield: 89.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C39H47N7O7, 726.85; found, 726.1.

[0805] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and methyl (Z) -1- ( (2- ( (4-aminobutanoyl) oxy) ethyl) (methyl) carbamoyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (99)

[0806] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 99b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a light yellow solid (0.08g, yield: 51.4%, DSR=15%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.82 –6.52 (m, 1.65H) , 6.10–5.91 (m, 0.15H) , 4.72 –4.26 (m, 2.3H) , 4.25 –2.32 (m, 12.55H) , 2.31 –1.32 (m, 4.95H) . Example 100 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and methyl (Z) -1- (3- ( ( (4- aminobutanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carbonyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (100)

[0807] Step 1: Preparation of methyl (Z) -1- (3- ( ( (4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carbonyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (100a)

[0808] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 1 by using nintedanib, as a light yellow solid (0.45g, yield: 53.1%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C46H57N7O10, 869.00; found, 868.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.81 (s, 1H) , 7.72 –7.41 (m, 8H) , 7.31 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.00 (s, 1H) , 6.75 (d, J = 42.3 Hz, 1H) , 5.81 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.52 (t, J = 10.4 Hz, 2H) , 4.18 –3.61 (m, 10H) , 3.10 (dd, J = 73.9, 33.6 Hz, 7H) , 2.81 –2.58 (m, 2H) , 2.44 –1.98 (m, 11H) , 1.87 –1.64 (m, 2H) , 1.35 (s, 9H) .

[0809] Step 2: Preparation of methyl (Z) -1- (3- ( ( (4-aminobutanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carbonyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate hydrochloride (100b)

[0810] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 100a, as a yellow solid (0.25g, yield: 62.8%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C41H49N7O8, 768.88; found, 768.1.

[0811] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and methyl (Z) -1- (3- ( ( (4-aminobutanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carbonyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (100)

[0812] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 100b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a light yellow solid (0.073g, yield: 47.8%, DSR=16%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.90 –6.52 (m, 1.76H) , 6.09 –5.92 (m, 0.16H) , 4.71 –4.29 (m, 2.32H) , 4.24 –2.28 (m, 13.04H) , 2.27 –1.45 (m, 5.08H) . Example 101 Preparation of conjugate of chondroitin sulfate and methyl (Z) -1- ( (2- ( (4- aminobutanoyl) oxy) ethyl) (methyl) carbamoyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (101)

[0813] The title compound was prepared in analogy to Example 99, step 3 by using chondroitin sulfate instead of hyaluronic acid, as a light yellow solid (0.09g, yield: 52.7%, DSR=10%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.75 –6.65 (m, 1.1H) , 6.09–5.95 (m, 0.1H) , 4.78 –4.35 (m, 2.2H) , 4.34 –2.74 (m, 10.5H) , 2.71 –2.25 (m, 1.2H) , 2.24 –1.52 (m, 4.13H) . Example 102 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and methyl (Z) -1- ( (2- ( (4- aminobutanoyl) oxy) ethyl) (ethyl) carbamoyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (102)

[0814] Step 1: Preparation of methyl (Z) -1- ( (2- ( (4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) butanoyl) oxy) ethyl) (ethyl) carbamoyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (102a)

[0815] The title compound was prepared in analogy to Example 26, step 1 by using nintedanib, as a light yellow solid (0.48g, yield: 58.5%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C45H57N7O9, 840.99; found, 840.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.84 (s, 1H) , 7.71 –7.41 (m, 6H) , 7.36 –7.12 (m, 4H) , 7.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 5.83 (d, J = 6.8 Hz, 1H) , 4.41 –4.04 (m, 2H) , 3.94 –3.49 (m, 5H) , 3.29 –2.89 (m, 11H) , 2.85 –2.32 (m, 11H) , 2.06 –1.80 (m, 2H) , 1.42 –1.17 (m, 12H) .

[0816] Step 2: Preparation of methyl (Z) -1- ( (2- ( (4-aminobutanoyl) oxy) ethyl) (ethyl) carbamoyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate hydrochloride (102b)

[0817] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 2 by using compound 102a, as a light yellow solid (0.64g, yield: 94.6%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C40H49N7O7, 740.87; found, 740.2.

[0818] Step 3: Preparation of conjugate of hyaluronic acid and methyl (Z) -1- ( (2- ( (4-aminobutanoyl) oxy) ethyl) (ethyl) carbamoyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (102)

[0819] The title compound was prepared in analogy to Example 1, step 3 by using compound 102b and hyaluronic acid (MW 500KDa) , as a light yellow solid (0.07g, yield: 45.8%, DSR=14%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.89 –7.31 (m, 0.84H) , 7.23 –6.60 (m, 0.7H) , 6.12 –5.81 (m, 0.14H) , 4.76 –4.18 (m, 2.28H) , 4.16 –2.59 (m, 12.24H) , 2.58 –1.62 (m, 4.82H) , 1.46 –0.94 (m, 0.42H) . Example 103 Preparation of conjugate of chondroitin sulfate and methyl (Z) -1- (3- ( ( (4- aminobutanoyl) oxy) methyl) morpholine-4-carbonyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (103)

[0820] The title compound was prepared in analogy to Example 100, step 3 by using chondroitin sulfate instead of hyaluronic acid, as a light yellow solid (0.09g, yield: 56.8%, DSR=18%) . 1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.96 –6.39 (m, 1.98H) , 6.08 –5.60 (m, 0.18H) , 4.77 –4.34 (m, 2.36H) , 4.30 –2.31 (m, 13.42H) , 2.30 –1.51 (m, 5.34H) . Example 104 Preparation of conjugate of hyaluronic acid and methyl (Z) -1- (3- ( ( ( (2- aminoethoxy) carbonyl) oxy) methyl) morpholine-4-carbonyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (104)

[0821] Step 1: Preparation of methyl (Z) -1- (3- (10, 10-dimethyl-3, 8-dioxo-2, 4, 9-trioxa-7-azaundecyl) morpholine-4-carbonyl) -3- ( ( (4- (N-methyl-2- (4-methylpiperazin-1-yl) acetamido) phenyl) amino) (phenyl) methylene) -2-oxoindoline-6-carboxylate (104a)

[0822] The title compound was prepared in analogy to Example 98, step 1 by using nintedanib, as a light yellow solid (0.36g, yield: 42.4%) . MS (m / z) : [M+H] + calcd for C45H55N7O11, 870.97; found, 870.3. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.01 (s, 1H) ...

Claims

A drug delivery system comprising:a therapeutic agent comprising one or more amine groups as a first binding group BG1; anda biopolymer comprising one or more carboxylic groups as a second binding group BG2;a linker covalently linking the biopolymer to the therapeutic agent and capable of retaining the therapeutic agent in the location of administration;wherein the linker comprises a structure of Formula (I) , Formula (II) or Formula (III) :whereinend of the linker is connected to the therapeutic agent through BG1 such that a urea linkage is formed, and *end of the linker is connected to the biopolymer through BG2 such that at least one amide linkage is formed;U is selected from a direct bond, -N (RU) -*orwhereinis a heterocyclyl optionally substituted with one or more Ra, wherein the *end of U is connected to the biopolymer;X is a direct bond, -C (=O) -, -C (RX) 2-, -N (RX) -, -O-or -S-;A is selected from a direct bond, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, or heteroaryl, wherein each of the alkyl, heteroalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, and heteroaryl is independently optionally substituted with one or more Rb;each of RU, RV, RX and RL is independently selected from a group consisting of hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, and heteroaryl, wherein each of the alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, aralkyl, and heteroaryl is independently optionally substituted with one or more Rb;each of Ra and Rb is independently selected from halogen, hydroxyl, amino, cyano, nitro, alkyl, or -C (=O) -alkyl; andp is 0, 1, 2 or 3.The drug delivery system of claim 1, wherein the linker comprises a structure of Formula (I) .The drug delivery system of claim 1 or 2, wherein RV is alkyl, alkynyl, aryl or aralkyl, each of which is optionally substituted with one or more Rb.The drug delivery system of claim 3, wherein RV is methyl, ethyl, isopropyl, benzyl, phenyl or cyanomethyl.The drug delivery system of claim 1, wherein the linker comprises a structure of Formula (II) .The drug delivery system of claim 5, whereinis selected from:The drug delivery system of claim 6, wherein each Ra is independently alkyl or -C (=O) -alkyl.The drug delivery system of claim 7, whereinis selected from:The drug delivery system of claim 1, wherein the linker comprises a structure of Formula (III) .The drug delivery system of claim 9, whereinisThe drug delivery system of any one of claims 1 and 9-10, wherein RL is alkyl.The drug delivery system of claim 11, wherein RL is ethyl, n-propyl, isopropyl, or tert-butyl.The drug delivery system of any one of claims 1-12, wherein U is -N (RU) -.The drug delivery system of claim 13, wherein RU is hydrogen or alkyl.The drug delivery system of claim 14, wherein RU is hydrogen or methyl.The drug delivery system of claim 1, wherein U isThe drug delivery system of claim 16, wherein U isThe drug delivery system of claim 1, wherein U is a direct bond.The drug delivery system of claim 1, wherein X is a direct bond, -C (=O) -, -O-, -C (RX) 2-, or -N (RX) -, wherein RX is selected from hydrogen or alkyl.The drug delivery system of claim 19, wherein X is a direct bond, -C (=O) -, -O-, -CH2-or -N (CH3) -.The drug delivery system of claim 1, wherein A is a direct bond.The drug delivery system of claim 1, wherein A is alkyl.The drug delivery system of claim 22, wherein A is selected from the group consisting of methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl and decyl.The drug delivery system of claim 1, wherein A is heteroalkyl.The drug delivery system of claim 24, wherein A is – (OCH2CH2) p-, wherein p is an integer of 1-4.The drug delivery system of claim 1, wherein A is cycloalkyl.The drug delivery system of claim 26, wherein A isThe drug delivery system of claim 1, wherein A is aralkyl.The drug delivery system of claim 28, wherein A isThe drug delivery system of claim 1, wherein X is a direct bond, and A is a direct bond, alkyl, heteroalkyl, cycloalkyl, or aralkyl.The drug delivery system of claim 1, wherein X is -O-, and A is alkyl, aralkyl, or cycloalkyl.The drug delivery system of claim 1, wherein X is -CH2-, and A is heteroalkyl.The drug delivery system of claim 1, wherein X is -N (CH3) -, and A is alkyl.The drug delivery system of claim 1, wherein X is -C (=O) -, and A is alkyl.The drug delivery system of claim 1, wherein the linker comprises a structure selected from the group consisting of:The drug delivery system of claim 1, wherein the linker comprises a structure selected from the group consisting of:wherein q is an integer from 0 to 10.The drug delivery system of any one of claims 1-36, wherein the biopolymer is selected from hyaluronic acid, chondroitin, or chondroitin sulfate.The drug delivery system of claim 37, wherein the biopolymer is hyaluronic acid.The drug delivery system of claim 37, wherein the biopolymer is chondroitin sulfate.The drug delivery system of any one of claims 1-39, wherein the therapeutic agent is Janus kinase (JAK) inhibitors or vascular endothelial growth factor (VEGF) inhibitors.The drug delivery system of claim 40, wherein the therapeutic agent is JAK inhibitor selected from the group consisting of Tofacitinib, Ruxolitinib, Baricitinib, Oclacitinib, Upadacitinib and Delgocitinib.The drug delivery system of claim 40, wherein the therapeutic agent is VEGF inhibitor selected from the group consisting of Axitinib, Nintedanib, and Sunitinib.The drug delivery system of claim 41, wherein the therapeutic agent is Tofacitinib.The drug delivery system of claim 41, wherein the therapeutic agent is Baricitinib.The drug delivery system of claim 41, wherein the therapeutic agent is Ruxolitinib.The drug delivery system of claim 41, wherein the therapeutic agent is Oclacitinib.The drug delivery system of claim 41, wherein the therapeutic agent is Delgocitinib.The drug delivery system of claim 41, wherein the therapeutic agent is Upadacitinib.The drug delivery system of claim 42, wherein the therapeutic agent is Axitinib.The drug delivery system of claim 42, wherein the therapeutic agent is Sunitinib.The drug delivery system of claim 42, wherein the therapeutic agent is Nintedanib.The drug delivery system of claim 1 selected from the group consisting of:wherein n is in a range of 1-25000.The drug delivery system of any one of claims 1-52, wherein the drug delivery system is locally administrated to a subject in need thereof.The drug delivery system of claim 53, wherein the drug delivery system is locally administered to a subject in need thereof via injection.The drug delivery system of claim 53, wherein the drug delivery system is locally administered to a subject in need thereof via oral dosage form.The drug delivery system of claim 53, wherein the drug delivery system is locally administered to a subject in need thereof via inhalation.The drug delivery system of claim 53, wherein the drug delivery system is locally administered to a subject in need thereof via implant.The drug delivery system of claim 53, wherein the drug delivery system is locally administered to a subject in need thereof via topical application.A pharmaceutical composition comprising the drug delivery system according to any one of claims 1-58 and a pharmaceutically acceptable excipient.A method of treating a disorder in a subject in need thereof, the method comprising administering to the subject a therapeutic effective amount of the drug delivery system according to any one of claims 1-58 or the pharmaceutical composition according to claim 59.The method according to claim 60, wherein the disorder is selected from the group consisting of rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, ulcerative colitis, polyarticular course juvenile idiopathic arthritis; myelofibrosis, polycythemia vera, steroid-refractory acute graft-versus-host disease, coronavirus disease, atopic dermatitis, alopecia areata, plaque psoriasis, peripheral T-cell lymphoma, relapsed diffuse large T-cell lymphoma; atopic dermatitis and pruritus from allergic dermatitis in dogs, asthma and allergic dermatitis in cats; autoimmune disorders, hypersensitivity; Crohn's disease, ankylosing spondylitis, axial spondyloarthritis; Renal cell carcinoma; gastrointestinal stromal tumor, meningioma, pancreatic neuroendocrine tumors; idiopathic pulmonary fibrosis, lung cancer, retinal vein occlusion; age-related macular degeneration; uveitis; polypoidal choroidal vasculopathy; radiation-induced optic neuropathy; diabetic macular edema; neovascular glaucoma; diabetic retinopathy; corneal neovascularization; retinopathy of prematurity; coats disease; retinal capillary hemangioma;and myopic CNV.

Images