Drug conjugates of imidazoquinoline amine derivatives, compositions and methods thereof

Abstract

Provided herein are novel drug-linker conjugates and antibody-drug conjugates of imidazoquinoline amine derivatives, which have agonistic activities towards Toll-like receptors (TLRs), in particular TLR7 and / or TLR8, as well as pharmaceutical compositions and methods of treatment thereof for certain diseases or conditions mediated by or associated with TLR7 and / or TLR8 (e. g., graft rejection, autoimmunity, inflammation allergy, asthma, infection, sepsis, cancer and immunodeficiency).

Description

DRUG CONJUGATES OF IMIDAZOQUINOLINE AMINE DERIVATIVES, COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF

[0001] Priority Claims and Related Applications

[0002] This application claims the benefit of priority to PCT Int’l Application No. PCT / CN2023 / 108272, filed July 20, 2023, the entire content of which is incorporated herein by reference for all purposes.Technical Field of the Invention

[0003] The invention generally relates to novel compounds and therapeutic uses thereof. More particularly, the invention provides novel drug-linker conjugates and antibody-drug conjugates of imidazoquinoline amine derivatives, which have agonistic activities towards Toll-like receptors (TLRs) , in particular TLR7 and / or TLR8, as well as pharmaceutical compositions and methods of treatment thereof for certain diseases or conditions mediated by or associated with TLR7 and / or TLR8 (e.g., graft rejection, autoimmunity, inflammation allergy, asthma, infection, sepsis, cancer and immunodeficiency) .Background of the Invention

[0004] Toll-like receptors (TLRs) are vital elements of the mammalian immune system that function by recognizing pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) , bridging innate and adaptive immunity (Iwasaki, et al. "Control of adaptive immunity by the innate immune system" Nat Immunol 2015, 16: 343-353; O'Neill, et al. "The history of Toll-like receptors -redefining innate immunity" Nat Rev Immunol 2013, 13: 453-460. ) TLRs have a central role in regulating innate immunity and in the last decade studies have begun to reveal their significance as prominent therapeutic target for the treatment of infectious diseases, cancer, rheumatoid arthritis and allergies, with many TLR agonists currently in clinical trials or approved as immunostimulants. (Kaczanowska, et al. "TLR agonists: our best frenemy in cancer immunotherapy" J Leukoc Biol 2013, 93: 847-863. ) Innate immunity begins with the recognition of PAMPs through TLRs by antigen presenting cells (APCs) , mainly dendritic cells (DCs) in the peripheral tissues. (Iwasaki, et al. "Toll-like receptor control of the adaptive immune responses"  Nat Immunol 2004, 5: 987-995. ) Binding of TLR ligands on dendritic cells initiates a downstream signaling cascade that initiates DC maturation. This process is characterized by the production of proinflammatory cytokines (TNF-α, IL-6, and IL-12) , upregulation of costimulatory molecules (CD40, CD80, and CD86) , increased antigen-presenting capacity, and DC migration from the peripheral tissues to draining lymph nodes (4) . There, antigen presenting DCs stimulate naive T-cells which begins the adaptive immune response. (Guo, et al. "The Novel Toll-Like Receptor 2 Agonist SUP3 Enhances Antigen Presentation and T Cell Activation by Dendritic Cells" Front Immunol 2017, 8: 158; Silva-Cardoso, et al. "CXCL4 Exposure Potentiates TLR-Driven Polarization of Human Monocyte-Derived Dendritic Cells and Increases Stimulation of T Cells" J Immunol 2017, 199: 253-262. ) B-cells also express TLRs and present antigen upon activation, resulting in antibody production specific for the encountered antigen. (Pone, et al. "B cell TLRs and induction of immunoglobulin class-switch DNA recombination" Front Biosci (Landmark Ed) 2012, 17: 2594-2615. ) Since T-and B-cell maturation is influenced by TLR, costimulatory, and cytokine signaling, TLR agonists play an important role in establishing the type of cellular and humoral immune response that is generated. (Bessa, et al. "T cell-dependent and -independent IgA responses: role of TLR signalling" Immunol Invest 2010, 39: 407-428; Booth, et al. "Modulation of B cell responses by Toll-like receptors" Cell Tissue Res 2011, 343: 131-140. ) Harnessing the powerful immunostimulatory properties of TLR agonists has great potential in the development of active immunotherapy against cancer.

[0005] Antibody-drug conjugates (ADCs) , a fast-growing class of drugs designed as targeted therapy with long plasma half-lives, represent a promising therapeutic modality in cancer treatment. To date, thirteen ADCs have received market approval by the US FDA.

[0006] The therapeutics and methods currently available for the management of diseases or disorders associated with TLRs 7 and 8 are inadequate. There remains an urgent and ongoing need for novel and improved therapeutics to effectively treat such diseases and conditions.Summary of the Invention

[0007] The invention is based in part on the novel drug-linker conjugates and ADCs of imidazoquinoline amine derivatives, which are agonists of TLRs, in particular TLR7 and / or TLR8, pharmaceutical compositions thereof, and methods of treatment, reduction or prevention of certain diseases or conditions mediated by or associated with TLR7 and / or TLR8, e.g., graft  rejection, autoimmunity, inflammation allergy, asthma, infection, sepsis, cancer and immunodeficiency, and related diseases and conditions.

[0008] In one aspect, the invention generally relates to a drug-linker conjugate having the structural formula (I) :

[0009] D-L'

[0010] (I)

[0011] wherein,

[0012] L’ is a group that comprises a functional or reactive group; and

[0013] D is a drug moiety having the structure of

[0014] wherein

[0015] R1 is a C1-C8 alkyl group;

[0016] R2 is H or P (=O) (CH3) 2;

[0017] n is an integer selected from 1 to 8;

[0018] X is a single bond or a linking moiety; and

[0019] or a pharmaceutically acceptable form or an isotope derivative thereof.

[0020] In yet another aspect, the invention generally relates to an antibody-drug conjugate comprises a drug moiety having the structure of

[0021] wherein

[0022] R1 is a C1-C8 alkyl group;

[0023] R2 is H or P (=O) (CH3) 2;

[0024] n is an integer selected from 1 to 8;

[0025] X is a single bond or a linking moiety; and

[0026] or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0027] In yet another aspect, the invention generally relates to an antibody-drug conjugate having the structural formula (II) :

[0028] D-L-Ab

[0029] (II)

[0030] wherein,

[0031] Ab is an antigen binding moiety;

[0032] L is a linker; and

[0033] D is a drug moiety having the structure of

[0034] wherein

[0035] R1 is a C1-C8 alkyl group;

[0036] R2 is H or P (=O) (CH3) 2;

[0037] n is an integer selected from 1 to 8;

[0038] X is a single bond or a linking moiety; and

[0039] or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0040] In yet another aspect, the invention generally relates to a pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate disclosed herein.

[0041] In yet another aspect, the invention generally relates to a unit dosage form comprising a pharmaceutical composition of the invention.

[0042] In yet another aspect, the invention generally relates to a method for treating, reducing, or preventing a disease or disorder, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate of the invention.

[0043] In yet another aspect, the invention generally relates to a method for modulating immune response, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate of the invention.

[0044] In yet another aspect, the invention generally relates to a method for modulating TLR7-and / or TLR8-mediated signaling, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate of the invention.

[0045] In yet another aspect, the invention generally relates to a method for of treating or reducing a condition or disorder treatable by modulation of TLR7-and / or TLR8-mediated cellular activities, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate of the invention.

[0046] In yet another aspect, the invention generally relates to use of an antibody-drug conjugate of the invention for treating or reducing a disease or disorder.

[0047] Definitions

[0048] Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. General principles of organic chemistry, as well as specific functional moieties and reactivity, are described in “Organic Chemistry” , Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, and “March’s Advanced Organic Chemistry” , 5th Ed.: Smith, M.B. and March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, the entire contents of which are hereby incorporated by reference.

[0049] As used herein, “at least” a specific value is understood to be that value and all values greater than that value.

[0050] The term “comprising” , when used to define compositions and methods, is intended to mean that the compositions and methods include the recited elements, but do not exclude other elements. The term “consisting essentially of” , when used to define compositions and methods, shall mean that the compositions and methods include the recited elements and exclude other elements of any essential significance to the compositions and methods. For example, “consisting essentially of” refers to administration of the pharmacologically active agents expressly recited and excludes pharmacologically active agents not expressly recited. The term consisting essentially of does not exclude pharmacologically inactive or inert agents, e.g., pharmaceutically acceptable excipients, carriers or diluents. The term “consisting of” , when used  to define compositions and methods, shall mean excluding trace elements of other ingredients and substantial method steps. Embodiments defined by each of these transition terms are within the scope of this invention.

[0051] Certain compounds of the present invention may exist in particular geometric or stereoisomeric forms. The present invention contemplates all such compounds, including cis-and trans-isomers, R-and S-enantiomers, diastereomers, (D) -isomers, (L) -isomers, the racemic mixtures thereof, and other mixtures thereof, as falling within the scope of the invention. Additional asymmetric carbon atoms may be present in a substituent such as an alkyl group. All such isomers, as well as mixtures thereof, are intended to be included in this invention.

[0052] Isomeric mixtures containing any of a variety of isomer ratios may be utilized in accordance with the present invention. For example, where only two isomers are combined, mixtures containing 50: 50, 60: 40, 70: 30, 80: 20, 90: 10, 95: 5, 96: 4, 97: 3, 98: 2, 99: 1, or 100: 0 isomer ratios are contemplated by the present invention. Those of ordinary skill in the art will readily appreciate that analogous ratios are contemplated for more complex isomer mixtures.

[0053] If, for instance, a particular enantiomer of a compound of the present invention is desired, it may be prepared by asymmetric synthesis, or by derivation with a chiral auxiliary, where the resulting diastereomeric mixture is separated and the auxiliary group cleaved to provide the pure desired enantiomers. Alternatively, where the molecule contains a basic functional group, such as amino, or an acidic functional group, such as carboxyl, diastereomeric salts are formed with an appropriate optically-active acid or base, followed by resolution of the diastereomers thus formed by fractional crystallization or chromatographic methods well known in the art, and subsequent recovery of the pure enantiomers.

[0054] Solvates and polymorphs of the compounds of the invention are also contemplated herein. Solvates of the compounds of the present invention include, for example, hydrates.

[0055] Definitions of specific functional groups and chemical terms are described in more detail below. When a range of values is listed, it is intended to encompass each value and sub-range within the range. For example, "C1-6 alkyl" is intended to encompass, C1, C2, C3, C4, C5, C6, C1-6, C1-5, C1-4, C1-3, C1-2, C2-6, C2-5, C2-4, C2-3, C3-6, C3-5, C3-4, C4-6, C4-5, and C5-6 alkyl.

[0056] As used herein, the term "alkyl" refers to a straight, branched or cyclic hydrocarbon radical consisting solely of carbon and hydrogen atoms, containing no unsaturation, having from one to ten carbon atoms (e.g., C1-10 alkyl) . Whenever it appears herein, a numerical range such as  "1 to 10" refers to each integer in the given range; e.g., "1 to 10 carbon atoms" means that the alkyl group can consist of 1 carbon atom, 2 carbon atoms, 3 carbon atoms, etc., up to and including 10 carbon atoms, although the present definition also covers the occurrence of the term "alkyl" where no numerical range is designated. In some embodiments, “alkyl” can be a C1-6 alkyl group. In some embodiments, alkyl groups have 1 to 10, 1 to 8, 1 to 6, or 1 to 3 carbon atoms.

[0057] Representative saturated straight chain alkyls include, but are not limited to, -methyl, -ethyl, -n-propyl, -n-butyl, -n-pentyl, and -n-hexyl; while saturated branched alkyls include, but are not limited to, -isopropyl, -sec-butyl, -isobutyl, -tert-butyl, -isopentyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhexyl, 5-methylhexyl, 2, 3-dimethylbutyl, and the like. The alkyl is attached to the parent molecule by a single bond.

[0058] Unless stated otherwise in the specification, an alkyl group is optionally substituted by one or more of substituents which independently include: acyl, alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylaryl, cycloalkyl, aralkyl, aryl, aryloxy, amino, amido, amidino, imino, azide, carbonate, carbamate, carbonyl, heteroalkyl, heteroaryl, heteroarylalkyl, heterocycloalkyl, hydroxy, cyano, halo (F, Cl, Br, I) , haloalkoxy, haloalkyl, ester, ether, mercapto, thio, alkylthio, arylthio, thiocarbonyl, nitro, oxo, phosphate, phosphonate, phosphinate, silyl, sulfinyl, sulfonyl, sulfonamidyl, sulfoxyl, sulfonate, urea, -Si (Ra) 3 , -ORa, -SRa, -OC (O) -Ra, -N (Ra) 2, -C (O) Ra, -C (O) ORa, -OC (O) N (Ra) 2, -C (O) N (Ra) 2, -N (Ra) C (O) ORa, -N (Ra) C (O) Ra, -N (Ra) C (O) N (Ra) 2, -N (Ra) C (NRa) N (Ra) 2, -N (Ra) S (O) tN (Ra) 2 (where t is 1 or 2) , -P (=O) (Ra) (Ra) , or -O-P (=O) (ORa) 2 where each Ra is independently hydrogen, alkyl, haloalkyl, carbocyclyl, carbocyclylalkyl, aryl, aralkyl, heterocycloalkyl, heterocycloalkylalkyl, heteroaryl or heteroarylalkyl, and each of these moieties can be optionally substituted as defined herein. In a non-limiting embodiment, a substituted alkyl can be selected from fluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, 2-fluoroethyl, 3-fluoropropyl, hydroxymethyl, 2-hydroxyethyl, 3-hydroxypropyl, benzyl, and phenethyl.

[0059] As used herein, the term “heteroatom” means one or more of oxygen, sulfur, nitrogen, or phosphorus (including, any oxidized form of nitrogen, sulfur, or phosphorus; the quaternized form of any basic nitrogen or; a substitutable nitrogen of a heterocyclic ring, for example N (as in 3, 4-dihydro-2H-pyrrolyl) , NH (as in pyrrolidinyl) or NR+ (as in N-substituted pyrrolidinyl) ) .

[0060] As used herein, the term “halogen” refers to fluorine (F) , chlorine (Cl) , bromine (Br) , or iodine (I) . As used herein, the term "halide" or "halo" , means fluoro, chloro, bromo or iodo. The terms "haloalkyl, " "haloalkenyl, " "haloalkynyl" and "haloalkoxy" include alkyl, alkenyl, alkynyl and alkoxy structures that are substituted with one or more halo groups or with combinations thereof. For example, the terms "fluoroalkyl" and "fluoroalkoxy" include haloalkyl and haloalkoxy groups, respectively, in which the halo is fluorine, such as, but not limited to, trifluoromethyl, difluoromethyl, 2, 2, 2-trifluoroethyl, 1-fluoromethyl-2-fluoroethyl, and the like. Each of the alkyl, alkenyl, alkynyl and alkoxy groups are as defined herein and can be optionally further substituted as defined herein.

[0061] As used herein, the terms "aromatic" or "aryl" refer to a radical with 6 to 14 ring atoms (e.g., C6-14 aromatic or C6-14 aryl) that has at least one ring having a conjugated pi electron system which is carbocyclic (e.g., phenyl, fluorenyl, and naphthyl) . In some embodiments, the aryl is a C6-10 aryl group. For example, bivalent radicals formed from substituted benzene derivatives and having the free valences at ring atoms are named as substituted phenylene radicals. In other embodiments, bivalent radicals derived from univalent polycyclic hydrocarbon radicals whose names end in"-yl" by removal of one hydrogen atom from the carbon atom with the free valence are named by adding "-idene" to the name of the corresponding univalent radical, e.g., a naphthyl group with two points of attachment is termed naphthylidene. Whenever it appears herein, a numerical range such as "6 to 14 aryl" refers to each integer in the given range; e.g., "6 to 14 ring atoms" means that the aryl group can consist of 6 ring atoms, 7 ring atoms, etc., up to and including 14 ring atoms. The term includes monocyclic or fused-ring polycyclic (i.e., rings which share adjacent pairs of ring atoms) groups. Polycyclic aryl groups include bicycles, tricycles, tetracycles, and the like. In a multi-ring group, only one ring is required to be aromatic, so groups such as indanyl are encompassed by the aryl definition. Non-limiting examples of aryl groups include phenyl, phenalenyl, naphthalenyl, tetrahydronaphthyl, phenanthrenyl, anthracenyl, fluorenyl, indolyl, indanyl, and the like. Unless stated otherwise in the specification, an aryl moiety can be optionally substituted by one or more substituents which independently include: acyl, alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylaryl, cycloalkyl, aralkyl, aryl, aryloxy, amino, amido, amidino, imino, azide, carbonate, carbamate, carbonyl, heteroalkyl, heteroaryl, heteroarylalkyl, heterocycloalkyl, hydroxy, cyano, halo, haloalkoxy, haloalkyl, ester, ether, mercapto, thio, alkylthio, arylthio, thiocarbonyl, nitro, oxo, phosphate, phosphonate,  phosphinate, silyl, sulfinyl, sulfonyl, sulfonamidyl, sulfoxyl, sulfonate, urea, -Si (Ra) 3 , -ORa, -SRa, -OC (O) -Ra, -N (Ra) 2, -C (O) Ra, -C (O) ORa, -OC (O) N (Ra) 2, -C (O) N (Ra) 2, -N (Ra) C (O) ORa, -N (Ra) C (O) Ra, -N (Ra) C (O) N (Ra) 2, -N (Ra) C (NRa) N (Ra) 2, -N (Ra) S (O) tN (Ra) 2 (where t is 1 or 2) , -P (=O) (Ra) (Ra) , or -O-P (=O) (ORa) 2 where each Ra is independently hydrogen, alkyl, haloalkyl, carbocyclyl, carbocyclylalkyl, aryl, aralkyl, heterocycloalkyl, heterocycloalkylalkyl, heteroaryl or heteroarylalkyl, and each of these moieties can be optionally substituted as defined herein.

[0062] As used herein, the terms "TLR7 and / or TLR8 ligand, " "ligand for TLR7 and / or TLR8, " and "TLR7 and / or signaling agonist" refer to a molecule, other than a compound disclosed herein, that interacts directly or indirectly with TLR7 and / or TLR8 through a TLR7 and / or TLR8 domain other than a TLR8 domain, and induces TLR7-and / or TLR8-mediated signaling. In certain embodiments, a TLR7 and / or TLR8 ligand is a natural ligand, i.e., a TLR7 and / or TLR8 ligand that is found in nature. In certain embodiments, a TLR7 and / or TLR8 ligand refers to a molecule other than a natural ligand of TLR7 and / or TLR8, e.g., a molecule prepared by human activity.

[0063] As used herein, the term “modulator” is defined as a compound that binds to and  / or activates or inhibits the target with measurable affinity, or directly or indirectly affecting the normal regulation of the receptor activity. In certain embodiments, a modulator has an EC50 and / or binding constant of less about 50 μM, less than about 1 μM, less than about 500 nM, less than about 100 nM, or less than about 10 nM.

[0064] As used herein, the term "agonist" refers to a compound that, in combination with a receptor (e.g., a TLR) , can produce a cellular response. An agonist may be a ligand that directly binds to the receptor. Alternatively, an agonist may combine with a receptor indirectly by, for example, (a) forming a complex with another molecule that directly binds to the receptor, or (b) otherwise resulting in the modification of another compound so that the other compound directly binds to the receptor. An agonist may be referred to as an agonist of a particular TLR (e.g., a TLR7 and / or TLR8 agonist) .

[0065] As used herein, the term "antagonist" refers to a compound that competes with an agonist or inverse agonist for binding to a receptor, thereby blocking the action of an agonist or inverse agonist on the receptor. However, an antagonist has no effect on constitutive receptor activity. More specifically, an antagonist is a compound that inhibits the activity of TLR7 or TLR8 at the TLR7 or TL8S receptor, respectively.

[0066] As used herein, the term "inhibit" refers to any measurable reduction of biological activity. Thus, as used herein, "inhibit" or "inhibition" may be referred to as a percentage of a normal level of activity.

[0067] As used herein, the term “antigen” as used herein is meant any substance that causes the immune system to produce antibodies or specific cell-mediated immune responses against it. A disease associated antigen is any substance that is associated with any disease that causes the immune system to produce antibodies or a specific-cell mediated response against it. An antigen is capable of being recognized by the immune system and / or being capable of inducing a humoral immune response and / or cellular immune response leading to the activation of B-and / or T-lymphocytes. An antigen can have one or more epitopes (B-and / or T-cell epitopes) . An antigen will preferably react, typically in a highly selective manner, with its corresponding antibody or TCR and not with the multitude of other antibodies or TCRs which may be evoked by other antigens. Antigens as used herein may also be mixtures of several individual antigens.

[0068] As used herein, the term “antibody” refers to molecules that are capable of binding an epitope or antigenic determinant. The term is meant to include whole antibodies and antigen-binding fragments thereof. The term encompasses polyclonal, monoclonal, chimeric, Fabs, Fvs, single-chain antibodies and single or multiple immunoglobulin variable chain or CDR domain designs as well as bispecific and multispecific antibodies. Antibodies can be from any animal origin. Preferably, the antibodies are mammalian, e.g., human, murine, rabbit, goat, guinea pig, camel, horse and the like, or other suitable animals. Antibodies may recognize polypeptide or polynucleotide antigens. The term includes active fragments, including for example, an antigen binding fragment of an immunoglobulin, a variable and / or constant region of a heavy chain, a variable and / or constant region of a light chain, a complementarity determining region (cdr) , and a framework region. The terms include polyclonal and monoclonal antibody preparations, as well as preparations including hybrid antibodies, altered antibodies, chimeric antibodies, hybrid antibody molecules, F (ab) 2 and F (ab) fragments; Fv molecules (for example, noncovalent heterodimers) , dimeric and trimeric antibody fragment constructs; minibodies, humanized antibody molecules, and any functional fragments obtained from such molecules, wherein such fragments retain specific binding.

[0069] As used herein, the term “antigen binding fragment” refers to one or more portions of an antibody that retain the ability to specifically interact with, e.g., by binding, steric hindrance, stabilizing / destabilizing, spatial distribution, an epitope of an antigen.

[0070] Examples of binding fragments include, but are not limited to, single-chain Fvs (scFv) , disulfide-linked Fvs (sdFv) , Fab fragments, F (ab') fragments, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL and CH1 domains; a F (ab) 2 fragment, a bivalent fragment comprising two Fab fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region; a Fd fragment consisting of the VH and CH1 domains; a Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody; a dAb fragment (Ward et al. 1989 Nature 341: 544-546, ) , which consists of a VH domain; and an isolated complementarity determining region (CDR) , or other epitope-binding fragments of an antibody.

[0071] Additionally, the two domains of the Fv fragment, VL and VH can be joined using recombinant methods by a synthetic linker that enables them to be made as a single protein chain in which the VL and VH regions pair to form monovalent molecules. (known as single chain Fv ( "scFv" ) ; see, e.g., Bird et al., 1988 Science 242: 423-426; and Huston et al. 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 5879-5883. ) Such single chain antibodies are also intended to be encompassed within the term “antigen binding fragment. ” These antigen binding fragments are obtained using conventional techniques known to those of skill in the art, and the fragments are screened for utility in the same manner as are intact antibodies.

[0072] Antigen binding fragments can also be incorporated into single domain antibodies, maxibodies, minibodies, nanobodies, intrabodies, diabodies, triabodies, tetrabodies, v-NAR and bis-scFv. (See, e.g., Hollinger and Hudson, 2005 Nature Biotechnology 23: 1 126-1136. ) Antigen binding fragments can be grafted into scaffolds based on polypeptides such as fibronectin type III (Fn3) . (See, e.g., U.S. Pat. No. 6,703,199, which describes fibronectin polypeptide monobodies. ) Antigen binding fragments can be incorporated into single chain molecules comprising a pair of tandem Fv segments (VH-CH1-VH-CH1) which, together with complementary light chain polypeptides, form a pair of antigen binding regions. (Zapata et al., 1995 Protein Eng. 8: 1057-1062; U.S. Pat. No. 5,641,870. )

[0073] As used herein, the term “bispecific antibody” or “bispecific” refers to an antibody, typically a monoclonal antibody, having binding specificities for at least two different antigenic epitopes. The epitopes can be from the same antigen or from two different antigens. Methods for  making bispecific antibodies are known in the art. For example, bispecific antibodies can be produced recombinantly using the co-expression of two immunoglobulin heavy chain / light chain pairs. Alternatively, bispecific antibodies can be prepared using chemical linkage. Bispecific antibodies include bispecific antibody fragments. (See, e.g., Milstein et al. 1983 Nature 305: 537-39; Brennan et al. 1985 Science 229: 81; Hollinger et al. 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 6444-48; Gruber et al. 1994 J. Immunol. 152: 5368-74. )

[0074] As used herein, the term “chimeric antibody” or “chimeric” refers to antibodies in which a portion of the heavy and / or light chain is identical with or homologous to corresponding sequences in antibodies derived from a particular species or belonging to a particular antibody class or subclass, while the remainder of the chain (s) is identical with or homologous to corresponding sequences in antibodies derived from another species or belonging to another antibody class or subclass, as well as fragments of such antibodies, so long as they specifically bind the target antigen and / or exhibit the desired biological activity.

[0075] As used herein, the term “human antibody” refers to antibodies having variable regions in which both the framework and CDR regions are derived from sequences of human origin. Furthermore, if the antibody contains a constant region, the constant region also is derived from such human sequences, e.g., human germline sequences, or mutated versions of human germline sequences or antibody containing consensus framework sequences derived from human framework sequences analysis, for example, as described in Knappik et al. 2000 J. Mol. Biol. 296: 57-86) . Human antibodies may include amino acid residues not encoded by human sequences, e.g., mutations introduced by random or site-specific mutagenesis in vitro or by somatic mutation in vivo, or a substitution to promote stability or manufacturing.

[0076] As used herein, the term “humanized antibody” refers to antibodies that contain sequences from non-human (e.g., murine) antibodies as well as human antibodies. Such antibodies are chimeric antibodies which contain minimal sequence derived from non-human immunoglobulin. In general, humanized antibodies comprise substantially all of at least one, and typically two, variable domains, in which all or substantially all of the hypervariable loops correspond to those of a non-human immunoglobulin and all or substantially all of the FR regions are those of a human immunoglobulin sequence. The humanized antibody optionally also comprises at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc) , typically that of a human immunoglobulin. (See e.g., Cabilly U.S. Pat. No. 4,816,567; Queen et al. 1989 Proc. Nat'l Acad.  Sci. USA 86: 10029-10033; ANTIBODY ENGINEERING: A PRACTICAL APPROACH, Oxford University Press 1996. )

[0077] As used herein, the term “monoclonal antibody” , refers to an antibody obtained from a population of substantially homogeneous antibodies, i.e., the individual antibodies comprising the population are identical except for possible naturally occurring mutations that may be present in minor amounts. Monoclonal antibodies are highly specific, being directed against a single antigenic epitope. In contrast, conventional (polyclonal) antibody preparations typically include a multitude of antibodies directed against (or specific for) different epitopes. “Monoclonal” indicates the character of the antibody as being obtained from a substantially homogeneous population of antibodies, and is not to be construed as requiring production of the antibody by any particular method. For example, the monoclonal antibodies to be used in accordance with the present invention may be made by various methods known in the art, including the hybridoma method first described by Kohler et al. 1975 Nature 256: 495, or may be made by recombinant DNA methods (see, e.g., U.S. Pat. No. 4,816,567) . “Monoclonal antibodies” may also be isolated from phage antibody libraries using the techniques described in Clackson et al. 1991 Nature 352: 624-628 and Marks et al. 1991 J. Mol. Biol. 222: 581-597, for example. These monoclonal antibodies will usually bind with at least a Kd of about 1 μM, more usually at least about 300 nM, typically at least about 30 nM, preferably at least about 10 nM.

[0078] As used herein, the term “cleavable” linker refers to a linker or linker component that connects two moieties by covalent connections, but breaks down to sever the covalent connection between the moieties under physiologically relevant conditions. Typically, a cleavable linker is severed in vivo more rapidly in an intracellular environment than when outside a cell, causing release of a payload to preferentially occur inside the targeted cell. Cleavage may be enzymatic or non-enzymatic. A payload is typically released from an antibody without degrading the antibody. Cleavage may leave some portion of a linker or linker component attached to the payload, or it may release the payload without any residual part or component of the linker (i.e., traceless release) .

[0079] As used herein, the term “non-cleavable” linker refers to a linker or linker component that is not especially susceptible to breaking down under physiological conditions, i.e., it is at least as stable as the antibody or antigen binding fragment portion of the immunoconjugate. Such linkers are sometimes referred to as “stable, ” meaning they are sufficiently resistant to  degradation to keep the payload connected to the antigen binding moiety until the antigen binding moiety is itself at least partially degraded. In such a case, the degradation of Ab precedes cleavage of the linker in vivo. Degradation of the antibody portion of an immunoconjugate having a stable or non-cleavable linker may leave some or all of the linker, and one or more amino acid groups from an antibody, attached to the payload or drug moiety that is delivered in vivo.

[0080] As used herein, the terms “disease” , “condition” or “disorder” are used interchangeably herein and refer to a pathological condition, for example, one that can be identified by symptoms or other identifying factors as diverging from a healthy or a normal state. The term “disease” includes disorders, syndromes, conditions, and injuries. Diseases include, but are not limited to, proliferative, inflammatory, immune, metabolic, infectious, and ischemic diseases.

[0081] As used herein, the term “in need of” a treatment refers to a subject that would benefit biologically, medically or in quality of life from such a treatment.

[0082] As used herein, the term “effective amount” of an active agent refers to an amount sufficient to elicit the desired biological response. As will be appreciated by those of ordinary skill in this art, the effective amount of a compound of the invention may vary depending on such factors as the desired biological endpoint, the pharmacokinetics of the compound, the disease being treated, the mode of administration, and the patient.

[0083] As used herein, the terms “treatment” or “treating” a disease or disorder refers to a method of reducing, delaying or ameliorating such a condition before or after it has occurred. Treatment may be directed at one or more effects or symptoms of a disease and / or the underlying pathology. The treatment can be any reduction and can be, but is not limited to, the complete ablation of the disease or the symptoms of the disease. As compared with an equivalent untreated control, such reduction or degree of prevention is at least 5%, 10%, 20%, 40%, 50%, 60%, 80%, 90%, 95%, or 100%as measured by any standard technique.

[0084] As used herein, the terms “prevent” , “preventing” , or “prevention” refer to a method for precluding, delaying, averting, or stopping the onset, incidence, severity, or recurrence of a disease or condition. For example, a method is considered to be a prevention if there is a reduction or delay in onset, incidence, severity, or recurrence of a disease or condition or one or more symptoms thereof in a subject susceptible to the disease or condition as compared to a  subject not receiving the method. The disclosed method is also considered to be a prevention if there is a reduction or delay in onset, incidence, severity, or recurrence of osteoporosis or one or more symptoms of a disease or condition in a subject susceptible to the disease or condition after receiving the method as compared to the subject's progression prior to receiving treatment. Thus, the reduction or delay in onset, incidence, severity, or recurrence of osteoporosis can be about a 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100%, or any amount of reduction in between.

[0085] As used herein, a "pharmaceutically acceptable form" of a disclosed compound includes, but is not limited to, pharmaceutically acceptable salts, esters, hydrates, solvates, polymorphs, isomers, prodrugs, and isotopically labeled derivatives thereof. In one embodiment, a "pharmaceutically acceptable form" includes, but is not limited to, pharmaceutically acceptable salts, esters, prodrugs and isotopically labeled derivatives thereof. In some embodiments, a "pharmaceutically acceptable form" includes, but is not limited to, pharmaceutically acceptable isomers and stereoisomers, prodrugs and isotopically labeled derivatives thereof.

[0086] In certain embodiments, the pharmaceutically acceptable form is a pharmaceutically acceptable salt. As used herein, the term "pharmaceutically acceptable salt" refers to those salts which are, within the scope of sound medical judgment, suitable for use in contact with the tissues of subjects without undue toxicity, irritation, allergic response and the like, and are commensurate with a reasonable benefit / risk ratio. Pharmaceutically acceptable salts are well known in the art. For example, Berge et al. describes pharmaceutically acceptable salts in detail in J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66: 1-19. Pharmaceutically acceptable salts of the compounds provided herein include those derived from suitable inorganic and organic acids and bases. Examples of pharmaceutically acceptable, nontoxic acid addition salts are salts of an amino group formed with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, sulfuric acid and perchioric acid or with organic acids such as acetic acid, oxalic acid, maleic acid, tartaric acid, citric acid, succinic acid or malonic acid or by using other methods used in the art such as ion exchange. Other pharmaceutically acceptable salts include adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, besylate, benzoate, bisulfate, borate, butyrate, camphorate, camphorsulfonate, citrate, cyclopentanepropionate, digluconate, dodecylsulfate, ethanesulfonate, formate, fumarate, glucoheptonate, glycerophosphate, gluconate, hemisulfate, heptanoate, hexanoate, hydroiodide, 2-hydroxy-ethanesulfonate, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate, methanesulfonate, 2- naphthalenesulfonate, nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, pamoate, pectinate, persulfate, 3-phenylpropionate, phosphate, picrate, pivalate, propionate, stearate, succinate, sulfate, tartrate, thiocyanate, p-toluenesulfonate, undecanoate, valerate salts, and the like. In some embodiments, organic acids from which salts can be derived include, for example, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, oxalic acid, lactic acid, trifluoracetic acid, maleic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, salicylic acid, and the like.

[0087] The salts can be prepared in situ during the isolation and purification of the disclosed compounds, or separately, such as by reacting the free base or free acid of a parent compound with a suitable base or acid, respectively. Pharmaceutically acceptable salts derived from appropriate bases include alkali metal, alkaline earth metal, ammonium and N+ (C1-4alkyl) 4 salts. Representative alkali or alkaline earth metal salts include sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, iron, zinc, copper, manganese, aluminum, and the like. Further pharmaceutically acceptable salts include, when appropriate, nontoxic ammonium, quaternary ammonium, and amine cations formed using counterions such as halide, hydroxide, carboxylate, sulfate, phosphate, nitrate, lower alkyl sulfonate and aryl sulfonate. Organic bases from which salts can be derived include, for example, primary, secondary, and tertiary amines, substituted amines, including naturally occurring substituted amines, cyclic amines, basic ion exchange resins, and the like, such as isopropylamine, trimethylamine, diethylamine, triethylamine, tripropylamine, and ethanolamine. In some embodiments, the pharmaceutically acceptable base addition salt can be chosen from ammonium, potassium, sodium, calcium, and magnesium salts.

[0088] In certain embodiments, the pharmaceutically acceptable form is a "solvate" (e.g., a hydrate) . As used herein, the term "solvate" refers to compounds that further include a stoichiometric or non-stoichiometric amount of solvent bound by non-covalent intermolecular forces. The solvate can be of a disclosed compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Where the solvent is water, the solvate is a "hydrate" . Pharmaceutically acceptable solvates and hydrates are complexes that, for example, can include 1 to about 100, or 1 to about 10, or 1 to about 2, about 3 or about 4, solvent or water molecules. It will be understood that the term "compound" as used herein encompasses the compound and solvates of the compound, as well as mixtures thereof.

[0089] In certain embodiments, the pharmaceutically acceptable form is a prodrug. As used herein, the term "prodrug" (or “pro-drug” ) refers to compounds that are transformed in vivo to yield a disclosed compound or a pharmaceutically acceptable form of the compound. A prodrug can be inactive when administered to a subject, but is converted in vivo to an active compound, for example, by hydrolysis (e.g., hydrolysis in blood) . In certain cases, a prodrug has improved physical and / or delivery properties over the parent compound. Prodrugs can increase the bioavailability of the compound when administered to a subject (e.g., by permitting enhanced absorption into the blood following oral administration) or which enhance delivery to a biological compartment of interest (e.g., the brain or lymphatic system) relative to the parent compound. Exemplary prodrugs include derivatives of a disclosed compound with enhanced aqueous solubility or active transport through the gut membrane, relative to the parent compound.

[0090] The prodrug compound often offers advantages of solubility, tissue compatibility or delayed release in a mammalian organism (see, e.g., Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985) , pp. 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam) . A discussion of prodrugs is provided in Higuchi, T., et al., "Pro-drugs as Novel Delivery Systems, " A.C.S. Symposium Series, Vol. 14, and in Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, both of which are incorporated in full by reference herein. Exemplary advantages of a prodrug can include, but are not limited to, its physical properties, such as enhanced water solubility for parenteral administration at physiological pH compared to the parent compound, or it can enhance absorption from the digestive tract, or it can enhance drug stability for long-term storage.

[0091] Prodrugs commonly known in the art include well-known acid derivatives, such as, for example, esters prepared by reaction of the parent acids with a suitable alcohol, amides prepared by reaction of the parent acid compound with an amine, basic groups reacted to form an acylated base derivative, etc. Of course, other prodrug derivatives may be combined with other features disclosed herein to enhance bioavailability. As such, those of skill in the art will appreciate that certain of the presently disclosed compounds having free amino, arnido, hydroxy or carboxylic groups can be converted into prodrugs. Prodrugs include compounds having an amino acid residue, or a polypeptide chain of two or more (e.g., two, three or four) amino acid residues which are covalently joined through peptide bonds to free amino, hydroxy or carboxylic  acid groups of the presently disclosed compounds. The amino acid residues include the 20 naturally occurring amino acids commonly designated by three letter symbols and also include 4-hydroxyproline, hydroxylysine, demosine, isodemosine, 3-methylhistidine, norvalin, beta-alanine, gamma-aminobutyric acid, citrulline homocysteine, homoserine, ornithine and methionine sulfone. Prodrugs also include compounds having a carbonate, carbamate, amide or alkyl ester moiety covalently bonded to any of the above substituents disclosed herein.

[0092] As used herein, the term “pharmaceutically acceptable” excipient, carrier, or diluent refers to a pharmaceutically acceptable material, composition or vehicle, such as a liquid or solid filler, diluent, excipient, solvent or encapsulating material, involved in carrying or transporting the subject pharmaceutical agent from one organ, or portion of the body, to another organ, or portion of the body. Each carrier must be "acceptable" in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not injurious to the patient. Some examples of materials which can serve as pharmaceutically-acceptable carriers include: sugars, such as lactose, glucose and sucrose; starches, such as corn starch and potato starch; cellulose, and its derivatives, such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose and cellulose acetate; powdered tragacanth; malt; gelatin; talc; excipients, such as cocoa butter and suppository waxes; oils, such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil and soybean oil; glycols, such as propylene glycol; polyols, such as glycerin, sorbitol, mannitol and polyethylene glycol; esters, such as ethyl oleate and ethyl laurate; agar; buffering agents, such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic saline; Ringer's solution; ethyl alcohol; phosphate buffer solutions; and other non-toxic compatible substances employed in pharmaceutical formulations. Wetting agents, emulsifiers and lubricants, such as sodium lauryl sulfate, magnesium stearate, and polyethylene oxide-polypropylene oxide copolymer as well as coloring agents, release agents, coating agents, sweetening, flavoring and perfuming agents, preservatives and antioxidants can also be present in the compositions.

[0093] As used herein, the terms “isolated” or “purified” refer to a material that is substantially or essentially free from components that normally accompany it in its native state. Purity and homogeneity are typically determined using analytical chemistry techniques such as polyacrylamide gel electrophoresis or high-performance liquid chromatography.

[0094] As used herein, the term “subject” refers to any animal (e.g., a mammal) , including, but not limited to humans, non-human primates, rodents, and the like, which is to be the recipient of a particular treatment. Typically, the terms “subject” and “patient” are used interchangeably herein in reference to a human subject.

[0095] As used herein, the term “low dosage” refers to at least 5%less (e.g., at least 10%, 20%, 50%, 80%, 90%, or even 95%) than the lowest standard recommended dosage of a particular compound formulated for a given route of administration for treatment of any human disease or condition. For example, a low dosage of an agent that is formulated for administration by inhalation will differ from a low dosage of the same agent formulated for oral administration.

[0096] As used herein, the term “high dosage” is meant at least 5% (e.g., at least 10%, 20%, 50%, 100%, 200%, or even 300%) more than the highest standard recommended dosage of a particular compound for treatment of any human disease or condition.

[0097] Isotopically-labeled compounds are also within the scope of the present disclosure. As used herein, an "isotopically-labeled compound" or "isotope derivative" refers to a presently disclosed compound including pharmaceutical salts and prodrugs thereof, each as described herein, in which one or more atoms are replaced by an atom having an atomic mass or mass number different from the atomic mass or mass number usually found in nature. Examples of isotopes that can be incorporated into compounds presently disclosed include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorous, fluorine and chlorine, such as 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, and 36Cl, respectively.

[0098] By isotopically-labeling the presently disclosed compounds, the compounds may be useful in drug and / or substrate tissue distribution assays. Tritiated (3H) and carbon-14 (14C) labeled compounds are particularly preferred for their ease of preparation and detectability. Further, substitution with heavier isotopes such as deuterium (2H) can afford certain therapeutic advantages resulting from greater metabolic stability, for example increased in vivo half-life or reduced dosage requirements and, hence, may be preferred in some circumstances. Isotopically labeled compounds presently disclosed, including pharmaceutical salts, esters, and prodrugs thereof, can be prepared by any means known in the art. Benefits may also be obtained from replacement of normally abundant 12C with 13C. (See, WO 2007 / 005643, WO 2007 / 005644, WO 2007 / 016361, and WO 2007 / 016431. )

[0099] For example, deuterium (2H) can be incorporated into a compound disclosed herein for the purpose in order to manipulate the oxidative metabolism of the compound by way of the primary kinetic isotope effect. The primary kinetic isotope effect is a change of the rate for a chemical reaction that results from exchange of isotopic nuclei, which in turn is caused by the change in ground state energies necessary for covalent bond formation after this isotopic exchange. Exchange of a heavier isotope usually results in a lowering of the ground state energy for a chemical bond and thus causes a reduction in the rate in rate-limiting bond breakage. If the bond breakage occurs in or in the vicinity of a saddle-point region along the coordinate of a multi-product reaction, the product distribution ratios can be altered substantially. For explanation: if deuterium is bonded to a carbon atom at a non-exchangeable position, rate differences of kM / kD = 2-7 are typical. If this rate difference is successfully applied to a compound disclosed herein that is susceptible to oxidation, the profile of this compound in vivo can be drastically modified and result in improved pharmacokinetic properties.

[0100] When discovering and developing therapeutic agents, the person skilled in the art is able to optimize pharmacokinetic parameters while retaining desirable in vitro properties. It is reasonable to assume that many compounds with poor pharmacokinetic profiles are susceptible to oxidative metabolism. In vitro liver microsomal assays currently available provide valuable information on the course of oxidative metabolism of this type, which in turn permits the rational design of deuterated compounds of those disclosed herein with improved stability through resistance to such oxidative metabolism. Significant improvements in the pharmacokinetic profiles of compounds disclosed herein are thereby obtained, and can be expressed quantitatively in terms of increases in the in vivo half-life (t / 2) , concen-tra-tion at maximum therapeutic effect (Cmax) , area under the dose response curve (AUC) , and F; and in terms of reduced clearance, dose and materials costs.

[0101] The following is intended to illustrate the above: a compound which has multiple potential sites of attack for oxidative metabolism, for example benzylic hydrogen atoms and hydrogen atoms bonded to a nitrogen atom, is prepared as a series of analogues in which various combinations of hydrogen atoms are replaced by deuterium atoms, so that some, most or all of these hydrogen atoms have been replaced by deuterium atoms. Half-life determinations enable favorable and accurate determination of the extent of the extent to which the improvement in resistance to oxidative metabolism has improved. In this way, it is determined that the half-life of  the parent compound can be extended by up to 100%as the result of deuterium-hydrogen exchange of this type.

[0102] Deuterium-hydrogen exchange in a compound disclosed herein can also be used to achieve a favorable modification of the metabolite spectrum of the starting compound in order to diminish or eliminate undesired toxic metabolites. For example, if a toxic metabolite arises through oxidative carbon-hydrogen (C-H) bond cleavage, it can reasonably be assumed that the deuterated analogue will greatly diminish or eliminate production of the unwanted metabolite, even if the particular oxidation is not a rate-determining step. Further information on the state of the art with respect to deuterium-hydrogen exchange may be found, for example in Hanzlik et al., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990, Reider et al., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987, Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985, Gillette et al, Biochemistry 33 (10) 2927-2937, 1994, and Jarman et al. Carcinogenesis 16 (4) , 683-688, 1993.

[0103] Compounds of the present invention are, subsequent to their preparation, preferably isolated and purified to obtain a composition containing an amount by weight equal to or greater than 95% ( “substantially pure” ) , which is then used or formulated as described herein. In certain embodiments, the compounds of the present invention are more than 99%pure.

[0104] Combinations of substituents and variables envisioned by this invention are only those that result in the formation of stable compounds. The term “stable” , as used herein, refers to compounds which possess stability sufficient to allow manufacture and which maintains the integrity of the compound for a sufficient period of time to be useful for the purposes detailed herein (e.g., therapeutic or prophylactic administration to a subject) .

[0105] The recitation of a listing of chemical groups in any definition of a variable herein includes definitions of that variable as any single group or combination of listed groups. The recitation of an embodiment for a variable herein includes that embodiment as any single embodiment or in combination with any other embodiments or portions thereof.Detailed Description of the Invention

[0106] The invention provides novel imidazoquinoline amine derivatives, which are agonists of TLRs, in particular TLR7 and / or TLR8, pharmaceutical compositions thereof, and methods of treatment, reduction or prevention of certain diseases or conditions mediated by or associated with TLR7 and / or TLR8, e.g., graft rejection, autoimmunity, inflammation allergy, asthma, infection, sepsis, cancer and immunodeficiency, or related diseases and conditions.

[0107] In one aspect, the invention generally relates to a drug-linker conjugate having the structural formula (I) :

[0108] D-L'

[0109] (I)

[0110] wherein,

[0111] L’ is a group that comprises a functional or reactive group; and

[0112] D is a drug moiety having the structure of

[0113] wherein

[0114] R1 is a C1-C8 alkyl group;

[0115] R2 is H or P (=O) (CH3) 2;

[0116] n is an integer selected from 1 to 8;

[0117] X is a single bond or a linking moiety; and

[0118] or a pharmaceutically acceptable form or an isotope derivative thereof.

[0119] In certain embodiments, R2 is H.

[0120] In certain embodiments, R2 is P (=O) (CH3) 2.

[0121] In certain embodiments, R1 is n-butyl and R2 is H, and the drug-linker conjugate has the structure:

[0122] In certain embodiments, R1 is n-butyl and R2 is P (=O) (CH3) 2, and the drug-linker conjugate has the structural formula:

[0123] In certain embodiments, n is 4.

[0124] In certain embodiments, L’ comprises para-aminobenzoic acid (PABA) and a dipeptide, and optionally further comprises a polyethylene glycol (PEG) unit comprising m units of CH2-CH2O, wherein m is an integer selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 and 12.

[0125] In certain embodiments, L’ comprises Mal-Val-Cit-PABA, Mal-Val-Ala-PABA, or Mal-Val-Cit-PABA, Mal-Val-Ala-PABA, Mal-Gly-Gly-Phe-Gly, Mal-PEG2-Val-Cit-PABA , Mal-PEG8-Val-Ala-PABA, Mal-amido-PEG8-C2-acid, Py-MAA-Val-Cit-PAB, CL2A, SMCC, Sulfo-SMCC sodium, SPDB, SPDP, DBCO, DBCO-NHCO-PEG4-amine, DBCO-PEG4-Gly-Gly-Phe-Gly, DBCO-PEG3-Val-Cit-PABA, DBCO- (PEG2-VC-PABA) 2 or Maleimide-DOTA.

[0126] In certain embodiments, L’ is:

[0127] In certain embodiments, L’ is selected from:

[0128] In certain embodiments, X is selected from:

[0129] Non-limiting examples of drug-linker conjugate include:

[0130] In yet another aspect, the invention generally relates to an antibody-drug conjugate comprises a drug moiety having the structure of

[0131] wherein

[0132] R1 is a C1-C8 alkyl group;

[0133] R2 is H or P (=O) (CH3) 2;

[0134] n is an integer selected from 1 to 8;

[0135] X is a single bond or a linking moiety; and

[0136] or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0137] In yet another aspect, the invention generally relates to an antibody-drug conjugate having the structural formula (II) :

[0138] D-L-Ab

[0139] (II)

[0140] wherein,

[0141] Ab is an antigen binding moiety;

[0142] L is a linker; and

[0143] D is a drug moiety having the structure of

[0144] wherein

[0145] R1 is a C1-C8 alkyl group;

[0146] R2 is H or P (=O) (CH3) 2;

[0147] n is an integer selected from 1 to 8;

[0148] X is a single bond or a linking moiety; and

[0149] or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0150] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, R2 is H.

[0151] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, R2 is P (=O) (CH3) 2.

[0152] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, R1 is n-butyl and R2 is H, and the antibody-drug conjugate has the structure:

[0153] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, R1 is n-butyl and R2 is P (=O) (CH3) 2, and the antibody-drug conjugate has the structure:

[0154] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, n is 4.

[0155] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, L is a cleavable linker.

[0156] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, L is a linker that is sensitive to acid, lysosomal protease, β-glucuronide or glutathione.

[0157] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, L is a non-cleavable linker.

[0158] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, X is selected from:

[0159] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, Ab is an antibody.

[0160] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, Ab is a monoclonal antibody.

[0161] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, Ab is a chimeric antibody.

[0162] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, Ab is a humanized antibody.

[0163] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, Ab is an antibody fragment.

[0164] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, Ab is a peptide

[0165] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, Ab is selected from:

[0166] Trastuzumab, Avelumab, mouse anti-human HER2 Ab, Anti-mouse PD-L1 (B7-H1) ,  Atezolizumab, or other antibodies against HER2, CD30, Netin-4, Trop3, CD79b, CD22, BCMA, TF, CD33, CD22, EGFR, TSHR, FSHR, LHR, CD19, FAP and FR-alpha.

[0167] Non-limiting examples of antibody-drug conjugates includes:

[0168] In yet another aspect, the invention generally relates to a pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate disclosed herein.

[0169] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, the pharmaceutical composition is effective to treat, prevent, or reduce autoimmune disease, or a related disease or disorder.

[0170] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, the pharmaceutical composition is effective to treat, prevent, or reduce graft rejection, or a related disease or disorder.

[0171] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, the pharmaceutical composition is effective to treat, prevent, or reduce an allergy, or a related disease or disorder.

[0172] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, the pharmaceutical composition is effective to treat, prevent, or reduce immunodeficiency, or a related disease or disorder.

[0173] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, the pharmaceutical composition is effective to treat, prevent, or reduce infection, sepsis, or a related disease or disorder.

[0174] In certain embodiments of the antibody-drug conjugate, the pharmaceutical composition is effective to treat, prevent, or reduce cancer, or a related disease or disorder.

[0175] In yet another aspect, the invention generally relates to a unit dosage form comprising a pharmaceutical composition of the invention.

[0176] In yet another aspect, the invention generally relates to a method for treating, reducing, or preventing a disease or disorder, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate of the invention.

[0177] In certain embodiments, the disease or disorder is selected from the group consisting of:autoimmune diseases, graft rejection, allergies, immunodeficiency, infection, sepsis, cancer, and related diseases or disorders.

[0178] In certain embodiments, the disease or disorder is an autoimmune disease, or a related disease or disorder.

[0179] In certain embodiments, the disease or disorder is graft rejection, or a related disease or disorder.

[0180] In certain embodiments, the disease or disorder is allergy, or a related disease or disorder.

[0181] In certain embodiments, the disease or disorder is immunodeficiency, or a related disease or disorder.

[0182] In certain embodiments, the disease or disorder is infection and / or sepsis, or a related disease or disorder.

[0183] In certain embodiments, the disease or disorder is cancer, or a related disease or disorder.

[0184] In yet another aspect, the invention generally relates to a method for modulating immune response, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate of the invention.

[0185] In yet another aspect, the invention generally relates to a method for modulating TLR7-and / or TLR8-mediated signaling, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate of the invention.

[0186] In yet another aspect, the invention generally relates to a method for of treating or reducing a condition or disorder treatable by modulation of TLR7-and / or TLR8-mediated cellular activities, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate of the invention.

[0187] In yet another aspect, the invention generally relates to use of an antibody-drug conjugate of the invention for treating or reducing a disease or disorder.

[0188] In yet another aspect, the invention generally relates to use of a drug conjugate or an antibody-drug conjugate of the invention, and a pharmaceutically acceptable excipient, carrier, or diluent, in preparation of a medicament for treating or reducing a disease or disorder.

[0189] In certain embodiments, the disease or disorder is associated with TLR7-and / or TLR8-mediated signaling.

[0190] In certain embodiments, the disease or disorder is selected from autoimmune diseases, graft rejection, allergies, immunodeficiency, infection, sepsis, cancer, or a related disease or disorder thereof.

[0191] In certain embodiments, the use is to treat or reduce an autoimmune disease, or a related disease or disorder.

[0192] In certain embodiments, the use is to treat or reduce graft rejection, or a related disease or disorder.

[0193] In certain embodiments, the use is to treat or reduce allergy, or a related disease or disorder.

[0194] In certain embodiments, the use is to treat or reduce immunodeficiency, or a related disease or disorder.

[0195] In certain embodiments, the use is to treat or reduce infection and / or sepsis, or a related disease or disorder.

[0196] In certain embodiments, the use is to treat or reduce cancer, or a related disease or disorder.

[0197] In certain embodiments, the use is as a vaccine adjuvant.

[0198] In yet another aspect, the invention relates to an antibody-drug conjugate that is comprised of an antibody (Ab) , a linker (L) and payload (D) , as represented below:

[0199] (D-L) k-Ab

[0200] (III)

[0201] wherein D, L and Ab are as discussed herein above, and k is an integer. The payload D can be conjugated to different parts of the Ab and may be attached via cysteine or lysine residues, for examples. Generally, more than one payload D molecules can be attached to each Ab. In some embodiments, k ranges from 1 to 8, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, or 1 to 2. In some embodiments, k ranges from 2 to 8, 2 to 7, 2 to 6, 2 to 5, 2 to 4 or 2 to 3. In other embodiments, k is 1, 2, 3, 4, 5 or 6. In some embodiments, k is 2, 3 or 4.

[0202] The drug to antibody ratio (DAR) or drug loading may be characterized by conventional means such as UV, mass spectroscopy, ELISA assay, HIC, HPLC or electrophoresis. In exemplary embodiments, DAR ranges from 1 to 8, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 2, 2 to 4, or about 1.

[0203] The DAR of an immunoconjugate may be controlled by various methods, including limiting the molar excess of payload-linker intermediate or linker reagent relative to the antibody; limiting the conjugation reaction time or temperature; varying reductive conditions for cysteine thiol modification; and modifying the number and positions of cysteine residues and positions of linker-payload attachments. (See, e.g., WO 2006 / 034488 A2. )

[0204] To date, numerous unique antigens have been identified and may be potentially used in antibody-based therapy as a target. Several factors are generally considered when selecting an antigen. First, the target antigen should have high expression in the tumor and no or low expression in the healthy cell. An example is the HER2 receptor, which is almost 100-fold higher expressed in the tumor cell compared to the healthy cell. Second, the target antigen should be displayed on the surface of the tumor cell to be available to the circulated monoclonal antibody. In addition, the target antigen should possess internalization properties as it will facilitate the ADC to transport into the cell, which will in turn enhance the efficacy of cytotoxic agent. Though some studies have demonstrated that non-internalized ADC product directed against components of the tumor microenvironment can efficiently detach their drug in the extracellular space and arbitrate a potent therapeutic activity in some cases and that ADCs often induce a  strong “bystander effect. ” (Strohl 2018 Protein & Cell. 9 (1) : 86-120; Damelin, et al. 2015 Pharma. Res. 32 (11) : 3494-507; Diamantis et al. 2016 British J. Cancer114 (4) : 362-7; Tipton et al. 2015 Blood 125 (12) : 1901-9; Donaghy et al. 2016 mAbs. 8 (4) : 659-71; Casi et al. 2015 Molecular Pharmaceutics 12 (6) : 1880-4. )

[0205] In general, the antibody should preferably possess target specificity and possess target binding affinity, e.g., a high binding affinity to the tumor cell-surface antigens. Additionally, the antibody should preferably possess good retention, low immunogenicity, low cross-reactivity, and appropriate linkage binding properties. (Peters, et al. 2015 Bioscience Reports 35 (4) ; Hughes B 2010 Nature Reviews Drug Discovery 9 (9) : 665-7. )

[0206] In certain embodiments, Ab is an antibody.

[0207] In certain embodiments, Ab is a monoclonal antibody.

[0208] In certain embodiments, Ab is a chimeric antibody.

[0209] In certain embodiments, Ab is a humanized antibody.

[0210] In certain embodiments, Ab is a bispecific antibody.

[0211] In certain embodiments, Ab is an antibody fragment.

[0212] In certain embodiments, Ab is a Fab fragment.

[0213] Antibodies and antibody fragments useful for the immunoconjugates of the invention include modified or engineered antibodies, such as an antibody modified to introduce a cysteine residue, or other reactive amino acid, including Pel, pyrrolysine, peptide tags, and non-natural amino acids, in place of at least one amino acid of the native sequence, thus providing a reactive site on the antibody or antigen binding fragment for conjugation to a cytotoxic agent.

[0214] Antibodies and antibody fragments can be readily produced by any methods known in the art, including but not limited to, recombinant expression, chemical synthesis, and enzymatic digestion of antibody tetramers, whereas full-length monoclonal antibodies can be obtained by, e.g., hybridoma or recombinant production. Recombinant expression can be from any appropriate host cells known in the art, for example, mammalian host cells, bacterial host cells, yeast host cells, insect host cells, etc. (See, e.g., Carvalho et al. 2016 “Production Processes for Monoclonal Antibodies” , DOI: 10.5772 / 64263 (https:  / / www. intechopen. com / chapters / 51512) ; Monoclonal Antibody Production, Committee on Methods of Producing Monoclonal Antibodies, Institute for Laboratory Animal Research, National Research Council, NATIONAL ACADEMY PRESS Washington, DC 1999; Jakobovits 1998 Adv. Drug Del. Rev. 31: 33-42; Marks, et al.  1991 J. Mol. Biol. 222: 581; Cole, et al. 1985 Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy 77-96; Teng, et al. 1983 Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80: 7308-7312; Kozbor, et al. 1983 Immunology Today 4: 72-79; Olsson, et al. 1982 Meth. Enzymol. 92: 3-16; U.S. Pat. No. 6,657,103 B2. )

[0215] The compounds according to the invention may be used as agonists of TLR’s, specifically for TLR7 and TLR8.

[0216] The compounds according to the invention may provide methods for modulating TLR7-and / or TLR8-mediated signaling. The methods of the invention are useful, for example, when it is desirable to alter TLR7-and / or TLR8-mediated signaling in response to a suitable TLR7 and / or TLR8 ligand or a TLR7 and / or TLR8 signaling agonist.

[0217] The compounds according to the invention may be used in the treatment or prevention of conditions and disorders include, but are not limited to, cancer, immune complex-associated diseases, inflammatory disorders, immunodeficiency, graft rejection, graft-versus-host disease, allergies, asthma, infection, and sepsis. More specifically, methods useful in the treatment of conditions involving autoimmunity, inflammation, allergy, asthma, graft rejection. Alternatively, methods useful in the treatment of conditions involving infection, cancer, and immunodeficiency generally will employ compounds disclosed herein that augment TLR7-and / or TLR8-mediated signaling in response to a suitable TLR7 and / or TLR8 ligand. In some instances, the compositions can be used to inhibit or promote TLR 7-and / or TLR8-mediated signaling in response to a TLR7 and / or TLR8 ligand or signaling agonist. In other instance, the compositions can be used to inhibit or promote TLR7-and / or TLR8-mediated immune-stimulation in a subject.

[0218] The compounds according to the inventions may also be used in the treatment or prevention of hepatocarcinomas, cholangiocarcinoma and malignant mesothelioma, pancreatic cancer, head and neck cancer, and haemoangioma.

[0219] The compounds according to the inventions may also be used in the treatment or prevention treating obesity in a patient. The invention provides a method of treating type II diabetes in a patient in need of treatment comprising administering to the patient an effective amount of a compound disclosed herein or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Preferably the patient is a human. The present invention provides a method for treating nonalcoholic  steatohepatitis in a patient in need of such treatment, comprising administering to the patient an effective amount of a compound disclosed herein or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0220] The present invention provides use of a compound disclosed herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in the manufacture of a medicament for the treatment of obesity. The present invention provides the use of a compound disclosed herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in the manufacture of a medicament for treatment to provide therapeutic weight loss.

[0221] The amount of compound in compositions of this invention is such that is effective to measurably modulate TLR’s, in particular TLR7 and / or TLR8, or a mutant thereof, in a biological sample or in a patient. In certain embodiments, the amount of compound in compositions of this invention is such that is effective to measurably modulate TLR’s, or a mutant thereof, in a biological sample or in a patient. In certain embodiments, a composition of this invention is formulated for administration to a patient in need of such composition.

[0222] Solid dosage forms for oral administration include capsules, tablets, pills, powders, and granules. In such solid dosage forms, the compounds described herein or derivatives thereof are admixed with at least one inert customary excipient (or carrier) such as sodium citrate or dicalcium phosphate or (i) fillers or extenders, as for example, starches, lactose, sucrose, glucose, mannitol, and silicic acid, (ii) binders, as for example, carboxymethylcellulose, alginates, gelatin, polyvinylpyrrolidone, sucrose, and acacia, (iii) humectants, as for example, glycerol, (iv) disintegrating agents, as for example, agar-agar, calcium carbonate, potato or tapioca starch, alginic acid, certain complex silicates, and sodium carbonate, (v) solution retarders, as for example, paraffin, (vi) absorption accelerators, as for example, quaternary ammonium compounds, (vii) wetting agents, as for example, cetyl alcohol, and glycerol monostearate, (viii) adsorbents, as for example, kaolin and bentonite, and (ix) lubricants, as for example, talc, calcium stearate, magnesium stearate, solid polyethylene glycols, sodium lauryl sulfate, or mixtures thereof. In the case of capsules, tablets, and pills, the dosage forms may also comprise buffering agents. Solid compositions of a similar type may also be employed as fillers in soft and hard-filled gelatin capsules using such excipients as lactose or milk sugar as well as high molecular weight polyethyleneglycols, and the like. Solid dosage forms such as tablets, dragees, capsules, pills, and granules can be prepared with coatings and shells, such as enteric coatings and others known in the art.

[0223] Liquid dosage forms for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups, and elixirs. In addition to the active compounds, the liquid dosage forms may contain inert diluents commonly used in the art, such as water or other solvents, solubilizing agents, and emulsifiers, such as for example, ethyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propyleneglycol, 1, 3-butyleneglycol, dimethylformamide, oils, in particular, cottonseed oil, groundnut oil, corn germ oil, olive oil, castor oil, sesame oil, glycerol, tetrahydrofurfuryl alcohol, polyethyleneglycols, and fatty acid esters of sorbitan, or mixtures of these substances, and the like. Besides such inert diluents, the composition can also include additional agents, such as wetting, emulsifying, suspending, sweetening, flavoring, or perfuming agents.

[0224] Materials, compositions, and components disclosed herein can be used for, can be used in conjunction with, can be used in preparation for, or are products of the disclosed methods and compositions. It is understood that when combinations, subsets, interactions, groups, etc. of these materials are disclosed that while specific reference of each various individual and collective combinations and permutations of these compounds may not be explicitly disclosed, each is specifically contemplated and described herein. For example, if a method is disclosed and discussed and a number of modifications that can be made to a number of molecules including in the method are discussed, each and every combination and permutation of the method, and the modifications that are possible are specifically contemplated unless specifically indicated to the contrary. Likewise, any subset or combination of these is also specifically contemplated and disclosed. This concept applies to all aspects of this disclosure including, but not limited to, steps in methods using the disclosed compositions. Thus, if there are a variety of additional steps that can be performed, it is understood that each of these additional steps can be performed with any specific method steps or combination of method steps of the disclosed methods, and that each such combination or subset of combinations is specifically contemplated and should be considered disclosed.

[0225] Compositions of the present invention are administered orally, parenterally, by inhalation spray, topically, rectally, nasally, buccally, vaginally or via an implanted reservoir. The term "parenteral" as used herein includes subcutaneous, intravenous, intramuscular, intra-articular, intra-synovial, intrasternal, intrathecal, intrahepatic, intralesional, intratumoral and intracranial injection or infusion techniques.

[0226] Pharmaceutically acceptable compositions of this invention are orally administered in any orally acceptable dosage form. Exemplary oral dosage forms are capsules, tablets, aqueous suspensions or solutions. In the case of tablets for oral use, carriers commonly used include lactose and corn starch. Lubricating agents, such as magnesium stearate, are also typically added. For oral administration in a capsule form, useful diluents include lactose and dried cornstarch. When aqueous suspensions are required for oral use, the active ingredient is combined with emulsifying and suspending agents. If desired, certain sweetening, flavoring or coloring agents are optionally also added.

[0227] Alternatively, pharmaceutically acceptable compositions of this invention are administered in the form of suppositories for rectal administration. These can be prepared by mixing the agent with a suitable non-irritating excipient that is solid at room temperature but liquid at rectal temperature and therefore will melt in the rectum to release the drug. Such materials include cocoa butter, beeswax and polyethylene glycols.

[0228] Pharmaceutically acceptable compositions of this invention are also administered topically, especially when the target of treatment includes areas or organs readily accessible by topical application, including diseases of the eye, the skin, or the lower intestinal tract. Suitable topical formulations are readily prepared for each of these areas or organs.

[0229] Topical application for the lower intestinal tract can be effected in a rectal suppository formulation (see above) or in a suitable enema formulation. Topically-transdermal patches are also used.

[0230] For topical applications, provided pharmaceutically acceptable compositions are formulated in a suitable ointment containing the active component suspended or dissolved in one or more carriers. Exemplary carriers for topical administration of compounds of this aremineral oil, liquid petrolatum, white petrolatum, propylene glycol, polyoxyethylene, polyoxypropylene compound, emulsifying wax and water. Alternatively, provided pharmaceutically acceptable compositions can be formulated in a suitable lotion or cream containing the active components suspended or dissolved in one or more pharmaceutically acceptable carriers. Suitable carriers include, but are not limited to, mineral oil, sorbitan monostearate, polysorbate 60, cetyl esters wax, cetearyl alcohol, 2-octyldodecanol, benzyl alcohol and water.

[0231] Pharmaceutically acceptable compositions of this invention are optionally administered by nasal aerosol or inhalation. Such compositions are prepared according to  techniques well-known in the art of pharmaceutical formulation and are prepared as solutions in saline, employing benzyl alcohol or other suitable preservatives, absorption promoters to enhance bioavailability, fluorocarbons, and / or other conventional solubilizing or dispersing agents.

[0232] Most preferably, pharmaceutically acceptable compositions of this invention are formulated for oral administration. Such formulations may be administered with or without food. In some embodiments, pharmaceutically acceptable compositions of this invention are administered without food. In other embodiments, pharmaceutically acceptable compositions of this invention are administered with food.

[0233] The amount of compounds of the present invention that are optionally combined with the carrier materials to produce a composition in a single dosage form will vary depending upon the host treated, the particular mode of administration. Preferably, provided compositions should be formulated so that a dosage of between 0.01 -100 mg / kg body weight / day of the compound can be administered to a patient receiving these compositions.

[0234] It should also be understood that a specific dosage and treatment regimen for any particular patient will depend upon a variety of factors, including the activity of the specific compound employed, the age, body weight, general health, sex, diet, time of administration, rate of excretion, drug combination, and the judgment of the treating physician and the severity of the particular disease being treated. The amount of a compound of the present invention in the composition will also depend upon the particular compound in the composition.

[0235] The following examples are meant to be illustrative of the practice of the invention and not limiting in any way.

[0236] Examples

[0237] As depicted in the Examples below, in certain exemplary embodiments, compounds are prepared according to the following general procedures. It will be appreciated that, although the general methods depict the synthesis of certain compounds of the present invention, the following general methods, and other methods known to one of ordinary skill in the art, can be applied to all compounds and subclasses and species of each of these compounds, as described herein.

[0238] Compound numbers utilized in the Examples below correspond to compound numbers set forth supra.

[0239] 1H and 13C NMR was recorded at 400 MHz on a Varian Mercury 400 spectrometer. Proton chemical shifts were internally referenced to the residual proton resonance in CDCl3 (7.26 ppm) . Carbon chemical shifts were internally referenced to the deuterated solvent signals in CDCl3 (77.20 ppm) .

[0240] LC-MS spectra were recorded on a Shimadzu LC-MS2020 using Agilent C18 column (Eclipse XDB-C18, 5um, 2.1 x 50mm) with flow rate of 1 mL / min. Mobile phase A: 0.1%of formic acid in water; mobile phase B: 0.1%of formic acid in acetonitrile. A general gradient method was used.

[0241] Analytical HPLC was performed on Agilent 1200 HPLC with a Zorbax Eclipse XDB C18 column (2.1 x 150 mm) with flow rate of 1 mL / min. Mobile phase A: 0.1%of TFA in water; mobile phase B: 0.1%of TFA in acetonitrile. A general method with following gradient was used.

[0242] Preparative HPLC was performed on Varian ProStar using Hamilton C18 PRP-1 column (15 x 250 mm) with flow rate of 20 mL / min. Mobile phase A: 0.1%of TFA in water; mobile phase B: 0.1%of TFA in acetonitrile. A typical gradient method was used.

[0243] Example 1. Synthesis of 4- (4-acetylphenoxy) -N- (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) butanamide (1)

[0244] Synthetic scheme 1

[0245] Step 1: To a mixture of compound 1-1 (5.00 g, 36.72 mmol) and potassium carbonate (10.15 g, 73.44 mmol) in acetone (75 mL) was added ethyl 4-bromobutanoate (10.74 g, 55.06 mmol) at 0 ℃. The mixture was warmed slowly to room temperature and stirred for 5 h. After completion of the reaction, the mixture was diluted with ethyl acetate (100 mL) and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 10%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 1-2 (7.63 g, yield 83%) as a white solid.

[0246] Step 2: LiOH (383 mg, 15.99 mmol) was added to a solution of compound 1-2 (2.00 g, 7.99 mmol) in tetrahydrofuran (20 mL) and water (10 mL) at 0 ℃. The mixture was warmed slowly to room temperature and stirred for 2 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated and adjusted pH =3 with 1 N HCl. The aqueous solution was extracted with ethyl acetate (50 mL x 2) . The combined organic layers were washed with water and brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude product 1-3 (1.49 g, yield 84%) was obtained as a white solid, which was used at the next step without further purification.

[0247] Step 3: To a solution of compound 1-4 (50 mg, 0.12 mmol) , compound 1-3 (35 mg, 0.16 mmol) , DMAP (2 mg, 0.016 mmol) and DIPEA (31 mg, 0.24 mmol) in anhydrous DMF (3 mL) was added EDCI (35 mg, 0.18 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 3 h. After completion of the reaction, the mixture was filter and concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 1 (40 mg, yield 54%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.28 –8.20 (m, 2H) , 7.93 (ddd, J = 10.0, 8.2, 1.5 Hz, 1H) , 7.89 –7.80 (m, 2H) , 7.03 –6.93 (m, 2H) , 4.39 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 4.04 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 3.16 (t, J = 6.8 Hz, 2H) , 2.99 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.45 (s, 3H) , 2.27 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 1.93 (dp, J = 21.6, 6.7 Hz, 4H) , 1.83 (q, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.75 (d, J = 13.4 Hz, 6H) , 1.66 (q, J = 7.6, 7.2 Hz, 2H) , 1.49 –1.35 (m, 2H) , 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C32H42N5O5P: 607.69; found: 608.64 [M+H] +.

[0248] Example 2. Synthesis of 3- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -4- ( (2-aminoethyl) amino) cyclobut-3-ene-1, 2-dione (2)

[0249] Synthetic scheme 2

[0250] Step 1: To a solution of compound 2-1 (1.06 g, 6.23 mmol) in anhydrous methanol (10 mL) was added dropwise a solution of compound 2-2 (1.0 g, 6.24 mmol) in anhydrous methanol (10 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 1 h. After completion of the reaction, the mixture was diluted with ethyl acetate and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was purified by silica gel column (eluted with 30%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 2-3 (1.62 g, yield 91%) .

[0251] Step 2: A solution of compound 2-4 (339 mg, 1.03 mmol) and DIPEA (333 mg 2.57mmol) in anhydrous methanol (4 mL) was added slowly to a solution of compound 2-3 (441 mg, 1.55 mmol) in anhydrous methanol (3 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 16 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with methanol in dichloromethane) to afford the title compound 2-5 (445 mg, yield 76%) as a pale-yellow solid. LCMS: m / z calculated for C29H39N7O5: 565.67; found: 566.72 [M+H] +.

[0252] Step 3: To a solution of compound 2-5 (445 mg, 0.78 mmol) in DCM (3 mL) was added trifluoroacetic acid (1 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 1 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired component was lyophilized to afford the title compound 2 (295 mg, yield 81%) as a white solid. 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 13.91 (s, 1H) , 8.52 (s, 2H) , 8.21 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 8.11 (s, 3H) , 7.83 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.75 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.64 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 4.45 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 3.71 (s, 2H) , 3.64 (s, 2H) ,  3.04 –2.97 (m, 4H) , 2.03 (p, J = 6.7 Hz, 2H) , 1.83 (dq, J = 20.6, 7.4 Hz, 4H) , 1.44 (h, J = 7.4 Hz, 2H) , 0.95 (t, J = 7.3 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C24H31N7O3: 465.56; found: 466.49 [M+H] +.

[0253] Example 3. Synthesis of (4-amino-2-butyl-1- (4- (methylamino) butoxy) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-7-yl) dimethylphosphine oxide (3)

[0254] Synthetic scheme 3

[0255] Step 1: A mixture of compound 3-1 (2.0 g, 10.57 mmol) , imidazole (1.8 g, 26.42 mmol) , DMAP (129 mg, 1.06 mmol) and TBS-Cl (2.39 g, 15.85 mmol) in dichloromethane (20 mL) was stirred at room temperature for 8 h. After completion of the reaction, the mixture was diluted with dichloromethane (100 mL) and washed with water (100 mL) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue  was purified by silica gel column (eluted with 5%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 3-2 (2.9 g, yield 90%) as a colorless oil.

[0256] Step 2: Under nitrogen atmosphere, NaH (60%in mineral oil, 554 mg, 13.84 mmol) was added to a solution of compound 3-2 (2.1 g, 6.92 mmol) in anhydrous DMF (8 mL) at 0 ℃. After stirring for 0.5 h, iodomethane (1.47 g, 10.38 mmol) was added thereto. The resulted mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 16 h. After completion of the reaction, the mixture was partitioned between ice water (100 mL) and ethyl acetate (100 mL) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 5%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 3-3 (1.8 g, yield 82%) as a colorless oil.

[0257] Step 3: To a solution of compound 3-3 (1.8 g, 5.67 mmol) in THF (5 mL) was added TBAF (1 M in THF, 8.5 mL, 8.51 mmol) at 0 ℃. The mixture was stirred at room temperature for 2 h. After completion of the reaction, the mixture was extracted with ethyl acetate (100 mL) and water (100 mL) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 10%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 3-4 (1.05 g, yield 91%) as a colorless oil.

[0258] Step 4: To a mixture of compound 3-4 (1.05 g, 5.16 mmol) and PPh3 (2.03 g, 7.74 mmol) in THF (20 mL) was added slowly a solution of tetrabromomethane in THF (10 mL) at 0 ℃ under nitrogen atmosphere. After stirring at room temperature for 4 h, the mixture was filtered, and the filtrate was concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 5%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 3-5 (1.08 g, yield 78%) as a colorless oil.

[0259] Step 5: A mixture of compound 3-6 (530 mg, 1.65 mmol) , potassium carbonate (457 mg, 3.31 mmol) and compound 3-5 (530 mg, 1.99 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at room temperature under nitrogen atmosphere for 16 h. After completion of the reaction, the mixture was partitioned between ethyl acetate (50 mL) and water (50 mL) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 30%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 3-7 (530 mg, yield 63%) as a light yellow solid. LCMS: m / z calculated for C24H33BrN4O3: 505.46; found: 505.54 [M+H] +.

[0260] Step 6: To a solution of compound 3-7 (530 mg, 1.05 mmol) in dichloromethane (10 mL) was added hydrogen peroxide (30%, 0.5 ml) and m-CPBA (362 mg, 2.10 mmol) at 0 ℃. The mixture was allowed to warm slowly to room temperature and stirred for 10 h. The resulting mixture was diluted with dichloromethane (50 mL) and washed with saturated sodium carbonate (50 mL x 2) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude intermediate was redissolved in dichloromethane (10 mL) , and to this was added ammonium hydroxide (25%, 0.6 ml) and a solution of TsCl (500 mg, 2.62 mmol) in dichloromethane (10 mL) . After stirring at room temperature for 18 h, the resulting mixture was diluted with dichloromethane (50 mL) , washed with saturated sodium bicarbonate. The organic layer was separated, washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 50%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 3-8 (500 mg, yield 90%) as a off-white solid. LCMS: m / z calculated for C24H34BrN5O3: 520.47; found: 520.55 [M+H] +.

[0261] Step 7: A mixture of compound 3-8 (500 mg, 0.96 mmol) , dimethylphosphine oxide (300 mg, 3.843 mmol) , xantphos (167 mg, 0.288 mmol) , palladium diacetate (65 mg, 0.288 mmol) and potassium phosphate (510 mg, 2.40 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at 120 ℃ under nitrogen atmosphere for 16 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, filtered and concentrated. The residue was purified by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 3-9 (360 mg, yield 72%) as a yellow solid. LCMS: m / z calculated for C26H40N5O4P: 517.61; found: 518.69 [M+H] +.

[0262] Step 8: To a solution of compound 3-9 (360 mg, 0.695 mmol) in ethyl acetate and methanol (v: v=3: 1, 3 mL) was added HCl ethyl acetate solution (4 N, 3 mL) . After stirring at room temperature for 1 h. The mixture was concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 3 (250 mg, yield 86%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.28 (dd, J = 8.3, 2.5 Hz, 1H) , 8.24 (d, J = 12.3 Hz, 1H) , 7.95 (t, J = 9.2 Hz, 1H) , 4.43 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.00 (dt, J = 14.4, 7.5 Hz, 4H) , 2.57 (s, 3H) , 2.00 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 1.86 (p, J = 8.4, 7.5 Hz, 4H) , 1.78 (s, 3H) , 1.74 (s, 3H) , 1.44 (h, J = 7.4 Hz, 2H) , 0.94 (t, J = 7.3 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C21H32N5O2P: 417.49; found: 418.47 [M+H] +.

[0263] Example 4. Synthesis of 4- (4-acetylphenoxy) -N- (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) -N-methylbutanamide (4)

[0264] Synthetic scheme 4

[0265] Step 1: To a solution of compound 3 (56 mg, 0.134mmol) , compound 1-3 (45 mg, 0.202 mmol) , DMAP (2 mg, 0.016 mmol) and DIPEA (36 mg, 0.278 mmol) in anhydrous dichloromethane (5 mL) was added EDCI (40 mg, 0.209 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 4 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 4 (62 mg, yield 74%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 –8.19 (m, 2H) , 7.95 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.92 –7.84 (m, 2H) , 7.80 –7.72 (m, 1H) , 7.01 (ddd, J = 8.6, 5.2, 2.7 Hz, 2H) , 6.94 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 4.41 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 4.07 (q, J = 6.2 Hz, 2H) , 3.47 –3.36 (m, 2H) , 3.08 –2.84 (m, 5H) , 2.47 (d, J =4.3 Hz, 3H) , 2.40 (d, J = 9.9 Hz, 2H) , 2.02 –1.80 (m, 7H) , 1.77 (s, 3H) , 1.74 (s, 3H) , 1.70 (d, J =6.9 Hz, 1H) , 1.48 –1.36 (m, 2H) , 0.92 (t, J = 7.3 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for

[0266] C33H44N5O5P: 621.72; found: 622.77 [M+H] +.

[0267] Example 5. Synthesis of 4- (4-acetylphenoxy) -N- (2- ( (2- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) ethyl) butanamide (5)

[0268] Synthetic scheme 5

[0269] Step 1: To a solution of compound 2 (100 mg, 0.21 mmol) , compound 1-3 (56 mg, 0.25 mmol) , DMAP (3 mg, 0.02 mmol) and DIPEA (53 mg, 0.41 mmol) in anhydrous dichloromethane (8 mL) was added EDCI (62 mg, 0.32 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 16 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 5 (65 mg, yield 46%) as a white solid. 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 13.68 (s, 1H) , 8.19 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 8.12 (s, 1H) , 8.04 (s, 2H) , 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.82 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.74 (t, J = 7.1 Hz, 1H) , 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 6.96 (s, 2H) , 4.42 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 4.01 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 3.62 (s, 2H) , 3.23 (s, 2H) , 2.99 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.48 (s, 3H) , 2.25 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 2.03 –1.97 (m, 2H) , 1.94 (p, J =6.5 Hz, 2H) , 1.81 (tt, J = 14.3, 7.2 Hz, 4H) , 1.43 (h, J = 7.4 Hz, 2H) , 0.94 (t, J = 7.4 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C36H43N7O6: 669.78; found: 670.86 [M+H] +.

[0270] Example 6. Synthesis of 3- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -4- ( (2- (methylamino) ethyl) amino) cyclobut-3-ene-1, 2-dione (6)

[0271] Synthetic scheme 6

[0272] Step 1: To a solution of compound 2-1 (1.1 g, 6.46 mmol) in MeOH (5 mL) under nitrogen atmosphere was added a solution of compound 6-1 (1.1 g, 6.31 mmol) at 0 ℃. The mixture was stirred at room temperature for 4 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 10%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 6-2 (1.5 g, yield 79%) as a white solid.

[0273] Step 2: To a solution of compound 6-2 (620 mg, 2.08 mmol) in anhydrous MeOH (5 mL) was added a solution of compound 2-4 (460 mg, 1.40 mmol) and DIPEA (365 mg, 2.80 mmol) in anhydrous MeOH (3 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 4 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 40%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 6-3 (700 mg, yield 86%) as a white solid.

[0274] Step 3: To a solution of compound 6-3 (700 mg, 1.21 mmol) in dichloromethane (6 mL) was added trifluoroacetic acid (2 mL) . After stirring at room temperature for 1 h, the mixture was concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) to afford the title compound 6 (467 mg, yield 80%) as a white solid. 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 13.87 (s, 1H) , 8.93 (s, 2H) , 8.51 (s, 2H) , 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.75 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.65 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 4.45 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 3.78 (s, 2H) , 3.65 (s, 2H) , 3.14 –3.06 (m, 2H) , 3.01 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.58 (t, J = 5.4 Hz, 3H) , 2.03 (p, J = 6.8 Hz, 2H) , 1.83 (dp, J = 13.6, 7.5 Hz, 4H) , 1.44 (dq, J = 14.8, 7.4 Hz, 2H) , 0.95 (t, J = 7.3 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C25H33N7O3: 479.59; found: 480.42 [M+H] +.

[0275] Example 7. Synthesis of 3- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -4- ( (2-aminoethyl) amino) cyclobut-3-ene-1, 2-dione (7)

[0276] Synthetic scheme 7

[0277] Step 1: A solution of compound 1-4 (270 mg, 0.67 mmol) and DIPEA (173 mg, 1.34 mmol) in anhydrous methanol (4 mL) was added slowly to a mixture of compound 2-3 (285 mg, 1.00 mmol) in anhydrous methanol (3 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 4 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 20%methanol in dichloromethane) to afford the title compound 7-1 (209 mg, yield 48%) as an off-white solid. LCMS: m / z calculated for C31H44N7O6P: 641.71; found: 664.89 [M+Na] +.

[0278] Step 2: To a solution of compound 7-1 (204 mg, 0.32 mmol) in DCM (4 mL) was added trifluoroacetic acid (1 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 1 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 7 (141mg, yield 81%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 –8.26 (m, 1H) , 8.23 (d, J = 12.4 Hz, 1H) , 7.96 (t, J = 9.3 Hz, 1H) , 4.44 (t, J = 6.6 Hz, 2H) , 3.74 –3.68 (m, 2H) , 3.62 (s, 2H) , 3.01 (t, J = 7.2 Hz, 4H) , 2.00 (q, J = 7.3 Hz, 2H) , 1.79 (t, J = 15.0 Hz, 10H) , 1.43 (p, J = 7.3 Hz, 2H) , 0.93 (t, J = 7.3 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C26H36N7O4P: 541.59; found: 564.87 [M+Na] +.

[0279] Example 8. Synthesis of 3- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -4- ( (2- (methylamino) ethyl) amino) cyclobut-3-ene-1, 2-dione (8)

[0280] Synthetic scheme 8

[0281] Step 1: A solution of compound 1-4 (170 mg, 0.42 mmol) and DIPEA (110 mg, 0.85 mmol) in anhydrous methanol (3 mL) was added slowly to a mixture of compound 6-2 (188 mg, 0.63 mmol) in anhydrous methanol (3 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 4 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 20%methanol in dichloromethane) to afford the title compound 8-1 (160 mg, yield 58%) as a white solid. LCMS: m / z calculated for C32H46N7O6P: 655.74; found: 679.16 [M+Na] +.

[0282] Step 2: To a solution of compound 8-1 (150 mg, 0.23 mmol) in DCM (4 mL) was added trifluoroacetic acid (1 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 1 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 7 (115 mg, yield 90%) as an off-white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.27 (d, J = 6.5 Hz, 1H) , 8.19 (d, J = 12.4 Hz, 1H) , 7.90 (t, J = 8.8 Hz, 1H) , 4.44 (s, 2H) , 3.76 (s, 2H) , 3.69 (s, 2H) , 3.12 (s, 2H) , 3.00 (s, 2H) , 2.59 (s, 3H) , 1.98 (s, 2H) , 1.76 (d, J =  13.5 Hz, 10H) , 1.42 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C27H36N7O4P: 555.62; found: 556.70 [M+H] +.

[0283] Example 9. Synthesis of (1- (4-aminobutoxy) -2-butyl-4-hydroxy-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-7-yl) dimethylphosphine oxide (9)

[0284] Synthetic scheme 9

[0285] Step 1: To a solution of compound 9-1 (785 mg, 1.60 mmol) in dichloromethane (20 mL) was added hydrogen peroxide (30%, 0.8 ml) and m-CPBA (552 mg, 3.20 mmol) at 0 ℃. The mixture was allowed to warm slowly to room temperature and stirred for 10 h. The resulting mixture was diluted with dichloromethane (80 mL) and washed with saturated sodium carbonate (80 mL x 2) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude intermediate was redissolved in dichloromethane (10 mL) , and to this was added ammonium hydroxide (25%, 0.2 ml) and a solution of TsCl (762 mg, 4.00 mmol) in dichloromethane (20 mL) . After stirring at room temperature for 18 h, the resulting mixture was diluted with dichloromethane (50 mL) , washed with saturated sodium bicarbonate. The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 50%ethyl acetate in petroleum ether) to afford the title compound 9-2 (495 mg, yield 61%) as a pale-yellow solid.

[0286] Step 2: A mixture of compound 9-2 (470 mg, 0.93 mmol) , dimethylphosphine oxide (216 mg, 2.77 mmol) , xantphos (160 mg, 0.27 mmol) , palladium diacetate (30 mg, 0.13 mmol) and potassium phosphate (322 mg, 2.33 mmol) in DMF (5 mL) was at 120 ℃ stirred under nitrogen atmosphere for 16 h. The reaction mixture was cooled to room temperature, filtered and concentrated. The residue was purified by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 9-3 (316 mg, yield 68%) as a yellow solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.76 (s, 1H) , 8.09 (d, J = 5.4 Hz, 1H) , 7.90 (d, J = 12.5 Hz, 1H) , 7.63 (t, J = 9.0 Hz, 1H) , 7.01 –6.89 (m, 1H) , 4.33 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.02 (d, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.94 –2.87 (m, 2H) , 1.87 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 1.81 –1.76 (m, 2H) , 1.71 (s, 3H) , 1.67 (s, 3H) , 1.63 (s, 2H) , 1.45 –1.41 (m, 2H) , 1.38 (s, 9H) , 0.94 (t, J = 7.3 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C25H37N4O5P: 504.57; found: 505.87 [M+H] +.

[0287] Step 3: To a solution of compound 9-3 (100 mg, 0.20 mmol) in ethyl acetate and methanol (v: v=3: 1, 3 mL) was added HCl ethyl acetate solution (4 N, 3 mL) . After stirring at room temperature for 1 h. The mixture was concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 9 (45 mg, yield 56%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.78 (s, 1H) , 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.90 (d, J = 12.0 Hz, 3H) , 7.70 –7.58 (m, 1H) , 4.36 (t, J = 5.7 Hz, 2H) , 2.91 (t, J = 7.4 Hz, 4H) , 2.01 –1.93 (m, 2H) , 1.85 –1.77 (m, 4H) , 1.70 (d, J =13.3 Hz, 6H) , 1.47 –1.38 (m, 2H) , 0.95 (t, J = 7.3 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C20H29N4O3P: 404.45; found: 405.70 [M+H] +.

[0288] Example 10. Synthesis of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) carbamate (10)

[0289] Synthetic scheme 10

[0290] Step 1: 2-Chorotrityl Chloride resin (0.71 mmol / g, 14.08 g, 10 mmol) was swollen in dichloromethane (40 mL) with nitrogen bubbling for 30 min. After removing dichloromethane, the first amino acid Fmoc-L-Cit-OH (4.76 g, 11.98 mmol) , dichloromethane (80 mL) and DIPEA (6.18 g, 47.81 mmol) were added. The mixture was bubbled for 2 h, the unreacted Cl group was blocked with methanol (7 mL) for 30 min. Next, the resin was washed with DMF and dichloromethane. Then Fmoc was removed by 20 %piperidine in DMF for 30 min. After removing the DMF solution of De-Fmoc, the resin was washed again with DMF (80 mL x 4) . The next amino acid was added by using the following coupling condition: Fmoc-AA-OH (30 mmol) , HBTU (28.5 mmol) , DIPEA (60 mmol) in DMF for 30 min. The following amino acids were coupled one by one: Fmoc-L-Val-OH and 6-Maleimidohexanoic acid. At last, desired linear peptide was cleaved from the resin with 20%hexafluoroisopropanol in DCM for 30 min. The filtrate was concentrated under reduced pressure at 35 ℃ to afford the title compound 10-1 (1.42 g, yield 30%) as an off-white solid. The crude product was used at the next step without further purification.

[0291] Step 2: To a solution of compound 10-1 (1.3 g, 2.78 mmol) in DCM (20 mL) and MeOH (10 mL) was added EEDQ (1.37 g, 5.56 mmol) and 4-aminobenzyl alcohol (514 mg, 4.17 mmol) . The mixture was stirred at room temperature in the dark for 16 h. The resulting mixture was filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel column (eluted with 10%methanol in dichloromethane) to afford the title compound 10-2 (350 mg, yield 22%) as a white solid. LCMS: m / z calculated for C28H40N6O7: 572.66; found: 595.88 [M+Na] +.

[0292] Step 3: To a mixture of compound 10-2 (350 mg, 0.61 mmol) in DMF (3 mL) was added DIPEA (316 mg, 2.44 mmol) and bis (4-nitrophenyl) carbonate (372 mg, 1.22 mmol) . The  mixture was stirred at room temperature for 5 h. After completion of the reaction, the mixture was diluted with DCM (30 mL) and washed with water (30 mL) . The organic layer was concentrated, and the residue was purified by reverse phase chromatography. The desired components were lyophilized to afford the title compound 10-3 (210 mg, yield 47%) as a white solid. LCMS: m / z calculated for C35H43N7O11: 737.77; found: 738.87 [M+H] +.

[0293] Step 4: To a solution of compound 10-3 (50 mg, 0.068 mmol) in DMF (1 mL) was added DIPEA (26 mg, 0.201 mmol) , compound 1-4 (45 mg, 0.108 mmol) and HOBt (14 mg, 0.102mmol) . After stirring at room temperature under nitrogen atmosphere for 12 h, the mixture was filtered and concentrated. The residue was redissolved in dichloromethane (20 mL) and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was purified by pre-TLC (eluted with MeOH in dichloromethane) to afford the title compound 10 (20 mg, yield 29%) as a white solid. LCMS: m / z calculated for C49H68N11O10P: 1002.12; found: 1003.12 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.00 (s, 1H) , 8.13 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 8.07 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.96 (d, J = 13.1 Hz, 1H) , 7.80 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.65 –7.56 (m, 3H) , 7.34 (s, 1H) , 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 6.99 (s, 2H) , 6.80 (s, 2H) , 5.98 (s, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 4.96 (s, 2H) , 4.35 (q, J = 7.2 Hz, 3H) , 4.19 (q, J = 7.6 Hz, 1H) , 3.13 (s, 2H) , 2.96 (s, 4H) , 2.14 (s, 2H) , 1.91 (s, 3H) , 1.82 (s, 2H) , 1.70 (d, J = 13.3 Hz, 9H) , 1.64 –1.37 (m, 11H) , 1.27 (s, 2H) , 0.94 (s, 3H) , 0.84 (s, 6H) .

[0294] Example 11. Synthesis of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) (methyl) carbamate (11)

[0295] Synthetic scheme 11

[0296] Step 1: To a solution of compound 10-3 (50 mg, 0.068 mmol) in DMF (1 mL) was added DIPEA (26 mg, 0.201 mmol) , compound 3 (45 mg, 0.108 mmol) and HOBt (14 mg, 0.102mmol) . After stirring at room temperature under nitrogen atmosphere for 12 h, the mixture was filtered and concentrated. The residue was redissolved in dichloromethane (20 mL) and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was purified by pre-TLC (eluted with MeOH in dichloromethane) to afford the title compound 11 (19 mg, yield 27%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.03 (s, 1H) , 8.34 (s, 1H) , 8.15 (s, 1H) , 8.08 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 8.03 –7.98 (m, 1H) , 7.95 (s, 1H) , 7.80 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.65 (t, J = 9.3 Hz, 1H) , 7.59 (s, 2H) , 7.29 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.20 (s, 1H) , 7.00 (s, 1H) , 5.99 (t, J = 5.8 Hz, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 5.00 (s, 2H) , 4.36 (d, J = 8.2 Hz, 3H) , 4.18 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 2.97 (dq, J = 12.8, 6.7 Hz, 4H) , 2.89 (s, 3H) , 2.89 (s, 2H) , 2.15 (tq, J = 14.1, 7.3 Hz, 2H) , 2.04 –1.92 (m, 3H) , 1.85 (d, J = 22.9 Hz, 3H) , 1.72 (d, J = 13.3 Hz, 9H) , 1.63 –1.35 (m, 11H) , 1.20 –1.13 (m, 2H) , 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.86 –0.80 (m, 6H) . LCMS: m / z calculated for C50H70N11O10P: 1016.15; found: 1007.25 [M+H] +.

[0297] Example 12. Synthesis of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl (2- ( (2- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) ethyl) (methyl) carbamate (12)

[0298] Synthetic scheme 12

[0299] Step 1: To a solution of compound 10-3 (68 mg, 0.092 mmol) in DMF (1 mL) was added (36 mg, 0.276 mmol) , compound 6 (44 mg, 0.092 mmol) and HOBt (19 mg, 0.138 mmol) . After stirring at room temperature under nitrogen atmosphere for 12 h, the mixture was filtered and concentrated. The residue was redissolved in dichloromethane (20 mL) and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was purified by pre-TLC (eluted with MeOH in dichloromethane) to afford the title compound 12 (7 mg, yield 7%) as a white solid. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.99 (s, 1H) , 8.13 (s, 1H) , 8.07 (s, 1H) , 7.80 (s, 1H) , 7.74 (s, 1H) , 7.62 (s, 1H) , 7.57 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 7.47 (s, 1H) , 7.25 (s, 2H) , 6.99 (s, 2H) , 5.99 (s, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 4.96 (s, 2H) , 4.40 (s, 3H) , 4.18 (s, 1H) , 3.64 (s, 4H) , 3.41 (s, 2H) , 3.01 (dd, J = 13.3, 6.7 Hz, 1H) , 2.96 (s, 3H) , 2.87 (s, 3H) , 2.16 (s, 1H) , 2.12 (s, 1H) , 1.97 (s, 4H) , 1.80 (d, J = 7.6 Hz, 4H) , 1.69 (s, 1H) , 1.59 (s, 1H) , 1.45 (d, J = 25.2 Hz, 10H) , 1.18 (s, 2H) , 0.93 (s, 3H) , 0.83 (d, J = 15.2 Hz, 9H) . LCMS: m / z calculated for C54H71N13O11: 1078.24; found: 1079.13 [M+H] +.

[0300] Example 13. Synthesis of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl (2- ( (2- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) ethyl) carbamate (13)

[0301] Synthetic scheme 13

[0302] Step 1: To a solution of compound 10-3 (50 mg, 0.068 mmol) in DMF (1 mL) was added DIPEA (26 mg, 0.204 mmol) , compound 2 (50 mg, 0.108 mmol) and HOBt (14 mg, 0.102mmol) . After stirring at room temperature under nitrogen atmosphere for 12 h, the mixture was filtered and concentrated. The residue was redissolved in dichloromethane (20 mL) and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was purified by pre-TLC (eluted with MeOH in dichloromethane) to afford the title compound 13 (16 mg, yield 22%) as a white solid. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.96 (s, 1H) , 8.76 (d, J = 46.7 Hz, 1H) , 8.17 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 8.06 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.79 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.72 (t, J = 7.9 Hz, 1H) , 7.57 (d, J = 8.1 Hz, 3H) , 7.46 (s, 1H) , 7.35 (d, J = 5.6 Hz, 1H) , 7.25 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 7.00 (s, 2H) , 5.97 (s, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 4.94 (s, 2H) , 4.43 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 4.38 (t, J = 7.1 Hz, 1H) , 4.18 (dd, J = 8.6, 6.7 Hz, 1H) , 3.59 (d, J = 43.6 Hz, 4H) , 3.36 (s, 3H) , 3.18 (d, J = 6.0 Hz, 2H) , 3.01 (dt, J = 15.5, 7.2 Hz, 3H) , 2.93 (dd, J = 13.1, 6.5 Hz, 1H) , 2.14 (ddt, J = 28.5, 14.2, 7.1 Hz, 2H) , 2.03 –1.92 (m, 3H) , 1.83 (dt, J = 15.5, 7.8 Hz, 4H) , 1.68 (s, 1H) , 1.58 (d, J = 9.6 Hz, 1H) , 1.45 (dp, J = 22.2, 7.3 Hz, 8H) , 1.37 (s, 1H) , 1.18 (p, J = 7.9 Hz, 2H) , 0.94 (t, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.84 (d, J = 6.7 Hz, 3H) , 0.81 (d, J = 6.7 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C53H69N13O11: 1064.22; found: 1065.21 [M+H] +.

[0303] Example 14. Synthesis of (1r, 4r) -N- (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) -4- ( (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) methyl) cyclohexane-1-carboxamide (14)

[0304] Synthetic scheme 14

[0305] Step 1: To a solution of compound 1-4 (210 mg, 0.52 mmol) and DIPEA (100 mg, 0.77 mmol) in DMF (3 mL) was added compound 14-1 (210 mg, 0.63 mmol) at 0 ℃. The mixture was allowed to warm slowly to room temperature and stirred for 3 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered and purified by pre-HPLC (eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 14 (180 mg, yield 55%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.13 (dd, J = 8.2, 3.0 Hz, 1H) , 7.97 (d, J = 11.9 Hz, 1H) , 7.79 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 7.61 (t, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.01 (s, 2H) , 6.92 (s, 2H) , 4.34 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 3.24 (d, J = 7.1 Hz, 2H) , 3.13 (q, J = 6.4 Hz, 2H) , 2.95 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 2.03 (d, J = 23.9 Hz, 1H) , 1.93 –1.85 (m, 2H) , 1.82 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.72 (s, 3H) , 1.68 (s, 4H) , 1.67 –1.59 (m, 4H) , 1.56 –1.49 (m, 1H) , 1.43 (q, J = 7.5 Hz, 2H) , 1.35 –1.23 (m, 3H) , 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.88 (dd, J = 15.0, 11.7 Hz, 2H) . LCMS: m / z calculated for C32H43N6O5P: 622.71; found: 623.80 [M+H] +.

[0306] Example 15. Synthesis of (1r, 4r) -N- (2- ( (2- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) ethyl) -4- ( (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) methyl) cyclohexane-1-carboxamide (15)

[0307] Synthetic scheme 15

[0308] Step 1: To a solution of compound 2 (300 mg, 0.64 mmol) and DIPEA (125 mg, 0.97 mmol) in DMF (4 mL) was added compound 14-1 (255 mg, 0.76 mmol) at 0 ℃. The mixture was allowed to warm slowly to room temperature and stirred for 3 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered and purified by pre-HPLC (eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 15 (250 mg, yield 57%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 –8.17 (m, 1H) , 7.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.75 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.60 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 6.97 (s, 2H) , 4.44 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 3.62 (s, 4H) , 3.19 (d, J = 7.1 Hz, 4H) , 3.00 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.04 –1.93 (m, 3H) , 1.83 (dt, J = 15.2, 7.6 Hz, 4H) , 1.68 (d, J = 10.8 Hz, 2H) , 1.57 (d, J = 11.5 Hz, 2H) , 1.42 (dd, J = 14.7, 7.3 Hz, 3H) , 1.24 (q, J = 12.9 Hz, 2H) , 0.97 –0.91 (m, 3H) , 0.85 (q, J = 12.5, 11.3 Hz, 2H) . LCMS: m / z calculated for C36H44N8O6: 684.80; found: 685.75 [M+H] +.

[0309] Example 16. Synthesis of 2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl 2- ( (1- ( ( (1r, 4r) -4- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) carbamoyl) cyclohexyl) methyl) -2, 5-dioxopyrrolidin-3-yl) thio) acetate (16)

[0310] Synthetic scheme 16

[0311] Step 1: To a solution of compound 14 (170 mg, 0.27 mmol) in anhydrous acetonitrile (3 mL) was added mercaptoacetic acid (38 mg, 0.41 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 19 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated and purified by HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired component was lyophilized to give the title compound 16-1 (101 mg, yield 51%) as a white solid. LCMS: m / z calculated for C34H47N6O7PS: 714.82; found: 716.01 [M+H] +.

[0312] Step 2: To a solution of compound 16-1 (39 mg, 0.054 mmol) in anhydrous DCM (1 mL) and anhydrous DMF (0.2 mL) was added N-Hydroxy succinimide (24 mg, 0.212 mmol) and DCC (43 mg, 0.212 mmol) under nitrogen atmosphere. The mixture was stirred at room temperature for 3 h. After completion of the reaction, the insoluble impurity was removed by filtration and the filter was concentrated to give the title compound 16 (crude, 42 mg, yield 95%) as a yellow solid. The crude product was used at the next step without further purification. LCMS: m / z calculated for C38H50N7O9PS: 811.89; found: 813.08 [M+H] +.

[0313] Example 17. Synthesis of 2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl 2- ( (1- ( ( (1s, 4s) -4- ( (2- ( (2- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) ethyl) carbamoyl) cyclohexyl) methyl) -2, 5-dioxopyrrolidin-3-yl) thio) acetate (17)

[0314] Synthetic scheme 17

[0315] Step 1: To a solution of compound 15 (124 mg, 0.18 mmol) in anhydrous acetonitrile (3 mL) was added mercaptoacetic acid (41.7 mg, 0.45 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 19 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated and purified  by pre-HPLC (C18 column, eluted with acetonitrile in water) . The desired component was lyophilized to afford the title compound 17 (83 mg, yield 51%) as a white solid. LCMS: m / z calculated for C38H48N8O8S: 776.91; found: 778.02 [M+H] +.

[0316] Step 2: To a solution of compound 17-1 (55 mg, 0.07 mmol) in anhydrous DCM (5 mL) and anhydrous DMF (0.2 mL) was added N-Hydroxy succinimide (24 mg, 0.212 mmol) and DCC (43 mg, 0.212 mmol) under nitrogen atmosphere. Then the mixture was stirred at room temperature for 2.5 h. After completion of the reaction, the insoluble impurity was removed by filtration and the filter was concentrated to give the compound 17 (crude, 59 mg, yield 96%) as a yellow solid. LCMS: m / z calculated for C42H51N9O10S: 873.98; found: 875.17 [M+H] +.

[0317] Example 18. Synthesis of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl (2- ( (2- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) ethyl) carbamate (18)

[0318] Synthetic scheme 18

[0319] Step 1: To a solution of compound 10-3 (67 mg, 0.091 mmol) in DMF (2 mL) was added DIPEA (24 mg, 0.186 mmol) , compound 7 (50 mg, 0.0.092 mmol) and HOBt (12 mg, 0.089mmol) . After stirring at room temperature under nitrogen atmosphere for 16 h, the mixture was filtered and concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (eluted with acetonitrile in water) to afford the title compound 18 (36 mg, yield 34%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz,  DMSO-d6) δ 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 8.08 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.82 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.57 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 7.24 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 6.98 (s, 2H) , 4.92 (s, 2H) , 4.42 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 4.37 (d, J = 5.6 Hz, 1H) , 4.16 (dd, J = 7.7, 5.0 Hz, 1H) , 3.62 (s, 2H) , 3.52 (s, 2H) , 3.19 –3.15 (m, 2H) , 3.01 –2.93 (m, 4H) , 2.90 (dd, J = 14.0, 6.9 Hz, 1H) , 2.18 (dd, J = 14.2, 7.5 Hz, 1H) , 2.11 (dd, J = 14.2, 7.0 Hz, 1H) , 1.96 (dd, J = 14.1, 7.5 Hz, 4H) , 1.81 (q, J = 7.6 Hz, 4H) , 1.73 (d, J =13.4 Hz, 8H) , 1.64 –1.51 (m, 2H) , 1.50 –1.39 (m, 8H) , 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.83 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 0.80 (d, J = 6.6 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C55H74N13O12P: 1140.25; found: 1141.63 [M+H] +.

[0320] Example 19. Synthesis of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl (2- ( (2- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) ethyl) (methyl) carbamate (19)

[0321] Synthetic scheme 19

[0322] Step 1: To a solution of compound 10-3 (70 mg, 0.095 mmol) in DMF (2 mL) was added DIPEA (24 mg, 0.186 mmol) , compound 8 (54 mg, 0.092 mmol) and HOBt (12 mg, 0.089mmol) . After stirring at room temperature under nitrogen atmosphere for 16 h, the mixture was filtered and concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (eluted with acetonitrile in water) to afford the title compound 19 (26 mg, yield 24%) as a white solid. 1H NMR (600 MHz,  DMSO-d6) δ 8.17 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 8.08 (d, J = 7.1 Hz, 1H) , 7.81 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.59 –7.53 (m, 2H) , 7.25 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 6.98 (s, 2H) , 4.95 (d, J = 6.1 Hz, 2H) , 4.37 (dt, J = 15.9, 7.0 Hz, 3H) , 4.16 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 3.64 (s, 4H) , 3.35 (t, J = 7.0 Hz, 2H) , 3.03 –2.89 (m, 5H) , 2.86 (d, J = 9.6 Hz, 3H) , 2.17 (dt, J = 14.7, 7.5 Hz, 1H) , 2.11 (q, J = 7.0 Hz, 1H) , 1.96 (h, J =7.8, 6.8 Hz, 4H) , 1.80 (p, J = 7.6 Hz, 4H) , 1.72 (d, J = 13.3 Hz, 8H) , 1.49 (s, 2H) , 1.48 –1.35 (m, 8H) , 0.92 (t, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.83 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 0.80 (d, J = 6.7 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C56H76N13O12P: 1154.28; found: 1155.70 [M+H] +.

[0323] Example 20. Synthesis of (1r, 4r) -N- (2- ( (2- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) ethyl) -4- ( (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) methyl) cyclohexane-1-carboxamide (20)

[0324] Synthetic scheme 20

[0325] Step 1: To a solution of compound 7 (100 mg, 0.184 mmol) and DIPEA (50 mg, 0.387 mmol) in DMF (4 mL) was added compound 14-1 (74 mg, 0.221 mmol) at 0 ℃, then the mixture was allowed to warm slowly to room temperature and stirred for 3 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered and purified by pre-HPLC (eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 20 (31 mg, yield 22%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.30 –8.24 (m, 2H) , 7.95 (t, J = 9.2 Hz, 1H) , 6.96 (s, 2H) , 4.46 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 3.62 (s, 2H) , 3.51 (s, 2H) , 3.23 –3.15 (m, 4H) , 3.02 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.99 (td, J = 6.9, 3.5 Hz, 3H) , 1.84 (p, J = 7.6 Hz, 4H) , 1.78 (s, 3H) , 1.75 (s,  3H) , 1.69 (d, J = 12.6 Hz, 2H) , 1.60 –1.53 (m, 2H) , 1.49 –1.40 (m, 3H) , 1.30 –1.25 (m, 1H) , 1.23 –1.18 (m, 1H) , 0.94 (t, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.90 –0.79 (m, 2H) . LCMS: m / z calculated for C38H49N8O7P: 760.83; found: 762.04 [M+H] +.

[0326] Example 21. Synthesis of (1r, 4r) -N- (2- ( (2- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-7- (dimethylphosphoryl) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) amino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) ethyl) -4- ( (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) methyl) -N-methylcyclohexane-1-carboxamide (21)

[0327] Synthetic scheme 21

[0328] Step 1: To a solution of compound 8 (100 mg, 0.18 mmol) and DIPEA (46 mg, 0.36 mmol) in DMF (4 mL) was added compound 14-1 (72 mg, 0.21 mmol) at 0 ℃. The mixture was allowed to warm slowly to room temperature and stirred for 3 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered and purified by pre-HPLC (eluted with acetonitrile in water) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 21 (25 mg, yield 18%) as a white solid. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.28 –8.21 (m, 2H) , 7.92 (q, J = 9.7 Hz, 1H) , 6.89 (s, 2H) , 4.44 (d, J = 5.8 Hz, 2H) , 3.62 (s, 4H) , 3.20 –3.09 (m, 3H) , 3.04 –2.95 (m, 4H) , 2.79 (s, 2H) , 1.98 (d, J = 20.5 Hz, 3H) , 1.82 (dd, J = 7.5, 3.2 Hz, 2H) , 1.76 (dd, J = 13.5, 1.8 Hz, 8H) , 1.59 (d, J = 23.6 Hz, 2H) , 1.52 (d, J = 22.2 Hz, 2H) , 1.42 (qd, J = 7.4, 2.7 Hz, 3H) , 1.17 (d, J = 14.2 Hz, 2H) , 0.93 (td, J = 7.3, 1.9 Hz, 5H) . LCMS: m / z calculated for C39H51N8O7P: 774.86; found: 775.90 [M+H] +.

[0329] Example 22. Synthesis of 4- ( (S) -2- ( (S) -2- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -3-methylbutanamido) -5-ureidopentanamido) benzyl (3- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) (2- (heptadecylamino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) propyl) (methyl) carbamate (22)

[0330] Synthetic scheme 22

[0331] Step 1: To a solution of compound 22-1 (3.00 g, 15.93 mmol) in dichloromethane (30 mL) was added Et3N (2.37 g, 23.46 mmol) and 2-nitrobenzenesulfonyl chloride (22-2) (3.90 g, 17.60 mmol) at 0 ℃ under nitrogen atmosphere. The mixture was stirred at room temperature for 4 h. After completion of the reaction, the mixture was diluted with dichloromethane (100 mL) and washed with water (100 mL) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluted with 30%EtOAc in petroleum ether) to afford the title compound 22-3 (5.26 g, yield 88%) as a pale-yellow oil. LCMS: m / z calculated for C15H23N3O6S: 373.42; found: 374.74 [M+H] +.

[0332] Step 2: To a mixture of compound 22-3 (5.00 g, 13.39 mmol) , potassium carbonate (5.55 g, 40.16 mmol) and potassium iodide (2.22 g, 13.37 mmol) in DMF (50 mL) was added 1-bromo-4-chlorobutane (22-4) (4.59 g, 39.18 mmol) . The mixture was stirred at room temperature under nitrogen atmosphere for 16 h. After completion of the reaction, the mixture was partitioned  between ethyl acetate (300 mL) and water (200 mL) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was purified by silica gel column chromatography (eluted with 20%EtOAc in petroleum ether) to afford the title compound 22-5 (5.90 g, yield 95%) as a pale-yellow oil.

[0333] Step 3: To a mixture of compound 22-6 (2.00 g, 7.80 mmol) and potassium carbonate (2.16 g, 15.63 mmol) in DMF (20 mL) was added compound 22-5 (4.34 g, 9.35 mmol) . The mixture was stirred at room temperature under nitrogen atmosphere for 16 h. The mixture was partitioned between ethyl acetate (200 mL) and water (150 mL) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluted with 3%MeOH in DCM) to afford the title compound 22-7 (2.15 g, yield 40%) as a yellow oil. LCMS: m / z calculated for C33H45N7O7S: 683.83; found: 685.13 [M+H] +.

[0334] Step 4: To a mixture of compound 22-7 (2.00 g, 2.92 mmol) and potassium carbonate (2.02 g, 14.61 mmol) in acetonitrile (20 mL) was added 4-ethylbenzenethiol (1.45 g, 10.49 mmol) . The mixture was stirred at room temperature under nitrogen atmosphere for 15 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluted with 3%MeOH in DCM with 0.1%Et3N) to afford the title compound 22-8 (1.33 g, yield 91%) as a yellow oil. LCMS: m / z calculated for C27H42N6O3: 498.67; found: 500.24 [M+H] +.

[0335] Step 5: To a solution of 3, 4-dimethoxycyclobut-3-ene-1, 2-dione (22-9) (313 mg, 2.20 mmol) in anhydrous methanol (5 mL) was added dropwise a solution of compound 22-8 (1.00 g, 2.01 mmol) and DIPEA (525 mg, 4.06 mmol) in anhydrous methanol (10 mL) . The mixture was stirred at room temperature under nitrogen atmosphere for 12 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by silica gel column chromatography (eluted with 5%MeOH in DCM) to afford the title compound 22-10 (931 mg, yield 76%) as a yellow oil. LCMS: m / z calculated for C32H44N6O6: 608.74; found: 610.22 [M+H] +.

[0336] Step 6: Under nitrogen atmosphere, to a solution of compound 22-10 (600 mg, 0.99 mmol) in anhydrous methanol (8 mL) was added dropwise a solution of heptadecan-1-amine (22-11) (378 mg, 1.48 mmol) in anhydrous methanol (4 mL) at 0 ℃. The mixture was warmed slowly to room temperature and stirred under nitrogen atmosphere for 12 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by silica gel column  chromatography (eluted with 9%MeOH in DCM) to afford the title compound 22-12 (784 mg, yield 95%) as a yellow foam. LCMS: m / z calculated for C48H77N7O5: 832.19; found: 833.50 [M+H] +.

[0337] Step 7: To a solution of compound 22-12 (710 mg, 0.85 mmol) in dichloromethane (8 mL) was added 4 N HCl in EtOAc (8 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 1 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The crude product was purified by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with 73%acetonitrile in water with 0.1%HCl) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 22-13 (510 mg, yield 82%) as a pale-yellow solid. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.18 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.84 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.75 (t, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.61 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 4.44 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 3.67 (s, 2H) , 3.56 (t, J = 6.8 Hz, 2H) , 2.99 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.91 (s, 2H) , 2.54 (s, 3H) , 1.93 (d, J = 15.8 Hz, 4H) , 1.81 (q, J = 7.5 Hz, 4H) , 1.52 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 1.46 –1.38 (m, 2H) , 1.28 –1.02 (m, 28H) , 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.83 (t, J = 7.0 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C43H69N7O3: 732.07; found: 733.36 [M+H] +.

[0338] Step 8: Under nitrogen atmosphere, to a solution of compound 22-13 (100 mg, 0.14 mmol) and DIPEA (45 mg, 0.35 mmol) in anhydrous DMF (2.5 mL) was added HOBt (23 mg, 0.17 mmol) and compound 10-3 (103 mg, 0.14 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 20 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered. The filtrate was purified directly by pre-HPLC (C18 column, eluted with 88%acetonitrile in water with 0.1%HCl) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 22 (121 mg, yield 65%) as a white solid. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.83 (dd, J =8.4, 1.0 Hz, 1H) , 7.74 (ddd, J = 8.4, 7.1, 1.4 Hz, 1H) , 7.57 (d, J = 8.1 Hz, 3H) , 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 6.97 (s, 2H) , 4.94 (s, 2H) , 4.41 (s, 2H) , 4.34 (s, 1H) , 4.14 (s, 1H) , 3.55 (s, 2H) , 3.35 (s, 2H) , 3.25 (s, 2H) , 2.96 (d, J = 21.0 Hz, 4H) , 2.83 (s, 3H) , 2.13 (d, J = 19.9 Hz, 2H) , 1.94 (s, 3H) , 1.79 (d, J = 9.9 Hz, 6H) , 1.67 (s, 1H) , 1.58 (s, 1H) , 1.44 (dd, J = 32.6, 7.4 Hz, 11H) , 1.18 (p, J =14.6, 11.0 Hz, 33H) , 0.91 (t, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.81 (q, J = 6.8 Hz, 9H) . LCMS: m / z calculated for C72H107N13O11: 1330.73; found: 1332.15 [M+H] +.

[0339] Example 23. Synthesis of N- (3- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) (2- (heptadecylamino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) propyl) -6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) -N-methylhexanamide (23)

[0340] Synthetic scheme 23

[0341] Step 1: To a solution of compound 22-13 (100 mg, 0.14 mmol) and DIPEA (45 mg, 0.35 mmol) in anhydrous DMF (2.5 mL) was added 2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl 6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanoate (23-1) (42 mg, 0.14 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 24 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered. The filtrate was purified directly by pre-HPLC (C18 column, eluted with 87%acetonitrile in water with 0.1%HCl) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 22 (52 mg, yield 41%) as a pale-yellow solid. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.18 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.75 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 6.97 (s, 2H) , 4.44 (d, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.56 (s, 2H) , 3.34 (s, 2H) , 3.29 (s, 2H) , 2.99 (s, 2H) , 2.92 (s, 2H) , 2.77 (s, 1H) , 2.21 (s, 2H) , 1.94 (s, 2H) , 1.82 (s, 5H) , 1.73 (s, 1H) , 1.50 (s, 2H) , 1.42 (d, J = 7.6 Hz, 7H) , 1.22 (d, J =23.8 Hz, 33H) , 0.92 (t, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.83 (t, J = 6.9 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C53H80N8O6: 925.27; found: 926.62 [M+H] +.

[0342] Example 24. Synthesis of [4- [ [ (2S) -2- [ [ (2S) -2- [6- [3- [2- [ [4- (2-azatricyclo [10.4.0.04, 9] hexadeca-1 (12) , 4 (9) , 5, 7, 13, 15-hexaen-10-yn-2-yl) -4-oxo-butanoyl] amino] ethylsulfanyl] -2, 5-dioxo-pyrrolidin-1-yl] hexanoylamino] -3-methyl-butanoyl] amino] -5-ureido-pentanoyl] amino] phenyl] methyl N- [4- (4-amino-2-butyl-7-dimethylphosphoryl-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxybutyl] carbamate (24)

[0343] Synthetic scheme 24

[0344] Step 1: To a solution of 2-aminoethane-1-thiol (24-2) (46 mg, 0.60 mmol) and DIPEA (96 mg, 0.74 mmol) in dichloromethane (4 mL) was added a solution of compound 24-1 (200 mg, 0.50 mmol) in dichloromethane (2 mL) at 0 ℃. The mixture was stirred at 0 ℃ for 1 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with 75%acetonitrile in water with 0.1%AcOH) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 24-3 (62 mg, yield 34%) as a white solid. LCMS: m / z calculated for C21H20N2O2S: 364.12; found: 365.10 [M+H] +.

[0345] Step 2: To a solution of compound 13 (50 mg, 0.05 mmol) and Et3N (10 mg, 0.10 mmol) in DMF (2 mL) was added compound 24-3 (22 mg, 0.06 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 1.5 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered. The filtrate was purified directly by pre-HPLC (C18 column, eluted with 55%acetonitrile in water with 0.1%AcOH) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 24 (21 mg, yield 30%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.99 (s, 1H) , 8.17 (s, 1H) , 8.06 (d, J = 20.6 Hz, 2H) , 7.90 (s, 1H) , 7.81 (s, 1H) , 7.70 (s, 1H) , 7.67 (s, 1H) , 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 3H) , 7.51 –7.41 (m, 3H) , 7.34 (s, 3H) , 7.27 (d, J = 8.5 Hz, 3H) , 5.96 (s, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 5.01 (d, J = 14.1 Hz, 1H) , 4.95 (s, 2H) , 4.36 (d, J = 5.8 Hz, 3H) , 4.18 (s, 1H) , 3.94 (d, J = 8.2 Hz,  1H) , 3.59 (d, J = 14.0 Hz, 1H) , 3.14 (dt, J = 17.5, 6.5 Hz, 5H) , 3.04 –2.88 (m, J = 6.6 Hz, 4H) , 2.75 (dq, J = 12.4, 6.4 Hz, 1H) , 2.58 (d, J = 16.4 Hz, 3H) , 2.42 (d, J = 18.4 Hz, 1H) , 2.27 –2.05 (m, 3H) , 1.97 (d, J = 13.7 Hz, 2H) , 1.91 (s, 2H) , 1.80 (d, J = 7.7 Hz, 3H) , 1.75 –1.62 (m, 10H) , 1.57 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 1.51 –1.26 (m, 9H) , 1.19 (d, J = 7.2 Hz, 2H) , 0.93 (t, J = 7.3 Hz, 3H) , 0.82 (dd, J = 12.5, 6.7 Hz, 6H) . LCMS: m / z calculated for C70H88N13O12PS: 1366.59; found: 1367.30 [M+H] +.

[0346] Example 25. Synthesis of N- (3- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) (2- (heptadecylamino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) propyl) -1- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) -N-methyl-3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24-octaoxaheptacosan-27-amide (25)

[0347] Synthetic scheme 25

[0348] Step 1: To a mixture of compound 22-13 (80 mg, 0.11 mmol) , compound 25-1 (86 mg, 0.16 mmol) , HOBt (15 mg, 0.11 mmol) and DIPEA (43 mg, 0.33 mmol) in DMF (4 mL) was added EDCI (42 mg, 0.22 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 5 h. After  completion of the reaction, the mixture was filtered. The filtrate was purified directly by pre-HPLC (C18 column, eluted with 80%acetonitrile in water with 0.1%TFA) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 25 (67 mg, yield 49%) as a white solid. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.18 (dd, J = 8.1, 1.4 Hz, 1H) , 7.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.75 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.65 (d, J = 22.9 Hz, 1H) , 7.59 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 7.02 (s, 2H) , 4.44 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 3.63 –3.53 (m, 8H) , 3.49 (s, 20H) , 3.46 (d, J = 7.1 Hz, 9H) , 3.30 (s, 3H) , 3.00 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.94 (s, 2H) , 2.79 (s, 1H) , 2.55 (dd, J = 13.4, 6.8 Hz, 4H) , 1.94 (s, 2H) , 1.82 (d, J = 7.6 Hz, 6H) , 1.51 (s, 2H) , 1.43 (d, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.21 (s, 28H) , 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H) , 0.84 (t, J = 6.9 Hz, 3H) . LCMS: m / z calculated for C66H106N8O14: 1234.78; found: 1235.60 [M+H] +.

[0349] Example 26. Synthesis of N- ( (34S, 37S, 40S) -40- ( ( (S) -65- (1- (2- ( (3- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) (2- (heptadecylamino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) propyl) (methyl) amino) -2-oxoethyl) -1H-1, 2, 3-triazol-4-yl) -28, 35, 63-trioxo-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60-heptadecaoxa-29, 36, 64-triazapentahexacontan-34-yl) carbamoyl) -34- (1- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) -3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24-octaoxaheptacosan-27-amido) -28, 35, 38-trioxo-37- (28-oxo-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26-nonaoxa-29-azatritriacontan-33-yl) -2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26-nonaoxa-29, 36, 39-triazatetratetracontan-44-yl) -2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26-nonaoxaoctacosan-28-amide (26)

[0350] Synthetic scheme 26

[0351] Step 1: 2-Chorotrityl Chloride resin (1.56 mmol / g, 3.22 g, 5.02 mmol) was swollen in dichloromethane (40 mL) with nitrogen bubbling for 30 min. After removing the dichloromethane, DIPEA (2.34 g, 18.10 mmol) and 1- (9H-fluoren-9-yl) -3-oxo-2, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28-nonaoxa-4-azahentriacontan-31-oic acid (26-1) (3.00 g, 4.52 mmol) and dichloromethane (40 mL) were added. The mixture was bubbled for 2 h, the unreacted Cl  group was blocked with methanol (3 mL) for 30 min. Next, the resin was washed with DMF and dichloromethane. Then Fmoc was removed by 20 %piperidine in DMF for 30 min. The next four Fmoc-Lys (Boc) -OH (26-2) was coupled in sequence by using the following condition: Fmoc-Lys (Boc) -OH (6.35 g, 13.55 mmol) , HBTU (4.89 g, 12.90 mmol) and DIPEA (3.48 g, 26.92 mmol) were bubbled with nitrogen in DMF for 30 min. The final Fmoc-protected resin was washed with DMF and MeOH, dried by nitrogen bubbling to afford the desired resin.

[0352] The desired resin was added to a mixed solution of hexafluoroisopropanol (40 mL) and dichloromethane (160 mL) . The reaction mixture was shaken at room temperature for 30 min and filtered. The filter cake was washed with 20%hexafluoroisopropanol in dichloromethane. The filtrate was concentrated to dryness to afford the title compound 26-3 (6.42 g, yield 90%) as a light yellow solid. LCMS: m / z calculated for C78H129N9O24: 1575.92; found 1576.85 [M+H] +.

[0353] Step 2: To a solution of compound 26-3 (3.00 g, 1.90 mmol) and propargylamine (210 mg, 3.81 mmol) in anhydrous dichloromethane (35 mL) was added EDCI (546 mg, 2.85 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 3 h. After completion of the reaction, the mixture was diluted with DCM (100 mL) and washed with water (80 mL) . The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was purified by silica gel column chromatography (eluted with 9%MeOH in DCM) to afford the title compound 26-4 (1.96 g, yield 64%) . LCMS: m / z calculated for C81H132N10O23: 1613.99; found 1614.79 [M+H] +.

[0354] Step 3: To a solution of compound 26-4 (1.50 g, 0.93 mmol) in dichloromethane (6 mL) and methanol (1.5 mL) was added 4 N HCl in EtOAc (7.5 mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was triturated with EtOAc and petroleum ether to afford the title compound 26-5 (hydrochloride, 1.16 g, yield 92%) . LCMS: m / z calculated for C61H100N10O15: 1212.74; found 1213.87 [M+H] +.

[0355] Step 4: A solution of 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26-nonaoxaoctacosan-28-oic acid (26-6) (2.20 g, 4.97 mmol) , DIPEA (1.06 g, 8.20 mmol) and HATU (2.50 g, 6.58 mmol) in anhydrous DMF (11 mL) was stirred at room temperature for 20 min. To this solution was added (1.40 g, 1.03 mmol) and DIPEA (1.06 g, 8.20 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue  was extracted with DCM (100 mL x 2) and water (100 mL) . The combined organic layers were washed with saturated NaHCO3 solution and 1 N HCl solution. The final organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was purified by silica gel column chromatography (eluted with 15%MeOH in DCM) to afford the title compound 26-7 (1.36 g, yield 45%) as a pale-yellow slurry. LCMS: m / z calculated for C137H244N10O55: 2911.47; found 971.78 [M+3H] 3+.

[0356] Step 5: A mixture of compound 26-7 (1.30 g, 0.45 mmol) and diethylamine (2.6 mL) in dichloromethane (10.4 mL) was stirred at room temperature for 2 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was dispersed with isopropanol (20 mL) and the insoluble slurry was centrifuged and dried in vacuum. The crude product was purified by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with 43%acetonitrile in water with 0.1%HCl) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 26-8 (847 mg, yield 70%) as a colorless oil. LCMS: m / z calculated for C122H234N10O53: 2689.23; found 897.37 [M+3H] 3+.

[0357] Step 6: To a solution of compound 26-8 (210 mg, 0.08 mmol) , HOBt (11 mg, 0.08) , DIPEA (35 mg, 0.27 mmol) and 1- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) -3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24-octaoxaheptacosan-27-oic acid (26-9) (53 mg, 0.10 mmol) in anhydrous dichloromethane (5 mL) was added EDCI (27 mg, 0.14 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 14 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with 75%acetonitrile in water with 0.1%TFA) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 26-10 (105 mg, yield 42%) as a colorless oil. LCMS: m / z calculated for C122H234N10O53: 3192.78; found 1065.27 [M+3H] 3+.

[0358] Step 7: To a mixture of compound 22-13 (200 mg, 0.27 mmol) , 2-azidoacetic acid (26-11) (42 mg, 0.42 mmol) , HOBt (37 mg, 0.27 mmol) and DIPEA (106 mg, 0.82 mmol) in anhydrous DMF (4 mL) was added EDCI (79 mg, 0.42 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered. The filtrate was purified directly by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with 86%acetonitrile in water with 0.1%TFA) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 26-12 (144 mg, yield 65%) as a colorless oil. LCMS: m / z calculated for C45H70N10O4: 814.56; found 815.64 [M+H] +.

[0359] Step 8: Under nitrogen atmosphere, a mixture of compound 26-10 (50 mg, 0.016 mmol) , compound 26-12 (16 mg, 0.020 mmol) , CuI (6 mg, 0.031 mmol) and DIPEA (16 mg, 0.124 mmol) in THF (2.5 mL) was stirred at room temperature for 2 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by pre-HPLC (C18 column, eluted with 73%acetonitrile in water with 0.1%HCl) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 26 (35 mg, yield 55%) as an off-white solid. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.41 –8.34 (m, 1H) , 8.15 (s, 1H) , 7.98 (d, J = 7.7 Hz, 1H) , 7.89 (s, 2H) , 7.86 –7.77 (m, 2H) , 7.75 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.72 –7.63 (m, 6H) , 7.02 (s, 2H) , 5.39 (d, J = 15.7 Hz, 2H) , 4.42 (s, 2H) , 4.29 (d, J = 5.5 Hz, 2H) , 4.24 –4.13 (m, 4H) , 3.85 (d, J = 1.9 Hz, 8H) , 3.55 (s, 26H) , 3.52 (s, 18H) , 3.50 (q, J = 1.8 Hz, 138H) , 3.47 (t, J = 2.2 Hz, 16H) , 3.48 –3.41 (m, 25H) , 3.23 (s, 12H) , 3.06 (d, J = 6.6 Hz, 6H) , 3.04 (s, 3H) , 2.97 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 2.40 (s, 1H) , 2.44 –2.32 (m, 5H) , 1.94 (s, 3H) , 1.81 (d, J = 7.3 Hz, 5H) , 1.62 (s, 4H) , 1.49 (d, J = 8.2 Hz, 6H) , 1.44 –1.33 (m, 12H) , 1.22 (d, J = 12.6 Hz, 36H) , 0.93 (td, J = 7.4, 2.0 Hz, 3H) , 0.85 –0.83 (m, 3H) . LCMS: m / z calculated for C190H341N21O68: 4007.90; found 1002.93 [M+4H] 4+.

[0360] Example 27. Synthesis of 4- ( (47S, 50S, 53S) -47- (6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanamido) -50-isopropyl-41, 48, 51-trioxo-53- (3-ureidopropyl) -2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38-tridecaoxa-42, 49, 52-triazatetrapentacontan-54-amido) benzyl (3- ( (4- ( (4-amino-2-butyl-1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-yl) oxy) butyl) (2- (heptadecylamino) -3, 4-dioxocyclobut-1-en-1-yl) amino) propyl) (methyl) carbamate (27)

[0361] Synthetic scheme 27

[0362] Step 1: A mixture of compound 27-1 (5.00 g, 8.31 mmol) and diethylamine (12 mL) in DMF (48 mL) was stirred at room temperature for 2 h. After completion of the reaction, MTBE (300 mL) was added to the mixture to form a precipitate. The crude product was triturated with EtOAc, filtered and dried in vacuum to afford the title compound 27-2 (3.04 mg, yield 95%) as a white solid. LCMS: m / z calculated for C18H29N5O4: 379.22; found 380.26 [M+H] +.

[0363] Step 2: A mixture of 27-3 (1.00 g, 1.58 mmol) , N-Hydroxy succinimide (364 mg, 3.16 mmol) and EDCI (606 mg, 3.16 mmol) in DCM (10 mL) was stirred at room temperature for 1 h. After completion of the active NHS ester, the mixture was diluted with DCM (100 mL) and washed with water (50 mL) . The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to afford the NHS ester intermediate. To another flask weighed compound 27-4 (467 mg, 1.90 mmol) and DIPEA (815 mg, 6.31 mmol) was added DMF (10 mL) and the NHS ester intermediate. The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by  silica gel column chromatography (eluted with 6%MeOH in DCM) to afford the title compound 27-5 (1.00 g, yield 74%) as a pale-yellow oil. LCMS: m / z calculated for C39H76N2O18: 860.51; found 861.57 [M+H] +.

[0364] Step 3: To a solution of compound 27-5 (970 mg, 1.13 mmol) , compound 27-2 (641 mg, 1.69 mmol) , HOBt (152 mg, 1.13) and DIPEA (730 mg, 5.64 mmol) in anhydrous DMF (10 mL) was added EDCI (433 mg, 2.26 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was purified by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with 50%acetonitrile in water with 0.1%TFA) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 27-6 (1.04 mg, yield 75%) as a colorless oil. LCMS: m / z calculated for C57H103N7O21: 1221.72; found 1222.71 [M+H] +.

[0365] Step 4: A mixture of compound 27-6 (1.16 g, 0.95 mmol) and TFA (6 mL) in DCM (24 mL) was stirred at room temperature for 1 h. After completion of the reaction, the mixture was concentrated. The residue was redissolved in 5%K2CO3 in mixed solvent of MeOH and H2O (v: v = 1: 1, 15 mL) and stirred for further 2 h. After the product was formed completely, the resulting mixture was concentrated. The crude product was purified directly by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with 40%acetonitrile in water with 0.1%TFA) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 27-7 (832 mg, yield 78%) as a colorless oil. LCMS: m / z calculated for C52H95N7O19: 1121.67; found 1122.75 [M+H] +.

[0366] Step 5: To a solution of compound 27-7 (832 mg, 0.74 mmol) and DIPEA (370 mg, 2.86 mmol) in DMF (10 mL) was added 2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl 6- (2, 5-dioxo-2, 5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanoate (23-1) (251 mg, 0.81 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered. The filtrate was purified directly by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with 50%acetonitrile in water with 0.1%AcOH) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 27-8 (623 mg, yield 64%) as a colorless oil. LCMS: m / z calculated for C62H106N8O22: 1314.74; found 1315.87 [M+H] +.

[0367] Step 6: A mixture of compound 27-8 (500 mg, 0.38 mmol) , DIPEA (200 mg, 1.55 mmol) and bis (4-nitrophenyl) carbonate (232 mg, 0.76 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at room temperature for 12 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered. The filtrate was purified directly by reverse phase flash chromatography (C18 column, eluted with 65% acetonitrile in water with 0.1%TFA) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 27-9 (422 mg, yield 75%) as a white solid. LCMS: m / z calculated for C69H109N9O26: 1479.75; found 1480.83 [M+H] +.

[0368] Step 7: A mixture of compound 22-13 (42 mg, 0.057 mmol) , DIPEA (22 mg, 0.17 mmol) , HOBt (8 mg, 0.059 mmol) and 27-9 (100 mg, 0.068 mmol) in DMF (3 mL) was stirred at room temperature under nitrogen atmosphere for 16 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered. The filtrate was purified directly by pre-HPLC (C18 column, eluted with 65%acetonitrile in water with 0.1%TFA) . The desired components were lyophilized to afford the title compound 27 (25 mg, yield 21%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ9.99 (s, 1H) , 8.16 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 8.09 (d, J = 7.1 Hz, 1H) , 7.95 (d, J = 7.9 Hz, 1H) , 7.86 –7.77 (m, 2H) , 7.72 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.65 (d, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.56 (d, J = 8.2 Hz, 3H) , 7.25 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 6.97 (s, 2H) , 4.95 (s, 2H) , 4.39 (d, J = 22.5 Hz, 3H) , 4.26 –4.13 (m, 2H) , 3.55 (s, 4H) , 3.51 –3.47 (m, 46H) , 3.46 (d, J = 1.8 Hz, 4H) , 3.34 (d, J = 7.1 Hz, 2H) , 3.25 (s, 2H) , 3.22 (s, 3H) , 3.03 –2.89 (m, 6H) , 2.83 (s, 3H) , 2.28 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 2.09 (dd, J = 8.9, 6.1 Hz, 2H) , 1.99 –1.89 (m, 3H) , 1.81 (p, J = 7.7 Hz, 6H) , 1.61 (d, J = 23.1 Hz, 2H) , 1.45 (dt, J = 14.2, 7.2 Hz, 10H) , 1.39 –1.31 (m, 4H) , 1.21 (d, J = 17.2 Hz, 34H) , 0.92 (t, J = 7.3 Hz, 3H) , 0.82 (dq, J = 10.1, 6.5, 5.0 Hz, 9H) . LCMS: m / z calculated for C106H173N15O26: 2073.63 found 692.29 [M+3H] 3+.

[0369] Example 28. General conjugate procedure for ADC preparation and characterization

[0370] Tris (2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride (TCEP-HCl, 0.5～5 mM, 2.5～6.5 eq, PBS solution, pH7.4) was added to a solution of antibody. The resulting solution was swirled gently and incubated at 25～37℃ for 2～24 hours. Linker payload (6～15 eq, 2～5 mM in DMSO) was added to the partially reduced antibody, the solution was swirled gently and kept at 25℃ for 1～24 hour. The crude sample was purified by illustraTM NAP column (GE healthcare) to remove the excess linker payload and exchanged into PBS buffer (pH 7.4) to give the purified conjugates. The purified ADCs were filtered through a 0.25-mm sterile filter and then stored at -80℃ as solution or at -20℃ as lyophilized powder until use. All ADCs were analyzed by hydrophobic interactional chromatography (HIC) for measurement of DAR (drug-to-antibody ratio) and UmAb% (unconjugated antibody percentage) , size exclusive chromatography (SEC) for determination of Agg% (aggregation percentage) , and UV absorption for calculation of ADC concentration and DAR.

[0371] HIC Conditions:

[0372] Apparatus: Agilent 1100 HPLC chromatograph with UV detector and auto-sampler

[0373] Column: TSKgel Butyl-NPR, 4.6mm ID x 3.5cm, 2.5um

[0374] Mobile phase A: 1.5 M (NH4) 2SO4 and 50 mM K2HPO4 in water, pH 7.0

[0375] Mobile phase B: 50 mM K3PO4 and 20%IPA in water, pH 7.0

[0376] Flow rate: 0.7 mL / min

[0377] Detector: UV at 280 nm

[0378] Run time: 22 min

[0379] Gradient Program:

[0380] SEC Conditions:

[0381] Apparatus: Agilent 1100 HPLC chromatograph with UV detector and auto-sampler

[0382] Column: YMC-Pack Diol 200, 300 x 8.0mm ID, S-5 um, 20 nm

[0383] Mobile phase: 40 mM NaCl and 20 mM K2HPO4 in water, pH 7.0

[0384] Flow rate: 0.8 mL / min

[0385] Detector: UV at 280 nm

[0386] Run time: 22 min

[0387] A summary of ADCs synthesized from a series of TLR agonist-derived linker payloads with antibodies including trastuzumab, avelumab, mouse anti-human HER2 Ab, anti-mouse PD-L1 (B7-H1) and atezolizumab is shown in Table 1.

[0388] Table 1: Exemplary ADCs Prepared from TLR Agonist-Derived Linker Payloads

[0389] Example 29. TLR7 / 8 agonists induce IFN-gamma and TNF-alpha release in human

[0390] PBMC

[0391] The system is used to assess the cytokines release. Activity is based on the measurement of interferon-gamma (IFN-γ) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) secreted into culture media.

[0392] Isolation of PBMCs

[0393] Fresh human blood was diluted with the same volume of PBS, 15 mL Lymphoprep was added into a Sepmate tube, then 30 mL diluted blood was added on the top gently without disturbing the interface.

[0394] The Sepmate tube was centrifuged for 25min at 1000x g at RT with brake off. The buffy coat containing peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) was collected from Sepmate tube and transferred into a new tube, and the cells were washed with 40 mL PBS twice and centrifuged at 350x g for 5min.

[0395] PBMCs were resuspended in complete culture medium at a density of 2E6 / ml.

[0396] Compound Preparation

[0397] The compounds are solubilized in dimethyl sulfoxide (DMSO) and diluted into indicated concentration with complete culture medium.

[0398] The compounds are tested at final concentrations 100 μM, 33.3μM, 11.1 μM, 3.7 μM, 1.23 μM, 0.41 μM, 0.137 μM, 0.0457 μM and 0.0152 μM.

[0399] Incubation

[0400] 2*105 PBMCs (in 100 μL) were added to each well of 96-well flat bottom plate. 2x final concentration of 3-fold serial diluted compounds (in 100 μL) were added to indicated wells and final volume was 200 μL.

[0401] The plate was covered with sterile lids, mixed gently and then incubated for 24 h at 37 ℃ / 5%CO2 incubator.

[0402] Separation Supernatant

[0403] Following incubation, the plates was centrifuged for 5 min. at 400x g. The cell-free culture Supernatant was removed into a non-sterile polypropylene plate. Samples are maintained at -80 ℃ until analysis. The samples were analyzed for TNF-α and IFN-γ by ELISA according to the direction.

[0404] TNF-α and IFN-α were analyzed by ELISA. IFN-α concentration was determined by ELISA using a Human IFN-α ELISA Kit from R&D Systems (Catalog #41100-2) and read on VICTOR Nivo TM from PerkinElmer. Results were expressed in pg / mL. TNF-α concentration was determined by ELISA using a Human TNF-alpha ELISA MAX TM Deluxe from BioLegend (Catalog #430205) and read on VICTOR Nivo TM from PerkinElmer. Results were expressed in pg / mL.

[0405] The data was analyzed to determine the minimum effective concentration (MEC) for each compound at which induction of a particular cytokine was observed in the assay. Specifically, the MEC of each compound (micromolar) was determined as the lowest concentration of the compound that induced a measured cytokine response at a level (pictograms / mL) that was at least 2X greater than that observed with the negative control wells. The results are presented in Table 2.

[0406] Table 2

[0407] Example 30. Anti-Tumor Effects of Immunostimulatory Antibody-Drug Conjugate (iADC) on Mouse MC38 CRC Model in C57BL / 6 Mice

[0408] Animal and Material

[0409] 63 C57BL / 6 inbred female mice, aged at 6-8 week, were used in this study. Mice were purchased from Charles River Lab. Upon their arrival, they were kept in SPF environment all the time. Briefly, they were housed on corncob bedding (ScottPharma) in Innovive caging system on a 12-hour light-dark cycle (0700-1900) at 68-74°F and 30-70%humidity. They were allowed continually to access water and regular rodent diet (Purine 5001) ad libitum. Animal handling and procedures were conducted under the protocols and / or guidelines approved by the Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) .

[0410] Test compounds were in clear solutions and they were stored at 4℃.

[0411] Implantation of Mouse CRC MC38 Cells

[0412] A vial of previous frozen MC38 cells were recovered. The cells were expended in complete DMEM (high glucose) culture medium containing 10%fetal bovine serum (inactivated at 56℃) , 2mM glutamine, and 0.5%antibiotics Penicillin / Streptomycin in in incubator set as 37℃ supplied ad 5%CO2. The medium was changed twice a week until inoculation day. Cells chosen for implantation generally met the following four criteria; 1) growing at a rapid phase (usually reaching around 80%to 90%confluence in culture flasks) ; 2) low passing number, usually between 2nd and 3rd passage; 3) culture medium was changed on previous day of inoculation, and 4) having high viability (around 92%) .

[0413] On the day of inoculation, MC38 cells were harvested, washed and counted according to SOP of the cell culture procedure. Cells were re-suspended as a single cell solution in PBS at a concentration of 5x106 cells / mL on the final step. Immediately, half million (5x105) of MC38 cells suspended in 0.1 mL PBS were injected in the right flank of 80 C57BL / 6 mice subcutaneously.

[0414] Study Design

[0415] Mice were closely monitored for MC38 tumor growth before initiating the treatment. Briefly, when the tumors became palpable, they were measured by a caliper in two dimensions in millimeter (mm) and its volume was then calculated according to the following formula:

[0416] Tumor Volume (mm3) = l *w *w *0.5236, (l = length, w = width)

[0417] In this study, tumors reached the expected size on the 9th day after inoculation. Each group received one regimen in pre-determined dose (s) and schedule (s) detailed in Table 3.

[0418] Dosing Solution Preparation

[0419] The dosing solutions were freshly prepared on each dosing day. The formulation (vehicle) is PBS.

[0420] The compound dosing solutions were prepared right before treatment. The dosing volume for all test articles was 10mL / kg intravenously.

[0421] Tumor volume and body weight were monitored twice a week.

[0422] Primary Endpoints

[0423] Any animal was sacrificed at least with one of the following conditions

[0424] 1) The average of group tumor size was over 1, 500mm3

[0425] 2) The animal became moribund or morbidity

[0426] 2) The animal body weigh lost more than 20%from its original weight

[0427] Data Analysis

[0428] Statistical analysis between control group and treatment groups, or between treatment groups was determined using one-way analysis of variance (ANOVA) , followed by Bonferroni’s multiple comparisons. All analysis was performed using the GraphPad Prism software package (Prism 6 for Windows, Version 6.0, GraphPad Software Inc., San Diego, CA) and statistical significance was accepted at the P<0.05 level.

[0429] Study Resutls

[0430] Study results are summarized in Table 3.

[0431] Table 3. Summary of the in vivo Studies

[0432] Note: %MAX TGI = 100 x [ (TVc-TVx)  / TVc] ; TVc: Tumor Volume of Control Group; TVx: Tumor Volume of Treatment Group; MST: mean survival time; A: >50%; B: 20-50%; C: <20%

[0433] Applicant’s disclosure is described herein in preferred embodiments with reference to the Figures, in which like numbers represent the same or similar elements. Reference throughout this specification to “one embodiment, ” “an embodiment, ” or similar language means that a particular feature, structure, or characteristic described in connection with the embodiment is included in at least one embodiment of the present invention. Thus, appearances of the phrases “in one embodiment, ” “in an embodiment, ” and similar language throughout this specification may, but do not necessarily, all refer to the same embodiment.

[0434] The described features, structures, or characteristics of Applicant’s disclosure may be combined in any suitable manner in one or more embodiments. In the description, herein, numerous specific details are recited to provide a thorough understanding of embodiments of the invention. One skilled in the relevant art will recognize, however, that Applicant’s composition and / or method may be practiced without one or more of the specific details, or with other methods, components, materials, and so forth. In other instances, well-known structures, materials, or operations are not shown or described in detail to avoid obscuring aspects of the disclosure.

[0435] In this specification and the appended claims, the singular forms "a, " "an, " and "the" include plural reference, unless the context clearly dictates otherwise.

[0436] Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art. Although any methods and materials similar or equivalent to those described herein can also be used in the practice or testing of the present disclosure, the preferred methods and materials are now described.  Methods recited herein may be carried out in any order that is logically possible, in addition to a particular order disclosed.

[0437] Incorporation by Reference

[0438] References and citations to other documents, such as patents, patent applications, patent publications, journals, books, papers, web contents, have been made in this disclosure. All such documents are hereby incorporated herein by reference in their entirety for all purposes. Any material, or portion thereof, that is said to be incorporated by reference herein, but which conflicts with existing definitions, statements, or other disclosure material explicitly set forth herein is only incorporated to the extent that no conflict arises between that incorporated material and the present disclosure material. In the event of a conflict, the conflict is to be resolved in favor of the present disclosure as the preferred disclosure.

[0439] Equivalents

[0440] The representative examples are intended to help illustrate the invention, and are not intended to, nor should they be construed to, limit the scope of the invention. Indeed, various modifications of the invention and many further embodiments thereof, in addition to those shown and described herein, will become apparent to those skilled in the art from the full contents of this document, including the examples and the references to the scientific and patent literature included herein. The examples contain important additional information, exemplification and guidance that can be adapted to the practice of this invention in its various embodiments and equivalents thereof.

Claims

1.A drug-linker conjugate having the structural formula (I) : D-L' (I)wherein,L’ is a group that comprises a functional or reactive group; andD is a drug moiety having the structure ofwhereinR1 is a C1-C8 alkyl group;R2 is H or P (=O) (CH3) 2;n is an integer selected from 1 to 8;X is a single bond or a linking moiety; andor a pharmaceutically acceptable form or an isotope derivative thereof.2.The drug-linker conjugate of claim 1, wherein R2 is H.3.The drug-linker conjugate of claim 2, wherein R1 is n-butyl, having the structure: 4.The drug-linker conjugate of claim 1, wherein R2 is P (=O) (CH3) 2.5.The drug-linker conjugate of claim 4, wherein R1 is n-butyl, having the structural formula: 6.The drug-linker conjugate of any one of claims 1-5, wherein n is 4.7.The drug-linker conjugate of any one of claims 1-6, wherein L’ comprises para-aminobenzoic acid (PABA) and a dipeptide, and optionally further comprises a PEG unit.8.The drug-linker conjugate of any one of claims 1-6, wherein L’ comprises Mal-Val-Cit-PABA, Mal-Val-Ala-PABA, or Mal-Val-Cit-PABA, Mal-Val-Ala-PABA, Mal-Gly-Gly-Phe-Gly, Mal-PEG2-Val-Cit-PABA , Mal-PEG8-Val-Ala-PABA, Mal-amido-PEG8-C2-acid, Py-MAA-Val-Cit-PAB, CL2A, SMCC, Sulfo-SMCC sodium, SPDB, SPDP, DBCO, DBCO-NHCO-PEG4-amine, DBCO-PEG4-Gly-Gly-Phe-Gly, DBCO-PEG3-Val-Cit-PABA, DBCO- (PEG2-VC-PABA) 2, or Maleimide-DOTA.9.The drug-linker conjugate of any one of claims 1-6, wherein L’ is: 10.The drug-linker conjugate of any one of claims 1-6, wherein L’ comprises a group selected from: 11.The drug-linker conjugate of any one of claims 1-10, wherein X is selected from: 12.A drug-linker conjugate selected from: 13.An antibody-drug conjugate comprising a drug moiety having the structure of whereinR1 is a C1-C8 alkyl group;R2 is H or P (=O) (CH3) 2;n is an integer selected from 1 to 8;X is a single bond or a linking moiety; andor a pharmaceutically acceptable salt thereof.14.An antibody-drug conjugate having the structural formula (II) : D-L-Ab (II)wherein,Ab is an antigen binding moiety;L is a linker; andD is a drug moiety having the structure ofwhereinR1 is a C1-C8 alkyl group;R2 is H or P (=O) (CH3) 2;n is an integer selected from 1 to 8;X is a single bond or a linking moiety; andor a pharmaceutically acceptable salt thereof.15.The antibody-drug conjugate of claim 13 or 14, wherein R2 is H.16.The antibody-drug conjugate of claim 14, wherein R1 is n-butyl, having the structure: 17.The antibody-drug conjugate of claim 13 or 14, wherein R2 is P (=O) (CH3) 2.18.The antibody-drug conjugate of claim 17, wherein R1 is n-butyl, having the structural formula: 19.The antibody-drug conjugate of any one of claims 13-18, wherein n is 4.20.The antibody-drug conjugate of any one of claims 14-18, wherein L is a cleavable linker.21.The antibody-drug conjugate of claim 20, wherein L is a linker that is sensitive to acid, lysosomal protease, β-glucuronide or glutathione.22.The antibody-drug conjugate of any one of claims 14-21, wherein L is a non-cleavable linker.23.The antibody-drug conjugate of any one of claims 14-21, wherein X is selected from: 24.The antibody-drug conjugate of any one of claims 13-23, wherein Ab is an antibody.25.The antibody-drug conjugate of claim 24, wherein Ab is a monoclonal antibody.26.The antibody-drug conjugate of claim 24, wherein Ab is a chimeric antibody.27.The antibody-drug conjugate of claim 24, wherein Ab is a humanized antibody.28.The antibody-drug conjugate of claim 24, wherein Ab is an antibody fragment.29.The antibody-drug conjugate of claim 24, wherein Ab is a peptide.30.The antibody-drug conjugate of claim 24, wherein Ab is selected from: Trastuzumab, Avelumab, mouse anti-human HER2 Ab, Anti-mouse PD-L1 (B7-H1) , Atezolizumab, or other antibodies against HER2, CD30, Netin-4, Trop3, CD79b, CD22, BCMA, TF, CD33, CD22, EGFR, TSHR, FSHR, LHR, CD19, FAP, and FR-alpha.31.An antibody-drug conjugate comprising an antibody that is conjugated to a linker payload as provided below: 32.A pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate according to any one of claims 13-31.33.The pharmaceutical composition of claim 32, effective to treat, prevent, or reduce autoimmune disease, or a related disease or disorder.34.The pharmaceutical composition of claim 32 or 33, effective to treat, prevent, or reduce graft rejection, or a related disease or disorder.35.The pharmaceutical composition of claim 32 or 33, effective to treat, prevent, or reduce an allergy, or a related disease or disorder.36.The pharmaceutical composition of claim 32 or 33, effective to treat, prevent, or reduce immunodeficiency, or a related disease or disorder.37.The pharmaceutical composition of claim 32 or 33, effective to treat, prevent, or reduce infection, sepsis, or a related disease or disorder.38.The pharmaceutical composition of claim 32 or 33, effective to treat, prevent, or reduce cancer, or a related disease or disorder.39.A unit dosage form comprising a pharmaceutical composition according to any one of claims 32-38.40.A method for treating, reducing, or preventing a disease or disorder, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate according to any one of claims 13-31.41.The method of claim 40, wherein the disease or disorder is selected from the group consisting of: autoimmune diseases, graft rejection, allergies, immunodeficiency, infection, sepsis, cancer, and related diseases or disorders.42.The method of claim 41, wherein the disease or disorder is an autoimmune disease, or a related disease or disorder.43.The method of claim 41, wherein the disease or disorder is graft rejection, or a related disease or disorder.44.The method of claim 41, wherein the disease or disorder is allergy, or a related disease or disorder.45.The method of claim 41, wherein the disease or disorder is immunodeficiency, or a related disease or disorder.46.The method of claim 41, wherein the disease or disorder is infection and / or sepsis, or a related disease or disorder.47.The method of claim 41, wherein the disease or disorder is cancer, or a related disease or disorder.48.A method for modulating immune response, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate according to any one of claims 13-31.49.A method for modulating TLR7-and / or TLR8-mediated signaling, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate according to any one of claims 13-31.50.A method for of treating or reducing a condition or disorder treatable by modulation of TLR7-and / or TLR8-mediated cellular activities, comprising administering to a subject in need thereof an antibody-drug conjugate according to any one of claims 13-31.51.Use of an antibody-drug conjugate of any one of claims 13-31 for treating or reducing a disease or disorder.52.Use of a drug conjugate of any one of claims 1-12 or an antibody-drug conjugate of any one of claims 13-31, and a pharmaceutically acceptable excipient, carrier, or diluent, in preparation of a medicament for treating or reducing a disease or disorder.53.The use of claim 51 or 52, wherein the disease or disorder is associated with TLR7-and / or TLR8-mediated signaling.54.The use of claim 51 or 52, wherein the disease or disorder is selected from autoimmune diseases, graft rejection, allergies, immunodeficiency, infection, sepsis, cancer, or a related disease or disorder thereof.55.The use of claim 51 or 52, to treat or reduce an autoimmune disease, or a related disease or disorder.56.The use of claim 51 or 52, to treat or reduce graft rejection, or a related disease or disorder.57.The use of claim 51 or 52, to treat or reduce allergy, or a related disease or disorder.58.The use of claim 51 or 52, to treat or reduce immunodeficiency, or a related disease or disorder.59.The use of claim 51 or 52, to treat or reduce infection and / or sepsis, or a related disease or disorder.60.The use of claim 51 or 52, to treat or reduce cancer, or a related disease or disorder.61.The use of claim 51 or 52, as a vaccine adjuvant.

Images