Antimicrobial compounds and methods of use thereof

Abstract

The significant upsurge in antibiotic resistance is constantly eroding the utility of today's antibiotics and there is a pressing need for novel antimicrobial agents. Bacterial NusB-NusE protein-protein interaction has been identified recently as a promising target for antibiotic discovery for its key function in bacterial transcription. Previously, we designed and synthesized a series of diaryl derivatives that showed potent antibacterial activity against Staphylococcus aureus based on the pharmacophore model from virtual screening.

Description

ANTIMICROBIAL COMPOUNDS AND METHODS OF USE THEREOFINCORPORATION BY REFERENCE OF SEQUENCE LISTING

[0001] The specification further incorporates by reference the Sequence Listing filed herewith. The Sequence Listing text file, identified as Sequence_Listing_100332US. xml, is 20 kilobytes and was created on October 11, 2024.TECHNICAL FIELD

[0002] The present disclosure relates to compounds useful as antimicrobial agents, pharmaceutical compositions comprising the same, and methods of use thereof.BACKGROUND

[0003] The rapid emergence in antibiotic resistance coupled with slow and ineffective development of novel antimicrobial agents has been challenging our ability to deal with bacterial infections [1, 2] . Consequently, innovative antimicrobials with new mechanisms of action are urgently required.

[0004] Bacterial transcription, where DNA segments are transcribed into RNA molecules (such as mRNA, tRNA, and rRNA) , is a crucial process for bacterial survival and highly modulated by RNA polymerase (RNAP) and a series of protein transcription factors [3] . Among these transcription factors, NusB-NusE protein protein interaction (PPI) is essential for the formation of antitermination complex to suppress premature transcription termination during transcription elongation, especially for rRNA synthesis [4, 5] . Moreover, NusB-NusE PPI have been identified as a promising target for antibiotic development due to the following reasons: 1) NusB and NusE are highly conserved across many bacteria [6] , making their interaction a suitable target for antibacterial agents with broad-spectrum activity; 2) The nature of PPI inhibitors reduces the occurrence of resistance mutations as mutations on one protein requires complementary mutations on its partner, otherwise they will fail to maintain the robust interactions; and 3) No human homologues of NusB or NusE are found, allowing discovery of antibacterial agents with low toxicity potential.

[0005] To identify NusB-NusE PPI inhibitors, the crystal structure of Escherichia coli NusB-NusE transcription antitermination complex (PDB: 3D3B) was used for the construction of a pharmacophore model [7, 8] . A close examination of NusB-NusE PPI in protein sequence alignment revealed that the major conserved intramolecular hydrogen bonding interactions occurred between the helix α1 of NusE and the binding groove of NusB, which involved NusB Glu75-NusE Arg16, NusB Glu81-NusE His15 and NusB Tyr18-NusE Asp19 (Figure 1A) [8-10]. These critical hot-spot residues were then chosen to develop the pharmacophore model (Figure 1B) , followed by an in-silico screening using the mini-Maybridge compound library and the Enamine antibacterial library, which furnished 7 compounds for further validation. Among these 7 compounds, (E) -2- ( ( (3-ethynylphenyl) imino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-1, Figure 1C) demonstrated an effective inhibition against NusB-NusE PPI with half-maximal inhibitory concentration (IC50) ～34.7±0.13 μM in the ELISA-based affinity assay [8] . The isothermal titration calorimetry (ITC) assay indicated a specific binding between hit compound MC4-1 and NusB [8] . In the antibacterial activity testing against different strains of Staphylococcus aureus including clinically isolated methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains, MC4-1 exhibited preferred antibacterial activities against all these S. aureus strains with minimum inhibitory concentration (MIC) values as low as 8 μg / mL against antibiotic susceptibility control strain S. aureus  25923 and 16 μg / mL against hospital-acquired MRSA ST239 [8] . Additionally, MC4-1 did not show significant in vitro cytotoxicity against human cell lines A549 and HaCaT [8] . All these biochemical and biophysical profiles of compound 1 make it a promising hit compound for the discovery of novel antibacterial agents.

[0006] Recently, we rationally designed and synthesized a series of novel diaryl compounds based upon the hit compound MC4-1 and the pharmacophore model [11, 12] . Several derivatives, including compounds MC4-2, MC4-3, MC4-4, and MC4-5 (Figure 2A) , exhibited promising antibacterial activity against a panel of bacterial pathogens, including clinically important MRSA strains. The preliminary structure activity relationship (SAR) highlighted the pivotal role of hydrophobic substituents on the left-hand benzene ring, and 2’ -OH and 5’ -NO2 on the right-hand benzene ring, which is also supported by the docking study of MC4-2 (Figure 2B) . Mechanistic study of compound MC4-2 demonstrated that it can effectively inhibit the NusB-NusE PPI by impairing subcellular localization of NusB, leading to the diminished levels of RNA. The high permeability and low-level hemolysis, together with the potent antibacterial activity, suggested certain drug-likeness potentials of these compounds.

[0007] There thus exists a need to identify improved antibacterial compounds and methods of use thereof.SUMMARY

[0008] In a first aspect, provided herein is a compound of Formula 1: or a pharamceutically acceptable salt thereof, wherein:m is 0, 1, or 2;n is 0 or 1;A is -NHCH2-, -NH (C=O) -, -NH (C=S) -, -OCH2-, -SCH2-, or -CH=CH-;R1 is hydrogen, chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, pyrrolyl, and furanyl;R2 is hydrogen, -NO2, or -SO2CF3;R3 is hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -SO2CF3, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl;R4 and R5 for each instance is independently selected from the group consisting of halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -B (OR) 2, -N (R) C (R) , -OCR, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, substituted or unsubstituted heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl;R6 for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl; andR for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, substituted or unsubstituted aryl, heteroaryl, and aralkyl; or two instances of R together with the atom they are covalently bonded form a 3-6 membered cycloalkyl and heterocyloalkyl, wherein if R1 is hydrogen then A must be -CH=CH-and at least R4 is chloride; or if R1 is hydrogen then A must be -NH (C=O) -and at least R4 is phenyl, and with the proviso that the compound is not selected from the group consisting of: wherein any of the substitutions is with one or more alkyl, halogen, haloalkyl, alkoxyl, alkenyl, alkynyl, aryl, or heteroaryl groups.

[0009] In certain embodiments, A is -NHCH2-, R2 is -NO2, R3 is chloride, and R1 is -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl.

[0010] In certain embodiments, at least one R6 is alkyl or R6 is hydrogen.

[0011] In certain embodiments, A is -NHCH2-or -NH (C=O) -, R2 is -SO2CF3 and R3 is hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl.

[0012] In certain embodiments, R1 is alkyl or -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl.

[0013] In certain embodiments, R5 is hydrogen.

[0014] In certain embodiments, at least one R6 is alkyl or R6 is hydrogen.

[0015] In certain embodiments, A is -OCH2-or -SCH2-, R2 is -NO2, or -SO2CF3, R3 is hydrogen, and R1 is alkyl or -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl.

[0016] In certain embodiments, at least one R6 is alkyl or R6 is hydrogen.

[0017] In certain embodiments, A is -CH=CH-, R2 is -NO2, and R1 is chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, and furanyl.

[0018] In certain embodiments, the compound is selected from the group consisting of: and pharmaceutically acceptable salts thereof, wherein:R1 is is hydrogen, chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, and furanyl;R2 is -NO2 and R3 is Cl;R2 is -NO2 and R3 is hydrogen;R2 is -SO2CF3 and R3 is hydrogen; orR2 is hydrogen and R3 is -SO2CF3;R4 and R5 for each instance is independently selected from the group consisting of halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl; or one or more of R4 and R5 is absent; andR for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, or aralkyl; or two instances of R together with the atom they are covalently bonded form a 3-6 membered cycloalkyl and heterocyloalkyl.

[0019] In certain embodiments, R4 and R5 for each instance is independently selected from the group consisting of halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, alkyl, haloalkylcycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl; or one or more of R4 and R5 is absent.

[0020] In certain embodiments, R1 is is hydrogen, tbutyl, chloride, bromide, CF3, optionally substituted phenyl, optionally substituted 2-thiophenyl, optionally substituted 2-furanyl, optionally substituted 3-thiophenyl, optionally substituted 3-furanyl, 4-tbutyl-phenyl, or 4-pentyl-phenyl.

[0021] In certain embodiments, the compound is selected from the group consisting of: and pharmaceutically acceptable salts thereof.

[0022] In certain embodiments, the compound is selected from the group consisting of: and pharmaceutically acceptable salts thereof.

[0023] In a second aspect, provided herein is a pharmaceutical composition comprising the compound described herein and at least one pharmaceutically acceptable excipient or pharmaceutically acceptable carrier.

[0024] In a third aspect, provided herein is a method of treating a bacterial infection in a subject in need thereof comprising the step of administering a therapeutically effective amount of the compound described herein to the subject.

[0025] In certain embodiments, the bacterial infection is a Gram-positive bacterial infection.

[0026] In certain embodiments, the bacterial infection is a Gram-negative bacterial infection.

[0027] In certain embodiments, the bacterial infection results from an Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium abscessus, Clostridioides difficile, or Helicobacter pylori infection.

[0028] In another aspect, the Staphylococcus aureus includes Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, or vancomycin-resistant Staphylococcus aureus.

[0029] In another aspect, provided herein is a method of treating a fungal infection in a subject in need thereof comprising the step of administering a therapeutically effective amount of the compound described herein to the subject.

[0030] In certain embodiments, the fungal infection results from a fungus of the Candida genus.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0031] The above and other objects and features of the present disclosure will become apparent from the following description of the disclosure, when taken in conjunction with the accompanying drawings.

[0032] Figure 1. A) E. coli NusB-NusE PPI interface (PDB: 3D3B) with hot-spot residues being displayed as sticks and labeled. B) Pharmacophore model with hit compound MC4-1 being docked in. Pink sphere: hydrogen bond donor; green sphere: hydrogen bond acceptor; blue sphere: hydrophobic interaction; grey sphere: exclusion zone. C) Chemical structure of hit compound MC4-1

[0033] Figure 2. A) Chemical structures of previous potent NusB-NusE PPI inhibitors. B) Docking model of compound MC4-2 (cyan) in complex with NusB (PDB: 3D3B) : hydrogen bonding interactions (green) , and hydrophobic interactions (pink) .

[0034] Figure 3. Modification strategies.

[0035] [Rectified under Rule 91, 07.01.2026]Figure 4. a, b. S. aureus type strain 25923 at early exponential phase was challenged with a) MC4-134 and b) MC4-135. c, d. Similarly, drug-resistant MRSA USA300 strain JE2 was also challenged with c) compound MC4-134 and d) MC4-135. Experiment was performed in triplicates and representative data presented.

[0036] Figure 5. Time-kill kinetics of MC4-190 when A) S. aureus type strain 29213 and B) drug-resistant MRSA USA300 strain JE2 at early exponential phase. Experiment was performed in triplicates and representative data presented.

[0037] Figure 6. A) B) S. aureus type strain 25923 and C) D) MRSA USA300 strain JE2 at early exponential phase were challenged with MC4-205. Experiment was performed in triplicates and representative data presented.

[0038] Figure 7. Daily fold changes in MICs during serial passaging of A) S. aureus 29213 at sub-inhibitory concentrations of MC4-135 compared to rifampicin and B) a drug-resistant ST-30 MRSA strain at sub-inhibitory concentrations of MC4-205 compared to rifampicin. Representative data were selected for presentation.

[0039]

[0040] [Rectified under Rule 91, 07.01.2026]Figure 8. Daily fold changes in MICs during serial passaging of A) S. aureus 29213 and B) drug-resistant MRSA USA300 strain JE2 at sub-inhibitory concentrations of MC4-190 compared to rifampicin. Representative data were selected for presentation.

[0041] Figure 9. Expression of virulence-associated genes in MRSA USA300 strain JE2 treated with either sub-inhibitory concentrations of MC4-205 or rifampicin. Rif: rifampicin.

[0042] Figure 10. Effect of subinhibitory concentrations of MC4-205, rifampicin and vancomycin on USA300 strain JE2 production of A) α-toxin and B) PVL, shown as (i) blot images and (ii) relative light units (RLU) . Experiments were performed in triplicates and representative figures were selected for presentation. Van: vancomycin; Rif: rifampicin.

[0043] Figure 11. Effect of subinhibitory levels of MC4-205, vancomycin and rifampicin on rabbit RBC lysis induced by MRSA USA300 strain JE2 ɑ-toxin, shown as (i) microplate images and (ii) %cell lysis calculated from the ratio between sample absorbance and control absorbance. Supernatants were serially-diluted 2-fold (× = number of folds) with packed rabbit RBC suspension. PBS and 1%Triton X-100 were used as negative control and positive control respectively. Experiments were conducted in triplicates and representative figures were selected for presentation. Van: Vancomycin; Rif: Rifampicin.

[0044] Figure 12. In vivo antimicrobial effects of different concentrations of MC4-190 and linezolid (LZD) on bacterial load of lung tissues (log10 (CFU / lung) ) infected with S. aureus strain 33591. **: P < 0.05.

[0045] Figure 13. Survival rates of mice infected by C. difficile 9689 treated with MC4-190 and vancomycin.

[0046] Figure 14. Survival rates of mice infected by C. difficile 9689 treated with MC4-135 and vancomycin.

[0047] Figure 15. Identification of interaction between NusB and representative compounds MC4-190 and MC4-135. A) B) Dose-dependent curves for the binding between NusB and MC4-190 or MC4-135. C) Sequence alignment of the NusB proteins from different pathogens. The essential residues targeted by compounds were indicated by black arrows. ECOL: E. coli; PAER: P. aeruginosa; ABAU: A. baumannii; BSUB: B. subtilis; EFAE: E. faecalis; SAUR: S. aureus. D) MST data of MC4-135 mixing with three NusB variants (D75A / R70A / F15A) . Technical repeats (n=3) were performed to enable data reproducibility.

[0048] Figure 16. In vitro and in vivo antitermination assay to characterise the molecular mechanism of the representative compounds MC4-134 and MC4-135. A) The scheme of antitermination during rRNA transcription. Antitermination complexes (rrnTAC) form at the antiterminator (nut-like) RNA for efficient 16S, 5S, and 23S rRNA synthesis. B) C) Cell-based transcription assay monitoring transcription of the reporter gene cat in E. coli K12 harbouring pSL115. The relative cat expression level was extrapolated using the ΔCT method. D) E) In vitro transcription assay monitoring the antitermination efficiency.Figure 17. Transcriptome analysis of MRSA USA300 strain JE2 treated with MC4-134. A) The cryoEM structure of the bacterial ribosome (PDB ID: 7K00) with rRNA in red and ribosomal proteins in blue. The scheme of representative ribosomal protein operons is illustrated, genes known to exert operon-specific inhibition in response to the decline in rRNA content are in bold letters. Log2 fold change of expressions of the known ribosomal protein autoregulators in MRSA USA300 treated with MC4-134 or rifampicin was shown. B) Heatmap showing the log2 fold change of ribosomal protein expression. C) Heatmap showing transcriptional response of genes under the treatment of MC4-134 and rifampicin.Figure 18. Fluorescent microscopy images of B. subtilis cells expressing (A) NusB-GFP, (B) RpoC-GFP, (C) RpsB-GFP, and (D) AtpA-GFP, in the presence of rifampicin (RIF) , chloramphenicol (CHL) , colistin (COL) , MC4-134, MC4-135, and MC4-190. The images show GFP fluorescence (green) , nucleoids stained with DAPI (red) , and overlays of the GFP and DAPI signals. Scale bar: 4 μm.

[0049] Figure 19. In vivo efficacy of MC4 compounds (MC4-438, MC4-423, MC4-412, MC4-416, MC4-434, MC4-134) and control drug, linezolid, in a neutropenic mouse thigh model with infection caused by MRSA USA300. *p < 0.05, **p < 0.01.

[0050] [Rectified under Rule 91, 07.01.2026]Figure 20. Characterisation of antimicrobial activity of MC4-134 in vivo. (A) Efficacy of subcutaneous (SC) injections of MC4-134 in a CA-MRSA USA300-infected mouse wound model (n = 4 per group) . The figure displays representative images of infected wounds treated with MC4-134 or linezolid. (B) The relative wound closure rate (%) over time (days) following 4-day SC injections of 5 mg / kg MC4-134, or 60 mg / kg linezolid. (C) Bacterial burden (log10 CFU / g) in wounds of CA-MRSA USA300-infected mice receiving SC injections of 5 mg / kg MC4-134, or 60 mg / kg linezolid. (D) Bacterial burden (log10 CFU / g) in the right thigh muscle of MRSA USA300-infected mice treated with various doses of MC4-134 or linezolid. (E-G) In vivo acute toxicity evaluation of MC4-134 in C57BL / 6J mice (n = 6 per group) : (E) Body weight changes (%) following SC administration of 100, 200, and 400 mg / kg MC4-134 (Na+) over time (days) ; (F) Tissue-to-body weight ratios of mice administered 100, 200, and 400 mg / kg MC4-134 (Na+) SC; (G) Representative haematoxylin and eosin (H&E, ×400) microphotographs of tissues from male mice sacrificed 3 days post-SC administration, including (1) heart, (2) liver, (3) spleen, (4) lung, (5) kidneys, (6) brain, (7) stomach, (8) duodenum, and (9) jejunum. *: P ≤ 0.05; **: P ≤ 0.01; ***: P ≤ 0.001; ****: P ≤ 0.0001; ns: no significance.

[0051] Figure 21. Death rate and minimum lethal dose (MLD) of MC4-134 administered subcutaneously (SC) at various doses in C57BL / 6J mice (n=6) .

[0052] Figure 22. In vivo efficacy of MC4-134 and MC4-438 and linezolid in a neutropenic rat deep thigh model with infection caused by MRSA USA300. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001, ****p < 0.0001.

[0053] Figure 23. Pharmacokinetic study and tissue distribution of MC4-425 in C57BL / 6J after a single dose of MC4-425 administered intravenously (5 mg / kg) or orally (10 mg / kg) (n = 3) . (A) Plasma concentration-time curve of MC4-425; (B) Pharmacokinetic parameters of MC4-425; (C) Tissue concentration-time curve of MC4-425 following intravenous administration at 5 mg / kg; (D) Tissue concentration-time curve of MC4-425 following oral administration at 10 mg / kg; (E) Tissue AUClast of MC4-425.

[0054] Figure 24. In vivo acute toxicity of MC4-425 in C57BL / 6J after a single dose of MC4-425 administered orally at different doses (n = 3) . (A) The minimum lethal dose (MLD) and death rate of MC4-425; (B) Body weight changes of mice treated with MC4-425; (C) Tissue-to-bodyweight ratio of mice administered MC4-425; (D) Selected microphotographs (hematoxylin and eosin stain × 400) of tissues in mice died in group of 200 mg / kg: (1) brain, (2) heart, (3) lung, (4) liver, (5) spleen, (6) kidneys, (7) stomach, (8) duodenum, (9) jejunum, and (10) colon. *p < 0.05, **p < 0.01.

[0055] Figure 25. Pharmacokinetic parameters of MC4-190 and MC4-205 after intravenous administration in rats (n = 3) (Mean ± SD) . Note: AUCINF, Vss, CL, and T1 / 2 of MC4-205 could not be calculated due to no elimination phase detected in the PK profile, and “ND” has been put to indicate that the parameters were not determined.

[0056] Figure 26. Plasma concentration-time profiles of intravenously administered rats receiving (A) 3 mg / kg and (B) 10 mg / kg doses of (i) MC4-190 and (ii) MC4-205. The corresponding rate identification numbers are indicated as Rat 004-015. Three rats were used per group.

[0057] Figure 27. Pharmacokinetic parameters of MC4-190 in rats after oral administration (n =3) (Mean ± SD) . Note: F%= AUCINF (oral 3 mg / kg)  / AUCINF (intravenous 3 mg / kg) .

[0058] Figure 28. Plasma concentration-time profile of MC4-190 in orally administered rats at a dose of 3 mg / kg. A zoomed-in view between 0-2 hours has been included for detailed analysis. The corresponding rate identification numbers are indicated as Rat 001-003. Three rats were used per group.

[0059] Figure 29. AUC (0-t min) of MC4-190 in plasma and different tissues in rats (n = 3) (Mean ±SD) .

[0060] Figure 30. Plasma concentration-time profiles of MC4-190 in plasma (μg / mL) and various tissues (μg / g) of rats (n= 3 per group) following (A) intravenous administration at a dose of 3 mg / kg and (B) oral administration at a dose of 15 mg / kg.Figure 31. Pharmacokinetic profiles and tissue distribution of MC4-134. (A-B) Pharmacokinetic profiles of MC4-190 in BALB / c mice. (C-D) Tissue distribution of MC4-134 after administrated via (i) intravenous, (ii) subcutaneous, or (iii) oral route.DEATAILED DESCRIPTION

[0061] To identify NusB-NusE PPI inhibitors, the crystal structure of Escherichia coli NusB-NusE transcription antitermination complex (PDB: 3D3B) was used for the construction of a pharmacophore model [7, 8] . A close examination of NusB-NusE PPI in protein sequence alignment revealed that the major conserved intramolecular hydrogen bonding interactions occurred between the helix α1 of NusE and the binding groove of NusB, which involved NusB Glu75-NusE Arg16, NusB Glu81-NusE His15 and NusB Tyr18-NusE Asp19 (Figure 1A) [8-10]. These critical hot-spot residues were then chosen to develop the pharmacophore model (Figure 1B) , followed by an in silico screening using the mini-Maybridge compound library and the Enamine antibacterial library, which furnished 7 compounds for further validation. Among these 7 compounds, (E) -2- ( ( (3-ethynylphenyl) imino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-1, Figure 1C) demonstrated an effective inhibition against NusB-NusE PPI with half-maximal inhibitory concentration (IC50) ～34.7±0.13 μM in the ELISA-based affinity assay [8] . The isothermal titration calorimetry (ITC) assay indicated a specific binding between hit compound MC4-1 and NusB [8] . In the antibacterial activity testing against different strains of Staphylococcus aureus including clinically isolated methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains, MC4-1 exhibited preferred antibacterial activities against all these S. aureus strains with minimum inhibitory concentration (MIC) values as low as 8 μg / mL against antibiotic susceptibility control strain S. aureus  25923 and 16 μg / mL against hospital-acquired MRSA ST239 [8] . Additionally, MC4-1 did not show significant in vitro cytotoxicity against human cell lines A549 and HaCaT [8] . All these biochemical and biophysical profiles of compound MC4-1 make it a promising hit compound for the discovery of novel antibacterial agents.

[0062] Encouraged by these positive outcomes, we pursued further systematic structural optimization. The SAR was updated, and the pharmacological properties were also investigated. The results of this investigation are described in greater detail herein.

[0063] Definitions

[0064] The following terms shall be used to describe the present invention. In the absence of a specific definition set forth herein, the terms used to describe the present invention shall be given their common meaning as understood by those of ordinary skill in the art.

[0065] Throughout the present disclosure, unless the context requires otherwise, the word "comprise"or variations such as "comprises"or "comprising", will be understood to imply the inclusion of a stated integer or group of integers but not the exclusion of any other integer or group of integers. It is also noted that in this disclosure and particularly in the claims and / or paragraphs, terms such as “comprises” , “comprised” , “comprising” and the like can have the meaning attributed to it in U. S. Patent law; e.g., they can mean “includes” , “included” , “including” , and the like; and that terms such as “consisting essentially of” and “consists essentially of” have the meaning ascribed to them in U. S. Patent law, e.g., they allow for elements not explicitly recited, but exclude elements that are found in the prior art or that affect a basic or novel characteristic of the present invention.

[0066] Furthermore, throughout the present disclosure and claims, unless the context requires otherwise, the word “include” or variations such as “includes” or “including” , will be understood to imply the inclusion of a stated integer or group of integers, but not the exclusion of any other integer or group of integers.

[0067] The use of the singular herein includes the plural (and vice versa) unless specifically stated otherwise. In addition, where the use of the term "about"is before a quantitative value, the present teachings also include the specific quantitative value itself, unless specifically stated otherwise. As used herein, the term "about"refers to a ±10%, ±7%, ±5%, ±3%, ±1%, or ±0%variation from the nominal value unless otherwise indicated or inferred.

[0068] As used herein, the terms “treat” , "treating", "treatment", and the like refer to reducing or ameliorating a disorder / disease and / or symptoms associated therewith. It will be appreciated, although not precluded, treating a disorder or condition does not require that the disorder, condition, or symptoms associated therewith be completely eliminated. In certain embodiments, treatment includes prevention of a disorder or condition, and / or symptoms associated therewith. The term “prevention” or “prevent” as used herein refers to any action that inhibits or at least delays the development of a disorder, condition, or symptoms associated therewith. Prevention can include primary, secondary and tertiary prevention levels, wherein: a) primary prevention avoids the development of a disease; b) secondary prevention activities are aimed at early disease treatment, thereby increasing opportunities for interventions to prevent progression of the disease and emergence of symptoms; and c) tertiary prevention reduces the negative impact of an already established disease by restoring function and reducing disease-related complications.

[0069] The term "subject"as used herein, refers to an animal, typically a mammal or a human, that will be or has been the object of treatment, observation, and / or experiment. When the term is used in conjunction with administration of a compound described herein, then the subject has been the object of treatment, observation, and / or administration of the compound described herein.

[0070] The term "therapeutically effective amount"as used herein, means that amount of the compound or pharmaceutical agent that elicits a biological and / or medicinal response in a cell culture, tissue system, subject, animal, or human that is being sought by a researcher, veterinarian, clinician, or physician, which includes alleviation of the symptoms of the disease, condition, or disorder being treated.

[0071] The term "composition"is intended to encompass a product comprising the specified ingredients in the specified amounts, as well as any product that results, directly or indirectly, from combinations of the specified ingredients in the specified amounts.

[0072] The term "pharmaceutically acceptable carrier"refers to a medium that is used to prepare a desired dosage form of a compound. A pharmaceutically acceptable carrier can include one or more solvents, diluents, or other liquid vehicles; dispersion or suspension aids; surface active agents; isotonic agents; thickening or emulsifying agents; preservatives; solid binders; lubricants; and the like. Remington's Pharmaceutical Sciences, Fifteenth Edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1975) and Handbook of Pharmaceutical Excipients, Third Edition, A. H. Kibbe ed. (American Pharmaceutical Assoc. 2000) , disclose various carriers used in formulating pharmaceutical compositions and known techniques for the preparation thereof.

[0073] As used herein, unless otherwise indicated, the term “halo” or “halide” includes fluoro, chloro, bromo or iodo.

[0074] As used herein, "alkyl"refers to a straight-chain or branched saturated hydrocarbon group. Examples of alkyl groups include methyl-, ethyl-, propyl (e.g., n-propyl and isopropyl) , butyl (e.g., n-butyl, iso-butyl, sec-butyl, tert-butyl) , pentyl groups (e.g., 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, iso-pentyl, tert-pentyl, 1, 2-dimethylpropyl, neopentyl, and 1-ethylpropyl) , hexyl groups, and the like. In various embodiments, an alkyl group can have 1 to 40 carbon atoms (i.e., C1-40 alkyl group) , for example, 1-30 carbon atoms (i.e., C1-30 alkyl group) . In certain embodiments, an alkyl group can have 1 to 6 carbon atoms, and can be referred to as a "lower alkyl group. "Examples of lower alkyl groups include methyl, ethyl, propyl (e.g., n-propyl and isopropyl) , and butyl groups (e.g., n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl) . In certain embodiments, alkyl groups can be optionally substituted as described herein. An alkyl group is generally not substituted with another alkyl group, an alkenyl group, or an alkynyl group.

[0075] As used herein, "alkenyl"refers to a straight-chain or branched alkyl group having one or more carbon-carbon double bonds. Examples of alkenyl groups include ethenyl, propenyl, butenyl, pentenyl, hexenyl, butadienyl, pentadienyl, hexadienyl groups, and the like. The one or more carbon-carbon double bonds can be internal (such as in 2-butene) or terminal (such as in 1-butene) . In various embodiments, an alkenyl group can have 2 to 40 carbon atoms (i.e., C2-40 alkenyl group) , for example, 2 to 20 carbon atoms (i.e., C2-20 alkenyl group) . In certain embodiments, alkenyl groups can be substituted as described herein. An alkenyl group is generally not substituted with another alkenyl group, an alkyl group, or an alkynyl group.

[0076] As used herein, "cycloalkyl"by itself or as part of another substituent means, unless otherwise stated, a monocyclic hydrocarbon having between 3-12 carbon atoms in the ring system and includes hydrogen, straight chain, branched chain, and / or cyclic substituents. Exemplary cycloalkyls include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, and the like.

[0077] As used herein, "heteroatom"refers to an atom of any element other than carbon or hydrogen and includes, for example, nitrogen, oxygen, silicon, sulfur, phosphorus, and selenium.

[0078] The term "heterocycloalkyl” as used herein includes reference to a saturated heterocyclic moiety having 3, 4, 5, 6 or 7 ring carbon atoms and 1, 2, 3, 4 or 5 ring heteroatoms selected from nitrogen, oxygen, phosphorus and sulfur. The group may be a polycyclic ring system but more often is monocyclic. This term includes reference to groups such as azetidinyl, pyrrolidinyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, oxiranyl, pyrazolidinyl, imidazolyl, indolizidinyl, piperazinyl, thiazolidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, quinolizidinyl and the like.

[0079] As used herein, "aryl"refers to an aromatic monocyclic hydrocarbon ring system or a polycyclic ring system in which two or more aromatic hydrocarbon rings are fused (i.e., having a bond in common with) together or at least one aromatic monocyclic hydrocarbon ring is fused to one or more cycloalkyl and / or heterocycloalkyl rings. An aryl group can have 6 to 24 carbon atoms in its ring system (e.g., C6-24 aryl group) , which can include multiple fused rings. In certain embodiments, a polycyclic aryl group can have 8 to 24 carbon atoms. Any suitable ring position of the aryl group can be covalently linked to the defined chemical structure. Examples of aryl groups having only aromatic carbocyclic ring (s) include phenyl, 1-naphthyl (bicyclic) , 2-naphthyl (bicyclic) , anthracenyl (tricyclic) , phenanthrenyl (tricyclic) , pentacenyl (pentacyclic) , and like groups. Examples of polycyclic ring systems in which at least one aromatic carbocyclic ring is fused to one or more cycloalkyl and / or cycloheteroalkyl rings include, among others, benzo derivatives of cyclopentane (i.e., an indanyl group, which is a 5, 6-bicyclic cycloalkyl / aromatic ring system) , cyclohexane (i.e., a tetrahydronaphthyl group, which is a 6, 6-bicyclic cycloalkyl / aromatic ring system) , imidazoline (i.e., a benzimidazolinyl group, which is a 5, 6-bicyclic cycloheteroalkyl / aromatic ring system) , and pyran (i.e., a chromenyl group, which is a 6, 6-bicyclic cycloheteroalkyl / aromatic ring system) . Other examples of aryl groups include benzodioxanyl, benzodioxolyl, chromanyl, indolinyl groups, and the like. In certain embodiments, aryl groups can be optionally substituted.

[0080] The term "aralkyl"refers to an alkyl group substituted with an aryl group.

[0081] As used herein, "heteroaryl"refers to an aromatic monocyclic ring system containing at least one ring heteroatom selected from oxygen (O) , nitrogen (N) , sulfur (S) , silicon (Si) , and selenium (Se) or a polycyclic ring system where at least one of the rings present in the ring system is aromatic and contains at least one ring heteroatom. Polycyclic heteroaryl groups include those having two or more heteroaryl rings fused together, as well as those having at least one monocyclic heteroaryl ring fused to one or more aromatic carbocyclic rings, non-aromatic carbocyclic rings, and / or non-aromatic cycloheteroalkyl rings. A heteroaryl group, as a whole, can have, for example, 5 to 24 ring atoms and contain 1-5 ring heteroatoms (i.e., 5-20 membered heteroaryl group) . The heteroaryl group can be attached to the defined chemical structure at any heteroatom or carbon atom that results in a stable structure. Generally, heteroaryl rings do not contain O-O, S-S, or S-O bonds. However, one or more N or S atoms in a heteroaryl group can be oxidized (e.g., pyridine N-oxide thiophene S-oxide, thiophene S, S-dioxide) . Examples of heteroaryl groups include, for example, the 5-or 6-membered monocyclic and 5-6 bicyclic ring systems shown below: where T is O, S, NH, N-alkyl, N-aryl, N- (arylalkyl) (e.g., N-benzyl) , SiH2, SiH (alkyl) , Si (alkyl) 2, SiH (arylalkyl) , Si (arylalkyl) 2, or Si (alkyl) (arylalkyl) . Examples of such heteroaryl rings include pyrrolyl, furyl, thienyl, pyridyl, pyrimidyl, pyridazinyl, pyrazinyl, triazolyl, tetrazolyl, pyrazolyl, imidazolyl, isothiazolyl, thiazolyl, thiadiazolyl, isoxazolyl, oxazolyl, oxadiazolyl, indolyl, isoindolyl, benzofuryl, benzothienyl, quinolyl, 2-methylquinolyl, isoquinolyl, quinoxalyl, quinazolyl, benzotriazolyl, benzimidazolyl, benzothiazolyl, benzisothiazolyl, benzisoxazolyl, benzoxadiazolyl, benzoxazolyl, cinnolinyl, lH-indazolyl, 2H-indazolyl, indolizinyl, isobenzofuyl, naphthyridinyl, phthalazinyl, pteridinyl, purinyl, oxazolopyridinyl, thiazolopyridinyl, imidazopyridinyl, furopyridinyl, thienopyridinyl, pyridopyrimidinyl, pyridopyrazinyl, pyridopyridazinyl, thienothiazolyl, thienoxazolyl, thienoimidazolyl groups, and the like. Further examples of heteroaryl groups include 4, 5, 6, 7-tetrahydroindolyl, tetrahydroquinolinyl, benzothienopyridinyl, benzofuropyridinyl groups, and the like. In certain embodiments, heteroaryl groups can be substituted as described herein. In certain embodiments, heteroaryl groups can be optionally substituted.

[0082] The term "optionally substituted"refers to a chemical group, such as alkyl, cycloalkyl aryl, and the like, wherein one or more hydrogen may be replaced with a substituent as described herein, for example, halogen, azide, alkyl, aralkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, hydroxyl, alkoxyl, amino, nitro, sulfhydryl, imino, amido, phosphonate, phosphinate, carbonyl, carboxyl, silyl, ether, alkylthio, sulfonyl, sulfonamido, ketone, aldehyde, ester, heterocyclyl, aromatic or heteroaromatic moieties, -CF3, -CN, or the like

[0083] The term "nitro"is art-recognized and refers to -NO2; the term "halogen"is art-recognized and refers to -F, -Cl, -Br or -I; the term "sulfhydryl"is art-recognized and refers to -SH; the term "hydroxyl"means -OH; and the term "sulfonyl"and “sulfone” is art-recognized and refers to -SO2-. "Halide"designates the corresponding anion of the halogens.

[0084] The symbol in a chemical structure represents a position from where the specified chemical structure is bonded to another chemical structure.

[0085] As used herein, the term "pharmaceutically acceptable salt"refers to those salts which are, within the scope of sound medical judgment, suitable for use in contact with the tissues of subjects without undue toxicity, irritation, allergic response and the like, and are commensurate with a reasonable benefit / risk ratio. Pharmaceutically acceptable salts are well known in the art. For example, Berge et al. describes pharmaceutically acceptable salts in detail in J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66: 1-19. Pharmaceutically acceptable salts of the compounds provided herein include those derived from suitable inorganic and organic acids and bases. Examples of pharmaceutically acceptable, nontoxic acid addition salts are salts of an amino group formed with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, sulfuric acid and perchloric acid or with organic acids such as acetic acid, oxalic acid, maleic acid, tartaric acid, citric acid, succinic acid or malonic acid or by using other methods used in the art such as ion exchange. Other pharmaceutically acceptable salts include adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, besylate, benzoate, bisulfate, borate, butyrate, camphorate, camphorsulfonate, citrate, cyclopentanepropionate, digluconate, dodecylsulfate, ethanesulfonate, formate, fumarate, glucoheptonate, glycerophosphate, gluconate, hemisulfate, heptanoate, hexanoate, hydroiodide, 2-hydroxy-ethanesulfonate, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, pamoate, pectinate, persulfate, 3-phenylpropionate, phosphate, picrate, pivalate, propionate, stearate, succinate, sulfate, tartrate, thiocyanate, p-toluenesulfonate, undecanoate, valerate salts, and the like. In certain embodiments, organic acids from which salts can be derived include, for example, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, oxalic acid, maleic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, salicylic acid, and the like.

[0086] Pharmaceutically acceptable salts derived from appropriate bases include alkali metal, alkaline earth metal, ammonium and N+ (C1-4alkyl) 4 salts. Representative alkali or alkaline earth metal salts include sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, iron, zinc, copper, manganese, aluminum, and the like. Further pharmaceutically acceptable salts include, when appropriate, non-toxic ammonium, quaternary ammonium, and amine cations formed using counterions, such as halide, hydroxide, carboxylate, sulfate, phosphate, nitrate, lower alkyl sulfonate, and aryl sulfonate. Organic bases from which salts can be derived include, for example, primary, secondary, and tertiary amines, substituted amines including naturally occurring substituted amines, cyclic amines, basic ion exchange resins, and the like, such as isopropylamine, trimethylamine, diethylamine, triethylamine, tripropylamine, and ethanolamine. In certain embodiments, the pharmaceutically acceptable base addition salt is chosen from ammonium, potassium, sodium, calcium, and magnesium salts.

[0087] Provided herein is a compound of Formula 1: or a pharamceutically acceptable salt thereof, wherein:m is 0, 1, or 2;n is 0 or 1;A is -NHCH2-, -NH (C=O) -, -NH (C=S) -, -OCH2-, -SCH2-, or -CH=CH-;R1 is hydrogen, chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, pyrrolyl, and furanyl;R2 is hydrogen, -NO2, or -SO2CF3;R3 is hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -SO2CF3, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl;R4 and R5 for each instance is independently selected from the group consisting of halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -B (OR) 2, -N (R) C (R) , -OCR, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, substituted or unsubstituted heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl;R6 for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl; andR for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, substitutted or unsubstituted aryl, heteroaryl, and aralkyl; or two instances of R together with the atom they are covalently bonded form a 3-6 membered cycloalkyl and heterocyloalkyl, wherein if R1 is hydrogen then A must be -CH=CH-and at least R4 is chloride; or if R1 is hydrogen then A must be -NH (C=O) -and at least R4 is phenyl, and with the proviso that the compound is not selected from the group consisting of: wherein any of the substitutions is with one or more alkyl, halogen, haloalkyl, alkoxyl, alkenyl, alkynyl, aryl, or heteroaryl groups.

[0088] The compounds described herein can be categorized according to the linker A into a compound of Formula 2, 3, 4, 5, 6, and 7 as shown below:

[0089] In certain embodiments, m is 0 or 1.

[0090] R1 can be hydrogen, chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, and furanyl. R6 represents moieties covalently bonded to any position of Ar1 valence permitting. The thiophenyl, and furanyl moieties can be covalently bonded to the compound of formula 1 at any position valency permitting, such as C-2 or C-3.

[0091] In certain embodiments, R1 is hydrogen, tbutyl, chloride, bromide, CF3, optionally substituted phenyl, optionally substituted 2-thiophenyl, optionally substituted 2-furanyl, optionally substituted 3-thiophenyl, optionally substituted 3-furanyl, 4-tbutyl-phenyl, or 4-pentyl-phenyl.

[0092] In certain embodiments, R3 is hydrogen, chloride, or -SO2CF3.

[0093] In certain embodiments, R2 is -NO2 and R3 is Cl; R2 is -NO2 and R3 is hydrogen; R2 is -SO2CF3 and R3 is hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -SO2CF3, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl; or R2 is hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -SO2CF3, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyland R3 is -SO2CF3.

[0094] In certain embodiments, R2 is -NO2 and R3 is Cl; R2 is -NO2 and R3 is hydrogen; R2 is -SO2CF3 and R3 is hydrogen; or R2 is hydrogen and R3 is -SO2CF3.

[0095] In certain embodiments, R6 for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, alkyl, haloalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl. In certain embodiments, R6 for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, halide, and alkyl.

[0096] In certain embodiments, R for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, or aralkyl; or two instances of R together with the atom they are covalently bonded form a 3-6 membered cycloalkyl and heterocyloalkyl. In certain embodiments, R for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, or alkyl; or two instances of R together with the atom they are covalently bonded form a 3-6 membered heterocyloalkyl.

[0097] In certain embodiments, the compound has Formula 2: or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each of m, n, R1, R2, R3, and R4 is indepednently as defined in any embodiment (s) described herein. In certain embodiments of the compound of Formula 2, R2 is -NO2, R3 is chloride, and R1 is -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl. In certain embodiments of the compound of Formula 2, at least one R6 is alkyl or R6 is hydrogen. In certain embodiments, of Formula 2, R1 is alkyl or -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl.

[0098] In certain embodiments, the compound has Formula 3: or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each of m, n, R1, R2, R3, and R4 is independently as defined in any embodiment (s) described herein. In certain embodiments of the compound of Formula 3

[0099] In certain embodiments, the compound has Formula 4: or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each of m, n, R1, R2, R3, and R4 is independently as defined in any embodiment (s) described herein. In certain embodiments of the compound of Formula 4, R2 is -NO2, or -SO2CF3, R3 is hydrogen, and R1 is alkyl or -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl. In certain embodiments of the compound of Formula 4, at least one R6 is alkyl or R6 is hydrogen.

[0100] In certain embodiments, the compound has Formula 5: or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each of m, n, R1, R2, R3, and R4 is independently as defined in any embodiment (s) described herein. In certain embodiments of the compound of Formula 5, R2 is -NO2, or -SO2CF3, R3 is hydrogen, and R1 is alkyl or -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl. In certain embodiments of the compound of Formula 5, at least one R6 is alkyl or R6 is hydrogen.

[0101] In certain embodiments, the compound has Formula 6: or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each of m, n, R1, R2, R3, and R4 is independently as defined in any embodiment (s) described herein. In certain embodiments of the compound of Formula 6, R2 is -NO2, and R1 is chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, and furanyl.

[0102] In certain embodiments, the compound is selected from the group consisting of: and pharmaceutically acceptable salts thereof, wherein: each of R1, R2, R3, R4, and R5 is independently defined in accordance with any embodiment (s) described herein; orR1 is is hydrogen, chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, and furanyl;R2 is -NO2 and R3 is Cl;R2 is -NO2 and R3 is hydrogen;R2 is -SO2CF3 and R3 is hydrogen; orR2 is hydrogen and R3 is -SO2CF3;R4 and R5 for each instance is independently selected from the group consisting of halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl; or one or more of R4 and R5 is absent; andR for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, or aralkyl; or two instances of R together with the atom they are covalently bonded form a 3-6 membered cycloalkyl and heterocyloalkyl.

[0103] In certain embodiments, the compound is selected from the group consisting of: and pharmaceutically acceptable salts thereof.

[0104] In certain embodiments, the compound is selected from the group consisting of: and pharmaceutically acceptable salts thereof.

[0105] The present disclosure also provides a pharmaceutical composition comprising a compound described herein and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or pharmaceutically acceptable carrier.

[0106] The compounds described herein and their pharmaceutically acceptable salts can be administered to a subject either alone or in combination with pharmaceutically acceptable carriers or diluents in a pharmaceutical composition according to standard pharmaceutical practice. The compound can be administered parenterally or orally. Parenteral administration includes intravenous, intramuscular, intraperitoneal, subcutaneous and topical.

[0107] Accordingly, the present disclosure provides pharmaceutically acceptable compositions, which comprise a therapeutically-effective amount of the compound described herein, formulated together with one or more pharmaceutically acceptable carriers (additives) and / or diluents. The pharmaceutical compositions of the present disclosure may be specially formulated for administration in liquid form, including those adapted for the following: (1) parenteral administration, for example, by intravenous as, for example, a sterile solution or suspension.

[0108] As set out herein, certain embodiments of the compound described herein may contain a basic functional group, such as amino, and are, thus, capable of forming pharmaceutically-acceptable salts with pharmaceutically-acceptable acids. The term "pharmaceutically-acceptable salts"in this respect, refers to the relatively non-toxic, inorganic and organic acid addition salts of the compound of the present disclosure. These salts can be prepared in situ in the administration vehicle or the dosage form manufacturing process, or by separately reacting a purified compound of the invention in its free base form with a suitable organic or inorganic acid, and isolating the salt thus formed during subsequent purification. Representative salts include the bromide, chloride, sulfate, bisulfate, carbonate, bicarbonate, nitrate, acetate, valerate, oleate, palmitate, stearate, laurate, benzoate, lactate, phosphate, tosylate, citrate, maleate, fumarate, succinate, tartrate, napthylate, mesylate, glucoheptonate, lactobionate, and laurylsulphonate salts and the like.

[0109] The pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present disclosure include the conventional nontoxic salts or quaternary ammonium salts of the compounds, e.g., from nontoxic organic or inorganic acids. For example, such conventional nontoxic salts include those derived from inorganic acids such as hydrochloride, hydrobromic, sulfuric, sulfamic, phosphoric, nitric, and the like; and the salts prepared from organic acids such as acetic, propionic, succinic, glycolic, stearic, lactic, malic, tartaric, citric, ascorbic, palmitic, maleic, hydroxymaleic, phenylacetic, glutamic, benzoic, salicyclic, sulfanilic, 2-acetoxybenzoic, fumaric, toluenesulfonic, methanesulfonic, ethane disulfonic, oxalic, isothionic, and the like.

[0110] In other cases, the compound described herein may contain one or more acidic functional groups and, thus, are capable of forming pharmaceutically-acceptable salts with pharmaceutically-acceptable bases. The term "pharmaceutically-acceptable salts"in these instances refers to the relatively non-toxic, inorganic and organic base addition salts of the compound of the present invention. These salts can likewise be prepared in situ in the administration vehicle or the dosage form manufacturing process, or by separately reacting the purified compound in its free acid form with a suitable base, such as the hydroxide, carbonate or bicarbonate of a pharmaceutically-acceptable metal cation, with ammonia, or with a pharmaceutically-acceptable organic primary, secondary or tertiary amine. Representative alkali or alkaline earth salts include the lithium, sodium, potassium, calcium, magnesium, and aluminum salts and the like. Representative organic amines useful for the formation of base addition salts include ethylamine, diethylamine, ethylenediamine, ethanolamine, diethanolamine, piperazine and the like.

[0111] Wetting agents, emulsifiers and lubricants, such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate, as well as coloring agents, release agents, coating agents, sweetening, flavoring and perfuming agents, preservatives, solubilizing agents, buffers and antioxidants can also be present in the compositions.

[0112] Methods of preparing the pharmaceutical comprising the compound include the step of bringing into association a compound described herein with the carrier and / or excipient, optionally, one or more accessory ingredients. In general, the formulations are prepared by uniformly and intimately bringing into association a compound described herein with liquid carriers (liquid formulation) , liquid carriers followed by lyophilization (powder formulation for reconstitution with sterile water or the like) , or finely divided solid carriers, or both, and then, if necessary, shaping or packaging the product.

[0113] Pharmaceutical compositions of the present disclosure suitable for parenteral administration comprise one or more compounds described herein in combination with one or more pharmaceutically-acceptable sterile isotonic aqueous or non-aqueous solutions, dispersions, suspensions or emulsions, or sterile powders which may be reconstituted into sterile injectable solutions or dispersions just prior to use, which may contain sugars (such as sucrose) , alcohols, non-ionic surfactants (such as Tween 20) , antioxidants, buffers, bacteriostats, chelating agents, solutes which render the formulation isotonic with the blood of the intended recipient or suspending or thickening agents.

[0114] Examples of suitable aqueous and non-aqueous carriers which may be employed in the pharmaceutical compositions of the disclosure include water, ethanol, polyols (such as glycerol, propylene glycol, polyethylene glycol, and the like) , and suitable mixtures thereof, vegetable oils, such as olive oil, and injectable organic esters, such as ethyl oleate. Proper fluidity can be maintained, for example, by the use of coating materials, such as lecithin, by the maintenance of the required particle size in the case of dispersions, and by the use of surfactants.

[0115] These compositions may also contain adjuvants, such as preservatives, wetting agents, emulsifying agents and dispersing agents. Prevention of the action of microorganisms upon the compounds of the present disclosure may be ensured by the inclusion of various antibacterial and antifungal agents, for example, paraben, chlorobutanol, phenol sorbic acid, and the like. It may also be desirable to include isotonic agents, such as sugars, sodium chloride, and the like into the compositions. In addition, prolonged absorption of the injectable pharmaceutical form may be brought about by the inclusion of agents which delay absorption such as aluminum monostearate and gelatin.

[0116] In another aspect, provided herein is a method of treating a bacterial infection in a subject in need thereof, the method comprising the step of administering a therapeutically effective amount of a compound described herein to the subject.

[0117] The bacterial infection can be the result of a Gram-positive bacteria or a Gram-negative bacteria.

[0118] Exemplary bacterial infections include, but are not limited to, pneumonia, otitis media, sinusitus, bronchitis, tonsillitis, and mastoiditis related to infection by Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, E. faecium, E. casselflavus, S. epidermidis, S. haemolyticus, or Peptostreptococcus spp.; pharyngitis, rheumatic fever, and glomerulonephritis related to infection by Streptococcus pyogenes, Groups C and G streptococci, Corynebacterium diphtheriae, or Actinobacillus haemolyticum; respiratory tract infections related to infection by Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, or Chlamydia pneumoniae; blood and tissue infections, including endocarditis and osteomyelitis, caused by S. aureus, S. haemolyticus, E. faecalis, E. faecium, E. durans, including strains resistant to known antibacterials such as, but not limited to, beta-lactams, vancomycin, aminoglycosides, quinolones, chloramphenicol, tetracyclines and macrolides; uncomplicated skin and soft tissue infections and abscesses, and puerperal fever related to infection by Staphylococcus aureus, coagulase-negative staphylococci (i.e., S. epidermidis, S. hemolyticus, etc. ) , Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Streptococcal groups C-F (minute-colony streptococci) , viridans streptococci, Corynebacterium minutissimum, Clostridium spp., or Bartonella henselae; uncomplicated acute urinary tract infections related to infection by Staphylococcus aureus, coagulase-negative staphylococcal species, or Enterococcus spp.; urethritis and cervicitis; sexually transmitted diseases related to infection by Chlamydia trachomatis, Haemophilus ducreyi, Treponema pallidum, Ureaplasma urealyticum, or Neiserria gonorrheae; toxin diseases related to infection by S. aureus (food poisoning and toxic shock syndrome) , or Groups A, B, and C streptococci; ulcers related to infection by Helicobacter pylori; systemic febrile syndromes related to infection by Borrelia recurrentis; Lyme disease related to infection by Borrelia burgdorferi; conjunctivitis, keratitis, and dacrocystitis related to infection by Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, S. aureus, S. pneumoniae, S. pyogenes, H. influenzae, or Listeria spp.; disseminated Mycobacterium avium complex (MAC) disease related to infection by Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare; infections caused by Mycobacterium tuberculosis, M. leprae, M. paratuberculosis, M. kansasii, M. abscessus or M. chelonei; gastroenteritis related to infection by Campylobacter jejuni; intestinal protozoa related to infection by Cryptosporidium spp.; odontogenic infection related to infection by viridans streptococci; persistent cough related to infection by Bordetella pertussis; gas gangrene related to infection by Clostridium perfringens or Bacteroides spp.; and atherosclerosis or cardiovascular disease related to infection by Helicobacter pylori or Chlamydia pneumoniae. Bacterial infections and disorders related to such infections, which may be treated or prevented in animals include the following: bovine respiratory disease related to infection by P. haemolytica, P. multocida, Mycoplasma bovis, or Bordetella spp.; cow enteric disease related to infection by E. coli or protozoa (i.e., coccidia, cryptosporidia, etc. ) ; dairy cow mastitis related to infection by S. aureus, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Klebsiella spp., Corynebacterium spp., or Enterococcus spp.; swine respiratory disease related to infection by A. pleuro., P. multocida, or Mycoplasma spp.; swine enteric disease related to infection by E. coli, Lawsonia intracellularis, Salmonella spp., or Serpulina hyodysinteriae; cow foot rot related to infection by Fusobacterium spp.; cow metritis related to infection by E coli; cow hairy warts related to infection by Fusobacterium necrophorum or Bacteroides nodosus; cow pink-eye related to infection by Moraxella bovis; cow premature abortion related to infection by protozoa (i.e. neosporium) ; urinary tract infection in dogs and cats related to infection by E. coli; skin and soft tissue infections in dogs and cats related to infection by S. epidermidis, S. intermedius, coagulase neg. Staphylococci or P. multocida; and dental or mouth infections in dogs and cats related to infection by Alcaligenes spp., Bacteroides spp., Clostridium spp., Enterobacter spp., Eubacterium spp., Peptostreptococcus spp., Porphyromonas spp., or Prevotella spp. . Other bacterial infections and disorders related to such infections, which may be treated or prevented in accord with the method of the present invention are referred to in J. P. Sanford et al., “The Sanford Guide To Antimicrobial Therapy, ” 26 th Edition, (Antimicrobial Therapy, Inc., 1996) .

[0119] In certain embodiments, the bacteria is selected from the group consisting of Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Streptococcus pneumoniae, or Methicillin-resistant Staphylococcus aureus. In certain embodiments, the bacteria is EFAE 19433, SAUR 25923, or SAUR 29213.

[0120] The subject can be a canine, feline, bovine, equine, non-human primate, or human. In certain embodiments, the subject is a human.

[0121] In certain embodiments, the compounds described herein are bactericidal or bacteriostatic.

[0122] In another aspect, provided herein is the use of a compound described herein for the preparation of a medicament for the treatment of a bacterial infection.

[0123] In another aspect, provided herein is a method of treating a bacterial infection in a subject in need thereof, the method comprising the step of co-administering a therapeutically effective amount of a compound described herein and an antibacterial agent to the subject. The antibacterial agent can be any antibacterial agent known in the art.

[0124] In another aspect, provided herein is a method of treating a fungal infection in a subject in need thereof comprising the step of administering a therapeutically effective amount of the compound described herein to the subject.

[0125] In another aspect, provided herein is the use of a compound described herein for the preparation of a medicament for the treatment of a fungal infection.

[0126] In certain embodiments, the fungal infection results from a fungus of the Candida genus include, but are not limited to, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida krusei, Candida auris, Candida dubliniensis, Candida lusitaniae, Candida kefyr, and Candida guilliermondii.

[0127] Derivative Design. The effects of hydrophobic substituents at 2-position and electron-withdrawing groups at 4’ -or 5’ -position as well as additional insertion at 3’ -or 4’ -position on antibacterial activity were more thoroughly explored. Various substituents including substituted phenyls, ethyl, methyl, chloride, and sulfonyl groups were introduced on either left-hand or right-hand benzene ring (Figure 3) .

[0128] The type of linker was also believed to have a pivotal function in enhancing antibacterial activity. Numerous linkers covering rigid (-NHCO-, -CONH-, and (E) -C=C-) and flexible ones (-SCH2-, -OCH2-, -COCH2-, -CH (OH) CH2-, -NHCH (Me) -, and -N (Me) CH2-) were investigated (Figure 3) .

[0129] Chemical Synthesis. Synthesis of derivatives MC4-143 to MC4-149 with modification on the left-hand benzene ring is shown in Scheme 1. The Schiff base intermediates 1b-7b were synthesized in 77-92%yields by reacting 5-nitrosalicylaldehyde with substituted anilines 1a-7a in ethanol at room temperature. The corresponding amine-linked compounds 1-7 were prepared via reductive amination of the above derivatives in 81-93%yields using sodium triacetoxyborohydride as a mild reducing agent. Reduction of 2-aminobenzophenone 4a by borane led to intermediate 6a in 73%yield, which was reduced by triethylsilane to furnish intermediate 7a in 78%yield. (Scheme 2) .

[0130] Scheme 1. Synthetic Route to Target Compounds MC4-143 to MC4-149a aReagents and conditions: (i) EtOH, rt, overnight, 77-92%; (ii) NaBH (OAc) 3, DCM, rt, overnight, 81-93%.

[0131] Scheme 2. Synthetic Route to Intermediate Compounds 6a, 7aa aReagents and conditions: (i) BH3, THF, 0℃-rt, overnight, 73%; (ii) triethylsilane, TFA, DCM, 0℃-rt, overnight, 78%.

[0132] Synthesis of right-hand benzene ring modified amine-linked derivatives MC4-150, MC4-155, MC4-180, MC4-181, MC4-184, MC4-187, MC4-188, MC4-190, MC4-192 to MC4-194, and 196-199 is outlined in Scheme 3-4. Among them, derivatives MC4-155, MC4-150, MC4-181, MC4-184, MC4-187, MC4-188 and MC4-190 and intermediates 15c and 18c were synthesized following the same synthetic method of Schiff base production and reductive amination. Compounds MC4-192 to 194 and MC4-198 and MC4-199 were prepared respectively from 15c and 18c with appropriate sulfinic acid salts as previously described

[0013] . Triflyl substituted derivatives MC4-197 and MC4-196 were obtained respectively by reacting critical intermediates 20e and 21e with 2-aminodiphenyl, followed by the demethylation of intermediates 20f and 21f. The key intermediates 20e and 21e were produced respectively from anilines 20a and 21a in five steps, via a diazotisation –trifluoromethylthiolation –oxidation –reduction –bromination sequence [14-16] .

[0133] Scheme 3. Synthetic Route to Target Compounds MC4-155, MC4-150, MC4-181, MC4-184, MC4-187, MC4-188, MC4-190a aReagents and conditions: (i) EtOH, rt, overnight, 79-88%; (ii) NaBH (OAc) 3, DCM, rt, overnight, 78-89%; (iii) CuI, L1, K3PO4, benzenesulfinic acid sodium salt for MC4-192 and MC4-198, 4-fluorobenzenesulfinic acid sodium salt for MC4-193, or sodium ethanesulfinate for MC4-194 and MC4-199, DMSO, 70℃, overnight, 71-79%.

[0134] Scheme 4. Synthetic Route to Target Compounds MC4-197, MC4-196a aReagents and conditions: (i) HBF4, tBuONO, MeOH, rt, 1 h; (ii) CuSCN, NaSCN, Cs2CO3, TMSCF3, ACN, rt, N2, overnight; (iii) NaIO3, RuCl3, ACN / CCl4 / water, rt, overnight, 61-67%in three steps; (iv) DIBAL, DCM, 0℃, 1 h; then NBS, PPh3, rt, 1 h, 65-73%in two steps; (v) K2CO3, ACN, 80℃, overnight, 72-77%; (vi) BBr3, DCM, 0℃-rt, overnight, 81-84%.

[0135] Nitration of salicylaldehydes with substituents at 3-position by concentrated HNO3 in AcOH afforded intermediates 8a-11a in 68-85%yields

[0017] . Similarly, nitration of salicylaldehydes with substituents at 4-position by concentrated HNO3 and H2SO4 in AcOH furnished intermediates 12a-13a in 52-71%yields. Intermediate 14a was prepared by reacting 5-iodosalicylaldehyde with sodium methanesulfinate in 78%yield as previously described (Scheme 5)

[0013] .

[0136] Scheme 5. Synthetic Route to Intermediate Compounds 8a-14aa

[0137] aReagents and conditions: (i) conc. HNO3, AcOH, rt, 2 h, 68-85%; (ii) conc. H2SO4, conc. HNO3, AcOH, rt, 2 h, 52-71%; (iii) CuI, L1, K3PO4, sodium methanesulfinate, DMSO, 70℃, overnight, 77%; (iv) DCM, TEA, isobutyl chloroformate , 2, 6-dimethylaniline, 0℃-rt., overnight; (v) DCM, TFA, rt, 5h, 78%for two steps.

[0138] Synthesis of linker modified derivatives MC4-134, MC4-135, MC4-152 to MC4-154, MC4-157, MC4-158, MC4-160 to MC4-166, MC4-182, MC4-189, MC4-195, MC4-204, MC4-205, MC4-230 to MC4-232, MC4-234, MC4-236 and MC4-237 is outlined in Scheme 6-10. The 5’ -NO2 substituted compounds MC4-152, MC4-154, MC4-160 to MC4-164, MC4-166 and MC4-189 with -OCH2-, -SCH2-, or -N (Me) CH2-as the linker were prepared through nucleophilic substitution between nitrobenzyl bromides 22a and the corresponding phenols 22b-25b, thiophenols 28b-31b or N-methylanilines 34b, followed by the nucleophilic substitution of fluorobenzenes intermediates 22c-25c, 28c-31c, 34c using sodium hydroxide in DMSO / water in 58-67%yields. Similarly, nucleophilic substitution reaction between triflyl substituted benzyl bromides 21i prepared from 21d via the demethylation-substitution-reduction-bromination sequence and the corresponding phenols 22b, 25b, or thiophenols 28b, 31b gave O-SEM protected key intermediates 26a-27a, 32a-33a, which were then readily deprotected in 2%H2SO4 / MeOH solution to furnish target compounds MC4-231, MC4-232, MC4-234 and MC4-237 in 74-85%yields. Reduction of in situ formed Schiff bases starting from 2-aminodiphenyl and acetophenones afforded compound MC4-182 with -NHCH (CH2) -as the linker (Scheme 6) .

[0139] Scheme 6. Synthetic Route to Target Compounds MC4-152, MC4-154, MC4-160 to MC4-164, MC4-166, MC4-182, MC4-189, MC4-231, MC4-232, MC4-234, MC4-237a

[0140] aReagents and conditions: (i) NaBH4, MeOH, rt, 1 h; then NBS, PPh3, DCM, rt, 1 h, 68%in two steps; (ii) K2CO3, ACN, reflux, N2, overnight for 22b-25b, 34b; K2CO3, ACN, rt, N2, overnight for 28b-31b; K2CO3, ACN, rt-80℃, N2, overnight, 70-86%for 26-27a, 32-33a; (iii) NaOH, DMSO / water, rt, N2, 4 h, 58-76%in two steps; (iv) AlCl3, DCM, rt, 3 h, 85%; (v) SEMCl, DIEA, rt, overnight, 92%; (vi) DIBAL, DCM, 0℃, 1 h; then NBS, PPh3, DCM, rt, 1 h, 62%in two steps; (vii) 2%H2SO4-MeOH, rt, overnight, 74-85%; (viii) MeOH, reflux, overnight; then NaBH4, MeOH, rt, 1 h, 59%in two steps.

[0141] The O-SEM protected bromobenzenes 36b underwent the coupling reaction with 2'-chloroacetophenone to form intermediate 36c

[0018] , which was then subjected to nitration and deprotection to yield compound MC4-158

[0019] . Reduction of MC4-158 by sodium borohydride gave derivative MC4-157 in 79%yield (Scheme 7) .

[0142] Scheme 7. Synthetic Route to Target Compounds MC4-156, MC4-157a aReagents and conditions: (i) SEMCl, DIEA, rt, overnight, 93%; (ii) Pd2 (dba) 3, DPEPhos, NaOtBu, 1- (2-chlorophenyl) ethan-1-one, THF, 70℃, 4 h, 87%; (iii) TBAN, trifluoroacetic anhydride, 18-crown-6, DCM, rt, 2 h, 67%; (iv) 2%H2SO4-MeOH, rt, overnight, 37%; (v) NaBH4, EtOH, rt, 1 h, 79%.

[0143] Benzamides MC4-195, MC4-204, MC4-205, MC4-230, and MC4-236 were obtained by reacting appropriate benzoyl chlorides prepared from corresponding benzoic acids through formylation with anilines, followed by the deprotection of methyl ethers using borane, while benzamides MC4-165 were approached from precursor 43a following the similar formylation-amidation-nucleophilic substitution sequence. The desired triflyl group in compounds MC4-195, MC4-204, MC4-205, MC4-230, and MC4-236 could be converted from the nitro group according to the typical procedures in good yields (Scheme 8)

[0020] .

[0144] Scheme 8. Synthetic Route to Target Compounds MC4-165, MC4-195, MC4-204, MC4-205, MC4-230, and MC4-236a aReagents and conditions: (i) (COCl) 2, DCM, DMF, rt, 1 h; then TEA, substituted anilines, DCM, rt, overnight, 60-72%; (ii) BBr3, DCM, -10℃-rt, 2-4 h, 59-92%; (iii) iron powder, NH4Cl, EtOH / water, 80℃, 1 h, 52%; then HBF4, tBuONO, MeOH, rt, 1 h; (iv) CuSCN, NaSCN, Cs2CO3, TMSCF3, ACN, rt, overnight; (v) NaIO3, RuCl3, ACN / CCl4 / water, rt, overnight, 50-51%in three steps; (vi) iron powder, NH4Cl, EtOH / water, 80℃, 1 h, 94%; (vii) NaOH, EtOH / water, rt, 2 h, 93-96%; (viii) NaOH, DMSO / water, rt, 4 h, 51%.

[0145] Stilbenes MC4-134, MC4-135 and MC4-153 were obtained from the Heck reaction between O-SEM protected styrenes 44b prepared from benzaldehydes 44a by the Wittig reaction and substituted iodobenzenes 44a-46a, followed by the deprotection of intermediates 44b-46b in 58-73%yields (Scheme 9) . Thiophenols intermediates 28b, 31b were synthesized by the typical diazotization reaction

[0021] , while N-methyl anilines 34b was synthesized in 77%yield via the palladium-catalyzed coupling reaction of 2-bromobiphenyl with methylamine (Scheme 10)

[0022] .

[0146] Scheme 9. Synthetic Route to Target Compounds MC4-134, MC4-135 and MC4-153a aReagents and conditions: (i) SEMCl, DIPEA, DCM, rt, 3 h, 80%; (iv) methyltriphenylphos-phonium bromide, NaH, THF, overnight, 62%; (iii) K3PO4, Pd (OAc) 2, DMF, 100℃, N2, overnight; (iv) 2%H2SO4-MeOH, rt, overnight, 58-73%in two steps.

[0147] Scheme 10. Synthetic Route to Intermediate Compounds 28b, 31b, 34ba aReagents and conditions: (i) NaNO2, conc. HCl, 0℃ for 28a or -20℃ for 31a, 15 min; then potassium ethylxanthate, 45℃, 30 min; then KOH, EtOH, reflux, 3 h, 37-48%in three steps; (ii) methylamine hydrochloride, Pd2dba3, rac-BINAP, NaOtBu, toluene, 75℃, N2, overnight, 77%.

[0148] Scheme 11. Synthetic Route to Target Compounds MC4-226, MC4-227a aReagents and conditions: (i) Pd (dppf) Cl2·DCM, Na2CO3, DMF / water, 1-bromo-4-tert-butylbenzene for 226a, 1-bromo-4-pentylbenzene for 227a, 90℃, overnight, 88-92%; (ii) EtOH, rt, overnight; then NaBH (OAc) 3, DCM, rt, overnight, 61-62%; (iii) conc. H2SO4, conc. HNO3, AcOH, rt, 15 min, 52%.

[0149] Scheme 12. Synthetic Route to Target Compound MC4-240 and MC4-242a aReagents and conditions: (i) HBF4 50%, tert-Butyl nitrite, EtOH, rt, 1 h; (ii) CuSCN, NaSCN, CsCO3, TMSCF3, ACN, rt, N2, overnight, 56%; (iii) RuCl3, NaIO4, H2O / ACN / DCM, rt, 2 h, 95%; (iv) Fe, NH4Cl, EtOH / H2O, 85℃, 1 h, 28-49%; (v) Acetic anhydride, AcOH, 85℃, 3 h, 95%; (vi) NaOH, EtOH / H2O, rt, 1 h; (vii) DMF, (COCl) 2, DCM, rt, 1 h; [1, 1’ -biphenyl] -2-amine, TEA, DCM, rt, overnight, 29%; (viii) EDCI, DMAP, [1, 1’ -biphenyl] -2-amine, DCM, rt, overnight, 54%

[0150] Scheme 13. Synthetic Route to Target Compound MC4-239, MC4-246 to MC4-249, MC4-252, MC4-253, and MC4-255a a Reagents and conditions: (i) HBF4 50%, tert-Butyl nitrite, EtOH, rt, 1 h; (ii) CuSCN, NaSCN, Cs2CO3, TMSCF3, ACN, rt, N2, overnight, 94%; (iii) RuCl3, NaIO4, H2O / ACN / DCM, rt, 2 h, 80%; (iv) NaOH, EtOH / H2O, rt, 1 h, 93%; (v) Aniline, DMF, (COCl) 2, DCM, rt, 1 h; (vi) TEA, DCM, rt, overnight, 42-83% (vii) BBr3, DCM, 0℃-rt, 10-95%; (viii) Lawesson’s reagent, Toluene, reflux, overnight, N2, 85%.

[0151] Scheme 14. Synthetic Route to intermediate 248e, and 253ea aReagents and conditions: (i) Pd (PPh3) 2Cl2, CuI, THF, TEA, rt., overnight, 80℃, 62%; (ii) Pd (PPh3) 4, NaCO3, H2O, EtOH, toluene, reflux, N2, 8 h, 89%.

[0152] Scheme 15. Synthetic Route to Target Compound MC4-264a aReagents and conditions: (i) 239e, pyridine, overnight, 80 ℃, 75%; (ii) BBr3, DCM, 0℃-rt, 25%

[0153] Scheme 16. Synthetic Route to Target Compound MC4-267, MC4-268, MC4-271, MC4-274, and MC4-275a aReagents and conditions: (i) SEM-Cl, DIEA, DCM, r.t., o / n, 70%; (ii) PPh3-CH3Br, NaH, THF, r.t., overnight, N2, 45%; (iii) idobenzene, Pd (OAc) 2, K3PO4, DMF, 110 ℃, 4-24 h, N2; (iv) 1%H2SO4, MeOH, r.t., overnight, 46-76%for two steps; (v) methyl trifluoromethanesulfonate, DCM, rt, 2-5 h, N2, 35-81%; (vi) benzoic boronic acid / acid pinacol ester, Pd (PPh3) 4, K3PO4, 100℃, H2O, THF, overnight, N2, 63-83%

[0154] Scheme 17. Synthetic Route to intermediate 267a, 267b and 271aa aReagents and conditions: (i) Pd (PPh3) 4, Na2CO3, 80℃, H2O, toluene, EtOH, overnight, N2, 46%; (ii) p-TsOH, NaNO2, MeCN, KI, 0 ℃-rt, 5h, 67%; (iii) KOAc, PdCl2 (dppf) , dioxane, 80℃, 5h, 91%

[0155] Scheme 18. Synthetic Route to Target Compound MC4-269

[0156] aReagents and conditions: (i) Pd (OAc) 2, K3PO4, DMF, 70 ℃, 4 h, N2, 18%; (ii) pyridin-4-ylboronic acid, Pd (PPh3) 4, K3PO4, 100℃, H2O, THF, 12 h, N2, 12%

[0157] Scheme 19. Synthetic Route to Target Compound MC4-363 to MC4-365, and MC4-368a

[0158] a Reagents and conditions: (i) EtOH, rt, overnight; (ii) NaBH3CN, AcOH, EtOH, rt, overnight, 37-73%.

[0159] Scheme 20. Synthetic Route to intermediate 363a-365a and 368aa a Reagents and conditions: (i) K2CO3, Pd (PPh3) 4, H2O, DMF, 100 ℃, N2 , overnight, 23-73%

[0160] Scheme 21a

[0161] Reagents and conditionsa: (a) SEMCl, DIEA, DCM, rt, o / n; (b) MePPh3Br, NaH, THF, 0℃-rt, N2, o / n; (c) 1-bromo-2-iodobenzene, Pd (OAc) 2, K3PO4, DMF, 100℃, N2, o / n; (d) Boronic acid / ester, PdCl2 (dppf) , K2CO3, Dioxane / H2O (10: 1, v / v) , 80℃, N2, o / n; (e) 2%H2SO4-MeOH (v / v) , rt, o / n.

[0162] Scheme 22a

[0163] Reagents and conditionsa: (a) (Bpin) 2, PdCl2 (dppf) , KOAc, Dioxane, 80℃, N2, o / n; (b) (i) heterocycle, PdCl2 (dppf) , K2CO3, Dioxane / H2O (10: 1, v / v) , 80℃, N2, o / n; (c) TFA / DCM (3: 1) , 0℃-rt, 0.5h.

[0164] Scheme 23a

[0165] Reagents and conditionsa: (a) amine, Pd (OAc) 2, Xphos, Cs2CO3, Toluene, 110℃, N2, o / n; (b) TFA / DCM (3: 1, v / v) , 0℃-rt, 0.5h; (c) 2%H2SO4-MeOH (v / v) , rt, o / n.

[0166] Scheme 24a

[0167] Reagents and conditionsa: (a) iodobenzene, Pd (OAc) 2, K3PO4, DMF, 100℃, N2, o / n; (b) 2%H2SO4-MeOH (v / v) , rt, o / n.

[0168] Scheme 25a:

[0169] Reagents and conditions: (a) alkyl halide, K2CO3, DMF, 80℃, o / n; (b) Pd (OAc) 2, K3PO4, DMF, 100℃, N2, o / n; (c) 2%H2SO4-MeOH (v / v) , rt, o / n.

[0170] Scheme 26a

[0171] Reagents and conditionsa: (a) iodobenzene, Pd (OAc) 2, K3PO4, DMF, 100℃, N2, o / n; (b) 2%H2SO4-MeOH (v / v) , rt, o / n.

[0172] Scheme 27a:

[0173] Reagents and conditions: (a) iodobenzene, Pd (OAc) 2, K3PO4, DMF, 100℃, N2, o / n; (b) Boronic acid / ester, PdCl2 (dppf) , K2CO3, Dioxane / H2O (10: 1, v / v) , 80℃, N2, o / n; (c) 2%H2SO4-MeOH (v / v) , rt, o / n.

[0174] Scheme 28a:

[0175] Reagents and conditionsa: (a) R-X, K2CO3, DMF, 80℃, o / n; (b) Pd (OAc) 2, K3PO4, DMF, 100℃, N2, o / n; (c) 2%H2SO4-MeOH (v / v) , rt, o / n.

[0176] Scheme 29a:

[0177] Reagents and conditionsa: (a) For485b: sulfuryl chloride, DMAP, pyridine, ACN, 80℃, o / n; For487b: acyl chloride, DMAP, DIEA, DCM, 3h; (b) Pd (OAc) 2, K3PO4, DMF, 100℃, N2, o / n; (c) 2%H2SO4-MeOH (v / v) , rt, o / n.

[0178] Biological investigation. Antibacterial assays were conducted by the broth microdilution method following the guidelines of the Clinical &Laboratory Standards Institute (CLSI) against antibiotic susceptibility control strain S. aureus ATCC 25923.

[0179] The antibacterial activity of derivatives MC4-143 to MC4-149 with hydrophobic substitution on the left-hand benzene ring is shown in Table 1. Since our previous SAR suggested that hydrophobic groups at 2-position may be the most favourable substitution for antibacterial potency, we confined our modification to 2-position to explore the effects of several different hydrophobic substituents. In agreement with our SAR, derivatives containing a smaller-sized or less hydrophobic group at 2-postion compared to MC4-2 with 2-tBu and MC4-5 with 2-Ph, such as compounds MC4-143 with 2-OPh, MC4-144 with 2-iPr, MC4-145 with 2-Et, MC4-147 with 2-piperidien, MC4-148 with 2-CH (OH) Ph, showed varying degrees of reduced activity (MIC 4-64 μg / mL) . Other derivatives including MC4-146 with 2-COPh and MC4-149 with 2-CH2Ph showed activity comparable with that of MC4-5, with MIC values of 2 μg / mL. These results again prove the significance of hydrophobic substitution at 2-position, as indicated by our preliminary SAR.

[0180] Table 1. Antibacterial Activitya of Compounds MC4-143 to MC4-149 a MIC values against S. aureus ATCC 25923.

[0181] Based on the above outcomes, we maintained the 2-Ph as part of the scaffold to pursue further structural optimization. The antibacterial activity of right-hand benzene ring modified derivatives MC4-155, MC4-180, MC4-181, MC4-184, MC4-187, MC4-188, MC4-190, MC4-192 to MC4-194, and MC4-196 to MC4-199 is shown in Table 2. Additional introduction of both electron-withdrawing groups (MC4-180 with 3’ -Cl, MC4-181 with 3’ -F) and electron-donating groups (MC4-187 with 3’ -Me, MC4-184 with 3’ -tBu) at 3’ -position resulted in diminished activity (MIC 2-256 μg / mL) compared with MC4-2 (MIC 1 μg / mL) . An extreme case is that 3’ -tBu substituted derivative MC4-184 totally lost antimicrobial activity with an MIC value up to 256 μg / mL, which may be attributed to the block to robust interactions between NusB and 2’ -OH from the steric hindrance of meta-tBu. In the case of derivatives MC4-188 and MC4-190 bearing an additional group at 4’ -position, the former with an electron-donating methyl showed slightly declined activity (MIC 2 μg / mL) , while the latter with an electron-withdrawing chloride exhibited notably improved activity with an MIC value of 0.125 μg / mL. Both the hydrophobic and electron-withdrawing property of chloride, the two crucial attributes affecting the activity as indicated in our preliminary SAR, may contribute to this sharp upsurge in antibacterial potency, which was also exemplified by the activity of compound MC4-196 bearing 5’ -SO2CF3 as a stronger electron-withdrawing substituent than nitro. Neither the displacement of 5’ -NO2 by other weaker electron-withdrawing sulfonyl groups, including compounds MC4-155 with 5’ -SO2Me, MC4-192 with 5’ -SO2Ph, MC4-193 with 5’ -SO2PhF and MC4-194 with 5’ -SO2Et (MIC 8-256 μg / mL) , nor switching these sulfonyl groups from 5’ -position to 4’ -position such as compounds MC4-198 with 4’ -SO2Ph, MC4-199 with 4’ -SO2Et, and MC4-197 with 4’ -SO2CF3 (MIC 1-256 μg / mL) led to superior activity to MC4-5. These results again confirm the important role of electron-withdrawing groups on the right-hand benzene ring in improving antibacterial activity.

[0182] Table 2. Antibacterial Activitya of Compounds MC4-155, MC4-180, MC4-181, MC4-184, MC4-187, MC4-188, MC4-190, MC4-192 to MC4-194, and MC4-196 to MC4-199 a MIC values against S. aureus ATCC 25923.

[0183] The antibacterial activity of linker modified derivatives MC4-134, MC4-135, MC4-152 to MC4-154, MC4-157, MC4-158, MC4-160 to MC4-166, MC4-182, MC4-189, MC4-195, MC4-204, MC4-205, MC4-230 to MC4-232, MC4-234, MC4-236 and MC4-237 is shown in Table 3. Among compounds MC4-154, MC4-161, MC4-153 and MC4-164 with -OCH2-as the linker, the 2-tBu substituted compound 25 (MIC ≤0.0625 μg / mL) demonstrated a dramatically increased activity in comparison with its amine-linked counterpart MC4-2 (MIC 1 μg / mL) , while the other three compounds showed equal or inferior activity compared with their amine-linked analogues. Compounds MC4-152, MC4-160, MC4-162, and MC4-166 with -SCH2-as the linker (MIC 0.5, 1, 1, 0.5 μg / mL, respectively) displayed superior activity to their corresponding amine-linked analogues MC4-5, MC4-3, MC4-4, and MC4-2 (MIC 1, 2, 2, 1 μg / mL, respectively) . In cases of derivatives with a flexible linker, 5’ -SO2CF3 group seemed to be a better surrogate for 5’ -NO2 group, as compounds MC4-196, MC4-232, MC4-237, and MC4-234 with 5’ -SO2CF3 all exhibited improved activity in comparison with their 5’-NO2 substituted analogues. When the amine linker was substituted by a methyl group to form a -N (Me) CH2-or -NHCH (Me) -linker, activity of both compounds MC4-189 and MC4-182 declined by more than 8 folds, with MIC values of 8 and 16 μg / mL, respectively. The -COCH2-linker, as well as the -CH (OH) CH2-linker obtained by reduction, led to slightly diminished activity (MIC 4-8 μg / mL) compared with amine-linked analogue MC4-2 (MIC 2 μg / mL) . With respect to derivatives 38-43MC4-165, MC4-195, MC4-204, MC4-205, MC4-230 and MC4-236 with amide as the linker, the -SO2CF3 group could well accommodate to the -NHCO-linker while it seemed not compatible with the -CONH-linker. The (E) -CH=CH-linker appeared to be a promising surrogate for amine linker, as shown by the enhanced activity of derivatives MC4-134, MC4-135 and MC4-153 with MIC values ranging between 0.25 and 0.5 μg / mL. In summary, we can draw a tentative conclusion that the (E) -CH=CH-, -SCH2-, -NHCO-, and -OCH2-may be preferable replacements for the amine linker, while the remaining linkers such as -NHCH (Me) -, -N (Me) CH2-, and -COCH2-may not be suitable for activity improvement.

[0184] Table 3. Antibacterial Activitya of Compounds MC4-134, MC4-135, MC4-152 to MC4-154, MC4-157, MC4-158, MC4-160 to MC4-166, MC4-182, MC4-189, MC4-195, MC4-204, MC4-205, MC4-230 to MC4-232, MC4-234, MC4-236 and MC4-237 a MIC values against S. aureus ATCC 25923.

[0185] Antibacterial spectrum of representative compounds. We examined the antibacterial spectra of the representative compounds. The bacterial panel we used consisted of 3 Gram-positive pathogens on most recent “WHO priority pathogens list for guiding R&D of new antibiotics” consisting of Enterococcus faecalis, S. aureus, and Streptococcus pneumonia. In general, the compounds demonstrated broad-spectrum antimicrobial activity against all tested Gram-positive bacteria as shown in Table 4.

[0186] Five representative compounds MC4-190, MC4-196, MC4-164, MC4-205, and MC4-153 with MIC values against S. aureus ATCC 25923 ≤ 0.25 μg / mL were then tested against a series of globally prevalent MRSA and vancomycin-resistant S. aureus (VRSA) strains. As indicated in Table 5, all five compounds were consistently superior to vancomycin, the drug of choice for most MRSA infections, and other widely used antibiotics including gentamicin and oxacillin, in antimicrobial potencies against these bacterial strains. These results again demonstrate the promising prospect of our compounds being developed as novel anti-MRSA and -VRSA agents.

[0187] Table 4. Antibacterial Activity of Representative Compounds

[0188] Antibacterial activities are shown as MIC values with μg / mL as the unit. S. aureusa: S. aureus 25923, S. aureusb: S. aureus 29213, Van: vancomycin, Cip: ciprofloxacin, Rif: rifampicin.

[0189] Table 5. Antibacterial Activity of Representative Compounds against Globally Spread MRSA and VRSA strainsa a Antibacterial activities are shown as MIC values with μg / mL as the unit.

[0190] Time-kill kinetic: The effects of compounds MC4-190, MC4-205, MC4-134, and MC4-135 on the time-and dose-dependent growth of S. aureus were studied by measuring the time-kill kinetics. Liquid cultures of type strain S. aureus 25923,  29213 and MRSA strain USA300 respectively were prepared and grown to early exponential phase before compounds were added at pre-determined levels relative to their MICs. Results showed a clear dose-response relationship over time for all tested compounds. MC4-190, MC4-205, and MC4-135 remained largely bacteriostatic up to 1 × MIC, but MC4-134 can attain bactericidal state against both type strain and drug-resistant S. aureus when concentration was increased to 16 × MIC (Fig. 4 –6) .

[0191] Resistance generation: We attempted to investigate the possibility of S. aureus developing resistance toward our compounds under laboratory conditions. Serial passage was performed using liquid cultures of S. aureus type and drug-resistant strains challenged with sub-lethal concentrations (1 / 4 × MIC) of MC4-190, MC4-205, MC4-134, and MC4-135 respectively, together with rifampicin as a control. Whilst the control drug rifampicin underwent a substantial increase of up to 1024-65536-fold in MIC after being passaged for about 7 –15 days, our results show that the MICs of MC4-190, MC4-205, MC4-134, and MC4-135 did not undergo any significant increase (i.e. >4-fold) throughout the course of the assay, even against MRSA strains (Fig. 7 –8) . This suggests that repeated exposure to sub-inhibitory concentrations of the tested compounds did not result in a resistant phenotype, where resistance was defined as greater than 4-fold of MIC elevation.

[0192] Attenuation of toxin production in MRSA: Real-time qPCR assays were performed using gyrB as reference gene, with each treatment group normalised against an untreated control. Relative expression levels of key genes associated with virulence, namely agrA (AgrA) , RNAII (encoding the AgrB / D / C / Aregulon) , RNAIII (toxin-mediating regulon) and sarA (SarA / R regulon) , as well as the secretory exoproteins under their modulation spa (Spa) , hla (α-toxin) and lukS (LukS subunit of PVL) , were probed with SYBR Green system and results extrapolated using the ΔΔCT method.

[0193] In general, the expression of RNAII and RNAIII in USA300 were downregulated following the addition of both rifampicin and MC4-205. The relative lack of change in USA300 sarA and spa expression treated with rifampicin and MC4-205 suggested that the drugs did not significantly promote sarA and by extension the phosphorylation of AgrA, which may also explain its repressed agrA levels (Fig. 10) . Apart from rifampicin-treated downregulation of RNAII and its autoinducing effector agrA, no apparent trends were observed for all probed virulence-associated genes following the use of MC4-205 in S. aureus when compared to both the class drug and untreated control (Fig. 9) .

[0194] The effects of our panel of MC4-205 on the levels of α-toxin and PVL production in MRSA USA300 were assessed by immunoblotting exoproteins secreted into supernatants harvested overnight cultures grown in the presence of sub-MIC compounds and control drugs (vancomycin and rifampicin) . The results showed that in MRSA USA300, MC4-205 significantly suppressed the release of α-toxin into the extracellular milieu compared to vancomycin and rifampicin (Fig. 10A) . Although MC4-205 and rifampicin also saw some response in decreasing PVL expression in the type strain, MC4-205, however, did not appear to have meaningfully attenuated PVL levels in harvested supernatant (Fig. 10B) .

[0195] The effects of MC4-205 on the in vitro production of α-toxin in S. aureus strains were assessed by the spectrophotometric analysis of haemoglobin release following exposure of the rabbit red blood cells (RBC) to the haemolytic agents. The results showed that MC4-205 can protect RBCs from lysis by USA300-derived α-toxin (Fig. 11) . From there onwards, there was a significant performance gap in the mitigation of RBC lysis between MC4 and rifampicin, which remained completely haemolytic even when the supernatant was diluted by 16-fold. Vancomycin had no apparent effect on α-toxin production compared to untreated controls in USA300.

[0196] In vitro cytotoxicity. Twelve compounds exhibiting potent antimicrobial activity against S. aureus ATCC 25923 with MIC values ranging from 0.0625 to 1 μg / mL were chosen for in vitro cytotoxicity testing against human lung carcinoma cell line A549 and human keratinocytes HaCaT. Their cytotoxicity and selectivity (therapeutic index, TI) are shown in Table 6. As evident from the table, some compounds showed a significant improvement in selectivity. For instance, MC4-190 with an additional 4’ -Cl and MC4-196 with 5’ -SO2CF3 replacing original 5’ -NO2 demonstrated superior TI values (58-104 for MC4-190, 30-59 for MC4-196) to amine-linked analogue MC4-5 (TI 6-11) . The 3-tBu substituted MC4-164 with -OCH2-as the linker displayed a remarkable upsurge in antibacterial activity while maintaining a similar level in cytotoxicity compared with that of amine-linked counterpart MC4-2, thereby reducing cytotoxicity by almost 15-fold with TI values larger than 116-157. The other derivatives exhibiting acceptably high selectivity were 5’ -NO2 substituted MC4-166 with -SCH2-as the linker, 5’ -NO2 substituted MC4-153 and MC4-135 with (E) -CH=CH-as the linker, and 4’ -SO2CF3 substituted MC4-205 with amide as the linker. In summary, these results imply the potential to enhance selectivity via modification of linker, replacement of 5’ -NO2, and insertion of additional groups on the right-hand benzene ring.

[0197] Table 6. Cytotoxicity of Representative Compounds against A549 and HaCaT a MIC values against S. aureus  25923b Calculated by CC50 (μM)  / 1 / 2 × MIC (μM)

[0198] In vivo efficacy: In vivo antimicrobial activity was evaluated by administering varying doses of MC4-190 to 4-6-week-old ICR mice infected with MRSA strain  33591.20 mg / kg and 40 mg / kg of linezolid were chosen as antibiotic control groups. Results showed a decrease in bacterial density from 4.7 × 107 CFU / lung to 1.0 × 107 CFU / lung for the 5 mg / kg compound MC4-190 treatment group, albeit the amount of reduction was not as remarkable when compared to linezolid at higher doses, which reduced bacterial density to below 106 CFU / lung (Fig. 12) . To further assess the in vivo activities, survival rates of mice infected by C. difficile  9689 were examined. On Day 6 after compound administration, up to 70 %of mice treated with MC4-190 were rescued, while approximately 20 %of mice-treated with MC4-135 remained alive (Fig. 13 –14) .

[0199] MC4-134 exhibits strong antimicrobial efficacy and promising safety profiles: Mice with MRSA-infected wounds received the treatment of either MC4-134 at 5 mg / kg or linezolid at 60 mg / kg, along with an infected vehicle control (VC) . While MC4-134 facilitated the healing of an approximate 80 %wound closure rate comparable to that of the uninfected group by Day 7, the linezolid-treated and VC groups showed only 40 %and 30 %wound closure rates respectively (Fig. 20a-b) . In addition to the enhanced wound healing, by Day 7, the MC4-134-treated group demonstrated a major reduction in bacterial load, significantly outperforming linezolid by 1 × log10 reduction in CFU / wound (Fig. 20c) . In a neutropenic mouse model of MRSA thigh infection, subcutaneous (SC) administration of MC4-134 resulted in a dose-dependent decrease in MRSA load, which performed favourably relative to linezolid (Fig. 20d) . MC4-134 administered via SC injection up to 400 mg / kg induced mortality of two mouses out of the six in C57BL / 6J mice (Fig. 21) . All groups exhibited comparable body weight gains (Fig. 20e) , and organ-to-body weight ratios showed no significant differences versus control groups (Fig. 20f) . Histopathological assessment of nine organs from one of the dead mice (heart, liver, spleen, lung, kidneys, brain, stomach, duodenum, jejunum) revealed intact tissue architecture with no drug-related lesions (Fig. 20g) , confirming tolerability at the tested doses. These findings underscored the strong efficacy and safety profile of MC4-134, and suggested that nusbiarylin compounds hold promise as prospective antibiotic candidate for the treatment of multidrug-resistant infections.

[0200] Elucidation of molecular mechanism. To verify the interactions biophyscially, microscale thermophoresis (MST) was performed. NusB from the model Gram-positive species B. subtilis showed specific binding to MC4-190, and MC4-135 with a KD value equal to 112 ± 27.6 μM (Fig. 15A –B) . Our data suggested that the binding affinity of MC4 analogues to NusB was retained following the computational optimisation with substantially improved antistaphylococcal effects. We thereby expanded the present investigation to identify the essential residues responsible for the binding. Residues to be mutated were F15, R70, D75 (B. subtilis numbering) (Fig. 15C) . MC4-135 displayed no specific interaction with the three NusB variants (Fig. 15D) .

[0201] NusB-NusE dimerisation represented the first regulatory step in forming antitermination complexes, in which RNAP was resistant to transcription termination signals (Fig. 16A) . To examine the nusbiarylin effects against NusB-mediated antitermination, transcription assays were carried out in vitro and in cells. A plasmid-borne E. coli reporter system was employed. As indicated in Fig. 16B, three reporter plasmids harboured the recombinant gene cat, driven by the rrnG promoter P2. While pSL102 showed the undisrupted gene expression, pSL103 indicated the basal expression level due to pre-mature Rho-dependent termination. pSL115 had the consensus boxA element for assembling rrnTAC before a terminator. The reporter strains were generated by transforming the reporter plasmids into E. coli K12 wildtype or the ΔnusB strain. As shown in Fig. 16C, compared to the ΔnusB strain, a higher reporter gene expression level was observed in the wildtype cells having pSL115. The result suggested that boxA-mediated antitermination occurred in a NusB-dependent manner. Provided the antimicrobial effects against E. coli, MC4-134 and MC4-135 can be tested by this system. At 1 / 8 × MIC, no significant change was observed, while a decrease in the reporter gene expression level was observed at 1 / 4 ×, 1 / 2 ×, and 1 × MIC in a dose-dependent manner.

[0202] An in vitro transcription assay previously used to monitor the antitermination efficacy was used. Varying E. coli RNAP transcription complexes were assembled, including the λN-mediated antitermination complex (NTAC) , transcription elongation complex (TEC) , and NTAC without NusB-NusE dimers (TAC-BE) . The antitermination efficiency was extrapolated by the runoff ratio (RO%) , reflecting the percentage of λTR terminator readthrough. As shown in Fig. 16D-E, NTAC showed the least amount of incomplete RNA products tR’ compared to TEC and TAC-BE which lacked NusB and NusE, suggesting the optimal RO%. Our data aligned with the widely known antitermination function of NusB. Addition of MC4-134 and MC4-135 to NTAC led to the increase in incomplete RNA TR’ , suggesting the defective antitermination in the presence of our antimicrobial compounds. Our data implicated that the tested compounds repressed the antitermination process mediated by NusB, resulting in the pre-mature termination in vitro and in cells.

[0203] To explain compound action on a genome-wide level, RNA sequencing was employed to analyse the change in the transcriptome of MRSA with MC4-134 or rifampicin at 1× MIC. Given the decrease in rRNA negatively regulated the production of ribosomal proteins (r-proteins) , 51 r-protein genes were examined. Expressions of the known autoregulators rplA, rplJ, rplL, rplT, rpsB, rpsD, rpsF, rpsO, and rpsR inducing operon-specific inhibition were downregulated by MC4-134, and rifampicin upregulated most of them except for rpsF and rpsO (Figure 17A) . Notably, MC4-134 and rifampicin had contrary regulation on most r-protein genes. MC4-134 diminished 38 r-protein gene expression, including all proposed autoregulators, while rifampicin stimulated most of them except for rpsF and rpsO (Figure 17B) . Consequently, tRNA-related genes were investigated because of the tRNA gene clusters within rrn operons. MC4-134 constricted the transcript quantity of tRNA synthetase except for glyS, whereas rifampicin merely constrained the transcription of ileS, pheT, and tyrS (Figure 17C) . By the change in transcriptome, MC4-134 is suggested to impede rRNA and r-protein synthesis and potentially ribosome biogenesis. Additionally, the decline in tRNA synthetase implied the rise of uncharged tRNAs, impairing bacterial growth.

[0204] The effects of MC4-135 on the transcription machinery in live and intact bacterial cells were examined by fluorescent microscopy. Three Gram-positive model organism Bacillus subtilis strains with the green fluorescent protein (GFP) genetically tagged to the protein of interest were utilised.

[0205] Green fluorescent protein (GFP) -based fluorescence analysis revealed that our compounds disrupted the subcellular localization of NusB (Fig. 18A) . This effect was comparable to that observed with rifampicin, a well-known transcription inhibitor. Interestingly, only rifampicin induced delocalization of RpoC and RpsB due to the expanded nucleoid induced by rifampicin (Fig. 18B&C) . In contrast, protein synthesis inhibitors such as chloramphenicol produced a distinct effect on RpsB localization, shifting it from the cell poles to the mid-cell due to nucleoid condensation and the mutual exclusiveness of RpsB and nucleoid (Fig. 18C) . For MC4-134, MC4-135, and MC4-190, the size of the nucleoid was similar to the untreated control, rendering no effect to both RpoC and RpsB.

[0206] To assess whether our compounds affect membrane morphology, ATP synthase was used as a membrane-associated marker. Neither rifampicin nor our compounds induced membrane invaginations (Fig. 18D) . In contrast, colistin, a membrane-targeting antibiotic, disrupted membrane structure, as evidenced by the loss of the AtpA-GFP signal from the membrane region.

[0207] These findings further support the notion that our compounds did induce the delocalization of NusB while since the nucleoid size of the bacteria was not affected by them, there was no noticeable changes in localization of RpoC and RpsB. For rifampicin, its nature to expand the nucleoid caused subcellular delocalization of RpoC, RpsB, and NusB. In contrast, translation inhibitors such as chloramphenicol lead to nucleoid condensation that RpsB was extended further towards to the mid-cell region. For cell membrane localized protein AtpA, only colistin induced membrane invagination while both rifampicin and our compounds kept the cell membrane intact. Collectively, our data suggested that our compounds disrupted the NusB-NusE interactions to inhibit the growth of bacteria.

[0208] Pharmacokinetic profiles of MC4-190 and MC4-205: Our findings, as presented in Fig. 25 &26, revealed intriguing aspects of the pharmacokinetic profiles of MC4-190 and MC4-205. Notably, approximately 50%of these derivatives could be eliminated from the body within 4 hours following intravenous administration at a dose of 10 mg / kg. The Cmax values for MC4-190 and MC4-205 were measured at 62.70 μg / mL and 64.2 μg / mL, respectively. These values surpassed the MIC values against various subtypes of S. aureus, including methicillin-and vancomycin-resistant strains. The Vss revealed exciting trends, with MC4-190 showing a higher tendency for retention in plasma, while MC4-205 demonstrated a more widespread distribution throughout the body. This observation aligns with the corresponding elimination half-life (T1 / 2) value, suggesting that MC4-205 could penetrate various tissues, which could pose challenges in their elimination from the body.

[0209] Furthermore, we calculated the AUC / MIC ratio, a predictor of drug efficacy against a specific microorganism. For MC4-190, the AUC / MIC ratio was determined to be 125.8, while for MC4-205, it was calculated to be 586, assuming a MIC of 0.5 μg / mL against S. aureus  33591. This value, though a reference and subject to variation in an infection model, is significant. The AUC / MIC ratio of MC4-205 exceeds the guideline threshold for vancomycin, suggesting that an AUC / MIC ratio greater than 400 effectively treats methicillin-resistant S. aureus. However, it is crucial to reiterate that direct comparisons between MC4-205 and vancomycin should be avoided due to potential deviations in experimental conditions.

[0210] Finally, to assess the bioavailability (F) of MC4-190, an important parameter that measures the rate and extent of absorption from a pharmaceutical form and the availability at the site of action, the pharmacokinetic parameters of this compound were obtained after oral administration in rats. The experiment included measuring the time to reach maximum concentration (Tmax) , which indicated that it took 10 minutes for MC4-190 to reach its maximum concentration in the plasma. Furthermore, it was observed that half of the compound was eliminated within 17 minutes, which could be attributed to its rapid metabolism. These factors could contribute to the low bioavailability of MC4-190.

[0211] In the oral administration study (Fig. 27) , 3 mg / kg of MC4-190 was prescribed to the rats. The maximum plasma concentration achieved was only 0.11 μg / mL, a result that underscores the rapid elimination of the compound. This finding was in line with the Caco-2 cell permeability assay, which indicates that MC4-190 triggers the efflux pump in the small intestine so as to impede majority of the compound from entering the bloodstream.

[0212] Furthermore, the calculated bioavailability was determined to be F = 5.71%, indicating that the bioavailability of MC4-190 was relatively low. This finding underscores the potential for increased efficacy when the drug is administered intravenously, a conclusion that is further supported by our research.

[0213] Our investigation into the tissue accumulation of MC4-190 in rats involved calculating the drug concentrations in various tissues, expressed as AUC (0-t min) . We then determined the tissue-to-plasma ratio (Kp) to gauge the drug’s preference in different tissues. Notably, MC4-190 demonstrated its ability to penetrate the brain with a Kp value exceeding 0.04. The order of tissue exposure, from highest to lowest, was as follows: small intestine, liver, lung, kidney, spleen, heart, and brain, as detailed in Figure 29.

[0214] Based on the tissue distribution data, it is promising to infer that MC4-190 may be a potent candidate for treating infectious diseases affecting significant organs, including lung, provided that one of the targets of nusbiarylins is S. aureus. This suggests that MC4-190 holds significant potential to reach and accumulate in different tissues, including those with pneumoniae induced by S. aureus.

[0215] Pharmacokinetic profiles and tissue distributions of MC4-425: The Plasma PK profile of MC4-425 were analyzed following I. V. administration of MC4-425 at 5 mg / kg and P. O. administration of MC4-425 at 10 mg / kg in C57BL / 6J mice. The plasma concentration-time curves and main PK parameters were summarized in Figure 23 (A-C) .

[0216] It was found that MC4-425 exhibited distinct pharmacokinetic behaviors depending on the route of administration. Following the intravenous injection of MC4-425 (5 mg / kg) , MC4-425 demonstrated rapid distribution (Tmax = 0.08 ± 0.00 h) with a high peak concentration (Cmax = 5212.17 ± 632.77 ng / mL) and moderate systemic exposure (AUC0-t = 1322.69 ± 10.25 h*ng / mL) . The elimination was rapid (T1 / 2 = 0.47 ± 0.18 h) , with a moderate clearance (CL = 3697.51 ± 87.38 mL / h / kg) and a volume of distribution (Vd = 2492.16 ± 919.53) suggesting extensive tissue penetration. In contrast, oral administration of MC4-425 (10 mg / kg) resulted in lower exposure (AUC0-t = 817.13 ± 40.55 h*ng / mL) despite the doubled dose, with an oral bioavailability of 30.59%. The prolonged T1 / 2 was 0.71 ± 0.08 h.

[0217] These findings showed that MC4-425 displayed favorable intravenous pharmacokinetics with rapid distribution and high plasma concentrations, but its oral bioavailability was moderate, necessitating further optimization. Additionally, the short half-life time suggested that frequent dosing or infusion strategies might be required for sustained therapeutic effects.

[0218] Different tissue levels of MC4-425 were analyzed following intravenous administration of MC4-425 at 5 mg / kg and P. O. administration of MC4-425 at 10 mg / kg in C57BL / 6J mice. The tissue concentration-time curves and tissue AUC0-t values were summarized in Figure 23 (D-E) .

[0219] After intravenous administration, MC4-425 demonstrated broad tissue distribution, with the tissue AUC0-t values following the order: lung (6289.89 h*ng / g) > liver (5911.54 h*ng / g) > heart (1482.96 h*ng / g) > plasma (1322.69 h*ng / g) > brain (1209.95 h·ng / g) > spleen (939.64 h*ng / g) > kidneys (883.63 h*ng / g) . In contrast, following oral administration, the distribution order was liver (5646.55 h*ng / g) > lung (3523.93 h*ng / g) > kidneys (860.92h*ng / g) >plasma (817.13 h*ng / g) > heart (756.63 h*ng / g) > spleen (680.74 h*ng / g) >brain (207.60 h*ng / g) . Notably, the brain-to-plasma (B / P) ratios were 0.91 for intravenous administration and 0.25 for oral administration, indicating that MC4-425 exhibited excellent brain penetration, particularly following intravenous dosing. This property provides a significant advantage in the treatment of central nervous system (CNS) infections.

[0220] These findings highlight the ability of MC4-425 to achieve therapeutically relevant concentrations across multiple tissues, especially in the lungs, liver, and brain. As a broad-spectrum antibiotic effective against both Gram-positive and Gram-negative bacteria, MC4-425 demonstrate significant potential for treating systemic and drug-resistant infections, including those affecting the CNS. Its favorable pharmacokinetic profile and extensive tissue distribution position MC4-425 as a promising candidate for addressing the growing challenge of bacterial infections, particularly in hard-to-treat sites such as the brain.

[0221] Table 7 Antibacterial Activity of Representative Compounds

[0222] Table 8. Mycobacterium tuberculosis (Mtb) H37Ra result of MC4 compounds Note: The MIC values were interpreted after being incubated for 14 and 21 days at 37℃.

[0223] Table 9. Mycobacterium abscessus (Mabs) 19977 result of MC4 compounds Note: The MIC values were interpreted after being incubated for 4 days at 37℃.

[0224] Table 10. Helicobacter pylori 43504 result of MC4 compounds

[0225] Table 11. Clostridioides difficile results of MC4 compounds Note: The MIC values were interpreted after being incubated anaerobically for 2 days at 37℃.

[0226] Table 12. Antifungal result of MC4 compounds

[0227] CONCLUSIONS

[0228] In this study, MC4 derivatives were synthesized via rational modification according to the previously established SAR in an effort to further improve antimicrobial activity and ameliorate cytotoxicity as well as the corresponding selectivity towards pathogens. Some derivatives, such as compounds MC4-153, MC4-164, MC4-190, MC4-196 and MC4-205 and displayed both significantly improved antimicrobial activity against a panel of pathogens including various MRSA and VRSA, and selectivity in comparison with their analogues developed in earlier studies, in which compound MC4-164 showed the best antibacterial profiles with an exceptional MIC value (≤ 0.0625 μg / mL) against S. aureus ATCC 25923 and a promising TI value (≥ 157) towards human keratinocytes HaCaT.

[0229] EXPERIMENTAL SECTION

[0230] General. Starting materials and regents, unless otherwise stated, were of commercial grade and were used without further purification. All reactions were monitored by thin-layer chromatography (TLC) on glass sheets (silica gel F254) which can be visualized under 256 nm UV light. Flash chromatography was carried out using silica-gel (200-300 mesh) . 1H NMR (400 MHz) and 13C NMR (100 MHz) spectra were measured on BRUKER AVANCE-III spectrometer with TMS as an internal standard. High-resolution MS spectra were measured using a QTOF-2 spectrometer by electron spray ionization. The purity of all of the compounds tested for biological activities was >95%, determined by analytical HPLC (Agilent 1260 Infinity) on a reverse-phase column (Agilent ZORBAX Eclipse plus C18, 4.6 × 100 mm, 5 μm particle size) with acetonitrile / water as the eluent. Compounds reported were screened for PAINS.

[0231] Synthetic Procedures of Compounds. General Procedure (A) for the Synthesis of Schiff Base Type Derivatives 1b-7b, 8b-15b, 18b. To a solution of benzaldehydes (1 equiv) in ethanol (10 mL) was added anilines (1 equiv) , and the reaction mixture was stirred at rt overnight. The solid was collected by filtration and washed with cold ethanol and hexane.

[0232] General Procedure (B) for the Synthesis of derivatives MC4-143 to MC4-149, MC4-155, MC4-180, MC4-181, MC4-184, MC4-187, MC4-188, MC4-190. To a solution of Schiff base type derivatives (1 equiv) obtained according to general procedure (A) in DCM (10 mL) was added sodium triacetoxyborohydride (3 equiv) , and the reaction mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure and the pure product was obtained by flash chromatography.

[0233] General Procedure (C) for Cu-catalyzed Coupling of Aryl Halides with Sulfinic Acid Aalts. To a mixture of iodobenzenes (1 equiv) , copper (I) iodide (0.1 equiv) , L1 (0.1 equiv) , K3PO4 (2.02 equiv) , sulfinic acid salts (1.3 equiv) in a 25 mL sealed tube was added DMSO (2 mL) in a glovebox. The resulting mixture was stirred at 70℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained by flash chromatography (Hexane / EA) .

[0234] General Procedure (D) for Synthesis of ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzenes. Step 1. benzenediazonium tetrafluoroborates. To a solution of anilines (1 equiv) in MeOH (10 mL) was added fluoroboric acid (50%w / w aqueous solution, 2 equiv) and tert-butyl nitrite (2 equiv) at 0℃. The resulting solution was allowed to warm to rt and stirred for 1 h. Upon completion, the formed precipitate was filtered, collected and dried in vacuo to afford the pure benzenediazonium tetrafluoroborates, which was used directly in the next step without further purification.

[0235] Step 2. phenyl (trifluoromethyl) sulfanes. To a mixture of copper (I) thiocyanate (0.5 equiv) , sodium thiocyanate (1.5 equiv) and cesium carbonate (2 equiv) was added anhydrous ACN (5 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at rt for 10 min before benzenediazonium tetrafluoroborates (1 equiv) in anhydrous ACN (10 mL) was added via syringe. The resulting mixture was stirred at rt for another 10 min before (trifluoromethyl) trimethylsilane (2 equiv) was added via syringe. The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was filtered through a short pad of Celite and the filtrate was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained by flash chromatography (Hexane / EA) .

[0236] Step 3. To a solution of phenyl (trifluoromethyl) sulfanes (1 equiv) in a mixture of CCl4 / ACN / water (20 mL, 1: 1: 2, v / v / v) was added sodium periodate (3 equiv) and ruthenium trichloride (0.05 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained by flash chromatography (Hexane / EA) .

[0237] General Procedure (E) for the Synthesis of (E) -stilbenes. Step 1: Hydroxyl group-protected (E) -stilbenes. To a solution of trimethyl (2- ( (4-nitro-2-vinylphenoxy) methoxy) ethyl) silane (400c) in dry DMF, add 1.5 eq substituted iodobenzene, 0.1 eq Pd (OAc) 2, and 2 eq K3PO4. The reaction mixture was stirred under N2 at 100℃ for overnight. Upon completion, the reaction mixture was filtered with celite, and the filtrate was extracted with EA / H2O. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered. All volatiles were removed under reduced pressure and the crude product was purified by column chromatography over silica gel (Hexane / EA = 100: 1) .

[0238] Step 2. To a solution of crude product obtained above in MeOH was added H2SO4 (2%, v / v) . The reaction mixture was stirred at rt overnight. After the completion of the reaction, the product was extracted with EA. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered.All volatiles were removed under reduced pressure and the title product was isolated by flash chromatography (EA / Hex) on silica gel.

[0239] General Procedure (F) for the Synthesis of 2-substituted heterocycle derivatives. Step 1: To a solution of (E) - (2- ( (2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (400d) in dioxane / H2O (10: 1) , add 1.5 eq boronic acid / ester, 0.1 eq PdCl2 (dppf) , and 3 eq K2CO3. The reaction mixture was stirred under N2 at 80℃ for overnight. Upon completion, the reaction mixture was filtered with celite, and the filtrate was extracted with EA / H2O. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered. All volatiles were removed under reduced pressure and the crude product was purified by column chromatography over silica gel (Hexane / EA = 100: 1) .

[0240] Step 2: To a solution of crude product obtained above in MeOH was added H2SO4 (2%, v / v) . The reaction mixture was stirred at rt overnight. After the completion of the reaction, the product was extracted with EA. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered. All volatiles were removed under reduced pressure and the title product was isolated by flash chromatography (EA / Hex) on silica gel.

[0241] General procedure (G) for the Synthesis of MC4-410 &411. Step 1: To a solution of (E) -trimethyl (2- ( (4-nitro-2- (2- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) styryl) phenoxy) methoxy) ethyl) silane (400d) in dioxane / H2O (10: 1) , add 1.5 eq halogenated heterocycle, 0.1 eq PdCl2 (dppf) , and 3 eq K2CO3. The reaction mixture was stirred under N2 at 80℃ for overnight. Upon completion, the reaction mixture was filtered with celite, and the filtrate was extracted with EA / H2O. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered.

[0242] All volatiles were removed under reduced pressure and the crude product was purified by column chromatography over silica gel (Hexane / EA = 100: 1) .

[0243] Step 2: To a solution of crude product obtained above in DCM was added TFA (3: 1, v / v) . The reaction mixture was stirred at rt for 0.5h. After the completion of the reaction, the product was extracted with EA. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered.

[0244] All volatiles were removed under reduced pressure and the title product was isolated by flash chromatography (EA / Hex) on silica gel.

[0245] General procedure (H) for the Synthesis of MC4-420 &MC4-421. Step 1: To a solution of (E) - (2- ( (2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (00d) in toluene, add 1.5 eq amine, 0.1 eq Pd (OAc) 2, 0.1 eq XPhos, and 3 eq Cs2CO3. The reaction mixture was stirred under N2 at 110℃ for overnight. Upon completion, the reaction mixture was filtered with celite, and the filtrate was extracted with EA / H2O. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered. All volatiles were removed under reduced pressure and the crude product was purified by column chromatography over silica gel (Hexane / EA = 100: 1) .

[0246] Step 2: To a solution of crude product obtained above in DCM was added TFA (3: 1, v / v) . The reaction mixture was stirred at rt for 0.5h. After the completion of the reaction, the product was extracted with EA. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered.

[0247] All volatiles were removed under reduced pressure and the title product was isolated by flash chromatography (EA / Hex) on silica gel.

[0248] General procedure (I) for the Synthesis of NH linker series compounds. Step 1: To a solution of (E) - (2- ( (2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (400d) in toluene, add 1.5 eq amine, 0.1 eq Pd (OAc) 2, 0.2 eq XPhos, and 3 eq Cs2CO3. The reaction mixture was stirred under N2 at 110℃ for overnight. Upon completion, the reaction mixture was filtered with celite, and the filtrate was extracted with EA / H2O. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered. All volatiles were removed under reduced pressure and the crude product was purified by column chromatography over silica gel (Hexane / EA = 100: 1) .

[0249] Step 2: To a solution of crude product obtained above in MeOH was added H2SO4 (2%, v / v) . The reaction mixture was stirred at rt overnight. After the completion of the reaction, the product was extracted with EA. The organic phase was combined and washed with saturated brine, dried over Na2SO4, and filtered.

[0250] All volatiles were removed under reduced pressure and the title product was isolated by flash chromatography (EA / Hex) on silica gel.

[0251] General procedure (J) for the Synthesis of468a, 471a, 472a. To a solution of 3-chloro-4-iodophenol (15) in DMF was added 1.5 eq halides and 3 eq K2CO3. The reaction mixture was stirred at 80℃ for overnight. Upon completion, the reaction mixture was washed with H2O to obtain the crude product, which was then purified by column chromatography over silica gel (Hexane) on silica gel.

[0252] 4-nitro-2- ( ( (2-phenoxyphenyl) amino) methyl) phenol (MC4-143) . Step 1. (E) -4-nitro-2- ( ( (2-phenoxyphenyl) imino) methyl) phenol (1b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 5-nitrosalicylaldehyde (50 mg, 0.30 mmol) and 2-phenoxyaniline 1a (55 mg, 0.30 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (92 mg, 92%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0253] Step 2. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 1b (92 mg, 0.28 mmol) , yielding the pure product as a white solid (78 mg, 84%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.91 (br s, 1H) , 8.15 (s, 2H) , 7.38 (t, J = 7.8 Hz, 2H) , 7.16 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.13 –6.65 (m, 7H) , 4.73 (s, 1H) , 4.58 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163.1, 156.7, 145.8, 140.8, 138.1, 130.0, 125.4, 124.7, 124.5, 123.6, 123.0, 121.8, 118.9, 117.9, 117.2, 115.6, 48.7; HRMS (ESI) calcd for C19H15N2O4 [M -H] -335.1037, found 335.1039; HPLC purity: 97.65%.

[0254] 2- ( ( (2-isopropylphenyl) amino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-144) . Step 1. (E) -2- ( ( (2-isopropylphenyl) imino) methyl) -4-nitrophenol (2b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 5-nitrosalicylaldehyde (50 mg, 0.30 mmol) and 2-isopropylaniline 2a (40 mg, 0.30 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (67 mg, 79%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0255] Step 2. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 2b (67 mg, 0.24 mmol) , yielding the pure product as a white solid (58 mg, 86%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.28 (s, 1H) , 8.17 –8.14 (m, 2H) , 7.29 (d, J = 3.0 Hz, 1H) , 7.19 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 7.05 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.97 –6.91 (m, 2H) , 4.58 (s, 2H) , 4.14 (s, 1H) , 3.04 (hept, J = 6.8 Hz, 1H) , 1.32 (d, J = 6.8 Hz, 6H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163.4, 142.6, 140.8, 136.5, 127.0, 125.8, 125.4, 124.6, 123.0, 122.4, 117.1, 115.1, 49.2, 27.4, 22.9; HRMS (ESI) calcd for C16H17N2O3 [M -H] -285.1245, found 285.1244; HPLC purity: 95.01%.

[0256] 2- ( ( (2-ethylphenyl) amino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-145) . Step 1. (E) -2- ( ( (2-ethylphenyl) imino) methyl) -4-nitrophenol (3b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 5-nitrosalicylaldehyde (50 mg, 0.30 mmol) and 2-ethylaniline 3a (36 mg, 0.30 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (62 mg, 77%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0257] Step 2. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 3b (62 mg, 0.23 mmol) , yielding the pure product as a white solid (51 mg, 81%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.19 (s, 1H) , 8.17 –8.14 (m, 2H) , 7.26 –7.15 (m, 2H) , 7.01 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.95 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 6.90 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.59 (s, 2H) , 4.07 (s, 1H) , 2.63 (q, J = 7.5 Hz, 2H) , 1.31 (t, J = 7.5 Hz, 3H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163.4, 143.4, 140.8, 131.6, 128.6, 127.3, 125.4, 124.7, 123.1, 122.0, 117.1, 114.5, 48.7, 23.9, 13.5; HRMS (ESI) calcd for C15H15N2O3 [M -H] -271.1088, found 271.1091; HPLC purity: 95.01%.

[0258] (2- ( (2-hydroxy-5-nitrobenzyl) amino) phenyl) (phenyl) methanone (MC4-146) . Step 1. (E) - (2- ( (2-hydroxy-5-nitrobenzylidene) amino) phenyl) (phenyl) methanone (4b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 5-nitrosalicylaldehyde (50 mg, 0.30 mmol) and (2-aminophenyl) (phenyl) methanone 4a (59 mg, 0.30 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (92 mg, 89%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0259] Step 2. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 4b (92 mg, 0.27 mmol) , yielding the pure product as a white solid (86 mg, 93%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.62 (s, 2H) , 8.21 (s, 1H) , 8.07 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.77 –7.34 (m, 7H) , 7.05 –6.58 (m, 3H) , 4.61 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 200.2, 161.5, 151.0, 141.0, 139.6, 135.6, 135.4, 131.6, 129.3, 128.3, 125.2, 125.0, 124.7, 119.4, 116.6, 116.2, 113.1, 44.6; HRMS (ESI) calcd for C20H15N2O4 [M -H] -347.1037, found 347.1041; HPLC purity: 97.98%

[0260] 4-nitro-2- ( ( (2- (piperidin-1-yl) phenyl) amino) methyl) phenol (MC4-147) . Step 1. (E) -4-nitro-2- ( ( (2- (piperidin-1-yl) phenyl) imino) methyl) phenol (5b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 5-nitrosalicylaldehyde (50 mg, 0.30 mmol) and 2- (piperidin-1-yl) aniline 5a (53 mg, 0.30 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (80 mg, 82%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0261] Step 2. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 5b (80 mg, 0.25 mmol) , yielding the pure product as a white solid (72 mg, 90%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10 : 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.64 (br s, 1H) , 8.18 –8.15 (m, 2H) , 7.14 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H) , 7.06 (td, J = 7.7, 1.6 Hz, 1H) , 6.99 –6.94 (m, 2H) , 6.83 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H) , 5.54 (br s, 1H) , 4.55 (s, 2H) , 2.84 (s, 4H) , 1.74 (s, 6H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163.6, 142.8, 141.8, 140.7, 125.2, 125.1, 124.3, 123.5, 121.5, 120.5, 117.0, 114.0, 53.7, 49.4, 26.8, 24.1; HRMS (ESI) calcd for C18H20N3O3 [M -H] -326.1510, found 326.1513; HPLC purity: 97.63%.

[0262] 2- ( ( (2- (hydroxy (phenyl) methyl) phenyl) amino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-148) . Step 1. (2-aminophenyl) (phenyl) methanol (6a) . To a solution of (2-aminophenyl) (phenyl) methanone 4a (500 mg, 2.53 mmol) in anhydrous THF was added borane-tetrahydrofuran complex (1M in THF, 5 mL, 5.07 mmol, 2 equiv) via syringe under N2 atmosphere at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and was stirred overnight. Upon completion, the reaction mixture was quenched by MeOH, extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow oil (369 mg, 73%) by flash chromatography (Hexane: EA = 8: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.47 –7.36 (m, 4H) , 7.36 –7.30 (m, 1H) , 7.15 (td, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 7.06 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 6.77 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H) , 6.70 (dd, J = 7.9, 1.2 Hz, 1H) , 5.89 (d, J = 4.1 Hz, 1H) , 3.99 (s, 2H) , 2.61 (d, J = 4.5 Hz, 1H) .

[0263] Step 2. (E) -2- ( ( (2- (hydroxy (phenyl) methyl) phenyl) imino) methyl) -4-nitrophenol (6b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 5-nitrosalicylaldehyde (50 mg, 0.30 mmol) and 6a (60 mg, 0.30 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (88 mg, 84%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0264] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 6b (88 mg, 0.25 mmol) , yielding the pure product as a white solid (81 mg, 92%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 –8.06 (m, 2H) , 7.49 –7.20 (m, 6H) , 7.15 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.96 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 6.84 (t, J = 10.2 Hz, 2H) , 5.98 (s, 1H) , 4.52 –4.23 (m, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163.2, 145.1, 141.0, 140.7, 130.2, 129.6, 129.4, 128.7, 127.9, 126.0 125.2, 124.5, 123.1, 120.9, 117.1, 115.3, 75.9, 48.2; HRMS (ESI) calcd for C20H17N2O4 [M -H] -349.1194, found 349.1196; HPLC purity: 96.62%.

[0265] 2- ( ( (2-benzylphenyl) amino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-149) . Step 1.2-benzylaniline (7a) . To a solution of 6a (400 mg, 2.01 mmol) in a mixture of DCM / TFA (2: 1, v / v) was added triethylsilane (962 μL, 6.02 mmol, 3 equiv) via syringe under N2 atmosphere at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and was stirred overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow oil (289 mg, 78%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 –7.31 (m, 2H) , 7.27 –7.18 (m, 3H) , 7.16 –7.04 (m, 2H) , 6.80 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H) , 6.71 (d, J = 7.9 Hz, 1H) , 3.94 (s, 2H) , 3.53 (s, 2H) .

[0266] Step 2. (E) -2- ( ( (2-benzylphenyl) imino) methyl) -4-nitrophenol (7b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 5-nitrosalicylaldehyde (50 mg, 0.30 mmol) and 7a (55 mg, 0.30 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (91 mg, 92%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0267] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 7b (91 mg, 0.27 mmol) , yielding the pure product as a white solid (78 mg, 85%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.79 (br s, 1H) , 8.11 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 8.05 (s, 1H) , 7.40 –7.11 (m, 7H) , 7.02 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.88 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 4.39 (s, 2H) , 4.02 (s, 2H) , 3.92 (br s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163.1, 144.1, 140.8, 138.7, 131.3, 129.0, 128.5, 128.3, 128.2, 126.9, 125.3, 124.6, 122.9, 121.8, 117.0, 114.9, 48.3, 38.4; HRMS (ESI) calcd for C20H17N2O3 [M -H] -333.1245, found 333.1246; HPLC purity: 97.50%.

[0268] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -6-methyl-4-nitrophenol (MC4-187) . Step 1.2-hydroxy-3-methyl-5-nitrobenzaldehyde (8a) . To a solution of 2-hydroxy-3-methylbenzaldehyde (250 mg, 1.84 mmol) in AcOH (5 mL) was added concentrated nitric acid (70%, 348 μL, 5.51 mmol, 3 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (246 mg, 74%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR spectral data were in agreement with literature value

[0023] .

[0269] Step 2. (E) -2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylimino) methyl) -6-methyl-4-nitrophenol (8b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 8a (100 mg, 0.55 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (93 mg, 0.55 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (152 mg, 83%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0270] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 8b (76 mg, 0.23 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (59 mg, 78%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.35 (s, 1H) , 7.99 (dd, J = 24.7, 2.8 Hz, 2H) , 7.52 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.46 –7.39 (m, 3H) , 7.31 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H) , 7.23 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.96 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.49 (s, 2H) , 4.28 (s, 1H) , 2.29 (s, 3H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.6, 143.4, 140.2, 138.2, 131.6, 130.6, 129.3, 129.0, 128.0, 126.8, 125.8, 122.0, 121.9, 121.8, 115.0, 49.8, 15.8; HRMS (ESI) calcd for C20H17N2O3 [M -H] -333.1245, found 333.1247; HPLC purity: 99.08%.

[0271] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -6-chloro-4-nitrophenol (MC4-180) . Step 1.3-chloro-2-hydroxy-5-nitrobenzaldehyde (9a) . To a solution of 3-chloro-2-hydroxybenzaldehyde (500 mg, 3.19 mmol) in AcOH (5 mL) was added concentrated nitric acid (70%, 606 μL, 9.58 mmol, 3 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (438 mg, 68%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.14 (s, 1H) , 10.03 (s, 1H) , 8.56 (d, J = 2.6 Hz, 1H) , 8.52 (d, J = 2.7 Hz, 1H) .

[0272] Step 2. (E) -2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylimino) methyl) -6-chloro-4-nitrophenol (9b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 9a (100 mg, 0.50 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (84 mg, 0.50 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (142 mg, 81%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0273] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 9b (73 mg, 0.21 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (65 mg, 89%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.24 (d, J = 2.6 Hz, 1H) , 8.06 (d, J = 2.7 Hz, 1H) , 7.56 –7.48 (m, 2H) , 7.43 (d, J = 2.6 Hz, 2H) , 7.31 –7.19 (m, 3H) , 7.02 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.51 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.6, 143.2, 140.6, 138.3, 130.8, 130.6, 129.3, 129.3, 129.0, 127.9, 125.2, 124.8, 122.4, 121.4, 121.0, 113.8, 47.8; HRMS (ESI) calcd for C19H14ClN2O3 [M -H] -353.0698, found 353.0699; HPLC purity: 97.61%.

[0274] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -6-fluoro-4-nitrophenol (MC4-181) . Step 1.3-fluoro-2-hydroxy-5-nitrobenzaldehyde (10a) . To a solution of 3-fluoro-2-hydroxybenzaldehyde (200 mg, 1.43 mmol) in AcOH (5 mL) was added concentrated nitric acid (70%, 271 μL, 4.28 mmol, 3 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (190 mg, 72%) by flash chromatography (Hexane : EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR spectral data were in agreement with literature value

[0024] .

[0275] Step 2. (E) -2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylimino) methyl) -6-fluoro-4-nitrophenol (10b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 10a (100 mg, 0.54 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (91 mg, 0.54 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (160 mg, 88%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0276] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 10b (81 mg, 0.24 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (70 mg, 87%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.98 –7.95 (m, 2H) , 7.52 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.47 –7.39 (m, 3H) , 7.32 –7.26 (m, 1H) , 7.22 (dd, J = 1.7, 7.6 Hz, 1H) , 7.04 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.54 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 150.9 (d, J = 13.1 Hz) , 150.1 (d, J = 247.5 Hz) , 143.1, 139.9 (d, J = 7.8 Hz) , 138.3, 131.0, 130.6, 129.3, 129.0, 128.0, 125.7, 121.2, 119.4 (d, J = 2.8 Hz) , 114.0, 111.6 (d, J = 23.1 Hz) , 48.0; HRMS (ESI) calcd for C19H14FN2O3 [M -H] -337.0994, found 337.0997; HPLC purity: 98.92%.

[0277] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -6- (tert-butyl) -4-nitrophenol (MC4-184) . Step 1. 3- (tert-butyl) -2-hydroxy-5-nitrobenzaldehyde (11a) . To a solution of 3- (tert-butyl) -2-hydroxybenzaldehyde (200 mg, 1.12 mmol) in AcOH (5 mL) was added concentrated nitric acid (70%, 213 μL, 3.37 mmol, 3 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (213 mg, 85%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.47 (s, 1H) , 10.00 (s, 1H) , 8.44 (s, 2H) , 1.48 (s, 9H) .

[0278] Step 2. (E) -2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylimino) methyl) -6- (tert-butyl) -4-nitrophenol (11b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 11a (100 mg, 0.45 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (76 mg, 0.45 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (144 mg, 86%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0279] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 11b (79 mg, 0.21 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (65 mg, 82%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.58 (br s, 1H) , 8.18 (d, J = 2.7 Hz, 1H) , 7.96 (d, J = 2.7 Hz, 1H) , 7.55 –7.46 (m, 2H) , 7.42 (ddd, J = 2.3, 3.6, 7.0 Hz, 3H) , 7.34 (td, J = 1.7, 7.9 Hz, 1H) , 7.25 (dd, J = 1.6, 7.5 Hz, 1H) , 7.10 (td, J = 1.2, 7.5 Hz, 1H) , 7.02 (dd, J = 1.1, 8.1 Hz, 1H) , 4.47 (s, 2H) , 4.17 (s, 1H) , 1.44 (s, 9H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.6, 143.2, 140.0, 138.3, 138.1, 131.8, 130.6, 129.3, 129.2, 129.0, 128.0, 122.9, 122.8, 122.5, 122.0, 115.3, 50.1, 35.1, 29.1; HRMS (ESI) calcd for C23H23N2O3 [M -H] -375.1714, found 375.1717; HPLC purity: 98.38%.

[0280] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -5-methyl-4-nitrophenol (MC4-188) . Step 1.2-hydroxy-4-methyl-5-nitrobenzaldehyde (12a) . To a solution of 2-hydroxy-4-methylbenzaldehyde (100 mg, 0.73 mmol) in AcOH (5 mL) was added concentrated nitric acid (70%, 70 μL, 1.10 mmol, 1.5 equiv) and concentrated sulfuric acid (80 μL, 1.47 mmol, 2 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (94 mg, 71%) by flash chromatography (Hexane: EA = 30: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.38 (s, 1H) , 9.95 (s, 1H) , 8.46 (s, 1H) , 6.96 (s, 1H) , 2.73 (s, 3H) .

[0281] Step 2. (E) -2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylimino) methyl) -5-methyl-4-nitrophenol (12b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 12a (94 mg, 0.52 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (88 mg, 0.52 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (138 mg, 80%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0282] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 12b (69 mg, 0.21 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (61 mg, 89%) after flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.83 (s, 1H) , 8.00 (s, 1H) , 7.54 –7.47 (m, 2H) , 7.45 –7.37 (m, 3H) , 7.32 (dd, J = 7.7, 1.6 Hz, 1H) , 7.22 (dd, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H) , 7.06 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H) , 6.96 (dd, J = 8.1, 1.0 Hz, 1H) , 6.76 (s, 1H) , 4.46 (s, 2H) , 2.62 (s, 3H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.5, 143.4, 141.2, 138.3, 136.8, 131.4, 130.5, 129.2, 129.0, 128.0, 126.0, 121.6, 121.0, 120.3, 114.7, 48.9, 21.3; HRMS (ESI) calcd for C20H17N2O3 [M -H] -333.1245, found 333.1244; HPLC purity: 95.83%.

[0283] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -5-chloro-4-nitrophenol (MC4-190) . Step 1.4-chloro-2-hydroxy-5-nitrobenzaldehyde (13a) . To a solution of 4-chloro-2-hydroxybenzaldehyde (200 mg, 1.28 mmol) in AcOH (5 mL) was added concentrated nitric acid (70%, 121 μL, 1.9 mmol, 1.5 equiv) and concentrated sulfuric acid (139 μL, 2.56 mmol, 2 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (133 mg, 52%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.51 (s, 1H) , 9.97 (s, 1H) , 8.40 (s, 1H) , 7.22 (s, 1H) .

[0284] Step 2. (E) -2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylimino) methyl) -5-chloro-4-nitrophenol (13b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 13a (133 mg, 0.66 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (112 mg, 0.66 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (184 mg, 79%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0285] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 13b (91 mg, 0.26 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (75 mg, 82%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.24 (br s, 1H) , 7.92 (s, 1H) , 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.46 –7.38 (m, 3H) , 7.32 (t, J = 7.9 Hz, 1H) , 7.24 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.08 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 6.99 (s, 1H) , 6.93 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.47 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.6, 143.0, 139.7, 138.1, 131.6, 130.6, 129.3, 129.2, 129.0, 128.1, 126.5, 122.1, 121.9, 119.8, 114.8, 49.0; HRMS (ESI) calcd for C19H14ClN2O3 [M -H] -353.0698, found 353.0698; HPLC purity: 98.55%.

[0286] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -4- (methylsulfonyl) phenol (MC4-155) . Step 1. (2S, 4R) -N- (2, 6-Dimethylphenyl) -4-hydroxypyrrolidine-2-carboxamide (L1) . The ligand is prepared according to a modified procedure

[0013] . To a solution of (2S, 4R) -1- (tert-butoxycarbonyl) -4-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid (1 g, 4.32 mmol) in DCM (50 mL) was added TEA (780 μL, 5.62 mmol, 1.3 equiv) and isobutyl chloroformate (670 μL, 5.19 mmol, 1.2 equiv) at 0℃. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 15 min before 2, 6-dimethylaniline (640 μL, 5.19 mmol, 1.2 equiv) was added dropwise. The resulting mixture was allowed to warm to rt and was stirred overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The immediate was obtained as a white solid by flash chromatography (DCM) . The immediate was then dissolved in DCM (30 mL) , followed by the addition of TFA (5 mL) . The resulting mixture was stirred at rt for 5 h. Upon completion, the reaction mixture was neutralized by saturated NaHCO3 aqueous solution and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in DCM (100 mL) and filtered. The filtrate was concentrated to yield pure ligand as a white solid (790 mg, 78%) . 1H NMR spectral data were in agreement with literature value

[0013] .

[0287] Step 2.2-hydroxy-5- (methylsulfonyl) benzaldehyde (14a) . The title compound was prepared according to general procedure (C) using 2-hydroxy-5-iodobenzaldehyde (106 mg, 0.43 mmol) and sodium methanesulfinate (57 mg, 0.56 mmol, 1.3 equiv) , yielding the pure product as a white solid (66 mg, 77%) after flash chromatography (Hexane : EA = 8: 1, v / v) . 1H NMR spectral data were in agreement with literature value

[0013] .

[0288] Step 3. (E) -2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylimino) methyl) -4- (methylsulfonyl) phenol (14b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 14a (66 mg, 0.33 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (56 mg, 0.33 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (100 mg, 86%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0289] Step 4. The title compound was prepared according to general procedure (B) using 14b (100 mg, 0.28 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (82 mg, 82%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.80 (br s, 1H) , 7.88 –7.64 (m, 2H) , 7.59 –7.14 (m, 7H) , 7.07 –6.93 (m, 3H) , 4.48 (s, 2H) , 4.26 (br s, 1H) , 3.05 (s, 3H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.9, 143.4, 138.3, 131.4, 131.2, 130.6, 129.3, 129.2, 128.9, 128.8, 128.0, 127.9, 123.7, 121.3, 117.4, 114.5, 48.9, 44.9; HRMS (ESI) calcd for C20H18NO3S [M -H] -352.1013, found 352.1015; HPLC purity: 98.21%.

[0290] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -4- (phenylsulfonyl) phenol (MC4-192) . Step 1. (E) -2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylimino) methyl) -4-iodophenol (15b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 2-hydroxy-5-iodobenzaldehyde 15a (500 mg, 2.02 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (341 mg, 2.02 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (692 mg, 86%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0291] Step 2.2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -4-iodophenol (15c) . The title compound was prepared according to general procedure (B) using 15b (692 mg, 1.73 mmol) , yielding the crude product as a yellow solid (609 mg, 88%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0292] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (C) using 15c (85 mg, 0.21 mmol) and benzenesulfinic acid sodium salt (52 mg, 0.32 mmol, 1.5 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (62 mg, 71%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.67 (br s, 1H) , 7.98 –7.88 (m, 2H) , 7.81 –7.72 (m, 2H) , 7.60 –7.54 (m, 1H) , 7.50 (dd, J = 16.4, 7.8 Hz, 4H) , 7.44 –7.35 (m, 3H) , 7.21 (dd, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H) , 7.04 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.92 (dd, J = 8.3, 3.9 Hz, 2H) , 4.44 (s, 2H) , 4.20 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.6, 143.4, 142.3, 138.3, 132.9, 132.3, 131.3, 130.6, 129.2, 129.2, 128.9, 128.3, 127.9, 127.3, 123.6, 121.3, 117.4, 114.6, 49.0; HRMS (ESI) calcd for C25H20NO3S [M -H] -414.1169, found 414.1172; HPLC purity: 96.76%.

[0293] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -4- ( (4-fluorophenyl) sulfonyl) phenol (MC4-193) . The title compound was prepared according to general procedure (C) using 15c (105 mg, 0.26 mmol) and 4-fluorobenzenesulfinic acid sodium salt (71 mg, 0.39 mmol, 1.5 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (84 mg, 74%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.69 (br s, 1H) , 7.94 (dd, J = 8.7, 5.1 Hz, 2H) , 7.76 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H) , 7.72 (d, J = 2.3 Hz, 1H) , 7.49 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.43 –7.38 (m, 3H) , 7.28 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 7.19 (q, J = 8.2 Hz, 3H) , 7.05 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.92 (t, J = 8.3 Hz, 2H) , 4.44 (s, 2H) , 4.20 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 164.0, 161.7, 143.3, 138.4, 138.3, 132.1, 131.3, 130.6, 130.1 (d, J = 9.5 Hz) , 129.2, 129.2, 129.2, 128.9, 128.2, 127.9, 123.7, 121.4, 117.6, 116.5 (d, J = 22.6 Hz) , 114.6, 49.0; HRMS (ESI) calcd for C25H20FNO3S [M -H] -432.1075, found 432.1078; HPLC purity: 95.11%.

[0294] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -4- (ethylsulfonyl) phenol (MC4-194) . The title compound was prepared according to general procedure (C) using 15c (150 mg, 0.37 mmol) and sodium ethanesulfinate (65 mg, 0.56 mmol, 1.5 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (109 mg, 79%) after flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.78 (br s, 1H) , 7.74 (dd, J = 8.5, 2.4 Hz, 1H) , 7.70 (d, J = 2.3 Hz, 1H) , 7.51 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.46 –7.37 (m, 3H) , 7.31 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 7.22 (dd, J = 7.4, 1.6 Hz, 1H) , 7.06 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.99 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 6.95 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.48 (s, 2H) , 4.23 (br s, 1H) , 3.11 (q, J = 7.4 Hz, 2H) , 1.30 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.9, 143.4, 138.4, 131.3, 130.6, 129.6, 129.3, 129.2, 129.2, 128.9, 128.8, 127.9, 123.6, 121.3, 117.4, 114.6, 50.9, 49.0, 7.6; HRMS (ESI) calcd for C21H20NO3S [M -H] -366.1169, found 366.1171; HPLC purity: 95.13%.

[0295] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -5- (phenylsulfonyl) phenol (MC4-198) . Step 1. (E) -2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylimino) methyl) -5-iodophenol (18b) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 2-hydroxy-4-iodobenzaldehyde 18a (300 mg, 1.21 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (202 mg, 1.21 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (381 mg, 79%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0296] Step 2. 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -4-iodophenol (18c) . The title compound was prepared according to general procedure (B) using 18b (381 mg, 0.95 mmol) , yielding the crude product as a yellow solid (324 mg, 85%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0297] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (C) using 18c (113 mg, 0.28 mmol) and benzenesulfinic acid sodium salt (69 mg, 0.42 mmol, 1.5 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (77 mg, 74%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.15 (br s, 1H) , 7.96 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.60 –7.45 (m, 6H) , 7.42 –7.37 (m, 3H) , 7.32 –7.11 (m, 4H) , 7.01 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 6.87 (d, J =8.0 Hz, 1H) , 4.43 (s, 2H) , 4.20 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.5, 143.5, 142.0, 141.5, 138.3, 133.2, 131.1, 130.5, 129.3, 129.2, 129.1, 128.9, 128.5, 127.9, 127.7, 127.7, 121.2, 119.0, 115.8, 114.4, 49.1; HRMS (ESI) calcd for C25H20NO3S [M -H] -414.1169, found 414.1171; HPLC purity: 98.17%.

[0298] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -5- (ethylsulfonyl) phenol (MC4-199) . The title compound was prepared according to general procedure (C) using 18c (120 mg, 0.30 mmol) and sodium ethanesulfinate (52 mg, 0.45 mmol, 1.5 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (80 mg, 73%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.19 (br s, 1H) , 7.51 (dd, J = 8.5, 6.5 Hz, 2H) , 7.44 –7.37 (m, 5H) , 7.33 (d, J = 7.9 Hz, 1H) , 7.31 –7.25 (m, 2H) , 7.21 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 7.03 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.89 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.49 (s, 2H) , 4.28 (br s, 1H) , 3.13 (q, J = 7.4 Hz, 2H) , 1.30 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.1, 143.7, 138.6, 138.5, 130.6, 130.5, 129.7, 129.3, 129.2, 129.0, 128.9, 127.8, 120.6, 119.5, 115.9, 113.8, 50.5, 48.1, 7.4; HRMS (ESI) calcd for C21H20NO3S [M -H] -366.1169, found 366.1171; HPLC purity: 96.21%.

[0299] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenol (MC4-197) . Step 1. methyl 2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoate (20d) . The title compound was prepared according to general procedure (D) using methyl 4-amino-2-methoxybenzoate (3 g, 16.56 mmol) , yielding the pure product as a white solid (3.3 g, 67%) by flash chromatography (Hexane: EA = 50: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.97 (d, J =8.0 Hz, 1H) , 7.69 (d, J = 7.9 Hz, 1H) , 7.57 (s, 1H) , 4.02 (s, 3H) , 3.97 (s, 3H) .

[0300] Step 2.2- (bromomethyl) -1-methoxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzene (20e) . To a solution of 20d (100 mg, 0.34 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added diisobutylaluminium hydride (1M in hexane, 1 mL, 3 equiv) at 0℃ via syringe under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by saturated aqueous solution of Rochelle salt and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydrous DCM (5 mL) , followed by the addition of N-bromosuccinimide (78 mg, 0.44 mmol, 1.3 equiv) and triphenylphosphine (114 mg, 0.44 mmol, 1.3 equiv) at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and was stirred for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (82 mg, 73%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100: 1, v / v) .

[0301] Step 3. N- (2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-amine (20f) . To a mixture of 20e (100 mg, 0.30 mmol) , [1, 1'-biphenyl] -2-amine (102 mg, 0.60 mmol, 2 equiv) and potassium carbonate (104 mg, 0.75 mmol, 2.5 equiv) was added ACN (5 mL) . The resulting mixture was stirred at 80℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (91 mg, 72%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20: 1, v / v) .

[0302] Step 4. To a solution of 20f (91 mg, 0.22 mmol) in anhydrous DCM (10 mL) was added boron tribromide (1M in DCM, 2.2 mL, 10 equiv) at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and stirred overnight. Upon completion, the reaction mixture was quenched by MeOH and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (74 mg, 84%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.57 (s, 1H) , 7.55 –7.49 (m, 4H) , 7.45 –7.40 (m, 4H) , 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.23 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.06 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.89 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.53 (s, 2H) , 4.30 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.1, 143.2, 138.2, 132.2, 131.4, 130.7, 129.4, 129.3, 129.2, 129.0, 128.0, 122.0, 121.6, 119.8 (q, J = 325.9 Hz) , 118.5, 114.5, 49.4; HRMS (ESI) calcd for C20H15F3NO3S [M -H] -406.0730, found 406.0733; HPLC purity: 97.30%.

[0303] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) methyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenol (MC4-196) . Step 1. methyl 2-methoxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoate (21d) . The title compound was prepared according to general procedure (D) using methyl 5-amino-2-methoxybenzoate 21a (5 g, 27.60 mmol) , yielding the pure product as a white solid (5.1 g, 61%) by flash chromatography (Hexane: EA = 50: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 (d, J =2.4 Hz, 1H) , 7.97 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H) , 7.14 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 3.97 (s, 3H) , 3.93 (s, 3H) .

[0304] Step 2.2- (bromomethyl) -1-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzene (21e) . To a solution of 21d (100 mg, 0.34 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added diisobutylaluminium hydride (1M in hexane, 1 mL, 3 equiv) at 0℃ via syringe under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by saturated aqueous solution of Rochelle salt and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydrous DCM (5 mL) , followed by the addition of N-bromosuccinimide (78 mg, 0.44 mmol, 1.3 equiv) and triphenylphosphine (114 mg, 0.44 mmol, 1.3 equiv) at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and was stirred for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (73 mg, 65%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100: 1, v / v) .

[0305] Step 3. N- (2-methoxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-amine (21f) . To a mixture of 21e (152 mg, 0.46 mmol) , [1, 1'-biphenyl] -2-amine (154 mg, 0.91 mmol, 2 equiv) and potassium carbonate (158 mg, 1.14 mmol, 2.5 equiv) was added ACN (5 mL) . The resulting mixture was stirred at 80℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (148 mg, 77%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 7.90 (s, 1H) , 7.54 –7.43 (m, 4H) , 7.39 (t, J = 7.1 Hz, 1H) , 7.19 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.13 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.07 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 6.81 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.60 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.49 (t, J = 6.5 Hz, 1H) , 4.39 (d, J = 6.2 Hz, 2H) , 3.95 (s, 3H) .

[0306] Step 4. To a solution of 21f (100 mg, 0.24 mmol) in anhydrous DCM (10 mL) was added boron tribromide (1M in DCM, 2.4 mL, 10 equiv) at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and stirred overnight. Upon completion, the reaction mixture was quenched by MeOH and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (78 mg, 81%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.49 (br s, 1H) , 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.81 (s, 1H) , 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.45 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 7.7 Hz, 2H) , 7.37 –7.27 (m, 1H) , 7.24 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.13 –7.03 (m, 2H) , 6.94 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.52 (s, 2H) , 4.26 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 165.0, 143.0, 138.2, 132.5, 131.7, 131.4, 130.7, 129.3, 129.2, 129.0, 128.0, 124.3, 121.9, 121.0, 119.9 (q, J = 325.5 Hz) , 118.2, 114.9, 49.3; HRMS (ESI) calcd for C20H15F3NO3S [M -H] -406.0730, found 406.0733; HPLC purity: 97.28%.

[0307] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-yloxy) methyl) -4-nitrophenol (MC4-154) . Step 1. 2- (bromomethyl) -1-fluoro-4-nitrobenzene (22a) . To a solution of 2-fluoro-5-nitrobenzaldehyde (100 mg, 0.59 mmol) in MeOH (5 mL) was added sodium borohydride (22 mg, 0.59 mmol, 1 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by 1N hydrochloric acid and extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydrous DCM (10 mL) , followed by the addition of N-bromosuccinimide (116 mg, 0.65 mmol, 1.1 equiv) and triphenylphosphine (171 mg, 0.65 mmol, 1.1 equiv) at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and was stirred for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (94 mg, 68%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100: 1, v / v) . 1H NMR spectral data were in agreement with literature value

[0025] .

[0308] Step 2. To a solution of [1, 1'-biphenyl] -2-ol 22b (50 mg, 0.18 mmol) in ACN (10 mL) was added 2- (bromomethyl) -1-fluoro-4-nitrobenzene 22a (69 mg, 0.18 mmol, 1 equiv) and potassium carbonate (122 mg, 0.88 mmol, 3 equiv) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred overnight under reflux. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (59 mg, 1.47 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (39 mg, 64%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 –8.11 (m, 2H) , 7.52 –7.46 (m, 4H) , 7.45 –7.35 (m, 3H) , 7.20 –7.13 (m, 3H) , 6.89 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 5.22 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.8, 154.0, 137.6, 132.1, 131.3, 129.3, 128.9, 128.5, 127.6, 125.6, 124.5, 122.9, 122.4, 117.1, 113.7, 69.1; HRMS (ESI) calcd for C19H14NO4 [M -H] -320.0928, found 320.0929; HPLC purity: 97.09%.

[0309] 2- ( (2-chlorophenoxy) methyl) -4-nitrophenol (MC4-161) . To a solution of 2-chlorophenol 23b (50 μL, 0.48 mmol) in ACN (5 mL) was added 2- (bromomethyl) -1-fluoro-4-nitrobenzene 22a (113 mg, 0.48 mmol, 1 equiv) and potassium carbonate (200 mg, 1.45 mmol, 3 equiv) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred overnight under reflux. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (97 mg, 2.41 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (90 mg, 67%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.21 (dq, J = 2.8, 4.9 Hz, 2H) , 7.80 (br s, 1H) , 7.46 (dd, J = 1.7, 8.0 Hz, 1H) , 7.32 (td, J = 1.7, 7.9 Hz, 1H) , 7.11 (dd, J = 1.5, 8.3 Hz, 1H) , 7.09 –7.03 (m, 2H) , 5.36 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 161.8, 153.9, 140.0, 130.5, 128.9, 126.0, 124.9, 124.6, 122.4, 122.0, 115.9, 114.7, 65.2; HRMS (ESI) calcd for C13H9ClNO4 [M -H] -278.0226, found 278.0266; HPLC purity: 96.41%.

[0310] 4-nitro-2- ( (2- (trifluoromethyl) phenoxy) methyl) phenol (MC4-163) . To a solution of 2- (trifluoromethyl) phenol 24b (50 mg, 0.31 mmol) in ACN (5 mL) was added 2- (bromomethyl) -1-fluoro-4-nitrobenzene 22a (72 mg, 0.31 mmol, 1 equiv) and potassium carbonate (128 mg, 0.93 mmol, 3 equiv) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred overnight under reflux. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (62 mg, 1.54 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (57 mg, 59%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.27 (d, J = 2.9 Hz, 1H) , 8.21 (dd, J = 2.8, 8.9 Hz, 1H) , 7.67 (d, J = 7.7 Hz, 1H) , 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.17 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.09 (s, 1H) , 7.05 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 5.37 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 161.7, 156.2 (q, J = 1.9 Hz) , 140.1, 134.8, 127.3 (q, J = 5.2 Hz) , 125.9, 124.5, 124.4, 124.3 (q, J = 272.2 Hz) , 121.2, 117.7 (q, J = 30.1 Hz) , 115.9, 114.3, 65.0; HRMS (ESI) calcd for C14H9F3NO4 [M -H] -312.0489, found 312.0491; HPLC purity: 96.22%.

[0311] 2- ( (2- (tert-butyl) phenoxy) methyl) -4-nitrophenol (MC4-164) . To a solution of 2- (tert-butyl) phenol 25b (70 μL, 0.46 mmol) in ACN (5 mL) was added 2- (bromomethyl) -1-fluoro-4-nitrobenzene 22a (107 mg, 0.46 mmol, 1 equiv) and potassium carbonate (189 mg, 1.37 mmol, 3 equiv) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred overnight under reflux. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (91 mg, 2.28 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (91 mg, 66%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.29 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.21 (dd, J = 2.8, 8.9 Hz, 1H) , 7.38 (dd, J = 1.7, 8.0 Hz, 1H) , 7.27 –7.20 (m, 1H) , 7.08 –7.03 (m, 3H) , 7.04 –7.00 (m, 1H) , 5.28 (s, 2H) , 1.42 (s, 9H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.3, 156.8, 141.4, 139.1, 127.3, 127.2, 125.7, 124.7, 123.9, 122.2, 116.5, 113.9, 67.8, 34.8, 30.1; HRMS (ESI) calcd for C14H18NO4 [M -H] -300.1241, found 300.1243; HPLC purity: 95.54%.

[0312] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-yloxy) methyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenol (MC4-232) . Step 1. methyl 2-hydroxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoate (21g) . To a solution of 21d (100 mg, 0.34 mmol) in DCM (5 mL) was added aluminum chloride (243 mg, 1.01 mmol, 3 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 3h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by 1N hydrochloric acid and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (81 mg, 85%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.68 (s, 1H) , 8.58 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 8.07 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H) , 7.25 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 4.06 (s, 3H) .

[0313] Step 2. methyl 5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) -2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) benzoate (21h) . To a solution of 21g (81 mg, 0.29 mmol) in anhydrous DCM (10 mL) was added DIEA (118 μL, 0.71 mmol, 2.5 equiv) and 2- (trimethylsilyl) ethoxymethyl chloride (50 μL, 0.29 mmol, 1 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a colorless oil (109 mg, 92%) by flash chromatography (Hexane: EA = 50: 1, v / v) .

[0314] Step 3. (2- ( (2- (bromomethyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenoxy) methoxy) ethyl) tri-methylsilane (21i) . To a solution of 21h (109 mg, 0.26 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added diisobutylaluminium hydride (1M in hexane, 780 μL, 3 equiv) at 0 ℃ via syringe under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by saturated aqueous solution of Rochelle salt and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydous DCM (5 mL) , followed by the addition of N-bromosuccinimide (61 mg, 0.34 mmol, 1.3 equiv) and triphenylphosphine (90 mg, 0.34 mmol, 1.3 equiv) at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and was stirred for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (73 mg, 62%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100: 1, v / v) .

[0315] Step 4. (2- ( (2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-yloxy) methyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenoxy) -methoxy) ethyl) trimethylsilane (26a) . To a mixture of 2-phenylphenol 22b (42 mg, 0.25 mmol, 1.1 equiv) , 21i (100 mg, 0.22 mmol) and potassium carbonate (145 mg, 0.44 mmol, 2 equiv) was added ACN (5 mL) . The resulting mixture was stirred at 80℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (103 mg, 86%) by flash chromatography (Hexane: EA = 50: 1, v / v) .

[0316] Step 5. To a solution of 26a (103 mg, 0.19 mmol) in MeOH (10 mL) was added concentrated H2SO4 (200 μL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (65 mg, 83%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10 : 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.92 –7.76 (m, 2H) , 7.56 –7.31 (m, 8H) , 7.24 –7.09 (m, 2H) , 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 5.23 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.6, 153.8, 137.5, 132.9, 132.1, 131.5, 131.4, 129.2, 129.0, 128.6, 127.7, 123.5, 123.1, 121.7, 119.8 (q, J = 325.7 Hz) , 118.3, 113.7, 69.2; HRMS (ESI) calcd for C20H14F3O4S [M -H] -407.0570, found 407.0572; HPLC purity: 98.92%.

[0317] 2- ( (2- (tert-butyl) phenoxy) methyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenol (MC4-231) . Step 1. (2- ( (2- ( (2- (tert-butyl) phenoxy) methyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenoxy) methoxy) ethyl) trimeth-ylsilane (27a) . To a mixture of 2-tert-butylphenol 25b (37 mg, 0.25 mmol, 1.1 equiv) , 21l (100 mg, 0.22 mmol) and potassium carbonate (145 mg, 0.44 mmol, 2 equiv) was added ACN (5 mL) . The resulting mixture was stirred at 80℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (97 mg, 84%) by flash chromatography (hexane: EA = 50: 1, v / v) .

[0318] Step 2. To a solution of 27a (97 mg, 0.19 mmol) in MeOH (10 mL) was added concentrated H2SO4 (200 μL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (62 mg, 85%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10 : 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (s, 1H) , 7.95 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.46 –7.32 (m, 2H) , 7.24 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.15 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 7.04 (t, J = 8.3 Hz, 2H) , 5.28 (s, 2H) , 1.42 (s, 9H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.7, 156.7, 139.1, 132.9, 131.7, 127.3, 127.3, 125.2, 122.3 (d, J = 2.2 Hz) , 122.2, 119.9 (q, J = 325.5 Hz) , 117.5 (d, J = 2.7 Hz) , 113.8 (d, J = 2.4 Hz) , 67.6, 34.8, 30.1; HRMS (ESI) calcd for C18H18F3O4S [M -H] -387.0883, found 387.0881; HPLC purity: 97.53%.

[0319] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylthio) methyl) -4-nitrophenol (MC4-152) . Step 1. [1, 1'-biphenyl] -2-thiol (28b) . To a solution of [1, 1'-biphenyl] -2-amine (100 mg, 0.59 mmol) in water (1.5 mL) was added concentrated hydrochloric acid (110 μL, 1.30 mmol, 2.2 equiv) and sodium nitrite (41 mg, 0.59 mmol, 1 equiv) in water (0.5 mL) dropwise at 0℃ in 5 min. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 15 min before being slowly added into a solution of potassium ethylxanthate (123 mg, 0.77 mmol, 1.3 equiv) in water (1 mL) at 45℃with rapid stirring. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 30 min. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product S- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) O-ethyl carbonodithioate was obtained as a colorless oil (94 mg, 58%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100: 1, v / v) .

[0320] Then, to a solution of the above product (94 mg, 0.34 mmol) in EtOH (5 mL) was added KOH (96 mg, 1.71 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at 80℃ for 3 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product 28b was obtained as a colorless oil (53 mg, 82%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58 –7.34 (m, 6H) , 7.27 –7.21 (m, 3H) , 3.42 (s, 1H) .

[0321] Step 2. To a solution of 28b (34 mg, 0.18 mmol) in ACN (3 mL) was added 22a (43 mg, 0.18 mmol, 1 equiv) and potassium carbonate (38 mg, 0.27 mmol, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (37 mg, 0.91 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (39 mg, 64%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (dd, J = 2.8, 8.9 Hz, 1H) , 7.81 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 7.53 –7.44 (m, 4H) , 7.42 (dd, J = 1.9, 7.7 Hz, 2H) , 7.37 –7.25 (m, 3H) , 6.84 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 6.80 (s, 1H) , 3.84 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.6, 144.7, 141.1, 140.2, 132.7, 130.8, 130.8, 129.4, 128.3, 128.3, 128.1, 127.8, 126.4, 125.1, 122.9, 117.0, 35.1; HRMS (ESI) calcd for C19H14NO3S [M -H] -336.0700, found 336.0703; HPLC purity: 97.84%.

[0322] 2- ( ( (2-chlorophenyl) thio) methyl) -4-nitrophenol (MC4-160) . To a solution of 2-chlorobenzenethiol 29b (50 μL, 0.44 mmol) in ACN (5 mL) was added 2- (bromomethyl) -1-fluoro-4-nitrobenzene 22a (103 mg, 0.44 mmol, 1 equiv) and potassium carbonate (91 mg, 0.66 mmol, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (88 mg, 2.20 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (76 mg, 58%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 8.01 (s, 1H) , 7.40 (dd, J = 7.5, 22.6 Hz, 2H) , 7.21 (p, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.03 –6.81 (m, 2H) , 4.24 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.3, 141.3, 136.2, 132.7, 132.2, 130.1, 129.1, 127.4, 126.5, 125.4, 123.1, 116.7, 33.7; HRMS (ESI) calcd for C13H9ClNO3S [M -H] -293.9997, found 293.9999; HPLC purity: 98.16%.

[0323] 4-nitro-2- ( ( (2- (trifluoromethyl) phenyl) thio) methyl) phenol (MC4-162) . To a solution of 2-trifluorobenzenethiol 30b (50 μL, 0.38 mmol) in ACN (5 mL) was added 2- (bromomethyl) -1-fluoro-4-nitrobenzene 22a (89 mg, 0.38 mmol, 1 equiv) and potassium carbonate (79 mg, 0.57 mmol, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (76 mg, 1.89 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (77 mg, 62%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (dd, J = 2.8, 8.9 Hz, 1H) , 7.96 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 7.71 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.51 –7.45 (m, 2H) , 7.39 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.96 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 6.59 (s, 1H) , 4.23 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.1, 141.3, 134.3, 132.6, 132.2, 131.7 (d, J = 30.1 Hz) , 127.9, 127.2 (q, J = 5.7 Hz) , 126.5, 125.4, 123.6 (d, J = 273.7 Hz) , 123.2, 116.8, 35.6; HRMS (ESI) calcd for C14H9F3NO3S [M -H] -328.0261, found 328.0262; HPLC purity: 97.30%.

[0324] 2- ( ( (2- (tert-butyl) phenyl) thio) methyl) -4-nitrophenol (MC4-166) . Step 1.2- (tert-butyl) benzenethiol (31b) . To a solution of 2- (tert-butyl) aniline (500 mg, 3.35 mmol) in water (5 mL) was added concentrated hydrochloric acid (615 μL, 7.37 mmol, 2.2 equiv) and sodium nitrite (231 mg, 3.35 mmol, 1 equiv) in water (0.5 mL) dropwise at -20℃ in 5 min. Upon addition, the resulting mixture was slowly added into a solution of potassium ethylxanthate (806 mg, 5.03 mmol, 1.5 equiv) in water (2 mL) at 45℃ with rapid stirring. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 30 min. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product S- (2- (tert-butyl) phenyl) O-ethyl carbonodithioate was obtained as a colorless oil (357 mg, 42%) by flash chromatography (hexane : EA = 100: 1, v / v) .

[0325] Then, to a solution of the above product (357 mg, 1.40 mmol) in EtOH (5 mL) was added KOH (394 mg, 7.01 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at 80℃ for 3 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a colorless oil (208 mg, 89%) by flash chromatography (hexane : EA = 100: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H) , 7.24 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H) , 7.12 (td, J = 7.6, 1.5 Hz, 1H) , 7.04 (td, J = 7.4, 1.5 Hz, 1H) , 3.61 (s, 1H) , 1.50 (s, 9H) .

[0326] Step 2. To a solution of 31b (85 mg, 0.51 mmol, 1.2 equiv) in ACN (5 mL) was added 22a (100 mg, 0.43 mmol) and potassium carbonate (118 mg, 0.85 mmol, 2 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (85 mg, 2.14 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (103 mg, 76%) by flash chromatography (Hexane : EA = 10: 1, v / v) ; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (dd, J = 9.0, 2.8 Hz, 1H) , 8.03 (d, J = 2.7 Hz, 1H) , 7.42 (t, J = 6.9 Hz, 2H) , 7.22 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 7.16 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.96 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 6.90 (s, 1H) , 4.23 (s, 2H) , 1.50 (s, 9H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.2, 151.0, 141.3, 134.0, 133.0, 127.6, 127.0, 126.7, 126.7, 125.2, 124.0, 116.6, 36.7, 36.6, 30.7; HRMS (ESI) calcd for C17H18NO3S [M -H] -316.1013, found 316.1013; HPLC purity: 98.10%.

[0327] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylthio) methyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenol (MC4-237) . Step 1. (2- ( (2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylthio) methyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenoxy) methoxy) ethyl) -trimethylsilane (32a) . To a solution of 28b (65 mg, 0.35 mmol, 1.2 equiv) in ACN (5 mL) was added 21l (130 mg, 0.29 mmol) and potassium carbonate (80 mg, 0.58 mmol, 2 equiv) . The resulting mixture was stirred at 40℃overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a colorless oil (113 mg, 70%) by flash chromatography (Hexane: EA = 50: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.85 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H) , 7.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 7.43 –7.37 (m, 4H) , 7.37 –7.26 (m, 6H) , 5.25 (s, 2H) , 3.88 (s, 2H) , 3.83 –3.70 (m, 2H) , 1.03 –0.94 (m, 2H) , 0.03 (s, 9H) .

[0328] Step 2. To a solution of 32a (113 mg, 0.20 mmol) in MeOH (10 mL) was added concentrated H2SO4 (200 μL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (67 mg, 77%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10 : 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.76 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 7.60 –7.19 (m, 10H) , 7.13 (s, 1H) , 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 3.82 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.3, 144.8, 140.2, 133.4, 133.1, 132.3, 130.8, 130.2, 129.4, 128.6, 128.3, 128.1, 127.8, 124.4, 121.5, 119.8 (q, J = 325.7 Hz) , 118.1, 34.9; HRMS (ESI) calcd for C20H14F3O3S2 [M -H] -423.0342, found 423.0345; HPLC purity: 96.42%.

[0329] 2- ( ( (2- (tert-butyl) phenyl) thio) methyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenol (MC4-234) . Step 1. (2- ( (2- ( ( (2- (tert-butyl) phenyl) thio) methyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenoxy) methoxy) ethyl) -trimethylsilane (33a) . To a mixture of 31b (76 mg, 0.46 mmol, 1.1 equiv) , 21l (150 mg, 0.41 mmol) and potassium carbonate (86 mg, 0.62 mmol, 1.5 equiv) was added ACN (5 mL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (176 mg, 79%) by flash chromatography (Hexane: EA =50: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H) , 8.01 (d, J = 2.9 Hz, 1H) , 7.47 (dd, J = 7.1, 2.2 Hz, 1H) , 7.40 (dd, J = 7.3, 2.2 Hz, 1H) , 7.25 –7.16 (m, 3H) , 5.35 (s, 2H) , 4.19 (s, 2H) , 3.87 –3.75 (m, 2H) , 1.45 (s, 9H) , 1.05 –0.95 (m, 2H) , 0.02 (s, 9H) .

[0330] Step 2. To a solution of 33a (176 mg, 0.33 mmol) in MeOH (10 mL) was added concentrated H2SO4 (200 μL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (99 mg, 74%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10 : 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.84 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 1H) , 7.66 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 7.42 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H) , 7.37 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 7.26 –7.19 (m, 1H) , 7.14 (td, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H) , 7.09 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 7.05 (s, 1H) , 4.22 (s, 2H) , 1.46 (s, 9H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.8, 151.3, 134.4, 133.6, 132.4, 127.8, 127.1, 126.6, 125.4, 122.1, 119.8 (q, J = 325.6 Hz) , 117.6, 36.6, 36.6, 30.7; HRMS (ESI) calcd for C18H18F3O3S2 [M -H] -403.0655, found 403.0654; HPLC purity: 96.78%.

[0331] 2- ( ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl (methyl) amino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-189) . Step 1. N-methyl- [1, 1'-biphenyl] -2-amine (34b) . To a mixture of 2-bromo-1, 1'-biphenyl (370 μL, 2.15 mmol) , rac-BINAP (67 mg, 0.11 mmol, 0.05 equiv) , methylamine hydrochloride (174 mg, 2.57 mmol, 1.2 equiv) , sodium tert-butoxide (660 mg, 6.86 mmol, 3.2 equiv) and Pd2dba3 (49 mg, 0.05 mmol, 0.025 equiv) was added toluene (10 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 75℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (303 mg, 77%) by flash chromatography (Hexane: EA = 50: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.53 –7.41 (m, 4H) , 7.40 –7.36 (m, 1H) , 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.12 (dd, J = 7.3, 1.6 Hz, 1H) , 6.80 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.72 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 2.83 (s, 3H) .

[0332] Step 2. To a solution of 34b (105 mg, 0.57 mmol) in ACN (5 mL) was added 22a (134 mg, 0.57 mmol, 1 equiv) and potassium carbonate (158 mg, 1.14 mmol, 2 equiv) . The resulting mixture was stirred overnight under reflux. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (115 mg, 2.86 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (121 mg, 63%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.21 (s, 1H) , 8.07 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 8.00 (s, 1H) , 7.60 –7.29 (m, 9H) , 6.79 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 4.20 (s, 2H) , 2.53 (s, 3H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163.4, 149.2, 140.3, 140.0, 139.0, 131.8, 129.0, 128.9, 128.8, 127.7, 126.0, 125.4, 125.2, 121.6, 121.1, 116.5, 60.3, 43.2; HRMS (ESI) calcd for C20H17N2O3 [M -H] -333.1245, found 333.1246; HPLC purity: 99.44%.

[0333] 2- (1- ( [1, 1'-biphenyl] -2-ylamino) ethyl) -4-nitrophenol (MC4-182) . To a solution of [1, 1'-biphenyl] -2-amine (100 mg, 0.59 mmol) in MeOH (10 mL) was added 1- (2-hydroxy-5-nitrophenyl) ethan-1-one (107 mg, 0.59 mmol, 1 equiv) . The resulting mixture was stirred overnight under reflux. The formed precipitate was filtered, collected and redissolved in MeOH (5 mL) , followed by the addition of sodium borohydride (22 mg, 0.59 mmol, 1 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (117 mg, 59%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.90 (br s, 1H) , 8.14 –8.11 (m, 2H) , 7.54 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.50 –7.43 (m, 1H) , 7.43 –7.33 (m, 2H) , 7.25 –7.21 (m, 2H) , 7.05 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.91 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 6.83 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.57 (q, J = 6.9 Hz, 1H) , 4.07 (s, 1H) , 1.52 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.8, 142.6, 140.9, 138.2, 131.8, 130.5, 129.3, 129.2, 129.0, 128.1, 127.8, 125.0, 123.6, 121.9, 117.6, 115.6, 56.6, 22.6; HRMS (ESI) calcd for C20H17N2O3 [M -H] -333.1245, found 333.1245; HPLC purity: 98.34%.

[0334] 1- (2-chlorophenyl) -2- (2-hydroxy-5-nitrophenyl) ethan-1-one (MC4-158) . Step 1. (2- ( (2-bromophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (36b) . To a solution of 2-bromophenol 36a (1400 mg, 8.09 mmol) in anhydrous DCM (20 mL) was added DIEA (3340 μL, 20.23 mmol, 2.5 equiv) and 2- (trimethylsilyl) ethoxymethyl chloride (1430 μL, 8.09 mmol, 1 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a colorless oil (2282 mg, 93%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100: 1, v / v) . 1H NMR spectral data were in agreement with literature value

[0026] .

[0335] Step 2.1- (2-chlorophenyl) -2- (2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) phenyl) ethan-1-one (36c) . To a mixture of 36b (1000 mg, 3.30 mmol) , Pd2 (dba) 3 (45 mg, 0.05 mmol, 0.015 equiv) , DPEPhos (64 mg, 0.12 mmol, 0.036 equiv) , sodium tert-butoxide (412 mg, 4.29 mmol, 1.3 equiv) in THF (30 mL) was added 1- (2-chlorophenyl) ethan-1-one (471 μL, 3.63 mmol, 1.1 equiv) via syringe under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 70℃ for 4 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a colorless oil (1081 mg, 87%) by flash chromatography (Hexane: EA = 50: 1, v / v) .

[0336] Step 3.1- (2-chlorophenyl) -2- (5-nitro-2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) phen-yl) ethan-1-one (36d) . To a solution of 36c (1081 mg, 2.87 mmol) in DCM (15 mL) was added dropwise a mixture of tetrabutylammonium nitrate (1135 mg, 3.73 mmol, 1.3 equiv) , trifluoroacetic anhydride (3986 μL, 28.68 mmol, 10 equiv) and 18-crown-6 (2653 mg, 10.04 mmol, 3.5 equiv) in DCM (15 mL) . The resulting solution was stirred at rt for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow oil (811 mg, 67%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.20 (dd, J = 2.8, 9.0 Hz, 1H) , 8.16 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 7.56 (dd, J = 1.7, 7.6 Hz, 1H) , 7.51 –7.41 (m, 2H) , 7.37 (td, J = 1.6, 7.3 Hz, 1H) , 7.25 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 5.30 (s, 2H) , 4.34 (s, 2H) , 3.72 (t, J = 8.3 Hz, 2H) , 0.98 –0.92 (t, J = 8.3 Hz, 2H) , 0.01 (s, 9H) .

[0337] Step 4. To a solution of 36d (811 mg, 1.92 mmol) in MeOH (30 mL) was added concentrated H2SO4 (300 μL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (207 mg, 37%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.47 (s, 1H) , 8.16 –8.09 (m, 2H) , 7.59 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 7.55 –7.50 (m, 2H) , 7.44 –7.39 (m, 1H) , 7.04 (d, J =8.6 Hz, 1H) , 4.40 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 199.4, 162.6, 139.8, 138.9, 132.8, 130.9, 130.1, 129.7, 128.1, 127.8, 125.4, 123.4, 115.4, 43.7; HRMS (ESI) calcd for C14H9ClNO4 [M -H] -290.0226, found 290.0225; HPLC purity: 96.58%.

[0338] 2- (2- (2-chlorophenyl) -2-hydroxyethyl) -4-nitrophenol (MC4-157) . To a solution of MC4-158 (75 mg, 0.26 mmol) in EtOH (5 mL) was added sodium borohydride (20 mg, 0.51 mmol, 2 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was neutralized by saturated NH4Cl aqueous solution and extracted with EA (10 mL ×3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (60 mg, 79%) by flash chromatography (Hexane: EA = 1: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.08 (br s, 1H) , 8.08 (dd, J = 2.9, 8.8 Hz, 1H) , 7.92 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 7.54 (dd, J = 2.7, 6.8 Hz, 1H) , 7.43 (dd, J = 2.5, 6.6 Hz, 1H) , 7.35 –7.18 (m, 2H) , 7.02 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 5.55 (dd, J = 4.2, 6.5 Hz, 1H) , 3.18 –3.12 (m, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.1, 141.0, 139.3, 131.4, 129.8, 129.4, 127.6, 127.3, 126.4, 125.6, 125.0, 117.7, 73.1, 39.4; HRMS (ESI) calcd for C14H11ClNO4 [M -H] -292.0382, found 292.0381; HPLC purity: 96.16%.

[0339] N- (2-hydroxy-5-nitrophenyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-carboxamide (MC4-195) . Step 1. N- (2-methoxy-5-nitrophenyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-carboxamide (38a) . To a solution of [1, 1'-biphenyl] -2-carboxylic acid (150 mg, 0.76 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added one drop of DMF and oxalyl chloride (96 μL, 1.14 mmol, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydrous DCM (5 mL) , followed by the addition of TEA (316 μL, 2.27 mmol, 3 equiv) and 2-methoxy-5-nitroaniline (153 mg, 0.91 mmol, 1.2 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (179 mg, 68%) by flash chromatography (Hexane: DCM = 1: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.80 (s, 1H) , 8.65 (dd, J = 8.3, 1.2 Hz, 1H) , 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.78 (dd, J = 8.3, 1.6 Hz, 1H) , 7.61 –7.38 (m, 7H) , 7.28 –7.19 (m, 2H) , 3.42 (s, 3H) .

[0340] Step 2. To a solution of 38a (179 mg, 0.51 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added boron tribromide (1M in DCM, 5.1 mL, 10 equiv) at -10℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and stirred for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by MeOH and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (118 mg, 83%) by flash chromatography (DCM: MeOH = 100: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.44 (br s, 1H) , 9.32 (s, 1H) , 8.73 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 7.92 (dd, J = 8.9, 2.9 Hz, 1H) , 7.67 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.60 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.53 –7.45 (m, 4H) , 7.40 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 7.36 –7.33 (m, 1H) , 6.97 (d, J = 8.9 Hz, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 168.6, 155.1, 140.3, 140.0, 139.5, 136.4, 130.7, 130.6, 128.9, 128.9, 128.7, 128.0, 127.8, 126.8, 121.7, 117.6, 115.4; HRMS (ESI) calcd for C19H13N2O4 [M -H] -333.0881, found 333.0882; HPLC purity: 97.85%.

[0341] N- (2-hydroxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-carboxamide (MC4-320) . Step 1. N- (2-methoxy-4-nitrophenyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-carboxamide (39a) . To a solution of 2-biphenylcarboxylic acid (354 mg, 1.79 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added one drop of DMF and oxalyl chloride (227 μL, 2.68 mmol, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydrous DCM (5 mL) , followed by the addition of TEA (745 μL, 5.35 mmol, 3 equiv) and 2-methoxy-4-nitroaniline (300 mg, 1.79 mmol, 1 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (370 mg, 60%) by flash chromatography (hexane : EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.66 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 7.98 –7.88 (m, 3H) , 7.65 –7.57 (m, 2H) , 7.53 (td, J = 7.6, 1.3 Hz, 1H) , 7.50 –7.45 (m, 3H) , 7.45 –7.35 (m, 3H) , 3.66 (s, 3H) .

[0342] Step 2. N- (4-amino-2-methoxyphenyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-carboxamide. To a solution of 39a (370 mg, 1.06 mmol) in EtOH / water (28 mL, 5: 2) was added NH4Cl (284 mg, 5.31 mmol, 5 equiv) and iron powder (297 mg, 5.31 mmol, 5 equiv) at 80℃. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was filtered through a short pad of Celite, and the filtrate was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The crude product (325 mg, 96%) was used directly in the next step.

[0343] Step 3. N- (2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-carboxamide (39d) . The title compound was prepared according to general procedure (D) using above product (325 mg, 1.02 mmol) , yielding the pure product as a white solid (229 mg, 52%) after flash chromatography (Hexane : EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.81 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 7.97 (s, 1H) , 7.92 (dd, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H) , 7.67 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H) , 7.62 (td, J = 7.6, 1.5 Hz, 1H) , 7.54 (td, J = 7.6, 1.4 Hz, 1H) , 7.50 –7.35 (m, 6H) , 7.25 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 3.66 (s, 3H) .

[0344] Step 4. To a solution of 39d (100 mg, 0.23 mmol) in anhydrous DCM (10 mL) was added boron tribromide (1M in DCM, 2.3 mL, 10 equiv) at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and stirred for 3 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by MeOH and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (57 mg, 59%) by flash chromatography (DCM : MeOH = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.17 (br s, 1H) , 9.41 (s, 1H) , 8.38 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 7.68 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.62 (t, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.57 (dd, J = 8.7, 2.3 Hz, 1H) , 7.52 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 2H) , 7.50 –7.43 (m, 3H) , 7.43 –7.31 (m, 4H) . 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 168.7, 148.5, 140.2, 140.1, 136.1, 135.5, 131.0, 130.7, 128.9, 128.9, 128.8, 128.1, 127.9, 123.3, 123.2, 121.6, 120.0 (q, J = 326.2 Hz) , 115.5; HRMS (ESI) calcd for C20H13F3NO4S [M -H] -420.0523, found 420.0524; HPLC purity: 99.14%.

[0345] N- (2-hydroxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-carboxamide (MC4-236) . Step 1.1-methoxy-2-nitro-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzene (40d) . The title compound was prepared according to general procedure (D) using 4-methoxy-3-nitroaniline (500 mg, 2.97 mmol) , yielding the pure product as a white solid (440 mg, 51%) after flash chromatography (Hexane : EA = 10: 1, v / v) .

[0346] Step 2.2-methoxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) aniline (40e) . To a solution of 40d (440 mg, 1.54 mmol) in EtOH / water (28 mL, 5: 2) was added NH4Cl (412 mg, 7.71 mmol, 5 equiv) and iron powder (430 mg, 7.71 mmol, 5 equiv) at 80℃. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was filtered through a short pad of Celite, and the filtrate was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The crude product (370 mg, 94%) was used directly in the next step.

[0347] Step 3. N- (2-methoxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) phenyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-carboxamide (40f) . To a solution of 2-biphenylcarboxylic acid (305 mg, 1.54 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added one drop of DMF and oxalyl chloride (196 μL, 2.31 mmol, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydrous DCM (5 mL) , followed by the addition of TEA (643 μL, 4.62 mmol, 3 equiv) and 40e (370 mg, 1.45 mmol, 1 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (455 mg, 72%) by flash chromatography (hexane : EA = 20: 1, v / v) .

[0348] Step 4. To a solution of 40f (100 mg, 0.23 mmol) in anhydrous DCM (10 mL) was added boron tribromide (1M in DCM, 2.3 mL, 10 equiv) at 0℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and stirred at the same temperature for 3 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by MeOH and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (89 mg, 92%) by flash chromatography (DCM : MeOH = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.44 (s, 1H) , 8.48 (d, J = 2.3 Hz, 1H) , 7.72 (dd, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H) , 7.67 (d, J = 7.4 Hz, 1H) , 7.60 (t, J =7.5 Hz, 1H) , 7.54 –7.43 (m, 4H) , 7.43 –7.31 (m, 3H) , 7.17 (d, J = 8.7 Hz, 1H) . 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 168.7, 157.1, 140.3, 140.0, 136.4, 130.8, 130.5, 129.2, 128.9, 128.8, 128.7, 128.1, 128.0, 127.8, 124.1, 120.1 (q, J = 325.8 Hz) , 118.0, 116.9; HRMS (ESI) calcd for C20H13F3NO4S [M -H] -420.0523, found 420.0525; HPLC purity: 96.55%.

[0349] N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-hydroxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-205) . Step 1.2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoic acid (41a) . To a solution of 20d (140 mg, 0.47 mmol) in EtOH (5 mL) was added sodium hydroxide (38 mg, 0.95 mmol, 2 equiv) in water (5 mL) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction was neutralized by addition of 1N hydrochloride acid and extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, concentrated under reduced pressure, and dried in vacuo to afford the crude product 41a as a white solid (124 mg, 93%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0350] Step 2. N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamilde (41b) . To a solution of 41a (124 mg, 0.44 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added one drop of DMF and oxalyl chloride (60 μL, 0.70 mmol, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydrous DCM (5 mL) , followed by the addition of TEA (196 μL, 1.41 mmol, 3 equiv) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (95 mg, 0.56 mmol, 1.2 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (135 mg, 66%) by flash chromatography (Hexane: DCM = 1: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.80 (s, 1H) , 8.65 (dd, J = 8.3, 1.2 Hz, 1H) , 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.78 (dd, J = 8.3, 1.6 Hz, 1H) , 7.61 –7.38 (m, 7H) , 7.28 –7.19 (m, 2H) , 3.42 (s, 3H) .

[0351] Step 3. To a solution of 41b (100 mg, 0.23 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added boron tribromide (1M in DCM, 2.3 mL, 10 equiv) at -10℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and stirred for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by MeOH and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (75 mg, 78%) by flash chromatography (DCM: MeOH = 100: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.45 (s, 1H) , 8.39 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 8.24 (s, 1H) , 7.67 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.62 –7.43 (m, 6H) , 7.43 –7.31 (m, 3H) , 7.14 (d, J = 8.3 Hz, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 166.0, 162.3, 137.3, 136.1, 133.3, 133.0, 130.3, 129.5, 129.3, 128.8, 126.5, 126.0, 121.8, 121.6, 121.1, 119.7, 119.6 (q, J = 326.2 Hz) ; HRMS (ESI) calcd for C20H13F3NO4S [M -H] -420.0523, found 420.0527; HPLC purity: 98.47%.

[0352] N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-hydroxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-204) . Step 1.2-methoxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoic acid (42a) . To a solution of 21d (300 mg, 1.01 mmol) in EtOH (5 mL) was added sodium hydroxide (80 mg, 2.02 mmol, 2 equiv) in water (5 mL) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction was neutralized by addition of 1N hydrochloride acid and extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, concentrated under reduced pressure, and dried in vacuo to afford the crude product 42a as a white solid (274 mg, 96%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0353] Step 2. N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-methoxy-5- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamilde (42b) . To a solution of 42a (274 mg, 0.96 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added one drop of DMF and oxalyl chloride (127 μL, 1.51 mmol, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydrous DCM (5 mL) , followed by the addition of TEA (420 μL, 3.02 mmol, 3 equiv) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (204 mg, 1.21 mmol, 1.2 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (256 mg, 61%) by flash chromatography (Hexane: DCM = 1: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.66 (s, 1H) , 9.00 (d, J = 2.5 Hz, 1H) , 8.67 (dd, J = 8.3, 1.1 Hz, 1H) , 8.09 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H) , 7.57 –7.43 (m, 6H) , 7.27 –7.21 (m, 2H) , 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 3.45 (s, 3H) .

[0354] Step 3. To a solution of 42b (100 mg, 0.23 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added boron tribromide (1M in DCM, 2.3 mL, 10 equiv) at -10℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and stirred for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by MeOH and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (76 mg, 79%) by flash chromatography (DCM: MeOH = 100: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13.24 (s, 1H) , 8.38 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 8.31 (s, 1H) , 7.98 (dd, J = 9.0, 2.2 Hz, 1H) , 7.63 –7.57 (m, 3H) , 7.57 –7.46 (m, 2H) , 7.48 –7.39 (m, 3H) , 7.35 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H) , 7.22 (d, J = 8.9 Hz, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ168.7, 166.0, 137.0, 135.8, 133.5, 133.0, 130.1, 129.7, 129.6, 129.0, 128.9, 128.7, 125.9, 121.5, 120.8, 120.4 (q, J = 1.6 Hz) , 119.7 (q, J = 325.5 Hz) , 115.6; HRMS (ESI) calcd for C20H13F3NO4S [M -H] -420.0523, found 420.0527; HPLC purity: 98.83%.

[0355] N- (2-chlorophenyl) -2-hydroxy-5-nitrobenzamide (MC4-165) . To a solution of 2-fluoro-5-nitrobenzoic acid (100 mg, 0.54 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) was added one drop of DMF and oxalyl chloride (69 μL, 0.81 mmol, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in anhydrous DCM (5 mL) , followed by the addition of TEA (225 μL, 1.62 mmol, 3 equiv) and 2-chloroaniline (68 μL, 0.65 mmol, 1.2 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was redissolved in a mixture of DMSO / water (3: 1, v / v) , followed by the addition of sodium hydroxide (108 mg, 2.70 mmol, 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 4 h under N2 atmosphere. Upon completion, the reaction mixture was acidified by 1N hydrochloric acid, extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (81 mg, 51%) by flash chromatography (Hexane: EA = 3: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.92 (s, 1H) , 8.87 (d, J = 3.1 Hz, 1H) , 8.40 (dd, J = 1.5, 8.3 Hz, 1H) , 8.32 (dd, J = 2.9, 9.0 Hz, 1H) , 7.58 (dd, J =1.5, 8.0 Hz, 1H) , 7.42 (td, J = 1.5, 7.9 Hz, 1H) , 7.24 –7.20 (m, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 162.8, 162.5, 140.3, 135.3, 129.8, 129.3, 128.4, 127.5, 126.1, 124.1, 123.4, 119.2, 118.7; HRMS (ESI) calcd for C13H8ClN2O4 [M -H] -291.0178, found 291.0180; HPLC purity: 96.54%.

[0356] (E) -2- (2- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) -4-nitrophenol (MC4-153) . Step 1.5-nitro-2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) benzaldehyde (44a) . To a mixture of 5-nitrosalicylaldehyde (500 mg, 2.99 mmol) and DIEA (1.24 mL, 7.48 mmol, 2.5 equiv) in anhydrous DCM (30 mL) was added 2- (trimethylsilyl) ethoxymethyl chloride (530 μL, 2.99 mmol, 1 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (716 mg, 80%) by flash chromatography (Hexane: EA = 30 : 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.49 (s, 1H) , 8.73 (d, J = 2.9 Hz, 1H) , 8.42 (dd, J = 9.3, 2.9 Hz, 1H) , 7.42 (d, J =9.3 Hz, 1H) , 5.48 (s, 2H) , 3.85 (t, J = 8.2 Hz, 2H) , 1.00 (t, J = 8.2 Hz, 2H) , 0.03 (s, 9H) .

[0357] Step 2. trimethyl (2- ( (4-nitro-2-vinylphenoxy) methoxy) ethyl) silane (44b) . To a solution of methyltriphenylphosphonium bromide (3.6 g, 10.08 mmol, 1.5 equiv) in anhydrous THF (30 mL) at 0℃ was added NaH (444 mg, 60%in mineral oil, 11.1 mmol, 1.65 equiv) . The resulting mixture was stirred at the same temperature for 30 min and 44a (2 g, 6.73 mmol) in anhydrous THF (10 mL) was added dropwise via syringe under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (1238 mg, 62%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100 : 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.40 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.13 (dd, J = 9.2, 2.9 Hz, 1H) , 7.23 (d, J = 9.1 Hz, 1H) , 7.04 (dd, J = 17.7, 11.1 Hz, 1H) , 6.15 –5.72 (m, 1H) , 5.60 –5.42 (m, 1H) , 5.38 (s, 2H) , 3.83 –3.76 (m, 2H) , 1.03 –0.93 (m, 2H) , 0.02 (s, 9H) .

[0358] Step 3. The title compound was prepared according to general procedure (E) using 2-iodo-1, 1'-biphenyl 44c (119 μL, 0.68 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (156 mg, 73%) by flash chromatography (Hexane: EA = 15: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.23 (d, J = 2.7 Hz, 1H) , 8.03 (dd, J = 8.9, 2.7 Hz, 1H) , 7.81 –7.75 (m, 1H) , 7.53 –7.45 (m, 2H) , 7.44 –7.38 (m, 6H) , 7.22 (d, J = 2.2 Hz, 2H) , 6.88 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 6.08 (s, 1H) . 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.3, 141.8, 141.6, 140.6, 134.8, 132.2, 130.4, 129.8, 128.3, 127.7, 127.5, 126.2, 125.8, 124.2, 123.3, 121.8, 116.0; HRMS (ESI) calcd for C20H14NO3 [M -H] -316.0979, found 316.0981; HPLC purity: 97.76%.

[0359] (E) -2- (2-chlorostyryl) -4-nitrophenol (MC4-134) . The title compound was prepared according to general procedure (E) using 1-chloro-2-iodobenzene 45c (70 mg, 0.29 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (47 mg, 58%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.50 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.10 (dd, J = 8.9, 2.8 Hz, 1H) , 7.73 (dd, J = 7.6, 1.9 Hz, 1H) , 7.66 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.44 (d, J = 7.7 Hz, 1H) , 7.34 –7.25 (m, 3H) , 6.93 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 6.16 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 162.0, 140.4, 135.3, 132.9, 130.2, 129.9, 128.1, 127.4, 127.1, 126.2, 125.3, 124.6, 124.1, 116.7; HRMS (ESI) calcd for C14H9ClNO3 [M -H] -274.0276, found 274.0274; HPLC purity: 98.36%.

[0360] (E) -2- (3-chlorostyryl) -4-nitrophenol (MC4-135) . The title compound was prepared according to general procedure (E) using 1-chloro-3-iodobenzene 46c (70 mg, 0.29 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (51 mg, 63%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.48 (s, 1H) , 8.09 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.43 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.37 –7.31 (m, 3H) , 7.20 (d, J = 16.5 Hz, 1H) , 6.92 (d, J =8.9 Hz, 1H) , 5.89 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 161.7, 140.4, 139.8, 134.1, 131.0, 129.9, 128.0, 126.7, 125.7, 125.2, 124.7, 123.9, 123.3, 116.6; HRMS (ESI) calcd for C14H9ClNO3 [M -H] -274.0276, found 274.0273; HPLC purity: 96.25%.

[0361] Determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) against Bacteria. The antimicrobial activity of the compounds was determined by broth microdilution according to the Clinical &Laboratory Standards Institute (CLSI) guidelines. E. faecalis, S. aureus  25923 and  29213, K. pneumoniae, P. aeruginosa, E. cloacae, and E. coli were cultured in cation adjusted Mueller-Hinton broth (MH) . S. pneumoniae was grown in Brain-heart Infusion broth (BHI) . For staphylococcal-optimised conditions, MRSA, MSSA, lab-derived SA, and VRSA were cultivated in Tryptic Soy broth (TSB) . M. tuberculosis H37Ra was raised in Middlebrook 7H9 broth supplemented with OADC and glycerol according to the EUCAST and WHO guidelines. C. difficile was raised in BHI supplemented with 0.1%l-cysteine. The bacterial cell inoculum was adjusted to approximately 5 × 106 CFU / mL. Serial two-fold dilutions were performed for the tested chemicals starting from 256 μg / mL to 0.5 μg / mL. Results were taken after 20 h of incubation at 37 ℃. The MIC was defined as the lowest concentration of antibiotic with no visible growth. For M. tuberculosis, MIC was taken 21 days following inoculation. For C. difficile, MIC was taken 2 days following 37 ℃ anaerobic incubation. Experiments were performed in duplicates.

[0362] Determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) against Fungi. A broth microdilution method was performed in accordance with CLSI guidelines, using 0.165 mol / L 3- (N-morpholino) propanesulfonic acid (MOPS) buffer at pH 7 supplemented with the Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 powder. Fungal inoculum was adjusted to approximately 1 × 103 CFU / mL by measuring the OD600. The plates were incubated at 35 ℃for 24-48 hours, and MIC values were determined by visual inspection of growth. The MIC was defined as the lowest concentration of an antifungal agent with no visible microbial growth.

[0363] Time-kill kinetics assay. The dose-and time-dependent antimicrobial effects of the compounds on S. aureus strains under aerobic conditions were evaluated by adapting to relevant CLSI guidelines. Experiments were conducted using S. aureus strains 25923,  29213, and MRSA USA300. A starter culture was prepared by resuspending fresh colonies of S. aureus in MHB to a density of ～ 1 × 106 CFU / mL, followed by compound (MC4-190 / MC4-205 / MC4-134 / MC4-135) addition at 1 / 4 ×, 1 ×, 4 ×, and 16 × MIC respectively alongside an untreated control. The cultures were then incubated at 37 ℃ at 175 rpm. At 0, 2, 4, and 6 hours, 20 μL samples were removed from each culture and were serially diluted 10-fold with sterile PBS. 5 μL droplets were pipetted onto Columbia agar plates supplemented with 5 %defibrinated horse blood, which were then incubated overnight at 37 ℃. The number of viable colonies formed was quantified the next day and used to extrapolate the final cell density of each treatment group. Experiments were performed in triplicates.

[0364] ATP production assay. Performed simultaneously as the time–kill kinetics, 20 μL samples were retrieved from the same cultures for each treatment group at the same time points (0, 2, 4 and 6 h) and added to white 96-well plates, after which equal volumes of reagents were added from the BacTiter-GloTM Microbial Cell Viability Assay Kit (Promega) and quantified according to the manufacturer’s protocol. The experiment was performed in triplicates.

[0365] Resistance generation by serial passage. Fresh colonies of S. aureus 29213, MRSA ST30, and USA300 JE2 were obtained by streaking from glycerol stocks onto LB agar and incubated overnight at 37 ℃. On Day 0, colonies were resuspended in MHB (or TSB when optimising for MRSA) and used to inoculate a broth microdilution plate set up to determine the MIC of MC4-190 / MC4-205 / MC4-135 in triplicates according to CLSI guidelines on determining antimicrobial susceptibility. From Day 1 onwards, the latest MIC of antimicrobial compounds was recorded upon each passage, and the wells containing cells cultured under 1 / 4 × MIC of compound in each replicate lane were homogenised and used to prepare inoculums for the corresponding fresh replicate lanes. Throughout the assay, each plate was covered with sterile gas-permeable seals to prevent desiccation and incubated overnight at 37 ℃ with constant agitation at 180 rpm on an orbital shaker. The process was repeated until its conclusion on Day 15.

[0366] Checkerboard assay. MC4-205 was investigated for potential drug synergism in combination with a panel of antibiotics readily available at clinical settings. S. aureus 29213 was cultured in the presence of a range of concentrations of both MC4-205 and a choice of either vancomycin, chloramphenicol, or rifampicin. The synergistic effects of combined antibiotics were assessed by the checkerboard assay method, in essence an adaptation of the CLSI broth microdilution assay for determining MICs: MC4-205 was two-fold serially diluted down from its equivalent 4 × MIC (final) in a horizontal manner across a TSB-loaded 96-well plate, whilst the same was performed for the combination antibiotic in a vertical manner. Broth containing appropriate antibiotic dilutions from each well were then transferred to corresponding wells on the plate containing MC4-205 dilutions to obtain the combination series –in effect in a chequered manner –before finally inoculated with one of the three staphylococcal suspensions prepared from fresh colonies. Each drug combination was summarily defined as antagonistic (>4.0) , indifferent (0.5 –4.0) or synergistic (≤ 0.5) by calculating their corresponding fractional inhibitory concentration (FIC) indices.

[0367] In vivo efficacy in Syrian golden hamsters with C. difficile-induced colitis. The in vivo antibacterial activity of compound MC4-190 and MC4-135 was tested in Syrian golden hamsters with C. difficile-induced colitis. In brief, the animals were divided into 5 groups of 8 animals comprised of two compound treatment groups (MC4-190 or MC4-135 at 25 mg / kg and 12.5 mg / kg) , a positive drug control group (vancomycin at 12.5 mg / kg) , a model control group and a blank control group. Each hamster was first subcutaneously injected with 10 mg / kg of clindamycin phosphate to predispose the animals to antibiotic-associated pseudomembranous colitis induced by C. difficile. After 24 hours, the minimal lethal dose (MLD) concentration of bacterial suspension was orally administered to the hamsters at a volume of 10 mL / kg (MLD OD600 = 0.665) , while C. difficile  9689 was cultured under anaerobic conditions. At 4 hours post-infection, compounds and vancomycin were orally administered to the hamsters once daily for total 7 days. The hamsters were monitored daily, and the number of deaths was recorded. All procedures in this protocol were in compliance with the Animal Welfare Act, the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, and the Office of Laboratory Animal Welfare, and the protocol was approved by IACUC of Sichuan Primed Shines Bio0tech Co., Ltd. (Ethics Approval Number: PAW2409) .

[0368] In vivo efficacy in neutropenic mouse thigh model with infection caused by MRSA USA300. Female C57BL / 6J mice were infected in the right thighs with MRSA USA300 suspension at 5 x 105 CFU / animal. Doses were delivered subcutaneously at 2 and 8 hours after infection. The doses of MC4 derivatives were 10 mg / kg, and the linezolid dose was 80 mg / kg. 26 hours post-infection, the right thighs were harvested and homogenized for CFU determination. The CFU / thigh was calculated and transformed to log10 value. Each symbol represented the log10 CFUs / g of the right thigh muscle, with horizontal bars representing mean values. One-way ANOVA analysis was used to compare the means of treatment groups with the vehicle control group.

[0369] In vivo efficacy in neutropenic rat deep thigh model with infection caused by MRSA USA300. Female Sprague-Dawley (SD) rat were infected in the right thighs with MRSA USA300 suspension at 2.0×106 CFU / animal. Doses were delivered subcutaneously at 2 and 8 hours after infection. The doses of the test compounds were 2 and 20 mg / kg, and the linezolid dose was 60 mg / kg. 26 hours post-infection, the right thighs were harvested and homogenized for CFU determination. The CFU / thigh was calculated and transformed to log10 value. Each symbol represented the log10 CFUs / g of the right thigh muscle, with horizontal bars representing mean values. One-way ANOVA analysis was used to compare the means of treatment groups with the vehicle control group.

[0370] In vivo efficacy in mouse wound model with infection caused by MRSA USA300. Female BALB / c mice were infected in the skin wounds with MRSA USA300 suspension at 1 x 107 CFU / animal. Doses were delivered subcutaneously daily on days 1, 2, 3, and 4 after infection (Day 0) . The doses of the tested compounds were 5 and 10 mg / kg, while the linezolid dose was 60 mg / kg. Wound sizes were measured using caliper every day. Wound tissues were harvested and homogenized for CFU determination on Day 7 after the infection. The CFU / wound was calculated and transformed to log10 value. One-way ANOVA analysis was used to compare the means of treatment groups with the vehicle control group.

[0371] Pharmacokinetic study and tissue distribution of MC4-425. Female C57BL / 6J mice (n = 3 per time point) were fasted for 15 hours before treatment. MC4-425 was administered at 5 mg / kg intravenously or 10 mg / kg orally. Blood was taken at various intervals after administration (5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 8h, and 12 h) . Blood samples in the lithium heparin tube were centrifuged at 4, 000 rpm for 10 mins at 4℃ to obtain plasma. The established UPLC-MS / MS determined the concentration of MC4-425. A non-compartmental analysis was performed using Phoenix WinNonlin software (Version 8.1, Pharsight Corporation, USA) to calculate the main PK parameters. The bioavailability (F) was calculated using the formula: F = mean AUCINF pred (Oral 10 mg / kg)  / mean AUCINF pred (Intravenous 5 mg / kg) × 5 / 10 × 100%. The data was presented as mean ± SD (n = 3) .

[0372] In vivo acute toxicity of MC4-425. C57BL / 6J mice (n = 6 per group; 3 males and 3 females) were fasted for 4 hours before treatment and randomly assigned to experimental, solvent control, or untreated control groups. MC4-425 was administered PO at 100 -400 mg / kg. Survival and bodyweight of mice were monitored for 14 days, and the death rate (%) was calculated: number of deaths / total number of mice × 100. The MLD was defined as the lowest dose causing mortality under controlled conditions. At the end of the 14-day observation period, the mice were euthanized using CO2 inhalation followed by cervical dislocation. Organs, including the brain, heart, lung, liver, spleen, kidneys, stomach, duodenum, jejunum, and colon, were collected and fixed in 10%formalin for histological analysis. Fixed tissues were dehydrated, embedded in paraffin, sectioned, and stained with hematoxylin and eosin (H&E) . Histopathological evaluation was performed using light microscopy, and representative sections were photographed for documentation. One-way ANOVA analysis was used to compare the means among groups.

[0373] Microscale thermophoresis. 280 nM of purified NusB wildtype and variants (F15A / R70A / D75A) in PBSTD were fluorescently labelled using the His-Tag Labelling Kit RED-tris-NTA 2nd Generation (NanoTemper) according to the manufacturer instruction. 10 μL tagged NusB was mixed with 10 μL compounds two-fold serially diluted from 282 μM for MC4-190 or from 725 μM for MC4-135 at room temperature for 20 min. Compound aggregation was removed by centrifugation at 15 000 × g, 4 ℃ for 10 min. 12 μL supernatant was loaded into Monolith Premium Capillaries (NanoTemper) , and signals were measured using Monolith NT. 115 (NanoTemper) with 40 %excitation power and medium MST power. Data analysis was performed using MO. Affinity Analysis 3 Software and binding curves were plotted using GraphPad prism.

[0374] Fluorescence Microscopy. Various B. subtilis strains were cultivated overnight on selective LB (Lennox) agar plate at 37 ℃. Single colony was picked and allowed to grow in LB medium with selective antibiotic and xylose at 37 ℃ with shaking at 180 rpm overnight. The culture was then diluted to OD600 = 0.05 and allowed to grow until OD600 = 0.50 at 37 ℃with agitation. Control antibiotics and MC4-135 were then added to the culture, followed by further incubation at 37 ℃ with shaking for 30 minutes. Afterwards, 2.5 μL of cell culture was placed onto 1.2%freshly prepared agarose plate and covered with a coverslip prior to imaging. Fluorescence images were captured using a Nikon Eclipse Ti2-E Live-cell Fluorescence Imaging System equipped with a 100× / 1.45 oil objective. The GFP (green fluorescent protein) signal was visualized using a FITC (fluorescein isothiocyanate) (525 / 50) filter, and the DAPI (4’, 6-diamidino-2-phenylindole) signal was visualized using a DAPI (460 / 50 emission) filter. The digital images were analysed using ImageJ version 1.53k software.

[0375] Western Blot. Fresh colonies of MRSA USA300 strain JE2 were attained following overnight incubation in LB agar. A starter culture of 50 mL in a 250 mL autoclaved conical flask was inoculated at OD600 0.1 and allowed to grow to OD600 ～0.2 with agitation at 175 rpm, after which it was split into 6 mL aliquots. Cells were grown overnight in TSB supplemented with 1 / 4 × MIC of MC4-205, after which 1 mL aliquots from each 6 mL culture were centrifuged at 8000 × g for 3 min and the supernatants containing the secretory exoproteins were retained. Samples not immediately used were stored at -20 ℃ until use in downstream assays. Supernatants were bound with loading dye, heat-denatured and loaded onto polyacrylamide gels for SDS-PAGE analysis, after which they were blotted onto 0.2 μm nitrocellulose membranes (Bio-Rad) and probed with antibodies targeting α-toxin and LukS-PV. Samples were separated in 10 %polyacrylamide gels at 150 V for 1 h, before being transferred to a PVDF membrane at 110 V for 1 h. The membrane was then blocked with 5 %non-fat milk in TBST buffer for 1 h, incubated overnight with either 1 μg / mL mouse monoclonal anti-alpha-haemolysin (Abcam) or 0.5 μg / mL rabbit polyclonal anti-PVL LukS subunit (Abcam) at 4 ℃ with agitation. Membranes were then incubated at room temperature with agitation with the corresponding HRP-conjugated secondary antibodies: 1: 3000 goat anti-rabbit (Abcam) or 1:5000 goat anti-mouse (Abcam) , flanked with TBST wash cycles in between. Bio-Rad ClarityTM Western ECL Substrates (Bio-Rad) were used to develop the blots and visualised in a Bio-Rad ChemiDocTM Touch system (Bio-Rad) under the Chemiluminescence mode at manual exposure settings (Bio-Rad) . The experiment was performed in triplicates, and representative data was presented.

[0376] Rabbit RBC lysis. 1 / 4 × MIC of MC4-205 was added to liquid cultures of MRSA USA300 strain JE2 grown to early exponential phase in TSB. Following overnight incubation at 37 ℃ and agitated at 175 rpm, the now post-stationary phase cultures were harvested by centrifugation at 8000 × g for 3 mins and the supernatants collected. Rabbit RBCs were packed by washing gently in sterile PBS until no haemolysis was observed, whereupon cells were resuspended into a 3%solution in PBS. Harvested sample supernatants were two-fold serially diluted and incubated with 3%RBC suspension in a 1: 10 ratio (i.e. 20 μL supernatant to 180 μL RBC suspension per well) in a 48-well microplate for 1 hour at 37 ℃. A PBS-only negative control was included alongside a positive control group using 1%Triton X-100. The amount of haemoglobin released was determined by measuring the absorbance at 540 nm, and %cell lysis was calculated as sample absorbance  / positive control absorbance.

[0377] Real-Time qPCR. To characterise the effects of sub-inhibitory concentrations of MC4-205 on the expression of staphylococcal toxin genes in comparison with the class drug rifampicin and normalised against the internal control gene gyrB (staphylococcal DNA gyrase B) , a starter culture of MRSA USA300 strain JE2 was inoculated at OD600 0.1 with fresh colonies and grown to early log phase (～OD600 0.2) at 37 ℃ with agitation at 175 rpm. MC4-205, along with a rifampicin-containing positive control and an untreated negative control, were then added at their respective 1 / 2 × MICs into aliquots divided from the starter culture. Upon reaching mid-log phase (～OD600 of 0.6) , approximately 3 mL samples were then harvested at normalised volumes and pelleted at 5000 × g for 5 mins at 4 ℃. After discarding the supernatant, the total RNA was extracted and purified from the pellets using the  Bacterial DNA / RNA / Protein Kit (Qiagen) , which were then quantified using the QubitTM RNA BR Assay Kit (Invitrogen) and Qubit 4 Fluorometer (Thermo Fisher) .

[0378] Purified RNA was then used as template for complementary DNA (cDNA) synthesis using the High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems) , which were quantified with the QubitTM ssDNA Assay Kit (Invitrogen) . Primer sequences along with their respective sources of design, were listed in Table 13.Table 13. The primers used for qPCR assays in this study. Primers and cDNA templates were diluted accordingly as recommended by the manufacturer’s protocol of the 2X PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix (Applied Biosystems) . For every 20 μL reaction loaded in 0.1 mL-sized  Fast 96-Well Reaction Plate (Applied Biosystems) , 10 μL of the 2X master mix was added, followed by 2 μL volumes of both forward and reverse primer solutions, 2 μL of cDNA template and 4 μL of nuclease-free water (Ambion) . cDNA was not added for no-template control (NTC) reactions and the corresponding volumes allotted to nuclease-free water instead. The loaded plate was sealed with MicroAmpTM Optical Adhesive Film (Applied Biosystems) and placed onto a StepOnePlusTM Real-Time PCR System (Applied Biosystems) , where 40-cycle reactions –complete with melting curves to ensure correct primer hybridisation took place –were performed. Experiments were performed in triplicates, and the extrapolated data were analysed using the ΔΔCT method.

[0379] In vitro transcription assay. Single-round transcription assays were performed on a DNA template and analysed by denaturing (7 M urea) polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE; 5 %) . Briefly, 40 nM E. coli core RNAP and σ70 factor were incubated for 30 min at 32℃, followed by addition of 20 nM template DNA, 100 μM ApU, 2 μM ATP, 10μM GTP and CTP and 2 μCi [α-32P] ATP in transcription buffer (40 mM Tris-HCl, pH 7.9, 50 mM potassium chloride, 5 mM magnesium chloride, 3% (v / v) glycerol, 0.1 mM DTT) and incubated at 37 ℃ for 12 min which allows the formation of a halted ternary RNAP-σ70-DNA complex containing a 15 nucleotide transcript. 100 nM NusA, 300 nM NusG, 300 nM NusB–NusE (TEC) , and 500 nM λN (N-TAC) were added to the reaction and incubated for 3 min at 37℃. RNA chain elongation was started by addition of a pre-heated (37 ℃) NTP mix containing 4 mM ATP, 200 μM GTP, CTP and UTP and incubated for 6 min at 37℃. Reactions were stopped by adding equal volumes of stop solution (45 mM Tris-borate, 10M Urea, 20 mM EDTA, 0.2%Xylene cyanol, 0.2 %Bromophenol blue, pH 8.3) and loaded on a denaturing polyacrylamide gel. To test effects by MC4-134 and MC4-135, either 25 μM, 50 μM, 100 μM, 150 μM and 250 μM of the substances were added together with Nus-factors and λN, respectively, and incubated as described. N-TAC-BE shows antitermination efficiency in the absence of NusBE, DMSO excludes possible effects of the solvent on antitermination (5%DMSO in the highest concentration of the substances) . RNA bands were visualised using a Storm PhosphorImager and quantified using Image-Quant software (GE Healthcare) . The anti-termination efficiency was determined as a ratio of the read-through to the sum of the terminated and read-through products with the values for TEC alone set to 0 and for N-TAC set to 100%and the values for all other complexes scaled accordingly. Quantified data represent means ± SEM of three independent experiments. Significance was assessed by S’ udent's unpaired t-test. Significance indicators: *-p < 0.05; **-p < 0.01; ***-p < 0.00–; ns -not significant (p ≥ 0.05) .

[0380] Cell-based transcription assay. E. coli strain K12 was transformed with plasmid pSL102, pSL103, or pSL115 by heat-shock transformation. Cells were grown in LB broth with 100 μg / mL ampicillin to an OD600 of 0.6. Reporter strains were treated with MC4-134 / MC4-135 at 1 / 8 ×, 1 / 4 ×, 1 / 2 ×, or 1 × MIC at 37 ℃ for 30 min. Total RNA was extracted using the  Protect Bacteria Mini Kit (Qiagen, Hiden, Germany) . Cells were lysed in TE buffer containing 1.5 mg / mL lysozyme. Reverse transcription and real time PCR were performed as described above. Experiments were performed in triplicate, and the extrapolated data were analysed using the ΔCT method. Primer sequences were listed in Table 14.Table 14. Primers used for qPCR in the cell-based transcription assay.

[0381] Transcriptome analysis. The overnight culture of MRSA USA300 was diluted in fresh LB broth to a final OD600 of 0.04 and incubated at 37 ℃ with shaking at 180 rpm until OD600 of 1.0. The culture was treated with MC4-134 or rifampicin at 1 × MIC for 30 min at 37 ℃. Total RNA was extracted using the Protect Bacteria Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) . Cells were lysed in TE buffer containing 15 mg / mL lysozyme and 1 mg / mL lysostaphin at 37 ℃ for 30 min with vortexing every 2 min. Purified total RNA was sent to BGI for library preparation and RNA sequencing.During library preparation, rRNA was depleted to enrich mRNA, followed by RNA fragmentation, reverse transcription, and amplification. The cDNA was then cyclised by splint oligo and DNA ligase and was sequenced on DNBseq platform. RNA sequencing data were filtered by SOAPnuke to filter reads of adaptors, low-quality reads (more than 20%of the base qualities were lower than 10) and reads in which unknown bases were more than 10%. The remaining ‘Clean Reads’ were stored in FASTA format. Reads were then mapped to S. aureus USA300_FPR3757 genome using Bowtie2 for calculating gene expression levels with RSEM. Differential expressed genes (DEGs) were detected by DEseq2 based on the negative binomial distribution (Michael et al. ) Genes with an adjusted P value of ≤ 0.05 and log2 fold change of ≤ -1 or ≥ 1 were categorised as DEGs.Gene ontology (GO) enrichment analysis was performed using phyper, a function of R, with false discovery rate (FDR) for each P value. Briefly, FDR lesser than 0.01 represented significant enrichment. GO terms and gene lengths were extracted for the genome of USA300_FPR3757 from the UniProt website. KEGG pathway enrichment was performed with reference to Staphylococcus aureus USA300_FPR3757. P value was calculated using the phyper function. Significance was defined when FDR was less than 0.01.

[0382] Cytotoxicity Assay. Human cell lines A549 lung carcinoma and HaCaT immortalized keratinocytes were used in this study. The cells were seed at 2.5 × 105 per well. After 24 h incubation, the tested compounds were added in a two-fold serial dilution ranging from 1.562 μg / mL to 50 μg / mL. The plates were incubated at 37 ℃. At 48 h and 72 h after adding the compound, the MTT assay was performed. Cisplatin was used as the positive control, and DMSO as the negative control.

[0383] General procedure (A) for deesterification of benzoate.

[0384] To a solution of benzoate (1 equiv) in EtOH was added sodium hydroxide (2, equiv) in water. The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction was neutralized by addition of 1N hydrochloride acid and extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, concentrated under reduced pressure, and dried in vacuo to afford the crude product, which was used directly in the next step without further purification.

[0385] General procedure (B) amidation of benzoic acid and substituted aniline with oxalyl chloride.

[0386] Step 1: Benzoyl chloride: To a solution of benzoic acid (1 equiv) in anhydrous DCM was added one drop of DMF and oxalyl chloride (1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure.

[0387] Step 2: The benzoyl chloride was redissolved in anhydrous DCM (5 mL) , followed by the addition of TEA (3 equiv) and substituted aniline (1.2 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with DCM (10 mL ×3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. Flash chromatography by (Hexane / EA) was conducted to obtain pure product.

[0388] General procedure (C) for nitro reduction.

[0389] To a solution of iron powder (3 equiv) and ammonium chloride (5 equiv) in water, the solution of substrate (1 equiv) in EtOH was added dropwise. The resulting mixture was stirred under reflux and the reaction progress was monitored by TLC. Upon completion, the reaction mixture was filtered through a short pad of Celite and the filtrate was extracted with EA (20 mL ×3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained by flash chromatography (Hexane / EA) .

[0390] General procedure (D) for demethylation.

[0391] To a solution of substituted N-phenyl-2-methoxy-benzamide (1 equiv) in anhydrous DCM (5 mL) was added boron tribromide (1M in DCM, 10 equiv) at -10℃. The resulting mixture was allowed to warm to rt and stirred for 2 h. Upon completion, the reaction mixture was quenched by MeOH and extracted with DCM (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. Flash chromatography by (Hexane / EA) was conducted to obtain pure product.

[0392]

[0393] General procedure (E) for synthesis of aniline type derivatives

[0394] Step 1: To a solution of benzaldehydes (1 equiv) in ethanol (10 mL) was added anilines (1 equiv) , and the reaction mixture was stirred at rt overnight. The solution mixture was directly used without purification in the next step.

[0395] Step 2: With additopn of NaBH3CN (1.5 equiv) and AcOH (1.5 equiv) , the reaction mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure and the pure product was obtained by flash chromatography.

[0396] General procedure (F) for synthesis of biphenyl intermiediate

[0397] To a mixture of phenylboronic acid or phenylboronic acid pinacol ester (1.2 equiv) , bromobenzene (1 equiv) , K2CO3 (2 equiv) , Pd (PPh3) 4 (0.05 equiv) was dissolved by mixture of DMF and H2O (v / v%= 1: 1) . The reaction was heated at 100 ℃ under N2 atmosphere and stirred overnight. Upon completion, the reaction mixture was washed and extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained by flash chromatography (Hexane / EA) .

[0398] 2- ( ( (4'- (tert-butyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-yl) amino) methyl) -5-chloro-4-nitrophenol (MC4-226)

[0399] Step 1. 4'- (tert-butyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-amine (226a) . To a solution of 2-aminophenylboronic acid pinacol ester (100 mg, 0.46 mmol) , Na2CO3 (242 mg, 2.28 mmol, 5 equiv) , and Pd (dppf) Cl2·DCM (19 mg, 0.02 mmol, 0.05 equiv) in DMF / water (4 mL, 1: 1) was added 1-bromo-4-tert-butylbenzene (95 μL, 0.55 mmol, 1.2 equiv) . The resulting mixture was stirred at 90℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a colorless oil (90 mg, 88%) by flash chromatography (hexane : EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.54 –7.46 (m, 2H) , 7.45 –7.35 (m, 2H) , 7.23 –7.07 (m, 2H) , 6.84 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H) , 6.79 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 3.80 (s, 2H) , 1.39 (s, 9H) .

[0400] Step 2. 4-chloro-2-hydroxy-5-nitrobenzaldehyde (226c) . To a solution of 4-chloro-2-hydroxybenzaldehyde 226b (200 mg, 1.28 mmol) in concentrated sulfuric acid (3 mL) was added potassium nitrate (168 mg, 1.66 mmol, 1.3 equiv) at 0℃. The resulting mixture was stirred at the same temperature for 15 min. Upon completion, the reaction mixture was poured into ice-cold water and extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (133 mg, 52%) by flash chromatography (Hexane : EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.51 (s, 1H) , 9.97 (s, 1H) , 8.40 (s, 1H) , 7.22 (s, 1H) .

[0401] Step 3. To a solution of 226c (81 mg, 0.40 mmol) in ethanol (10 mL) was added anilines 226a (90 mg, 0.40 mmol, 1 equiv) and the reaction mixture was stirred at rt overnight. The solid was collected by filtration and washed with cold ethanol and hexane. To a solution of product (1 equiv) obtained above in DCM (10 mL) was added sodium triacetoxyborohydride (3 equiv) , and the reaction mixture was stirred at rt overnight. The pure product was obtained as a yellow solid (99 mg, 61%) after flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.44 (br s, 1H) , 7.92 (s, 1H) , 7.55 –7.50 (m, 2H) , 7.36 –7.25 (m, 3H) , 7.23 (dd, J = 7.5, 1.2 Hz, 2H) , 7.07 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H) , 7.00 (s, 1H) , 6.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.48 (s, 2H) , 4.37 (br s, 1H) , 1.40 (s, 9H) . 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.8, 151.1, 143.2, 139.6, 134.9, 131.6, 130.7, 129.0, 128.8, 128.8, 126.4, 126.2, 122.0, 119.8, 114.9, 49.3, 34.7, 31.3.

[0402] 5-chloro-4-nitro-2- ( ( (4'-pentyl- [1, 1'-biphenyl] -2-yl) amino) methyl) phenol (MC4-227)

[0403] Step 1.4'-pentyl- [1, 1'-biphenyl] -2-amine (227a) . To a solution of 2-aminophenylboronic acid pinacol ester (200 mg, 0.91 mmol) , Na2CO3 (483 mg, 4.56 mmol, 5 equiv) , and Pd (dppf) Cl2·DCM (37 mg, 0.05 mmol, 0.05 equiv) in DMF / water (4 mL, 1: 1) was added 1-bromo-4-pentylbenzene (196 μL, 1.10 mmol, 1.2 equiv) . The resulting mixture was stirred at 90℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a colorless oil (202 mg, 92%) by flash chromatography (hexane: EA = 20: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.39 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.28 (d, J = 6.4 Hz, 2H) , 7.20 –7.11 (m, 2H) , 6.84 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.79 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 3.79 (br s, 2H) , 2.73 –2.60 (m, 2H) , 1.68 (p, J = 7.2 Hz, 2H) , 1.39 (h, J = 3.6, 3.1 Hz, 4H) , 1.11 –0.84 (m, 3H) .

[0404] Step 2. To a solution of 226c (170 mg, 0.84 mmol) in ethanol (10 mL) was added anilines 227a (202 mg, 0.84 mmol, 1 equiv) and the reaction mixture was stirred at rt overnight. The solid was collected by filtration and washed with cold ethanol and hexane. To a solution of product (1 equiv) obtained above in DCM (10 mL) was added sodium triacetoxyborohydride (3 equiv) , and the reaction mixture was stirred at rt overnight. The pure product was obtained as a yellow solid (221 mg, 62%) after flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.38 (br s, 1H) , 7.91 (s, 1H) , 7.35 –7.28 (m, 5H) , 7.23 (dd, J =7.5, 1.6 Hz, 1H) , 7.07 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.99 (s, 1H) , 6.92 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.47 (s, 2H) , 2.74 –2.58 (m, 2H) , 1.69 (p, J = 7.4 Hz, 2H) , 1.39 (h, J = 3.4 Hz, 4H) , 0.94 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.8, 143.1, 143.0, 139.6, 135.2, 131.7, 130.7, 129.3, 129.0, 128.8, 126.5, 122.0, 122.0, 119.8, 114.9, 49.2, 35.7, 31.6, 31.1, 22.6, 14.0.

[0405] N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-hydroxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzothioamide (MC4-239)

[0406] Step 1: 3-methoxy-4- (methoxycarbonyl) benzenediazonium tetrafluoroborates (239a) . To a solution of anilines (5.00 g, 27.60 mmol, 1 equiv) in EtOH (25 mL) was added fluoroboric acid (50%w / w aqueous solution, 9.65 mL, 55.20 mmol, 2.2 equiv) and tert-butyl nitrite (8.25 mL, 55.20 mmol, 2.2 equiv) at 0℃. The resulting solution was allowed to warm to rt and stirred for 2 h. Upon completion, the formed precipitate was filtered, collected and dried in vacuo to afford the pure benzenediazonium tetrafluoroborates, which was used directly in the next step without further purification.

[0407] Step 2: methyl 2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) thio) benzoate (239b) . To a mixture of copper (I) thiocyanate (1.68 g, 13.8 mmol, 0.5 equiv) , sodium thiocyanate (3.36 g 1.5 equiv) and cesium carbonate (17.99 g, 55.2 mmol, 2 equiv) was added anhydrous ACN (5 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at rt for 10 min before 239a (1.68g, 13.8 mmol, 1 equiv) in anhydrous ACN (10 mL) was added via syringe. The resulting mixture was stirred at rt for another 10 min before (trifluoromethyl) trimethylsilane (7.85g, 55.3 mmol, 2 equiv) was added via syringe. The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was filtered through a short pad of Celite and the filtrate was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product (3.87 g, 94%) was obtained by flash chromatography (Hexane: EA=15: 1, v / v) .

[0408] Step 3: methyl 2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoate (239c) . To a 239b (6.937g, 26.08 mmol, 1 equiv) in a mixture of DCM / ACN / water (20 mL, 1: 1: 2, v / v / v) was added sodium periodate (16.74 g, 78.24 mmol, 3 equiv) and ruthenium trichloride (0.27g, 1.30 mmol, 0.05 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product (6.22 g, 80%) was obtained by flash chromatography (Hexane: EA= 10 / 1, v / v) .

[0409] Step 4: 2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoic acid (239d) . To a solution of 239c (140 mg, 0.47 mmol) in EtOH (5 mL) was added sodium hydroxide (38 mg, 0.95 mmol, 2 equiv) in water (5 mL) . The resulting mixture was stirred at rt for 1 h. Upon completion, the reaction was neutralized by addition of 1N hydrochloride acid and extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, concentrated under reduced pressure, and dried in vacuo to afford the crude product as a white solid (124 mg, 93%) , which was used directly in the next step without further purification.

[0410] Step 5: N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (239f) . The title compound was prepared according to general procedure (B) using 239d (150 mg, 0.53 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (600 mg, 2.1 mmol) , yielding the pure product as a white solid (840 mg, 92%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) .

[0411] Step 6: N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzothioamide (239g) . To a solution of 239f (300 mg, 0.69 mmol) in toluene was added Lawesson’s reagent (279 mg, 0.69 mmol) under N2 atmosphere. The resulting solution was stirred at reflux temperature for overnight. Upon completion, as monitored by TLC, the reaction was added water (20 mL) and concentrated under reduced pressure, followed by extraction with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product (265 mg, 85%) was obtained by flash chromatography (Hexane / EA = 10: 1, v / v) .

[0412] Step 7: MC4-239 was prepared according to general procedure (D) using 239g (176 mg, 0.39 mmol) boron tribromide (1M in DCM, 3.85 mL, 10 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (145 mg, 85%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.07 (s, 1H) , 8.92 (s, 1H) , 7.98 (s, 1H) , 7.69 (s, 1H) , 7.53 –7.40 (m, 9H) , 7.19 (d, J = 8.3 Hz, 1H) . 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 192.7, 158.7, 138.0, 137.3, 134.4, 134.0, 130.9, 129.6, 129.1, 128.9, 128.8, 128.7, 128.3, 126.8, 125.3, 121.9, 121.3, 120.7, 120.0 (q, J = 393.9 Hz) . HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C20H13F3NO3S2] - (M-H) -436.0294, found 436.0296.

[0413] 3- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-methyl-7- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) quinazolin-4 (3H) -one (MC4-240)

[0414] Step 1: methyl 2-nitro-4- ( (tetrafluoro-λ5-boraneyl) diazenyl) benzoate (240a) . After dissolving methyl 4-amino-2-nitrobenzoate (1.88g, 9.58 mmol, 1 equiv) in EtOH (100 mL) and HBF4 (50%w / w aqueous solution, 2.4 mL, 19.2 mmol 2 equiv) , tert-butyl nitrite was added to the solution dropwise by a syringe (2.16 mL, 19.2 mmol, 2 equiv) at 0℃ by using the ice bath. Afterward, addition, the resulting solution was stirred at rt for 1 h. Solid would precipitate after completion of reaction and was collected from filtration by wash of diethyl ether. The solid collect was dried in vacuo and could be used without purification.

[0415] Step 2: methyl 2-nitro-4- ( (trifluoromethyl) thio) benzoate (240b) To a mixture of copper (I) thiocyanate (0.54 g, 4.44 mmol, 0.5 equiv) , sodium thiocyanate (1.08 g, 13.3 mmol, 1.5 equiv) and cesium carbonate (5.77g, 17.7 mmol, 2 equiv) , anhydrous ACN (5 mL) was added via syringe under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at rt for 10 min before 240a (8.89 mmol, 1 equiv) in anhydrous ACN (10 mL) was added via syringe. The resulting mixture was stirred at rt for another 10 min before (trifluoromethyl) trimethylsilane (2.62 mL, 17.7 mmol, 2 equiv) was added via syringe. The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was filtered through a short pad of Celite and the filtrate was extracted with EA (20 mL ×3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product (1.39 g, 56%) was obtained by flash chromatography (Hexane / EA=25: 1) .

[0416] Step 3: methyl 2-nitro-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoate (240c) To a solution of compound 240b (1.39 g, 4.94 mmol, 1 equiv) in a mixture of DCM / ACN / H2O (100 mL, 1: 1: 2, v / v / v) was added sodium periodate (3.17g, 14.82 mmol, 3 equiv) and ruthenium trichloride (0.067 g, 0.247 mmol, 0.05 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (20 mL ×3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product (1.47 g, 95%) was obtained by flash chromatography (Hexane / EA=20: 1) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.64 (d, J = 1.7 Hz, 1H) , 8.37 (dd, J = 8.1, 1.7 Hz, 1H) , 8.05 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.03 (s, 3H) . 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ = 164.0, 148.1, 135.1, 134.9, 134.9, 131.6, 126.4, 119.46 (q, J = 326.0 Hz) , 54.1.

[0417] Step 4: methyl 2-amino-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoate (240d) . The title compound was prepared according to general procedure (C) using compound 240c (0.742 g, 0.95 mmol) . The pure product (0.367 g, 49%) was obtained by flash chromatography (Hexane / EA= 10: 1) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.33 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.25 –7.20 (m, 1H) , 6.15 (s, 2H) , 3.96 (s, 3H) . HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C9H7F3NO4S] - (M-1) -: 282.0053, found 282.0048.

[0418] Step 5: methyl 2-acetamido-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoate (240e) . To a solution of compound 240d (100 mg, 1 equiv) in AcOH (10 mL) was added (Ac) 2O (50 μL, 1.5 equiv) . The resulting mixture was stirred under reflux for 3 h. Upon completion, the reaction mixture was neutralize by adding saturated sodium bicarbonate and was extracted by EA, washed by brine and dried over Na2SO4. The pure product (109 mg, 95%) was obtained by flash chromatography (Hexane / EA=15: 1) . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 11.15 (s, 1H) , 9.48 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 8.30 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.70 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H) , 4.03 (s, 3H) , 2.29 (s, 3H) . 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ = 169.3, 167.1, 142.4, 136.3, 132.2, 123.1, 122.3, 120.5, 119.9 (q, J = 327.6 Hz) , 53.4, 25.5.

[0419] Step 6: 2-acetamido-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoic acid (240f) . The title compound was prepared according to general procedure (A) using 240e (180 mg, 20.9 mmol) . The crude product was directly used in the next step without purification.

[0420] Step 7: 3- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-methyl-7- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) quinazolin-4(3H) -one (MC4-240) . To a solution 240f (116 mg, 0.37 mmol, 1 equiv) was added EDCI (65 mg, 0.41 mmol, 1.1 equiv) and DMAP (5 mg, 0.04 mmol, 0.1 equiv) in DCM and the resulting mixture was stirred at rt for 15 min. Then, [1, 1'-biphenyl] -2-amine (57 mg, 0.43 mmol, 1.1 equiv) was added to the mixture solution and the resulting solution was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction was quenched by water and the mixture solution was washed by saturated sodium bicarbonate, extracted by EA, washed by brine and dried over Na2SO4. The pure product (90 mg, 54%) was obtained by flash chromatography (Hexane / EA=20: 1) . 1H NMR (400 MHz, Acetone) δ 8.58 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.21 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 8.13 (dd, J =8.4, 1.9 Hz, 1H) , 7.74 –7.61 (m, 4H) , 7.36 (dq, J = 6.2, 2.7, 2.3 Hz, 2H) , 7.32 –7.26 (m, 3H) , 2.14 (s, 3H) . 13C NMR (101 MHz, Acetone) δ 161.3, 157.6, 148.1, 140.1, 138.0, 135.8, 135.1, 131.4, 130.3, 130.2, 129.6, 129.3, 129.2, 128.6, 128.1, 128.1, 126.6, 125.8, 124.6, 121.4, 118.2, 23.6. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C22H14F3N2O3S] - (M-1) -: 443.0683, found 443.0690.

[0421] N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-amino-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-242)

[0422] Step 1: 2-nitro-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzoic acid (242a) The title compound was prepared according to general procedure (A) using 240e (2.270 g, 7.25 mmol) . The crude product was directly used in the next step without purification.

[0423] Step 2: N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-nitro-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (242b) The title compound was prepared according to general procedure (B) using compound 242a (7.25 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -2-amine (1.472 g, 21.8 mmol) . The pure product (1.76 g, 54%) was obtained by flash chromatography (Hexane / EA= 30: 1) .

[0424] Step 3: N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-amino-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-242) . The title compound was prepared according to general procedure (C) using compound 13 (150 mg, 0.33 mmol) . The pure product (0.0391 g, 28%) was obtained by flash chromatography (Hexane / EA= 7.5: 1) . 1H NMR (400 MHz, Acetone) δ = 9.20 (s, 1H) , 7.86 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.75 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.53 –7.44 (m, 6H) , 7.38 (ddd, J = 11.4, 6.0, 3.0 Hz, 3H) , 7.14 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H) , 6.67 (s, 2H) . 13C NMR (101 MHz, Acetone) δ = 166.3, 150.5, 139.1, 137.1, 134.5, 133.3, 130.3, 129.9, 129.0, 128.6, 127.9, 127.5, 126.3, 126.3, 122.2, 119.86 (d, J = 325.5 Hz) , 117.7, 115.3. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C20H14F3N2O3S] - (M-1) -419.0683, found 419.0683.

[0425] N- (2- (tert-butyl) phenyl) -2-hydroxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-246)

[0426] Step 1: N- (2- (tert-butyl) phenyl) -2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (246f) The title compound was prepared according to general procedure (B) using 239d (150 mg, 0.53 mmol) and 2- (tert-butyl) aniline (95 mg, 0.64 mmol) , yielding the pure product as a white solid (160 mg, 70%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) .

[0427] Step 2: MC4-246 was prepared according to general procedure (D) using 246f (160 mg, 0.39 mmol) boron tribromide (1M in DCM, 3.85 mL, 10 equiv) , yielding the pure product as a white solid (80 mg, 38%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 12.56 (s, 1H) , 8.16 (s, 1H) , 7.82 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.74 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 7.60 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.56 –7.49 (m, 2H) , 7.37 –7.31 (m, 2H) , 1.48 (s, 9H) . 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 167.0, 162.5, 144.3, 136.3, 132.9, 128.8, 128.1, 127.3, 127.2, 126.8, 121.7, 120.9, 119.8, 119.4 (q, J = 325.8 Hz) , 34.9, 30.9. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C18H17F3NO4S] - (M-H) -400.0836, found 400.084.

[0428] N- ( [1, 1'-biphenyl] -4-yl) -2-hydroxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-247)

[0429] Step 1: N- ( [1, 1'-biphenyl] -4-yl) -2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (247f) The title compound was prepared according to general procedure (B) using 246d (150 mg, 0.53 mmol) and [1, 1'-biphenyl] -4-amine (107 mg, 0.64 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) .

[0430] Step 2: MC4-247 was prepared according to general procedure (D) using 247f and boron tribromide (1M in DCM, 5.3 mL, 10 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (87 mg, 39%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.47 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.97 –7.93 (m, 2H) , 7.74 –7.69 (m, 5H) , 7.58 (dd, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H) , 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 7.39 –7.35 (m, 1H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 164.9, 162.4, 140.3, 137.6, 137.1, 134.2, 131.3, 128.9, 127.2, 127.1, 126.6, 125.0, 121.1, 120.1, 119.15 (q, J =332.2 Hz) , 118.2. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C20H13F3N O4S] - (M-H) -420.0523, found 420.0534.

[0431] 2-hydroxy-N- (2- (phenylethynyl) phenyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-248)

[0432] Step 1: 4'- (tert-butyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-amine (248e) A mixture of 2-iodoaniline (0.50 g, 2.28 mmol, 1 equiv) , ethynylbenzene (0.38 mL, 3.42 mmol, 1.5 equiv) , PdCl2 (PPh3) 2 (48mg, 0.07 mmol, 3.0 mol%) , CuI (22mg, 0.12 mmol, 5.0 mol%) and TEA (2 mL) was dissolved in THF (8 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 80 ℃ overnight. Upon completion, the mixture was cooled to 25 ℃, poured into water (10 mL) , and extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product (0.27 g, 62%) was obtained by flash chromatography (Hexane / EA) .

[0433] Step 2: 2-methoxy-N- (2- (phenylethynyl) phenyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (248f) The title compound was prepared according to general procedure (B) using 246d (150 mg, 0.53 mmol) and 248e (0.12 g, 0.64 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (0.20 g, 83%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) .

[0434] Step 3: MC4-248 was prepared according to general procedure (D) using 248f (200 mg, 0.44 mmol) and boron tribromide (1M in DCM, 4.39 mL, 10 equiv) , yielding the pure product as a pale yellow solid (20 mg, 9%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.56 (dd, J = 59.6, 8.3 Hz, 2H) , 7.71 (s, 1H) , 7.66 –7.54 (m, 4H) , 7.48 (t, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.26 (d, J = 36.9 Hz, 4H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 163.3, 160.7, 139.6, 134.0, 132.7, 132.6, 131.6, 129.3, 128.6, 128.3, 126.2, 124.0, 122.6, 121.3, 119.9, 119.9 (q, J = 317.1 Hz) , 118.4, 114.0, 95.6, 84.9. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C22H13F3NO4S] - (M-H) -444.0523, found 444.0528.

[0435] 2-hydroxy-N- (2- (trifluoromethyl) phenyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-249)

[0436] Step 1: 2-methoxy-N- (2- (trifluoromethyl) phenyl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (249f) The title compound was prepared according to general procedure (B) using 246d (75 mg, 0.27 mmol) and 2- (trifluoromethyl) aniline (0.040mL, 0.32 mmol) , yielding the pure product as a white solid (50 mg, 46%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) .

[0437] Step 2: MC4-249 was prepared according to general procedure (D) using 249f (50 mg, 0.12 mmol) and boron tribromide (1M in DCM, 1.18 mL, 10 equiv) , yielding the pure product as a white solid (30 mg, 60%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.51 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.30 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.80 (dd, J =7.9, 1.5 Hz, 1H) , 7.78 –7.73 (m, 2H) , 7.65 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H) , 7.47 (t, J = 7.7 Hz, 1H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 164.2, 160.6, 135.3, 134.6, 133.0, 132.4, 126.6, 126.2 (q, J =5.4 Hz) , 125.6, 125.1, 124.1 (q, J = 272.4 Hz) , 122.2 (q, J = 29.8 Hz) , 119.9 (q, J = 325.5 Hz) , 119.8, 119.1. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C15H8F6NO4S] - (M-H) -412.0084, found 412.0084.

[0438] N- (3-chlorophenyl) -2-hydroxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-252)

[0439] Step 1: N- (3-chlorophenyl) -2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (252f) The title compound was prepared according to general procedure (B) using 246d (75 mg, 0.27 mmol) and 3-chloroaniline (0.034 mL, 0.32 mmol) , yielding the pure product as a white solid (50 mg, 48%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) .

[0440] Step 2: MC4-252 was prepared according to general procedure (D) using 252f (50 mg, 0.13 mmol) and boron tribromide (1M in DCM, 1.27 mL, 10 equiv) , yielding the pure product as a white solid (46 mg, 95%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 10.81 (s, 1H) , 8.43 (s, 1H) , 8.06 (d, J = 5.5 Hz, 1H) , 7.71 –7.59 (m, 3H) , 7.43 (s, 1H) , 7.24 (s, 1H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 165.3, 161.3, 139.4, 134.6, 133.9, 131.2, 130.3, 124.6, 124.5, 120.6, 119.8 (q, J = 325.8 Hz) , 119.8, 119.2, 119.1. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C14H8ClF3NO4S] - (M-H) -377.982, found 377.9807.

[0441] N- (4'- (tert-butyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-hydroxy-4 ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-253)

[0442] Step 1: 2- (phenylethynyl) aniline (253e) To a 2-bromoaniline (0.17 g, 1.00 mmol, 1 equiv) , a (4- (tert-butyl) phenyl) boronic acid (0.21 g, 1.20 mmol, 1.2 equiv) , and a Na2CO3 (0.23 g, 2.5 mmol 2.5equiv) in a mixture of H2O / EtOH / toluene (6 mL, 1: 1: 1, v / v / v) was added Pd(PPh3) 4 (58 mg, 0.05 mmol, 5.0 mol%) . The resulting mixture was stirred at 80 ℃ overnight. Upon completion, the resulting mixture was cooled to 25 ℃ and extracted with EA (20 mL ×3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product (0.20 g, 89%) was obtained by flash chromatography (Hexane: EA=40: 1) .

[0443] Step 2: N- (4'- (tert-butyl) - [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-methoxy-4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (253f) The title compound was prepared according to general procedure (B) using 246d (75 mg, 0.27 mmol) and 253e (72 mg, 0.32 mmol) , yielding the pure product as a white solid by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) .

[0444] Step 3: MC4-253 was prepared according to general procedure (D) using 253f and boron tribromide (1M in DCM, 2.65 mL, 10 equiv) , yielding the pure product as a white solid (54 mg, 43%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 10.27 (s, 1H) , 8.27 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.13 (s, 1H) , 7.59 –7.53 (m, 2H) , 7.49 –7.34 (m, 7H) , 1.30 (s, 9H) . HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C24H21F3NO4S] - (M-H) -476.1149, found 476.1164.

[0445] 2-hydroxy-N- (naphthalen-2-yl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (MC4-255)

[0446] Step 1: 2-methoxy-N- (naphthalen-2-yl) -4- ( (trifluoromethyl) sulfonyl) benzamide (255f) The title compound was prepared according to general procedure (B) using 246d (75 mg, 0.27 mmol) and naphthalen-2-amine (45 mg, 0.32 mmol) , yielding the pure product as a yellow solid (45 mg, 42%) by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) .

[0447] Step 2: MC4-255 was prepared according to general procedure (D) using 255f (45 mg, 0.11 mmol) and boron tribromide (1M in DCM, 1.11 mL, 10 equiv) , yielding the pure product as a pale yellow solid (30 mg, 68%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.56 –8.50 (m, 1H) , 7.99 –7.88 (m, 2H) , 7.74 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 7.61 (dd, J = 8.3, 1.9 Hz, 1H) , 7.53 (ddd, J = 8.2, 6.7, 1.3 Hz, 1H) , 7.47 (ddd, J = 8.0, 6.6, 1.3 Hz, 1H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 165.1, 162.1, 135.7, 134.3, 133.9, 131.3, 131.0, 128.6, 127.7, 127.6, 126.5, 125.2, 125.0, 120.9, 120.0, 119.9 (q, J = 325.7 Hz) , 118.5, 117.6. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C18H11F3NO4S] - (M-H) -394.0366, found 394.0367.

[0448] N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-hydroxy-5-nitrobenzenesulfonamide (MC4-264)

[0449] Step 1: N- ( [1, 1'-biphenyl] -2-yl) -2-methoxy-5-nitrobenzenesulfonamide (264a) To a solution of 2-methoxy-5-nitrobenzenesulfonyl chloride (1.0 g, 3.97 mmol) in pyridine was added 238e (672 mg, 3.97 mmol) . The resulting solution was heat at 80℃ overnight. Upon completion, the reaction was quenched with water and extracted with EA (20 mL x 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a yellow solid (1.14 g, 75%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20 : 1, v / v) .

[0450] Step 2: MC4-264 was prepared according to general procedure (D) using 264a (200 mg, 0.52 mmol) and boron tribromide (1 M in DCM, 5.2 mL, 10 equiv) , yielding the pure product as a pale yellow solid (48 mg, 25%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.44 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 7.90 (dt, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H) , 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.41 (q, J = 7.2 Hz, 3H) , 7.35 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.21 –7.14 (m, 2H) , 7.11 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.24 (d, J = 9.3 Hz, 1H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 138.9, 135.4, 130.7, 129.5, 128.9, 128.4, 127.9, 127.8, 127.2, 124.4, 124.4, 122.6, 121.8. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C18H13N2O5S] - (M-H) -369.0551, found 369.0551.

[0451] (E) -2- (2- (4'- (dimethylamino) - [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) -4-nitrophenol (MC4-267)

[0452] Step 1: N4', N4'-dimethyl- [1, 1'-biphenyl] -2, 4'-diamine (267a) . To a mixture of 4-bromo-N, N-dimethylaniline (609 mg, 3.04 mmol) , (2-aminophenyl) boronic acid (500 mg, 3.65 mmol, 1.2 equiv) , Pd (PPh3) 4 (176 mg, 0.15 mmol, 0.05 equiv) , and Na2CO3 (806 mg, 7.61 mmol, 2.5 equiv) was added toluene / water / EtOH (v / v%= 1: 1: 1) mixture (10 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 80℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as red solid (0.2941 g, 46%yield. ) 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 7.31 –7.25 (m, 2H) , 7.05 –6.99 (m, 2H) , 6.86 –6.82 (m, 2H) , 6.78 (dd, J = 7.9, 1.2 Hz, 1H) , 6.67 (td, J =7.4, 1.2 Hz, 1H) , 4.38 (s, 2H) , 2.99 (s, 6H) .

[0453] Step 2: 2'-iodo-N, N-dimethyl- [1, 1'-biphenyl] -4-amine (267b) . To stirred solution of p-TsOH (0.791 g, 4.16 mmol, 3 equiv) in MeCN was added 267a (0.294 g, 1.39 mmol) at 0 ℃. The mixture was stirred for 10 min. NaNO2 (0.192 g, 2.77 mmol, 2 equiv) was then added dropwise and stirred for 10 min. Afterwards, an aqueous solution of KI (0.575 g, 3.46 mmol, 2.5 equiv) was added dropwise to the mixture. The reaction progress was monitored by TLC. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as light yellow oil (0.3016 g, 67%yield. ) 1H NMR (400 MHz, Acetone) δ 7.82 (dd, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H) , 7.27 (td, J = 7.5, 1.3 Hz, 1H) , 7.16 (dd, J = 7.6, 1.8 Hz, 1H) , 7.07 –7.02 (m, 2H) , 6.88 (ddd, J = 7.9, 7.3, 1.8 Hz, 1H) , 6.66 –6.60 (m, 2H) , 2.84 (s, 6H) .

[0454] Step 3: 5-nitro-2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) benzaldehyde (267c) . To a mixture of 5-nitrosalicylaldehyde (2.00 g, 11.97 mmol) and DIEA (5.21 mL, 29.93 mmol, 2.5 equiv) in dry DCM (30 mL) was added 2- (trimethylsilyl) ethoxymethyl chloride (2.33 mL , 13.16 mmol, 1.1 equiv) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a transparent oil (2.50 mg, 70%) by flash chromatography (Hexane: EA = 20 : 1, v / v) .

[0455] Step 4: trimethyl (2- ( (4-nitro-2-vinylphenoxy) methoxy) ethyl) silane (267d) . To a solution of methyltriphenylphosphonium bromide (4.5 g, 12.60 mmol, 1.5 equiv) in dry THF (30 mL) at 0℃ was added NaH (554 mg, 60%in mineral oil, 13.9 mmol, 1.65 equiv) . The resulting mixture was stirred at the same temperature for 30 min and 267c (2.5 g, 8.40 mmol) in dry THF (10 mL) was added dropwise via syringe under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (20 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as a white solid (1689 mg, 68%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100 : 1, v / v) .

[0456] Step 5: (E) -N, N-dimethyl-2'- (5-nitro-2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) styryl) -[1, 1'-biphenyl] -4-amine (267e) . To a mixture of 267d (230 mg, 0.79 mmol, 1 equiv) , K3PO4 (231 mg, 1.09 mmol, 1.4 equiv) and Pd (OAc) 2 (17 mg, 0.078 mmol, 0.1 equiv) in a egg-plant flask added 267b (301 mg, 0.93 mmol, 1.2 equiv) and anhydrous DMF (8 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 100℃ overnight. After the reaction mixture was cooled to rt, the product was extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as light-yellow oil by flash chromatography (Hexane / EA= 50: 1) .

[0457] Step 6: (E) -2- (2- (4'- (dimethylamino) - [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) -4-nitrophenol (MC4-267) . To a solution of 267e obtained above in MeOH (10 mL) was added H2SO4 (100 μL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as yellow solid (125 mg, 46%for step 1 and 2) by flash chromatography (Hexane / EA=10: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.34 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.08 (dd, J = 8.9, 2.8 Hz, 1H) , 7.91 –7.86 (m, 1H) , 7.54 –7.45 (m, 2H) , 7.44 –7.39 (m, 3H) , 7.36 –7.31 (m, 2H) , 7.17 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 6.92 –6.88 (m, 2H) , 3.06 (s, 6H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 160.4, 150.0, 141.8, 141.0, 135.0, 131.2, 130.5, 130.1, 128.2, 128.0, 126.7, 126.0, 125.9, 123.9, 122.4, 121.9, 115.9, 112.0, 39.6. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C22H20N2O3] +([M+H] +) : 361.1547, found 361.1574. HPLC: Purity: 99.13%

[0458] (E) -2'- (2-hydroxy-5-nitrostyryl) -N, N, N-trimethyl- [1, 1'-biphenyl] -4-aminium trifluoromethanesulfonate (MC4-268)

[0459] Step 1: To a solution of MC4-267 (75.0 mg, 0.21 mmol) in anhydrous DCM (3 mL) was added methyl trifluoromethanesulfonate dropwise (22.8 μL, 0.12 mmol) under N2 atmosphere at 0 ℃ in an ice bath. After 2 hour, it was observed some solid precipitated out. The solid was collected with a Hirsch funnel and rinsed thoroughly with EA twice. The pure product was obtained as white solid (38 mg, 35 %) 1H NMR (600 MHz, CD3CN) δ 9.10 (s, 1H) , 8.27 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.10 (dd, J = 8.9, 2.8 Hz, 1H) , 7.97 –7.93 (m, 3H) , 7.77 –7.73 (m, 2H) , 7.59 (td, J = 7.6, 1.5 Hz, 1H) , 7.54 (td, J = 7.5, 1.3 Hz, 1H) , 7.48 (dd, J = 7.6, 1.4 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.28 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.10 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 3.70 (s, 9H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 160.9, 146.6, 143.8, 141.8, 139.5, 136.1, 132.3, 130.7, 130.6, 129.5, 129.0, 127.1, 125.9, 125.1, 124.5, 123.8, 120.6, 116.6, 57.8. 19F NMR (565 MHz, CD3CN) δ -79.4. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [CF3O3S] - ( [M] ) -148.9526, found 148.9526. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C23H23N2O3] + ( [M] +) : 375.1703, found 375.1719.

[0460] HPLC: Purity: 95.04%

[0461] (E) -4-nitro-2- (2- (pyridin-4-yl) styryl) phenol (MC4-269) .

[0462] Step 1: (E) - (2- ( (2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (269a) . To a mixture of 267d (1.00 g, 3.39 mmol, 1 equiv) , K3PO4 (1.08 g, 5.08 mmol, 1.5 equiv) and Pd (OAc) 2 (339 mg, 0.17 mmol, 0.1 equiv) in a egg-plant flask added 1-bromo-2-iodobenzene (0.652 mL, 5.08 mmol, 1.5 equiv) and anhydrous DMF (10 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 70℃ for 4 hours. After the reaction mixture was cooled to rt, the product was extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as light-yellow oil (0.20 g, 18%) by flash chromatography (Hexane / EA= 25: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.55 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.15 (dd, J = 8.9, 2.8 Hz, 1H) , 7.93 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H) , 7.83 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.72 (dd, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H) , 7.55 –7.46 (m, 2H) , 7.32 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H) , 7.21 (d, J = 8.9 Hz, 1H) .

[0463] Step 2: To a mixture of 269a (200.0 mg, 0.62 mmol) , pyridin-4-ylboronic acid (115.18 mg, 0.94 mmol, 1.5 equiv) , Pd (PPh3) 4 (36.10 mg, 0.031 mmol, 0.05 equiv) , and K3PO4 (331.52 mg, 1.56 mmol, 2.5 equiv) was added THF / water (v / v%= 1: 1) mixture (2 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 100℃ for 12 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as yellow solid (23.00 mg, 12%) by flash chromatography (DCM / Acetone=4: 1) . 1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 8.73 –8.62 (m, 2H) , 8.21 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.01 (dd, J = 9.0, 2.9 Hz, 1H) , 7.89 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.52 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.44 (dd, J = 16.8, 6.4 Hz, 3H) , 7.37 (dd, J = 20.2, 6.9 Hz, 3H) , 6.99 (d, J = 9.0 Hz, 1H) . 13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 162.1, 150.1, 148.4, 140.1, 138.5, 135.4, 130.3, 129.6, 129.4, 128.7, 126.6, 125.3, 125.1, 125.0, 125.0, 124.1, 116.7.

[0464] (E) -4-nitro-2- (2- (3'- (pyrrolidin-1-yl) - [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) phenol (MC4-271)

[0465] Step 1: (E) - (2- ( (2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (271a) . To a mixture of 1- (3-bromophenyl) pyrrolidine (0.100 g, 0.44 mmol) , 4, 4, 4', 4', 5, 5, 5', 5'-octamethyl-2, 2'-bi (1, 3, 2-dioxaborolane) (0.224 g, 0.88 mmol, 2 equiv) , PdCl2 (dppf) 2 (16.2 mg, 0.022 mmol, 0.05 equiv) , and KOAc (0.130 g, 1.33 mmol, 3 equiv) was added dioxane (5 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 80℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as yellow oil (110 mg, 91%) by flash chromatography (Hexane: EA = 100: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 7.18 (dd, J = 8.2, 7.1 Hz, 1H) , 7.03 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 6.96 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 6.68 (ddd, J = 8.2, 2.8, 1.0 Hz, 1H) , 3.30 –3.25 (m, 4H) , 2.03 –1.99 (m, 4H) , 1.33 (s, 12H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 147.6, 128.3, 121.8, 117.6, 114.6, 83.3, 47.3, 25.1, 24.3.

[0466] Step 2: (E) - (2- ( (2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (271b) . To a mixture of 267d (1.00 g, 3.39 mmol, 1 equiv) , K3PO4 (1.08 g, 5.08 mmol, 1.5 equiv) and Pd (OAc) 2 (339 mg, 0.17 mmol, 0.1 equiv) in a egg-plant flask added 1-bromo-2-iodobenzene (0.652 mL, 5.08 mmol, 1.5 equiv) and anhydrous DMF (10 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 70℃ for 4 hours. After the reaction mixture was cooled to rt, the product was extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as light-yellow oil (0.80 g, 52%) by flash chromatography (Hexane / EA= 75: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.53 –8.46 (m, 1H) , 8.22 –8.15 (m, 1H) , 7.85 (td, J = 6.6, 5.5, 2.7 Hz, 1H) , 7.76 (dd, J = 16.4, 1.8 Hz, 1H) , 7.70 –7.62 (m, 1H) , 7.49 –7.39 (m, 3H) , 7.30 –7.21 (m, 1H) , 5.57 (d, J = 1.2 Hz, 2H) , 3.90 (td, J =9.0, 8.5, 1.9 Hz, 2H) , 1.00 (s, 2H) , -0.00 (s, 9H) .

[0467] Step 3: (E) -1- (2'- (5-nitro-2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) styryl) - [1, 1'-biphenyl] -3-yl) pyrrolidine (271c) . To a mixture of (E) - (2- ( (2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (271b) (0.200 g, 0.44 mmol) , (3- (pyrrolidin-1-yl) phenyl) boronic acid (271a) (0.110 g, 0.58 mmol, 1.3 equiv) , Pd (PPh3) 4 (25.7 mg, 0.022 mmol, 0.05 equiv) , and K3PO4 (0.236 g, 0.11 mmol, 2.5 equiv) was added THF / water (v / v%=1: 1) mixture (5 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 80℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as yellow oil (144 mg, 63%) by flash chromatography (Hexane: EA = 50: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.28 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.13 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H) , 7.88 (dd, J = 7.2, 1.6 Hz, 1H) , 7.52 (d, J = 16.5 Hz, 1H) , 7.45 –7.39 (m, 4H) , 7.37 (d, J = 9.1 Hz, 1H) , 7.29 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 6.66 –6.62 (m, 2H) , 6.59 (t, J = 2.1 Hz, 1H) , 5.48 (s, 2H) , 3.80 (s, 2H) , 3.32 (s, 4H) , 2.04 –2.00 (m, 4H) , 0.99 –0.93 (m, 2H) , 0.00 (s, 9H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 159.5, 147.9, 142.8, 142.1, 141.4, 134.9, 131.6, 130.1, 128.8, 128.2, 128.0, 127.4, 125.6, 123.6, 122.1, 121.9, 116.9, 114.5, 113.2, 110.7, 93.1, 66.7, 47.4, 25.2, 17.6, -2.2.

[0468] Step 3: (E) -4-nitro-2- (2- (3'- (pyrrolidin-1-yl) - [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) phenol (MC4-271) . To a solution of (E) -1- (2'- (5-nitro-2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) styryl) -[1, 1'-biphenyl] -3-yl) pyrrolidine (271c) (0.144 g) obtained above in MeOH (10 mL) was added H2SO4 (100 μL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was neutralized by saturated NaHCO3 solution and extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as yellow solid (93.5 mg, 87%) by flash chromatography (Hexane / EA=5: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.26 (d, J =2.8 Hz, 1H) , 8.02 (dd, J = 8.9, 2.8 Hz, 1H) , 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.51 –7.38 (m, 5H) , 7.27 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.10 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 6.65 –6.58 (m, 3H) , 3.32 (s, 4H) , 2.03 –1.99 (m, 4H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 160.5, 148.0, 142.6, 141.4, 141.0, 135.0, 130.7, 130.1, 128.8, 127.9, 127.4, 125.8, 125.6, 124.0, 122.3, 121.9, 117.0, 115.9, 113.2, 110.7, 47.4, 25.2. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C24H21N2O3] - (M-H) -385.1558, found 385.1566. HPLC purity: 96.69%

[0469] (E) -2- (2- (4'-fluoro- [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) -4-nitrophenol (MC4-273)

[0470] Step 1: (E) - (2- ( (2- (2- (4'-fluoro- [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (273c) . To a mixture of 271b (0.150 g, 0.33 mmol) , (4-fluorophenyl) boronic acid (0.070 g, 0.50 mmol, 1.5 equiv) , Pd (PPh3) 4 (19.2 mg, 0.017 mmol, 0.05 equiv) , and K3PO4 (0.177 g, 0.83 mmol, 2.5 equiv) was added THF / water (v / v%= 1: 1) mixture (4 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 70℃ for 12 h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as yellow oil (150 mg, 96.7%) by flash chromatography (Hexane: EA = 75: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.28 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.13 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H) , 7.88 (dd, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H) , 7.49 –7.45 (m, 3H) , 7.44 (dd, J = 7.5, 1.4 Hz, 1H) , 7.41 (d, J = 5.5 Hz, 2H) , 7.39 –7.36 (m, 2H) , 7.28 (t, J = 8.8 Hz, 2H) , 5.48 (s, 2H) , 3.83 –3.78 (m, 2H) , 0.97 (t, J = 8.1 Hz, 2H) , 0.00 (d, J = 1.0 Hz, 9H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 162.22 (d, J = 244.8 Hz) , 159.5, 142.1, 140.4, 137.09 (d, J = 3.3 Hz) , 135.2, 131.65 (d, J = 8.1 Hz) , 130.9, 130.3, 128.2, 127.9, 127.8, 126.1, 123.8, 123.2, 122.4, 115.1, 115.05 (d, J = 21.5 Hz) , 93.2, 66.7, 17.6, -2.2.19F NMR (565 MHz, Acetone) δ -116.7.

[0471] Step 2: (E) -2- (2- (4'-fluoro- [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) -4-nitrophenol (MC4-273) . To a mixture of (E) - (2- ( (2- (2- (4'-fluoro- [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (273c) (0.150 g, 0.32 mmol) obtained above in MeOH (10 mL) was added H2SO4 (100 μL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was neutralized by saturated NaHCO3 solution and extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as yellow oil (53.5 mg, 50%) by flash chromatography (Hexane: EA = 5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.33 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.11 (dd, J = 8.9, 2.8 Hz, 1H) , 7.97 (dd, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H) , 7.57 –7.52 (m, 3H) , 7.50 (t, J = 1.7 Hz, 3H) , 7.45 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H) , 7.34 (t, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.19 (d, J = 8.9 Hz, 1H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ162.20 (d, J = 244.5 Hz) , 160.4, 141.1, 140.3, 137.06 (d, J = 3.3 Hz) , 135.4, 131.65 (d, J = 8.2 Hz) , 130.3, 130.2, 128.0, 127.9, 126.0, 125.4, 124.1, 123.3, 122.9, 116.0, 114.98 (d, J = 21.5 Hz) . 19F NMR (565 MHz, Acetone) δ -116.9. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C20H13FNO3] - (M-H) -334.0885, found 334.0892. HPLC purity: 99.89%HPLC purity: 99.89%

[0472] (E) -4-nitro-2- (2- (4'- (pyrrolidin-1-yl) - [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) phenol (MC4-274)

[0473] Step 1: (E) -1- (2'- (5-nitro-2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) styryl) - [1, 1'-biphenyl] -4-yl) pyrrolidine (274c) . To a mixture of (E) - (2- ( (2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (271b) (0.225 g, 0.50 mmol) , (4- (pyrrolidin-1-yl) phenyl) boronic acid (0.143 g, 0.749 mmol, 1.5 equiv) , Pd (PPh3) 4 (28.9 mg, 0.025 mmol, 0.05 equiv) , and K3PO4 (0.265 g, 0.13 mmol, 2.5 equiv) was added THF / water (v / v%= 1: 1) mixture (5 mL) under N2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at 70℃ overnight. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (10 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as yellow oil (213 mg, 83%) by flash chromatography (Hexane: EA = 50: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.31 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.13 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H) , 7.82 (dd, J = 7.7, 2.0 Hz, 1H) , 7.50 –7.39 (m, 2H) , 7.39 –7.34 (m, 4H) , 7.27 –7.24 (m, 2H) , 6.69 –6.65 (m, 2H) , 5.50 (s, 2H) , 3.87 –3.80 (m, 2H) , 3.39 –3.30 (m, 4H) , 2.05 (q, J = 3.4 Hz, 4H) , 0.97 (dd, J = 8.5, 7.6 Hz, 2H) , 0.00 (s, 9H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 159.4, 147.4, 142.2, 142.1, 134.8, 132.1, 130.6, 130.1, 128.3, 128.1, 127.1, 126.6, 126.0, 123.6, 122.0, 121.6, 114.5, 111.4, 93.1, 66.7, 47.3, 25.2, 17.6, -2.2.

[0474] Step 2: (E) -4-nitro-2- (2- (4'- (pyrrolidin-1-yl) - [1, 1'-biphenyl] -2-yl) vinyl) phenol (MC4-274) . To a solution of (E) -1- (2'- (5-nitro-2- ( (2- (trimethylsilyl) ethoxy) methoxy) styryl) - [1, 1'-biphenyl] -4-yl) pyrrolidine (274c) (0.213 g) obtained above in MeOH (10 mL) was added H2SO4 (100 μL) . The resulting mixture was stirred at rt overnight. Upon completion, the reaction mixture was neutralized by saturated NaHCO3 solution and extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained as yellow solid (145 mg, 91%) by flash chromatography (Hexane / EA=7.5: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone) δ 8.29 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.03 (dd, J = 8.9, 2.8 Hz, 1H) , 7.82 (dd, J = 7.1, 2.4 Hz, 1H) , 7.48 –7.39 (m, 2H) , 7.38 –7.33 (m, 3H) , 7.28 –7.24 (m, 2H) , 7.11 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 6.67 –6.64 (m, 2H) , 3.35 –3.29 (m, 4H) , 2.06 –2.03 (m, 4H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone) δ 160.3, 147.4, 142.0, 141.1, 135.0, 131.3, 130.6, 130.1, 128.0, 127.1, 126.6, 126.0, 125.9, 123.9, 122.3, 121.7, 115.9, 111.3, 47.3, 25.2. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C24H21N2O3] - (M-H) -385.1558, found 385.1568. HPLC purity: 96.32%

[0475] (E) -1- (2'- (2-hydroxy-5-nitrostyryl) - [1, 1'-biphenyl] -4-yl) -1-methylpyrrolidin-1-ium trifluoromethanesulfonate (MC4-275)

[0476] Step 1: To a solution of MC4-274 (90.0 mg, 0.23 mmol) in anhydrous DCM (3 mL) was added methyl trifluoromethanesulfonate dropwise (51.0 μL, 0.47 mmol, 2 equiv) under N2 atmosphere at 0 ℃ in an ice bath. After 5 hours, the solvent of reaction mixture was removed by rotary evaporator. The pure product was obtained as yellow solid (104 mg, 81%) by flash chromatography (DCM: MeOH = 10: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 8.15 (d, J = 2.9 Hz, 1H) , 8.03 –7.98 (m, 3H) , 7.86 (dd, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H) , 7.68 –7.62 (m, 2H) , 7.51 (td, J =7.6, 1.4 Hz, 1H) , 7.45 (td, J = 7.5, 1.3 Hz, 1H) , 7.38 (dd, J = 7.6, 1.4 Hz, 1H) , 7.32 (d, J = 16.3 Hz, 1H) , 7.21 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 6.99 (dd, J = 9.0, 1.7 Hz, 1H) , 4.38 –4.28 (m, 2H) , 4.06 –3.96 (m, 2H) , 3.45 (s, 3H) , 2.32 –2.18 (m, 4H) . 13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 146.4, 143.1, 142.4, 139.1, 135.5, 131.6, 130.6, 129.4, 129.1, 128.7, 126.9, 125.2, 124.8, 123.3, 122.2, 121.8, 120.1, 116.8, 65.7, 54.6, 20.9.19F NMR (565 MHz, DMSO) δ -77.8. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [CF3O3S] - (M) -148.9526, found 148.9528., calcd for [C25H25N2O3] + (M+) : 401.186, found 401.1879. HPLC purity: 99.71%

[0477] 2- ( ( (4'-fluoro- [1, 1'-biphenyl] -4-yl) amino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-363)

[0478] Step 1: 4'-fluoro- [1, 1'-biphenyl] -4-amine (363a) . 363a was prepared according to general procedure (E) using 4- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) aniline (500 mg, 2.28 mmol, 1.2 equiv) and 1-bromo-4-fluorobenzene (0.209 mL, 1.9 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a transparent oil (82.5 mg, 23%) by flash chromatography (Hexane: EA=75:1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone-d) δ 7.60 –7.54 (m, 2H) , 7.39 –7.34 (m, 2H) , 7.15 (d, J =2.1 Hz, 2H) , 6.79 –6.74 (m, 2H) , 4.80 (s, 2H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone-d) δ 161.5 (d, J = 242.9 Hz) , 148.1, 137.9 (d, J = 3.2 Hz) , 128.2, 127.5 (d, J = 7.9 Hz) , 127.4, 115.2 (d, J = 21.4 Hz) , 114.6.19F NMR (565 MHz, Acetone-d) δ -119.6.

[0479] Step 2: The title compound was prepared according to general procedure (F) using 2-hydroxy-5-nitrobenzaldehyde (58.0 mg, 0.35 mmol, 1 equiv) and aniline 363a (65.0 mg, 0.035 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (86.1 mg, 73%) by flash chromatography (Hexane: EA = 7.5: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone-d) δ 8.27 (d, J = 3.2 Hz, 1H) , 8.07 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 7.57 (td, J = 5.9, 5.3, 2.5 Hz, 2H) , 7.42 (dd, J = 8.8, 2.3 Hz, 2H) , 7.18 –7.11 (m, 2H) , 7.09 (dd, J = 8.9, 2.1 Hz, 1H) , 6.83 –6.77 (m, 2H) , 5.87 (s, 1H) , 4.52 (s, 2H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone-d) δ 161.6 (d, J = 243.1 Hz) , 161.2, 147.9, 140.9, 137.6, 137.6, 128.7, 127.6, 127.5, 127.5 (d, J = 7.6 Hz) , 124.1 (d, J = 17.2 Hz) , 115.3, 115.2 (d, J =8.6 Hz) , 113.2, 42.0.19F NMR (565 MHz, Acetone-d) δ -119.4. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C19H14FN2O3] - (M-H) -337.0994, found 337.0998. HPLC purity: 97.45%.

[0480] 2- ( ( (4'-fluoro- [1, 1'-biphenyl] -2-yl) amino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-364)

[0481] Step 1: 4'-fluoro- [1, 1'-biphenyl] -2-amine (364a) . 364a was prepared according to general procedure (E) using 2- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) aniline (500 mg, 2.28 mmol, 1.2 equiv) and 1-bromo-4-fluorobenzene (0.209 mL, 1.9 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a transparent oil (260 mg, 73%) by flash chromatography (Hexane: EA=75: 1) . 1H NMR (400 MHz, Acetone-d) δ 7.53 –7.44 (m, 2H) , 7.27 –7.18 (m, 2H) , 7.09 (ddd, J = 8.1, 7.3, 1.6 Hz, 1H) , 7.03 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 6.83 (dd, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H) , 6.71 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H) , 4.47 (s, 2H) .

[0482] Step 2: The title compound was prepared according to general procedure (F) using 2-hydroxy-5-nitrobenzaldehyde (93.2 mg, 0.56 mmol, 1 equiv) and aniline 364a (104.4 mg, 0.056 mmol, 1.1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (69.2 mg, 79%) by flash chromatography (Hexane: EA = 7.5: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone-d) δ 8.20 (t, J = 2.1 Hz, 1H) , 8.04 (dt, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H) , 7.51 (ddd, J = 8.1, 5.4, 1.7 Hz, 2H) , 7.25 (td, J = 8.8, 1.7 Hz, 2H) , 7.14 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.05 (t, J = 8.3 Hz, 2H) , 6.75 –6.64 (m, 2H) , 5.16 (s, 1H) , 4.48 (s, 2H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone-d) δ 162.0 (d, J = 244.2 Hz) , 161.1, 144.8, 140.8, 135.9, 135.8, 131.3 (d, J = 8.2 Hz) , 130.2, 128.7, 127.5, 127.1, 124.1, 117.3, 115.6 (d, J = 21.4 Hz) , 115.2, 111.1, 42.4.19F NMR (565 MHz, Acetone-d) δ -116.9. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C19H14FN2O3] - (M-H) -337.0994, found 337.0995. HPLC purity: 97.19%.

[0483] 2- ( ( (4'-chloro- [1, 1'-biphenyl] -2-yl) amino) methyl) -4-nitrophenol (MC4-365)

[0484] Step 1: 4'-chloro- [1, 1'-biphenyl] -2-amine (365a) . 365a was prepared according to general procedure (E) using (4-chlorophenyl) boronic acid (545 mg, 3.49 mmol, 1.2 equiv) and 2-bromoaniline (500 mg, 2.91 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a transparent oil (307 mg, 52%) by flash chromatography (Hexane: EA= 75: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone-d) δ 7.48 (d, J = 1.9 Hz, 4H) , 7.10 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 7.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 6.71 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 4.51 (d, J = 15.1 Hz, 2H) .

[0485] Step 2: The title compound was prepared according to general procedure (F) using 2-hydroxy-5-nitrobenzaldehyde (77.0 mg, 0.46 mmol, 1 equiv) and aniline 365a (93.8 mg, 0.046 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (86.1 mg, 73%) by flash chromatography (Hexane: EA = 7.5: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone-d) δ 8.21 (s, 1H) , 8.05 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 7.51 (s, 4H) , 7.15 (t, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.10 –7.04 (m, 2H) , 6.73 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.69 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 5.23 (s, 1H) , 4.49 (s, 2H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone-d) δ161.1, 144.8, 140.8, 138.5, 132.5, 131.1, 130.1, 128.9, 127.5, 126.8, 124.2, 124.1, 117.3, 115.1, 111.1, 110.7, 42.3. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C19H14ClN2O3] - (M-H) -353.0698, found 353.0699. HPLC purity: 99.01%.

[0486] 2- ( ( (3'-chloro- [1, 1'-biphenyl] -2-yl) amino) methyl) -5-nitrophenol (MC4-368)

[0487] Step 1: 3'-chloro- [1, 1'-biphenyl] -2-amine (368a) . 368a was prepared according to general procedure (E) using (3-chlorophenyl) boronic acid (1.09 g, 6.98 mmol, 1.2 equiv) and 2-bromoaniline (1.00 g, 5.81 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a transparent oil (804 mg, 68%) by flash chromatography (Hexane: EA= 75: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone-d) δ7.51 –7.45 (m, 2H) , 7.42 (dt, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H) , 7.38 (ddd, J = 7.9, 2.1, 1.3 Hz, 1H) , 7.12 (ddd, J = 8.0, 7.3, 1.6 Hz, 1H) , 7.05 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 6.85 (dd, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H) , 6.72 (td, J = 7.4, 1.2 Hz, 1H) , 4.56 (s, 2H) . 13C NMR (151 MHz, Acetic) δ 144.9, 142.3, 134.0, 130.4, 130.0, 128.8, 128.7, 127.4, 126.8, 125.0, 117.4, 115.6.

[0488] Step 2: The title compound was prepared according to general procedure (F) using 2-hydroxy-4-nitrobenzaldehyde (100.0 mg, 0.60 mmol, 1 equiv) and aniline 368a (121.9 mg, 0.60 mmol, 1 equiv) , yielding the pure product as a yellow solid (127.1 mg, 60%) by flash chromatography (Hexane: EA = 7.5: 1) . 1H NMR (600 MHz, Acetone-d) δ 9.67 (s, 1H) , 7.74 –7.68 (m, 2H) , 7.57 –7.48 (m, 3H) , 7.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.15 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.07 (d, J = 7.4 Hz, 1H) , 6.74 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 6.62 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 5.28 (t, J = 6.1 Hz, 1H) , 4.51 (d, J = 6.1 Hz, 2H) . 13C NMR (151 MHz, Acetone-d) δ 155.4, 147.6, 144.7, 141.9, 134.3, 134.1, 130.5, 130.1, 129.2, 129.1, 128.7, 127.9, 127.2, 126.4, 117.2, 114.4, 111.0, 109.3, 42.5. HRMS (ESI-TOF) m / z: calcd for [C19H14ClN2O3] - (M-H) -353.0698, found 353.0698. HPLC purity: 98.51%.

[0489] (E) -2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenol (MC4-400)

[0490] The title compound was prepared according to general procedure (E) using 1-bromo-2-iodobenzene (718 mg, 1.26 mmol) , yielding the pure product as yellow solid (357mg, 67%) by flash chromatography (Hexane: EA =5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (s, 1H) , 8.40 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.08 (dd, J = 9.0, 2.8 Hz, 1H) , 7.85 (dd, J = 7.9, 1.6 Hz, 1H) , 7.70 –7.66 (m, 2H) , 7.43 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.37 (d, J = 16.3 Hz, 1H) , 7.25 (td, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 7.07 (d, J = 9.0 Hz, 1H) ; 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 161.8, 139.8, 136.6, 133.0, 129.8, 129.4, 128.2, 127.1, 126.1, 125.0, 124.1, 123.8, 123.5, 116.4; HRMS (ESI) calcd for C14H10BrNO3 [M -H] -317.9844, found 317.9845 ; HPLC purity: 98.5%.

[0491] (E) -2- (2- (furan-2-yl) styryl) -4-nitrophenol (MC4-401)

[0492] The title compound was prepared according to general procedure (F) using furan-2-ylboronic acid (26.9 mg, 0.24 mmol) , yielding the pure product as yellow solid (39 mg, 81%) by flash chromatography (Hexane: EA =5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.61 (s, 1H) , 8.36 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.05 (dd, J = 9.0, 2.9 Hz, 1H) , 7.85 (dd, J = 1.8, 0.8 Hz, 1H) , 7.77 –7.73 (m, 2H) , 7.68 –7.64 (m, 1H) , 7.43 –7.37 (m, 2H) , 7.29 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.06 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 6.70 –6.63 (m, 2H) ; 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 161.4, 151.9, 143.3, 139.9, 134.5, 130.1, 129.1, 128.2, 128.1, 127.5, 126.9, 124.7, 124.6, 124.5, 123.5, 116.2, 112.0, 110.1; HRMS (ESI) calcd for C18H13NO4 [M -H] -306.0845, found 306.0829 ; HPLC purity: 96.67%.

[0493] (E) -2- (2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) styryl) -4-nitrophenol (MC4-402)

[0494] The title compound was prepared according to general procedure (F) using (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) boronic acid (30 mg, 0.24 mmol) , yielding the pure product as yellow solid (45 mg, 87%) by flash chromatography (Hexane: EA =5: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.56 (s, 1H) , 8.31 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.03 (dd, J = 9.0, 2.8 Hz, 1H) , 7.92 (s, 1H) , 7.76 –7.73 (m, 1H) , 7.63 –7.59 (m, 2H) , 7.41 –7.38 (m, 1H) , 7.35 –7.26 (m, 3H) , 7.04 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 3.90 (s, 3H) ; 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 161.3, 139.9, 138.4, 134.7, 131.9, 130.3, 130.1, 129.4, 128.1, 126.9, 126.2, 124.9, 124.3, 123.7, 123.3, 120.4, 116.1, 38.6; HRMS (ESI) calcd for C18H15N3O3 [M -H] -320.1113, found 320.1104 ; HPLC purity: 96.08%.

[0495] (E) - (2- (2-hydroxy-5-nitrostyryl) phenyl) boronic acid (MC4-403)

[0496] Step 1: Synthesis of (E) -trimethyl (2- ( (4-nitro-2- (2- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) styryl) phenoxy) methoxy) ethyl) silane.

[0497] To a mixture of of (E) - (2- ( (2- (2-bromostyryl) -4-nitrophenoxy) methoxy) ethyl) trimethylsilane (400b) (500 mg, 1.11 mmol) , PdCl2 (dppf) (40 mg, 0.05 mmol, 0.05 equiv) , KOAc (330 mg, 3.36 mmol, 3 equiv) in Dioxane was added (Bpin) 2 (562 mg, 2.21 mmol, 2 equiv) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight under N2 protection. After the reaction mixture was cooled to room temperature, the product was extracted with EA (30 mL × 3) The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained by flash chromatography (Hexane: EA = 10: 1, v / v) . Yellow solid was achieved in 530 mg with the yield of 72%. 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.50 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.19 –8.13 (m, 2H) , 7.80 (d, J = 7.9 Hz, 1H) , 7.73 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H) , 7.52 (td, J = 7.5, 1.4 Hz, 1H) , 7.38 –7.31 (m, 3H) , 5.50 (s, 2H) , 3.78 (t, J = 8.1 Hz, 2H) , 1.37 (s, 12H) , 0.90 (t, J = 8.1 Hz, 2H) , -0.06 (s, 9H) .

[0498] Step 2: To a solution of pure product obtained above in THF / H2O (4: 1) was added NaIO4 (600 mg, 3 mmol, , 5 equiv) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 2h. Add drops of 1M HCl to the reaction mixture and stir it for another 2h. Upon completion, the reaction mixture was extracted with EA (30 mL × 3) . The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na2SO4, filtered, and concentrated under reduced pressure. The pure product was obtained by flash chromatography (DCM: MeOH = 20: 1, v / v) . Pure product as yellow solid was achieved in 79 mg with the yield of 75%. 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.47 (s, 1H) , 8.34 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.28 (s, 2H) , 8.04 (dd, J = 9.0, 2.8 Hz, 1H) , 7.77 –7.70 (m, 2H) , 7.50 (dd, J = 7.4, 1.4 Hz, 1H) , 7.38 (td, J = 7.6, 1.5 Hz, 1H) , 7.29 –7.23 (m, 2H) , 7.04 (d, J = 9.0 Hz, 1H) ; 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 161.0, 140.2, 139.9, 133.5, 132.4, 129.0, 126.8, 125.2, 124.5, 124.3, 121.9, 121.7, 116.1; HRMS (ESI) calcd for C14H12BNO5, [M -H] -284.0809, found 284.0752 ; HPLC purity: 96.08%.

[0499] (E) -4-nitro-2- (2- (thiophen-3-yl) styryl) phenol (MC4-405)

[0500] The title compound was prepared according to general procedure (F) using thiophen-3-ylboronic acid (106 mg, 0.83 mmol) , yielding the pure product as yellow solid (132 mg, 73%) by flash chromatography (Hexane: EA =3: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.49 (s, 1H) , 8.22 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.01 (dd, J = 9.0, 2.9 Hz, 1H) , 7.82 –7.78 (m, 1H) , 7.67 (dd, J = 4.9, 3.0 Hz, 1H) , 7.55 (dd, J = 3.0, 1.3 Hz, 1H) , 7.47 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.42 –7.36 (m, 3H) , 7.30 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.25 (dd, J = 4.9, 1.3 Hz, 1H) , 7.02 (d, J = 9.0 Hz, 1H) ; 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 161.3, 140.7, 139.9, 135.5, 135.1, 130.0, 129.9, 129.2, 128.0, 127.8, 126.3, 126.0, 124.8, 124.4, 124.2, 123.6, 123.0, 116.1; HRMS (ESI) calcd for C18H13NO3S [M -H] -322.0616, found 322.0625 ; HPLC purity: 99.74%.

[0501] (E) -2- (2- (1-methyl-1H-1, 2, 4-triazol-5-yl) styryl) -4-nitrophenol (MC4-406)

[0502] The title compound was prepared according to general procedure (F) using 5-bromo-1-methyl-1H-1, 2, 4-triazole (129 mg, 0.83 mmol) , yielding the pure product as yellow solid (132 mg, 56%) by flash chromatography (Hexane: EA =3: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.56 (s, 1H) , 8.23 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.11 (s, 1H) , 8.02 (dd, J = 9.0, 2.8 Hz, 1H) , 7.98 (d, J = 7.9 Hz, 1H) , 7.61 (td, J = 7.5, 1.8 Hz, 1H) , 7.51 –7.45 (m, 2H) , 7.33 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.24 (d, J = 16.4 Hz, 1H) , 7.00 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 3.70 (s, 3H) ; 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 161.5, 153.3, 150.5, 139.8, 136.8, 130.5, 128.1, 127.9, 126.9, 125.8, 125.3, 124.7, 124.2, 123.7, 116.2, 36.0; HRMS (ESI) calcd for C17H14N4O3 [M -H] -321.1066, found 321.1066; HPLC purity: 95.40%.

[0503] (E) -2- (2-fluorostyryl) -4-nitrophenol (MC4-407)

[0504] The title compound was prepared according to general procedure (E) using 1-fluoro-2-iodobenzene (563 mg, 2.54 mmol) , yielding the pure product as yellow solid (329 mg, 75%) by flash chromatography (Hexane: EA =3: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.58 (s, 1H) , 8.46 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.06 (dd, J = 9.0, 2.8 Hz, 1H) , 7.79 (td, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H) , 7.54 –7.46 (m, 2H) , 7.35 (tdd, J = 7.3, 5.4, 1.7 Hz, 1H) , 7.27 –7.22 (m, 2H) , 7.06 (d, J = 9.0 Hz, 1H) ; 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 161.3, 160.7, 159.1, 140.0, 129.7, 129.6, 127.8, 127.8, 125.0, 124.9, 124.8, 124.8, 124.8, 124.7, 124.6, 124.4, 123.2, 123.1, 123.1, 116.2, 116.0, 115.8; 19F NMR (565 MHz, DMSO-d6) δ -117.8; HRMS (ESI) calcd for C14H10FNO3 [M -H] -258.0645, found 258.0645; HPLC purity: 99.05%.

[0505] (E) -4-nitro-2- (2- (thiophen-2-yl) styryl) phenol (MC4-408)

[0506] The title compound was prepared according to general procedure (F) using thiophen-2-ylboronic acid (106 mg, 0.83 mmol) , yielding the pure product as yellow solid (82 mg, 53%) by flash chromatography (Hexane: EA =3: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.55 (s, 1H) , 8.27 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.03 (dd, J = 9.0, 2.8 Hz, 1H) , 7.80 (dd, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H) , 7.70 –7.66 (m, 1H) , 7.61 (d, J = 16.3 Hz, 1H) , 7.48 (dd, J = 7.5, 1.4 Hz, 1H) , 7.44 (td, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H) , 7.39 (td, J = 7.4, 1.3 Hz, 1H) , 7.31 (d, J = 16.3 Hz, 1H) , 7.20 (d, J = 4.0 Hz, 2H) , 7.03 (d, J = 9.0 Hz, 1H) ; 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 161.4, 141.4, 139.9, 135.5, 133.0, 130.4, 129.7, 128.3, 128.2, 127.8, 127.7, 127.1, 126.6, 124.7, 124.5, 124.2, 123.1, 116.2; HRMS (ESI) calcd for C18H13NO3S [M -H] -322.0616, found 322.0615 ; HPLC purity: 95.44%.

[0507] (E) -2- (2- (furan-3-yl) styryl) -4-nitrophenol (MC4-409)

[0508] The title compound was prepared according to general procedure (F) using furan-3-ylboronic acid (94 mg, 0.83 mmol) , yielding the pure product as yellow solid (95 mg, 58%) by flash chromatography (Hexane: EA =3: 1, v / v) . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.54 (s, 1H) , 8.31 (d, J = 2.8 Hz, 1H) ...

Claims

A compound of Formula 1:or a pharamceutically acceptable salt thereof, wherein:m is 0, 1, or 2;n is 0 or 1;A is -NHCH2-, -NH (C=O) -, -NH (C=S) -, -OCH2-, -SCH2-, or -CH=CH-;R1 is hydrogen, chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, pyrrolyl, and furanyl;R2 is hydrogen, -NO2, or -SO2CF3;R3 is hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -SO2CF3, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl;R4 and R5 for each instance is independently selected from the group consisting of halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -B (OR) 2, -N (R) C (R) , -OCR, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, substituted or unsubstituted heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl;R6 for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl; andR for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, substituted or unsubstituted aryl, heteroaryl, and aralkyl; or two instances of R together with the atom they are covalently bonded form a 3-6 membered cycloalkyl and heterocyloalkyl, wherein if R1 is hydrogen then A must be -CH=CH-and at least R4 is chloride; or if R1 is hydrogen then A must be -NH (C=O) -and at least R4 is phenyl, and with the proviso that the compound is not selected from the group consisting of:wherein any of the substitutions is with one or more alkyl, halogen, haloalkyl, alkoxyl, alkenyl, alkynyl, aryl, or heteroaryl groups.The compound of claim 1, wherein A is -NHCH2-, R2 is -NO2, R3 is chloride, and R1 is -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl.The compound of claim 2, wherein at least one R6 is alkyl or R6 is hydrogen.The compound of claim 2 or 3, wherein A is -NHCH2-or -NH (C=O) -, R2 is -SO2CF3 and R3 is hydrogen, halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl.The compound of anyone of claims 1-4, wherein R1 is alkyl or -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl.The compound of anyone of claims 1-4, wherein R5 is hydrogen.The compound of claim 2, wherein at least one R6 is alkyl or R6 is hydrogen.The compound of claim 1, wherein A is -OCH2-or -SCH2-, R2 is -NO2, or -SO2CF3, R3 is hydrogen, and R1 is alkyl or -Ar1 (R6) p, wherein Ar1 is phenyl.The compound of claim 8, wherein at least one R6 is alkyl or R6 is hydrogen.The compound of claim 1, wherein A is -CH=CH-, R2 is -NO2, and R1 is chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, and furanyl.The compound of claim 1, wherein the compound is selected from the group consisting of:and pharmaceutically acceptable salts thereof, wherein:R1 is is hydrogen, chloride, bromide, CF3, -Ar1 (R6) p, or alkyl, wherein p is 1, 2, or 3 and Ar1 is selected from the group consisting of phenyl, thiophenyl, and furanyl;R2 is -NO2 and R3 is Cl;R2 is -NO2 and R3 is hydrogen;R2 is -SO2CF3 and R3 is hydrogen; orR2 is hydrogen and R3 is -SO2CF3;R4 and R5 for each instance is independently selected from the group consisting of halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, -C (O) R, -C (O) OR, -OC (O) R, -N (R) C (O) R, -C (O) N (R) 2, -N (R) C (O) OR, -OC (O) N (R) -, -OC (O) OR, -N (R) C (O) N (R) 2, -S (O) 2R, -S (O) 2N (R) 2, -N (R) S (O) 2R, perhaloalkoxyl, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl; or one or more of R4 and R5 is absent; andR for each instance is independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, or aralkyl; or two instances of R together with the atom they are covalently bonded form a 3-6 membered cycloalkyl and heterocyloalkyl.The compound of claim 11, wherein R4 and R5 for each instance is independently selected from the group consisting of halide, nitrile, nitro, azido, -OR, -SR, -N (R) 2, alkyl, haloalkylcycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl; or one or more of R4 and R5 is absent.The compound of claim 11 or 12, wherein R1 is is hydrogen, tbutyl, chloride, bromide, CF3, optionally substituted phenyl, optionally substituted 2-thiophenyl, optionally substituted 2-furanyl, optionally substituted 3-thiophenyl, optionally substituted 3-furanyl, 4-tbutyl-phenyl, or 4-pentyl-phenyl.The compound of claim 1, wherein the compound is selected from the group consisting of:and pharmaceutically acceptable salts thereof.The compound of claim 1, wherein the compound is selected from the group consisting of:and pharmaceutically acceptable salts thereof.A pharmaceutical composition comprising the compound of claim of any one of claims 1-15 and at least one pharmaceutically acceptable excipient or pharmaceutically acceptable carrier.A method of treating a bacterial infection in a subject in need thereof comprising the step of administering a therapeutically effective amount of the compound of claim of any one of claims 1-15 to the subject.The method of claim 17, wherein the bacterial infection is a Gram-positive bacterial infection.The method of claim 17, wherein the bacterial infection is a Gram-negative bacterial infection.The method of claim 17, wherein the bacterial infection results from an Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium abscessus, Clostridioides difficile, or Helicobacter pylori infection.A method of treating a fungal infection in a subject in need thereof comprising the step of administering a therapeutically effective amount of the compound of claim of any one of claims 1-15 to the subject.The method of claim 21, wherein the fungal infection results from a fungus of the Candida genus.

Images