An Anti-CD38 monoclonal antibody and application thereof

Abstract

Provided is a humanized monoclonal antibody targeting CD38 in the treatment of immune thrombocytopenia (ITP). The anti-CD38 monoclonal antibody distinguishes itself through its unique mechanism of action, which includes the reduction of autoantibody-mediated destruction of platelets and modulation of the immune system, thereby restoring hemostatic balance, which addresses both the symptoms and the underlying immunological dysregulation characteristic of ITP.

Description

AN ANTI-CD38 MONOCLONAL ANTIBODY AND APPLICATION THEREOFTECHNICAL FIELD

[0001] The present disclosure belongs to the field of medical technology, and specifically relates to antibodies that target CD38.BACKGROUND

[0002] CD38 is a type II transmembrane glycoprotein widely expressed on the surface of many immune cells, including B lymphocytes, natural killer cells, and certain types of T cells. Its functions are multifaceted, encompassing roles in cell adhesion, signal transduction, and calcium signaling. CD38's enzymatic activity also impacts the metabolism of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) and cyclic ADP-ribose, influencing various cellular processes. CD-38 plays a crucial role in immune response regulation and its presence on plasma cells, particularly those involved in autoimmune responses, has made CD38 a target of interest in immunotherapy.

[0003] The development of anti-CD38 monoclonal antibodies marks a significant advancement in the treatment of autoimmune diseases and certain hematological malignancies. By targeting CD38, these antibodies can modulate immune responses, offering a novel approach to conditions where CD38 expression contributes to disease pathology.

[0004] In the context of immune thrombocytopenia (ITP) , traditional treatments have primarily included corticosteroids, intravenous immunoglobulins, and splenectomy, along with second-line therapies such as rituximab and thrombopoietin receptor agonists (TPO-RAs) . However, these treatments often present limitations in terms of efficacy, sustainability of response, and side effects. Patients with refractory or relapsed ITP, in particular, pose a significant therapeutic challenge.

[0005] The synthesis and application of anti-CD38 monoclonal antibodies, as described in WO2021104052A1, provide insights into its unique structure and potential therapeutic benefits. As an anti-CD38 monoclonal antibody differs from conventional ITP therapies by targeting the underlying immunological dysregulation, it offers a dual therapeutic mechanism: firstly, by reducing the autoantibody-mediated destruction of platelets, and secondly, by modulating the immune system to restore hemostatic balance, thus, this dual action addresses both the symptoms and the root cause of ITP, offering a more comprehensive treatment approach.SUMMARY OF THE INVENTION

[0006] The present disclosure encompasses a antibody or antigen-binding portion thereof targeting CD38, which is characterized by its unique complementarity-determining region sequence, differentiating it from existing anti-CD38 antibodies (WO2021104052A1) . It exhibits potent cell-killing capabilities via Fc-receptor-dependent mechanisms and a favorable safety profile.

[0007] In one embodiment, an antibody or antigen-binding portion thereof targeting CD38 is used in the treatment of ITP, targeting short-lived and long-lived plasma cells (LLPCs) responsible for  autoantibody production against platelets. This approach not only reduces autoantibody-mediated platelet destruction but also modulates the immune system to restore hemostatic balance.

[0008] Immune thrombocytopenia (ITP) is a hematological autoimmune disease characterized by a platelet count of less than 100 × 109 / L and an increased risk of bleeding. It affects approximately 9-20 individuals per 10,000 adults annually. Patients with ITP often experience a higher likelihood of hospitalization, fatigue, and a diminished quality of life. The clinical manifestations, predominantly cutaneous and mucosal bleeding, vary in severity depending on platelet counts and can pose life-threatening risks, especially in cases where platelet counts drop below 30 × 109 / L.

[0009] Corticosteroids are the mainstay of first-line treatment for ITP. While many patients initially respond to corticosteroid regimens, only about 20-40%maintain a sustained platelet response after discontinuing treatment. Prolonged use of corticosteroids is discouraged due to associated adverse effects. Patients unresponsive to or relapsing after first-line treatment often turn to second-line therapies, such as splenectomy, rituximab, and thrombopoietin receptor agonists (TPO-RAs) . However, the response to these therapies is varied, underlining a critical need for safer and more effective treatment strategies.

[0010] The pathophysiology of ITP involves the loss of immune tolerance to platelet autoantigens, leading to the production of antiplatelet autoantibodies and the aberrant activation of both humoral and cellular immunity. This results in the destruction of platelets and insufficient production by megakaryocytes. Notably, antiplatelet-specific plasma cells have been identified in the spleens of ITP patients treated with rituximab, shedding light on the resistance to such therapy. These cells, including long-lived plasma cells (LLPCs) , are the primary source of natural antibodies and play a crucial role in immune responses. Hence, strategies targeting only B cell elimination may be ineffective due to the persistent antibody production by LLPCs.

[0011] CD38, a type II glycoprotein, is highly expressed in plasmablasts, short-lived plasma cells, and LLPCs. Its role in autoimmune diseases has become a focus of clinical investigation, especially using an antibody or antigen-binding portion thereof targeting CD38. Humanized monoclonal anti-CD38 antibody, is distinct in its complementarity-determining region sequence from other antibodies like daratumumab. Preclinical studies suggest that the antibody or antigen-binding portion thereof targeting CD38 is effective in inducing potent cell killing via Fc-receptor-dependent mechanisms and is well-tolerated with no significant drug-related adverse effects.

[0012] The present disclosure also encompasses methods of administering the antibody or antigen-binding portion thereof targeting CD38, including dosage and treatment regimens, based on clinical trials. The trials demonstrate the safety and efficacy of the anti-CD38 antibody in treating ITP, with a focus on rapid increase in platelet counts and sustained response. The anti-CD38 antibody offers a promising new strategy for ITP treatment by targeting and eliminating both short-lived plasma cells and LLPCs. The phase 1 / 2 trial of the anti-CD38 antibody has shown promising results in terms of safety and efficacy in treating ITP. The study also aims to elucidate the mechanism behind the rapid increase in platelet counts observed with the anti-CD38 antibody treatment, investigating changes in  the peripheral blood immune status of patients and in passive ITP mouse models.

[0013] The anti-CD38 antibody's unique approach lies in addressing the underlying immunological dysregulation in ITP. By targeting the CD38 pathway, the anti-CD38 antibody not only reduces the autoantibody-mediated destruction of platelets but also modulates the immune system to restore hemostatic balance. This dual-action mechanism provides a comprehensive treatment approach, offering significant improvements over traditional therapies. Its ability to rapidly increase platelet counts and maintain a sustained response with a favorable safety profile positions the anti-CD38 antibody as a potential breakthrough in ITP treatment, potentially changing the treatment landscape for patients who have exhausted other options.

[0014] The anti-CD38 antibody stands out as an immunomodulator in the treatment of ITP and potentially other autoimmune diseases. Unlike traditional therapies that primarily focus on symptom management, the anti-CD38 antibody directly targets the dysregulated immune cells responsible for the disease pathology.

[0015] In one embodiment, the anti-CD38 antibody is employed as a novel therapeutic agent for the treatment of immune thrombocytopenia (ITP) , targeting and eliminating both short-lived plasma cells and long-lived plasma cells (LLPCs) . This approach is based on the premise that these cell types are key contributors to the autoimmune response seen in ITP, where they produce autoantibodies against platelets, leading to their destruction and the resultant thrombocytopenia.

[0016] In one embodiment, the anti-CD38 monoclonal antibody was administrated intravenously weekly at a dose of 16 mg / kg over an 8-week treatment course. Prophylactic medications, as specified in Table 1 below, were provided during the treatment period.

[0017] Table 1. Prophylactic medications of the anti-CD38 monoclonal antibody treatment

[0018] In one embodiment, the phase 1 / 2 trial of the anti-CD38 monoclonal antibody has demonstrated promising results regarding the safety and efficacy of this treatment in patients with ITP. This trial involved adult patients who had a history of ITP for at least three months and a baseline platelet count of less than 30 × 109 / L. The patients were administered the anti-CD38 monoclonal antibody intravenously at a dose of 16 mg / kg on a weekly basis for eight weeks, followed by a 16-week follow-up period. The primary endpoints of this trial included the proportion of patients achieving a platelet count of ≥ 50 × 109 / L on two consecutive occasions within eight weeks of treatment initiation and the incidence and severity of adverse events.

[0019] In one embodiment, the study also seeks to elucidate the mechanism behind the rapid increase in platelet counts observed with the anti-CD38 monoclonal antibody treatment. This involves investigating changes in the peripheral blood immune status of ITP patients undergoing treatment with the anti-CD38 monoclonal antibody. Key metrics include monitoring the expression of CD38 on various immune cells, levels of serum immunoglobulins, and the composition of immune cell subsets, such as T cells, B cells, natural killer cells, and monocytes.

[0020] In one embodiment, passive ITP mouse models are utilized to further understand the impact of anti-CD38 therapy on the mononuclear phagocytic system. These models involve the induction of ITP in mice followed by the administration of the anti-CD38 monoclonal antibody, allowing for a detailed examination of the effects of the treatment on spleen macrophage populations, NK cell counts, and other relevant immune parameters.

[0021] The mechanism of action of the anti-CD38 monoclonal antibody involves several key aspects:

[0022] 1. Reduction of Autoantibody Production: By binding to CD38 on plasma cells, the anti-CD38  monoclonal antibody helps reduce the production of autoantibodies that target and destroy platelets.

[0023] 2. Immune System Modulation: the anti-CD38 monoclonal antibody influences various facets of the immune system. It modulates the activity of B cells and T cells, potentially restoring immune tolerance and reducing the autoimmune attack on platelets.

[0024] 3. Impact on NK Cells and Monocytes: the anti-CD38 monoclonal antibody treatment has been observed to decrease the number of CD56dimCD16+ NK cells and alter the expression of CD32b on monocytes, which play roles in antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) and phagocytosis-processes implicated in the destruction of platelets in ITP.

[0025] The advantages of the anti-CD38 monoclonal antibody over traditional ITP treatments are multifaceted:

[0026] Rapid and Sustained Response: Clinical trials have shown that the anti-CD38 monoclonal antibody can rapidly increase platelet counts within weeks, with a sustained response over several months.

[0027] Safety Profile: the anti-CD38 monoclonal antibody has demonstrated a manageable safety profile, with most adverse events being mild to moderate and resolvable.

[0028] Potential for Treating Refractory Cases: the anti-CD38 monoclonal antibody offers hope for patients who have not responded to or have relapsed after conventional treatments.

[0029] Comprehensive Immune Modulation: By targeting the CD38 pathway, the anti-CD38 monoclonal antibody addresses both the symptomatic and immunological aspects of ITP, offering a more holistic treatment approach.

[0030] In conclusion, the anti-CD38 monoclonal antibody represents a significant advancement in the treatment of ITP and potentially other autoimmune diseases, offering a novel mechanism of action with considerable therapeutic benefits.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0031] Figure 1 illustrates the flow diagram of the human clinical trial of the anti-CD38 monoclonal antibody in ITP treatment.

[0032] Figure 2 illustrates the platelet count dynamics for Patient 009 and Patient 014.

[0033] Figure 3 illustrates the cumulative incidence of platelet count first declining below 50 × 109 / L for patients who completed the anti-CD38 monoclonal antibody treatment.

[0034] Figure 4 illustrates the dynamic changes in peripheral blood CD19+ B cells before and after the anti-CD38 monoclonal antibody infusion in ITP patients.

[0035] Figure 5 illustrates the dynamic changes in peripheral blood T cells before and after the anti-CD38 monoclonal antibody infusion in ITP patients.

[0036] Figure 6 illustrates the alterations in plasma cytokines and T cell proliferation before and after the anti-CD38 monoclonal antibody infusion.

[0037] Figure 7 illustrates the alterations in peripheral blood monocyte subsets and membrane surface Fcγreceptors expression levels before and after the anti-CD38 monoclonal antibody treatment.

[0038] Figure 8 illustrates the establishment of a passive ITP mouse model and the changes in spleen volume following anti-mouse CD38 monoclonal antibody intervention.

[0039] DEFINATIONS

[0040] As used herein, the term "immune thrombocytopenia (ITP) " refers to an autoimmune disorder characterized by a significantly low platelet count in the blood (below 100 × 109 / L) , often resulting in increased bleeding and bruising tendencies. It is caused primarily by the immune system's destruction of platelets or inhibition of platelet production.

[0041] As used herein, the term “monoclonal antibody” refers to a population of identical antibodies, meaning that each individual antibody molecule in the population of monoclonal antibodies is identical to another antibody molecule. This property is in contrast to the property of a population of polyclonal antibodies comprising antibodies having a plurality of different sequences. Monoclonal antibodies can be prepared by a number of well-known methods (Smith et al. (2004) J. Clin. Pathol. 57, 912-917; and Nelson et al., J Clin Pathol (2000) , 53, 111-117) . For example, monoclonal antibodies can be prepared by immortalizing B cells, for example, by fusing B cells with myeloma cells to generate hybridoma cell lines or by infecting B cells with a virus such as EBV. Recombinant techniques can also be used to prepare antibodies from clonal populations of host cells in vitro by transforming host cells with plasmids carrying artificial sequences encoding the nucleotides of the antibodies.

[0042] As used herein, the term “bispecific antibody (BsAb) ” refers to an antibody and / or antigen-binding molecule capable of specifically binding to two different antigenic determinants. Generally, a bispecific antibody and / or antigen-binding molecule comprises two antigen-binding sites, each of which is specific for different antigenic determinants. In some embodiments, the bispecific antibody and / or antigen binding molecule is capable of binding two antigenic determinants simultaneously, particularly two antigenic determinants expressed on two different cells.

[0043] As used herein, the term “hybridoma” or “hybridoma cell” refers to a cell or cell line (typically a myeloma or lymphoma cell) resulting from the fusion of antibody-producing lymphocytes and non-antibody-producing cancer cells. As known to those of ordinary skill in the art, hybridomas can be propagated and continuously supplied to produce a particular monoclonal antibody. Methods for producing hybridomas are known in the art (see, e.g., Harlow & Lane, 1988) . When referring to the term “hybridoma” or “hybridoma cell” , it also includes subclones and progeny cells of hybridomas. As used herein, a full-length antibody is an antibody having two full-length heavy chains (e.g., VH-CH1-CH2-CH3 or VH-CH1-CH2-CH3-CH4) and two full-length light chains (VL-CL) and a hinge region, e.g., an antibody naturally produced by an antibody secreting B cell as well as a synthetically produced antibody having the same domain.

[0044] As used herein, the term “chimeric antibody” refers to an antibody in which the variable region sequences are derived from one species and the constant region sequences are derived from another species, such as an antibody in which the variable region sequences are derived from a mouse antibody and the constant region sequences are derived from a human antibody.

[0045] As used herein, a “humanized” antibody refers to a form of non-human (e.g., mouse) antibody that is a chimeric immunoglobulin, immunoglobulin chain or fragment thereof (e.g., Fv, Fab, Fab’, F (ab’) 2  or other antigen-binding subsequence of an antibody) , containing minimal sequence derived from a non-human immunoglobulin. Preferably, the humanized antibody is a human immunoglobulin (recipient antibody) in which residues from a complementarity determining region (CDR) of the recipient antibody are replaced by CDR residues from a non-human species (donor antibody) such as mouse, rat, or rabbit having the desired specificity, affinity, and capacity.

[0046] Furthermore, in humanization it is also possible to mutate amino acid residues within the CDR1, CDR2 and / or CDR3 regions of VH and / or VL, thereby improving one or more binding properties (e.g., affinity) of the antibody. Mutations can be introduced, e.g., by PCR-mediated mutagenesis, and their effect on antibody binding or other functional properties can be assessed using the in vitro or in vivo assays described herein. Typically, conservative mutations are introduced. Such mutations may be amino acid substitutions, additions, or deletions. In addition, mutations within CDR typically do not exceed one or two. Thus, humanized antibodies of the present invention also encompass antibodies comprising one or two amino acid mutations within CDR.

[0047] As used herein, an “antibody fragment” or “antigen-binding fragment” of an antibody refers to any portion of a full-length antibody that is less than full-length, but that comprises at least a portion of the variable region (e.g., one or more CDRs and / or one or more antibody binding sites) of the antibody that binds antigen, thus retaining binding specificity as well as at least a portion of the specific binding capacity of the full-length antibody. Thus, an antigen-binding fragment refers to an antibody fragment that comprises an antigen-binding portion that binds the same antigen as the antibody from which the antibody fragment was derived. Antibody fragments include antibody derivatives produced by enzymatic treatment of full-length antibodies, as well as synthetic derivatives, e.g., recombinant derivatives Antibodies include antibody fragments. Examples of antibody fragments include, but are not limited to, Fab, Fab’, F (ab’) 2, single chain Fv (scFv) , Fv, dsFv, diabodies, Fd, and Fd’ fragments and other fragments, including modified fragments (see, e.g., Methods in Molecular Biology, Vol 207: Recombinant Antibodies for Cancer Therapy Methods and Protocols (2003) ; Chapter 1; p 3-25, Kipriyanov) . The fragments may comprise multiple chains linked together, for example, by disulfide bonds and / or by peptide linkers. Antibody fragments generally comprise at least or about 50 amino acids, and typically at least or about 200 amino acids. Antigen-binding fragments include any antibody fragment that, when inserted into an antibody framework (e.g., by displacement of the corresponding region) , results in an antibody that immunospecifically binds (i.e., exhibiting a Ka of at least or at least about 107-108M-1) an antigen. As used herein, a “functional fragment” or “analog of an anti-CD38 antibody” is a fragment or analog that prevents or substantially reduces the ability of the receptor to bind a ligand or initiate signal transduction. As used herein, functional fragments generally have the same meaning as “antibody fragments” and, in the case of antibodies, can refer to fragments that prevent or substantially reduce the ability of the receptor to bind a ligand or initiate signal transduction, e.g., Fv, Fab, F (ab’) 2, and the like. An “Fv” fragment consists of a dimer (VH-VL dimer) of a variable domain of a heavy chain and a variable domain of a light chain formed by non-covalent association.

[0048] In this configuration, the three CDRs of each variable domain interact to define a target binding site on the surface of the VH-VL dimer, as is the case with intact antibodies. The six CDRs together confer target binding specificity to the intact antibody. However, even a single variable domain (or half of an Fv comprising only three target-specific CDRs) may still have the ability to recognize and bind to targets.

[0049] As used herein, the term “CDR” refers to a complementarity-determining region known to have three CDRs per heavy and light chain of an antibody molecule. CDR is also known as a hypervariable region and is present in the variable region of each of the heavy and light chains of an antibody with a very high site of variability in the primary structure of CDR. In the present specification, the CDR of the heavy chain is represented by CDR1, CDR2, CDR3 from the amino terminus of the amino terminal sequence of the heavy chain, and the CDR of the light chain is represented by CDR1, CDR2, CDR3 from the amino terminus of the amino terminal sequence of the light chain. These sites are adjacent to each other in the tertiary structure and determine the specificity of the antigen to which the antibody binds.

[0050] As used herein, the term “epitope” refers to any antigenic determinant on an antigen to which the paratope of an antibody binds. Epitopic determinants usually comprise chemically active surface types of molecules, such as amino acids or sugar side chains, and usually have specific three-dimensional structural characteristics as well as specific charge characteristics.

[0051] As used herein, “expression” refers to a process of producing a polypeptide by transcription and translation of a polynucleotide. The level of expression of a polypeptide can be assessed using any method known in the art, including, for example, methods of determining the amount of polypeptide produced from a host cell. Such methods may include, but are not limited to, quantitation of polypeptides in cell lysates by ELISA, gel electrophoresis followed by Coomassie blue staining, Lowry protein assay, and Bradford protein assay.

[0052] As used herein, a “host cell” is a cell for receiving, maintaining, replicating, and expanding a vector. The host cell may also be used to express a polypeptide encoded by the vector. The nucleic acid contained in the vector replicates during the host cell division, thereby amplifying the nucleic acid. The host cell may be a eukaryotic cell or a prokaryotic cell. Suitable host cells include, but are not limited to, CHO cells, various COS cells, HeLa cells, HEK cells such as HEK 293 cells.

[0053] As used herein, a “vector” is a replicable nucleic acid from which one or more heterologous proteins can be expressed when the vector is transformed into an appropriate host cell. References to vectors include those into which a nucleic acid encoding a polypeptide or fragment thereof may be introduced, typically by restriction digestion and ligation. References to vectors also include those comprising a nucleic acid encoding a polypeptide. Vectors are used to introduce a nucleic acid encoding a polypeptide into a host cell, to amplify the nucleic acid, or to express / display the polypeptide encoded by the nucleic acid. The vector generally remains episomal, but can be designed to allow integration of a gene or portion thereof into the chromosome of the genome. Also contemplated are vectors for artificial chromosomes, such as yeast artificial vectors and mammalian  artificial chromosomes. The selection and use of such vehicles is well known to those skilled in the art.

[0054] As used herein, a vector also includes a “virus vector” or a “viral vector” . A viral vector is an engineered virus that is operably linked to a foreign gene to transfer (as a vehicle or shuttle) the foreign gene into a cell.

[0055] As used herein, an “expression vector” includes a vector capable of expressing a DNA operably linked to regulatory sequences, such as a promoter region, capable of affecting the expression of such DNA fragments. Such additional fragments may include promoter and terminator sequences, and optionally may include one or more origins of replication, one or more selectable markers, enhancers, polyadenylation signals, etc. Expression vectors are typically derived from plasmid or viral DNA, or may contain elements of both. Thus, an expression vector refers to a recombinant DNA or RNA construct, such as a plasmid, phage, recombinant virus or other vectors, which results in the expression of a cloned DNA when introduced into an appropriate host cell. Appropriate expression vectors are well known to those skilled in the art and include expression vectors that are replicable in eukaryotic and / or prokaryotic cells as well as expression vectors that remain episomal or that are integrated into the host cell genome.

[0056] As used herein, the term "efficacy" refers to the ability of a treatment, such as a drug or therapy, to produce a desired or intended result. In clinical trials, this often pertains to the treatment's effectiveness in achieving specific outcomes, such as increasing platelet counts in ITP patients.

[0057] As used herein, the term "safety" in the context of clinical trials refers to the monitoring and assessment of various adverse events and side effects associated with a treatment or therapy, aimed at determining the treatment's risk profile and overall tolerability in patients.

[0058] As used herein, the term “pharmacodynamics” refers to the study of the biochemical and physiological effects of drugs, particularly pharmaceuticals, on the body. This includes the mechanisms of drug action and the relationship between drug concentration and effect.

[0059] As used herein, the term “immunogenicity” refers to the ability of a particular substance, such as a therapeutic drug or vaccine, to provoke an immune response in the body. This term is often used in the context of evaluating how a patient's immune system reacts to biologic therapies, including monoclonal antibodies.

[0060] As used herein, the term “treatment-emergent adverse event (TEAE) ” refers to any undesirable experience associated with the use of a medical product or drug that emerges or worsens during the course of treatment.

[0061] As used herein, the term “intention-to-treat population” refers to a principle in clinical trial analysis where all participants who were randomly allocated to each treatment are included in the analysis, regardless of whether they completed the treatment according to the study protocol.

[0062] As used herein, the term “Fc-receptor-dependent mechanisms” refers to the biological processes that involve the interaction of the Fc (Fragment crystallizable) region of an antibody with Fc receptors on  various immune cells. This interaction is crucial for triggering immune responses such as phagocytosis and antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) .

[0063] As used herein, the term “plasma cells” refers to a type of white blood cell that originates from B lymphocytes and is primarily responsible for the production of antibodies. In the context of ITP, certain plasma cells contribute to the disease pathology by producing autoantibodies against platelets. As used herein, the term “autoantibodies” refers to antibodies produced by the immune system that mistakenly target and react with a person's own tissues or organs, leading to autoimmune diseases. In ITP, autoantibodies target and destroy platelets.

[0064] As used herein, the term “thrombopoietin receptor agonists (TPO-RAs) ” refers to a class of drugs that stimulate the production of platelets by mimicking the action of thrombopoietin, a natural hormone in the body. They are used in the treatment of conditions like ITP to increase platelet counts.

[0065] As used herein, “treating” a subject with a disease or condition means that the subject's symptoms are partially or completely alleviated or remain unchanged after the treatment. Thus, treatment includes prevention, treatment and / or cure. The prevention refers to preventing the underlying disease and / or preventing the worsening of symptoms or the progression of the disease. The treatment also includes any antibody or antigen-binding fragment thereof provided and any pharmaceutical use of the compositions provided herein.

[0066] As used herein, “therapeutic effect” refers to an effect resulting from treatment of a subject that alters, typically improves or ameliorates a symptom of a disease or condition or cures a disease or condition.

[0067] As used herein, a “therapeutically effective amount” or “therapeutically effective dose” refers to an amount of a substance, compound, material, or composition comprising a compound that is at least sufficient to produce a therapeutic effect after being administered to a subject. Thus, it is an amount necessary to prevent, cure, ameliorate, block, or partially block the symptoms of a disease or disorder.

[0068] As used herein, a “prophylactically effective amount” or “prophylactically effective dose” refers to an amount of a substance, compound, material, or composition comprising a compound that, when administered to a subject, has the desired prophylactic effect, e.g., preventing or delaying the occurrence or recurrence of a disease or condition, reducing the likelihood of the occurrence or recurrence of a disease or condition. A fully prophylactically effective dose need not occur by administration of one dose, and may occur only after administration of a series of doses. Thus, a prophylactically effective amount may be administered one or more times.

[0069] As used herein, the term "cytotoxic amount" refers to a quantity of a substance, typically a drug or therapeutic agent, that is sufficient to cause cell death. In the context of medical treatment, a cytotoxic amount is an amount that is effective to kill or inhibit the growth of cells, such as cancer cells or other pathologically proliferating cells, without causing unacceptable damage to healthy cells or tissues. The specific cytotoxic amount can vary depending on factors such as the type of cells  targeted, the specific drug or agent being used, the method of administration, and the patient's individual characteristics.

[0070] As used herein, the term “patient” refers to a mammal, such as a human.

[0071] DETAILED DESCRIPTION OF THE EMBODIMET

[0072] The trial for an anti-CD38 monoclonal antibody, was structured as an investigator-initiated, open-label, phase 1 / 2 trial was designed. The primary aim was to assess the efficacy, safety, pharmacodynamics, and immunogenicity of the anti-CD38 monoclonal antibody in treating patients with Immune Thrombocytopenia (ITP) .

[0073] The trial protocol was approved by the Ethics Committees of the Institute of Hematology and Blood Diseases Hospital. The trial was conducted in accordance with the principles of the Declaration of Helsinki. All patients provided written informed consent. All animal protocols were approved by the Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) , Institute of Hematology and Blood Disease Hospital, CAMS. All surgeries were performed under sodium pentobarbital anesthesia, and all efforts were made to minimize suffering.

[0074] Trial Design and Procedure are listed as follow and in Figure 1:

[0075] 1. Screening Period (4 weeks) : Patients were screened for eligibility, which included adults aged 18 years or older diagnosed with ITP for at least 3 months and a platelet count of less than 30 × 109 / L. Exclusion criteria included secondary thrombocytopenia, previous anti-CD38 antibody treatment, and significant organ dysfunction.

[0076] 2. Treatment Period (8 weeks) : Eligible patients received the anti-CD38 monoclonal antibody intravenously at a dose of 16 mg / kg weekly. Concurrently, therapies with either thrombopoietin-receptor agonists (TPO-RAs) or glucocorticoids were permitted. Additionally, all patients received prophylactic medications including glucocorticoids, antihistamines, and acetaminophen before and after the anti-CD38 monoclonal antibody infusion.

[0077] 3. Follow-up Period (16 weeks) : After the 8-week treatment, patients were monitored for an additional 16 weeks to observe long-term effects and any delayed adverse reactions.

[0078] Participants:

[0079] The detailed inclusion criteria and exclusion criteria of the selected patients are listed as follow:

[0080] Inclusion Criteria:

[0081] (1) Age ≥ 18 years, male or female.

[0082] (2) Before enrollment, the subjects have been clinically diagnosed with primary immune thrombocytopenia for no less than three months according to the American Society of Hematology guidelines 2011 Evidence-Based Practice Guideline (Neunert et al., Blood (2011) , 117, 4190-4207) or the International Consensus Report on the Investigation and Management of Primary Immune Thrombocytopenia (Provan et al., Blood (2010) , 115, 168-186) .

[0083] (3) Patients have failed glucocorticoid therapy (either due to inefficacy, inability to maintain efficacy, or relapse) , and at least one second-line ITP treatments (including rituximab and / or platelet production stimulants, such as rhTPO or eltrombopag) as prescribed by the guidelines (either due to  inefficacy, inability to maintain efficacy, or relapse) . Inefficacy is defined as platelet counts of <30×109 / L following the utilization of rhTPO at 300 U / kg / d for more than 14 days, eltrombopag at 75 mg / d for over 28 days, herombopag at 7.5 mg / d for over 28 days, or avatrombopag at 60 mg / d for over 28 days. Previous treatments for ITP (for instance, methylprednisolone, platelet transfusions, gamma globulin infusions, etc. ) must have been concluded at least two weeks before the first dose.

[0084] (4) Subjects with a platelet count of <30×109 / L within the 48 hours prior to the first dose of the study drug (as observed during the screening visit and / or before the administration of the study drug, with at least two consecutive platelet counts <30×109 / L on at least two separate assessments, with a minimum interval of one day) .

[0085] (5) ECOG performance status score ≤ 2.

[0086] (6) Enrollment of subjects receiving maintenance therapy with a stable dosage is permitted, including glucocorticoids (≤ 0.5 mg / kg of prednisone or equivalent) or TPO receptor agonists. However, at the time of enrollment, subjects are restricted to using only one concomitant medication with a stable dose, and the concomitant medication must have been stable for a minimum of 4 weeks prior to the initial infusion of the study drug.

[0087] (7) For fertile female patients, a negative pregnancy test result is required. Fertile female and male patients must use effective contraception separately during the study and for 4 or 6 months after the cessation of study drug treatment.

[0088] (8) Subjects must comprehensively understand and be able to adhere to the study protocol requirements and willingly sign the informed consent form.

[0089] 2.1.2 Exclusion Criteria

[0090] (1) Subjects with a known allergy to anti-CD38 monoclonal antibodies or excipients, or those who have previously received anti-CD38 monoclonal antibodies with ineffective therapeutic outcomes.

[0091] (2) Subjects who are diagnosed with autoimmune hemolytic anemia, various secondary and hereditary thrombocytopenic disorders, including leukemia, lymphoma, multiple myeloma, aplastic anemia, myelodysplastic syndromes, Evans syndrome, common variable immunodeficiency, systemic lupus erythematosus, liver cirrhosis, antiphospholipid antibody syndrome, pseudothrombocytopenia, drug-induced thrombocytopenia (such as quinine, heparin, antimicrobial agents, and antiepileptic drugs) .

[0092] (3) Subjects with history of any thrombotic or embolic events or extensive and severe bleeding, such as hemoptysis, major upper gastrointestinal bleeding, intracranial hemorrhage, or the presence of sepsis or other irregular bleeding within the 12 months preceding the initiation of the first dose of the study drug.

[0093] (4) Subjects who have participated in any other investigational drug studies (including vaccine studies) or been exposed to other investigational drugs within the first 4 weeks or 5 half-lives (whichever is longer) prior to the first dose of the study drug.

[0094] (5) Subjects who have used anticoagulants or any agents with antiplatelet effects, such as aspirin, within 3 weeks prior to the first dose of the study drug.

[0095] (6) Subjects who have received emergency treatment for ITP (e.g., methylprednisolone, platelet transfusion, intravenous immunoglobulin infusion, or thrombopoietin receptor agonist therapy) within 2 weeks prior to the first dose of the study drug.

[0096] (7) Subjects who have been treated with medications, including azathioprine, danazol, dapsone, cyclosporine A, tacrolimus, and sirolimus, within 4 weeks prior to the first dose of the study drug. Subjects who have received anti-CD20 monoclonal antibodies such as rituximab, or medications including cyclophosphamide and vindesine within 3 months prior to the first dose.

[0097] (8) Subjects who have undergone splenectomy within 6 months prior to the first dose of study drug.

[0098] (9) Subjects who have received live vaccines within 4 weeks prior to the first dose of study drug, or plan to receive any live vaccines during the course of the study.

[0099] (10) Subjects who have undergone allogeneic stem cell transplantation or organ transplantation.

[0100] (11) Within the 6 months before screening, subjects with a clinically significant medical history, as perceived by investigators, that will pose risks to subjects’ safety during the study or potentially affect the safety or efficacy analyses. This includes major clinical histories such as cardiovascular events (e.g., acute myocardial infarction, heart failure, unstable angina, severe arrhythmias such as frequent ventricular premature beats, ventricular tachycardia, ventricular fibrillation, or poorly controlled hypertension) ; New York Heart Association (NYHA) class III-IV heart failure; poorly controlled diabetes, peptic ulcer, hepatic or renal dysfunction; and various connective tissue diseases.

[0101] (12) Subjects with a history of malignancy within the 5 years prior to screening (excluding completely cured in situ cervical cancer and non-metastatic skin squamous cell carcinoma or basal cell carcinoma) .

[0102] (13) Subjects with a history of severe recurrent or chronic infections, or acute infections requiring systemic treatment with antibiotics, antiviral drugs, antiparasitic drugs, anti-amoebic drugs, or antifungal drugs within 4 weeks prior to the first dose and during the screening period, or superficial skin infections requiring systemic treatment within one week prior to the first dose of study drug. Notably, after the resolution of the infection, the subject may be re-screened.

[0103] (14) Subjects with a history of known or suspected immunosuppression, including invasive opportunistic infections such as histoplasmosis, listeriosis, coccidioidomycosis, pneumocystis pneumonia, and aspergillosis, even if the infection has resolved; or unusually frequent, recurrent, or prolonged infections (as judged by the investigator) .

[0104] (15) Significant laboratory abnormalities during screening: a) Alanine aminotransferase or aspartate aminotransferase equal to or greater than the upper limit of normal (ULN) . b) Total bilirubin equal to or greater than 1.2 times the ULN (note: subjects diagnosed with Gilbert syndrome based on medical records should not be excluded based on this criterion) . c) Creatinine and blood urea nitrogen equal to or greater than the ULN".

[0105] (16) Positive for HIV antibodies or syphilis antibodies.

[0106] (17) Subjects test positive for Hepatitis B surface antigen (HBsAg) , hepatitis B core antibody, HBV-DNA (through polymerase chain reaction testing) , or hepatitis C virus antibody during the  screening period. Subjects with positive hepatitis B core antibody but negative HBV-DNA can be enrolled, with HBV-DNA monitoring every 4 weeks.

[0107] (18) Pregnant or lactating women, or those intending to conceive or breastfeed during the study; and male patients with a plan for pregnancy in their partners during the study.

[0108] (19) Subjects with psychiatric disorders, inability to provide informed consent, and participate in the trial and follow-up.

[0109] (20) Subjects with toxic symptoms induced by prior treatments that have not resolved are excluded from participation in the trial.

[0110] (21) Any other conditions unsuitable for participation in this study, as assessed by the investigator.

[0111] A total of 27 ITP patients were initially screened, with 22 meeting the criteria and enrolling in the trial, 4 patients were excluded based on the eligibility criteria (3 patients were excluded due to misdiagnosis: myelodysplastic syndrome (n=1) , aplastic anemia (n=1) , common variable immunodeficiency (n=1) ; 1 patient was a carrier of hepatitis B virus) , and 1 patient withdrew informed consent. Ultimately, 22 patients were enrolled in the study. Throughout the anti-CD38 monoclonal antibody treatment period, 1 patient succumbed to sudden cerebral hemorrhage after a single dose of the anti-CD38 monoclonal antibody infusion. All 22 patients were included in efficacy and TRAEs evaluation, while 21 patients were dynamically monitored for changes in peripheral blood immune status before and after the anti-CD38 monoclonal antibody infusion. 19 patients were included in immunogenicity set for anti-drug antibody analysis. The patient group primarily consisted of adults with a median age of 35.5 years, predominantly female (72.7%) . These participants had experienced ITP for a median duration of 27 months and had previously undergone multiple ITP therapies, including glucocorticoids, intravenous immunoglobulin, TPO-RAs, rituximab, and in some cases, splenectomy.

[0112] Outcome Measures:

[0113] 1. Primary Outcomes: The main focus was on safety / tolerability and the achievement of ≥ 2 consecutive platelet counts of ≥ 50 × 109 / L within 8 weeks post-first dose. Adverse events were closely monitored and categorized by severity.

[0114] 2. Secondary Outcomes: These included response definitions, changes in immune cell populations, cytokine levels, and other biomarkers, analyzed through flow cytometry, enzyme-linked immunosorbent assays, and other methods.

[0115] Statistical Analysis:

[0116] The trial's statistical analysis plan was designed to test the hypothesis that the primary endpoint (platelet count increase) would exceed the target value, using descriptive statistics and confidence interval calculations. Both efficacy and safety data were analyzed, with efficacy evaluated on an intention-to-treat basis, including all enrolled patients, and safety data considered for those who received at least one dose of the anti-CD38 monoclonal antibody.

[0117] Ethical Considerations:

[0118] The trial was conducted in adherence to ethical standards, with approval from the relevant ethics committees and institutional review boards. All patients provided written informed consent, and animal care protocols were duly followed for any related animal studies.

[0119] Embodiment 1: Human Clinical Trial of the anti-CD38 monoclonal antibody in ITP Patients

[0120] To evaluate the efficacy, safety, pharmacodynamics, and immunogenicity of the anti-CD38 monoclonal antibody, as monotherapy in patients with Immune Thrombocytopenia (ITP) , 27 patients were initially screened based on eligibility criteria (diagnosis of ITP for ≥ 3 months, platelet count <30 × 109 / L) . Exclusions included prior anti-CD38 antibody treatment and severe organ dysfunction. 22 patients were enrolled. An investigator-initiated, open-label, phase 1 / 2 trial (NCT05694767) was conducted, comprising a 4-week screening, 8-week treatment, and 16-week follow-up period. The anti-CD38 monoclonal antibody was administered intravenously at 16 mg / kg weekly. Concomitant treatments with TPO-RAs or glucocorticoids were permitted. The median age was 35.5 years, with a majority being female (72.7%) . Patients had diverse ITP histories and treatments, including rituximab and splenectomy. Patients received the anti-CD38 monoclonal antibody along with prophylactic medications like glucocorticoids, antihistamines, and acetaminophen before and after infusion.

[0121] Between January 22nd, 2023, and December 25th, 2023, a total of 27 patients were screened based on eligibility criteria (diagnosis of ITP for ≥ 3 months, platelet count < 30 × 109 / L) . Exclusions included prior anti-CD38 antibody treatment and severe organ dysfunction. 22 patients were enrolled. An investigator-initiated, open-label, phase 1 / 2 trial (NCT05694767) was conducted, comprising a 4-week screening, 8-week treatment, and 16-week follow-up period. During the trail, the patients were treated with the anti-CD38 monoclonal antibody at a dose of 16 mg / kg (Figure 1) . Patient demographics and baseline characteristics are summarized in Table 2.

[0122] Table 2. Patient Demographics and Baseline Characteristics

[0123] *Sex was self-reported by the participants, with options "male" or "female" . Platelet GP autoantibodies were detected by a commercial kit (PakAutoassay, Immucor GTI Diagnostics, USA) .

[0124] The median age of the 22 patients was 35.5 years (IQR: 25.0-41.0) , with 72.7%being female. The median duration of ITP was 27 months (IQR: 13-110) , and the median baseline platelet count was 12 × 109 / L (IQR: 6-23 × 109 / L) . Nearly half (45.5%) of the patients had a baseline platelet count of < 10 × 109 / L. Patients had received a median of 4 different therapies for ITP (range: 3-7) . All patients had received glucocorticoids, intravenous immunoglobulin, and TPO-RAs, with 36.4% (8 / 22) and 18.2% (4 / 22) having undergone rituximab and splenectomy, respectively. The detection of platelet glycoprotein (GP) autoantibodies revealed positive results in 14 of 22 patients (63.6%) : 4.5%tested positive for anti-GP Ib / IX only, 27.3%for anti-GP IIb / IIIa only, 9.1%for both anti-GP IIb / IIIa and anti-GP Ia / IIa, 4.5%for both anti-GP IIb / IIIa and anti-GP Ib / IX, and 18.2%for all anti-GP IIb / IIIa, anti-GP Ia / IIa, and anti-GP Ib / IX.

[0125] Analysis:

[0126] In the conducted trial, it was assumed that the proportion of patients achieving a platelet count of ≥ 50 × 109 / L within 8 weeks post-treatment would be 55%, with the target value set at 20%. The type I error was established at a two-sided 0.05. Utilizing the PASS software, it was determined that a cohort of 16 subjects would provide an 85.6%power to test the hypothesis that the primary endpoint exceeds the target value. Considering an anticipated drop-out rate of 20%, the total enrollment was ultimately set at 20 subjects.

[0127] Efficacy analyses were carried out on an intention-to-treat basis, encompassing all enrolled patients. Safety analyses, on the other hand, were confined to the safety population, which included all participants who had received at least one dose of the study drug.

[0128] The statistical analyses conducted were primarily descriptive in nature and were executed using SAS version 9.4. For the purpose of these analyses, categorical variables were summarized through frequencies and percentages, whereas continuous variables were presented in terms of their median values, along with their interquartile ranges (IQR) or the minimum and maximum values observed. The 95%confidence intervals (CI) for binary endpoints were computed employing the Clopper-Pearson method. Time-to-event endpoints were analyzed via the Kaplan-Meier method, with the calculation of their median (IQR) and 95%CI using the Brookmeyer-Crowley method, which included a log-log transformation. Changes in immune function and biomarkers were represented as mean values with standard deviations (SD) . For statistical testing, both paired t-tests and independent samples t-tests were utilized.

[0129] In the handling of the data, binary data recorded post-rescue medication were treated as non-responses. Continuous data following rescue medication were considered missing and were not included in the analyses of time-to-event endpoints. Any missing efficacy data were imputed using the last observation carried forward (LOCF) method before being utilized to derive the related endpoints. Other missing data were not addressed in the analysis.

[0130] Results and Discussion:

[0131] 1. Safety Analysis:

[0132] Adverse events were monitored and graded based on severity. A total of 16 out of 22 patients (72.7%) experienced at least one treatment-emergent adverse event (TEAE) , with most being of grade 1 or 2 severity. Infusion-related reactions (IRRs) were reported as drug-related TEAEs, with 31.8%of patients experiencing grade 2 reactions, as shown in Table 3. All IRRs occurred during the first infusion. The most common symptoms of IRRs (≥ 10%) reported during the initial the anti-CD38 monoclonal antibody infusion included chill (22.7%) , nausea (22.7%) , and blood pressure increased (13.6%) . All IRRs were resolved on the day of the antibody infusion by temporarily discontinuing the anti-CD38 monoclonal antibody infusion and slowing down the infusion rate after the administration of glucocorticoids.

[0133] Table 3. Summary of Adverse Events

[0134] *Included grade 2 pyrexia (n=2) , grade 2 COVID-19 (n=1) , and combined pyrexia and COVID-19 (n=3, all grade 2) .

[0135] #Patient 021 developed grade 3 perianal infection combined with pyrexia, which improved after anti-infection treatments.

[0136] Excluding IRRs, the most common TEAEs of any grade were upper respiratory tract infection (31.8%) , asthenia (18.2%) , and hyperuricemia (13.6%) , with upper respiratory tract infection (31.8%) being the most frequent drug-related AE. One patient (4.5%) developed grade 3 drug-related TEAEs (pyrexia and perianal infection) , as showed in Table 4. Patient 009 experienced elevated levels of aspartate aminotransferase (AST) , alanine aminotransferase (ALT) , gamma-glutamyltransferase (GGT) , and alkaline phosphatase (ALP) , which were not considered related to the anti-CD38 monoclonal antibody.

[0137] Table 4. Summary of treatment-related adverse events

[0138] Note:

[0139] Data were presented as n (%) .

[0140] *Included grade 2 pyrexia (n=2) , grade 2 COVID-19 (n=1) , and combined pyrexia and COVID-19 (n=3, all grade 2) .

[0141] #Patient 021 developed grade 3 perianal infection combined with pyrexia, which improved after anti-infection treatments.

[0142] One death (patient 022) occurred due to a TEAE of grade 5 intracranial haemorrhage, which was not considered drug-related (Table 3) . This 39-year-old female patient, who had undergone seven different prior therapies, initially responded to eltrombopag (75 mg / days) for two months. Following the subsequent loss of response, she proceeded to receive eltrombopag (75 mg / days) in combination with the antibody infusion. Unfortunately, intracranial haemorrhage occurred on the second day after the first antibody infusion and rescue therapies failed to salvage her life.

[0143] 2. Efficacy Outcomes:

[0144] The treatment outcomes are listed below in Table 5. Totally 21 out of 22 patients (95.5%) successfully achieved a platelet count of ≥ 50 × 109 / L during the 8-week treatment period, with a median cumulative response duration of 23 weeks (IQR: 17-24) over the course of the study (Table 5) . The median time to the first platelet count of ≥ 50 × 109 / L was 1 week (range: 1-3) (Table 5) . Furthermore, the 21 patients reached ≥ 2 consecutive platelet counts of ≥ 30 × 109 / L and ≥ 2-fold increase from the baseline count during the 8-week treatment period, with a median cumulative response duration of 24 weeks (IQR: 17-24) throughout the study (Table 5) . The median time to the first platelet count of ≥ 30 × 109 / L and ≥ 2-fold increase from the baseline count was 1 week (range: 1-3) . The overall response rate was observed in the 95.5%of patients throughout the trial (n=20 for CR; n=1 for PR) (Table 5) , with nine patients achieving CR and five patients achieving PR at week 24.

[0145] Table 5. Treatment outcomes

[0146] Note:

[0147] CI: confidence interval; PLT: platelet count; IQR: interquartile range.

[0148] #Proportion of patients with platelet count ≥ 50×109 / L (observed on more than 2 consecutive measurements which separated by ≥ 1 day) within 8 weeks after the first dose of the anti-CD38 monoclonal antibody.

[0149] □ Being analyzed based on the 21 patients who responded to the anti-CD38 monoclonal antibody treatment, with the exception of one patient (patient 022) who died on Day 1.

[0150] The PLT ≥ 30 × 109 / L with a ≥ 2-fold increase from the baseline count.

[0151] Defined as the proportion of subjects with platelet counts of ≥ 50×109 / L for at least six of the eight visits between weeks 17 and 24 of the study.

[0152] §OR was defined as CR or PR.

[0153] Both patient 009 and patient 014, who responded to the anti-CD38 monoclonal antibody, experienced a transient elevation in platelet counts after the first antibody infusion, with counts returning to baseline levels at week 3 and 4, respectively. However, subsequent increases occurred, reaching ≥ 50 × 109 / L at week 9 and 7, respectively, and these levels were maintained during the follow-up period, as shown in Figure 2.

[0154] Throughout the trial, the proportion of patients with bleeding (WHO bleeding score > 0) decreased from 68.2% (15 / 22) at baseline to 4.8% (1 / 21) at both week 8 and 24 (Table 6) .

[0155] Table 6. WHO bleeding score before and after the anti-CD38 monoclonal antibody treatment

[0156] Note:

[0157] WHO: Word Health Organization.

[0158] #One patient died on day 1.

[0159] Among the 21 patients with platelet counts of ≥ 50 × 109 / L, 7 (31.8%) experienced a relapse (Figure 3) : 2 patients relapsed at weeks 14 and 17, respectively, without requiring rescue medications; the 5 remaining patients, received rescue medications, including glucocorticoids, intravenous immunoglobulin, platelet infusion, and TPO-RAs (Table 7) .

[0160] Table 7. Rescue medications over the trial period

[0161] Note:

[0162] IVIG: intravenous immunoglobulin; rhFⅦ: recombinant human factor Ⅶ.

[0163] *Patient 022 was died on day 1.

[0164] Concomitant medications were used in nine patients (40.1%) in this study, with the majority discontinuing concomitant medications due to the restoration of the platelet count to normal or safe levels with the antibody treatment (Table 8) . All patients except one (patient 022) met the primary endpoint, regardless of the results of platelet GP autoantibodies. At week 24, platelet counts of ≥ 50 × 109 / L were observed in 53.3% (8 / 15) and 46.7% (7 / 15) of patients with GP autoantibody-positive and GP autoantibody-negative, respectively (Table 9) .

[0165] Table 8. Concomitant medications over the trial period

[0166] Table 9. Treatment outcomes in different types of platelet glycoprotein autoantibodies

[0167] Note:

[0168] GP: glycoprotein.

[0169] #Proportion of patients with platelet count ≥ 50×109 / L (observed on more than 2 consecutive measurements which separated by ≥ 1 day) within 8 weeks after the first dose of the anti-CD38 monoclonal antibody.

[0170] 3. Immunological Insights and

[0171] A total of 19 of 22 patients had at least one valid ADA assessment. Table 10 showed the results that all the 19 patients tested negative for ADA.

[0172] Table 10. MSD analysis for ADA before and after the antibody infusion

[0173] MSD: Meso Scale Discovery; ADA: anti-drug antibody; RLU: Relative Light Units; SIR: Signal Inhibition Ratio; NA: not available.

[0174] *For patient 001-019, the screening assay cut point is 63.5; for patient 020-021, the screening assay cut point is 62.3. ADA data was absent for the following patients: patient 010, patient 016, and patient 022.

[0175] The trial marked a significant advancement in the treatment of ITP, showcasing a manageable safety profile and remarkable efficacy. The ability of the anti-CD38 monoclonal antibody to rapidly and sustainably increase platelet counts in a population with multiple prior therapies represents a notable achievement in ITP management. Its dual effect of elevating and sustaining platelet counts, coupled with a manageable safety profile, positions the anti-CD38 monoclonal antibody as a potentially transformative therapeutic option for ITP patients.

[0176] Achieving an initial platelet response sufficient to prevent bleeding and ensuring a durable treatment-free remission remains a challenge in managing ITP. While TPO-RAs typically yield an overall response rate of over 70%in patients, only up to one-third can sustain this response. 18 The  use of rituximab has become more prevalent in cases of persistent or chronic ITP before opting for splenectomy. Approximately 40%to 50%of patients with persistent or chronic ITP reported an initial response to rituximab monotherapy, with response rates at 1, 2, and 5 years estimated at 38%, 31%, and 21%, respectively. 19, 20 In our study, 95.5% (21 / 22) of ITP patients, who had received a median of four different therapies, achieved platelet count of ≥ 50 × 109 / L with the anti-CD38 monoclonal antibody treatment. This response was rapid, observed in all but one patients within the first week, and was sustained for a median cumulative response duration of 23 weeks. Bleeding symptoms were completely relieved in 86.7% (13 / 15) of patients after treatment, highlighting the potential of the anti-CD38 monoclonal antibody as an auxiliary or emergency treatment option. The anti-CD38 monoclonal antibody also demonstrated efficacy in patients with a history of splenectomy or rituximab failure or relapse, as well as in patients with GP autoantibody-negative. The overall response rates among patients who had previously undergone splenectomy or rituximab were 75% (3 / 4) and 100% (8 / 8) , respectively. Additionally, all patients with GP autoantibody-negative (n=8) met primary endpoint.

[0177] Analyses of changes in immune function were conducted to provide mechanistic insights into the mode of action of anti-CD38 antibody. In line with previous research on daratumumab, 21 the anti-CD38 monoclonal antibody infusion effectively suppressed the proliferation function of peripheral blood lymphocytes in ITP patients and reduced plasma IgG levels, indicating its ability to downregulate autoantibody production by clearing plasma cells and thus maintaining a long-term response in patients. Correspondingly, the attenuation of platelet self-destruction and the restoration of platelet count may gradually return the immune activation state to equilibrium.

[0178] Notably, patients experienced a rapid increase in platelet count within 1 week after the antibody infusion. Considering the metabolic cycle of pre-existing endogenous antibodies in the body, this suggests the involvement of other mechanisms in the rapid recovery of platelet count. Therefore, we examined various immune indicators of patients before and after the anti-CD38 monoclonal antibody treatment, focusing especially on changes within one week. Interestingly, as one of the effector cells of ADCC, the number of CD56dimCD16+ NK cells significantly decreased at day 7 after the antibody treatment. Simultaneously, the surface expression of CD32b on the monocytes significantly decreased. This decline may be associated with the activation of CD32b by anti-CD38 monoclonal antibodies, leading to subsequent CD32b internalization22 and inhibitory signal transduction to suppress platelet phagocytosis. Thus, we speculate that the anti-CD38 monoclonal antibody, akin to IVIG, may achieve rapid platelet recovery by downregulating ADCC. 23, 24 As the primary effector cells of phagocytosis, we also assessed the impact of anti-CD38 targeted therapy on the macrophages in the spleen of passive ITP mouse models. Similar to the results in patients, anti-CD38 antibody injection significantly downregulated the numbers of CD38+ monocytes and macrophages, especially CD38+ macrophages. Given that CD38 can serve as a surface marker for M1-type macrophages that predominantly execute phagocytic functions, 25, 26 Anti-CD38 targeted therapy primarily achieves the downregulation of platelet phagocytosis and the reduction in the number of  macrophages might by eliminating M1-type macrophages. In summary, based on the results of immunological indicator monitoring in both ITP patients and mouse models, we speculate that, in addition to maintaining a sustained response in ITP patients by eliminating antibody-secreting cells, similar to IVIG, may rapidly increase platelet counts by inhibiting ADCC mediated by NK cells and the mononuclear phagocytic system. Therefore, the treatment with the anti-CD38 monoclonal antibody achieves a dual effect of rapidly elevating and sustaining platelet counts.

[0179] The anti-CD38 monoclonal antibody exhibited a manageable safety profile in this study, with most treatment-emergent adverse events (TEAEs) being of grade 1 or 2. IRRs and upper respiratory tract infections were the most commonly reported TEAEs, with all IRRs being of grade 2 and resolving while patients remained on the antibody infusion. The significant decrease in immunoglobulin levels may elevate the risk of infection, as evidenced by nine infection events observed in eight patients, with only one event classified as grade 3. While severe infections were limited, considering the potential risk, patients might benefit from intermittent intravenous immunoglobulin infusions to mitigate infection incidence.

[0180] Embodiment 2: Immunological analysis in itp patients post the anti-cd38 monoclonal antibody treatment

[0181] The aim was to assess the immunological changes in ITP patients following treatment with the anti-CD38 monoclonal antibody.

[0182] Patients undergoing the anti-CD38 monoclonal antibody treatment had their peripheral blood analyzed at various time points. This involved staining peripheral blood cells with fluorescence-conjugated antibodies and subsequent analysis through flow cytometry. Additional assays were conducted for peripheral blood helper T cell subsets and for evaluating T and B lymphocyte proliferation and apoptosis functions.

[0183] (1) Peripheral Blood Cell Flow Cytometry

[0184] Peripheral blood was obtained from both healthy volunteers and patients undergoing anti-CD38 monoclonal antibody treatment at various observation points (d0, d7, d21, d35, d56, d77, d105, d133, and d161) . Subsequently, peripheral blood cells were stained with fluorescence-conjugated mouse anti-human antibodies (listed in the table below) at room temperature, with precautions taken to avoid light, for 15 minutes. After treating the cells with FACS lysing solution (BD biosciences) to remove red blood cells and washing them twice with phosphate buffered saline (PBS) , the stained cells were assessed using Canto Ⅱ (BD biosciences) and analyzed with FlowJo Version 10.4 for windows.

[0185] (2) Peripheral Blood Helper T Cell (Th) Subsets Assay

[0186] Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated from peripheral blood through density gradient centrifugation. Following two washes with PBS, PBMCs were resuspended at 1×106 cells / mL. Subsequently, PBMCs were cultured in completed RPMI 1640 medium with or without ionomycin (1 ug / mL; Sigma) , Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA; 75 ng / mL; Sigma) and  protein transport inhibitor (BD GolgiStopTM; BD biosciences) for 5.5 hours (37℃, 5%CO2) . After incubation, PBMCs were collected and stained with fluorescence-conjugated mouse anti-human CD4, interleukin-4 (IL-4) , interleukin-17A (IL-17A) and interferon-gamma (IFN-γ) antibodies following the manufacturer’s instructions (BD biosciences) . The proportion of Th1, Th2 and Th17 cells were then analyzed by flow cytometry as described above.

[0187] (3) Peripheral Blood T and B Lymphocyte Proliferation and Apoptosis Function Assay

[0188] PBMCs were isolated and resuspended as described above, then cultured in completed RPMI 1640 medium with recombinant human interleukin-2 (rhIL-2; 5 ng / mL; PeproTech) and phytohemagglutinin (PHA; 5 ug / mL; Sigma) or recombinant human CD40L (1 ug / mL; BioLegend) , recombinant human interleukin-4 (rhIL-4; 20 ng / mL; PeproTech) and F (ab’) 2-goat anti-human IgG+IgM secondary antibody (10 ug / mL; Invitrogen) for 72 hours (37℃, 5%CO2) . The incubated cells were then harvested and stained with the FITC BrdU flow kit and FITC Annexin Ⅴ apoptosis detection kit (BioLegend) according to the manufacturer’s instructions, respectively. Finally, T and B lymphocyte proliferation and apoptosis functions were analyzed by flow cytometry as described above.

[0189] Plasma transforming growth factor β1 (TGFβ1) levels in ITP patients before and after receiving the anti-CD38 monoclonal antibody infusion (d0 d7, d21, and d105) were assessed using a commercial enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (NeoBioscience) in accordance with the manufacturer’s instructions. The detection limit for this assay kit was 15.6 pg / ml.

[0190] Before the administration of the antibody, patients displayed significantly elevated CD38 expression on various immune cells, including T lymphocytes, B lymphocytes, monocytes, and NK cells, compared to healthy controls. After the anti-CD38 monoclonal antibody treatment, a marked decrease in the surface expression of CD38 on these immune cells was observed.

[0191] Key findings included:

[0192] 1. A reduction in serum IgG levels and plasma Granzyme B (GZMB) concentration.

[0193] 2. Decreased proliferation of T and B cells.

[0194] 3. Increase in plasma TGF-β1 concentration.

[0195] 4. No notable changes in the proportion, distribution, and apoptosis of B and T cells.

[0196] 5. A rapid decrease in CD56dimCD16+ NK cells and a reduction in the expression of CD32b on monocytes after treatment.

[0197] Before the anti-CD38 monoclonal antibody transfusion, ITP patients exhibited significantly elevated CD38 expression on various immune cells (T lymphocytes, B lymphocytes, monocytes, and natural killer cells) , along with a higher proportion of antibody-secreting cells in peripheral blood compared to healthy controls. Following targeted CD38 treatment, the surface expression of CD38 on immune cells markedly decreased. Additionally, serum IgG level, plasma GZMB concentration, and T and B cell proliferation continued to decrease, while plasma TGF-β1 concentration increased. No significant changes were observed in the proportion, distribution and apoptosis of B and T cells after treatment (Figure 4-6) .

[0198] Remarkably, in alignment with the rapid increase in platelet count, the count of NK cells, particularly CD56dimCD16+ NK cells, underwent a rapid downregulation within a week after the anti-CD38 monoclonal antibody treatment. Correspondingly, the expression of CD32b on the remaining monocyte significantly decreased compared to pre-treatment levels, while the distribution of monocyte and the expressions of other activated Fcγreceptors remained unchanged (Figure 7) . Since macrophages are rarely present in peripheral blood, a passive ITP mouse model was constructed to further investigate the effect of anti-CD38 targeted therapy on macrophages (Figure 8) . The results indicated a trend toward decreased numbers of monocytes and macrophages after treatment. Notably, the proportion of CD38+ monocytes and CD38+ macrophages dramatically decreased, with CD38+macrophages almost disappearing.

[0199] These results indicated a potential downregulation of autoantibody production and a modulation of immune responses post-the antibody treatment.

[0200] Embodiment 3: Passive ITP Mouse Model Experiment

[0201] Aim:

[0202] To investigate the effect of anti-CD38 targeted therapy on immune cells in a passive ITP mouse model.

[0203] Method and Steps:

[0204] 1. Induction of Passive ITP in Mice: Female BALB / c mice were injected intraperitoneally with anti-mouse CD41 antibody to induce antibody-mediated platelet clearance.

[0205] 2. Intervention: On reaching the lowest platelet count, mice received an intraperitoneal injection of either anti-CD38 monoclonal antibody or normal saline (control group) .

[0206] 3. Harvesting and Analysis of Spleen Samples: Spleens were collected for analysis. Splenocytes were stained with various antibodies and analyzed via flow cytometry.

[0207] Fresh mice spleens were harvested and ground on ice to obtain splenocyte suspensions on day +3. The splenocytes were then stained with CD45, Ly6G, Ly6C, F4 / 80 and other fluorescence-conjugated rat anti-mouse antibodies (listed in the table below) at 4℃, with precautions taken to avoid light, for 30 minutes. After the removal of red blood cells and washing with PBS twice, the stained cells were analyzed by flow cytometry as described above.

[0208] Analysis and Discussion:

[0209] 1. Splenocyte Analysis: The study revealed a decrease in monocytes and macrophages post-treatment. Notably, CD38+ monocytes and macrophages dramatically decreased in number, with CD38+macrophages almost disappearing.

[0210] 2. Implications for Immune Response: The data suggested that anti-CD38 therapy in mice led to a significant alteration in spleen immune cell composition, mirroring the changes observed in human  patients. This included the downregulation of phagocytic cells, which could contribute to the rapid increase in platelet counts.

[0211] 3. Relevance to Human ITP: The mouse model provided insights into the mechanisms of the anti-CD38 monoclonal antibody's action, indicating its potential for rapid platelet recovery and sustained response in ITP patients through modulating immune cell function and reducing autoantibody-mediated destruction of platelets.

[0212] In both embodiments, the outcomes showcased the efficacy of the anti-CD38 monoclonal antibody in modulating immune responses, both in human ITP patients and in a passive ITP mouse model, underscoring its therapeutic potential in treating ITP through immunological pathways.

[0213] Treatment Mechanism:

[0214] The study provided valuable insights into the immunological mechanisms of the anti-CD38 monoclonal antibody. It was found to effectively suppress the proliferation of peripheral blood lymphocytes and reduce plasma IgG levels, indicating its potential to downregulate autoantibody production. The rapid increase in platelet count within a week of the antibody infusion suggests additional mechanisms beyond the clearance of antibody-secreting cells, possibly involving the modulation of antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) .

[0215] Interestingly, a significant decrease in CD56dimCD16+ NK cells and a reduction in CD32b expression on monocytes were observed post-treatment, suggesting a downregulation of ADCC. Furthermore, the study in passive ITP mouse models showed that anti-CD38 therapy led to a notable decrease in the number of CD38+ monocytes and macrophages, particularly the CD38+macrophages known for their phagocytic functions. These findings indicate that the anti-CD38 monoclonal antibody might rapidly increase platelet counts by inhibiting NK cell-mediated ADCC and the mononuclear phagocytic system.

Claims

1.A method for treating an autoimmune diseases in a subject, wherein the method comprises the step of administering to the subject a therapeutic effective amount of an antibody or antigen-binding portion thereof having binding specificity for CD38,wherein the antibody or antigen-binding portion thereof comprises the antibody or antigen-binding portion thereof shown in WO2021104052A1.2.The method of claim 1, wherein the autoimmune diseases is selected from a group comprising from the following: systemic lupus erythematosus (SLE) , rheumatoid arthritis (RA) , multiple sclerosis (MS) , immune thrombocytopenia (ITP) ;3.The method of claim 1 or 2, wherein the autoimmune disease is immune thrombocytopenia (ITP) .4.The method of claim 3, wherein the subject is a mammal, preferably, the subject is a human patient.5.The method of claim 4, wherein the patient has failed or relapsed after glucocorticoid treatment and has received at least one second-line ITP treatment.6.The method of claim 5, wherein the patient has previously shown resistance or intolerance to treatments by rituximab and / or thrombopoietin-receptor agonists (TPO-RAs) .7.The method of any one of the claims 1-6, wherein the therapeutic effective amount of the antibody or antigen-binding portion thereof is administered by an intravenous method.8.The method of any one of the claims 1-7, wherein the therapeutic effective amount of the antibody or antigen-binding portion thereof is administered at a dose of 10-20mg / kg, preferably 14-18mg / kg, more preferably 16 mg / kg.9.The method of any one of the claims 1-8, wherein the therapeutic effective amount of the antibody or antigen-binding portion thereof is administered with a dose regimen comprising a 8-week treating period and a 16-week follow-up period, preferably the dose regimen further comprises a 4-week screening period.10.The method of any one of the claims 3-9, wherein the treatment results in the patient achieving a platelet count of ≥ 50 × 109 / L during the 8-week treatment period.11.The method of any one of the claims 3-10, wherein the method is particularly suitable for patients having a baseline platelet count of < 30 × 109 / L.12.The method of any one of the claims 3-11, wherein, the patients have been diagnosed with ITP for no less than 3 months.13.The method of any one of the claims 3-12, wherein the method further comprises a step of monitoring the patient's platelet count and adjusting the dosage of the antibody or antigen-binding portion thereof based on the response of the patients;preferably, the method further comprises a maintenance phase, wherein the dosage of the antibody or antigen-binding portion thereof is adjusted based on the sustained platelet count or clinical response of the patient;preferably, the method further comprises genetic, immunological, or biochemical testing prior to treatment initiation to identify patients most likely to benefit from the antibody or antigen-binding portion thereof therapy.14.The method of any one of the claims 1-13, wherein the method includes administering the antibody or antigen-binding portion thereof combined with a second therapeutic agents for a synergistic effect;preferably, the second therapeutic agents are selected one or more from the group comprising: thrombopoietin-receptor agonists (TPO-RAs) , corticosteroids and immunosuppressants;optionally, the patient receives prophylactic medications including glucocorticoids, antihistamines, acetaminophen, etc., before and after the infusion of the antibody or antigen-binding portion thereof.15.The method of any one of the claims 1-14, wherein the antibody or antigen-binding portion thereof were comprised in a pharmaceutical formulation suitable for intravenous infusion;preferably, the pharmaceutical formulation is a lyophilized powder for intravenous infusion.16.The method of any one of the claims 1-15, where in the method further comprises a step of pretreatment screening for CD38 expression on plasma cells.17.The method of any one of the claims 1-16, wherein the methods leads to a decrease in the number  of treatment-emergent adverse events compared to conventional treatments.

Images