Novel conjugates for protein degradation, compositions comprising the same, and methods of using the same

Abstract

Provided are novel bifunctional conjugates, especially degrader-antibody conjugates (DACs), that are useful in meditation the levels of target proteins and treating certain diseases. A conjugate disclosed herein comprises a binding moiety that specifically binds to a binding protein such as GPRC5D, CD79b or CD19, an optional linker, and payload degrader, such as a payload derived from a PROTAC molecule, which is a bioactive moiety capable of inducing degradation of a target protein, such as one or more of the Ikaros ('IKZF') family.

Description

NOVEL CONJUGATES FOR PROTEIN DEGRADATION, COMPOSITIONS COMPRISING THE SAME, AND METHODS OF USING THE SAME

[0001] Field of the Disclosure

[0002] This disclosure relates to novel bifunctional conjugates, especially degrader-antibody conjugates (DACs) , that are useful in meditating the levels of target proteins and treating certain diseases. Specifically, this disclosure relates to DACs that can meditate the levels of Ikaros zinc-finger protein family by degradation, enhance immune responses, and treat certain disorders, such as blood tumors.

[0003] Background of the Disclosure

[0004] Antibody-drug conjugates (ADCs) are a rapidly emerging class of therapeutic agents that combine the lethality of cytotoxic cellular poison with the target specificity of a monoclonal antibody (mAb) . The fundamental components of an ADC include an antibody, a linker, and a payload. Unlike conventional chemotherapeutic drug-based therapies, which are mainly associated with modest specificity and therapeutic benefit, the three key components of ADCs can achieve remarkable improvements in terms of targeted killing of cancer cells and a reduction in systemic side effects caused by off-tumor toxicity. However, most ADCs are still associated with unique toxicities, such as pneumonitis / interstitial lung disease, and ocular or skin toxicities that warrant careful monitoring and mitigation strategies (Youwen Zhu. et al., Cancer, 129 (2) : 283 (2023) ) . To address these challenges, modifying the payload and other effective targeted therapies may further extend the utility of these agents in the treatment of solid tumors to improve therapeutic index while minimizing toxicity.

[0005] Recently, target protein degradation (TPD) technology, i.e., a strategy to hijack endogenous proteolysis systems to degrade disease-relevant proteins and thus to reduce their abundance in cells, has been widely used for drug discovery since the proteins that were once considered undruggable can now be made to be druggable. Most TPD strategies, such as proteolysis targeting chimeras (PROTACs) , molecular glues, specific and non-genetic inhibitors of apoptosis protein-dependent protein erosive agents, rely on the ubiquitin–proteasome system (UPS) and mainly target intracellular proteins. Lysosome-dependent TPD  strategies can degrade membrane proteins, extracellular proteins, and protein aggregates, thus greatly expanded the range of substrates. Despite the promising potential of TPD to access undruggable protein degradation, their physicochemical characteristics are generally associated with poor drug metabolism and pharmacokinetics (DMPK) properties and low bioavailability. In general, the lack of discrimination between healthy cells and cancer cells of TPD could raise the issue of off-target toxicities.

[0006] To overcome these challenges of TPD, diverse drug delivery systems were tested, and the combination of ADCs and TPD molecules provided improved characteristics, such as solubility, intracellular accumulation, site-specific distribution, and reduced side effects. Degrader-antibody conjugates (DACs) reduced the side effects while inherit the advantages of PROTACs in targeting shallow binding pockets and the internalization effect of mAbs. As a result, the DACs are one of the most promising new modalities (Ki Bum Hong et al., Journal of Medicinal Chemistry, 66 (1) , 140 (2023) ) .

[0007] Multiple myeloma (MM) , also known as plasma cell myeloma and simply myeloma, is a cancer of plasma cells, a type of white blood cell that normally produces antibodies. MM is the second most common malignancy blood tumors and accounts for 2%of all cancer deaths. MM is a heterogeneous disease and is mainly caused by chromosomal translocations, especially t (11; 14) , t (4; 14) , t (8; 14) , del (13) , del (17) . Due to bone marrow infiltration, bone destruction, kidney failure, immune deficiency, and the psychological burden of a cancer diagnosis, patients affected by MM may experience a variety of disease-related symptoms. MM is still an incurable disease, despite of the increased survival rate since 2000. Relapsed / refractory MM medium PFS is <12 months (for example, medium PFS for CD38 treatment is 3.7m) , remains a high unmet medical need.

[0008] G protein-coupled receptor class C group 5 member D (GPRC5D) is an orphan G-protein coupled receptor, located on human chromosome 12p13. The ligand of GPRC5D is unknown, and the signaling mechanism and function in normal tissue and MM have not established yet. GPRC5D is highly expressed in MM cells and is abundant in the bone marrow of the patients with MM and smoldering MM. Additionally, GPRC5D mRNA expression is also higher in MM cells versus other hematologic cancers. The selective expression in MM cells suggests  that GPRC5D is an ideal target for immune effector cell–mediated therapy to treat MM. (Paula Rodriguez-Otero et al., Blood Cancer Journal 14: 24 (2024) ) . These factors make GPRC5D a potential binding target for potential treatments of diseases, such as MM. Other potential targets include, for example, CD79b and CD19.

[0009] Diseases such as MM may be meditated by the levels of multiple target proteins. As disclosed herein, Ikaros represents a zinc-finger protein family important for lymphocyte development and certain other physiological processes. The IKZF family consists of five members: Ikaros (encoded by the gene IKZF1) , Helios (IKZF2) , Aiolos (IKZF3) , Eos (IKZF4) , and Pegasus (IKZF5) . Ikaros and Aiolos have recently been found to be the main targets for immunomodulatory drug (IMiD) -induced cereblon (CRBN) ubiquitination and subsequent degradation in the treatment of MM patients. In addition to direct anti-MM activity, IKZF1 / 3 degraders also induce immune responses through activation of T and NK cells. IKZF1 / 3 are master transcription factors that play a key role in B and T-cell differentiation and maintain levels of interferon regulatory factor 4 (IRF4) , a critical regulator in non-Hodgkin's lymphoma (NHL) . However, it was also reported that IKZF1 and IKZF3 degradation leads to on-target hematopoietic toxicities such as neutropenia and myelosuppression (M. Q. Lacy, A. R. McCurdy, Blood, 122: 2305 (2013) ; D. Boutboul et al., J.Clin. Invest., 128: 3071 (2018) ; S. Li, J. Fu et al., Blood Adv., 2: 492 (2018) ) . So, DAC molecules by combining IKZF1 / IKZF3 degraders as drug payloads with tumor-targeting antibodies for specific delivery will be a promising therapeutic strategy for treatment of several blood tumors, including multiple myeloma, leukemia, lymphoblastic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, Hodgkin's lymphoma and non-Hodgkin's lymphoma.

[0010] Summary of the Present Disclosure

[0011] The present disclosure relates to novel bifunctional conjugates, especially degrader-antibody conjugates (DACs) , that are useful in meditating the levels of target proteins and treating certain diseases. A conjugate disclosed herein comprises a binding moiety that specifically binds to a binding protein, an optional linker, and payload degrader, such as a payload derived from a PROTAC molecule, which is a bioactive moiety capable of inducing degradation of a target protein.

[0012] In a first aspect, disclosed herein is a conjugate of Formula I:

[0013] wherein Bm is an antibody or antigen-binding segment thereof which is capable of binding to specific binding protein,

[0014] the Linker is a cleavable linker,

[0015] the Spacer is an optional spacing moiety selected from substituted or unsubstituted alkylene, such as C1-C8 alkylene,

[0016] ring A1 is a saturated or unsaturated 4-to 10-membered monocyclic or 6-to 12-membered bicyclic group optionally containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S,

[0017] each hydrogen of ring A1 is optionally substituted by halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, alkyl, cycloalkyl, haloalkyl, halocycloalkyl, heterocycloalkyl alkenyl, cycloalkenyl, haloalkenyl, alkoxyl, cycloalkoxyl, haloalkoxyl, alkylcarbonyloxy, alkylthio, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl, alkyl amino group, dialkyl amino group, alkyl aminocarbonyl group, or dialkyl aminocarbonyl group,

[0018] the Degron comprises an E3 Ubiquitin ligase moiety, and

[0019] x is an integer selected from 1 to 30.

[0020] In a second aspect, disclosed herein is a conjugate of Formula II:

[0021] wherein Bm is an antibody or antigen-binding segment thereof which is capable of binding to specific binding protein,

[0022] the Linker is a cleavable linker,

[0023] ring A2 is a saturated or unsaturated 4-to 10-membered monocyclic or 6-to 12-membered  bicyclic group containing a nitrogen atom and optionally 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S,

[0024] each hydrogen of ring A2 is optionally substituted by halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, alkyl, cycloalkyl, haloalkyl, halocycloalkyl, heterocycloalkyl alkenyl, cycloalkenyl, haloalkenyl, alkoxyl, cycloalkoxyl, haloalkoxyl, alkylcarbonyloxy, alkylthio, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl, alkyl amino group, dialkyl amino group, alkyl aminocarbonyl group, or dialkyl aminocarbonyl group,

[0025] the Degron comprises an E3 Ubiquitin ligase moiety, and

[0026] x is an integer selected from 1 to 30.

[0027] In a third aspect, disclosed herein is a conjugate of Formula I-1:

[0028] wherein:

[0029] Bm is an antibody or antigen-binding segment thereof, which is capable of binding to GPRC5D, CD79b or CD19;

[0030] L is a cleavable linker;

[0031] R1, R2, R3, and R4 are each independently being absent or selected from

[0032] hydrogen, halogen, substituted or unsubstituted C1-C8 alkyl, substituted or unsubstituted C3-C8 cycloakyl, oxo, and -NR5R6, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C8 haloalkyl, hydroxyl, and -NR5R6;

[0033] R5 and R6 are each independently selected from hydrogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and -C (=O) (C1-C8 alkyl) ;

[0034] ring A1 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic group, a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic group, a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic heterocycle  group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; wherein the saturated or unsaturated monocyclic group, the saturated or unsaturated bicyclic group, the saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group, and the saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group, are each optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, oxo, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-;

[0035] R' is each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C8 alkyl, C2-C8 alkenyl, and C2-C8 alkynyl;

[0036] R" is each independently absent or selected from C1-C8 alkylene, C2-C8 alkenylene, and and C2-C8 alkynylene;

[0037] ring B is an optionally substituted saturated or unsaturated 5-to 6-membered heterocycle group containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, a substituted or unsubstituted 5-to 6-membered heteroaryl containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, or a substituted or unsubstituted phenyl, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C6 alkyl, and C1-C6 haloalkyl;

[0038] L’ is absent or selected from C1-C4 alkylene optionally substituted by C1-C4 alky, C1-C4 haloalkyl, or C3-C6 cycloalkyl; and

[0039] x is an integer selected from 1 to 30.

[0040] In a fourth aspect, disclosed herein is a conjugate of Formula II-1:

[0041] wherein:

[0042] Bm is an antibody or antigen-binding segment thereof, which is capable of binding to GPRC5D, CD79b or CD19;

[0043] L is a cleavable linker;

[0044] R1, R2, R3, and R4 are each independently being absent or selected from

[0045] hydrogen, halogen, substituted or unsubstituted C1-C8 alkyl, substituted or unsubstituted C3-C8 cycloakyl, oxo, and -NR5R6, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C8 haloalkyl, hydroxyl, and -NR5R6;

[0046] R5 and R6 are each independently selected from hydrogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and -C (=O) (C1-C8 alkyl) ;

[0047] ring A2 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing a nitrogen atom and 0-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group containing a nitrogen atom and 0-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; wherein the monocyclic heterocycle group, and the saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group, are each optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, oxo, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-;

[0048] R' is each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C8 alkyl, C2-C8 alkenyl, and C2-C8 alkynyl;

[0049] R" is each independently absent or selected from C1-C8 alkylene, C2-C8 alkenylene, and and C2-C8 alkynylene;

[0050] ring B is an optionally substituted saturated or unsaturated 5-to 6-membered heterocycle group containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, a substituted or unsubstituted 5-to 6-membered heteroaryl containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, or a substituted or unsubstituted phenyl, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C6 alkyl, and C1-C6 haloalkyl; and

[0051] x is an integer selected from 1 to 30.

[0052] In some embodiments, disclosed herein is a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker- Payload-10, and Linker-Payload-11.

[0053] In a fifth aspect, disclosed herein is a method for preparing the conjugate disclosed herein, comprising:

[0054] route 1:

[0055] or

[0056] route 2:

[0057] wherein Bm, L, L1, L2, L3, L4, R1, R2, R3, R4, ring A1, ring A2, ring B, L’ , and x are defined as disclosed herein.

[0058] In some embodiments, disclosed herein is a method for preparing a conjugate of Formula I-1, I-1-1, Conjugate-1, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-2, Linker-Payload-4, Linker-Linker-Payload-6, and Linker-Payload-7, wherein the method comprises:

[0059] route 1:

[0060] wherein Bm, L, L1, L2, L3, L4, R1, R2, R3, R4, ring A1, ring B, L’ , and x are defined as disclosed herein.

[0061] In some embodiments, disclosed here in is a method for preparing a conjugate of II-1, II-1-1, Conjugate-2, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-3, Linker-Payload-5, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11, wherein the method comprises:

[0062] route 2:

[0063] wherein Bm, L, L1, L2, L3, L4, R1, R2, R3, R4, ring A2, ring B, and x are defined as disclosed herein.

[0064] In a sixth aspect, disclosed herein is a pharmaceutical composition comprising a conjugate disclosed herein and at least one pharmaceutically acceptable carrier.

[0065] In some embodiments, disclosed herein is a pharmaceutical composition comprising a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11.

[0066] In a seventh aspect, disclosed herein is a method of degrading a target protein in a cell, comprising exposing the cell to the conjugate disclosed herein, or the pharmaceutical composition disclosed herein.

[0067] In some embodiments, the cell is a somatic cell.

[0068] In some embodiments, the cell is a blood cell.

[0069] In some embodiments, the cell is a white blood cell.

[0070] In some embodiments, the cell is a plasma cell.

[0071] In some embodiments, the cell is a tumor cell.

[0072] In some embodiments, the cell is a multiple myeloma cell.

[0073] In some embodiments, the target protein is a protein associated with lymphocyte development.

[0074] In some embodiments, the target protein is one or more of the Ikaros ( “IKZF” ) family.

[0075] In some embodiments, the target protein is Ikaros (IKZF1) and / or Aiolos (IKZF3) .

[0076] In an eighth aspect, disclosed herein is a method for treating or alleviating a disease, a disorder, or a condition mediated by IKZF family, comprising administering in a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the conjugate disclosed herein, or the pharmaceutical composition disclosed herein.

[0077] In some embodiments, disclosed herein is a method for treating or alleviating a disease, a disorder, or a condition mediated by Ikaros (IKZF1) and / or Aiolos (IKZF3) , comprising administering in a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the conjugate disclosed herein, or the pharmaceutical composition disclosed herein.

[0078] In some embodiments, the disease, the disorder or the condition is a cancer.

[0079] In some embodiments, the disease, the disorder or the condition is a tumor.

[0080] In some embodiments, the disease, the disorder or the condition is a blood cancer.

[0081] In some embodiments, the disease, the disorder or the condition is selected from multiple myeloma, leukemia, lymphoblastic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, Hodgkin's lymphoma, and non-Hodgkin's lymphoma.Detailed Description

[0082] I. Definitions

[0083] In the present disclosure, unless otherwise specified, the scientific and technical terms used herein have meanings generally understood by a person skilled in the art. Accordingly, the terms defined herein are more fully described by reference to the Specification as a whole.

[0084] The term “a” or “an” when referring to a noun as used herein encompasses the expression “at least one” and therefore encompasses both singular and plural units of the noun. For example, “an additional pharmaceutical agent” means a single or two or more additional pharmaceutical agents.

[0085] As used herein, the term “about” will be understood by persons of ordinary skill in the art and will vary to some extent depending on the context in which it is used. In some embodiments, the term “about” when referring to a value is meant to encompass art-accepted variations. In some embodiments, the term “about” when referring to such values, is meant to encompass variations of ±20%or ±10%, more preferably ±5%, even more preferably ±1%, and still more preferably ±0.1%from the specified value, as such variations are appropriate in the context in which the term “about” is used.

[0086] As used herein, “and / or” refers to and encompasses any and all possible combinations of one or more of the associated listed items, as well as the lack of combinations when interpreted in the alternative ( “or” ) . Moreover, the present invention also contemplates that in some embodiments of the invention, any feature or combination of features set forth herein can be excluded or omitted.

[0087] Unless the context requires otherwise, the terms “comprise, ” “comprises, ” and “comprising, ” or similar terms are intended to mean a non-exclusive inclusion, such that a recited list of elements or features does not include those stated or listed elements solely, but may include other elements or features that are not listed or stated.

[0088] As used herein, “optionally substituted” is interchangeable with the phrase “substituted or unsubstituted. ” In general, the term “substituted, ” refers to the replacement of hydrogen radicals in a given structure with the radical of a specified substituent. Unless otherwise indicated, an “optionally substituted” group may have a substituent at each substitutable position of the group, and when more than one position in any given structure may be substituted with more than one substituent chosen from a specified group, the substituent may be either the same or different at every position. Combinations of substituents envisioned by the present disclosure are those that result in the formation of stable or chemically feasible compounds.

[0089] Unless otherwise indicated, structures depicted herein are also meant to include all isomeric forms of the structure, e.g., racemic mixtures, cis / trans isomers, geometric (or conformational) isomers, such as (Z) and (E) double bond isomers, and (Z) and (E) conformational isomers. Therefore, geometric and conformational mixtures of the present  compounds are within the scope of the present disclosure. Unless otherwise stated, all tautomeric forms of the compounds of the present disclosure are within the scope of the present disclosure.

[0090] The term “alkyl” as used herein, means a linear or branched, substituted or unsubstituted hydrocarbon chain that is completely saturated. Unless otherwise specified, an alkyl group contains 1 to 30 alkyl carbon atoms. In some embodiments, an alkyl group contains 1 to 20 alkyl carbon atoms. In some embodiments, an alkyl group contains 1 to 10 aliphatic carbon atoms. In some embodiments, an alkyl group contains 1 to 8 aliphatic carbon atoms. In some embodiments, an alkyl group contains 1 to 6 alkyl carbon atoms. In some embodiments, an alkyl group contains 1 to 4 alkyl carbon atoms. In other embodiments, an alkyl group contains 1 to 3 alkyl carbon atoms. And in yet other embodiments, an alkyl group contains 1 to 2 alkyl carbon atoms. In some embodiments, alkyl groups are substituted. In some embodiments, alkyl groups are unsubstituted. In some embodiments, alkyl groups are linear or straight-chain or unbranched. In some embodiments, alkyl groups are branched.

[0091] The term “cycloalkyl” refers to a monocyclic C3-8 hydrocarbon or a spirocyclic, fused, or bridged bicyclic or tricyclic C8-14 hydrocarbon that is completely saturated, wherein any individual ring in said bicyclic ring system has 3 to 7 members. In some embodiments, cycloalkyl groups are substituted. In some embodiments, cycloalkyl groups are unsubstituted. In some embodiments, the cycloalkyl is a C3 to C12 cycloalkyl. In some embodiments, the cycloalkyl is a C3 to C8 cycloalkyl. In some embodiments, the cycloalkyl is a C3 to C6 cycloalkyl. Non-limiting examples of monocyclic cycloalkyls include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, and adamantyl.

[0092] The term “heterocycloalkyl” or “heterocyclic alkyl” refers to a type of cycloalkyl group as defined above and is included within the meaning of the term “cycloalkyl, ” where at least one of the carbon atoms of the ring is replaced with a heteroatom such as, but not limited to, nitrogen, oxygen, sulfur, or phosphorus. The cycloalkyl group and heterocycloalkyl group can be substituted or unsubstituted.

[0093] The term “carbocyclyl” encompasses the term “cycloalkyl” and refers to a monocyclic C3-8 hydrocarbon or a spirocyclic, fused, or bridged bicyclic or tricyclic C8-14 hydrocarbon that is  completely saturated, or is partially saturated as it contains one or more units of unsaturation but is not aromatic, wherein any individual ring in said bicyclic ring system has 3 to 7 members. Bicyclic carbocyclyls include combinations of a monocyclic carbocyclic ring fused to, for example, a phenyl. In some embodiments, carbocyclyl groups are substituted. In some embodiments, carbocyclyl groups are unsubstituted. In some embodiments, the carbocyclyl is a C3 to C12 carbocyclyl. In some embodiments, the carbocyclyl is a C3 to C10 carbocyclyl. In some embodiments, the carbocyclyl is a C3 to C8 carbocyclyl. Non-limiting examples of monocyclic carbocyclyls include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentanyl, cyclohexyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, etc.

[0094] The term “alkenyl” as used herein, means a linear or branched, substituted or unsubstituted hydrocarbon chain that contains one or more double bonds. In some embodiments, alkenyl groups are substituted. In some embodiments, alkenyl groups are unsubstituted. In some embodiments, alkenyl groups are linear, straight-chain, or unbranched. In some embodiments, alkenyl groups are branched.

[0095] The term "alkynyl" refers to a hydrocarbon group selected from linear and branched hydrocarbon group, comprising at least one C≡C triple bond and of 2-18, or 2-12, or 2-6 carbon atoms. Examples of the alkynyl group include ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl (propargyl) , 1-butynyl, 2-butynyl, and 3-butynyl groups.

[0096] The term “cycloalkadienyl” refers to a carbocyclyl containing two double bonds within the ring structure.

[0097] The term “cyclic ketone” refers to a carbocyclyl where a carbonyl group (C=O) is part of the ring structure.

[0098] The term “monocyclic group” refers to a ring having 4 to 30 ring forming atoms, preferably all ring forming atoms are carbon atoms. Unless otherwise specified, the monocyclic group can be saturated, or partially unsaturated. Monocyclic group may include, for example, cycloalkyl, cycloalkenyl, and cycloalkynyl. For example, a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic group include C4-C10 cycloalkyl, C4-C10 cycloalkenyl, and C8-C10 cycloalkynyl.

[0099] The term “bicyclic group” refers to any bicyclic ring system, i.e. carbocyclic or heterocyclic, saturated or partially unsaturated. The bicyclic group may contain spiro rings,  bridged rings, or fused rings. Examples of bicyclic groups may be radicals derived from, for example, bicyclo [4.4.0] decane, bicyclo [2.2.1] heptane, or bicyclo [2.2.2] octane, etc.

[0100] The term “heterocyclyl” or “heterocycle” as used herein means non-aromatic (i.e., completely saturated or partially saturated as in it contains one or more units of unsaturation but is not aromatic) , monocyclic, or spirocyclic, fused, or bridged bicyclic or tricyclic ring systems in which one or more ring members is an independently chosen heteroatom. Bicyclic heterocyclyls or bicyclic heterocycle group include, for example, the following combinations of monocyclic rings: a monocyclic heteroaryl fused to a monocyclic heterocyclyl; a monocyclic heterocyclyl fused to another monocyclic heterocyclyl; a monocyclic heterocyclyl fused to phenyl; a monocyclic heterocyclyl fused to a monocyclic carbocyclyl / cycloalkyl; and a monocyclic heteroaryl fused to a monocyclic carbocyclyl / cycloalkyl. In some embodiments, the “heterocyclyl” group contains 3 to 14 ring members in which one or more ring members is a heteroatom independently chosen, for example, from oxygen, sulfur, nitrogen, and phosphorus. In some embodiments, each ring in a bicyclic or tricyclic ring system contains 3 to 7 ring members. In some embodiments, the heterocycle has at least one unsaturated carbon-carbon bond. In some embodiments, the heterocycle has at least one unsaturated carbon-nitrogen bond. In some embodiments, the heterocycle has one heteroatom independently chosen from oxygen, sulfur, nitrogen, and phosphorus. In some embodiments, the heterocycle has one heteroatom that is a nitrogen atom. In some embodiments, the heterocycle has one heteroatom that is an oxygen atom. In some embodiments, the heterocycle has two heteroatoms that are each independently selected from nitrogen and oxygen. In some embodiments, the heterocycle has three heteroatoms that are each independently selected from nitrogen and oxygen. In some embodiments, heterocycles are substituted. In some embodiments, heterocycles are unsubstituted. In some embodiments, the heterocyclyl is a 3-to 12-membered heterocyclyl. In some embodiments, the heterocyclyl is a 4-to 10-membered heterocyclyl. In some embodiments, the heterocyclyl is a 3-to 8-membered heterocyclyl. In some embodiments, the heterocyclyl is a 5-to 10-membered heterocyclyl. In some embodiments, the heterocyclyl is a 5-to 8-membered heterocyclyl. In some embodiments, the heterocyclyl is a 5-or 6-membered heterocyclyl. In some embodiments, the heterocyclyl is a 6-membered heterocyclyl.  Non-limiting examples of monocyclic heterocyclyls include piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, tetrahydropyranyl, azetidinyl, oxetanyl, tetrahydrothiophenyl, dihyropyranyl, tetrahydropyridinyl, etc.

[0101] The term “heteroaryl” refers to a radical of a 5-14 membered monocyclic or polycyclic (e.g., bicyclic, tricyclic) 4n+2 aromatic ring system (e.g., having 6, 10, or 14π electrons shared in a cyclic array) having ring carbon atoms and 1-4 ring heteroatoms provided in the aromatic ring system, wherein each heteroatom is independently selected from nitrogen, oxygen, and sulfur ( “5-14 membered heteroaryl” ) , or a group derived therefrom. In heteroaryl groups that contain one or more nitrogen atoms, the point of attachment may be a carbon or nitrogen atom, as valency permits. Heteroaryl polycyclic ring systems may include one or more heteroatoms in one or both rings. “Heteroaryl” includes ring systems wherein the heteroaryl ring, as defined above, is fused with one or more carbocyclyl or heterocyclyl groups wherein the point of attachment is on the heteroaryl ring, and in such instances, the number of ring members continue to designate the number of ring members in the heteroaryl ring system. “Heteroaryl” also includes ring systems wherein the heteroaryl ring, as defined above, is fused with one or more aryl groups wherein the point of attachment is either on the aryl or heteroaryl ring, and in such instances, the number of ring members designates the number of ring members in the fused polycyclic (aryl / heteroaryl) ring system. Polycyclic heteroaryl groups wherein one ring does not contain a heteroatom (e.g., indolyl, quinolinyl, carbazolyl, and the like) the point of attachment can be on either ring, i.e., either the ring bearing a heteroatom (e.g., 2-indolyl) or the ring that does not contain a heteroatom (e.g., 5-indolyl) . Unless otherwise specified, each instance of a heteroaryl group is independently unsubstituted (an “unsubstituted heteroaryl” ) or substituted (a “substituted heteroaryl” ) with one or more substituents.

[0102] Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing one heteroatom include, without limitation, pyrrolyl, furanyl, and thiophenyl. Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing two heteroatoms include, without limitation, imidazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, and isothiazolyl. Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing three heteroatoms include, without limitation, triazolyl, oxadiazolyl, and thiadiazolyl. Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing four heteroatoms include, without  limitation, tetrazolyl. Exemplary 6-membered heteroaryl groups containing one heteroatom include, without limitation, pyridinyl. Exemplary 6-membered heteroaryl groups containing two heteroatoms include, without limitation, pyridazinyl, pyrimidinyl, and pyrazinyl. Exemplary 6-membered heteroaryl groups containing three or four heteroatoms include, without limitation, triazinyl and tetrazinyl, respectively. Exemplary 7-membered heteroaryl groups containing one heteroatom include, without limitation, azepinyl, oxepinyl, and thiepinyl. Exemplary 5, 6-bicyclic heteroaryl groups include, without limitation, indolyl, isoindolyl, indazolyl, benzotriazolyl, benzothiophenyl, isobenzothiophenyl, benzofuranyl, benzoisofuranyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, benzisoxazolyl, benzoxadiazolyl, benzthiazolyl, benzisothiazolyl, benzthiadiazolyl, indolizinyl, and purinyl. Exemplary 6, 6-bicyclic heteroaryl groups include, without limitation, naphthyridinyl, pteridinyl, quinolinyl, isoquinolinyl, cinnolinyl, quinoxalinyl, phthalazinyl, and quinazolinyl. Exemplary tricyclic heteroaryl groups include, without limitation, phenanthridinyl, dibenzofuranyl, carbazolyl, acridinyl, phenothiazinyl, phenoxazinyl and phenazinyl.

[0103] The term “heteroatom” means one or more of oxygen, sulfur, and nitrogen, including, any oxidized form of nitrogen or sulfur, or silicon; the quaternized form of any basic nitrogen or; a substitutable nitrogen of a heterocyclic ring, for example N (as in 3, 4-dihydro-2H-pyrrolyl) , NH (as in pyrrolidinyl) or NR+ (as in N-substituted pyrrolidinyl) .

[0104] The term “unsaturated” , as used herein, means that a moiety has one or more units or degrees of unsaturation. Unsaturation is the state in which not all of the available valence bonds in a compound are satisfied by substituents and thus the compound contains double or triple bonds.

[0105] The term “alkoxy” as used herein, refers to an alkyl group, as defined above, wherein one carbon of the alkyl group is replaced by an oxygen ( “alkoxy” ) atom, provided that the oxygen atom is linked between two carbon atoms.

[0106] C1-C6 is selected from C1, C2, C3, C4, C5, and C6; C3-6 is selected from C3, C4, C5, and C6.

[0107] Unless otherwise specified, the term "halo" or "halogen" itself or as a part of another substituent refers to a fluorine, chlorine, bromine or iodine. In addition, the term "haloalkyl" is  intended to include monohaloalkyl and polyhaloalkyl. Examples of haloalkyl include but are not limited to: trifluoromethyl, trichloromethyl, pentafluoroethyl, and pentachloroethyl. “Haloalkoxy” means an alkoxy further consisting of, from one to the maximum possible number of identical or different, halos, including, for example, fluoromethoxy, trifluoromethoxy, 2, 2-difluoropropoxy, chloromethoxy, trichloromethoxy, 1, 1, 2, 2-tetrafluoroethoxy, and pentafluoroethoxy. The term “haloalkyoxyl” is intended to refer to monohaloalkyoxyl and polyhaloalkoxyl.

[0108] “Cycloalkoxy” means a cycloalkyl further consisting of a carbon-oxygen single bond, including, for example, cyclopropyloxy, cyclobutyloxy, cyclopentyloxy, norbornyloxy, and bicyclo [2.2.2] octyloxy.

[0109] “Cycloalkenyl” means a monocyclic or polycyclic, unsaturated (at least one carbon-carbon double bond) substituent consisting of carbon and hydrogen, including, for example, cyclobutenyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, norbornenyl, bicyclo [2.2.2] octenyl, tetrahydronaphthyl, hexahydronaphthyl, and octahydronaphthyl.

[0110] “Alkylene” refers to a straight or branched divalent hydrocarbon chain linking two groups in a molecule, which may be saturated or unsaturated (i.e., contains one or more double and / or triple bonds) , and have from one to twelve carbon atoms, preferably one to eight carbon atoms (C1-C8 alkylene) or one to six carbon atoms (C1-C6 alkylene) , e.g., methylene, ethylene, propylene, n-butylene, ethenylene, propenylene, n-butenylene, propynylene, n-butynylene, and the like. The alkylene chain is attached to the rest of the molecule through a single or double bond. The points of attachment of the alkylene chain to the rest of the molecule may be through one carbon, e.g., methylene, or any two carbons within the chain, e.g., -CH2CH (CH3) CH2CH2-. Unless stated otherwise specifically in the specification, an alkylene chain is optionally substituted.

[0111] “Alkenylene” is an unsaturated alkylene, as defined herein, which comprises one or more carbon-carbon double bonds. Unless stated otherwise specifically in the specification, an alkenylene is optionally substituted.

[0112] “Alkynylene” is an unsaturated alkylene, as defined herein, which comprises one or more carbon-carbon triple bonds. Unless stated otherwise specifically in the specification, an  alkynylene is optionally substituted.

[0113] Unless otherwise specified, the term "hetero" refers to a heteroatom or a heteroatom group (i.e. a group containing a heteroatom) , including atoms other than carbon (C) and hydrogen (H) and groups containing these heteroatoms, for example, including oxygen (O) , nitrogen (N) , sulfur (S) , silicon (Si) , germanium (Ge) , aluminum (Al) , boron (B) , -O-, -S-, =O, =S, -C (=O) O-, -C (=O) -, -C (=S) -, -S (=O) , -S (=O) 2, and optionally substituted -C (=O) N (H) -, -N (H) -, -C (=NH) -, -S (=O) 2N (H) -or -S (=O) N (H) -.

[0114] Unless otherwise specified, the "ring" refers to a substituted or unsubstituted cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkenyl, heterocycloalkenyl, cycloalkynyl, heterocycloalkynyl, aryl or heteroaryl. The so-called ring includes a single ring, a joint ring, a spiro ring, a fused ring or a bridged ring. A number of the atoms on the ring is usually defined as the member of the ring, for example, "5-to 7-membered ring" refers to a ring looped with 5 to 7 atoms. Unless otherwise specified, the ring optionally contains 1-3 of heteroatoms. Therefore, "5-to 7-membered ring" includes, for example, phenyl, pyridine and piperidinyl; on the other hand, the term "5-to 7-membered heterocycloalkyl" includes pyridyl and piperidinyl, but does not include phenyl. The term "ring" also includes a ring system containing at least one ring, wherein each of the "rings" is independently in line with the above definition.

[0115] As disclosed herein, a bond can be a covalent bond or an ionic bond. In some embodiments, a bond can be a saturated bond or an unsaturated bond. In some embodiments, a bond refers to a single bond. In some embodiments, a bond refers to a double bond. In other embodiments, a bond refers to a triple bond. The term “unsaturated bond” refers to a double or triple bond.

[0116] As used herein, a “cyano” or “nitrile” group refers to -CN.

[0117] As used herein, a “carboxylate” or “carboxyl” group refers to -COOH.

[0118] An “oxo” group refers to a carbonyl moiety such that alkyl substituted by oxo refers to a ketone group.

[0119] As used herein, the term “aminoalkylcarboxylate” group refers to linear or branched, hydrocarbon chain that is completely saturated that is substituted with an amino group and a carboxylate group. In some embodiments, the amino group and the carboxylate group are substituents on the same carbon atom of the alkyl group. In some embodiments, the amino  group and the carboxylate group are substituents on different carbon atoms of the alkyl group.

[0120] As used herein, an “aromatic ring” refers to a carbocyclic or heterocyclic ring that contains conjugated, planar ring systems with delocalized pi electron orbitals comprised of [4n+2] p orbital electrons, wherein n is an integer of 0 to 6. A “non-aromatic” ring refers to a carbocyclic or heterocyclic that does not meet the requirements set forth above for an aromatic ring, and can be either completely or partially saturated. Nonlimiting examples of aromatic rings include aryl and heteroaryl rings that are further defined as follows.

[0121] The term “aryl” used alone or as part of a larger moiety as in “arylalkyl, ” “arylalkoxy, ” or “aryloxyalkyl, ” refers to monocyclic or spirocyclic, fused, or bridged bicyclic or tricyclic ring systems having a total of five to fourteen ring members, wherein every ring in the system is an aromatic ring containing only carbon atoms and wherein each ring in a bicyclic or tricyclic ring system contains 3 to 7 ring members. Nonlimiting examples of aryl groups include phenyl (C6) and naphthyl (C10) rings. In some embodiments, aryl groups are substituted. In some embodiments, aryl groups are unsubstituted.

[0122] The term “heteroaryl” refers to monocyclic or spirocyclic, fused, or bridged bicyclic or tricyclic ring systems having a total of five to fourteen ring members, wherein at least one ring in the system is aromatic, at least one ring in the system contains one or more heteroatoms, and wherein each ring in a bicyclic or tricyclic ring system contains 3 to 7 ring members. Bicyclic heteroaryls include, for example, the following combinations of monocyclic rings: a monocyclic heteroaryl fused to another monocyclic heteroaryl; and a monocyclic heteroaryl fused to a phenyl. In some embodiments, heteroaryl groups are substituted. In some embodiments, heteroaryl groups have one or more heteroatoms chosen, for example, from nitrogen, oxygen, and sulfur. In some embodiments, heteroaryl groups have one heteroatom. In some embodiments, heteroaryl groups have two heteroatoms. In some embodiments, heteroaryl groups are monocyclic ring systems having five ring members. In some embodiments, heteroaryl groups are monocyclic ring systems having six ring members. In some embodiments, heteroaryl groups are unsubstituted. In some embodiments, the heteroaryl is a 3-to 12-membered heteroaryl. In some embodiments, the heteroaryl is a 3-to 10-membered heteroaryl. In some embodiments, the heteroaryl is a 3-to 8-membered heteroaryl. In some  embodiments, the heteroaryl is a 5-to 10-membered heteroaryl. In some embodiments, the heteroaryl is a 5-to 8-membered heteroaryl. In some embodiments, the heteroaryl is a 5-or 6-membered heteroaryl. Non-limiting examples of monocyclic heteroaryls are pyridinyl, pyrimidinyl, thiophenyl, thiazolyl, isoxazolyl, 2-amino-4-hydroxy-1H-pteridine, etc.

[0123] A “spirocyclic ring system” refers to a ring system having two or more cyclic rings, where every two rings share only one common atom.

[0124] The term “glycosidic” refers to a carbohydrate group, such as a monosaccharide, disaccharide, trisaccharide, tetrasaccharide or polysaccharide group, and may exist in various isomeric forms, for example α-D, α-L, β-D or β-L forms. The carbohydrate group may be optionally substituted with other type of substituents or even additional glycosidic groups. In some embodiments, th glycosidic group is selected from α-D-glucopyranoside, α-D-galactopyranoside, α-D-mannopyranoside, α-L-fucopyranoside, α-L-arabinopyranoside, β-D-glucopyranoside, β-D-galactopyranoside, β-D-glucuronide, β-D-lactopyranoside, β-D-xylopyranoside, β-D-glucosaminide, β-D-galactosaminide, β-D-alloside, β-D-lyxoside, β-D-taloside, β-D-threoside, β-D-riboside, β-D-fructoside, β-D-rhamnoside and β-L-guloside groups.

[0125] Non-limiting examples of suitable solvents that may be used in the present disclosure include water, methanol (MeOH) , ethanol (EtOH) , dichloromethane or “methylene chloride” (CH2Cl2) , toluene, acetonitrile (MeCN) , dimethylformamide (DMF) , dimethyl sulfoxide (DMSO) , methyl acetate (MeOAc) , ethyl acetate (EtOAc) , heptanes, isopropyl acetate (IPAc) , tert-butyl acetate (t-BuOAc) , isopropyl alcohol (IPA) , tetrahydrofuran (THF) , 2-methyl tetrahydrofuran (2-Me THF) , methyl ethyl ketone (MEK) , tert-butanol, diethyl ether (Et2O) , methyl-tert-butyl ether (MTBE) , 1, 4-dioxane, and N-methyl pyrrolidone (NMP) .

[0126] Non-limiting examples of suitable bases that may be used in the present disclosure include 1, 8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene (DBU) , potassium tert-butoxide (KOtBu) , potassium carbonate (K2CO3) , N-methylmorpholine (NMM) , triethylamine (Et3N; TEA) , diisopropyl-ethyl amine (i-Pr2EtN; DIPEA) , pyridine, potassium hydroxide (KOH) , sodium hydroxide (NaOH) , lithium hydroxide (LiOH) and sodium methoxide (NaOMe; NaOCH3) .

[0127] The term “polypeptide” is intended to encompass a singular “polypeptide” as well as plural  “polypeptides, ” and refers to a molecule composed of monomers (amino acids) linearly linked by amide bonds (also known as peptide bonds) . The term “polypeptide” refers to any chain or chains of two or more amino acids and does not refer to a specific length of the product. Thus, “peptides, ” “protein” , or any other term used to refer to a chain or chains of two or more amino acids, are included within the definition of “polypeptide, ” and the term “polypeptide” may be used instead of, or interchangeably with any of these terms. The term “polypeptide” is also intended to refer to the products of post-expression modifications of the polypeptide, including without limitation glycosylation, acetylation, phosphorylation, amidation, derivatization by known protecting / blocking groups, proteolytic cleavage, or modification by non-naturally occurring amino acids. A polypeptide may be derived from a natural biological source or produced by recombinant technology, but is not necessarily translated from a designated nucleic acid sequence. It may be generated in any manner, including by chemical synthesis.

[0128] As used herein, the term “encode” or “encoding” as it is applied to polynucleotides refers to a polynucleotide which is said to “encode” a polypeptide if, in its native state or when manipulated by methods well known to those skilled in the art, it can be transcribed and / or translated to produce the mRNA for the polypeptide and / or a fragment thereof. The antisense strand is the complement of such a nucleic acid, and the encoding sequence can be deduced therefrom.

[0129] The term “expression” refers to the transcription and / or translation of a particular nucleotide sequence driven by its promoter.

[0130] As used herein, “percent (%) amino acid sequence identity” with respect to a peptide, polypeptide or protein sequence is defined as the percentage of amino acid residues in a candidate sequence that are identical with the amino acid residues in another peptide or polypeptide sequence, after aligning the sequences and introducing gaps, if necessary, to achieve the maximum percent sequence identity, and not considering any conservative substitutions as part of the sequence identity. Percent amino acid sequence identity in the current disclosure is measured using BLAST software. Those skilled in the art can determine appropriate parameters for measuring alignment, including any algorithms needed to achieve maximal alignment over the full length of the sequences being compared.

[0131] An amino acid substitution refers to the replacement of one amino acid in a polypeptide with another amino acid. Amino acid substitutions can be conservative or non-conservative substitutions. Amino acid substitutions may be introduced into a protein of interest and the products screened for a desired activity, for example, retained / improved biological activity.

[0132] Amino acids may be grouped according to common side-chain properties:

[0133] (1) hydrophobic: Norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

[0134] (2) neutral hydrophilic: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

[0135] (3) acidic: Asp, Glu;

[0136] (4) basic: His, Lys, Arg;

[0137] (5) residues that influence chain orientation: Gly, Pro;

[0138] (6) aromatic: Trp, Tyr, Phe.

[0139] The term “antibody, ” as used herein, is intended to refer to immunoglobulin molecules comprising four polypeptide chains, two heavy (H) chains and two light (L) chains inter-connected by disulfide bonds, as well as multimers thereof (e.g., IgM) . Each heavy chain comprises a heavy chain variable region (abbreviated herein as HCVR or VH) and a heavy chain constant region. The heavy chain constant region comprises three domains, C H1, C H2 and C H3. Each light chain comprises a light chain variable region (abbreviated herein as LCVR or VL) and a light chain constant region. The light chain constant region comprises one domain (CL1) . The VH and VL regions can be further subdivided into regions of hypervariability, termed complementarity determining regions (CDRs) , interspersed with regions that are more conserved, termed framework regions (FR) . Each VH and VL is composed of three CDRs and four FRs, arranged from amino-terminus to carboxy-terminus in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. In different embodiments of the invention, the FRs of the anti-IL-4R antibody (or antigen-binding portion thereof) may be identical to the human germline sequences, or may be naturally or artificially modified. An amino acid consensus sequence may be defined based on a side-by-side analysis of two or more CDRs.

[0140] The term “antibody, ” as used herein, also includes antigen-binding fragments of full antibody molecules. The terms “antigen-binding portion” of an antibody, “antigen-binding  fragment” of an antibody, and the like, as used herein, include any naturally occurring, enzymatically obtainable, synthetic, or genetically engineered polypeptide or glycoprotein that specifically binds an antigen to form a complex. Antigen-binding fragments of an antibody may be derived, e.g., from full antibody molecules using any suitable standard techniques such as proteolytic digestion or recombinant genetic engineering techniques involving the manipulation and expression of DNA encoding antibody variable and optionally constant domains. Such DNA is known and / or is readily available from, e.g., commercial sources, DNA libraries (including, e.g., phage-antibody libraries) , or can be synthesized. The DNA may be sequenced and manipulated chemically or by using molecular biology techniques, for example, to arrange one or more variable and / or constant domains into a suitable configuration, or to introduce codons, create cysteine residues, modify, add or delete amino acids, etc.

[0141] As disclosed herein, non-limiting examples of antigen-binding fragments include: (i) Fab fragments; (ii) F (ab′) 2 fragments; (iii) Fd fragments; (iv) Fv fragments; (v) single-chain Fv (scFv) molecules; (vi) dAb fragments; and (vii) minimal recognition units consisting of the amino acid residues that mimic the hypervariable region of an antibody (e.g., an isolated complementarity determining region (CDR) such as a CDR3 peptide) , or a constrained FR3-CDR3-FR4 peptide. Other engineered molecules, such as domain-specific antibodies, single domain antibodies, domain-deleted antibodies, chimeric antibodies, CDR-grafted antibodies, diabodies, triabodies, tetrabodies, minibodies, nanobodies (e.g. monovalent nanobodies, bivalent nanobodies, etc. ) , small modular immunopharmaceuticals (SMIPs) , and shark variable IgNAR domains, are also encompassed within the expression “antigen-binding fragment, ” as used herein.

[0142] An antigen-binding fragment of an antibody will typically comprise at least one variable domain. The variable domain may be of any size or amino acid composition and will generally comprise at least one CDR which is adjacent to or in frame with one or more framework sequences. In antigen-binding fragments having a VH domain associated with a VL domain, the VH and VL domains may be situated relative to one another in any suitable arrangement. For example, the variable region may be dimeric and contain VH-VH, VH-VL or VL-VL dimers. Alternatively, the antigen-binding fragment of an antibody may contain a monomeric  VH or VL domain.

[0143] In certain embodiments, an antigen-binding fragment of an antibody may contain at least one variable domain covalently linked to at least one constant domain. Non-limiting, exemplary configurations of variable and constant domains that may be found within an antigen-binding fragment of an antibody of the present invention include: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; and (xiv) VL-CL. In any configuration of variable and constant domains, including any of the exemplary configurations listed above, the variable and constant domains may be either directly linked to one another or may be linked by a full or partial hinge or linker region. A hinge region may consist of at least 2 (e.g., 5, 10, 15, 20, 40, 60 or more) amino acids which result in a flexible or semi-flexible linkage between adjacent variable and / or constant domains in a single polypeptide molecule. Moreover, an antigen-binding fragment of an antibody of the present invention may comprise a homo-dimer or hetero-dimer (or other multimer) of any of the variable and constant domain configurations listed above in non-covalent association with one another and / or with one or more monomeric VH or VL domain (e.g., by disulfide bond (s) ) .

[0144] As with full antibody molecules, antigen-binding fragments may be monospecific or multispecific (e.g., bispecific) . A multispecific antigen-binding fragment of an antibody will typically comprise at least two different variable domains, wherein each variable domain is capable of specifically binding to a separate antigen or to a different epitope on the same antigen. Any multispecific antibody format may be adapted for use in the context of an antigen-binding fragment of an antibody of the present invention using routine techniques available in the art.

[0145] The term “specifically binds, ” or the like, means that an antibody or antigen-binding fragment thereof forms a complex with an antigen that is relatively stable under physiologic conditions. Methods for determining whether an antibody specifically binds to an antigen are well known in the art and include, for example, equilibrium dialysis, surface plasmon resonance, and the like.

[0146] Disclosed herein are pharmaceutically acceptable salts of the disclosed compounds. A salt of a compound is formed between an acid and a basic group of the compound, such as an amino functional group, or a base and an acidic group of the compound, such as a carboxyl functional group.

[0147] The term “cleavable linker” refers to any linkers which can be used in an antibody drug conjugate. In certain embodiments, the linker selected is cleavable in vitro and in vivo. Cleavable linkers may include chemically or enzymatically unstable or degradable linkages. Cleavable linkers generally rely on processes inside the cell to liberate the drug, such as reduction in the cytoplasm, exposure to acidic conditions in the lysosome, or cleavage by specific proteases or other enzymes within the cell. Cleavable linkers generally incorporate one or more chemical bonds that are either chemically or enzymatically cleavable while the remainder of the linker is non-cleavable.

[0148] In certain embodiments, a linker comprises a chemically labile group such as hydrazone and / or disulfide groups. Linkers comprising chemically labile groups exploit differential properties between the plasma and some cytoplasmic compartments. The intracellular conditions to facilitate drug release for hydrazone containing linkers are the acidic environment of endosomes and lysosomes, while the disulfide containing linkers are reduced in the cytosol, which contains high thiol concentrations, e.g., glutathione. In certain embodiments, the plasma stability of a linker comprising a chemically labile group may be increased by introducing steric hindrance using substituents near the chemically labile group.

[0149] It is to be understood that this disclosure is not limited to the particular methodology, protocols, and reagents described, as these may vary, depending upon the context in which they are used by those skilled in the art.

[0150] The term "pharmaceutically acceptable" as used herein is directed to those compounds, materials, compositions and / or formulations which are within the scope of reliable medical judgment, suitable for use in contact with human and animal tissues but without too much toxicity, irritation, allergic reactions or other problems or complications, and also commensurate with a reasonable benefit / risk ratio.

[0151] The term "pharmaceutically acceptable salt" refers to a salt of the compound disclosed  herein, which is prepared from the compound with specific substituents disclosed herein and a relatively non-toxic acid or alkali. When the compound disclosed herein contains a relatively acidic functional group, an alkali-addition salt can be obtained by contacting the compound in a neutral form with a sufficient amount of alkali in a pure solution or suitable inert solvent. The pharmaceutically acceptable alkali-addition salt includes, for example, the salt of sodium, potassium, calcium, ammonium, organic ammine or magnesium or the like. When the compound disclosed herein contains a relatively alkaline functional group, an acid-addition salt can be obtained by contacting the compound in a neutral form with a sufficient amount of acid in a pure solution or suitable inert solvent. Examples of the pharmaceutically acceptable acid-addition salt include a salt of an inorganic acid, wherein the inorganic acid includes, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, carbonic acid, bicarbonate, phosphoric acid, hydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, sulfuric acid, bisulfate, hydriodic acid, phosphorous acid; and a salt of an organic acid, wherein the organic acid includes, for example, acetic acid, propionic acid, isobutyric acid, maleic acid, malonic acid, benzoic acid, succinic acid, suberic acid, fumaric acid, lactic acid, mandelic acid, phthalic acid, phenylsulfonic acid, p-toluene sulfonic acid, citric acid, tartaric acid, methylsulfonic acid and the like; and also includes a salt of an amino acid (e.g. arginine etc. ) , and salts of organic acids such as glucuronic acid and the like (see Berge et al., "Pharmaceutical Salts, " Journal of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977) ) . Some specific compounds disclosed herein contain both alkaline and acidic functional groups and thereby may be transformed to any of the alkali-addition or acid-addition salt.

[0152] Further, the "pharmaceutically acceptable salt" used herein belongs to the derivatives of the compounds disclosed herein, wherein the compound disclosed herein is modified by salifying with an acid or an alkali. Examples of the pharmaceutically acceptable salt disclosed herein include, but are not limited to: an inorganic acid or organic acid salt of an alkali such as amine, alkali metal or an organic salt of an acid radical such as carboxylic acid. Further, the pharmaceutically acceptable salts disclosed herein include conventional non-toxic salts or quaternary ammonium salts of the compounds disclosed herein, such as a salt formed by a non-toxic inorganic acid or organic acid. The conventional non-toxic salt includes but is not limited  to those salts derived from an inorganic acid and an organic acid, the inorganic acid or organic acid is selected, for example, from 2-acetoxybenzoic acid, 2-isethionic acid, acetic acid, ascorbic acid, phenylsulfonic acid, benzoic acid, bicarbonate, carbonic acid, citric acid, edetic acid, ethanedisulfonic acid, ethanesulfonic acid, fumaric acid, glucoheptose, gluconic acid, glutamic acid, glycolic acid, hydrobromic acid, hydrochloric acid, hydriodate, hydroxyl, hydroxynaphthoic, isethionic acid, lactic acid, lactose, dodecanesulfonic acid, maleic acid, malic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, nitric acid, oxalic acid, pamoic acid, pantothenic acid, phenylacetic acid, phosphoric acid, polygalacturonan, propionic acid, salicylic acid, stearic acid, folinic acid, succinic acid, aminosulfonic acid, p-aminobenzenesulfonic acid, sulphuric acid, tannic acid, tartaric acid, and p-toluene sulfonic acid.

[0153] The pharmaceutically acceptable salt of the present disclosure can be prepared by a conventional chemical method using the compounds disclosed herein.

[0154] The compounds disclosed herein and / or the pharmaceutically acceptable salts thereof may be employed alone or in combination with at least one other therapeutic agent for treatment. The compound and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof disclosed herein may be administered with the at least one other therapeutic agent in a single dosage form or as a separate dosage form. When administered as a separate dosage form, the at least one other therapeutic agent may be administered prior to, at the same time as, or following administration of the compound and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof disclosed herein.

[0155] The composition comprising the compound disclosed herein and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be administered in various known manners, such as orally, topically, rectally, parenterally, by inhalation spray, or via an implanted reservoir, although the most suitable route in any given case will depend on the particular host, and nature and severity of the conditions for which the active ingredient is being administered. The term “parenteral” as used herein includes subcutaneous, intracutaneous, intravenous, intramuscular, intraarticular, intraarterial, intrasynovial, intrasternal, intrathecal, intralesional and intracranial injection or infusion techniques. The compositions disclosed herein may be conveniently presented in unit dosage form and prepared by any of the methods well known in the art.

[0156] The compound disclosed herein and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be administered orally in solid dosage forms, such as capsules, tablets, troches, dragées, granules and powders, or in liquid dosage forms, such as elixirs, syrups, emulsions, dispersions, and suspensions.

[0157] Liquid dosage forms for oral administration can further comprise at least one agent selected from coloring and flavoring agents to increase patient acceptance. In general, water, a suitable oil, saline, aqueous dextrose (glucose) , and related sugar solutions and glycols such as propylene glycol or polyethylene glycols can be examples of suitable carriers for parenteral solutions.

[0158] A pharmaceutically acceptable carrier disclosed herein is, for example, selected from carriers that are compatible with active ingredients of the composition (and in some embodiments, capable of stabilizing the active ingredients) and not deleterious to the subject to be treated. In some embodiments, solubilizing agents, such as cyclodextrins (which can form specific, more soluble complexes with the at least one compound and / or at least one pharmaceutically acceptable salt disclosed herein) , can be utilized as pharmaceutical excipients for delivery of the active ingredients. Examples of other carriers include colloidal silicon dioxide, magnesium stearate, cellulose, sodium lauryl sulfate, and pigments such as D&C Yellow #10. Suitable pharmaceutically acceptable carriers are described in Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, a standard reference text in the art.

[0159] Some compounds of the present disclosure may contain an asymmetric carbon atom (optical center) or double bond. The racemic isomers, diastereomers, geometric isomers and single isomers are all included within the scope of the present disclosure. As disclosed herein, the term “stereoisomers” includes enantiomers, diastereomers, racemic isomers, and geometric isomers.

[0160] As used herein, the term "effective amount" or "therapeutically effective amount" refers to a quantity of a compound disclosed herein or a composition comprising the compound that is sufficient to achieve desired effects without toxicity. For the oral formulation disclosed herein, "an effective amount" of the compound in the composition disclosed herein refers to the amount that is required to achieve desired effects in combination with another active substance, if any,  in the composition. The determination of the therapeutically effective amount varies from person to person, and depends, for example, on the age and the general condition of a recipient. An appropriate therapeutically effective amount can be determined by a person skilled in the art according to conventional tests.

[0161] As used herein, the term "treat, " "treating" or "treatment" of any disease or disorder refers in one embodiment, to ameliorating the disease or disorder (i.e., slowing or arresting or reducing the development of the disease or at least one of the clinical symptoms thereof) . In another embodiment, "treat" , "treating" or "treatment" refers to alleviating or ameliorating at least one physical parameter including those which may not be discernible by the patient. In yet another embodiment, "treat" , "treating" or "treatment" refers to modulating the disease or disorder, either physically (e.g., stabilization of a discernible symptom) , physiologically (e.g., stabilization of a physical parameter) , or both. In yet another embodiment, "treat" , "treating" or "treatment" refers to delaying the development or progression of the disease or disorder.

[0162] As used herein, a subject is "in need of " a treatment if such subject would be expected to benefit biologically, medically or in quality of life from such treatment.

[0163] As used herein, the term "substituted" refers to any one or more hydrogen atoms on a specific atom being optionally replaced by a substituent, including a deuterium and a variant of hydrogen, as long as the valence state of the specific atom is normal and the substituted compound is stable. When the substituent is a keto group (i.e. =O) , it means that two hydrogen atoms are replaced. A substitution of keto group will not occur on an aryl. The term "optionally substituted" means that it may be substituted or not be substituted, unless otherwise specified, the type and number of substituents can be arbitrary under the premise of being chemically feasible.

[0164] When any parameter (e.g. R) occurs more than once in the composition or structure of the compound, its definition at each occurrence is independent. Therefore, for example, if a group is substituted by 0-2 of R, the group may optionally be substituted by at most two Rs, and R has an independent option at each occurrence. In addition, a combination of substituents and / or their variants is allowed only if such a combination will lead to a stable compound.

[0165] The compounds disclosed herein are named manually or by software  The  commercially available compounds are named according to the catalogs of the suppliers.

[0166] II. Compounds and Compositions

[0167] In a first embodiment, disclosed herein is a conjugate of the following Formula I-1:

[0168] wherein:

[0169] Bm is an antibody or antigen-binding segment thereof, which is capable of binding to GPRC5D, CD79b or CD19;

[0170] L is a cleavable linker;

[0171] R1, R2, R3, and R4 are each independently being absent or selected from hydrogen, halogen, substituted or unsubstituted C1-C8 alkyl, substituted or unsubstituted C3-C8 cycloakyl, oxo, and -NR5R6, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C8 haloalkyl, hydroxyl, and -NR5R6;

[0172] R5 and R6 are each independently selected from hydrogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and -C (=O) (C1-C8 alkyl) ;

[0173] ring A1 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic group, a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic group, a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; wherein the saturated or unsaturated monocyclic group, the saturated or unsaturated bicyclic group, the saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group, and the saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group, are each optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, oxo, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8  haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-;

[0174] R' is each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C8 alkyl, C2-C8 alkenyl, and C2-C8 alkynyl;

[0175] R" is each independently absent or selected from C1-C8 alkylene, C2-C8 alkenylene, and and C2-C8 alkynylene;

[0176] ring B is an optionally substituted saturated or unsaturated 5-to 6-membered heterocycle group containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, a substituted or unsubstituted 5-to 6-membered heteroaryl containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, or a substituted or unsubstituted phenyl, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C6 alkyl, and C1-C6 haloalkyl;

[0177] L’ is absent or selected from C1-C4 alkylene optionally substituted by C1-C4 alky, C1-C4 haloalkyl, or C3-C6 cycloalkyl;

[0178] x is an integer selected from 1 to 30.

[0179] In some embodiments, disclosed herein is a conjugate of Formula I-1-1:

[0180] wherein Bm, L1, L2, L3, and L4, are defined as disclosed herein.

[0181] In another embodiment, disclosed herein is a conjugate of the following Formula II-1:

[0182] wherein:

[0183] Bm is an antibody or an antigen-binding segment thereof, which is capable of binding to GPRC5D, CD79b or CD19;

[0184] L is a cleavable linker;

[0185] R1, R2, R3, and R4 are each independently being absent or selected from

[0186] hydrogen, halogen, substituted or unsubstituted C1-C8 alkyl, substituted or unsubstituted C3-C8 cycloakyl, oxo, and -NR5R6, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C8 haloalkyl, hydroxyl, and -NR5R6;

[0187] R5 and R6 are each independently selected from hydrogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and -C (=O) (C1-C8 alkyl) ;

[0188] ring A2 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing a nitrogen atom and 0-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group containing a nitrogen atom and 0-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; wherein the monocyclic heterocycle group, and the saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group, are each optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, oxo, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-;

[0189] R' is each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C8 alkyl, C2-C8 alkenyl, and C2-C8 alkynyl;

[0190] R" is each independently absent or selected from C1-C8 alkylene, C2-C8 alkenylene, and and C2-C8 alkynylene;

[0191] ring B is an optionally substituted saturated or unsaturated 5-to 6-membered heterocycle group containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, a substituted or unsubstituted 5-to 6-membered heteroaryl containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, or a substituted or unsubstituted phenyl, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C6 alkyl, and C1-C6 haloalkyl;

[0192] x is an integer selected from 1 to 30.

[0193] In some embodiments, disclosed herein is a conjugate of Formula II-1-1:

[0194] wherein Bm, L1, L2, L3, and L4 are defined as disclosed herein.

[0195] Bm

[0196] In some embodiments, the Bm is a targeting moiety, such as an antibody and antigen-binding fragment thereof, a ligand, a protein, a polypeptide, a non-protein agent (e.g., sugar, RNA, or DNA) , an antibody analog, and the like.

[0197] In some embodiments, Bm is an antibody or antigen-binding fragment thereof.

[0198] In some embodiments, Bm is an antibody or antigen-binding fragment thereof that has endocytic activity.

[0199] In some embodiments, Bm is an antibody or antigen-binding fragment thereof that has activity to bind tumor cell surface antigens.

[0200] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is an antibody or antigen-binding fragment thereof that has tumor cell surface antigen-binding activity and has tumor cell endocytosis activity.

[0201] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is an antibody or antigen-binding fragment thereof that has antigen-binding activity and no or weak tumor cell endocytic activity.

[0202] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds a non-endocytosed antigen on the surface of a tumor cell.

[0203] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is an antibody or antigen-binding fragment thereof that does not have tumor cell endocytic activity.

[0204] In some preferred embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is an antibody or antigen-binding fragment thereof that has the activity of binding to tumor cell surface antigens and has tumor cell endocytosis activity.

[0205] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof includes Fab, Fab', F (ab') 2, Fd, Fv, dAb, complementarity determining region fragment, single chain antibody (e.g., scFv) , non-human antibody, humanized antibodies, chimeric antibodies, fully human antibodies, probodies, bispecific antibodies or multispecific antibodies.

[0206] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is a non-human antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody, or a fully human antibody.

[0207] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is a probody, bispecific antibody, or multispecific antibody.

[0208] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof includes Fab, Fab', F (ab') 2, Fd, Fv, dAb, complementarity determining region fragment, single chain antibody (eg, scFv) .

[0209] In some embodiments, Bm is an antibody or antigen-binding segment thereof, which is capable of binding to GPRC5D, CD79b or CD19.

[0210] In some embodiments, Bm is an antibody or antigen-binding segment directed against the G protein-coupled receptor class C group 5 member D (GPRC5D) .

[0211] In some embodiments, Bm is an antibody or antigen-binding segment directed against the tumor-associated antigen (TAA) B-cell antigen receptor complex-associated protein beta chain (CD79b) .

[0212] In some embodiments, Bm is an antibody or antigen-binding segment directed against the tumor-associated antigen (TAA) cluster of differentiation 19 (CD19) .

[0213] In some embodiments, Bm of the present disclosure comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 below:

[0214] Linker L

[0215] As disclosed herein, L is a cleavable linker.

[0216] In some embodiments, L is a linker cleavable by a protease.

[0217] In some embodiments, L is a linker cleavable by an enzyme other than a protease, such as beta-glucuronidase.

[0218] In some embodiments, L is represented by -L4-L3-L2-L1-, wherein L1 is a moiety connecting to the antibody Bm of the conjugate.

[0219] In some embodiments, L1 is a residue of a reactive group.

[0220] In some embodiments, L1 is a residue of a reactive group capable of reacting with a -SH group of an antibody.

[0221] In some embodiments, when the S-S bond of antibody is reduced by reducing agent to release -SH group, the precursor of L1 can react with the -SH group of antibody, so that L1 can be linked through C-S bond with antibody.

[0222] In some embodiments, L1 is selected from

[0223] wherein the bond represented by *is a bond connecting to Bm,

[0224] wherein the substituent EWG is an electron-withdrawing group selected from -CN, halogen, -CF3, - (C=O) -OR7, and - (C=O) -R7, wherein R7 is each independently a substituted or unsubstituted C1-C8 alkyl, a substituted or unsubstituted C3-C10 cycloalkyl, a substituted or unsubstituted C4-C8 cycloalkenyl, substituted or unsubstituted C6-C12 aryl, a substituted or  unsubstituted 3-to 8 membered heterocycloalkyl comprising 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S, or a substituted or unsubstituted 5-to 12 membered heteroaryl comprising 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; and wherein the substituent is each independently selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 cycloalkyl, C3-C8 heterocyclic alkyl comprising 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S, C1-C8 alkoxyl, C1-C8 haloalkyoxyl, and oxo.

[0225] In some embodiments, L1 is

[0226] In some embodiments, L1 is

[0227] In some embodiments, L2 is a linker moiety.

[0228] In some embodiments, L2 is a linker moiety represented by

[0229] wherein the bond represented by *is a bond connecting to L1, and

[0230] wherein m, n and p are each independently an integer selected from 0 to 30.

[0231] In some embodiments, L2 is

[0232] In some embodiments, L3 is a cleavable linker or a non-cleavable linker.

[0233] In some embodiments, L3 is a cleavable linker cleavable by a protease.

[0234] In some embodiments, L3 comprises a peptide containing 2-10 amino acid residues, further wherein the amino acid residue is obtained from a natural amino acid, an unnatural amino acid, a stereoisomer of a natural amino acid, or a stereoisomer of an unnatural amino acid.

[0235] In some embodiments, L3 is cleavable by intracellular proteases.

[0236] In some embodiments, L3 is cleavable by lysosomal enzymes.

[0237] In some embodiments, L3 is a peptide represented by sequences selected from: alanine-alanine, valine-alanine, valine-citrulline, alanine-phenylalanine, glycine-valine-citrulline, aspartic acid-valine-citrulline, alanine-alanine-asparagine, alanine-alanine-alanine, alanine-phenylalanine-lysine, glycine-glycine-glycine, glycine-glycine-valine-citrulline (SEQ ID NO: 2) , and glycine-glycine-phenylalanine-glycine (SEQ ID NO: 3) .

[0238] In some embodiments, L3 is a cleavable linker cleavable by beta-glucuronidase.

[0239] In some embodiments, L3 is selected from:

[0240] substituted or unsubstituted

[0241] substituted or unsubstituted

[0242] substituted or unsubstituted and

[0243] substituted or unsubstituted

[0244] wherein the bond represented by *is a bond connecting to L2,

[0245] wherein q is an integer selected from 2 to 15, and

[0246] wherein the substituent is each independently selected from halogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and C1-C8 alkoxyl.

[0247] In some embodiments, L3 comprises a peptide containing 2-10 amino acid residues and a moiety cleavable by beta-glucuronidase.

[0248] In some embodiments, L3 is of Formula III,

[0249] wherein the bond represented by *is a bond connecting to L2,

[0250] wherein Formula III is optionally substituted by at least one group selected from halogen,  C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and C1-C8 alkoxyl; and

[0251] further wherein S is each independently an amino acid residue selected from a natural amino acid, an unnatural amino acid, a stereoisomer of a natural amino acid, and a stereoisomer of an unnatural amino acid.

[0252] In some embodiments, the -NH-connecting to L2 in Formula III is a part of an amino acid residue S.

[0253] In some embodiments, the -NH-connecting to L2 in Formula III is not a part of an amino acid residue S.

[0254] In some embodiments, L3 is substituted or unsubstituted

[0255] wherein the bond represented by *is a bond connecting to L2,

[0256] wherein the substituent is each independently selected from halogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and C1-C8 alkoxyl.

[0257] In some embodiments, L4 is absent or a self-immolative group, wherein a cascade of disassembly reactions of L4 is capable of being triggered by the cleavage of L3.

[0258] In some embodiments, L4 is selected from

[0259] wherein the bond represented by *is a bond connecting to L3.

[0260] R1, R2, R3, and R4

[0261] In some embodiments, R1, R2, R3, and R4 are each independently selected from common  substituents in pharmaceutical chemistry.

[0262] In some embodiments, R1, R2, R3, and R4 are each independently being absent or selected from hydrogen, halogen, substituted or unsubstituted C1-C8 alkyl, substituted or unsubstituted C3-C8 cycloakyl, oxo, and -NR5R6, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C8 haloalkyl, hydroxyl, and -NR5R6.

[0263] In some embodiments R5 and R6 as disclosed herein are each independently selected from hydrogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and -C (=O) (C1-C8 alkyl) .

[0264] Ring A1

[0265] In some embodiments, ring A1 is a non-aromatic cyclic moiety.

[0266] In some embodiments, ring A1 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic group, a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic group, a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; wherein the saturated or unsaturated monocyclic group, the saturated or unsaturated bicyclic group, the saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group, and the saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group, are each optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, oxo, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-, wherein R'is each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C8 alkyl, C2-C8 alkenyl, and C2-C8 alkynyl; and R" is each independently absent or selected from C1-C8 alkylene, C2-C8 alkenylene, and C2-C8 alkynylene.

[0267] In some embodiments, ring A1 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic group, selected from C4-C10 cycloalkyl, C4-C10 cycloalkenyl, and C8-C10 cycloalkynyl.

[0268] In some embodiments ring A1 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic group optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-.

[0269] In some embodiments, ring A1 is substituted or unsubstituted C4-C10 cycloalkyl,  substituted or unsubstituted C4-C10 cycloalkenyl, or substituted or unsubstituted C8-C10 cycloalkynyl, wherein the substituent is one or more selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-.

[0270] In some embodiments, ring A1 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S.

[0271] In some embodiments, ring A1 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S, and which is optionally substituted by optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, oxo, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-, wherein R'is each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C8 alkyl, C2-C8 alkenyl, and C2-C8 alkynyl; and R" is each independently absent or selected from C1-C8 alkylene, C2-C8 alkenylene, and C2-C8 alkynylene.

[0272] In some embodiments, ring A1 is selected from

[0273] wherein, in an asymmetric moiety, a bond represented by *is a bond connecting to -L’ -NH-L-Bm.

[0274] Ring A2

[0275] In some embodiments, ring A2 is a heterocycle containing at least one nitrogen atom.

[0276] In some embodiments, ring A2 is an aromatic heterocycle group or a non-aromatic heterocycle group.

[0277] In some embodiments, ring A2 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing a nitrogen atom and 0-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group containing a nitrogen atom and 0-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; wherein the monocyclic heterocycle group, and the saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group, are each optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, oxo, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-; wherein R'is each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C8 alkyl, C2-C8 alkenyl, and C2-C8 alkynyl; and R" is each independently absent or selected from C1-C8 alkylene, C2-C8 alkenylene, and C2-C8 alkynylene.

[0278] In some embodiments ring A2 is selected from

[0279] wherein, in an asymmetric moiety, a bond represented by *is a bond connecting to -L-Bm.

[0280] Moiety L’

[0281] In some embodiments, L’ is absent or selected from C1-C4 alkylene optionally substituted by C1-C4 alky, C1-C4 haloalkyl, or C3-C6 cycloalkyl.

[0282] In some embodiments, L’ is absent or selected from -CH2-,

[0283] Ring B

[0284] In some embodiments, ring B is an optionally substituted saturated or unsaturated 5-to 6-membered heterocycle group containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, a substituted or unsubstituted 5-to 6-membered heteroaryl containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, or a substituted or unsubstituted phenyl, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C6 alkyl, and C1-C6 haloalkyl.

[0285] In some embodiments, ring B is a saturated 5-to 6-membered heterocycle group containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O. In some embodiments, ring B is a 5-to 6-membered cyclic amine group.

[0286] In some embodiments, ring B is a 5-or 6-membered heteroaryl containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O.

[0287] In some embodiments, ring B is selected from substituted or unsubstituted phenyl, substituted or unsubstituted pyridinyl, substituted or unsubstituted pyrrolyl, substituted or unsubstituted pyrazolyl, and substituted or unsubstituted imidazole, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C4 alkyl, and C1-C4 haloalkyl.

[0288] In some embodiments, ring B is selected from optionally substituted by at least one substituent selected from F and Cl, wherein in an asymmetric moiety, the bond represented by *is a bond connecting to -CR1R2-moiety.

[0289] Integer x

[0290] In some embodiments, x is an integer selected from 1 to 30.

[0291] In some embodiments, x is an integer selected from 1 to 20.

[0292] In some embodiments, x is an integer selected from 2 to 10.

[0293] In some embodiments, x is an integer selected from 2 to 8.

[0294] In some embodiments, x is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, or 30.

[0295] In some embodiments, x is 2, 4, 6, or 8.

[0296] Conjugate, Payload, Linker-Payload

[0297] In some embodiments, disclosed herein a conjugate selected from below Conjugate 1, Conjugate 2, and Conjugate 3:

[0298] In some embodiments, the present disclosure provides a payload compound for synthesis of the conjugate disclosed herein, wherein the payload compound is selected from

[0299] In some embodiments, the present disclosure provides a Linker-Payload conjugate for synthesis of the conjugate disclosed herein, wherein the Linker-Payload conjugate is selected from

[0300] III. Methods of Treatment and Uses

[0301] In some embodiments, the present disclosure provides a pharmaceutical composition comprising a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11.

[0302] In a seventh aspect of the present disclosure, disclosed herein a method for degrading a target protein in a cell, comprising exposing the cell to a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11, or the pharmaceutical composition comprising a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11.

[0303] In some embodiments, the cell is a somatic cell.

[0304] In some embodiments, the cell is a blood cell.

[0305] In some embodiments, the cell is a white blood cell.

[0306] In some embodiments, the cell is a plasma cell.

[0307] In some embodiments, the cell is a tumor cell.

[0308] In some embodiments, the cell is a multiple myeloma cell.

[0309] In some embodiments, the target protein is a protein associated with lymphocyte development.

[0310] In some embodiments, the target protein is one or more of the Ikaros ( “IKZF” ) family.

[0311] In some embodiments, the target protein is Ikaros (IKZF1) , and / or Aiolos (IKZF3) .

[0312] In an eighth aspect of the present disclosure, , disclosed herein is a method for treating or alleviating a disease, a disorder, or a condition mediated by IKZF family, comprising administering in a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker- Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11, or the pharmaceutical composition comprising a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11.

[0313] In some embodiments, disclosed herein is a method for treating or alleviating a disease, a disorder, or a condition mediated by Ikaros (IKZF1) and / or Aiolos (IKZF3) , comprising administering in a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11, or the pharmaceutical composition comprising a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11.

[0314] In some embodiments, the disease, the disorder or the condition is a cancer.

[0315] In some embodiments, the disease, the disorder or the condition is a tumor.

[0316] In some embodiments, the disease, the disorder or the condition is a blood cancer.

[0317] In some embodiments, the disease, the disorder or the condition is selected from multiple myeloma, leukemia, lymphoblastic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, Hodgkin's lymphoma, and non-Hodgkin's lymphoma.

[0318] In another aspect of the present disclosure, disclosed herein is a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload- 1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11, for use in degrading a target protein in a cell.

[0319] In another aspect of the present disclosure, disclosed herein is a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11, for use in treating or alleviating a disease, a disorder, or a condition mediated by IKZF family.

[0320] In another aspect of the present disclosure, disclosed herein is use of a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate-1, Conjugate-2, Conjugate-3, a conjugate synthesized by Payload-1, a conjugate synthesized by Payload-2, or a conjugate synthesized by a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11, for the manufacture of a medicament for treating a disease, a disorder, or a condition mediated by IKZF family.

[0321] Examples

[0322] Synthesis of Compounds

[0323] To fully understand the present disclosure, the following examples are provided. It should be understood that these examples are for illustrative purposes only and are not to be construed as limiting the present disclosure in any manner.

[0324] All the specific and generic compounds, and the intermediates disclosed for making those compounds or conjugates, are considered to be part of the present disclosure.

[0325] The conjugates and compounds of the present disclosure may be made according to standard chemical practices or as disclosed herein. Throughout the following synthetic schemes and in the descriptions for preparing a conjugate of Formula I-1, II-1, I-1-1, II-1-1, Conjugate- 1, Conjugate-2, Conjugate-3, Payload-1, Payload-2, or a linker-payload conjugate selected from Linker-Payload-1, Linker-Payload-2, Linker-Payload-3, Linker-Payload-4, Linker-Payload-5, Linker-Payload-6, Linker-Payload-7, Linker-Payload-8, Linker-Payload-9, Linker-Payload-10, and Linker-Payload-11, the following abbreviations are used:

[0326] = angstrom

[0327] Ac = acetyl

[0328] Ac2O = acetic anhydride

[0329] Boc2O = di-tert-butyl dicarbonate

[0330] DCM = dichloromethane

[0331] DIEA = N, N-Diisopropylethylamine or N-ethyl-N-isopropyl-propan-2-amine

[0332] DMAP = dimethylamino pyridine

[0333] DMA = dimethyl acetamide

[0334] DME = dimethoxyethane

[0335] DMF = dimethylformamide

[0336] DMSO = dimethyl sulfoxide

[0337] EtOAc  / EA= Ethyl Acetate

[0338] EtOH = ethanol

[0339] HOAc = acetic acid

[0340] KOAc = potassium acetate

[0341] LiHMDS = lithium bis (trimethylsilyl) amide

[0342] MeMgBr = methylmagnesium bromide

[0343] MeOH = methanol

[0344] NaOAc = sodium acetate

[0345] NBS = N-bromosuccinimide

[0346] Pd (dppf) 2Cl2 = [1, 1′-Bis (diphenylphosphino) ferrocene] dichloropalladium (II)

[0347] PTSA = p-Toluenesulfonic acid monohydrate

[0348] rt = room (ambient) temperature

[0349] T3P = 2, 4, 6-Tripropyl-1, 3, 5, 2, 4, 6-trioxatriphosphorinane-2, 4, 6-trioxide

[0350] TEA = triethylamine

[0351] TFA = trifluoroacetic acid

[0352] THF = tetrahydrofuran

[0353] TsCl = p-toluene sulfonyl chloride

[0354] UV = ultra-violet

[0355] X-Phos = 2-dicyclohexylphosphino-2′, 4′, 6′-triisopropylbiphenyl

[0356] Example 1. Synthesis of Payload Compounds and linker-payload compounds

[0357] Synthesis of Payload-1: 3- (2-oxo-6- (4- (piperazin-1-ylmethyl) benzyl) benzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione

[0358] Step a. Preparation of 6- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) benzo [cd] indol-2 (1H) -one: To a solution of 6-bromobenzo [cd] indol-2 (1H) -one (5 g, 20.16 mmol) in dioxane (100 mL) was added 4, 4, 5, 5-tetramethyl-2- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) -1, 3, 2-dioxaborolane (7.68 g, 30.23 mmol) and KOAc (3.956 g, 40, 31 mmol) and Pd (dppf) Cl2 (1.64 g, 2.01 mmol) . The reaction mixture was stirred at 90℃ under N2 for 16 hrs. The solvent was removed under reduced pressure and the residue was purified by Combiflash column (PE / EA = 0 ～ 20 %) to give the product 6- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) benzo [cd] indol-2 (1H) -one (10 g, 84%) as yellow oil. Mass (m / z) : 296.0 [M+H] +.

[0359] Step 1. Preparation of tert-butyl ( (1- (4- (chloromethyl) benzyl) piperidin-4- yl) methyl) carbamate: To a solution of 1, 4-bis (chloromethyl) benzene (5 g, 28.56 mmol) in MeCN (100 mL) was added tert-butyl piperazine-1-carboxylate (6.1 g, 28.56 mmol) and K2CO3 (3.95 g, 28.56 mmol) . The resulting mixture was stirred at 50℃ under N2 for 3 hrs. The solvent was removed under reduced pressure and the residue was purified by Combiflash column (PE / EA = 0 ～ 20%) to give the product tert-butyl ( (1- (4- (chloromethyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate as yellow oil (3 g, 42%) . Mass (m / z) : 353.2 [M+H] +.

[0360] Step 2. Preparation of tert-butyl ( (1- (4- ( (2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate: To a solution of tert-butyl ( (1- (4- (chloromethyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate (3 g, 8.4 mmol) in dioxane / H2O (10 / 1, 80 mL) was added 6- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) benzo [cd] indol-2 (1H) -one (3.7 g, 12.6 mmol) , Cs2CO3 (5.4 g, 16.8 mmol) and Pd (dppf) Cl2 (584 mg, 0.8 mmol) . The reaction mixture was stirred at 90℃ under N2 for 16 hrs. The solvent was removed under reduced pressure and the residue was purified by Combiflash column (PE / EA = 0 ～ 50%) to give the product tert-butyl ( (1- (4- ( (2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate as yellow solid (3.5 g, 85 %) . Mass (m / z) : 486.2 [M+H] +.

[0361] Step 3. Preparation of tert-butyl ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate: To a solution of tert-butyl ( (1- (4- ( (2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate (1 g, 2.5 mmol) in THF (20 mL) was added NaH (1 g, 25 mmol) , then was added 3-bromopiperidine-2, 6-dione (2.4 g, 12.5 mmol) . The reaction mixture was stirred at 90℃ for 2 hrs. After the reaction completed, ice water (100 mL) was added to the reaction mixture, and then extracted with EA (100 mL x 3) . The combined organic layer was washed with brine (50 mL x 3) , then dried over with anhydrous Na2SO4. After filtration, the solution was concentration under vacuum, and the crude product was purified by Combiflash column (DCM / MeOH = 0 ～ 10%) to give the product tert-butyl ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate as yellow solid (500 mg, 41 %) . Mass (m / z) : 597.1 [M+H] +.

[0362] Step 4. Preparation of 3- (6- (4- ( (4- (aminomethyl) piperidin-1-yl) methyl) benzyl) -2-oxobenzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione: A solution of tert-butyl ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate (500 mg, 0.83 mmol) in TFA / DCM (1: 3, 4 mL) . The reaction mixture was stirred at rt for 1 hour. The resulting mixture was concentrated to give the crude product. The residue was purified via Genal-Prep-HPLC [Gemini-C18, 150 x 21.2 mm, 5um; ACN-H2O (0.1%FA) , 10-40] to give the product 3- (6- (4- ( (4- (aminomethyl) piperidin-1-yl) methyl) benzyl) -2-oxobenzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione as a yellow solid (300 mg, 72%) . Mass (m / z) : 497.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.13 (s, 1H) , 8.35 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.09 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 7.82 (dd, J = 8.1, 7.1 Hz, 4H) , 7.47 (d, J = 7.4 Hz, 1H) , 7.40 (q, J = 8.3 Hz, 4H) , 7.12 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 5.45 (dd, J = 12.9, 5.2 Hz, 1H) , 4.44 (s, 2H) , 4.21 (d, J = 4.4 Hz, 2H) , 3.34 (d, J = 11.7 Hz, 2H) , 3.02 –2.82 (m, 3H) , 2.80 –2.60 (m, 4H) , 2.15 –2.04 (m, 1H) , 1.88 (d, J = 13.6 Hz, 2H) , 1.76 (s, 1H) , 1.32 (d, J = 10.6 Hz, 2H) .

[0363] Synthesis of Payload-2: 3- (2-oxo-6- (4- (piperazin-1-ylmethyl) benzyl) benzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione

[0364] Step 1. Preparation of tert-butyl 4- (4- (chloromethyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate: To a solution of 1, 4-bis (chloromethyl) benzene (5 g, 28.56 mmol) in MeCN (100 mL) was added tert-butyl piperazine-1-carboxylate (5.35 g, 28, 56 mmol) and K2CO3 (3.95 g, 28.56 mmol, the resulting mixture was stirred at 50℃ under N2 for 3 hrs. The solvent was removed under reduced pressure and the residue was purified by Combiflash column (PE / EA = 0 ～ 20%)  to give the product tert-butyl 4- (4- (chloromethyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate as yellow oil (3.93 g, 42%) . Mass (m / z) : 325.1 [M+H] +.

[0365] Step 2. Preparation of tert-butyl 4- (4- ( (2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate: To a solution of tert-butyl 4- (4- (chloromethyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate (3.8 g, 11.66 mmol) in dioxane / H2O (10 / 1, 80 mL) was added 6- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) benzo [cd] indol-2 (1H) -one (5.16 g, 17.49 mmol) and Cs2CO3 (7.58 g, 23.32 mmol) and Pd (dppf) Cl2 (952 mg, 1.17 mmol) . The reaction mixture was stirred at 90℃ under N2 for 16 hrs. The solvent was removed under reduced pressure and the residue was purified by Combiflash column (PE / EA = 0 ～ 50%) to give the product tert-butyl 4- (4- ( (2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate as yellow solid (5.3 g, 89%) . Mass (m / z) : 457.9 [M+H] +.

[0366] Step 3. Preparation of tert-butyl 4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate: To a solution of tert-butyl 4- (4- ( (2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate (1 g, 2.18 mmol) in DMF (20 mL) was added NaH (872 mg, 21.8 mmol) , then was added 3-bromopiperidine-2, 6-dione (2.09 g, 10.9 mmol) The reaction mixture was stirred at 90℃ for 2 hrs. After the reaction completed, ice water (100 mL) was added to the reaction mixture, and then extracted with EA (100 mL x 3) . The combined organic layer was washed with brine (50 mL x 3) , then dried over with anhydrous Na2SO4. After filtration, the solution was concentration under vacuum, and the crude product was purified by Combiflash column (DCM / MeOH = 0 ～ 10%) to give the product tert-butyl 4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate as yellow solid (410 mg, 33%) . Mass (m / z) : 569.1 [M+H] +.

[0367] Step 4. Preparation of 3- (2-oxo-6- (4- (piperazin-1-ylmethyl) benzyl) benzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione: A solution of tert-butyl 4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate (40 mg, 0.72 mmol) in TFA / DCM=1: 3 (4 mL) . The reaction mixture was stirred at rt for 1 hour. The resulting mixture was concentrated to give the crude product. The residue was purified via Genal-Prep- HPLC [Gemini-C18, 150 x 21.2 mm, 5um; ACN-H2O (0.1%FA) , 10-40] to give the product 3- (2-oxo-6- (4- (piperazin-1-ylmethyl) benzyl) benzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione as yellow solid (17 mg, 51%) . Mass (m / z) : 469.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.14 (s, 1H) , 8.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.20 (s, 1H) , 8.08 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 7.85 –7.78 (m, 1H) , 7.43 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 7.27 (d, J = 7.8 Hz, 2H) , 7.19 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.11 (d, J = 7.4 Hz, 1H) , 5.45 (dd, J = 12.8, 5.2 Hz, 1H) , 4.38 (s, 2H) , 3.44 (s, 2H) , 3.00 –2.90 (m, 5H) , 2.76 (dd, J = 13.0, 4.4 Hz, 1H) , 2.65 (d, J = 16.0 Hz, 1H) , 2.45 (s, 4H) , 2.13 –2.05 (m, 1H) .

[0368] Synthesis of Linker-Payload-1: 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl 4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate

[0369] Preparation of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl 4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1,2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine -1-carboxylate: To a solution of 3- (2-oxo-6- (4- (piperazin-1-ylmethyl) benzyl) benzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione (30 mg, 0.06 mmol) in DMF (5 mL) was added 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl (4-nitrophenyl) carbonate (47 mg, 0.06 mmol) and DIEA (17 mg, 0.13 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ under N2 for 16 hrs. The mixture was concentrated and the residue was purified via Genal-Prep-HPLC [Gemini-C18, 150 x 21.2 mm, 5um; ACN-H2O (0.1%FA) , 20-40] to give the product 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3- methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl 4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1,2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine -1-carboxylate (22 mg, 32%) as a yellow solid. Mass (m / z) : 1067.4 [M+H] +. 1HNMR (400 MHz, MeOD) δ 8.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.04 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 7.73 (dd, J = 8.2, 7.0 Hz, 1H) , 7.57 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 7.35 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 7.29 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 7.26 (s, 4H) , 7.01 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 6.77 (s, 2H) , 5.42 (d, J = 12.6 Hz, 1H) , 5.05 (s, 2H) , 4.49 (dd, J = 9.0, 5.0 Hz, 1H) , 4.42 (s, 2H) , 4.15 (d, J = 7.4 Hz, 1H) , 3.68 (s, 2H) , 3.51 (s, 4H) , 3.46 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.19 (dt, J = 13.6, 6.8 Hz, 1H) , 3.13 –3.06 (m, 1H) , 3.00 –2.90 (m, 1H) , 2.88 –2.77 (m, 2H) , 2.60 (s, 4H) , 2.27 (t, J =7.4 Hz, 2H) , 2.24 –2.16 (m, 1H) , 2.06 (dt, J = 10.2, 5.2 Hz, 1H) , 1.89 (dt, J = 14.2, 7.8 Hz, 1H) , 1.80 –1.69 (m, 1H) , 1.65 –1.53 (m, 6H) , 1.34 –1.30 (m, 2H) , 0.96 (dd, J = 6.6, 3.8 Hz, 6H) .

[0370] Synthesis of Linker-Payload-2: 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate

[0371] Preparation of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1,2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate: To a solution of 3- (6- (4- ( (4- (aminomethyl) piperidin-1-yl) methyl) benzyl) -2-oxobenzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione (20 mg, 0.04 mmol) in DMF (2 mL) was added 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl (4-nitrophenyl) carbonate (29 mg, 4.02 mmol) and DIEA (10 mg, 0.08 mmol) . The mixture was concentrated and the resulting mixture was stirred at rt under N2 for 3 hrs. The residue was purified via Genal-Prep-HPLC [Gemini-C18, 150 x 21.2 mm, 5um;  ACN-H2O (0.1%FA) , 10-40] to give the product 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl ( (1- (4- ( (1- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate as a yellow solid (5 mg, 11%) . Mass (m / z) : 1095.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.13 (s, 1H) , 9.98 (s, 1H) , 9.07 (s, 1H) , 8.34 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.08 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 7.81 (t, J = 7.8 Hz, 2H) , 7.58 (d, J = 8.5 Hz, 2H) , 7.45 (d, J = 7.4 Hz, 1H) , 7.42 –7.34 (m, 5H) , 7.26 (d, J = 8.5 Hz, 2H) , 7.12 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.00 (s, 2H) , 5.98 (s, 1H) , 5.45 (dd, J = 12.5, 5.3 Hz, 2H) , 4.92 (s, 2H) , 4.49 –4.28 (m, 3H) , 4.17 (d, J = 6.9 Hz, 2H) , 3.38 –3.31 (m, 2H) , 3.10 –2.85 (m, 8H) , 2.79 –2.65 (m, 4H) , 2.26 –2.08 (m, 5H) , 1.96 (dd, J = 13.4, 6.6 Hz, 2H) , 1.84 –1.66 (m, 4H) , 1.61 –1.40 (m, 8H) , 0.83 (dd, J = 12.2, 6.8 Hz, 7H) .

[0372] Synthesis of Linker-Payload-3: N- ( (10S) -10-benzyl-1- (4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazin-1-yl) -1, 6, 9, 12, 15-pentaoxo-3-oxa-5, 8, 11, 14-tetraazahexadecan-16-yl) -6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamide

[0373] Preparation of N- ( (10S) -10-benzyl-1- (4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazin-1-yl) -1, 6, 9, 12, 15-pentaoxo-3-oxa- 5, 8, 11, 14-tetraazahexadecan-16-yl) -6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamide: To a solution of 3- (2-oxo-6- (4- (piperazin-1-ylmethyl) benzyl) benzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2,6-dione (40 mg, 0.09 mmol) in DCM (5 mL) was added (S) -10-benzyl-23- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) -6, 9, 12, 15, 18-pentaoxo-3-oxa-5, 8, 11, 14, 17-pentaazatricosanoic acid (53 mg, 0.09 mmol) , TEA (17 mg, 0.17 mmol) , HOBT (17 mg, 0.13 mmol) and EDCI (25 mg 0.13 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ under N2 for 2 hrs. The solvent was removed under reduced pressure to give the crude product. The crude product was purified via Genal-Prep-HPLC [Gemini-C18, 150 x 21.2 mm, 5um; ACN-H2O (0.1%FA) , 20-40] to give the product N- ( (10S) -10-benzyl-1- (4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazin-1-yl) -1, 6, 9, 12, 15-pentaoxo-3-oxa-5, 8, 11, 14-tetraazahexadecan-16-yl) -6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamide (3 mg, 3%) as a yellow solid. Mass (m / z) : 1067.1 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.13 (s, 1H) , 8.54 (t, J = 6.8 Hz, 1H) , 8.30 (dd, J = 18.0, 9.6 Hz, 3H) , 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 8.07 (d, J = 7.0 Hz, 2H) , 8.02 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 7.84 –7.78 (m, 1H) , 7.41 (d, J = 7.4 Hz, 1H) , 7.23 (d, J = 6.0 Hz, 5H) , 7.18 (d, J = 7.8 Hz, 2H) , 7.11 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 6.99 (s, 2H) , 5.49 –5.39 (m, 1H) , 4.56 (d, J = 6.6 Hz, 2H) , 4.52 –4.44 (m, 1H) , 4.37 (s, 2H) , 4.08 (s, 2H) , 3.75 (d, J =5.6 Hz, 1H) , 3.66 (d, J = 5.6 Hz, 5H) , 3.59 (dd, J = 16.8, 5.4 Hz, 4H) , 3.08 –2.90 (m, 4H) , 2.83 –2.75 (m, 2H) , 2.65 (d, J = 16.0 Hz, 2H) , 2.54 (s, 2H) , 2.27 (d, J = 18.2 Hz, 4H) , 2.11 (d, J =7.2 Hz, 2H) , 1.47 (dd, J = 14.8, 7.4 Hz, 4H) , 1.17 (dd, J = 15.2, 7.4 Hz, 2H) .

[0374] Synthesis of Linker-Payload-4: N- ( (12S) -12-benzyl-1- (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) -3, 8, 11, 14, 17-pentaoxo-5-oxa-2, 7, 10, 13, 16-pentaazaoctadecan-18-yl) -6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamide

[0375] Preparation of N- ( (12S) -12-benzyl-1- (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) -3, 8, 11, 14, 17-pentaoxo-5-oxa-2, 7, 10, 13, 16-pentaazaoctadecan-18-yl) -6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamide: To a solution of 3- (6- (4- ( (4- (aminomethyl) piperidin-1-yl) methyl) benzyl) -2-oxobenzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione (20 mg, 0.04 mmol) in DMF (2 mL) was added (S) -10-benzyl-23- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) -6, 9, 12, 15, 18-pentaoxo-3-oxa-5, 8, 11, 14, 17-pentaazatricosanoic acid (24 mg, 0.04 mmol) , EDCI (11 mg, 0.06 mmol) , HOBT (8 mg, 0.06 mmol) and DIEA (10 mg, 0.08 mmol) . The resulting mixture was stirred at rt under N2 for 3 hrs. The mixture was concentrated and the residue was purified via Genal-Prep-HPLC [Gemini-C18, 150 x 21.2 mm, 5um; ACN-H2O (0.1%FA) , 10-40] to give the product N- ( (12S) -12-benzyl-1- (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) -3, 8, 11, 14, 17-pentaoxo-5-oxa-2, 7, 10, 13, 16-pentaazaoctadecan-18-yl) -6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamide  as a yellow solid (5 mg, 11%) . Mass (m / z) : 1095.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.13 (s, 1H) , 8.61 (t, J = 6.6 Hz, 1H) , 8.38 –8.28 (m, 3H) , 8.11 (dd, J = 25.1, 7.5 Hz, 2H) , 8.03 (t, J = 5.7 Hz, 1H) , 7.90 –7.78 (m, 2H) , 7.49 –7.33 (m, 6H) , 7.29 –7.15 (m, 6H) , 7.12 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 6.99 (s, 2H) , 5.45 (dd, J = 12.9, 5.3 Hz, 1H) , 4.57 (d, J = 6.4 Hz, 2H) , 4.51 –4.39 (m, 4H) , 4.22 (t, J = 22.4 Hz, 3H) , 3.43 –3.25 (m, 6H) , 3.12 –2.93 (m, 6H) , 2.90 –2.73 (m, 7H) , 2.20 –2.03 (m, 3H) , 1.86 –1.60 (m, 4H) , 1.56 –1.37 (m, 4H) .

[0376] Synthesis of Linker-payload compound 5: (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- ( (2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) ethyl) carbamoyl) -4- ( ( (4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carbonyl) oxy) methyl) phenoxy) -3, 4, 5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid

[0377] Step 1. tert-butyl (2- (5-formyl-2-hydroxybenzamido) ethyl) carbamate: To a solution of 5-formyl-2-hydroxybenzoic acid (5.00 g, 30.1 mmol) in DMF (100 mL) was added tert-butyl N- (2-aminoethyl) carbamate (5.79 g, 36.1 mmol) , HOBt (4.88 g, 36.1 mmol) and EDCI (6.92 g, 36.1 mmol) at 0℃. The reaction mixture was stirred at 25℃ under N2 for 18 hrs. The solution was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by column  chromatography (EA / PE= 3: 2) to give target product (5.0 g , 51.19%) as a white solid. Mass (m / z) : 331 [M+Na] +.

[0378] Step 2. (2S, 3R, 4S, 5S, 6S) -2- (2- ( (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) ethyl) carbamoyl) -4-formylphenoxy) -6- (methoxycarbonyl) tetrahydro-2H-pyran-3, 4, 5-triyl triacetate: To a solution of tert-butyl N- {2- [ (5-formyl-2-hydroxyphenyl) formamido] ethyl} carbamate (5.00 g, 16.2 mmol) in CH3CN (150 mL) were added Ag2O (7.51 g, 32.4 mmol) and methyl (2S, 3S, 4S, 5R, 6R) -3, 4, 5-tris (acetyloxy) -6-bromooxane-2-carboxylate (7.08 g, 17.8 mmol) at 0℃. The reaction solution was stirred at 25℃ under N2 for 18 hrs. The solution was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (EA / PE= 4: 1) to give target product (4.00 g, 37.52%) as a white solid. Mass (m / z) : 625 [M+H] +.

[0379] Step 3. (2S, 3R, 4S, 5S, 6S) -2- (2- ( (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) ethyl) carbamoyl) -4- (hydroxymethyl) phenoxy) -6- (methoxycarbonyl) tetrahydro-2H-pyran-3, 4, 5-triyl triacetate: To a solution of methyl (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -3, 4, 5-tris (acetyloxy) -6- {2- [ (2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} ethyl) carbamoyl] -4-formylphenoxy} oxane-2-carboxylate (4.00 g, 6.40 mmol) in dichloromethane (120 mL) . was added a solution of sodium borohydride (0.266 g, 7.04 mmol) in methanol (120 mL) dropwise at 0℃. The resulting solution was stirred for 30 mins at 0℃. The solution was quenched by a saturated aqueous solution of ammonium chloride (500 mL) and extracted with dichloromethane (3 x 250 mL) and ethyl acetate (3 x 250 mL) sequentially. The organic layers were combined, dried over sodium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure to give the target product (2.00 g, 47.35%) as a brown solid. Mass (m / z) : 649 [M+Na] +.

[0380] Step 4. (2S, 3R, 4S, 5S, 6S) -2- (2- ( (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) ethyl) carbamoyl) -4- ( ( ( ( (2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl) oxy) carbonyl) oxy) methyl) phenoxy) -6- (methoxycarbonyl) tetrahydro-2H-pyran-3, 4, 5-triyl triacetate: A solution of methyl (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -3, 4, 5-tris (acetyloxy) -6- {2- [ (2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} ethyl) carbamoyl] -4- (hydroxymethyl) phenoxy} oxane-2-carboxylate (200 mg, 0.319 mmol) , bis (2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate (164 mg, 0.638 mmol) and pyridine (126 mg, 1.60 mmol) in DCM (5 mL) was stirred at 25℃ under N2 for 18 hrs. The solution was quenched by water and extracted with DCM twice. The organic layers were  combined, washed with brine, dried over anhydrous Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure to give the desired product (200 mg, 77.54%) as a white solid. Mass (m / z) : 790 [M+Na] +.

[0381] Step 5. (2S, 3R, 4S, 5S, 6S) -2- (2- ( (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) ethyl) carbamoyl) -4- ( ( (4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carbonyl) oxy) methyl) phenoxy) -6- (methoxycarbonyl) tetrahydro-2H-pyran-3, 4, 5-triyl triacetate: A solution of methyl (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -3, 4, 5-tris (acetyloxy) -6- {2- [ (2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} ethyl) carbamoyl] -4- [ ( { [ (2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl) oxy] carbonyl} oxy) methyl] phenoxy} oxane-2-carboxylate (180 mg, 0.235 mmol) , pyridine (92.7 mg, 1.17 mmol) and 3- (2-oxo-6- (4- (piperazin-1-ylmethyl) benzyl) benzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione (110 mg, 0.235 mmol) in DCM (5 mL) was stirred at 25℃ under N2 for 18 hrs. The solution was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (MeOH / DCM = 1: 10) to give the desired product (150 mg, 51.34%) as a yellow solid. Mass (m / z) : 1121 [M+H] +.

[0382] Step 6. (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- ( (2-aminoethyl) carbamoyl) -4- ( ( (4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carbonyl) oxy) methyl) phenoxy) -3, 4, 5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid: A solution of (2S, 3R, 4S, 5S, 6S) -2- (2- ( (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) ethyl) carbamoyl) -4- ( ( (4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carbonyl) oxy) methyl) phenoxy) -6- (methoxycarbonyl) tetrahydro-2H-pyran-3, 4, 5-triyl triacetate (150 mg, 0.134 mmol) in THF (3 mL) and 6N HCl solution (3 mL) was stirred at 45℃ for 18 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure to give the target product (100 mg, 76.38%) as a yellow solid. Mass (m / z) : 881.3 [M+H] +.

[0383] Step 7. (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- ( (2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) ethyl) carbamoyl) -4- ( ( (4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carbonyl) oxy) methyl) phenoxy) -3, 4, 5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid: To a solution of (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6-  (2- ( (2-aminoethyl) carbamoyl) -4- ( ( (4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carbonyl) oxy) methyl) phenoxy) -3, 4, 5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid (140 mg, 0.159 mmol) and DIEA (103 mg, 0.795 mmol) in DMF (3 mL) , 2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl 6- (2, 5-dioxopyrrol-1-yl) hexanoate (53.9 mg, 0.175 mmol) was added batchwise. The reaction solution was stirred at 25℃ for 18 hrs. The mixture was purified by prep-HPLC (Gemini-C18 150 x 21.2 mm, 5um; ACN-H2O (0.1%FA) 10-40) to give the product (4 mg, 2.01%) as a white solid. Mass (m / z) : 1074 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.10 (s, 1H) , 8.29 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.24 (t, J = 5.5 Hz, 1H) , 8.04 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 7.85 –7.68 (m, 3H) , 7.45 –7.36 (m, 2H) , 7.34 –7.11 (m, 5H) , 7.07 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 6.96 (s, 2H) , 5.77 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 5.51 –5.37 (m, 2H) , 5.35 (d, J = 4.3 Hz, 1H) , 5.08 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 4.99 (s, 2H) , 4.35 (s, 2H) , 3.93 (d, J = 9.5 Hz, 1H) , 3.67 –3.34 (m, 8H) , 3.25 –3.16 (m, 4H) , 3.02 –2.82 (m, 2H) , 2.81 –2.54 (m, 6H) , 2.42 –2.11 (m, 3H) , 2.09 -1.95 (m, 3H) , 1.57 –1.28 (m, 4H) , 1.18 –1.05 (m, 2H) .

[0384] Synthesis of Linker-Payload-6: (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- ( (2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) ethyl) carbamoyl) -4- ( ( ( ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamoyl) oxy) methyl) phenoxy) -3, 4, 5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid

[0385] Step 1. (2S, 3R, 4S, 5S, 6S) -2- (2- ( (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) ethyl) carbamoyl) -4- ( ( ( ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamoyl) oxy) methyl) phenoxy) -6- (methoxycarbonyl) tetrahydro-2H-pyran-3, 4, 5-triyl triacetate: A solution of methyl  (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -3, 4, 5-tris (acetyloxy) -6- {2- [ (2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} ethyl) carbamoyl] -4- [ ( { [ (2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl) oxy] carbonyl} oxy) methyl] phenoxy} oxane-2-carboxylate (200 mg, 0.261 mmol) , 3- (6- (4- ( (4- (aminomethyl) piperidin-1-yl) methyl) benzyl) -2-oxobenzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2,6-dione (129 mg, 0.261 mmol) , pyridine (103 mg, 1.30 mmol) in DCM (5 mL) was stirred at 25℃ under N2 for 18 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (MeOH / DCM = 1: 10) to give target product (180 mg, yield: 57.12%) as a white solid. Mass (m / z) : 1149.2 [M+H] +.

[0386] Step 2. (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- ( (2-aminoethyl) carbamoyl) -4- ( ( ( ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamoyl) oxy) methyl) phenoxy) -3, 4, 5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid: A solution of (2S, 3R, 4S, 5S, 6S) -2- (2- ( (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) ethyl) carbamoyl) -4- ( ( ( ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamoyl) oxy) methyl) phenoxy) -6- (methoxycarbonyl) tetrahydro-2H-pyran-3, 4, 5-triyl triacetate (180 mg, 0.157 mmol) in THF (4 mL) and 6 N aqueous HCl (4 mL) was stirred at 45℃ for 4 hrs. The mixture was freeze-dried directly to give the desired product (150 mg, yield: 52.68%) as a yellow solid. Mass (m / z) : 909 [M+H] +.

[0387] Step 3. (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- ( (2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) ethyl) carbamoyl) -4- ( ( ( ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamoyl) oxy) methyl) phenoxy) -3, 4, 5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid: To a solution of (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- ( (2-aminoethyl) carbamoyl) -4- ( ( ( ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamoyl) oxy) methyl) phenoxy) -3, 4, 5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid (150 mg, 0.165 mmol) and DIEA (107 mg, 0.825 mmol) in DMF (2 mL) was added 2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl 6- (2, 5-dioxopyrrol-1-yl) hexanoate (56.0 mg, 0.182 mmol) . The reaction solution was stirred at 25℃ for 18 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The crude product was purified by prep- HPLC [Gemini-C18 150 x 21.2 mm, 5um; ACN-H2O (0.1%FA) , 10-40] to give the desired product (8 mg, 3.94%) as a white solid. Mass (m / z) : 1102.3 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.13 (s, 1H) , 8.42 –8.36 (m, 1H) , 8.32 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.07 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 8.04 –7.96 (m, 1H) , 7.85 –7.77 (m, 1H) , 7.72 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.47 –7.37 (m, 2H) , 7.29 –7.18 (m, 4H) , 7.11 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 6.99 (s, 2H) , 5.72 (s, 1H) , 5.51 –5.36 (m, 2H) , 5.26 (s, 1H) , 5.04 -4.92 (m, 3H) , 4.38 (s, 2H) , 3.75 -3.62 (m, 2H) , 3.48 (s, 3H) , 3.24 –3.13 (m, 3H) , 3.03 –2.72 (m, 8H) , 2.68 –2.62 (m, 2H) , 2.36 –2.30 (m, 1H) , 2.14 –1.83 (m, 6H) , 1.57 (d, J = 12.1 Hz, 2H) , 1.51 –1.31 (m, 5H) , 1.25 –0.98 (m, 6H) .

[0388] Synthesis of Linker-Payload-7: 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) propanamido) benzyl ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate

[0389] Preparation of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) propanamido) benzyl ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate: To a solution of 3- (6- (4- ( (4- (aminomethyl) piperidin-1-yl) methyl) benzyl) -2-oxobenzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione (20 mg, 0.04 mmol) in DMF (2 mL) was added 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) propanamido) benzyl  (4-nitrophenyl) carbonate (26 mg, 0.04 mmol) and DIEA (10 mg, 0.08 mmol) . The resulting mixture was stirred at rt under N2 for 3 hrs. The mixture was concentrated and the residue was purified via Genal-Prep-HPLC [Gemini-C18, 150 x 21.2 mm, 5um; ACN-H2O (0.1%FA) , 10-40] to give the product 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) propanamido) benzyl ( (1- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperidin-4-yl) methyl) carbamate as a yellow solid (8 mg, 20%) . Mass (m / z) : 1009.1 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ11.13 (s, 1H) , 9.92 (s, 1H) , 8.32 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.15 (d, J = 7.9 Hz, 1H) , 8.07 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 7.84 –7.77 (m, 2H) , 7.57 (d, J = 8.5 Hz, 2H) , 7.41 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.31 –7.18 (m, 7H) , 7.11 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.00 (s, 2H) , 5.44 (dd, J = 13.1, 5.1 Hz, 1H) , 4.91 (s, 2H) , 4.44 –4.32 (m, 3H) , 4.20 –4.12 (m, 1H) , 3.54 (s, 2H) , 3.03 –2.60 (m, 8H) , 2.27 –2.05 (m, 4H) , 2.02 –1.87 (m, 2H) , 1.70 –1.39 (m, 8H) , 1.30 (d, J = 7.1 Hz, 3H) , 1.18 (dt, J = 15.6, 7.9 Hz, 4H) , 0.84 (dd, J = 15.7, 6.8 Hz, 7H) .

[0390] Synthesis of Linker-Payload-8: 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) propanamido) benzyl 4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate

[0391] Preparation of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) propanamido) benzyl 4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2- dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylate: To a solution of 3- (2-oxo-6- (4- (piperazin-1-ylmethyl) benzyl) benzo [cd] indol-1 (2H) -yl) piperidine-2, 6-dione (18 mg, 0.042 mmol) in DMF (2 mL) was added 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) propanamido) benzyl (4-nitrophenyl) carbonate (26 mg, 0.04 mmol) and DIEA (10 mg, 0.08 mmol) . The resulting mixture was stirred at rt under N2 for 3 hrs. The residue was concentrated and the residue was purified via Genal-Prep-HPLC [Gemini-C18, 150 x 21.2 mm, 5um; ACN-H2O (0.1%FA) , 10-40] to give the product 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) propanamido) benzyl 4- (4- ( (1- (2, 6-dioxopiperidin-3-yl) -2-oxo-1, 2-dihydrobenzo [cd] indol-6-yl) methyl) benzyl) piperazine-1-carboxylat as a yellow solid (9 mg, 21 %) . Mass (m / z) : 981.1 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.14 (s, 1H) , 9.96 (s, 1H) , 9.70 (s, 1H) , 8.35 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.17 (d, J = 6.8 Hz, 1H) , 8.09 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 7.86 –7.78 (m, 2H) , 7.58 (d, J = 8.5 Hz, 2H) , 7.43 (dd, J = 24.9, 8.7 Hz, 5H) , 7.30 (d, J = 8.5 Hz, 2H) , 7.12 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.00 (s, 2H) , 5.45 (d, J = 7.4 Hz, 1H) , 5.01 (s, 2H) , 4.38 (dd, J =20.0, 13.0 Hz, 3H) , 4.18 (dd, J = 27.0, 19.6 Hz, 3H) , 4.04 (s, 2H) , 3.32 –2.88 (m, 8H) , 2.83 –2.59 (m, 3H) , 2.23 –2.04 (m, 3H) , 1.95 (dd, J = 13.7, 7.0 Hz, 1H) , 1.48 (dd, J = 14.7, 7.4 Hz, 4H) , 1.30 (d, J = 7.1 Hz, 3H) , 1.25 –1.10 (m, 2H) , 0.84 (dd, J = 15.4, 6.8 Hz, 6H) .

[0392] Example 2. Preparation of degrader antibody conjugate compounds

[0393] Synthesis of GPRC5D-LP4:

[0394] Antibody in PBS was diluted to 1mg / ml, and the pH was adjusted to ～7.8 after 8 molar equivalents of TCEP were added. The mixture was incubated for 1 hour at 37 degree. The 10 molar equivalents of compounds were added and final concentration of DMSO was adjusted to 10%for incubation at room temperature for 2 hours. The excess compounds were removed by Amicon centrifugal filter unit (UFC505096) . Remaining conjugate was analyzed by HIC, SEC and LC-MS.

[0395] Synthesis of GPRC5D-LP5:

[0396] Antibody in PBS was diluted to 1mg / ml, and the pH was adjusted to ～7.8 after 8 molar equivalents of TCEP were added. The mixture was incubated for 1 hour at 37 degree. The 10  molar equivalents of compounds were added and final concentration of DMSO was adjusted to 10%for incubation at room temperature for 2 hours. The excess compounds were removed by Amicon centrifugal filter unit (UFC505096) . Remaining conjugate was analyzed by HIC, SEC and LC-MS.

[0397] Synthesis of GPRC5D-LP6:

[0398] Antibody in PBS was diluted to 1mg / ml, and the pH was adjusted to ～7.8 after 8 molar equivalents of TCEP were added. The mixture was incubated for 1 hour at 37 degree. The 10 molar equivalents of compounds were added and final concentration of DMSO was adjusted to 10%for incubation at room temperature for 2 hours. The excess compounds were removed by Amicon centrifugal filter unit (UFC505096) . Remaining conjugate was analyzed by HIC, SEC and LC-MS.

[0399] Testing:

[0400] For characterization of size exclusion chromatography (SEC) aggregation: the aggregation of DACs was analyzed by SEC. Protein was dissolved in deionized water or PBS and analyzed by SEC under non-denaturing conditions. It can distinguish the size difference of protein in the non-denatured state. Thus, it can more truly reflect the aggregation state of proteins. The DAC conjugates were exchanged to PBS buffer and loaded on a size exclusion column (TSKgel Super SW mAB HR ) with a PBS buffer. Aggregation ratio was calculated by the aggreation peak area / all peak area.

[0401] For characterization of drug to antibody ratio (DAR) : the DAR is the average of the number of drugs to which the antibody is attached. DARs of degrader-antibody-conjugates (DACs) were first dissolved in deionized water, then treated with PNGase F and DTT and finally analyzed via LC-MS. A series of m / z signals with different amounts of charge were generated by mass spectrometer. By deconvolution of the mass spectrum, the molecular weight distribution of a group of drug-carrying antibody molecules with different number of charges were obtained. According to the theoretical molecular weight of antibody and drug loading, the number of drug loading peaks of molecular weight were determined after deconvolution, and the DAR value of the ADC molecule were obtained according to the signal strength of each peak in the molecular weight distribution diagram.

[0402] The characterization results are listed in below Table 1.

[0403] Table 1 Characterizations of the degrader-antibody-conjugates of the present disclosure

[0404] Example 3. In Vitro Biological Assays

[0405] IKZF1 / 3 degradation assay

[0406] Western blot was applied to assess Aiolos (IKZF3) and Ikaros (IKZF1) degradation of compounds. NCI-H929 (CBP60243, COBIOER) cells were incubated with a variety of concentrations of compound. After 4h incubation, the cells were collected and lysed. The protein concentration was determined by BCA protein assay kit from Thermo (23227) . The protein levels of Aiolos (IKZF3) and Ikaros (IKZF1) were determined by western blots, using Ikaros (D6N9Y) monoclonal antibody from CST (14859S) and Aiolos (D1C1E) monoclonal antibody from CST (15103S) , respectively. Proteins were loaded into each well of the pre-casting gels and subjected to electrophoretic separation by SDS-PAGE. The protein resolved by SDS-PAGE were transferred to PVDF, blocked by 5%skim milk, and probed with primary antibodies including anti-Aiolos (IKZF3) , anti-Ikaros (IKZF1) antibody or anti-COX IV antibody from CST (4850S) , using standard western blotting procedure. The degradation results are shown in the following Table 2.

[0407] Table 2. Results of compounds in IKZF degradation assay

[0408] Above results indicates that both payload compounds can induce IKZF protein degradation with excellent potency.

[0409] Anti-Proliferation activity assay

[0410] NCI-H929 (CBP60243, COBIOER) cells were seeded in a 96-well microplate at 7,000  cells per well in RPMI-640 media supplemented with 10%FBS and incubated with a variety of concentrations of compound. Relative cell viability was measured 96 hours after drug addiction using CellTiter-Glo (Promega, G9242) according to the manufacturer’s protocol. Each analysis was performed in biological triplicate. The anti-proliferation results in NCI-H929 are shown in the following Table 3.

[0411] Table 3. Results of compounds and conjugates in anti-proliferation assay in NCI-H929 cells

[0412] Above results show that degrader-antibody-conjugate compounds have better anti-proliferation activity than corresponding payload compounds and linker-payload compounds in NCI-H929 cell.

[0413] MM. 1R (CBP61235, COBIOER) cells were seeded in a 96-well microplate at 7,000 cells per well in RPMI-640 media supplemented with 10%FBS and incubated with a variety of concentrations of compound. Relative cell viability was measured 96 hours after drug addiction using CellTiter-Glo (Promega, G9242) according to the manufacturer’s protocol. Each analysis was performed in biological triplicate. The anti-proliferation results in MM. 1R are shown in the following Table 4.

[0414] Table 4. Results of compounds and conjugates in anti-proliferation assay in MM. 1R cells

[0415] The results show that degrader-antibody-conjugate compounds had better anti-proliferation activity than corresponding payload compounds and linker-payload compounds in MM1R cell.

[0416] MM. 1S (CBP60239, COBIOER) cells were seeded in a 96-well microplate at 7,000 cells per well in RPMI-640 media supplemented with 10%FBS and incubated with a variety of concentrations of compound. Relative cell viability was measured 96 hours after drug addiction using CellTiter-Glo (Promega, G9242) according to the manufacturer’s protocol. Each analysis was performed in biological triplicate. The anti-proliferation results in MM. 1S are shown in the following Table 5.

[0417] Table 5. Results of compounds and conjugates in anti-proliferation assay in MM. 1S cells

[0418] The results show that degrader-antibody-conjugate compounds had better anti-proliferation activity than corresponding payload compounds and linker-payload compounds in MM.1S cells.

Claims

A conjugate of Formula I-1 or Formula I-2:wherein:Bm is an antibody or an antigen-binding segment thereof, which is capable of binding to GPRC5D, CD79b or CD19;L is a cleavable linker;R1, R2, R3, and R4 are each independently being absent or selected fromhydrogen, halogen, substituted or unsubstituted C1-C8 alkyl, substituted or unsubstituted C3-C8 cycloakyl, oxo, and -NR5R6, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C8 haloalkyl, hydroxyl, and -NR5R6;R5 and R6 are each independently selected from hydrogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and -C (=O) (C1-C8 alkyl) ;ring A1 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic group, a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic group, a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group containing 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; wherein the saturated or unsaturated monocyclic group, the saturated or unsaturated bicyclic group, the saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group, and the saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group, are each optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, oxo, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-;ring A2 is a 4-to 10-membered saturated or unsaturated monocyclic heterocycle group containing a nitrogen atom and 0-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; a 6-to 12-membered saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group containing a nitrogen atom and 0-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S; wherein the monocyclic heterocycle group, and the saturated or unsaturated bicyclic heterocycle group, are each optionally substituted by at least one substituent selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, oxo, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 halogenated cycloalkyl, R'-O-R"-, (R') 2N-R"-, and R'-S-R"-;R' is each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C8 alkyl, C2-C8 alkenyl, and C2-C8 alkynyl;R" is each independently absent or selected from C1-C8 alkylene, C2-C8 alkenylene, and C2-C8 alkynylene;ring B is an optionally substituted saturated or unsaturated 5-to 6-membered heterocycle group containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, a substituted or unsubstituted 5-to 6-membered heteroaryl containing 1 to 3 heteroatoms each independently selected from N, S, and O, or a substituted or unsubstituted phenyl, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C6 alkyl, and C1-C6 haloalkyl;L’ is absent or selected from C1-C4 alkylene optionally substituted by C1-C4 alky, C1-C4 haloalkyl, or C3-C6 cycloalkyl;x is an integer selected from 1 to 30.The conjugate according to claim 1, whereinring B is selected from substituted or unsubstituted phenyl, substituted or unsubstituted pyridinyl, substituted or unsubstituted pyrrolyl, substituted or unsubstituted pyrazolyl, and substituted or unsubstituted imidazole, wherein the substituent is at least one group selected from halogen, C1-C4 alkyl, and C1-C4 haloalkyl.The conjugate according to claim 1, whereinring B is selected fromoptionally substituted by at least one substituent selected from F and Cl,wherein in an asymmetric moiety, the bond represented by *is a bond connecting to -CR1R2-moiety.The conjugate according to claim 1, whereinring A1 is selected fromwherein, in an asymmetric moiety, a bond represented by *is a bond connecting to -L’-NH-L-Bm.The conjugate according to claim 1, whereinring A2 is selected fromwherein, in an asymmetric moiety, a bond represented by *is a bond connecting to -L-Bm.The conjugate according to claim 1, whereinL’ is absent or selected from -CH2-, The conjugate according to claim 1, whereinL is represented by -L4-L3-L2-L1-, wherein L1 is a moiety connecting to -Bm.The conjugate according to claim 7, wherein L1 is a residue of a reactive group, wherein the reactive group is a group capable of reacting with -SH group.The conjugate according to claim 8, wherein L1 is selected fromwherein the bond represented by *is a bond connecting to Bm,wherein the substituent EWG is an electron-withdrawing group selected from -CN, halogen, -CF3, - (C=O) -OR7, and - (C=O) -R7, wherein R7 is each independently a substituted or unsubstituted C1-C8 alkyl, a substituted or unsubstituted C3-C10 cycloalkyl, a substituted or unsubstituted C4-C8 cycloalkenyl, substituted or unsubstituted C6-C12 aryl, a substituted or unsubstituted 3-to 8 membered heterocycloalkyl comprising 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S, or a substituted or unsubstituted 5-to 12 membered heteroaryl comprising 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S;wherein the substituent is each independently selected from halogen, hydroxyl, carboxyl, amino, cyano, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, C3-C8 cycloalkyl, C3-C8 heterocyclic alkyl comprising 1-3 heteroatoms each independently selected from N, O, and S, C1-C8 alkoxyl, C1-C8 haloalkyoxyl, and oxo.The conjugate according to claim 7, wherein L2 is a linker moiety represented bywherein the bond represented by *is a bond connecting to L1, andwherein m, n and p are each independently an integer selected from 0 to 30.The conjugate according to claim 7, wherein L3 is a cleavable linker or a non-cleavable linker.The conjugate according to claim 11, wherein L3 is a cleavable linker cleavable by a protease.The conjugate according to claim 12, wherein L3 comprises a peptide containing 2-10 amino acid residues, further wherein the amino acid residue is obtained from a natural amino acid, an unnatural amino acid, a stereoisomer of a natural amino acid, or a stereoisomer of an unnatural amino acid.The conjugate according to claim 13, wherein L3 is cleavable by intracellular proteases selected from lysosomal enzymes.The conjugate according to claim 13 or 14, wherein the peptide is selected from alanine-alanine, valine-alanine, valine-citrulline, alanine-phenylalanine, glycine-valine-citrulline, aspartic acid-valine-citrulline, alanine-alanine-asparagine, alanine-alanine-alanine, alanine-phenylalanine-lysine, glycine-glycine-glycine, glycine-glycine-valine-citrulline (SEQ ID NO: 2) , and glycine-glycine-phenylalanine-glycine (SEQ ID NO: 3) .The conjugate according to claim 11, wherein L3 is a cleavable linker cleavable by beta-glucuronidase.The conjugate according to claim 16, wherein L3 is selected from substituted or unsubstitutedsubstituted or unsubstitutedsubstituted or unsubstitutedand substituted or unsubstitutedwherein the bond represented by *is a bond connecting to L2,wherein q is an integer selected from 2 to 15, andwherein the substituent is each independently selected from halogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and C1-C8 alkoxyl.The conjugate according to claim 11, wherein L3 comprises a peptide containing 2-10 amino acid residues and a moiety cleavable by beta-glucuronidase.The conjugate according to claim 18, wherein L3 is of Formula III,wherein the bond represented by *is a bond connecting to L2,wherein Formula III is optionally substituted by at least one group selected from halogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and C1-C8 alkoxyl; andwherein S is each independently an amino acid residue selected from a natural amino acid, an unnatural amino acid, a stereoisomer of a natural amino acid, and a stereoisomer of an unnatural amino acid.The conjugate according to claim 19, wherein L3 is substituted or unsubstitutedwherein the bond represented by *is a bond connecting to L2, andwherein the substituent is each independently selected from halogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, and C1-C8 alkoxyl.The conjugate according to any one of claims 7 to 20, wherein L4 is absent or a self-immolative group, wherein a cascade of disassembly reactions of L4 is capable of being triggered by cleavage of L3.The conjugate according to any one of claims 7 to 21, wherein L4 is selected fromwherein the bond represented by *is a bond connecting to L3.The conjugate of claim 7, wherein the conjugate is of Formula I-1-1The conjugate according to claim 7, wherein the conjugate is of Formula II-1-1The conjugate according to claim 1, wherein the conjugate is selected fromThe conjugate according to any one of claims 1 to 25, wherein Bm comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.A payload compound for synthesis of the conjugate according to claim 1, wherein the payload compound is selected fromA linker-payload conjugate for synthesis of the conjugate according to claim 1, wherein the linker-payload conjugate is selected fromA method for preparing a conjugate according to claim 1, comprisingroute 1:orroute 2:wherein Bm, L, L1, L2, L3, L4, R1, R2, R3, R4, ring A1, ring A2, ring B, L’, and x are defined according to claim 1.A pharmaceutical composition comprising a conjugate according to any one of claims 1 to 28, and at least one pharmaceutically acceptable carrier.A method for degrading a target protein in a cell, comprising exposing the cell to a conjugate according to any one of claims 1 to 28, or a pharmaceutical composition according to claim 30.The method of claim 31, wherein the target protein is a protein of Ikaros zinc-finger (IKZF) protein family.The method of claim 32, wherein the target protein is selected from IKZF1 and IKZF3.A method for treating or alleviating a disease, a disorder or a condition mediated by IKZF family, comprising administering in a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a conjugate according to any one of claims 1 to 28, or a pharmaceutical composition according to claim 30.The method of claim 34, wherein the disease, the disorder or the condition is a cancer.The method of claim 35, wherein the cancer is selected from multiple myeloma, leukemia, lymphoblastic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, Hodgkin's lymphoma, and non-Hodgkin's lymphoma.

Images