Dynamically controlled immunohistochemistry (IHC) stainer systems and methods

Abstract

A staining system (200) includes a dynamically controlled external air pressurized heating chamber for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process, said heating chamber of low mass and capable to be pressurized by external air. The staining system (200) includes an adjustable air pressure control mechanism that regulates the pressurization of the heating chamber. The staining system (200) further includes a capillary gap cover that protects a tissue during the HIER IHC staining process to ensure even heat distribution within a buffer pool. The staining system (200) further includes a submersion system that submerges a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling, the heating chamber and associated components allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types pH and staining protocol requirements.

Description

DYNAMICALLY CONTROLLED IMMUNOHISTOCHEMISTRY (IHC) STAINER SYSTEMS AND METHODSTECHNICAL FIELD

[0001] This description relates to immunohistochemistry (IHC) staining and associated systems, devices, methods, and apparatuses.BACKGROUND

[0002] In some cases, heat induced epitope retrieval (HIER) uses heat coupled with specific buffered solutions to recover antigen reactivity in formalin fixed paraffin embedded tissue. Gaining finely tuned and specifically calibrated environment conditions during staining of tissues in such processes has proven difficult. For example, uneven heating or poorly controlled temperature conditions damages tissues or causes bubble formation in the tissue preparation.SUMMARY

[0003] A Legend 6G Stainer includes a dynamically controlled external air pressurized heating chamber designed for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process, said heating chamber being of low mass and capable of being pressurized by external air. The Legend 6G Stainer further includes an adjustable air pressure control mechanism that regulates the pressurization of the heating chamber. The Legend 6G Stainer further includes a capillary gap cover that protects a tissue during the HIER IHC staining process to ensure even heat distribution within a buffer pool. The Legend 6G Stainer further includes a submersion system that submerges a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots  and micro nucleated boiling, the heating chamber and associated components allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements.

[0004] A staining system includes a dynamically controlled external air pressurized heating chamber designed for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process, said heating chamber being of low mass and capable of being pressurized by external air. The staining system further includes an adjustable air pressure control mechanism configured to regulate the pressurization of the heating chamber. The staining system further includes a capillary gap cover that protects a tissue during the HIER IHC staining process to ensure even heat distribution within a buffer pool. The staining system further includes a submersion system that submerges a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling, the heating chamber and associated components allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements.

[0005] A staining method comprising dynamically controlling an external air pressurized heating chamber designed for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process, said heating chamber being of low mass and capable of being pressurized by external air, regulating the pressurization of the heating chamber using an adjustable air pressure control mechanism, ensuring even heat distribution within a buffer pool using a capillary gap cover that protects a tissue during the HIER IHC staining process, submerging a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling using a submersion system, allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements using the heating chamber and associated components.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0006] Aspects of the present disclosure are best understood from the following detailed description when read with the accompanying figures. It is noted that, in accordance with the standard practice in the industry, various features are not drawn to scale. In fact, the dimensions of the various features may be arbitrarily increased or reduced for clarity of discussion.

[0007] Figure 1 is a table diagram of pressure ranges in relation to temperature, in accordance with some embodiments.

[0008] Figure 2 is a schematic diagram of a stainer system, in accordance with some embodiments.

[0009] Figure 3 is a block diagram of system architecture in accordance with some embodiments.DETAILED DESCRIPTION

[0010] The following disclosure provides many different embodiments, or examples, for implementing different features of the provided subject matter. Specific examples of components, values, operations, materials, arrangements, or the like, are described below to simplify the present disclosure. These are, of course, merely examples and are not intended to be limiting. Other components, values, operations, materials, arrangements, or the like, are contemplated. For example, the formation of a first feature over or on a second feature in the description that follows may include embodiments in which the first and second features are formed in direct contact, and may also include embodiments in which additional features may be formed between the first and second features, such that the first and second features may not be in direct contact. In addition, the present disclosure may repeat reference numerals and / or letters in the various examples. This repetition is for the purpose of simplicity and clarity and  does not in itself dictate a relationship between the various embodiments and / or configurations discussed.

[0011] For the past 80 years, the application of heat in the Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) process for immunohistochemistry (IHC) staining has been a challenging endeavor. Various methods, ranging from coplin jars to modern auto-stainers, have been explored to improve the efficiency and effectiveness of antigen retrieval. However, these methods often encounter limitations and drawbacks. Cold enzyme digestion processes have shown to be problematic as these processes damage numerous antigen sites. High heat antigen retrieval processes using pressure cookers at 120℃ are prone to inconsistencies. Most auto-stainers today apply temperatures approaching the boiling point which poses the risk of micro bubble formation and tissue damage. Existing HIER-based solutions suffer from heat-induced thermal flow, leading to biomaterial displacement and non-uniform antigen retrieval. In particular, the other systems uneven heating causes bubble formation and cell cluster detachment, while in other systems an air knife displaces reagents and results in the loss of cell features. The capillary gap, resembling a clam, also contributes to material loss from sectioned cells.

[0012] Figure 1 is a table diagram 100 of pressure ranges in relation to temperature, in accordance with some embodiments.

[0013] In some embodiments, a heating chamber and associated components allow users to adjust a pressure within a pounds per square inch (psi) range, as described herein, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements. For example, a pressure range of 8 to 12 psi (102) is shown as related to particular temperatures. Therefore, dynamic control of air pressure, according to embodiments herein, allows for dynamic control of boiling point. One of ordinary skill in the art would understand that the use of psi as a measure of pressure is merely an example and that other units are also usable for adjusting the pressure range.

[0014] Figure 2 is a schematic diagram of a stainer system 200 (hereinafter referred to as “stainer system 200” ) , in accordance with some embodiments. Figure 2 is  simplified for the purpose of illustration. The stainer system 200 is capable of carrying out, or being used for, one or more staining processes or procedures.

[0015] The stainer system 200 includes a cover 202. In some embodiments, the cover 202 comprises a material suitable for forming an air-tight enclosure. In some embodiments, the cover 202 comprises a hard plastic metallic material. In some embodiments, the cover 202 comprises a plexi-glass material. In some embodiments, the cover 202 comprises a glass material. In some embodiments, the cover 202 comprises a polypropylene material. In some embodiments, the cover 202 comprises a polypropylene and polyethylene blend material. In some embodiments, the cover 202 comprises an acrylic material. In some embodiments, the cover 202 comprises another material. In some embodiments, the cover 202 comprises a dark or colored material usable to block light.

[0016] The stainer system 200 includes a container 204. In some embodiments, the container 204 comprises a material suitable for forming an air-tight enclosure. In some embodiments, the container 204 comprises a high temperature hard plastic material. In some embodiments, the container 204 comprises a plexi-glass metallic material. In some embodiments, the container 204 comprises a glass material. In some embodiments, the container 204 comprises a polypropylene material. In some embodiments, the container 204 comprises a polypropylene and polyethylene blend material. In some embodiments, the container 204 comprises an acrylic material. In some embodiments, the container 204 comprises another material. In some embodiments, the container 204 comprises a dark or colored material usable to block light.

[0017] In some embodiments, the cover 202 and the container 204 are comprised of the same material. In some embodiments, the cover 202 and the container 204 are comprised of different materials.

[0018] The stainer system 200 includes a hinge 206 attached to the cover 202 and the container 204. In some embodiments, the hinge 206 allows for opening and closing of the cover 202. In some embodiments, the cover 202 and the container 204 are attached by more than one hinge or a hinge alternative. In some embodiments, the hinge 206  comprises a metallic material. In some embodiments, the hinge 206 comprises a plastic material. In some embodiments, the hinge 206 comprises a material that is the same material as the cover 202 or the container 204. In some embodiments, a hinge is not used.

[0019] In some embodiments, the container 204 forms a chamber area. In some embodiments, the chamber area is a heating chamber of low mass capable of being pressurized by external air or air from sources external to the chamber area, such as an air tank compressor, etc. In some embodiments, the chamber area includes an air-circulating section or portion for circulating air. In some embodiments, the air is heated. In some embodiments, the chamber area is an air-heating area or portion. In some embodiments, the heating chamber area and associated components allow users to adjust a pressure within a psi range, such as a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements. In some the cover 202 and the container 204 form an air-tight enclosure. In some embodiments, the cover 202 and the container 204 are capable of forming an air-tight seal.

[0020] The stainer system 200 includes a fan 208. In some embodiments, the fan is suitable for circulating air within a chamber area, causing the temperature of the air to equilibrate or become more consistent. In some embodiments, the fan 208 comprises an electrical fan. In some embodiments, the fan 208 is battery operated. In some embodiments, the fan 208 is enclosed, shielded, or substantially enclosed or shielded. In some embodiments, the fan 208 is in communication with one or more processors, controllers, microcontrollers, or circuits. In some embodiments, the fan 208 speed is capable of being controlled by the one or more processors, controllers, microcontrollers, or circuits. In some embodiments, the fan 208 speed is adjusted based on a temperature of a chamber area. In some embodiments, the fan 208 speed is adjusted based on a temperature of dewax process. a buffer liquid, as described herein.

[0021] The stainer system 200 includes a heater element 210. In some embodiments, the heater element is suitable for heating or increasing the temperature of the air HIER  buffer in a chamber area. In some embodiments, the heater element 210 comprises an electrical heater. In some embodiments, the heater element 210 is battery operated. In some embodiments, the heater element 210 is enclosed, shielded, or substantially enclosed or shielded. In some embodiments, the heater element 210 is in communication with one or more processors, controllers, microcontrollers, or circuits. In some embodiments, the heater element 210 temperature is capable of being controlled by the one or more processors, controllers, microcontrollers, or circuits. In some embodiments, the heater element 210 temperature is adjusted based on a temperature of a 214 chamber area. In some embodiments, the heater element 210 temperature is adjusted based on a temperature of a buffer liquid, as described herein.

[0022] The stainer system 200 includes an air inlet / outlet 212. In some embodiments, the air inlet / outlet 212 forms an air-tight passage into a chamber area. In some embodiments, the air inlet / outlet 212 is capable of adding or removing air from a chamber area. In some embodiments, the air inlet / outlet 212 is connected to an air pump or similar device. In some embodiments, the air inlet / outlet 212 is in communication with one or more processors, controllers, microcontrollers, or circuits. In some embodiments, the air pressure in a chamber area is capable of being controlled by the one or more processors, controllers, microcontrollers, or circuits. In some embodiments, the air pressure is controlled by an adjustable air pressure control mechanism. In some embodiments, the air pressure in a chamber area is adjusted based on a temperature of a chamber area. In some embodiments, the air pressure in a chamber area is adjusted based on a temperature of a buffer area, as described herein. In some embodiments, the adjustable air pressure control mechanism comprises an air pressure measurement gauge or measurement device connected to a valve. In some embodiments, the valve is opened or closed to allow for air pressure adjustment.

[0023] The stainer system 200 includes a seating area 214. In some embodiments, the seating area 214 is capable of, or suitable for, holding a slide 214a or IHC utensil for staining. In some embodiments, stack a slide over another in an angle, so the chamber is capable to hold more slides per each staining process. In some embodiments, the slide or IHC utensil for staining includes a capillary gap cover that protects a tissue during an  HEIR IHC staining process to ensure even heat distribution within a buffer pool. In some embodiments, the seating area 214 is capable of, or suitable for, containing a liquid, such as a buffer liquid. In some embodiments, the seating area 214 is capable of, or suitable for, containing a buffer pool 214b. In some embodiments, the seating area 214 includes or comprises a submersion system that submerges a slide within a buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling. In some embodiments, the seating area 214 comprises a material suitable for conducting heat. In some embodiments, the seating area 214 comprises a hard plastic metallic material prefer stainless steel. In some embodiments, the seating area 214 comprises a plexi-glass material. In some embodiments, the seating area 214 comprises a glass material. In some embodiments, the seating area 214 comprises a polypropylene material. In some embodiments, the seating area 214 comprises a polypropylene and polyethylene blend material. In some embodiments, the seating area 214 comprises an acrylic material. In some embodiments, the seating area 214 comprises another material. In some embodiments, the seating area 214 comprises a dark or colored material usable to block light. In some embodiments, a submersion system comprises a dish, bowl, or other device capable of containing a liquid.

[0024] In some embodiments, the seating area 214 is removable attached to the container 204. In some embodiments, the seating area 214 is cup-shaped, rectangularly and cup-shaped, or U-shaped, and removably attached to the container 204. In some embodiments, the seating area 214 allows for suspension of an IHC slide, device, or utensil above a chamber area, allowing for heat conduction from the chamber area, through the seating area 214 or through a buffer liquid or pool.

[0025] The stainer system 200 includes a liquid drain 216 from the seating area 214. The liquid drain 216 allows for removal of liquid, such as a liquid buffer, from the seating area 214.

[0026] The stainer system 200 includes a temperature sensor 218. In some embodiments, the temperature sensor 218 allows for determination of a temperature of a liquid such as a buffer liquid in which an IHC slide or device is immersed. In some  embodiments, the temperature sensor 218 is in communication with one or more processors, controllers, microcontrollers, or circuits. In some embodiments, the temperature of a liquid, such as a buffer liquid, is capable of being controlled by the one or more processors, controllers, microcontrollers, or circuits. In some embodiments, the temperature of a liquid, such as a buffer liquid, is adjusted based on a temperature of a chamber area, or vice versa.

[0027] In some embodiments, various systems, sub-systems, and components from the aforementioned are combined and in communication with the same controlling unit comprising one or more processors, controllers, microcontrollers, or circuits.

[0028] Signals and Measurements Intake

[0029] In some embodiments, temperatures are continuously monitored by one or more temperature sensors. In some embodiments, temperatures are determined at predetermined intervals by one or more temperature sensors. For example, temperatures may be determined by one or more temperature sensors in a buffer liquid, chamber area, etc.

[0030] In some embodiments, air pressures are continuously monitored by one or more pressure sensors. In some embodiments, air pressures are determined at predetermined intervals by one or more pressure sensors. For example, air pressures may be determined by one or more pressure sensors in a chamber area, etc.

[0031] The temperature and pressure readings and measurements from various sensors are delivered to a controlling unit, for example.

[0032] Dynamic Control and Adjustment

[0033] The controlling unit allows for synchronization, adjustment, and calibration of various system components based on various system environment measurements.

[0034] For example, when a temperature sensor determines a temperature of a buffer pool falls below, or increases beyond, a predetermined temperature range, one or more  signals may be delivered by the controlling unit to a heating element to increase or decrease the temperature so as to adjust the temperature of the buffer pool.

[0035] Similarly, in some examples, when a pressure sensor determines a pressure of a chamber area falls below, or increases beyond, a predetermined pressure range, one or more signals may be delivered by the controlling unit to a compressor element or system to increase or decrease the air pressure by adding or removing air through an air inlet / outlet so as to adjust the air pressure of the chamber area.

[0036] In some examples, physical chemistry relationships between temperature and pressure are used to adjust environment conditions in a chamber area or buffer pool. For example, pressure adjustments are used to modify boiling points and chamber temperatures and humidities for example, and vice versa.

[0037] The systems and methods herein are usable to dynamically control environment conditions, such as the conditions of a heating chamber or buffer pool, during a staining process. By utilizing a dynamic control process, the systems and methods herein help to prevent tissue damage and bubble formation during staining.

[0038] Figure 3 is a block diagram of system architecture 300 in accordance with some embodiments.

[0039] System architecture 300 includes a hardware processor 302 and a non-transitory, computer readable storage medium 304 encoded with, i.e., storing, the computer program code 306, i.e., a set of executable instructions. Computer readable storage medium 304 is also encoded with instructions 307 for interfacing with external devices. The processor 302 is electrically coupled to the computer readable storage medium 304 via a bus 308. The processor 302 is also electrically coupled to an I / O interface 310 by bus 308. A network interface 312 is also electrically connected to the processor 302 via bus 308. Network interface 312 is connected to a network 314, so that processor 302 and computer readable storage medium 304 are capable of connecting to external elements via network 314. The processor 302 is configured to execute the computer program code 306 encoded in the computer readable storage medium 304 in  order to cause system architecture 300 to be usable for performing a portion or all of the operations as described herein.

[0040] In some embodiments, the processor 302 is a central processing unit (CPU) , a multi-processor, a distributed processing system, an application specific integrated circuit (ASIC) , or a suitable processing unit.

[0041] In some embodiments, the computer readable storage medium 304 is an electronic, magnetic, optical, electromagnetic, infrared, or a semiconductor system (or apparatus or device) . For example, the computer readable storage medium 604 includes a semiconductor or solid-state memory, a magnetic tape, a removable computer diskette, a random access memory (RAM) , a read-only memory (ROM) , a rigid magnetic disk, or an optical disk. In some embodiments using optical disks, the computer readable storage medium 304 includes a compact disk-read only memory (CD-ROM) , a compact disk-read / write (CD-R / W) , or a digital video disc (DVD) .

[0042] In some embodiments, the storage medium 304 stores the computer program code 606 configured to cause system architecture 300 to perform a portion or all of the operations as described herein. In some embodiments, the storage medium 304 also stores information needed for performing a portion or all of the operations as described herein as well as information generated during performing a portion or all of the operations as described herein, such as a user interface parameter 316.

[0043] In some embodiments, the storage medium 304 stores instructions 607 for interfacing with external devices. The instructions 307 enable processor 302 to generate instructions readable by the external devices to effectively implement a portion or all of the operations as described herein.

[0044] System architecture 300 includes I / O interface 310. I / O interface 310 is coupled to external circuitry. In some embodiments, I / O interface 310 includes a keyboard, keypad, mouse, trackball, trackpad, or cursor direction keys for communicating information and commands to processor 302.

[0045] System architecture 300 also includes network interface 312 coupled to the processor 302. Network interface 312 allows computer architecture 600 to communicate with network 314, to which one or more other computer systems are connected. Network interface 312 includes wireless network interfaces such as BLUETOOTH, WIFI, WIMAX, GPRS, or WCDMA; or wired network interface such as ETHERNET, USB, or IEEE-1394. In some embodiments, a portion or all of the operations as described herein, and information are exchanged between different system architecture 300 via network 314.

[0046] In at least some embodiments, the apparatus is another device capable of processing logical functions in order to perform the operations herein. In at least some embodiments, the controller and the storage unit need not be entirely separate devices, but share circuitry or one or more computer-readable mediums in some embodiments. In at least some embodiments, the storage unit includes a hard drive storing both the computer-executable instructions and the data accessed by the controller, and the controller includes a combination of a central processing unit (CPU) and RAM, in which the computer-executable instructions are able to be copied in whole or in part for execution by the CPU during performance of the operations herein.

[0047] In at least some embodiments where the apparatus is a computer, a program that is installed in the computer is capable of causing the computer to function as or perform operations associated with apparatuses of the embodiments described herein. In at least some embodiments, such a program is executable by a processor to cause the computer to perform certain operations associated with some or all of the blocks of flowcharts and block diagrams described herein.

[0048] At least some embodiments are described with reference to flowcharts and block diagrams whose blocks represent (1) steps of processes in which operations are performed or (2) sections of a controller responsible for performing operations. In at least some embodiments, certain steps and sections are implemented by dedicated circuitry, programmable circuitry supplied with computer-readable instructions stored on computer-readable media, or processors supplied with computer-readable instructions  stored on computer-readable media. In at least some embodiments, dedicated circuitry includes digital or analog hardware circuits and include integrated circuits (IC) or discrete circuits. In at least some embodiments, programmable circuitry includes reconfigurable hardware circuits including logical AND, OR, XOR, NAND, NOR, and other logical operations, flip-flops, registers, memory elements, etc., such as field-programmable gate arrays (FPGA) , programmable logic arrays (PLA) , etc.

[0049] In at least some embodiments, the computer readable storage medium includes a tangible device that is able to retain and store instructions for use by an instruction execution device. In some embodiments, the computer readable storage medium includes, for example, but is not limited to, an electronic storage device, a magnetic storage device, an optical storage device, an electromagnetic storage device, a semiconductor storage device, or any suitable combination of the foregoing. A non-exhaustive list of more specific examples of the computer readable storage medium includes the following: a portable computer diskette, a hard disk, a random access memory (RAM) , a read-only memory (ROM) , an erasable programmable read-only memory (EPROM or Flash memory) , a static random access memory (SRAM) , a portable compact disc read-only memory (CD-ROM) , a digital versatile disk (DVD) , a memory stick, a floppy disk, a mechanically encoded device such as punch-cards or raised structures in a groove having instructions recorded thereon, and any suitable combination of the foregoing. A computer readable storage medium, as used herein, is not to be construed as being transitory signals per se, such as radio waves or other freely propagating electromagnetic waves, electromagnetic waves propagating through a waveguide or other transmission media (e.g., light pulses passing through a fiber-optic cable) , or electrical signals transmitted through a wire.

[0050] In at least some embodiments, computer readable program instructions described herein are downloadable to respective computing / processing devices from a computer readable storage medium or to an external computer or external storage device via a network, for example, the Internet, a local area network, a wide area network or a wireless network. In at least some embodiments, the network includes copper transmission cables, optical transmission fibers, wireless transmission, routers,  firewalls, switches, gateway computers or edge servers. In at least some embodiments, a network adapter card or network interface in each computing / processing device receives computer readable program instructions from the network and forwards the computer readable program instructions for storage in a computer readable storage medium within the respective computing / processing device.

[0051] In at least some embodiments, computer readable program instructions for carrying out operations described above are assembler instructions, instruction-set-architecture (ISA) instructions, machine instructions, machine dependent instructions, microcode, firmware instructions, state-setting data, or either source code or object code written in any combination of one or more programming languages, including an object oriented programming language such as Smalltalk, C++ or the like, and conventional procedural programming languages, such as the C programming language or similar programming languages. In at least some embodiments, the computer readable program instructions are executed entirely on the user's computer, partly on the user's computer, as a stand-alone software package, partly on the user's computer and partly on a remote computer or entirely on the remote computer or server. In at least some embodiments, in the latter scenario, the remote computer is connected to the user's computer through any type of network, including a local area network (LAN) or a wide area network (WAN) , or the connection is made to an external computer (for example, through the Internet using an Internet Service Provider) . In at least some embodiments, electronic circuitry including, for example, programmable logic circuitry, field-programmable gate arrays (FPGA) , or programmable logic arrays (PLA) execute the computer readable program instructions by utilizing state information of the computer readable program instructions to individualize the electronic circuitry, in order to perform aspects of the subject disclosure.

[0052] While embodiments of the subject disclosure have been described, the technical scope of any subject matter claimed is not limited to the above described embodiments. Persons skilled in the art would understand that various alterations and improvements to the above-described embodiments are possible. Persons skilled in the art would also understand from the scope of the claims that the embodiments added  with such alterations or improvements are included in the technical scope of the invention.

[0053] The operations, procedures, steps, and stages of each process performed by an apparatus, system, program, and method shown in the claims, embodiments, or diagrams are able to be performed in any order as long as the order is not indicated by 'prior to, ' 'before, ' or the like and as long as the output from a previous process is not used in a later process. Even if the process flow is described using phrases such as 'first' or 'next' in the claims, embodiments, or diagrams, such a description does not necessarily mean that the processes must be performed in the described order.

[0054] Supplemental Note 1

[0055] A Legend 6G Stainer includes a dynamically controlled external air pressurized heating chamber designed for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process, said heating chamber being of low mass and capable of being pressurized by external air. The Legend 6G Stainer further includes an adjustable air pressure control mechanism that regulates the pressurization of the heating chamber. The Legend 6G Stainer further includes a capillary gap cover that protects a tissue during the HIER IHC staining process to ensure even heat distribution within a buffer pool. The Legend 6G Stainer further includes a submersion system that submerges a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling, the heating chamber and associated components allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements.

[0056] Supplemental Note 2

[0057] In some embodiments, the Legend 6G Stainer of Supplemental Note 1 wherein the heating chamber maintains a temperature range and a boing point between 100 and 130℃, reducing the risk of tissue damage and enabling precise control during the HIER IHC staining process.

[0058] Supplemental Note 3

[0059] In some embodiments, the Legend 6G Stainer of any of Supplemental Notes 1-2 further comprising a pressure control system that adjusts the air pressure in real-time to prevent the formation of bubbles, ensuring effective antigen retrieval and staining.

[0060] Supplemental Note 4

[0061] In some embodiments, the Legend 6G Stainer of any of Supplemental Notes 1-3 wherein the heating chamber comprises a size and liquid volume that eliminates formation of bubbles and allows for dynamic control of the HIER IHC staining process.

[0062] Supplemental Note 5

[0063] In some embodiments, the Legend 6G Stainer of any of Supplemental Notes 1-4 wherein the capillary gap cover protects the slide from uneven heating and other irregularities that lead to formation of bubbles, preventing staining issues, and breaking off of cell clusters.

[0064] Supplemental Note 6

[0065] A staining system includes a dynamically controlled external air pressurized heating chamber designed for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process, said heating chamber being of low mass and capable of being pressurized by external air. The staining system further includes an adjustable air pressure control mechanism configured to regulate the pressurization of the heating chamber. The staining system further includes a capillary gap cover that protects a tissue during the HIER IHC staining process to ensure even heat distribution within a buffer pool. The staining system further includes a submersion system that submerges a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling, the heating chamber and associated components allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements.

[0066] Supplemental Note 7

[0067] In some embodiments, the staining system of Supplemental Note 6 wherein the heating chamber maintains a temperature range and a boing point between 100 and 130℃, reducing the risk of tissue damage and enabling precise control during the HIER IHC staining process.

[0068] Supplemental Note 8

[0069] In some embodiments, the staining system of any of Supplemental Notes 6-7 further comprising a pressure control system configured to adjust the air pressure in real-time to prevent the formation of bubbles, ensuring effective antigen retrieval and staining.

[0070] Supplemental Note 9

[0071] In some embodiments, the staining system of any of Supplemental Notes 6-8 wherein the heating chamber comprises a size and liquid volume that eliminates formation of bubbles and allows for dynamic control of the HIER IHC staining process.

[0072] Supplemental Note 10

[0073] In some embodiments, the staining system of any of Supplemental Notes 6-9 wherein the capillary gap cover protects the slide from uneven heating and other irregularities that lead to formation of bubbles, preventing staining issues, and breaking off of cell clusters.

[0074] Supplemental Note 11

[0075] A staining method comprising dynamically controlling an external air pressurized heating chamber designed for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process, said heating chamber being of low mass and capable of being pressurized by external air, regulating the pressurization of the heating chamber using an adjustable air pressure control mechanism, ensuring even heat distribution within a buffer pool using a capillary gap cover that protects a tissue during  the HIER IHC staining process, submerging a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling using a submersion system, allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements using the heating chamber and associated components.

[0076] Supplemental Note 12

[0077] In some embodiments, the staining system of Supplemental Note 11 further comprising maintaining a temperature range and a boing point between 100 and 130℃, reducing the risk of tissue damage and enabling precise control during the HIER IHC staining process using the heating chamber.

[0078] Supplemental Note 13

[0079] In some embodiments, the staining method of any of Supplemental Notes 11-12 further comprising adjusting the air pressure in real-time to prevent the formation of bubbles, ensuring effective antigen retrieval and staining using a pressure control system.

[0080] Supplemental Note 14

[0081] In some embodiments, the staining method of any of Supplemental Notes 11-13 wherein the heating chamber comprises a size and liquid volume that eliminates formation of bubbles and allows for dynamic control of the HIER IHC staining process.

[0082] Supplemental Note 15

[0083] In some embodiments, the staining method of any of Supplemental Notes 11-14 further comprising protecting the slide from uneven heating and other irregularities that lead to formation of bubbles, preventing staining issues, and breaking off of cell clusters using the capillary gap cover.

Claims

1. A Legend 6G Stainer comprising:dynamically controlled external air pressurized heating chamber designed for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process;said heating chamber being of low mass and capable of being pressurized by external air;an adjustable air pressure control mechanism that regulates the pressurization of the heating chamber;a capillary gap cover that protects a tissue during the HIER IHC staining process to ensure even heat distribution within a buffer pool;a submersion system that submerges a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling;the heating chamber and associated components allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different pH and staining protocol requirements.2.The Legend 6G Stainer of claim 1, wherein the heating chamber maintains a temperature range and a boiling point between 100 95 and 130℃, reducing the risk of tissue damage and enabling precise control during the HIER IHC staining process.3.The Legend 6G Stainer of claim 2, further comprising a pressure control system that adjusts the air pressure in real-time to prevent the formation of bubbles, ensuring effective antigen retrieval and staining.

4. The Legend 6G Stainer of claim 3, wherein the heating chamber comprises a size and liquid volume that eliminates formation of bubbles and allows for dynamic control of the HIER IHC staining process.5.The Legend 6G Stainer of claim 4, wherein the capillary gap cover protects the slide from uneven heating and other irregularities that lead to formation of bubbles, preventing staining issues, and breaking off of cell clusters.6.A staining system comprising:dynamically controlled external air pressurized heating chamber designed for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process;said heating chamber being of low mass and capable of being pressurized by external air;an adjustable air pressure control mechanism configured to regulate the pressurization of the heating chamber;a capillary gap cover that protects a tissue during the HIER IHC staining process to ensure even heat distribution within a buffer pool;a submersion system that submerges a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling;the heating chamber and associated components allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements.7.The staining system of claim 6, wherein the heating chamber maintains a temperature range and a boing point between 100 and 130℃, reducing the risk of tissue damage and enabling precise control during the HIER IHC staining process.8.The staining system of claim 7, further comprising a pressure control system configured to adjust the air pressure in real-time to prevent the formation of bubbles, ensuring effective antigen retrieval and staining.9.The staining system of claim 8, wherein the heating chamber comprises a size and liquid volume that eliminates formation of bubbles and allows for dynamic control of the HIER IHC staining process.10.The staining system of claim 9, wherein the capillary gap cover protects the slide from uneven heating and other irregularities that lead to formation of bubbles, preventing staining issues, and breaking off of cell clusters.11.A staining method comprising:dynamically controlling an external air pressurized heating chamber designed for a Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) immunohistochemistry (IHC) staining process;said heating chamber being of low mass and capable of being pressurized by external air;regulating the pressurization of the heating chamber using an adjustable air pressure control mechanism;ensuring even heat distribution within a buffer pool using a capillary gap cover that protects a tissue during the HIER IHC staining process;submerging a slide within the buffer pool to eliminate formation of hot spots and micro nucleated boiling using a submersion system;allowing users to adjust a pressure within a range of 8 to 12 psi, thereby providing control over a boiling point of the HIER IHC staining process for different tissue types and staining protocol requirements using the heating chamber and associated components.12.The staining method of claim 11, further comprising:Maintaining a temperature range and a boing point between 100 95 and 130℃, reducing the risk of tissue damage and enabling precise control during the HIER IHC staining process using the heating chamber.13.The staining method of claim 12, further comprising:Adjusting the air pressure in real-time to prevent the formation of bubbles, ensuring effective antigen retrieval and staining using a pressure control system.14.The staining method of claim 13, wherein the heating chamber comprises a size and liquid volume that eliminates formation of bubbles and allows for dynamic control of the HIER IHC staining process.15.The staining method of claim 14, further comprising:Protecting the slide from uneven heating and other irregularities that lead to formation of bubbles, preventing staining issues, and breaking off of cell clusters using the capillary gap cover.

Images