Bicyclic peptide inhibitors of il-23 receptor

Abstract

Provided are novel bicyclic peptide compounds, pharmaceutical compositions, and their use as interleukin-23 receptor (IL-23R) inhibitors. More specifically, it provides bicyclic peptide compounds as IL-23R inhibitors, pharmaceutical compositions containing such compounds, and methods for the treatments and / or preventions of diseases and disorders mediated by IL-23R using the compounds. Also provided are methods for the preparation of the compounds.

Description

BICYCLIC PEPTIDE INHIBITORS OF IL-23 RECEPTORFIELD OF THE INVENTION

[0001] The present invention relates to novel bicyclic peptide compounds, pharmaceutical compositions containing the same and their use as interleukin-23 receptor (IL-23R) inhibitors. More specifically, the present invention provides new bicyclic peptide compounds as IL-23R inhibitors, pharmaceutical compositions containing such compounds and methods for the treatments and / or preventions diseases and disorders mediated by IL-23R using the compounds. The present invention also relates to methods for the preparations of the compounds.BACKGROUND

[0002] IL-23 is a member of the interleukin IL-12 cytokine family and is composed as a heterodimer of the IL-23p19 subunit, and the IL-12p40 subunit shared by IL-12. IL-12Rβ1 is the receptor of the IL-12p40 subunit, while IL-23R is the receptor of IL23-p19 subunit. IL-12Rβ1 are mainly expressed on T cells, NK cells and dendritic cells, while IL-23R are expressed only on T cells, NK cells, monocytes and dendritic cells. IL-23 binds to IL-23R and IL-12Rβ1 to form a cytokine-receptor ternary complex, including IL-23, IL-23R and IL-12Rβ1, which activates a series of Janus kinases (JAKs; such as JAK2, TYK2) and signal transducer and activator of transcription (STATs; such as STAT3, STAT4) (Floss, D. M. et al., Mol. Biol. Cell. 2016, 27, 2301-2316) .

[0003] IL-23 is associated with a series of immune-mediated inflammatory diseases (IMIDs) , including psoriasis (PsO) , psoriatic arthritis (PsA) , and inflammatory bowel disease (IBD) . Early data indicated that IL-23 enhances the production of IFN-γ by memory CD4+ T cells; and later, it was found that IL-23 can also induce these cells to produce IL-17 (Aggarwal, S. et al., J. Biol. Chem. 2003, 278, 1910-1914) . In the EAE model of IL-23p19 knockout mice, the mice were protected from autoimmune inflammation, confirming the key role of IL-23 in inflammatory diseases (Cua, D.J. et al., Nature, 2003, 421, 744-748) . Subsequent genome-wide association studies have shown that the IL-23 signaling pathway plays an important role in the pathogenesis of several chronic inflammatory diseases, including Crohn's disease (Duerr, R.H., et al., Science, 2006, 314, 1461-1463) , spondyloarthritis (Burton, P.R., et al., Nat. Genet. 2007, 39, 1329-1337) , and psoriasis (Cargill, M. et al., Am. J. Hum. Genet. 2007, 80, 273-290) .

[0004] IL-23R is expressed on various adaptive and innate immune cells, including: Th17 cells, γδ T cells, natural killer (NK) cells, dendritic cells, macrophages and innate lymphoid cells (ILC) . These cells are widely distributed in the intestine, and elevated gene expression and protein levels of IL-23R have been found on the intestinal mucosal surface of IBD patients. It is believed that IL-23 mediates this effect by promoting the development of pathogenic CD4+T cells that produce IL-6, IL-17 and tumor necrosis factor (TNF) .

[0005] Psoriasis, a chronic skin disease, has been confirmed to be mediated by the inflammatory response mechanism of helper T cells in the body. Approximately 40 million people worldwide suffer from psoriasis, with the prevalence rate ranging from 0.09%to 3.34%in different countries. Many research and clinical studies have shown that the TNF-α / IL-23 / Th17 cytokine signaling axis explains the occurrence of psoriasis inflammation from a pathological mechanism. The presence of pro-inflammatory factors such as TGF-β, IL-6, and IL-1βinduces the initial differentiation of CD4+T cells into Th17 cells and leads to the upregulation of IL-23R expression on the surface of Th17 cells. IL-23 released by dendritic cells and antigen-presenting cells binds to the surface receptors of Th17 cells, activating and stimulating the expansion of Th17 subgroups. Activated Th17 cells induce the production of cytokines such as IL-17A, IL-17F, IL-22, IL-21, and TNF-α. IL-17A functions to stimulate the recruitment and activation of neutrophils, directly activate keratinocytes, and synergize with TNF-αto enhance inflammation. IL-22 induces excessive proliferation of keratinocytes and is associated with the severity of psoriasis.

[0006] Therapeutic drugs that inhibit the IL-23 pathway have been developed for the treatment of IL-23-related diseases and disorders. For example, Ustekinumab, which targets IL-12 / 23 (IL-12p40 subunit) , has been approved for the treatment of moderate to severe plaque psoriasis (PsO) , active psoriatic arthritis (PsA) , moderate to severe active Crohn's disease (CD) , and moderate to severe active ulcerative colitis (UC) . Guselkumab and Risankizumab, which target the IL-23p19 subunit, have been approved for the treatment of plaque psoriasis and psoriatic arthritis, pustular psoriasis, erythrodermic psoriasis, and psoriatic arthritis, as well as inflammatory bowel disease. Although antibody therapies targeting IL-23, represented by Ustekinumab and Risankizumab, have made significant breakthroughs in the treatment of psoriasis and inflammatory bowel disease, there are still many problems to be solved in antibody treatment, such as poor patient compliance and high cost.

[0007] Currently, there are no small molecule or peptide oral inhibitors that selectively inhibit IL-23 signaling on the market. Only JNJ-2113, a peptide inhibitor targeting the IL-23 receptor (IL-23R) developed by Johnson&Johnson and Protagonist Therapeutics, is in Phase III clinical trials. Therefore, there is still a significant need in this field for more effective small molecule and peptide oral drugs to treat and / or prevent IL-23-related diseases and disorders, providing treatment options that do not require injection delivery.SUMMARY OF THE INVENTION

[0008] In general, the present invention relates to novel bicyclic peptide inhibitors of the interleukin-23 receptor (IL-23R) , or pharmaceutically acceptable salts, solvates and / or other forms thereof; pharmaceutical compositions comprising the IL-23R inhibitors, methods and / or uses of the IL-23R inhibitors for treatment of autoimmune inflammation diseases and / or related disorders.

[0009] In particular, the present invention relates to a compound of Formula (I) , or pharmaceutically acceptable salts, solvates and / or other forms thereof; pharmaceutical compositions containing them comprising the IL-23R inhibitors, methods and / or uses for treatment of autoimmune inflammation diseases and related disorders.

[0010] The bicyclic peptide inhibitors described in the present invention comprise the amino acid sequence of Formula (I) :

[0011] R1-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15

[0012] Formula (I)

[0013] wherein, the linear form structure of Formula (I) is intended for exemplary and non-limiting purposes, which will be apparent from examples set forth and exemplified throughout the instant specification, e.g., each such structure may be longer or shorter than the length of fourteen amino acids and / or other corresponding chemical moieties or functional group substituents as defined herein.

[0014] Specifically, in Formula (I) :

[0015] R1 is selected from wherein ring A is selected from C6-C10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, C3-C10 cycloalkyl, and 3～8 membered heterocyclyl, wherein said C6-C10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, C3-C10 cycloalkyl, or 3～8 membered heterocyclyl is unsubstituted or each independently substituted with one or more substituents B, wherein said substituent B is selected from halogen, C1-C10 alkoxy, C3-C10 cycloalkyl, N, N-dimethylamino-C1-C6 alkoxy and N, N, N-trimethylammonium-C1-C6 alkoxy, wherein n is an integer from 0 to 4;

[0016] Ra is selected from hydrogen or C1-C4 alkyl group;

[0017] Preferably, wherein R1 is selected from the following groups that are unsubstituted or each independently substituted by one or more substituents C:  wherein the substituent C is selected from halogen,  wherein m is an integer from 1 to 4, n is an integer from 0 to 4, r is an integer from 1 to 4;

[0018] Ra is selected from hydrogen or methyl;

[0019] More preferably, wherein R1 is selected from

[0020] X3 is selected from Cys, Pen or Abu;

[0021] X4 is selected from Asp or

[0022] X5 is selected from Thr, Ser or absent; Preferably, X5 is Thr or absent;

[0023] X6 is Trp, either unsubstituted or substituted by C1-C4 alkyl; Preferably, X6 is W (7-Me) ;

[0024] X7 is selected from Lys (Ac) , Lys (NMeAc) , Pro,

[0025] X8 is selected from Cys or Pen;

[0026] X9 is selected from Tyr or Phe, each of which is unsubstituted or substituted by one or more substituents D, the substituent D is selected from halogen, C1～C6 alkyl, C1～C6 alkynyl, C1～C6 alkoxy, carboxy, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy, N, N, N-trimethyl-5-ammonium pentoxy, N, N-dimethyl-5-aminopentoxy and N, N, N-trimethyl-3-ammonium propoxy;

[0027] Preferably, X9 is selected from Phe or wherein R2 is selected from halogen, ethynyl, C1～C4 alkoxy, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy, N, N, N-trimethyl-5-ammoniumpentoxy, N, N-dimethyl-5-aminopentoxy or N, N, N-trimethyl-3-ammoniumpropoxy;

[0028] More preferably, X9 is selected from Phe or wherein R2 is selected from halogen, methoxyl, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy, N, N, N-trimethyl-5-ammoniumpentoxyamino, N, N-dimethyl-5-aminopentoxy or N, N, N-trimethyl-3-ammoniumpropoxyamino;

[0029] X10 is 2Nal;

[0030] X11 is selected from the followingα-disubstituted amino acids: 4-amino-4-carboxy-tetrahydropyran (THP) , α-MeLys,

[0031] X12 is any amino acid; Preferably, X12 is selected from Glu, Asp, Lys, D-Glu or D-Asp;

[0032] X13 is any amino acid; Preferably, X13 is selected from Glu, Asp, Asn, Ala, Val, Ser, Thr, Arg, D-Ala, D-Asn, D-Asp, D-Glu, D-Ser, D-Thr, D-Arg,

[0033] More preferably, X13 is selected from Glu, Asp, Asn, Ala, Val, Thr,

[0034] X14 is 3Pal;

[0035] X15 is Gly, either unsubstituted or substituted with one or more substituents; Preferably, X15 is selected from

[0036] wherein:

[0037] the bicyclic peptide inhibitor of an interleukin-23 receptor is cyclized by forming the following bonds:

[0038] ·a disulfide bond between X3 and X8 formed by Cys to Cys, Pen to Pen, and Cys to Pen; or a thioether bond formed by Abu to Cys or Pen, and

[0039] ·an amide bond formed between R1 and carboxylic acid on the side chain of X12 or an amide bond formed between R1 and amino group on the side chain of X12;

[0040] wherein the bicyclic peptide inhibitors inhibit the binding of interleukin-23 (IL-23) with the IL-23 receptor (IL-23R) .

[0041] The present invention also relates to a bicyclic peptide inhibitor of the interleukin-23 receptor, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, wherein the bicyclic peptide inhibitor comprises the amino acid sequence of Formula (I) ;

[0042] wherein:

[0043] R1 is selected from the following groups that are unsubstituted or eachindependently substituted by one or more substituents C: wherein the substituent C is selected from halogen,  wherein m is an integer from 1 to 4,n is an integer from 0 to 4, r is an integer from 1 to 4;

[0044] Ra is selected from hydrogen or methyl;

[0045] X3 is selected from Cys,Pen or Abu;

[0046] X4 is selected from Asp or

[0047] X5 is selected from Thr,Ser or absent;

[0048] X6 is W (7-Me);

[0049] X7 is selected from Lys(Ac) , Lys(NMeAc) , Pro, X8 is selected from Pen or Cys;

[0050] X9 is selected from Phe or wherein R2 is selected from halogen, ethynyl, C1～C4 alkoxy, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy, N, N, N-trimethyl-5-ammoniumpentoxy, N, N-dimethyl-5-aminopentoxy or N, N, N-trimethyl-3-ammoniumpropoxy;

[0051] X10 is 2Nal;

[0052] X11 is selected from 4-amino-4-carboxy-tetrahydropyran (THP) , α-MeLys,

[0053] X12 is selected from Glu, Asp, Lys, D-Glu or D-Asp;

[0054] X13 is selected from Glu, Asp, Asn, Ala, Val, Ser, Thr, Arg, D-Ala, D-Asn, D-Asp, D-Glu, D-Ser, D-Thr, D-Arg,

[0055] X14 is 3Pal;

[0056] X15 is selected from

[0057] wherein:

[0058] the bicyclic peptide inhibitor of an interleukin-23 receptor is cyclized by forming the following bonds:

[0059] ·a disulfide bond between X3 and X8 formed by Cys to Cys, Pen to Pen; or thioether bond formed by Abu to Cys or Pen, and

[0060] ·an amide bond formed between R1 and carboxylic acid on the side chain of X12 or an amide bond formed between R1 and amino group on the side chain of X12;

[0061] wherein the bicyclic peptide inhibitors inhibit the binding of interleukin-23 (IL-23) with the IL-23 receptor (IL-23R) .

[0062] The present invention also relates to a bicyclic peptide inhibitor of the interleukin-23 receptor, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, wherein the bicyclic peptide inhibitor comprises the amino acid sequence of Formula (I) ;

[0063] wherein:

[0064] R1 is selected from

[0065] X3 is selected from Cys, Pen or Abu;

[0066] X4 is selected from Asn,

[0067] X5 is selected from Thr or absent;

[0068] Wherein, when X4 is selected from Asn,  X5 is Thr;

[0069] when X4 is X5 is absent;

[0070] X6 is W (7-Me) ;

[0071] X7 is selected from Lys (Ac) , Lys (NMeAc) , Pro,

[0072] X8 is selected from Pen or Cys;

[0073] X9 is wherein, R2 is selected from methoxyl, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy or N, N, N-trimethyl-5-ammonium pentoxyamino;

[0074] X10 is 2Nal;

[0075] X11 is selected from 4-amino-4-carboxy-tetrahydropyran (THP) ,

[0076] X12 is selected from Glu or Lys;

[0077] X13 is selected from Glu, Asn, Ala, Val, Thr,

[0078] X14 is 3Pal;

[0079] X15 is selected from

[0080] wherein:

[0081] the bicyclic peptide inhibitor of an interleukin-23 receptor is cyclized by forming the following bonds:

[0082] ·a disulfide bond between X3 and X8 formed by Cys to Cys, Pen to Pen; or a thioether bond formed by Abu to Cys or Pen, and

[0083] ·an amide bond formed between R1 and carboxylic acid on the side chain of X12 or an amide bond formed between R1 and amino group on the side chain of X12;

[0084] wherein the bicyclic peptide inhibitors inhibit the binding of interleukin-23 (IL-23) with the IL-23 receptor (IL-23R) .

[0085] The present invention also relates to a bicyclic peptide inhibitor of the interleukin-23 receptor, corresponding pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, comprising the following bicyclic peptide:

[0086] Table 1:

[0087] The present invention further relates to a bicyclic peptide inhibitor of the interleukin-23 receptor, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, including the following bicyclic peptides:

[0088] Table 2:

[0089] wherein the bicyclic peptide inhibitor inhibits the binding of interleukin-23 (IL-23) with the IL-23 receptor (IL-23R) .

[0090] The present invention also relates to pharmaceutical composition (s) , which comprises a bicyclic peptide inhibitor with an amino acid sequence of Formula (I) according to the present invention; its isomers, prodrugs, solvates, stable isotopic derivatives or pharmaceutically acceptable salts, and pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.

[0091] The present invention also relates to pharmaceutical composition (s) , which comprises a bicyclic peptide inhibitor with an amino acid sequence of Formula (I) according to the present invention; its isomers, prodrugs, solvates, stable isotopic derivatives or pharmaceutically acceptable salts, or uses of the pharmaceutical composition for preparation of a medicament, wherein the medicament is used to treat or prevent an IL-23 / IL23-R-mediated inflammatory disease, autoimmune inflammatory disease and / or a related disorder, such as psoriasis, psoriatic arthritis, ulcerative colitis, Crohn's disease, etc.

[0092] The present invention also relates to uses of a medicament for treating or preventing an IL-23  / IL23-R-mediated inflammatory disease, autoimmune inflammatory disease, and / or a related disorder, the disease and / or a related disorder is selected from: multiple sclerosis, asthma, rheumatoid arthritis, inflammation of the gut, inflammatory bowel diseases (IBDs) , Juvenile IBD, young adult IBD, Crohn’s disease, ulcerative colitis, Celiac disease (Non-tropical sprue) , microscopic colitis, collagenous colitis, eosinophilic gastroenteritis / esophagitis, colitis associated with radiotherapy or chemotherapy such as colitis associated with congenital immunodeficiency in leukocyte adhesion deficiency-1, sarcoidosis, Systemic Lupus Erythematosus, ankylosing spondylitis (axial spondyloarthritis) , psoriatic arthritis, psoriasis (such as plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, palmoplantar pustulosis, psoriasis vulgaris, or erythrodermic psoriasis) , atopic dermatitis, acne inversa, enteropathy associated with seronegative arthropathy, chronic granulomatous disease, glycogen storage disease type 1b, Hermansky-Pudlak syndrome, Chediak-Higashi syndrome, Wiskott-Aldrich syndrome, pouchitis, pouchitis secondary to proctocolectomy and ileoanal anastomosis, gastrointestinal cancer, pancreatitis, Insulin-dependent diabetes mellitus, mastitis, cholecystitis, cholangitis, primary biliary cirrhosis, virus-associated enteropathy, pericholangitis, chronic bronchitis, chronic sinusitis, asthma, uveitis, or graft-versus-host disease, comprising administering a therapeutically effective amount of the compound or its isomers, prodrugs, stable isotopic derivatives or pharmaceutically acceptable salts, or the pharmaceutical composition.

[0093] The present invention also relates to pharmaceutical composition (s) , which comprises a bicyclic peptide inhibitor with an amino acid sequence of Formula (I) according to the present invention; its isomers, prodrugs, solvates, stable isotopic derivatives or pharmaceutically acceptable salts, or uses of the pharmaceutical composition for preparation of a medicament, wherein the medicament is used to treat or prevent an IL-23 / IL23-R-mediated inflammatory disease, autoimmune inflammatory disease, and / or a related disorder, the disease and / or a related disorder is selected from: multiple sclerosis, asthma, rheumatoid arthritis, inflammation of the gut, inflammatory bowel diseases (IBDs) , Juvenile IBD, young adult IBD, Crohn’s disease, ulcerative colitis, Celiac disease (Non-tropical sprue) , microscopic colitis, collagenous colitis, eosinophilic gastroenteritis / esophagitis, colitis associated with Radiotherapy or chemotherapy such as colitis associated with congenital immunodeficiency in leukocyte adhesion deficiency-1, sarcoidosis, systemic lupus erythematosus, ankylosing spondylitis (axial spondyloarthritis) , psoriatic arthritis, psoriasis (such as plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, palmoplantar pustulosis, psoriasis vulgaris, or erythrodermic psoriasis) , atopic dermatitis, acne inversa, enteropathy associated with seronegative arthropathy, chronic granulomatous disease, glycogen storage disease type 1b, Hermansky-Pudlak syndrome, Chediak-Higashi syndrome, Wiskott-Aldrich syndrome, pouchitis, pouchitis secondary to proctocolectomy and ileoanal anastomosis, gastrointestinal cancer, pancreatitis, Insulin-dependent diabetes mellitus, mastitis, cholecystitis, cholangitis, primary biliary cirrhosis, virus-associated enteropathy, pericholangitis, chronic bronchitis, chronic sinusitis, asthma, uveitis, or graft-versus-host disease etc.

[0094] The present invention also relates to pharmaceutical composition (s) , which comprises a bicyclic peptide inhibitor with an amino acid sequence of Formula (I) according to the present invention; its isomers, prodrugs, solvates, stable isotopic derivatives or pharmaceutically acceptable salts, or uses of the pharmaceutical composition for preparation of a medicament, which is used in medicament for treating or preventing an IL-23 / IL23-R-mediated inflammatory disease, autoimmune inflammatory disease, and / or a related disorder, the disease or disorder is related to autoimmune inflammatory disease, and the autoimmune inflammatory disease is selected from ulcerative colitis (UC) , Crohn's disease (CD) , psoriasis (PsO) or psoriatic arthritis (PsA) .

[0095] Figure Description

[0096] Figure 1 shows the inhibitory effect of Compound 1 in an IL-23 induced rat skin inflammation model (administered intravenously) .

[0097] Figure 2 shows the inhibitory effects of Compound 1 and Compound 50 in an IL-23 induced rat skin inflammation model (administered orally) .Detailed Description

[0098] 1. GENERAL

[0099] The present invention relates to novel bicyclic peptide inhibitors of the interleukin-23 receptor (IL-23R) or pharmaceutically acceptable salts, solvates and / or other forms thereof. ; corresponding pharmaceutical compositions, methods and / or uses of the IL-23R inhibitors for treatment of autoimmune inflammation diseases and / or related disorders.

[0100] The present invention relates to bicyclic peptide inhibitors of an IL-23R. Compared to the corresponding monocyclic peptide inhibitor of IL-23R, the bicyclic peptide inhibitor of the present invention may exhibit enhanced properties such as lower in vivo clearance and longer in vivo half-life.

[0101] 2. DEFINITIONS

[0102] The scientific and technical terms used in this invention shall have the meanings that are commonly understood by those of ordinary skill in the art, unless otherwise defined.

[0103] When referring to a value, “about” includes+ / -10%of the stated value. For example, about 50%includes a range from 45%to 55%, while "about 20 moles" includes a range from 18 moles to 22 moles. Accordingly, when referring to a range, “about” refers to each of the stated values+ / -10%of the stated value of each end of the range. For example, a ratio of from about 1 to about 3 (weight / weight) includes a range of from 0.9 to 3.3.

[0104] The terms “Patient” or “subject” can be used interchangably, and refer to a living organism, including but not limited to a human subject suffering from or prone to a disease or condition that can be treated by administration of a pharmaceutical composition as provided herein. Further non-limiting examples may include, but is not limited to humans, other mammals, cattle, rat, mouse, dog, monkey, sheep, goat, cow, deer, horse and other mammalian animals and the like. In some aspects, the patient is human.

[0105] Unless otherwise defined, the names of naturally occurring and non-naturally occurring aminoacyl residues used herein follow the naming conventions suggested by the IUPAC Commission on the Nomenclature of Organic Chemistry and the IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature as set out in “Nomenclature of α-Amino Acids (Recommendations, 1974) ” Biochemistry, 14 (2) , (1975) . To the extent that the names and abbreviations of amino acids and aminoacyl residues employed in this specification and appended claims differ from those suggestions, they will be explained in detail. In the amino acid sequences representing the IL-23 inhibitor, the individual amino acids are separated by a hyphen “-” .

[0106] In the present invention, unless naturally occurring amino acids are referred to by their full name (e.g., alanine, etc. ) , they are designated by their conventional three-letter or single-letter abbreviations (e.g., Ala or A for alanine, Arg or R for arginine etc. ) . Unless otherwise indicated, three-letter and single-letter abbreviations of amino acids refer to the L-isomeric form of the amino acid in question. The term “L-amino acid, ” as used herein, refers to the “L” isomeric form of a peptide, and conversely the term “D-amino acid” refers to the “D” isomeric form of a peptide (e.g., (D) Asp or D-Asp; (D) Phe or D-Phe) . Amino acid residues in the D isomeric form can be substituted for any L-amino acid residue as long as the desired function is retained by the peptide. D-amino acids may be indicated as customary in lowercase letter when referred to using single-letter abbreviations. For example, L-arginine can be represented as “Arg” or “R” while D-arginine can be represented as “arg” or “r” . Similarly, L-lysine can be represented as “Lys” or “K, ” while D-lysine can be represented as “lys” or “k. ” Alternatively, a lower case “d” in front of an amino acid can be used to indicate that it is of the D isomeric form, for example D-lysine can be represented by dK. The term "gE" occurred in a modified amino acid residue, particular a modified lysine residue (such as KPEG2PEG2gEC20OH or KPEG6PEG6gEC18OH) refers to Isoglutamic acid.

[0107] In the case of less common or non-naturally occurring amino acids, unless they are referred to by their full name (e.g. sarcosine, ornithine etc. ) , frequently employed three-or fourcharacter codes are employed for residues thereof, including, Sar or Sarc (sarcosine, i.e. N-methylglycine) , Aib (α-aminoisobutyric acid) , γ-Glu (γ-glutamic acid) , Gaba (γ-aminobutyric acid) and the like.

[0108] Amino acids of the D-isomeric form may be located at any of the positions in the IL-23R inhibitors set forth herein (any one of X3-X15 appearing in the molecule) . In an aspect, amino acids of the D-isomeric form may be located only at any one or more of X4, X5, X12, X13 and optionally one additional position. In other aspects, amino acids of the D-isomeric form may be located only at any one or more of X13, and optionally one additional position.

[0109] As conventionally understood in the art, the peptide sequences in the present invention are shown proceeding from left to right, with the left end of the sequence being the N-terminus of the peptide and the right end of the sequence being the C-terminus of the peptide.

[0110] Among sequences in the present invention are sequences incorporating either an “-OH” moiety or an “-NH2” moiety at the carboxy terminus (C-terminus) of the sequence. Unless otherwise indicated, in such cases, an “-OH” or an “-NH2” moiety at the C-terminus of the sequence indicates a hydroxy group or an amino group, corresponding to the presence of a carboxylic acid (COOH) or an amido (CONH2) group at the C-terminus, respectively. In each sequence of the invention, a C-terminal “-OH” moiety may be substituted for a C-terminal “-NH2” moiety, and vice-versa.

[0111] Certain amino acids and other chemical moieties are modified when bound to another molecule. For example, an amino acid side chain may be modified when it forms an intramolecular bridge with another amino acid side chain, e.g., one or more hydrogen may be removed or replaced with a bond.

[0112] A “compound of the invention” , an “inhibitor of the present invention” , an “IL-23R inhibitor of the present invention” , a “compound described herein” , and a “compound herein” include the novel compounds disclosed herein, for example the compounds of any of the Examples, including compounds of Formula (I) such as those found in Table 1.

[0113] “Pharmaceutically effective amount” refers to an amount of a compound of the invention in a composition or combination thereof that provides the desired therapeutic or pharmaceutical result.

[0114] “Pharmaceutically acceptable” means the carrier (s) , diluent (s) , salts, or excipient (s) must be compatible with the other components or ingredients of the compositions of the present invention, in other words, that which is useful, safe, non-toxic, acceptable for pharmaceutical use. In accordance with the present invention, pharmaceutically acceptable means approved or approvable as is listed in the U.S. Pharmacopoeia or other generally recognized pharmacopoeia for use in animals, and more particularly, in humans.

[0115] “Pharmaceutically acceptable excipient” includes without limitation any adjuvant, carrier, excipient, glidant, sweetening agent, diluent, preservative, dye / colorant, flavor enhancer, surfactant, wetting agent, dispersing agent, suspending agent, stabilizer, isotonic agent, solvent, or emulsifier which has been approved by the United States Food and Drug Administration as being acceptable for use in humans or domestic animals.

[0116] “Absorption enhancer” refers to a component that improves or facilitates the mucosal absorption of a drug in the gastrointestinal tract, such as a permeation enhancer or intestinal permeation enhancer. As conventionally understood in the art, permeation enhancers (PEs) are agents aimed to improve oral delivery of therapeutic drugs with poor bioavailability. PEs can increase the paracellular and / or transcellular passage of drugs.

[0117] Pharmaceutical excipients that can increase permeation have been termed “absorption modifying excipients” (AMEs) . AMEs may be used in oral compositions, for example, as wetting agents (Sodium dodecyl sulfate) , antioxidants (e.g., EDTA) , and emulsifiers (e.g., polyethylene glycol glycerides) , and may be specifically included in compositions as PEs to improve bioavailability. PEs can be categorized as to how they alter barrier integrity via paracellular or transcellular routes. “Intestinal permeation enhancer (IPE) ” refers to a component that improves the bioavailability of a component. Suitable representative IPEs for use in the present invention, include, but are not limited to, various surfactants, fatty acids, medium chain glycerides, Steroid detergents, acylcarnitines and alkanoylcholines, N-acetylated α-amino acids and N-acetylated non-α-amino acids, and Deacetylated chitosan, and other mucoadhesive polymers, and the like. For example, a suitable IPE for use in the present invention may be sodium caprate (NaC10) , sodium octanoate (NaC8) or octanoate and decanoate polyethylene glycol glyceryl ester (Labrasol) .

[0118] “Composition” or “Pharmaceutical Composition” as used in the present invention is intended to encompass an invention or product comprising the specified active product ingredient (API) , which may include pharmaceutically acceptable excipients, carriers or diluents as described herein, such as in specified amounts defined throughout the invention. Compositions or Pharmaceutical Compositions result from combination of specific components, such as specified ingredients in the specified amounts as described herein.

[0119] Compositions or pharmaceutical compositions of the present invention may be in different pharmaceutically acceptable forms, which may include, but are not limited to a liquid composition, a tablet or matrix composition, a capsule composition, etc. and the like. When the composition is a tablet composition, the tablet may include, but is not limited to different layers, two or more different phases, including an internal phase and an external phase that can comprise a core. The tablet composition can also include but is not limited to one or more coatings.

[0120] “Solvate” as used herein, means a physical association of the compound of the present invention with one or more solvent molecules. This physical association involves varying degrees bonding, including hydrogen bonding. In some cases, the solvate can be isolated. The term "solvate" is intended to encompass both solution-phase and isolatable solvates. Non-limiting examples of suitable solvates include hydrates.

[0121] Pharmaceutically acceptable salts and tautomeric forms of the compounds described herein are also provided. “Pharmaceutically acceptable” or “physiologically acceptable” refer to compounds, salts, compositions, dosage forms and other materials which are useful in preparing a pharmaceutical composition that is suitable for veterinary or human pharmaceutical use.

[0122] The IL-23R inhibitors of the present invention, or their pharmaceutically acceptable salts or solvates may contain one or more asymmetric centers and may thus give rise to enantiomers, diastereomers, and other stereoisomeric forms that may be defined, in terms of absolute stereochemistry, as (R) -or (S) -or, as (D) -or (L) -for amino acids. The present invention is meant to include all such possible isomers, as well as their racemic and optically pure forms of the IL-23R inhibitors of the present invention. Optically active (+) and (-) , (R) -and (S) -, or (D) -and (L) -isomers may be prepared using chiral synthons or chiral reagents, or resolved using conventional techniques (for example, chromatography and fractional crystallization) . Conventional techniques for the preparation / isolation of individual enantiomers include chiral synthesis from a suitable optically pure precursor or resolution of the racemate (or the racemate of a salt or derivative) using, for example, chiral high pressure liquid chromatography (HPLC) . Likewise, all tautomeric forms are also intended to be included. Where compounds are represented in their chiral form, it is understood that the aspect encompasses, but is not limited to, the specific diastereomerically or enantiomerically enriched form. Where chirality is not specified but is present, it is understood that the aspect is directed to either the specific diastereomerically or enantiomerically enriched form; or a racemic or scalemic mixture of such compound (s) .

[0123] “Racemates” refer to a mixture of enantiomers. The mixture can include equal or unequal amounts of each enantiomer.

[0124] “Stereoisomer” and “stereoisomers” refer to compounds that differ in the chirality of one or more stereocenters. Stereoisomers include enantiomers and diastereomers. The compounds may exist in stereoisomeric form if they possess one or more asymmetric centers or a double bond with asymmetric substitution and, therefore, can be produced as individual stereoisomers or as mixtures. Unless otherwise indicated, the description is intended to include individual stereoisomers as well as mixtures. The methods for the determination of stereochemistry and the separation of stereoisomers are well-known in the art (see, e.g., Chapter 4 of Advanced Organic Chemistry, 4th ed., J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992) .

[0125] “Tautomer” refers to alternate forms of a compound that differ in the position of a proton, such as enol-keto and imine-enamine tautomers, or the tautomeric forms of heteroaryl groups containing a ring atom attached to both a ring -NH-and a ring =N-such as pyrazoles, imidazoles, benzimidazoles, triazoles, and tetrazoles.

[0126] Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly or conventionally understood by one of ordinary skill in the art. In the Chemical Arts, a dash at the front or end of a chemical group is a matter of convenience; chemical groups may be depicted with or without one or more dashes without losing their ordinary meaning. A wavy line drawn through a line in a structure indicates a point of attachment of a group. A dashed line indicates an optional bond. Unless chemically or structurally required, no directionality is indicated or implied by the order in which a chemical group is written or the point at which it is attached to the remainder of the molecule. For instance, the group “-SO2CH2-” is equivalent to “-CH2SO2-” and both may be connected in either direction. Similarly, an “arylalkyl” group, for example, may be attached to the remainder of the molecule at either an aryl or an alkyl portion of the group. A prefix such as “Cu-v” or (Cu-Cv) indicates that the following group has from u to v carbon atoms. For example, “C1-6 alkyl” and “C1-C6 alkyl” both indicate that the alkyl group has from 1 to 6 carbon atoms.

[0127] “Fatty acid” as used herein is an unbranched alkanoic acid of at least six carbons, for example, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, or more carbons, in length. The fatty acid can contain 1, 2, 3, or more carboxylic acid groups. The fatty acid can include other functional groups, such as but not limited to, amides and phenyl rings. Exemplary fatty acids include hexanoic acid, octanoic acid, decanoic acid, dodecanoic acid, tetradecanoic acid, hexadecanoic acid, octadecanoic acid, 1, 6-hexanedioic acid, 1, 8-octanedioic acid, 1, 10-decanedioic acid, 1, 12-dodecanedioic acid, 1, 14-tetradecanedioic acid, 1, 16-hexadecanedioic acid, and 1, 18-octadecanedioic acid.

[0128] In the present invention, the term "alkyl" refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group, including linear and branched groups of 1 to 20 carbon atoms, e.g., linear and branched groups that can be 1 to 18 carbon atoms, 1 to 12 carbon atoms, 1 to 8 carbon atoms, 1 to 6 carbon atoms, or 1 to 4 carbon atoms. Non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1, 1-dimethylpropyl, 1, 2-dimethylpropyl, 2, 2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1, 1, 2-Trimethylpropyl, 1, 1-dimethylbutyl, 1, 2-dimethylbutyl, 2, 2-dimethylbutyl, 1, 3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, and various branched isomers thereof. The alkyl group may be either optionally substituted or unsubstituted.

[0129] In the present invention, the term "cycloalkyl group" refers to a saturated monocyclic or polycyclic hydrocarbon group, comprising 3 to 12 ring atoms, which may, for example, be 3 to 12, 5 to 10, 3 to 10, 3 to 8 or 3 to 6 ring atoms. Non-limiting examples of cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, bicyclo [2, 2, 1] heptane, etc. The cycloalkyl group may be either optionally substituted or unsubstituted.

[0130] In the present invention, the term "heterocyclic group" refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic hydrocarbon group comprising, for example, 3 to 20 ring atoms, which may be 3 to 16, 3 to 12, 3 to 10, 3 to 8 or 4 to 6 ring atoms. One or more of the ring atoms are chosen from heteroatoms of nitrogen, oxygen, or S (O) m (where m is an integer 0 to 2) , but not the ring parts of-O-O-, -O-S-, or-S-S-, and the remaining ring atoms are carbon. Preferably comprising 3 to 10 ring atoms, of which 1 to 4 are heteroatoms, more preferably a heterocyclic ring comprising 3 to 8 ring atoms, more preferably including 4 to 6 ring atoms, preferably a 4-membered ring, a5-membered ring or a 6-membered ring; wherein, 1 to 4 are heteroatoms, preferably 1 to 3 are heteroatoms, preferably 1 to 2 are heteroatoms. Non-limiting examples of heterocyclic groups include oxacyclobutanyl, oxacyclocyclohexyl, azacyclobutanyl, morpholinyl, 2-morpholinyl, dihydropyrazolyl, etc. The heterocyclic group may be either optionally substituted or unsubstituted.

[0131] In the present invention, the term "aryl" refers to a 6 to 14-membered all-carbon monocyclic or fused polycyclic (that is, rings sharing adjacent pairs of carbon atoms) group, a polycyclic (that is, its rings with adjacent pairs of carbon atoms) group having a conjugatedπ-electron system, preferably 6 to 10 membered, such as phenyl and naphthyl, preferably phenyl. Aryl groups can be substituted or unsubstituted.

[0132] In the present invention, the term "heteroaryl" refers to a heteroaromatic system comprising 1 to 4 heteroatoms, 5 to 14 ring atoms, wherein the heteroatoms include oxygen, sulfur, and nitrogen. Preferably, the heteroaryl group comprises one to three heteroatoms, and the heteroatoms included comprise at least one nitrogen atom. The heteroaryl group is preferably 5 to 10 membered. It is preferred that the heteroaryl group be of 5 or 6 membered. Preferred heteroaryl groups such as pyrazolyl, imidazolyl, triazolyl (including 1, 2, 3-triazolyl, 1, 2, 4-triazolyl, etc. ) , thiazolyl, pyrazinyl, oxazolyl, isoxazolyl, pyridinyl, etc. The heteroaryl group may be either optionally substituted or unsubstituted.

[0133] In the present invention, the term "halogen" refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.

[0134] “Polyethylene glycol” or “PEG” is a polyether monovalent radical of general formula– (O-CH2-CH2) n-OH, or divalent radical of formula- (O-CH2-CH2) n-O-, wherein n is an integer greater than 1. When followed by a number, the PEG indicates the number of repeated units in the linking moiety. For instance, PEG3 can correspond with a divalent radical of formula- (O-CH2-CH2) 3-O-, while PEG8 can correspond with a monovalent radical of formula- (O-CH2-CH2) 8-OH.

[0135] PEG is prepared by polymerization of ethylene oxide and are commercially available over a range of molecular weights from 300 Da to 10,000,000 Da. Lower molecular weight PEGs are generally available as pure oligomers, referred to as monodisperse, uniform, or discrete. These are used in certain aspects of the present invention. In certain aspects, the PEG is PEG2, PEG3, PEG4, PEG5, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10, PEG11, PEGl2, PEGl 8, or PEG24. In certain aspects, the PEG is PEG2, PEG6, or PEG24.

[0136] “Treatment” or “treat” or “treating” as used herein refers to an approach for obtaining beneficial or desired results. For purposes of the present invention, beneficial or desired results include, but are not limited to, alleviation of a symptom and / or diminishment of the extent of a symptom and / or preventing a worsening of a symptom associated with a disease or condition. In one aspect, “treatment” or “treating” includes one or more of the following: (a) inhibiting the disease or condition (e.g., decreasing one or more symptoms resulting from the disease or condition, and / or diminishing the extent of the disease or condition) ; (b) slowing or arresting the development of one or more symptoms associated with the disease or condition (e.g., stabilizing the disease or condition, delaying the worsening or progression of the disease or condition) ; and (c) relieving the disease or condition, e.g., causing the regression of clinical symptoms, ameliorating the disease state, delaying the progression of the disease, increasing the quality of life, and / or prolonging survival.

[0137] “Therapeutically effective amount” or “effective amount” as used herein refers to the amount that is effective to elicit the desired biological or medical response, including the amount of a compound that, when administered to a subject for treating a disease, is sufficient to affect such treatment for the disease. The effective amount will vary depending on the compound, the disease, and its severity and the age, weight, etc., of the subject to be treated. The effective amount can include a range of amounts. As is understood in the art, an effective amount may be in one or more doses, i.e., a single dose or multiple doses may be required to achieve the desired treatment endpoint. An effective amount may be considered in the context of administering one or more therapeutic agents, and a single agent may be considered to be given in an effective amount if, in conjunction with one or more other agents, a desirable or beneficial result may be or is achieved. Suitable doses of any co-administered compounds may optionally be lowered due to the combined action (e.g., additive or synergistic effects) of the compounds.

[0138] “Co-administration” as used herein refers to administration of unit dosages of the compounds disclosed herein before or after administration of unit dosages of one or more additional therapeutic agents, for example, administration of the compound disclosed herein within seconds, or minutes of the administration of one or more additional therapeutic agents. For example, in some respects, a unit dose of a compound of the invention is administered first, followed within seconds or minutes by administration of a unit dose of one or more additional therapeutic agents. Alternatively, in other aspects, a unit dose of one or more additional therapeutic agents is administered first, followed by administration of a unit dose of a compound of the invention within seconds or minutes administered enterally or parenteral (usually by injection, infusion, or implantation, etc. ) .

[0139] “Systemically active” peptide drug therapy according to the present invention generally refers to treatment by means of a pharmaceutical composition comprising a peptide active ingredient, wherein said peptide resists immediate metabolism and / or excretion resulting in its exposure in various body tissues and organs, such as the cardiovascular, respiratory, gastrointestinal, nervous, or immune systems.

[0140] Systemic drug activity in the present invention also refers to treatment using substances that travel through the bloodstream, reaching and affecting cells in various body tissues and organs. Systemic active drugs are transported to their site of action and work throughout the body to attack the physiological processes that cause inflammatory diseases.

[0141] “Bioavailability” refers to the extent and rate at which the active moiety (drug or metabolite) enters systemic circulation, thereby accessing the site of action. Bioavailability of a drug is impacted by the properties of the dosage form, which depend partly on its design and manufacture.

[0142] “Digestive tract tissue” as used herein refers to all the tissues that comprise the organs of the alimentary canal. For example, only, and without limitation, “digestive tract tissue” includes tisues of the mouth, esophagus, stomach, small intestine, large intestine, duodenum, and anus.

[0143] 3. COMPOUNDS

[0144] The present invention relates to novel bicyclic peptide inhibitors of the interleukin-23 receptor (IL-23R) or pharmaceutically acceptable salts thereof.

[0145] To be specific, the present invention relates to a bicyclic peptide inhibitor compound of the interleukin-23 receptor (IL-23R) or a pharmaceutically acceptable salts thereof, where each compound structure is as identified in Table 1 of the present specification.

[0146] In one aspect, a bicyclic peptide inhibitor compound of the interleukin-23 receptor (IL-23R) compound, or a pharmaceutically acceptable salts thereof, has a structure of a compound in Table 1.

[0147] 4. SYNTHESIS

[0148] The compounds described herein may be synthesized by many techniques that are known to those skilled in the art. In certain aspects, monomer subunits are synthesized and purified using the techniques described in the accompanying Examples.

[0149] In some aspects, the present invention provides a method of producing a compound (or monomer subunit thereof) of the invention, comprising chemically synthesizing a peptide having an amino acid sequence described herein, including but not limited to any of the amino acid sequences set forth in the compounds of Formual (I) , Table 1 herein. In some aspects, methods of producing a compound further include cyclizing the compound precursor after the constituent subunits have been attached. In particular aspects, cyclization is accomplished via any of the various methods described herein.

[0150] The present invention may include, but is not limited to, polynucleotides and vectors (e.g., expression vectors) that encode a portion of the amino acid sequence of a compound described herein, for instance, in the accompanying Examples, Table 1.

[0151] The present invention further describes synthesis of bicyclic compounds described herein, such as the compounds of Formual (I) , and the compounds of Table 1. In some aspects, one or more of the amino acid residues or amino acid monomers are lipidated and then covalently attached to one another to form a compound of the invention.

[0152] In some aspects, one or more of the amino acid residues or amino acid monomers are covalently attached to one another and lipidated at an intermediate oligomer stage before attaching additional amino acids and cyclization to form a compound of the invention.

[0153] In some aspects, a cyclic peptide is synthesized and then bicyclized to form a compound of the invention. Illustrative synthetic methods are described in the Examples.

[0154] The present invention further describes synthesis of compounds described herein, such as the compounds of Formulas (I) . Illustrative synthetic methods are described in the Examples.

[0155] 5. PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS

[0156] The present invention relates to pharmaceutical composition which comprises an IL-23R inhibitor of the present invention.

[0157] The present invention includes pharmaceutical compositions comprising one or more inhibitors of the present invention and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent, or excipient.

[0158] The pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient may be a solid, semi-solid or liquid filler, diluent, encapsulating material, or formulation auxiliary of any type. Prevention of the action of microorganisms may be ensured by the inclusion of various antibacterial and antifungal agents, for example, paraben, chlorobutanol, phenol sorbic acid, and the like. It may also be desirable to include isotonic agents such as sugars, sodium chloride, and the like.

[0159] The pharmaceutical compositions may be administered orally, parenterally, intracistemally, intravaginally, intraperitoneally, intrarectally, topically (as by powders, ointments, drops, suppository, or transdermal patch) , by inhalation (such as intranasal spray) , ocularly (such as intraocularly) or buccally. The term “parenteral” as used herein refers to modes of administration which include intravenous, intramuscular, intraperitoneal, intrastemal, subcutaneous, intradermal, and intraarticular injection and infusion. Accordingly, in certain embodiments, the compositions are formulated for delivery by any of these routes of administration. A pharmaceutical composition may be formulated for and administered orally. A pharmaceutical composition may be formulated for and administered parenterally.

[0160] In particular aspects, an IL-23R inhibitor of the present invention, is suspended in a sustained-release matrix. A sustained-release matrix, as used herein, is a matrix made of materials (usually polymers) , which are degradable by enzymatic or acid-base hydrolysis or by dissolution. Once inserted into the body, the matrix is acted upon by enzymes and body fluids. A sustained-release matrix desirably is chosen from biocompatible materials such as liposomes, polylactides (polylactic acid) , polyglycolide (polymer of glycolic acid) , polylactide co-glycolide (copolymers of lactic acid and glycolic acid) polyanhydrides, poly (ortho) esters, polypeptides, hyaluronic acid, collagen, chondroitin sulfate, carboxylic acids, fatty acids, phospholipids, polysaccharides, nucleic acids, polyamino acids, amino acids (such as phenylalanine, tyrosine, isoleucine) , polynucleotides, polyvinyl propylene, polyvinylpyrrolidone and silicone. One embodiment of a biodegradable matrix is a matrix of one of either polylactide, polyglycolide, or polylactide co-glycolide (co-polymers of lactic acid and glycolic acid) .

[0161] As used herein, the term "pharmaceutically acceptable salt" refers to a salt or zwitterionic form of a compound or peptide of the invention, which is water soluble or oil soluble or dispersible, and which is suitable for the treatment of disease without unusual toxicity, irritation, and allergic reactions; It meets a reasonable benefit / risk ratio, and it is effective for its intended use. Salts can be prepared during the final isolation and purification of the compound or by separated reaction of an amine group with a suitable acid. "Pharmaceutically acceptable salts" include salts derived from inorganic or organic acids, the acids include, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, perchloric acid, phosphoric acid, formic acid, acetic acid, lactic acid, maleic acid, fumaric acid, succinic acid, tartaric acid, glycolic acid, salicylic acid, citric acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, benzoic acid, malonic acid, trifluoroacetic acid, trichloroacetic acid, naphthalene-2-sulfonic acid and the like. Other examples of pharmaceutically acceptable salts are described in Berge, et al., "Pharmaceutically acceptable salts" , J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19, and are obvious to pharmaceutical chemists. The salt is essentially non-toxic and can provide the desired pharmacokinetic properties, palatability, absorption, distribution, metabolism, or excretion.

[0162] Pharmaceutically acceptable salts of the present invention can be synthesized by general chemical methods.

[0163] In general, the preparation of a salt can be made by the reaction of a free base or acid with an equal chemical equivalent or an excess acid (inorganic acid or organic acid) or base in a suitable solvent or solvent composition.

[0164] The present invention relates to pharmaceutial compositions, comprisng an IL-23R inhibitor of the present invention or pharmaceutically acceptable salts, isomers, or a mixture thereof, in which from 1 to n hydrogen atoms attached to a carbon atom may be replaced by a deuterium atom or D, in which n is the number of hydrogen atoms in the molecule. As known in the art, the deuterium atom is a non-radioactive isotope of the hydrogen atom. Such compounds may increase resistance to metabolism, and thus may be useful for increasing the half-life of the compounds described herein or pharmaceutically acceptable salts, isomer, or a mixture thereof when administered to a mammal. See, e.g., Foster, “Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism, ” Trends Pharmacol. Sci., 5 (12) : 524-527 (1984) . Such compounds are synthesized by means well known in the art, for example by employing starting materials in which one or more hydrogen atoms have been replaced by deuterium.

[0165] Examples of isotopes that can be incorporated into the disclosed compounds also include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorous, fluorine, chlorine, and iodine, such as 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 123I, and 125I, respectively. Substitution with positron emitting isotopes, (such as 11C, 18F, 15O, and 13N) , can be useful in Positron Emission Topography (PET) studies for examining substrate receptor occupancy. Isotopically labeled compounds of Formula (I) , can generally be prepared by conventional techniques known to those skilled in the art or by processes analogous to those described in the Examples as set out below using an appropriate isotopically labeled reagent in place of the non-labeled reagent previously employed.

[0166] In some aspects, pharmaceutical compositions for parenteral injection comprise pharmaceutically acceptable sterile aqueous or nonaqueous solutions, dispersions, suspensions or emulsions, or sterile powders, for reconstitution into sterile injectable solutions or dispersions just prior to use. Examples of suitable aqueous and nonaqueous carriers, diluents, solvents or vehicles include water, ethanol, polyols (such as glycerol, propylene glycol, polyethylene glycol, and the like) , carboxymethylcellulose and suitable mixtures thereof, β-cyclodextrin, vegetable oils (such as olive oil) , and injectable organic esters (such as ethyl oleate) . For example, using coating materials such as lecithin, by the maintenance of the required particle size in the case of dispersions, and by the usage of surfactants, proper fluidity may be maintained. These compositions may also contain adjuvants such as preservative, wetting agents, emulsifying agents, and dispersing agents. Prolonged absorption of an injectable pharmaceutical form may be brought about by the inclusion of agents which delay absorption, such as aluminum monostearate and gelatin.

[0167] Injectable depot forms include those made by forming microencapsulated matrices of the peptide inhibitor in one or more biodegradable polymers such as polylactide-polyglycolide, poly (orthoesters) , poly (anhydrides) , and (poly) glycols, such as PEG. Depending upon the ratio of peptide to polymer and the nature of the particular polymer employed, the rate of release of the peptide inhibitor can be controlled. Depot injectable Formulations are also prepared by entrapping the peptide inhibitor in liposomes or microemulsions compatible with body tissues.

[0168] The injectable formulations may be sterilized, for example, by filtration through a bacterial-retaining filter, or by incorporating sterilizing agents in the form of sterile solid compositions which can be dissolved or dispersed in sterile water or other sterile injectable medium just prior to use.

[0169] Topical administration includes administration to the skin or mucosa, (including surfaces of the lung and eyes) . A pharmacologically acceptable and metabolizable lipid for topical lung administration. In addition to peptide inhibitors of the present invention, compositions of the present invention in liposomal form may also contain stabilizers, preservatives, excipients, etc. In certain embodiments, the lipid comprises phospholipids, including natural and synthetic phosphatidylcholine (lecithin) and serine. The method used to form liposomes is known in the art.

[0170] Pharmaceutical compositions suitable for parenteral administration in a method or use described herein may comprise sterile aqueous solutions and / or suspensions of the IL-23R inhibitors made isotonic with the blood of the recipient, generally using sodium chloride, glycerin, glucose, mannitol, sorbitol, and the like.

[0171] The present invention provides a pharmaceutical composition for oral delivery. Compositions and peptide inhibitors of the present invention may be prepared for oral administration according to any of the methods, techniques, and / or delivery vehicles described herein. Further, one having skill in the art will understand that the peptide inhibitors of the instant invention may be modified or integrated into a system or delivery vehicle that is not disclosed herein yet is well known in the art and compatible for use in oral delivery of peptides.

[0172] Formulations for oral administration may comprise adjuvants (e.g., resorcinols and / or nonionic surfactants such as polyoxyethylene oleyl ether and n-hexadecylpolyethylene ether) to artificially increase the permeability of the intestinal walls, and / or enzymatic inhibitors (e.g., pancreatic trypsin inhibitors, diisopropylfluorophosphate (DFF) or trasylol) to inhibit enzymatic degradation. In certain embodiments, the peptide inhibitor of a solid-type dosage form for oral administration can be mixed with at least one additive, such as sucrose, lactose, cellulose, mannitol, trehalose, raffmose, maltitol, dextran, starches, agar, alginates, chitins, chitosans, pectins, gum tragacanth, gum arabic, gelatin, collagen, casein, albumin, synthetic or semisynthetic polymer, or glyceride. These formulations for oral administration can also contain other type (s) of additives, e.g., inactive diluting agent, lubricant (such as magnesium stearate, paraben) , preserving agent (such as sorbic acid, ascorbic acid, alpha-tocopherol) , antioxidants (such as cysteine) , disintegrators, binders, thickeners, buffering agents, pH adjusting agents, sweetening agents, flavoring agents or perfuming agents.

[0173] In particular aspects, oral dosage forms or unit doses compatible for use with the peptide inhibitors of the present invention may include a mixture of peptide inhibitor and nondrug components or excipients, as well as other non-reusable materials that may be considered either as an ingredient or packaging. Oral compositions may include at least one of a liquid, a solid, and a semi-solid dosage form. In some embodiments, an oral dosage form is provided comprising an effective amount of peptide inhibitor, wherein the dosage form comprises at least one of a pill, a tablet, a capsule, a gel, a paste, a drink, a syrup, ointment, and suppository. In some instances, an oral dosage form is provided that is designed and configured to achieve delayed release of the peptide inhibitor in the subject’s small intestine and / or colon.

[0174] Tablets may contain excipients, glidants, fillers, binders and the like. Aqueous compositions are prepared in sterile form, and when intended for delivery by other than oral administration generally will be isotonic. Compositions may optionally contain excipients such as those set forth in the “Handbook of Pharmaceutical Excipients” (1986) . Excipients include ascorbic acid and other antioxidants, chelating agents such as EDTA, carbohydrates such as dextran, hydroxyalkylcellulose, hydroxyalkylmethylcellulose, stearic acid and the like. The pH of the compositions ranges from, for example, about 3 to about 11. The pH of the compositions may, for example, range from about 5 to about 7 or from about 7 to about 10.

[0175] An oral pharmaceutical composition of the present invention comprises the IL-23R inhibitor of the present invention, which comprises an enteric coating, an enteric coating was designed to delay the release of the IL-23R inhibitor in the small intestine. The present invention relates to a pharmaceutical composition comprising the IL-23R inhibitor and protease inhibitor of the present invention, such as aprotinin, in a delayed release drug formulation. A pharmaceutical composition (such as an oral pharmaceutical composition) may include an enteric coating that is soluble in gastric juice at a pH of about 5.0 or higher. This enteric coating may contain polymers with dissociative carboxyl groups, such as derivatives of cellulose, including hydroxypropyl methylcellulose phthalate, cellulose acetate phthalate, and cellulose acetate trimellitate, as well as similar derivatives of cellulose and other carbohydrate polymers.

[0176] The oral pharmaceutical composition comprising the IL-23R inhibitor of the present invention may include an enteric coating, which is designed to protect and release the pharmaceutical composition in a controlled manner in the lower gastrointestinal system of a subject, and to avoid systemic side effects. In addition to the enteric coating, an oral pharmaceutical composition of the IL-23R inhibitor of the present invention can also be encapsulated, coated, conjugated or otherwise associated in any compatible oral drug delivery system or component. For example, in some embodiments, the IL-23R inhibitor of the invention is provided in a lipid carrier system, which includes at least one of the following: polymer hydrogel, nanoparticles, microspheres, micelles and other lipid systems.

[0177] To overcome the peptide degradation of the IL-23R inhibitor of the invention in the small intestine, the pharmaceutical composition may include a hydrogel polymer carrier system containing the bicyclic peptide inhibitor of the invention, and the hydrogel polymer may protect the effect of the IL-23R inhibitor from proteolysis in the small intestine and / or colon. IL-23R inhibitors may also be formulated to be compatible with carrier systems, which may increase dissolution kinetics and enhance intestinal absorption of peptides. These methods include using liposomes, micelles, and nanoparticles to increase the GI tract penetration of peptides.

[0178] Various bioreactive systems may also be combined with one or more IL-23R inhibitors of the present invention to provide pharmaceutical agent for oral delivery. For example, the IL-23R inhibitor of the present invention may be used in combination with a biological reactive system, such as hydrogels and mucosal adhesive polymers with hydrogen bonding groups (such as PEG, poly (methacrylic acid) [PMAA] , cellulose, chitosan and alginate) , to provide therapeutic agent for oral administration.

[0179] In certain aspects, the pharmaceutical compositions and formulations may comprise the IL-23R inhibitor of the present invention and one or more absorption enhancers, enzyme inhibitors, or mucoadhesive polymers. In one embodiment, the absorption enhancer may be an intestinal permeability enhancer.

[0180] The IL-23R inhibitor of the present invention can be formulated in a formulation vehicle such as, for example, an emulsion, liposome, microsphere or nanoparticle.

[0181] The present invention provides a method for treating a subject with an IL-23R inhibitor of the present invention having an increased half-life. In one aspect, the present invention provides a peptide inhibitor that has a half-life of at least several hours to several days in vitro or in vivo (e.g., when administered to a human subject) , sufficient to administer a therapeutic effective amount once daily (q.d.) or twice daily (b.i.d.) .

[0182] When used in at least one of the treatment or delivery systems described herein, the peptide inhibitors of the present invention may be employed in pure form or in pharmaceutically acceptable salt forms if it exists.

[0183] The total daily dosage of the IL-23R inhibitor and compositions of the present invention can be determined by the attending physician within the scope of reasonable medical judgment. The specific therapeutically effective dosage level for any particular subject will depend on a variety of factors, including: a) the disorder being treated and the severity of the disorder; b) the activity of the specific compound employed; c) the specific composition employed, the age, body weight, general health, sex, and diet of the patient; d) the time of administration, route of administration, and rate of excretion of the specific peptide inhibitor employed; e) the duration of the treatment; f) drugs used in combination with or concurrently with the specific peptide inhibitor employed, and similar factors well-known in the medical arts.

[0184] In certain embodiments, the total daily dosage of the IL-23R inhibitor of the present invention to be administered to a human or other mammalian host in a single dose or divided doses may be, for example, an amount of 0.0001 mg / kg body weight to 300 mg / kg body weight per day or 1 mg / kg body weight to 300 mg / kg body weight per day.

[0185] The compositions may conveniently be presented in unit dosage form and can be prepared by any of the methods well known in the art of pharmacy. Techniques and compositions generally are found in Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA) . Such methods include the step of bringing into association the active ingredient with the carrier which constitutes one or more accessory ingredients. In general, the compositions are prepared by uniformly and intimately bringing into association the active ingredient with liquid carriers or finely divided solid carriers or both, and then, if necessary, shaping the product.

[0186] Compositions suitable for oral administration can be presented as discrete units such as capsules, cachets, or tablets each containing a predetermined amount of the active ingredient; as a powder or granules; as a solution or a suspension in an aqueous or non-aqueous liquid; or as an oil-in-water liquid emulsion or a water-in-oil liquid emulsion. The active ingredient may also be administered as a bolus, electuary or paste. The active ingredient may also be administered as a buccal or sublingual formulation. Buccal or sublingual formulations may comprise an active ingredient in a matrix that releases the active ingredient for transport across the buccal and / or sublingual membranes. The buccal or sublingual formulation may further include a rate controlling matrix that releases the active compounds at a predetermined rate for transport across the buccal and / or sublingual membranes. The buccal or sublingual formulation may further include one or more compounds selected from the group consisting of: (i) taste masking agents, (ii) enhancers, (iii) complexing agents, and mixtures thereof; and (iv) other pharmaceutically acceptable carriers and / or excipients. The enhancer may be a permeation enhancer.

[0187] A tablet is made by compression or molding, optionally with one or more accessory ingredients. Compressed tablets can be prepared by compressing in a suitable machine the active ingredient in a free-flowing form (such as a powder or granules) , optionally mixed with a binder, lubricant, inert diluent, preservative, surface active or dispersing agent. Molded tablets may be made by molding in a suitable machine a mixture of the powdered active ingredient moistened with an inert liquid diluent. The tablets can optionally be coated or scored and optionally are formulated to provide slow or controlled release of the active ingredient therefrom.

[0188] 6. NON-INVASIVE DETECTION OF INTESTINAL INFLAMMATION

[0189] The IL-23R inhibitors of the present invention may be used for detection, assessment, and diagnosis of intestinal inflammation by microPET imaging, wherein the peptide inhibitor is labeled with a chelating group or a detectable label, as part of a non-invasive diagnostic procedure. In certain embodiments, an IL-23R inhibitor of the present invention is conjugated with a bifunctional chelator. In certain embodiments, an IL-23R inhibitor of the present invention is radiolabeled. The labeled IL-23R inhibitor is then administered to a subject orally or rectally. In certain embodiments, an IL-23R bicyclic inhibitor is included in drinking water. Following uptake of an IL-23R bicyclic inhibitor, microPET imaging may be used to visualize inflammation throughout the subject’s bowels and digestive track.

[0190] 7. METHODS OF TREATMENTS AND / OR USES

[0191] The present invention relates to methods for treating a subject afflicted with a condition or indication associated with IL-23 or IL-23R (e.g., activation of the IL-23 / IL-23R signaling pathway) , where the method comprises administering to the subject an IL-23R inhibitor disclosed herein. In one aspect, the present invention relates to a method for treating a subject afflicted with a condition or indication characterized by inappropriate, deregulated, or increased IL-23 or IL-23R activity or signaling, comprising administering to the individual a peptide inhibitor of the present invention in an amount sufficient to inhibit (partially or fully) binding of IL-23 to an IL-23R in the subject. The inhibition of IL-23 binding to IL-23R may occur in particular organs or tissues of the subject, e.g., the stomach, small intestine, large intestine / colon, intestinal mucosa, lamina propria, Peyer’s Patches, mesenteric lymph nodes, or lymphatic ducts.

[0192] The present invention relates to methods comprising providing a peptide inhibitor described herein to a subject in need thereof. The subject in need thereof may be a subject that has been diagnosed with or has been determined to be at risk of developing a disease or disorder associated with IL-23 / IL-23R. The subject may be a mammal. The subject may be a specifically human.

[0193] The disease or disorder to be treated with an IL-23R inhibitor of the present invention may be autoimmune inflammation and related diseases and disorders, such as multiple sclerosis, asthma, rheumatoid arthritis, inflammation of the gut, inflammatory bowel diseases (IBDs) , Juvenile IBD, young adult IBD, Crohn’s disease, ulcerative colitis, sarcoidosis, systemic lupus erythematosus, ankylosing spondylitis (axial spondyloarthritis) , psoriatic arthritis, or psoriasis. In particular, the disease or disorder may be psoriasis (such as plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, palmoplantar pustulosis, psoriasis vulgaris, or erythrodermic psoriasis) , atopic dermatitis, acne inversa, ulcerative colitis, Crohn’s disease, Celiac disease (Non-tropical sprue) , enteropathy associated with seronegative arthropathy, microscopic colitis, collagenous colitis, eosinophilic gastroenteritis / esophagitis, colitis associated with Radiotherapy or chemotherapy such as colitis associated with congenital immunodeficiency in leukocyte adhesion deficiency-1, chronic granulomatous disease, glycogen storage disease type 1b, Hermansky-Pudlak syndrome, Chediak-Higashi syndrome, Wiskott-Aldrich syndrome, pouchitis, pouchitis secondary to proctocolectomy and ileoanal anastomosis, gastrointestinal cancer, pancreatitis, Insulin-dependent diabetes mellitus, mastitis, cholecystitis, cholangitis, primary biliary cirrhosis, virus-associated enteropathy, pericholangitis, chronic bronchitis, chronic sinusitis, asthma, uveitis, or graft-versus-host disease.

[0194] The present invention relates to a method or use of an IL-23R inhibitor for treating an inflammatory disease in a subject that includes administering to the subject a therapeutically effective amount of an IL-23R inhibitor of the present invention or pharmaceutically acceptable solvates or salts thereof, or a composition disclosed herein comprising an IL-23 inhibitor of the present invention. In some respects, the present invention provides a method of treating an inflammatory disease in a subject that includes administering to the subject a therapeutically effective amount of an IL-23R inhibitor of the present invention or pharmaceutically acceptable solvates or salts thereof, or a composition of the present invention. Suitable inflammatory diseases for treatment with a compound or pharmaceutically acceptable salts thereof, or a composition of the present invention, may include, but are not limited to inflammatory bowel disease (IBD) , Crohn’s disease (CD) , ulcerative colitis (UC) , psoriasis (PsO) , or psoriatic arthritis (PsA) and the like. The inflammatory disease to be treated may be inflammatory bowel disease (IBD) , Crohn’s disease, or ulcerative colitis. The inflammatory disease to be treated may be selected from psoriasis, or psoriatic arthritis. The inflammatory disease to be treated may be psoriasis. The inflammatory disease to be treated may be psoriatic arthritis. The inflammatory disease to be treated may be IBD.

[0195] The present invention relates to methods for treating an inflammatory disease in a subject in need thereof, comprising administering to the subject an IL-23R bicyclic inhibitor disclosed herein (e.g., a peptide inhibitor or the IL-23R of Formula (I) or any of Tables 1. The inflammatory disease may be IBD, Crohn’s disease, or ulcerative colitis. In an aspect, the IBD may be ulcerative colitis. In an aspect, the IBD may be Crohn’s disease. In an aspect, the inflammatory disease may be psoriasis (PsO) or psoriatic arthritis (PsA) .

[0196] The present invention relates to methods for treating inflammatory diseases in a subject in need thereof, which methods comprise administering to the subject an IL-23R inhibitor of formula (I) . The inflammatory disease may be IBD, Crohn's disease, or ulcerative colitis. In an aspect, the IBD may be ulcerative colitis. In an aspect, the IBD may be Crohn's disease. In an aspect, the inflammatory disease may be psoriasis (PsO) or psoriatic arthritis (PsA) .

[0197] The present invention relates to methods for treating inflammatory diseases in a subject in need thereof, which methods comprise administering to the subject an IL-23R inhibitor of formula (I) . The inflammatory disease may be IBD, Crohn's disease, or ulcerative colitis. In an aspect, the IBD may be ulcerative colitis. In an aspect, the IBD may be Crohn's disease. In an aspect, the inflammatory disease may be psoriasis (PsO) or psoriatic arthritis (PsA) .

[0198] The present invention relates to methods for treating inflammatory bowel disease (IBD) in subjects in need thereof, comprising administering the bicyclic peptide IL-23R bicyclic inhibitor of the present invention to the subjects. Inflammatory diseases may be IBD, Crohn's disease, or ulcerative colitis. IBD may be ulcerative colitis. IBD may be Crohn's disease. Inflammatory diseases may be psoriasis (PsO) or psoriatic arthritis (PsA) .

[0199] The present invention relates to methods of inhibiting IL-23 binding to an IL-23R on a cell, comprising contacting the IL-23R with a peptide inhibitor of the receptor disclosed herein. The cell may be a mammalian cell. The method may be performed in vitro or in vivo. Inhibition of binding may be determined by a variety of routine experimental methods and assays known in the art.

[0200] The present invention relates to a method of selectively inhibiting IL-23 or IL-23R signaling (or the binding of IL-23 to IL-23R) in a subject (e.g., in a subject in need thereof) , comprising providing to the subject a peptide inhibitor of the IL-23R described herein. The present invention includes and provides a method of selectively inhibiting IL-23 or IL-23R signaling (or the binding of IL-23 to IL-23R) in the GI tract of a subject (e.g., a subject in need thereof) , comprising providing to the subject a peptide inhibitor of the IL-23R of the present invention by oral administration. The exposure of GI tissues (e.g., small intestine or colon) to the administered peptide inhibitor may be at least 10-fold, 20-fold, least 50-fold, or 100-fold greater than the exposure (level) in the blood. In particular embodiments, the present invention includes a method of selectively inhibiting IL23 or IL23R signaling (or the binding of IL23 to IL23R) in the GI tract of a subject (e.g., a subject in need thereof) , comprising providing to the subject a peptide inhibitor, wherein the peptide inhibitor does not block the interaction between IL-6 and IL-6R or antagonize the IL-12 signaling pathway. In a further related embodiment, the present invention includes a method of inhibiting GI inflammation and / or neutrophil infiltration to the GI, comprising providing to a subject in need thereof a peptide inhibitor of the present invention. In some embodiments, methods of the present invention comprise providing a peptide inhibitor of the present invention (i.e., a first therapeutic agent) to a subject (e.g., a subject in need thereof) in combination with a second therapeutic agent. In certain embodiments, the second therapeutic agent is provided to the subject before and / or simultaneously with and / or after the peptide inhibitor is administered to the subject. In particular embodiments, the second therapeutic agent is an anti-inflammatory agent. In certain embodiments, the second therapeutic agent is a non-steroidal anti-inflammatory drug, steroid, or immune modulating agent. In certain embodiments, the method comprises administering to the subject a third therapeutic agent. In certain embodiments, the second therapeutic agent is an antibody that binds IL-23 or IL-23R.

[0201] The present invention relates to methods of inhibiting IL-23 signaling by a cell, comprising contacting the IL-23R with a peptide inhibitor described herein. In certain embodiments, the cell is a mammalian cell. In particular embodiments, the method is performed in vitro or in vivo. In particular embodiments, the inhibition of IL-23 signaling may be determined by measuring changes in phospho-STAT3 levels in the cell.

[0202] In any of the foregoing methods, IL-23R inhibitor administration to a subject may be conducted orally, but other routes of administration are not excluded. Other routes of administration include, but are not limited to, parenteral, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, transdermal, topical, buccal or ocular routes. Dosages of a peptide inhibitor or the IL-23R described herein (e.g., a compound of Formula (I) or any of Tables 1 or salts or solvates thereof to be administered to a subject may be determined by a person of skill in the art taking into account the disease or condition being treated including its severity, and factors including the age weight, sex, and the like. Exemplary dose ranges include, but are not limited to, from about 1 mg to about 1000 mg, or from about 1 mg to about 500 mg, from about 1 mg to about 100 mg, from about 10 mg to about 50 mg, from about 20 mg to about 40 mg, or from about 20 mg to about 30 mg. A dose range of a peptide inhibitor or the IL-23R described herein may be from about 600 mg to about 1000 mg. A dose range of a peptide inhibitor or the IL-23R described herein may be from about 300 mg to about 600 mg. A dose range of a peptide inhibitor or the IL-23R described herein may be from about 5 mg to about 300 mg. A dose range of a peptide inhibitor or the IL-23R described herein may be from about 25 mg to about 150 mg. A dose range of a peptide inhibitor or the IL-23R described herein may be from about 25 mg to about 100 mg. A dose range of a peptide inhibitor or the IL-23R described herein may be present in a dose range of from about 1 mg to about 100 mg. A dose range of a peptide inhibitor or the IL-23R described herein may be present in a dose range of from about 20 mg to about 40 mg. A dose range of a peptide inhibitor or the IL-23R described herein may be present in a dose range of from about 20 mg to about 30 mg.

[0203] 8. Example

[0204] The following examples illustrate the invention. These examples are not intended to limit the scope of the present invention, but rather to provide guidance to the skilled artisan to prepare and use the compounds, compositions, and methods of the present invention. While particular aspects of the present invention are described, the skilled artisan will appreciate that various changes and modifications can be made without departing from the spirit and scope of the invention.

[0205] Some abbreviations useful in describing the invention are defined below in the following Table 3.

[0206] Table 3. Amino Acid Abbreviations

[0207] General Peptide Synthetic Procedure 1

[0208] The peptides were assembled using coupling conditions of ethyl 2-oxime cyanoacetate (Oxyma) and N, N'-diisopropylcarbodiimide (DIC) . For some amino acids, PyBOP (benzotriazol-1-yl-oxy-trispyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate) and DIEA (N, N-diisopropylethylamine) conditions were employed for coupling. Rink Amide MBHA resin (100-200 mesh, 0.5-0.7 mmol / g) was used for peptide with C-terminal amides and pre-loaded CTC Resin with Ν-α-Fmoc protected amino acid was used for peptide with C-terminal acids. The coupling reagents (Oxyma and DIC premixed) were prepared at 100 mmol concentration. Based on solid-phase synthesis and medicinal chemistry optimization, the present invention's bicyclic peptide inhibitors are screened to identify those with excellent binding and / or inhibitory properties.

[0209] Preparation of Certain Modified Amino Acids

[0210] Certain modified amino acids appear in the sequences of the IL-23R inhibitors described herein. Those modified amino acids, and their precursors suitable for synthesizing the inhibitors described herein may be obtained from commercial sources, synthesized as described in the art, or by any suitable route. The synthesis of certain additional modified amino acids is described below.

[0211] Example 1: Synthesis of compounds

[0212] Intermediate 1

[0213] 4- (4- ( (tert-Butoxycarbonyl) amino) methyl) piperidin-1-yl) butyric acid

[0214] 4- (4- ( (tert-Butoxycarbonyl) amino) methyl) piperidin-1-yl) methyl butyrate

[0215] A mixture of compounds 4- (tert-butoxycarbonyl) aminomethyl) piperidine 1-1 (0.86 g, 4.00 mmol) , methyl 4-bromobutyrate (1.09 g, 6.00 mmol) , cesium carbonate (1.95 g, 6.00 mmol) , and N, N-dimethylformamide (15 mL) were heated to 50 ℃ and stirred for 2 hours. After cooled to room temperature, the reaction mixture was diluted with ethyl acetate (50 mL) , washed with brine (50 mL×2) . The organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was evaporated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column separation (30-70%petroleum ether / ethyl acetate) to obtain the target product 4- (4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) piperidin-1-yl) methyl butyrate 1-2 (0.71 g) , yield: 57%.

[0216] MS m / z (ESI) : 315 [M+1] ;

[0217] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ4.60 (brs, 1H) , 3.67 (s, 3H) , 3.02-2.88 (m, 4H) , 2.35-2.31 (m, 4H) , 1.93-1.77 (m, 4H) , 1.71-1.65 (m, 2H) , 1.44 (s, 9H) , 1.28-1.19 (m, 3H) .

[0218] Step 2

[0219] 4- (4- ( (tert-Butoxycarbonyl) amino) methyl) piperidin-1-yl) butyric acid

[0220] Compound 4- (4- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) piperidin-1-yl) methyl butyrate 1-2 (0.71 g, 2.30 mmol) was dissolved in a 2 M lithium hydroxide methanol / tetrahydrofuran / water (volume ratio 1 / 1 / 1) solution (9 mL) , and the mixture was reacted at room temperature for 2 hours. After being concentrated under reduced pressure, the residue was dissolved in water (10 mL) , adjusted to a pH of about 5 with dilute hydrochloric acid (1 M) ,extracted with ethyl acetate (20 mL×2) , and the organic phases were combined and washed with brine (20 mL) , dried with anhydrous sodium sulfate, and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure to obtain the target product 4- (4- ( (tert-Butoxycarbonyl) amino) methyl) piperidin-1-yl) butyric acid intermediate 1 (0.48 g) . Yield: 71%. MS m / z (ESI) : 301 [M+1] ;

[0221] Intermediate 2

[0222] (S) -4- (2- ( ( (tert-Butoxycarbonyl) amino) methyl) pyrrolidin-1-yl) butyric acid

[0223] (S) -4- (2- ( ( (tert-Butoxycarbonyl) amino) methyl) pyrrolidin-1-yl) methyl butyrate

[0224] A mixture of compounds (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) pyrrolidine 2-1 (0.20 g, 1.00 mmol) , methyl 4-bromobutyrate (0.36 g, 2.00 mmol) , cesium carbonate (0.65 g, 2.00 mmol) , and tetrahydrofuran (5 mL) were heated to 40 ℃ and stirred for 6 hours. After cooled to room temperature, the reaction mixture was diluted with ethyl acetate (15 mL) , washed with brine (15 mL×2) , the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was evaporated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column separation (30-70%petroleum ether / ethyl acetate) to obtain the target product (S) -4- (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) pyrrolidin-1-yl) methyl butyrate 2-2 (0.18 g) , yield: 60%. MS m / z (ESI) : 301 [M+1] ;

[0225] Step 2

[0226] (S) -4- (2- ( (tert-Butoxycarbonyl) amino) methyl) pyrrolidin-1-yl) butyric acid

[0227] Compound (S) -4- (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) pyrrolidin-1-yl) methyl butyrate 2-2 (0.18 g, 0.60 mmol) was dissolved in a 2 M lithium hydroxide methanol / tetrahydrofuran / water (volume ratio 1 / 1 / 1) solution (3 mL) , and reacted at room temperature for 2 hours. After being concentrated under reduced pressure, the residue was dissolved in water (5 mL) , adjusted to a pH of about 5 with dilute hydrochloric acid (1 M) , and extracted with ethyl acetate (10 mL×2) . The combined organic phase was washed with brine (10 mL) , dried with anhydrous sodium sulfate and filtered, and the filtrate was evaporated under reduced pressure to obtain the target product (S) -4- (2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) methyl) pyrrolidin-1-yl) butyric acid intermediate 2 (0.15 g) . Yield: 85%.

[0228] MS m / z (ESI) : 287 [M+1] ;

[0229] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ5.68 (s, 1H) , 3.49-3.27 (m, 3H) , 3.18-3.01 (m, 2H) , 2.85-2.80 (m, 1H) , 2.63-2.42 (m, 3H) , 2.09-1.99 (m, 1H) , 1.92-1.69 (m, 5H) , 1.40 (s, 9H) .

[0230] Intermediate 3

[0231] 5- (3- ( ( (tert-Butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5- (2-carboxyethyl) phenoxy) -N, N, N-trimethylpentan-1-aminium

[0232] 3-Bromo-5- ( (methylamino) methyl) phenol

[0233] 3-Bromo-5-hydroxybenzaldehyde 3-1 (10.00 g, 0.05 mol) , methylamine hydrochloride (6.70 g, 0.10 mol) , and triethylamine (12.60 g, 0.12 mol) were dissolved in methanol (200 mL) . Sodium borohydride (3.00 g,0.08 mol) was added to the above mixture at 0℃, and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction solution was quenched with water (200 mL) , and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (50 mL x 3) after most of the methanol was removed by rotary evaporateion under reduced pressure. The organic phase was washed with brine (100 mL) , then dried with anhydrous sodium sulfate, filtered to remove the desiccant, and evaporated under reduced pressure to obtain the crude target product 3-bromo-5- ( (methylamino) methyl) phenol 3-2 (10.00 g) . MS m / z (ESI) : 216 [M+1] ;

[0234] Step 2

[0235] (3-Bromo-5-hydroxybenzyl) (methyl) tert-butyl carbamate

[0236] 3-Bromo-5- ( (methylamino) methyl) phenol 3-2 (10.00 g, 50 mmol) and di tert-butyl dicarbonate (10.80 g, 50.00 mmol) were dissolved in tetrahydrofuran (150 mL) , and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. The solvent was removed by rotary evaporateion under reduced pressure, and the residue was dissolved in water (200 mL) . The aqueous phase was extracted with ethyl acetate (50 mL×3) , and the combined organic phases were washed with saturated brine (50 mL×2) . The organic phase was dried with anhydrous sodium sulfate, filtered to remove the desiccant, desolventized under reduced pressure to obtain the crude product. The residue was purified by chromatography on a silica gel column (petroleum ether / ethyl acetate=100: 1-5: 1) to obtain the target product (3-bromo-5-hydroxybenzyl) (methyl) tert-butyl carbamate 3-3 (15.00 g) . Yield: 95%.

[0237] MS m / z (ESI) : 260 [M-55] ;

[0238] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ6.94 (s, 1H) , 6.85 (s, 1H) , 6.66 (s, 1H) , 4.31 (s, 2H) , 2.81 (s, 3H) , 1.48 (s, 9H) .

[0239] Step 3

[0240] 3- (3- ( (tert-Butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5-hydroxyphenyl) methyl acrylate

[0241] (3-Bromo-5-hydroxybenzyl) (methyl) tert-butyl carbamate 3-3 (12.50 g, 39.70 mmol) , methyl acrylate (17.10 g, 198.80 mmol) , palladium acetate (1.78 g, 7.95 mmol) , sodium acetate (3.60 g, 43.90 mmol) , and triphenylphosphine (11.40 g, 43.50 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (150 mL) , and the reaction mixture was stirred at 90℃for 16 hours. The residue was dissolved in water (600 mL) , and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (100 mL×3) . The combined organic phases were washed with brine (200 mL×2) . The organic phase was dried with anhydrous sodium sulfate, filtered to remove the desiccant, desolventized under reduced pressure to obtain the crude product, which was purified by chromatography on a silica gel column (petroleum ether / ethyl acetate=100: 1～5: 1) to obtain the target product 3- (3- ( (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5-hydroxyphenyl) methyl acrylate 3-4 (9 g) . Yield: 70%.

[0242] MS m / z (ESI) : 266 [M-55] ;

[0243] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.59 (d, J=15.8 Hz, 1H) , 6.91 (s, 1H) , 6.87 (s, 1H) , 6.78 (s, 1H) , 6.37 (d, J=16.0 Hz, 1H) , 4.37 (s, 2H) , 3.80 (s, 3H) , 2.81 (s, 3H) , 1.48 (d, J=12.0 Hz, 9H) .

[0244] Step 4

[0245] 3- (3- ( (tert-Butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5-hydroxyphenyl) methyl propionate

[0246] 3- (3- ( (tert-Butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5-hydroxyphenyl) methyl acrylate 3-4 (9.00 g, 28.00 mmol) was dissolved in methanol (150 mL) , and palladium on carbon (10%loaded on activated carbon) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours under hydrogen (15 psi) . The mixture was filtered to remove palladium on carbon, and evaporated under reduced pressure to obtain the crude target product 3- (3- ( (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5-hydroxyphenyl) methyl propionate 3-5 (9.00 g) .

[0247] MS m / z (ESI) : 224 [M-99] ;

[0248] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ6.62-6.60 (m, 2H) , 6.55 (s, 1H) , 4.32 (s, 2H) , 3.67 (s, 3H) , 2.95-2.70 (m, 5H) , 2.59 (m, 2H) , 1.48 (s, 9H) .

[0249] Step 5

[0250] 3- (3- ( (5-Bromopentyl) oxy) -5- ( (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) phenyl) methyl propionate

[0251] 3- (3- ( (tert-Butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5-hydroxyphenyl) methyl propionate 3-5 (9.00 g, 28.00 mmol) , 1, 5-dibromopentane (25.50 g, 0.11 mol) , potassium carbonate (7.73 g, 56.00 mmol) were dissolved in acetonitrile (100 mL) , and the reaction mixture was stirred at 65℃ for 16 hours. The organic solvent was removed by rotary evaporateion under reduced pressure, and the residue was dissolved in water (200 mL) . The aqueous phase was extracted with ethyl acetate (50 mL×3) , and the combined organic phases were washed with brine (50 mL×2) . The organic phase was dried with anhydrous sodium sulfate, filtered to remove the desiccant, evaporated under reduced pressure to obtain the crude product and purified by chromatography on a silica gel column (petroleum ether / ethyl acetate=100: 1-10: 1) to obtain the target product 3- (3- ( (5-bromopentyl) oxy) -5- ( (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) phenyl) methyl propionate 3-6 (9.60 g) . Yield: 73%.

[0252] MS m / z (ESI) ; 372 [M-99] ;

[0253] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ6.64-6.62 (m, 3H) , 4.35 (s, 2H) , 3.94 (t, J=6.4 Hz, 2H) , 3.67 (s, 3H) , 3.44 (t, J=6.8 Hz, 2H) , 2.90 (t, J=7.8 Hz, 2H) , 2.82 (m, 3H) , 2.61 (t, J=7.8 Hz, 2H) , 1.97-1.90 (m, 2H) , 1.87-1.73 (m, 2H) , 1.71-1.56 (m, 2H) , 1.48 (s, 9H) .

[0254] Step 6

[0255] 5- (3- ( ( (tert-Butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5- (3-methoxy-3-propionyl) phenoxy) -N, N, N-trimethylpentyl-1-ammonium

[0256] 3- (3- ( (5-Bromopentyl) oxy) -5- ( (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) phenyl) methyl propionate 3-6 (9.60 g, 20.40 mmol) and trimethylamine (30.6 mL, 61.2 mmol) were dissolved in acetonitrile (100 mL) , and the reaction mixture was stirred at 50℃ for 16 hours. The organic solvent was removed by rotary evaporation under reduced pressure, and the residue was dissolved in water (200 mL) . The aqueous phase was extracted with ethyl acetate (50 mL×3) , and the combined organic phases were washed with brine (50 mL×2) . The organic phase was dried with anhydrous sodium sulfate, filtered to remove the desiccant, and evaporated under reduced pressure to obtain the crude target product 5- (3- ( ( (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5- (3-methoxy-3-propionyl) phenoxy) -N, N, N-trimethylpentyl-1-ammonium 3-7 (9.6 g) . MS m / z (ESI) : 451 [M] ;

[0257] Step 7

[0258] 5- (3- ( ( (tert-Butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5- (2-carbonylethyl) phenoxy) -N, N, N-trimethylpentyl-1-ammonium

[0259] 5- (3- ( ( (tert-Butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5- (3-methoxy-3-propionyl) phenoxy) -N, N, N-trimethylpentyl-1-ammonium 3-7 (9.60 g, 20.40 mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (20 mL) , 4 M lithium hydroxide aqueous solution (20 mL) was added. The reaction solution was stirred at room temperature for 1 hour. The organic solvent was concentrated under reduced pressure. The residue was adjusted to pH about 5 with 1 M hydrochloric acid and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (50 mL×3) , and the combined organic phases were washed with brine (50 mL×2) . The organic phase was dried with anhydrous sodium sulfate, filtered to remove the desiccant, and evaporated under reduced pressure to obtain the crude product. The residue was purified by Prep-HPLC to obtain the target product 5- (3- ( ( (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) -5- (2-carbonylethyl) phenoxy) -N, N, N-trimethylpentyl-1-ammonium intermediate 3 (10.00 g) .

[0260] MS m / z (ESI) : 437 [M] ;

[0261] 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ6.71 (s, 1H) , 6.68 (s, 1H) , 6.61 (s, 1H) , 4.36 (s, 2H) , 4.00 (t, J=6.4 Hz, 2H) , 3.40-3.32 (m, 2H) , 3.13 (s, 9H) , 2.89-2.85 (m, 2H) , 2.81 (s, 3H) , 2.58 (t, J=7.6 Hz, 2H) , 1.90-1.83 (m, 4H) , 1.61-1.53 (m, 2H) , 1.47 (s, 9H) .

[0262] The synthesis of intermediates 4-5 is following synthesis process of intermediate 3.

[0263] Intermediate 4

[0264] 5- (3- ( ( (tert-Butoxycarbonyl) amino) methyl) -5- (2-carboxyethyl) phenoxy) -N, N, N-trimethylpentan-1-aminium

[0265] MS m / z (ESI) : 423 [M] ;

[0266] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ6.66-6.63 (m, 3H) , 4.06 (d, J=6.0 Hz, 2H) , 3.95 (t, J=6.2 Hz, 2H) , 3.35-3.31 (m, 2H) , 3.07 (s, 9H) , 2.76 (t, J =7.6 Hz, 2H) , 2.51 (t, J=7.6 Hz, 2H) , 1.78-1.71 (m, 4H) , 1.47-1.33 (m, 11H) .

[0267] Intermediate 5

[0268] 3- (3- ( ( (tert-Butoxycarbonyl) amino) methyl) -5- ( (5- (dimethylamino) pentyl) oxy) phenyl) propanoic acid

[0269] MS m / z (ESI) : 409 [M+1] ;

[0270] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ6.65-6.62 (m, 3H) , 4.05 (d, J=6.0 Hz, 2H) , 3.96-3.91 (m, 2H) , 3.10-3.01 (m, 2H) , 2.83-2.67 (m, 8H) , 2.55-2.44 (m, 2H) , 1.79-1.61 (m, 4H) , 1.50-1.33 (m, 11H) .

[0271] Intermediate 6

[0272] (S) -5- ( ( ( (9H-Fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) -5-carboxy-N, N, N-trimethylhexan-1-aminium

[0273] (S) -2- ( ( (9H-Fluoro-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) -6- (dimethylamino) -2-methylhexanoic acid (synthesis reference WO2024003313 A1) (0.50 g, 1.22 mmol) , N, N-diisopropylethylamine (0.39 g, 3.66 mmol) , acetonitrile (15 mL) and methanol (15 mL) were mixed, and the mixture was stirred at 0 ℃ for 10 minutes, then added with iodomethane (1.73 g, 12.20 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 15 minutes, and the solution was evaporated under reduced pressure to obtain the crude product, which was directly used in the next step without purification. MS m / z (ESI) : 425 [M] ;

[0274] Intermediate 7

[0275] (S) -N, N, N, 2, 2, 8-Hexamethyl-4, 7, 10-trioxo-6- (pyridin-3-ylmethyl) -3, 14, 17-trioxa-5, 8, 11-triazanonadecan-19-ammonium chloride

[0276] (2- (2- (2-Dimethylaminoethoxy) ethoxy) ethyl) tert-butyl carbamate

[0277] (2- (2- (2-Aminoethoxy) ethoxy) ethyl) tert-butyl carbamate 7-1 (2.48 g, 10.00 mmol) was dissolved in methanol (30 mL) and 36%aqueous formaldehyde solution (10.00 g) . The mixture was stirred at room temperature for 5 minutes, cooled down to 0℃ in an ice bath. Sodium cyanoborohydride was added (6.30 g, 100 mmol) , slowly warmed to room temperature and reacted for 3 hours. The reaction mixture was quenched with 20 mL of saturated aqueous ammonium chloride solution, and methanol was removed by vacuum concentration. The mixture was extracted with dichloromethane (30 mL×4) , and the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and purified by column chromatography (dichloromethane: methanol=30: 1) to obtain the target compound (2- (2- (2-dimethylaminoethoxy) ethoxy) ethyl) tert-butyl carbamate 7-2 (2.20 g) with a yield of 80%.

[0278] MS m / z (ESI) : 277 [M+1] ;

[0279] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ5.10-5.08 (m, 1H) , 3.83-3.63 (m, 6H) , 3.57-3.54 (m, 2H) , 3.32-3.30 (m, 2H) , 3.00-2.95 (m, 2H) , 2.66 (s, 6H) , 1.45 (s, 9H) .

[0280] Step 2

[0281] N, N, N, 2, 2-Pentamethyl-4-Oxo-3, 8, 11-Trioxa-5-Azatridecane-13-Ammonium Iodide

[0282] (2- (2- (2-Dimethylaminoethoxy) ethoxy) ethyl) tert-butyl carbamate 7-2 (2.20 g, 7.90 mmol) was dissolved in acetonitrile (10 mL) and tetrahydrofuran (20 mL) . Iodomethane (3.36 g, 23.80 mmol) was added and the mixture was heated in an oil bath to 70 ℃ for 18 hours. Moreiodomethane (3.36 g, 23.80 mmol) was added and it was continued to react at 70℃ for 18 hours. The mixture was cooled to room temperature, added with N, N-diisopropylethylamine (300 mg) and stirred for2 hours. The reaction solution was directly concentrated under reduced pressure to obtain the target compound N, N, N, 2, 2-pentamethyl-4-oxo-3, 8, 11-trioxa-5-azatridecane-13-ammonium iodide 7-3 (3.6 g, crude) .

[0283] MS m / z (ESI) : 291 [M] ;

[0284] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ6.84-6.81 (m, 1H) , 3.86-3.83 (m, 2H) , 3.62-3.52 (m, 8H) , 3.40-3.36 (m, 2H) , 3.12-3.11 (m, 9H) , 1.37 (s, 9H) .

[0285] Step 3

[0286] 2- (2-Aminoethoxy) ethoxy-N, N, N-trimethylethoxy-1-ammonium chloride hydrochloride

[0287] N, N, N, 2, 2-Pentamethyl-4-oxo-3, 8, 11-trioxa-5-azatridecane-13-ammonium iodide 7-3 (3.50 g crude, 7.90 mmol) was dissolved in dioxane (10 mL) , and hydrogen chloride dioxane solution (4 M, 20 mL) was added. The reaction was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction solution was concentrated under reduced pressure and freeze-dried to obtain the target compound 2- (2-aminoethoxy) ethoxy-N, N, N-trimethylethoxy-1-ammonium chloride hydrochloride 7-4 (2.80 g, crude) . MS m / z (ESI) : 191 [M] ;

[0288] Step 4

[0289] N, N, N, 2, 2, 5-Hexamethyl-4, 7-dioxo-3, 11, 14-trioxa-5, 8-diazahexadecane-16-ammonium chloride

[0290] 2- (2-Aminoethoxy) ethoxy-N, N, N-trimethylethoxy-1-ammonium chloride hydrochloride 7-4 (2.5 g, 7.2 mmol) and 2- (tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) acetic acid (1.36 g, 7.2 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (25 mL) Triethylamine (1.45 g, 14.4 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. O- (7-azabenzotriazole-1-yl) -N, N, N', N'-tetramethylurea hexafluorophosphate (3.28 g, 8.6 mmol) was added and the mixture was reacted at room temperature for 30 minutes. The reaction solution was directly purified by Prep-HPLC to obtain the target compound N, N, N, 2, 2, 5-Hexamethyl-4, 7-dioxo-3, 11, 14-trioxa-5, 8-diazahexadecane-16-ammonium chloride 7-5 (1.85 g) , yield 64%. MS m / z (ESI) : 362 [M] ;

[0291] Step 5

[0292] N. N, N-Trimethyl-4-oxo-8, 11-dioxa-2, 5-diazatridecane-13-ammonium chloride hydrochloride

[0293] N, N, N, 2, 2, 5-Hexamethyl-4, 7-dioxo-3, 11, 14-trioxa-5, 8-diazahexadecane-16-ammonium chloride 7-5 (1.85 g, 4.60 mmol) was dissolved in dioxane (10 mL) , followed by the addition of dioxane hydrochloride solution (4 M, 10 mL) . The reaction was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction solution was concentrated under reduced pressure and freeze-dried using a freeze dryer to obtain 1.7 g of the target compound N, N, N-trimethyl-4-oxo-8, 11-dioxa-2, 5-diazatridecane-13-ammonium chloride hydrochloride 7-6 (crude product) . MS m / z (ESI) : 262 [M] ;

[0294] Step 6

[0295] (S) -N, N, N, 2, 2, 8-Hexamethyl-4, 7, 10-trioxo-6- (pyridin-3-ylmethyl) -3, 14, 17-trioxa-5, 8, 11-triazanonane-19-ammonium chloride

[0296] N, N, N-Trimethyl-4-oxo-8, 11-dioxa-2, 5-diazatridecane-13-ammonium chloride hydrochloride 7-6 (1.70 g, 4.60 mmol) and tert-butoxycarbonyl-3- (3-pyridyl) -L-alanine (1.22 g, 4.60 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (15 mL) . Triethylamine (1.40 g, 14.00 mmol) was added to the mixture and it was stirred at room temperature for 5 minutes. O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -N, N', N'-tetramethylurea hexafluorophosphate (2.19 g, 5.75 mmol) was added and it was reacted at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was directly purified (formic acid) by reverse phase chromatography. 1.2 g of the target (S) -N, N, N, 2, 2, 8-hexamethyl-4, 7, 10-trioxo-6- (pyridin-3-ylmethyl) -3, 14, 17-trioxa-5, 8, 11-triazanonane-19-ammonium chloride intermediate 7 was obained, yield: 48%. MS m / z (ESI) : 510[M] ;

[0297] Compound 1

[0298] 3AMPh2EtCO (1) -C (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -C (2) -F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-THP-E (1) -Ala-3Pal-Sarc-NH2 (HCl)

[0299] Swollen Resin: 3 g of Rink Amide MBHA solid phase resin (0.615 mmol / g loading) was transferred to a 150 ml graduated gravity column, and the resin was washed 3 x with DMF.

[0300] Step 1

[0301] Coupling of Fmoc-Sarc-OH

[0302] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 x with DMF under shaking. FMOC-Sarc-OH (1.72 g, 5.53 mmol) was dissolved in 50 ml of DMF along with Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) . Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 311 [M+1] .

[0303] Step 2

[0304] Coupling of Fmoc-3Pal-OH

[0305] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-3Pal-OH (2.15 g, 5.54 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 459 [M+1] .

[0306] Step 3

[0307] Coupling of Fmoc-Ala-OH

[0308] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-Ala-OH (1.73 g, 5.56 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF.. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 530 [M+1] .

[0309] Step 4

[0310] Coupling of Fmoc-E (tBu) -OH

[0311] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-E (tBu) -OH (2.35 g, 5.53 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 659 [M+1] .

[0312] Step 5

[0313] Coupling of Fmoc-THP-OH

[0314] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-THP-OH (2.03 g, 5.53 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 786 [M+1] .

[0315] Step 6

[0316] Coupling of Fmoc-2Nal-OH

[0317] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-2Nal-OH (2.42 g, 5.54 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after～15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 983 [M+1] .

[0318] Step 7

[0319] Coupling of Fmoc-F (4-AEN (Me) 2) -OH

[0320] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-F (4-AEN (Me) 2) -OH (2.62 g, 5.53 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 609 [M / 2+1] .

[0321] Step 8

[0322] Coupling of Fmoc-C (Trt) -OH

[0323] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-C (Trt) -OH (3.24 g, 5.54 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 660.5 [M / 2+1] .

[0324] Step 9

[0325] Coupling of Fmoc-K (Ac) -OH

[0326] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-K (Ac) -OH (2.27 g, 5.54 mmol) and oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 745.5 [M / 2+1] .

[0327] Step 10

[0328] Coupling of Fmoc-W (7-Me) -OH

[0329] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-W (7-Me) -OH (2.43 g, 5.52 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 845.5 [M / 2+1] .

[0330] Step 11

[0331] Coupling of Fmoc-T (t-Bu) -OH

[0332] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-T (t-Bu) -OH (2.2 g, 5.54 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 896 [M / 2+1] .

[0333] Step 12

[0334] Coupling of Fmoc-Ala (3-Cyclopropyl) -OH

[0335] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-Ala (3-Cyclopropyl) -OH (1.94 g, 5.53 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 951.5 [M / 2+1] .

[0336] Step 13

[0337] Coupling of Fmoc-C (Trt) -OH

[0338] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-C (Trt) -OH (3.24 g, 5.54 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 1003 [M / 2+1] .

[0339] Step 14

[0340] Coupling of 3- (3- (tert-butoxycarbonylamino) methyl) phenyl) propionic acid

[0341] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection the resin was washed 3 times with DMF under shaking. 3- (3- (tert-butoxycarbonylamino) methyl) phenyl) propionic acid (1.55 g, 5.54 mmol) and Oxyma (1.18 g, 8.31 mmol) were dissolved in 50 ml of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.93 g, 7.38 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.58 g, 4.6 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide and then five times with DCM under shaking. The resin was placed under vacuum for 1.5 hours, followed by cracking with trifluoroacetic acid. MS m / z (ESI) : 972.5 [M / 2+1] .

[0342] Step 15

[0343] 3AMPh2EtCO-C-Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -C-F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-THP-E-Ala-3Pal-Sarc-NH2

[0344] 100 mL of the TFA cleavage cocktail (90 / 5 / 2.5 / 2.5 of TFA / water / Tips / DODT) was added to a tube containing protected resin bound peptide and the mixute was shaken for two hours. The used resin was filtered out and the filtrate was spin dried, and then transferred to a centrifuge tube for precipitation. 50 mL of isopropyl ether was added to a centrifuge tube to give a white precipitate, which was centrifuged. The upper isopropyl ether clear solution was poured into the waste, and the precipitate was washed with isopropyl ether (50 mL X 2) . The white precipitate filter cake was spin dried to give a crude reducing peptide. MS m / z (ESI) : 972.4 [M / 2+1] .

[0345] Step 16

[0346] 3AMPh2EtCO-C (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -C (2) -F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-THP-E-Ala-3Pal-Sarc-NH2

[0347] 3 g of Crude peptide was dissolved in 1000 mL of 20%acetonitrile / water. A saturated solution of iodine in acetic acid / methanol (1 / 1) was dropwise added to 1000 mL of peptide solution with stirring until the yellow / brown color of iodine remained. The light yellow solution was stationed for 5 min, and the excess iodine was quenched with a small amount of ascorbic acid.

[0348] Purification of Monocyclic Peptide (Disulfide Bond) by Reverse Chromatography Column

[0349] A reverse chromatography column was equilibrated with 100%mobile phase A (MPA=0.1%TFA in water) at the flow rate of 50 mL / min. The 1 L of quenched oxidized peptide was loaded onto the equilibrated column directly at 50 mL / min, and washed with 5%mobile phase B (MPB=100%acetonitrile)  / A (MPA=0.1%TFA in water) for 5 min. The separation was achieved using linear gradient of 5-50%MPB in 60 min at 50 mL / min. The desired oxidized peptide was eluted at～35%MPB. The products were combined and lyophilized to give 1.6 g of purified oxidized peptide in the form of TFA salt, with a yield of 44.7%.

[0350] Characterization

[0351] After lyophilization, the product was measured to have a purity of >78%by analytical HPLC. Low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) gave triply charged ion [M / 3+1] + (648) and double charged ion [M / 3+1] + (971.3) .

[0352] Step 17

[0353] 3AMPh2EtCO (1) -C (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -C (2) -F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-THP-E (1) -Ala-3Pal-Sarc-NH2

[0354] Purified oxidized intermediate peptide (1.6 g, 0.82 mmol) was dissolved in 500 mL of N, N-dimethylformamide. 1H-Benzotriazole-1-yl-oxotrispyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (853 mg, 1.64 mmol) was added followed by addition of N, N-Diisopropylethylamine (530 mg, 4.10 mmol) . The mixture was stirred at room temperature and the reaction was monitored by low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) . The reaction was completed within 10 minutes, and then the sample was loaded onto a reverse chromatography column for purification.

[0355] Purification of the bicyclic peptide (Disulfide Bond and Lactam Bond) by Reverse Chromatography Column

[0356] The same procedure as described in step 17 above was used for purification. The products were combined and freeze-dried to obtain 320 mg of purified bicyclic peptide in the form of trifluoroacetate salt, with a yield of 20.2%for the step of lactam bond formation and a total yield of 9%.

[0357] Conversion of trifluoroacetate salt to hydrochloride salt

[0358] The reverse chromatography column was equilibrated with 5%acetonitrile / water at the floe rate of 50 mL / min (A=0.01 M HCl aqueous solution, B=100%acetonitrile, C=0.04 M ammonium bicarbonate aqueous solution) . The purified peptide TFA salt was dissolved in 20%acetonitrile / water. The solution was loaded onto the equilibrated column at a rate of 50 ml / minute and the solvent front was eluted. A5%B of A solution was used for washing for 5 minutes. Then a 5%B of C solution was used for washing at 50 mL / minute for 40 minutes to remove all trifluoroacetic acid ions from the system. The 5%B of A solution was further used at 50 mL / min for 10 minutes to remove all ammonium bicarbonate from the system. Finally, the peptide was eluted with a gradient of 5%-70%B of A solution within 60 minutes and collected in the fraction. The products were combined and freeze-dried to obtain 310 mg of the product in hydrochloride form.

[0359] Characterization

[0360] After lyophilization the product was measured to have a purity of>95%by analytical HPLC. Low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) gave [M / 3+1] + (642.2) and [M / 2+1] + (962.5) .

[0361] Table 4A: Synthesis of compounds 2-59 with reference to compound 1 synthesis process (compounds 2-11 are trifluoroacetate salts, compounds 12-59 are hydrochloride salts) .

[0362] Compound 60

[0363] 3AMPh2EtCO (1) -Abu (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -C (2) -F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-THP-E (1) -Ala-3Pal-Sarc-NH2 (HCl)

[0364] Coupling of Fmoc-Abu (Cl) -OH

[0365] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin Fmoc-Ala (3-Cyclopropyl) -T (t-Bu) -W (7-Me) -K (Ac) -C (Trt) -F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-THP-E (t-Bu) -Ala-3Pal-Sarc-Rink (synthesized according to the experimental steps of compound 1) and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-Abu (Cl) -OH (0.19 g, 0.55 mmol) and Oxyma (0.11 g, 0.83 mmol) were dissolved in 5 mL of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.093 g, 0.73 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.05 g, 0.46 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, and then proceeded to the next step of deprotection / coupling cycle. MS m / z (ESI) : 1011.2 [M / 2+1] .

[0366] Step 2

[0367] Coupling of 3- (3- (tert-butoxycarbonylamino) methyl) phenyl) propionic acid

[0368] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection the resin was washed 3 times with DMF under shaking. 3- (3- (tert-Butoxycarbonylamino) methyl) phenyl) propionic acid (0.15 g, 0.55 mmol) and Oxyma (0.11 g, 0.83 mmol) were dissolved in 5 mL of DMF. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.093 g, 0.73 mmol) with shaking for 15 min prior to addition to the deprotected resin. An additional aliquot of DIC (0.05 g, 0.46 mmol) was then added after about 15 min of coupling. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking, andthen washed five times with DCM under shaking. The resin was placed under vacuum for 1.5 hours, followed by cracking with trifluoroacetic acid.

[0369] Step 3

[0370] 3AMPh2EtCO-Abu (Cl) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -C-F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-THP-E-Ala-3Pal-Sarc-NH2

[0371] 10 mL of the TFA cleavage cocktail (90 / 5 / 2.5 / 2.5 of TFA / water / Tips / DODT) was added to a tube containing protected resin bound peptide and the mixture was shaken for two hours. The used resin was filtered out and the filtrate was spin dried, and then transferred to a centrifuge tube for precipitation. 20 mL of isopropyl ether was added to a centrifuge tube to give a white precipitate which was centrifuged. The upper isopropyl ether clear solution was poured into the waste, and the precipitate was washed with isopropyl ether (20 mL X 2) . The obtained white precipitate filter cake was spin dried to give a crude reducing peptide.

[0372] Step 4

[0373] 3AMPh2EtCO-Abu (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -C (2) -F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-THP-E-Ala-3Pal-Sarc-NH2

[0374] 100 mg of Crude peptide was dissolved in 5 mL of 10%water / DMF. NaI (0.02 g, 0.07 mmol) , Na2CO3 (0.50 g, 0.5 mmol) , and ethylenediaminetetraacetic acid EDTA (0.02 g, 0.07 mmol) were added at room temperature. The mixture was stirred at room temperature, and the reaction was monitored by low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) . The reaction was completed within 4 hours, and then the sample was loaded onto a reverse chromatography column for purification.

[0375] A reverse chromatography column was equilibrated with 100%mobile phase A (0.1%TFA in water) at the flow rate of 50 mL / min. The 1 L of quenched oxidized peptide was loaded onto the equilibrated column directly at 50 mL / min, and washed with 5%mobile phase B (100%acetonitrile)  / A(0.1%TFA in water) for 5 min. The separation was achieved using linear gradient of 5-50%in 60 min at 50 mL / min. The desired oxidized peptide was eluted at about 35%. The products were combined and lyophilized to give 50 mg of purified oxidized peptide in the form of TFA salt.

[0376] Characterization

[0377] After lyophilization, the product was measured to have a purity of >78%by analytical HPLC. Low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) gave double charged ion [M / 2+1] + (962.4) .

[0378] Step 5

[0379] 3AMPh2EtCO (1) -Abu (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -C (2) -F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-THP-E (1) -Ala-3Pal-Sarc-NH2

[0380] Purified oxidized intermediate peptide (50 mg, 0.82 mmol) was dissolved in 500 mL of N, N-dimethylformamide. 1H-Benzotriazole-1-yl-oxotrispyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (20 mg, 0.037 mmol) and N, N-diisopropylethylamine (5 mg, 0.037 mmol) were added sequently. The mixture was stirred at room temperature, and monitored by low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) . The reaction was completed within 10 minutes, and then the sample was loaded onto a reverse chromatography column for purification.

[0381] Purification of Bicyclic Peptide (Disulfide Bond and Lactam Bond) by Reverse Chromatography Column

[0382] The same procedure as described in step 17 above was used for purification. The products were combined and freeze-dried to obtain 10 mg of purified bicyclic peptide in the form of trifluoroacetate salt.

[0383] Conversion of trifluoroacetate salt to hydrochloride salt

[0384] The reverse chromatography column was equilibrated with 5%acetonitrile / water at the flow rate of 50 mL / min (A=0.01 M HCl aqueous solution, B=100%acetonitrile, C=0.04 M ammonium bicarbonate aqueous solution) . The purified peptide TFA salt was dissolved in 20%acetonitrile / water. The solution was loaded onto the equilibrated column at a rate of 50 ml / minute and the solvent front was eluted. A5%B of A solution was used for washing for 5 minutes. Then a 5%B of C solution was used for washing at 50 mL / minute for 40 minutes to remove all trifluoroacetic acid ions from the system. The 5%B of A solution was further used at 50 mL / min for 10 minutes to remove all ammonium bicarbonate from the system. Finally, the peptide was eluted with a gradient of 5%-70%B of A solution within 60 minutes and collected in the fraction. The products were combined and freeze-dried to obtain 6 mg of the product in hydrochloride form.

[0385] Characterization

[0386] After lyophilization the product was measured to have a purity of>95%by analytical HPLC. Low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) gave [M / 2+H] + (953.4) .

[0387] Compound 61

[0388] 3MAMPh2EtCO (1) -Pen (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -Pen (2) -F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-K (αMeNMe2) -E (1) -N-3Pal-Sar (CONMe2) (HCl)

[0389] Coupling of Fmoc-Asp-OAll

[0390] The Rink resin (0.25 g, 0.14 mmol) in the reaction flask was washed twice with 4 mL of N, N-dimethylformamide, then treated with 2.5 mL of 20%4-methylpyridine in N, N-dimethylformamide solution (Fmoc deprotected) for 10 minutes. The resin was filtered and washed twice with N, N-dimethylformamide (4 mL) , followed by the treatment with N-methylpyridine for 30 minutes. The resin was washed three times again with N, N-dimethylformamide (4 mL) . Fmoc-Asp-OAll (0.17 g, 0.42 mmol) and 1-hydroxyphenyl-4, 5-diphenylimidazole (90 mg, 0.62 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide. Then N, N'-diisopropylcarbodiimide (71 mg, 0.56 mmol) was added. The reaction was stirred at room temperature for 15 minutes. The mixture was added to the resin and shaken well for 15 minutes. Another batch of N, N'-diisopropylcarbodiimide (45 mg, 0.35 mmol) was added. The reaction was shaken for 5 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was filtered and washed three times with N, N-dimethylformamide, and shaken for 5 minutes to obtain the resin that can be used without further purification.

[0391] Step 2

[0392] Deprotection of allyloxy group

[0393] Under nitrogen protection, 5 mL of N, N-dimethylformamide, phenylsilane (0.23 g, 2.10 mmol) and tetrakis (triphenylphosphine) palladium (17 mg, 0.02 mmol) were added to the obtained resin, and the mixture was reacted at room temperature for 12 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and shaken for 5 minutes to obtain the resin that can be used without further purification. MS m / z (ESI) : 354.1 [M+1] .

[0394] Step 3

[0395] Coupling of (S) -2-amino-N- (2- (dimethylamino) -2-oxoethyl) -N-methyl-3- (pyridin-3-yl) propenamide

[0396] The resin obtained in the previous step (0.14 mmol) was washed twice with 4 mL of N, N-dimethylformamide, then treated with 2.5 mL of 20%4-methylpyridine (Fmoc deprotected) for 10 minutes. The resin was filtered and washed twice with N, N-dimethylformamide (4 mL) , followed by the treatment with N-methylpyridine for 30 minutes. The resin was washed three times again with N, N-dimethylformamide (4 mL) . (S) -2-Amino-N- (2- (dimethylamino) -2-carbonylethyl) -N-methyl-3- (pyridin-3-yl) propanamide (0.11 g, 0.42 mmol, synthesis reference WO2023288017) and 1-hydroxyphenyl-4, 5-diphenylimidazole (90 mg, 0.62 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide, and then N, N'-diisopropylcarbodiimide (71 mg, 0.56 mmol) was added. The reaction was stirred at room temperature for 15 minutes. The mixture was added to the resin and shaken well for 15 minutes. Another batch of N, N'-diisopropylcarbodiimide (45 mg, 0.35 mmol) was added. The reaction was shaken for 5 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was filtered and washed three times with N, N-dimethylformamide, and shaken for 5 minutes to obtain the resin that can used without further purification. MS m / z (ESI) : 600.2 [M+1] .

[0397] Step 4

[0398] Coupling of Fmoc-E (tBu) -OH

[0399] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl piperidinein DMF. The mixture was shaken for an additional 20-30 min and then discharge to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-E (tBu) -OH (0.77 g, 1.80 mmol) and Oxyma (0.38 g, 2.70 mmol) were dissolved in 10 ml of DMF together. Preactivation of the acid for about 15 min was accomplished by addition of DIC (0.30 g, 2.40 mmol) , then the mixture was added to resin (0.60 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.19 g, 1.50 mmol) was added. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 730.3 [M+1] .

[0400] Step 5

[0401] Coupling of Fmoc-K (αMeNMe2) -OH

[0402] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl piperidine in DMF. The mixture was shaken for an additional 20-30 min and then discharged to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-K (αMeNMe2) -OH (0.74 g, 1.80 mmol) and Oxyma (0.38 g, 2.70 mmol) were dissolved in 10 ml of DMF together. Preactivation of the acid for about 15 min was accomplished by addition of DIC (0.30 g, 2.40 mmol) , then the mixture was added to resin (0.6 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.19 g, 1.50 mmol) was added. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 899.8 [M+1] .

[0403] Step 6

[0404] Coupling of Fmoc-2Nal-OH

[0405] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl-piperidine in DMF. The mixture was shaken for an additional 20-30 min and then discharged to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-2Nal-OH (0.79 g, 1.80 mmol) and Oxyma (0.38 g, 2.70 mmol) were dissolved in 10 ml of DMF together. Preactivation of the acid for about 15 min was accomplished by addition of DIC (0.30 g, 2.40 mmol) , then the mixture was added to resin (0.60 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.19 g, 1.50 mmol) was added. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 549.3 [M / 2+1] .

[0406] Step 7

[0407] Coupling of Fmoc-F (4-AEN (Me) 2) -OH

[0408] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl-piperidine in DMF. The mixture was shaken for an additional 20-30 min and then discharged to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed 3 times with DMF under shaking. Fmoc-F (4-AEN (Me) 2) -OH (0.85 g, 1.80 mmol) and Oxyma (0.38 g, 2.70 mmol) were dissolved in 10 ml of DMF together. Preactivation of the acid for about 15 min was accomplished by addition of DIC (0.30 g, 2.40 mmol) , then the mixture was added to resin (0.60 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.19 g, 1.50 mmol) was added. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 666.3 [M / 2+1] .

[0409] Step 8

[0410] Coupling of Fmoc-Pen (Trt) -OH

[0411] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl-piperidine in DMF and shaking for an additional 20-30 min and then discharge to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking. Fmoc-Pen (Trt) -OH (0.37 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol, 4.5 equivalents) were dissolved in 10 mL of N, N-dimethylformamide. Preactivation of the acid for about 15 min was accomplished by addition of DIC (0.10 g, 0.80 mmol) for about 15 minutes, then the mixture was added to the resin (0.2 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 731.9 [M / 2+1] .

[0412] Step 9

[0413] Coupling of Fmoc-K (Ac) -OH

[0414] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl-piperidine in DMF and shaking for an additional 20-30 min and then discharge to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking. Fmoc-K (Ac) -OH (0.25 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in 10 mL of N, N-dimethylformamide. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.10 g, 0.80 mmol) for about 15 minutes, then the mixture was added to the resin (0.2 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 816.9 [M / 2+1] .

[0415] Step 10

[0416] Coupling of Fmoc-W (7-Me) -OH

[0417] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl-piperidine in DMF and shaking for an additional 20-30 min and then discharge to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking. Fmoc-W (7-Me) -OH (0.26 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in 10 mL of N, N-dimethylformamide. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.10 g, 0.80 mmol) for about 15 minutes, then the mixture was added to the resin (0.2 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction. The mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 917.0 [M / 2+1] .

[0418] Step 11

[0419] Coupling of Fmoc-T (tBu) -OH

[0420] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl-piperidine in DMF and shaking for an additional 20-30 min and then discharge to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking. Fmoc-T (tBu) -OH (0.24 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in 10 mL of N, N-dimethylformamide. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.10 g, 0.80 mmol) for about 15 minutes, then the mixture was added to the resin (0.2 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 967.5 [M / 2+1] .

[0421] Step 12

[0422] Coupling of Fmoc-Ala (3-Cyclopropyl) -OH

[0423] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl-piperidine in DMF and shaking for an additional 20-30 min and then discharge to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking. Fmoc-Ala (3-Cyclopropyl) -OH (0.21 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in 10 mL of N, N-dimethylformamide. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.10 g, 0.80 mmol) for about 15 minutes, then the mixture was added to the resin (0.2 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 1023.0 [M / 2+1] .

[0424] Step 13

[0425] Coupling of Fmoc-Pen (Trt) -OH

[0426] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl-piperidine in DMF and shaking for an additional 20-30 min and then discharge to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking. Fmoc-Pen (Trt) -OH (0.37 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in 10 mL of N, N-dimethylformamide. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.10 g, 0.80 mmol) for about 15 minutes, then the mixture was added to the resin (0.2 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction. The mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 1088.5 [M / 2+1] .

[0427] Step 14

[0428] Coupling of Boc-MAMPh2EtCO-OH

[0429] 2 Resin-bed volumes of 20%4-methyl-piperidine in DMF was added to the swollen resin and shaken for 3-5 min., followed by discharge and addition of a second 2-resin-bed volume of the 20%4-methyl-piperidine in DMF and shaking for an additional 20-30 min and then discharge to realize deprotection of resin bound Fmoc groups. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking. Boc-MAMPh2EtCO-OH (0.09g, 0.30 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.07 g, 0.45 mmol) were dissolved in 10 mL of N, N-dimethylformamide. Preactivation of the acid was accomplished by addition of DIC (0.05 g, 0.40 mmol) for about 15 minutes, then the mixture was added to the resin (0.1 mmol) , shaken for 15 minutes, then an additional DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction. The mixture was further shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken for cracking detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed three times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 1064.8 [M / 2+1] .

[0430] Step 15

[0431] TFA Cleavage and Ether Precipitation

[0432] 5 mL of the TFA cleavage cocktail (90 / 5 / 2.5 / 2.5 of TFA / water / Tips / DODT) was prepared. 5 mL of the cocktail was added to a tube containing protected resin bound peptide and shaken for two hours. The used resin was filtered out, isopropyl ether was added to the filtrate, a white precipitate was formed and then centrifuged. The upper isopropyl ether clear solution was poured into the waste, and the precipitate was washed twice with isopropyl ether again. Then the precipitate was evaporated under reduced pressure to obtain the crude reducing peptide, which was directly used in the next step without purification. MS m / z (ESI) : 1064.8 [M / 2+1] .

[0433] Step 16

[0434] Oxidation of Disulfides

[0435] 0.20 g of Crude reducing peptide was dissolved in acetonitrile (10 mL) and water (30 mL) , a saturated solution of iodine in acetic acid / methanol (1 / 1) was dropwise added to the 40 mL solution of peptide with stirring, until the yellow / brown color of iodine remained. The excess iodine was quenched with a small amount of ascorbic acid.

[0436] Step 17

[0437] Purification of Monocyclic Peptide (Disulfide Bond) by Reverse Chromatography Column

[0438] A reverse chromatography column was equilibrated with 100%mobile phase A (0.1%TFA in water) at the flow rate of 50 mL / min. The 40 mL of quenched oxidized peptide was loaded onto the equilibrated column directly at 50 mL / min, and washed with 5%mobile phase B (100%acetonitrile)  / A(0.1%TFA in water) for 5 minutes. The separation was achieved using linear gradient of 5%-50%in 60 min at 50 mL / min. The desired oxidized peptide was eluted at～35%gradient. The fractions were combined and lyophilized, 110.0 mg g of purified oxidized peptide was obtained in the form of TFA salt, with a yield of 55.0%.

[0439] Step 18

[0440] Characterization

[0441] After lyophilization the product was measured to have a purity of>90%by analytical HPLC. Low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) gave triply charged ion [M / 3+1] + (709.5) and double charged ion [M / 2+1] + (1063.7) .

[0442] Step 19

[0443] Synthesis of 3MAMPh2EtCO (1) -Pen (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (Ac) -Pen (2) -F (4-AEN (Me) 2) -2Nal-K (αMeNMe2) -E (1) -N-3Pal-Sar (CONMe2)

[0444] Purified oxidized intermediate peptide (110.0 mg, 0.05 mmol) was dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) , N, N-diisopropylethylamine (10 mg, 0.08 mmol) and 1H-benzotriazole-1-yl-oxotrispyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (32 mg, 0.06 mmol) were added. The mixture was stirred at room temperature, and the reaction was monitored by low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) . The reaction was completed within 10 minutes, and then the sample was loaded onto a reverse chromatography column for purification.

[0445] Step 20

[0446] Purification of the bicyclic peptide (Disulfide Bond and Lactam Bond) by Reverse Chromatography Column

[0447] The same procedure as described in step 17 above was used for purification. The products were combined and freeze-dried to obtain 18 mg of purified bicyclic peptide in the form of trifluoroacetate salt, with a yield of 16.4%for the step of lactam bond formation and a total yield of 9%.

[0448] Step 21

[0449] Conversion of Trifluoroacetate Salt to Hydrochloride Salt

[0450] The reverse chromatography column was equilibrated with 5%acetonitrile / water at the flow rate of 50 mL / min (A=0.01 M HCl aqueous solution, B=100%acetonitrile, C=0.04 M ammonium bicarbonate aqueous solution) . The purified peptide TFA salt was dissolved in 20%acetonitrile / water. The solution was loaded onto the equilibrated column at a rate of 50 ml / minute and the solvent front was eluted. 5%B of A solution was used for washing for 5 minutes. Then 5%B of C solution was used for washing at 50 mL / minute for 40 minutes to remove all trifluoroacetic acid ions from the system. 5%B of A solution was used again at 50 mL / min for 10 minutes to remove all ammonium bicarbonate from the system. Finally, the peptide was washed with a gradient of 5%-70%B of A solution within 60 minutes and collected in the fraction. The products were combined and freeze-dried to obtain 15 mg of the product in hydrochloride form.

[0451] Step 22

[0452] Characterization

[0453] After lyophilization the product was measured to have a purity of>95%by analytical HPLC. Low resolution liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) gave triply charged ion [M / 3+1] + (703.4) and double charged ion (1054.4) [M / 2+1] +.

[0454] Table 4B: Synthesis of compounds 62-81 with reference to compound 61 synthesis process (compounds 62-81 are hydrochloride salts) .

[0455] Compound 82

[0456] 3MAMPh2EtCO (1) -C (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (NMeAc) -C (2) -TMACl5F-2Nal-THP-E (1) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2) (HCl)

[0457] Fmoc-Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0458] 3Pal-Sar (CONMe2) 1 (1.06 g, 4.00 mmol) , Fmoc alanine (1.86 g, 6.00 mmol) , N, N-diisopropylethylamine (1.04 g, 8.00 mmol) , hexafluorophosphate benzotriazole-1-yl-oxytrispyrrolidinophosphonium (2.60 g, 5.00 mmol) , and N, N-dimethylformamide (20 mL) were mixed. The mixture was stirred at room temperature for 30 minutes and then purified by reverse phase chromatography (acetonitrile / 0.1%trifluoroacetic acid aqueous solution=5: 95～55: 45) to obtain the target product Fmoc-Ala-3-Pal-Sar (CONMe2) 2 (1.12 g) . Yield: 50%.

[0459] MS m / z (ESI) : 558 [M+1] ;

[0460] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ8.90 (s, 1H) , 8.60-8.56 (m, 1H) , 8.40-8.28 (m, 1H) , 7.78-7.72 (m, 2H) , 7.70-7.68 (m, 1H) , 7.60-8.56 (m, 2H) , 7.42-7.38 (m, 2H) , 7.34-7.30 (m, 2H) , 5.86-5.82 (m, 1H) , 5.34-5.31 (m, 1H) , 4.54-4.50 (m, 1H) , 4.43-4.40 (m, 1H) , 4.33-4.30 (m, 1H) , 4.22-4.20 (m, 2H) , 3.88-3.84 (m, 1H) , 3.50-3.45 (m, 1H) , 3.35-3.31 (m, 1H) , 3.19 (s, 3H) , 3.02 (s, 3H) , 2.98 (s, 3H) , 1.38 (d, J=8.0 Hz, 3H) .

[0461] Step 2

[0462] Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0463] Fmoc-Ala-3-Pal-Sar (CONMe2) 2 (1.12 g, 2.00 mmol) , lithium hydroxide (0.24 g, 10.00 mmol) , and methanol (20 mL) were mixed. The mixture was stirred at room temperature for 30 minutes and then purified by reverse phase chromatography (acetonitrile / 0.1%trifluoroacetic acid aqueous solution=5: 95～55: 45) to obtain the target product Ala-3Pal-Sar (CONMe2) 3 (0.67 g) . Yield: 99%. MS m / z (ESI) : 336 [M+1] .

[0464] Step 3

[0465] Fmoc-E (t-Bu) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0466] Ala-3Pal-Sar (CONMe2) 3 (0.67 g, 2.00 mmol) , Fmoc-O-tert-butyl-L-glutamic acid (0.85 g, 2.00 mmol) , N, N-diisopropylethylamine (0.65 g, 5.00 mmol) , hexafluorophosphate benzotriazole-1-yl-oxytrispyrrolidinophosphonium (1.04 g, 2.00 mmol) , and N, N-dimethylformamide (15 mL) were mixed. The mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction solution was concentrated, and the residue was purified by reverse phase chromatography (acetonitrile / 0.1%trifluoroacetic acid aqueous solution=5: 95～55: 45) to obtain the target product Fmoc-E (t-Bu) -Ala-3-Pal-Sar (CONMe2) 4 (0.80 g) . Yield: 54%. MS m / z (ESI) : 743 [M+1] .

[0467] Step 4

[0468] Fmoc-E-Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0469] Fmoc-E (t-Bu) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2) (0.80 g, 1.08 mmol) and trifluoroacetic acid (10 mL) were mixed. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction solution was concentrated. The residue was purified by reverse phase chromatography (acetonitrile / 0.1%trifluoroacetic acid aqueous solution=5: 95～55: 45) to obtain the target product Fmoc-E-Ala-3Pal-Sar (CONMe2) 5 (0.60 g) . Yield: 81%. MS m / z (ESI) : 687 [M+1] .

[0470] Step 5

[0471] Fmoc-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0472] The solid-phase CTC resin (0.6g, 0.60 mmol) was transferred into a 50 mL peptide synthesis tube. The resin was washed with anhydrous dichloromethane, shaken for 15 minutes and washed four times with anhydrous N, N-dimethylformamide. Fmoc-E-Ala-3Pal-Sar (CONMe2) 5 (0.60 g, 0.9 mmol) and N, N-diisopropylethylamine (0.26 g, 2.00 mmol) were dissolved in anhydrous N, N-dimethylformamide (10 mL) , and the mixture was added to the resin. The mixture was shaken for 15 hours, and the resin was washed four times with a solution of dichloromethane / methanol / N, N-diisopropylethylamine (6: 3: 1) . Finally a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction. The resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used to the next step. MS m / z (ESI) : 687 [M+1] .

[0473] Step 6

[0474] Fmoc-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0475] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution, went on shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0476] 4- ( ( (9H-Fluoro-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) tetrahydro-2H-pyran-4-carboxylic acid (0.22 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin. After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the resulting mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 814 [M+1] .

[0477] Step 7

[0478] Fmoc-2Nal-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0479] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0480] Fmoc-3- (2-naphthyl) -L-alanine (0.26 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin (0.20 mmol) . After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 1011 [M+1] .

[0481] Step 8

[0482] Fmoc-TMA5F-2Nal-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0483] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0484] Fmoc-4- (N, N, N-trimethyl-5-ammonium pentoxy) -L-phenylalanine (0.32 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin (0.20 mmol) . After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 1301 [M] .

[0485] Step 9

[0486] Fmoc-C (Trt) -TMA5F-2Nal-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0487] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0488] Fmoc-S-triphenylmethyl-L-cysteine (0.35 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin (0.20 mmol) . After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 824 [M / 2] .

[0489] Step 10

[0490] Fmoc-K (NMeAc) -C (Trt) -TMA5F-2Nal-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0491] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0492] Fmoc- (S) -6-Acetyl-6-Methylamino-2-aminohexanoic acid (0.25 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin (0.20 mmol) . After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 916 [M / 2] . With Trt

[0493] Step 11

[0494] Fmoc-W (7-Me) -K (NMeAc) -C (Trt) -TMA5F-2Nal-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0495] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0496] (S) -2- ( ( ( (9H-Fluoro-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) -3- (7-methyl-1H-indol-3-yl) propionic acid (0.26 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin (0.20 mmol) . After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 895 [M / 2] .

[0497] Step 12

[0498] Fmoc-T (tBu) -W (7-Me) -K (NMeAc) -C (Trt) -TMA5F-2Nal-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0499] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0500] Fmoc-O-tert-butyl-L-threonine (0.24 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin (0.20 mmol) . After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 945 [M / 2] .

[0501] Step 13

[0502] Fmoc-Ala (3-Cyclopropyl) -T (tBu) -W (7-Me) -K (NMeAc) -C (Trt) -TMA5F-2Nal-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0503] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0504] (R) -2- ( ( (9H-Fluoro-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) -3-cyclopropyl propionic acid (0.21 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin (0.20 mmol) . After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 1001 [M / 2] .

[0505] Step 14

[0506] Fmoc-C (Trt) -Ala (3-Cyclopropyl) -T (tBu) -W (7-Me) -K (NMeAc) -C (Trt) -TMA5F-2Nal-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0507] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0508] Fmoc-S-triphenylmethyl-L-cysteine (0.35 g, 0.60 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.13 g, 0.90 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin (0.20 mmol) . After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 1108 [M / 2] .

[0509] Step 15

[0510] Boc-3MAMPh2EtCO-C (Trt) -Ala (3-Cyclopropyl) -T (tBu) -W (7-Me) -K (NMeAc) -C (Trt) -TMA5F-2Nal-THP-E (CTC-Resin) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0511] The deprotection of the Fmoc groups bound to the resin was achieved by adding 20%4-methyl-piperidine in DMF at two volume of the resin-bed to the swollen resin and the resulting mixture was shaked for 3-5 min., then replacing with another two volumn of the resin-bed of the 4-methyl piperidine solution and shaking for an additional 20-30 min. After deprotection, the resin was washed three times with N, N-dimethylformamide under shaking.

[0512] 3- (3- ( ( (tert-Butoxycarbonyl) (methyl) amino) methyl) phenyl) propionic acid (0.09 g, 0.30 mmol) and ethyl 2-oxime cyanoacetate (0.06 g, 0.45 mmol) were dissolved in N, N-dimethylformamide (5 mL) . DIC (0.10 g, 0.80mmol) was added and the resulting mixture was stirred for about 15 minutes to preative the acid, then the mixture was added to the resin (0.20 mmol) . After the addition, the mixture was shaked for 15 min., then DIC (0.06 g, 0.50 mmol) was added to the reaction, the mixture was shaken for 8 hours. Finally, a small amount of resin was taken and cleaved for detection to confirm the completion of the reaction, the resin was washed four times with N, N-dimethylformamide, and then directly used in the next step. MS m / z (ESI) : 1029 [M / 2] .

[0513] Step 16

[0514] 3MAMPh2EtCO-C-Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (NMeAc) -C-TMA5F-2Nal-THP-E-Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0515] 5 mL of TFA cleavage cocktail (90 / 5 / 2.5 / 2.5, TFA / water / TIPS / DODT) was prepared and added to a test tube containing the resin bound with the protected peptide and shaken for two hours. Filtered, and isopropyl ether was added to the filtrate, white precipitates were formed, the miture was centrifuged. The upper isopropyl ether clear solution was poured out. The precipitate was washed twice with isopropyl ether. The white filter cake was dried under reduce vacuum. The crude peptide 3MAMPh2EtCO-C-Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (NMeAc) -C-TMA5F-2Nal-THP-E-Ala-3Pal-Sar (CONMe2) (0.20 g) was obtained. MS m / z (ESI) : 1029 [M / 2] .

[0516] Step 17

[0517] 3MAMPh2EtCO-C (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (NMeAc) -C (2) -TMA5F-2Nal-THP-E-Ala-3Pal-Sar (CONMe2)

[0518] 3MAMPh2EtCO-C-Ala (3-Cyclopropylkyll) -T-W (7-Me) -K (NMeAc) -C-TMA5F-2Nal-THP-E-Ala-3Pal-Sar (CONMe2) (0.20 g, 0.1 mmol) was dissolved in 20%MeCN / water (80 mL) . A saturated solution of iodine in acetic acid / methanol (1 / 1) was add dropwise to the peptide solution with stirring, until the yellow / brown color of iodine remained and did not fade away. The resulting light yellow solution was kept standing for 5 minitues, and then the excess iodine was quenched with the addition of the small amount of ascorbic acid. The mixture was directly purified by reverse phase chromatography (acetonitrile / 0.1%trifluoroacetic acid aqueous solution=5: 95～55: 45) . The desited product as a TFA salt was obtained by freeze-drying. MS m / z (ESI) : 1028 [M / 2] .

[0519] Step 18

[0520] 3MAMPh2EtCO (1) -C (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (NMeAc) -C (2) -TMA5F-2Nal-THP-E (1) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2) The purified oxidative intermediate peptide 3MAMPh2EtCO-C (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (NMeAc) -C (2) -TMA5F-2Nal-THP-E-Ala-3Pal-Sar (CONMe2) (0.035 g, 0.015 mmol) was dissolved in 3 mL of N, N-dimethylformamide. 1H-Benzotriazole-1-yl-oxotrispyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (0.015 g, 0.03 mmol) was added to the peptide solution with strring, followed by the addition of N, N-diisopropylethylamine (0.013 g, 0.10 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 30 minutes, then purified by Pre-HPLC to obtain the target product 3MAMPh2EtCO (1) -C (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (NMeAc) -C (2) -TMA5F-2Nal-THP-E (1) -Ala-3-Pal-Sar (CONMe2) as a trifluoroacetate salt (0.015 g) .

[0521] Step 19

[0522] Trifluoroacetate Salt Converted to Hydrochloride Salt

[0523] The reverse chromatography column was equilibrated with 5%acetonitrile / water at the flow rate of 50 mL / min (A=0.01 M HCl aqueous solution, B=100%acetonitrile, C=0.04 M ammonium bicarbonate aqueous solution) . The purified peptide TFA salt was dissolved in 20%acetonitrile / water. The solution was loaded onto the equilibrated column at a rate of 50 ml / minute and the solvent front was eluted. The captured peptide was washed with eluent (solution A: B=95: 5 in volumn) for 5 minutes. The captured peptide was washed with eluent (solution B: C=5: 95 in volumn) at 50 mL / minute for 40 minutes to remove all trifluoroacetate ions. The captured peptide was washed with eluent (solution A: B=95: 5 in volumn) at 50 mL / min for 10 minutes to remove all ammonium bicarbonate. Finally, the peptide was eluted with a gradient (solution A: B=95: 5～30: 70) within 60 minutes while the solution of the product was collected by UV absorption detection. The combined solution of the product was lyophilized. The desired peptide 3MAMPh2EtCO (1) -C (2) -Ala (3-Cyclopropyl) -T-W (7-Me) -K (NMeAc) -C (2) -TMA5F-2Nal-THP-E (1) -Ala-3Pal-Sar (CONMe2) hydrochloride (0.012 g) was obtained. MS m / z (ESI) : 1019 [M / 2] .

[0524] Table 4C: With reference to the synthesis process of Compound 1, Compounds 83-87 were synthesized. (Compounds 83-87 are hydrochloride salts) .

[0525] EXAMPLE 2 BICYCLIC PEPTIDES INHIBIT BINDING OF INTERLEUKIN-23 TO INTERLEUKIN-23 RECEPTOR EXAMPLE 2A: IL23-IL23R Binding Assays

[0526] Human IL-23 protein and human IL-23R protein were purchased from Sino Biological Inc. The assay buffer contained 25 mM HEPES (pH 7.2) , 0.1%BSA, and 0.01%Tween-20. The test compounds were dissolved in DMSO to 200-fold the highest test concentration, followed by 4-fold serial dilution in DMSO to generate 8 concentration points. Each concentration point was further diluted 50-fold with the assay buffer. Human IL-23R protein was diluted to 2nM with assay buffer. Then, 5μL of diluted human IL-23R protein was added to each well of a 384-well plate (Corning, Cat#3572) , followed by 5μL of diluted compound or DMSO. The plate was centrifuged at 2000 rpm for 1 min at room temperature and then incubated at 25℃ for 30 min. Next, 5μL of human IL-23 at a concentration of 8 nM was added, and the plate was centrifuged again at 2000 rpm for 1 min and incubated at 25℃ for 60 min. After incubation, 5μL of a mixture of HTRF Streptavidin-Eu cryptate (Cisbio, Cat#610SAKLA) and HTRF Human PAb Anti IgG-d2 (Cisbio, Cat#61HFCDAA) was added to each well. The plate was centrifuged at 2000 rpm for 1 min and incubated at 25℃ for 60 min. After incubation, the plate was read on a plate reader (Perkin Elmer, Envision 2105) to measure Em665 / Em615 and the inhibition percentage (%) was calculated.

[0527] In this experiment, the wells without IL-23 protein were used as the 100%inhibition group, and the wells with IL-23 and IL-23R protein and DMSO was used as the 0%inhibition group. The inhibition percentage of the compound on protein binding was calculated using the following formula: Inhibition percentage=100-100* (Signal compound-Signal 100%inhibition)  / (Signal 0%inhibition–Signal 100%inhibition)

[0528] The IC50 value of the compound was derived from 8 concentration points and calculated using XLfit (ID Business Solutions Ltd., UK) software through the following formula: Y=Bottom+ (Top-Bottom)  /  (1+10^ ( (LogIC50-X) ×Slope factor) )

[0529] Where Y is the inhibition percentage, Bottom is the bottom platform value of the S-shaped curve, Top is the top platform value of the S-shaped curve, X is the logarithmic value of the concentration of the test compound, and Slope factor is the slope coefficient of the curve.

[0530] EXAMPLE 2B: HEK-Blue Assay

[0531] HEK-Blue IL-23 cells (InvivoGen, cat#hkb-il23) were cultured in DMED medium containing 10%fetal bovine serum at 37℃ with 5%CO2. Cells were seeded at 1×104cells / well in a 384-well plate. The compounds were serially diluted in 5-fold to generate 8 concentration points, with a final initial concentration of 10μM. Cells were incubated with the compounds at indicated concentrations or DMSO for 1 hour, and then IL-23 (ACRO Biosystem, Cat#ILB-H5219) was added to a final concentration of 2ng / ml. DMSO was used in the control wells. The plate was incubated in a cell culture incubator for 24 hours. Then, 5μL of cell culture supernatant from each test well was transferred to a clear-bottom 384-well plate, and 45μL of QUANTI-BlueTM solution (InvivoGen, Cat#rep-qbs) was added to each well and incubated at 37℃ for 10 min. The absorbance was measured at a wavelength of 630 nm using a plate reader and the data was analyzed using analysis software.

[0532] In this experiment, the wells without IL-23 were used as the 100%inhibition group, and the wells with IL-23 and DMSO were used as the 0%inhibition group. The inhibition percentage of the compound on the IL-23 pathway was calculated using the following formula: Inhibition percentage=100-100* (Signal compound-Signal 100%inhibition)  / (Signal 0%inhibition–Signal 100%inhibition)

[0533] The IC50 value of the compound was derived from 8 concentration points and calculated using XLfit (ID Business Solutions Ltd., UK) software through the following formula: Y=Bottom+ (Top-Bottom)  /  (1+10^ ( (LogIC50-X) ×Slope factor) )

[0534] Where Y is the inhibition percentage, Bottom is the bottom platform value of the S-shaped curve, Top is the top platform value of the S-shaped curve, X is the logarithmic value of the concentration of the test compound, and Slope factor is the slope coefficient of the curve.

[0535] JNJ-2113 (Reference: Scientific Reports (2024) , 14 (1) , 17515)

[0536] JNJ-Reference A (WO2023288017, SEQ ID 2)

[0537] Table 5: Inhibition of binding of interleukin-23 to the interleukin-23 receptor and IL-23-induced bioactivity in HEK-Blue IL-23 cells by Bicyclic peptides

[0538] The compounds listed in Table 5 exhibit comparable in vitro potencies (IL23-IL23R binding and IL-23-induced bioactivity in HEK-Blue IL-23 cells) to reference compound JNJ-2113 and JNJ-Reference A.

[0539] Example 3. Stability of Peptide Inhibitors in Simulated Intestinal Fluid (SIF) and Simulated Gastric Fluid (SGF)

[0540] The remaining amounts of the peptide inhibitors were analyzed using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS / MS) , and then the percentage remaining (%) was calculated to obtain the terminal elimination half-life (t1 / 2) .

[0541] Experimental conditions and procedures:

[0542] 1. Stock Solution

[0543] Appropriate amount of peptide was weighed and dissolved in appropriate amount of DMSO to obtain a 5 mM stock solution.

[0544] 2. Work Solution Preparation

[0545] This 5 mM stock solution was diluted with DMSO to obtain a 2 mM working solution.

[0546] 3. Preparation of simulated intestinal fluid (SIF) and simulated gastric fluid (SGF)

[0547] SGF: 200 mg NaCl was dissolved in 50 ml of water, an appropriate amount of HCl was added to give a volumn of 100 mL and a final pH of 1.2±0.1. 64 mg porcine pepsin was weighed and 20 mL of the above solution was added to give SGF.

[0548] SIF: 680 mg monobasic potassium phosphate was dissoved in 50 mL of water, an appropriate amount of NaOH was added to give a volumn of 100 mL and a final pH of 6.8±0.1. 200 mg pancreatin was weighed and 20 mL of the above solution was added to obtain SIF.

[0549] 4. Stability Study in SIF and SGF

[0550] SIF and SGF were preheated at 37℃. An appropriate amount of the compound working solution was precisely sucked into a 1.1 mL high tube, and blank SIF and SGF were added, followed by vortex mixing. Its stability was investigated at 37℃. Samples were precisely taken at 0 h, 1 h, 6 h and 24 h, and the reaction was terminated by adding a quantitative internal standard solution (5 ng / mL terfenadine containing 0.1%formic acid) . After vortexing for 5 min, centrifugation was performed at 3200 rpm for 15 min at 4℃. The supernatant was taken, diluted with water, mixed by vortex, and then injected for analysis.

[0551] 5. LC-MS / MS Method

[0552] According to the molecular weight of the peptide, the corresponding parent ions and fragment ions were found, and the appropriate mass spectrometry conditions and liquid phase methods were optimized and identified.

[0553] 6. Sample Detection

[0554] The samples were detected by an appropriate LC-MS / MS method.

[0555] 7. Data analysis

[0556] The main computerized systems used in this experiment include:

[0557] Table 6: Stability of Illustrative Peptides Inhibitors in Simulated Intestinal Fluid (SIF) and Simulated Gastric Fluid (SGF)

[0558] The compounds of the present invention listed in Table 6 have stability in SIF and SGF substantially equivalent to that of the control compound JNJ-2113.

[0559] Example 4. In vivo pharmacokinetic Study in SD Rat

[0560] The plasma concentration of the peptide in SD (Sprague-Dawley) rats was determined by the LC-MS / MS, and its pharmacokinetic parameters were calculated by Phoenix WinNolin to screen out compounds with better pharmacokinetic properties.

[0561] Experimental conditions and procedures:

[0562] 1. Formulation Preparation

[0563] Formula 1: An appropriate amount of peptide was weighed into a bottle, and 10%DMA / 10%Solutol / 80%50 mM PBS PH7.4 (v / v / v) was added in sequence, followed by sonication and stirring at room temperature to obtain a homogeneous solution for IV administration.

[0564] Formula 2: An appropriate amount of peptide was weighed into a bottle, and 30%Labrasol / 70%50 mM PBS (v / v) was added in sequence, followed by sonication and stirring at room temperature to obtain a homogeneous solution for intragastric administration (PO) and colonic administration (ID) .

[0565] Formula 3: An appropriate amount of peptide was weighed into a bottle, and 40 mg / mL sodium caprate in 50 mM PBS was added, followed by sonication and stirring at room temperature to obtain a homogeneous solution for intragastric administration (PO) and colonic administration (ID) .

[0566] 2. Animal Experiment

[0567] Three male SD rats were prepared for each group and weighed. The administration dose was 1 mg / kg, and the administration volume was 2 mL / kg for intravenous administration to SD rats. Plasma was collected at 0.0833 h, 0.25 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, and 24 h after administration.

[0568] Three male SD rats were prepared for each group and weighed. The administration dose was 10 mg / kg, and the administration volume was 10 mL / kg for intragastric administration (PO) to SD rats. Plasma was collected at 0.25 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, and 24 h after administration.

[0569] Three male SD rats were prepared for each group and weighed. The administration dose was 50 mg / kg, and the administration volume was 10 mL / kg for intragastric administration (PO) to SD rats. Plasma was collected at 0.25 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, and 24 h after administration.

[0570] Three male SD rats were prepared for each group and weighed. The administration dose was 5 mg / kg, and the administration volume was 2.5 mL / kg for colonic administration (ID) to SD rats. Plasma was collected at 0.0833 h, 0.25 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, and 24 h after administration.

[0571] 3. LC-MS / MS Method

[0572] According to the molecular weight of the peptide, the corresponding parent ions and fragment ions were found, and the appropriate mass spectrometry conditions and liquid phase methods were optimized and identified.

[0573] 4. Preparation of standard curve and quality control (QC) samples

[0574] Preparation of working solutions: an appropriate amount of the test samples was accurately weighed and a suitable amount of DMSO was added to dissolve the samples to give a standard stock solution with a concentration of 2 mg / mL. Using the standard stock solution, acetonitrile-water (50: 50, v / v) was added to prepare standard curve and quality control (QC) working solutions with a series of concentrations for the test samples.

[0575] Preparation of standard curve and QC plasma samples: To 20μL of blank plasma from SD rats was added 2μL of the standard curve and quality control (QC) working solutions of test samples at a series of concentrations, to prepare standard curve plasma samples and QC plasma samples.

[0576] 5. Samples Analysis and Determination

[0577] To 20μL of plasma sample in a 1.1 mL high tube, was added 2μL of acetonitrile-water (50: 50, v / v) then 200μL of internal standard solution (amixed solution of 5 ng / mL terfenadine and propranolol containing 0.1%formic acid) was added. Vortex for 1 minute, centrifuge at 3500 rpm for 10 minutes at 4℃. The supernatant was diluted with 0.1%formic acid aqueous solution, mixed by vortex, and injected for analysis. During sample concentration determination, standard curve samples and QC samples shall be processed simultaneously by the same method.

[0578] 6. Sample Detection

[0579] Detect the samples by an appropriate LC-MS / MS method.

[0580] 7. Data analysis

[0581] The main computerized systems used in this experiment include:

[0582] Table 7A: Pharmacokinetic results (PK, IV and PO) of IL-23 receptor inhibitors in SD rats

[0583] a: Formula 1; b: Formula 2; c: Formula 3

[0584] The compounds of the present invention listed in Table 7A generally exhibit superior rat IV PK and PO compared to the reference compounds JNJ-2113 hydrochloride and JNJ-Reference A, wherein the compounds of Table 7A show approximately 1.1-3.4 times higher exposure (AUC) in rat PK (IV and PO) than JNJ-2113 and JNJ-Reference A, demonstrating its excellent pharmacokinetic properties.

[0585] Table 7B: Pharmacokinetic results (ID, PK) of IL-23 receptor inhibitors in SD rats

[0586] a: Formula 1; b: Formula 2; c: Formula 3

[0587] The compounds of the present invention listed in Table 7B generally exhibit superior rat ID (colonic administration) PK compared to the reference compound JNJ-2113 hydrochloride, wherein Compound 1 shows approximately 3-4 times higher exposure (AUC) in rat ID PK than JNJ-2113, demonstrating its excellent pharmacokinetic properties.

[0588] Example 5. In vivo pharmacokinetic Study in ICR Mouse

[0589] The plasma concentration of the compounds in ICR mice was determined by the LC-MS / MS, and pharmacokinetic parameters were calculated by Phoenix WinNolin to screen out compounds with better pharmacokinetic properties.

[0590] Experimental conditions and procedures:

[0591] 1. Formulation Preparation

[0592] Formula 2: An appropriate amount of peptide was weighed into a bottle, and 30%Labrasol / 70%50 mM PBS (v / v) was added in sequence, followed by sonication and stirring at room temperature to obtain a homogeneous solution for PO or ID administration.

[0593] Formula 3: An appropriate amount of peptide was weighed into a bottle, and 40 mg / mL Sodium caprate in 50 mM PBS was added, followed by sonication and stirring at room temperature to obtain a homogeneous solution for PO or ID administration.

[0594] 2. Animal Experiment

[0595] Three male ICR mice were prepared for each group and weighed. The administration dose was 50 mg / kg, and the administration volume was 10 mL / kg for intragastric administration (PO) to ICR mice. Plasma was collected at 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, and 24 h after administration.

[0596] 3. LC-MS / MS Method

[0597] According to the molecular weight of the peptide, the corresponding parent ions and fragment ions were found, and the appropriate mass spectrometry conditions and liquid phase methods were optimized and identified.

[0598] 4. Preparation of standard curve and quality control (QC) samples

[0599] Preparation of working solutions: To accurately weighed appropriate amount of the test samples, was added suitable amount of DMSO to give a standard stock solution with a concentration of 2 mg / mL. To the standard stock solution, was added acetonitrile-water (50: 50, v / v) to prepare standard curve and quality control (QC) working solutions with a series of concentrations for the test samples.

[0600] Preparation of standard curve and QC plasma samples: To 20μL of blank plasma from ICR mice, was added 2μL of the standard curve and quality control (QC) working solutions of test samples at a series of concentrations, to give standard curve plasma samples and QC plasma samples.

[0601] 5. Samples Analysis and Determination

[0602] To 20μL of plasma sample, was added 2μL of acetonitrile-water (50: 50, v / v) into a 1.1 mL high tube, then added 200μL of internal standard solution (a mixed solution of 5 ng / mL terfenadine and propranolol containing 0.1%formic acid) . It was vortexed for 1 minute, centrifuged at 3500 rpm for 10 minutes at 4℃. The supernatant wasdiluted with 0.1%formic acid aqueous solution, mixed by vortex, and injected for analysis. During sample concentration determination, standard curve samples and QC samples shall be processed simultaneously by the same method.

[0603] 6. Sample Detection

[0604] Detect the samples by an appropriate LC-MS / MS method.

[0605] 7. Data analysis

[0606] The main computerized systems used in this experiment include:

[0607] Table 8: Pharmacokinetic results of IL-23 receptor inhibitors in ICR mouse

[0608] b: Formula 2; c: Formula 3

[0609] As listed in Table 8, the AUC of Compound 1 was～2.2 times that of JNJ-2113 in mouse.

[0610] Example 6. In vivo pharmacokinetic Study in Beagle Dogs

[0611] The plasma concentration of the compounds in Beagle Dogs was determined by the LC-MS / MS, and pharmacokinetic parameters were calculated by Phoenix WinNolin to screen out compounds with better pharmacokinetic properties.

[0612] Experimental conditions and procedures:

[0613] 1. Formulation Preparation

[0614] Formula 1: An appropriate amount of peptide was weighed to a bottle, and 30%Labrasol / 70%50 mM PBS (v / v) was added in sequence, followed by sonication and stirring at room temperature to obtain a homogeneous solution for PO administration.

[0615] Formula 2: An appropriate amount of peptide was weighed to a bottle, and 40 mg / mL Sodium caprate in 50 mM PBS was added, followed by sonication and stirring at room temperature to obtain a homogeneous solution for PO administration.

[0616] 2. Administration

[0617] Three male Beagle Dogs were prepared for each group and weighed. The administration dose was 3 mg / kg, and the administration volume was 5 mL / kg for intragastric administration (PO) to Beagle Dogs. Plasma was collected at 0.25 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, and 24 h after administration.

[0618] 3. LC-MS / MS Method

[0619] According to the molecular weight of the peptide, the corresponding parent ions and fragment ions were found, and the appropriate mass spectrometry conditions and liquid phase methods were optimized and identified.

[0620] 4. Preparation of standard curve and quality control (QC) samples

[0621] Preparation of working solutions: To accurately weighed appropriate amount of the test samples, was added a suitable amount of DMSO to give a standard stock solution with a concentration of 2 mg / mL. To the standard stock solution, was added acetonitrile-water (50: 50, v / v) to prepare standard curve and quality control (QC) working solutions with a series of concentrations for the test samples.

[0622] Preparation of standard curve and QC plasma samples: To 20μL of blank plasma from Beagle Dogs, was added 2μL of the standard curve and quality control (QC) working solutions of test samples at a series of concentrations, to prepare standard curve plasma samples and QC plasma samples.

[0623] 5. Samples Analysis and Determination

[0624] To 20μL of plasma sample, was added 2μL of acetonitrile-water (50: 50, v / v) into a 1.1 mL high tube, then added 200μL of internal standard solution (a mixed solution of 5 ng / mL terfenadine and propranolol containing 0.1%formic acid) . It was vortexed for 1 minute, centrifuged at 3500 rpm for 10 minutes at 4℃. The supernatant was diluted with 0.1%formic acid aqueous solution, mixed by vortex, and injected for analysis. During sample concentration determination, standard curve samples and QC samples shall be processed simultaneously by the same method.

[0625] 6. Sample Detection

[0626] Detect the samples by an appropriate LC-MS / MS method.

[0627] 7. Data analysis

[0628] The main computerized systems used in this experiment include:

[0629] Table 9: Pharmacokinetic results of IL-23 receptor inhibitors in beagle dogs

[0630] b: Formula 1; c: Formula 2

[0631] As listed in Table 8, the AUC of Compound 1 and Compound 50 was 3.6～4.1 times than that of JNJ-2113. Compound 1 and Compound 50 have an exposure higher than that of JNJ-2113 in various species (mouse, rat, dog, etc. ) .

[0632] Example 7: Construction of an IL-23-induced rat skin inflammation model, and evaluation of the in vivo efficacy of Compound 1 (administered by tail vein injection) by measuring the thickness of rat ears.

[0633] After one week of adaptive feeding, female SD rats of 6-8 weeks were randomly divided into 4 groups according to their body weight and ear thickness: normal control group, model control group, JNJ-2113 treatment group, and Compound 1 treatment group. In order to establish IL-23-induced skin inflammation model, recombinant rat IL-23 protein (Sino Biological, Cat: CT045-R08H, Lot: MB18JA0307) was diluted to 75μg / mL with sterile PBS, and 20μL (1.5μg) was injected intracutaneously into the right ear of each rat once a day. Administration was started on the day of the first IL-23 injection, defined as Day 0 after administration. For administration, Compound 1 in 10%PEG400+90%50 mM PBS was injected to tail vein at a dose of 1 mg / kg once a day for 5 consecutive days. During the experiment, the ear thickness of the right ear of the rats was measured every day, and the ear thickening and the inhibition rate of ear thickening (Ear thickness inhibition, ETI) of each group relative to Day 0 were calculated according to the formula: ETI (%) = [1- (Ti-T0)  /  (Vi-V0) ] ×100%: Ti is the average ear thickness for each measurement in the treatment groups, T0 is the average ear thickness measured in the treatment groups at the start of administration, Vi is the average ear thickness measured in the model control group on the same day as Ti, and V0 is the average ear thickness measured in the model control group at the start of administration.

[0634] The ear thickness of rats in the model group began to thicken 2 days after IL-23 injection, and reached the maximum on Day 5, with an increase of 0.216 mm relative to Day 0, while the ear thickness of rats in the normal control group remained unchanged, indicating that the model was successfully constructed. On Day 5 after administration, the ears of rats in JNJ-2113 and Compound 1 treatment groups were thickened by 0.137 mm and 0.070 mm, respectively, and the ETI rates were 36.90%and 64.72%, respectively. The above results indicated that Compound 1 could significantly inhibit IL-23-induced ear thickening in rats compared with the model group, and the inhibitory effect was stronger than that of the positive control JNJ-2113 at the same dose (as shown in FIG. 1) .

[0635] In summary, since Compound 1 shows similar in vitro activity as JNJ-2113, while its pharmacokinetic properties are much better than JNJ-2113, Compound 1 is much more effective than JNJ-2113 at the same dose in the IL-23-induced rat skin inflammation pharmacodynamic model.

[0636] Example 8: Construction of IL-23-induced rat skin inflammation model, and evaluation of the in vivo efficacy of Compound 1 and Compound 50 by measuring rat ear thickness (oral administration) .

[0637] After 3 days of adaptive feeding, female SD rats of 6-8 weeks were randomly divided into 5 groups according to their body weight and ear thickness: normal control group, model control group, JNJ-2113 treatment group, Compound 1 treatment group and Compound 50 treatment group. The day of grouping was defined as Day 0. For administration, JNJ-2113, Compound 1, and Compound 50 were dissolved in Labrasol (Gattefossé, LOT: 190913)  / 50 mM PBS, 30 / 70, v / v) and given by oral gavage at a dose of 15 mg / kg twice a day for 5 days. In order to establish an IL-23-induced rat skin inflammation model, the recombinant rat IL-23 protein (Sino Biological, Cat: CT045-R08H, Lot: MB18JA0307) was diluted to 75μg / mL with sterile PBS, and 20 μL (1.5μg) was injected intracutaneously into the right ear of each rat from Day 1. One injection per day for a total of 4 injections. During the experiment, the ear thickness of the right ear of the rats was measured every day, and the ear thickening and the inhibition rate of ear thickening (Ear thickness inhibition, ETI) of each group relative to Day 0 were calculated according to the formula: ETI (%) = [1- (Ti-T0)  /  (Vi-V0) ] ×100%: Ti is the average ear thickness for each measurement in the treatment groups, T0 is the average ear thickness measured in the treatment groups at the start of administration, Vi is the average ear thickness measured in the model control group on the same day as Ti, and V0 is the average ear thickness measured in the model control group at the start of administration.

[0638] The results of ear thickness showed that the ear thickness of rats in the model group increased continuously after IL-23 injection, reached the maximum on Day 5, with an increase of 0.219 mm relative to Day 0, while the ear thickness of rats in the normal control group remained unchanged, indicating that the model was successfully constructed. On Day 5 after administration, the ears of rats in the JNJ-2113, Compound 1 and Compound 50 treatment groups were thickened by 0.136 mm, 0.144 mm and 0.106 mm, respectively, and the inhibition rates of ear thickening were 37.61%, 34.17%and 51.41%, respectively. The above results indicated that compared with the model group, both Compound 1 and Compound 50 significantly inhibited IL-23-induced ear thickening in rats by oral administration (P<0.01, P<0.0001) , and the inhibitory efficacy was equivalent or stronger than that of the positive control JNJ-2113 at the same dose (as shown in FIG. 2) .

[0639] In summary, since Compound 1 and Compound 50 showed an in vitro activity similar to JNJ-2113, while the oral pharmacokinetic properties were significantly better than JNJ-2113. Thus, by oral administration, Compound 1 and Compound 50 were equivalent or more effective than JNJ-2113 in the rat skin inflammation model induced by IL-23.

Claims

A bicyclic peptide inhibitor of an interleukin-23 receptor, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, wherein the bicyclic peptide inhibitor comprises an amino acid sequence of Formula (I) :R1-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15Formula (I) ,wherein:R1 iswherein ring A is selected from C6-C10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, C3-C10 cycloalkyl, and 3～8 membered heterocyclyl, wherein the C6-C10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, C3-C10 cycloalkyl, and 3～8 membered heterocyclyl are unsubstituted or optionally substituted with one or more substituents B, wherein the substituent B is selected from halogen, C1-C10 alkoxy, C3-C10 cycloalkyl, N, N-dimethylamino-C1-C6 alkoxy and N, N, N-trimethylammonium-C1-C6 alkoxy, wherein n is an integer from 0 to 4;Ra is selected from hydrogen or C1-C4 alkyl group;preferably, wherein R1 is selected from the following groups that are unsubstituted or optionally substituted by one or more substituents C:wherein the substituent C is selected from halogen, wherein m is an integer from 1 to 4, n is an integer from 0 to 4, r is an integer from 1 to4;Ra is selected from hydrogen or methyl;more preferably, wherein R1 is selected fromX3 is selected from Cys, Pen or Abu;X4 is selected fromAsn, Asp orX5 is selected from Thr, Ser or absent; preferably, X5 is Thr or absent;X6 is Trp, either unsubstituted or substituted by a C1-C4 alkyl; preferably, X6 is W (7-Me) ;X7 is selected from Lys (Ac) , Lys (NMeAc) , Pro, X8 is selected from Cys or Pen;X9 is selected from Tyr or Phe, which is unsubstituted or substituted by one or more substituents D, the substituent D is selected from halogen, C1～C6 alkyl, C1～C6 alkynyl, C1～C6 alkoxy, carboxy, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy, N, N, N-trimethyl-5-ammonium pentoxy, N, N-dimethyl-5-aminopentoxy and N, N, N-trimethyl-3-ammonium propoxy; preferably, X9 is selected from Phe orwherein R2 is selected from halogen, ethynyl, C1-C4 alkoxy, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy, N, N, N-trimethyl-5-ammonium pentoxy, N, N-dimethyl-5-aminopentoxy or N, N, N-trimethyl-3-ammonium propoxy;more preferably, X9 is selected from Phe orwherein R2 is selected from halogen, methoxyl, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy, N, N, N-trimethyl-5-ammonium pentoxyamino, N, N-dimethyl-5-aminopentoxy or N, N, N-trimethyl-3-ammonium propoxyamino;X10 is 2Nal;X11 is selected from the followingα-disubstituted amino acids: 4-amino-4-carboxy-tetrahydropyran (THP) , α-MeLys, X12 is any amino acid; preferably, X12 is selected from Glu, Asp, Lys, D-Glu or D-Asp;X13 is any amino acid; preferably, X13 is selected from Glu, Asp, Asn, Ala, Val, Ser, Thr, Arg, D-Ala, D-Asn, D-Asp, D-Glu, D-Ser, D-Thr, D-Arg, more preferably, X13 is selected from Glu, Asp, Asn, Ala, Val, Thr, X14 is 3Pal;X15 is an unsubstituted or optionally substituted Gly with one or more substituents; preferably, X15 is selected fromwherein:the bicyclic peptide inhibitors of the interleukin-23 receptor are cyclized by forming the following bonds:· a disulfide bond between X3 and X8 formed by Cys to Cys, Pen to Pen, and Cys to Pen; or a thioether bond formed by Abu to Cys or Pen, and· an amide bond formed between R1 and carboxylic acid on the side chain of X12 or an amide bond formed between R1 and amino group on the side chain of X12;wherein the bicyclic peptide inhibitor inhibits the binding of an interleukin-23 (IL-23) with the IL-23 receptor (IL-23R) .The bicyclic peptide inhibitor of the interleukin-23 receptor, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof according to claim 1, wherein:R1 is selected from the following groups that are unsubstituted or substituted by one or more substituents C: the substituents C is selected from halogen, wherein m is an integer from 1 to 4, n is an integer from 0 to 4, r is an integer from 1 to 4;Ra is selected from hydrogen or methyl;X3 is selected from Cys, Pen or Abu;X4 is selected fromAsn, Asp orX5 is selected from Thr, Ser or absent;X6 is W (7-Me) ;X7 is selected from Lys (Ac) , Lys (NMeAc) , Pro, X8 is selected from Pen or Cys;X9 is selected from Phe orwherein R2 is selected from halogen, ethynyl, C1-C4 alkoxy, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy, N, N, N-trimethyl-5-ammonium pentoxy, N, N-dimethyl-5-aminopentoxy or N, N, N-trimethyl-3-ammonium propoxy;X10 is 2Nal;X11 is selected from 4-amino-4-carboxy-tetrahydropyran (THP) , α-MeLys, X12 is selected from Glu, Asp, Lys, D-Glu or D-Asp;X13 is selected from Glu, Asp, Asn, Ala, Val, Ser, Thr, Arg, D-Ala, D-Asn, D-Asp, D-Glu, D-Ser, D-Thr, D-Arg, X14 is 3Pal;X15 is selected fromwherein:the bicyclic peptide inhibitor of the interleukin-23 receptor is cyclized by forming the following bonds:· a disulfide bond between X3 and X8 formed by Cys to Cys, Pen to Pen; or a thioether bond formed by Abu to Cys or Pen, and· an amide bond formed between R1 and carboxylic acid on the side chain of X12 or an amide bond formed between R1 and amino group on the side chain of X12;wherein the bicyclic peptide inhibitor inhibits the binding of the interleukin-23 (IL-23) with the IL-23 receptor (IL-23R) .The bicyclic peptide inhibitor of the interleukin-23 receptor, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof according to claim 1, wherein:R1 is selected fromX3 is selected from Cys, Pen or Abu;X4 is selected fromAsn, X5 is Thr or absent;wherein, when X4 is selected from Asn, X5 is Thr;when X4 isX5 is absent;X6 is W (7-Me) ;X7 is selected from Lys (Ac) , Lys (NMeAc) , Pro, X8 is selected from Pen or Cys;X9 iswherein, R2 is selected from methoxyl, 2-aminoethoxy, N, N-dimethyl-2-aminoethoxy or N, N, N-trimethyl-5-ammonium pentoxyamino;X10 is 2Nal;X11 is selected from 4-amino-4-carboxy-tetrahydropyran (THP) , X12 is selected from Glu or Lys;X13 is selected from Glu, Asn, Ala, Val, Thr, X14 is 3Pal;X15 is selected fromwherein:the bicyclic peptide inhibitor of the interleukin-23 receptor is cyclized by forming the following bonds:· a disulfide bond between X3 and X8 formed by Cys to Cys, Pen to Pen; or a thioether bond formed by Abu to Cys or Pen, and· an amide bond formed between R1 and carboxylic acid on the side chain of X12 or an amide bond formed between R1 and amino group on the side chain of X12;wherein the bicyclic peptide inhibitors inhibit the binding of the interleukin-23 (IL-23) with the IL-23 receptor (IL-23R) .A bicyclic peptide inhibitor of an interleukin-23 receptor, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, which is selected from the following bicyclic polypeptides:wherein the bicyclic peptide inhibitor inhibits the binding of an interleukin-23 (IL-23) with an IL-23 receptor (IL-23R) .A bicyclic peptide inhibitor of an interleukin-23 receptor, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, which is selected from the following bicyclic polypeptides:wherein the bicyclic peptide inhibitors inhibit the binding of an interleukin-23 (IL-23) with the IL-23 receptor (IL-23R) .A pharmaceutical composition, comprising the bicyclic peptide inhibitor of the interleukin-23 receptor, the pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof according to any one of claims 1-5, and apharmaceutically acceptable carrier, diluent, or excipient.Use of the bicyclic peptide inhibitors of the interleukin-23 receptor, the pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof according to any one of claims 1-5 or the pharmaceutical composition according to claim 6 in manufacture of a medicament for treating or preventing an IL-23 / IL23-R-mediated inflammatory disease, an autoimmune inflammatory disease, and / or a related disorder.The use according to claim 7, wherein the inflammatory disease, the autoimmune inflammatory disease, and / or the related disorder is selected from: multiple sclerosis, asthma, rheumatoid arthritis, inflammation of the gut, inflammatory bowel diseases (IBDs) , Juvenile IBD, young adult IBD, Crohn’s disease, ulcerative colitis, Celiac disease (Non-tropical sprue) , microscopic colitis, collagenous colitis, eosinophilic gastroenteritis / esophagitis, colitis associated with radiotherapy or chemotherapy such as colitis associated with congenital immunodeficiency in leukocyte adhesion deficiency-1, sarcoidosis, systemic lupus erythematosus, ankylosing spondylitis (axial spondyloarthritis) , psoriatic arthritis, psoriasis (such as plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, palmoplantar pustulosis, psoriasis vulgaris, or erythrodermic psoriasis) , atopic dermatitis, acne inversa, enteropathy associated with seronegative arthropathy, chronic granulomatous disease, glycogen storage disease type 1b, Hermansky-Pudlak syndrome, Chediak-Higashi syndrome, Wiskott-Aldrich syndrome, pouchitis, pouchitis secondary to proctocolectomy and ileoanal anastomosis, gastrointestinal cancer, pancreatitis, insulin-dependent diabetes mellitus, mastitis, cholecystitis, cholangitis, primary biliary cirrhosis, virus-associated enteropathy, pericholangitis, chronic bronchitis, chronic sinusitis, asthma, uveitis, or graft-versus-host disease, comprising administering a therapeutically effective amount of the bicyclic peptide inhibitors of the interleukin-23 receptor, the pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof according to any one of claims 1-5; or the pharmaceutical composition according to claim 6, to a subj ect or patient in need thereof.The use according to claim 7 or 8, the autoimmune inflammatory disease is selected from ulcerative colitis, Crohn's disease, psoriasis, or psoriatic arthritis.

Images