A method for treating retinal and choroidal vascular diseases with a chimeric molecule

Abstract

The present invention pertains to the biomedical field, and particularly relates to a chimeric molecule comprising an Ang-2 antagonist peptide and an anti-VEGF antibody, and a method for treating retinal and choroidal vascular diseases with the chimeric molecule.

Description

A method for treating retinal and choroidal vascular diseases with a chimeric molecule

[0001] CROSS REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS

[0002] This application claims the benefit of, and priority to, PCT Application No. PCT / CN2024 / 093176, filed on May 14, 2024. The content of that application is incorporated herein by reference in its entirety for all purposes.TECHNICAL FIELD

[0003] The present invention pertains to the biomedical field, and particularly relates to a chimeric molecule and a method for treating retinal and choroidal vascular diseases with the chimeric molecule, as well as a formulation in the form of a single dose for treating retinal and choroidal vascular diseases which formulation comprises said chimeric molecule as an active ingredient.BACKGROUND OF THE INVENTION

[0004] Angiogenesis is implicated in the pathogenesis of a variety of disorders including solid tumors, intraocular neovascular syndromes such as proliferative retinopathies or age-related macular degeneration (AMD) , rheumatoid arthritis, and psoriasis. In the case of solid tumors, the neovascularization allows the tumor cells to acquire a growth advantage and proliferative autonomy compared to the normal cells.

[0005] Human vascular endothelial growth factor (VEGF / VEGF-A) has been studied for decades and its expression is potentiated in response to hypoxia, by activated oncogenes, and by a variety of cytokines. VEGF is involved in the regulation of normal and abnormal angiogenesis and neovascularization associated with tumors and intraocular disorders (e.g., Dvorak, H. F., et al, Am. J. Pathol. 146 (1995) 1029-1039) .

[0006] Deregulated VEGF expression contributes to the development of solid tumors by promoting tumor angiogenesis and to the etiology of several additional diseases that are characterized by abnormal angiogenesis (Kim, K. J., et al., 1993. Nature (London) 362, 841–844; Millauer, B., et al., 1994. Nature (London) 367, 576–579) . Consequently, inhibition of VEGF signaling abrogates the development of a wide variety of tumors.

[0007] In retinopathies, in which partial or general ischemia of the retina is accompanied by overexpression of VEGF and hyperproliferation of blood vessels, blindness can result (Aiello, L. P et al., 1994. N. Engl. J. Med. 331, 1480–1487; Adamis, A. P., et al., Am. J. Ophthalmol. 118, 445–450) . Inhibition of VEGF expression in such disease states can treat or prevent resulting blindness.

[0008] Human angiopoietin-2 (ANG-2 or Ang-2 or Ang2) (alternatively abbreviated with ANGPT2 or ANG2) plays an important role in angiogenesis and its expression levels have been correlated with cancer and eye diseases (e.g., Watanabe et al., Am. J. Ophthalmol. 2005, 139 (3) : 476-81) .

[0009] Research studies have shown that, some chimeric proteins, which comprise an Ang-2 binding peptide linked to either a VEGF antibody or a VEGF receptor-Fc fusion protein, possess dual-antagonist activities in the binding affinity assays (WO2017197199A1) .

[0010] However, effective methods for treating retinal and choroidal vascular diseases, especially AMD and diabetic macular edema (DME) , are still needed.SUMMARY OF THE INVENTION

[0011] It is an object of the invention to provide a chimeric molecule, which comprises an Ang-2 antagonist peptide which binds to Ang-2 and inhibits a biological activity of Ang-2, and an anti-VEGF antibody; as well as a method of treating retinal and choroidal vascular diseases with the chimeric molecule.

[0012] The present invention provides a chimeric molecule, comprising:

[0013] an Ang-2 antagonist peptide which binds to Ang-2 and inhibits a biological activity of Ang-2, having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-3; and

[0014] an anti-VEGF antibody, which comprises a heavy chain and a light chain;

[0015] with the Ang-2 antagonist peptide being fused with the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain.

[0016] In some embodiments, the Ang-2 antagonist peptide comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.

[0017] In some embodiments, the heavy chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 or 10, and the light chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0018] In some embodiments, the Ang-2 antagonist peptide is fused to the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain with a peptide linker, preferably the peptide linker comprises one or more amino acid sequences: GGGGS (SEQ ID NO: 9) .

[0019] In some embodiments, the chimeric molecule comprises a heavy chain fusion having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8 and 11, and a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0020] In some embodiments, the chimeric molecule comprises a heavy chain fusion having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6; and a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0021] The present invention also provides a polynucleotide encoding the chimeric molecule as described above.

[0022] The present invention further provides an expression vector comprising the polynucleotide as described above.

[0023] The present invention further provides a host cell transfected with the expression vector as described above.

[0024] The present invention further provides a method of making the chimeric molecule as described above, comprising culturing a host cell transfected with the expression vector as described above under conditions that allow expression of the chimeric molecule, and isolating the chimeric molecule.

[0025] The present invention further provides a pharmaceutical composition, comprising the chimeric molecule as described above as an active ingredient.

[0026] In some embodiments, the pharmaceutical composition comprises the chimeric molecule at a concentration of 0.5 mg / ml or higher, a concentration of 1.0 mg / mL or higher, a concentration of 1.5 mg / mL or higher, or a concentration of 3 mg / mL or higher.

[0027] In some embodiments, the pharmaceutical composition comprises the chimeric molecule at a concentration of 15.0 mg / mL or lower, a concentration of 10.0 mg / mL or lower, or a concentration of 6.0 mg / mL or lower.

[0028] The present invention further provides a method for treating retinal and choroidal vascular diseases in a subject in need thereof comprising administering to the subject a series of doses of a chimeric molecule, which comprises:

[0029] an Ang-2 antagonist peptide which binds to Ang-2 and inhibits a biological activity of Ang-2, having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-3; and

[0030] an anti-VEGF antibody, which comprises a heavy chain and a light chain;

[0031] with the Ang-2 antagonist peptide being fused with the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain,

[0032] wherein the amount of the chimeric molecule in each dose for said series of doses is a same amount of about 0.5 mg to about 12 mg.

[0033] In some embodiments, the Ang-2 antagonist peptide comprises an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.

[0034] In some embodiments, the heavy chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 or 10, and the light chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0035] In some embodiments, the Ang-2 antagonist peptide is fused to the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain with a peptide linker, preferably the peptide linker comprises one or more amino acid sequences: GGGGS (SEQ ID NO: 9) .

[0036] In some embodiments, the chimeric molecule comprises a heavy chain fusion having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8 and 11, and a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0037] In some embodiments, the chimeric molecule comprises a heavy chain fusion having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6; and a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0038] In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 0.5 mg to about 9 mg, preferably about 3 mg to about 9 mg.

[0039] In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 3 mg. In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 6 mg. In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 9 mg.

[0040] In some embodiments, the time period between each dose and the next in said series of doses is four weeks or more, preferably four weeks to eight weeks.

[0041] In some embodiments, the chimeric molecule is administered for three to six continuous doses in total in said series of doses.

[0042] In some embodiments, the method further comprises administering to the subject a subsequent series of doses of the chimeric molecule, after said series of doses are administered.

[0043] In some embodiments, the time period between each dose and the next in said subsequent series of doses is four weeks or more, preferably four weeks to twenty-eight weeks, more preferably four weeks or more, six weeks or more, eight weeks or more, twelve weeks or more, sixteen weeks or more, twenty weeks or more, twenty-four weeks or more, or twenty-eight weeks.

[0044] In some embodiments, the chimeric molecule is administered for one to six continuous doses per year in said subsequent series of doses.

[0045] In some embodiments, said subsequent series of doses are administered pro re nata (PRN) .

[0046] In some embodiments, said subsequent series of doses are administered treat-and-extend (T&E) .

[0047] In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose for said subsequent series of doses is the same with that in each dose for said series of doses.

[0048] In some embodiments, the interval between the last dose of said series of doses and the first dose of said subsequent series of doses is four weeks or more, six weeks or more, eight weeks or more, twelve weeks or more, sixteen weeks or more, twenty weeks or more, twenty-four weeks or more, twenty-eight weeks or more, thirty-two weeks or more, thirty-six weeks or more, forty weeks or more, forty-four weeks or more, forty-eight weeks or more, or fifty-two weeks or more.

[0049] In some embodiments, the chimeric molecule is administered through intraocular injection (e.g. intravitreal injection, and suprachoroidal injection) .

[0050] In some embodiments, the method is used in a clinical trial. In some embodiments, the method is used after regulatory approval.

[0051] In some embodiments, the subject is suffering from at least one item of said diseases selected from the group consisting of (i) best corrected visual acuity (BCVA) decrease from the best BCVA of 1 letter or more, 3 letters or more, 5 letters or more or 10 letters or more; and (ii) BCVA decrease from the average of the last 2 visits of 1 letter or more, 3 letters or more, 5 letters or more or 10 letters or more; (iii) central subfield thickness (CST) increase from the lowest CST of 5 μm or more, 10 μm or more, 20 μm or more, 50 μm or more, or 80 μm or more; and (iv) CST increase from the average of the last 2 visits of 5 μm or more, 10 μm or more, 20 μm or more, 50 μm or more, or 80 μm or more; and (v) macular hemorrhage due to disease progression.

[0052] In some embodiments, the subject is  In some embodiments, the subject has undergone one or more other treatments.

[0053] In some embodiments, the retinal and choroidal vascular diseases include, neovascular age-related macular degeneration (AMD) for example neovascular age-related macular degeneration (nAMD) , diabetic macular edema (DME) , diabetic retinopathy (DR) , retinal vein occlusion (RVO) , retinopathy of prematurity (ROP) , or pathologic myopia.

[0054] The invention also provides a formulation in the form of a single dose, wherein the formulation comprises the chimeric molecule as described above;

[0055] wherein the formulation comprises the chimeric molecule with a dose of about 0.5 mg to about 12 mg.

[0056] The invention further provides a use of a formulation for the manufacture of a medicament for treating retinal and choroidal vascular diseases;

[0057] wherein the formulation comprises the chimeric molecule as described above; and

[0058] wherein the formulation is in the form of a single dose comprising the chimeric molecule with a dose of about 0.5 mg to about 12 mg.

[0059] In some embodiments, the formulation is in the form of a single dose comprising the chimeric molecule with a dose of about 0.5 mg, about 1.5 mg, about 3 mg, about 6 mg, or about 9 mg.

[0060] The invention further provides a formulation for use in treating retinal and choroidal vascular diseases; wherein the formulation comprises the chimeric molecule as described above.

[0061] In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 0.5 mg to about 9 mg, preferably about 3 mg to about 9 mg.

[0062] In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 3 mg. In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 6 mg. In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 9 mg.

[0063] In some embodiments, the retinal and choroidal vascular diseases include, neovascular age-related macular degeneration (AMD) for example neovascular age-related macular degeneration (nAMD) , diabetic macular edema (DME) , diabetic retinopathy (DR) , retinal vein occlusion (RVO) , retinopathy of prematurity (ROP) , or pathologic myopia.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0064] Figure 1 shows the inhibition of the binding of Ang-2 to Tie-2 by chimeric molecules O3 / WT, O3 / QFM and O3 / QF.

[0065] Figure 2 shows the PK value of Chimeric Molecule O3 in cynomolgus monkeys dosed I. V. at 36 mg / animal.

[0066] Figure 3 shows the mean BCVA change from baseline in each cohort in part 1 study.

[0067] Figure 4 shows the mean CST change from baseline in each cohort in part 1 study.

[0068] Figure 5 shows the mean BCVA change from baseline in each cohort in Part 2 study (data cut-off date 1st March 2024) .

[0069] Figure 6 shows the mean CST change from baseline in each cohort in Part 2 study (data cut-off date 1st March 2024) .

[0070] Figure 7 shows Mean (± SD) Plasma Chimeric Molecule O3 Concentration -Time Plot by Dose Type (first dose) .

[0071] Figure 8 shows Mean (± SD) Plasma Chimeric Molecule O3 Concentration -Time Plot by Dose Type (multiple dose) .DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

[0072] Definitions

[0073] Unless otherwise defined below, all technical and scientific terms used herein have the same meanings as commonly understood by one of ordinary skill in the art. References to techniques used herein are intended to refer to techniques that are generally understood in the art, including those obvious changes or equivalent replacements of the techniques for those skilled in the art. While it is believed that the following terms are well understood by those skilled in the art, the following definitions are set forth to better explain the invention.

[0074] As used herein, the terms “including” , “comprising” , “having” , “containing” or “comprising” , and other variants thereof, are inclusive or open, and do not exclude other unlisted elements or method steps. As used herein and in the appended claims, the singular forms “a” , “an” , and “the” include plural referents unless the context clearly dictates otherwise.

[0075] The term “retinal and choroidal vascular diseases” refers to any vascular disease that occurs in retina and choroid. The retinal and choroidal vascular diseases used herein include diabetic retinopathy (DR) , diabetic macular edema (DME) , retinal vein occlusion (RVO) , retinopathy of prematurity (ROP) , age-related macular degeneration (AMD) , pathologic myopia, and other related diseases.

[0076] The term “AMD” or “age-related macular degeneration” refers to both wet and dry forms of the disease. In some embodiments, AMD may be neovascular age-related macular degeneration (nAMD) .

[0077] The term “VEGF” as used herein refers to human vascular endothelial growth factor (VEGF / VEGF-A, ) the 165-amino acid human vascular endothelial cell growth factor (amino acid 27-191 of precursor sequence of human VEGF165) , and related 121, 189, and 206 vascular endothelial cell growth factor isoforms; together with the naturally occurring allelic and processed forms of those growth factors. VEGF is involved in the regulation of normal and abnormal angiogenesis and neovascularization associated with tumors and intraocular disorders. VEGF is a homodimeric glycoprotein that has been isolated from several sources and includes several isoforms. VEGF shows highly specific mitogenic activity for endothelial cells. A VEGF antagonist / inhibitor inhibits binding of VEGF to its receptor VEGFR.

[0078] The term “Ang-2” as used herein refers to human angiopoietin-2 (Ang-2) . Ang-2 was discovered as ligand for Tie-2, a tyrosine-protein kinase receptor that is selectively expressed within the vascular endothelium.

[0079] The term “chimeric molecule” as used herein includes chimeric molecules which comprise anti-VEGF antibody and Ang-2 antagonist peptide.

[0080] The term “fused” or “fusion” in reference to two or more polypeptide sequences (such as an antibody heavy chain, antibody light chain, an antibody heavy chain fragment, an antibody light chain fragment, a drug conjugation moiety, a heterologous peptide, an albumin, or an albumin fragment) refers to joining of the polypeptide sequences through a backbone peptide bond.

[0081] The antibodies of the invention comprise immunoglobulin constant regions derived from human origin of one or more immunoglobulin classes, wherein such immunoglobulin classes include IgG, IgM, IgA, IgD, and IgE classes and, in the case of IgG and IgA, their subclasses, especially IgG1 and IgG4. The antibody may be human antibody or humanized antibody.

[0082] The term “human antibody” , as used herein, is intended to include antibodies having variable and constant regions derived from human germ line immunoglobulin sequences.

[0083] The term “humanized antibody” refers to antibodies in which the framework or “complementarity determining regions” (CDR) have been modified to comprise the CDR of an immunoglobulin of different specificity as compared to that of the parent immunoglobulin. In a preferred embodiment, a murine CDR is grafted into the framework region of a human antibody to prepare the “humanized antibody” .

[0084] The term “antagonist” encompasses all the previously identified terms, titles, and functional states and characteristics whereby the target protein itself, a biological activity of the target protein, or the consequences of the biological activity, are substantially nullified, decreased, or neutralized in any meaningful degree, e.g., by at least 20%, 50%, 70%, 85%, 90%, or above.

[0085] The term “amino acid” refers to any compound containing both an amino group and a carboxylic acid group. Although the amino group most commonly occurs at the position adjacent to the carboxy function, the amino group may be positioned at any location within the molecule. The amino acid may also contain additional functional groups, such as amino, thio, carboxyl, carboxamide, imidazole, etc. An amino acid may be synthetic or naturally occurring, and may be used in either its racemic or optically active (D-, or L-) forms, including various ratios of stereoisomers.

[0086] When “about” is followed by a value or a ratio, it means such value or ratio ± 10%, preferably ± 5%, more preferably ± 1%.

[0087] “Substantially” has the meaning generally known in the art. For example, “substantially absent of (free from) X” means that X is present in 10 wt%or lower, preferably 5 wt%or lower, more preferably 1 wt%or lower; “does not change substantially” means that the decomposition rate is 10%or lower, preferably 5%or lower, more preferably 1%or lower.

[0088] “Pharmaceutically acceptable carrier” or “carrier” or “excipient” in the context of the present invention refers to a diluent, adjuvant, excipient or vehicle together with which the therapeutic agent is administered, and which is suitable for contacting a tissue of human and / or other animals within the scope of reasonable medical judgment, and without excessive toxicity, irritation, allergic reactions, or other problems or complications corresponding to a reasonable benefit / risk ratio. Furthermore, “Pharmaceutically acceptable carrier” or “carrier” or “excipient” in the context of the present invention refers to an excipient that may optionally be included in the formulation of the invention, and taken into the nasal cavity or lung with no significant adverse toxicological effects to the subject, and particularly to the nasal cavity or lung of the subject.

[0089] The pharmaceutically acceptable carriers or excipients that can be used in the pharmaceutical formulation of the invention include, but are not limited to, sterile liquids such as water and oils, including those oils derived from petroleum, animals, vegetables or synthetic origins, for example, peanut oil, soybean oil, mineral oil, sesame oil, etc. Other pharmaceutical carriers or excipients include starch, glucose, lactose, sucrose, gelatin, maltose, chalk, silica gel, sodium stearate, glyceryl monostearate, talc, sodium chloride, skimmed milk powder, glycerin, propylene glycol, mannitol, water, ethanol and the like. The pharmaceutical formulation may further contain a pH buffering agent as needed. Examples of suitable pharmaceutically acceptable carriers are as described in Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990) .

[0090] The term “effective amount” as used herein refers to an amount of active ingredient that, after administration, will relieve to some extent one or more symptoms of the condition being treated.

[0091] As used herein, “individual” or “subject” includes a human or a non-human animal. Exemplary human individual includes a human individual (referred to as a patient) suffering from a disease (such as the disease described herein) or a normal individual. “Non-human animal” in the present invention includes all vertebrates, such as non-mammals (e.g., birds, amphibians, reptiles) and mammals, such as non-human primates, domestic animals, and / or domesticated animals (e.g., sheep, dogs, cats, cows, pigs, etc. ) .

[0092] As used herein, “loading phase” refers to the time period in which an initial series of doses of a chimeric molecule are administered to a subject in need thereof. As used herein, “maintenance phase” refers to the time period in which a subsequent series of doses of a chimeric molecule are administered to a subject in need thereof.

[0093] Therapeutic Compounds

[0094] The present invention provides a chimeric molecule, comprising:

[0095] an Ang-2 antagonist peptide which binds to Ang-2 and inhibits a biological activity of Ang-2, having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-3; and

[0096] an anti-VEGF antibody, which comprises a heavy chain and a light chain;

[0097] with the Ang-2 antagonist peptide being fused with the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain.

[0098] In some embodiments, the Ang-2 antagonist peptide comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.

[0099] In some embodiments, the anti-VEGF antibody comprises light chain CDRs or variable domains as that of bevacizumab, ranibizumab, or brolucizumab, and heavy chain CDRs or variable domains as that of bevacizumab, ranibizumab, or brolucizumab.

[0100] In some embodiments, the heavy chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 5 or 10, and the light chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0101] In some embodiments, the Ang-2 antagonist peptide is fused to the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain with a peptide linker, preferably the peptide linker comprises one or more (for example, two or three) amino acid sequences: GGGGS (SEQ ID NO: 9) .

[0102] In some embodiments, the chimeric molecule comprises a heavy chain fusion having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8 and 11, and a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0103] In some embodiments, the chimeric molecule comprises a heavy chain fusion having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6; and a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0104] In some embodiments, the chimeric molecule comprises two identical heavy chain fusions having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8 and 11, and two identical light chains having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0105] In some embodiments, the chimeric molecule comprises two identical heavy chain fusions having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 6, and two identical light chains having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0106] The present invention also provides an Ang-2 antagonist peptide having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-3.

[0107] Therapeutic Methods and Uses

[0108] The present invention provides a method for treating retinal and choroidal vascular diseases in a subject in need thereof comprising administering to the subject a series of doses of a chimeric molecule, which comprises:

[0109] an Ang-2 antagonist peptide which binds to Ang-2 and inhibits a biological activity of Ang-2, having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-3; and

[0110] an anti-VEGF antibody, which comprises a heavy chain and a light chain;

[0111] with the Ang-2 antagonist peptide being fused with the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain;

[0112] wherein the amount of the chimeric molecule in each dose for said series of doses is a same amount of about 0.5 mg to about 12 mg.

[0113] In some embodiments, the heavy chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 or 10, and the light chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0114] In some embodiments, the Ang-2 antagonist peptide is fused to the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain with a peptide linker, preferably the peptide linker comprises one or more (for example, two or three) amino acid sequences: GGGGS (SEQ ID NO: 9) .

[0115] In some embodiments, the chimeric molecule comprises a heavy chain fusion having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8 and 11, and a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0116] In some embodiments, the chimeric molecule comprises two identical heavy chain fusions having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8 and 11, and two identical light chains having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0117] In some embodiments, the chimeric molecule comprises two identical heavy chain fusions having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NO: 6, and two identical light chains having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.

[0118] As used herein, the administration of said series of doses corresponds to “loading phase” of the chimeric molecule.

[0119] In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose for said series of doses is a same amount of about 0.5 mg to about 9 mg, preferably about 3 mg to about 9 mg. In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 0.5 mg, about 1 mg, about 1.5 mg, about 2 mg, about 2.5 mg, about 3 mg, about 3.5 mg, about 4 mg, about 4.5 mg, about 5 mg, about 5.5 mg, about 6 mg, about 6.5 mg, about 7 mg, about 7.5 mg, about 8 mg, about 8.5 mg, about 9 mg, about 9.5 mg, about 10 mg, about 10.5 mg, about 11 mg, about 11.5 mg or about 12 mg.

[0120] In some embodiments, the time period between each dose and the next in said series of doses is four weeks or more. In some embodiments, the time period between each dose and the next in said series of doses is four weeks to eight weeks, for example four weeks, five weeks, six weeks, seven weeks, or eight weeks.

[0121] In some embodiments, the time period between each dose and the next in said series of doses is four weeks, and the chimeric molecule is administered for three to six (for example three, four, five, or six) continuous doses in total in said series of doses.

[0122] In some embodiments, the method further comprises administering to the subject a subsequent series of doses of the chimeric molecule, after said series of doses are administered.

[0123] As used herein, the administration of said subsequent series of doses corresponds to “maintenance phase” of the chimeric molecule.

[0124] In some embodiments, the time period between each dose and the next in said subsequent series of doses is four weeks or more. In some embodiments, the time period between each dose and the next in said subsequent series of doses is one year or less, ten months or less, eight months or less, or six months or less. In some embodiment, the time period between each dose and the next in said subsequent series of doses is four weeks to twenty-eight weeks, for example four weeks or more, six weeks or more, eight weeks or more, twelve weeks or more, sixteen weeks or more, twenty weeks or more, twenty-four weeks or more, or twenty-eight weeks.

[0125] In some embodiments, the chimeric molecule is administered for one or more continuous doses (for example, one, two, three, four, five or six continuous doses) in total in said subsequent series of doses.

[0126] In some embodiments, in said subsequent series of doses, the chimeric molecule is administered for one to six continuous doses (for example, one, two, three, four, five or six continuous doses) per year.

[0127] In some embodiments, the subsequent series of doses are administered pro re nata (PRN) .

[0128] In some embodiments, the subsequent series of doses are administered treat-and-extend (T&E) .

[0129] In some embodiments, the amount of the chimeric molecule in each dose for said subsequent series of doses is the same with that in each dose for said series of doses.

[0130] In some embodiments, the interval between the last dose of said series of doses and the first dose of said subsequent series of doses (i.e., the interval between loading phase and maintenance phase) is four weeks or more. Preferably, the interval is six weeks or more, eight weeks or more, nine weeks or more, ten weeks or more, eleven weeks or more, twelve weeks or more, sixteen weeks or more, twenty weeks or more, twenty-four weeks or more, twenty-eight weeks or more, thirty-two weeks or more, thirty-six weeks or more, forty weeks or more, forty-four weeks or more, forty-eight weeks or more, or fifty-two weeks or more.

[0131] In some embodiments, the method does not comprise a step of administering to the subject any further dose of the chimeric molecule, after said series of doses are administered.

[0132] In some embodiments, the chimeric molecule is administered through intraocular injection, such as intravitreal injection (IVI) or suprachoroidal injection.

[0133] In some embodiments, the method is used in a clinical trial.

[0134] In some embodiments, the method is used after regulatory approval, for example a commercial treatment.

[0135] In some embodiments, the subject is suffering from at least one item of said diseases selected from the group consisting of (i) best corrected visual acuity (BCVA) decrease from the best BCVA of 1 letter or more, 3 letters or more, 5 letters or more or 10 letters or more; and (ii) BCVA decrease from the average of the last 2 visits of 1 letter or more, 3 letters or more, 5 letters or more or 10 letters or more; (iii) central subfield thickness (CST) increase from the lowest CST of 5 μm or more, 10 μm or more, 20 μm or more, 50 μm or more, or 80 μm or more; and (iv) CST increase from the average of the last 2 visits of 5 μm or more, 10 μm or more, 20 μm or more, 50 μm or more, or 80 μm or more; and (v) macular hemorrhage due to disease progression.

[0136] In some embodiments, the subject is

[0137] In some embodiments, the subject has undergone one or more other treatments.

[0138] The present invention also provides a formulation comprising a chimeric molecule herein.

[0139] The present invention further provides a use of a chimeric molecule or formulation herein for the manufacture of a medicament for treating retinal and choroidal vascular diseases.

[0140] In some embodiments, the formulation is in the form of single dose. In some embodiments, the formulation comprises the chimeric molecule with a dose of about 0.5 mg to about 12 mg, preferably about 0.5 mg to about 9 mg, preferably about 3 mg to about 9 mg, preferably about 6 mg, and preferably about 9 mg.

[0141] In some embodiments, the formulation further comprises pharmaceutically acceptable carriers or excipients.

[0142] EXAMPLES

[0143] In order to make the objects and technical solutions of the present invention clearer, the present invention will be further described below in conjunction with specific example. It should be understood that the examples are not intended to limit the scope of the invention. Further, specific experimental methods not mentioned in the following examples were carried out in accordance with a conventional experimental method.

[0144] The Chimeric Molecule O3 comprising the Ang-2 antagonist peptide linked the VEGF antibody in the C end of the heavy chain is prepared and purified according to Example 1.

[0145] The sequences used in the embodiments are listed as follows.

[0146] Anti-Ang-2 Peptide in O3 / WT (SEQ ID NO: 1)

[0147] Anti-Ang-2 Peptide in O3 / QFM (SEQ ID NO: 2)

[0148] Anti-Ang-2 Peptide in O3 / QF (SEQ ID NO: 3)

[0149] Light Chain (SEQ ID NO: 4)

[0150] Heavy Chain (SEQ ID NO: 5)

[0151] Heavy Chain Fusion (SEQ ID NO: 6)

[0152] Heavy Chain Fusion (SEQ ID NO: 7)

[0153] Heavy Chain Fusion (SEQ ID NO: 8)

[0154] Linker Peptide (SEQ ID NO: 9)

[0155] Heavy Chain (SEQ ID NO: 10)

[0156] Heavy Chain Fusion (SEQ ID NO: 11)

[0157] Example 1 -Preparation of Chimeric Molecules

[0158] A chimeric molecule named O3 / WT (also referred to as “Chimeric Molecule O3” or “O3” ) comprising two identical light chains of SEQ ID NO: 4 and two identical heavy chain fusions of SEQ ID NO: 6 was expressed by a CHO cell line and purified. Further, two variants of the chimeric molecules named O3 / QFM and O3 / QF were synthesized, wherein O3 / QFM comprises the Ang-2 antagonist peptide of SEQ ID NO: 2 and wherein O3 / QF comprises the Ang-2 antagonist peptide of SEQ ID NO: 3. Also, a chimeric molecule named O (also referred to as “Chimeric Molecule O” or “O” ) comprising two identical light chains of SEQ ID NO: 4 and two identical heavy chain fusions of SEQ ID NO: 11 (LALA mutations) was expressed. All molecules were expressed recombinantly and purified.

[0159] Chimeric Molecule O heavy chain fusion comprises an Fc which comprises the LALA mutations (L240A, L241A) and an additional mutation K453A (numbering according to SEQ ID NO: 11) . In addition to the same Fc mutations L240A, L241A and K453A, Chimeric Molecule O3 heavy chain fusion also comprises three more Fc mutations I259A, H316A, and H441A (numbering according to SEQ ID NO: 6) . Sequence alignment for the heavy chain fusions of Chimeric Molecules O and O3 are shown below.

[0160] The LALA mutations are intended to reduce the ADCC and CDC functionalities of the Fc domain.

[0161] Example 2 -Blocking of Ang-2 Binding to Tie-2 as Analysed by ELISA

[0162] The chimeric molecules were assessed in their abilities in blocking the binding of Ang-2 to its receptor Tie-2.96-well microtiter plate (NUNC) was coated with 100 μL final concentration 100 ng / mL of human Tie-2-Fc (R&D System, 313-T1) diluted in 0.1 M carbonate (pH 9.3) at 4 ℃ overnight. The plate was then blocked for 2 hours with 5%BSA in PBST (0.05%Tween 20) . Purified chimeric molecule, at starting concentration of 1000 ng / mL, was serially diluted with dilution factor of three in PBS with 1%BSA. Human Ang-2 protein (R&D System) was added to final concentration of 50 ng / mL and incubated at room temperature for 1 hour. The mixture of chimeric molecule and Ang-2 was then added into microtiter plate coated with human Tie2-Fc and incubated for another hour at room temperature. 100 μL anti-Ang-2 monoclonal antibody (R&D System) was added into each well at final concentration of 1 μg / mL and incubated for 1 hour at room temperature. Horseradish-peroxidase (HRP) conjugated anti-mouse IgG secondary antibody was added at 1: 5000 dilution and incubated for 1 hour at room temperature. Standard colorimetric response was developed by using TMB (Pierce) . Absorbance was read at OD450 by spectrophotometer. Between each step, the plate was washed 5 times with 100 μL PBS. The results are shown in Figure 1.

[0163] Chimeric Molecule O3 (O3 / WT) , as well as O3 / QFM and O3 / QF were active in inhibiting the binding of Ang-2 to its receptor Tie-2, even though the Ang-2 antagonist peptides in O3 / QFM with 20 amino acids and O3 / QF with 19 amino acids were substantially shorter than the Ang-2 antagonist peptide in O3 (26 amino acids) , as shown in Figure 1. The potency (as expressed in IC50) for O3 / WT, O3 / QFM and O3 / QF in blocking Ang-2 binding to Tie-2 was 20.84, 23.09 and 92.27 pM, respectively.

[0164] Example 3 -Blocking of VEGF Binding to VEGFR as Analysed by ELISA

[0165] A VEGF ELISA assay was developed to evaluate the blocking of VEGF binding to the VEGF receptor by the chimeric molecules or related reference molecules. The ELISA assay was carried out following the procedure described as follows. The ELISA plate was prepared by coating the NUNC 96 well Maxisorp flat-bottom ELISA plate (Thermo Fisher Scientific) overnight at 4 ℃ with 100 μL of 100 ng / ml recombinant human VEGFR2-Fc protein (R&D system) . Working solution was prepared by mixing 0.1 nM recombinant human VEGF165 (Sino Biological) with the chimeric molecules that were serially diluted 1: 3 to 10 points with incubation buffer (PBS, no calcium and magnesium, pH 7.2, 0.05%tween 20, 1%BSA) from the starting concentration of 6 μg / ml. The working solution was then incubated overnight at room temperature. After coating, the ELISA plate was washed 3 times with 200 μl washing buffer (PBS, no calcium and magnesium, pH 7.2, 0.05%tween 20) and then blocked with washing buffer with 5%BSA for 2 hrs at room temperature. After another 3 washes, 185 μl of the working solution was added to the ELISA plate and incubated for 1 hr at room temperature with plate sealer. The plate was then washed 4 times and 100 μl of anti-human VEGF-biotinylated antibody (R&D System) was added to a final concentration 0.2 μg / ml and incubated for 1 hour at room temperature with plate sealer. After the ELISA plate was washed 4 times with 200 μl washing buffer, 100 μl peroxidase-conjugated streptavidin (Jackson Immuno-Research Lab) was added at 0.1 μg / ml and incubated for 1 hour at room temperature with plate sealer. The plate was washed 4 times with 200 μl washing buffer, and 100 μl TMB substrate (Thermo Fisher Scientific) was then added and incubated to desired time. 100 μl of 1 M HSO4 was then added to stop the reaction and the plate was read using Spectra Max at Wavelengths OD450. The potency of Chimeric Molecule O3 in blocking VEGF binding to VEGFR was 37.8 nM in this ELISA assay.

[0166] Example 4 -Binding Affinity with Fc Receptors

[0167] The targets of the Chimeric Molecule O3 are VEGF and Ang-2, both of which are soluble factors. Therefore, there are no direct target cells, and no studies on ADCC (antibody-dependent cellular cytotoxicity) or CDC (complement-dependent cytotoxicity) were conducted.

[0168] The binding ability of the Chimeric Molecule O3 to Fc receptors (FcR) was assessed using surface plasmon resonance (SPR) . The affinities of the Chimeric Molecule O3 for FcRn, FcγRI, FcγRIIa, and FcγRIIIa were evaluated, with the wild-type IgG1Fc antibody (Bevacixumab analog) used as a control. The results are as shown in Table 1. The results showed that the Chimeric Molecule O3 with the Fc domain mutations has significantly reduced binding affinities to Fc receptors compared to the wild type IgG1 Fc.

[0169] Table 1. Comparison of Fc receptor binding affinities of the Chimeric Molecule O3 vs a wild type IgG1 Fc.

[0170] Example 5 -PK in cynomolgus monkeys

[0171] PK of the Chimeric Molecule O3 was carried out in cynomolgus monkeys. Two animals, one male and one female, were dosed at 36 mg per animal through intravenous administration. Blood samples were collected at the following time points: before the first and last doses, and at 5 min, 4 h, 8 h, 24 h, Day 2 (D2) , Day 3 (D3) , Day 5 (D5) , Day 7 (D7) , Day 14 (D14) , and Day 28 (D28) after dosing. The sample type was serum. The concentrations of the Chimeric Molecule O3 in the serum samples were analyzed using the MSD method, which detected targets with unoccupied binding sites for both VEGF and Ang-2. The results are shown in Figure 2. Consistent with the abolished binding to FcRN, the half-life of O3 in the cynomolgus monkeys was about 17 hours (data not shown) , significantly shorter than a regular IgG1 antibody with a wild type Fc domain. This shorter half-life of O3 would allow faster clearance in the circulation and lead to reduced systemic toxicity and better safety.

[0172] Example 6 -Safety and tolerability study of Chimeric Molecule O3 in subjects with nAMD

[0173] Study protocol Title: A Prospective, Multi-Center, Open-label, Sequential, Multiple Ascending-Dose and High Concentration Cohorts Phase 1 Study to Investigate the Safety, Tolerability, Pharmacokinetics, and Efficacy of Chimeric Molecule O3 Following Intravitreal Administration in Patients with neovascular Age-related Macular Degeneration.

[0174] Objective: To evaluate the safety, tolerability, pharmacokinetics and efficacy of Chimeric Molecule O3 in subjects with neovascular Age-related Macular Degeneration (nAMD) .

[0175] Investigational product:

[0176] · Tested IP: Chimeric Molecule O3

[0177] · Preparation: Solution for injection

[0178] · Route of administration: Intravitreal (IVT) injection

[0179] Study design

[0180] The Phase 1 study is comprised of multiple ascending-dose component (Part 1) and High Concentration (HC) cohorts component (Part 2) to evaluate the safety, tolerability, pharmacokinetics, and efficacy of Chimeric Molecule O3 in patients with neovascular age-related macular degeneration (nAMD) .

[0181] PART 1

[0182] The Part 1 is a multicenter, open-label, sequentially, multiple ascending-dose study to evaluate the safety, tolerability, pharmacokinetics, and efficacy of Chimeric Molecule O3 in subjects with nAMD.

[0183] Subjects will be sequentially enrolled into 4 dose-level cohorts of 0.5, 1.5, 3, and 6 mg following the traditional "3+3" design until the maximally tolerated dose (MTD) or the maximally administered dose (MAD) has been reached. A safety review committee, comprised of clinical trialists, the medical monitor, the PV physician and the statistician will meet to review the safety data after the 7-day follow-up visit for all subjects in each cohort.

[0184] This component is designed to include up to a 28-day screening phase and 8-week treatment phase and 8-week follow-up phase for each subject, and an extended up to 16-week follow-up for subjects who have not been rescued at Week 16 in cohorts of 1.5, 3, and 6 mg. All subjects will receive an intravitreal (IVT) injection of Chimeric Molecule O3 at each dose level in the study eye every 4 weeks for the first 2 months at baseline (Day 0, Week 0) , Week 4 and Week 8.

[0185] End of study (EOS) visit includes EOS1, EOS2 and EOS3. EOS1 is at week 16 for patients in cohort 1, and for patients who have been rescued at week 12 in cohorts 2, 3 and 4. EOS2 is at week 32 for patients entering extension follow up phase who have not been rescued until Week 32. For patients who are rescued after Week 12, EOS3 should be performed 4 weeks after receiving the rescue therapy, including any subject who has been rescued at Week 16 visit and any subject in Cohorts of 1.5 mg, 3 mg, and 6 mg who has been rescued during Weeks 20 to 32.

[0186] All subjects will be assessed by the investigator for rescue criteria on the Week 12 and the Week 16. Subjects who enter the extended follow-up period will be assessed by the investigator for rescue criteria on the Week 20, the Week 24, Week 28 and the Week 32. Subjects are allowed to be rescued for only once.

[0187] Rescue therapy will be given at applicable visits on the same day to the subject who meets any of the criteria.

[0188] (1) An increase in CST > 50 μm compared with the average CST from the last 2 visits, as assessed by SD-OCT

[0189] (2) An increase in CST ≥ 75 μm compared with the lowest CST from the previous visits, as assessed by SD-OCT;

[0190] (3) A loss > 5 letters compared with the average BCVA by ETDRS chart from the last 2 visits which was caused by nAMD;

[0191] (4) A loss > 10 letters compared with the best BCVA by ETDRS chart from the previous visits which was caused by nAMD progression;

[0192] (5) Macular hemorrhage due to nAMD progression.

[0193] 2 mg of will be used as rescue medication administrated by IVT injection in the study eye.

[0194] PART 2

[0195] The Part 2 is a multicenter, open-label study to evaluate the safety, tolerability, pharmacokinetics, and efficacy of High Concentration (HC) of Chimeric Molecule O3 at selected doses in  subjects with nAMD.

[0196] In the Part 2, 3 mg and 6 mg are originally selected as 2 dose cohorts. The first 3 subjects will be enrolled and receive HC Chimeric Molecule O3 (3 mg) IVT injection in the study eye every 4 weeks for the first 2 months at Week 0 (Day 0) , Week 4 (Day 28) and Week 8 (Day 56) . Following the enrollment of the first 3 patients, the next 3 patients will be enrolled and receive HC Chimeric Molecule O3 (6 mg) with the same treatment regimen mentioned above. Following 6 mg cohort, 3 patients will be enrolled and receive HC Chimeric Molecule O3 (9 mg) with the same treatment regimen. Safety will be monitored and assessed by sponsor on an ongoing basis to decide whether to suspend the following recruitment or enroll additional patients in the specified cohort, or to involve steering committee at the discretion of sponsor.

[0197] Subjects will be assessed by the investigator for retreatment criteria at the monthly visit from Week 12 up to Week 32. Subjects will receive retreatment if the above criteria are met. If the subject has received 3 retreatments, then from the next visit, the subject will be assessed for rescue criteria and receive rescue medication if the above criteria are met.

[0198] Retreatment / rescue will be given at applicable visits on the same day to the subject who meets any of the above retreatment / rescue criteria

[0199] The same dose level of Chimeric Molecule O3 as in the loading phase will be used as retreatment medication administrated by IVT injection in the study eye. 2 mg of  will be used as rescue medication administrated by IVT injection in the study eye. Patients who have received rescue therapy will be followed to the visit one month after the rescue therapy. Other patients will be followed to Week 36 and will receive standard-of-care at the discretion of investigator at Week 36.

[0200] This component will include up to a 28-day screening phase and an 8-week loading phase and an up-to-28-week durability assessment phase for each subject.

[0201] Key eligibility criteria:

[0202] - Pretreated (Part 1) or Treatment   (Part 2) nAMD subjects with 50 years of age or older.

[0203] - Active sub-foveal choroidal neovascularization (CNV) lesion secondary to nAMD including juxta-foveal or extra-foveal lesions that partially affect the fovea.

[0204] - The area of CNV must occupy at least 50%of total lesion.

[0205] - Total lesion area ≤ 12 Macular Photocoagulation Study Disc Areas (DA) in size.

[0206] - Absence of CNV due to other causes.

[0207] Study Endpoints:

[0208] Primary safety endpoints

[0209] · Incidence of ocular adverse events (AEs) of the study eyes

[0210] · Incidence of non-ocular AEs

[0211] · Any relevant safety observations derived from BCVA, SD-OCT, fundus photography (FP) , and fluorescence angiography (FA)

[0212] · Indirect ophthalmoscopy, intraocular pressure (IOP) , slit lamp examination

[0213] · Vital signs, ECG, clinical laboratory test

[0214] Secondary endpoints

[0215] Efficacy endpoints

[0216] · Mean change from baseline in central subfield thickness as assessed by SD-OCT

[0217] · Proportion of patients with no intraretinal fluid, subretinal fluid, or pigment epithelial detachment as assessed by SD-OCT

[0218] · Mean change from baseline in BCVA (ETDRS Letters)

[0219] · Proportion of patients gaining ≥ 15 letters from baseline BCVA

[0220] · Proportion of subjects meeting rescue criteria at Week 12 and Week 16 for the first time, respectively (part 1 only)

[0221] · Number of retreatments patients receiving as of Week 32 (part 2 only)

[0222] PK endpoints

[0223] · Plasma Chimeric Molecule O3:

[0224] · Cmax, Ctrough, AUClast, AUCτ, Tmax, accumulation ratio (Rac) for Cmax and AUC and if possible AUCinf, t1 / 2, CL / F, Vz / F

[0225] Statistical methods:

[0226] Descriptive statistics will be provided for selected demographic, safety, and efficacy data by dose level group as appropriate. Descriptive statistics will include number of observations (n) , means, medians, standard deviations, and ranges for continuous parameters, and frequency counts (n) and percentages (%) for categorical parameters.

[0227] Statistical Hypotheses

[0228] No formal statistical hypotheses will be tested based on the data collected in this study

[0229] Sample Size Determination

[0230] In Part 1, a standard “3+3” design will be used with maximum number of subjects accrued to be 24. The actual sample size will depend on the safety profiles and the number of doses studied.

[0231] In Part 2, three (3) subjects in each cohort are expected to be enrolled. The actual sample size will depend on the safety profiles with a maximum number of subjects accrued to be 9.

[0232] Results

[0233] Safety

[0234] In Part 1, Chimeric Molecule O3 was safe and well-tolerated at all dose levels with no dose-limiting toxicities (DLTs) , no intraocular inflammations (IOIs) , no drug-related treatment-emergent adverse events (TEAEs) and no TEAEs leading to study drug discontinuation. The AE incidence was similar among different dose cohorts.

[0235] In Part 2, Chimeric Molecule O3 was also well-tolerated at all tested dose levels with similar AE incidence among different dose cohorts. All the ocular AEs were assessed as non-serious except for the uveitis case in 6 mg cohort. The uveitis markedly improved within one week after starting steroids. No retinal vasculitis or vascular occlusion were observed.

[0236] Table 2 shows the overview of adverse events in Chimeric Molecule O3 phase 1 part 1 and part 2 study.

[0237] Efficacy

[0238] In part 1, dose-dependent improvements in BCVA and CST were observed across cohorts (Figure 3 and Figure 4) . From baseline to 4 weeks post-third dose administration: mean (± SD) change from baseline in BCVA were 0.0 (± 6.00) letters in 0.5 mg cohort, 1.3 (± 5.51) letters in 1.5 mg cohort, 5.0 (± 0.00) letters in 3 mg cohort and 9.3 (± 12.50) letters in 6 mg cohort; mean (± SD) change from baseline in CST were -1.33 (±5.13) μm in 0.5 mg cohort, -8.33 (± 13.61) μm in 1.5 mg cohort, -78.00 (± 35.56) μm in the 3 mg cohort and -83.33 (± 134.18) μm in the 6 mg cohort. Notably, more than 90%of subjects achieved ≥8-week rescue-free intervals post-third dose, with 2 subjects (16.7%) maintaining ≥24-week intervals, suggesting prolonged therapeutic durability. Higher-dose cohorts (3 mg and 6 mg) exhibited extended intervals between last Chimeric Molecule O3 administration and rescue therapy compared to pre-study treatment intervals.

[0239] In part 2, both BCVA and CST demonstrated sustained improvements through Week 36 in all cohorts (Figure 5 and Figure 6) . In the 3 mg HC cohort, BCVA increased by +10.3 (± 6.11) letters at 4 weeks post-third dose and remained elevated at +10.0 (± 8.19) letters by Week 36, while CST showed sustained reductions from -140.00 (± 71.90) μm (4 weeks post-third dose) to -138.33 (±75.38) μm (Week 36) . Similarly, the 6 mg HC cohort exhibited progressive BCVA improvement from +8.0 (± 6.08) to +10.5 (± 6.36) letters, and a CST reduction from -105.17 (± 31.30) μm to -71.00 (± 69.30) μm. The 9 mg HC cohort demonstrated modest BCVA gains +5.3 (± 8.50) to +4.5 (± 0.71) letters alongside maintained CST decreases from -123.33 (± 38.41) μm to -99.00 (±43.84) μm. The findings suggest a sustained effect of the Chimeric Molecule O3 on visual activity and CST for all dose cohorts. All cohorts demonstrated a sustained retreatment-free interval, with more than half subjects were retreatment-free throughout the study.

[0240] Table 3

[0241] *SoC: Standard-of-care (switching to SoC was at the discretion of the PIs without further specification by the study protocol)

[0242] Part 1 Bioanalytical data summary

[0243] In Part 1, after a single dose of Chimeric Molecule O3 (one intravitreal injection) , plasma concentration reached peak at 24-48 hours (median) for all cohorts. Plasma exposures of Chimeric Molecule O3 generally increased as dose increased but seemed to reach plateau after 3 mg: Cmax (geometric mean) for cohort 0.5 mg, 1.5 mg, 3 mg and 6 mg ranged from 7 to 47 ng / mL. Plasma half-life t1 / 2 ranged from 121.72 to 406.37 hours (Figure 7) .

[0244] After multiple doses of Chimeric Molecule O3 (three intravitreal injections) , plasma levels reached peak concentration at 24 hours (median) for all cohorts. Plasma exposures generally increased as dose increased but seemed to reach plateau after 3 mg: Cmax (geometric mean) for cohort 0.5 mg, 1.5 mg, 3 mg and 6 mg ranged from 7 to 52 ng / mL. Plasma half-life t1 / 2 ranged from 122.29 to 349.96 hours (Figure 8) .

[0245] Overall, plasma PK parameters of Chimeric Molecule O3 were similar after either single dose or multiple doses which indicated that there was no significant accumulation after multiple dosing.

[0246] For the detection of antidrug antibodies (ADA) , plasma samples were collected for all patients in Part 1 pre-dose at the first, second, third dosing of Chimeric Molecule O3 and at 28 days and 56 days after the third dosing. All samples were tested negative for ADA, supporting the low risk of immunogenicity for Chimeric Molecule O3.

[0247] EQUIVALENTS

[0248] All references, patents and patent applications disclosed herein are incorporated by reference with respect to the subject matter for which each is cited, which in some cases may encompass the entirety of the document.

Claims

1.A chimeric molecule, comprising:an Ang-2 antagonist peptide which binds to Ang-2 and inhibits a biological activity of Ang-2, having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-3; andan anti-VEGF antibody, which comprises a heavy chain and a light chain;with the Ang-2 antagonist peptide being fused with the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain.2.The chimeric molecule according to claim 1, wherein the Ang-2 antagonist peptide comprise an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.3.The chimeric molecule according to claims 1 or 2, wherein the heavy chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 or 10, and the light chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.4.The chimeric molecule according to any one of claims 1-3, wherein the Ang-2 antagonist peptide is fused to the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain with a peptide linker, preferably wherein the peptide linker comprises one or more amino acid sequences: GGGGS (SEQ ID NO: 9) .5.The chimeric molecule according to any one of claims 1-4, wherein the chimeric molecule comprises a heavy chain fusion having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8 and 11, preferably an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8, more preferably an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6; and a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.6.A polynucleotide encoding the chimeric molecule according to any one of claims 1-5.7.An expression vector comprising the polynucleotide according to claim 6.8.A host cell transfected with the expression vector according to claim 7.9.A method of making the chimeric molecule according to any one of claims 1-5, comprising culturing a host cell transfected with the expression vector according to claim 7 under conditions that allow expression of the chimeric molecule, and isolating the chimeric molecule.10.A pharmaceutical composition, comprising the chimeric molecule according to any one of claims 1-5 as an active ingredient.11.The pharmaceutical composition according to claim 10, wherein the pharmaceutical composition comprises the chimeric molecule at a concentration of 0.5 mg / ml or higher, a concentration of 1.0 mg / mL or higher, a concentration of 1.5 mg / mL or higher, or a concentration of 3 mg / mL or higher; and / orthe pharmaceutical composition comprises the chimeric molecule at a concentration of 15.0 mg / mL or lower, a concentration of 10.0 mg / mL or lower, or a concentration of 6.0 mg / mL or lower.12.A method for treating retinal and choroidal vascular diseases in a subject in need thereof comprising administering to the subject a series of doses of a chimeric molecule, which comprises:an Ang-2 antagonist peptide which binds to Ang-2 and inhibits a biological activity of Ang-2, having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1-3; andan anti-VEGF antibody, which comprises a heavy chain and a light chain;with the Ang-2 antagonist peptide being fused with the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain; andwherein the amount of the chimeric molecule in each dose for said series of doses is a same amount of about 0.5 mg to 12 mg.13.The method according to claim 12, wherein the heavy chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 or 10, and the light chain of the anti-VEGF antibody has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.14.The method according to claim 12, wherein the Ang-2 antagonist peptide is fused to the anti-VEGF antibody in the C end of the heavy chain with a peptide linker, preferably wherein the peptide linker comprises one or more amino acid sequences: GGGGS (SEQ ID NO: 9) .15.The method according to claim 12, wherein the chimeric molecule comprises a heavy chain fusion having an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8 and 11, preferably an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 6-8, more preferably an amino acid sequence of SEQ ID NO: 6; and a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.16.The method according to any one of claims 12-15, wherein the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 0.5 mg to 9 mg, preferably about 3 mg to 9 mg.17.The method according to any one of claims 12-15, wherein the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 3 mg.18.The method according to any one of claims 12-15, wherein the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 6 mg.19.The method according to any one of claims 12-15, wherein the amount of the chimeric molecule in each dose is a same amount of about 9 mg.20.The method according to any one of claims 12-19, wherein the time period between each dose and the next in said series of doses is four weeks or more, preferably four weeks to eight weeks.21.The method according to any one of claims 12-20, wherein the chimeric molecule is administered for three to six continuous doses in total in said series of doses.22.The method according to any one of claims 12-21 wherein the method further comprises administering to the subject a subsequent series of doses of the chimeric molecule, after said series of doses are administered.23.The method according to claim 22, wherein the time period between each dose and the next in said subsequent series of doses is four weeks or more, preferably four weeks to twenty-eight weeks, more preferably four weeks or more, six weeks or more, eight weeks or more, twelve weeks or more, sixteen weeks or more, twenty weeks or more, twenty-four weeks or more, or twenty-eight weeks.24.The method according to claim 22, wherein the chimeric molecule is administered for one to six continuous doses per year in said subsequent series of doses.25.The method according to claim 22, wherein said subsequent series of doses are administered pro re nata (PRN) .26.The method according to claim 22, wherein said subsequent series of doses are administered treat-and-extend (T&E) .27.The method according to any one of claims 22-26, wherein the amount of the chimeric molecule in each dose for said subsequent series of doses is the same with that in each dose for said series of doses.28.The method according to any one of claims 22-27, wherein the interval between the last dose of said series of doses and the first dose of said subsequent series of doses is four weeks or more, six weeks or more, eight weeks or more, twelve weeks or more, sixteen weeks or more, twenty weeks or more, twenty-four weeks or more, twenty-eight weeks or more, thirty-two weeks or more, thirty-six weeks or more, forty weeks or more, forty-four weeks or more, forty-eight weeks or more, or fifty-two weeks or more, .29.The method according to any one of claims 22-28, wherein the chimeric molecule is administered through intraocular injection, such as intravitreal injection or suprachoroidal injection.30.The method according to any one of claims 22-29, wherein the method is used in a clinical trial.31.The method according to any one of claims 22-29, wherein the method is used after regulatory approval.32.The method according to any one of claims 12-31, wherein the subject is suffering from at least one item of said diseases selected from the group consisting of (i) best corrected visual acuity (BCVA) decrease from the best BCVA of 1 letter or more, 3 letters or more, 5 letters or more or 10 letters or more; and (ii) BCVA decrease from the average of the last 2 visits of 1 letter or more, 3 letters or more, 5 letters or more or 10 letters or more; (iii) central subfield thickness (CST) increase from the lowest CST of 5 μm or more, 10 μm or more, 20 μm or more, 50 μm or more, or 80 μm or more; and (iv) CST increase from the average of the last 2 visits of 5 μm or more, 10 μm or more, 20 μm or more, 50 μm or more, or 80 μm or more; and (v) macular hemorrhage due to disease progression.33.The method according to any one of claims 12-32, wherein the subject is  34.The method according to any one of claims 12-32, wherein the subject has undergone one or more other treatments.35.The method according to any one of claims 12-34, wherein the retinal and choroidal vascular diseases include, neovascular age-related macular degeneration (AMD) for example neovascular age-related macular degeneration (nAMD) , diabetic macular edema (DME) , diabetic retinopathy (DR) , retinal vein occlusion (RVO) , retinopathy of prematurity (ROP) , or pathologic myopia.

Images