Antibodies capable of selectively binding to his tagged recombinant proteins and use thereof

Abstract

Provided herein are antibodies capable of selectively binding to His-tagged recombinant proteins and use thereof in such as, the purification of His-tagged recombinant proteins.

Description

ANTIBODIES CAPABLE OF SELECTIVELY BINDING TO HIS TAGGED RECOMBINANT PROTEINS AND USE THEREOFTECHNICAL FIELD

[0001] The present disclosure concerns the field of genetic engineering, in particular relates to recombinant protein production and purification. It inter alia pertains to antibodies capable of selectively binding to recombinant proteins having N terminal His tag and use thereof.BACKGROUND

[0002] The histidine tag (His tag) is a most wildly used tag in recombinant protein purification since the length of which is small. The DNA sequence specifying a string of six or more histidine residues is frequently used in vectors for production of recombinant proteins. The result is expression of a recombinant protein with a 6xHis or poly-His-tag fused to its N-or C-terminus.

[0003] Expressed His-tagged proteins can be purified and detected because the string of histidine residues binds to several types of immobilized metal ions, including nickel, cobalt and copper, under specific buffer conditions.

[0004] However, due to the insufficient affinity and low specificity between His tag and commercially available resins (e.g., Ni-excel or Ni-NTA) , the purification of His-tagged recombinant protein, especially those with low expression level, is still a big challenge.

[0005] There is still a great need to develop novel substances that can be used to improve the binding and purification of His-tagged recombinant proteins.SUMMARY OF THE INVENTION

[0006] Disclosed herein are monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof capable of specifically binds to a His-tagged polypeptide or protein. Also disclosed herein are encoding sequence, vector, host cell and products for the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof, as well as product and method for using the same.

[0007] According to some aspects, disclosed herein is a monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof capable of specifically binds to a His-tagged polypeptide or protein, wherein the monoclonal antibody comprises a heavy chain variable region (VH) , or further comprises a light chain variable region (VL) ; and wherein the VH comprises three VH complementarity determining regions (VHCDRs) which are VHCDR1, VHCDR2, and VHCDR3; the VL comprises three VL complementarity determining regions (VLCDRs) which are VLCDR1, VLCDR2, and VLCDR3; and wherein the VHCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 1; the VHCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or 3 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 2 or 3; and the VHCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 4; and / or the VLCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 5; the VLCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 6; and the VLCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 7.

[0008] According to some aspects, disclosed herein is an isolated nucleic acid molecule encoding the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the present application.

[0009] According to some aspects, disclosed herein is a vector comprising the nucleic acid molecule of the present application.

[0010] According to some aspects, disclosed herein is a host cell comprising the nucleic acid molecule or vector of the present application.

[0011] According to some aspects, disclosed herein is a product for producing the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the present application, wherein the product comprises the isolated nucleic acid molecule, the vector or the host cell of the present application.

[0012] According to some aspects, disclosed herein is a method for preparing the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the present application, the method comprises culturing the host cell of the present application or using the product for production under conditions that allow expression of the antibody or fragment, and optionally isolating the antibody or fragment

[0013] According to some aspects, disclosed herein is a product comprising the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the present application for specifically binding to a His-tagged polypeptide or protein.

[0014] Other objects, features, advantages and aspects of the present application will become apparent to those skilled in the art from the following description and appended claims. It should be understood, however, that the following description, appended claims, and specific examples, while indicating preferred embodiments of the application, are given by way of illustration only. Various changes and modifications within the spirit and scope of the disclosed invention will become readily apparent to those skilled in the art from reading the following.

[0015] BRIEF DESCRTPTION OF THE DRAWINGS

[0016] The novel features of the invention are set forth with particularity in the appended claims. A better understanding of the features and advantages of the present invention will be obtained by reference to the following detailed description that sets forth illustrative embodiments, in which the principles of the invention are utilized, and the accompanying drawings of which:

[0017] Figure 1 shows the overall affinity data profile: KD ranking profile of 180 candidates generated from single B cell sequencing.

[0018] Figures 2A&B show VH and VL amino acid sequences of two selected candidates with high affinity (Figure 2A) and the comparison between the sequences of the two candidates (Figure 2B) .

[0019] Figure 3 shows the sequences of mouse mEGFR and mHER2 (with N-His tag and C-Avi tag) used for KD testing.

[0020] Figure 4 shows purity data of two selected candidates in Fab version obtained by SDS-PAGE (left) and SEC-HPLC (right) .

[0021] Figure 5 shows KD data of the two selected candidates in Fab version.

[0022] Figure 6 shows the sequences of the Fabs constructed in Example 6.

[0023] Figures 7A&B show the comparison of the binding affinity of Candidates 1 and 2 and PentaHis to N-terminal His-tagged protein (Figure 7A) and C-terminal His-tagged protein (Figure 7B) .

[0024] DETAILED DESCRIPTION OF THE DISCLOSURE

[0025] The following description and examples illustrate embodiments of the invention in detail. It is to be understood that this invention is not limited to the particular embodiments described herein and as such can vary. Those of skill in the art will recognize that there are numerous variations and modifications of this invention, which are encompassed within its scope.

[0026] It is well known in the art that an antibody is capable of binding to its corresponding antigen with high affinity and high specificity, utilizing this kind of interaction can facilitate the specific binding of His tag recombinant protein. In this invention, we describe antibodies with specific interaction with His tag protein and it can be further prepared onto a resin for purification and in other bio-functional application like Western blotting.

[0027] In the present application, we provide a method for discovering His tag specific antibodies by immunization and then single B cell sequencing and a high throughput screening. By such a method, we provide two particular monoclonal antibodies having high binding specificity and affinity to His tag of a recombinant protein. Once the target antibodies are obtained, they are further constructed into a chimeric Fab for affinity test. The chimeric Fabs share the same VH and VL of original candidates. For example, Candidate l_Fab shares the same VH and VL of candidate 1, and Candidate 2_Fab shares the same VH and VL of candidate 2.The KD of the Fabs of the present application is range from 1-200 nM, preferably 10-180 nM, 20-150 nM or any subranges or values in those ranges for varied His-tagged protein.

[0028] The antibodies and functional fragments thereof of the present application having high specificity and affinity to His tag can be effectively used for binding, identification, purification, enrichment and / or preparation of His-tagged recombinant proteins.

[0029] I. Definitions

[0030] Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by those of ordinary skill in the art to which the disclosure belongs. Although any methods and materials similar or equivalent to those described herein can be used in the practice or testing of the present disclosure, preferred methods and materials are described.

[0031] As used herein, the term "a" or "an" is intended to mean "one or more" (i.e., at least one) of the grammatical object of the article. Singular expressions, unless defined otherwise in contexts, include plural expressions. By way of example, "an element" means one element or more than one element.

[0032] By "about" is meant a quantity, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight or length that varies by as much as 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 or 1%to a reference quantity, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight or length.

[0033] The use of “or” means “and / or” unless stated otherwise.

[0034] As used herein, unless otherwise noted, the term "comprise" , "include" and "including" will be understood to imply the inclusion of a stated step or element or group of steps or elements but not the exclusion of any other step or element or group of steps or elements.

[0035] The phrase "consisting of" is meant to include, and is limited to, whatever follows the phrase "consisting of. " Thus, the phrase "consisting of" indicates that the listed elements are required or mandatory and that other elements may be present.

[0036] The term "isolated" refers to a material that is substantially or essentially free from components that normally accompany it in its native state. The material can be a cell or a macromolecule such as a protein or nucleic acid. For example, an "isolated cell, " as used herein, refers to a cell, which has been purified from the cells in a naturally-occurring state.

[0037] The term “antibody” as used herein encompasses any immunoglobulin, monoclonal antibody, polyclonal antibody, nanobody (VHH) , multi-specific antibody, or bispecific (bivalent) antibody that binds to one or more specific antigens. Typically, as in the case of a native intact antibody, an antibody comprises two heavy chains and two light chains. However, some special antibodies only have VH domains and lack VL domains, but are still highly stable, such as those known as VHH antibodies or nanobodies.

[0038] Each heavy chain comprises a variable region ( “VH” ) and a first, a second, a third constant regions (CH1, CH2, CH3) and conditionally a fourth constant region (CH4) as in the cases of IgM and IgE antibodies, while each light chain consists of a variable region ( “VL” ) and a constant region (CL) . Mammalian heavy chains are classified as α, δ, ε, γ, and μ, and mammalian light chains are classified as λ or κ. The variable regions of the light and the heavy chains are responsible for antigen binding.

[0039] Each variable region typically contains three highly variable loops called "complementarity determining regions (CDRs) " . As used herein, the term "CDR" or "complementarity determining region" means the noncontiguous antigen combining sites found within the variable region of the heavy and / or light chain polypeptides. CDR boundaries can be defined or identified by the conventions of such as Kabat, Chothia, IMGT, Al-Lazikani numbering scheme or combinations thereof. The three CDRs are interposed between flanking stretches known as framework regions (FRs) , which are more highly conserved than the CDRs and form a scaffold to support the hypervariable loops. In some embodiments, one or more of the CDRs are identified according to Kabat numbering scheme, IMGT numbering scheme or a combination of IMGT and Kabat numbering schemes. In some embodiments, one or more of the CDRs are identified according to Kabat numbering scheme.

[0040] The constant regions of the heavy and light chains are not involved in antigen binding, but exhibit various effector functions. The five major classes of antibodies are IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM, which are characterized by the presence of α, δ, ε, γ, and μ heavy chains, respectively. Several of the major antibody classes are divided into subclasses such as IgG1 (γ1 heavy chain) , IgG2 (γ2 heavy chain) , IgG3 (γ3 heavy chain) , IgG4 (γ4 heavy chain) , IgA1 (αl heavy chain) , or IgA2 (α2 heavy chain) . Accordingly, in context of the present invention, a particular IgG isotype, e.g., "IgGl" or "IgG1 isotype" , refers to IgG isotypes of the defined subclass, and different IgG isotypes refer to IgG isotypes of different subclasses.

[0041] The term “percentage of sequence identity” is determined by comparing two optimally aligned sequences over a window of comparison of at least 20 positions, wherein the portion of the polynucleotide or polypeptide sequence in the comparison window may comprise additions or deletions (i.e., gaps) of 20 percent or less, usually 5 to 15 percent, or 10 to 12 percent, as compared to the reference sequences (which does not comprise additions or deletions) for optimal alignment of the two sequences. The percentage is calculated by determining the number of positions at which the identical nucleic acid bases or amino acid residues occur in both sequences to yield the number of matched positions, dividing the number of matched positions by the total number of positions in the reference sequence (i.e., the window size) and multiplying the results by 100 to yield the percentage of sequence identity.

[0042] II. Contents of the invention

[0043] Provide herein is an anti-His tag antibody or antigen binding fragment thereof (also called “functional fragment” ) comprising a His tag binding domain, wherein the His tag binding domain comprises heavy chain (VH) complementary determining region (CDR) 1, 2 and 3, for example the VHCDR1 has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, the VHCDR2 has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or 3, and the VH CDR3 has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0044] In some embodiments, the His tag binding domain of the anti-His tag antibody or antigen binding fragment thereof further comprises light chain (VL) complementary determining region (CDR) 1, 2 and 3, for example the VLCDR1 has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, the VLCDR2 has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and the VL CDR3 has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 7.

[0045] In some embodiments, the His tag binding fragment of the anti-His tag antibody or the antigen binding fragment thereof comprises a polypeptide having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 19 or 20, or its combination to SEQ ID NO: 21 or 22.

[0046] In some embodiments, the His tag binding fragment of the anti-His tag antibody or the antigen binding fragment thereof comprises a polypeptide which has a sequence identity of more than 80% (such as more than 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) with SEQ ID NO: 17, 18 or 19 and has the binding specificity to His tag.

[0047] In some embodiments, the antibodies or fragments thereof may be defined by their variable sequence, which include additional “framework” regions (FR) . The antibodies sequences may vary from these sequences. The three CDRs in the same chain are interposed between flanking stretches, i.e., framework regions (FRs) , which are more highly conserved than the CDRs and form a scaffold to support the hypervariable loops. The sequences of FRs that can be used in the present application are exemplarily shown in the Sequence listing, such as in SEQ ID NOs: 8-18.

[0048] In some embodiments, the anti-His tag antibody or the antigen binding fragment is a monovalent or multivalent monoclonal antibody, nanobody, scFv, Fab, F (ab) 2, Fv. In some embodiments, the anti-His tag is a humanized antibody, a chimeric antibody. In some embodiments, a Fab comprises an amino acid chain of SEQ ID NO: 23 or 24 and an amino acid chain of SEQ ID NO: 25 or 26. In some embodiments, an Fab comprises an amino acid chain of SEQ ID NO: 23 and an amino acid chain of SEQ ID NO: 25. In some embodiments, an Fab comprises an amino acid chain of SEQ ID NO: 24 and an amino acid chain of SEQ ID NO: 26.

[0049] The anti-His tag antibody or the antigen binding fragment have high specificity and affinity to His tags. In some embodiments, the KD of the anti-His tag antibody or the antigen binding fragment for various His-tagged proteins is in a range from 1 nM to 200 nM, from 2 nM to 150 nM, from 3 nM to 100 nM. The specificity and affinity of the antibodies or functional fragments of the present application to His tags and thus His-tagging proteins can be determined via methods known in the art, such as Bio-layer interferometry (BLI) , Biacore, OI-RD.

[0050] Further provided herein is a vector (such as E. coli, yeast cells, insect cells, genetically modified plant cells) comprising the nucleic acid molecule of the present application, and host cells (such as CHO, NSO, HEK293) comprising the nucleic acid molecule or vector of the present application. A person skilled in the art could make conventional selection to suitable vector and host cells according to the need in practice.

[0051] Also provided herein is a product comprising the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the present application for specifically binding to a His-tagged polypeptide or protein. Due to the high specification and affinity of the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the present application to His tag, the product of the present application can be effectively used in affinity binding, identification, purification, enrichment and / or preparation of His-tagged polypeptide or protein.

[0052] To fit the use in practice, the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of the present application can be further modified or formulated physically or chemically, such as by immobilized to a support (such as a beads, preferably a magnetic bead; resin, e.g., a resin column; chip; gel; silicon sphere) ; chemically modified to improve the stability in use.

[0053] III. Specific Embodiments

[0054] Further embodiments of the present invention are described again in the following. The present invention in particular also provides for the following items:

[0055] 1. A monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof capable of specifically binds to a His-tagged polypeptide or protein, wherein the monoclonal antibody comprises a heavy chain variable region (VH) , or further comprises a light chain variable region (VL) ; and wherein

[0056] the VH comprises three VH complementarity determining regions (VHCDRs) which are VHCDR1, VHCDR2, and VHCDR3; the VL comprises three VL complementarity determining regions (VLCDRs) which are VLCDR1, VLCDR2, and VLCDR3; and wherein

[0057] the VHCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 1;

[0058] the VHCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or 3 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 2 or 3; and

[0059] the VHCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 4; and / or

[0060] the VLCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 5;

[0061] the VLCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 6; and

[0062] the VLCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 7.

[0063] 2. The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of item 1, wherein the monoclonal antibody comprises

[0064] a VH comprising (a) a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 2, and a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4; or (b) a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 3, and a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4; and / or

[0065] a VL comprising a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7.

[0066] 3. The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of item 1, wherein the monoclonal antibody comprises one or more frame regions (FRs) selected from SEQ ID NOs: 8-18 or having at least 80%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 8-18.

[0067] In some embodiments, the FRs in the VH (VHFRs) is one or more selected from an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 8-12 or having at least 80%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 8-12; and / or the FRs in the VL (VLFRs) is one or more selected from an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 13-18 or having at least 80%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 13-18.

[0068] In some embodiments, the four FRs in the VH (VHFRs) are VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 or 9, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively.

[0069] In some embodiments, the four FRs in the VL (VLFRs) are VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 or 14, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15 or 16, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively.

[0070] In some embodiments, the four FRs in the VH (VHFRs) are (i) VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; or (ii) VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively.

[0071] In some embodiments, the four FRs in the VL (VLFRs) are (i) VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; or (ii) VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively.

[0072] In some embodiments, the four FRs in the VH (VHFRs) and the four FRs in the VL (VLFRs) are selected from:

[0073] (A) VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; and, VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; or

[0074] (B) VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; and, VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively.

[0075] 4. The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of item 1, wherein the VH of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 19 or 20 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 19 or 20.

[0076] In some embodiments, the VL of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 or 22 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 21 or 22.

[0077] In some embodiments, the VH of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 19 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 19; and / or the VL of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 21.

[0078] In some embodiments, the VH of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 20 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 20; and / or the VL of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 22.

[0079] 5. The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of item 1, wherein

[0080] (a) the antibody comprises: a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 2, a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4, a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7;

[0081] (b) the antibody comprises: a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 2, a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4, a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7; and, a VHFR1 of SEQ ID NO: 8, a VHFR2 of SEQ ID NO: 10, a VHFR3 of SEQ ID NO: 11, a VHFR4 of SEQ ID NO: 12, a VLFR1 of SEQ ID NO: 13, a VLFR2 of SEQ ID NO: 15, a VLFR3 of SEQ ID NO: 17, a VLFR4 of SEQ ID NO: 18;

[0082] (c) the antibody comprises: a VH of SEQ ID NO: 19 and a VL of SEQ ID NO: 21;

[0083] (a') the antibody comprises: a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 3, a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4, a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7;

[0084] (b') the antibody comprises: a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 3, a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4, a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7; and, a VHFR1 of SEQ ID NO: 9, a VHFR2 of SEQ ID NO: 10, a VHFR3 of SEQ ID NO: 11, a VHFR4 of SEQ ID NO: 12, a VLFR1 of SEQ ID NO: 14, a VLFR2 of SEQ ID NO: 16, a VLFR3 of SEQ ID NO: 17, a VLFR4 of SEQ ID NO: 18; and / or

[0085] (c') the antibody comprises: a VH of SEQ ID NO: 20 and a VL of SEQ ID NO: 22.

[0086] 6. The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of item 1, wherein the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof is selected from a humanized antibody, a human antibody, a chimeric antibody, bispecific antibody, a monovalent scFv (single chain fragment variable) antibody, divalent scFv, Fab fragment, F (ab') 2 fragment, F (ab') 3 fragment, Fv fragment, or single chain antibody.

[0087] In some embodiments, the antibody or antigen binding fragment thereof is an IgG antibody or a recombinant IgG antibody or antibody fragment. In some embodiments, the equilibrium dissociation constant (KD) of the antibody or antigen binding fragment thereof to His-tagged protein is in a range from about 1～200 nM. In some embodiments, the Fab comprises a heavy chain of SEQ ID NO: 23 or 24, and a light chain of SEQ ID NO: 25 or 26. In some embodiments, the Fab comprises a heavy chain of SEQ ID NO: 23 and a light chain of SEQ ID NO: 25. In some embodiments, the Fab comprises a heavy chain of SEQ ID NO: 24 and a light chain of SEQ ID NO: 26.

[0088] 7. The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of item 1, wherein the His-tag is at the N-terminal of the polypeptide or protein.

[0089] In some embodiments, the His-tag is a tag comprising at least 5 histidine residues. In some embodiments, the His-tag is a 5xHis-tag, 6xHis-tag, or comprising 7, 8, 9, 10, 11 or 12 histidine residues. In some embodiments, the polypeptide or protein is a recombinant polypeptide or protein. In some embodiments, the polypeptide or protein is a therapeutic, prophylactic, diagnostic polypeptide or protein. In some embodiments, the polypeptide or protein further comprises another affinity tag or report tag, which optionally selected from the group consisting of Avi, FLAG, MBP, GST, SUMO, Halo, SNAP, c-Myc, HA, e-GFP, eCFP, eYFP, eCherry.

[0090] 8. An isolated nucleic acid molecule encoding the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of any of items 1-7.

[0091] 9. A vector comprising the nucleic acid molecule of item 8.

[0092] 10. A host cell comprising the nucleic acid molecule of item 8 or the vector of item 9.

[0093] 11. A product for producing the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of any of items 1-7, wherein the product comprises the isolated nucleic acid molecule of item 8, the vector of item 9 or the host cell of item 10.

[0094] 12. A method of preparing the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of any of items 1-7, the method comprises culturing the host cell of item 10 or using the product of item 11 under conditions that allow expression of the antibody or fragment, and optionally isolating the antibody or fragment.

[0095] 13. A product comprising the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of any of items 1-7 for specifically binding to a His-tagged polypeptide or protein.

[0096] 14. The product of item 13, wherein the His-tag is at the N-terminal of the polypeptide or protein.

[0097] In some embodiments, the His-tag is a tag comprising at least six histidine residues. In some embodiments, the His-tag is a 6xHis-tag, or comprising 7, 8, 9, 10 histidine residues. In some embodiments, the polypeptide or protein is a recombinant polypeptide or protein. In some embodiments, the polypeptide or protein is a therapeutic, prophylactic, diagnostic polypeptide or protein. In some embodiments, the polypeptide or protein further comprises another affinity tag or report tag, which optionally selected from the group consisting of Avi, FLAG, MBP, GST, SUMO, Halo, SNAP, c-Myc, HA, e-GFP, eCFP, eYFP, eCherry.

[0098] 15. The product of item 13, wherein the product is for affinity binding, identification, purification, enrichment and / or preparation of His-tagged polypeptide or protein.

[0099] In some embodiments, the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof is in a solution form, is in a carrier or is immobilized on a support.

[0100] In some embodiments, the support is selected from gel, resin, silicon sphere, bead, chip.

[0101] This invention is not limited by the exemplary methods and materials disclosed herein, and any methods and materials similar or equivalent to those described herein can be used in the practice or testing of embodiments of this invention. Numeric ranges are inclusive of the numbers defining the range. The headings provided herein are not limitations of the various aspects or embodiments of this invention which can be read by reference to the specification as a whole.

[0102] Throughout the specification, where compositions are described as comprising components or materials, it is contemplated that the compositions can in embodiments also consist essentially of, or consist of, any combination of the recited components or materials, unless described otherwise. Reference to "the disclosure" and “the invention” and the like includes single or multiple aspects taught herein; and so forth. Aspects taught herein are encompassed by the term "invention" .

[0103] It is preferred to select and combine preferred embodiments described herein and the specific subject-matter arising from a respective combination of preferred embodiments also belongs to the present disclosure.EXAMPLES

[0104] The present invention is further illustrated by the following examples. These examples are provided merely for illustration purposes and shall not be interpreted to limit the scope or content of the present invention in any way. The CDRs in the Examples are identified according to Kabat numbering scheme.

[0105] Publications cited herein and the materials for which they are cited are hereby specifically incorporated by reference in their entireties. All reagents, unless otherwise indicated, were obtained commercially. All parts and percentages are by weight unless stated otherwise. An average of results is presented unless otherwise stated. The abbreviations used herein are conventional, unless otherwise defined.

[0106] Amino acid sequences of polypeptide / proteins or fragments thereof used in the Examples can be found in the attached sequence listing.

[0107] Example 1. Immunization

[0108] Female BALB / C mice from Zhejiang Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd at age of 6-8 weeks were immunized. The mice were immunized with 30 μg / mouse / injection of KLH-conjugated 5His (with adjuvant Adju-Phos (InvivoGen) or TiterMax (Sigma-Alderich) ) .

[0109] KLH-conjugated 5His was prepared by buffer exchanging KLH (Sigma, H8283-100mg) ) to PBS, pH6.5; mixing the solution with succinimidyl 4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-l-carboxylate (TCL, S0853) at a ratio of 500: 1 for 1 hour at room temperature; and then adding 5His-containing polypeptides to the mixture at a ratio of 1000: 1 and leaving overnight at room temperature. The final sample was formulated into PBS, pH7.4 and filtered using 0.2μm membrane.

[0110] The mice were injected every two weeks through footpad and subcutaneous or Intraperitoneal. When the serum titer was sufficiently high (＞=1: 24, 300) , the mice with the highest titer were given a final boost with mEGFR and mHER2 (with N-His tag and C-Avi tag, as shown in Figure 3) without adjuvant. After 2 days (48-hours) , the mice were euthanized, the lymph nodes and spleen were collected for cell preparation.

[0111] Example 2. Specific B Cell Enrichment

[0112] Splenocytes from immunized mouse was firstly purified to remove non-B cells, and specific B cells were isolated by magnetic-assisted cell sorting (MACS) using  Separator Starting Kits (130-042-501, Miltenyi Biotec) and Mouse B cell Isolation Kit (130-090-862, Miltenyi Biotec) . Enrichment of antigen-specific B cells was conducted using biotinylated-6xHis-Antigen together with Strepavidin MACS Beads for further purification. The obtained B cells were sent for single cell mRNA sequencing thereafter.

[0113] Example 3. Single B cell sequencing

[0114] After antigen-specific enrichment, all B cells were loaded on a 10X Chromium A Chip (10xGenomics) . Single-cell lysis and RNA first-strand synthesis were performed using 10X Chromium Single Cell 50 Library &Gel Bead Kit according to the manufacturer's protocol. RNA samples were washed with 80%EtOH for three times and sealed in a plastic box for sample transportation.

[0115] The following VDJ library preparation is performed according to the manufacturer's protocol (Chromium Single Cell V (D) J Reagent Kits, 10X Genomics) . The library was quantified by using Qubit 3.0 (ThermoFisher) , and Fragment Analyzer. Sequencing was performed on a NovaSeq platform. Average sequencing depth aimed at 5,000 read pairs per cell. About 10G raw sequencing data were harvested.

[0116] Example 4. Antibody Sequence Selection

[0117] VH-VL sequence assembly and annotation were implemented using cellranger (v7.0.1) . VH-VL pairs with complete V (D) J and unique VH and VL were kept for downstream analysis.

[0118] Two independent methods were used to do VH-VL clonotype clustering:

[0119] Method 1: VH-VLs sharing identical CDR3 region for both heavy and light chains were grouped into the same clonotypes; and

[0120] Method 2: VH-VLs were grouped into the same clonotypes with criteria including sharing same V and J, same length of CDRH3, and similarity of CDRH sequence.

[0121] For the two independent methods, clonotypes with larger than 3 BCR pairs were picked out. The common VH-VL pairs maintained in the two groups were kept for downstream.

[0122] Somatic hypermutation (SHM) analysis of heavy chain were carried out with Change-O (v1.2.0) . VH-VL pairs with heavy chain SHM rate larger than 2%were maintained. At last, 180*VH-VLs with IgG type were picked out for wet-lab validation.

[0123] Example 5. High Throughput Screening of anti-His Fab Candidates

[0124] 180*VH-VLs were gene synthesized and then subclone onto hIgG1 backbone to make the corresponding monoclonal antibody plasmid versions. The plasmids were then used for transient expression in 96-deep well plates with CHO-K1. After 7 days expression, the plates were purified using Protein A resin to generate protein solution for following testing. Screening experiments for 180 clones were conducted by label-free bio-layer interferometry (BLI) analysis with Octet Red96 (Sartorius) . Streptavidin (SA) biosensors were pre-equilibrated for 15 min in PBST (1X phosphate buffered solution, 0.05%Tween 20, pH 7.4) . mEGFR (Figure 3) was diluted at 10 μg / mL in PBST and loaded onto SA biosensors for 300s. The association step was performed through incubating biosensors with the supernatant of crude product for 130s, followed by a dissociation step lasting 180s. Biosensors were then regenerated using three cycles of 1M NaCl for 30s each. Fitting was performed with a 1: 1 binding fit model by Octet Data Analysis 9.0 (Sartorius) .

[0125] The overall affinity data profile is shown in Figure 1.

[0126] Among which, 8 unique candidates with and top KD (KD range from 1～2x10-2) were selected for further screening. The screening experiments were carried out by label-free bio-layer interferometry (BLI) analysis with Octet Red96 (Sartorius) . Anti-Human IgG Fc Capture (AHC) biosensors were pre-equilibrated for 15 min in PBST (1X phosphate buffered solution, 0.05%Tween 20, pH 7.4) . Candidates were coupled onto AHC biosensors for 200 s at a concentration of 15 μg·mL-1 in PBST. His-PD1 (SEQ ID NO: 29) was allowed to bind for 120 s and then dissociation in PBST for 180 s, with a 200 nM starting concentration and four three-fold dilutions. The biosensor surface was regenerated through a 5-second exposure to 10 mM Glycine, pH 1.7, alternating with a 5-second exposure of neutralization PBST buffer, and then repeating this sequence for a total of 5 times. Raw data was processed using a double reference subtraction method. The binding affinity constant were calculated using 1: 1 binding model through global fitting of multiple kinetic traces. Data were analyzed by Octet Data Analysis 9.0 (Sartorius) .

[0127] The results can be found in the Table 1 below. Among which, Candidate 1 and Candidate 2 display slower dissociation rates of 8.67E-03 1 / sand 9.97E-03 1 / srespectively, indicating a better binding capacity compared to other candidates.

[0128] Based on the above screening, 2 clones, Candidate 1 and Candidate 2, with high KD value and kinetics were selected, the sequence of which are shown in Figures 2A&2B.

[0129] Example 6. Production of Recombinant anti-His Fab

[0130] The obtained VH and VL sequences were combined with hIgG1 backbone to generate a chimera Fab version. The detail sequences of Fabs are shown in Figure 6. The sequences of the antigens mEGFR and mHER2 were obtained from https:  / / www. uniprot. org / and the sequence of which can be found in Figure 3.

[0131] After gene synthesis, all the target genes were cloned into expression vector. The vector was used for transient expression by CHO-K1 cells with 1 L volume in a 3L shaking flask or lmL volume in a commercially available 96 deep well plate. After 7 days of cell culture, the supernatant of cells was collected by centrifuging and further filtrated. The supernatant was loaded onto a commercially available 50mL KanCapG column followed by a Superdex200 SEC column polish (lxPBS pH7.4 as mobile phase) . The main peak in SEC column was collected and filtrated. Finally, SEC-HPLC and SDS-PAGE were performed to characterize the Fabs (Figure 4) .

[0132] Example 7. Affinity Test of anti-His Fabs

[0133] Affinity experiments were carried out by label-free bio-layer interferometry (BLI) analysis with Octet Red96 (Sartorius) . Streptavidin (SA) biosensors were pre-equilibrated for 15 min in PBST (lx phosphate buffered solution, 0.05%Tween 20, pH 7.4) . mEGFR was coupled onto SA biosensors for 200s at a concentration of 10 μg / mL in PBST. Anti-His candidates were allowed to bind for 120 s and then dissociation in PBST for 180 s, with a 300 nM starting concentration and four three-fold dilutions. Raw data were processed using a double reference subtraction method. The binding affinity constant were calculated using 1: 1 binding model through global fitting of multiple kinetic traces. Data were analyzed by Octet Data Analysis 9.0 (Sartorius) .

[0134] The results are shown in Figure 5. The results verify that candidate 1 and candidate 2 have high affinity to His-tag.

[0135] Example 8. Comparison of the His-tagged protein binding affinity between candidates and PentaHis

[0136] SPR binding assay was conducted using Biacore T200 (Cytiva) . Anti-human IgG (Fc) antibody was first diluted to 25 μg / mL in 10 mM sodium acetate buffer (pH5.0) and immobilized onto flow cell 2 of CM5 chip for 7 minutes with the amine coupling kit (Cytiva / BR100050) . Then, 1 μg / ml candidates 1 and 2 were captured on flow cell 2 via anti-human IgG (Fc) antibody at a flow rate of 10 μL / min for 30 s and 40 s, respectively. mEGFR (i.e., His6-mEGFR-Avi in Figure 7A) and PD1-His6 (i.e., PD1-G-His6 in figure 7B) dilutions were injected for 90 s with a 250 nM starting concentration and seven three-fold dilutions in HBS-EP+buffer, followed by a 300 s dissociation phase at a flow rate of 30 μL / min. For commercial PentaHis mAb, 1μg / ml PentaHis was captured for 45 s, and 1500 nM mEGFR and 250 nM PD1-His6 starting concentrations were utilized. Between injection cycles, the chip surface was regenerated with 3X 20 s injections of 3 M MgCl2 and reloaded with ligands. Data was analyzed by Biacore Insight Evaluation Software (Version 5.0.18.22102, Cytiva) .

[0137] The results are shown in Figure 6. For N-terminal His-tagged protein mEGFR, candidates 1 and 2 show similar excellent binding behavior to commercial antibody PentaHis (Qiagen, Inc. 34660, for sensitive detection of 6x His-tagged proteins) . Concentration-dependent signals were observed upon titration of mEGFR for both candidates and PentaHis. Similar off-rate values were observed, while candidates 1 and 2 exhibited faster on-rate values compared to PentaHis, resulting in stronger binding. Candidate 1 and candidate 2 bind His-tagged protein with KD values of 8.53 nM and 4.45 nM to mEGFR, respectively, which is one order of magnitude stronger than PentaHis.

[0138] In the case of C-terminal His-tagged protein PD-1-His6, candidates 1 and 2 show no binding behavior, whereas commercial antibody PentaHis binds to the C-terminal His-tagged protein. The results suggest the candidates of the present application has high binding specificity to N-terminal His-tagged proteins, which benefits specific binding and purification of N-terminal His-tagged proteins.

[0139] The present invention is not to be limited in scope by the embodiments disclosed herein, which are intended as single illustrations of individual aspects of the invention, and any that are functionally equivalent are within the scope of the invention. Various modifications to the compositions and methods of the invention, in addition to those described herein, will become apparent to those skilled in the art from the foregoing description and teachings, and are similarly intended to fall within the scope of the invention. Such modifications or other embodiments can be practiced without departing from the true scope and spirit of the invention.

[0140] Appendix

[0141] Information about the sequences in the present application:

Claims

1.A monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof capable of specifically binds to a His-tagged polypeptide or protein, wherein the monoclonal antibody comprises a heavy chain variable region (VH) , or further comprises a light chain variable region (VL) ; and whereinthe VH comprises three VH complementarity determining regions (VHCDRs) which are VHCDR1, VHCDR2, and VHCDR3; the VL comprises three VL complementarity determining regions (VLCDRs) which are VLCDR1, VLCDR2, and VLCDR3; and whereinthe VHCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 1;the VHCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or 3 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 2 or 3; andthe VHCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 4; and / orthe VLCDR1 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 5;the VLCDR2 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 6; andthe VLCDR3 comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 or having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 7.2.The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of claim 1, wherein the monoclonal antibody comprisesa VH comprising (a) a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 2, and a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4; or (b) a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 3, and a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4; and / ora VL comprising a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7.3.The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of claim 1, wherein the monoclonal antibody comprises one or more frame regions (FRs) selected from SEQ ID NOs: 8-18 or having at least 80%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 8-18; and / orwherein the FRs in the VH (VHFRs) is one or more selected from an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 8-12 or having at least 80%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 8-12; and / or the FRs in the VL (VLFRs) is one or more selected from an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 13-18 or having at least 80%sequence identity to any one of SEQ ID NOs: 13-18; and / orwherein the four FRs in the VH (VHFRs) are VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 or 9, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; and / orwherein the four FRs in the VL (VLFRs) are VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 or 14, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15 or 16, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; and / orwherein the four FRs in the VH (VHFRs) are (i) VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; or (ii) VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; and / orwherein the four FRs in the VL (VLFRs) are (i) VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; or (ii) VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; and / orwherein the four FRs in the VH (VHFRs) and the four FRs in the VL (VLFRs) are selected from:(A) VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; and, VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; or(B) VHFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, VHFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, VHFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, VHFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively; and, VLFR1 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, VLFR2 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, VLFR3 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, VLFR4 having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to the aforementioned amino acid sequences, respectively.4.The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of claim 1, wherein the VH of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 19 or 20 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 19 or 20; and / orwherein the VL of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 or 22 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 21 or 22; and / orwherein the VH of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 19 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 19; and / or the VL of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 21; and / orwherein the VH of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 20 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 20; and / or the VL of the antibody comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 or an amino acid sequence having at least 80%sequence identity to SEQ ID NO: 22.5.The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of claim 1, wherein(a) the antibody comprises: a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 2, a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4, a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7; and / or(b) the antibody comprises: a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 2, a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4, a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7; and, a VHFR1 of SEQ ID NO: 8, a VHFR2 of SEQ ID NO: 10, a VHFR3 of SEQ ID NO: 11, a VHFR4 of SEQ ID NO: 12, a VLFR1 of SEQ ID NO: 13, a VLFR2 of SEQ ID NO: 15, a VLFR3 of SEQ ID NO: 17, a VLFR4 of SEQ ID NO: 18; and / or(c) the antibody comprises: a VH of SEQ ID NO: 19 and a VL of SEQ ID NO: 21; and / or(a') the antibody comprises: a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 3, a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4, a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7; and / or(b') the antibody comprises: a VHCDR1 of SEQ ID NO: 1, a VHCDR2 of SEQ ID NO: 3, a VHCDR3 of SEQ ID NO: 4, a VLCDR1 of SEQ ID NO: 5, a VLCDR2 of SEQ ID NO: 6, and a VLCDR3 of SEQ ID NO: 7; and, a VHFR1 of SEQ ID NO: 9, a VHFR2 of SEQ ID NO: 10, a VHFR3 of SEQ ID NO: 11, a VHFR4 of SEQ ID NO: 12, a VLFR1 of SEQ ID NO: 14, a VLFR2 of SEQ ID NO: 16, a VLFR3 of SEQ ID NO: 17, a VLFR4 of SEQ ID NO: 18; and / or(c') the antibody comprises: a VH of SEQ ID NO: 20 and a VL of SEQ ID NO: 22.6.The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of claim 1, wherein the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof is selected from a humanized antibody, a human antibody, a chimeric antibody, bispecific antibody, a monovalent scFv (single chain fragment variable) antibody, divalent scFv, Fab fragment, F (ab') 2 fragment, F (ab') 3 fragment, Fv fragment, or single chain antibody; and / orwherein the antibody or antigen binding fragment thereof is an IgG antibody or a recombinant IgG antibody or antibody fragment; and / orwherein the equilibrium dissociation constant (KD) of the antibody or antigen binding fragment thereof to His-tagged protein is in a range from about 1～200 nM; and / orwherein the Fab comprises a heavy chain of SEQ ID NO: 23 or 24, and a light chain of SEQ ID NO: 25 or 26; and / orwherein the Fab comprises a heavy chain of SEQ ID NO: 23 and a light chain of SEQ ID NO: 25; and / orwherein the Fab comprises a heavy chain of SEQ ID NO: 24 and a light chain of SEQ ID NO: 26.7.The monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of claim 1, wherein the His-tag is at the C-terminal and / or N-terminal of the polypeptide or protein; and / orwherein the His-tag is a tag comprising at least 5 histidine residues; and / orwherein the His-tag is a 5xHis-tag, 6xHis-tag, or comprising 7, 8, 9, 10, 11 or 12 histidine residues; and / orwherein the polypeptide or protein is a recombinant polypeptide or protein; and / orwherein the polypeptide or protein is a therapeutic, prophylactic, diagnostic polypeptide or protein; and / orwherein the polypeptide or protein further comprises another affinity tag or report tag, which optionally selected from the group consisting of Avi, FLAG, MBP, GST, SUMO, Halo, SNAP, c-Myc, HA, e-GFP, eCFP, eYFP, eCherry.8.An isolated nucleic acid molecule encoding the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of any of claims 1-7.9.A vector comprising the nucleic acid molecule of claim 8.10.A host cell comprising the nucleic acid molecule of claim 8 or the vector of claim 9.11.A product for producing the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of any of claims 1-7, wherein the product comprises the isolated nucleic acid molecule of claim 8, the vector of claim 9 or the host cell of claim 10.12.A method of preparing the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of any of claims 1-7, the method comprises culturing the host cell of claim 10 or using the product of claim 11 under conditions that allow expression of the antibody or fragment, and optionally isolating the antibody or fragment.13.A product comprising the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof of any of claims 1-7 for specifically binding to a His-tagged polypeptide or protein.14.The product of claim 13, wherein the His-tag is at the C-terminal and / or N-terminal of the polypeptide or protein; and / orwherein the His-tag is a tag comprising at least six histidine residues; and / orwherein the His-tag is a 6xHis-tag, or comprising 7, 8, 9, 10 histidine residues; and / orwherein the polypeptide or protein is a recombinant polypeptide or protein; and / orwherein the polypeptide or protein is a therapeutic, prophylactic, diagnostic polypeptide or protein; and / orwherein the polypeptide or protein further comprises another affinity tag or report tag, which optionally selected from the group consisting of Avi, FLAG, MBP, GST, SUMO, Halo, SNAP, c-Myc, HA, e-GFP, eCFP, eYFP, eCherry.15.The product of claim 13, wherein the product is for affinity binding, identification, purification, enrichment and / or preparation of His-tagged polypeptide or protein; and / orwherein the monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof is in a solution form, is in a carrier or is immobilized on a support; and / orwherein the support is selected from gel, resin, silicon sphere, bead, chip.

Images