Joint deliverable oligonucleotide modulators and use thereof in treatment of joint diseases

Abstract

Provided herein are joint deliverable oligonucleotide modulators and the use thereof in the treatment of joint diseases, such as rheumatoid arthritis (RA). The intra-articular (IA) deliverable oligonucleotide agents comprise: a double-stranded oligonucleotide capable of modulating the expression of a selected gene associated to a joint disease, and one or more delivery moieties conjugating to the double-stranded oligonucleotide for delivery of the oligonucleotide to cells in the joint. Also provided are products comprising the same, methods for delivering the same to cells in the joint, and methods for the treatment of joint diseases using the same.

Description

JOINT DELIVERABLE OLIGONUCLEOTIDE MODULATORS AND USE THEREOF IN TREATMENT OF JOINT DISEASESTECHNICAL FIELD

[0001] The present application relates to the technical field of nucleic acids, specifically relates to oligonucleotide modulators associated with treatment of joint diseases, such as rheumatoid arthritis (RA) , and pharmaceutical use thereof.CROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS

[0002] This application claims priority to the filing date of provisional patent application serial No. PCT / CN2024 / 124311 filed October 12, 2024, the disclosure of which application is herein incorporated by reference.SEQUENCE LISTING

[0003] The instant application contains a Sequence Listing which has been submitted electronically in computer readable format and is hereby incorporated by reference in its entirety.BACKGROUND OF THE INVENTION

[0004] Joint disorders are conditions that affect the human musculoskeletal system, leading to symptoms that can range from mild discomfort to severe pain and disability. These disorders can be acute or chronic and may impact a single joint or multiple sites throughout the skeleton. Inflammatory joint diseases, such as rheumatoid arthritis, gout, synovitis, and ankylosing spondylitis, are characterized by inflammation as a primary symptom, while noninflammatory joint diseases like injuries and degenerative disorders may also involve inflammation but do not center on it as the defining feature.

[0005] RA, in particular, is a chronic systemic autoimmune disease that affects the synovial joints and is associated with significant morbidity and mortality. As a chronic, systemic autoimmune disorder characterized by inflammation in the synovial joints, RA results in joint pain, swelling, and the progressive loss of cartilage and bone (Lee DM, et al., 2001) . Although RA can affect adults at any age, it is diagnosed more frequently between the ages of 40 and 70 and has a global annual incidence of approximately 3 per 10,000 individuals, with a prevalence rate of around 1% (Smolen JS, et al., 2016) . The etiology of RA remains multifactorial, involving genetic predispositions, environmental factors, and immune system dysregulation. While the exact pathogenesis is not fully understood, it is widely accepted as an autoimmune disease where the immune system mistakenly attacks the body's own tissues, particularly the joints (Moura, C. S. et al., 2015) .

[0006] Current treatment strategies for RA focus on disease-modifying antirheumatic drugs (DMARDs) , including traditional synthetic drugs like methotrexate (MTX) , which can effectively alleviate symptoms and slow disease progression, although it carries potential side effects on the hematopoietic and hepatic systems. The landscape of biological DMARDs has expanded to include TNF inhibitors, anti-CD20 antibodies, IL-6 receptor antibodies, RANKL antibodies, and JAK inhibitors, offering new options for patients who do not respond to or cannot tolerate traditional DMARDs.

[0007] Despite the availability of these disease-modifying therapies, there is an ongoing need for new therapeutic options that can target etiology of the joint diseases. In recent years, oligonucleotide therapy has emerged as a promising gene expression modulation therapy and achieved long-term remission, high specificity and low toxicity in treating many rare or liver-targeting diseases. Differing in mechanisms of action, the oligonucleotides include antisense oligonucleotides (ASO) , small interfering RNA (siRNA) , microRNA (miRNA) , and small activating RNA (saRNA) , etc. With the appropriate drug delivery technologies, these therapeutic oligonucleotides can be delivered to organs and tissues such as the liver, central nervous system, lungs, muscles, etc. However, the development of oligonucleotide drugs for joint diseases is rarely reported, mainly due to the lack of joint delivery technologies. Therefore, successfully delivering oligonucleotides, especially double-stranded siRNA and saRNA, to the pathological tissues of joints is a long-standing unresolved technical issue in this field and is key to developing oligonucleotide drugs for the treatment of bone and joint diseases.SUMMARY OF THE INVENTION

[0008] To address the problems, the present application provides oligonucleotide agents (also called “oligonucleotide modulators” ) capable of being delivered to the cells in a joint and modulating the expression of gene (s) associating with joint diseases, such as RA, and also a product comprising the oligonucleotide agents. The oligonucleotide agent comprises a double-stranded oligonucleotide and a delivery moiety for enhancing the delivery of the oligonucleotide to the cells in the joint.

[0009] Also provided herein is a method for delivering an oligonucleotide agent to cells in the joint, comprising providing the oligonucleotide agent with the delivery moiety or the product comprising the oligonucleotide agent to in vitro cells from joints or via intra-articular (IA) administration (such as IA injection) to the joint. Further provided herein is a method for the treatment and / or prevention of joint disease, comprising administering an effective amount of the oligonucleotide agent or the product of the present application to a subject in need of the treatment and / or prevention via IA administration.

[0010] In particular, the inventors discovered that oligonucleotide agents with strong potency for modulating the expression of joint disease associated gene (s) and high joint delivery efficiency, comprising: (a) a double-stranded oligonucleotide, such as a siRNA or a saRNA, targeting and capable of modulating the expression of a selected gene associated to a joint disease; and (b) a delivery moiety, such as a non-targeting single-stranded accessory oligonucleotide (ACO) and / or a lipid, conjugated to the oligonucleotide for delivery of the oligonucleotide to the joint. Consequently, an oligonucleotide agent, a product comprising the same, and a method for delivering the same to cells in the joint and a method for the treatment of joint diseases in a subject by administering the oligonucleotide agent or the product (such as a pharmaceutical composition) are provided.

[0011] In certain embodiments, the oligonucleotide is a double-stranded RNA (dsRNA) , such as a siRNA or a saRNA comprising a sense strand and an antisense strand forming a double stranded structure which comprises 0, 1, 2 or 3 mismatches. The antisense strand of the dsRNA comprises a region of complementarity to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a selected region of the selected gene; and / or, the sense strand comprises a region of homology to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a selected region of the selected gene. In some embodiments, the dsRNA comprises at least one blunt end at 5’ end of the antisense strand. In some embodiments, the dsRNA comprises at least one overhang at 3’ end of the antisense strand or the sense strand of the dsRNA. The overhang may be a natural overhang or a non-natural overhang, each consisting of 1, 2, 3, 4, or 5 nucleotides. In some embodiments, the lengths of the sense strand and the antisense strand of the dsRNA are independently about 16-25 nucleotides, preferably 18-24 nucleotides, more preferably 19-23, such as 19, 20, 21, 22 or 23 nucleotides.

[0012] In certain embodiments, at least one nucleotide of the oligonucleotide and / or ACO disclosed in the present application is a chemically modified nucleotide. In certain embodiments, at least one nucleotide of the antisense and / or sense strand of a double-stranded oligonucleotide disclosed in the present application is chemically modified. In certain embodiments, the chemically modified nucleotide disclosed in the present application is a nucleotide with at least one the following modifications: a) modification of a phosphodiester bond connecting nucleotides in the nucleotide sequence of the double-stranded oligonucleotide; b) modification of 2'-OH of a ribose in the nucleotide sequence of the double-stranded oligonucleotide; and c) modification of a base in the nucleotide sequence of the double-stranded oligonucleotide.

[0013] In certain embodiments, at least one nucleotide of the oligonucleotide disclosed in the present application is a locked nucleic acid, an abasic nucleotide, a 2′-amino-modified nucleotide, a 2′-alkyl-modified nucleotide, a morpholino nucleotide, a phosphoramidate, a non-canonical base nucleotide, or an unnatural nucleotide analog.

[0014] In certain embodiments, the chemical modification of the at least one chemically modified nucleotide disclosed in the present application is a phosphorothioate (PS) backbone modification.

[0015] In certain embodiments, the chemical modification of the at least one chemically modified nucleotide disclosed in the present application is a 2' sugar modification selected from one or more of: 2'-fluoro-2'-deoxynucleoside (2'-F) modification, 2'-O-methyl (2'-O-Me) , modification, and 2'-O- (2-methoxyethyl) (2'-O-MOE) modification.

[0016] In certain embodiments, the chemical modification of the at least one chemically modified nucleotide disclosed in the present application is an addition of a 5'-phosophate moiety at the 5'end of the nucleotide sequence. In certain embodiments, the chemical modification of the at least one chemically modified nucleotide disclosed in the present application is an addition of a (E) -vinylphosphonate moiety, 5-methyl uracil or 5-methyl cytosine moiety at the 5’ end of the sense strand and / or the antisense strand.

[0017] In certain embodiments, the disclosure provides oligonucleotide modulator wherein the sense strand and / or the antisense strand of the double-stranded oligonucleotide disclosed in the present application is conjugated to one or more delivery moieties selected from an oligonucleotide, a lipid, a fatty acid, a fluorophore, a ligand, a saccharide, a peptide, and an antibody.

[0018] In certain embodiments of the oligonucleotide modulator, the sense strand or the antisense strand of the double-stranded oligonucleotide disclosed in the present application is conjugated to one or more delivery moieties selected from an ACO, a cell-penetrating peptide, polyethylene glycol, an alkaloid, a tryptamine, a benzimidazole, a quinolone, an amino acid, a cholesterol, and a glucose. In certain embodiments, the double-stranded oligonucleotide is conjugated to an ACO sequence through a linking component to form an oligonucleotide-based delivery vehicle (ODV) . In certain embodiments, the double-stranded oligonucleotide is conjugated to a lipid selected from C4-30 fatty acid. In certain embodiments, the delivery moiety is a lipid / fatty acid having a saturated or unsaturated, linear or branched C16 carbon chain.

[0019] In certain embodiments of the oligonucleotide modulator, the double-stranded oligonucleotide is conjugated to C5x5 as shown below. In certain embodiments, C5x5 is conjugated to the 5'end of sense strand.

[0020] The delivery moieties can be synthesized via procedures known in the art, for example WO 2023280190A1 and WO2024002046A1 which are fully incorporated herein for methods of use and synthetic processes of ACO and C5x5; and S9, the linking component conjugating dsRNA and ACO, is commercially available (such as purchased from Wuhu Huaren Science and Technology Co., Ltd (HR-00214009, Anhui, China) ) .

[0021] In certain embodiments, the joint disease is an inflammatory joint disease, such as RA, or a noninflammatory joint diseases.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0022] The novel features of the invention are set forth with particularity in the appended claims. A better understanding of the features and advantages of the present invention will be obtained by reference to the following detailed description that sets forth illustrative embodiments, in which the principles of the invention are employed, and the accompanying drawings (also “figure” and “FIG. ” herein) , of which:

[0023] FIG. 1 shows the activity of saRNA in inducing CDKN1A mRNA expression in human rheumatoid arthritis synovial fibroblasts (RSF) . saRNA-C5x5 (i.e., RD-16447) , a lipid (i.e., compound C5x5) conjugated saRNA, was transfected into RSF cells at 2.5 nM or 25 nM for 3 days. RD-11704, a duplex siRNA targeting CDKN1A mRNA, was transfected at 10 nM as a siRNA control. Cells transfected in the absence of any oligonucleotide were used as Mock treatment. CDKN1A mRNA levels were quantified by two step RT-qPCR using a gene specific primer set. Geometric means of the mRNA levels of HPRT1 and B2M were used as internal reference. The values (y-axis) represent CDKN1A mRNA expression levels relative to Mock treatment after normalized to the reference of HPRT1 and B2M.

[0024] FIGs. 2A-2B show the knockdown activity of siRNAs administered via IA injection on the expression of rat Sod1 (i.e., Sod1) mRNA in female Sprague-Dawley (SD) rats. siRNA-ACO was a non-targeting single-stranded accessory oligonucleotide conjugated siRNA, and siRNA-C5x5 was a lipid (i.e., compound C5x5) conjugated siRNA. The indicated siRNA-ACO (i.e., RD-17711) and siRNA-C5x5 (i.e., RD-17619) were administered to the female SD rats via IA injection at 7 and 21 nmol, respectively. RD-17911 was a duplex siRNA targeting Sod1 mRNA and were administered to another group of female SD rats via IA injection at 7 or 21 nmol. Treatment with saline alone served as vehicle control to indicate baseline expression. The rats were sacrificed on day 14 post dosing. FIGs. 2A-2B show the remaining Sod1 mRNA levels as quantified in tissues from synovium of the hind limb knee joints and liver via two step RT-qPCR using gene specific primer sets after RNA isolation and RT reaction. Rat B2M was amplified as an internal reference. Mean Sod1 mRNA levels in the selected tissues are shown relative to mRNA levels in the saline group after normalized to B2M. The data represents mean ± SEM of 4-5 rats per group. p value less than 0.05 was considered statistically significant between the two groups. *represents p < 0.05, **represents p < 0.01, ***represents p < 0.001, and ****represents p < 0.0001.DETAILED DESCRIPTIONDefinitions

[0025] In the present application, the related terms are defined as follows:

[0026] Every numerical range given throughout this specification will include every narrower numerical range that falls within such broader numerical range, as if such narrower numerical ranges were all expressly written herein.

[0027] The transitional terms / phrases (and any grammatical variations thereof) “comprising” , “comprises” , “comprise” , include the phrases “consisting essentially of” , “consists essentially of” , “consisting” , and “consists” and can be interchanged throughout the application. The open term “comprise” also includes a closed term “consisting of” as one option. As used herein, the terms “include, ” “have” and “comprise” are used synonymously, which terms and variants thereof are intended to be construed as non-limiting.

[0028] The term "complementary" as used herein refers to the capability of forming base pairs between two oligonucleotide strands. The base pairs are generally formed through hydrogen bonds between nucleotides in the antiparallel oligonucleotide strands. The bases of the complementary oligonucleotide strands can be paired in the Watson-Crick manner (such as A pairs with T, A pairs with U, and C pairs with G) or in any other manner allowing the formation of a duplex (such as Hoogsteen or reverse Hoogsteen base pairing) .

[0029] Complementarity includes complete complementarity and incomplete complementarity. "Complete complementarity" or "100%complementarity" means that each nucleotide from the first oligonucleotide strand can form a hydrogen bond with a nucleotide at a corresponding position in the second oligonucleotide strand in the double strand region of the double-stranded oligonucleotide molecule, with no base pair being "mispaired" or “mismatched” . "Incomplete complementarity" and “mismatch” can be used interchangeably and mean that not all the nucleotide units of the two strands are bound with each other by hydrogen bonds. For example, for two oligonucleotide strands each of 20 nucleotides in length in the double strand region, if only two base pairs in this double strand region can be formed through hydrogen bonds, the oligonucleotide strands have a complementarity of 10%. In the same example, if 18 base pairs in this double strand region can be formed through hydrogen bonds, the oligonucleotide strands have a complementarity of 90%. Substantial complementarity refers to at least about 75%, about 79%, about 80%, about 85%, about 90%, about 95%or 99%complementarity.

[0030] The term "oligonucleotide" refers to polymers of nucleotides, and includes, but is not limited to, single-strand or double-strand nucleic acid molecules of DNA, RNA, or DNA / RNA hybrid, oligonucleotide strands containing regularly and irregularly alternating deoxyribosyl portions and ribosyl portions, as well as modified and naturally or unnaturally existing frameworks for such oligonucleotides.

[0031] The terms "oligonucleotide strand" , “strand” and "oligonucleotide sequence" as used herein can be used interchangeably, referring to a generic term for short nucleotide sequences having less than 35 bases (including nucleotides in deoxyribonucleic acid (DNA) or ribonucleic acid (RNA) ) . In a non-limiting example, the length of a strand can be any length from 16 to 35 nucleotides.

[0032] The term "target gene" as used herein can refer to nucleic acid sequences, transgenes, viral or bacterial sequences, chromosomes or extrachromosomal genes that are naturally present in organisms, and / or can be transiently or stably transfected or incorporated into cells and / or chromatins thereof. The target gene can be a protein-coding gene or a non-protein-coding gene (such as a microRNA gene and a long non-coding RNA gene) . In some embodiments, the target gene generally contains a promoter sequence, and the positive regulation for the target gene can be achieved by designing a double-stranded oligonucleotide having sequence identity (also called homology) to the promoter sequence, characterized as the up-regulation of expression of the target gene. "Target sequence" or “target site” used interchangeably refers to a sequence fragment in the sequence of a target gene, such as, a target gene promoter, which is homologous or complementary to a sense strand or an antisense strand of a double-stranded oligonucleotide. The target gene can also include one or more regulatory elements where one or more double-stranded oligonucleotides are designed to have sequence identity to a regulatory element. Non-limiting examples of one or more regulatory elements include: a promoter, an enhancer, a silencer, an insulator, a TATA box, a GC box, a CAAT box, a transcriptional start site, a DNA binding motif of a transcription factor or other protein that regulates transcription, and a 5’ untranslated region.

[0033] As used herein, the term "sense strand" of a double-stranded oligonucleotide refers to the strand having sequence homology or sequence identity with a fragment of the coding strand of the sequence of a target gene.

[0034] As used herein, the terms "antisense strand" of a double-stranded oligonucleotide refers to the strand having sequence complementary to the sense strand. Said antisense strand may interact with a target sequence to down-regulate or up-regulate gene expression, said target sequence may be a fragment of the coding strand of the sequence of a target gene.

[0035] The term "coding strand" as used herein refers to a DNA strand in the target gene which cannot be used for transcription, and the nucleotide sequence of this strand is the same as that of an RNA produced from transcription (in the RNA, T in DNA is replaced by U) . In some embodiments, the coding strand of the double strand DNA sequence of the target gene promoter described herein refers to a promoter sequence on the same DNA strand as the DNA coding strand of the target gene.

[0036] The term "template strand" as used herein refers to the other strand complementary to the coding strand in the double strand DNA of the target gene, i.e., the strand that, as a template, can be transcribed into RNA, and this strand is complementary to the transcribed RNA (Apairs with U and G pairs with C) . In the process of transcription, RNA polymerase binds to the template strand, moves along the 3'→5'direction of the template strand, and catalyzes the synthesis of the RNA along the 5'→3'direction. The template strand of the double strand DNA sequence of the target gene promoter described herein refers to a promoter sequence on the same DNA strand as the DNA template strand of the target gene.

[0037] As used herein, the term “locked nucleic acid (LNA) ” refers to a locked nucleic acid in which the 2′-oxygen and 4′-carbon atoms are joined by an extra bridge. As used herein, the term “BNA” refers to a 2'-O and 4'-aminoethylene bridged nucleic acid that can contain a five-membered or six-membered bridged structure with an N-O linkage. As used herein, the term “peptide nucleic acid (PNA) ” refers to a nucleic acid mimic with a pseudopeptide backbone composed of N- (2-aminoethyl) glycine units with the nucleobases attached to the glycine nitrogen via carbonyl methylene linkers.

[0038] The term "promoter" as used herein refers to a sequence which is spatially associated with a protein-coding or RNA-coding nucleic acid sequence and plays a regulatory role for the transcription of the protein-coding or RNA-coding nucleic acid sequence. Generally, a eukaryotic gene promoter contains 100 to 5000 base pairs, although this length range is not intended to limit the term "promoter" as used herein. Although the promoter sequence is generally located at the 5'terminus of a protein-coding or RNA-coding sequence, it may also exist in exon and intron sequences.

[0039] The term "transcription start site (TSS) " as used herein refers to a nucleotide marking the transcription start on the template strand of a gene. The transcription start site can appear on the template strand of the promoter region. Different variants of a gene may have different TSS, but with identical upstream sequences. Conventional means can be used to find the TSS in a gene, such as cap analysis of gene expression (CAGE) , oligo-capping and robust analysis of 5'-transcipt ends (5'-RACE) .

[0040] The term "identity" or "homology" as used herein means that one oligonucleotide strand (sense or antisense strand) of a double-stranded oligonucleotide has sequence similarity with a coding strand or template strand in a region of a target gene. As used herein, the "identity" or "homology" may be at least about 75%, about 79%, about 80%, about 85%, about 90%, about 95%or 99%. In some embodiments, the double-stranded oligonucleotide has 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 residues that are different from a reference sequence. To determine the percent identity of two nucleic acid sequences, the sequences are aligned for optimal comparison purposes (e.g., gaps can be introduced in one or both of a first and a second nucleic acid sequence for optimal alignment and non-homologous sequences can be disregarded for comparison purposes) . The nucleotides at corresponding nucleotide positions are then compared. When a position in the first sequence is occupied by the same nucleotide as the corresponding position in the second sequence, then the molecules are identical at that position. The percent identity between the two sequences is a function of the number of identical positions shared by the sequences, taking into account the number of gaps, and the length of each gap, which need to be introduced for optimal alignment of the two sequences. The comparison of sequences and determination of percent identity between two sequences can be accomplished using a mathematical algorithm, such as using the Needleman and Wunsch ( (1970) J. Mol. Biol. 48: 444-453) algorithm which has been incorporated into the GAP program in the GCG software package (available at www. gcg. com) . The percent identity between two nucleotide sequences can be determined using the algorithm of E. Meyers and W. Miller ( (1989) CABIOS, 4: 11-17) which has been incorporated into the ALIGN program (version 2.0) , using a PAM120 weight residue table, a gap length penalty of 12 and a gap penalty of 4. It is understood that the molecules described herein may have additional conservative or non-essential nucleic acid substitutions, which do not have a substantial effect on their functions.

[0041] The term “sequence specific mode” as used herein means a binding or hybridization way of two nucleic acid fragments according to their nucleotide sequence, e.g., a Watson-Crick manner (such as A pairs with T, A pairs with U, and C pairs with G) or any other manner allowing the formation of a duplex (such as Hoogsteen or reverse Hoogsteen base pairing) .

[0042] The term "overhang" as used herein refers to non-base-paired nucleotides at the terminus (5'or 3') of an oligonucleotide strand, which is formed by one strand extending out of the other strand in a double-stranded oligonucleotide. A single-strand region extending out of the 3'terminus and / or 5'terminus of a duplex is referred to as an overhang.

[0043] The term “natural overhang” as used herein refers to an overhang which consists of one or more nucleotides identical to or complementary to the corresponding position on the target sequence. A natural overhang on a sense strand consists of one or more nucleotides identical to the corresponding position on the DNA or mRNA target. A natural overhang on a sense strand consists of one or more nucleotides identical to the corresponding position on the DNA or mRNA target. A natural overhang on an antisense strand consists of one or more nucleotides complementary to the corresponding position on the DNA or mRNA target.

[0044] As used herein, the term “isolated, ” refers to material that is removed from its original or native environment (e.g., the natural environment if it is naturally occurring) . For example, a naturally-occurring polynucleotide or polypeptide present in a living animal is not isolated, but the same polynucleotide or polypeptide, separated by human intervention from some or all of the co-existing materials in the natural system, is isolated. Such polynucleotide could be part of a vector and / or such polynucleotide or polypeptide could be part of a composition, and still be isolated in that such vector or composition is not part of the environment in which it is found in nature. An isolated molecule may be obtained, for example, by extraction from a natural source, by expression of a recombinant nucleic acid, or by chemically synthesizing the molecule. For example, the term "isolated RNA" refers to RNA molecules which are substantially free of other cellular material, or culture medium when produced by recombinant techniques, or substantially free of chemical precursors or other chemicals when chemically synthesized. In some embodiments, the materials of the present application, such as the polynucleotides, oligonucleotides and / or double-stranded oligonucleotides of the present application, are isolated.

[0045] As used herein, the terms "gene activation" or "activating gene expression" and "gene up-regulation" or "up-regulating gene expression" can be used interchangeably, and mean an increase in transcription, translation, expression or activity of a certain nucleic acid as determined by measuring the transcriptional level, mRNA level, protein level, enzymatic activity, methylation state, chromatin state or configuration, translation level or the activity or state in a cell or biological system of a gene. These activities or states can be determined directly or indirectly. In addition, "gene activation" , "activating gene expression" , "gene up-regulation" or "up-regulating gene expression" refers to an increase in activity associated with a nucleic acid sequence, regardless of the mechanism of such activation. For example, gene activation occurs at the transcriptional level to increase transcription into RNA and the RNA is translated into a protein, thereby increasing the expression of the protein.

[0046] As used herein, the terms "small activating RNA" , "saRNA" , and "small activating nucleic acid molecule" can be used interchangeably, and refer to a nucleic acid molecule that can up-regulate target gene expression and can be composed of a first nucleic acid fragment (sense strand) containing a nucleotide sequence having high sequence identity to the non-coding nucleic acid sequence (e.g., a promoter or an enhancer) of a target gene and a second nucleic acid fragment (antisense strand) containing a nucleotide sequence complementary to the first nucleic acid fragment, wherein the first nucleic acid fragment and the second nucleic acid fragment form a duplex. The saRNA can also be comprised of a synthesized or vector-expressed single-strand RNA molecule that can form a hairpin structure by two complementary regions within the molecule, wherein the first region contains a nucleotide sequence having sequence identity to the target sequence of a promoter of a gene, and the second region contains a nucleotide sequence which is complementary to the first region. The length of the duplex region of the saRNA is typically about 15 to about 35, about 16 to about 32, about 17 to about 30, about 18 to about 28, about 19 to about 26, about 20 to about 24, and about 21 to about 22 base pairs, and typically about 15, about 16, about 17, about 18, about 19, about 20, about 21, about 22 or about 23 base pairs. In addition, the terms "saRNA" , "small activating RNA" , and "small activating nucleic acid molecule" also contain nucleic acids other than the ribonucleotide, including, but not limited to, modified nucleotides or analogues.

[0047] As used herein, the terms “gene silencing” , “knockdown of gene expression” , “gene downregulation” and “downregulating gene expression” can be used interchangeably, and means a decrease or downregulation in transcription, translation, expression or activity of a certain nucleic acid sequence as determined by measuring the transcription level, mRNA level, protein level, enzymatic activity, methylation state, chromatin state or configuration, translation level or the activity or state in a cell or biological system of a gene. These activities or states can be determined directly or indirectly. In addition, “gene downregulation” or “downregulating gene expression” refers to a decrease in activity associated with a nucleic acid sequence, regardless of the mechanism of such downregulation. For example, gene downregulation occurs at the transcriptional level to decrease or silence transcription into RNA and the RNA is not translated into a protein, thereby decreasing or silencing the expression of the protein.

[0048] As used herein, the terms “short interfering RNA” , “siRNA” and “silencing RNA” can be used interchangeably and refer to a ribonucleic acid molecule that can downregulate, knockdown, or silence target gene expression. It can be a double strand nucleic acid molecule. siRNA binds to target mRNA mainly in the cytoplasm to downregulate gene expression post-transcriptionally via the RNA interference (RNAi) mechanism.

[0049] The terms “oligonucleotide modulator” and “oligonucleotide agent” are used interchangeably, and refer to an oligonucleotide-containing substance which at least comprises or consists of one or more double-stranded oligonucleotide of the invention and has the activity of modulating target gene expression, and further comprises other oligonucleotide moieties / components (such as ACO) or non-oligonucleotide moieties / components (such as lipid) conjugated with the double-stranded oligonucleotide (s) . In certain embodiments, the oligonucleotide modulator comprises an RNA (such as the saRNA and siRNA of the invention) , a DNA, a BNA, an LNA, a PNA or a mixture thereof.

[0050] As used herein, the term “atarget site” refers to a specific sequence on the mRNA or genomic DNA molecule that is complementary to the sequence of a siRNA or a saRNA. This site is where the siRNA or saRNA binds, leading to gene silencing or activation, respectively. As used herein, the term “a polynucleotide” in the context of double-stranded oligonucleotide means a polynucleotide which encodes a saRNA or siRNA, for example a DNA.

[0051] As used herein, the terms “p21” , “p21 gene” , “CDKN1A” , or “CDKN1A gene” refers to a human gene. As used herein, the term “p21” and “CDKN1A” can be used interchangeably. As used herein, the term "CDKN1A mRNA" refers to a message RNA (mRNA) generated from the expression of CDKN1A gene, or the transcription of CDKN1A gene. The cell cycle inhibitor p21 (CDKN1A) encoded by CDKN1A gene is a protein playing multiple roles not only in the DNA damage response, but also in many cellular processes during unperturbed cell growth. It has been reported that CDKN1A produces a treatment effect on RA by mediating proliferation and invasion of fibroblast-like synoviocytes (X Gang et al., 2018) .

[0052] As used herein, the terms “Sod1” or “Sod1 gene” refers to a mouse or rat gene. As used herein, the term “Sod1 mRNA” refers to a mRNA generated from the expression of Sod1 gene, or the transcription of Sod1 gene.

[0053] As used herein, the term "baseline expression of CDKN1A gene" refers to the expression of CDKN1A gene of a parallel reference (such as a cell or an individual) without or before the treatment of the saRNA.

[0054] As used herein, the term "baseline expression of Sod1 gene" refers to the expression of Sod1 gene of a parallel reference (such as a cell or an individual) without or before the treatment of the siRNA.Double-stranded oligonucleotide

[0055] According to the present application, the term “double-stranded oligonucleotide” refers to the oligonucleotide molecule of the present application comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded structure which may comprise 0, 1, 2 or 3 mismatches, and capable of modulating the expression of a selected gene associated to a joint disease. In some embodiments of the present application, the double-stranded oligonucleotide is a saRNA capable of up-regulating or increasing the expression of a target gene associated to a joint disease. In some embodiments of the present application, the double-stranded oligonucleotide is a siRNA capable of down-regulating or decreasing the expression of a target gene associated to a joint disease.saRNA

[0056] In some embodiments of the present application, saRNA is capable of upregulating or increasing the expression of a target gene associated to a joint disease in a joint cell or tissue. In particular, the saRNA comprises a sense strand and an antisense strand forming a double strand which comprises 0, 1, 2 or 3 mismatches, wherein the antisense strand comprises a region of complementarity to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from the selected region of a target gene, and / or wherein the sense strand comprises a region of homology to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from the selected region of the target gene.

[0057] As a beneficial consequence, a target sequence (e.g., a nucleic acid sequence on the promoter region of the target gene which the saRNA can complement to) , upon interacting with the saRNA, can activate / upregulate the mRNA transcript by at least 10%, for example, at least 20%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 150%, at least 200%, or about 250%, as compared to a baseline level of the mRNA transcript in a cell. In one embodiment, mRNA transcript of the target gene is increased by at least 50%. Based at least in part on these discoveries, the present application relates to saRNA, compositions, and pharmaceutical compositions for activating / upregulating the target mRNA transcript by at least 10%as compared to baseline levels of the mRNA transcript. Also provided herein are methods for preventing or treating a joint disease or condition induced or caused by low expression of the corresponding target protein, a target gene mutation, and / or low or abnormal target mRNA level in an individual comprising administering to the individual any of the saRNA, compositions, and / or pharmaceutical compositions described herein.

[0058] In some embodiments of the present application, the target gene is CDKN1A gene, which encodes CDKN1A protein playing multiple roles in many cellular processes during cell proliferation. It has been reported in some researches that CDKN1A produces a treatment effect on RA. CDKN1A is downregulated in rheumatoid arthritis, and its overexpression can significantly inhibit the proliferation and invasion of RA fibroblast-like synoviocytes (HFLS-RA) , arresting the cell cycle progression of HFLS-RA at the G0 / G1 phase, and downregulating the expression of tumor necrosis factor (TNF) -α and interleukin (IL) -6, while upregulating the expression of IL-10. Additionally, overexpression of CDKN1A can inhibit the expression of phosphorylated signal transducer and activator of transcription 1 (pSTAT-1) . miR-146a is highly expressed in RA tissues and can negatively regulate CDKN1A. Inhibition of miR-146a can suppress cell proliferation and invasion, while enhancing the expression of IL-10 but inhibiting the expression of IL-6, TNF-α, and pSTAT-1 (X Gang et al., 2018) . By exploring and validating therapeutic molecules based on ferroptosis-related genes, the study found that CDKN1A is one of the two central genes, which is downregulated in RA synovial tissues. The study also found that the natural compound withaferin-ashowed the highest negative CMap score, and in vitro and in vivo experiments confirmed its anti-arthritic effects (Jianzhu Wang et al., 2010) . In addition, CDKN1A, as a primary target of p53, encodes the p21 protein, which is a cyclin-dependent kinase inhibitor that can block cell proliferation by inhibiting cyclin E-CDK2 at the G1 / Sphase. In the synovial tissues and synovial cells of RA patients, the transcription of p21 is suppressed, and increasing the expression of p21 can inhibit the proliferation of fibroblast-like synoviocytes from RA patients. These studies suggest that CDKN1A or p21 may play an important role in the treatment of rheumatoid arthritis, potentially providing new therapeutic targets by regulating cell proliferation, invasion, and the expression of inflammatory factors.

[0059] In some embodiments, the target sequence for designing the saRNA is a region in the promoter of CDKN1A gene, from -1000 bp upstream of a TSS to +3 bp downstream of the TSS. The TSS is represented by a curved arrow. Putative human CDKN1A promoter sequence (5'-3') (SEQ ID NO: 21) :

[0060] In some embodiments, the functional saRNAs capable of activating / up-regulating the level of CDKN1A mRNA were not randomly distributed on the target sequence but clustered in specific hotspot regions. Only some regions on the promoter of CDKN1A gene are in favor of gene activation by saRNAs. A hotspot region herein is defined by a nucleic acid region (such as in the promoter) on the target gene of the saRNAs, where the full-length target sequences of a plurality of the functional saRNAs are located and enriched. The hotspot region of the CDKN1A gene is selected from a group consisting of SEQ ID NO: 22-29, wherein the sequence of the target region in the CDKN1A promoter is from -893 bp to -801 bp (SEQ ID NO: 22) , -717 bp to -632 bp (SEQ ID NO:23) , -585 bp to -551 bp (SEQ ID NO: 24) , -554 bp to -504 bp (SEQ ID NO: 25) , -514 bp to -485 bp (SEQ ID NO: 26) , -442 bp to -405 bp (SEQ ID NO: 27) , -352 bp to -313 bp (SEQ ID NO: 28) , or -325 bp to -260 bp (SEQ ID NO: 29) , respectively. The hotspot regions are listed in Table A. In some embodiments, the saRNA (1) has a GC content of 35-65%; (2) does not contain 5 or more consecutive identical nucleotides; and (3) does not contain 3 or more duplicated or triplicated nucleotides. Table A. Target sequences of hotspot regions of CDKN1A promoter

[0061] The saRNAs of the oligonucleotide agent described herein include a RNA strand (the antisense strand) having a region which is 60 nucleotides or less in length, i.e., 15-40 nucleotides in length, generally 19-25 nucleotides in length, which region is substantially complementary to at least part of a promoter of a CDKN1A gene differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from the selected region of CDKN1A gene. The use of these saRNAs enables the targeted upregulation of mRNA levels of genes that are implicated in joint pathologies associated with CDKN1A expression in mammals. Very low dosages of CDKN1A saRNAs in particular can specifically and efficiently mediate RNAa, resulting in significant upregulation of expression of a CDKN1A gene, e.g., at least 10%as compared to the baseline expression level without saRNA treatment. Thus, methods and oligonucleotide agents including these saRNAs are useful for treating pathological processes that can be mediated by upregulating CDKN1A, such as in the treatment of a joint disease associated with lowed CDKN1A levels, e.g., RA.

[0062] In some embodiments, the continuous oligonucleotide sequence of the saRNA has five or less, i.e., 5, 4, 3, 2, 1, or 0 nucleotide differences or mismatches relative to the equal length portion of CDKN1A promoter. In some embodiments, the continuous oligonucleotide sequence of the sense strand of saRNA has three or less, i.e., 3, 2, 1, or 0 nucleotide differences or mismatches relative to the equal length portion of CDKN1A promoter. In some embodiments, the continuous oligonucleotide sequence of the antisense strand of saRNA has three or less, i.e., 3, 2, 1, or 0 nucleotide differences or mismatches relative to the equal length portion of CDKN1A promoter. In some embodiments, the equal length region of CDKN1A gene is located in a region of SEQ ID NO: 21. In some embodiments, the equal length region of CDKN1A gene is located in a region selected from a group consisting of SEQ ID NO: 22-29.

[0063] In some embodiments, the differences or mismatches are located in the middle or 3’ terminus of the oligonucleotide sequence of the saRNA. Methods and principles of saRNA molecule design are well known to those skilled in the art and are described in detail in, for example, Place et. al., Molecular Therapy Nucleic Acids (2012) 1, e15; and Li et. al., PNAS, 2006, vol. 103, no. 46, 17337–17342, which are herein incorporated by reference in their entireties.

[0064] In some embodiments, the saRNA disclosed herein comprises a sense strand and an antisense strand. The sense strand and / or the antisense strand comprise complementary regions capable of forming a double-stranded nucleic acid structure that increases the CDKN1A transcript level in a cell via the RNAa mechanism. The sense strand and the antisense strand of the saRNA can exist either on two different nucleic acid strands or on one nucleic acid strand (e.g., a contiguous nucleic acid sequence) . When the sense strand and the antisense strand are located on two different strands, at least one strand of the saRNA has a 3'overhang of 0 to 6 nucleotides in length, such that the overhangs of 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 nucleotides in length, and in some cases, both strands have a 3'overhang of 2 or 3 nucleotides in length. The nucleotide of the overhang is, in some cases thymine deoxyribonucleotide (dT) , or in some cases, natural overhangs which are nucleotides selected from or complementary to the corresponding position on the DNA target. When the sense strand and the antisense strand are located on one nucleic acid strand, in some cases, the saRNA is a hairpin single-stranded nucleic acid molecule, where the complementary regions of the sense strand and the antisense strand form a double-stranded nucleic acid structure with each other.

[0065] In the saRNA disclosed herein, in some embodiments, the sense strand has a length ranging from 10 to 60 nucleotides. For example, in some embodiments, the sense strand and the antisense strand, independently comprise a length of 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 or 35 nucleotides. In some embodiments, the antisense strand has a length ranging from 10 to 60 nucleotides. For example, in some embodiments, the sense strand and the antisense strand, independently comprise a length of 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 or 35 nucleotides.

[0066] In some embodiments, the antisense strand and / or the sense strand disclosed herein is capable of interacting with a target nucleic acid sequence in the promoter of CDKN1A gene in a sequence specific manner, meaning that the antisense strand and / or the sense strand is capable of undergoing hybridization to a target nucleic acid through hydrogen bonding. In some embodiments, an antisense strand and / or a sense strand has a nucleotide sequence that, when written in the 5'to 3'direction, comprises the reverse complement of the target portion of a target nucleic acid to which it is targeted, e.g., the target portion in a fragment of a CDKN1A gene promoter.

[0067] In some embodiments, the sense strand of the saRNA comprises at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 8, and / or the antisense strand of the saRNA comprises at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 2. In some embodiments, the saRNA has a nucleotide sequence that is at least 60% (e.g., at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%or 100%) identical to the nucleotide sequences of RD-12173 whose antisense strand has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 that has complementarity with a fragment the of the sense strand of SEQ ID NO: 8.

[0068] In some embodiments, the sense strand of the saRNA comprises at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 1, and / or the antisense strand of the saRNA comprises at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 2. In some embodiments, the saRNA has a nucleotide sequence that is at least 60% (e.g., at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%or 100%) identical to the nucleotide sequences of RD-16447 whose antisense strand has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 that has complementarity with a fragment of the C5x5 conjugated sense strand of SEQ ID NO: 1 or an ACO conjugated sense strand. In some embodiments, the ACO conjugated sense strand is a sense strand of SEQ ID NO: 8 conjugated with an ACO of SEQ ID NO: 5. In some embodiments, the ACO is directly conjugated to the sense strand or via a linking component, such as a S9 with triethylene glycolyl:

[0069] saRNAs targeting CDKN1A gene are also selected as described in WO2019196883A1 and WO2022166815A1 and are hereby incorporated by reference in its entirety.siRNA

[0070] In some embodiments of the present application, siRNA is capable of downregulating or decreasing the expression of a target gene associated to a joint disease in a joint cell or tissue. In particular, the siRNA comprises a sense strand and an antisense strand forming a double strand which comprises 0, 1, 2 or 3 mismatches, wherein the antisense strand comprises a region of complementarity to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from the selected region of a target gene, and / or wherein the sense strand comprises a region of homology to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from the selected region of the target gene.

[0071] As a beneficial consequence, a target sequence, upon interacting with the siRNA, can inhibit / downregulate the mRNA transcript of the target gene by at least 10%, for example, at least 20%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 93%, at least 96%, at least 99%, or about 100%, as compared to a baseline level of the mRNA transcript. In one embodiment, the mRNA transcript of the target gene is decreased by at least 80%. Based at least in part on these discoveries, the present application relates to siRNA, compositions, and pharmaceutical compositions for inhibiting / downregulating the mRNA transcript of the target gene by at least 10%in a cell of joint, as compared to baseline levels of the mRNA transcript of the target gene. Also provided herein are methods for preventing or treating a disease or condition induced by over-expression of a protein encoded by the target gene, a gene mutation in the target gene, and / or high or abnormal target gene, mRNA transcript or protein levels in an individual comprising administering to the individual any of the siRNA, compositions, and / or pharmaceutical compositions described herein.

[0072] The double-stranded siRNAs described herein include a RNA strand (the antisense strand) having a region which is 60 nucleotides or less in length, i.e., 15-40 nucleotides in length, generally 19-25 nucleotides in length, which region is substantially complementary to at least part of a mRNA transcript of a target gene differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from the selected region of the gene. The use of these siRNAs enables the targeted degradation of mRNAs of genes that are implicated in pathologies associated with the target gene expression in mammals. siRNAs can specifically and efficiently mediate RNAi, resulting in significant downregulation of expression of a joint disease associated gene.

[0073] In one aspect, an RNA interference agent includes a single-stranded RNA that interacts with a target mRNA sequence to direct the cleavage of the target mRNA. Without wishing to be bound by theory, long double-stranded RNA introduced into plants and invertebrate cells is broken down into siRNA by a Type III endonuclease known as Dicer (Sharp et al., Genes Dev. 2001, 15:485) . Dicer, a ribonuclease-III-like enzyme, processes the dsRNA into 19-23 base pair siRNAs with characteristic two base 3’ overhangs (Bernstein, et al., (2001) Nature 409: 363) . The siRNAs are then incorporated into an RNA-induced silencing complex (RISC) where one or more helicases unwind the siRNA duplex, enabling the complementary antisense strand to guide target recognition (Nykanen, et al., (2001) Cell 107: 309) . Upon binding to the appropriate target mRNA, one or more endonucleases within the RISC cleaves the target to induce silencing (Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15: 188) .

[0074] In some embodiments, the continuous oligonucleotide sequence of the siRNA has five or less, i.e., 5, 4, 3, 2, 1, or 0 nucleotide differences or mismatches relative to the equal length portion of the mRNA of a target gene. In some embodiments, the continuous oligonucleotide sequence of the sense strand of siRNA has three or less, i.e., 3, 2, 1, or 0 nucleotide differences or mismatches relative to the equal length portion of the target mRNA. In some embodiments, the continuous oligonucleotide sequence of the antisense strand of siRNA has three or less, i.e., 3, 2, 1, or 0 nucleotide differences or mismatches relative to the equal length portion of the target mRNA

[0075] In some embodiments, the target gene or mRNA disclosed herein contains at least one nucleotide mutation. In some embodiments, the mRNA disclosed herein contains at least one nucleotide mutation upper stream and / or downstream the targeting site of the siRNA. In some embodiments, the target mRNA disclosed herein contains at least one nucleotide mutation on the targeting site of the siRNA. In some embodiments, the target mRNA disclosed herein does not contain any nucleotide mutation. In some embodiments, the differences or mismatches are located in the middle or 3’ terminus of the oligonucleotide sequence of the siRNA. Methods and principles of siRNA molecule design are well known to those skilled in the art.

[0076] In some embodiments, the siRNA disclosed herein comprises a sense strand and an antisense strand. The sense strand and the antisense strand comprise complementary regions capable of forming a double-stranded nucleic acid structure that decreases the transcript level of the target gene in a joint cell via the RNAi mechanism. The sense strand and the antisense strand of the siRNA can exist either on two different nucleic acid strands or on one nucleic acid strand (e.g., a contiguous nucleic acid sequence) . When the sense strand and the antisense strand are located on two different strands, at least one strand of the siRNA has a 3'overhang of 0 to 6 nucleotides in length, such that the overhangs of 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 nucleotides in length, and in some cases, both strands have a 3'overhang of 2 or 3 nucleotides in length. The nucleotide of the overhang is, in some cases thymine deoxyribonucleotide (dT) , or in some cases, natural overhangs which are nucleotides selected from or complementary to the corresponding position on the DNA target. When the sense strand and the antisense strand are located on one nucleic acid strand, in some cases, the siRNA is a hairpin single-stranded nucleic acid molecule, where the complementary regions of the sense strand and the antisense strand form a double-stranded nucleic acid structure with each other.

[0077] In the siRNA disclosed herein, in some embodiments, the sense strand has a length ranging from 10 to 60 nucleotides. For example, in some embodiments, the sense strand and the antisense strand, independently comprise a length of 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 or 35 nucleotides. In some embodiments, the antisense strand has a length ranging from 10 to 60 nucleotides. For example, in some embodiments, the sense strand and the antisense strand, independently comprise a length of 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 or 35 nucleotides.

[0078] In some embodiments, the antisense strand disclosed herein is capable of interacting with a target nucleic acid sequence of a mRNA of a target gene in a sequence specific manner, meaning that the antisense strand is capable of undergoing hybridization to a target nucleic acid through hydrogen bonding. In some embodiments, an antisense strand has a nucleotide sequence that, when written in the 5'to 3'direction, comprises the reverse complement of the target portion of a target nucleic acid to which it is targeted. In certain such embodiments, an antisense strand has a nucleotide sequence that, when written in the 5'to 3'direction, comprises the reverse complement of the target portion in a fragment of a target gene transcript. Chemical modifications

[0079] In the double-stranded oligonucleotides and the ACO disclosed herein, all nucleotides may be natural or non-chemically modified nucleotides, or at least one nucleotide is a chemically modified nucleotide. Non-limiting examples of the chemical modification include one or more of a combination of the following: (1) modification of a phosphodiester bond in the backbone between two nucleotides in the nucleotide sequence; (2) modification of 2'-OH of the ribose in the nucleotide sequence; and (3) modification of a base in the nucleotide.

[0080] The chemical modification described herein is well-known to those skilled in the art. The modifications disclosed herein stabilize the oligonucleotide structure, maintaining high specificity and high affinity for base pairing.

[0081] In some embodiments, the double-stranded oligonucleotide and the ACO of the present application includes at least one modified backbone include, for example, phosphorothioates, chiral phosphorothioates, phosphorodithioates, phosphotriesters, aminoalkylphosphotriesters, methyl and other alkyl phosphonates including 3′-alkylene phosphonates and chiral phosphonates, phosphinates, phosphoramidates including 3′-amino phosphoramidate and aminoalkylphosphoramidates, thionophosphoramidates, thionoalkylphosphonates, thionoalkylphosphotriesters, and boranophosphates having normal 3′-5′linkages, 2′-5′linked analogs of these, and those having inverted polarity wherein the adjacent pairs of nucleoside units are linked 3′-5′to 5′-3′or 2′-5′to 5′-2′.

[0082] In some embodiments, the double-stranded oligonucleotide and the ACO of the present application includes at least one chemically modified nucleotide which is modified at 2'-OH in pentose of a nucleotide, i.e., the introduction of certain substituents at the hydroxyl position of the ribose, such as 2'-fluoro modification, 2'-oxymethyl modification, 2'-oxyethylidene methoxy modification, 2, 4'-dinitrophenol modification, locked nucleic acid, 2'-amino modification or 2'-deoxy modification, e.g., a 2′-deoxy-2′-fluoro modified nucleotide, a 2′-deoxy-modified nucleotide.

[0083] In some embodiments, the double-stranded oligonucleotide or the ACO of the present application includes at least one chemically modified nucleotide which is modified at the base of the nucleotide, e.g., 5 '-bromouracil modification, 5'-iodouracil modification, N-methyluracil modification, or 2, 6-diaminopurine modification.

[0084] In some embodiments, the chemical modification of the double-stranded oligonucleotide is an addition of a (E) -vinylphosphonate moiety at the 5’ end of the sense or antisense sequence. In some embodiments, the chemical modification of at least one chemically modified nucleotide is an addition of a 5-methyl uracil or 5-methyl cytosine moiety at the 5’ end of the sense or antisense sequence.

[0085] In some embodiments, the double-stranded oligonucleotide of the present application includes at least one nucleotide being a nucleic acid analog, e.g., a locked nucleotide, an abasic nucleotide, a 2′-amino-modified nucleotide, a 2′-alkyl-modified nucleotide, a morpholino nucleotide, a phosphoramidate, a non-canonical base nucleotide, or an unnatural nucleotide analog.

[0086] In some embodiments, the double-stranded oligonucleotide of the present application is chemically modified to enhance stability or other beneficial characteristics. The nucleic acids featured in the present application may be synthesized and / or modified by conventional methods, such as those described in “Current protocols in nucleic acid chemistry, ” Beaucage, S. L. et al. (Edrs. ) , John Wiley &Sons, Inc., New York, N.Y., USA, which is hereby incorporated herein by reference.Conjugate agent and delivery moieties

[0087] In addition, to facilitate entry of the double-stranded oligonucleotide into a cell, chemical delivery moieties may be introduced at the ends of the sense or antisense strands of the double-stranded oligonucleotide on the basis of the above modifications to facilitate action through a cell membrane composed of lipid bilayers and gene promoter regions within the nuclear membrane and nucleus. Therefore, the current disclosure also provides an oligonucleotide agent comprising the oligonucleotide and at least one delivery moiety.

[0088] In certain embodiments, oligonucleotides disclosed in the present application are covalently attached to one or more conjugate moieties. In certain embodiments, delivery moieties modify one or more properties of the attached oligonucleotide, including but not limited to pharmacodynamics, pharmacokinetics, stability, binding, absorption, tissue distribution, cellular distribution, cellular uptake, charge and clearance. In certain embodiments, delivery moieties impart a new property on the attached oligonucleotide, e.g., fluorophores or reporter groups that enable detection of the oligonucleotide. Certain delivery moieties and conjugate moieties have been described previously, for example: an accessory oligonucleotide (ACO, WO2023280190A1 and PCT / CN2024 / 084814) , lipid (fatty acid, WO2024002046A1) , cholesterol moiety (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556) , cholic acid (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4, 1053-1060) , a thioether, e.g., hexyl-S-tritylthiol (Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1993, 3, 2765-2770) , a thiocholesterol (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538) , an aliphatic chain, e.g., do-decan-diol or undecyl residues (Saison-Behmoaras et al., EMBO 1, 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54) , a phospholipid, e.g., di-hexadecyl-rac-glycerol or triethyl-ammonium 1, 2-di-O-hexadecyl-rac-glycero-3-H-phosphonate (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783) , a polyamine or a polyethylene glycol chain (Manoharan et al., Nucleosides &Nucleotides, 1995, 14, 969-973) , or adamantane acetic acid, a palmityl moiety (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237) , an octadecylamine or hexylamino-carbonyl-oxycholesterol moiety (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937) , a tocopherol group (Nishina et al., Molecular Therapy Nucleic Acids, 2015, 4, e220; and Nishina et al., Molecular Therapy, 2008, 16, 734-740) , or a GalNAc cluster (e.g., WO2024002046A1) .

[0089] In some embodiments, the oligonucleotide of the present application relates to the sense strand or the antisense strand of the double-stranded oligonucleotide that is conjugated to one or more delivery moieties selected from: intercalators, reporter molecules, polyamines, polyamides, peptides, carbohydrates, vitamin moieties, polyethylene glycols, thioethers, polyethers, cholesterols, thiocholesterols, cholic acid moieties, folate, lipids, phospholipids, biotin, phenazine, phenanthridine, anthraquinone, adamantane, acridine, fluoresceins, rhodamines, coumarins, fluorophores, and dyes.

[0090] In some embodiments, a delivery moiety comprises an active drug substance, for example, aspirin, warfarin, phenylbutazone, ibuprofen, suprofen, fen-bufen, ketoprofen, (S) - (+) -pranoprofen, carprofen, dansylsarcosine, 2, 3, 5-triiodobenzoic acid, fingolimod, flufenamic acid, folinic acid, a benzothiadiazide, chlorothiazide, a diazepine, indo-methicin, a barbiturate, a cephalosporin, a sulfa drug, an antidiabetic, an antibacterial or an antibiotic.

[0091] In some embodiments, the oligonucleotide of the present application is conjugated to one or more delivery moieties selected from: an oligonucleotide, a lipid, a fatty acid, a fluorophore, a ligand, a saccharide, a peptide, and an antibody.

[0092] In some embodiments, the sense strand or the antisense strand of the oligonucleotide agent is conjugated to one or more delivery moieties selected from a single-stranded oligonucleotide, a cell-penetrating peptide, polyethylene glycol, an alkaloid, a tryptamine, a benzimidazole, a quinolone, an amino acid, a cholesterol, glucose and N-acetylgalactosamine.

[0093] In certain embodiments, the double-stranded oligonucleotide is conjugated to a lipid selected from C4-30 fatty acid. In certain embodiments, the delivery moiety is a lipid / fatty acid having a saturated or unsaturated, linear or branched C16 carbon chain. In certain embodiments, said delivery moiety is fatty acid comprising a carbon chain length of 16, 18 or 22 carbon atoms. In certain embodiments, the delivery moiety is selected from lipophilic moieties as described in WO2024002046A1. In certain embodiments, the double-stranded oligonucleotide may comprise 1, 2, 3, 4, or even more oligonucleotides separately conjugated to 1, 2, 3, 4 or even more of the delivery moieties via 1, 2, 3, 4 or even more linking moieties.

[0094] According to another embodiment, the double-stranded oligonucleotide agents further comprise at least one ACO conjugated with the oligonucleotide (s) . The term “accessory oligonucleotide” herein means a non-targeting single-stranded oligonucleotide having at least 6 nucleotides with or without one or more linking components conjugated to another oligonucleotide. The ACO component is not designed to specifically target any complementary nucleic acid sequence in the subject to be administered to. The ACO component can be chemically-modified on its backbone, nucleoside, base or other positions, e.g., a phosphorothioate, mesyl phosphoramidate or boranophosphate backbone, a 2′-fluoro-2′-deoxynucleoside (2′-F) , a 2′-O-methyl (2′-O-Me) , a 2′-O- (2-methoxyethyl) (2′-O-MOE) , locked nucleic acid (LNA) , bridged nucleic acid (BNA) , peptide nucleic acid (PNA) , 5’ - (E) ‐vinylphosphonate moiety, 5-methyl uracil, 5-methyl cytosine moiety, etc., to impart physiochemical properties conducive to improve the oligonucleotide (s) ’ bioavailability and delivery. Covalent linking components can be natural or unnatural nucleotides, ethylglycol, carbohydrates, alkyl chains, or any other linker used to covalently connect any two oligonucleotides positioned on the 3’ -or 5’ -terminus of one or both of the strands within the oligonucleotide agent. ACO and its conjugation with dsRNA may be described and prepared according to those disclosed in WO2023280190A1, which is herein incorporated by reference in its entirety. In certain embodiments, ACO conjugates to the 3'end of sense strand of the double-stranded oligonucleotide.

[0095] In some embodiments, the linking component conjugating the double-stranded oligonucleotide and ACO is a S9 linker, as shown in the present application:

[0096] In some embodiments, the sense strand or the antisense strand of the double-stranded oligonucleotide is conjugated to C5x5, as shown below:

[0097] In certain embodiments, C5x5 conjugates to the 5'end of sense strand. In certain embodiments, the 3'end of the sense strand of the double-stranded oligonucleotide conjugates to one or more ACO, and the 5'end of the sense strand of the double-stranded oligonucleotide conjugates to one or more C5x5.

[0098] The delivery moieties can be purchased or can be synthesized via procedures known in the art, for example WO2024002046A1 is fully incorporated herein for synthetic process of C5x5; and S9 is commercially available, such as can be purchased from Wuhu Huaren Science and Technology Co., Ltd (HR-00214009, Anhui, China) .

[0099] In certain embodiments, the 3'end of the sense strand of the double-stranded oligonucleotide conjugates to one or more ACO, and the 5'end of the sense strand of the double-stranded oligonucleotide conjugates to one or more C5x5.

[0100] In certain embodiments, oligonucleotides disclosed in the present application are covalently attached to one or more conjugate moieties through linking moieties. The linking moieties, when present, can be selected from the group consisting of -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C1-C12) alkyl) -, -N ( (C1-C12) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2O-, -P (O) (O-) O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O-, -S (O) -O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH- (C1-C22) alkylene-NH-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (O-) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (O-) O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, - (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-, -O-P (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -O-P (O) -O- (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, -OP (O) (S) O- (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-and -O-S (O) - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-; wherein the - (C1-C22) alkylene-contained in the linking moiety can be an alkylene group comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 5 to 12 carbon atoms, or from 6 to 10 carbon atoms. In one embodiment, the delivery moiety is directly linked with the oligonucleotide when the linking moiety is a direct bond.

[0101] In some embodiments, the double-stranded oligonucleotide conjugated to one or more delivery moieties disclosed in the embodiments, e.g., C5x5 and ACO. In some embodiments, the double-stranded oligonucleotide is directly contacted, transferred, delivered or administrated to a cell or a patient.DNA encoding saRNA or siRNA

[0102] In certain embodiments, the present application relates to a nucleic acid or polynucleotide encoding the saRNA which can activate or up-regulate the expression of a target gene, e.g., CDKN1A gene in a cell, preferably by at least 10% (e.g., as compared to baseline expression of the CDKN1A gene) . In certain embodiments, the nucleic acid is a DNA encoding a saRNA. The vectors disclosed herein comprise a fragment of DNA that encodes a saRNA of the present application.

[0103] In certain embodiments, the present application relates to a nucleic acid or polynucleotide encoding the siRNA which can inhibit or down-regulate the expression of a target gene, e.g., Sod1 gene in a cell, preferably by at least 10% (e.g., as compared to baseline expression of the Sod1 gene) . In certain embodiments, the nucleic acid is a DNA encoding a siRNA. The vectors disclosed herein comprise a fragment of DNA that encodes a siRNA of the present application.Cell comprising saRNA or siRNA

[0104] After contacting a cell, the saRNA disclosed herein can effectively activate or up-regulate the expression of CDKN1A gene in a cell, preferably up-regulate the expression by at least 10% (e.g., as compared to baseline expression of the CDKN1A gene) . In certain embodiments, the present application relates to a cell comprising the saRNA disclosed herein. In some embodiments, the cell is a mammalian cell. In some embodiments, the cell is a human cell (e.g., RSF cell) . The cell disclosed herein may be in vitro, or ex vivo, such as a cell line or a cell strain, or may exist in a mammalian body, such as a human body.

[0105] After contacting a cell, the siRNA disclosed herein can effectively inhibit or down-regulate the expression of a target gene in a cell, preferably down-regulate the expression by at least 10% (e.g., as compared to baseline expression of the target gene) . In certain embodiments, the present application relates to a cell comprising the siRNA disclosed herein. In some embodiments, the cell is a mammalian cell. In some embodiments, the cell is a human cell. The cell disclosed herein may be in vitro, or ex vivo, such as a cell line or a cell strain, or may exist in a mammalian body, such as a human body.Composition comprising saRNA or siRNA

[0106] In certain embodiments, the present application relates to a composition or pharmaceutical composition comprising the saRNA or siRNA or the nucleic acid of the present application. In some embodiments, the composition comprises at least one pharmaceutically acceptable carrier. In some embodiments, the composition comprising at least one pharmaceutically acceptable carrier selected from an aqueous carrier, liposome or LNP, polymer, micelle, colloid, metal nanoparticle, non-metallic nanoparticle, bioconjugate (e.g., C5x5 or GalNAc) , polypeptide and antibody. In one embodiment, the aqueous carrier may be, for example, RNase-free water, or RNase-free buffer. In some embodiments, the composition may contain 0.001-1600 nM (e.g., 0.001-1000 nM, 0.001-500 nM, 0.001-400 nM, 10-100 nM, 10-50 nM, 20-50 nM, 20-100 nM, 50-150 nM, 50-400 nM, 50-1000 nM or 400-1600 nM) of the saRNA or polynucleotide as described herein. In some embodiments, the composition includes 25 nM of the saRNA or polynucleotide as described herein. In some embodiments, the composition may contain 0.001-150 nM (e.g., 0.01-100 nM, 0.1-50 nM, 1-150 nM, 1-20 nM, 0.001-1 nM, 1-10 nM, 10-100 nM, 10-50 nM, 20-50 nM, 20-100 nM) of the saRNA or siRNA polynucleotide as described herein. In some embodiments, the composition includes 25 nM of the saRNA or siRNA or polynucleotide as described herein.Methods of using saRNA or siRNA

[0107] Another aspect of the present application relates to a method of using saRNA for activating / up-regulating the CDKN1A gene expression in a cell. The saRNA activates / up-regulates the expression of the CDKN1A gene, such as by at least 10% (e.g., at least 20%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 150%, at least 200%, at least 300%, at least 500%, at least 800%, at least 1000%, at least 2000%, or at least 5000%as compared to baseline expression of the CDKN1A gene) . In certain embodiments, the expression of CDKN1A gene is activated / up-regulated by administering the saRNA disclosed in the embodiments to a cell at a concentration of at least 0.01 nM, e.g., 0.02 nM, 0.05 nM, 0.08 nM, 0.1 nM, 0.2 nM, 0.3 nM, 0.4 nM, 0.5 nM, 0.6 nM, 0.8 nM, 1 nM, 5 nM, 10 nM, 25 nM, 50 nM, 75 nM, 100 nM, 150 nM, 200 nM, 400 nM, 800 nM, 1000 nM, or 1600 nM. In certain embodiments, the induction of p21 protein is activated / up-regulated by administering the saRNA disclosed in the embodiments to a cell at a concentration of at least 0.01 nM, e.g., 0.02 nM, 0.05 nM, 0.08 nM, 0.1 nM, 0.2 nM, 0.3 nM, 0.4 nM, 0.5 nM, 0.6 nM, 0.8 nM, 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4nM, 5 nM, 10 nM, 25 nM, 50 nM, 75 nM, 100 nM, or 150 nM.

[0108] Another aspect of the present application relates to a method for preventing or treating p21-related disorder or condition, such as rheumatoid arthritis, comprising administering an effective amount of the saRNA, the nucleic acid or polynucleotide encoding the saRNA, or the composition comprising the saRNA disclosed herein to the individual. In certain embodiments, the effective amount of the saRNA disclosed herein can be a concentration ranging from 0.01 nM to 1600 nM, e.g., 0.01 nM, 0.02 nM, 0.05 nM, 0.08 nM, 0.1 nM, 0.2 nM, 0.3 nM, 0.4 nM, 0.5 nM, 0.6 nM, 0.8 nM, 1 nM, 5 nM, 10 nM, 25 nM, 50 nM, 75 nM, 100 nM, 150 nM, 200 nM, 400 nM, 800 nM, 1000 nM, or 1600 nM. In certain embodiments, the effective amount of the saRNA disclosed herein can be a concentration ranging from 0.01 nM to 150 nM, e.g., 0.01 nM, 0.02 nM, 0.05 nM, 0.08 nM, 0.1 nM, 0.2 nM, 0.3 nM, 0.4 nM, 0.5 nM, 0.6 nM, 0.8 nM, 1 nM, 5 nM, 10 nM, 25 nM, 50 nM, 75 nM, 100 nM, or 150 nM. In some embodiments, the disorder or condition is rheumatoid arthritis. In some embodiments, the individual is a mammal. In some embodiments, the individual is a human.

[0109] In any of the embodiments provided herein, such saRNA, nucleic acids encoding the saRNA of the present application, or compositions comprising such saRNA of the present application may be introduced directly into a cell, or may be produced intracellularly upon introduction of a nucleotide sequence encoding the saRNA into a cell, for example a mammalian cell including or a human cell. Such cells may be ex vivo, such as cell lines, and the like, or may be present in mammalian bodies, such as humans. In certain embodiments, a nucleic acid or a polynucleotide encoding a saRNA or a composition comprising the aforementioned saRNA as described herein, in respective amounts sufficient to treat rheumatoid arthritis.

[0110] Another aspect of the present application relates administering an effective mount of the saRNA or the composition to an individual using administration pathway as described herein. In some embodiments, the administration pathway is selected from one or more of: IA, parenteral infusions, oral administration, intranasal administration, inhaled administration, vaginal administration, and rectal administration. In some embodiments, the administration pathway is selected from one or more of: intrathecal, intramuscular, intravenous, intra-arterial, intraperitoneal, intravesical, intracerebroventricular, intravitreal and subcutaneous administrations.

[0111] In certain embodiments, pharmaceutical compositions comprise one or more tissue-specific delivery molecules designed to deliver the one or more pharmaceutical agents of the present invention to specific tissues or cell types. For example, in certain embodiments, pharmaceutical compositions include liposomes and / or coated with a tissue-specific antibody.

[0112] A typical formulation of the oligonucleotide modulator in the present application is prepared by mixing a double-stranded oligonucleotide of the present application and a carrier or excipient. Suitable carriers and excipients are well known to those skilled in the art and are described in detail in, e.g., Ansel H. C. et al., Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (2004) Lippincott, Williams &Wilkins, Philadelphia; Gennaro A. R. et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2000) Lippincott, Williams &Wilkins, Philadelphia; and Rowe R. C, Handbook of Pharmaceutical Excipients (2005) Pharmaceutical Press, Chicago. The formulations may also include one or more buffers, stabilizing agents, surfactants, wetting agents, lubricating agents, emulsifiers, suspending agents, preservatives, antioxidants, opaquing agents, glidants, processing aids, colorants, sweeteners, perfuming agents, flavoring agents, diluents and other known additives to provide an elegant presentation of the drug (i.e., a double-stranded oligonucleotide of the present application or pharmaceutical composition thereof) or aid in the manufacturing of the pharmaceutical product (i.e., medicament) .Kit

[0113] Another aspect of the present application relates to a kit for performing the method for increasing a level of p21 protein in a cell or a level of functional p21 protein in blood, comprising the saRNA disclosed herein. In certain embodiments, the kit further comprises means for administering said saRNA to an individual. In certain embodiments, the kit is in a labeled package and the label on said package indicates that the saRNA or the composition can be used in preventing or treating p21-related disease or condition or disorder, such as rheumatoid arthritis.

[0114] A "kit" as used herein, typically defines a package, assembly, or container (such as an insulated container) including one or more of the components or embodiments of the application, and / or other components associated with the application, for example, as previously described. Any of the agents or components of the kit may be provided in liquid form (e.g., in solution) , or in solid form (e.g., a dried powder, frozen, etc. ) .Particular embodiments

[0115] The present application provides the following particular embodiments: 1. An intra-articular (IA) deliverable oligonucleotide agent comprising: (a) a double-stranded oligonucleotide capable of modulating the expression of a selected gene associated to a joint disease; and (b) one or more delivery moieties conjugated to the oligonucleotide for the delivery of the oligonucleotide to cells in the joint. 2. The oligonucleotide agent of embodiment 1, wherein the double-stranded oligonucleotide is selected from the group consisting of a small activating RNA (saRNA) and a short interfering RNA (siRNA) ; and / or wherein one or more nucleotide residues in the oligonucleotide are chemically modified, and / or wherein at least one nucleotide, such as at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%or all the nucleotides of the oligonucleotide are chemically modified nucleotides; and / or wherein at least one backbone bond, such as at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%or all the backbone bonds of the oligonucleotide are selected from the group consisting of phosphorothioate, mesyl phosphoramidate and boranophosphate bond. 3. The oligonucleotide agent of embodiment 1 or 2, wherein the oligonucleotide is a saRNA or siRNA comprises a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded structure which comprises 0, 1, 2 or 3 mismatches; and / or wherein the antisense strand comprises a region of complementarity to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a selected region of the selected gene; and / or wherein the sense strand comprises a region of homology to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a selected region of the selected gene; and / or wherein the lengths of the sense strand and the antisense strand are independently about 16-25 nucleotides, preferably 18-24 nucleotides, more preferably 19-23, such as 18, 19, 20, 21, 22, 23 or 24 nucleotides; and / or wherein the double-stranded oligonucleotide comprises at least one blunt end at 5’ end of the antisense strand, and / or the double-stranded oligonucleotide comprises at least one natural or non-natural overhang at 3’ end of the antisense strand or the sense strand, each consisting of 1, 2, 3, 4, or 5 nucleotides; and / or wherein the sense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 8 and the antisense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2. 4. The oligonucleotide agent of any one of embodiments 1-3, wherein the delivery moiety is selected from a non-targeting single-stranded accessory oligonucleotide (ACO) , a lipid, a cell-penetrating peptide, a polyethylene glycol, an alkaloid, a tryptamine, a benzimidazole, a quinolone, an amino acid, a cholesterol, a glucose, a N-acetylgalactosamine, a fatty acid (such as fatty acid comprising a carbon chain with 4-30, 12-24, 16-22 carbon atoms) , a fluorophore, a ligand, a saccharide, a peptide, an antibody and any combinations thereof; and / or wherein the delivery moiety is a C4-30 fatty acid which has a saturated or unsaturated, linear or branched C16 carbon chain wherein the delivery moiety is conjugated to the oligonucleotide directly or via one or more linking components; and / or wherein the delivery moiety is conjugated to the oligonucleotide at the 3’ end or 5’ end or internal nucleotide (s) of one or two strands of the oligonucleotide. 5. The oligonucleotide agent of embodiment 4, wherein the ACO is composed of one or more of nucleotides selected from RNA, DNA, BNA, LNA, GNA and PNA; and / or the ACO is about 6-22 nucleotides, about 8-20, preferably 10-18 nucleotides in length, such as 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 or 22 nucleotides in length; and / or the ACO comprises at least 8 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 5. 6. The oligonucleotide agent of embodiment 4, wherein the ACO comprises a 5’ end and a 3’ end, and wherein the 5’ end or the 3’ end of the ACO is conjugated to the sense strand or the antisense strand of the siRNA directly or indirectly via a linking component; and / or wherein at least one nucleotide, such as at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%or all the nucleotides of the ACO are chemically modified nucleotides; and / or wherein at least one backbone bond, such as at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%or all the backbone bonds of the ACO are selected from the group consisting of phosphorothioate (PS) , mesyl phosphoramidate and boranophosphate bond. 7. The oligonucleotide agent of embodiment 4, wherein the lipid is derived from C5x5, and / or wherein the lipid is conjugated with the oligonucleotide through a S9 linker: 8. The oligonucleotide agent of embodiment 2 or 6, wherein the modification of the chemically modified nucleotide in the oligonucleotide sequence or in the ACO sequence is independently selected from the group consisting of: (a) modification of a phosphodiester bond connecting nucleotides in the nucleotide sequence; (b) modification of 2'-OH of a ribose in the nucleotide sequence; and (c) modification of a base in the nucleotide sequence. 9. The oligonucleotide agent of embodiment 2 or 6, wherein the modification of the chemically modified nucleotide in the oligonucleotide or in the ACO is independently selected from the group consisting of: a 2’ sugar modification, preferably a 2’ sugar modification selected from one or more of: 2’ -fluoro-2’ -deoxynucleoside (2’ -F) modification, 2’ -O-methyl (2’ -O-Me) , modification, and 2’ -O- (2-methoxyethyl) (2’ -O-MOE) modification; a base modification; a PS backbone modification, such as 6～17 PS backbone modifications; an addition of an (E) -vinylphosphonate moiety at the 5’ end of the nucleotide sequence, such as at the 5’ end of the antisense strand; and an addition of a 5-methyl uracil or 5-methyl cytosine moiety at the 5’ end of the nucleotide sequence. 10. The oligonucleotide agent of embodiment 4, wherein the linking component is one or more selected from the group consisting of ethylene glycol chain, an alkyl chain, an alkenyl chain, an alkynyl chain, a peptide, RNA, DNA, carbohydrates, thiol linkage, a phosphodiester, a phosphorothioate, a phosphoramidate, an amide, a carbamate, a tetrazole linkage, and a benzimidazole linkage; and / or wherein the linking component is one or more selected from the group consisting of: a) Spacer phosphoramidite 18: 1, 1-bis (4-methoxyphenyl) -1-phenyl-2, 5, 8, 11, 14, 17-hexaoxanonadecan-19-yl 2-cyanoethyl N, N-diisopropylphosphoramidite; b) Spacer-9: 3- [2- [2- [2- [bis (4-methoxyphenyl) -phenylmethoxy] ethoxy] ethoxy] ethoxy-[di(propan-2-yl) amino] phosphanyl] oxypropanenitrile; c) Spacer phosphoramidite C3: 6- (4, 4'-Dimethoxytrityl) hexyl-1- [ (2-cyanoethyl) - (N, N-diisopropyl) ] -phosphoramidite; d) Spacer-C6 Phosphoramidite: 6- (4, 4'-Dimethoxytrityl) hexyl-1- [ (2-cyanoethyl) - (N, N-diisopropyl) ] -phosphoramidite; and e) Divalent linker (DIO) : 16- ( (bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methoxy) methyl) -1, 1-bis (4-methoxyphenyl) -18-oxo-1-phenyl-2, 5, 8, 11, 14, 17-hexaoxahenicosan-CPG. 11. The oligonucleotide agent of embodiment 1, wherein the joint disease is an inflammatory joint disease or a noninflammatory joint diseases; and / or wherein the joint disease is rheumatoid arthritis (RA) ; and / or wherein the gene associated to a joint disease is CDKN1A. 12. The oligonucleotide agent of embodiment 1, wherein the oligonucleotide agent is a saRNA targeting CDKN1A gene; and / or wherein the antisense strand of the saRNA comprises a region of complementarity to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a selected region in the promoter of CDKN1A gene; and / or the sense strand comprises a region of homology to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from the selected region in the promoter of CDKN1A gene; and / or wherein the 5’ end of the sense strand of the saRNA is conjugated to C5x5 and / or the 3’ end of the sense strand of the saRNA is conjugated to an ACO, such as an ACO of SEQ ID NO: 5; wherein the sense strand of the saRNA comprises at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 1 or 8; and / or wherein the antisense strand of the saRNA comprises at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 2; and / or wherein the sense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 and the antisense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2; or the sense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 8 and the antisense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2; wherein the oligonucleotide agent is a saRNA conjugated to C5x5 having the sequences of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, or a saRNA having the sequence of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 2 conjugated to an ACO having the sequence of SEQ ID NO: 5; and / or wherein the oligonucleotide agent is capable of increasing the expression of CDKN1A gene, such as up-regulating the expression by at least 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200%or 250%as compared to the baseline of CDKN1A mRNA level. 13. An intra-articular deliverable product comprising the oligonucleotide agent of any one of embodiments 1-12. 14. The product of embodiment 13, wherein the product is in the form of a ready for intra-articular delivery solution, a concentrated solution which needs to be diluted before intra-articular delivery, or a powder which needs to be redissolved before intra-articular delivery; and / or wherein the product further comprises a pharmaceutically acceptable carrier, a container, a packet, an instruction for use or any combinations thereof; and / or wherein the product is a medicament or a kit, such as a preloaded injection syringe or ampoule, or an injectable pen; and / or wherein the product is for injection, infusion, or implant, into the joint. 15. A method for delivering an oligonucleotide agent to cells in the joint, comprising providing the oligonucleotide agent of any one of embodiments 1-12 or the product of any one of embodiments 13-14; and, administering the oligonucleotide agent to in vitro cells from the joint or via intra-articular delivery to the joint. 16. A method for the treatment of a joint disease in a subject in need of the treatment and / or prevention comprising the step of administering a therapeutically effective amount of the oligonucleotide agent of any one of embodiments 1-12 or the product of any one of embodiments 13-14 to the subject via intra-articular administration. 17. The method of embodiment 16, wherein the subject is a mammal, such as a human, a non-human primate, a livestock or a pet; and / or wherein the subject is suffering from an inflammatory joint disease or a noninflammatory joint diseases; and / or wherein the subject is suffering from a joint disease of RA; and / or wherein the subject is suffering from a joint disease comprising abnormal CDKN1A gene expression. 18. Use of the oligonucleotide agent of any one of embodiments 1-12 or the product of any one of embodiments 13-14 in the preparation of a medicament for the treatment of a joint disease in a subject.

[0116] While specific embodiments of the active substances (such as the siRNAs) , products, compositions and methods herein have been discussed, many variations of the invention will become apparent to those skilled in the art upon review of this specification and the claims. The full scope of the invention should be determined by reference to the claims, along with their full scope of equivalents, and the specification, along with such variations.EXAMPLES

[0117] The present application will be further illustrated with reference to specific examples and drawings below. It should be understood that these examples are merely intended to illustrate the present application rather than limit the scope of the present application. In the following examples, study methods without specific conditions were generally in accordance with conventional conditions, such as conditions described in Sambrook, et al., Molecular Cloning: Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) , or conditions recommended by the manufacturer.

[0118] The following examples are set forth so as to provide those of ordinary skill in the art with a complete disclosure and description of how to make and use the present invention and are not intended to limit the scope of what the inventors regard as their invention nor are they intended to represent that the experiments below are all or the only experiments performed. Efforts have been made to ensure accuracy with respect to numbers used (e.g., amounts, temperature, etc. ) but some experimental errors and deviations should be accounted for. Unless indicated otherwise, parts are parts by weight, molecular weight is weight average molecular weight, temperature is in degrees Celsius, and pressure is at or near atmospheric. Standard abbreviations may be used, e.g., bp, base pair (s) ; kb, kilobase (s) ; pl, picoliter (s) ; s or sec, second (s) ; min, minute (s) ; h or hr, hour (s) ; aa, amino acid (s) ; nt, nucleotide (s) ; IA / i. a., intra-articular (ly) .Example 1. Oligonucleotides synthesized and used in the Examples

[0119] The oligonucleotides tested in the following examples are listed in Table 1. Table 1. Oligonucleotide sequences and compositions Note: upper case, RNA; *, PS backbone modification; f, 2'-fluoro; m, 2'-O-methyl (2'-OMe) ; Vp, 5’ - (E) -vinylphosphonate; me, 2'-O-methoxyethyl (2’ MOE) ; meC, 2'-O-methoxyethyl-5-methyl cytosine; meU, 2'-O-methoxyethyl-5-methyl uracil; C5x5: see the description of compound A5 in WO2024002046A1; n / a, not available; S9, triethylene glycolyl.

[0120] saRNAs targeting CDKN1A gene are also selected as described in WO2019196883A1 and WO2022166815A1 and are hereby incorporated by reference in its entirety.Example 2. In vitro activity of saRNA-C5x5 in inducing CDKN1A mRNA expression in RSF cells

[0121] To assess in vitro activity of saRNA-C5x5 in inducing CDKN1A mRNA expression, the indicated saRNA-C5x5 (i.e., RD-16447) was transfected into RSF cells at 2.5 or 25 nM for 3 days. RD-11704 was a duplex siRNA targeting CDKN1A mRNA and transfected at 10 nM as a siRNA control. CDKN1A mRNA levels as quantified by two step RT-qPCR were shown in FIG. 1 and summarized in Table 2. The results indicate that the saRNA-C5x5 can be successfully delivered into the cells, and effectively induce CDKN1A mRNA expression and activate CDKN1A mRNA expression in the cells by more than 1.5-fold as compared to baseline expression. Table 2. CDKN1A mRNA levels following saRNA treatments in RSF cells Example 3. Knockdown activity of siRNA-ACO and siRNA-C5x5 on Sod1 mRNA expression in the joints of SD rats

[0122] To assess the knockdown activity of siRNA-ACO and siRNA-C5x5 on Sod1 mRNA, the indicated siRNA-ACO (i.e., RD-17711) and siRNA-C5x5 (i.e., RD-17619) were administered to the joints of the female SD rats via IA injection at 7 and 21 nmol. Treatment with saline alone served as vehicle control to indicate baseline expression. RD-17911 was a duplex siRNA targeting Sod1 mRNA and were administered to another group of female SD rats via IA injection at 7 or 21 nmol. All the rats were sacrificed on day 14 post dosing. Remaining Sod1 mRNA levels as quantified in tissues from synovium of the hind limb knee joints and liver tissues via two step RT-qPCR.

[0123] As shown in FIG. 2A, siRNA-ACO and siRNA-C5x5 exhibited significantly higher knockdown activity than siRNA alone in synovium tissue, with the results also summarized in Table 3. In FIG. 2B, siRNA-ACO and siRNA-C5x5 showed no liver activity, indicating that both conjugated siRNAs do not cause systematic exposure in the animals. The results clearly demonstrate that ACO and C5x5 moieties are capable of facilitating the dsRNA conjugates’ delivery to the joints via IA injection, and are potentially systematically safe and well tolerated by the animals. Table 3. Sod1 knockdown activity following siRNA treatments in SD rats. Note: "-" represents not available. "SEM" represents Standard Error of the Mean.MATERIALS AND METHODSOligonucleotide synthesis (1) Single-stranded oligonucleotide synthesis

[0124] Single-stranded oligonucleotides were synthesized on a K&ADNA synthesizer (K&ALaborgeraete GbR, chaafheim, Germany) by a solid phase synthesis technique.

[0125] The starting material was universal solid support or special solid support commercially available or synthesis as disclosure in previous context. In general, phosphoramidite monomers including various linkers and conjugates (0.1M in acetonitrile or dichloromethane) , were added sequentially onto a solid support in the DNA synthesizer to generate the desired full-length oligonucleotides.

[0126] Amidite addition: each cycle of amidite addition consisted of four chemical reactions including detritylation, coupling, oxidation / thiolation and capping. In the first step, the detritylation was performed by using 3%dichloroacetic acid (DCA) in DCM for 45 seconds. In the second step, phosphoramidite coupling was conducted for 6 minutes for all amidites by 12 eq. In the third step, oxidation was performed by using 0.02 M iodine in THF: pyridine: water (70: 20: 10, v / v / v) for 1 minute; if phosphorothioate modification was needed then replace oxidation by thiolation which was carried out with 0.1 M solution of xanthane hydride in pyridine: ACN (50: 50, v / v) for 3 minutes. In the fourth step, the capping was performed by using a THF: acetic anhydride: pyridine (80: 10: 10, v / v / v) (CAP A) and N-methylimidazole: THF (10: 90, v / v) , (CAP B) for 20 seconds. The cycles of four chemical reactions were depended by the length of single of oligonucleotide.

[0127] Deprotection I (Nucleobase Deprotection) : after completion of the synthesis, the solid support was transferred to a screw-cap microcentrifuge tube. For a 1 μmol synthesis scale, 1 ml of a mixture of methylamine and ammonium hydroxide was added. The tube containing the solid support was then heated in an oven at 60℃ to 65℃ for 15 min and then allowed to cool to room temperature. The cleavage solution was collected and evaporated to dryness in a speedvac to provide crude single-strand of oligonucleotide.

[0128] Deprotection II (Removal of 2’ -TBDMS Group) : if the crude RNA oligonucleotide, still carrying the 2’ -TBDMS groups, then dissolved it in 0.1 ml of DMSO. After adding 1 ml of triethylamine trihydrofluoride, the tube was capped, and the mixture was shaken vigorously to ensure complete dissolution and then heated in an oven at 65℃ for 15 minutes. The tube was removed from the oven and cooled down to room temperature. The solution containing the completely desilylated oligonucleotide was cooled on dry ice. Two ml of ice-cold n-butanol (-20℃) were carefully added in 0.5 ml portions to precipitate the oligonucleotides. The precipitate was filtered, washed with 1 ml ice-cold n-butanol, and subsequently dissolved in 0.01 M Tris (hydroxymethyl) aminomethanol hydrochloride buffer. (2) Single-stranded oligonucleotide purification

[0129] The purification of oligonucleotides was performed on an AKTA explorer 10 equipped with a Source 15Q 4.6 / 100 PE column using the following conditions: buffer A: (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5) , B: (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 2M NaCl, pH 7.5) , gradient: 10%B to 60%B in 25 min, flow rate: 1 ml / min. The pure oligonucleotides were collected and desalting by a HiPrep 26 / 10 Desalting column. (3) Annealing of single-stranded oligonucleotides to form duplex

[0130] For duplex, after the generation of desalted purified single-stranded solutions, sense strand and antisense strand were mixed by equal volumes at equimolar concentration in the tube. The tube was placed in a heat block at 95℃ for 5 min and then cooled to room temperature. Then, the thus obtained duplex were subsequently lyophilized to powder.Delivery moiety and oligonucleotide modulators

[0131] The delivery moieties can be synthesized via procedures known in the art, for example WO2023280190A1 and WO2024002046A1 which are fully incorporated herein for methods of use and synthetic processes of ACO and C5x5. The oligonucleotide modulators were synthesized by using the support material pre-conjugated with delivery facilitating moieties (e.g., C5x5) as starting support material following the aforementioned “Oligonucleotide synthesis” method.Cell culture and treatment

[0132] Human Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblasts Cells (RSF, IMP-H056) were purchased from Xiamen Immocell Biotechnology Co., Ltd and were cultured at 37℃ with 5%CO2 in Specific medium (IMP-H056-1, Xiamen, China) . Transfection was carried out using Lipofectamine RNAiMax (ThermoFisher, Waltham, MA, USA) in growth media without antibiotics according to the manufacturer’s protocol.Animal study

[0133] All animal procedures were conducted by certified laboratory personnel following protocols consistent with local and state regulations and approved by the Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) . Sprague-Dawley (SD) female rats (A102, SPF, China) were purchased from SPF (Suzhou) Biotechnology Co., LTD. Formulations for animal treatments were freshly prepared prior to use by dissolving allotments of lyophilized oligonucleotide into saline to create stock solutions for dilution to the intended treatment concentrations.Intra-articular injection

[0134] Rats were anesthetized using an isoflurane anesthesia device. After anesthesia, hair at the knee joint was shaved and the skin was disinfected. The hind limbs of the rats were bent at a 90-degree angle at the knee joint, and the thumb was used to locate the depression between the patella and the tibial tuberosity, below the patella, and a needle was inserted through the patellar ligament. A syringe was carefully employed to inject the specified volume of liquid, ensuring no cartilage damage, with a standard unilateral injection volume of 50 μL. Following injection, the syringe was withdrawn, and the application site was gently compressed to check for any liquid leakage.Joint synovium and liver sample collection

[0135] Rats were humanely euthanized via cervical dislocation and secured on a foam board in a supine position using an injection needle, with hind limbs positioned and fixed. The skin and fascia around the knee joint were carefully incised to expose the muscles. The rats were dissected above and beside the patellar ligament with a No. 15 scalpel blade. The patellar ligament's distal attachment was transected, exposing the infrapatellar fat pad, which was then dissected to reveal the joint capsule. The synovial layer was exposed by blunt dissection with ophthalmic forceps, and the synovial tissue was carefully extracted after clamping the patellar ligament and immediately submerged in RNAlaterTM (AM7021, Thermo Fisher, Carlsbad, CA, USA) . Liver tissue was isolated according to anatomical schematics and immediately submerged in RNAlaterTM.RNA isolation from animal tissues

[0136] Animal tissues were submerged and stored in RNAlaterTM prior to sample processing. Joint synovium and liver tissues were respectively cut into 2-3 slices less than 0.5 cubic thick and the resulted fragments were transferred to a 2 mL Micro tube containing 1 mL RNAVzol (Biosharp, BS259A, China) and 6-8 ceramic beads (ALLSHENG Ceramic Beads, China) . The tissues were homogenized by a Bioprep-24 homogenizer (ALLSHENG Bioprep-24, China) . 200 μL chloroform was pipetted to the homogenate, then vortexed and incubated for 5 min, followed by a centrifugation for 15 min at 12000 g. 200 μL top aqueous phase was pipetted to a new 1.5 mL tube. RNA was isolated using a MagPure Total RNA Micro LQ kit (Magen, R6621, Guangdong, China) following its instructions provided by the manufacturer in an Auto-Pure96 machine (ALLSHENG, Zhejiang, China) . RNA concentrations were determined by a microplate reader system (Infinite M2000 Pro, Tecan) .RNA isolation and reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) (1) RNA isolation and two-step RT-qPCR

[0137] Total cellular RNA was isolated from treated cells using a RNeasy Plus Mini kit (Qiagen, Hilden, Germany) according to its manual. Animal tissue RNAs were isolated as described above. The resultant RNA (～1 μg) was reverse transcribed into cDNA by using a PrimeScriptTM RT reagent kit with gDNA Eraser (Takara, RR047A, Shlga, Japan) . The resultant cDNA was amplified in a Roche LightCycler 480 Multiwell Plate 384 (Roche, ref: 4729749001, US) using TB  Premix Ex TaqTM II (Takara, RR820A, Shlga, Japan) reagents and primers specifically for amplified target genes of interest.

[0138] Reaction conditions were as follows: reverse transcription reaction (stage 1) : 42℃ for 5 min, 95℃ for 10 sec; PCR reaction (stage 2) : 95℃ for 5 sec, 60℃ for 30 sec, 72℃ for 10 sec, 40 cycles of amplification; and melting curve (stage 3) . PCR reaction conditions were shown in Table 4 and Table 5. Primer sequences are listed in Table 6. Table 4: RT reaction Table 5: RT-qPCR reaction Table 6. Primer sequences for RT-qPCR assay One reference gene

[0139] To calculate the expression levels (Erel) of target gene mRNA in dsRNA-treatment samples relative to control treatment, the Ct values of the target gene and the internal reference gene were substituted into Formula I, wherein CtTm was the Ct value of the target gene from the control-treated sample; CtTs was the Ct value of the target gene from the dsRNA-treated sample; CtRm was the Ct value of the internal reference gene from the control-treated sample; CtRs was the Ct value of the internal reference gene from the dsRNA-treated sample.Two reference genes

[0140] To calculate the relative expression level (Erel) of target gene mRNA in a dsRNA-transfected sample relative to control treatment (Mock) , the Ct values of the target gene and the two internal reference genes were substituted into Formula II, wherein CtTm was the Ct value of the target gene from the mock-treated sample; CtTs was the Ct value of the target gene from the dsRNA-treated sample; CtR1m was the Ct value of the internal reference gene 1 from the mock-treated sample; CtR1s was the Ct value of the internal reference gene 1 from the dsRNA-treated sample; CtR2m was the Ct value of the internal reference gene 2 from the mock-treated sample; and CtR2s was the Ct value of the internal reference gene 2 from the dsRNA treated sample.Statistical analysis

[0141] Data analytics were performed using GraphPad Prism software. Differences between groups of continuous variables were compared using one-way analysis of variance (ANOVA) followed by Turkey’s multiple comparisons. A P value of less than 0.05 was considered statistically significant between the two groups. *represents p < 0.05, **represents p < 0.01, ***represents p <0.001, ****represents p < 0.0001. EQUIVALENTS

[0142] While specific embodiments of the compositions and methods herein have been discussed, the above specification is illustrative and not restrictive. Many variations of the invention will become apparent to those skilled in the art upon review of this specification and the claims below. The full scope of the invention should be determined by reference to the claims, along with their full scope of equivalents, and the specification, along with such variations. INCORPORATION BY REFERENCE

[0143] All publications, patents, and accession numbers mentioned herein are hereby incorporated by reference in their entirety as if each individual publication or patent was specifically and individually indicated to be incorporated by reference. REFERENCES 1. Lee DM, Weinblatt ME. Rheumatoid arthritis. Lancet. 2001; 358: 903-911. 2. Moura, C.S. et al. Early medication use in new-onset rheumatoid arthritis may delay joint replacement: results of a large population-based study. Arthritis Res. Ther. 2015 Aug 3; 17 (1) : 197. 3. Smolen JS, Aletaha D, McInnes IB. Rheumatoid arthritis. Lancet (London, England) . 2016; 388 (10055) : 2023-38. 4. X Gang et al., Treatment effect of CDKN1A on rheumatoid arthritis by mediating proliferation and invasion of fibroblast-like synoviocytes cells. Clin Exp Immunol. 2018 Nov; 194 (2) : 220-230. 5. Jianzhu Wang et al., Effects of triptolide on cell proliferation and regulation of Ras-MAPKs pathway in synoviocytes induced by tumor necrosis factor. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2010 Apr; 35 (7):888-91.

Claims

1.An intra-articular (IA) deliverable oligonucleotide agent comprising:(a) a double-stranded oligonucleotide capable of modulating the expression of a selected gene associated to a joint disease; and(b) one or more delivery moieties conjugated to the oligonucleotide for the delivery of the oligonucleotide to cells in the joint.2.The oligonucleotide agent of claim 1, wherein the double-stranded oligonucleotide is selected from the group consisting of a small activating RNA (saRNA) and a short interfering RNA (siRNA) ; and / orwherein one or more nucleotide residues in the oligonucleotide are chemically modified, and / orwherein at least one nucleotide, such as at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%or all the nucleotides of the oligonucleotide are chemically modified nucleotides; and / orwherein at least one backbone bond, such as at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%or all the backbone bonds of the oligonucleotide are selected from the group consisting of phosphorothioate, mesyl phosphoramidate and boranophosphate bond.3.The oligonucleotide agent of claim 1 or 2, wherein the oligonucleotide is a saRNA or siRNA comprises a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded structure which comprises 0, 1, 2 or 3 mismatches; and / orwherein the antisense strand comprises a region of complementarity to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a selected region of the selected gene; and / orwherein the sense strand comprises a region of homology to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a selected region of the selected gene; and / orwherein the lengths of the sense strand and the antisense strand are independently about 16-25 nucleotides, preferably 18-24 nucleotides, more preferably 19-23, such as 18, 19, 20, 21, 22, 23 or 24 nucleotides; and / orwherein the double-stranded oligonucleotide comprises at least one blunt end at 5’ end of the antisense strand, and / or the double-stranded oligonucleotide comprises at least one natural or non-natural overhang at 3’ end of the antisense strand or the sense strand, each consisting of 1, 2, 3, 4, or 5 nucleotides; and / orwherein the sense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 8 and the antisense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2.4.The oligonucleotide agent of any one of claims 1-3, wherein the delivery moiety is selected from a non-targeting single-stranded accessory oligonucleotide (ACO) , a lipid, a cell-penetrating peptide, a polyethylene glycol, an alkaloid, a tryptamine, a benzimidazole, a quinolone, an amino acid, a cholesterol, a glucose, a N-acetylgalactosamine, a fatty acid (such as fatty acid comprising a carbon chain with 4-30, 12-24, 16-22 carbon atoms) , a fluorophore, a ligand, a saccharide, a peptide, an antibody and any combinations thereof; and / orwherein the delivery moiety is a C4-30 fatty acid which has a saturated or unsaturated, linear or branched C16 carbon chainwherein the delivery moiety is conjugated to the oligonucleotide directly or via one or more linking components; and / orwherein the delivery moiety is conjugated to the oligonucleotide at the 3’ end or 5’ end or internal nucleotide (s) of one or two strands of the oligonucleotide.5.The oligonucleotide agent of claim 4, wherein the ACO is composed of one or more of nucleotides selected from RNA, DNA, BNA, LNA, GNA and PNA; and / orthe ACO is about 6-22 nucleotides, about 8-20, preferably 10-18 nucleotides in length, such as 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 or 22 nucleotides in length; and / orthe ACO comprises at least 8 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 5.6.The oligonucleotide agent of claim 4, wherein the ACO comprises a 5’ end and a 3’ end, and wherein the 5’ end or the 3’ end of the ACO is conjugated to the sense strand or the antisense strand of the siRNA directly or indirectly via a linking component; and / orwherein at least one nucleotide, such as at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%or all the nucleotides of the ACO are chemically modified nucleotides; and / orwherein at least one backbone bond, such as at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%or all the backbone bonds of the ACO are selected from the group consisting of phosphorothioate (PS) , mesyl phosphoramidate and boranophosphate bond.7.The oligonucleotide agent of claim 4, wherein the lipid is derived from C5x5, and / or wherein the lipid is conjugated with the oligonucleotide through a S9 linker: 8.The oligonucleotide agent of claim 2 or 6, wherein the modification of the chemically modified nucleotide in the oligonucleotide sequence or in the ACO sequence is independently selected from the group consisting of:(a) modification of a phosphodiester bond connecting nucleotides in the nucleotide sequence;(b) modification of 2'-OH of a ribose in the nucleotide sequence; and(c) modification of a base in the nucleotide sequence.9.The oligonucleotide agent of claim 2 or 6, wherein the modification of the chemically modified nucleotide in the oligonucleotide or in the ACO is independently selected from the group consisting of:a 2’ s ugar modification, preferably a 2’ sugar modification selected from one or more of: 2’ -fluoro-2’ -deoxynucleoside (2’ -F) modification, 2’ -O-methyl (2’ -O-Me) , modification, and 2’ -O- (2-methoxyethyl) (2’ -O-MOE) modification;a base modification;a PS backbone modification, such as 6～17 PS backbone modifications;an addition of an (E) -vinylphosphonate moiety at the 5’ end of the nucleotide sequence, such as at the 5’ end of the antisense strand; andan addition of a 5-methyl uracil or 5-methyl cytosine moiety at the 5’ end of the nucleotide sequence.10.The oligonucleotide agent of claim 4, wherein the linking component is one or more selected from the group consisting of ethylene glycol chain, an alkyl chain, an alkenyl chain, an alkynyl chain, a peptide, RNA, DNA, carbohydrates, thiol linkage, a phosphodiester, a phosphorothioate, a phosphoramidate, an amide, a carbamate, a tetrazole linkage, and a benzimidazole linkage; and / orwherein the linking component is one or more selected from the group consisting of:a) Spacer phosphoramidite 18: 1, 1-bis (4-methoxyphenyl) -1-phenyl-2, 5, 8, 11, 14, 17-hexaoxanonadecan-19-yl 2-cyanoethyl N, N-diisopropylphosphoramidite;b) Spacer-9: 3- [2- [2- [2- [bis (4-methoxyphenyl) -phenylmethoxy] ethoxy] ethoxy] ethoxy-[di (propan-2-yl) amino] phosphanyl] oxypropanenitrile;c) Spacer phosphoramidite C3: 6- (4, 4'-Dimethoxytrityl) hexyl-1- [ (2-cyanoethyl) - (N, N-diisopropyl) ] -phosphoramidite;d) Spacer-C6 Phosphoramidite: 6- (4, 4'-Dimethoxytrityl) hexyl-1- [ (2-cyanoethyl) - (N, N-diisopropyl) ] -phosphoramidite; ande) Divalent linker (DIO) : 16- ( (bis (4-methoxyphenyl) (phenyl) methoxy) methyl) -1, 1-bis (4-methoxyphenyl) -18-oxo-1-phenyl-2, 5, 8, 11, 14, 17-hexaoxahenicosan-CPG.11.The oligonucleotide agent of claim 1, wherein the joint disease is an inflammatory joint disease or a noninflammatory joint diseases; and / orwherein the joint disease is rheumatoid arthritis (RA) ; and / orwherein the gene associated to a joint disease is CDKN1A.12.The oligonucleotide agent of claim 1, wherein the oligonucleotide agent is a saRNA targeting CDKN1A gene; and / orwherein the antisense strand of the saRNA comprises a region of complementarity to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a selected region in the promoter of CDKN1A gene; and / or the sense strand comprises a region of homology to at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from the selected region in the promoter of CDKN1A gene; and / orwherein the 5’ end of the sense strand of the saRNA is conjugated to C5x5 and / or the 3’ end of the sense strand of the saRNA is conjugated to an ACO, such as an ACO of SEQ ID NO: 5;wherein the sense strand of the saRNA comprises at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 1 or 8; and / orwherein the antisense strand of the saRNA comprises at least 15 contiguous nucleotides differing by 0, 1, 2 or 3 nucleotides from a sequence of SEQ ID NO: 2; and / orwherein the sense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 and the antisense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2; or the sense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 8 and the antisense strand of the saRNA has a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2;wherein the oligonucleotide agent is a saRNA conjugated to C5x5 having the sequences of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, or a saRNA having the sequence of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 2 conjugated to an ACO having the sequence of SEQ ID NO: 5; and / orwherein the oligonucleotide agent is capable of increasing the expression of CDKN1A gene, such as up-regulating the expression by at least 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200%or 250%as compared to the baseline of CDKN1A mRNA level.13.An intra-articular deliverable product comprising the oligonucleotide agent of any one of claims 1-12.14.The product of claim 13, wherein the product is in the form of a ready for intra-articular delivery solution, a concentrated solution which needs to be diluted before intra-articular delivery, or a powder which needs to be redissolved before intra-articular delivery; and / orwherein the product further comprises a pharmaceutically acceptable carrier, a container, a packet, an instruction for use or any combinations thereof; and / orwherein the product is a medicament or a kit, such as a preloaded injection syringe or ampoule, or an injectable pen; and / orwherein the product is for injection, infusion, or implant, into the joint.15.A method for delivering an oligonucleotide agent to cells in the joint, comprising providing the oligonucleotide agent of any one of claims 1-12 or the product of any one of claims 13-14; and, administering the oligonucleotide agent to in vitro cells from the joint or via intra-articular delivery to the joint.16.A method for the treatment of a joint disease in a subject in need of the treatment and / or prevention comprising the step of administering a therapeutically effective amount of the oligonucleotide agent of any one of claims 1-12 or the product of any one of claims 13-14 to the subject via intra-articular administration.17.The method of claim 16, wherein the subject is a mammal, such as a human, a non-human primate, a livestock or a pet; and / orwherein the subject is suffering from an inflammatory joint disease or a noninflammatory joint diseases; and / orwherein the subject is suffering from a joint disease of RA; and / orwherein the subject is suffering from a joint disease comprising abnormal CDKN1A gene expression.18.Use of the oligonucleotide agent of any one of claims 1-12 or the product of any one of claims 13-14 in the preparation of a medicament for the treatment of a joint disease in a subject.

Images