Crystal forms of a weel inhibitor and preparation method thereof

Abstract

Provides crystal forms of Weel inhibitor 6- (2,6-dichlorophenyl) -2- ((3-methyl-4-((3S,5R) -3,4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) -8,9-dihydroimidazo [1,2-a]pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one and the preparation method thereof. The crystal forms are suitable for the treatment or prevention of diseases or conditions that respond to the inhibition of Weel activity, such as cancers.

Description

Crystal Forms of A Weel Inhibitor and Preparation Method ThereofTechnical field

[0001] The present disclosure relates to crystal forms of Weel inhibitor 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ( (3 S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1 -yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one and the preparation method thereof.Background

[0002] The process of growth, proliferation of eukaryotic cells involves the mother cell producing two identical daughter cells through mitosis of the cell′s chromosomes by accurately replicating its genome which contains genetic information. This process of cell proliferation and division is called a cell cycle, which includes the entire process from the completion of one division to the completion of the next division. The cell cycle comprises four growth stages: the G1 phase, where proteins, RNAs and the like are synthesized in large quantities after mitosis, the S phase, where DNA is synthesized and replicated, the G2 phase, the preparatory stage before mitosis, and the M phase, where cells undergo mitosis. Depending on the condition and needs of the cell, the cell decides to divide and proliferate, or stop, through the cell cycle. Cell proliferation and division must maintain its genetic information intact and correct. Whether or not to enter the next phase of the cell cycle until the completion of the entire cell cycle is ensured and completed by multiple checkpoints during the cell cycle process.

[0003] There are a plurality of cell cycle checkpoints throughout the cell cycle. Each cell cycle checkpoint comprises a very complex system and consists of multiple factors. The checkpoint in the G1 phase determines whether the cell enters the cell cycle by examining the state inside and outside the cell, and thus determines whether the cell enters the S phase DNA synthesis. The G1 checkpoint is a complex system that includes the well-known CDK4 / CDK6. Another important checkpoint is when the cell completes DNA replication (S phase) and enters the cell growth phase (G2 phase) , the so-called G2-M checkpoint. This checkpoint examines whether the cell has DNA damage or defects after DNA synthesis, which determines whether the cell undergoes mitosis (M-phase) with chromosome segregation. Cell cycle checkpoints at this stage include complex kinases Cdkl complexes, including Cyclin-B-cdc2 (Nurse, P., 1990, Nature 344, 503-508) . Activation of CDK1 leads to the initiation of mitosis, and its subsequent inactivation is accompanied by the completion of mitosis. The activity of Cdk1 is regulated by cdc2 binding to Cyclin-A or Cyclin-B and its phosphorylation. For example, activation of the cyclin B-Cdk1 complex leads to mitosis (Lindqvist, A., et al., 2009, The Journal of cell biology 185, 193-202) . Cdc2 is maintained in an inactive state by phosphorylation before the cell enters mitosis. Its phosphorylation state is achieved by tyrosine kinase Weel, etc. In addition, there are M-phase cell cycle checkpoints.

[0004] Weel phosphorylates tyrosine 15 (Y15) on Cdk1 and thus inhibits Cdk1 activity (McGowan, C.H., et al., 1993, The EMBO journal 12, 75-85; Parker, L.L., et al., 1992, Science 257, 1955-1957) . Thus, Weel is a key inhibitory regulator of Cdk1 activity and plays an important role at the G2-M phase checkpoints, ensuring that DNA enters mitosis without damage when DNA replication is complete (O′Connell et al., 1997, The EMBO journal 16, 545-554) . Loss or inactivation of Weel can lead to premature entry into mitosis, causing mitotic failure and cell death (Stumpff, J., et al., 2004, Curr Biol 14, 2143-2148) . Some tumor cells have functional defects in the G1 phase cell cycle checkpoint and rely on the G2-M phase checkpoint to ensure the cell cycle (Sancar, A., et al., 2004, Annual review of biochemistry 73, 39-85) . The loss of Weel expression or inhibition of Weel activity in these cancer cells, resulting from the loss of p53 protein function, leads to the loss of the G2-M phase checkpoint. Consequently, tumor cells become very sensitive to DNA damage, with this sensitization being particularly prominent in tumor cells that lose the ability of the G1 phase checkpoint (Wang, Y., et al., 2004, Cancer biology &therapy 3, 305-313) .

[0005] In summary, inhibition of Weel activity can selectively induce apoptosis in cancer cell with defective cell cycle checkpoints, while exerting minimal impact on normal cell cycle checkpoints. Therefore, Weel inhibitors have the potential to be used as targeted therapeutics for the treatment of cancer and other cell proliferation disorders.

[0006] In addition, since inhibition of Weel activity increases the sensitivity of cells to DNA damage, Weel inhibitors can be used in combination with anticancer drugs that cause DNA damage or inhibit DNA repair mechanisms, including PARP inhibitors such as Olaparib, Niraparib, Rucaparib, Talazoparib, and Senaparib; HDAC inhibitors such as Vorinostat, Romidepsin, Panobinostat and Belinostat, which are used to treat cancer or other cell proliferative conditions. Weel inhibitors may also be used in combination with other anti-cancer drugs related to cell division cell cycle checkpoints, including Chk1 / 2 inhibitors, CDK4 / 6 inhibitors such as palbociclib, ATM inhibitors, ATR inhibitors, and Myt1 inhibitors, which are used to treat cancer and other conditions.

[0007] Weel kinase inhibitors in the clinical stage at present include ZN-c3 and Debio-0123, which are undergoing phase II clinical trials; SY-4835 and SC-0191, which are in Phase I clinical trial. Additionally, there are also several Weel kinase inhibitors currently being investigated in preclinical studies, such as ATRN-W1051, SPH-6162, and SGR-3515 and the like.

[0008] WO2018090939A1 discloses a compound of the following formula I: (6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ( (3S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one) as a Weel inhibitor and its preparation method, and its contents are incorporated herein as a reference in its entirety.

[0009] The specific crystal form of the compound of formula I may have beneficial properties, for example, with respect to its solubility and / or its stability and / or its bioavailability and / or its impurity distribution and / or its filtration properties and / or its drying properties and / or its low moisture absorption, and / or it can be handled more easily and / or can be micronized and / or made into tablets. In addition, there is still a need for alternative or modified synthetic preparation methods, especially for large-scale, environmentally friendly production.Summary

[0010] The present disclosure provides solvates and crystal forms of the compound of formula I (6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ( (3S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one) .

[0011] In some embodiments, the solvates include, but are not limited to, hydrates, MTBE solvates, 1, 4-dioxane solvates, THF solvates, 2-MeTHF solvates, toluene solvates, IPAc solvates, CHC13 solvates and DMAc solvates.

[0012] In one or more embodiments, the present disclosure provides crystal forms A, B, D, E, F, G, H, I, J, K, L, L, M, N, O and P of the compound of formula I (6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ( (3 S , 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1 -yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one) , or a mixture of two or more of these crystal forms, such as a mixture of A and D, a mixture of D and G, a mixture of A, B and H, etc.

[0013] The present disclosure also provides crystal forms A, B, D, E, F, G, H, I, J, K, L, M, N, O and P of the compound of formula I (6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ( (3S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one) , or a mixture of two or more of these crystal forms, such as a mixture of A and D, A mixture of D and G, a mixture of A, B and H, in the preparation of a medicament for treatment or prevention of diseases or conditions that respond to inhibition of Weel activity, especially the cancers described herein.

[0014] The present disclosure also provides a method for preparing the compound of formula I (6-(2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3 -methyl-4- ( (3 S , 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1 -yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one) , and its crystal forms, especially a method for preparing the crystal form B of the compound of formula I.

[0015] The present disclosure also provides a pharmaceutical composition comprising the compound of formula I (6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ( (3 S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one) and one or more pharmaceutically acceptable excipients.

[0016] The present disclosure also provides a method for preparing a drug, which comprises a step of mixing the crystal form B of compound I of the present disclosure and a pharmaceutically acceptable excipient. Preferably, the method further comprises a step of making the resulting mixture into tablets or granules.

[0017] The present disclosure also provides a method for treating or preventing a disease or condition that responds to inhibition of Weel activity, which comprises administering an effective amount of a crystal form of the compound of formula I, a pharmaceutical composition comprising the crystal form, or a pharmaceutical composition prepared using the crystal form described in any embodiment of the present disclosure to a subject in need.Description of Drawings

[0018] Figure 1 shows the XRPD spectrum of the crystal form A.

[0019] Figure 2 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form A.

[0020] Figure 3 shows the XRPD spectrum of the crystal form B.

[0021] Figure 4 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form B.

[0022] Figure 5 shows the XRPD spectrum of the crystal form D.

[0023] Figure 6 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form D.

[0024] Figure 7 shows the XRPD spectrum of the crystal form E.

[0025] Figure 8 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form E.

[0026] Figure 9 shows the XRPD spectrum of the crystal form F.

[0027] Figure 10 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form F.

[0028] Figure 11 shows the XRPD spectrum of the crystal form G.

[0029] Figure 12 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form G.

[0030] Figure 13 shows the XRPD spectrum of the crystal form H.

[0031] Figure 14 shows the TGA and DSC thermogram ofpolymorph H.

[0032] Figure 15 shows the XRPD spectrum of the crystal form I.

[0033] Figure 16 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form I.

[0034] Figure 17 shows the XRPD spectrum of the crystal form J.

[0035] Figure 18 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form J.

[0036] Figure 19 shows the XRPD spectrum of the crystal form K.

[0037] Figure 20 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form K.

[0038] Figure 21 shows the XRPD spectrum of the crystal form L.

[0039] Figure 22 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form L.

[0040] Figure 23 shows the XRPD spectrum of the crystal form M.

[0041] Figure 24 shows the XRPD spectrum of the crystal form N.

[0042] Figure 25 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form N.

[0043] Figure 26 shows the XRPD spectrum of the crystal form O.

[0044] Figure 27 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form O.

[0045] Figure 28 shows the XRPD spectrum of the crystal form P.

[0046] Figure 29 shows the TGA and DSC thermogram of the crystal form P.

[0047] Figure 30 shows the XRPD spectrum of the crystal form B from a process production batch.Detailed Description

[0048] I. General Description

[0049] In the following descriptions, certain specific details are set out to provide a thorough understanding of the various embodiments of the present disclosure. However, a person skilled in the art will understand that the present disclosure can be practiced without these details. The following descriptions of several embodiments are made with the understanding that the present disclosure is an example of the subject matter claimed, and is not intended to limit the attached claims to the specific embodiments shown. Headings throughout this disclosure are provided for convenience only and should not be construed as limiting the claims in any way. The embodiments shown under any heading may be combined with the embodiments shown under any other heading.

[0050] II. Definitions

[0051] Unless the context otherwise requires, throughout the specification and claims, the words "including" and variations thereof are construed in an open, inclusive meaning, i.e., "including, but not limited to" ; at the same time, "include" and its variants such as "comprise" or "contain" also include "is mainly consisting of... " and "be consisting of... " .

[0052] A reference to "an embodiment" or "one embodiment" throughout the present specification means that a particular feature, structure or characteristic described in conjunction with that embodiment is included in at least one embodiment of the present disclosure. Thus, the phrases "in an embodiment" or "in one embodiment" that appear throughout this specification do not necessarily refer to the same embodiment. In addition, a particular feature, structure, or characteristic may be combined in any appropriate manner in one or more embodiments.

[0053] Embodiments of"the compound of formula I" mentioned throughout the specification include the crystals, salts, eutectics and solvate forms of the formula and / or the compound disclosed herein.

[0054] "Pharmaceutically acceptable excipients" include, but are not limited to, any adjuvants, carriers, excipients, flow aids, sweeteners, diluents, preservatives, dyes / colorants, flavor enhancers, surfactants, wetting agents, dispersants, suspending agents, stabilizers, isotonic agents, solvents, or emulsifiers that have been approved by the FDA or NMPA or other relevant authorities for acceptable use in humans or livestock.

[0055] "A pharmaceutical composition" means a preparation comprising the compound of the present disclosure and a vehicle generally accepted in the art for the delivery of a biologically active compound to a mammalian (e.g., human) . Such vehicles include all pharmacologically acceptable excipients for this purpose.

[0056] "An effective amount" or "a therapeutically effective amount" means the amount of a compound according to the present disclosure which, when administered to a patient in need, is sufficient to achieve an effective treatment of a disease state, condition, or disorder. Such an amount will be sufficient to elicit a biological or medical response from the tissue system or patient sought by the researcher or clinician. The amount of the compound constituting a therapeutic effective amount according to the present disclosure will vary according to factors such as: the compound and its biological activity, the composition used for administration, the time of administration, the route of administration, the rate of excretion of the compound, the duration of treatment, the type of disease state or condition being treated and its severity, the drug used in combination with or in conjunction with the compounds of the present disclosure, and the age, weight, general health, gender, and diet of the patient. Persons of ordinary skill in the art may routinely determine the therapeutically effective amount on the basis of their own knowledge, prior art and the present disclosure.

[0057] Unless otherwise specified, the term "treatment" as used herein means to reverse, alleviate, inhibit its progression, or prevent the disorder or condition, or one or more symptoms of such disorder or condition, to which this term applies.

[0058] "Prevention" means any treatment of a disease or condition that results in the non-development of the clinical symptoms of the disease or condition.

[0059] The term "subject" , or "patient" refers to an animal, such as a mammalian (including human) , that has been or will be the subject of treatment, observation, or experimentation. The method described herein can be used for human therapeutic and / or veterinary applications. In some embodiments, the subject is a mammalian (or patient) . In some embodiments, the subjects (or patients) are human beings, domestic animals (e.g., dogs and cats) , farm animals (e.g., cattle, horses, sheep, goats, and pigs) , and / or laboratory animals (e.g., mice, rats, hamsters, guinea pigs, pigs, rabbits, dogs, and monkeys) . In some embodiments, the subject (or patient) is a human being. "Human being (or patient) in need" means a human being who may have or is suspected to have a disease or condition that would benefit from certain treatments; for example, a treatment with the compound disclosed herein according to the present disclosure.

[0060] "Tautomer" refers to the transfer of protons from one atom of a molecule to another atom of the same molecule. The present disclosure includes tautomers of any of the compounds.

[0061] The reference to an "approximate" value or parameter in the present disclosure includes (and describes) the implementation of the value or parameter itself. For example, a description that mentions "about X" includes a description of "X" . In addition, the singular forms "a (n) " and "the" include the plural, unless otherwise specified. Thus, for example, a reference to "the compound" includes a plurality of such compounds, and a reference to "the assay" includes a reference to one or more assays and their equivalents known to those skilled in the art.

[0062] "Pharmaceutically acceptable" or "physiologically acceptable" means compounds, salts, compositions, dosage forms and other substances that can be used in the preparation of pharmaceutical compositions suitable for veterinary or human medicinal use.

[0063] A "unit dose form" is a physically discrete unit which is suitably used as a unit dose of a subject (e.g., human subjects and other mammals) , each containing a predetermined amount of an active substance calculated to produce the desired therapeutic effect, along with suitable medicinal excipients.

[0064] For the purposes of the present disclosure, the compound or its pharmaceutical composition can be administered by any route to achieve its intended purpose. For example, it can be administered by parenteral, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, transdermal, buccal, intrathecal, intracranial, nasal, or topical routes. As an alternative or in parallel, it can be administered orally. The dosage of the drug will depend on the patient′s age, health and weight, the type of concurrent treatment, the frequency of treatment, and the benefit of the treatment required.

[0065] When referring to, for example, XRPD spectrums, DSC thermograms, or TGA graphs, the term "substantially as shown in... " includes spectrums, thermograms or graphs that are not necessarily identical to those described herein, but which, when considered by a person of ordinary skill in the art, fall within the limits of experimental error or deviation.

[0066] In the present disclosure, the allowable error of the angular position (2 θ ) is ±0.2 ° for the position of the characteristic powder X-ray diffraction peak of the crystal form. This error is used when two powder X-ray diffraction patterns are compared. If a diffraction peak in one spectrum is designated as a certain angular position range (2 θ ) of the measured peak location ± 0.2 ° , while a diffraction peak in another spectrum is designated as another angular position range (2 θ ) of the measured peak location ±0.2 ° , and if these peak ranges overlap, the two peaks are considered to have the same angular position (2 θ ) . For example, ifthe diffraction peak of a spectrum is measured at 5.20° , the tolerable error allows the peak to be specified in the range of 5.00° -5.40° for comparison. If the control peak of another diffraction pattern is determined to be at 5.35 ° , the tolerable error allows the peak to be specified in the range of 5.15° -5.55° for comparison. Because of the overlap between the two peak ranges, the two peaks compared are considered to have the same angular position (2 θ ) . In some embodiments of the present disclosure, the tolerable error of the angular position (2 θ ) is ±0.1 °.

[0067] III. Crystal Forms

[0068] The compound of formula I of the present disclosure is 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4 - ( (3 S, 5 R) -3, 4, 5 -trimethylpip erazin-1 -yl) phenyl) amino ) -8, 9 -dihydro imidaz o [1, 2 -a] pyrimido [5, 4 -e] pyrimidin-5 (6H) -one and its chemical structure is shown below:

[0069] The present disclosure provides crystal forms of the compound of formula I. Crystal forms of the present disclosure have properties suitable for medical or pharmaceutical uses, including, but not limited to, bioavailability, stability, purity, and / or manufacturability.

[0070] In some embodiments, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ = 6.9 ± 0.2°, 12.7± 0.2°, 13.7 ± 0.2°, 17.8 ± 0.2°, and 21.2 ± 0.2°. In some embodiments, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of this crystal form further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, five, six or all seven of 2θ = 12.2 ± 0.2°, 17.1 ± 0.2°, 19.4 ± 0.2°, 24.0 ± 0.2°, 25.5 ± 0.2°, 28.1 ± 0.2°, and 33.4 ± 0.2°. In some embodiments, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of this crystal form further contains diffraction peaks at any one, two, three or all four of 2θ = 8.6± 0.2°, 10.4± 0.2°, 21.7± 0.2°, and 22.9± 0.2°. In some embodiments, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of this crystal form further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, five, six or all seven of 2θ = 10.1± 0.2°, 13.1± 0.2°, 14.9± 0.2°, 15.9± 0.2°, 20.5± 0.2°, 22.4± 0.2°, and 24.3± 0.2°. In some embodiments, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of this crystal form further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, five, six or all seven of 2θ = 15.8± 0.2°, 16.6± 0.2°, 17.4± 0.2°, 19.8± 0.2°, 22.1± 0.2°, 26.1± 0.2°, and 27.6± 0.2°.

[0071] In some embodiments, the present disclosure provides crystal forms A, B, D, E, F, G, H, I, J, K, L, M, N, O and P of the compound of formula I. The present disclosure also comprises mixtures of two or more of crystal forms of the compound of formula I, such as a mixture of A and D, a mixture of D and G, a mixture of A, B and H, etc.

[0072] Crystal form A

[0073] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form A of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ =8.6 ±0.2°, 10.4 ± 0.2°, 13.7 ± 0.2°, 17.3 ± 0.2°, and 22.9 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form A further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, or all five of 2θ=12.1 ± 0.2°, 12.8 ± 0.2°, 17.6 ± 0.2°, 20.8 ± 0.2°, and 21.7 ± 0.2°.

[0074] Preferably, the crystal form A has an XRPD spectrum that is substantially as shown in Figure 1.

[0075] The crystal form A of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 2.

[0076] In some embodiments, the crystal form A of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0077] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 1;

[0078] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 2;

[0079] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 2.

[0080] Crystal form B

[0081] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form B of the compound of formula I of the present disclosure contains characteristic peaks at at least three, four, five, or six of 2θ = 6.3 ± 0.2°, 6.9 ± 0.2°, 10.1 ± 0.2°, 12.4 ± 0.2°, 12.7 ± 0.2°, 13.1 ± 0.2°, 13.9 ± 0.2°, 14.1 ±0.2°, 14.9 ± 0.2°, 15.9 ± 0.2°, 19.4 ± 0.2°, 20.5 ± 0.2°, 21.3 ± 0.2°, 22.4 ± 0.2°, 24.0 ± 0.2°, 24.3 ±0.2°, 25.5 ± 0.2°, and 28.2 ± 0.2°. In some embodiments, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form B has characteristic peaks at at least 1, at least 2, or at least 3 of 2θ =10.1 ± 0.2°, 13.1 ± 0.2°, 14.1 ± 0.2°, and 20.5 ± 0.2°.

[0082] In some embodiments, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form B of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ = 6.9 ± 0.2°, 12.7 ± 0.2°, 15.9 ± 0.2°, 20.5 ± 0.2°, and 24.3 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form B further contains diffraction peaks at any one, two, three, or all four of 2θ = 10.1 ± 0.2°, 13.9 ± 0.2°, 19.4± 0.2°, and 22.4± 0.2°, and / or at any one, two, three, or all four of 2θ = 6.3 ± 0.2°, 13.1 ± 0.2°, 21.3 ± 0.2°, and 24.0 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form B further contains diffraction peaks at any one, any two, or all three of 2θ=12.4 ± 0.2°, 14.9 ± 0.2°, and 25.5 ± 0.2°.

[0083] In some embodiments, the XRPD spectrum of the crystal form B contains diffraction peaks at 6.3 ± 0.2°, 6.9 ± 0.2°, 12.7 ± 0.2°, 13.1 ± 0.2°, 15.9 ± 0.2°, 20.5 ± 0.2°, 21.3 ± 0.2°, 24.0 ± 0.2°, and 24.3 ± 0.2°. In some embodiments, the XRPD spectrum of the crystal form B further contains diffraction peaks in any one, two, three, or all four of 2θ = 10.1 ± 0.2°, 13.9 ± 0.2°, 19.4± 0.2°, and 22.4± 0.2°, and optionally any one, any two, or all three of 2θ = 12.4 ± 0.2°, 14.9 ± 0.2°, and 25.5 ± 0.2°.

[0084] In some embodiments, the crystal form B of the compound of formula I has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 3 or Figure 30.

[0085] In some embodiments, the crystal form B of the compound of formula I has diffraction peaks at 2θ as shown in Table 2 or Table 18.

[0086] In some embodiments, the crystal form B of the compound of formula I has a TGA thermogram substantially as shown in Figure 4.

[0087] In some embodiments, the crystal form B of the compound of formula I has a DSC thermogram substantially as shown in Figure 4.

[0088] In the preferred embodiment, the crystal form B of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0089] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 3 or 30;

[0090] (b) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 4; and

[0091] (c) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 4.

[0092] In some embodiments, the crystal form B is an anhydrous crystal form.

[0093] Crystal form D

[0094] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form D of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ = 12.7 ±0.2°, 16.7 ± 0.2°, 19.8 ± 0.2°, and 22.1 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form D further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, five, or all six of 2θ = 6.8 ± 0.2°, 13.2 ± 0.2°, 17.4 ± 0.2°, 17.9 ± 0.2°, 26.1 ± 0.2°, and 27.6 ± 0.2°. Preferably, the crystal form D has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 5.

[0095] The crystal form D of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 6.

[0096] In some embodiments, the crystal form D of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0097] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 5;

[0098] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 6; and

[0099] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 6.

[0100] In some embodiments, the crystal form D is a hydrate.

[0101] Crystal form E

[0102] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form E of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ= 8.1 ±0.2°, 12.7 ± 0.2°, 16.3 ± 0.2°, 20.7 ± 0.2°, and 22.0 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form E further contains diffraction peaks at any one, two, three or all four of 2θ= 11.9 ± 0.2°, 15.9 ±0.2°, 17.7 ± 0.2°, and 19.7 ± 0.2°. Preferably, the crystal form E has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 7.

[0103] The crystal form E of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram as shown in Figure 8.

[0104] In some embodiments, the crystal form E of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0105] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 7;

[0106] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 8; and

[0107] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 8.

[0108] In some embodiments, the crystal form E is a MTBE solvate.

[0109] Crystal form F

[0110] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form F of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ=8.5 ± 0.2°, 12.1 ± 0.2°, 17.0 ± 0.2°, and 22.8 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form F further contains diffraction peaks in any one, two, three or all four of 2θ = 12.9 ± 0.2°, 16.5 ± 0.2°, 20.6 ± 0.2°, and 22.2 ± 0.2°. Preferably, the crystal form F has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 9.

[0111] The crystal form F of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 10.

[0112] In some embodiments, the crystal form F of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0113] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 9;

[0114] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 10; and

[0115] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 10.

[0116] In some embodiments, the crystal form F is an isomorphic crystal form, and there is a 1, 4-dioxane solvate and a THF solvate.

[0117] Crystal form G

[0118] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form G of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ = 4.2 ±0.2°, 4.6 ± 0.2°, 14.1 ± 0.2°, and 18.6 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form G further contains diffraction peaks at any one, any two, or all three of 2θ=16.0 ± 0.2°, 23.0 ± 0.2°, and 28.0 ± 0.2°. Preferably, the crystal form G has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 11.

[0119] The crystal form G of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 12.

[0120] In some embodiments, the crystal form G of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0121] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 11;

[0122] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 12; and

[0123] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 12.

[0124] Crystal form H

[0125] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form H of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ = 7.7 ±0.2°, 8.1 ± 0.2°, 15.5 ± 0.2°, and 24.0 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form H further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, or all five of 2θ=12.5 ± 0.2°, 13.1 ± 0.2°, 13.8 ± 0.2°, 22.5 ± 0.2°, and 23.3 ± 0.2°. Preferably, the crystal form H has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 13.

[0126] The crystal form H of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 14.

[0127] In some embodiments, the crystal form H of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0128] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 13;

[0129] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 14; and

[0130] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 14.

[0131] Crystal form I

[0132] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form I of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ = 7.4 ±0.2°, 8.3 ± 0.2°, 16.7 ± 0.2°, and 22.3 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form I further contains diffraction peaks at any one, two, three, any four, or all five of 2θ=13.0 ± 0.2°, 20.3 ± 0.2°, 21.0 ± 0.2°, 21.7 ± 0.2°, and 29.9 ± 0.2°. Preferably, the crystal form I has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 15.

[0133] The crystal form I of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 16.

[0134] In some embodiments, the crystal form I of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0135] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 15;

[0136] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 16; and

[0137] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 16.

[0138] In some embodiments, the crystal form I is a 2-MeTHF solvate.

[0139] Crystal form J

[0140] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form J of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ= 8.3 ±0.2°, 12.3 ± 0.2°, 14.7 ± 0.2°, 22.7 ± 0.2°, and 24.4 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form J further contains diffraction peaks at any one, any two, or all three of 2θ=8.5 ± 0.2°, 14.3 ± 0.2°, and 16.6 ± 0.2°. Preferably, the crystal form J has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 17.

[0141] The crystal form J of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 18.

[0142] In some embodiments, the crystal form J of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0143] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 17;

[0144] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 18; and

[0145] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 18.

[0146] In some embodiments, the crystal form J is a toluene solvate.

[0147] Crystal form K

[0148] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form K of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ = 7.7 ±0.2°, 8.0 ± 0.2°, 8.3 ± 0.2°, 16.1 ± 0.2°, and 22.4 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form K further contains diffraction peaks in any one, two, three or all four of 2θ= 14.5 ± 0.2°, 16.7 ± 0.2°, 19.0 ± 0.2°, and 23.7 ± 0.2°. Preferably, the crystal form K has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 19.

[0149] The crystal form K of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 20.

[0150] In some embodiments, the crystal form K of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0151] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 19;

[0152] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 20; and

[0153] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 20.

[0154] In some embodiments, the crystal form K is an IPAc solvate.

[0155] Crystal form L

[0156] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form L of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ= 8.6 ±0.2°, 17.1 ± 0.2°, 18.5 ± 0.2°, and 22.7 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form L contains diffraction peaks at any one, two, three, four, or all five of 2θ=16.4 ± 0.2°, 17.8 ± 0.2°, 21.4 ± 0.2°, 21.9 ± 0.2°, and 25.5 ± 0.2°. Preferably, the crystal form L has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 21.

[0157] The crystal form L of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 22.

[0158] In some embodiments, the crystal form L of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0159] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 21;

[0160] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 22; and

[0161] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 22.

[0162] In some embodiments, the crystal form L is a CHCl3 solvate.

[0163] Crystal form M

[0164] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form M of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ = 12.7 ±0.2°, 17.4 ± 0.2°, 19.8 ± 0.2°, and 21.9 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form M further contains diffraction peaks at any one, two, three, or all four of 2θ = 13.0 ± 0.2°, 16.7 ± 0.2°, 20.8 ± 0.2°, and 22.2 ± 0.2°. Preferably, the crystal form M has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 23. In some embodiments, the crystal form M is an anhydrous crystal form.

[0165] Crystal form N

[0166] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form N of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ= 7.9 ±0.2°, 13.3± 0.2° and 24.7 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form N contains diffraction peaks at either or both of 2θ= 12.8 ± 0.2° and 22.9 ± 0.2°. Preferably, the crystal form N has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 24.

[0167] The crystal form N of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 25.

[0168] In some embodiments, the crystal form N of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0169] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 24;

[0170] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 25; and

[0171] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 25.

[0172] In some embodiments, the crystal form N is a toluene solvate.

[0173] Crystal form O

[0174] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form O of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ= 5.3 ±0.2°, 7.5 ± 0.2°, 18.1 ± 0.2°, 20.9 ± 0.2°, and 26.1 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form O further contains diffraction peaks at any one, two, three, or all four of 2θ = 10.5 ± 0.2°, 13.5 ± 0.2°, 15.1 ± 0.2°, and 22.2 ± 0.2°. Preferably, the crystal form O has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 26.

[0175] The crystal form O of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 27.

[0176] In some embodiments, the crystal form O of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0177] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 26;

[0178] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 27; and

[0179] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 27.

[0180] In some embodiments, the crystal form O is a DMAc solvate.

[0181] Crystal form P

[0182] The X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form P of the compound of formula I of the present disclosure contains diffraction peaks (characteristic peaks) at 2θ = 5.0 ±0.2°, 10.1 ± 0.2°, and 20.8 ± 0.2°. Preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form P further contains diffraction peaks at any one, two, three or all four of 2θ = 15.1 ± 0.2°, 15.9 ± 0.2°, 20.2 ± 0.2°, and 25.3 ±0.2°. Preferably, the crystal form P has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 28.

[0183] The crystal form P of the present disclosure may have a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 29.

[0184] In some embodiments, the crystal form P of the present disclosure has at least one, any two or all three of the following (a) ～ (c) :

[0185] (a) an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 28;

[0186] (b) a TGA thermogram substantially as shown in Figure 29; and

[0187] (c) a DSC thermogram substantially as shown in Figure 29.

[0188] IV. Preparation method

[0189] The present disclosure provides a method for preparing the compound of formula I 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ( (3S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one, and the whole synthesis process does not need separation and purification, such as by any chromatographic column, which is especially suitable for large-scale industrial production. Compared with the prior art, such as Example 77 of WO2018090939 (PCT / CN2017 / 111230) (see Example 1a-1e and 4b) , the method of the present disclosure has great superiority in terms of reaction, workup, yield and product quantity and quality.

[0190] Specifically, the compound of formula I is prepared using a method that comprises the following steps 4a and 4b:

[0191] Step (4a) : the compound of Formula 5 and a chlorinating reagent undergo a chlorination reaction in the presence of an organic solvent to obtain the compound of Formula 6;

[0192] Step (4b) : the compound of Formula 6 and the compound of Formula 7 or a salt thereof undergo a substitution reaction in the presence of a base and an organic solvent to obtain the compound of Formula I.

[0193] In one or more embodiments of step (4a) , the chlorinating reagent is selected from one or more of SO2Cl2, SOCl2 and CH3SO2Cl. Preferably, the chlorinating reagent is SO2Cl2. Preferably, the molar ratio of the chlorinating reagent such as SO2Cl2 to the compound of Formula 5 is (2.8 ～ 3.1) : 1.

[0194] In one or more embodiments of step (4a) , the organic solvent is selected from one or more of acetonitrile, dichloromethane and tetrahydrofuran. Preferably, the organic solvent is acetonitrile. Preferably, the ratio of the volume of the organic solvent used such as acetonitrile to the mass of the compound of Formula 5 is (15 ～16) : 1.

[0195] In one or more embodiments of step (4a) , the reaction temperature is 20～30 ℃. In one or more embodiments of step (4a) , the reaction time is 2～6 hours; for example, the reaction mixture is kept at a temperature of 20～30 ℃ for 2～6 hours.

[0196] In one or more embodiments of step (4a) , after the reaction is completed, the reaction system is concentrated under reduced pressure to 1.0～2.0V.

[0197] In one or more embodiments of step (4a) , methyl tert-butyl ether and DIPEA are added to the concentrated reaction system. In some embodiments, the addition amount of DIPEA and methyl tert-butyl ether is such that the molar ratio of DIPEA to the compound of Formula 5 is (2.8 ～ 3.2) : 1 and the ratio of the volume of methyl tert-butyl ether to the mass of the compound of Formula 5 is (4～6) : 1. In some embodiments, DIPEA and methyl tert-butyl ether are mixed in the required amount, and the resulting mixture is added to the concentrated reaction system. In some embodiments, when the mixture of DIPEA and methyl tert-butyl ether is added, the temperature of the system is controlled at 15～25 ℃, and the system is kept at that temperature for 1～3 hours after addition. In some embodiments, after the completion of insulation, the system is filtered and the filter cake is washed with methyl tert-butyl ether to obtain the compound of Formula 6. Optionally, the method further comprises a step of drying the filter cake to obtain a dried compound of Formula 6. The filter cake can be dried at a temperature of 40～50℃ for 6～15 hours.

[0198] In some embodiments, in step (4a) , to a mixture of acetonitrile and the compound of Formula 5 at 20～30 ℃ is added a solution of sulfonyl chloride in acetonitrile, stirred for 2-6 hours and then concentrated to 1.0～2.0V under reduced pressure to obtain a concentrated mixture, to which are added methyl tert-butyl ether and N, N-diisopropylethylamine at 15～25 ℃. The resulting mixture is stirred for 1～3 hours, filtered and washed with methyl tert-butyl ether to obtain the compound of Formula 6. In some embodiments, the filter cake is dried at a temperature of 40～50 ℃ for 6～15 hours to obtain the dried compound of Formula 6.

[0199] In one or more embodiments of step (4b) , the salt of the compound of Formula 7 is a hydrochloride salt.

[0200] In one or more embodiments of step (4b) , the base may be selected from one or more of Et3N (triethylamine) , pyridine, DBU (1, 8-diazadicycloundec-7-ene) , TMG (tetramethylguanidine) , DABCO (triethylenediamine) , DIPEA (N, N-diisopropylethylamine) and NMM (N-methylmorpholine) . Preferably, the base is DIPEA. The molar ratio of the base used such as DIPEA to the compound of Formula 6 is (2.5 ～ 3.0) : 1.

[0201] In one or more embodiments of step (4b) , the organic solvent may be selected from one or more of DMF, NMP, THF and 1, 4-dioxane. Preferably, the organic solvent is NMP. The ratio of the volume of the solvent used such as NMP to the mass of the compound of Formula 6 is (6 ～ 8) : 1.

[0202] In one or more embodiments of step (4b) , the molar ratio of the compound of Formula 6 to the compound of Formula 7 is (1.0～1.1) : 1.

[0203] In one or more embodiments of step (4b) , the reaction temperature is 75℃ ～ 85℃. In some embodiments, the reaction time is 3～7 hours.

[0204] In one or more embodiments of step (4b) , after the reaction is completed, water is added, the system is stirred, filtered, and slurried with tetrahydrofuran and n-heptane to obtain the compound of formula I.

[0205] In one or more embodiments of step (4b) , the temperature of the reaction system is cooled to 50～60 ℃ after the reaction is completed, water is added, stirred, then cooled to 20～30 ℃, and the mixture is stirred for 1～3 hours at that temperature, and then filtered, and washed with water. The ratio of the volume of water added to the mass of the compound of Formula 6 can be (6～8) : 1. In some embodiments, after being washed with water, the filter cake is mixed with tetrahydrofuran (the volume added is 6～9 times the mass of the compound of Formula 6) and stirred at 45～55 ℃for 2～4 hours, and then solvents such as n-heptane are added (the volume added is 6～9 times the mass of the compound of Formula 6) , and the resulting mixture is kept at 45～55 ℃ for 2-4 hours, and then cooled to 5～15 ℃ and stirred for 1～3 hours. The compound of Formula I can be obtained by filtering and washing the filter cake with a mixed solvent oftetrahydrofuran and n-heptane. The compound of formula I is obtained by slurry with tetrahydrofuran and n-heptane.

[0206] In some embodiments, in step (4b) , a mixture of such as N-methylpyrrolidone, a hydrochloride salt of the compound of formula 7, the compound of Formula 6 and N, N-diisopropylethylamine is stirred at 75～85 ℃ for 3～7 hours, then cooled to 50～60 ℃, water is added to the mixture (the volume of water added is 5～8 times the mass of compound of Formula 6) , then cooled to 20～30 ℃, and stirred for 1-3 hours, then filtered to obtain a filter cake. The filter cake is washed with water, and a mixture of the filter cake with a solvent such as tetrahydrofuran (the volume added is 6～9 times the mass of the compound of Formula 6) is stirred at 45～55 ℃ for 2～4 hours, and then a solvent such as n-heptane (the volume added is 6～9 times the mass of the compound of Formula 6) is added and stirred at 45～55 ℃ for 2-4 hours. Then the mixture is cooled to 5～15 ℃ and stirred for 1～3 hours, filtered and washed with a mixed solvent of tetrahydrofuran and n-heptane to obtain the compound of formula I.

[0207] In step (4b) , when necessary, the filter cake can be dried under reduced pressure at 50～60 ℃for 18～22 hours.

[0208] In one or more embodiments, compound 5 may be prepared by a method that comprises the following steps (3) :

[0209] Step (3) : the compound of Formula 4 and phosphorus oxychloride undergo a ring-closing reaction in the presence of a base and an organic solvent.

[0210] In one or more embodiments of step (3) , the molar ratio of phosphorus oxychloride to the compound of Formula 4 is (2 ～ 4) : 1.

[0211] In one or more embodiments of step (3) , the base may be selected from DMAP (4-dimethylaminopyridine) , DMA (N, N-dimethylaniline) , DIPEA (N, N-diisopropylethylamine) , Et3N (triethylamine) , pyridine, and NMM (N-methylmorpholine) , or any mixture thereof. Preferably, the base is DIPEA. The molar ratio of the base used, such as DIPEA, to the compound of Formula 4 can be (1.7 ～ 2.1) : 1.

[0212] In one or more embodiments of step (3) , the organic solvent may be selected from DCM, acetonitrile, THF and 1, 4-dioxane, or any mixture thereof. Preferably, the organic solvent is acetonitrile. The ratio of the volume of the solvent used, such as acetonitrile, to the mass of the compound of Formula 4 can be (9 ～ 11) : 1.

[0213] In one or more embodiments of step (3) , the reaction temperature is 75～85℃. In some embodiments, the reaction time is 8～12 hours.

[0214] In one or more embodiments of step (3) , after the reaction is completed, the reaction mixture is cooled and quenched with water, during which the temperature of the system should not be too high in case of any degradation of the product. Therefore, preferably, water is added to quench the reaction after the system is cooled to 20～30 ℃. The amount of water added, based on volume, can be 4～6 times that of the compound of Formula 4. After water is added, the mixture can be kept at that temperature for 1～3 hours.

[0215] In one or more embodiments of step (3) , after water is added, the pH of the solution is adjusted to 6 ～ 8 and stirred, then filtered to obtain the compound of Formula 5. In some embodiments, an aqueous solution of sodium carbonate, such as 10%aqueous sodium carbonate, is used to adjust the pH of the solution. In some embodiments, the mixture is stirred for no more than 7 hours at room temperature after the pH is adjusted. Preferably, the stirring time is 3～7 hours.

[0216] In some embodiments, in step (3) , a mixture of acetonitrile, the compound of Formula 4 and N,N-diisopropylethylamine is stirred at 75～85 ℃, to which phosphorus oxychloride is added and stirred at 75～85 ℃ for 8～12 hours, then cooled to 20～30 ℃ and water (the volume added is 4～6 times the mass of the compound of Formula 4) is added, then stirred for 1～3 hours. The pH value of the solution is adjusted to 6～8 and stirred at room temperature for 3～7 hours, filtered and washed with a mixed solvent of water and acetonitrile to obtain the compound of Formula 5. In some embodiments, the filter cake is dried under reduced pressure at 55～65 ℃ for 18～24 hours to obtain the dried compound of Formula 5.

[0217] In one or more embodiments, compound 4 is prepared using a method that comprises the following steps 2a and 2b:

[0218] Step (2a) : the compound of Formula 3 is prepared by the compound of formula SM3 with triphosgene (BTC) in the presence of a base and an organic solvent;

[0219] Step (2b) : the compound of Formula 4 is prepared by the compound of Formula 3 with the compound of Formula 2 or its salts in the presence of a base.

[0220] In one or more embodiments of step (2a) , the molar ratio of the triphosgene to the compound of formula SM3 is (0.3 ～ 0.5) : 1, and preferably, the molar ratio of the triphosgene to the compound of formula SM3 is 1: 3.

[0221] In one or more embodiments of step (2a) , the base may be selected from Et3N (triethylamine) , pyridine, DBU (1, 8-diazadicycloundec-7-ene) , TMG (tetramethylguanidine) , DABCO (triethylenediamine) , DIPEA (N, N-diisopropylethylamine) , NMP (N-methylpyrrolidone) and NMM (N-methylmorpholine) , or any mixture thereof. Preferably, the base is pyridine. The molar ratio of the base used such as pyridine to the compound of formula SM3 can be (7 ～ 8) : 1.

[0222] In one or more embodiments of step (2a) , the organic solvent may be selected from DCM, acetonitfile, THF and 1, 4-dioxane, or any mixture thereof. Preferably, the organic solvent is acetonitrile. The ratio of the volume of the organic solvent used such as acetonitrile to the mass of the compound of formula SM3 is (18 ～ 21) : 1.

[0223] In one or more embodiments of step (2a) , the reaction temperature is -10℃ ～ 0℃. Preferably, the reaction time is 1～3 hours.

[0224] In one or more embodiments of step (2a) , after the reaction is completed, the unpurified compound of Formula 3 reacts with the compound of Formula 2 directly.

[0225] In some embodiments, in step (2a) , a mixture of acetonitrile, the compound of formula SM3 and pyridine is stirred at 15～25 ℃ for 10～30 minutes. The resulting mixture is removed for later use. Acetonitrile and triphosgene are added to a reaction kettle at 15～25℃, to which the resulting mixture mentioned above is added at -10 ℃～0 ℃ dropwise, and stirred for 1～3 hours.

[0226] In one or more embodiments of step (2b) , the salt of the compound of Formula 2 is dihydrochloride.

[0227] In one or more embodiments of step (2b) , the molar ratio of the compound of Formula 2 to the compound of formula SM3 can be 1: (0.9～1.1) .

[0228] In one or more embodiments of step (2b) , the organic solvent is acetonitrile, and the ratio of the volume of acetonitrile used to the mass of the compound of Formula 2 is (4～6) : 1.

[0229] In one or more embodiments of step (2b) , the reaction temperature is 15 ℃ ～ 25 ℃. Preferably, the reaction time is 1～3 hours.

[0230] In one or more embodiments of step (2b) , after the reaction is completed, water is added, and then stirred and filtered, the filter cake is washed with acetonitrile, and slurried with DMSO and methanol to obtain the compound of Formula 4. There is no special restriction on the amount of DMSO and methanol used in slurry operation, and it can be reasonably selected according to the actual situation. For example, the volume of DMSO can be 2～4 times the mass of the compound of Formula 2, and the amount of methanol added can be 8～10 times the mass of the compound of Formula 2.

[0231] In some embodiments, in step (2b) , the compound of Formula 2 and acetonitrile are added to the reaction mixture obtained in step (2a) , and the resulting mixture is stirred at -10 ℃～0 ℃ for 0.5～1.5 hours, and then heated to 15～25 ℃, and stirred for 8～12 hours. Water (the ratio of the volume of water to the mass of the compound of Formula 2 is 0.3～0.65) is added to the reaction system and stirred for 1～3 hours, filtered, and washed with acetonitrile. The resulting wet filter cake is slurried with a mixed solvent of DMSO and methanol at 35～45 ℃ for 2～4 hours, then cooled to 15～25 ℃, and stirred for 3～7 hours, and then filtered, washed with methanol to obtain the compound of Formula 4. In some embodiments, the filter cake is dried under reduced pressure at 45～55 ℃ for 18～22 hours to obtain the dried compound of Formula 4.

[0232] In one or more embodiments, compound 2 is prepared by a method that comprises the following steps (1a) and (1b) :

[0233] Step (1a) : the compound of Formula 1 is prepared by the compound of formula SM1 with the compound of formula SM2 in the presence of a base and an organic solvent;

[0234] Step (1b) : the compound of Formula 2 is prepared by the compound of Formula 1 under an acidic condition.

[0235] In one or more embodiments of step (1a) , the molar ratio of the compound of formula SM 1 to the compound of formula SM2 is 1: (1.0～1.1) .

[0236] In one or more embodiments of step (1a) , the base can be selected from an inorganic base, such as sodium carbonate and potassium carbonate. Preferably, the base is sodium carbonate. The molar ratio of the base used, such as sodium carbonate, to the compound of formula SM1 can be (1.0～1.5) : 1.

[0237] In one or more embodiments of step (1a) , the organic solvent can be selected from DMSO, NMP and isopropyl acetate, or any mixture thereof. Preferably, the organic solvent is DMSO. There is no special restriction on the amount of solvent used, for example, the volume of solvent used can be 4～6 times the mass of the compound of formula SM1.

[0238] In one or more embodiments of step (1a) , the reaction temperature is 20～30 ℃. Preferably, the reaction time is 1～3 hours.

[0239] In one or more embodiments of step (1b) , the acidic condition is an organic solution of HCl, wherein the organic solution is selected from ethyl acetate and isopropyl acetate, preferably isopropyl acetate.

[0240] In one or more embodiments of step (1b) , the molar equivalent ratio of HCl used to the compound of formula SM1 is (6～12) : 1. Preferably, the molar equivalent ratio of HCl used to the compound of formula SM1 is 8: 1.

[0241] In one or more embodiments of step (lb) , the reaction temperature is 20～30 ℃.

[0242] In one or more embodiments of step (lb) , after the reaction is completed, the mixture is filtered, and the filter cake is washed with ethyl acetate to obtain the compound of Formula 2.

[0243] In some embodiments, compound 2 is prepared as follows: DMSO, the compound of formula SM1 and Na2CO3 are added to a reaction kettle and stirred at room temperature, then a solution of N-tert-butoxycarbonyl-l, 2-ethylenediamine (the compound of formula SM2) in DMSO is added dropwise to the reaction kettle at a temperature of not higher than 30 ℃, and the mixture is stirred for 2-3 hours. H2O (the volume added is 13～17 times the mass of the compound of formula SM1) and EtOAc (the volume added is 12～15 times the mass of the compound of formula SM1) are added to the reaction system respectively, and after stirring evenly, an organic phase is obtained by separation, washed with water, collected and concentrated to 4～5 V at a temperature of not higher than 40 ℃ under reduced pressure. A solution of HCl in isopropyl acetate is added to the concentrated organic phase at a temperature of not higher than 20 ℃, and then the resulting mixture is stirred at that temperature for at least 16 hours, and then filtered, and the filter cake is washed with ethyl acetate to obtain the compound of Formula 2. In some embodiments, the filter cake is dried under reduced pressure at 45～55 ℃ for 12～20 hours to obtain the dried compound of Formula 2.

[0244] The present disclosure also provides methods for preparing various crystal forms described herein.

[0245] For example, for the crystal form A, the compound of formula I prepared by the method described herein or by the existing known method can be stirred in acetonitrile for a period of time, such as 0.5～1.5 hours, filtered, and dried to obtain the crystal form A.

[0246] For the crystal form B, dichloromethane and ethanol can be used as solvents for crystallization. In some embodiments, the volume ratio of dichloromethane to ethanol can be 1: 3 ～ 1: 4. In some embodiments, activated carbon are used for decolorization. In some embodiments, the crystal form B is prepared as follows: dichloromethane (the volume added can be 4～6 times the mass of the compound of formula I) , the compound of formula I and ethanol (the volume added can be 0.9～1.5 times the mass of the compound of formula I) are added to a reactor, and stirred at 20～30 ℃ for 1～2 hours before decolorization with, e.g. activated carbon; After the completion of decolorization and filtration, ethanol (the volume added can be 13～18 times the mass of the compound of formula I) is added to the filtrate at 20～30℃ for, generally speaking, at least 2 hours; The resulting mixture is concentrated under atmospheric pressure below 73 ℃ (jacket temperature) , such as 65～72 ℃. The mixture is switched to ethanol mixture by another concentration with ethanol. After the concentration is completed, the mixture is cooled to 45～55 ℃ and ethanol (the volume added can be 1.3～2.0 times the mass of the compound of formula I) is added to the system, cooled to 15～25 ℃, and stirred for 1～3 hours before filtered and washed with ethanol to obtain the crystal form B. In some embodiments, the method further comprises drying the filter cake at 55～65℃ for 15～20 hours. In some embodiments, the method comprises concentrating at atmospheric pressure. In some embodiments, the decolorization medium, such as activated carbon, can be washed with a mixture of dichloromethane (the volume added can be 1.5～2.5 times the mass of the compound of formula I) and ethanol (the ratio of the added volume to the mass of the compound of formula I can be 0.55～0.85) , the filtrate is collected, combining with the filtrate used for decolorization and then ethanol is added to the filtrate.

[0247] In some embodiments, the crystal form A, E, F, I, J, K, L, N, or O is heated to 160 ℃ or more (e.g., not less than 180 ℃ or not less than 200 ℃) and then cooled to room temperature to obtain the crystal form B. In some embodiments, the crystal form B can also be obtained by stirring the compound of formula I in toluene at room temperature for a period of time (e.g., 1～3 days) .

[0248] In some embodiments, crystal form D is obtained in MeOH / H2O system using the compound of formula I as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition. In some embodiments, crystal form E is obtained in CHCl3 / MTBE system using the compound of formula I as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition. In some embodiments, the crystal form F is obtained in 1, 4-dioxane / n-heptane system using the compound of formula I as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition. In some embodiments, the system of the compound of formula I in MeOH is firstly cooled to 5℃, then to -20℃, and finally volatilized at 5℃ to obtain the crystal form G. In some embodiments, the system of the compound of formula I in EtOAc is firstly cooled to 5 ℃, then to -20 ℃, and finally volatilized at 5 ℃ to obtain the crystal form H. In some embodiments, the system of the compound of formula I in 2-MeTHF is firstly cooled to 5℃, then to -20℃, and finally volatilized at 5℃ to obtain the crystal form I. In some embodiments, the system of the compound of formula I in toluene is firstly cooled to 5 ℃, then to -20 ℃, and finally volatilized at 5 ℃ to obtain the crystal form J. In some embodiments, the crystal form K is obtained in THF / IPAc system using the compound of formula I as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition along with the volatilization at room temperature after stirring at 5℃. In some embodiments, the crystal form L can be obtained in a CHCl3 / EtOAc (1:1, v / v) system by polymer induction. In some embodiments, the crystal form D is heated to approximately 130 ℃ in a nitrogen atmosphere to obtain the crystal form M. In some embodiments, the crystal form J is heated to around 120 ℃ and cooled to room temperature to obtain the crystal form N. In some embodiments, the compound of formula I is transferred to room temperature for volatilization after gas-liquid permeation in a DMAc / MTBE system, and the crystal form O is obtained. In some embodiments, the crystal form P is obtained in MeOH / MIBK system using the compound of formula I as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition along with the volatilization at room temperature.

[0249] V. Methods and Uses

[0250] The compound of the present disclosure is a Weel inhibitor. Therefore, the crystal forms of the compound of the present disclosure can be used to prepare a drug for treatment or prevention of a clinical condition that responds to inhibition of Weel activity.

[0251] For the purposes of this disclosure, a clinical condition that responds to inhibition of Weel activity means that pathogenesis and development of the disease or condition can be treated or prevented by inhibition of Weel kinase activity.

[0252] In this disclosure, clinical conditions that respond to inhibition of Weel activity include cancers and other diseases that respond to inhibition of Weel activity, such as excessive cell death, and central nervous system diseases such as strokes and neurodegenerative diseases.

[0253] Cancers that respond to inhibition of Weel activity include, but are not limited to, liver cancer, melanoma, Hodgkin’s disease, non-Hodgkin lymphoma, acute lymphoid leukemia, chronic lymphoid leukemia, multiple myeloma, neuroblastoma, breast cancer, ovarian cancer, lung cancer, Wilms’ tumor, cervical cancer, testicular cancer, soft tissue sarcoma, primary macroglobulinemia, bladder cancer, chronic myeloid leukemia, primary brain cancer, malignant melanoma, small cell lung cancer, gastric cancer, colon cancer, malignant pancreatic islet tumor, malignant carcinoid cancer, choriocarcinoma, mycosis fungoides, head and neck cancer, osteogenic sarcoma, pancreatic cancer, acute myeloid leukemia, hairy cell leukemia, rhabdomyosarcoma, Kaposi’s sarcoma, genitourinary neoplastic disease, thyroid cancer, esophageal cancer, malignant hypercalcemia, cervical hyperplasia, renal cell carcinoma, endometrial cancer, polycythemia vera, idiopathic thrombocythemia, adrenocortical cancer, skin cancer, and prostate cancer.

[0254] Accordingly, the present disclosure provides anhydrous crystal forms, hydrates or solvates of the present disclosure and the crystal form A, B, D, E, F, G, H, I, J, K, L, M, N, O and P of the present disclosure or a mixture of two or more crystal forms in the preparation of a medicament for treatment or prevention of clinical conditions that respond to inhibition of Weel activity, in particular the cancers described herein.

[0255] In some embodiments, provided in the present disclosure is the anhydrous crystal forms, hydrates or solvates of the present disclosure and the crystal form A, B, D, E, F, G, H, I, J, K, L, M, N, O and P of the present disclosure or a mixture of two or more crystal forms for use in a method for treating or preventing clinical conditions that respond to inhibition of Weel activity, in particular the cancers described herein.

[0256] In a particularly preferred embodiment, the present disclosure provides the crystal form B described in the present disclosure as an active pharmaceutical ingredient in the preparation of a medicament for treatment or prevention of clinical conditions that respond to inhibition of Weel activity, in particular, the cancers described herein. In some embodiments, provided is the crystal form B described in the present disclosure for use in a method for treating or preventing clinical conditions that respond to inhibition of Weel activity, in particular, the cancers described herein.

[0257] It is also provided the crystal form B of the compound of formula I of the present disclosure for the preparation of a medicament for treatment or prevention of clinical conditions that respond to inhibition of Weel activity, such as cancers, especially the cancers described herein.

[0258] It is also provided a method for preparing a medicament, comprising a step of mixing the crystal form B of the present disclosure with one of more pharmaceutically acceptable excipients. Preferably, the method further comprises a step of granulating or tableting.

[0259] For more descriptions of the preparation, composition, dosage form, use and mode of use of drugs or drug compositions, please refer to PCT / CN2017 / 111230, which is incorporated herein in its entirety by citation.

[0260] The embodiments described herein are further illustrated by the examples illustrated below, which should not be construed as limiting the scope of the embodiments described herein. Compounds, starting materials, intermediates, and reagents used in the process described herein, such as the compound of formula SM1, the compound of formula SM2, and the compound of formula 7, may be obtained from commercial sources or prepared using methods known to those skilled in the art. A 1HNMR spectrum was recorded at 400 MHz using a BRUKER UltraShieldTM NMR instrument, and the chemical shift was recorded as ppm from low field with TMS as the internal standard (0.00 ppm) and the coupling constant J value in Hz.

[0261] Abbreviations

[0262] BTC, triphosgene;

[0263] CHCl3, chloroform;

[0264] DMAc, dimethylacetamide;

[0265] DMSO, dimethyl sulfoxide;

[0266] EtOAc, ethyl acetate;

[0267] IPA, isopropanol;

[0268] IPAc, isopropyl acetate;

[0269] MTBE, methyl tert-butyl ether;

[0270] MIBK, methyl isobutyl ketone;

[0271] THF, tetrahydrofuran;

[0272] 2-MeTHF, 2-methyltetrahydrofuran.

[0273] Example I: study of crystal forms of the compound of formula I

[0274] I. Instrument parameters and test methods

[0275] 1. X-ray powder diffractometer (XRPD)

[0276] XRPD spectrums were acquired on an X-ray powder diffraction analyzer manufactured by Panalytical, and the scanning parameters were shown in the table below:

[0277] 2. Thermogravimetric analyzer (TGA) and differential scanning calorimeter (DSC)

[0278] TGA and DSC thermograms were acquired on the TA Q5000 / 5500 thermogravimetric analyzer and the TA Q200 / Q2000 / 2500 differential scanning calorimeter, respectively. The test parameters were shown in the following table:

[0279] 3. The liquid hydrogen NMR spectrum was collected on a Bruker 400M NMR instrument, with DMSO-d6 as the solvent.

[0280] 2. Preparation and characterization of crystal forms

[0281] The compound of formula I was prepared by a synthesis method similar to Example 77 disclosed in WO2018090939, and the obtained compound of formula I was stirred in acetonitrile for 1 hour, filtered, and dried under reduced pressure, and the obtained product was used as a starting sample for the study of the crystal forms of the compound of formula I.

[0282] 1. The crystal form A of the compound formula I

[0283] The above-mentioned starting sample is the crystal form A of the present disclosure. XRPD was used to characterize the crystal form A, and the XRPD diffraction peak data were shown in Table 1 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 1.

[0284] Table 1: XRPD diffraction peak data of the crystal form A

[0285] Figure 2 shows the TGA and DSC thermograms of the crystal form A. The TGA showed a 0.5%weight loss when the sample was heated to 150 ℃, the crystal form A was anhydrous, and the DSC results showed that the sample had 2 endothermic peaks at 177.5℃ (peak temperature) and 278.3℃ (starting temperature) and 1 exothermic peak at 186.2℃ (peak temperature) . To study the pre-melting signal on the DSC thermogram, the sample was heated to 200℃ and cooled to room temperature, and XRPD detection showed that the crystal form B described herein was obtained.

[0286] 2. The crystal form B of the compound of formula I

[0287] The sample obtained by stirring the starting sample in toluene at room temperature for 2 days is the crystal form B of the present disclosure. XRPD was used to characterize the crystal form B, and the XRPD data were shown in Table 2 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 3.

[0288] Table 2: XRPD diffraction peak data of the crystal form B

[0289] Figure 4 shows the TGA and DSC thermograms of the crystal form B. The thermal analysis showed a weight loss of 0.9%when the sample was heated to 150℃ and an endothermic peak at 277.7℃ (peak temperature) . Due to the small weight loss of TGA in the crystal form B, it was presumed to be an anhydrous crystal form.

[0290] 3. The crystal form D of the compound of formula I

[0291] The crystal form D is obtained by the anti-solvent addition in MeOH / H2O system using the compound of formula I as the starting material. XRPD was used to characterize the crystal form D, and the XRPD diffraction peak data were shown in Table 3 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 5.

[0292] Table 3: XRPD diffraction peak data of the crystal form D

[0293] Figure 6 shows the TGA and DSC thermograms of the crystal form D. The thermal analysis showed a 4.0%weight loss when heated to 150 ℃, 2 endothermic peaks (peak temperature) at 155.1℃ and 277.3℃, and 1 exothermic peak (peak temperature) at 192.7 ℃. In order to study the heat signal of the crystal form D before melting, a heating test was performed, which showed that the crystal form D remained unchanged after heating to 130℃ and cooling to room temperature, and then changed to the crystal form B after heating to 200℃ and cooling to room temperature. The variable temperature XRPD test of the crystal form D showed that the crystal form D did not change after 20 minutes of nitrogen purging, but changed to the crystal form M after heating to 130℃. Combined with the results of TGA, nuclear magnetic resonance (NMR) and heating / variable temperature XRPD tests, it was speculated that the crystal form D was a hydrate, which was dehydrated and turned into anhydrous crystal form M after heating under nitrogen purging, and then the crystal form M reabsorbed water and returned to the crystal form D after cooling and contact with air.

[0294] 4. The crystal form E of the compound of formula I

[0295] The crystal form E is obtained by the anti-solvent addition in CHCl3 / MTBE system using the compound of formula I as the starting material. XRPD was used to characterize the crystal form E, and the XRPD diffraction peak data were shown in Table 4 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 7.

[0296] Table 4: XRPD diffraction peak data of the crystal form E

[0297] Figure 8 shows the TGA and DSC thermograms of the crystal form E. The thermal analysis showed a weight loss of 2.2%when the sample of the crystal form E was heated to 120℃, a weight loss of 9.3%when further heated to 200℃, 2 endothermic peaks at 171.7 and 277.6℃ (peak temperature) , and 1 exothermic peak at 189.2 ℃ (peak temperature) . The NMR results showed that the molar ratio of the residual solvent CHCl3 to the compound of formula I was 0.1 (corresponding to 2.0%weight loss) , and the molar ratio of the residual solvent MTBE to the compound of formula I was 0.22 (corresponding to the weight loss of 3.2%) . In order to study the DSC thermal signal and the great TGA weight loss of the crystal form E, it was heated to 120℃ and 200℃ respectively, then cooled to room temperature, and XRPD characterization was performed, and the results showed that after the crystal form E was heated to 120℃ and cooled to room temperature, the crystal form did not change, when it was heated to 200℃ and cooled to room temperature, the crystal form E changed to the crystal form B. The NMR results showed that the residual solvent remained unchanged after the crystal form E was heated to 120℃, and it was speculated that the stepped weight loss from 120℃ to 200℃ on the TGA mainly corresponded to the removal of the organic solvent. Since when the crystal form E sample was heated to 120℃, it remained unchanged, but when heated to 200℃, the crystal form changed, it was speculated that the removal of organic solvent caused the crystal transformation, and considering that the crystal form E is obtained in the MTBE-containing system, it was speculated to be an MTBE solvate.

[0298] 5. The crystal form F of the compound of formula I

[0299] The crystal form F is obtained by the anti-solvent addition in 1, 4-dioxane / n-heptane system using the compound of formula I as the starting material. XRPD was used to characterize the crystal form F, and the XRPD diffraction peak data were shown in Table 5 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 9.

[0300] Table 5: XRPD diffraction peak data of the crystal form F

[0301] Figure 10 shows the TGA and DSC thermograms of the crystal form F. The thermal analysis result showed a weight loss of 2.7%when heated to 100℃, a weight loss 4.7%when further heated to 200℃, 2 endothermic peaks at 180.2 and 277.6℃ (peak temperature) , and 1 exothermic peak at 190.8℃ (peak temperature) . The NMR results showed that the molar ratio of the residual solvent 1, 4-dioxane to the compound of formula I was 0.40 (corresponding to a weight loss of 5.9%) . After the crystal form F was heated to 200℃ and cooled to room temperature, XRPD results showed that the sample was converted to the crystal form B. In combination with the crystal transformation of the crystal form F after heating, stepped weight loss on TGA and residual solvent from nuclear resonance, it was speculated to be a 1, 4-dioxane solvate.

[0302] Slow volatilization of the starting sample in THF also yielded the crystal form F, and the thermal analysis showed a weight loss of 1.4%when heated to 120℃, a weight loss of 8.2%when further heated to 200℃, and two endothermic peaks at 174.7 and 277.8℃ (peak temperature) . The NMR results showed that the molar ratio of residual solvent THF to the compound of formula I was 0.69 (corresponding to a weight loss of 8.1%) . After the crystal form F was heated to 200℃and cooled to room temperature, XRPD results showed that the sample was converted to the crystal form B. In combination with the crystal transformation of the crystal form F after heating, stepped weight loss on TGA and residual solvent from nuclear resonance, it was speculated to be a THFsolvate.

[0303] Since there were both 1, 4-dioxane solvate and THF solvate in the crystal form F, it was speculated that the crystal form F is an isomorphic crystal form. According to the results of the multi-crystal form screening test, the solvents that can form the crystal form F may also include 2-methyltetrahydrofuran, MTBE, MIBK and the like.

[0304] 6. the crystal form G of the compound of Formula I

[0305] The starting sample was slowly cooled to 5℃ in the MeOH system, then cooled to -20℃, and finally volatilized at 5℃ to obtain a sample, which was the crystal form G of the present disclosure. XRPD was used to characterize the crystal form G, and the XRPD data were shown in Table 6 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 11.

[0306] Table 6: XRPD diffraction peak data of the crystal form G

[0307] Figure 12 shows the TGA and DSC thermograms of the crystal form G. The thermal analysis showed a weight loss of 3.8%at 150 ℃ and 2 endothermic peaks at 211.5 and 277.4 ℃ (peak temperature) and 1 exothermic peak at 214.5℃ (peak temperature) .

[0308] 7. the crystal form H of the compound of Formula I

[0309] The starting sample was slowly cooled to 5℃ in the EtOAc system, then cooled to -20℃, and finally volatilized at 5℃ to obtain a sample, which was the crystal form H of the present disclosure. XRPD was used to characterize the crystal form H, and the XRPD data were shown in Table 7 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 13.

[0310] Table 7: XRPD diffraction peak data of the crystal form H

[0311] Figure 14 shows the TGA and DSC thermograms of the crystal form H. The TGA results showed a weight loss of 13.0%when heated to 200 ℃, and the DSC results showed two endothermic peaks at 152.1 and 276.2 ℃ (peak temperature) .

[0312] 8. the crystal form I of the compound of Formula I

[0313] The starting sample was slowly cooled to 5℃ in the 2-MeTHF system, then cooled to -20℃, and finally volatilized at 5℃ to obtain a sample, which was the crystal form I of the present disclosure. XRPD was used to characterize the crystal form I, and the XRPD data were shown in Table 8 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 15.

[0314] Table 8: XRPD diffraction peak data of the crystal form I

[0315] Figure 16 shows the TGA and DSC thermograms of the crystal form I. The thermal analysis showed a weight loss of 7.1%when heated to 120℃, a weight loss of 6.7%when further heated to 200℃, and three endothermic peaks at 77.0, 156.6 and 276.4 ℃ (peak temperature) . The NMR results showed that the molar ratio of the residual solvent 2-MeTHF to the compound of formula I was 0.47 (corresponding to a weight loss of 6.7%) . In order to study the DSC thermal signal and the great TGA weight loss of the crystal form I, it was heated to 120℃ and 200℃ respectively, then cooled to room temperature, and XRPD characterization was performed, and the results showed that when the crystal form I was heated to 120℃ and cooled to room temperature, the crystal form did not change, and when the crystal form I was heated to 200℃ and cooled to room temperature, it was converted to the crystal form B. The NMR results showed that the residual solvent remained substantially unchanged after the crystal form I was heated to 120℃, indicating that the stepped weight loss at 120℃ to 200℃ on the TGA corresponded to the removal of the 2-MeTHF solvent. Since when the crystal form I sample was heated to 120℃, it remained unchanged, but when heated to 200℃, the crystal form changed, it was speculated that the removal of 2-MeTHF solvent caused the crystal transformation. Thus, it was speculated to be a 2-MeTHF solvate.

[0316] 9. the crystal form J of the compound of Formula I

[0317] The starting sample was slowly cooled to 5℃ in the toluene system, then cooled to -20℃, and finally volatilized at 5℃ to obtain a sample, which was the crystal form J of the present disclosure. XRPD was used to characterize the crystal form J, and the XRPD data were shown in Table 9 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 17.

[0318] Table 9: XRPD diffraction peak data of the crystal form J

[0319] Figure 18 shows the TGA / DSC thermograms of the crystal form J. The thermal analysis showed a weight loss of 2.4%when the crystal form J was heated to 120℃, a weight loss of 6.8%when further heated to 200℃, and three endothermic peaks at 134.9, 161.8 and 277.9℃ (peak temperature) . The NMR results showed that the molar ratio of the residual solvent toluene to the compound of formula I was 0.58 (corresponding to a weight loss of 8.6%) . In order to study the DSC thermal signal and the great TGA weight loss of the crystal form J, the heating test was carried out. XRPD results showed that when the crystal form J was heated to 120℃ and cooled to room temperature, it was converted to the crystal form N. When the crystal form J was heated to 145℃and cooled to room temperature, it was converted to a mixture of the crystal form N and B, when the crystal form J was heated to 180℃ and cooled to room temperature, it was converted to the crystal form B. According to the characterization and heating test results of the crystal form N, it was speculated to be a toluene solvate. Since the crystal form N is obtained by heating the crystal form J, and the crystal form J had a higher toluene residue, it was speculated that the crystal form J is also a toluene solvate.

[0320] 10. the crystal form K of the compound of Formula I

[0321] The crystal form K is obtained in THF / IPAc system using the compound of formula I as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition along with the volatilization at room temperature after stirring at 5℃. XRPD was used to characterize the crystal form K, and the XRPD data were shown in Table 10 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 19.

[0322] Table10: XRPD diffraction peak data of the cr ystal form K

[0323] Figure 20 showed the TGA / DSC thermograms of the crystal form K. The thermal analysis showed a weight loss of 2.6%when heated to 100℃ and a weight loss of 8.6%when further heated to 180℃, and DSC showed that the sample had 2 endothermic peaks at 131.2 and 275.9℃ (peak temperature) . The NMR results showed that the molar ratio of the residual solvent IPAc to the compound of formula I was 0.41 (corresponding to a weight loss of 6.9%) , and no residual solvent THF was detected. In order to study the DSC thermal signal and the great TGA weight loss of the crystal form K, it was heated to 100℃ and 180℃ respectively and then cooled to room temperature, and XRPD characterization was performed, and the results showed that after the crystal form K was heated to 100℃ and cooled to room temperature, the crystal form did not change, and after the crystal form K was heated to 180℃ and cooled to room temperature, it was converted to the crystal form B. The NMR results showed that the residual solvent remained unchanged after the crystal form K was heated to 100℃, indicating that the stepped weight loss from 100℃ to 180℃ on TGA mainly corresponded to the removal of IPAc solvent. Since when the crystal form K sample was heated to 100℃, it remained unchanged, but when heated to 180℃, the crystal form changed, it was speculated that the removal of IPAc solvent caused the crystal transformation. Thus, it was speculated to be an IPAc solvent.

[0324] 11. The crystal form L of the compound of formula I

[0325] The sample obtained by polymer induction of the compound of formula I in CHCl3 / EtOAc (1: 1, v / v) system is the crystal form L of the present disclosure. XRPD was used to characterize the crystal form L, and the XRPD data were shown in Table 11 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 21.

[0326] Table11: XRPD diffraction peak data of the crystal form L

[0327] Figure 22 shows the TGA / DSC thermograms of the crystal form L. The thermal analysis showed a weight loss of 1.6%when the crystal form L was heated to 150℃, a weight loss of 9.3%when further heated to 200℃, and two endothermic peaks at 181.4 and 278.0℃ (peak temperature) . The NMR results showed that the molar ratio of the residual solvent CHCl3 to the free base was 0.60 (corresponding to a weight loss of 11.3%) , and the residual solvent EtOAc was not detected. In order to study the DSC thermal signal and the great TGA weight loss of the crystal form L, a heating test was performed. XRPD results showed that after the crystal form L was heated to 200℃and cooled to room temperature, it was converted to the crystal form B. In combination with the crystal transformation of the crystal form L after heating and the residual solvent detected by nuclear magnetic resonance, it was speculated to be a CHCl3 solvate.

[0328] 12. The crystal form M of the compound of formula I

[0329] The crystal form D was heated to 130 ℃ in a nitrogen atmosphere in a variable temperature XRPD to obtain the crystal form M of the present disclosure. XRPD was used to characterize the crystal form M, and the XRPD data was shown in Table 12 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 23.

[0330] Table12: XRPD diffraction peak data of the crystal form M

[0331] Since the crystal form M is obtained by heating in a nitrogen atmosphere, it was speculated to be an anhydrous crystal form. Based on the results of the heating test of the crystal form D, it was speculated that the crystal form M would turn back to the crystal form D when it was exposed to air.

[0332] 13. The crystal form N of the compound of formula I

[0333] The sample obtained by heating the crystal form J to 120 ℃ and cooling to room temperature was the crystal form N. XRPD was used to characterize the crystal form N, and its XRPD data was shown in Table 13 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 24.

[0334] Table13: XRPD diffraction peak data of the crystal form N

[0335] Figure 25 shows the TGA / DSC thermograms of the crystal form N. The thermal analysis results showed a weight loss of 1.6%when heated to 120℃, a weight loss of 5.6%when further heated to 200℃, and 2 endothermic peaks at 155.9 and 277.4℃ (peak temperature) . The NMR results showed that the molar ratio of the residual solvent toluene to the compound of formula I was 0.45 (corresponding to a weight loss of 6.8%) . The crystal form J was converted to the crystal form N after heated to 120 ℃ and cooled to room temperature, was converted to a mixture of the crystal form N and the crystal form B after heated to 145 ℃ and cooled to room temperature and then converted to the crystal form B after heated to 180 ℃ and cooled to room temperature. Therefore, it could be speculated that the crystal form N was converted to the crystal form B after heated to 180 ℃. In combination with the residual solvent on NMR of the crystal form N and the TGA stepped weight loss, it was speculated to be a toluene solvate.

[0336] 14. The crystal form O of the compound of formula I

[0337] The starting sample was transferred to room temperature after gas-liquid permeation in a DMAc / MTBE system and volatized to obtain a sample, which was the crystal form O of the present disclosure. XRPD was used to characterize the crystal form O, and the XRPD data were shown in Table 14 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 26.

[0338] Table 14: XRPD diffraction peak data of the crystal form O

[0339] Figure 27 shows the TGA / DSC thermograms of the crystal form O. The thermal analysis showed a weight loss of 7.3%when heated to 130℃, a weight loss of 7.1%when further heated to 200℃, and three endothermic peaks at 130.4, 153.6 and 278.7 ℃ (peak temperature) . The NMR results showed that the molar ratio of the residual solvent DMAc to the compound of formula I was 1.1 (corresponding to a weight loss of 14.5%) , and no residual solvent MTBE was detected. In order to study the DSC thermal signal and the great TGA weight loss of the crystal form O, it was heated to 130℃ and 200℃, respectively, and then cooled to room temperature, and XRPD characterization was performed, and the results showed that after the crystal form O was heated to 130℃ and cooled to room temperature, it was converted to the crystal form A, and after the crystal form O was heated to 200℃ and cooled to room temperature, it was converted to the crystal form B. Since the crystal form O is transformed after heated and the NMR showed residual solvent, it is speculated to be a DMAc solvate.

[0340] 15. The crystal form P of the compound of formula I

[0341] The crystal form P is obtained in MeOH / MIBK system using the compound of formula I as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition along with the volatilization at room temperature. XRPD was used to characterize the crystal form P, and the XRPD data were shown in Table 15 below, and the XRPD spectrum was shown in Figure 28.

[0342] Table 15: XRPD diffraction peak data of the crystal form P

[0343] Figure 29 shows the TGA / DSC thermograms of the crystal form O. The thermal analysis showed a weight loss of 29.7%when the sample was heated to 200℃, with 2 endothermic peaks at 157.8 and 267.3℃ (peak temperature) and 1 exothermic peak at 150.5℃ (peak temperature) . The NMR results showed no solvent residues and some additional signals were observed. The HPLC test results showed that the HPLC area purity of the sample was only 90.8%, indicating that the sample had been degraded, and the additional signal observed on the NMR may correspond to the degradation products.

[0344] 16. Suspension competition test

[0345] In order to study the transformation relationship between each anhydrous crystal form and its hydrate, three anhydrous crystal forms A, B, M and one hydrate crystal form D discovered in the experiment were tested in suspension competition (the crystal form M was not used in suspension competition study because it was only obtained in the variable temperature XRPD test and was transferred after contact with air) .

[0346] (1) Study on the transformation relationship between anhydrous crystal forms

[0347] Suspension competition tests were carried out on anhydrous crystal forms A and B. A certain amount of the crystal form A was weighed into an HPLC vial and 1.0 mL of different solvents were added. After suspension stirring for 1 hour at room temperature, samples were filtered using a 0.45 μm pore size PTFE membrane, and the filtrate was transferred to HPLC vials containing the crystal form A and B solids (～5 mg each) , where they were tested for solid XRPD after suspension stirring at room temperature / 50 ℃, respectively. The results were summarized in Table 16 below. The results showed that the crystal form A was converted to the crystal form B at room temperature and at 50℃ in different solvents, indicating that the crystal form B was more thermodynamically stable than the crystal form A at room temperature to 50℃.

[0348] Table 16: Summary table of suspension competition test between anh ydrous crystal forms

[0349] (2) Study on the transformation relationship between anhydrous crystal form and hydrate

[0350] Anhydrous crystal form B and hydrate crystal form D, which were more stable at room temperature, were selected for suspension competition test under different water activities. A certain amount of the crystal form A was weighed into an HPLC vial and 1.0 mL of solvent with different water activities were added. After suspension stirring for 1 hour at room temperature, the samples were filtered using a 0.45 μm pore size PTFE filter, and the filtrate was transferred to HPLC vials each containing ～5 mg of the crystal form B and D solids, and the solid XRPD was tested after suspension stirring at room temperature. The results were summarized in Table 17 below. The results showed that anhydrous crystal form B was obtained at water activity of 0.8 and less, and hydrate crystal form D was obtained in pure water, indicating that the key water activity point for the mutual conversion of anhydrous crystal form B and hydrate crystal form D at room temperature was in the range of 0.8～1.

[0351] Table 17: Summary of suspension competition test between anhydrous crystal form and hydrate

[0352] Example II: the preparation of the crystal form B

[0353] 1. Synthesis

[0354] Step 1: ethyl 4- ( (2-aminoethyl) amino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylate dihydrochloride (the compound of Formula 2)

[0355] To a mixture of DMSO (235.0 kg, 4.0 V) , ethyl 4-chloro-2-methylthiopyrimidine-5-carboxylate (the compound of SM1, 53.0 kg, 227.77 mol, 1.0eq. ) and Na2CO3 (29.4 kg, 277.4 mol) is stirred at room temperature is added the solution ofN-tert-butoxycarbonyl-1, 2-ethylenediamine (the compound of formula SM2, 37.2 kg, 232.20 mol) in DMSO (58.3 kg, 1.0V) at 25 ℃ and stirred for 2 hours. After the addition of H2O (795.0 kg, 15.0 V) and EtOAc (715.5 kg, 15.0 V) to the mixture and phases separation, the organic phase is collected, washed twice with water (53.0 kg, 1.0 V) and concentrated to 4 V under reduced pressure at no more than 40 ℃. 4 N HC1 solution in isopropyl acetate (448.0 kg, 9.5V) is added slowly to the concentrated organic solution at no more than 20 ℃, and stirred for at least 16 hours. The mixture was filtered and the filter cake is washed with ethyl acetate. The filter cake is dried under reduced pressure at 45 ℃ for 16 hours to obtain ethyl 4- ( (2-aminoethyl) amino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylate dihydrochloride (the compound of Formula 2, 70.65 kg, white solid, purity 99.13%, yield 89.4%) .

[0356] Step 2: Preparation of ethyl 4- ( (2- (3- (2, 6-dichlorophenyl) ureido) ethyl) amino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylate (the compound of Formula 4) .

[0357] To a mixture of acetonitrile (200.0 kg, 10.0 V) , 2, 6-dichloroaniline (the compound of SM3, 13.0 kg, 80.24 mol) and pyridine (48.0 kg, 606.8 mol) which is prepared at 20℃ and stirred for 20 minutes is added acetonitrile (175.0 kg, 9.0 V) and triphosgene (BTC, 9.8 kg, 33.02 mol) at 20℃, followed by ] the prepared acetonitrile solution of the compound of SM3 drop-wise at -5 ℃, and the resulting mixture is stirred for 2 hours. Ethyl 4- ( (2-aminoethyl) amino) -2- (methylthio) pyrimidin-5-carboxylate dihydrochloride (the compound of Formula 2, 25.0 kg, 75.93 mol, 1.0eq. ) and acetonitrile (100.0 kg, 5.0 V) are added to the mixture and stirred at -5℃ for 1.0 hours. Then the system is heated to 20℃ and stirred for 10 hours. Process water (13.2 kg, 0.53 V) is added to the mixture and stirred for 2 hours. The mixture is filtered and the filter cake is washed with acetonitrile. The filter cake is slurried with a mixed solvent of DMSO (84.0 kg, 3.0 V) and methanol (178.0 kg, 9.0 V) for 3 hours at 40 ℃. After cooled to 20℃ and stirred for 5 hours, the mixture is filtered and washed with methanol. The filter cake is dried under reduced pressure at 50 ℃ for 20 hours to obtain ethyl 4- ( (2- (3- (2, 6-dichlorophenyl) ureido) ethyl) amino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylate (the compound of Formula 4, 28.5 kg, white solid, purity 99.3%, yield 80.7%) .

[0358] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8.54 (s, 1H) , 8.37 (t, J= 5.7 Hz, 1H) , 8.02 (s, 1H) , 7.47 (s, 1H) , 7.45 (s, 1H) , 7.28 -7.21 (m, 1H) , 6.47 (t, J= 5.8 Hz, 1H) , 4.27 (q, J= 7.1 Hz, 2H) , 3.62 (q, J = 6.0 Hz, 2H) , 3.35 (d, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.48 (s, 3H) , 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H) .

[0359] Step 3: Preparation of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (methylthio) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (the compound of Formula 5) .

[0360] To a mixture of acetonitrile (213.0 kg, 10.0 V) , ethyl 4- ( (2- (3 - (2, 6-dichlorophenyl) ureido) ethyl) amino) -2- (methylthio) pyrimidin-5-carboxylate (the compound of Formula 4, 26.6 kg, 59.86 mol, 1.0eq. ) , N, N-diisopropylethylamine (15.0 kg, 116.15 mol) at 80 ℃is added phosphorus oxychloride (27.7 kg, 180.66 mol) . After stirred for 10 hours, the mixture is then cooled to 25℃ and water (133.0 kg, 5.0V) is added and stirred for 2 hours. The pH of the mixture is adjusted to 7 with 10%Na2CO3 aqueous solution and stirred for 5 h at room temperature. The mixture is filtered and the filter cake is washed with a mixed solvent of water and acetonitrile. 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (methylthio) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (the compound of Formula 5, 19.97 kg, white solid, purity 99.47%, yield 85.8%) is obtained by drying the filter cake under reduced pressure at 60 ℃ for 22 hours.

[0361] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8.76 (s, 1H) , 7.70 (d, J = 0.8 Hz, 1H) , 7.68 (s, 1H) , 7.56 (dd, J= 8.8, 7.4 Hz, 1H) , 4.18 (dd, J= 9.4, 8.0 Hz, 2H) , 3.83 (dd, J= 9.4, 8.0 Hz, 2H) , 2.59 (s, 3H) .

[0362] Step 4: Preparation of 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ( (3 S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (the compound of formula I) .

[0363] To a mixture of acetonitrile (81.5 kg, 5.5V) and 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- (methylthio) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (the compound of Formula 5, 19.2 kg, 50.49 mol, 1.0eq. ) that prepared at 25℃ is added a mixture of acetonitrile (155.0 kg, 10.0 V) and sulfonyl chloride (20.3 kg, 150.40 mol) . The resulting mixture is stirred for 4 hours and then the mixture is concentrated to 1.5 V under reduced pressure. To the concentrated solution is added the methyl tert-butyl ether (70.0 kg, 5.0 V) and N, N-diisopropylethylamine (19.8 kg, 153.19 mol) and stirred at 20℃ for 2 hours before filtered. The filter cake is washed with methyl tert-butyl ether and dried at 45 ℃ for 10 hours to give 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2-chloro-8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (the compound of Formula 6, 20.21 kg) .

[0364] A mixture of N-methylpyrrolidone (143.0 kg, 7.0 V) , the compound of Formula 6 (20.21 kg, 54.83 mol, 1.0 eq. ) , 3-methyl-4- ( (3S, SR) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) aniline hydrochloride (hydrochloride of the compound of formula 7, 14.0 kg, 51.89 mol) and N, N-diisopropylethylamine (19.7 kg, 152.42 mol) is stirred at 80 ℃ for 5 hours. The resulting mixture is cooled to 55℃ and water (142.0 kg, 7.0 V) is added. After slowly cooled down to 25 ℃ and stirred for 2 hours, the mixture is filtered and washed with water. A mixture of tetrahydrofuran (140.0 kg, 7.8V) and filter cake obtained is stirred at 50℃ for 3 hours and n-heptane (104.0 kg, 7.5 V) is added and stirred at 50℃ for 3 hours. After cooled down slowly to 10 ℃ and stirred for 2 hours, the mixture is filtered, and washed with a mixed solvent of tetrahydrofuran and n-heptane. The filter cake is dried under reduced pressure at 55 ℃ for 20 hours to obtain 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ( (3S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (the compound of formula I, 21.1 kg, yellow solid, purity 100.0%, yield 69.0%) .

[0365] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 10.28 (s, 1H) , 8.66 (s, 1H) , 7.66 (d, J= 8.1 Hz, 2H) , 7.65-7.57 (m, 1H) , 7.54 (dd, J= 8.8, 7.5 Hz, 1H) , 6.95 (d, J= 8.6 Hz, 1H) , 4.17 (t, J= 8.7 Hz, 2H) , 3.87 -3.75 (m, 2H) , 2.87 (d, J= 11.0 Hz, 2H) , 2.41 (t, J= 10.7 Hz, 2H) , 2.29 (ddd, J= 10.3, 6.2, 2.6 Hz, 2H) , 2.25 (s, 3H) , 2.20 (s, 3H) , 1.03 (d, J = 6.0 Hz, 6H) .

[0366] 2. Crystallization

[0367] A mixture of dichloromethane (100.0 kg, 4.0 V) , 6- (2, 6-dichlorophenyl) -2- ( (3-methyl-4- ((3S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperazin-1-yl) phenyl) amino) -8, 9-dihydroimidazo [1, 2-a] pyrimido [5, 4-e] pyrimidin-5 (6H) -one (the compound of formula I, 19.05 kg, 33.69 mol, 1.0eq. ) and ethanol (24.0 kg, 1.6V) is stirred at 25℃ for 1.5 hours and then is decolorized with activated carbon. After completion, the activated carbon is washed with a mixed solvent of dichloromethane (52.0 kg, 2.0 V) and ethanol (10.8 kg, 0.7 V) . The filtrate is combined together and ethanol (246.0 kg, 16V) is slowly added to the filtrate at 25℃. The jacket temperature is controlled at 70℃ and the mixture is concentrated at atmospheric pressure and switched with ethanol once. After the concentration is completed and cooled to 50℃, ethanol (34.0 kg, 2.3V) is added to the mixture, slowly cooled to 20℃, and stirred for 2.5 hours. The mixture is filtered, the filter cake is washed with ethanol. The filter cake is dried at 60 ℃ for 16 hours to obtain the crystal form B (16.45 kg, yellow solid, purity 100.0%, yield 86.4%) .

[0368] The XRPD spectrum of the crystal form B of the resultant product is acquired on an X-ray powder diffraction analyzer from Bruker and the scanning parameters are shown in the table below:

[0369] The XRPD data for the crystal form B is shown in Table 18 below, and the XRPD spectrum is shown in Figure 30.

[0370] Table 18: XRPD diffraction peak data of the crystal form B

[0371] Example III: stability study of the crystal form B

[0372] The crystal form B sample was placed at high temperatures (60℃) for 5, 10, and 38 days. The XRPD of this sample was detected as described above. The results showed that the XRPD data for the sample did not change significantly at 5, 10 and 38 days, i.e., the sample was still the crystal form B.

[0373] The crystal form B sample was subjected to high humidity (25 ℃ / 92.5%RH) for 5, 10, and 30 days. The XRPD of this sample was detected as described above. The results showed that the XRPD data for the sample did not change significantly at 5, 10 and 30 days, i.e., the sample was still the crystal form B.

[0374] The crystal form B sample was exposed to strong light (5000Lx ± 500Lx) for 5 and 10 days, and then the XRPD of the irradiated sample was measured. The results showed that there was no significant change in XRPD at 5 and 10 days under strong light irradiation, i.e., the sample was still the crystal form B.

[0375] The crystal form B sample was tested for XRPD after 6 months of accelerated (40℃±2℃ / 75%RH±5%RH) . The results showed no significant change in XRPD for this sample, i.e., the sample was still the crystal form B.

[0376] The crystal form B sample was tested for XRPD after 6, 12, 24, and 36 months of long-term (25℃±2℃ / 60%RH±5%RH) conditions. The results showed no change in XRPD for the sample after 6, 12, 24 and 36 months, i. e. the sample was still the crystal form B.

[0377] In summary, the crystal form B has good crystal form stability.

[0378] Example IV: Assay of inhibitory activity of the compound of formula I on Weel kinase

[0379] ADP-Glo Kinase reagent (Promega, #V9103) was used with reaction buffers of 50 mM HEPES, 1 mM EGTA, 10 mM MgCl2, 0.01%Brij 35, 2 mM DTT (pH 7.5) . The mother liquor of the compound of formula I was firstly diluted in series to 10 concentrations in DMSO at a 1: 3 ratio, then 0.05 μL of the diluted compound was added to a 384-well plate (Greiner, #784075) using an Echo 665 instrument, and 2.5 μL of Weel enzyme (Carna, #05-177) solution was added and centrifuged at 1000 rpm for 1 minute. After incubation at 25℃ for 10 minutes, 2.5 μL of ATP / substrate mixture was added to initiate the reaction and reacted at 25℃ for 60 minutes. Subsequently, 4 μL of an ADP-Glo reagent was added and incubated at 25℃ for 40 minutes, followed by the addition of 8 μL ofa kinase detection reagent and incubation at 25℃ for 40 minutes. Finally, the chemiluminescence value was measured on the PHERAstar FSX instrument from BMG.

[0380] The inhibition was calculated as follows: the inhibition %= (Chemiluminescence value of the well without the compound-Chemiluminescence value of the well with the compound of Formula I)  /  (Chemiluminescence value of the well without the compound -Chemiluminescence value of the negative control well) × 100, and the curve was fitted with a nonlinear regression equation: Y =Bottom + (Top-Bottom)  /  (1+10^ ( (LogIC50-X) *HillSlope) ) and the IC50 value was calculated using the software XLfit 5.5.0.

[0381] The results showed that the compound of formula I had a good inhibitory effect on Weel kinase enzyme activity (IC50=1.75 nM)

[0382] Example V: Inhibition of the growth of LoVo cells by formula I compounds

[0383] The newly recovered LoVo cells were cultured to the third generation, and the growth state was good and the confiuency was about 90%, and they were used for experiments. The LoVo cells was digested with trypsin, centrifugated at 800 rpm for 5 min, the supernatant was discarded, the residue was resuspended with fresh medium, counted, seeded at a density of 6, 000 cells per well onto a 96-well cell culture plate, and placed overnight in a 37℃ 5%CO2 incubator. The mother liquor of the compound of formula I was diluted in series to 8 concentrations in DMSO at a ratio of 1: 3 and 1: 10 (the last concentration was a DMSO negative control) : 10 μM, 3.3 μM, 1 μM, 0.33 μM, 0.1 μM, 0.033 μM, 0.01 μM, 0 μM (the DMSO final concentration was 1‰) . 5 μL of each concentration was added to 120 μL of medium (25-fold dilution) and mixed with shaking. The cells cultured overnight were taken and the medium was removed, 195 μL of fresh medium was added to each well, and 5 μL of diluted medium containing the corresponding concentration of tested compound was added, and then the plate was incubated in a 37℃ 5%CO2 incubator for 3 days. After removing the stock solution, 90 μL of fresh serum-free 1640 medium was added to each well, and then 10 μL of CCK-8 detection reagent was added to each well, and after 2 hours of incubation, it was placed in a multi-function reader to read the absorbance value (OD value) at the wavelength of 450 / 650nm. The data were analyzed with the software Graph Pad Prism 5.0, and the inhibitory activity of the compound on cell proliferation was plotted as the coordinates of cell viability and the concentration of the compound. The IC50 values were fitted with an S-shaped dose-response curve equation as: Y= 100 /  (1+10^ (LogC-LogIC50) ) , where C is the concentration of the compound.

[0384] The results showed that the compound of formula I had a good inhibitory effect on the growth of LoVo cells (IC50=117 nM) .

[0385] Example VI: Inhibition of the growth of NCI-H 1299 cells by the compound of formula I

[0386] The newly recovered NCI-H1299 cells were cultured to the third generation, and the growth state was good and the confluency was about 90%, and they were used for experiments. The NCI-H1299 cells was digested with trypsin, centrifugated at 800 rpm for 5 min, the supernatant was discarded, and the residual was resuspended with fresh medium, counted, seeded at a density of 1000 cells per well to a 96-well cell culture plate, and incubated overnight in a 37℃ 5%CO2 incubator. The mother liquor of the compound of formula I was diluted in series to 8 concentrations in DMSO at a ratio of 1: 3 and 1: 10 (the last concentration was a DMSO negative control) : 10 μM, 3.3 μM, 1 μM, 0.33 μM, 0.1 μM, 0.033 μM, 0.01 μM, 0 μM (the DMSO final concentration was 1‰). 5 μL of each concentration was added to 120 μL of medium (25-fold dilution) and mixed with shaking. Cells cultured overnight were taken, the medium was removed, 195 μL of fresh medium was added to each well, and 5 μL of diluted medium containing the corresponding concentration of test compound was added, and then the plate was incubated in a 37℃ 5%CO2 incubator for 3 days. After removing the stock solution, 90 μL of fresh serum-free 1640 medium was added to each well, and then 10 μL of CCK-8 detection reagent was added to each well, and after 2 h of incubation, it was placed in a multifunction reader to read the absorbance value (OD value) at the wavelength of 450 / 650 nm. The data were analyzed with the software Graph Pad Prism 5.0, and the inhibitory activity of the compound on cell proliferation was plotted as the coordinates of cell viability and the concentration of the compound. The IC50 values were fitted with an S-shaped dose-response curve equation as: Y=100 /  (1+10^ (LogC-LogIC50) ) , where C is the concentration of the compound.

[0387] The results showed that the compound of formula I had a good inhibitory effect on the growth of H1299 cells (IC50 = 161nM).

Claims

1.A crystal form of the compound of the following formula I: wherein the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form contains diffraction peaks at 2θ = 6.9 ± 0.2°, 12.7± 0.2°, 13.7 ± 0.2°, 17.8 ± 0.2°, and 21.2 ± 0.2°.2.The crystal form of the compound of formula I of claim 1, wherein the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, five, six or all seven of 2θ = 12.2 ± 0.2°, 17.1 ± 0.2°, 19.4 ± 0.2°, 24.0 ± 0.2°, 25.5 ± 0.2°, 28.1 ± 0.2°, and 33.4 ± 0.2°.3.The crystal form of the compound of formula I of claim 2, wherein the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form further contains diffraction peaks at any one, two, three or all four of 2θ = 8.6± 0.2°, 10.4± 0.2°, 21.7± 0.2°, and 22.9± 0.2°; orthe X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, five, six or all seven of 2θ = 10.1± 0.2°, 13.1± 0.2°, 14.9± 0.2°, 15.9± 0.2°, 20.5± 0.2°, 22.4± 0.2°, and 24.3± 0.2°; orthe X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, five, six or all seven of 2θ = 15.8± 0.2°, 16.6± 0.2°, 17.4± 0.2°, 19.8± 0.2°, 22.1± 0.2°, 26.1± 0.2°, and 27.6± 0.2°.4.A crystal form of the compound of the following formula I, which is selected from the crystal form B, the crystal form A, the crystal form D, the crystal form E, the crystal form F, the crystal form G, the crystal form H, the crystal form I, the crystal form J, the crystal form K, the crystal form L, the crystal form M, the crystal form N, the crystal form O, the crystal form P and any mixture thereof: wherein:the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form B contains characteristic peaks at at least three, four, five, or six of 2θ = 6.3 ± 0.2°, 6.9 ± 0.2°, 10.1 ± 0.2°, 12.4 ± 0.2°, 12.7 ± 0.2°, 13.1 ± 0.2°, 13.9 ± 0.2°, 14.1 ± 0.2°, 14.9 ± 0.2°, 15.9 ± 0.2°, 19.4 ± 0.2°, 20.5 ± 0.2°, 21.3 ± 0.2°, 22.4 ± 0.2°, 24.0 ± 0.2°, 24.3 ± 0.2°, 25.5 ± 0.2°, and 28.2 ± 0.2°, preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form B contains diffraction peaks at 2θ = 6.9 ± 0.2°, 12.7 ± 0.2°, 15.9 ± 0.2°, 20.5 ± 0.2°, and 24.3 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form B further contains diffraction peaks at any one, two, three, or all four of 2θ = 10.1 ± 0.2°, 13.9 ± 0.2°, 19.4± 0.2°, and 22.4± 0.2°, and / or at any one, two, three, or all four of 2θ = 6.3 ± 0.2°, 13.1 ± 0.2°, 21.3 ± 0.2°, and 24.0 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form B further contains diffraction peaks at any one, two, or all three of 2θ=12.4 ± 0.2°, 14.9 ± 0.2°, and 25.5 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form A contains diffraction peaks at 2θ=8.6 ± 0.2°, 10.4 ± 0.2°, 13.7 ± 0.2°, 17.3 ± 0.2°, and 22.9 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form A further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, or all five of 2θ=12.1 ± 0.2°, 12.8 ± 0.2°, 17.6 ± 0.2°, 20.8 ± 0.2°, and 21.7 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form D contains diffraction peaks at 2θ = 12.7 ± 0.2°, 16.7 ± 0.2°, 19.8 ± 0.2°, and 22.1 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form D further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, five, or all six of 2θ = 6.8 ± 0.2°, 13.2 ± 0.2°, 17.4 ± 0.2°, 17.9 ± 0.2°, 26.1 ± 0.2°, and 27.6 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form E contains diffraction peaks at 2θ = 8.1 ± 0.2°, 12.7 ± 0.2°, 16.3 ± 0.2°, 20.7 ± 0.2°, and 22.0 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form E further contains diffraction peaks at any one, two, three or all four of 2θ = 11.9 ± 0.2°, 15.9 ± 0.2°, 17.7 ± 0.2°, and 19.7 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form F contains diffraction peaks at 2θ=8.5 ± 0.2°, 12.1 ± 0.2°, 17.0 ± 0.2°, and 22.8 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form F further contains diffraction peaks in any one, two, three or all four of 2θ = 12.9 ± 0.2°, 16.5 ± 0.2°, 20.6 ± 0.2°, and 22.2 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form G contains diffraction peaks at 2θ = 4.2 ± 0.2°, 4.6 ± 0.2°, 14.1 ± 0.2°, and 18.6 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form G further contains diffraction peaks at any one, two, or all three of 2θ=16.0 ± 0.2°, 23.0 ± 0.2°, and 28.0 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form H contains diffraction peaks at 2θ = 7.7 ± 0.2°, 8.1 ± 0.2°, 15.5 ± 0.2°, and 24.0 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form H further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, or all five of 2θ=12.5 ± 0.2°, 13.1 ± 0.2°, 13.8 ± 0.2°, 22.5 ± 0.2°, and 23.3 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form I contains diffraction peaks at 2θ = 7.4 ± 0.2°, 8.3 ± 0.2°, 16.7 ± 0.2°, and 22.3 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form I further contains diffraction peaks at any one, two, three, four, or all five of 2θ=13.0 ± 0.2°, 20.3 ± 0.2°, 21.0 ± 0.2°, 21.7 ± 0.2°, and 29.9 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form J contains diffraction peaks at 2θ = 8.3 ± 0.2°, 12.3 ± 0.2°, 14.7 ± 0.2°, 22.7 ± 0.2°, and 24.4 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form J further contains diffraction peaks at any one, two, or all three of 2θ=8.5 ± 0.2°, 14.3 ± 0.2°, and 16.6 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form K contains diffraction peaks at 2θ = 7.7 ± 0.2°, 8.0 ± 0.2°, 8.3 ± 0.2°, 16.1 ± 0.2°, and 22.4 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form K further contains diffraction peaks in any one, two, three or all four of 2θ = 14.5 ± 0.2°, 16.7 ± 0.2°, 19.0 ± 0.2°, and 23.7 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form L contains diffraction peaks at 2θ = 8.6 ± 0.2°, 17.1 ± 0.2°, 18.5 ± 0.2°, and 22.7 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form L contains diffraction peaks at any one, two, three, four, or all five of 2θ=16.4 ± 0.2°, 17.8 ± 0.2°, 21.4 ± 0.2°, 21.9 ± 0.2°, and 25.5 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form M contains diffraction peaks at 2θ = 12.7 ± 0.2°, 17.4 ± 0.2°, 19.8 ± 0.2°, and 21.9 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form M further contains diffraction peaks at any one, two, three, or all four of 2θ = 13.0 ± 0.2°, 16.7 ± 0.2°, 20.8 ± 0.2°, and 22.2 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form N contains diffraction peaks at 2θ = 7.9 ± 0.2°, 13.3± 0.2° and 24.7 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form N contains diffraction peaks at either or both of 2θ = 12.8 ± 0.2° and 22.9 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form O contains diffraction peaks at 2θ = 5.3 ± 0.2°, 7.5 ± 0.2°, 18.1 ± 0.2°, 20.9 ± 0.2°, and 26.1 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form O further contains diffraction peaks at any one, two, three, or all four of 2θ = 10.5 ± 0.2°, 13.5 ± 0.2°, 15.1 ± 0.2°, and 22.2 ± 0.2°;the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form P contains diffraction peaks at 2θ = 5.0 ± 0.2°, 10.1 ± 0.2°, and 20.8 ± 0.2°; preferably, the X-ray powder diffraction (XRPD) spectrum of the crystal form P further contains diffraction peaks at any one, two, three or all four of 2θ = 15.1 ± 0.2°, 15.9 ± 0.2°, 20.2 ± 0.2°, and 25.3 ± 0.2°.5.The crystal form of the compound of formula I of claim 4, wherein:the crystal form A has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 1;the crystal form B has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 3 or Figure 30;the crystal form D has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 5;the crystal form E has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 7;the crystal form F has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 9;the crystal form G has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 11;the crystal form H has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 13;the crystal form I has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 15;the crystal form J has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 17;the crystal form K has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 19;the crystal form L has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 21;the crystal form M has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 23;the crystal form N has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 24;the crystal form O has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 26;the crystal form P has an XRPD spectrum substantially as shown in Figure 28.6.The crystal form of the compound of formula I of claim 4 or 5, wherein:the crystal form A has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 2;the crystal form B has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 4;the crystal form D has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 6;the crystal form E has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 8;the crystal form F has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 10;the crystal form G has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 12;the crystal form H has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 14;the crystal form I has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 16;the crystal form J has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 18;the crystal form K has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 20;the crystal form L has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 22;the crystal form N has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 25;the crystal form O has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 27;the crystal form P has a TGA thermogram and / or a DSC thermogram substantially as shown in Figure 29.7.The crystal form of the compound of formula I of claim 4, wherein the XRPD spectrum of the crystal form B contains diffraction peaks at 6.3 ± 0.2°, 6.9 ± 0.2°, 12.7 ± 0.2°, 13.1 ± 0.2°, 15.9 ± 0.2°, 20.5 ± 0.2°, 21.3 ± 0.2°, 24.0 ± 0.2°, and 24.3 ± 0.2° and optionally diffraction peaks in any one, two, three, or all four of 2θ = 10.1 ± 0.2°, 13.9 ± 0.2°, 19.4± 0.2°, and 22.4± 0.2°, and optionally any one, two, or all three of 2θ = 12.4 ± 0.2°, 14.9 ± 0.2°, and 25.5 ± 0.2°.8.A pharmaceutical composition comprising a crystal form of the compound of formula I of any one of claims 1-7 and a pharmaceutically acceptable excipient.9.A method for preparing the compound of the following formula I, comprising steps (4a) and (4b) : wherein, step (4a) : the compound of Formula 5 and a chlorinating reagent undergo a chlorination reaction in the presence of an organic solvent to obtain the compound of Formula 6;step (4b) : the compound of Formula 6 and the compound of Formula 7 or a salt thereof undergo a substitution reaction in the presence of a base and an organic solvent to obtain the compound of Formula I.10.The method of claim 9, wherein, in step (4a) :the chlorinating reagent is selected from one or more of SO2Cl2, SOCl2 and CH3SO2Cl; preferably, the chlorinating reagent is SO2Cl2;the organic solvent is selected from one or more of acetonitrile, dichloromethane and tetrahydrofuran; preferably, the organic solvent is acetonitrile;preferably, the molar ratio of the chlorinating reagent to the compound of Formula 5 is (2.8 ～3.1) : 1;preferably, the ratio of the volume of the organic solvent to the mass of the compound of Formula 5 is (15 ～16) : 1;preferably, the temperature is 20～30 ℃.11.The method of claim 9 or 10, wherein, in step (4a) , to a mixture of acetonitrile and the compound of Formula 5 at 20～30 ℃ is added a solution of sulfonyl chloride in acetonitrile, stirred for 2-6 hours and then concentrated to 1.0～2.0V under reduced pressure to obtain a concentrated mixture, to which methyl tert-butyl ether and N, N-diisopropylethylamine are added at 15～25 ℃, stirred for 1～3 hours, filtered to obtain a filter cake, which is then washed with methyl tert-butyl ether to obtain the compound of Formula 6; optionally, step (4a) further comprises drying the filter cake at a temperature of40～50 ℃ for 6～15 hours to obtain a dried compound of Formula 6.12.The method of any one of claim 9-11, wherein, in step (4b) , the base is selected from one or more of Et3N (triethylamine) , pyridine, DBU (1, 8-diazadicycloundec-7-ene) , TMG (tetramethylguanidine) , DABCO (triethylenediamine) , DIPEA (N, N-diisopropylethylamine) and NMM (N-methylmorpholine) ; preferably, the base is DIPEA;the organic solvent is selected from one or more of DMF, NMP, THF and 1, 4-dioxane; preferably, the organic solvent is NMP;preferably, the salt of the compound of Formula 6 is a hydrochloride salt;preferably, the molar ratio of the base to the compound of Formula 6 is (2.5 ～ 3.5) : 1;preferably, the ratio of the volume of the solvent to the mass of the compound of Formula 6 is (6 ～ 8) : 1;preferably, the molar ratio of the compound of Formula 6 to the compound of Formula 7 is (1.0～1.1) : 1;preferably, the reaction temperature is 75℃ ～ 85℃.13.The method of any one of claim 9-12, wherein, in step (4b) , a mixture of N-methylpyrrolidone, a hydrochloride salt of the compound of Formula 7, the compound of Formula 6, and N, N-diisopropylethylamine is stirred at 75～85 ℃ for 3～7 hours, then cooled to 50～60 ℃; water is added to the mixture, cooled to 20～30 ℃ and stirred for 1-3 hours, then filtered to obtain a filter cake, which is then washed with water; a mixture of the filter cake with a solvent such as tetrahydrofuran is stirred at 45～55 ℃ for 2～4 hours, and then a solvent such as n-heptane (the volume is 6～9 times to the mass of the compound of formula 6) is added and stirred at 45～55 ℃ for 2-4 hours, then cooled to 5～15 ℃ and stirred for 1～3 hours, filtered to obtained a filter cake, which is then washed with a mixed solvent of tetrahydrofuran and n-heptane to obtain the compound of formula I; preferably, after washing, the filter cake is dried under reduced pressure at 50～60 ℃ for 18～22 hours to obtain a dried compound of formula I.14.The method of any one of claim 9-13, wherein compound 5 is prepared by a method comprising the following step (3) : Step (3) : the compound of Formula 4 and phosphorus oxychloride undergo a ring-closing reaction in the presence of a base and an organic solvent.15.The method of claim 14, wherein the molar ratio of phosphorus oxychloride to the compound of Formula 4 is (2 ～ 4) : 1;the base is selected from DMAP, DMA, DIPEA, Et3N, pyridine, and NMM, or any mixture thereof, preferably, the base is DIPEA;preferably, the molar ratio of the base used to the compound of Formula 4 is (1.7 ～ 2.1) : 1;the organic solvent is selected from DCM, acetonitrile, THF and 1, 4-dioxane, or any mixture thereof; preferably, the organic solvent is acetonitrile; preferably, the ratio of the volume of the solvent used to the mass of the compound of Formula 4 is (9 ～ 11) : 1;the reaction temperature is 75～85℃;preferably, in step (3) , a mixture of acetonitrile, the compound of Formula 4 and N, N-diisopropylethylamine is stirred at 75～85 ℃ and phosphorus oxychloride is added to the mixture, stirred for 8～12 hours then cooled to 20～30 ℃; water is added to the reaction system and stirred for 1～3 hours, then the pH value of the reaction system is adjusted to 6～8, stirred for 3～7 hours, then filtered to obtain a filter cake, which is then washed with a mixed solvent of water and acetonitrile to obtain the compound of Formula 5; preferably, the filter cake is dried at 55～65 ℃ for 18～24 hours under reduced pressure to obtain a dried compound of Formula 5.16.The method of claim 14 or 15, wherein compound 4 is prepared using a method comprising the following steps 2a and 2b: step (2a) : reacting the compound of formula SM3 with triphosgene (BTC) in the presence of a base and an organic solvent to obtain the compound of Formula 3;step (2b) : reacting the compound of Formula 3 with the compound of Formula 2 or its salts in the presence of a base and an organic solvent to obtain the compound of Formula 4.17.The method of claim 16, wherein the molar ratio of the triphosgene to the compound of formula SM3 is (0.3 ～ 0.5) : 1;the base is selected from Et3N, pyridine, DBU, TMG, DABCO, DIPEA, NMP and NMM, or any mixture thereof; preferably, the base is pyridine; preferably, the molar ratio of the base to the compound of formula SM3 is (7 ～ 8) : 1;the organic solvent is selected from DCM, acetonitrile, THF and 1, 4-dioxane, or any mixture thereof; preferably, the organic solvent is acetonitrile; preferably, the ratio of the volume of the organic solvent to the mass of the compound of formula SM3 is (18 ～ 21) : 1;the reaction temperature is -10℃ ～ 0℃;preferably, in step (2a) , a mixture of acetonitrile, the compound of formula SM3 and pyridine is stirred at 15～25 ℃ for 10～30 minutes, and the resulting mixture is removed from reaction kettle for later use; acetonitrile and triphosgene are added to the reaction kettle at 15～25℃, to which the resulting mixture is added at -10 ℃～0 ℃ dropwise, and then stirred for 1～3 hours.18.The method of claim 16 or 17, wherein:the molar ratio of the compound of Formula 2 to the compound of formula SM3 is 1: (0.9～1.1) ;the organic solvent is acetonitrile, and the ratio of the volume of acetonitrile to the mass of the compound of Formula 2 is (4～6) : 1;the reaction temperature is 15 ℃ ～ 25 ℃;preferably, in step (2b) , to the reaction mixture obtained in step (2a) is added the compound of Formula 2 and acetonitrile, stirred at -10 ℃～0 ℃ for 0.5～1.5 hours, then heated to 15～25 ℃ and stirred for 8～12 hours; water is added to the mixture and stirred for 1～3 hours, filtered, and washed with acetonitrile to obtain a wet filter cake; a mixture of the wet filter cake and a mixed solvent of DMSO and methanol is stirred at 35～45 ℃ for 2～4 hours, then cooled to 15～25 ℃, and stirred for 3～7 hours, filtered to obtain a filter cake, which is then washed with methanol to obtain the compound of Formula 4; optionally, the filter cake is dried under reduced pressure at 45～55 ℃for 18～22 hours to obtain a dried compound of Formula 4.19.The method of any one of claim 16-18, wherein compound 2 is prepared by a method comprising the following steps (1a) and (1b) : Step (1a) : reacting the compound of formula SM1 with the compound of formula SM2 in the presence of a base and an organic solvent to obtain the compound of Formula 1;Step (1b) : deprotecting the compound of Formula 1 under an acidic condition to obtain the compound of Formula 2.20.The method of claim 19, wherein:the step (1a) has one or more of the following features: the molar ratio of the compound of formula SM1 to the compound of formula SM2 is 1: (1.0～1.1) ; the base is selected from an inorganic base, such as sodium carbonate and potassium carbonate, preferably, sodium carbonate; preferably, the molar ratio of the base to the compound of formula SM1 is (1.0～1.5) : 1; the organic solvent is selected from DMSO, NMP and isopropyl acetate, or any mixture thereof; preferably, the organic solvent is DMSO; preferably, the volume of the solvent is 4～6 times to the mass of the compound of formula SM1; the reaction temperature is 20～30 ℃;the step (1b) has one or more of the following features: the acidic condition is an organic solution of HCl, wherein the organic solution is selected from ethyl acetate and isopropyl acetate, preferably isopropyl acetate; preferably, the molar equivalent ratio of HCl used to the compound of formula SM1 is (6～12) : 1; the reaction temperature is 20 ℃ ～ 30 ℃; after the reaction is completed, the mixture is filtered and the filter cake is washed with ethyl acetate to obtain the compound of Formula 2;preferably, compound 2 is prepared as follows: DMSO, the compound of formula SM1 and Na2CO3 are added to a reaction kettle and stirred at room temperature, then a solution of the compound of formula SM2 in DMSO is added dropwise to the reaction kettle at a temperature of not higher than 30 ℃, and the resulting mixture is stirred for 2-3 hours at room temperature, and then H2O and EtOAc are added and stirred, and an organic phase is collected, washed with water, and concentrated to 4～5 V at a temperature of not higher than 40 ℃ under reduced pressure to obtain a concentrated organic phase; to the concentrated organic phase is added a solution of HCl in isopropyl acetate at a temperature of not higher than 20 ℃, and then stirred for at least 16 hours, and the resulting mixture is filtered to obtain a filter cake and the filter cake is washed with ethyl acetate to obtain the compound of Formula 2; optionally, the filter cake is dried under reduced pressure at 45～55 ℃ for 12～20 hours to obtain a dried compound of Formula 2.21.A method for preparing the crystal form B, the crystal form A, the crystal form D, the crystal form E, the crystal form F, the crystal form G, the crystal form H, the crystal form I, the crystal form J, the crystal form K, the crystal form L, the crystal form M, the crystal form N, the crystal form O, the crystal form P of any one of claims 4-7, wherein:the compound of formula I is stirred in acetonitrile for a period of time, filtered and dried to obtain the crystal form A;dichloromethane and ethanol are used for recrystallization to obtain the crystal form B; preferably, the volume ratio of dichloromethane to ethanol is 1: 3 ～ 1: 4; preferably, the crystal form B is prepared as follows: dichloromethane, the compound of formula I and ethanol are added to a reactor and stirred at 20～30 ℃ for 1～2 hours, filtered to obtain a filtrate; the filtrate is decolorized, e.g. using activated carbon flakes; the temperature of the filtrate is controlled to be 20～30 ℃, and ethanol is added to the filtrate; the jacket temperature is controlled to be ＜ 73 ℃, the reaction system is concentrated under atmospheric pressure, and is switched to ethanol mixture by another concentration with ethanol; after concentration, the temperature is cooled to 45～55 ℃, ethanol is added to the system, cooled to 15～25 ℃, and kept at this temperature for 1～3 hours; the system is filtered to obtain a filter cake which is then washed with ethanol to obtain the crystal form B; or the crystal form A, E, F, I, J, K, L, N, or O is heated to 160 ℃ or more and then cooled to room temperature to obtain the crystal form B; or the crystal form B is obtained by stirring the crystal form A in toluene at room temperature for a period of time;the crystal form D is obtained in MeOH / H2O system using crystal form A as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition;the crystal form E is obtained in CHCl3 / MTBE system using crystal form A as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition;the crystal form F is obtained in a 1, 4-dioxane / n-heptane system using crystal form A as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition;the crystal form A in MeOH is firstly cooled to 5℃, then to -20℃, and finally volatilized at 5℃ to obtain the crystal form G;the crystal form A in EtAOc is firstly cooled to 5 ℃, then to -20 ℃, and finally volatilized at 5 ℃ to obtain the crystal form H;the crystal form A in 2-MeTHF is firstly cooled to 5℃, then to -20℃, and finally volatilized at 5℃ to obtain the crystal form I;the crystal form A in toluene is firstly cooled to 5 ℃, then to -20 ℃, and finally volatilized at 5 ℃ to obtain the crystal form J;the crystal form K is obtained in THF / IPAc system using crystal form A as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition along with the volatilization at room temperature after stirring at 5℃the crystal form L is obtained by polymer induction in CHCl3 / EtOAc (1: 1, v / v) system;the crystal form D is heated to 130±3 ℃ in a nitrogen atmosphere to obtain the crystal form M;the crystal form J is heated to 120±3 ℃ and cooled to room temperature to obtain the crystal form N;the crystal form O is obtained by transferring the crystal form A to room temperature for volatilization after gas-liquid permeation in a DMAc / MTBE system;the crystal form P is obtained in MeOH / MIBK system using crystal form A as the starting material by the crystallization of anti-solvent addition along with the volatilization at room temperature.22.Use of the crystal form of the compound of formula I of any one of claims 1-7 in the preparation of a medicament for treatment or prevention of clinical conditions that respond to inhibition of Wee 1 activity;preferably, the clinical conditions that respond to the inhibition of Weel activity include cancers and central nervous system diseases;preferably, cancers are selected from liver cancer, melanoma, Hodgkin′s disease, non-Hodgkin lymphoma, acute lymphoid leukemia, chronic lymphoid leukemia, multiple myeloma, neuroblastoma, breast cancer, ovarian cancer, lung cancer, Wilms′ tumor, cervical cancer, testicular cancer, soft tissue sarcoma, primary macroglobulinemia, bladder cancer, chronic myeloid leukemia, primary brain cancer, malignant melanoma, gastric cancer, colon cancer, malignant pancreatic islet tumor, malignant carcinoid cancer, choriocarcinoma, mycosis fungoides, head and neck cancer, osteogenic sarcoma, pancreatic cancer, acute myeloid leukemia, hairy cell leukemia, rhabdomyosarcoma, Kaposi′s sarcoma, genitourinary neoplastic disease, thyroid cancer, esophageal cancer, malignant hypercalcemia, cervical hyperplasia, renal cell carcinoma, endometrial cancer, polycythemia vera, idiopathic thrombocythemia, adrenocortical cancer, skin cancer, and prostate cancer;preferably, the central nervous system diseases are strokes and neurodegenerative diseases.

Images