Untranslated regions and uses thereof

Abstract

Provided are multiple 5'-untranslated region (5'-UTR) sequences and 3'-UTR sequences for RNA constructs. Also provided are polynucleotides, vectors, and cells comprising the 5'-UTR and 3'-UTR described herein.

Description

Untranslated Regions and Uses Thereof

[0001] FIELD OF DISCLOSURE

[0002] The present disclosure provides 5’-untranslated region (UTR) sequences and 3’-UTR sequences, and combinations thereof. The present disclosure further provides polynucleotides, vectors, cells, and methods related to the 5’-UTR and 3’-UTR sequences.

[0003] SEQUENCE LISTING

[0004] This application contains a Sequence Listing as an XML file entitled “FILE NAME. xml” having a size of #X bytes and created on DATE. The information contained in the Sequence Listing is incorporated by reference herein.BACKGROUND

[0005] UTRs are important regulatory elements with a strong impact on the post-transcriptional regulation of gene expression. The numerous roles that UTRs play include (i) regulation of mRNA export from the nucleus, (ii) regulation of translation efficiency, (iii) orchestration of subcellular localization, and (iv) mRNA stability.

[0006] Design of proper 5’ and 3’-UTRs is crucial for the success of RNA products. Many investigations have been conducted to screen and design the most effective 5’ and 3’-UTRs. For example, it has been found that introduction of α-globin 3’ end UTRs results in stabilization of mRNA, while the incorporation of beta-globin 5’ end and 3’ end UTRs leads to enhanced translational efficiency.

[0007] There is a need to identify more 5’-UTR and 3’-UTR that enables the RNA to achieve good translational efficiency.SUMMARY

[0008] The present disclosure provides 5’-UTR and 3’-UTR sequences designed and selected by machine learning, genetic algorithms, and / or data mining.

[0009] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-untranslated region (5’-UTR) selected from SEQ ID NOs: 4-12.

[0010] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-untranslated region (5’-UTR) selected from SEQ ID NOs: 4-12 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21. In some embodiments, the 5’-UTR and the 3’-UTR are:

[0011] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0012] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0013] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0014] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0015] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0016] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0017] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0018] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0019] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0020] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0021] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0022] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0023] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0024] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0025] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0026] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0027] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0028] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0029] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0030] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0031] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0032] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0033] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0034] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0035] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0036] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0037] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0038] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0039] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0040] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0041] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0042] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0043] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0044] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0045] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0046] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0047] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0048] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0049] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0050] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0051] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0052] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0053] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0054] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0055] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0056] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0057] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0058] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0059] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0060] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0061] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0062] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0063] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0064] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0065] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0066] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0067] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0068] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0069] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0070] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0071] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0072] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0073] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0074] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0075] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0076] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0077] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0078] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0079] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0080] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0081] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0082] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0083] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0084] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0085] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0086] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0087] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0088] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0089] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0090] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0091] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0092] In some embodiments, the RNA sequence comprises a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 4-12 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41. In some embodiments, the 5’-UTR and 3’-UTR are:

[0093] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0094] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0095] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0096] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0097] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0098] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0099] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0100] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0101] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0102] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0103] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0104] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0105] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0106] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0107] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0108] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0109] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0110] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0111] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0112] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0113] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0114] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0115] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0116] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0117] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0118] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0119] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0120] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0121] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0122] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0123] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0124] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0125] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0126] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0127] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0128] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0129] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0130] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0131] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0132] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0133] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0134] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0135] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0136] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0137] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0138] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0139] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0140] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0141] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0142] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0143] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0144] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0145] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0146] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0147] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0148] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0149] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0150] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0151] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0152] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0153] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0154] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0155] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0156] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0157] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0158] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0159] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0160] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0161] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0162] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0163] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0164] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0165] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0166] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0167] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0168] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0169] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0170] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0171] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0172] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0173] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0174] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0175] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0176] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0177] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0178] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0179] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0180] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0181] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0182] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 41, respectively.

[0183] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21. In some embodiments, the 5’-UTR and 3’-UTR are:

[0184] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0185] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0186] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0187] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0188] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0189] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0190] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0191] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0192] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0193] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0194] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0195] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0196] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0197] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0198] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0199] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0200] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0201] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0202] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0203] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0204] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0205] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0206] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0207] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0208] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0209] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0210] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0211] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0212] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0213] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0214] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0215] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0216] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0217] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0218] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0219] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0220] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0221] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0222] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0223] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0224] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0225] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0226] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0227] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0228] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0229] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0230] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0231] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0232] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0233] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0234] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0235] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0236] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0237] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0238] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0239] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0240] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0241] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0242] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0243] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0244] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0245] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0246] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0247] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0248] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0249] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0250] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0251] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0252] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0253] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0254] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0255] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0256] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0257] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0258] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0259] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0260] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0261] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0262] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0263] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0264] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0265] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0266] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0267] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0268] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0269] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0270] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0271] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0272] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0273] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 21, respectively.

[0274] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41. In some embodiments, the 5’-UTR and 3’-UTR are:

[0275] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0276] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0277] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0278] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0279] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0280] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0281] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0282] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0283] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0284] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0285] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0286] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0287] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0288] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0289] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0290] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0291] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0292] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0293] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0294] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0295] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0296] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0297] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0298] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0299] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0300] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0301] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0302] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0303] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0304] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0305] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0306] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0307] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0308] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0309] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0310] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0311] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0312] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0313] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0314] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0315] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0316] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0317] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0318] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0319] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0320] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0321] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0322] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0323] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0324] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0325] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0326] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0327] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0328] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0329] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0330] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0331] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0332] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0333] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0334] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0335] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0336] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0337] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0338] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0339] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0340] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0341] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0342] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0343] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0344] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0345] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0346] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0347] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0348] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0349] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0350] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0351] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0352] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0353] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0354] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0355] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0356] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0357] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0358] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0359] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0360] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0361] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0362] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0363] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0364] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0365] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0366] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0367] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0368] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0369] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0370] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0371] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0372] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0373] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0374] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 41, respectively.

[0375] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 4-12.

[0376] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 4-12 and 22-31, and a 3’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 13-21 and 32-41.

[0377] In an aspect, the present disclosure provides an engineered RNA sequence comprising a 3’-UTR selected from any one of SEQ ID NOs: 13-21 and 32-41, and a coding sequence encoding a therapeutic agent.

[0378] In an aspect, the present disclosure provides an engineered RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from any one of SEQ ID NOs: 22-31, and a coding sequence encoding a therapeutic agent.

[0379] In some embodiments of the RNA sequence described herein, the RNA sequence further comprises a polyA sequence at the 3’ end of the RNA sequence.

[0380] In some embodiments of the RNA sequence described herein, the RNA sequence further comprises a 5’ cap at the 5’ end of the RNA sequence.

[0381] In some embodiments of the RNA sequence described herein, the RNA sequence comprises at least one modified nucleotide.

[0382] In some embodiments of the RNA sequence described herein, the RNA sequence comprises a coding sequence that encodes a polypeptide.

[0383] In another aspect, the present disclosure provides a polynucleotide encoding any of the RNA sequence described herein.

[0384] In another aspect, the present disclosure provides a vector comprising any of the RNA sequence described herein and / or the polynucleotide described herein.

[0385] In some embodiments, the vector is a plasmid, a viral vector, or a lipid-based vector.

[0386] In another aspect, the present disclosure provides a cell comprising any of the RNA sequence described herein.

[0387] In another aspect, the present disclosure provides a cell comprising the polynucleotide described herein and / or the vector described herein.

[0388] In another aspect, the present disclosure provides a composition comprising any of the RNA sequence described herein.

[0389] In another aspect, the present disclosure provides a composition comprising the polynucleotide described herein.

[0390] In some embodiments, the composition further comprises a carrier selected from the group consisting of lipid nanoparticles, liposomes, cationic nanoemulsions, dendrimer-based lipid nanoparticles, cationic polymers, and polysaccharide particles.

[0391] In another aspect, the present disclosure provides a kit comprising any of the RNA sequence described herein and / or the polynucleotide described herein, and a carrier selected from the group consisting of lipid nanoparticles, liposomes, cationic nanoemulsions, dendrimer-based lipid nanoparticles, cationic polymers, and polysaccharide particles.

[0392] In another aspect, the present disclosure provides a method of preparing any of the RNA sequence described herein, selected from in vivo transcription or in vitro transcription from the polynucleotide described herein, wherein the polynucleotide is DNA.

[0393] In another aspect, the present disclosure provides a method of preparing the cell described herein, selected from transduction or transfection of a vector described herein into the cell.

[0394] In another aspect, the present disclosure provides a method of preparing the composition of described herein and / or the kit described herein, comprising (a) preparing the RNA sequence described herein, and / or prepare the polynucleotide sequence described herein when the polynucleotide sequence is a DNA, and (b) loading the RNA sequence described herein or the polynucleotide described herein into the carrier.

[0395] In another aspect, the present disclosure provides a method of constructing an engineered polynucleotide sequence comprising a coding sequence, e.g., encoding a therapeutic agent, the method comprising:

[0396] adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 4-12 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 4-12, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 13-21 to the coding sequence; or

[0397] adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 4-12 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 4-12, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 32-41 to the coding sequence; or

[0398] adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 22-31, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 13-21 to the coding sequence; or

[0399] adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 22-31, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 32-41 to the coding sequence.

[0400] BRIEF DESCRIPTION OF FIGURES

[0401] Fig. 1 describes the workflow of machine learning (ML) -based in-silico UTR design.

[0402] Fig. 2 shows predicted translational efficiency vs mutation generations.DETAILED DESCRIPTION

[0403] Definitions

[0404] All publications, patents, and patent applications referred to herein are incorporated by reference in their entirety to the same extent as if each individual publication, patent, or patent application was specifically and individually indicated to be incorporated by reference in its entirety.

[0405] In the present disclosure, unless otherwise specified, the scientific and technical terms used herein have the meanings generally understood by a person skilled in the art. Although any methods and materials similar or equivalent to those described herein find use in the practice of the present disclosure, the preferred methods and materials are described herein. Accordingly, the terms defined herein are more fully described by reference to the Specification as a whole.

[0406] As used herein, the singular terms “a, ” “an, ” and “the” include the plural reference unless the context clearly indicates otherwise.

[0407] As used herein, “and / or” refers to and encompasses any and all possible combinations of one or more of the associated listed items, as well as the lack of combinations when interpreted in the alternative ( “or” ) . Moreover, the present invention also contemplates that in some embodiments of the invention, any feature or combination of features set forth herein can be excluded or omitted.

[0408] Unless the context requires otherwise, the terms “comprise, ” “comprises, ” and “comprising, ” or similar terms are intended to mean a non-exclusive inclusion, such that a  recited list of elements or features does not include those stated or listed elements solely, but may include other elements or features that are not listed or stated.

[0409] Unless otherwise indicated, nucleic acids are written left to right in the 5' to 3' orientation; and amino acid sequences are written left to right in amino to carboxy orientation, respectively.

[0410] It is to be understood that this disclosure is not limited to the particular methodology, protocols, and reagents described, as these may vary, depending upon the context in which they are used by those skilled in the art.

[0411] The term “nucleic acid” refers to deoxyribonucleotides or ribonucleotides and polymers thereof in either single-or double-stranded form. Unless specifically limited, the term encompasses nucleic acids containing known analogues of natural nucleotides which have similar binding properties as the reference nucleic acid and are metabolized in a manner similar to naturally occurring nucleotides. The term nucleic acid is used interchangeably with polynucleotide, and (in appropriate contexts) gene, cDNA, and mRNA encoded by a gene.

[0412] As used herein, “mRNA” or “messenger RNA” refers to an RNA molecule that comprises a protein encoding sequence, which can be translated by ribosome in the process of protein synthesis.

[0413] As used herein, a composition refers to any mixture of two or more products, substances, or compounds, including cells.

[0414] As used herein, the term “coding sequence” and “coding region” are used interchangeably. They refer to the portion of a polynucleotide that codes for a protein.

[0415] As used herein, the terms “percent identity” and “%identity, ” as applied to nucleic acid or polynucleotide sequences, refer to the percentage of residue matches between at least two nucleic acid or polynucleotide sequences aligned using a standardized algorithm. Such an algorithm may insert, in a standardized and reproducible way, gaps in the sequences being compared in order to optimize alignment between two sequences, and therefore achieve a more meaningful comparison of the two sequences.

[0416] Percent identity between nucleic acid or polynucleotide sequences may be determined using a suite of commonly used and freely available sequence comparison algorithms provided by the National Center for Biotechnology Information (NCBI) Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) (Altschul, S. F. et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410) , which is available from several sources, including the NCBI, Bethesda, Md., and on the Internet at http:  / / www. ncbi. nlm. nih. gov / BLAST / .

[0417] Nucleic acid or polynucleotide sequences that do not show a high degree of identity may nevertheless encode similar amino acid sequences due to the degeneracy of the genetic code. It is understood that changes in a nucleic acid sequence can be made using this degeneracy to produce multiple nucleic acid sequences that all encode substantially the same  protein. Specifically, degenerate codon substitutions may be achieved by generating sequences in which the third position of one or more selected (or all) codons is substituted with mixed-base and / or deoxyinosine residues (Batzer et al., 1991) Nucleic Acid Res 19: 5081; Ohtsuka et al. (1985) J Biol Chem 260: 2605-2608; Cassol et al. (1992) ; Rossolini et al. (1994) Mol Cell Probes 8: 91-98) . The term “nucleic acid” refers to deoxyribonucleotides or ribonucleotides and polymers thereof in either single-or double-stranded form. Unless specifically limited, the term encompasses nucleic acids containing known analogues of natural nucleotides which have similar binding properties as the reference nucleic acid and are metabolized in a manner similar to naturally occurring nucleotides. The term nucleic acid is used interchangeably with polynucleotide, and (in appropriate contexts) gene, cDNA, and mRNA encoded by a gene.

[0418] As used herein, an “engineered” article refers to an article that is not naturally occurring in any species. For example, an “engineered” RNA refers to an RNA sequence that is not naturally occurring in any species.

[0419] As used herein, “therapeutic agent” refers to a substance that can be used to prevent, diagnose, treat or alleviate a disease or medical condition.

[0420] Untranslated region

[0421] Untranslated region (UTR) refers to the region flanking the protein coding sequence on either the 3’ side or the 5’ side on an RNA. It is called 5’-UTR if it is upstream of the protein coding sequence (i.e., on the 5’ side) . It is called 3’-UTR if it is downstream of the protein coding sequence (i.e., on the 3’ side) .

[0422] UTRs are important regulatory elements with a strong impact on the post-transcriptional regulation of gene expression. The numerous roles that UTRs play include (i) regulation of mRNA export from the nucleus, (ii) regulation of translation efficiency, (iii) orchestration of subcellular localization, and (iv) mRNA stability. Together with the complex of different RNA-interacting factors, UTRs regulate mRNA stability, export to the cytoplasm, sub-cellular localization, and translation efficiency to influence the total amount of synthesized protein. The 5’-UTR is mainly involved in translation of its downstream open reading frame, while the function of the 3’-UTR is to maintain mRNA stability.

[0423] Design of proper 5’ and 3’-UTRs is crucial for the success of RNA products. Many investigations have been conducted to screen and design the most effective 5’ and 3’-UTRs. For example, it has been found that introduction of α-globin 3’ end UTRs results in stabilization of mRNA, while the incorporation of beta-globin 5’ end and 3’ end UTRs leads to enhanced translational efficiency.

[0424] There is a need to identify more 5’-UTR and 3’-UTR that can achieve good translational efficiency. The present disclosure provides 5’-UTR and 3’-UTR sequences designed and selected by machine learning, genetic algorithms, and / or data mining. The present disclosure provides 9 5’-UTR sequences designed by machine learning, which are SEQ ID NOs: 4-12. The present disclosure provides 9 3’-UTR sequences designed by data mining,  which are SEQ ID NOs: 13-21. The present disclosure also provides 10 5’-UTR and 10 3’-UTR sequences identified by data mining, which are SEQ ID NOs: 22-31 and SEQ ID NOs: 32-41, respectively.

[0425] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-untranslated region (5’-UTR) selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 4-12. In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 22-31. In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 3’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs 13-21. In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 3’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs 32-41.

[0426] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-untranslated region (5’-UTR) selected from SEQ ID NOs: 4-12. In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31.In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21. In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41.

[0427] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-untranslated region (5’-UTR) selected from SEQ ID NOs: 4-12 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21. In some embodiments, the 5’-UTR and the 3’-UTR are:

[0428] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0429] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0430] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0431] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0432] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0433] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0434] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0435] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0436] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0437] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0438] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0439] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0440] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0441] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0442] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0443] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0444] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0445] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0446] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0447] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0448] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0449] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0450] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0451] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0452] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0453] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0454] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0455] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0456] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0457] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0458] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0459] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0460] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0461] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0462] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0463] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0464] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0465] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0466] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0467] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0468] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0469] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0470] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0471] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0472] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0473] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0474] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0475] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0476] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0477] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0478] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0479] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0480] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0481] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0482] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0483] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0484] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0485] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0486] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0487] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0488] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0489] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0490] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0491] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0492] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0493] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0494] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0495] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0496] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0497] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0498] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0499] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0500] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0501] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0502] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0503] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0504] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0505] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0506] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0507] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0508] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0509] In some embodiments, the RNA sequence comprises a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 4-12 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41. In some embodiments, the 5’-UTR and 3’-UTR are:

[0510] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0511] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0512] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0513] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0514] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0515] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0516] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0517] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0518] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0519] SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0520] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0521] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0522] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0523] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0524] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0525] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0526] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0527] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0528] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0529] SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0530] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0531] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0532] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0533] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0534] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0535] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0536] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0537] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0538] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0539] SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0540] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0541] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0542] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0543] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0544] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0545] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0546] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0547] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0548] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0549] SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0550] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0551] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0552] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0553] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0554] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0555] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0556] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0557] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0558] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0559] SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0560] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0561] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0562] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0563] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0564] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0565] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0566] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0567] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0568] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0569] SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0570] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0571] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0572] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0573] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0574] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0575] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0576] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0577] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0578] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0579] SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0580] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0581] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0582] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0583] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0584] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0585] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0586] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0587] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0588] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0589] SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0590] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0591] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0592] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0593] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0594] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0595] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0596] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0597] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0598] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0599] SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 41, respectively.

[0600] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21. In some embodiments, the 5’-UTR and 3’-UTR are:

[0601] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0602] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0603] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0604] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0605] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0606] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0607] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0608] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0609] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0610] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 13, respectively; or

[0611] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0612] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0613] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0614] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0615] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0616] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0617] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0618] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0619] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0620] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 14, respectively; or

[0621] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0622] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0623] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0624] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0625] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0626] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0627] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0628] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0629] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0630] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 15, respectively; or

[0631] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0632] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0633] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0634] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0635] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0636] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0637] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0638] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0639] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0640] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 16, respectively; or

[0641] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0642] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0643] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0644] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0645] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0646] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0647] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0648] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0649] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0650] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 17, respectively; or

[0651] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0652] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0653] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0654] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0655] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0656] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0657] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0658] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0659] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0660] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 18, respectively; or

[0661] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0662] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0663] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0664] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0665] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0666] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0667] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0668] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0669] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0670] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 19, respectively; or

[0671] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0672] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0673] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0674] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0675] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0676] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0677] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0678] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0679] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0680] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 20, respectively; or

[0681] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0682] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0683] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0684] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0685] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0686] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0687] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0688] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0689] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 21, respectively; or

[0690] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 21, respectively.

[0691] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41. In some embodiments, the 5’-UTR and 3’-UTR are:

[0692] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0693] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0694] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0695] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0696] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0697] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0698] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0699] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0700] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0701] SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0702] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0703] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0704] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0705] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0706] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0707] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0708] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0709] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0710] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0711] SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0712] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0713] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0714] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0715] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0716] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0717] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0718] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0719] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0720] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0721] SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0722] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0723] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0724] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0725] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0726] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0727] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0728] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0729] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0730] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0731] SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0732] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0733] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0734] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0735] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0736] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0737] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0738] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0739] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0740] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0741] SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0742] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0743] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0744] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0745] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0746] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0747] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0748] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0749] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0750] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0751] SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0752] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0753] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0754] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0755] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0756] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0757] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0758] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0759] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0760] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0761] SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0762] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0763] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0764] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0765] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0766] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0767] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0768] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0769] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0770] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0771] SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0772] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0773] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0774] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0775] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0776] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0777] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0778] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0779] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0780] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0781] SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 41, respectively; or

[0782] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 32, respectively; or

[0783] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 33, respectively; or

[0784] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 34, respectively; or

[0785] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 35, respectively; or

[0786] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 36, respectively; or

[0787] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 37, respectively; or

[0788] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 38, respectively; or

[0789] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 39, respectively; or

[0790] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 40, respectively; or

[0791] SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 41, respectively.

[0792] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 4-12.

[0793] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 4-12, and 22-31, and a 3’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 13-21, and 32-41.

[0794] In an aspect, the present disclosure provides an engineered RNA sequence comprising a 3’-UTR selected from any one of SEQ ID NOs: 13-21 and 32-41, and a coding sequence encoding a therapeutic agent.

[0795] In an aspect, the present disclosure provides an engineered RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from any one of SEQ ID NOs: 22-31, and a coding sequence encoding a therapeutic agent.

[0796] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 3’-UTR selected from any one of SEQ ID NOs: 13-21 and 32-41.

[0797] In an aspect, the present disclosure provides an RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from any one of SEQ ID NOs: 4-12 and 22-31.

[0798] For an RNA sequence comprising a 5’-UTR sequence, point mutations in the 5’-UTR that are not close to the start codon of the coding region may not affect the translation efficiency of the RNA. In some embodiment, the one or more point mutations in the 5’-UTR are located at least 1, 2, 3, 4, or 5 nucleotides away from the first nucleotide of the coding region.

[0799] In some embodiments of the RNA sequence described herein, the RNA sequence further comprises a polyA sequence at the 3’ end of the RNA sequence. The poly (A) tail plays an important role in maintaining mRNA stability and translation efficiency. mRNA stability can be improved by inhibiting exonuclease-mediated mRNA degradation. The poly (A) tail can also bind to multiple poly (A) -binding proteins (PABPs) while working synergistically with 5’ m7G cap sequences to regulate translational efficiency. Polyadenylation can be done by traditional enzymatic polyadenylation, adding the poly (A) tail to the 3’ end of mRNA, or by designing a fixed-length poly (A) sequence on a DNA template and transcribing the resulting length-controllable poly (A) tail. The poly (A) tail is a long chain of adenine nucleotides that is added to the 3’ end of a mRNA molecule. In some embodiments, the length of the poly (A) tail is at least 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 or 500 nucleotides. In some embodiments, the length of the poly (A) tail is adjusted to control the stability of the mRNA molecule disclosed herein. For example, since the length of the poly (A) can influence the half-life of the mRNA molecule, the length of the poly (A) tail can be adjusted to modify the level of resistance of the mRNA to nucleases and thereby control the time course of protein expression.

[0800] In some embodiments of the RNA sequence described herein, the RNA sequence further comprises a 5’ cap at the 5’ end of the RNA sequence. 5’ cap refers to a specially altered  nucleotide on the 5’ end of the RNA sequence. According to the degree of methylation, three main cap structures are possible: cap 0, cap 1, and cap 2. A cap 0 structure is the most elementary, namely m7GpppNp; however, an mRNA of cap 0 is likely to be recognized as exogenous RNA by the host, which could stimulate the innate immune response of the host and ultimately trigger inflammatory responses. A cap1 structure (m7GpppN1mp) has a methylated 2’-OH on the first nucleotide connecting the 5’ end of the mRNA to the cap. Since the cap1 structure has only been described to date in eukaryotic mRNAs, it can be used as a signature of self-RNA, thus reducing the activation of pattern recognition receptor (PRR) and consequently improving translation efficiency of mRNA in vivo. Lastly, cap2 (m7GpppN1mpN2mp) has a methylated 2’-OH on both the first and second nucleotides that connect the 5’ end of the mRNA to the cap, and methylation improves mRNA translation efficiency. In some embodiments, the 5’ cap has a cap1 structure. In some embodiments, the 5’ cap is methylated, e.g., m7GpppN, wherein N is the 5’ terminal nucleotide of the nucleic acid carrying the 5’ cap. In some embodiments, the 5’ cap structure is selected from glyceryl, inverted deoxy abasic residue, 4’, 5’-methylene nucleotide, 1- (beta-D-erythrofuranosyl) nucleotide, 4’-thio nucleotide, carbocyclic nucleotide, 1, 5-anhydrohexitol nucleotide, L-nucleotides, alpha-nucleotide, modified base nucleotide, threo-pentofuranosyl nucleotide, acyclic 3’, 4’-seco nucleotide, acyclic 3, 4-dihydroxybutyl nucleotide, acyclic 3, 5 dihydroxypentyl nucleotide, 3’-3’-inverted nucleotide moiety, 3’-3’-inverted abasic moiety, 3’-2’-inverted nucleotide moiety, 3’-2’-inverted abasic moiety, 1, 4-butanediol phosphate, 3’-phosphoramidate, hexylphosphate, aminohexyl phosphate, 3’-phosphate, 3’-phosphorothioate, phosphorodithioate, bridging methylphosphonate moiety, and non-bridging methylphosphonate moiety.

[0801] Any method known in the art can be used to add the 5’ cap. For example, a capping enzyme RNA 5’-triphosphatase (RTPase) can be used, which hydrolyzes the 5’ γ-phosphate of RNA, with a transfer of guanosine monophosphate (GMP) to 5’-diphosphate RNA by guanylyltransferase (GTase) , and the resulting 5’-end β-phosphate is combined with GMP to form GpppNp-RNA. Finally, the guanosine moiety is methylated by a cap-specific S-adenosylmethionine- (AdoMet) -dependent (guanine-N7) methyltransferase (N7MTase) , forming a cap0 structure (m7GpppNp) . The cap0 structure can be further modified to cap1 (m7GpppN1mp) by 2’-O-methyltransferase (2’-O-MTase) .

[0802] In some embodiments of the RNA sequence described herein, the RNA sequence comprises at least one modified nucleotide. In some embodiments, the modified nucleotide is selected from the group consisting of pseudouridine (Ψ) , 1-methylpseudouridine (m1Ψ) , 5-methyluridine (m5U) , 2-thiouridine (s2U) , 5-methylcytidine (m5C) , and N6-methyladenosine (m6A) . As used herein, the term “modified nucleotide” includes any synthetic nucleotide and nucleotide analogue, and any naturally existing nucleotide other than adenine, adenine, guanine, thymine, or uracil. Exemplary nucleotide modification includes 2’-O-methylation (Nm) and conversion of uridine to pseudouridine (Ψ) . Both Nm and Ψ modifications have the potential  to stabilize RNA folding domains. Methylation of 2’-OH sites endows a nucleotide with greater hydrophobicity, protects against nucleolytic attack and stabilizes helices, and thus can benefit inter-or intra-molecular interactions. Pseudouridine exerts a significant rigidifying influence on the sugar–phosphate backbone and enhances base stacking. In addition, Ψ provides an additional donor site for hydrogen-bond formation, which can stabilize RNA–RNA or RNA–protein interactions (Baillieu et al., Nucleic Acids Res. 2009) .

[0803] In some embodiments of the RNA sequence described herein, the RNA sequence further comprises a coding sequence that encodes a polypeptide, which may be a therapeutic agent. In some embodiments, the coding sequence is codon optimized. Codon optimization methods are known in the art and may be useful in efforts to achieve one or more of several goals. These goals include to match codon frequencies in target and host organisms to ensure proper folding, bias GC content to increase mRNA stability or reduce secondary structures, minimize tandem repeat codons or base runs that may impair gene construction or expression, customize transcriptional and translational control regions, insert or remove protein trafficking sequences, remove / add post translation modification sites in encoded protein (e.g., glycosylation sites) , add, remove or shuffle protein domains, insert or delete restriction sites, modify ribosome binding sites and mRNA degradation sites, to adjust translational rates to allow the various domains of the protein to fold properly, or to reduce or eliminate problem secondary structures within the mRNA. Codon optimization tools, algorithms and services are known in the art, non-limiting examples include services from GeneArt (Life Technologies) and / or DNA2.0 (Menlo Park Calif. ) .

[0804] In some embodiments, the RNA sequence encodes a cytokine. In some embodiments, the RNA sequence encodes interleukin (IL) -2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-15, IL-21, or IL-23.

[0805] In some embodiments, the RNA sequence encodes an antibody. In some embodiments, the antibody is a monoclonal antibody. In some embodiments, the antibody is an anti-PD-1 antibody. In some embodiments, the antibody is an anti-PD-L1 antibody.

[0806] In some embodiments, the RNA sequence encodes a therapeutic protein. In some embodiments, the RNA sequence encodes hEPO, PA, MMA, GSD1a, CFTR, CN1, PKU, OTC, PCV, KRAS, or VEGFa.

[0807] In some embodiments, the RNA sequence encodes an antigen. In some embodiments, the RNA sequence encodes a protein or a peptide, which comprises a pathogenic antigen or a fragment, variant or derivative thereof. Such pathogenic antigens are derived from pathogenic organisms, in particular bacterial, viral or protozoo logical (multicellular) pathogenic organisms, which evoke an immunological reaction in a subject, in particular a mammalian subject, more particularly a human. More specifically, pathogenic antigens are preferably surface antigens, e.g. proteins (or fragments of proteins, e.g. the exterior portion of a surface antigen) located at the surface of the virus or the bacterial or protozoological organism.

[0808] Pathogenic antigens are peptide or protein antigens preferably derived from a pathogen associated with infectious disease which are preferably selected from antigens derived from the pathogens Acinetobacter baumannii, Anaplasma genus, Anaplasma phagocytophilum, Ancylostoma braziliense, Ancylostoma duodenale, Arcanobacterium haemolyticum, Ascaris lumbricoides, Aspergillus genus, Astroviridae, Babesia genus, Bacillus anthracis, Baci llus cereus, Bartonella henselae, BK virus, Blastocystis hominis, Blastomyces dermatitidis, Bordetella pertussis, Borrelia burgdorferi, Borrelia genus, Borrelia spp, Brucella genus, Brugia malayi, Bunyaviridae family, Burkholderia cepacia and other Burkholderia species, Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei, Caliciviridae fami ly, Campylobacter genus, Candida albicans, Candida spp, Chlamydia trachomatis, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydophila psittaci, CJD prion, Clonorchis sinensis, Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, Clostridium perfringens, Clostridium spp, Clostridium tetani, Coccidioides spp, coronaviruses, Corynebacterium diphtheriae, Coxiella burnetii, Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, Cryptococcus neoformans, Cryptosporidium genus, Cytomegalovirus (CMV) , Dengue viruses (DEN-1 , DEN-2, DEN-3 and DEN-4) , Dientamoeba fragi lis, Ebolavirus (EBOV) , Echinococcus genus, Ehrlichia chaffeensis, Ehrlichia ewingii, Ehrlichia genus, Entamoeba histolytica, Enterococcus genus, Enterovirus genus, Enteroviruses, mainly Coxsackie A virus and Enterovirus 71 (EV71 ) , Epidermophyton spp, Epstein-Barr Virus (EBV) , Escherichia coli 01 57: H7, 01 1 1 and O1 04:H4, Fasciola hepatica and Fasciola gigantica, FFI prion, Fi larioidea superfamily, Flaviviruses, Francisella tularensis, Fusobacterium genus, Geotrichum candidum, Giardia intestinalis, Gnathostoma spp, GSS prion, Guanarito virus, Haemophilus ducreyi, Haemophilus influenzae, Helicobacter pylori, Henipavirus (Hendra virus Nipah virus) , Hepatitis A Virus, Hepatitis B Virus (HBV) , Hepatitis C Virus (HCV) , Hepatitis D Virus, Hepatitis E Virus, Herpes simplex virus 1 and 2 (HSV-1 and HSV-2) , Histoplasma capsulatum, HIV (Human immunodeficiency virus) , Hortaea werneckii, Human bocavirus (HBoV) , Human herpesvirus 6 (HHV-6) and Human herpesvirus 7 (HHV-7) , Human metapneumovirus (hMPV) , Human papil lomavirus (HPV) , Human parainfluenza viruses (HPIV) , Japanese encephalitis virus, JC virus, Junin virus, Kingella kingae, Klebsiella granulomatis, Kuru prion, Lassa virus, Legionella pneumophila, Leishmania genus, Leptospira genus, Listeria monocytogenes, Lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) , Machupo virus, Malassezia spp, Marburg virus, Measles virus, Metagonimus yokagawai, Microsporidia phylum, Molluscum contagiosum virus (MCV) , Mumps virus, Mycobacterium leprae and Mycobacterium lepromatosis, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium ulcerans, Mycoplasma pneumoniae, Naegleria fowleri, Necator americanus, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Nocardia asteroides, Nocardia spp, Onchocerca volvulus, Orientia tsutsugamushi, Orthomyxoviridae family (Influenza) , Paracoccidioides brasiliensis, Paragonimus spp, Paragonimus westermani, Parvovirus B1 9, Pasteurella genus, Plasmodium genus, Pneumocystis j irovecii, Pol iovirus, Rabies virus, Respiratory syncytial virus (RSV) , Rhinovirus, rhinoviruses, Rickettsia akari, Rickettsia genus, Rickettsia prowazekii, Rickettsia rickettsii, Rickettsia typhi, Rift Valley fever  virus, Rotavirus, Rubella virus, Sabia virus, Salmonella genus, Sarcoptes scabiei, SARS coronavirus, Schistosoma genus, Shigel la genus, Sin Nombre virus, Hantavirus, Sporothrix schenckii, Staphylococcus genus, Staphylococcus genus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Strongyloides stercoralis, Taenia genus, Taenia solium, Tick-borne encephalitis virus (TBEV) , Toxocara canis or Toxocara cati, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum, Trichinella spiralis, Trichomonas vaginalis, Trichophyton spp, Trichuris trichiura, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Ureaplasma urealyticum, Varicella zoster virus (VZV) , Varicella zoster virus (VZV) , Variola major or Variola minor, vCJD prion, Venezuelan equine encephalitis virus, Vibrio cholerae, West Nile virus, Western equine encephalitis virus, Wuchereria bancrofti, Yellow fever virus, Yersinia enterocolitica, Yersinia pestis, and Yersinia pseudotuberculosis. In this context particularly preferred are antigens from the pathogens selected from Influenza virus, respiratory syncytial virus (RSV) , Herpes simplex virus (HSV) , human Papilloma virus (HPV) , Human immunodeficiency virus (HIV) , Plasmodium, Staphylococcus aureus, Dengue virus, Chlamydia trachomatis, Cytomegalovirus (CMV) , Hepatitis B virus (HBV) , Mycobacterium tuberculosis, Rabies virus, and Yellow Fever Virus.

[0809] In some embodiments, the RNA encodes a protein or a peptide, which comprises a peptide or protein comprising a tumour antigen, a fragment, variant or derivative of said tumour antigen, preferably, wherein the tumour antigen is a melanocyte-specific antigen, a cancer-testis antigen or a tumour-specific antigen, preferably a CT-X antigen, a non-X CT-antigen, a binding partner for a CT-X antigen or a binding partner for a non-X CT-antigen or a tumour-specific antigen, more preferably a CT-X antigen, a binding partner for a non-X CT-antigen or a tumour-specific antigen or a fragment, variant or derivative of said tumour antigen; and wherein each of the nucleic acid sequences encodes a different peptide or protein; and wherein at least one of the nucleic acid sequences encodes for 5T4, 707-AP, 9D7, AFP, AlbZIP HPG1 , alpha-5-beta-1 -integrin, alpha-5-beta-6-integrin, alpha-actinin-4 / m, alpha-methylacyl-coenzyme A racemase, ART-4, ARTC1 / m, B7H4, BAGE-1 , BCL-2, bcr / abl, beta-catenin / m, BING-4, BRCA1 / m, BRCA2 / m, CA 15-3 / CA 27-29, CA 1 9-9, CA72-4, CA125, calreticulin, CAMEL, CASP-8 / m, cathepsin B, cathepsin L, CD1 9, CD20, CD22, CD25, CDE30, CD33, CD4, CD52, CD55, CD56, CD80, CDC27 / m, CDK4 / m, CDKN2A / m, CEA, CLCA2, CML28, CML66, COA-1 / m, coactosin-like protein, collage XXIII, COX-2, CT-9 / BRD6, Cten, cyclin B1 , cyclin D1 , cyp-B, CYPB1 , DAM-10, DAM-6, DEK-CAN, EFTUD2 / m, EGFR, ELF2 / m, EMMPRIN, EpCam, EphA2, EphA3, ErbB3, ETV6-AML1 , EZH2, FGF-5, FN, Frau-1 , G250, GAGE-1 , GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4, GAGE-5, GAGE-6, GAGE7b, GAGE-8, GDEP, GnT-V, gp100, GPC3, GPNMB / m, HAGE, HAST-2, hepsin, Her2 / neu, HERV-K-MEL, HLA-A*0201 -R1 7I, HLA-A1 1 / m, HLA-A2 / m, HNE, homeobox NKX3.1 , HOM-TES-14 / SCP-1 , HOM-TES-85, HPV-E6, HPV-E7, HSP70-2M, HST-2, hTERT, iCE, IGF-1 R, IL-13Ra2, IL-2R, IL-5, immature laminin receptor, kallikrein-2, kallikrein-4, Ki67, KIAA0205, KIAA0205 / m, KK-LC-1 , K-Ras / m, LAGE-A1 , LDLR-FUT, MAGE-A1 , MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A6, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-A12, MAGE-B1 ,  MAGE-B2, MAGE-B3, MAGE-B4, MAGE-B5, MAGE-B6, MAGE-B10, MAGE-B16, MAGE-B1 7, MAGE-C1 , MAGE-C2, MAGE-C3, MAGE-D1 , MAGE-D2, MAGE-D4, MAGE-E1 , MAGE-E2, MAGE-F1 , MAGE-H1 , MAGEL2, mammaglobin A, MART-1 / melan-A, MART-2, MART-2 / m, matrix protein 22, MC1 R, M-CSF, ME1 / m, mesothelin, MG50 / PXDN, MMP1 1 , MN / CA IX-antigen, MRP-3, MUC-1 , MUC-2, MUM-1 / m, MUM-2 / m, MUM-3 / m, myosin class l / m, NA88-A, N-acetylglucosaminyltransferase-V, Neo-PAP, Neo-PAP / m, NFYC / m, NGEP, NMP22, NPM / ALK, N-Ras / m, NSE, NY-ESO-1 , NY-ESO-B, OA1 , OFA-iLRP, OGT, OGT / m, OS-9, OS-9 / m, osteocalcin, osteopontin, pi 5, p190 minor bcr-abl, p53, p53 / m, PAGE-4, PAI-1 , PAI-2, PAP, PART-1 , PATE, PDEF, Pim-1 -Kinase, Pin-1 , Pml / PARalpha, POTE, PRAME, PRDX5 / m, prostein, proteinase-3, PSA, PSCA, PSGR, PSM, PSMA, PTPRK / m, RAGE-1 , RBAF600 / m, RHAMM / CD1 68, RU1 , RU2, S-100, SAGE, SART-1 , SART-2, SART-3, SCC, SIRT2 / m, Sp1 7, SSX-1 , SSX-2 / HOM-MEL-40, SSX-4, STAMP-1 , STEAP-1 , survivin, survivin-2B, SYT-SSX-1 , SYT-SSX-2, TA-90, TAG-72, TARP, TEL-AML1 , TGFbeta, TGFbetaRII, TGM-4, TPI / m, TRAG-3, TRG, TRP-1 , TRP-2 / 6b, TRP / INT2, TRP-p8, tyrosinase, UPA, VEGFR1 , VEGFR-2 / FLK-1 , WT1 and a immunoglobulin idiotype of a lymphoid blood cell or a T cell receptor idiotype of a lymphoid blood cell, or a fragment, variant or derivative of said tumour antigen; preferably survivin or a homologue thereof, an antigen from the MAGE-family or a binding partner thereof or a fragment, variant or derivative of said tumour antigen. Particularly preferred in this context are the tumour antigens NY-ESO-1 , 5T4, MAGE-C1 , MAGE-C2, Survivin, Muc-1 , PSA, PSMA, PSCA, STEAP and PAP.

[0810] In some embodiments, the RNA encodes a protein or a peptide, which comprises a therapeutic protein or a fragment, variant or derivative thereof. Therapeutic proteins as defined herein are peptides or proteins, which are beneficial for the treatment of any inherited or acquired disease or which improves the condition of an individual. Particularly, therapeutic proteins play an important role in the creation of therapeutic agents that could modify and repair genetic errors, destroy cancer cells or pathogen infected cells, treat immune system disorders, treat metabolic or endocrine disorders, among other functions. For instance, Erythropoietin (EPO) , a protein hormone can be utilized in treating patients with erythrocyte deficiency, which is a common cause of kidney complications. Furthermore, adjuvant proteins, therapeutic antibodies are encompassed by therapeutic proteins and also hormone replacement therapy which is e.g., used in the therapy of women in menopause. In more recent approaches, somatic cells of a patient are used to reprogram them into pluripotent stem cells, which replace the disputed stem cell therapy. Also, these proteins used for reprogramming of somatic cells or used for differentiating of stem cells are defined herein as therapeutic proteins. Furthermore, therapeutic proteins may be used for other purposes, e.g., wound healing, tissue regeneration, angiogenesis, etc. Furthermore, antigen-specific B cell receptors and fragments and variants thereof are defined herein as therapeutic proteins.

[0811] Therefore therapeutic proteins can be used for various purposes including treatment of various diseases like e.g. infectious diseases, neoplasms (e.g. cancer or tumour diseases) , diseases of the blood and blood-forming organs, endocrine, nutritional and metabolic diseases, diseases of the nervous system, diseases of the circulatory system, diseases of the respiratory system, diseases of the digestive system, diseases of the skin and subcutaneous tissue, diseases of the musculoskeletal system and connective tissue, and diseases of the genitourinary system, independently if they are inherited or acquired.

[0812] In this context, particularly preferred therapeutic proteins which can be used inter alia in the treatment of metabolic or endocrine disorders are selected from (in brackets the particular disease for which the therapeutic protein is used in the treatment) : Acid sphingomyelinase (Niemann-Pick disease) , Adipotide (obesity) , Agalsidase-beta (human galactosidase A) (Fabry disease; prevents accumulation of lipids that could lead to renal and cardiovascular complications) , Alglucosidase (Pompe disease (glycogen storage disease type II) ) , alpha-galactosidase A (alpha-GAL A, Agalsidase alpha) (Fabry disease) , alpha-glucosidase (Glycogen storage disease (GSD) , Morbus Pompe) , alpha-L-iduronidase (mucopolysaccharidoses (MPS) , Hurler syndrome, Scheie syndrome) , alpha-N-acetylglucosaminidase (Sanfil ippo syndrome) , Amphiregulin (cancer, metabolic disorder) , Angiopoietin ( (Ang1 , Ang2, Ang3, Ang4, ANGPTL2, ANGPTL3, ANGPTL4, ANGPTL5, ANGPTL6, ANGPTL7) (angiogenesis, stabilize vessels) , Betacellulin (metabolic disorder) , Beta-glucuronidase (Sly syndrome) , Bone morphogenetic protein BMPs (BMP1 , BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP1 0, BMP1 5) (regenerative effect, bone-related conditions, chronic kidney disease (CKD) ) , CLN6 protein (CLN6 disease -Atypical Late Infantile, Late Onset variant, Early Juvenile, Neuronal Ceroid Lipofuscinoses (NCL) ) , Epidermal growth factor (EGF) (wound healing, regulation of cell growth, proliferation, and differentiation) , Epigen (metabolic disorder) , Epiregulin (metabolic disorder) , Fibroblast Growth Factor (FGF, FGF-1 , FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, FGF-1 0, FGF-1 1 , FGF-12, FGF-1 3, FGF-1 4, FGF-1 6, FGF-1 7, FGF-1 7, FGF-1 8, FGF-1 9, FGF-20, FGF-21 , FGF-22, FGF-23) (wound healing, angiogenesis, endocrine disorders, tissue regeneration) , Galsulphase (Mucopolysaccharidosis VI) , Ghrelin (irritable bowel syndrome (IBS) , obesity, Prader-Willi syndrome, type II diabetes mellitus) , Glucocerebrosidase (Gaucher's disease) , GM-CSF (regenerative effect, production of white blood cells, cancer) , Heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF) (wound healing, cardiac hypertrophy and heart development and function) , Hepatocyte growth factor HGF (regenerative effect, wound healing) , Hepcidin (iron metabolism disorders, Beta-thalassemia) , Human albumin (Decreased production of albumin (hypoproteinaemia) , increased loss of albumin (nephrotic syndrome) , hypovolemia, hyperbilirubinaemia) , Idursulphase (lduronate-2 -sulphatase) (Mucopolysaccharidosis II (Hunter syndrome) ) , Integrins α. νβ3, aVp5 and α5β1 (Bind matrix macromolecules and proteinases, angiogenesis) , luduronate sulfatase (Hunter syndrome) , Laronidase (Hurler and Hurler-Scheie forms of mucopolysaccharidosis I) , N-acetylgalactosamine-4-sulfatase (rhASB; galsulfase, Arylsulfatase A (ARSA) , Arylsulfatase B  (ARSB) ) (arylsulfatase B deficiency, Maroteaux-Lamy syndrome, mucopolysaccharidosis VI) , N-acetylglucosamine-6-sulfatase (Sanfilippo syndrome) , Nerve growth factor (NGF, Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF) , Neurotrophin-3 (NT-3) , and Neurotrophin 4 / 5 (NT-4 / 5) (regenerative effect, cardiovascular diseases, coronary atherosclerosis, obesity, type 2 diabetes, metabolic syndrome, acute coronary syndromes, dementia, depression, schizophrenia, autism, Rett syndrome, anorexia nervosa, bulimia nervosa, wound healing, skin ulcers, corneal ulcers, Alzheimer's disease) , Neuregulin (NRG1 , NRG2, NRG3, NRG4) (metabolic disorder, schizophrenia) , Neuropilin (NRP-1 , NRP-2) (angiogenesis, axon guidance, cel l survival, migration) , Obestatin (irritable bowel syndrome (IBS) , obesity, Prader-Willi syndrome, type II diabetes mellitus) , Platelet Derived Growth factor (PDGF (PDFF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D) (regenerative effect, wound healing, disorder in angiogenesis, Arteriosclerosis, Fibrosis, cancer) , TGF beta receptors (endoglin, TGF-beta 1 receptor, TGF-beta 2 receptor, TGF-beta 3 receptor) (renal fibrosis, kidney disease, diabetes, ultimately end-stage renal disease (ESRD) , angiogenesis) , Thrombopoietin (THPO) (Megakaryocyte growth and development factor (MGDF) ) (platelets disorders, platelets for donation, recovery of platelet counts after myelosuppressive chemotherapy) , Transforming Growth factor (TGF (TGF-alpha, TGF-beta (TGFbetal , TGFbeta2, and TGFbeta3) ) ) (regenerative effect, wound healing, immunity, cancer, heart disease, diabetes, Marfan syndrome, Loeys-Dietz syndrome) , VEGF (VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F und PIGF) (regenerative effect, angiogenesis, wound healing, cancer, permeability) , Nesiritide (Acute decompensated congestive heart failure) , Trypsin (Decubitus ulcer, varicose ulcer, debridement of eschar, dehiscent wound, sunburn, meconium ileus) , adrenocorticotrophic hormone (ACTH) ( "Addison's disease, Small cell carcinoma, Adrenoleukodystrophy, Congenital adrenal hyperplasia, Cushing's syndrome, Nelson's syndrome, Infantile spasms) , Atrial-natriuretic peptide (ANP) (endocrine disorders) , Cholecystokinin (diverse) , Gastrin (hypogastrinemia) , Leptin (Diabetes, hypertriglyceridemia, obesity) , Oxytocin (stimulate breastfeeding, non-progression of parturition) , Somatostatin (symptomatic treatment of carcinoid syndrome, acute variceal bleeding, and acromegaly, polycystic diseases of the liver and kidney, acromegaly and symptoms caused by neuroendocrine tumors) , Vasopressin (antidiuretic hormone) (diabetes insipidus) , Calcitonin (Postmenopausal osteoporosis, Hypercalcaemia, Paget's disease, Bone metastases, Phantom limb pain, Spinal Stenosis) , Exenatide (Type 2 diabetes resistant to treatment with metformin and a sulphonylurea) , Growth hormone (GH) , somatotropin (Growth failure due to GH deficiency or chronic renal insufficiency, Prader-Willi syndrome, Turner syndrome, AIDS wasting or cachexia with antiviral therapy) , Insulin (Diabetes mellitus, diabetic ketoacidosis, hyperkalemia) , Insulinlike growth factor 1 IGF-1 (Growth failure in children with GH gene deletion or severe primary IGF1 deficiency, neurodegenerative disease, cardiovascular diseases, heart failure) , Mecasermin rinfabate, IGF-1 analog (Growth failure in children with GH gene deletion or severe primary IGF1 deficiency, neurodegenerative disease, cardiovascular diseases, heart failure) , Mecasermin, IGF-1 analog (Growth failure in children with GH gene deletion or severe primary IGF1 deficiency, neurodegenerative disease,  cardiovascular diseases, heart failure) , Pegvisomant (Acromegaly) , Pramlintide (Diabetes mellitus, in combination with insulin) , Teriparatide (human parathyroid hormone residues 1 -34) (Severe osteoporosis) , Becaplermin (Debridement adjunct for diabetic ulcers) , Dibotermin-alpha (Bone morphogenetic protein 2) (Spinal fusion surgery, bone injury repair) , Histrelin acetate (gonadotropin releasing hormone; GnRH) (Precocious puberty) , Octreotide (Acromegaly, symptomatic relief of VIP-secreting adenoma and metastatic carcinoid tumours) , and Palifermin (keratinocyte growth factor; KGF) (Severe oral mucositis in patients undergoing chemotherapy, wound healing) . These and other proteins are understood to be therapeutic, as they are meant to treat the subject by replacing its defective endogenous production of a functional protein in sufficient amounts. Accordingly, such therapeutic proteins are typically mammalian, in particular human proteins.

[0813] For the treatment of blood disorders, diseases of the circulatory system, diseases of the respiratory system, cancer or tumour diseases, infectious diseases or immunedeficiencies following therapeutic proteins may be used: Alteplase (tissue plasminogen activator; tPA) (Pulmonary embolism, myocardial infarction, acute ischaemic stroke, occlusion of central venous access devices) , Anistreplase (Thrombolysis) , Antithrombin III (AT-lll) (Hereditary AT-III deficiency, Thromboembolism) , Bivalirudin (Reduce blood-clotting risk in coronary angioplasty and heparin-induced thrombocytopaenia) , Darbepoetin-alpha (Treatment of anaemia in patients with chronic renal insufficiency and chronic renal failure (+ / -dialysis) ) , Drotrecogin-alpha (activated protein C) (Severe sepsis with a high risk of death) , Erythropoietin, Epoetin-alpha, erythropoetin, erthropoyetin (Anaemia of chronic disease, myleodysplasia, anaemia due to renal failure or chemotherapy, preoperative preparation) , Factor IX (Haemophilia B) , Factor Vila (Haemorrhage in patients with haemophilia A or B and inhibitors to factor VIII or factor IX) , Factor VIII (Haemophilia A) , Lepirudin (Heparin-induced thrombocytopaenia) , Protein C concentrate (Venous thrombosis, Purpura fulminans) , Reteplase (deletion mutein of tPA) (Management of acute myocardial infarction, improvement of ventricular function) , Streptokinase (Acute evolving transmural myocardial infarction, pulmonary embolism, deep vein thrombosis, arterial thrombosis or embolism, occlusion of arteriovenous cannula) , Tenecteplase (Acute myocardial infarction) , Urokinase (Pulmonary embolism) , Angiostatin (Cancer) , Anti-CD22 immunotoxin (Relapsed CD33+ acute myeloid leukaemia) , Denileukin diftitox (Cutaneous T-cell lymphoma (CTCL) ) , Immunocyanin (bladder and prostate cancer) , MPS (Metallopanstimulin) (Cancer) , Aflibercept (Non-small cell lung cancer (NSCLC) , metastatic colorectal cancer (mCRC) , hormone-refractory metastatic prostate cancer, wet macular degeneration) , Endostatin (Cancer, inflammatory diseases like rheumatoid arthritis as well as Crohn's disease, diabetic retinopathy, psoriasis, and endometriosis) , Collagenase (Debridement of chronic dermal ulcers and severely burned areas, Dupuytren's contracture, Peyronie's disease) , Human deoxy-ribonuclease I, dornase (Cystic fibrosis; decreases respiratory tract infections in selected patients with FVC greater than 40%of predicted) , Hyaluronidase (Used as an adjuvant to increase the absorption and dispersion of injected drugs, particularly anaesthetics in ophthalmic surgery and certain imaging agents) ,  Papain (Debridement of necrotic tissue or liquefication of slough in acute and chronic lesions, such as pressure ulcers, varicose and diabetic ulcers, burns, postoperative wounds, pi lonidal cyst wounds, carbuncles, and other wounds) , L-Asparaginase (Acute lymphocytic leukaemia, which requires exogenous asparagine for proliferation) , Peg-asparaginase (Acute lymphocytic leukaemia, which requires exogenous asparagine for proliferation) , Rasburicase (Paediatric patients with leukaemia, lymphoma, and solid tumours who are undergoing anticancer therapy that may cause tumour lysis syndrome) , Human chorionic gonadotropin (HCG) (Assisted reproduction) , Human follicle-stimulating hormone (FSH) (Assisted reproduction) , Lutropin-alpha (Infertility with luteinizing hormone deficiency) , Prolactin (Hypoprolactinemia, serum prolactin deficiency, ovarian dysfunction in women, anxiety, arteriogenic erecti le dysfunction, premature ejaculation, oligozoospermia, asthenospermia, hypofunction of seminal vesicles, hypoandrogenism in men) , alpha-1 -Proteinase inhibitor (Congenital antitrypsin deficiency) , Lactase (Gas, bloating, cramps and diarrhoea due to inabi lity to digest lactose) , Pancreatic enzymes (lipase, amylase, protease) (Cystic fibrosis, chronic pancreatitis, pancreatic insufficiency, post-Billroth II gastric bypass surgery, pancreatic duct obstruction, steatorrhoea, poor digestion, gas, bloating) , Adenosine deaminase (pegademase bovine, PEG-ADA) (Severe combined immunodeficiency disease due to adenosine deaminase deficiency) , Abatacept (Rheumatoid arthritis (especially when refractory to TNFalpha inhibition) ) , Alefacept (Plaque Psoriasis ) , Anakinra (Rheumatoid arthritis) , Etanercept (Rheumatoid arthritis, polyarticular-course juvenile rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, plaque psoriasis, ankylosing spondylitis) , lnterleukin-1 (IL-1) receptor antagonist, Anakinra (inflammation and cartilage degradation associated with rheumatoid arthritis) , Thymulin (neurodegenerative diseases, rheumatism, anorexia nervosa) , TNF-alpha antagonist (autoimmune disorders such as rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, Crohn's disease, psoriasis, hidradenitis suppurativa, refractory asthma) , Enfuvirtide (HIV-1 infection) , and Thymosin <x1 (Hepatitis B and C) . (In brackets is the particular disease for which the therapeutic protein is used in the treatment) . See WO2016107877.

[0814] In some embodiments, the RNA sequence described herein is an mRNA. In some embodiments, the mRNA is a non-replicating mRNA. In some embodiments, the mRNA is a self-amplifying mRNA (saRNA) . saRNA contains a long ORF after 5’ UTR encoding the four NSPs (nsP1, nsP2, nsP3, and nsP4) of alphavirus that functions as an mRNA capping enzyme, an NTPase / helicase / protease, a macrodomain, or an RNA-dependent RNA polymerase (RDRP) , respectively. A subgenomic promoter can then be used to initiate transcription of the gene coding for the target antigen. Once in the cytoplasm of a host cell, saRNA undergoes translation by the endogenous ribosomal machinery, thereby enabling translation of nsP precursors to form an early replication complex. The positive-strand RNA is then used as a template to synthesize negative-strand RNA, which is the replication intermediate. With the cleavage of nsP precursors, a late replication complex is produced. Then, the negative-strand RNA of the replication intermediate is used as a template to synthesize a full-length positive-strand genomic RNA. At the same time, a subgenomic positive-strand RNA containing only  information coding for the antigen is also synthesized. As a result, one copy of saRNA produces multiple copies of RNA transcripts by the above-described mechanism to initiate self-amplification of antigen genes in the cell.

[0815] In some embodiments, the mRNA is a circular RNA (circRNA) . CircRNA is a highly stable single-stranded RNA with a covalently closed loop structure. Despite the lack of essential elements for cap-dependent translation, circRNA can be translated by adding the IRES element or m6A modification incorporated to its 5’ UTR region. (Wesselhoeft, R. Alexander, Piotr S. Kowalski, and Daniel G. Anderson. "Engineering circular RNA for potent and stable translation in eukaryotic cells. " Nature communications 9.1 (2018) : 1-10. )

[0816] In some embodiments, the RNA is an in vitro transcribed (IVT) mRNA. In vitro transcription is a simple procedure that allows for template-directed synthesis of RNA molecules of any sequence from short oligonucleotides to those of several kilobases in μg to mg quantities. In some embodiments, it is based on the engineering of a template that includes a bacteriophage promoter sequence (e.g., from the T7 coliphage) upstream of the sequence of interest followed by transcription using the corresponding RNA polymerase. Techniques for in vitro transcription is well known in the art. (Beckert, Bertrand, and Masquida. "Synthesis of RNA by in vitro transcription. " Rna. Humana Press, 2011.29-41. )

[0817] Polynucleotides, Vectors, and Cells

[0818] In another aspect, the present disclosure provides a polynucleotide encoding any of the RNA sequence described herein. In some embodiments, the polynucleotide is a DNA. In some embodiment, the polynucleotide is a cDNA. In some embodiment, the polynucleotide is a plasmid DNA.

[0819] In another aspect, the present disclosure provides a vector comprising any of the RNA sequence described herein and / or the polynucleotide described herein. In some embodiments, the vector is a plasmid, a viral vector, or a lipid-based vector. Viral vectors can include, but are not limited to, adenoviral vectors, lentiviral vectors, retroviral vectors, and adeno-associated viral vectors. Commonly, expression vectors contain selection markers such as ampicillin-resistance, hygromycin-resistance, tetracycline resistance, kanamycin resistance, or neomycin resistance to permit detection of those cells transformed with the desired DNA sequences. Suitable vectors, promoter, and enhancer elements are known in the art; many are commercially available for generating subject recombinant constructs. In some embodiments, the vector is a polycistronic vector. Any methods known to those skilled in the art for the insertion of polynucleotide fragments into a vector can be used to construct the vector disclosed herein. The polynucleotide disclosed herein can be operably linked to control sequences in the expression vector (s) to ensure the expression of the polypeptide disclosed herein. Such control sequences may include, but are not limited to, leader or signal sequences, promoters (e.g., naturally associated or heterologous promoters) , ribosomal binding sites, enhancer or activator  elements, translational start and termination sequences, and transcription start and termination sequences.

[0820] In another aspect, the present disclosure provides a cell comprising any of the RNA sequence described herein.

[0821] In another aspect, the present disclosure provides a cell comprising the polynucleotide described herein and / or the vector described herein.

[0822] The cell described herein include, but not limited to, eukaryotic cells, prokaryotic cells, plant cells, or archeal cells. Escherichia coli, bacilli, such as Bacillus subtilis, and other enterobacteriaceae, such as Salmonella, Serratia, and various Pseudomonas species are examples of prokaryotic host cells. Other microbes, such as yeast, are also useful for expression. Saccharomyces (e.g., S. cerevisiae) and Pichia are examples of suitable yeast host cells. Exemplary eukaryotic cells may be of mammalian, insect, avian, or other animal origins.

[0823] Compositions and Kits

[0824] In another aspect, the present disclosure provides a composition comprising any of the RNA sequence described herein. In another aspect, the present disclosure provides a composition comprising the polynucleotide described herein.

[0825] As used herein, the term “composition” includes, but is not limited to, a pharmaceutical composition. A “pharmaceutical composition” refers to an active pharmaceutical agent formulated in pharmaceutically acceptable or physiologically acceptable solutions for administration to a cell or an animal, either alone, or in combination with one or more other modalities of therapy. It will also be understood that, if desired, the compositions of the disclosure may be administered in combination with other agents, such as, e.g., cytokines, growth factors, hormones, small molecules, chemotherapeutics, pro-drugs, drugs, antibodies, or other various pharmaceutically active agents. There is virtually no limit to other components that may also be included in the compositions, provided that the additional agents do not adversely affect the ability of the composition to deliver the intended therapy. The phrase “pharmaceutically acceptable” is used herein to refer to those compounds, materials, compositions, and / or dosage forms which are, within the scope of sound medical judgment, suitable for use in contact with the tissues of human beings and animals without excessive toxicity, irritation, allergic response, or other problem or complication, commensurate with a reasonable benefit / risk ratio.

[0826] The compositions may also comprise a pharmaceutically acceptable carrier, diluent, or excipient. As used herein “pharmaceutically acceptable carrier, diluent, or excipient” includes, without limitation, any adjuvant, carrier, excipient, glidant, sweetening agent, diluent, preservative, dye / colorant, flavor enhancer, surfactant, wetting agent, dispersing agent, suspending agent, stabilizer, isotonic agent, solvent, surfactant, or emulsifier which has been approved as being acceptable for use in humans or domestic animals. Exemplary pharmaceutically acceptable carriers include, but are not limited to, to sugars, such as lactose,  glucose, and sucrose; starches, such as corn starch and potato starch; cellulose, and its derivatives, such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose, and cellulose acetate; tragacanth; malt; gelatin; talc; cocoa butter; waxes; animal and vegetable fats; paraffins; silicones; bentonites; silicic acid; zinc oxide; oils, such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil, and soybean oil; glycols, such as propylene glycol; polyols, such as glycerin, sorbitol, mannitol, and polyethylene glycol; esters, such as ethyl oleate, and ethyl laurate; agar; buffering agents, such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic saline; Ringer's solution; ethyl alcohol; phosphate buffer solutions; and any other compatible substances employed in pharmaceutical formulations.

[0827] The liquid pharmaceutical compositions, whether they be solutions, suspensions or other like form, may include one or more of the following: sterile diluents such as water for injection, saline solution, preferably physiological saline; Ringers solution; isotonic sodium chloride; fixed oils such as synthetic mono or diglycerides which may serve as the solvent or suspending medium; polyethylene glycols; glycerin; propylene glycol or other solvents; antibacterial agents, such as benzyl alcohol or methyl paraben; antioxidants such as ascorbic acid or sodium bisulfite; chelating agents, such as ethylenediaminetetraacetic acid; buffers such as acetates, citrates, or phosphates; and agents for the adjustment of tonicity, such as sodium chloride or dextrose. The parenteral preparation can be enclosed in ampoules, disposable syringes, or multiple dose vials made of glass or plastic. An injectable pharmaceutical composition is preferably sterile. The composition may be suitably developed for intravenous, intratumoral, oral, rectal, vaginal, parenteral, topical, pulmonary, intranasal, buccal, ophthalmic, or another route of administration.

[0828] In some embodiments, the composition further comprises a carrier selected from the group consisting of lipid nanoparticles, liposomes, cationic nanoemulsions, dendrimer-based lipid nanoparticles, cationic polymers, and polysaccharide particles.

[0829] In another aspect, the present disclosure provides a kit comprising any of the RNA sequence described herein and / or the polynucleotide described herein, and a carrier selected from the group consisting of lipid nanoparticles, liposomes, cationic nanoemulsions, dendrimer-based lipid nanoparticles, cationic polymers, and polysaccharide particles.

[0830] As used herein, the term “carrier” refers to compounds or compositions that are used for delivery of the polypeptide or the polynucleotide into a subject. Preferably, the carrier enhances effectiveness and / or safety of the delivery. In some embodiments, the carrier is capable of delivering large nucleic acid sequences (e.g., nucleic acids of at least 1 kDa, 1.5 kDa, 2 kDa, 2.5 kDa, 5 kDa, 10 kDa, 12 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, or more) . The nucleic acids can be formulated with one or more acceptable reagents, which provide a vehicle for delivering such nucleic acids to target cells. Appropriate reagents are generally selected with regards to a number of factors, which include, among other things, the biological or chemical properties of the nucleic acids (e.g., charge) , the intended route of administration, the  anticipated biological environment to which such nucleic acids will be exposed and the specific properties of the intended target cells.

[0831] Lipid nanoparticles (LNPs) are nanoparticles made of one or more types of lipids. In some embodiments, lipid nanoparticles comprise ionizable lipids, which are positively charged at low pH (enabling RNA complexation) and neutral at physiological pH (reducing potential toxic effects, as compared with positively charged lipids, such as liposomes) . Owing to their size and properties, lipid nanoparticles are taken up by cells via endocytosis, and the ionizability of the lipids at low pH (likely) enables endosomal escape, which allows release of the cargo into the cytoplasm. In some embodiments, the lipid nanoparticles comprise cationic lipids, which have a head group with permanent positive charges. In addition, lipid nanoparticles usually contain a helper lipid, for example, phospholipid, to promote cell binding, cholesterol to fill the gaps between the lipids, and a polyethylene glycol (PEG) to reduce opsonization by serum proteins and reticuloendothelial clearance. The relative amounts of ionizable lipid, helper lipid, cholesterol and PEG can vary (See Hou et al., Nature Reviews Materials, 2021) .

[0832] Liposomes are spherical-shaped vesicles that is composed of one or more phospholipid bilayers. Liposomes are most often composed of phospholipids, especially phosphatidylcholine and cholesterol, but may also include other lipids, such as phosphatidylethanolamine, as long as they are compatible with lipid bilayer structure. The lipid bilayer of liposome can fuse with other bilayers such as the cell membrane, thus delivering the liposome contents. Generally, liposomes are definite as spherical vesicles with particle sizes ranging from 30 nm to several micrometers. They consist of one or more lipid bilayers surrounding aqueous units, where the polar head groups are oriented in the pathway of the interior and exterior aqueous phases. On the other hand, self-aggregation of polar lipids is not limited to conventional bilayer structures which rely on molecular shape, temperature, and environmental and preparation conditions but may self-assemble into various types of colloidal particles (See Akbarzadeh, Nanoscale Res Lett., 2013) .

[0833] Cationic nanoemulsions (CNE) are mainly composed of two parts: one is the cationic lipid DOTAP (1, 2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine) that can be added to the oil phase to bind the mRNA electrostatically; the other is the emulsion adjuvant MF59 that is an oil-in-water emulsion consisting of squalene and surfactants. CNEs are usually fabricated by the probe sonication method (Brito et al., A cationic nanoemulsion for the delivery of next-generation RNA vaccines, 2014) .

[0834] Dendrimer-based lipid nanoparticles are nanoparticles made of lipids and dendrimers, which are highly ordered, branched polymeric molecules. Dendrimers are composed of three distinct structural components: (1) the core, (2) the repetitive branching layers (also referred to as “generation” ) , and (3) the abundant terminal groups. These precisely controlled dendritic structures harbor multivalent cooperativity and can exploit membrane-fusion-based endosome release by mimicking lipid vectors, while simultaneously retaining the  “proton-sponge” -mediated endosome release of polymer vectors (See Chen et al., Amphiphilic Dendrimer Vectors for RNA Delivery: State-of-the-Art and Future Perspective, 2022) .

[0835] Cationic polymer is another viable RNA carrier. An exemplary cationic polymer is poly (ethyleneimine) and its derivatives Polyethyleneimine (PEI) is among the earliest and most widely studied cationic polymers for gene delivery, including the delivery of RNA. It has high gene transfection efficiency and is often referred to as the gold standard for non-viral gene transfection (Lungwitz et al., 2005) . PEI can be in either linear or branched structures and its positive charge is conferred by numerous amine groups separated by short alkyl spacers, which lead to very high positive charge density within its structure (Jiang et al., Polymeric nanoparticles for RNA delivery, 2021) .

[0836] Polysaccharides are a complex collection of biopolymers isolated from plant, animal, microbial and algal sources that are built from monosaccharides linked by O-glycosidic linkages. An exemplary polysaccharide that can be used for RNA delivery is Chitosan, is a polysaccharide contained in the cell walls of fungi and in the shells of arthropods such as crustaceans and consists of a linear chain of 2-acetaylamino-2-deoxy-β-D-glucopyranose units connected through β-1, 4 linkages (Bodnar, Hartmann &Borbely, 2005; Barclay et al., Review of polysaccharide particle-based functional drug delivery, 2020) .

[0837] Methods

[0838] In another aspect, the present disclosure provides a method of preparing any of the RNA sequence described herein, selected from in vivo transcription or in vitro transcription from the polynucleotide described herein, wherein the polynucleotide is DNA.

[0839] The RNA sequences described herein and / or the polynucleotides described herein can be prepared according to any available technique including, for example, but not limited to chemical synthesis, enzymatic synthesis, which is generally termed in vitro transcription (IVT) or enzymatic or chemical cleavage of a longer precursor, etc. Methods of synthesizing RNAs are known in the art (see, e.g., Gait, M.J. (ed. ) Oligonucleotide synthesis: a practical approach, Oxford [Oxfordshire] , Washington, D.C.: IRL Press, 1984; and Herdewijn, P. (ed. ) Oligonucleotide synthesis: methods and applications, Methods in Molecular Biology, v. 288 (Clifton, N.J. ) Totowa, N.J.: Humana Press, 2005; both of which are incorporated herein by reference) .

[0840] For in vitro transcription, first DNA encoding RNA of interest is synthesized with methods know in the art, such as column-based oligonucleotide synthesis and microarray-based oligonucleotide synthesis. (Hughes RA, Ellington AD. Synthetic DNA Synthesis and Assembly: Putting the Synthetic in Synthetic Biology. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2017 Jan 3; 9 (1) : a023812. doi: 10.1101 / cshperspect. a023812. PMID: 28049645; PMCID: PMC5204324. ) .

[0841] The DNA construct is then cloned into a plasmid vector. In some embodiments, the vector comprises a T7 promoter. The vector is then amplified, isolated and purified using  methods known in the art such as, but not limited to, a maxi prep using the Invitrogen PURELINKTM HiPure Maxiprep Kit (Carlsbad, Calif. ) .

[0842] The plasmid may then be linearized using methods known in the art such as, but not limited to, the use of restriction enzymes and buffers. The linearization reaction may be purified using methods including, for example Invitrogen's PURELINKTM PCR Micro Kit (Carlsbad, Calif. ) , and HPLC based purification methods such as, but not limited to, strong anion exchange HPLC, weak anion exchange HPLC, reverse phase HPLC (RP-HPLC) , and hydrophobic interaction HPLC (HIC-HPLC) and Invitrogen's standard PURELINKTM PCR Kit (Carlsbad, Calif. ) . The purification method may be modified depending on the size of the linearization reaction which was conducted. The linearized plasmid is then used to generate cDNA for in vitro transcription (IVT) reactions.

[0843] A cDNA template may be synthesized by having a linearized plasmid undergo polymerase chain reaction (PCR) . In one embodiment, the cDNA may be submitted for sequencing analysis before undergoing transcription.

[0844] The cDNA produced in the previous step may be transcribed using an in vitro transcription (IVT) system. The system typically comprises a transcription buffer, nucleotide triphosphates (NTPs) , an RNase inhibitor and a polymerase. The NTPs may be manufactured in house, may be selected from a supplier, or may be synthesized as described herein. The NTPs may be selected from, but are not limited to, those described herein including natural and unnatural (modified) NTPs. The polymerase may be selected from, but is not limited to, T7 RNA polymerase, T3 RNA polymerase and mutant polymerases such as, but not limited to, polymerases able to be incorporated into modified nucleic acids.

[0845] The cDNA template may be removed using methods known in the art such as, but not limited to, treatment with Deoxyribonuclease I (DNase I) . RNA clean-up may also include a purification method such as, but not limited to,  system from Beckman Coulter (Danvers, Mass. ) , HPLC based purification methods such as, but not limited to, strong anion exchange HPLC, weak anion exchange HPLC, reverse phase HPLC (RP-HPLC) , and hydrophobic interaction HPLC (HIC-HPLC) .

[0846] In another aspect, the present disclosure provides a method of preparing the cell described herein, selected from transduction or transfection of a vector described herein into the cell. The term "transduction" is used to describe a virus-mediated transfer of nucleic acids into cells. The viral vector, itself, also called virion, is able to infect cells and transport the DNA directly into the nucleus, independent of further actions. After the release of the DNA into the nucleus, the protein of interest is produced using the cells' own machineries. In some embodiments, the vector is adenovirus or lentivirus. For non-viral vectors, such as plasmid, they are introduced into cells by transfection. In stable transfection, foreign DNA is delivered to nucleus by passage through the cell and nuclear membranes. Foreign DNA is integrated into the host genome and expressed sustainably. In transient transfection, foreign DNA is delivered  into the nucleus but is not integrated into the genome; foreign RNA is delivered into the cytosol, where it is translated. Methods for transduction and transfection are well known in the art. (Kim TK, Eberwine JH. Mammalian cell transfection: the present and the future. Anal Bioanal Chem. 2010 Aug; 397 (8) : 3173-8. doi: 10.1007 / s00216-010-3821-6. Epub 2010 Jun 13. PMID: 20549496; PMCID: PMC2911531. )

[0847] In another aspect, the present disclosure provides a method of preparing the composition of described herein and / or the kit described herein, comprising (a) preparing the RNA sequence described herein, and / or prepare the polynucleotide sequence described herein when the polynucleotide sequence is a DNA, and (b) loading the RNA sequence described herein or the polynucleotide described herein into the carrier.

[0848] In another aspect, the present disclosure provides a method of constructing an engineered polynucleotide sequence comprising a coding sequence, e.g., encoding a therapeutic agent, the method comprising:

[0849] adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 4-12 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 4-12, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 13-21 to the coding sequence; or

[0850] adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 4-12 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 4-12, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 32-41 to the coding sequence; or

[0851] adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 22-31, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21 to the coding sequence or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 13-21; or

[0852] adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 22-31, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 32-41 to the coding sequence.

[0853] Table 1 Sequences

[0854] EXAMPLES

[0855] Example 1 5’-UTR selection machine learning

[0856] Machine learning (ML) -based in-silico design (Fig. 1) .

[0857] A convolution neural network (CNN) model was trained on sequence features to predict 5’ UTR translational efficiency. The model was trained on experimentally determined translation efficiency (TE) rates and mRNA levels, which were obtained from analyzing publicly available RNA-seq and Ribo-seq data of endogenous genes from the three human cell types HEK 293T cells, PC3 cells, and human muscle tissue (Ho, T. K. The random subspace method for constructing decision forests. IEEE Trans. Pattern Anal. Mach. Intell. 20, 832–844 (1998) . ) .

[0858] 200 UTRs were obtained.

[0859] SEQ ID NOs 4-12 are 5’-UTR sequences designed by machine learning.

[0860] The sequences designed by machine learning were further optimized by genetic algorithms. Over a set number of iterations, a single randomly selected base or two bases with a 50%probability, were introduced and the fitness was evaluated using the model. If the new  sequence scored higher or closer to the target performance, then it was accepted; otherwise, the unchanged sequence was selected.

[0861] Example 2 UTR selection by data mining

[0862] Sequence evolutions began with randomized sequences. Over a set number of iterations, a single randomly selected base or two bases with a 50%probability, were introduced and the fitness was evaluated using the model. If the new sequence scored higher or closer to the target performance, then it was accepted; otherwise, the unchanged sequence was selected.

[0863] SEQ ID NOs: 13-21 are 3’-UTR sequences selected by data mining.

[0864] SEQ ID NOs: 22-31 are 5’-UTR sequences selected by data mining. SEQ ID NOs: 32-41 are 3’-UTR sequences selected by data mining.

[0865] Example 3 Construction of UTR library

[0866] RNA constructs were designed with different combinations of the 5’-UTRs and 3’-UTRs selected. ALL the RNA constructs comprise a fire fly luciferase coding sequence of SEQ ID NO: 1. RY01 5’-UTR (SEQ ID NO: 2) is a five prime untranslated region derived from the sequence of human alpha globin. (Walsh EE, Frenck RW, Falsey AR, Kitchin N, Absalon J, Gurtman A, et al. (October 2020) . "Safety and Immunogenicity of Two RNA-Based Covid-19 Vaccine Candidates" . The New England Journal of Medicine. 383 (25) : 2439–50. doi: 10.1056 / NEJMoa2027906. PMC 7583697. PMID 33053279) . RY01 3’-UTR (SEQ ID NO: 3) is a three prime untranslated region combined from AES and mtRNR1. (Orlandini von Niessen AG, Poleganov MA, Rechner C, Plaschke A, Kranz LM, Fesser S, et al. (April 2019) . "Improving mRNA-Based Therapeutic Gene Delivery by Expression-Augmenting 3' UTRs Identified by Cellular Library Screening" . Molecular Therapy. 27 (4) : 824–836. doi: 10.1016 / j. ymthe. 2018.12.011. PMC 6453560. PMID 30638957) .

[0867] Example 4 Plasmid construction and in vitro transcription

[0868] All plasmids used in this study were based on the pST1 vector; 5’ UTR, luciferase and 3’ UTR sequences were chemically synthesized, and cloned into the vector using Cold Fusion technology (SBI) .

[0869] To generate mRNA, a DNA template was produced via PCR or restriction cleavage of the template plasmid, then mRNA with cap was produced by in vitro transcription using commercial T7 polymerase catalysis kit, according to the manufacturer’s instructions. Synthesized mRNAs were purified by Quick Spin RNA Columns (Roche) .

[0870] Example 5 Cell culture

[0871] C2C12 mouse myoblasts (ATCC, CRL-1772) were cultivated in DMEM with 10%FCS and 1 mM sodium pyruvate. HepG2 human hepatocellular carcinoma (ATCC, HB-8065)  were cultivated in DMEM with 10%FBS and 1%Pen-Strep. All cells were cultivated at 37℃and a CO2 content of 5%.

[0872] Example 6 Luciferase Assay to test translational efficiency

[0873] Prior to day of transfection, C2C12 and HepG2, 20000 cells / well were with 100 μl of complete DMEM growth medium seed in 96-well tissue culture plate. In the following day, cells with density about 50～80%confluence were transfected with 25, 12.5, 6.25, or 3.125 ng of mRNA per well using Lipofectamine MessengerMax Transfection Reagent according to manufacturer’s protocol. Then, cells were incubated at 37℃ in a CO2 incubator. In vitro luciferase expression was measured at 16h and 48h post transfection using the One-Glo Luciferase Assay System (Promega, Madison, WI) . The translational efficiency of different mRNA constructs was calculated as fold change relative to the benchmark mRNA RY01 which contain 5’UTR and 3’UTR from a benchmark mRNA product.

[0874] Fold changes relative to the benchmark mRNA RY01 based on in vitro luciferase expression are shown in Table 2.

[0875] Table 2 Results of Luciferase Assay of selected mRNA constructs

Claims

1.An RNA sequence comprising a 5’-untranslated region (5’-UTR) selected from SEQ ID NOs: 4-12.2.The RNA sequence of claim 1 further comprising a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21.3.The RNA sequence of claim 2, wherein the 5’-UTR and the 3’-UTR are:a. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 13, respectively; orb. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 13, respectively; orc. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 13, respectively; ord. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 13, respectively; ore. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 13, respectively; orf. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 13, respectively; org. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 13, respectively; orh. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 13, respectively; ori. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 13, respectively; orj. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 14, respectively; ork. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 14, respectively; orl. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 14, respectively; orm. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 14, respectively; orn. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 14, respectively; oro. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 14, respectively; orp. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 14, respectively; orq. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 14, respectively; orr. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 14, respectively; ors. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 15, respectively; ort. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 15, respectively; oru. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 15, respectively; orv. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 15, respectively; orw. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 15, respectively; orx. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 15, respectively; ory. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 15, respectively; orz. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 15, respectively; oraa. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 15, respectively; orbb. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 16, respectively; orcc. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 16, respectively; ordd. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 16, respectively; oree. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 16, respectively; orff. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 16, respectively; orgg. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 16, respectively; orhh. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 16, respectively; orii. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 16, respectively; orjj. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 16, respectively; orkk. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 17, respectively; orll. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 17, respectively; ormm. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 17, respectively; ornn. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 17, respectively; oroo. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 17, respectively; orpp. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 17, respectively; orqq. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 17, respectively; orrr. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 17, respectively; orss. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 17, respectively; ortt. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 18, respectively; oruu. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 18, respectively; orvv. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 18, respectively; orww. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 18, respectively; orxx. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 18, respectively; oryy. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 18, respectively; orzz. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 18, respectively; oraaa. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 18, respectively; orbbb. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 18, respectively; orccc. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 19, respectively; orddd. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 19, respectively; oreee. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 19, respectively; orfff. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 19, respectively; orggg. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 19, respectively; orhhh. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 19, respectively; oriii. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 19, respectively; orjjj. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 19, respectively; orkkk. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 19, respectively; orlll. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 20, respectively; ormmm. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 20, respectively; ornnn. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 20, respectively; orooo. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 20, respectively; orppp. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 20, respectively; orqqq. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 20, respectively; orrrr. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 20, respectively; orsss. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 20, respectively; orttt. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 20, respectively; oruuu. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 21, respectively; orvvv. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 21, respectively; orwww. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 21, respectively; orxxx. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 21, respectively; oryyy. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 21, respectively; orzzz. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 21, respectively; oraaaa. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 21, respectively; orbbbb. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 21, respectively; orcccc. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 21, respectively.4.The RNA sequence of claim 1 further comprising a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41.5.The RNA sequence of claim 4, wherein the 5’-UTR and 3’-UTR are:a. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 32, respectively; orb. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 33, respectively; orc. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 34, respectively; ord. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 35, respectively; ore. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 36, respectively; orf. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 37, respectively; org. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 38, respectively; orh. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 39, respectively; ori. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 40, respectively; orj. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 41, respectively; ork. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 32, respectively; orl. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 33, respectively; orm. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 34, respectively; orn. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 35, respectively; oro. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 36, respectively; orp. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 37, respectively; orq. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 38, respectively; orr. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 39, respectively; ors. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 40, respectively; ort. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 41, respectively; oru. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 32, respectively; orv. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 33, respectively; orw. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 34, respectively; orx. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 35, respectively; ory. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 36, respectively; orz. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 37, respectively; oraa. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 38, respectively; orbb. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 39, respectively; orcc. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 40, respectively; ordd. SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 41, respectively; oree. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 32, respectively; orff. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 33, respectively; orgg. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 34, respectively; orhh. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 35, respectively; orii. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 36, respectively; orjj. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 37, respectively; orkk. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 38, respectively; orll. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 39, respectively; ormm. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 40, respectively; ornn. SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 41, respectively; oroo. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 32, respectively; orpp. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 33, respectively; orqq. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 34, respectively; orrr. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 35, respectively; orss. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 36, respectively; ortt. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 37, respectively; oruu. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 38, respectively; orvv. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 39, respectively; orww. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 40, respectively; orxx. SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 41, respectively; oryy. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 32, respectively; orzz. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 33, respectively; oraaa. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 34, respectively; orbbb. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 35, respectively; orccc. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 36, respectively; orddd. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 37, respectively; oreee. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 38, respectively; orfff. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 39, respectively; orggg. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 40, respectively; orhhh. SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 41, respectively; oriii. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 32, respectively; orjjj. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 33, respectively; orkkk. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 34, respectively; orlll. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 35, respectively; ormmm. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 36, respectively; ornnn. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 37, respectively; orooo. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 38, respectively; orppp. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 39, respectively; orqqq. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 40, respectively; orrrr. SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 41, respectively; orsss. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 32, respectively; orttt. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 33, respectively; oruuu. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 34, respectively; orvvv. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 35, respectively; orwww. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 36, respectively; orxxx. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 37, respectively; oryyy. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 38, respectively; orzzz. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 39, respectively; oraaaa. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 40, respectively; orbbbb. SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 41, respectively; orcccc. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 32, respectively; ordddd. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 33, respectively; oreeee. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 34, respectively; orffff. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 35, respectively; orgggg. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 36, respectively; orhhhh. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 37, respectively; oriiii. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 38, respectively; orjjjj. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 39, respectively; orkkkk. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 40, respectively; orllll. SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 41, respectively.6.An RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21.7.The RNA sequence of claim 6, wherein the 5’-UTR and 3’-UTR area. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 13, respectively; orb. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 13, respectively; orc. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 13, respectively; ord. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 13, respectively; ore. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 13, respectively; orf. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 13, respectively; org. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 13, respectively; orh. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 13, respectively; ori. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 13, respectively; orj. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 13, respectively; ork. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 14, respectively; orl. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 14, respectively; orm. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 14, respectively; orn. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 14, respectively; oro. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 14, respectively; orp. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 14, respectively; orq. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 14, respectively; orr. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 14, respectively; ors. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 14, respectively; ort. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 14, respectively; oru. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 15, respectively; orv. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 15, respectively; orw. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 15, respectively; orx. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 15, respectively; ory. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 15, respectively; orz. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 15, respectively; oraa. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 15, respectively; orbb. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 15, respectively; orcc. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 15, respectively; ordd. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 15, respectively; oree. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 16, respectively; orff. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 16, respectively; orgg. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 16, respectively; orhh. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 16, respectively; orii. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 16, respectively; orjj. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 16, respectively; orkk. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 16, respectively; orll. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 16, respectively; ormm. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 16, respectively; ornn. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 16, respectively; oroo. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 17, respectively; orpp. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 17, respectively; orqq. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 17, respectively; orrr. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 17, respectively; orss. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 17, respectively; ortt. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 17, respectively; oruu. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 17, respectively; orvv. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 17, respectively; orww. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 17, respectively; orxx. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 17, respectively; oryy. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 18, respectively; orzz. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 18, respectively; oraaa. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 18, respectively; orbbb. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 18, respectively; orccc. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 18, respectively; orddd. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 18, respectively; oreee. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 18, respectively; orfff. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 18, respectively; orggg. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 18, respectively; orhhh. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 18, respectively; oriii. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 19, respectively; orjjj. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 19, respectively; orkkk. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 19, respectively; orlll. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 19, respectively; ormmm. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 19, respectively; ornnn. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 19, respectively; orooo. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 19, respectively; orppp. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 19, respectively; orqqq. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 19, respectively; orrrr. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 19, respectively; orsss. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 20, respectively; orttt. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 20, respectively; oruuu. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 20, respectively; orvvv. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 20, respectively; orwww. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 20, respectively; orxxx. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 20, respectively; oryyy. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 20, respectively; orzzz. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 20, respectively; oraaaa. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 20, respectively; orbbbb. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 20, respectively; orcccc. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 21, respectively; ordddd. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 21, respectively; oreeee. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 21, respectively; orffff. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 21, respectively; orgggg. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 21, respectively; orhhhh. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 21, respectively; oriiii. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 21, respectively; orjjjj. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 21, respectively; orkkkk. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 21, respectively; orllll. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 21, respectively.8.An RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 and a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41.9.The RNA sequence of claim 8, wherein the 5’-UTR and 3’-UTR area. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 32, respectively; orb. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 33, respectively; orc. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 34, respectively; ord. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 35, respectively; ore. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 36, respectively; orf. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 37, respectively; org. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 38, respectively; orh. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 39, respectively; ori. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 40, respectively; orj. SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 41, respectively; ork. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 32, respectively; orl. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 33, respectively; orm. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 34, respectively; orn. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 35, respectively; oro. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 36, respectively; orp. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 37, respectively; orq. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 38, respectively; orr. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 39, respectively; ors. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 40, respectively; ort. SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 41, respectively; oru. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 32, respectively; orv. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 33, respectively; orw. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 34, respectively; orx. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 35, respectively; ory. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 36, respectively; orz. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 37, respectively; oraa. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 38, respectively; orbb. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 39, respectively; orcc. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 40, respectively; ordd. SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 41, respectively; oree. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 32, respectively; orff. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 33, respectively; orgg. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 34, respectively; orhh. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 35, respectively; orii. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 36, respectively; orjj. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 37, respectively; orkk. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 38, respectively; orll. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 39, respectively; ormm. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 40, respectively; ornn. SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 41, respectively; oroo. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 32, respectively; orpp. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 33, respectively; orqq. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 34, respectively; orrr. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 35, respectively; orss. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 36, respectively; ortt. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 37, respectively; oruu. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 38, respectively; orvv. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 39, respectively; orww. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 40, respectively; orxx. SEQ ID NO: 26 and SEQ ID NO: 41, respectively; oryy. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 32, respectively; orzz. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 33, respectively; oraaa. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 34, respectively; orbbb. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 35, respectively; orccc. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 36, respectively; orddd. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 37, respectively; oreee. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 38, respectively; orfff. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 39, respectively; orggg. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 40, respectively; orhhh. SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 41, respectively; oriii. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 32, respectively; orjjj. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 33, respectively; orkkk. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 34, respectively; orlll. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 35, respectively; ormmm. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 36, respectively; ornnn. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 37, respectively; orooo. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 38, respectively; orppp. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 39, respectively; orqqq. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 40, respectively; orrrr. SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 41, respectively; orsss. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 32, respectively; orttt. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 33, respectively; oruuu. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 34, respectively; orvvv. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 35, respectively; orwww. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 36, respectively; orxxx. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 37, respectively; oryyy. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 38, respectively; orzzz. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 39, respectively; oraaaa. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 40, respectively; orbbbb. SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 41, respectively; orcccc. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 32, respectively; ordddd. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 33, respectively; oreeee. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 34, respectively; orffff. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 35, respectively; orgggg. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 36, respectively; orhhhh. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 37, respectively; oriiii. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 38, respectively; orjjjj. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 39, respectively; orkkkk. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 40, respectively; orllll. SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 41, respectively; ormmmm. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 32, respectively; ornnnn. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 33, respectively; oroooo. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 34, respectively; orpppp. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 35, respectively; orqqqq. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 36, respectively; orrrrr. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 37, respectively; orssss. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 38, respectively; ortttt. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 39, respectively; oruuuu. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 40, respectively; orvvvv. SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 41, respectively.10.An RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 4-12.11.An RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 4-12, and 22-31, and a 3’-UTR selected from a sequence with at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100%identity to any one of SEQ ID NOs: 13-21, and 32-41.12.An engineered RNA sequence comprising a 3’-UTR selected from any one of SEQ ID NOs: 13-21 and 32-41, and a coding sequence encoding a therapeutic agent.13.An engineered RNA sequence comprising a 5’-UTR selected from any one of SEQ ID NOs: 22-31, and a coding sequence encoding a therapeutic agent.14.The RNA sequence of any one of claim 1-13 further comprising a polyA sequence at the 3’ end of the RNA sequence.15.The RNA sequence of any one of claims 1-14 further comprising a 5’ cap at the 5’ end of the RNA sequence.16.The RNA sequence of any one of claims 1-15, wherein the RNA sequence comprises at least one modified nucleotide.17.The RNA sequence of any one of claims 1-11 and 14-16 further comprising a coding sequence that encodes a polypeptide.18.A polynucleotide encoding the RNA sequence of any one of claims 1-17.19.A vector comprising the RNA sequence of any one of claims 1-17 and / or the polynucleotide of claim 18.20.The vector of claim 19, wherein the vector is a plasmid, a viral vector, or a lipid-based vector.21.A cell comprising the RNA sequence of any one of claims 1-16.22.A cell comprising the polynucleotide of claim 16 and / or the vector of claims 19 or 20.23.A composition comprising the RNA sequence of any one of claims 1-17.24.A composition comprising the polynucleotide of claim 18.25.The composition of claim 23 or 24 further comprising a carrier selected from the group consisting of lipid nanoparticles, liposomes, cationic nanoemulsions, dendrimer-based lipid nanoparticles, cationic polymers, and polysaccharide particles.26.A kit comprising the RNA sequence of any one of claims 1-17 and / or the polynucleotide of claim 18, and a carrier selected from the group consisting of lipid nanoparticles, liposomes, cationic nanoemulsions, dendrimer-based lipid nanoparticles, cationic polymers, and polysaccharide particles.27.A method of preparing the RNA sequence of any one of claims 1-17, selected from in vivo transcription or in vitro transcription from the polynucleotide of claim 18, wherein the polynucleotide of claim 18 is DNA.28.A method of preparing the cell of any one of claims 21-22, selected from transduction or transfection of a vector of claims 19 or 20 into the cell.29.A method of preparing the composition of claim 24 and / or the kit of claim 26, comprising (a) preparing the RNA sequence of any one of claims 1-17 according to claim 27, and / or prepare the polynucleotide sequence of claim 18 when the polynucleotide sequence is a DNA, and (b) loading the RNA sequence of any one of claims 1-17 or the polynucleotide of claim 16 into a carrier.30.A method of constructing an engineered polynucleotide sequence comprising a coding sequence, the method comprising:a. adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 4-12 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 4-12, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 13-21 to the coding sequence; orb. adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 4-12 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 4-12, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 32-41 to the coding sequence; orc. adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 22-31, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 13-21 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 13-21 to the coding sequence; ord. adding a 5’-UTR selected from SEQ ID NOs: 22-31 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 22-31, and / or a 3’-UTR selected from SEQ ID NOs: 32-41 or a polynucleotide encoding anyone of SEQ ID NOs: 32-41 to the coding sequence.31.The method of claim 30, wherein the coding sequence encodes one or more therapeutic agents.

Images