Dihydroimidazopyrimidopyrimidinone compounds and the use thereof

Abstract

Provided compounds of Formula I or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof. Compounds of Formula I are Wee1 kinase inhibitors. Therefore, the compounds may be used to treat diseases caused by abnormal Wee1 activity.

Description

Dihydroimidazopyrimidopyrimidinone Compounds and The Use ThereofTechnical Field

[0001] The present invention relates to 8, 9-dihydroimidazol [1, 2-a] pyrimidino [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one compounds and their use as effective Wee1 kinase inhibitors for the treatment of cancer.

[0002] Technical Background

[0003] The process of growth and division of eukaryotic cells is called the cell cycle. Cells multiply by gradually growing from newborn cells and dividing into two cells through the cell cycle. The cell cycle roughly includes G1, S, G2 and M phases: the G1 stage, also known as the growth phase, is characterized by the active metabolism of the cell, large quantities of proteins, sugars, lipids, and RNA needed for cell growth are rapidly maturated from newly dividing young cells. There are also some cells that no longer go through the cell cycle after completing the G1 stage, and stay in this stage, which is called the G0 stage; The main characteristics of the S stage are DNA synthesis and replication, and the cell chromosome changes from diploid to tetraploid; After that, the cells enter the G2 stage. This stage is characterized by the fact that the cell continues to grow on the one hand, and the synthetic DNA is examined and repaired to prepare the cell for mitosis. The last stage of the cell cycle is the M phase, in which the cell divides from one mother cell into two identical daughter cells through mitosis, completing cell reproduction. There are multiple cell cycle checkpoints throughout the cell cycle, including G1 / Sor G1 and G2 / M or G2 Checkpoints. One of their main functions is to check to ensure the accuracy of the replication of genetic information (DNA) during the cell cycle and whether it is moving forward to the next stage of the cell cycle.

[0004] Each cell cycle checkpoint is a system of multiple factors that work through a complex mechanism. For example, before a cell completes DNA replication and enters mitosis, the so-called G2-M checkpoint consists of a very complex system that examines whether a cell has DNA after synthesis, including phosphorylation damage or defect that determines whether the cell undergoes mitosis (M-phase) with chromosome segregation. An important kinase in this cell cycle checkpoint is Cdk1, which forms a complex with Cyclin-B1 (Nurse, P., 1990, Nature 344, 503-508) . The activation and inactivation of Cdk1 plays a crucial role in the transition of cells from G2 to mitosis (M) and the subsequent completion of mitosis. The control of Cdk1 activity is regulated by multiple mechanisms, including with cyclin A (Cyclin-A) or cyclin B (Cyclin-B) . as well as phosphorylation and dephosphorylation mechanisms. Wee1 is an important kinase that phosphorylates Cdk1.

[0005] Wee1 is a tyrosine kinase that inhibits the activity of Cdk1 by phosphorylating tyrosine 15 (Y15) on Cdk1 (McGowan, C.H., et al., 1993, The EMBO journal  12, 75-85; Parker, L. L., et al., 1992, Science 257, 1955-1957) . Thus, Wee1 is a key inhibitory regulator of Cdk1 activity and plays an important role at the G2-M phase detection site (OConnell, . et al., 1997, The EMBO journal 16, 545-554) . Loss or inactivation of Wee1 can cause cells to enter mitosis prematurely, causing mitotic failure and cell death (Stumpff, J., et al., 2004, Curr Biol 14, 2143-2148) . Some tumor cells have functional defects or loss of cell cycle checkpoints in the G1-Sphase and rely heavily on the G2-M phase checkpoints to ensure cell growth and division (Sancar, A., et al., 2004, Annual review of biochemistry 73, 39-85) . In these cancer cells that have lost the ability of the G1 checkpoint, due to some reasons, such as the loss of p53, the expression or activity of Wee1 is reduced and the G2-M checkpoint is lost, these tumor cells are very sensitive to DNA damage (Wang, Y., et al., 2004, Cancer biology &therapy 3, 305-313) .

[0006] Inhibiting the activity of Wee1 can selectively promote the death of cancer cells with defective cell cycle checkpoints, while having little effect on normal cells with normal cell cycle checkpoints. Therefore, Wee1 kinase inhibitors have the potential to be used as targeted drugs for the treatment of cancer and other cell proliferative conditions.

[0007] A variety of Wee1 kinase inhibitors have been reported and published, such as WO2007126122, WO2015092431, WO2018162932, WO2018133829, WO2019037678, WO2019028008, WO2019173082, WO2019085933, WO202021032, WO2020210377, WO2020210383, WO2020210375, WO2020210380, WO2020210381, WO2023041066, WO2023030388 and WO2023045942. Among them, Adavosertib (AZD1775) was the first Wee1 kinase inhibitor to enter clinical trials, but phase II trials have been terminated due to off-target side effects. The Wee1 kinase inhibitors currently in the clinical stage include ZN-c3, Debio-0123 and SC-0191, which are in phase II; IMP7068, SY-4835, APR-1051 and SGR-3515, which are in Phase I. There are also a variety of Wee1 kinase inhibitors that are currently in the preclinical research stage, such as ATRN-W1051 and SPH-6162, etc.

[0008] In addition, the human ether-a-go-go-related gene (hERG) K+ channel is a tetramer of four identical subunits, which plays a central role in cardiac repolarization. Drugs that bind to hERG often lead to prolonged QT, which can lead to drug cardiotoxicity. In recent years, some drugs have been withdrawn from the market due to their inhibitory effect on the hERG channel. Therefore, there is a strong need for effective treatment regimens to maintain efficacy while reducing the cardiac toxicity associated with hERG. The present invention has identified a series of Wee1 inhibitor compounds with low hERG channel inhibitory activity.Summary of the Invention

[0009] The present invention provides compounds as represented in Formula I and Formula II as Wee1 kinase inhibitors.

[0010] The invention also provides pharmaceutical compositions comprising a compound  of Formula I or Formula II in an effective amount for the treatment of cancer.

[0011] In a specific embodiment, the pharmaceutical composition useful for the treatment of cancer may also contain one or more pharmaceutically acceptable carriers or diluents.

[0012] In a specific embodiment, the pharmaceutical composition useful for the treatment of cancer may also contain at least one known anticancer drug or its pharmaceutically acceptable salts.

[0013] The present invention also relates to a method for preparing novel compounds with structural Formula I and Formula II.

[0014] Detailed Description of the Disclosure

[0015] It should be understood that the characteristics of each embodiment described herein can be arbitrarily combined to form the technical solution of this disclosure. The definition of each group herein can apply to any of the embodiments described herein. For example, the definitions of the substituents of alkyl herein apply to any of the embodiments described herein unless the substituents of alkyl are clearly defined in the embodiment.

[0016] The term “hydrogen (H) ” as used herein includes its isotopes deuterium (D) and tritium (T) .

[0017] As used in this disclosure, the term “alkyl” as used herein refers to alkyl itself or a straight or branched chain radical of up to ten carbons. Useful alkyl groups include straight-chain or branched C1-10 alkyl, preferably C1-6 alkyl. In some embodiments, alkyl is C1-4 alkyl. In some embodiments, alkyl is C1-3 alkyl. In some embodiments, alkyl is deuterated C1-3 alkyl. Typical C1-10 alkyl groups include methyl, trideuteromethyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl (such as 3-pentyl) , hexyl and octyl groups, which may be optionally substituted.

[0018] The term "alkoxy" as used herein refers to oxygen substituted by the above-mentioned C1-10 alkyl groups, preferred C1-6 alkyl groups or C1-4 alkyl groups or C1-3 alkyl groups, e.g., methoxy, ethoxy, etc. The alkyl in the alkoxy groups may be optionally substituted. Substituents of alkoxy groups include, without limitation, halogen, morpholino, amino (including alkylamino and dialkylamino) , and carboxy (including esters thereof) .

[0019] Useful amino and optionally substituted amino groups are -NR'R”, wherein R' and R” each are independently hydrogen, an optionally substituted C1-10 alkyl, an optionally substituted C3-8 cycloalkyl, an optionally substituted heterocyclic group, an optionally substituted aryl or an optionally substituted heteroaryl. Preferably, R' and R” each are independently hydrogen, an optionally substituted C1-4 alkyl, an optionally substituted C3-6 cycloalkyl, an optionally substituted 3-6 membered heterocyclic group or an optionally substituted 5 membered heteroaryl, or R' and R” together with the N to which they are attached form an optionally substituted 4-7 membered cyclic amino group, which optionally comprises one or more (such as  2, 3) additional heteroatoms selected from a group consisting of O, N and S. Preferably, the amino groups include -NH2, -NHR' and -NR'R”, wherein R' and R” are each independently selected from a group consisting of an optionally substituted C1-4 alkyl, an optionally substituted C3-6 cycloalkyl or an optionally substituted 3-6 membered heterocyclic group.

[0020] The term “oxo” as used herein refers to =O.

[0021] The term “aryl” as used herein by itself or as part of another group refers to monocyclic, bicyclic or tricyclic aromatic groups containing 6 to 14 carbon atoms. Aryl may be substituted by one or more substituents as described herein.

[0022] Useful aryl groups include C6-14 aryl groups, preferably C6-10 aryl groups. Typical C6-14 aryl groups include phenyl, naphthyl, phenanthryl, anthracyl, indenyl, azulyl, biphenyl, biphenylene and fluorenyl.

[0023] Useful halo or halogen groups include fluoro (F) , chloro (Cl) , bromo (Br) and iodo (I) .

[0024] Useful acyl groups include C1-6 acyl groups, such as acetyl. Acyl may be optionally substituted by group selected from halo, amino and aryl, wherein the amino and aryl may be optionally substituted. When acyl is substituted by halo, the number of halogen substituents may be in the range of 1-5. Examples of substituted acyls include chloroacetyl and pentafluorobenzoyl. When acyl is substituted by amino, amino group may be substituted by one or two substituents as described herein. In some embodiments, aminoacyl is -C (O) -NR'R”, wherein R' and R” each are independently hydrogen, an optionally substituted C1-10 alkyl, an optionally substituted C3-8 cycloalkyl, an optionally substituted heterocyclic group, an optionally substituted aryl or an optionally substituted heteroaryl. Preferably, R' and R” each are independently hydrogen, an optionally substituted C1-4 alkyl, an optionally substituted C3-6 cycloalkyl or an optionally substituted 3-6 membered heterocyclic group.

[0025] In this disclosure, sulfonyl refers to R-S (=O) 2-, wherein R can be an alkyl group such as that described herein. In this disclosure, C1-4 sulfonyl refers to a sulfonyl group where R is a C1-4 sulfonyl group.

[0026] The term “heteroaryl” as used herein refers to a group having 5 to 14 ring atoms, preferably 5 to 10 ring atoms, with 6, 10 or 14 electrons shared in a cyclic array. Ring atoms are carbon atoms and 1-3 heteroatoms selected from a group consisting of oxygen, nitrogen and sulfur. Heteroaryl may be optionally substituted by one or more substituents as described herein.

[0027] The term "heterocyclic group" as herein refers to a saturated or partially saturated 3-7 membered monocyclic group, 7-10 membered bicyclic group, 11-14 membered tricyclic group, spiralcyclic group or bridged ring group, which consists of carbon atoms and 1-4 heteroatoms independently selected from a group consisting of O, N, and S, wherein the nitrogen and / or sulfur heteroatoms can be optionally oxidized and the nitrogen can be optionally quaternized, and the term also includes any bicyclic ring system in which any of the above-defined  heterocyclic rings is fused to a benzene ring. The heterocyclic group can be substituted on carbon atom or nitrogen atom if the resulting compound is stable. The heterocyclic group may be substituted by one or more substituents as described herein.

[0028] In this disclosure, unless otherwise described, when superseded, the alkyl, alkoxy, amino, acyl, aryl, or heteroaryl groups described in any embodiment herein may be substituted by one or more (such as 1, 2, 3 or 4) substituents selected from the group consisting of halogen, hydroxyl, carboxy, amino, nitro, cyano, C1-6 amido, C1-6 alkoxy, C1-6 alkyl, C1-6 acyl, C6-10 aryl, C3-8 cycloalkyl, heteroaryl and carbonyl groups, etc. The substituent itself may also be optionally substituted. Preferably substituents include, but are not limited to, halogen, hydroxy, cyano, amino, C1-6alkoxy, C1-6 alkyl and C1-6 acyl groups.

[0029] It should be understood that in each embodiment, when the substituent is a heterocyclic group, aryl or heteroaryl, the number thereof is usually one.

[0030] Specifically, the disclosure provides compounds represented by Formula I:

[0031] or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, wherein:

[0032] A1, A2 and A3 are each independently N or CH;

[0033] R1 and R2 are each independently selected from halogen and an optionally substituted C1-4 alkyl;

[0034] R3 and R4 are each independently hydrogen, halogen, cyano, an optionally substituted C1-4 alkyl, or an optionally substituted C1-4 alkoxy;

[0035] R5 is hydrogen, an optionally substituted C1-4 alkyl, an optionally substituted C1-4 acyl or an optionally substituted C1-4 sulfonyl; and

[0036] R6 is hydrogen, halogen, cyano, hydroxyl, an optionally substituted C1-4 alkyl or an optionally substituted C1-4 alkoxy; or R6 can be connected to R3 or R4 to form a 5-6 membered ring.

[0037] In Formula I and each formula of the disclosure, unless otherwise described, when alkyl, alkoxy and acyl are substituted, the substituents can be selected from a group consisting of cyano, hydroxyl, nitro, amino (–NR′R″) , aryl, heteroaryl and halogen, etc., and the  number of substituents may be 1-5. R′ and R″ are preferably each independently H or an optionally substituted C1-4 alkyl. For example, substituted alkyl can be hydroxyalkyl, dihydroxyalkyl, alkylaminoalkyl, dialkylaminoalkyl, arylalkyl, heteroarylalkyl, and haloalkyl, etc. It should be understood, when the substituent is aryl, heteroaryl, heterocyclic group, cyano, nitro and carboxyl, the number thereof is usually 1. When the substituent is halogen, the number of substituents can be up to 5 depending on the carbon chain length of the alkyl, alkenyl, alkynyl and alkoxy groups; exemplary substituents are trifluoromethyl and pentafluoroethyl, etc.

[0038] In one or more embodiments of the compound of Formula I, one of A1, A2, and A3 is N, and the other two are CH. In some embodiments, A2 is N, A1 and A3 are CH. In some embodiments, A1, A2 and A3 are all CH.

[0039] In one or more embodiments of the compound of Formula I, both R1 and R2 are halogen, such as each independently being chloro or fluoro, preferably both R1 and R2 are chloro.

[0040] In one or more embodiments of the compound of Formula I, R3 and R4 each independently are hydrogen, halogen, cyano, C1-3 alkyl, or C1-3 alkoxy. In some embodiments, at least one of R3 and R4 is a non-hydrogen substituent. In some embodiments, R3 and R4 are each independently halogen, C1-3 alkyl or C1-3 alkoxy. In some embodiments, R3 is methyl or methoxy, and R4 is H. In some embodiments, R3 is C1-3 alkyl, such as methyl, and R4 is H.

[0041] In one or more embodiments of the compound of Formula I, R5 is hydrogen, C1-3alkyl, C1-3 acyl or C1-3 sulfonyl, preferably hydrogen or methyl.

[0042] In one or more embodiments of the compound of Formula I, R6 is selected from hydrogen, halogen, cyano, hydroxyl, C1-2 alkyl or C1-2 alkoxy. Preferably, R6 is cyano, hydroxyl, methyl, or methoxy, more preferably, R6 is cyano.

[0043] In one or more embodiments of the compound of Formula I, when R6 is connected to R3 or R4 to form a 5-6 membered ring, the ring can be a saturated or unsaturated carbon ring or a heterocyclic, the heteroatoms in the heterocyclic can be 1 or 2 heteroatoms selected from O, S, or N.

[0044] One group of preferred compounds of Formula I in this disclosure is represented by compounds of Formula II:

[0045] or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or  pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, wherein A2, R1, R2, R3, R5 and R6 are as described in Formula I.

[0046] In one or more embodiments of the compounds of Formula II, both of R1 and R2 are chloro.

[0047] In one or more embodiments of the compounds of Formula II, R3 is halogen, cyano, methyl or methoxy. In some embodiments, R3 is methyl or methoxy. In some embodiments, R3 is methyl.

[0048] In one or more embodiments of the compounds of Formula II, R5 is hydrogen, C1-3 alkyl, C1-3 acyl, or C1-3 sulfonyl, preferably hydrogen or methyl.

[0049] In one or more embodiments of the compounds of Formula II, R6 is selected from hydrogen, halogen, cyano, hydroxyl, C1-2 alkyl or C1-2alkoxy. Preferably, R6 is cyano, hydroxyl, methyl, or methoxy.

[0050] It should be understood that although A1, A2, A3, R1, R2, R3, R4, R5, R6 and R7 in Formula I (including Formula II) are described separately above, the described features, especially the preferred features, can be arbitrarily combined to form the scope of different compounds of Formula I (including Formula II) in this disclosure. For example, in some embodiments of compounds of Formula I (including Formula II) of this disclosure.

[0051] The preferred compounds of this disclosure, without limitation, are selected from: 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 1) ;

[0052] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-fluoro-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 2) ;

[0053] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-methoxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 3) ;

[0054] 4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile (Example 4) ;

[0055] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-fluoro-4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 5) ;

[0056] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-fluoro-4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -5-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 6) ;

[0057] 4- (4- ( (6- (2-chloro-6-fluorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile (Example 7) ;

[0058] 4- (4- ( (6- (3, 5-dichloropyridin-4-yl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile (Example 8) ;

[0059] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-hydroxypiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 9) ;

[0060] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-methoxypiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 10) ;

[0061] 4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) piperidine-4-carbonitrile (Example 11) ;

[0062] 4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-fluorophenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile (Example 12) ;

[0063] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (1, 4-dimethylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 13) ;

[0064] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- (4-methylpiperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 14) ;

[0065] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3, 5-dimethyl-4- (piperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 15) ;

[0066] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methoxy-5-methyl-4- (piperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 16) ;

[0067] 2- ( (3-chloro-5-methoxy-4- (piperidin-4-yl) phenyl) amino) -6- (2, 6-dichlorophenyl) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 17) ;

[0068] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- (1- (methylsulfonyl) piperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 18) ;

[0069] 2- ( (4- (1-acetylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -6- (2, 6-dichlorophenyl) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 19) ;

[0070] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (1', 7-dimethyl-3H-spiro [isobenzofuran-1, 4'-piperidin] -5-yl)amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 20) ; and 4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methoxyphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile (Example 21) ;

[0071] or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, isotope-substituted derivatives, solvates or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof.

[0072] Some of the compounds of the present disclosure may exist as stereoisomers including optical isomers. The disclosure includes all stereoisomers and the racemic mixtures of such stereoisomers as well as the individual enantiomers that may be separated according to methods that are well known to those of ordinary skill in the art.

[0073] Examples of pharmaceutically acceptable salts include inorganic and organic acid salts, such as hydrochloride, hydrobromide, phosphate, sulphate, citrate, lactate, tartrate, maleate, fumarate, mandelate and oxalate; and inorganic and organic base salts formed with bases, such as sodium hydroxy, tris (hydroxymethyl) aminomethane (TRIS, tromethamine) and N-methyl-glucamine.

[0074] The compounds of this disclosure may be prepared using methods known to those skilled in the art, or the novel methods of this disclosure. Specifically, the compounds of this  disclosure with Formula I (including Formula II) can be prepared as illustrated by the exemplary reaction in Scheme 1. The mixture of compounds b and c was prepared by using a synthesis method similar to that disclosed in WO2018090939. Reaction of 4-bromo-3-methylaniline, trifluoroacetic anhydride and triethylamine in dichloromethane produced N- (4-bromo-3-methylphenyl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide. Reaction of N- (4-bromo-3-methylphenyl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide, 1-methylpiperidine-4-one and n-butyllithium in tetrahydrofuran produced 2, 2, 2-trifluoro-N- (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin) -4-yl) -3-methylphenyl) acetamide. Reaction of 2, 2, 2-trifluoro-N- (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) acetamide and sodium hydroxide aqueous solution in methanol produced 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidin-4-ol. Reaction of 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidin-4-ol, and the mixture of compounds b and c in acetonitrile catalyzed by trifluoroacetic acid produced the target compound 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one.

[0075] Scheme 1

[0076] Other related compounds can be prepared by similar methods. For example, replacement of 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidin-4-ol with 4- (4-amino-2-fluorophenyl) -1-methylpiperidin-4-ol produced the target compound 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-fluoro-4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one. Replacement of 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidin-4-ol with tert butyl 4- (4-amino-2-methylphenyl) -4-hydroxypiperidin-1-carboxylate, and further hydrolysis to remove tert butoxycarbonyl protection produced the target compound 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-hydroxypiperidin) -4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one.

[0077] The compounds of this disclosure may be prepared using methods known to those skilled in the art, or the novel methods of this disclosure. Specifically, the compounds of this disclosure with Formula I (including Formula II) can be prepared as illustrated by the exemplary reaction in Scheme 2. Reaction of 2-chloro-N- (2-chloroethyl) -N-methylethylamine and 2- (4- bromo-2-methylphenyl) acetonitrile in anhydrous dimethylformamide in the presence of sodium hydrogen produced 4- (4-bromo-2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carnitrile. Reaction of 4- (4-bromo-2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile and benzophenone imine in the catalysis of Pd2 (dba) 3, 4, 5-bisdiphenylphosphine-9, 9-dimethylxanthene and cesium carbonate in dioxane produced 4- (4- ( (diphenylmethylene) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile. Hydrolysis of 4- (4- ( (diphenylmethylene) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile in HCl / ethyl acetate produced 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile. Reaction of 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile and the mixture of b and c catalyzed by trifluoroacetic acid produced the target compound 4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile.

[0078] Scheme 2

[0079] Other related compounds can be prepared using similar methods. For example, replacement of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (methylthio) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one with 6- (2-chloro-6-fluorophenyl) -2- (methylthio) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one produced the target compound 4- (4- ( ( (6- (2-chloro-6-fluorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile. Replacement of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (methylthio) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one with 6- (3, 5-dichloropyridin-4-yl) -2- (methylthio) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one produced the target compound 4- (4- ( ( (6- (3, 5-dichloropyridin-4-yl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile.

[0080] An important aspect of the present disclosure is the discovery that compounds having Formula I (including Formula II) are Wee1 kinase inhibitors. Therefore, these compounds or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, isotope-substituted derivatives, solvates or pharmaceutically acceptable salts thereof are useful for the treatment of Wee1-related diseases, i.e., Wee1-mediated diseases, such as cancer. As used herein, the Wee1-mediated diseases refer to diseases in which Wee1 is involved in their occurrence and development.

[0081] The present disclosure includes a therapeutic method comprising administering to a mammal an effective amount of compound of Formula I (including Formula II) or stereoisomers,  or a pharmaceutically acceptable salt, wherein said therapeutic method is useful for the treatment of diseases related with kinase, especially Wee1 kinase, such as cancer. Such diseases that can be treated or prevented by the method or pharmaceutical composition of the present disclosure include, but are not limited to, liver cancer, melanoma, Hodgkin's disease, non-Hodgkin's lymphoma, acute lymphocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, multiple myeloma, neuroblastoma, breast carcinoma, ovarian carcinoma, lung carcinoma, Wilms'tumor, cervical carcinoma, testicular carcinoma, soft-tissue sarcoma, primary macroglobulinemia, bladder carcinoma, chronic granulocytic leukemia, primary brain carcinoma, malignant melanoma, small-cell lung carcinoma, stomach carcinoma, colon carcinoma, malignant pancreatic insulinoma, malignant carcinoid carcinoma, choriocarcinoma, mycosis fungoides, head and neck carcinoma, osteogenic sarcoma, pancreatic carcinoma, acute granulocytic leukemia, hairy cell leukemia, rhabdomyosarcoma, Kaposi's sarcoma, genitourinary carcinoma, thyroid carcinoma, esophageal carcinoma, malignant hypercalcemia, cervical hyperplasia, renal cell carcinoma, endometrial carcinoma, polycythemia vera, essential thrombocytosis, adrenal cortex carcinoma, skin cancer, and prostatic carcinoma.

[0082] Therefore, the present invention provides a method for treating or preventing diseases or disorders caused by abnormal activity of Wee1 kinase, comprising administering an effective amount of a compound of Formula I (including Formula II) or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, isotope-substituted derivatives, solvates or pharmaceutically acceptable salts thereof, to a subject in need, or a pharmaceutical composition comprising an effective amount of a compound of Formula I (including Formula II) or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, isotope-substituted derivatives, solvates or pharmaceutically acceptable salts thereof. In the present invention, the subject includes mammals, more specifically humans.

[0083] In practicing the therapeutic methods, effective amounts of compositions containing therapeutically effective concentrations of the compounds of Formula I (including Formula II) or stereoisomers, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which was formulated for oral, intravenous, local or topical application, for the treatment of cancer and other diseases, are administered to an individual exhibiting the symptoms of one or more of these disorders. The amounts are effective to ameliorate or eliminate one or more symptoms of the disorders. An effective amount of a compound for treating a particular disease is an amount that is sufficient to ameliorate, or in some manner reduce, the symptoms associated with the disease. Such amount may be administered as a single dosage or may be administered according to an effective regimen. The amount may cure the disease but, typically, is administered in order to ameliorate the symptoms of the disease. Typically, repeated administration is required to achieve the desired amelioration of symptom.

[0084] In another embodiment, a pharmaceutical composition comprising a compound of  Formula I (including Formula II) or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, isotope-substituted derivatives, solvates or pharmaceutically acceptable salts thereof, which functions as kinase inhibitor, in combination with a pharmaceutically acceptable vehicle, is provided.

[0085] Another embodiment of the present disclosure is directed to a composition effective to treat cancer comprising a compound of Formula I (including Formula II) or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, isotope-substituted derivatives, solvates or pharmaceutically acceptable salts thereof, which functions as a kinase inhibitor, in combination with at least one known anticancer agent or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In particular, the compound herein can be combined with other anticancer drugs related to the mechanism of DNA damage and repair, including PARP inhibitors Olaparib, Niraprib, Rucaparib, Talazoparib, Senaparib and Saruparib; HDAC inhibitors Volinota, Romididesin, Papiseta and Bailesta; and so on. And the compound herein can be combined with other anticancer drugs related to cell division detection sites, including Chk1 / 2 inhibitors, CDK4 / 6 inhibitors such as Paposinib, ATM / ATR inhibitors, and so on. Other examples of known anticancer agents which may be used for combination therapy include, but not are limited to alkylating agents, such as busulfan, melphalan, chlorambucil, cyclophosphamide, ifosfamide, temozolomide, bendamustine, cis-platin, mitomycin C, bleomycin, and carboplatin; topoisomerase I inhibitors, such as camptothecin, irinotecan, and topotecan; topoisomerase II inhibitors, such as doxorubicin, epirubicin, aclarubicin, mitoxantrone, elliptinium and etoposide; RNA / DNA antimetabolites, such as 5-azacytidine, gemcitabine, 5-fluorouracil and methotrexate; DNA antimetabolites, such as 5-fluoro-2'-deoxy-uridine, fludarabine, nelarabine, ara-C, pralatrexate, pemetrexed, hydroxyurea and thioguanine; antimitotic agents, such as colchicine, vinblastine, vincristine, vinorelbine, paclitaxel, ixabepilone, cabazitaxel and docetaxel; antibodies such as campath, panitumumab, metazotuzumab, navuzumab, pymzumab, remoluzumab, bevacizumab, partuzumab, trastuzumab, cetuximab, obinutuzumab, olfactuzumab, rituximab, alemtuzumab, tiemuzumab, toximab, bentuximab, daremuzumab, errotuzumab, T-DM1, ofatumumab, dinutuximab, blinatumomab, ipilimma, avastin, trastuzumab and rituximab; kinase inhibitors such as imatinib, gefitinib, erlotinib, osimertinib, afatinib, ceritinib, aletinib, crizotinib, erlotinib, lapatinib, sorafenib, regorafenib, vemurafenib, dabrafenib, aflibercept, sunitinib, nilotinib, dasatinib, bosutinib, pratinib, ibrutinib, cabozatinib, lenvatinib, vandetanib, trametinib, cobimetinib, axitinib, temsirolimus, idelalisib, pazopanib, temsirolimus and everolimus. Other known anticancer agents which may be used for combination therapy include tamoxifen, letrozole, fulvestrant, mitoguazone, octreotide, retinoic acid, arsenic trioxide, zoledronic acid, bortezomib, carfazomide, ixazomib, erivedge, sonidegib, denosumab, thalidomide, lenalidomide, venetoclax, aldesleukin (recombinant human interleukin-2) and sipueucel-T (prostate cancer therapeutic vaccine) .

[0086] In practicing the methods of the present disclosure, the compound of the disclosure  may be administered together with at least one known anticancer agent as part of a unitary pharmaceutical composition. Alternatively, the compound of the disclosure may be administered apart from at least one known anticancer agent. In one embodiment, the compound of the disclosure and at least one known anticancer agent are administered substantially simultaneously, i.e. the compounds are administered at the same time or one after the other, so long as the compounds reach therapeutic levels in the blood at the same time. In another embodiment, the compound of the disclosure and at least one known anticancer agent are administered according to their individual dose schedule, so long as the compounds reach therapeutic levels in the blood.

[0087] Another embodiment of the present disclosure is directed to a composition effective to inhibit neoplasia comprising a bioconjugate of a compound described herein, which functions as a kinase inhibitor, in bioconjugation with at least one known therapeutically useful antibody, such as trastuzumab or rituximab, growth factors, such as DGF, NGF; cytokines, such as IL-2, IL-4, or any molecule that binds to the cell surface. The antibodies and other molecules will deliver a compound described herein to its targets and make it an effective anticancer agent. The bioconjugates could also enhance the anticancer effect of the therapeutically useful antibodies, such as trastuzumab or rituximab.

[0088] Similarly, another embodiment of the present disclosure is directed to a composition effective to inhibit neoplasia comprising a compound of Formula I (including Formula II) , or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, isotope-substituted derivatives, solvates or pharmaceutically acceptable salts thereof, which functions as a kinase inhibitor, in combination with radiation therapy. In this embodiment, the compound of the disclosure may be administered at the same time as the radiation therapy is administered or at a different time.

[0089] Yet another embodiment of the present disclosure is directed to a composition effective for post-surgical treatment of cancer, comprising a compound of Formula I (including Formula II) or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, isotope-substituted derivatives, solvates or pharmaceutically acceptable salts thereof, which functions as a kinase inhibitor. The disclosure also relates to a method of treating cancer by surgically removing the tumor and then treating the mammal with one of the pharmaceutical compositions described herein.

[0090] Pharmaceutical compositions within the scope of this disclosure include all compositions wherein the compounds of the present disclosure are contained in an amount that is effective to achieve its intended purpose. While individual needs vary, determination of optimal ranges of effective amounts of each component is within the skill of the art. Typically, the compounds may be administered to mammals, orally at a dose of from about 0.0025 to 50 mg / kg of body weight, per day, or an equivalent amount of the pharmaceutically acceptable salt thereof, to a mammal being treated. Preferably, from approximately 0.01 to approximately 10 mg / kg of body weight is orally administered. If a known anticancer agent is also administered, it is administered in an amount that is effective to achieve its intended purpose. The optimal amounts  of such known anticancer agents effective for cancer are well known to those skilled in the art.

[0091] The unit oral dose may comprise from approximately 0.01 to approximately 50 mg, preferably approximately 0.1 to approximately 10 mg of the compound of the disclosure. The unit dose may be administered one or more times daily, as one or more tablets, each containing from approximately 0.1 to approximately 50 mg, conveniently approximately 0.25 to 10 mg of the compound or its solvates.

[0092] In a topical formulation, the compound may be present at a concentration of approximately 0.01 to 100 mg per gram of carrier.

[0093] In addition to administering the compound as a raw chemical, the compounds of the disclosure may be administered as part of a pharmaceutical preparation containing suitable pharmaceutically acceptable carriers comprising excipients and auxiliaries, which facilitate processing of the compounds into preparations that may be used pharmaceutically. Preferably, the preparations, particularly those preparations which may be administered orally and that may be used for the preferred type of administration, such as tablets, dragees, and capsules, as well as suitable solutions for administration by injection or orally, contain from approximately 0.01 to 99 percent, preferably from approximately 0.25 to 75 percent of active compound (s) , together with the excipient.

[0094] Also included within the scope of the present disclosure are the non-toxic pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present disclosure. Acid addition salts are formed by mixing a solution of the compounds of the present disclosure with a solution of a pharmaceutically acceptable non-toxic acid, such as hydrochloric acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, acetic acid, citric acid, tartaric acid, carbonic acid, phosphoric acid, oxalic acid, and the like. Base addition salts are formed by mixing a solution of the compounds of the present disclosure with a solution of a pharmaceutically acceptable non-toxic base, such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, choline hydroxide, sodium carbonate, tris (hydroxymethyl) aminomethane (TRIS) , N-methyl-glucamine and the like.

[0095] The pharmaceutical compositions of the disclosure may be administered to any mammal, so long as they may experience the therapeutic effects of the compounds of the disclosure. Foremost among such mammals are humans and veterinary animals, although the disclosure is not intended to be so limited.

[0096] The pharmaceutical compositions of the present disclosure may be administered by any means that achieve their intended purpose. For example, administration may be by parenteral, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, transdermal, buccal, intrathecal, intracranial, intranasal or topical routes. Alternatively, or concurrently, administration may be by the oral route. The dosage administered will be dependent upon the age, health, and weight of the recipient, kind of concurrent treatment, if any, frequency of treatment, and the nature of the effect desired.

[0097] The pharmaceutical preparations of the present disclosure are manufactured in a manner, which is itself known, e.g., by means of conventional mixing, granulating, dragee-making, dissolving, or lyophilizing processes. Thus, pharmaceutical preparations for oral use may be obtained by combining the active compounds with solid excipients, optionally grinding the resulting mixture and processing the mixture of granules, after adding suitable auxiliaries, if desired or necessary, to obtain tablets or dragee cores.

[0098] Suitable excipients are, in particular: fillers, such as saccharides, e.g. lactose or sucrose, mannitol or sorbitol; cellulose preparations and / or calcium phosphates, e.g. tricalcium phosphate or calcium hydrogen phosphate; as well as binders, such as starch paste, using, e.g., maize starch, wheat starch, rice starch, potato starch, gelatin, tragacanth, methyl cellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, and / or polyvinyl pyrrolidone. If desired, disintegrating agents may be added, such as the above-mentioned starches and also carboxymethyl-starch, cross-linked polyvinyl pyrrolidone, agar, or alginic acid or a salt thereof, such as sodium alginate. Auxiliaries are, above all, flow-regulating agents and lubricants, e.g., silica, talc, stearic acid or salts thereof, such as magnesium stearate or calcium stearate, and / or polyethylene glycol. Dragee cores are provided with suitable coatings which, if desired, are resistant to gastric juices. For this purpose, concentrated saccharide solutions may be used, which may optionally contain gum arabic, talc, polyvinyl pyrrolidone, polyethylene glycol and / or titanium dioxide, lacquer solutions and suitable organic solvents or solvent mixtures. In order to produce coatings resistant to gastric juices, solutions of suitable cellulose preparations, such as acetylcellulose phthalate or hydroxypropylmethyl-cellulose phthalate, are used. Dye stuffs or pigments may be added to the tablets or dragee coatings, e.g., for identification or in order to characterize combinations of active compound doses.

[0099] Other pharmaceutical preparations, which may be used orally, include push-fit capsules made of gelatin, as well as soft, sealed capsules made of gelatin and a plasticizer, such as glycerol or sorbitol. The push-fit capsules may contain the active compounds in the form of: granules, which may be mixed with fillers, such as lactose; binders, such as starches; and / or lubricants, such as talc or magnesium stearate and, optionally, stabilizers. In soft capsules, the active compounds are preferably dissolved or suspended in suitable liquids, such as fatty oils, or liquid paraffin. In addition, stabilizers may be added.

[0100] Suitable formulations for parenteral administration include aqueous solutions of active compounds, e.g., aqueous solutions and alkaline solutions of water-soluble salts. In addition, suspensions of the active compounds as appropriate oily injection suspensions may be administered. Suitable lipophilic solvents or vehicles include fatty oils, e.g., sesame oil, or synthetic fatty acid esters, e.g., ethyl oleate or triglycerides or polyethylene glycol-400, or Cremophor, or cyclodextrins. Aqueous injection suspensions may contain substances which increase the viscosity of the suspension, e.g., sodium carboxymethyl cellulose, sorbitol, and / or  dextran. Optionally, the suspension may also contain stabilizers.

[0101] In accordance with one aspect of the present disclosure, compounds of the disclosure are employed in topical and parenteral formulations and are used for the treatment of skin cancer.

[0102] The topical compositions of this disclosure are formulated preferably as oils, creams, lotions, ointments and the like by choice of appropriate carriers. Suitable carriers include vegetable or mineral oils, white petrolatum (white soft paraffin) , branched chain fats or oils, animal fats and high molecular weight alcohol (greater than C12) . The preferred carriers are those in which the active ingredient is soluble. Emulsifiers, stabilizers, humectants and antioxidants may also be included, as well as agents imparting color or fragrance, if desired. Additionally, transdermal penetration enhancers may be employed in these topical formulations. Examples of such enhancers are found in U.S. Patent Nos. 3,989,816 and 4,444,762.

[0103] Creams are preferably formulated from a mixture of mineral oil, self-emulsifying beeswax and water in which mixture of the active ingredient, dissolved in a small amount of an oil, such as almond oil, is admixed. A typical example of such a cream is one which includes approximately 40 parts water, approximately 20 parts beeswax, approximately 40 parts mineral oil and approximately one part almond oil.

[0104] Ointments may be formulated by mixing a solution of the active ingredient in a vegetable oil, such as almond oil, with warm soft paraffin and allowing the mixture to cool. A typical example of such an ointment is one which includes approximately 30 %almond oil and approximately 70 %white soft paraffin by weight.

[0105] The present disclosure also includes the use of the compounds of the subject disclosure in the manufacture of a medicament for treating a clinical condition responsive to the inhibition of kinase (especially Wee1) activity. The medicament may include the pharmaceutical compositions as described above.

[0106] The following examples are illustrative, but not limiting, of the method and compositions of the present disclosure. Other suitable modifications and adaptations of the variety of conditions and parameters normally encountered in clinical therapy and which are obvious to those skilled in the art are within the spirit and scope of the disclosure.EXAMPLES

[0107] General remarks

[0108] All reagents were of commercial quality. Solvents were dried and purified by standard methods. Mass spectrum analyses were recorded on a Platform II (Agilent 6110) quadrupole mass spectrometer fitted with an electrospray rinterface. 1H NMR spectra was recorded at 400 MHz, on a Brücker Ascend 400 apparatus. Chemical shifts were recorded as parts per million (ppm) downfield from TMS (0.00 ppm) , and J coupling constants were reported in hertz (Hz) .

[0109] Example 1

[0110] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one

[0111] a) Preparation of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (methylsulfinyl) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one and 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (methylsulfonyl) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one: to a solution of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (methylthio) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimidin [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (0.5 g, 1.3 mmol) in DCM (5 mL) was added M-chloroperoxybenzoic acid (m-CPBA, 80%purity, 0.4 g, 2.0 mmol) . The mixture was stirred at 0℃ for 2 hours. After completion of the reaction, the mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with DCM (30 mL × 2) . The combined organic phase was washed with water (30 mL × 2) , saturated sodium bicarbonate aqueous solution (30 mL ×2) and sodium sulfite aqueous solution (5 wt%, 100 mL × 3) , dried over anhydrous sodium sulfate, and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure to afford a crude mixture of the target products (0.46 g, off-white solid) . MS (ESI) 396.00 [M+H] +; 411.00 [M+H] +.

[0112] b) Preparation of N- (4-bromo-3-methylphenyl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide: to a solution of 4-bromo-3-methylaniline (1 g, 5.4 mmol) in DCM (10 mL) were added trifluoroacetic anhydride (1.7 g, 8.1 mmol) and triethylamine (1.6 g, 16.0 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature overnight. After, it was diluted with water (50 mL) and extracted with EA (100 mL×3) . The organic phases were collected, washed with saline solution (50 mL) , dried with anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure in the filtrate to obtain a crude product, and purified with a silica gel column (PE / EA = 5 / 1) to obtain the target product (1.4 g, 92%yield, white solid) . MS (ESI) 291.95 [M+H] +.

[0113] c) Preparation of 2, 2, 2-trifluoro-N- (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) acetamide: to a solution of N- (4-bromo-3-methylphenyl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide (1.0 g, 3.6 mmol) in THF (10 mL) was added n-butyllithium (n-BuLi, 2.5 M, 3.6 mL) dropwise under N2 atmosphere at -78℃. The mixture was stirred at -78℃ for 1 h. Then 1-methylpiperidin-4-one (0.5 g, 4.3 mmol) in THF (5 mL) was added. The reaction mixture was stirred under N2 at room temperature for 2 hours. After the reaction was completed, the mixture was quenched with saturated NH4Cl aqueous solution (50 mL) and extracted with EA (100 mL ×3) . The combined organic layers were washed with brine (50 mL) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (DCM / MeOH = 30 / 1) to afford the target product (560 mg, 50%yield, white solid) . MS (ESI) : 317.10 [M+H] +.

[0114] d) Preparation of 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidin-4-ol: to a solution of 2, 2, 2-trifluoro-N- (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) acetamide (510 mg, 1.6 mmol) in methanol (10 mL) was added 1 M NaOH aqueous solution (3 mL) at room  temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 4 hours. After the reaction was completed, the mixture was diluted with water (30 mL) and extracted with a mixed solvent of dichloromethane and methanol (v / v=10 / 1, 50 mL ×3) . The combined organic layers were washed with brine (10 mL) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford the target product (200 mg, 57%yield, white solid) . MS (ESI) 221.00 [M+H] +.

[0115] e) Preparation of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one: to a solution of 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidin-4-ol (30 mg, 0.14 mmol) in THF (2 mL) was added a mixture of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (methylsulfinyl) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one, 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2-(methylsulfonyl) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (61 mg, 0.15 mmol) and 1 drop of trifluoroacetic acid. The reaction mixture is stirred at 25 ℃ for 2 h. After the reaction was completed, the mixture was concentrated under reduced pressure and purified with a preparative HPLC column to obtain the target compound (7.5 mg, white solid in 10%yield) .

[0116] Example 2

[0117] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-fluoro-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one

[0118] To a solution of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (Example 1, 60.0 mg, 0.1 mmol) in DCM (3 mL) was added DAST (32.0 mg, 0.2 mmol, 2.0 eq ) at 0℃, The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. After the reaction was completed, the mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by Pre-HPLC to afford the target compound (20.2 mg, 34%yield, white solid) .

[0119] Example 3

[0120] 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-methoxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one

[0121] a) Preparation of 2, 2, 2-trifluoro-N- (4- (4-fluoro-1-methylpiperidine-4-yl) -3-methylphenyl) acetamide: to a solution of 2, 2, 2-trifluoro-N- (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) acetamide (Example 1c, 2.0 g, 6.3 mmol) in THF (30 mL) was added [bis (2-methoxyethyl) amine] sulfur trifluoride (BAST, 4.6 g, 20.8 mmol) slowly at 0℃. The mixture was stirred for 16 h at room temperature, and then the mixture was quenched with saturated ammonia chloride aqueous solution (30 ml) and extracted with E A (30 mL × 3) . The combined organic layers were dried with sodium sulfate, filtered, and the filtrate was concentrated, and the resulting crude product was purified with a silica gel column (PE / EA=3 / 1) to afford the target  product (600 mg, 30%yield, white solid) . MS (ESI) : 319.10 [M+H] +.

[0122] b) Preparation of 4- (4-methoxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylaniline: to a solution of 2, 2, 2-trifluoro-N- (4- (4-fluoro-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) acetamide (200 mg, 0.6 mmol) in methanol (5 mL) was added sodium methoxide (340 mg, 6.3 mmol) . The mixture was stirred at 70℃for 5 hours under nitrogen protection. Water (20 mL) was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with EA (30 mL ×3) . The combined organic phase was dried with anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure, and the crude product obtained was purified by preparative thin plate chromatography (DCM / MeOH=10 / 1) to afford the target product (20 mg, 14%yield, white solid) . MS (ESI) : 235.05 [M+H] +.

[0123] c) Preparation of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-methoxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one: replacement 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidin-4-ol with 4- (4-methoxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylaniline produced the target compound (3.5 mg, 7%yield, white solid) by using the synthesis method similar to that of Example 1e.

[0124] Example 4

[0125] 4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile

[0126] a) Preparation of 4- (4-bromo-2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile: to a solution of 2-chloro-N- (2-chloroethyl) -N-methylethylamine (3.0 g, 19.1 mmol) and 2- (4-bromo-2-methylphenyl) acetonitrile (2.0 g, 9.6 mmol) in anhydrous dimethylformamide (20 mL) was added Sodium hydride, 60%dispersion in oil (1.1 g, 28.8 mmol, 3.0 eq) . The mixture was heated at 60 ℃ for 1 hour and then stirred at room temperature for 18 hours. The reaction mixture was poured into ice-water (20 mL) and extracted with EA (30 mL×3) . The organic layers were combined, dried over sodium sulfate and concentrated. The residue was purified by silica gel column (PE / EA=10 / 1) to afford the target product (1.8 g, 64%yield, white solid) . MS (ESI) : 294.95 [M+H] +.

[0127] b) Preparation of 4- (4- ( (diphenylmethylene) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile: To a solution of 4- (4-bromo-2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile (1.8 g, 6.2 mmol) and benzophenone imine (1.7 g, 9.2 mmol) in dioxane (25 mL) was added Pd2(dba) 3 (565 mg, 0.6 mmol) and Xantphos (713 mg, 1.2 mmol) and cesium carbonate (6.0 g, 18.4 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at 100℃ for 8 hours. The mixture was cooled to room temperature and filtered. Water (30 mL) was added to the filtrate, extracted with EA (30 mL×3) . The organic layers were dried over sodium sulfate and concentrated. The residue was purified by silica gel column (PE / EA=5 / 1) to afford the target product (1.8 g, 74%yield, white solid) . MS (ESI) : 395.95 [M+H] +.

[0128] c) Preparation of 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile: to a solution of 4- (4- ( (diphenylmethylene) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile (0.8 g, 2.0 mmol) in EA (10 mL) was added HCl-EA (4 M, 20.0 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction was completed, the mixture was concentrated to afford the hydrochloride of the target product (400 mg, white solid) . MS (ESI) : 230.10 [M+H] +.

[0129] d) Preparation of 4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile: replacement of 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidin-4-ol with 4- (4-amino-2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile (102mg, 35 %yield, white solid) produced the target compound by using a synthesis method similar to that of Example 1.

[0130] Examples 5-20

[0131] Examples 5, 6 and 9 were prepared by using a synthesis method similar to that of Example 1; Examples 7, 8, 11, 12 and 21 were prepared by using a synthesis method similar to that of Example 4; Example 10 was prepared by using a synthesis method similar to that of Example 3; Examples 15-20 were prepared by using a synthesis method similar to that disclosed in Example 1 or WO2021073491. The results of each compounds are as follows:

[0132] Example 22

[0133] Determination of the inhibitory effect of compounds on Wee1 kinase using Wee1 (h) kinase activity assay

[0134] Using the ADP-Glo Kinase reagent (Promega, #V9103) , the reaction buffer consists of 50  mM HEPES, 1 mM EGTA, 10 mM MgCl2, 0.01%Brij 35, and 2 mM DTT (pH 7.5) . First, a series of dilutions of the compound stock solution were prepared in DMSO at a 1: 3 ratio to achieve 10 concentrations. Then, the Echo 665 instrument was used to add 0.05 μL of the diluted compounds to a 384-well plate (Greiner, #784075) , followed by the addition of 2.5 μL of Wee1 enzyme (Carna, #05-177) solution. Centrifuge at 1000 rpm for 1 minute. After incubating at 25℃ for 10 minutes, 2.5 μL of the ATP / substrate mixture was added to initiate the reaction, and the mixture was incubated at 25℃ for 60 minutes. Then, 4 μL of ADP-Glo reagent was added and incubated at 25℃ for 40 minutes, followed by the addition of 8 μL of the kinase detection reagent, continuing to incubate at 25℃ for another 40 minutes. Finally, the chemiluminescence was measured by using the BMG PHERAstar FSX instrument. The inhibition rate %was calculated as follows: Inhibition Rate %= (Chemiluminescence of wells without compound -Chemiluminescence of compound)  /  (Chemiluminescence of wells without compound-Chemiluminescence of wells with negative control) ×100. The curve was fitted by using the nonlinear regression equation: Y = Bottom + (Top-Bottom)  /  (1+10^ ( (LogIC50-X) *HillSlope) ) . The IC50 value was calculated by using the software XLfit 5.5.0.

[0135] Table 1 lists the Wee1 kinase inhibition data (IC50) for the compounds.

[0136] Table 1

[0137] The compound of the present invention exhibits a good inhibitory effect on Wee1 kinase activity.

[0138] Example 23

[0139] Determination of the inhibitory effect of compounds on the proliferation of LoVo cell using CCK-8 method

[0140] The thawed LoVo cells were cultured and passaged until they grew well and had a confluence about 90%, and then they were used for experiments. The cells were digested by trypsinase and centrifuged at 800 rpm for 5 minutes, the supernatant was discarded, and the residual was resuspended with fresh medium and counted. The cells were seeded into 96-well cell culture plate with a density of 6000 cells per well and incubated overnight in a 5%CO2 incubator at 37℃. The stock solutions of test compounds were serially diluted to 8 concentrations by DMSO at the ratios of 1: 3 and 1: 10, respectively. The final concentration of compound was: 10 μM, 3.3 μM, 1 μM, 0.33 μM, 0.1 μM, 0.033 μM, 0.01 μM and 0 μM. 5 μL diluent of each concentration was added to 120 μL of medium (25 times diluted) and mixed by shaking. The overnight cell plates were taken and the culture medium was removed, 195 μL of  fresh medium was added to each well, and 5 μL of diluted medium containing the corresponding concentration of the test compound was added respectively (the final concentration of DMSO is 1‰) , and the culture plate was then placed in a 5%CO2 incubator at 37℃ for 3 days. After removing the original solution, 90 μL of fresh serum-free 1640 medium was added, then 10μL of CCK-8 reagent was added to each well and continued incubation for 2 hours. The 96-well plates were placed in a multi-function reader to read the absorbance at the wavelength of 450 / 650 nm. Cell viability (%) = (ODcompound-ODbackground)  /  (ODDMSO-ODbackground) ×100. GraphPad Prism 5.0 was used to analyze the data. The inhibitory activity of compounds on cell proliferation was plotted based on cell viability and the logarithm of compound concentration. The IC50 value was fitted by a sigmoidal dose response curve equation Y=100 /  (1+10^ (LogC-LogIC50) ) , wherein C was the concentration of compound.

[0141] Table 2 summarizes the inhibitory effect data (IC50) of compounds on the proliferation of LoVo cell.

[0142] Table 2

[0143] Therefore, the compounds of the present invention have a good inhibitory effect on the growth of LoVo cells as determined by the CCK-8 detection method.

[0144] Example 24

[0145] Determination of the inhibitory effect of compounds on the proliferation of NCI-H1299 cell using CCK-8 method

[0146] The thawed NCI-H1299 cells were cultured and passaged until they grew well and had a confluence about 90%, and then they were used for experiments. The cells were digested by trypsinase and centrifuged at 800 rpm for 5 minutes, the supernatant was discarded, and the residual was resuspended with fresh medium and counted. The cells were seeded into 96-well cell culture plate with a density of 1000 cells per well and incubated overnight in a 5%CO2 incubator at 37℃. The stock solutions of test compounds were serially diluted to 8 concentrations by DMSO at the ratios of 1: 3 and 1: 10, respectively. The final concentration of compound was: 10 μM, 3.3 μM, 1 μM, 0.33 μM, 0.1 μM, 0.033 μM, 0.01 μM and 0 μM. 5 μL diluent of each concentration was added to 120 μL of medium (25 times diluted) and mixed by shaking. The overnight cell plates were taken and the culture medium was removed, 195 μL of  fresh medium was added to each well, and 5 μL of diluted medium containing the corresponding concentration of the test compound was added respectively (the final concentration of DMSO is 1‰) , and the culture plate was then placed in a 5%CO2 incubator at 37℃ for 3 days. After removing the original solution, 90 μL of fresh serum-free 1640 medium was added, then 10μL of CCK-8 reagent was added to each well and continued incubation for 2 hours. The 96-well plates were placed in a multi-function reader to read the absorbance at the wavelength of 450 / 650 nm. Cell viability (%) = (ODcompound-ODbackground)  /  (ODDMSO-ODbackground) ×100. GraphPad Prism 5.0 was used to analyze the data. The inhibitory activity of compounds on cell proliferation was plotted based on cell viability and the logarithm of compound concentration. The IC50 value was fitted by a sigmoidal dose response curve equation Y=100 /  (1+10^ (LogC-LogIC50) ) , wherein C was the concentration of compound.

[0147] Table 3 summarizes the inhibitory effect data (IC50) of compounds on the proliferation of NCI-H1299 cell.

[0148] Table 3

[0149] Therefore, the compound of the present invention has a good inhibitory effect on the growth of NCI-H1299 cells as determined by the CCK-8 detection method.

[0150] Example 25

[0151] The effect of the compound of the present invention on the hERG current detected by the manual patch-clamp method

[0152] The compound was tested at different concentrations (0.37 μM, 1.11 μM, 3.33 μM, 10 μM, 30 μM) in HEK293 cells stably transfected with the hERG gene (purchased from InGentech) to assess its effect on hERG currents and the concentration-effect relationship. Data analysis and curve fitting were performed using PatchMaster software and GraphPad Prism 8.0 to determine the concentration of the compound that inhibits 50%of hERG currents.

[0153] Table 4 summarizes the data on the inhibitory effects of the compound on hERG (IC50, μM) .

[0154] Table 4

[0155] Note: *E12 is the compound of Example 12 in WO2021073491.

[0156] Therefore, measurements using the manual patch-clamp method indicate that the compound of the present invention has a weak inhibitory effect on hERG currents.

[0157] Having now fully described this disclosure, it will be understood by those of ordinary skill in the art that the same can be performed within a wide and equivalent range of conditions, formulations and other parameters without affecting the scope of the disclosure or any embodiment thereof. All patents, patent applications and publications cited herein are fully incorporated by reference herein in their entirety.

Claims

1.A compound represented by Formula I: or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, wherein:A1, A2 and A3 are each independently N or CH;R1 and R2 are each independently selected from halogen and an optionally substituted C1-4 alkyl;R3 and R4 are each independently hydrogen, halogen, cyano, an optionally substituted C1-4 alkyl, or an optionally substituted C1-4 alkoxy;R5 is hydrogen, an optionally substituted C1-4 alkyl, an optionally substituted C1-4 acyl or an optionally substituted C1-4 sulfonyl; andR6 is hydrogen, halogen, cyano, hydroxyl, an optionally substituted C1-4 alkyl or an optionally substituted C1-4 alkoxy; or R6 is connected to R3 or R4 to form a 5-6 membered ring.2.The compound of claim 1, or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, wherein one of A1, A2, and A3 is N, and the other two are CH; preferably, A2 is N, A1 and A3 are CH; or A1, A2 and A3 are all CH.3.The compound of claim 1 or 2, or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, wherein both R1 and R2 are halogen, such as each independently being chloro or fluoro, preferably both R1 and R2 are chloro.4.The compound of any one of claims 1-3, or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, wherein R3 and R4 are each independently hydrogen, halogen, cyano, C1-3 alkyl or C1-3 alkoxy;preferably, R3 and R4 are each independently hydrogen, C1-3 alkyl or C1-3 alkoxy, or R3 and R4 are each independently halogen, C1-3 alkyl or C1-3 alkoxy;preferably, at least one of R3 and R4 is a non-hydrogen substituent;preferably, R3 is C1-3 alkyl, such as methyl, and R4 is H.5.The compound of any one of claims 1-4, or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, wherein:R5 is hydrogen, C1-3 alkyl, C1-3 acyl or C1-3 sulfonyl, preferably hydrogen or methyl; and / orR6 is selected from hydrogen, halogen, cyano, hydroxyl, C1-2 alkyl or C1-2 alkoxy; preferably, R6 is cyano, hydroxyl, methyl, or methoxy; more preferably, R6 is cyano.6.The compound of claim 1, or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, wherein the compound of Formula I has a structure represented by the following Formula II: wherein A2, R1, R2, R3, R5, and R6 are as defined in any one of claims 1～6.7.The compound of claim 1, or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, wherein the compound is selected from:6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-fluoro-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-methoxy-1-methylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-fluoro-4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-fluoro-4- (4-hydroxy-1-methylpiperidin-4-yl) -5-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;4- (4- ( (6- (2-chloro-6-fluorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile;4- (4- ( (6- (3, 5-dichloropyridin-4-yl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-hydroxypiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (4-methoxypiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methylphenyl) piperidine-4-carbonitrile;4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-fluorophenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (4- (1, 4-dimethylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- (4-methylpiperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3, 5-dimethyl-4- (piperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methoxy-5-methyl-4- (piperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;2- ( (3-chloro-5-methoxy-4- (piperidin-4-yl) phenyl) amino) -6- (2, 6-dichlorophenyl) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- (1- (methylsulfonyl) piperidin-4-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;2- ( (4- (1-acetylpiperidin-4-yl) -3-methylphenyl) amino) -6- (2, 6-dichlorophenyl) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one;6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (1', 7-dimethyl-3H-spiro [isobenzofuran-1, 4'-piperidin] -5-yl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one; and4- (4- ( (6- (2, 6-dichlorophenyl) -5-oxo-5, 6, 8, 9-tetrahydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-2-yl) amino) -2-methoxyphenyl) -1-methylpiperidine-4-carbonitrile.8.Use of the compound of any one of claims 1～7, or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, in the manufacture of a medicament for treating or preventing Wee1-mediated diseases; preferably, the Wee1-medicated disease is a cancer preferably liver cancer, melanoma, Hodgkin's disease, non-Hodgkin's lymphomas, acute lymphocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, multiple myeloma, neuroblastoma, breast carcinoma, ovarian carcinoma, lung carcinoma, Wilms' tumor, cervical carcinoma, testicular carcinoma, soft-tissue sarcoma, chronic lymphocytic leukemia, primary macroglobulinemia, bladder carcinoma, chronic  granulocytic leukemia, primary brain carcinoma, malignant melanoma, small-cell lung carcinoma, stomach carcinoma, colon carcinoma, malignant pancreatic insulinoma, malignant carcinoid carcinoma, malignant melanoma, choriocarcinoma, mycosis fungoide, head and neck carcinoma, osteogenic sarcoma, pancreatic carcinoma, acute granulocytic leukemia, hairy cell leukemia, rhabdomyosarcoma, Kaposi's sarcoma, genitourinary carcinoma, thyroid carcinoma, esophageal carcinoma, malignant hypercalcemia, cervical hyperplasia, renal cell carcinoma, endometrial carcinoma, polycythemia vera, essential thrombocytosis, adrenal cortex carcinoma, skin cancer, or prostatic carcinoma.9.The use of claim 8, wherein:the medicament further comprises at least one known anticancer agent or a pharmaceutically acceptable salt of said anticancer agent; preferably, the anticancer agent is selected from one or more of the following anticancer agents: busulfan, melphalan, chlorambucil, cyclophosphamide, ifosfamide, temozolomide, bendamustine, cis-platin, mitomycin C, bleomycin, carboplatin, camptothecin, irinotecan, topotecan, doxorubicin, epirubicin, aclarubicin, mitoxantrone, elliptinium, etoposide, 5-azacytidine, gemcitabine, 5-fluorouracil, methotrexate, 5-fluoro-2'-deoxy-uridine, fludarabine, nelarabine, ara-C, pralatrexate, pemetrexed, hydroxyurea, thioguanine, colchicine, vinblastine, vincristine, vinorelbine, paclitaxel, ixabepilone, cabazitaxel, docetaxel, campath, panitumumab, metazotuzumab, navuzumab, pymzumab, remoluzumab, bevacizumab, partuzumab, trastuzumab, cetuximab, obinutuzumab, olfamzumab, rituximab, alemtuzumab, tiemuzumab, toximab, bentuximab, daremuzumab, errotuzumab, T-DM1, ofatumumab, dinutuximab, blinatumomab, ipilimma, avastin, trastuzumab, rituximab, imatinib, gefitinib, erlotinib, osimertinib, afatinib, ceritinib, aletinib, crizotinib, erlotinib, lapatinib, sorafenib, sunitinib, nilotinib, dasatinib, pazopanib, temsirolimus, everolimus, vorinostat, romidepsin, panobinostat, belinostat, tamoxifen, letrozole, fulvestrant, mitoguazone, octreotide, retinoic acid, arsenic trioxide, zoledronic acid, bortezomib, carfilzomib, ixazomib, vismodegib, sonidegib, denosumab, thalidomide, lenalidomide, venetoclax, aldesleukin (recombinant human interleukin-2) , sipueucel-T (prostate cancer therapeutic vaccine) , palbociclib, olaparib, niraparib, rucaparib, talazoparib, senaparib and saruparib; and / orthe medicament is used in combination with radiotherapy.10.A pharmaceutical composition comprising (1) the compound of any of claims 1～7, or stereoisomers, tautomers, N-oxides, hydrates, solvates, isotope-substituted derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or mixtures thereof, and (2) a pharmaceutically acceptable carrier;preferably, the pharmaceutical composition further comprises at least one known anticancer agent or a pharmaceutically acceptable salt of said anticancer agent; preferably, the pharmaceutical composition comprises at least one of the following anticancer drugs: busulfan, melphalan, chlorambucil, cyclophosphamide, ifosfamide, temozolomide, bendamustine, cis-platin, mitomycin C, bleomycin, carboplatin, camptothecin, irinotecan, topotecan, doxorubicin, epirubicin, aclarubicin, mitoxantrone, elliptinium, etoposide, 5-azacytidine, gemcitabine, 5-fluorouracil, methotrexate, 5-fluoro-2'-deoxy-uridine, fludarabine, nelarabine, ara-C, pralatrexate, pemetrexed, hydroxyurea, thioguanine, colchicine, vinblastine, vincristine, vinorelbine, paclitaxel, ixabepilone, cabazitaxel, docetaxel, campath, panitumumab, metazotuzumab, navuzumab, pymzumab, remoluzumab, bevacizumab, partuzumab, trastuzumab, cetuximab, obinutuzumab, olfamzumab, rituximab, alemtuzumab, tiemuzumab, toximab, bentuximab, daremuzumab, errotuzumab, T-DM1, ofatumumab, dinutuximab, blinatumomab, ipilimma, avastin, trastuzumab, rituximab, imatinib, gefitinib, erlotinib, osimertinib, afatinib, ceritinib, aletinib, crizotinib, erlotinib, lapatinib, sorafenib, sunitinib, nilotinib, dasatinib, pazopanib, temsirolimus, everolimus, vorinostat, romidepsin, panobinostat, belinostat, tamoxifen, letrozole, fulvestrant, mitoguazone, octreotide, retinoic acid, arsenic trioxide, zoledronic acid, bortezomib, carfilzomib, ixazomib, vismodegib, sonidegib, denosumab, thalidomide, lenalidomide, venetoclax, aldesleukin (recombinant human interleukin-2) , sipueucel-T (prostate cancer therapeutic vaccine) , palbociclib, olaparib, niraparib, rucaparib, talazoparib, senaparib and saruparib.

Images