Engineered tyrosinase and uses thereof

Abstract

Provided are the engineered tyrosinases, the polynucleotides encoding the engineered tyrosinases, and the uses of the engineered tyrosinases. The engineered tyrosinases can have at least one amino acid substitution relative to the wild type tyrosinase, and can modify tyrosine residues, for example, tyrosine residues in a mussel adhesive protein, to L-DOPA (3,4-dihydroxy-L-phenylalanine) more efficiently than the wild type tyrosinase.

Description

ENGINEERED TYROSINASE AND USES THEREOFCROSS-REFERENCE

[0001] This application claims the benefit of International Patent Application No. PCT / CN2024 / 077141, filed February 09, 2024, which is incorporated by reference herein in its entirety.BACKGROUND

[0002] Tyrosinase is a type of copper-containing enzyme that can be found in many species in nature, including bacteria. Tyrosinase plays a role in many activities, such as melanin formation, formation of L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) , and wound healing. L-DOPA is a precursor to dopamine, norepinephrine and epinephrine in human and can be useful as therapeutic agents. L-DOPA residues can be found in marine adhesive proteins (e.g., mussel adhesive proteins) after posttranslational modification of tyrosine residues in the peptide sequence by tyrosinase, which can contribute to some unique properties of these proteins, such as adhesion and cohesion.

[0003] There remains a need for generating L-DOPA or proteins with L-DOPA residues with higher efficiency using engineered tyrosinase for use in different diverse applications, such as therapeutic, cosmetic, or industrial applications.SUMMARY

[0004] Disclosed herein, in some aspects, is an engineered tyrosinase comprising an MelC2 protein, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of a wild type tyrosinase comprising a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0005] Disclosed herein, in some aspects, is an engineered tyrosinase comprising an MelC1 protein, wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of a wild type tyrosinase having a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0006] Disclosed herein, in some aspects, is an engineered tyrosinase comprising at least one amino acid substitution relative to a wild type Streptomyces tyrosinase, and wherein the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of the wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the wild type Streptomyces tyrosinase is a Streptomyces antibioticus tyrosinase having a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, where in the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, where in the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0007] Disclosed herein, in some aspects, is an engineered tyrosinase comprising an MelC2 protein, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, provided that the at least one amino acid substitution (a) is not an E14G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96; (b) is not an A33S amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96; (c) is not a T104A amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96; (d) is not a N130T amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96; (e) is not a V193L amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96; (f) is not a N191G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96; (g) is not a K252G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96; and (h) is not A33S and T94A amino acid substitutions relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, where in the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0008] Disclosed herein, in some aspects, is an engineered tyrosinase comprising an MelC1 protein, wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, provided that the at least one amino acid substitution (a) is not a P2A amino acid substitution amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97; (b) is not an H73D amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97; and (c) is not a W111T amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0009] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of a wild type tyrosinase having a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type tyrosinase having a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 85%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0010] In any one of the foregoing or related aspects, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, T52, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, V195, T203, G204, V205, K221, E225, R228, R229, D246, E249, D256, D264, R267, and D272. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution at position N191. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: N191F, N191G, N191C, N191A, N191V, and K252A. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T52, V195, and V205. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: T52C, V195F, V195A, V195N, and V205F. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with phenylalanine. In some cases, the amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with phenylalanine comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T203, G204, V205. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site of a wild type MelC2 of a wild type tyrosinase, wherein the wild type MelC2 comprises the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the copper catalytic site is a CuA site. In some cases, the copper catalytic site is a CuB site. In some cases, the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T203, G204, and V205 relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: T203F, G204F, and V205F. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-3. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 is V205F. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth SEQ ID NO: 3. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, K221, E225, R228, R229, D246, E249, K252, D256, D264, R267, and D272. In some cases, the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, R192A, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid or a negatively charged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid or a negatively charged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, K15, R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, K221, R228, R229, K252, and R267. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, K15A, R16A, R17A, R27A, R30A, R65A, R72A, R92A, R95A, R109A, R111A, R132A, R136A, R153A, R185A, R192A, K221A, R228A, R229A, K252A, and R267A. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 46-64. In some cases, the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is lysine. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, K15, K221, and K252. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, K15A, K221A, and K252A. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 46, 47, 60 or 63. In some cases, the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is arginine. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, R228, R229, and R267. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: R16A, R17A, R27A, R30A, R65A, R72A, R92A, R95A, R109A, R111A, R132A, R136A, R153A, R185A, R192A, R228A, R229A, and R267A. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with a negatively charged amino acid. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid or a positively charged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid or a positively charged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: E13, E24, E50, D78, D87, D91, D102, D112, D117, E149, E155, D157, D175, E225, D246, E249, D256, D264, and D272. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: E13A, E24A, E50A, D78A, D87A, D91A, D102A, D112A, D117A, E149A, E155A, D157A, D175A, E225A, D246A, E249A, D256A, D264A, and D272A. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32 or 70-87. In some cases, the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is aspartic acid. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D78, D87, D91, D102, D112, D117, D157, D175, D246, D256, D264, and D272. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D78A, D87A, D91A, D102A, D112A, D117A, D157A, D175A, D246A, D256A, D264A, and D272A. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 73-78, 80, 81, 83, or 85-87. In some cases, the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is glutamic acid. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: E13, E24, E50, E149, E155, E225, and E249. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: E13A, E24A, E50A, E149A, E155A, E225A, and E249A. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32, 70-72, 79, 82, or 84. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with a positively charged amino acid. In some cases, the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine, and isoleucine. In some cases, the uncharged amino acid is alanine. In some cases, the positively charged amino acid is lysine or arginine. In some cases, the negatively charged amino acid is aspartic acid or glutamic acid. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 is K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises two, three, four, or more amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0011] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0012] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, H102, R105, D108, Y118, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: E100, H102, Y118, E119, D122, R125, D133, and R139. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: E100A, H102A, Y118F, E119A, D122A, R125A, D133A, and R139A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with phenylalanine. In some cases, the amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with phenylalanine comprises an amino acid substitution at position Y118. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site of a wild type MelC1 protein of a wild type tyrosinase, wherein the wild type MelC1 protein comprises the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the copper catalytic site is a CuA site. In some cases, the copper catalytic site is a CuB site. In some cases, the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises an amino acid substitution at position Y118 of SEQ ID NO: 97. In some cases, the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: Y118F, Y118A, and Y118G. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17-19. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, R105, D108, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139. In some cases, the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, R105A, D108A, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid or a negatively charged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid or a negatively charged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K58, R60, R61, R65, R105, R125, R129, and R139. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K58A, R60A, R61A, R65A, R105A, R125A, R129A, and R139A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 65-69. In some cases, the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is lysine. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises an amino acid substitution at position K58. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution K58A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in SEQ ID NO: 65. In some cases, the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is arginine. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: R60, R61, R65, R105, R125, R129, and R139. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: R60A, R61A, R65A, R105A, R125A, R129A, and R139A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 66-69. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with a negatively charged amino acid. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid or a positively charged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid or a positively charged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, D69, D81, D97, E100, D108, E119, D122, D133, and E134. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, D69A, D81A, D97A, E100A, D108A, E119A, D122A, D133A, and E134A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 8, 11, 12, 36-43, or 88-95. In some cases, the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is aspartic acid. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, D54, D69, D81, D97, D108, D122, and D133. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, D54A, D69A, D81A, D97A, D108A, D122A, and D133A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 8, 11, 36-39, 41-43, 88-91, or 93-95. In some cases, the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is glutamic acid. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of:E39, E55, E100, E119, and E134. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: E39A, E55A, E100A, E119A, and E134A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with a positively charged amino acid. In some cases, the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine and isoleucine. In some cases, the uncharged amino acid is alanine. In some cases, the positively charged amino acid is lysine or arginine. In some cases, the negatively charged amino acid is aspartic acid or glutamic acid. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 is D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions selected from the group consisting of: E119 and D108, E119 and D122, and E119 and E134. In some cases, the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are selected from the group consisting of: E119 and D108A, E119A and D122A, and E119A and E134A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 37, 38, or 40. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions selected from the group consisting of: E119, D122, and D108, E119, E134, and D108, and E119, E134, and D122. In some cases, the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are selected from the group consisting of: E119A, D122A, and D108A, E119A, E134A, and D108A, and E119A, E134A, and D122A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 39 or 41-42. In some cases, the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises four or more amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the four or more amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions E119, D122, D108, and E134. In some cases, the four or more amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are E119A, D122A, D108A, and E134A. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NO: 43.

[0013] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0014] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, T52, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, V195, T203, G204, V205, K221, E225, R228, R229, D246, E249, D256, D264, R267, and D272; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, H102, R105, D108, Y118, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139.

[0015] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, N191G, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.

[0016] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95.

[0017] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, K221, E225, R228, R229, D246, E249, K252, D256, D264, R267, and D272; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, R105, D108, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139.

[0018] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, R192A, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, R105A, D108A, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.

[0019] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95.

[0020] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: R16A, R17A, R27A, R30A, R65A, R72A, R92A, R95A, R109A, R111A, R132A, R136A, R153A, R185A, R192A, R228A, R229A, and R267A; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: E39A, E55A, E100A, E119A, and E134A.

[0021] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92.

[0022] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: T52C, V195F, V195A, V195N, and V205F, and R192A; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: E100A, H102A, Y118F, E119A, D122A, R125A, D133A, and R139A.

[0023] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17.

[0024] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with an amino acid substitution R192A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with an amino acid substitution E119A relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0025] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NO: 34; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NO: 7.

[0026] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is at position N191; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, H102, R105, D108, Y118, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139.

[0027] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: N191F, N191G, N191C, N191A, N191V, and K252A; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.

[0028] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4-5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95.

[0029] In any one of the foregoing or related aspects, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid deletion relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least one amino acid deletion relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the at least one amino acid deletion relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 is at one or more positions selected from M1-D47, L68-W99, or L143-G146. In some cases, the at least one amino acid deletion relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 is two, three four, five, six, seven, eight, nine, ten, or more amino acid deletions at positions selected from M1-D47, 68L-99W, or 143L-146G.

[0030] Disclosed herein, in some aspects, is a method of modifying a tyrosine residue in a protein substrate to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue, the method comprising: contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase described herein.

[0031] Disclosed herein, in some aspects, is a method of modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue in a protein substrate to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) residue, the method comprising: contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase described herein.

[0032] Disclosed herein, in some aspects, is a method of modifying a tyrosine to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) , the method comprising: contacting the tyrosine with the engineered tyrosinase described herein.

[0033] Disclosed herein, in some aspects, is a method of modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) , the method comprising: contacting the L-DOPA with the engineered tyrosinase described herein.

[0034] Disclosed herein, in some aspects, is a method of modifying a monophenol to an o-diphenol, the method comprising contacting the monophenol with the engineered tyrosinase described herein.

[0035] Disclosed herein, in some aspects, is a method of modifying an o-diphenol to an o-quinone, the method comprising contacting the monophenol with the engineered tyrosinase described herein.

[0036] Disclosed herein, in some aspects, is use of the engineered tyrosinase described herein for modifying a tyrosine residue in a protein substrate to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue.

[0037] Disclosed herein, in some aspects, is use of the engineered tyrosinase described herein for modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue in a protein substrate to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) residue.

[0038] Disclosed herein, in some aspects, is use of the engineered tyrosinase described herein for modifying a tyrosine to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) .

[0039] Disclosed herein, in some aspects, is use of the engineered tyrosinase described herein for modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) .

[0040] Disclosed herein, in some aspects, is use of the engineered tyrosinase described herein for modifying a monophenol to an o-diphenol.

[0041] Disclosed herein, in some aspects, is use of the engineered tyrosinase described herein for modifying an o-diphenol to an o-quinone.

[0042] In any one of the foregoing or related aspects, the protein substrate is a mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues.

[0043] Disclosed herein, in some aspects, is a method of making a mussel adhesive protein having one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues, the method comprising: contacting (a) a mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues with (b) the engineered tyrosinase described herein.

[0044] Disclosed herein, in some aspects, is a use of the engineered tyrosinase described herein for making a mussel adhesive protein having one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues from a mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues.

[0045] In any one of the foregoing or related aspects, the mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 116-133.

[0046] Disclosed herein, in some aspects, is a polypeptide comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95.

[0047] Disclosed herein, in some aspects, is a polynucleotide encoding the polypeptide described herein.

[0048] Disclosed herein, in some aspects, is a vector comprising the polynucleotide described herein.

[0049] Disclosed herein, in some aspects, is a host cell comprising the vector described herein or the polynucleotide described herein.

[0050] Disclosed herein, in some aspects, is composition comprising the engineered tyrosinase described herein, the polypeptide described herein, or the polynucleotide described herein.

[0051] Disclosed herein, in some aspects, is kit comprising a container comprising the engineered tyrosinase described herein, the polypeptide described herein, or the polynucleotide described herein.

[0052] Additional aspects and advantages of the present disclosure will become readily apparent to those skilled in this art from the following detailed description, wherein only illustrative instances of the present disclosure are shown and described. As will be realized, the present disclosure is capable of other and different instances, and its several details are capable of modifications in various obvious respects, all without departing from the disclosure. Accordingly, the drawings and description are to be regarded as illustrative in nature, and not as restrictive. INCORPORATION BY REFERENCE

[0053] All publications, patents, and patent applications mentioned in this specification are herein incorporated by reference to the same extent as if each individual publication, patent, or patent application was specifically and individually indicated to be incorporated by reference.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0054] The novel features of the disclosure are set forth with particularity in the appended claims. A better understanding of the features and advantages of the present disclosure will be obtained by reference to the following detailed description that sets forth illustrative embodiments, in which the principles of the disclosure are utilized, and the accompanying drawings ( “FIG. ” or “FIGs. ” herein) , of which:

[0055] FIGs. 1A-1E show the structure of wild type Streptomyces antibioticus (S. antibioticus) tyrosinase and various amino acid residues that can be modified to make engineered S. antibioticus tyrosinase according to some embodiments of the present disclosure. FIG. 1A shows the wild type S. antibioticus tyrosinase structure, including both MelC1 and MelC2 proteins and their interaction with copper ions (Cu2+) , as indicated by the round circles in the center, at their catalytic sites. FIG. 1B depicts the proposed Cu2+ enter pathway and the histidine residues involved. FIG. 1C depicts the amino acid residues located on a loop near Cu2+ catalytic site of MelC2, which can play a role in Cu2+ influx. FIG. 1D depicts the substrate enter pathway and the amino acid residues involved. FIG. 1E depicts the amino acid residues that are positively charged and negatively charged.

[0056] FIG. 2 shows the results of SDS-PAGE analysis of the recombinant mussel foot protein I of Mytilus edulis (Mfp-1 (Blue mussel) ) , lane M indicates protein markers of molecular mass.

[0057] FIGs. 3A-3B show the results of SDS-PAGE analysis of the recombinant S. antibioticus tyrosinases, including both wild type and engineered S. antibioticus tyrosinases; lane M indicates protein markers of molecular mass. The following abbreviations were used in the Drawings, Description of the Drawings, and Example sections of the present disclosure: “WT” stands for wild type S. antibioticus tyrosinases; “E-” followed by a number stands for an engineered S. antibioticus tyrosinase numbered according to the number in Table 1, the first column to the left, for example, “E-3” stands for Engineered S. antibioticus tyrosinase #3 in Table 1. FIG. 3A shows SDS-PAGE analysis of the wild type S. antibioticus tyrosinase and the engineered S. antibioticus tyrosinases numbered 3-9, 11, 30, and 31. FIG. 3B SDS-PAGE analysis of the wild type S. antibioticus tyrosinase and the engineered S. antibioticus tyrosinases numbered 13, 15-17, 20, and 26-31.

[0058] FIG. 4 shows the comparison of the enzyme activity of the wild type S. antibioticus tyrosinase and the engineered S. antibioticus tyrosinases numbered 3-9, 11, 13, 15-17, 20, and 26-31, as indicated by the percentage of tyrosine residue on the substrate (Mfp-1 (Blue mussel) ) that is modified to L-DOPA ( “DOPA %modification” ) by the corresponding wild type S. antibioticus tyrosinase and the engineered S. antibioticus tyrosinases.DETAILED DESCRIPTIONOverview

[0059] The present disclosure provides, in some aspects, engineered tyrosinases and uses thereof. An engineered tyrosinase can have at least one amino acid substitution or deletion relative to a wild type tyrosinase found in nature. A tyrosinase can use oxygen to catalyze two enzymatic reactions. The first reaction is ortho-hydroxylation of monophenols to ortho-diphenols (monophenolase or cresolase activity) , which includes converting a tyrosine to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) . The second reaction is oxidation of diphenols to ortho-quinones (diphenolase or catecholase activity) . A wild type tyrosinase can comprise a bacterial tyrosinase, such as Streptomyces tyrosinases. A wild type tyrosinase can comprise a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase. A wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase can comprise a wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96. A wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase can further comprises a wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97) . In Streptomyces antibioticus, melC2 and melC1 gene can play a role in encoding a functional tyrosinase. The melC2 gene in a polycistronic operon (MelC) encodes an MelC2 protein, which is produced by an melC1 gene located upstream. The melC1 gene encodes an MelC1 protein, which can contribute to transportation of MelC2 protein and the copper-transfer process that activate MelC2 protein. As shown in the Example 3, expressing melC2 gene alone without melC1 gene (engineered tyrosinase number 14 in Table 1) does not have successful protein expression. Without wishing to be bound by any theory, Streptomyces antibioticus tyrosinase or engineered tyrosinase based on Streptomyces antibioticus tyrosinase can comprise MelC2 protein and MelC1 protein to perform the catalytic function. The structure of wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase including both MelC1 protein and MelC2 protein is shown in FIG. 1A. The wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 comprises an active site with six histidine residues that coordinate two copper ions located at CuA and CuB sites, as shown in FIG. 1B. Without wishing to be bound by any theory, two sites that are labeled Cu1 site and Cu2 site on the MelC1 protein are proposed to be a part of the Cu2+ enter pathway, as shown in FIG. 1B, and certain histidine residues of MelC1 and MelC2 proteins can play a role in transferring Cu2+ to the catalytic sites of MelC2 protein. The wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 comprises H87 and H88 that can help capture Cu2+ at Cu1 site, an H102 that can help transfer Cu2+ from Cu1 site to Cu2 site, and an H117 that can help transfer Cu2+ from Cu2 site to CuA site. The wild type MelC2 protein comprises an H54 (numbered according to SEQ ID NO: 96) that can help transfer Cu2+ from Cu2 site to CuA site, and an H63 (numbered according to SEQ ID NO: 96) that can help transfer Cu2+ from CuA site to CuB site. The H38 and H63 (numbered according to SEQ ID NO: 96) of the wild type MelC2 protein can bind to Cu2+ at CuA, and the H190 and H216 (numbered according to SEQ ID NO: 96) of wild type MelC2 protein can bind to Cu2+ at CuB site. Characterization of Streptomyces antibioticus tyrosinase and its uses or functions are described in K Streffer et al., Analytica Chimica Acta 427 (2001) 201–210; E Orenes- et al., Enzyme and Microbial Technology 39 (2006) 158–163; and S Mario et al., Archives of Biochemistry and Biophysics 505 (2011) 67–74; each of which is hereby incorporated herein by reference in its entirety.

[0060] The engineered tyrosinases described herein can be beneficial for use in modifying tyrosine residues of certain protein substrates, for example, mussel adhesive proteins. Mussel adhesive proteins (MAP) is an adhesive agent generated by the sea mussel to attach the animal to various underwater surfaces. Mussels can attach to the reefs on the coast or to the bottom of the ship and withstand wave impacts in the offshore. Mussels can also attach extremely strongly to the substrate of any material, such as metal, wood, or glass. Such abilities derive from the MAPs that are formed and stored in the foot of the mussels. The mussels release the MAPs through the foot silk to a solid surface such as rock to form the water-resistant adhesion. Thus, MAPs have various therapeutic, tissue engineering, cosmetics, and / or industrial applications. However, generation of MAPs with desired characteristics has significant challenge, whether the protein is generated by extraction from natural organisms or by recombinant protein expression. Using the methods and engineered tyrosinases as described herein, MAPs can be generated with beneficial properties (such as higher L-DOPA content) . Thus, the present disclosure provides a solution for the generation of MAPs with a higher L-DOPA content at a higher efficiency with a relatively low cost compared to existing methods for various therapeutic, cosmetic, or industrial applications.

[0061] Different approaches, such as those described in Example 2, can be employed to design and generate engineered tyrosinases to improve the catalytic activity. The engineered tyrosinases can have an improved catalytic activity in modifying tyrosine or tyrosine residues (e.g., tyrosine residues of a protein substrate such as mussel adhesive protein) to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) at a higher rate than wild type tyrosinase (e.g., wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase) and thus find use in methods of generating L-DOPA or methods of making proteins having L-DOPA. In some cases, the engineered tyrosinases can have at least one amino acid substitution of a charged amino acid residue in the wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase with an uncharged amino acid (such as an alanine) . In some cases, the engineered tyrosinases can have at least one amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase with a phenylalanine. Such engineered tyrosinases can be useful in many applications, including in pharmaceutical, biomedical, cosmetics, food processing, and environmental fields. Engineered Tyrosinases

[0062] Provided herein, in some aspects, are engineered tyrosinases. The engineered tyrosinase can have at least one amino acid substitution or deletion relative to a wild type tyrosinase. The engineered tyrosinase can have at least one amino acid substitution relative to a wild type tyrosinase. The engineered tyrosinase can have at least one amino acid deletion relative to a wild type tyrosinase. The wild type tyrosinase can be a wild type Streptomyces tyrosinase. The wild type tyrosinase can be a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase. The wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase can comprise a wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96. The wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase can comprise a wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97. The wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase can comprise a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97. The engineered tyrosinase can have at least one amino acid substitution or deletion relative to a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinases described herein lack a starting methionine in the amino acid sequences provided in Table 1.

[0063] The engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least one amino acid. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein having at least one amino acid substitution relative to sequence of SEQ ID NO: 96. The engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least one amino acid. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein having at least one amino acid substitution relative to sequence of SEQ ID NO: 97.

[0064] An amino acid substitution can comprise substituting an amino acid residue in the wild type MelC1 protein or MelC2 protein with a different amino acid, for example a different canonical amino acid. “Canonical amino acids” refer to those 22 proteinogenic amino acids (20 in the standard genetic code and an additional 2 [selenocysteine and pyrrolysine] that can be incorporated by special translation mechanisms) . Table 2 below lists the 20 proteinogenic amino acids in the standard genetic code with each of their three letter abbreviations, one letter abbreviations, structures, and corresponding codons. An amino acid substitution can comprise substituting an amino acid residue in the wild type MelC1 protein or MelC2 protein with a different naturally-occurring amino acid. An amino acid substitution can comprise substituting an amino acid residue in the wild type MelC1 protein or MelC2 protein with a different proteinogenic amino acid. An amino acid substitution can comprise substituting a charged amino acid residue in the wild type MelC1 protein or MelC2 protein with an uncharged amino acid. An amino acid substitution can comprise substituting a positively charged amino acid residue in the wild type MelC1 protein or MelC2 protein with an uncharged amino acid. An amino acid substitution can comprise substituting a positively charged amino acid residue in the wild type MelC1 protein or MelC2 protein with a negatively charged amino acid. An amino acid substitution can comprise substituting a negatively charged amino acid residue in the wild type MelC1 protein or MelC2 protein with a positively charged amino acid. An amino acid substitution can comprise substituting a negatively charged amino acid residue in the wild type MelC1 protein or MelC2 protein with an uncharged amino acid. An amino acid substitution can comprise substituting an amino acid residue in the wild type MelC1 protein or MelC2 protein with a Phenylalanine. Table 2: A list of 20 proteinogenic amino acids in the standard genetic code MelC2 Protein

[0065] The engineered tyrosinases described herein can comprise an MelC2 protein that differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 1 amino acid. The engineered tyrosinases described herein can comprise an MelC2 protein that differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 50 amino acids. In some cases, the engineered tyrosinases further comprises an MelC1 protein that is a wild type MelC1 protein having 100%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0066] The engineered tyrosinases can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. The engineered tyrosinases can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the at least one amino acid substitution is not an E14G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the at least one amino acid substitution is not an A33S amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the at least one amino acid substitution is not a T104A amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the at least one amino acid substitution is not a N130T amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the at least one amino acid substitution is not a V193L amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the at least one amino acid substitution is not a N191G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the at least one amino acid substitution is not a K252G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the at least one amino acid substitution is not A33S and T94A amino acid substitutions relative to SEQ ID NO: 96.

[0067] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that does not comprise an E14G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that does not comprise an A33S amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that does not comprise a T104A amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that does not comprise a N130T amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that does not comprise a V193L amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that does not comprise a N191G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that does not comprise a K252G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that does not comprise A33S and T94A amino acid substitutions relative to SEQ ID NO: 96.

[0068] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an E14G amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an A33S amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an T104A amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an N130T amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an N191G amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an K252G amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an A33S and a T94A amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 96.

[0069] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 81%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 82%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 83%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 84%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 85%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 86%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 87%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 88%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 89%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 91%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 92%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 93%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 94%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 95%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 96%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 97%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 98%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 99%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0070] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at most 99.7%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 85%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 91%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 92%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 93%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 94%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 95%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 96%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 97%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 98%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 99%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at most 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0071] In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 1 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 1 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 2 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 3 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 4 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 5 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 6 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 7 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 8 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 9 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 10 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 11 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 12 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 13 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 14 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 15 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 16 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 17 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 18 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 19 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 20 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 25 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 30 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 35 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 40 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at least 45 amino acids.

[0072] In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by 1 amino acid. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 1 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 2 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 3 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 4 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 5 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 6 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 7 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 8 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 9 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 10 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 11 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 12 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 13 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 14 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 15 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 16 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 17 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 18 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 19 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 20 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 25 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 30 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 35 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 40 amino acids. In some cases, the MelC2 protein differs from the wild type MelC2 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 by at most 45 amino acids.

[0073] In some cases, the MelC2 protein comprises at least 1 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 2 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 3 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 4 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 5 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 6 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 7 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 8 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 9 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 10 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 11 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 12 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 13 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 14 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 15 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 16 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 17 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 18 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 19 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 20 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 25 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 30 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 35 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 40 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 45 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 50 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at least 55 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 is K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A. In some cases, the at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, at least 50, or at least 55 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprise amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, T52, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, V195, T203, G204, V205, K221, E225, R228, R229, D246, E249, D256, D264, R267, and D272. In some cases, the at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, at least 50, or at least 55 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprise amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A. In some cases, the at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, at least 50, or at least 55 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprise amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, T52, H63, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, N191, R192, V195, T203, G204, V205, K221, K252, E225, R228, R229, D246, E249, D256, D264, R267, and D272. In some cases, the at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, at least 50, or at least 55 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 are amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, H63C, H63F, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191G, N191V, R192A, V195F, V195A, V195N, V195C, V195G, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A. In some cases, the at least 1 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: N191F, N191G, N191C, N191A, N191V, and K252A.

[0074] In some cases, the at least 1, at least 2, or at least 3 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T52, V195, and V205. In some cases, the at least 1, at least 2, or at least 3 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: T52C, V195F, V195A, V195N, and V205F.

[0075] In some cases, the MelC2 protein comprises at most 57 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 2 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 3 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 4 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 5 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 6 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 7 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 8 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 9 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 10 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 11 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 12 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 13 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 14 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 15 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 16 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 17 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 18 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 19 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 20 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 25 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 30 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 35 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 40 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 45 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 50 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises at most 55 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, at most 11, at most 12, at most 13, at most 14, at most 15, at most 16, at most 17, at most 18, at most 19, at most 20, at most 25, at most 30, at most 35, at most 40, at most 45, at most 50, at most 55, or at most 57 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprise amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, T52, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, V195, T203, G204, V205, K221, E225, R228, R229, D246, E249, D256, D264, R267, and D272. In some cases, the at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, at most 11, at most 12, at most 13, at most 14, at most 15, at most 16, at most 17, at most 18, at most 19, at most 20, at most 25, at most 30, at most 35, at most 40, at most 45, at most 50, at most 55, or at most 57 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprise amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A. In some cases, the at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, at most 11, at most 12, at most 13, at most 14, at most 15, at most 16, at most 17, at most 18, at most 19, at most 20, at most 25, at most 30, at most 35, at most 40, at most 45, at most 50, at most 55, or at most 57 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprise amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, T52, H63, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, N191, R192, V195, T203, G204, V205, K221, K252, E225, R228, R229, D246, E249, D256, D264, R267, and D272. In some cases, the at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, at most 11, at most 12, at most 13, at most 14, at most 15, at most 16, at most 17, at most 18, at most 19, at most 20, at most 25, at most 30, at most 35, at most 40, at most 45, at most 50, at most 55, or at most 57 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprise amino acid substitution selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, H63C, H63F, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191G, N191V, R192A, V195F, V195A, V195N, V195C, V195G, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A.

[0076] In some cases, the at most 2 or at most 3 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T52, V195, and V205. In some cases, the at most 2 or at most 3 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: T52C, V195F, V195A, V195N, and V205F.

[0077] In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position K5. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position E13. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position K15. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R16. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R17. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position E24. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R27. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R30. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position E50. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position T52. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position H63. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R65. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R72. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D78. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D87. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D91. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R92. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R95. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D102. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R109. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R111. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D112. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D117. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R132. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R136. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position E149. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R153. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position E155. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D157. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D175. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R185. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position N191. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R192. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position V195. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position T203. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position G204. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position V205. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position K221. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position K252. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position E225. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R228. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R229. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D246. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position E249. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D256. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D264. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R267. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position D272.

[0078] In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution K5A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution E13A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution K15A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R16A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R17A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution E24A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R27A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R30A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution E50A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution T52C relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution H63C relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution H63F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R65A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R72A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D78A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D87A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D91A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R92A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R95A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D102A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R109A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R111A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D112A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D117A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R132A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R136A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution E149A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R153A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution E155A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D157A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D175A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R185A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution N191F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution N191C relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution N191A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution N191G relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution N191V relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R192A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution V195F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution V195A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution V195N relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution V195C relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution V195G relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution T203F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution G204F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution V205F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution K221A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution E225A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R228A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R229A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D246A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution E249A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution K252A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D256A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D264A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution R267A relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution D272A.

[0079] In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution of at least one amino acid residue of the sequence of SEQ ID NO: 96 with phenylalanine. In some cases, the amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with phenylalanine comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T203, G204, V205. In some cases, the amino acid substitution is at position T203. In some cases, the amino acid substitution is at position G204. In some cases, the amino acid substitution of is at position G204.

[0080] In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site of a wild type MelC2 protein of a wild type tyrosinase, wherein the wild type MelC2 protein comprises the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the copper catalytic site is a CuA site of the MelC2 protein. In some cases, the copper catalytic site is a CuB site of the MelC2 protein. In some cases, the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T203, G204, and V205, relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the amino acid substitution is at position T203 relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the amino acid substitution is at position G204 relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the amino acid substitution is at position V205 relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the amino acid substitution of T203, G204, and V205 relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 is substituted with a proteogenic amino acid described in Table 2. In some cases, the amino acid substitution of T203, G204, and V205 relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 is substituted with a bulkier amino acid, for example, phenylalanine. In some cases, the amino acid substitution is selected from the group consisting of: T203F, G204F, and V205F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the amino acid substitution is T203F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the amino acid substitution is G204F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the amino acid substitution is V205F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0081] In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, K221, E225, R228, R229, D246, E249, K252, D256, D264, R267, and D272. In some cases, the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine, and isoleucine. In some cases, the uncharged amino acid is alanine. In some cases, the amino acid substitutions of at least one charged amino acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, R192A, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A.

[0082] In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid. In some cases, the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is at one or more positions selected from the group consisting of: K5, K15, R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, K221, R228, R229, K252, and R267. In some cases, the at least one positively charged amino acid is lysine at positions selected from the group consisting of: K5, K15, K221, and K252. In some cases, the at least one positively charged amino acid is arginine at positions selected from the group consisting of: R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, R228, R229, and R267. In some cases, the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine, and isoleucine. In some cases, the uncharged amino acid is alanine. In some cases, the amino acid substitutions of at least one positively charged amino acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of:K5A, K15A, R16A, R17A, R27A, R30A, R65A, R72A, R92A, R95A, R109A, R111A, R132A, R136A, R153A, R185A, R192A, K221A, R228A, R229A, K252A, and R267A. In some cases, the amino acid substitutions of at least one lysine with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: K5A, K15A, K221A, and K252A. In some cases, the amino acid substitutions of at least one arginine with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: R16A, R17A, R27A, R30A, R65A, R72A, R92A, R95A, R109A, R111A, R132A, R136A, R153A, R185A, R192A, R228A, R229A, and R267A.

[0083] In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with a negatively charged amino acid. In some cases, the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is at one or more positions selected from the group consisting of: K5, K15, R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, K221, R228, R229, K252, and R267. In some cases, the at least one positively charged amino acid is lysine at positions selected from the group consisting of: K5, K15, K221, and K252. In some cases, the at least one positively charged amino acid is arginine at positions selected from the group consisting of: R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, R228, R229, and R267. In some cases, the negatively charged amino acid is aspartic acid. In some cases, the negatively charged amino acid is glutamic acid.

[0084] In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid. In some cases, the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is at one or more positions selected from the group consisting of: E13, E24, E50, D78, D87, D91, D102, D112, D117, E149, E155, D157, D175, E225, D246, E249, D256, D264, and D272. In some cases, the at least one negatively charged amino acid is aspartic acid at positions selected from the group consisting of: D78, D87, D91, D102, D112, D117, D157, D175, D246, D256, D264, and D272. In some cases, the at least one negatively charged amino acid is glutamic acid at positions selected from the group consisting of: E13, E24, E50, E149, E155, E225, and E249. In some cases, the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine, and isoleucine. In some cases, the uncharged amino acid is alanine. In some cases, the amino acid substitutions of at least one negatively charged amino acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: E13A, E24A, E50A, D78A, D87A, D91A, D102A, D112A, D117A, E149A, E155A, D157A, D175A, E225A, D246A, E249A, D256A, D264A, and D272A. In some cases, the amino acid substitutions of at least one aspartic acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: D78A, D87A, D91A, D102A, D112A, D117A, D157A, D175A, D246A, D256A, D264A, and D272A. In some cases, the amino acid substitutions of at least one glutamic acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: E13A, E24A, E50A, E149A, E155A, E225A, and E249A.

[0085] In some cases, the MelC2 protein comprises an amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with a positively charged amino acid. In some cases, the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is at one or more positions selected from the group consisting of: E13, E24, E50, D78, D87, D91, D102, D112, D117, E149, E155, D157, D175, E225, D246, E249, D256, D264, and D272. In some cases, the at least one negatively charged amino acid is aspartic acid at positions selected from the group consisting of: D78, D87, D91, D102, D112, D117, D157, D175, D246, D256, D264, and D272. In some cases, the at least one negatively charged amino acid is glutamic acid at positions selected from the group consisting of:E13, E24, E50, E149, E155, E225, and E249. In some cases, the positively charged amino acid is lysine. In some cases, the positively charged amino acid is arginine. MelC1 Protein

[0086] The engineered tyrosinases described herein can comprise an MelC1 protein that differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 1 amino acid. The engineered tyrosinases described herein can comprise an MelC1 protein that differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by most 80 amino acids. In some cases, the engineered tyrosinase further comprises an MelC2 protein is a wild type MelC2 protein having 100%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96.

[0087] The engineered tyrosinases can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. The engineered tyrosinases can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the at least one amino acid substitution is not a P2A amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97. In some cases, the at least one amino acid substitution is not an H73D amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97. In some cases, the at least one amino acid substitution is not a W111T amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97.

[0088] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein that does not comprise a P2A amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein that does not comprise an H73D amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein that does not comprise a W111T amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97.

[0089] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising a P2A amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an H73D amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising a W111T amino acid substitution and an additional amino acid substitution or deletion relative to SEQ ID NO: 97.

[0090] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 81%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 82%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 83%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 84%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 85%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 86%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 87%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 88%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 89%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 91%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 92%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 93%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 94%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 95%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 96%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 97%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 98%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 99%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0091] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at most 99.7%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 85%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 91%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 92%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 93%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 94%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 95%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 96%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 97%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 98%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 99%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at most 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0092] In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 1 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 1 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 2 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 3 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 4 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 5 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 6 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 7 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 8 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 9 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 10 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 11 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 12 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 13 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 14 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 15 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 16 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 17 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 18 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 19 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 20 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 25 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 30 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 35 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 40 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 45 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 50 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 55 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 60 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 65 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 70 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 75 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at least 80 amino acids.

[0093] In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by 1 amino acid. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 2 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 3 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 4 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 5 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 6 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 7 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 8 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 9 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 10 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 11 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 12 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 13 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 14 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 15 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 16 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 17 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 18 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 19 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 20 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 25 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 30 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 35 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 40 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 45 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 50 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 55 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 60 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 65 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 70 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 75 amino acids. In some cases, the MelC1 protein differs from the wild type MelC1 protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 by at most 80 amino acids.

[0094] In some cases, the MelC1 protein comprises at least 1 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 2 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 3 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 4 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 5 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 6 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 7 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 8 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 9 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 10 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 11 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 12 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 13 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 14 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 15 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 16 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 17 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 18 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 19 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 20 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 25 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at least 29 amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 is selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A. In some cases, the at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 25, or at least 29 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprise amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, H102, R105, D108, Y118, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139. In some cases, the at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 25, or at least 29 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprise amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.

[0095] In some cases, the at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, or at least 8 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprise amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: E100, H102, Y118, E119, D122, R125, D133, and R139. In some cases, the at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, or at least 8 amino acid substitutions or the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprise amino acid substitutions selected from the group consisting of: E100A, H102A, Y118F, E119A, D122A, R125A, D133A, and R139A.

[0096] In some cases, the MelC1 protein comprises two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions E119 and D108. In some cases, the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions E119 and D122. In some cases, the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions E119 and E134. In some cases, the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are E119 and D108A. In some cases, the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are E119A and D122A. In some cases, the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are E119A and E134A.

[0097] In some cases, the MelC1 protein comprises three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions E119, D122, and D108. In some cases, the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions E119, E134, and D108. In some cases, the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions E119, E134, and D122. In some cases, the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are E119A, E134A, and D108A. In some cases, the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are E119A, D122A, and D108A. In some cases, the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are E119A, E134A, and D122A.

[0098] In some cases, the MelC1 protein comprises four amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the four amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions E119, D122, D108, and E134. In some cases, the four amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are E119A, D122A, D108A, and E134A.

[0099] In some cases, the MelC1 protein comprises at most 2 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 3 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 4 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 5 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 6 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 7 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 8 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 9 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 10 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 11 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 12 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 13 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 14 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 15 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 16 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 17 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 18 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 19 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 20 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 25 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 29 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, at most 11, at most 12, at most 13, at most 14, at most 15, at most 16, at most 17, at most 18, at most 19, at most 20, at most 25, or at most 29 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprise amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, H102, R105, D108, Y118, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139. In some cases, the at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, at most 11, at most 12, at most 13, at most 14, at most 15, at most 16, at most 17, at most 18, at most 19, at most 20, at most 25, or at most 29 amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprise amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.

[0100] In some cases, the MelC1 protein comprises at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20, at least 30, at least 40, at least 50, at least 60, at least 70, or at least 80 amino acid deletions, relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the MelC1 protein comprises at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, at most 20, at most 30, at most 40, at most 50, at most 60, at most 70, or at most 80 amino acid deletions, relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the amino acid deletions comprise amino acid deletions at one or more positions selected from M1-D47, L68-W99, or L143-G146 relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the amino acid deletions comprise at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20, at least 30, or at least 40 at positions selected from M1-D47 relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the amino acid deletions comprise at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20, or at least 30 at positions selected from L68-W99 relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the amino acid deletions comprise at least 1, at least 2, at least 3, or at least 4 amino acid deletions at positions selected from L143-G146 relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0101] In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid substitution of at least one amino acid residue of the sequence of SEQ ID NO: 97 with phenylalanine. In some cases, the amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with phenylalanine comprises an amino acid substitution at position Y118.

[0102] In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site of a wild type MelC1 protein of a wild type tyrosinase, wherein the wild type MelC1 protein comprises the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the copper catalytic site is a CuA site of the MelC1 protein. In some cases, the copper catalytic site is a CuB site of the MelC1 protein. In some cases, the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises an amino acid substitution at position Y118 relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the amino acid substitution of Y118 relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 is substituted with a proteogenic amino acid described in Table 2. In some cases, the amino acid substitution of Y118 relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 is substituted with a bulkier amino acid, for example, phenylalanine. In some cases, the amino acid substitution is selected from the group consisting of: Y118F, Y118A, and Y118G relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the amino acid substitution is Y118F relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the amino acid substitution is Y118A relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the amino acid substitution is Y118G relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0103] In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid. In some cases, the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, R105, D108, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139. In some cases, the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine, and isoleucine. In some cases, the uncharged amino acid is alanine. In some cases, the amino acid substitutions of at least one charged amino acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, R105A, D108A, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.

[0104] In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid. In some cases, the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is at one or more positions selected from the group consisting of: K58, R60, R61, R65, R105, R125, R129, and R139. In some cases, the at least one positively charged amino acid is lysine at position K58. In some cases, the at least one positively charged amino acid is arginine at positions selected from the group consisting of: R60, R61, R65, R105, R125, R129, and R139. In some cases, the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine, and isoleucine. In some cases, the uncharged amino acid is alanine. In some cases, the amino acid substitutions of at least one positively charged amino acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: K58A, R60A, R61A, R65A, R105A, R125A, R129A, and R139A. In some cases, the amino acid substitutions of at least one lysine with an uncharged amino acid is K58A. In some cases, the amino acid substitutions of at least one arginine with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: R60A, R61A, R65A, R105A, R125A, R129A, and R139A.

[0105] In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with a negatively charged amino acid. In some cases, the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is at one or more positions selected from the group consisting of: K58, R60, R61, R65, R105, R125, R129, and R139. In some cases, the at least one positively charged amino acid is lysine at position K58. In some cases, the at least one positively charged amino acid is arginine at positions selected from the group consisting of: R60, R61, R65, R105, R125, R129, and R139. In some cases, the negatively charged amino acid is aspartic acid. In some cases, the negatively charged amino acid is glutamic acid.

[0106] In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid. In some cases, the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is at one or more positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, D69, D81, D97, E100, D108, E119, D122, D133, and E134. In some cases, the at least one negatively charged amino acid is aspartic acid at positions selected from the group consisting of: D31, D32, D54, D69, D81, D97, D108, D122, and D133. In some cases, the at least one negatively charged amino acid is glutamic acid at positions selected from the group consisting of: E39, E55, E100, E119, and E134. In some cases, the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine, and isoleucine. In some cases, the uncharged amino acid is alanine. In some cases, the amino acid substitutions of at least one negatively charged amino acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, D69A, D81A, D97A, E100A, D108A, E119A, D122A, D133A, and E134A. In some cases, the amino acid substitutions of at least one aspartic acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: D31A, D32A, D54A, D69A, D81A, D97A, D108A, D122A, and D133A. In some cases, the amino acid substitutions of at least one glutamic acid with an uncharged amino acid are selected from the group consisting of: E39A, E55A, E100A, E119A, and E134A.

[0107] In some cases, the MelC1 protein comprises an amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with a positively charged amino acid. In some cases, the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is at one or more positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, D69, D81, D97, E100, D108, E119, D122, D133, and E134. In some cases, the at least one negatively charged amino acid is aspartic acid at positions selected from the group consisting of: D31, D32, D54, D69, D81, D97, D108, D122, and D133. In some cases, the at least one negatively charged amino acid is glutamic acid at positions selected from the group consisting of: E39, E55, E100, E119, and E134. In some cases, the positively charged amino acid is lysine. In some cases, the positively charged amino acid is arginine. Combination of MelC2 protein and MelC1 protein

[0108] The engineered tyrosinase described herein can comprise an MelC2 protein and an MelC1 protein.

[0109] In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: K5 , E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, T52, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, V195, T203, G204, V205, K221, E225, R228, R229, D246, E249, D256, D264, R267, and D272; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, H102, R105, D108, Y118, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139. In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, N191G, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.

[0110] In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, K221, E225, R228, R229, D246, E249, K252, D256, D264, R267, and D272; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, R105, D108, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139. In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, R192A, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, R105A, D108A, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.

[0111] In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, R228, R229, and R267; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: E39, E55, E100, E119, and E134. In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: R16A, R17A, R27A, R30A, R65A, R72A, R92A, R95A, R109A, R111A, R132A, R136A, R153A, R185A, R192A, R228A, R229A, and R267A; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: E39A, E55A, E100A, E119A, and E134A.

[0112] In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: T52, V195, and V205F; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: E100, H102, Y118, E119, D122, R125, D133, and R139. In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: T52C, V195F, V195A, V195N, and V205F, and R192A; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: E100A, H102A, Y118F, E119A, D122A, R125A, D133A, and R139A.

[0113] In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R192; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 at E119 position. In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with an R192A amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with an E119A amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0114] In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 at position R192; and (b) an MelC1 protein comprising one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 at E119 position. In some cases, the engineered tyrosinase comprises (a) an MelC2 protein comprising an R192A amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96; and (b) an MelC1 protein comprising an E119A amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. Improved Monophenolase Activity

[0115] The engineered tyrosinases described herein can have improved monophenolase activity as compared to a wild type tyrosinase. The engineered tyrosinases described herein can have improved efficiency in modifying tyrosine to L-DOPA as compared to a wild type tyrosinase. The engineered tyrosinases described herein can have improved monophenolase activity as compared to a wild type tyrosinase. In some cases, the wild type tyrosinase is wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the wild type tyrosinase is wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein having an amino acid substitution selected from the group consisting of T52C, V195F, V195A, V195N, and V205F relative to the sequence of SEQ ID NO: 96. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein having 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein having an amino acid substitution selected from the group consisting of E100A, H102A, Y118F, E119A, D122A, R125A, D133A, and R139A relative to the sequence of SEQ ID NO: 97. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17.

[0116] The engineered tyrosinases described herein can modify tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) at an increased efficiency that of a wild type Streptomyces tyrosinase. The engineered tyrosinases described herein can modify a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 110%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 130%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 140%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 150%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 170%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 180%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 190%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 200%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 250%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 300%relative to that of a wild type Streptomyces tyrosinase. In some cases, the wild type Streptomyces tyrosinase is wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase. In some cases, the wild type Streptomyces tyrosinase modifies about 10%of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) when its monophenolase activity is tested according to the method described in Example 4. In some cases, the percentage of tyrosine residues in a protein substrate modified to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) by a wild type or an engineered tyrosinase is measured by the method described in Example 4. In some cases, the protein substrate is an MAP described herein. In some cases, the protein substrate is a mussel adhesive protein comprising at least one tyrosine residue. In some cases, the protein substrate is recombinant mussel foot protein I of Mytilus edulis (Mfp-1 (Blue mussel) ) , having an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 116. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein having at least 99%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17.

[0117] The engineered tyrosinases described herein can modify a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition. The engineered tyrosinases described herein can modify a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 130%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition. The engineered tyrosinases described herein can modify a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 140%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition. The engineered tyrosinases described herein can modify a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 150%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition. The engineered tyrosinases described herein can modify a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition. In some cases, the percentage of tyrosine residues in a protein substrate modified to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) by a wild type or an engineered tyrosinase is measured by the method described in Example 4. In some cases, the protein substrate is an MAP described herein comprising at least one tyrosine residue. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein having at least 99%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17.

[0118] The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 10.5%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 11%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 12%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 13%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 14%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 15%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 16%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 17%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 18%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 19%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 20%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 21%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 22%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 23%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 24%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 25%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 26%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 27%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 28%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 29%when tested according to the method described in Example 4. The engineered tyrosinases described herein has a DOPA %modification that is at least 30%when tested according to the method described in Example 4. Exemplary Sequences of the Engineered Tyrosinases

[0119] The present disclosure provides, in some aspects, an engineered tyrosinase comprising an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to any one of the amino acid sequence that is not a wild type as described in Table 1. Table 1. Exemplary sequences for wild type and engineered tyrosinases *Unless specified otherwise, listing only amino acid substitution (s) of MelC2 or MelC1 without  additional description indicates that wild type MelC1 or MelC2, respectively, is co-expressed.

[0120] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an amino acid sequence having at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95.

[0121] The present disclosure also provides a nucleic acid encoding the polypeptide sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95. The present disclosure also provides a nucleic acid encoding the polypeptide sequence having at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95. The present disclosure also provides a nucleic acid encoding the polypeptide sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95. In some instances, a nucleic acid is a nucleic acid molecule. In some cases, a nucleic acid is a species / type of nucleic acid. In some cases, a nucleic acid comprises a polymeric form of nucleotides. In some cases, a nucleic acid comprises a polynucleotide. In some cases, the nucleic acid comprises a sequence of nucleotides (i.e., a nucleic acid sequence) . In some cases, a nucleic acid comprises a modified polynucleotide. In some cases, a nucleic acid comprises a canonical or non-canonical nucleotide. A canonical nucleotide comprises adenosine with base types (A) , cytosine (C) , guanine (G) , thymine (T) , uracil (U) , or variants thereof. When referring to a base type of a nucleotide or a polynucleotide, T and U may be interchangeable. When referring to a sequence of a nucleic acid, the sequence comprises the complementary form of the sequence. The complementary of the nucleic acid sequence can be based on canonical base-pairing of the nucleotides or nucleic acids. A nucleic acid can comprise one or more modified nucleotides or nucleotide analogs. In some cases, a nucleic acid may be single-stranded, double-stranded, triple stranded, or a combination thereof. In some cases, a nucleic acid is single-stranded. In some cases, the nucleic acid is double-stranded. In some cases, the nucleic acid comprises single-stranded and double-stranded regions or portions. In some cases, the nucleic acid is linear. In some cases, a nucleic acid is closed linear double-stranded (e.g., a doggybone DNA) . In some cases, a nucleic acid may be circular. In some cases, a nucleic acid may be branched. The nucleic acid can comprise a deoxyribonucleic acid (DNA) or ribonucleic acid (RNA) . The nucleic acid can comprise a peptide engineered nucleic acid (PNA) , an unlocked engineered nucleic acid (UNA) , a locked engineered nucleic acid (LNA) , or a combination thereof. The nucleic acid can comprise at least a coding sequence, at least a non-coding sequence, or a combination thereof. The nucleic acid can comprise at least a coding sequence. The nucleic acid can comprise at least a non-coding sequence. The nucleic acid can comprise a coding or non-coding region of a gene or gene fragment (e.g., the gene encoding the engineered tyrosinases described herein) , a locus defined from linkage analysis, an exons, an intron, an intein, or any combination thereof. A coding sequence can be a gene sequence, a codon-modified thereof, or a codon-optimized thereof.

[0122] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20, at least 30 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, at most 20, or at most 30 substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95. In some cases, the present disclosure provides a nucleic acid sequence encoding the foregoing amino acid sequences.

[0123] In some cases, the engineered tyrosinase comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20, at least 30, at least 40, at least 50, at least 60, at least 70, or at least 80 amino acid deletions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. some cases, the engineered tyrosinase comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, at most 20, at most 30, at most 40, at most 50, at most 60, at most 70, at most 80, or at most 90 deletions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. In some cases, the present disclosure provides a nucleic acid sequence encoding the foregoing amino acid sequences. In some cases, the amino acid deletions comprise amino acid deletions at one or more positions selected from M1-D47, L68-W99, or L143-G146 relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. In some cases, the amino acid deletions comprise at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20, at least 30, or at least 40 at positions selected from M1-D47 relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. In some cases, the amino acid deletions comprise at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20, or at least 30 at positions selected from L68-W99 relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. In some cases, the amino acid deletions comprise at least 1, at least 2, at least 3, or at least 4 at positions selected from L143-G146 relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95.

[0124] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87.

[0125] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63.

[0126] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-3. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-3. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-3. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 1-3. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 1-3. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein having at least one amino acid substitution (e.g., T203F, G204F, and V205F relative to SEQ ID NO: 96) of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site (e.g., CuA site or CuB site) of the MelC2 protein. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein having at least one amino acid substitution (e.g., at positions of T203, G204, and V205 relative to SEQ ID NO: 96) with a phenylalanine.

[0127] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises amino acid substitutions of at least one charged amino acid (e.g., at positions K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, K221, E225, R228, R229, D246, E249, K252, D256, D264, R267, and D272 relative to SEQ ID NO: 96) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) .

[0128] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 46-64. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 46-64. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 46-64. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 46-64. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 46-64. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises amino acid substitutions of at least one positively charged amino acid (e.g., at positions K5A, K15A, R16A, R17A, R27A, R30A, R65A, R72A, R92A, R95A, R109A, R111A, R132A, R136A, R153A, R185A, R192A, K221A, R228A, R229A, K252A, and R267A relative to SEQ ID NO: 96) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a negatively charged amino acid (e.g., aspartic acid or glutamic acid) .

[0129] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 46, 47, 60 or 63. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 46, 47, 60 or 63. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 46, 47, 60 or 63. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 46, 47, 60 or 63. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 46, 47, 60 or 63. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises amino acid substitutions of at least one positively charged lysine (e.g., at positions K5, K15, K221, and K252 relative to SEQ ID NO: 96) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a negatively charged amino acid (e.g., aspartic acid or glutamic acid) .

[0130] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises amino acid substitutions of at least one positively charged arginine (e.g., at positions R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, R228, R229, and R267 relative to SEQ ID NO: 96) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a negatively charged amino acid (e.g., aspartic acid or glutamic acid) .

[0131] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32 or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32 or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32 or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 32 or 70-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 32 or 70-87. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises amino acid substitutions of at least one negatively charged amino acid (e.g., at positions E13, E24, E50, D78, D87, D91, D102, D112, D117, E149, E155, D157, D175, E225, D246, E249, D256, D264, and D272 relative to SEQ ID NO: 96) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a positively charged amino acid (e.g., lysine or arginine) .

[0132] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 73-78, 80, 81, 83, or 85-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 73-78, 80, 81, 83, or 85-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 73-78, 80, 81, 83, or 85-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 73-78, 80, 81, 83, or 85-87. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 73-78, 80, 81, 83, or 85-87. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises amino acid substitutions of at least one negatively charged aspartic acid (e.g., at positions: D78, D87, D91, D102, D112, D117, D157, D175, D246, D256, D264, and D272 relative to SEQ ID NO: 96) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a positively charged amino acid (e.g., lysine or arginine) .

[0133] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32, 70-72, 79, 82, or 84. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32, 70-72, 79, 82, or 84. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 32, 70-72, 79, 82, or 84. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 32, 70-72, 79, 82, or 84. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 32, 70-72, 79, 82, or 84. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises amino acid substitutions of at least one negatively charged glutamic acid (e.g., at positions: E13, E24, E50, E149, E155, E225, and E249 relative to SEQ ID NO: 96) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a positively charged amino acid (e.g., lysine or arginine) .

[0134] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0135] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 3. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 3. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 3. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 3. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 3. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0136] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 28. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 28. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 28. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 28. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 28. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0137] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 29. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 29. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 29. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 29. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 29. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0138] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 30. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 30. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 30. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 30. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 30. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0139] An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 31. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 31. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 31. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 31. An engineered tyrosinase can comprise an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 31. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0140] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95.

[0141] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 17-19. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 17-19. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 17-19.An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 17-19. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 17-19. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein having at least one amino acid substitution (e.g., Y118F, Y118A, and Y118G) of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site (e.g., CuA site or CuB site) of the MelC1 protein. In some cases, the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein having at least one amino acid substitution (e.g., Y118) with a phenylalanine.

[0142] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises amino acid substitutions of at least one charged amino acid (e.g., at positions D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, R105, D108, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139 relative to SEQ ID NO: 97) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) .

[0143] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 65-69. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 65-69. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 65-69. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 65-69. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 65-69. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises amino acid substitutions of at least one positively charged amino acid (e.g., at positions D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, R105, D108, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139 relative to SEQ ID NO: 97) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a negatively charged amino acid (e.g., aspartic acid or glutamic acid) .

[0144] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 65. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 65. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 65. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 65. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 65. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises amino acid substitutions of at least one positively charged lysine (e.g., at position K58 relative to SEQ ID NO: 97) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a negatively charged amino acid (e.g., aspartic acid or glutamic acid) .

[0145] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 66-69. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 66-69. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 66-69. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 66-69. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 66-69. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises amino acid substitutions of at least one positively charged arginine (e.g., at positions R60, R61, R65, R105, R125, R129, and R139 relative to SEQ ID NO: 97) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a negatively charged amino acid (e.g., aspartic acid or glutamic acid) .

[0146] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 8, 11, 12, 36-43, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 8, 11, 12, 36-43, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 8, 11, 12, 36-43, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 8, 11, 12, 36-43, or 88-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 8, 11, 12, 36-43, or 88-95. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises amino acid substitutions of at least one negatively charged amino acid (e.g., at positions D31, D32, E39, D54, E55, D69, D81, D97, E100, D108, E119, D122, D133, and E134 relative to SEQ ID NO: 97) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a positively charged amino acid (e.g., lysine or arginine) .

[0147] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 8, 11, 36-39, 41-43, 88-91, or 93-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 8, 11, 36-39, 41-43, 88-91, or 93-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 8, 11, 36-39, 41-43, 88-91, or 93-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 8, 11, 36-39, 41-43, 88-91, or 93-95. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 8, 11, 36-39, 41-43, 88-91, or 93-95. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises amino acid substitutions of at least one negatively charged aspartic acid (e.g., at positions D31, D32, D54, D69, D81, D97, D108, D122, and D133 relative to SEQ ID NO: 97) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a positively charged amino acid (e.g., lysine or arginine) .

[0148] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises amino acid substitutions of at least one negatively charged glutamic acid (e.g., at positions E39, E55, E100, E119, and E134 relative to SEQ ID NO: 97) with an uncharged amino acid (e.g., alanine) or a positively charged amino acid (e.g., lysine or arginine) .

[0149] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 37, 38, or 40. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 37, 38, or 40. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 37, 38, or 40. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 37, 38, or 40. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 37, 38, or 40. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein having two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0150] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 39 or 41-42. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 39 or 41-42. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 39 or 41-42. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 39 or 41-42. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 39 or 41-42. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein having three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0151] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 43. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 43. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 43. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 43. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 43. In some cases, the engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein having four or more amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.

[0152] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0153] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 4. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 4. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 4. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 4. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 4. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0154] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 5. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 5. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 5. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 5. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 5. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0155] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 7. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 7. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 7. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 7. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 7. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0156] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 8. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 8. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 8. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 8. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 8. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0157] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 9. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 9. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 9. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 9. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 9. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0158] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 11. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 11. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 11. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 11. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 11. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0159] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 13. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 13. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 13. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 13. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 13. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0160] An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 17. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to SEQ ID NO: 17. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to SEQ ID NO: 17. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20 or more amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 17. An engineered tyrosinase can comprise an MelC1 protein that comprises an amino acid sequence having at most 1, at most 2, at most 3, at most 4, at most 5, at most 6, at most 7, at most 8, at most 9, at most 10, or at most 20 amino acid substitutions, relative to SEQ ID NO: 17. In some cases, the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 120%, at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type Streptomyces antibioticus tyrosinase under the same condition.

[0161] An engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87 and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95.

[0162] An engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87 and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence at most 80%, at most 85%, at most 90%, at most 91%, at most 92%, at most 93%, at most 94%, at most 95%, at most 96%, at most 97%, at most 98%, at most 99%, at most 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95.

[0163] An engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95.

[0164] An engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95. The engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95.

[0165] An engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92. The engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92.

[0166] An engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17. The engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17.

[0167] An engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in SEQ ID NO: 34; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in SEQ ID NO: 7. The engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in SEQ ID NO: 34; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in SEQ ID NO: 7.

[0168] An engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4-5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. The engineered tyrosinase can comprise (a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63; and (b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4-5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95. Enzyme substrate

[0169] Provided herein, in some aspects, are enzyme substrates that are suitable substrates of the engineered tyrosinases described herein. In some cases, the enzyme substrates comprise a monophenol. In some cases, the enzyme substrates comprise o-diphenol. In some cases, the enzyme substrates comprise a tyrosine. In some cases, the enzyme substrates comprise L-DOPA. In some cases, the enzyme substrates comprise a 2- (4-hydroxyphenyl) ethanol. In some cases, the enzyme substrates comprise a dopamine hydrochloride. In some cases, the enzyme substrates comprise a catechol. In some cases, the enzyme substrates comprise a 4-tert-butylphenol. In some cases, the enzyme substrates comprise a protein substrate. In some cases, the protein substrate can be any suitable protein comprising at least one tyrosine residue. In some cases, the protein substrate can be any suitable protein comprising at least one L-DOPA residue. In some cases, the protein substrate comprises two, three, four, five or more tyrosine residue. In some cases, the protein substrate is positively charged. In some cases, the protein substrate is a protein of mussel origin. In some cases, the protein substrate is a mussel adhesive protein comprising one or more tyrosine residue for modification to L-DOPA. In some cases, the protein substrate comprises mussel derived antimicrobial peptides (AMP) . Mussel Adhesive Protein (MAP)

[0170] In some cases, the protein substrates are mussel adhesive protein (MAP) . In some cases, the MAP comprises one or more tyrosine residue for modification by the engineered tyrosinases described herein. In some cases, the MAP comprises no L-DOPA residue prior to modification by the engineered tyrosinases described herein. In some cases, the MAP comprises at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, or at least 10 tyrosine residues.

[0171] The MAP can be an MAP from any source, including synthetic MAP, recombinant MAP or extracted from mussels. In some cases, the mussel adhesive protein is a recombinantly expressed MAP. In some cases, the recombinantly expressed MAP does not have post-translational modification prior to the modification by the engineered tyrosinases described herein.

[0172] In some cases, the MAP is extracted from mussel. Extracting MAP from mussels can be obtained by the following preparation methods. For example, the Chinese Patent No. ZL200710179491.0 describes separation and purification of mussel adhesive protein by adsorption chromatography, Chinese Patent No. ZL200710179492.5 describes a method of purifying MAP using carboxymethyl ion exchange chromatography, and Chinese Patent No. ZL200910087567.6 discloses a method of separation using salting out and dialysis for purifying MAP; each of which is hereby incorporated herein by reference in its entirety.

[0173] In some cases, the MAP is recombinant MAP. Recombinant MAP can be obtained by conventional or known recombinant protein techniques, including those described in Example 1. Additional methods for obtaining recombinant MAP include the methods described in Chinese Patent No. CN115894655A, U. S. Patent No. US6987170B1, and U. S. Patent Publication No. US2016030323A; each of which is hereby incorporated herein by reference in its entirety.

[0174] In some embodiments, the MAP is synthetic MAP. Synthetic MAP can be obtained by methods that have been reported, such as the methods described in Kitamura et al., J. Polymer Science: Part A: Polymer Chemistry 37: 729-736 (1991) ; Lim et al., Biomaterials, 31: 3715-3722 (2010) , and Hwang et al., Biomaterials 28: 3560-3568 (2007) ; each of which is hereby incorporated herein by reference in its entirety.

[0175] In some embodiments, the MAP is commercially available, such as Cell-Tek (Catalog No. 354240) and ACRO Biosystems (Catalog No. MAP-O4012) .

[0176] An MAP can comprise Mfp-1 (Mytilus edulis (Blue mussel) ) , Mfp-1 (Mytilus galloprovincialis) , Mfp-1 (Mytlilus coruscus) , Mfp-1 (Perna viridis) , Mfp-1 (Mytlilus californianus) , Mfp-2 (Mytilus edulis (Blue mussel) ) , Mfp-2 (Mytilus galloprovincialis) , Mfp-2 (Limnoperna fortune) , Mfp-3 (Mytilus edulis (Blue mussel) ) , Mfp-3 (Mytilus galloprovincialis) , Mfp-3 (Mytlilus coruscus) , Mfp-4 (Mytlilus californianus) , Mfp-5 (Mytilus edulis (Blue mussel) ) , Mfp-5 (Mytilus galloprovincialis) , Mfp-5 (Mytlilus coruscus) , Mfp-5 (Mytlilus californianus) , Mfp-6 (Mytilus galloprovincialis) , Mfp-6 (Mytlilus coruscus) , or a combination thereof. An MAP can comprise Mfp-1 (Mytilus edulis (Blue mussel) ) . An MAP can comprise Mfp-1 (Mytilus galloprovincialis) . An MAP can comprise Mfp-1 (Mytlilus coruscus) . An MAP can comprise Mfp-1 (Perna viridis) . An MAP can comprise Mfp-1 (Mytlilus californianus) . An MAP can comprise Mfp-2 (Mytilus edulis (Blue mussel) ) . An MAP can comprise Mfp-2 (Mytilus galloprovincialis) . An MAP can comprise Mfp-2 (Limnoperna fortune) . An MAP can comprise Mfp-3 (Mytilus edulis (Blue mussel) ) . An MAP can comprise Mfp-3 (Mytilus galloprovincialis) . An MAP can comprise Mfp-3 (Mytlilus coruscus) . An MAP can comprise Mfp-4 (Mytlilus californianus) . An MAP can comprise Mfp-5 (Mytilus edulis (Blue mussel) ) . An MAP can comprise Mfp-5 (Mytilus galloprovincialis) . An MAP can comprise Mfp-5 (Mytlilus coruscus) . An MAP can comprise Mfp-5 (Mytlilus californianus) . An MAP can comprise Mfp-6 (Mytilus galloprovincialis) . An MAP can comprise Mfp-6 (Mytlilus coruscus) . The sequence encoding the MAP may have at least about 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 60, 90, 120, 150, 300, 600, 900, 1200, 1500, 3000, 6000, 9000 or more nt. The sequence encoding the MAP can have at most about 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 60, 90, 120, 150, 300, 600, 900, 1200, 1500, 3000, 6000, or 9000 nt.

[0177] A nucleic acid sequence encoding the MAP can comprise a sequence having at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, at least about 91%, at least about 92%, at least about 93%, at least about 94%, at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, at least about 98%, at least about 99%, at least about 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 98-115. A nucleic acid sequence encoding the MAP can comprise a sequence having at most about 80%, at most about 85%, at most about 90%, at most about 91%, at most about 92%, at most about 93%, at most about 94%, at most about 95%, at most about 96%, at most about 97%, at most about 98%, at most about 99%, at most about 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 98-115. A nucleic acid sequence encoding the MAP can comprise a sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 98-115. A nucleic acid sequence encoding the MAP can comprise a sequence having at least about 1, at least about 2, at least about 3, at least about 4, at least about 5, at least about 6, at least about 7, at least about 8, at least about 9, at least about 10, at least about 20, at least about 30 or more mutations, relative to any one of SEQ ID NOs: 98-115. A nucleic acid sequence encoding the MAP can comprise a sequence having at most about 1, at most about 2, at most about 3, at most about 4, at most about 5, at most about 6, at most about 7, at most about 8, at most about 9, at most about 10, at most about 20, or at most about 30 mutations, relative to any one of SEQ ID NOs: 98-115. The MAP can thus comprise the polypeptide sequence encoded by the nucleic acid sequence as described herein. For example, the MAP can comprise a sequence having at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, at least about 91%, at least about 92%, at least about 93%, at least about 94%, at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, at least about 98%, at least about 99%, at least about 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 116-133. The MAP can comprise a sequence having at most about 80%, at most about 85%, at most about 90%, at most about 91%, at most about 92%, at most about 93%, at most about 94%, at most about 95%, at most about 96%, at most about 97%, at most about 98%, at most about 99%, at most about 99.9%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 116-133. The MAP can comprise a sequence having 100%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 116-133. The MAP can comprise a sequence having at least about 1, at least about 2, at least about 3, at least about 4, at least about 5, at least about 6, at least about 7, at least about 8, at least about 9, at least about 10, at least about 20, at least about 30 or more mutations, relative to any one of SEQ ID NOs: 116-133. The MAP can comprise a sequence having at most about 1, at most about 2, at most about 3, at most about 4, at most about 5, at most about 6, at most about 7, at most about 8, at most about 9, at most about 10, at most about 20, or at most about 30 mutations, relative to any one of SEQ ID NOs: 116-133.

[0178] In some embodiments, the MAP comprises MAP fusion protein comprising at least one MAP and fragments thereof. The MAP fusion protein can comprise two, three, or more of Mfp-1, Mfp-2, Mfp-3, Mfp-4, Mfp-5, Mfp-6. The MAP fusion protein can include the fused MAP disclosed in WO2006 / 107183 and WO2005 / 092920. In some cases, the MAP comprises fused fragments of an MAP, for example (from N-terminus to C-terminus) Mfp-1 fragment-Mfp-5 fragment-Mfp-1 fragment (i.e., fp-151) , Mfp-1 Fragment-Mfp-3 fragment-Mfp-1 fragment (i.e., fp-131) , Mfp-3 fragment-Mfp-5 fragment-Mfp-3 fragment (i.e., fp-353) , Mfp-1 fragment-Mfp-5 fragment -Mfp-3 fragment (i.e., fp-153) , Mfp-3 fragment -Mfp-5 fragment -Mfp-1 fragment (i.e., fp-351) .

[0179] In some embodiments, the MAP comprises MAP fragments. MAP fragments can contain 1%to 10%, 10%to 20%, 20%to 30%, 30%to 40%, 40%to 50%, 50%to 60%, 60%to 70%, 70 %to 80%, 80%to 90%, 90%to 99%of the complete amino acid sequence of an MAP.

[0180] In some cases, the MAP does not comprise a starting methionine (such as those described herein) . In some cases, the MAP comprises a staring methionine. In some cases, the MAP can further comprise a signal peptide.

[0181] Table 3 below describes the exemplary sequences of MAPs that can be used as a protein substrate of the present disclosure. Table 3: Exemplary Sequences of MAP

[0182] Table 4 below describes the exemplary sequences of AMP that can be used as a protein substrate of the present disclosure. Table 4: Exemplary Sequences of AMP Methods and Uses

[0183] Provided herein, in some aspects, are methods of modifying tyrosine to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) using the engineered tyrosinases described herein. In some cases, the method comprises contacting the tyrosine with the engineered tyrosinase.

[0184] Provided herein, in some aspects, are methods of modifying a tyrosine residue in a protein substrate to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue. In some cases, the method comprises contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase. In some cases, the protein substrate is a mussel adhesive protein described herein. In some cases, the contacting comprises contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase in a buffer. In some cases, the buffer is a phosphate buffer. In some cases, the buffer comprises CuSO4. In some cases, the buffer comprises an acid. In some cases, the acid is ascorbic acid. In some cases, the buffer has a pH of about 6.0. In some cases, the buffer has a pH of about 5.0 or lower. In some cases, the buffer has a pH of 5.0 to 6.0. In some cases, the method comprises contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase at room temperature for 1, 2, 3, 4, 5, 7, 7, 8, 9, 10, 11, 12 hours or more. In some cases, the method comprises contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase at room temperature for 4 hours or more.

[0185] Provided herein, in some aspects, are methods of modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) using the engineered tyrosinases described herein. In some cases, the method comprises contacting the L-DOPA with the engineered tyrosinase.

[0186] Provided herein, in some aspects, are methods of modifying a tyrosine to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) using the engineered tyrosinases described herein. In some cases, the method comprises contacting the tyrosine with the engineered tyrosinase.

[0187] Provided herein, in some aspects, are methods of modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue in a protein substrate to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) residue. In some cases, the protein substrate is a mussel adhesive protein described herein. In some cases, the contacting comprises contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase in a buffer. In some cases, the buffer is a phosphate buffer. In some cases, the buffer comprises CuSO4. In some cases, the buffer comprises an acid. In some cases, the acid is ascorbic acid. In some cases, the buffer has a pH of about 6.0. In some cases, the buffer has a pH of about 5.0 or lower. In some cases, the buffer has a pH of 5.0 to 6.0. In some cases, the method comprises contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase at room temperature for 1, 2, 3, 4, 5, 7, 7, 8, 9, 10, 11, 12 hours or more. In some cases, the method comprises contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase at room temperature for 4 hours or more.

[0188] Provided herein, in some aspects, are methods of modifying a monophenol to an o-diphenol, the method comprising contacting the monophenol with the engineered tyrosinase described herein.

[0189] Provided herein, in some aspects, are methods of modifying an o-diphenol to an o-quinone, the method comprising contacting the monophenol with the engineered tyrosinase described herein

[0190] Provided herein, in some aspects, are methods of expressing the engineered tyrosinase described herein recombinantly. In some cases, the method comprises expressing the engineered tyrosinase using the vectors and host cells described herein. In some cases, the method comprises those described in Example 3.

[0191] Provided herein, in some aspects, are uses of the engineered tyrosinases described herein for modifying a tyrosine residue in a protein substrate to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue.

[0192] Provided herein, in some aspects, are uses of the engineered tyrosinases described herein for modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue in a protein substrate to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) residue.

[0193] Provided herein, in some aspects, are uses of the engineered tyrosinases described herein for modifying a tyrosine to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) .

[0194] Provided herein, in some aspects, are uses of the engineered tyrosinases described herein for modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) .

[0195] Provided herein, in some aspects, are uses of the engineered tyrosinases described herein for modifying a monophenol to an o-diphenol.

[0196] Provided herein, in some aspects, are uses of the engineered tyrosinases described herein for modifying an o-diphenol to an o-quinone.

[0197] Provided herein, in some aspects, are uses of the engineered tyrosinases described herein for making a mussel adhesive protein having one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues from a mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues. In some cases, the mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues does not have a L-DOPA residue prior to modification by the engineered tyrosinases.

[0198] Additional uses of the engineered tyrosinases described herein include synthesizing melanin, catalyzing the reaction of chitosan formation from gelatin, catalyzing the reaction of hydroxytyrosol formation from tyrosol, processing food (such as meat processing and protein cross-linking) , synthesizing phenols, making biosensor, identifying herbicides, polymerization of biopolymers, and identifying specific components within beverages (e.g., alcoholic beverages) .

[0199] The methods and uses described herein comprises contacting the engineered tyrosinases described herein with a substrate (e.g., a tyrosine, a monophenol, or a tyrosine residue on a protein substrate) in the presence of oxygen. Vectors and host cells

[0200] Provided herein, in some aspects, are vectors comprising the polynucleotide described herein. The vectors can be used for expressing the protein or polypeptide described herein, such as the engineered tyrosinases or the substrates thereof.

[0201] The present disclosure encompassed any suitable expression vectors including plasmids, viruses, cosmids, bacmids, shuttle vectors, artificial chromosomes, etc. In one particular embodiment, the expression vector is a plasmid. Examples of potentially useful plasmid include pET24a, pLMAR, pALTER-Ex1 , pALTER-Ex2, pBAD / His, pBAD / Myc-His, pBAD / glll, pBacP, pBac, pBacPTandem, pBacTandem, pBacPTandem, pBacTandemRev, pCal-n, pCal-n-EK, pCal-c, pCal-Kc, pcDNA 2.1 , pDUAL, pET-3a-c, pET-9a-d, pET-11a-d, pET-12a-c, pET-14b, pET-15b, pET-16b, pET-17b, pET-19b, pET-20b (+) , pET-21 a-d (+) , pET-22b (+) , pET-23a-d (+) , pET-24b-d (+) , pET-25b (+) , pET-26b (+) , pET-27b (+) , pET-28a-c (+) , pET-29a-c (+) , pET-30a-c (+) , pET-31 b (+) , pET-32a-c (+) , pET-33b (+) , pET-34b (+) , pET-35b (+) , pET-36b (+) , pET-37b (+) , pET-38b (+) , pET-39b (+) , pET-40b (+) , pET-41a-c (+) , pET-42a-c (+) , pET-43a-c (+) , pETBIue-1 , pETBIue-2, pETBIue-3, pGEMEX-1 , pGEMEX-2, pGEX-I IT, pGEX-2T, pGEX-2TK, pGEX-3X, pGEX-4T, pGEX-5X, pG EX-6, P, pHAT10 / 11 / 12, pHAT20, pHAT-GF, Puv, pKK223-3, pLEX, pMAL-c2X, pMAL-c2E, pMAL-c2G, pMAL-, p2X, pMAL-, p2E, pMAL-, p2G, p, ProEX HT, p, PROLar. A, p, PROTet. E, pQE-9, pQE-16, pQE-30 / 31 / 32, pQE-40, pQE-60, pQE-70, PQE-80 / 81 / 82L, pQE-100, pRSET, pSE280, pSE380, pSE420, pThioHis, pTrc99A, pTrcHis, pTrcHis2, pTriEx-1 , pTriEx-2, pTrxFus, pBP26, pBP27, pBQ200, pGP380, pGP382, pGP3273, pGM1202. In some cases, pACYCDuet-1 is used for expression of two genes (e.g., one encoding for an MelC1 protein described herein and the other encoding for an MelC2 protein described herein) .

[0202] Also Provided herein, in some aspects, are host cells for carrying the vectors described herein. The host cells can be used for expressing the protein or polypeptide encoded by the sequence of the expression constructs as defined herein and / or comprising an isolated nucleic acid molecules encoding any of the protein or polypeptide defined herein. The host cell may comprise bacterial cells, yeast cells, fungal cells, insect cells, mammalian cells, etc. In embodiments the cells are E. coli bacterial cells such as E. coli BL21 (DE3) , E. coli BL21 , and in E. coli ArhaB (B0002) . In embodiments the cells are E. coli BL21 (DE3) -pLysS, E. coli BL21 Star-pLysS, E. coli BL21-SI, E. coli BL21-AI, E. coli Tuner, E. coli Tuner pLysS, E. coli Origami, E. coli Origami B, E. coli Origami B pLysS, E. coli Rosetta, E. coli Rosetta pLysS, E. coli Rosetta-gami-pLysS, E. coli Rosetta2, E. coli Rosetta2 pLysS, E. coli BL21 CodonPlus, E. coli AD494, E. coli BL21trxB, E. coli HMS174, E. coli NovaBlue (DE3) , E. coli BLR, E. coli C41 (DE3) , E. coli C43 (DE3) , E. coli Lemo21 (DE3) , E. coli SHuffle T7, E. coli ArcticExpress, E. coli ArcticExpress (DE3) . In embodiments the cells are Streptomyces lividans, Lactoccocus lactis and Bacillus subtilis. In some cases, the host cell may comprise a cell of Saccharomyces Cerevisiae, Spodoptera frugiperda (e.g., Sf9 or Sf21) , Human Embryonic Kidney 293, Chinese hamster ovary cells, A549, Baby hamster kidney (BHK) cells, CAD, DUKX-X11, HeLa, Hep G2, HT1080, J558L, L929, MCF-7, N2a, NIH 3T3, P19, SO-Rb50, U2OS, Y79, or a combination thereof. In some cases, the host cell comprises a cell of Saccharomyces Cerevisiae. In some cases, the host cell comprises a cell of Spodoptera frugiperda (e.g., Sf9 or Sf21) . In some cases, the host cell comprises a cell of Human Embryonic Kidney 293. In some cases, the host cell comprises a cell of Chinese hamster ovary cells. In some cases, the host cell comprises a cell of A549. In some cases, the host cell comprises a cell of Baby hamster kidney (BHK) cells. In some cases, the host cell comprises a cell of CAD. In some cases, the host cell comprises a cell of DUKX-X11. In some cases, the host cell comprises a cell of HeLa. In some cases, the host cell comprises a cell of Hep G2. In some cases, the host cell comprises a cell of HT1080. In some cases, the host cell comprises a cell of J558L. In some cases, the host cell comprises a cell of L929. In some cases, the host cell comprises a cell of MCF-7. In some cases, the host cell comprises a cell of N2a. In some cases, the host cell comprises a cell of NIH 3T3. In some cases, the host cell comprises a cell of P19. In some cases, the host cell comprises a cell of SO-Rb50. In some cases, the host cell comprises a cell of U2OS. In some cases, the host cell comprises a cell of Y79. When using various host cells, suitable vector systems may be selected. For example, Baculovirus vector may be used with insect cells. Kits and Compositions

[0203] Provided herein, in some aspects, are compositions comprising the engineered tyrosinases described herein, the polypeptide of the engineered tyrosinases described herein, or the polynucleotide encoding the engineered tyrosinases described herein. The composition can further comprise another agent, such as a buffer or solvent for stabilizing the engineered tyrosinases described herein, the polypeptide of the engineered tyrosinases described herein, or the polynucleotide encoding the engineered tyrosinases described herein. In some cases, the composition comprises a protein substrate and an engineered tyrosinase. In some cases, the protein substrate is a mussel adhesive protein.

[0204] The methods and compositions described herein can be provided in kit form together with instructions for use according to the methods described herein. The kits can comprise additional reagents or buffers for completing the methods described herein. Definitions

[0205] In the present disclosure, wherever aspects are described herein with the language “comprising, ” otherwise analogous aspects described in terms of “consisting of” and / or “consisting essentially of” are also provided. All definitions herein described whether specifically mentioned or not, should be construed to refer to definitions as used throughout the specification and attached claims.

[0206] In the present disclosure, one, some, or all of the properties of the various embodiments described herein may be applied to any aspect unless the content clearly dictates otherwise. Furthermore, that the various embodiments may be combined to form other embodiments of the present disclosure. These and other aspects of the disclosure will become apparent to one of skill in the art. These and other embodiments of the disclosure are further described by the detailed description herein.

[0207] Throughout the specification and attached claims, and unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this disclosure is related. For example, the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press, provide one of ordinary skill with a general dictionary of many of the terms used in this disclosure.

[0208] Amino acids can be referred to herein by either their commonly known three letter symbols or by the one-letter symbols recommended by the IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission, for example, as shown in Table 2. Unless specified otherwise, the term “amino acid” refers to natural, unnatural, and synthetic amino acids, including both the D or L optical isomers, and amino acid analogs and peptidomimetics. Nucleotides, likewise, can be referred to by their commonly accepted single-letter codes.

[0209] As used herein and thereof, the singular forms “a, ” “an, ” and “the” include plural references unless the context clearly dictates otherwise.

[0210] The term “about” or “approximately” as used herein when referring to a measurable value such as an amount or concentration and the like, is meant to encompass variations of 20 %, 10 %, 5 %, 1 %, 0.5 %, or even 0.1 %of the specified amount. For example, “about” can mean plus or minus 10 %, per the practice in the art. Alternatively, “about” can mean a range of plus or minus 20 %, plus or minus 10 %, plus or minus 5 %, or plus or minus 1 %of a given value. Alternatively, particularly with respect to biological systems or processes, the term can mean within an order of magnitude, up to 5-fold, or up to 2-fold, of a value. Where particular values can be described in the application and claims, unless otherwise stated the term “about” can encompass the acceptable error range for the particular value. Also, where ranges, subranges, or both, of values can be provided, the ranges or subranges can include the endpoints of the ranges or subranges. The terms “substantially, ” “substantially no, ” “substantially free, ” and “approximately” can be used when describing a magnitude, a position or both to indicate that the value described can be up to a reasonable expected range of values. For example, a numeric value can have a value that can be + / -0.1 %of the stated value (or range of values) , + / -1 %of the stated value (or range of values) , + / -2 %of the stated value (or range of values) , + / -5 %of the stated value (or range of values) , + / -10 %of the stated value (or range of values) , etc. Any numerical range recited herein can be intended to include all sub-ranges subsumed therein.

[0211] Where values are described as ranges, it can be understood that such disclosure includes the disclosure of all possible sub-ranges within such ranges, as well as specific numerical values that fall within such ranges irrespective of whether a specific numerical value or specific sub-range is expressly stated.

[0212] The terms “comprise, ” “have, ” and “include” are open-ended linking verbs. Any forms or tenses of one or more of these verbs, such as “comprises, ” “comprising, ” “has, ” “having, ” “includes, ” and “including, ” are also open-ended. For example, any method that “comprises, ” “has, ” or “includes” one or more steps is not limited to possessing only those one or more steps and also covers other unlisted steps.

[0213] The terms “polypeptide, ” “peptide, ” and “protein” are used interchangeably herein to refer to polymers of amino acids of any length. The polymer may be linear or branched, it may comprise modified amino acids, and it may be interrupted by non-amino acids. The terms also encompass an amino acid polymer that has been modified naturally or by intervention; for example, disulfide bond formation, glycosylation, lipidation, acetylation, phosphorylation, or any other manipulation or modification, such as conjugation with a labeling component. Also included within the definition are, for example, polypeptides containing one or more analogs of an amino acid (including, for example, unnatural amino acids, etc. ) , as well as other modifications known in the art. It is understood that, because the polypeptides as described herein are based upon an antibody, the polypeptides can occur as single chains or associated chains.

[0214] “Polynucleotide, ” or “nucleic acid, ” as used interchangeably herein, refer to polymers of nucleotides of any length, and include DNA and RNA. The nucleotides can be deoxyribonucleotides, ribonucleotides, modified nucleotides or bases, and / or their analogs, or any substrate that can be incorporated into a polymer by DNA or RNA polymerase. A polynucleotide can comprise modified nucleotides, such as methylated nucleotides and their analogs. If present, modification to the nucleotide structure may be imparted before or after assembly of the polymer. The sequence of nucleotides may be interrupted by non-nucleotide components. A polynucleotide can be further modified after polymerization, such as by conjugation with a labeling component. Other types of modifications include, for example, “caps” , substitution of one or more of the naturally occurring nucleotides with an analog, internucleotide modifications such as, for example, those with uncharged linkages (e.g., methyl phosphonates, phosphotriesters, phosphoramidates, carbamates, etc. ) and with charged linkages (e.g., phosphorothioates, phosphorodithioates, etc. ) , those containing pendant moieties, such as, for example, proteins (e.g., nucleases, toxins, antibodies, signal peptides, ply-L-lysine, etc. ) , those with intercalators (e.g., acridine, psoralen, etc. ) , those containing chelators (e.g., metals, radioactive metals, boron, oxidative metals, etc. ) , those containing alkylators, those with modified linkages (e.g., alpha anomeric nucleic acids, etc. ) , as well as unmodified forms of the polynucleotide (s) . Further, any of the hydroxyl groups ordinarily present in the sugars may be replaced, for example, by phosphonate groups, phosphate groups, protected by standard protecting groups, or activated to prepare additional linkages to additional nucleotides, or may be conjugated to solid supports. The 5’a nd 3’ terminal OH can be phosphorylated or substituted with amines or organic capping group moieties of from 1 to 20 carbon atoms. Other hydroxyls may also be derivatized to standard protecting groups. Polynucleotides can also contain analogous forms of ribose or deoxyribose sugars that are generally known in the art, including, for example, 2’ -O-methyl-, 2’ -O-allyl, 2’ -fluoro-or 2’ -azido-ribose, carbocyclic sugar analogs, a-anomeric sugars, epimeric sugars such as arabinose, xyloses or lyxoses, pyranose sugars, furanose sugars, sedoheptuloses, acyclic analogs and abasic nucleoside analogs such as methyl riboside. One or more phosphodiester linkages may be replaced by alternative linking groups. These alternative linking groups include embodiments wherein phosphate is replaced by P (O) S ( “thioate” ) , P (S) S ( “dithioate” ) , (O) NR2 ( “amidate” ) , P (O) R, P (O) OR’ , CO or CH2 ( “formacetal” ) , in which each R or R’ is independently H or substituted or unsubstituted alkyl (1-20 C) optionally containing an ether (-O-) linkage, aryl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkenyl or araldyl. Not all linkages in a polynucleotide need be identical. The preceding description applies to all polynucleotides referred to herein, including RNA and DNA.

[0215] A “host cell” includes an individual cell or cell culture that can be or has been a recipient for vector (s) comprising exogenous polynucleotides. Host cells include progeny of a single host cell, and the progeny may not necessarily be completely identical (in morphology or in genomic DNA complement) to the original parent cell due to natural, accidental, or deliberate mutation. A host cell includes cells transfected in vivo with a polynucleotide (s) of the present disclosure.

[0216] As used herein, “vector” means a construct, which is capable of delivering, and preferably expressing, one or more gene (s) or sequence (s) of interest in a host cell. Examples of vectors include viral vectors, naked DNA or RNA expression vectors, plasmid, cosmid or phage vectors, DNA or RNA expression vectors associated with cationic condensing agents, DNA or RNA expression vectors encapsulated in liposomes, and certain eukaryotic cells, such as producer cells.

[0217] A “fragment” when applied to a protein, peptide, or polypeptide, is a truncated form of a native biologically active protein or polypeptide that may or may not retain at least a portion of the therapeutic and / or biological activity.

[0218] The term “engineered tyrosinase” refers to a tyrosinase that has been intentionally modified and is different from the wild type tyrosinases found in nature. Such differences relative to a wild type tyrosinases can include, for example, an alteration, substitution, deletion, addition, or chemical modification of one or more amino acids, one or more unnatural amino acids, or any combination thereof relative to a wild type tyrosinase. In various embodiments, the engineered tyrosinase comprises an engineered Streptomyces antibioticus tyrosinase comprising an MelC2 protein, and optionally an MelC1 protein.

[0219] The terms “substitution” or “mutation” used in the context of a protein or polypeptide refers to a change to the polypeptide backbone wherein an amino acid occurring naturally in the wild type sequence of a polypeptide is substituted to another amino acid not naturally occurring at the same position in the said polypeptide. In some cases, a mutation or substitution is introduced to modify a polypeptide’s interaction with another protein (e.g., interaction between an engineered tyrosinase and its protein substrate, such as a mussel adhesive protein) thereby altering its activity such that it becomes different from the activity of the wild type polypeptide (e.g., wild type tyrosinase) . Mutations or substitutions can also improve a polypeptide’s biophysical properties. Amino acid mutations or substitutions can be carried out using genetic or chemical methods well known in the art. Genetic methods can include site-directed mutagenesis, PCR, gene synthesis and the like. It is contemplated that methods of altering the side chain group of an amino acid by methods other than genetic engineering, such as chemical modification, can also be useful. Sequence Identity

[0220] The sequence identity with respect to the engineered tyrosinases or any other amino acid sequences or nucleic acid sequences identified herein, is defined as the percentage of amino acid residues (or nucleotides) in a query sequence that are identical with the amino acid residues of a second, reference polypeptide sequence or a portion thereof (or the nucleotides of a second, reference nucleic acid sequence or a portion thereof) , after aligning the sequences and introducing gaps, if necessary, to achieve the maximum percent sequence identity, and not considering any conservative substitutions as part of the sequence identity. Alignment for purposes of determining percent amino acid sequence identity or nucleic acid sequence identity can be achieved in various ways that are within the skill in the art, for instance, using publicly available computer software such as BLAST, BLAST-2, ALIGN or Megalign (DNASTAR) software. Those skilled in the art can determine appropriate parameters for measuring alignment, including any algorithms needed to achieve maximal alignment over the full length of the sequences being compared. Percent identity can be measured over the length of an entire defined polypeptide sequence or nucleic acid sequence, or can be measured over a shorter length, for example, over the length of a fragment taken from a larger, defined polypeptide sequence, or larger, defined nucleic acid sequence, for instance, a fragment of at least 15, at least 20, at least 30, at least 40, at least 50, at least 70 or at least 150 contiguous residues or base pairs or nucleotides. Such lengths are exemplary only, and it is understood that any fragment length supported by the sequences shown herein, in the tables, figures or Sequence Listing, can be used to describe ...

Claims

1.An engineered tyrosinase comprising an MelC2 protein, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of a wild type tyrosinase comprising a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97.2.The engineered tyrosinase of claim 1, wherein the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, where in the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.3.An engineered tyrosinase comprising an MelC1 protein, wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of a wild type tyrosinase having a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97.4.The engineered tyrosinase of claim 3, wherein the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.5.An engineered tyrosinase comprising at least one amino acid substitution relative to a wild type Streptomyces tyrosinase, and wherein the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of the wild type Streptomyces tyrosinase.6.The engineered tyrosinase of claim 5, wherein the wild type Streptomyces tyrosinase is a Streptomyces antibioticus tyrosinase having a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97.7.The engineered tyrosinase of claim 5, wherein the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, where in the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.8.The engineered tyrosinase of claim 5, wherein the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.9.An engineered tyrosinase comprising an MelC2 protein, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, provided that the at least one amino acid substitution(a) is not an E14G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96;(b) is not an A33S amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96;(c) is not a T104A amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96;(d) is not a N130T amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96;(e) is not a V193L amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96;(f) is not a N191G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96;(g) is not a K252G amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 96; and(h) is not A33S and T94A amino acid substitutions relative to SEQ ID NO: 96.10.The engineered tyrosinase of claim 9, wherein the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, where in the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.11.An engineered tyrosinase comprising an MelC1 protein, wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, provided that the at least one amino acid substitution(a) is not a P2A amino acid substitution amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97;(b) is not an H73D amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97; and(c) is not a W111T amino acid substitution relative to SEQ ID NO: 97.12.The engineered tyrosinase of claim 11, wherein the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.13.The engineered tyrosinase of any one of claims 9-12, wherein the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) that is at least 120%relative to that of a wild type tyrosinase having a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97.14.The engineered tyrosinase of claim 13, wherein the engineered tyrosinase modifies a percentage of tyrosine residues in a protein substrate to L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues that is at least 130%, at least 140%, at least 150%, or at least 160%relative to that of a wild type tyrosinase having a first amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and a second amino acid sequence of SEQ ID NO: 97.15.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 85%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.16.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.17.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, T52, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, V195, T203, G204, V205, K221, E225, R228, R229, D246, E249, D256, D264, R267, and D272.18.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87.19.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises an amino acid substitution at position N191; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: N191F, N191G, N191C, N191A, N191V, and K252A; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 21-25 or 63.20.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T52, V195, and V205; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: T52C, V195F, V195A, V195N, and V205F; optionally wherein the engineered tyrosinase comprises an MelC2 protein that comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31.21.The engineered tyrosinase of claims 4 or 12, wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96.22.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with phenylalanine; optionally wherein the amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with phenylalanine comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T203, G204, and V205; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site of a wild type MelC2 of a wild type tyrosinase, wherein the wild type MelC2 comprises the sequence of SEQ ID NO: 96; optionally wherein the copper catalytic site is a CuA site or a CuB site; optionally wherein the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: T203, G204, and V205 relative to the sequence of SEQ ID NO: 96; optionally wherein the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: T203F, G204F, and V205F; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-3; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 is V205F; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth SEQ ID NO: 3.23.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, K221, E225, R228, R229, D246, E249, K252, D256, D264, R267, and D272; optionally wherein the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, R192A, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87.24.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid or a negatively charged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid or a negatively charged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, K15, R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, K221, R228, R229, K252, and R267.25.The engineered tyrosinase of claim 24, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, K15A, R16A, R17A, R27A, R30A, R65A, R72A, R92A, R95A, R109A, R111A, R132A, R136A, R153A, R185A, R192A, K221A, R228A, R229A, K252A, and R267A; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 46-64.26.The engineered tyrosinase of claim 25, wherein the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is lysine; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K5, K15, K221, and K252; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K5A, K15A, K221A, and K252A; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 46, 47, 60 or 63.27.The engineered tyrosinase of claim 25, wherein the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is arginine; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: R16, R17, R27, R30, R65, R72, R92, R95, R109, R111, R132, R136, R153, R185, R192, R228, R229, and R267; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: R16A, R17A, R27A, R30A, R65A, R72A, R92A, R95A, R109A, R111A, R132A, R136A, R153A, R185A, R192A, R228A, R229A, and R267A; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64.28.The engineered tyrosinase of claim 24, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with a negatively charged amino acid.29.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid or a positively charged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid or a positively charged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: E13, E24, E50, D78, D87, D91, D102, D112, D117, E149, E155, D157, D175, E225, D246, E249, D256, D264, and D272.30.The engineered tyrosinase of claim 29, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: E13A, E24A, E50A, D78A, D87A, D91A, D102A, D112A, D117A, E149A, E155A, D157A, D175A, E225A, D246A, E249A, D256A, D264A, and D272A; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32 or 70-87.31.The engineered tyrosinase of claim 30, wherein the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is aspartic acid; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D78, D87, D91, D102, D112, D117, D157, D175, D246, D256, D264, and D272; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D78A, D87A, D91A, D102A, D112A, D117A, D157A, D175A, D246A, D256A, D264A, and D272A; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 73-78, 80, 81, 83, or 85-87.32.The engineered tyrosinase of claim 30, wherein the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 is glutamic acid; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: E13, E24, E50, E149, E155, E225, and E249; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: E13A, E24A, E50A, E149A, E155A, E225A, and E249A; optionally wherein the MelC2 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32, 70-72, 79, 82, or 84.33.The engineered tyrosinase of claim 29, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 96 with a positively charged amino acid.34.The engineered tyrosinase of claim 29, wherein the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine, and isoleucine; optionally wherein the uncharged amino acid is alanine.35.The engineered tyrosinase of claim 29, wherein the positively charged amino acid is lysine or arginine.36.The engineered tyrosinase of claim 28, wherein the negatively charged amino acid is aspartic acid or glutamic acid.37.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96; optionally wherein the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 is K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A.38.The engineered tyrosinase of any one of claims 1, 4, 8, 9, or 12, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96 comprises two, three, four, or more amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 96.39.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.3%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97.40.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, H102, R105, D108, Y118, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139.41.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95.42.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: E100, H102, Y118, E119, D122, R125, D133, and R139; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: E100A, H102A, Y118F, E119A, D122A, R125A, D133A, and R139A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17.43.The engineered tyrosinase of claim 2 or 10, wherein the engineered tyrosinase comprises an MelC1 protein, wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having 100%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97.44.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with phenylalanine; optionally wherein the amino acid substitution of at least one amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with phenylalanine comprises an amino acid substitution at position Y118; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site of a wild type MelC1 protein of a wild type tyrosinase, wherein the wild type MelC1 protein comprises the sequence of SEQ ID NO: 97; optionally wherein the copper catalytic site is a CuA site or a CuB site; optionally wherein the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises an amino acid substitution at position Y118 of SEQ ID NO: 97; optionally wherein the amino acid substitution of an amino acid located on a loop near a copper catalytic site comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: Y118F, Y118A, and Y118G; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 17-19.45.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, R105, D108, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139; optionally wherein the amino acid substitution of at least one charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, R105A, D108A, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95.46.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid or a negatively charged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid or a negatively charged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: K58, R60, R61, R65, R105, R125, R129, and R139.47.The engineered tyrosinase of claim 46, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: K58A, R60A, R61A, R65A, R105A, R125A, R129A, and R139A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 65-69.48.The engineered tyrosinase of claim 47, wherein the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is lysine; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises an amino acid substitution at position K58; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution K58A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in SEQ ID NO: 65.49.The engineered tyrosinase of claim 47, wherein the at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is arginine; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: R60, R61, R65, R105, R125, R129, and R139; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: R60A, R61A, R65A, R105A, R125A, R129A, and R139A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 9, 10, 13, or 66-69.50.The engineered tyrosinase of claim 46, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one positively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with a negatively charged amino acid.51.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid or a positively charged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid or a positively charged amino acid comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, D69, D81, D97, E100, D108, E119, D122, D133, and E134.52.The engineered tyrosinase of claim 51, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid; optionally wherein the amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with an uncharged amino acid comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, D69A, D81A, D97A, E100A, D108A, E119A, D122A, D133A, and E134A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 8, 11, 12, 36-43, or 88-95.53.The engineered tyrosinase of claim 52, wherein the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is aspartic acid; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: D31, D32, D54, D69, D81, D97, D108, D122, and D133; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: D31A, D32A, D54A, D69A, D81A, D97A, D108A, D122A, and D133A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 8, 11, 36-39, 41-43, 88-91, or 93-95.54.The engineered tyrosinase of claim 52, wherein the at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 is glutamic acid; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions at positions selected from the group consisting of: E39, E55, E100, E119, and E134; optionally wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of: E39A, E55A, E100A, E119A, and E134A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92.55.The engineered tyrosinase of claim 51, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises amino acid substitution of at least one negatively charged amino acid of the sequence of SEQ ID NO: 97 with a positively charged amino acid.56.The engineered tyrosinase of claim 46, wherein the uncharged amino acid is selected from the group consisting of: glycine, alanine, valine, leucine, serine, threonine and isoleucine.57.The engineered tyrosinase of claim 46, wherein the uncharged amino acid is alanine.58.The engineered tyrosinase of claim 55, wherein the positively charged amino acid is lysine or arginine.59.The engineered tyrosinase of claim 50, wherein the negatively charged amino acid is aspartic acid or glutamic acid.60.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97; optionally wherein the one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 is D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.61.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97; optionally wherein the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions selected from the group consisting of: E119 and D108, E119 and D122, and E119 and E134; optionally wherein the two amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are selected from the group consisting of: E119 and D108A, E119A and D122A, and E119A and E134A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 37, 38, or 40.62.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97; optionally wherein the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions selected from the group consisting of: E119, D122, and D108, E119, E134, and D108, and E119, E134, and D122; optionally wherein the three amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are selected from the group consisting of: E119A, D122A, and D108A, E 119A, E134A, and D108A, and E119A, E134A, and D122A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 39 or 41-42.63.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 comprises four or more amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97; optionally wherein the four or more amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are at positions E119, D122, D108, and E134; optionally wherein the four or more amino acid substitutions relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 are E119A, D122A, D108A, and E134A; optionally wherein the MelC1 protein comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NO: 43.64.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-12, wherein the engineered tyrosinase comprises(a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, T52, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, V195, T203, G204, V205, K221, E225, R228, R229, D246, E249, D256, D264, R267, and D272; and(b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, H102, R105, D108, Y118, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139.65.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-12, wherein the engineered tyrosinase comprises(a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, T52C, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, N191F, N191C, N191A, N191V, N191G, R192A, V195F, V195A, V195N, T203F, G204F, V205F, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A; and(b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, H102A, R105A, D108A, Y118F, Y118A, Y118G, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.66.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-12, wherein the engineered tyrosinase comprises(a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-3, 22-25, 28-35, 46-62, 64, or 70-87; and(b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-13, 17-19, 36-43, or 65-69, or 88-95.67.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-12, wherein the engineered tyrosinase comprises(a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: K5, E13, K15, R16, R17, E24, R27, R30, E50, R65, R72, D78, D87, D91, R92, R95, D102, R109, R111, D112, D117, R132, R136, E149, R153, E155, D157, D175, R185, R192, K221, E225, R228, R229, D246, E249, K252, D256, D264, R267, and D272; and(b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is at one or more positions selected from the group consisting of: D31, D32, E39, D54, E55, K58, R60, R61, R65, D69, D81, D97, E100, R105, D108, E119, D122, R125, R129, D133, E134, and R139.68.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-12, wherein the engineered tyrosinase comprises(a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 96 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 96, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: K5A, E13A, K15A, R16A, R17A, E24A, R27A, R30A, E50A, R65A, R72A, D78A, D87A, D91A, R92A, R95A, D102A, R109A, R111A, D112A, D117A, R132A, R136A, E149A, R153A, E155A, D157A, D175A, R185A, R192A, K221A, E225A, R228A, R229A, D246A, E249A, K252A, D256A, D264A, R267A, and D272A; and(b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 90%sequence identity to the sequence of SEQ ID NO: 97 with at least one amino acid substitution relative to the sequence of SEQ ID NO: 97, wherein the at least one amino acid substitution is selected from the group consisting of: D31A, D32A, E39A, D54A, E55A, K58A, R60A, R61A, R65A, D69A, D81A, D97A, E100A, R105A, D108A, E119A, D122A, R125A, R129A, D133A, E134A, and R139A.69.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-12, wherein the engineered tyrosinase comprises(a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 32-35, 46-64, or 70-87; and(b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7-13, 36-43, 65-69, or 88-95.70.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-12, wherein the engineered tyrosinase comprises(a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 33-35, or 48-59, 61, 62, or 64; and(b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 7, 12, 37-43, 90, or 92.71.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-12, wherein the engineered tyrosinase comprises(a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 3 or 28-31; and(b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 4, 5, 7-9, 11, 13, or 17.72.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-12, wherein the engineered tyrosinase comprises(a) an MelC2 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NO: 34; and(b) an MelC1 protein comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NO: 7.73.The engineered tyrosinase of any one of claims 2, 3, 7, 10, or 11, wherein the MelC1 protein comprises at least one amino acid deletion relative to the sequence of SEQ ID NO: 97; optionally wherein the at least one amino acid deletion relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 is at one or more positions selected from M1-D47, L68-W99, or L143-G146; optionally wherein the at least one amino acid deletion relative to the sequence of SEQ ID NO: 97 is two, three four, five, six, seven, eight, nine, ten, or more amino acid deletions at positions selected from M1-D47, 68L-99W, or 143L-146G.74.A method of modifying a tyrosine residue in a protein substrate to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue, the method comprising: contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73.75.A method of modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue in a protein substrate to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) residue, the method comprising: contacting a protein substrate with the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73.76.A method of modifying a tyrosine to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) , the method comprising: contacting the tyrosine with the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73.77.A method of modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) , the method comprising: contacting the L-DOPA with the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73.78.A method of modifying a monophenol to an o-diphenol, the method comprising contacting the monophenol with the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73.79.A method of modifying an o-diphenol to an o-quinone, the method comprising contacting the monophenol with the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73.80.Use of the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73 for modifying a tyrosine residue in a protein substrate to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue.81.Use of the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73 for modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residue in a protein substrate to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) residue.82.Use of the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73 for modifying a tyrosine to a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) .83.Use of the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73 for modifying a L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) to a L-Dopaquinone (2-amino-3- (3, 4-dioxocyclohexa-1, 5-dien-1-yl) propanoic acid) .84.Use of the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73 for modifying a monophenol to an o-diphenol.85.Use of the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73 for modifying an o-diphenol to an o-quinone.86.The engineered tyrosinase of any one of claims 1-8 or 13-73, the method of claim 74 or 75, or the use of claim 80 or 81, wherein the protein substrate is a mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues.87.A method of making a mussel adhesive protein having one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues, the method comprising: contacting (a) a mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues with (b) the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73.88.Use of the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73 for making a mussel adhesive protein having one or more L-DOPA (3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine) residues from a mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues.89.The engineered tyrosinase, the method, or the use of claim 86, the method of claim 87, or the use of claim 88, wherein the mussel adhesive protein having one or more tyrosine residues comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 116-133.90.A polypeptide comprising an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 99%, or at least 99.5%or 100%sequence identity to the sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1-13, 15-43, or 46-95.91.A polynucleotide encoding the polypeptide of claim 90.92.A vector comprising the polynucleotide of claim 91.93.A host cell comprising the vector of claim 92 or the polynucleotide of claim 91.94.A composition comprising the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73, the polypeptide of claim 90, or the polynucleotide of claim 91.95.A kit comprising a container comprising the engineered tyrosinase of any one of claims 1-73, the polypeptide of claim 90, or the polynucleotide of claim 91.

Images