Fibroblast activation protein ligands and the use thereof

Abstract

Disclosed herein are compounds comprising ligands of Fibroblast Activation Protein (FAP), compositions or kit comprising said compounds, and methods of diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein, such as cancer.

Description

FIBROBLAST ACTIVATION PROTEIN LIGANDS AND THE USE THEREOFTECHNICAL FIELD

[0001] The present disclosure generally relates to compounds comprising ligands of Fibroblast Activation Protein (FAP) , compositions or kit comprising said compounds, and methods of diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein, such as cancer.BACKGROUND OF THE DISCLOSURE

[0002] Cancer-associated fibroblasts (CAFs) , a subpopulation of fibroblasts, is known to be involved in tumor growth, migration and progression. A distinguishing feature of CAFs is the expression of fibroblast activation protein α (FAP-α) , which is a type II membrane bound glycoprotein belonging to the dipeptidyl peptidase 4 (DPP4) family. FAP-α has both dipeptidyl peptidase and endopeptidase activity. FAP-α has a role in normal developmental processes during embryogenesis and in tissue modelling. It is not or only at insignificant levels expressed on adult normal tissues. However, high expression occurs in wound healing, arthritis, artherosclerotic plaques, fibrosis and in more than 90%of epithelial carcinomas. Thus, FAP-α represents an ideal target for the development of targeted radionuclide drug conjugates (RDCs) due to its low expression in normal organs.

[0003] The present invention aims to provide an improved compound for targeted delivery, which binds to the fibroblast activation protein (FAP) . The compound should be suitable for therapeutic and / or diagnostic applications, and be capable of reaching a site afflicted by or at risk of disease or disorder characterized by overexpression of FAP. Preferably, the compound should have improved solubility, high activity labelling, good compound stability (especially with respect to chemical and radiolytic stability and stability in in vitro and in vivo biological systems) , advantageous disease site-to-organ biodistribution, a prolonged residence at the site of disease, and / or a lower accumulation in healthy organs.SUMMARY OF THE DISCLOSURE

[0004] The present disclosure relates to the compound comprising fibroblast activation protein inhibitor, the composition or kit comprising the same, uses thereof, and the compound of fibroblast activation protein inhibitor.

[0005] In one aspect, the present disclosure is directed to a compound having Formula (I) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or  prodrug thereof, wherein each of X, Y and Z is independently selected from the group consisting of C, CH,  C=O or N, under the proviso that at least one of X, Y and Z is N; R1 is selected from the group consisting of CN, H, B (OH) 2, -C=C-C (O) -aryl, - C=C-S (O) 2-aryl, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2, 5-tetrazolyl and CORa; each of R2 and R3 is independently H or halogen; R4 is selected from the group consisting of O, NRb, S, S=O, S (=O) 2 and CH2; L is absent or is a linker; A is selected from the group consisting of radioactive moiety, chelating agent,  fluorescent dye, a contrast agent, a cytotoxic and / or cytostatic agent, an immunomodulator agent and combinations thereof; Ra is selected from the group consisting of H, hydroxyl, amino, alkyl, alkenyl,  haloalkyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc; and Rb is selected from the group consisting of H, -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl, alkenyl,  alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalknyl, cycloalkyl, heterocyclyl, cycloalkenyl, cycloheteroalkenyl, aryl, and aralkyl, wherein each of -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Rc; and each of Rc is independently selected from halogen, hydroxyl, oxo, amino, cyano , nitro, alkoxyl or alkyl.

[0006] In another aspect, there is provided a compound having Formula (Ia) or Formula (Ib) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or  prodrug thereof, wherein R1 is selected from the group consisting of CN, H, B (OH) 2, -C=C-C (O) -aryl, - C=C-S (O) 2-aryl, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2, 5-tetrazolyl and CORa; each of R2 and R3 is independently H or halogen; R4 is selected from the group consisting of O, NRb, S, S=O, S (=O) 2 and CH2; L is absent or is a linker; A is selected from the group consisting of radioactive moiety, chelating agent,  fluorescent dye, a contrast agent, a cytotoxic and / or cytostatic agent, an immunomodulator agent and combinations thereof; Ra is selected from the group consisting of H, hydroxyl, amino, alkyl, alkenyl,  haloalkyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc; and Rb is selected from the group consisting of H, -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl, alkenyl,  alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, cycloalkyl, heterocyclyl, heteroalknyl cycloalkenyl, cycloheteroalkenyl, aryl, and aralkyl, wherein each of -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Rc; and each of Rc is independently selected from halogen, hydroxyl, oxo, amino, cyano,  nitro, alkoxyl or alkyl.

[0007] In another aspect, the present disclosure is directed to a composition comprising the compound of the present disclosure, and a carrier.

[0008] In another aspect, the present disclosure is directed to a kit comprising the compound or the composition of the present disclosure.

[0009] In a further aspect, the present disclosure is directed to a method for diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) in a subject, comprising administering an effective amount of the compound, the composition, or the kit of the present disclosure to the subject.

[0010] In a further aspect, the present disclosure is directed to use of the compound, the composition, or the kit of the present disclosure in the manufacture of a diagnostic reagent or medicament for diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) in a subject.

[0011] In a further aspect, the present disclosure is directed to the compound, the composition, or the kit of the present disclosure, for use in diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) in a subject.

[0012] In another aspect, there is provided a compound having Formula (III) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or  prodrug thereof, wherein each of X, Y and Z is independently selected from the group consisting of CR7,  C=O or N, under the proviso that at least one of X, Y and Z is N; R1 is selected from the group consisting of CN, H, B (OH) 2, -C=C-C (O) -aryl, - C=C-S (O) 2-aryl, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2, 5-tetrazolyl and CORa; each of R2 and R3 is independently H or halogen, under the proviso that at least  one of R2 and R3 is halogen; R7 is H, hydroxyl, amino, halogen, alkyl, alkoxyl, alkenyl, heteroalkyl or  heteroalkenyl; Ra is selected from the group consisting of H, hydroxyl, amino, alkyl, alkenyl,  haloalkyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc; and each of Rc is independently selected from halogen, hydroxyl, oxo, amino, cyano ,  nitro, alkoxyl or alkyl.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0013] Figures 1 (a) , 1 (b) , 1 (c) , 1 (d) , 1 (e) and 1 (f) show the TLC diagrams of the 68Ga labeled compounds 68Ga-E5, 68Ga-E6, 68Ga-E7, 68Ga-FAPI-04, 68Ga-E9 and 68Ga-E10, respectively.

[0014] Figure 2 shows the PET / CT MIP images of the 68Ga labeled compounds 68Ga-E5, 68Ga-E6, 68Ga-E7, 68Ga-E9, 68Ga-E10 and the reference 68Ga-FAPI-04 in HT-1080 hFAP model at 1 hr post-injection.

[0015] Figure 3 shows the MIP diagram of the compound 18F-AlF-E7 in mice bearing HT-1080 hFAP xenograft tumors 1 hr post injection.

[0016] Figure 4 shows biological distribution of 18F-AlF-E7 at 30, 60 and 120 min post-injection.

[0017] Figure 5 shows body weight change of normal mice after injection of 18F-AlF-E7 or saline.

[0018] Figures 6 (a) , 6 (b) and 6 (c) show the TLC diagrams of the 64Cu labeled compounds 64Cu-E6, 64Cu-E7 and the reference compound 64Cu-FAPI-04.

[0019] Figure 7 shows imaging results of PET / CT scanning of 64Cu labeled compounds at 1 hr post-injection.

[0020] Figure 8 shows uptake of 64Cu-labeled compounds in tumors and selected organs.DETAILED DESCRIPTION

[0021] Reference will now be made in detail to certain embodiments of the invention, examples of which are illustrated in the accompanying structures and formulas. While the invention will be described in conjunction with the enumerated embodiments, it will be understood that they are not intended to limit the invention to those embodiments. On the contrary, the invention is intended to cover all alternatives, modifications, and equivalents, which may be included within the scope of the present invention as defined by the claims. One skilled in the art will recognize many methods and materials similar or equivalent to those described herein, which could be used in the practice of the present invention. The present invention is in no way limited to the methods and materials described. In the event that one or more of the incorporated literature and similar materials differs from or contradicts this application, including but not limited to defined terms, term usage, described techniques, or the like, this application controls.

[0022] It is appreciated that certain features of the present disclosure, which are, for clarity, described in the context of separate embodiments, can also be provided in combination in a single embodiment. Conversely, various features of the present disclosure, which are, for brevity, described in the context of a single embodiment, can also be provided separately or in any suitable sub-combination.

[0023] It must be noted that, as used in the specification and the appended claims, the singular forms “a, ” “an” , and “the” include plural forms of the same unless the context clearly dictates otherwise. Thus, for example, reference to “acompound” includes a plurality of compounds. In this specification and in the claims that follow, reference will be made to a number of terms that shall be defined to have the following meanings unless a contrary intention is apparent.Definitions

[0024] Definitions of specific functional groups and chemical terms are described in more detail below. For purposes of this disclosure, the chemical elements are identified in accordance with the Periodic Table of the Elements, CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed., inside cover, and specific functional groups are generally defined as described therein. Additionally, general principles of organic chemistry, as well as specific functional moieties and reactivity, are described in Organic Chemistry, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March March’s Advanced Organic Chemistry, 5th Edition, John Wiley &Sons, Inc., New York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989; Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3rd Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 1987; the entire contents of each of which are incorporated herein by reference.

[0025] As used herein, the term “compounds provided herein” , or “compounds disclosed herein” or “compounds of the present disclosure” refers to the compounds of Formula (I) , Formula (Ia) , Formula (Ib) , Formula (III) , as well as the specific compounds disclosed herein.

[0026] As used herein, the term “stereoisomer” refers to a compound containing the same atoms bonded by the same bonds but having different three-dimensional structures, which are not interchangeable. The current disclosure contemplates various stereoisomers and mixtures thereof and includes “enantiomers” , which refers to two stereoisomers whose molecules are non-superimposable mirror images of one another.

[0027] As used herein, the term “enantiomers” represent a pair of stereoisomers that are non-superimposable mirror images of each other. A 1: 1 mixture of a pair of enantiomers is a “racemic” mixture. A mixture of enantiomers at a ratio other than 1: 1 is a “scalemic” mixture.

[0028] As used herein, the term “diastereoisomers” represent stereoisomers that have at least two asymmetric atoms, but which are not mirror-images of each other.

[0029] As used herein, the term “tautomer” refers to a proton shift from one atom of a molecule to another atom of the same molecule. The present disclosure includes tautomers of any compounds provided herein.

[0030] The present disclosure is also intended to include all isotopes of atoms in the compounds. Isotopes of an atom include atoms having the same atomic number but different mass numbers. For example, unless otherwise specified, hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorous, sulfur, fluorine, chlorine, bromide or iodine in the compounds of present disclosure are meant to also include their isotopes, such as but not limited to 1H, 2H, 3H, 11C, 12C, 13C, 14C, 14N, 15N, 16O, 17O, 18O, 31P, 32P, 32S, 33S, 34S, 36S, 17F, 18F, 19F, 35Cl, 37Cl, 79Br, 81Br, 124I, 127I and 131I. In some embodiments, hydrogen includes protium, deuterium and tritium. In some embodiments, carbon includes 12C and 13C. Isotopically-enriched compounds provided herein can be prepared without undue experimentation by conventional techniques well known to those skilled in the art or by processes analogous to those described in the Examples herein using appropriate isotopically-enriched reagents and / or intermediates.

[0031] As used herein, the term “solvate” or “solvated form” refers to solvent addition forms that contain either stoichiometric or non-stoichiometric amounts of solvent. Some compounds have a tendency to trap a fixed molar ratio of solvent molecules in the crystalline solid state, thus forming a solvate. If the solvent is water, the solvate formed is a hydrate; and if the solvent is alcohol, the solvate formed is an alcoholate. Hydrates are formed by the combination of one or more molecules of water with one molecule of the substance in which the water retains its molecular state as H2O. Examples of solvents that form solvates include, but are not limited to, water, isopropanol, ethanol, methanol, DMSO, ethyl acetate, acetic acid, and ethanolamine.

[0032] A salt of a compound of this invention is formed between an acid and a basic group of the compound, such as an amino functional group, or a base and an acidic group of the compound, such as a carboxyl functional group.

[0033] As used herein, the term “pharmaceutically acceptable” indicates that the substance or composition is compatible chemically and / or toxicologically, with the other ingredients comprising a formulation, and / or the subjects being treated therewith.

[0034] As used herein, the term “pharmaceutically acceptable salt” , unless otherwise indicated, includes salts that retain the biological effectiveness of the free acids and bases of the specified compound and that are not biologically or otherwise undesirable. Contemplated pharmaceutically acceptable salt forms include, but are not limited to, mono, bis, tris, tetrakis, and so on. Pharmaceutically acceptable salts are non-toxic in the amounts and concentrations at which they are administered. The preparation of such salts can facilitate the pharmacological use by altering the physical characteristics of a compound without preventing it from exerting its physiological effect. Useful alterations in physical properties include lowering the melting point to facilitate transmucosal administration and increasing the solubility to facilitate administering higher concentrations of the drug.

[0035] Pharmaceutically acceptable salts include acid addition salts such as those containing sulfate, chloride, hydrochloride, fumarate, maleate, phosphate, sulfamate, acetate, citrate, lactate, tartrate, methanesulfonate, ethanesulfonate, benzenesulfonate, p-toluenesulfonate, cyclohexylsulfamate, trifluoroacetate, formate, gentianate, hydrobromate and quinate. Pharmaceutically acceptable salts can be obtained from acids such as hydrochloric acid, maleic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, sulfamic acid, acetic acid, citric acid, lactic acid, tartaric acid, malonic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, cyclohexylsulfamic acid, fumaric acid, trifluoroacetic acid, formic acid, gentic acid, hydrobromic acid and quinic acid.

[0036] Pharmaceutically acceptable salts also include basic addition salts such as those containing benzathine, chloroprocaine, choline, diethanolamine, ethanolamine, t-butylamine, ethylenediamine, meglumine, procaine, aluminum, calcium, lithium, magnesium, potassium, sodium, ammonium, alkylamine, and zinc, when acidic functional groups, such as carboxylic acid or phenol are present. For example, see Remington’s Pharmaceutical Sciences, 19th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, Vol. 2, p. 1457, 1995; “Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use” by Stahl and Wermuth, Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002. Such salts can be prepared using the appropriate corresponding bases.

[0037] Pharmaceutically acceptable salts can be prepared by standard techniques. For example, the free-base form of a compound can be dissolved in a suitable solvent, such as an aqueous or aqueous-alcohol solution containing the appropriate acid and then isolated by evaporating the solution. Thus, if the particular compound is a base, the desired pharmaceutically acceptable salt may be prepared by any suitable method available in the art, for example, treatment of the free base with an inorganic acid, such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid and the like, or with an organic acid, such as acetic acid, maleic acid, succinic acid, mandelic acid, fumaric acid, malonic acid, pyruvic acid, oxalic acid, glycolic acid, salicylic acid, a pyranosidyl acid, such as glucuronic acid or galacturonic acid, an alpha-hydroxy acid, such as citric acid or tartaric acid, an amino acid, such as aspartic acid or glutamic acid, an aromatic acid, such as benzoic acid or cinnamic acid, a sulfonic acid, such as p-toluenesulfonic acid or ethanesulfonic acid, or the like.

[0038] Similarly, if the particular compound is an acid, the desired pharmaceutically acceptable salt may be prepared by any suitable method, for example, treatment of the free acid with an inorganic or organic base, such as an amine (primary, secondary or tertiary) , an alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide, or the like. Illustrative examples of suitable salts include organic salts derived from amino acids, such as L-glycine, L-lysine, and L-arginine, ammonia, primary, secondary, and tertiary amines, and cyclic amines, such as hydroxyethylpyrrolidine, piperidine, morpholine or piperazine, and inorganic salts derived from sodium, calcium, potassium, magnesium, manganese, iron, copper, zinc, aluminum and lithium.

[0039] As used herein, the term “prodrug” refers to a less biologically active or inactive compound which is transformed within the body into a more biologically active compound via a chemical or biological process (i.e., a chemical reaction or an enzymatic biotransformation) . Typically, a biologically active compound is rendered less biologically active (i.e., is converted to a prodrug) by chemically modifying the compound with a prodrug moiety. In some aspects, the prodrug is a Type II prodrug, which are bioactivated outside cells, e.g., in digestive fluids, or in the body’s circulation system, e.g., in blood. Exemplary prodrugs are esters and β-D-glucopyranosides.

[0040] At various places in the present disclosure, linking substituents are described. It is specifically intended that each linking substituent includes both the forward and backward forms of the linking substituent. For example, -NR (CR’R”) -includes both -NR (CR’R”) -and - (CR’R”) NR-. Where the structure clearly requires a linking group, the Markush variables listed for that group are understood to be linking groups. For example, if the structure requires a linking group and the Markush group definition for that variable lists “alkyl” , then it is understood that the “alkyl” represents a linking alkylene group.

[0041] When any variable (e.g., Ri) occurs more than one time in any constituent or formula for a compound, its definition at each occurrence is independent of its definition at every other occurrence. Thus, for example, if a group is shown to be substituted with 0-2 Ri moieties, then the group may optionally be substituted with up to two Ri moieties and Ri at each occurrence is selected independently from the definition of Ri. Also, combinations of substituents and / or variables are permissible, but only if such combinations result in stable compounds.

[0042] As used herein, a dash “-” at the front or end of a chemical group is used, a matter of convenience, to indicate a point of attachment for a substituent. For example, -OH is attached through the oxygen atom; chemical groups may be depicted with or without one or more dashes without losing their ordinary meaning. A wavy line drawn through a line in a structure indicates a point of attachment of a group. Unless chemically or structurally required, no directionality is indicated or implied by the order in which a chemical group is written or named. As used herein, a solid line coming out of the center of a ring indicates that the point of attachment for a substituent on the ring can be at any ring atom. When a substituent is listed without indicating the atom via which such substituent is bonded to the rest of the compound of a given formula, then such substituent may be bonded via any atom in such formula. Combinations of substituents and / or variables are permissible, but only if such combinations result in stable compounds.

[0043] As used herein, the term “about” , directed to that value or parameter per se, includes the indicated amount ±10%, ±5%, or ±1%. Also, the term “about X” includes description of “X” .

[0044] As used herein, the term “comprise” , “comprises” or “comprising” will be understood to imply the inclusion of a stated integer or step or group of integers or steps but not the exclusion of any other integer or step or group of integers or steps.

[0045] As used herein, the term “Ci-Cj” indicates a range of the carbon atoms numbers, wherein i and j are integers and the range of the carbon atoms numbers includes the endpoints (i.e., i and j) and each integer point in between, and wherein j is greater than i. For examples, C1-C6 indicates a range of one to six carbon atoms, including one carbon atom, two carbon atoms, three carbon atoms, four carbon atoms, five carbon atoms and six carbon atoms. In some embodiments, the term “C1-C12” indicates 1 to 12, particularly 1 to 10, particularly 1 to 8, particularly 1 to 6, particularly 1 to 5, particularly 1 to 4, particularly 1 to 3 or particularly 1 to 2 carbon atoms. In similar manner, the term “m-n membered” ring, wherein m and n are integers and n is greater than m, refers to a ring containing m to n atoms.

[0046] As used herein, the term “alkyl” , whether as part of another term or used independently, refers to a saturated linear or branched-chain hydrocarbon radical, which may be optionally substituted independently with one or more substituents described below. The term “Ci-Cj alkyl” refers to a linear or branched-chain alkyl having i to j carbon atoms. For example, alkyl groups contain 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8, 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, or 1 to 2 carbon atoms. Examples of “C1-C6 alkyl” include, but are not limited to, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, i-butyl, s-butyl, t-butyl, n-pentyl, 2-pentyl, 3-pentyl, 2-methyl-2-butyl, 3-methyl-2-butyl, 3-methyl-1-butyl, 2-methyl-1-butyl, 2-ethyl-1-butyl, 1-hexyl, 2-hexyl, 3-hexyl, 2-methyl-2-pentyl, 3-methyl-2-pentyl, 4-methyl-2-pentyl, 3-methyl-3-pentyl, 2-methyl-3-pentyl, 2, 3-dimethyl-2-butyl, 3, 3-dimethyl-2-butyl, and the like.

[0047] As used herein, the term “alkenyl” , whether as part of another term or used independently, refers to linear or branched-chain hydrocarbon radical having at least one carbon-carbon double bond, which may be optionally substituted independently with one or more substituents described herein, and includes radicals having “cis” and “trans” orientations, or alternatively, “E” and “Z” orientations. In some embodiments, alkenyl groups contain 2 to 12 carbon atoms. In some embodiments, alkenyl groups contain 2 to 11 carbon atoms. In some embodiments, alkenyl groups contain 2 to 11 carbon atoms, 2 to 10 carbon atoms, 2 to 9 carbon atoms, 2 to 8 carbon atoms, 2 to 7 carbon atoms, 2 to 6 carbon atoms, 2 to 5 carbon atoms, 2 to 4 carbon atoms, 2 to 3 carbon atoms, and in some embodiments, alkenyl groups contain 2 carbon atoms. Examples of alkenyl group include, but are not limited to, ethylenyl (or vinyl) , propenyl (allyl) , butenyl, pentenyl, 1-methyl-2 buten-1-yl, 5-hexenyl, and the like.

[0048] As used herein, the term “alkynyl” , whether as part of another term or used independently, refers to a linear or branched hydrocarbon radical having at least one carbon-carbon triple bond, which may be optionally substituted independently with one or more substituents described herein. In some embodiments, alkenyl groups contain 2 to 12 carbon atoms. In some embodiments, alkynyl groups contain 2 to 11 carbon atoms. In some embodiments, alkynyl groups contain 2 to 11 carbon atoms, 2 to 10 carbon atoms, 2 to 9 carbon atoms, 2 to 8 carbon atoms, 2 to 7 carbon atoms, 2 to 6 carbon atoms, 2 to 5 carbon atoms, 2 to 4 carbon atoms, 2 to 3 carbon atoms, and in some embodiments, alkynyl groups contain 2 carbon atoms. Examples of alkynyl group include, but are not limited to, ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, and the like.

[0049] As used herein, the term “alkoxyl” , whether as part of another term or used independently, refers to an alkyl group, as previously defined, attached to the parent molecule through an oxygen atom. The term “Ci-Cj alkoxyl” means that the alkyl moiety of the alkoxyl group has i to j carbon atoms. For example, alkoxy groups can contain 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8, 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, or 1 to 2 carbon atoms. Examples of “C1-C6 alkoxyl” include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy (e.g. n-propoxy and isopropoxy) , t-butoxy, neopentoxy, n-hexoxy, and the like.

[0050] As used herein, the term “amino” refers to the group -NRaRb, wherein Ra and Rb are independently selected from groups consisting of hydrogen, alkyl, haloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyl, and heterocyclyl and each of which may be optionally substituted.

[0051] As used herein, the term “aryl” , whether as part of another term or used independently, refers to monocyclic and polycyclic ring systems, typically having a total of 5 to 20 ring members, wherein at least one ring in the system is aromatic and wherein each ring in the system contains 3 to 12 ring members. Examples of “aryl” include, but are not limited to, phenyl, biphenyl, naphthyl, anthracyl and the like, which may bear one or more substituents. Also included within the scope of the term “aryl” , as it is used herein, is a group in which an aromatic ring is fused to one or more additional rings. In the case of polycyclic ring system, only one of the rings needs to be aromatic (e.g., 2, 3-dihydroindole) , although all of the rings may be aromatic (e.g., quinoline) . The second ring can also be fused or bridged. Examples of polycyclic aryl include, but are not limited to, benzofuranyl, indanyl, phthalimidyl, naphthimidyl, phenanthridinyl, or tetrahydronaphthyl, and the like.

[0052] Unless otherwise indicated, an “arylene” , by itself or as part of another term, is an aryl group as defined above which has two covalent bonds (i.e., it is divalent) and can be in the ortho, meta, or para orientations.

[0053] As used herein, the term “aralkyl” refers to an alkyl moiety, which is substituted by aryl, wherein alkyl and aryl have the meaning as outlined above. An example is the benzyl radical. The aralkyl group is optionally substituted at the alkyl and / or aryl part of the group.

[0054] As used herein, the term “cyano” refers to -CN.

[0055] As used herein, the term “nitro” refers to -NO2.

[0056] As used herein, the term “cycloalkyl” , whether as part of another term or used independently, refers to a monovalent non-aromatic, saturated or partially unsaturated monocyclic and polycyclic ring system, in which all the ring atoms are carbon and which contains at least three ring forming carbon atoms. In some embodiments, the cycloalkyl group may contain 3 to 12 ring forming carbon atoms, 3 to 10 ring forming carbon atoms, 3 to 9 ring forming carbon atoms, 3 to 8 ring forming carbon atoms, 3 to 7 ring forming carbon atoms, 3 to 6 ring forming carbon atoms, 3 to 5 ring forming carbon atoms, 4 to 12 ring forming carbon atoms, 4 to 10 ring forming carbon atoms, 4 to 9 ring forming carbon atoms, 4 to 8 ring forming carbon atoms, 4 to 7 ring forming carbon atoms, 4 to 6 ring forming carbon atoms, 4 to 5 ring forming carbon atoms. The cycloalkyl group may be saturated or partially unsaturated. In some embodiments, the cycloalkyl group may be a saturated cyclic alkyl group. In some embodiments, the cycloalkyl group may be a partially unsaturated cyclic alkyl group that contains at least one double bond or triple bond in its ring system.

[0057] In some embodiments, the cycloalkyl group may be saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring system, examples of which include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, 1-cyclopent-1-enyl, 1-cyclopent-2-enyl, 1-cyclopent-3-enyl, cyclohexyl, 1-cyclohex-1-enyl, 1-cyclohex-2-enyl, 1-cyclohex-3-enyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclononyl, cyclodecyl, cycloundecyl and cyclododecyl.

[0058] In some embodiments, the cycloalkyl group may be saturated or partially unsaturated polycyclic (e.g., bicyclic and tricyclic) carbocyclic ring system, which can be arranged as a fused, spiro or bridged ring system. As used herein, the term “fused ring” refers to a ring system having two rings sharing two adjacent atoms, the term “spiro ring” refers to a ring systems having two rings connected through one single common atom, and the term “bridged ring” refers to a ring system with two rings sharing three or more atoms. Examples of fused carbocyclyl include, but are not limited to, naphthyl, benzopyrenyl, anthracenyl, acenaphthenyl, fluorenyl and the like. Examples of spiro carbocyclyl include, but are not limited to, spiro [5.5] undecanyl, spiro-pentadienyl, spiro [3.6] -decanyl, and the like. Examples of bridged carbocyclyl include, but are not limited to bicyclo [1, 1, 1] pentenyl, bicyclo [2, 2, 1] heptenyl, bicyclo [2.2.1] heptanyl, bicyclo [2.2.2] octanyl, bicyclo [3.3.1] nonanyl, bicyclo [3.3.3] undecanyl, and the like.

[0059] As used herein, the term “cycloalkenyl” refer to olefinic unsaturated carbon atoms containing rings with one or more double bonds.

[0060] As used herein, the term “halo” or “halogen” refers to an atom selected from fluorine (or fluoro) , chlorine (or chloro) , bromine (or bromo) and iodine (or iodo) .

[0061] As used herein, the term “haloalkyl” refers to an alkyl group as defined above, wherein one or more hydrogen atoms are replaced by a halogen. If a residue is substituted with more than one halogen, it may be referred to by using a prefix corresponding to the number of halogen moieties attached. Dihaloalkyl and trihaloalkyl refer to alkyl substituted with two ( “di” ) or three ( “tri” ) halo groups, which may be, but are not necessarily, the same halogen. Some examples of haloalkyl include difluoromethyl (-CHF2) and trifluoromethyl (-CF3) .

[0062] As used herein, the term “heteroatom” refers to nitrogen, oxygen, sulfur or phosphorus, and includes any oxidized form of nitrogen, sulfur or phosphorus, and any quaternized form of a basic nitrogen.

[0063] As used herein, the term “heteroalkyl” refers to an alkyl, at least one of the carbon atoms of which is replaced with a heteroatom selected from N, O, or S. The heteroalkyl may be a carbon radical or heteroatom radical (i.e., the heteroatom may appear in the middle or at the end of the radical) , and may be optionally substituted independently with one or more substituents described herein. The term “heteroalkyl” encompasses alkoxyl and heteroalkoxy radicals.

[0064] As used herein, the term “heteroalkenyl” refers to an alkenyl, at least one of the carbon atoms of which is replaced with a heteroatom selected from N, O, or S. The heteroalkenyl may be a carbon radical or heteroatom radical (i.e., the heteroatom may appear in the middle or at the end of the radical) , and may be optionally substituted independently with one or more substituents described herein.

[0065] As used herein, the term “heteroalkynyl” refers to an alkynyl, at least one of the carbon atoms of which is replaced with a heteroatom selected from N, O, or S. The heteroalkynyl may be a carbon radical or heteroatom radical (i.e., the heteroatom may appear in the middle or at the end of the radical) , and may be optionally substituted independently with one or more substituents described herein.

[0066] As used herein, the term “heteroaryl” , whether as part of another term or used independently, refers to an aryl group having, in addition to carbon atoms, one or more heteroatoms. The heteroaryl group can be monocyclic. Examples of monocyclic heteroaryl include, but are not limited to, thienyl, furanyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, triazolyl, tetrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, thiadiazolyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, indolizinyl, purinyl, naphthyridinyl, benzofuranyl and pteridinyl. The heteroaryl group also includes polycyclic groups in which a heteroaromatic ring is fused to one or more aryl, heteroaryl, cycloaliphatic, or heterocyclyl rings, where the radical or point of attachment is on the heteroaromatic ring. Examples of polycyclic heteroaryl include, but are not limited to, indolyl, isoindolyl, benzothienyl, benzofuranyl, benzo [1, 3] dioxolyl, dibenzofuranyl, indazolyl, benzimidazolyl, benzthiazolyl, quinolyl, isoquinolyl, dihydroquinolinyl, dihydroisoquinolinyl, tetrahydroquinolinyl, tetrahydroisoquinolinyl, cinnolinyl, phthalazinyl, quinazolinyl, quinoxalinyl, 4H-quinolizinyl, carbazolyl, acridinyl, phenazinyl, phenothiazinyl, phenoxazinyl, tetrahydroquinolinyl, tetrahydroisoquinolinyl, and the like.

[0067] As used herein, the term “heterocyclyl” refers to a saturated or partially unsaturated carbocyclyl group in which one or more ring atoms are heteroatoms independently selected from oxygen, sulfur, nitrogen, phosphorus, and the like, the remaining ring atoms being carbon, wherein one or more ring atoms may be optionally substituted independently with one or more substituents. In some embodiments, the heterocyclyl is a saturated heterocyclyl. In some embodiments, the heterocyclyl is a partially unsaturated heterocyclyl having one or more double bonds in its ring system. In some embodiments, the heterocyclyl may contains any oxidized form of carbon, nitrogen or sulfur, and any quaternized form of a basic nitrogen. The heterocyclyl radical may be carbon linked or nitrogen linked where such is possible. In some embodiments, the heterocycle is carbon linked. In some embodiments, the heterocycle is nitrogen linked. For example, a group derived from pyrrole may be pyrrol-1-yl (nitrogen linked) or pyrrol-3-yl (carbon linked) . Further, a group derived from imidazole may be imidazol-1-yl (nitrogen linked) or imidazol-3-yl (carbon linked) .

[0068] Heterocyclyl group may be monocyclic. Examples of monocyclic heterocyclyl include, but are not limited to oxetanyl, 1, 1-dioxothietanylpyrrolidyl, tetrahydrofuryl, tetrahydropyranyl, tetrahydrothienyl, azetidinyl, pyrrolyl, furanyl, thienyl, pyrazolyl, imidazolyl, triazolyl, oxazolyl, thiazolyl, piperidyl, piperazinyl, morpholinyl, pyridinyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, triazinyl, pyridonyl, pyrimidonyl, pyrazinonyl, pyrimidonyl, pyridazonyl, pyrrolidinyl, triazinonyl, and the like.

[0069] Heterocyclyl group may be polycyclic, including the fused, spiro and bridged ring systems. The fused heterocyclyl group includes radicals wherein the heterocyclyl radicals are fused with a saturated, partially unsaturated, or fully unsaturated (i.e., aromatic) carbocyclic or heterocyclic ring. Examples of fused heterocyclyl include, but are not limited to, phenyl fused ring or pyridinyl fused ring, such as quinolinyl, isoquinolinyl, quinoxalinyl, quinolizinyl, quinazolinyl, azaindolizinyl, pteridinyl, chromenyl, isochromenyl, indolyl, isoindolyl, indolizinyl, indazolyl, purinyl, benzofuranyl, isobenzofuranyl, benzimidazolyl, benzothienyl, benzothiazolyl, carbazolyl, phenazinyl, phenothiazinyl, phenanthridinyl, imidazo [1, 2-a] pyridinyl, furo [3, 4-d] pyrimidinyl, pyrrolo [3, 4-d] pyrimidinyl, dihydrofuro [3, 4-b] pyridinyl groups, and the like. Examples of spiro heterocyclyl include, but are not limited to, spiropyranyl, spirooxazinyl, 5-aza-spiro [2.4] heptanyl, 6-aza-spiro [2.5] octanyl, 6-aza-spiro [3.4] octanyl, 2-oxa-6-aza-spiro [3.3] heptanyl, 2-oxa-6-aza-spiro [3.4] octanyl, 6-aza-spiro [3.5] nonanyl, 7-aza-spiro [3.5] nonanyl, 1-oxa-7-aza-spiro [3.5] nonanyl, 3, 8-dioxa-1-azaspiro [4.5] dec-1-enyl and the like. Examples of bridged heterocyclyl include, but are not limited to, 3-aza-bicyclo [3.1.0] hexanyl, 8-aza-bicyclo [3.2.1] octanyl, 1-aza-bicyclo [2.2.2] octanyl, 2-aza-bicyclo [2.2.1] heptanyl, 1, 4-diazabicyclo [2.2.2] octanyl, and the like.

[0070] As used herein, the term “N-containing aromatic or non-aromatic mono or bicyclic heterocycle” refers to a cyclic saturated or unsaturated hydrocarbon compound which contains at least one nitrogen atom as constituent of the cyclic chain.

[0071] As used herein, the term “hydroxyl” refers to –OH.

[0072] As used herein, the term “carboxy” refers to –COOH.

[0073] “Optional” or “optionally” means that the subsequently described event or circumstance may or may not occur, and that the description includes instances where the said event or circumstance occurs and instances in which it does not.

[0074] As used herein, the term “partially unsaturated” refers to a radical that includes at least one double or triple bond. The term “partially unsaturated” is intended to encompass rings having multiple sites of unsaturation, but is not intended to include aromatic (i.e., fully unsaturated) moieties.

[0075] As used herein, the term “substituted” , whether preceded by the term “optionally” or not, means that one or more hydrogens of the designated moiety are replaced with a suitable substituent. It will be understood that “substitution” or “substituted with” includes the implicit proviso that such substitution is in accordance with permitted valence of the substituted atom and that the substitution results in a stable or chemically feasible compound, e.g., which does not spontaneously undergo transformation such as by rearrangement, cyclization, elimination, etc. Unless otherwise indicated, an “optionally substituted” group may have a suitable substituent at each substitutable position of the group, and when more than one position in any given structure may be substituted with more than one substituent selected from a specified group, the substituent may be either the same or different at every position. The substituents may include, but not limited to, alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, acyl, amino, amido, amidino, aryl, azido, carbamoyl, carboxyl, carboxyl ester, cyano, guanidino, halo, haloalkyl, heteroalkyl, heteroaryl, heterocyclyl, hydroxy, hydrazino, imino, oxo, nitro, alkylsulfinyl, sulfonic acid, alkylsulfonyl, thiocyanate, thiol, thione, or combinations thereof. It will be understood by those skilled in the art that substituents can themselves be substituted, if appropriate. Unless specifically stated as “unsubstituted” , references to chemical moieties herein are understood to include substituted variants. For example, reference to an “aryl” group or moiety implicitly includes both substituted and unsubstituted variants.

[0076] As used herein, the term “linker” , “linker moiety” , or “linking group” refers to a moiety that connects two groups, such as a cell binding agent and a radioactive compound, together. Typically, the linker is substantially inert under conditions for which the two groups it is connecting are linked. A bifunctional crosslinking agent may comprise two reactive groups, one at each end of a linker moiety, such that one reactive group can be first reacted with the radioactive compound to provide a compound bearing the linker moiety and a second reactive group, which can then react with a cell binding agent. Alternatively, one end of the bifunctional crosslinking agent can be first reacted with the cell binding agent to provide a cell binding agent bearing a linker moiety and a second reactive group, which can then react with a radioactive compound. The linking moiety may contain a chemical bond that allows for the release of the radioactive moiety at a particular site. Suitable chemical bonds are well known in the art and include disulfide bonds, thioether bonds, acid labile bonds, photolabile bonds, peptidase labile bonds and esterase labile bonds (see for example US Patents 5,208,020; 5,475,092; 6,441,163; 6,716,821; 6,913,748; 7,276,497; 7,276,499; 7,368,565; 7,388,026 and 7,414,073) . Preferred are disulfide bonds, thioether and peptidase labile bonds. Other linkers that can be used in the present invention include non-cleavable linkers, such as those described in are described in detail in U.S. publication number 20050169933, or charged linkers or hydrophilic linkers and are described in US 2009 / 0274713, US 2010 / 01293140 and WO 2009 / 134976, each of which is expressly incorporated herein by reference, each of which is expressly incorporated herein by reference.

[0077] The term “amino acid” refers to naturally occurring and synthetic amino acids, as well as amino acid analogs and amino acid mimetics that function in a manner similar to the naturally occurring amino acids. Naturally occurring amino acids are those encoded by the genetic code, as well as those amino acids that are later modified, e.g., hydroxyproline, γ-carboxyglutamate, selinocystiene and O-phosphoserine. Amino acid analogs refers to compounds that have the same basic chemical structure as a naturally occurring amino acid, i.e., a carbon that is bound to a hydrogen, a carboxyl group, an amino group, and an R group, e.g., homoserine, norleucine, methionine sulfoxide, methionine methyl sulfonium. Such analogs have modified R groups (e.g., norleucine) or modified peptide backbones, but retain the same basic chemical structure as a naturally occurring amino acid. One amino acid that may be used in particular is citrulline, which is a derivative of arginine and is involved in the formation of urea in the liver. Amino acid mimetics refers to chemical compounds that have a structure that is different from the general chemical structure of an amino acid, but functions in a manner similar to a naturally occurring amino acid. The term “unnatural amino acid” is intended to represent the “D” stereochemical form of the twenty naturally occurring amino acids described above. It is further understood that the term unnatural amino acid includes homologues of the natural amino acids or their D isomers, and synthetically modified forms of the natural amino acids. The synthetically modified forms include, but are not limited to, amino acids having side chains shortened or lengthened by up to two carbon atoms, amino acids comprising optionally substituted aryl groups, and amino acids comprised halogenated groups, preferably halogenated alkyl and aryl groups and also N substituted amino acids (e.g., N-methyl-alanine) . An amino acid or peptide can be attached to a linker / spacer or a cell binding agent through the terminal amine or terminal carboxylic acid of the amino acid or peptide. The amino acid can also be attached to a linker / spacer or a cell-binding agent through a side chain reactive group, such as but not restricted to the thiol group of cysteine, the epsilon amine of lysine or the side chain hydroxyls of serine or threonine.

[0078] In some embodiments, the amino acid is represented by NH2-C (Raa'Raaa) -C (=O) OH, wherein Raa and Raa' are each independently H, an optionally substituted linear, branched or cyclic alkyl, alkenyl or alkynyl having 1 to 10 carbon atoms, aryl, heteroaryl or heterocyclyl, or R and the N-terminal nitrogen atom can together form a heterocyclic ring (e.g., as in proline) . The term “amino acid residue” refers to the corresponding residue when one hydrogen atom is removed from the amine and / or the hydroxyl group is removed from the carboxy end of the amino acid, such as -NH-C (Raa'Raa) -C (=O) O-.

[0079] As used herein, the amino acid can be L or D isomers. Unless specified otherwise, then when an amino acid is referenced, it can be L or D isomer or a mixture thereof. In some embodiments, when a peptide is referenced by its amino acid sequence, each of the amino acid can be L or D isomer unless otherwise specified. If one of the amino acids in a peptide is specified as D isomer, the other amino acid (s) are L isomer unless otherwise specified. For example, the peptide D-Ala-Ala means D-Ala-L-Ala.

[0080] Amino acids and peptides may be protected by blocking groups. A blocking group is an atom or a chemical moiety that protects the N-terminus of an amino acid or a peptide from undesired reactions and can be used during the synthesis of a drug-ligand conjugate. It should remain attached to the N-terminus throughout the synthesis, and may be removed after completion of synthesis of the drug conjugate by chemical or other conditions that selectively achieve its removal. The blocking groups suitable for N-terminus protection are well known in the art of peptide chemistry. Exemplary blocking groups include, but are not limited to, methyl esters, tert-butyl esters, 9-fluorenylmethyl carbamate (Fmoc) and carbobenzoxy (Cbz) .

[0081] As used herein, the term “radioactive moiety” refers to a molecular assembly which carries a radioactive nuclide. The nuclide is bound either by covalent or coordinate bonds which remain stable under physiological conditions. In some embodiments, the radioactive moiety comprises a radioisotope, a chelate of a radioisotope with a chelating agent, a fluorescent group, or combinations thereof. Examples are [131I] -3-iodobenzoic acid or 68Ga-DOTA.

[0082] As used herein, the term “fluorescent group” refers to a group that emits electromagnetic adiation after excitation by electromagnetic radiation of a shorter wavelength.

[0083] As used herein, the term “radioisotope” is a radioactive isotope of an element (included by the term “radionuclide” ) emitting α-, β-, and / or γ-radioation, or a complex of the radioactive isotope, such as 18F-Al or 18F-Si.

[0084] As used herein, the term “chelating agent” refers to a molecule, often an organic one, and often a Lewis base, having two or more unshared electron pairs available for donation to a metal ion. The metal ion is usually coordinated by two or more electron pairs to the chelating agent. The terms, “bidentate chelating agent” , “tridentate chelating agent” , and “tetradentate chelating agent” refer to chelating agents having, respectively, two, three, and four electron pairs readily available for simultaneous donation to a metal ion coordinated by the chelating agent. Usually, the electron pairs of a chelating agent forms coordinate bonds with a single metal ion; however, in certain embodiments, a chelating agent may form coordinate bonds with more than one metal ion, with a variety of binding modes being possible.

[0085] As used herein, the term “fluorescent dye” refers to a compound that emits visible or infrared light after excitation by electromagnetic radiation of a shorter and suitable wavelength. It is understood by the skilled person, that each fluorescent dye has a predetermined excitation wavelength.

[0086] As used herein, the term “contrast agent” refers to a compound which increases the contrast of structures or fluids in medical imaging. The enhancement is achieved by absorbing electromagnetic radiation or altering electromagnetic fields.

[0087] As used herein, the term “cytotoxic and / or cytostatic agent” refers to an agent, which can inhibit or prevent the function of cells and / or cause destruction of cells. Examples of cytotoxic agents include radioactive isotopes, chemotherapeutic agents, and toxins such as small molecule toxins or enzymatically active toxins of bacterial, fungal, plant or animal origin, including synthetic analogues and derivatives thereof. The cytotoxic agent may be selected from the group consisting of an auristatin, a DNA minor groove binding agent, a DNA minor groove alkylating agent, an enediyne, a lexitropsin, a duocarmycin, a taxane, a puromycin, a dolastatin, a maytansinoid and a vinca alkaloid or a combination of two or more thereof. Preferred cytotoxic and / or cytostatic agent is a chemotherapeutic agent selected from the group consisting of topoisomerase inhibitors, alkylating agents, antimetabolites, antibiotics, mitotic disrupters, DNA intercalating agents, DNA synthesis inhibitors, DNA-RNA transcription regulator, enzyme inhibitors, gene regulators, hormone response modifiers, hypoxia-selective cytotoxins, epidermal growth factor inhibitors, anti-vascular agents and a combination of two or more thereof.

[0088] As used herein, the term “immunomodulator agent” refers to a molecule known to be able to modulate the immune system, such a ligand of CD3, CD25, TLRs, STING, 4-1BBL, 4-1BB, PD-1, mTOR, PDL-1, NKG-2D IMiDs, wherein ligand can be an agonist and / or antagonist.

[0089] As used herein, the term “diagnosis” or “diagnosing” refers to the process of determining which disease or condition explains a person's symptoms and signs.

[0090] As used herein, the term “treatment” or “treating” describes the management and care of a patient for the purpose of reversing, inhibiting, or combating a disease, condition, or disorder.

[0091] As used herein, the term “fibroblast activation protein (FAP) ” is also known under the term “seprase” . Both terms can be used interchangeably herein. Fibroblast activation protein is a homodimeric integral protein with dipeptidyl peptidase IV (DPPIV) -like fold, featuring an alpha / beta-hydrolase domain and an eight-bladed beta-propeller domain.

[0092] As used herein, the term “subject” refers to an animal, preferably a mammal, more preferably a human, who has been the object of diagnosis, treatment, observation or experiment.

[0093] As used herein, the term “administration” or “administering” typically refers to the administration of a composition to a subject or system to achieve delivery of an agent that is, or is included in, the composition. Those of ordinary skill in the art will be aware of a variety of routes that may, in appropriate circumstances, be utilized for administration to a subject, for example a human. Examples of routes of administration include parenteral, e.g., intravenous, intradermal, subcutaneous, oral (e.g., inhalation) , transdermal (i.e., topical) , transmucosal, and rectal administration. For example, in some embodiments, administration may be ocular, oral, parenteral, topical, etc. In embodiments, administration is parenteral (e.g., intravenous administration) . In embodiments, intravenous administration is intravenous infusion. In some particular embodiments, administration may be bronchial (e.g., by bronchial instillation) , buccal, dermal (which may be or comprise, for example, one or more of topical to the dermis, intradermal, interdermal, transdermal, etc. ) , enteral, intra-arterial, intradermal, intragastric, intramedullary, intramuscular, intranasal, intraperitoneal, intrathecal, intravenous, intraventricular, within a specific organ (e.g. intrahepatic) , mucosal, nasal, oral, rectal, subcutaneous, sublingual, topical, tracheal (e.g., by intratracheal instillation) , vaginal, vitreal, etc.

[0094] As used herein, the term “therapeutically effective amount” or “effective amount” refers to an amount of a compound effective to diagnose, treat or prevent a disease or disorder in a mammal (e.g., as described herein) .Compound of Formula (I)

[0095] In one aspect, there is provided a compound having Formula (I) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or  prodrug thereof, wherein each of X, Y and Z is independently selected from the group consisting of C, CH,  C=O or N, under the proviso that at least one of X, Y and Z is N; R1 is selected from the group consisting of CN, H, B (OH) 2, -C=C-C (O) -aryl, - C=C-S (O) 2-aryl, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2, 5-tetrazolyl and CORa; each of R2 and R3 is independently H or halogen; R4 is selected from the group consisting of O, NRb, S, S=O, S (=O) 2 and CH2; L is absent or is a linker; A is selected from the group consisting of radioactive moiety, chelating agent,  fluorescent dye, a contrast agent, a cytotoxic and / or cytostatic agent, an immunomodulator agent and combinations thereof; Ra is selected from the group consisting of H, hydroxyl, amino, alkyl, alkenyl,  haloalkyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc; and Rb is selected from the group consisting of H, -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl, alkenyl,  alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalknyl, cycloalkyl, heterocyclyl, cycloalkenyl, cycloheteroalkenyl, aryl, and aralkyl, wherein each of -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Rc; and each of Rc is independently selected from halogen, hydroxyl, oxo, amino, cyano , nitro, alkoxyl or alkyl.FAP Inhibitor

[0096] In some embodiments, R1 is CN.

[0097] In some embodiments, R1 is CORa.

[0098] In certain embodiments, Ra is saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc.

[0099] In certain embodiments, Rc is cyano.

[0100] In some embodiments, Ra is amino, wherein the amino can be further substituted with one or more Rc.

[0101] In certain embodiments, each of Rc is independently selected from alkoxyl or alkyl.

[0102] In some embodiments, R1 together with the carbon atoms at positions 2 and / or 3 shown in Formlar (I) above, forms a saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with, e.g., hydroxyl.

[0103] In some embodiments, the C atom to which R1 is directly bound is in S-configuration.

[0104] In some embodiments, both of R2 and R3 are H.

[0105] In certain embodiments, both of R2 and R3 are deuterium.

[0106] In some embodiments, at least one of R2 and R3 is halogen.

[0107] In certain embodiments, at least one of R2 and R3 is F.

[0108] In some embodiments, both of R2 and R3 are halogen.

[0109] In certain embodiments, both of R2 and R3 are F.

[0110] In some embodiments, two of X, Y and Z is N.

[0111] In certain embodiments, X is N, Y is C, and Z is N.

[0112] In some embodiments, only one of X, Y and Z is N.

[0113] In certain embodiments, wherein a) X is N, Y is C, and Z is CH; b) X is CH, Y is C, and Z is N; c) X is CH, Y is N, and Z is C; or d) X is CH, Y is N, and Z is C=O.

[0114] In certain embodiments, X is CH, Y is C, and Z is N.Linking heteroatom

[0115] In some embodiments, R4 is CH2, S, or S=O.

[0116] In some embodiments, R4 is O, S (=O) 2, or NRb.

[0117] In certain embodiments, R4 is O.

[0118] In certain embodiments, R4 is S (=O) 2.

[0119] In certain embodiments, R4 is NRb, and Rb is H or methyl.

[0120] In certain embodiments, R4 is NRb, and Rb is -C (O) H, -C (O) CH3, cycloalkyl, or heterocyclyl, wherein each of -C (O) H, -C (O) CH3, cycloalkyl and heterocyclyl is optionally substituted with one or more Rc.

[0121] In certain embodiments, Rc is amino or alkyl.

[0122] In some embodiments, R4 is covalently attached to X, Y or Z.

[0123] In certain embodiments, R4 is covalently attached to Y.Linker

[0124] In some embodiments, L has a formula selected from the group consisting of: wherein B is a spacer; C is selected from the group consisting of S, NRd, NRd-O, NRd-alkyl, NRd- alkyl-NRd, NRd-cycloalkyl-NRd, NRd-heterocycle-NRd, NRd-C (O) -NRd, NRd-C (S) -NRd, and a 5-to 10-membered N-containing aromatic or non-aromatic mono-or bicyclic heterocycle, wherein the NRd-alkyl-NRd, NRd-cycloalkyl-NRd, NRd-heterocycle-NRd, NRd-C (O) -NRd, NRd-C (S) -NRd, and N-containing heterocycle is optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of -OH, alkyl, aryl and aralkyl; Rd is selected from the group consisting of H, alkyl, -O-alkyl, -S-alkyl,  alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalknyl, cycloalkenyl, cycloheteroalkenyl, aryl, and aralkyl, wherein each of the alkyl is optionally substituted with one or more substituents selected from -OH, oxo or halogen; D is absent, or is -NH-C (O) -, -C (O) -NH-, -NH-alkyl-C (O) -, -C (O) -alkyl- NH-or -NH-S (=O) 2-NH-, wherein each of the alkyl is optionally substituted with one or more substituents selected from halogen, cyano, hydroxyl, amino, alkoxy, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalknyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl; and *denotes the site covalently linked to R4; wherein E is selected from the group consisting of -NH-, -C (O) -NH-, -NH-C (O) -, - NH-alkyl-, -NH-heteroalkyl-, -C (O) -NH-alkyl-, -C (O) -NH-heteroalkyl-, -NH-C (O) -alkyl-, and -NH-C (O) -heteroalkyl-; Q is -alkyl-C (O) -*, -herteroalkyl-C (O) -*, alkyl or herteroalkyl; m is an integer from 0 to 40; *denotes the site covalently linked to R4; and wherein G is absent, or is -NH-alkyl-NH-, -NH-alkyl-C (O) -, -NH-heteroalkyl-NH- or -NH-heteroalkyl-C (O) -, wherein each of the alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Re; J is wherein each of R5 is independently selected from H, OH, SH, NH2, halogen, cyano,  carboxy, alkyl, cycloalkyl, aryl and heteroaryl, each of which is substituted or unsubstituted; each of R6 is independently selected from a side-chain residue of a  proteinogenic or a non-proteinogenic amino acid, each of which can be further substituted; n is an integer from 1 to 10; K is absent, or is -NH-alkyl-*, -C (O) -alkyl-*, -NH-heteroalkyl-*, or -C (O) - heteroalkyl-*, wherein each of the alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Re; each of Re is independently selected from halogen, cyano, hydroxyl, amino,  alkoxy, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalknyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which is substituted or unsubstituted; *denotes the site covalently linked to R4.

[0125] In certain embodiments, L has formula II (a) .

[0126] In certain embodiments, B is selected the group consisting of alkyl, heteroalkyl, -C (O) -alkyl-,  wherein each of alkyl and heteroalkyl is unsubstituted or substituted; wherein i is an integer from 0 to 10; wherein j is an integer from 0 to 10; wherein k is an integer from 0 to 10.

[0127] In certain embodiments, B is selected from alkyl, heteroalkyl, -C (O) -alkyl-, or

[0128] In certain embodiments, B is C1-C6 alkyl.

[0129] In certain embodiments, B is C3 alkyl or C5 alkyl.

[0130] In certain embodiments, B is C2 alkyl.

[0131] In certain embodiments, B is and i is 1.

[0132] In some embodiments, C is 5-to 10-membered N-containing aromatic or non-aromatic mono-or bicyclic heterocycle.

[0133] In some embodiments, C is selected from the group consisting of:

[0134] In certain embodiments, C is

[0135] In certain embodiments, C is

[0136] In some embodiments, D is absent.

[0137] In some embodiments, D is -NH-alkyl-C (O) -or -C (O) -alkyl-NH-.

[0138] In certain embodiments, D is -NH-C1-C6 alkyl-C (O) -or -C (O) -C1-C6 alkyl-NH-.

[0139] In certain embodiments, D is -NH-C2 alkyl-C (O) -or -C (O) -C2 alkyl-NH-.

[0140] In some embodiments, L is selected from the group consisting of: wherein *denotes the site covalently linked to R4.

[0141] In certain embodiments, L is selected from the group consisting of: wherein *denotes the site covalently linked to R4.

[0142] In certain embodiments, L is

[0143] In some embodiments, L has formula II (b) .

[0144] In certain embodiments, E is -NH-C0-C10 alkyl-.

[0145] In certain embodiments, E is -NH-.

[0146] In some embodiments, Q is –C1-C10 alkyl-C (O) -*or C1-C10 alkyl.

[0147] In certain embodiments, Q is –C2 alkyl-C (O) -*or C3 alkyl.

[0148] In some embodiments, Q is –C1-C10 heteroalkyl-C (O) -*or C1-C10 hetero alkyl.

[0149] In some embodiments, m is 0-10, 18 or 28.

[0150] In some embodiments, L is wherein p is 0-10, 18 or 28, and *denotes the site covalently linked to R4.

[0151] In some embodiments, L has formula II (c) .

[0152] In certain embodiments, G is absent.

[0153] In some embodiments, G is -NH-alkyl-NH-or -NH-alkyl-C (O) -.

[0154] In certain embodiments, G is -NH-C1-C6 alkyl-NH-or -NH-C1-C6 alkyl-C (O) -.

[0155] In certain embodiments, G is -NH-C2 alkyl-NH-or -NH-C2 alkyl-C (O) -.

[0156] In some embodiments, J is and each of R5 is independently selected from H or alkyl.

[0157] In certain embodiments, R5 is H.

[0158] In some embodiments, each of R6 is independently selected from the group consisting of: -H,  -CH3, -CH- (CH3) 2, -CH2-CH (CH3) 2, -CH (CH3) -CH2-CH3,  -CH2-COOH, -CH2-CONH2, - (CH2) 2-COOH, - (CH2) 4-NH2, - (CH2) 2-CONH2, - (CH2) 2-S-CH3, -CH2-OH, -CH (CH3) -OH, -CH2-SH, and

[0159] In certain embodiments, each of R6 is independently selected from -H,

[0160] In some embodiments, n is 2 or 3.

[0161] In some embodiments, K is -NH-alkyl-*, or -C (O) -alkyl-*.

[0162] In certain embodiments, K is -NH-C1-C6 alkyl-*, or -C (O) -C1-C6 alkyl-*.

[0163] In certain embodiments, K is -NH-C3 alkyl-*, or -C (O) -C3 alkyl-*.

[0164] In some embodiments, L is selected from the group consisting of: wherein *denotes the site  covalently linked to R4.Moiety A

[0165] In some embodiments, A comprises a chelating agent, wherein the chelating agent is selected from bis (carboxymethyl) -1 , 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6.2] hexadecane (CBTE2a) , cyclohexyl-1, 2-diaminetetraacetic acid (CDTA) , 4- (1, 4.8, 11-tetraazacyclotetradec-1-yl) -methylbenzoic add (CPTA) , N’- (5- [acetyl (hydroxy) amino] pentyl] -N- [5- [ [4- [5-aminopentyl- (hydroxy) amino] -4-oxobutanoyl] amino] pentyl] -N-hydroxybutandiamide (DFO) , 4, 11-bis (carboxymethyl) -1 , 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6, 2] hexadecane (DO2A) , 1, 4, 7, 10-tetracyclododecan-N, N’, N", N "’-tetraacetic acid (DOTA) , alfa- (2-carboxyethyl) -1 ,4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7, 10-tetraacetic acid (DOTAGA) , 1, 4, 7, 10-tetraaxacyclododecane N, Ν ’, N”, N ”’-1, 4, 7, 10-tetra (methylene) phosphonic acid (DOTMP) , N, N’-dipyridoxylethylendiamine-N, N'-diacetate-5, 5'-bis (phosphat) (DPDP) , diethylene triamine Ν, Ν ’, Ν ”-penta (methylene) phosphonic acid (DTMP) , diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) , ethylenediamine-N, N'-tetraacetic acid (EDTA) , ethyleneglycol-O, O-bis (2-aminoethyl) -N, N, Ν ’, N ’-tetraacetic acid (EGTA) , N, N-bis (hydroxybenzyl) -ethylenediamine-N, N’-diacetic acid (HBED) , hydroxyethyldiaminetriacetic acid (HEDTA) , 1 - (p-nitrobenzyl) -l , 4, 7, 10-tetraazacyclodecan-4, 7, 10-triacetate (HP-DOA3) , 6-hydrazinyl-N-methylpyridine-3-carboxamide (HYNIC) , tetra 3-hydroxy-N-methyl-2-pyridinone chelators (4- ( (4- (3- (bis (2- (3-hydroxy-1-methyl-2-oxo-1, 2-dihydropyridine-4-carboxamido) ethyl) amino) -2- ( (bis (2- (3-hydroxy-1-methyl-2-oxo-1, 2-dihydropyridine-4-carboxamido) ethyl) amino) methyl) propyl) phenyl) amino) -4-oxobutanoic acid) , abbreviated as Me-3, 2-HOPO, 1 , 4, 7-triazacyclononan-1 -succinic acid-4, 7-diacetic acid (NODASA) , 1- (1-carboxy-3-carboxypropyl) -4, 7- (carbooxy) -1, 4, 7-triazacyclononane (NODAGA) , 1 , 4, 7-triazacyclononanetriacetic acid (NOTA) , 4, 11-bis (carboxymethyl) -1, 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6.2] hexadecane (TE2A) . 1, 4, 8, 11 -tetraazacyclododecane-1 , 4, 8, 11-tetraacetic acid (TETA) , tris {hydroxypyridinone) (THP) , terpyridin-bis (methyleneamintetraacetic acid (TMT) , 1, 4, 7-triazacyclononane-1 , 4, 7-tris [methylene (2-carboxyethyl) phosphinic acid] (TRAP) , 1, 4, 7, 10-tetraazacyclotridecan-N, N', N", N”’-tetraacetic acid (TRITA) , 3- [[4, 7-bis [ [2-carboxyethyl (hydroxy) phosphoryl] methyl] -1, 4, 7-triazonan-1-yl] methyl-hydroxy-phosphoryl] propanoic acid, triethylenetetraaminehexaacetic acid (TTHA) , and 1, 4-bis (carboxymethyl) -6- [bis (carboxymethyl) ] amino-6-methylperhydro-1, 4-diazepine (AAZTA) .

[0166] In some embodiments, A comprises a chelating agent, wherein the chelating agent is selected from:

[0167] In certain embodiments, the chelating agent is selected from the group consisting of:

[0168] In certain embodiments, the chelating agent is

[0169] In some embodiments, the compound of the present disclosure has a formula selected from the group consisting of:

[0170] In some embodiments, A comprises a radioactive moiety, wherein the radioactive moiety comprises a radioisotope, a chelate of a radioisotope with a chelating agent, a fluorescent group, or combinations thereof.

[0171] In certain embodiments, the radioactive moiety is selected from: , wherein M is a radioisotope.

[0172] In certain embodiments, the radioactive moiety is selected from

[0173] In certain embodiments, the radioactive moiety comprises a radioisotope selected from a metallic or a non-metallic nuclide.

[0174] In certain embodiments, the radioisotope is selected from 223Ra, 89Sr, 94mTc, 99mTc, 186Re, 188Re, 203Pb, 67Ga, 68Ga, 47Sc, 111In, 97Ru, 62Cu, 64Cu, 86Y, 88Y, 90Y, 121Sn, 161Tb, 153Sm, 166Ho, 105Rh, 177Lu, 123I, 124I, 125I, 131I, 18F, 211At, 225Ac, 89Sr, 225Ac, 117mSn or 169Er, wherein 18F is preferably bound to chelated Al, Zr, Si, Ga, or In, more preferably 18F is bound to Al chelated by the chelating agent.

[0175] In certain embodiments, the radioisotope is selected from 68Ga, 177Lu, 225Ac, 18F-Al or 64Cu.

[0176] In some embodiments, the compound of the present disclosure has a formula selected from the group consisting of:

[0177] In some embodiments, A is a group consisting of a radioisotope covalently attached to a moiety with any of the following structures: wherein W is independently selected from N, S, O or CH.

[0178] In some embodiments, A comprises a fluorescent group selected from a xanthene dye, acridine dye, oxazine dye, cyanine dye, styryl dye, coumarin dye, porphyrin dye, fluorescent metal-ligand-complex, fluorescent protein, nanocrystals, perylene dye, boron-dipyrromethene dye and phthalocyanine dye.

[0179] In some embodiments, A comprises a cytotoxic and / or cytostatic agent, or an immunomodulator agent.

[0180] In certain embodiments, the cytotoxic and / or cytostatic agent is a chemotherapeutic agent selected from the group consisting of topoisomerase inhibitors, alkylating agents, antimetabolites, antibiotics, mitotic disrupters, DNA intercalating agents, DNA synthesis inhibitors, DNA-RNA transcription regulator, enzyme inhibitors, gene regulators, hormone response modifiers, hypoxia-selective cytotoxins, epidermal growth factor inhibitors, anti-vascular agents and a combination of two or more thereof.

[0181] In certain embodiments, the immunomodulator agent is selected from a ligand of CD3, CD25, TLRs, STING, 4-1BBL, 4-1BB, PD-1, mTOR, PDL-1 or NKG-2D IMiDs, wherein the ligand is an agonist and / or antagonist.Compounds of Formula (Ia) and Formula (Ib)

[0182] In another aspect, there is provided a compound having Formula (Ia) or Formula (Ib) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or  prodrug thereof, wherein R1 is selected from the group consisting of CN, H, B (OH) 2, -C=C-C (O) -aryl, - C=C-S (O) 2-aryl, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2, 5-tetrazolyl and CORa; each of R2 and R3 is independently H or halogen; R4 is selected from the group consisting of O, NRb, S, S=O, S (=O) 2 and CH2; L is absent or is a linker; A is selected from the group consisting of radioactive moiety, chelating agent,  fluorescent dye, a contrast agent, a cytotoxic and / or cytostatic agent, an immunomodulator agent and combinations thereof; Ra is selected from the group consisting of H, hydroxyl, amino, alkyl, alkenyl,  haloalkyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc; Rb is selected from the group consisting of H, -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl, alkenyl,  alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, cycloalkyl, heterocyclyl, heteroalknyl cycloalkenyl, cycloheteroalkenyl, aryl, and aralkyl, wherein each of -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Rc; and each of Rc is independently selected from halogen, hydroxyl, oxo, amino, cyano, nitro, alkoxyl or alkyl.

[0183] In some embodiments, R1 is defined as described herein.

[0184] In some embodiments, R2 and R3 are defined as described herein.

[0185] In some embodiments, R4 is defined as described herein.

[0186] In some embodiments, L is defined as described herein.

[0187] In some embodiments, A is defined as described herein.Compound Formula (III)

[0188] In another aspect, there is provided a compound having Formula (III) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or  prodrug thereof, wherein each of X, Y and Z is independently selected from the group consisting of CR7,  C=O or N, under the proviso that at least one of X, Y and Z is N; R1 is selected from the group consisting of CN, H, B (OH) 2, -C=C-C (O) -aryl, - C=C-S (O) 2-aryl, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2, 5-tetrazolyl and CORa; each of R2 and R3 is independently H or halogen, under the proviso that at least  one of R2 and R3 is halogen; R7 is H, hydroxyl, amino, halogen, alkyl, alkoxyl, alkenyl, heteroalkyl or  heteroalkenyl; Ra is selected from the group consisting of H, hydroxyl, amino, alkyl, alkenyl,  haloalkyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc; and each of Rc is independently selected from halogen, hydroxyl, oxo, amino, cyano ,  nitro, alkoxyl or alkyl.

[0189] In some embodiments, R1 is CN.

[0190] In some embodiments, R1 is CORa.

[0191] In certain embodiments, Ra is saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc.

[0192] In certain embodiments, Rc is cyano.

[0193] In some embodiments, Ra is amino, wherein the amino can be further substituted with one or more Rc.

[0194] In certain embodiments, each of Rc is independently selected from alkoxyl or alkyl.

[0195] In some embodiments, R1 together with the carbon atoms at positions 2 and / or 3 shown in Formlar (I) above, forms a saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with, e.g., hydroxyl.

[0196] In some embodiments, the C atom to which R1 is directly bound is in S-configuration.

[0197] In some embodiments, both of R2 and R3 are halogen.

[0198] In certain embodiments, both of R2 and R3 are F.

[0199] In some embodiments, two of X, Y and Z is N.

[0200] In certain embodiments, X is N, Y is CR7, and Z is N.

[0201] In some embodiments, only one of X, Y and Z is N.

[0202] In certain embodiments, wherein a) X is N, Y is CR7, and Z is CR7; b) X is CR7, Y is CR7, and Z is N; c) X is CR7, Y is N, and Z is CR7; or d) X is CR7, Y is NH, and Z is C=O; wherein each of R7 is independently selected from H, hydroxyl or alkoxyl.

[0203] In certain embodiments, both of X and Y are CR7, and Z is N.

[0204] In certain embodiments, R7 is H or hydroxyl.

[0205] In some embodiments, the compound of the present disclosure has a formula selected from the group consisting of: Deuterated compounds

[0206] In another aspect, there is provided a compound having Formula (IV) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or  prodrug thereof, wherein each of X, Y and Z is described herein; optionally X, Y and / or Z can be further deuterated; R1 is defined as described herein, optionally R1 can be further deuterated; each of R2 and R3 is described herein; optionally R2 and / or R3 can be further deuterated; R4 is defined as described herein, optionally R4 can be further deuterated; L is defined as described herein, optionally L can be further deuterated; A is defined as described herein, optionally A can be further deuterated; and R1’, R2’, R3’, R4’, R5’, R6’, R7’, R8’, R9’a nd R10’ independently from each other are  H or deutaurium.

[0207] In some embodiments, each of R2 and R3 is independently deuterium or halogen.

[0208] In another aspect, there is provided a compound having Formula (V) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or  prodrug thereof, wherein each of X, Y and Z is described herein; optionally X, Y and / or Z can be further  deuterated; R1 is defined as described herein, optionally R1 can be further deuterated; each of R2 and R3 is described herein; optionally R2 and / or R3 can be further  deuterated; and R1’, R2’, R3’, R4’, R5’, R6’, R7’, R8’, R9’a nd R10’ independently from each other are  H or deutaurium.Methods of synthesis

[0209] Synthesis of the compounds provided herein, including pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof, are illustrated in the synthetic schemes in the examples. The compounds provided herein can be prepared using any known organic synthesis techniques and can be synthesized according to any of numerous possible synthetic routes, and thus these schemes are illustrative only and are not meant to limit other possible methods that can be used to prepare the compounds provided herein. Additionally, the steps in the Schemes are for better illustration and can be changed as appropriate. The embodiments of the compounds in examples were synthesized for the purposes of research and potentially submission to regulatory agencies.

[0210] The reactions for preparing compounds of the present disclosure can be carried out in suitable solvents, which can be readily selected by one skilled in the art of organic synthesis. Suitable solvents can be substantially non-reactive with the starting materials (reactants) , the intermediates, or products at the temperatures at which the reactions are carried out, e.g., temperatures that can range from the solvent’s freezing temperature to the solvent's boiling temperature. A given reaction can be carried out in one solvent or a mixture of more than one solvent. Depending on the particular reaction step, suitable solvents for a particular reaction step can be selected by one skilled in the art.

[0211] Preparation of compounds of the present disclosure can involve the protection and deprotection of various chemical groups. The need for protection and deprotection, and the selection of appropriate protecting groups, can be readily determined by one skilled in the art. The chemistry of protecting groups can be found, for example, in T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., Wiley &Sons, Inc., New York (1999) , in P. Kocienski, Protecting Groups, Georg Thieme Verlag, 2003, and in Peter G.M. Wuts, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 5th Edition, Wiley, 2014, all of which are incorporated herein by reference in its entirety.

[0212] Reactions can be monitored according to any suitable method known in the art. For example, product formation can be monitored by spectroscopic means, such as nuclear magnetic resonance spectroscopy (e.g., 1H or 13C) , infrared spectroscopy, spectrophotometry (e.g., UV-visible) , mass spectrometry, or by chromatographic methods such as high-performance liquid chromatography (HPLC) , liquid chromatography-mass spectroscopy (LCMS) , or thin layer chromatography (TLC) . Compounds can be purified by one skilled in the art by a variety of methods, including high performance liquid chromatography (HPLC) ( “Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization” Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs J. Combi. Chem. 2004, 6 (6) , 874-883, which is incorporated herein by reference in its entirety) , and normal phase silica chromatography.

[0213] The structures of the compounds in the examples were characterized by nuclear magnetic resonance (NMR) and / or LC-MS.

[0214] The known starting materials of the present disclosure can be synthesized by using or according to the known methods in the art, or can be purchased from commercial suppliers. Unless otherwise noted, analytical grade solvents and commercially available reagents were used without further purification.

[0215] Unless otherwise specified, the reactions of the present disclosure were all done under a positive pressure of nitrogen or argon or with a drying tube in anhydrous solvents, and the reaction flasks were typically fitted with rubber septa for the introduction of substrates and reagents via syringe. Glassware was oven dried and / or heat dried.

[0216] For illustrative purposes, the Examples section below shows synthetic route for preparing the compounds of the present disclosure as well as key intermediates. Those skilled in the art will appreciate that other synthetic routes may be used to synthesize the inventive compounds. Although specific starting materials and reagents are depicted, other starting materials and reagents can be easily substituted to provide a variety of derivatives and / or reaction conditions. In addition, many of the compounds prepared by the methods described below can be further modified in light of this disclosure using conventional chemistry well known to those skilled in the art.Composition and kit

[0217] For the purposes of administration, in some embodiments, the compounds provided herein are administered as a raw chemical or are formulated as compositions or kits.

[0218] Therefore, in a further aspect, the present disclosure provides compositions comprising one or more compounds or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof provided herein. In some embodiments, the compositions of the present disclosure comprise a compound selected from Formula (I) , Formula (Ia) , Formula (Ib) , or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof. In some embodiments, the compositions of the present disclosure comprise a first compound selected from Formula (I) , Formula (Ia) , Formula (Ib) , or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof and one or more additional compounds of the same formula but said first compound and additional compounds are not the same molecules.

[0219] As used herein, the term “composition” is a formulation containing the compounds of the present disclosure in a form suitable for administration to a subject. The compositions include compositions suitable for oral, rectal, topical, and parenteral (including subcutaneous, intramuscular, and intravenous) administration, although the most suitable route in any given case will depend on the particular host, and nature and severity of the conditions for which the active ingredient is being administered.

[0220] In some embodiments, the composition of the present disclosure is a pharmaceutical composition. The pharmaceutical compositions may be conveniently presented in unit dosage form and prepared by any of the methods well known in the art of pharmacy.

[0221] In some embodiments, the composition comprises one or more compounds of the present disclosure, or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof, and at least one carrier.

[0222] The term “carrier” refers to a diluent, adjuvant or excipient, with which a compound is administered. Such pharmaceutical carriers can be liquids, such as water and oils, including those of petroleum, animal, vegetable or synthetic origin, such as peanut oil, soybean oil, mineral oil, sesame oil. The carriers can be saline, gum acacia, gelatin, starch paste, talc, keratin, colloidal silica, urea. In addition, auxiliary, stabilizing, thickening, lubricating and coloring agents can be used. In some embodiments, when administered to a patient, the compound or compositions and pharmaceutically acceptable carriers are sterile.

[0223] Water is an exemplary carrier when the compounds are administered intravenously. Saline solutions and aqueous dextrose and glycerol solutions can also be employed as liquid carriers, particularly for injectable solutions. Suitable pharmaceutical carriers also include excipients such as starch, glucose, lactose, sucrose, gelatin, malt, rice, flour, chalk, silica gel, sodium stearate, glycerol monostearate, talc, sodium chloride, dried skim milk, glycerol, propylene, glycol, water, ethanol. The present compositions, if desired, can also contain minor amounts of wetting or emulsifying agents, or pH buffering agents.

[0224] In some embodiments, the pharmaceutical composition of the present disclosure comprising one or more compounds provided herein or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof further comprises one or more additional therapeutically / diagnostically active agents.

[0225] In some embodiments, the present disclosure provides a kit comprising compound or the composition provided herein.

[0226] As used herein, the term “kit” refers to any delivery system for delivering materials. Such delivery systems may include systems that allow for the storage, transport, or delivery of various diagnostic or therapeutic reagents (e.g., oligonucleotides, enzymes, etc. in the appropriate containers) and / or supporting materials (e.g., buffers, written instructions for performing the assay, etc. ) from one location to another. For example, kits include one or more enclosures (e.g., boxes, cartridges, bottles, ampoules, etc. ) containing the relevant reaction reagents and / or supporting materials. As used herein, the term “fragmented kit” refers to a delivery system comprising two or more separate containers that each contain a subportion of the total kit components. The containers may be delivered to the intended recipient together or separately. For example, a first container may contain an enzyme for use in an assay, while a second container contains oligonucleotides. The term “fragmented kit” is intended to encompass kits containing Analyte Specific Reagents regulated under section 520 (e) of the Federal Food, Drug, and Cosmetic Act, but are not limited thereto. Indeed, any delivery system comprising two or more separate containers that each contains a subportion of the total kit components are included in the term “fragmented kit” . In contrast, a “combined kit” refers to a delivery system containing all of the components in a single container (e.g., in a single box housing each of the desired components) . The term “kit” includes both fragmented and combined kits.

[0227] In certain embodiments, the kit disclosed herein is a diagnostic kit. In certain embodiments, the kit disclosed herein comprises or consists of the compound or the composition of the present disclosure and instructions for the diagnosis or treatment of a disease. The included instructions can provide a description of administration of the compounds or compositions to a subject to achieve the intended activity, e.g., diagnosis and / or treatment of a disease or condition such as cancer, in a subject. In some embodiments, the instructions relating to the use of the compositions described herein can include information as to dosage, dosing schedule, and route of administration for the intended diagnosis and / or treatment. The containers can be unit doses, bulk packages (e.g., multi-dose packages) or sub-unit doses. Instructions supplied in the kits of the disclosure are typically written instructions on a label or package insert. The label or package insert indicates that the compositions are used for diagnosing, treating, delaying the onset, and / or alleviating a disease or disorder in a subject.

[0228] In some embodiments, the kits provided herein are in suitable packaging. Suitable packaging includes, but is not limited to, vials, bottles, jars, flexible packaging, and the like. Also contemplated are packages for use in combination with a specific device, such as an inhaler, nasal administration device, or an infusion device. In some embodiments, a kit can have a sterile access port (for example, the container can be an intravenous solution bag or a vial having a stopper pierceable by a hypodermic injection needle) .Method of diagnosing or treating diseases

[0229] In an aspect, there is provided a method for diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) in a subject, comprising administering an effective amount of the compound, the composition, or the kit of the present disclosure to the subject.

[0230] In some embodiments, the disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) is selected from the group consisting of cancer, inflammation, atherosclerosis, fibrosis, tissue remodeling, keloid disorder, fracture and heart ligation.

[0231] As used herein, the term “cancer” and “cancerous” refer to or describe the physiological condition in mammals that is typically characterized by unregulated cell growth. Examples of cancer include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma (including medulloblastoma and retinoblastoma) , sarcoma (including liposarcoma and synovial cell sarcoma) , neuroendocrine tumors (including carcinoid tumors, gastrinoma, and islet cell cancer) , mesothelioma, schwannoma (including acoustic neuroma) , meningioma, adenocarcinoma, melanoma, and leukemia or lymphoid malignancies. More particular examples of such cancers include squamous cell cancer (e.g. epithelial squamous cell cancer) , lung cancer including small-cell lung cancer, non-small cell lung cancer, adenocarcinoma of the lung and squamous carcinoma of the lung, cancer of the peritoneum, hepatocellular cancer, gastric cancer including gastrointestinal cancer, pancreatic cancer, glioblastoma, neuroblastoma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, urinary tract cancer, hepatoma, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, colorectal cancer, endometrial or uterine carcinoma, salivary gland carcinoma, kidney or renal cancer, prostate cancer, vulval cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma, anal carcinoma, penile carcinoma, testicular cancer, esophageal cancer, tumors of the biliary tract, as well as head and neck cancer.

[0232] In certain embodiments, the cancer is selected from the group consisting of breast cancer, pancreatic cancer, small intestine cancer, colon cancer, rectal cancer, lung cancer, head and neck cancer, ovarian cancer, hepatocellular carcinoma, esophageal cancer, hypopharynx cancer, nasopharynx cancer, larynx cancer, myeloma cells, bladder cancer, cholangiocellular carcinoma, clear cell renal carcinoma, neuroendocrine tumor, oncogenic osteomalacia, sarcoma, CUP (carcinoma of unknown primary) , thymus carcinoma, desmoid tumors, glioma, astrocytoma, cervix carcinoma and prostate cancer.

[0233] As used herein, the term “inflammation” refers to part of the complex biological response of body tissues to harmful stimuli, such as pathogens, damaged cells, or irritants, and is a protective response involving immune cells, blood vessels, and molecular mediators. The function of inflammation is to eliminate the initial cause of cell injury, clear out necrotic cells and tissues damaged from the original insult and the inflammatory process, and initiate tissue repair.

[0234] As used herein, the term “atherosclerosis” refers to a pattern of the disease arteriosclerosis, characterized by development of abnormalities called lesions in walls of arteries. These lesions may lead to narrowing of the arteries’ walls due to buildup of atheromatous plaques.

[0235] As used herein, the term “fibrosis” also known as fibrotic scarring, is a pathological wound healing in which connective tissue replaces normal parenchymal tissue to the extent that it goes unchecked, leading to considerable tissue remodeling and the formation of permanent scar tissue.

[0236] In certain embodiments, the fibrosis is selected from the group consisting of pulmonary fibrosis, liver fibrosis, heart fibrosis, kidney fibrosis, mediastinal fibrosis, retroperitoneal cavity fibrosis, bone marrow fibrosis, skin fibrosis, and scleroderma.

[0237] As used herein, the term “tissue remodeling” refers to the reorganization or renovation of existing tissues. Tissue remodeling can be either physiological or pathological. The process can either change the characteristics of a tissue such as in blood vessel remodeling, or result in the dynamic equilibrium of a tissue such as in bone remodeling. Macrophages repair wounds and remodel tissue by producing extracellular matrix and proteases to modify that specific matrix.

[0238] As used herein, the term “keloid” also known as keloid disorder and keloidal scar, is the formation of a type of scar which, depending on its maturity, is composed mainly of either type III (early) or type I (late) collagen. It is a result of an overgrowth of granulation tissue (collagen type III) at the site of a healed skin injury which is then slowly replaced by collagen type I.

[0239] In some embodiments, the compounds, or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof, the composition or the kit of the present disclosure can be administered as the sole active agent. In some embodiments, the compounds, or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof, the composition, or the kit of the present disclosure can be administered in combination with one or more additional active ingredients. The skilled artisan will recognize that a variety of active ingredients may be combined with the compounds of the present disclosure. In some embodiments, the additional active ingredient of the pharmaceutical combination formulation or dosing regimen has complementary activities to the compounds of disclosure such that they do not adversely affect each other. Such ingredients are suitably present in combination in amounts that are effective for the purpose intended.

[0240] In some such embodiment, the compounds or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof, the composition or the kit of the present disclosure can be used in combination with an additional therapy. The additional therapy may optionally include one or more therapeutic agents, radiation therapy, surgery (e.g., lumpectomy and a mastectomy) , chemotherapy, gene therapy, DNA therapy, viral therapy, RNA therapy, immunotherapy, bone marrow transplantation, nanotherapy, monoclonal antibody therapy, or a combination of the foregoing.

[0241] In some embodiments, the compounds or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof, the composition or the kit of the present disclosure may be administered simultaneously, sequentially or separately with one or more additional therapeutic agents.

[0242] In further aspect, there is provided use of the compound, the composition, or the kit of the present disclosure in the manufacture of a diagnostic reagent or medicament for diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) in a subject.

[0243] In a further aspect, there is provided the compound, the composition, or the kit of the present disclosure, for use in diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) in a subject. EXAMPLES

[0244] For the purpose of illustration, the following examples are included. The Examples provided herein describe the synthesis of compounds disclosed herein as well as intermediates used to prepare the compounds. However, it is to be understood that these examples do not limit the present disclosure and are only meant to suggest a method of practicing the present disclosure. Persons skilled in the art will recognize that the chemical reactions described may be readily adapted to prepare a number of other compounds of the present disclosure, and alternative methods for preparing the compounds of the present disclosure are deemed to be within the scope of the present disclosure. For example, the synthesis of non-exemplified compounds according to the present disclosure may be successfully performed by modifications apparent to those skilled in the art, e.g., by appropriately protecting interfering groups, by utilizing other suitable reagents and building blocks known in the art other than those described, and / or by making routine modifications of reaction conditions. Besides, persons skilled in the art will also understand that individual steps described herein or in the separate batches of a compound may be combined. Alternatively, other reactions disclosed herein or known in the art will be recognized as having applicability for preparing other compounds of the present disclosure. The following description is, therefore, not intended to limit the scope of the present disclosure, but rather is specified by the claims appended hereto.

[0245] The following abbreviations have been used in the examples: Example 1Synthesis of (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6-hydroxy-1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E1)

[0246] Synthetic procedure:

[0247] Step 1: methyl 6-methoxy-1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E1-2)

[0248] A solution of E1-1 (2.00 g, 10.26 mmol) , Pd (dppf) Cl2 (749.74 mg, 1.03 mmol) and TEA (3.11 g, 30.78 mmol) in MeOH (20 mL) was stirred at 80℃ for 16 hours under CO. The reaction was monitored by LC-MS, filtered and concentrated on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM / MeOH = 20: 1) to E1-2 (1.35 g, 61%) as a yellow solid.

[0249] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.24 (d, J = 0.6 Hz, 1H) , 8.99 (d, J = 4.3 Hz, 1H) , 8.13 (d, J = 4.3 Hz, 1H) , 7.87 (d, J = 0.5 Hz, 1H) , 4.01 (s, 3H) , 3.99 (s, 3H) .

[0250] Step 2: 6-methoxy-1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E1-3)

[0251] A mixture of E1-2 (1.36 g, 6.24 mmol) and NaOH (748.62 mg, 18.72 mmol) in MeOH / H2O (15 mg; 2: 1) was stirred at 25℃ for 2 hours under N2. The reaction was monitored by LC-MS. Upon completion and adjust PH to 6 with 1 N HCl aq., a white solid was precipitated and then filtered to afford the desired product E1-3 (1.1 g, 87%) as a white solid.

[0252] MS (ESI) : m / z found 205.1 [M+H] +.

[0253] Step 3: 6-hydroxy-1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E1-4)

[0254] A mixture of E1-3 (700 mg, 3.41 mmol) and HBr / AcOH (10 mL) was stirred at 100℃ for 1 hour. The reaction was monitored by LC-MS. Upon completion, the reaction solution was concentrated to afford the desired product, E1-4 (800 mg, crude) as a yellow solid.

[0255] MS (ESI) : m / z found 190.6.

[0256] Step 4: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6-hydroxy-1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E1)

[0257] A mixture of E1-4 (800 mg, 4.21 mmol) , E1-5 (1.19 g, 6.32 mmol) , HOBT (853.2 mg, 6.32 mmol) , EDCI (1.20 g, 6.32 mmol) , DIEA (4.08 g, 31.6 mmol) and DMF (10 mL) was stirred at room temperature for 2 hours under N2. Upon completion, the residue was purified by C18 column (eluent: H2O (0.5%TFA)  / ACN = 10 / 1) first and then purified by SFC to afford E1 (35 mg, 2%) as a yellow solid.

[0258] MS (ESI) : m / z found 361.7.

[0259] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.17 (s, 1H) , 9.19 –9.01 (m, 2H) , 8.84 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.66 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 5.16 (dd, J = 9.3, 2.5 Hz, 1H) , 4.51 –3.96 (m, 4H) , 3.11 –2.71 (m, 2H) . Example 2Synthesis of (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6-hydroxy-1, 5-naphthyridine-4-carboxamide (E2)

[0260] Synthetic procedure:

[0261] Step 1: 6-methoxy-l, 5-naphthyridine-4-carboxylate (E2-2)

[0262] To a solution of E2-1 (2.00 g, 8.37 mmol, in MeOH (10 mL) was added Pd (dppf) Cl2 (918.19 mg, 1.25 mmol) and TEA (2539.61mg, 25.10 mmol) under N2. The suspension was degassed under vacuum and purged with CO several times. The mixture was stirred under CO at 80 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography (SiO2, Petroleum ether / Ethyl acetate = 10 / 1 to 3 / 1) to give E2-2 (2.0 g, 91.6%) as a yellow solid.

[0263] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.89 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 8.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 7.85 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 4.00 (s, 3H) , 3.97 (s, 3H) .

[0264] Step 2: 6-hydroxy-1, 5-naphthyridine-4-carboxylic acid (E2-3)

[0265] To a solution of E2-2 (2.0 g, 9.17 mmol) in 6.0 M aq. HCl (76.9 mL) . The mixture was stirred at 100 ℃ for 2 hours. On completion, the reaction mixture was concentrated in vacuo to give E2-3 (1.8 g, 94.7%) as a yellow solid.

[0266] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.78 (d, J = 326.0 Hz, 3H) , 8.63 (t, J =5.4 Hz, 1H) , 8.06 (d, J = 9.9 Hz, 1H) , 8.00 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 6.89 (d, J =9.9 Hz, 1H) .

[0267] Step 3: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6-hydroxy-1, 5-naphthyridine-4-carboxamide (E2)

[0268] To a solution of E2-3 (500 mg, 2.21 mmol) in DMF (10 mL) was added HOBT (600.09 mg, 3.94 mmol) , EDCI (918.19 mg, 1.25 mmol) , DIPEA (756.08 mg, 3.94 mmol) . and E1-5 (994.77 mg, 5.26 mmol) was added at 0 ℃. The mixture was continuously stirred at 20 ℃ for 16 hours. Saturated aqueous NH4Cl (20 mL) was added. The residue was extracted with EA (3 x 50 mL) . The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified via Flash Chromatography and was eluted with CH2Cl2 / MeOH to give the crude product (0.4 g) . The product (0.1 g) was further separated by SFC (Column: DAICEL OJ-H 4.6 mm I.D. *250 mmL 5 μm; Mobile phase: CO2 / CH3CH2OH = 70 / 30) to give E2 (12.8 mg, 12.8 %yield) as a white solid.

[0269] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H) , 9.56 (s, 1H) , 8.65 (d, J =4.8 Hz, 1H) , 8.03 (d, J = 9.6 Hz, 1H) , 7.94 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 6.86 (d, J =9.6 Hz, 1H) , 5.15 (dd, J1 = 9.2 Hz, J 2= 2.4 Hz, 1H) , 4.39 –4.09 (m, 4H) , 3.01 –2.76 (m, 2H) . Example 3Synthesis of N- {2- [ (2S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl] -2-oxoethyl} -7-methoxy-1, 6-naphthyridine-4-carboxamide (E3)

[0270] Synthetic procedure:

[0271] Step 1: Methyl 7-methoxy-1, 6-naphthyridine-4-carboxylate (E3-2)

[0272] To a solution of E3-1 (11.0 g, 56.7 mmol) in MeOH (120 mL) was added Pd (dppf) Cl2 (4.15 g, 5.67 mmol) and TEA (17.21 g, 170.1 mmol) , the resulting mixture was stirred under CO (50 psi) at 80 ℃ for 16 hours and concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography (SiO2, PE / EtOAc =20 / 1 to 6 / 1) to give E3-2 (9.0 g, 72.8%yield) as a white solid.

[0273] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.92 (s, 1H) , 9.08 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 7.80 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 4.10 (s, 3H) , 4.07 (s, 3H) .

[0274] Step 2: 7-methoxy-1, 6-naphthyridine-4-carboxylic acid (E3-3)

[0275] To a solution of E3-2 (2 g, 9.2 mmol) in MeOH (15 mL) was added NaOH (27 mL, 1 N in H2O, 2.76 mmol) , the mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hour. The aqueous 1N HCl aq. was added to the mixture to adjust pH value to 2 -3, and the separated solid was collected by filtration to give the E3-3 (1.9 g, 91.3%yield) as a pale-yellow solid.

[0276] MS (ESI) : m / z found 205.2 [M+H] +.

[0277] Step 3: Benzyl 2- [ (7-methoxy-1, 6-naphthyridin-4-yl) formamido] acetate (E3-4)

[0278] To a solution of E3-3 (660 mg, 3.23 mmol) in DMF (8 mL) was added benzyl 2-aminoacetate (800.94 mg, 4.85 mmol) , HATU (1843.58 mg, 1.85 mmol) , DIEA (2088.78 mg, 16.16 mmol) , the mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The mixture was diluted with H2O and extracted with ethyl acetate, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash chromatography (petroleum ether / ethyl acetate= 4 / 1) to give E3-4 (650 mg, 53.23%yield) as a yellow solid.

[0279] MS (ESI) : m / z found 352.1 [M+H] +.

[0280] Step 4: [ (7-methoxy-1, 6-naphthyridin-4-yl) formamido] acetic acid (E3-5)

[0281] To a solution of E3-4 (650 mg, 1.85 mmol) in THF / H2O = 1: 1 (10 mL) was added LiOH (221.52 mg, 9.25 mmol) , the mixture was stirred at 80 ℃ for 2 hours. The mixture was diluted with H2O and adjusted the pH value to 2-3 with 1N HCl aq., and then the separated solid was collected by filtration to give E3-5 (300 mg, 57.73%yield) as a yellow solid.

[0282] MS (ESI) : m / z found 262.2 [M+H] +.

[0283] Step 5: N- {2- [ (2S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl] -2-oxoethyl} -7-methoxy-1, 6-naphthyridine-4-carboxamide (E3)

[0284] To a solution of E3-5 (300 mg, 1.15 mmol) in DMF (8 mL) was added (2S) -4, 4-difluoropyrrolidine-2-carbonitrile hydrochloride (348.46 mg, 2.07 mmol) , DEPBT (618.52 mg, 2.07 mmol) , DIEA (742.1 mg, 5.7 mmol) , the mixture was stirred at 25 ℃ for 10 hours. The mixture was diluted with H2O and extracted with ethyl acetate, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash chromatography (dichloromethane / methanol= 12 / 1) to give the residue. The residue was purified by prep-HPLC to give E3 (130 mg, 29.86%yield) as a white solid.

[0285] MS (ESI) : m / z found 376.1 [M+H] +.

[0286] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 9.26 (t, J = 5.2 Hz, 1H) , 9.10 –9.07 (m, 1H) , 7.51 –7.47 (m, 1H) , 7.30 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 5.18 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 4.39 –4.08 (m, 4H) , 4.02 (d, J = 1.6 Hz, 3H) , 3.01 –2.75 (m, 2H) . Example 4Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 6-naphthyridin-7-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E4)

[0287] Step 1: 7-hydroxy-1, 6-naphthyridine-4-carboxylic acid (E4-1)

[0288] A round-bottom flask containing a mixture of E3-3 (1.9 g, 9.3 mmol) , and HBr aq. (33%) in AcOH (15 mL) was placed in oil bath heated to 100 ℃ for 16 hours. The mixture was cooled to room temperature. The separated solid was collected by filtration and slurried with (dichloromethane / methanol= 10 / 1) to give the E4-1 (1.8 g, 91.4%yield) as a red solid.

[0289] LC-MS [M+H] + = 191.1

[0290] Step 2: Benzyl 2- [ (7-hydroxy-1, 6-naphthyridin-4-yl) formamido] acetate (E4-2)

[0291] To a solution of E4-1 (1.00 g, 5.26 mmol) in DMF (12 mL) was added benzyl 2-aminoacetate (1.04 g, 6.32 mmol) , HATU (2.40 g, 6.32 mmol) , DIEA (2.04 g, 15.8 mmol) , the mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The mixture was diluted with H2O and extracted with ethyl acetate, dried over by Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash chromatography (DCM / MeOH = 15 / 1) to give E4-2 (636 mg, 35.8%yield) as a yellow solid.

[0292] LC-MS [M+H] + = 338.1

[0293] Step 3: Tert-butyl 4- (3- ( (4- ( (2- (benzyloxy) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 6-naphthyridin-7-yl) oxy) propyl) piperazine-1-carboxylate (E4-3)

[0294] To a solution of E4-2 (586 mg, 1.74 mmol) , tert-butyl 4- (3-hydroxypropyl) piperazine-1-carboxylate (637 mg, 2.61 mmol) and PPh3 (686mg, 2.61 mmol) in THF (10 mL) was added DIAD (527 mg, 2.61 mmol) dropwise at 25 ℃under N2. The resulting mixture was stirred under N2 at 25 ℃ for 16 hours and then concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography (SiO2, DCM / MeOH = 20 / 1 to 10 / 1) to give E4-3 (750 mg, 76.4%yield) as a yellow solid.

[0295] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.42 (t, J = 6.0 Hz, 1H) , 9.36 (s, 1H) , 9.08 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 7.54 –7.33 (m, 6H) , 7.27 (s, 1H) , 5.24 (s, 2H) , 4.42 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 4.21 (d, J = 6.4 Hz, 2H) , 3.44 –3.41 (m, 4H) , 2.41 –2.36 (m, 6H) , 1.96 (t, J =6.8 Hz, 2H) , 1.39 (s, 9H) .

[0296] Step 4: Benzyl (7- (3- (piperazin-1-yl) propoxy) -1, 6-naphthyridine-4-carbonyl) glycinate (E4-4)

[0297] To a solution of E4-3 (1.08 g, 1.91 mmol) in DCM (15 mL) was added TFA (5 mL) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours and concentrated in vacuo to give E4-4 (1.00 g, crude) as a yellow oil.

[0298] LC-MS [M+H] + = 464.2

[0299] Step 5: Tri-tert-butyl 2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (benzyloxy) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 6-naphthyridin-7-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetate (E4-5)

[0300] To a mixture of E4-4 (1.00 g crude, 1.91 mmol) , 2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecan-1-yl) acetic acid (1.31 g, 2.29 mmol) , HATU (1.09 g, 2.87 mmol) in DMF (10 mL) was added DIEA (1.23 g, 9.55 mmol) . The resulting mixture was stirred for 2 hours at 25 ℃ and then quenched by H2O (30 mL) . The mixture was extracted with EA (3 x 50 mL) , washed by saturated brine (3 x 50 mL) . The organic layer was concentrated under reduced pressure to give the residue which was purified via Flash Chromatography (SiO2, DCM / MeOH =20 / 1 to 10 / 1) to give E4-5 (600 mg, 30.8%) as a yellow solid.

[0301] LC-MS [M+H] + = 1018.5

[0302] Step 6: (7- (3- (4- (2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecan-1-yl) acetyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 6-naphthyridine-4-carbonyl) glycine (E4-6)

[0303] A mixture of E4-5 (460 mg, 0.45 mmol) , NaOH (90.4 mg, 2.26 mmol) , THF (15 mL) and H2O (5 mL) was stirred for 0.5 hour at 25 ℃. Then, the mixture was adjusted pH value to 7-8 with HCl (1 M, aq. ) and extracted with DCM: MeOH = 10: 1 (50 mL x 3) . The combined organic layers were concentrated under vacuum. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%H2O / MeCN containing 0.1%NH4OH) to afford E4-6 (190 mg, 45.3%yield) as a white solid.

[0304] LC-MS [M+H] + = 928.5

[0305] Step 7: Tri-tert-butyl (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 6-naphthyridin-7-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetate (E4-7)

[0306] To a mixture of E4-6 (160 mg, 0.17 mmol) , (S) -4, 4-difluoropyrrolidine-2-carbonitrile hydrochloride (58.1 mg, 0.34 mmol) , DEPBT (77.1 mg, 0.26 mmol) in THF (8 mL) was added DIEA (221 mg, 1.72 mmol) at 25 ℃. The mixture was stirred for 2 hours at 50 ℃ and then quenched by H2O (3 mL) . The mixture was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%H2O / MeCN containing 0.1%TFA) to give E4-7 (85 mg, 47.4%yield) as a yellow solid.

[0307] LC-MS [M+H] + = 1042.6

[0308] Step 8: (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 6-naphthyridin-7-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E4)

[0309] A solution of E4-7 (75 mg, 0.07 mmol) in TFA (5 mL) was stirred for 3 hours at 25 ℃ and concentrated under vacuum. The residue was dissolved by MeOH (3 mL) and saturated NaHCO3 (1 mL, aq. ) . The mixture was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%H2O / MeCN containing 0.1%FA) to give E4 (20 mg, 31.8%yield) as a white solid.

[0310] LC-MS [M+H] + = 874.5

[0311] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H) , 9.27 (s, 1H) , 9.08 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.49 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.28 (s, 1H) , 5.20 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 4.45 –4.43 (m, 2H) , 4.35 –4.12 (m, 4H) , 3.95 –3.81 (m, 4H) , 3.63 –3.45 (m, 8H) , 3.32 –3.15 (m, 4H) , 2.96 –2.81 (s, 16H) , 2.49 –2.41 (m, 4H) , 2.05 –1.95 (m, 2H) . Example 5Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E5)

[0312] Step 1: 8-bromo-1, 5-naphthyridin-2-ol (E5-2)

[0313] A solution of E5-1 (3.00 g, 15.4 mmol) and HBr in AcOH (80 mL) was stirred at 100 ℃ for 2 hours under N2. Upon completion, the reaction mixture was cooled down and the resulting solid was washed with MeOH (3 x 4.0 mL) to provide the crude product E5-2 (3.0 g) which was used directly in next step without further purification.

[0314] Step 2: (4- {3- [ (8-bromo-1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy] propyl} piperazin-1-yl) tert-butyl formate (E5-3)

[0315] To a solution of E5-2 (2.5 g, 11 mmol) in DMSO (25 mL) was added [4- (3-bromopropyl) piperazin-1-yl] tert-butyl formate (5.13 g, 16.6 mmol) , and Ag2CO3 (6.12 g, 22.2 mmol) . The mixture was stirred at 60 ℃ for 16 hours. The mixture was diluted with H2O and extracted with ethyl acetate, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash chromatography (petroleum ether / ethyl acetate= 1 / 1) to give E5-3 (1.8 g, 33.33%yield) as a yellow solid.

[0316] LC-MS [M+H] + = 451.1

[0317] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (d, J = 4.8Hz, 1H) , 8.30 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 8.08 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 7.32 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 4.55 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 3.33 –3.27 (m, 4H) , 2.48 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 2.37 –2.31 (m, 4H) , 2.00 (t, J = 6.8 Hz, 2H) , 1.40 (s, 9H) .

[0318] Step 3: methyl 6- (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 5-naphthyridine-4-carboxylate (E5-4)

[0319] To a solution of E5-3 (1.7 g, 3.8 mmol) in MeOH (50 mL) was added Pd (dppf) Cl2 (278 mg, 0.38 mmol) and TEA (1153 mg, 11.4 mmol) under N2. The suspension was degassed under vacuum and purged with CO several times. The mixture was stirred under CO at 80 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography (SiO2, Petroleum ether / Ethyl acetate = 10 / 1 to 3 / 1) to give E5-4 (1.4 g, 86.4%) as a yellow solid.

[0320] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.84 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 8.23 (d, J = 9.1 Hz, 1H) , 7.73 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 7.15 (d, J = 9.1 Hz, 1H) , 4.55 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 4.04 (s, 3H) , 3.49 (s, 4H) , 2.45 (dd, 6H) , 2.04 (dd, J = 22.4, 13.2 Hz, 2H) , 1.46 (s, 9H) .

[0321] Step 4: methyl 6- (3- (piperazin-1-yl) propoxy) -1, 5-naphthyridine-4-carboxylate (E5-5)

[0322] To a solution of E5-4 (1400 mg, 3.25 mmol) in TFA (10 mL) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 16 hours. On completion, the reaction mixture was concentrated in vacuo to give E5-5 (2.25 g, crude) as a yellow oil.

[0323] LC-MS [M+H] + = 330.8

[0324] Step 5: tri-tert-butyl 2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (8- (methoxycarbonyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetate (E5-6)

[0325] To a solution of 2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecan-1-yl) acetic acid (4.67 g, 8.1 mmol) , in DMF (10 mL) was added HATU (3.36 g, 8.8 mmol) and DIPEA (4.39 g, 34 mmol) , E5-5 (2.25 g, 6.8 mmol) was added at 0 ℃. The mixture was continuously stirred under 20 ℃ for 3 hours. Saturated aqueous NH4Cl (20 mL) was added. The residue was extracted with EA (3 x 50 mL) . The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified via Flash Chromatography and then eluted with CH2Cl2 / MeOH to give E5-6 (2.5 g, 41.5%yield) as a yellow solid.

[0326] LC-MS [M+H] + = 885.6

[0327] Step 6: 6- (3- (4- (2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecan-1-yl) acetyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 5-naphthyridine-4-carboxylic acid (E5-7)

[0328] E5-6 (2.5 g, 2.8 mmol) was added carefully to a solution of NaOH (560 mg, 14 mmol) in H2O (10.0 mL) and THF (30 mL) . The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 2 hours. Then the organic solvent was removed under reduced pressure. The aqueous solution was adjusted to pH= 7-8 with NH4Cl aq. Then the resulting mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with DCM: MeOH=10: 1 (50 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine, dried over sodium sulfate, and concentrated under vacuum to give E5-7 (2100 mg, 85.4%yield) as a white solid.

[0329] LC-MS [M+H] + = 871.6

[0330] Step 7: tri-tert-butyl 2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (8- ( (2- (benzyloxy) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetate (E5-8)

[0331] To a solution of E5-7 (1.6 g, 1.8 mmol) in DMF (10 mL) was added HATU (1.0 g, 2.7 mmol) and DIPEA (1.16 g, 9 mmol) , benzyl glycinate (446 mg, 2.7 mmol) was added at 0 ℃. The mixture was continuously stirred under 20 ℃ of 2 hours. Saturated aqueous NH4Cl (20 mL) was added. The residue was extracted with EA (50 *3 mL) . The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified via Flash Chromatography and was eluted with CH2Cl2 / MeOH (100: 0-98: 2) to give E5-8 (1.2 g, 64.2%yield) as a white solid.

[0332] LC-MS [M+H] + = 509.8 (M / 2+1)

[0333] Step 8: (6- (3- (4- (2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecan-1-yl) acetyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 5-naphthyridine-4-carbonyl) glycine (E5-9)

[0334] E5-8 (350 mg, 0.34mmol) was added carefully to a solution of NaOH (69 mg, 1.72 mmol) in H2O (10.0 mL) and THF (30 mL) . The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 1 hour. Then the organic solvent was removed under reduced pressure. The aqueous solution was adjusted to pH = 7-8 with NH4Cl aq. Then the resulting mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with DCM: MeOH=10: 1 (50 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine, dried over sodium sulfate, and concentrated under vacuum to give E5-9 (300 mg, 94.0%yield) as a white solid.

[0335] LC-MS [M+H] + = 928.8

[0336] Step 9: (S) -tri-tert-butyl 2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetate (E5-10)

[0337] To a solution of E5-9 (300 mg, 0.32 mmol) in DMF (6 mL) was added HATU (182.4 mg, 0.48 mmol) and DIPEA (156.1 mg, 1.21 mmol) , (S) -4, 4-difluoropyrrolidine-2-carbonitrile hydrogen chloride (81 mg, 0.48mmol) was added at 0 ℃. The mixture was continuously stirred under 20 ℃ for 3 hours. Saturated aqueous NH4Cl (20 mL) was added. The residue was extracted with EA (50 *3 mL) . The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified via HPLC-Prep (0.1%TFA) to give E5-10 (140 mg, 41.5%yield) as a yellow solid.

[0338] LC-MS [M+H] + = 1042.9

[0339] Step 10: (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E5)

[0340] To a solution of E5-10 (140 mg, 0.13 mmol) in TFA (5 mL) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 4 hours. On completion, the reaction mixture was concentrated in vacuo to give crude product. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E5 (15 mg, 12.8%yield) as a white solid.

[0341] LC-MS [M+H] + = 874.2

[0342] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.53 (t, J = 4.8 Hz, 1H) , 8.96 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 8.43 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 8.30 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 7.41 (d, J = 9.2Hz, 1H) , 5.16 (dd, J =9.2, 2.8 Hz, 1H) , 4.70 –4.59 (m, 2H) , 4.46 (d, J = 4.4 Hz, 2H) , 4.31 (dd, J = 19.2, 8.0 Hz, 1H) , 4.18 –4.10 (m, 1H) , 3.64 (s, 4H) , 3.38 (s, 12H) , 3.03 –2.82 (m, 16H) , 2.41 (d, J = 18.4 Hz, 4H) , 2.02 (s, 2H) . Example 6Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E6)

[0343] Step 1: 4-bromo-1, 7-naphthyridin-6-ol (E6-2)

[0344] A solution of E6-1 (3.00 g, 15.4 mmol) and HBr in AcOH (80 mL) was stirred at 100 ℃ for 2 hours under N2. The reaction was monitored by LC-MS. Upon completion, the reaction mixture was cooled down and the resulting solid was washed with MeOH (3 x 4.0 mL) to provide the crude product E6-2 (3.0 g, 86.7%yield) , which was used directly in next step without further purification.

[0345] LC-MS [M+H] + = 226.5.

[0346] Step 2: tert-butyl 4- (3- ( (4-bromo-1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazine-1-carboxylate (E6-3)

[0347] A mixture of E6-2 (2.0 g, 8.9 mmol) , tert-butyl [4- (3-hydroxypropyl) piperazin-1-yl] formate (2.62 g, 10.6 mmol) , PPh3 (3.5 g, 13.3 mmol) , DIAD (2.7 g, 13.3 mmol) and THF (40 mL) was stirred at room temperature for 16 hours under N2. Upon completion, the reaction was quenched by the addition of H2O. Then the mixture was extracted with EtOAc (20.0 mL x 3) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM / MeOH = 5%) to afford E6-3 (2.0 g, 50.2%yield) as a yellow solid.

[0348] LC-MS [M+H] + = 451.1.

[0349] Step 3: methyl 6- (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E6-4)

[0350] A mixture of E6-3 (2 g, 4.4 mmol) , Pd (dppf) Cl2 (0.32 g, 0.4 mmol) , TEA (1.34 g, 13.2 mmol) and MeOH (60 mL) was stirred at 80 ℃ for 16 hours under CO. Upon completion, the reaction solution was concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM / MeOH = 5%) to afford E6-4 (1.8 g, 94.2%yield) as a white solid.

[0351] LC-MS [M+H] + = 431.2.

[0352] Step 4: methyl 6- (3- (piperazin-1-yl) propoxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E6-5)

[0353] A mixture of E6-4 (520 mg, 1.21 mmol) , TFA (7 mL) and DCM (21 mL) was stirred at room temperature for 16 hours under N2. Upon completion, the reaction mixture was concentrated to provide the crude product E6-5 (1.1 g, crude) which was used directly in next step without further purification.

[0354] LC-MS [M+H] + = 331.2.

[0355] Step 5: tri-tert-butyl 2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- (methoxycarbonyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetate (E6-6)

[0356] A mixture of E6-5 (1.1 g, 3.3 mmol) , 2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecan-1-yl) acetic acid (2.08 g, 3.6 mmol) , HATU (1.9 g, 4.9 mmol) , DIPEA (2.13 g, 16.5 mmol) and DMF (50 mL) was stirred at room temperature for 3 hours under N2. The reaction was monitored by LC-MS. Upon completion, the reaction was quenched by the addition of H2O. Then the mixture was extracted with EtOAc (50.0 mL × 3) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM / MeOH = 5%) to afford E6-6 (1.0 g, 34.0%yield) as a white solid.

[0357] LC-MS [M+H] + = 885.5.

[0358] Step 6: 6- (3- (4- (2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10Tetraazacy clododecan-1-yl) acetyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E6-7)

[0359] A mixture of E6-6 (1 g, 1.1 mmol) , sodium hydroxide (0.22 g, 5.5 mmol) and THF / H2O = 5: 1 (50 mL) was stirred at room temperature for 1 hour. Upon completion, the reaction was quenched by the addition of H2O. Then the mixture was extracted with EtOAc (20.0 mL x 3) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated to provide the crude product E6-7 (0.8 g, 81.6%yield) , which was used directly in next step without further purification.

[0360] LC-MS [M+H] + = 871.5.

[0361] Step 7: tri-tert-butyl 2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (benzyloxy) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetate (E6-8)

[0362] A mixture of E6-7 (900 mg, 1.03 mmol) , benzyl 2-aminoacetate hydrochloride (229.18 mg, 1.14 mmol) , HATU (589.28 mg, 1.55 mmol) , DIPEA (667.71 mg, 5.17 mmol) and DMF (30 mL) was stirred at room temperature for 2 hours. Upon completion, the reaction was quenched by the addition of H2O. Then the mixture was extracted with EtOAc (50.0 mL x 3) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM / MeOH = 5%) to afford E6-8 (0.5 g, 47.5%yield) as a white solid.

[0363] LC-MS [M+H] + = 1018.6.

[0364] Step 8: (6- (3- (4- (2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecan-1-yl) acetyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 7-naphthyridine-4-carbonyl) glycine (E6-9)

[0365] E6-8 (350 mg, 0.48 mmol) was added successively to a solution of NaOH (98 mg, 2.46 mmol) in H2O (10.0 g) and THF (30 mL) . The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 1 hour. Then the organic solvent was removed under reduced pressure. The aqueous solution was adjusted to pH 7-8 with NH4Cl. Then the resulting mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with DCM: MeOH=10: 1 (50 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine, dried over sodium sulfate, and concentrated under vacuum to give E6-9 (428 mg, 94.0%yield) as a white solid.

[0366] LC-MS [M+H] + = 928.7.

[0367] Step 9: (S) -tri-tert-butyl 2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetate (E6-10)

[0368] To a solution of E6-9 (300 mg, 0.32 mmol) in DMF (6 mL) was added HATU (182.4 mg, 0.48 mmol) and DIPEA (156.1 mg, 1.21 mmol) , (S) -4, 4-difluoropyrrolidine-2-carbonitrile hydrogen chloride (81 mg, 0.48 mmol) was added at 0 ℃. The mixture was continuously stirred under 20 ℃ for 2 hours. Saturated aqueous NH4Cl (20 mL) was added. The residue was extracted with EA (50*3 mL) . The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified via HPLC-Prep (0.1%TFA) to give E6-10 (140 mg, 41.5%yield) as a white solid.

[0369] LC-MS [M+H] + = 1042.8.

[0370] Step 10: (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E6)

[0371] To a solution of E6-10 (140 mg, 0.13 mmol) in TFA (5 mL) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 2 hours. On completion, the reaction mixture was concentrated in vacuo to give crude product. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E6 (14.51 mg, 12.3%yield) as a white solid.

[0372] LC-MS [M+H] + = 874.2

[0373] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.26 –9.13 (m, 2H) , 8.93 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.72 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 5.17 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 4.40 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 4.31 (d, J =11.6 Hz, 1H) , 4.27 –4.21 (m, 2H) , 4.14 (d, J = 9.6 Hz, 1H) , 3.66 (s, 4H) , 3.38 (s, 8H) , 3.02 –2.84 (m, 18H) , 2.40 (d, J = 20.4 Hz, 6H) , 1.98 (d, J = 6.4 Hz, 2H) . Example 7Synthesis of (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E7)

[0374] Step 1: di-tert-butyl 2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (4- (methoxycarbonyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetate (E7-1)

[0375] A mixture of E6-5 (950 mg, 2.87 mmol) , 2- (4, 7-bis (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonan-1-yl) acetic acid (1 g, 2.4 mmol) , HATU (1.64 g, 4.31 mmol) , DIEA (1.85 g, 14.35 mmol) and DMF (10 mL) was stirred at 25 ℃ for 16 hours under N2. Upon completion, the reaction was quenched by the addition of H2O. Then the mixture was extracted with EtOAc (50 mL x 3) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM / MeOH =20: 1) to afford E7-1 (1.05 g, 50%yield) as a yellow solid.

[0376] MS (ESI) : m / z found 728.8 [M+H] +.

[0377] Step 2: 6- (3- (4- (2- (4, 7-bis (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonan-1-yl) acetyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E7-2)

[0378] A mixture of E7-1 (1.05 g, 1.44 mmol) , sodium hydroxide (0.17 g, 4.33 mmol) and THF / H2O = 5: 1 (10 mL) was stirred at 25 ℃ for 1 hour. Upon completion, the reaction was quenched by the addition of H2O. Then the mixture was extracted with EtOAc (30.0 mL x 3) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated to provide the crude product E7-2 (0.65 g, 65%yield) which was used directly in next step without further purification.

[0379] MS (ESI) : m / z found 714.3 [M+H] +.

[0380] Step 3: di-tert-butyl 2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (benzyloxy) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetate (E7-3)

[0381] A mixture of E7-2 (650 mg, 0.91 mmol) , benzyl 2-aminoacetate hydrochloride (226.05 mg, 1.37 mmol) , HATU (520.60 mg, 1.37 mmol) , DIEA (586.95 mg, 4.55 mmol) and DMF (10 mL) was stirred at 25 ℃ for 2 hours. Upon completion, the reaction was quenched by the addition of H2O. Then the mixture was extracted with EtOAc (30 mL x 3) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM / MeOH = 20: 1) to afford E7-3 (0.4 g, 51%yield) as a yellow solid.

[0382] MS (ESI) : m / z found 861.5 [M+H] +.

[0383] Step 4: (6- (3- (4- (2- (4, 7-bis (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonan-1-yl) acetyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 7-naphthyridine-4-carbonyl) glycine (E7-4)

[0384] A mixture of E7-3 (250 mg, 0.29 mmol) and THF / H2O (5 mL; 1: 1) was stirred at 50 ℃ for 16 hours. The reaction was monitored by LC-MS. Upon completion, the mixture was filtered and purified by C18 column (eluting with H2O (0.5%TFA)  / ACN = 10: 1) to afford E7-4 (0.19 g, 85%yield) as a yellow solid.

[0385] MS (ESI) : m / z found 771.4 [M+H] +.

[0386] Step 5: di-tert-butyl (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetate (E7-5)

[0387] A mixture of E7-4 (190 mg, 0.25 mmol) , (S) -4, 4-difluoropyrrolidine-2-carbonitrile HCl salt (41.4 mg, 0.25 mmol) , DEPBT (150 mg, 0.50 mmol) , TEA (126.25 mg, 1.25 mmol) and THF (5 mL) was stirred at 25 ℃ for 2 hours. Upon completion, the mixture was filtered and purified by prep-HPLC to afford E7-5 (90 mg, 41%yield) as a white solid.

[0388] MS (ESI) : m / z found 885.5 [M+H] +.

[0389] Step 6: (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E7)

[0390] A mixture of E7-5 (90 mg, 0.10 mmol) and TFA (5 mL) was stirred at 25 ℃for 2 hours. Upon completion, the mixture was filtered and purified by prep-HPLC to afford E7 (21 mg, 27%yield) as a white solid.

[0391] MS (ESI) : m / z found 773.4 [M+H] +.

[0392] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.25 –9.08 (m, 2H) , 8.93 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.72 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 5.17 (dd, J = 9.1, 2.5 Hz, 1H) , 4.41 (t, J =6.3 Hz, 2H) , 4.35 –4.28 (m, 1H) , 4.24 (t, J = 5.7 Hz, 2H) , 4.14 (dd, J = 22.0, 11.6 Hz, 1H) , 3.65 (s, 2H) , 3.47 (s, 6H) , 3.01 (s, 4H) , 2.89 (d, J = 14.3 Hz, 12H) , 2.39 (d, J =19.2 Hz, 6H) , 2.03 –1.83 (m, 2H) . Example 8Synthesis of 2, 2', 2”- (10- ( (7S, 10S) -10-benzyl-7- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -2-methyl-9, 12, 15-trioxo-2, 8, 11, 14-tetraazahexadecan-16-yl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E8)

[0393] Step 1: 6- (3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propoxy) -1, 5-naphthyridine-4-carboxylic acid (E8-1)

[0394] To a solution of E2-3 (1.00 g, 5.26 mmol, 1.0 eq) in anhydrous DMF (10 mL, 10 V) was added tert-Butyl 3-bromopropylcarbamate (5.00 g, 21.03 mmol, 4.0 eq) , Potassium carbonate (2.91 g, 21.03 mmol, 4.0 eq) , Potassium iodide (87.3 mg, 0.53 mmol, 0.1 eq) , and molecular sieves pack 4A (50 mg) . The mixture was purged with nitrogen for 3 times and stirred at 70 ℃ for 24 hours. The reaction was cooled to room temperature and filtered. The filtrate was added with H2O (10 mL, 10 V) , Lithium hydroxide monohydrate (220.0 mg, 5.26 mmol, 1.0 eq) and stirred for 1 hour. The pH value was adjusted to 5-6 with slowly addition of Citric acid solution. The resulting solution was added with H2O (20 mL) and extracted with DCM (20 mL *2) . The combined organic layer was dried over anhydrous Na2SO4. After the solvent was removed, the residue was purified by silica gel column chromatography to give E8-1 (4.38 g, [M+H] + = 348.3 ) as a yellow solid.

[0395] 1HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.75 (d, J=4.4Hz, 1H) , 8.27 (d, J=9.2Hz, 1H) , 7.55 (d, J=4.4Hz, 1H) , 7.26 (d, J=9.2Hz, 1H) , 6.97 (t, J=5.2Hz, 1H) , 4.41 (t, J=6.0Hz, 2H) , 3.13 (t, J=6.8Hz, 2H) , 1.91 (q, J=6.4Hz, 2H) .

[0396] Step 2: methyl (6- (3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propoxy) -1, 5-naphthyridine-4-carbonyl) glycinate (E8-2)

[0397] To a solution of E8-1 (1.44 g, 4.2 mmol, 1.0 eq) in DMF (15 mL, 10 V) was added HATU (3.20 g, 8.4 mmol, 2.0 eq) , DIEA (1.63 g, 12.6 mmol, 3.0 eq) . After stirring for 5 minutes, the mixture was added with Glycine methyl ester hydrochloride (0.52 g, 4.2 mmol, 1.0 eq) and was allowed to stir for another 1 hour. The mixture was diluted with H2O (30 mL) and extracted with EA (30 mL) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4. After the solvent was removed, the residue was purified by silica gel column chromatography to give E8-2. (0.91 g, [M+H] + = 419.5, yield = 50.0%) as a yellow solid

[0398] Step 3: (6- (3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propoxy) -1, 5-naphthyridine-4-carbonyl) glycine (E8-3)

[0399] To a solution of E8-2 (910.0 mg, 2.17 mmol, 1.0 eq) in MeOH (9 mL, 10 V) , H2O (9 mL, 10V) was added Lithium hydroxide monohydrate (273.8 mg, 6.52 mmol, 3.0 eq) . The reaction was purged with nitrogen for 3 times and stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was concentrated on vacuum to remove MeOH, and its pH was adjusted to 5-6 by slow addition of Citric acid solution. The resultant was extracted with DCM (20 mL) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated on vacuum to give E8-3 (450.0 mg, yield = 51.2%) as a yellow solid.

[0400] Step 4: tert-butyl (S) - (3- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamate (E8-4)

[0401] To a solution of E8-3 (424.3 mg, 1.05 mmol, 1.0 eq) in DMSO (5 mL, 10 V) was added (S) -4, 4-difluoropyrrolidine-2-carbonitrile hydrochloride (353.7 mg, 2.10 mmol, 2.0 eq) , HATU (798.0 mg, 2.10 mmol, 1.0 eq) , DIEA (406.8 mg, 3.15 mmol, 3.0 eq) . The reaction was purged with nitrogen for 3 times and stirred at room temperature for 1 hour. The mixture was diluted with H2O (15 mL) and extracted with EA (15 mL) . After the solvent was removed, the residue was purified by silica gel column chromatography to give E8-4 (558.3 mg) as a yellow solid.

[0402] Step 5: (S) -6- (3-aminopropoxy) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 5-naphthyridine-4-carboxamide (E8-5)

[0403] A solution of E8-4 (538.3 mg, 1.04 mmol, 1.0 eq) in EA (4.3 mL, 8V) was cooled to 0 ℃, followed by the slow addition of 4N HCl in EA (1.1 mL, 2V) . The reaction was allowed to stir and react for 2 hours. The mixture was filtered to give the crude, which was washed with EA (20 mL) and dried under reduced pressure to give a yellow solid. The crude product E8-5 was used directly in next step without further purification. (457.1 mg, [M+H] + = 419.4, yield = 63.1%) .

[0404] Step 6: tert-butyl ( (8S, 11S) -8-benzyl-11- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -1- (9H-fluoren-9-yl) -3, 6, 9-trioxo-2-oxa-4, 7, 10-triazapentadecan-15-yl) (methyl) carbamate (E8-6)

[0405] To a solution of N2- ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) glycyl-L-phenylalanyl-N6- (tert-butoxycarbonyl) -N6-methyl-L-lysine (530 mg, 0.77 mmol, 1.0 eq) in DMF (5.3 mL, 10 V) was added EDCI (221.9 mg, 1.16 mmol, 1.5 eq) , HOBt (156.4 mg, 1.16 mmol, 1.5 eq) . The mixture was stirred at 0 ℃. And then, a mixture consisting of E8-5 (579.2 mg, 1.27 mmol, 1.1 eq) and DIEA (300.0 mg, 2.32 mmol, 3.0 eq) in DMF (5.3 mL, 10 V) was added. The reaction mixture was purged with nitrogen for 3 times and stirred at 0 ℃ for 1 hour. The mixture was poured into NaCl aq. (30 mL) and extracted with EA (30 mL) . The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated on vacuum to give the crude E8-6. (1.01 g, [M+H] + = 1087.8) as a yellow solid.

[0406] Step 7: tert-butyl ( (S) -5- ( (S) -2- (2-aminoacetamido) -3-phenylpropanamido) -6- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) amino) -6-oxohexyl) (methyl) carbamate (E8-7)

[0407] To a solution of E8-6 (1.01 g, 0.93 mmol, 1.0eq) in DMF (10 mL, 10 V) was added DBU (142.0 mg, 0.93 mmol, 1.0 eq) . The mixture was stirred and reacted at room temperature for 30 minutes. The mixture was purified by Prep-HPLC (column: Gemini-C18 250*21.2 mm, 10 μm; mobile phase: ACN-H2O (0.1%TFA) ; gradient: 5%-95%) to afford E8-7 (1.20 g, [M+H] + = 865.5) as a yellow solid.

[0408] Step 8: 2', 2”- (10- ( (10S, 13S) -13-benzyl-10- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -2, 2, 5-trimethyl-4, 12, 15, 18-tetraoxo-3-oxa-5, 11, 14, 17-tetraazanonadecan-19-yl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E8-8)

[0409] To a solution of E8-7 (225 mg, 0.26 mmol, 1.0 eq) in DMF (9 mL) was added DOTA-NHS ester (391.4 mg, 0.78 mmol, 3.0 eq) . DIEA was added to the reaction to adjust pH=8-9. The reaction was stirred at room temperature for 1 hour. MTBE (100 mL) was added to the mixture, then the mixture was filtered and dried to give the crude E8-8 as a white solid (991 mg, [M-H] -= 1251.2) .

[0410] Step 9: 2, 2', 2”- (10- ( (7S, 10S) -10-benzyl-7- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -9, 12, 15-trioxo-2, 8, 11, 14-tetraazahexadecan-16-yl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E8-9)

[0411] The crude E8-8 (404 mg) was added into a mixture of 30%TFA / DCM (4 mL, 10 V) . The mixture was allowed to stir and react at 0 ℃ for 30 minutes followed by purified by Prep-HPLC (column: Gemini-C18 250*21.2 mm, 10 μm; mobile phase: ACN-H2O (0.1%TFA) ; gradient: 5%-95%) to afford E8-9 as a yellow solid (110 mg, [M-H] -= 1151.1, yield = 29.5%) .

[0412] Step 10: 2, 2', 2”- (10- ( (7S, 10S) -10-benzyl-7- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -2-methyl-9, 12, 15-trioxo-2, 8, 11, 14-tetraazahexadecan-16-yl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E8)

[0413] To a solution of E8-9 (60 mg, 0.05 mmol, 1.0 eq) in MeOH (6 mL, 100 V) was added CH3COOH (15.7 mg, 0.26 mmol, 5.0eq) , 37%Formaldehyde aq. (11.0 mL, 0.14 mmol, 2.6 eq) , NaBH3CN (36.0mg, 0.57 mmol, 11 eq) . The reaction was purged with nitrogen for 3 times and stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was purified by Prep-HPLC (column: Gemini-C18 250*21.2 mm, 10 μm; mobile phase: ACN-H2O (0.1%TFA) ; gradient: 5%-95%) to afford E8 (27.0 mg, [M-H] -= 1163.4, yield = 29.6%) as a white solid.

[0414] 1HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.56 (s, 1H) , 9.56 (s, 1H) , 9.00 (s, 1H) , 8.95 (t, J=4.4Hz, 1H) , 8.41 (dd, J=9.2, 5.2Hz, 1H) , 8.28 (dd, J=10.8, 7.2Hz, 2H) , 8.18 (s, 1H) , 7.52 (d, J=8.8Hz, 2H) , 7.15–7.01 (m, 6H) , 5.20 (d, J=9.2Hz, 1H) , 4.66 (s, 1H) , 4.60–4.39 (m, 5H) , 4.33 (t, J=13.6Hz, 1H) , 4.16 (dd, J=22.4, 10.0Hz, 1H) , 4.10–4.00 (m, 1H) , 3.69 (d, J=14.8Hz, 1H) , 3.60–3.50 (m, 3H) , 3.14 (d, J=6.8Hz, 4H) , 3.10 (d, J=14.8Hz, 3H) , 2.85 (d, J=8.4Hz, 5H) , 2.78–2.69 (m, 4H) , 2.67 (d, J=1.6Hz, 1H) , 2.64 (s, 6H) , 2.56 (s, 1H) , 2.36 (dd, J=17.0, 9.6Hz, 3H) , 2.17 (d, J=14.0Hz, 1H) , 2.09–1.81 (m, 10H) , 1.75 (d, J=13.2Hz, 2H) , 1.58 (s, 2H) , 1.52–1.42 (m, 1H) . Example 9Synthesis of 2, 2', 2”- (10- ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -3-imino-2-methyl-10, 13, 16-trioxo-2, 4, 9, 12, 15-pentaazaheptadecan-17-yl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triaceticacid (E9)

[0415] Step 1: N, N-dimethyl-N2- (2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecan-1-yl) acetyl) glycyl-L-phenylalanyl-L-arginine (E9-2)

[0416] To a mixture containing CTC resin (sub: 1.08 mmol / g, 0.71 mmol, 0.66 g) and Fmoc-Arg (Me) 2-OH (E9-1) (3.0 eq) was added DMF (7 V) , then DIEA (6.0 eq) was added and mixed for 1 hour, 20%piperidine in DMF was used for deblocking. Each subsequent amino acid (Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Gly-OH, 2- (4, 7, 10-tris (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecan-1-yl) acetic acid) was coupled with 3 eq using activator reagents, HOBt (3.0 eq) and DIC (3.8 eq) in DMF. The reaction was monitored by ninhydrin color reaction. After synthesis completion, the peptide resin was washed with DMF × 3, MeOH × 3, and then dried under N2 bubbling overnight. The peptide resin was then treated with 30%TFE / DCM (6.3 mL, 7 V) for 3 hours. The peptide was concentrated on vacuum to give the crude E9-2 (120 mg) as a yellow solid.

[0417] LC-MS: [M+H] + = 961.9.

[0418] Step 2. tri-tert-butyl 2, 2', 2”- (10- ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -3-imino-2-methyl-10, 13, 16-trioxo-2, 4, 9, 12, 15-pentaazaheptadecan-17-yl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetate (E9-3)

[0419] To a solution of E9-2 (74 mg, 0.08 mmol, 1.0 eq) in DMF (0.8 mL) was added HATU (35 mg, 0.09 mmol, 1.2 eq) and E8-5 (32 mg, 0.08 mmol, 1.0 eq) , DIEA (30 mg, 0.23 mmol, 3.0 eq) , the mixture was stirred at 20～25 ℃ for 0.5 hour, The residue was purified by Prep-HPLC (column: Gemini-C18 250*21.2 mm, 10 μm; mobile phase: ACN-H2O (0.1%TFA) ; gradient: 5%-95%) to afford E9-3 (71 mg, 68%yield) as a yellow solid.

[0420] LCMS [M+2H] + / 2 =682.0

[0421] Step 3. 2, 2', 2”- (10- ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -3-imino-2-methyl-10, 13, 16-trioxo-2, 4, 9, 12, 15-pentaazaheptadecan-17-yl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E9)

[0422] E9-3 (64 mg, 0.05 mmol) was added into TFA (2 mL) . The mixture was stirred at 20～25 ℃ for 0.5 hour. The reaction was concentrated on vacuum to give the crude. The crude was purified by Prep-HPLC (column: Gemini-C18 250 *21.2 mm, 10 μm; mobile phase: ACN-H2O (0.1%HCOOH) ; gradient: 5%-95%) to afford E9 (18 mg, 32%yield) as a white solid.

[0423] LCMS [M+H] + =1193.7.

[0424] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.61 (s, 1H) , 9.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.95 (d, J = 4.5 Hz, 1H) , 8.71 (s, 1H) , 8.41 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 8.33 –8.24 (m, 2H) , 8.18 (dd, J = 17.2, 10.7 Hz, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 7.43 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 7.16 –7.04 (m, 5H) , 5.21 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 4.77 –4.61 (m, 1H) , 4.59 –4.47 (m, 2H) , 4.37 (ddd, J = 31.0, 15.0, 7.2 Hz, 2H) , 4.25 –4.00 (m, 2H) , 3.09 (dd, J = 37.8, 11.6 Hz, 10H) , 2.89 (d, J = 27.7 Hz, 13H) , 2.82 –2.54 (m, 7H) , 2.35 (dt, J = 18.1, 7.8 Hz, 4H) , 2.13 (d, J = 10.3 Hz, 2H) , 2.01 (t, J = 13.5 Hz, 2H) , 1.96 –1.75 (m, 6H) , 1.70 –1.29 (m, 4H) . Example 10Synthesis of 2, 2', 2”- (10- ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- (4- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) butanamido) -3-imino-2-methyl-9, 12, 17-trioxo-2, 4, 10, 13, 16-pentaazaoctadecan-18-yl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E10)

[0425] Step 1: tert-butyl (S) -4- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) butanoate (E10-1)

[0426] A solution of E2 (50 mg, 0.14 mmol, 1.0 eq) , tert-butyl 4-bromobutanoate (37 mg, 0.17 mmol, 1.2 eq) , K2CO3 (57 mg, 0.41 mmol, 3.0 eq) and DMF (3 mL) was stirred at 65 ℃ for 4 hours. The mixture was diluted with water, and extracted with EA, then dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated to afford E10-1 (80 mg) as a yellow solid, which was used directly in next step without further purification.

[0427] LC-MS [M+H] + = 504.4

[0428] Step 2: (S) -4- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) butanoic acid (E10-2)

[0429] A solution of E10-1 (80 mg, 0.16 mmol, 1.0 eq) , TFA (1 mL) and DCM (4 mL) was stirred at 25 ℃ for 4 hours. The mixture was concentrated to afford E10-2 (156 mg) as a yellow solid, which was used directly in next step without further purification.

[0430] LC-MS [M+H] + = 448.3

[0431] Step 3: tert-butyl ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- (4- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) butanamido) -3-imino-2-methyl-9, 12-dioxo-2, 4, 10, 13-tetraazapentadecan-15-yl) carbamate (E10-3)

[0432] To a solution of tert-butyl ( (8S, 11S) -8-amino-11-benzyl-3-imino-2-methyl-9, 12-dioxo-2, 4, 10, 13-tetraazapentadecan-15-yl) carbamate (128 mg, 0.18 mmol, 1.0 eq) , in DMF (5 mL) was added E10-2 (80.5 mg, 0.18 mmol, 1.0 eq) , HOBt (36 mg, 0.27 mmol, 1.5 eq) , DIEA (35 mg, 0.268 mmol, 1.5 eq) and EDCI (51 mg, 0.268 mmol, 1.5 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hour. The reaction mixture was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E10-3 (60 mg, 36.5%yield) as a yellow solid.

[0433] LC-MS [M+H] + = 921.8

[0434] Step 4: 6- (4- ( ( (8S, 11S) -15-amino-11-benzyl-3-imino-2-methyl-9, 12-dioxo-2, 4, 10, 13-tetraazapentadecan-8-yl) amino) -4-oxobutoxy) -N- (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 5-naphthyridine-4-carboxamide (E10-4)

[0435] A solution of E10-3 (80 mg, 0.16 mmol, 1.0 eq) , TFA (0.4 mL) and DCM (1.6 mL) was stirred at 25 ℃ for 4 hours. The mixture was concentrated to afford the crude E10-4 which was used directly in next step without further purification.

[0436] Step 5: 2, 2', 2”- (10- ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- (4- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) butanamido) -3-imino-2-methyl-9, 12, 17-trioxo-2, 4, 10, 13, 16-pentaazaoctadecan-18-yl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E10)

[0437] A solution of E10-4 (25 mg, 0.03 mmol, 1.0 eq) , DOTA-NHS (46 mg, 0.0912 mmol, 3.0 eq) , DIEA (20 mg, 0.152 mmol, 5.0 eq) and DMF (1 mL) was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E10 (9.1 mg, 18.2%yield) as a white solid.

[0438] LC-MS [M-H] -= 1207.2

[0439] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.49 (s, 1H) , 8.96 (s, 1H) , 8.41 (dd, J =15.8, 10.2 Hz, 1H) , 8.28 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 8.21 (s, 1H) , 7.37 (dd, J = 9.6, 6.4 Hz, 2H) , 7.30 –7.12 (m, 6H) , 7.09 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 5.17 (s, 1H) , 4.61 –4.50 (m, 3H) , 4.47 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 4.39 –4.34 (m, 1H) , 3.22 –3.05 (m, 14H) , 2.93 (d, J = 6.4 Hz, 16H) , 2.81 (d, J = 19.2 Hz, 8H) , 2.67 (s, 2H) , 2.32 (s, 4H) , 2.01 (s, 6H) , 1.57 (dd, J = 19.2, 10.0 Hz, 2H) . Example 11Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) (methyl) amino) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E11)

[0440] Step 1: 6-chloro-1, 5-naphthyridine-4-carboxylic acid (E11-1)

[0441] A solution of E2-3 (700 mg) , and POCl3 (4.9 mL) was stirred at 110 ℃ for 3 hours. The mixture was quenched with ice-water, extracted with DCM: MeOH = 5: 1, concentrated to afford crude E11-1 (300 mg) as a yellow oil, which was used directly in next step without further purification.

[0442] Step 2: methyl (6-chloro-1, 5-naphthyridine-4-carbonyl) glycinate (E11-2)

[0443] To a solution of E11-1 (300 mg, 1.4 mmol, 1.0 eq) in DMF (5 mL) , HATU (1.1 g, 2.8 mmol, 2.0 eq) , DIEA (904mg, 7.0 mmol, 5.0 eq) and methyl glycinate (210 mg, 1.68 mmol, 1.2 eq) were added at room temperature. The mixture was stirred at 20 ℃ for 1 hour. The reaction was diluted with water, extracted with DCM: MeOH = 10: 1, dried over anhydrous Na2SO4, concentrated in vacuo to give the crude. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM: MeOH = 10: 1) to afford E11-2 (140 mg, 78%yield) as a yellow solid.

[0444] LC-MS [M+H] +=280.3

[0445] Step 3: methyl (6- ( (3-hydroxypropyl) (methyl) amino) -1, 5-naphthyridine-4-carbonyl) glycinate (E11-3)

[0446] A solution of E11-2 (1.2 g, 4.3 mmol, 1.0 eq) , 3- (methylamino) propan-1-ol (421 mg, 4.73 mmol, 1.1 eq) , TEA (2.1 g, 21.5 mmol, 5.0 eq) and DMF (12 mL) was stirred at 60 ℃ for 3 hours. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%TFA) to afford E11-3 (850 mg, 59.8%) as a yellow solid.

[0447] LC-MS: [M+H] + = 333.4

[0448] Step 4: methyl (6- (methyl (3-oxopropyl) amino) -1, 5-naphthyridine-4-carbonyl) glycinate (E11-4)

[0449] A solution of E11-3 (332 mg, 1.0 mmol, 1.0 eq) , Dess-Martin (848 mg, 2.0 mmol, 2.0 eq) and DCM (5 mL) was stirred at 20 ℃ for 2 hours. The mixture was filtered which was used directly in next step without further purification.

[0450] Step 5: tert-butyl 4- (3- ( (8- ( (2-methoxy-2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) (methyl) amino) propyl) piperazine-1-carboxylate (E11-5)

[0451] A solution of E11-4 (280 mg, 0.85 mmol, 1.0 eq) , Boc-piperizine (316 mg, 1.7 mmol, 2.0 eq) , NaCNBH3 (106 mg, 1.7 mmol, 2 eq) and DCM (5 mL) was stirred at 20 ℃ for 30 min. The mixture was purified by silica gel (eluting with DCM: MeOH = 20: 1) to afford E11-5 (210 mg, 49.4%yield) as a yellow solid.

[0452] LC-MS [M+H] + = 501.6

[0453] Step 6: (6- ( (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propyl) (methyl) amino) -1, 5-naphthyridine-4-carbonyl) glycine (E11-6)

[0454] A solution of E11-5 (210 mg, 0.42 mmol, 1.0 eq) , LiOH (30 mg, 1.26 mmol, 3.0 eq) and MeOH: H2O (3: 1) was stirred at 20 ℃ for 2 hours. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%TFA) to afford E11-6 (190 mg, 93.1%yield) as a white solid.

[0455] LC-MS [M+H] + =487.5

[0456] Step 7: tert-butyl (S) -4- (3- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) (methyl) amino) propyl) piperazine-1-carboxylate (E11-7)

[0457] To a solution of E11-6 (280 mg, 0.58 mmol, 1.0 eq) in NMP (5 mL) , HATU (657 mg, 1.73 mmol, 3.0 eq) , DIEA (374 mg, 2.9 mmol, 5.0 eq) and (S) -4, 4-difluoropyrrolidine-2-carbonitrile (290 mg, 1.73 mmol, 3.0 eq) were added at room temperature. The mixture was stirred at 20 ℃ for 1 hour. The reaction was diluted with water, extracted with DCM: MeOH=10: 1, dried over anhydrous Na2SO4, and concentrated in vacuo to give the crude. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM: MeOH = 15: 1) to afford E11-7 (670 mg) as a yellow solid.

[0458] LC-MS [M+H] + = 601.5

[0459] Step 8: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- (methyl (3- (piperazin-1-yl) propyl) amino) -1, 5-naphthyridine-4-carboxamide (E11-8)

[0460] A solution of E11-7 (670 mg) in TFA (1 mL) and DCM (4 mL) was stirred at 25 ℃ for 1 hour. The mixture was concentrated to afford the crude E11-8 as a yellow solid, which was used directly in next step without further purification.

[0461] Step 9: (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) (methyl) amino) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E11)

[0462] A solution of E11-8 (70 mg, 0.14 mmol, 1.0 eq) , DOTA-NHS ester (140 mg, 0.28 mmol, 2 eq) , DIEA (adjusted pH to 8-9) and DMF (1 mL) was stirred at 25 ℃for 0.5 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E11 (35 mg, 14.5%yield) as a white solid.

[0463] LC-MS [M+2H] 2+ / 2 = 444.5

[0464] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.31 (s, 1H) , 8.67 (d, J = 4.4Hz, 1H) , 8.18 (s, 1H) , 8.16 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 5.12 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H) , 4.44 (d, J = 5.2 Hz, 2H) , 4.33 (d, J = 12.0 Hz, 1H) , 4.22 –4.07 (m, 2H) , 3.72 (s, 2H) , 3.59 (s, 6H) , 3.23 (s, 4H) , 2.99 (d, J = 10.4 Hz, 8H) , 2.92 (s, 4H) , 2.83 (d, J =12.8 Hz, 5H) , 2.69 –2.65 (m, 2H) , 2.34 –2.31 (m, 4H) , 2.04 –1.96 (m, 1H) , 1.81 (s, 2H) , 1.45 (s, 1H) , 1.23 (s, 3H) . Example 12Synthesis of 2, 2'- (7- ( (7S, 10S) -10-benzyl-7- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -2-methyl-9, 12, 15-trioxo-2, 8, 11, 14-tetraazahexadecan-16-yl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E12)

[0465] Step 1: 2, 2'- (7- ( (10S, 13S) -13-benzyl-10- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -2, 2, 5-trimethyl-4, 12, 15, 18-tetraoxo-3-oxa-5, 11, 14, 17-tetraazanonadecan-19-yl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E12-1)

[0466] To a solution of E8-7 (75 mg, 0.09 mmol, 1.0 eq) in DMF (3 mL) was added 2, 2'- (7- (2- ( (2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl) oxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (69.4 mg, 0.17 mmol, 2.0 eq) . The pH value of the mixture was adjusted to 8-9 with DIEA. The reaction was allowed to stir and react at room temperature for 1 hour. MTBE (100 mL) was added to the mixture, the crude was separated, which was dried under reduced pressure to give the crude product E12-1 (200 mg, [M+H] + = 1150.7) as a yellow oil.

[0467] Step 2: 2, 2'- (7- ( (7S, 10S) -10-benzyl-7- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -9, 12, 15-trioxo-2, 8, 11, 14-tetraazahexadecan-16-yl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E12-2)

[0468] E12-1 (200 mg, crude) was added into 30%TFA / DCM (4 mL, 10 V) . The reaction mixture was stirred at 0 ℃ for 30 minutes. The mixture was purified by Prep-HPLC (column: Gemini-C18 250 *21.2 mm, 10 μm; mobile phase: ACN-H2O (0.1%TFA) ; gradient: 5%-95%) to afford E12-2 (168.7mg, [M-H] -= 1048.9) as a white solid.

[0469] Step 3: 2, 2'- (7- ( (7S, 10S) -10-benzyl-7- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -2-methyl-9, 12, 15-trioxo-2, 8, 11, 14-tetraazahexadecan-16-yl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E12)

[0470] To a solution of E12-2 (90.0 mg, 0.09 mmol, 1.0 eq) in MeOH (9 mL, 100V) was added CH3COOH (25.7 mg, 0.43 mmol, 5.0 eq) , 37%Formaldehyde aq. (18 mL, 0.22 mmol, 2.6 eq) , NaBH3CN (59.0 mg, 0.94 mmol, 11 eq) . The reaction was purged with nitrogen for 3 times and stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was purified by Prep-HPLC (column: Gemini-C18 250 *21.2 mm, 10 μm; mobile phase: ACN-H2O (0.1%TFA) ; gradient: 5%-95%) to afford E12 (8.3 mg, 5.1%yield) as a white solid.

[0471] 1HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.63 (s, 1H) , 8.94 (t, J=4.4Hz, 2H) , 8.39 (dd, J=11.6, 9.2Hz, 1H) , 8.26 (d, J=4.4Hz, 1H) , 8.20 (s, 1H) , 7.40 (dd, J=20.0, 10.8Hz, 1H) , 7.24–7.08 (m, 2H) , 7.05 (s, 3H) , 5.20 (d, J=7.6Hz, 1H) , 4.59 (dd, J=18.0, 5.6Hz, 1H) , 4.51 (t, J=6.8Hz, 2H) , 4.41 (dd, J=17.6, 4.4Hz, 1H) , 4.37–4.27 (m, 1H) , 4.19–4.05 (m, 2H) , 3.95 (s, 1H) , 3.79 (s, 1H) , 3.58 (d, J=34.0Hz, 3H) , 3.20 (d, J=15.6Hz, 6H) , 3.02–2.75 (m, 11H) , 2.59 (s, 6H) , 2.52 (s, 2H) , 2.05–1.91 (m, 3H) , 1.85 (s, 1H) , 1.62 (s, 3H) , 1.43 (d, J=13.6Hz, 2H) , 1.31 (s, 2H) , 1.23 (s, 2H) . Example 13Synthesis of 2, 2'- (7- ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -3-imino-2-methyl-10, 13, 16-trioxo-2, 4, 9, 12, 15-pentaazaheptadecan-17-yl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E13)

[0472] Step 1: (9H-fluoren-9-yl) methyl ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -3-imino-2-methyl-10, 13-dioxo-2, 4, 9, 12-tetraazatetradecan-14-yl) carbamate (E13-1)

[0473] To a solution of N2- ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) glycyl-L-phenylalanyl-N, N-dimethyl-L-arginine (100.0 mg, 0.16 mmol, 1.0 eq) in DMF (1 mL, 10 V) was added EDCI (45.8mg, 0.24 mmol, 1.5 eq) , HOBt (32.3 mg, 0.24 mmol, 1.5 eq) , DIEA (30.8 mg, 0.24 mmol, 1.5 eq) , E8-5 (66.5 mg, 0.16 mmol, 1.0 eq) . The reaction was purged with nitrogen for 3 times and stirred at room temperature for 2 hours. The reaction was added with H2O (2 mL) and extracted with EA (2 mL) . The organic layer was concentrated on vacumm to give the crude E13-1 (117.0 mg, [M+H] + = 1029.9, 33.2%yield) as a yellow solid.

[0474] Step 2: 6- (3- ( (S) -2- ( (S) -2- (2-aminoacetamido) -3-phenylpropanamido) -5- (3, 3-dimethylguanidino) pentanamido) propoxy) -N- (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 5-naphthyridine-4-carboxamide (E13-2)

[0475] To a solution of E13-1 (100.0 mg, 0.10 mmol, 1.0 eq) in DMF (1 mL, 10 V) was added DBU (30.0 mg, 0.20 mmol, 2.0 eq) . The mixture was reacted at room temperature for 30 minutes. MTBE (10 mL) was added to the reaction, and the crude was filtered and dried to give E13-2 (27.7 mg, [M+H] + = 807.8, 35.4%yield) as a yellow solid.

[0476] Step 3: 2, 2'- (7- ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- ( (3- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) propyl) carbamoyl) -3-imino-2-methyl-10, 13, 16-trioxo-2, 4, 9, 12, 15-pentaazaheptadecan-17-yl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E13)

[0477] To a solution of E13-2 (27.7 mg, 0.03 mmol, 1.0 eq) in DMF (300 uL, 10 V) was added 2, 2'- (7- (2- ( (2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl) oxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (41.1 mg, 0.10 mmol, 3.3 eq) . The pH value of the mixture was adjusted to 8-9 with DIEA. The mixture was allowed to stir and react at room temperature for 1 hour. The mixture was purified by Prep-HPLC (column: Gemini-C18 250 *21.2 mm, 10 μm; mobile phase: ACN-H2O (0.1%TFA) ; gradient: 5%-95%) to afford E13 (5.0 mg, 13.4%yield) as a white solid.

[0478] 1HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.66 (s, 1H) , 9.92 (s, 1H) , 9.56 (d, J=6.8Hz, 1H) , 9.29 (d, J=7.6Hz, 1H) , 8.93 (t, J=4.8Hz, 1H) , 8.83 (s, 1H) , 8.36 (d, J=9.2Hz, 1H) , 8.25 (d, J=4.4Hz, 2H) , 8.03 (s, 1H) , 7.45 (s, 2H) , 7.37 (t, J= 8.4Hz, 1H) , 7.07 (s, 3H) , 7.02 (s, 2H) , 5.20 (d, J=9.2Hz, 1H) , 4.66–4.47 (m, 4H) , 4.41 (d, J=17.6Hz, 1H) , 4.31 (t, J=13.2Hz, 1H) , 4.10 (d, J=8.4Hz, 2H) , 3.95 (s, 2H) , 3.58–3.45 (m, 3H) , 3.20 (d, J=15.6Hz, 3H) , 3.13 (d, J=16.8Hz, 3H) , 3.06 (d, J=9.2Hz, 3H) , 3.00 (s, 1H) , 2.93 (s, 11H) , 2.80 (s, 5H) , 2.67 (s, 1H) , 2.33 (s, 1H) , 2.00 (m, 3H) , 1.79 (d, J=5.6Hz, 1H) , 1.63 (s, 1H) , 1.54 (s, 1H) , 1.24 (s, 2H) , 0.85 (d, J=6.8Hz, 1H) . Example 14Synthesis of 2, 2'- (7- ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- (4- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) butanamido) -3-imino-2-methyl-9, 12, 17-trioxo-2, 4, 10, 13, 16-pentaazaoctadecan-18-yl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E14)

[0479] Step 1: 2, 2'- (7- ( (8S, 11S) -11-benzyl-8- (4- ( (8- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) oxy) butanamido) -3-imino-2-methyl-9, 12, 17-trioxo-2, 4, 10, 13, 16-pentaazaoctadecan-18-yl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E14)

[0480] A solution of E10-4 (25 mg) in DMF (1 mL) was added NOTA-NHS ester (117 mg, 0.25 mmol) , and DIEA (adjusted pH to 8-9) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E14 (16 mg, 12%yield) as a white solid.

[0481] LC-MS [M+H] + = 1106.6

[0482] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.96 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 7.79 (t, J = 15.2 Hz, 2H) , 7.63 (dd, J = 9.2, 5.6 Hz, 6H) , 7.59 (s, 1H) , 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 6.26 (d, J = 14.2 Hz, 1H) , 6.14 (d, J = 14.2 Hz, 1H) , 4.11 (d, J = 19.6 Hz, 4H) , 3.13 (q, J = 6.8 Hz, 2H) , 2.81 (t, J = 2.4 Hz, 1H) , 2.73 (d, J = 6.0 Hz, 5H) , 2.57 (t, J = 6.8 Hz, 2H) , 2.26 (td, J = 7.2, 2.8 Hz, 2H) , 2.04 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 1.95 (s, 2H) , 1.70 (d, J = 33.6 Hz, 7H) , 1.56 –1.50 (m, 2H) , 1.31 (s, 18H) . Example 15Synthesis of (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) (methyl) amino) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E15)

[0483] Step 1: (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (8- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 5-naphthyridin-2-yl) (methyl) amino) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E15)

[0484] A solution of E11-8 (40 mg, 0.08 mmol, 1.0 eq) , NOTA-NHS ester (64 mg, 0.16 mmol, 2 eq) , DIEA (adjusted pH to 8-9) and DMF (1 mL) was stirred at 25 ℃for 0.5 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E15 (22 mg, 35%yield) as a white solid.

[0485] LC-MS [M+2H] 2+  / 2= 394.2

[0486] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.31 (s, 1H) , 8.67 (d, J = 4.5 Hz, 1H) , 8.19 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.16 (d, J = 3.7 Hz, 1H) , 7.53 (d, J = 9.3 Hz, 1H) , 5.12 (dd, J = 9.1, 2.5 Hz, 1H) , 4.44 (d, J = 5.3 Hz, 2H) , 4.35 –4.27 (m, 1H) , 4.15 (dd, J = 21.7, 9.9 Hz, 1H) , 3.88 (dd, J = 19.6, 6.4 Hz, 1H) , 3.71 (dd, J = 14.0, 7.0 Hz, 2H) , 3.56 (s, 2H) , 3.45 (s, 7H) , 3.24 (s, 3H) , 3.03 (s, 4H) , 2.91 (s, 5H) , 2.83 (s, 5H) , 2.32 (d, J = 7.0 Hz, 6H) , 1.85 –1.75 (m, 2H) . Example 16Synthesis of (S) -2, 2'- (7- (2- ( (3- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -3-oxopropyl) amino) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E16)

[0487] Step 1: 6- (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propoxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E16-1)

[0488] A solution of E1-4 (247 mg, 1.3 mmol, 1.0 eq) , tert-butyl 4- (3-chloropropyl) piperazine-1-carboxylate (1 g, 3.8 mmol, 3.0 eq) , K2CO3 (359 mg, 2.6 mmol, 2.0 eq) and DMF (3 mL) was stirred at 65 ℃ for 14 hours . The reaction mixture was added into a mixture consisting of water (5 mL) and LiOH (87.4 mg, 3.8 mmol, 3.0 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 1hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E16-1 (350 mg, 64.8%yield) as a yellow solid.

[0489] LC-MS [M+H] + = 417.5

[0490] Step2: tert-butyl (S) -4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazine-1-carboxylate (E16-2)

[0491] A solution of E16-1 (310 mg, 0.74 mmol, 1.0 eq) , (S) -4, 4-difluoro-1-glycylpyrrolidine-2-carbonitrile (281 mg, 1.49 mmol, 2.0 eq) , NMI (610 mg, 7.44 mmol, 10 eq) , TCFH (416 mg, 1.49 mmol, 2 eq) and NMP (3 mL) was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour . The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E16-2 (110 mg, 25.2%yield) as a white solid.

[0492] LC-MS [M+H] += 588.7

[0493] Step 3: tert-butyl (S) - (3- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -3-oxopropyl) carbamate (E16-3)

[0494] A solution of E16-2 (20 mg, 0.03 mmol, 1.0 eq) , TFA (0.4 mL) , DCM (0.8 mL) was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product which was used directly in next step without further purification. The above crude product was dissolved into ACN (1 mL) , and then 3- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) propanoic acid (9.6 mg, 0.051 mmol, 1.5 eq) , NMI (14 mg, 0.17 mmol, 5.0 eq) and TCFH (19.2 mg, 0.07 mmol, 2.0 eq) were added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM: MeOH = 8: 1) to afford E16-3 (11 mg, 39.3%yield) as a yellow solid.

[0495] LC-MS [M+H] += 659.8

[0496] Step 4: (S) -2, 2'- (7- (2- ( (3- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -3-oxopropyl) amino) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E16)

[0497] A solution of E16-3 (11 mg, 0.17 mmol, 1.0 eq) , TFA (0.5 mL) , DCM (1.0 mL) was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product which was used directly in next step without further purification. The above crude product was dissolved into NMP (0.22 mL) , and then NOTA-NHS ester (20 mg, 0.05 mmol, 3.0 eq) and DIEA (11 mg, 0.08 mmol, 5.0 eq) were added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E16 (7 mg, 49.9%yield) as a white solid.

[0498] LC-MS [M-H] -= 843.2

[0499] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.20 (s, 1H) , 9.17 (d, J = 5.9 Hz, 1H) , 8.93 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 8.55 (t, J = 5.5 Hz, 1H) , 8.17 (s, 1H) , 7.72 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 5.17 (d, J = 6.6 Hz, 1H) , 4.40 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 4.31 (dd, J = 19.0, 8.6 Hz, 1H) , 4.24 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 4.20 –4.09 (m, 1H) , 3.48 (s, 4H) , 3.45 (s, 4H) , 3.29 –3.24 (m, 7H) , 3.21 (s, 3H) , 3.05 (s, 4H) , 2.93 (s, 4H) , 2.85 (d, J = 19.0 Hz, 1H) , 2.61 (s, 3H) , 2.55 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 2.39 (s, 2H) , 2.34 (s, 2H) , 2.00 –1.91 (m, 2H) . Example 17Synthesis of 2, 2'- (7- ( (R) -1-carboxy-4- (4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -4-oxobutyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E17)

[0500] Step 1: (R) -2, 2'- (7- (1-carboxy-4- ( (2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl) oxy) -4-oxobutyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E17-3)

[0501] To a solution of E17-1 (200 mg, 0.37 mmol, 1.0 eq) in ACN (4 mL) was added HBTU (154 mg, 3.50 mmol, 2.0 eq) , HOSu (47 mg, 0.41 mmol, 1.1 eq) under N2 protection. Then the reaction was stirred at 25 ℃ for 4 hours. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with DCM: MeOH = 50: 1) to afford E17-2 (141 mg, 60%yield) as a pale-yellow oil. A mixture of the above crude product and TFA (4 mL) was stirred at room temperature for overnight. The residue was concentrated on vacuo to give the crude product E17-3 as a yellow oil.

[0502] Step 2: 2, 2'- (7- ( (R) -1-carboxy-4- (4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -4-oxobutyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E17)

[0503] A solution of E16-2 (25 mg, 0.04 mmol, 1.0 eq) , TFA (0.5 mL) , DCM (1.0 mL) was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product which was used directly in next step without further purification. The above crude product was dissolved into NMP (0.8 mL) , and then E17-3 (68 mg, 0.13 mmol, 3.0 eq) and DIEA (27 mg, 0.21 mmol, 5.0 eq) were added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E17 (25.5 mg, 71.2%yield) as a white solid.

[0504] LC-MS [M-H] -= 843.9

[0505] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.23 –9.15 (m, 2H) , 8.93 (d, J = 4.1 Hz, 1H) , 8.16 (s, 1H) , 7.72 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.58 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 5.17 (d, J = 7.1 Hz, 1H) , 4.40 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 4.36 –4.28 (m, 1H) , 4.24 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 4.14 (dd, J = 22.1, 12.1 Hz, 1H) , 3.50 (s, 1H) , 3.47 (s, 5H) , 3.43 (s, 4H) , 3.41 (s, 2H) , 3.05 –2.85 (m, 12H) , 2.80 (d, J = 15.3 Hz, 3H) , 2.44 (s, 1H) , 2.38 (d, J = 25.8 Hz, 3H) , 2.04 –1.85 (m, 3H) , 1.84 –1.71 (m, 1H) . Example 18Synthesis of 2, 2', 2”- (2- (4- (4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazine-1-carbothioamido) benzyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E18)

[0506] Step 1: 2, 2', 2”- (2- (4- (4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazine-1-carbothioamido) benzyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E18)

[0507] A solution of E16-2 (25 mg, 0.04 mmol, 1.0 eq) , TFA (0.5 mL) , DCM (1.0 mL) was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product which was used directly in next step without further purification. The above crude product was dissolved into NMP (0.8 mL) , and then (p-SCN-Bn) -NOTA (18 mg, 0.041 mmol, 1 eq) and DIEA (26 mg, 0.21 mmol, 5.0 eq) were added. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E18 (17.9 mg, 46.6%yield) as an off-white solid.

[0508] LC-MS [M-H] -= 937.1

[0509] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.27 (s, 1H) , 9.21 (s, 1H) , 9.17 (t, J = 5.8 Hz, 1H) , 8.93 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 8.14 (s, 1H) , 7.73 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 7.22 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 7.17 (s, 2H) , 5.17 (dd, J = 9.2, 2.5 Hz, 1H) , 4.42 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 4.32 (dd, J = 19.3, 8.5 Hz, 1H) , 4.24 (t, J = 5.7 Hz, 2H) , 4.20 –4.10 (m, 1H) , 3.88 (s, 4H) , 3.59 (s, 1H) , 3.55 (s, 3H) , 3.48 (s, 3H) , 3.41 (s, 3H) , 3.01 –2.84 (m, 8H) , 2.82 (s, 2H) , 2.70 –2.56 (m, 2H) , 2.54 (d, J = 6.7 Hz, 2H) , 2.48 –2.45 (m, 3H) , 2.04 –1.94 (m, 2H) , 1.23 (s, 1H) . Example 19Synthesis of (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (5- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) pentyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E19)

[0510] Step 1: 6- ( (5-hydroxypentyl) oxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E19-1)

[0511] A solution of E1-4 (300.0 mg, 1.58 mmol, 1.0 eq) , 5-bromopentan-1-ol (1.05 g, 6.31 mmol, 4.0 eq) , K2CO3 (872.2 mg, 6.31 mmol, 4.0 eq) , KI (52.4 mg, 0.32 mmol, 0.2 eq) and DMF (3 mL) was stirred at 65 ℃ for 16 hours. To the mixture was added LiOH (62.6 mg, 1.49 mmol, 1.0 eq) and H2O (1 mL) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%TFA) to afford E19-1 (130.0 mg, 29.8%yield) as a yellow solid.

[0512] LC-MS [M+H] + = 277.4

[0513] Step 2: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- ( (5-hydroxypentyl) oxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E19-2)

[0514] To a solution of E19-1 (120 mg, 0.43 mmol, 1 eq) in NMP (1.2 mL) , TCFH (365.6 mg, 1.30 mmol, 3 eq) , 1-Methylimidazole (176.5 mg, 2.15 mmol, 5 eq) and (S) -4, 4-difluoro-1-glycylpyrrolidine-2-carbonitrile (293.3 mg, 1.30 mmol, 3 eq) in DMSO (0.6mL) was added at room temperature. The mixture was stirred at 20-25 ℃ for 0.5 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%TFA) to afford E19-2 (140 mg, 72%yield) as a yellow solid.

[0515] Step 3: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- ( (5-oxopentyl) oxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E19-3)

[0516] To a solution of E19-2 (120 mg, 0.27 mmol, 1 eq) in THF (2.4 mL) and DCM (2.4 mL) was added Dess-Martin (113.8 mg, 0.54 mmol, 2 eq) . The mixture was stirred at 20-25 ℃ for 1 hour. The mixture was purified by silica gel (eluting with DCM: MeOH = 20: 1) to E19-3 (120 mg, 100%yield) as a yellow solid.

[0517] Step 4: tert-butyl (S) -4- (5- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) pentyl) piperazine-1-carboxylate (E19-4)

[0518] A mixture consisting of E19-3 (120 mg, 0.27 mmol, 1 eq) , Boc-piperizine (75.3 mg, 0.41 mmol, 1.5 eq) , NaCNBH3 (33.9 mg, 0.54 mmol, 2 eq) and NMP (2.4 mL) was stirred at 20-25 ℃ for 0.5 hour. The mixture was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%TFA) to afford E19-4 (120 mg, 72%yield) as an off-white solid.

[0519] LC-MS: [M+H] +=616.5

[0520] Step 5: (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (5- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) pentyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E19)

[0521] A solution of E19-4 (60 mg, 0.10 mmol, 1 eq) in TFA (0.6 mL) and DCM (1.4 mL) was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product which was used directly in next step without further purification. The above crude product was dissolved in NMP (0.6 mL) , and then NOTA-NHS ester (194 mg, 0.48 mmol, 5 eq) was added. The pH value of the mixture was adjusted to 8-9 with DIEA. The mixture was stirred at 20-25 ℃ for 0.5 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E19 (19.7 mg, 25.6%yield) as an off-white solid.

[0522] LC-MS: [M-H] -= 799.3

[0523] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.20 (d, J = 5.0 Hz, 2H) , 8.92 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 8.19 (s, 0H) , 7.73 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 5.16 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H) , 4.36 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 4.32 (s, 1H) , 4.24 (t, J = 6.0 Hz, 2H) , 4.16 (d, J = 12.2 Hz, 1H) , 3.95-3.89 (m, 1H) , 3.62 (s, 1H) , 3.56 (s, 3H) , 3.46 (s, 4H) , 3.40 (s, 3H) , 3.03 (s, 4H) , 2.91 (s, 4H) , 2.83 (s, 4H) , 2.30 (s, 6H) , 1.85-1.75 (m, 2H) , 1.55-1.40 (m, 4H) . Example 20Synthesis of (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (2- (2- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) ethoxy) ethyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E20)

[0524] Step 1: 6- (2- (2-hydroxyethoxy) ethoxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E20-1)

[0525] A solution of E1-4 (400 mg, 2.1 mmol, 1.0 eq) , 2- (2-bromoethoxy) ethan-1-ol (1.4 g, 8.4 mmol, 4.0 eq) , K2CO3 (1.4 g, 10.5 mmol, 5.0 eq) and DMF (4 mL) was stirred at 65 ℃ for 6 hours. To the mixture was added LiOH (151 mg, 6.3 mmol, 3.0 eq) and H2O (1 mL) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E20-1 (1.1g, crude) as a yellow solid.

[0526] LC-MS [M+H] + = 279.4

[0527] Step 2: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- (2- (2-hydroxyethoxy) ethoxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E20-2)

[0528] To a solution of E20-1 (100 mg, 0.36 mmol, 1.0 eq) in NMP (5 mL) , TCFH (251 mg, 0.90 mmol, 2.5 eq) , 1-Methylimidazole (118 mg, 1.44 mmol, 4.0 eq) and (S) -4, 4-difluoro-1-glycylpyrrolidine-2-carbonitrile (237 mg, 1.25 mmol, 3.5 eq) were added at room temperature. The mixture was stirred at 20 ℃ for 0.5 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95% MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E20-2 (110 mg, 68.3%yield) as a yellow solid.

[0529] LC-MS [M+H] + = 450.4

[0530] Step 3: tert-butyl (S) -4- (2- (2- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) ethoxy) ethyl) piperazine-1-carboxylate (E20-4)

[0531] A solution of E20-2 (100 mg, 0.22 mmol, 1.0 eq) , Dess-Martin (186 mg, 0.44 mmol, 2.0 eq) and THF (2 mL) was stirred at 25 ℃ for 3 hours. The mixture was purified by silica gel (eluting with DCM: MeOH = 20: 1) to afford E20-3 (100 mg, 100%yield) , which was dissolved in NMP (2 mL) , and then Boc-piperizine (61.4 mg, 0.33 mmol, 1.5 eq) , NaCNBH3 (28 mg, 0.44 mmol, 2.0 eq) and NMP (2 mL) was added. The mixture was stirred at 20 ℃ for 1 hour, and then purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E20-4 (75 mg, yield: 55.3%) as an off-white solid.

[0532] LC-MS: [M+H] + = 618.6

[0533] Step 4: (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (2- (2- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) ethoxy) ethyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E20)

[0534] A solution of E20-4 (50 mg, 0.08 mmol, 1.0 eq) in TFA (1 mL) and DCM (2 mL) was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product which was used directly in next step without further purification. The above crude product was dissolved in NMP (0.8 mL) , and then NOTA-NHS (97.2 mg, 0.24 mmol, 3.0 eq) and DIEA (52 mg, 0.41 mmol, 5.0 eq) were added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hour. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E20 (16 mg, yield: 24.6%) as a white solid.

[0535] LC-MS [M-H] -= 801.6

[0536] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.33 (t, J = 5.7 Hz, 1H) , 9.20 (s, 1H) , 8.93 (d, J = 4.1 Hz, 1H) , 8.18 (s, 1H) , 7.77 (d, J = 4.1 Hz, 1H) , 7.60 (s, 1H) , 5.25-5.12 (m, 1H) , 4.51 (d, J = 4.3 Hz, 2H) , 4.34 (d, J = 11.7 Hz, 1H) , 4.26 (dd, J = 14.6, 8.4 Hz, 2H) , 4.22-4.06 (m, 2H) , 3.95 (d, J = 6.1 Hz, 1H) , 3.79 (s, 3H) , 3.61 –3.57 (m, 4H) , 3.51 (s, 3H) , 3.35 (s, 2H) , 3.21 (s, 2H) , 3.03 (s, 4H) , 2.90 (s, 5H) , 2.82 (s, 5H) , 2.34 (s, 4H) . Example 21Synthesis of (2R) -2- (11- (carboxymethyl) -1, 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6.2] hexadecan-4-yl) -5- (4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -5-oxopentanoic acid (E21)

[0537] Step 1: 1- (tert-butyl) 5- (2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl) (2R) -2- (11- (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6.2] hexadecan-4-yl) pentanedioate (E21-2)

[0538] A solution of E21-1 (150 mg, 0.29 mmol, 1.0 eq) , HBTU (119 mg, 0.31 mmol, 1.1 eq) , HOSu (36 mg, 0.31 mmol, 1.1 eq) and ACN (3 mL) was stirred at 25 ℃ for 4 hours. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluting with n-heptane: EA = 19: 1) to afford E21-2 (70 mg, 39.5%yield) as a yellow oil.

[0539] Step 2: tert-butyl (2R) -2- (11- (2- (tert-butoxy) -2-oxoethyl) -1, 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6.2] hexadecan-4-yl) -5- (4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -5-oxopentanoate (E21-3)

[0540] A solution of E16-2 (12 mg, 0.02 mmol, 1.0 eq) , TFA (0.5 mL) , DCM (1.0 mL) was stirred at 25 ℃ for 0.5 hour. The reaction mixture was concentrated to provide the crude product which was used directly in next step without further purification. The above crude product was dissolved into NMP (0.8 mL) , and then E21-2 (15 mg, 0.02 mmol, 1.0 eq) , TCFH (13 mg, 0.05 mmol, 2.5 eq) and 1-Methylimidazole (4 mg, 0.05 mmol, 2.5 eq) were added at room temperature. The mixture was stirred at 20 ℃ for 0.5 hour. LC-MS showed the reaction was completed. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E21-3 (11.5 mg, 50%yield) as a yellow solid.

[0541] LC-MS: [M-H] -= 995.3

[0542] Step 3: (2R) -2- (11- (carboxymethyl) -1, 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6.2] hexadecan-4-yl) -5- (4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) oxy) propyl) piperazin-1-yl) -5-oxopentanoic acid (E21)

[0543] A solution of E21-3 (10.7 mg) and TFA (214 μL) was stirred at 25 ℃ for 15 hours. The crude product was purified by prep-HPLC (C18 column, eluting with 5%to 95%MeCN / H2O containing 0.1%HCOOH) to afford E21. (3.6 mg, yield: 40.4%) as an off-white solid.

[0544] LC-MS: [M+H] + = 882.8

[0545] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.25 (d, J = 26.0 Hz, 1H) , 9.20 (s, 1H) , 8.93 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 8.26 (s, 1H) , 7.72 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 5.17 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 4.41 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 4.32 (dd, J = 20.0, 7.6 Hz, 1H) , 4.27-4.22 (m, 2H) , 4.21-4.10 (m, 1H) , 3.97-3.76 (m, 3H) , 3.63 (s, 6H) , 3.02-2.87 (m, 12H) , 2.86-2.65 (m, 10H) , 2.42 (s, 2H) , 2.38-2.30 (m, 3H) , 2.27 (s, 1H) , 2.07 (s, 2H) , 1.99-1.93 (m, 2H) , 1.75 (s, 2H) , 1.54 (d, J = 14.4 Hz, 2H) . Example 22Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (4- (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -7-oxo-1, 6-naphthyridin-6 (7H) -yl) butyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E22)

[0546] Step 1: tert-butyl 4- (4-chlorobutyl) piperazine-1-carboxylate (E22-2)

[0547] A mixture of 4-chloroiodobutane (5.0 g, 22.89 mmol, 1eq) , E22-1 (4.26 g, 22.89 mmol, 1 eq) and K2CO3 (6.33 g, 45.77 mmol, 2 eq) in ACN (80 mL) was degassed and purged with N2 for 3 times. Then the mixture was stirred at 70 ℃ for 16 hours under N2 atmosphere. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was purified by preparative HPLC (column: Phenomenex luna C18 (250*70 mm, 10 μm) ; mobile phase: water (NH4HCO3) -ACN; gradient: 0%-30%B over 25 min) to give E22-2 (6.213 g, 22.45 mmol, 98.31%yield) as a white solid.

[0548] LC-MS: [M-Cl] + = 241.2

[0549] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.84 (br d, J = 15.0 Hz, 8H) , 3.66 (br t, J = 5.1 Hz, 4H) , 2.36 -2.22 (m, 4H) , 1.64 (s, 9H)

[0550] Step 2: 6- (4- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) butyl) -7-oxo-6, 7-dihydro-1, 6-naphthyridine-4 carboxylic acid (E22-3)

[0551] A mixture of E4-1 (600 mg, 3.16 mmol, 1 eq) , E22-2 (3.06 g, 11.04 mmol, 3.5 eq) and Cs2CO3 (5.14 g, 15.78 mmol, 5 eq) in NMP (10 mL) was degassed and purged with N2 for 3 times. Then the mixture was stirred at 80 ℃ for 12 hours under N2 atmosphere. The mixture was purified by preparative HPLC (column: CD05-Phenomenex luna C18 150*40 mm, 10 μm; mobile phase: water (FA) -ACN; gradient: 0%-33%B over 10 min) to give E22-3 (FA salt, 200 mg, 464.58 μmol, 14.72%yield) as a yellow solid.

[0552] LC-MS: [M+H] + = 431.2

[0553] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.56 (s, 1H) , 8.74 (d, J = 4.1 Hz, 1H) , 8.15 -8.14 (m, 1H) , 7.24 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 6.61 (s, 1H) , 4.26 -4.20 (m, 2H) , 3.46 (br s, 2H) , 2.42 -2.37 (m, 6H) , 1.79 -1.72 (m, 2H) , 1.52 -1.47 (m, 2H) , 1.40 -1.38 (m, 11H)

[0554] Step 3: tert-butyl (S) -4- (4- (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -7-oxo-1, 6-naphthyridin-6 (7H) -yl) butyl) piperazine-1-carboxylate (E22-4)

[0555] To a solution of E22-3 (200 mg, 464.58 μmol, 1 eq) , E1-5 (104.82 mg, 464.58 μmol, 1 eq, HCl salt) and DIEA (180.13 mg, 1.39 mmol, 242.76 μL, 3 eq) in DMF (2 mL) was added HATU (229.64 mg, 603.95 μmol, 1.3 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours . The solution was purified by preparative HPLC (column: CD20-Waters Xbidge BEH C18 250*25 mm, 10 μm; mobile phase: water (NH4HCO3) -ACN; gradient: 20%-50%B over 15 min) to give E22-4 (188 mg, 312.48 μmol, 67.26%yield) as a yellow solid.

[0556] LC-MS: [M+H] + = 602.3

[0557] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.25 -9.17 (m, 2H) , 8.79 (d, J = 4.1 Hz, 1H) , 7.04 (d, J = 4.1 Hz, 1H) , 6.66 (s, 1H) , 5.14 (dd, J = 2.8, 9.2 Hz, 1H) , 4.39 -4.10 (m, 7H) , 3.27 (br s, 4H) , 2.94 (s, 2H) , 2.36 -2.24 (m, 7H) , 1.50 -1.43 (m, 2H) , 1.41 -1.38 (m, 9H)

[0558] Step 4: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -7-oxo-6- (4- (piperazin-1-yl) butyl) -6, 7-dihydro-1, 6-naphthyridine-4-carboxamide (E22-5)

[0559] To a solution of E22-4 (200 mg, 332.42 μmol, 1 eq) in MeCN (2 mL) was added dropwise HCl / dioxane (2 M, 1.99 mL, 12 eq) at 20 ℃. The resulting mixture was stirred at 20 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E22-5 (180 mg, crude, HCl) as a red solid.

[0560] LC-MS: [M+H] + = 502.3

[0561] Step 5: (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (4- (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -7-oxo-1, 6-naphthyridin-6 (7H) -yl) butyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E22)

[0562] To a solution of E22-5 (180 mg, 358.90 μmol, 1 eq) in DMF (2 mL) was added DIEA (139.16 mg, 1.08 mmol, 187.54 μL, 3 eq) and DOTA-NHS ester (269.98 mg, 538.36 μmol, 1.5 eq) . The mixture was stirred at 40 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove DMF. The residue was purified by preparative HPLC (column: Boston Prime C18 150*30 mm, 5μm; mobile phase: water (FA) -ACN; gradient: 0%-20%B over 10 min) to give desired compound (70 mg) as a yellow solid, which was further purified by preparative HPLC (column: Welch Xtimate C18 150*30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA) -ACN; gradient: 0%-25%B over 15 min) to give E22 (FA salt, 24.4 mg, 18.37 μmol, 5.12%yield, 66.85%purity) as a yellow solid.

[0563] LC-MS: [M+H] + = 888.4

[0564] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.38 -9.29 (m, 1H) , 9.23 (s, 1H) , 8.78 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 8.20 (s, 1H) , 7.06 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 6.66 (s, 1H) , 5.15 (br dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H) , 4.32 (br d, J = 2.9 Hz, 1H) , 4.24 (br s, 2H) , 4.15 (br s, 1H) , 3.63 (br d, J = 1.3 Hz, 4H) , 3.47 (br s, 10H) , 3.35 (br s, 4H) , 3.00 (br d, J = 18.3 Hz, 10H) , 2.86 (br d, J = 1.8 Hz, 6H) , 2.34 (br d, J = 1.5 Hz, 4H) , 1.80 -1.74 (m, 2H) , 1.48 (br d, J = 5.9 Hz, 2H) . Example 23Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (4- (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -7-oxo-1, 6-naphthyridin-6 (7H) -yl) butyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E24)

[0565] Step 1: 6-bromo-1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E24-2)

[0566] To a solution of E24-1 (0.5 g, 1.78 mmol, 1 eq) in THF (5 mL) was added LiOH.H2O (373.20 mg, 8.89 mmol, 5 eq) in H2O (2 mL) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 4 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove THF. The residue was diluted with H2O (10 mL) and adjusted to pH = 4 by addition 1 M HCl (aq) . The precipitated was filtered out and dried in vacuum to give E24-2 (0.4 g, 1.50 mmol, 84.43%yield, 95%purity) as a yellow solid.

[0567] LC-MS: [M+H] + = 252.9

[0568] Step 2: 6- ( (4-methoxybenzyl) amino) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E24-3)

[0569] A mixture of E24-2 (0.4 g, 1.58 mmol, 1 eq) and (4-methoxyphenyl) methanamine (4.23 g, 30.82 mmol, 4.00 mL, 19.50 eq) was degassed and purged with N2 for 3 times. Then the mixture was stirred at 120 ℃ for 16 hours under N2 atmosphere. The residue was diluted with NaOH (2.0 M, 1.0 mL) and H2O (20.0 mL) . The solution was adjusted to pH = 3 by 2.0 M HCl (aq) . The precipitated was filtered out and dried in vacuum to give E24-3 (0.46 g, 1.40 mmol, 88.44%yield, 94%purity) as a yellow solid.

[0570] LC-MS: [M+H] + = 310.1

[0571] Step 3: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- ( (4-methoxybenzyl) amino) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E24-4)

[0572] To a solution of E24-3 (0.46 g, 1.49 mmol, 1 eq) and (2S) -1- (2-aminoacetyl) -4, 4-difluoro-pyrrolidine-2-carbonitrile (337.57 mg, 1.78 mmol, 1.2 eq) in DMF (4 mL) was added HATU (678.55 mg, 1.78 mmol, 1.2 eq) and DIEA (576.60 mg, 4.46 mmol, 777.09 μL, 3 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash silica gel chromatography (eluting with 0～55%THF / Petroleum ether) to give E24-4 (0.55 g, 1.04 mmol, 70.05%yield, 91%purity) as a yellow solid.

[0573] LC-MS: [M+H] + = 481.2

[0574] Step 4: (S) -6-amino-N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E24-5)

[0575] To a solution of E24-4 (0.55 g, 1.14 mmol, 1 eq) in DCM (8 mL) was added TFA (6.14 g, 53.85 mmol, 4 mL, 47.04 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours under N2 atmosphere. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was diluted with H2O (5 mL) and extracted with EtOAc (5mL *3) . The combined organic layers were concentrated under reduced pressure to give E24-5 (0.38 g, 896.43 μmol, 78.31%yield, 85%purity) as a black brown oil.

[0576] LC-MS: [M+H] + = 361.1

[0577] Step 5: tert-butyl (S) - (21- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) amino) -21-oxo-3, 6, 9, 12, 15, 18-hexaoxahenicosyl) carbamate (E24-7)

[0578] To a solution of E24-5 (380 mg, 1.05 mmol, 1 eq) and 3- [2- [2- [2- [2- [2- [2- (tert-butoxycarbonylamino) ethoxy] ethoxy] ethoxy] ethoxy] ethoxy] ethoxy] propanoic acid (478.30 mg, 1.05 mmol, 1 eq) in Pyridine (3 mL) was added EDCI (404.35 mg, 2.11 mmol, 2 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by preparative HPLC (basic condition, column: Boston Prime C18 150*30 mm, 5 μm; mobile phase: water (NH3*H2O+NH4HCO3) -ACN; gradient: 30%-60%B over 11 min) . The product was further purified by SFC (column: DAICEL CHIRALPAK AD (250mm*30 mm, 10 μm) ; mobile phase: CO2-EtOH (0.1%NH3*H2O) ; 50%B, isocratic elution mode) to give E24-7 (38 mg, 46.79 μmol, 33.85%yield, 98%purity) as a yellow oil.

[0579] LC-MS: [M+H] + = 796.5

[0580] Step 6: (S) -6- (1-amino-3, 6, 9, 12, 15, 18-hexaoxahenicosanamido) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E24-8)

[0581] To a solution of E24-7 (38 mg, 47.75 μmol, 1 eq) in MeCN (0.3 mL) was added HCl / dioxane (2 M, 0.3 mL, 12.57 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hour. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E24-8 (32 mg, 46.00 μmol, 96.33%yield) as a red oil.

[0582] LC-MS: [M+H] + = 696.3

[0583] Step 7: (S) -2, 2', 2”- (10- (24- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) amino) -2, 24-dioxo-6, 9, 12, 15, 18, 21-hexaoxa-3-azatetracosyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E24)

[0584] To a solution of E24-8 and DATA-NHS ester (70.10 mg, 139.78 μmol, 1.5 eq) in DMF (500 μL) was added DIEA (36.13 mg, 279.56 μmol, 48.69 μL, 3 eq) . The mixture was stirred at 60 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by preparative HPLC (column: Phenomenex Gemini NX 150×30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA) -ACN; gradient: 0%-32%B over 9 min) to give E24 (9.6 mg, 95%purity) as a yellow solid.

[0585] LC-MS: [M+H] + = 1082.4

[0586] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.81-10.76 (m, 1H) , 9.28-9.24 (m, 1H) , 9.22-9.15 (m, 1H) , 9.02-8.99 (m, 1H) , 8.87-8.82 (m, 1H) , 8.20-8.13 (m, 1H) , 7.82-7.77 (m, 1H) , 5.17-5.13 (m, 1H) , 4.39-4.28 (m, 2H) , 4.27-4.12 (m, 2H) , 3.75-3.70 (m, 2H) , 3.56-3.50 (m, 6H) , 3.50-3.44 (m, 18H) , 3.41 (s, 2H) , 3.30-3.19 (m, 4H) , 3.07 (s, 2H) , 3.03-2.95 (m, 8H) , 2.94-2.88 (m, 4H) , 2.86-2.76 (m, 2H) , 2.72-2.68 (m, 2H) , 2.66-2.56 (m, 4H) . Example 24Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) (methyl) amino) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E25)

[0587] Step 1: tert-butyl 4- (3- ( (methylsulfonyl) oxy) propyl) piperazine-1-carboxylate (E25-2)

[0588] To a solution of E25-1 (2.5 g, 10.23 mmol, 1 eq) in DCM (16 mL) was added dropwise TEA (1.55 g, 15.35 mmol, 2.14 mL, 1.5 eq) at 20 ℃. After addition, the mixture was cooled to 0℃ and then Ms2O (2.14 g, 12.28 mmol, 1.2 eq) in DCM (4 mL) was added dropwise at 0 ℃. The resulting mixture was stirred at 0 ℃ for 1 hour. The reaction mixture was partitioned between DCM (20 mL) and H2O (40 mL) . The organic phase was separated, washed with aqueous NaCl (20 mL *2) , dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give E25-2 (3.3 g, crude) as a yellow oil.

[0589] LC-MS: [M+H] + = 323.1

[0590] Step 2: tert-butyl 4- (3- (methylamino) propyl) piperazine-1-carboxylate (E25-3)

[0591] To a solution of E25-2 (3.3 g, 10.24 mmol, 1 eq) in EtOH (30 mL) was added MeNH2 (5.30 g, 51.18 mmol, 30%purity, 5 eq) . The mixture was stirred at 65 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E25-3 (3.5 g, crude) as a yellow oil.

[0592] LC-MS: [M+H] + = 258.2

[0593] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.47 -3.41 (m, 4H) , 3.09 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 2.78 (s, 3H) , 2.52 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 2.46 -2.40 (m, 4H) , 1.97 (quin, J = 6.7 Hz, 2H) , 1.46 (s, 9H) .

[0594] Step 3: ethyl 6-hydroxy-1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E25-4)

[0595] A solution of E25-3 (4 g, 17.22 mmol, 1 eq) in HBr / AcOH (33%, 66.22 g, 270.09 mmol, 44.44 mL, 15.68 eq) was stirred at 100 ℃ for 1 hour. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The crude was slurried with EtOAc. The solid was filtered out and dried in vacuum to give E25-4 (6.2 g, 17.05 mmol, 98.98%yield, 60%purity) as a brown solid.

[0596] LC-MS: [M+H] + = 219.1

[0597] Step 4: ethyl 6- ( ( (trifluoromethyl) sulfonyl) oxy) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E25-5)

[0598] To a solution of E25-4 (4.50 g, 12.37 mmol, 1 eq) in DCM (200 mL) was added Tf2O (13.96 g, 49.49 mmol, 8.17 mL, 4 eq) and TEA (7.51 g, 74.24 mmol, 10.33 mL, 6 eq) at -30 ℃. The mixture was stirred at -30 ℃ for 0.5 hour. Water (200 mL) was added and the mixture was extracted with DCM (100 mL *3) . Combined organic phases were dried over Na2SO4, filtered and concentrated. The crude product was purified by flash chromatography (silica gel column, eluting with 0 to 9%THF / Petroleum ether) to give E25-5 (3.6 g, 9.25 mmol, 74.76%yield, 90%purity) as a yellow solid.

[0599] LC-MS: [M+H] + = 350.9

[0600] Step 5: ethyl 6- ( (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propyl) (methyl) amino) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E25-6)

[0601] To a solution of E25-5 (1.7 g, 4.85 mmol, 1 eq) in DMA (20 mL) was added DIEA (1.88 g, 14.56 mmol, 2.54 mL, 3 eq) and E25-3 (2.75 g, 10.68 mmol, 2.2 eq) . The mixture was stirred at 120 ℃ for 4 hours. The reaction mixture was partitioned between EtOAc (40 mL) and H2O (80 mL) . The organic phase was separated, washed with aqueous NaCl (40 mL *2) , dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash chromatography (silica gel column, eluting with 0 to 30%THF / PE) to give E25-6 (980 mg, 1.93 mmol, 39.72%yield, 80%purity) as a red oil.

[0602] LC-MS: [M+H] + = 458.3

[0603] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.09 (s, 1H) , 8.68 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.98 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.47 (s, 1H) , 4.42 (q, J = 7.0 Hz, 2H) , 3.70 (br t, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.31 (br s, 4H) , 3.12 (s, 3H) , 2.36 -2.28 (m, 6H) , 1.79 -1.75 (m, 2H) , 1.39 (s, 12H) .

[0604] Step 6: 6- ( (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propyl) (methyl) amino) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E25-7)

[0605] To a solution of E25-6 (980 mg, 2.14 mmol, 1 eq) in THF (10 mL) was added a solution of LiOH. H2O (2 M in H2O, 5.35 mL, 5 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 3 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove THF. The reaction mixture was extracted with DCM / i-PrOH (V / V=3: 1, 20 mL *2) . The organic layers were washed with aqueous NaCl (10 mL *2) , dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give E25-7 (900 mg, crude) as a red solid.

[0606] LC-MS: [M+H] + = 430.2

[0607] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.92 (s, 1H) , 8.47 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.70 (s, 1H) , 7.50 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 3.65 (br t, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.31 -3.27 (m, 4H) , 3.05 (s, 3H) , 2.33 -2.27 (m, 6H) , 1.77 -1.72 (m, 2H) , 1.40 (s, 9H) .

[0608] Step 7: tert-butyl (S) -4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) (methyl) amino) propyl) piperazine-1-carboxylate (E25-8)

[0609] A mixture of E25-7 (800 mg, 1.86 mmol, 1 eq) , E1-5 (630.36 mg, 2.79 mmol, 1.5 eq, HCl) , HATU (1.06 g, 2.79 mmol, 1.5 eq) and DIEA (481.45 mg, 3.73 mmol, 648.85 μL, 2 eq) in DMF (5 mL) was degassed and purged with N2 for 3 times. Then the mixture was stirred at 20 ℃ for 4 hours under N2 atmosphere. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was purified by flash silica gel chromatography (silica gel column, eluting with 0 to 15%MeOH / DCM) to give E25-8 (900 mg, 1.35 mmol, 72.40%yield, 90%purity) as a yellow solid.

[0610] LC-MS: [M+H] + = 601.2

[0611] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.11 -9.06 (m, 2H) , 8.66 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.56 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.24 (s, 1H) , 5.17 (dd, J = 2.6, 9.2 Hz, 1H) , 4.39 -4.28 (m, 1H) , 4.23 (d, J = 5.9 Hz, 2H) , 4.12 (br s, 2H) , 3.75 (br t, J = 6.8 Hz, 2H) , 3.51 (br d, J = 3.3 Hz, 2H) , 3.35 (br s, 2H) , 3.11 (s, 3H) , 2.98 -2.82 (m, 7H) , 2.00 -1.92 (m, 2H) , 1.40 (s, 9H) .

[0612] Step 8: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- (methyl (3- (piperazin-1-yl) propyl) amino) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E25-9)

[0613] To a solution of E25-8 (190 mg, 316.32 μmol, 1 eq) in MeCN (2 mL) was added HCl / dioxane (2 M, 1.56 mL, 9.87 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E25-9 (240 mg, crude) as a red solid.

[0614] LC-MS: [M+H] + = 501.3

[0615] Step 9: Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) (methyl) amino) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E25)

[0616] To a solution of E25-9 (170 mg, 316.57 μmol, 1 eq, HCl) and DIEA (122.74 mg, 949.71 μmol, 165.42 μL, 3 eq) in DMF (2 mL) was added DOTA-NHS ester (174.63 mg, 348.23 μmol, 1.1 eq) . The mixture was stirred at 60 ℃ for 16 hours. The reaction was brown solution. The reaction mixture was purified by preparative HPLC (column: Phenomenex Gemini NX 150×30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA (0.225%v / v) ) -ACN; gradient: 0%-36%B over 9 min) to give E25 (50 mg, 54.12 μmol, 17.10%yield, 93%purity) as a yellow solid. This product was then re-purified by preparative HPLC (column: Xtimate C18 150*40 mm, 10 μm; mobile phase: Water-ACN; gradient: 10%-30%B over 9 min) to give E25 (17 mg, 18.59 μmol, 54.97%yield, 97%purity) as a yellow solid.

[0617] LC-MS: [M+H] + = 887.4

[0618] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.12 -9.02 (m, 2H) , 8.62 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.53 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.19 (s, 1H) , 5.13 (br d, J = 9.5 Hz, 1H) , 4.30 (br d, J = 16.5 Hz, 1H) , 4.26 -4.06 (m, 4H) , 3.69 (br s, 4H) , 3.65 -3.58 (m, 3H) , 3.39 -3.30 (m, 6H) , 3.10 (s, 3H) , 3.05 -2.87 (m, 12H) , 2.84 (br s, 6H) , 2.40 -2.31 (m, 6H) , 1.77 (br s, 2H) . Example 25Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) thio) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E26)

[0619] Step 1: 6- ( (3-hydroxypropyl) thio) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E26-1)

[0620] To a mixture of E24-1 (4.65 g, 16.54 mmol, 1 eq) and Cs2CO3 (13.47 g, 41.35 mmol, 2.5 eq) in DMF (110 mL) was added 3-mercaptopropan-1-ol (2.29 g, 24.81 mmol, 2.15 mL, 1.5 eq) . The mixture was stirred at 80 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove DMF to afford E26-1 (21 g, crude) as a brown solid.

[0621] LC-MS: [M+H] + = 265.0

[0622] Step 2: methyl 6- ( (3-hydroxypropyl) thio) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E26-2)

[0623] To a solution of E26-1 (21 g, crude) in MeOH (130 mL) was slowly added H2SO4 (16.89 g, 172.25 mmol, 9.18 mL, 10.84 eq) under 0 ℃. The mixture was stirred at 65 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was adjusted to pH = 8 with sat. NaHCO3 at 0-5 ℃ and then concentrated under reduced pressure to remove MeOH. The mixture was extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give E26-2 (4.4 g, crude) as a brown solid.

[0624] LC-MS: [M+H] + = 279.0

[0625] Step 3: methyl 6- ( (3-oxopropyl) thio) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E26-3)

[0626] To a solution of E26-2 (1.5 g, crude) in DCM (80 mL) was added Dess-Martin periodinane (4.57 g, 10.78 mmol, 3.34 mL, 2 eq) portionwise at 0 ℃ under N2 atmosphere. The reaction mixture was stirred at 20 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was quenched by addition of H2O (40 mL) at 0 ℃, and the mixture was extracted with DCM (20 mL *2) . The combined organic layers were dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give E26-3 (1.45 g, crude) as a brown solid.

[0627] LC-MS: [M+H] + = 277.0

[0628] Step 4: methyl 6- ( (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propyl) thio) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E26-4)

[0629] To a solution of E26-3 (1.4 g, crude) and tert-butyl piperazine-1-carboxylate (1.42 g, 7.60 mmol, 1.5 eq) in DCM (45 mL) was added NaBH (OAc) 3 (3.22 g, 15.20 mmol, 3 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The crude product was purified by flash chromatography (silica gel column, eluting with 0 to 30% THF / Petroleum ether) to give E26-4 (780 mg, 1.75 mmol, 34.47%yield) as a brown oil.

[0630] LC-MS: [M+H] + = 447.3

[0631] Step 5: 6- ( (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propyl) thio) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E26-5)

[0632] To a solution of E26-4 (700 mg, 1.57 mmol, 1 eq) in THF (7 mL) and H2O (3.5 mL) was added LiOH. H2O (197.32 mg, 4.70 mmol, 3 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was adjusted to pH 5～6 with 1 M HCl and concentrated under reduced pressure to afford E26-5 (670 mg, crude) as a yellow solid.

[0633] LC-MS: [M+H] + = 433.2

[0634] Step 6: tert-butyl (S) -4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) thio) propyl) piperazine-1-carboxylate (E26-6)

[0635] To a solution of E26-5 (670 mg, 1.55 mmol, 1 eq) , DIEA (400.39 mg, 3.10 mmol, 539.61 μL, 2 eq) and E1-5 (559.19 mg, 2.22 mmol, 1.43 eq) in DMF (10 mL) was added HATU (883.47 mg, 2.32 mmol, 1.5 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The crude product was purified by flash chromatography (silica gel column, eluting with 0 to 40%THF / DCM) to give E26-6 (500 mg, 828.25 μmol, 53.47%yield) as a yellow solid.

[0636] LC-MS: [M+H] + = 604.4

[0637] Step 7: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- ( (3- (piperazin-1-yl) propyl) thio) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E26-7)

[0638] To a solution of E26-6 (300 mg, 496.95 μmol, 1 eq) in ACN (2.5 mL) was added HCl / dioxane (2 M, 2.48 mL, 10 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E26-7 (260 mg, 481.46 μmol, 96.88%yield, HCl salt) as a yellow solid.

[0639] LC-MS: [M+H] + = 504.1

[0640] Step 8: (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) thio) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E26)

[0641] To a solution of E26-7 (260 mg, 481.46 μmol, 1 eq, HCl) and DOTA-NHS ester (386.31 mg, 770.33 μmol, 1.6 eq) in DMF (3.5 mL) was added DIEA (186.67 mg, 1.44 mmol, 251.58 μL, 3 eq) . The mixture was stirred at 60℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was purified by preparative HPLC (column: Phenomenex Gemini NX 150×30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA (0.225%) ) -ACN; gradient: 0%-31%B over 9 min) to give E26 (140 mg, 75.51 μmol, 15.68%yield, 48%purity) as a yellow solid. Then the product was further purified by preparative HPLC (column: Boston Prime C18 150*30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA (0.225%) ) -ACN; gradient: 0%-20%B over 11 min) to give E26 (70 mg, 72.36 μmol, 15.03%yield, 92%purity) as a yellow solid. Then the product was further purified by preparative HPLC (column: Welch Xtimate C18 150*30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA (0.225%) ) -ACN; gradient: 0%-30%B over 20 min) to give E26 (17 mg, 18.15 μmol, 3.77%yield, 95%purity) as a yellow solid.

[0642] LC-MS: [M+H] + = 890.3

[0643] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.48 -9.20 (m, 2H) , 9.03 (d, J = 4.3 Hz, 1H) , 8.28 -8.04 (m, 1H) , 7.90 -7.74 (m, 1H) , 5.17 (dd, J = 2.4, 9.3 Hz, 1H) , 4.40 -4.29 (m, 1H) , 4.28 -4.06 (m, 4H) , 3.61 (br s, 3H) , 3.44 -3.31 (m, 6H) , 3.26 (br t, J =6.9 Hz, 4H) , 3.15 -2.89 (m, 12H) , 2.89 -2.69 (m, 6H) , 2.48 -2.29 (m, 6H) , 1.95 -1.79 (m, 2H) . Example 26Synthesis of (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) (methyl) amino) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E27)

[0644] Step 1: di-tert-butyl2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) (methyl) amino) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) (S) -diacetate (E27-2)

[0645] To a solution of E25-9 (130 mg, 259.72 μmol, 1 eq) , E27-1 (107.92 mg, 259.72 μmol, 1 eq) and DIEA (67.13 mg, 519.44 μmol, 90.48 μL, 2 eq) in DMF (2.6 mL) was added HATU (148.13 mg, 389.58 μmol, 1.5 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 16 hours. The reaction was purified directly by preparative HPLC (column: Welch Xtimate C18 150*25 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA) -ACN; gradient: 23%-43%B over 11 min) to afford E27-2 (110 mg, 122.49 μmol, 47.16%yield, 100%purity) as a yellow solid.

[0646] LC-MS: [M+H] + = 898.6

[0647] Step 2: (S) -2, 2'- (7- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) (methyl) amino) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7-triazonane-1, 4-diyl) diacetic acid (E27)

[0648] To a solution of E27-2 (120 mg, 133.62 μmol, 1 eq) in MeCN (1.2 mL) was added HCl / dioxane (2 M, 1.20 mL, 18 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was purified by preparative HPLC (column: Phenomenex Gemini NX 150×30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA) -ACN; gradient: 0%-34%B over 9 min) to give desired compound (40 mg) as a yellow solid, which was further purified by preparative HPLC (column: Welch Xtimate C18 150*30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA) -ACN; gradient: 0%-30%B over 20 min) to give E27 (27 mg, 31.02 μmol, 60.93%yield, 90.27%purity) as a yellow solid.

[0649] LC-MS: [M+H] + = 786.4

[0650] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.63 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 8.23 (s, 1H) , 7.54 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 7.19 (s, 1H) , 5.18 -5.09 (m, 1H) , 4.38 -4.29 (m, 1H) , 4.25 -4.20 (m, 2H) , 4.17 -4.09 (m, 1H) , 3.73 -3.68 (m, 2H) , 3.57 (br s, 3H) , 3.47 -3.41 (m, 8H) , 3.11 (s, 3H) , 3.04 (br s, 4H) , 2.95 -2.81 (m, 10H) , 2.38 -2.28 (m, 6H) , 1.80 -1.72 (m, 2H) . Example 27Synthesis of 2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) sulfinyl) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E28)

[0651] Step 1: tert-butyl 4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) sulfinyl) propyl) piperazine-1-carboxylate (E28-1)

[0652] To a solution of E26-6 (270 mg, 447.26 μmol, 1 eq) in THF (1.7 mL) and H2O (0.425 mL) was added Oxone (225.64 mg, 367.04 μmol, 0.82 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was purified by flash chromatography (silica gel column, eluting with 0 to 7%MeOH / DCM) to give E28-1 (610 mg, 1.77 mmol, 32.82%yield, 90%purity) as a white solid.

[0653] LC-MS: [M+H] + = 620.2

[0654] Step 2: N- (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- ( (3- (piperazin-1-yl) propyl) sulfinyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E28-2)

[0655] To a solution of E28-1 (70 mg, 112.96 μmol, 1 eq) in DCM (560 μL) was added TFA (214.90 mg, 1.88 mmol, 140 μL, 16.68 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E28-2 (60 mg, crude, TFA salt) as a red solid.

[0656] LC-MS: [M+H] + = 520.3

[0657] Step 3: 2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- ( (S) -2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) sulfinyl) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E28)

[0658] To a solution of E28-2 (60 mg, 107.91 μmol, 1 eq, TFA) and DOTA-NHS ester (16.23 mg, 32.37 μmol, 0.3 eq) in DMF (900 μL) was added DIEA (41.84 mg, 323.73 μmol, 56.39 μL, 3 eq) . The mixture was stirred at 60 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was purified by preparative HPLC (column: Phenomenex Gemini NX 150×30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA (0.225%) ) -ACN; gradient: 0%-31%B over 9 min) to give E28 (18 mg, 18.68 μmol, 17.31%yield, 94%purity) as a white solid.

[0659] LC-MS: [M+H] + = 906.4

[0660] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.71 -9.40 (m, 2H) , 9.30 (d, J = 4.3 Hz, 1H) , 8.66 (s, 1H) , 8.21 -8.05 (m, 1H) , 5.17 (br dd, J = 3.3, 9.1 Hz, 1H) , 4.38 (br d, J = 5.8 Hz, 1H) , 4.36 -4.06 (m, 4H) , 3.71 -3.46 (m, 5H) , 3.43 -3.15 (m, 8H) , 3.14 -2.90 (m, 12H) , 2.89 -2.64 (m, 6H) , 2.38 -2.13 (m, 6H) , 1.94 -1.82 (m, 1H) , 1.67 -1.50 (m, 1H) . Example 28Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) sulfonyl) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E29)

[0661] Step 1: methyl 6- ( (3-hydroxypropyl) sulfonyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E29-1)

[0662] To a solution of E26-2 (1.5 g, 5.39 mmol, 1 eq) in MeOH (15 mL) was added Oxone (4.97 g, 8.08 mmol, 1.5 eq) in H2O (15 mL) . The mixture was stirred at 20 ℃for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The crude product was purified by flash chromatography (silica gel column, eluting with 0 to 7%MeOH / DCM) to give E29-1 (610 mg, 1.67 mmol, 31.11%yield, 85%purity) as a white solid.

[0663] LC-MS: [M+H] + = 311.0

[0664] Step 2: methyl 6- ( (3-oxopropyl) sulfonyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E29-2)

[0665] To a solution of E29-1 (610 mg, 1.97 mmol, 1 eq) in DCM (20 mL) was added Dess-Martin periodinane (1.67 g, 3.93 mmol, 1.22 mL, 2 eq) portionwise at 0 ℃ under nitrogen atmosphere. The resultant reaction mixture was stirred at 20 ℃for 2 hours. The reaction mixture was quenched by addition H2O (40 mL) at 0 ℃. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with DCM (20 mL *2) . The combined organic layers were dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give E29-2 (600 mg, 1.83 mmol, 93.00%yield, 94%purity) as a white solid.

[0666] LC-MS: [M+H] + = 309.0

[0667] Step 3: methyl 6- ( (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propyl) sulfonyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E29-3)

[0668] To a solution of E29-2 (600 mg, 1.95 mmol, 1 eq) and tert-butyl piperazine-1-carboxylate (543.69 mg, 2.92 mmol, 1.5 eq) in DCM (15 mL) was added NaBH (OAc) 3 (1.24 g, 5.84 mmol, 3 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E29-3 (930 mg, crude) as a yellow solid.

[0669] LC-MS: [M+H] + = 479.3

[0670] Step 4: 6- ( (3- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) propyl) sulfonyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E29-4)

[0671] A solution of E29-3 (930 mg, crude) and LiOH. H2O (978.59 mg, 23.32 mmol, 12 eq) in THF (10 mL) and H2O (5 mL) was stirred at 20℃ for 16 hours. The reaction mixture was adjusted to pH = 4～5 with 1 M HCl and then concentrated under reduced pressure to remove solvent. The crude product was purified by flash chromatography (C18, eluting with 0 to 25%ACN / water) to afford E29-4 (560 mg, 1.13 mmol, 58.31%yield, 94%purity) as a brown solid.

[0672] LC-MS: [M+H] + = 465.2

[0673] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.61 (s, 1H) , 9.51 (s, 1H) , 9.21 (d, J =4.4 Hz, 1H) , 8.10 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 3.54 (br d, J = 7.8 Hz, 2H) , 3.25 -3.20 (m, 4H) , 2.38 -2.32 (m, 2H) , 2.20 (br t, J = 4.8 Hz, 4H) , 1.77 -1.73 (m, 2H) , 1.37 (s, 9H) .

[0674] Step 5: tert-butyl (S) -4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) sulfonyl) propyl) piperazine-1-carboxylate (E29-5)

[0675] To a solution of E29-4 (560 mg, 1.21 mmol, 1 eq) , DIEA (311.60 mg, 2.41 mmol, 419.95 μL, 2 eq) and E1-5 (435.19 mg, 1.45 mmol, 1.2 eq, HCl salt) in DMF (13 mL) was added HATU (687.56 mg, 1.81 mmol, 1.5 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The crude product was purified by flash chromatography (silica gel column, eluting with 0 to 40%THF / DCM) to give E29-5 (500 mg, 707.90 μmol, 58.73%yield, 90%purity) as a brown solid.

[0676] LC-MS: [M+H] + = 636.3

[0677] Step 6: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- ( (3- (piperazin-1-yl) propyl) sulfonyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E29-6)

[0678] To a solution of E29-5 (300 mg, 471.93 μmol, 1 eq) in ACN (2 mL) was added HCl / dioxane (2 M, 1.89 mL, 8 eq) . The mixture was stirred at 20 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E29-6 (260 mg, 431.79 μmol, 9.49%yield, 95%purity, HCl salt) as a pastel purple solid.

[0679] LC-MS: [M+H] + = 536.0

[0680] Step 7: (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (3- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridin-6-yl) sulfonyl) propyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E29)

[0681] To a solution of E29-6 (260 mg, 454.52 μmol, 1 eq, HCl salt) and DOTA-NHS ester (364.70 mg, 727.24 μmol, 1.6 eq) in DMF (3.3 mL) was added DIEA (176.23 mg, 1.36 mmol, 237.50 μL, 3 eq) . The mixture was stirred at 60 ℃ for 16 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was purified by preparative HPLC (column: Phenomenex Gemini NX 150×30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA (0.25%) ) -ACN; gradient: 0%-31%B over 9 min) to give E29 (130 mg, 105.75 μmol, 23.27%yield, 75%purity) as a white solid. Then the product was further purified by preparative HPLC (column: Boston Prime C18 150*30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA (0.25%) ) -ACN; gradient: 0%-20%B over 11 min) to give E29 (18 mg, 18.94 μmol, 4.17%yield, 97%purity) as a white solid.

[0682] LC-MS: [M+H] + = 922.3

[0683] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.71 -9.53 (m, 2H) , 9.40 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 8.95 (s, 1H) , 8.21 -8.09 (m, 1H) , 5.17 (dd, J = 2.3, 9.4 Hz, 1H) , 4.38 (br d, J = 6.1 Hz, 1H) , 4.35 -4.08 (m, 4H) , 3.62 -3.49 (m, 5H) , 3.43 -3.16 (m, 8H) , 3.12 -2.89 (m, 12H) , 2.89 -2.70 (m, 6H) , 2.38 -2.16 (m, 6H) , 1.85 -1.72 (m, 2H) . Example 29Synthesis of (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (2- (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridine-6-sulfonamido) ethyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E30)

[0684] Step 1: ethyl 6- (benzylthio) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E30-1)

[0685] To a solution of E24-1 (0.5 g, 1.78 mmol, 1 eq) and phenylmethanethiol (265.10 mg, 2.13 mmol, 250.57 μL, 1.2 eq) in DMF (5 mL) was added Cs2CO3 (869.30 mg, 2.67 mmol, 1.5 eq) . The mixture was stirred at 80 ℃ for 1 hour. The reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to remove DMF. The residue was purified by flash silica gel chromatography (eluting with 0～16%Ethyl acetate / Petroleum ether) to give E30-1 (0.4 g, 1.20 mmol, 67.24%yield, 97%purity) as a yellow oil.

[0686] LC-MS: [M+H] + = 325.1

[0687] Step 2: ethyl 6- (chlorosulfonyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E30-2)

[0688] A solution of E30-1 (0.4 g, 1.20 mmol, 1 eq) in AcOH (0.5 mL) and H2O (0.2 mL) was cooled to 0 ℃ and then NCS (658.62 mg, 4.93 mmol, 4 eq) was added. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E30-2 (350 mg, 1.16 mmol, 94.39%yield) as a yellow oil.

[0689] LC-MS (quenched with morpholine) : [M+H] + = 352.2

[0690] Step 3: ethyl 6- (N- (2- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) ethyl) sulfamoyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylate (E30-3)

[0691] To a solution of E30-2 (350 mg, 1.16 mmol, 1 eq) and tert-butyl 4- (2-aminoethyl) piperazine-1-carboxylate (533.80 mg, 2.33 mmol, 2 eq) in DCM (5 mL) was added TEA (353.32 mg, 3.49 mmol, 485.99 μL, 3 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was diluted with H2O (10 mL) and extracted with DCM (10 mL *3) . The combined organic layer was dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash silica gel chromatography (eluting with 0～58%THF / Petroleum ether) to give E30-3 (0.3 g, 571.34 μmol, 49.09%yield, 94%purity) as a yellow solid.

[0692] LC-MS: [M+H] + = 494.2

[0693] Step 4: 6- (N- (2- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) ethyl) sulfamoyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxylic acid (E30-4)

[0694] To a solution of E30-3 (120 mg, 243.12 μmol, 1 eq) in THF (1.5 mL) and H2O (0.5 mL) was added LiOH. H2O (30.61 mg, 729.37 μmol, 3 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was diluted with H2O (5 mL) and extracted with DCM: MeOH=10: 1 (15mL) . The combined organic layers were concentrated under reduced pressure to give E30-4 (110 mg, 236.29 μmol, 97.19%yield) as a brown solid, which was used into the next step without further purification.

[0695] LC-MS: [M+H] + = 466.3

[0696] Step 5: tert-butyl (S) -4- (2- ( (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridine) -6-sulfonamido) ethyl) piperazine-1-carboxylate (E30-5)

[0697] To a solution of E30-4 (110 mg, 236.29 μmol, 1 eq) and (2S) -1- (2-aminoacetyl) -4, 4-difluoro-pyrrolidine-2-carbonitrile (67.05 mg, 354.44 μmol, 1.5 eq) in DMF (2 mL) was added HATU (107.82 mg, 283.55 μmol, 1.2 eq) and DIEA (91.62 mg, 708.88 μmol, 123.47 μL, 3.0 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove solvent. The residue was diluted with H2O (10 mL) and extracted with EtOAc (10 mL *3) . The combined organic layers were dried over Na2SO4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash silica gel chromatography (eluting with 0～75%Ethyl acetate / Petroleum ether) to give E30-5 (220 mg, 190.05 μmol, 80.43%yield, 55%purity) as a brown solid.

[0698] LC-MS: [M+H] + = 637.2

[0699] Step 6: (S) -N- (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) -6- (N- (2- (piperazin-1-yl) ethyl) sulfamoyl) -1, 7-naphthyridine-4-carboxamide (E30-6)

[0700] To a solution of E30-5 (120 mg, 188.48 μmol, 1 eq) in MeCN (2 mL) was added HCl / dioxane (2 M, 2 mL, 21.22 eq) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hour. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give E30-6 (100 mg, 186.37 μmol, 98.88%yield) as a brown oil.

[0701] LC-MS: [M+H] + = 537.3

[0702] Step 7: (S) -2, 2', 2”- (10- (2- (4- (2- (4- ( (2- (2-cyano-4, 4-difluoropyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl) carbamoyl) -1, 7-naphthyridine-6-sulfonamido) ethyl) piperazin-1-yl) -2-oxoethyl) -1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7-triyl) triacetic acid (E30)

[0703] To a solution of E30-6 (120 mg, 223.65 μmol, 1 eq) and DOTA-NHS ester (168.24 mg, 335.47 μmol, 1.5 eq) in DMF (0.5 mL) was added DIEA (86.72 mg, 670.95 μmol, 116.87 μL, 3 eq) . The mixture was stirred at 60 ℃ for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by preparative HPLC (column: Phenomenex Gemini NX 150×30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA) -ACN; gradient: 0%-32%B over 9 min) to give crude product (50 mg, 84%purity) as a white solid. The solid was further purified by preparative HPLC (column: Xtimate C18 150*40 mm, 10 μm; mobile phase: water (NH4OAc) -ACN; gradient: 10%-30%B over 9 min) to give crude product (26 mg, 98%purity) as a white solid. The solid was further purified by preparative HPLC (column: Phenomenex Gemini NX 150×30 mm, 5 μm; mobile phase: water (FA) -ACN; gradient: 0%-34%B over 9 min) to give E30 (9.6 mg, 10.73 μmol, 45.00%yield, 99%purity) as a white solid.

[0704] LC-MS: [M+H] + = 923.4

[0705] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.72-9.66 (m, 1H) , 9.60-9.56 (m, 1H) , 9.35-9.31 (m, 1H) , 8.85-8.79 (m, 1H) , 8.18 (FA, s, 1H) , 8.15 (d, J = 4.2 Hz, 1H) , 8.01-7.90 (m, 1H) , 5.21-5.12 (m, 1H) , 4.40-4.20 (m, 4H) , 3.54 (d, J = 10.3 Hz, 4H) , 3.44 (s, 6H) , 3.21 (s, 2H) , 3.11 (d, J = 5.7 Hz, 4H) , 3.06-2.91 (m, 12H) , 2.84-2.78 (m, 4H) , 2.35-2.26 (m, 2H) , 2.19 (s, 4H) . Example 30 Binding assay

[0706] Materials:

[0707] Experiment:

[0708] Compound plate preparation (10 points dilution in DMSO)

[0709] Compounds were dissolved in DMSO to make 10 mM stock solution. Preparation of the compound plate: the first concentration was 1000 μM diluted from the stock solution, followed by 9 points of 5-fold serial dilutions.

[0710] Assay procedure:

[0711] FAP assay protocol:

[0712] 1. Dilute FAP to 2.5 nM and 78 pM in Assay Buffer.

[0713] 2. Dilute Substrate GP-AMC to 20 μM in Assay Buffer.

[0714] 3. Load 20 μL of 2.5 nM and 78 pM of FAP into assay plate.

[0715] 4. Transfer 2 μL compounds from the stock compound plate to the corresponding wells in the intermediate plate containing 23 μL of assay buffer and mix well.

[0716] 5. Transfer 0.5 μL of diluted compounds to the corresponding wells in the assay plate. Incubate the plate for 5 min at room temperature (R. T. ) .

[0717] 6. Add 20 μL of 20 μM Substrate into assay plate. Include a Substrate Blank containing 20 μL of Assay Buffer and 20 μL of Substrate.

[0718] 7. Incubate the plate at R. T. for 30 min.

[0719] 8. Read at excitation and emission wavelengths of 370 nm and 440 nm.

[0720] DPP-4 assay protocol:

[0721] 1. Dilute DDP-4 to 0.1 μg / mL in Assay Buffer.

[0722] 2. Dilute Substrate GP-AMC to 20 μM in Assay Buffer.

[0723] 3. Load 20 μL of 0.1μg / mL of DDP4 into assay plate.

[0724] 4. Transfer 2 μL compounds from the stock compound plate to the corresponding wells in the intermediate plate containing 23 μL of assay buffer and mix well.

[0725] 5. Transfer 0.5 μL of diluted compounds to the corresponding wells in the assay plate. Incubate the plate for 5 min at R. T.

[0726] 6. Add 20 μL of 20 μM Substrate into a plate. Include a Substrate Blank containing 20 μL of Assay Buffer and 20 μL of Substrate.

[0727] 7. Incubate the plate at R. T. for 5 min.

[0728] 8. Read at excitation and emission wavelengths of 370 nm and 440 nm.

[0729] PREP assay protocol:

[0730] 1. Dilute PREP to 50 ng / mL in Assay Buffer.

[0731] 2. Dilute Substrate z-GP-AMC to 20 μM in Assay Buffer.

[0732] 3. Load 20 μL of 50 ng / mL of FAP into assay plate.

[0733] 4. Transfer 2 μL compounds from the stock compound plate to the corresponding wells in the intermediate plate containing 23 μL of assay buffer and mix well.

[0734] 5. Transfer 0.5 μL of diluted compounds to the corresponding wells in the assay plate. Incubate the plate for 5 min at 37 ℃.

[0735] 6. Add 20 μL of 20 μM Substrate into a plate. Include a Substrate Blank containing 20 μL of Assay Buffer and 20 μL of Substrate.

[0736] 7. Incubate the plate for 5 min. at 37 ℃.

[0737] 8. Read at excitation and emission wavelengths of 370 nm and 440 nm.

[0738] Results were showed in the Table 1 below (All data were calculated using GraphPad Prism Software) . Table 1. Results of FAP, DPP-4 and PREP assays Example 31 SPR assay

[0739] 1. Equipment &materials

[0740] 1) Equipment: Biacore 8K

[0741] 2) Assay temperature: 25 ℃

[0742] 3) Sensor Chip: Series S Sensor Chip CM5 (Cat#29149603, Cytiva)

[0743] 4) Protein Target: FAP (Cat#FAP-H82Q6) , ACROBiosystems Inc.

[0744] 5) Cmpds: FAPI-04 (Internal Reference) , desired compounds

[0745] 6) Running Buffer: 50 mM Tris, 150 mM NaCl, 0.05% (v / v) P20 (Tween 20) , and 5%DMSO, pH 7.2-7.4

[0746] 2. Procedures

[0747] 1) . Protein immobilization and affinity measurement

[0748] The Protein Target was amine-coupled at pH 5.5 onto the Series S Sensor Chip CM5 to ～ 6-9 kRU, and a serial conc. of cmpds was injected to measure affinity using SCK (Single-cycle Kinetics) (highest conc.: 70 nM, dilution ratio: 2, #of conc.: 5) . Affinity results are shown in the Table 2 below. (All data were solvent-corrected and double-referenced prior to 1: 1 fitting using Biacore Insight Evaluation Software v4.0, Cytiva to determine apparent KD)

[0749] 3. Results Table 2. Affinity results Example 3268Ga labeling experiment

[0750] General procedures:

[0751] 68GaCl3 was obtained from 68Ge / 68Ga generator with 2 mL 0.05 M HCl in the reactor, the precursor (2 mg / mL) was dissolved in H2O then mixed with 130 μl of 1 M NaOAc, the mixture was incubated at various temperatures for 5 to 30 min based on precursor conditions.

[0752] Radiochemical purity was detected by Radio-TLC (1 M ammonium acetate: methanol buffer =1: 1) or Radio-HPLC (acetonitrile-water containing TFA as mobile phase) . The specific activity was analyzed by HPLC via the UV calibration curve.

[0753] Elution gradient:

[0754] Results:

[0755] Each of radiolabeled compounds was prepared with a radiochemical purity (RCP) of more than 95%by Radio-TLC, as shown in Figures 1 (a) -1 (f) .

[0756] PET / CT imaging

[0757] The Mice bearing HT-1080 hFAP (n = 2-3 / group) xenograft tumors were intravenously injected with radiolabeled compound (100-200 μCi in 100-200 μL) . The mice were anesthetized with 3% (v / v) isoflurane and underwent Micro-PET scans with continuous 1-1.5% (v / v) isoflurane. The images were acquired at 60 min p.i. PET-CT scan was performed on a Super Nova PET / CT scanner and then displayed on Recon / Avator-s-10 workstation. The SUVmax for each Region of interest (ROI) over tumor or muscle was measured.

[0758] Imaging data showed that the uptake of compound 68Ga-E7 was better at the tumor site than 68Ga-FAPI-04, and the uptake of compound 68Ga-E7 in muscle background was lower than 68Ga-FAPI-04, resulting in better tumor to muscle ratio and better efficiency in detecting tumor in vivo. Compound 68Ga-E6 was similar or superior when compared to 68Ga-FAPI-04 in tumor and muscle uptake and tumor to muscle ratio; compound 68Ga-E5 was similar to 68Ga-FAPI-04 in terms of tumor and muscle uptake and tumor to muscle ratio while compound 68Ga-E10 had higher tumor uptake and tumor to muscle ratio than 68Ga-E9, resulting in better imaging quality.

[0759] Maximum-intensity projection (MIP) images of each radiolabeled compound and the reference 68Ga-FAPI-04 in HT-1080 hFAP model at 60 min p. i. were shown in Figure 2. The tumor and muscle uptake were shown in Table 3. Table 3. Tumor and muscle uptake for the compounds and the reference Example 3318F-Al labeling experiment

[0760] General procedures:

[0761] 200 μg precursor, 9.8 mg Vc, 100 μL 0.5 M potassium hydrogen phthalate and 10 μL, 20 mM AlCl3 were added into the reaction vessel.  Light QMA was prepared with 5 mL of saline and 5 mL of high purity water. The 18F ion produced by cyclotron was retained on the activated QMA column and eluted into the reaction vessel by a mixture of 0.3 mL normal saline and 0.3 mL acetonitrile. 1 mL of acetonitrile was added into the reaction vessel and then heated at 100 ℃ for 10 min. After cooling, 8 mL of water was added to dilute the reaction solution, then purified by C18 column (using 0.3 mL ethanol and 1 mL of water as elution buffer) for the final product with an activity of 2-3 mCi.

[0762] Radiochemical purity was detected by Radio-TLC (1 M ammonium acetate: methanol buffer =1: 1) or Radio-HPLC (acetonitrile-water containing TFA as mobile phase) . The specific activity was analyzed by HPLC via the UV calibration curve.

[0763] Elution gradient:

[0764] Results:

[0765] Radio-TLC data showed the radiochemical purity of all samples exceeded 90%.

[0766] PET / CT imaging:

[0767] The Mice bearing HT-1080 hFAP (n = 2-3 / group) xenograft tumors were intravenously injected with radiolabeled compound (100-200 μCi in 100-200 μl) . The mice were anesthetized with 3% (v / v) isoflurane and underwent Micro-PET scans with continuous 1-1.5% (v / v) isoflurane. The images were acquired at 60 or 120 min p.i. or a 3600s continuously collection. PET-CT scan was performed on a Super Nova PET / CT scanner and then displayed on Recon / Avator-s-10 workstation. The SUVmax for each Region of interest (ROI) over tumor or muscle was measured.

[0768] Toxicity in Mice

[0769] 18F-Al labeled compound or normal saline was injected into male or female mice. The mice were weighed daily, euthanized at day 14 and main organs removed for gross observation.

[0770] Results of PET / CT imaging:

[0771] MIP diagram of compound 18F-AlF-E7 was shown in Figure 3. Compared with the 68Ga labeled compound, 18F-Al labeled compound showed higher tumor uptake and longer tumor retention. However, a relatively higher gallbladder and GI tract signals were observed.

[0772] Biological distribution:

[0773] As shown in Figure 4, the radioactivity of compound 18F-AlF-E7 in normal mice was mainly distributed in bone, kidney, blood, lung and digestive tract, consistent with the earlier imaging data. Uptake in all tissues decreased significantly over time.

[0774] Toxicity in mice:

[0775] As shown in Figure 5, the radiolabeled compound 18F-AlF-E7 was well tolerated in mice. After normalization, the weight of male and female mice injected with radiolabeled compound 18F-AlF-E7 (G3 and G4, experimental group) showed no significant difference compared to male and female mice injected with saline (G1 and G2, control group) . Both the control group and the experimental group gained weight in a 14-day period. Example 3464Cu labeling experiment

[0776] General procedures:

[0777] 64CuCl2 was produced by cyclotron and prepared in 0.01 M or 0.1M HCl, 20 μg precursors and 10 μL of 1 M NaOAc solution containing Vc is mixed with 64CuCl2 in HCl, the mixture was incubated at various temperatures for 5 to 60 min based on precursor conditions.

[0778] Radiochemical purity was measured by Radio-TLC (1 M ammonium acetate: methanol buffer =1: 1) or Radio-HPLC (acetonitrile-water containing TFA as mobile phase) . The specific activity was analyzed by HPLC via the UV calibration curve.

[0779] Radio-TLC data showed the radiochemical purity of all samples exceeded 90%, as shown in Figures 6 (a) -6 (c) .

[0780] PET / CT imaging:

[0781] The mice bearing HT-1080 hFAP (n = 2-3 / group) xenograft tumors were intravenously injected with radiolabeled compound (100-200 μCi in 100-200 μl) . The mice were anesthetized with 3% (v / v) isoflurane and underwent Micro-PET scans with continuous 1-1.5% (v / v) isoflurane. The images were acquired at 1 hr, 5 hrs and 24 hrs p.i. PET-CT scan was performed on a Super Nova PET / CT scanner and then displayed on Recon / Avator-s-10 workstation. The SUVmax for each Region of interest (ROI) over tumor or muscle is measured.

[0782] Results:

[0783] The PET / CT imaging results of 64Cu labeled compounds were shown in Figure 7, the SUVmax of tumor, muscle, liver and gallbladder were shown in Figure 8, and Table 4. The results indicate that the uptake of 64Cu-E7 is similar in tumor and muscle to that of the reference 64Cu-FAPI-04 in all time points measured. However, it is surprising that in important organs such as liver and gallbladder, the uptake of 64Cu-E7 is significantly lower than that of the reference 64Cu-FAPI-04, consistent with the significantly improved imaging quality for 64Cu-E7 than the reference 64Cu-FAPI-04 as shown in Figure 7. Therefore, we believe that the E7 compound could be a much better probe for FAP than the current standard FAPI-04. Table 4. The tumor and muscle uptake of the 64Cu-labeled compounds

[0784] The foregoing description is considered as illustrative only of the principles of the present disclosure. Further, since numerous modifications and changes will be readily apparent to those skilled in the art, it is not desired to limit the invention to the exact construction and process shown as described above. Accordingly, all suitable modifications and equivalents may be considered to fall within the scope of the invention as defined by the claims that follow.

Claims

1.A compound having Formula (I) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof, whereineach of X, Y and Z is independently selected from the group consisting of C, CH, C=O or N, under the proviso that at least one of X, Y and Z is N;R1 is selected from the group consisting of CN, H, B (OH) 2, -C=C-C (O) -aryl, -C=C-S (O) 2-aryl, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2, 5-tetrazolyl and CORa;each of R2 and R3 is independently H or halogen;R4 is selected from the group consisting of O, NRb, S, S=O, S (=O) 2 and CH2;L is absent or is a linker;A is selected from the group consisting of radioactive moiety, chelating agent, fluorescent dye, a contrast agent, a cytotoxic and / or cytostatic agent, an immunomodulator agent and combinations thereof;Ra is selected from the group consisting of H, hydroxyl, amino, alkyl, alkenyl, haloalkyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc; andRb is selected from the group consisting of H, -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalknyl, cycloalkyl, heterocyclyl, cycloalkenyl, cycloheteroalkenyl, aryl, and aralkyl, wherein each of -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Rc; and each of Rc is independently selected from halogen, hydroxyl, oxo, amino, cyano, nitro, alkoxyl or alkyl.2.The compound of claim 1, wherein R1 is CN.3.The compound of any one of the preceding claims, wherein the C atom to which R1 is directly bound is in S-configuration.4.The compound of any one of the preceding claims, wherein both of R2 and R3 are H.5.The compound of any one of claims 1-3, wherein at least one of R2 and R3 is halogen.6.The compound of claim 5, wherein at least one of R2 and R3 is F.7.The compound of any one of claims 1-3, wherein both of R2 and R3 are halogen.8.The compound of claim 7, wherein both of R2 and R3 are F.9.The compound of any one of the preceding claims, wherein two of X, Y and Z is N.10.The compound of claim 9, wherein X is N, Y is C, and Z is N.11.The compound of any one of claims 1-8, wherein only one of X, Y and Z is N.12.The compound of claim 11, whereina) X is N, Y is C, and Z is CH;b) X is CH, Y is C, and Z is N;c) X is CH, Y is N, and Z is C; ord) X is CH, Y is N, and Z is C=O.13.The compound of claim 12, wherein X is CH, Y is C, and Z is N.14.The compound of any one of the preceding claims, wherein R4 is O, S (=O) 2, or NRb.15.The compound of claim 14, wherein R4 is O.16.The compound of claim 14, wherein R4 is NRb, and Rb is H or methyl.17.The compound of any one of the preceding claims, wherein R4 is covalently attached to X, Y or Z.18.The compound of claim 17, wherein R4 is covalently attached to Y.19.The compound of any one of the preceding claims, wherein L has a formula selected from the group consisting of: whereinB is a spacer;C is selected from the group consisting of S, NRd, NRd-O, NRd-alkyl, NRd-alkyl-NRd, NRd-cycloalkyl-NRd, NRd-heterocycle-NRd, NRd-C (O) -NRd, NRd-C (S) -NRd, and a 5-to 10-membered N-containing aromatic or non-aromatic mono-or bicyclic heterocycle, wherein the NRd-alkyl-NRd, NRd-cycloalkyl-NRd, NRd-heterocycle-NRd, NRd-C (O) -NRd, NRd-C (S) -NRd, and N-containing heterocycle is optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of -OH, alkyl, aryl and aralkyl;Rd is selected from the group consisting of H, alkyl, -O-alkyl, -S-alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalknyl, cycloalkenyl, cycloheteroalkenyl, aryl, and aralkyl, wherein each of the alkyl is optionally substituted with one or more substituents selected from -OH, oxo or halogen;D is absent, or is -NH-C (O) -, -C (O) -NH-, -NH-alkyl-C (O) -, -C (O) -alkyl-NH-or -NH-S (=O) 2-NH-, wherein each of the alkyl is optionally substituted with one or more substituents selected from halogen, cyano, hydroxyl, amino, alkoxy, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalknyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl; and*denotes the site covalently linked to R4;whereinE is selected from the group consisting of -NH-, -C (O) -NH-, -NH-C (O) -, -NH-alkyl-, -NH-heteroalkyl-, -C (O) -NH-alkyl-, -C (O) -NH-heteroalkyl-, -NH-C (O) -alkyl-, and -NH-C (O) -heteroalkyl-;Q is -alkyl-C (O) -*, -herteroalkyl-C (O) -*, alkyl or herteroalkyl;m is an integer from 0 to 40;*denotes the site covalently linked to R4; andwhereinG is absent, or is -NH-alkyl-NH-, -NH-alkyl-C (O) -, -NH-heteroalkyl-NH-or -NH-heteroalkyl-C (O) -, wherein each of the alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Re;J iswhereineach of R5 is independently selected from H, OH, SH, NH2, halogen, cyano, carboxy, alkyl, cycloalkyl, aryl and heteroaryl, each of which is substituted or unsubstituted;each of R6 is independently selected from a side-chain residue of a proteinogenic or a non-proteinogenic amino acid, each of which can be further substituted;n is an integer from 1 to 10;K is absent, or is -NH-alkyl-*, -C (O) -alkyl-*, -NH-heteroalkyl-*, or -C (O) -heteroalkyl-*, wherein each of the alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Re;each of Re is independently selected from halogen, cyano, hydroxyl, amino, alkoxy, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalknyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which is substituted or unsubstituted;*denotes the site covalently linked to R4.20.The compound of claim 19, wherein L has formula II (a) .21.The compound of claim 20, wherein B is selected the group consisting of alkyl, heteroalkyl, -C (O) -alkyl-,  wherein each of alkyl and heteroalkyl is unsubstituted or substituted.wherein i is an integer from 0 to 10;wherein j is an integer from 0 to 10;wherein k is an integer from 0 to 10.22.The compound of claim 21, wherein B is selected from alkyl, heteroalkyl, -C (O) -alkyl-, or 23.The compound of claim 21, wherein B is C1-C6 alkyl.24.The compound of claim 21, wherein B is C3 alkyl or C5 alkyl.25.The compound of claim 21, wherein B is and i is 1.26.The compound of claim 20, wherein C is 5-to 10-membered N-containing aromatic or non-aromatic mono-or bicyclic heterocycle.27.The compound of claim 20, wherein C is selected from the group consisting of: 28.The compound of claim 20, wherein C is 29.The compound of claim 20, wherein D is absent.30.The compound of claim 20, wherein D is -NH-alkyl-C (O) -or -C (O) -alkyl-NH-.31.The compound of claim 30, wherein D is -NH-C1-C6 alkyl-C (O) -or -C (O) -C1-C6 alkyl-NH-.32.The compound of claim 30, wherein D is -NH-C2 alkyl-C (O) -or -C (O) -C2 alkyl-NH-.33.The compound of claim 1, wherein L is selected from the group consisting of: wherein *denotes the site covalently linked to R4.34.The compound of claim 19, wherein L has formula II (b) .35.The compound of claim 34, wherein E is -NH-C0-C10 alkyl-.36.The compound of claim 35, wherein E is -NH-.37.The compound of claim 34, wherein Q is –C1-C10 alkyl-C (O) -*or C1-C10 alkyl .38.The compound of claim 37, wherein Q is –C2 alkyl-C (O) -*or C3 alkyl.39.The compound of claim 34, wherein m is 0-10, 18 or 28.40.The compound of claim 1, wherein L is wherein p is 0-10, 18 or 28, and *denotes the site covalently linked to R4.41.The compound of claim 19, wherein L has formula II (c) .42.The compound of claim 41, wherein G is absent.43.The compound of claim 41, wherein G is -NH-alkyl-NH-or -NH-alkyl-C (O) -.44.The compound of claim 43, wherein G is -NH-C1-C6 alkyl-NH-or -NH-C1-C6 alkyl-C (O) -.45.The compound of claim 43, wherein G is -NH-C2 alkyl-NH-or -NH-C2 alkyl-C (O) -.46.The compound of claim 41, wherein J is and each of R5 is independently selected from H or alkyl.47.The compound of claim 46, wherein R5 is H.48.The compound of claim 41, wherein each of R6 is independently selected from the group consisting of: -H,  -CH3, -CH- (CH3) 2, -CH2-CH (CH3) 2, -CH (CH3) -CH2-CH3,  -CH2-COOH, -CH2-CONH2, - (CH2) 2-COOH, - (CH2) 4-NH2, - (CH2) 2-CONH2, - (CH2) 2-S-CH3, -CH2-OH, -CH (CH3) -OH, -CH2-SH, and 49.The compound of claim 48, wherein each of R6 is independently selected from -H,  50.The compound of claim 41, wherein n is 2 or 3.51.The compound of claim 41, wherein K is -NH-alkyl-*, or -C (O) -alkyl-*.52.The compound of claim 51, wherein K is -NH-C1-C6 alkyl-*, or -C (O) -C1-C6 alkyl-*.53.The compound of claim 51, wherein K is -NH-C3 alkyl-*, or -C (O) -C3 alkyl-*.54.The compound of claim 1, wherein L is selected from the group consisting of: wherein *denotes the site covalently linked to R4.55.The compound of any one of the preceding claims, wherein A comprises a chelating agent, wherein the chelating agent is selected from bis (carboxymethyl) -1, 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6.2] hexadecane (CBTE2a) , cyclohexyl-1, 2-diaminetetraacetic acid (CDTA) , 4- (1, 4.8, 11-tetraazacyclotetradec-1-yl) -methylbenzoic add (CPTA) , N’- (5- [acetyl (hydroxy) amino] pentyl] -N- [5- [ [4- [5-aminopentyl- (hydroxy) amino] -4-oxobutanoyl] amino] pentyl] -N-hydroxybutandiamide (DFO) , 4, 11-bis (carboxymethyl) -1 , 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6, 2] hexadecane (DO2A) , 1, 4, 7, 10-tetracyclododecan-N, N’, N", N "’-tetraacetic acid (DOTA) , alfa- (2-carboxyethyl) -1 , 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7, 10-tetraacetic acid (DOTAGA) , 1, 4, 7, 10-tetraaxacyclododecane N, Ν ’, N”, N ”’-1, 4, 7, 10-tetra (methylene) phosphonic acid (DOTMP) , N, N’-dipyridoxylethylendiamine-N, N'-diacetate-5, 5'-bis (phosphat) (DPDP) , diethylene triamine Ν, Ν ’, Ν ”-penta (methylene) phosphonic acid (DTMP) , diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) , ethylenediamine-N, N'-tetraacetic acid (EDTA) , ethyleneglycol-O, O-bis (2-aminoethyl) -N, N, Ν ’, N ’-tetraacetic acid (EGTA) , N, N-bis (hydroxybenzyl) -ethylenediamine-N, N’-diacetic acid (HBED) , hydroxyethyldiaminetriacetic acid (HEDTA) , 1 - (p-nitrobenzyl) -l , 4, 7, 10-tetraazacyclodecan-4, 7, 10-triacetate (HP-DOA3) , 6-hydrazinyl-N-methylpyridine-3-carboxamide (HYNIC) , tetra 3-hydroxy-N-methyl-2-pyridinone chelators (4- ( (4- (3- (bis (2- (3-hydroxy-1-methyl-2-oxo-1, 2-dihydropyridine-4-carboxamido) ethyl) amino) -2- ( (bis (2- (3-hydroxy-1-methyl-2-oxo-1, 2-dihydropyridine-4-carboxamido) ethyl) amino) methyl) propyl) phenyl) amino) -4-oxobutanoic acid) , abbreviated as Me-3, 2-HOPO, 1 , 4, 7-triazacyclononan-1 -succinic acid-4, 7-diacetic acid (NODASA) , 1- (1-carboxy-3-carboxypropyl) -4, 7- (carbooxy) -1, 4, 7-triazacyclononane (NODAGA) , 1 , 4, 7-triazacyclononanetriacetic acid (NOTA) , 4, 11-bis (carboxymethyl) -1, 4, 8, 11-tetraazabicyclo [6.6.2] hexadecane (TE2A) . 1, 4, 8, 11 -tetraazacyclododecane-1 , 4, 8, 11-tetraacetic acid (TETA) , tris {hydroxypyridinone) (THP) , terpyridin-bis (methyleneamintetraacetic acid (TMT) , 1, 4, 7-triazacyclononane-1 , 4, 7-tris [methylene (2-carboxyethyl) phosphinic acid] (TRAP) , 1, 4, 7, 10-tetraazacyclotridecan-N, N', N", N”’-tetraacetic acid (TRITA) , 3- [ [4, 7-bis [ [2-carboxyethyl (hydroxy) phosphoryl] methyl] -1, 4, 7-triazonan-1-yl] methyl-hydroxy-phosphoryl] propanoic acid, triethylenetetraaminehexaacetic acid (TTHA) , and 1, 4-bis (carboxymethyl) -6- [bis (carboxymethyl) ] amino-6-methylperhydro-1, 4-diazepine (AAZTA) .56.The compound of any one of claims 1-54, wherein A comprises a chelating agent, wherein the chelating agent is selected from: 57.The compound of claim 56, wherein the chelating agent is selected from the group consisting of: 58.The compound of any one of the preceding claims, having a formula selected from the group consisting of: 59.The compound of any one of the preceding claims, wherein A comprises a radioactive moiety, wherein the radioactive moiety comprises a radioisotope, a chelate of a radioisotope with a chelating agent, a fluorescent group, or combinations thereof.60.The compound of claim 59, wherein the radioactive moiety is selected from: , wherein M is a radioisotope.61.The compound of claim 59, wherein the radioactive moiety comprises a radioisotope selected from a metallic or a non-metallic nuclide.62.The compound of claim 59 or 60, wherein the radioisotope is selected from 223Ra, 89Sr, 94mTc, 99mTc, 186Re, 188Re, 203Pb, 67Ga, 68Ga, 47Sc, 111In, 97Ru, 62Cu, 64Cu, 86Y, 88Y, 90Y, 121Sn, 161Tb, 153Sm, 166Ho, 105Rh, 177Lu, 123I, 124I, 125I, 131I, 18F, 211At, 225Ac, 89Sr, 225Ac, 117mSn or 169Er, wherein 18F is preferably bound to chelated Al, Zr, Si, Ga, or In, more preferably 18F is bound to Al chelated by the chelating agent.63.The compound of claim 62, wherein the radioisotope is selected from 68Ga, 177Lu, 225Ac, 18F-Al or 64Cu.64.The compound of any one of the preceding claims, having a formula selected from the group consisting of: 65.The compound of claim 1, wherein A is a group consisting of a radioisotope covalently attached to a moiety with any of the following structures: wherein W is independently selected from N, S, O or CH.66.The compound of claim 59, wherein A comprises a fluorescent group selected from a xanthene dye, acridine dye, oxazine dye, cyanine dye, styryl dye, coumarin dye, porphyrin dye, fluorescent metal-ligand-complex, fluorescent protein, nanocrystals, perylene dye, boron-dipyrromethene dye and phthalocyanine dye.67.The compound of any one of the preceding claims, wherein A comprises a cytotoxic and / or cytostatic agent, or an immunomodulator agent.68.The compound of claim 67, wherein the cytotoxic and / or cytostatic agent is a chemotherapeutic agent selected from the group consisting of topoisomerase inhibitors, alkylating agents, antimetabolites, antibiotics, mitotic disrupters, DNA intercalating agents, DNA synthesis inhibitors, DNA-RNA transcription regulator, enzyme inhibitors, gene regulators, hormone response modifiers, hypoxia-selective cytotoxins, epidermal growth factor inhibitors, anti-vascular agents and a combination of two or more thereof.69.The compound of claim 67, wherein the immunomodulator agent is selected from a ligand of CD3, CD25, TLRs, STING, 4-1BBL, 4-1BB, PD-1, mTOR, PDL-1 or NKG-2D IMiDs, wherein the ligand is an agonist and / or antagonist.70.A compound having Formula (Ia) or Formula (Ib) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof, whereinR1 is selected from the group consisting of CN, H, B (OH) 2, -C=C-C (O) -aryl, -C=C-S (O) 2-aryl, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2, 5-tetrazolyl and CORa;each of R2 and R3 is independently H or halogen;R4 is selected from the group consisting of O, NRb, S, S=O, S (=O) 2 and CH2;L is absent or is a linker;A is selected from the group consisting of radioactive moiety, chelating agent, fluorescent dye, a contrast agent, a cytotoxic and / or cytostatic agent, an immunomodulator agent and combinations thereof;Ra is selected from the group consisting of H, hydroxyl, amino, alkyl, alkenyl, haloalkyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc; andRb is selected from the group consisting of H, -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl, alkenyl, alkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, cycloalkyl, heterocyclyl, heteroalknyl cycloalkenyl, cycloheteroalkenyl, aryl, and aralkyl, wherein each of -C (O) H, -C (O) CH3, alkyl and heteroalkyl is optionally substituted with one or more Rc; andeach of Rc is independently selected from halogen, hydroxyl, oxo, amino, cyano, nitro, alkoxyl or alkyl.71.The compound of claim 70, wherein R1 is defined as any one of claims 2-3.72.The compound of claim 70, wherein R2 and R3 are defined as any of claims 4-8.73.The compound of claim 70, wherein R4 is defined as any of claims 14-16.74.The compound of claim 70, wherein L is defined as any of claims 19-54.75.The compound of claim 70, wherein A is defined as any of claims 55-57, 59-63 and 65-69.76.A composition comprising the compound of any one of claims 1-75, and a carrier.77.A kit comprising the compound of any one of claims 1-75 or the composition of claim 76.78.A method for diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) in a subject, comprising administering an effective amount of the compound of any one of claims 1-75, the composition of claim 76, or the kit of claim 77 to the subject.79.The method of claim 78, wherein the disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) is selected from the group consisting of cancer, inflammation, atherosclerosis, fibrosis, tissue remodeling, keloid disorder, fracture and heart ligation.80.The method of claim 79, wherein the cancer is selected from the group consisting of breast cancer, pancreatic cancer, small intestine cancer, colon cancer, rectal cancer, lung cancer, head and neck cancer, ovarian cancer, hepatocellular carcinoma, esophageal cancer, hypopharynx cancer, nasopharynx cancer, larynx cancer, myeloma cells, bladder cancer, cholangiocellular carcinoma, clear cell renal carcinoma, neuroendocrine tumor, oncogenic osteomalacia, sarcoma, CUP (carcinoma of unknown primary) , thymus carcinoma, desmoid tumors, glioma, astrocytoma, cervix carcinoma and prostate cancer.81.The method of claim 79, wherein the fibrosis is selected from the group consisting of pulmonary fibrosis, liver fibrosis, heart fibrosis, kidney fibrosis, mediastinal fibrosis, retroperitoneal cavity fibrosis, bone marrow fibrosis, skin fibrosis, and scleroderma.82.Use of the compound of any one of claims 1-75, the composition of claim 76, or the kit of claim 77 in the manufacture of a diagnostic reagent or medicament for diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) in a subject.83.The compound of any one of claims 1-75, the composition of claim 76, or the kit of claim 77, for use in diagnosing or treating a disease characterized by overexpression of fibroblast activation protein (FAP) in a subject.84.A compound having Formula (III) : or a pharmaceutically acceptable stereoisomer, tautomer, hydrate, solvate, salt or prodrug thereof, whereineach of X, Y and Z is independently selected from the group consisting of CR7, C=O or N, under the proviso that at least one of X, Y and Z is N;R1 is selected from the group consisting of CN, H, B (OH) 2, -C=C-C (O) -aryl, -C=C-S (O) 2-aryl, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2, 5-tetrazolyl and CORa;each of R2 and R3 is independently H or halogen, under the proviso that at least one of R2 and R3 is halogen;R7 is H, hydroxyl, amino, halogen, alkyl, alkoxyl, alkenyl, heteroalkyl or heteroalkenyl;Ra is selected from the group consisting of H, hydroxyl, amino, alkyl, alkenyl, haloalkyl, saturated or partially unsaturated cycloalkyl, saturated or partially unsaturated heterocyclyl, aryl and heteroaryl, each of which can be further substituted with one or more Rc; andeach of Rc is independently selected from halogen, hydroxyl, oxo, amino, cyano , nitro, alkoxyl or alkyl.85.The compound of claim 84, wherein R1 is CN.86.The compound of any one of claims 84-85, wherein the C atom to which R1 is directly bound is in S-configuration.87.The compound of any one of claims 84-86, wherein both of R2 and R3 are halogen.88.The compound of claim 87, wherein both of R2 and R3 are F.89.The compound of any one of claims 84-88, wherein two of X, Y and Z is N.90.The compound of claim 89, wherein X is N, Y is CR7, and Z is N.91.The compound of any one of claims 84-88, wherein only one of X, Y and Z is N.92.The compound of claim 91, whereina) X is N, Y is CR7, and Z is CR7;b) X is CR7, Y is CR7, and Z is N;c) X is CR7, Y is N, and Z is CR7; ord) X is CR7, Y is NH, and Z is C=O;wherein each of R7 is independently selected from H, hydroxyl or alkoxyl.93.The compound of claim 92, wherein both of X and Y are CR7, and Z is N.94.The compound of claim 84, having a formula selected from the group consisting of:

Images